CN116622593B - 一株发酵用的副干酪乳杆菌及其制备抗风排酸酵素的发酵工艺 - Google Patents
一株发酵用的副干酪乳杆菌及其制备抗风排酸酵素的发酵工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于微生物技术领域,本发明涉及一株发酵用的副干酪乳杆菌及其制备抗风排酸酵素的发酵工艺。所述副干酪乳杆菌101‑M‑H‑5已于2023年05月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏编号为CGMCC No.27413。本发明所述的副干酪乳杆菌101‑M‑H‑5促进肠道中主要细菌对尿酸的分解,以该副干酪乳杆菌101‑M‑H‑5制备的发酵食品也正向调节了肠道菌群对尿酸等指标的分解排泄,进而降低血清尿酸、肌酐水平,对于痛风具有良好的预防和/或改善等功能。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域,特别涉及一株发酵用的副干酪乳杆菌及其制备抗风排酸酵素的发酵工艺的应用。
背景技术
近年来,随着生活水平的提高,人们的饮食结构发生了显著变化,由吃不饱到吃的过饱、饮食不均衡等引起的痛风等慢性疾病患者越来越多。尿酸是人类嘌呤核苷代谢的最终产物,主要由肝和肾调节其代谢平衡。不同于其他哺乳动物,灵长类动物由于尿酸降解酶的缺乏,有较高的血清尿酸水平,进而会导致高尿酸血症。肠道菌群在人类健康中扮演着多种重要的角色,具有包括复杂纤维和脂肪的代谢,免疫调节等作用,可在调节人体的体重和能量代谢方面发挥重要的作用。
肠道微生物失衡不仅与代谢综合征(MS)、肥胖、胰岛素抵抗(IR)密切相关,而且还可能增加内毒素在血液循环中的水平,进而诱导慢性炎症。既往研究表明,人体在高尿酸血症等多种代谢性疾病发生时,都存在肠道菌群的改变,主要表现为益生菌如双歧杆菌和乳酸杆菌的减少,从而导致肠道菌群的结构以及数量的变化。在健康个体中,大约70%尿酸是通过肾脏排泄,其余大约30%的在人体肠道排泄或肠内菌群分解。
成人的肠道中大约有1.5-2.5 kg的内容物,由未消化完的食物、消化液、胆汁、人体排出的废物等成分组成,同时,人体肠道内还存在着大约1014个微生物(也称为肠道菌群),约为人体细胞数量的10倍,肠道菌群构成微生态系统,参与人体营养物质消化吸收、合成、免疫调节、能量代谢等生命活动,构成肠道黏膜的保护屏障,因此,肠道菌群构成与生活习惯,饮食和许多疾病密切相关。在成年人个体中,这些肠道微生物的总重量约1271 g,相当于肝脏的重量。这些微生物编码基因的总量是人类编码基因数目的50-100倍,被统称为宏基因组。人体每日排出粪便重量的50%以上由细菌及其分解物构成。通过对肠道排泄尿酸的机制解析,人们发现肠道内细菌在嘌呤和尿酸的产生和代谢过程中扮演着重要的角色。某些肠道细菌自身能够分泌尿酸,同时死亡菌体富含嘌呤,嘌呤被机体吸收后最终代谢产物也是尿酸。然而,许多研究结果也表明,部分肠道细菌具有降解尿酸的能力。痛风患者体内肠道菌群失调导致尿酸代谢不平衡,可能是高尿酸症状的重要原因。
副干酪乳杆菌是一类革兰氏阳性、不运动、兼性厌氧的乳酸菌。许多研究表明,副干酪乳杆菌作为益生菌,定植于肠道,具有分泌细菌素、抵抗致病菌和病毒感染、调节人体免疫等生理功能。本发明筛选的副干酪乳杆菌L. paracaseiCGMCC NO. 27413,不仅能够在肠道定植正向改善肠道菌群结构,而且能有效地缓解高尿酸血症,拓展了副干酪乳杆菌作为益生菌的应用范围,对于深入挖掘益生菌的功能,开发具有更高保健价值的益生菌具有十分重要的意义。同时,副干酪乳杆菌的降尿酸潜力,也为利用膳食策略缓解高尿酸血症开辟出新的途径和解决方案。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求,本发明的目的是为了克服现有技术存在的改善痛风高尿酸病症的益生菌问题,提供了一种发酵用的副干酪乳杆菌,其具有降低体内尿酸水平的功能。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
本发明提供一种副干酪乳杆菌,命名为101-M-H-5,该菌株于2023年05月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101,分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei,保藏编号为CGMCC NO. 27413。
本发明的一个方面,提供一种益生菌组合物,其包括上述的益生菌以及医学上可接受的载体、辅料或添加剂。该益生菌组合物可以降低血清尿酸水平,降低血清肌酐水平,降低血清尿素氮水平,减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤,缓解高尿酸血症和/或缓解代谢性疾病症状。
进一步的,所述益生菌产品的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂、粉剂或缓释剂。
进一步的,组合物中副干酪乳杆菌的活菌数不低于1×106 CFU/mL。
本发明还提供上述副干酪乳杆菌的培养物,是将副干酪乳杆菌在MRS培养基中培养得到的物质。培养物可以是菌剂、上清液、发酵液、离心菌体、干燥菌体、菌粉等。
本发明还提供一种菌剂,菌剂含有上述的副干酪乳杆菌或/和上述益生菌组合物或/和上述培养物。优选的,菌剂中还包括赋形剂、稀释剂或载体。
菌剂具有下述至少一种特性:
A1) 降低血清尿酸水平;
A2) 降低血清肌酐水平;
A3) 降低血清尿素氮水平;
A4) 减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤;
A5) 缓解高尿酸血症;
A6) 缓解代谢性疾病症状。
本发明提供上述菌剂的应用:包括
B1) 在制备降低血清尿酸水平产品中的应用;
B2) 在制备降低血清肌酐水平的产品中的应用;
B3) 在制备降低血清尿素氮水平的产品中的应用;
B4) 在制备减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤的产品中的应用;
B5) 在开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风的产品中的应用;
B6) 在开发或制备治疗和/或缓解代谢性疾病的产品中的应用。
本发明还提供上述菌剂制备产品的应用,包括
C1) 在制备降低血清尿酸水平产品中的应用;
C2) 在制备降低血清肌酐水平的产品中的应用;
C3) 在制备降低血清尿素氮水平的产品中的应用;
C4) 在制备减轻高尿酸血症引起的肾脏损伤的产品中的应用;
C5) 在开发或制备治疗和/或缓解高尿酸血症或痛风的产品中的应用;
C6) 在开发或制备治疗和/或缓解代谢性疾病的产品中的应用。
另一方面,本发明还提供制备前述菌剂的方法,包括将上述副干酪乳杆菌在MRS培养基中培养的步骤。
另一方面,本发明还提供一种发酵物,其包括对上述副干酪乳杆菌进行培养,将具有抗风排酸功效的中药材进行预处理后作为培养原料,加入副干酪乳杆菌进行发酵和后熟处理,发酵液过滤后得到抗风排酸酵素原浆。
另一方面,本发明还提供一种菌剂、发酵物和/或抗风排酸酵素的制备工艺,具体包括:
发酵菌剂培养步骤:包括将副干酪乳杆菌在MRS培养基中活化及传代培养,活菌数达到1×108CFU/mL以上后,离心收集菌体,无菌水溶解,作为发酵菌剂。
中草药处理步骤:包括将中药材清洗沸水浴烫漂。具体的,中药材选自栀子、葛根、菊苣、百合和蒲公英中的一种或多种;清洗干净后沸水浴烫漂20 s-4 min不等,以达到物料表面杀菌的作用。继续添加纯净水打浆,煮沸15-20 s后冷却备用,获得中草药原液。具体的,中草药重量与纯净水体积比为(50-200g):(1-5L);优选的重量体积比为(50-150g):(2-4L),更优选为(50-150g):(3L)。发酵及后熟步骤:包括在无菌环境中,将原液无菌灌装于无菌发酵罐中,按照1-10%接入发酵种子液,置于35-39℃培养箱中,发酵12-72 h。发酵完成后,置于0-10℃低温冷藏箱中,后熟6-84 h。优选的,培养温度为36-38℃;发酵24-60 h;低温后熟温度2-6℃;后熟12-72 h,优选的发酵24-60 h、后熟30-48 h。
发酵液后处理步骤:包括在无菌环境,将发酵原液离心过滤(2000-8000 r/min,5-20 min),取上清液过100-500目滤布,即得到抗风排酸酵素原液。并按照酵素原液5-40 mL,纯净水5-100 mL,蜂蜜1-20 mL调味。无菌灌装于已灭菌的容器内,即得一种副干酪乳杆菌发酵制备的抗风排酸酵素产品。优选的,发酵原液在4000-6000 rpm下离心10-15 min,200-400目滤布过滤;优选的,按照酵素原液:纯净水体积比1:(0.5-10)比例调配,添加适量蜂蜜调味,蜂蜜加入量为2-30%的体积比。
本发明相比现有技术的有益效果为:
(1)本发明筛选获得一株具有降低尿酸水平的益生菌,该菌株经鉴定为副干酪乳杆菌,命名为101-M-H-5,该菌株于2023年05月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei,保藏编号为CGMCC NO. 27413。
(2)本发明提供了利用副干酪乳杆菌101-M-H-5制备抗风排酸酵素的工艺。使用栀子、葛根、菊苣、百合和蒲公英为原料,利用副干酪乳杆菌101-M-H-5发酵后制备抗风排酸效果优良的抗风排酸酵素。
(3)本发明发现,采用副干酪乳杆菌101-M-H-5制备的酵素能够有效降低小鼠血清尿酸(UA)水平、小鼠血清肌酐(CRE)水平、小鼠血清尿素氮(BUN)。
(4)通过实验证明,使用菌剂和其发酵物酵素可以明显降低由嘌呤代谢异常导致的高尿酸血症,降低小鼠尿酸水平,改善小鼠的痛风症状;在降低由嘌呤代谢异常导致的高尿酸血症的同时,可以显著减轻HUA伴随的肾功能损伤;降低血清中尿素氮水平,且对于患者无肾损伤的不良反应,抗风排酸酵素对急性高尿酸血症有明显的预防效果。
附图说明
图1 7株乳酸菌的形态鉴定, A为菌落形态平板图; B为革兰氏染色图;C为扫描电镜图。三组形态学鉴定的照片中菌株从左到右、从上到下的顺序为:101-M-H-5、84-M-Y-7、56-M-H-6、85-M-Y-8、51-P-Y-1、ZW、BJ。
图2 7株乳酸菌16S rDNA鉴定结果及系统发育树。
图3 7株乳酸菌抗风排酸酵素优势发酵菌种筛选。
图4 副干酪乳杆菌抗风排酸酵素对小鼠体重(A)和摄食量(B)的影响。
图5 副干酪乳杆菌抗风排酸酵素对小鼠血清尿酸水平(A)、血清肌酐水平(B)、血清尿素氮水平(C)的影响。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值,应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说,各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间,以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围,这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。应当能够理解的是,以下实施例仅用于示例性地进一步详细解释和说明本发明的内容,而不用于限制本发明。
以下实施例中,副干酪乳杆菌来源于天然发酵酵素,分离的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。其他采用的化学试剂均购自正规化学试剂供应商,纯度为分析纯。
实施例1 菌种分离纯化
将收集的天然发酵酵素产品在超净工作台中利用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释,取适当稀释倍数的菌液1 mL均匀涂布于乳酸菌鉴别培养基上,置于37℃厌氧培养箱中恒温培养48-72 h。随后取出培养基于无菌环境下挑取直径为1-2 mm、表面光滑的单菌落,利用划线法接种到新的MRS固体培养基上,多次重复,直到分离纯化出纯菌落,初步鉴定菌种为乳酸菌。将筛选出的乳酸菌利用无菌生理盐水进行梯度稀释并利用MRS固体培养基于37℃恒温培养72 h。随后根据菌落大小、颜色、光泽、透明度,挑取表面光滑且呈乳白色的单一菌落,利用划线的方法在MRS平板上连续划线纯化2-3次后,将菌株4℃冰箱保存。
实施例2 菌种鉴定
通过表型特征和16S rDNA对分纯的菌株进行系统鉴定。
(1)表型观察
分离得到的7株乳酸菌的菌落形态特征如图1A所示,菌株的菌落形态均呈乳白色,边缘比较规则呈圆形,表面光滑,菌落直径大小在1.0-1.5 mm范围内,分别将其命名为101-M-H-5、84-M-Y-7、85-M-Y-8、56-M-H-6、51-P-Y-1、ZW、BJ。将这7株乳酸菌进行革兰氏染色鉴定,并在100倍的油镜下观察菌体特征(图1B)。进一步通过扫描电镜鉴定,如图1C所示,所有菌株均为革兰氏阳性菌株,其菌体形态呈杆状且排列方式多样。
(2)16 SrDNA序列分析
分离获得的7株乳酸菌接种到MRS液体培养基中活化24 h,取1 mL菌液于1.5 mL无菌离心管中,采用Plant Zol(TransGen试剂盒)提取基因组,将提取的基因组DNA利用细菌通用引物27F(SEQ ID NO:1 5′-AGAGT TTGAT CCTGG CTCAG-3′)和1492R(SEQ ID NO:2 5′-CTACG GCTAC CTTGT TACGA -3′)扩增细菌16S rDNA。PCR条件如下:94℃ 预变性5 min;94℃ 变性30 s,57℃ 退火30 s,72℃ 延伸1.5 min,25次循环;72℃ 延伸 7 min;3% 琼脂糖电泳检测,随后将扩增样品送北京睿博兴科生物技术有限公司测序。
登录 NCBI网站,将分离获得的7株乳酸菌16S rDNA测序结果与该网站数据库中相关信息进行BLAST同源性分析和比对,鉴定菌种并进行系统发育树构建,结果如图2所示。由图2可知,编号为101-M-H-5的菌株为副干酪乳杆菌,编号为84-M-Y-7的菌株为类谷糠乳杆菌,编号为85-M-Y-8的菌株为布氏乳杆菌,编号为56-M-H-6的菌株为哈尔滨乳杆菌,编号为51-P-Y-1的菌株为谷糠乳杆菌,编号为ZW的菌株为乳酸乳球菌,编号为BJ的菌株为植物乳杆菌。
实施例3 抗风排酸酵素发酵的优势菌种筛选
选用栀子、葛根、菊苣、百合和蒲公英各100 g,流动水清洗后利用沸水浴烫漂30 s左右,榨汁,煮沸(约10-20 s),灌装至250 mL锥形瓶中,冷却备用。250 mL锥形瓶采用121℃,灭菌15 min。
将活化好的7株乳酸菌于超净工作台中接种到事先灭好菌的MRS液体培养基中进行3-4次传代培养,当活菌数达到1×108CFU/mL以上时,制成种子液备用。
将7株乳酸菌种子液按照10%的接种量分别接种到栀子、葛根、菊苣、百合和蒲公英复合液中进行发酵,发酵条件为:37℃恒温静置培养48 h,随后转置于4℃低温冷藏冰箱中后熟48 h。发酵后熟期间,每12 h测定一次pH值、总酸含量以及活菌数,共计9个样品时间点,即0、12、24、36、48、60、72、84、96 h。通过比较多指标测定结果以优选出适宜发酵菌株。
基本指标测定包括:
pH值测定:利用pH计测定;
总酸含量测定:利用氢氧化钠标准滴定溶液滴定法测定;
活菌数测定:利用平板法测定。
数据采用Graph Pad Prism 7.0绘图软件进行处理和分析作图。
结果分析:不同菌株发酵液的pH、总酸含量以及OD600值如图3所示,其中0-48 h为37℃发酵三种指标的变化趋势,48-96 h为4℃后熟三种指标的变化趋势。由图3可知,在整个发酵、后熟过程中,pH值的变化与总酸含量的变化呈负相关,而活菌数呈先上升后平缓的变化趋势。
由图3A和图3B可知,未发酵酵素原液的pH值为6.67,总酸含量为0.99 mL/L,经副干酪乳杆菌101-M-H-5、布氏乳杆菌85-M-Y-8、类谷糠乳杆菌84-M-Y-7、哈尔滨乳杆菌56-M-H-6、谷糠乳杆菌51-P-Y-1、乳酸乳球菌ZW、植物乳杆菌BJ发酵结束后(48 h),pH值依次降到了4.07、4.99、4.15、4.27、4.63、4.08。乳酸含量依次增加到9.00 mL/L、4.52 mL/L、5.86mL/L、4.89 mL/L、4.76 mL/L、5.54 mL/L、6.25 mL/L。自48 h发酵结束进入后熟阶段后,由于乳酸菌生长代谢速度变慢,96 h后熟结束后,pH值几乎没有变化,总酸含量有轻微波动,依次为9.12 mL/L、6.43 mL/L、4.86 mL/L、4.42 mL/L、5.46 mL/L、6.66 mL/L。综合而言,经副干酪乳杆菌101-M-H-5制备的抗风排酸酵素中pH值最低,总酸含量最高,其次是类谷糠乳杆菌,变化最小的布氏乳杆菌。由图3C可知,在整个发酵、后熟过程中,副干酪乳杆菌101-M-H-5制备的抗风排酸酵素的菌落总数明显高于其他6株菌株,其次是类谷糠乳杆菌,最后是布氏乳杆菌,整体变化与pH值及总酸含量变化相对应。
因此,根据上述实验结果可知,副干酪乳杆菌101-M-H-5在抗风排酸酵素体系中适应性较强,制备的抗风排酸酵素效果优于其他菌株。选取该菌株于2023年05月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,分类命名为副干酪乳杆菌L. paracasei,保藏编号为CGMCC NO. 27413,并进行后续研究。
实施例4抗风排酸酵素产品的制备
(1)发酵菌剂的制备:将发酵所用菌种副干酪乳杆菌(L. paracasei)101-M-H-5在MRS液体培养基中进行3-4次传代培养。当活菌数达到1×108CFU/mL以上时,离心收集菌体,无菌水溶解,作为发酵种子液置于4℃冰箱中保存备用。
(2)中草药原液的制备:根据抗风排酸酵素的功效需求,选择栀子、葛根、菊苣、百合和蒲公英各100 g,清洗干净后沸水浴烫漂30 s左右,以达到物料灭菌的作用。随后,添加纯净水3000 mL,利用打浆机打浆,煮沸15-20 s后冷却,即获得中草药原液。
(3)发酵及后熟:在无菌环境中,将中草药原液无菌灌装于无菌发酵罐中,按照10%接入发酵种子液,置于37℃培养箱中,发酵48 h。发酵完成后,置于4℃低温冷藏箱中,后熟48 h。
(4)发酵液后处理:在无菌环境,将发酵原液离心过滤,4000 r/min离心10 min,取上清液过300目滤布,即得到抗风排酸酵素原液。按照酵素原液20 mL,纯净水20 mL,蜂蜜5mL调味。无菌灌装于已灭菌的容器内,即得一种副干酪乳杆菌发酵制备的抗风排酸酵素产品。
实施例5降尿酸活性评估
(1)降尿酸评估模型搭建:
① 模型分组:共设置5个分组。空白对照组(Control)和模型对照组(Model)每天灌胃等体积的0.5%的羧甲基纤维素钠溶液,阳性对照组灌胃给予30 mg/kg/d别嘌呤醇(Allopurinol),未发酵组(Unfermentable)灌胃给予未发酵原液(4.5 mg/10 g小鼠体重),菌剂组(Bacterial powder)灌胃给予菌粉(4.5 mg/10 g小鼠体重),酵素组(Ferment)灌胃给予酵素原液(30 mg/10 g小鼠体重)。
未发酵原液样品(未发酵组):实施例4中步骤(2)熬煮、烫漂后的中草药原液,相同条件离心后,冻干制成的未发酵原液样品,未加入副干酪乳杆菌。
菌剂样品(菌剂组):实施例4中步骤(1)离心收集的副干酪乳杆菌101-M-H-5菌体,其活菌数不低于1×108CFU/mL,进而冻干制成菌剂。
酵素原液样品(酵素组):按照实施例4制备获得的抗风排酸酵素原液,活菌数不低于1×106CFU/mL的发酵液,离心后冻干制成的酵素原液样品。
② 给药方式:采用预防性给药联合造模给药方式,灌胃每日一次,灌胃体积为0.1mL/10 g。以上各组连续给药14天,每天一次,最后一次给药前30 min,除空白对照组除外,其他各种腹腔注射次黄嘌呤1000 mg/kg造成急性HUA模型,并禁食。45 min后,眼眶采血,5000 r/min离心10 min,分离上清液用于测定相关指标,其余血清-80℃冷冻。
(2)小鼠体重、摄食量差异:在造模过程中,小鼠体重、摄食量未见差异(图4)。在预防性给药期间,菌剂、酵素、未发酵原液对小鼠均没有不良影响。
表 1 不同实验组的生化指标
(3)小鼠血清尿酸(UA)水平:如表1所示,腹腔注射次黄嘌呤45 min后小鼠血清UA水平平均升高显著高于正常对照组,说明小鼠急性HUA造模成功。菌剂组灌胃给药14天后,可以明显缓解小鼠HUA,使血清UA水平较模型组明显下降(P<0.05),酵素和未发酵两组UA水平也呈现下降趋势(图5A)。与模型组相比,作为阳性药的别嘌醇(Allopurinol,CAS:315-30-0),以10 mg/kg的剂量灌胃给药14天后,可以使小鼠血清UA水平降至接近正常范围(P<0.01)。菌剂组降低UA水平的效果更优,侧面证明副干酪乳杆菌101-M-H-5菌剂能够定植于小鼠的肠道,调节肠道菌群结构,显著降低由嘌呤代谢异常导致的高尿酸血症,改善小鼠的痛风症状。
(4)小鼠血清肌酐(CRE)水平:如表1所示,腹腔注射次黄嘌呤45 min后,小鼠CRE水平无明显变化,各给药组与正常组之间没有明显区别(图5B)。说明药物对小鼠肾功能没有太大影响。但是,与阳性药别嘌呤醇组比,菌剂、酵素、未发酵三组CRE水平较低,前两组效果更优于未发酵组,再次说明菌剂能够在肠道定植,以及酵素中益生元能够正向干预肠道菌群,在降低由嘌呤代谢异常导致的高尿酸血症的同时,可以显著减轻HUA伴随的肾功能损伤。
(5)小鼠血清尿素氮(BUN)水平:如表1所示,在肾功能不全失代偿时,BUN将升高。与模型组比较,未发酵组小鼠血清中尿素氮水平降低,其他组别没有明显差异(图5C)。在本实验中,次黄嘌呤未对动物肾功能指标如BUN造成影响,与模型组相比,各给药组的这些指标没有显著性差异。阳性药别嘌醇组BUN明显升高,表明阳性药会引起肾损伤,各给药组的这些指标没有显著性差异,菌剂组、酵素组与别嘌呤醇组比较,对于患者无肾损伤的不良反应,表明副干酪乳杆菌制备的抗风排酸酵素对急性高尿酸血症有明显的预防效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种副干酪乳杆菌,其特征在于,菌株命名为101-M-H-5,该菌株于2023年05月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei,保藏编号为CGMCC NO. 27413。
2.一种益生菌组合物,其特征在于,包含权利要求1所述的副干酪乳杆菌。
3.一种培养物,其特征在于,包括将权利要求1所述的副干酪乳杆菌在MRS培养基中培养得到的物质。
4.一种菌剂,其特征在于:
所述菌剂含有权利要求1所述的副干酪乳杆菌或/和权利要求2所述的益生菌组合物或/和权利要求3所述的培养物。
5.如权利要求4所述的菌剂,其特征在于,菌剂中还包括赋形剂、稀释剂或载体。
6.如权利要求4所述的菌剂,其特征在于:
所述菌剂具有下述至少一种特性:
A1)降低血清尿酸水平;
A2)缓解高尿酸血症。
7.如权利要求4-6任一所述的菌剂的下述至少一种应用:
B1)在制备降低血清尿酸水平产品中的应用;
B2)在制备治疗和/或缓解高尿酸血症产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述产品为药物。
9.一种制备抗风排酸酵素的方法,其特征在于,包括将权利要求1所述的副干酪乳杆菌在MRS培养基中培养的步骤,将具有抗风排酸功效的中药材进行预处理后作为培养原料,加入副干酪乳杆菌进行发酵和后熟处理,发酵液过滤后得到抗风排酸酵素原浆。
10.如权利要求9所述制备抗风排酸酵素的方法,其特征在于,中药材选自栀子、葛根、菊苣、百合和蒲公英中的一种或多种。
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Citations (6)
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---|---|---|---|---|
WO2006073151A1 (ja) * | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Astellas Pharma Inc. | 新規発酵生産物 |
CN115364178A (zh) * | 2021-09-14 | 2022-11-22 | 育米生物科技(云南)有限公司 | 一种适用于高尿酸及痛风人群的药食同源酵素及其制备方法 |
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CN116139177A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-05-23 | 四川高福记生物科技有限公司 | 用于防治代谢性疾病的植物乳杆菌组合物及其应用 |
CN116254190A (zh) * | 2022-11-18 | 2023-06-13 | 东北农业大学 | 一种副干酪乳杆菌亚种及其应用 |
CN116445327A (zh) * | 2023-01-19 | 2023-07-18 | 杭州娃哈哈科技有限公司 | 一种降血脂多元益生菌及其应用 |
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---|---|---|---|---|
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006073151A1 (ja) * | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Astellas Pharma Inc. | 新規発酵生産物 |
CN115364178A (zh) * | 2021-09-14 | 2022-11-22 | 育米生物科技(云南)有限公司 | 一种适用于高尿酸及痛风人群的药食同源酵素及其制备方法 |
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CN116254190A (zh) * | 2022-11-18 | 2023-06-13 | 东北农业大学 | 一种副干酪乳杆菌亚种及其应用 |
CN116445327A (zh) * | 2023-01-19 | 2023-07-18 | 杭州娃哈哈科技有限公司 | 一种降血脂多元益生菌及其应用 |
CN116139177A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-05-23 | 四川高福记生物科技有限公司 | 用于防治代谢性疾病的植物乳杆菌组合物及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
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全国人民代表大会常务委员会.《中华人民共和国食品安全法》.2021,第828页. * |
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