JPH04120087A

JPH04120087A - 新規抗腫瘍性抗生物質ｓｆ２５８７ｃ物質およびその製造法

Info

Publication number: JPH04120087A
Application number: JP2240043A
Authority: JP
Inventors: Yoshikazu Sato; 佐藤　吉和; Hiroshi Hashimoto; 橋本　広志; Katsumi Kawarajiyou; 河原條　勝己; Masao Koyama; 小山　正夫
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1990-09-12
Filing date: 1990-09-12
Publication date: 1992-04-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は新規抗腫瘍性抗生物質ＳＦ２５８７Ｃ物質及び
その医薬的に許容し得る製造法に関するものである。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕従来か
ら種々の抗腫瘍性抗生物質が微生物により生産されてい
ることが、知られている。例えば、プルラマイシン（Ｊ
、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　９Ａ、７５．１９５６）、
ネオブルラマシン（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　２３
，３５４．１９７０）、キダマイシン（Ｊ、Ａｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｓ　２４，５９９．１９７１）、ヘダマイシ
ン（Ｈｅｌｖ、Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ　６０，８９６．１
９７１）などが微生物により生産されることが報告され
ている。しかしながら、これら公知の化合物よりも更に
優れた、医薬として有用な抗腫瘍活性を有する新規物質
の提供は常に要望されている。

本発明者らは、以上のような点に着目し、新規な抗腫瘍
性抗生物質を提供するとともに、その製造法を確立する
ことによって、これを解決しようとするものである。

〔課題を解決するだめの手段〕

本発明者らは、先に特定の微生物を培養することにより
、強い抗＠瘍活性を有する物質が培養液中に生産、蓄積
されることを見いだし、その有効物質を採取することに
成功し、ＳＦ２５８７物質と命名し特許出願を行った（
特開平１−１９３２６５号公報参照）。

本発明者らはこれと同一菌株の培養液中に他の新規な有
効物質が生産されていることを見いだし、該物質を単離
し抗腫瘍性抗生物質ＳＦ２５８７Ｃ物質と命名し、その
理化学的性状及び生物学的性状を確定することにより本
発明を完成した。

すなわち第一の発明は下記の理化学的性質を有する新規
抗腫瘍性抗生物質ＳＦ２５８７Ｃ物質及びその医薬的に
許容される塩を提供するものである。

（イ）分子量５７５　（ＥＩＭＳ、　　ｍ／ｚ　５７５．　　Ｍ　）
（ロ）分子式％式％紫外部吸収スペクトル：（ト）（チ）（す）（ヌ）（ル）メタノール溶液中で測定したスペクトルは第１図に示す通りである。

光外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠で測定したスペクトルは第２図に示す通りである。

水素核核磁気共鳴スペクトル二重クロロホルム溶液中で測定した４００ＭＨｚ水素核核
磁気共鳴スペクトルは第３図に示す通りである。

炭素核核磁気共鳴スペクトル二重クロロホルム溶液中で測定した１００ＭＨｚ炭素核核
磁気共鳴スペクトルは第４図に示す通りである。

溶解性：クロロホルム、アセトン、メタノール及びエタノールに易溶。酢酸エチル及ヒシエチルエーテルに難溶。ｎ−ヘキサン及び水に不溶。

呈色反応：過マンガン酸カリウム、ｌＯ％硫酸及びリンモリブデン酸試薬に陽性。ニンヒドリン試薬に陰性。

（ヲ）薄層クロマトグラフィー：メルク社製シリカゲル薄層（Ａｒｔ５７１４）を使用し、展開溶媒がクロロホルム−メタノ
ール（１０：　ｌ）の場合、Ｒｆ　　Ｏ，２０、展開溶
媒がｎ−ブタノール−メタノール−水（４：ｌ：２）の
場合、Ｒｆ　Ｏ，４１゜（ワ）外観：黄色粉末更に、第二の発明は、上記の理化学的性状で表される化
合物であるＳＦ２５８７Ｃ物質またはその塩の製造法に
関する発明であって、ストレプトミセス属に属するＳＦ
２５８７Ｃ物質生産菌を培養し、その培養物からＳＦ２
５８７Ｃ物質を分離採取することを特徴とするものであ
る。

本発明に使用されるＳＦ２５８７Ｃ物質の生産菌の一例
としては、特開平１−１９３２６５号公報に菌学的性状
を記載した放線菌ＳＦ２５８７株がある。本菌株は、当
初は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第９
８３１号（ＦＥＲＭ　Ｐ−９８３１）として寄託されて
いたが、現在は微工研条寄第２２４４号（ＦＥＲＭ　Ｂ
Ｐ〜２２４４）として寄託されている。

ＳＦ２５８７株は他の放線菌にみられるように、その性
状が変化し易い。例えば、ＳＦ２５８７株に由来する突
然変異株（自然発生または誘発性）、形質接合体または
遺伝子組換え体であっても、ＳＦ２５８７ｃ物質を生産
するものはすべて本発明に使用できる。本発明の方法で
は、前記の菌を通常の微生物が利用し得る栄養物を含有
する培地で培養する。栄養源としては、従来放線菌の培
養に利用されている公知のものが、使用できる。例えば
、炭素源として、グルコース、水飴、デキストリン、澱
粉、シュクロース、糖蜜、動・植物油などを使用しうる
。また窒素源として、大豆粉、小麦胚芽、コーンステイ
ープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス
、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素などを使用しう
る。その他、必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カル
シウム、マグネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硫酸
、及びその他のイオンを生成することができる無機塩類
を添加することは有効である。また菌の発育を助け、Ｓ
Ｆ２５８７Ｃ物質の生産を促進するような有機及び無機
物を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は２６−３７°
Ｃであるが、多くの場合、２８°Ｃ付近で培養する。Ｓ
Ｆ２５８７Ｃ物質の生産は培地や培養条件により異なる
が、振盪培養、タンク培養とも通常２−７日の間でその
蓄積が最高に達する。培養中のＳＦ２５８７Ｃ物質が最
高になったときに培養を停止し、培養液から目的物質を
単離精製する。

本発明のＳＦ２５８７Ｃ物質は、脂溶性物質であるので
、培養物からＳＦ２５８７Ｃ物質の単離、精製にあたっ
ては、その特性を利用して行う事ができる。すなわち、
ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）等の合成吸着
剤、セファデックスＬＨ−２０ソー社製）等のゲルろ通
則、酢酸エチル、クロロホルム等による溶媒抽出法、シ
リカゲル、アルミナ等によるカラムクロマトグラフィー
　さらにシリカゲルを担体としだ分取薄層クロマトグラ
フィー等が有効である。

以上のような方法により、或はこれらを適宜組み合わせ
ることにより、前述の理化学的性質を有する高純度のＳ
Ｆ２５８７Ｃ物質が得られる。

紫外部吸収スペクトルから、本発明のＳＦ２５８７Ｃ物
質はプルラマイシン系抗生物質に属することが推定され
、上述した理化学的性状及び後述の第１表に示す生物学
的性状と本発明化合物に類似する既知のプルラマイシン
系抗生物質のそれらとを比較すると１．該当する物質は
なく、ＳＦ２５８７Ｃは新規な抗生物質と判断された。

次に、ＳＦ２５８７Ｃ物質の生物学的性質について述べ
る。

（１）　　ＳＦ２５８７Ｃ物質の抗菌活性：ペーパーデ
ィスク法により測定したＳＦ２５８にホしだ。

第１表　ＳＦ２５８７Ｃ物質の抗菌スペクトル濃度　　
　検定菌　　　〔阻止円直径（ｍｍ））（μｇ　／ｍｌ
）　　　　ｌ　　　　　　　２２０００　　　　　１５
．６　　　　１５．１１０００　　　　　１４．０　　
　　１４．２５００　　　　　１２．１　　　　１２．
０２５０　　　　　１０．６　　　　１１．１１、ミク
ロコツカス　ルテウス　ＡＴＣＣ９３４１（Ｍｉｃｒｏ
ｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ　ＡＴＣＣ９３４１）２、
エシェリヒア　コリ　ＮＩＨＪ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）（２）ＳＦ２５
８７Ｃ物質の細胞障害活性本発明によるＳＦ２５８７Ｃ
物質はマウス白血病細胞（ｐ−３８８）に対し細胞障害
活性を示し、その５０％阻害濃度は１４０ｎｇ／ｍｌで
あった。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではない。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を持
ちうろことは勿論のことである。

実施例種培地として、スターチ２．０％、グルコース１．０％
、小麦胚芽０．６％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粉０．２％、炭酸カルシウム０．２％
の組成からなる培地を用いた。

また、生産培地として、水飴２．０％、大豆油口１５％
、大豆粉１．０％、ファーマメディア０．５％、サング
レイン（サンダレイン社製）　０．２５％、炭酸カルシ
ウム０．１％、硫酸第一鉄（７水塩）　０．０００５％
、塩化コバルト（６水塩）　０．００００５％、及び塩
化ニッケル０．００００５％の組成からなる培地を用い
た。なお、殺菌前のｐＨは何れもｐＨ７，０に調製して
使用した。

前記の種培地２０ｍ１を分注した１００ｍ１容三角フラ
スコを１２０℃で３０分間殺菌し、これにストレプトミ
セス・エスピー・ＳＦ２５８７株（ＦＥＲＭＢＰ−２２
４４）の斜面寒天培地の２−３白金耳を接種し、２８°
Ｃで３日間振盪培養し、第一種培養とした。

ついで、種培地８０ｍ１を分注した５００ｍ　ｌ容三角
フラスコを１２０°Ｃで３０分間殺菌し、前記第一種培
養２．４ｍ　ｌを接種し、２８°Ｃで１日間振盪培養し
、これを第２種培養とした。

予め１２０°Ｃで３０分間殺菌した３５Ｌの生産培地を
含む５０Ｌ容ジヤー・ファーメンタ−４基に、前記の第
２種培養を各々３００ｍ１ずつ接種し、２８°Ｃで４日
間通気（２ＯＬ　／分）、撹はん（２５０ｒｐｍｎ）培
養した。

培養終了後、ろ過動剤として珪藻土を加えたろ過により
菌体を含む固形分を得た。

得られた固形分を６７％アセトン水６０Ｌで室温２時間
撹はん、抽出し、ろ過して固形分を除き、抽出液を得た
。その抽出液を減圧下アセトンを留去し、ＩＯＬとし、
これを酢酸エチル１５Ｌで抽出した後、酢酸エチル層を
無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧下濃縮し、８．５
ｇの油状物質を得た。得られた油状物質を珪藻土９ｇに
まぶし、−覆滅圧下乾燥後、クロロホルム−メタノール
混液で充填したシリカゲルＣ−２００（和光純薬工業社
製）４００ｍｌの塔の上にのせ、クロロホルム−メタノ
ール混液（２０：１）、次いでクロロホルム−メタノー
ル混液（１０：１）で洗浄後、クロロホルム−メタノー
ル混液（５：１）にて展開するクロマトグラフィーを行
っｔ；。展開液を、マウス白血病細胞に対する細胞障害
性の測定に付し、細胞障害性を示す分画を集め、減圧下
に濃縮乾固して、２０３ｍｇの油状物質を得た。この油
状物質をシリカゲルプレート（メルク社製）を用いた分
取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：
メタノール−５：ｌ）に付し、活性画分をクロロホルム
−メタノール混液で抽出後、減圧下溶媒を除去し、４４
ｍｇの赤黄色の粉末を得た。この粉末を少量のメタノー
ルに溶解し、メタノールにて充填したトヨパールＨＷ−
４０（ｈ−ソー社製）３００ｍｌの塔に乗せ、メタノー
ルにて展開するクロマトグラフィーを行った。展開液の
マウス白血病（Ｐ　３８８）に対する細胞障害性の測定
の結果から、活性画分を集め減圧下濃縮乾固すると、精
製されたＳＦ２５８７Ｃ物質２３．５ｍ　ｇが黄色粉末
とじて得られた。本物質は前記の理化学的性状を有する
。

〔発明の効果〕

以上説明したように、本発明によるＳＦ２５８７Ｃ物質
は、第１表に示すように、ダラム陽性並びに陰性細菌に
対して抗菌活性を示すことから、抗菌剤またはその変換
素材として用いられることが考えられる。さらに本物質
の作用特性と、その利用に関して研究した結果、細胞障
害性を示すことから、抗癌剤としての有用性が期待され
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＳＦ２５８７Ｃ物質のメタノール溶液中での
紫外部吸収スペクトル図である。第２図は、ＳＦ２５８７Ｃ物質の臭化カリウム錠での赤
外部吸収スペクトル図である。第３図は、ＳＦ２５８７Ｃ物質の重クロロホルム溶液中
での水素核核磁気共鳴スペクトル図であり、内部標準と
してテトラメチルシランを用いて測定したものである。第４図は、ＳＦ２５８７Ｃ物質の重クロロホルム溶液中
での炭素核核磁気共鳴スペクトル図であり、内部標準としてテトラメチルシランを用いて測定したも
のである。出願人明治製菓株式

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学性質を有する新規抗生物質ＳＦ２５
８７Ｃ物質。（イ）分子量５７５（ＥＩＭＳ、ｍ／ｚ５７５、Ｍ＾＋）（ロ）分子
式Ｃ＿３＿３Ｈ＿３＿７ＮＯ＿８（ハ）元素分析値炭素６８．５３水素６．５０窒素２．３７％（ニ）融点１７５〜１７８℃ （ホ）比旋光度［α］＾２＾５＿Ｄ＝＋５８．２゜（ｃ０．１、メタノ
ール）（ヘ）紫外部吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定したスペクトルは第１図に示す通りである。（ト）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠で測定したスペクトルは第２図に示す通りである。（チ）水素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム溶液中で測定した４００ＭＨｚ水素核核磁気共鳴スペクトルは第３図に示す通りである。（リ）炭素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム溶液中で測定した１００ＭＨｚ炭素核核磁気共鳴スペクトルは第４図に示す通りである。（ヌ）溶解性：クロロホルム、アセトン、メタノール及びエタノールに易溶。酢酸エチル及びジエチルエーテルに難溶。ｎ−ヘキサン及び水に不溶。（ル）呈色反応：過マンガン酸カリウム、１０％硫酸及びリンモリブデン酸試薬に陽性。ニンヒドリン試薬に陰性。（ツ）薄層クロマトグラフィー：メルク社製シリカゲル薄層（Ａｒｔ５７１４）を使用し、展開溶媒がクロロホルム−メタノール（１０：１）の場合、Ｒｆ０．２０、展開溶媒がｎ−ブタノール−メタノール−水（４：１：２）の場合、Ｒｆ０．４
１。（ワ）外観：黄色粉末
（２）ストレプトミセス属に属し、ＳＦ２５８７Ｃ物質
を生産しうる菌を培養し、その培養物からＳＦ２５８７Ｃ物質を採取することを特徴とする新規抗生物質ＳＦ２５８７Ｃ物質またはその塩の製造法。