JPH02117696A - 抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はガリデルミン（Ｇａｌｌｉｄｅｒｍｉｎ　）と
称される新規抗生物質、その塩、それらを含む薬学的組
成物、およびそれらの製造法に関する。

多環ペプチド抗生物質が多数知られている。これらの抗
生物質の若干、例えばナイシン、スブチリン・ズラマイ
シン（ｄｕｒａｍｙｃｉｎ　）、シンナマイシン（ｃｉ
ｎｎａｍｙｃｉｎ　）、アンコベニン（ａｎｃｏｖｅｎ
ｉｎ　）Ｒｏ　０９−０１９８、ｐｅｐ　５およびエビ
デルミン（ｅｐｔｄｅｒｍｉｎ　）、はランチオニン構
造を含む。

典型的には、これらの抗生物質は高含量の不飽和アミノ
酸（デヒドロアラニン、デヒドロブチリン）およびチオ
エーテルアミノ酸〔メソーラン千オニン、（２３，３Ｓ
、６Ｒ）−３−メチルランチオニン〕を有する。リシノ
ラニン、３−ヒドロキシアスパラギン酸および５−（２
−アミノビニル）−Ｄ−システィンもまた若干の構成員
中に見出された。

ズラマイシンおよびシンナマイシンとの間の構造類似性
を別として、これらの種々の公知ペプチド抗生物質問に
配列相同性があまり存在しないと思われる。これは抗生
物質のプロペプチド配置を示す第１図において明らかに
される。この図から、例えばエビデルミンは他の抗生物
質と有意な配列Ｆ目間性を示さないことが明らかに見ら
れるであろう。

さらに、エビデルミンの起源が、それが微生物スタヒロ
コソカス・エビデルミス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓｅｐｉｄｅｒｍｉｓ　）の株の培養によって得られ、
他の抗生物質がストレプトコッカス・ラクチス（５ｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｃｔｉｓ　）　（ナイシン
）、バシラス・サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ
ｉｌｌｉｓ　）　　（スプチリン）、ストレプトマイセ
ス・シンナモネウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｉ
ｎｎａｍｏｎｅｕｓ　）およびストレプトマイセス種（
シンナマイシン、ズラマイシンおよびアンコベニン）並
びにストレプトベルティシラム・グリセオベルティシラ
ム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｍｇｒｉｓｅ
ｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｍ　）　（Ｒｏ　Ｏ９０１９８
）の株の培養により得られた点で他の抗生物ｒｒ１（ｐ
ｅｐ５を除き）の起源と異なることを認めることができ
る。

エビデルミンは微生物プロピオニバクテリウム・アクネ
ス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｃｎｅｓ
　）に対して殊に活性であり、そのため、この病気の治
療に使用する潜在的治療活性物質として研究された。

しかし、我々は今回エビデルミスに構造的に密接に関連
する。ペプチドがエビデルミンに比べてプロピオニバク
テリウム・アクネスに対して意外に大きい活性を有する
ことを見出した。公知ペプチド抗生物質が一般に構造的
に互いに著しく異なる事実を考えると、単に１アミノ酸
の置換によりそれらの構成員の１つと異なる他のそのよ
うな抗生物質が存在することは意外であり、エビデルミ
ス中の１つのアミノ酸のそのような交換が微生物プロピ
オニバクテリウム・アクネスに対する活性の存意な増加
を生ずることはさらに意外であり、全く予想できない。

従って本発明は化合物として、我々がガリデルミン（Ｇ
ａｌｌｉｄｅｒｍｉｎ　）と称し、構造：を有するもの
、およびその薬学的に許容される酸付加塩を提供する。

ガリデルミンはドイツチエ・ザムルング・フォノ・ミク
ロオルガニスメン（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ　Ｓａｍｍｌｕｎ
ｇｖｏｎ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　）に１９
８８年５月１８日にブダペスト条約の条件下に寄託され
、受託番号ＤＳＭ４６１６を受けた微生物スタヒロコツ
カス・ガリナラム（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｇ
ａｌｌｉｎａｒｕｍ　）　（Ｆ１６／Ｐ５７）Ｔｕ３９
２８またはその変異体の培養により生成されることがで
きる。

スタヒトコソカス・ガリナラム（Ｆ１６／　Ｐ５７）Ｔ
ｕ３９２８　　（０５Ｍ４６１６）はドフリース（Ｄｅ
ｖｒｉｅｓｅ　）ほかにより記載された新たに開発され
たスタヒロコソカス種に属する〔インターナショナル・
ジャーナル・オブ・システマチック・バクテリオロジー
（Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、
　）３３．４８０〜４８６　　（１９８３））。その株
はニワトリトサカから分離することができる。

株Ｓ、ガリナリウム（Ｆ　１６／Ｐ　５７）　’ｒｕ３
９２８　（０５Ｍ４６１６）は前節に言及したドフリー
ス（Ｄｅｖｒｉｅｓｅ　）ほかによる論文中に詳細に記
載されている。

Ｓ、ガリナラムとＳ、エピデルミスとの間のＤＮＡ／Ｄ
ＮＡ相同性は１０〜２５％にすぎず、ガリデルミンおよ
びエピデルミン生産株が明らかに別個の種に属すること
を示すことを認めるべきである。２つの種が若干の他の
標識例えばノボビオシン耐性およびＳ、ガリナラムの広
範囲の陽性Ｒ氷化物反応（セロビオース、マンニトール
、メリジトース、トレハロース、アラビノース、リボー
スおよびキシリトール）により識別されることもまた認
めるべきである〔アーカイブス・オブ・ミクロバイオロ
ジー（Δｒｃｈ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）　　９２
．６５〜８５（１９７３）、ジャーナル・オブ・クリニ
カル・ミクロバイオロジー（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ、）、■、８２〜８８（１９７５）、およ
び「原核生物（Ｔｈｅ　Ｐｒｏｃａｒｙｏｔｅｓ　）Ｊ
スプリンガー・フェルラーク（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅ
ｒｌａｇ、　Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ　）、１５４８〜１
５６９　　（１９８１））。

従って、本発明はさらに、ガリデルミンを発現できる微
生物、好ましくはＳ、ガリデルミン（Ｆ１６／Ｐ５７）
Ｔｕ３９２８　（０５Ｍ４６１６）を、ガリデルミンが
発現され、培地中へ分泌される条件下に培養し次いでガ
リデルミンを培地から分離すること、および望むならば
分離された物質をその薬学的に許容される塩に転化する
ことを含むガリデルミンおよびその薬学的に許容される
塩を製造する方法を提供する。

ガリデルミン生産微生物例えばＳ、ガリデルミ７　（Ｆ
　１６／Ｐ　５７）　Ｔｕ　３９２８（０５Ｍ４６１６
）の培養は普通の培地を用いる標準法により行なうこと
ができる。例えば、Ｓ、ガリデルミン（Ｆ１６／Ｐ５７
）Ｔｕ３９２８　　（０５Ｍ４６１６）を適当な窒素源
、炭素源、アルカリ土類金属の水酸化物を含む培地、例
えば肉エキス、麦芽エキス、Ｃａ　（ＯＨ）　ｚを含む
培地を適当なバイオリアクター中で培養することができ
る。培養は通気下に、例えば５．４〜８．５のｐＨ範囲
中であるべきであり、好ましくは培養を６〜７の範囲内
のｐＨで開始する。

ガリデルミンは酌酵ブロスから、そのような培地からの
小分子量タンパク質の分離に使用される適当な普通の方
法で分離することができる。

殊に、培地を吸着剤で処理する筒車な手段、次の弱陽イ
オン性イオン交換樹脂上の吸着、脱塩および場合により
さらにクロマトグラフ精製例えば逆相ＨＰＬＣまたはゲ
ルセファデックス（Ｇｅ１Ｓｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　
Ｈ２０上の例えばメタノール１０．０１Ｎ−ＨＣＩ　（
９：　１）を溶離剤として用いるクロマトグラフィーの
段階を含む操作によりガリデルミンを容易に分離するこ
とができることが見出された。

化合物ガリデルミンは強塩基性であるので、それは常法
により適当な薬学的に許容される酸で容易に酸付加塩を
形成する。この目的に使用できる生理学的に許容される
有機または無機酸は例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、ベ
ンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンス
ルホン酸およびシクロヘキシルスルファミン酸である。

抗菌活性 最小阻止ｌ（ＭＩＣ１表１）は次の組成の液体ＢＦ培地
：乳酸ナトリウム０．５％、硫酸ナトリウム０．５％、
リン酸二水素カリウム０．０５％、リン酸水素二カリウ
ム０．１５％、塩化マグネシウム０．０２％、塩化アン
モニウム０．０５％、グルコース１％；Ｃａ−パントテ
ン酸塩５０μｇ１葉酸０．２５μｇ、ナイアシン５０μ
ｇ、ｐ−アミノ安息香酸２５μｇ、ピリドキサール塩酸
塩５０μｇおよびリボフラビン２５μｇ補給（毎ｍ７り
、中で測定した。

結果は表１中に示される。

プロピオニバクテリウム・アクネスに関するエビデルミ
ンとの比較研究において、次のＭＩＣ値が得られた： ＭＩＣ（μｇ／ｍ／） ガリデルミン　　　　　０．１２５ エビデルミン　　　　　０．２５ 広域スペクトル抗菌活性を顧慮すると、ガリデルミンお
よびその酸付加塩は細菌との戦い、および細菌感染の治
療に有用である。殊に、プロピオニバクテリウム・アク
ネスの重要株に対するそれらの活性を考えるとガリデル
ミンおよびその酸付加塩は皮膚感染例えば座蒼、湿疹、
インペチゴおよびフレグモーネとの戦いに殊に有用であ
る。

従って、本発明の他の特徴によれば、活性成分としてガ
リデルミンまたはその薬学的に許容される酸付加塩を、
１種またはそれ以上の不活性薬学的担体および（または
）賦形剤に関連して含む薬学的組成物が提供される。

前記ポリペプチドの薬学的投与のために、薬学技術に普
通に使用される担体および賦形剤を用い、場合により他
の活性成分と組合せて、液体または固体形態の調製物に
組込むことができる。調製物は、例えば経口、非経口、
腸内または好ましくは局所に適用することができる。好
ましい形態には、例えば液剤、乳剤、ゲル剤、噴霧剤、
ローション剤、軟膏剤、クリーム剤または散剤が含まれ
る。

有利には、組成物を投薬単位として配合することができ
、各単位は活性成分の一定量の供給に適合される。合計
１日量はもちろん治療される被験者および関連疾患によ
って変えることができる。

本発明のなお他の特徴によれば、感染に悩みまたは感染
され易い患者を治療する方法であって、前記患者に有効
量のガリデルミンまたはその薬学的に許容される塩を投
与することを含む治療方法が提供される。

ガリデルミンおよびその酸付加塩はまた化粧用配合物、
殊に安定剤として作用するコラーゲンを含む配合物、中
の添加剤として使用できる。

本発明による化粧用配合物はガリデルミンまたはその酸
付加塩を適当な担体および（または）賦形剤、好ましく
はコラーゲン、並びに場合により化粧用調製物に適する
他の添加剤例えば香料および着色剤に関連して含む。

実施例１ 発酵 Ｓ、ガリナラムの超凍結培養株をＧＡ培地含有寒天ディ
スクの接種に用いた。接種したディスクを３７゛Ｃで１
２時間維持した後これを、肉エキス３４３％、麦芽エキ
ス３．０％、Ｃａ（Ｏｉｌ）ｚ　Ｏ，３８％からなるｐ
Ｈ６，５の培地１００ｍｊ！を含む三角フラスコに移し
た。

接種フラスコを回転振とう器（Ｒｅ２Ｏ３型、インフォ
ースＡ　Ｃ（Ｉｎｆｏｒｓ　ＡＧ　Ｂａ５ｅｌ　））上
で２６０ｒｐｍの速度および３６°Ｃの温度で８時間維
持した。生じた前培養２００ｍＡを、インテンサー系を
備えた２０１７１Ｎ容量バイオアクタ−発酵容器〔ジオ
バノラ・プレレス（に１０ｙａ１０１ａ　Ｆｒｅｒｅｓ
Ｍｏｎｔｈｅｙ　）　）の接種に用いた。用いた培地は
前節に記載したと同様であったが、しかし、さらにＮａ
Ｃｆｆ６％を含有した。通気およびかくはん速度を０．
４　ｖｏｌ／ｖｏｌ　／分および９００ｒｐｍに調整し
た。ｐ　Ｏｚは初めの５時間内に１０％未満に速やかに
低下し、１０時間後それは残りの発酵時間内に８０％に
上昇した。ｐＨは初めの８時間内に６．５から５．４に
低下し、次いでそれが残りの発酵時間内に８．５に上昇
した。最大細胞密度は２４時間後に到達され、８〜９×
１０”細胞毎ｍｌであった。泡の発生はポリウラックス
ボリオール（Ｐｏ１ｙｕｒｅｘ　Ｐｏ１ｙｏｌ　）ＰＰ
Ｇ２０２５　（ＢＰ　・ゲミカルズ（ＢＰ　Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌｓ　）製〕の反復添加により低下させた。

分離 発酵３４時間後、吸着剤樹脂アンバーライト（八ｍｂｅ
ｒｌｉｔｅ　）Ｘ　Ａ　Ｄ　　１１８０を直接発酵容器
中に加えた。吸着剤３ハツチ（発酵ブロスの容積に関し
２％、１％および１％の量）を４５分間隔で加えた。樹
脂を濾過し、３０Ａの水およびメタノール１０．０１Ｎ
−ＨＣＩ！　（９：　１）で洗浄し、活性溶離剤（１，
４Ｉりを減圧下に濃縮し、２．７ｇの乾燥重量を得た。

次いで生成物を再びメタノール１０．０ＩＮ−ＨＣＩ　
　（９：　１）に溶解し、アンバーライト（Ａｍｂｅｒ
ｌｉｔｅ　）　　Ｉ　ＲＣ−５０（Ｈ”形）にｐＨ５，
５で加えた。次いで樹脂を水で洗浄し、０．ＩＮＨＣβ
で溶離した。

ガリデルミンを含む溶出液を次いでアンバーライトＸＡ
Ｄ−１１８０に接触させて脱塩を行ない、溶液をアンバ
ーライトから分離し、凍結乾燥した。

その後凍結乾燥生成物を水に溶解し、逆相ＨＰＬＣによ
りクロマトグラフを行なった。この段階は２ポンプ５０
１、自動注入器ＷＩＳＰ７１２および勾配プログラマ−
Ｍ２Ｂ５を有するウェーターズ（Ｗａｔｅｒｓ　）系で
行なわれる。固定相ヌクレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ
　）　１０　Ｃ１８または５Ｃ１ｇ　（カラム４．６　
Ｘ　２５０　ｍｍおよび８Ｘ２５０＋＋ｏｎ）ＪよびＨ
Ｄ−Ｇｅｌ−ＲＤ−７ｓ−３００（カラム４×１５０ｍ
ｍ）を用いる。溶離はアセトニトリル／水中０．１％ト
リフルオロ酢酸の種々の勾配を用いて行なう。生じたガ
リデルミンを含む溶出液を捕集し、蒸発により濃縮し、
望むならば数回水に吸収させて凍結乾燥することができ
る。

脱塩段階から生じた凍結乾燥生成物をＲＰ−ＨＰＬＣＯ
代りにゲルクロマトグラフィーにより精製することがで
きる。そのような操作において凍結乾燥物はメタノール
１０．０１Ｎ−Ｈ（１（９：１）に溶解され、セファデ
ックスＬＨ２０を固定相として用いるカラムに通される
。ガリデルミンを含む生じた溶出液は前記のように処理
される。

発酵によるガリデルミンの生成は、前記例について、ペ
プチン１０ｇ、ラブレムコ（Ｊａｂ　Ｉｅｍｃｏ　）パ
ウダ〔オキソイド（０ｘｏｉｄ　））　８　ｇ、　　Ｎ
ａＣ１３ｇ　％　Ｎａｚ＋＋ｐｏａ　２　ｇ　％グルコ
ース１０ｇ　（別個に滅菌）、寒天２０　ｇ、　ＨｚＯ
１ｊｌ！、　　ｐＨ７，２〜７．４からなるＧＡ寒天１
０ｍｊ２を含む寒天平板上の標準試験株ミクロコツカス
・ルテウスＡＴＣＣ９３４１を用いて追跡することがで
きる。

株Ｓ、ガリナルムは管中次の培地ニラプレムコパウダ〔
オキソイド（０ｘｏｉｄ　））　３３　ｇ、麦芽エキス
〔フレンケル（Ｆｒ’１ｎｋｅｌ　）十エク　（Ｅｃｈ
　））３０　ｇ　、、Ｃａ（０１１）ｚ　３．７　ｇ　
、グリ（！０−ル４００ｇ、１１ｚ０　１１．ｐＨ６，
０、中に一１８°Ｃで貯蔵することができる。

実施例２ チンキ チンキｌｏｏｇ当り： ガリデルミン　　　　　　　　　　　１．０ｇエタノー
ル（９４，５容量％）　　　　　５６．０　ｇｌ、２−
プロピレングリコール　　４０．０　ｇ脱塩水　　　　
　　３．０ｇ 製造 ガリデルミンをエタノール／１，２−プロピレングリコ
ール／水の混合物中に溶解し、次いで溶液を濾過滅菌す
る。

実施例３ ０−シヨン ローション１００ｇ当り： ガリデルミン　　　　　　　　　　　１　、００ｇ１．
２−プロピレングリコール　　　７．００ｇコン（Ｂｅ
ｎｚａｌｋｏｎ）　Ａ　”’　）パルミチン酸セチル　
　　　　　　　０．８０ｇ脱塩水　　　　全量１００　
ｇ 製造 上記量のアルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリ
ド、ソルビタンモノパルミタート、ソルビマクロゴルパ
ルミタート、オレイン酸デシル、セチルおよびステアリ
ルアルコール、並びにパルミチン酸セチルを水７５ｍｌ
中へかくはん下に入れ、１．　２−プロピレングリコー
ル中のガリデルミンの濾過溶液および残余の水をかくは
ん下に入れ、チンキを均質化する。

実施例４ ゲル ゲル１００ｇ当り： ガリデルミン １．０ｇ ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル　　　　　１．６μｌ−
ヒドロキシ安息香酸フロヒ）Ｌｉ　　　　　０．４ｇ香
料　　　　　　　　適量 水酸化ナトリウム溶液　　　　　　　ｐＨ６，５まで脱
塩水　　　　　全量１００ｇ 賦形剤明示量を水７５ｍＡ中へかくはん下に入れ、ガリ
デルミンを１．２−プロピレンと残余の水との混合物に
溶解し、この溶液をまたかくはん下に入れ、完成ゲルを
もう一度均質化する。

参照例１ シリカゲルプレー）６０Ｆ２５．　　（メルク（Ｍｅｒ
ｃｋＤａｒｍｓ　ｔａｄ　ｔ）　）上の薄層クロマトグ
ラフにかけたとき、次のＲ，値がガリデルミンに対して
認められた： 参照例２ ペプチド（１００ｎｍｏｌ）の全加水分解を、密閉瓶中
でチオグリコール酸（５μｌ）を含む６ＮＨ（１（２０
０μｌ）中で窒素下に１００℃で１８時間行なった。薄
発後残留氷解物をクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ２，２
中に溶解し、アミノ酸アナライザーＬＫＢ４１５０の標
準プログラムを用いて分析した。次の値が見出された（
計算値）二Ａｌａ　１．９８　（２）、　Ａｓｐ　Ｏ，
９８（１）、　Ｇｌｙ　２．１０　（２）。

ｌｉｅ　Ｏ，９２（１）、　Ｌｅｕ　Ｏ，９８（１）、
　Ｌａｎ　２．０　（２）。

Ｌｙｓ　１．９１　（２）、　ＭｅＬａｎ　１．０　（
１）、　Ｐｈｅ　１．８６　（２）。

Ｐｒｏ　０．９１　（１）、　Ｔｙｒ　Ｏ，８７（１）
。

参照例３ アミノ酸の配置の決定 タンパク質アミノ酸、殊にランチオニンおよび３−メチ
ルランチオニンの配置を、ガスクロマトグラフ法をシク
ロマド・オートプリハート（Ｓｉｃｈｒｏ−ｍａｔ　Ａ
ｕｔｏｄｅｒｉｖａｔ）　１００　　（シーメンス（Ｓ
ｉｍｅｎｓ）　）を用いキラシル・パル〔フランク（Ｆ
ｒａｎｋ　Ｈ，）ほか、ジャーナル・オプ・クロマトグ
ラフィー（Ｊ。

Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）　、　　１４６．　１
９１〜２０６（１９７８））でコートしたガラス毛管（
２５〜３３ｍ）上でトリフルオロアセチル化アミノ酸ｎ
プロピルエステルを分離する最近案出されたガスクロマ
トグラフ法〔クスターズ（Ｋｊｓｔｅｒｓ　Ｅ、）ほか
、クロマトグラフイア（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉ
ａ）　。

１８．２８７〜２９３　（１９８４））によって決定し
た。約１００ｎｍｏｌのアミノ酸を含む試料を次のよう
に誘導体化した：密閉容器中、４Ｎ−ＨＣＩ／１−プロ
パツール＜１ｍＮ）で１１０℃で３０分間エステル化し
、窒素の流れ中で乾燥した後トリフルオロ酢酸無水物（
５０μｍ）を加え、密閉容器中で１４０°Ｃで１０分間
加熱した。再び溶液を窒素の流れ中で蒸発させた。分析
のため試料はジクロロメタン中で適用した。担体ガスは
窒素であり、フレームイオン化検出器を用いた。

温度プログラムに対し前記参照文献が参照される。

次の値が認められた： Ｌ−Ａｌａ　　（２）、　　Ｌ−八ｓｐ　　（１）、　
　Ｌ−Ｇｌｙ　　（２）、　　Ｌ−１１ｅ　　（ＩＬｍ
ｅｓｏ−Ｌａｎ　（２）、　Ｌ−Ｌｅｕ　（１）、　Ｌ
−Ｌｙｓ　（２）、　（２Ｓ、　３Ｓ。

６Ｒ）−３−ＭｅＬａｎ　（１）、　Ｌ−Ｐｈｅ　（２
）、　Ｌ−Ｐｒｏ　（１）。

参照例４ トリプシン切断 ガリデルミンを、０．０５μｍ−エチルモルホリンアセ
タート、０．０１　Ｍ　　ＣａＣＺｚ’　６１１ｚＯ、
ｐＨ１７，８およびトリプシン〔５０μｇ、カルビオケ
ム（Ｃａ　Ｉｂ　ｉｏｃｈｅｍ）　）からなる緩衝溶液
（１ｍｇ／ｍ７り中に溶解した。３７℃で２４時間後、
酢酸をｐＨ４まで加えることにより酵素切断を停止し、
Ｃ末端フラグメント１４〜２１を沈殿させるためにン容
？夜を０°Ｃに冷却した。遠心分離後、上澄みを凍結乾
燥し、可溶性成分をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製してＮ−
末端フラグメント１〜１３を得た。

参照例５ 質量分光測定 ＦＡＢ質量スペクトル（第３図）を、セシウムイオン源
を備えた分光計ＶＧ　７０／２５０／ＳＥ口で記録した
。試料は３−ニトロヘンシルアルコール／メタノールマ
トリックス中で適用した。

値ＣＭ十Ｈ）　’　　：　２１６６Ｍ、Ｕ、が計算分子
量を確証した。娘イオンのスペクトル（第３ｂ図）はフ
ラグメントＢＩ２、Ｂ、３．８１４およびＢＩＳを示す
。

これらのフラグメントはトリプシン切断部位に対し典型
的であり、この重なりは別個に分析したＮおよびＣ末端
フラグメントに対して得られた結果に結合される。

サーモスプレーイオン化質量スペクトルはサーモスプレ
ー系ｔ−＋ｐｓ９ｓｓ　　〔ヒユーレット・パソカード
（ｌｌｃｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ）　）を用いて得
られた。

ガリデルミンのトリプシンフラグメントの試料を注入し
た。追加電子衝撃による陽イオン化を適用し、イオンを
３５０〜９５０質量単位の走査領域中で検出した。３５
０〜５５０質量単位の有意領域中の若干のフラグメント
の検出はバックグラウンド控除後に得られ、質量のコニ
リュージョンにより確認された。

走査領域３５０〜５５０ドルトン中のスペクトルが第２
図中に示される。アミド化Ｃ末端を形成するＣｙｓ（Ａ
ｖｉ）の安定性は、それが主ピークを形成するので注目
すべきである。それぞれ二重の結合切断を有する特有の
４倍フラグメンテーションが両Ｃ末端フラグメントガリ
デルミン１４〜２１およびエビデルミン１４〜２１に対
する特徴である。質量のコニリュージョンがこの特異フ
ラグメンテーションパターンを確証する。

参照例６ ペプチドの配列決定 ガリデルミンおよびそのＮ末端フラグメントを、パルス
液体ガス相シーケンサ−４７７ＡをオンラインＰＴＨア
ナライザー〔アプライド・ハイオシスシステムズ（八ｐ
ｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））とともに用いて
自動エドマン分解により配列決定した。Ｉ＋ＰＬＣ溶出
液中に溶解したＲＰ−ＨＰＬＣ分離の試料を直接反応室
中のフィルターディスクに適用した。

配列決定およびＰＴＨ分析は標準プログラムで行なった
。

この分析はＮ末端配列： １１ｅ’　−Ａｌａ２−ｘ３−　Ｌｙｓ　’−Ｐｈｅ５
−Ｌｅｕ６−ｘ７−ｘ”−Ｐｒｏ’−Ｇｌｙ”ｘ、ｌ　
１−Ａｌ　ａ　ｌ　２−１　ｙ　ｓ　ｌ　３を示した。

位置３．７．８および１１におけるＸはアミノ酸誘Ｗ体
が検出されなかった位置を示す。これらの位置はＮ末端
フラグメントのアミノ酸組成によるＩＬａｎおよびＩ　
Ｍｅ　Ｌ　ａｎ残基に相当する。

ビス−Ｐ　Ｔ　Ｈ−Ｉ、ａｎのスルフィｌ゛架橋および
特異性質のために、分解がさらることんなに進行しても
、自動分解はこれらの位置で評価できない。ガリデルミ
ンに対する分解収量が第４図中に示される。

アミノ酸Ｌｅｕは位置６中に明らかに検出された。

ガリデルミンの中心部中に特性的酵素切断部位Ｌｙｓ１
３−Ｄｈｂ”がある。トリプシン消化の間に生したＣ末
端非荷電および疎水性フラグメント１４〜２１の沈殿が
認められ、Ｎ末端４倍荷電および親水性フラグメント１
〜１３は溶液中に保持される。

Ｌｙｓ−Ｄｈｂ結合に対する切断速度はＬｙｓと任意タ
ンパク質アミノ酸との他の結合に比べて非常に遅い。エ
ビデルミンの場合におけるように、トリプシン切断はＤ
ｈｂの２−オキソブチリル残基への転化を生じ、それが
Ｃ末端フラグメントのエドマン分解による構造解明を妨
げる。

参照例７ 紫外分析 ガリデルミンのＵ■スペクトルは２６７ｎｍにおけるビ
ニル二重結合を確認し、それはチロシン吸収の低い値（
１４００Ｍ−’ｃｍ−’）に比べて１１０００Ｍ　−’
　ｃｍ　−’　（水、０．１ｍｇ／ｍＡ、ｄ＝１ｃｍ、
２１°Ｃ）の非常に高い吸光係数を示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は若干の抗生物質のプロペプチド配置を示す図で
あり、 第２図はガリデルミンの走査領域３５０〜５５０ドルト
ン中のスペクトルを示す図であり、第３図はセシウムイ
オン源を備えた分光計ＶＧ７０／２５０／ＳＥＧで記録
したガリデルミンのＦＡＢ質量スペクトルであり、 第３Ｂ図はガリデルミンの娘イオンスペクトルであり、 第４図はガリデルミンのＮ末端フラグメントのエドマン
分解分解収量を示すグラフである。 ］０ ４ｏ０ ５ｏ０ 手 続 補 正 書 （方式） ％式％ ■、事件の表示 平成１年特許項第１２４１１７号 ２、発明の名称 Ｌ 生 物 質 ３、　ｈ！正をする者 事件との関係 出 願 人 名 称 ドクトル　力ルル　トーマエ　ゲゼルシャフトミント　
ベシュレンクテル　ハフラング４、代 理 人

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するガリデルミンおよびその薬学的に許容される酸
   付加塩。
2. （２）請求項（１）記載の化合物を、薬学的に許容され
   る担体および（または）賦形剤に関連して含む薬学的組
   成物。
3. （３）局所適用のための請求項（２）記載の薬学的組成
   物。
4. （４）細菌感染、殊に皮膚感染例えば湿疹、インペチゴ
   、フレグモーネおよび座瘡を治療する方法であって、そ
   の必要な患者に、好ましくは局所に、請求項（１）記載
   の化合物を投与することを含む方法。
5. （５）スタヒロコッカス・ガリナラムのガリデルミン生
   産株を、ガリデルミンが発現され、培地中へ分泌される
   条件下に培養し次いでガリデルミンを培地から分離する
   こと、および望むならば前記ガリデルミンをその酸付加
   塩に転化することを含む、請求項（１）記載の化合物を
   製造する方法。
6. （６）分離操作が、培地を吸着剤で処理する段階、並び
   に次の、弱陽イオン性イオン交換樹脂上の吸着、脱塩お
   よび場合によりさらにクロマトグラフ精製の段階を含む
   、請求項（５）記載の方法。
7. （７）請求項（１）記載の化合物を薬学的に許容される
   担体および（または）賦形剤と密接触させることを含む
   、請求項（２）記載の薬学的組成物の調製法。
8. （８）局所適用のための薬学的組成物を製造する、請求
   項（７）記載の方法。
9. （９）適当な担体および（または）賦形剤と関連し、好
   ましくはコラーゲンを含む、請求項（１）記載の化合物
   を含む化粧用調製物。
10. （１０）株スタヒロコッカス・ガリナラムＤＳＭ４６１
    ６またはその変異株の微生物により生成されうる抗生物
    質化合物またはその生理学的に許容される塩。