JPS6368596A - 新規なマクロライド抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はマクロライド抗生物質のスワル・ミマイシン（
ｓｗａｌｐａｍｙｃｉｎ）　、微生物菌株のストレプト
　ミ　セ　ス　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　　＠　
　Ｙ　−８４，３０９６（ＤＳＭ３７４０　）を用いる
該抗生物質製造のための微生物学的方法並びに医薬およ
び動物飼料添加剤としてのその用途に関する。

ストレプトミセス種培讐ＮＩＩＬＨ工Ｌ　Ｙ−８４，３
０９６７（以下、Ｓｔｒ、　ｓｐ、　Ｙ−８４，３０９
６７と称する）は、インドのマハラシュトラ（Ｍａｈａ
ｒａｓｈｔｒａ）州のブーナ（Ｐｕｎｅ）で採集した土
壌の１試料から単離された。この菌株の変異体および突
然変異体は知られた方法で、例えばＮ−メチル−Ｎ−ニ
トロ−Ｎ′−ニトロソグアニジンのような突然変異源を
用いてまたは紫外線によって得ることができる。この微
生物Ｓｔｒ、　ｓｐ、　Ｙ−８４，３０９６７は放線菌
目（Ａｃｔｌｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ）、ストレプトミ
セス科（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）および
ストレプトミセス属（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　　
に属する。いくつかのストレプトミセス種については、
それらがマクロライド型の抗生物質を生産することは知
られておりそしてこれら抗生物質は文献に記載されてい
る［　Ｔ、　０ｓｏｎｏ氏等著［Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓＪ２０、１７４　（１９６７）　：　８．　Ｏ
ｍｕｒａ氏等著「：ｒ、　Ａｎｔｉ−ｂｉｏｔｉｃｓＪ
　２３．５１１　（１９７０）　；工、　Ｈａｕｐｔ氏
等著［Ｊ、　　ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃＪ　：ｉＪ−、１
３１４（１９７６）　　：　　Ｓ、　Ｏｍｕｒａ氏等著
［Ｍａｃｒｏｌｉｄｅ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ町１．　
ｐｐ、　３〜３５゜Ｅｌ、　Ｏｍｕｒａ氏編、　Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ　Ｉ’ｒｅｓｅ、　０ｒｌａｎｄｏ。

Ｆ’１ｏｒｌｄａ、　ＵＳＡ　（１９８４）参照］。

８ｔｒ、　８Ｔ）、　Ｙ−８４，３０９６７は、以下の
記載から明らかなようにその形態学的、培養上および生
理学的性質のいくつかにおいて既知菌株とは異なってい
るので新規菌株とし、てみ々される。

これに関する別の理由としては、以下の記載に指摘する
ようにこの菌株が本明細啓中でスピラマイシンと称され
る新規マクロライド抗生物質を生産しかつスワル・ξノ
ライド（ｓｗａｌｐａｎｏ−１１ｄθ）と称される新規
マクロライドアグリコンを生産するということが挙げら
れる。

マクロライド抗生物質は、広汎スはクトルのグラム陽性
菌およびマイコプラズマに対する抗菌剤として医薬にお
いて重要である。現在までのとζろ種々のマクロライド
抗生物質例えば臨床的に用いられているエリスロマイシ
ン、ロイコマイシン、オレアンドマイシン、スピラマイ
シンおよびミデカマイシン並びに獣医薬として用いられ
ているタイロシンが記載されている。

マクロライド′は多数の論文に記載されている（　Ｚ、
　Ｖａｎｋｅｋ氏等著「ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＪ　、
　ｖｏｌ　２゜ｐ、　１５４〜１８８．　Ｄ、　ＧＯｔ
ｔ’１ｉｅｂ氏等＆ｌ　、　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１９６７）　：　Ｄ、　Ｖａｓｑ
ｕｅｚ氏著「Ａｎｔｌｂｌ−ｏｔｉｃａｌ、　ｖｏｗ　
３．　ｐ、　４５５’〜４７９．　Ｊ、Ｗ、　Ｃｏｒｃ
ｏｒａｎ氏等１ｉ、　　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｎｅ＋＋
ｖ　Ｙｏｒｋ　；　Ｊ、　ＢＱｒｄ７氏著「ｃＲａ　Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ　Ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ｃｏｍ
ｐｏｕｎｄｓＪ　。

ｖｏｌ　２．　ｐ、　３９〜１５６．　ＣＲＣＰｒｅｓ
ｓ、　Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ。

１ｏｒｉｄａ　（１９ｓａ）参照〕。

さらにマクロライド抗生物質に関する文献は、Ｕｎｉｖ
、　Ｐａｒｋ　ＰｒｅＳｓ、　５ｔａｔｅ　Ｃ！ｏｌｌ
ｅｇｅ　Ｐｅｎｎ５ｙｌ−ｖａｎｉａ、　ＵＳＡ　（１
９６７）発行、Ｈａｍａｏ　Ｕｍｅｚａｗａ　ＭＡ１［
Ｉｎｄｅｘ　　ｏｆ　　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　ｆ
ｒｏｍ　　ＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓＪ第１巻第１１
４．１２３．１３５．１７１．１７２．２０７．２２３
゜２７５．３７３，３８２〜３８４，６０４〜６０６，
６４０〜６４１および６６９頁：並びにＵｎｉｖ　Ｐａ
ｒｋ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、　ＵＳＡ　（１９７８）発行、第
２巻第２５４．２５５．２８７〜２８９，３０５，３５
７〜５６２，４８１，４８３゜５０８．５０９．５３２
〜５３７．５４９〜５５０，５７３〜５７９゜６３０〜
６３５．６３９〜６４１％８０９〜８２３および１０１
３〜１０１４頁に見出すことができる。

Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　０ｒｌａｎｄｏ、　
Ｆｌｏｒｌｄａ、　ＵＳＡ（１９８４）発行、ｓ、　Ｏ
ｍｕｒａ　ｆ１４の「Ｍａｃｒｏｌｉｄｅ　Ａｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｓ−Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｂｉｏｌｏｑｙ
　ａｎｄ　ＰｒａｃｔｉｃｅＪの書物にはマクロライド
抗生物質、それらの生合成、化学誘導、化学合成並びに
臨床および獣医学上の実用における重要性についてわか
り易く説明が表されている。

マクロライド抗生物質は、アグリコンを形成する巨大環
状ラクトン環の大きさによって３種の主要群に分けられ
る（Ｗｉｌｅｙ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９８２）発行
、Ｍ、　Ｇｒａｙａｏｎ　１８％、　Ａ、　Ｋ、　Ｍａ
ｌｌａｍｅ氏著「Ｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ　Ｊ第１５６頁
参照）。第１群はメチマイシン、ネオメチマイシンおよ
びＹＣ−１７からなる１２員マクロライドの群によって
形成される。

第２群は１４員マクロライドから々す、その重要なもの
にはエリスロマイシン、オレアンドマイシン、ランカマ
イシン、クジマイシン、メチマイシン、ピクロマイシン
およびナルボマイシンがある。第６群は以下のａ）およ
びｂ）に細分されうる１６員マクロライＶからなる。

ａ）少々くとも１個のアミノ糖残基を含有する塩基性マ
クロライド抗生物質。

この小群は多数の抗生物質を包含し、その代表的かつ科
学的に重要か化合物の例としてはアンゴラマイシン、ロ
イコマイシン、スピラマイシン、マリドマイシン、カル
ボマイシン、シーラマイシン、ロサマイシン、マシナマ
イシン、　Ｍ−４３６５０１およびＧ２並びにタイロシ
ンが挙げられる。

ｂ）アミノ糖を全く含有しない中性マクロライド抗生物
質。

この小群に属するものとして挙げられるのはカルコマイ
シン（Ｐ、Ｗ、に、　Ｗｏｏ氏等著［Ｊ。

Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　ｓｏｃ、Ｊ８４．　ｓｅａ　
：　１０６６　（１９６２））、ノイトラマイシン（Ｄ
、Ｖ、　Ｌｅｆｅｍｉｎｅ氏等著［Ａｎｔｉｍｉｃｒｏ
ｂ、　Ａｇｅｎｔ８Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、ｊ　ｐ、　４
１（１９６１）　、アンゴラマイシン（Ｍ　、Ｐ　、Ｋ
ｕｎｓ　ｔｍａｎｎ氏等著［Ａｎｔｉｍｉｃｒｏ’ｂ、
　Ａｇｅｎｔｓ　Ｏｈｅｍｏｔｈｅｒ、ｊｐ、８７（１
９６４））および幾つかのマイシナマイシン類（Ｋ、　
Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ氏等著「：ｒ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ、　３８５２２〜５２６　（１９８５）　）であ
る。以下の本発明の詳細な記載から明らかなように本発
明によるスピラマイシンはこの中性マクロライド小群に
属するが、しかし後記のＩ（ＰＬＣ！クロマトグラム（
図１参照）並びに生理化学的および分光学的性質（図２
〜５参照）かられかるようにカルコマイシン、ノイトラ
マイシン、アンゴラマイシンおよびマイシナマイシンと
は異なる。

かくして本発明は式！ ＱＣ！ＥＩ５ で表されるマクロライド抗生物質スピラマイシンおよび
式■ で表されるマクロライドアグリコンスワルパノライドに
関する。

さらに本発明は式Ｉで表されるマクロライド抗生物質ス
ワルパマイシン並びに式■で表されるマクロライドアグ
リコンスワルパノライドおよびカルコマイシンの製造方
法に関する。この方法はＳｔｒ、　ｓｐ、　Ｙ−８４，
３０９６７（ＤｓＭ　５７４０　）を同化性炭素および
窒素源を必須無機塩とともに含有する水性培地中、好気
性条件の下６〜９の声値および１８°〜３７℃の温度に
おいてこの培地が実質的外抗生活性を示すまで培養し次
いでこの培地からその発酵生産物を得ることからなる。

本発明による新規抗生物質は多数の病原性微生物例えば
グラム陽性菌およびマイコプラズマに対して活性であり
、それ故にヒトおよび獣の医薬として使用されうる。特
にスワルパマイシンは、グラム陽性菌お：びマイコプラ
ズマ例えばスタフィロコッカスアウレウス（Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒθＵＳ）　、ストレプトコッ
カスピオゲネス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ３ｐｙｏｇ
ｅｎｅｓ）　、ジブロコツカスニューモニア（Ｄｉｐｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、レジオネラ
＝ニーモニア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎ
ｉａｅ）　、リケッチャ（Ｒｌｃｋｅｔｔｓｉａ）菌株
、スピロヘータ（６！ｐｉｒｏｃｈａｅｔａ）、トキソ
プラズマ（Ｔｏズｏｐ１ａ日ｍａ）、クロストリジウム
テタニ（Ｃｌｏａｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｅｔａｎｉ）　、
バクテロイデスフラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　
ｆｒａｇｌｌｌｓ）、マイコバクテリウムカンサシ（Ｍ
ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｋａｎｅａｓｉ）、マイコ
ブラズマガリナルム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌ
ｉｎａｒｕｍ）　、　マイコプラズマニューモニア（Ｍ
ｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｐｎｅ−ｎｉａｅ）、クラミジア
トラコマチス（Ｃ！ｈｌａｍｙｄｉａ　ｔｒａｃｈｏｍ
ａｔｉｓ）等により生起される感染病の治療のための治
療薬物として適当である。さらに本発明による新規抗生
物質は種々の抗生物質例えばエリスロマイシンに対して
抵抗する菌株に対して活性である。それはまた動物飼料
添加剤として使用されうる。スワル・ξマイシンは単独
でまたはカルコマイシンと組み合わせたもののいずれか
の生物学的に利用しうる形態で使用されうる。

菌株ストレプトミセス種Ｙ−８４，′５０９６７は土壌
の１試料から、それを炭素源および窒素源、無機栄養塩
類および固化剤からなる培地中、　ｐｌ＋６．５〜ａ５
　において培養することによって得られる。適当表炭素
源としてはグルコース、デンプン、テキストリン、クリ
セロール、スクロースおよび糖蜜を挙げることができる
。適当な窒素源としてははブトン、酵母エキス、ビーフ
ェキス、麦芽エキスおよびカゼインを挙げることができ
る。寒天は固化剤としての可能な例である。

無機栄養塩類の例としてはナトリウム、カリウム、マグ
ネシウム、カルシウム、燐および硫黄の塩を挙げること
ができる。

本発明による微生物は、枝分れ状基質菌糸体から得られ
る無色の空気中で生長する菌糸体に及ぶ。胞子鎖はその
空気中で生長する菌糸体上に螺旋状に形成される。輪生
体または子のうのいずれもが観察されない。種々の寒天
培地上の微生物の培養性質は以下のように記載されうる
。

１、酵母エキス／麦芽エキス寒天 生長　　　　　　　　：　豊富 好気性菌糸体　　　　：　豊富、白色〜ピンク色がかっ
た灰色、粉末状 下面　　　　　　　　：　淡茶色 可溶性色素　　　　　：　検出されない２、オートミー
ル寒天 生長　　　　　　　：　豊富 好気性菌糸体　　　　：！！、富、白色〜灰色〜淡茶色
、粉末状 下面　　　　　　　　：　淡黄色 可溶性色素　　　　　：　、検出され々い３、無機塩／
デンプン寒天 生長　　　　　　　　：　豊富 好気性菌糸体　　　　：　豊富、灰色〜茶色がかった灰
色。

粉末状 下面　　　　　　　　：　淡茶色 可溶性色素　　　　　：　検出されない４、　グリセロ
ール／アスパラギン寒天生長　　　　　　　　：　良好 好気性菌糸体　　　　二　弱い、白色、粉末状下面　　
　　　　　　：　淡黄色 可溶性色素　　　　　：　検出されない５、ヘプトン／
簿母エキス／鉄寒天 生長　　　　　　　　：　中位 好気性菌糸体　　　　：　検出されない下面　　　　　
　　　：　濃茶色〜黒 可溶性色素　　　′　二　茶色がかった黒＆　チロシン
寒天 生長　　　　　　　　：　良好 好気性菌糸体　　　　：　良好、白色〜ピンク色がかっ
た灰色、粉末状 下面　　　　　　　　：　茶色がかった熱可溶性色素　
　　　　：　淡茶色 Ｚ　スクロース／硝酸塩寒天 生長　　　　　　　　：　弱い 好気性菌糸体　　　　：　まばら、白色、粉末状下面　
　　　　　　　：　淡茶色 可溶性色素　　　　　：　検出されない＆　グルコース
／アスパラギン寒天 生長　　　　　　　　：　中位 好気性菌糸体　　　　二　弱い、白色〜灰色がかった茶
色、粉末状 下面　　　　　　　　二　淡黄色 可溶性色素　　　　　：　検出されない９　培養寒天 生長　　　　　　　　：　中位 好気性菌糸体　　　　：　検出されない下面　　　　　
　　　；　淡茶色 可溶性色素　　　　　：　検出されない本発明による微
生物の生長に最適の温度範囲は２５℃〜３５℃である。

この微生物はグルコース／はブト／／ゼラチン／′培地
中のゼラチンを液化し、デンプン／無機塩寒天中のデン
プンを加水分解しそして脱脂乳を凝固させしめる。

チロシン寒天、はブトン／′酵母エキス、／鉄寒天およ
びトリプトン／酵母エキスプロス中ではメラノイド色素
の生成が観察される。

この微生物の炭素源に関する同化性の・ぞクーンは以下
のとおりである（　Ｐｒｉｄｈａｍ−ＧＯｔｔｌｉｓｂ
培地中）。

陽　性＝Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース。

Ｄ−キシロース、１−イノシトール、 Ｄ−マンニトール、Ｄ−７ラクトース、ラフィノース、
ガラクトース、マルト ース、セロビオース、グルタミン酸ナ トリウム、マンノース、７　クトーｘ。

弱陽性ニスクロース 陰性：ラムノース、セルロース、サリシン、ズルシトー
ル。

側光ばカルコマイシン、ヌトラマイシン、アルトガマイ
シン類、マイシナマイシン類およびパンダマイシン類の
ような知られた１６員の中性マクロライド抗生物質の生
成に関して、以下の既知微生物即ちストレプトミセスビ
キニエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｂｉｋｉｎ
ｉｅｎｓｉｓ）、ストレブトミ＊　スフ　／ｌ／ｌダボ
グリオ／Ｌ’　ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｌｂ
ｏｇｒｉ−５ｅｏ１ｕｓ）、ストレプトミセスリモサス
（Ｓｔｒｅｐｔｏ−ｍｙｃｅｓ　ｒｉｍｏ日ＵＳ）、ス
トレフトミセスゴシキエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　ｇｏｓｈｉｋｉｅｎｅ、ｉｓ）およびストレプト
ミセスラ（ンデュラ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　１ａ
ｖｅｎｄｕｌａｅ）７５！Ｓｔｒ、　ｓｐ、　Ｙ−８４
，３０９６７と比較しうる。

知られているように、マイシナマイシン類はミクロモノ
スポラグリセオルビダエスピーノブ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎ
ｏｅｐｏｒａ　ｇｒｉｓｅｏｒｕｂｌａ　ｓｐ、　ｎｏ
ｖ、）によって生成される。

前記の既知微生物の培養上および生理学的性質に関して
発表されたデータは、本発明による微生物と前記既知微
生物との明確な相違を示している。例えばストレプトミ
セスラベンデュラおよびストレプトミセスゴシキエンシ
スハ赤色系に属しそしてストレブトミセスリモサスは白
色系に属するが、−力木発明による微生物は灰色系に包
含されうる。ストレブトミセスアルボグリセオルスはメ
ラノイビ色素生成に基づいてストレプトミセス［Ｙ−８
４，３０９６７と相異力ることができる。本発明による
微生物は、炭素源の同化のパターンにおいてストレプト
ミセスビキニエンシスとの明確な相違を示す。さらに、
発酵により本発明の微生物はカルコマイシンおよび式Ｉ
で表される新規マクロライド抗生物質を生成しそして該
抗生物質はスワルパマイシンと称されかつ新規な１６員
のマクロライドアグリコンを含有する。前記観察に基づ
いて、本発明によみ微生物はストレプトミセスの新規な
在を示すものと結論される。

この微生物菌株は、寄託Ｎα６７４０として１９８６年
５月２０日付でＤ＠ｕｔａｃｈｅ　Ｓａｍｍｌｕｎｇ　
ｖｏｎＭｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　（ドイツ微生
物収集所、Ｄ−３４００ゲッチンゲン）に寄託された。

当業者にとっては自明のことであろうが、本発明は前述
の定義を有する特定の微生物に限定されずに、該微生物
から自発的におよび人工的に誘導されそして新規抗生物
質のスワルパマイシンおよび新規マクロライドアグリコ
ンのスワルパノライドを生成しうるすべての突然変異体
を包含する。

前記マクロライド抗生物質群に属する化合物の製造方法
はＳｔｒ、　ｎｐ、　Ｙ−８’４．３０９６７（ＤＳＭ
　！１７４０）を炭素源および窒素源、無機栄養塩類お
よび痕跡量の元素を有する培地中、好気性条件の下６．
０〜ｚＯのｐ！（値および２０〜４０℃の温度において
培養し、該培養ブロスおよび菌糸体から後記の知られた
方法によって化合物を得ることからなる。

新規抗生物質製造のための培地に適当か炭素源ハグルコ
ース、デンプン、デキストリン、グリセロール、スクロ
ース、＄１＠および油であり。

適当な窒素源はダイズミール、酵母エキス、ビーフェキ
ス、麦芽エキス、コーンステイープリカー、ヘプトンお
よびカゼインでありそして適当な無機栄養塩類は塩化ナ
トリウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモニウムおよび
炭酸カルシウムである。鉄、マンガン、銅、亜鉛および
コバルトは痕跡量の元素として使用されうる。

Ｓｔｒ’、　ｓｐ、　Ｙ−８４，３０９６７（ＤＳＭ　
３７４０　）は２５〜３０℃、特に好適には２７℃およ
び［）Ｈ６，５で培養するのが好ましい。発酵は４０〜
４５時間後に終了し、この時に化合物の最高収量が得ら
れる。

発酵は表面下発酵として行うのが好ましい。発酵の進行
および抗生物質マクロライド化合物の生成はその培養液
および菌糸体の、スタフィロコッカスアウレウス　２０
９Ｐに対する抗菌活性によって追跡されうる。

スワルパマイシンは、水と非混和性の溶媒例エバクロロ
ホルム、メチレンクロライド、ｎ−ブタノール、酢酸エ
チルまたは酢酸ブチル（酢酸エチルがより好ましい）で
の抽出のようか慣用方法を用いてｔｆ！６．０〜Ｚ５好
適には６．５の炉液からカルコマイシンとの混合物とし
て得ることができる。

この抗生物質複合体は、菌糸体または全培養プロスから
有機溶媒例えばケトン好適にはアセトンによる菌糸体ケ
ーキの抽出てよって得ることができる。抽出に続いてそ
のアセトン抽出物を二縮し、水性層を−６，０〜Ｚ５好
適には−６，５に調整し次いで水と非混和性の有機溶媒
例えばクロロホルム、メチレンクロライｒ％　ｎ−ブタ
ノール、酢酸エチルまたは酢酸ブチル（酢酸エチルがよ
υ好ましい）で抽出する。菌糸体および培養ｐ液の酢酸
エチル抽出物は一緒にするかまたは別個に後処理するこ
とができる。

培養ブロスからスワルパマイシンを得る別の方法は吸着
に基づく。このためには本発明化合物を含有する液体物
質例えば培養デ液または溶媒抽出物を適当な吸着剤例え
ば活性木炭、”’ＤｉａｉｏｎＨＰ−２０（登録商標）
、■ＸＡＤ　４　（登録商標）、アルミナ、シリカケ゛
ルもしくは■セファデックスＬＨ−２０（登録商標）を
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは液体クロマト
グラフィー等に付す。本発明化合物を単独もしくけお互
いの組合せもしくは水との組合せでの５例えばクロロホ
ルム、メタノールもしくはアセトンのよう力適当な移動
相を用いて吸着物から溶出し次にその溶出物を蒸発乾固
する。

スワルパマイシンおよびカルコマイシンを含有する前記
溶媒抽出物または濃縮溶出物から本発明化合物を得そし
て精製するには多くの方法を用いることができる。例え
ば単離およびｆｆｆｆのためには活性木炭、■Ａｍｂｅ
ｒｌｉｔｅ　（登録商標）、’Ｅ）Ｘ　ＡＤ−Ｉｌｌお
よび７　（Ｒａｈｍ　ａｎｄ　Ｂａ５ｓ社製）寸たは■
Ｄｔａｔｏｎ　ｔｒｐ−２ｏ　（三菱化学工業株式会社
判）による吸着および溶出法、■５ｅｐｈａｄｓｘ　Ｌ
Ｈ−２０（Ｐｈａｒ＋ｎａｃｉａ　Ｆｉｎｏ　Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ　　ＡＢ社製）および同等の製品によるデル
濾過並びにアルミナおよびシリカゲル上での吸着クロマ
トグラフィー等を併用するのが可能でありしかも好都合
である。

また適当か溶媒系で適尚カ吸着剤例えばシリカゲルおよ
びシラン化したシリカケ゛ルＣ１８を用いる薄層クロマ
トグラフィー、中圧および高性能液体クロマトグラフィ
ーも適当である。さらに前記目的は定義された溶媒系に
よ７．自流クロマトグラフィーによっても達成されうる
３゜スワルバマイシンはメタノール、エタノール、ｎ−
プロパツール、インプロ・ξノール、ｎ−ブタノール、
酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチル、アセトン、エチルメチル
ケトン、メチルイソブチルケトン、メチレンクロライド
１、クロロホルム、ジメチルホルムアミド１およびジメ
チルスルホキシドに可溶性の無色無定形粉末である。ス
ワルパマイシンはヘキサン、石油ｘ−ｆル（４（１〜６
０℃）および水中においてほとんど溶解しないかもしく
は不溶性である。

後に詳記する薄層クロマトグラフィー系（−）において
スワルパマイシンおよびカルコマイ７ンは以下の結果を
示す。

ＴＬＣプレート：シリカケ゛ルであらかじめ破覆された
プレート（製品Ｎα５５５４　、　Ｋ、　Ｍｅｒｃｋ社
製）スワルｌξマイシン　０．５　　　　　０．６０．
７カルコマイシン　　０．４２　　　　１１．５３　　
　　０．４６後記第１図に示される分析用高性能液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）におけるスヮルパマイシ
ンおよびカルコマイシンの保持時間は以下のとお幻であ
る。

カラム充填　　　：　■Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ１
８流速　　：１−７分 検出　　：ａｔ２１６ｎｍ 溶媒　　：　Ｍａｌ：Ｈ２Ｏ（７：３）保持時間 スワルノぐマイシン　：５．７分 カルコマイシン　　：５．０分 スワルパマイシンは１２６〜１２９℃で融解しそシテ旋
光度［：αＩＤ　−−Ａ８’　（ＯＨＣ！（’５中にオ
イてｃ＝０．２１）を有する。

スフルパマイシンに関する分光学上のデータは以下に詳
記のとおシである。

１、　メタノール中のＵＶλｍａｘ　：第２図参照。Ｕ
Ｖ吸収最大を測定するのに濃度が０．２り／Ｑのスワル
パマイシンの溶液を用いた。吸収スＲクトルは２００〜
８　Ｑ　Ｑ　ｎｍで測定した。

２、　工Ｒスはクトル（ＫＢｒ円板）はｌξ−キンエル
マーＰ、に、５２１　ＩＲ分光計を用いて測定した：第
３図参照。

１Ｈおよび１５Ｃ核磁気共鳴スにクトルは、ＪｅｏｌＦ
ｘ　−９０フ一リエ変換核磁気共鳴分光計を使用し、そ
の際内部標準としてＭｅ４Ｓｉを用いｃｚｇＳ中でそれ
ぞれ９　Ｑ　ＭＨｚおよび２２．５ＭＨ２において測定
した。

五　’ＨＮＭＲスはクトル：第４図参照。

４、　１”ＣＮＭＲスはクトル：第５図参照。

５、質量分光写真調査は、電子衝撃イオン化によってス
ワル、ｏマイシンのシリル化訪導体について行いそして
各ピーク例えばＭ＋ピークに対する原子式は高分解能質
量測定によって決定した。

上記より得られる分子量および実験式は以下のとおシで
ある。

スワルパマイシンー分子ｉ　　：　　７２４−実験式　
：　　Ｃ３７Ｈ５６０１４ 前述の入手しうるデータから、スワルパマイシンおよび
スワルパノライドの各縫進はそれぞれ前記の式Ｉおよび
式■に示されたものであると結論される。

実鹸室の寒天プレート試験において、スフルパマイシン
は細菌、マイコプラズマおよび放線菌類に対して抗菌ス
はクトルを示す。スワルパマイシンは生体外においてス
タフィロコッカスアラ【／ウスおよびストレプトコッカ
スフェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃ
ａｌｉｓ）の過敏性かつ耐性菌株並びにバチルスズブチ
リス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂ−ｔｔｘｔｅ）、サル
シナルテア（Ｓａｒｃｉｎａ　１ｕｔｅａ）、ストレブ
トコツカスパイロゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｙｏｇｅｎｅｓ）　、ミクロコツカスルテウス（Ｍｉ
ｃｒｏ−ｃｏｃｃｕｅ　１ｕｔｅｕｓ）、マイコプラズ
マガリナルム（Ｍｙｃｏｐｌ、ａｓ＋ｎａ　ｇａｌｌｌ
ｎａｒｕｍ）およびマイコブラズマプルモニス（Ｍｙｃ
ｏｐｌａｓｍａ　ｐｕｌｍｏｎｉｓ）の菌株に対して作
用する。スワル・ξマイシンの最小抑制濃度（Ｍ工Ｃ）
を種々の微生物に対して測定した。

結果は以下の表１に示すとおりである。

表　　１ スワルパマイシンのＭ工Ｃ １、Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　２０９Ｆ　　　　　　　　　
　６．３２、　　８．　　ａｕｒｅｕｓ　　２０４２４
　　ＭａｃＲ５０五Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　５０６６　Ｍ
ｅｔｈ”　　　　　　　３．２４、　　　Ｓ、　ａｕｒ
ｅｕｓ　Ｒ８５ｊＣｍＲ１２，５５、ｓ、　ａｕｒｅｕ
ｓ　Ｒ８５／Ｍ、　ＫｍＲ＞　５０６、　　　Ｓ、　ａ
ｕｒｅｕｓ　７１２　ＭｅｔｈＲ１２，５７、Ｂ、　ａ
ｕｒｅｕｅ　７８９　ＭｅｔｈＲ）　５Ｑａ　　　８ｔ
ｒｅｐｔ、　ｆａｅｃａｌｉｅ　ＵＤ　８６　　　　＞
　５０９、　　８ｔｒｓｐｔ、　ｆａｅｃａｌｉｓ　Ｅ
ｄｅｒ：ＭａｃＲ：＞　５０１０、　　　Ｍｉｃｒｏｃ
ｏｃｃｕｅ　１ｕｔｅｕｓ　　　　　　　　１．６１１
、　　８ａｒｃｉｎａ　１ｕｔｅａ　　　　　　　　　
　　０．２ｊ２．　　　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ　　　　　　　　　Ｏ，１１５、Ｓ、　ａｕｒｅ
ｕｓ　ＭＬＳ　１１．ＫｍＲ２５１４、８，ａｕｒｅｕ
ｓ　ＭＬＳ　１４．ＫｍＲ２５１５、Ｓ、　ａｕｒｅｕ
ｓ　ＭＬＳ　１６．ＫｍＲ１２，５１６、０ａｎｄｉｄ
ａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　　　　　　　＞　５０１７、　
　　Ｅ、　ｃｏｌｉ　９６３２　　　　　　　　　＞　
５０Ｉａ　　　Ｋ、　ｃｏｌｉ　ＦＸＳＢ　２２３１　
　　　　　　＞　５０ｊ９．　　　Ｐｓ、　ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ　Ｍ　３５　　　　　＞　５０２０、　　　
Ｐｒ、　ｖｕｌｇａｒｉｓ　　　　　　　　　）　５０
２１、Ｋｎｔ、　ｃｌｏａｃａｅ　　　　　　　　　’
＞　５０２２、　　　Ｐｒｏｖ、　５ｔｕａｒｔｉｉ　
　　　　　　　＞　５０２五　　Ｃ１ｔ、　ｆｒｅｕｎ
ｄｉｉ　　　　　　　　　＞　５０従ってスワルパマイ
シンはグラム陽性菌例えばエリスロマイシン耐性菌株並
びにマイコゾラズマに対して活性であり、前記病原性細
菌によって生起される感染症の治療に使用されうる。

従って本発明はまた。微生物による感染症の治療用の１
式１の化合物を含有する医薬製剤にも関する。

本発明化合物はまた。その他の活性物質例えばはニジリ
ン系、セファロスポリン系またはアミノグリコシド系か
らの物質と組合せて用いることもできる。

式Ｉの化合物およびその生理学的に許容しうる酸付加塩
は経口的に、筋肉内にもしくは静脈内に投与されうる。

活性物質としてスヮルパマイシンを含有する医薬製剤は
１式Ｉの化合物を１種またはそれ以上の薬理学的に許容
しうるビヒクルまたは希釈剤例えば充填剤、乳化剤、潤
滑剤、マスキングフレーバー、着色剤または緩衝物質と
混合し次いで例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤または
非経口用に適し九ａ濁液もしくは溶液のよう表医薬形態
に変換することによって調製されうる。

ビヒクルまたは希釈剤の例と１７では、トラガカント、
ラクトース、タルク、寒天、ポリグリコール、エタノー
ルおよび水を挙げることができる。非経口用としては水
中の懸濁液または溶液が適当でありかつ好適である。ま
たビヒクルもしくは希釈剤かして適当な形態例えばカプ
セルにして活性成分をそのｉｔで投与することも可能で
ある。

式Ｉの化合物またはその生理学的に許容しうる酸付加塩
の適当な投与量は、体重的６０に９の成人の場合約０．
４〜２０　ｆ／Ｓ、好適には０．５〜４ｆ／日である。

単一投与量または一般的には多数回投与量を投与するこ
とが可能であり、その単−投与量は活性物質を約５０〜
１１０００ｖ、好適には約１００〜５００ａＦの量で含
有することができる。

以下に本発明を実施例ＶＣより説明する。

実施例　１ 土壌からのストレプトミセス′ｇＬＹ−８４，３０９６
７の単離 ａ）単離培地の調製 培地１　：　グルコース　　　　　　　　　　　　１．
０タグリセロール　　　　　　　　　　１．０１Ｌ−フ
ルギニン　　　　　　　　　０．３２に２ＨＰＯ４０，
３ノ Ｍｇ５Ｏａ・７Ｈ２００，２ｆ ＮａｃＱ　　　　　　　　　　　　　　ｕ３り酵母エキ
ス　　　　　　　　２，０１ Ｆｅ２（Ｓｏａ）ｓ　　　　　　　　１０　　ｍｑＣｕ
５ｏ４ａ５Ｆ（２０１Ｗ ＺｎＳＯ４ａ７Ｈ２０１ＮＩＰ Ｍｎ８０４ｏ７Ｈ２０１Ｗ 閃天　　　　　　１５．ＯＦ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　１リツトルｐＨ６
，５ 培地２　ニゲルコース　　　　　　　　　　　　２．０
ｆ−−アスノぞラギン　　　　　　　　　１．０ｆＫ２
ＨＰＯ４０，５ｆ ＭｇＳｏ４０７Ｈ２００，５ｆ 土壌エキス　　　　　　　　　　２０〇　−寒天　　　
　　　１５．Ｏｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　８００　　Ｔｎｌ〆
（ａＯ 培地３　：デンプン　　　　　　　　　　　１０．Ｃｌ
カゼイン　　　　　　　　　　　　　　α３２ＫＮＯｓ
　　　　　　　　　　　　　　　　２．０ｆＮａ＋：［
２，０ｆ Ｋ２ＨＰＯａ　　　　　　　　　　　　　２．０２Ｍｇ
５０４ｍ７Ｆｉ２０　　　　　　　　　　　０．０５　
ｆｃａｃＯｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ，
０２ｆＦｅＳ０４　　　　　　　　　　　　　　　　　
Ｄ、０１９寒天　　　　　　１５．Ｏｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　１リツトルｐ＋
（７，２〜・ｚ５ 前記培地は１２１℃でイ時間滅菌した。

１１１）土壌懸濁液の調製 土壌１ｆを激しく振盪させながら蒸留水中に懸濁する。

この土壌を沈殿させ、上澄み液を前記単離培地の各々に
植え付けるのに用いる。

Ｃ）単離培地の植え付は 前記の単離培地の１種５０−を含有するＲトリ皿の各々
に１−の土壌懸濁液を植え付ける。

ｄ）ストレプトミセス種ｙ−８４，３０９６７の単離植
え付けられたハトリ皿を３０℃で２週間培養し、ストレ
プトミセス種Ｙ−８４，３０９６７を成育している微生
物から単離する。

実施例　２ 発酵によるスワルパマイシン製造のためのストレプトミ
セス種Ｙ−８４，５０９６７の培養ストレプトミセス種
Ｙ−８４，３０９６７を以下の組成 麦芽エキス　　　　　　　　　　　　　　１０．ＯＦ酵
母エキス　　　　　　　　　　　　　　　４．０ｆグル
コース　　　　　　　　　　　　　　　　４・０り寒天
　　　　　　　　１５．Ｏｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
リツトルｐＨ７，０ から力る酵母−麦芽寒天上に維持する。この培地を各試
験管に分配し、１２１℃で３０分間滅菌する。寒天斜面
を調製するためにこれらの管を傾斜した位置で冷却する
。各寒天斜面に前記培養菌を植え付け、２８℃で１０〜
１５日間培辞し、その時までに良好な成育および胞子生
成が観察される。寒天斜面から得た胞子の蒸留水懸濁液
を各々が１００ｄの種培地を含有する５Ｘ５００ｍエル
レンマイヤーフラスコまたは１Ｑの上記と同一の種培地
を含有する５　Ｑ、アスピレータ−ボトル上に植え付け
るのに用いる。

種培地の組成 グルコース　　　　　　　　　　　　　　１５．Ｏｆダ
イズミール　　　　　　　　　　　　１５．Ｏｙコーン
ステイープリカー　　　　　　　　５．０ｙＣａＣＯ５
２，ＣＤ’ Ｎａ（４５，０２ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１リツ
トルｐａ１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　６．５前記培地を１００Ｍ／ずつ（でして５００ｒｒ
ｔｅエルレンマイヤーフラスコにまたは１Ｑ、ずつにし
て５Ｑアスピレータ−ボトルに分配し７ついで１２１℃
で５０分間滅菌する。これらのフラスコ／ボトルを冷却
し、前記胞子懸濁液を植え付けそして３８０スロー（ｔ
ｈｒＯｙ）を有する回転振盪器上で２４　Ｏｒｐｍにお
いて２７℃（±１℃）で７２時間振盪する。成育した生
産物を、第２の種培養段階の調整のために各々が８〜１
０容量％の種培地１０Ｑを含有する２個の１５２ガラス
製発酵器に植え付けるのに用いる。この発酵は、１８０
〜２０　Ｏｒｐｍで攪拌しながらかつ６〜７リツトル、
７分で通気し々から２７℃（±１℃）で２４時間行う。

得られた十分に成育したこの第２の種培養段階は生産培
地の植え付けのために用いる。

生産培地の組成 グルコース　　　　　　　　　　　　　１５．０５！可
溶性デンプン　　　　　　　　　　　２Ｑ、Ｏｆダイズ
ミール　　　　　　　　　　　　　３．０タズブトン　
　　　　　　　　　　　　　　３．０１ＣａＯＯｓ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
．０ｆＮａＣ４２，０ｆ コーンステイープリカー　　　　　　　　　　　２．０
２（ＮＨ４）　２８０４　　　　　　　　　　　　　　
　　　　ｏ、　５　ｙ蒸留水　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１リツトルｐＨ６，５ ０、０２５Ｘ　Ｄｅｓｍｏｐｈｅｎ■（登録商標）を消
泡剤として発酵器の内容物に加える。

前記培地２８０Ｑを３９０Ｑの発酵器に入れ、直接およ
び間接蒸気によって１２１℃で２８分間滅菌する。この
発酵器を冷却しそして前記の第２の種培養段階（７容量
％）を植え付ける。この発酵は１００〜２００　ｒｐｍ
での攪拌下２７℃（±１℃）で４０〜４５時間行う。通
気速度は毎分１７０リツトルである。４０〜４５時間後
に発弾が終了した際、その培養Ｆ液を寒天ウェル法（６
簡直径）によす試験するとスタフィロコッカスアウレウ
ス２０９Ｐの阻害帯の直径は１６ｍであり、その培養液
の關は６．４〜６．８である。

充填された細胞容量は２８〜３０％である。

抗生物質複合体を含有する。採取した培養ブロスを遠心
分離にかけて菌糸体を除去しそして培養液をさらに実施
例６の記載のように処理する。

実施例　３ 発酵によるスワルパマイシン製造のだめのストレプトミ
セス種Ｙ−８４，５０９６７の培養操作は実施例２の場
合と同様であるが、以下の点に相違がある。

寒天培地の組成 デンプン（可溶性’）　　　　　　　　　　１０．０２
に２［（ＰＯ４１，０１ Ｍｇ５Ｏ４−７Ｈ２０１，０ｆ ＮａＣＱ１．３　ｆ （ＮＨＪ　）２ｓ０４　　　　　　　　　　　　　２．
　ＯりＣａＣＯ３２，０９ １Ｆｅ８０４０７Ｈ＋ＯＯ，１’Ｆ ＭｎＣＱ２−４Ｆ１２０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　ｏ、　１ＷＺｎＳＯ４０７Ｈ２００，１！１
９ 寒天　　　　　　　　　１５．Ｏｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
リツトル…　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　７２生産培地の組成 グルコース　　　　　　　　　　　　　　２０．　Ｏｆ
ダイズミール　　　　　　　　　　　　１０．０ｆＣａ
Ｃ！Ｏ！ｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｄ、　
２　ｆＣｏＣＱ２ｏ６Ｈ２，Ｏｏ、　１　ｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１リツ
トルｐＨ７，０ 前記の各培地１００Ｑを１５０Ｑの発酵器中に導入し、
直接および間接蒸気によって１２１℃で２８分間滅菌す
る。この発酵器を冷却し、前記の第２の種培養段階（９
容ユタ（）を植え付ける。

この発酵は８０〜９０　ｒｐｍでの攪拌下、毎分６０〜
７０リツトルの通気速度で２７℃（±１℃）において行
う。４０〜４３時間後に発酵が終了した際その培養ブロ
スの〆■は＆４５でありそして培養戸液を寒天ウェル法
（６■直径）により試験するとスタフィロコッカスアウ
レウス　２０９Ｐの阻害帯の直径は１５闘である。この
培づブロスは実施例７の記載のように処理する。

実施例　４ スワルパマイシン製造のためのストレプトミセス種Ｙ−
８４，３０９６７の培養 操作は実施例２の場合と同様であるが、以下の点に相違
がある。

寒天培地の組成 オートミール　　　　　　　　　　　　　２αＯｆ寒天
　　　　　　　１５．０り Ｆｅ５Ｏａｏ７）Ｉ２０　　　　　　０．１１ＦＺｎＳ
００７Ｈ２００，１ｍ９ ＭｎＣＱ２−４Ｈ２００，ＩＱ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１リ
ツトルｐＨ７，２ 種培地の組成 デンプン　　　　　　　　　　　　　　　３Ｃ１，Ｏｆ
スクロース　　　　　　　　　　　　　　１０．０ｆグ
ルコース　　　　　　　　　　　　　　１αＯｆダイズ
ベブトン　　　　　　　　　　　１５０Ｆコーンステイ
ープリカー　　　　　　　　１０．０りに２ＨＰＯ４３
，Ｏｆ ＮａＱＱ　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．Ｏ
Ｆ。ａｃＯ５３１″′７ ＣｕＳＯａ　−５Ｈ２０７，Ｏ”９ Ｆｅ８０４−７Ｈ＋０　　　　　　　　　　　　　　１
．ＯＮｉＭｎＣ！！２＊４Ｈ２０ａＯＷ ＺｎＳＯｉｏ７Ｈ２０２，０１１１Ｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１リ
ツトルｐＨ７，２ 生産培地の組成 デキストリン　　　　　　　　　　　　　２０．　Ｏｆ
ダイズミール　　　　　　　　　　　　１αＯｆ酵母エ
キス　　　　　　　　　　　　　　２．０ｆＦｅＳＯａ
＊７Ｈ２０α１Ｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１リ
ツトルｐＨ６，５ ４９時間後に発酵器から採取した際その培養プロスの声
は６．７５であり、充填された細胞容量は２２にである
。培養ろ液を寒天ウェル法（６ｔｘｓ）Ｋよって試験す
るとスタフィロコッカスアウレウス　１０９Ｐの阻害帯
の直径は１５冒である。この採取した培養プロスはさら
に実施例６の記載のように処理する。

実施例　５ 発酵によるスワルパマイシン製造のためのストレプトミ
セス種Ｙ−８４，３０９６７の培養操作は実施例５の場
合と同様でおるが、以下の点に相違がある。

生産培地の組成 はプトン　　　　　　　　　　　　　　１０，０タビ−
７エキス　　　　　　　　　　　　　５，０１グルコー
ス　　　　　　　　　　　　　　２０．ＣｌＮａ０Ｑ、
５．０ｆ ＣａＣＯ３五〇ｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１リ
ツトルｐＨ６，５ ４６時間後に発酵器から採取した際その培養ブロスの…
は６．５であり、充填された細胞容量は２７％でありそ
して寒天ウェル法（６−直径）による試験ではその培養
戸液は１６■（阻害帯の直径）の活性を有する。この採
取した培養ブロスはさらに実施例７の記載のように処理
する。

実施例　６ スワルパマイシンの単離および精製 実施例２で得た発酵プロスを遠心分離にかけて菌糸体お
よび培養ｐ液を分離する。こうして得た培養ろ液（２３
２Ｑ）を必要に応じて２Ｎ　ｉｇでメ１６．５に調整し
次いでそれぞれ１２０Ｑの酢酸エチルで２回抽出する。

各水性層を傾写し、合一した酢酸エチル抽出物を真空中
で蒸発乾固させる。こうして得られる粗抽出物の量は１
６５Ｆである。菌糸体（１４，５１１ｙ）をそれぞれ４
５Ｑ、のアセトンで２回抽出する。合一した抽出物を真
空中で蒸発し７てアセトンを除去する。こうして得た水
性層を２Ｎ　ＮａＯＨで声６．５に調整し、水２０Ｑを
加え、その混合物をそれぞれ２ｏ２の酢酸エチルで３回
抽出する。各水性層を傾写し、合一した抽出物を真空中
で蒸発乾固させる。これより約１１０９の粗抽出物が得
られる。培養ろ液および菌糸体からの粗抽出物を合−Ｌ
　（２７５Ｆ）、１０％濃度のメタノール水溶液１Ｑ中
に溶解し次いでその溶液をそれぞれ１Ｑのへブタンで４
回処理する。ヘプタン層を傾写し、水性層を減圧下に濃
縮する。メタノールの除去後水性層をそれぞれ５００−
のクロロホルムで２回抽出する。

得られたクロロホルム抽出物を減圧下Ｋａ縮して抗生物
質混合物を含有する化合物１１０Ｆを得る。

これら１１０ｒｔ−１５に９のシリカゲル（メツシュの
大きさ３００〜４００）含有のカラムに連続して２回適
用し次いでクロロホルムコメタノール（９７：３）から
なる溶媒系で溶出する。６１の活性フラクションＡおよ
び８０Ｆの活性フラクションＢがこの方法で得られる。

フラクションＢをシリカダルクロマトグラフィー（２，
４Ｋｙのシリカケ゛ル、メツシュの大きさ１００〜２０
０）処理の繰シ返しによってさらに精製して９ｖの生籾
製カルコマイシンおよびさらに別の活性フラクションを
得る。

生籾製カルコマイシン１Ｆをブレ／ξラフイブ薄層クロ
マトグラフィー（０，５１ｇ厚さのシリカゲルプレート
）により精製して７０町の精製カルコマイシンヲ得る。

このカルコマイシンヲソの物理化学的性質および分光分
析によシ同定する。さらに精製するためにフラクション
Ａを６００ＦのシリカダルＲＰ１８含有のカラムに適用
し次いでメタノール：水（７：３）から力る溶媒系で溶
出して８５岬の半Ｎ製スワル・ξマイシンを得る。それ
は、クロロホルムおよびメタノール（９０：１０）の混
合物中でのプレペラテイブ薄層クロマトグラフィー（０
，５ｍ厚さのシリカゲルプレート）１次いで流速１τｔ
／分で２８０泗においてＵＶ検波器を用い、溶離剤とし
てメタノール：水（７：＋）を使用する■μｍＢｏｎ、
１ａｐｘｈ　（登録商標）０１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ
社製）上でのプレパラテイプ高性能液体クロマトグラフ
ィーによシさらに精製する。これより純粋なスワル・ξ
マイシン２３岬が得られる。

このスワルパマイシンは化学分析および分光学的方法に
よって同定される。

実施例　７ スワルパマイシンの単離および精製 実施例３の記載のようにして得た発酵ブロス約６２９を
遠心分離にかけて菌糸体および培養Ｆ液を分離する。プ
ロスから得た涙液をそれぞれ３０Ｑの酢酸エチルで２回
抽出する。酢酸エチル抽出物を合一し、回転蒸発器中で
蒸発乾固させて１２りの粗抽出物を得る。菌糸体をそれ
ぞれ６Ｑのアセトンで２回抽出する。アセトン抽出物を
合一し、アセトンの除去後、得られた水性層を１（ｌの
酢酸エチルで抽出する。酢酸エチル層を蒸発乾固して８
２の粗抽出物を得ろ。

培養Ｐｇおよび菌糸体からの乾燥した粗抽出物（２（１
）を合一し、クロロホルムと漸増する割合のメタノール
即ち１０％までのメタノール”とからなる溶離剤を用い
るシリカケ゛ル（メツシュの大きさ１００〜２００）上
でのカラムクロマトグラフィーを繰り返して精製を行う
。この方法により２１の生物活性フラクションが得られ
る。

これら２ｆの生物活性混合物を石油エーテル（４０〜６
０°）で摩砕して１．５２の不活性な油状残留物および
３６０ｆｆ＋９の生物活性沈殿を得る。この沈殿を少食
のメタノールに溶解し、■５ｅｐｈａｄｅｘ（登録商標
）　ＬＥ（−’２０カラム（７０Ｘ３．５０）に通し次
いでフラクションのそれぞれをメタノールで溶出させる
。これより約２６０〜の生籾製の抗生物質混合物が得ら
れ、これをクロロホルム中の１０％メタノールからなる
溶媒系において薄層クロマトグラフィー（０，５ｔｍ厚
さのシリカゲルプレート）によりさらに精製する。この
方法でクロマトグラフィー、スＲクトル分析および物理
化学的性質によって同定されたカルコマイシン１５０Ｉ
ＩＩ？、生物活性物質１０■およびスワルノξマイシン
１２１＋９が得られる。このスワルパマイシンは化学分
析および分光学的方法によって同定される。

【図面の簡単な説明】

第１図は分析用高性能液体クロマトグラフィーにおける
スワル／ξマイシ／およびカルコマイシンの保持時間を
示す。 第２図はスワルパマイシ／のメタノール中のＵＶ　’ｍ
ａＸを示す。 第３図はスワルパマイシンの工Ｒスペクトル（ＫＢｒ円
板）を示す。 第４図はヌワルパマイシンの１ｆ（ＮＭＲスにクトルを
、また第５図はスワルパマイシンの１ｓｃｐｒｙａスＲ
クトルを示す。 特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名 第１図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）次の式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表される化合物。 ２）微生物菌株のストレプトミセス種Ｙ− ８４，３０９６（ＤＳＭ３７４０）またはその変異体も
   しくは突然変異体を炭素源および窒素源、無機栄養塩類
   および適切ならば痕跡量の元素を含有する慣用の栄養培
   地中、好気性条件の下６〜７のｐＨ値および２０〜４０
   ℃の温度において発酵させ、次いで培養濾液および菌糸
   体を有機溶媒で抽出するかもしくは培養濾液に吸着法を
   適用しそして引き続き溶媒抽出物もしくは溶出物にクロ
   マトグラフィー法を適用して本発明化合物の単離および
   精製を行うことからなる式 I の化合物の製造方法。 ３）微生物ストレプトミセス種Ｙ−８４，３０９６７（
   ＤＳＭ−３７４０）の発酵を６．５のｐＨ値および２５
   〜３０℃の温度における表面下発酵として実施しかつ４
   ０〜４５時間続行する特許請求の範囲第２項記載の方法
   。 ４）培養濾液を６．０〜７．５のｐＨ値において水と非
   混和性の有機溶媒で抽出し、菌糸体をアセトンで抽出し
   、この抽出物をアセトンの除去のために蒸発させ、次い
   で水で希釈し、その水性相を水と非混和性の有機溶媒で
   抽出し、合一した溶媒抽出物から本発明化合物をシリカ
   ゲルクロマトグラフイーおよび薄層クロマトグラフィー
   によつて単離および精製する特許請求の範囲第２項記載
   の方法。 ５）特許請求の範囲第１項記載の化合物を含有する医薬
   。 ６）グラム陽性菌、マイコプラズマおよび放線菌類に対
   して作用する医薬を製造するための特許請求の範囲第１
   項記載の化合物の使用。 ７）ストレプトミセス種Ｙ−８４，３０９６７（ＤＳＭ
   ３７４０）。