JPS61249995A - マクロライド系化合物８−デヒドロキシアルドガマイシンｆ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、新規なマクロラード系化合物に関する。

マクロラード系化合物は医薬（抗菌剤）として重要な位
置を占めており、既に各種のものが提案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが大きいから、マクロラード系化合物についても
そのアグリコン部分および糖部分の種類または置換基に
おいて既存のものと異なる化合物に対しては不断の希求
があるといえよう。

発明の概要 本発明は、上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明によるマクロラード系化合物８−デヒ
ドロキシアルドガマイシンＦ （８−ｄ＠ｈｙｄｒｏｘｙａｌｄｇａｍｙｃｉｎ　Ｆ　
）は、下式で示されるものである。

（Ａ） 発明の詳細な説明 マクロラード系化合物８−デヒドロキシアルドガマイシ
ンＦ １）化学構造 本発明によるマクロラード系化合物８−デヒドロキシア
ルドガマイシンＦは、上記の式（Ａ）で示される化学構
造を有する。

８−デヒドロキシアルドガマイシンＦの化学構造は、紫
外部可視部吸収スペクトル、核磁気共鳴スペクトル、Ｆ
Ｄマススペクトル、元素分析等の結果および々既に知ら
れているアルドガマイシンベｔｌｋテ ｍ、　Ｂｅｒ、’）　１０８．７８Ｑ、　１９７５）の
分析結果との比較により上記の通り決定された。

２）物理化学的性質 （１）色・性状：　無色粉末 （２）融　点：１４６℃〜１４９℃ ２７．０ （３）比旋光度：　〔α）　　　　−２９，０’　（艶
１．０９、ＣＨＣｌ３　）（４）元素分析値：　　Ｃ３
７Ｈｓｓ　Ｏ□６実測値Ｃ：　５９．８９％　Ｈ：　７
．４８％（計算４ｖＩＣ：　５９．９（ｊ％　　Ｈ：　
７．６２％）（５）紫外部可視部吸収スペクトル 第１図 ＣＨ３０Ｈ中　　λ（ε） ２１８．２　（２，２Ｘ　１０’）、２４０．６　（１
，２３Ｘ　１０’）（６）赤外線吸収スペクトル（臭化
カリウム錠）第２図 （７）溶剤に対する溶解性 可溶：　　メタノール、エタノール、クロロホルム、酢
酸エチル、ベンゼン 不溶：　ヘキサン、水 （８）薄層クロマトグラフィーρ挙動 （メルク社「シリカゲル６０Ｆ２５４Ｊプレート使用）
Ｒｆ値 クロロホルム：メタノール＝　９　：　１　　０．６７
酢酸エチル　　　　　　　　　　　０．７１（９）　Ｉ
Ｈ−ＮＭＲスペクトル 第３図　（１００ＭＨｚ　ＣＤＣＤＣ１３）Ｑ１１３Ｃ
−Ｎ　スヘ／　トに 第４図　（２５ＭＨｚ　ＣＤＣ１３） （１１）分子量　　７４０ （ＦＤマススペクトル） １）概要 マクロラード系化合物８−デヒドロキシアルドガマイシ
ンＦは現在のところ微生物の培養によってのみしか得ら
れていないが、類縁化合物の合成化学的または微生物学
的修飾によって製造することも、あるいは全合成化学的
に製造することもできよう。

微生物の培養による場合の菌株としては、ストレプトミ
セス属に属する８−デヒドロキシアルドガマイシンＦ生
成能を有するものが使用される。

具体的には、本発明者らの分離したストレプトミセス・
アビデイニイ５１１１７が８−デヒドロキシアルドガマ
イシンＦを生産することが本発明者らによって明らかに
されているが、その他の菌株に。

ついては抗生物質生産菌単離の常法によって適当なもの
を自然界より分離することが可能である。

また、ストレプトミセス・アビデイニイＡ１１１７を含
めて８−デヒドロキシアルドガマイシンＦ生産菌を放射
線照射その他の処理に付して、８−デヒドロキシアルド
ガマイシンＦ生産能を高める余地も残されている。

２）爲１１１７株 マクロラード系化合物８−デヒドロキシアルドガマイシ
ンＦ生産能を有するストレプトミセス属の菌株として本
発明者らの見出し【いるＡ１１１７株は、下記の内容の
ものである。

（１）由来および寄託番号 ／Ｆｈ１１１７株は北海道中用郡池田町のぶどう畑で採
取した土壌から分離されたものであり、昭和６０年２月
８日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて「
微工研菌寄第８０７８号」の番号を得ている。

（２）菌学的性状および生理学的性質 ８−デヒドロキシアルドガマイシ／Ｆを生産する上記＆
　１１１７株は、次のような菌学的性質を有する。

Ａ）形態 良く分枝した基土菌糸から、気菌糸を長く伸長し、単純
分枝する。その先端に鉤状（ｈｏｏｋ）あるいは不完全
な螺旋状（ＲＡ：　ｒｅｔｉｎａｅｕｌｉａｐｅｒｔｉ
）の１０〜５０個の胞子の連鎖を形成する。輪生糸の形
成は認められない。

胞子の形状は、円筒形の中央部がくぼんだいわゆる指骨
状である。大きさは０．７〜１．１μｘ０．７〜０．９
μで、表面は平滑である。

胞子の５、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態は認められな
い。

Ｂ）各糧培地上の生育状態 各種培地上で２７’Ｃで３週間培養したときの性状は、
第１表に示すとおりである。

Ｃ）生理的性質は、第２表のとおりである。

Ｄ）炭素源の同化性は、第３表のとおりである（プリド
ハム・ｔトリープ寒天培地上）。

以上の性状から、／Ｋ１１１７株は明らかにストレプト
ミセス属に属し、特徴を要約すれば、気菌糸は鉤状ある
いは不完全な螺旋状で、胞子の形状は指骨状、その表面
は平滑である。種々の合成あるいは天然培地で黄味白色
ないし暗い黄茶色の発育をし、５すピンク色の気菌糸を
着生する。一般に可溶性色素は産生じないが、イースト
・麦芽寒天培地でにぶ黄色の色素の拡散が認められるこ
とがアル。メラニン様色素はチロシン寒天、ペフトン上
記から、ＩＭＦ（インターナショナル・ストレプトミセ
ス・プロジェクト）の記載（インターナショナル・、ジ
ャーナル・オプ・システマテイ′ツク・バクテリオ−ジ
ー１８巻６９〜１８９頁、２７９〜３９２頁、１９６８
年、および同誌１９巻、３９１〜５１２頁１９６９年、
および同誌ｎ巻、２６５〜３９４頁、１９７２年）、パ
ーシーズ・マニュアル・オプ・デイターミネイティブ・
バクテリオロジー（８版）およびその他の菌種記載など
を参照した結果、ストレプトミセス・アビデイニイかに
１１１７株に最も近縁の菌種としてあげられる。そこで
、ム１１１７株とストレプトミセス・アビデイニイＩＦ
Ｏ１３４２９（ＩＳＰ５５２６）とを同一条件下で培養
し比較すると、ストレプトミセス・アビデイニイは、グ
リセリン・アスパラギン寒天培地では気菌糸が貧弱で白
色の生育をし、オートミール寒天培地では裏面の色が黄
味臼になるなど１に１１１７株とやや異なる点があるが
、その他の培養性状および生理的性質はよく一致する以
上の結果から、Ａ１１１７株をストレプトミセス・アビ
デイニイに最も近縁な種と認め、ストレプトミセス・ア
ピディニイ（、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ　ａｖｉｄｉ
ｎｌｉ）　４１１１７と同定し第２表 第３表 Ｄ−グルコース　　　　　　＋ Ｌ−アラビノース　　　　　− Ｄ−キシロース　　　　　　− ｉ−イノシトール　　　　− Ｄ−マンニトール　　　　− Ｄ−７ラクトース　　　　　＋ ラムノース　　　　　　　　− シュクロース　　　　　　　− ラフィノース　　　　　　　− ＋：生育する　−：生育せず ３）培養／８−デヒドロキシアルドガマイシンＦの生産 マクロラード系化合物８−デヒドロキシアルドガマイシ
ンＦは、ストレプトミセス属に属する８−デヒドロキシ
アルドガマイシンＦ生産菌を適当な培地で好気的に培養
し、培養物から目的物質を採取することによって製造す
ることができる。

培地は、８−デヒドロキシアルドガマイシンＦ生産菌が
利用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。具
体的には、例えば、炭素源としてグルコース、シュクロ
ース、マルトース、スターチおよび油脂類などが使用で
き、窒素源として大豆粉、綿実粕、肉エキス、ペプトン
、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンスチープリカーな
どの有機物並びにアンモニウム塩または硝酸塩たとえば
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニ
ウム等の無機物が使用できる。また、必要に応じて、食
塩、塩化カリウム、リン酸塩、重金属塩など無機塩類を
添加することができる。発酵中の発泡を抑制する為に、
常法に従って適当な消泡剤たとえばシリコーンを添加す
ることもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく好気的液体深部培養法が最も適している
。培養温度は２０’Ｃ〜３５’Ｃが適当であるが、５℃
〜（資）℃が好ましい。この方法で８−デヒドロキシア
ルドガマイシンＦの生産量は、振と５培養では４８時間
〜７２時間、通気攪拌培養ではＵ時間で最高に達する。

このようにして８−デヒドロキシアルドガマイシンＦの
蓄積された培養物が得られる。この培養物から８−デヒ
ドロキシアルドガマイシンＦを採取するには、合目的的
な任意の方法が利用可能である。その一つの方法は、抽
出の原理に基くものであって、具体的には、たとえば、
培養ｒ液中の８−デヒドロキシアルドガマイシンＦにつ
いてはこれを水不混和性の有機溶媒、例えば酢酸エチル
、酢酸ブチル、クロロホルム、ブタノール等で抽出する
方法（培養ｆ液は中性ないし微塩基性であると抽出効率
が良好である）あるいは菌体を分離せずに培養物そのま
まを上記の抽出操作に付することもできる。

培養物から８−デヒドロキシアルドガマイシンＦを採取
する他の方法の一つは１．吸着の原理に基くものであっ
て、既に液状となっている８−デヒドロキシアルドガマ
イシンＦ含有物、例えば培養Ｐ液あるいは上記のように
して抽出操作を行なうことによって得られる抽出液を対
象として適当な吸着剤、例えば活性炭、アルミナ、シリ
カゲル、ダイヤイ芽ンＨＰ２０　（三菱化成製）等を用
いたカラムクロマトグラフィーによって目的の８−デヒ
ドロキシアルドガマイシンＦを吸着させ、その後溶離さ
せることによって、８−デヒドロキシアルドガマイシン
Ｆを得ることができる。このようにして得られた８−デ
ヒドロキシアルドガマイシンＦ溶液を減圧濃縮乾固すれ
ば、８−デヒドロキシアルドガマイシンＦの粗標品が得
られる。

このようにして得られる８−デヒドロキシアルドガマイ
シンＦの粗標品をさらに精製するためには、上記抽出法
および吸着法を必要に応じて組合せて必要回数実施すれ
ばよい。例えば、シリカゲル、アルミナなどの吸着剤ま
たはゲルｒ過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、適
当な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー、および向流
分配法を適宜組合せて実施することができる。具体的に
は、例えば、８−デヒドロキシアルドガマイシンＦ粗標
品を少量のクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムを
用いて適当な溶媒で展開して活性成分を溶出させ、溶出
液を減圧濃縮後、更に「トヨパールＨＷ４０Ｊ　　（東
洋曹達■製）カラムで溶出させると、８−デヒドロキシ
アルドガマイシンＦが単一物質として分離されるから、
これを濃縮してか、ら適当な溶媒から晶析させて、８−
デヒドロキシアルドガマイシンＦを無色粉末として得る
ことができる。

生理活性 １）抗菌活性 （１）８−デヒドロキシアルドガマイシンＦは種々の微
生物に対して抗菌活性を示す物質であり、最小増殖阻止
濃度（ＭＩＣ）を寒天平板希釈法により求めた（第４表
）。

測定条件： Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈ１ｎｔｏｎ寒天培地／ｐＨ７，３／
３７℃７２０時間 ＭＩＣは、１０６個／ｍｌに検定菌の菌体懸濁液を調製
し、ミクロプランタ−で接電して、培賽後の生育の有無
で判定した。

上記のように、本発明の８−デヒドロキシアルドガマイ
シンＦは抗菌作用を有し、特にダラム陽性菌に対して抗
菌性を示すので１．これらに起因する感染症の治療に対
して有効に使用することができる。

また、本発明化合物は、類似の既知化合物アルトガマイ
シンＦより強い抗歯性を有していた。

（２）　　ｉｎ　ｖｉｖｏでの活性 マウスにおける抗菌活性をスタフィロコッカス・オウレ
ウス・スミス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕａａｕｒｅ
ｕ＠Ｓｍ１ｔｈ）株による実験的感染により測定した。

平均体重２１　ｇの雄のマウス６匹を一群と臥スタフィ
ロコッカス・オウレウス・スミス株の２００×ＬＤ５ｏ
量を腹腔内注射することによって感染を行った。

感染１時間後に、所定量の８−デヒドロキシアルドガマ
イシンＦを経口投与した。

投与７日後に観察を行い、生残数よりＥ　Ｄ　ｓｏを求
めた。

対象の薬剤としてジョサマイシンおよびエリスロマイシ
ンを用いて、比較を行った。

８−デヒドロキシアルドガマイシンＦ　　　　０．５７
ジヨサマイシン　　　　　　　　　　　　１．１５エリ
スロマイシン　　　　　　　　　　　１．０上記のよう
に、本発明の８−デヒドロキシアルドガマイシンＦは少
量で効果を示し、感染症の治療に有効に使用することが
できる。

２）急性毒性（ＬＤ５ｏ） ８−デヒドロキシアルドガマイシンＦのマウス腹腔内投
与によるＬＤ５０は、１００１００Ｏ／　ｋｇ　以上で
あった。

実験例 以下において「チ」は「ｗ／マチ」である。

実施例１ （１）　　培養 グリセロール３％、コーンスチープリヵ−１％、乾燥酵
母０．３チ、ＣａＣＯ３０−３５％およびＮａＣ１０，
５％＜ｐＨ７，２）を含有する前々培養培地１００ｍ　
ｌを含む５００ｍ１容三角フラスコにストレプトミセス
・アビディエイＡ１１１フ株を１白金耳接糧し、ｎ℃で
４８時間振と５培養する。さらに、同じ組成の前培養培
地１リツトルを含む５リツトル容三角フラスコへ前々培
養培地１００ｍ１を移植し２７℃で４８時間振とう培養
して種母とした。

前培養培地と同じ組成の培地１５０’Ｊツトルを含む３
００リットル容ファーメンタ−に前培養培地５リツトル
容三角フラスコ３本を移植し、’ｚ’ｔ℃７通気量１ｖ
ｖｍ／回転数１５Ｏｒｐｍの条件でＵ時間培養した。

（２）　　８−デヒドロキシアルドガマイシンＦ粗標品
の採取 培養後、ｐＨを７とし、セライトを加えて加圧ｒ遇する
。洗液を含めた培養ｆ液１５０リットルを「ダイヤイオ
ンＨＰ２０Ｊ（三菱化成製）のカラム１０φＸ１００ｃ
ｍに吸着させた。水および５０チメタノール各２０１Ｊ
ツトルで洗浄した後、メタノールで溶出させた。溶出液
を濃縮し、濃縮液をｐＨ８，５に調整し、等量の酢酸ブ
チルで２回反復抽出した。

この抽出液を濃縮して、１３ｇの粗標品を得た。

実施例２ 実施例１で得られた８−デヒドロキシアルドガマイシン
粗標品１３ｇをクロロホルムに溶解し、シリカゲル２５
０．をクロロホルムで平衡化したカラム４φＸ３５ｃｍ
に加え、クロロホルムで洗浄した後、クロロホルム：メ
タノール（９：１）で展開した＠ここで１目的物を含有
するフラクションが得られた。これを減圧下で濃縮乾固
して、６８０ｍｇの残渣を得た。この残渣をメタノール
に溶解し、ｒ　）　：ｌ　ｔｅ−ルＨＷ４０Ｊ（東洋曹
達■製）カラム２φＸ３５ｃｍでゲル濾過を行って、８
−デヒドロキシアルドガマイシンＦフラクションを得た
。濃縮後、少量のクロロホルム：ヘキサン（１：１０）
に溶解し、室温に放置して、８−デヒドロキシアルドガ
マイシンＦの粉末７７ｍｇが得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、紫外部可視部吸収スペクトルを模写した図で
ある。 第２図は、赤外吸収スペクトルを模写した図である。 第３図は、１）１−ＮＭＲスペクトルを模写した図であ
る。 第４図は、”３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを模写した図であ
る。 出願人代理人　　猪　　股　　　清 手続補正書 昭和６１年　７月／７日 特許°庁長官　黒田明雄　殿 １　事件の表示 昭和６０年　特許願　第９１９７４号 ２　発明の名称 マクロラード系化合物８−デヒドロ キシアルドガマイシンＦ ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 畝麟麦酒株式会社 ４　　代　　理　　人 ７　補正の対象

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次の式で示されるマクロラード系化合物８−デヒドロキ
   シアルドガマイシンＦ ▲数式、化学式、表等があります▼