CN105384727A - 一类Tetramic acid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用 - Google Patents

一类Tetramic acid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用 Download PDF

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CN105384727A CN201510651467.7A CN201510651467A CN105384727A CN 105384727 A CN105384727 A CN 105384727A CN 201510651467 A CN201510651467 A CN 201510651467A CN 105384727 A CN105384727 A CN 105384727A
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Abstract

本发明公开了一类Tetramic？acid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用。本发明的Tetramic？acid类化合物，其结构如式(Ⅰ)和式(Ⅱ)所示。其对人肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa、食管癌细胞株Eca109、前列腺癌细胞株PC-3、喉癌细胞株Hep-2、白血病细胞株KG-1a、单纯疱疹病毒HSV-1的生长有较强的抑制作用，在制备抗肿瘤和抗病毒药物方面有良好的应用前景。

Description

一类Tetramic acid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一类Tetramicacid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用。
背景技术
Tetramicacid(吡咯烷-2,4-二酮)类的天然产物通常可以从细菌、真菌以及海绵中分离得到[Schobert,R.；Andrea,S.Bioorg.Med.Chem.2008,16,4203–4221.]。它们的结构特征是含有1个吡咯-2,4-二酮的杂环片段，很长的侧链或由很多环聚合在一起等，其中含有十氢萘片段的tetramicacid类化合物经常在很多微生物的次生代谢产物中被发现，由于tetramicacid类化合物具有结构新颖、活性独特的特点[Li,G.；Kusari,S.；Spiteller,M.Nat.Prod.Rep.2014,31,1175–1201.]，因此，很多学者们对它们的生物合成、化学合成以及生物活性展开了广泛的研究。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一类具有抗肿瘤和抗病毒活性的Tetramicacid类化合物。
本发明通过多种柱层析及一维、二维核磁共振波谱，从真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的发酵液中分离得到一类新的Tetramicacid类化合物，这种化合物具有抑制多种癌症细胞和HSV-1病毒生长的活性，可用于制备抗肿瘤和抗病毒药物，从而实现了本发明的目的。
本发明的5个Tetramicacid类化合物，其结构如式(Ⅰ)和式(Ⅱ)所示：
其中，式(Ⅰ)中
化合物1：
或化合物2：
或化合物4：
或化合物5：
或化合物3，其结构如式(Ⅱ)所示。
本发明的第二个目的是提供上述Tetramicacid类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的固体发酵物；
(2)将步骤(1)得到的固体发酵物的浸膏用乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿溶剂萃取，浓缩得到乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物经过中压、常压硅胶柱层析，以水-甲醇、氯仿-甲醇、氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯溶剂系统分别作为正反相洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并组分，经过SephadexLH-20凝胶柱层析得到粗品，经高效液相色谱纯化，得到Tetramicacid类化合物1-5。
步骤(1)中所述的真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的固体发酵物是通过将真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021接种到真菌适用的培养基中，在通常的发酵条件下制得。优选的制备方法是将真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021接种于PDA琼脂培养基中，28℃培养3天，得到培养有菌种的平板，然后将平板中菌种接种入液体培养基中，于转速180r/min摇床、温度28℃培养3天，得到种子液，再将种子液接种于大米培养基中，于28℃静置培养30天，得到固体发酵物，所述的液体培养基为每升含有葡萄糖10g，甘露醇20g，麦芽糖20g，玉米浆1g，味精10g，KH2PO40.5g，MgSO40.3g，酵母浸膏3g，海盐30g，余量为水，pH7.0，所述的大米培养基为每600mL是这样配制的：将大米400g，酵母膏2g，葡萄糖2g，海盐18g，加入到容器中，然后用水定容到600ml。
本发明的第三个目的是提供真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021在制备上述Tetramicacid类化合物中的应用。
通过体外抗肿瘤活性筛选实验，结果显示：本发明的Tetramicacid类化合物能抑制肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa、食管癌细胞株Eca109、前列腺癌细胞株PC-3、喉癌细胞株Hep-2、白血病细胞株KG-1a、单纯疱疹病毒HSV-1的生长，它们的IC50值如表3所示，由此证明本发明的Tetramicacid类化合物可以用于制备抗肿瘤和抗病毒的药物。
因此，本发明的第三个目的是上述Tetramicacid类化合物在制备抗肿瘤或抗病毒药物中的应用。
一种抗肿瘤或抗病毒药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的Tetramicacid类化合物和药学上可以接受的载体。
所述的抗肿瘤药物优选为抗肝癌、宫颈癌、食管癌、前列腺癌、喉癌、白血病的药物。
所述的抗病毒药物优选为抗单纯疱疹病毒HSV-1的药物。
本发明的Tetramicacid类化合物对人肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa、食管癌细胞株Eca109、前列腺癌细胞株PC-3、喉癌细胞株Hep-2、白血病细胞株KG-1a、单纯疱疹病毒HSV-1的生长有较强的抑制作用，在制备抗肿瘤和抗病毒药物方面有良好的应用前景。
本发明的真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021于2015年8月20日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉武汉大学，其保藏编号：CCTCCNO.M2015496。
附图说明：
图1是化合物1中的关键HMBC和1H-1HCOSY图；
图2是化合物1中的关键NOESY图；
图3是化合物1-5的CD图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：Tetramicacid类化合物1-5的制备
每升液体培养基是这样配制的：将10克葡萄糖，20克甘露醇，20克麦芽糖，1克玉米浆，10克味精，0.5克KH2PO4，0.3克MgSO4，3克酵母浸膏，30克海盐混合，用水定容到1L，调pH7.0。将液体培养基装入约5个500mL的三角烧瓶中，每瓶约150mL，在121℃高压蒸汽灭菌25分钟。
大米培养基是这样配制的：每个5L三角瓶中盛装大米400g，酵母膏2g，葡萄糖2g，海盐18g，用水定容到600mL，混匀，121℃高压蒸汽灭菌25分钟，共6瓶备用。
用移液枪吸约2微升的真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021菌种接种入PDA琼脂培养基上，28℃培养3天，得到培养有菌种的平板，然后用竹签从平板中挑约3微升菌种接种入含150mL上述液体培养基的500mL三角烧瓶中，于摇床(转速180r/min)温度28℃培养3天，得到种子液后，在上述盛有大米培养基的5L三角瓶中接种50mL种子液，于28℃静置培养30天后，收取固体发酵物。
将经大米培养基培养得到的固体发酵物每瓶用2L丙酮浸泡、捣碎，在用组织匀浆机搅拌均匀，超声破壁30分钟，减压抽滤得到滤液，将滤液减压蒸馏除去丙酮后，再用水制成水混悬液，再用20L乙酸乙酯萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物29.93g。乙酸乙酯提取物用正相硅胶(200-300目)干法拌样后，装入玻璃层析柱(含正相硅胶200-300目约300g)，进行常温柱层析，以氯仿-甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析(GF254硅胶板)情况合并得到7个流分(Fr.1-Fr.7)，回收洗脱溶剂，蒸干流分用甲醇转移。在薄层层析板能用氯仿-甲醇(体积比10:1)为展开剂展开的流分Fr.2进一步通过硅胶柱(含正相硅胶100-200目约100g)进行常温柱层析，以石油醚-氯仿作为洗脱剂，从体积比100:2到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析(GF254硅胶板)情况合并得到3个亚流分(Fr.2-1-Fr.2-3)，其中在薄层层析板上用氯仿-甲醇(体积比10:1)为展开剂时，含Rf值为0.5～0.7主点的亚流分Fr.2-1采用高效液相半制备(检测波长为254nm，流速为3mL/min，色谱柱为YMC-Pack10mm×250mm，流动相为体积比为85:15的甲醇-水)分别在出峰时间为30和39分钟时分离纯化得到化合物4和5。其中在薄层层析板上用氯仿-甲醇(体积比10:1)为展开剂时，含Rf值为0.2～0.5主点的流分Fr.3进一步通过硅胶柱进行常温柱层析，以氯仿-丙酮作为洗脱剂，从体积比100:2到1:1进行梯度洗脱，根据薄层层析(GF254硅胶板)情况合并得到4个亚流分(Fr.3-1-Fr.3-4)，其中在薄层层析板上用氯仿-甲醇(体积比10:1)为展开剂时，含Rf值为0.3～0.5主点的亚流分Fr.3-1再通过中压柱层析，以甲醇-水作为洗脱剂，从体积比2:8到9:1进行梯度洗脱，根据薄层层析(GF254硅胶板)情况合并得到4个亚流分(Fr.3-1-1-Fr.3-1-4)，其中在薄层层析板上用氯仿-甲醇(体积比10:1)为展开剂时，以Rf值为0.3～0.5主点为主要成分的亚流分Fr.3-1-1采用高效液相半制备(检测波长为254nm，流速为3mL/min，色谱柱为YMC-Pack10mm×250mm，流动相为体积比为60:40的甲醇-水)分别在出峰时间为16、19和22分钟时分离纯化得到化合物3、1和2。
其中化合物1的结构解析如下：
通过高分辨质谱(HRESIMS)在m/z430.2958[M+H]+处给出准分子离子峰，结合NMR波谱数据，得知化合物1的分子式为C26H39NO4。1H谱(表1)中显示分子中有3个低场次甲基信号δ5.47(1H,d,J＝4.5Hz),4.26(1H,t,J＝11.0Hz),3.57(1H,d,J＝2.0Hz)，7个甲基信号δ2.82(3H,s),1.46(3H,s),1.10(3H,d,J＝5.5Hz),1.02((3H,s),0.86(3H,t,J＝7.5Hz),0.75(3H,d,J＝7.5Hz),0.70(3H,d,J＝5.5Hz).13C谱(表2)显示分子中有26个碳原子，其中包括2个羰基碳[δC173.5,193.8]，3个烯化季碳[δC130.5,103.9,190.7]，1个氧化的季碳[δC61.9]，1个烯化次甲基[δC130.7]，1个氧化的次甲基[δC60.2]，1个氮化次甲基[δC69.6]，6个高场次甲基[δC35.5,53.7,40.0,38.2,42.1,35.4]，4个亚甲基[δC29.0,26.6,28.8,24.9]，7个甲基[δC11.4,13.4,20.2,21.2,13.7,12.1,26.4]。这些NMR信号与化合物PF1052[Koyama,N.；Nagahiro,T.；Yamaguchi,Y.；Ohshiro,T.；Masuma,R.；Tomoda,H.；S.J.Antibiot.2005,58,338–345.]，Sch210971[Yang,S.W.；Mierzwa,R.；Terracciano,J.；Patel,M.；Gullo,V.；Wagner,N.；Baroudy,B.；Puar,M.；Chan,T.M.；McPhail,A.T.；Chu,M.J.Nat.Prod.2006,69,1025-1028.]和myceliothermophinsA–E[Yang,Y.L.；Lu,C.P.；Chen,M.Y.；Chen,K.Y.；Wu,Y.C.；Wu,S.H.Chem.Eur.J.2007,13,6985–6991.]基本骨架相似，并且包含有1个十氢萘环的结构。化合物1与化合物PF1052唯一的区别在于C-16位的甲基连接在C-3位上，而不是在C-7位，这些可以从HMBC谱(Figure1)中得到证实。在HMBC谱中，H-2与C-1，C-3，C-11，C-12，C-16相关，H-4与C-2，C-5，C-10，C-16相关，H-16与C-2，C-3，C-4相关。再仔细分析HMBC谱与1H-1HCOSY谱(图1)，化合物1的平面构型得以确定。
化合物1的相对构型通过NOESY谱(图2)和偶合常数得以确定下来。在NOESY谱中，可以观察到H-9和H-5相关、H-10和CH3-15相关。J1-2(10.0Hz)和J1-10(11.0Hz)说明H-1/H-2和H-1/H-10同为反式构型，形成了一个反式十氢萘环结构，说明H-10和H-5处于直立方向，分别为β-和α-构型。NOESY谱中H-2和H-12相关说明两者为顺势构型。化合物1的CD谱(图3)在波长229nm处为负cottoneffect效应，这和已知化合物altersetin、equisetin、coniosetin、hymenosetin的CD谱数据相似(1.Hellwig,V.；Grothe,T.；Mayer-Bartschmid,A.；Endermann,R.；Geschke,F.；Henkel,T.；Stadler,M.J.Antibiot.2002,55,881–892.2.Segeth,A.P.；Bonnefoy,A.；Bronstrup,M.；Knau,M.；Schummer,D.；Toti,L.；Vertesy,L.；Wetzel-Raynal,M.；Wink,J.；Seibert,G.J.Antibiot.2003,56,114–122.3.Halecker,S.；Surup,F.；Kuhnert,E.；Mohr,K.I.；Brock,N.L.；Dickschat,J.S.；Junker,C.；Schulz,B.；Stadler,M.Phytochemistry2014,100,86–91)；在波长292nm处为正cottoneffect效应，这和已知化合物ent-equisetin、decahydrofuligorubin、phomasetin、chaunolidineA的CD谱数据相似(1.Hellwig,V.；Grothe,T.；Mayer-Bartschmid,A.；Endermann,R.；Geschke,F.；Henkel,T.；Stadler,M.J.Antibiot.2002,55,881–892.2.Shang,Z.；Li,L.；Espósito,B.P.；Salim,A.A.；Khalil,Z.G.；Quezada,M.；Bernhardt,P.V.；Capon,R.J.Org.Biomol.Chem.2015,13,7795–7802)，说明在化合物中，C-1和C-12的绝对构型为1S,20R。基于C-19的化学位移为δ173.5)，说明Δ17,18为Z构型(Aoki,S.；Higuchi,K.；Ye,Y.；Satari,R.；Kobayashi,M.Tetrahedron2000,56,1833-1856)。
化合物1为无色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[a]20 D＝+45.21(c,2.0inCH3Cl)。化合物1的结构如式(Ⅲ)所示，
其中化合物2的结构解析如下：
通过高分辨质谱(HRESIMS)在m/z416.2804[M+H]+处给出准分子离子峰，结合NMR波谱数据，得知化合物2的分子式为C25H37NO4。仔细比较化合物2与化合物1的1H谱(表1)和13C谱(表2)发现这两个化合物唯一的区别是化合物2中C-20连接的是异丙基，而不是仲丁基，这一推断在HMBC谱和1H-1HCOSY谱中得以证实。在HMBC谱中，H-20与C-22、C-23、C-24相关，H-23与C-20、C-22、C-24相关，H-24与C-20、C-22、C-23相关；在1H-1HCOSY谱中也观察到H-20与H-22的相关，因此化合物2的平面结构得以确定。化合物2的NOESY谱数据与化合物1的一致，说明它的相对构型与化合物1也一致。
化合物2为无色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[a]20 D＝+19.04(c,0.7inCH3Cl)。化合物2的结构如式(Ⅲ)所示，
其中化合物3的结构解析如下：
通过高分辨质谱(HRESIMS)在m/z432.2745[M+H]+处给出准分子离子峰，结合NMR波谱数据，得知化合物3的分子式为C25H37NO5。仔细比较化合物3与化合物2的1H谱和13C谱发现(表1和表2)，这两个化合物唯一的区别是化合物2中C-3，C-4位的双键在化合物3中被氧化成了一个三元氧环(δc57.2,C-3；δc65.4,C-4和δH2.86,H-4)，这一推断在HMBC谱和1H-1HCOSY谱中得以证实。在HMBC谱中，H-16与C-2、C-3、C-4相关，H-5与C-1、C-3、C-4、C-10相关，H-4与C-2、C-5、C-10、C-16相关；在1H-1HCOSY谱也观察到H-5与H-4的相关。在NOESY谱中，H-4和H-5/CH3-16相关，说明H-4和CH3-16均为α-构型。化合物3中的C-1,C-2,C-5,C-9,C-10,C-11,C-12,和C-20的相对构型通过比较其NOESY谱与化合物1的NOESY谱数据一致而得到确定。
化合物3为无色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[a]20 D＝-14.1(c,1.65inCH3Cl)。化合物3的结构如式(Ⅲ)中的3所示。
其中化合物4的结构解析如下：
通过高分辨质谱(HRESIMS)在m/z400.2843[M+H]+处给出准分子离子峰，结合NMR波谱数据，得知化合物4的分子式为C25H37NO3。仔细比较化合物4与化合物2的1H谱和13C谱发现，这两个化合物唯一的区别是化合物2中C-11，C-12位的三元氧环在化合物4中脱水形成了一个双键(δc134.6,C-11；δc122.4,C-12和δH5.13,H-12)，这一推断在HMBC谱和1H-1HCOSY谱中得以证实。在HMBC谱中，H-2和C-1、C-3、C-4、C-11、C-12、C-13相关，H-12与C-2、C-11、C-13、C-14相关，H-14和C-11、C-12相关，进一步证明与C-2相连的是一个1-甲基丙烯基。化合物4的相对构型也通过比较其NOESY谱与化合物1的NOESY谱数据一致而得到确定。
化合物4为无色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[a]20 D＝+62.7(c,0.53inCH3Cl)。化合物4的结构如式(Ⅲ)所示，
其中化合物5的结构解析如下：
通过高分辨质谱(HRESIMS)在m/z414.3015[M+H]+处给出准分子离子峰，结合NMR波谱数据，得知化合物5的分子式为C26H39NO3。仔细比较化合物5与化合物4的1H谱和13C谱发现，这两个化合物唯一的区别是化合物5中C-20连接的是仲丁基，而不是异丙基，这一推断在HMBC谱和1H-1HCOSY谱中得以证实。在HMBC谱中，H-20和C-22、C-23、C-24相关,H-23和C-20、C-22、C-24相关，H-24和C-20、C-22、C-23相关,H-25和C-22、C-24相关；在1H-1HCOSY谱中也观察到H-20与H-22的相关，因此化合物5的平面结构得以确定。化合物5的相对构型也通过比较其NOESY谱与化合物1的NOESY谱数据一致而得到确定。
化合物5为无色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[a]20 D＝+15.98(c,0.4inCH3Cl)。化合物5的结构如式(Ⅲ)所示，
其中，
化合物1：
化合物2：
化合物4：
化合物5：
表1.化合物1-5的氢谱NMR数据(在CDCl3溶剂中)
表2.化合物1-5的碳谱NMR数据(在CDCl3溶剂中)
实施例4：上述Tetramicacid类化合物1-5的体外抗肿瘤和抗病毒活性筛选实验：
1、体外抗肿瘤筛选实验：
分别收集对数生长期的肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa、食管癌细胞株Eca109、前列腺癌细胞株PC-3、喉癌细胞株Hep-2、白血病细胞株KG-1a用10％血清1640培养基使其悬浮，再接种于96孔培养板，每孔细胞数为5000个/80μL，置于5％CO2培养箱37℃培养。用10％血清1640培养基将Tetramicacid类化合物1-5稀释成浓度为3.125μg/mL，6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL的实验溶液。次日于不同的实验组的培养板中分别加入浓度为3.125μg/mL,6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL的实验溶液20μL，并使每孔中的终浓度达到测试(实验组浓度采用对倍稀释)。另外阴性对照组中加入等量的10％血清1640培养基。48h后，吸弃实验组和对照组中的培养液，其中，含Hela,HepG2,Eca109,PC-3和Hep2悬浮液的96孔板中每孔加入MTT5μL(10mg/mL)，含KG-1a悬浮液的96孔板中每孔加入CCK-85μL(10mg/mL)，继续培养2～3h，再每孔加入DMSO100μL终止反应，37℃放置20min，用酶标仪检测各孔在450nm或者650nm处的吸光度A值，计算细胞生长抑制率。细胞生长率＝(实验组OD÷对照组OD)×100％。阳性对照药物为Doxorubicin(阿霉素)。
2、体外抗病毒活性筛选实验：
收集单纯疱疹病毒HSV-1用10％血清1640培养基使其悬浮，再接种于24孔培养板，每孔细胞数为30个/80μL，置于5％CO2培养箱37℃培养2h。用10％血清1640培养基将Tetramicacid类化合物1-5稀释成浓度为3.125μg/mL，6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL的实验溶液。次日于不同的实验组的培养板中分别加入浓度为3.125μg/mL,6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL的实验溶液20μL，并使每孔中的终浓度达到测试(实验组浓度采用对倍稀释)。另外阴性对照组中加入等量的10％血清1640培养基。48h后，吸弃实验组和对照组中的培养液，加入1％甲基纤维素和各种待测浓度的化合物，培育72h后，细胞膜用10％福尔马林和1％结晶紫固定，继续培养2～3h，再每孔加入DMSO100μL终止反应，37℃放置20min，用酶标仪检测各孔在450nm或者650nm处的吸光度A值，计算细胞生长抑制率。细胞生长率＝(实验组OD÷对照组OD)×100％。阳性对照药物为Acyclovir(阿昔洛韦)。
实验结果显示，本发明的Tetramicacid类化合物1-5能分别抑制不同肿瘤细胞株(肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa、食管癌细胞株Eca109、前列腺癌细胞株PC-3、喉癌细胞株Hep-2、白血病细胞株KG-1a)和单纯疱疹病毒HSV-1的生长，它们的IC50值如表3所示。因此本发明的如式(I)所示的Tetramicacid类化合物能用于制备抗肿瘤和抗病毒药物。
表3.化合物1-5对6种肿瘤细胞和1种病毒的细胞毒活性

Claims (10)

1.Tetramicacid类化合物，其结构如式(Ⅰ)和式(Ⅱ)所示：
其中，式(Ⅰ)中
化合物1：
或化合物2：
或化合物4：
或化合物5：
或化合物3，其结构如式(Ⅱ)所示。
2.一种权利要求1所述的Tetramicacid类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的固体发酵物；
(2)将步骤(1)得到的固体发酵物的浸膏用乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿溶剂萃取，浓缩得到乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物经过中压、常压硅胶柱层析，以氯仿-甲醇、氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯或水-甲醇溶剂系统分别作为正反相洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并组分，经过SephadexLH-20凝胶柱层析得到粗品，经高效液相色谱纯化，得到Tetramicacid类化合物1-5。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的固体发酵物是通过将真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021接种到真菌适用的培养基中，在通常的发酵条件下制得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法是将真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021接种于PDA琼脂培养基中，28℃培养3天，得到培养有菌种的平板，然后将平板中菌种接种入液体培养基中，于转速180r/min摇床、温度28℃培养3天，得到种子液，再将种子液接种于大米培养基中，于28℃静置培养30天，得到固体发酵物，所述的液体培养基为每升含有葡萄糖10g，甘露醇20g，麦芽糖20g，玉米浆1g，味精10g，KH2PO40.5g，MgSO40.3g，酵母浸膏3g，海盐30g，余量为水，pH7.0，所述的大米培养基为每600mL是这样配制的：将大米400g，酵母膏2g，葡萄糖2g，海盐18g，加入到容器中，然后用水定容到600ml。
5.真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021在制备权利要求1所述的Tetramicacid类化合物中的应用。
6.权利要求1所述的Tetramicacid类化合物在制备抗肿瘤或抗病毒药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌、宫颈癌、食管癌、前列腺癌、喉癌或白血病的药物；所述的抗病毒药物为抗单纯疱疹病毒HSV-1的药物。
8.一种抗肿瘤或抗病毒药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的Tetramicacid类化合物和药学上可以接受的载体。
9.根据权利要求8所述的抗肿瘤或抗病毒药物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌、宫颈癌、食管癌、前列腺癌、喉癌或白血病的药物；所述的抗病毒药物为抗单纯疱疹病毒HSV-1的药物。
10.真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021，其保藏编号：CCTCCNO.M2015496。
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