JPS6365679B2

JPS6365679B2 -

Info

Publication number: JPS6365679B2
Application number: JP55042051A
Authority: JP
Inventors: Hideo Koshama; Fumihide Sakai; Hiroaki Ookuma
Original assignee: BURISUTORU MAIYAAZU KENKYUSHO KK
Current assignee: BURISUTORU MAIYAAZU KENKYUSHO KK
Priority date: 1979-04-02
Filing date: 1980-04-02
Publication date: 1988-12-16
Also published as: FI67403C; IE800598L; ES8104411A1; JPH0341475B2; BE882574A; LU82318A1; JPS63139191A; DK153501C; AU5700280A; NO155780C; IL59746A0; SE441930B; FR2452930B1; IE49191B1; FR2452930A1; NL8001868A; AR223372A1; GB2050384B; HU184256B; YU81280A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、新しい抗腫瘍抗生物質コンプレツク
ス及びの生理活性成分に関する。現在のスペクトルのデータ及び利用し得る物理
化学的性質を基にすると、本発明の抗腫瘍抗生物
質コンプレツクスは、エチノマイシン、デル等、
J.Am.Chem.Soc.，97，2497（1975）、キノマイシ
ン類、シヨウジ等、J.Antibiotics，14A，335
（1961）、並びにトリオスチンＣ，The Merck
Index，９版、9399に構造が関係あるように見え
る。然し、この抗腫瘍抗生物質コンプレツクス
は、次の点でこれらの抗生物質から区別される：１本発明のコンプレツクス及びその成分は、ア
クチノロイキン群の抗生物質におけるキノキサ
リンではなく発色団としてキノリン核を有す
る。２本コンプレツクス及びその成分は、アクチノ
ロイキン抗生物質の構造中の二硫化物又はチオ
アセタール架橋の存在とは異なり硫黄を含有し
ない。３本コンプレツクス及びその成分は、強力な抗
菌性抗生物質であるアクチノロイキン類に比べ
て比較的弱い抗菌活性を示す。本発明によつてBBM−928と称される新しい
抗生物質コンプレツクスは、少なくとも６種の成
分を含有し、深部通気条件を用いる水性栄養培地
中で放線菌のBBM−928生産菌株
（ATCC31491）又はその変異株を培養することに
よつて製造される。本発明は又、培地からBBM
−928コンプレツクスの回収法及び向流分配又は
クロマトグラフの技術によつてコンプレツクスの
その生物活性成分への分離を取扱う。本発明は、希釈された形態の、適正な濃縮物と
しての、並びに精製された形態の成分BBM−
928A，Ｂ及びＣを対象とする。但し分離前の
BBM−928コンプレツクスにはこれら以外の生
理活性成分としてＤ，Ｅ及びＦも含有されている
ので、以下ではこれらについても説明する。第１図は、臭化カリウム中BBM−928Aの赤外
吸収スペクトルである。第２図は、臭化カリウム中BBM−928Bの赤外
吸収スペクトルである。第３図は、臭化カリウム中BBM−928Cの赤外
吸収スペクトルである。第４図は、臭化カリウム中BBM−928Dの赤外
吸収スペクトルである。第５図は、90MHzの波数におけるNMRスペク
トロメーターによる内部標準としてTMSを使用
する重水素化クロロホルムに溶解したBBM−
928Aのプロトン磁気共鳴スペクトルを示す。第６図は、90MHzの波数におけるNMRスペク
トロメーターによる内部標準としてTMSを使用
する重水素化クロロホルムに溶解したBBM−
928Bのプロトン磁気共鳴スペクトルを示す。第７図は、90MHzの波数におけるNMRスペク
トロメーターによる内部標準としてTMSを使用
する重水素化クロロホルムに溶解したBBM−
928Cのプロトン磁気共鳴スペクトルを示す。第８図は、90MHzの波数におけるNMRスペク
トロメーターによる内部標準としてTMSを使用
する重水素化クロロホルムに溶解したBBM−
928Dのプロトン磁気共鳴スペクトルを示す。本発明は、ここで任意にBBM−928と称され
る新しい抗腫瘍抗生物質に関する。このコンプレ
ツクスは、アクチノロイキン群の抗生物質に構造
が関連していると信じられ、まだ同定されていな
い放線菌の菌株の醗酵によつて生成する。培地中
BBM−928を生成することができる放線菌の菌
株はいずれも、ブリストル−バンユウコレクシヨ
ン中放線菌菌株G445−101号と称される好適な生
産菌と共に使用することができる。この菌は、フ
イリンピン群島で集められた土壌試料から分離さ
れ、ATCC31491として米国の微生物代表培養コ
レクシヨンに寄託されている。又この微生物は、
昭和55年３月25日に工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託された。（微工研菌寄第5460号）この
微生物の名称はアクチノマジユラ・ルルゾネンシ
ス（Actinomaduraluzonensis）である。ここにいう本発明の新規抗腫瘍抗生物質コンプ
レツクスは、BBM−928A，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ及び
Ｆと称される少なくとも６種の成分を有する。
BBM−928コンプレツクスの成分Ａ，Ｂ，Ｃ及
びＤは、結晶性形態で単離され、成分Ａ，Ｂ及び
Ｃの化学構造が同定されている。即ちこれらは式（ただしSerはセリンであり、Glyはグリシン
であり、Sarはサルコシンであり、HM−Valは
ベータヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンでありそし
てR₁及びR₂は独立に水素又はアセチルである）
で示され、ＡはR₁とR₂が共にアセチルである化
合物であり、ＢはR₁がアセチル、R₂が水素であ
る化合物であり、ＣはR₁とR₂が共に水素である
化合物である。それぞれの特性は次のとおりまと
めることができる。抗腫瘍抗生物質化合物BBM−928A： (a) クロロホルム及び塩化メチレンに可溶性、ベ
ンゼン、エタノール、メタノール及びｎ−ブタ
ノールにわずかに可溶性、そして水及びｎ−ヘ
キサンに実質的に不溶性； (b) 塩化第二鉄及びエールリヒ試薬反応陽性そし
てトレンス、サカグチ及びニンヒドリン試薬反
応陰性であり； (c) マウス腹腔内移植P388白血病、L1210白血
病、B16黒色腫、ルイス肺カルシノーマ、並び
にザルコーマ180腹水腫瘍に有効な抗腫瘍剤で
あり； (d) 融点246〜248℃を有し； (e) 比旋光度〔α〕²⁵ _D＝−27゜（C1，CHCl₃）を有
し； (f) 分子量1427を有し； (g) 炭素52.47％、水素5.48％、窒素13.81％、並
びに酸素28.24％の概算元素組成を有し； (h) シリカゲル薄層クロマトグラフイーにおいて
Rf値0.71〔溶媒系ｎ−ブタノール−メタノール
−水（63：27：10）〕、並びにRf値0.48〔溶媒系
キシレン−メチルエチルケトン−メタノール
（５：５：１）〕を示し； (i) 酸加水分解するとベータ−ヒドロキシ−Ｎ−
メチルバリン、グリシン、セリン、並びにザル
コシンを含む水溶性のニンヒドリン陽性物質を
生じ； (j) 塩基加水分解するとフラグメント（ただしSerはセリンであり、Glyはグリシ
ンであり、Sarはサルコシンであり、HM−
Valはベータ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリン
でありそして記号Ｘはアミノ酸部分を表わす）
を生じ； (k) 実質的に第１図に示すとおりの臭化カリウム
中赤外吸収スペクトルを有し；そして (l) 重水素化クロロホルムに溶解する時実質的に
第５図に示すとおりのプロトンNMRスペクト
ルを得る。抗腫瘍抗生物質BBM−928B： (a) クロロホルム及び塩化メチレンに可溶性、ベ
ンゼン、エタノール、メタノール、並びにｎ−
ブタノールにわずかに可溶性、そして水及びｎ
−ヘキサンに実質的に不溶性であり； (b) 塩化第二鉄及びエールリヒ試薬反応陽性そし
てトレンス、サカグチ、並びにニンヒドリン試
薬陰性であり； (c) マウス腹腔内移植P388白血病に有効な抗腫
瘍剤であり； (d) 融点214〜217℃を有し； (e) 比旋光度〔α〕²⁵ _D＝−74゜（C1，CHCl₃）を有
し； (f) 炭素50.14％、水素5.29％、窒素12.34％、並
びに酸素32.23％の概算元素組成を有し； (g) シリカゲル薄層クロマトグラフイーにおいて
Rf値0.53〔溶媒系ｎ−ブタノール−メタノール
−水（63：27：10）〕、並びにRf値0.26〔溶媒系
キシレン−メチルエチルケトン−メタノール
（５：５：１）〕を示し； (h) 実質的に第２図に示すとおりの赤外吸収スペ
クトルを有し； (i) 重水素化クロロホルムに溶解する時実質的に
第６図に示すとおりのプロトンNMRスペクト
ルを得；そして (j) キノリン発色団を有し、酸加水分解すると、
セリン、グリシン、サルコシン、並びにベータ
−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−バリンを含む水溶
性の成分を生ずる。抗腫瘍抗生物質BBM−928C： (a) クロロホルム及び塩化メチレンに可溶性、ベ
ンゼン、エタノール、メタノール及びｎ−ブタ
ノールにわずかに可溶性、そして水及びｎ−ヘ
キサンに実質的に不溶性であり； (b) 塩化第二鉄及びエールリヒ試薬反応陽性そし
てトレンス、サカグチ及びニンヒドリン試薬陰
性であり； (c) マウス腹腔内移植P388白血病、L1210白血
病、B16黒色腫、ルイス肺カルシノーマ、並び
にザルコーマ180腹水腫瘍に有効な抗腫瘍剤で
あり； (d) 融点244〜248℃を有し； (e) 比旋光度〔α〕²⁵ _D＝−91゜（C1，CHCl₃）を有
し； (f) 概算分子量1470を有し； (g) 炭素51.77％、水素5.29％、窒素13.55％及び
酸素29.39％の概算元素組成を有し； (h) シリカゲル薄層クロマトグラフイーにおいて
Rf値0.27〔溶媒系ｎ−ブタノール−メタノール
−水（63：27：10）〕、並びにRf値0.07〔溶媒系
キシレン−メチルエチルケトン−メタノール
（５：５：１）〕を示し； (i) 実質的に第３図に示すとおりの臭化カリウム
中赤外吸収スペクトルを有し； (j) 重水素化クロロホルムに溶解する時実質的に
第７図に示すとおりのプロトンNMRスペクト
ルを得；そして (k) キノリン発色団を有し、酸加水分解すると、
セリン、グリシン、サルコシン、並びにベータ
−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンを含む水溶性
の成分を生ずる。本発明のコンプレツクス（及び個々の成分）
は、抗腫瘍抗菌性を有している。抗菌活性に関し
ては、コンプレツクス及びその個々の成分は、動
物飼料中栄養補給剤として又哺乳類の細菌感染を
処置する際治療剤として有用である。その外、こ
れら抗生物質は、実験室ガラス器具及び外科用機
器を清浄にし減菌するのに有用であり、石けん、
洗剤及び消毒用洗液と組合せて使用することがで
きる。抗腫瘍効果については、コンプレツクス及
びその個々の成分は、種々の腹腔内移植マウス腫
瘍に対して特に有用である。放線菌種G455−101号菌株以下は、抗生物質抗腫瘍コンプレツクスBBM
−928を生産する好適な微生物の一般的記述であ
る。標準分類学的方法、例えばシヤーリング等、
Inst J.Syst.Bactariol.16，313（1966）及びルシユ
バリエ等、Biol.Actinomycetes Related Org.
11，78（1976）に従つてこの菌の培養、生理学及
び形態学学的特徴を観察した。ミクロ形態学−G455−101号菌株は、基者及び
気中菌糸を共に形成し、基質菌糸は、よく発達
し、長くかつ枝分れしている（幅0.5〜0.8μ）。こ
の基質菌糸の明瞭な分裂は見られない。ストレプ
トミセス属の通常の種と異なり、G455−101菌株
は、短かくかつ未発達の気中菌糸のみを有する
か、或いは寒天培地によつては何も形成しない。
短かいか又は長い胞子鎖が気中菌糸中に生じ、そ
れは鎖の中に２〜50の卵形胞子を有する（大部分
５〜20の胞子）。胞子鎖が、形が直線か、屈曲が
多いか又は輪になつている。胞子は、形が円形
（0.3〜0.4μ）、卵形又は円筒形（0.3×1.5〜3.0μ）
であり、滑らかな表面を有している。胞子は、空
の菌糸で分離されていることが多い。短かいコイ
ル状の胞子鎖を包む無定形の胞子のう様の包のう
が気中菌糸上にときに観察される。細胞壁組成及び全細胞糖成分−G455−101菌株
の細胞壁は、メソ−ジアミノピメリン酸を含有す
るが、グリシンを欠いている。全細胞水解物は、
グルコース、マンノース及びマズロース（３−Ｏ
−メチル−Ｄ−ガラクトース）の存在を示す。前
述した細胞壁組成及び全細胞糖成分は、G455−
101菌株が細胞壁Ｂ型の放線菌１菌株であるこ
とを示す。培養及び生理学的特性−G455−101菌株は、豊
富に生育し、紅色又は灰紅色の気中菌糸を形成
し、イースト抽出液−モルト抽出液寒天及びオー
トミル寒天のような栄養に富む寒天培地中で赤味
のある水不溶性の色素を生じる。然し、無機塩−
デンプン寒天、グリセロール−アスパラギン寒天
及びチロシン寒天中では、貧弱な生育を行ない、
白色又はベージユ色の未発達の気中菌糸を形成
し、少量の赤味のある色素を生じる。ペプトン−
イースト−鉄寒天及びチロシン寒天中で黒ずんだ
色素を生じない。硝酸塩は亜硝酸塩に還元され
る。28℃、37℃、並びに45℃において豊富に生育
するが、10℃又は50℃においては生育しない。五
炭糖及び六炭糖は、この菌株によつてよく利用さ
れる。G455−101菌株の培養及び生理学的特性
を、それぞれ表１及び２に示す。炭素源の利用を
表３に示す。表１ G455−101菌株の培養特性^* １チエペツクの寒天 G^**生育ないか又はわずかＲ暗バラ色Ａ白又は淡紅色Ｄなし２トリプトン−イースト抽出液ブイヨン
（ISP1号）中程度の生育、羊毛状、堆積、色素なし３イースト抽出液−モルト培出液寒天（ISP2
号）Ｇ豊富Ｒ深紅ないし赤褐色Ａ豊富、灰色ないし紫紅色Ｄなし４オートミール寒天（ISP3号）Ｇ豊富Ｒ強い黄赤色Ａ中程度、紅色Ｄ灰黄色５無機塩−デンプン寒天（ISP4号）Ｇ貧弱Ｒ淡黄褐ないし暗赤色Ａわずか、白ないしベージユ色Ｄなし６グリセロール−アスパラギン寒天（ISP5号）Ｇ貧弱Ｒ黄紅ないし赤褐色わずか、白色Ｄなし７ペプトン−イースト抽出液−鉄寒天（ISP6
号）Ｇ貧弱、ひだありＲ強い赤橙色ＡなしＤ淡黄橙色８チロシン寒天（ISP7号）Ｇ貧弱Ｒ暗赤色Ａわずか、白色Ｄなし９グリコース−アンモニウム塩寒天Ｇ貧弱Ｒ赤褐色Ａわずか、淡灰色Ｄなし 10 ベネツトの寒天Ｇ中程度Ｒ赤褐色Ａ限定、灰紅色Ｄなし ※ 37℃において３週間温置後観察 ※※ 略号：Ｇ−生育Ｒ−基質菌糸の裏の色Ａ−気中菌糸Ｄ−拡散性色素【表】反応
【表】おいて貧弱
な生育。10
℃及び50℃
において生
育なし。
【表】【表】 BBM−928コンプレツクスの生産は、上の生
育及び顕微鏡特定によつて説明された特定の放線
菌種G455−101号菌株に限定されないことが理解
される。これらの特性は、例示の目的のみで示さ
れ、本発明は、Ｘ線放射、紫外線放射、ナイトロ
ジエン・マスタード、フアージ露出等のような当
該技術に既知の常用の手段によつて前述した菌か
ら得られる菌株又は変異株の使用を意図してお
り、これらは、BBM−928コンプレツクス又は
その個々の成分を生産することができる。抗腫瘍抗生物質BBM−928コンプレツクスの製
造本発明の抗腫瘍抗生物質BBM−928コンプレ
ツクスの製法は、放線菌G455−101号菌株を、同
化性炭素源及び同化性窒素源を含有する水溶液中
深部通気条件下に、該溶液に実質的な抗腫瘍抗生
物質活性が付与されるまで醗酵培養することを特
徴とする。本発明の抗生物質抗腫瘍剤の生産のた
め有用である培地は、デンプン、グルコース、デ
キストラン、マルトース、ラクトース、シユクロ
ース、フラクトース、マンノース、糖蜜、グリセ
ロール等のような同化性炭素源を含む。この栄養
培地は又、タンパク、タンパク水解物、ポリペプ
チド、アミノ酸、コーン・ステイープ・リカー、
カゼイン、尿素等のような同化性窒素源並びにカ
リウム、ナトリウム、アンモニウム、カルシウ
ム、硫酸塩、炭酸塩、燐酸塩、塩化物、硝酸塩等
のような陰イオン及び陽イオンを生じる栄養無機
塩を含有するべきである。 BBM−928コンプレツクスを生産する際、菌
の満足すべき生育を得ることができる任意の温度
を用いてよい。20゜〜45℃の範囲の温度が実施可
能であり、菌の至適の生育に好適な温度は28゜〜
34℃の範囲であり、30〜32゜の範囲の温度が最も
好適である。BBM−928コンプレツクスの最高
の生産は、一般に約４〜６日で得られる。醗酵期
においては常法が用いられる。例えば、少量の製
造は、振とうフラスコ中か又は表面培養によつて
実施するのが便利である。大量の製造は、無菌タ
ンク中深部通気培養条件下に実施するのが好適で
ある。タンク培養の場合にはまず菌からの胞子を
ブイヨン培養に接種することによつて栄養ブイヨ
ン中栄養接種物を生産して若い活性のある種培養
物を得、次にこれを醗酵タンク培地に無菌的に移
す。タンク及びビン中の通気は、無菌空気を醗酵
培地又はその供給施設に強制的に送り、機械推進
体によつてタンク中更に撹拌を生じることによつ
て得ることができる。シリコン油、大豆油及びラ
ード油のような消泡剤を必要に応じて添加してよ
い。醗酵プロス又はBBM−928コンプレツクスの
抽出液中の抗生物質レベルは、試験菌としてサル
シナ・ルテア（Sarcina lutea）を使用しそして
定量培地として栄養寒天を用いるペーパー・デイ
スク寒天一拡散定量によつて決定することができ
る。至適ブロス力価を決定するために使用される
この定量系の最も望ましい感受性のためにPHを
9.0に調節する。 BBM−928コンプレツクスは、溶媒抽出操作
のような常用の手段によつて醗酵ブロスから単離
される。精製は、下の例２及び３に更に詳細に説
明するとおり製造用向流分配及びクロマトグラフ
イー操作によつて実施してBBM−928成分Ａ，
Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ及びＦを得るのが便利である。例３のBBM−928成分Ａ，Ｂ，Ｃ、並びにＤの
物理化学的性質 BBM−928の個々の成分は、たがいに似た溶
解性及び発色反応を示す。例えば、それらはクロ
ロホルム及び塩化メチレンに易溶性、ベンゼン、
エタノール、メタノール及びｎ−ブタノールにわ
ずかに可溶性そして水及びｎ−ヘキサンに不溶性
である。塩化第二鉄及びエールリヒ試薬により陽
性反応が得られ、トレンス、サカグチ及びニンヒ
ドリンに対しては陰性反応である。例３のBBM−928成分の特徴のある物理化学
的性質を表４に示す。【表】成分Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤの赤外（IR）及び核磁
気共鳴スペクトルは、それぞれ添付図面の第１〜
４図及び第５〜８図に示される。BBM−928A
（第５図）、BBM−928B（第６図）、並びにBBM
−928C（第７図）のNMRスペクトルは、たがい
にきわめて似ており、唯一の差違は、成分Ａ
（δ：2.03ppm、２モル当量）及びＢ（δ：
2.05ppm、１モル当量）中アセチルの存在、然し
Ｃ中不存在である。ピリジン中無水酢酸によつて
アセチル化すると、BBM−928成分Ａ，Ｂ及び
Ｃに対しそれぞれ２，３及び４モル当量のアセチ
ル基が導入された。かくして得られたるアセチル
化生成物は、TLC，UV，IR及びNMRスペクト
ルにおいて同一の性質を示し、BBM−928Aが
BBM−928Bのモノアセチル誘導体そしてBBM
−928Cのジアセチル誘導体であることを示した。 BBM−928Aの酸加水分解は、５種のｎ−ブタ
ノール可溶性UV吸収性フラグメント（，，
，及び）及び５種の水溶性ニンヒドリン陽
性物質（NPS−１，２，３，４及び５）を生じ
た。後者の物質は、ダウエツクス50w×４クロマ
トグラフイーによつて分離され、次のアミノ酸と
して同定された：【表】上述した５種のUV吸収性フラグメントは、次
の構造を有することが示されている：フラグメント C₁₄H₁₄N₂O₆ MS：ｍ／e306（M⁺） λ^MeOH _nax：227，233，261，345nm フラグメント C₂₀H₂₅N₃O₈ MS：ｍ／e377（M⁺−58） λ^MeOH _nax：229，234，261，345nm フラグメント λ^MeOH _nax：230，235，262，345nm フラグメント C₁₀H₇NO₄ MS：ｍ／e205（M⁺） λ^MeOH _nax：228，260，354nm フラグメント C₂₃H₃₀N₄O₉ λ^MeOH _nax：230，235，262，345nm 酸加水分解（6H HCl）の際、フラグメント
，，及びは、次の分解生成物を生じた：【表】 0.1N NaOHを用い25℃において３時間BBM
−928A又はBBM−928Cを塩基加水分解すると
フラグメント（略号Ser，HM−Val、並びに
Sarは上記のとおりであり、Glyはグリシンを表
わし、記号“Ｘ”は未決定の部分を表わす）を生
じる。フラグメント 0.1N HClを用い110℃において１時間フラグ
メントを処理するとフラグメントプラスHM
−Valが得られる。フラグメント 0.1N NaOHを用い37℃において40時間フラグ
メントを処理するとフラグメントプラスフラ
グメントが得られる。Ｘ→Gly→Sar→HM→Val フラグメント 0.1N NaOHを用い37℃において40時間フラグ
メントを処理するとフラグメントプラスフラ
グメントが得られる。Ｘ→Gly→Sar フラグメント未決定の部分（Ｘ）は、フラグメント及び他
の（Ｘ）を含有するフラグメントのミクロ分析及
び下い要約するスペクトル分析を基にして
C₅H₆N₂O₂（ペプチド形態）の分子式を有する。【表】【表】フラグメント及びに対するスペクトルデー
タ及び例４のBBM−928Apの360MHzプロトン
NMRによれば、未決定のアミノ酸部分（Ｘ）
は、次のテトラヒドロピリタジン構造によつて最
もよく表わされるように見える：前述した分解実験、スペクトルデータ、ミクロ
分析及び分子量決定の結果を基にして、次の構造
がBBM−928A，Ｂ及びＣを最もよく表わすと信
じられる：【表】【表】抗微生物活性 BBM−928成分の抗微生物活性を、ステイー
ヤのマルチ接種装置を使用しPH７において栄養寒
天中順次寒天稀釈法によつて種々の細菌及びカビ
に対して決定した。接種材料のサイズは、約10⁴
細胞／mlを含有する試験菌の分別材料0.0025mlを
すべての細菌及びカビ−抗酸菌を除、これに対し
ては10⁶細胞／mlの懸濁液を使用した−に対して
用いるように標準化した。37℃において一夜温置
して後、最小阻止濃度（MIC）を表５に示す。
表中見られるように、BBM−928成分は、グラ
ム陽性及び抗酸菌に対し中程度ないし弱い活性が
あるが、グラム陰性菌及びカビに対して実際上活
性がない。溶原菌（ILB）中プロフアージ誘発の活性を
BBM−928成分について決定した。100mcg／ml
の濃度までBBM−928成分Ａ，Ｂ及びＣについ
て有意なILB活性が示されなかつた。【表】抗腫瘍活性抗腫瘍活性についてマイトマイシンＣとの
BBM−928成分Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤの比較試験を、
腹腔内移植腫瘍：P388白血病、L1210白血病、
B16黒色腫、ルイス肺（LL）カルシノーマ、並
びにザルコーマ180腹水（S180）を用いて実施し
た。10％ジメチルスルホキシドを含有する0.9％
食塩水中BBM−928成分及び0.9％食塩水中マイ
トマイシンＣを、１回の１日処置から多回連日処
置までの範囲の投薬スケジユールに従つて１日１
回投与した。投薬量を変えることにより、処置動
物に対して対照動物より少なくとも1.25倍の中央
生存時間値を与える最小有効用量（MED）を決
定した。この活性の水準は、有意な抗腫瘍活性の
尺度であると考えられている。結果は、計算活性
比と共に表６に示され、BBM−928Aがマイトマ
イシンＣより、腫瘍の株及び投薬スケジユールに
よつて10〜300の因子だけ著しく活性が大きいこ
とを例示する。ヴアン・デル・ヴエルデン、
Arch.Expt.Path.Pharmak.，195，389（1940）の
方法によつて決定したBBM−928成分Ａ，Ｂ，
Ｃ及びＤ及びマイトマイシンＣの腹腔内LD₅₀値
も表６に示す。【表】例１ BBM−928コンプレツクスの生産寒天醗酵−放線菌種G455−101の１菌株のよく
生育した寒天斜面を使用して２％可溶性デンプ
ン、１％グルコース、0.5％フアーマメデイア、
0.5％イースト抽出液、0.5％NZ−アミン（Ａ型）
及び0.1％CaCO₃を含有する栄養培地に接種し、
減菌の前にPHを7.2に調節する。この種培養をロ
ータリー振とう器（250rpm）上32℃に72時間温
置し、生育物５mlを、２％可溶性デンプン、１％
フアーマメデイア、0.003％ZnSO₄・7H₂O及び0.4
％CaCO₃よりなる醗酵培地100mlを含有する500
mlの三角フラスコに移す。BBM−928コンプレ
ツクスの生産は、一般に５日の振とう培養の後最
高に達する。タンク醗酵−種培養を三角フラスコ中４日間振
とうし、200リツトルの種タンク醗酵器中2.0％オ
ートミール（クエーカー・プロダクツ、オースト
ラリア）、0.5％グルコース、0.2％乾操イースト、
0.0008％MnCl₂・4H₂O，0.0007％CuSO₄・7H²O，
0.0002％ZnSO₄・7H₂O及び0.0001％FeSO₄・
7H₂Oよりなる発芽培地100リツトルに接種し、
これを200rpm，30℃において54時間撹拌する。
次にこの種培養の15リツトル分を、400リツトル
のタンク醗酵器中2.0％可溶性デンプン、1.0％フ
アーマメデイア、0.003％ZnSO₄・7H₂O及び0.4％
CaCO₃を含有する醗酵培地170リツトルに接種
し、これを30℃、200rpm、通気速度150リツト
ル／分で操作する。醗酵の進行と共にブロスのPH
は次第に増大し、100〜120時間後8.4〜8.5に達
し、この時30mcg／mlのピーク抗生物質力価が得
られる。例２溶媒抽出によるBBN−928コンプレツクスの単
離例１から得られたブロス（170リツトル、PH
8.5）を清澄剤と共に過する。活性は、菌体ケ
ーキ及び液に共に見出される。菌体ケーキをア
セトンとメタノールとの溶媒混合物（１：１，30
リツトル×２）で２回抽出する。抽出液を合し、
減圧下蒸発させて水性濃縮物を得、これをｎ−ブ
タノールで抽出する。ブロス液をｎ−ブタノー
ルで２回抽出する（40リツトル×２）。ｎ−ブタ
ノール抽出液を合し、減圧下に濃縮し、残留物を
凍結乾操して粗製の固体（21.4ｇ）を得る。薄層
クロマトグラフイー定量によれば、このものは３
種の主成分、Ａ，Ｂ及びＣ、並びに３種の副成
分、Ｄ，Ｅ及びＦよりなるコンプレツクスであ
り、下の表７に述べるとおりのRf値を有する。【表】例３ BBM−928コンプレツクスの精製例２の粗コンプレツクス四塩化炭素−クロロホ
ルム−メタノール−水（５：２：５：１）の溶媒
系を使用する製造用向流分配装置（ミタムラ、
100ml／管）によつて精製する。50回の転溶の後、
管５号ないし20号を合し、濃縮して成分Ａ，Ｂ，
Ｄ，Ｅ及びＦを含有する淡黄色粉末（4.4ｇ）を
得る。この混合物を少量のクロロホルムに溶解
し、予め酢酸エチルで処理したシリカゲルＣ−
200（500ml）のカラム上に入れる。増加量のメタ
ノール（２〜５％、Ｖ／Ｖ）を有する酢酸エチル
でカラムを展開し、345nmにおける光学密度によ
つてフラクシヨンをモニターする。副成分Ｄが最
初に、次いで成分Ａが酢酸エチルによつて溶離さ
れる。成分Ｅ，Ｂ及びＦは、次に３％のメタノー
ル濃度においてその順に溶離される。適当な成分
を含有する各フラクシヨンを減圧下蒸発させ、残
留物をクロロホルム−メタノールから結晶化させ
る。同様に、成分Ｃの組製物が上述した向流分配
の管21号ないし35号から得られる。成分Ｃの精製
を、シリカゲルクロマトグラフイー及びクロロホ
ルム−メタノールからの結晶化によつて実施す
る。成分Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ及びＦについて収量
は、それぞれ、988mg、420mg、848mg、130mg、
119mg、並びに114mgである。例４例３の成分BBM−928Aのより以上の精製例３のBBM−928A成分の薄層クロマトグラフ
イー定量（トルエン中10％メタノールよりなる系
を用いる）は、試料がBBM−928A成分のすぐ上
に行く外の材料を含有するという点で完全には均
質でないことを示した。精製を行なうために次の
工程を実施した。 (1) 試料を、クロロホルムないし６％メタノール
−クロロホルムの線状勾配を使用してシリカゲ
ル上クロマトグラフ処理する。2.4及び3.3％メ
タノール−クロロホルムの間に溶離するフラク
シヨン（BBM−928A成分プラス若干の汚染物
を含有する）を次の工程のために合わせる。 (2) 最初の２個中２％メタノール−トルエンそし
て第３のものの中に６％メタノール−トルエン
を含有する３個の容器を使用して凹形勾配を発
生させる。この勾配上クロマトグラフ（シリカ
ゲルカラム）処理した工程１からの複合物は、
１副成分、すぐに続いて精製されたBBM−
928A成分（ここでBBM−928Apという）を生
じる。 BBM−928Apの分子量は、場脱着質量分析
（Field Desorption Mass Spectromtry）によつ
て決定して、1427であり、実験式C₆₄H₇₈N₁₄O₂₄
（分子量1427.417）に相当する。元素分析（100℃で18時間乾操した成分） C₆₄H₇₈N₁₄O₂₄としてＣＨＮ O^a 計算値：53.85 5.51 13.74 26.90 実験値^b：52.47 5.48 13.81 28.24^a ａ差による。ｂ３回の測定の平均

【図面の簡単な説明】

添付図面の第１図は臭化カリウム中BBM−
928Aの赤外吸収スペクトルである。第２図は臭
化カリウム中BBM−928Bの赤外吸収スペクトル
である。第３図は臭化カリウム中BBM−928Cの
赤外吸収スペクトルである。第４図は臭化カリウ
ム中BBM−928Dの赤外吸収スペクトルである。
第１図〜第４図において、縦軸は透過パーセント
であり、横軸上部は波長（ミクロン）、縦軸下部
は波数（cm^-1）である。第５図は、90MHzの波数
におけるNMRスペクトロメーターによる内部標
準としてTMSを使用する重水素化クロロホルム
に溶解したBBM−928Aのプロトン磁気共鳴スペ
クトルを示す。第６図は、同じ条件下のBBM−
928Bのプロトン磁気共鳴スペクトルを示す。第
７図は、同じ条件下のBBM−928Cのプロトン磁
気共鳴スペクトルを示す。第８図は、同じ条件下
のBBM−928Dのプロトン磁気共鳴スペクトルを
示す。第５図〜第８図において、横軸はPPMで
ある。

Claims

【特許請求の範囲】１式（ただしSerはセリンであり、Glyはグリシン
であり、Sarはサルコシンであり、HM−Valは
ベータ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンでありそ
してR₁及びR₂は独立に水素又はアセチルである）
で示される化合物。２ R₁及びR₂がアセチルである特許請求の範囲
第１項記載の化合物。３ R₁がアセチルでありそしてR₂が水素である
特許請求の範囲第１項記載の化合物。４ R₁及びR₂が水素である特許請求の範囲第１
項記載の化合物。５式（ただしSerはセリンであり、Glyはグリシン
であり、Sarはサルコシンであり、HM−Valは
ベータ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンでありそ
してR₁及びR₂は独立に水素又はアセチルである）
で示される化合物を有効成分とする抗腫瘍剤。