JPS62270587A - ４１８１−２物質及びそのアシル誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の不便１包厨 本発明は、新規な４１８１−２物質及びそのアシル誘導
体に関するものである。

従来の技術 本発明の４１８１−２物質及びぞのアシル誘導体は、文
献未記載の新規化合物である。

光烟万邂決しようどする肌■飛 本発明の目的は、ある種のダラム陽性菌、陰性菌、真菌
類に対して増殖抑制作用を示し、かつ制癌作用を示す新
規な抗生物質として有用な新規物質を提供することにあ
る。

罠順貞を解決するための手段 上記目的は、下記一般式（Ｉ）で表わされる本発明に係
る化合物により達成される。

一般式 （式中、Ｒは水素原子又はアシル基を示す。）Ｒで示さ
れるアシル基としては、炭素数２〜５の例えばアセチル
基、プロピオニル基、ブチリル基、バレリル基等が挙げ
られる。

本発明化合物の製造方法は、上記式中、置換基Ｒが水素
原子である化合物（以下／′１１８１−２物質と称する
。）については、微生物の培養により１ｑることかでき
る。すなわち、／４１８１−２物質の生産能力を有する
菌株（以下４１８１−２物質生産菌と称する。）を適当
な条件下で培養することによって、菌体または培養液か
ら採取することができる。更に、アシル誘導体は、４１
８１−２物質を原料として通常用いられるアシル化反応
により合成することができる。例えば有機溶媒の存在下
又は非存在下、アンモニア或いはピリジン、１〜リエヂ
ルアミン等の有機塩基類、水酸化す１−リウム、水酸化
カリウム等の金属水酸化物、炭酸すトリウム、炭酸水素
カリウム等の無機塩類、酸化銀等の金属酸化物等の無機
塩基の存在下、また（ま非存在下に４．１８１−２物質
とアシルハライドまたはアルコールとのエステル体を反
応させることにより、アシル誘導体を得ることができる
。

有機溶媒としては、ヘキサン等の炭化水素類、クロロホ
ルム等のハロゲン系炭化水素類、エチルエーテル、ジオ
キサン等のエーテル類、アレトン等のケトン類、ベンゼ
ン、トルエン等の芳香族炭化水素類、ニトロメタン、ジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の非プロ
］・ン性極性溶媒を単独であるいは、複数混合して使用
することができる。また上記塩基類は必要に応じ溶媒と
しても使用できる。

４１８’ｌ−２物質の製造に用いる菌株としては、４１
８）２物質を生産できる菌株であれば、とのにうな菌株
でも良いが、−例として本発明者らが分離したストレプ
トミセス属に属する７１１８１菌株が挙げられる。この
４１８１菌株は、本発明者らが中華人民共和国四用省峨
幀山（ウーメイシャン）の土壌から新たに分離したスト
レア１〜ミセス属に属する菌株であり、通商産業省工業
技術院微生物工業技術研究所に受託番号［微工研条奇第
１０１０号ｊ　　（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１０１０）とし
て寄託されている。この菌株の菌学的性質は次の通りで
ある。

菌学的諸性質 （ａ）形態 胞子形成菌糸の分校法：単純分枝。

胞子形成の形態：直状（胞子の形は円筒状）。

胞子の数：１０胞子以上。

胞子の表面構造；平滑。

胞子の大きさ二０．８〜１．０Ｘ１．１〜１．５ミクロ
ン。

鞭毛胞子の有無：無。

胞子のうの有無：無。

胞子柄の着生位置：気菌糸。

菌核形成性の有無：無。

（ｂ）各種培地における生育状態を第１表に示す。

（Ｃ）生理的諸性質 １）生育温度範囲：２６〜３０°Ｃの温度範囲で良好に
生育する。４０°Ｃ以上の温度範囲では生育しない。

２）じラチンの液化（グルコース・ペア１〜ンゼラヂン
培地）；陽性（３週間以上）。

３）ミルクの凝固：陰性。

ミルクのペア１ヘン化；陽性。

４〉メラミン様色素の生成；チロシン寒天（ＩＳＰ−７
培地）及びペプ］・ン・酵母エキス・鉄寒天（ＩＳＰ−
７培地） 培地上で陰性。

５）硫化水素の産生；陰性。

６）スターチの加水分解くスターチ寒天培地）；陽性。

７）硝酸塩の還元；陰性。

８）セルロースの分解性；陽性。

（ｄ）炭素源の利用性（ブリードハム・ゴトリーー　　
　〇　　　− ブ寒天培地、１３Ｐ−９培地） １−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラ
フィノース、Ｄ−マンニト−ル、シュークロース、スタ
ーチ、Ｄ−マンノース、マルトース、Ｄ−ソルビトール
、セルロース、イヌリンのいずれの炭素源をも良く利用
して生育する。

（ｅ）菌体組成 ベツカ−（３ｅｃｋｅｒ　）らの方法しアプライ。

マイクロバイオロジー（△ｐｐ１．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１
．　　）、１２．４２１〜４２３　（１９６／１）］に
より９分した結果、しＬ−型のジアミノピメリン酸及び
少量のグリシンが検出された。

以上の菌学的性質から本４１８１菌株は基中菌糸より多
数の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し、ジアミノピメ
リン酸がＬＬ−型であり、鞭毛胞子や胞子のうを形成し
ない性質を有することより、ス１〜レプトミセス属に属
する菌株であることは明らかである。よって本菌株をス
トレアｌ−ミセス・スピーシーズ４１８１　（ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　５ｐｅｃｉｅｓ。

４、１８１　）と称することとした。

本発明の４１８１−２物質を例えば上記のようなス］ヘ
レプ［・ミセス属に属するストレプトミセス◆スピーシ
ーズ４１８１　（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　５ｐｅｃ
ｉｅｓ。

／′１１８１）又はその各種変異株を適当な培地に培養
することによって製造する場合について説明する。

培養方法は原則的には一般微生物の培養方法に準するが
、通常は液体培養による振盪培養法、通気撹拌培養法な
どの好気的条件下で行なうのが良い。培養に用いられる
培地としては、ス１〜レプｌ〜ミセス属に属する４１８
１−２物質生産菌が利用できる栄養源を含有する培地で
あればよい。

すなわち、合成培地、半合成培地あるいは天然培地を用
いることができる。培地の組成は炭素源としてグルコー
ス、シュークロース、フラグ１〜−ス、グリセリン、デ
キス］〜リン、澱粉、糖蜜、コーン・ステイープ・リカ
ー、有機酸等が単独又は組合せで用いられる。窒素源と
してはファーマメディア、ペプ］・ン、肉エキス、酵母
エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素等の有機窒
素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素
源が単独又は組合せで用いられる。ナトリウム塩、カリ
ウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その仙の重金属塩
等も必要に応じて添加される。

また、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆油、亜麻仁
油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール、
ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン
化合物等の消泡剤を適宜添加してもＪ：い。

培地のｐ１＝１は、やや酸性ないし中性付近で培養を行
なうのが好ましい。培養温度は／１１８１−２物質生産
菌が通常２０〜３７°Ｃ程度の温度下で生育するので、
通常２０〜３７°Ｃ１特に好ましくは２７〜３０’Ｃ付
近に保つのが良い。培養時間は液体培養の場合、２〜５
日間程度培養を行なうと／Ｉ−１８１−２物質が生成蓄
積される。

以上）ホべた培養条件から使用生産菌株の種類や特性、
外部の条件などに応じてそれぞれの最適条件を適宜選択
、調節して適用することができる。

この培養により生産された抗生物質として有用な４、１
８１−２物質を単離するには発酵生産物を採取する一般
的な方法に準じて行なうことができる。

例えば溶媒抽出、液体交換、あるいは結晶化等の各種手
段を単独または任意の順序に相合ｊｔで用いることがで
きる。

詳しくは、培養して得られた培養物中に蓄積された４、
　１８１−２物質は培養炉液と菌体に含有されるので、
遠心分離又は濾過等の手段で培養炉液と菌体に分離した
後、得られた菌体についてはアレｌ−ン、メタノールな
どの溶媒にて目的物質を仙出する。又得られた＝１．１
８１−２物質を含む培養炉液については、水と混合しな
い酢酸エチル、クロロホルム、ブタノール等の溶媒を用
いて４１８１−２物質を有機溶媒層に転溶させ、得られ
た溶媒層に芒硝を加え、脱水後、溶媒を減圧下で留去す
れば４１８１−２物質を含む粗抽出物を得ることができ
る。必要があれば、塩酸又は硫酸にて１ＤＨを調節した
り、又工業用食塩等を加えることにより抽出効率を高く
したり、■マルジョン防止などの方法を講じることがで
きる。

更に精製するためには通常の脂溶性低分子物質の精製手
段を適用できる。すなわちシリカゲル、アルミナ、マク
ロポーラス非イオン系吸着樹脂等の吸着剤による種々の
吸着クロマトグラフィーが使用できるが、溶出溶媒クロ
ロホルム／メタノールの混合溶媒系を用いるシリカゲル
クロマトグラフィーが最も有効に利用できる。又、更に
精製を必要とする場合には上記のクロマトグラフィーを
くり返すか、あるいはクロロホルム、メタノール、アセ
トン等の溶媒を用いる再結晶等の手段を適宜くみあわせ
て行なうことにより高純度の４−１８１−２物質を単離
、精製することができる。

このようにして得られた４１８１−２物質及び４、１８
　’ｌ−２物質アシル誘導体は、ダラム陽性菌、ダラム
陰性菌又は真菌類に広く抗菌スペク１へラムを有するの
みならず、すぐれた抗腫瘍作用をも有する化合物である
。次に、本発明化合物の抗菌、抗真菌作用及び抗腫瘍効
果について薬理試験結果を示す。

く薬理試験〉 ■抗菌スペク［・ラム ４１８１−２物質の抗菌、抗真菌活性をグラム陽性、陰
性細菌では栄養寒天培地を用い、又真菌類に対してはサ
ブロード寒天培地を用いて系列２倍希釈法により、最少
発育阻止濃度　（Ｍ、Ｉ。

Ｃ１）で測定した。４１８１−２物質の各種微生物に対
する抗菌スペクトラムは第２表に示した通りである。

■抗腫瘍活性 ４１８１−２物資及びそのアセチル誘導体の抗腫瘍活性
をマウス白血病に対する延命効果で判定した。試験動物
としてＢＡＬ／ＣとＤＢＡ／２の交配第一代マウス（Ｂ
ＤＦ＋マウス）を各群６匹用い、ＤＢＡ／２マウス由来
の白血病Ｐ３８Ｂ細胞の１０６個を腹腔内移植した。翌
日に０．２％ツイーン８０の生理食塩水溶液に懸濁させ
た４１８１−２物質又はそのアセチル誘導体を１回腹腔
内に投与し、生存日数を観察した。結果を第３表に示す
。また、延命増加率（％）は下式に算出した。

第　　　３　　　表 次に、実施例を挙げて更に詳細に説明する。

なお、精製工程中の有効物質の確認は、４１８１−２物
質ににり増殖抑制作用のみられるスタフィロコッカス・
アウレウス　２０９Ｐ（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
　　ａｕｒｅｕｓ　　２０９　Ｐ　）　、ザルシナ・ル
ティア　へ丁ＣＣ９３４１（ＳａｌｃｉｎａＩｕｔｅａ
　　ＡＴＣＣ９３４１）等の微生物を用いたバイオアッ
セイ法及びバイオ・オートグラフ法、−１８＝ 又はヒ１−獅咽腔癌由来の株化培養細胞（ＫＢ細胞）に
対する殺細胞効果を調べることにより行なった。

実施例　１ ４、１８１−２物質の製造 グルコース０．１％、ポリペプトン０．１％、肉エキス
０．３％、酵母エキス０．５％、溶性デンプン２．／１
％、炭酸カルシウム０．２％よりなる培地（＋）Ｈ７，
Ｏ＞１００ｍＧを５００ｍＱの三角フラスコに分注、滅
菌後、ストレス１ヘミセス・スピーシーズ４１８１株（
微工研条寄第１０１０号）を−白金Ｈ量接種し、２７°
Ｃで４８時間回転振盪培養した（毎分、１８０回転、振
幅１０ｃｍ＞。次にグリセロール４．０％、ファーマメ
ディア１．０％、塩化ナトリウム０．２％、硫酸マグネ
シウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％よりなる培地
（１）Ｈ７，０）を５００＋Ｔ１１２の三角フラスコに
１００ｍＱずつ分注し、滅菌後、上記の種菌を５％の割
合で加え、２７°Ｃ１９６時間回転振盪培養した。培養
終了後、培養液（７，４，Ｑ　、　ｐｌ−１７，４）を
採取し、遠心、濾過後、菌体をメタノール（約ＩＱ）で
３回連続抽出した。得られた抽出液は減圧下で留去後、
酢酸エチル（０，３９）で３回撹拌抽出した。又培養液
については希塩酸でｐＨ３に調整し、酢酸エチル（０，
８Ｑ）で３回撹拌抽出した。先の菌体の抽出区分とこの
酢酸エチル抽出区分とを合せ、水で洗浄し、無水ｔａ酸
す１ヘリウムで乾燥後、減圧濃縮して褐色の油状物質（
６，＝１２ｇ）を得た。この油状物質を酢酸工チル（０
，３９＞に溶解後、ｎ−ヘキサン（０，！Ｍ）を添加し
て得られた沈澱物を乾固して７１−１８１−２物質を含
む赤褐色の粗粉末（８０１ｍｙ）を得た。　　　・ この粉末をクロロホルム（約１０ｍＱ＞に溶解しシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー 製、キーゼルゲル、５．９Ｘ１９ｃｍ）に吸着させ、ク
ロロホルム（１．４９＞で洗浄後、次いでクロ目ホルム
：メタノール で溶出した、クロロホルム：メタノール溶出区分の４１
８１−２物質を含む活性画分を集め、溶媒を留去後、ク
ロロホルム−アセトンより再結晶し、乾固して赤橙色粉
末（８３ｍｇ＞を得た。

融点　＞２６０’Ｃ（分解）。

’ｌ−（−ＮＭＲスペクトルを第１図に示す。紫外吸収
スペク１〜ルを第２図に示す。赤外吸収スペクトルを第
３図に示す。

実施例　２ ４、　１　８　１−２物質アセチル誘導体の合成４１８
１−２物質２９ｍｇ、クロ［ＴＩ小ルム１５ｎ＋Ｑ。

ピリジン１５ｎ＋Ｑの溶液に水冷上無水酢酸７．５ｍ（
？を滴下した。滴下後室部で一夜撹拌した。反応液を’
＋Ｗ４縮し、残ｔｆｆｌをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（メルク社製、キーゼルグル、５．９×１９ｃ
ｍ）に付し、クロロホルム−メタノール（５０　：　１
　）で溶出し、溶出液を濃縮乾固して上記ジアセヂル誘
導体２８ｍ３＜収率８３．０％）を得た。

融点　２０８〜２１２℃（分解）。

１Ｆ＋−ＮＭＲスペク１〜ルを第４図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、４１８１−２物質をＤＭＳＯｄａ中で測定し
た’！−！−ＮｆＶＩＲスペク］・ルの結果を、第２図
はクロロホルム中で測定した紫外吸収スペクトルの結果
を、第３図は臭化カリウム錠で測定した赤外吸収スペク
１〜ルの結果をそれぞれ示す。 また第４図は４’１８１−２物質アセデル誘導体を重ク
ロロホルム中で測定した１１１１−１−Ｎスペクトルの
結果を示す。 （以　上） イ、□Ａい□１ヨツア訂［淘

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［１］一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは水素原子又はアシル基を示す。）で表わさ
   れる４１８１−２物質及びそのアシル誘導体。