JPH04316578A - 新規抗生物質ｐｆ１０５２物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、新規抗生物質ＰＦ１０
５２物質ならびにその製造法に関する。ＰＦ１０５２物
質は後述するごとく抗菌活性を有しており医薬、動物薬
等の分野への応用が期待される。 【０００２】 【従来の技術】本発明による抗生物質ＰＦ１０５２物質
と類似する化合物としては、バ−ミスポリン（ｖｅｒｍ
ｉｓｐｏｒｉｎ）［特開平２−４０３２９］が知られて
いるが、ＰＦ１０５２物質とは分子式、化学構造および
生産菌が異なり明確に区別される。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】従来、微生物が生産す
る種々の抗生物質が知られており、医薬品、化粧料、動
物薬、農薬等の分野で実用化されている。これら公知の
化合物よりも有用な活性を有する新規物質の出現が常に
要望されている。本発明者らは以上のような点に着目し
、新規な抗生物質を提供するとともに、その製造法を確
立することによって、これを解決しようとするものであ
る。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述の期
待にこたえるべく抗菌活性を有する物質の探索を続けて
いたところ、ポーマ属に属する１菌株の培養物中に嫌気
性細菌に対する強い抗菌作用を有する物質が生産されて
いることを見いだした。本菌株の生産する有効物質ＰＦ
１０５２物質を単離し、その物理化学的性質を明かにす
ることにより本発明を完成させた。本発明の目的は、新
規抗生物質ＰＦ１０５２物質ならびにその製造法を提供
することにある。第１の本発明の要旨とするところは、
下記の式Ｉ【化２】 で表されるＰＦ１０５２物質を提供するものであり、さ
らに第２の発明は、糸状菌に属するＰＦ１０５２物質生
産菌を培養し、その培養物からＰＦ１０５２物質を採取
するＰＦ１０５２物質の製造法にある。本発明に使用さ
れるＰＦ１０５２物質生産菌の一例としては、１９８８
年、沖縄県与那国島のサトウキビ葉から分離されたＰＦ
１０５２株がある。 【０００５】１．ＰＦ１０５２株の菌学的性状（１）．
培養の特徴 ポテト・デキストロース寒天培地、麦芽エキス寒天培地
、オートミール寒天培地にて、２５℃で　７日間培養し
たところ、どの培地でも同様の性状を示した。コロニー
の大きさは８５ｍｍ以上に達する。気菌糸の発育はよく
、うす茶色で羊毛状に着生する。集落の裏面は黄土色〜
茶色を呈する。ポテトキャロット寒天培地、ＬＣＡ培地
（三浦培地）上でもよく生育し　２５℃　７日間の培養
で集落の径は　７０〜８０ｍｍに達する。この気生菌糸
中に分生子殻を形成する。３７℃の培養では、どの培地
上でも生育しなかった。 （２）．形態学的特徴 顕微鏡下での観察結果を以下に示す。分生子殻は孔口を
有し亜球形、褐色等径細胞よりなり、その大きさは５０
〜１２０μｍである。分生子は１細胞、無色、滑面、楕
円形でその大きさは４〜７　ｘ　２〜３μｍである。以
上の菌学的性状より、ＰＦ１０５２株は、分生子果不完
全菌綱ポーマ（Ｐｈｏｍａ）属に属すると考えられる。 従って、本菌株をＰｈｏｍａ　ｓｐ．　ＰＦ１０５２株
と呼称することにした。尚、本菌株は工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第１１９５８号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１９５８）として寄託されている。ＰＦ１０５２
株は、他のカビに見られるようにその性状が変化し易い
。例えばこの株に由来する突然変異株（自然発生または
誘発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であっても
、ＰＦ１０５２物質を生産するものは全て本発明に使用
できる。 【０００６】２．ＰＦ１０５２物質生産菌の培養法不完
全菌類に属するＰＦ１０５２物質生産菌を通常の微生物
が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄養源
としては、従来カビの培養に利用されている公知のもの
が使用できる。例えば、炭素源としては、グルコース、
シュクロース、水飴、デキストリン、澱粉、グリセロー
ル、糖蜜、動・植物油等を使用しうる。また、窒素源と
しては、大豆粉、小麦胚芽、コーン・スティープ・リカ
ー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸ア
ンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等を使用しうる。そ
の他必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、
マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸およびその
他のイオンを生成することができる無機塩類を添加する
ことは有効である。また、菌の発育を助け、ＰＦ１０５
２物質の生産を促進するような有機および無機物を適当
に添加することができる。培養法としては、好気的条件
での培養法、特に深部培養法が最も適している。培養に
適当な温度は１５〜３０℃であるが、多くの場合２６℃
付近で培養する。ＰＦ１０５２物質の生産は培地や培養
条件により異なるが、振盪培養、タンク培養のいずれに
おいても通常２〜１０日間でその蓄積が最高に達する。 培養中のＰＦ１０５２物質の蓄積量が最高になった時に
培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。 【０００７】３．ＰＦ１０５２物質の精製法本発明によ
って得られるＰＦ１０５２物質の培養物からの採取に当
たっては、その性状を利用した通常の分離手段、例えば
、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着または分配カラ
ムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単独で
または適宜組み合わせて抽出精製することができる。例
えば、ＰＦ１０５２物質は、培養菌体中からはアセトン
−水、メタノール−水または酢酸エチル等で抽出される
。また、培養液中に蓄積されたＰＦ１０５２物質は、水
と混ざらない有機溶剤、例えば、ブタノール、酢酸エチ
ル等で抽出すればＰＦ１０５２物質は有機溶剤層に抽出
される。ＰＦ１０５２物質を更に精製するには、シリカ
ゲル（ワコーゲル　Ｃ−３００、和光純薬工業社製等）
、アルミナ等の吸着剤やセファデックス　ＬＨ−２０（
ファルマシア社製）、トヨパールＨＷ−４０（株式会社
東ソー社製）等を用いるクロマトグラフィーを行うとよ
い。以上のような方法により、あるいはこれらを適宜組
み合わせることにより、高純度のＰＦ１０５２物質が得
られる。得られたＰＦ１０５２物質の物理化学的性状は
次の通りである。 【０００８】４．ＰＦ１０５２物質の物理化学的性状（
１）　　色および形状：無色油状物質（２）　　分子式
：Ｃ２６Ｈ３９ＮＯ４（３）　　マススペクトル　　（
ＦＤ−ＭＳ）：　ｍ／ｚ　４２９　（Ｍ＋Ｈ）＋（４）
　　比旋光度：［α］Ｄ２４　＝　＋５２．９°（ｃ１
．０，　ＣＨＣｌ３）（５）　　紫外部吸収スペクトル λｍａｘｎｍ（ＭｅＯＨ，ε）：２２９　（６１００）
，　２９１　（１２１００）（６）　　赤外部吸収スペ
クトル：νｍａｘ　ｃｍ−１（ＫＢｒ）：１７００，　
１６４０，　１６００，　１４８０，　１４５０，１３
８０　等（７）　　１Ｈ　ＮＭＲスペクトル：重クロロ
ホルム溶液中で測定したスペクトルは第１図に示す通り
である。 （８）　　１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
溶液中で測定したスペクトルは第２図に示す通りである
。 （９）　　溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノールに可溶で、水に不溶である。 さらに構造研究の結果、ＰＦ１０５２物質の化学構造を
、前記式　Ｉのごとく決定した。 【０００９】以下に本発明の実施例を示すが、ＰＦ１０
５２物質の性状が本発明によって明らかにされたので、
それらの性状にもとずきＰＦ１０５２物質の製造法を種
々考案することができる。従って本発明は実施例に限定
されるものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明
によって明らかにされたＰＦ１０５２物質の性状にもと
ずいて公知の手段を施してＰＦ１０５２物質を生産、濃
縮、抽出、精製する方法をすべて包括する。 【００１０】（試験例１）ＰＦ１０５２物質の抗菌活性
日本化学療法学会標準法に従い、種々の濃度の被験薬を
含んだ寒天培地（日水製薬社製）を用い、第一表に示し
た被験菌を３７℃で１８時間好気培養した後生育の有無
を観察し、各被験菌に対するＰＦ１０５２物質の最小発
育阻止濃度を求めた。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第
１表───────────────────────
────────　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　被験菌　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　最小発育阻止
濃度　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　（μｇ／ｍｌ）────
─────────────────────────
──　　　　　　　　　　スタフィロコッカス　アウレ
ウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）
２０９Ｐ　ＪＣ−１　　　　　３．１３　　　　　　〃
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｂ２０５６　
　　　　　　　　６．２５　　　　　　〃　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　ＤＨ−１８Ｓ　　　　　　
　　０．３９スタフィロコッカス　エピデルミデス（Ｓ
．　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）ＡＴＣＣ　１４９９０　
　　　　　　３．１３エシェリヒア　コリ（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）ＮＩＨＪ　ＪＣ−２　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　＞１００サルモネラ　
チフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉ）Ｏ−９０
１−Ｗ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＞
１００シュ−ドモナス　エルギノ−サ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）　ＮＫ２１４　　　
　　　＞１００──────────────────
─────────────　　　　　　　　　　【０
０１１】（試験例２）試験例１と同様に第２表に示した
被験菌を、ＰＦ１０５２物質を含んだＧＡＭ培地を用い
、３７℃で４８時間嫌気培養した後生育の有無を観察し
、各被験菌に対するＰＦ１０５２物質の最小発育阻止濃
度を求めた。その結果を第２表に示した。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第
２表───────────────────────
─────────────　　　　　　　　　　　　
　　　　被験菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　最小発育阻止濃度　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　（μｇ／ｍｌ）───────────────
─────────────────────スタフィ
ロコッカス　サッカロリチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ＡＴＣＣ　１４９５３　　　０．３９ストレプト
コッカス　パルバラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　
ｐａｒｖｕｌｕｓ　Ｍｏｏｒｅ）　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５２２９　　　
　　　　　０．７８ペプトストレプトコッカス　ミクロ
ス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｉｃｒ
ｏｓ　Ｍｏｏｒｅ）　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　５４６２　　　　　　　　０
．０５ビヒドバクテリウム　アドレスセンティス（Ｂｉ
ｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉ
ｓ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
ＡＴＣＣ　１５７０５　　　　　　１２．５ユウバクテ
リウム　レンタム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｅｎｔ
ｕｍ）　ＡＴＣＣ　２５５５９　　　　　　　　　１．
５６プロピオニバクテリウム　アクネス（Ｐｒｏｐｉｏ
ｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｃｎｅｓ）　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ＡＴＣＣ　６９１
９　　　　　　　　０．７８クリストリディウム　パ−
フリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉ
ｎｇｅｎｓ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　ＪＡＭ　３−２　　　　　　　　０．３
９バクテロイデス　フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅ
ｓ　ｆｒａｇｉｌｌｉｓ）　ＮＣＴＣ　９３４３　　　
　　　　０．７８─────────────────
───────────────────【００１２】
（試験例３）試験例２と同様に第３表に示したトレポネ
−マに属する被験菌を、ＰＦ１０５２物質を含んだ５％
　馬脱繊血添加寒天培地を用い、３７℃で４８時間嫌気
培養した後生育の有無を観察し、各被験菌に対するＰＦ
１０５２物質の最小発育阻止濃度を求めた。その結果を
第３表に示した。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　第３表─────────────────────
───────────────　　　　　　　　　　
　　　　　　被験菌　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　最小発育阻止濃度　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　（μｇ／ｍｌ）─────────────
───────────────────────トレ
ポネ−マ　ハイオディセンテリア（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ
　ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　ＰＦ９　　　　　　　　　
　　０．３９　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　ＤＪ７０　　　　　　　　　　０．７８　　　　　
　　　　　〃　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　ＹＤ　３　　　　　
　　　　　０．３９　　　　　　　　　　〃　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　Ｋｏｃｈｉ　　　　　　　　　０．７８──
─────────────────────────
─────────【００１３】 【実施例】種培地として、可溶性澱粉　２．０％、グル
コース　１．０％、ポリペプトン　０．５％、小麦胚芽
　０．６％、酵母エキス　０．３％、大豆粕　０．２％
、炭酸カルシウム　０．２％の組成からなる培地を用い
た。また生産培地として、グルコース　２．０％、澱粉
　１．０％、小麦胚芽　０．８％、大豆粕　１．３％、
肉エキス　０．３８％、塩化ナトリウム０．１３％、炭
酸カルシウム０．１５％の組成からなる培地を用いた。 なお、殺菌前ｐＨはすべてｐＨ７．０に調整して使用し
た。前記の種培地（２０　ｍｌ）を分注した１００　ｍ
ｌ容三角フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し、これに
Ｐｈｏｍａ　ｓｐ．　ＰＦ１０５２株の斜面寒天培養の
　２〜３白金耳を接種し、２６℃で４８時間振盪培養し
て種培養とした。次いで、前記の生産培地（１００　ｍ
ｌ）を分注した５００　ｍｌ容三角フラスコ（４５本）
を１２０℃で１５分間殺菌し、これに前記種培養（各１
　ｍｌ）を接種して、２６℃で　９６時間振盪培養した
。培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し、
濾液と菌体を得た。 【００１４】この菌体に７０％アセトン水（２．６　Ｌ
）を加え、１時間撹拌後菌体を濾別して菌体抽出液を得
た。菌体抽出液は、減圧下でアセトンを留去して１　Ｌ
の濃縮液とした。この濃縮液を酢酸エチル（２　Ｌ）で
活性成分を抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固し油状物質
（１．５４　ｇ）を得た。この油状物質をシリカゲルカ
ラム（Ｗａｋｏｇｅｌ　　Ｃ−２００　　１００　ｇ）
の上部に載せ、ヘキサンで洗浄した後、　ヘキサン−ア
セトン（５０：１）の混合溶媒を展開溶媒とするクロマ
トグラフィーを行い、溶出液を８ｇずつ分画した。ＰＦ
１０５２物質を含む画分（フラクション番号６７〜１４
４）を濃縮乾固し、淡黄色油状物質を２７９ｍｇ得た。 さらに、ＰＦ１０５２物質を含む油状物質をメタノール
を展開溶媒とするセファデックス　ＬＨ−２０（２５０
　ｍｌ）カラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＦ１０
５２を含む画分（フラクション番号１８〜２１）を濃縮
すると１２２　ｍｇの油状物質を得た。この油状物質を
再度シリカゲルカラム（Ｗａｋｏｇｅｌ　Ｃ−３００，
　４０ｇ）の上にのせクロロホルムでカラムを洗浄後ク
ロロホルム−メタノール（１００：１）の混合溶媒で活
性物質を溶出した。ＰＦ１０５２物質を含む画分（フラ
クション番号２１〜３６）を濃縮乾固することにより無
色油状物質３５．５　ｍｇ　を得た。本物質は前記の物
理化学的性状を有する。 【００１５】 【発明の効果】本発明のＰＦ１０５２物質は、第１表、
第２表および第３表に示したごとく抗菌作用を有してお
り抗菌剤としての用途が期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＦ１０５２物質の重クロロホルム溶液中での
４００　ＭＨｚ　１Ｈ　ＮＭＲスペクトル

【図２】ＰＦ１０５２物質の重クロロホルム溶液中での
１００　ＭＨｚ　１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の式Ｉ 【化１】 で表わされるＰＦ１０５２物質。
2. 【請求項２】ポーマ属（Ｐｈｏｍａ属）に属する、抗生
   物質ＰＦ１０５２物質生産菌を培養し、その培養物から
   抗生物質ＰＦ１０５２物質を採取することを特徴とする
   抗生物質ＰＦ１０５２物質の製造法。