JPS60126295A - 抗生物質ｔ−２３−７およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は式 で表わされる新規化合物Ｔ−２３−■およびその製造法
に関する。

本発明者らは微生物によって抗生物質Ｔ−２３−ｎを他
の化合物に変換する方法の検索を行つたところ、バチル
ス属に属する微生物の培養物またはその菌体を該化合物
に作用させるとＴ−２３−■に変換される事実を見い出
して本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明の第一の要旨とするところは、式 で表わされる抗生物質Ｔ−２３−■にある。

また本発明の第二の要旨とするところは、式で表わされ
るＴ−２５−ｎ物質をＴ−２３−■物質に変換する能力
を有するある種の微生物の培養物またはその菌体にＴ−
２５−ｎ物質を接触させることを特徴とする抗生物質Ｔ
−２３−■の製造法にある。出発物質たるＴ−２５−ｎ
物質はたとえばストレプトミセス・リシリエンシス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｅ　ｒｉｅｈｉｒｉａｎｅｉｅ　
）　Ｔ　−２３の培地培養物から採取精製することによ
り得られる。

本発明方法で用いられる微生物はバチルス属に属しＴ−
２５−ｎ物質をＴ−２５−■物質に変換する能力を有す
る微生物でめればよい。本発明方法で用いることのでき
る菌株は、土壌中から分離することＫよって選ぶことも
可能であシ、菌株寄託機関に寄託されているタイプカル
チャーの中から選ぶこともできる。たとえばバチルス・
メガテリウム（Ｂａｃｉ：Ｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉ
ｕｍ　）工ＡＭ１０３０％　工ＡＭ１０３２．工ＡＭ１
１６６などが挙げられる。

一般にバチルス属菌はその性状が変化しゃすく紫外線照
射、Ｘ線照射、ニトロソグアニジンその他の人工変異剤
などによる人工変異手段で容易に変異させることができ
る。そのような変異株でも〒−２３−１１物質なＴ−２
５−■物質に変換する能力を有する微生物はすべて本発
明に使用し得る。

本発明を実施するに当ってバチルス・メガテ７リウムエ
ＡＭ１１６６株の培養は２０〜４５℃好ましくは２４℃
〜５７℃の温度範囲で、初発ｐＨを中性附近好ましくは
６．５〜ａ５０条件が望ましい。培養時間は１０〜１０
０時間程度でよいが、とくに２４〜４８時間で良好であ
る。培養手段としては静置培養、振盪培養あるいは通気
攪拌培養を用いうるが大量処理には深部通気攪拌培養に
よるのが望ましい。

培養のための培地としては通常の細菌が利用できる栄養
源を含むものであれば液状でも固状でもよいが、大量処
理の場合には液体培地がより適している。培地組成とし
てはグルコース、乳糖、蔗糖、麦芽糖、デキス）　ＩＪ
ン、殿粉、グリセロール、マニトールなどの炭素源、お
よびカゼイン、ポリハシトン、大豆粉、綿実粉、肉エキ
ス、乾燥酵母、コーンステイープリカー、廃１！密など
の有機引鼠素もしくは硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ワムなどの無機態窒素などの窒素源を単独ないしは組合
せて使用できる。

さらにナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウ
ムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、ニッケル、コ
バルトなどの金属塩類、燐酸、硼酸などの塩類や酢酸、
プロピオン酸などの有機酸の塩類を使用できる。またグ
ルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、リ
ジン、プロリンメチオニンなどのアミノ酸や各種はプチ
ド類、さらには各種ビタミン類やプリン、ピリミジンな
どの核酸類を含有させてもよい。また培地のｐＨを調節
する目的で無機または有機の酸またはアルカリ類、緩衝
剤などを添加することはもちろん、必要に応じてシリコ
ーン油、植物油、合成消泡剤などを添加して発泡を抑え
ることも可能である。

本発明で用いられる「培養物」とは上記した培養で得ら
れるＳｌのをいい、また「国体」は上記の培養物をｐ過
あるいは遠心分離することによって得られたものである
。

本発明方法は原料化合物Ｔ−２３−ｎをＮ−１２３株の
培養物またはその菌体と接触させて行なわれる。反応液
中の原料化合物の濃度は通常１〜５００μｙ／ｍｔ、好
適には１０〜１００μ２／−程度である。反応の温度は
通常２０〜５０℃特に２４〜４０℃が適当である。反応
のためのｐＨは通常５〜９好適には５〜７である。反応
時間は通常１〜１００時間好ましくは３〜２４時間であ
る。

このようにして得られたＴ−２３−■物質を採取するた
めには通常の脂溶性低分子物質の分離精製手段を適用で
きる。すなわち各種溶媒による抽出、シリカゲル、アル
ミナ、マクロポーラス非イオン系樹脂等の吸着剤による
カラムクロマトグラフィー、さらに液滴クロマトグラフ
ィーやセファデックスＬＨ−２０等によるゲルい過クロ
マトグラフィーなどが単独あるいは組み合わせて利用で
きる。

Ｔ−２５−■は培養炉液および菌体に含まれているため
に培養物を濾過または遠心分離などで分離し、それぞれ
から溶媒抽出するのが有利である。

培養ｐ液からの抽出には水と混合しない酢酸エチル、ク
ロロホルム、ブタノールなどの溶媒が用いられる。抽出
は中性附近のｐ”ｓ好ましくはｐＨ７で酢酸エチルによ
って行なわれる。抽出液を飽和食塩水などの溶液で洗浄
すれば水溶性の不純物などの除去に効果がある。かくし
て得られた溶媒層に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し
た後、溶媒全減圧留去すればＴ−２５−■を含む粗抽出
物（ａ）を得ることができる。

一方、菌体からの抽出には、メタノール、エタノール、
アセトンなどの水混和性有機溶媒と水との混合物を用い
ることができるが、７０％アセトン水を用いるのが有利
である。すなわち菌体にｐ液と同量の７０チアセトン水
を加え、室温で２時間撹拌することによって菌体中のＴ
−２３−■はすべて抽出される。抽出操作は必決に応じ
て繰り返し行える。このようにしてＴ−２３−■を含む
抽出液を得た後、減圧下に混合溶媒を除去する。イｂら
れたＴ−２３−■を含む水溶液はｐ液と同様に酢酸エチ
ル等で抽出し、溶媒層を水洗後、無水硫酸ナトリウムで
脱水してから溶媒全留去し、Ｔ−２３−■を含む粗抽出
物（ｂ）が得ることができる。

更にＴ−２６−■全精製するには柚々の吸着クロマトグ
ラフィーが有効であり、吸着剤としてはシリカゲル、ア
ルミナ、マクロポーラス非イオン系材脂等が使用できる
が、前記の粗抽出物（ａ）および（ｂ）よりの精製はシ
リカゲルを用いるのが適しており、クロロホルム／メタ
ノールの混合溶媒系で溶出するのが有利である。

すなわち、シリカゲルを担体としてクロロホルム／メタ
ノール（１０：１）の混合溶媒系でカラムクロマトグラ
フィーを行ない、溶出液をシリカゲル薄層クロマトグラ
フィー〔西独メルク社キーゼルゲル６０　Ｆ　２５４、
α２５ｍＩＩｍ、２ＱＸ２０　ｃｍ。

溶媒系クロロホルム／メタ／−ル（７：１）ＥＶＣ付し
、紫外線２５３７ｘを照射して検出する吸収像で確認す
ることによってＴ−２３−■を含有する７ラク７ヨンを
集め、減圧下に濃縮乾固するとＴ−２５−■の粗粉末が
得られる。得られた粗粉末は酢酸エチルに溶解したＬ　
ｎ−ヘキサンを加えて無色不定形結晶を得ることができ
る。またシリカゲルを用いる調整的薄層クロマトグラフ
ィーによって分離することもできる。

すなわち粗抽出物（ａ）および（ｂ）をシリカゲルガラ
スプレート（西独メルク社キーゼルゲル６０Ｆ２５４．
０、５　ｗａｓ、２０Ｘ２０ｃｒｎ）に付し、クロロホ
ルム／メタノール（７：１）混合溶媒系で展開してＲｆ
＝０．１５附近のＴ−２３−■に相当する区分をかきと
り、かき取ったシリカゲルをクロロホルム／メタノール
（７：１）混合溶媒系で溶出し、減圧濃縮してｎ−ヘキ
サンを加えるとＴ−２３−■が無色不定形結晶として単
離採取される。

このようにして得られたＴ−２３−■は新規な抗生物質
であってその物理化学的性状および生物活性は次のとお
りである。

１）　結晶形態　無色不定形結晶 ２）分子量　ＦＤ−ＭＳ　（Ｍ＋Ｈ）　８０１、（Ｍ＋
−Ｎａ）　８２３６）分子式　Ｃ４２Ｈ６ＯＮ２０１！
Ｓ４）　元素分析値 、理論（ＩＪＬチ　実測値チ ｃ：６３．００　６３．６１ Ｈ：　７．５０　７．９５ １Ｊ：　３．５０　３．２３ ｏ：２６．００　２５．２１ ５）〔α）、＝＋１７９°（ｃｍ１．２８、ＣＨ３０Ｈ
）６）融点１４８〜１５１℃ ７）　紫外線吸収スペクトル（メタノール中）λｍ、Ｈ
２５１ｎｍ（ｇ２３，６００）２６１ｎｍ（ｇ２９，６
００） ２７１ｎｍ（ｇ３Ｂ、６００） ２８１ｎｍ（ｇ２８，０００） ３０５ｎｍ（ｇ　２，２００） ８）　赤外部吸収スはクトル（ＫＢｒ錠中）（第１図参
照）νｍａｘ　３３５１：ｃｒＩＴ、　２９２Ｃｋｍ　
、２８５１１ｋｍ　。

１７２（ｋｍ　、１６５５ｚ　、１６３ｈ　。

１５４０ｃＩｎ、　１５３Ｉｌｋｍ　、１４７５ｃｍ　
、１４５０ｃｒｎ、　１３７５ａｎ　１１２８５ｃｍ　
、１２１０＞−’、１２００ｔｙｎ−’、１１７０ｃｍ
−’、１０７５ｃｒｎ、９巽−，８９０ｃｍ　、７％個
　。

９　）　１５０−ＮＭＲスペクトル化学シフト（重メタ
ノール中）−」鮫−」（− １９，７ｐｐｍ　（ｑＦ　２２　７ａＯｐｐｍ　（ａ）
２　１７．２　（ｑ）　２３　７ａ１（ａ）５　２１．
０　（ｑ）　２４　８１．６　（ａ）４　２６．８　（
ｔ）　２５　１０３．５　（ｄ）５　２６．９　（ｔ）
　２６　１１０．５　（ａ）６　２６．９　（ｔ）　２
７　１１８．４　（ｄ）７　２７．５　（ｔ）　２８　
１２４．８　（ｄ）８　５０．７　（ｔ）　２９　１２
７．０　（ｓ）９　５０．８　（ｔ）　ｉ　１３０．５
　社）１０　３２．５　（ｔ）　！１１　１３０．７　
（ｄ）１１　３３．８　（ｔ）　３２　１３１．１　（
ｄ）１２！１９．６　（→　５ｓ　１３３．２　（ｓ）
１５　４３．６　（ｔ）　３４　１り４．６　（ｄ）１
４　４５．９　（ｄ）　３５　１３５．７　（ｄ）１５
５０．２　Ｂ）　３６　１３６．６　（ｃｌ）１６５６
．７　（ト）　３７　１３９．７　（８）１７　６２．
６　（ｔ）　３８　１４４．３　（ｓ）１８　６９．６
　（ｃｌ）　３９　１５１．５　（Ｂ）１９　７１．５
　（ｄ）　４０　１７１．７　（θ）２０　７４．９　
（ａ）　４１　１７３．９　（ｓ）２１　７６．４　ｔ
ａ）　４２　１７９．２　（ａ）＊　オフレゾナンスス
はクトルにおける多重度１０）　１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル（重アセトン中）（第２図参照）１１）溶解性 メタノール、エタノール、アセトン、ピリジン、酢酸エ
チルに可溶 ｎ−へキサン、ベンゼン、水に不溶 （１）　マウス白面病Ｌ−５１７８Ｙ細胞に対する作用
イーグルＭＥＭ培地にツスイ製）に馬鹿溝を１０チそし
てＬ−グルタミンおよびＬ−アスパラギンをそれぞれ０
．０５チずつ補添した培養液に、同培養液中で１０５〜
１Ｑ６／、１の細胞数に増殖したマウス白血病Ｌ−５１
７８Ｙ細胞を１０４／ｒｎ１．になるように接種し、炭
酸ガス培養装置中５７℃で２４時間培養した。その後、
各種濃度のＴ−２３−■のエタノール溶液を０．５チ添
加してさらに１２０時間培養し、細胞増殖の有無を判定
した。その結果、Ｔ−２５−■はマウス白血病Ｌ−５１
７８Ｙ細胞に対して０，４μｆ　７ｍ１以上の濃度で生
育阻害作用を示すことが認められた。かくしてＴ−２３
−■は抗腫瘍活性を有し、抗ｊ庫瘍剤としての用途が期
待される。

次に実施列を掲げるが本発明はこれに限定されるもので
はない。

実施例　１ ｘＡｈｓ　１１６６株を肉汁培地１ｏｏｍｅを入れた５
０〇−容量の三角フラスコに接釉し、２８℃で２４時間
振盪培養してジャー醗酵槽による本培養の種菌とした。

デキストリン１％、ペプトン０．５チ、酵母エキス０．
５％、肉エキス０．５％おヨヒ沈降性炭酸カルシウム０
．５チよりなる培地（ｐＨ７、２）に上記種菌を５チの
割合で接種し、ジャー醗酵槽中で３０℃で通気攪拌培養
を行なった（３０２醗酵槽使用、培地量１５２、通気遣
１５Ｌ／分、回転数３０Ｏｒｐｍ）。４８時間培養後、
０．５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ５，５）　Ｓ　ｆＬを添加し
た後、Ｔ−２３−１［７５０■をエタノール１〇−に溶
解して添加し、３０℃において１６時間通気攪拌するこ
とによって反応を行なった。

反応液は遠心分Ｍして菌体とｐ液とに分熱し、得られた
上澄液は酢酸エチル２０λを加えて攪拌抽出する。酢酸
エチル層は水洗後に無水硫酸す）　ＩＪウムで乾燥して
から減圧下に濃縮乾固して粗抽出物（１ンを得た。一方
、菌体は７０％アセトン水２λを加えて２時間攪拌して
抽出液を得た。抽出液から減圧下にアセトンを留去しそ
して得られた水溶液に酢酸エチル５００ｍ１を加えて攪
拌抽出する。酢酸エチル層は水洗後に無水硫酸ナトリウ
ムを加えて乾燥し減圧下に濃縮乾固して粗抽出物（１１
）を得た。

得られた混合物（１）および（１１）はクロロホルム／
メタノール（１０：１）に−緒に溶解し、そして得られ
る溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付して
クロロホルム／メタノール（１０：１）混合溶媒系で溶
出した。Ｔ−２３−■に相当するフジクションを合しそ
して溶媒を減圧下に留去することによってＴ−２６−■
の粗粉末９０■を得た。粗粉末は少量のアセトンに溶解
してシリカゲル（西独メルク社、　ＨＦ２５４　）の薄
層クロマトグラフィー〔溶媒系クロロホルム／メタノー
ル（７：１））に付してＲｆ＝０．１５０Ｔ−２５−■
に相当する区分をかき取り、クロロホルム／メタノール
（７：１）混合溶媒で溶出しそして溶出液を減圧下に濃
縮乾固した後、少量の酢酸エチルに溶解してｎ−ヘキサ
ンを添加するとＴ−２３−■の無色不定形の結晶１５岬
が得られた。得られた結晶の融点は１４６〜１５１℃で
あり、？Ｄマススはクトルは８０１（Ｍ＋Ｈ）”と８２
３（Ｍ＋Ｎａ）＋の分子イオンピークを示した。

実施例　２ 実施例１と同様にジャー醗酵槽中で培養したバチルス・
メガテリウムエＡＭ１１６６株の培養物１５２を遠心分
離し、得られた菌体を０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ５，５
）２０Ｉｔに懸濁した後、Ｔ−２３−ＩＩ　７５０キを
エタノール１０−に溶解して添加し、６０℃１６時間通
気攪拌することによって反応を行なった。

反応終了後の精製は実施例１と同様に行ないＴ−２３−
■の無色不定形の結晶５５りを得た。

得られた結晶の融点は１４７〜１５１℃であり、ＦＤマ
ススペクトルは８０１（Ｍ＋Ｈ）と８２３（Ｍ十史）＋
の分子イオンピークを示１７た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＴ−２６−■の赤外線吸収スペクトルを示す図
であり、そして第２図はＴ−２３−■のＩ　Ｈ−ＮＭＲ
を示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ２）式 で表わされるＴ−２３−１１物質をＴ−２３−■物質に
   変換する能力を有するバチルス属に属する微生物の培養
   物またはその菌体にＴ−２５−■物質を接触させること
   ′ｆ：ｔａ徴とする、抗生物質Ｔ−２３−■の製造法。