DK149336B - Fremgangsmaade til fremstilling af antibiotikum a/16686 eller syreadditionssalte deraf - Google Patents

Fremgangsmaade til fremstilling af antibiotikum a/16686 eller syreadditionssalte deraf Download PDF

Info

Publication number
DK149336B
DK149336B DK140080AA DK140080A DK149336B DK 149336 B DK149336 B DK 149336B DK 140080A A DK140080A A DK 140080AA DK 140080 A DK140080 A DK 140080A DK 149336 B DK149336 B DK 149336B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
butanol
water
antibiotic
methanol
acid
Prior art date
Application number
DK140080AA
Other languages
English (en)
Other versions
DK149336C (da
DK140080A (da
Inventor
Bruno Cavalleri
Hermes Pagani
Giancarlo Volpe
Original Assignee
Lepetit Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lepetit Spa filed Critical Lepetit Spa
Publication of DK140080A publication Critical patent/DK140080A/da
Publication of DK149336B publication Critical patent/DK149336B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK149336C publication Critical patent/DK149336C/da

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C10PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10GCRACKING HYDROCARBON OILS; PRODUCTION OF LIQUID HYDROCARBON MIXTURES, e.g. BY DESTRUCTIVE HYDROGENATION, OLIGOMERISATION, POLYMERISATION; RECOVERY OF HYDROCARBON OILS FROM OIL-SHALE, OIL-SAND, OR GASES; REFINING MIXTURES MAINLY CONSISTING OF HYDROCARBONS; REFORMING OF NAPHTHA; MINERAL WAXES
    • C10G49/00Treatment of hydrocarbon oils, in the presence of hydrogen or hydrogen-generating compounds, not provided for in a single one of groups C10G45/02, C10G45/32, C10G45/44, C10G45/58 or C10G47/00
    • C10G49/02Treatment of hydrocarbon oils, in the presence of hydrogen or hydrogen-generating compounds, not provided for in a single one of groups C10G45/02, C10G45/32, C10G45/44, C10G45/58 or C10G47/00 characterised by the catalyst used
    • C10G49/08Treatment of hydrocarbon oils, in the presence of hydrogen or hydrogen-generating compounds, not provided for in a single one of groups C10G45/02, C10G45/32, C10G45/44, C10G45/58 or C10G47/00 characterised by the catalyst used containing crystalline alumino-silicates, e.g. molecular sieves
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01JCHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J29/00Catalysts comprising molecular sieves
    • B01J29/04Catalysts comprising molecular sieves having base-exchange properties, e.g. crystalline zeolites
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C01INORGANIC CHEMISTRY
    • C01BNON-METALLIC ELEMENTS; COMPOUNDS THEREOF; METALLOIDS OR COMPOUNDS THEREOF NOT COVERED BY SUBCLASS C01C
    • C01B33/00Silicon; Compounds thereof
    • C01B33/20Silicates
    • C01B33/26Aluminium-containing silicates, i.e. silico-aluminates
    • C01B33/28Base exchange silicates, e.g. zeolites
    • C01B33/2807Zeolitic silicoaluminates with a tridimensional crystalline structure possessing molecular sieve properties; Isomorphous compounds wherein a part of the aluminium ore of the silicon present may be replaced by other elements such as gallium, germanium, phosphorus; Preparation of zeolitic molecular sieves from molecular sieves of another type or from preformed reacting mixtures
    • C01B33/2884Zeolitic silicoaluminates with a tridimensional crystalline structure possessing molecular sieve properties; Isomorphous compounds wherein a part of the aluminium ore of the silicon present may be replaced by other elements such as gallium, germanium, phosphorus; Preparation of zeolitic molecular sieves from molecular sieves of another type or from preformed reacting mixtures the aluminium or the silicon in the network being partly replaced
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C1/00Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon
    • C07C1/02Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon
    • C07C1/04Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon from carbon monoxide with hydrogen
    • C07C1/0425Catalysts; their physical properties
    • C07C1/043Catalysts; their physical properties characterised by the composition
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C1/00Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon
    • C07C1/02Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon
    • C07C1/04Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon from carbon monoxide with hydrogen
    • C07C1/0425Catalysts; their physical properties
    • C07C1/043Catalysts; their physical properties characterised by the composition
    • C07C1/0435Catalysts; their physical properties characterised by the composition containing a metal of group 8 or a compound thereof
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C1/00Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon
    • C07C1/02Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon
    • C07C1/04Preparation of hydrocarbons from one or more compounds, none of them being a hydrocarbon from oxides of a carbon from carbon monoxide with hydrogen
    • C07C1/0425Catalysts; their physical properties
    • C07C1/043Catalysts; their physical properties characterised by the composition
    • C07C1/0435Catalysts; their physical properties characterised by the composition containing a metal of group 8 or a compound thereof
    • C07C1/044Catalysts; their physical properties characterised by the composition containing a metal of group 8 or a compound thereof containing iron
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C10PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10GCRACKING HYDROCARBON OILS; PRODUCTION OF LIQUID HYDROCARBON MIXTURES, e.g. BY DESTRUCTIVE HYDROGENATION, OLIGOMERISATION, POLYMERISATION; RECOVERY OF HYDROCARBON OILS FROM OIL-SHALE, OIL-SAND, OR GASES; REFINING MIXTURES MAINLY CONSISTING OF HYDROCARBONS; REFORMING OF NAPHTHA; MINERAL WAXES
    • C10G35/00Reforming naphtha
    • C10G35/04Catalytic reforming
    • C10G35/06Catalytic reforming characterised by the catalyst used
    • C10G35/065Catalytic reforming characterised by the catalyst used containing crystalline zeolitic molecular sieves, other than aluminosilicates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/005Glycopeptides, glycoproteins
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2529/00Catalysts comprising molecular sieves
    • C07C2529/04Catalysts comprising molecular sieves having base-exchange properties, e.g. crystalline zeolites, pillared clays
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/045Actinoplanes
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/827Actinoplanes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Geology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

U9336
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt antibiotisk stof, der arbitrært i nærværende beskrivelse betegnes A/16686, eller syreadditionssalte deraf. Fremgangsmåden består ifølge op-5 findelsen i at man dyrker den hidtil ubeskrevne mikroorganismestamme Actinoplanes sp. ATCC 33076 under aerobe submerse betingelser i et dyrkningsmedium indeholdende en as-similerbar kilde til kulstof, en assimilerbar kilde til nitrogen og uorganiske salte, hvorpå man udvinder antibioti-10 ket og om ønsket omdanner det til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf eller frigør antibiotiket i basisk form fra et dannet syreadditionssalt deraf. Stoffet og dets syreadditionssalte er egnet til anvendelse som an-tibakterielt middel.
15 Antibiotikum A/16686 er et glykopeptid-antibiotikum med basisk karakter, der som nævnt er i stand til at danne syreadditionssalte.
For enkelthedens skyld bruges i nærværende beskrivelse betegnelsen "antibiotikum A/16686" til antibiotiket både 20 i form af antibiotikum A/16686 som fri base og i form af dets fysiologisk acceptable syreadditionssalte.
Antibiotikum A/16686 inhiberer in vitro væksten af visse pathogene bakterier, navnlig grampositive sådanne. Desuden giver parenteral indgift af antibiotikum A/16686 en høj 25 grad af beskyttelse mod eksperimentelt fremkaldte infektioner hos mus.
Som anført foran vindes antibiotikum A/16686 ved dyrkning af en hidtil ukendt stamme af slægten Actinoplanes. En kultur af denne stamme, der isoleredes fra en jordprøve sam-30 let ved Vaghalbod (Indien) er den 30. januar 1979 deponeret hos den permanente kultursamling ATCC (American Type Culture Collection), 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA, hvor den har fået accessionsnummeret ATCC 33076.
Egenskaberne af Actionplanes sp. ATCC 33076 anføres i 35 det følgende.
2 169336
Morfologi
Stammen vokser vel på forskellige medier og har orangefarvet substratmycelium. Den frembringer ikke pigment. Der mangler altid luftmycelium. En mikroskopisk undersøgelse af 5 det vegetative mycelium viser grenede hyfer med en diameter på ca. 1 y. Sporangier dannes sparsomt og kun på kartoffelagar, og de er kugledannede med meget uregelmæssig overflade og en diameter fra 5,0-9,0 y. Sporeafgivelse iagttages efter brud på sporangiumsvæg. De subsfæriske sporer er bevægelige 10 og har en diameter på 1,0-1,5 y. Analyse af cellevægskomponenterne viser meso-diaminopimelinsyre og et sukkermønster af type D (Lechevalier et al., Chemical composition as a criterium in the classification of Actinomycetes. Adv. Applied Microbiology, 14, 1971. Academic Press N.Y.).
15
Kulturkarakterer
Nedenstående tabel I viser kulturkaraktereme for Actinoplanes ATCC 33076 dyrket på forskellige standardmedier foreslået af Shirling og Gottlieb (Intern. J. System. Bact.
20 .ϋ' 313-340, 1966) og andre medier anbefalet af Waksman (The Actinomycetes, bind II, The Williams and Wilkins Co. 1961).
Kulturkaraktererne bestemtes efter 6-14 dages inkubering ved 30°C.
3 14933$
Tabel I
Kulturkarakterer
Nummeret på nogle af kulturmedierne refererer til dem der angives af Shirling ogr Gottlieb i Methods for characterization of Streptomyces species - Intern. J. System. Bact.
5 16, 313-340, 1966.
Kulturmedium Kulturkarakter
Medium nr. 2 (gærekstrakt- rigelig vækst, rynket overflade, 10 maltagar) lysebrun 12 H 12
Medium nr. 3 (havremels- sparsom vækst, tynd, lysorange agar) 9 B 6
Medium nr. 4 (uorganiske moderat vækst, skorpet overflade, salte-stivelsesagar) orange 11 L 12 15 Medium nr. 5 (glycerol- sparsom vækst, hyalin asparaginagar)
Medium nr. 6 (pepton-gær- sparsom vækst, hyalin til lysebrun eks trakt-j ernagar)
Medium nr. 7 (tyrosinagar) sparsom vækst, glat overflade, 20 brun 5 D 11
Havremelsagar (ifølge rigelig vækst, rynket overflade,
Waksman) orange til brun 12 C 10
Hickey og Tresners agar rigelig vækst, skorpet overflade, orange 11 G 8 25 Czapeks glukoseagar moderat vækst, skorpet overflade, orange 11 G 8 4 149336
Tabel I (fortsat)
Kulturmedium Kulturkarakter
Glukose-asparaginagar sparsom vækst, skorpet overflade, lysorange 11 F 6 5 Næringsagar moderat vækst, glat overflade, orange 11 G 8
Kartoffelagar rigelig vækst, rynket overflade, ravfarvet-brun 12 E 10
Bennets agar rigelig vækst, rynket overflade, 10 orange 11 C 8
Kalciummalatagar moderat vækst, glat overflade, lysorange 10 C 6
Skumraetmælksagar rigelig vækst, rynket overflade, orange 9 C 2 15 Czapeks agar moderat vækst, skorpet overflade, orange 10 D 7 Æg-agar moderat vækst, glat overflade, hyalin til lysorange
Pepton-glukoseagar rigelig vækst, rynket overflade, 20 orange 11 G 11
Agar meget sparsom vækst, glat over flade, hyalin
Loefflers serum meget sparsom vækst, glat over flade, orange 25 Kartoffel sparsom vækst, skorpet, lysebrun
Gelatine sparsom vækst, lysorange,
Cellulose meget sparsom vækst, tynd, hyalin
Udnyttelse af kulstofkilder
Tabel II viser udnyttelse af kulstofkilder undersøgt i 30 overensstemmelse med Pridham og Gottliebs metode (J. Bact. 56, 107, 1948).
149336 5
Tabel II
kulstofkilde Udnyttelse
Inositol
Fruktose + 5 Rhamnose +
Mannitol
Xylose +
Raffinose
Arabinose + 10 Cellulose
Sakkarose +
Glukose +
Mannose +
Laktose - 15 Salicin + + = positiv udnyttelse - = ingen vækst
Fysiologiske egenskaber
Tabel III viser de fysiologiske karakterer for stammen.
20 Tabel III
Prøve Resultat
Stivelseshydrolyse positiv I^S-dannelse positiv
Tyrosinase-reaktion negativ 25 Kasein-hydrolyse positiv
Opløseliggørelse af kalcium-malat negativ
Gelatinesmeltning positiv koagulering af lakmusmælk positiv 30 Peptonisering af lakmusmælk negativ
Nedbrydning af cellulose negativ 6 149336
Til fremstilling af antibiotikum A/16686 dyrkes stammen Actinoplanes sp. ATCC 33076 under aerobe betingelser i et vandigt næringsmedium indeholdende en assimilerbar kilde til kulstof, en assimilerbar kilde til nitrogen og uorganiske 5 salte. Dette dyrkningsmedium kan være et hvilket som helst af et antal næringsmedier der sædvanligvis bruges ved gæringer, men visse medier foretrækkes. Således er fx foretrukne kulstofkilder glukose, fruktose, mannose, sakkarose og lignende sukkerarter. Foretrukne nitrogenkilder er sojamel, pepton, 10 kødekstrakt, gærekstrakt, trypton, aminosyrer og lignende kom-plexe kilder. Blandt de uorganiske salte der kan inkorporeres i dyrkningsmediet er de sædvanlige opløselige salte med evne til at give ioner af natrium, kalium, jern, zink og kobolt, magnium, kalcium, ammonium, klorid, karbonat, sulfat, nitrat 15 og deslige. Som regel fordyrkes den antibiotikumproducerende stamme i en rystekolbe, hvorefter denne kultur bruges til at pode krukkefermentorer til produktion af væsentlige mængder antibiotikum A/16686. Det medium der bruges til forkulturen kan være det samme som det der bruges til større gæringer, 20 men der kan også bruges andre medier.
Den A/16686-producerende stamme kan dyrkes ved temperatuer mellem ca. 20°C og ca. 37°C og dyrkes fortrinsvis ved en temperatur på omkring 28-30°C.
Under gæringen kan antibiotikumproduktionen følges ved 25 at man undersøger prøver af gæringssuppen eller af ekstrakter af myceliefaststoffet for antibiotisk aktivitet.
Organismer der vides at være følsomme for antibiotikum A/16686 er nyttige til dette formål. En særlig nyttig prøveorganisme er Sarcina lutea. Biobestemmelsen udføres hensigts-30 mæssigt ved agar-diffusionsmetoden på agarplader. Maximal produktion af antibiotisk aktivitet forekommer i almindelighed mellem 3. og 5. dag. Det antibiotikum der.frembringes under gæringen med stammen Actinoplanes sp. ATCC 33076 findes både i gæringsmediet og i myceliemassen. Udvinding af antibio-35 tikum A/16686 kan derfor udføres ved særskilt ekstraktion af medium og mycelium.
Ekstraktion af myceliemassen udføres bedst med metanol, men andre lavtkogende alkanoler og kloroform egner sig også.
149336 7
Antibiotikum A/16686 udvindes som råprodukt fra ekstraktionsopløsningsmidlet ved rutineprocedurer. Analogt ekstraheres også mediet, fortrinsvis med n-butanol, og der vindes en yderligere mængde råt antibiotikum A/16686 ved fældning fra denne 5 opløsning. Rensning af det rå antibiotikum A/16686 opnås derefter ved at man behandler det produkt der er udvundet fra ekstraktions-opløsningsmidlerne med en opløsning af kloro-form/ætanol/vand 4:7:2, hvorefter man fraskiller det dannede olieagtige produkt og udhælder det i vand. Denne behandling 10 bevirker størkning af produktet som udvindes ved filtrering og renses yderligere ved søjlekromatografi på silikagel under eluering med en blanding af acetonitril og 0,01N HC1 1:1. Antibiotikum A/16686, som ved denne fremgangsmåde udvindes i form af hydrokloridet, udsaltes derefter ved kromatografering 15 på en tværbundet dextrangelkolonne.
Alle trin af den ovenfor beskrevne rensningsproces overvåges ved tyndlagskromatografi med anvendelse af et passende opløsningsmiddelsystem såsom et basisk opløsningsmiddelsystem, fx n-propanol/n-butanol/N-ammoniumhydroxyd 2:3:4 20 (øvre fase) eller metanol/10%s vandigt ammoniumacetat/10%s ammoniumhydroxyd 10:9:1, hvori et hvilket som helst syreadditionssalt af antibiotikum A/16686 omdannes til den fri base.
Alle de foran nævnte trin tager derfor sigte på at isolere rent antibiotikum A/16686, karakteriseret ved en særlig Rf-25 værdi i det særlige anvendte opløsningsmiddelsystem.
Der kan’hensigtsmæssigt også anvendes andre rensningsmetoder som indebærer konventionelle ekstraktions- og adsorb-tionsprocedurer. Disse alternative metoder kan let udformes, trin for trin, ved at man overvåger rensningens fremadskriden 30 ved tyndlagskromatografi som beskrevet foran. Når man følger TLC-pletten for antibiotikum A/16686 med en given Rf-værdi vil det således være klart for den sagkyndige hvilke operationer der hensigtsmæssigt kan udføres for at isoleren rent antibiotikum A/16686.
35 Eventuelt kan rent antibiotikum A/16686-hydroklorid, vundet på den måde der er beskrevet foran, derefter omdannes til den tilsvarende fri base eller til et andet fysiologisk acceptabelt syreadditionssalt på i og for sig sædvanlig måde.
8 149336
Antibiotikum A/16686 er et antimikrobielt middel og det er særlig aktivt mod grampositive mikroorganismer. Aktivitetspektret in vitro for antibiotikum A/16686 er vist summarisk i nedenstående tabel IV, hvor MIC står for mindste 5 inhiberende koncentration (i pg/ml).
Tabel IV
Organisme MIC (yg/ml)
Antibiotikum A/16686
Staphylococcus aureus ATCC 6538 0,16 10 Staphylococcus aureus ATCC 9144 0,16
Staphylococcus aureus Tour 0,31
Staphylococcus 10B Ciba 0,08 S. epidermidis ATCC 12228 0,08 S. saprophyticus NCTC 7292 0,16 15 M. flavus ATCC 10240 0,016 S. lutea ATCC 9341 0,02
Streptococcus pyogenes C 203 SKF 13400 0,01
Streptococcus pneumoniae Felton UC 41 0,05
Streptococcus faecalis ATCC 7080 0,31 20 S. foecium ATCC 10541 0,08 S. agalactiae ATCC 7077 0,02 S. mutans ATCC 27607 0,08 C. diphtheriae var.mitis ATCC 11051 0,31 C. xerosis NCTC 9755 0,02 25 Bacillus subtilis ATCC 6633 0,062 B. cereus var.mycoides ATCC 11778 0,08 C. perfringens ISS 30543 0,16 P. acnes ATCC 6919 0,4 P. acnes ATCC 6922 0,8 30 P. acnes ATCC 25746 0,4
Nedenstående tabel V viser resultater af forsøg hvor antibiotikum A/16686 blev afprøvet mellem forskellige klinisk isolerede stammer af.Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae og Streptococcus faecalis.
149336 9
Tabel V
Organisme MIC (yg/ml) _Antibiotikum A/16686
Staphylococcus aureus 54310 L 1096 0,62 5 " aureus 54560/1 L 1097 0,31 " aureus 54635 L 1098 0,31
Streptococcus pyogenes L 33 0,04 " pyogenes L 794 0,08 " pyogenes L 800 0,04 10 " pyogenes L 801 0,16 " pyogenes L 802 0,08 " pyogenes L 803 0,08 " pyogenes L· 804 0,62 " pyogenes L 805 0,08 15 Streptococcus pneumoniae L 1055 0,04 " pneumoniae L 1102 0,04 " pneumoniae L 1174 0,08
Streptococcus faecalis L 768 0,31 " faecalis L 876 0,31 20 " faecalis L 922 0,31 " faecalis L 949 0,31 " faecalis L 965 0,31 " faecalis L 1139 0,62 S. foecium L 763 0,16 25 Antibiotikum A/16686 har også vist sig at have en høj aktivitetsgrad. in vivo mod forskellige pathogene organismer. Effektiviteten af antibiotikum A/16686 ses let af nedenstående tabel VI, der giver ED5Q-værdierne hos mus mod tre forskellige mikroorganismer.
30 Tabel VI
ED50 mg/kg, subkutant
Staphylococcus Streptococcus Streptococcus aureus Tour pyogenes C203 pneumoniae _ISM_Felton UC 41 35 A/16686 24,6 0,09 0,2 10 149336
Antibiotikum A/16686 har vist sig at have forholdsvis lav toxicitet ved afprøvning på forsøgsdyr. Fx er LD^q-værdien når det antibiotiske stof indgives intraperitonealt hos mus mellem ca. 500 og ca. 750 mg/kg.
5 Antibiotikum A/16686 skal derfor bruges som antibak- terielt middel/ og med denne anvendelse sigtes til alle industrielt anvendelige aspekter af en sådan anvendelse, hertander inkorporering af antibiotikum A/16686 i farmaceutiske præparater.
10 Sådanne farmaceutiske præparater, egnet til oral, lo kal eller parenteral administration, fremstilles på de sædvanlige måder der er velkendt for.de kyndige i farmaceutisk teknik og videnskab. Eksempler på sådanne præparater er beskrevet fx i Remington's Pharmaceutical Sciences 15. udgave, 15 1975, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania. Disse for mer omfatter tabletter, kapsler, pulvere, salver, flydende opløsninger, opløsninger til injektion og lignende. Dosisenheden kan indeholde fra 0,5-99 og fortrinsvis fra 0,5-80% af den virksomme bestanddel. Den daglige dosis må bestemmes 20 under hensyn til en række faktorer såsom legemsvægt, infektionsorganismen, infektionens alvor og indgiftsmåden og -hyppigheden .
Til mere fuldstændigt at belyse fremgangsmåden ifølge opfindelsen henvises til de efterfølgende eksempler.
25 Eksempel 1 Gæring af stammen Actinoplanes sp. ATCC 33076
En kultur af Actinoplanes sp. ATCC 33076 dyrkes som forkultur ved rystekolbedyrkning i et medium med følgende sammensætning : 30 kødekstrakt 3 g/1 gærekstrakt 5 g/1 trypton 5 g/1 opløselig stivelse 24 g/1 glukose 1 g/1 35 CaC03 4 g/1 postevand 1 liter 149336 11
Kolberne rystes i ca. 96 timer ved 28-30°C og derefter bruges forkulturen (1 liter) til podning af krukkefermentorer der hver indeholder 10 liter af følgende næringsmedium: kødekstrakt 40 g 5 pepton 40 g gærekstrakt 10 g natriumklorid 25 g sojamel 100 g glukose 250 g 10 CaC03 50 g postevand 10 liter Gæringsportionerne inkuberes aerobt under omrøring ved 28-30°C. Med mellemrum bestemmes den antibiotiske aktivitet mikrobiologisk ved agar-diffusionsmetoden med Sarcina 15 lutea som testorganisme. Den maximale aktivitet nås efter 72-120 timers gæring.
Eksempel 2
Udvinding af antibiotikum A/16686
En fuld gæringssuppe (170 liter) fremstilles som be-20 skrevet i eksempel 1 afkøles til 10°C og bringes til pH 3,5 ved hjælp af 18%s HC1. Det resulterende sure medium filteres ved anvendelse af filterhjælp ("Clarcel Flow-Ma"), og mycelie-kagen vaskes med vand. Derefter behandles det filtrerede medium og myceliet videre hver for sig.
25 a) 30 liter metanol bruges til at ekstrahere myceliemas- sen som efter filtrering ekstraheres på ny med en blanding af metanol og vand (30 liter metanol plus 5 liter vand). Det udtømte mycelium kasseres og de to metanolekstrakter koncentreres under vakuum ved en temperatur på under 40°C for at 30 give 6 liter vandigt koncentrat. Dette vandige koncentrat ekstraheres med 3 portioner på hver 10 liter n-butanol, og de forenes og koncentreres til et ringe rumfang under vakuum.
Dette koncentrat sættes til petroleumsæter og det resulterende bundfald fraskilles ved dekantering og sættes til 35 en yderligere portion petroleumsæter. Bundfaldet fraskilles ved ... 149336 12 filtrering og tørres under vakuum ved stuetemperatur, hvorved der vindes 80 g antibiotikum A/16686 som et råmateriale med en MIC mod S. pneumoniae UC 41 på 0,1 yg/ml.
b) Det filtrerede medium plus vaskevæsker (165 liter) af-5 køles til 10°C og reguleres til pH 3,5 ved tilsætning af 2,5 liter koncentreret HC1. Den vundne opløsning ekstraheres med 80 liter n-butanol og den organiske ekstrakt koncentreres derefter under vakuum ved en temperatur på under 35°C, hvorved der fremkommer 6 liter butanolkoncentrat. Dette koncen-10 trat sættes til petroleumsæter og det vundne bundfald, der fraskilles ved dekantering, sættes til en yderligere portion petroleumsæter. Det faste stof fraskilles ved filtrering og tørres under vakuum ved stuetemperatur, og der vindes 26,3 g råt antibiotikum A/16686 med en MIC mod S. pneumoniae UC 41 .15 på 0,8 ug/ml.
Eksempel 3
Rensning af antibiotikum A/16686 47,7 g råt antibiotikum A/16686 vundet i eksempel 2 a) behandles med 1,4 liter af en blanding af kloroform/ætanol/ 20 vand 4:7:2 (rumfang), og det derved dannede olieagtige produkt skilles fra opløsningen ved dekantering. Yderligere 70 ml af ovennævnte blanding sættes herefter til det olieagtige produkt og adskillelsen gentages. Ved behandling af det olieagtige produkt med 440 ml vand størkner det, og det fraskilles . 25- ved centrifugering og filtrering.
a) Det faste stof som fraskilles suspenderes i 170 ml vand, opløses ved tilsætning af 400 ml metanol og filtreres. Deref.-ter afdampes opløsningsmidlerne under vakuum ved tilsætning af n-butanol ved en temperatur der aldrig er højere end 35°C, 30 og der opnås et butanolkoncentrat på ca. 50 ml. Ved tilsætning af 500 ml diætylæter danner der sig et bundfald som fraskilles ved filtrering og tørres under vakuum ved stuetemperatur, hvorved der vindes 1,012 g temmelig rent antibiotikum A/16686 med én MIC over'for S. pyogenes på 0,025 yg/ml. Det på denne måde 149336 13 vundne, temmelig rene antibiotikum A/16686 underkastes derefter. følgende rensningsprocesser: 1,58 g af nævnte antibiotikum A/16686, karakteriseret ved en MIC mod S. pyogenes på 0,025 yg/ml, opløses i acetoni-5 tril/vand 1:1 og den resulterende opløsning anbringes på en kolonne indeholdende 430 g silikagel 60 ("Merck" 0,06-0,2 mm), præpareret i samme blanding. Kolonnen fremkaldes ved at man først bruger samme blanding af acetonitril og vand og opsamler 70 fraktioner på hver 20 ml, og derefter eluerer med en blan-10 ding af lige rumfang acetonitril og N/100 HCl, hvoraf man opsamler yderligere 290 fraktioner på hver 20 ml. Elueringen af kolonnen overvåges ved tyndlagskromatografi på 60 F254 silika“ gelplader og ved bedømmelse af fraktionerne niod Sarcina lutea. Fraktionerne nr. 130 til 265 forenes og opløsningsmidlerne 15 afdampes under vakuum med n-butanol, hvorved der vindes et n-butanolkoncentrat på 20 ml. Dette residualrumfang udhældes i en stor mængde ætylæter og det dannede bundfald fraskilles ved filtrering og tørres under vakuum ved stuetemperatur over P205, hvorved der vindes 1,015 g antibiotikum A/16686.
20 0,67 g af denne substans opløses i 24 ml vand og 76 ml metanol. Den resulterende opløsning anbringes på en 3,0 x 62,0 cm stor kolonne indeholdende 220 g "Sephadex" ® LH-20, præpareret i metanol/vand 7:3 (rumfang). Kolonnen fremkaldes ved samme blanding under opsamling af fraktioner på 10 ml.
25 Fraktionerne nr. 24 til 32 forenes og opløsningsmidlerne af- dampes under vakuum ved en temperatur på under 35°C med n-bu- . tanol til et residual-butanolrumfang på ca. 10 ml. Denne opløsning sættes til ætylæter for at udfælde, det ønskede rene. antibiotikum A/16686. Bundfaldet fraskilles ved filtrering, 30 vaskes med ætylæter og tørres under vakuum over F2°5 ved stue“ temperatur, og der vindes 0,26 g rent antibiotikum A/16686.
b) Filtratet strippes under vakuum ved en temperatur på under 35°C ved tilsætning af n-butanol til frembringelse af et n-butanolkoncentrat på 50 ml. Ved tilsætning af petroleums-35 æter danner der sig et bundfald som fraskilles ved filtrering og tørres under vakuum ved stuetemperatur, hvorved der fremkommer 42,9 g delvis renset antibiotikum A/16686, kendetegnet 14 149336 ved en MIC-værdi mod Streptococcus pyogenes på 0,2 yg/ml.
Dette antibiotiske stof suspenderes i 2,5 liter vand og opløses ved tilsætning af IN NaOH indtil pH 7. Derefter ekstra-heres den dannede vandige opløsning med 3 portioner på hver 5 5 liter n-butanol, og efter at være blevet vasket med vand koncentreres denne organiske fase til 200 ml under vakuum ved en temperatur på under 35°C.
Ved tilsætning af diætylæter til koncentratet danner der sig et bundfald som filtreres og tørres under vakuum ved 10 stuetemperatur. Det tørrede produkt opløses i 160 ml af det øvre lag af en blanding af n-propanol/n-butanol/lN ammonium-hydroxyd 2:3:4 (rumfang). Den resulterende opløsning anbringes på en 100 cm høj kolonne med en diameter på 7,5 cm og indeholdende 1,7 kg silikagel 60 ("Merck" 0,06-0,2 mm), tilbe-15 redt i ovennævnte opløsningsmiddelblanding. Kolonnen fremkaldes ved hjælp af samme blanding under opsamling af fraktioner på 300 ml. Elueringen af kolonnen overvåges ved tyndlagskromatografi. Fraktionerne nr. 21 til 26 forenes og strippes under vakuum ved en temperatur på under 35°C med n-butanol, 20 hvorved der fremkommer et n-butanolkoncentrat på 50 ml. Ved tilsætning af diætylæter danner der sig et bundfald som fraskilles ved filtrering, vaskes med diætylæter og tørres under vakuum over P2°5 ve<^ stuetemperatur. Der vindes et udbytte på 1,875 g temmelig rent antibiotikum A/16686, som derefter ren-25 ses yderligere på samme måde som beskrevet foran under a).
Antibiotikum A/16686 er i form af hydrokloridet et hvidt krystallinsk materiale som er svagt hygroskopisk og som smelter ved 224-226°C. Det er meget opløseligt i vand og di-metylformamid, opløseligt i metanol, ætanol, propanol og buta-30 nol, men uopløseligt i ætylæter, petroleumsæter og benzen.
Elementæranalyse af antibiotikum A/16686-hydroklorid, i forvejen tørret ved 140°C under en inert atmosfære, viser følgende tilnærmede procentuelle sammensætning, fremkommet som gennemsnit af flere analyser: kulstof 51,73%, hydrogen 6,34%, 35 nitrogen 9,96%, klor (totalindhold) 5,84%, kloridioner 4,74%, rest 1%. Det infrarøde spektrum i nujol er vist på fig. 1.
Følgende absorptionsmaxima er konstateret:3290-3070, 2930 og 2860 (nujol), 1765, 1630, 1510, 1455, 1375 (nujol), 1230, 149336 15 1175, 1130, 1065, 1030, 1015, 980, 840 og 820 cm-1.
Det ultraviolette absorptionsspektrum ses 1 fig. 2 og har følgende absorptionsmaxima: la i a a) i metanol 232 nm (E^cin = 178) og 265 nm (Ej_ = 10?)» 5b) i metanol indeholdende 0,1N HCl: 231 nm (E, = 167) i a lem og 270 nm (E^cm = 96); c) i metanol indeholdende 0,1N NaOH: 250 nm (E?-^ = 232) lem og 295 nm (skulder); 1% d) i metanol indeholdende pH 7/38 puffer: 231 nm 55 10 167) og 270 nm (E^m = 96) .
De ultraviolette absorptionsspektre blev konstateret ved hjælp af et "Beckmann" DK-2 spektrofotometer.
Antibiotikum A/16686-hydroklorid har en optisk drejning, [a]^, på +49,7° (c = 0,43% i DMF) .
15 Antibiotikum A/16686 udviser følgende karakteristiske reaktioner: ninhydrin (3%s ætanolisk opløsning) negativ ninhydrin (3%s ætanolisk opløsning + natriumacetat) positiv 20 1% FeCl3 - .1% K3Fe(CN)g (vandig opløsning) positiv (grøn)
Molisch's reaktion positiv
Fehling's reaktion negativ
Biuret-reaktion positiv 25 Anthron-reaktion positiv
Millon's reaktion negativ
Koncentreret H2S04 negativ
Vandigt KMnO^ positiv
Rf-værdierne for antibiotikum A/16686 ved papirkroma-30 tografi med forskellige elueringssystemer og Staphylococcus aureus ATCC 6538 som organisme til opdagelsen anføres i føl-r gende tabel.
Tabel VII
149336 16
Kromatografisk opførsel af antibiotikum A/16686 ("Whatman" nr. 1 papir; nedadløbende kromatografering, Km 40 cm, mængder: 20 yg af forbindelsen opløst i vandig metanol (2 mg/ml)).
5 Elueringssystem Rf-værdi 1) n-butanol mættet med Sorensens puffer pH 6,0 0,00 2) n-butanol mættet med vand indeholdende 2% p-toluensulfonsyre 0,00 10 3) n-butanol mættet med vand indeholdende 2% ammoniumhydroxyd 0,00 4) Sorensens puffer, pH 6,0, mættet med n- butanol 0,05 5) n-butanol/metanol/vand 4:1:2 0,43 15 6) ætylacetat mættet med vand 0,00 7) n-butanol/eddikesyre/vand 2:1:1 0,52 8) n-butanol/pyridin/vand 4:3:7 0,87
Rf-værdierne for antibiotikum A/16686 i forskellige tyndlags-kromatografisystemer er anført i tabel VIII. Betin-20 gelserne var følgende: Rm: ca. 140 mm. Mængder: 2-5 yl af en opløsning (1 mg/ml) af forbindelsen i acetonitril/vand 1:1. Synliggørelse: a) bioautografering på agarplader podet med Bacillus subtilis ATCC 6633; b) karbonisering ved opvarmning med α-naftol-svovlsyre; c) joddamp; d) klor-toluidin-reagens; 25 e) UV-lys ved 254 nm.
System 1) til 7): Silikagel 60 F254^plader ("Merck"); synliggørelse a, e; b, c, d, e.
System 8) og 9): Silikagel 60 F^4 silaniseret ("Merck"); synliggørelse e.
30 System 10) og 11): Cellulose F plader ("Merck"); synlig- / gøreise a.
149336 17
Tabel VIII__
Elueringssystem (rumfangsforhold) _Rf-vardi I) n-propanol/n-butanol/N ammoniumhydroxyd 2:3:4 (øvre fase) 0,15 5 2) n-butanol/eddikesyre/vand 4:2:5 0,61 3) n-butanol/ætanol/O,IN saltsyre 0,61 4) kloro£orm/ætanol/10%s eddikesyre 4:7:2 0,00 5) n-butanol/eddikesyre/vand 4:1:5 0,17 6) metanol/10%s vandigs ammoniumacetat/10%s 10 ammoniumhydroxyd 10:9:1 0,52 7) n-butanol/pyridin/vand/eddikesyre 6:4:3:1 0,45 8) metanol/10Ss vandigt ammoniumacetat/10%s ammoniumhydroxyd 10:9:1 0,11 9) 0,25M vandigt NaH2P04/acetonitril 1:1 0,68 15 10) metanol/10%s vandigt ammoniumacetat 1:1 0,65 II) n-butanol/eddikesyre/vand 4:2:5 0,77
Som bestemt ved højpålidelige kromatografiteknikker består antibiotikum A/16686, isoleret og renset som beskrevet i eksempel 3, af en hovedkomponent som andrager 70-80%, mens 20 de resterende 30-20% kan tilskrives mindst to mindre komponenter.
Antibiotikum A/16686-hydroklorid, isoleret som beskrevet i de foregående eksempler, er hydrokloridet af et klorhol-digt basisk glykopeptid som afviger fra antibiotika hørende 25 den klassiske glykopeptidgruppe ved at indeholde klor og i arten af dets aminosyrekomponenter. Aminosyreanalyse af antibiotikum A/16686 efter sur hydrolyse i 6N saltsyre ved 110°C 6 timer viste ved hjælp af en aminosyre-autoanalysator, tilstedeværelse af følgende aminosyrer: ornitin (118 yg/mg = 30 0,58 yM/mg), asparaginsyre (29,2 yg/mg =0,22 yM/rag), treonin (68 yg/mg = 0,57 yM/mg), glycin (25 yg/mg =0,33 yM/mg), alanin (29 yg/mg = 0,32 yM/mg), leucin (41 yg/mg = 0,31 yM/mg) og fenylalanin (42 yg/mg =0,25 yM/mg).
Der opdagedes yderligere fire toppe ved anvendelse af 35 kolonnen til neutrale og sure aminosyrer. To af disse fire aminosyrer blev identificeret ved hjælp af gaskromatografi- 18 149336 massespektrometri efter omdannelse til deres tilsvarende me-tylester-trifluoracetylderivater, og de blev tilskrevet følgende strukturer: ?H OH Cl (O) |J8J)
T T
CH—NH0 CH-NH0
i I
COOH I COOH II
5 Eksempel 4
Isolering af den fri base
Ved behandling af en opløsning af 0,05 g antibiotikum A/16686-hydroklorid i 3 ml vand og 8 ml ætanol med 2 ml 1,2-epoxybutan danner der sig et bundfald som efter henståen ved 10 en lav temperatur i 1 døgn fraskilles ved centrifugering, vaskes med ætanol og tørres over P2°5 un<^er vakuum ved stuetemperatur, hvorved der vindes 0,016 g af den tilsvarende fri base.
Behandling af denne fri basiske form af antibiotikum 15 A/16686 med en farmaceutisk acceptabel, uorganisk eller orga nisk syre fører til dannelse af det tilsvarende syreadditionssalt. Eksempler på farmaceutisk acceptable syrer er ugiftige syrer som egner sig til dannelse af terapeutisk anvendelige salte og som i og for sig kendes i teknikken, fx saltsyre, 20 brombrintesyre, svovlsyre, fosforsyre, salpetersyre, vinsyre, eddikesyre, ravsyre, mælkesyre, glutaminsyre og metansulfon-syre.

Claims (5)

149336
1. Fremgangsmåde til fremstilling af antibiotikum A/16686 i form af den fri base eller et fysiologisk acceptabelt syreadditionssalt deraf, hvilket antibiotikum i form af hydroklo-5 ridet har følgende egenskaber: A) er et hvidt krystallinsk materiale med smp. 224-226°C, B) er letopløseligt i vand og dimetylformamid, opløseligt i metanol, ætanol, propanol og butanol og uopløseligt i ætylæter, petroleumsæter og benzen,
10 C) har tilnærmelsesvis den elementære sammensætning 51,73% C, 6,34% H, 9,96% N, 5,84% Cl (ialt), 4,74% Cl-ion og 1% rest, D) Infrarødt absorptionsspektrum i nujol som vist i fig. 1 og med følgende konstaterbare absorptionsmaxima: 3290-3070, 15 2930 og 2860 (nujol), 1765, 1630, 1510, 1455, 1375 (nujol), 1230, 1175, 1130, 1065, 1030, 1015, 980, 840 og 820 cm-1, E) ultraviolet absorptionsspektrum som vist i fig. 2 og med følgende absorptionsmaxima: a) i metanol: 232 nm (E^ = 178) og 265 nm (E^_ = 107), lem 3 lem 20 b) i metanol indeholdende 0,1N HCl: 231 nm (E2Cm = 167) og 270 nm (E^° = 96), c) i metanol indeholdende 0,1N NaOH: 250 nm = 232) og 295 nm (skulder), og 1% d) i metanol indeholde pH 7,38 puffer: 231 nm = 25 167) og 270 nm (E^m = 96) , F) optisk drejning [a]^4 = +49,7° (c = 0,43% i DMF) , G) følgende karakteristiske reaktioner: ninhydrin (3% ætanolisk opløsning) negativ ninhydrin ( do 30. natriumacetat) positiv 1% FeCl^ - 1% K.jFe(CN)g positiv (grøn) Molish positiv Fehling negativ
35 Biuret positiv Anthron positiv i 149336 Milion negativ kone. H2S04 negativ KMnO^ positiv H) følgende papirkromatografi-værdier på "Whatman" nr. 1 5 papir med S. aureus ATCC 6538 som opdagelsesorganisme: I) n-butanol mættet med Sorensen puffer pH 6,0 0,00 2. n-butanol mættet med vand med 2% p-toluensul- fonsyre 0,00 3. n-butanol mættet med vand med 2% ammonium- 10 hydroxyd 0,00
4. Sorensen puffer, pH 6,0, mættet med n-butanol 0,05 5. n-butanol/metanol/vand 4:1:2 0,43 6) ætylacetat mættet med vand 0,00 7. n-butanol/eddikesyre/vand 2:1:1 0,52 15 8) n-butanol/pyridin/vand 4:3:7 0,87 I) følgende Rf-værdier ved forskellige tyndlagskromatogra- fisysterner: I) n-propanol/n-butanol/N ammoniumhydroxyd 2:3:4 (øvre fase) 0,15 20 2) n-butanol/eddikesyre/vand 4:2:5 0,61 3. n-butanol/ætanol/Ο,ΙΝ saltsyre 0,61 4. kloroform/ætanol/10%s eddikesyre 4:7:2 0,00 5. n-butanol/eddikesyre/vand 4:1:5 0,17 6. metanol/10%s vandigt ammoniumacetat/10%s ammo- 25 niumhydroxyd 10:9:1 0,52 7. n-butanol/pyridin/vand/eddikesyre 6:4:3:1 0,45 8. metanol/10%s vandigt ammoniumacetat/10%s ammoniumhydroxyd 10:9:1 0,11 9) 0,25M vandigt NaH2PC>4/acetonitril 1:1 0,68 30 10) metanol/10%s vandigt ammoniumacetat 1:1 0,65 II) n-butanol/eddikesyre/vand 4:2:5 0,77 I) til 7) på silikagel 60 F2g4 plader? 8), 9) på silikagel 60 F254 silaniseret og 10), 11) på cellulose F plader, J) aminosyreanalyse efter sur hydrolyse i 6N saltsyre ved 35 110°C i 6 timer visende mindst følgende genkendte aminosyrer: ornitin, asparaginsyre, treonin, glycin, alanin, leuein, fenyl-alanin, p-hydroxyfenylglycin og hydroxy, klor-substitueret fe-nylglycin,
DK140080A 1979-04-07 1980-04-01 Fremgangsmaade til fremstilling af antibiotikum a/16686 eller syreadditionssalte deraf DK149336C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB7912298 1979-04-07
GB7912298 1979-04-07

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK140080A DK140080A (da) 1980-10-08
DK149336B true DK149336B (da) 1986-05-05
DK149336C DK149336C (da) 1986-10-13

Family

ID=10504421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK140080A DK149336C (da) 1979-04-07 1980-04-01 Fremgangsmaade til fremstilling af antibiotikum a/16686 eller syreadditionssalte deraf

Country Status (30)

Country Link
US (2) US4303646A (da)
JP (2) JPS5697237A (da)
AR (1) AR222217A1 (da)
AT (1) AT370130B (da)
AU (2) AU533951B2 (da)
BE (1) BE882632A (da)
CA (1) CA1142866A (da)
CH (1) CH655515B (da)
DE (1) DE3013246A1 (da)
DK (1) DK149336C (da)
ES (1) ES490236A0 (da)
FI (1) FI65630C (da)
FR (1) FR2452931A1 (da)
GR (1) GR67279B (da)
HK (1) HK23584A (da)
HU (1) HU181534B (da)
IE (1) IE49327B1 (da)
IL (1) IL59704A (da)
IT (1) IT1212411B (da)
LU (1) LU82327A1 (da)
MX (1) MX5958E (da)
NL (1) NL192989C (da)
NO (1) NO155496C (da)
NZ (1) NZ193357A (da)
PH (1) PH17230A (da)
PT (1) PT71064A (da)
SE (1) SE441188B (da)
SG (1) SG22687G (da)
YU (1) YU41917B (da)
ZA (1) ZA801629B (da)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3163075D1 (en) 1980-08-16 1984-05-17 Lepetit Spa Antibiotic a/16686 factor a2, the process for the preparation thereof, and the co-produced antibiotic a/16686 factors a1 and a3
US4375513A (en) * 1980-12-18 1983-03-01 Eli Lilly And Company Biologically pure culture of Actinoplanes missouriensis
US4613503A (en) * 1984-10-11 1986-09-23 The Dow Chemical Company Antibiotic A26201-1 and antibiotic A26201-2 produced by a novel strain of actinoplanes
US4859599A (en) * 1984-10-11 1989-08-22 The Dow Chemical Company Antibiotic A26201-1 and antibiotic A26201-2 produced by a novel strain of actinoplanes
GB8624806D0 (en) * 1986-10-16 1986-11-19 Pfizer Ltd Glycopeptide antibiotic
GB8720980D0 (en) * 1987-09-07 1987-10-14 Lepetit Spa Derivatives
GB8729989D0 (en) * 1987-12-23 1988-02-03 Lepetit Spa Novel hydrogenated derivatives of antibiotic a/16686
GB8808658D0 (en) * 1988-04-13 1988-05-18 Lepetit Spa Aglycons of a/16686 antibiotics
WO2001053533A2 (en) * 2000-01-21 2001-07-26 Kosan Biosciences, Inc. Method for cloning polyketide synthase genes
US7257562B2 (en) * 2000-10-13 2007-08-14 Thallion Pharmaceuticals Inc. High throughput method for discovery of gene clusters
DE60109952T2 (de) * 2000-10-13 2006-02-09 Ecopia Biosciences Inc., Saint-Laurent Ramoplaninbiosynthesegenkluster
US20030211567A1 (en) * 2001-07-24 2003-11-13 Ecopia Biosciences, Inc. Compositions, methods and systems for discovery of lipopeptides
JP2005529852A (ja) * 2002-03-08 2005-10-06 ビクロン・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツド ラモプラニン−様アミド誘導体の製造法
CA2430580A1 (en) * 2002-04-17 2003-09-04 Ecopia Biosciences Inc. Specialized dual condensation/epimerization domain in non-ribosomal peptide synthetase systems
US7317001B2 (en) * 2002-06-06 2008-01-08 Oscient Pharmaceuticals Corporation Use of ramoplanin to treat diseases associated with the use of antibiotics
AU2003274927A1 (en) * 2002-08-23 2004-03-11 Genome Therapeutics Corporation Methods and reagents for preventing bacteremias
US20040127403A1 (en) * 2002-09-06 2004-07-01 Francesco Parenti Methods for treating and preventing Gram-positive bacteremias
US20050043223A1 (en) * 2003-04-25 2005-02-24 Leach Timothy S. Methods for reducing or preventing transmission of nosocomial pathogens in a health care facility
CA2945768A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Nanotherapeutics, Inc. Methods of treatment of c. difficile spores with ramoplanin
US20180002741A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Method of diagnosis and treating gastrointestinal and neurological diseases associated with species of genus clostridium

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE790627A (fr) * 1971-10-27 1973-04-27 Lilly Co Eli L'antibiotique a477 et son procede de preparation
GB1458512A (en) * 1973-11-22 1976-12-15 Lepetit Spa Antibiotic substance
US4038383A (en) * 1975-01-17 1977-07-26 Pfizer Inc. Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes
US4001397A (en) * 1975-08-11 1977-01-04 Pfizer Inc. Antibiotic compound 41,012
US4115552A (en) * 1976-04-19 1978-09-19 Eli Lilly And Company Factor A and B of antibiotic A-4696
US4169887A (en) * 1978-02-21 1979-10-02 Pfizer Inc. Antibiotics produced by species of actinoplanes
JPS54135703A (en) * 1978-04-11 1979-10-22 Dainippon Pharmaceut Co Ltd Antibiotic ab-102 and preparation thereof

Also Published As

Publication number Publication date
NL192989B (nl) 1998-03-02
DK149336C (da) 1986-10-13
SG22687G (en) 1989-07-07
HU181534B (en) 1983-10-28
NO155496B (no) 1986-12-29
IE49327B1 (en) 1985-09-18
NL8001982A (nl) 1980-10-09
IT1212411B (it) 1989-11-22
YU41917B (en) 1988-02-29
FR2452931B1 (da) 1983-07-01
IL59704A (en) 1983-11-30
ES8103170A1 (es) 1981-02-16
US4328316A (en) 1982-05-04
FI65630B (fi) 1984-02-29
FI800881A (fi) 1980-10-08
SE8002601L (sv) 1980-12-01
PH17230A (en) 1984-07-03
DE3013246C2 (da) 1987-11-19
JPS6320514B2 (da) 1988-04-27
US4303646A (en) 1981-12-01
CH655515B (da) 1986-04-30
JPS5697237A (en) 1981-08-05
NO155496C (no) 1987-04-08
NO800869L (no) 1980-10-08
GR67279B (da) 1981-06-26
MX5958E (es) 1984-09-06
BE882632A (fr) 1980-10-03
JPS6251274B2 (da) 1987-10-29
CA1142866A (en) 1983-03-15
ES490236A0 (es) 1981-02-16
LU82327A1 (fr) 1981-12-02
PT71064A (en) 1980-05-01
AU5903680A (en) 1980-12-11
ZA801629B (en) 1981-03-25
IL59704A0 (en) 1980-06-30
FR2452931A1 (fr) 1980-10-31
AU533951B2 (en) 1983-12-22
AT370130B (de) 1983-03-10
IT8021162A0 (it) 1980-04-03
DK140080A (da) 1980-10-08
FI65630C (fi) 1984-06-11
AU535727B2 (en) 1984-04-05
NL192989C (nl) 1998-07-03
IE800697L (en) 1980-10-07
YU93580A (en) 1983-06-30
DE3013246A1 (de) 1980-10-16
AR222217A1 (es) 1981-04-30
AU5703680A (en) 1980-10-09
JPS62282579A (ja) 1987-12-08
NZ193357A (en) 1982-12-07
ATA187480A (de) 1982-07-15
HK23584A (en) 1984-03-23
SE441188B (sv) 1985-09-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK149336B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af antibiotikum a/16686 eller syreadditionssalte deraf
US5278052A (en) Process for the simultaneous production of benanomicins A and B
EP0231111B1 (en) Glycopeptide antibiotics, their preparation and use and microorganisms for producing them
EP0046201B1 (en) Antibiotic a/16686 factor a2, the process for the preparation thereof, and the co-produced antibiotic a/16686 factors a1 and a3
JPH0216756B2 (da)
EP1285928B1 (en) Antibiotics tripropeptins and process for producing the same
NL8501708A (nl) Antitumor antibioticum.
AU752169B2 (en) Macrolides with antitumor activity
US5109122A (en) Antibiotics, dexylosylbenanomicin B
US5451581A (en) Antibiotic LL-14E605β and O-methyl-LL-14E605β
US5098708A (en) Antiviral antibiotic BU-3889V
GB2045231A (en) Antibiotic A/16686 and its preparation from actinoplanes
WO1989002441A1 (en) Antibiotic compounds
KR830001443B1 (ko) 항생물질 a/16686의 제법
CA1090728A (en) Antibiotic a-7413 mixture comprising factors a,b,c and d and a process for producing it
US5140101A (en) Antiviral antibiotic BU-4344V
CA1086669A (en) Antibiotic substance
CA2006342A1 (en) Antibiotic a80915 and process for its production
US5256548A (en) Antiviral antibiotic BU-4344V
CA2110854A1 (en) Antiviral antibiotic bu-4628v and preparation thereof
GB2159150A (en) Antibiotics do-248-a and b and their preparation
US4010075A (en) Process for producing 4-thiouracil
CA2110827A1 (en) Antiviral antibiotic bu-4724v and preparation thereof
EP0515927A2 (en) Pradimicin antibiotics
JP2000239292A (ja) 抗mrsa抗生物質

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired