CN103483354B

CN103483354B - 一类色酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤与酶抑制剂药物中的应用

Info

Publication number: CN103483354B
Application number: CN201310413815.8A
Authority: CN
Inventors: 漆淑华; 鲍洁
Original assignee: South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Current assignee: South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Priority date: 2013-09-11
Filing date: 2013-09-11
Publication date: 2016-01-20
Anticipated expiration: 2033-09-11
Also published as: CN103483354A

Abstract

本发明公开了一类色酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤与酶抑制剂药物中的应用。本发明的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物对肺腺癌细胞、组织细胞淋巴瘤细胞、白血病细胞、胃癌细胞、急性淋巴母细胞白血病细胞、急性粒细胞白血病细胞或肝癌细胞的生长有较强的抑制作用，对JAK3，AuroraA和ABL有抑制作用，在制备抗肿瘤以及酶抑制剂药物方面有良好的应用前景。

Description

一类色酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤与酶抑制剂药物中的应用

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一类含硫色酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤与酶抑制剂药物中的应用。

背景技术：

真菌能产生多种多样具有不同生理活性的代谢产物，如抗肿瘤、抗细菌、抗真菌、抗虫、酶抑制剂等生物活性。从真菌中寻找活性化合物已经成为天然药物研发的一个热点。色酮类化合物作为自然界中普遍存在的一类化合物，不仅结构形式多样，并且具有多种多样的生物活性，引起了化学家等的广泛关注。含硫色酮类化合物较少见，对其研究也较少。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一类具有抗肿瘤与酶抑制剂活性的含硫色酮类化合物。

本发明通过多种柱层析及一维、二维核磁共振波谱，从草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液中分离得到一类含硫色酮类化合物，这种含硫色酮类化合物具有抑制多种癌症细胞生长的细胞毒活性，可用于制备抗肿瘤药物，并且对多种激酶有较好抑制作用，可用于制备酶抑制剂药物，从而实现了本发明的目的。

本发明的含硫色酮类化合物，其结构如式（Ⅰ）所示：

其中化合物1：C-6为R构型，R₂＝H；

化合物2：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物3：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物4：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物5：C-6为S构型，

化合物6：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物7：C-6为S构型，

化合物8：C-6为S构型，

化合物9：C-6为R构型，R₂＝H；

化合物10：C-6为R构型，R₂＝H。

本发明的第二个目的是提供如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物的制备方法。

本发明的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液；

（2）将步骤(1)得到的发酵液用乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿溶剂萃取，萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物；

（3）将步骤(2)所述的乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物经过常压硅胶柱层析，以氯仿-甲醇、氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯溶剂系统为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并组分，将在薄层层析上能用体积比8:2的氯仿-丙酮溶剂系统展开的组分，经进一步的分离纯化，得到化合物oxalicumoneA以及式（I）中的化合物1-3；

（4）将oxalicumoneA溶于无水吡啶中在室温用4-二甲氨基吡啶作为催化剂，分别与4-硝基苯甲酰氯、3，5-双(三氟甲基)苯甲酰氯、苯甲酰氯反应制备得到式（I）中的化合物4-8；

（5）将化合物1溶于无水吡啶中在室温分别与(R)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酰氯（(R)-MTPA）和(S)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酰氯（(S)-MTPA）反应制备得到化合物9和10。

步骤（1）中所述的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液可以将草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507接种到青霉属真菌适用的培养基中，在通常的发酵条件下制得。优选的制备方法是将草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507接种于PDA培养基中，28℃培养3天，得到培养有菌种的平板，然后将平板中菌种接种入PDB培养基中，于室温静置培养30天，得到草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液，所述的PDA培养基每升含有土豆200g，葡萄糖20g，海盐30g，琼脂20g，余量为水，所述的PDB培养基每升含有土豆200g，葡萄糖20g，海盐30g，余量为水。

步骤（2）所述的萃取最好用乙酸乙酯，所述的浓缩可以采用常规的方法如减压浓缩。

步骤（3）所述的纯化可以采用色谱柱分离或重结晶。

通过体外抗肿瘤活性筛选实验，结果显示：本发明的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物能抑制肺腺癌细胞株H1975、组织细胞淋巴瘤细胞株U937、白血病细胞株K562、胃癌细胞株BGC-823，急性淋巴母细胞白血病细胞株MOLT-4、乳腺癌细胞株MCF-7、急性粒细胞白血病细胞株HL-60和肝癌细胞株Huh-7的生长，它们的IC₅₀值如表2所示，由此证明本发明的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物可以用于制备抗肿瘤药物。

通过酶抑制剂活性筛选实验，结果显示：本发明的式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物对JAK3，AuroraA和ABL有抑制作用，它们的IC₅₀值如表3所示，由此证明本发明的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物可用于制备JAK3、AuroraA和ABL酶抑制剂药物。

因此，本发明的第三个目的是提供如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物1、2、3、4、5、6、7、8或10在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物1、2、3、4、5、6、7、8或10，和药学上可以接受的载体。

优选，当为化合物1时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤、胃癌或白血病药物。

优选，当为化合物2时，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌或白血病药物。

优选，当为化合物3或4时，所述的抗肿瘤药物为抗肺癌、淋巴瘤、胃癌、白血病、乳腺癌或肝癌药物。

优选，当为化合物5时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤、胃癌、白血病、乳腺癌或肝癌药物。

优选，当为化合物6时，所述的抗肿瘤药物为抗肺癌、淋巴瘤、胃癌、白血病或乳腺癌药物。

优选，当为化合物7时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤药物。

优选，当为化合物8时，所述的抗肿瘤药物为抗白血病药物。

优选，当为化合物10时，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌或白血病药物。

本发明的第五个目的是提供如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物1、4、5、6或9在制备酶抑制剂药物中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种酶抑制剂药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物1、4、5、6或9，和药学上可以接受的载体。

优选，当为化合物1、5、6或9时，所述的酶抑制剂药物为蛋白酪氨酸激酶3的抑制剂。

优选，当为化合物4时，所述的酶抑制剂药物为酪氨酸激酶、蛋白酪氨酸激酶3、Aurora-A激酶的抑制剂。

本发明的如式（Ⅰ）所示的含硫色酮类化合物对肺腺癌细胞、组织细胞淋巴瘤细胞、白血病细胞、胃癌细胞、急性淋巴母细胞白血病细胞、急性粒细胞白血病细胞或肝癌细胞的生长有较强的抑制作用，对JAK3，AuroraA和ABL有抑制作用，在制备抗肿瘤以及酶抑制剂药物方面有良好的应用前景。

本发明的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507于2012年12月6日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国，武汉，武汉大学，保藏号为CCTCCNO：M2012507。

附图说明：

图1是化合物1-3在HPLC中观察到了UV吸收谱图；

图2中A是化合物1在二氯甲烷中所测CD图；B是化合物2在甲醇中所测CD图；

图3中A是化合物3在二氯甲烷中所测CD图；B是化合物3在二氯甲烷中所测Rh₂(OCOCF₃)₄络合物的CD差图。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：含硫色酮类化合物oxalicumoneA和化合物1-3的制备

每升PDB培养基配制方法：将200克土豆，20克葡萄糖，30克海盐混合，用水定容到1L。将PDB培养基装入约300个1000mL的三角烧瓶中，每瓶约300mL，在121℃高压蒸汽灭菌25分钟，备用。

每升PDA培养基配置方法：将200克土豆，20克葡萄糖，30克海盐，20克琼脂混合，用水定容到1L。121℃高压蒸汽灭菌25分钟，备用。

用竹签挑取适量的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507菌种接种入PDA培养基上，28℃培养3天，得到培养有菌种的平板，然后用竹签从平板中挑适量菌种接种入1000mL的装有300mLPDB培养基的三角烧瓶中，于室温（28℃）静置培养30天后，收取草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液。

将经PDB培养基培养得到草酸青霉（Penicilliumoxalicum）SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液100L用乙酸乙酯萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物70g。乙酸乙酯提取物用正相硅胶（100-200目）干法拌样后，装入玻璃层析柱，进行常温柱层析，以氯仿-甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得氯仿-甲醇98:2洗脱的组分A1（14g），氯仿-甲醇95：5洗脱的组分B1（5g），氯仿-甲醇80:20洗脱的组分C1（16g）。

组分A1经再次的正相硅胶（200-300目）分离。干法拌样后，装入玻璃层析柱，进行常温柱层析，以氯仿-丙酮作为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得氯仿-丙酮80:20洗脱的组分A2（1.3g）。组分A2进一步通过MPLC进行分离（ODS柱，流速20ml/min），以MeOH/H₂O(v/v50:50)作为洗脱剂进行洗脱，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得纯度约90%的化合物A3（oxalicumoneA、200mg），以及oxalicumoneA和化合物1的混合物A4（100mg）。组分A3通过凝胶（直径18mm，柱长1600mm，凝胶为sephedexLH-20，流动相为体积比1:1的氯仿-甲醇）的进一步纯化，得到纯度99%的化合物oxalicumoneA（180mg）；组分A4采用高效液相半制备（检测波长为280nm，流速为3mL/min，色谱柱为phenomenexGemini10mm×250mm，流动相为体积比为53:47的甲醇-水）在出峰时间为44.2min时分离纯化得到化合物1。

组分B1通过MPLC进行分离（ODS柱，流速20ml/min），分别用体积比为20:80，40:60，60:40，80:20，100:0的MeOH/H₂O为洗脱剂进行洗脱，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得以60:40MeOH/H₂O洗脱的组分B2（0.5g）。组分B2经再次的正相硅胶（200-300目）分离。干法拌样后，装入玻璃层析柱，进行常温柱层析，以氯仿-丙酮作为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得氯仿-丙酮9:1洗脱的组分B3（70mg）。组分B3采用高效液相半制备（检测波长为280nm，流速为3mL/min，色谱柱为phenomenexGemini10mm×250mm，流动相为体积比为54：46的甲醇-水）在出峰时间为38.5min时分离纯化得到化合物3（7mg）。

组分C1通过再次的正相硅胶（200-300目）分离。干法拌样后，装入玻璃层析柱，进行常温柱层析，以氯仿-丙酮作为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得氯仿-丙酮8:2洗脱的组分C2（6g）。组分C2通过凝胶（直径18mm，柱长1600mm，凝胶为sephedexLH-20，流动相为体积比1:1的氯仿-甲醇）进一步纯化，根据薄层层析（GF₂₅₄硅胶板）情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得进一步纯化的组分C3；组分C3通过MPLC进行分离（ODS柱，流速20ml/min），用体积比为50:50:10^-4的MeOH/H₂O/TFA洗脱，获得化合物2（50mg）。

化合物1-3在紫外灯下可见有紫外吸收，硫酸香草醛显色为橙色，以及在HPLC中观察到的特征UV吸收（图1），可以作为目标化合物特征，为分离提供一定指导。

其中化合物oxalicumoneA的TLC、HPLC、MS以及¹HNMR数据与本实验室发表的文献Sun，Y.L.，He，F.，Liu，K.S.，Zhang，X.Y.，Bao，J.，Wang，Y.F.，Nong，X.H.，Xu，X.Y.，Qi，S.H.PlantaMedica，2012，78，1957-1961.公开的化合物oxalicumoneA一致，因此鉴定其为化合物oxalicumoneA。

化合物1的结构解析如下：

质谱显示化合物1的分子量（ESIMS）m/z447.1[M+Na]⁺与化合物oxalicumoneA相同，结合NMR波谱数据，得知化合物1与oxalicumoneA有相同的分子式C₁₉H₂₀O₉S。进一步分析化合物1的NMR数据，发现两个化合物非常相似，仅仅是C-11的化学位移（δ_C86.2）与oxalicumoneA（δ_C79.6）相差较大，因此推测化合物1是oxalicumoneA的差向异构体。通过旋光、圆二色谱的测定以及Mosher酯化反应，最终确定了该化合物C-6、C-11、C-13的绝对构型分别为R、S、R。结构如式（I）所示。化合物1为黄色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[α]²⁰ _D+102(c0.204，CHCl₃)。

化合物2的结构解析如下：

通过高分辨质谱（ESIMS）m/zHRESIMS411.0743[M+H]⁺，推测出该化合物的分子式为C₁₈H₁₈O₉S。比较该化合物的₁H、₁₃CNMR以及DEPT135，可看出该化合物与oxalicumoneA非常相似，但是只有一个甲氧基信号，并且分子量比oxalicumoneA少14，推测结构上比oxalicumoneA少了一个氧甲基。HMBC谱中，H-16与C-11/C-15，H-13与C-14的相关，确定了C-15上甲氧基的连接，结合分子式推测出该化合物的平面结构。为了进一步确定该化合物的绝对构型，我们测试了该化合物的圆二色谱，发现化合物2与oxalicumoneA在254nm，284nm以及323nm处有类似的cotton效应。同时我们发现化合物2在室温下，溶于甲醇时，会自发产生少量的化合物oxalicumoneA，因此我们推测化合物2与oxalicumoneA有相同的绝对构型6S，11S，13R。结构如式（I）所示。化合物2为黄色油状物，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[α]²⁰ _D+10(c0.5，MeOH)。

化合物3的结构解析如下：

通过高分辨质谱（ESIMS）m/zHRESIMS395.0786[M+H]⁺，推测出该化合物的分子式为C₁₈H₁₈O₈S。通过NMR数据分析，发现该化合物与oxalicumoneA也比较相似，不同之处在于比oxalicumoneA少了一个亚甲基信号(δ_H/δ_C4.45/71.2)，并且H-12的化学位移差别较大。HMBC谱中，H-12与C-11/C-13，H-14与C-13相关，推测出片段C-11～C-14，并且这也解释了化合物3在H-12处的化学位移会向低场偏移。由此确定了该化合物的平面结构。该化合物的CD谱图与oxalicumoneA很相似，有类似的cotton效应，由此确定了C-6的绝对构型为S。C-11的构型是采用与Rh₂(OCOCF₃)₄络合后测试CD差谱，运用bulkiness规则的方法得以确定。该化合物的CD差谱在350nm处显示正的cotton效应，推断C-11的绝对构型是S。结构如式（I）所示。化合物3为黄色粉末，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇、DMSO，难溶于水，比旋光度值[α]²⁰ _D-18(c0.2，MeOH)。

化合物1-3的氢谱和碳谱数据如表1所示：

表1：化合物1-3的¹H(500MHz)，和¹³C数据(125MHz)（DMSO-d₆，δppm)

^[a]RecordedinCDCl₃.^[b]RecordedinDMSO-d₆.

由此确定化合物1、2、3的结构分别如下述式（Ⅰ）中的化合物1、2、3所示。

实施例2：含硫色酮类化合物4-8的制备

称取2.0mgoxalicumoneA溶于装有0.5mL无水吡啶的5mL烧瓶中，加入3，5-双(三氟甲基)苯甲酰氯(BTBC)15μl，然后加入少量的4-二甲氨基吡啶（DMAP）作为催化剂，28℃震荡反应10小时，将溶剂减压蒸干后，将粗品采用高效液相半制备(MeOH/H₂O，v/v87.5:22.5，3ml/min)冲洗20min后，再用MeOH/H₂O（v/v100:0，3ml/min）洗脱8min，收集该部分得到化合物7。相同的方法，当加入BTBC的量较少时（7μl），可以反应生成化合物6，采用高效液相半制备(MeOH/H₂O，v/v80:20，3ml/min)，收集出峰时间为17.5min样品得到。采用相同方法，将反应试剂BTBC分别用4-硝基苯甲酰氯（NC）和苯甲酰氯（BC）代替，分别得到化合物4-5（高效液相半制备，MeOH/H₂O，v/v75:25，3ml/min，出峰时间分别为17.1min，23.5min)和化合物8（高效液相半制备，MeOH/H₂O，v/v46:54，3ml/min，出峰时间为22.3min)。

化合物4-8的核磁共振数据与化合物oxalicumoneA的核磁共振数据相比较，确定化合物4-8的结构如式（I）所示。

化合物4-8的氢谱数据如下：

化合物4：¹HNMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.21(1H，s，1-OH)，6.97(1H，s，H-4)，6.70(1H，s，H-2)，6.13(1H，s，11-OH)，5.56(1H，dd，J=8.0，4.5Hz，H-13)，4.04(1H，t，J=8.5Hz，H-6)，3.74(3H，s，H-17)，3.67(3H，s，H-16)，3.58(1H，dd，J=17.0，8.0Hz，H-7a)，3.29(1H，dd，J=14.5，4.0Hz，H-12a)，3.21(1H，J=14.0，7.5Hz，H-12b)，3.14(1H，dd，J=17.0，8.5Hz，H-7b)，2.39(3H，s，H-10);

化合物5：¹HNMR(500MHz，DMSO-d₆)δ7.54(1H，s，H-4)，7.25(1H，s，H-2)，5.96(1H，s，11-OH)，5.54(1H，dd，J=7.5，4.0Hz，H-13)，3.99(1H，t，J=8.5Hz，H-6)，3.73(3H，s，H-17)，3.55(3H，s，H-16)，3.56(1H，dd，J=17.0，8.0Hz，H-7a)，3.27(1H，dd，J=14.5，4.0Hz，H-12a)，3.19(1H，J=14.0，7.5Hz，H-12b)，3.13(1H，dd，J=17.0，8.5Hz，7b)，2.49(3H，s，H-10);

化合物6：¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ12.01(1H，s，1-OH)，6.70(1H，s，H-4)，6.63(1H，s，H-2)，5.56(1H，m，H-13)，4.07(1H，t，J=8.5Hz，H-6)，3.87(3H，s，H-17)，3.83(3H，s，H-16)，3.38(1H，dd，J=17.5，8.0Hz，H-7a)，3.27-3.15(3H，m，H-7b，12a，12b)，2.39(3H，s，H-10);

化合物7：¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ7.28(1H，s，H-4)，7.01(1H，s，H-2)，5.50(1H，t，7.0Hz，H-6)，4.50(1H，dd，7.5，4.5Hz，H-13)，3.79(3H，s，H-17)，3.75(3H，s，H-16)，3.74(1H，dd，17.5，7.5Hz，H-7a)，3.32(1H，dd，J=17.5，4.0Hz，H-7b)，3.18(2H，m，H-12a，12b)，2.52(3H，s，H-10);

化合物8：¹HNMR(500MHz，DMSO-d₆)δ7.51(1H，s，H-4)，7.18(1H，s，H-2)，5.95(1H，s，11-OH)，5.46(1H，dd，7.5，4.5Hz，H-13)，4.00(1H，t，J=8.0Hz，H-6)，3.72(3H，s，H-17)，3.54(3H，s，H-16)，3.53(1H，dd，J=17.0，8.0Hz，H-7a)，3.24(1H，dd，J=14.0，4.0Hz，H-12a)，3.17(1H，J=14.0，7.0Hz，H-12b)，3.12(1H，dd，J=17.0，8.5Hz，H-7b)，2.48(3H，s，H-10);

实施例3：含硫色酮类化合物9-10的制备

称取2.0mg化合物1溶于0.5mL无水吡啶，往溶液中加入Mosher试剂10μL(R)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酰氯和1.0mgDMAP（作为催化剂），于室温反应9小时。将溶剂减压蒸干后，将粗品采用高效液相半制备(MeOH/H₂O，v/v80:20，3ml/min)，收集出峰时间为18.5min样品得到化合物9。

制备化合物10的方法与化合物9的方法类似，只是Mosher试剂换为(S)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酰氯。

化合物9和10是化合物1的Mosher酯化产物，根据核磁共振数据、以及与化合物1的核磁共振数据相比较，确定化合物9和10的结构如式（I）所示。

化合物9-10的氢谱表如下：

化合物9：2.42(3H，s，H-18)，2.92(1H，dd，J=9.0，17.0Hz，H-7a)，2.71(1H，dd，J=10.0，17.0Hz，H-7b)，3.48(1H，dd，J=3.0，15.0Hz，H-12a)，3.10(1H，dd，J=7.0，15.0Hz，H-12b)，3.78(3H，s，H-16)，3.77(3H，s，H-17)，3.73(1H，t，J=9.5Hz，H-6)，5.57(1H，dd，J=3.5，6.5Hz，H-13)，6.66(1H，s，H-2)，6.75(1H，s，H-4)，12.00(OH-1).

化合物10：2.42(3H，s，H-18)，3.09(1H，dd，J=9.0，17.0Hz，H-7a)，2.77(1H，dd，J=10.0，17.0Hz，H-7b)，3.32(1H，dd，J=3.5，14.5Hz，H-12a)，3.12(1H，dd，J=6.0，14.5Hz，H-12b)，3.74(3H，s，H-16)，3.82(3H，s，H-17)，3.37(1H，t，J=9.5Hz，H-6)，5.64(1H，dd，J=4.0，6.0Hz，H-13)，6.66(1H，s，H-2)，6.76(1H，s，H-4)，12.01(OH-1).

其中化合物1：C-6为R构型，R₂＝H；

化合物2：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物3：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物4：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物5：C-6为S构型，

化合物6：C-6为S构型，R₂＝H；

化合物7：C-6为S构型，

化合物8：C-6为S构型，

化合物9：C-6为R构型，R₂＝H；

化合物10：C-6为R构型，R₂＝H。

实施例4：如式（I）所示的含硫色酮类化合物1-10的体外抗肿瘤活性筛选实验：

分别收集对数生长期的肺腺癌细胞株H1975、组织细胞淋巴瘤细胞株U937、白血病细胞株K562、胃癌细胞株BGC-823，急性淋巴母细胞白血病细胞株MOLT-4、乳腺癌细胞株MCF-7、急性粒细胞白血病细胞株HL-60和肝癌细胞株Huh-7，用10%血清1640培养基使其悬浮，再接种于96孔培养板，每孔细胞数为5000个/80μL，置于5%CO₂培养箱37℃培养。用10%血清1640培养基将含硫色酮类化合物（化合物1-10）稀释成浓度为3.125μg/mL，6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL的实验溶液。次日于不同的实验组的培养板中分别加入浓度为3.125μg/mL，6.25μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL的实验溶液20μL，并使每孔中的终浓度达到测试（实验组浓度采用倍比稀释）。另外阴性对照组中加入等量的10%血清1640培养基。48h后，吸弃实验组和对照组中的培养液，每孔加入MTT20μL(2.5mg/mL)，继续培养4h，再每孔加入DMSO100μL终止反应，37℃放置20min，用酶标仪检测各孔在570nm处的吸光度A值，计算细胞生长抑制率。细胞生长率=(实验组OD÷对照组OD)×100%。

实验结果显示，式（I）所示的含硫色酮类化合物1-8以及化合物10能抑制肺腺癌细胞株H1975、组织细胞淋巴瘤细胞株U937、白血病细胞株K562、胃癌细胞株BGC-823，急性淋巴母细胞白血病细胞株MOLT-4、乳腺癌细胞株MCF-7、急性粒细胞白血病细胞株HL-60或肝癌细胞株Huh-7的生长，它们的IC₅₀值如表2所示。因此本发明的如式（I）所示的含硫色酮类化合物能用于制备抗肿瘤药物。

表2：化合物1-10对8种肿瘤细胞的细胞毒活性

注：“-”表示IC₅₀>10μM.

实施例5：如式（I）所示的含硫色酮类化合物1-10的酶抑制剂活性筛选实验：

1）在384孔板上，按照布置每孔加入10μl反应液（其中10μMATP，2μM的相应底物肽，0.01%BRIJ-35，10mMMgCl₂，1mMEGTA以及相应激酶，其中当为酪氨酸激酶（ABl）时，其底物为Tyr02；当为蛋白酪氨酸激酶3时（JAK3），其底物为Ser/Thr01；当为Aurora-A激酶（Aurora-A）时，其底物为Tyr06；2）按照布置加入系列稀释的待测化合物或相应激酶的阳性对照物；3)将检测板室温放置反应2小时；4)加入5μlRT-PCR扩增产物室温继续放置反应2小时后加入5μl终止液（10mmol／L叠氮钠）；5)读取445nm/520nm处的荧光吸收值6)GraphpadPrism5分析原始数据。结果如表3所示。

表3：化合物1-10对3种酶的抑制活性（IC₅₀，μM）

注：“-”表示IC₅₀>10μM.

Claims

1.含硫色酮类化合物，其结构如式(Ⅰ)所示：

其中化合物1：C-6为R构型，R₁＝R₂＝H；

化合物2：C-6为S构型，R₁＝R₂＝H；

化合物3：C-6为S构型，R₁＝R₂＝H；

化合物4：C-6为S构型，R₁＝R₂＝H；

化合物5：C-6为S构型，R₁＝R₂＝

化合物6：C-6为S构型，R₁＝R₂＝H；

化合物7：C-6为S构型，R₁＝R₂＝

化合物8：C-6为S构型，R₁＝R₂＝

化合物9：C-6为R构型，R₁＝R₂＝H；

化合物10：C-6为R构型，R₁＝R₂＝H。

2.一种权利要求1所述的如式(Ⅰ)所示的含硫色酮类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备草酸青霉(Penicilliumoxalicum)SCSGAF0023CCTCCNO：M2012507的发酵液；

(2)将步骤(1)得到的发酵液用乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿溶剂萃取，萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物；

(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物经过常压硅胶柱层析，以氯仿-甲醇、氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯溶剂系统为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并组分，将在薄层层析上能用体积比8:2的氯仿-丙酮溶剂系统展开的组分，经进一步的分离纯化，得到化合物oxalicumoneA以及式(I)中的化合物1-3；

(4)将oxalicumoneA溶于无水吡啶中在室温用4-二甲氨基吡啶作为催化剂，分别与4-硝基苯甲酰氯、3,5-双(三氟甲基)苯甲酰氯、苯甲酰氯反应制备得到式(I)中的化合物4-8；

(5)将化合物1溶于无水吡啶中在室温分别与(R)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酰氯((R)-MTPA)和(S)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酰氯((S)-MTPA)反应制备得到化合物9和10。

3.权利要求1所述的如式(Ⅰ)所示的含硫色酮类化合物1、2、3、4、5、6、7、8或10在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，当为化合物1时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤、胃癌或白血病药物；当为化合物2时，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌或白血病药物；当为化合物3或4时，所述的抗肿瘤药物为抗肺癌、淋巴瘤、胃癌、白血病、乳腺癌或肝癌药物；当为化合物5时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤、胃癌、白血病、乳腺癌或肝癌药物；当为化合物6时，所述的抗肿瘤药物为抗肺癌、淋巴瘤、胃癌、白血病或乳腺癌药物；当为化合物7时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤药物；当为化合物8时，所述的抗肿瘤药物为抗白血病药物；当为化合物10时，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌或白血病药物。

5.一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的权利要求1所述的如式(Ⅰ)所示的含硫色酮类化合物1、2、3、4、5、6、7、8或10，和药学上可以接受的载体。

6.根据权利要求5所述的抗肿瘤药物，其特征在于，当为化合物1时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤、胃癌或白血病药物；当为化合物2时，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌或白血病药物；当为化合物3或4时，所述的抗肿瘤药物为抗肺癌、淋巴瘤、胃癌、白血病、乳腺癌或肝癌药物；当为化合物5时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤、胃癌、白血病、乳腺癌或肝癌药物；当为化合物6时，所述的抗肿瘤药物为抗肺癌、淋巴瘤、胃癌、白血病或乳腺癌药物；当为化合物7时，所述的抗肿瘤药物为抗淋巴瘤药物；当为化合物8时，所述的抗肿瘤药物为抗白血病药物；当为化合物10时，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌或白血病药物。

7.权利要求1所述的如式(Ⅰ)所示的含硫色酮类化合物1、4、5、6或9在制备酶抑制剂药物中的应用，当为化合物1、5、6或9时，所述的酶抑制剂药物为蛋白酪氨酸激酶3的抑制剂；当为化合物4时，所述的酶抑制剂药物为酪氨酸激酶、蛋白酪氨酸激酶3或Aurora-A激酶的抑制剂。

8.一种酶抑制剂药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的权利要求1所述的如式(Ⅰ)所示的含硫色酮类化合物1、4、5、6或9，和药学上可以接受的载体。

9.根据权利要求8所述的酶抑制剂药物，其特征在于，当为化合物1、5、6或9时，所述的酶抑制剂药物为蛋白酪氨酸激酶3的抑制剂；当为化合物4时，所述的酶抑制剂药物为酪氨酸激酶、蛋白酪氨酸激酶3或Aurora-A激酶的抑制剂。