JP3036923B2 - デプシペプチドａ、ｂその製造方法、並びに抗ウイルス剤及び抗菌剤 - Google Patents
デプシペプチドａ、ｂその製造方法、並びに抗ウイルス剤及び抗菌剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗生物質デプシペプチド
及びその製造方法に関する。また、本発明は該抗生物質
を有効成分として含有する抗ウイルス剤並びに、抗菌剤
に関する。
及びその製造方法に関する。また、本発明は該抗生物質
を有効成分として含有する抗ウイルス剤並びに、抗菌剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、種々のウイルスにより惹起される
エイズや肝炎等の疾患が増加傾向にあることが指摘され
ている。これらのウイルス性疾患の治療には、例えばア
ジドチミジン等の抗ウイルス剤が使用されるが、いずれ
も抗ウイルス作用が充分ではなく、また毒性が強いとい
う問題があった。
エイズや肝炎等の疾患が増加傾向にあることが指摘され
ている。これらのウイルス性疾患の治療には、例えばア
ジドチミジン等の抗ウイルス剤が使用されるが、いずれ
も抗ウイルス作用が充分ではなく、また毒性が強いとい
う問題があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するため
の手段】本発明者は、抗ウイルス作用に優れた抗ウイル
ス剤を提供することを目的として、土壌より分離された
微生物により産生される抗生物質を検索するうちに、特
に抗ウイルス作用に優れた抗生物質としてデプシペプチ
ドＡ及びＢを見出し、本発明を完成するに至った。ま
た、本発明者はデプシペプチドＡ及びＢが優れた抗菌作
用並びに抗腫瘍作用を有することを見出し、本発明を完
成した。すなわち本発明は、抗生物質デプシペプチドＡ
及びＢ、抗生物質デプシペプチドＡ及びＢの製造方法、
抗生物質デプシペプチドＡまたはＢを有効成分として含
有する抗ウイルス剤並びに抗菌剤、を提供するものであ
る。
の手段】本発明者は、抗ウイルス作用に優れた抗ウイル
ス剤を提供することを目的として、土壌より分離された
微生物により産生される抗生物質を検索するうちに、特
に抗ウイルス作用に優れた抗生物質としてデプシペプチ
ドＡ及びＢを見出し、本発明を完成するに至った。ま
た、本発明者はデプシペプチドＡ及びＢが優れた抗菌作
用並びに抗腫瘍作用を有することを見出し、本発明を完
成した。すなわち本発明は、抗生物質デプシペプチドＡ
及びＢ、抗生物質デプシペプチドＡ及びＢの製造方法、
抗生物質デプシペプチドＡまたはＢを有効成分として含
有する抗ウイルス剤並びに抗菌剤、を提供するものであ
る。
【０００４】抗生物質デプシペプチドＡは下記の構造式
で示される抗生物質であり、以下の理化学的性質を有す
る物質である。
で示される抗生物質であり、以下の理化学的性質を有す
る物質である。
【０００５】
【化３】
【０００６】 性状： 黄橙色結晶 融点： ２０３−２２０℃ 分子式： C47H57N7O11 分子量（ＳＩ−ＭＳ、ｍ／ｚ）： ８９６ （ＭＨ+ ） 元素分析： C:60.17% H:6.24% N:10.44% 比旋光度： [ α ]22 D ＝ ＋２７０°（ｃ 0.45 クロ
ロホルム） 紫外線吸収スペクトル（1% 1,4−ジオキサン−H2O)：λ
max nm（ε）＝ 257(16,110), 354(sh37,321), 369(49,
225), 387(43,855) 赤外線吸収スペクトル：3350、1730、1620、1590、150
0、1430、1250、1100、1000 溶解性：クロロホルム、ジメチルスルホキシドに易溶 メタノールに難溶 水に不溶 酸加水分解： アラニン、プロリン、フェニルアラニ
ン、セリン、Ｎ−メチルアラニン、４−メチルプロリン また、抗生物質デプシペプチドＢは下記の構造式で示さ
れる抗生物質であり、以下の理化学的性質を有する物質
である。
ロホルム） 紫外線吸収スペクトル（1% 1,4−ジオキサン−H2O)：λ
max nm（ε）＝ 257(16,110), 354(sh37,321), 369(49,
225), 387(43,855) 赤外線吸収スペクトル：3350、1730、1620、1590、150
0、1430、1250、1100、1000 溶解性：クロロホルム、ジメチルスルホキシドに易溶 メタノールに難溶 水に不溶 酸加水分解： アラニン、プロリン、フェニルアラニ
ン、セリン、Ｎ−メチルアラニン、４−メチルプロリン また、抗生物質デプシペプチドＢは下記の構造式で示さ
れる抗生物質であり、以下の理化学的性質を有する物質
である。
【０００７】
【化４】
【０００８】 性状： 黄橙色結晶 融点： １８２−１９０℃ 分子式： C46H55N7O11 分子量（ＳＩ−ＭＳ、ｍ／ｚ）： ８８２ （ＭＨ+ ） 元素分析： C:60.08% H:6.14% N:10.88% 比旋光度： [ α ]22 D ＝ ＋２１１°（ｃ 0.45 クロ
ロホルム） 紫外線吸収スペクトル（1% 1,4−ジオキサン−H2O)：λ
max nm（ε）＝ 257(15,417), 354(sh33,478), 369(45,
503), 387(40,526) 赤外線吸収スペクトル：3300、1730、1650、1640、155
0、1500、1440、1350、1250、1100、1000 溶解性：クロロホルム、ジメチルスルホキシドに易溶 メタノールに難溶 水に不溶 酸加水分解： アラニン、プロリン（２）、フェニルア
ラニン、セリン、Ｎ−メチルアラニン、 抗生物質デプシペプチドＡ及びＢは、山形県鶴岡市から
採取された土壌から分離されたストレプトミセス属に属
する微生物であるＲＫ−１０５１菌を培養して得られた
培養物から単離された。ＲＫ−１０５１菌は以下の菌学
的性質を有する微生物である。 1. 形態学的特徴 本菌株を、１％酵母エキス及び１％グルコースを含む液
体培地で培養し、この菌体を６Ｎ塩酸を用いて１１０℃
で１８時間加水分解したを薄層クロマトグラフィーで分
析すると、L,L-ジアミノピメリン酸を検出した。寒天平
板培地上に発育させたものの顕微鏡写真では、気菌糸は
螺旋状を呈していた。疑似胞子嚢の形成が認められた。 2. 各種培地上における成育状態（２７℃で２０日間培
養、色調はカラーハーモニーマニュアル．米国コンテナ
ー社による） (1) スターチ・イースト寒天培地 発育： 良好 気菌糸： 豊富 気菌糸色調：アッシュ（5fe) 裏面色調： ダークオリーブ(1・1/2nl) 可溶性色素：なし (2) イーストエキス・モルトエキス寒天培地 発育： 良好 気菌糸： 豊富 気菌糸色調：コバートグレー(2fe) 裏面色調： ダスティ イエロー(1・1/2gc) 可溶性色素：なし (3) オートミール寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：ベージュ グレー(3ih) 裏面色調： ダーク ブラウン(4nl) 可溶性色素：なし (4) スターチ・無機塩寒天培地 発育： 普通 気菌糸： 少ない 気菌糸色調：ベージュ グレー(3ih) 裏面色調： ダーク ブラウン(4nl) 可溶性色素：なし (5) 蔗糖硝酸塩寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 無し 気菌糸色調：− 裏面色調： 無色 可溶性色素：なし (6) グルコース・アスパラギン寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 豊富 気菌糸色調：ベージュグレー(3ih) 裏面色調： ダークオリーブ(1・1/2nl) 可溶性色素：なし (7) グリセロール・アスパラギン寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：白色 裏面色調： 無色 可溶性色素：なし (8) Ｖ８ジュース寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：白 裏面色調： マスタード・ゴールド(2ne) 可溶性色素：なし (9) ジャガイモ・ニンジン寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：白 裏面色調： 無色 可溶性色素：なし 3. 糖の利用 D-グルコース 発育：良い D-フルクトース 発育：普通 L-ラムノース 発育：しない ラフィノース 発育：良い D-キシロース 発育：普通 L-アラビノース 発育：良い 蔗糖 発育：良い イノシトール 発育：良い D-マンニトール 発育：良い 上記の諸性質により、ＲＫ−１０５１菌はストレプトミ
セス（Streptomyces）属に属する微生物であることが明
らかである。尚、ＲＫ−１０５１菌は工業技術院微生物
工業技術研究所に平成２年７月24日付けで受託番号微工
研菌寄第１１６２４号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１６２４）と
して寄託されている。
ロホルム） 紫外線吸収スペクトル（1% 1,4−ジオキサン−H2O)：λ
max nm（ε）＝ 257(15,417), 354(sh33,478), 369(45,
503), 387(40,526) 赤外線吸収スペクトル：3300、1730、1650、1640、155
0、1500、1440、1350、1250、1100、1000 溶解性：クロロホルム、ジメチルスルホキシドに易溶 メタノールに難溶 水に不溶 酸加水分解： アラニン、プロリン（２）、フェニルア
ラニン、セリン、Ｎ−メチルアラニン、 抗生物質デプシペプチドＡ及びＢは、山形県鶴岡市から
採取された土壌から分離されたストレプトミセス属に属
する微生物であるＲＫ−１０５１菌を培養して得られた
培養物から単離された。ＲＫ−１０５１菌は以下の菌学
的性質を有する微生物である。 1. 形態学的特徴 本菌株を、１％酵母エキス及び１％グルコースを含む液
体培地で培養し、この菌体を６Ｎ塩酸を用いて１１０℃
で１８時間加水分解したを薄層クロマトグラフィーで分
析すると、L,L-ジアミノピメリン酸を検出した。寒天平
板培地上に発育させたものの顕微鏡写真では、気菌糸は
螺旋状を呈していた。疑似胞子嚢の形成が認められた。 2. 各種培地上における成育状態（２７℃で２０日間培
養、色調はカラーハーモニーマニュアル．米国コンテナ
ー社による） (1) スターチ・イースト寒天培地 発育： 良好 気菌糸： 豊富 気菌糸色調：アッシュ（5fe) 裏面色調： ダークオリーブ(1・1/2nl) 可溶性色素：なし (2) イーストエキス・モルトエキス寒天培地 発育： 良好 気菌糸： 豊富 気菌糸色調：コバートグレー(2fe) 裏面色調： ダスティ イエロー(1・1/2gc) 可溶性色素：なし (3) オートミール寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：ベージュ グレー(3ih) 裏面色調： ダーク ブラウン(4nl) 可溶性色素：なし (4) スターチ・無機塩寒天培地 発育： 普通 気菌糸： 少ない 気菌糸色調：ベージュ グレー(3ih) 裏面色調： ダーク ブラウン(4nl) 可溶性色素：なし (5) 蔗糖硝酸塩寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 無し 気菌糸色調：− 裏面色調： 無色 可溶性色素：なし (6) グルコース・アスパラギン寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 豊富 気菌糸色調：ベージュグレー(3ih) 裏面色調： ダークオリーブ(1・1/2nl) 可溶性色素：なし (7) グリセロール・アスパラギン寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：白色 裏面色調： 無色 可溶性色素：なし (8) Ｖ８ジュース寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：白 裏面色調： マスタード・ゴールド(2ne) 可溶性色素：なし (9) ジャガイモ・ニンジン寒天培地 発育： 良い 気菌糸： 多い 気菌糸色調：白 裏面色調： 無色 可溶性色素：なし 3. 糖の利用 D-グルコース 発育：良い D-フルクトース 発育：普通 L-ラムノース 発育：しない ラフィノース 発育：良い D-キシロース 発育：普通 L-アラビノース 発育：良い 蔗糖 発育：良い イノシトール 発育：良い D-マンニトール 発育：良い 上記の諸性質により、ＲＫ−１０５１菌はストレプトミ
セス（Streptomyces）属に属する微生物であることが明
らかである。尚、ＲＫ−１０５１菌は工業技術院微生物
工業技術研究所に平成２年７月24日付けで受託番号微工
研菌寄第１１６２４号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１６２４）と
して寄託されている。
【０００９】本発明のデプシペプチドＡ及びＢは、上記
の菌株を栄養源含有培地に接種し、好気的に培養するこ
とにより製造される。デプシペプチドＡ及びＢの生産菌
としては上記の菌株に限らず、ストレプトミセス属に属
しデプシペプチドＡ及び／又はＢを生産する能力を有す
るものであれば、すべて本発明に使用できる。上記微生
物の培養方法は原則的には一般の微生物の培養方法に準
ずるが、通常は液体培養による振盪培養法、通気攪拌培
養法で行うのが好適である。培養に用いられる培地とし
てはストレプトミセス属に属する微生物が利用できる栄
養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、半
合成培地、天然培地等のいずれも用いることができる。
培地組成としては炭素源としてのグルコース、シューク
ロース、フルクトース、グリセリン、デキストリン、澱
粉、糖蜜、コーン・スティープリカー、有機酸等を単独
または組み合わせて使用できる。窒素源としてはペプト
ン、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ
酸、尿素等の有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモ
ニウム等の無機窒素源を単独または組み合わせて使用で
きる。ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リ
ン酸塩、その他の重金属等も必要に応じて添加使用され
る。なお培養中発泡の著しいときにはアデカノールやシ
リコーンオイル等の公知の消泡剤を適宜培地中に添加す
ることもできる。培地のpHは微生物の至適pH範囲、通常
中性付近とするのが望ましい。培地温度は微生物が良好
に発育する温度、通常２０〜３０℃、好ましくは２８℃
付近に保つのがよい。培養時間は一般に３〜６日程度で
ある。上記の培養によってデプシペプチドＡ及びＢが培
地中に蓄積されるが、これらの培養条件は使用される微
生物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更するこ
とができる。
の菌株を栄養源含有培地に接種し、好気的に培養するこ
とにより製造される。デプシペプチドＡ及びＢの生産菌
としては上記の菌株に限らず、ストレプトミセス属に属
しデプシペプチドＡ及び／又はＢを生産する能力を有す
るものであれば、すべて本発明に使用できる。上記微生
物の培養方法は原則的には一般の微生物の培養方法に準
ずるが、通常は液体培養による振盪培養法、通気攪拌培
養法で行うのが好適である。培養に用いられる培地とし
てはストレプトミセス属に属する微生物が利用できる栄
養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、半
合成培地、天然培地等のいずれも用いることができる。
培地組成としては炭素源としてのグルコース、シューク
ロース、フルクトース、グリセリン、デキストリン、澱
粉、糖蜜、コーン・スティープリカー、有機酸等を単独
または組み合わせて使用できる。窒素源としてはペプト
ン、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ
酸、尿素等の有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモ
ニウム等の無機窒素源を単独または組み合わせて使用で
きる。ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リ
ン酸塩、その他の重金属等も必要に応じて添加使用され
る。なお培養中発泡の著しいときにはアデカノールやシ
リコーンオイル等の公知の消泡剤を適宜培地中に添加す
ることもできる。培地のpHは微生物の至適pH範囲、通常
中性付近とするのが望ましい。培地温度は微生物が良好
に発育する温度、通常２０〜３０℃、好ましくは２８℃
付近に保つのがよい。培養時間は一般に３〜６日程度で
ある。上記の培養によってデプシペプチドＡ及びＢが培
地中に蓄積されるが、これらの培養条件は使用される微
生物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更するこ
とができる。
【００１０】上記の培養により生産されるデプシペプチ
ドＡ及びＢの単離は、培地中に抗生物質デプシペプチド
Ａ及び／又はＢが蓄積された後、好ましくは蓄積が最大
になる時に、醗酵生産物を採取する一般的方法に準じ
て、例えば塩析法、抽出法、各種ゲルクロマトグラフィ
ー、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラ
フィー等の各種手段を単独または組み合わせて実施され
る。尚、デプシペプチドＡ及び／又はＢの蓄積はバイオ
アッセイ法等により検出すればよい。より具体的には、
上記培養により生産される抗生物質デプシペプチドＡ及
びＢは菌体内と培地中の両方に存在するので、濾過、遠
心分離等の手段で培養濾液と菌体固形分とを分離した後
に、菌体固形分からメタノール、アセトン等の溶剤を用
いてデプシペプチドＡ及び／又はＢを抽出し、さらに有
機溶剤を除去した水溶液を酢酸エチル、クロロホルム等
で抽出して目的物を含有する抽出液を得ればよい。さら
に培養液中からは酢酸エチル抽出等の方法により目的物
を含有する抽出液を得ればよい。ついで目的物を含有す
る抽出液を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー、セファデックスＬＨ−２０カラム等を用いたク
ロマトグラフィー等により精製すればよい。また、デプ
シペプチドＡ及びＢの分離は、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィーあるいはＨＰＬＣ等の方法により効率的に
行うことができる。
ドＡ及びＢの単離は、培地中に抗生物質デプシペプチド
Ａ及び／又はＢが蓄積された後、好ましくは蓄積が最大
になる時に、醗酵生産物を採取する一般的方法に準じ
て、例えば塩析法、抽出法、各種ゲルクロマトグラフィ
ー、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラ
フィー等の各種手段を単独または組み合わせて実施され
る。尚、デプシペプチドＡ及び／又はＢの蓄積はバイオ
アッセイ法等により検出すればよい。より具体的には、
上記培養により生産される抗生物質デプシペプチドＡ及
びＢは菌体内と培地中の両方に存在するので、濾過、遠
心分離等の手段で培養濾液と菌体固形分とを分離した後
に、菌体固形分からメタノール、アセトン等の溶剤を用
いてデプシペプチドＡ及び／又はＢを抽出し、さらに有
機溶剤を除去した水溶液を酢酸エチル、クロロホルム等
で抽出して目的物を含有する抽出液を得ればよい。さら
に培養液中からは酢酸エチル抽出等の方法により目的物
を含有する抽出液を得ればよい。ついで目的物を含有す
る抽出液を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー、セファデックスＬＨ−２０カラム等を用いたク
ロマトグラフィー等により精製すればよい。また、デプ
シペプチドＡ及びＢの分離は、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィーあるいはＨＰＬＣ等の方法により効率的に
行うことができる。
【００１１】デプシペプチドＡ及びＢの急性毒性（ＬＤ
50、腹腔内投与）は、ＩＣＲマウスを用いた場合にいず
れも２００mg/kg であり毒性が低い。また、デプシペプ
チドＡ及びＢは抗ウイルス作用及び抗菌作用、を有する
ので、デプシペプチドＡまたはＢを有効成分として含む
医薬組成物は抗ウイルス剤及び抗菌剤、として有用であ
る。医薬組成物としては、経口投与用の医薬組成物とし
て錠剤、カプセル剤、散剤、非経口投与用の医薬組成物
として注射剤、座剤、外用剤等を例示することができ
る。医薬組成物を製造するにあたっては経口剤及び座剤
にあっては賦形剤（乳糖、D-マンニトール、澱粉、結晶
セルロース等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロー
ス、カルボキシメチルセルロースカルシウム等）、結合
剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、滑沢
剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク等）コーティン
グ剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖
等）、基剤（ポリエチレングリコール、ハードファット
等）等の製剤成分が、注射剤あるいは点眼、点耳剤にあ
っては溶解剤ないし溶解補助剤（注射用蒸留水、生理食
塩水、プロピレングリコール等）、pH調節剤（無機又は
有機の酸あるいは塩基）、等張化剤、安定化剤等の製剤
成分が、外用剤にあっては軟膏剤、クリーム剤、貼付剤
として適切な製剤成分（白色ワセリン、マクロゴール、
グリセリン等）が使用される一般にデプシペプチドＡ又
はＢとして経口投与の場合には１日量１〜5,000 mg、好
ましくは１０〜1,000 mgを１日あたり２〜５回に分けて
投与すればよいが、投与量は投与経路、治療の対象とな
る疾患、症状等により適宜増減されるべきである。
50、腹腔内投与）は、ＩＣＲマウスを用いた場合にいず
れも２００mg/kg であり毒性が低い。また、デプシペプ
チドＡ及びＢは抗ウイルス作用及び抗菌作用、を有する
ので、デプシペプチドＡまたはＢを有効成分として含む
医薬組成物は抗ウイルス剤及び抗菌剤、として有用であ
る。医薬組成物としては、経口投与用の医薬組成物とし
て錠剤、カプセル剤、散剤、非経口投与用の医薬組成物
として注射剤、座剤、外用剤等を例示することができ
る。医薬組成物を製造するにあたっては経口剤及び座剤
にあっては賦形剤（乳糖、D-マンニトール、澱粉、結晶
セルロース等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロー
ス、カルボキシメチルセルロースカルシウム等）、結合
剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、滑沢
剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク等）コーティン
グ剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖
等）、基剤（ポリエチレングリコール、ハードファット
等）等の製剤成分が、注射剤あるいは点眼、点耳剤にあ
っては溶解剤ないし溶解補助剤（注射用蒸留水、生理食
塩水、プロピレングリコール等）、pH調節剤（無機又は
有機の酸あるいは塩基）、等張化剤、安定化剤等の製剤
成分が、外用剤にあっては軟膏剤、クリーム剤、貼付剤
として適切な製剤成分（白色ワセリン、マクロゴール、
グリセリン等）が使用される一般にデプシペプチドＡ又
はＢとして経口投与の場合には１日量１〜5,000 mg、好
ましくは１０〜1,000 mgを１日あたり２〜５回に分けて
投与すればよいが、投与量は投与経路、治療の対象とな
る疾患、症状等により適宜増減されるべきである。
【００１２】
【実施例】以下に本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されること
はない。 例１ 放線菌ＲＫ−１０５１株を用いたデプシペプチド
Ａの製造 放線菌ＲＫ−１０５１株を３０リットルジャーファーメ
ンターで１８リットルの培地（グルコース２０ｇ、スタ
ーチ１０ｇ、肉エキス１ｇ、乾燥酵母４ｇ、食塩２ｇ、
大豆粉２５ｇ、水１リットル、pH7.３）によって培養
後、遠心分離により菌体と培養上清に分離した。菌体は
１０リットルの７０％アセトン溶液に一晩漬けて溶菌さ
せた後、残渣を遠心分離により除去した。アセトン溶液
を減圧濃縮により水溶液とした後に培養上清と合わせ
た。これを等量の酢酸エチルで抽出すると活性成分は酢
酸エチル層に回収された。溶剤を減圧濃縮した後にシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーに付した（カラム径１
２cm×長さ６０cm）。クロロホルム・メタノール（２
０：１）の溶媒系で洗浄後、順次メタノールの比率を上
げ、２０：１→１０：１→５：１とした。得られた活性
成分を濃縮後、ＯＤＳカラムクロマトグラフィーに付し
た（カラム径８cm×長さ４０cm）。メタノール６０％の
溶媒系から順次メタノールの比率を１００％まで上げる
と活性画分が溶出された。メタノール８０％で溶出され
た画分から約２５mgのデプシペプチドＡの粗結晶が得ら
れた。
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されること
はない。 例１ 放線菌ＲＫ−１０５１株を用いたデプシペプチド
Ａの製造 放線菌ＲＫ−１０５１株を３０リットルジャーファーメ
ンターで１８リットルの培地（グルコース２０ｇ、スタ
ーチ１０ｇ、肉エキス１ｇ、乾燥酵母４ｇ、食塩２ｇ、
大豆粉２５ｇ、水１リットル、pH7.３）によって培養
後、遠心分離により菌体と培養上清に分離した。菌体は
１０リットルの７０％アセトン溶液に一晩漬けて溶菌さ
せた後、残渣を遠心分離により除去した。アセトン溶液
を減圧濃縮により水溶液とした後に培養上清と合わせ
た。これを等量の酢酸エチルで抽出すると活性成分は酢
酸エチル層に回収された。溶剤を減圧濃縮した後にシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーに付した（カラム径１
２cm×長さ６０cm）。クロロホルム・メタノール（２
０：１）の溶媒系で洗浄後、順次メタノールの比率を上
げ、２０：１→１０：１→５：１とした。得られた活性
成分を濃縮後、ＯＤＳカラムクロマトグラフィーに付し
た（カラム径８cm×長さ４０cm）。メタノール６０％の
溶媒系から順次メタノールの比率を１００％まで上げる
と活性画分が溶出された。メタノール８０％で溶出され
た画分から約２５mgのデプシペプチドＡの粗結晶が得ら
れた。
【００１３】Ｂの製造法 最後の「メタノール８０％で溶出された画分から約２５
mgのデプシペプチドＡの粗結晶が得られた。」の後に続
けて、その画分に連続してデプシペプチドＢを含む画分
が得られたが、これにはデプシペプチドＡも共存するた
め、両者をＨＰＬＣ（カラム：センシューパックＮ溶
媒：メタノール・アセトニトリル・水・0.１Ｍジエチル
アミン緩衝液（ギ酸でＰＨ7.０に調整）＝７：0.５：1.
５：１）で分離した。
mgのデプシペプチドＡの粗結晶が得られた。」の後に続
けて、その画分に連続してデプシペプチドＢを含む画分
が得られたが、これにはデプシペプチドＡも共存するた
め、両者をＨＰＬＣ（カラム：センシューパックＮ溶
媒：メタノール・アセトニトリル・水・0.１Ｍジエチル
アミン緩衝液（ギ酸でＰＨ7.０に調整）＝７：0.５：1.
５：１）で分離した。
【００１４】１８リットルの培養液から得られるデプシ
ペプチドＡとＢの比率は、全体で約２０：１であり、Ａ
が１０６mgでＢが５mg得られた。 例２ デプシペプチドＡの抗ファージ活性 パクテリアを宿主として増殖するウイルスであるバクテ
リオファージとして、放線菌ストレプトミセス・グリセ
ウスを溶菌するファージＢを用いて以下の実験を行っ
た。実験方法：水１リットル当たり普通ブイヨン（栄研
製）１８g 、酵母エキス（ディフコ社製）２g 、寒天１
５g を成分とする寒天平板を作成し、その上層にストレ
プトミセス・グリセウスとファージＢを同一培地にて重
層した。検定試料を８mm径のペーパーディスクに含浸さ
せて寒天平板上に置いた。28℃で48時間インキュベート
した後に、ペーパーディスクの周辺にファージプラーク
を阻止した放線菌の成育の有無を判定した。 結果： デプシペプチドＡの濃度（μｇ／ディスク） 160 80 40 20 10 5 2.5 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋ − − ＋は抗ファージ活性の強さを示す ＋＋＋： 放線菌の成育が良く、プラークは無い ＋： プラークの数が有意に減少している −： 抗ファージ活性無し 例３ デプシペプチドＢの抗ファージ活性 160 80 40 20 10 5 2.5 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ± − − 例４ デプシペプチドＡ及びＢの抗菌活性 実験方法： ギャンディダ・アルビカンスはサブロー培
地で、ピリキュリア・オリゼ、はポテトシュークロース
培地で、細菌（エシェリヒア・コリ、スタフィロコッカ
ス・アウレウスシュードモナス・エルギノサ）は栄養培
地でそれぞれ培養した。
ペプチドＡとＢの比率は、全体で約２０：１であり、Ａ
が１０６mgでＢが５mg得られた。 例２ デプシペプチドＡの抗ファージ活性 パクテリアを宿主として増殖するウイルスであるバクテ
リオファージとして、放線菌ストレプトミセス・グリセ
ウスを溶菌するファージＢを用いて以下の実験を行っ
た。実験方法：水１リットル当たり普通ブイヨン（栄研
製）１８g 、酵母エキス（ディフコ社製）２g 、寒天１
５g を成分とする寒天平板を作成し、その上層にストレ
プトミセス・グリセウスとファージＢを同一培地にて重
層した。検定試料を８mm径のペーパーディスクに含浸さ
せて寒天平板上に置いた。28℃で48時間インキュベート
した後に、ペーパーディスクの周辺にファージプラーク
を阻止した放線菌の成育の有無を判定した。 結果： デプシペプチドＡの濃度（μｇ／ディスク） 160 80 40 20 10 5 2.5 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋ − − ＋は抗ファージ活性の強さを示す ＋＋＋： 放線菌の成育が良く、プラークは無い ＋： プラークの数が有意に減少している −： 抗ファージ活性無し 例３ デプシペプチドＢの抗ファージ活性 160 80 40 20 10 5 2.5 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ± − − 例４ デプシペプチドＡ及びＢの抗菌活性 実験方法： ギャンディダ・アルビカンスはサブロー培
地で、ピリキュリア・オリゼ、はポテトシュークロース
培地で、細菌（エシェリヒア・コリ、スタフィロコッカ
ス・アウレウスシュードモナス・エルギノサ）は栄養培
地でそれぞれ培養した。
【００１５】デプシペプチドＡまたはＢを含む各培地で
希釈系列を作成し、寒天平板とした。これに真菌と細菌
を塗布し、真菌は２８℃で４８時間、細菌は３７℃で２
４時間培養した後、菌の成育の有無を判定して最小発育
阻止濃度（MIC,μg/ml) を決定した。 結果： 菌 種 テ゛フ゜シヘ゜フ゜チト゛ テ゛フ゜シヘ゜フ゜チト゛ セフタシ゛シ゛ン Ａ Ｂ スタフィロコッカス オーレウス (Staphylococcus aureus) FDA 209P 12.5 ＞100 25 スタフィロコッカス オーレウス (Staphylococcus aureus) スミス 25 ＞100 3.13 スタフィロコッカス オーレウス (Staphylococcus aureus)JS-1 MRSA 25 ＞100 50 スタフィロコッカス ピオジェネス (Staphylococcus pyogenes) クック 3.13 100 0.2 ストレプトコッカス フェカリス (Streptococcus faecalis)1373 25 ＞100 25 エッシェリヒア コリ (Escherichia coli)NIHJ JC-2 ＞100 ＞100 0.2 エッシェリヒア コリ (Escherichia coli)4704 ＞100 ＞100 0.1 シュードモナス エルギノサ (Pseudomonas aeruginosa)PAO-1 ＞100 ＞100 0.78 ピリキュラリア オリゼ (Pyricularia oryzae)IFO 5994 ＞100 ＞100 ＞100 キャンディダ アルビカンス (Candida albicans)IFO 1594 ＞100 ＞100 ＞100
希釈系列を作成し、寒天平板とした。これに真菌と細菌
を塗布し、真菌は２８℃で４８時間、細菌は３７℃で２
４時間培養した後、菌の成育の有無を判定して最小発育
阻止濃度（MIC,μg/ml) を決定した。 結果： 菌 種 テ゛フ゜シヘ゜フ゜チト゛ テ゛フ゜シヘ゜フ゜チト゛ セフタシ゛シ゛ン Ａ Ｂ スタフィロコッカス オーレウス (Staphylococcus aureus) FDA 209P 12.5 ＞100 25 スタフィロコッカス オーレウス (Staphylococcus aureus) スミス 25 ＞100 3.13 スタフィロコッカス オーレウス (Staphylococcus aureus)JS-1 MRSA 25 ＞100 50 スタフィロコッカス ピオジェネス (Staphylococcus pyogenes) クック 3.13 100 0.2 ストレプトコッカス フェカリス (Streptococcus faecalis)1373 25 ＞100 25 エッシェリヒア コリ (Escherichia coli)NIHJ JC-2 ＞100 ＞100 0.2 エッシェリヒア コリ (Escherichia coli)4704 ＞100 ＞100 0.1 シュードモナス エルギノサ (Pseudomonas aeruginosa)PAO-1 ＞100 ＞100 0.78 ピリキュラリア オリゼ (Pyricularia oryzae)IFO 5994 ＞100 ＞100 ＞100 キャンディダ アルビカンス (Candida albicans)IFO 1594 ＞100 ＞100 ＞100
【図１】デプシペプチドＡの赤外線吸収スペクトルを示
す図である。
す図である。
【図２】デプシペプチドＢの赤外線吸収スペクトルを示
す図である。
す図である。
【図３】デプシペプチドＡの紫外線吸収スペクトルを示
す図である。
す図である。
【図４】デプシペプチドＢの紫外線吸収スペクトルを示
す図である。
す図である。
【図５】デプシペプチドＡのＮＭＲスペクトルを示す図
である。
である。
【図６】デプシペプチドＢのＮＭＲスペクトルを示す図
である。
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 1/00 - 19/00 A61P 31/04 A61P 31/12 C12P 1/00 - 41/00 C12N 1/00 - 1/38 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (8)
- 【請求項１】 下記の式で示される抗生物質デプシペプ
チドＡ。 【化１】 - 【請求項２】 下記の式で示される抗生物質デプシペプ
チドＢ。 【化２】 - 【請求項３】 ストレプトミセス属に属するデプシペプ
チドＡ生産菌を培養し、培養物からデプシペプチドＡを
採取することを特徴とする、請求項１記載のデプシペプ
チドＡの製造方法。 - 【請求項４】 ストレプトミセス属に属するデプシペプ
チドＢ生産菌を培養し、培養物からデプシペプチドＢを
採取することを特徴とする、請求項２記載のデプシペプ
チドＢの製造方法。 - 【請求項５】 請求項１記載のデプシペプチドＡを有効
成分として含む抗ウイルス剤。 - 【請求項６】 請求項２記載のデプシペプチドＢを有効
成分として含む抗ウイルス剤。 - 【請求項７】 請求項１記載のデプシペプチドＡを有効
成分として含む抗菌剤。 - 【請求項８】 請求項２記載のデプシペプチドＢを有効
成分として含む抗菌剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3281352A JP3036923B2 (ja) | 1991-10-28 | 1991-10-28 | デプシペプチドａ、ｂその製造方法、並びに抗ウイルス剤及び抗菌剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3281352A JP3036923B2 (ja) | 1991-10-28 | 1991-10-28 | デプシペプチドａ、ｂその製造方法、並びに抗ウイルス剤及び抗菌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05117298A JPH05117298A (ja) | 1993-05-14 |
| JP3036923B2 true JP3036923B2 (ja) | 2000-04-24 |
Family
ID=17637918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3281352A Expired - Fee Related JP3036923B2 (ja) | 1991-10-28 | 1991-10-28 | デプシペプチドａ、ｂその製造方法、並びに抗ウイルス剤及び抗菌剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3036923B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016111574A1 (ko) * | 2015-01-09 | 2016-07-14 | 한국생명공학연구원 | 신규한 고리형 뎁시펩타이드계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY110603A (en) * | 1993-05-27 | 1998-08-29 | Novartis Ag | Tetrahydropyran derivatives |
| MX9801792A (es) * | 1995-09-07 | 1998-07-31 | Upjohn Co | Inhibidores cicloantihelminticos. |
| DE10146104A1 (de) | 2001-09-19 | 2003-04-03 | Bayer Ag | Antibakterielle Markrozyklen |
-
1991
- 1991-10-28 JP JP3281352A patent/JP3036923B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016111574A1 (ko) * | 2015-01-09 | 2016-07-14 | 한국생명공학연구원 | 신규한 고리형 뎁시펩타이드계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물 |
| KR101671325B1 (ko) | 2015-01-09 | 2016-11-02 | 한국생명공학연구원 | 신규한 고리형 뎁시펩타이드계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05117298A (ja) | 1993-05-14 |
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Legal Events
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