JPH0353315B2

JPH0353315B2 -

Info

Publication number: JPH0353315B2
Application number: JP5974883A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Oomura; Yoshitake Tanaka
Original assignee: Kitasato Institute
Current assignee: Kitasato Institute
Priority date: 1983-04-05
Filing date: 1983-04-05
Publication date: 1991-08-14
Also published as: JPS59186989A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規抗生物質イルマノライドおよび
ならびにそれらの製造方法に関する。本発明の
目的は、新規抗生物質イルマノライドおよび
ならびにこれらの製造方法を提供することにあ
る。本発明により次式で示される新規抗生物質が提
供される。式〔式中Ｒは

【式】（イルマノライド）または

【式】（イルマノライド）を表わす〕本発明により提供される新規抗生物質イルマノ
ライドおよびは、精製された状態において安
定な白色粉末であつて、上式で示される構造を有
している。イルマノライドおよびは、第１表の通りの
理化学的性質を示す。

【表】第１表のイルマノライドおよびの性質をも
とに既知抗生物質を検索したところ、該当するも
のは見当たらない。比較的類似しているものとし
て、ベンチユリシジンより化学的に得られたアグ
リコン部〔ブルフアニら、エクスペリエンシア
（Experiencia）第27巻、第604頁、1971年に化合
物と記載されるもので、融点は135〜137℃、分
子式はC₃₄H₅₆O₇、紫外線吸収スペクトルに特徴
的な吸収はない〕があげられる。しかし、この化
合物とイルマノライドとを比較するイルマノ
ライドが強い紫外線吸収極大を232nｍに示す
点で区別される。またイルマノライドと比較す
ると、分子式と分子量の点で明確に区別される。
また構造を比較しても、イルマノライドおよび
はいずれも20員環ラクトン内に水酸基を２個有
するのに対して、上記化合物は１個しか水酸基
を有していない点で明確に異なる。従つてイルマ
ノライドおよびは新規物質であると判定され
る。次にイルマノライドおよびの生物活性を示
す。なお測定は常法により、ポテトグリコース寒
天培地を用いる倍々稀釈法を用い、27℃、45時間
後に判定した最小発育阻止濃度（MIC）を第２
表に示す。

【表】第２表から明らかなように、イルマノライド
およびは真菌、とくに植物病原性の真菌に効力
を有するから、これらの微生物に起因するヒト、
動物、植物の疾病の治療および予防に用い得るこ
とが期待される。なお、イルマノライドあるい
はを100mg／Kgの濃度にマウスの腹腔内に投与
した場合、１ケ月後にも全部が生存した。イルマノライドおよびは化学的および生物
的手段により、たとえば抗生物質AM−3603（特
開昭57−48996号）の誘導体を得るための出発物
質として有用である。本発明者らは、また、イルマノライドおよび
が、抗生物質AM−3603生産菌ストレプトミセ
ス・エスピー・AM−3603（微工研菌寄第5619号）
菌株における抗生物質AM−3603生合成の中間体
であることをセルレニン存在下での微生物転換法
により確認した。用いた試験方法は抗生物質セル
レニンがポリケタイド生合成の特異的な阻害剤で
あることを利用するものであり、本発明者らの１
人と共同研究者により、すでに16員環マクロライ
ド抗生物質であるタイロシンの生合成研究に応用
され、その有効性が確認されているものであつ
て、詳細はたとえば次の文献に記載されている。大村ら、ケミカル・アンド・フアーマシユウチ
カル・ブリテン（Chem.Pharm、Bull.）第30巻、
第223頁、1982年。大村ら、バイオケミカル・アンド・バイオフイ
ジカル・リサーチ・コミユニケーシヨン
（Biochem.Biophys.Res.Commun.）第107巻、
554頁、1982年。上記で用いられた方法と本質的に同じ方法をを
用い、ストレプトミセス・エスピー・AM−3603
（微工研菌寄第5619号）菌株を抗生物質AM−
3603生産培地で培養するに際し、セルレニンを
80μｇ／ml／日の割合で添加してAM−3603のア
グリコン部の生合成を阻害した条件下、ここにイ
ルマノライドあるいはを添加して培養を続け
たところ、いずれの場合にもAM−3603に効率よ
く転換されることを確認した。この事実から明らかな通り、イルマノライド
およびは抗生物質AM−3603の生産量を増加さ
せるためにも有用である。後記の試験例はこれを
確認した１例である。次にイルマノライドおよびの製造方法につ
いて説明する。本発明に用いられる微生物としては、たとえば
本発明者によりは分離されたストレプトミセス・
サブフラブス・サブエスピー・イルマエンシス
FN−114株が好適な１例である。本菌株はスト
レプトミセス・エスピー・AM−3603（微工研菌
寄第5619号）菌株を常法により、Ｎ−メチル−
N′−ニトロ−Ｎ−ニトロングアニジンを用いて
変異処理し、その後、各々の変異株を培養した
後、抗生物質AM−3603の生産能が低下した株と
して選択した。親株として用いた抗生物質AM−
3603生産菌ストレプトミセス・エスピー・AM−
3603（微工研菌寄第5619号）菌株の菌学的性質に
ついては、特開昭57−48996号公報に記載されて
いる。イルマノライド生産菌株ストレプトミセス・サ
ブフラブス・サブエスピー・イルマエンシスFN
−114株は、微工研菌寄第6925号として工業技術
院微生部工業技術研究所に寄託されている。本菌
株の菌学的性質は、抗生物質AM−3603の生産能
を実質的に欠失しているほか、特開昭57−48996
号公報記載のストレプトミセス・エスピー・AM
−3603の菌学的性質と実質的に著差がない。後記
実施例記載の方法で得られた培養物から抗生物質
AM−3603を検出できなかつた。本発明には、その他、ストレプトミセス属に属
し、イルマノライドおよびの一方もしくは両
方を生産する能力を有する微生物であれば、野生
株、変異株、いずれも用いることができる。本発明に用いる微生物を培養するに際して用い
る培地は、使用菌株が生育し、かつイルマノライ
ドおよびの一方もしくは両方が生成されるな
らば、合成培地、天然培地、液体培地、固体培地
のいずれでも良い。好適な培地の組成は、放射菌
による抗生物質の生産に通常用いられる培地を考
慮して決定される。すなわち、炭素源としては、
たとえばグルコース、マルトース、シユクロー
ス、スターチ、デキストリン、グリセリン、動物
油、植物油など使用微生物の資化しうる種々のも
のが使用可能である。窒素源としては、酵母エキス、ペプトン、大豆
粉、乾燥酵母などの各種複合含窒素物質、さらに
アンモニア、尿素など使用微生物の資化しうるも
のならば多数のものが使用できる。その他、リン
酸塩、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、
鉄、マンガン、コバルトなどの金属塩を必要に応
じて用いる。培養は、振盪培養または深部通気撹拌培養など
の好気的条件が好適な結果を与えやすい。培養温
度は通常20℃〜40℃が好適であるが、使用菌株が
生育すればこれ以外の温度でも実施しうる。イルマノライド生産菌を培養するに際して、培
地にリン酸マグネシウム、天然ゼオライト、合成
ゼオライトの１つ以上を添加することにより、イ
ルマノライドの蓄積量を増加させうる場合があ
る。また、いくつかのアミノ酸、たとえばロイシ
ン、イソロイシン、バリン、スレオニン、セリ
ン、アラニンの１つ以上を培地に添加することに
より、イルマノライドの生産量を増加させうる場
合がある。培養期間は、通常１〜８日間で菌体内外にイル
マノライドおよびの一方もしくは両方が生成
蓄積する。培養終了後、培養物から公知方法によりイルマ
ノライドを回収する。その際、中性、脂溶性物質
の回収法に用いられる種々の抽出法、濃縮法が用
いられる。たとえば培養物を遠心により菌体と
液とに分け、液から、酢酸エチル、ベンゼン等
の有機溶媒で抽出し、濃縮する。菌体部分から
は、含水メタノールや含水アセトンで抽出し、濃
縮する。この後、公知の精製方法により、イルマ
ノライドおよびを精製分離する。たとえばシ
リカゲルカラムクロトゲラフイー、アルミナカラ
ムクロマトグラフイー、シリカゲル高速液体クロ
マトトグラフイー、調製用薄層クロマトグラフイ
ーなどが使用できる。次に実施例を示す。これらは単に例示であつ
て、本発明を限定するものではない。実施例ストレプトミセス・サブフラブス・サブエスピ
ー・イルマエンシス FM−114（微工研菌寄第
6925号）の斜面培養から１白金耳を100mlの種培
地（グリセリン1.0％、グルコース0.2％、大豆粉
1.0％、食塩0.3％、PH7.0）を入れた500ml容の坂
口フラスコに接種し、27℃で２日間振盪培養して
種培養液を得た。この種培養液200mlを20の発
酵培地（グリセリン2.0％、グルコース0.4％、大
豆粉1.0％、食塩0.3％、PH7.0）を入れた30容ジ
ヤーフアーメンターに接種し、27℃で３日間通気
撹拌培養（通気量10／min、撹拌250r.p.m.）を
行なつた。培養液（18）をカセイソーダでPH
7.0に調節し、８のベンゼンで抽出した。ベン
ゼン層を減圧下で濃縮し、黄色油状物質21.5ｇを
得た。この油状物質を100mlのノルマルヘキサン
で洗浄し、淡黄色粗粉末6.15ｇを得た。ベンゼン／アセトン（５／１、600ml）に懸濁
させたシリカゲル（メルク、Art 7734、250ｇ）
で調製した500mlのカラムの上端に、上記の粗粉
末をベンゼン／アセトン（５／１）に懸濁して添
加した。カラムをベンゼン／アセトン（５／１、
３）で溶出し、15〜20mlずつ分画した。シルカ
ゲル薄層クロマトグラフイー（メルク、キーゼル
ゲル60F254、展開溶媒ベンゼン／アセトン＝
５／２）を行ない、Rf約0.5を示す分画を集めて
減圧下で濃縮し、イルマノライド750mgを白色
粉末として単離した。また、Rf約0.4を示す分画
を集めて減圧下で濃縮し、イルマノライド1.75
ｇを白色粉末として単離した。こうして得たイル
マノライドおよびの理化学的性質は前記の通
りである。試験例種菌としてストレプトミセス・エスピー・AM
−3603（微工研菌寄第5619号）菌株を用い、この
菌株を抗生物質AM−3603生産培地（グリセリン
２％、グルコース0.4％、大豆粉１％、食塩0.3
％、PH7.0）100mlを含む500ml容坂口フラスコで
培養して抗生物質AM−3603を生産させるに際
し、培養１日目にイルマノライドもしくはを
200μｇ／mlになるように添加した。その結果、
４日目の倍養液中にAM−3603が、それぞれ700μ
ｇ／ml、560μｇ／ml生成蓄積した。同時に実施
した対照（無添加）の培養液中のAM−3603の生
成量は360μｇ／mlであつた。

【図面の簡単な説明】

添付図面において、第１図はイルマノライド
の赤外線吸収スペクトル（KBr法）を示す。第
２図はイルマノライドの赤外線吸収スペクトル
（KBr法）を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１式〔式中Ｒは【式】（イルマノライド）または【式】（イルマノライド）を表わす〕で示される抗生物質
イルマノライドおよび。２ストレプトミセス属に属し、かつ式（）で
示される抗生物質イルマノライドおよびの一
方もしくは両方の生産能を有する微生物を培地に
好気的に培養することにより、抗生物質イルマノ
ライドおよびの一方もしくは両方を菌体内外
に蓄積させ、これらを回収することを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載の抗生物質イルマノラ
イドまたはの製造方法。