BG61310B1 - щам sтrертомyсеs теnевrаrius,продуцент на тобрамицин - Google Patents
щам sтrертомyсеs теnевrаrius,продуцент на тобрамицин Download PDFInfo
- Publication number
- BG61310B1 BG61310B1 BG98319A BG9831993A BG61310B1 BG 61310 B1 BG61310 B1 BG 61310B1 BG 98319 A BG98319 A BG 98319A BG 9831993 A BG9831993 A BG 9831993A BG 61310 B1 BG61310 B1 BG 61310B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- tobramycin
- tenebrarius
- strain
- medium
- factor
- Prior art date
Links
- 241000187178 Streptoalloteichus tenebrarius Species 0.000 title claims abstract description 26
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 title claims abstract description 13
- 229960000707 tobramycin Drugs 0.000 title claims abstract description 10
- 229950006334 apramycin Drugs 0.000 abstract description 8
- XZNUGFQTQHRASN-XQENGBIVSA-N apramycin Chemical compound O([C@H]1O[C@@H]2[C@H](O)[C@@H]([C@H](O[C@H]2C[C@H]1N)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](N)[C@@H](CO)O1)O)NC)[C@@H]1[C@@H](N)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O XZNUGFQTQHRASN-XQENGBIVSA-N 0.000 abstract description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 18
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 11
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 11
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- YPPFEJHOHNPKLT-PBSUHMDJSA-N nebramycin 5' Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](COC(N)=O)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N YPPFEJHOHNPKLT-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- 229950011272 nebramycin Drugs 0.000 description 4
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 4
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 101000775660 Anarhichas lupus Type-3 ice-structuring protein 1.5 Proteins 0.000 description 1
- 101000775628 Anarhichas lupus Type-3 ice-structuring protein 1.9 Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 101710128742 Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 101000643905 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 101000775697 Pseudopleuronectes americanus Ice-structuring protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229960001192 bekanamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012474 bioautography Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229930182824 kanamycin B Natural products 0.000 description 1
- SKKLOUVUUNMCJE-FQSMHNGLSA-N kanamycin B Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SKKLOUVUUNMCJE-FQSMHNGLSA-N 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 229960003292 rifamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Щам Streptomyces tenebrarius, продуцент на тобрамицин, регистриран в НБПМКК под № 2342.
Description
ОБЛАСТ HA ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася до щам Streptomyces tenebrarius, продуцент на тобрамицин, приложим във фармацевтичната промишленост.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Известно е, че щам S.tenebrarius продуцира небрамицинов антибиотичен комплекс, който се състои от 11 аминоциклитолни компонента с известна химична структура. Три от тях се синтезират в значително по-големи количества - фактор 2(апрамицин); фактор 4 (карбамоилканамицин В) и фактор 5' (карбамоилтобрамицин), а останалите са минори (J. Antibiot. 26 (12), 1973,745-751; Antibiot. Agents Chemother.,1970,309-313;J. Org.Chem., 1976,41, 2087-2092).
Фактор 2 (апрамицин) намира приложение във ветеринарната медицина. Фактор 4 се превръща във фактор 5 (канамицин В) чрез алкална хидролиза след отстраняване на карбамоилната група. Фактор 5' се превръща във фактор 6 (тобрамицин) при същите условия и намира приложение в хуманната медицина за третиране на инфекции, причинени от грамположителни и грамотрицателни микроорганизми и по-специално от Pseudomonas, Proteus и др. (Antimicrob.Agents Chemother.,1970,309313;J.Inf.Diseases, 1976,134,Suppl.s3-s 19).
Известни са щамове, продуциращи различни компоненти или съотношение на компоненти в небрамициновия комплекс, в това число и такива, продуциращи предимно фактор 5' (American Inst.of Biol. Science. Washington, 1976,61-77; Антибиотики, 1980,25 (12) 891894).
Известно е също, че при дълбочинни условия щам S.tenebrarius 1575 продуцира апра мицин, карбамоилканамицин В и карбамоилтобрамицин в съотношение 4:2:1, т.е. продукцията на карбамоилтобрамицина е 1/7 част от общото количество синтезиран продукт /BG 47276А/.
Известно е, че щам S.tenebrarius 5519 в условията на дълбочинна ферментация продуцира антибиотиците апрамицин, карбамоилканамицин В и карбамоилтобрамицин в съотношение 0,5:0,1:1,3 /BG 47276А/.
Недостатъци на посочените щамове са преобладаващата продукция на факторите 2 и 4 в културалната течност, което ги прави слабо ефективни за промишлено производство, поради ниската концентрация на целевия продукт - фактор 5', и води до значителни разходи при получаването му.
СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Съгласно изобретението се получава щам Streptomyces tenebrarius, който продуцира преимуществено карбамоилтобрамицин /фактор 5'/ при намалена продукция на апрамицин и карбамоилканамицин В /фактори 2 и 4/.
Щамът е регистриран в НБПМКК под № 2342 и се получава чрез мутагенеза и селекция на изходен щам S.tenebrarius, регистриран в НБПМ КК под № 1022 и произхождащ от родителя S.tenebrarius 1575.
Селекцията на щам S.tenebrarius включва протопластиране и регенерация, третиране на получените колонии с ултравиолетова светлина с дължина на вълната 253,7 пш при преживяемост 0,01 - 1 % и последващ естествен отбор.
За характеризиране на щамовете и получения мутант S.tenebrarius са използвани методите на International Streptomyces Project (Ind. J.Syst.bacteriol, 1966,16/3/,313-340).
Цветът на въздушния (ВМ) и субстратния (СМ) мицели, както и пигментацията в средата се отчитат по скалата на Бондарцев, (Бондарцев А.С.,Шкала цветов, Изд.АН СССР, 1954, с.27).
Таблица 1
Сравнителна характеристика на родителския, изходния щам и получения от него мутант.
| Среда | Родителски щам S.tenebrarius 1575 | Изходен щам S.tenebrarius № 1022, НБПМКК | Получен мутант S.tenebrarius № 2342, НБПМКК |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| ISP-2 дрождево малцов агар | ВМ-тебеширенобял /дЗ/;СМ-розово теракотов до бледориж /в5-ж2/. Обилен ръст и спорулация. Образува розоволилав разтворим в средата пигмент /жЗ/ | ВМ-тебеширенобял /дЗ/;СМ-тьмнокремав/об/. Колонии с неспорулирал център. Не образува разтворим в средата пигмент. | ВМ-тебеширенобял /дЗ/;СМ-тьмнокремав/об/. Обилен ръст и спорулация. Не образува разтворим в средата пигмент. |
| ISP-3 овесен агар | ВМ-тебеширенобял до шамуа/дЗ-г5/;СМ безцветен до кремав /66/. Образува слаборазтворим в средата пигмент /жЗ/. | ВМ-тебеширенобял /дЗ/;СМ-безцветен Добър ръст. Не образува разтворим в средата пигмент. | ВМ-тебеширенобял до тъмнокремав / дЗ-об/;СМ-безцветен. Не образува разтворим в средата пигмент. |
| ISP-4 нишестено солев агар | ВМ-шамуа/г5/;СМкремав/бб/. Добър ръст, обилна спорулация. Не образува разтворим в средата пигмент. | ВМ-тебеширенобял /дЗ /; СМ -жълто-кафяв /д4/. Добър ръст спорул. по края на колониите. Не образува разтворим в средата пигмент. | ВМ-тебеширенобял до кремав/дЗ-бб/ СМ-кремав до жълто-кафяв/б6-д4/. Добър ръст, обилна спорулация. Не образува разтворим рим в средата пигмент. |
| ISP-5 глицериново аспаргинов агар | ВМ-тебеширенобял / дЗ/; СМ-кайсиевожълт до тъмнокафяв/д2-в6/. Добър ръст. Образува розово-лилав разтворим в средата пигмент/жЗ/. | ВМ-тебеширенобял /дЗ/;СМ-тъмно-кафяв до шамуа/в6-г5/. Мн.добър ръст. Не образува разтворим в средата пигмент. | ВМ-тебеширенобял /дЗ/ ;СМ-тъмно-кафяв до шамуа/в6-г5/. Добър ръст. Не образува разтворим в средата пигмент. |
| ISP-7 тирозинов агар | ВМ-тебеширенобял / дЗ/ ;СМ-розово-лилав/жЗ/. Много добър ръст. Образува розово-лилав разтворим в средата пигмент/жЗ/ | ВМ-бледоват/д1/ СМ-бледокафяв/в7дЗ/. Много добър ръст. Не образува разтворим в средата пигмент. | ВМ-тебеширенобял до кремав/дЗ-бб/; СМ-тъмнокафяв до шамуа/в6-г5/. Добър ръст. Не образува пигмент в средата. |
| мине- | Колонии с диаметър | Колонии с диаметър | Колонии с диаме- |
| рална | 5-8 mm с изпъкнал | 2-4 mm, плоски с | тър 4-6 mm с |
| среда | център, радиални с | точковиден неспо- | вдлъбнат център |
| Гаузе | обилна спорулация. | рулиращ център, | и обилна спору- |
| 1 | Образува разтворим | вдлъбнат. Не обра- | лация. Не обра- |
| в агара розово-ли- | зува в агара раз- | зува в агара | |
| лав пигмент. | творим пигмент. | разтворим пигмент |
Броят на спорите в спороносните хифи е над 10. Спороносните хифи представляват спирали с множество витки. 15
По отношение усвояването на моноза хари не се наблюдава различие в усвояването им при трите щама. Разлики съществуват по отношение на резистентността им спрямо различни антибиотици.
Таблица 2
Сравнителна резистентност на изходните щамове Streptomyces tenebrarius и получения мутант спрямо различни антибиотици.
| Щам | К | Ам | Км | Тм | См | Гм | Пен | Цеф | Хлф | Риф | Тц |
| 1575 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | |
| № 1022 | |||||||||||
| НБПМКК | + | + | + | + | + | + | + | + | - | - | - |
| № 2342 | |||||||||||
| НБПМКК | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | + |
К-контрола; Ам-апрамицин; Км-канамицин; Тм-тобрамицин; См-стрептомицин; Гмгентамицин; Пен-пеницилин; Цеф-цефалоспорин; Хлф-хлорамфеникол; Риф-рифамицин; Тцтетрациклин; “+”-устойчив; “-’’-резистентен.
Изследванията са направени върху агарова среда Гаузе 1, като антибиотиците са добавени към средата при температура под 50°С.
Същественото в случая е, че полученият мутант Streptomyces tenebrarius № 2342 НБП МКК е резистентен спрямо основните компоненти на небрамициновия комплекс в много повисока степен, отколкото щамове S.tenebrarius 1575 и S.tenebrarius № 1022 НБПМКК.
По отношение на pH, температура и други изисквания щамовете не показват съществени различия.
Ферментацията се провежда двустъпално при използване на следните хранителни среди.
Инокулационна среда в %: глицерин 2, царевичен екстракт 2, амониев хлорид 0,2, натриев хлорид 0,3, калциев карбонат 0,5, чешмяна вода, pH 7,0.
Ферментационна среда в %: соев шрот 3, амониев хлорид 0,6, магнезиев сулфат 1,1, калциев карбонат 0,8, глюкоза 3, соево масло 0,6, чешмяна вода, pH 7,0.
Таблица 3
Продуктивност на щамове Streptomyces tenebrarius.
| Щам | Съотношение на продуцираните фактори 2:4:5' |
| S.tenebrarius 1575 | 4:2:1 |
| S.tenebrarius | |
| № 1022 НБПМКК | 0,5 : 0,1 : 1,3 |
| S.tenebrarius | |
| № 2342 НБПМКК | 2:1:6 |
Предимствата на щама съгласно изобретението се изразяват в измененото съотношение на продукцията на основните фактори в небрамициновия комплекс - нарастване образуването на карбамоилтобрамицин /фактор 57 в средата при намалена продукция на апрамицин и карбамоилканамицин В /фактори 2 и 4/.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Изобретението се изяснява със следните примери.
Пример 1. Щамът, монопродуцент на тобрамицин, се получава, като щам Streptomyces tenebrarius № 1022, НБПМКК се протопластира по метод на Ferenzy /US 4729951/. Използва се вегетативна култура с оптична плътност при 600 nm 0,4 - 0,8, от транзитната фаза на развитие, култивирана трикратно върху среда съдържаща глицин 4 - 6 %.
Мицелът се центрофугира и промива, след което се обработва с лизоцим 0,5 % за 1 h при 37°С. Получените протопласти се промиват и се разсяват върху регенерационна среда. Израстналите колонии се препасажират на среда Гаузе 1 и се проверяват за продуктивност. Получените колонии от хетерокариозисен тип се обработват с ултравиолетова светлина с дължина на вълната 253,7 nm при преживяемост 0,01 - 0,1 % на обработваната суспензия. На обработка се подлага водна спорова суспензия с гъстота 1 - 1,5.10’. 2 ml суспензия се поставят в стъклено петри с диаметър 50 mm при постоянно бъркане, на разстояние 20 cm от източника за 30 - до 60 sek. След облъчването се правят серийни разреждания и разсев върху агарова среда Гаузе 1. Колониите се препасажират на епруветки и се изпитват за продуктивност чрез ферментация, както е описано в пример 2.
Пример 2. Към 50 ml инокулационна среда, в колби от 250 ml се поставя късче агар с повърхност около 1 cm от добре спорулирала култура и се култивира на тъмно при 37°С 18 h на ротативна клатачка. След това към 80 ml ферментационна среда се прехвърлят 10 об. % от развития инокулум и ферментацията продължава при същите условия 120 Ь. След отстраняване на мицела 10 μΐ филтрат се закапват на плака Merk 5553 за тънкослойна хроматография, която се развива в система етилметил кетон:етанол:амоняк в съотношение 1:1:1. След изсушаване на плаката, съдържаща пробите и съответните стандарти в подходящи концентрации, последната се биоавтографира върху повърхността на агарова среда, съдържаща в %: пептон 0,1, дрождев екстракт 0,3, натриев фосфат 0,2 и arap 2, с pH 7,8 8,0, заразена с 1 % от стандартизирана суспензия на тестмикроба Bacillus subtilis ATCC 6633, при 530 nm за пропускливост 20 %. Хроматографските плаки се налагат върху агаровата повърхност за 30 min и термостатират за 16 до 18 h при 37°С. След оцветяване с разтвор на метиленово синьо се снемат отпечатъци. Спрямо съответни стандарти на апрамицин, канамицин и тобрамицин се установява съотношението на факторите 2:4:5’, което е 2:1:6.
Прецизен анализ на продуктивността се прави чрез високоефективна течностна хроматография (Abstract of VII-th Nat.Conf.on Antibiotics, Razgrad, 1988,7).
Пример 3. От добре спорулирала епруветка на получения монопродуцент S.tenebrarius № 2342, НБПМКК, върху среда Гаузе 1 се посява еднолитрова Ерленмайлерова колба с 200 ml инокулационна среда със следния състав в %: царевичен екстракт 2, амониев хлорид 0,2, натриев хлорид 0,3, глицерин 2, калциев карбонат 0,5 и чешмяна вода, с pH 7,0, стерилизирана 30 min при 120°С. Културата се инкубира при 37°С на ротационна клатачка 18 до 20 h. Този инокулум се използва за посев на 50 1 ферментатор, зареден със същата среда. Култивирането се извършва при 37°С, 100 об. на бъркалката, приток на въздух
1:1, налягане 0,5 at за около 20 h. 10 % об. от така развития посевен материал се подават към 50 1 фсрмснтатор, съдържащ среда със следния състав в %: соев шрот 3, амониев хлорид 0,6, магнезиев сулфат 1,1, калциев карбонат 0,8, 5 глюкоза 3, соево масло 0,6 и чешмяна вода, и pH 7,0. Ферментационният процес се провежда при температура 37°С; 100 об. на бъркалката, въздух 1:1 и налягане 0,5 at за около 120 h.
Антибиотичното съдържание в културалната течност се определя чрез тънкослойна хроматография с последваща биоавтография с тестмикроба B.subtilis АТСС 6633, описана в пример 2.
Съотношението на компонентите в културалната течност е следното: фактор 2: фактор 4: фактор 5' = 2:1:6.
Получената активност на културална течност по отношение на фактор 5' е 3000 U/ ml, определена по метода на ВЕТХ (Abstract of VII-th Nat.Conf.on Antibiotics Razgrad,988,7).
Claims (1)
- Патентни претенции1. Щам Streptomyces tenebrarius - продуцент на тобрамицин, регистриран в НБПМКК под № 2342.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG98319A BG61310B1 (bg) | 1993-12-21 | 1993-12-21 | щам sтrертомyсеs теnевrаrius,продуцент на тобрамицин |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG98319A BG61310B1 (bg) | 1993-12-21 | 1993-12-21 | щам sтrертомyсеs теnевrаrius,продуцент на тобрамицин |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG98319A BG98319A (en) | 1995-07-28 |
| BG61310B1 true BG61310B1 (bg) | 1997-05-30 |
Family
ID=3925530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG98319A BG61310B1 (bg) | 1993-12-21 | 1993-12-21 | щам sтrертомyсеs теnевrаrius,продуцент на тобрамицин |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| BG (1) | BG61310B1 (bg) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106520554A (zh) * | 2016-10-31 | 2017-03-22 | 山东齐发药业有限公司 | 一种获取安普霉素高产菌株的高通量筛选方法 |
-
1993
- 1993-12-21 BG BG98319A patent/BG61310B1/bg unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106520554A (zh) * | 2016-10-31 | 2017-03-22 | 山东齐发药业有限公司 | 一种获取安普霉素高产菌株的高通量筛选方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BG98319A (en) | 1995-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Baute et al. | New antibiotics from the fungus Epicoccum nigrum I. Fermentation, isolation and antibacterial properties | |
| Miyairi et al. | Enterocin, a new antibiotic taxonomy, isolation and characterization | |
| NO149239B (no) | Offshore-konstruksjon. | |
| CN102363755B (zh) | 一种链霉菌及其生产阿霉素的方法 | |
| KR960016874B1 (ko) | 미생물에 의한 트랜스-4-히드록시-l-프롤린의 제조방법 | |
| JPS63139191A (ja) | 抗腫瘍抗菌剤 | |
| JPS61148189A (ja) | Ｃｌ−１５７７ｄおよびｃｌ−１５７７ｅ抗生／抗腫瘍化合物およびそれらの製法 | |
| US3597325A (en) | Production of 3-(2-nitro-3-chlorophenyl)-4-chloro-pyrrole | |
| BG61310B1 (bg) | щам sтrертомyсеs теnевrаrius,продуцент на тобрамицин | |
| RU2013448C1 (ru) | Штамм streptomyces bambergiensis - продуцент моеномицина а | |
| JP3107455B2 (ja) | 新規抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ及びその製造方法 | |
| RU2087535C1 (ru) | Штамм актиномицета streptomyces avermitilis - продуцент авермектинов | |
| RU2057180C1 (ru) | Штамм streptomyces fradiae - продуцент тилозина | |
| KR0154492B1 (ko) | 신규 항생물질 엠알-93에이 및 이의 제조방법 | |
| RU2049797C1 (ru) | Штамм hypomyces rosellus -продуцент органического пигмента, используемый в красках | |
| JPH04261180A (ja) | １３β−１３−デオキシ−２２，２３−ジヒドロアベルメクチン−Ｂｌａ／Ｂｌｂアグリコンの微生物学的製造 | |
| NO135182B (bg) | ||
| PARRY et al. | Isolation and characterization of furanomycin nonproducing Streptomyces threomyceticus mutants | |
| Kim | Production, purification and antifungal activity of antibiotic substances produced by Pseudomonas aeruginosa strain B5 | |
| US4248970A (en) | Antibiotic complex producing bacterial culture | |
| JP3327982B2 (ja) | 新規な抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ関連物質 | |
| SU734271A1 (ru) | Штамм продуцент кормогризина | |
| JPS6250473B2 (bg) | ||
| CA1063953A (en) | Figaroic acid antibiotic complex from streptosporangium | |
| RU1092951C (ru) | Штамм streptomyces erythreus 85-1 - продуцент эритромицина |