JPS63188695A

JPS63188695A - エリスロマイシンｂ誘導体およびその製造方法

Info

Publication number: JPS63188695A
Application number: JP62019827A
Authority: JP
Inventors: Jiyouji Sasaki; 冗二佐々木; Kazutoshi Mizogami; 溝上　一敏; Sadafumi Omura; 大村　貞文
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1987-01-30
Filing date: 1987-01-30
Publication date: 1988-08-04

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明はエリスロマイシンＢ誘導体およびその製造方法
に関し、更に詳しくは１４−ハイドロキシ−６−０−メ
チルエリスロマイシンＢおよびその塩ならびにその製造
方法に関する。

［従来の技術］本発明者らの一部により、式で表わされる抗生物質６−０−メチルエリスロマイシン
Ｂが発明されている。（特開昭５８−９６０９７公報）
。

これはすぐれた抗生物質であるが、更に抗菌活性のすぐ
れた抗生物質の出現が要望されていた。

［発明が解決しようとする問題点］本発明者らはこの要望にこたえるべく鋭意研究をかさね
た結果、特定の微生物を６−〇−メチルエリスロマイシ
ンＢに作用させることにより、その１４位に水酸基が導
入された新規の化合物を得ることができた。

この化合物は化学的手段では得ることが困難であるが、
微生物を利用すれば容易に得ることができ、しかもスタ
ヒロコッカス・オーレウス（兆肋吐ｆμ遼ｃｃｕｓ　ａ
ｕｒｅｕｓ）　＊スタヒロコツカス・エビデルミデス（
Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ｅ　ｉｄｅｒｍｉｄｉ
ｓ）　、　−ｃンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅ−ｃａｌｉｓ　）　＊ミクロ
コツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｌｕｔｅ
ｕｓ　）およびバチルス・ズブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓ　）などのダラム陽性菌に対して強
い抗菌活性を示すことを見いだし、本発明を完成した。

本発明の目的は、新規化合物であってすぐれた抗菌活性
を有するエリスロマイシンＢ誘導体およびその容易な製
造方法を提供することにある。

［問題点を解決するための手段］本発明の化合物は、式で表わされる１４−ハイドロキシ−６−〇−メチルエリ
スロマイシンＢおよびその塩であり、本発明の方法は、
６−０−メチルエリスロマイシンＢを基質として含む培
地中で糸状菌を培養することを特徴とする１４−ハイド
ロキシ−６−０−メチルエリスロマイシンＢの製造方法
である。

本発明において、塩とは薬理的に許容される塩であって
、例えば酒石酸、クエン酸、ステアリン酸、コハク酸な
どの有機酸との塩、メタンスルホン酸との塩、アミノエ
タンスルホン酸との塩、アスパラギン酸、グルタミン酸
などのアミノ酸との塩が挙げられる。

糸状菌とは、糸状菌の範晴に属するすべての菌を意味し
、好ましくはムコール属、カニングハメラ属またはビウ
ベリア属に属する糸状菌であり、最も好ましくはムコー
ル・シルシネロイデス・ｆ。

・グリセオシアヌス（Ｍｕｃｏｒ　ｃｉｒｃｉｎｅｌｌ
ｏｉｄｅｓ　ｆ。

ｒｉｓｅｏ−ｃ　ａｎｕｓ　）　ＩＦＯ４５６３、カニ
ングハメラ拳エチヌラタ（Ｃｕｎｎｉｎ　ｈａｍｅｌｌ
ａ　ｅｃｈｉｎｕｌａｔａ）ＩＦＯ６１５６またはビウ
ベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉ−
倶す）　ＡＩＣＣ７１５９である。

ムコール・シルシネロイデス・ｆ、・グリセオシアヌス
ＩＦＯ４６５３およびカニングハメラ・エチヌラタＩＦ
Ｏ６１５６は共に財団法人発酵研究所の保存株であり、
ビウベリア・バシアナＡＴＣＣ７１５９はアメリカン・
タイプ・カルチャー・フレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ
　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）
の保存株である。これらの菌の菌学的性状はすでに明ら
かにされている。

本発明者らの研究によって、本菌株は１４員環マクロラ
イド系化合物の１４位に水酸基を導入する能力を有する
ことが明らかにされた。

本発明の方法は、６−０−メチルエリスロマイシンＢを
含む培地で糸状菌を好気的条件下で培養することによっ
て６−〇−メチルエリスロマイシンＢの１４位に水酸基
の導入を行なうもので本発明の方法を式で示すと下記の
ようになる。

１４−ハイドロキシ６−０−メチル６−０−メチルエリスロマイシンＢ　　　　　　　　エ
リスロマイシンＢ培地は主として液体培地を用い、炭素
源としてシュクロース、グルコース、デキストロースヲ
単独かまたは混合して用いる。窒素源としては、ポリペ
プトン、硝酸ナトリウム、酵母エキスなどを単独かまた
は混合して用いる。その他、本菌株の生育を助け、１４
−ハイドロキシ−６−〇−メチルエリスロマイシンＢの
生産を促進する有機物および無機塩を必要により添加す
ることができる。消泡剤としては、アデカノール（商品
名、旭電化工業■製）、シリコンなどを用いることがで
きる。

培養方法は振盪培養９通気攪拌培養などの好気培養が適
しておりｐＨ７〜８，２８℃〜３０℃で３〜７日間培養
する。

なお、基質の６−〇−メチルエリスロマイシンＢは培養
初期に適量添加する。

この培養により生産された１４−ハイドロキシ−６−〇
−メチルエリスロマイシンＢを単離するには、発酵生産
物を採取する一般的な方法に準じて行なえばよい。

すなわち、培養終了後、遠心分間または、濾過により分
離した培養液を酢酸エチルまたはクロロホルムなどで抽
出し、その抽出物をシリカゲル・カラム令クロマトグラ
フィーに付するなどの処理により、１４−ハイドロキシ
−６−０−メチルエリスロマイシンＢを単離することが
できる。

本発明の方法によって得た１４−ハイドロキシ−６−０
−メチルエリスロマイシンＢの物理化学的性質は次に示
す通りである。

［物理化学的性質］（１）外観：白色板状結晶〈２）融点＝２２２℃〜２２４℃ （３）元素分析値：実測値　　　　　　　　計算値Ｃ：　６０．９２％　　　　　Ｃ：　６１．０２−％Ｈ
：９．３３％　　　　　Ｈ：９．３０％Ｎ：２．４９％
　　　　　Ｎ：１．８７％（４）分子量：　ＦＡＲマス
スペクトルＦＡＢ　　ＭＳ：　　［Ｍ＋Ｈコ＋ｍ／ｚ　
　　７４８（５）分子式：　ＣｓｓＨ＃＃Ｎ　Ｏ＋５（
６）ＵＶ吸収：エタノール溶液で測定２８０ｎｍ（ε５
０）（７）ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ錠にて測定した結果を第１図に示す。

（８）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重ピリジン中、４００ＭＨｚで測定したスペクトルを第
２図に示す。

（９）”Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重ピリジン中、１００ＭＨｚで測定したスペクトルを第
３図に示す。

（１０）溶解性易溶：クロロホルム、メタノール、エタノール、アセト
ン、酢酸エチル難溶：エチルエーテル、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、
ベンゼン、水（１１）呈色反応陽性：硫酸、ヨウ素、アニスアルデヒド−硫酸、バニリ
ン−硫酸陰性：塩化第二鉄水溶液、ニンヒドリン（１２）塩基性
、酸性、中性の区別：塩基性［発明の効果コ本発明の化合物である１４−ハイドロキシ−６−〇−メ
チルエリスロマイシンＢおよびその塩は、ダラム陽性菌
の一部、特にスタヒロコツカス・オーレウス、スタヒロ
コツカス・エビデルミデス、エンテロコツカス・フェカ
リス、ミクロコツカス・ルテウスおよ゛びバチルス・ズ
ブチルレスに対し抗菌活性を示し、抗生物質として使用
することができる。

また、本発明の方法により化学的手段では困難な１４員
環マクロライド系化合物の１４位への水酸基の導入を容
易に行なうことができ、本発明の化合物である１４−ハ
イドロキシ−６−０−メチルエリスロマイシンＢおよび
その塩を効率よく容易に製造することができる。

（実施例）以下実施例および試験例をあげて本発明をさらに具体的
に説明する。

実施例１（１）　６−０−　メｆルｘ、リス口マイシンＢＢ１０
０Ｐ／Ｔ１１１１を含むシュクロース３％、ペプトン０
．２％、酵母ニーｔ−スｏ、ｔ％、に！ＨＰ０．０．１
％、　　Ｋ　Ｑｌ　Ｏ，０５％。

ＭｇＳ　Ｏ＝　・７　Ｈｔｏ　０．０５％、ｐＨ７，０
（７）無菌液体培地（以下、培地Ａと称す。）にムコー
ル・シルシネロイデス・ｒ、・グリセオシアヌスＩＦ０
４５６３を接種し、３０°Ｃで４８時間、攪拌振盪培養
し、種培養液とした。

次に内容量５１の培養ジャーを用いて、６−０−メチル
エリスロマイシンＢを１００．／ｌ＋ｔＱ含む培地Ａ３
１に前記種培養液６０ｒｎｆｌを接種し、３０℃で１６
８時間通気攪拌培養した。

（２）培養終了後、培養液を濾過し、菌体と濾液に分け
、得られた濾液をｐＨ９に調整した後、酢酸エチル３１
を加えて３分間攪拌し、分液漏斗を使用して酢酸エチル
画分と水溶液画分とに分けた。

この分液操作によって得られた約３１の酢酸エチル画分
を無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し、減圧下に濃縮乾
固した後、クロロホルム−メタノール−２５％アンモニ
ア水溶液（２０：　１　：　０．１ｖ／ｖ）の混合溶媒
５ｍｌに溶解し、同じ混合溶媒で調製したシリカゲル・
カラム（ローパー・カラム・サイズＣ，リクロブレップ
５ｉ６０　：商品名、メルク社製）に吸着させた。この
シリカゲル・カラムを調製したものと同じ混合溶媒１１
でこれを溶出し、１４−ハイドロキシ−６−〇−メチル
エリスロマイシンＢの溶出画分をシリカゲル（キーゼル
ゲル６０Ｆ　２５４　：商品名、メルク社製）の薄層ク
ロマトグラフィーで確認し、この両分にジエチルエーテ
ル０．５ｍｌを加え、次にｎ−ヘキサン０．５ＴＩＩＱ
を加えて攪拌後静置し、白色板状結晶として１４−ハイ
ドロキシ−６−０−メチルエリスロマイシンＢ（融点２
２２℃〜２２４℃）約９０■を得た。

実施例２（１）６−０−メチルエリスロマイシンＢ５０Ｐｇ／ｍ
Ｑを含むシュクロース４％、ペプトン１％、ｐＨ７，０
の無菌液体培地（以下、培地Ｂと称す。）にカニングハ
メラ・エチヌラタＩＦＯ６１５６を接種し、２８℃で４
８時間攪拌振盪培養し、種培養液とした。

次に、６−０−メチルエリスロマイシンＢを１１００Ｐ
／ｍｆｌ含む培地Ｂ　１００ｔｎＱを入れた５００ｍ１
容量の三角フラスコを３０本用意し、それぞれの三角フ
ラスコに前記種培養液２ｍＱを接種し、２８°Ｃで７２
時間通気攪拌培養した。

この分液操作によって得られた約３１の酢酸エチル画分
に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し、減圧下に濃縮乾
固した後、クロロホルム−メタノール−２５％アンモニ
ア水溶液（２０：　１　：　０．１ｖ／ｖ）の混合溶媒
５ｍｌに溶解し、同じ混合溶媒で調製したシリカゲル・
カラム（ローパー・カラム・サイズＣ，リクロブレップ
５ｉ６０　：商品名、メルク社製）に吸着させた。

このシリカゲル・カラムを調製したものと同じ混合溶媒
１１でこれを溶出し、１４−ハイドロキシ−６−０−メ
チルエリスロマイシンＢの溶出画分をシリカゲル（キー
ゼルゲル６０　Ｆ　２５４　：商品名。

メルク社製）の薄層クロマトグラフィーで確認し、この
両分を濃縮乾固した。

この濃縮乾固した画分に０．１ｍｌのジエチルエーテル
を加え、次に０．１ｍＱのｎ−ヘキサンを加えて攪拌後
静置し、白色板状結晶として１４−ハイドロキシ−６−
０−メチルエリスロマイシンｌ１２０ｍｇを得た。

実施例３（１）６−０−メチルエリスロマイシンＢ５ｈｇ／ｍＱ
を含むシュクロース３％、カザミノ酸０．３％、Ｋ。

ＨＰｏ、０．１％、ＫＧｏ、０５％、Ｍｇ５Ｏｔ”７Ｈ
ｎＯＯ００５％、ｐＨ７，０の無菌液体培地（以下、培
地Ｃと称す。）にビウベリア・バシアナＡＴＣＣ７１５
９を接種し、２８°Ｃで７２時間攪拌振盪し、種培養液
とした。

次に、６−Ｏ−メチルエリスロマイシンＢを１００［／
ｍＱ含む培地Ｃｌ００ｍ１ｌを入れた５００ｍ１容量の
三角フラスコ３０本を用意し、それぞれの三角フラスコ
に前記種培養液２Ｔ１１１１を接種し、２８°Ｃで７２
時間、通気攪拌培養した。

（２）培養終了後、培養液を濾過し、菌体と濾液に分け
、得られた濾液のｐｔｔを９に調整した後、酢酸エチル
３１を加えて３分間攪拌し、分液漏斗を使用して酢酸エ
チル画分と水溶液画分とに分けた。

この分液操作によって得られた約３１の酢酸エチル画分
に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し、減圧下に濃縮乾
固した後、クロロホル、ムーメタノールー２５％アンモ
ニア水溶液（２０：　１　：　０．１ｖ／ｖ）の混合溶
媒５ｍ１ｌに溶解し、同じ混合溶媒で調製したシリカゲ
ル・カラム（ローパー・カラム・サイズＣ，リクロブレ
ップ５ｉ６０　：商品名、メルク社製）に吸着させた。

メルク社製）の薄層クロマトグラフィーで確認し、この
画分を濃縮乾固した。

この濃縮乾固した両分に０．１ｍｌのジエチルエーテル
を加え、次に０．１ｍＱのｎ−ヘキサンを加えて攪拌後
静置し、白色板状結晶として１４−ハイドロキシ−６−
０−メチルエリスロマイシンＢ約２０ｒｒｔ。

を得た。

試験例１（インビトロ抗菌活性試験）日本化学療法学会標準法に従い、１４−ハイドロキシ−
６−０−メチルエリスロマイシンＢの抗菌力（ＭＩＣ：
最小発育阻止濃度）測定を行なった。その測定結果を第
１表に示す。

第１表（接種菌量１０’ｃｆｕ／ｍＱ　）

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＫＢｒ錠にて測定した１４−ハイドロキシ−
６−〇−メチルエリスロマイシンＢの赤外吸収スペクト
ル、第２図は重ピリジン中、４００ＭＨｚで測定した１
４−ハイドロキシ−６−０−メチルエリスロマイシンＢ
の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、第３図は重ピリジン中、１
００ＭＨｚで測定した１４−ハイドロキシ−６−０−メ
チルエリスロマイシンＢの目Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示
す。

Claims

【特許請求の範囲】１）１４−ハイドロキシ−６−Ｏ−メチルエリスロマイ
シンＢおよびその塩。２）６−Ｏ−メチルエリスロマイシンＢを基質として含
む培地中で糸状菌を培養することを特徴とする１４−ハ
イドロキシ−６−Ｏ−メチルエリスロマイシンＢの製造
方法。３）糸状菌がムコール属、カニングハメラ属またはビウ
ベリア属に属する菌である特許請求の範囲第２項に記載
の製造方法。４）糸状菌がムコール・シルシネロイデス・ｆ．・グリ
セオシアヌス（￥Ｍｕｃｏｒ￥￥ｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏ
ｉｄｅｓ￥ｆ．￥ｇｒｉｓｅｏ−ｃｙａｎｕｓ￥）ＩＦ
Ｏ４５６３である特許請求の範囲第２項に記載の製造方
法。５）糸状菌がカニングハメラ・エチヌラタ（￥Ｃｕｎｎ
￥−￥ｉｎｇｈａｍｅｌｌａ￥￥ｅｃｈｉｎｕｌａｔａ
￥）ＩＦＯ６１５６である特許請求の範囲第２項に記載
の製造方法。６）糸状菌がビウベリア・バシアナ（￥Ｂｅａｕｖｅｒ
ｉａ￥￥ｂａｓｓｉａｎａ￥）ＡＴＣＣ７１５９である
特許請求の範囲の第２項に記載の製造方法。