JP4439401B2 - マクロライド系化合物の製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、抗腫瘍活性を有する１２員環マクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質の生物学的変換による製造方法およびそれに用いられる新規菌株に関する。

１２員環マクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質は、優れた抗腫瘍活性を有する１２員環マクロライド系化合物であり、１１１０７Ｂ物質とともにストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｍｅｒ−１１１０７株の培養物より見出されたものである（ＷＯ−Ａ０２／０６０８９０参照）。１１１０７Ｄ物質は、１１１０７Ｂ物質の１６位水酸化体に相当するが、その生産性は１１１０７Ｂ物質の生産性よりも少なく、効率的な製造方法の確立が望まれていた。

本発明の課題は、マクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質を出発原料とした、生物学的変換方法によるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質の新規な製造方法を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するために広範な微生物群からマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質の１６位水素原子を水酸基に変換しうる微生物のスクリーニングを試みたところ、糸状菌に分類されるモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属に属する菌株、放線菌に分類されるストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株および同じく放線菌に分類されるミクロモノスポラセアエ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）科に属する菌株が前記変換能を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち本発明は、以下の（１）〜（３）に関する。
（１） 式（Ｉ）

で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質の、式（ＩＩ）

で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への生物学的変換方法による、式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質の製造方法であって、下記工程（Ａ）及び（Ｂ）を含むことを特徴とする製造方法。
（Ａ）前記生物学的変換方法を行いうるものであって、かつ、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属またはミクロモノスポラセアエ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）科に属する菌株またはその培養菌体の調製物の存在下で、式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質をインキュベーション処理する工程。
（Ｂ）工程（Ａ）で得られるインキュベーション処理液から式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質を採取する工程。
（２）前記モルティエレラ属に属する菌株がモルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４７）またはＦ−１５３０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８）である前記（１）記載の製造方法。
（３） 前記ストレプトミセス属に属する菌株がストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１）、Ａ−１５４４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４６）またはＡ−１５４５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４７）である前記（１）記載の製造方法。
（４）前記ミクロモノスポラセアエ科に属する菌株がＡＢ−１８９６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５０）である前記（１）記載の製造方法。
（５） 前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への変換能を有する、ストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１）。
（６）前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への変換能を有する、モルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４７）またはＦ−１５３０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８）。
（７）前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への変換能を有する、ＡＢ−１８９６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５０）。
発明の詳細な説明
本発明の生物学的変換方法では、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属またはミクロモノスポラセアエ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）科に属する微生物であって、前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質へ変換する能力を有する微生物であれば、種および株の種類を問うことなく使用できるが、好ましい微生物として、いずれも土壌から分離されたモルティエレラ属に属するモルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株およびＦ−１５３０株、ストレプトミセス属に属するストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株、Ａ−１５４４株およびＡ−１５４５株、ミクロモノスポラセアエ科に属するＡＢ−１８９６株等を挙げることができる。
Ｍｅｒ−１１１０７株は、ＦＥＲＭ Ｐ−１８１４４として平成１２年１２月１９日付で日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番３号在の工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託され、さらに平成１３年１１月２７日付で日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）において、これを国際寄託ＦＥＲＭ ＢＰ−７８１２に移管された。
モルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株は、日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに平成１５年１１月１２日付けでＦＥＲＭ ＢＰ−８５４７として国際寄託されている。また、モルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５３０株は、同じく日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに平成１５年１１月１２日付けでＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８として国際寄託されている。
ストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株は、日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに平成１４年９月５日付で、ＦＥＲＭ Ｐ−１８９９９として寄託され、さらに平成１５年１１月１２日付で日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）において、これを国際寄託ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１に移管された。また、Ａ−１５４４株、Ａ−１５４５株は、同じく日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに平成１４年７月２３日付でそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−１８９４３およびＦＥＲＭ Ｐ−１８９４４として寄託され、さらに平成１５年７月３０日付で日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）において、それぞれ国際寄託ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４６およびＦＥＲＭ ＢＰ−８４４７に移管された。
ミクロモノスポラセアエ科に属するＡＢ−１８９６株は、日本国３０５−８５６６茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６在の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに平成１５年１１月１２日付けでＦＥＲＭ ＢＰ−８５５０として国際寄託されている。
なお、上記菌株の菌学的性状は次のとおりである。
［Ｆ−１５２９株の菌学的性状］
（１） 形態
オートミールアガー（Ｏａｔｍｅａｌ Ａｇａｒ：以下ＯＡと略称する場合がある），モルトアガー（Ｍａｌｔ Ａｇａｒ：２％ Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ ＋ １．５％ Ａｇａｒ：以下ＭＥＡと略称する場合がある），ポテトデキストロースアガー（Ｐｏｔａｔｏ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ａｇａｒ：以下ＰＤＡと略称する場合がある）のプレートにおいて、コロニーは羊毛状（ｆｌｏｃｃｏｓｅ）を示し、菌糸色は白色でｗｈｉｔｅ（１Ａ−１）の色調を呈する。２５℃、１週間培養における生育はＯＡプレートで７５ｍｍ、ＭＥＡプレートで７５〜８０ｍｍ、ＰＤＡプレートで直径７５〜８０ｍｍに達する。コロニーは花笠状の形状を示す。裏面着色及び可溶性色素の産生は認められない。色調に関する記述は「メチューン・ハンドブック・オブ・カラー［Ｍｅｔｈｕｅｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｏｌｏｕｒ（Ｋｏｒｎｅｒｕｐ ＆ Ｗａｎｓｃｈｅｒ，１９７８）］に従った。
光学顕微鏡による観察の結果、栄養菌糸は無色、表面は平滑で、隔壁は無く、菌糸の幅は４〜５μｍとなる。菌糸の一部に球状で２６．５〜３３μｍ位の厚壁胞子の様な膨らんだ構造が観察された。供試した培地においては最長３週間の培養でも生殖器官と思われる構造は形成しなかった。
（２）１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子解析
Ｆ−１５２９株の寒天平板培養菌体をＦａｓｔＰｒｅｐ ＦＰ１２０（Ｑ−ＢＩＯｇｅｎｅ社製）及びＦａｓｔ ＤＮＡ Ｋｉｔ（Ｑ−ＢＩＯｇｅｎｅ社製）を用いてＤＮＡ抽出を行った。ＰＣＲはｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ ｂｅａｄｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）と表１及び表２に示すＰＣＲプライマーＮＳ１及びＮＳ８を用いて実施した。ＰＣＲ産物はＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて精製し、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）に用いた。シークエンシングプライマーは表１及び表２に示すＮＳ１，ＮＳ２，ＮＳ３，ＮＳ４，ＮＳ５，ＮＳ６，ＮＳ７及びＮＳ８を用いた。反応生成物はＤｙｅＥｘ２．０ Ｓｐｉｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて精製し、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）で配列解読を行い、ＡｕｔｏＡｓｓｅｍｂｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて各シークエンス断片を結合し、目的塩基配列を得た。

得られた本菌株の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子は、配列番号９に記載の塩基配列を有する。
日本ＤＮＡデータバンク（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／）より公知菌株のＤＮＡ塩基配列を入手し、１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の相同性を調べた。その結果、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｈｙａｌｉｎａ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＹ１５７４９３）の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子と９９％（上流８０３塩基）、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒａ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＦ１５７１４３）の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子と９８％（全長）、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｉｄｉｖａｒｉｃａｔａ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＦ１５７１４４）の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子と９８％（全長）の相同性を示した。
以上の菌学的性質から本発明者らは本菌株がモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属に属すると判断した。
［Ｆ−１５３０株の菌学的性状］
（１） 形態
オートミールアガー（Ｏａｔｍｅａｌ Ａｇａｒ），モルトアガー（Ｍａｌｔ Ａｇａｒ），ポテトデキストロースアガー（Ｐｏｔａｔｏ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ａｇａｒ）のプレートにおいて、コロニーは綿毛状（ｃｏｔｔｏｎｙ）を示し、菌糸色は白色でｗｈｉｔｅ（１Ａ−１）の色調を呈する。２５℃、１週間培養における生育はＯＡプレートで８０〜８５ｍｍ、ＭＥＡプレートで８５ｍｍ、ＰＤＡプレートで直径８５ｍｍに達する。コロニーは花笠状の形状を示す。裏面着色及び可溶性色素の産生は認められない。色調に関する記述は「メチューン・ハンドブック・オブ・カラー［Ｍｅｔｈｕｅｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｏｌｏｕｒ（Ｋｏｒｎｅｒｕｐ ＆ Ｗａｎｓｃｈｅｒ，１９７８）］に従った。
光学顕微鏡による観察の結果、栄養菌糸は無色、表面は平滑で、隔壁は無く、菌糸の幅は２．５〜５μｍとなる。菌糸の一部に球状で１０μｍ位の厚壁胞子の様な膨らんだ構造が観察された。供試した培地においては最長３週間の培養でも生殖器官と思われる構造は形成しなかった。
（２）１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子解析
Ｆ−１５２９株と同様の手法でＦ−１５３０株の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を解析した。
得られたＦ−１５３０株の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子は、配列番号１０に記載の塩基配列を有する。
日本ＤＮＡデータバンク（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／）より公知菌株のＤＮＡ塩基配列を入手し、１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の相同性を調べた。その結果、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｈｙａｌｉｎａ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＹ１５７４９３）の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子と１００％（上流８０３塩基）、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒａ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＦ１５７１４３）の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子と９８％（全長）、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｉｄｉｖａｒｉｃａｔａ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＦ１５７１４４）の１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子と９８％（全長）の相同性を示した。
以上の菌学的性質から本発明者らは本菌株がモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属に属すると判断した。
［ＡＢ−１７０４株の菌学的性状］
（１） 形態
基生菌糸より直状（Ｒｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅｓ ｔｙｐｅ）の気中菌糸を伸長する。成熟した気中菌糸の先に２０〜５０個程度の円筒形の胞子からなる胞子鎖を形成する。胞子の大きさは０．６〜０．８×１．０〜１．１μｍ位で、胞子の表面は平滑状（ｓｍｏｏｔｈ）を示し、胞子のう、菌核、鞭毛などの特殊な器官は認められない。
（２） 各種培地における生育状態
各種培地上で２８℃、約２週間培養後の培養性状を表３に示す。色調の記載はトレズナーのカラー・ホイールズ（ＴｒｅｓｎｅｒのＣｏｌｏｒ ｗｈｅｅｌｓ）の色標名と括弧内に示す符号で表示する。

（３） 各種炭素源の同化性
プリードハム・ゴトリーブ寒天培地に各種の炭素源を加え、２８℃、培養２週間後の生育状況を表４に示す。

（４） 生理学的諸性質
本菌の生理学的諸性質は以下の通りである。
（ａ）生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：５℃〜３３℃
（ｂ）生育至適温度（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：１５℃〜３３℃
（ｃ）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）：陽性
（ｄ）ミルクの凝固（スキムミルク培地）：陽性
（ｅ）ミルクのペプトン化（スキムミルク培地）：陽性
（ｆ）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）：陽性
（ｇ）メラニン様色素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陰性
（チロシン培地）：陰性
（ｈ）硫化水素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陰性
（ｉ）硝酸塩の還元（０．１％硝酸カリ含有ブロス）：陽性
（ｊ）食塩の耐性（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：食塩含有量７％以下で生育
（５） 菌体成分
本菌の細胞壁からＬＬ型のジアミノピメリン酸が検出された。
以上の菌学的性質から本発明者らは本菌株がストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると判断した。
［Ａ−１５４４株の菌学的性状］
（１） 形態
基生菌糸より螺旋状（Ｓｐｉｒａ ｔｙｐｅ）の気中菌糸を伸長する。成熟した気中菌糸の先に１０〜２０個程度の円筒形の胞子からなる胞子鎖を形成する。胞子の大きさは１．０×１．２〜１．４μｍ位で、胞子の表面はトゲ状（ｓｐｉｎｙ）を示し、胞子のう、菌核、鞭毛などの特殊な器官は認められない。
（２） 各種培地における生育状態
各種培地上で２８℃、約２週間培養後の培養性状を表５に示す。色調の記載はトレズナーのカラー・ホイールズ（ＴｒｅｓｎｅｒのＣｏｌｏｒ ｗｈｅｅｌｓ）の色標名と括弧内に示す符号で表示する。

（３） 各種炭素源の同化性
プリードハム・ゴトリーブ寒天培地に各種の炭素源を加え、２８℃、培養２週間後の生育状況を表６に示す。

（４） 生理学的諸性質
本菌の生理学的諸性質は以下の通りである。
（ａ）生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：１５℃〜４１℃
（ｂ）生育至適温度（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：２０℃〜３７℃
（ｃ）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）：陽性
（ｄ）ミルクの凝固（スキムミルク培地）：陽性
（ｅ）ミルクのペプトン化（スキムミルク培地）：陽性
（ｆ）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）：陽性
（ｇ）メラニン様色素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陽性
（チロシン培地）：陰性
（ｈ）硫化水素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陽性
（ｉ）硝酸塩の還元（０．１％硝酸カリ含有ブロス）：陰性
（ｊ）食塩の耐性（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：食塩含有量７％以下で生育
（５） 菌体成分
本菌の細胞壁からＬＬ型のジアミノピメリン酸が検出された。
以上の菌学的性質から本発明者らは本菌株がストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると判断した。
［Ａ−１５４５株の菌学的性状］
（１） 形態
基生菌糸より直状（Ｒｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅｓ ｔｙｐｅ）の気中菌糸を伸長する。成熟した気中菌糸の先に５０個以上の胞子からなる胞子鎖を形成する。胞子の大きさは０．８×１．０μｍ位で、胞子の表面は平滑状（ｓｍｏｏｔｈ）を示し、胞子のう、菌核、鞭毛などの特殊な器官は認められない。
（２） 各種培地における生育状態
各種培地上で２８℃、約２週間培養後の培養性状を表７に示す。色調の記載はトレズナーのカラー・ホイールズ（ＴｒｅｓｎｅｒのＣｏｌｏｒ ｗｈｅｅｌｓ）の色標名と括弧内に示す符号で表示する。

（３） 各種炭素源の同化性
プリードハム・ゴトリーブ寒天培地に各種の炭素源を加え、２８℃、培養２週間後の生育状況を表８に示す。

（４） 生理学的諸性質
本菌の生理学的諸性質は以下の通りである。
（ａ）生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：１０℃〜３７℃
（ｂ）生育至適温度（イースト麦芽寒天培地、２週間培養）：２０℃〜３３℃
（ｃ）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）：陰性
（ｄ）ミルクの凝固（スキムミルク培地）：陽性
（ｅ）ミルクのペプトン化（スキムミルク培地）：陽性
（ｆ）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）：陽性
（ｇ）メラニン様色素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陰性
（チロシン培地）：陰性
（ｈ）硫化水素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陽性
（ｉ）硝酸塩の還元（０．１％硝酸カリ含有ブロス）：陰性
（ｊ）食塩の耐性（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：食塩含有量７％以下で生育
（５） 菌体成分
本菌の細胞壁からＬＬ型のジアミノピメリン酸が検出された。
以上の菌学的性質から本発明者らは本菌株がストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると判断した。
［ＡＢ−１８９６株の菌学的性状］
（１）形態
ＡＢ−１８９６株は菌株同定に使用した培地上２８℃、７〜１４日間培養において良好もしくは中程度の生育を見せる。培養中気菌糸は観察されず、基生菌糸上に１個ずつ胞子が観察される。胞子は球形で、大きさは約０．８〜０．９μｍ、胞子の表面はイボ状（ｗａｒｔｙ）である。胞子嚢、菌核、鞭毛などの特殊な器官は認められない。
（２）各種培地における生育状態
各種培地上で２８℃、約２週間培養後の培養性状を表９に示す。色調の記載はトレズナーのカラー・ホイールズ（ＴｒｅｓｎｅｒのＣｏｌｏｒ ｗｈｅｅｌｓ）の色標名と括弧内に示す符号で表示する。

（３）各種炭素源の同化性
プリードハム・ゴトリーブ寒天培地に各種の炭素源を加え、２８℃、培養２週間後の生育状況を表１０に示す。

（４）生理学的諸性質
本菌の生理学的諸性質は以下の通りである。
（ａ）生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：２０℃〜４１℃
（ｂ）生育至適温度（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養）：２５℃〜３７℃
（ｃ）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）：陰性
（ｄ）ミルクの凝固（スキムミルク培地）：陽性
（ｅ）ミルクのペプトン化（スキムミルク培地）：陽性
（ｆ）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）：陽性
（ｇ）メラニン様色素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陰性
（チロシン培地）：陰性
（ｈ）硫化水素の産生（ペプトン・イースト・鉄寒天培地）：陰性
（ｉ）硝酸塩の還元（０．１％硝酸カリ含有ブロス）：腸性
（ｊ）食塩の耐性（イースト麦芽寒天培地、２週間培養）：食塩含有量４％でも生育しない
（５）菌体成分
ＡＢ−１８９６株の細胞壁からｍｅｓｏ型のジアミノピメリン酸が検出された。全菌体の主要構成糖としてキシロースとマンノースが検出された。細胞壁ペプチドグリカン中のアシル型はグリコリル型であった。ミコール酸は検出されなかった。主要メナキノン成分としてＭＫ−９（Ｈ_４）、ＭＫ−９（Ｈ_６）、ＭＫ−１０（Ｈ_４）、ＭＫ−１０（Ｈ_６）が検出された。
（６）１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子解析
ＡＢ−１８９６株の培養液を集菌後、Ｆａｓｔ ＤＮＡ Ｋｉｔ（Ｑ−ＢＩＯｇｅｎｅ社製）を用いてＤＮＡ抽出を行った。ＰＣＲは９６℃２０秒、５０℃２０秒、７２℃１分を３０サイクルの反応条件で行った。プライマーは９Ｆ（５’−ＧＴＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ−３’）（配列番号１１）及び５３６Ｒ（５’−ＧＴＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧ−３’）（配列番号１２）を用いた。ＰＣＲ産物はＭｉｎＥｌｕｔｅ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて精製し、シークエンシング用サンプルとした。
シークエンシングはＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１０ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）装置、及びＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒキットを用い、標準のプロトコールに従った。プライマーは９Ｆ，５３６Ｒを用いた。
得られた本菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の５’末端側の約５００塩基は、配列番号１３の通りである。
日本ＤＮＡデータバンク（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／）より公知菌株のＤＮＡ塩基配列を入手し、１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の５’末端側４００〜５００塩基間の相同性を調べた。その結果、Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐ．ＤＳＭ４４３９６（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．ＡＪ５６０６３７）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子とは９８％、Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｐｕｒｐｕｒｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．Ｘ９２６１１）遺伝子と９８％、Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ属の基準株であるＭ．ｃｈａｌｃｅａ ＩＦＯ１２１３５（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．Ｄ８５４８９）遺伝子と９５％、Ｖｅｒｒｕｃｏｓｉｓｐｏｒａ属の基準株であるＶｅｒｒｕｃｏｓｉｓｐｏｒａ ｇｉｆｈｏｒｎｅｎｓｉｓ（ＧｅｎＢａｎｋ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ．Ｙ１５５２３）遺伝子と９５％の相同性を示した。
ＡＢ−１８９６株は大方Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ属の特徴を持つが、全菌体の主要構成糖としてアラビノースが検出されずマンノースが検出された点でＭｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ属とは完全には一致しない。またＶｅｒｒｕｃｏｓｉｓｐｏｒａ ｇｉｆｈｏｒｎｅｎｓｉｓで見られる特徴的な胞子が菌株同定に使用した培地上では観察されない点でＶｅｒｒｕｃｏｓｉｓｐｏｒａ属とも完全には一致しない。本発明者らは、これらの菌学的性質を総合的に考慮して、ＡＢ−１８９６株をミクロモノスポーラセアエ科（Ｆａｍｉｌｙ Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）に属する放線菌と判断した。
本発明によれば、まず工程（Ａ）において、前記菌株またはその培養菌体調製物、さらに酸素の存在下で、出発原料（基質）であるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質がインキュベーション処理される。この処理は前記菌株を好気的条件下で培養する際に、その培養液中に基質を添加して行うか、あるいは場合により前記菌株の培養菌体を、例えばそのまま、もしくはホモジナイズした調製物の懸濁液中に基質を添加し、酸素を含む気体、例えば空気を通気しながらインキュベーションして行うこともできる。
培養液への基質の添加は、培養前または培養開始後一定期間経過したときのいずれの時期に行ってもよい。上記菌体は上記いずれかの菌株を栄養源含有培地に接種し、好気的に培養することにより製造できる。かかる培養菌体の調製物を用意するための菌株の培養または基質が添加された状態で行われる菌株の培養は、原則的には一般微生物の培養方法に準じて行うことができるが、通常は液体培養による振とう培養、通気攪拌培養などの好気的条件下で実施するのが好ましい。
培養に用いられる培地としては、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属またはミクロモノスポラセアエ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）科に属する微生物が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、半合成培地、天然培地などいずれも利用可能である。培地組成としては炭素源としての、グルコース、ガラクトース、シュークロース、マルトース、フルクトース、グリセリン、デキストリン、澱粉、糖蜜、大豆油等を単独または組み合わせて用いることができる。
窒素源としては、ファルマメディア、ペプトン、肉エキス、大豆粉、魚粉、グルテンミール、カゼイン、乾燥酵母、アミノ酸、酵母エキス、ＮＺ−ｃａｓｅ、尿素等の有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素源を単独または組み合わせて用いうる。その他、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、燐酸ナトリウム、燐酸カリウム、硫酸銅、硫酸鉄、塩化マンガン、塩化コバルト等の塩類、重金属類塩、ビタミンＢおよびビオチン等のビタミン類、シクロデキストリン類のような包接剤も必要に応じ添加使用することができる。なお、培養中発泡が著しい場合には、各種消泡剤を適宜培地中に添加することができる。消泡剤の添加にあたっては目的物質の生産に悪影響を与えない濃度とする必要がある。
培養条件は該菌株が良好に生育して上記物質を生産し得る範囲内で適宜選択し得る。例えば培地のｐＨは５〜９程度、通常中性付近とするのが望ましい。培養温度は、通常２０〜４０℃、好ましくは２４〜３０℃に保つのが良い。培養日数は１〜８日程度で、通常２〜５日程度である。上述した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更でき、最適条件を選択できるのはいうまでもない。
また、培養菌体調製物は、培養終了後、遠心分離または濾過により分離した菌体またはホモジナイズした菌体を適当な溶液に懸濁して調製する。菌体の懸濁に使用できる溶液は、前記した培地であるか、あるいはトリス−酢酸、トリス−塩酸、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウムなどの緩衝液を単独または混合したものである。緩衝液のｐＨは、５．０〜９．０、好ましくは６．０〜７．５である。
基質となる１１１０７Ｂ物質は、粉末のままか、あるいは水溶性有機溶媒、例えばエタノール、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシドなどに溶解して培養液または菌体の懸濁液に添加することができ、その添加量は、例えば、培養液の場合、培養液１Ｌ当り５０〜５０００ｍｇが好ましい。基質添加後は、２０〜３１℃で約１〜５日間、振とうあるいは通気攪拌などの操作を行い、好気的条件下で反応を進行させることにより基質である１１１０７Ｂ物質を目的の１１１０７Ｄ物質に変換することができる。
次に、工程（Ｂ）において、前記工程（Ａ）で得られたインキュベーション処理液から目的の１１１０７Ｄ物質を採取する。１１１０７Ｄ物質を工程（Ａ）の反応混合物から単離するには、一般に微生物代謝産物を単離するために用いられる種々の既知精製手段を選択、組合せて行うことができる。例えば、メタノール、エタノール、ブタノール、アセトン、酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、トルエン等を用いた有機溶媒抽出、各種のイオン交換クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０等を用いたゲル濾過クロマトグラフィー、ダイヤイオンＨＰ−２０等の疎水性吸着樹脂、活性炭、シリカゲル等による吸着クロマトグラフィー、もしくは薄層クロマトグラフィーによる吸脱着処理、あるいは逆相カラム等を用いた高速液体クロマトグラフィー等を、単独あるいは適宜組合せ、場合により反復使用することにより、分離精製することができる。

以下、本発明について具体例を挙げてより詳細に説明するが、本発明をこれらの例に限定することを意図するものではない。なお、下記の例中のパーセント（％）は、特に断りのない限り、重量パーセント（％（ｗ／ｖ））を示す。
参考例１（原料である１１１０７Ｂ物質の製造）
ストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｍｅｒ−１１１０７株（ＦＥＲＭ ＢＰ−７８１２）の斜面培養（ＩＳＰ−２培地）から１白金耳を５０ｍｌの種母培地［グルコース２．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）１．０％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、炭酸カルシウム０．３２％、殺菌前ｐＨ６．８］を入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２８℃で２日間培養して第一段種母培養液を得た。この培養液０．１ｍｌを同じ種母培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２８℃で１日間培養して第二段種母培養液を得た。このようにして得た第二段種母培養液８００ｍｌを生産培地［可溶性澱粉５．０％、ファルマメディア０．８％、グルテンミール０．８％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム０．１％、殺菌前ｐＨ６．８］１００Ｌを入れた２００Ｌタンクに接種し、培養温度２８℃で攪拌数９０ｒｐｍ、通気量１．０ｖｖｍ、内圧２０ｋＰａの条件で５日間通気攪拌培養を行って培養液を得た。
このようにして得た培養液の一部（１０Ｌ）を１０Ｌの１−ブタノールにて抽出後、ブタノール層を減圧乾固し、１００ｇの粗活性画分を得た。この粗活性画分をセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製、１５００ｍｌ）上に添加し、テトラヒドロフラン−メタノール（１：１）の溶媒で溶出した。５４０ｍｌから６６０ｍｌまでに溶出した画分を減圧下で濃縮乾固し、残渣（６６０ｍｇ）を得た。さらにこの残渣を酢酸エチルおよびメタノール（９：１；ｖ／ｖ）の混液に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ−２００、５０ｇ）に付した。このカラムをｎ−ヘキサンおよび酢酸エチル（１：９；ｖ／ｖ）の混液（２Ｌ）で溶出し、４６８ｍｌから１２６０ｍｌまでに溶出した画分を集め、減圧下で濃縮し、粗活性画分を２５ｍｇ得た。
得られた粗活性画分を下記のＨＰＬＣ分取条件（Ａ）で分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、保持時間３４分に溶出される画分を集め、アセトニトリルを留去後、下記ＨＰＬＣ分取条件（Ｂ）にてその画分をＨＰＬＣによる脱塩を行うことにより１１１０７Ｂ物質（保持時間：３７分）を６ｍｇ得た。
ＨＰＬＣ分取条件（Ａ）
カラム：ＹＭＣ−ＰＡＣＫ ＯＤＳ−ＡＭ ＳＨ−３４３−５ＡＭ，φ２０ｍｍ×２５０ｍｍ（ワイエムシー社製）
温度：室温
流速：１０ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：アセトニトリル／０．１５％リン酸一カリウム（ｐＨ３．５）（２：８〜８：２，ｖ／ｖ，０〜５０分，リニアグラジェント）
ＨＰＬＣ分取条件（Ｂ）
カラム：ＹＭＣ−ＰＡＣＫ ＯＤＳ−ＡＭ ＳＨ−３４３−５ＡＭ，φ２０ｍｍ×２５０ｍｍ（ワイエムシー社製）
温度：室温
流速：１０ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：メタノール／水（２：８〜１０：０，ｖ／ｖ，０〜４０分，リニアグラジェント）
実施例１（ＡＢ−１７０４株の取得）
土壌から分離された菌株の斜面培地［可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、魚肉エキス（和光純薬工業（株）製）０．１％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．１％、ＮＺ−ｃａｓｅ（フムコ・シェフィールド・ケミカル社製）０．２％、塩化ナトリウム０．２％、炭酸カルシウム０．１％、寒天（和光純薬工業（株）製）１．６％］から１白金耳を７ｍｌの種母培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％］を入れた６５ｍｌ容の試験管に接種し、２８℃で３日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。
さらに種母培養液０．５ｍｌを７ｍｌの生産培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％］の入った６５ｍｌ容の試験管に植え継ぎ、２８℃で３日間振とう培養機上で培養した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を２５ｍｇ／ｍｌエタノール溶液として調製し、０．２ｍｌ添加した。添加後、２８℃で４８時間振とうし、変換反応を行った。反応後、下記のＨＰＬＣ分析条件（ａ）でＨＰＬＣ分析を行い、反応混合物中に１１１０７Ｄ物質が生成している株、ＡＢ−１７０４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１）を取得した。
ＨＰＬＣ分析条件（ａ）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＳＧ１２０，φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（資生堂（株）製）
温度：４０℃
流速：１ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：アセトニトリル／０．１５％リン酸一カリウム（ｐＨ３．５）（３：７〜５：５，ｖ／ｖ，０〜１８分，リニアグラジエント），アセトニトリル／０．１５％リン酸一カリウム（ｐＨ３．５）（５：５〜８５：１５，ｖ／ｖ，１８〜２２分，リニアグラジエント）
保持時間：１１１０７Ｄ物質 ９．９分、１１１０７Ｂ物質 １９．４分
実施例２（Ａ−１５４４株およびＡ−１５４５株の取得）
土壌から分離された菌株の斜面培地（イースト・麦芽寒天培地）から１白金耳を２０ｍｌの種母培地［可溶性澱粉２．４％、グルコース０．１％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）０．５％、牛肉エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）０．３％、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）０．５％、トリプトン・ペプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）０．５％、炭酸カルシウム０．４％］を入れた２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２８℃で３日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。
さらに種母培養液０．６ｍｌを６０ｍｌの生産培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース２．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、炭酸カルシウム０．３２％、硫酸銅０．０００５％、塩化マンガン０．０００５％、硫酸亜鉛０．０００５％、殺菌前ｐＨ７．４］の入った５００ｍｌ容の三角フラスコに植え継ぎ、２８℃で４日間振とう培養機上で培養した。得られた培養液２ｍｌを１５ｍｌ試験管に分注した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を２０ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液として調製し、０．０５ｍｌ添加した。添加後２８℃で２３時間振とうし、変換反応を行った。反応後、下記のＨＰＬＣ分析条件（ｂ）でＨＰＬＣ分析を行い、反応混合物中に１１１０７Ｄ物質が生成している株、Ａ−１５４４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４６）およびＡ−１５４５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４７）を取得した。
ＨＰＬＣ分析条件（ｂ）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＳＧ１２０，φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（資生堂（株）製）
温度：４０℃
流速：１ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：アセトニトリル／水（５０：５０，ｖ／ｖ）アイソクラティック
保持時間：１１１０７Ｂ物質 ７．２分、１１１０７Ｄ物質 ３．６分
実施例３（フラスコスケールにおけるＡＢ−１７０４株による変換）
土壌から分離されたストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１）の斜面培地［可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、魚肉エキス（和光純薬工業（株）製）０．１％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．１％、ＮＺ−ｃａｓｅ（フムコ・シェフィールド・ケミカル社製）０．２％、塩化ナトリウム０．２％、炭酸カルシウム０．１％、寒天（和光純薬工業（株）製）１．６％］から１白金耳を１００ｍｌの種母培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％］を入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２８℃で３日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに１００ｍｌの生産培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％］の入った５００ｍｌ容の三角フラスコ１５０本に種母培養液を２ｍｌずつ植え継ぎ、２８℃で２日間振とう培養機上で培養した。
得られた培養液（１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ、１５０本）に、２０ｍｇ／ｍｌエタノール溶液として調製した、基質である１１１０７Ｂ物質をそれぞれ０．４４ｍｌ添加した。添加後、２８℃で９時間振とうし、変換反応を行った。反応終了後、培養液を集め、２７００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離によって培養上清と菌体に分離した。菌体は５Ｌのメタノールで抽出後、ろ過してメタノール抽出液を得た。メタノール抽出液から減圧下でメタノールを留去した後、培養上清と合わせて、１０Ｌの酢酸エチルにて抽出した。得られた酢酸エチル溶液を減圧下で濃縮し、２０９０ｍｇの粗活性画分を得た。この粗活性画分をテトラヒドロフラン−メタノール（１：１，ｖ／ｖ）の混液４ｍｌおよび５０％アセトニトリル水溶液６ｍｌに溶解し、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（ワイエムシー社製、ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ５０ φ３．６ｃｍ×４３ｃｍ）に付し、４０％アセトニトリル水溶液で溶出した。３３６ｍｌから４０８ｍｌまでに溶出した画分を減圧下で濃縮乾固することにより５６０ｍｇの残渣を得た。さらにこの残渣を５０％メタノール水溶液１０ｍｌに溶解し、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（ワイエムシー社製ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ５０ φ３．６ｃｍ×４０ｃｍ）に付し、５０％メタノール水溶液で溶出した。１３４４ｍｌから１８２４ｍｌまでに溶出した画分を減圧下で濃縮乾固することにより、１１１０７Ｄ物質２５２ｍｇを得た。
実施例４（フラスコスケールにおけるＡ−１５４５株による変換）
Ａ−１５４５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４７）の斜面培地（イースト・麦芽寒天培地）から１白金耳を２５ｍｌの種母培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース２．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、炭酸カルシウム０．３２％、殺菌前ｐＨ７．４］を入れた２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２８℃で２日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。この培養液０．７５ｍｌを２ｍｌ容のセラムチューブ（住友ベークライト（株）製）に分注し、同量の４０％グリセロール水溶液を添加し、攪拌後−７０℃で凍結し、凍結種母を作製した。この凍結種母を融解し、そのうち０．２５ｍｌを２５ｍｌの種母培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース２．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、炭酸カルシウム０．３２％、殺菌前ｐＨ７．４］を入れた２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２８℃で２日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに種母培養液０．５ｍｌを１００ｍｌの生産培地［可溶性澱粉２．０％、グルコース２．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、炭酸カルシウム０．３２％、殺菌前ｐＨ７．４］の入った５００ｍｌ容の三角フラスコに植え継ぎ、２８℃で３日間振とう培養機上で培養した。
得られた培養液（１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ、１０本）、それぞれについて３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を行い集菌し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１００ｍｌに懸濁した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を１００ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液として調製し、それぞれ１ｍｌ添加した。添加後、２８℃で２４時間振とうし、変換反応を行った。反応終了後、反応液を集め、５０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離によって、上清と菌体に分離した。上清は１Ｌの酢酸エチルにて抽出した。菌体は５００ｍｌのメタノールで抽出後、ろ過してメタノール抽出液を得た。メタノール抽出液から減圧下でメタノールを留去した後、１Ｌの酢酸エチルで抽出した。それぞれの酢酸エチル層を水洗し、無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、合わせて減圧下で濃縮し、９３７ｍｇの粗画分を得た。この粗画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０，５０ｇ）に付し、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサン（９０：１０；ｖ／ｖ）の混液１２００ｍｌで溶出し、１１１０７Ｄ物質を含む画分２３４ｍｇを得た。得られた活性画分を下記分取条件（Ｃ）で分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、得られる溶出液を下記の分析条件（ｃ）でＨＰＬＣ分析した。こうして得られた１１１０７Ｄ物質を含む画分から、溶媒を留去することにより、１１１０７Ｄ物質８０ｍｇを得た。
ＨＰＬＣ分取条件（Ｃ）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＵＧ１２０，φ３０ｍｍ×２５０ｍｍ（資生堂（株）製）
流速：２０ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：アセトニトリル／水（３０：７０，ｖ／ｖ）アイソクラティック
ＨＰＬＣ分析条件（ｃ）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＳＧ１２０，φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ（資生堂（株）製）
温度：４０℃
流速：１ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：アセトニトリル／水（３５：６５，ｖ／ｖ）アイソクラティック
保持時間：１１１０７Ｄ物質 ７．８分
実施例５（フラスコスケールにおけるＡ−１５４４株による変換）
実施例４と同様の方法にて得られたＡ−１５４４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４６）の培養液（１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ、１０本）、それぞれについて、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を行い集菌し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１００ｍｌに懸濁した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を１００ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液として調製し、それぞれ１ｍｌ添加した。添加後、２８℃で２４時間振とうし、変換反応を行った。反応終了後、反応液を集め、５０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離によって、上清と菌体に分離した。上清は１Ｌの酢酸エチルにて抽出した。菌体は５００ｍｌのアセトンで抽出後、ろ過してアセトン抽出液を得た。アセトン抽出液から減圧下でアセトンを留去した後、１Ｌの酢酸エチルで抽出した。それぞれの酢酸エチル層を水洗し、無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、合わせて減圧下で濃縮し、９４５ｍｇの粗画分を得た。この粗画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０，５０ｇ）に付し、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサン（５０：５０；ｖ／ｖ）の混液１００ｍｌ、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサン（７５：２５；ｖ／ｖ）の混液２００ｍｌ、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサン（９０：１０；ｖ／ｖ）の混液（６００ｍｌ）で溶出し、１１１０７Ｄ物質を含む画分４６３ｍｇを得た。得られた画分を実施例４記載の分取条件（Ｃ）で分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、得られる溶出液を実施例４記載の分析条件（ｃ）でＨＰＬＣ分析した。こうして得られた１１１０７Ｄ物質を含む画分から、溶媒を留去することにより、１１１０７Ｄ物質３０４ｍｇを得た。
実施例６（Ｆ−１５２９株およびＦ−１５３０株の取得）
土壌から分離された菌株の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から１白金耳を２０ｍｌの種母培地（馬鈴薯澱粉２．０％、グルコース１．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％）を入れた２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２５℃で３日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに種母培養液０．６ｍｌを６０ｍｌの生産培地（馬鈴薯澱粉２．０％、グルコース１．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％）の入った５００ｍｌ容の三角フラスコに植え継ぎ、２８℃で４日間振とう培養機上で培養した。得られた培養液２ｍｌを１５ｍｌ試験管に分注した。それぞれについて３０００ｒｐｍ、５分間の遠心分離によって集菌し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２ｍｌに懸濁した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を２０ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液として調製し、それぞれ０．０５ｍｌ添加した。添加後２８℃で２３時間振とうし、水酸化反応を行った。反応後、実施例４記載の分析条件（ｃ）でＨＰＬＣ分析を行い、１１１０７Ｄ物質のピークが現れる株、Ｆ−１５２９株（ＦＥＲＭ ＢＰ８５４７）およびＦ−１５３０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８）を取得した。
実施例７（フラスコスケールにおけるＦ−１５２９株による変換）
モルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４７）の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から１白金耳を２５ｍｌの種母培地［馬鈴薯澱粉２．０％、グルコース１．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％］を入れた２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２５℃で２日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに種母培養液０．６ｍｌを６０ｍｌの生産培地［馬鈴薯澱粉２．０％、グルコース１．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（社）製）２．０％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％］の入った５００ｍｌ容の三角フラスコに植え継ぎ、２５℃で３日間振とう培養機上で培養した。
得られた培養液（６０ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ、１８本）をそれぞれ３０００ｒｐｍ、５分間の遠心分離によって集菌し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）６０ｍｌに懸濁した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を１００ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液として調製し、それぞれ０．６ｍｌ添加した。添加後、２５℃で２２時間振とうし、変換反応を行った。反応終了後、５０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離によって、ろ液と菌体に分離した。上清は１Ｌの酢酸エチルにて抽出した。菌体は５００ｍｌのアセトンで抽出後、ろ過してアセトン抽出液を得た。アセトン抽出液から減圧下でアセトンを留去した後、１Ｌの酢酸エチルで抽出した。それぞれの酢酸エチル層を水洗し、無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、合わせて減圧下で濃縮し、１１１０７Ｄ物質を含む１．２１ｇの粗画分を得た。この１１１０７Ｄ物質を含む粗画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０，５０ｇ）に付し、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサン（９０：１０；ｖ／ｖ）の混液１２００ｍｌで溶出し、１１１０７Ｄ物質を含む画分３６９ｍｇを得た。
得られた画分を実施例４に記載したＨＰＬＣ分取条件（Ｃ）で分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、溶出される１１１０７Ｄ物質を含む画分を得た後、溶媒を留去することにより、１１１０７Ｄ物質１８０ｍｇを得た。
実施例８（フラスコスケールにおけるＦ−１５３０株による変換）
モルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５３０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８）の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から１白金耳を２５ｍｌの種母培地［馬鈴薯澱粉２．０％、グルコース１．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％］を入れた２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２５℃で２日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに種母培養液０．６ｍｌを６０ｍｌの生産培地［馬鈴薯澱粉２．０％、グルコース１．０％、大豆粉（エスサンミート、味の素（株）製）２．０％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％］の入った５００ｍｌ容の三角フラスコに植え継ぎ、２５℃で３日間振とう培養機上で培養した。
得られた培養液（６０ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ、１８本）をそれぞれ３０００ｒｐｍ、５分間の遠心分離によって集菌し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）６０ｍｌに懸濁した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を１００ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液として調製し、それぞれ０．６ｍｌ添加した。添加後、２５℃で２２時間振とうし、変換反応を行った。反応終了後、５０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離によって、ろ液と菌体に分離した。上清は１Ｌの酢酸エチルにて抽出した。菌体は５００ｍｌのアセトンで抽出後、ろ過してアセトン抽出液を得た。アセトン抽出液を減圧下でアセトンを留去した後、１Ｌの酢酸エチルで抽出した。それぞれの酢酸エチル層を水洗し、無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、合わせて減圧下で濃縮し、１１１０７Ｄ物質を含む０．８９ｇの粗画分を得た。この１１１０７Ｄ物質を含む粗画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０，５０ｇ）に付し、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサン（９０：１０；ｖ／ｖ）の混液１２００ｍｌ、次いで酢酸エチル５００ｍｌで溶出し、１１１０７Ｄ物質を含む粗画分１６３ｍｇを得た。得られた画分を実施例４に記載したＨＰＬＣ分取条件（Ｃ）で分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、溶出される１１１０７Ｄ物質を含む画分を得た後、溶媒を留去することにより、１１１０７Ｄ物質３０ｍｇを得た。
実施例９（ＡＢ−１８９６株の収得）
土壌から分離された菌株の斜面培地［可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、魚肉エキス（和光純薬工業（株）製）０．１％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．１％、ＮＺ−ｃａｓｅ（フムコ・シェフィールド・ケミカル社製）０．２％、塩化ナトリウム０．２％、炭酸カルシウム０．１％、寒天（和光純薬工業（株）製）１．６％］から１白金耳を５ｍｌの種母培地（可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬社製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％）を入れた６５ｍｌ容の試験管に接種し、２８℃で１０日間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに種母培養液０．１ｍｌを５ｍｌの生産培地（可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％）の入った６５ｍｌ容の試験管に植え継ぎ、２８℃で３日間振とう培養機上で培養した。次に基質である１１１０７Ｂ物質を４０ｍｇ／ｍｌエタノール溶液として調製し、それぞれ０．０５ｍｌ添加した。添加後、２８℃で２４時間振とうし、水酸化反応を行った。反応後、下記の分析条件（ｄ）でＨＰＬＣ分析を行い、１１１０７Ｄ物質が現れる株、ＡＢ−１８９６株を取得した。
ＨＰＬＣ分析条件（ｄ）
カラム：ＵＮＩＳＯＮ ＵＫ−Ｃ１８，φ４．６ｍｍ×５０ｍｍ（Ｉｍｔａｋｔ社製）
温度：３０℃
流速：２ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：水／アセトニトリル／ギ酸（１０００：１０：１〜１０：１０００：１，ｖ／ｖ／ｖ、０〜４分，リニアグラジエント）
保持時間：１１１０７Ｄ物質 ２．５分
実施例１０（試験管スケールにおけるＡＢ−１８９６株による変換）
ＡＢ−１８９６株の斜面培地（可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、魚肉エキス（和光純薬工業（株）製）０．１％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．１％、ＮＺ−ｃａｓｅ（フムコ・シェフィールド・ケミカル社製）０．２％、塩化ナトリウム０．２％、炭酸カルシウム０．１％、寒天（和光純薬工業（株）製）１．６％）から１白金耳を５ｍｌの種母培地（可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％）を入れた６５ｍｌ容の試験管に接種し、２８℃で１０間振とう培養機上で培養して種母培養液を得た。さらに種母培養液０．１ｍｌを５ｍｌの生産培地（可溶性澱粉２．０％、グルコース１．０％、ポリペプトン（日本製薬（株）製）０．５％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業（株）製）０．５％、炭酸カルシウム０．１％）の入った６５ｍｌ容の試験管に植え継ぎ、２８℃で３日間振とう培養機上で培養した。
得られた培養液（５ｍｌ／６５ｍｌ容試験管、１本）に基質である１１１０７Ｂ物質を４０ｍｇ／ｍｌエタノール溶液として調製し、０．０５ｍｌ添加した。添加後、２８℃で２４時間振とうし、水酸化反応を行った。得られた培養液を３ｍｌ分取し、２ｍｌの１−ブタノールを加えて振とうした後、３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離した。得られた上清を留去し、２ｍｌのメタノール溶液として、下記のＨＰＬＣ分析条件（ｅ）およびＨＰＬＣ分析条件（ｆ）にてＨＰＬＣ分析を行い、反応混合物中に１１１０７Ｄ物質が生成していることを確認した。
ＨＰＬＣ分析条件（ｅ）
カラム：ＵＮＩＳＯＮ ＵＫ−Ｃ１８，φ４．６ｍｍ×５０ｍｍ（Ｉｍｔａｋｔ社製）
温度：４０℃
流速：２ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：アセトニトリル／０．０１％トリフルオロ酢酸（２：８〜５：５，ｖ／ｖ，０〜１０分，リニアグラジエント）
保持時間：１１１０７Ｄ物質６．１分
ＨＰＬＣ分析条件（ｆ）
カラム：ＵＮＩＳＯＮ ＵＫ−Ｃ１８，φ４．６ｍｍ×５０ｍｍ（Ｉｍｔａｋｔ社製）
温度：４０℃
流速：２ｍｌ／分
検出：２４０ｎｍ
溶出液：メタノール／０．０１％トリフルオロ酢酸（４：６〜７：３，ｖ／ｖ，０〜１０分，リニアグラジエント）
保持時間：１１１０７Ｄ物質６．１分

Claims (7)

1. 式（Ｉ）
   

   

   で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質の、式（ＩＩ）
   

   

   で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への生物学的変換方法による、式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質の製造方法であって、下記工程（Ａ）及び（Ｂ）を含むことを特徴とする製造方法。
   （Ａ）前記生物学的変換方法を行いうるものであって、かつ、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属またはミクロモノスポラセアエ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）科に属する菌株またはその培養菌体の調製物の存在下で、式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質をインキュベーション処理する工程。
   （Ｂ）工程（Ａ）で得られるインキュベーション処理液から式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質を採取する工程。
2. 前記モルティエレラ属に属する菌株がモルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４７）またはＦ−１５３０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８）である請求項１記載の製造方法。
3. 前記ストレプトミセス属に属する菌株がストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１）、Ａ−１５４４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４６）またはＡ−１５４５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８４４７）である請求項１記載の製造方法。
4. 前記ミクロモノスポラセアエ科に属する菌株がＡＢ−１８９６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５０）である請求項１記載の製造方法。
5. 前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への変換能を有する、ストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＢ−１７０４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５１）。
6. 前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への変換能を有する、モルティエレラ エスピー（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）Ｆ−１５２９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４７）またはＦ−１５３０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５４８）。
7. 前記式（Ｉ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｂ物質から前記式（ＩＩ）で示されるマクロライド系化合物１１１０７Ｄ物質への変換能を有する、ＡＢ−１８９６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−８５５０）。