JPH05247018A - 抗生物質１０６−ｂ、その製造方法、抗生物質１０６−ｂを有効成分とする抗菌剤および抗生物質１０６−ｂを有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 抗腫瘍活性を有し、かつグラム陽性菌および
グラム陰性菌に対して抗菌力を有する新規な抗生物質を
提供する。 【構成】 ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属する抗生物質１０６−Ｂ生産菌を培養し、
その培養物から抗生物質１０６−Ｂを分離、採取して、
下記の平面構造式で表される抗生物質１０６−Ｂを製造
する方法、抗生物質１０６−Ｂそれ自体ならびに抗生物
質１０６−Ｂを含有する抗菌剤または抗腫瘍剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な抗生物質、その
製造方法、その抗生物質を有効成分とする抗菌剤および
その抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、各種の抗生物質が発見、開発
されているが、抗生物質は、使用を継続すると、被使用
菌に使用抗生物質に対する耐性が生じるという問題があ
る。また、癌（がん）などの腫瘍も、抗生物質の使用を
継続すると、使用抗生物質に対して耐性が生じるように
なる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】そのため、常に新しい
抗生物質の出現が望まれている。特に抗腫瘍活性を有す
る新規抗生物質の出現が望まれている。

【０００４】したがって、本発明は、抗腫瘍活性を有す
る新規な抗生物質を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）Ｋ１０６（微
工研菌寄第１２７０１号）が、抗腫瘍活性を有し、かつ
グラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して抗菌力を有す
る新規な抗生物質１０６−Ｂを生産することを見出し、
本発明を完成するにいたった。

【０００６】上記ストレプトマイセスＫ１０６は、本発
明者らが大阪府堺市で採取した土壌試料中より発見した
微生物であり、通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されていて、その微生物受託番号は、前記の
ように微工研菌寄第１２７０１号である。

【０００７】本発明の抗生物質１０６−Ｂを生産するス
トレプトマイセスＫ１０６株は次のような菌学的性質を
有している。

【０００８】（１） 形態学的特徴 培養は通常２８℃で行う、ストレプトマイセスＫ１０６
株の形態学的特徴は、気菌糸、基底菌糸を形成し、胞子
を形成することである。

【０００９】（２） 各種培地上の成育状態 麦芽エキス寒天培地、あるいは、でんぷん（殿粉）酵母
エキス培地上の成育状態は良好であり、灰色ないし白色
気菌糸が生じ、基底菌糸が生じる。可溶性褐色色素を生
産する。

【００１０】（３） 生理学的性質 ストレプトマイセスＫ１０６株の生理学的性質を表１
に、炭素源の資化性を表２に示す。

【００１１】

【表１】

【００１２】

【表２】 ＋：利用する ＋＋：かなり利用する

【００１３】ストレプトマイセスＫ１０６株の菌学的性
質は上記のとおりであるが、このストレプトマイセスＫ
１０６株の自然的および遺伝子工学的方法を含む人工的
変異株も抗生物質１０６−Ｂを生産でき、これらも抗生
物質１０６−Ｂの生産菌として使用することができる。

【００１４】本発明において、抗生物質１０６−Ｂの生
産にあたり、抗生物質１０６−Ｂ生産菌の培養は、一般
の放線菌における培養方法に準じて行われる。これを詳
しく説明すると、次のとおりである。

【００１５】本発明の抗生物質１０６−Ｂは、ストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する抗
生物質１０６−Ｂ生産菌、たとえばストレプトマイセス
Ｋ１０６株を好気的条件下に利用しうる炭素源および窒
素源を含有する栄養培地中で生育させることにより生産
される。

【００１６】その具体的手段としては、液体培地中での
振盪培養、深部培養あるいは通気攪拌培養などによるの
が好ましい。工業的に有利に培養するには、前記抗生物
質１０６−Ｂ生産菌の胞子懸濁液または培養液を培地に
接種し、通気攪拌培養を行うのが好ましい。

【００１７】培地の栄養源としては、特に限定されるこ
とはなく、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素
源、その他を培地中に含有させ、これらを栄養源とする
ことができる。

【００１８】培地成分としては、炭素源として、たとえ
ばグルコース、ガラクトース、シュクロース、マルトー
ス、ラクトース、ラフィノース、イノシトール、マンニ
ット、糖蜜、グリセロール、デキストリン、でんぷん、
大豆油、綿実油などが用いられ、特にグリセロール、グ
ルコース、でんぷんが好ましい。

【００１９】また、窒素源としては、たとえば大豆粉、
落花生粉、綿実油、魚粉、コーンスティーブリカー、ペ
プトン、肉エキス、酵母、酵母エキス、麦芽、米ぬか、
ふすま、アスパラギン、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、ＮＺアミンＴｙｐｅＡ（商品
名、和光純薬工業社製）などが用いられ、特にＮＺアミ
ンＴｙｐｅＡ、ペプトンが好ましい。

【００２０】また、無機塩としては、食塩、リン（燐）
酸塩、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、微量金属塩
（たとえば、マンガン、亜鉛、銅、モリブデン、鉄、ホ
ウ素、コバルト、セレン、バナジウム、ヨウ素などの硫
酸塩、リン酸塩、塩酸塩、硝酸塩など）などが必要に応
じて適宜添加される。液体培養に際しては、シリコン
油、植物油、動物油、鉱油、液体パラフィン、界面活性
剤などが消泡剤として適宜使用される。

【００２１】培地のｐＨは、中性ないし微アルカリ性、
特にｐＨ７付近が好ましく、培養温度は２５〜３０℃、
特に２８℃前後が好ましい。

【００２２】培養の経過に伴って生産される抗生物質１
０６−Ｂの力価の経時的変化は、枯草菌を被検菌とした
ペーパーディスク〔たとえば、東洋濾紙社製またはアド
バンテック東洋社製の直径６ｍｍの濾紙Ｔｈｉｎ（薄）
タイプを使用〕検定法により測定することができる。通
常、４８〜１２０時間の培養で抗生物質１０６−Ｂ（以
下、簡略化して、単に「１０６−Ｂ」という）の生産量
は最高値に達する。

【００２３】１０６−Ｂは、培養終了後、菌体その他の
固形部分を珪藻土などを濾過助剤とする濾過操作あるい
は遠心分離によって除去し、その濾液あるいは上清中か
ら抽出、精製することによって得られる。

【００２４】また、１０６−Ｂの物理化学的性状を利用
することにより、たとえば吸着剤を用いて、１０６−Ｂ
を採取することができる。

【００２５】吸着剤としては、たとえば活性炭、あるい
は吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ
−４、ＸＡＤ−７など（いずれも商品名、ローム・アン
ド・ハース社製）またはダイヤイオンＨＰ１０、ＨＰ２
０、ＨＰ２０ＡＧ、ＨＰ５０など（いずれも商品名、三
菱化成工業社製）が使用される。

【００２６】このような吸着剤を用いる場合、１０６−
Ｂは、１０６−Ｂを含む液を上記の吸着剤の層を通過さ
せて該１０６−Ｂを含む液に含まれる不純物を吸着させ
て取り除くか、または１０６−Ｂを吸着させた後、ベン
ゼン、アセトン、クロロホルム、メタノール、メタノー
ル水、アセトン水などを用いて溶出することによって得
られる。

【００２７】また、１０６−Ｂは、酸性脂溶性物質を培
養液から採取する方法に準じ、たとえば水と混和しない
クロロホルム、酢酸エチル、ｎ−ブタノールなどの有機
溶媒により、１０６−Ｂを培養濾液または水溶液から抽
出することも可能である。

【００２８】このようにして得られた１０６−Ｂの精製
にあたっては、たとえばアビセル（旭化成工業社製）な
どのセルロースまたはセファデックスＬＨ−２０、ＬＨ
−６０（ファルマシア社製）などを用いた分配カラムク
ロマトグラフィー、シリカゲル、アルミナ、フロリジル
のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー、
逆相用担体を用いた逆相カラムクロマトグラフィー、あ
るいは１０６−Ｂと混在する不純物との溶媒に対する分
配率の差を利用した抽出法、あるいは向流分配法などを
精製手段として採用し、これらの精製手段を単独あるい
は適宜組み合わせ、要すれば反復して用いることによ
り、１０６−Ｂを精製することができる。

【００２９】また、１０６−Ｂは、一般の脂溶性抗生物
質と同じく培養条件によっては培養液中の菌体部分に存
在する。この場合は、アルコール類、アセトンなどの親
水性有機溶媒を用いて抽出し、抽出液より溶媒を除去
し、ついで水溶液とした後、培養濾液からの場合と同様
の方法で抽出、精製することができる。

【００３０】このようにして得られた１０６−Ｂは、次
の理化学的および生物学的性状を有する。

【００３１】（１） 物質の性状 淡黄色粉末

【００３２】（２） 比旋光度 〔α〕²⁶ _D −１４２．６° Ｃ＝０．００３４５ｇ／ｍｌ Ｃ₂ Ｈ₅ ＯＨ

【００３３】（３） 分子式 Ｃ₂₄Ｈ₂₇Ｏ₆ Ｎ

【００３４】（４） 分子量 ４２５（マススペクトル
測定）

【００３５】（５） 紫外線吸収スペクトル メチルアルコール中で測定した紫外線吸収スペクトル
は、図１に示すとおり３０５ｎｍ（ε＝２２６００リッ
トル／ｍｏｌ・ｃｍ）、２７８ｎｍ（ε＝３２１００リ
ットル／ｍｏｌ・ｃｍ）に極大吸収を示す。

【００３６】（６） 赤外線吸収スペクトル ＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルは、図２
に示すとおりである。

【００３７】（７） 核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル ＣＤＣｌ₃ ：ＣＤ₃ ＯＤ＝９５：５溶液中でテトラメチ
ルシランを基準物質として測定した。 ¹Ｈ−核磁気共鳴
スペクトルを図３に、¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを図
４に示す。図４における化学シフト値は次のとおりであ
る。

【００３８】

【００３９】（８） 融点 １２２〜１２４℃（分解）

【００４０】（９） 溶解性 エチルアルコール、アセトン、ジメチルスルホキシドに
易溶、メチルアルコール、酢酸エチル、クロロホルムに
溶、ベンゼンに難溶

【００４１】（１０） 呈色反応 ヨーソガスに陽性、２，４−ジニトロフェニルヒドラジ
ンに陽性、硫酸に陽性、ニンヒドリンに陰性、ドラーゲ
ンドルフ試薬に陰性

【００４２】（１１） 薄層クロマトグラフィー 吸着剤 シリカゲル 展開溶媒系 酢酸エチル Ｒｆ＝０．２７ 展開溶媒系 ベンゼン：アセトン＝１：１ Ｒｆ＝０．
４６

【００４３】（１２） 抗菌スペクトル １０６−Ｂの抗菌スペクトルをアガーダイリューション
法によって測定した。その結果は表３に示すとおりであ
る。

【００４４】

【表３】

【００４５】以上のデータの解析により（比旋光度、分
子式、分子量などに加え、紫外線吸収スペクトルによる
カルボニル基などの二重結合の存在確認、赤外線吸収ス
ペクトルによる官能基の類推、核磁気共鳴スペクトルに
よる水酸基の特定、メチル基の数、全カーボン数の特定
などにより）、１０６−Ｂの平面構造は、

【００４６】

【化２】

【００４７】と決定した。また、これを既知物質と比較
した結果、１０６−Ｂは新規物質であると判定された。

【００４８】つぎに、１０６−Ｂを有効成分とする抗菌
剤について説明する。

【００４９】上記１０６−Ｂを有効成分とする抗菌剤
は、経口投与、非経口投与のいずれにも適用可能であ
る。経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤または錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、腸溶剤、懸濁剤として使用
することができる。非経口投与する場合は、注射剤、点
滴剤、坐剤、乳剤、懸濁剤として使用することができ、
また軟膏剤、クリーム剤、液剤、パップ剤、テープ剤と
して粘膜吸収または経皮吸収が維持できるような剤型で
使用することができる。

【００５０】１０６−Ｂを有効成分とする抗菌剤の製剤
化は、医学的に許容しうる界面活性剤、賦形剤、滑沢
剤、佐剤、その他を用いて適宜行うことができ、固体、
半固体、液体などの製剤を得ることができる。さらに、
安定化剤、着色剤、香料などを使用してもよい。製剤中
の１０６−Ｂ量は、対象菌、使用方法などに応じて適宜
決定すればよい。

【００５１】つぎに、１０６−Ｂの抗腫瘍作用を下記の
マウス腫瘍細胞に対する増殖抑制試験の結果に基づいて
説明する。

【００５２】１．培養Ｂ１６−Ｆ０ ＡＴＣＣ Ｎｏ．
ＣＲＬ６３２２（マウスのメラノーマ）に対する増殖抑
制効果の評価

【００５３】１−（１）試料添加培地の調製 １０６ＢをダルベッコＭＥＭ（大日本製薬社製）９０容
量％とＦＢＳ（シグマ社製の牛胎児血清）１０容量％か
らなる培地に溶解して、１０６Ｂの濃度が０．４μｇ／
ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌおよび５０μｇ／
ｍｌの４種類の試料添加培地を調製した。

【００５４】１−（２）培養 ポリスチレン製シャーレ（コーニング社製、最大外径５
９ｍｍ、高さ１５ｍｍ）に各試料添加培地を４ｍｌずつ
加え、培養Ｂ１６−Ｆ０を４×１０⁵ 個まきこみ（播き
込み）３日間培養した。上記培養には炭酸ガス培養器を
用い、３７℃、５％ＣＯ₂ ｉｎ ａｉｒ（５容量％の炭
酸ガスを含んだ空気中）で行った。

【００５５】１−（３）細胞増殖測定 培養３日後、シャーレから上清を取り出した後、残渣を
トリプシンで処理し、そのトリプシン処理後、遠心分離
により細胞を集め、ビルケルチュルク血球計算盤を用い
て細胞数を測定した。

【００５６】１−（４）結果 生細胞数について、添加群（Ｔ）と無添加群（Ｃ）を比
較した。１０６Ｂの添加量とＴ／Ｃ（％）との関係を表
４に示す。

【００５７】

【表４】

【００５８】上記表４に示す結果から、１０６Ｂの培養
Ｂ１６−Ｆ０に対する５０％抑制濃度（ＩＣ₅₀）を算出
したところ、５０％抑制濃度は２．５μｇ／ｍｌであ
り、これは市販の抗腫瘍剤と同レベルの値であって、こ
の５０％抑制濃度値から、１０６Ｂは有効な抗腫瘍活性
を有し、抗腫瘍剤として充分に使用可能であると考えら
れる。

【００５９】２．培養Ｐ３８８Ｄ₁ ＡＴＣＣ Ｎｏ．Ｃ
ＣＬ４６（転移性リンパ様細胞）に対する増殖抑制効果
の評価

【００６０】２−（１）試料添加培地の調製 １０６ＢをＲＰＭＩ−１６４０（大日本製薬社製）９０
容量％とＦＢＳ（シグマ社製の牛胎児血清）１０容量％
からなる培地に溶解して、１０６Ｂの濃度が２μｇ／ｍ
ｌ、１０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ
および１００μｇ／ｍｌの５種類の試料添加培地を調製
した。

【００６１】２−（２）培養 ポリスチレン製丸底試験管（外径１６ｍｍ、長さ１２５
ｍｍ）に各試料添加培地を１ｍｌずつ加え、培養Ｐ３８
８Ｄ₁ を５×１０⁵ 個まきこみ２日間培養した。上記培
養には炭酸ガス培養器を用い、３７℃、５％ＣＯ₂ ｉｎ
ａｉｒで行った。

【００６２】２−（３）細胞増殖測定 培養２日後、ビルケルチュルク血球計算盤を用いて細胞
数を測定した。 ２−（４）結果 生細胞数について、添加群（Ｔ）と無添加群（Ｃ）を比
較した。１０６Ｂの添加量とＴ／Ｃ（％）との関係を表
５に示す。

【００６３】

【表５】

【００６４】表５に示す結果から、１０６Ｂの培養Ｐ３
８８Ｄ₁ に対する５０％抑制濃度（ＩＣ₅₀）を算出した
ところ、５０％抑制濃度は５．７μｇ／ｍｌであり、こ
れは市販の抗腫瘍剤と同レベルの値であって、この５０
％抑制濃度値から、１０６Ｂは有効な抗腫瘍活性を有
し、抗腫瘍剤として充分に使用可能であると考えられ
る。

【００６５】つぎに、１０６−Ｂを有効成分とする抗腫
瘍剤について説明する。

【００６６】上記１０６−Ｂを有効成分とする抗腫瘍剤
は、経口投与、非経口投与のいずれにも適用可能であ
る。経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤または錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、腸溶剤、懸濁剤として使用
することができる。非経口投与する場合は、注射剤、点
滴剤、坐剤、乳剤、懸濁剤として使用することができ、
また軟膏剤、クリーム剤、液剤、パップ剤、テープ剤と
して粘膜吸収または経皮吸収が維持できるような剤型で
使用することができる。

【００６７】１０６−Ｂを有効成分とする抗腫瘍剤の製
剤化は、医学的に許容しうる界面活性剤、賦形剤、滑沢
剤、佐剤、その他を用いて適宜行うことができ、固体、
半固体、液体などの製剤を得ることができる。さらに、
安定化剤、着色剤、香料などを使用してもよい。製剤中
の１０６−Ｂ量は、対象腫瘍、使用方法などに応じて適
宜決定すればよい。

【００６８】この１０６−Ｂを有効成分として含有する
抗腫瘍剤をヒト（人間）に使用する場合、静脈内、筋肉
内、経口または経皮投与により使用することが望まし
い。投与量は、対象腫瘍を治療するのに充分な量であれ
ばよく、腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって若干
異なるが、マウスのＬＤ₅₀値から考えて、一般に経口投
与の場合、１０６−Ｂが１日あたり０．０００１〜２０
０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、特に上限は約５０ｍｇ／ｋｇ
体重程度にするのが好ましい。非経口投与の場合は、１
０６−Ｂが１日あたり０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ
体重の範囲、特に上限は約５ｍｇ／ｋｇ体重程度にする
のが好ましい。

【００６９】

【実施例】つぎに、１０６−Ｂの製造例を実施例として
示す。なお、実施例は、単に本発明の例示目的に提供さ
れるものであって、本発明の範囲を限定するものではな
い。

【００７０】実施例１ ストレプトマイセスＫ１０６株を下記の培地組成−１で
示される培地１６．８リットルに接種し、２８℃で５日
間振盪培養した。

【００７１】培地組成−１ グリセロール １０ｇ ＮＺアミンＴｙｐｅＡ ２．５ｇ 酵母エキス １ｇ 肉エキス １ｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ｐＨ ７．０

【００７２】培養終了後、培養液を遠心分離し、得られ
た上清部分（液側部分）１６．８リットルに８．４リッ
トルの酢酸エチルを加え、２回抽出した。

【００７３】一方、菌体部分（固形分側部分）にはメチ
ルアルコール６リットルを加え、攪拌後、濾過した。こ
の濾液のメチルアルコールを減圧濃縮した後、残渣に水
６リットルを加え、これを６リットルの酢酸エチルで３
回抽出した。

【００７４】得られた抽出液を前記上清部分からの抽出
液とあわせ、溶媒を減圧濃縮し、得られた油状残渣にベ
ンゼンを加え、不溶物を除去した後、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーに供した。

【００７５】すなわち、上記ベンゼン溶液をあらかじめ
ベンゼンを充填したシリカゲル（和光純薬工業社製）３
ｃｍ×４５ｃｍのカラムに通導し、ベンゼン：アセトン
＝８：２で溶出し、１０６−Ｂの含まれる画分を集め、
減圧濃縮し、得られた油状残渣にクロロホルムを加え不
溶物を除去した後、再度シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーに供した。

【００７６】すなわち、上記クロロホルム溶液をあらか
じめクロロホルムを充填したシリカゲル（和光純薬工業
社製）３ｃｍ×４５ｃｍのカラムに通導し、クロロホル
ム：メタノール＝９５：５で溶出し、１０６−Ｂの含ま
れる画分を集め、減圧濃縮することによって１０６−Ｂ
を４００ｍｇ得た。

【００７７】この実施例１で得られた１０６−Ｂの理化
学的および生物学的性状は、前記した１０６−Ｂの理化
学的および生物学的性状の通りである。

【００７８】実施例２ ストレプトマイセスＫ１０６株を培地組成−２で示され
る培地１６．８リットルに接種し、２８℃で５日間振盪
培養した。

【００７９】培地組成−２ グルコース １０ｇ ポリペプトン ２ｇ 酵母エキス １ｇ 肉エキス １ｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ｐＨ ７．０

【００８０】培養終了後、実施例１と同様の操作によ
り、１０６−Ｂを２００ｍｇ得た。

【００８１】この実施例２で得られた１０６−Ｂの理化
学的および生物学的性状も、前記した１０６−Ｂの理化
学的および生物学的性状の通りである。

【００８２】

【発明の効果】以上説明したように、本発明の抗生物質
１０６−Ｂは、新規物質であり、抗菌活性および抗腫瘍
活性を有する。

【図面の簡単な説明】

【図１】抗生物質１０６−Ｂの紫外線吸収スペクトル
（メチルアルコール溶液中）である。

【図２】抗生物質１０６−Ｂの赤外線吸収スペクトル
（ＫＢｒ錠剤）である。

【図３】抗生物質１０６−Ｂの ¹Ｈ−核磁気共鳴スペク
トルである。

【図４】抗生物質１０６−Ｂの¹³Ｃ−核磁気共鳴スペク
トルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者 林 謙一郎 大阪府堺市百舌鳥梅町４丁804 大阪府立 大学内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の平面構造式で表される抗生物質１
   ０６−Ｂ。 【化１】
2. 【請求項２】 ストレプトマイセス属に属する抗生物質
   １０６−Ｂ生産菌を培養し、その培養物から抗生物質１
   ０６−Ｂを分離、採取することを特徴とする請求項１記
   載の抗生物質１０６−Ｂの製造方法。
3. 【請求項３】 抗生物質１０６−Ｂ生産菌がストレプト
   マイセスＫ１０６株である請求項２記載の抗生物質１０
   ６−Ｂの製造方法。
4. 【請求項４】 抗生物質１０６−Ｂ生産菌がストレプト
   マイセスＫ１０６株の通常手段による変異株である請求
   項２記載の抗生物質１０６−Ｂの製造方法。
5. 【請求項５】 請求項１記載の抗生物質１０６−Ｂを有
   効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
6. 【請求項６】 請求項１記載の抗生物質１０６−Ｂを有
   効成分として含有することを特徴とする抗腫瘍剤。