KR0154492B1 - 신규 항생물질 엠알-93에이 및 이의 제조방법 - Google Patents
신규 항생물질 엠알-93에이 및 이의 제조방법Info
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Abstract
본 발명은 하기 구조식을 갖는 옥사졸계 신규 항생물질 MR-93A 화합물, 이를 생산하는 트리코데르마(Trichoderma)속 MR93 균주 및 상기 균주를 배양하는 것을 특징으로 하는 신규 항생물질 MR-93A의 제조방법에 관한 것이다.
Description
제1도는 MR-93A 화합물의 수소 핵자기 공명(1H-NMR) 스펙트럼을 나타낸 것이고,
제2도는 MR-93A 화합물의 탄소 핵자기 공명(13C-NMR) 스펙트럼을 나타낸 것이다.
본 발명은 하기의 구조식을 갖는 신규 항생물질 MR-93A 화합물, 이를 생산하는 미생물 균주 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
1992년 플레밍에 의해 최초로 페니실린이 발견된 이래 많은 항생물질이 개발되어 왔으며, 현재 그 수는 13,500여종 이상에 달하는 것으로 보고되어 있다. 그러나 이처럼 많은 항생물질이 개발되었음에도 불구하고, 항생물질의 빈번한 사용에 의해 내성을 갖게 된 세균들도 증가하게 되고, 따라서 새로운 항생물질의 개발이 계속적으로 요구되고 있는 실정이다.
이에 본 발명자들은 내성을 갖는 세균에 대해 활성을 나타낼 수 있도록 기존의 항생물질과 상이한 구조를 갖는 신규한 항생물질을 개발하기 위해 연구를 계속 진행한 결과, 트리코데르마(Trichoderma) 속에 속하는 균주의 배양액으로부터 신규 항생물질 MR-93A를 분리해 냄으로써 본 발명의 완성에 이르게 되었다.
즉, 본 발명의 목적은 트리코데르마(Trichoderma) 속에 속하는 균주의 배양액으로부터 분리한 신규 항생물질을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 항생물질을 생산하는 트리코데르마(Trichoderma) 속에 속하는 균주 및 상기 균주를 배양하여 항생물질을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명에서는 하기 구조식을 갖는 옥사졸(oxazole)께 신규 항생물질 MR-93A, 그의 유도체 및 화학적, 약학적으로 허용가능한 이들의 염을 제공한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명에서는 신규 항생물질 MR-93A를 생산하는 트리코데르마(Trichoderma)속 MR93 균주 및 상기 균주를 배양하는 것을 특징으로 하는 옥사졸계 신규 항생물질 MR-93A의 제조방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 좀 더 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명의 옥사졸계 신규 항생물질 MR-93A는 한국 야생 식물체로부터 새롭게 트리코데르마(Trichoderma) 속에 속하는 트리코데르마속 MR93 균주를 배양하여 생산된다. 트리코데르마속 MR93 균주의 균학적 성상은 다음과 같다.
(1) 균총
·색상-녹색
·낮게 생장
·빠르게 퍼짐
·MEA 배지에서 5일 배양시 직경이 5㎝인 밝고 흐릿한 황녹색 분생자를 가진 흰색 균사체
·배면색-옅은색
·5℃에서 생육 못함
·37℃에서 생육 못한
(2) 균사
·격막이 있음
·투명함
(3) 분생자병
·투명함
·분지가 많이 되어 있음
·피라미드 모양을 이루며 분생자병에 수직인 무성포자의 나선을 나타냄(거의 직각임)
(4) 무성포자
·플라스크 모양의 단지형
·투명함
·크기 5-7×2.0-3.5㎛
·각 무성포자의 끝에 끈적끈적한 구로 집적됨
(5) 분생자
·종종 작은 덩어리에 점착됨
·모양-타원체, 약간 타원체
·벽-매끄러움
·색상-밝은 황색에서 녹색
·후막포자-사이에 삽입되고 말단임
구형이나 반구형임
본 발명의 옥사졸계 신규 항생물질 MR-93A 화합물은 상기 트리코데르마속 MR93 균주를 통상적으로 미생물이 이용하는 영양원을 함유하는 배지에서 배양하여 생산할 수 있다. 영양원은 탄소원으로 슈크로스, 락토스 등을 사용하고 질소원으로는 펩톤, 콘스팁리쿼, 질산칼륨 등을 사용하는 것이 바람직하고 기타 필요에 따라서는 황산 마그네슘 및 기타 무기염류를 첨가하는 것도 유효하다.
배양방법으로는 호기적인 조건에서의 배양법, 특히 액침 배양법으로 26 내지 30℃ 부근에서 수행하는 것이 바람직하다.
본 발명의 MR-93A 화합물은 상기 트리코데르마속 MR93 균주의 배양액으로부터 다음 방법에 따라 분리정제하여 얻을 수 있다. 다이아이온(Daiaion) HP-20 칼럼에서 30% 메탄올 용액으로 회수한 후 농축하고 에틸아세테이트로 추출한 후 농축한다. 농축한 에틸아세테이트층을 전개용매 50% 메탄올로 세파덱스(Sephadex) LH-20 칼럼을 통과시켜 활성분획을 분리한다. 농축한 활성분획을 메탄올 농도구배 조건으로 MCI-겔 칼럼을 통과시킨 후 고압액체크로마토그래피에서 PLRP-S 칼럼을 사용하고 10% 아세토니트릴을 용매로 하여 MR-93A를 정제한다.
본 발명의 신규 항생물질 MR-93A 화합물을 제조하는데 사용되는 신규한 트리코데르마속 MR93 균주는 한국과학기술연구원 생명공학연구소 부설 유전자은행에 1994년 6월 9일자로 기탁번호 KCTC 0114BP호로서 기탁하였다. MR93 균주는 다른 곰팡이와 같이 그 성상이 변하기 쉬우므로 이 균주의 돌연변이주(자연발생 또는 유발생), 형질융합체 또는 유전자 재조합체라도 MR-93A의 생산성이 있는 트리코데르마 속의 균은 모두 본 발명의 범주에 포함되며 사용가능하다.
한편, 본 발명의 신규 항생물질 MR-93A 및 이의 유도체는 공지된 화학적 합성법에 의해서도 제조될 수 있으며, 그 제조방법 또는 구조의 변화가 당해 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 경우 본 발명의 범위에 포함된다. 또한 이러한 유도체는 트리코데르마속 MR93 균주 또는 그의 돌연변이주, 형질융합체 또는 유전자 재조합체 등의 배양을 통해서도 얻을 수 있을 것이다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들만으로 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1]
(발효생산)
1ℓ의 삼각플라스크 5개에 각각 200㎖씩 분주한 종배지(슈크로스 2%, 락토스 1%, 펩톤 0.3%, 염화 나트륨 0.5%, 콘스팁리쿼(cornsteep liquor) 0.3%, 질산칼륨 0.23%, 황산 마그네슘 0.05%, 무기염류액 0.1%)를 121℃에서 20분간 살균하고 트리코데르마속 MR93 균주의 사면배양 1-2 백금이를 접종하고 25℃에서 2일간 진탕배양하여 배양기의 종배양으로 하였다. 121℃에서 1시간 살균한 35ℓ 생산배지를 함유한 50ℓ 발효조에서 전기의 종배양액 1ℓ를 접종하여 25℃에서 6일 동안 통기하에 200rpm 교반속도로 배양하였다. 배양종료후 여과지로 여과하여 균체를 제거한 후 배양여액을 얻었다.
[실시예 2]
(물질의 분리정제)
실시예 1에서 얻은 배양여액 35ℓ를 다이아이온 HP-20 칼럼에 흡착시켜 물로 세척하고 30% 메탄올로 탈착시킨 후 감압 농축하여 500㎖의 수용액으로 하였다. 이 수용액을 동량의 에틸아세테이트로 3회 반복추출한 후 에틸아세테이트층을 재농축하였다. 이 농축물을 소량의 50% 메탄올에 녹여 세파덱스 LH-20에서 겔 크로마토그래피하여 활성분획을 수집하였다. 활성분획을 감압 농축하고 MCI-겔 카럼에서 1 내지 100% 메탄올 농도구배로 용출시켰다. 용출분획을 고압액체크로마토그래피(칼럼:PLRS-S 100Å 8μ, 유속:1.5㎖/분, 220㎚ 검출, 용매:10% 아세토니트릴)하여 유지시간 16분 대에서 MR-93A를 순수분리하고 용매를 감압 증발시킨후 냉동 건조하여 무색의 유액을 6㎎의 수율로 얻었다.
[실시예 3]
(MR-93A의 구조결정)
실시예 2에서 분리 정제한 물질 MR-93A에 대한 분자량 측정결과 169.0751로 나타나, 분자식을 C8H11NO3로 결정하였다. 듀트로클로로포름(CDCl3)을 용매로 하고 테트라메틸실란을 표준물질로 하여 수소 핵자기 공명과 탄소 핵자기 공명을 측정한 결과, 옥사졸(oxazole)과 디하이드록시 펜테닐(ditydroxy-(E)-1-pentenyl)이 결합된 구조임을 확인하였고, 옥사졸의 치환 위치를 2차원 핵자기 공명 스펙트럼 측정을 통해 확인하여 그 구조를 최종적으로 4-(3,4-dihydroxy-(E)-1-pentenyl) oxazole의 신규물질로 결정하였다. MR-93A의 이화학적 특성을 다음 표 1에서 나타내었다.
[실시예 4]
(MR-93A의 항균활성)
MR-93A의 각종 미생물에 대한 항균활성을 1㎎/㎖ 농도에서 페이퍼 디스크법(Hewitt, W., et al., Theory and Application of Microbiological Assay, AP, (1989))으로 조사하여 다음 표 2에 나타내었다. 그 결과는 표 2에서 보듯이 본 발명의 옥사졸계 신규 항생물질 MR-93A는 살모넬라 티피무리움(Salmonella trphimurium)에 대해 특이적으로 활성을 나타냄을 알 수 있다.
Claims (4)
- 하기 구조식을 갖는 옥사졸계 항생물질 MR-93A, 그의 유도체 및 화학적, 약학적으로 허용가능한 염:
- 신규 항생물질 MR-93A를 생산할 수 있는 트리코데르마(Trichoderma)속 균주.
- 제2항에 있어서, 트리코데르마(Trichoderma)속 MR93 균주인 KCTC 0114BP.
- 제2항의 균주를 배양하는 것을 특징으로 하는 옥사졸계 항생물질 MR-93A의 생산방법.
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| KR (1) | KR0154492B1 (ko) |
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1995
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| KR970021068A (ko) | 1997-05-28 |
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