JP3339235B2 - 抗生物質ｗａｐ−８２９４ａ、その製造法及び抗菌剤 - Google Patents
抗生物質ｗａｐ−８２９４ａ、その製造法及び抗菌剤Info
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- JP3339235B2 JP3339235B2 JP01604495A JP1604495A JP3339235B2 JP 3339235 B2 JP3339235 B2 JP 3339235B2 JP 01604495 A JP01604495 A JP 01604495A JP 1604495 A JP1604495 A JP 1604495A JP 3339235 B2 JP3339235 B2 JP 3339235B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は病原微生物による感染症
の治療剤として有用な新規抗生物質ＷＡＰ−８２９４
Ａ、その製造法、及び用途に関する。
の治療剤として有用な新規抗生物質ＷＡＰ−８２９４
Ａ、その製造法、及び用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】細菌感染症における化学療法剤の歴史は
キニーネ、サルバルサンの合成やペニシリンの発見に始
まり、これまで人類に多大な恩恵を与えてきたが、近
年、ＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）感染症
に代表されるごとく、バンコマイシン、ハベカシン以外
の化学療法剤が効を奏しない耐性菌が出現し医療現場で
の混迷を招き大きな社会問題になっている。バンコマイ
シンは１９５８年アメリカのイーライリリー社によって
開発された抗生物質として現在ＭＲＳＡ感染症の治療に
使用されているが、腎障害や肝障害さらには第８脳神経
障害をしばしば伴うこともあり、また効力の面でも殺菌
到達時間が遅いうえに、再び耐性菌の出現が懸念されつ
つある。
キニーネ、サルバルサンの合成やペニシリンの発見に始
まり、これまで人類に多大な恩恵を与えてきたが、近
年、ＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）感染症
に代表されるごとく、バンコマイシン、ハベカシン以外
の化学療法剤が効を奏しない耐性菌が出現し医療現場で
の混迷を招き大きな社会問題になっている。バンコマイ
シンは１９５８年アメリカのイーライリリー社によって
開発された抗生物質として現在ＭＲＳＡ感染症の治療に
使用されているが、腎障害や肝障害さらには第８脳神経
障害をしばしば伴うこともあり、また効力の面でも殺菌
到達時間が遅いうえに、再び耐性菌の出現が懸念されつ
つある。
【０００３】一方、ハベカシンはアミノグリコシド系抗
生物質カナマイシンを骨格として化学的に誘導され、優
れた抗菌力と各種耐性菌にも有効である点で数少ないＭ
ＲＳＡ感染症の化学療法剤として使用されているが、ア
ミノグリコシド系抗生物質本来の副作用である重篤な腎
障害と第８脳神経障害併発の危険性を招くこともあり必
ずしも医療の立場から安心して使用できる抗生物質では
ない。このような実状に鑑み、低毒性で殺菌作用が短時
間で発揮でき、かつ副作用の少ない新しい化学療法剤の
発見または創製が常に要望されておりそのために多くの
研究が行われている。
生物質カナマイシンを骨格として化学的に誘導され、優
れた抗菌力と各種耐性菌にも有効である点で数少ないＭ
ＲＳＡ感染症の化学療法剤として使用されているが、ア
ミノグリコシド系抗生物質本来の副作用である重篤な腎
障害と第８脳神経障害併発の危険性を招くこともあり必
ずしも医療の立場から安心して使用できる抗生物質では
ない。このような実状に鑑み、低毒性で殺菌作用が短時
間で発揮でき、かつ副作用の少ない新しい化学療法剤の
発見または創製が常に要望されておりそのために多くの
研究が行われている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
の要望に応えることのできる抗菌活性を有する新規な抗
生物質を提供することである。本発明の他の目的は、よ
り低毒性すなわち選択毒性の優れた臨床上有用な化学療
法剤を提供することである。
の要望に応えることのできる抗菌活性を有する新規な抗
生物質を提供することである。本発明の他の目的は、よ
り低毒性すなわち選択毒性の優れた臨床上有用な化学療
法剤を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは有用な新規
抗生物質を発見すべく鋭意研究を行い、その結果新規な
微生物としてリソバクター属に属する菌株を土壌中より
分離することに成功し、この菌株が文献未記載の抗生物
質を産生することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。
抗生物質を発見すべく鋭意研究を行い、その結果新規な
微生物としてリソバクター属に属する菌株を土壌中より
分離することに成功し、この菌株が文献未記載の抗生物
質を産生することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。
【０００６】本発明は、新規リソバクター属に属する菌
株の培養液中に見出される新規抗生物質ＷＡＰ−８２９
４Ａである。この抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは、さら
に少なくとも７種類の成分ＡＸ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ
4 、Ａ5 、Ａ6 に分画され、ＡＸはさらに少なくとも１
３種類の成分ＡＸ−１、ＡＸ−２、ＡＸ−３、ＡＸ−
４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、ＡＸ−８、ＡＸ−
９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−１２及びＡＸ−１
３に分画される。この明細書中、「抗生物質ＷＡＰ−８
２９４Ａ」とは、上記ＡＸ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ4 、
Ａ5 、Ａ6 、ＡＸ−１、ＡＸ−２、ＡＸ−３、ＡＸ−
４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、ＡＸ−８、ＡＸ−
９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−１２、ＡＸ−１３
又はこれらの２種以上の混合物を意味するものとする。
本発明はまた、遊離形態の抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ
の他、その薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、硫
酸塩、メタンスルホン酸塩等も包含する。これらの物質
はグラム陽性の細菌、特にメチシリン耐性黄色ブドウ球
菌（ＭＲＳＡ菌）に対し強い抗菌力を有する。
株の培養液中に見出される新規抗生物質ＷＡＰ−８２９
４Ａである。この抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは、さら
に少なくとも７種類の成分ＡＸ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ
4 、Ａ5 、Ａ6 に分画され、ＡＸはさらに少なくとも１
３種類の成分ＡＸ−１、ＡＸ−２、ＡＸ−３、ＡＸ−
４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、ＡＸ−８、ＡＸ−
９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−１２及びＡＸ−１
３に分画される。この明細書中、「抗生物質ＷＡＰ−８
２９４Ａ」とは、上記ＡＸ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ4 、
Ａ5 、Ａ6 、ＡＸ−１、ＡＸ−２、ＡＸ−３、ＡＸ−
４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、ＡＸ−８、ＡＸ−
９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−１２、ＡＸ−１３
又はこれらの２種以上の混合物を意味するものとする。
本発明はまた、遊離形態の抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ
の他、その薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、硫
酸塩、メタンスルホン酸塩等も包含する。これらの物質
はグラム陽性の細菌、特にメチシリン耐性黄色ブドウ球
菌（ＭＲＳＡ菌）に対し強い抗菌力を有する。
【０００７】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは、Ｃ18逆相
シリカゲル高速液体クロマトグラフィーの溶出条件〔カ
ラム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm）、移動相：
０．０５％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：
水（４５：５５）、検出波長：ＵＶ２１４nm、流速：１
ml／分〕で得られる保持時間が、それぞれ４．０〜６．
１分、８．０分、１１．１分、１２．５分、１６．５
分、１７．９分及び１８．８分の成分：ＡＸ、Ａ1 、Ａ
2 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ5 及びＡ6 に分画される（図１）。
この画分ＡＸは、さらに図６に示すように、Ｃ18逆相シ
リカゲル高速液体クロマトグラフィーの溶出条件〔カラ
ム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm）、移動相：0.
０５％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：水
（３７：６３）、検出波長：ＵＶ２１４nm、流速：１ml
／分〕で、5.３分、5.９分、6.２分、6.５分、6.９分、
7.３分、8.１分、9.３分、9.８分、１1.３分、１2.１
分、１3.７分、１5.０分の成分：ＡＸ−１、ＡＸ−２、
ＡＸ−３、ＡＸ−４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、
ＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−
１２、ＡＸ−１３に分画される。
シリカゲル高速液体クロマトグラフィーの溶出条件〔カ
ラム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm）、移動相：
０．０５％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：
水（４５：５５）、検出波長：ＵＶ２１４nm、流速：１
ml／分〕で得られる保持時間が、それぞれ４．０〜６．
１分、８．０分、１１．１分、１２．５分、１６．５
分、１７．９分及び１８．８分の成分：ＡＸ、Ａ1 、Ａ
2 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ5 及びＡ6 に分画される（図１）。
この画分ＡＸは、さらに図６に示すように、Ｃ18逆相シ
リカゲル高速液体クロマトグラフィーの溶出条件〔カラ
ム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm）、移動相：0.
０５％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：水
（３７：６３）、検出波長：ＵＶ２１４nm、流速：１ml
／分〕で、5.３分、5.９分、6.２分、6.５分、6.９分、
7.３分、8.１分、9.３分、9.８分、１1.３分、１2.１
分、１3.７分、１5.０分の成分：ＡＸ−１、ＡＸ−２、
ＡＸ−３、ＡＸ−４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、
ＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−
１２、ＡＸ−１３に分画される。
【０００８】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 は、紫外線吸収スペクトル（水中）におい
て、λmax ２７５nm、２８０nm、２８７nmを与える。抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 の紫外線吸収スペクトルを
図２に示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 は、後述する酸加水分解物の確認から分子中
にクロモフォアーとしてトリプトファンを含む。抗生物
質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 の赤外線吸収
スペクトルは、３３００cm-1にＯＨ、ＮＨ、１７２０cm
-1〜１７１５cm-1にカルボキシル基またはエステルカル
ボニル基、１６３６cm-1および１５４１cm-1にアミド結
合、さらに１２０７、１１３７cm-1にＣ−Ｏの伸縮振動
に起因する吸収を示すが、特にその他の特徴的な吸収は
認められない。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 の赤外線
吸収スペクトルを図３に示す。
Ａ2 、Ａ4 は、紫外線吸収スペクトル（水中）におい
て、λmax ２７５nm、２８０nm、２８７nmを与える。抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 の紫外線吸収スペクトルを
図２に示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 は、後述する酸加水分解物の確認から分子中
にクロモフォアーとしてトリプトファンを含む。抗生物
質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 の赤外線吸収
スペクトルは、３３００cm-1にＯＨ、ＮＨ、１７２０cm
-1〜１７１５cm-1にカルボキシル基またはエステルカル
ボニル基、１６３６cm-1および１５４１cm-1にアミド結
合、さらに１２０７、１１３７cm-1にＣ−Ｏの伸縮振動
に起因する吸収を示すが、特にその他の特徴的な吸収は
認められない。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 の赤外線
吸収スペクトルを図３に示す。
【０００９】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 の 1Ｈ−ＮＭＲは、数多くのメチル、メチレ
ン、メチン、および複素環または芳香環に由来する複雑
なプロトンシグナルを示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４
Ａ2 の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図４に示す。抗生物質
ＷＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 のＦＡＢ−マススペ
クトルの測定から、ＷＡＰ−８２９４Ａ1 の（Ｍ＋Ｈ）
+ イオンは１５４８．９、Ａ2 の（Ｍ＋Ｈ）+ イオンは
１５６２．９、Ａ4 の（Ｍ＋Ｈ）+ は１５７６．９を与
えること、及びＡ1 、Ａ2 、Ａ4 各成分のナトリウム溶
融試験の結果から、炭素、水素、酸素、窒素からなる化
合物であることが判明した。また後述するすべての構成
アミノ酸および構成脂肪酸の構造決定とそれらの存在モ
ル比、さらには高分解能ＦＡＢ−マススペクトルの測定
結果を考え合せると、抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 に対して表１に示す分子式が提出される。
Ａ2 、Ａ4 の 1Ｈ−ＮＭＲは、数多くのメチル、メチレ
ン、メチン、および複素環または芳香環に由来する複雑
なプロトンシグナルを示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４
Ａ2 の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図４に示す。抗生物質
ＷＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 のＦＡＢ−マススペ
クトルの測定から、ＷＡＰ−８２９４Ａ1 の（Ｍ＋Ｈ）
+ イオンは１５４８．９、Ａ2 の（Ｍ＋Ｈ）+ イオンは
１５６２．９、Ａ4 の（Ｍ＋Ｈ）+ は１５７６．９を与
えること、及びＡ1 、Ａ2 、Ａ4 各成分のナトリウム溶
融試験の結果から、炭素、水素、酸素、窒素からなる化
合物であることが判明した。また後述するすべての構成
アミノ酸および構成脂肪酸の構造決定とそれらの存在モ
ル比、さらには高分解能ＦＡＢ−マススペクトルの測定
結果を考え合せると、抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 に対して表１に示す分子式が提出される。
【００１０】
【表１】 表１ Ａ1 Ａ2 Ａ4 FAB マス (M+H)+ 1548.9 1562.9 1576.9 FAB マス (M-H)- 1546.7 1561.2 1575.4 Δマスユニット 14 マスユニット 14 マスユニット A1─────→A2 A2─────→A4 分子量 1547.9 1561.9 1575.9 HR-FAB−マス 1548.8088 1562.8224 1576.8363分子式 C72H109O21N17 C73H111O21N17 C74H113O21N17
【００１１】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2
及びＡ4 は、ニンヒドリン、エールリッヒ、ライドンス
ミス、ヨードベーパー、過マンガン酸カリウム水溶液、
硫酸反応に陽性を示し、ＵＶ２５４nmランプの照射によ
るクエンチングの出現が認められ、モーリッシュ、ドラ
ーゲンドルフ、硝酸銀、塩化第二鉄反応に陰性を示す。
また抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 の
構成アミノ酸を知る目的で、各画分を酸完全加水分解
し、２次元ＴＬＣ及びアミノ酸分析を行った。その結
果、いずれの画分もアスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタ
ミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ロイシン（Ｌ
ｅｕ）、セリン（Ｓｅｒ）、トリプトファン（Ｔｒ
ｐ）、オルニチン（Ｏｒｎ）を含み、他に未知アミノ酸
３個を含むことが判明した。抗生物質ＷＡＰ−８２９４
Ａの２次元ＴＬＣの結果を図５に示す。
及びＡ4 は、ニンヒドリン、エールリッヒ、ライドンス
ミス、ヨードベーパー、過マンガン酸カリウム水溶液、
硫酸反応に陽性を示し、ＵＶ２５４nmランプの照射によ
るクエンチングの出現が認められ、モーリッシュ、ドラ
ーゲンドルフ、硝酸銀、塩化第二鉄反応に陰性を示す。
また抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 の
構成アミノ酸を知る目的で、各画分を酸完全加水分解
し、２次元ＴＬＣ及びアミノ酸分析を行った。その結
果、いずれの画分もアスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタ
ミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ロイシン（Ｌ
ｅｕ）、セリン（Ｓｅｒ）、トリプトファン（Ｔｒ
ｐ）、オルニチン（Ｏｒｎ）を含み、他に未知アミノ酸
３個を含むことが判明した。抗生物質ＷＡＰ−８２９４
Ａの２次元ＴＬＣの結果を図５に示す。
【００１２】さらに未知アミノ酸を決定するため、ＷＡ
Ｐ−８２９４Ａを再び酸加水分解し、未知アミノ酸−
１、未知アミノ酸−２および未知アミノ酸−３を単離し
た。各種機器分析の結果から、未知アミノ酸−１はβ−
ヒドロキシアスパラギン酸、未知アミノ酸−２はＮ−メ
チルバリン、および未知アミノ酸−３はＮ−メチルフェ
ニルアラニンであることが判明した。一方、抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 のそれぞれの酸加水分
解液のエーテル抽出物から、Ａ1 からは３−ヒドロキシ
オクタン酸、Ａ2 からは３−ヒドロキシ−７−メチルオ
クタン酸、Ａ4 からは３−ヒドロキシ−８−メチルノナ
ン酸が得られた。
Ｐ−８２９４Ａを再び酸加水分解し、未知アミノ酸−
１、未知アミノ酸−２および未知アミノ酸−３を単離し
た。各種機器分析の結果から、未知アミノ酸−１はβ−
ヒドロキシアスパラギン酸、未知アミノ酸−２はＮ−メ
チルバリン、および未知アミノ酸−３はＮ−メチルフェ
ニルアラニンであることが判明した。一方、抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 のそれぞれの酸加水分
解液のエーテル抽出物から、Ａ1 からは３−ヒドロキシ
オクタン酸、Ａ2 からは３−ヒドロキシ−７−メチルオ
クタン酸、Ａ4 からは３−ヒドロキシ−８−メチルノナ
ン酸が得られた。
【００１３】さらに、抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ
は、図６に示すＣ18逆相シリカゲル高速液体クロマトグ
ラムから、保持時間ＡＸ−１：5.３分、ＡＸ−２：5.９
分、ＡＸ−３：6.２分、ＡＸ−４：6.５分、ＡＸ−５：
6.９分、ＡＸ−６：7.３分、ＡＸ−７：8.１分、ＡＸ−
８：9.３分、ＡＸ−９：9.８分、ＡＸ−１０：１1.３
分、ＡＸ−１１：１2.１分、ＡＸ−１２：１3.７分、Ａ
Ｘ−１３：１5.０分の少なくとも１３の画分に分離され
た。抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−
９及びＡＸ−１３の各画分の紫外線吸収スペクトル（水
中）は、λmax ２７３nm、２８０nm、２８９nmを与え、
ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−
１３は後述する酸加水分解物の確認から分子中にクロモ
フォアーとして１モルのトリプトファンを含んでいる。
抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８の紫外線吸収スペク
トル（水中）を図７に示す。
は、図６に示すＣ18逆相シリカゲル高速液体クロマトグ
ラムから、保持時間ＡＸ−１：5.３分、ＡＸ−２：5.９
分、ＡＸ−３：6.２分、ＡＸ−４：6.５分、ＡＸ−５：
6.９分、ＡＸ−６：7.３分、ＡＸ−７：8.１分、ＡＸ−
８：9.３分、ＡＸ−９：9.８分、ＡＸ−１０：１1.３
分、ＡＸ−１１：１2.１分、ＡＸ−１２：１3.７分、Ａ
Ｘ−１３：１5.０分の少なくとも１３の画分に分離され
た。抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−
９及びＡＸ−１３の各画分の紫外線吸収スペクトル（水
中）は、λmax ２７３nm、２８０nm、２８９nmを与え、
ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−
１３は後述する酸加水分解物の確認から分子中にクロモ
フォアーとして１モルのトリプトファンを含んでいる。
抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８の紫外線吸収スペク
トル（水中）を図７に示す。
【００１４】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３の各画分の赤外線吸収スペ
クトルは、３３００cm-1にＯＨ、ＮＨ、１７２０cm-1〜
１７１５cm-1にカルボキシル基またはエステルカルボニ
ル基、１６３６cm-1および１５４１cm-1にアミド結合、
さらに１２０７、１１３７cm-1にＣ−Ｏの伸縮振動に起
因する吸収を示すが、特にその他の特徴的な吸収を認め
ない。抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８の赤外線吸収
スペクトルを図８に示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ
Ｘ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３の各画分の 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルは、数多くのメチル、メチレン、メ
チン、および複素環または芳香環に由来する複雑なプロ
トンシグナルを示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−
８の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図９に示す。
８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３の各画分の赤外線吸収スペ
クトルは、３３００cm-1にＯＨ、ＮＨ、１７２０cm-1〜
１７１５cm-1にカルボキシル基またはエステルカルボニ
ル基、１６３６cm-1および１５４１cm-1にアミド結合、
さらに１２０７、１１３７cm-1にＣ−Ｏの伸縮振動に起
因する吸収を示すが、特にその他の特徴的な吸収を認め
ない。抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８の赤外線吸収
スペクトルを図８に示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ
Ｘ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３の各画分の 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルは、数多くのメチル、メチレン、メ
チン、および複素環または芳香環に由来する複雑なプロ
トンシグナルを示す。抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−
８の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図９に示す。
【００１５】ＦＡＢ−マススペクトルの測定から抗生物
質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８の（Ｍ＋Ｈ）+ イオンは１
５４９、ＡＸ−９の（Ｍ＋Ｈ）+ イオン１５４９、ＡＸ
−１３の（Ｍ＋Ｈ）+ イオン１５７７を与えること、及
びＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の各成分のナトリウ
ム溶融試験の結果から、炭素、水素、酸素、窒素からな
る化合物であることが判明した。また、後述するすべて
の構成アミノ酸及び構成脂肪酸の構造決定とそれらの存
在モル比、さらには高分解能ＦＡＢ−マススペクトルの
測定結果を考え合せると、抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ
Ｘ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３に対して表２の分子式
が提出される。
質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８の（Ｍ＋Ｈ）+ イオンは１
５４９、ＡＸ−９の（Ｍ＋Ｈ）+ イオン１５４９、ＡＸ
−１３の（Ｍ＋Ｈ）+ イオン１５７７を与えること、及
びＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の各成分のナトリウ
ム溶融試験の結果から、炭素、水素、酸素、窒素からな
る化合物であることが判明した。また、後述するすべて
の構成アミノ酸及び構成脂肪酸の構造決定とそれらの存
在モル比、さらには高分解能ＦＡＢ−マススペクトルの
測定結果を考え合せると、抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ
Ｘ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３に対して表２の分子式
が提出される。
【００１６】
【表２】 表２ 成 分 ＡＸ−８ ＡＸ−９ ＡＸ−13 FABマス (M+H)+ 1549 1549 1577 FABマス (M-H)- ── 1547 ── -14マスユニット -14マスユニット +14マスユニット Δマスユニット Ａ2 →ＡＸ−８ Ａ2 →ＡＸ−９ Ａ2 →ＡＸ−13 分子量 1548 1548 1576 HR-FAB マス 1548.8079 1548.8065 1576.8324 分子式 C72H109O21N17 C72H109O21N17 C74H113O21N17
【００１７】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３は、ニンヒドリン、エール
リッヒ、ライドンスミス、ヨードベーパー、過マンガン
酸カリウム水溶液、硫酸反応に陽性を示し、ＵＶ２５４
nmランプの照射によるクエンチングの出現が認められ、
モーリッシュ、ドラーゲンドルフ、硝酸銀、塩化第二鉄
反応に陰性を示す。
８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３は、ニンヒドリン、エール
リッヒ、ライドンスミス、ヨードベーパー、過マンガン
酸カリウム水溶液、硫酸反応に陽性を示し、ＵＶ２５４
nmランプの照射によるクエンチングの出現が認められ、
モーリッシュ、ドラーゲンドルフ、硝酸銀、塩化第二鉄
反応に陰性を示す。
【００１８】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３各画分の構成アミノ酸及び構
成脂肪酸を知る目的で、ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の各画分について、それぞれ
酸完全加水分解を行い、２次元ＴＬＣ（セルロースプレ
ート、展開剤１：ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：
２）、展開剤２：ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水
（１５：１０：３：１２）、発色剤（ニンヒドリン）〕
およびアミノ酸分析を行った結果、ＷＡＰ−８２９４Ａ
Ｘのニンヒドリン陽性物質として確認したアミノ酸は、
アスパラギン酸（Ａsp）、グルタミン酸（Ｇlu）、グリ
シン（Ｇly）、β−アラニン（β−Ａla）、ロイシン
（Ｌeu）、セリン（Ｓer）、トリプトファン（Ｔrp）、
オルニチン（Ｏrn）、バリン（Ｖal）、Ｎ−メチルバリ
ン（Ｎ−ＭｅＶal）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（β−ＯＨ−Ａsp）、フェニルアラニン（Ｐhe）、Ｎ−
メチルフェニルアラニン（Ｎ−ＭｅＰhe）であった。
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３各画分の構成アミノ酸及び構
成脂肪酸を知る目的で、ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の各画分について、それぞれ
酸完全加水分解を行い、２次元ＴＬＣ（セルロースプレ
ート、展開剤１：ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：
２）、展開剤２：ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水
（１５：１０：３：１２）、発色剤（ニンヒドリン）〕
およびアミノ酸分析を行った結果、ＷＡＰ−８２９４Ａ
Ｘのニンヒドリン陽性物質として確認したアミノ酸は、
アスパラギン酸（Ａsp）、グルタミン酸（Ｇlu）、グリ
シン（Ｇly）、β−アラニン（β−Ａla）、ロイシン
（Ｌeu）、セリン（Ｓer）、トリプトファン（Ｔrp）、
オルニチン（Ｏrn）、バリン（Ｖal）、Ｎ−メチルバリ
ン（Ｎ−ＭｅＶal）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（β−ＯＨ−Ａsp）、フェニルアラニン（Ｐhe）、Ｎ−
メチルフェニルアラニン（Ｎ−ＭｅＰhe）であった。
【００１９】一方、抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸの酸
完全加水分解液のエーテル抽出物から３−ヒドロキシ−
７−メチルオクタン酸を確認した。抗生物質ＷＡＰ−８
２９４ＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の各画分につい
ても抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸと同様な操作を行
い、二次元ＴＬＣ、アミノ酸分析、さらに酸完全加水分
解液のエーテル抽出物誘導体のＧＣ−Ｍass 分析から表
３に示す各成分の構成アミノ酸および構成脂肪酸を明ら
かにすることができた。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2
の結果も合わせて示す。
完全加水分解液のエーテル抽出物から３−ヒドロキシ−
７−メチルオクタン酸を確認した。抗生物質ＷＡＰ−８
２９４ＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の各画分につい
ても抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸと同様な操作を行
い、二次元ＴＬＣ、アミノ酸分析、さらに酸完全加水分
解液のエーテル抽出物誘導体のＧＣ−Ｍass 分析から表
３に示す各成分の構成アミノ酸および構成脂肪酸を明ら
かにすることができた。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2
の結果も合わせて示す。
【００２０】
【表３】 表３ 各画分のアミノ酸と構成脂肪酸 成分 ＡＸ−８ ＡＸ−９ ＡＸ−１３ Ａ2 （主成分） 構成アミノ酸 Ａsp（１モル） Ａsp（１モル） Ａsp（１モル） Ａsp（１モル） Ｓer（２モル） Ｓer（２モル） Ｓer（２モル） Ｓer（２モル） Ｇlu（１モル） Ｇlu（１モル） Ｇlu（１モル） Ｇlu（１モル） Ｇly（１モル） Ｇly（１モル） β- Ａla(1モル） Ｇly（１モル） Ｌeu（１モル） Ｌeu（１モル） Ｌeu（１モル） Ｌeu（１モル） Ｔrp（１モル） Ｔrp（１モル） Ｔrp（１モル） Ｔrp（１モル） Ｏrn（２モル） Ｏrn（２モル） Ｏrn（２モル） Ｏrn（２モル） β-OH-Asp(1モル) β-OH-Asp(1モル) β-OH-Asp(1モル) β-OH-Asp(1モル) Ｖal（１モル） N-MeVal(1モル) N-MeVal(1モル) N-MeVal(1モル) N-MePhe (1モル） Ｐhe (1モル ） N-MePhe (1モル） N-MePhe (1モル) 構成脂肪酸 3-OH-7-メチル 3-OH-7-メチル 3-OH-7-メチル 3-OH-7-メチル オクタン酸(1モル) オクタン酸(1モル) オクタン酸(1モル) オクタン酸(1モル)
【００２１】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 、ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３
の上記物理化学的性質、酸完全加水分解物、構成アミノ
酸、構成脂肪酸等の知見から、既知化合物を検索し比較
した結果、上記化合物は文献未記載の新規物質であると
結論した。
Ａ2 、Ａ4 、ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３
の上記物理化学的性質、酸完全加水分解物、構成アミノ
酸、構成脂肪酸等の知見から、既知化合物を検索し比較
した結果、上記化合物は文献未記載の新規物質であると
結論した。
【００２２】本発明の抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ
1 、Ａ2 、Ａ4 、ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−
１３は、リソバクター（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ）属に属
する抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ生産菌を培養し、その
培養物から抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａを分離採取し、
必要によりさらに分離精製操作を施すことにより製造で
きる。本発明の方法で用いるリソバクター属に属するＷ
ＡＰ−８２９４Ａ生産菌の１例としては、本発明者らに
よって静岡県下田市の土壌より分離したリソバクター・
エスピー（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）ＷＡＰ−８
２９４株が挙げられる。この菌株の菌学的性状は次のと
おりである。
1 、Ａ2 、Ａ4 、ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ−
１３は、リソバクター（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ）属に属
する抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ生産菌を培養し、その
培養物から抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａを分離採取し、
必要によりさらに分離精製操作を施すことにより製造で
きる。本発明の方法で用いるリソバクター属に属するＷ
ＡＰ−８２９４Ａ生産菌の１例としては、本発明者らに
よって静岡県下田市の土壌より分離したリソバクター・
エスピー（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）ＷＡＰ−８
２９４株が挙げられる。この菌株の菌学的性状は次のと
おりである。
【００２３】１．形態 肉汁寒天平板上、２５℃、３日間培養後、顕微鏡下で観
察すると、細胞の大きさは直径０．４〜０．６μｍ、長
さ３．２〜４．２μｍの桿状を呈し、グラム染色は陰性
で、鞭毛は認められないが滑走性を示し、胞子の形成は
なく、抗酸性を示さない。
察すると、細胞の大きさは直径０．４〜０．６μｍ、長
さ３．２〜４．２μｍの桿状を呈し、グラム染色は陰性
で、鞭毛は認められないが滑走性を示し、胞子の形成は
なく、抗酸性を示さない。
【００２４】２．各種培地における生育状態 ２５℃で培養し、３ないし１４日間にわたって観察し
た。 （１）肉汁寒天平板培養 コロニーは半透明な薄黄色の円形を呈し、表面は凸円状
で周縁部は全縁〜波状である。拡散性色素は生成しな
い。 （２）肉汁寒天斜面培養 拡布状に生育して半透明な薄黄色を呈する。 （３）肉汁液体培養 わずかに混濁を認め、菌環を形成し、培養容器の底辺に
菌の沈渣が認められる。
た。 （１）肉汁寒天平板培養 コロニーは半透明な薄黄色の円形を呈し、表面は凸円状
で周縁部は全縁〜波状である。拡散性色素は生成しな
い。 （２）肉汁寒天斜面培養 拡布状に生育して半透明な薄黄色を呈する。 （３）肉汁液体培養 わずかに混濁を認め、菌環を形成し、培養容器の底辺に
菌の沈渣が認められる。
【００２５】（４）肉汁ゼラチン穿刺培養 表面から中深部にかけてゼラチンを液化しながら生育す
る。 （５）リトマス・ミルク培養 リトマスの還元能および凝固はみられないが、ペプトン
化が認められる。 （６）スキムミルク・アセテート寒天培養 強いタンパク質分解活性を示し、寒天平板上に粘性の高
いゲル状の塊を生成しながら生育する。
る。 （５）リトマス・ミルク培養 リトマスの還元能および凝固はみられないが、ペプトン
化が認められる。 （６）スキムミルク・アセテート寒天培養 強いタンパク質分解活性を示し、寒天平板上に粘性の高
いゲル状の塊を生成しながら生育する。
【００２６】３．生理学的性質 ＷＡＰ−８２９４株の生理学的性質は次のとおりであ
る。 （１） 硝酸塩の還元 − （２） 脱窒反応 − （３） ＭＲテスト − （４） ＶＰテスト − （５） インドールの生成 − （６） 硫化水素の生成 − （７） デンプンの加水分解 −
る。 （１） 硝酸塩の還元 − （２） 脱窒反応 − （３） ＭＲテスト − （４） ＶＰテスト − （５） インドールの生成 − （６） 硫化水素の生成 − （７） デンプンの加水分解 −
【００２７】（８） クエン酸の利用 コーゼル培地 − シモンズ培地 − クリステンセン培地 ＋ （９） 無機窒素源の利用 硝酸ナトリウム ＋ 硝酸アンモニウム ＋ グルタミン酸ソーダ ＋ （１０）色素の生成 キングＡ培地 − キングＢ培地 −
【００２８】 （１１）ウレアーゼ − （１２）オキシダーゼ ＋ （１３）カタラーゼ ＋ （１４）生育温度 １５〜３
７℃ （１５）生育ｐＨ ５〜８ （１６）酸素に対する態度 好気的 （１７）Ｏ−Ｆテスト 非分解
型 （１８）デオキシリボヌクレアーゼ ＋ （１９）フォスファターゼ ＋ （２０）溶血性 β （２１）セルロースの分解 −
７℃ （１５）生育ｐＨ ５〜８ （１６）酸素に対する態度 好気的 （１７）Ｏ−Ｆテスト 非分解
型 （１８）デオキシリボヌクレアーゼ ＋ （１９）フォスファターゼ ＋ （２０）溶血性 β （２１）セルロースの分解 −
【００２９】（２２）Ｔｗｅｅｎの分解 Ｔｗｅｅｎ２０ ＋ Ｔｗｅｅｎ４０ ＋ Ｔｗｅｅｎ６０ ＋ Ｔｗｅｅｎ８０ ＋ （２３）コロイダルキチンの分解 ＋ （２４）多糖類の分解 ＣＭＣ ＋ アルギン酸 − ペクチン酸 − （２５）溶菌活性 Saccharomyces cerevisiae ＋ Bacillus subtilis ＋ Escherichia coli ＋ （２６）ＧＣ含量 ６８．３
％（ＨＰＬＣ法）
％（ＨＰＬＣ法）
【００３０】 （２７）糖類からの酸およびガスの生成 糖 類 酸の生成 ガスの生成 利用性 （ペプトン水）（肉汁寒天）（デービス培地） Ｌ−アラビノース − − − Ｄ−キシロース − − − Ｄ−グルコース ＋ − − Ｄ−マンノース ＋ − − Ｄ−フラクトース ＋ − − Ｄ−ガラクトース ＋ − − 麦芽糖 ＋ − ＋ ショ糖 ＋ − − 乳糖 ＋ − − トレハロース ＋ − − Ｄ−ソルビット − − − Ｄ−マンニット − − − イノシット − − − グリセリン − − − デンプン ＋ − ＋ セロビオース ＋ − ＋
【００３１】以上の結果より、ＷＡＰ−８２９４株をバ
ージーズ・マニュアル・オブ・システマテックバクテリ
オロジー〔Bergey's Manual of Systematic Bacteriolo
gy,Vol. 3(1989) 〕の菌種記載を参照し比較すると、本
菌株は鞭毛を持たず、滑走による運動性を示すグラム陰
性の好気性桿菌であることから滑走細菌(Gliding Bacte
ria)に属する。
ージーズ・マニュアル・オブ・システマテックバクテリ
オロジー〔Bergey's Manual of Systematic Bacteriolo
gy,Vol. 3(1989) 〕の菌種記載を参照し比較すると、本
菌株は鞭毛を持たず、滑走による運動性を示すグラム陰
性の好気性桿菌であることから滑走細菌(Gliding Bacte
ria)に属する。
【００３２】Gliding Bacteriaは子実体の形成が認めら
れない滑走細菌(Nonfruiting Gliding Bacteria)と子実
体の形成が認められる滑走細菌(Fruiting Gliding Bact
eria) に分類されるが、本菌株は子実体の形成が認めら
れないので、Nonfruiting Gliding Bacteriaである。No
nfruiting Gliding BacteriaにはCytophagales，Beggia
toles, Lysobacteralesの３つの目(Order) が存在する
が、これらの目(Order) を明確にする１つの重要な特性
(Key Character) はＤＮＡのＧＣ含量である。そこで、
本菌株のＤＮＡを常法に従って抽出し、FEMS Microbio
l. Letters,２５，125 (1984)に記載のＨＰＬＣ法でＧ
Ｃ含量を測定したところ、68.3％の高い値が得られた。
従って本菌株はＤＮＡのＧＣ含量が65〜71％と高いLyso
bacterales目のLysobacter属に属するものと考えられ
る。
れない滑走細菌(Nonfruiting Gliding Bacteria)と子実
体の形成が認められる滑走細菌(Fruiting Gliding Bact
eria) に分類されるが、本菌株は子実体の形成が認めら
れないので、Nonfruiting Gliding Bacteriaである。No
nfruiting Gliding BacteriaにはCytophagales，Beggia
toles, Lysobacteralesの３つの目(Order) が存在する
が、これらの目(Order) を明確にする１つの重要な特性
(Key Character) はＤＮＡのＧＣ含量である。そこで、
本菌株のＤＮＡを常法に従って抽出し、FEMS Microbio
l. Letters,２５，125 (1984)に記載のＨＰＬＣ法でＧ
Ｃ含量を測定したところ、68.3％の高い値が得られた。
従って本菌株はＤＮＡのＧＣ含量が65〜71％と高いLyso
bacterales目のLysobacter属に属するものと考えられ
る。
【００３３】同属の公知の種と性状を比較したところLy
sobacter enzymogenesと類似した性質を示したが、クエ
ン酸利用能など細部にわたって一致しない点もあるの
で、本菌株をリソバクター・エスピーＷＡＰ−８２９４
（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＷＡＰ−８２９４）と
命名した。ＷＡＰ−８２９４株は工業技術院生命工学工
業技術研究所に平成６年１月３１日に寄託され、受託番
号ＦＥＲＭ Ｐ−１４０９３号として受託された後、ブ
ダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、受託番号FE
RM BP-4990 号として受託された。リソバクター属を含
むバクテリアの一般性状としてその菌学的性質は極めて
変異しやすくＷＡＰ−８２９４株も例外ではない。しか
し、それらの変異株が自然に変異したものであっても、
各種変異誘起剤等による人工的な変異株であっても、抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａを生産する能力を有する限り
すべて本発明の方法において使用することができる。
sobacter enzymogenesと類似した性質を示したが、クエ
ン酸利用能など細部にわたって一致しない点もあるの
で、本菌株をリソバクター・エスピーＷＡＰ−８２９４
（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＷＡＰ−８２９４）と
命名した。ＷＡＰ−８２９４株は工業技術院生命工学工
業技術研究所に平成６年１月３１日に寄託され、受託番
号ＦＥＲＭ Ｐ−１４０９３号として受託された後、ブ
ダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、受託番号FE
RM BP-4990 号として受託された。リソバクター属を含
むバクテリアの一般性状としてその菌学的性質は極めて
変異しやすくＷＡＰ−８２９４株も例外ではない。しか
し、それらの変異株が自然に変異したものであっても、
各種変異誘起剤等による人工的な変異株であっても、抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａを生産する能力を有する限り
すべて本発明の方法において使用することができる。
【００３４】（培養と生産）本発明の抗生物質ＷＡＰ−
８２９４Ａは、上記生産菌を栄養源含有培地に接種し、
好気的に培養することによって製造される。抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａの生産菌の培養に際しては、炭素源と
して例えば、グルコース、フラクトース、デンプン、デ
キストリン、グリセリン、糖蜜、水飴、油脂類、有機酸
類などの資化し得る有機炭素化合物が利用され、一方、
窒素源としては、例えば、大豆粉、綿実粉、コーンスチ
ープリカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エキ
ス、胚芽、尿素、アミノ酸類、アンモニウム塩などの有
機窒素化合物や無機窒素化合物が利用できる。また、塩
類としては例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの無機塩類を単
独あるいは適宜組合わせて使用することができる。さら
に必要に応じて、鉄塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩など
の重金属や、微生物の生育に必要なビオチン、ビタミン
Ｂ1 などのビタミン類をはじめ、その他生産菌の生育を
促進し、ＷＡＰ−８２９４Ａを著量生産することができ
る有機物や無機物を適宜添加することが望ましい。ま
た、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコールエー
テルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に加えても良い。
８２９４Ａは、上記生産菌を栄養源含有培地に接種し、
好気的に培養することによって製造される。抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａの生産菌の培養に際しては、炭素源と
して例えば、グルコース、フラクトース、デンプン、デ
キストリン、グリセリン、糖蜜、水飴、油脂類、有機酸
類などの資化し得る有機炭素化合物が利用され、一方、
窒素源としては、例えば、大豆粉、綿実粉、コーンスチ
ープリカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エキ
ス、胚芽、尿素、アミノ酸類、アンモニウム塩などの有
機窒素化合物や無機窒素化合物が利用できる。また、塩
類としては例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの無機塩類を単
独あるいは適宜組合わせて使用することができる。さら
に必要に応じて、鉄塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩など
の重金属や、微生物の生育に必要なビオチン、ビタミン
Ｂ1 などのビタミン類をはじめ、その他生産菌の生育を
促進し、ＷＡＰ−８２９４Ａを著量生産することができ
る有機物や無機物を適宜添加することが望ましい。ま
た、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコールエー
テルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に加えても良い。
【００３５】培養法としては、一般に抗生物質の生産に
用いられている方法が採用されるが、液体培養法では、
特に好気性に保つために深部通気撹拌培養が好ましく、
実験室的にはフラスコによる通常の振盪培養が適してい
る。培養温度は通常２０〜４０℃で可能であるが、好ま
しくは２５〜３０℃に保つことが望ましい。培養のｐＨ
は６〜８付近で可能であるが、好ましくは７付近に保つ
ことが望ましい。培養物中のＷＡＰ−８２９４Ａの生産
量は２〜６日間位で充分達成される。
用いられている方法が採用されるが、液体培養法では、
特に好気性に保つために深部通気撹拌培養が好ましく、
実験室的にはフラスコによる通常の振盪培養が適してい
る。培養温度は通常２０〜４０℃で可能であるが、好ま
しくは２５〜３０℃に保つことが望ましい。培養のｐＨ
は６〜８付近で可能であるが、好ましくは７付近に保つ
ことが望ましい。培養物中のＷＡＰ−８２９４Ａの生産
量は２〜６日間位で充分達成される。
【００３６】（単離・精製）以上のごとく、培養物中に
蓄積されたＷＡＰ−８２９４Ａを培養物中から採取する
ためには、後記する本発明の抗生物質の物理化学的性質
を利用することによって有利に行い得る。すなわち、抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは培養濾液中に含有されてい
るので、まず培養物にセライトやラジオライトなどの濾
過助剤を加えて減圧濾過を行うか、遠心分離することに
よって菌体を除去して培養濾液を得る。
蓄積されたＷＡＰ−８２９４Ａを培養物中から採取する
ためには、後記する本発明の抗生物質の物理化学的性質
を利用することによって有利に行い得る。すなわち、抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは培養濾液中に含有されてい
るので、まず培養物にセライトやラジオライトなどの濾
過助剤を加えて減圧濾過を行うか、遠心分離することに
よって菌体を除去して培養濾液を得る。
【００３７】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは後記する物
理化学的性質から水溶性のポリペプタイド系抗生物質と
考えられ、分子量が１，４００〜１，７００程度の比較
的大きな化合物からなる成分によって構成されている。
これらの性質を考慮して、培養濾液中よりＷＡＰ−８２
９４Ａを採取するにあたっては、吸着樹脂例えばダイヤ
イオンＨＰ−２０、セパビーズＳＰ２０７、ＣＨＰ−２
０（三菱化成社製）やアンバーライトＸＡＤ−２（ロー
ムアンドハース社製）、デュオライトＳ−３０（ダイヤ
モンドシャームロックケミカル社製）などが有利に使用
できるが、特に活性炭カラムクロマトグラフィーによる
精製が効率的である。
理化学的性質から水溶性のポリペプタイド系抗生物質と
考えられ、分子量が１，４００〜１，７００程度の比較
的大きな化合物からなる成分によって構成されている。
これらの性質を考慮して、培養濾液中よりＷＡＰ−８２
９４Ａを採取するにあたっては、吸着樹脂例えばダイヤ
イオンＨＰ−２０、セパビーズＳＰ２０７、ＣＨＰ−２
０（三菱化成社製）やアンバーライトＸＡＤ−２（ロー
ムアンドハース社製）、デュオライトＳ−３０（ダイヤ
モンドシャームロックケミカル社製）などが有利に使用
できるが、特に活性炭カラムクロマトグラフィーによる
精製が効率的である。
【００３８】例えば、ｐＨ６．９の培養濾液をアンバー
ライトＩＲ−１２０Ｂ Ｈ+ 型カラムに通過し、その酸
性通塔液をそのまま活性炭カラムに吸着せしめ、水洗
後、８０％アセトン水、またはアルカリ性の８０％アセ
トン水で溶出することによって抗生物質ＷＡＰ−８２９
４Ａが回収される。減圧下でアセトンを留去後、脂溶性
の不純物を除去する目的で酸性条件下で酢酸エチル抽出
を行い、水層部を再びｎ−ブタノールなどの極性の高い
有機溶媒でＷＡＰ−８２９４Ａを抽出することができ
る。ｎ−ブタノールを低温で留去後、そのまま濃縮乾固
するか、濃縮液に例えばアセトンなどＷＡＰ−８２９４
Ａに不溶な溶媒を加えることによって沈殿を生ぜしめ、
遠心分離または減圧濾過によって粗物質を採取すること
ができる。
ライトＩＲ−１２０Ｂ Ｈ+ 型カラムに通過し、その酸
性通塔液をそのまま活性炭カラムに吸着せしめ、水洗
後、８０％アセトン水、またはアルカリ性の８０％アセ
トン水で溶出することによって抗生物質ＷＡＰ−８２９
４Ａが回収される。減圧下でアセトンを留去後、脂溶性
の不純物を除去する目的で酸性条件下で酢酸エチル抽出
を行い、水層部を再びｎ−ブタノールなどの極性の高い
有機溶媒でＷＡＰ−８２９４Ａを抽出することができ
る。ｎ−ブタノールを低温で留去後、そのまま濃縮乾固
するか、濃縮液に例えばアセトンなどＷＡＰ−８２９４
Ａに不溶な溶媒を加えることによって沈殿を生ぜしめ、
遠心分離または減圧濾過によって粗物質を採取すること
ができる。
【００３９】このように採取される粗物質をさらに精製
するためには、酸性条件下でｎ−ブタノールなどの極性
有機溶媒に抽出されることから、遠心液々分配クロマト
グラフィーなどに代表される向流分配法、あるいはシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーによる吸着クロマトグ
ラフィー、さらにはセルロースカラムクロマトグラフィ
ーなどの分配クロマトグラフィーを単独もしくは適宜組
合せることによって高純度の精製品を得ることができ
る。また、セファデックスＧ−１０、Ｇ−１５、ＬＨ−
２０（ファルマシア社製）やバイオゲルＰ−４ゲル（バ
イオラッド社製）などの分子ふるい効果を用い、水ある
いは含水メタノールなどの低級アルコールなどの含水溶
媒や希アルカリ性、希酸性水溶液、適当な塩類を加えた
水溶液、など適宜組合せて展開し溶出することによって
精製することも可能である。
するためには、酸性条件下でｎ−ブタノールなどの極性
有機溶媒に抽出されることから、遠心液々分配クロマト
グラフィーなどに代表される向流分配法、あるいはシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーによる吸着クロマトグ
ラフィー、さらにはセルロースカラムクロマトグラフィ
ーなどの分配クロマトグラフィーを単独もしくは適宜組
合せることによって高純度の精製品を得ることができ
る。また、セファデックスＧ−１０、Ｇ−１５、ＬＨ−
２０（ファルマシア社製）やバイオゲルＰ−４ゲル（バ
イオラッド社製）などの分子ふるい効果を用い、水ある
いは含水メタノールなどの低級アルコールなどの含水溶
媒や希アルカリ性、希酸性水溶液、適当な塩類を加えた
水溶液、など適宜組合せて展開し溶出することによって
精製することも可能である。
【００４０】このようにして得られたＷＡＰ−８２９４
Ａをさらに、先に記載した向流分配法や高速液体クロマ
トグラフィーによって分離精製を行い、７種類の成分Ａ
Ｘ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ5 、Ａ6 を得る。ＡＸ
をさらに分離精製して１３種類の成分ＡＸ−１、ＡＸ−
２、ＡＸ−３、ＡＸ−４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−
７、ＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、Ａ
Ｘ−１２及びＡＸ−１３を得ることができる。高速液体
クロマトグラフィーに用いられる充填剤としては、シリ
カゲルや、オクタデシル基、オクチル基などのアルキル
基をシリカゲルのシラノール基と化学結合した優れた担
体が市販されており、またポリスチレン系のポーラスポ
リマーゲルなどの担体もよく汎用されており、これらの
充填剤を使用して効率よく分離することができる。移動
相としては酸性条件下、例えばトリフルオロ酢酸などを
含んだ含水アセトニトリルや含水メタノールなどの低級
アルコールおよび緩衝液などを用いることができる。
Ａをさらに、先に記載した向流分配法や高速液体クロマ
トグラフィーによって分離精製を行い、７種類の成分Ａ
Ｘ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ5 、Ａ6 を得る。ＡＸ
をさらに分離精製して１３種類の成分ＡＸ−１、ＡＸ−
２、ＡＸ−３、ＡＸ−４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−
７、ＡＸ−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、Ａ
Ｘ−１２及びＡＸ−１３を得ることができる。高速液体
クロマトグラフィーに用いられる充填剤としては、シリ
カゲルや、オクタデシル基、オクチル基などのアルキル
基をシリカゲルのシラノール基と化学結合した優れた担
体が市販されており、またポリスチレン系のポーラスポ
リマーゲルなどの担体もよく汎用されており、これらの
充填剤を使用して効率よく分離することができる。移動
相としては酸性条件下、例えばトリフルオロ酢酸などを
含んだ含水アセトニトリルや含水メタノールなどの低級
アルコールおよび緩衝液などを用いることができる。
【００４１】（物理化学的性質）前記した各種クロマト
グラフィーを用いて得られるＷＡＰ−８２９４Ａ、
Ａ1、Ａ2 、Ａ4 、ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ
−１３（いずれも塩酸塩）の物理化学的性質および酸完
全加水分解によるニンヒドリン陽性物質および酸加水分
解液のエーテル抽出物について以下に記す。
グラフィーを用いて得られるＷＡＰ−８２９４Ａ、
Ａ1、Ａ2 、Ａ4 、ＡＸ、ＡＸ−８、ＡＸ−９及びＡＸ
−１３（いずれも塩酸塩）の物理化学的性質および酸完
全加水分解によるニンヒドリン陽性物質および酸加水分
解液のエーテル抽出物について以下に記す。
【００４２】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１３〜２２０℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間
（図１）：４．０〜６．１分、８．０分、１１．１分、
１２．５分、１６．５分、１７．９分、１８．８分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間
（図１）：４．０〜６．１分、８．０分、１１．１分、
１２．５分、１６．５分、１７．９分、１８．８分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm
【００４３】（７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−Ｉ
Ｒ、ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１，４００〜１，７００ （９）有機化合物定性試験（ナトリウム溶融法）：炭
素、水素、酸素、窒素の元素よりなる化合物 （10）酸完全加水分解によるニンヒドリン陽性物質：Ａ
ｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｏｒ
ｎ、Ｎ−メチルバリン、β−ヒドロキシアスパラギン酸
およびＮ−メチルフェニルアラニンを与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４２°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
Ｒ、ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１，４００〜１，７００ （９）有機化合物定性試験（ナトリウム溶融法）：炭
素、水素、酸素、窒素の元素よりなる化合物 （10）酸完全加水分解によるニンヒドリン陽性物質：Ａ
ｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｏｒ
ｎ、Ｎ−メチルバリン、β−ヒドロキシアスパラギン酸
およびＮ−メチルフェニルアラニンを与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４２°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００４４】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ1 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１５〜２２５℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
８．０分
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
８．０分
【００４５】（６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λ
max ２７５nm、２８０nm、２８７nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３３cm-1 （８）分子量：１５４７．９〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ
１５４８．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５４６．７（Ｍ
−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍａｓｓより（Ｍ＋Ｈ）+ イオンの実測値：ｍ／ｚ １
５４８．８０８８、計算値：ｍ／ｚ １５４８．８０６
３〕 （10）酸完全加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ
（１モル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓ
ｅｒ（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モ
ル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシア
スパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）および３−ヒドロキシオクタン酸（１モル）
を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４１°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
max ２７５nm、２８０nm、２８７nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３３cm-1 （８）分子量：１５４７．９〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ
１５４８．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５４６．７（Ｍ
−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍａｓｓより（Ｍ＋Ｈ）+ イオンの実測値：ｍ／ｚ １
５４８．８０８８、計算値：ｍ／ｚ １５４８．８０６
３〕 （10）酸完全加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ
（１モル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓ
ｅｒ（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モ
ル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシア
スパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）および３−ヒドロキシオクタン酸（１モル）
を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４１°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００４６】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１５〜２２５℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１１．１分
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１１．１分
【００４７】（６）紫外線吸収スペクトル（水中）（図
２）：λmax ２７５nm（Ｅ1cm 1%３１．８）、２８０nm
（Ｅ1cm 1%３３．４）、２８７nm（Ｅ1cm 1%２９．２） （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ法）
（図３）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８） 1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（図４）：
（２７０ＭＨｚ、Ｄ2 Ｏ）、メチル；メチレン、メチン
及び複素環又は芳香環に由来する複雑なプロトンシグナ
ルが観測される。 （９）分子量：１５６１．９〔ＦＡＢ−Ｍａｓｓ ｍ／
ｚ １５６２．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５６１．２
（Ｍ−Ｈ）- 〕 （10）分子式：Ｃ73Ｈ111 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍａｓｓより（Ｍ＋Ｈ）+ イオンの実測値：ｍ／ｚ １
５６２．８２２４、計算値：ｍ／ｚ １５６２．８２１
９〕 （11）酸完全加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ
（１モル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓ
ｅｒ（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モ
ル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシア
スパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）および３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン
酸（１モル）を与える。 （12）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４２°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （13）塩基性、酸性、中性の区別：両性
２）：λmax ２７５nm（Ｅ1cm 1%３１．８）、２８０nm
（Ｅ1cm 1%３３．４）、２８７nm（Ｅ1cm 1%２９．２） （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ法）
（図３）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８） 1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（図４）：
（２７０ＭＨｚ、Ｄ2 Ｏ）、メチル；メチレン、メチン
及び複素環又は芳香環に由来する複雑なプロトンシグナ
ルが観測される。 （９）分子量：１５６１．９〔ＦＡＢ−Ｍａｓｓ ｍ／
ｚ １５６２．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５６１．２
（Ｍ−Ｈ）- 〕 （10）分子式：Ｃ73Ｈ111 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍａｓｓより（Ｍ＋Ｈ）+ イオンの実測値：ｍ／ｚ １
５６２．８２２４、計算値：ｍ／ｚ １５６２．８２１
９〕 （11）酸完全加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ
（１モル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓ
ｅｒ（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モ
ル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシア
スパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）および３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン
酸（１モル）を与える。 （12）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４２°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （13）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００４８】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ4 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１５〜２２５℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１６．５分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１６．５分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm
【００４９】（７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−Ｉ
Ｒ、ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５７５．９〔ＦＡＢ−Ｍａｓｓ ｍ／
ｚ １５７６．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５７５．４
（Ｍ−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ74Ｈ113 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍａｓｓより（Ｍ＋Ｈ）+ イオンの実測値：ｍ／ｚ １
５７６．８３６３、計算値：ｍ／ｚ １５７６．８３７
５〕 （10）酸加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ（１モ
ル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓｅｒ
（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モル）、Ｎ
−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギ
ン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モ
ル）および３−ヒドロキシ−８−メチルノナン酸（１モ
ル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４３°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
Ｒ、ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５７５．９〔ＦＡＢ−Ｍａｓｓ ｍ／
ｚ １５７６．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５７５．４
（Ｍ−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ74Ｈ113 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍａｓｓより（Ｍ＋Ｈ）+ イオンの実測値：ｍ／ｚ １
５７６．８３６３、計算値：ｍ／ｚ １５７６．８３７
５〕 （10）酸加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ（１モ
ル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓｅｒ
（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モル）、Ｎ
−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギ
ン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モ
ル）および３−ヒドロキシ−８−メチルノナン酸（１モ
ル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４３°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００５０】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、
Ａ2 、Ａ4 のＣ18逆相シリカゲル高速液体クロマトグラ
フィーの溶出条件は以下のとおりである。 カラム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm） 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水 (45：55) 検出波長：ＵＶ２１４nm 流速：１ml／分
Ａ2 、Ａ4 のＣ18逆相シリカゲル高速液体クロマトグラ
フィーの溶出条件は以下のとおりである。 カラム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm） 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水 (45：55) 検出波長：ＵＶ２１４nm 流速：１ml／分
【００５１】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ （１）外観：白色粉末 （２）融点：１９６〜２００℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間
（図６）：5.３分、5.９分、6.２分、6.５分、6.９分、
7.３分、8.１分、9.３分、9.８分、１1.３分、１2.１
分、１3.７分、１5.０分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間
（図６）：5.３分、5.９分、6.２分、6.５分、6.９分、
7.３分、8.１分、9.３分、9.８分、１1.３分、１2.１
分、１3.７分、１5.０分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm
【００５２】（７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−Ｉ
Ｒ，ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：1,４００〜1,７００ （９）有機化合物定性試験（ナトリウム溶融法）：炭
素、水素、酸素、窒素の元素よりなる化合物 （10）酸完全加水分解によるニンヒドリン陽性物質およ
び脂肪酸：Ａsp、Ｇlu、Ｇly、β−Ａla、Ｌeu、Ｓer、
Ｔrp、Ｏrn、Ｖal、Ｎ−メチルバリン、β−ヒドロキシ
アスパラギン酸、Ｐhe、Ｎ−メチルフェニルアラニンお
よび３−ハイドロキシ−７−メチルオクタン酸を与え
る。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２４° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
Ｒ，ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：1,４００〜1,７００ （９）有機化合物定性試験（ナトリウム溶融法）：炭
素、水素、酸素、窒素の元素よりなる化合物 （10）酸完全加水分解によるニンヒドリン陽性物質およ
び脂肪酸：Ａsp、Ｇlu、Ｇly、β−Ａla、Ｌeu、Ｓer、
Ｔrp、Ｏrn、Ｖal、Ｎ−メチルバリン、β−ヒドロキシ
アスパラギン酸、Ｐhe、Ｎ−メチルフェニルアラニンお
よび３−ハイドロキシ−７−メチルオクタン酸を与え
る。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２４° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００５３】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８ （１）外観：白色粉末 （２）融点：１９６〜２００℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
9.３分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）（図７）：λmax
２７３nm、２８０nm、２８９nm
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
9.３分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）（図７）：λmax
２７３nm、２８０nm、２８９nm
【００５４】（７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−Ｉ
Ｒ，ＫＢｒ法）（図８）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３３cm-1 （８） 1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（図９）：
（２７０ＭＨz 、ＤＭＳＯ−Ｄ6 ）、メチル、メチレ
ン、メチン及び複素環又は芳香環に由来する複雑なプロ
トンシグナルが観測される。 （９）分子量：１５４８〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
４９（Ｍ＋Ｈ）+ （10）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍass より（Ｍ＋Ｈ）+イオンの実測値：ｍ／ｚ１５４
８．８０７９、計算値：ｍ／ｚ１５４８．８０６３〕 （11）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、Ｇly（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｖal（１モ
ル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸（１モル）、Ｎ−
メチルフェニルアラニン（１モル）および３−ヒドロキ
シ−７−メチルオクタン酸（１モル）を与える。 （12）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２５° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （13）塩基性、酸性、中性の区別：両性
Ｒ，ＫＢｒ法）（図８）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３３cm-1 （８） 1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（図９）：
（２７０ＭＨz 、ＤＭＳＯ−Ｄ6 ）、メチル、メチレ
ン、メチン及び複素環又は芳香環に由来する複雑なプロ
トンシグナルが観測される。 （９）分子量：１５４８〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
４９（Ｍ＋Ｈ）+ （10）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍass より（Ｍ＋Ｈ）+イオンの実測値：ｍ／ｚ１５４
８．８０７９、計算値：ｍ／ｚ１５４８．８０６３〕 （11）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、Ｇly（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｖal（１モ
ル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸（１モル）、Ｎ−
メチルフェニルアラニン（１モル）および３−ヒドロキ
シ−７−メチルオクタン酸（１モル）を与える。 （12）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２５° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （13）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００５５】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−９ （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１６〜２２０℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
9.８分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
9.８分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm
【００５６】（７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−Ｉ
Ｒ，ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５４８〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
４９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５４７（Ｍ−Ｈ）- （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍass より（Ｍ＋Ｈ）+イオンの実測値：ｍ／ｚ１５４
８．８０６５、計算値：ｍ／ｚ１５４８．８０６３〕 （10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、Ｇly（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｎ−メチルバ
リン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸（１モ
ル）、Ｐhe（１モル）および３−ヒドロキシ−７−メチ
ルオクタン酸（１モル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２８° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
Ｒ，ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５４８〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
４９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５４７（Ｍ−Ｈ）- （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍass より（Ｍ＋Ｈ）+イオンの実測値：ｍ／ｚ１５４
８．８０６５、計算値：ｍ／ｚ１５４８．８０６３〕 （10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、Ｇly（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｎ−メチルバ
リン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸（１モ
ル）、Ｐhe（１モル）および３−ヒドロキシ−７−メチ
ルオクタン酸（１モル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２８° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００５７】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−１３ （１）外観：白色粉末 （２）融点：２０５〜２１０℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１5.０分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１5.０分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm
【００５８】（７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−Ｉ
Ｒ，ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５７６〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
７７（Ｍ＋Ｈ）+ 〕 （９）分子式：Ｃ74Ｈ113 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍass より（Ｍ＋Ｈ）+イオンの実測値：ｍ／ｚ１５７
６．８３２４、計算値：ｍ／ｚ１５７６．８３７５〕
（10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、β−アラニン（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer
（２モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モル）お
よび３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン酸（１モル）
を与える。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２７° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
Ｒ，ＫＢｒ法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５７６〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
７７（Ｍ＋Ｈ）+ 〕 （９）分子式：Ｃ74Ｈ113 Ｏ21Ｎ17〔高分解能ＦＡＢ−
Ｍass より（Ｍ＋Ｈ）+イオンの実測値：ｍ／ｚ１５７
６．８３２４、計算値：ｍ／ｚ１５７６．８３７５〕
（10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、β−アラニン（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer
（２モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モル）お
よび３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン酸（１モル）
を与える。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２７° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性
【００５９】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３のＣ18逆相シリカゲル高速
液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下のとおりであ
る。 カラム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm） 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水 (37：63) 検出波長：ＵＶ２１４nm 流速：１ml／分
８、ＡＸ−９及びＡＸ−１３のＣ18逆相シリカゲル高速
液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下のとおりであ
る。 カラム：ＹＭＣ Ａ−３１２（６×１５０mm） 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水 (37：63) 検出波長：ＵＶ２１４nm 流速：１ml／分
【００６０】（生物学的性質） （１）抗菌活性 抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 の抗菌
活性試験結果を表４に示す。最小生育阻止濃度（ＭＩ
Ｃ）の測定は感受性ブイヨン培地（栄研化学社製）を用
い液体培地希釈法により実施した。表４に示すようにＷ
ＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 はメチシリン耐性
黄色ブドウ球菌を含むグラム陽性球菌に強い活性を示
し、その活性は牛血清１０％を添加した同培地で８倍以
上増強されることが特徴である。なお、グラム陰性桿菌
やカビ、酵母にはほとんど活性を認めない。
活性試験結果を表４に示す。最小生育阻止濃度（ＭＩ
Ｃ）の測定は感受性ブイヨン培地（栄研化学社製）を用
い液体培地希釈法により実施した。表４に示すようにＷ
ＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 はメチシリン耐性
黄色ブドウ球菌を含むグラム陽性球菌に強い活性を示
し、その活性は牛血清１０％を添加した同培地で８倍以
上増強されることが特徴である。なお、グラム陰性桿菌
やカビ、酵母にはほとんど活性を認めない。
【００６１】
【表４】 表４（その１） ＭＩＣ（μｇ／ml） 試 験 菌 Ａ Ａ1 血 清 10％血 血 清 10％血 無添加 清添加 無添加 清添加 スタフィロコッカス・アウレウス No. 1 0.７８ ＜0.10 0.３９ ＜0.10 （ＭＲＳＡ臨床分離株） スタフィロコッカス・アウレウス No. 11 0.７８ ＜0.10 0.３９ ＜0.10 （ＭＲＳＡ臨床分離株） スタフィロコッカス・アウレウス No. 371R 0.７８ ＜0.10 0.３９ ＜0.10 （ＭＲＳＡ臨床分離株） スタフィロコッカス・アウレウス 0.７８ ＜0.10 0.３９ ＜0.10 （ＡＴＣＣ２５９２３） スタフィロコッカス・ 0.７８ ＜0.10 0.３９ ＜0.10 エピデルミディス(ATCC12228) ストレプトコッカス・ピオゲネス 6.２５ ２５ 6.２５ ２５ （ＡＴＣＣ１９６１５） バチルス・サブチルス 0.７８ ＜0.10 0.３９ ＜0.10 （ＡＴＣＣ６６３３） エシェリヒア・コリ ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＡＴＣＣ２５９２２） シュードモナス・エルギノーザ ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＡＴＣＣ９０２７） カンジダ・アルビカンス ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＴＩＭＭ０２３９） アスペルギルス・フミガタス ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＩＡＭ２００４）
【００６２】
【表５】 表４（その２） ＭＩＣ（μｇ／ml） 試 験 菌 Ａ2 Ａ4 血 清 10％血 血 清 10％血 無添加 清添加 無添加 清添加 スタフィロコッカス・アウレウス No. 1 0.７８ ＜0.10 0.７８ ＜0.10 （ＭＲＳＡ臨床分離株） スタフィロコッカス・アウレウス No. 11 0.７８ ＜0.10 0.７８ ＜0.10 （ＭＲＳＡ臨床分離株） スタフィロコッカス・アウレウス No. 371R 0.７８ ＜0.10 0.７８ ＜0.10 （ＭＲＳＡ臨床分離株） スタフィロコッカス・アウレウス 0.７８ ＜0.10 0.７８ ＜0.10 （ＡＴＣＣ２５９２３） スタフィロコッカス・ 0.７８ ＜0.10 0.７８ ＜0.10 エピデルミディス(ATCC12228) ストレプトコッカス・ピオゲネス 6.２５ ２５ 6.２５ ２５ （ＡＴＣＣ１９６１５） バチルス・サブチルス 0.７８ ＜0.10 0.７８ ＜0.10 （ＡＴＣＣ６６３３） エシェリヒア・コリ ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＡＴＣＣ２５９２２） シュードモナス・エルギノーザ ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＡＴＣＣ９０２７） カンジダ・アルビカンス ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＴＩＭＭ０２３９） アスペルギルス・フミガタス ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 （ＩＡＭ２００４）
【００６３】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の抗菌活性試験結果を表５に
示す。最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定はＭＲＳＡ菌
についてはミュラーヒントン培地 (Muller-Hinton brot
h:ＤＩＦＣＯ社）に２％の塩化ナトリウムを添加した培
地を用い、その他の菌についてはミュラーヒントン培地
のみを用いて液体培地希釈法により実施した。表５に示
すように抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−８、Ａ
Ｘ−９、ＡＸ−１３の各成分はメチシリン耐性黄色ブド
ウ球菌を含むグラム陽性球菌に強い活性を示し、その活
性は牛血清１０％を添加した同培地で約２倍程度増強さ
れることが判った。なお、グラム陰性棹菌やカビ、酵母
にはほとんど活性を示さない。
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３の抗菌活性試験結果を表５に
示す。最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定はＭＲＳＡ菌
についてはミュラーヒントン培地 (Muller-Hinton brot
h:ＤＩＦＣＯ社）に２％の塩化ナトリウムを添加した培
地を用い、その他の菌についてはミュラーヒントン培地
のみを用いて液体培地希釈法により実施した。表５に示
すように抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ、ＡＸ−８、Ａ
Ｘ−９、ＡＸ−１３の各成分はメチシリン耐性黄色ブド
ウ球菌を含むグラム陽性球菌に強い活性を示し、その活
性は牛血清１０％を添加した同培地で約２倍程度増強さ
れることが判った。なお、グラム陰性棹菌やカビ、酵母
にはほとんど活性を示さない。
【００６４】
【表６】 表５（その１） ＭＩＣ （μｇ／ml） 試 験 菌 ＡＸ ＡＸ−８ 血清 10％血清 血清 10％血清 無添加 添加 無添加 添加 スタフィロコッカス・アウレウス No.1 1.56 0.78 3.13 3.13 (MRSA 臨床分離株) スタフィロコッカス・アウレウス 1.56 0.78 3.13 1.56 (ATCC 25923) スタフィロコッカス・エピ 1.56 0.78 1.56 0.78 デルミディス(ATCC 12228) ストレプトコッカス・ >100 >100 >100 >100 ピオゲネス(ATCC 19615) バチルス・サブチルス 1.56 0.78 1.56 0.78 (ATCC 6633) エシェリヒア・コリ >100 >100 >100 >100 (ATCC 25922) シュードモナス・ >100 >100 >100 >100 エルギノーザ(ATCC 9027) カンジダ・アルビカンス >100 >100 >100 >100 (TIMM 0239) アスペルギルス・フミガタス >100 >100 >100 >100 (IAM 2004)
【００６５】
【表７】 表５（その２） ＭＩＣ−（μｇ／ml） 試 験 菌 ＡＸ−９ ＡＸ−１３ 血清 10％血清 血清 10％血清 無添加 添加 無添加 添加 スタフィロコッカス・アウレウス No.1 3.13 1.56 3.13 3.13 (MRSA 臨床分離株) スタフィロコッカス・アウレウス 3.13 1.56 3.13 3.13 (ATCC 25923) スタフィロコッカス・エピ 1.56 0.78 1.56 0.78 デルミディス(ATCC 12228) ストレプトコッカス・ >100 >100 >100 >100 ピオゲネス(ATCC 19615) バチルス・サブチルス 3.13 1.56 3.13 1.56 (ATCC 6633) エシェリヒア・コリ >100 >100 >100 >100 (ATCC 25922) シュードモナス・ >100 >100 >100 >100 エルギノーザ(ATCC 9027) カンジダ・アルビカンス >100 >100 >100 >100 (TIMM 0239) アスペルギルス・フミガタス >100 >100 >100 >100 (IAM 2004)
【００６６】（２）マウスにおける感染防御試験 抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａは、表４のｉｎ ｖｉｔｒ
ｏにおける抗菌活性からＭＲＳＡを含むグラム陽性球菌
に強い抗菌力を示しているので、スタフィロコッカス・
アウレウスＮｏ．１（ＭＲＳＡ臨床分離株）を用いてマ
ウスにおける感染防御試験を行った。
ｏにおける抗菌活性からＭＲＳＡを含むグラム陽性球菌
に強い抗菌力を示しているので、スタフィロコッカス・
アウレウスＮｏ．１（ＭＲＳＡ臨床分離株）を用いてマ
ウスにおける感染防御試験を行った。
【００６７】実験方法はＩＣＲ−ＭＣＨ系マウス、４週
令、雄（日本クレア社）１群８匹を使用して感染３日前
にマウス１匹当り、サイクロフォスファミド０．５mg／
０．５mlを腹腔内投与した後、５％ムチンを添加した２
×１０6 ／mlのスタフィロコッカス・アウレウスＮｏ．
１株の菌液をマウス１匹当り０．５mlずつ腹腔内投与し
て感染させた。感染１時間後に塩酸バンコマイシン（塩
野義製薬社製）１０mg／kgおよびＷＡＰ−８２９４Ａ
１０mg／kg、５mg／kg、２．５mg／kg、１．０mg／kg、
０．５mg／kg、０．２５mg／kg、０．１mg／kgおよび
０．０５mg／kgをマウス１匹当り０．２mlずつ単回で皮
下投与した。なお、無処置対照群は生理食塩水０．２ml
を皮下に投与した。
令、雄（日本クレア社）１群８匹を使用して感染３日前
にマウス１匹当り、サイクロフォスファミド０．５mg／
０．５mlを腹腔内投与した後、５％ムチンを添加した２
×１０6 ／mlのスタフィロコッカス・アウレウスＮｏ．
１株の菌液をマウス１匹当り０．５mlずつ腹腔内投与し
て感染させた。感染１時間後に塩酸バンコマイシン（塩
野義製薬社製）１０mg／kgおよびＷＡＰ−８２９４Ａ
１０mg／kg、５mg／kg、２．５mg／kg、１．０mg／kg、
０．５mg／kg、０．２５mg／kg、０．１mg／kgおよび
０．０５mg／kgをマウス１匹当り０．２mlずつ単回で皮
下投与した。なお、無処置対照群は生理食塩水０．２ml
を皮下に投与した。
【００６８】治療成績の結果を表６に示すが、無処置対
照群は感染後３日目に全例死亡した。一方、抗生物質投
与群の感染後５日目の治療成績はバンコマイシン１０mg
／kg投与群で５／８が生存した。これに対しＷＡＰ−８
２９４Ａは表６に示したように低投与量で優れた治療成
績が得られ、ＥＤ50をプロビット法によって求めると
０．１５５mg／kgである。
照群は感染後３日目に全例死亡した。一方、抗生物質投
与群の感染後５日目の治療成績はバンコマイシン１０mg
／kg投与群で５／８が生存した。これに対しＷＡＰ−８
２９４Ａは表６に示したように低投与量で優れた治療成
績が得られ、ＥＤ50をプロビット法によって求めると
０．１５５mg／kgである。
【００６９】
【表８】 表６ ＷＡＰ−８２９４Ａの感染防御試験成績 実験群 投与量（mg／kg） 生存数／試験動物数 無処置群（生理食塩水） ０／８ バンコマイシン １０ ５／８ １０ ８／８ ５ ８／８ ＷＡＰ−８２９４Ａ ２．５ ８／８ １．０ ８／８ ０．５ ７／８ ０．２５ ５／８ ０．１０ ３／８ ０．０５ １／８
【００７０】同様に、抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ
は、表５の in vitro における抗菌活性からＭＲＳＡを
含むグラム陽性球菌に強い抗菌力を示しているので、ス
タフィロコッカス・アウレウスＪＣＭ８７０２（ＭＲＳ
Ａ臨床分離株）を用いてマウスにおける感染防御試験を
行った。実験方法はＩＣＲ−ＭＣＨ系マウス、４週令、
雄（日本クレア社）１群８匹を使用して感染３日前にマ
ウス１匹当り、サイクロフォスファミド0.５mg／0.５ml
を腹腔内投与した後、５％ムチンを添加した２×１０4
／mlのスタフィロコッカス・アウレウスＪＣＭ８７０２
株の菌液をマウス１匹当り0.５mlずつ腹腔内投与して感
染させた。感染１時間後に塩酸バンコマイシン（塩野義
製薬社製）１０mg／kgおよびＷＡＰ−８２９４ＡＸ１０
mg／kg、2.５mg／kg、1.０mg／kg、0.５mg／kgをマウス
１匹当り0.２mlずつ単回で皮下投与した。治療成績の結
果を表７に示すが、無処置対照群は感染後３日目に６／
８が死亡した。一方、抗生物質投与群の感染後５日目の
治療成績はバンコマイシン１０mg／kg投与群で５／８が
生存した。これに対しＷＡＰ−８２９４ＡＸは表７に示
したように低投与量で優れた治療成績が得られ、ＥＤ50
をプロビット法によって求めると1.２５mg／kgである。
は、表５の in vitro における抗菌活性からＭＲＳＡを
含むグラム陽性球菌に強い抗菌力を示しているので、ス
タフィロコッカス・アウレウスＪＣＭ８７０２（ＭＲＳ
Ａ臨床分離株）を用いてマウスにおける感染防御試験を
行った。実験方法はＩＣＲ−ＭＣＨ系マウス、４週令、
雄（日本クレア社）１群８匹を使用して感染３日前にマ
ウス１匹当り、サイクロフォスファミド0.５mg／0.５ml
を腹腔内投与した後、５％ムチンを添加した２×１０4
／mlのスタフィロコッカス・アウレウスＪＣＭ８７０２
株の菌液をマウス１匹当り0.５mlずつ腹腔内投与して感
染させた。感染１時間後に塩酸バンコマイシン（塩野義
製薬社製）１０mg／kgおよびＷＡＰ−８２９４ＡＸ１０
mg／kg、2.５mg／kg、1.０mg／kg、0.５mg／kgをマウス
１匹当り0.２mlずつ単回で皮下投与した。治療成績の結
果を表７に示すが、無処置対照群は感染後３日目に６／
８が死亡した。一方、抗生物質投与群の感染後５日目の
治療成績はバンコマイシン１０mg／kg投与群で５／８が
生存した。これに対しＷＡＰ−８２９４ＡＸは表７に示
したように低投与量で優れた治療成績が得られ、ＥＤ50
をプロビット法によって求めると1.２５mg／kgである。
【００７１】
【表９】 表 ７ ＷＡＰ−８２９４ＡＸの感染防御試験 実 験 群 投与量（mg／kg） 生存数／試験動物数 無処置群（生理食塩水） ２／８ バンコマイシン １０ ５／８ １０ ７／８ ＷＡＰ−８２９４ＡＸ 2.５ ５／８ 1.０ ４／８ 0.５ ２／８
【００７２】（３）マウス急性毒性試験 抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ２５mg／kg、５０mg／kg、
１００mg／kgおよび２５０mg／kgをマウス（ＩＣＲ−Ｍ
ＣＨ系、４週齢、雄、１群５匹）に静脈投与したが、急
性毒性は認められなかった。また抗生物質ＷＡＰ−８２
９４ＡＸ２５mg／kg、１００mg／kgをマウス（ＩＣＲ−
ＭＣＨ系、４週齢、雄、１群５匹）に腹腔内投与した
が、急性毒性は認められなかった。以上より、本発明の
抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、
Ａ4 、Ａ5 、Ａ6 、ＡＸ、ＡＸ−１、ＡＸ−２、ＡＸ−
３、ＡＸ−４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、ＡＸ−
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−１２及
びＡＸ−１３は、人および動物の細菌感染症、特にメチ
シリン耐性黄色ブドウ球菌感染症の治療剤として有用で
あることがわかる。
１００mg／kgおよび２５０mg／kgをマウス（ＩＣＲ−Ｍ
ＣＨ系、４週齢、雄、１群５匹）に静脈投与したが、急
性毒性は認められなかった。また抗生物質ＷＡＰ−８２
９４ＡＸ２５mg／kg、１００mg／kgをマウス（ＩＣＲ−
ＭＣＨ系、４週齢、雄、１群５匹）に腹腔内投与した
が、急性毒性は認められなかった。以上より、本発明の
抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、
Ａ4 、Ａ5 、Ａ6 、ＡＸ、ＡＸ−１、ＡＸ−２、ＡＸ−
３、ＡＸ−４、ＡＸ−５、ＡＸ−６、ＡＸ−７、ＡＸ−
８、ＡＸ−９、ＡＸ−１０、ＡＸ−１１、ＡＸ−１２及
びＡＸ−１３は、人および動物の細菌感染症、特にメチ
シリン耐性黄色ブドウ球菌感染症の治療剤として有用で
あることがわかる。
【００７３】（用途）本発明の新規抗生物質を医薬とし
て投与する場合、常法に従って種々の形態で投与され
る。その投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、
カプセル剤、シロップ剤などの形態で経口的に、または
注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布
剤、軟膏剤などの形態で非経口的に安全に投与すること
ができる。また本発明の新規抗生物質の殺菌速度がバン
コマイシンより早く低濃度で有効な点を考慮すると眼科
領域での点眼剤や点眼軟膏にも非経口的に安全に投与す
ることができる。
て投与する場合、常法に従って種々の形態で投与され
る。その投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、
カプセル剤、シロップ剤などの形態で経口的に、または
注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布
剤、軟膏剤などの形態で非経口的に安全に投与すること
ができる。また本発明の新規抗生物質の殺菌速度がバン
コマイシンより早く低濃度で有効な点を考慮すると眼科
領域での点眼剤や点眼軟膏にも非経口的に安全に投与す
ることができる。
【００７４】これらの各種製剤は常法に従って主薬に賦
形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、滑沢剤、安定
剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、希釈剤などの医
薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤
を用いて製剤化することができる。投与量においては対
象疾患、投与経路および投与回数などにより異なるが、
例えば成人に対し１日５mgから２０００mgを症状に応じ
て１回または数回に分けて投与することが好ましい。
形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、滑沢剤、安定
剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、希釈剤などの医
薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤
を用いて製剤化することができる。投与量においては対
象疾患、投与経路および投与回数などにより異なるが、
例えば成人に対し１日５mgから２０００mgを症状に応じ
て１回または数回に分けて投与することが好ましい。
【００７５】
【実施例】次に実施例をもって詳細に本発明を説明する
が、これによって本発明が限定されるものではない。 実施例１ ５００ml容の三角フラスコにグルコース２．５％、脱脂
大豆粉２．０％、大豆油０．４％、塩化ナトリウム０．
２５％、炭酸カルシウム０．５％からなる培地（ｐＨ
７．２）１００mlを注入後滅菌した培地を４本用意し、
これにリソバクター・エスピーＷＡＰ−８２９４株の斜
面寒天培地から１白金耳づつ接種した後、ロータリーシ
ェーカーで１８０往復／分、３０℃、２日間培養を行っ
た。上述の培地を１００ml注入後滅菌した５００ml容三
角フラスコ１５０本を用意し、先に培養した三角フラス
コの培養液をそれぞれに２mlづつ接種して、ロータリー
シェーカーで１８０往復／分、３０℃、４日間培養を行
った。なお、抗菌活性をスタフィロコッカス・アウレウ
スＮｏ．１の寒天平板法で測定した。
が、これによって本発明が限定されるものではない。 実施例１ ５００ml容の三角フラスコにグルコース２．５％、脱脂
大豆粉２．０％、大豆油０．４％、塩化ナトリウム０．
２５％、炭酸カルシウム０．５％からなる培地（ｐＨ
７．２）１００mlを注入後滅菌した培地を４本用意し、
これにリソバクター・エスピーＷＡＰ−８２９４株の斜
面寒天培地から１白金耳づつ接種した後、ロータリーシ
ェーカーで１８０往復／分、３０℃、２日間培養を行っ
た。上述の培地を１００ml注入後滅菌した５００ml容三
角フラスコ１５０本を用意し、先に培養した三角フラス
コの培養液をそれぞれに２mlづつ接種して、ロータリー
シェーカーで１８０往復／分、３０℃、４日間培養を行
った。なお、抗菌活性をスタフィロコッカス・アウレウ
スＮｏ．１の寒天平板法で測定した。
【００７６】実施例２ 実施例１で得られた培養液を連続遠心分離（９，０００
ｒｐｍ）し、培養濾液１５リットルを得た。培養濾液
（ｐＨ６．９）をアンバーライトＩＲ−１２０Ｂ（ロー
ムアンドハース社製、Ｈ+ 型、１．５リットル）のカラ
ムに負荷し、通塔液１５リットルと水洗浄液３リットル
を集めた。通塔液と水洗浄液を合わせて、ｐＨ３に調整
後、活性炭（和光純薬製、７００ml）のカラムクロマト
グラフィーに付した。水４リットルで洗浄後、活性物質
を８０％アセトン水４リットルおよび８０％アセトン水
（ｐＨ１２）４リットルで溶出した。溶出液を８００ml
まで濃縮し、塩酸でｐＨ３に調整後、酢酸エチル４００
mlで３回抽出した。続いてｎ−ブタノール４００mlで３
回抽出し、ｎ−ブタノール層を濃縮後、凍結乾燥し、粗
物質６．４ｇ（塩酸塩）を得た。
ｒｐｍ）し、培養濾液１５リットルを得た。培養濾液
（ｐＨ６．９）をアンバーライトＩＲ−１２０Ｂ（ロー
ムアンドハース社製、Ｈ+ 型、１．５リットル）のカラ
ムに負荷し、通塔液１５リットルと水洗浄液３リットル
を集めた。通塔液と水洗浄液を合わせて、ｐＨ３に調整
後、活性炭（和光純薬製、７００ml）のカラムクロマト
グラフィーに付した。水４リットルで洗浄後、活性物質
を８０％アセトン水４リットルおよび８０％アセトン水
（ｐＨ１２）４リットルで溶出した。溶出液を８００ml
まで濃縮し、塩酸でｐＨ３に調整後、酢酸エチル４００
mlで３回抽出した。続いてｎ−ブタノール４００mlで３
回抽出し、ｎ−ブタノール層を濃縮後、凍結乾燥し、粗
物質６．４ｇ（塩酸塩）を得た。
【００７７】実施例３ 実施例２で得られた粗物質６．４ｇをセルロース（エー
メルク社製、４５０ml）のカラムクロマトグラフィーに
付し、アセトニトリル：酢酸：水（７５：１：２５）の
溶媒系で溶出、分画した。活性画分を集め、濃縮後、凍
結乾燥しＷＡＰ−８２９４Ａの白色粉末を８８０mg（塩
酸塩）得た。
メルク社製、４５０ml）のカラムクロマトグラフィーに
付し、アセトニトリル：酢酸：水（７５：１：２５）の
溶媒系で溶出、分画した。活性画分を集め、濃縮後、凍
結乾燥しＷＡＰ−８２９４Ａの白色粉末を８８０mg（塩
酸塩）得た。
【００７８】実施例４ 実施例３で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ７００mgを逆相
系のオクタデシルシリカゲルカラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー〔カラム：ＹＭＣ−ＧＥＬＳＨ−３４
３−５、２０×２５０mm、山村化学研究所製、移動相：
０．０５％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：水
（４５：５５）〕に十数回にわけて注入し、ＷＡＰ−８
２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 を含む画分を集め、それぞれを
濃縮し、ＷＡＰ−８２９４Ａ1 （５０mg）、Ａ2 （２１
０mg）、Ａ4 （１６mg）の白色粉末（塩酸塩）を得た。
系のオクタデシルシリカゲルカラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー〔カラム：ＹＭＣ−ＧＥＬＳＨ−３４
３−５、２０×２５０mm、山村化学研究所製、移動相：
０．０５％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：水
（４５：５５）〕に十数回にわけて注入し、ＷＡＰ−８
２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4 を含む画分を集め、それぞれを
濃縮し、ＷＡＰ−８２９４Ａ1 （５０mg）、Ａ2 （２１
０mg）、Ａ4 （１６mg）の白色粉末（塩酸塩）を得た。
【００７９】実施例５ ＷＡＰ−８２９４Ａのアミノ酸
分析 実施例３で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ５mgを０．２％
３−（２−アミノメチル）インドールを添加した４Ｎメ
タンスルホン酸溶液０．５mlに溶解し、１１０℃、２４
時間、酸完全加水分解を行った。加水分解液を濃縮乾固
し少量の水に溶かしてＤｏｗｅｘ ５０ＷＸ−８（ダウ
ケミカル社製、Ｈ+ 型、１ml）のカラムに負荷し、水２
０mlで洗浄後、０．５Ｎ ＮＨ4 ＯＨ ２０mlで溶出し
た。溶出液を濃縮、乾固した後、少量の水に溶解し、セ
ルロースの２次元薄層クロマトグラフィー〔展開溶媒
１次元目、ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：２）、
２次元目、ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１
５：１０：３：１２）〕及びアミノ酸分析（日立アミノ
酸分析計Ｌ−８５００）を行った。その結果、Ａｓｐ
（１モル），Ｇｌｕ（１モル），Ｇｌｙ（１モル），Ｓ
ｅｒ（２モル），Ｌｅｕ（１モル），Ｔｒｐ（１モ
ル），Ｏｒｎ（２モル）の他に３種類の未知アミノ酸を
含むことがわかった。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａの２
次元ＴＬＣの結果を、図５に示す。
分析 実施例３で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ５mgを０．２％
３−（２−アミノメチル）インドールを添加した４Ｎメ
タンスルホン酸溶液０．５mlに溶解し、１１０℃、２４
時間、酸完全加水分解を行った。加水分解液を濃縮乾固
し少量の水に溶かしてＤｏｗｅｘ ５０ＷＸ−８（ダウ
ケミカル社製、Ｈ+ 型、１ml）のカラムに負荷し、水２
０mlで洗浄後、０．５Ｎ ＮＨ4 ＯＨ ２０mlで溶出し
た。溶出液を濃縮、乾固した後、少量の水に溶解し、セ
ルロースの２次元薄層クロマトグラフィー〔展開溶媒
１次元目、ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：２）、
２次元目、ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１
５：１０：３：１２）〕及びアミノ酸分析（日立アミノ
酸分析計Ｌ−８５００）を行った。その結果、Ａｓｐ
（１モル），Ｇｌｕ（１モル），Ｇｌｙ（１モル），Ｓ
ｅｒ（２モル），Ｌｅｕ（１モル），Ｔｒｐ（１モ
ル），Ｏｒｎ（２モル）の他に３種類の未知アミノ酸を
含むことがわかった。抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａの２
次元ＴＬＣの結果を、図５に示す。
【００８０】実施例６ 未知アミノ酸の同定 実施例３で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ１００mgに４％
チオグリコール酸を含む６ＮＨＣｌ １０mlを加え１１
０℃、２０時間加水分解した。加水分解液を濃縮後、ｐ
Ｈを７．０に調整してセパビーズＳＰ２０７（三菱化成
社製、３０ml）のカラムクロマトグラフィーに付し、水
で展開した。未知アミノ酸−１を含む溶出液量１８mlか
ら２７mlの画分を濃縮し、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ−８
（Ｈ+ 型、９ml）に負荷した。０．１ＮＨＣｌで溶出
後、濃縮、乾固して未知アミノ酸−１の塩酸塩の白色粉
末４mgを得た。本アミノ酸は分子量：１４９〔ＦＡＢ−
ＭＳｍ／ｚ：１５０（Ｍ＋Ｈ）+ 〕および 1Ｈ−ＮＭＲ
スペクトル（Ｄ2 Ｏ、２７０ＭＨｚ）の化学シフトδ
（ｐｐｍ）：４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、
５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）より、β−ヒド
ロキシアスパラギン酸であると推定された。標品β−ヒ
ドロキシアスパラギン酸（シグマ社製）の塩酸塩と比較
したところ、標品の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの化学シフ
ト、セルロースＴＬＣのＲｆ値：０．２０〔展開溶媒：
ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１０：
３：１２）〕と完全に一致したので、未知アミノ酸−１
はβ−ヒドロキシアスパラギン酸と同定した。
チオグリコール酸を含む６ＮＨＣｌ １０mlを加え１１
０℃、２０時間加水分解した。加水分解液を濃縮後、ｐ
Ｈを７．０に調整してセパビーズＳＰ２０７（三菱化成
社製、３０ml）のカラムクロマトグラフィーに付し、水
で展開した。未知アミノ酸−１を含む溶出液量１８mlか
ら２７mlの画分を濃縮し、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ−８
（Ｈ+ 型、９ml）に負荷した。０．１ＮＨＣｌで溶出
後、濃縮、乾固して未知アミノ酸−１の塩酸塩の白色粉
末４mgを得た。本アミノ酸は分子量：１４９〔ＦＡＢ−
ＭＳｍ／ｚ：１５０（Ｍ＋Ｈ）+ 〕および 1Ｈ−ＮＭＲ
スペクトル（Ｄ2 Ｏ、２７０ＭＨｚ）の化学シフトδ
（ｐｐｍ）：４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、
５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）より、β−ヒド
ロキシアスパラギン酸であると推定された。標品β−ヒ
ドロキシアスパラギン酸（シグマ社製）の塩酸塩と比較
したところ、標品の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの化学シフ
ト、セルロースＴＬＣのＲｆ値：０．２０〔展開溶媒：
ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１０：
３：１２）〕と完全に一致したので、未知アミノ酸−１
はβ−ヒドロキシアスパラギン酸と同定した。
【００８１】また、セパビーズＳＰ２０７カラムの溶出
液量３０mlから４５mlに溶出される、未知アミノ酸−２
を含む画分を濃縮し、活性炭カラム（１０ml）に負荷し
た。溶出液量２４〜３４mlの画分を集め、Ｄｏｗｅｘ
５０ＷＸ−８カラム（１ml）に負荷し０．５Ｎ ＮＨ4
ＯＨで溶出後、濃縮、乾固して未知アミノ酸−２の白色
粉末２．１mgを得た。本アミノ酸は分子量：１３１〔Ｆ
ＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ：１３２（Ｍ＋Ｈ）+ 〕および 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（Ｄ2 Ｏ、２７０ＭＨｚ）の化学シ
フトδ（ｐｐｍ）：１．１８（６Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０
Ｈｚ）、２．３８（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝４．８，７．０Ｈ
ｚ）、２．８７（３Ｈ，ｓ）、３．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝４．８Ｈｚ）よりＮ−メチルバリンであると推定され
たので、標品Ｎ−メチルＤＬバリン（シグマ社製）と比
較したところ、標品の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの化学シ
フト、セルロースＴＬＣのＲｆ値：０．７１〔展開溶
媒：ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１
０：３：１２）と完全に一致したので、未知アミノ酸−
２はＮ−メチルバリンと同定した。
液量３０mlから４５mlに溶出される、未知アミノ酸−２
を含む画分を濃縮し、活性炭カラム（１０ml）に負荷し
た。溶出液量２４〜３４mlの画分を集め、Ｄｏｗｅｘ
５０ＷＸ−８カラム（１ml）に負荷し０．５Ｎ ＮＨ4
ＯＨで溶出後、濃縮、乾固して未知アミノ酸−２の白色
粉末２．１mgを得た。本アミノ酸は分子量：１３１〔Ｆ
ＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ：１３２（Ｍ＋Ｈ）+ 〕および 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（Ｄ2 Ｏ、２７０ＭＨｚ）の化学シ
フトδ（ｐｐｍ）：１．１８（６Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０
Ｈｚ）、２．３８（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝４．８，７．０Ｈ
ｚ）、２．８７（３Ｈ，ｓ）、３．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝４．８Ｈｚ）よりＮ−メチルバリンであると推定され
たので、標品Ｎ−メチルＤＬバリン（シグマ社製）と比
較したところ、標品の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの化学シ
フト、セルロースＴＬＣのＲｆ値：０．７１〔展開溶
媒：ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１
０：３：１２）と完全に一致したので、未知アミノ酸−
２はＮ−メチルバリンと同定した。
【００８２】また、セパビーズＳＰ２０７カラムから８
０％アセトンで溶出される、未知アミノ酸−３を含む画
分を濃縮し、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ−８カラム（Ｈ
+ 型、１ml）に負荷した。１ＮＨＣｌで溶出後、濃縮、
乾固して未知アミノ酸−３の塩酸塩の粉末３．５mgを得
た。本アミノ酸は分子量：１７９〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／
ｚ：１８０（Ｍ＋Ｈ）+ 〕および 1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル（Ｄ2 Ｏ，２７０ＭＨｚ）の化学シフトδ（ｐｐ
ｍ）：２．７８（１Ｈ，ｓ），３．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ
＝６．２Ｈｚ），３．９５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈ
ｚ），７．４〜７．５（５Ｈ，ｍ）よりＮ−メチルフェ
ニルアラニンであると推定されたので、標品Ｎ−メチル
−Ｌ−フェニルアラニン（シグマ社製）と比較したとこ
ろ、標品の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの化学シフト、セル
ロースＴＬＣのＲｆ値：０．８２〔展開溶媒：ｎ−ブタ
ノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１０：３：１
２）〕と完全に一致したので、未知アミノ酸−３はＮ−
メチルフェニルアラニンと同定した。
０％アセトンで溶出される、未知アミノ酸−３を含む画
分を濃縮し、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ−８カラム（Ｈ
+ 型、１ml）に負荷した。１ＮＨＣｌで溶出後、濃縮、
乾固して未知アミノ酸−３の塩酸塩の粉末３．５mgを得
た。本アミノ酸は分子量：１７９〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／
ｚ：１８０（Ｍ＋Ｈ）+ 〕および 1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル（Ｄ2 Ｏ，２７０ＭＨｚ）の化学シフトδ（ｐｐ
ｍ）：２．７８（１Ｈ，ｓ），３．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ
＝６．２Ｈｚ），３．９５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈ
ｚ），７．４〜７．５（５Ｈ，ｍ）よりＮ−メチルフェ
ニルアラニンであると推定されたので、標品Ｎ−メチル
−Ｌ−フェニルアラニン（シグマ社製）と比較したとこ
ろ、標品の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの化学シフト、セル
ロースＴＬＣのＲｆ値：０．８２〔展開溶媒：ｎ−ブタ
ノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１０：３：１
２）〕と完全に一致したので、未知アミノ酸−３はＮ−
メチルフェニルアラニンと同定した。
【００８３】実施例７ ＷＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、
Ａ4 のアミノ酸分析 実施例４で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4
それぞれ約３０μｇを６ＮＨＣｌで１１０℃、２４時間
完全加水分解し、濃縮してアミノ酸分析を行った。その
結果いずれもＡｓｐ（１モル），Ｇｌｕ（１モル），Ｇ
ｌｙ（１モル），Ｓｅｒ（２モル），Ｌｅｕ（１モ
ル），Ｏｒｎ（２モル），Ｔｒｐ（１モル），β−ヒド
ロキシアスパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルバリン
（１モル）およびＮ−メチルフェニルアラニン（１モ
ル）を含むことが判明した。
Ａ4 のアミノ酸分析 実施例４で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、Ａ4
それぞれ約３０μｇを６ＮＨＣｌで１１０℃、２４時間
完全加水分解し、濃縮してアミノ酸分析を行った。その
結果いずれもＡｓｐ（１モル），Ｇｌｕ（１モル），Ｇ
ｌｙ（１モル），Ｓｅｒ（２モル），Ｌｅｕ（１モ
ル），Ｏｒｎ（２モル），Ｔｒｐ（１モル），β−ヒド
ロキシアスパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルバリン
（１モル）およびＮ−メチルフェニルアラニン（１モ
ル）を含むことが判明した。
【００８４】実施例８ ＷＡＰ−８２９４Ａ1 、Ａ2 、
Ａ4 の構成脂肪酸の単離と構造 実施例４で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ1 １０mgを６Ｎ
ＨＣｌで１１０℃、２時間加水分解した。加水分解液を
エーテル抽出し、エーテル層を濃縮、乾固して白色粉末
０．８mgを得た。本物質は分子量：１６０〔ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ ｍ／ｚ１６１（Ｍ＋Ｈ）+ 〕、 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（ＣＤＣｌ3 ，２７０ＭＨｚ）の化学シフトδ（ｐ
ｐｍ）：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．
３〜１．５５（８Ｈ，ｍ）、２．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１６．５，８．８Ｈｚ）、２．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１６．５，３．３Ｈｚ）、４．０３（１Ｈ，ｍ）より
３−ヒドロキシオクタン酸であると推定された。本物質
１００μｇを０．１mlのベンゼン：メタノール（８：
２）に溶解し、トリメチルシリルジアゾメタン（東京化
成社製）１滴を加えて、室温で１０分間メチルエステル
化した。メチルエステル体のＥＩ−ＭＳを測定した結
果、ｍ／ｚ １７３（Ｍ+ −１）イオンピークおよび１
５６（Ｍ+ −１８）、１４３（Ｍ+ −３１）、１２５
（Ｍ+ −３１−１８）の各フラグメントイオンピークと
３−ヒドロキシ脂肪酸メチルエステルのＣ3−Ｃ4 開裂
に由来する特徴的な基準フラグメントイオンピーク ｍ
／ｚ １０３が観測されたので、本物質は３−ヒドロキ
シオクタン酸であると決定した。
Ａ4 の構成脂肪酸の単離と構造 実施例４で得られたＷＡＰ−８２９４Ａ1 １０mgを６Ｎ
ＨＣｌで１１０℃、２時間加水分解した。加水分解液を
エーテル抽出し、エーテル層を濃縮、乾固して白色粉末
０．８mgを得た。本物質は分子量：１６０〔ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ ｍ／ｚ１６１（Ｍ＋Ｈ）+ 〕、 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（ＣＤＣｌ3 ，２７０ＭＨｚ）の化学シフトδ（ｐ
ｐｍ）：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．
３〜１．５５（８Ｈ，ｍ）、２．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１６．５，８．８Ｈｚ）、２．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１６．５，３．３Ｈｚ）、４．０３（１Ｈ，ｍ）より
３−ヒドロキシオクタン酸であると推定された。本物質
１００μｇを０．１mlのベンゼン：メタノール（８：
２）に溶解し、トリメチルシリルジアゾメタン（東京化
成社製）１滴を加えて、室温で１０分間メチルエステル
化した。メチルエステル体のＥＩ−ＭＳを測定した結
果、ｍ／ｚ １７３（Ｍ+ −１）イオンピークおよび１
５６（Ｍ+ −１８）、１４３（Ｍ+ −３１）、１２５
（Ｍ+ −３１−１８）の各フラグメントイオンピークと
３−ヒドロキシ脂肪酸メチルエステルのＣ3−Ｃ4 開裂
に由来する特徴的な基準フラグメントイオンピーク ｍ
／ｚ １０３が観測されたので、本物質は３−ヒドロキ
シオクタン酸であると決定した。
【００８５】ＷＡＰ−８２９４Ａ2 １０mgを上述と同様
の方法で酸加水分解し、エーテル抽出後、エーテル層を
濃縮、乾固して、白色粉末０．９mgを得た。本物質は分
子量：１７４〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １７５（Ｍ＋
Ｈ）+ 〕、 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ，２７
０ＭＨｚ）の化学シフトδ（ｐｐｍ）：０．８７（６
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．１５〜１．５６（７
Ｈ，ｍ）、２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，８．
８Ｈｚ）、２．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，３．
３Ｈｚ）、４．０３（１Ｈ，ｍ）及びメチルエステル体
のＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ１８７（Ｍ+ −１）、１７０（Ｍ
+ −１８）、１５７（Ｍ+ −３１）、１３９（Ｍ+ −３
１−１８）、１０３（Ｃ3 −Ｃ4 開裂、基準フラグメン
トイオンピーク）より３−ヒドロキシ−７−メチルオク
タン酸であると決定した。
の方法で酸加水分解し、エーテル抽出後、エーテル層を
濃縮、乾固して、白色粉末０．９mgを得た。本物質は分
子量：１７４〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １７５（Ｍ＋
Ｈ）+ 〕、 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ，２７
０ＭＨｚ）の化学シフトδ（ｐｐｍ）：０．８７（６
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．１５〜１．５６（７
Ｈ，ｍ）、２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，８．
８Ｈｚ）、２．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，３．
３Ｈｚ）、４．０３（１Ｈ，ｍ）及びメチルエステル体
のＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ１８７（Ｍ+ −１）、１７０（Ｍ
+ −１８）、１５７（Ｍ+ −３１）、１３９（Ｍ+ −３
１−１８）、１０３（Ｃ3 −Ｃ4 開裂、基準フラグメン
トイオンピーク）より３−ヒドロキシ−７−メチルオク
タン酸であると決定した。
【００８６】ＷＡＰ−８２９４Ａ4 １０mgを上述と同様
の方法で酸加水分解し、エーテル抽出後、エーテル層を
濃縮、乾固して白色粉末０．８mgを得た。本物質は分子
量：１８８〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １８９（Ｍ＋Ｈ）
+ 〕、 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ，２７０Ｍ
Ｈｚ）の化学シフトδ（ｐｐｍ）：０．８０（６Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．１５〜１．６（９Ｈ，
ｍ）、２．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，８．８Ｈ
ｚ）、２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，３．３Ｈ
ｚ）、３．９５（１Ｈ，ｍ）およびメチルエステル体の
ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ２０１（Ｍ+ −１）、１８４（Ｍ+
−１８）、１７１（Ｍ+ −３１）、１５３（Ｍ+ −３１
−１８）、１０３（Ｃ3 −Ｃ4 開裂、基準フラグメント
イオンピーク）より３−ヒドロキシ−８−メチルノナン
酸であると決定した。
の方法で酸加水分解し、エーテル抽出後、エーテル層を
濃縮、乾固して白色粉末０．８mgを得た。本物質は分子
量：１８８〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １８９（Ｍ＋Ｈ）
+ 〕、 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ，２７０Ｍ
Ｈｚ）の化学シフトδ（ｐｐｍ）：０．８０（６Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．１５〜１．６（９Ｈ，
ｍ）、２．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，８．８Ｈ
ｚ）、２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，３．３Ｈ
ｚ）、３．９５（１Ｈ，ｍ）およびメチルエステル体の
ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ２０１（Ｍ+ −１）、１８４（Ｍ+
−１８）、１７１（Ｍ+ −３１）、１５３（Ｍ+ −３１
−１８）、１０３（Ｃ3 −Ｃ4 開裂、基準フラグメント
イオンピーク）より３−ヒドロキシ−８−メチルノナン
酸であると決定した。
【００８７】実施例９ 実施例２と同様の操作により得られた粗物質9.０ｇをオ
クタデシルシリカゲル（クロマトレックスＯＤＳ−ＤＭ
１０２０Ｔ、富士シリシア化学製、４５０ml）のカラム
クロマトグラフィーに付し、0.０５％トリフルオロ酢酸
を含むアセトニトリル：水（４：６）の溶媒系で溶出
し、分画した。活性画分を集め、濃縮後、凍結乾燥し、
ＷＡＰ−８２９４ＡＸの白色粉末を４５０mg（塩酸塩）
得た。
クタデシルシリカゲル（クロマトレックスＯＤＳ−ＤＭ
１０２０Ｔ、富士シリシア化学製、４５０ml）のカラム
クロマトグラフィーに付し、0.０５％トリフルオロ酢酸
を含むアセトニトリル：水（４：６）の溶媒系で溶出
し、分画した。活性画分を集め、濃縮後、凍結乾燥し、
ＷＡＰ−８２９４ＡＸの白色粉末を４５０mg（塩酸塩）
得た。
【００８８】実施例１０ 実施例９で得られたＷＡＰ−８２９４ＡＸ１２０mgをオ
クタデシルシリカゲルカラムを用いた高速液体クロマト
グラフィ〔カラム：ＹＭＣ−ＧＥＬ ＳＨ−３４３−
５、２０×２５０mm、山村化学研究所製、移動相0.０５
％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：水（３７：
６３）に十数回にわけて注入し、ＷＡＰ−８２９４ＡＸ
−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３を含む画分を集め、それぞ
れを濃縮し、ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８（１４mg）、Ａ
Ｘ−９（１０mg）、ＡＸ−１３（１２mg）の白色粉末
（塩酸塩）を得た。
クタデシルシリカゲルカラムを用いた高速液体クロマト
グラフィ〔カラム：ＹＭＣ−ＧＥＬ ＳＨ−３４３−
５、２０×２５０mm、山村化学研究所製、移動相0.０５
％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル：水（３７：
６３）に十数回にわけて注入し、ＷＡＰ−８２９４ＡＸ
−８、ＡＸ−９、ＡＸ−１３を含む画分を集め、それぞ
れを濃縮し、ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８（１４mg）、Ａ
Ｘ−９（１０mg）、ＡＸ−１３（１２mg）の白色粉末
（塩酸塩）を得た。
【００８９】実施例１１ ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８、
ＡＸ−９、ＡＸ−１３のアミノ酸分析 実施例１０で得られたＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８ ５mg
を0.２％３−（２−アミノメチル）インドールを添加し
た４Ｎメタンスルホン酸溶液0.５mlに溶解し、１１０
℃、２４時間、酸完全加水分解を行った。加水分解液を
濃縮乾固し少量の水に溶かしてＤowex ５０ＷＸ８（ダ
ウケミカル社製、Ｈ+ 型、１ml）のカラムに負荷し、水
２０mlで洗浄後、0.５Ｎ ＮＨ4 ＯＨ ２０mlで溶出し
た。溶出液を濃縮、乾固した後、少量の水に溶解しセル
ロースの２次元薄層クロマトグラフィー〔展開溶媒 １
次元目、ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：２）、２
次元目、ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１５：
１０：３：１２）およびアミノ酸分析（日立アミノ酸分
析計Ｌ−８５００）を行った。その結果、Ａsp（１モ
ル）、Ｇlu（１モル）、Ｇly（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｌeu（１モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モ
ル）、Ｖal（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸（１モ
ル）を含むことがわかった。
ＡＸ−９、ＡＸ−１３のアミノ酸分析 実施例１０で得られたＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８ ５mg
を0.２％３−（２−アミノメチル）インドールを添加し
た４Ｎメタンスルホン酸溶液0.５mlに溶解し、１１０
℃、２４時間、酸完全加水分解を行った。加水分解液を
濃縮乾固し少量の水に溶かしてＤowex ５０ＷＸ８（ダ
ウケミカル社製、Ｈ+ 型、１ml）のカラムに負荷し、水
２０mlで洗浄後、0.５Ｎ ＮＨ4 ＯＨ ２０mlで溶出し
た。溶出液を濃縮、乾固した後、少量の水に溶解しセル
ロースの２次元薄層クロマトグラフィー〔展開溶媒 １
次元目、ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：２）、２
次元目、ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１５：
１０：３：１２）およびアミノ酸分析（日立アミノ酸分
析計Ｌ−８５００）を行った。その結果、Ａsp（１モ
ル）、Ｇlu（１モル）、Ｇly（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｌeu（１モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モ
ル）、Ｖal（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸（１モ
ル）を含むことがわかった。
【００９０】さらにＷＡＰ−８２９４ＡＸ−９及びＡＸ
−１３各５mgを用いて上述と同様の方法で酸完全加水分
解を行い、加水分解物のアミノ酸分析を行った。その結
果、ＡＸ−９はＡsp（１モル）、Ｇlu（１モル）、Ｇly
（１モル）、Ｓer（２モル）、Ｌeu（１モル）、Ｔrp
（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｐhe（１モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）を含み、ＡＸ−１３はＡsp（１モル）、Ｇlu
（１モル）、β−アラニン（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｌeu（１モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モ
ル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）を含むことが判明した。
−１３各５mgを用いて上述と同様の方法で酸完全加水分
解を行い、加水分解物のアミノ酸分析を行った。その結
果、ＡＸ−９はＡsp（１モル）、Ｇlu（１モル）、Ｇly
（１モル）、Ｓer（２モル）、Ｌeu（１モル）、Ｔrp
（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｐhe（１モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）を含み、ＡＸ−１３はＡsp（１モル）、Ｇlu
（１モル）、β−アラニン（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｌeu（１モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モ
ル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）を含むことが判明した。
【００９１】実施例１２ ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８、
ＡＸ−９、ＡＸ−１３の脂肪酸分析 実施例１０で得られたＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８、ＡＸ
−９、ＡＸ−１３各１mgを６ＮＨＣl で１１０℃、２時
間加水分解した。各加水分解液をエーテル抽出し、エー
テル層を濃縮、乾固した後、0.１mlのベンゼン：メタノ
ール（８：２）及びトリメチルシリルジアゾメタン（東
京化成社製）１滴を加えて、室温で１０分間メチルエス
テル化した。各メチルエステル体のＧＣ−ＭＳ分析〔カ
ラム：ＤＢ−５（内径0.２５mm、長さ３０ｍ、膜厚0.２
５μｍ、Ｊ＆Ｗ社製）、温度：１００〜２４０℃（昇温
１０℃／分）、気相：ヘリウム、0.９９３ml／分〕を行
った。その結果、いずれもＧＣの保持時間9.７分及びＥ
Ｉ−ＭＳのｍ／ｚ１８７（Ｍ+ −１）、１７０（Ｍ+ −
１８）、１５７（Ｍ+ −３１）、１３９（Ｍ+ −３１−
１８）、１０３（Ｃ3 −Ｃ4 開裂、基準フラグメントイ
オン）が３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン酸（ＷＡ
Ｐ−８２９４Ａ2 の構成脂肪酸）のメチルエステル体と
一致した。従ってＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８、ＡＸ−
９、ＡＸ−１３はいずれも構成脂肪酸として３−ヒドロ
キシ−７−メチルオクタン酸を含むことが判明した。
ＡＸ−９、ＡＸ−１３の脂肪酸分析 実施例１０で得られたＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８、ＡＸ
−９、ＡＸ−１３各１mgを６ＮＨＣl で１１０℃、２時
間加水分解した。各加水分解液をエーテル抽出し、エー
テル層を濃縮、乾固した後、0.１mlのベンゼン：メタノ
ール（８：２）及びトリメチルシリルジアゾメタン（東
京化成社製）１滴を加えて、室温で１０分間メチルエス
テル化した。各メチルエステル体のＧＣ−ＭＳ分析〔カ
ラム：ＤＢ−５（内径0.２５mm、長さ３０ｍ、膜厚0.２
５μｍ、Ｊ＆Ｗ社製）、温度：１００〜２４０℃（昇温
１０℃／分）、気相：ヘリウム、0.９９３ml／分〕を行
った。その結果、いずれもＧＣの保持時間9.７分及びＥ
Ｉ−ＭＳのｍ／ｚ１８７（Ｍ+ −１）、１７０（Ｍ+ −
１８）、１５７（Ｍ+ −３１）、１３９（Ｍ+ −３１−
１８）、１０３（Ｃ3 −Ｃ4 開裂、基準フラグメントイ
オン）が３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン酸（ＷＡ
Ｐ−８２９４Ａ2 の構成脂肪酸）のメチルエステル体と
一致した。従ってＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８、ＡＸ−
９、ＡＸ−１３はいずれも構成脂肪酸として３−ヒドロ
キシ−７−メチルオクタン酸を含むことが判明した。
【００９２】実施例１３ ＷＡＰ−８２９４Ａの製剤 薬剤組成物を調製する代表例を次に示す。注射剤 ：第１２改正日本薬局方解説書製剤総則「注射
剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８２９４Ａ塩酸塩４０mg
を無菌生理食塩水（日局）３mlに溶解し、３ml用注射用
アンプルに無菌充填後、熔封して注射剤を製造した。錠 剤 ：同総則「錠剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８２
９４Ａ2 塩酸塩１００mgを賦形剤として乳糖（日局）６
５mg、でんぷん（日局）１4.２mg、結合剤としてポリビ
ニルピロリドンＫ２５（日局）２０mg、滑沢剤としてス
テアリン酸マグネシウム（日局）0.８mgを加えて均一に
混合し打錠機で圧縮成型し、１錠当り２００mgの素錠を
製造した。軟膏剤 ：同総則「軟膏剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８
２９４Ａ2 塩酸塩４０mgを1.２ｇのポリエチレングリコ
ール４０００（日局）、６００mgのポリエチレングリコ
ール４００（日局）１５６mgの親水ワセリン（日局）お
よび抗カビ剤としてパラオキシ安息香酸プロピル（日
局）0.８mg、パラオキシ安息香酸エチル（日局）3.２mg
を加温溶融し均一に練合して１チューブ当り４ｇの軟膏
剤を製造した。点眼剤 ：同総則「点眼剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８
２９４Ａ2 塩酸塩２５mgを0.９％の無菌食塩水５mlに溶
解し、防腐剤として塩化ベンザルコニウム（日局）0.５
mgを加えて均一な溶液とし、無菌濾過を経て、５ml用点
眼容器に無菌充填して点眼剤を製造した。
剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８２９４Ａ塩酸塩４０mg
を無菌生理食塩水（日局）３mlに溶解し、３ml用注射用
アンプルに無菌充填後、熔封して注射剤を製造した。錠 剤 ：同総則「錠剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８２
９４Ａ2 塩酸塩１００mgを賦形剤として乳糖（日局）６
５mg、でんぷん（日局）１4.２mg、結合剤としてポリビ
ニルピロリドンＫ２５（日局）２０mg、滑沢剤としてス
テアリン酸マグネシウム（日局）0.８mgを加えて均一に
混合し打錠機で圧縮成型し、１錠当り２００mgの素錠を
製造した。軟膏剤 ：同総則「軟膏剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８
２９４Ａ2 塩酸塩４０mgを1.２ｇのポリエチレングリコ
ール４０００（日局）、６００mgのポリエチレングリコ
ール４００（日局）１５６mgの親水ワセリン（日局）お
よび抗カビ剤としてパラオキシ安息香酸プロピル（日
局）0.８mg、パラオキシ安息香酸エチル（日局）3.２mg
を加温溶融し均一に練合して１チューブ当り４ｇの軟膏
剤を製造した。点眼剤 ：同総則「点眼剤」の規定に準拠し、ＷＡＰ−８
２９４Ａ2 塩酸塩２５mgを0.９％の無菌食塩水５mlに溶
解し、防腐剤として塩化ベンザルコニウム（日局）0.５
mgを加えて均一な溶液とし、無菌濾過を経て、５ml用点
眼容器に無菌充填して点眼剤を製造した。
【００９３】
【発明の効果】上述のとおり、本発明の新規抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａは、グラム陽性球菌特に現在、医療の
現場で混迷を深めているメチシリン耐性黄色ブドウ球菌
感染症に優れた治療効果が小動物感染モデルから得られ
ているので、ＭＲＳＡ感染症を含めたグラム陽性細菌を
起炎菌とする疾患の治療剤として有用である。
ＡＰ−８２９４Ａは、グラム陽性球菌特に現在、医療の
現場で混迷を深めているメチシリン耐性黄色ブドウ球菌
感染症に優れた治療効果が小動物感染モデルから得られ
ているので、ＭＲＳＡ感染症を含めたグラム陽性細菌を
起炎菌とする疾患の治療剤として有用である。
【図１】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａの高速液体クロマ
トグラフィーの分離によるクロマトグラムを示す図面で
ある。
トグラフィーの分離によるクロマトグラムを示す図面で
ある。
【図２】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 （塩酸塩）の紫
外線吸収スペクトル（水中）を示す図面である。
外線吸収スペクトル（水中）を示す図面である。
【図３】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 （塩酸塩）の赤
外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ法）を示す図
面である。
外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ法）を示す図
面である。
【図４】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ2 （塩酸塩）の 1
Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、Ｄ2 Ｏ）を示す
図面である。
Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、Ｄ2 Ｏ）を示す
図面である。
【図５】抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａの酸完全加水分解
生成物の二次元ＴＬＣクロマトグラムを示す図面であ
る。
生成物の二次元ＴＬＣクロマトグラムを示す図面であ
る。
【図６】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸの高速液体クロ
マトグラフィーの分離によるクロマトグラムを示す図面
である。
マトグラフィーの分離によるクロマトグラムを示す図面
である。
【図７】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８（塩酸塩）
の紫外線吸収スペクトル（水中）を示す図面である。
の紫外線吸収スペクトル（水中）を示す図面である。
【図８】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８（塩酸塩）
の赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ法）を示
す図面である。
の赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ法）を示
す図面である。
【図９】抗生物質ＷＡＰ−８２９４ＡＸ−８（塩酸塩）
の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨz 、ＤＭＳＯ−
Ｄ6 ）を示す図面である。
の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨz 、ＤＭＳＯ−
Ｄ6 ）を示す図面である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:01 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 加藤 あずさ 東京都中央区日本橋室町１−５−３ わ かもと製薬株式会社内 (72)発明者 相場 勇志 東京都中央区日本橋室町１−５−３ わ かもと製薬株式会社内 (72)発明者 小久保 直美 東京都中央区日本橋室町１−５−３ わ かもと製薬株式会社内 (72)発明者 鈴木 信 東京都中央区日本橋室町１−５−３ わ かもと製薬株式会社内 (72)発明者 前田 孚 東京都中央区日本橋室町１−５−３ わ かもと製薬株式会社内 (56)参考文献 特開 昭61−227788（ＪＰ，Ａ) 特開 昭54−95796（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 2/00 C12P 1/04 C12N 1/20 ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＰｕｂＭｅｄ
Claims (11)
- 【請求項１】 リソバクター (Lysobacter)属に属し、
抗生物質混合物WAP-8294Aの生産能を有する微生物を培
養することにより得られる、 次の物理化学的性状を有
する抗生物質混合物ＷＡＰ−８２９４Ａ又はその薬学的
に許容される塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１３〜２２０℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
４．０〜６．１分、８．０分、１１．１分、１２．５
分、１６．５分、１７．９分、１８．８分、 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(45：55) 流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８） 1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：（２７０
ＭＨｚ、Ｄ2 Ｏ）、メチル；メチレン、メチン及び複素
環又は芳香環に由来する複雑なプロトンシグナルが観測
される。 （９）分子量：１，４００〜１，７００ （10）有機化合物定性試験（ナトリウム溶融法）：炭
素、水素、酸素、窒素の元素よりなる化合物 （11）酸完全加水分解によるニンヒドリン陽性物質：Ａ
ｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｏｒ
ｎ、Ｎ−メチルバリン、β−ヒドロキシアスパラギン酸
およびＮ−メチルフェニルアラニンを与える。 （12）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４２°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （13）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項２】 次の物理化学的性状を有する抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａ1 又はその薬学的に許容される塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１５〜２２５℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
８．０分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(45：55) 流速：１ml／分 (６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３３cm-1 （８）分子量：１５４７．９〔ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １
５４８．９（Ｍ＋Ｈ）+、ｍ／ｚ １５４６．７（Ｍ−
Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17 （10）酸完全加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ
（１モル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓ
ｅｒ（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モ
ル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシア
スパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）および３−ヒドロキシオクタン酸（１モル）
を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４１°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項３】 次の物理化学的性状を有する抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａ2 又はその薬学的に許容される塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１５〜２２５℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１１．１分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(45：55) 流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５６１．９〔ＦＡＢ−Ｍａｓｓ ｍ／
ｚ １５６２．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５６１．２
（Ｍ−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ73Ｈ111 Ｏ21Ｎ17 （10）酸完全加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ
（１モル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓ
ｅｒ（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モ
ル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシア
スパラギン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン
（１モル）および３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン
酸（１モル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４２°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項４】 次の物理化学的性状を有する抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４Ａ4 又はその薬学的に許容される塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１５〜２２５℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１６．５分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(45：55) 流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７５n
m、２８０nm、２８７nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ、ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５７５．９〔ＦＡＢ−Ｍａｓｓ ｍ／
ｚ １５７６．９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５７５．４
（Ｍ−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ74Ｈ113 Ｏ21Ｎ17 （10）酸加水分解物：Ａｓｐ（１モル）、Ｇｌｕ（１モ
ル）、Ｇｌｙ（１モル）、Ｌｅｕ（１モル）、Ｓｅｒ
（２モル）、Ｔｒｐ（１モル）、Ｏｒｎ（２モル）、Ｎ
−メチルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギ
ン酸（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モ
ル）および３−ヒドロキシ−８−メチルノナン酸（１モ
ル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕D 20＝＋４３°（ｃ＝０．５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項５】 リソバクター (Lysobacter)属に属し、抗
生物質混合物WAP-8294Aの生産能を有する微生物を培養
することにより得られる、次の物理化学的性状を有する
抗生物質混合物ＷＡＰ−８２９４ＡＸ又はその薬学的に
許容される塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：１９６〜２００℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
5.３分、5.９分、6.２分、6.５分、6.９分、7.３分、8.
１分、9.３分、9.８分、１1.３分、１2.１分、１3.７
分、１5.０分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(37：63) 流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル （水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ，ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８） 1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：（２７０
ＭＨz 、ＤＭＳＯ−Ｄ6）、メチル、メチレン、メチン
及び複素環又は芳香環に由来する複雑なプロトンシグナ
ルが観測される。 （９）分子量：1,４００〜1,７００ （10）有機化合物定性試験（ナトリウム溶融法）：炭
素、水素、酸素、窒素の元素よりなる化合物 （11）酸完全加水分解によるニンヒドリン陽性物質およ
び脂肪酸：Ａsp、Ｇlu、Ｇly、β−Ａla、Ｌeu、Ｓer、
Ｔrp、Ｏrn、Ｖal、Ｎ−メチルバリン、β−ヒドロキシ
アスパラギン酸、Ｐhe、Ｎ−メチルフェニルアラニンお
よび３−ハイドロキシ−７−メチルオクタン酸を与え
る。 （12）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２４° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （13）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項６】 次の物理化学的性状を有する抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４ＡＸ−８又はその薬学的に許容される
塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：１９６〜２００℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
9.３分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(37：63)流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ，ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３３cm-1 （８）分子量：１５４８〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
４９（Ｍ＋Ｈ）+ 〕 （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17 （10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、Ｇly（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer（２モ
ル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｖal（１モ
ル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸（１モル）、Ｎ−
メチルフェニルアラニン（１モル）および３−ヒドロキ
シ−７−メチルオクタン酸（１モル）を与える。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２５° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項７】 次の物理化学的性状を有する抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４ＡＸ−９又はその薬学的に許容される
塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２１６〜２２０℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
9.８分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(37：63) 流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ，ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５４８〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
４９（Ｍ＋Ｈ）+ 、ｍ／ｚ １５４７（Ｍ−Ｈ）- 〕 （９）分子式：Ｃ72Ｈ109 Ｏ21Ｎ17 （10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、Ｇly（１モル）、 Ｌeu（１モル）、Ｓer（２モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏ
rn（２モル）、Ｎ−メチルバリン（１モル）、β−ヒド
ロキシアスパラギン酸（１モル）、Ｐhe（１モル）、お
よび３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン酸（１モ
ル）。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２８° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項８】 次の物理化学的性状を有する抗生物質Ｗ
ＡＰ−８２９４ＡＸ−１３又はその薬学的に許容される
塩。 （１）外観：白色粉末 （２）融点：２０５〜２１０℃（分解） （３）溶解性：水、メタノール、ｎ−ブタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホオキサイドに可溶、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 （４）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ、ライド
ンスミス、過マンガン酸カリウム水溶液、硫酸、ヨード
ベーパー反応に陽性、ＵＶランプ２５４nmの照射によっ
てクエンチングスポットを示す。モーリッシュ、硝酸
銀、塩化第二鉄、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （５）高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：
１5.０分 ただし、高速液体クロマトグラフィーの溶出条件は以下
の通りである： カラム：YMC A-312(6×150mm) 移動相：0.05％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリ
ル：水(37：63)流速：１ml／分 （６）紫外線吸収スペクトル（水中）：λmax ２７３n
m、２８０nm、２８９nm （７）赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ，ＫＢｒ
法）：特性吸収 ３３００cm-1、１７２０〜１７１５cm-1、１６３６c
m-1、１５４１cm-1、１４０４cm-1、１２０７cm-1、１
１３７cm-1 （８）分子量：１５７６〔ＦＡＢ−Ｍass ｍ／ｚ １５
７７（Ｍ＋Ｈ）+ 〕 （９）分子式：Ｃ74Ｈ113 Ｏ21Ｎ17 （10）酸完全加水分解物：Ａsp（１モル）、Ｇlu（１モ
ル）、β−アラニン（１モル）、Ｌeu（１モル）、Ｓer
（２モル）、Ｔrp（１モル）、Ｏrn（２モル）、Ｎ−メ
チルバリン（１モル）、β−ヒドロキシアスパラギン酸
（１モル）、Ｎ−メチルフェニルアラニン（１モル）お
よび３−ヒドロキシ−７−メチルオクタン酸（１モ
ル）。 （11）比旋光度：〔α〕20 D ＝＋２７° （Ｃ＝0.５、
Ｈ2 Ｏ） （12）塩基性、酸性、中性の区別：両性 - 【請求項９】 リソバクター（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ）
属に属し、請求項１〜８のいずれか１項記載の抗生物質
ＷＡＰ−８２９４Ａを生産する能力を有する微生物を培
地中で培養し、培養中に該抗生物質を生産蓄積せしめ、
ついでこれを採取することを特徴とする請求項１〜８の
いずれか１項記載の抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａの製造
法。 - 【請求項１０】 抗生物質ＷＡＰ−８２９４Ａの生産菌
である、Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ． ＷＡＰ−８２９
４。 - 【請求項１１】 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗
生物質ＷＡＰ−８２９４Ａ及びその薬学的に許容される
塩の少なくとも１種を含有する抗菌剤。
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