JPS5948992B2 - 抗生物質ｃ−１４４８２ａ↓１ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ、（以下、Ｃ−
１４４８２Ａ、と略称することもある。

）およびその製造法に関する。本発明者らは多種類の土
壌など自然界から試料を採取して、それらから分離され
る微生物について、その生産する抗生物質を検索し、あ
る種の微生物が新規な抗生物質を生産すること、該微生
物はノカルデイア属に属すること、該微生物を適宜な栄
養培地で醗酵制御しながら培養することにより該抗生物
質を培養物中に蓄積させ得ることを知り、さらに研究し
た結果、本発明を完成した。

すなわち本発明は、（１）次の性状を有する抗生物質Ｃ
−１４４８２Ａ、；（Ｉ）元素分析値゜（％） Ｃ５８．０２５９．１８ Ｈ５．８４５．７０ Ｎ１６．３２１７．１４ および（２）ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ一１４
４８２Ａ１生産菌を培地に培養し、培養中に抗生物質Ｃ
−１４４８２Ａ１を生成蓄積せしめ、これを採取す，る
ことを特徴とする抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１の製造法
、である。

上述の微生物は本発明者らが抗生物質生産菌の探索中に
分離した放線菌の一種（放線菌ＩＳ！ＱＣ一１４４８２
株：以後ＩＳ！ＱＣ−１４４８２株と略称することもあ
，る。

）で、下記に示すように新しいタイプのノカルデイア属
に属する新菌種でゐる。ＮＱＣ−１４４８２株の菌学的
諸性質をシヤーリングおよびゴツトリーブの方法〔イン
ターナシヨナル・ジヤーナル・オブ・システマテイツク
・バク・テリオロジ一（ＩｎｔｅｍａｔｉＯｎａｉＪＯ
ｕｍａｌＯｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｌＯｌ
Ｏｇｙ），第１６巻，３１３頁〜３４０頁，１９６６年
）〕に準じて検討し、２８℃、２１日間にわたつて観察
した結果は下記の通りである。

１形態的特徴 基生菌糸は無色ないし淡黄または橙黄色を示し、寒天培
地上おむび液体培地中ともによく伸長し、分岐する。

基生菌糸の直径の多くは０．５〜１．２μｍであり、培
養後期に桿菌状、長桿菌状または分岐した菌糸状に分断
する。本菌は、種々の分類用培地上でよく生育し、気菌
糸は基生菌糸上に発育するが、多くの束状体（５０〜１
８０μｍ×４００〜１５００μｍ）を形成し、それらの
上に発育しているように観察されることが多い。気菌糸
の形状の多くは屈曲状または直線状を示し、まれにゆる
い螺旋状を示すものも見られる。本菌の成熟した培養を
検鏡すると胞子が連鎖状になつていると考えられるもの
は少なく、いわゆる分生子または胞子の形成は少ない。
それらの培養表面から採取した菌懸濁液について検鏡し
た所、長楕円形（０．５〜１．２μＭｘ４．８〜６．８
μｍ）および楕円形（０．８〜１．２μｍ×１．５〜４
μｍ）の分裂細胞または分節胞子様のものが多く観察さ
れ、電子顕微鏡による観察ではその表面は平滑であつた
。また気菌糸の発育は一般に貧弱であり多くの培地上で
は３〜７日培養までは比較的発育しているが、１０日以
上培養すると観察されなくなることがある。なお、本菌
は液体培地で培養すると運動性を有する時期があり、蓮
動性を有する時の菌糸は桿菌状、それが分岐した菌糸ま
たは長桿菌状、その連鎖したものおよびそれらの分岐し
た多形態性の形状を示す。

またこれらを電子顕微鏡によつて観察するとそれらの細
胞周辺に多くの長い鞭毛が観察される。゛ 菌体組成 本菌株をＩＳＰＭｌの改変培地中で２８℃，６６〜９０
時間振盪培養して、十分生育し、静止期になつた菌体を
集め洗滌した。

上記菌体をビ一・ベツカ一らの方法〔アプライド・マイ
クロバイオロジ一（ＡｐｐｌｌｅｄＭｉｃｒＯｂｌＯｌ
Ｏｇｙ）、１２巻、４２１頁、１９６４年〕および゛エ
ム・ビ一・ルシバリエ一の方法〔ジヤーナル・オブ・ラ
ボラトリ・アンド・クリニカノレ・メデイシン（ＪＯｕ
ｍａｌＯｆＬａｂＯｒａｔＯｒｙａｎｄＣｌｉｎｃａｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）７１巻、９３４頁、１９６８年〕に
従つて菌体細胞中のジアミノピメリン酸および糖組成を
検した結果、前者はメソ体であることが認められ、後者
についてはガラクトースおよび゛アラビノースに相当す
るスポツトの存在が認められた。またビ一・ベツカ一ら
の方法〔アプライド・マイクロバイオロジ一（Ａｐｐｌ
ｌｅｄＭｉｃｒＯｂｌＯｌＯｇｙ）１７巻、２３６頁、
１９６５年〕に従つて細胞壁を調製し、ジアミノピ５メ
リン酸，糖およびアミノ酸を検すると以下の通りであつ
た。すなわちジアミノピメリン酸はメソ体が検出され、
糖は多量のガラクトースの存在が認められたが、アラビ
ノースは検出されなかつた。またアミノ酸についてはグ
ルタミンｌ（酸、アラニンは明瞭に検出されたが、リジ
ン、グリシンは極く微量しか検出されなかつた。３分類
用培地上の諸性質 本菌株は各種培地上で、いずれも比較的よく発育し、そ
の基生菌糸は培養初期無色ないし淡１黄色で、その後、
淡黄褐色または黄褐色を示す。

またほとんどの分類用培地中に可溶性色素を生成しない
が、２，３の培地中に微褐色の可溶性色素を生成する。
気菌糸は粉状で、一般には中程度に発育し、白色ないし
、黄色または淡２黄褐色を示す。これらの気菌糸は多く
の培地上では長期間（約２週間以上）培養すると消失し
た状態となり、基生菌糸表面が光沢を帯びて来る。本菌
株の各種分類用培地上における諸性状は第１表に示した
通りである。 ２本菌株の生理的性質は
第２表に示した通りである。

すなわち生育温度範囲は１２℃ないし３８℃また寒天培
地（ＩＳＰＮＱ２）上で気菌糸をよく着生する温度範囲
は２０℃ないし３５℃である。第２表：ＮＱＣ−１４４
８２株の生理的性状第３表：１ＮＱＣ−１４４８２株の
炭素源利用性５各種炭素源の利用性プリーダムおよびゴ
ツトリープの方法〔ジヤーナル・オブ・バクテリオロジ
一（ＪＯｕｍａｌＯｆＢａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙ）５６
巻、１０７頁、１９４８年〕に記載４されている培地お
よびそれに酵母工キズ（デイフコ社製）を０．１％添加
した基礎培地を用いて、各種炭素源の利用性を検し、そ
れらの結果を第３表に示した。

５ その他の諸性質 前述の「２菌体組成」に示した方法で菌体を集め、−こ
れらをシュー・マーマ一らの方法〔ジヤーナル・オブ・
モレキユラ一・バイオロジ一（ＪＯｕｍａｌＯｆＭＯｌ
ｅｃｕｌａｒＢｉＯｌｇｙ）３巻、２０８頁、１９６１
年〕に準じてＤＮＡを調製し、ＤＮＡのＧ−Ｃ（グアニ
ン−シトシン）含量を検すると約７１モル％であつた。

本菌株の栄養菌糸をグラム染色すると陽性であつた。

以上述べたＮＱＣ−１４４８２株の諸性質をエス・エ一
・ワツクスマン著、ジ・アクチノミセテスＴｈｅＡｃｔ
ｉｎＯｍｙｃｅｔｅｓ）第２巻、ザ・ウイリアム（・ア
ンド・ウイルキンス・カンパニー発行、９６１年、アー
ル・イ一・ブツフアナン・アンド・ヌ・イ一・ギボンス
編、バージーズ・マニユアル・オブ・デターミネーテイ
ブ・バクテリオロジ一 （ＢｅｒｇｅｙｓＭａｎｎｕａ
ｌＯｆＤｅｔｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｌＯｌＯ
ｇｙ）第８版、１９７４年およびその他の文献に従つて
検索した。

本菌株は上記したように１培養後期に桿菌または長桿菌
状に分断し、それらの分枝した形態のものが観察される
。

２）分生子または胞子の明瞭な形態が少ない。

３）寒天培地上のコロニーの表面は皮状を示し、一般細
菌のように光沢を示すことが多い。

４）菌糸のＧ−Ｃ含量は約７１モル％であ，る。

その他の諸性質から本菌株は大別するとノカルデイア（
ＮＯｃａｒｄｉａ）属のグループ１１１に属すると考え
られるが、分類用培地上の諸性質、生理的諸性質、運動
性細胞および細胞壁組成などから既知菌株の中には上記
諸性質を有する種は見出され，ず、新菌種と同定された
。本菌株．ＮＱＣ−１４４８２株は、財団法人発酵研究
所にＩＦＯ−１３７２５として、工業技術院微生物工業
技術研究所に申請書受理番号第４１３０号（ＦＥＲＭＰ
ＮＱ４ｌ３Ｏ）として、ジ・アメリカン・タイプ・力，
ルチヤ一・コレタシヨン（ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＴｙ
ｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣＯｌｌｅｃｔｉＯｎ） （米国）
にＡＴＣＣ−３１３０９としてそれぞれ寄託されている
。

以上に述べた様にＮＱＣ−１４４８２株は、ノカルデイ
ア属の新菌種に属する菌株であるが、微生物の：ー般的
性質として自然的にまた変異剤によつて変異を起し得る
。

たとえばＸ線、ガンマ一線、紫外線等の放射線の照射単
胞子分離、種々の薬剤を含有する培地上での培養、その
他の手段で変異させて得られる多くの変異株、あるいは
自然に得られ，る突然変異株等であつでも、上記した菌
学的性状または下記に示した様な菌学的性状との比較に
おいて実質的に別種とするに足らず、しかもＣｌ４４８
２Ａｌを生産する性質を有するものはすべて覧Ｃ−１４
４８２株と同様に本発明方法に利用し得る。．たとえば
、ＩＳ！ＱＣ−１４４８２株を種々の変異処理すること
により、淡黄色ないし淡黄褐色または褐色の可溶性色素
を生成するもの、基生菌糸が無色のもの、赤褐色ないし
橙赤色を示すもの、黄緑色の基生菌糸または可溶性色素
を生成するもの、豊富な白色の気菌糸を生成するものお
よび菌糸が分断し易い変異株が得られる。ＪＮＱＣ−１
４４８２株の培養に用いられる培地は該菌株が利用し得
る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが、大
量を処理するときには液体培地を用いるのがより適当で
ある。

培地には、ＮＱＣ一１４４８２株が同化し得る炭素源、
消化し得る窒素源、無機物質、微量栄養素が適宜配合さ
れる。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、シヨ
糖、麦芽糖、デキストリン、でん紛、グリセリン、マン
ニトール、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、ラード
油、チキン油など）、ｎ−パラフインその他が、窒素源
としては、たとえば肉工キズ、酵母工キズ、乾燥酵母、
大豆紛、コーン・スチープ・りカー、ペプトン、棉実紛
、撥糖密、尿素、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アン
モニウムなど）その他が用いられる。さらにナトリウム
、カリウム、カノレシウム、マグネシウムなどを含む塩
類、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、ニツケルなどの金
属塩類、リン酸、ホウ酸などの塩類や酢酸、プロピオン
酸などの有機酸の塩類が適宜用いられる。その他、アミ
ノ酸（例、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、
リジン、メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例、
ジベプチド、トリペプチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ
ｌ，Ｂ２、ニコチン酸、Ｂｌ２，Ｃなど）、核酸類（例
、プリン、ピリミジン、その誘導体など）等を含有させ
てもよい。もちろん培地の坦を調節する目的で無機また
は有機の酸、アルカリ類、緩衝剤等を加え、あるいは消
胞の目的で油脂類、表面活性剤等の適量を添加してもさ
しつかえない。培養の手段は静置培養でも、振盪培養あ
るいは通気攪拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の
処理には、いわゆる深部通気攪拌培養によるのが望まし
いことはいうまでもない。培養の条件は培地の状態、組
成、菌株の種類、培養の手段等によつて一定しないのは
当然であるが、それらは通常２０℃〜３２℃の温度で、
初発田を中性付近に選択するのがよい。とりわけ、培養
中期の温度は、２５℃〜２８℃、また初発…は６．５〜
７．５の条件が望ましい。培養期間も前記の諸条件によ
り一定しないが、所望の抗生物質濃度が最大となるまで
培養するのがよい。これに要する時間は液体培地を用い
る振盪培養または通気攪拌培養の場合は通常３〜８日間
程度である。このようにして得られた培養液中に生成さ
れた抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１を分離採取するには微
生物の代謝物をその微生物の培養物から採取するのに通
常使用される分離手段が適宜利囲され得る。

例えば抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１は弱塩基性を示すの
で、これらの性質を利用する手段を適宜組み合せて採取
することが出来る。培養物中、抗生物質Ｃ一１４４８２
Ａ１は主に培養淵液中に含まれるので、培養液を済過し
て菌体を沢別した後、培養沢液を中性或いは弱塩基性と
して、水と任意に混合しない有機溶媒を適宜使用して分
離採取することが出来る。そのような有機溶媒としては
、たとえばハロゲン化炭化水素類（例、クロロホルム、
メチレンクロリド）、脂肪酸エステル類（例、酢酸エチ
ル、酢酸ブチル）、ケトン類（例、メチルイソブチルケ
トン）、アルコール類（例、ブタノール、イソブタノー
ル）などが適宜利用される。このようにして水と混和し
ない有機溶媒に抽出された本抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ
１は希鉱酸水溶液または酸性の緩衝液などによつて水層
に転溶され糖製され得る。また菌体中に含まれる該抗生
物質Ｃ−１４４８２Ａ１は菌体を済取後、アセトン、メ
タノール等の水と任意に混和する有機溶媒或いは希鉱酸
水、または両者の混合液によつて菌体から抽出される。

さらに場合によつては菌体を含む培養液を弱酸性とし、
これにアセトン、メタノール等の水溶性ヒ有機溶媒を加
えて攪拌し、淵過、減圧濃縮し、アセトンあるいはメタ
ノールなどを留去したのち、培養Ｐ液と同様に処理する
ことが出来る。培養淵液から本抗生物質Ｃ−１４４８２
Ａ１を採取する方法としては、吸着剤を用いて活性物質
を吸着５させた後、適当な溶媒で溶出させることも出来
る。

吸着剤としては、たとえば活性炭、非イオン交換性樹脂
、アンバーライトＸＡＤ−２（口ーム・アンド・ハース
社製、米国）、ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成製）
などがあげられ、溶出溶二媒としては、含水アルコ―ル
類、たとえば含水メタノール、含水ブタノ一 ルなど、
或いは含水アセトン、またはこれらの溶液に希鉱酸など
を加えて酸性とした溶液が適当であるが、酢酸エチル、
クロロホルムのような有機溶媒によつても溶出され４る
。また該抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１はその塩基性を利
用して陽イオン交換樹脂に吸着させた後、各種溶出剤で
溶出される。

陽イオン交換樹脂としては、アンバーライトＩＲＣ−５
０、アンバーライトＩＲ−１２０（ローム・アンド・ハ
ース社製、米国）ダウエツクス一５０（タウケミカル社
製、米国）或いはＣＭ−セフアデツクスＣ−２５（フア
ルマシア杜製・スウエーデン）等が挙げられる。

吸着された有効成分を溶出させるには、希鉱酸水溶液、
食塩、ギ酸アンモニウム等の塩類溶液、希アルカリ水溶
液およびこれらとメタノール、アセトンなどの水溶性有
機溶媒との混合液などが用いられる。培養液中の各成分
の含量や組成比に応じて上記の精製法を適宜組み合わせ
ることにより、かなり純度の高い目的成分を得一ること
が出来る。さらに高純度の精製品を得るにはシリカゲル
（タルク社製 西独）、アルミナ（タルク社製 西独）
、セフアデツクスＬＨ−２０（フアルマシア社製 スウ
エーデン）などの吸着剤が適宜利用される。展開溶媒と
しては、たとえばハロゲン化炭化水素（例、クロロホル
ム、メチレンクロリド）、アルコール類（例、メタノー
ル、エタノール），あるいはこれら両者の混合液たとえ
ばタロロホルム・メタノールの混液、酢酸エチルなどの
エステル類とアルコール類との混合液等通常の有機化合
物の分離に用いられる溶媒が利用される。さらに精製分
離する手段としては、たとえば分配率の差を利用する方
法や吸着剤を利用する方法が挙げられる。

分配率の差を利用する方法としては２液層に分離する２
種の溶媒の分配率の差を利用する分配法あるいは向流分
配法、あるいはセルローズパウダなどを担体とする分配
クロマトグラフイ一などが挙げられる。

たとえばクロロホルムとＰＨ８．Ｏの水との間で分配す
るとＣ−１４４８２Ａ１はクロロホルム層に移行する。
また、吸着剤としてたとえばシリカゲルを使用する場合
、Ｃ−１４４８２Ａ１をシリカゲル（タルク社 西独）
のカラムに吸着させたのち、例えばクロロホルム・メタ
ノールの混合溶媒で展開する。このようにして得られた
粗物質をさらに酢酸エチル・メタノール系で薄層クロマ
トグラフイ一に付すと、Ｃ−１４４８２Ａ１の単品が分
離される。かくして得られたＣ−１４４８２Ａ１の諸性
質は次の通りである。

（１）元素分析値：（％） （４）塩の形成：Ｃ−１４４８２Ａ１は弱塩基性物質で
あるので塩酸、硫酸、リン酸、酒石酸、グルクロン酸な
どの酸と共に水溶性の塩を、ピクリン酸、ビクロロン酸
などの酸と共に水に難溶性の塩を形成する。

生物活性 Ａ抗微生物活性 トリプテイカーゼ・ソー寒天培地（以下 ＴＳＡと略す、ＢＢＬ製）、ＴＳＡにグリセロール３％
を添加したものおよびＴＳＡにグルコースを１％添加し
た培地を用いて、寒天稀釈法により、一般細菌、抗酸性
菌、かびおよび酵母に対するＣ−１４４８２Ａ１の発育
阻止濃度を検した。

その結果は第４表に示した通りである。ＴＳＡ：トリプ
テイカーゼ・ソー寒天培地ＴＳＡ− Ｇｌｙ：グリセロ
ール３％添加トリプテイカーゼ・ソー寒天培地ＴＳＡ−
Ｇｌｕ：グルコース１％添加トリプテイカーゼ・ソー寒
天培地０Ｅ−Ｒ：オレアンドマイシン・エリスロマイシ
ン耐性４Ｒ：テトラサイクリン、ストレプトマイシン、
クロラムフエニコール、エリスロマイシン耐性ＳＭ−Ｒ
：ストレプトマイシン耐性 ＮＭ−Ｒ：ネオマイシン耐性 ＩＦＯ番号：財団法人発酵研究所の寄託番号大腸菌染色
体複製開始遺伝子 ＤｎａＡの温度感受性変異株ＣＲＴ
４６（広田らジヤーナル・オブ・モレキユラ一・バイオ
ロジ一 ３５１７５Ｃ６８））およびその試験管内ナリ
ジキシン酸耐性変異株にプラスミドＲｌＯＯ，ＲｌＯＯ
−１またはＦを導入し、インテグラテイブ・サプレツ．
シヨン（西村らジヤーナル・オブ・モレキユラ一・バイ
オロジ一 ５５４４１Ｃ７１））を利用して得られた温
度非感受性変異株ＴＥ３３，ＴＥ８２およびＴＥｌ２Ｏ
に対する抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１の抗菌活性を吉川
らの方法（吉川らアンテイミクロｌビアル・エージエン
ツ・アンド・ケモテラピ一５３６２Ｃ７４））に準じて
液体希釈法で試験した。

対照として温度非感受性自然復帰変異株ＴＥｌ４４およ
びＴＥｌ４６を用いた。増殖は波長６００ｎｍの吸光度
で測定し、増殖率は抗生物質無１添加区の吸光度に対す
る添加区の吸光度の割合で第５表に、結果を示した。Ｂ
毒性 マウス（ＣＦ＃１、雄、４週令）を供試動物とした急性
毒性試験で、Ｃ−１４４８２Ａ１を生理食一塩水に溶解
したものを静脈注射した場合、該抗生物質による推定Ｌ
Ｄ５Ｏは約５ｍｇ／Ｋｇであつた。

上記したように本抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１はグラム
陰性および陽性菌、および抗酸性菌に対し惰い発育阻止
能を有するので、第４表に示した細菌に対する抗細菌剤
として有用なものである。また第５表に示された結果か
ら本物質はＲプラスミツドの除去剤としての有用性およ
び強い核酸合成阻害剤であることの可能性から抗腫瘍剤
としての有用性が期待される。本抗生物質Ｃ−１４４８
２Ａ１を殺菌剤、消毒剤または外用薬として食器、手術
用器具、鳥かご、人の手などの消毒に使用することがで
きる。

第４表に示したような細菌に対して殺菌剤または消毒剤
として使用する場合には、たとえば本抗生物質１０ｍｇ
を１０００ｍ１ないし２０００ｍ１の水に溶解して、液
剤として使用することができる。また外用薬として使用
するにはたとえば本抗生物質Ｃ一１４４８２Ａ１の０．
５ｍｇを白色ワセリン１０ｇに均一になるように混和し
たものを軟膏剤として使用することができる。以上の化
学的諸性質（特に紫外部および可視部吸収スペクトル）
および生物学的諸性質において該当する既知抗生物質は
知られておらず、本抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１は新規
物質と考えられる。

以下に実施例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明する
。

実施例 １ イーストエキストラクトーマルトエキストラクト斜面寒
天培地に培養した抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ１生産菌ノ
カルデイアＳｐ．ＩＮＱＣ−１４４８２（ＩＦＯｌ３７
２５、微工研申請書受理番号第４１３０号（ＦＥＲＭ−
ＰＮＱ４ｌ３Ｏ）、ＡＴＣＣ−３１３０９）を、２００
ｍ１容三角フラスコ内の、グルコース２％、可溶性デン
プン３％、生大豆紛１％、コーンステイープリカ一１％
、ポリペプトン０．５％、ＮａＣｌＯ．３％、ＣａｃＯ
３Ｏ．５％、Ｉｉ−１７．０を含む４０ｍ１の種培地に
接種し、２８℃、４８時間回転振盪機上で培養し、種培
養液を得た。

得られた種培養液の０．５ｍ１を２００ｍ１容三角フラ
スコ内のデキストリン５％、生大豆紛３％、ポリペプト
ン０．１％、ＣａｃＯ３Ｏ．５％、Ｉｉｌ７．Ｏを含む
４０ｍ１の主培地に移殖し、２８℃、９０時間回転振盪
機上で培養した。

この培養液はスタフイロコツカス・アウレウスＦＤＡ２
Ｏ９Ｐおよびプロテウス・ミラピリスＩＦＯ３８４９を
検定菌とし、Ｃ−１４４８２Ａ１を標準品として寒天希
釈法で検定すると５０μｇ／ｍｌの生産力価を示した。
実施例 ２ 実施例１で得た種培養液の１０ｍ１を種培地５００ｍ１
を含む２１容坂ロフラスコに移植し、２８℃、４８時間
往復振盪機上で培養した。

この培養液の１１を種培地１０旧を含む２０旧ステンレ
ス・スチールタンクに接種し、２８℃、通気１００１／
分、攪拌２００回転／分で４８時間培養し、種培養液を
得た。得られた種培養液を、移植率１０％で実施例１に
示した主培地１０００１を含む２０００１容ステンレス
・スチールタンクに移植し２８℃、通気１０００１／分
、攪拌１５０回転／分（１／３ＤＴ）内圧１ｋｇ／ｄの
条件で９０時間培養した。得られた培養液は、実施例１
の検定法で２０μｇ／ｍｌの生産力価を示した。培養液
をＩｉＩ５．Ｏとして、ハイフロ・スーパーセル（ジヨ
ン・マンヴイル社、米国）３０ｋｇを加えて加圧式済過
器により濾過して得られた培養濾液８８０１乞…８．０
として、１００１のアンバーライトＸＡＤ−２のカラム
に通し、水３０旧で洗つた後、５０％アセトン水２５０
１で溶出する。

溶出液のアセトンを減圧下に留去後、残る水溶液をＩｉ
ｌ６とし、アンバーライトＩＲＣ−５０（Ｈ型）、６０
１のカラムに吸着させる。

カラムを水１８０１で洗つた後、０．２Ｎ一塩酸１８旧
で溶出し溶出液：をＩｉｌ６．Ｏとして減圧濃縮し、濃
縮液３旧をＩｉＩ６．Ｏで、１５１のアンバーラ゛イト
ＸＡＤ−２のカラムに吸着させる。カラムを水４５１で
洗浄後、５０％アセトン水６０１で溶出させる。溶出液
乞山５〜６として減圧下に濃縮して約１１とし、これに
アセトン．−９１を加えると粗物質１、１２４ｇが得ら
れた。更にこの母液のアセトンを留去後、凍結乾燥する
と粗物質１１、３６ｇが得られた。粗物質１１４．５ｇ
を水４５０ｍ１に溶かし、希ＮＨ４ＯＨ水で１ｉ１８と
して後、ＣＨＣｌ３２２５ｍｌで繰返し（４〜Ｓ５回）
抽出する。

ＣＨＣｌ３抽出液を合併し、１／２００Ｎ一塩酸３００
ｍ１で水層に転溶させる。ブドウ酒色の水層の…を５．
５〜６．０として減圧濃縮し、山６．０として非イオン
交換性樹脂ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成）１７０
ｍ１のカラムに通す。カラムを水Ｑ５ＯＯｍｌ．３Ｏ％
メタノール水７００ｍ１で順次洗つた後、８０％メタノ
ール水７００ｍ１で展開すると、ブドウ酒色の抗生物質
が溶出される。溶出液を１ｉ１６として減圧濃縮した後
凍結乾燥すると、暗赤色粉末１８５ｎ１ｇが得られた。

このうち、１５５ｍｇをシリカゲル（西独、タルク、Ｈ
Ｆ２５４）の薄層クロマトグラフイ一（ＣＨＣｌ３−Ｍ
ｅＯＨ＝１０：１）に付すと、Ｒｆ＝０．４５のＡ１区
分２４ｍｇが得られた。Ａ１区分２０ｍｇを酢酸エチル
−メタノール（１０：１）の系でもう一度、薄層クロマ
トグラフイ一（シリカゲル：西独、タルク、ＨＦ２５４
）にかけると、Ｒｆ＝０．３３のＡ１が分離された。Ｃ
一１４４８２Ａ１の収量は９ｍｇであつた。かくして得
られたＣ−１４４８２Ａ１の可視部吸収スペクトルは、
ＭｅＯＨλ重Ｘ４９８ｎｍ（ＥΔ１％１？４１．３）で
あつた。実施例 ３実施例２の方法で得られた培養沢液
８５旧斂Ｗ６．Ｏとし、アンバーライトＸＡ…−２カラ
ム８５１に通し水洗後（２５５１）、５０％アセトン水
２１旧で溶出させる、溶出液のアセトンを留去後、残る
水溶液の…を６．０としてアンバーライトＩＲＣ−５０
（Ｈ型）５１１のカラムに吸着させ、水１５旧で洗浄後
、０．２Ｎ一塩酸１５０１で溶出させる。

溶出液を坦５．５〜６．０として約５０１迄減圧濃縮し
てアンバーライトＸＡＤ−２カラム１２１に吸着させ、
水洗後５０％アセトン水１８１で溶出する。溶出液の…
を５．５〜６．０として減圧濃縮後、凍結乾燥すると、
Ｃ一１４４８２Ａ１の粗粉末１１８．３ｇが得られた。
この粗粉末９０ｇを水９１に溶かし、希ＮＨ４ＯＨ水で
′Ｉｆ［８．０としてｎ−ブタノール３１で３回抽出す
る。抽出液を合併してＮ／２００一塩酸３１で２回転溶
し、水層を合せてＩｉＩ６として減圧濃縮し、五−ブタ
ノールを留去して残る水溶液をＩｉＩ６でダイヤイオン
ＨＰ−１０（三菱化成製）４．５１のカラムに吸着させ
る。

カラムを水１３．５１及び３０％メタノール水９１で順
次洗つた後、８０％メタノール水１３．５１で溶出する
と、Ａ１を主成分とする分画、Ｆ一１、３．４５ｇが得
られた。上記のＡ１を主成分とする分画（Ｆ−１）３．
０ｇを、シリカゲル（西独、タルク１５０ｇのカラムに
吸着させ、クロロホルム−メタノールの混合溶媒；５０
：１（１．３１）→２５：１（１１）→１０：１（１１
）で順次展開し、最後にメタノール１１で展開する。

クロロホルム−メタノール（２５：１）で溶出するとＡ
１を主成分とする区分３６８１ｒ１ｇが得られた。

Ａ１を主成分とする区分３４０ｍｇをクロロホルム一メ
タノール（９：１）の系で、シリカゲル（タルク ＨＦ
２５４）の薄層クロマトグラフイ一に付して精製すると
、暗赤色のＣ−１４４８２Ａ１の結晶性粉末１０９ｍｇ
が得られた。実施例 ４ 実施例２と同様の方法で得ららた培養液９００１に４Ｎ
−Ｈ２ＳＯ４を加えてＩｌｆＩ４．Ｏとし、これにアセ
トン８０旧を加え、攪拌３時間後、ハイフロースパーセ
ル（米国、ジヨンズ・マンヴイル社）３０ｋｇを加え、
加圧式涙過器で涙過して得られた濾液をＩｉＩ５．５に
して減圧下に８００１迄濃縮し、含有するアセトンを除
去後、ナ．０として、ダイヤイオンＨＰ−１０，９旧の
カラムに通し、２７０１の水で洗つた後、５０％アセト
ン水、２５０１で溶出する。

溶出液のアセトンを留去後、残る水溶液１００１の？を
８としてＩｓＯ−ブタノール３旧で３回抽出し、抽出液
を合わせて、Ｎ／２００一塩酸６０１で２回転溶する。
塩酸水を合わせて１１１５〜６として減圧下にＩｓＯ−
ブタノールを留去後、残る水溶液の惧を６．０として、
ダイヤイオンＨＰ−１０のカラム（４５１）に吸着させ
る。水洗後、５０％アセトン水１３５１で溶出し、溶出
液の田を６として減圧濃縮し凍結乾燥するとＣ−１４４
８２Ａ１を主成分とする粗粉末（ｆ−１）８２ｇが得ら
れた。上記粗粉末ｆ−１１５ｇを水１．５１に溶かし、
希ＮＨ４ＯＨ水で山８としてＣＨＣｌ３７５Ｏｍｌで４
回抽出する。

抽出液を合併して１／２００Ｎ一塩酸７５０ｍ１で２回
転溶し水層を合せく由６で減圧濃縮する。濃縮液をダイ
ヤイオンＨＰ−１０のカラム４００ｍ１に通し、水１．
２１．３０％メタノール水１．２１で順次洗浄後、８０
％メタノール水１．２１で溶出し、溶出液の坦を６とし
、減圧濃縮後凍結乾燥すると、Ａ１を主性分とする暗赤
褐色の粉末３９３ｍｇが得られた。この粉末のうち３７
５ｍｇを実施例２の方法に従つてシリカゲルカラム法及
び薄層クロマトグラフイ一法を用いて精製すると、暗赤
色の精製されたＣ一１４４８２Ａ１２０ｍｇが得られた
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、紫外部及び可視部吸収スペクトルを、第２図
は、赤外部吸収スペタトルを、それぞれ表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の性状を有する抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ＿１；
   （ I ）元素分析値：（％）Ｃ５８．０２５９．１８ Ｈ５．８４５．７０ Ｎ１６．３２１７．１４ （II）融点： ３００℃以上 （III）比旋光度 〔α〕＾２＾４＾．＾５＿Ｄ＋１５０°±３０°（Ｃ＝
   ０．０５、エタノール）（IV）紫外線吸収スペクトル： λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ
   ＿ｍ）２１４ｎｍ±２（５０３±５０）λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ
   ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）２８１ｎ
   ｍ±２（２０９±１０）λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿
   ｘ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）４９８ｎｍ±２（４６．
   ０±５）（Ｖ）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：主要
   ピークを示す：（ｃｍ＾−＾１） ３４３０、３１７５、２９４０、２８９０、２８５０、
   １６８０１６５０、１６２５、１６００、１４５５、１
   ３９０、１３４５、１２５０、１１７０、１１４０、１
   １１０、１０７５、１０２５、９９５、９３５、９１０
   、８２５、（VI）溶解性： 難溶：ヘキサン、石油エーテル。 可溶：メタノール、エタノール、ブタノール、酢酸エチ
   ル、クロロホルム、水。 （VII）呈色反応： 陰性：坂口反応、バートン反応。 過マンガン酸カリウムを脱色。 （VIII）酸性、中性、塩基性の区別： 弱塩基性。 （IX）形状： 暗赤色〜赤褐色の針状晶。 ２ ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ
   ＿１生産菌を培地に培養し、培養物中に抗生物質Ｃ−１
   ４４８２Ａ＿１を生成蓄積せしめ、これを採取すること
   を特徴とする抗生物質Ｃ−１４４８２Ａ＿１の製造法。