JPS6341490A - 抗生物質ａ４２８６７およびその付加塩 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗生物質Ａ４２８６７と命名する新規な抗生
物質、その付加塩類、その！！！薬学的組成物および、
とくにそれらに感受性の微生物を含む伝染病の処置にお
ける、薬物としてのそれらの使用、に関する。

本発明の化合物は、また、動物、例えば、家禽、ブタ、
反すう動物などにおける成長促進剤として活性である。

本発明の他の目的は、新規な菌株ノルカルデイア（Ｎｏ
ｒｃａｒｄｉａ）　ｓｐ　　ＡＴＣＣ５３４９２または
その抗生物質Ａ４２８６７生産性突然変異体またはその
変異型を培養することを含む、抗生物質Ａ４２８６７を
調製する方法に関する。

ノルカルデイア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）　ｓｐ　　ＡＴ
ＣＣ５３４９２は、土の試料から分離され、そしてブタ
ベスト条約の規定に従い１９８６年５月２３日にアメリ
カン・タイプ・カルチャーφコレクション（Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉδｎ。

１２３０１　　Ｐａｒｋｌａｗｎ　　Ｄｒｉｖｅ、　Ｒ
ｏｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ、　Ｕ、　　Ｓ
、　　Ａ、　　２０８５２　）に受託された。この菌株
はＡ’ｒＣＣＮｏ、５３４９２の受託番号を付された。

抗生物質Ａ４２８６７および対応する製薬学的に許容さ
れうる塩類の抗微生物活性の類似性をかんがみえて、本
発明においては、抗生物質Ａ４２８６７の生物学的活性
を取扱うとき、また、対応する塩類も含められ、そして
、逆に、抗生物質Ａ４２８６７のｖ１薬学的に許容され
うる塩類を取扱うとき、また、対応する［塩でない」形
態も包含される。抗生物ｌｆｆＡ４２８６７の生産は、
それを生産できる／ルカルディア（Ｎ　ｏｒｅａｒｄｉ
ａ）　ｓｐ、すなわち、／ルカルディア（Ｎ　ｏｒｃａ
ｒｄｉａ）　ｓｐ　　Ａ　ＴＣＣ５３４９２またはその
抗生物質Ａ４２８６７生産性突然変異体またはその変異
型を、好気的条件下に、炭素および窒素の同化可１１８
な源、および無機塩類を含有する水性栄養培地中で培養
することによで達成される。しかしながら、発酵分野に
おいで通゛Δを用いる栄芸培地の多くを使用できるが、
ある種の培地は好ましい。好ましい炭′Ａ源は、グルコ
ース、マンノース、〃ラクトース、澱粉、トーモロコシ
粉末などである。好ましい窒素源は、アンモニア、硝酸
塩類、大豆粉末、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、ト
リプトン、アミノ酸などである。培地中に混入できる無
機塩類のうちには、ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、
コバルト、マンガン、カルシウム、アンモニウム、塩素
、炭酸、硫酸、リン酸、硝酸などのイオンを生産するこ
とのできる慣用の可溶性塩類が存在する。

通常、抗生物質生産性菌株を振盪７ラスフ内で予備培養
し、次いでこの培養物を使用してツヤ−発酵器に接種し
て、実質的な量の抗生物質を生産する。予備培養のため
に使用する培地はより大きい発酵のために使用するもの
と同一のちのであることができるが、池の培地を使用す
ることもできる。抗生物質Ａ４２８６７生産性菌株は、
２０〜４０°Ｃ１好ましくは２４〜３５°Ｃの温度にお
いて生長できる。

発酵の間、抗生物質の生産は、ブロスまｔこは菌糸体エ
キス試料を抗生活性について、例乏ぼ、バイオアッセイ
またはＴＬＣまたはＨｌ）　Ｌ　Ｃ手順によって監視す
ることができる。

抗生物質、・〜４２８６７に対して感受性の有機体、例
えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔｉｌｉｓおよびＳ
、ａｕｒ早且を試験有機体として使用できる。バイオア
ッセイは寒天拡散法により寒天平板上で便利に実施する
ことができる。抗生活性の最次の生産は、一般に、発酵
のｆＰＪ２日〜第日日第５日こる。

抗生物質Ａ４２８６７は、菌株／ルカルディア（Ｎｏｒ
ｃａｒｄｉａ）　ｓｐ　　ＡＴＣＣ５３４９２またはそ
の抗生物￥ｌＡ４２８６７生産性突然変異体またはその
変異型を培養することによって生産され、そして主とし
て培養ブロス中に見出される。

土壌寒天培地上で培養したこの菌株の形態学は、アクチ
／ミセテス（ａｃｔｉｎｏＢｃｅｔｅｓ）の１つに類似
し、適度１こ分校した長い菌糸をもつ、豊富な気中性菌
糸体の発現を示す。この菌株の主要な形態学的特性は、
棒様要索における基質および気中性菌糸体の断片化（ｆ
ｒａＢＩＩｌｅｎｔａＬｉｏｎ）である。基質菌糸体の
断片化は、培ｆｉ物の特性づけのために使用したｔべて
の寒天培地につい゛ζ観察されたが、ｆｆｌ地Ｎｏ、５
、培地ＮＯ６７、ヒッケイートエスナー（Ｈ１ｃｋｅｙ
　−Ｔ　ｒｅｓｎｅｒ）および卵アルブミン上において
、完全な断片化が認められたａ／フルカルブイア　Ｎｏ
ｒｃａｒｄｉａ）　ｓｐ　　ＡＴＣＣ５３４９２の基質
の菌糸は完全に発現し、培養物の年令に依存して分校お
よび断片化した棒様要素を有した。

気中性菌糸体は土壌寒天上および氷水天上で良好に発現
した。気中性菌糸は土壌寒天上で長く直線状であり、時
には節または巣に似たもつれを形成した。この菌株の形
態学は／ルカルディア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）属の１つ
に類似する。

この菌株の形態学的特性は、培養の性質を研究するため
に使用した同一の平板上で達成された。

発酵が寒天平板上で起こったかどうかを確立するために
、培地の表面をプラスチックのナイフで採取し、そして
試料をプラススライド上で光学顕微鏡によって観察した
。液体培養物において、この菌株はバチルス性要素（ｂ
ａｃｉｌｌａｒｙ　　ｅｌｅｍｅｎｔｓ）への広範な断
片化を示した。

培養物の特性を検査するために、フルカルブイア（Ｎｏ
ｒｅａｒｃｌｉａ）　ｓｐ　　Ａ　ＴＣＣ５３４９２を
、シャーリング（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およびゴツトリー
ブ（ＧｏＬｔｌｉｅｂ）が示唆している種々の標準培地
［シャーリング（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）　Ｅ、　Ｂ、およ
びゴツトリーブ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）　Ｄ、　、１９６
６−スドレプトマイーセス種の特性づけ法（Ｍｅｔｈｏ
ｄ　　ｆｏｒ　　ｃｈａｒａｃｔｃｒｉｚａＬｉｏｎ　
　ｏｆ　　Ｓ　ｔｒｅｐｔｏＩＩｙｃｅｓ）　−インタ
ーナシラナル・ジャーナル・オブ・システマチック番バ
クテリオロノー（Ｉ　ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊ
　ｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　
Ｂｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）　、１６．３１３−３４０］
上で、プラスマン（Ｗａｋｓｍａｎ）が推奨するいくっ
がの培地［プラスマン（〜￥　ａｋｓｍａｎ）　、　Ｓ
、　Ａ、　　１９６１−シ・アクチ／ミセテス（’Ｆｈ
ｅ　　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｃｓ）−ザ争ウィリアム
ス−アンド・ウィルキンス・カンパニー（′「ｌ＋ｅ　
　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　　ａｎｄ　　Ｗｉｌｋｉｎｓ　　
Ｃｏ、　）　、バルチモア；Ｖｏｌ、　　２．３２８−
３３４］　を添加して培養した。

必要に応じて、マエルズ（Ｍａｅｒｚ）およびバワル（
Ｐｕｕｌ）の方法［マエルズ（Ｍａｅｒｚ）　Ａ。

およびＭ、　　Ｌ／ア＋　バウル（Ｒｅａ　　Ｐａｕｌ
）　、１９８５−色の辞書（Ａ　　Ｄｉｃｔｉｏｎａｒ
ｙ　　ｏｆ　　Ｃｏ１ｏｒ）−第２歳、マクグロー−ヒ
ル・ブック・カンパニー・インコーホレーテッド（Ｍｃ
Ｇｒａｗ　−Ｈ１ｌｌＢｏｏｋ　　Ｃｏｍｐａｎｙ＋　
　Ｉｎｃ、　）　、ニューヨーク］によって、色の決定
を実施しｒこ。

有機体の炭素源を利用する能力は、シャーリング（Ｓｈ
ｉｒｌｉｎｇ）お上１ゴツトリーブ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ
）の方法によって研究した。

培養的およプ生理学的特性および炭素源の利用を９１、
ＩＩ、Ｉ　Ｉ　ｒ　、　　Ｉ　Ｖ　ｊ；　、１：　ヒＶ
　ｌ：　報告ｔ　ル。

表１における読みは、２８°Ｃにおいて２週間後に収っ
た。

ｃｙｌ＋旋曽−１ｒ−ソコー Ｊ−に賢　　シー×　　る１さト　」−り　（ＱｄＣＳ
　　　Ｇａｓ　　　Ｓト＼　Ｃ＼浪　ｓ逼宙咲＝　　喧
管味　　；　２工　召＝罎　史礪１ｍ藝ｄ　　ｍｌ劇　
　　７弓＼　（＼癩　斉、＼／　／ｋ　　／　−／　　
　ボ（ロ　　、−馴　。

ボへＮｃｌ　卒へ〜ζ　−一一　二一ミ　認州へ−担口
　祠ムー域　Ｃ４（チｄ’？　　←Ｓせ＼壷；　Ｓ侍＼
罎　旬Ｃム　：５５１Ｃ８鵠、−穂ぽ　怖、二沫　謬；
ト　ミ、だ　畑＠４＼駅８：！　　輻４＼馴　うシｎ　
輻４肇　囮【Ａ？ 舅　　　　　　１＠＜： ｇ要　ｇｎ※ｏ’−”−＜　ｏ’、入へＺ［Ｚコへ　　
２ト嵌　２０　　　き 妾顧−妾＼キ　　型７≦　回←　　　７ツー×　　　　
ツーＩさ　　ツーＫ　ツー　　〉＼掴　　−八だＥ（’
１＼　　　＼浪　Ｑ′り駅　　二、＼琺挺　　４−　　
（Ｑ壷　呂こ８　　　るΔ　、、に＋；＼　　　々＼逗
　Ｃ′八へ　　ト←ロー＝１　　さの　　　射口−；・
、＼Ｃ；７−域ロ　−≦　　÷−う　シΔ：ｆ：Ｉ、遍
＼（＝　　２傘　　　、ｄ×１・賢＠　　諷（−畷Ｅ硯
　Σ濱　　諷塙Ｃ二１　、　　チ劇＼馴馴　ザ　、　　
　会；ブ　胡。

塙Ｃｏ　　　々呂へ台籟　Ｓ遺　　ａ斑祷　８゜Ｋ　　
栄　　っ Δ　　　　　　く　　　　　。

嵌　　　　Ｋ−４−Ｊ＞　　　　　ユ Ｋ　　　　を　　　　　　ｂ　　　　、λ　　　　。

１　　　　　ま　　　　　　　　呂　　　　　全　　　
　　＝コ　　　　　　　　　ｌ　　　　　　　　　　　
　　　　５Ｑ　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　
−へ　　　　　・・ｌ　　　　　　　　ヤｋ　　　層　
　　　　ムま　　　　−　　　　　　　ヤ＊’ｈｈｉＫ
Ｋ　　　　　　　　ｌ　　　　　　　　　　　　へ　１
　　　　　へ　　　　　　＋嵌１ｋ　　　ｋ　　　　　
　　」本　　　コ）’ｅ　　　　Ｙｆｌ；ザ＼―宙　Ｃ
９＼　祠Δ　　胡０馴　９１（＋さ １　　　　　　　°； ｎ　　　　　　　＜　　　　　　　　　　　’Ｋ　　　
　　’Ｋま　　　　　　　ト　　　　　　　　　　　蛍
　　　　　蛍Ｋ　１　へ入 １　　　　　　　Ｋ　　　　　　　　　　　全　　　　
　ｒｒ〆へ　　　　　　堅　　　イ　　　　・・／トへ
　　　　　　ｒＩ嵌　　　嵌　　　　く　　　　ξ７×
　　　全入　　＠４　　　イ　　　トド嵌　　　　時　
　※　　　　Ｋ　　　　糞面、無色、微量の気中性 １百糸本 可溶性顔料ローズ 形成の気中性菌糸休出 文字および番号は、マエルズ（Ｍａｅｒｚ）およびパウ
ル（Ｐ　ａｕ　ｌ　）（２）に従って決定した色を示ｒ
。

／ルカルディア（Ｎ　ｏｒｃａｒｄｉａ）ｓｐムＩＩ 試　　　験　　　　　　　　　　　　　　　　　結果澱
粉の加水分解　　　　　　　　　　陽性チロシン反応　
　　　　　　　　　　陽性カゼインの加水分解　　　　
　　　　陽性リンゴ酸カルシウムの安定化　　　　陰性
硝酸塩からの亜硝酸塩　　　　　　　陰性セルソースの
分解　　　　　　　　　陰性リドマスミルクのペプトン
化　　　　陽性リドマスミルクの凝固　　　　　　　陰
性１５°Ｃ＝− ２２°Ｃ＝＋ ２８°Ｃ−＋＋ ３７’Ｃ＝＋ ４２°Ｃ＝＋ ５０’Ｃ＝− コロニーの発現ｉこ最ら適当な温度は、約２２°Ｃ〜約
４２“Ｃの範囲であることがわがた。

最適温度は２８°Ｃ〜３７°Ｃである。

表ＩＶ ｐｌ（３＝− ｐＨ＝Ｓ　　＝十十 ｐＨ５＝＋＋ １］Ｈ６＝＋＋ ｐ！（７＝　十＋ ｐＨ８＝十十 １］ト１９　　　　　＝＋＋ １＋１−（１０＝　− ｐト１１１＝− 一　二生畏なし 十　＝中、程度の生長 ＋＋＝豊富な成長 生理学的特性、ｐＨおよび温度の耐性の実験のため、ヒ
ンキーおよびトレスナーの寒天培地を使用した。

災１３眩ソり止 友史 炭素の利用 炭素源　　　　　　　　　　　生長 ラクトース　　　　　　　　　　　　　＋十アラビ／−
ス　　　　　　　　　　　　＋＋キシロース　　　　　
　　　　　　　　＋＋マン／−ス　　　　　　　　　　
　　　＋＋フルクトース　　　　　　　　　　　　　＋
十セロビオース　　　　　　　　　　　　＋＋〃ラクト
ース　　　　　　　　　　　　＋十イノシトール　　　
　　　　　　　　　士十グルコース　　　　　　　　　
　　　　＋＋ラフィ７−ス　　　　　　　　　　　　−
リボース　　　　　　　　　　　　　　＋＋スクロース
　　　　　　　　　　　　　−サリシン　　　　　　　
　　　　　　　　＋セルロース　　　　　　　　　　　
　　−ラムノース　　　　　　　　　　　　　　−一　
＝生長なし 十　＝中程度の生長 十＋＝豊富な成長 この試験のため、培地Ｎｏ、８を使用し、そして２８℃
〜３０℃で１０日間インキュベージランした後結果を取
った。

史上ｌし失蜆部。

菌株をＶ−６培地（牛肉エキス０．５％、自己分解酵母
０．５％、ペプトン０．５９６、加水分解カゼイン０．
３％、グルツース２％、ＮａＣｌ０．１５％）中で培養
し、回転振盪器上で２００ｒｐａ＋において３０°Ｃで
７２時間インキュベーションした。Ｖ−６培地中で生長
した菌糸体を遠心（３０００ｒｐｍＸ１０分）によって
収穫し、そして蒸留水で２回洗浄した。培地をさらにエ
タノールで洗浄し、次いで室温で層流のもとに乾燥した
。

乾燥した菌糸体は、全細胞調製物として使用した。

アミノ酸分析ニ アミノ酸分析は、ベラカー（Ｂ　ｅｃｋｅｒ）ら［［全
細胞加水分解物のペーパークロマドグラフイーによろノ
ルカルデイアとストレプトミセスとの間の迅速識別（Ｒ
ａｐｉｄ　　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｉａｔｉｏｎ　　ｂｅ
ｔｍｅｅｎ　　　Ｎ　ｏｒｃａｒｄｉａ　　　ａｎｄ　
　　Ｓ　　ｔｒｅｐｔｏＩＩｌｙｃｅｓ）　　Ｊ　　、
Ａｐｐｌ、　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、１２．４２１−４
２３（１９６４）］に記載されているように実施し、そ
してこれによりメソ−ジアミノピメリン酸類の存在が示
された。

糖の分析： Ｊ、Ｌ、　スティンネック（Ｓ　ｔａｎｅｃｋ）および
Ｇ。

Ｂ、ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）、　［［薄層りＣｌ？
トゲラフイーのシートによる嫌気的アクチ／ミセテスの
同定ｉこ対する簡素化されたアプローチ（Ｓｉωｐｌｉ
ｆｉｅｄ　　ａｐｐｒｏａｃｈ　　ｔｏ　　１ｃｌｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　ｏｆａｅｒｏｂｉｃ　　　ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　　　ｂｙ　　　ｔｈｉｎ−
１ａｙｅｒ　　　ｃｈｒｏ＋ａａｔｏｇｒａｐｈｙ）　
Ｊ　、２３−１２２６−２３１（１９７４）］に従い薄
層クロマトグラフィーのシートを使用して、Ｍ、Ｐ、　
　レチェハリエール（Ｌ　ｅｃｈｅｖａｔｉｅｒ）　［
ｒ臨床上重要性をもつ嫌気的アクチノミセテスの同定（
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ａｅｒｏｂ
ｉｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｅＬｅｓ　　　ｏｆ　　　ｃｌ
ｉｎｉｃａｌ　　　　ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ）　　Ｊ　
　、ジャーナル・オブ・ラボラトリ−・７ンド・クリニ
カル・メディシン（Ｊ、　　　Ｌａｂ、　　　Ｃｌ１ｎ
。

Ｍｅｃｌ、　）　、ヱ」工、９３４−９４４（１９６８
）］に従い実施した糖分の分析は、アラビ／−スおよび
〃ラクトースの存在を示した。

診断糖類、例えば、アラビノースおよＶｌｆラクトース
と一緒のメソージアミノピメリン酸蹟の存在は、この菌
株が、レチェバリアー（Ｌ　ｅｃｈｅｖａ　ｌ　１ｅｒ
）　Ｍ、　Ｐ、およびＨ，レチェハリアー（Ｌｅｃｂｅ
ｖａｌｉｅｒ）の分類［［嫌気的アクチノミセテスの分
類における基準としての化学組成（ＣｈｅＬｏｉｃａｌ
ｃｏｍｐｏＳｉｔｉｏｎ　　ａｓ　　ａ　　ｃｒｅｔｅ
ｒｉｏｎ　　ｉｎ　　ｔｈｃ　　ｃｌａＳｓｉｆｉｅａ
ｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ａｅｒｏｂｉｃ　　ａｃｔｉｎｏ
ｍｙｃｅＬｅｓ）　Ｊ、インターナショナル・ツヤ−ナ
ル・オブ・システマチックｅ　ハクテリオロジ−（Ｉ　
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪ　ｏｕｒｎａｌ　　　ｏｆ
　　　Ｓ　ｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　　Ｂ　ｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ）　　、先仄、４３５−４４３（１９７０）］
に従い、細胞ＩＶ型をもつアクチノミセテス（ａｃＬｉ
ｎｏ＋ａｙｃｃｔｃＳ）であることを示す。

他の有機体を用いて、抗生物質Ａ　４２８６７生産性菌
株の特性を変異にかける。例えば、この菌株の人工的変
異型または突然変異体は種々の既知の突然変異原、例え
ば、紫外線、Ｘ＃ａ、高い振動数の波、放射線、および
化学物質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ゛−二）ｏ
　　Ｎ−二トロソグアニノン、および多くの他のちので
処理することによって得ることができる。ノルカルデイ
ア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）　ｍの種に属しかつ抗生物質
Ａ４２３６７を生産ｒる、すべての天然および人工的変
異型または突然変異体は、菌株フルカルブイア（Ｎｏｒ
ｃａｒｄ’＋ｕ）　３１］　　Ａ　ＴＣＣ５３４９２と
同等であると認められ、そして本発明の範囲内に入る。

生産性微生物の発酵ブロスからの抗生ａ！Ｊ貿Ａ４２８
６７の回収は、それ自体既知の技術に従って実施し、そ
して溶媒による抽出、非溶媒の添加または溶液のｐＨの
変化によるによる沈殿、分配クロマトグラフィー、逆相
りロマトグラフイー、イオン交換クロマトグラフィー、
親和クロマトグラフィーなどを包含する。

好ましい手順は、固定化されたＤ−７ラニルーＤ−アラ
ニンを使ルする親和クロマトグラフィーおよび引続く逆
相りロマトグラフィーを包含する。

このＵｉ！３収法に適する固定化されたＤ−７ラニルー
Ｄ−アラニンのマトリックスは、欧州特許出願第８３１
１２５５５号に開示されている。この方法における好ま
しいマ）　ｌ）ツク又は、調節された孔の架橋したポリ
デキストランと結合したＤ−７ラニルーＤ−アラニンで
ある。

次いで、濾過した発酵プロスは、カラム中においである
いはバッチ式で、固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンのχ見料クロマトグラフィー（二がける。

抗生！＃’ｆ（Ａ　４２８６７の親和マドｌ）ンクスへ
の結合は好ましくはｐＨ約７．１−８．０において天施
し、そしてその溶離はより塩基性のｐＨ値（好ましくは
９．０〜１１．５）において水性塩基）こよって実施す
る。この水性塩基は、アンモニア、揮発性アミン、アル
カリ金属またはフル土Ｍ金属の水酸化物または塩基性緩
衝化溶液であることができ、必要に応じて、下に定義す
る極性有機溶媒、例元ば、極性水混和性溶媒を存在させ
ることができる。

必要に応じて、塩類、尿素およ１／または水混和性：８
媒を含有してもよい、水性緩衝液ｐＨ４−８でカラムを
洗浄することによって不純物を除去した後、抗生＠Ｊ質
Ａ　４２８６７を前述の溶離混合物で溶離する。次いで
、この粗製抗生物質は、好ましくは、プールした抗生物
質含有分画力弓ン、水と最小共沸混合物を形成できる有
機？８媒と一緒に共沸蒸留して水を完全に除去し、次い
で非溶媒を添加して所望生成物を沈殿させることによっ
て、回収する。

水と最小共沸混合物を形成できる有機溶媒の代表例は、
次の通りである＝ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン
、ブチルエーテル、四塩化炭素、クロロホルム、シクロ
ヘキＳＮ、２．５−ツメチル７ラン、ヘキサンおよびｍ
−キシレン；好ましい溶媒はｎ−ブタ／−ルである。

非溶媒の例は、次の通りである：５油エーテル、低級ア
ルキルエーテル、例えば、エチルエーテル、プロピルエ
ーテルおよびブチルエーテル、および低級アルキルケト
ン、例えば、アセトン。

あるいは、プールした抗生物質含有分画は、好ましくは
、上１こ定義した有機溶媒との共沸蒸留によって、小さ
い体積に濃縮し、そして得られた水溶液を（束結乾燥す
る。

′、８離に使用した水性塩基が非揮発性である場合、沈
殿または凍結乾燥のＩγｆに、濃縮を中和しかつ脱塩今
一ることが必要である二とがある。

普通の脱塩手順は、抗生物質含有水溶液をンラン化シリ
カゾルのカラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして極性
水混和性溶媒と水との混合物で溶離するこを包含する。

極性水混和性溶媒の代表例は、次の通りである：水溶性
アルコール（例えば、メタ／−ル、エタ／−ル、インプ
ロパ７−ル、ｎ−ブタノール）、アセトン、アセトニト
リル、低級アルキルアルカ／エート（例えば、酢酸エチ
ル）、テトラヒＶロアラン、ノオキサンおよびツメチル
ホルムアミドおよびそれらの混合物；好ましい極性水混
和性溶媒はアセトニトリルである。

あるいは、脱塩は、抗生物質含有溶液をｉｆｆ述の親和
カラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして親和クロマト
グラフィーの溶離について前述しｔこ押売性水性塩基で
溶離することによって実施ｒることがでさる。

そのようにして得られた生成物は、抗生物質Ａ・＄２８
６７である。純粋な抗生物質Ａ４２８６７を得るための
便利な手順は、親和クロマトグラフイ−のカラムについ
て前述した、それ以上の精製によって代表される。上と
同一の静止相（固定化されたＤ−７ラニルーＤ−アラニ
ン）を一般に使用し、そして所望の抗生物質は前述の固
定化されたＤ−７ラニルーＤ−アラニンを使用する親和
クロマトグラフィーの手順に従って溶離する６好ましい
固定化されたＤ−７ラニルーＤ−７ラニンはセファロー
ス−ε−アミノカルロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−７ラニ
ンであり、好ましい平衡化混合物は２モルのＮａＣｌを
含有し、ｐＨ７〜８に調節された０、１６％（ｗ／ｖ）
のアンモニアであり、好ましい洗浄溶液は２モルのＮａ
Ｃ１を含有し、ｐＨ７−８に調節された０、１６％　（
Ｗ／Ｖ）のアンモニアであり、好ましい溶離混合物は０
゜１６％（Ｕ＋／Ｖ）のアンモニアである。

あるいは、紫外線の抗生物質は、発酵ブロスから単離す
るが、あるいは官能化ポリスチレン、アクリルまたはポ
リデキストランマトリックスを包含する強いまたは弱い
アニオン交換０１脂によってさらに精製する。弱いアニ
オン交換樹脂は、次の商品名で販売されているものであ
る：　ドウエクス（ＤＯＩＩ＋（！Ｘ）　ＭＷＡ　　１
またはＷ　Ｇ　Ｒ（グツ・ケミカル）、アンバーライト
（Ａａ＋ｂｅｒｌｉｔｅ）　　Ｉ　ＲＡ　−７３（ロー
ム・アンド・ハース）、ＤＥＡＥ−セファデックス（Ｓ
　ｅｐｌ＋ａｄｅｘ）　（７７−７シア）。

本発明に従って使用できる強いアニオン交換樹脂の例は
、次の商品名で販売されているものを包含する：　ドウ
エクス（Ｄｏｗｅｘ）　ＭＳ　Ａ　　１、ＳＢＲ。

Ｓ　Ｂ　Ｒ−Ｐ　（ダウ・ケミカル）、アンバーライト
（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）　　Ｉ　Ｒ−９０４（ローム・
アンド・ハース）およびＱＡＥ−セファデックス（５ｅ
ｐｈａｄｃｘ）　（７ｙ−マシア）。

これらの＃Ｉ脂からの抗生物質Ａ４２８６７の溶離は、
水または水と有撤水混和性溶媒、例えば、低級アルコー
ル（例えば、（ＣＩＣ４）アルコール）または低級アル
キルケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトンな
ど）との混合物の中の電解質、例えば、ナ）　＋７　’
７ムまたはカリツムの塩酸塩の水性溶液の直線の勾配の
混合物によって実施する。

Ｕ”Ｉ物〜Ａ４２８６７の　。

Ａ）　添付図面の第１図に示し、かつ次の吸収最大を示
す紫外線吸収スペクトル： λｗａｘ（ｎ１ｌ） ａ）０．１ＮのＨＣｌ　　　　　　２８２ｂ）水　　　
　　　　　２８２ Ｃ）リン酸塩緩衝液ｐＨ７，４２８２ ｄ）リン酸塩緩衝液ｐＨ７２８２ （Ｒ） ｅ）リン酸塩緩衝液　　　　　　３０５０．１ＫＯ８２
６５ （Ｗ） Ｂ）　添付図面の第２図に示し、かつ次の＠収最大を示
す赤外線板収入ベクトル（ａｍ−’）　：３７００−３
１００．３０００−２８００（ヌノａ−ル）；　１６５
０；　１５８０；１４６０（ヌノａ−ル）；１３７５（
ヌジａ−ル）；　　１３００；　１２３５；　１２１０
；　　１１６０；　　１１３０：　　１０６０；　　１
０２５；　　１０００；　　９７０；　　８４０；　　
７９０−７００：　７２０（ヌノａ−ル） Ｃ）　第３図に示し、ＴＭＳを標準（０，００ｐｐｍ）
　、（δ＝ｐｐｍ）として使用してＤＭｓｏ　　ｄａ（
ヘキサデユーテロジメチルスルホキシド）中で２７０Ｍ
Ｈｚにおいて記録した信号（ｐｐｍ）の次の群を示す ’Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ０．９０、ｄ［（ＣＨ２）２−（ＣＨ）］；　　１．０
２、ｄ［ＣＨ，−（ＣＨ）］　；１．２３、ｄ［ＣＨ，
−（ＣＨ）］　；　　１゜５２、ｓ［ＣＨ３ＣＨ＝］　
；　　１．７　？、ａ＋［ＣＨ（ＣＨ３）２］　；　　
２．３８、Ｓ（Ｎ−ＣＨ３］　：　　３．Ｏ−６，３５
、Ｓお上りｍ（芳香族、糖およびペプチドのＣＨ）；　
６．２７−９．２９（芳香族のＣＨ，ペプチドのＮＨお
よびフェノールの０Ｈ） ｄ＝二重線 Ｓニー重線 ■＝多重線 Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰ　Ｌ　Ｃによって分析した
とき、バンコマイシン（Ｖ　ａｎｃｏｍｙｃｉｎ）ｊＨ
ＣＩ（Ｖａｎｃｏｃｉｎ、　Ｅｌｉ　　Ｌｉ１ｉｙ、　
Ｒｔ＝１６．３６分） ｉこ関して０．５３７の保持時間（Ｒｔ）　：カラム：
　ウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　Ｏ
Ｄ　Ｓ　（５μｌ）アトレックス（Ａｔ１ｅｘ） （ベックマン）４，６ｏ＋ｍ ×２５０ＩＯＩＩｌ 予備カラム：　ブロウンリー・ラプス（Ｂｒｏｕ＋ｎ１
ｅｅ　　Ｌ　ａｂｓ）　ＲＰＩ３（５μａＡ） 溶離剤：　水ニアセトニトリル：２−エタ／−ルアミン
：　トリフルオロ酸 酸９：　１：　０．０１：　Ｏ，Ｏｉ （ｖ／ｖ） 流速：　　　１．６ｍｌ／分 ｔＪ、Ｖ、検出器：　　２５４ｎＩ。

内ｆｆ１ｌ？２準：　バンコマイシン・ｉ４　Ｃｌ（Ｒ
ｔ＝９．９６分）　（Ｖ　ａｎｃｏｃｉｎ。

Ｅ　ｌｉ　　Ｌ　１ｉｉｙ） Ｆ）　次の概算百分率組成（平均）を示す、不活性雰囲
気中で約１４０°Ｃにおいて試料を萌もって乾燥後の元
素分析：炭素５３．３％；水素５．９％；窒素７．８５
％；塩素（合計）４．４１％；塩素（イオン性）２．２
２％。空気中で９００　’Ｃにける無機残留物：０，８
７５％、 Ｇ）　過剰の水性ＨＣｌを而もって添加した試料の０．
０５Ｎ水性ＫＯＨで滴定したとき、水中の酸−塩基滴定
プロフィル：　ｐＫａ値３．２．７．１および８．３、 ）（）　　次のクロマトグラフ系における０、５６のＲ
ｃ値： （水性塩化ナトリウム８７．５ｇ／　ｌ：　ＮａＨ２Ｐ
Ｏ４０，５ｇ／Ｉ）　　　　７０９６ＣＨ，ＣＮ　　　
　　　　　　　　３０％、１（６に調節、 逆相シラン化シリカゾルの板（ＲＡ−ｉ８Ｆ　２．−）
を使用する 可視化ニ ーＵ、Ｖ、光、２５４ｎｍ −パウリ試薬（Ｐｎｕｌｙ　　Ｒｅａｇｅｎｔ）　、す
なわち、ノアゾ化スルファニル酸で黄 色［ツヤ−ナル・オブ・クロマトグラ フ　４−（Ｊ　、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ、　　）　、２０
−１１７１（１９６５）　、Ｚ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ。

Ｃｈｅｗ、　）　、２９２．９９（１９５３）］−最小
デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上で８、５ｕｂｔｉｌｉｓ
　　Ａ　”ｌ”ｃｃ　　６６３３を使用するバイオオー
トグラフィー、 Ｉ）　　　１５６０；：Ｍ＋ＨΦヒークを示すＦＡＢ−
ＭＳスペクトルから推定した約１５５９の分子量。

抗生物質Ａ４２８６７は、酸および塩基の８！能を有し
、そして適切なｐＨ条件下に内部塩類を形成するほかに
、有機および無代の反対イオンと普通の手順に従って塩
須を形成するおことができる。

本発明の代表的なかつ適当な酸付加塩は、楳鵡の反応に
よって次の有へ酸および無機酸と形成した塩類を包合す
る：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフル
オロ酢酸、コノ＼り酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳
酸、マレイン酸、７マル酸、バルミチン酸、コール酸、
バモン酸、ムチン酸、グルタミン酸、ショウ７７酸、グ
ルタル酸、グリコール酸、７タル酸、酒石酸、ラウリン
酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベ
ンゼンスルホン酸、ソリビン酸、ビンリン酸、安息香酸
、桂皮酸などの酸類。

これらの塩基類の代表例は、次の通りである：アルカリ
金属およびアルカリ土類金属の水酸化物、例えば、ナト
リウム、カリウム、カルシワム、マグネシワム、バリウ
ムの水酸化物；アンモニアおよび脂肪族、脂環族または
芳香族の有機アミン、例えば、メチルアミン、ツメチル
アミン、トリメチルアミン、およびピコリン。

本冗明の１塩でない」化合物の対応ｒる付加塩への転化
、およびその逆、すなわち、本発明の化合物の付加塩へ
の転化は、当業者の技量の範囲内で・あり、そして本発
明に包含される。

例えば、抗生物質Ａ４２８６７は、塩でない形態の化合
物を水性溶媒中に溶解し、そしてわずかに過剰量の選択
した酸または塩基を添加することによって、対応する付
加塩に転化することができる。次いで、得られる溶液ま
たは懸濁液を凍結乾燥して所望の塩を回収する６ 最終の塩が塩でない形態の化合物が可溶性である溶媒中
に不溶性である場合、化学量＋！！１量またはわずかに
過剰量の選択した酸または塩基の添加後１こ、それを塩
でない化合物の化合物の有機溶液からろ過によって回収
する。

塩でない形態の化合物は水性溶媒中に溶解した対応する
酸または塩基の塩から調製することができ、次いで塩を
中和して塩でない形態の化合物を遊離させる。

中和後、過剰の酸または塩基の排除を必要とするとさ、
普通の脱塩手順を用いることができる。

例えば、シラン化シリカゲル、非官能化ポリスチレン、
アクリルおよび調節された孔のオリデキストラン樹脂し
例えば、セ７アセックス（Ｓｃｐｈａｄｃｘ）　Ｌ　１
（２０）または活性炭のカラムクロマトグラフィーを便
利に用いることができる。望ましくない塩類を水溶液で
溶離した後、所望生成物を水および極性または非極性の
有機溶媒の混合物、例えば、５０：５０〜約１００％の
ア七ト二トリルのア七ト二トリル／水の直線の勾配また
は１′段階の勾配によって溶離する。

この分野において知られているように、製薬学的に許容
されうる酸（または塩基）または製薬学的に許容される
以外の酸（または塩基）を便利な精製技術において使用
できろ。形成お上り単離後、塩の形態の抗生物質Ａ４２
８６７を対応する塩でない形態または製薬学的に許容さ
れうる塩の形態に転化できる。

ある場合において、抗生物質Ａ４２８６７の塩基イ１１
加塩は、水および親水性溶媒中により可溶性である。

本発明の化合物の抗菌活性は、ＭＩＣ（最小限と濃度）
の決定のための培地およＶ範囲条件は、次の通りであっ
た：アイソセンチテス）（Ｉｓ。

５ｅｎＬｉｔｅｓｔ）プロス［オキソイド（０ｘｏｉｄ
）　］、２４時２４時開フイロ：７７キ（５ｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｉ）、βｔｅｐ、ｆａｅｃａｌｉｓおよプ
グラム陰性バクテリア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉｎ　　ｃ
ｏｌｉ）　：　　）　ラド−ヘライツト（丁ｏｄｄ　　
Ｈｅｕ＋１ｔｔ）プロス［デイ７＝２（Ｄｉｒｃｏ）、
２４時開、他のスタフイｔｆｆ：Ｉツキ（５ｔａｐｈｙ
ｌｏｅｏｃｃ１）種；ＧＣ基剤時間（デイ７コ）＋１％
のアイソビタレックス（ｌ５ｏｖｉｔａｌｅｘ）　（Ｂ
ＢＬ）　、４８時間、ＣＯ２に富んだ＄囲気、Ｎ　ｃｉ
ｓｓｅｒｉａｙｏｎｏｒｒｂｏｅａｅ；脳心ブロス（デ
イ７コ）＋１％サブルメント（Ｓ　ｕｐｐｌｅｍｅｎｔ
）　Ｃ（デイ７コ）、２４時開、嫌気的雰囲気、ＣＩｏ
ｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｄｎＪ　ｅ　Ｉ咀；ウィルキンス
ーチャログレン（Ｗｉｌｋｉｎｓ−Ｃｈａｌｇｒｅｎ）
寒天［参照：　Ｔ、Ｄ、ウィルｋｒ；ンス（Ｗｉｌｋｉ
ｎｓ）およびＳ、チー１−ログレン（ＣＩ＋ａ１ｇｒｅ
ｎ）、１９７６、抗微生物削の化学療法（Ａｎｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ、Ａｇ、ＣｈｅｍｏＬＩ＋ｅｒ、　）　、１０
．９２６］、４８時間、嫌気的雰囲気、池の嫌気的菌類
（Ｃ，ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ％’Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　　ａｃｎｅｓ、Ｂ　ａｃＬｅｒｏｉｄｃ
ｓ　　ｄ）　；　Ｐ　Ｐ　Ｌ　Ｏプロス（デイ７コ）十
ｉｏ％のウマ血清＋１％のグルコース、４８時間、Ｍ　
ｃｏ　Ｉａｓｍａ　　ｇａｌｌｉｓｅ　ｔｉｃｕａ＋；
　Ｒ，Ｔ。

エバンス（Ｅ　ｖａｎｓ）およびり、タイラーーロビン
ソン（Ｔ　ａｙｌｏｒ　　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）における
ような補充物を含むＰＰＬＯブロス［抗微生物化学療法
誌（Ｊ、　Ａｎｔｉｌｌｉｃｒｏ、　Ｃｈｅｍｏｔｈｅ
ｒ、　）、支、５７１１２４時間、Ｕ、　　ｕｒｅａｌ
ｙｔｉｅｕｍ、インキュベーションは３７℃において実
施する。接種物は次の通りである： 屹エエｌ１ｉｓ。ｌユニ、−について４８時間のブロス
培養物の１％（ｖ／ｖ）；Ｕニジ」互ｂ１ｊシ捷工につ
イテ約１０４色変化単位／１；池のブロス希釈微生物に
ついて約１０’〜１０５コロニー形成単位／ｍ１；寒天
希釈微生物について約１０’〜１０５コロニー形成単位
／ｍｌ；寒天希釈微生物（Ｃ，ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｐ
ｉ！！ＪＪｉｏｎｉｂａｃＬｅｒｉｕｍ　　ａｅｎｅｓ
、Ｂ　ｇｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　　ｆｒａｉ月二）につい
て約１０１〜１０５バクテリア／スポツト（多点接種器
を使用して接種した）。

いくつかの微生物についての最小阻止濃度（ＭＩ　Ｃ，
μｇ／ｍｌ）を、下ｉＶＩに報告する。

抗生物質Ａ４２８６７はフ７グラーゼ陰性スタフイロコ
ッキ（５ｔａｐｌ＋ｙｌｏｃｏｃｃｉ）に対して活性で
あることがわかった。Ｓ、　　ｅｐｉｃｌｅｒｍｉｄｉ
ｓおよびＳ、　　ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓの臨床的分
離物の１系列に関するＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）を、次に報
告する二表ＶＩＩ 本発明の化合物の抗微生物活性は、また、マウスにおけ
る実験的敗血症において確証される。

対照群および処置群は、１０匹のＣＤ−１マウス（Ｃｈ
ａｒｌｅｓ　　Ｒｉｖｅｒ）体重１８−２２ｇを含有し
た。３工吐坦組阻　Ｃ２０３（Ｌ４９）の−夜の培養物
を無菌ペプトン化生理的食塩水で希釈することによって
？！４製したバクテリア懸濁液の０．５ｍｌを、それら
のマウスに腹腔内に感染させた。敗血症の未処置動物が
４８時間以内に死ぬように、接種物を調節した。試験す
べき化合物を感染直後に皮下に投与した。第７０目に、
スペア−マン（Ｓ　ｐｅａｒａ＋ｉｎ）お上りケルベル
方法［Ｄ．Ｊ．７１ネイ（　Ｆ　ｉｎｎｅｙ）　、ｒ生
物学の７ツセイにおける統計学的方法（　Ｓ　ｔａｔｉ
ｓｔｉｃａｌ’　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　　Ｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　　Ａｓｓａｙ）　Ｊ　、グリフフィン（
　Ｇｒｉｆｆｉｎ）　、５　２　４ページ、１９５２ｊ
によで、各投与量において生きている動物の百分率から
、Ｅ　Ｄ　ｓｏ（　ｍｇ／　ｋｒ）を２１″算した。

これらの条件下で、抗生物質Ａ４２８６７のＥＩ）ｉｎ
値は１．５４ｍｇ／ｋｇであ゛った。

一般に、抗菌処置のために、抗生物質Ａ４２８６７なら
びにその無毒の製薬学的に許容されうる塩類およびそれ
らの混合物は、異なる経路、例えば、局所的にまたは非
経口的に投与できる．非経口的投与は、一般に、投与の
好ましい経路である。

注射のための組成物は、油性または水性の賦形剤中の懸
濁液、溶液、または乳濁液のような形態であることがで
き、そして７ジ１パント、例りば、懸濁剤、可溶化剤お
上り／または分散剤を含有することができる。

あるいは、活性成分は、放出の時、適当な賦形剤、例え
ば、無菌の水を添加して再構成するための粉末の形態で
あることができる。

投与の経路に依存して、これらの化合物は種々の投与形
態に配合することがでえきる。

ある場合において、それは経口的投与のための腸溶皮の
投与形態に本発明の化合物を配合することがでさ、この
Ｉ！溶皮の投与形態はこの分野において知られているよ
うにして調製できる【参照、例えば、レミントンの製薬
科学Ｃ　Ｒｅ論ｉｎｇｔｏｎ’　ｓＰｈａｒｍａｃｅｕ
’Ｌｉｃａｌ　　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）　Ｊ　％　Ｍｌ　
５版、マフク拳パブリジング・カンパニー（　Ｍａｃｋ
　　Ｐｕｂｉｓｈｉｎｇ　　ＣｏｌＩｌａｎｙ）　、米
国ペンシルベニア州ニーストン］。

これは、ことに抗微生物物質肖を未変化で通過し、腸管
内の抗微生物物質の吸収がとくに望ましい場合であるこ
とができる。

投与すべき活性成分の量は、種々の因子、例えば、処置
すべき患者の大きさおよび状態、投与の経路および頻度
、および含まれる病原因子に依存する。

本発明の抗生物質およびその製薬学的に許容され）る塩
類は、一般に、患者の体重１に１１につき０、５〜５０
ｍｇの活性成分の１日の投与量で有効であり、必要に応
じて１日に１〜４回の投与に分割する。

とくに望ましい組成物は、約１００〜約５，０００ｍｇ
／単位を含有する投与単位で調製されるものである。

注射に適する賦形剤の代表例は、注射用のｐ＆菌の水、
リンデル溶液、０．９％の生理的食塩水お上１５％のデ
キストロ−人である。静脈内注入のために、賦形剤中の
抗生物質の適当な濃度は約５％〜１０％の闇であ゛る。

投与単位の他の適当な配合物は、気密密閉したバイアル
、プラスチックのパッチ、無菌のゴム栓付きのバイアル
なとである。

さらに、本発明の抗生物質は局所用調製物、例えば、洛
液、クリームまたはローションに配合ｒることができる
。これらの調製物は、便利には、０．１〜１５％（ｕ＋
／’ｖ）の活性成分を含有する。

さらに、本発明の抗生物質は、腸内の偽膜大腸炎を引き
起こすＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ
　　の生長を抑制すうために有用である。これらの抗生
物質は、ｇ１薬学的に許容されうる投与形態でｉ＊され
た、有効投与量の抗生物質またはその製薬学的に許容さ
れうる塩の経口的投与によって、偽膜大腸炎の処置に使
用できるであろう。このような使用のため、抗生物質は
ゼラチンカプセルまたは液状）ガ濁液で投与することが
できる。

薬物としてのその活性のほかに、抗生物質Ａ４２８６７
、またはその許容されうる塩は、動物成長促進剤として
使用できる。

この目的に対して、本発明の化合物は適当な飼料中で経
口的に投与される。使用する精確な濃度は、正規の量の
飼料が消費されるとき、成長促進有効量の活性剤を提供
するために要求されるン農度である。

動物飼料への本発明の活性化合物の添加は、好ましくは
、活性化合物を有効量で含有する適当な飼料予備混合物
を調製し、そしてこの予備混合物を完全定量に混入する
ことによって達成される。

あるいは、活性成分を含有する中間の濃縮物または飼料
補助物質を飼料中に配合することができる。

このような飼料予備混合物および完全定量を調製しそし
て投与する方法は、参考書に記載されている［例えば、
［アプライド・アニマル・ニュートリジョン（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ　　Ａｎｉｍａｌ　　Ｎｕｊｒｉｔｉｏ＋＋）、
Ｗ、８．７リードマン・アンド・カンパニー（Ｆｒｅｅ
ｄＩＩｌａｎ　　ａｎｄ　　Ｃｏ、　）　、米国サン７
ランシスフ州、１９６９またはドライブストック・フイ
ーズ・アンド・フィーディング（Ｌ　１ｖｅｓｔｏｃｋ
　　Ｆ　ｅｅｄｓ　　ａｎｄ　　Ｆｅｅｄｉｎｇ）　Ｊ
　、Ｏ・アンド−Ｂブックス（Ｏａｎｄ　　Ｂ　　ｂｏ
ｏｋｓ）　、米国オレゴン州コルパリス、１９７７］（
これらを引用によってユニに加える）。

次の実施例により本発明をさらに説明するが、これらの
実施例はいかなる方法においても本発明を限定しない。

実施例１ 抗生物質Ａ４２８６７の製造 生産性有機体［／ルカルディア（Ｎ　ｏｒｃａｒｄｉｎ
）ｓｐ　　Ａ’ｌ”ＣＣ５３４９２］の原培養物を、オ
ートミール寒天斜面培地上に線状に接種し、そして２８
℃で２週間インキユベーンヨンする。

１白金耳の菌株生長物を、デキストロース２゜０％、大
豆粉末０．８％、酵母エキス０．２％、ＮａＣｌ０．１
％およびＣａＣＯ３０、４％から構成され、ｐ　Ｈが無
菌前に７．３に調節されている種培地の１００１を含有
する５００ａ＋１のエルレンマイヤーフラスコに接種す
る。このフラスコを回転！：Ｘ１ｊ５Ｌ器上で２８化合
物において７２時間インキエベーションする。次いで、
培養物の１００ω１の７リコートを、４リツトルの同一
種培地を含有するツヤ−の発酵器の中に接種し、そして
培養物を約９００　ｒｐｍで攪拌しかつ１標準リツトル
の空気／体積／分で通気しながら、２８℃において４８
時間インキエベーシシンする。種培地と同一の組成を有
する発酵培地の２００リツトル中に種ｉｌ！物の４リツ
トルを接種した後、約２５０　ｒｐｍｔ’ａ！押しかつ
１標準リツトルの空気／体積／分で通気しながら、発酵
を９６時間実施する。

抗生活性は、微生物学的アッセイにより最小デイビス培
地で培養した１工５ｕｂｔ　ｉ　Ｉ　ｉｓを使用して監
視した。

実施例２ 抗生物質Ａ４２８６７の回収 実施例１において得られた全発酵ブロス（４００リツト
ル）を、回転フィルターで濾過助剤（Ｈｙｆｌｏ　　Ｆ
ＩｏＭａ反応）を使用１して濾過する。濾過したブロス
を２Ｎ塩酸でｐ）１７．５に調節し、そしてｉｏｏｏｍ
ｌの予［ＩＦ５潤したＤ−Ａｌａ　　Ｄ　　Ａｌａ−ア
ミ７カプロイルーセフアロース（Ｓ　Ｃｐｈａｒ。

ｓｅ）　　　４Ｂ変性マ）　＋７ツクス（欧州特許出ｉ
Ｎｏ。

８３１１２５５５．４号に記載されでいるようにしてＡ
ｆｉ）に添加し、そしておだやかに攪拌しながら一夜放
置する。この樹脂を濾過により回収し、そして５％　（
ｗ／ｖ）のＮａＣ１を含有する約１０１のＯ，Ｓ％（ｗ
／　ｖ）　ＨＣｌ−トリス緩衝液ｐＨ７゜５で洗浄し、
次いで水（４Ｘ５１）で洗浄し、その間プロスを廃棄す
る。

樹脂に選択的に結合した生成物を、１．５％（Ｗ／Ｖ）
の水酸化アンモニウム（４Ｘ５１）で溶離し、そして減
圧下にｎ−ブタノールとの共沸蒸留によって小さい体積
に濃縮する。

濃ａされた水溶液を凍結乾燥して、抗生物質Ａ４２８６
７を得る（７５．６ｇ）。

実施例３ 粗製抗生物質Ａ４２８６７の精製 実施例２の手順に従って得られた粗製抗生物質Ａ４２８
６７（７５ｇ）を、２モルの塩化ナトリウムを含有し、
０．ＩＮの水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７，５に調節し
た水の２リツトル中に溶解した。

２モルの塩化ナトリウムおよび０．６１１＋１のトリト
ンＸ１００（ペイカー等級）を含有する０゜０４モルの
ホウ酸塩緩衝液ｐＨ゛７，５で葭もって平衡化しである
、予備Ｂ潤したＤＡｌａ−Ｄ−Ａｌａ−６−アミツカブ
ロイル−セファロース（５ｅｐｈａｒｏｓｅ）　−４Ｂ
変性マトリックス（欧州特許出願Ｎｏ、８３１１２５５
５．４号に記載されているようにして調製）の１０１０
０Ｏのカラム（０，ＩＸＯ６１ｍ）　に、前記ｔ＆ｌｔ
　ヲ５００　ｍｌ／時間で適用する。

このカラムを８モルの尿素（ｐＨ７，５）で５００１／
時間の流速で洗浄し、次いで７０１の水性ＮａＯＨ，ｐ
Ｈ１０で洗浄し、各々１０００１の分画を集める。これ
らの分画をＢ、　　５ｕｂｔｉｌｉｓ培養物で寒天−デ
ィスクアッセイによりアッセイし、そして不活性である
分画を廃棄し１．一方活性である分画（この場合、分ｄ
ｉ６３〜７０であると思われる）を−緒にし、減圧下に
ｎ−１タノールとの共沸蒸留によって小さい体８（５０
０ｍｌ）に濃縮し、そして凍結乾燥して抗生物質Ａ４２
８６？（４ｇ）を得る。

実施例４ 抗生物質Ａ４２８６７の精製お上り脱塩実施例３の手順
に従って得られた抗生物ｔｆＡ４２８６７３．５ｇを、
リン酸二水素ナトリウム−水和物（２，５ｇ／ｌ）の溶
液の７０−１中に溶解し、そしてａｔ過する。

この濾ｉＱｌノ１０　ｍｌを、４０．の１０＃ｓのＲＰ
１８リチリソープ（Ｌ　１ｃｈｒｏｓｏｒｂ）逆相シリ
カゲル［ｉル９（Ｍｅｒｃｋ）　］を充填したステンレ
入鋼の力？ム（２Ｘ５０ｃｍ）へ適用する。このカラム
はクロマトスパック・モヅルプレプ（Ｃｈｒｏｓａｔｏ
ｓｐａｃ　　Ｍｏｄｕｌｐｒｅｐ）単位［ジョビンーイ
ボン（Ｊ。

ｂｉｎ　　Ｙｖｏｎ）　、　７ランス国ａングクエメア
ウ９１１６９ルエ・デーカナル１６−１８１の一部であ
る。

このカラムを試料の溶解に使用したのと同一の浴衣で８
ｍ１／分で溶離し、そして５０ｍ１の分画を集める。

各分画をＨＰ　Ｌ　Ｃおよび紙のディスクのバイオ７フ
セイによって感受性の微生物、例えば、１２ｓｕｂｔ　
ｉ　ｌ　ｉｓについて監視する。

７回の実験の１エ５ｕｂｔｉｌｉｓについて活性な分画
を一緒にし、アセトニトリルを減圧蒸発によって除去し
、そして残蕾物をほぼ最初の溶液体積である量のウェル
で希釈する。

溶液をｐＨ７，５に調節し、次いで１００＋ａｌ／時間
の流速で、０．０４モルのホウ酸塩緩衝液ｐＨ７，５で
前もって平衡化しである予備膨潤したＤ　−Ａ　ｌｔ　
−Ｄ　−Ａ　１ｍ　−６−アミ７カブロイルー七７７ｔ
ｆｆ−ス（Ｓ　ｅｐｈａｒｏｓｅ）−４Ｂ変性マトリッ
クス（欧州特許出願Ｎｏ、８３１１２５５５．４号に記
載されているようにして調製）のカラム（５Ｘ１５ｃｍ
）に、適用する。

このカラムを８１の水（０，５ｍｌ／ＩのＩＮ塩酸で酸
性化した）で洗浄する０次いで、カラムを１゜５％（智
／、）の水酸化７ンモニウムで溶離し、各／ｚ１００ｍ
ｌの分画を集める。　ＢＬｓｕｂｔｉｌｉｓに対して活
性である分画をプールし、減圧濃縮し、そして凍結乾燥
すると、１．２ｇの脱塩された抗生物１Ａ４２８６７の
、ｉ４！！物が得られ、その物理化学的特性は１ｉτ１
１．：報告した通りである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質Ａ４２８６７の紫外線吸収スペクト
ルを示す。 第２図は、抗生物質Ａ４２８６７の赤外線吸収スペクト
ルを示す。 第３図は、抗生物質Ａ４２８６７の’Ｈ−ＮＭＲスペク
トルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、塩でない形態において、次の特性： 抗生物質Ａ４２８６７の物理化学的特性 Ａ）添付図面の第１図に示し、かつ次の吸収最大を示す
   紫外線吸収スペクトル： 　　　　　　　　　　　　　　　λｍａｘ（ｎｍ） ａ）０．１ＮのＨＣｌ　　　　　２８２ ｂ）水　　　　　　　　　　　　２８２ ｃ）リン酸塩緩衝液ｐＨ７．４　２８２ ｄ）リン酸塩緩衝液ｐＨ７　　　２８２ 　　　　　　　　　　　　　　　３０５ 　　　　　　　　　　　　　　　（肩） ｅ）リン酸塩緩衝液　　　　　　３０５ ０．１ＫＯＨ　　　　　　　　　２６５ 　　　　　　　　　　　　　　　（肩） Ｂ）添付図面の第２図に示し、かつ次の吸収最大を示す
   赤外線吸収スペクトル（ｃｍ＾−＾１）：３７００−３
   １００、３０００−２８００（ヌジョール）；１６５０
   ；１５８０；１４６０（ヌジョール）；１３７５（ヌジ
   ョール）；１３００；１２３５；１２１０；１１６０；
   １１３０；１０６０；１０２５；１０００；９７０；８
   ４０；７９０−７００；７２０（ヌジョール） Ｃ）第３図に示し、ＴＭＳを標準（０．００ｐｐｍ）、
   （δ＝ｐｐｍ）として使用してＤＭＳＯ　ｄ＿６（ヘキ
   サデューテロジメチルスルホキシド）中で２７０ＭＨｚ
   において記録した信号（ｐｐｍ）の次の群を示す ＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ０．９０、ｄ［（ＣＨ＿３）＿２−（ＣＨ）］；１．０
   ２、ｄ［ＣＨ＿３−（ＣＨ）］；１．２３、ｄ［ＣＨ＿
   ３−（ＣＨ）］；１．５２、ｓ［ＣＨ＿３−ＣＨ＝］；
   １．７７、ｍ［ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２］；２．３８、ｓ
   （Ｎ−ＣＨ＿３］；３．０−６．３５、ｓおよびｍ（芳
   香族、糖およびペプチドのＣＨ）；６．２７−９．２９
   （芳香族のＣＨ、ペプチドのＮＨおよびフェノールのＯ
   Ｈ） ｄ＝二重線 ｓ＝一重線 ｍ＝多重線 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣによって分析したとき、
   バンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）・ＨＣｌ（Ｖ
   ａｎｃｏｃｉｎ、Ｅｌｉ　Ｌｉｉｉｙ、Ｒｔ＝１６．３
   ６分）に関して０．５３７の保持時間（Ｒｔ）：： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アトレックス（Ａｔｌｅｘ）（ベッ
   クマン）４．６ｍｍ×２５０ｍｍ 予備カラム：ブロウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   　Ｌａｂｓ）ＲＰ　１８（５μｍ） 溶離剤：水：アセトニトリル：２−エタノールアミン：
   トリフルオロ酢酸９：１：０．０１：０．０１（ｖ／ｖ
   ） 流速：１．６ｍｌ／分 Ｕ．Ｖ．検出器：２５４ｎｍ 内部標準：バンコマイシン・ＨＣｌ（Ｒｔ：９．９６分
   ）（Ｖａｎｃｏｃｉｎ、ＥｌｉＬｉｉｉｙ Ｆ）次の概算百分率組成（平均）を示す、不活性雰囲気
   中性で約１４０℃において試料を前もって乾燥後の元素
   分析：炭素５３．３％；水素５．９％；窒素７．８５％
   ；塩素（合計）４．４１％；塩素（イオン性）２．２２
   ％。空気中性で９００℃にける無機残留物：０．８７５
   ％、 Ｇ）過剰の水性ＨＣｌを前もって添加した試料の０．０
   ５Ｎ水性ＫＯＨで滴定したとき、 水中の酸−塩基滴定プロフィル：ｐＫａ値 ３．２、７．１および８．３、 Ｈ）次のクロマトグラフ系における０．５６のＲｆ値： （水性塩化ナトリウム８７．５ｇ／ｌ：ＮａＨ＿２ＰＯ
   ＿４　０．５ｇ／ｌ）　７０％ ＣＨ＿３ＣＮ　３０％ ｐＨ６に調節、 逆相シラン化シリカゲルの板（ＲＡ−１８Ｆ＿２＿５＿
   ４）を使用する可視化：−Ｕ．Ｖ．光、２５４ｎｍ−バ
   ウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわち、
   ジアゾ化スルファニル酸で黄色［ジャーナル・オブ・ク
   ロマトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）、２０
   、１７１（１９６５）、Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
   ．）、２９２、９９（１９５３）］−最小デイビス（Ｄ
   ａｖｉｓ）培地上でＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ＡＴＣＣ　
   ６６３３を使用するバイオオートグラフィー、Ｉ）１５
   ６０にＭ＋Ｈ＾■ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペクトル
   から推定した約１５５９の分子量を有することを特徴と
   する抗生物質Ａ４２８６７またはその塩。 ２、菌株ノルカルディア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）ｓｐＡ
   ＴＣＣ　５３４９２またはその抗生物質Ａ４２８６７生
   産性突然変異体または変異型を、深部好気的条件下に、
   炭素および窒素の同化可能な源および無機塩類の存在下
   に培養し、前記抗生物質を発酵ブロスから回収および分
   離し、そして、必要に応じて、それを所望塩に転化する
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の化合物を
   調製する方法。 ３、菌株を２０℃〜４０℃の温度において培養する特許
   請求の範囲第２項記載の方法。 ４、温度は２４℃〜３５℃である特許請求の範囲第２項
   記載の方法。 ５、抗生物質の回収および分離は、ろ過した発酵ブロス
   を固定化したＤ−アラニル−アラニンの親和クロマトグ
   ラフィーにかけ、次いで分配、逆相またはイオン交換の
   クロマトグラフィーにかけることによって実施する特許
   請求の範囲第２項記載の方法。 ６、医薬として使用するための特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 ７、抗生物質の治療および成長促進剤としての医薬を調
   製するための特許請求の範囲第１項記載の化合物の使用
   。 ８、活性成分として特許請求の範囲第１項記載の化合物
   を含有する製薬学的組成物。 ９、有効量の特許請求の範囲第１項記載の化合物を処置
   が必要な患者に投与することを特徴とする伝染病を処置
   する方法。 １０、炭素および窒素の同化可能な源および無機物質を
   含有する水性栄養培地中で、抗生物質Ａ４２８６７を回
   収可能な量で生産できることを特徴とするノルカルデイ
   ア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）ｓｐＡＴＣＣ　５３４９２ま
   たはその抗生物質Ａ４２８６７生産性生産性突然変異体
   またはその変異型の生物学的に純粋な培養物。 １１、ノルカルディア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）ｓｐ　Ａ
   ＴＣＣ　５３４９２。