JPS63139191A - 抗腫瘍抗菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新しい抗腫瘍抗生物質に関する。

本発明の抗生物質は深部通気条件を用いる水性栄養培地
中で放腺飴のＢＢＭ−９２８生産菌株（Ａ　Ｔ　ＣＣ３
１４，９１）又はその変異株を培養することによって製
造されるＢＢＭ−９２８と称される新しい抗生物質コン
プレックス中の１成分であり、このコンプレックスは、
少なくとも６種の成分を含有する。それは生理活性成分
Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ及びＦと称し、本発明はその１つで
あるＤ即ちＥＢＭ−９２８Ｂを対称とする。

紀１図は、臭化カリウム中ＢＢＭ−９２８Ｄの赤外吸収
スペクトルである。

第２図は、９０ＭＨｚの波数におけるＮＭＲスペクトロ
メーターによる内部標準としてＴ　Ａ（Ｓを使用する重
水素化クロロホルムに溶解したＢＢＭ−９２８Ｄのプロ
トン４］ａｆｉ共鳴スペクトルを示す。

ＢＢＭ−９２８コンプレツクスはアクナノロイキン群の
抗生物質に検音が関連していると信じられ、まだ同定さ
れていない放ｆｉ！閑の菌株の醗酵によって生成する。

培地中ＢＢＭ−９２８を生成することができる放線菌の
菌株はいずれも、ブリストルーバンユウコレクション中
放線菌菌株Ｇ４５５−１０１号と称される好適な生産菌
と共に使用することができる。この菌は、フィリンビン
群島で集められた土壌試料から分離され、ＡＴＣＣ３１
４９１として米国の微生物代表培養コレクションに寄託
されている。又この微生物は、昭和５５年３月２５日に
工業技術院微生物工業技術研究所に寄託された。（微工
研菌寄第５４６０号）前記したとおり新規抗腫瘍抗生物
質コンプレックスは、ＢＢＭ−９２８Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、
Ｅ及びＦと称される少なくとも６種の成分を有する。Ｅ
ＢＭ−９２８コンプレツクスの成分Ａ、　Ｂ、　Ｃ及び
Ｄは、結晶性形態で単離され、成分Ａ、　Ｂ及びＣの化
学構造が同定されている。本発明の抗生物質りは他の成
分同様抗腫瘍抗菌性を有している。これは動物飼料中栄
養補給剤として又哺乳類の細菌感染を処置する際治療剤
として有用である。その外、この抗生物質は、実験室ガ
ラス器具及び外科用機器を清浄にし滅菌するのに有用で
あり、石けん、洗剤及び消毒用洗液と組合せて使用する
ととができる。抗腫瘍効果については、コンプレックス
及びその個々の成分は、種々の腹腔内移植マウス腫瘍に
対して特に有用である。

放線菌種Ｇ４５５−１０１号菌採 取下は、抗生物質抗腫瘍コンプレックスＢＢＭ−９２８
を生産する好適な微生物の一般的記述である。標準分類
学的方法、例えばシャーリング等、Ｉ外ａｔ　Ｊ、　５
ｙａｔ。

Ｂａｃｔａｒｉｏｌ、　１６．３１３（１９６６）及び
ルシュバリエ等、Ｂｉｏｌ、　Ａｅｔｉｓｏｎｃｙｅｅ
ｔａａ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｏｒｇ。

１１．７８（１９７６）に従ってこの菌の培養、生理学
及び形態学的特徴を観察した。

ミクロ形態学−Ｇ４５５−１０１号菌採取４基質及び気
中菌糸を共に形成し、基質菌糸は、よ（発達し、長くか
つ枝分れしている（幅０．５〜０．８μ）。この基質菌
糸の明瞭なり、Ｇ４５５−１０１菌株は、短かくかつ未
発達の気中菌糸のみを有するか、或いは寒天培地によっ
ては何も形成しない。短かいか又は長い胞子鎖が気中菌
糸中に生じ、それは鎖の中に２〜５０の卵形胞子を有す
る（大部分５〜２０の胞子）。胞子鎖は、形が直線か、
屈曲が多いか又は輪になっている。胞子は、形が円形（
０，３〜０．４μ）、卵形又は円筒形（０，３Ｘ　１．
５〜３．０μ）であり、滑らかな表面を有している。胞
子は、空の菌糸で分離されていることが多い。短かいコ
イル状の胞子鎖を包む無定形の胞子の５様の包の５が気
中菌糸上にときに観察される。

細胞壁は、メン−ジアミノピメリン酸を含有するが、グ
リシンを欠いている。全細胞氷解物は、グルコース、マ
ンノース及ヒマズロース（３−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラク
トース）の存在を示す。前述した細胞壁組成及び全細胞
糖成分は、Ｇ４５５−１０１菌株が細胞壁ｍＢ型の放線
菌１菌株であることを示す。

培養及び生理学的特性−Ｇ４５５−１０１菌株は、豊富
に生育し、紅色又は灰紅色の気中菌糸を形成し、イース
ト抽出液−モルト抽出液寒天及びオートミル寒天のよう
な栄養に冨む寒天培地中で赤味のある水不溶性の色素を
生じる。

然し、無機塩−デンプン寒天、グリセロール−アスパラ
ギン寒天及びチロシン寒天中では、貧弱な生育を行ない
、白色又はベージュ色の未発達の気中菌糸を形成し、少
量の赤味のある色素を生じる。ペプトン−イースト−鉄
寒天及びチロシン寒天中で黒ずんだ色素を生じない。硝
酸塩は亜硝酸塩に還元される。２８℃、３７℃、並びに
４５℃において豊富に生育するが、１０℃又は５０℃に
おいては生育しない。五炭糖及び六炭糖は、この菌株に
よってよく利用される。Ｇ４５５−１０１菌株の培養及
び生理学的特性を、それぞれ表１及び２に示す。炭素源
の利用を表３に示す。

表　　１ １、チェペックの寒天　　　Ｇ”　生育ないか又はわず
かＲ暗バラ色 Ａ　　白又は淡紅色 Ｄ　　なし ２、トリプトン−イースト　　　　　中程度の生育、羊
毛状、抽出液ブイヨン（ＩＳＦ１号）　　　堆積、色素
なし３、イースト抽出液−モル　　Ｇ　　豊富ト培世液
寒天（ＩＳＦ　２号）Ｒ深紅ないし赤褐色Ａ　　豊富、
灰紅ないし紫紅 色 Ｄ　　なし 表１−統 ４、オートミール寒天　　　Ｇ　豊富 （ＩＦＩＰ　　３号）　　　　　Ｒ強い黄赤色Ａ　中程
度、紅色 Ｄ　灰黄色 ５、無機塩−デンプン寒天　　Ｇ　貧弱（ＩＳＦ　　４
号）　　　　　Ｒ淡黄褐ないし暗赤色Ａ　わずか、白な
いしベー ジュ色 Ｄ　なし ６、グリセロール−アスパラ　Ｇ　　貧弱ギン寒天（Ｉ
ＳＰ　　５号）　Ｒ黄紅ないし赤褐色Ａ　わずか、白色 Ｄ　なし 表１−統 ７．ペプトン−イースト抽　　　Ｇ　貧弱、ひだあり出
液−鉄寒天（ＩＳＰ６号）　　Ｒ強い赤橙色Ａ　なし Ｄ　淡黄橙色 ８、チロシン寒天　　　　　　Ｇ　貧弱（ＩＳＰ　　７
号）　　　　　　Ｒ暗赤色Ａ　わずか、白色 Ｄ　なし ９、グルコースーアンモニ　　　Ｇ　貧弱ラム塩寒天　
　　　　　　　Ｒ赤褐色 Ａ　わずか、淡灰色 Ｄ　なし 表１−統 １０、ベネットの寒天　　　　　Ｇ　中程度Ｒ赤褐色 Ａ　限定、灰紅色 Ｄ　なし 畳　３７℃において３週間温置後観察 軸　略号：Ｇ−生育 Ｒ−基質菌糸の裏の色 Ａ−気中菌糸 り−拡散性色素 表　　２ Ｇ４５５−１０１号菌採取生理学的特性試　験　　反応
　　　　方法と培地 硝酸塩　　　　　　　　　　糖硝酸塩ブイヨン硝酸塩か
ら亜　　陽性　　　有機培地＝０．５％イースト抽硝酸
塩　　　　　　　　　　出液、１．０％グルコース、０
．５％ＫＮＯ３，０，１％ＣａＣ０ｇ 寒天培地中力　　弱陽性　　リューデマンの寒天培地ゼ
イン水解 スキムミルク　　陽性 凝固 ゼラチン液化　陰性　　　トリプトン−イースト抽出液
ブイヨン（ＩＳＰ　　１号培地） 中１５％ゼラチン 、　　生産　　　　　　　　　　　プラス寒天にＬ−シ
スティン（０，１％）添加 １０％水性酢酸鉛含有紙片で Ｈ，Ｓを検出 ＝１２− 表２−続 試　験　　反応　　　　方法と培地 メラノイドの　　陰性　　ペプトン−イースト−鉄寒天
寒天Ｃｌ５Ｐ　　７号） カタラーゼ反　　陽性　　Ｈ，０，水溶液応 オキシダーゼ　陽性　　コバツクの試薬反応 生育温度　　　　２８．３７及び４５℃　　ベネットの
において豊富な生育。　　寒天 ２０℃において貧弱な 生育。１０℃及び５０ ℃において生育なし。

表　　３ １．グリセロール　　　　　　　　什　　　十２、Ｄ（
−）−アラビノース　　　　　　士　　　　＋３、Ｌ（
十）−アラビノース　　　　　　＋　　　　＋４、　　
Ｄ−キシロース　　　　　　　　科　　　　＋５、　　
Ｉ）−リボース　　　　　　　　丑　　　　十６、　　
Ｌ−ラムノース　　　　　　　　什　　　　十７、　　
Ｄ−グルコース　　　　　　　　＋　　　　＋８、　　
Ｄ−ガラクトース　　　　　　　料　　　＋９、　　Ｄ
−フラクトース　　　　　　　料　　　＋１０、Ｄ−マ
ンノース　　　　　　　　科　　　　＋１１、　　Ｌ　
（−）−ソルボース　　　　　　−−１２、シュクロー
ス　　　　　　　　　　−−１３、ラクトース　　　　
　　　　　　−、十−１４、セロビオース　　　　　　
　　　　＋　　　　＋１５、　　メリビオース　　　　
　　　　　−、十−１６、トロハロース　　　　　　　
　　　＋　　　　十表３−統 ＰＧ　　　　　　Ｌ惧 Ｉ蝙−−１■■−■■■■■シ １７、　　ラフィノース　　　　　　　　　−−１８、
Ｄ（＋）−フラクトース　　　　−−１９、可溶性デン
プン　　　　　　　　十　　　　　−２０、ズルシトー
ル　　　　　　　　　−−２１、イノシトール　　　　
　　　　十　　　　−２２、Ｄ−マンニトール　　　　
　　什　　　　十２３、Ｄ−ソルビトール　　　　　　
　−−２４、サリシン　　　　　　　　　　　−　　　
　−２５、セルロース　　　　　　　　　＋　　　　十
２６、　　チチン　　　　　　　　　　　　＋　　　　
十２７、　　ケラチン　　　　　　　　　　＋　　　　
十基礎培地　ＰＧ：プリドハムーゴッ）　ＩＪ−ブノ無
機培地、０．１％イースト抽出液補足 Ｌｍ：ｌＪユーデマンの有機培地 温度３７℃において２週間 ＢＢＭ−９２８コンプレツクスの生産は、上の生育及び
顕微鏡特定によって説明された特定の放線菌種Ｇ４５５
−１０１号菌採取限定されないことが理解される。これ
らの特性は、例示の目的のみで示され、本発明は、Ｘ線
放射、紫外線放射、ナイトロジエン・マスタード、ファ
ージｊｔｆｆ１等のような当該技術に既知の常用の手段
によって前述した菌から得られる菌株又は変異株の使用
を意図しており、これらは、ＢＢＭ−９２８コンプレツ
クス又はその個々の成分を生産することができる。

抗腫瘍抗生物質ＢＢＭ−９２８コンプレックスの製造本
発明の抗腫瘍抗生物質ＢＢＭ−９２８コンプレックスの
製法は、放線菌Ｇ４５５−１０１号菌採取、同化性炭素
源及び同化性窒素源を含有する水溶液中深部通気条件下
に、該溶液に実質的な抗腫瘍抗生物質活性が付与される
まで醗酵培養することを特徴とする。本発明の抗生物質
抗腫瘍剤の生産のため有用である培地は、デンプン、グ
ルコース、デキストラン、マルトース、ラクトース、シ
ュクロース、フラクトース、マンノース、糖蜜、グリセ
ロール等のような同化性炭素源を含む。この栄養培地は
又、タンパク、タンパク氷解物、ポリペプチド、アミノ
酸、コーン・ステイープ・リカー、カゼイン、尿素等の
ような同化性窒素源並びにカリウム、ナトリウム、アン
モニウム、カルシウム、硫酸塩、炭酸塩、燐酸塩、塩化
物、硝酸塩等のような陰イオン及び陽イオンを生じる栄
養無機塩を含有するべきである。

ＢＢＭ−９２８コンプレツクスを生産する際、菌の満足
すべき生育を得ることができる任意の温度を用いてよい
。

２０°〜４５℃の範囲の温度が実施可能であり、菌の至
適の生育に好適な温度は２８０〜３４℃の範囲であり、
３０〜３２°の範囲の温度が最も好適である。ＢＢＭ−
９２８コンプレックスの最高の生産は、一般に約４〜６
日で得られる。醗酵期においては常法が用いられる。例
えば、少量の製造は、振とうフラスコ中か又は表面培養
によって実施するのが便利である。大量の製造は、無菌
タンク中深部通気培養条件下に実施するのが好適である
。タンク培養の場合にはまず菌からの胞子をブイヨン培
養に接種することによって栄養ブイヨン中栄養接種物を
生産して若い活性のある種培養物を得、次にこれを醗酵
タンク培地に無菌的に移す。タンク及びビン中の通気は
、無菌空気を醗酵培地又はその供給施設に強制的に送り
、機械推進体によってタンク中東に攪拌を生じることに
よって得ることができる。シリコン油、大豆油及びラー
ド油のような消泡剤を必要に応じて添加してよい。

醗酵ブロス又はＢＢＭ−９２８コンプレツクスの抽出液
中の抗生物質レベルは、試験菌としてサルシナ・ルテア
（Ｓａデａｔｓａ　　１ｕｔ−α）を使用しそして定量
培地として栄養寒天を用いるペーパー・ディスク寒天−
拡散定量によって決定することができる。至適ブロス力
価を決定するために使用されるこの定量系の最も望まし
い感受性のためＫｐＨを９．０に調節する。

ＢＢＭ−９２８コンプレツクスは、溶媒抽出操作のよう
な常用の手段によって醗酵ブロスから単離される。精製
は、下の例２及び３に更に詳細に説明するとおり製造用
向流分配及びクロマトグラフィー操作によって実施して
ＢＢＭ−９２８成分Ａ、　Ｂ、　Ｃ，Ｄ、　Ｅ及びＦを
得るのが便利である。

例３のＥＢＭ−９２８成分Ａ、　Ｂ、　Ｃ，並びＦＣＤ
の物理化学的性質 ＢＥＭ−９２８の個々の成分は、たがいに似た溶解性及
び発色反応を示す。例えば、それらはクロロホルム及び
塩化メチレンに易溶性、ベンゼン、エタノール、メタノ
ール及びニーブタノールにわずかに可溶性そして水及び
ニーへキサンに不溶性である。塩化第二鉄及びエールリ
ヒ試薬により陽性反応が得られ、トレンス、サカグチ及
びニンヒドリンに対しては陰性反応である。

例３０ＢＢＭ−９２８成分の特徴のある物理化学的性質
を表４に示す。

本発明の抗生物質りの特性を１とめると次のとおりであ
る。

（ａｌ　　クロロホルム及び塩化メチレンに可溶性、ベ
ンゼン、エタノール、メタノール及び％−ブタノールに
わずかに可溶性、そして水及び悴−ヘキサンに実質的に
不溶性であり： （Ｊｌ＋　　塩化第二鉄及びエールリヒ試薬反応陽性そ
してトレンス、サカグチ及びニンヒドリン試薬陰性であ
り：（ｃｌ　　マウス腹腔内移植Ｐ３８８白而病に有効
な抗腫瘍剤であり； （ｄｉ　　融点２２４〜２２７℃を有し；（−１比旋光
度〔α）　　−−１３°　（ＣＩ、　ＣＨＣｌ３）を有
り し； ｆ／ｌ　　炭素５０．７５％、水素５．２５％、窒素１
２．５８％、並びに酸素３１４２％の概算元素組成を有
し；（ｇｌ　　シリカゲル薄層クロマトグラフィーにお
いてＲｆ値０．７３（溶媒系外−ブタノールーメタノー
ルー水（６３：２７：１０）〕、並びにＲｆ値０．５３
［溶媒系キシレン−メチルエチルケトン−メタノール（
５：５：１））を示し； （Ａｌ　　実質的に第１図に示すとおりの臭化カリウム
中赤外スペクトルを有し：そして （ｊｌ　　重水素化クロロホルムに溶解する時実質的に
第２図に示すとおりのプロトンＮＭＲスペクトルを得る
。

抗微生物活性 ＢＢＭ−９２８成分の抗微生物活性を、ステイーヤのマ
ルチ接種装置を使用しｐＨ７において栄養寒天中順次寒
天稀釈法によって種々の細菌及びカビに対して決定した
。接種材料のサイズは、約１０４細胞／づを含有する試
験菌の分別材料０．００２５ｔＲ１をすべての細菌及び
カビ−抗酸菌を除、これに対しては１０＠細胞／−の懸
濁液を使用した−に対して用いるように標準化した。３
７℃において一夜装置して後、最小阻止濃度（ＭＩＣ）
を表５に示す。表中見られるように、ＢＢＭ−９２８成
分は、グラム陽性及び抗酸菌に対し中程度ないし弱い活
性があるが、ダラム陰性菌及びカビに対して実際上活性
がない。

溶源菌（ＩＬＥ）中プロファージ誘発の活性なりＢＭ−
９２８成分について決定した。

表　　５ Ｓａ−１８，オーレウス　２０９Ｐ　　　　　　　　１
００Ｓｐ−Ｉ　　Ｓ−ピオゲネス　Ｓ−２３５０Ｅｌ−
１８，ルテア　ＰＣＩ　　１００１　　　　　　５０Ｍ
ｆ−Ｉ　Ｍ、フラバス　Ｌ１２　　　　　　　　　１０
０Ｃｒ−Ｉ　　Ｃ，クセロシス　５３に−１＞１００Ｅ
ｓ−Ｉ　　Ｂ、ズブチリス　ＰＣＩ　　２１９　　　　
１００１００Ｅ　　Ｂ、メガテリウム　Ｄ２　　　　　
　　　１００Ｂａ−３Ｂ、アンスラシス　Ａ９５０４　
　　　　　５０Ｍｃ−ＩＭ、スメグマチス　６０７　　
ＭＢ２　　　１００ｕｐ−Ｉ　Ｍ、フレイ　Ｄ８Ｂ　　
　　　　　　　　　　５０Ｅｅ−ＩＥ、コーリ　ＮＩＨ
Ｊ　　　　　　　　　＞１００Ｋｐ−Ｉ　Ｋ、ニューモ
ニエ　Ｄ−１１＞１００Ｐａ−３Ｆ、エルギノサ　Ａ９
９３０　　　　　　＞１００ＰシーＩ　　Ｐ、ノ〈ルカ
リス　Ａ９４３６　　　　　　ン１００Ｐｔｎ−ＩＰ、
ミラビリス　Ａ９５５４　　　　　ン１００表５−続 Ｐｇ−Ｉ　　Ｐ、モルガニイ　Ａ９５５３　　　　　　
＞１００８ｓ−Ｉ　　Ｓ、マルセセン、ｘ、　　Ａ２０
０１９　　　　＞１００ＡＪ−Ｉ　　Ａ、７エカリスＡ
Ｔｃｃ８７５０　　　　＞１００Ｃａ−ＩＣ，アルビカ
ンス　ＩＡＭ４８８８　　　ン１００ＣｔＬ−３Ｃ，ネ
オホルマンス　　　　　　　　〉１ｏ。

抗腫瘍活性 抗腫瘍活性についてマイトマイシンＣとのＢＢＭ−９２
８Ｄの比較試験を、腹腔内移植腫瘍：Ｐ３８８白血病、
Ｌ１２１０白血病、Ｌ１６黒色腫、ルイス肺（ＬＬ）カ
ルシノーｉ、並びにザルコーマｉｓｏ腹水（、Ｓ＋１８
０）を用いて実施した。１０％ジメチルスルホキシドを
含有する０、９％食塩水中ＢＢＭ−９２８成分及び０．
９％食塩水中マイトマイシンＣを、１回の１日処置から
多回連日処置までの範囲の投薬スケジュールに従って１
日１回投与した。投薬量を変えることにより、処置動物
に対して対照動物より少なくとも１．２５倍の中央生存
時間値を与える最小有効用量（ＭＥＤ）を決定した。こ
の活性の水準は、有意な抗腫瘍活性の尺度であると考え
られている。結果は、計算活性比と共に表６に示す。ヴ
アン・デル・ヴエルデン、Ａデミｈ。

Ｅｘｐｔ、　Ｐａｔｈ、　Ｐｈａｒｒｎａｋ、　、　　
１９５．３８９（１９４０）の方法によって決定したＥ
ＢＭ−９２８及びマイトマイシンＣの腹腔内ＬＤ、ｏ値
も表６に示す。

例　　１゜ 寒天醗酵−放線菌種Ｇ４５５−１０１の１菌株のよく生
育した寒天斜面を使用して２％可溶性デンプン、１％グ
ルコース、０．５％ファーマメディア、０．５％イース
ト抽出液、０．５％ＭＥ−アミンＣＡ型）及び０．１％
ＣａＣ０１を含有する栄養培地に接種し、滅菌の前圧ｐ
Ｈを７．２に調節する。

この種培養をロータリー振とう器（２５０ｒｐｍ）上３
２℃に７２時間温装し、生育物５−を、２％可溶性デン
プン、１％ファーマメディア、０．００３％ＺｇｋＳＯ
４・７Ｈ，０及び０．４％ＣａＣ０Ｂよりなる醗酵培地
１００−を含有する５０〇−の三角フラスコに移す。Ｅ
ＢＭ−９２８コンプレツクスの生産は、一般に５日の振
とう培養の後最為に達する。

タンク醗酵一種培養を三角フラスコ中４日間振とうし、
２００リツトルの糧タンク醗酵器中２．０％オートミー
ル（クエーカー・プロダクツ、オーストラリア）、　Ｏ
，Ｓ％グルコース、０．２％乾燥イースト、ｏ、ｏｏｏ
ｓ％Ｍ％ｃｔ、・４Ｈ，０，０，０００７％Ｃ藝ＳＯ，
・７Ｈ７０，０，０００２％Ｚ％ＳＯ４・７Ｈ２０及び
０．０００１％ＦａＳＯ４・７Ｈ２０よりなる発芽培地
１００リツトルに接種し、これを２００デｐｍ、３０℃
において５４時間攪拌する。次にこの種培養の１５リッ
トル分を、４００リツトルのタンク醗酵器中２．０％可
溶性デンプン、１．０％ファーマメディア、０．００３
％ＺｓＳＱ、・７Ｈ７０及び０．４％ＣＧｃｏ、を含有
する醗酵培地１７０リツトルに接種し、これを３０’Ｃ
，２００デｐ講、通気速度１５０リットル／分で操作す
る。醗酵の進行と共にブロスのｐＨは次第に増大し、１
００〜１２０時間後８．４〜８二５に達し、この時３０
悔ｃｒｔ／−のピーク抗生物質力価が得られる。

例　　２゜ 溶媒抽出によるＢＢＮ−９２８コンプレツクスの単離例
１から得られたブロス（１７０リツトル、ｐｇ　ｓ、５
　）を清澄剤と共に濾過する。活性は、菌体ケーキ及び
Ｆ液に共に見出される。菌体ケーキをアセトンとメタノ
ールとの溶媒混合物（１：１．３０リツトルＸ２）で２
回抽出する。

抽出液を合し、減圧下蒸発させて水性濃縮物を得、これ
を艷−ブタノールで抽出する。プロスル液を１−ブタノ
ールで２回抽出する（４０リツトル×２）。１−ブタノ
ール抽出液を合し、減圧下に濃縮し、残留物を凍結乾燥
して粗製の固体（２１，４ｔ　）を得る。薄層クロマト
グラフィ一定量によれば、このものは３種の主成分、Ａ
、Ｂ及びＣ１並びに３種の副成分、ＤｌＥ及びＦよりな
るコンプレックスであり、下の表７に述べるとおりのＲ
ｆ値を有する。

表　　７ ＢＢＭ−９２８Ａ　　Ｏ，７１０，４８ＢＢＭ−９２８
Ｂ　　Ｏ，５３０，２６ＢＢＭ−９２８ＣＯ，２７０，
０７ ＢＢＭ−９２８Ｄ　　Ｏ，７３０，５３ＢＢＭ−９２８
Ｅ　　Ｏ，５６０，３４ＢＢＭ−９２８Ｆ　　Ｏ，３９
０，１７◆　ＵＶスキャナー（シマズＣ８−９１０）Ｋ
より３４５％惰において検出 軸　−一ブタノールーメタノールー水（６３：２７：蕾
普費　キシレン−メチルエチルケトン−メタノール（５
：５：１） 例　　３゜ 例２の粗コンプレックス四塩化炭素−クロロホルムーメ
タノールー水（５：２：５：１）の溶媒系を使用する製
造用向流分配装置（ミタムラ、１００ｄ／管）Ｋよって
精製する。５０回の転溶の後、管５号ないし２０号を合
し、濃縮して成分Ａ、　Ｂ、Ｄ、　Ｅ及びＦを含有する
淡黄色粉末（４，４Ｓ’　）を得る。この混合物を少量
のクロロホルムに溶解し、予め酢酸エチルで処理したシ
リカゲルＣ−２Ｃ−２００（５００のカラム上に入れる
。増加量のメタノール（２〜５％、ｖ７ｖ）を有する酢
酸エチルでカラムを展開し、３４５％％における光学密
度によってフラクションをモニターする。副成分りが最
初に、次いで成分Ａが酢酸エチルによって溶解される。

成分Ｅ、Ｂ及びＦは、次に３％のメタノール濃度におい
てその順に溶離される。適当な成分を含有する各７ラク
シヨンを減圧下蒸発させ、残留物をクロロホルム−メタ
ノールから結晶化させる。同様に、成分Ｃの粗製物が上
述した向流分配の管２１号ないし３５号から得られる。

成分Ｃの精製を、シリカゲルクロマトグラフィー及びク
ロロホルム−メタノールからの結晶化によって実施する
。成分Ａ、　Ｂ、　Ｃ，Ｄ、　Ａ’及びＦについて収量
は、それぞれ、９８８〜．４２０■、８４８■、１３０
〜．１１９■、並びに１１４１１９である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、臭化カリウム中ＢＢＭ−９２８Ｄの赤外吸収
スペクトルである。 第１図において、縦軸は透過パーセントであり、横軸上
部は波長（ミクロン）、横軸下部は波数（ｃＩＬ’　）
である。 第２図は、同じ条件下のＥＢＭ−９２８Ｄのプロトン磁
気共鳴スペクトルを示す。 第２図において、横軸はｐｐｙである。 〇 匡

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次の特性を有する抗腫瘍抗生物質ＢＢＭ−９２８Ｄ：（
   ａ）クロロホルム及び塩化メチレンに可溶性、ベンゼン
   、エタノール、メタノール及びｎ−ブタノールにわずか
   に可溶性、そして水及びｎ−ヘキサンに実質的に不溶性
   であり； （ｂ）塩化第二鉄及びエールリヒ試薬反応陽性そしてト
   レンス、サカグチ及びニンヒドリン試薬陰性であり；（
   ｃ）マウス腹腔内移植Ｐ３８８白血病に有効な抗腫瘍剤
   であり、 （ｄ）融点２２４〜２２７℃を有し； （ｅ）比旋光度〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝−１３°（Ｃ１，
   ＣＨＣｌ＿３）を有し；（ｆ）炭素５０．７５％、水素
   ５．２５％、窒素１２．５８％、並びに酸素３１．４２
   ％の概算元素組成を有し；（ｇ）シリカゲル薄層クロマ
   トグラフィーにおいてＲｆ値０．７３〔溶媒系ｎ−ブタ
   ノール−メタノール−水（６３：２７：１０）〕、並び
   にＲｆ値０．５３〔溶媒系キシレン−メチルエチルケト
   ン−メタノール（５：５：１）〕を示し； （ｈ）実質的に第１図に示すとおりの臭化カリウム中赤
   外スペクトルを有し；そして （ｉ）重水素化クロロホルムに溶解する時実質的に第２
   図に示すとおりのプロトンＮＭＲスペクトルを得る。