JPH0446194A - Ｗｓ１２７９ａ物質、その生産法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はＩＪＳ　１２７９Ａ物質、その関連物質、その
生産法及び用途に関するものである。　　ＷＳ１２７９
Ａ物質は、ストレプトミセス属菌が産生するｌｌ５１２
７９Ａ物質と総称される物質群に含まれる成分であり、
白血球減少回復剤作用及び骨髄細胞増殖促進作用を有す
る新規物質であって、医薬として有用である。

（従来の技術） 抗腫瘍活性を有するペプチドないし蛋白系の生理活性物
質としては、例えばモノ力インのひとつである腫瘍壊死
因子（ＴＮＦ）やリンホカインのひとつであるインター
フェロン（ＩＦＮ）等が知られている。

しかしながら、微生物、例えば放線菌に由来する抗腫瘍
活性を有するペプチド自体の数は少なく、完全に実用に
供されているものはほとんどないというのが技術の現状
である。

そして、微生物起源に限らずペプチド系その他の抗腫瘍
剤の完全な実用化を阻害していてる要因のひとつとして
２抗腫瘍剤による食欲減退、白血球の減少等の副作用が
挙げられている。

（発明が解決しようとする問題点） 現在までに多数の抗腫瘍剤が開発されてきているが、完
全なものは未だ開発されてはいない。

そのひとつの理由は抗腫瘍剤のスクリーニングが生成し
た腫瘍の直接抑制ないし直接縮少、消滅を主たる対象と
して行われていることである。

そこで本発明者らは発想の転換を行い、上記した副作用
に着目し１重篤な副作用がなければ直接的腫瘍抑制効果
は多少低くても、抗腫瘍剤を大量且つ長期間投与するこ
とができ、その結果腫瘍の完全抑制が可能となるとの着
想を得、抗腫瘍剤の投与による副作用の発生を防止し、
間接的な方法による抗腫瘍システムを開発することとし
たのである。

（問題点を解決するための手段） 本発明は上記目的を達成するために既知の化学物質につ
いてのスクリーニングを行ったけれども目的達成には至
らなかった。

そこで本発明者らは微生物の発酵生産物に着目し、各種
微生物を検索した結果、香川系の土壌から分離した放線
菌が培養液中に白血球減少回復作用を有する物質を蓄積
することを発見した。そして更にこの物質についてその
理化学的性質を詳細に研究したところ、従来未知の新規
物質であることを確認し、そして更にこの物質がす５１
２７９物質と総称される物質群に含まれるひとつの成分
であることを確認し、この物質を新たにＷＳ１２７９Ａ
物質と命名した。

そして更に研究の結果、発酵法及び有機合成法による工
業的製法も確立し、却せて白血球減少回復作用、骨髄細
胞増殖促進作用も確認し、遂に本発明の完成に至ったの
である。

本発明に係るーＳ　１２７９Ａ物質の構造解析を以下に
より行った。

（１）　ＷＳ１２７９Ａ物質の構造解析ｉ　）　ＷＳ１
２７９Ａ物質の理化学的性質本発明に係るＩ／５１２７
９Ａ物質は、ストレプトミセス属菌、具体的には後記す
るストレプトミセス・ウイルモレイ（Ｓｔｒｅｐｔｏ国
ｙｃｅｓ　ｔｚｉｌｌｌｌｏｒｅｉ）から産生される物
質であるが、その産生量がきわめて少量で、かつ単離も
回置な物質であるため、ＷＳ１２７９Ａ物質を含む一５
１２７９物質を混合物として単離し　（す５１２７９Ａ
物質はＩｄＳ１２７９物質と総称される物質群の主要成
分と思われる）、混合物のまま構造解析を行い、その理
化学的性質として次のＪ（−ＮＭＲスペクトルを得た。

ＷＳ１２７９Ａ物貿（７）１Ｈ−ＮＭＲｌＨ−ＮＭＲ（
ＣＤ、０Ｄ−ＣＤＣＱ３）δ（ρＰＩ１１）：０．８５
（９［（、ｍ）、　１．２５（７２）１．　ｔｓ）、１
．６０（６Ｌ　ｍ）、２．３０（６８，耐、２．８（５
Ｈ，ｍ）。

３．０６（１Ｈ、ｄｄ、　Ｊ＝５．５．１４）、３．７
５−４．０（８Ｈ，ｍ）、４、］、３（１Ｈ、ｄｄ、　
Ｊ＝６．５．１２）、４．３１．（１Ｎ、　ｍ）、４．
３７（１Ｈ、ｍ）、　４．４５（１Ｈ、ｍ）、４．５１
（Ｉｔ（、ｍ）。

４．６５（１Ｈ、ｍ）、５．１８（１Ｈ、＋ｍ）ＷＳ１
２７９Ａ物貿は５そ（７）　１Ｈ−ＮＭＲスペクトルが
上記のとおりであり、そのδ値、０，８５．１．２５．
１．６０及び２．３０のピークから、長鎖飽和脂肪酸残
基を含むペプチドと推定された。

６Ｈ−ＨＣｆｆｉによる加水分解では、アスパラギン酸
、セリン、グリシン、アンモニアが１：２：２：１の比
率で検出され、未知のピークと微量のシスチンも同時に
検出された。この未知のピークは、グリセリル　システ
ィンについての文献 （Ｊｏｒｇ　　Ｍｅｔｚｇｅｒ、　　Ｚ＋　Ｎａｔｕｒ
ｆｏｒｓｃｈ　　Ｂ：　　Ｃｈｅ＋＊、　　Ｓｃｉ。

４２、１１９５〜１２０１　（１９８７））の記載とよ
く類似し、また１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいても、−
ＣＨ□−ＣＨ（０−）−ＣＨ２−０−（δ（ｐｐｍ）　
２．７５．５．１８．４．１３及び４．３７）の部分構
造が明らかとなり、グリセリル　システィンの存在を支
持した。

一方Ｃｈｉｒａｌ　Ｃｏｌｕｍｎ　ＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒ
ａｌｐａｋ　ｗＨ：　ダイセル化学工業株式会社製）よ
り、アスパラギン酸、セリンはいずれもＬ体であること
が判明した。またヒドラジン分解により、Ｃ末端アミノ
酸としてセリンが検出された。しかし、ニンヒドリン反
応が陰性であることより、Ｎ末端はアシル化されている
と考えられた。

加水分解で得られた脂肪酸をメチルエステルとし、ガス
クロマトグラフ質量分析、　ＧＣ−ＭＳで分析した結果
、パルミチン酸が検出された。

ＦＡＢ−阿ＡＳでは、　＠／ｚ　１３３４　にピークが
観測され。

この値は、　Ｇｌｙｃｅｒｙｌ　ｃｙｓｔｅｊｎｅを含
むヘキサペプチドにパルミチン酸が３個結合した値に相
当する。

一方、　１１ｓ１．２７９物質のアルカリ加水分解物は
、Ｉｌｌ／Ｚ８５８にピークが認められ、このことより
ＶＳ１２７９Ａ物質は、パルミチン酸をＮ末端とするヘ
キサペプチドに、２個のパルミチン酸がエステル結合し
たものと考えられる。また、１）１−ＮＭＲのケミカル
シフト値（６５，１８，４，１３及び４．３７）より、
この脂肪酸エステルはＧｌｙｃｅｒｙｌ　ｃｙｓｔｅｉ
ｎｅの水酸基に結合していることが明らかとなった。

残る問題となるアミノ酸の配列は、ＦＡＢ−ＭＡＳとカ
ルボキシペプチダーゼによる酸素分解により、検討した
。その結果、　ｍ／ｚ　８８０．７９３．７３６．６７
９゜５９２および４７８にピークが観測され、その差よ
り−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇ１ｙ−５ｅｒ−ＯＨの
配列を有すると推定された。

…）　ＶＳ１２７９Ａ物質の推定構造 以上の結果から総合的に判断して、　　ＷＳ１２７９Ａ
物質は、下記推定構造式を有する化合物であることが判
明した。

ＣＨ２０ＣＯＣ，、）Ｉ、　１ Ｇｎ刀Ｃｔｓ）Ｉ３□ ■ Ｃ１（２ 但し、グリセリン部分の２位の立体配位は（Ｒ）または
（Ｓ）であるが、そのいずれであるかは確定できない。

市）　ＷＳ１２７９Ａ物質の立体構造 上記推定構造式に基づき、本発明等はＶＳ１２７９Ａ物
質の全合成を行い、後記する実施例に開示した方法によ
り、ＷＳ１２７９Ａ物質のグリセリン部位の２位におけ
るジアステレオマーを得た。

本発明は、これらのＷＳ１２１９Ａ物質、そのジアステ
レオマー及び各ジアステレオ異性体を各種比率で含む混
合物をすべて包含するものである（以下。

各ジアステレオ異性体、これらの同量混合物、及びこれ
らを各種比率で含む混合物を、まとめてジアステレオマ
ーという。）、これらの物質は、すぐれた白血球減少回
復作用を有し、医薬として用いられる。

以下、ＷＳ１２７９Ａ物質の微生物による生産法、ＷＳ
ｌ　２７９Ａ物質の化学合成法、これらの化合物の白血
球減少回復作用について詳述する。

（ｆｆ）　ｌｍ５１２７９Ａ物質の生産１ｉ’５１２７
９Ａ物質は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属に属するＷＳ
Ｉ２７９Ａ物質生産菌、例えばＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓｗｊｌｌｍｏｒｅｊ　Ｎａ１２７９を適当な培地に培
養し、得られた培養物からＷＳ１２７９Ａ物質を分離精
製することによって製造することができる。

】）生産菌 本発明に係る［ｌ５Ｉ２７９Ａ物質は１例えば本発明者
らが香川糸で採取した土壌から新たに分離した放線菌＆
１２７９によって生産される。放線菌ＮＱ１２７９はＳ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属に属するものと認められ、Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｗｊｌｌｍｏｒｅｉ　と同定
された。

本菌株の凍結乾燥サンプルは、工業技術院微生物工業技
術研究所（〒３０５、茨城系つくば市東１−１−３）へ
ＦＥＲＭ−Ｐ　＆１１４０５の番号で寄託されている。

（寄託日：１９９０年４月１１日） １１ｓ１２７９Ａ物質の生産は、単に説明を目的として
挙げただけの本明細書記載の特定の微生物の使用に限定
されるものではないことを理解すべきである。この発明
は、記載の微生物からＸ線照射、紫外線照射、Ｎ−メチ
ル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジン、２−アミ
ノプリン等の変異処理により取得できる人工変異株並び
に自然変異株を含めてＶＳ１２７９Ａ物質を生産しうる
全ての変異株の使用をも包含するものである。

５ｔｒｅｐｔａｒｉｙｃｅｓ　ｗｉｌｌ、ｍｏｒｅｉ　
ＮＱ１２７９の菌学的性質を以下に示す。

本菌株の形態観察、培養性状、生理学的性質を属へるた
めの培地、方法は主にシャーリングとゴツトリーブ〔引
用文献（１）〕、ワックスマン〔引用文献（２）〕に従
った。３０℃、１４〜２１日間培養後それぞれの観察を
行った。色名は″メシューエン・ハンドブック・オブ・
カラー″〔引用文献（３）〕から引用した。炭素源の利
用性はプリドハム・ゴツトリーブの方法〔引用文献（６
）〕に従った。生育温度は酵母エキス・麦芽エキス寒天
培地、温度勾配機（アトバンチツク東洋、ＴＮ−３）を
用いた。細胞壁の分析はペソ力−等の方法〔引用文献（
４）〕、山口の方法〔引用文献（５）〕に従った。

（１）形態的特徴 オートミール寒天、酵母エキス・麦芽エキス寒天、無機
塩・でんぷん寒天培地上で３０℃、１４日培養後、光学
及び電子顕微鏡ｔＲ察を行った。栄養菌糸はよく発達し
断裂しない。気中菌糸は単純分枝し、直状、波状の胞子
連鎖を形成する。１つの胞子連鎖は２０〜４０個の胞子
を連鎖する９胞子は、平滑な表面を有し、大きさは０．
５−０．８Ｘ０．７−０．９μｍの卵型であった。菌核
、胞子のう、遊走子等は観察されなかった。

（２）培養性状 結果を表１に示す。気菌糸の色はオートミール寒天上で
灰色、酵母エキス・麦芽スキス寒天、無機塩・でんぷん
寒天、グリセリン・アスパラギン寒天とで茶味灰色、グ
ルコース・アスパラギン寒天上で黄味灰色であった。

生育裏面は、＃母エキス・麦芽エキス寒天、グリセリン
・アスパラギン寒天、オートミール寒天上で暗い茶色、
栄養寒天、ペプトン・酵母エキス・鉄基天上で橙味黄色
を呈する。メラノイト色素及び他の可溶性色素生産はみ
られなかった。

表Ｉ　　１５１２７９株の培養性状 １１　　　　　　　　　獅１淋 酵母エキス・麦芽エキス寒天　　Ｇ：良好Ａ：豊富、茶
味灰（８Ｅ２） Ｒ：暗い茶（６Ｆ６） Ｓ：なし オートミール寒天　　　　　　　Ｇ：良好Ａ：豊富、灰
（Ｅｌ） Ｒ：暗い茶（６Ｆ６） Ｓ：なし 無機塩・でんぷん寒天　　　　　Ｇ：良好Ａ：ｌ富、茶
味灰（８Ｅ２） Ｒ：黄味（５Ｅ５） Ｓ：なし グリセリン・アスパラギン寒天 Ｇ：良好 Ａ：Ｉｋ富、茶味灰（３Ｅ２） Ｒ：暗い茶（６Ｆ６） Ｓ：なし ペプトン・酵母エキス・鉄寒天 Ｇ：良好 Ａ　：　なし。

Ｒ：橙味黄（４Ａ７） Ｓ：なし チロシン寒天 Ｇ：良好 Ａ：豊富、茶味灰（８Ｅ２） Ｒ：暗い茶（６Ｆ６） Ｓ：なし グルコース・アスパラギン寒天 Ｇ：普通 Ａ：普通、黄味法（４８２） Ｒ：薄い黄（３Ａ３） Ｓ：なし 栄養寒天 Ｇ：普通 Ａ：なし Ｒ：橙味黄（４Ａ７） Ｓ：なし ペンネット寒天　　　　　　　　　Ｇ二良好Ａ：豊富、
茶味灰（８Ｅ２） Ｒ：暗い茶（６Ｆ６） Ｓ：なし シュクロース・硝酸寒天　　　　Ｇ：良好Ａ：豊富、茶
味灰（６Ｃ２） Ｒ：茶（６Ｅ６） Ｓ：なし 略　号　Ｇ：生育、Ａ：気菌糸、Ｒ：生育裏面の色、Ｓ
：可溶性色素 （３）細胞壁タイプ ８０１２７９株の全菌体分解物の分析の結果、　ＬＬ−
ジアミノピメリン酸の存在が確認できた。従って本菌株
の細胞壁は■型であると考えられる。

（４）生理的性質 生理的性質と炭素源利用性の結果を表２．３にそれぞれ
示す。

表２ 陥１２７９株の生理的性質 生育温度範囲 至適生育温度範囲 ゼラチン液化 ミルク凝固 ミルクペプトン化 でんぷん加水分解 メラノイド色素生産 セルロース分解 １２℃〜３５℃ ２８℃〜３３℃ 陽性 陰性 陽性 陽性 陰性 陽性 Ｄ−グルコース シュークロース Ｄ−キシロース Ｄ−フラクトース し−ラムノース ラフィノース ＋ ＋ 十 ＋ Ｌ−アラビノース　　　　　＋ イノシトール マンニトール　　　　　　＋ ＋：利用する ｍ：利用しない 形態観察及び化学分析の結果から、Ｎα１２７９株はＳ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属に属すると考えられる〔引用
文献（７）〕。そこで本菌株を文献に記載された同属の
種と比較した［引用文献（８）−（１２）］。その結果
、本菌株はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｗｉｌｌｍｏｒ
ｅｉと近似していることを認めたので、ＮＧ　１２７９
株とＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｗｉｌｌｍｏｒｅｉ　
ＪＣＭ４ｇ６１株との比較実験を行った。両株の性質は
、表４に示す若干の相違点を除き、殆ど同じであった。

これらの相違は、両株を別種とみなすには不充分である
と考えられる。そこで、４１２７９株を５ｔｒｅｐｔｏ
ＩＩＩｙｃｅｓ　ｗｉｌｌｍｏｒｅｉと同定し、　Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔ＋ｉｌ１ｍｏｒｅｉ　Ｎｎ１
２７９と命名した。

表４ Ｎｏ１２７９株とＪＣ阿４８６１株の相違点ＮＱＩ２７
９　　　　　ＪＣＭ４８６１グリセリン・アスパラギン 寒天上における気菌糸の色　茶味灰（８Ｅ２）　　黄味
白（４Ａ２）ベンネット寒天上における 気菌糸の色　　　　　　　　茶味灰（６Ｃ２）　　黄味
白（４Ａ２）引用文献： （１）　　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、　　Ｅ、　　Ｂ、　　ａ
ｎｄ　　Ｄ、　　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：　　Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ　　ｆｏｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ
　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　５ｐｅｃｉｅｓ。

Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔａｒｉｏｌｏｇｙ、　１
６．３１３−３４０．１９６６（２）　Ｗａｋｓｍａｎ
、　Ｓ、　Ａ、：　Ｔｈｅ　ａｃｔｉ、ｎｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ　Ｖｏｌ、　２：Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、
　１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｃｒ
ｉｐｔｉｏｎｏｆ　　ｇｅｎｅｒａ　　ａｎｃｌ　　５
ｐｅｃｉｅｓ：　　丁ｈｅ　　Ｗｊｌｌｊａｍｓ　　ａ
ｎｄ　　ｌ１ｉｌｋｉｎｓＣｏ、、　Ｂａｌｔｉｍｏｒ
ｅ、　１９６１（３）　Ｋｏｒｎｅｒｕｐ、　Ａ、　ａ
ｎｄ　Ｊ、　＋１．１ｉｌａｎｓｃｈｅｒ：　Ｍｅｔｈ
ｕｅｎＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｕｒ、　Ｍｅ
ｔｈｕｅｎ、　Ｌｏｎｄｏｎ、　１９７８（４）　Ｂｅ
ｃｋｅｒ、　Ｂ、、　Ｍ、　Ｐ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉ
ｅｒ、　Ｒ，Ｅ、　Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄＨ，Ａ、　Ｌ
ｅｃｈｅｖａｌｊｅｒ：　Ｒａｐｉｃｌ　ｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｉａｔｊｏｎｂｅｔｉｉｅｅｎ　Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ　ａｎｄ針二１ニジ９狙ｂｙ　ｐａｐｅｒｃｈｒｏｍ
ａｔｏｇｒａｐｈｙ　　ｏｆ　　ｗｈｏｌｅ−ｃｅｌ、
ｌ　　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ：　　Ａｐｐｌ。

Ｎ１ｃｒｏｂｉｏ１．　１２．４２１−４２３．　１９
６４（５）　Ｙａｍａｇｕｃｈｉ、　Ｔ＋：　Ｃｏｍｐ
ａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｗａｌｌｃｏ
ｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉ
ｃａｌｌｙ　　ｄｉｓｔｉｎｃｔａｃｔｉｎｏａｙｃｅ
ｔｅｓ：　Ｊ、　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　８９．４
４４−４５３．　１９６５（６）　Ｐｒｉｄｈａｍ、　
Ｔ、　Ｇ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：　Ｔｈ
ｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｃｏ
ｍｐｏｕｎｄｓ　ｂｙ　ｓｏ＠ｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｔａｌｅｓ　ａｓａｎ　ａｉｄ　ｆｏｒ　５ｐｅｃｉ
ｅｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｊｏｎ：　Ｊ、Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ−５６：　　１０７−１１４．１９４８ （７）　Ｂｕｃｈａｎａｎ、　Ｒ＋Ｅ＋ａｎｄ　Ｎ、　
Ｅ、　Ｇｉｂｂｏｎｓ：　Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａ
ｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ、　　８ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、　ｐｐ、　
７４８−８２９：　Ｔｈｅ　Ｖｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ
す１ｌｋｊ、ｎ５Ｃｏ−、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、１９７
４（８）　Ｓｈｉｒｌｊｎｇ、　Ｅ、　Ｂ、　ａｎｄ　
Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：　Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅｄ
ｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　ｃｕｌｔｕｒ
ｅ　ｏｆ　７．２゜５ｐｅｃｉｅｓ　ｄｅｓｃｒｉｐｔ
ｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｆｉｒｓｔ　５ｔｕｄｙ、Ｉｎｔ
ｅｒｎ。

Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、１８：　　６９−
１８９，１９６ｇ（９）　ＳｈｉｒｌＬｎｇ、　Ｅ、　
Ｂ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：　Ｃｏｏｐｅ
ｒａｔｉｖｅｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ
　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　７．３゜Ａｄｄｉｔｊ、ｏｎ
ａｌ　　５ｐｅｃｉｅｓ　　ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ
　　ｆｒｏｍ　　ｆｉｒｓｔ　　ａｎｄｓｅｃｏｎｄ　
　ｓｆ；ｕｄｉｅｓ、　　Ｉｎｔｅｒｎ、　　Ｊ、　　
５ｙｓｔ＋　８ａｃｔｅｒｉｏ１．　１８：２７９−３
９２．　１９６８ （１０）Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、　Ｅ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｄ
、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：　Ｃｏｏｐｅｒａｔｊｖｅｄｅ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、　４゜５ｐｅｃｉ
ｅｓ　ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　
５ｅｃｏｎｄ　、　ｔｈｉｒｄａｎｄ　　ｆｏｒｔｈ　
５ｔｕｄｉｅｓ、　　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｊ、　５ｙｓｔ
、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

１９：　３９１−５１２．　１９６９ （１１）Ｓｋｅｒｍａｎ、　Ｖ、　Ｂ、　Ｄ、；　Ｖ、
　ＭｃＧｏｗａｎ　＆　Ｐ、　Ｈ，Ａ、　Ｓｒ＋ｅａｔ
ｈ：Ａｐｐｒｏｖｅｄ　１ｉｓｔ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒ
ｉａｌ　ｎａｍｅｓ、　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｊ。

５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　３０：　２２５−
４２０．１９８０（１２）Ｍｏｏｒｅ、　Ｗ、　Ｅ、　
Ｃｎ＋　Ｅ、　Ｐ、　Ｃａｔｏ　＆　Ｌ、　Ｖ、　Ｈ，
Ｍｏｏｒｓ：Ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　
ａｎｄ　Ｙｅａｓｔ　ＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒａｌＣｈ
ａｎｇｅｓ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　１．
　Ｊ、　Ｓ、　Ｂ、　５ｉｎｃｅ　ｔｈｅ１９８０　Ａ
ｐｐｒｏｖｅｄ　Ｌｉ５ｔｓ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉａ
ｌ　Ｎａｍｅｓ、　Ｉｎｔｅｒｎ＋Ｊ、　５ｙｓｔ、　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　３５：　３８２−４０７．１９
８５ｉｉ）培養法 本発明に係るＶＳ１２７９Ａ物質は、　５ｔｒｅｐｔｏ
＋ｗｙｃｅｓ属に属する該物質生産菌（例えばＳｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓｗｉｌｌｌｏｒｅｉ　＆１２７９）を
資化しうる炭素及び窒素源を含む栄養培地中に接種し、
好気条件下で培養することにより（例えば、振どう培養
９通気攪拌培養等）、生産せしめることができる。

炭素源としては、グルコース、シュークロース。

澱粉、フラクトース、グリセリンその他の炭水化物を使
用するのが好ましい。

窒素源としては、オートミール、イーストエキストラク
ト、ペプトン、グルテンミール５綿実粉、大豆ミール、
コーンステイープリカー、乾燥イースト、小麦胚芽、落
花生粉、チキン骨肉ミール等を使用するのが好ましいが
、アンモニウム塩（例えば、硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿素、アミノ酸
等の無機及び有機の窒素化合物も有利に使用することが
できる。

これらの炭素源及び窒素源は、併用するのが有利である
が、純粋なものを必らずしも使用する必要はない。純粋
でないものには、生長因子や微量要素が含まれているか
らである。

必要ある場合には、例えば次のような無機塩類を培地に
添加してもよい：炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、リン
酸ナトリウム、リン酸カリウム。

塩化ナトリウム、塩化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨ
ウ化カリウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩等。

特に、培地が強く発泡するのであれば、必要あるときに
、液体パラフィン、動物油、植物油、鉱物油、シリコン
等を添加してもよい。

目的物質を大量に工業生産するには、他の発酵生産物の
場合と同様に、通気攪拌培養するのが好ましい。

少量生産の場合は、フラスコを用いる振どう培養が好適
である。

また、培養を大きなタンクで行う場合、ＶＳｌ、２７９
Ａ物質の生産工程において菌の生育遅延を防止するため
、はじめに比較的少量の培地に生産菌を接種培養した後
１次に培養物を大きな生産タンクに移してそこで生産培
養するのが好ましい。

この場合、前培養に使用する培地及び生産培養に使用す
る培地の組成は、両者ともに同一であってもよいし必要
あれば両者を変えてもよい。

培養は通気攪拌条件で行うのが好ましく、例えばプロペ
ラやその他機械による攪拌、ファーメンタ−の回転また
は振どう、ポンプ処理、空気の吹込み等既知の方法が適
宜使用される。通気用のエアーは滅菌しておくのが良い
。

培養温度は１本！７Ｓ１２７９Ａ物質生産菌が本物質を
生産する範囲内で適宜変更しうるが、通常は１０〜４０
℃、好ましくは２５〜３５℃で培養するのがよい。

培養時間は、培養条件や培養量によっても異なるが、通
常は約１日〜１週間である。

１ｉｉ）分離精製法 発酵終了後、培養物から目的とするＶＳ１２７９Ａ物質
を回収する。すなわち、菌体は、直接水及び／又は有機
溶媒による抽出、あるいは、これを機械的に又は超音波
等既知の手段を用いて破壊した後、水及び／又は有機溶
媒で抽出した後、常法にしたがって回収、精製する。培
養液の場合は、直接、常法にしたがって回収、精製すれ
ばよい。

回収、精製方法としては１例えば、水、有機溶媒、これ
らの混合溶媒による溶媒抽圧；クロマトグラフィー；単
一溶媒又は混合溶媒からの再結晶等常法が適宜単独であ
るいは組合わせて使用できる。

ＶＳｌ、２７９Ａ物質の回収、精製は上記のように既知
の方法を適宜利用して行うが、通常は培養液中に蓄積さ
れることが多いので、例えば次のようにしてもよい。ま
ず、培養物の抽出液を、酢酸エチル、アセトン、または
これらの混合溶媒で抽出し、抽出液を蒸発又は蒸留して
濃縮する。濃縮残渣をクロマトグラフィ又は再結晶処理
して、必要あれば更に凍結乾燥してもよい。

このようにして得たＩＩＳ］、２７９Ａ物質は、遊離の
形で使用するほか１例えば次のような塩基で処理すると
いった常法によって薬剤上許容できる塩の形で使用して
もよく、これらの塩類も本発明の権利範囲に包含される
。

塩基として好適なものの例は次のとおりである：アルカ
リ金属（例えばナトリウム、カリウム等）、アルカリ土
金属（例えばマグネシウム、カルシウム等）、　これら
の水酸化物又は炭酸塩、アルカリ金属アルコキサイド（
例えばナトリウムメトキサイド、ナトリウムエトキサイ
ド、カリウムｔ−ブトキサイド等）その他。

（ＩＩＩ）製剤化 本発明に係る薬剤組成物は、　ＷＳ１２７９Ａ物質、そ
のジアステレオマー及び／又はその塩を有効成分として
これに常用される無機又は有機の担体を加えて、固体、
半固体又は液体の形で、経口投与剤のほか、外用剤等の
非経口投与剤に製剤化する。

経口投与のための製剤としては、錠剤、火剤、顆粒剤、
軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤。

乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げら
れる。非経口投与のための製剤としては、注射剤、軟膏
、ローション、トニック、スプレー懸濁剤、油剤、乳剤
、半開等が挙げられる。本発明の有効成分を製剤化する
には、常法にしたがえばよく、界面活性剤、賦形剤、着
色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤１等張
剤その他常用される佐薬を適宜使用する。

本発明に係る薬剤組成物の投与量は、その種類。

治療ないし予防対象疾病の種類、投与方′法、患者の年
令、患者の症状、処理時間等によって相違するが、静脈
投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分（ＷＳ１２
７９Ａ物質、そのジアステレオマー及び／又はその塩類
）を０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ投与し、筋肉投与の場合
は同じ＜０．１〜１．００ｍｇ／ｋｇ投与し、経口投与
の場合も同じ＜　ｏ、ｉ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内で
投与する。なお１本物質をラットに対して体重１ｋｇ当
り１００ｍｇ経口投与したが、格別の毒性は認められず
安全であった。

（ＴＶ）　ＷＳ１２７９Ａ物質のジアステレオマーの化
学合成 ｖｓ１２７９Ａ物質のジアステレオマーは、ベンジルオ
キシカルボニル−〇−ｔ−ブチルセリンｔ−ブチルエス
テル（ＦＲ１３３５１５）を原料とし、第１図に図示し
たスキームによって製造することができる。

（Ｖ）　ＷＳ１２７９Ａ物質およびＷＳ　ｌ　２７９Ａ
物質のジアステレオマーの生物学的活性 ｉｎ　ｖｉｔｒｏマウス骨髄細胞増殖促進作用カーユ直 仔牛血清（１０％）、　Ｌ−ｃｅｌｌ培養上澄（２，５
％）含有ダルベツコ改変イーグル氏培地で希釈したＷＳ
１２７９Ａ物質またはそのジアステレオマーを９６ｗｅ
ｌｌに５０μΩずつ入れ、そこに同培地に懸濁したマウ
ス骨髄細胞３　Ｘ　１０’ｃｅｌｌｓ／ｍＱを、２５μ
ｕずつ入れ、５％Ｃ０２，３７℃で４日間培養した。培
養終了後、３−　（４。

５−ジメチル−２−チアゾイル）−２，５−ジフェニル
−２）１−テトラゾリウム（ＮＴＴ）の５　ｒａｇｌ−
Ｑ溶液を１０μｎずつ各−ａｌｌに添加し、さらに６時
間インキュベートした。インキュベート終了後、０．０
４Ｎ塩酸−イツブロバノール１５０μＱを各ｗｅｌｌに
添加して、生じた還元型ＮＴＴを溶かしＯＤ６．。を測
定した。薬剤非添加群のＯＤ７．。を１０％促進させる
濃度をＮＥＣ（最小有効濃度）とした。

結果 １Ｎｓ１．２７９Ａ物質およびシ５１２７９Ａ物質のジ
アステレオマーのｊ、ｎ　ｖｉｔｒｏマウス骨髄細胞増
殖促進作用の結果を表５に示す。

表５の結果から明らかなように、ＷＳ　１２７９Ａ物貿
及びそのジアステレオマーはすぐれた結果を示し。

前者は特に低いＮＥＣを示した。

ＥＣ ＶＳ１２７９Ａ物質 １０ｎｇ／ｍ１２ 上記の結果から明らかなように、　　ＶＳ１２７９Ａ物
質及びそのジアステレオマーが卓越した白血球減少回復
作用を有することから、これらの物質は、例えば抗藻剤
投与時の白血球減少症の予防及び／又は治療薬として利
用することができ５抗癌剤の作用を側面からアシストす
ることができる。

以下１本発明を実施例について更に詳しく説明する。

実施例１ （１）　５ｔｒｅｐｔｏ＋ｗｙｃｅｓ　ｗｉｌｌｍｏｒ
ｅｉ　＆１２７９　（ＦＥＲＭ　Ｐ１１４０５）の斜面
培養物を表６に示した前培養培地（培地１５０ｍＮ１５
００ｍＱフラスコ）シこ一白金耳ずつ接種し、３０℃で
３日間培養した。さらにこの第１前培養物を前培養培地
（培地１６０園Ｑ１５００ｍＧフラスコ）に０．６％シ
ートし、３０℃で１日間第２次前培養した。

得られた第２次前培養物を表６に示した本培養培地（培
地＋４０　Ｑ　／２００　Ｑジャーフッメンタ−）に１
．７％シートし、通気量１ｖｖＭ、回転数２５Ｏｒｐｍ
、温度３０°Ｃで４日間本培養した。

（２）　２００Ｑ容ジャーファーメンタ−培養２基分の
培養濾液２４０Ｑを６Ｎ　ＨＣＱでＰＨ２に調製後、１
２０Ｑの酢酸エチルで２回抽出し、これを２０１２まで
減圧濃縮した。

濃縮液を水ｔＯＱで洗浄後、ＩＯＡの５％炭酸水素ナト
リウム溶液で２回抽出し、６Ｎ　ＨＣＱでｐ＋＋２に調
製後、ＩＯＡの酢酸エチルで２回抽出し、これを減圧濃
縮した。濃縮液に無水硫酸ナトリウムを加え脱水後、５
ｉｌｉｃａｒ　ＣＣ−４（阿ａｌｌｉｎｃｈｒｏｄｔ）
　２５０ｒａｆｌにまぶした。

これをあらかじめｎ−ヘキサンでパンクした５ｉｌｉｃ
ａｒ　ＣＣ−４５００ｎＱに付し、ｎ−ヘキサン０．８
１２．ｎヘキサン−酢酸エチル（３：　ｌ）　１．６Ｑ
、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：　１）　１．ｉ、酢
酸エチル１．６Ｑで順次カラムを洗浄後、酢酸エチル−
アセトン（１：　１）３．２Ｑで活性画分を溶出した。

この溶性画分を減圧濃縮して得られる油状物質１２ｇを
、２００ａｒｇ／ｕａＱになるように６０＋ｍＱのメタ
ノールで溶解し、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ　ＲＰ−８（Ｌ
ｏｂａｒ　ｃｏｌｕｌＩｎ、　５ｉｚｅＢ、　Ｍｅｒｃ
ｋ）に５＋＋＋Ｑ付し、メタノールで展開すると活性画
分は１８０ｍＱ〜３８０ｔＱの間に収率良く溶出された
。この操作を１２回繰り返し、活性画分を集め減圧濃縮
した。

得られた油状物質２５０＋ｓｇを５社のメタノールに溶
解し、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ　ＲＰ−８に付し、メタノ
ールで展開すると活性画分は１８０ｍＱ〜３８０ｍ１２
の間に収率良く溶出された。活性画分を集め、減圧濃縮
すると。

褐色粗粉末５０ｍｇが得られた。この段階で、２００Ｑ
容ジャーファーメンタ−培養１０基分の褐色粉末をまと
めて２５０ｍｇとし、５ＩＩＱのメタノールに溶解し、
ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ　ＨＷ−４０（ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ
）（東洋曹達）２５０ｍ　Ｑに付し、メタノールで展開
した。溶出液を２０ｉＱずつ分画すると、Ｅ成分（フラ
クション８〜１１．５５ｍｇ、純度３０％）、Ｄ成分（
フラクション１２−１４．１５ｔｒｔｇ、純度９０％）
、Ｃ成分（フラクション１５〜１７．１２Ｂ。

純度８０％）、Ｂ成分（フラクション１８〜２０．８ｍ
ｇ。

純度８０％）、Ａ成分（フラクション２１〜３０．２０
１ｇ、純度９５％）、が順次溶出されてきた。

このうち、収量が多く、純度も高いＡ成分を構造決定に
供した。必要があれば、さらにシリカゲルプレート（Ｍ
ｅｒｃｋ）を用い、クロロホルム−メタノール−水（１
０：　６　：　１）で展開しプレパラティブ薄層クロマ
トグラフィを行い、ＷＳ１２７９Ａ物質を高純度で得た
。

実施例２　錠剤の製造 （１）実施例１で製造した物質　　ｓｏｇ（２）ラクト
ース　　　　　　　　９０ｇ（３）コーンスターチ　　
　　　　２９ｇ（４）ステアリン酸マグネシウム　１ｇ
（１）、（２）及び（３）（但し１７ｇ）を混合し、（
３）（但し７ｇ）から真裏したペーストとともに顆粒化
した。

得られた顆粒に（３）（但し５ｇ）と（４）を加えてよ
く混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して。

１錠あたり有効成分（１）を５０ｍｇ含有する錠剤１０
００個を製造した。

実施例３　注射剤の製造 （１）実施例４で製造した物質　５ｇ （２）食塩　　　　　　９ｇ （３）クロロブタノール　　　　５ｇ （４）炭酸水素ナトリウム　　　１ｇ （１）〜（４）の全成分を蒸留水１０００ａｌｌに溶解
した後、アンプルに１１ずつ分注して、注射剤１０００
本を製造した。

実施例４ Ｆｌ’１１３３５１５　　　　　　　　　　　　ＦＲ１
３３５１４Ｚ−５ｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−（）−ｔ−Ｂｕ　
　　　　　　Ｈ−５ｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−０−ｔベンジル
オキシカルボニル−〇−１−ブチルセリンｔ−ブチルエ
ステル（ＦＲ１３３５１５）　（１３，７ｇ）を、常法
にしたがってパラジウム黒の存在下で接触還元して、ベ
ンジルオキシカルボニル基を除去し、０−ｔ−ブチルセ
リンｔ−ブチルエステル（ＦＲ１３３５１４）を得た。

ＦＲＩ３３５１７ Ｚ−Ｇｕｙ−（）ＩＩＩＰ ０−ｔ−胸 ＦＲ１３３５１６ Ｚ−Ｇｌｙ−５ｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−０−ｔ−Ｂｕ前（１
）で得たＦＲ１３３５１４の全量と、ベンジルオキシカ
ルボニルグリシン　ρ−ニトロフェノール　エステル（
ＦＲ１３３５１７）　（７，４ｇ）をＤＭＦ　（ジメチ
ルホルムアミド）（５０ｉＱ）に溶解し、室温にて４８
ｈｒ攪拌した。

溶媒を留去し、残渣オイルを酢酸エチルに溶解し、酢酸
エチル層を５％Ｎａ２Ｃｏ、、１０％クエン酸、水で洗
浄後、Ｎａ２５ｏ、で乾燥した。溶媒を留去してオイル
状の粗生成物を得た。

これをＣＨＣＱ、　　５　ｎ＋Ｒに溶解し、シリカゲル
（ＹＭＣシリカゲル６０人７０−２７０−２３Ｏ，５Ｘ
　２６ｃＩＩ＋）に付し。

ＣＨＣＱ、で溶出した。２．０Ｑ溶出した後、ＩＱのＣ
ＨＣＱ、溶液を集め、溶媒を留去してオイル状の目的物
質、ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ａ　−ｔ−ブ
チルセリン　し−ブチル　エステル（ＦＲ１３３５１，
６）を得た。収量８．２ｇ（，８９％）。

以下の実施例においては酸分解物のアミノ酸組成は協和
精密に−１０１，ＡＳアミノ酸分析器により測定した。

また、薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬＣ）はシリカ
ゲルプレート（Ｋｉｅｓｅ１４ｅｌ　６０Ｇ＋　Ｅ、Ｍ
ｅｒｃｋ社製）により行った。

Ｒｆ値は以下の溶媒系での値を示した。

Ｒｆ’　：　ＣＨＣＱ、　：メタノール：酢酸（９０：
８：２）Ｒｆ”　：　ＣＨＣＱ３：メタノール：水　（
８９：１０：１）Ｒｆ３：　ＣＨＣｌ２３：メタノール
：水　（８：３：１）（下層）Ｒｆ’　：　ｎ−ブタノ
ール：酢酸：水　（４：１：５）（上層）Ｒｆ’　：　
ｎ−ブタノール：酢ａ：ピリジン：水（１：１：１：１
） Ｒｆ”　０．７３、Ｒｆ２０．６３ ６Ｎ−ＨＣＱ、１１０℃、１８ｈｒ酸加水分解後のアミ
ノ酸分析値：　Ｓｅｒ　１．００．　Ｇｌｙ　１．００
Ｃ２１１（，２Ｎ２０．（Ｍ、Ｗ、　４０８．４）理論
値：　Ｃ６１，７４；　Ｈ７，９０；　Ｎ　６．８６実
験値：　Ｃ６１，６９：　Ｈ７，９３；　Ｎ　６，７９
−ｔ−Ｂｕ Ｃｌ−１゜ ■ 缶１．３３５１９ Ｈ−Ｇｌｙ−５ｅｒ　（ｔ−Ｂｕ）−０−ｔ−Ｂｕ前（
２）で得たＦＲ１３３５１６（８，２ｇ）を、 常法にしたが ってパラジウム黒の存在下で接触還元して、ベンジルオ
キシカルボニル基を除去し、グリシル−〇−ｔブチルセ
リンｔ−ブチルエステル（ＦＲ１３３ｓ１９）を得た。

ＦＢＩ３３５１８ Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−５ｅｒ＜ｔ−Ｂｕ）÷ｔ−Ｂｕ前
（３）で得たＦＲ１３３５１９の全量とＦＲ１３３５１
７（６，３ｇ）をＤＭＦ　８０ｍｆｌに溶解し、室温に
て４８ｈｒ攪拌した。

溶媒を留去し、＄１渣オイルを酢酸エチルに溶解し、酢
酸エチル層を５％Ｎ劫ＣＯ７，１０％クエン酸、水で洗
浄した後、Ｎａ、ＳＯ４で乾燥した。

溶媒を留去し、残渣オイルに石油エーテルを加え、薄貨
色の粉末状化合物を得た。粗生成物を酢酸エチル−エー
テルより再結晶し、白色粉末状の目的物質、ペンジルオ
キシ力ルポニルグリシルグリンルー０−１−ブチルセリ
ン　ｔ−ブチル　エステル（ＦＲ１３３５１８）を得た
。収量５　、７ｇ　（６４％）。

融点＝９２〜９８℃ Ｒｆ’　０．５０．　Ｒｆ２０．４４ 比旋光度＝〔α〕ら”＋５．８°（Ｃ＝１．０、メタノ
ール）６Ｎ−１＋ｃＱ、　１１０℃、１８ｈｒ酸分解後
のアミノ酸分析値：Ｓｅｒ　１．００、Ｇｌｙ　１．９
５（平均回収率７８％） （）ｔ−Ｂｕ Ｃ８４ 団１３３５２１ Ｈ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−５ｅｒ　（ｔ−Ｂｕ）−ｏ−ｔ−
Ｂｕ前（４）で得たＦＲ１３３５１８（５，６ｇ）を、
常法にしたがってパラジウム黒の存在下で接触還元して
、ベンジルオキシカルボニル基を除去し、グリシルグリ
シル−〇−シーブチルセリン　し−プチルエヌテル（Ｆ
Ｒ１３３５２１）を得た。

ベンジルオキシカルボニル−〇−１−ブチル−セリンの
ジシクロヘキシルアミン塩を６．１ｇ＃ｍエチルに懸濁
し、水冷下１０％クエン酸を加え、３０分間攪拌し、有
機層を取り、有機層を水で洗浄した後、Ｎａ２ＳＯ４で
乾燥し、溶媒を留去して、ベンジルオキシカルボニル−
０−ｔ−ブチルセリン（Ｆ）ｔ１３３００６）　を得た
。

ＦＲｌ、３３５２１ ＦＲ１３３００６ ↓ ＦＲ１３３５２０ （）−１−関 （）−ｔ−Ｂｕ 前（５）で得たＦＲ１３３５２１の全量と前（６）で得
たＦＲ１３３００６の全量をＤＭＦ　８０ｍＱに溶解し
、ブタノール１．６ｇを加え、氷−食塩にて冷却した。

上記溶液にジシクロへキシルカルボジイミド２．７ｇを
加え、４℃で１５時間攪拌した。生じたＤＣｕｒｅａを
濾過して除き、溶媒を留去し、残渣オイルを酢酸エチル
に溶解した。酢酸エチル層を５％Ｎａ２ＣＯ３−１０％
クエン酸７水で洗浄した後、　Ｎａ２５ｏ。

で乾燥した。溶媒を留去し、残渣オイルに石油エーテル
を加え、薄黄色の粉末状化合物を得た。

粗生成物をＣＨＣＱ、５ＩＩＩＱに溶解し、シリカゲル
カラム（ＹＭＣシリカゲル６０人７０〜２３０ａ＋ｅｓ
ｈ、４Ｘ３４Ｃ１１に付し、Ｃ）ＩＣＮ］（１，５Ｑ　
）、　０．５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ２３（０，９Ｑ）で
溶出した後、０．５％メタノール／ＣＨＣＱ、　（０，
３Ｑ）、１％メタノール／ＣＨＣＱ、　（０，６Ｑ　）
　を集め、合して溶媒を留去し、残渣オイルに石油エー
テルを加えて、白色粉末状の目的物質、ベンジルオキシ
カルボニル−０−１−ブチルセリルグリシルグリシル０
−１−ブチルセリンｔ−ブチル　エステル（ＦＲ１３３
５２０）を得た。収量４．７ｇ（６４％）。

融点＝１４８〜１５１’Ｃ Ｒｆｌｏ、５７、Ｒｆ２０．４６ 比旋光度：　［α）Ｄ２＋　５．８°（Ｃ＝０．９２、
Ｍｅａｔ（）６Ｎ−ＨＣＲ５１１０℃、１８ｈｒ酸加水
分解後のアミノ酸分析値：　Ｓｅｒ　１．９２．　Ｇｌ
ｙ　２．００（Ｇｌｙの回収率７４％） Ｓｅｔ　（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−５ｅｒ　（ｔ
−Ｂｕ）−０−ｔ−Ｂｕ前記（７）で得たＦＲ１３３５
２０を、常法にしたがってパラジウム黒の存在下で接触
還元して、ベンジルオキシカルボニル基を除去し、０−
１−ブチルセリルグリシルグリシル−０−ｔ−ブチルセ
リン　し−ブチルエステル（ＦＲ１３１，６７９）を得
た。

ＦＲ１３３５２３ ＦＲ１３］６７９ ＦＲ１３３５２２ 前（８）で得たＦＲ１３１６７９の全量とベジルオキシ
力ルボニルアスパラギン　ｐ−ニトロフェノール　エス
テル（ＦＲｌ、３３５２３）　（１，５ｇ）をＤＭＦ（
２０ｍ（ｔ）に溶解し。

室温にて４８ｈｒ攪拌した。溶媒を留去し、残渣に酢酸
エチルを加えるとゲル状沈澱物が生したのでこれを濾過
し、粗生成物を得た。

これをエタノール！５ｍＱに溶解し、セファデックスＬ
Ｈ−２０カラム（：３．５　Ｘ　１２７ｃｍ）に付し、
エタノールで溶出し、８ｇずつ分取した。Ｎｏ’、　３
４〜４２の両分を集め、溶媒を留去し、残渣に酢酸エチ
ルを加え留去をくり返し、残渣にエーテルを加え、生じ
たゼラチン状沈澱を濾取し一白色粉末状の目的物質。

ベンジルオキシカルボニルアスパラギニル−０−ｔ−ブ
チルセリルグリシルグリシル−〇−ｔ−ブチルセリンｔ
−ブチルエステル（ＦＲ１３３５２２）を得た。収量１
．９ｇ（６９％）。

融点：１４２〜１４５．５℃ Ｒｆ”　０−３４、Ｒｆ２０．２６ 比旋光度：〔α〕♂２−１．２°（Ｃ＝０．９７、ＤＭ
Ｆ）６Ｎ−ＨＣ１２，１１０℃、１８ｈｒ酸分解後のア
ミノ酸分析値：　Ａｓｐ　１．１０、Ｓｅｒ　２．０．
　Ｇ１．ｙ　２．０（Ｇｌｙの回収率８０％） Ｃ３４Ｈ，４ＮＧＯ□□（Ｍ、す、　７２２．８）理論
値：　Ｃ５６，５０：　Ｈ７，５３；　Ｎ　１１．６３
実験値二〇 ５６．３０； Ｉイ ア、７９； １１、：１３ Ｆ７１１３１９２７ Ａｓｎ−５ｅｔ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−５ｅｒ
（ｔ−Ｂｕ）−（）−ｔ−Ｂｕ前（９）で得たＦＲｌ、
３３５２２（１，５ｇ）をメタノール５０ｍＮに溶解し
、パラジウムブラック存在下接触還元を４ｈｒ行った。

パラジウムブラックを濾過して除き溶媒を留去して後、
残渣オイルをエタノールに溶解して留去をくり返し、残
渣にエーテル、石油エーテルを加え、生じた沈澱を濾過
し、白色粉末状の目的物質、アスパラギニル−０−ｔ−
プチルセルルグリシルグリシルー０−ｔ−ブチルセリン
　ｔ−ブチルエステル（ＦＲ１３１９２７）を得た。収
量１．１４（９１％）。

融点＝６２〜７８℃ Ｒｆ’　０．１１ 比旋光度：〔α）５２＋ｏ、ｚ’　（Ｃ＝０．４８、Ｄ
−Ｆ）６Ｎ−ＨＣＱ−１１，０℃−８ｈｒ酸分解後のア
ミノ酸分析値：Ａｓｐ １、Ｏｌ Ｓｅｒ １．０、 Ｇｌｙ １．０ 酸分桁値：　Ａｓｐ ■、０、 Ｓｅｒ １．０゜ Ｇｌｙ １．０ （Ｇｌｙの回収率７０％） Ｃ２Ｇ８４８ＮＧＯ！　ＣＭ、ｗ。

５８８．１） 理論値二〇 ５３．０７； ■ ８．２１； １４．２７ 実験値：Ｃ ５２，７５； ８．２６； １３．９８ Ｆ７１１３３５２５ 開、０ＣＯ１４，）！お ＣＨＯＱ）Ｃ，、Ｈ，。

ＦＲ１３３５２４ Ｓ−（２，３−Ｂｉｓ（パルミ トイルオキシ） （Ｒ，Ｓ）ヘプ ロピル］−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−システィン（Ｆ
Ｒ１３３５２５）口、Ｏｇ）をジクロロメタン２０Ｉｌ
ＩＱに溶解し、ＤＭＦ（３ｍＱ）に溶解したブタノール
（０，１４ｇ）を加え、氷−食塩で冷却下攪拌した。そ
こへジシクロへキシルカルボジイミドを加え、そのまま
３０分間攪拌した。

前（１０）で得たＦＲｌ、３１９２７　（０，５８ｇ）
をジクロロメタン（２０ｍＱ）およびＤＭＦ（２ＩＩ＋
Ｑ）に溶解し、これを前述の反応液に加え、室温で１５
ｈｒ攪拌した。

溶媒を留去した後、残渣をＣＨＣＱ、　４ｒｍＱに懸濁
し、メタノール１０１１Ｉｎを加え熱時溶解後、冷凍庫
に４ｈｒ放置した。生じたゲル状の沈澱物を濾取し、デ
シケータ−で乾燥した。

粗生成物をＣＨＣＱ、　３ｍＨに懸濁し、メタノール６
ｍＱを加え加熱溶解後、そのまは室温で放置し、ゲル状
沈澱物が生じたところで冷凍庫に入れ、３ｈｒ放置した
。沈澱物を濾過し、メタノール−クロロフォルム混合液
で洗浄して、目的物質、５−（２，３−Ｂｉｓ（パルミ
トイルオキシ）−２−（Ｒ，Ｓ）−プロピル〕−Ｎ−パ
ルミトイル〜（Ｒ）〜システイニルアスパラギニルー０
−シーブチル−セリルグリシルグリシル−〇−シーブチ
ルセリン　し−ブチル　エステル（ＦＲ１３３５２４）
を得た。

収量１．２ｇ（８０％）。

融点：１７９〜１８７℃ Ｒｆ’　０．５１ ６Ｎ−ＨＣＱ、１１０℃、　１８ｈｒ酸分解後のアミノ
酸分析値：　Ａｓｐ　１．１．　Ｓｅｒ　１．８、Ｇｌ
ｙ　２．０（Ｇｌｙの回収率８３％） Ｃ，、ｌ（，４，Ｎ７０．、Ｓ・２Ｈ２０（Ｍ、Ｗ、　
１５１７．１．）理論値：　Ｃ６３，３３；　Ｈ１０，
１６；　Ｎ　６．４６実験値：　Ｃ６３，６８；　Ｈ１
０，１１；　Ｎ　６．６２（］２） ＣＨ２（ト）烏、１１．□ ＣＨＯＣＯＣｌ、Ｈ，。

ＣＨ。

ＦＲ１２８１７６ 前（１１）で得たＦＲ１３３５２４（１，０ｇ）にトリ
フルオロ酸１１２５　、４　ａｔ　Ｄを加え、０℃で１
０分間、室温で３ｈｒ攪拌した。室温でトリフルオロ酢
酸を留去した後、残渣に水２０＋ｎＱを加え、留去した
。残渣にＣＨＣＱ、　６−Ｑを加ノて加熱し、やや濁っ
た状態のところへメタノール１０ｖＩＱを加え加熱して
溶解し、水冷した。

沈澱物を濾取し、ＣＨＣＱ、−メタノールで洗浄した。

粗生成物をメタノール５■Ｑに懸濁し、ＣＨＣＱ、　８
ｍＱを加え加熱して溶解した後、冷蔵庫で放置した。

沈澱物を濾取し、白色粉末状の目的物質、５−（２，３
−ビス（パルミトイルオキシ）−２−（Ｒ，Ｓ）−プロ
ピル〕−〜バルミトイル−（Ｒ）−システイニルアスパ
ラギニルセリルグリシルグリシルセリン（ＦＲ１２８１
７６）を得た。収量０．５６ｇ　（６２％）。

融点：　２００．５〜２０３．５℃ Ｒｆ３０．１０ ６Ｎ−ＨＣＱ、１１０℃、１８ｈｒ酸分解後のアミノ酸
分析値：　Ａｓｐ　Ｏ，９４，Ｓｅｒ　２．０３、Ｇｌ
ｙ　２．００（Ｇｌｙの回収率９４％） Ｃ，、Ｈ□２．Ｎ、００．Ｓ・３Ｈ２０（Ｍ、Ｗ、　１
３６６．８）理論値：　Ｃ５９，７５；　Ｈ９，６６；
　Ｎ　７．１７実験値：　Ｃ５９，５５；　Ｈ９，４０
；　Ｎ　７．４１（発明の効果） 本発明は、　１１ｓ１２７９Ａ物質及び−５１２７９Ａ
物質のジアステレオマーを提供するものであるが、これ
らの物質は、いずれも文献未載の新規物質であって、す
ぐれた白血球減少回復作用を示し、医薬、特に抗腫瘍剤
投与時の白血球減少症の予防及び／又は治療剤として有
用である。

また、本発明によって、微生物を利用するそしてまた化
学合成法による上記物質の工業的製法も確立された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＷＳＩ２７９Ａ物質のジアステレオマーの製
造スキームを図示したものである。 代理人　弁理士　戸　１）親　男

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記の物性を有することを特徴とするＷＳ１２７
   ９Ａ物質： （Ａ）核磁気共鳴スペクトル ＾１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ＿３ＯＤ−ＣＤＣｌ＿３）δ（ｐ
   ｐｍ）：０．８５（９Ｈ、ｍ）、１．２５（７２Ｈ、ｍ
   ）、１．６０（６Ｈ、ｍ）、２．３０（６Ｈ、ｍ）、２
   ．８（５Ｈ、ｍ）、３．０６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５
   、１４）、３．７５〜４．０（８Ｈ、ｍ）、 ４．１３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．５、１２）、４．３１
   （１Ｈ、ｍ）、４．３７（１Ｈ、ｍ）、４．４５（１Ｈ
   、ｍ）、４．５１（１Ｈ、ｍ）、４．６５（１Ｈ、ｍ）
   、５．１８（１Ｈ、ｍ）（２）下記の推定構造式を有す
   ることを特徴とするＷＳ１２７９Ａ物質： （但し、グリセリン部分の２位の立体配位は（Ｒ）また
   は（Ｓ）であるが、そのいずれであるかは確定できない
   。） （３）Ｓ−〔２，３−Ｂｉｓ（パルミトイルオキシ）−
   ２−（Ｒ，Ｓ）−プロピル〕−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ
   ）−システイニルアスパラギニルセリルグリシルグリシ
   ルセリン。 （但し、グリセリン部分の２位の立体配位が（Ｒ）又は
   （Ｓ）であるジアステレオマー及びそれらの混合物を含
   む。） （４）請求項１ないし３のいずれか１項に記載の物質又
   はそれらの混合物を有効成分とすることを特徴とする骨
   髄細胞増殖促進剤及び／又は抗白血球減少剤。 （５）ストレプトミセス属に属するＷＳ１２７９Ａ物質
   生産菌を培養することを特徴とする請求項１ないし３の
   いずれか１項に記載の物質の生産方法。