HU184256B - Process for producing citostatic antibiotic complexes - Google Patents

Process for producing citostatic antibiotic complexes Download PDF

Info

Publication number
HU184256B
HU184256B HU80775A HU77580A HU184256B HU 184256 B HU184256 B HU 184256B HU 80775 A HU80775 A HU 80775A HU 77580 A HU77580 A HU 77580A HU 184256 B HU184256 B HU 184256B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
bbm
methanol
chloroform
butanol
water
Prior art date
Application number
HU80775A
Other languages
English (en)
Inventor
Hideo Koshiyama
Fumihide Sakay
Hiroaki Ohkuma
Original Assignee
Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Co filed Critical Bristol Myers Co
Publication of HU184256B publication Critical patent/HU184256B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás rákellenes hatású antibiotikum-komplex, valamint egyes komponenseknek előállítására.
A mellékelt spektrumok és az ismertetett fizikai-kémiai adatok alapján a jelen leírásban ismertetett rákellenes hatású antibiotikum-komplex szerkezetileg hasonló a Dell és munkatársai által leírt kinoxalin típusú echinomicinhez [J. Am. Chem. Soc., 97,2497 (1975)], a Shoji és munkatársai által leírt kinomicinhez [J. Antibiotics, 14A, 335 (1961)] és a triosztin C-hez [Merck Index, 9. kiadás, 9399)]. A tárgyalt rákellenes hatású antibiotikum-komplex azonban a következőkben különbözik ezektől az antibiotikumoktól:
1. A teljes komplex és komponensei az aktinoleukin antibiotikum-csoportra jellemző kinoxalin helyett kinolin magot tartalmaznak kromofórként.
2. A teljes komplex és komponensei az· aktinoleukin antibiotikumok szerkezetében előforduló diszulfid vagy tioacetál-híddal ellentétben nem tartalmaznak kénatomot.
3. A teljes komplex és komponensei az aktinoleukinokhoz képest, melyek jó baktériumellenes antibiotikumok, viszonylag gyenge mikróbaellenes hatást mutatnak.
A találmány tárgya eljárás új rákellenes hatású antibiotikum-komplex (jele BBM-928) előállítására. A legalább hat komponenst tartalmazó komplex előállításához a találmány szerinti eljárás előnyös kivitelezési módja szerint úgy járunk el, hogy egy a ΒΒΜ-928-at termelő Actinomyces-t (ATCC 31 491), vagy ennek egy mutánsát használjuk süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, vizes táptalajban. A találmány tárgya továbbá eljárás a BBM-928 komplex kinyerésére a táptalajból és a komplex szétválasztására biológiailag aktív komponenseire ellenáramú megoszlási és kromatográfiás technikák alkalmazásával.
A találmány oltalmi köre kiterjed a BBM-928 komplex és a biológiailag aktív komponensek, a BBM-928 A, B, C, D, E és F előállítására. A leírás további részében elsősorban a BBM-928 A, B, C és D komponensekkel foglalkozunk, melyek híg oldatokban, valódi sűrítményekben és tisztított alakban léteznek.
A következőkben ismertetjük az egyes komponensek spektrumait.
Az 1. ábra a BBM-928 A kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be.
A 2. ábra a BBM-928 B kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be.
A 3. ábra a BBM-928 C kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be.
A 4. ábra a BBM-928 D kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be.
Az 5. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 A-nak 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként.
A 6. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 B-nek 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként.
A 7. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 C-nek 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia 2 spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként.
A 8. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 D-nek 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként.
A találmány tárgya eljárás új, BBM-928 jelű rákellenes hatású antibiotikum-komplex előállítására. A komplex szerkezetileg feltételezhetően az aktinoleukin antibiotikum-csoporthoz tartozik, és egy eddig nem azonosított Aktinomyces törzs tenyésztése során keletkezik. Bármelyik, a BBM-928 termelésére képes Aktinomyces használható a termelő táptalajban, előnyösen a Bristol-Banyu törzsgyűjteményben G455-101 számmal letétbe helyezett Aktinomyces törzs. A mikroorganizmust a Fülöp-szigeteken gyűjtött talajmintából izoláltuk, és az Amerikai Nemzeti Törzsgyűjteményben ATCC 31 491 számon helyeztük letétbe. A jelen találmányban tárgyalt új, rákellenes hatású antibiotikum-komplex hat komponensből áll, ezeket BBM-928 A, B, C, D, E és F betűkkel jelöljük. A BBM-928 komplex A, B, C és D komponenseit kristályos formában izoláltuk, A, B és C kémiai szerkezetét meghatároztuk. A szabadalomban szereplő komplex és az egyes komponensei rákellenes hatással rendelkeznek.
Ami a baktériumellenes hatást illeti, a komplex és egyes komponensei állati tápszer kiegészítőként, valamint emlősöknél bakteriális fertőzés elleni terápiás hatású szerként használhatók. Az említett antibiotikumokat ezenkívül laboratóriumi üvegeszközök, valamint sebészeti eszközök tisztítására és sterilezésére használhatjuk, közegészségügyi célokra pedig szappanokkal, detergensekkel és vizes oldatokkal kombinálva alkalmazhatjuk. A komplex és egyes komponensei igen hatásosak különféle, egérbe intraperitoneálisan beültetett rákos daganat ellen.
A következőkben a BBM-928 rákellenes hatású antibiotikum-komplexet termelő, kiválasztott organizmus általános leírását adjuk meg. A standard taxonómiai módszerekkel [Shirling és munkatársai, Int. J. Syst. Bacteriol., 16, 313 (1966), valamint Lechevalier és munkatársai, Bioi. Actinomycetes Related Org., 11, 78 (1976)] összhangban megfigyeltük az organizmus tenyésztési, élettani és morfológiai tulajdonságait.
A G455-101 törzs táptalaj és légmicéliumot is fejleszt, a táptalaj-micélium jól fejlett, hosszú és elágazó (0,5-0,8 μ átmérőjű). A táptalaj-micélium határozott töredezését nem figyeltük meg. A közönséges Streptomyces fajoktól eltérően, a G455-101 törzsnek csak rövid vagy csökevényes légmicéliuma van, néhány agar-táptalajon nem fejleszt légmicéliumot.
A légmicéliumon rövid vagy hosszú spóra-láncok képződnék, melyek egy láncban 2-50 ovális spórát tartalmaznak (legtöbbször 5-20 spórát). A spóraláncok egyenesek, hajlékonyak vagy hurkot képeznek. A spórák gömbölyűek (0,3-0,4 μ), oválisak vagy hengeresek (0,3 X 1,5-3,0 μ) és sima felületüek. A spórákat gyakran üres fonalak választják el egymástól. A légmicéliumon alkalmanként alaktalan spóratartószerű képződmény figyelhető meg, mely rövid, összecsavarodott spóraláncokat borít.
A G455—101 törzs sejtfala mezo-diamino-pimelinsavat tartalmaz, de nem tartalmaz glicint. A teljes sejthidrolizátumban glükózt, mannózt és madurózt (3-0-metil-D-galaktóz) találtunk. A fent említett sejtfal-össze-21
184 256 tétel és az egész sejt cukorkomponensei arra utalnak, hogy a G455-101 törzs III B sejtfaltípussal rendelkező Aktinomyces faj.
A G455-101 törzs jól nő, rózsaszínű vagy szürkés légmicéliumot fejleszt, és vöröses vízoldható színanyagot 5 termel szerves nitrogént bőségesen tartalmazó agar-táptalajon, mint például az élesztőkivonat-malátakivonat- és zabliszt tartalmú agaron. A szervetlen sókat és keményítőt, a glicerint és aszparagint tartalmazó, valamint a tirozin-agaron azonban gyengén nő, fehér vagy drapp színű 1 o csökevényes légmicéliumot képez, és kevés vöröses színanyagot termel. Melanoid színanyagot nem termel a pepton-élesztő-vas-agaron és a tirozin-agaron. A nitrátot nitritté redukálja. Jól nő 28 °C-on, 37 °C-on és 45 °Gon, de nem nő 10 °C-on és 50 °C-on. A törzs jól 15 hasznosítja a pentózokat és a hexózokat. A G455-101 törzs tenyésztési és élettani jellemzőit az 1. és 2. táblázatban mutatjuk be.
A G455-1Q1 törzs élettani jellemzői
Vizsgálat Válasz
Nitrát-redukció Pozitív
Nitrát-redukció Pozitív
Kazein-hidrolízis Gyengén
agar-táptalajban Fölözött tej pozitív
koagulálás Pozitív
Zselatin elfolyósítás Negatív
Kénhidrogén- termelés L-ciszteinból Pozitív
2. táblázat
Módszer és táptalaj
Szervetlen táptalaj: Czapek szacharóz-nitrát táptalaj Szerves táptalaj: 0,5% élesztőkivonat: 1,0% glükóz 0,5% kálium-nitrát 0,1% kalcium-karbonát Luedemann agar táptalaj
A G455-101* törzs tenyészeti jellemzői
1. Czapek agar (szacharóz-nitrát-agar)
2. Trypton-élesztőkivonat táptalaj (ISP 1.)
3. Élesztőkivonat-maláta-kivonat-agar (ISP 2.)
4. Zabliszt-agar (ISP 3.)
5. Szervetlen sók-keményítő-agar (ISP 4.)
6. Glicerin-aszparagin-agar (ISP 5.)
7. Pepton-élesztőkivonat-vas-agar (ISP 6.)
8. Tirozin-agar (ISP 7.)
9. Glükóz-ammónium-sók-agar
10. Bennett-agar
I. táblázat ?q
G** nem nő, vagy csekély növekedés
R sötétvörös
A fehér vagy halvány 25 rózsaszín
D nincs közepes növekedés, pelyhes üledékes, nincs színanyag
G bőséges 30
R mélyvöröstől vörösesbarnáig
A bőséges, szürkés rózsaszíntől bíboros rózsaszínig
D nincs 35
G bőséges
R erős sárgáspiros
A közepes, rózsaszín
D szürkés sárga
G gyenge
R világos sárgásbarnától sötétvörösig
A kevés fehértől drappig
D nincs
G gyenge
R sárgás rózsaszíntől vörösesbarnáig «g
A kevés, fehér 0
D nincs
G gyenge, ráncos
R erős vöröses narancs
A nincs
D világos sárgás narancs __
G gyenge
R sötétvörös
A kevés, fehér
D nincs
G gyenge
R vörösesbarna
A kevés, világosszürke 55
D nincs
G közepes
R vörösesbarna
A korlátozott szürkés rózsaszín
D nincs θθ
Melanoid-képződés Negatív
Ka taláz-re akció Pozitív
Oxidáz-re akció Pozitív
Növekedési Jó növe-
hőmérséklet kedés 28, 37 és 45’C-on Gyenge növekedés 20’C-on. Nem nő 1 és50’C-o
15% zselatin tripton-élesztőkivonat, táptalaj (ISP 1. táptalaj) L-cisztein (0-1%) tripton-élesztőkivonat táptalajban (ISP 1. táptalaj) plusz agar.
A kénhidrogént 10%-os vizes ólom-acetát oldattal átitatott papírcsíkkal detektáltuk. Pepton-élesztő-vas-agar (ISP 6.) és tirozin-agar (ISP 7.) Hidrogén-peroxid vizes oldat Kovács-reagens
Bennett agar
3. táblázat
A G455-101 törzs szénhidrát-forrás hasznosítása
PG Lm
1. Glicerin + + +
2. D(-)-Arabinóz + +
3. L(+)-Arabin óz + +
4. D-Xilóz + + +
5. D-Ribóz + + +
6. L-Rammóz + + +
7. D-Glükóz + +
8. D-Gal aktóz ++ +
9. D-Fruktóz + + +
10. D-Mannóz + + +
11. L(-)-Szorbóz +
12. Szacharóz
13. Laktóz -,±
14. Cellobiőz + +
15. Milibióz
16. Trehalóz + +
17. Raffinóz - —
18. D(+)-Melocitóz -
19. Oldható keményítő +
20. Dulcit -
21. Inozit +
22. D-Mannit ++ +
23. D-Szorbit —
24. Szalicin
25. Cellulóz + +
26. Kitin + +
27. Keratin + +
♦Háromhetes, 37 °C-on való inkubálás után figyeltük meg. ** Rövidítés G - növekedés
R - a táptalaj-micélium hátsó színe A - légmicélium D — diffundáló színanyag
A lap-táptalaj:
PG: Pridham-Gottlieb-féle szervetlen táptalaj 0,1% élesztőkivonattal kiegészítve.
cc Lm: Luedemann-féle szerves táptalaj.
00 Inkubálás 2 hétig 37 ’C-on.
-3184 256
Megjegyezzük, hogy a jelen szabadalmi leírás szerint a BBM-928 termelése nem korlátozódik a fenti növekedési és mikroszkópos jellemzőkkel leírt G455-101 jelű, kiválasztott Aktinomyces törzsre. A fenti jellemzőket csak bemutatás céljából adtuk meg, és a találmány szerinti eljárásban a fent leírt organizmusból ismert módokon készített, a BBM-928 komplex vagy egyes komponenseinek termelésére képes törzseket vagy mutánsokat is alkalmaztunk. (Az ismert módok: röntgen és ultraibolya besugárzás, nitrogén-mustár, fággal való fertőzés és hasonlók.)
A találmány szerinti eljárás előnyös kivitelezési változata szerint a rákellenes hatású BBM-928 komplex előállítására a G455-101 jelű Aktinomyces törzset emészthető szén- és nitrogén-fonást tartalmazó vizes oldatban, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között addig tenyésztjük, míg az említett oldatban a kívánt rákellenes aktivitás mérhető. A G455-101 számú Aktinomyces törzs tenyésztésére a bevált fermentációs módszereket alkalmazzuk. A jelen találmány szerinti antibiotikus, rákellenes hatású anyag termelésére használt táptalaj olyan emészthető szénforrást tartalmaz, mint például a keményítő, dextrin, maltóz, laktóz, szacharóz, fruktóz, mannóz, melasz, glicerin és hasonlók. A táptalaj tartalmazhat még emészthető nitrogén-forrásként fehérjét, fehérje-hidrolizátumot, polipeptideket, aminosavakat, kukoricalekvárt, kazeint, karbamidot és hasonlókat, valamint szervetlen tápsókat, szervetlen anionokat és kationokat, mint például kálium-, nátrium-, ammónium-, kalcium-, szulfát-, karbonát, foszfát-, klorid-, nitrát-ion és hasonlók. A BBM-928 komplex termeléséhez bármely, az organizmus kielégítő növekedését elősegítő hőmérséklet használható. A körülbelül 20°C-tól 15 °C-ig terjedő hőmérséklet-tartomány alkalmazható, előnyös az organizmus növekedéséhez optimális 28 °C-tól 34 °C-ig terjedő tartomány, legelőnyösebb a 30-32 °C-os hőmérséklet.
A BBM-928 komplex maximális koncentrációját általában 4-6 nap alatt érjük el. A fermentációs periódusban a bevált módszereket használjuk. Például kis mennyiségek előállítására előnyösen használhatjuk a rázott lombikos vagy felületi tenyészetet. Nagyobb mennyiségek előállítására előnyösen használhatjuk a süllyesztett, levegőztetett tenyésztést, steril tankban. Tank-fermentáció esetén először vegetatív oltóanyagot állítunk elő, a táptalajt beoltjuk az organizmus spórájával, hogy fiatal, aktív oltóanyagot nyerjünk, ezt sterilen átoltjuk a fermentorban lévő táptalajba. A tankban, illetve az üvegekben a levegőztetést úgy biztosítjuk, hogy steril levegőt áramoltatunk át a táptalajon, vagy a táptalaj felületére juttatjuk, és a táptalajt mechanikusan keverjük. Szükség esetén habgátló anyagokat adagolhatunk, mint például szójaolajat, szilikonolajat és disznózsírt.
A fermentációs táptalaj, vagy a BBM-928 komplex kivonatai antibiotikum-tartalmát a papirkorong agar-diffúziós módszerrel határozzuk meg Sarcina luteát alkalmazva vizsgáló organizmusként és tápagart használva vizsgáló táptalajként. A táptalaj hatóanyag-tartalmának meghatározásához a pH-t 9,0-re állítjuk be, hogy a mérőrendszer optimális érzékenységét biztosítjuk.
A BBM-928 komplexet olyan bevált módszerekkel izoláljuk a fermentléből, mint az oldószeres extrakciós eljárások. A BBM-928 A, B, C, D, E és F komponensek előállítására a tisztítást előnyösen preparatív ellenáramú megoszlási és kromatográfiás módszerekkel végezzük, mint ahogy azt a 2. és 3. példában részletesen ismertetjük. A BBM-928 egyes komponenseinek oldhatósága és színreakciói hasonlók egymáshoz. Például jól oldódnak kloroformban és diklórmetánban, gyengén oldódnak benzolban, etanolban, metanolbanoés n-butanolban, valamint oldhatatlanok vízben és n-hexánban. Vas(III)-kloriddal és Ehrlich-reagenssel pozitív reakciót adnak, míg a Tollens- és Sakaguchi-reagensekkel, valamint ninhidrinnel nem reagálnak. A 3. példa szerinti BBM-928 komponensek fizikai-kémiai tulajdonságait a 4. táblázatban mutatjuk be.
4. táblázat
A BBM-928 A, B, C és D komponensek fizikai-kémiai tulajdonságai
BBM-928
A B C D
Olvadáspont, °C 246-248 214-217 244- 248 224-227
(1% kloroform) -27° -74° -91° -13°
Elemanalízis C: 53,19 50,14 51,77 50,75
H: 5,40 5,29 5,29 5,25
N: 12,92 12,34 13,55 12,58
(különbségből) O: 28,49 32,23 29,39 31,42
\nax. nm-ben 235(586) ' 235(570) 235(638) 235(550)
ÍFi% cm· ) 264(415) 264(400) 264(442) 264(380)
etanolban 345(165) 345(163) 345(173) 345(155)
sósavas etanolban 234(610) 234(556) 234(650) 234(565)
264(410) 264(446) 264(442) 264(405)
345(165) 345(188) 345(173) 345(165)
natrium-hidroxidos 230(564) 230(530) 230(580) 230(650)
etanolban 256(763) 256(775) 256(704) 256(930)
330(180) 330(116) 330(117) 330(140)
383(170) 383(122) 383(122) 383(145)
Molekulasúly
(Ozmométer,
kloroformban) 1,450 - 1,470 -
Az A, B, C és D komponensek infravörös (IR) spektrumát az 1-4. ábrán láthatjuk, mágneses magrezonancia spektrumát az 5-8. ábrán láthatjuk. A BBM-928 A (5. ábra), a BBM-928 B (6. ábra) és a BBM-928 C (7. ábra) mágneses magrezonancia spektruma nagyon hasonló, az egyetlen különbség az, hogy az A komponensben (δ: 2,03 ppm, 2 mól ekvivalens) és a B komponensben (δ: 2,05 ppm, 1 mól ekvivalens) acetilcsoport van jelen, míg a C-ben nincs. Piridinben ecetsav-anhidriddel acetilezve 2, 3 qs 4 mól ekvivalens acetilcsoportot vittünk be a BBM-928 A, B és C komponenseibe. Az így kapott három acetilezett termék azonos vékonyréteg-kromatográfiás tulajdonságokat, valamint azonos ultraibolya, infravörös és mágneses magrezonancia spektrumokat mutatott, jelezve, hogy a BBM-928 mono-acetil-származéka a BBM-928 B-nek és diacetil-származéka a BBM-928 C-nek. A BBM-928 A savas hierolizátumában öt n-butanolban oldódó ultraibolya elnyelő fragmenst (I, II, III, IV és V) és öt vízben oldódó, ninhidrin-pozitív anyagot (NPS-1, 2, 3, 4 és 5) találtunk. Az utóbbi anyagokat Dowex 50X4 gyantán kromatografálva elválasztottuk, és a következő aminosavakként azonosítottuk:
184 256
Anyagok Rf (S—123*) Azonosítás
NPS-1 0,72 (5-hidroxi-N-metil-valin (HM-Val)
NPS-2 0,49 glicin (Gly)
NPS-3 0,46 szerin (Ser)
NPS-4 0,45 szarkozin (Sár)
NPS-5 0,23 (nincs azonosítva)
•vékonyréteg-kromatográfia, szilikagél-lemez
S—123: 10% ammónium-acetát-metanol-10 ammóniaoldat
9:10:1 arányú elegye.
A fent említett öt ultraibolya elnyelő fragmensnek 1θ következő a szerkezete:
az I képletű fragmens összegképlete: Ci4H14N2Os, molekulasúlya: m/e 306 (Nf);
XMgH; 227, 233, 251, 343 nm; 15 aII képletű fragmens összegképlete C2 0H2 5 N3 Oe, molekulasúlya: m/e 377 (M*-58);
λΜ^Η-229, 234, 261,345 nm;
a III képletű fragmens 20
230, 235, 262, 345 nm;
a IV képletű fragmens összegképlete Ci 0H7NO4, molekulasúlya: m/e-205 (NT);
XMeOH:228, 260, 354 nm; 25 az V képletű fragmens összegképlete C23H30N4O9, XMeOH:230, 235,262, 345 nm.
normál sósavval végzett savas hidrolízis hatására az I, II, III és V képletű töredékekből a következő bőm- 30 lástermékek keletkeznek:
Fragmens A hidrolízis körülményei bombacső' reflux
110°C, 20 óra 110 °C, 3 óra
I IV, Ser -
II IV, Ser, HM-Val I, HM-Val
III IV -
V - I, HM-Val, Ser
Ser: szerin 40
HM-Val: /3-hidroxi-N-metil-valin Sár: szarkozin.
Ha a BBM-928 A vagy a BBM—928 C komponenst 0,1 normál nátrium-hidroxiddal 25 °C-on 3 órán át lúgosán hidrolizáljuk, a (VI) képletű fragmenst kapjuk (a Ser, HM-Val és Sár rövidítéseket a fentiekben magyaráztuk, a Gly glicint jelent, az X meghatározatlan részt).
Ha a (VI) képletű fragmenst 0,1 normál sósavval kezeljük 110°C-on egy órán át, a (VII) képletű fragmenst és HM-Val-t kapunk.
Ha a (VI) képletű fragmenst 0,1 normál nátrium-hidroxiddal kezeljük 37 °C-on 40 órán át, a (VII) képletű fragmenst és az I képletű fragmenst kapjuk.
Ha a (VII) képletű fragmenst 0,1 normál nátrium-hidroxiddal kezeljük 37 °C-on .40 órán át, a (IX) képletű fragmenst és az (I) képletű fragmenst kapjuk.
Az azonosítatlan rész (X) összegképlete C5H6N2O2 (peptid alakban), a (IX) törmelék és más, az (X)-et tartalmazó peptid fragmensek mikroanalizise, valamint az alábbiakban összegzett spektrumanalízis alapján.
C13-NMR Proton-NMR Csoport
30,14 (triplett) 61,4 (dublett) 61,7 (dublett) 140,7 (dublett) 171 (szingulett)
2,36 ppm (2H, m) 4,2-4,5 (2H, m) 6,76 (1H, t)
2x -ch;
(Ovagy N)
-CH=N-CO- (amid) -OH NH
Gram-negatív baktériumok és gombák ellen.
Meghatároztuk az egyes BBM-928 komponensek profág indukciós aktivitását (ILB) lizogén baktériumban. 100 Mg/ml koncentrációig nem figyeltünk meg lényeges ILB aktivitást a BBM-928 A, B és C komponensekkel.
A mitomicin-C és a BBM-928 A, B, C és D komponensek összehasonlító rákellenes hatásvizsgálatát intraperitoneálisan bevitt tumorokon végeztük, a következőkön: P388 leukémia, L1210 leukémia, B16 melanóma, Lewis-Lung (LL) karcinóma és szarkóma 180 aszkitesz (S 180). A BBM-928 komponenseket 0,9% sót és 10% dimetil-szulfoxidot tartalmazó oldatokban, a mitomicin-C-t 0,9% sót tartalmazó oldatban adtuk naponta egyszer az egyszer egynapi kezeléstől a napi többszöri kezelésig terjedő adagolási program alapján. Változtatva
A BBM-928 komponensek in vitro mikroboellenes 5. tábláiét aktivitása aerob baktériumok ellen
Vizsgált
Kód organizmus
Sa-1 S. aureus 209P
Sp-1 S. pyogenes S-23
Sl-1 S. luteaPCI 1001
Mf-1 M. flavus D12
Cr-1 C. xerosis 53K-1
Bs-1 B. subtilis PCI 219
Bg-1 B. megaterium D2
Ba-3 B. anthracis A9504
M6-1 M. smegmatis 607 D87
Mp-1 M. phlei D88
Ec-1 E. coli NIHJ
Kp-1 K. pneumoniae D-11
Pa-3 P. aeruginosa A9930
Pv-1 P. vulgáris A9436
Pm-1 P. mirabilis A9554
Pg-1 P. morganii A9553
Sm-1 s. marcescens Λ20019
Al-1 A faecalis ATCC 8750
Ca-1 C. arbicans IÁM 4888
Cn-3 C neoformans
12,5
6,3
6,3
12,5
6,3
12,5 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100
BBM-928 komponensek (MIC Mg/mbben)
B c D E F
25 50 100 100 25
12,5 25 50 50 12,5
12,5 50 50 50 25
25 50 100 100 25
50 100 100 100 50
25 100 100 100 25
25 50 100 100 25
12,5 25 50 50 12,5
25 25 100 100 25
12,5 12,5 50 50 12,5
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
>100 >100 >100 >100 >100
184 256 a dózisokat meghatároztuk a legkisebb hatásos dózist (MED), mely a kezelt állatoknál 1,25-ször hosszabb túlélési időt jelentett ú kontroll csoporthoz viszonyítva. Ezt az aktivitási szintet tekintik a lényeges rákellenes hatás mértékének. A‘6. táblázatban látható eredmények a számított aktivitási arányokkal azt mutatják, hogy a BBM-928 A lényegesen aktívabb, mint a mitomicin C, a tumor-törzstői és a kezelési programtól függően 10-300-szor. a BBM-928 A, B, C és D, valamint a mitomicin C intraperitoneális LD50 értékeit Van dér Werden módszerével határoztuk meg [Arch. Expt. Path. Pharmak., 195, 389 (1940)], és szintén láthatók a 6. táblázatban.
6. táblázat
A BBM-928 A, B,C és D, valamint a mitomicin-C rákellenes hatása és toxicitása
Minimális hatásos dózis (MED, mg/kg/nap) lD50
Aezeiesa - P388 L1210 B16 LL S180 (mg/kg/nap)
BBM-928 A 0,003 0,1 0,003 0,03 0,003 0,13
BBM-928-B 0,1 - - - - 0,18
BBM-928 C - - - - - 0,81
BBM-928 D 0,003 - - - - 0,083
Mitomicin-C 0,1 3 1 0,3 0,3 9,3
Kezelés^
BBM-928 A 0,001 0,003 0,003 0,003 0,0001 0,013
Mitomicin-C 0,1 0,3 0,3 0,3 0,3 1,4
Aktivitási arány (BBM-928 A/Mitomicin-C)
Kezelés3 30 300 10 100
Kezelés*5 100 100 100 100 100
a: egyszeri kezelés az 1. napon b: napi kezelés az 1-9. napokon.
A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal szemléltetjük.
1. példa
A G455-101 jelű Aktinomyces faj egyik törzsének jól kinőtt ferde tenyészetével 2% oldható keményítőt, 1% glükózt, 0,5% Pharmamédiát, 0,5% élesztőkivonatot, 0,5% A típusú NZ-amint és 0,1% kalcium-karbonátot (pH = 7,2 sterilezés előtt) tartalmazó vegetatív táptalajt oltunk. A szaporító tenyészetet 72 óráig 32 °Con inkubáljuk rotációs rázógépen (250 min1), és a kinőtt tenyészetből 5 millilitert 100 milliliter 2% oldható keményítőt, 1% Pharmamédiát, 0,003% hét molekula kristályvizet tartalmazó cink-szulfátot és 0,4% kalcium-karbonátot tartalmazó fermentációs táptalajba oltunk (500 milliliteres Erlenmeyer lombikban). A BBM-928 komplex legnagyobb koncentrációját körülbelül 5 napos rázott lombikban való tenyésztés után éri el.
A szaporító tenyészetet 4 napig rázatjuk Erlenmeyer lombikokban, 100 liter csíráztató táptalajba oltjuk, összetétele 2% zabliszt (Quaker Products, Ausztrália), 0,5% glükóz, 0,2% száraz élesztő, 0,0008% négy kristályvizet tartalmazó mangán(II)-klorid, 0,0007% hét kristályvizet tartalmazó réz(II)-szulfát, 0,0002% hét kristályvizet tartalmazó cink-szulfát és 0,0001% hét kristályvizet tartalmazó vas(II)-szulfát, majd 200 literes szaporító fermentorban 200 min1 fordulatszámmal kevertetjük 30 °C-on 54 órán át. A szaporító táptalaj 15 liter térfo6 gatú részét 170 liter 2% oldható keményítőt, 1,0% Pharmamédiát, 0,0003% hét kritályvizet tartalmazó cinkszulfátot és 0,4% kalcium-karbonátot tartalmazó fermentációs táptalajba oltjuk, 400 literes fermentorban, 30 °Con 150 liter/perc levegőztetési sebességgel és 200 min-1 fordulatszámmal kevertetve növekedés közben. A táptalaj pH-ja a fermentáció előrehaladtával fokozatosan növekszik, és 100-200 óra után eléri a 8,4-8,5 értéket, mikor is az antibiotikum-termelés a 30 pg/ml csúcsértéket éri el.
2. példa
Az 1. példában leírt (170 liter, pH = 8,5) tenyészlevet szűrési segédanyaggal leszűijük. Az antibiotikum-aktivitást mind a szűrletben, mind a szűrési maradékban megtaláljuk. A micélium-pogácsát kétszer extraháljuk az aceton-metanol oldószerkeverékkel (1:1, 2 X 30 liter). Az extraktumokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk, hogy n-butanollal extrahálható vizes sűrítményt kapjunk. A tápoldat szűrletét kétszer extraháljuk n-butanollal (2 X 40 liter). Az egyesített n-butanol extraktumok csökkentett nyomáson való bepárlásával és a maradék fagyasztva szárításával 21,4 g nyers szilárd anyagot kapunk. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok szerint ez az anyag összetett, három fő komponenst, A-t, B-t és C-t és három mellékkomponenst, D-t, E-t és F-et tartalmaz, Rf-értéküket az alábbi, 7. táblázatban közöljük.
7. táblázat
A BBM-928 komponensek szilikagélen végzett vékonyréteg-kro mátográfiája
Rf-értékek*
N-118 rendszer* * N-103 rendszer* * *
BBM-928 A 0,71 0,48
BBM-928 B 0,53 0,26
BBM-928 C 0,27 0,07
BBM-928 D 0,73 0,53
BBM-928 E 0,56 0,34
BBM-928 F 0,39 0,17
♦Detektálás UV scannerrel (Shimadzu CS-910) 345 nm-nél. **n-Butanol-metanol-víz 6327:10 arányú elegye.
***Xilol-metil-etil-keton-metanol 5:5:1 arányú elegye.
3. példa
A 2. példában kapott nyers komplexet preparatív ellenáramú megoszlási berendezésben (Mitamura, 100mI/cső) széntetraklorid-kloroform-metanol-víz oldószer eleggyel tisztítjuk. Az 50. lépés után az 5-20. csövek tartalmát egyesítjük, bepárolva 4,4 g halványsárga port kapunk, mely az A, B, D, E és F komponenseket tartalmazza. Ezt a keveréket kis mennyiségű kloroformban oldjuk, és etilacetáttal előkezelt, 500 ml térfogatú C-200 szilikagél oszlopra töltjük. Az oszlopot növekvő mennyiségű (2-5 tf.%) metanolt tartalmazó etil-acetáttal eluáljuk, és a frakciókat 345 nm-en optikai sűrűségük alapján ellenőrizzük. A D mellék-komponens eluálódik először etil-acetáttal, majd az A komponens. Az E, B és F eluálódnak ezután ebben a sorrendben a 3% metanol koncentrációnál. Mindegyik, a megfelelő komponenst tartalmazó frakciót csökkentett nyomáson bepároljuk,
184 256 és a maradékot kloroform-metanol elegyből kristályosítjuk. Hasonlóan a C komponens nyers preparátumát a 21-35. csövekből kapjuk a fent leírt ellenáramú megoszlási módszerrel. A C komponens tisztítását szilikagél kromatográfiával és kloroform-metanolból való kristályosítással végezzük. Az A, B, C, D, E és F komponensekre a kitermelés a megfelelő sorrendben: 988 mg, 420 mg, 848 mg, 130 mg, 119 mg és 114 mg.
4. példa
A 3. példában kapott BBM-928 A komponens vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata 10% metanolt tartalmazó toluolos rendszert használva azt mutatja, hogy a minta nem teljesen homogén, mert egy további, közvetlenül a BBM—928 A komponens felett futó anyagot tartalmaz. A következő lépésekben tisztítjuk meg az anyagot:
1. A mintát szilikagél oszlopon kromatografáljuk, a tiszta kloroformtól a 8% metanolt tartalmazó kloroformos elegyig teijedő lineáris gradienst használunk. A 2,4 és 3,3% metanol kloroform elegynél eluálódó frakciókat egyesítjük a következő lépéshez.
2. Homorú gradienst készítünk, három cső használatával, az első kettő 2% metanol toluolos oldatát, a harmadik 6% metanol toluolos oldatát tartalmazza. Az 1. lépésben kapott anyagot szilikagél oszlopon a fenti gradienssel kromatografálva kapunk egy mellékkomponenst, mely szorosan a megtisztított BBM-928 A komponens (ezentúl BBM-928p) előtt eluálódik.
A BBM-928 Ap molekulasúlya mező deszorpciós tömegspektrometriával meghatározva 1427,aQ4B7gNi4O24 tapasztalati képletnek megfelelően (molekulasúly 1427, 417). Elemanalízis C64H7íN14O24-re (a minták 100°Con szárítva 18 órán át).
Számított: C: 53,85; H: 5,51; N: 13,74; Oa: 26,9%; Mértb: C: 52,47; H: 5,48; N: 13,81; Oa: 28,24%;
a: különbség alapján, b: három meghatározás átlaga.

Claims (5)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás BBM-928 rákellenes hatású antibiotikum komplex, valamint BBM-928A, B, C, D, E és F jelű komponenseinek előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Aktinomyces-törzset (ATCC 31 491), illetve ezen törzs tulajdonságaival rendelkező mutánsát süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, felhasználható szénforrást és nitrogénforrást, valamint adott esetben szervetlen sókat tartalmazó vizes táptalajban tenyésztünk, és a BBM-928 komplexet, és adott esetben az A, B, C, D, E vagy F jelű komponensek bármelyikét a táptalajból elkülönítjük.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a (XI) képlet szerinti szerkezettel rendelkező, ahol Ser szerint, a Gly glicint, a Sár szarkozint, HM-Val /3-hidroxiN-metil-valint, Rj és R2 acetilcsoportot jelent, BBM—928A jelű vegyület előállítására, mely az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik:
    a) oldódik kloroformban és diklór-metánban, gyengén oldódik benzolban, etanolban, metanolban és n-butanolban, és lényegében oldhatatlan vízben és n-hexánban;
    b) pozitív reakciót ad vas(in)-kloriddal és az Ehrlichreagenssel, nem ad reakciót a Tollens-, Sakaguchi-reagensekkel és ninhidrinnel;
    c) hatásos rákellenes anyag egérbe intraperitoneálisan beültetett P388 leukémia, L1210 leukémia, B16 melanóma, Lewis Lung karcinóma és szarkóma 180 aszkites daganatok ellen;
    d) olvadáspontja: 246-248;
    e) fajlagos forgatási értéke: [a]JD5 = 27° (1%, kloroform);
    f) molekulasúlya: 1427;
    g) közelítő elem-összetétele: 52,47% szén, 5,48% hidrogén, 13,81% nitrogén és 28,24% oxigén;
    h) a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok során az n-butanol, metanol, víz 63:27:10 arányú elegyében Rf => 0,71, a xilol, metil-etil-keton, metanol 50:1 arányú elegyében Rf = 0,48 értékkel fut;
    i) savas hidrolíziskor vízoldható, ninhidrin-pozitív anyagok keletkeznek belőle, a d-hidroxi-N-metil-vaÚn, glicin, szerin és szarkozin;
    j) lúgos hidrolízis során a (VI) általános képletű vegyület keletkezik belőle, ahol a Ser szerint, a Gly glicint, a Sár szarkozint, a NM-Val 0-hidroxi-N-metil-valint, az X pedig egy aminosavat jelent;
    k) az 1. ábrán bemutatott kálium-bromidban felvett infravörös spektrummal rendelkezik;
    l) deuterált kloroformban oldva az 5. ábrán bemutatott mágneses magrezonancia spektrummal rendelkezik, azzal jellemezve, hogy a kapott komplexből a BBM-928 A vegyületet elkülönítjük.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a (XIV) képlet szerinti szerkezettel rendelkező, ahol a Ser szerint, a Gly glicint, a Sár szarkozint, a HM-Val 0-hidroxi-N-metil-valint, Rí pedig acetilcsoportot jelent, BBM-928B jelű vegyület előállítására, mely az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik:
    a) oldódik kloroformban és diklór-metánban, gyengén oldódik benzolban, etanolban, metanolban és n-butanolban, lényegében oldhatatlan vízben és n-hexánban;
    b) pozitív reakciót ad vas(III)-kloriddal és az Ehrlich-reagenssel, nem reagál a Tollens- és Sakaguchi-reagensekkel és ninhidrinnel;
    c) hatásos rákellenes anyag egerekbe intraperitoneálisan beültetett P388 leukémia ellen;
    d) olvadáspontja: 214-217 °C;
    e) fajlagos forgatóképessége: [ακ3 —74° (1%, kloroform);
    f) közeÚtő elem-összetétel: 50,14% szén, 5,29% hidrogén, 12,34% nitrogén és 32,23% oxigén;
    g) a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok során az n-butanol, metanol, víz 6327:10 arányú elegyében Rf = 0,53, a xilol, metű-etíl-keton-metanol 5:5:1 arányú elegyében Rf - 0,26 értékkel fut;
    h) a 2. ábrán bemutatott, kálium-bromidban felvett infravörös spektrummal rendelkezik;
    i) deuterált kloroformban oldva a 6. ábrán bemutatott mágneses magrezonancia spektrummal rendelkezik, azzal jellemezve, hogy a kapott komplexből a BBM-928 B vegyületet elkülönítjük.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a (XV) képlet szerinti szerkezettel rendelkező, ahol a Ser szerint, a Sár szarkozint és a HM-Val 0-hidroxt-N-metil-valint jelent, BBM-928 C jelű vegyület előállítására melynek tulajdonságai;
    -7184 256
    a) oldódik kloroformban és diklór-metánban, gyengén oldódik benzolban, etanolban, metanolban és n-butanolban, lényegében oldhatatlan vízben és n-hexánban;
    b) pozitív reakciót ad vas(III)-kloriddal és az Ehrlich-reagenssel, nem reagál a Tollens- és Sakaguchi-reagensekkel, valamint ninhidrinnel;
    c) hatásos rákellenes anyaegerekbe intraperitoneálisan beültetett P388 leukémia, L1210 leukémia, B16 melanóma, Lewis Lung karcinóma és szarkóma 180 aszkitesz tumorok ellen;
    d) olvadáspontja: 244—248 °C;
    e) fajlagos forgatóképessége: [ofD=-91° (1%, kloroformban);
    f) molekulasúlya: kb. 1470;
    g) közelítő elem-összetétele: 51,77% szén, 5,29% hidrogén, 13,55% nitrogén és 29,39% oxigén;
    h) a szilikagél vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok során az n-butanol, metanol, víz 63:27:10 arányú elegyében Rf = 0,27, a xilol, metil-etil-keton, metanol 5:5:1 arányú elegyében Rf = 0,07 értékkel fut;
    i) a 3. ábrán bemutatott, kálium-bromidban felvett infravörös spektrummá rendelkezik;
    j) deuterált kloroformban oldva lényegében a 7. ábrán bemutatott mágneses magrezonancia-spektrummá rendelkezik, azzal jellemezve, hogy a kapott komplexből a BBM-928 C jelű vegyületet elkülönítjük.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a BBM—928 D jelű vegyület előállására, mely a következő tulajdonságokkal rendelkezik:
    a) oldódik kloroformban és diklór-metánban, gyengén 5 oldódik benzolban, etanolban, metanolban és n-butanolban, lényegében oldhatatlan vízben és n-hexánban;
    b) pozitív reakciót ad vas(III)-kloriddal és az Ehrlich-reagenssel, nem reagá a Tollens-, Sakaguchi-reagensekkel és ninhidrinnel;
    c) hatásos rákellenes anyag egerekbe intraperitoneálisan beültetett P388 leukémia ellen;
    d) olvadáspontja: 224-227 °C;
    e) fajlagos forgatóképessége: [a]25 = -13° (1%, kloroform);
    f) közelítő elem-összetétele: 50,75% szén, 5,25% hidrogén, 12,58% nitrogén és 31,42% oxigén;
    g) a szilikagél vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok során az n-butanol, metanol, víz 63:27:10 arányú elegyében Rf = O,73, a xilol-metil-etil-keton-metanol 5:5:1 arányú elegyében Rf = 0,53 értékkel fut;
    h) a 4. ábrán bemutatott, káium-bromidban felvett infravörös spektrummá rendelkezik;
    i) deuterált kloroformban oldva lényegében a 8. ábrán látható mágneses magrezonancia spektrummal rendelkezik, azzal jellemezve, hogy a kapott komplexből a BBM-928 Djelű vegyületet elkülönítjük.
    (12 db ábraoldal)
    Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Megjelent a Műszaki Könyvkiadó gondozásában Zöldért Nyomda - Miskolc
HU80775A 1979-04-02 1980-04-01 Process for producing citostatic antibiotic complexes HU184256B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2648879A 1979-04-02 1979-04-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU184256B true HU184256B (en) 1984-07-30

Family

ID=21832125

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU80775A HU184256B (en) 1979-04-02 1980-04-01 Process for producing citostatic antibiotic complexes

Country Status (24)

Country Link
JP (3) JPS55162752A (hu)
AR (1) AR223372A1 (hu)
AT (1) AT371144B (hu)
AU (1) AU533672B2 (hu)
BE (1) BE882574A (hu)
CH (1) CH647247A5 (hu)
DE (1) DE3012565A1 (hu)
DK (1) DK153501C (hu)
ES (1) ES490209A0 (hu)
FI (1) FI67403C (hu)
FR (1) FR2452930A1 (hu)
GB (1) GB2050384B (hu)
GR (1) GR66663B (hu)
HU (1) HU184256B (hu)
IE (1) IE49191B1 (hu)
IL (1) IL59746A (hu)
LU (1) LU82318A1 (hu)
NL (1) NL8001868A (hu)
NO (1) NO155780C (hu)
PH (1) PH16970A (hu)
SE (1) SE441930B (hu)
SU (1) SU999981A3 (hu)
YU (1) YU41700B (hu)
ZA (1) ZA801856B (hu)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4416874A (en) 1982-03-05 1983-11-22 Bristol-Myers Company Injectable compositions of BBM-928A
AU566569B2 (en) * 1983-01-31 1987-10-22 Bristol-Myers Company Luzopeptin e2
ATE31623T1 (de) * 1983-09-14 1988-01-15 Bristol Myers Co Injizierbare zusammensetzungen von bbm-928a.
US6749993B2 (en) 2002-02-06 2004-06-15 Konica Corporation Planographic printing precursor and printing method employing the same
JP2003300382A (ja) 2002-04-08 2003-10-21 Konica Minolta Holdings Inc 熱転写中間転写媒体を用いた画像形成方法
JP2004188848A (ja) 2002-12-12 2004-07-08 Konica Minolta Holdings Inc 印刷版材料
JP2004322511A (ja) 2003-04-25 2004-11-18 Konica Minolta Medical & Graphic Inc 印刷方法
JP2006056184A (ja) 2004-08-23 2006-03-02 Konica Minolta Medical & Graphic Inc 印刷版材料および印刷版
EP1944174A1 (en) 2005-11-01 2008-07-16 Konica Minolta Medical & Graphic, Inc. Lithographic printing plate material, lithographic printing plate, method for preparing lithographic printing plate, and method for printing by lithographic printing plate
JP4878612B2 (ja) * 2008-07-16 2012-02-15 スタンレー電気株式会社 車両用信号灯具
US9052217B2 (en) 2012-11-09 2015-06-09 Honeywell International Inc. Variable scale sensor

Also Published As

Publication number Publication date
JPS63139191A (ja) 1988-06-10
DE3012565C2 (hu) 1990-11-08
JPS6365679B2 (hu) 1988-12-16
IE49191B1 (en) 1985-08-21
ES8104411A1 (es) 1981-04-16
LU82318A1 (fr) 1980-12-16
AT371144B (de) 1983-06-10
YU41700B (en) 1987-12-31
JPH0341475B2 (hu) 1991-06-24
FR2452930B1 (hu) 1983-12-30
NO155780B (no) 1987-02-16
NL8001868A (nl) 1980-10-06
ZA801856B (en) 1981-04-29
AR223372A1 (es) 1981-08-14
AU533672B2 (en) 1983-12-08
AU5700280A (en) 1980-10-09
YU81280A (en) 1983-09-30
PH16970A (en) 1984-04-27
GB2050384A (en) 1981-01-07
NO155780C (no) 1987-05-27
JPS63139192A (ja) 1988-06-10
ATA180380A (de) 1982-10-15
GR66663B (hu) 1981-04-07
DE3012565A1 (de) 1980-10-23
GB2050384B (en) 1983-04-07
CH647247A5 (fr) 1985-01-15
DK153501C (da) 1988-11-28
SE8002521L (sv) 1980-10-03
IL59746A (en) 1983-02-23
ES490209A0 (es) 1981-04-16
IL59746A0 (en) 1980-06-30
DK138780A (da) 1980-10-03
SU999981A3 (ru) 1983-02-23
IE800598L (en) 1980-10-02
JPH0341157B2 (hu) 1991-06-21
DK153501B (da) 1988-07-18
FI67403C (fi) 1985-03-11
NO800967L (no) 1980-10-03
FI800973A (fi) 1980-10-03
SE441930B (sv) 1985-11-18
FR2452930A1 (fr) 1980-10-31
FI67403B (fi) 1984-11-30
JPS55162752A (en) 1980-12-18
BE882574A (fr) 1980-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4923990A (en) Pyrindamycins A and B and duocarmycin A antibiotics derived from certain streptomyces culture
US4107297A (en) Antibiotic compound
US4552842A (en) Process for producing rebeccamycin
FI77264C (fi) Foerfarande foer framstaellning av rebeccamycin med antitumoer effekt.
US4518589A (en) BBM-2478 Antibiotic complex
US5071957A (en) Antibiotic BU-4061T
HU184256B (en) Process for producing citostatic antibiotic complexes
GB2041360A (en) Antiobiotic
YANO et al. ACTINOPYRONES A, B AND C, NEW PHYSIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES I. PRODUCING ORGANISM, FERMENTATION, ISOLATION AND BIOLOGICAL PROPERTIES
US4360458A (en) Antitumor antibacterial agents
Nakagawa et al. A new depsipeptide antibiotic, variapeptin
Tsukiura et al. Bu-2313, a new antibiotic complex active against anaerobes I. production, isolation and properties of Bu-2313 A and B
EP1001957B1 (en) Macrolides with antitumor activity
EP0110155A1 (en) Novel anthracycline derivatives, a process for preparing the same by a microorganism strain, the novel strain streptomyces cyaneus, and use of the anthracycline derivatives as medicaments
US4503152A (en) Process for preparing antibiotic AM-2604-A
US4927848A (en) BU-3839T antibiotic
CA1338245C (en) Compound dc-107 and process for its preparation
US4451456A (en) Antitumor antibacterial agents
NL8401572A (nl) Antibiotica.
US5001058A (en) BU-3839T antibiotic
US4780416A (en) Microorganism for BBM 928 production
US4992376A (en) Biological pure culture of Streptomyces violaceus ATCC 53807
US4631256A (en) Fermentation process for BBM-928
US4572895A (en) Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417
US4169096A (en) Antibiotic compounds

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee