JPH0462317B2

JPH0462317B2 -

Info

Publication number: JPH0462317B2
Application number: JP61113323A
Authority: JP
Inventors: Chosei Seki; Kyoshi Den; Teruyoshi Marunaka; Ichiro Yamawaki; Toshio Ootani; Kensuke Minami
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1986-05-16
Filing date: 1986-05-16
Publication date: 1992-10-05
Also published as: JPS62270587A

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は、新規な4181−２物質及びそのアシル
誘導体に関するものである。従来の技術本発明の4181−２物質及びそのアシル誘導体
は、文献末記載の新規化合物である。発明が解決しようとする問題点本発明の目的は、ある種のグラム陽性菌、陰性
菌、真菌類に対して増殖抑制作用を示し、かつ制
癌作用を示す新規な抗生物質として有用な新規物
質を提供することにある。問題点を解決するための手段上記目的は、下記一般式（）で表わされる本
発明に係る化合物により達成される。一般式（式中、Ｒは水素原子又はアシル基を示す。）Ｒで示されるアシル基としては、炭素数２〜５
の例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル
基、バレリル基等が挙げられる。本発明化合物と製造方法は、上記室式中、置換
基Ｒが水素原子である化合物（以下4181−２物質
と称する。）については、微生物の培養により得
ることができる。すなわち、4181−２物質の生産
能力を有する菌株（以下4181−２物質生産菌と称
する。）を適当な条件下で培養することによつて、
菌体または培養液から採取することができる。更
に、アシル誘導体は、4181−２物質を原料として
通常用いられるアシル化反応により合成すること
ができる。例えば有機溶媒の存在下又は非存在
下、アンモニア或いはピリジン、トリエチルアミ
ン等の有機塩基類、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム等の金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸
水素カリウム等の無機塩類、酸化銀等の金属酸化
物等の無機塩基の存在下、または非存在下に4181
−２物質とアシルハライドまたは酸無水物とのエ
ステル体を反応させることにより、アシル誘導体
を得ることができる。有機溶媒としては、ヘキサン等の炭化水素類、
クロロホルム等のハロゲン系炭化水素類、エチル
エーテル、ジオキサン等のエーテル類、アセトン
等のケトン類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭
化水素等、ニトロメタン、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性
溶媒を単独であるいは、複数混合して使用するこ
とができる。また上記塩基類は必要に応じ溶媒と
しても使用できる。 4181−２物質の製造に用いる菌株としては、
4181−２物質を生産できる菌株であれば、どのよ
うな菌株でも良いが、一例として本発名者らが分
離したストレプトミセス層に属する4181菌株が挙
げられる。この4181菌株は、本発明者らが中華人
民共和国四川省峨嵋山（ウーメイシヤン）の土壌
から新たに分離したストレプトミセス属に属する
菌株であり、通商産業工業技術院微生物工業技術
研究所に受託番号「微工研条寄第1010号」
（FERM BP−1010）として寄託されている。こ
の菌株の菌学的性質は次の通りである。菌学的諸性質 (a) 形態胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝。胞子形成形態：直状（胞子の形は円筒状）。胞子の数：10胞子以上。胞子の表面構造：平滑。胞子の大きさ：0.8〜1.0×1.1〜1.50ミクロ
ン。鞭毛胞子の有無：無。胞子のうの有無：無。胞子柄の着生位置：気菌糸。菌核形成性の有無：無。 (b) 各種培地における生育状態を第１表に示す。

【表】 (c) 生理的諸性質 (1) 生育温度範囲；26〜30℃の温度範囲で良好
に生育する。40℃以上の温度範囲では生育し
ない。 (2) ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼ
ラチン培地）；陽性（３週間以上）。 (3) ミルクの凝固；陰性。ミルクのペプトン化；陽性。 (4) メラミン様色素の生成；チロシン寒天（ISP−７培地）及びペプトン・酵母エキ
ス・鉄寒天（ISP−６培地）培地上で陰性。 (5) 硫化水素の産生；陰性。 (6) スターチの加水分解（スターチ寒天培
地）；陽性。 (7) 硝酸塩の還元；陰性。 (8) セルロースの分解性；陽性。 (d) 炭素源の利用性（プリードハム・ゴトリーブ
寒天培地、ISP−９倍地）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グ
ルコース、Ｄ−フラクトース、イノシトール、
Ｌ−ラムノース、ラフイノース、Ｄ−マンニト
ール、シユークロース、スターチ、Ｄ−マンノ
ース、マルトール、Ｄ−ソルビトール、セルロ
ース、イヌリンのいずれの炭素源をも良く利用
して生育する。 (e) 菌体組成ベツカー（Becker）らの方法［アプライド．
マイクロバイオロジー（Appl.Microbiol.）、
12、421〜423（1964）］により分析した結果、
LL−型のジアミノピメリン酸及び少量のグリ
シンが検出された。以上の菌学的性質から本4181菌株は基中菌糸よ
り多数の報糸の連鎖を有する気菌糸を形成し、ジ
アミノピメリン酸がLL−型であり、鞭毛胞子や
胞子のうを形成しない性質を有することより、ス
トレプトミセス属に属する菌株であることは明ら
かである。よつて本菌株をストレプトミセス・ス
ピーシーズ4181（streptomyces species，4181）
と称することとした。本発明の4181−２物質を例えば上記のようなス
トレプトミセス属に属するストレプトミセス・ス
ピーシーズ4181（streptomyces species，4181）
又はその各種変異株を適当な培地に培養すること
によつて製造する場合について説明する。培養方法は原則的には一般微生物の培養方法に
準ずるが、通常は液体培養による振盪培養法、通
気攪拌培養法などの好気的条件下で行なうのが良
い。培養に用いられる培地としては、ストレプト
ミセス属に属する4181−２物質生産菌が利用でき
る栄養源を含有する培地であればよい。すなわち、合成培地、半合成培地あるいは天然
培地を用いることができる。培地の組成は炭素源
としてグルコース、シユークロース、フラクトー
ス、グリセリン、デキストリン、澱粉、糖蜜、コ
ーン・ステイープ・リカー、有機酸等が単独又は
組合せで用いられる。窒素源としてはフアーマメ
デイア、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆
粉、ガゼイン、アミノ酸、尿素等の有機窒素源、
硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素
源が単独又は組合せで用いられる。ナトリウム
塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、そ
の他の重金属塩等も必要に応じて添加される。また、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆
油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テ
トラデカノール、ヘプタデカノール等の高級アル
コール類、各種シリコン化合物等の消泡剤を適宜
添加してもよい。培地のPHは、やや酸性ないし中性付近で培養を
行なうのが好ましい。培養温度は4181−２物質生
産菌が通常20〜37℃程度の温度下で生育するの
で、通常20〜37℃、特に好ましくは27〜30℃付近
に保つのが良い。培養時間は液体培養の場合、２
〜５日間程度培養を行なうと4181−２物質が生成
蓄積される。以上述べた培養条件から使用生産菌株の種類や
特性、外部の条件などに応じてそれぞれの最適条
件を適宜選択、調節して適用することができる。
この培養により生産された抗生物質として有用な
4181−２物質を単離するには発酵生産物を採取す
る一般的な方法に準じて行なうことができる。例
えば溶媒抽出、液性交換、あるいは結晶化等の各
種手段を単独または任意の順序に組合せて用いる
ことができる。詳しくは、培養して得られた培養物中に蓄積さ
れた4181−２物質は培養液と菌体に含有される
ので、遠心分離又は過等の手段で培養液と菌
体に分離した後、得られた菌体についてはアセト
ン、メタノールなどの溶媒にて目的物質を抽出す
る。又得られた4181−２物質を含む培養液につ
いては、水と混合しない酢酸エチル、クロロホル
ム、ブタノール等の溶媒を用いて4181−２物質を
有機溶媒層に転溶させ、得られた溶媒層に芒硝を
加え、脱水後、溶媒を減圧下で留去すれば4181−
２物質を含む粗抽出物を得ることができる。必要
があれば、塩酸又は硫酸にてPHを調節したり、又
工業用食塩等を加えることにより抽出効率を高く
したり、エマルジヨン防止などの方法を講じるこ
とができる。更に精製するためには通常の脂溶性低分子物質
の精製手段を適用できる。すなわちシリカゲル、
アルミナ、マクロポーラス非イオン系吸着樹脂等
の吸着剤による種々の吸着クロマトグラフイーが
使用できるが、溶出溶媒クロロホルム／メタノー
ルの混合溶媒系を用いるシリカゲルクロマトグラ
フイーが最も有効に利用できる。又、更に精製を
必要とする場合には上記のクロマトグラフイーを
くり返すか、あるいはクロロホルム、メタノー
ル、アセトン等の溶媒を用いる再結晶等の手段を
適宜くみあわせて行なうことにより高純度の4181
−２物質を単離、精製することができる。このようにして得られた4181−２物質及び4181
−２物質アシル誘導体は、グラム陽性菌、グラム
陰性菌又は真菌類に広く抗菌スペストラムを有す
るのみならず、すぐれた抗腫瘍作用をも有する化
合物である。次に、本発明化合物の抗菌、抗真菌
作用及び抗腫瘍効果について薬理試験結果を示
す。＜薬理試験＞抗菌スペクトラム 4181−２物質の抗菌、抗真菌活性をグラム陽
性、陰性細菌では栄養寒天培地を用い、又真菌
類に対してはサブロード寒天培地を用いて系列
２倍希釈法により、最少発育阻止濃度（M.I.
C.）で測定した。4181−２物質の各種微生物に
対する抗菌スペクトラムは第１表に示した通り
である。抗腫瘍活性 4181−２物質及びそのアセチル誘導体の抗腫
瘍活性をマウス白血病に対する延命効果で判定
した。試験動物としてBALB／ＣとDBA／２
の交配第一代マウス（BDF₁マウス）を各群６
匹用い、DBA／２マウス由来の白血病P₃₈₈細
胞の10⁶個を腹腔内移植した。翌日に0.2％ツイ
ーン80の生理食塩水溶液に懸濁させた4181−２
物質又はそのアセチル誘導体を１回腹腔内に投
与し、生存日数を観察した。結果を第３表に示
す。また、延命増加率（％）は下式に算出し
た。延命増加率（％）＝（化合物投与群の平均生
存日数／無処置群の平均生存日数−１）×100

【表】

【表】次に、実施例を挙げて更に詳細に説明する。なお、精製工程中の有効物質の確認は、4181−
２物質により増殖抑制作用のみられるスタフイロ
コツカス・アウレウス 209P（staphylococcus
aureus 209P）、サルシナ・ルテイア ATCC
9341（Salcina lutea ATCC 9341）等の微生物を
用いたバイオアツセイ法及びバイオ・オートブラ
フ法、又はヒト鼻咽喉癌由来の株化培養細胞
（KB細胞）に対する殺細胞効果を調べることに
より行なつた。実施例１ 4181−２物質の製造グルコース0.1％、ポリペプトン0.1％、肉エキ
ス0.3％、酵母エキス0.5％、溶性デンプン2.4％、
炭酸カルシウム0.3％よりなる培地（PH7.0）100
mlを500mlの三角フラスコに分注、滅菌後、スト
レプトミセス・スピーシーズ4181株（微工研条寄
第1010号）を一白金耳量接種し、27℃で48時間回
転振盪培養した（毎分、180回転、振幅10cm）。次
にグリセロール4.0％、フアーマメデイア1.0％、
塩化ナトリウム0.2％、硫酸マグネシウム0.2％、
炭酸カルシウム0.3％よりなる培地（PH7.0）を
500mlの三角フラスコに100mlずつ分注し、滅菌
後、上記の種菌を５％の割合で加え、27℃、96時
間回転振盪培養した。培養終了後、培養液（7.4
、PH7.4）を採取し、遠心、過後、菌体をメ
タノール（約１）で３回連続抽出した。得られ
た抽出液は減圧下で留去後、酢酸エチル（0.3）
で３回攪拌抽出した。又培養液については希塩酸
でPH３に調整し、酢酸エチル（0.8）で３回攪
拌抽出した。先の菌体抽出区分とこの酢酸エチル
抽出区分とを合せ、水で洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、減圧濃縮して褐色の油状物質
（6.42ｇ）を得た。この油状物質を酢酸エチル
（0.3）に溶解後、ｎ−ヘキサン（0.5）を添
加して得られた沈澱物を乾固して4181−２物質を
含む赤褐色の粗粉末（801mg）を得た。この粉末をクロロホルム（約10ml）に溶解しシ
リカゲルカラムクロマソグラフイー（メルク社
製、キーゼルゲル、5.9×19cm）に吸着させ、ク
ロロホルム（1.4）で洗浄後、次いでクロロホ
ルム：メタノール（20：１）（3.9）で溶出し
た、クロロホルム：メタノール溶出区分の4181−
２物質を含む活性画分を集め、溶媒を留去後、ク
ロロホルム−アセトンより再結晶し、乾固して赤
橙色粉末（83mg）を得た。融点＞260℃（分解）。 ¹H−NMRスペクトルを第１図に示す。紫外吸
収スペクトルを第２図に示す。赤外線吸収スペク
トルを第３図に示す。実施例２ 4181−２物質アセチル誘導体の合成 4181−２物質29mg、クロロホルム15ml、ピリジ
ン15mlの溶液に氷冷下無水酢酸7.5mlを滴下した。
滴下後室温で一夜攪拌した。反応液を濃縮し、残
渣をシリカゲルカラムクロマトグラフイー（メル
ク社製、キーゼルゲル、5.9×19cm）に付し、ク
ロロホルム−メタノール（50：１）で溶出し、溶
出液を濃縮乾固して上記ジアセチル誘導体28mg
（収率83.0％）を得た。融点 208〜212℃（分解）。Ｈ−NMRスペクトルを第４図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、4181−２物質をDMSO−d₆中で測
定した¹H−NMRスペクトルの結果を、第２図は
クロロホルム中で測定した紫外吸収スペクトルの
結果を、第３図は臭化カリウム錠で測定した赤外
吸収スペクトルの結果をそれぞれ示す。また第４
図は4181−２物質アセチル誘導体を重クロロホル
ム中で測定した¹H−NMRスペクトルの結果を示
す。

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（式中、Ｒは水素原子又はアシル基を示す。）で表わされる4181−２物質及びそのアシル誘導
体。