NL192989C - Antibioticum, werkwijze voor de bereiding en farmaceutisch preparaat dat dit antibioticum bevat. - Google Patents
Antibioticum, werkwijze voor de bereiding en farmaceutisch preparaat dat dit antibioticum bevat. Download PDFInfo
- Publication number
- NL192989C NL192989C NL8001982A NL8001982A NL192989C NL 192989 C NL192989 C NL 192989C NL 8001982 A NL8001982 A NL 8001982A NL 8001982 A NL8001982 A NL 8001982A NL 192989 C NL192989 C NL 192989C
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- antibiotic
- water
- butanol
- methanol
- acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
- C10G—CRACKING HYDROCARBON OILS; PRODUCTION OF LIQUID HYDROCARBON MIXTURES, e.g. BY DESTRUCTIVE HYDROGENATION, OLIGOMERISATION, POLYMERISATION; RECOVERY OF HYDROCARBON OILS FROM OIL-SHALE, OIL-SAND, OR GASES; REFINING MIXTURES MAINLY CONSISTING OF HYDROCARBONS; REFORMING OF NAPHTHA; MINERAL WAXES
- C10G49/00—Treatment of hydrocarbon oils, in the presence of hydrogen or hydrogen-generating compounds, not provided for in a single one of groups C10G45/02, C10G45/32, C10G45/44, C10G45/58 or C10G47/00
- C10G49/02—Treatment of hydrocarbon oils, in the presence of hydrogen or hydrogen-generating compounds, not provided for in a single one of groups C10G45/02, C10G45/32, C10G45/44, C10G45/58 or C10G47/00 characterised by the catalyst used
- C10G49/08—Treatment of hydrocarbon oils, in the presence of hydrogen or hydrogen-generating compounds, not provided for in a single one of groups C10G45/02, C10G45/32, C10G45/44, C10G45/58 or C10G47/00 characterised by the catalyst used containing crystalline alumino-silicates, e.g. molecular sieves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J29/00—Catalysts comprising molecular sieves
- B01J29/04—Catalysts comprising molecular sieves having base-exchange properties, e.g. crystalline zeolites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01B—NON-METALLIC ELEMENTS; COMPOUNDS THEREOF; METALLOIDS OR COMPOUNDS THEREOF NOT COVERED BY SUBCLASS C01C
- C01B33/00—Silicon; Compounds thereof
- C01B33/20—Silicates
- C01B33/26—Aluminium-containing silicates, i.e. silico-aluminates
- C01B33/28—Base exchange silicates, e.g. zeolites
- C01B33/2807—Zeolitic silicoaluminates with a tridimensional crystalline structure possessing molecular sieve properties; Isomorphous compounds wherein a part of the aluminium ore of the silicon present may be replaced by other elements such as gallium, germanium, phosphorus; Preparation of zeolitic molecular sieves from molecular sieves of another type or from preformed reacting mixtures
- C01B33/2884—Zeolitic silicoaluminates with a tridimensional crystalline structure possessing molecular sieve properties; Isomorphous compounds wherein a part of the aluminium ore of the silicon present may be replaced by other elements such as gallium, germanium, phosphorus; Preparation of zeolitic molecular sieves from molecular sieves of another type or from preformed reacting mixtures the aluminium or the silicon in the network being partly replaced
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C1/00—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon
- C07C1/02—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon
- C07C1/04—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon from carbon monoxide with hydrogen
- C07C1/0425—Catalysts; their physical properties
- C07C1/043—Catalysts; their physical properties characterised by the composition
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C1/00—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon
- C07C1/02—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon
- C07C1/04—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon from carbon monoxide with hydrogen
- C07C1/0425—Catalysts; their physical properties
- C07C1/043—Catalysts; their physical properties characterised by the composition
- C07C1/0435—Catalysts; their physical properties characterised by the composition containing a metal of group 8 or a compound thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C1/00—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon
- C07C1/02—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon
- C07C1/04—Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon from carbon monoxide with hydrogen
- C07C1/0425—Catalysts; their physical properties
- C07C1/043—Catalysts; their physical properties characterised by the composition
- C07C1/0435—Catalysts; their physical properties characterised by the composition containing a metal of group 8 or a compound thereof
- C07C1/044—Catalysts; their physical properties characterised by the composition containing a metal of group 8 or a compound thereof containing iron
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
- C10G—CRACKING HYDROCARBON OILS; PRODUCTION OF LIQUID HYDROCARBON MIXTURES, e.g. BY DESTRUCTIVE HYDROGENATION, OLIGOMERISATION, POLYMERISATION; RECOVERY OF HYDROCARBON OILS FROM OIL-SHALE, OIL-SAND, OR GASES; REFINING MIXTURES MAINLY CONSISTING OF HYDROCARBONS; REFORMING OF NAPHTHA; MINERAL WAXES
- C10G35/00—Reforming naphtha
- C10G35/04—Catalytic reforming
- C10G35/06—Catalytic reforming characterised by the catalyst used
- C10G35/065—Catalytic reforming characterised by the catalyst used containing crystalline zeolitic molecular sieves, other than aluminosilicates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2529/00—Catalysts comprising molecular sieves
- C07C2529/04—Catalysts comprising molecular sieves having base-exchange properties, e.g. crystalline zeolites, pillared clays
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/045—Actinoplanes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/827—Actinoplanes
Description
1 192989
Antibioticum, werkwijze voor de bereiding en farmaceutisch preparaat dat dit antibioticum bevat
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een basisch, tegen bacteriën werkzaam antibioticum dat kan worden gewonnen uit een cultuur van een micro-organisme dat behoort tot het genus Actinoplanes, waarbij 5 dit antibioticum aanwezig is in de vorm van de vrije base of in de vorm van ee nietgiftig farmaceutisch aanvaardbare zuuradditiezout. Een door een micro-organisme uit het genus Actinoplanes geproduceerd antibioticum is bekend uit het Amerikaanse octrooischrift 3.780.174. Deze literatuurplaats heeft betrekking op het basische antibioticum. A477 dat wordt gewonnen uit een kweek van Actinoplanes sp. NRRL 3884. Antibioticum A477 bevat chloor in het molecule. Dit antibioticum en de zouten met organisch en anorgani-10 sche zuren ervan remmen de groei van micro-organismen en zijn met name bruikbaar voor het bestrijden van cariogene organismen, en als groeibevorderaar van kuikens.
Gevonden is nu een nieuw antibioticum dat kan worden verkregen door het kweken van een nieuwe stam, die taxonomisch als behorende tot een nieuwe soort van het geslacht Actinoplanes kan worden aangemerkt. Dit antibioticum heeft de aanduiding ’’A/16686’’ gekregen, waarmee zowel de vrije base als de 15 fysiologisch aanvaardbare zuuradditiezouten worden bedoeld. Antibioticum A/16686 is een glycopeptiden-houdend antibioticum met een basisch karakter dat chloor in het molecule bevat.
De onderhavige uitvinding voorziet aldus in een antibioticum als in de aanhef omschreven, met het kenmerk, dat dit antibioticum in de vorm van het hydrochloride A) een witte, kristallijne stof is, die bij 224-226°C smelt; 20 B) zeer goed in water en dimethylformamide oplost; goed in methanol, ethanol, propanol en butanol oplost; en onoplosbaar is in diëthylether, petroleumether en benzeen; C) volgens de elementanalyse bij benadering de volgende samenstelling heeft: 51,73% C, 6,34% H, 9,96% N, 5,84% C1 (in totaal), 4,74% C1-ionen en 1% verbrandingsrest; D) een infrarood absorptiespectrum in nujol vertoont, waarin de volgende absorptiemaxima waarneembaar 25 zijn: (zie figuur 1 van de tekening) : 3290-3070, 2930 en 2860 (nujol), 1765, 1630, 1510, 1455, 1375 (nujol), 1230, 1175, 1130, 1065, 1030, 1015, 980, 840 en 820 cm'1; E) een ultraviolet absorptiespectrum met de volgende absorptiemaxima (zie figuur 2 van de bijgevoegde tekening) heeft: a) in methanol: 30 232 nm (E]» = 178) 265 nm (E ]%= 107) b) in methanol met 0,1 N HC1: 231 nm (E = 167) 270 nm (E 96) 35 c) in methanol met 0,1 N NaOH: 250 nm (E ]* = 232) 295 nm (schouder) d) in methanol met een buffer, pH = 7,38: 231 nm (E ]%= 167) 40 270 nm (E = 96) F) een specifieke optische draaiing, [afé , van + 49,7° (C = 0,43% in DMF) vertoont; G) de volgende, kenmerkende reacties vertoont: ninhydrien (3% oplossing in ethanol) negatief ninhydrien (3% oplossing in ethanol + natriumacetaat) positief 45 1% FeC13 + 1% K3Fe(CN)6 positief (groen)
Fehling negatief
Molisch positief
Biureet positief 50 Anthron positief
Millon negatief
Geconc. H2S04 negatief KMn04 positief H) bij papierchromatografie op Whatman papier nr 1 met S, aureus ATCC 6538 als proeforganisme de 55 volgende Rf-waarden vertoont: 192989 2
Elutiesysteem R,-waarde 1) n-butanol, verzadigd met buffer van Sorensen, pH = 6,0 0,00 2) n-butanol, verzadigd met water, dat 2% p-tolueensulfonzuur bevat 0,00 3) n-butanol, verzadigd met water, dat 2% ammoniumhydroxide bevat 0,00 5 4) buffer van Sorensen, pH 6,0, verzadigd met n-butanol 0,05 5) n-butanol:methanol:water 4:1:2 0,43 6) ethylacetaat, verzadigd met water 0,00 7) n-butanol:azijnzuur:water 2:1:1 0,52 811)¾¾¾ c^ifi'enïïfiliieronSer vermelde systemen voor dunne-laagchrofnatografie de volgende Rf-waarden vertoont:
Elutiesysteem (volumeverhouding) R,-waarde 1) n-propanol:n-butanol: N ammoniumhydroxide 2:3:4 (bovenste fase) 0,15 2) n-butanoi:azijnzuur:water 4:2:5 0,61 3) n-butanol:ethanol:0,1 N zoutzuur 0,61 4) chloroform:ethanol:10% azijnzuur 4:7:2 0,00 5) n-butanol:azijnzuur:water 4:1:5 0,17 6) methanol: 10% ammoniumacetaat in water: 10% ammoniumhydr- 0,52 oxide 10:9:1 20 7) n-butanol:pyridine:water:azijnzuur 6:4:3:1 0,45 8) methanol:10% ammoniumacetaat in water: 10% ammoniumhydr- 0,11 oxide in water 10:9:1 (zie 6) 9) 0,25 M NaH2P04 in water:acetonitril 1:1 0,68 25 10) methanol:10% ammoniumacetaat in water 1:1 0,65 11) n-butanol:azijnzuur:water 4:2:5 (zie 2) 0,77 1 tot 7 op silicagel 60 F254-platen; 8 en 9 op gesilaniseerd Silicagel 60 F2S4 en 10 en 11 op cellulose F platen.
30 J) na 6 uur hydrolyse bij 110°C in 6 N HC1 een aminozuur-analyse vertoont, die duidt op de aanwezigheid van ten minste de volgende, aminozuren: ornithine, asparaginezuur, threonine, glycine, alanine, leucine, fenylalanine, p-hydroxifenylglycine en een fenylglycine-derivaat met hydroxil- en chloorgroepen, welk antibioticum A/16686 kan worden gewonnen uit een cultuur van Actinoplanes sp. ATCC 33076.
De uitvinding voorziet verder in een werkwijze voor het bereiden van antibioticum A/16686 door het 35 submers onder beluchting kweken van de nieuwe Actinoplanes stam in een voedingsvloeistof die assimileerbare koolstof en stikstofbronnen en anorganische voedingszouten bevat, en het isoleren van het antibioticum.
De uitvinding voorziet verder in een farmaceutisch preparaat dat het antibioticum A/16686 of een fysiologisch aanvaardbaar zuuradditiezout daarvan bevat.
40 Antibioticum A/16686 remt jn vitro de groei van bepaalde pathogene bacteriën, meer in het bijzonder van Gram-positieve bacteriën. Bovendien wordt door parenterale toediening van antibioticum A/16686 in muizen een hoge graad van bescherming tegen experimenteel toegediende infecties verkregen. Gebleken is dat het antibioticum A/16686 bestaat uit een mengsel van ten minste drie nauw verwante verbindingen.
Gewezen wordt nog op het Amerikaanse octrooischrift 4.115.552 dat betrekking heeft op het antibioticum 45 A-4696. A-4696 wordt geproduceerd door de stam Actinoplanes sp. ATCC 23342 en bestaat evenals het antibioticum A/16686 uit een mengsel van enige nauw met elkaar verwante basische verbindingen, maar onderscheidt, zich evenals bovengenoemd antibioticum A477, door verschillen in fysischchemische eigenschappen (elementanalyse, smeltpunt, UV- en IR-spectrum, van het onderhavige antibioticum A/16686. Het antibioticum A-4696 is evenals het antibioticum A/16686 actief tegen Grampositieve bacteriën. Het is 50 ook werkzaam tegen kunstmatige infecties van muizen met Staphyzococcus aureus, Streptococcus pyogenes en Streptococcus pneumoniae. Als toepassing voor A-4696 wordt echter vermeld de bestrijding van tandbederf en het bevorderen van de groei van kuikens en varkens.
De nieuwe, voor het verkrijgen van antibioticum A/16686 gebruikte stam van het genus Actinoplanes werd geïsoleerd uit een in Vaghalbod (India) genomen grondmonster. Een cultuur van deze stam werd op 55 30 januari 1979 gedeponeerd bij de ATTC (American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, Verenigde Staten van Amerika), die aan het depot het inschrijvingsnummer ATCC 33076 heeft toegekend en die de stam ter beschikking van het publiek houdt.
3 192989 ATCC 33076 en de stammen van de genoemde literatuurplaatsen verschillen onderling in morfologie, kweekkenmerken en fysiologische eigenschappen.
(Zie verder oorspronkelijke beschrijving vanaf bladzijde 1, regel 29).
Er volgt nu een beschrijving van de kenmerken van 5
Actinoplanes sp. ATCC 33076.
Morfologie
De stam groeit goed op verschillende voedingsbodems en heeft oranje mycelium. Dit scheidt geen 10 kleurstof af en vormt geen luchtmycelium. Bij microscopisch onderzoek blijkt het vegetatieve mycelium uit vertakte hyfen met een diameter van ongeveer 1 /urn te bestaan. Alleen op aardappel-agar worden enkele sporangiën gevormd. Deze zijn bolvormig met een erg onregelmatige oppervlakte en een doorsnede van 5,0 tot 9,0 ,um. Nadat de wand van het sporangium is gebarsten, kan het vrijkomen van sporen worden waargenomen. De bijna kogelvormige sporen zijn beweeglijk (diameter 1,0-1,5 /Urn). Bij analyse van de 15 celwandkomponenten kan de aanwezigheid van meso-diaminopimelinezuur en een suikerpatroon van het type D (Lechevalier et al., Chemical composition as a criterium in the classification of Actinomycetes, Adv. Applied Microbiology, 14, 1971, Academie Press N.Y.) worden waargenomen.
Kenmerken bij het kweken
In Tabel A zijn de kenmerken van Actinoplanes sp. ATCC 33076 vermeld, als deze op verschillende 20 standaardvoedingsbodems wordt gekweekt die worden aanbevolen door Shilling en Gottlieb (Intern. J. System. Bact. 1J3, 313-340, 1966) en door Waksman (The Actinomycetes, Vol. II The Williams and Wilkins Co. 1961). De kenmerken van de culturen werden 6 tot 14 dagen na het begin van de bebroeding bij 30°C bepaald.
25 Kenmerken bij het kweken
De bij enkele voedingsbodems vermelde nummers zijn de door Shilling en Gottlieb in "Methods for characterization of Streptomyces species, Intern J. System. Bact., 1j3, 313-340,1966” aan deze voedingsbodems gegeven nummers.
30 TABEL A
Voedingsbodem Kenmerken cultuur
Nr. 2 (gistextract-moutagar) Overvloedige groei, gerimpeld oppervlak, lichtbruin 12H 12 35 Nr. 3 (havermoutagar) geringe groei, dun, lichtoranje 9 B 6
Nr. 4 (anorganische zouten- matige groei, korstige oppervlakte, oranje 11 L 12 zetmeel-agar)
Nr. 5 (glycerol-asparagine-agar) geringe groei, glasachtig Nr. 6 (pepton-gistextract-ijzer-agar) geringe groei, glasachtig tot lichtbruin 40 Nr. 7 (tyrosine-agar) geringe groei, gladde oppervlakte, bruin 5 D 11
Havermoutagar (volgens overvloedige groei, gerimpelde oppervlakte, oranje tot bruin 12 C 10
Waksman)
Agar volgens Hickey en overvoedige groei, korstige oppervlakte, oranje 11 G 8
Tresner 45 Glucose-agar volgens Czapek matige groei, korstige oppervlakte, oranje 11 G 8 Glucose-asparagine-agar geringe groei, korstig oppervlak, lichtoranje 11 F 6
Voedingszoutenagar matige groei, glad oppervlak, oranje 11 G 8
Aardappelagar overvloedige groei, gerimpeld oppervlak, barnsteenkleurig 12 E 10
Agar van Bennett overvloedige groei, gerimpeld oppervlak, oranje 11 C 8 50 Calciummalaatagar matige groei, glad oppervlak, lichtoranje, 10 C 6
Ondermelkagar overvloedige groei, gerimpeld oppervlak, oranje 9 C 2
Agar volgens Czapek matige groei, korstig oppervlak, oranje 10 D 7
Ei-agar matige groei, glad oppervlak glasachtig tot lichtoranje
Pepton-glucose-agar overvloedige groei, gerimpeld oppervlak, oranje 11 G 11 55 Agar zeer geringe groei, glad oppervlak, oranje
Aardappel geringe groei, korstig, lichtbruin 192989 4 TABEL A (vervolg)
Voedingsbodem Kenmerken cultuur 5 Gelatine zeer geringe groei, dun, glasachtig
Cellulose zeer geringe groei, dun glasachtig
Koolstofverbruik 10 In tabel B worden de resultaten weergegeven van een onderzoek naar de assimilatie van verschillende koolstof bronnen volgens de methode van Pridham en Gottlieb (J. Bact. 56, 107, 1948).
TABEL B
15 Koolstofbron Assimilatie
Inositol
Fructose +
Rhamnose + 20 Mannitol
Xylose +
Raffinose
Arabinose +
Cellulose 25 Saccharose +
Glucose +
Mannose +
Lactose
Salicien + 30 + positief - geen groei
Fysiologische eigenschappen 35 In Tabel C zijn de.fysiologische eigenschappen van de stam vermeld.
TABEL C
Proef Resultaat 40 -
Zetmeelhydrolyse positief H2S-ontwikkeling positief
Tyrosinase-reactie negatief
Caseïnehydrolyse positief 45 oplosbaar maken van calciummalaat negatief vervloeiing van gelatine positief coagulatie positief lakmoesmelk ^ peptonisatie negatief 50 ontleding cellulose negatief
Om het antibioticum A/16686 te vormen wordt stam Actinoplanes sp. ATCC 33076 onder aërobe voorwaar den in een waterig voedingsmilieu gekweekt, dat een assimileerbare koolstofbron, een assimileerbare 55 stikstofbron en voedingszouten bevat. Allerlei voedingsmedia die in de techniek gewoonlijk voor fermentatie worden gebruikt zijn bruikbaar, maar men geeft wel de voorkeur aan bepaalde media. Als koolstofbron gebruikt men bij voorkeur glucose, fructose, mannose en saccharose. Als stikstofbron gebruikt men bij 5 192989 voorkeur soyameel, pepton, vleesextract, gistextract, trypton en aminozuren. Onder de anorganische zouten, die in de voedingsmedia opgenomen kunnen worden, bevinden zich de gebruikelijke, oplosbare zouten, die natrium-, kalium-, ijzer-, zink-, kobalt-, magnesium-, calcium-, ammonium-, chloride-, carbonaat-, sulfaat- en nitraat- ionen kunnen afsplitsen.
5 De antibioticum-vormende stam wordt gewoonlijk voorgekweekt in geschudde kolven. De daarmee verkregen cultuur wordt gebruikt voor het enten van fermentatievaten, waarin behoorlijke hoeveelheden antibioticum A/16686 gevormd kunnen worden. Men kan voor het kweken van de entcultuur dezelfde voedingsbodem gebruiken als voor de grotere fermentaties, maar noodzakelijk is dit niet.
De A/16686-vormende stam kan bij temperaturen in het traject van 20° tot 37°C gekweekt worden, maar 10 men past bij voorkeur temperaturen van 28-30°C toe.
Men kan de vorming van het antibioticum tijdens de fermentatie volgens door monsters van de cultuur of van extracten van het mycelium op hun antibiotische activiteit te toetsen. Hierbij kan men gebruik maken van organismen, waarvan bekend is, dat ze gevoelig zijn voor antibioticum A/16686. Een organisme, dat zich bijzonder goed leent voor dit onderzoek is Sarcina lutea. De biologische toets kan gemakkelijk met 15 behulp van de agar-diffusieproef op agarplaten worden uitgevoerd. De maximale vorming van antibiotisch actief materiaal treedt gewoonlijk op tussen de derde en de vijfde dag. Het antibioticum, dat tijdens de fermentatie van stam Actinoplanes sp. ATCC 33076 wordt gevormd, bevindt zich zowel in de kweekvloeistof als in de myceliummassa. Men kan daarom antibioticum A/16686 afscheiden door afzonderlijke extractie van de vloeistof en het mycelium.
20 Men kan het mycelium het beste extraheren met methanol, maar ook andere lagere alkanoien en chloroform zijn bruikbaar. Antibioticum A/16686 wordt in ruwe vorm uit het extract afgescheiden. De kweekvloeistof wordt ook geëxtraheerd, bij voorkeur met n-butanol, waarna een tweede hoeveelheid ruw antibioticum verkregen wordt door dit uit de butanoloplossing neer te slaan. Het ruwe antibioticum A/16686 wordt vervolgens gezuiverd door het uit de extractievloeistoffen afgescheiden product met een mengsel van 25 chloroform: ethanol: water (4:7:2) te behandelen, het daarbij gevormde olieachtige product af te scheiden en dit in water te gieten. Door deze behandeling wordt het product vast en kan afgefiltreerd worden en verder gezuiverd door chromatografie over een kolom silicagel met een mengsel van acetonitril: 0,01 N HC1 (1:1) als elutiemiddel. Op deze wijze wordt antibioticum A/16686 afgescheiden in de vorm van het hydrochloride, dat van zouten ontdaan kan worden door het over een kolom verknoopt dextrangel te chromatograferen.
30 Elke fase van de beschreven zuivering wordt gevolgd via dunne-laagchromatografie met behulp van een geschikt oplosmiddelsysteem, bijvoorbeeld een basisch systeem, zoals n-propanol: n-butanol: N-ammoniumhydroxide (2:3:4) (bovenste fase); of methanol: 10% ammoniumacetaat in water: 10% ammoniumhydroxide (10:9:1), waarin eventueel aanwezig zuur-additiezout van antibioticum A/16686 in de vrije base wordt omgezet. Alle genoemde fasen zijn daarom gericht op het isoleren van zuiver antibioticum 35 A/16686, dat gekenmerkt wordt door een bepaalde Rf-waarde in elk der gebruikte oplosmiddelsystemen.
Men kan ook met goed gevolg andere, in de techniek bekende zuiveringsmethoden gebruiken. Deze andere methoden kunnen gemakkelijk stap voor stap uitgewerkt worden door het zuiveringsproces op de beschreven wijze via dunne-laagchromatografie te volgen. Als men hierbij de d.1.c.-vlek van antibioticum A/16686 met een speciale R,-waarde volgt, zal een deskundige gemakkelijk vast kunnen stellen, welke 40 bewerkingen bruikbaar zijn bij het isoleren van zuiver antibioticum A/16686.
Desgewenst kan het zuivere antibioticum-A/16686-hydrochloride, dat op de beschreven wijze wordt verkregen, in de vrije base worden omgezet of in een ander, fysiologisch aanvaardbaar zuur-additiezout, wat op bekende wijze kan worden uitgevoerd.
Antibioticum A/16686 is een bacteriedodend middel en is vooral actief tegen Gram-positieve micro-45 organismen. Bijzonderheden over het in-vitro activiteitsspectrum van antibioticum A/16686 zijn in de nu volgende Tabel D samengevat:
TABEL D
50 Organisme M.I.C. (pg/cm3) antibioticum A/16686
Staphylococcus aureus ATCC 6538 0,16
Staphylococcus aureus ATCC 9144 0,16 55 Staphylococcus aureus Tour 0,31
Staphylococcus 10B Ciba 0,08 192989 6 TABEL D (vervolg)
Organisme M.I.C. (pg/cm3) antibioticum A/16686 5 ---
Staphylococcus spidermidis ATCC 12228 0,08
Staphylococcus saprophyticus NCTC 7292 0,16
Micrococcus 1 uteus (M. Flavus) ATCC 10240 0,16
Sarcina lutea ATCC 9341 0,02 10 Streptococcus pyogenes C 203 SKF 13400 0,01
Streptococcus pneumoniae Felton UC 41 0,05
Streptococcus faecalis ATCC 7080 0,31
Streptococcus faecalis ATCC 10541 0,08
Streptococcus agalactiae ATCC 7077 0,02 15 Streptococcus mutans ATCC 27607 0,08
Corynebacterium diphtheriae var.mitis ATCC 11051 0,31
Corynebacterium xerosis NCTC 9755 0,02
Bacillus subtilis ATCC 6633 0,062
Bacillus cereus var.mycoides ATCC 11778 0,08 20 Clostridium perfringens ISS 30543 0,16
Propionibacterium acnes ATCC 6919 0,4
Propionibacterium acnes ATCC 6922 0,8
Propionibacterium acnes ATCC 25746 0,4 25
In Tabel E zijn de resultaten weergegeven van een aantal proeven, waarbij de werking van antibioticum A/16686 op verscheidene, klinisch geïsoleerde stammen van Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae en Streptococcus faecalis werd onderzocht.
30 TABEL E
Organisme M.I.C. (pg/cm3) antibioticum A/16686 35 Staphylococcus aureus 54310 L 1096 0,62
Staphylococcus aureus 54560/I L 1097 0,31
Staphylococcus aureus 54635 L 1098 0,31
Streptococcus pyogenes L 33 0,04
Streptococcus pyogenes L 794 0,08 40 Streptococcus pyogenes L 800 0,04
Streptococcus pyogenes L 801 0,16
Streptococcus pyogenes L 802 0,08
Streptococcus pyogenes L 803 0,08
Streptococcus pyogenes L 804 0,62 45 Streptococcus pyogenes L 805 0,08
Streptococcus pneumoniae L 1055 0,04
Streptococcus pneumoniae L 1102 0,04
Streptococcus pneumoniae L 1174 0,08
Streptococcus faecalis L 768 0,31 50 Streptococcus faecalis L 876 0,31
Streptococcus faecalis L 922 0,31
Streptococcus faecalis L 949 0,31
Streptococcus faecalis L 965 0,31
Streptococcus faecalis L 1139 0,62 55 Streptococcus faecium L 763 0,16 7 192989
Ontdekt werd, dat antibioticum A/16686 ook in vivo een hoge activiteitsgraad tegen verschillende pathogene organismen vertoont. De werkzaamheid van antibioticum A/16686 blijkt duidelijk uit Tabel F, waarin de EDso bij muizen tegen drie verschillende micro-organismen is vermeld.
5 TABEL F
Staphylococcus ED^, mg/kg Streptococcus aureus Tour subcutaan pneumoniae 10 Streptococcus Felton UC 41
pyogenes C203 ISM
A/16686 24,6 0,09 0,2 15
Gebleken is, dat antibioticum A/16686 bij toediening aan proefdieren een relatief geringe giftigheid heeft. De LF50 bij muizen intraperitioneale toediening ligt bijvoorbeeld ongeveer tussen 500 en 750 mg/kg.
De uitvinding betreft derhalve tevens de toepassing van antibioticum A/16686 als bacteriebestrijdend middel, waarbij met toepassing alle mogelijkheden van industriële toepassing worden bedoeld, met inbegrip 20 van de verwerking van antibioticum A/16686 in farmaceutische producten. Dit laatste vormt tevens een afzonderlijk aspect van de uitvinding.
Deze farmaceutische producten, die geschikt zijn voor orale, plaatselijk of parenterale toediening, worden op de gebruikelijke, in de farmaceutische techniek bekende wijzen vervaardigd. Voorbeelden van dergelijke producten worden bijvoorbeeld beschreven in Remington’s Pharmaceutical Sciences, 15de druk, 1975 Mack 25 Publishing Co. Easton, Pennsylvania. De farmaceutische producten kunnen de vorm hebben van tabletten, capsules, poeders, zalven, vloeibare oplossingen, injectievloeistoffen, en dergelijke. De doseringseenheden kunnen 0,5 tot 99%, en bij voorkeur 5 tot 80%, van de actieve stof bevatten. De dagelijkse dosis kan vastgesteld worden met inachtneming van verschillende factoren, zoals het lichaamsgewicht, het ziekteverwekkende organisme, en de duur en de wijze van toediening.
30 De uitvinding wordt nu nader toegelicht met de volgende voorbeelden.
Voorbeeld I
Fermentatie van stam Actinoplanes sp. ATCC 33076
Men kweekt Actinoplanes sp. ATCC 33076 in schudkolven met een kweekvloeistof van de volgende 35 samenstelling: vleesextract 3 g/iiter gistextract 5 g/liter trypton 5 g/liter 40 oplosbaar zetmeel 24 g/liter glucose 1 g/liter
CaC03 4 g/liter kraanwater 1 liter 45 De kolven worden ongeveer 96 uur bij 28-30°C geschud, waarna de culturen (telkens 1 liter) gebruikt worden om de fermentatievaten te enten, die elk 10 liter kweekvloeistof van de volgende samenstelling bevatten: vleesextract 40 g 50 pepton 40 g gistextract 10 g natriumchloride 25 g soyameel 100 g glucose 250 g 55 CaC03 50 g kraanwater 10 liter 192989 8
De fermentatievaten worden geroerd en onder beluchting bij 28-30°C bebroed. De antibiotische activiteit van de culturen wordt met tussenpozen bepaald met behulp van de agar-diffusiemethode en Sarcina lutea als proeforganisme. De maximale activiteit wordt 72 tot 120 uur na het begin van de fermentatie bereikt.
5 Voorbeela II
Afscheiding van antibioticum A/16686
De gehele voorraad kweekvloeistof (170 liter), die op de in voorbeeld I beschreven wijze wordt bereid, wordt tot 10°C afgekoeld en met behulp van HC1 18% op een pH van 3,5 gebracht. De zure vloeistof wordt met toepassing van een filtreerhulpmiddel (Clarcel Flow-Ma) gefiltreerd, waarna de op het filter achtergeble-10 ven myceliumkoek met water wordt gewassen. Hierna worden de gefiltreerde kweekvloeistof en het mycelium afzonderlijk verwerkt.
a) Men gebruikt 30 liter methanol om de myceliummassa te extraheren. Vervolgens wordt deze massa nogmaals geëxtraheerd, nu met een mengsel van methanol en water (30 I methanol en 5 I water). Het afgewerkte mycelium wordt weggegooid en de beide methanolextracten worden onder vacuüm en bij een 15 temperatuur van minder dan 40°C ingedampt, tot een waterig concentraat (6 liter) is verkregen. Dit waterige concentraat wordt driemaal met 10 liter n-butanol geëxtraheerd. De extracten worden bij elkaar gevoegd en onder vacuüm sterk ingedampt. Het verkregen concentraat wordt in petroleumether gegoten, waarbij een neerslag ontstaat. De bovenstaande vloeistof wordt afgegoten en het neerslag wordt bij een nieuwe hoeveelheid petroleumether gevoegd. Dan wordt het neerslag afgefiltreerd en bij kamertemperatuur onder 20 vacuüm drooggedampt. Men verkrijgt hierbij 80 g ruw antibioticum A/16686 met een M.I.C. tegen S. pneumoniae UC 41 van 0,1 /ug/cm3.
b) De gefiltreerde kweekvloeistof wordt, samen met het waswater (in totaal 165 I) tot 10°C afgekoeld en door toevoeging van 2,5 I geconcentreerd HC1 op een pH van 3,5 gebracht. De verkregen oplossing wordt met 80 I n-butanol geëxtraheerd, waarna het organische extract onder vacuüm bij een temperatuur van 25 minder dan 35°C wordt ingedampt tot een butanolconcentraat van 6 liter is verkregen. Dit concentraat wordt bij petroleumether gevoegd, het hierbij ontstane neerslag wordt afgescheiden door afgieten van de bovenstaande vloeistof en bij een tweede hoeveelheid petroleumether gevoegd. Het neerslag wordt nu afgefiltreerd en bij kamertemperatuur onder vacuüm drooggedampt. Men verkrijgt hierbij 26,3 ruw antibioticum A/16686 met een M.I.C. tegen S. pneumoniae UC 41 van 0,8 /jg/cm3.
30
Voorbeeld III
Zuivering van antibioticum A/16686
Men voegt aan 47,7 g van het volgens voorbeeld II a) verkregen ruwe antibioticum A/16686 1,4 liter chloroform:ethanol:water-mengsel (4:7:2 volumeverhouding toe en roert, waarbij een olie-achtig product 35 ontstaat, dat men van de oplossing afgiet. Vervolgens voegt men nog eens 70 cm3 van het oplosmiddel-mengsel bij het olie-achtige product en giet dit weer af. Het olie-achtige product wordt door toevoegen van 440 cm3 water vast, waarna het afgecentrifugeerd of afgefiltreerd wordt. De winning van het antibioticum A/16686 uit het vaste product wordt beschreven onder a) en de winning van dit antibioticum uit het centrifugaat of het filtraat wordt beschreven onder b).
40 a) Het afgescheiden neerslag wordt in 170 cm3 water gesuspendeerd en door toevoeging van 400 cm3 methanol opgelost, waarna de oplossing gefiltreerd wordt. Vervolgens worden de oplosmiddelen onder vacuüm afgedampt bij een temperatuur, die steeds lager is dan 35°C, waarbij n-butanol wordt toegevoegd, zodat ongeveer 50 cm3 butanolconcentraat wordt verkregen. Hier voegt men 500 cm3 diëthylether bij, waarbij een neerslag ontstaat, dat afgefiltreerd en onder vacuüm bij kamertemperatuur gedroogd wordt. Men 45 verkrijgt 1,012 g tamelijk zuiver antibioticum A/16686 met een M.I.C. tegen S. pyogenes C203 SKF 13400 van 0,025 /Ug/cm3. Het op deze wijze verkregen, tamelijk zuivere antibioticum A/16686 wordt vervolgens op de volgende wijze verder gezuiverd: Men lost 1,58 g van het verkregen antibioticum A/16686 met een M.I.C. tegen pyogenes C203 SKF 13400 van 0,025 /ug/cm3 op in een mengsel van 1 vol .deel acetonitril op 1 vol.deel water en brengt de verkregen oplossing in een kolom met 430 g silicagel 60 (Merck 0,06-0,2 mm), 50 die met hetzelfde mengsel is bereid. De kolom wordt eerst met hetzelfde acetonitril-watermengsel ontwikkeld, waarbij men 70 fracties, elk van 20 cm3, opvangt. Vervolgens gaat men over op acetonitril: 0,01 N HC1 (1:1, vol. verhouding) en vangt hiermee nog eens 290 fracties, elk van 20 cm3, op. De fracties van het eivaat uit de kolom worden onderzocht met behulp van dunne-laagchromatografie op 60 F silicagelplaten en door de fracties op werkzaamheid tegen Sarcina lutea te toetsen. De fracties 130 tot 265 wordt bij elkaar 55 gevoegd, waarna de oplosmiddelen onder vacuüm onder toevoeging van n-butanol worden af gedampt, zodat 20 cm3 n-butanolconcentraat wordt verkregen. Dit concentraat wordt in een grote hoeveelheid diëthylether gegoten, waarna het daarbij ontstane neerslag wordt afgefiltreerd en bij kamertemperatuur 9 192989 onder vacuüm over P205 gedroogd. De opbrengst is 1,015 g antibioticum A/16686.
Van het verkregen antibioticum lost men 0,67 g op in een mengsel van 24 cm3 water en 76 cm3 methanol. De verkregen oplossing wordt in een kolom van 3,0 x 62,0 cm met 220 g Sephadex LH-20 gebracht, die was bereid met methanol: water (7:3, vol.verhouding). De kolom wordt ontwikkeld met 5 hetzelfde mengsel, waarbij fracties van 10 cm3 worden opgevangen. De fracties 24 tot 32 worden bij elkaar gevoegd, waarna de oplosmiddelen onder toevoeging van n-butanol onder vacuüm bij een temperatuur van minder dan 35°C worden afgedampt en een butanolconcentraat van ongeveer 10 cm3 achterblijft. Deze oplossing wordt in diëthylether gegoten, waarin het gezochte zuivere antibioticum A/16686 neerslaat. Het neerslag wordt afgefiltreerd, met diëthylether gewassen en onder vacuüm bij kamertemperatuur over P205 10 gedroogd. Men verkrijgt 0,26 g zuiver antibioticum A/16686.
b) Het filtraat wordt onder vacuüm bij een temperatuur van minder dan 35°C onder toevoeging van n-butanol afgedampt, waarbij 50 cm3 n-butanolconcentraat wordt verkregen. Door toevoeging van petroleu-mether ontstaat een neerslag, dat afgefiltreerd en onder vacuüm bij kamertemperatuur gedroogd wordt. Men verkrijgt hiermee 42,9 g gedeeltelijk gezuiverd antibioticum A/16686, dat een M.I.C.-waarde tegenover S.
15 pyogenes C203 SKF 13400 van 0,2 /ug/cm3 heeft. Deze antibiotische stof wordt in 2,5 I water gesuspendeerd en opgelost door toevoeging van 1 N NaOH tot een pH van 7 is bereikt. Vervolgens wordt de waterige oplossing driemaal met 5 liter n-butanol geëxtraheerd, de extracten worden samengevoegd, met water gewassen en onder vacuüm bij een temperatuur van minder dan 35°C tot 200 cm3 ingedampt.
Men voegt diëthylether bij het concentraat, waardoor een neerslag ontstaat, dat afgefiltreerd en onder 20 vacuüm bij kamertemperatuur gedroogd wordt. Het gedroogd product wordt in 160 cm3 van de bovenste laag van een mengsel van n-propanol:n-butanol: 1 N ammoniumhydroxide (2:3:4, vol.verhouding) opgelost. De verkregen oplossing wordt in een kolom van 7,5 x 100 cm gebracht, die 1,7 kg silicagel 60 (Merck 0,06-0,2 mm) bevat, bereid in het bovengenoemde oplosmiddelmengsel. De kolom wordt met hetzelfde mengsel ontwikkeld, waarbij fracties van 300 cm3 worden opgevangen. De fracties van de kolom worden 25 onderzocht met behulp van dunne-laagchromatografie. De fracties 21 tot 26 worden bij elkaar gevoegd en onder vacuüm bij een temperatuur van minder dan 35°C onder toevoeging van n-butanol afgedampt, waarbij 50 cm3 n-butanolconcentraat wordt verkregen. Door toevoeging van diëthylether wordt een neerslag gevormd, dat afgefiltreerd wordt, met diëthylether gewassen en onder vacuüm bij kamertemperatuur over P205 gedroogd. Men verkrijgt 1,875 behoorlijk zuiver antibioticum A/16686, dat op dezelfde wijze als 30 hierboven voor a) is beschreven. Verder wordt gezuiverd.
In de vorm van het hydrochloride bestaat antibioticum A/16686 uit een wit, kristallijn, licht hygroscopisch materiaal, dat bij 224-226°C smelt. Het is zeer goed oplosbaar in water en dimethylformamide, oplosbaar in methanol, ethanol, propanol en butanol, maar onoplosbaar in diëthylether, petroleumether en benzeen. De elementenanalyse van antibioticum A/16686 dat eerst bij 140°C onder een inerte atmosfeer is gedroogd, 35 levert (als gemiddelde van verscheidene analyses) ongeveer de volgende procentuele samenstelling op: koolstof 51,75%; waterstof 6,34%; stikstof 9,96%; chloor (het gehele gehalte) 5,84%; chloorionen 4,74%; en verbrandingsrest 1%.
In Figuur 1 van de begeleidende tekeningen is het infrarood absorptiespectrum in nujol weergegeven.
In dit spectrum worden de volgende absorptiemaxima waargenomen (in cm'1): 3290-3070, 2930 en 2860 40 (nujol), 1765, 1630, 1510, 1455, 1375 (nujol), 1230, 1175, 1130, 1065, 1030, 1015, 980, 840 en 820.
In Figuur 2 van de bijgevoegde tekeningen is het ultraviolet absorptiespectrum afgebeeld, en daarin kunnen de volgende absorptiemaxima worden waargenomen: a) in methanol 232 nm (E]^= 178) 45 265 nm (E]£= 107) b) in methanol met 0,1 N HC1 231 nm (EJ* =167) 270 nm (E}% =96)
c) in methanol met 0,1 N NaOH
50 250 nm (E]% =232) 295 nm (schouder) d) in methanol met een buffer voor een pH van 7,38 231 nm (E = 167) 270 nm (E = 96) 55 De ultraviolet spectra werden geregistreerd met een Beckmann DK-2 Spectrofotometer.
Antibioticum A/16686-hydrochloride heeft een specifieke draaiing 7%4 van +49,7° (c = 0,43% in DMF) 192989 10
Antibioticum A/16686 vertoont de volgende, kenmerkende reacties: ninhydrien (3% oplossing in ethanol) negatief 5 ninhydrien (3% oplossing in ethanol + natriumacetaat) positief 1% FeC13 + 1% K3Fe (CN)6 (oplossing in water) positief (groen)
Molisch positief
Fehling negatief
Biureet positief 10 Anthron positief
Millon negatief
Geconcentreerd H2S04 negatief KMn04, in water positief 15
In de volgende tabel zijn de R,-waarden van antibioticum A/16686 bij papierchromatografie met verschillende elutiesystemen en aureus ATCC 6538 als proeforganisme vermeld:
Resultaten papierchromatografie (Whatman papier, nr. 1)* met antibioticum A/16686) 20
TABEL G
Elutiesysteem R,-waarde 25 1) n-butanol, verzadigd met de buffer van Sörensen, pH 6,0 0,00 2) n-butanol, verzadigd met water, dat 2% p-tolueen-sulfonzuur bevat 0,00 3) n-butanol, verzadigd met water, dat 2% ammonium-hydroxide 0,00 bevat 4) buffer van Sörensen, pH 6,0, verzadigd met n-butanol 0,05 30 5) n-butanol:methanol:water, 4:1:2 0,43 6) ethylacetaat, verzadigd met water 0,00 7) n-butanol:azijnzuur:water 2:1:1 0,52 8) n-butanol:pyridine:water 4:3:7 0,87 * Dalende chromatografie 35 - RM: (= afstand tussen opbrengplaats en vloeistoffront) 40 cm.
Hoeveelheden: 20 ,ug verbinding, opgelost in water: methanol (2 mg/cm3). D Rf-waarden van antibioticum A/16686 in verschillende dunne-laagchromatografie-systemen zijn in de nu volgende tabel H weergegeven 40 (de voorwaarden zijn eveneens in de tabel vermeld).
TABEL H
Elutiesysteem (vol. verhouding) R,-waarde 45 -—- 1) n-propanol:n-butanol:1N ammoniumhydroxide 2:3:4 (bovenste fase) 0,15 2) n-butanol:azijnzuur:water 4:2:5 0,61 3) n-butanol:ethanol:0,1 N zoutzuur 0,61 4) chloroform:ethanol:10% azijnzuur 4:7:2 0,00 50 5) n-butanol:azijnzuur:water 4:1:5 0,17 6) methanol:10% ammoniumacetaat in water: 10% ammoniumhydr- 0,52 oxide 10:9:1 7) n-butanol:pyridine:water:azijnzuur 6:4:3:1 0,45 8) methanol:10% ammoniumacetaat in water: 10% ammoniumhydr- 0,11 55 oxide 10:9:1 (zie 6) 9) 0,25 M NaH2P04 in wateracetonitril 1:1 0,68
Claims (3)
1. Basisch, tegen bacteriën werkzaam antibioticum dat kan worden gewonnen uit een cultuur van een micro-organisme dat behoort tot het genus Actinoplanes, waarbij dit antibioticum, aanwezig is in de vorm 50 van de vrije base of in de vorm van een niet-giftig, farmaceutisch aanvaardbaar zuuradditiezout daarvan, met het kenmerk, dat dit antibioticum, aangeduid als antibioticum A/16686, in de vorm van het hydrochloride: A) een witte, kristallijne stof is, die bij 224-226°C smelt; B) zeer goed in water en dimethylformamide oplost; goed in methanol, ethanol, propanol en butanol 55 oplost; en onoplosbaar is in diëthylether, petroleumether en benzeen; C) volgens de elementanalyse bij benadering de volgende samenstelling heeft: 51,73% C, 6,34% H, 9,96% N, 5,84% C1 (in totaal), 4,74% C1-ionen en 1% verbrandingsrest; 192989 12 D) een infrarood absorptiecentrum in nujol vertoont, waarin de volgende absorptiemaxima waarneembaar zijn: (zie figuur 1 van de tekening): 3290-3070, 2930 en 2860 (nujol), 1765,1630, 1510, 1455, 1375 (nujol), 1230, 1175, 1130, 1065, 1030, 1015, 980, 840 en 820 cm"1; E) een ultraviolet absorptiespectrum met de volgende absorptiemaxima (zie figuur 2 van de tekening) 5 heeft: а) in methanol: 232 nm (E.1£" = 178) 265 nm (E}% = 107) b) in methanol met 0,1 N HC1: 10 23Γηηη (E]“> = 167) 270 nm (Ej^ = 96) c) in methanol met 0,1 N NaOH: 250nm(E;«n = 232) 295 nm 15 (schouder) d) in methanol met een buffer, pH = 7,38: 231 nm(EJ% =167) 270 nm(Ej% = 96) F) een specifieke optische draaiing, [a] 24 van +49,7° (c = 0,43% in DMF) vertoont; G) de volgende, kenmerkende reacties vertoont: 20 ninhydrien (3% oplossing in ethanol) negatief ninhydrien (3% oplossing in ethanol + natriumacetaat positief 1% FeC13 + 1% K3Fe(CN)6 positief (groen) Fehling negatief
25 Molisch positief Bi u reet positief Anthron positief Millon negatief Geconc. H2S04 negatief
30 KMn04 positief H) bij papierchromatografie op Whatman papier nr 1 met S. aureus ATCC 6538 als proeforganisme de volgende R,-waarden vertoont: 35 -—:- Elutiesysteem Rf-waarde I) n-butanol, verzadigd met buffer van Sörensen, pH = 6,0 0,00 2. n-butanol, verzadigd met water, dat 2% p-tolueensulfonzuur bevat 0,00 40 3) n-butanol, verzadigd met water, dat 2% ammoniumhydroxide bevat 0,00 4. buffer van Sörensen, pH 6,0, verzadigd met n-butanol 0,05 5. n-butanol:methanol:water 4:1:2 0,43 б) ethylacetaat, verzadigd met water 0,00 7. n-butanol:azijnzuur:water 2:1:1 0,52 45 8) n-butanol:pyridine:water 4:3:7 0,87 1. in de verschillende, hieronder vermelde systemen voor dunne-laagchromatografie de volgende Rf-waarden vertoont: 50 Elutiesysteem (volumverhouding) Ruwaarde 55 1) n-propanol:n-butanol: N ammoniumhydroxide 2:3:4 (bovenste fase) 0,15 2. n-butanol:azijnzuur:water 4:2:5 0,61 13 192989 (vervolg) Elutiesysteem (volumverhouding) R,-waarde 5 3) n-butanol:ethanol:0,1 N zoutzuur 0,61 4. chloroform:ethanol:10% azijnzuur 4:7:2 0,00 5. n-butanol:azijnzuur:water 4:1:5 0,17 6. methanol:10% ammoniumacetaat in water:10% ammoniumhydroxide 10:9:1 0,52 7. n-butanol:pyridine:water:azijnzuur 6:4:3:1 0,45 10 8) methanol:10% ammoniumacetaat in water: 10% ammoniumhydroxide in 0,11 water 10:9:1 9) 0,25 M NaH2P04 in watenacetonitril 1:1 0,68 10. methanol:10% ammoniumacetaat in water 1:1 0,65 11. n-butanol:azijnzuur:water 4:2:5 0,77 15 ----- 1 tot 7 op silicagel 60 F254-platen; 8 en 9 op gesilaniseerd Silicagel 60 F254 en 10 en 11 op cellulose F platen. J) na 6 uur hydrolyse bij 110°C in 6 N HC1 een aminozuur-analyse vertoont, die duidt op de aanwezig-20 heid van ten minste de volgende aminozuren: ornithine, asparaginezuur, threonine, glycine, alanine, leucine, fenylalanine, p-hydroxifenylglycine en een fenylglycine-derivaat met hydroxil- en chloorgroepen, welk antibioticum A/16686 kan worden gewonnen uit een cultuur van Actinoplanes sp. ATCC 33076.
2. Werkwijze voor het bereiden van het antibioticum volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat men de stam Actinoplanes sp. ATCC 33076 onder beluchting submers kweekt in een voedingsvloeistof die 25 assimileerbare koolstof- en stikstofbronnen en anorganische voedingszouten bevat, tot een aanmerkelijke hoeveelheid van het antibioticum A 16686 is gevormd en dat men uit de verkregen cultuur het antibioticum A/16686 isoleert.
3. Farmaceutisch preparaat, met het kenmerk, dat het het antibioticum volgens conclusie 1 of een farmaceutisch aanvaardbaar zuuradditiezout daarvan als werkzaam bestanddeel bevat. Hierbij 3 bladen tekening
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB7912298 | 1979-04-07 | ||
| GB7912298 | 1979-04-07 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8001982A NL8001982A (nl) | 1980-10-09 |
| NL192989B NL192989B (nl) | 1998-03-02 |
| NL192989C true NL192989C (nl) | 1998-07-03 |
Family
ID=10504421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8001982A NL192989C (nl) | 1979-04-07 | 1980-04-03 | Antibioticum, werkwijze voor de bereiding en farmaceutisch preparaat dat dit antibioticum bevat. |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4303646A (nl) |
| JP (2) | JPS5697237A (nl) |
| AR (1) | AR222217A1 (nl) |
| AT (1) | AT370130B (nl) |
| AU (2) | AU533951B2 (nl) |
| BE (1) | BE882632A (nl) |
| CA (1) | CA1142866A (nl) |
| CH (1) | CH655515B (nl) |
| DE (1) | DE3013246A1 (nl) |
| DK (1) | DK149336C (nl) |
| ES (1) | ES8103170A1 (nl) |
| FI (1) | FI65630C (nl) |
| FR (1) | FR2452931A1 (nl) |
| GR (1) | GR67279B (nl) |
| HK (1) | HK23584A (nl) |
| HU (1) | HU181534B (nl) |
| IE (1) | IE49327B1 (nl) |
| IL (1) | IL59704A (nl) |
| IT (1) | IT1212411B (nl) |
| LU (1) | LU82327A1 (nl) |
| MX (1) | MX5958E (nl) |
| NL (1) | NL192989C (nl) |
| NO (1) | NO155496C (nl) |
| NZ (1) | NZ193357A (nl) |
| PH (1) | PH17230A (nl) |
| PT (1) | PT71064A (nl) |
| SE (1) | SE441188B (nl) |
| SG (1) | SG22687G (nl) |
| YU (1) | YU41917B (nl) |
| ZA (1) | ZA801629B (nl) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE7031T1 (de) | 1980-08-16 | 1984-04-15 | Gruppo Lepetit S.P.A. | Antibiotikum a/16686 faktor a2, verfahren zu dessen herstellung und die gleichzeitig hergestellten antibiotika a/16686 faktoren a1 und a3. |
| US4375513A (en) * | 1980-12-18 | 1983-03-01 | Eli Lilly And Company | Biologically pure culture of Actinoplanes missouriensis |
| US4613503A (en) * | 1984-10-11 | 1986-09-23 | The Dow Chemical Company | Antibiotic A26201-1 and antibiotic A26201-2 produced by a novel strain of actinoplanes |
| US4859599A (en) * | 1984-10-11 | 1989-08-22 | The Dow Chemical Company | Antibiotic A26201-1 and antibiotic A26201-2 produced by a novel strain of actinoplanes |
| GB8624806D0 (en) * | 1986-10-16 | 1986-11-19 | Pfizer Ltd | Glycopeptide antibiotic |
| GB8720980D0 (en) * | 1987-09-07 | 1987-10-14 | Lepetit Spa | Derivatives |
| GB8729989D0 (en) * | 1987-12-23 | 1988-02-03 | Lepetit Spa | Novel hydrogenated derivatives of antibiotic a/16686 |
| GB8808658D0 (en) * | 1988-04-13 | 1988-05-18 | Lepetit Spa | Aglycons of a/16686 antibiotics |
| AU2001245263A1 (en) * | 2000-01-21 | 2001-07-31 | Kosan Biosciences, Inc. | Method for cloning polyketide synthase genes |
| US7257562B2 (en) * | 2000-10-13 | 2007-08-14 | Thallion Pharmaceuticals Inc. | High throughput method for discovery of gene clusters |
| EP1326983B1 (en) * | 2000-10-13 | 2005-04-06 | Ecopia Biosciences Inc. | Gene cluster for ramoplanin biosynthesis |
| US20030211567A1 (en) * | 2001-07-24 | 2003-11-13 | Ecopia Biosciences, Inc. | Compositions, methods and systems for discovery of lipopeptides |
| WO2003076460A1 (en) * | 2002-03-08 | 2003-09-18 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | A process for the production of ramoplanin-like amide derivatives |
| CA2430580A1 (en) * | 2002-04-17 | 2003-09-04 | Ecopia Biosciences Inc. | Specialized dual condensation/epimerization domain in non-ribosomal peptide synthetase systems |
| WO2003103699A1 (en) * | 2002-06-06 | 2003-12-18 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Use of ramoplanin to treat diseases associated with the use of antibiotics |
| US20040147441A1 (en) * | 2002-08-23 | 2004-07-29 | Leach Timothy S. | Methods and reagents for preventing bacteremias |
| US20040127403A1 (en) * | 2002-09-06 | 2004-07-01 | Francesco Parenti | Methods for treating and preventing Gram-positive bacteremias |
| US20050043223A1 (en) * | 2003-04-25 | 2005-02-24 | Leach Timothy S. | Methods for reducing or preventing transmission of nosocomial pathogens in a health care facility |
| US20170028016A1 (en) | 2014-04-16 | 2017-02-02 | Nanotherapeutics, Inc. | Methods of treatment of c. difficile spores with ramoplanin |
| US20180002741A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Method of diagnosis and treating gastrointestinal and neurological diseases associated with species of genus clostridium |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE790627A (fr) * | 1971-10-27 | 1973-04-27 | Lilly Co Eli | L'antibiotique a477 et son procede de preparation |
| GB1458512A (en) * | 1973-11-22 | 1976-12-15 | Lepetit Spa | Antibiotic substance |
| US4038383A (en) * | 1975-01-17 | 1977-07-26 | Pfizer Inc. | Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes |
| US4001397A (en) * | 1975-08-11 | 1977-01-04 | Pfizer Inc. | Antibiotic compound 41,012 |
| US4115552A (en) * | 1976-04-19 | 1978-09-19 | Eli Lilly And Company | Factor A and B of antibiotic A-4696 |
| US4169887A (en) * | 1978-02-21 | 1979-10-02 | Pfizer Inc. | Antibiotics produced by species of actinoplanes |
| JPS54135703A (en) * | 1978-04-11 | 1979-10-22 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | Antibiotic ab-102 and preparation thereof |
-
1980
- 1980-03-20 ZA ZA00801629A patent/ZA801629B/xx unknown
- 1980-03-21 FI FI800881A patent/FI65630C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-03-22 GR GR61511A patent/GR67279B/el unknown
- 1980-03-25 NO NO800869A patent/NO155496C/no unknown
- 1980-03-25 IL IL59704A patent/IL59704A/xx unknown
- 1980-03-31 PH PH23840A patent/PH17230A/en unknown
- 1980-03-31 US US06/135,560 patent/US4303646A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-01 DK DK140080A patent/DK149336C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-04-01 AU AU57036/80A patent/AU533951B2/en not_active Expired
- 1980-04-01 CH CH256780A patent/CH655515B/it unknown
- 1980-04-02 ES ES490236A patent/ES8103170A1/es not_active Expired
- 1980-04-03 BE BE0/200117A patent/BE882632A/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 HU HU80822A patent/HU181534B/hu unknown
- 1980-04-03 LU LU82327A patent/LU82327A1/fr unknown
- 1980-04-03 SE SE8002601A patent/SE441188B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 PT PT71064A patent/PT71064A/pt unknown
- 1980-04-03 DE DE19803013246 patent/DE3013246A1/de active Granted
- 1980-04-03 IE IE697/80A patent/IE49327B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 IT IT8021162A patent/IT1212411B/it active
- 1980-04-03 FR FR8007547A patent/FR2452931A1/fr active Granted
- 1980-04-03 NL NL8001982A patent/NL192989C/nl not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 NZ NZ193357A patent/NZ193357A/xx unknown
- 1980-04-04 AT AT0187480A patent/AT370130B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-04 YU YU935/80A patent/YU41917B/xx unknown
- 1980-04-07 AR AR280577A patent/AR222217A1/es active
- 1980-04-07 JP JP4476480A patent/JPS5697237A/ja active Granted
- 1980-04-07 MX MX808745U patent/MX5958E/es unknown
- 1980-04-08 CA CA000349360A patent/CA1142866A/en not_active Expired
- 1980-06-04 AU AU59036/80A patent/AU535727B2/en not_active Ceased
- 1980-12-11 US US06/215,310 patent/US4328316A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-03-15 HK HK235/84A patent/HK23584A/xx not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-03-06 SG SG226/87A patent/SG22687G/en unknown
- 1987-04-13 JP JP62088966A patent/JPS62282579A/ja active Granted
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NL192989C (nl) | Antibioticum, werkwijze voor de bereiding en farmaceutisch preparaat dat dit antibioticum bevat. | |
| HU188684B (en) | Process for producing a2, and simultaneously produced a1 and a3 components of antibioticum a/16686 | |
| CA1297825C (en) | Antibiotics called "chloropolysporins b and c" a process for their preparation, and their therapeutic and veterinary use | |
| NL8501708A (nl) | Antitumor antibioticum. | |
| US4456592A (en) | Antibiotics, neoviridogriseins, and their method of production | |
| US4174390A (en) | Antibiotic A-7413 and process for preparation thereof | |
| US4355112A (en) | Streptomyces culture | |
| US3824305A (en) | Antibiotic a-287 and process for production thereof | |
| US4248863A (en) | Antibiotics saframycins A, B, C, D and E and process for producing the same | |
| KR920001366B1 (ko) | 새로운 항암 항생복합체 bbm-1675의 제조방법 | |
| CA1088441A (en) | Antibiotics, neoviridogriseins, and their method of production | |
| US3991183A (en) | Antibiotic produced by a species of micromonospora | |
| US4038383A (en) | Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes | |
| KR950013857B1 (ko) | 신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도 | |
| US4536397A (en) | Antibiotics, neoviridogriseins, and their method of production | |
| CA1046965A (en) | Naphthyridinomycin antibiotics from streptomyces | |
| US4232006A (en) | Antibiotic W-10 complex, antibiotic 20561 and antibiotic 20562 as antifungal agents | |
| US4137224A (en) | Process for the preparation of antibiotic W-10 complex and for the isolation of antibiotic 20561 and antibiotic 20562 therefrom | |
| JPH07114704B2 (ja) | 抗生物質ａ４２８６７およびその付加塩 | |
| US4607012A (en) | Antibiotic SB 22484 | |
| GB2045231A (en) | Antibiotic A/16686 and its preparation from actinoplanes | |
| CA1090728A (en) | Antibiotic a-7413 mixture comprising factors a,b,c and d and a process for producing it | |
| US4148880A (en) | Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes | |
| US4230799A (en) | Process for the preparation of antibiotic W-10 complex and for the isolation of Antibiotic 20561 and Antibiotic 20562 therefrom | |
| KR830001443B1 (ko) | 항생물질 a/16686의 제법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| SNR | Assignments of patents or rights arising from examined patent applications |
Owner name: BIOSEARCH ITALIA S.P.A. |
|
| V4 | Discontinued because of reaching the maximum lifetime of a patent |
Free format text: 20000403 |