WO2006073151A1

WO2006073151A1 - 新規発酵生産物

Info

Publication number: WO2006073151A1
Application number: PCT/JP2006/300020
Authority: WO
Inventors: Masato Watanabe; Kazuma Kamigiri; Kouichi Tanaka; Yasuyo Takeda; Takako Yokoi; Mitsuyoshi Shibazaki; Kenichi Suzumura; Michizane Hashimoto; Shinya Nishiwaki; Shigehiro Takase; Fumie Abe
Original assignee: Astellas Pharma Inc.
Priority date: 2005-01-05
Filing date: 2006-01-05
Publication date: 2006-07-13

Abstract

　新規なストレプトミセス　エスピー（Streptomyces sp.） Q34752株並びにQ47152株から単離された本発明の新規な環状化合物は、プロピオニバクテリウム属の菌種、特にプロピオニバクテリウムアクネス(Propionibacterium acnes)等に対して優れた抗菌活性を有し、抗菌剤として尋常性ざ瘡の治療に有用である。また、本発明化合物は良好な抗炎症活性を有しており、各種炎症性疾患の予防若しくは治療に有用である。さらに、本発明は、該化合物を産生する新規菌株及び該菌株を用いた該化合物の製造法にも関する。

Description

明細書

新規発酵生産物

技術分野

[0001] 本発明は、医薬、特にプロピオ-パクテリゥム属菌種に対する抗菌剤として、また抗炎症剤として、有用な新規発酵生産物に関する。

背景技術

[0002] 尋常性ざ瘡（にきび)は、主に思春期前後から発症する脂腺性毛包の慢性炎症性疾患である。尋常性ざ瘡は、アンドロゲンの分泌増力！]、皮脂分泌の亢進、毛包漏斗部の角化異常に起因する毛孔の狭窄による面皰形成、さらにはプロピオ-パクテリウム属の菌種，特にプロピオ-バタテリゥムァクネス (Propionibacterium acnes)などの毛包内細菌により産生されるリパーゼ等の菌体外酵素や好中球遊走因子などの炎症性物質が関与して発症する。発症後は，面皰、膿皰を形成、色素沈着や小瘢痕を残し消退する。この治療には、毛孔を塞いでいる角質の除去とともに，ピーァクネス (P. acnes)の増殖を抑制するためにィォゥ、サリチル酸、レゾルシンやマクロライド系抗生物質などの各種抗菌剤が使用されている。し力しながら、汎用されるマクロライド系抗生物質等に対する耐性菌の出現もあり、今なお、有効な治療薬の開発が切望されている。

抗炎症作用を有する環状の発酵生産物の報告がある (例えば、特許文献 1並びに 2、及び非特許文献 1)。し力しながら、プロピオ-パクテリゥム属の菌種に優れた抗菌活性を有する化合物の開示はな、。

特許文献 1：特開 2005-200324

特許文献 2： W095/22339

非特許文献 1 :J. Am. Chem. Soc, 1999, 121, pl l273- 11276

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0003] プロピオ-バタテリゥム属の菌種，特にプロピオ-バタテリゥムァクネス (Propionibac terium acnes)に優れた抗菌活性を有する、新たな尋常性ざ瘡治療剤の創製が切望されている。

課題を解決するための手段

本発明者らは、様々な微生物から得られる生理活性物質につ!ヽて鋭意探索した結果、ストレプトミセス属に属する放線菌より、プロピオ-バタテリゥム属菌種に優れた抗菌活性を有する新規な環状化合物を単離することに成功し、また、これらの化合物が良好な抗炎症作用を有することを見出し、本発明を完成した。

即ち、本発明は下記式 (I)又は (II)で示される環状ィ匕合物又はその塩に関する。また、該化合物を有効成分として含有する医薬組成物、殊に抗菌剤、尋常性ざ瘡の予防若しくは治療剤並びに抗炎症剤に関する。

[化 1]

(式中、 R¹はメチル若しくはェチル基を、 R²はメチル若しくはトリフルォロメチル基を、 R ³はメトキシ基若しくは水素原子を、それぞれ意味する。以下同様。 )

(式中、 R⁴は水素原子又は水酸基を、 R⁵は水素原子又はクロ口原子を、 R⁶並びに R⁷は一方が水酸基で、他方カトキシメチル又はクロロメチル基を意味する力、 R⁶と R⁷がー体となって、式

[化 3]

O

ハで示される基を意味する。以下同様。 )

更に、本発明は、ストレプトミセス (Streptomyces)属に属し上記式 (I)又は (II)で示される環状化合物を生産する能力を有する微生物を培養し、その培養物から下記式 (I)又は (II)で示される環状ィ匕合物を単離することを特徴とする、下記式 (I)又は (II)で示される環状化合物の製造法、殊に、ストレプトミセスエスピー (Streptomyces sp.) Q34752 株若しくは前記式 (I)で示される環状化合物を生産する能力を有するその変異株を培養し、その培養物から前記式 (I)で示される環状化合物を単離することを特徴とする、前記式 (I)で示される環状化合物の製造法、並びに、ストレプトミセスエスピー（ Streptomyces sp.) Q47152株若しくは前記式 (Π)で示される環状ィ匕合物を生産する能力を有するその変異株を培養し、その培養物から前記式 (II)で示される環状化合物を単離することを特徴とする、前記式 (Π)で示される環状化合物の製造法に関する。

また、本発明は、ストレプトミセスエスピー (Streptomyces sp.) Q34752株並びに前記式 (I)で示される環状ィ匕合物を生産する能力を有するその変異株、及び、ストレブトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q47152株並びに前記式（Π)で示される環状化合物を生産する能力を有するその変異株にも関する。

発明の効果

[0006] 本発明化合物はプロピオ-バタテリゥム属の菌種、特にプロピオ-バタテリゥムァクネス (Propionibacterium acnes)等に対して優れた抗菌活性を有し、抗菌剤として尋常性ざ瘡の治療に有用である。また、本発明化合物は良好な抗炎症活性を有しており、各種炎症性疾患の予防若しくは治療に有用である。炎症性疾患としては、例えば、敗血症およびそれに起因する疾患、炎症性自己免疫疾患、炎症性血管疾患、炎症性心血管疾患、アレルギー性疾患、炎症性肝臓疾患、炎症性腎臓疾患、炎症性消ィ匕器疾患、炎症性心疾患、炎症性循環器疾患、感染症、全身性炎症反応症候群 (S IRS)、急性呼吸疾患症候群 (ARDS)、発熱、移植片対宿主病、重症筋無力症、変形性関節症、痛風および火傷等が挙げられる。

プロピオ-パクテリゥムァクネス等に対する優れた抗菌活性と抗炎症作用を併せ持つ本発明化合物は、尋常性ざ瘡の治療に特に有用である。

図面の簡単な説明

[0007] [図 1]化合物 Aの¹ H- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 2]化合物 Aの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 3]化合物 Aの IR ^ベクトルを示す図である。

[図 4]化合物 Bの¹ H- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 5]化合物 Bの¹³ C- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 6]化合物 Cの¹!" I- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 7]化合物 Cの¹³ C- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 8]化合物 Cの IR ^ベクトルを示す図である。 [図 9]化合物 Dの¹ H- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 10]化合物 Dの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 11]化合物 Eの¹!" I- NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 12]化合物 Eの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 13]化合物 Eの赤外吸収スペクトルを示す図である。

[図 14]化合物 Fの¹!" I-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 15]化合物 Fの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 16]化合物 Gの¹ H-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 17]化合物 Gの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 18]化合物 Hの¹ H-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 19]化合物 Hの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

[図 20]化合物 Iの¹ H-NMRスペクトルを示す図である。

[図 21]化合物 Iの¹³ C-NMR ^ベクトルを示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0008] 本発明の環状ィ匕合物は、ストレプトミセス属に属する当該物質生産菌を栄養培地にて培養し、当該物質を蓄積させた培養物から常法によって得られる。当該物質の製造方法において使用する微生物は、ストレプトミセス属に属し当該物質の生産能を有する微生物であればいずれも用いることができる。このような微生物としては、例えば化合物 (I)を生産能を有する、茨城県つくば市の土壌より分離されたストレプトミセス属に属する放線菌ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q34752株、並びに化合物 (Π)生産能を有する、沖縛県八重山郡竹富町波照間 (波照間島)の土壌より分離されたストレプトミセス属に属する放線菌ストレプトミセスエスピー（Streptomyc es sp.) Q47152株を挙げることができる。

[0009] ストレプトミセスエスピー (Streptomyces sp.) Q34752株の菌学的性質

1.形態

本菌株は各種有機及び無機培地において良く生育し、基生菌糸の色調は黄味灰〜黄茶色である。気菌糸はオートミール寒天培地、スターチ '無機塩寒天培地上に良く形成され、明るい灰〜茶灰色を呈する。胞子鎖は螺旋状で、 50個以上の胞子が連鎖する。電子顕微鏡による観察では、胞子の形状は円筒形、大きさは 0.4〜0.8 X 1.0〜1.5 mで、その表面は平滑である。液体培養で基生菌糸の断片化は見られない。胞子のう、運動性胞子等の特殊な器官は観察されない。

[0010] 2.各種寒天培地上の性状

各種寒天培地上の性状は以下に示すとおりである。特に記載しない限り、 28°Cで 2 1日間培養し、常法に従って観察したものである。色調の記載については色の標準（日本色彩研究所）によった。

[表 1]

[0011] 3.生理的性質

[表 2]

生育温度範囲 1 0〜 3 7 °C

至適生育温度 2 0〜 2 8。C

ゼラチンの液化

単純ゼラチン

グルコース ·ペプトンゼラチン

脱脂牛乳の凝固

脱脂牛乳のペプトン化

硝酸還元作用

スターチの加水分解作用

メラニン様色素の生成

チロシン寒大培地

ペプトン ·イースト ·鉄寒天培地

セルロースの分解作用

(注）生育温度範囲及び至適生育温度は各温度（5,10,15,20,24,28,32,37,40,45,50 °C)で、 7〜21日までの観察結果 (脱脂牛乳に対する作用は 37°Cで 3〜21日までの観察結果)である。それ以外は、特に指摘のない限り、 28°Cで 2週間後の観察結果を示陰場陰 ¾場場場

ニニ二二二二二一二二二一- - - - - ...-

4.炭素源の資化性 (プリドノ、ム'ゴドリーブ寒天培地、 28°C培養)

[表 3]

L-ァラビノース + マノレトース +

D-キシロース + トレノヽロース +

D-グルコース + ラクトース +

D-フラクトース + D-ソルビトール

シ'ユークロ一ス ― サリシン十

イノシト一ノレ士— メリビオース +

ラムノース + グリセリン +

ラフイノーススターチ + マンニトーノレ + キサンチン +

D-ガラクトース + キチン +

(注） + ：生育する、土：生育が疑わしい、一：生育しない

5.菌体成分の化学分析

LECHVALIERらの方法（LECHVALIER, MP. et al; PP277-238 in DIETZ, A et al e d., Actinomycete Taxonomy, SIM Special Publication No.6, 1980)に従ヽ本菌株の酸加水分解物の分析を行った結果、 LL-ジアミノピメリン酸が検出された。主要な菌体メナキノンは MK-9(H8)であった。

[0014] 上記諸性状を有する菌種を各種文献（Bergey's Manual of Systematic Bacteriology vol.4, 1989等）により検索すると、本菌株はストレプトミセス（Streptomyces)属に属す菌株と判断される。そこで、本菌株をストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q 34752と命名した。なお、本菌株は、〒 305-8566日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番地 1中央第 6 独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター (IPOD)に受領番号 FERM BP-10435号として寄託されている。また、微生物は人工的に又は自然に変異を起こしやすいので、本発明において用いられるストレプトミセスエスピー Q34752株は、天然から分離された微生物の他に、これに紫外線、 X線、化学薬剤などで人工的に変異させたもの及びそれらの天然変異株についても包含する。

[0015] ストレプトミセスエスピー (Streptomyces sp.) Q47152株の菌学的性質

1.形態

本菌株は各種有機及び無機培地において生育がやや不良で、基生菌糸の色調は灰味茶〜暗い黄茶色である。気菌糸はスターチ ·無機塩寒天培地上にもっとも良く形成され、白〜青味灰色を呈する。胞子鎖はコイル状で、 50個以上の胞子が連鎖する。電子顕微鏡による観察では、胞子の形状は円筒形、大きさは1.0〜1.5 0.4〜0.8 /z mで、その表面はとげ状である。液体培養で基生菌糸の断片化は見られない。胞子のう、運動性胞子等の特殊な器官は観察されない。

[0016] 2.各種寒天培地上の性状

[表 4] 培地気菌糸の着生裏 ώίの色相可溶性色素及ぴその色相

シユークロース ·硝酸塩寒不良喑ぃ黄茶暗い黄茶天培地灰白

グノレコース · ァスノラギンなし灰味黄茶黄茶寒天培地

グリセリン · ァスバラギンやや不良黄茶黄茶寒天培地白

スターチ ·無機塩寒天培地中程度〜やや良好暗い黄茶黄茶育味灰

チロシン寒天培地なし黄茶〜喑ぃ黄茶黄茶イースト '麦芽寒天培地やや不良喑レ、黄茶暗い黄茶白〜青味灰

ォートミール寒天培地やや不良喑レ、黄茶喑ぃ黄茶青味灰

リンゴ酸 ·石灰寒天培地やや不良灰味茶灰味茶青味灰

[0017] 3.生理的性質

[表 5]

生育温度範囲 1 5 4 5 °C

¾場 ¾ ¾

至適生育温度 2 4 4 0 °C 単純ゼラチ

グノレコースフ

脱脂牛乳の凝固

脱脂牛乳のぺプ

硝酸還元作用

スターチの加水分解作用

メラニン様色素の生成

チロシン寒天培地

ぺプトン · ィースト鉄寒天培地

セルロースの分解作用

(注）生育温度範囲及び至適生育温度は各温度（5,10,15,20,24,28,32,37,40,45,50 °C)で、 7〜21日までの観察結果 (脱脂牛乳に対する作用は 37°Cで 3〜21日までの観察結果)である。それ以外は、特に指摘のない限り、 28°Cで 2週間後の観察結果を示す。

[0018] 4.炭素源の資化性 (プリドノヽム'ゴドリーブ寒天培地、 28°C培養）

[表 6] レアラビノース + マノレトース +

D-キシロース + トレノヽ口 '一フ、 +

D-グノレコース + ラタトース +

D-フラクト一ス十 D-ソノレビトーノレ ―

シユーク口ース + サリシン +

イノシ卜ール + メリビオース +

ラムノース + グリセリン +

ラフィノース + スターチ +

マンニトーノレ + キサンチン +

D-ガラク卜ース + キチン +

(注） + ：生育する、士：生育が疑わしい、：生育しない

[0019] 5.菌体成分の化学分析

[0020] 上記諸性状を有する菌種を各種文献（Bergey's Manual of Systematic Bacteriology vol.4, 1989等）により検索すると、本菌株はストレプトミセス（Streptomyces)属に属す菌株と判断される。そこで、本菌株をストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q 47152と命名した。なお、本菌株は、〒 305-8566日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番地 1中央第 6 独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター (IPOD)に受領番号 FERM BP-10436号として寄託されている。また、微生物は人工的に又は自然に変異を起こしやすいので、本発明において用いられるストレプトミセスエスピー Q47152株は、天然から分離された微生物の他に、これに紫外線、 X線、化学薬剤などで人工的に変異させたもの及びそれらの天然変異株についても包含する。

[0021] (製造方法）

本発明化合物はストレプトミセス属に属し、本発明化合物生産能を有する微生物を培養することによって得られる。培養は一般微生物の培養方法に準じて行われる。培養に用いられる培地としては、ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q34 752等の、本発明化合物生産能を有するストレプトミセス属の微生物が利用する栄養源を含有する培地であればよぐ合成培地、半合成培地または天然培地が用いられる。培地に添加する栄養物として公知のものを使用できる。培地の組成は、例えば炭素源としては、 L—ァラビノース、 D—キシロース、 D—グルコース、 D—フラクトース、イノシトーノレ、ラムノース、マンニトーノレ、 D—ガラクトース、マノレトース、トレノヽロース、ラタトース、 D—マンノース、デンプン、ブドウ糖、デキストリン、グリセリン、植物油、ポテトスターチ等が挙げられる。窒素源としては肉エキス、ペプトン、ダルテンミール、綿実粕、大豆粉、落花生粉、魚粉、コーンスチープリカー、乾燥酵母、酵母エキス、塩化アンモ-ゥム、硫酸アンモ-ゥム、硝酸アンモ-ゥム、尿酸その他の有機、無機の窒素源が用いられる。また、金属塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシゥム、亜鉛、鉄、コバルトなどの硫酸塩、硝酸塩、炭酸塩、リン酸塩などが必要に応じて添加される。さら〖こ、必要に応じてメチォニン、システィン、シスチン、チォ硫酸塩、ォレイン酸メチル、ラード油、シリコン油、界面活性剤などの生成促進物質または消泡剤を添加することもできる。また、培地にトリフルォロロイシンを添加することにより、トリフルォロ基が導入された誘導体を得ることもできる。

[0022] 培養条件としては好気的条件下で培養するのが一般的に有利で、培養温度は、ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q34752の場合は、 10〜37°Cの範囲、好ましくは 20〜28。C付近で、一方、ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q471 52の場合は、 15〜45°Cの範囲、好ましくは 20〜40°C付近で行われる。培地の pH は約 5〜9、好ましくは約 6〜8の範囲に調整すると好結果が得られる。培養期間は培地の組成、温度条件に応じて適宜設定されるが、通常 1〜14日程度、好ましくは 3〜 8日程度である。

[0023] (単離法）

本発明化合物の単離は、天然物力生理活性物質を単離する際の通常の抽出、精製の手段を適宜利用して行うことができる。本発明化合物は、メタノールやエタノール、ブタノール等のアルコール類やアセトンに溶け易いことから、これらの溶媒で抽出するのが好ましい。また、本発明化合物は酢酸ェチルやクロ口ホルム等の有機溶剤には溶解する力水には溶解しにくいことから、水と、酢酸ェチルやクロ口ホルム等による分液操作により、抽出精製することができる。

また、活性成分を含む画分を適当な担体に接触させることにより活性成分を吸着させ、次いで適当な溶媒で溶出することにより活性を有する本発明化合物を精製することができる。好ましくは、セフアデックス (登録商標) LH— 20、アンバーライト（登録商標) XAD— 2、ダイヤイオン (登録商標) HP— 20、ダイヤイオン (登録商標） CHP 20、又はダイヤイオン (登録商標） SP— 900のような多孔性吸着樹脂に接触'吸着させ、次いでメタノール、エタノール、アセトン、ブタノール、ァセトニトリル、クロロホルム等の有機溶媒又は水、或いはそれらの混合液を用いて、本発明化合物を溶出させることができる。このとき有機溶媒と水の混合比率を段階的に又は連続的に変化させることが有利な場合がある。また、本発明化合物含有画分は、シリカゲル、 ODS等を用いたカラムクロマトグラフィー、遠心液々分配クロマトグラフィー、 ODSを用いた高速液体クロマトグラフィー (HPLC)等の当業者に自明の各種精製法によっても精製することができる。これらの各種操作法を適宜組み合わせて行うことが、純粋な化合物を分離精製するうえで有利な場合がある。

[0024] 本発明化合物は、酸付加塩を形成することができる。力かる塩としては、製薬学的に許容される塩であり、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、或いは、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シユウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マイレン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クェン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ァスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸等が挙げられる。

また、本発明化合物は不斉炭素原子を有するので、これに基づく立体異性体 (ラセミ体、光学異性体、ジァステレオマー等）が存在する。本発明は、これらの立体異性体の混合物もしくは単離されたものを包含する。また、本発明は、本発明化合物の水和物、各種溶媒和物等も含まれる。更に、本発明には結晶多形などの本発明化合物の結晶をも包含する。

[0025] 本発明化合物を有効成分として含有する医薬組成物は、通常製剤化に用いられる担体ゃ賦形剤、その他の添加剤を用いて調製される。

投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、あるいは静注、筋注等の注射剤、坐剤、経皮剤、経鼻剤あるいは吸入剤等による非経口投与の!、ずれの形態であってもよ！/、。

本発明による経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、本発明化合物又はその塩力少なくとも一つの不活性な賦形剤、例えば乳糖、マン-トール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビュルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等の崩壊剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性コーティング剤で被膜してもよ、。

[0026] 経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な溶剤、例えば精製水、ェタノールを含む。この組成物は不活性な溶剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁化剤のような補助剤、甘味剤、矯味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。

非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤を含む。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート 80 (局方名）等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解、懸濁して使用することちでさる。

[0027] 外用剤としては、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ゼリー剤、パップ剤、噴霧剤、ローシヨン剤、点眼剤、眼軟膏等を包含する。一般に用いられる軟膏基剤、ローション基剤、水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤等を含有する。例えば、軟膏又はローション基剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、白色ワセリン、サラシミッロウ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ラウロマクロゴール、セスキォレイン酸ソルビタン等が挙げられる。

[0028] 投与量は症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される力通常、成人 1日当たり経口投与の場合、 0.1〜1500 mg、非経口投与の場合、 0.01〜500 mg程度が適当であり、これを 1日に 1回乃至複数回投与する。投与量は種々の条件で変動するので、上記投与量範囲より少ない量で十分な場合もある。また、外用剤として用いる場合は、化合物（I)を 0.001〜20%、好ましくは 0.01〜10% を含む外用剤が好ましい。これを 1日 1〜数回、症状に応じて局所に投与する。

実施例

[0029] 以下、実施例に基づき本発明を更に詳細に説明する。本発明化合物は下記実施例に限定されるものではない。

実施例 1

グルコース 1%、ポテトスターチ 2%、ポリペプトン 0.5%、酵母エキス 0.5%、炭酸カルシゥム 0.4%よりなる培地（滅菌前 pH7.0)を 100mlずつ 500ml容の三角フラスコに分注し、 121°Cで 20分間滅菌した。この培地にベネット寒天培地に良く生育させたストレブトミセスエスピー Q34752株を力き取って接種し、 28°C、 220回転 Z分の条件で 4日間振とう培養し、種培養液とした。次に同じ組成の培地を 50本の 500ml容の三角フラスコに 100mlずつ分注し、 121°Cで 20分間滅菌した。この培地に前記種培養液を 2mlずつ接種し、 28°C、 220回転 Z分の条件で 6日間、振盪培養した。

このようにして培養した Q34752株の培養液 5Lにアセトン 20Lを添カ卩し、充分に攪拌した後、濾過した。濾液、約 25Lを減圧濃縮し、 pH7.0に調整して、約 5Lの酢酸ェチルで抽出した。有機溶媒層を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（10g) に供した。クロ口ホルム溶液 50mlで洗浄した後、クロ口ホルム-メタノール（9:1)、（7 : 3) 溶液、各 50mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、 ODSカラムクロマトグラフィー (6g)に供した。 50%及び 60%(v/v)メタノール水溶液各 50mlで洗浄した後、 70%、 80%、 90%、及び 100%(v/v)メタノール水溶液各 50mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、約 212mg の粗抽出物を得た。粗抽出物を ODS HPLC(L-column, 20 x 250mm,化学物質評価研究機構)に供し、 55%(v/v)ァセトニトリル水溶液で溶出し、 UV210nmで検出して目的のピークを分取した。分取した溶液を減圧濃縮し、酢酸ェチルで抽出して、化合物 A (19.8mg)、及び化合物 B (2.4mg)を得た。

[0030] 物理化学的性状 (化合物 A)

色および形状：白色粉末

分子式： C H N O

44 70 8 11

高分解能 ESI- MS: m/z 887.5242 ([Μ+Η]⁺, Δ 1.8 mmu)

UV吸収 (MeOH) : λ ( ε ) 277nm (1,500) , 226nm (15,700)

max

旋光度 [ひ] ²⁴ ·⁷ = -219。 (c 0.0192, MeOH)

D

NMRデータ： CDC1中で測定した¹ H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 1

3

及び 2に示す。

赤外吸収データ： KBrで測定した赤外吸収スペクトラムのチャートを図 3に示す. (化合物 B)

色および形状：白色粉末

分子式： C H N O

43 68 8 11

高分解能 ES MS: m/z 873.5086 ([Μ+Η]⁺, Δ 0.1 mmu)

UV吸収 (MeOH) : λ ( ε ) 276nm (2,500) , 226nm (18,900)

max

NMRデータ： CDC1中で測定した¹ H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 4及

3

び 5に示す。

実施例 2

グルコース 1%、ポテトスターチ 2%、ポリペプトン 0.5%、酵母エキス 0.5%、炭酸カルシゥム 0.4%よりなる培地（滅菌前 pH7.0)を 100mlずつ 500ml容の三角フラスコに分注し、 121°Cで 20分間滅菌した。この培地にベネット寒天培地に良く生育させたストレブトミセスエスピー Q34752株を力き取って接種し、 28°C、 220回転 Z分の条件で 4日間振とう培養し、種培養液とした。次に同じ組成の培地にトリフルォロロイシンを 0.05%となるように添加し、 100本の 500ml容の三角フラスコに 100mlずつ分注し、 121°Cで 20分間滅菌した。この培地に前記種培養液を 2mlずつ接種し、 28°C、 220回転 Z分の条件で 6日間、振盪培養した。

このようにして培養した Q34752株の培養液 10Lにアセトン 40Lを添カ卩し、充分に攪拌した後、濾過した。濾液、約 50Lを減圧濃縮し、 pH7.0に調整して、約 10Lの酢酸ェチルで抽出した。有機溶媒層を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (20g) に供した。クロ口ホルム溶液 100mlで洗浄した後、クロ口ホルム-メタノール（20:1)、（9 : 1)溶液、各 100mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、 ODSカラムクロマトグラフィー (12 g)に供した。 60%(v/v)メタノール水溶液 100mlで洗浄した後、 80%及び 100%(v/v)メタノール水溶液各 100mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、約 400mgの粗抽出物を得た。粗抽出物を ODS HPLC(L-column, 20 x 250mm,化学物質評価研究機構)に供し、ァセトニトリル-水 (55:45)、 5mlで溶出し、 UV210nmで検出して目的のピークを分取した。分取した溶液を減圧濃縮し、化合物 C (77mg)を得た。

[0032] 物理化学的性状

(化合物 C)

色および形状：白色粉末

分子式： C H F N O

44 67 3 8 11

高分解能 ESI- MS: m/z 941.4977 ([Μ+Η]⁺, Δ 1.7 mmu)

UV吸収 (MeOH) : λ ( ε ) 283nm (2,800), 277nm (3,300) , 225nm (32,700)

max

旋光度 [ α ] ²⁴·⁷ = -118° (c 0.04, MeOH)

D

NMRデータ： CDC1中で測定した¹ H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 6及

3

び 7に示す。

赤外吸収データ： KBrで測定した赤外吸収スペクトラムのチャートを図 8に示す.

[0033] 実施例 3

グルコース 1%、ポテトスターチ 2%、ポリペプトン 0.5%、酵母エキス 0.5%、炭酸カルシゥム 0.4%よりなる培地（滅菌前 pH7.0)を 30mlずつ 100ml容の三角フラスコに分注し、 1 21°Cで 30分間滅菌した。この培地にベネット寒天培地に良く生育させたストレプトミセスエスピー Q34752株を力き取って接種し、 30°C、 250回転 Z分の条件で 3日間振とう培養し、第一段種培養液とした。前記組成の培地が 100mlづっ分注された 500ml容の三角フラスコに、第一段種培養液 2%を植菌し、 30°C、 250回転 Z分の条件で 3日間振とう培養し、第二段種培養液とした。グルコース 1%、ポテトスターチ 2%、ポリぺプトン 1%、酵母エキス 0.5%、炭酸カルシウム 0.4%、消泡剤 0.1%よりなる培地（滅菌前 pH7. 0) 20Lを、 30L容ジャーフアーメンターに分注し、 123°Cで 30分間滅菌した。この培地に、第二段種培養液 5%を植菌、 30°C、 200〜300回転 Z分の条件で 6日間通気攪拌培養を行った。

このようにして培養した Q34752株の培養液 35Lにアセトンを等量添カ卩し、濾過用助剤 (ラヂオライト # 600、昭和化学工業)を添加し、充分に攪拌'抽出した後、濾過した。濾液、約 70Lに水 30Lを添カ卩し、あらかじめ 20%アセトン水溶液で平衡化しておいたセパビーズ SP_850 (2L、三菱化学 (株））に供した。 50%メタノール水溶液 5Lで洗浄した後、 100%メタノール 10Lで溶出した。 100%メタノール溶出画分に水と酢酸アンモ-ゥムを添加し、 50%メタノール水溶液（0.2%酢酸アンモ-ゥム含有）とした後、 ODS(50mm φ X 1,000 mmL:ダイソー（株）ダイソーゲル SP— 120— 15/30— ODS— B)カラムクロマトグラフィ一に供した。 70%、 75%、 80%メタノール水溶液（0.2%酢酸アンモ-ゥム含有）各 6Lで溶出した。目的化合物を含有したフラクションを濃縮、乾燥し、粉末 (約 30mg)を得た。その粉末を少量の DMSOに溶解し、 ODSカラム (20mm (i) x250mmL:ダイソーパック SP- 120- 5- ODS- BP)を用い、 50%ァセトニトリル水溶液（0.1Mリン酸二水素力リウム含有）、 10ml/分にて HPLC分取した。目的物質を含んだフラクションを濃縮、水置換後、酢酸ェチルで抽出し、化合物 D (10.4mg)を得た。

[0034] 物理化学的性状

(化合物 D)

色および形状：白色粉末

分子式： C H N O

43 68 8 10

高分解能 ESI- MS: m/z 857.5131 ([Μ+Η]⁺, Δ -0.5 mmu)

UV吸収 (MeOH) : 末端吸収

max

旋光度 [ α ] ²⁴·⁷ = -114。 (c 0.02, MeOH)

D

NMRデータ： CDC1中で測定した 1H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 9

3

及び 10に示す。

[0035] 上記実施例 1〜3で得られた化合物は、その物理ィ匕学的性状より、以下の構造で示される環状ィ匕合物であると同定された。

[化 4]

化合物 A R¹：ェチル基、 R²：メチル基、 R³：メトキシ基

化合物 B R¹：メチル基、 R²：メチル基、 R³：メトキシ基

化合物 C R¹：ェチル基、 R²：トリフルォロメチル基、 R³：メトキシ基

化合物 D R¹：ェチル基、 R²：メチル基、 R³：水素原子

実施例 4

グルコース 1%、ポテトスターチ 2%、ポリペプトン 0.5%、酵母エキス 0.5%、炭酸カルシゥム 0.4%よりなる培地（滅菌前 pH7.0)を 100mlずつ 500ml容の三角フラスコに分注し、 121°Cで 20分間滅菌した。この培地にベネット寒天培地に良く生育させたストレブトミセスエスピー Q47152株を力き取って接種し、 28°C、 220回転 Z分の条件で 4日間振とう培養し、種培養液とした。次に同じ組成の培地を 50本の 500ml容の三角フラスコに 100mlずつ分注し、 121°Cで 20分間滅菌した。この培地に前記種培養液を 2mlずつ接種し、 28°C、 220回転 Z分の条件で 6日間振盪培養した。

このようにして培養した Q47152株の培養液 5Lにアセトン 20Lを添カ卩し、充分に攪拌した後、濾過した。濾液、約 25Lを減圧濃縮し、 pH7.0に調整して、約 5Lの酢酸ェチルで抽出した。有機溶媒層を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (20g) に供した。クロ口ホルム溶液 100mlで洗浄した後、クロ口ホルム-メタノール（9:1)、（7 : 3 )溶液、各 100mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、 ODSカラムクロマトグラフィー (6g) に供した。 50%及び 60%(v/v)メタノール水溶液各 50mlで洗浄した後、 70%、 80%及び 9 0%(v/v)メタノール水溶液各 50mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、約 455mgの粗抽出物を得た。粗抽出物を ODS HPLC(L-column, 20 x 250mm,化学物質評価研究機構)に供し、ァセトニトリル- 6.5mM酢酸アンモ-ゥム (pH5.5)(55:45)、 10mlで溶出し、 UV266nmで検出して目的のピークを分取した。分取した溶液を減圧濃縮し、酢酸ェチルで抽出して、化合物 E (68mg)を得た。

[0037] 物理化学的性状

(化合物 E)

色および形状：白色粉末

分子式： C H C1N O

52 64 9 16

高分解能 ESIMS: m/z 1106.4232 ([Μ+Η]⁺, Δ -0.6 mmu)

UV吸収 (MeOH) : ( ε ) 263nm ( ε 9,000)

max

旋光度 [ α ] ² = -34.7。 (c 0.0144, MeOH)

D

NMRデータ： CDC1中で測定した¹ H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 11

3

及び 12に示す。

赤外吸収データ：赤外吸収スペクトラムのチャートを図 13に示す.

[0038] 実施例 5

グルコース 1%、ポテトスターチ 2%、ポリペプトン 0.5%、酵母エキス 0.5%、炭酸カルシゥム 0.4%よりなる培地（滅菌前 pH7.0)を 30mlずつ 100ml容の三角フラスコに分注し、 1 21°Cで 30分間滅菌した。この培地にベネット寒天培地に良く生育させたストレプトミセスエスピー Q47152株を力き取って接種し、 30°C、 250回転 Z分の条件で 3日間振とう培養し、第一段種培養液とした。次に、同じ組成の培地を 500ml容の三角フラスコに 100mlずつ分注し、 121°Cで 30分間滅菌した。この培地に第一段種培養液を 2%づっ接種し、 30°C、 250回転 Z分の条件で 3日間振盪培養し、第二段種培養液とした。 MS #3600 7%、乾燥酵母 1%、小麦胚芽 2%、硫酸コバルト 10ppm、消泡剤 0.1% (滅菌前 p H6.5)を 20Lづっ 30Lジャーファメンターに分注し、 123°C、 30分滅菌した。第二段種培養液を 2%植菌し、 30°C、 3日間、通気攪拌培養を行った。

このようにして培養した Q47152株の培養液 30Lにアセトンを等量添カ卩し、濾過用助剤 (ラヂオライト #600、昭和化学工業 (株)）を添加して充分に攪拌'抽出した後、濾過した。濾液、約 60Lに水 30Lを添カ卩し、 pH2.5に調整して、あらかじめ 20%アセトン水溶液（0.01N HC1含有）で平衡化してお!、たセパビーズ SP-850 (2L：三菱化学 (株））に供した。 75%メタノール水溶液（0.01N HC1含有） 6Lで洗浄後、 100%メタノール（0.01N HC1含有） 16Lで溶出した。メタノール溶出画分に水を等量添カ卩し、 ODS-B (50mm φ χ l,000mmL:ダイソー（株）ダイソーゲル SP- 120- 15/30- ODS- Β )カラムクロマトグラフィ一に供した。 52%ァセトニトリル水溶液 (0.05%TFA含有)で溶出し、一定時間毎に分画した。目的化合物を含有するフラクションを減圧濃縮'水置換後、酢酸ェチル抽出した。酢酸ェチル抽出液を減圧濃縮'乾固し、粗抽出物 728mgを少量のメタノールに溶解し、 ODSカラム（20mm (i) 250mmL:ダイソーパック SP- 120- 5- DS- BP)を用い、 52% ァセトニトリル水溶液（50mMリン酸二水素カリウム含有）で毎分 10mlにて HPLC分取した。目的化合物を含んだフラクションを濃縮、水置換後、酢酸ェチル抽出し、化合物 F (13.5 mg)、並びに化合物 G (17.1mg)を得た。また、もうひとつの目的化合物を含有するフラクションに水を等量添加し、ダイアイオン HP-20-SS (1.2L：三菱化学 (株)）ク口マトグラフィ一に供し、 70%メタノール水溶液 (0.5%酢酸アンモ-ゥム含有)で溶出した。減圧濃縮'水置換後、酢酸ェチルで抽出し、化合物 H (80 mg)を得た。

[0039] 物理化学的性状

(化合物 F)

色および形状：白色粉末

分子式： C H C1N O

53 68 9 17

高分解能 ESIMS: m/z 1138.4500 ([Μ+Η]⁺, Δ -0.1 mmu)

UV吸収 (MeOH) : ( ε ) 267nm ( ε 26,600)

max

旋光度 [ α ] ²⁴·⁷ = -106.8° (c 0.02, MeOH)

D

NMRデータ： CDC1中で測定した 1H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 14

3

及び 15に示す。

[0040] (化合物 G)

色および形状：白色粉末

分子式： C H C1N O

52 64 9 15

高分解能 ESIMS: m/z 1090.4293 ([Μ+Η]⁺, Δ 0.1 mmu)

UV吸収 (MeOH) : ( ε ) 263nm ( ε 25,100)

max

旋光度 [ α ] ²⁴·⁷ = -96.8° (c 0.02, MeOH) NMRデータ： CDC1中で測定した 1H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 16

3

及び 17に示す。

[0041] (化合物 H)

色および形状：白色粉末

分子式： C H C1 N O

52 65 2 9 16

高分解能 ESIMS: m/z 1142.4001 ([Μ+Η]⁺, Δ -0.3 mmu)

UV吸収 (MeOH) : ( ε ) 264nm ( ε 22,000)

max

旋光度 [ α ] ²⁴·³ = -52.6

D 。 (c 0.02, MeOH)

NMRデータ： CDC1中で測定した¹ H NMR、及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 18

3

及び 19に示す。

[0042] 実施例 6

このようにして培養した Q47152株の培養液 10Lを濾過し、 pH 7.0に調整した。濾液、約 8Lを酢酸ェチル 10Lで抽出し添カ卩し、シリカゲルクロマトグラフィー（20mm φ 100m mL)に供した。クロ口ホルム溶液 100mlで洗浄した後、クロ口ホルム-メタノール（9:1)、 (7 : 3)溶液、各 100mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、 ODSカラムクロマトグラフィー（ 6g)に供した。 50%及び 60%(v/v)メタノール水溶液各 50mlで洗浄した後、 70%、 80%及び 90%(v/v)メタノール水溶液各 50mlで溶出した。溶出液を減圧濃縮し、目的化合物を含有するフラクションを得た。粗抽出物を ODS HPLC(L-column, 20 x 250mm,ィ匕学物質評価研究機構)に供し、 55%ァセトニトリル水溶液 (0.05% TFA含有)で目的ピ一クを分取し、化合物 I(3mg)を得た。

[0043] 物理化学的性状 (化合物 I)

色および形状：白色粉末

分子式： C H N O

52 65 9 16

高分解能 ESIMS: m/z 1072.4642 ([Μ+Η]⁺, Δ 0.9 mmu)

UV吸収 (MeOH) : λ ( ε ) 267 nm ( ε 14,700)

max

旋光度 [ α ] ²⁴·°= -252° (c 0.001, MeOH)

D

NMRデータ： CDCl中で測定した¹ H NMR,及び¹³ C NMRの一次元のチャートを図 20

3

及び 21に示す。

上記実施例 4〜6で得られた環状ィ匕合物は、その物理ィ匕学的性状より、以下の式で示される構造を有する化合物であると同定された。

[化 5]

0

_>7 . L

化合物 E R⁴ OH、 R⁵： Cl、 R⁶ + R'：

化合物 F R⁴ OH、 R⁵： Cl、 R⁶： OH、 R⁷： CH₂OCH₃

O

化合物 G R⁴ H、 R⁵： Cl、 R⁶ + R⁷： ~~

化合物 H R⁴ OH、 R⁵： Cl、 R⁶： OH、 R⁷： CH₂C1

0

化合物 I R⁴： OH、 R⁵： H、 R⁶ + R⁷：実施例 7

プロピオ-バタテリゥム属の菌種に対する最小発育阻止濃度 (MIC)は、 GAM寒天培地を用いて嫌気性条件にて 37°C, 24h培養後，生育の有無を測定し，判定した。本発明化合物の、プロピオ-バタテリゥムァクネス (P. acnes) JCM6425及びプロピオ-バクテリゥムグラヌ口サム (P. granulosum) GAI7414に対する MIC ( μ g/ml)は下表の通りである。

[表 7] 被験化合物 P. acnes JCM6425( \l /ml) P. granulosum GAI7414( / g/ml) 化合物 A 0.10 0.10

化合物 B 0.20 0.20

化合物 c 0.10 0.10

化合物 D 0.05 0.10

化合物 E 0.20 0J8

化合物 F 3.13 12.5

化合物 G 0.20 0.78

化合物 H 0.39 3.13

化合物！ 6.25 12.5

[0046] 実施例 8 TPA誘発マウス耳浮腫抑制活性

BDF1系雌性マウスの右耳介部の両面に TPA g/ear塗布して皮膚炎を誘発した。薬剤は、 TPA誘発の 24時間と 2時間前に右耳介部の両面に 10 Lずつ塗布した。 T PA誘発の 24時間後に右耳介部の厚さを測定し浮腫の指標とした。

(結果)本発明の化合物 Aは、 0.3%, 1%, 3%溶液塗布により，コントロールに比べてそれぞれ 7.1%, 60%, 57%の抑制活性を示した。また、化合物 Eは， 0.3%、 1%、 3% 溶液塗布により、コントロールに比べてそれぞれ 20%、 50%並びに 63%の抑制活性を示した。よって、本発明化合物は良好な抗炎症作用を有することが確認された。産業上の利用可能性

[0047] 本発明化合物はプロピオ-バタテリゥム属の菌種、特にプロピオ-バタテリゥムァクネス (Propionibacterium acnes)等に対して優れた抗菌活性を有し、抗菌剤として尋常性ざ瘡の治療に有用である。

また、本発明化合物は良好な抗炎症活性を有しており、各種炎症性疾患の予防若しくは治療に有用である。

差替え招紙（規則 ) 受理官庁記入欄 -4 この用¾は囯際出 ί!とともに受理した

(はい/いいえ)

-4-1 棺限のある職員国際事務局記入櫚 -5 この用氏が囯 ^事務局に受理された日 -5-1 榼限のある職員

差替え招紙（規則 26)

Claims

請求の範囲

下記式 (I)又は (II)で示される環状化合物又はその塩。

[化 6]

(式中、 R¹はメチル若しくはェチル基を、 R²はメチル若しくはトリフルォロメチル基を、 R ³はメトキシ'基若しくは水素原子をそれぞれ意味する。 )

[化 7]

差替え招紙（規則 ) (式中、 R⁴は水素原子又は水酸基を、 R⁵は水素原子又はクロ口原子を、 R⁶並びに R⁷は一、方が水酸基で、他方がメトキシメチル又はクロロメチル基を意味する力 \ R⁶と R⁷が一体となって、式 .

[化 8]

で示される基を意味する。 )

請求項 1に記載される式 (I)で示される環状化合物又はその塩であって、

(1) R¹がェチル基、がメチル基、且つ R³力 Sメトキシ基である化合物、

(2) R¹がメチル基、 R²がメチル '基、且つ R³がメトキシ基である化合物、

(3) R¹がェチル基、 R²がトリフルォロメチル基、且つ R³がメトキシ基である化合物、又は、

(4) R¹がェチル基、 R²がメチル '基、且つ R³が水素原子である化合物。

請求項 1に記載される式 (II)で示される環状化合物又はその塩であって、

[化 9]

( 1 ) R⁴が OH、 R⁵が Cl、且つ R⁰と R⁷が一体となって、式 ^ で示される基である化合物、

( 2 ) R⁴が OH、 R⁵が Cl、 R⁶が OH、且つ R⁷が CH₂OCH₃である化合物、

( 3 ) が H、が Cl、且つ R⁶と R⁷がー体となって、式示される基である化合物、

( 4 ) R⁴が OH、 R⁵が Cl、 R⁶が OH、且つ R⁷が C¾C1である化合物、又は

( 5 ) R⁴が OH、 R⁵が H、且つ R⁶と R⁷がー体となって、式 ^ で示される基である化合物。

[4] 請求項 1記載の化合物若しくはその塩を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。

[5] 抗菌剤である請求項 2記載の医薬組成物。

差替え招紙（規則 26) [6] 抗炎症剤である請求項 2記載の医薬組成物。

[7] 尋常性ざ瘡の予防若しくは治療剤である請求項 2記載の医薬組成物。

[8] ストレプトミセス (Streptomyces)属に属し、請求項 1記載の化合物を生産する能力を有する微生物を培養し、その培養物から請求項 1記載の化合物を単離することを特徴とする、請求項 1記載の化合物の製造法。

[9] ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q34752株若しくは請求項 1記載の化合物 (I)を生産する能力を有するその変異株を培養し、その培養物から請求項 1記載の化合物 (I)を単離することを特徴とする、請求項 1記載の化合物 (I)の製造法である請求項 8記載の製造法。

[10] ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q47152株若しくは請求項 1記載の化合物（II)を生産する能力を有するその変異株を培養し、その培養物から請求項 1記載の化合物 (Π)を単離することを特徴とする、請求項 1記載の化合物 (II)の製造法である請求項 8記載の製造法。

[11] ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q34752株並びに請求項 1記載の化合物 (I)を生産する能力を有するその変異株。

[12] ストレプトミセスエスピー（Streptomyces sp.) Q47152株並びに請求項 1記載の化合物（Π)を生産する能力を有するその変異株。

差替え周紙（規則 2β)