JP4028593B2 - ３−ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドａ含有ワクチン組成物 - Google Patents
３−ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドａ含有ワクチン組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4028593B2 JP4028593B2 JP52064094A JP52064094A JP4028593B2 JP 4028593 B2 JP4028593 B2 JP 4028593B2 JP 52064094 A JP52064094 A JP 52064094A JP 52064094 A JP52064094 A JP 52064094A JP 4028593 B2 JP4028593 B2 JP 4028593B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mpl
- vaccine composition
- composition according
- antigen
- hbsag
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7024—Esters of saccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Description
本発明は、新規ワクチン処方、それらの製造方法および治療におけるそれらの使用に関する。
３−Ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（または３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ）は、グルコサミンの還元末端の３位がデ−Ｏ−アシル化されていることを示すので、以前は３Ｄ−ＭＰＬまたはｄ３−ＭＰＬと呼ばれていた。製造についてはＧＢ２２２０２２１Ａ参照。化学的には、該物質は、４、５または６位がアシル化された鎖を有する３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。本明細書においては、「ＭＰＬ」は、モンタナ州のリビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）により、その３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ製品を明示するために使用される登録商標であるため、本明細書においては３Ｄ−ＭＰＬ（またはｄ３−ＭＰＬ）をＭＰＬと略する。
ＧＢ２２２０２２１Ａには、以前使用されていた腸内細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）のエンドトキシン毒性が減じられるが、その一方で、免疫原としての特性が変化することが述られている。しかしながら、ＧＢ２２２０２２１には、細菌（グラム陰性）の系との関連においてのみこれらの知見が引用されている。ＭＰＬの粒子サイズは述べられていなかった。実際、知られている３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡは、粒子サイズが５００ｎｍを超えるものがある。
ＷＯ９２／１６２３１には、３−脱アシル化リピドＡに抱合した単純ヘルペスウイルス糖蛋白ｇＤまたはその免疫学的フラグメントからなるワクチン処方が開示された。やはり、３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの粒子サイズは述べられていなかった。
ＷＯ９２／０６１１３には、３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡに結合した、ＨＩＶｇｐ１６０、またはｇｐ１２０のごときその透導体からなるワクチン処方が開示された。ＭＰＬの粒子サイズは述べられていなかった。
本発明は、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（本明細書ではＭＰＬと略す）と抱合した抗原および適当な担体からなり、ＭＰＬ粒子サイズが「小さく」、調製された場合に一般的には１２０ｎｍを超えないワクチン組成物を提供する。
かかる処方は、広範囲の１価または多価ワクチンに適する。
驚くべきことに、本発明ワクチン組成物が本明細書記載の有利な特性を特別に有することが見いだされた。詳細には、かかる処方は非常に免疫原性がある。さらに、製品は除菌濾過が可能であるので、アジュバント処方の滅菌状態が保証されうる。ＭＰＬは水酸化アルミニウムおよび抗原と相互作用して単一物を形成するため、水酸化アルミニウムとともに処方された場合に「小さい」ＭＰＬのさらなる利点が生じる。
本発明の具体例において、抗原はウイルス抗原、例えば、下記の肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥ型肝炎）感染またはヘルペス（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）感染に対する抗原である。多くの鍵となる文献を包含している現代の肝炎ワクチンに関する概説は、１９９０年５月１２日付けのランセット（Lancet）の１１４２ｆｆ頁（エイ・エル・ダブリュウ・エフ・エドレストン（A.L.W.F.Eddleston）教授著）において見いだすことができる。さらに「ウイラル・ヘパティティス・アンド・リバー・ディジーズ（Viral Hepatitis and Liver Disease）」（ビアス，ビー・エヌ（Vyas,B.N.）、ディエンスタグ，ジェイ・エル（Dienstag,J.L.）およびホーフナグル，ジェイ・エイチ（Hoofnagle,J.H.）編，グルネ・アンド・ストラットン，インコーポレイテッド（Grune and Stratton,Inc.）（１９８４年））および「ウイラル・ヘパティティス・アンド・リバー・ディジーズ（Viral Hepatitis and Liver Disease）」（１９９０年国際シンポジウムのプロシーディングス，エフ・ビー・ホリンガー（F.B.Hollinger）、エス・エム・レモン（S.M.Lemon）およびエイチ・マーゴリス（H.Margolis）編，ウィリアムス・アンド・ウィルキンス（Williams and Wilkins）により出版）参照のこと。ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に関する文献は、ＷＯ９２／１６２３１において見いだすことができる。
Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）での感染は、広範囲にわたる問題であるが、大量の人を免疫するために使用することのできるワクチン、例えば、ＨＡＶのＨＭ−１７５株から得られる死滅弱毒ワクチン製品「ハブリックス（Havrix）」（スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルズ（SmithKline Beecham Biologicals）製が市販されている［エフ・イー・アンドレ（F.E.Andre）、エイ・ヘプバン（A.Hepburn），プログ・メディ・ウイロロ（Prog.Med.Virol.）第３７巻７２〜９５頁の「インアクチベーティッド・キャンディデイト・ワクチンズ・フォー・ヘパティティス・Ａ（Inactivated Candidate Vaccines for Heppatitis A）」および製品のモノグラフ「ハブリックス・パブリッシュト・バイ・スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルズ（Havrix Published by SmithKline Beecham Biologicals（１９９１年）」参照］。
フレーミング（上記文献５６〜７１頁）は、Ａ型肝炎の臨床的局面、ウイルス学、免疫学および伝染病学について概説し、このありふれたウイルス感染に対するワクチンの開発のアプローチについて議論している。
本明細書で用いる表現「ＨＡＶ抗原」は、ヒトにおいてＨＡＶに対する中和抗体を刺激することのできるすべての抗原をいう。ＨＡＶ抗原は、生きた弱毒ウイルス粒子または不活性化弱毒ウイルス粒子からなっていてもよく、あるいは例えば、組み換えＤＮＡ法により便利に得ることにできるＨＡＶキャプシドまたはＨＡＶウイルス蛋白であってもよい。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）での感染は、広範囲にわたる問題であるが、大量の人を免疫するために使用することのできるワクチン、例えば、遺伝子操作法により得られる製品「エンジェリックス−Ｂ（Engerix-B）」（スミスクライン・ビーチャム・ピ−エルシー（SmithKline Beecham plc）製）が市販されている。
Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の製造も十分に開示されている。例えば、ハーフォード（Harford）ら，ディベロップ・バイオロ・スタンダード（Divelop.Biol.Standard）第５４巻，１２５頁（１９８３年）、グレッグ（Gregg）ら，バイオテクノロジー（Biotechnology）第５巻，４７９頁（１９８７年）、ＥＰ−Ａ−０２２６８４６、ＥＰ−Ａ−２９９およびそれらの中の文献参照。
本明細書に用いる表現「Ｂ型肝炎表面抗原」または「ＨＢｓＡｇ」は、ＨＢＶ表面抗原の抗原性を示すすべてのＨＢｓＡｇ抗原またはそのフラグメントを包含する。ＨＢｓＡｇ Ｓ抗原の２２６個のアミノ酸配列（チオライス（Tiollais）ら，ネイチャー（Nature）第３１７巻，４８９頁（１９８５年）およびその中の文献参照）の他に、本明細書記載のＨＢｓＡｇは、所望であれば、上記文献およびＥＰ−Ａ−１２７８９４０に記載のプレ−Ｓ配列のすべてまたは一部分を含んでいてもよい。詳細には、ＨＢｓＡｇは、ａｂ血清型のＢ型肝炎ウイルス上のオープンリーディングフレームに関するＬ−蛋白の残基１２〜５２、１３３〜１４５および１７５〜４００からなるアミノ酸配列よりなるポリペプチドからなる（このポリペプチドはＬ＊と呼ばれる；ＥＰ０４１４３７４参照）。本発明の範囲内のＨＢｓＡｇは、ＥＰ０１９８４７４（エンドトロニクス（Endotronics）社）に記載のごときプレＳ１−プレＳ２−ＳポリペプチドまたはＥＰ０３０４５７８（マコーミック・アンド・ジョーンズ（Mc Cormick and Jones））に記載のごときそのアナログを包含してもよい。本明細書記載のＨＢｓＡｇは、変異種、例えば、ＷＯ９１／１４７０３または欧州特許出願公開第０５１１８５５Ａ１号記載の「エスケープ変異種」とも呼ばれ、特に、１４５番目の位置でのアミノ酸置換がグリシンからアルギニンへの置換となっている。
通常は、ＨＢｓＡｇは粒子形態であろう。該粒子は、例えば、Ｓ蛋白のみからなっていてもよく、あるいは、例えば、Ｌ＊が上記定義と同じでありＳがＨＢｓＡｇのＳ−蛋白を意味する（Ｌ＊，Ｓ）である成分蛋白であってもよい。有利には、該粒子は、酵母において発現される形態である。
単純ヘルペスウイルス糖蛋白はＤウイルス外套上に存在し、感染された細胞の細胞質にも見いだされる（アイゼンベルグ，アール・ジェイ（Eisenberg R.J.）ら，ジャーナル・オブ・ウイロロジー（J.of Virol.），１９８９年，第３５巻４２８〜４３５頁）。それはシグナルペプチド含む３９３個のアミノ酸からなり、約６０ｋＤの分子量を有する。おそらく、すべてのＨＳＶ外套糖蛋白のうち、この糖蛋白が最もよく特徴づけられているであろう（コーエン（Cohen）ら，ウイロロジー（Virology）第６０巻１５７〜１６６頁）。インビボにおいて、それは、細胞膜へのウイルスの付着に中心的役割を果たしていること知られている。さらにそのうえ、糖蛋白Ｄは、インビボにおいて中和抗体を誘導することができることが示されている（エイング（Eing）ら，ジャーナル・オブ・メディカル・ウイロロジー（J.Med.Virol.）第１２７巻：５９〜６５頁）。しかしながら、潜伏しているＨＳＶ２ウイルスは、やはり、再活性化され、患者の血清中の高い中和抗体の力価にもかかわらず、疾病の再発を誘導しうる。それゆえ、中和抗体のみを誘導する能力が、疾病を十分に抑制するには不十分であると考えられる。
哺乳動物細胞から分泌された成熟組み換え型切断糖蛋白Ｄ（ｒｇＤ２ｔ）または同等蛋白は、好ましくは、本発明ワクチン処方中に使用される。同等蛋白はＨＳＶ−１由来の糖蛋白ｇＤを包含する。
好ましい態様において、ｒｇＤ２ｔは、天然に存在する糖蛋白の１から３０６までのアミノ酸とそのＣ末端にアスパラギンおよびグルタミンを付加したものからなる３０８個のアミノ酸であるＨＳＶ−２糖蛋白Ｄである。該蛋白のこの形態は、開裂されて２８３個のアミノ酸の成熟蛋白を生じるシグナルペプチドを含んでいる。チャイニーズハムスター卵巣細胞におけるかかる蛋白の生産は、ジェネンテック（Genentech）社の欧州特許ＥＰ−Ｂ−１３９４１７号およびサイエンス（Science）第２２２巻５２４頁、ならびにバイオテクノロジー（Biotechnology），１９８４年６月，５２７頁に記載されている。本発明によれば、かかるワクチンが小型のＭＰＬとともに処方された場合、既知のｒｇＤ２ｔ処方と比較すると、すばらしい治療能力を有する。
ある種の実験的および市販のワクチンは優れた結果を得ているが、最適なワクチンは中和抗体を刺激する必要があるのみならずＴ細胞により媒介される細胞性免疫を可能なかぎり刺激する必要があるということが、認識されている事実である。
特別な利点は、たとえ非常に低用量の抗原が存在している場合にでさえ、防御的免疫性を誘導することにおいて、本発明ワクチン処方は非常に有効であるということである。
本発明ワクチン処方は、一次感染および再発性感染に対して優れた防御を提供し、有利なことに、特異的な体液性免疫応答（中和抗体）ならびにエフェクター細胞により媒介される（ＤＴＨ）免疫応答の両方を刺激する。
通常１２０ｎｍを越えない小さい粒子サイズの３脱アシル化モノホスホリルリピドＡを調製するためには、ＧＢ２２２０２１１記載の方法にしたがって既知の３Ｄ−ＭＰＬを得て（あるいは、リビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）から市販されているより大きな粒子サイズのＭＰＬを得て）、次いで、懸濁液が透明になるまで生成物を超音波処理することができる。下記のごとく、ダイナミック・ライト・スキャタリング（dynamic light scattering）を用いて粒子サイズを測定してもよい。水酸化アルミニウムとともに処方した後のＭＰＬサイズを１００ｎｍの範囲に維持するためには、抗原、緩衝液、ツイン８０またはソルビトールを添加することができる。これらの条件下では、ＭＰＬはリン酸緩衝液の存在下において凝集しない（処方調製中にそれらの物質がなければ凝集しうる）ことが確認されている。そのようにすることにより、最終処方がさらに定義され特徴づけられる。また、これらの条件下では、ＭＰＬは水酸化アルミニウムとさらに反応し、抗原は単一物となることが確認されている。
ＭＰＬの透明溶液は本発明の態様を形成する。フィルターを通過させることにより、この溶液を滅菌してもよい。
好ましくは、粒子サイズは６０〜１２０ｎｍの範囲である。
最も有利には、粒子サイズは１００ｎｍ未満である。
上記定義のＭＰＬは、通常は、１回分につき１０〜２００μｇ、好ましくは２５〜５０μｇの範囲で提供され、典型的には、抗原は１回分につき２〜５０μｇの範囲またはそれ以上の量で存在する。本発明ワクチン処方は、さらに、免疫刺激剤を含有していてもよく、本発明ワクチンの好ましい具体例においてはＱＳ２１（時々ＱＡ２１と呼ばれる）を含有していてもよい。これは、キラジャ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮から抽出されるサポニンのＨＰＬＣによる画分であり、その製造方法は米国特許５，０５７，５４０号に開示されている。
所望により、担体は、水中油エマルジョン、脂質担体、または水酸化アルミニウム（水酸化アルミニウム塩）であってよい。
好ましくは、無毒の水中油エマルジョンは、例えばスクアレンのような無毒の油およびツイン８０のごとき乳化剤を水性担体中に含有している。水性担体は、例えば、リン酸緩衝化セイラインであってもよい。
好ましくは、ワクチン処方は、ヒトまたは動物の病原体に対する免疫応答を誘導することのできる抗原または抗原性成分を含有している。該抗原または抗原性成分は、ＨＩＶ−１由来のもの（ｇｐ１２０またはｇｐ１６０のごとき；ＷＯ９２／０６１１３およびその中の文献参照）、ｇＤ誘導体のごときヘルペスウイルス由来のもの、またはＨＳＶ−１もしくはＨＳＶ−２由来のＩＣＰ２７のごとき即時型初期蛋白、ヒトサイトメガロウイルス由来のｇＢ（もしくはその誘導体）、または水痘−帯状疱疹ウイルス由来のｇｐＩ、IIもしくはIII、もしくはＢ型肝炎ウイルスのごとき肝炎ウイルス由来のもの、もしくは呼吸器合胞体ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルスもしくはインフルエンザウイルスのごとき他のウイルス性病原体由来のものであるか、あるいはサルモネラ（Salmonella）、ネイセリア（Neisseria）、ボレリア（Borrelia）（例えば、ＯｓｐＡまたはＯｓｐＢもしくはそれらの誘導体）、またはクラミジア（Chlamydia）、もしくは例えばＰ．６９、ＰＴおよびＦＨＡのごときボルデテラ（Bordetella）に対するものであるか、またはプラスモジウム（plasmodium）もしくはトキソプラズマ（Toxoplasma）のごとき寄生体に対するものである。本発明ワクチン処方は、腫瘍抗原を含有していてもよく、抗癌ワクチンとして有用でありうる。
本発明の１の具体例は、下記のごときＭＰＬおよび水酸化アルミニウムと混合されたＨＡＶ抗原（例えばハブリックス（Havrix）のごとき）である。
本発明のさらなる具体例は、下記のごときＭＰＬおよび水酸化アルミニウムと混合されたＨＢウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）（例えば、エンジェリックス−Ｂ（Engerix-B）のごとき）である。
本発明のさらなる特別な具体例は、ＭＰＬおよび水酸化アルミニウムと混合された、上記定義の（Ｌ＊，Ｓ）粒子としてのＨＢｓＡｇ抗原である。
Ａ型肝炎とＢ型肝炎との混合ワクチンを本発明により製造してもよい。
さらなる具体例は、上記成熟切断糖蛋白Ｄ（ｒｇＤ２ｔ）または同等蛋白からなる本発明処方である。そのうえ、さらなる具体例は、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）由来のＯｓｐＡ抗原またはその誘導体からなる本発明処方である。例えば、抗原、特にＺＳ７またはＢ３１株由来のＯＳｐＡ抗原が使用される。さらなる具体例は、インフルエンザ（flu）抗原からなる本発明処方である。これは、特に「スプリット（split）」ウイルスを使用した場合に改良されたインフルエンザワクチンを提供する。
さらに本発明処方は、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８２４および国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／００１７９に記載のごときヘルペス軽粒子（herpetic light particles）との使用に有用である。
有利には、本発明ワクチン組成物は、１種またはそれ以上の細菌性、ウイルス性または真菌性感染の治療または予防に有効なように、他の抗原を含有する。
例えば、本発明肝炎ワクチン処方は、好ましくは、ジフテリア、破傷風、百日咳、ヘモフィルス・インフルエンゼｂ（Haemophilus influenzae b）（Ｈｉｂ）およびポリオのうちの１種またはそれ以上に対する防御を提供することが当該分野において知られている肝炎以外の抗原から選択される少なくとも１つの他の成分を含有する。
好ましくは、本発明ワクチンは、上記定義のＨＢｓＡｇを含有する。
本発明の範囲内の特別な複合ワクチンは、ＤＴＰ（ジフテリア、破傷風、百日咳）−Ｂ型肝炎複合ワクチン処方、Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方、ＤＴＰ−Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方およびＩＰＶ（不活性化ポリオワクチン）−ＤＴＰ−Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方を包含する。
有利には、上記複合ワクチンは、Ａ型肝炎に対して防御的な成分、特にハービックス中に存在するようなＨＭ−１７５株由来の死滅弱毒株を包含する。
かかるワクチン中に使用する安定な成分は、すでに市販されており、詳細は世界保健機構（World Health Organization）から得られる。例えば、ＩＰＶ成分はサルク不活性化ポリオワクチン（Salk inactivated polio vaccine）であってもよい。
有利には、本発明肝炎または複合ワクチンは小児用ワクチンである。
さらなる態様において、本発明は、医学的治療、特に、ウイルス性および細菌性感染の治療もしくは予防、または癌の免疫療法のための治療に使用する本発明ワクチン組成物を提供する。好ましい態様において、本発明ワクチンは、進行中の感染、例えば罹患しているヒトのＢ型肝炎またはヘルペス感染の治療に有用な治療用ワクチンである。
一般的には、ワクチン標品は、ニュー・トレンズ・アンド・ディベロップメンツ・イン・ワクチンズ（New Trends and Developments in Vaccines），ヴォラー（Voller）ら編，米国メリーランド州ボルチモアのユニバーシティー・パーク・プレス（University Park Press）（１９７８年）に記載されている。リポソームへの封入は、例えば、フラートン（Fullerton）の米国特許第４，２３５，８７７号に記載されている。高分子への蛋白の抱合は、例えば、ライクハイト（Likehite）の米国特許第４，３７２，９４５号およびアーマー（Armor）らの米国特許第４，４７４，７５７号に開示されている。
ワクチン１回分の抗原量は、典型的なワクチンの有意かつ不利な効果を伴わずに免疫防御応答を誘導する量として選択される。かかる量は、使用される個々の免疫原により変更される。一般的には、１回分は全免疫原１〜１０００μｇ、好ましくは２〜１００μｇ、最も好ましくは４〜４０μｇからなる。個々のワクチンの最適量は、対象中の抗体力価および他の応答の観察をはじめとする標準的研究により確認することができる。最初のワクチン接種の後、約４週間たってから対象に追加免疫を行ってもよい。
本発明のさらなる態様において、抗原を担体およびＭＰＬと混合することからなる、感染の予防または治療に有効なワクチンの製造方法が提供される。ここに、粒子サイズは１２０ｎｍ未満、通常は６０〜１２０ｎｍ、好ましくは約１００ｎｍまたはそれ未満である。
以下の実施例は本発明およびその利点を説明する。
実施例１： ６０〜１２０ｎｍの粒子サイズのＭＰＬの調製
モンタナ州のリビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）社製の凍結乾燥した３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）の入ったバイアルに、シリンジを用いて、注射用水を添加して、１ｍｌあたり１ないし２ｍｇの濃度とする。ボルテックス（vortex）用いて混合することにより予備的な懸濁液を得る。次いで、バイアルの内容物を２５ｍｌの丸底コルテックス試験管（Cortex tubes)（１本あたり懸濁液１０ｍｌ）中に移し、水浴ソニケーターを用いて懸濁液を超音波処理する。懸濁液が透明になったら、ダイナミック・ライト・スキャッタリング（dynamic light scattering）（マルバーン・ゼータサイザー３（Malvern Zetasizer3））を用いて粒子サイズを測定する。ＭＰＬ粒子のサイズが６０〜１２０ｎｍの範囲になるまで処理を繰り返す。
いくつかの場合には、懸濁液は、有意な凝集を伴わずに、４℃で５カ月まで保存される。等張ＮａＣｌ（０．１５Ｍ）または等張ＮａＣｌに１０ｍＭリン酸を添加したものは急激な凝集（サイズ＞３〜５μｍ）を誘導する。
実施例２： 粒子サイズ１００ｎｍ未満の滅菌可溶性ＭＰＬの大規模生産
３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡをリビ・イミュノケムから得、注射用水（ＷＦＩ）に懸濁した。懸濁液をポンプで超音波フローセル（ultrasound flow cell）に通過させた。典型的には、フローセルは、ＧＭＰ圧に対抗するためにＰＴＦＥシールのついたガラスまたはステンレス鋼でできている。ウンダチム・ウルトラソニックス（Undatim Ultrasonic）社製（ベルギーのルーベン−ラ−ヌーブ（Louvain-La-Nouve））の超音波発生装置およびチタン製ホーン（ソノトロード（sonotrode））を用いて超音波を発生させる。ループ中に熱交換器を設けて生成物の熱分解を回避する。フローセルの入り口と出口との間にあるＭＰＬの温度を＋４℃ないし３０℃の間に維持し、入り口と出口との間の温度差を２０℃未満に維持する。熱は、さらに器具中を伝導して除去されることが理解されよう。
使用装置を図１に図式的に示す。
２．１ 超音波処理
ＭＰＬ粉末（５０ないし５００ｍｇ）を、１ないし２ｍｇ／ｍｌの濃度でＷＦＩに懸濁する。
ＭＰＬ懸濁液（攪拌条件下）を、１分間に５０ないし１００ｍｌの流速で連続的に超音波処理ループを通過させて（図１参照）＋４℃ないし＋１５℃の間の系の平衡温度に到達させる。
システム配置中の超音波ホーンの固有周波数スペクトル（出力、フローセル、流速、Ｔ°）を、装置の供給者の説明に従ってセットする。前以て設定された範囲は、２００００ヘルツの変換器に関しては１９０００ヘルツないし２１０００ヘルツの間に固定される。
超音波発生装置は、一定の時間間隔における超音波処理の最適有効性（より発熱が少なく、よりエネルギー伝導が多い）の調節が可能である。
処理を行っている間の温度を３０℃未満に維持してＭＰＬの分解を回避する。
粒子サイズが１００ｎｍ未満になり、溶液が肉眼で観察して透明になった時、処理を完了する。超音波処理中、実施例１と同じやり方でマルバーン・ゼータサイザー３型を用いる光相関分光法（photocorrelation spectroscopy）（ダイナミック・ライト・スキャッタリング）による粒子サイズ測定のために、超音波処理試料を取る。超音波処理フローセルにおける液体の全滞留時間は、フローセル体積２０ｍｌ、循環流速５０ｍｌ／分を用いると、２．５ないし３．５分であると計算される（表１参照）。この流速は、１サイクルあたり２５秒の平均滞留時間を与え、通常、小型粒子ＭＰＬに対する所望の効果を得るには１０サイクル未満が必要である。
２．２ 滅菌処理
得られた「可溶性」ＭＰＬを、親水性ＰＶＤＦ０．２２ミクロン膜によるデッドエンド濾過により滅菌する。観察される圧力は、通常、１バール未満である。１平方センチメーターあたり、少なくとも２５ｍｇの「可溶性」ＭＰＬが容易に処理され、回収率は約８５％である。
２．３ 保存／安定性
滅菌「可溶性」ＭＰＬを＋２℃ないし＋８℃で保存する。安定性のデータ（マルバーン（Malvern））によれば、６カ月保存後の実際の粒子サイズについて有意な差異はまったく示されていない（表２参照）。
実施例３： Ｂ型肝炎ワクチン処方
実施例１と同様にして、ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を得た。水酸化アルミニウム（アルハイドロゲル（Alhydrogel）をスーパーフォス（Superfos）社から得た。
ＭＰＬを、０．２ないし１ｍｇ／ｍｌの種々の濃度で注射用水に再懸濁し、水浴中での超音波処理により、粒子サイズを光相関スキャッタリングにより測定した場合に８０ないし５００ｎｍの間となるようにした。
リン酸緩衝溶液中の１ないし２０μｇのＨＢｓＡｇ（エンジェリックスＢ中と同様のＳ−抗原）を、３０ないし１００μｇの水酸化アルミニウムに室温で１時間攪拌しながら吸着させる。体積およびオスモル濃度を注射用水および５倍濃度のリン酸緩衝液で調節して６００μｌとする。溶液を室温で１時間インキュベーションし、使用するまで４℃で保存する。処方の成熟が保存中に起こる。これにより、マウスにおいて１０回分の注射用量が得られる。
実施例４： Ａ型肝炎ワクチン処方
実施例１に記載のようにして、ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を得た。水酸化アルミニウム（アルハイドロゲル（Alhydrogel））をスーパーフォス（Superfos）社から得た。
ＨＡＶ（１回分あたり３６０ないし２２ＥＵ）を、最終濃度１０％の水酸化アルミニウムに吸着させる（０．５ｍｇ／ｍｌ）。ＭＰＬ（１回分あたり１２．５ないし１００μｇ）を溶液に添加する。
残りの水酸化アルミニウムを溶液に添加し、室温でさらに１時間放置する。リン酸緩衝液（リン酸１０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で体積を調節し、次いで、最終処方を使用するまで４℃で保存する。
実施例５： 組み換え型単純ヘルペスウイルス糖蛋白Ｄサブユニットワクチンに対するアジュバント効果の比較
５．１ この研究において、２型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ２）（ｒｇＤ２ｔ）由来の切断された糖蛋白Ｄの防御的免疫性を改善する種々のＡｌ（ＯＨ）3処方の能力を、モルモットを用いた予防的および治療的もでるにおいて評価した。霊長類における免疫原性の研究も行った。これらの実験の目的は、げっ歯類および霊長類におけるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬの免疫原性および防御有効性に対する３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）のサイズの影響を調べることであった。小型ＭＰＬの３種の異なるＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方を試験した：
Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ（上記のものと同じ）
ソルビトールを伴うＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
ツインを伴うＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
５．２ 抗原−アジュバント標品および免疫スケジュール
５．２．１ 抗原処方
水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）3）を、デンマークのスーパーフォス（Superfos）社から得た。ＭＰＬを、リビ・イミュノケム・リサーチ・インコーポレイテッド（Ribi Immunochem Research Inc.）から得た。
５．２．１．１ ｒｇＤ2ｔ（Ａｌ（ＯＨ）3）／ＭＰＬ ＴＥＡ
ＭＰＬを水浴で超音波処理することにより再懸濁して２００ないし６００ｎｍの間のサイズとした。特許出願ＷＯ９２／１６２３１の方法により標品を調製し、使用するまで４℃で保存した。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．２．１．２ ｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3／ＭＰＬ １００ｎｍ
実施例１に記載のようにして、ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を得た。ｒｇＤ2ｔを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。ＭＰＬを溶液に添加して所望濃度とし、室温でさらに１時間インキュベーションした。
ＰＢＳを添加して、最終濃度を１０ｍＭ ＰＯ4、１５０ｍＭ ＮａＣｌとして標品を完成した。最終処方を室温でさらに３０分間インキュベーションし、使用するまで４℃で保存した。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．２．１．３ ｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3／ＭＰＬ １００ｎｍ ソルビトール
実施例１記載のごとくＭＰＬを調製した。ｒｇＤ2ｔを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。次いで、５０％ソルビトール溶液を添加して最終濃度５％とした。次いで、１０ｍＭのＴｒｉｓ溶液を添加して最終的な所望体積とし、溶液を攪拌しながら室温で１時間インキュベーションした。
使用するまで処方を４℃で保存した。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．２．１．４ ｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3／ＭＰＬ １００ｎｍ ツイン
実施例１記載のごとくＭＰＬを調製した。ＭＰＬサイズを１００ｎｍに維持するために、ツイン８０を最終濃度０．０１％に等しくなるように溶液に添加した。次いで、上記処方５．２．１．３に記載のごとく処方を調製する。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．３ モルモットでの予防実験
これらの実験において、０日目および２８日目において、２種の異なる水酸化アルミニウムＭＰＬ処方中５μｇのｒｇＤ２ｔをモルモットに接種した。０．５ｍｌ用量で皮下的に免疫を行った。２回目の免疫の１カ月後、モルモットに１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株を膣内感染させした。モルモットを、一次および再発性ＨＳＶ２疾患について毎日モニターした（感染させてから４ないし３９日目まで）。
５．３．１ モルモットでの治療実験
これらの実験において、０日目において、モルモットに１０5ｐｆｕのＨＳＶ２のＭＳ株を感染させた。最初の感染から回復後、モルモットを、再発性の肝炎疾患について毎日（１３日目から２１日目まで）モニターした。２１日目および４２日目に、モルモットにｒｇＤ２ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬワクチンを投与した。ワクチンは０．５ｍｌ用量で皮下的に投与された。±６０または±８４日目まで、ヘルペス性障害について、動物を毎日モニターした。
５．３．２ 霊長類での免疫原性の研究
ソルビトール中でＭＰＬと混合されたｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性を、アフリカミドリザル（African Green Monkeys）において評価した。０日目および２８日目に、サルのグループに、ソルビトール中の５０、２０または５μｇのＭＰＬと混合された２０μｇのｒｇＤ2ｔおよび０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3を投与した。特異的な体液性免疫応答（ＥＬＩＳＡおよび中和抗体力価）およびエフェクター細胞により媒介される免疫応答（遅延型過敏性応答）を評価した。各サルのグループは５匹の動物からなっていた。処方を１ｍｌ用量として筋肉内投与した。処方標品は上記用量であった。抗体の測定のために、各２週間ごとに動物から採血した。
２回目のワクチン投与後１４日目にＤＴＨ応答を試験した。皮膚試験の説明を以下に行う。
５．４ データの読み出し
ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方でのワクチン接種により誘導される特異的抗体応答（抗−ｒｇＤ2ｔ ＥＬＩＳＡ力価および抗−ＨＳＶ２中和力価）を評価するためにアッセイを行った。これらのｇＤ２処方の防御能を、予防的および治療的モルモットモデルにおいて評価した。サルにおいて免疫原性の研究も行った。特異的体液性応答およびＤＴＨ応答を評価した。
５．４．１ ＥＬＩＳＡおよび中和力価
抗−ｒｇＤ2ｔ抗体力価および抗−ＨＳＶ２中和活性を、特許出願ＷＯ９２／１６２３１記載の方法により測定した。
５．４．２ 遅延型過敏性（ＤＴＨ）
遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答の誘導により測定される、サルにおけるＴ細胞特異的免疫応答を誘導する能力についても、ｒｇＤ2ｔ処方を試験した。
０および２８日目に、アフリカミドリザルに２０μｇのｇＤ２ワクチン処方を筋肉内投与した。２回目のワクチン接種後１４日目に、セイライン中１５または５μｇのｒｇＤ2ｔを腹部に皮内注射することにより、アフリカミドリザルについて皮膚試験を行った。２４および４８時間後に、紅斑および硬化について注射部位を検査し、これらの局部的反応のサイズを測定した。
５．４．３ モルモットに対する膣内投与感染モデル
性器からのＨＳＶ感染に関するモルモットモデルは、エル・スタンベリー（L.Stanberry）ら（ジャーナル・オブ・インクシャス・ディジージズ（J.of Infectious Diseases）１９８２年第１４６巻：３９７〜４０３頁；インターウイロロジー（Intervirology）１９８５年第２４巻：２２６〜２３１頁）により記載されている。簡単に説明すると、予防実験においては、最終接種から１カ月後にモルモットを１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株で感染させた。感染後４〜１２日の間における性器の皮膚の障害の発生率および程度を毎日観察することにより、最初の疾病の臨床的変化をモニターした。次いで、１３ないし３９日目において、ヘルペス性損傷の証拠について動物を試験した。治療実験においては、０日目に１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株で感染させた。一次感染から回復後、再発性ヘルペス性障害について毎日（１３日目から２１日目にかけて）動物を評価し、次いで、一次および再発性のスコアにしたがってランダム化して（各グループにおいて温和から重篤にいたるまでの感染に関する動物の均等な分散を提供）、未処理またはワクチン接種を行った。感染後２０および４１日目にワクチン投与を行った。再発性疾病のパターンは、一般的には、感染後±７０日目まで観察された。０から３２点までの範囲の障害スコアを用いてヘルペス性障害を定量化した。
スコア付けシステム
臨床的データの読出し
一次感染
−障害の程度＝感染後４ないし１２日における毎日のスコアの合計
障害の程度を算術平均±標準偏差ならびにメジアン（非パラメーター試験にはより適当）で表す。
−一次感染の発生率＝０、０．５、１、２、４、８または１６（まれに３２）のうちの最大障害スコアを記録した動物の％値
一次感染インデックス＝Σｉ（最大スコア）ｘ（発生率％）
（ｉ＝０、０．５、２、４、８、１６）
再発性疾病
−再発日数＝感染後１３ないし３９日目の間の再発日数。１回の再発は、障害のない１日が先行またはこれに続くものとし、紅斑を伴う少なくとも２日または水胞を伴う１日により特徴づけられる。再発日数を算術平均±標準偏差ならびにメジアンで表す。
−再発の程度＝感染後１３ないし３９日目の間の毎日のスコアの合計。結果を算術平均±標準偏差ならびにメジアンで表す。
５．５ 結果
異なるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の防御能を、モルモットにおける予防および治療実験において比較した。さらに、霊長類における免疫原性の研究も行った。これらの実験の目的は、異なるＭＰＬ粒子サイズを有するｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性および防御能を比較することであった。
５．５．１ 予防実験
２つの実験を行って、膣内ウイルス接種前にモルモットに投与した場合の異なるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬワクチンの一次および再発性ＨＳＶ２疾病に対する防御能を評価した。
実験例１： ＭＰＬ ＴＥＡに対するＭＰＬ １００ｎｍ ソルビトールの比較
０日目および２８日目において、メスのハートレイモルモット（hartley guinea pigs）のグループを、小サイズのＭＰＬ粒子（１００ｎｍ；ソルビトール中ＭＰＬ）またはより大きなサイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）と混合されたｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3（各５μｇ）で免疫した。対照の動物には、同じプロトコールに従って、アジュバントのみを注射するかまたは処理を行わなかった。２回目のワクチン接種から１４日目および２８日目に、ＥＬＩＳＡによる抗体測定および中和アッセイのために動物から採血した。２回目のワクチン接種後２９日目に、動物を１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株に膣内感染させた。感染後、急性感染（感染合計４ないし１２日）の臨床的徴候および再発性ヘルペス性疾病（感染後１３日ないし３９日）の証拠について、モルモットを毎日モニターした。
ａ）体液性免疫の誘導
表３に示すように、小サイズのＭＰＬ粒子をｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3処方に使用した場合、高いＥＬＩＳＡおよび中和力価が誘導された。
ｂ）霊長類のＨＳＶ２感染に対するワクチン接種の効果（表３）
感染され急性の一次感染を経験した対照と比較すると、両方のワクチン接種グループは有意な障害の程度の低下を示した（ｐ＜０．００００５）。
ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍでワクチン接種されたグループにおいて、有意に低い皮膚障害の発生率が観察された（ｐ＜０．０６）。
ｃ）再発性ＨＳＶ２疾病に対するワクチン接種の効果
結果を表４に示す。対照と比較すると、両ワクチンは、再発回数の減少により測定される再発性ヘルペス性疾病の進行を抑制することができた（ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍに関してＰ＜０．０２）。
ｄ）結論
両処方とも、最初の感染に対して有意な防御を行い、再発性疾病を抑制することができた。これらの結果は、小サイズのＭＰＬ含んでいるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3処方は非常に有効な予防効果を有することを示す。
実験例２： Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍの有効性
０日目および２８日目において、ハートレイモルモット（Hartley guinea pigs）（体重２００〜２５０ｇ）に、Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ中に処方したｇＤ２（５μｇ）を接種した。１回分０．５ｍｌとして皮下的に免疫を行った。Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方中に５０μｇのＭＰＬ用量を使用した。同じプロトコールに従い、対照の動物にァジュバントのみを投与するかまたは処理を行わなかった。ＥＬＩＳＡによる抗体測定および中和アッセイのために、２回目のワクチン接種後１４および２８日目に動物から採血した。最後の免疫を行った後２９日目に、１０5ｐｆｕのＨＳＶ ＭＳ株をモルモットに膣内接種した。
ａ）体液性免疫の誘導
表３に示すように、ワクチン接種されたグループは良好なＥＬＩＳＡおよび中和力価を生じた。対照群は検知可能な抗体応答を示さなかった。
ｂ）最初のＨＳＶ２感染に対するワクチン接種の効果（表３）
感染され急性の一次感染を経験した対照と比較すると、ワクチン接種されたグループは有意に低下した障害の程度（Ｐ＜０．００００５）および障害の発生率（ｐ＜０．００２）を示した。いずれのワクチン接種されたモルモットにおいても外的皮膚障害の証拠は存在しなかった。
ｃ）対照と比較すると、ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬワクチンは、再発の程度（ｐ＜０．００００５）および再発の発生率（ｐ＜０．０１）の有意な低下により測定される再発性ヘルペス性疾病の進行を抑制することができた。
ｄ）結論
小サイズのＭＰＬ粒子に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3は、モルモットにおける一次および再発性のＨＳＶ２感染に対する防御を提供することにおいて非常に有効である。
上記実験から、２つの異なる方法により得られた小サイズの
ＭＰＬ Ａｌ（ＯＨ）3処方は、少なくとも、大きなサイズのＭＰＬを有する
ＭＰＬ Ａｌ（ＯＨ）3処方と同様の有効な予防的応答を誘導すると結論できる。さらに、小サイズのＭＰＬは、使用前に容易に滅菌されるという利点を有する。
５．５．２ 治療実験
これらの実験の目的は、ＨＳＶ２感染させたモルモットにおける再発性疾病の経過に対するｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の治療能を比較することであった。
０日目に１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株をモルモットに膣内接種した。急性感染（４ないし１２日目）の臨床的徴候ならびに再発性ヘルペス性疾病（１３ないし２０日目）の証拠に関して、毎日モルモットをモニターした。一次および再発性のスコアに応じて、動物を異なる実験群にランダム化し、各グループにおいて軽度の感染から重篤な感染に至るまでの動物の均等な分散を行った。感染の臨床的徴候の証拠を示さないモルモットをプロトコールから除外した。感染後２１および４２日目にワクチンを皮下投与した。
ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の治療有効性を、３つの異なる実験において評価した。
実験例１： 大サイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の有効性
再発性疾病にかかったモルモットをランダム化して大サイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3を２０μｇ、またはジュバンとのみのいずれかを投与した。感染後２１および４２日目にワクチンを投与した。再発性疾病のパターンを８４日目まで観察した。
表３に示すように、ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ ＴＥＡ処方は、進行中の再発性疾病の抑制には効果がなかった。
実験例２： ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍの有効性
２つのグループのモルモットを、２０μｇの小サイズ粒子ＭＰＬ（ＭＰＬ １００ｎｍ）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3でワクチン接種するかまたは処理しなかった。
感染後２０および４１日目にワクチン接種を行った。再発性疾病を６９日目まで追跡した。
表５に示すように、大サイズのＭＰＬが用いられた実験例１のデータとは対照的に、ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍワクチンでの接種は、対照グループと比較すると、再発の程度の有意な低下（−３９％，ｐ＜０．０５）および再発日数の減少（−２８％，ｐ＜０．１）により、確立されたＨＳＶ２疾病の再発を抑制した。
実験例３： 小サイズのＭＰＬ粒子に結合したＡｌ（ＯＨ）3の有効性の比較
この実験において、小サイズのＭＰＬ粒子を得るための第３の方法： 例えばツイン８０のごときツインの添加を用いた。
実験グループは以下の通り：
グループ１（ｎ＝１５）： ツインを伴う２０μｇのｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
グループ２（ｎ＝１５）： ソルビトールを伴う２０μｇのｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
グループ３（ｎ＝１６）： 対照
対照については、処理しないかまたはＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬのみで処理した。感染後２１および４２日目にワクチンを接種した。再発性疾病のパターンを感染後６０日目まで観察した。
結果を表５に示す。２種のｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方でワクチン接種した動物において、明確かつ有意な治療効果が観察された。両処方とも、再発の程度、再発日数および発生回数を有意に減少させた。
結論
小サイズのＭＰＬ粒子（約１００ｎｍ）を含有するｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬに関して、確立された再発性ＨＳＶ２性器疾病に対する非常に有効な効果が観察された。対照的に、大サイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）をｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3ワクチンに添加した場合にはこのような治療効果は観察されなかった。
結論として、モルモットにおいて得られた結果は、小サイズのＭＰＬ粒子とともに調製されたｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の予防における有効性を示すものである。これらの処方は、大サイズのＭＰＬ粒子に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3と比較すると、改善された治療有効性を有する。
５．５．３ 霊長類における小サイズのＭＰＬ粒子に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性の研究
小サイズのＭＰＬ粒子（ＭＰＬ １００ｎｍ ソルビトール）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性を霊長類（アフリカミドリザル）において評価した。１００ｎｍのＭＰＬ５０、２０または５μｇ用量を２０μｇのｒｇＤ2ｔおよびＡｌ（ＯＨ）3（０．５ｍｇ）と混合した。０および１カ月目に２回にワクチン接種を行った。特異的体液性免疫応答（ＥＬＩＳＡおよび中和力価）およびエフェクター細胞により媒介される免疫応答（ＤＴＨ）を測定した。
ａ）実験プロトコール
５匹のアフリカミドリザルからなる３つのグループに、０日目および２８日目に、５０、２０または５μｇのＭＰＬ含有する２０μｇのｇＤ２ｔ水酸化アルミニウム処方を接種した。１ｍｌ用量として筋肉内に免疫を行った。ＥＬＩＳＡによる抗体測定（抗−ｇＤ２力価）および中和アッセイのために、２週間おきに動物から採血した。さらに、特異的遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答の誘導により測定されるインビボにおけるＴ細胞により媒介される免疫性を誘導する能力について、３種のワクチン処方を比較した。セイライン中１５または５μｇのｇＤ2ｔでの腹部への２回目のワクチン接種後１４日目に、各グループのサルを皮膚試験した。さらに、セイラインのみを与えた動物も、対象として皮膚試験した。皮内接種部位の紅斑および硬化を、２４時間後および４８時間後にモニターした。
ｂ）結果
血清学的およびＤＴＨ応答を表６に示す。５０または２０μｇのＭＰＬを含有するｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3処方でワクチン接種したサルのグループは、用量５μｇのＭＰＬを与えられたグループよりも有意に多い中和抗体を産生した（それぞれＰ＜０．００３およびｐ＜０．００８）。５０または２０μｇのＭＰＬのグループにはＥＬＩＳＡまたは中和力価の有意な相違は存在しなかった。ＭＰＬ用量とエフェクター細胞により媒介される免疫応答との間の相関を調べた。５０または２０μｇのＭＰＬ処方でワクチン接種されたサルの大多数（３／４）において強力なＤＴＨ応答が検出された。対照的に、５μｇのＭＰＬのグループのうち１匹のサルだけが皮膚試験応答を示した。
ｃ）結論
上記データは、小サイズのＭＰＬ粒子に結合したＡｌ（ＯＨ）3のアジュバント効果は、霊長類においても有効であり、小動物種に限定されないことを示す。ＭＰＬ用量とｒｇＤ2ｔ水酸化アルミニウムＭＰＬ処方との間の相関は、サルにおいても観察することができ、２０および５０μｇの場合に最良の血清学的応答およびＤＴＨ応答が示された。
実施例６： ライム病ならびにＢ型肝炎ワクチンおよび小さいＭＰＬでの臨床的研究
６．１ インフルエンザウイルス由来のＮＳ１（１−８１）とビー・ブルグドルフェリ（B.burgdorferi）ＺＳ７由来のＯｓｐＡとの融合蛋白からなるライム病ワクチン
処方の調製
６．１．１ ＮＳ１−ＯｓｐＡ／水酸化アルミニウム
ＷＯ９３／０４１７５に記載の方法に従って調製されたＮＳ１−ＯｓｐＡを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。リン酸緩衝液（ＰＯ4 １０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で最終体積を調節した。処方を使用するまで４℃で保存した。
１回分は、ＮＳ１−ＯｓｐＡ １０μｇ／水酸化アルミニウム ５００μｇを含有する。
６．１．２ ＮＳ１−ＯｓｐＡ／水酸化アルミニウム／ＭＰＬ
ＮＳ１−ＯｓｐＡを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。次いで、上記のごとく調製されたＭＰＬを処方に添加し、さらに１時間室温でインキュベーションした。次いで、リン酸緩衝液処方（ＰＯ4 １０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で処方の最終体積を調節した。処方を使用するまで４℃で保存した。
１回分は、ＯｓｐＡ １０μｇ／Ａｌ（ＯＨ）3 ５００μｇ／ＭＰＬ ５０μｇを含有する。
６．１．３ 免疫スケジュール
ボランティアの人に、１ｍｌの所定の処方を０、３１および６２日目に３回筋肉内注射した。Ｉ、IIおよびIII回目の接種から３０日後に血清を採取した。
次いで、抗ＯｓｐＡ全ＩｇＧおよび阻害試験におけるＬＡ−２様抗体応答（ＬＡ−２モノクローナル抗体はマウスにおいて感染に対する防御的抗体であることが示された）について、彼らをＥＬＩＳＡにより分析した。
６．２． ヒトにおけるＨＢｓＡｇ／ＭＰＬ処方
６．２．１． 処方の調製
ＨＢｓＡｇ ２０μｇ／水酸化アルミニウム ５００μｇ
ＨＢｓＡｇを全最終量の水酸化アルミニウムに吸着させ、リン酸緩衝液セイライン（ＰＯ4 １０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で最終体積を１回分あたり１ｍｌに調節した。処方を使用するまで４℃で保存した。
６．２．２． ＨＢｓＡｇ ２０μｇ／水酸化アルミニウム １００μｇ
わずか１００μｇのＡｌ（ＯＨ）3に吸着させた以外は上記のごとくＨＢｓＡｇを処方した。最終体積は１回分あたり１ｍｌであった。
６．２．３． ＨＢｓＡｇ ２０μｇ／水酸化アルミニウム １００μｇ／ＭＰＬ ５０μｇ
ＨＢｓＡｇを１００μｇの水酸化アルミミウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。次いで、ＭＰＬを所望濃度で添加し、室温で１時間インキュベーションした。次いで、適当な緩衝液（上記）にて処方を最終体積（１回分あたり１ｍｌ）に調節し、使用まで４℃で保存した。
６．２．４． 免疫スケジュール
ボランテイアの人（グループあたり２０人）に、１ｍｌの所定の処方のうちの１つを筋肉内注射した。０、１、３および６カ月目に血清を集めた。それらを、市販のアボット試験（Abbot test）により中和抗体について分析した。
６．３． 結果
表８は、水酸化アルミニウムおよびＮＳ１−ＯｓｐＡと一緒に使用された１００ｎｍの粒子形態のＭＰＬは、水酸化アルミニウム上の抗原よりも阻害特性を有する高い抗体力価の産生に有効であり、血清変換が早いことを示す。
このことにより、ＮＳ１−ＯｓｐＡのような可溶性抗原については、小さな粒子として処方されたＭＰＬが、すでに動物において他の可溶性抗原について示されているアジュバント特性をヒトにおいて保持することが確認された。
表７は、Ｂ型肝炎処方中に存在する水酸化アルミニウム処方の量を減じることにより失われるアジュバント効果を、本明細書において記載された形態のＭＰＬを添加することにより回復させることができることを示す。さらにＭＰＬは血清変換速度を改善する。
実施例７： 複合ワクチン処方−Ｂ型肝炎＋Ａ型肝炎
最終量（０．５ｍｇ／ｍｌ）の９０％の水酸化アルミニウムにＨＢｓＡｇを吸着させ、室温で一晩インキュベーションする。ｐＨを６．２に調節し、標品を室温に１４時間放置して熟成させる。
ＨＭ−１７５株の不活性化誘導体の形態の（ハービックス中と同様）３６０ないし２２ＥＵ用量のＡ型肝炎抗原を、最終濃度（０．５ｍｇ／ｍｌ）の水酸化アルミニウムのうちの１０％に吸着させる。次いで、残りの水酸化アルミニウムを溶液に添加し、室温で１時間攪拌する。次いで、水酸化アルミニウムに吸着したＨＡＶをＨＢｓＡｇ処方に添加する。
ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を、最終濃度が１ｍｌの１回分において１２．５ないし１００μｇとなるようＨＡＶ／ＨＢｓＡｇ溶液に添加し、体積を最終剤型の体積に調節し、使用するまで処方を４℃で保存する。
実施例８： さらなる抗原を含有する複合ワクチン
１種またはそれ以上の所望抗原を上記実施例２または実施例３もしくは実施例４記載の処方に添加することにより、複合ワクチンを調製することができる。
実施例９： 水酸化アルミニウムおよびＭＰＬとともに処方されたＨＢｓＡｇでのマウスに対する免疫による、体液性免疫の増大および細胞により媒介される免疫の誘導
９．１． 抗−ＨＢｓ抗体に対するＡｌ（ＯＨ）3＋ＭＰＬの効果
アジュバントとしてのＭＰＬを伴うＡｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇで、皮下経路または皮内経路によりＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した。ＨＢｓＡｇ／Ａｌ／ＭＰＬ処方でマウスを２回免疫し、１回目および２回目の投与後に抗体応答を測定した。ＥＬＩＳＡまたはＡＵＳＡＢ（アボット・ラブ，III（Abbot Lab,III））により全Ｉｇを測定したところ、ＩｇＧ２ａイソタイプ抗体の誘導が特に注意を引いた。なぜなら、このイソタイプは主にγ−インターフェロンの分泌により誘導されるからである。したがって、このイソタイプの誘導は、細胞により媒介される免疫の活性化、すなわちＴｈ１の活性化を間接的に反映するものである。
ＭＰＬ粒子のサイズのみならずＨＢｓＡｇ／ＭＰＬ比についても調べた。
９．１．１． 実験例Ｉ−Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇの免疫原性に対するＭＰＬ（＞５００ｎｍ）投与の効果
１０匹のメスのＢａｌｂ／ｃマウスからなるグループに、粒子サイズが５００ｎｍを越える５０ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として、ＭＰＬ量を増加させて（３．１から５０ｍｃｇまで））に吸着した２．５ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇを皮下注射した。体積１００ｍｃｌとして２週間間隔で２回マウスに注射した。最初の注射から２週間後（部分採血）および追加免疫から１週間後に、マウスから採血した。捕捉抗体として組み換え型ＨＢｓＡｇを用いるＥＬＩＳＡにより全抗−ＨＢｓＡｇ ＩｇＧおよび特異的ＩｇＧ２ａを測定した。最大値の５０％に対応する希釈倍率の逆数で力価を表した（中点希釈（mid-point dilution））。結果は、ＭＰＬ用量の増加、とりわけ１２．５から５０ｍｃｇまでの用量に伴う特異的ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａ双方の増加を示す。該効果は、一次応答および二次応答の両方に関して見られ、特にＩｇＧ２ａについて顕著であり（２０倍までの増加）、ＭＰＬでの免疫により誘導されたγ−インターフェロンの分泌を間接的に示すものである。
９．１．２． 実験例II−ＭＰＬ（＞５００ｎｍ）含有または不含の吸着組み換え型ＨＢｓＡｇの臨床的ロットの比較
Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇの３種の臨床用ロットを調製した。ロットＤＳＡＨ１６はＭＰＬ不含であり、対照として役立つ。ロットＤＳＡＲ５０１および５０２は同様に調製（０．５ｍｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）に吸着した２０ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇ）されたが、５０ｍｃｇのＭＰＬ（＞５００ｎｍ）を含有していた。
１０匹のマウスからなるグループに該３つのロットを２週間間隔で２回皮下注射した（ＨＢｓＡｇ２．５ｍｇ、Ａｌ+++１００ｍｃｇおよびＭＰＬ６．２５ｍｃｇを含有する２００ｍｃｌ）。１４日目および追加免疫後１週間目にマウスから採血した。ＡＵＳＡＢキットまたはイン−ハウスＥＬＩＳＡ（in-house ELISA）を用いて、抗−ＨＢｓＡｇ抗体をＩｇＧまたはＩｇＧ２ａいずれかについて測定した。結果を表１０に示す。それらにより、最初の注射から２週間後に、ＭＰＬを含有する２つのロットは有意な抗−ＨＢｓ応答（１２．４および４１．９ｍＩＵ／ｍｌ）を誘導したが、ＭＰＬ不含ロットは最低の応答（０．７５ｍＩＵ／ｍｌ）しか誘導しなかったことが示される。応答者数もＭＰＬ含有ロットについては多かった（ＭＰＬ不含ロットは１／１０であるのに対し９／１０および９／１０）。ロットＤＳＡＲ５０１および５０２について得られる力価はＭＰＬ不含ロットについて得られる力価よりも約６倍高いため、ＭＰＬの効果は追加免疫後に確認される。
このことは、少なくともマウスにおいては、ＭＰＬ（＞５００ｎｍ）は抗−ＨＢｓ応答の動力学および抗−ＨＢｓ応答のレベルの双方を向上させうることを示すものである。
ロットＤＳＡＨ１６（ＭＰＬ不含）およびＤＳＡＲ５０２（ＭＰＬ含有）での免疫後に特異的ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａを測定した場合に、これらの結果が確認された。ＭＰＬが存在する場合、抗−ＨＢｓ ＩｇＧ力価は５倍（一次応答）および３倍（二次応答）高い。
ＩｇＧ２ａ応答に関しては、少なくとも２回目の投与後においてはＭＰＬの効果はより衝撃的でさえあり、ＩｇＧ２ａの優先的な誘導が示される。このことは、ＭＰＬ含有標品による細胞により媒介される免疫の活性化を間接的に反映している。
９．１．３． 実験例III： Ａｌ（ＯＨ）3に吸着組したみ換え型ＨＢｓＡｇの免疫性に対するＭＰＬ（＜１００ｎｍ）投与の影響
１０匹のマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、メス、７週齢）からなるグループに、ＭＰＬ（＜１００ｎｍ）の量を増加させて（３．１から２５ｍｃｇまで）、５０ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇ １ｍｃｇを皮下注射した。マウスに２００ｍｃｌの体積で２週間間隔で２回注射した。最初の注射２週間後および追加免疫１週間後にマウスから採血した。ＥＬＩＳＡにより抗−ＨＢｓ応答（全Ｉｇ、ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａ）を貯留しておいた血清について評価した。力価を、中点希釈率（最高値の５０％を与える希釈率の逆数）として表した。結果は、３．１ｍｃｇ程度の少ないＭＰＬでも、一次および二次応答の双方に対して強力な抗体応答の増大を誘導することを示す。応答最高値は６．２５ｍｃｇについて得られ、高用量のＭＰＬ（２５ｍｃｇ）を用いた場合、ＭＰＬ不含のものにおいて見られるのと同様にその後減少する。抗体応答のパターンはＩｇＧ、ＩｇＧ２ａおよび全Ｉｇについて同様である。該パターンは、より大きなサイズのＭＰＬについて得られた結果とは対照をなし、最大効果を得るためにより少量のＭＰＬが必要とされることから、小サイズ（＜１００ｎｍ）のＭＰＬ粒子は大サイズ（＞５００ｎｍ）の粒子よりも効果的であることを示す。小サイズのＭＰＬの最大活性はいくつかの実験において確認された。
大サイズＭＰＬ（＞５００ｎｍ）について示すように、ＭＰＬのアジュバント効果はＩｇＧまたは全Ｉｇに対してよりもＩｇＧ２ａに対して大きい。二次応答の最大効果において（６．２５ｍｃｇのＭＰＬ）、２５倍のＩｇ２ａ増加がみられたが、ＩｇＧまたは全Ｉｇの増加はそれぞれ７．６倍および４．３倍であった。
９．２． Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇによる細胞により媒介される免疫の応答−ＭＰＬの効果
体液性免疫がＢ型肝炎に対して防御を行うに十分である場合、細胞により媒介される免疫（ＣＴＬ，Ｔｈ１）は疾病の治療にとり特に重要となりうるであろう。
しかしながら、Ａｌ（ＯＨ）3は体液性免疫を向上させるが細胞により媒介される免疫を向上させないため、治療用ワクチンには新たな処方が必要とされる。
我々は、ＩＬ−２およびｇ−（すなわちガンマ）インターフェロンを分泌する能力のα−Ｔｈ１細胞の誘導に対するＭＰＬの効果を、Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇで免疫されたＢａｌｂ／ｃマウスにおいて調べた。
９．２．１． 実験例Ｉ−Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇでＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した後の、Ｔｈ１細胞の誘導に対するＭＰＬ（＞５００ｎｍ）の影響
１０匹のＢａｌｂ／ｃマウス（メス、５週齢）からなるグループに、１０ｍｃｇのＨＢｓＡｇ、１５ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）および１５ｍｃｇのＭＰＬを含有する３０ｍｃｌを各マウスの足の甲に注射することにより免疫した。対照マウスに、ＦＣＡと混合した同量のＨＢｓＡｇ（陽性対照）またはＭＰＬなしでＡｌ（ＯＨ）3に吸着した同量のＨＢｓＡｇ（陰性対照）のいずれかを同様に注射した。
免疫後６日目にマウスを殺し、膝窩リンパ節を取った。リンパ節細胞（ＬＮＣ，２ｘ１０5個／ｍｌ）を、組み換え型ＨＢｓＡｇ５ｍｃｇを含有する、陰性マウス血清１％を補足したＲＰＭＩ培地中において異なる時間（２４時間ないし７４時間）培養した。培養終了後、培地中に分泌されたＩＬ−２、ＩＮＦ−ｇおよびＩＬ−４の量を測定した。ＩＬ−２依存性ＣＴＬ細胞系（ＶＤＡ２細胞）の分化を刺激する能力によりＩＬ−２を評価し（３Ｈ−チミジンの取り込みにより評価）、刺激インデックスＳＩ（ＳＩ＝刺激された細胞に取り込まれた３Ｈ−チミジン量／刺激されない細胞に取り込まれた３Ｈ−チミジン量）として力価を表した。ＩＬ−４およびＩＮＦ−ｇの量を、市販のＥＬＩＳＡキット（ＩＦＮ−ｇにはホーランド・バイオテクノロジー（Holland Biotechnology）社製のものおよびＩＬ−４にはエンドジェン（Endogen）社製のもの）を用いて測定した。力価を１ｍｌあたりのＩＦＮ−ｇのピコグラム数（ｐｇ）で表した。
結果は、Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇで免疫されたマウス由来のＬＮＣによっては有意な量のＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＮＦ−ｇは分泌されないことを示す。対照的に、高レベルのＩＬ−２（４８時間目にＩ．Ｓ．＝３８）および有意な量のＩＮＦ−ｇは、ＭＰＬを伴うＡｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇで免疫されたマウス由来のＬＮＣにより分泌される。この分泌は、ＦＣＡを伴うＨＢｓＡｇで免疫されたマウスについて観察された分泌と同様であるかまたはそれより多く、インビトロ分泌はより早く起こる。
ＭＰＬ存在下でＡｌ（ＯＨ）3に吸着したＨｂｓＡｇでの免疫後であっても、ＩＬ−４は検出されなかった。
この分泌特性は、Ｔｈ１細胞（ＩＬ−２、ＩＮＦ−ｇ）はＭＰＬ存在下で吸着したＨＢｓＡｇでの免疫により誘導されたが、ＭＰＬ不存在下においては誘導されなかったことを示す。しかしながら、これらの免疫条件において、Ｔｈ２（ＩＬ−４）は検出されなかった。
９．２．２． 実験例II−Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇでＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した後の、Ｔｈ１細胞の誘導に対するＭＰＬ（＜１００ｎｍ）の影響
５匹のＢａｌｂ／ｃマウスからなるグループに、ＭＰＬ量を増加させて（１００ｎｍ、０ないし１５ｍｃｇ）、１５ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）に吸着した１０ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇを含有する３０ｍｃｌを、２本の足の甲に免疫した。
注射後６日目に、マウスを殺し、膝窩リンパ節を取った。リンパ節細胞（ＬＮＣ）を、２ｘ１０6個／ｍｌとして、組み換え型ＨＢｓＡｇ５ｍｃｇ／ｍｌの存在下、陰性マウス血清１％を補足したＲＰＭＩ培地中において異なる時間（２４ないし９６／２５時間）培養した。
ＶＤＡ２細胞の分化に対する刺激によりＩＬ−２の分泌を測定し、ＩＬ−２濃度を刺激インデックス（ＳＩ）として表した。ＩＮＦ−ｇの分泌を市販キットを用いて測定し、ｐｇ／ｍｌで表した。
低用量のＭＰＬ（７．５ｍｃｇ）によりＩＬ−２の分泌は劇的に増加し、その最大効果は１５ｍｃｇのＭＰＬについて得られることがわかった。
一般的に、ＩＬ−２の分泌は４８時間目または７２時間目よりも２４時間目において重要である。
ＭＰＬ不存在下においてＨＢｓＡｇをＡｌ（ＯＨ）3に吸着させた場合、ＩＮＦ−ｇの分泌はない。低用量のＭＰＬ（７．５ｍｃｇ）はＩＮＦ−ｇの分泌を誘導し、さらに、その最大効果は１５ｍｃｇのＭＰＬについて得られる。ＩＬ−２について観察されたこととは対照的に、培地中におけるＩＮＦ−ｇの分泌は遅れ、９６時間目まで継時的に増加する。
これらのデータを総合すると、ＭＰＬ（＜１００ｎｍ）は、Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇに結合した場合、Ｔｈ１の有効な誘導物質であることが示される。
Ａｌ（ＯＨ）3およびＭＰＬに吸着したＨＢｓＡｇを含有する処方の、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける体液性免疫および細胞により媒介される免疫の双方に対する影響を調べた。結果は、一次および二次いずれの免疫の後にも、ずっと多くの抗−ＨＢｓ抗体が見いだされるので、ＭＰＬは抗−ＨＢｓ応答の動力学をはっきりと向上させることが示される。抗−ＨＢｓの量も変化し、ＩｇＧ２ａの優先的な誘導が観察され、このことはＩＮＦ−ｇの分泌、すなわち細胞により媒介される免疫の誘導を間接的に反映する。
ＨＢｓＡｇ、Ａｌ（ＯＨ）3およびＭＰＬを含有する処方によるＴｈ１細胞の誘導の直接的評価が、ＭＰＬは、ＩＬ−２およびＩＮＦ−ｇ双方を分泌するＴｈ１細胞の有効な誘導物質であることを明確に示す。よって、この種の処方は、治療用ワクチンの開発において重要である。
１００ｎｍ未満の粒子サイズのＭＰＬを用いて最良の結果が得られた。
上記実験結果を示す表については、以下の表９〜１４を参照のこと。
１３． 結論
全データは、ヒトを含む霊長類において、小さいＭＰＬは大きいサイズのＭＰＬに優る改善された免疫刺激物質であることを示す。このことにより、大規模の滅菌ロットを製造しうることと相俟って、小さいＭＰＬは、ヒトおよび動物の健康のためのワクチンの範囲に用いられる適当な免疫刺激剤となる。
明細書記載のごとく、免疫後にリンパ節細胞を１ｍｌあたり５ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇとともに示された時間培養し、ＶＤＡ２Ｔ細胞系および２種の市販ＥＬＩＳＡキットをそれぞれ用いてＩＬ−２、ＩＮＦ−γおよびＩＬ−４の分泌を測定した。
３−Ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（または３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ）は、グルコサミンの還元末端の３位がデ−Ｏ−アシル化されていることを示すので、以前は３Ｄ−ＭＰＬまたはｄ３−ＭＰＬと呼ばれていた。製造についてはＧＢ２２２０２２１Ａ参照。化学的には、該物質は、４、５または６位がアシル化された鎖を有する３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。本明細書においては、「ＭＰＬ」は、モンタナ州のリビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）により、その３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ製品を明示するために使用される登録商標であるため、本明細書においては３Ｄ−ＭＰＬ（またはｄ３−ＭＰＬ）をＭＰＬと略する。
ＧＢ２２２０２２１Ａには、以前使用されていた腸内細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）のエンドトキシン毒性が減じられるが、その一方で、免疫原としての特性が変化することが述られている。しかしながら、ＧＢ２２２０２２１には、細菌（グラム陰性）の系との関連においてのみこれらの知見が引用されている。ＭＰＬの粒子サイズは述べられていなかった。実際、知られている３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡは、粒子サイズが５００ｎｍを超えるものがある。
ＷＯ９２／１６２３１には、３−脱アシル化リピドＡに抱合した単純ヘルペスウイルス糖蛋白ｇＤまたはその免疫学的フラグメントからなるワクチン処方が開示された。やはり、３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの粒子サイズは述べられていなかった。
ＷＯ９２／０６１１３には、３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡに結合した、ＨＩＶｇｐ１６０、またはｇｐ１２０のごときその透導体からなるワクチン処方が開示された。ＭＰＬの粒子サイズは述べられていなかった。
本発明は、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（本明細書ではＭＰＬと略す）と抱合した抗原および適当な担体からなり、ＭＰＬ粒子サイズが「小さく」、調製された場合に一般的には１２０ｎｍを超えないワクチン組成物を提供する。
かかる処方は、広範囲の１価または多価ワクチンに適する。
驚くべきことに、本発明ワクチン組成物が本明細書記載の有利な特性を特別に有することが見いだされた。詳細には、かかる処方は非常に免疫原性がある。さらに、製品は除菌濾過が可能であるので、アジュバント処方の滅菌状態が保証されうる。ＭＰＬは水酸化アルミニウムおよび抗原と相互作用して単一物を形成するため、水酸化アルミニウムとともに処方された場合に「小さい」ＭＰＬのさらなる利点が生じる。
本発明の具体例において、抗原はウイルス抗原、例えば、下記の肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥ型肝炎）感染またはヘルペス（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）感染に対する抗原である。多くの鍵となる文献を包含している現代の肝炎ワクチンに関する概説は、１９９０年５月１２日付けのランセット（Lancet）の１１４２ｆｆ頁（エイ・エル・ダブリュウ・エフ・エドレストン（A.L.W.F.Eddleston）教授著）において見いだすことができる。さらに「ウイラル・ヘパティティス・アンド・リバー・ディジーズ（Viral Hepatitis and Liver Disease）」（ビアス，ビー・エヌ（Vyas,B.N.）、ディエンスタグ，ジェイ・エル（Dienstag,J.L.）およびホーフナグル，ジェイ・エイチ（Hoofnagle,J.H.）編，グルネ・アンド・ストラットン，インコーポレイテッド（Grune and Stratton,Inc.）（１９８４年））および「ウイラル・ヘパティティス・アンド・リバー・ディジーズ（Viral Hepatitis and Liver Disease）」（１９９０年国際シンポジウムのプロシーディングス，エフ・ビー・ホリンガー（F.B.Hollinger）、エス・エム・レモン（S.M.Lemon）およびエイチ・マーゴリス（H.Margolis）編，ウィリアムス・アンド・ウィルキンス（Williams and Wilkins）により出版）参照のこと。ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に関する文献は、ＷＯ９２／１６２３１において見いだすことができる。
Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）での感染は、広範囲にわたる問題であるが、大量の人を免疫するために使用することのできるワクチン、例えば、ＨＡＶのＨＭ−１７５株から得られる死滅弱毒ワクチン製品「ハブリックス（Havrix）」（スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルズ（SmithKline Beecham Biologicals）製が市販されている［エフ・イー・アンドレ（F.E.Andre）、エイ・ヘプバン（A.Hepburn），プログ・メディ・ウイロロ（Prog.Med.Virol.）第３７巻７２〜９５頁の「インアクチベーティッド・キャンディデイト・ワクチンズ・フォー・ヘパティティス・Ａ（Inactivated Candidate Vaccines for Heppatitis A）」および製品のモノグラフ「ハブリックス・パブリッシュト・バイ・スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルズ（Havrix Published by SmithKline Beecham Biologicals（１９９１年）」参照］。
フレーミング（上記文献５６〜７１頁）は、Ａ型肝炎の臨床的局面、ウイルス学、免疫学および伝染病学について概説し、このありふれたウイルス感染に対するワクチンの開発のアプローチについて議論している。
本明細書で用いる表現「ＨＡＶ抗原」は、ヒトにおいてＨＡＶに対する中和抗体を刺激することのできるすべての抗原をいう。ＨＡＶ抗原は、生きた弱毒ウイルス粒子または不活性化弱毒ウイルス粒子からなっていてもよく、あるいは例えば、組み換えＤＮＡ法により便利に得ることにできるＨＡＶキャプシドまたはＨＡＶウイルス蛋白であってもよい。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）での感染は、広範囲にわたる問題であるが、大量の人を免疫するために使用することのできるワクチン、例えば、遺伝子操作法により得られる製品「エンジェリックス−Ｂ（Engerix-B）」（スミスクライン・ビーチャム・ピ−エルシー（SmithKline Beecham plc）製）が市販されている。
Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の製造も十分に開示されている。例えば、ハーフォード（Harford）ら，ディベロップ・バイオロ・スタンダード（Divelop.Biol.Standard）第５４巻，１２５頁（１９８３年）、グレッグ（Gregg）ら，バイオテクノロジー（Biotechnology）第５巻，４７９頁（１９８７年）、ＥＰ−Ａ−０２２６８４６、ＥＰ−Ａ−２９９およびそれらの中の文献参照。
本明細書に用いる表現「Ｂ型肝炎表面抗原」または「ＨＢｓＡｇ」は、ＨＢＶ表面抗原の抗原性を示すすべてのＨＢｓＡｇ抗原またはそのフラグメントを包含する。ＨＢｓＡｇ Ｓ抗原の２２６個のアミノ酸配列（チオライス（Tiollais）ら，ネイチャー（Nature）第３１７巻，４８９頁（１９８５年）およびその中の文献参照）の他に、本明細書記載のＨＢｓＡｇは、所望であれば、上記文献およびＥＰ−Ａ−１２７８９４０に記載のプレ−Ｓ配列のすべてまたは一部分を含んでいてもよい。詳細には、ＨＢｓＡｇは、ａｂ血清型のＢ型肝炎ウイルス上のオープンリーディングフレームに関するＬ−蛋白の残基１２〜５２、１３３〜１４５および１７５〜４００からなるアミノ酸配列よりなるポリペプチドからなる（このポリペプチドはＬ＊と呼ばれる；ＥＰ０４１４３７４参照）。本発明の範囲内のＨＢｓＡｇは、ＥＰ０１９８４７４（エンドトロニクス（Endotronics）社）に記載のごときプレＳ１−プレＳ２−ＳポリペプチドまたはＥＰ０３０４５７８（マコーミック・アンド・ジョーンズ（Mc Cormick and Jones））に記載のごときそのアナログを包含してもよい。本明細書記載のＨＢｓＡｇは、変異種、例えば、ＷＯ９１／１４７０３または欧州特許出願公開第０５１１８５５Ａ１号記載の「エスケープ変異種」とも呼ばれ、特に、１４５番目の位置でのアミノ酸置換がグリシンからアルギニンへの置換となっている。
通常は、ＨＢｓＡｇは粒子形態であろう。該粒子は、例えば、Ｓ蛋白のみからなっていてもよく、あるいは、例えば、Ｌ＊が上記定義と同じでありＳがＨＢｓＡｇのＳ−蛋白を意味する（Ｌ＊，Ｓ）である成分蛋白であってもよい。有利には、該粒子は、酵母において発現される形態である。
単純ヘルペスウイルス糖蛋白はＤウイルス外套上に存在し、感染された細胞の細胞質にも見いだされる（アイゼンベルグ，アール・ジェイ（Eisenberg R.J.）ら，ジャーナル・オブ・ウイロロジー（J.of Virol.），１９８９年，第３５巻４２８〜４３５頁）。それはシグナルペプチド含む３９３個のアミノ酸からなり、約６０ｋＤの分子量を有する。おそらく、すべてのＨＳＶ外套糖蛋白のうち、この糖蛋白が最もよく特徴づけられているであろう（コーエン（Cohen）ら，ウイロロジー（Virology）第６０巻１５７〜１６６頁）。インビボにおいて、それは、細胞膜へのウイルスの付着に中心的役割を果たしていること知られている。さらにそのうえ、糖蛋白Ｄは、インビボにおいて中和抗体を誘導することができることが示されている（エイング（Eing）ら，ジャーナル・オブ・メディカル・ウイロロジー（J.Med.Virol.）第１２７巻：５９〜６５頁）。しかしながら、潜伏しているＨＳＶ２ウイルスは、やはり、再活性化され、患者の血清中の高い中和抗体の力価にもかかわらず、疾病の再発を誘導しうる。それゆえ、中和抗体のみを誘導する能力が、疾病を十分に抑制するには不十分であると考えられる。
哺乳動物細胞から分泌された成熟組み換え型切断糖蛋白Ｄ（ｒｇＤ２ｔ）または同等蛋白は、好ましくは、本発明ワクチン処方中に使用される。同等蛋白はＨＳＶ−１由来の糖蛋白ｇＤを包含する。
好ましい態様において、ｒｇＤ２ｔは、天然に存在する糖蛋白の１から３０６までのアミノ酸とそのＣ末端にアスパラギンおよびグルタミンを付加したものからなる３０８個のアミノ酸であるＨＳＶ−２糖蛋白Ｄである。該蛋白のこの形態は、開裂されて２８３個のアミノ酸の成熟蛋白を生じるシグナルペプチドを含んでいる。チャイニーズハムスター卵巣細胞におけるかかる蛋白の生産は、ジェネンテック（Genentech）社の欧州特許ＥＰ−Ｂ−１３９４１７号およびサイエンス（Science）第２２２巻５２４頁、ならびにバイオテクノロジー（Biotechnology），１９８４年６月，５２７頁に記載されている。本発明によれば、かかるワクチンが小型のＭＰＬとともに処方された場合、既知のｒｇＤ２ｔ処方と比較すると、すばらしい治療能力を有する。
ある種の実験的および市販のワクチンは優れた結果を得ているが、最適なワクチンは中和抗体を刺激する必要があるのみならずＴ細胞により媒介される細胞性免疫を可能なかぎり刺激する必要があるということが、認識されている事実である。
特別な利点は、たとえ非常に低用量の抗原が存在している場合にでさえ、防御的免疫性を誘導することにおいて、本発明ワクチン処方は非常に有効であるということである。
本発明ワクチン処方は、一次感染および再発性感染に対して優れた防御を提供し、有利なことに、特異的な体液性免疫応答（中和抗体）ならびにエフェクター細胞により媒介される（ＤＴＨ）免疫応答の両方を刺激する。
通常１２０ｎｍを越えない小さい粒子サイズの３脱アシル化モノホスホリルリピドＡを調製するためには、ＧＢ２２２０２１１記載の方法にしたがって既知の３Ｄ−ＭＰＬを得て（あるいは、リビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）から市販されているより大きな粒子サイズのＭＰＬを得て）、次いで、懸濁液が透明になるまで生成物を超音波処理することができる。下記のごとく、ダイナミック・ライト・スキャタリング（dynamic light scattering）を用いて粒子サイズを測定してもよい。水酸化アルミニウムとともに処方した後のＭＰＬサイズを１００ｎｍの範囲に維持するためには、抗原、緩衝液、ツイン８０またはソルビトールを添加することができる。これらの条件下では、ＭＰＬはリン酸緩衝液の存在下において凝集しない（処方調製中にそれらの物質がなければ凝集しうる）ことが確認されている。そのようにすることにより、最終処方がさらに定義され特徴づけられる。また、これらの条件下では、ＭＰＬは水酸化アルミニウムとさらに反応し、抗原は単一物となることが確認されている。
ＭＰＬの透明溶液は本発明の態様を形成する。フィルターを通過させることにより、この溶液を滅菌してもよい。
好ましくは、粒子サイズは６０〜１２０ｎｍの範囲である。
最も有利には、粒子サイズは１００ｎｍ未満である。
上記定義のＭＰＬは、通常は、１回分につき１０〜２００μｇ、好ましくは２５〜５０μｇの範囲で提供され、典型的には、抗原は１回分につき２〜５０μｇの範囲またはそれ以上の量で存在する。本発明ワクチン処方は、さらに、免疫刺激剤を含有していてもよく、本発明ワクチンの好ましい具体例においてはＱＳ２１（時々ＱＡ２１と呼ばれる）を含有していてもよい。これは、キラジャ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮から抽出されるサポニンのＨＰＬＣによる画分であり、その製造方法は米国特許５，０５７，５４０号に開示されている。
所望により、担体は、水中油エマルジョン、脂質担体、または水酸化アルミニウム（水酸化アルミニウム塩）であってよい。
好ましくは、無毒の水中油エマルジョンは、例えばスクアレンのような無毒の油およびツイン８０のごとき乳化剤を水性担体中に含有している。水性担体は、例えば、リン酸緩衝化セイラインであってもよい。
好ましくは、ワクチン処方は、ヒトまたは動物の病原体に対する免疫応答を誘導することのできる抗原または抗原性成分を含有している。該抗原または抗原性成分は、ＨＩＶ−１由来のもの（ｇｐ１２０またはｇｐ１６０のごとき；ＷＯ９２／０６１１３およびその中の文献参照）、ｇＤ誘導体のごときヘルペスウイルス由来のもの、またはＨＳＶ−１もしくはＨＳＶ−２由来のＩＣＰ２７のごとき即時型初期蛋白、ヒトサイトメガロウイルス由来のｇＢ（もしくはその誘導体）、または水痘−帯状疱疹ウイルス由来のｇｐＩ、IIもしくはIII、もしくはＢ型肝炎ウイルスのごとき肝炎ウイルス由来のもの、もしくは呼吸器合胞体ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルスもしくはインフルエンザウイルスのごとき他のウイルス性病原体由来のものであるか、あるいはサルモネラ（Salmonella）、ネイセリア（Neisseria）、ボレリア（Borrelia）（例えば、ＯｓｐＡまたはＯｓｐＢもしくはそれらの誘導体）、またはクラミジア（Chlamydia）、もしくは例えばＰ．６９、ＰＴおよびＦＨＡのごときボルデテラ（Bordetella）に対するものであるか、またはプラスモジウム（plasmodium）もしくはトキソプラズマ（Toxoplasma）のごとき寄生体に対するものである。本発明ワクチン処方は、腫瘍抗原を含有していてもよく、抗癌ワクチンとして有用でありうる。
本発明の１の具体例は、下記のごときＭＰＬおよび水酸化アルミニウムと混合されたＨＡＶ抗原（例えばハブリックス（Havrix）のごとき）である。
本発明のさらなる具体例は、下記のごときＭＰＬおよび水酸化アルミニウムと混合されたＨＢウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）（例えば、エンジェリックス−Ｂ（Engerix-B）のごとき）である。
本発明のさらなる特別な具体例は、ＭＰＬおよび水酸化アルミニウムと混合された、上記定義の（Ｌ＊，Ｓ）粒子としてのＨＢｓＡｇ抗原である。
Ａ型肝炎とＢ型肝炎との混合ワクチンを本発明により製造してもよい。
さらなる具体例は、上記成熟切断糖蛋白Ｄ（ｒｇＤ２ｔ）または同等蛋白からなる本発明処方である。そのうえ、さらなる具体例は、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）由来のＯｓｐＡ抗原またはその誘導体からなる本発明処方である。例えば、抗原、特にＺＳ７またはＢ３１株由来のＯＳｐＡ抗原が使用される。さらなる具体例は、インフルエンザ（flu）抗原からなる本発明処方である。これは、特に「スプリット（split）」ウイルスを使用した場合に改良されたインフルエンザワクチンを提供する。
さらに本発明処方は、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８２４および国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／００１７９に記載のごときヘルペス軽粒子（herpetic light particles）との使用に有用である。
有利には、本発明ワクチン組成物は、１種またはそれ以上の細菌性、ウイルス性または真菌性感染の治療または予防に有効なように、他の抗原を含有する。
例えば、本発明肝炎ワクチン処方は、好ましくは、ジフテリア、破傷風、百日咳、ヘモフィルス・インフルエンゼｂ（Haemophilus influenzae b）（Ｈｉｂ）およびポリオのうちの１種またはそれ以上に対する防御を提供することが当該分野において知られている肝炎以外の抗原から選択される少なくとも１つの他の成分を含有する。
好ましくは、本発明ワクチンは、上記定義のＨＢｓＡｇを含有する。
本発明の範囲内の特別な複合ワクチンは、ＤＴＰ（ジフテリア、破傷風、百日咳）−Ｂ型肝炎複合ワクチン処方、Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方、ＤＴＰ−Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方およびＩＰＶ（不活性化ポリオワクチン）−ＤＴＰ−Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方を包含する。
有利には、上記複合ワクチンは、Ａ型肝炎に対して防御的な成分、特にハービックス中に存在するようなＨＭ−１７５株由来の死滅弱毒株を包含する。
かかるワクチン中に使用する安定な成分は、すでに市販されており、詳細は世界保健機構（World Health Organization）から得られる。例えば、ＩＰＶ成分はサルク不活性化ポリオワクチン（Salk inactivated polio vaccine）であってもよい。
有利には、本発明肝炎または複合ワクチンは小児用ワクチンである。
さらなる態様において、本発明は、医学的治療、特に、ウイルス性および細菌性感染の治療もしくは予防、または癌の免疫療法のための治療に使用する本発明ワクチン組成物を提供する。好ましい態様において、本発明ワクチンは、進行中の感染、例えば罹患しているヒトのＢ型肝炎またはヘルペス感染の治療に有用な治療用ワクチンである。
一般的には、ワクチン標品は、ニュー・トレンズ・アンド・ディベロップメンツ・イン・ワクチンズ（New Trends and Developments in Vaccines），ヴォラー（Voller）ら編，米国メリーランド州ボルチモアのユニバーシティー・パーク・プレス（University Park Press）（１９７８年）に記載されている。リポソームへの封入は、例えば、フラートン（Fullerton）の米国特許第４，２３５，８７７号に記載されている。高分子への蛋白の抱合は、例えば、ライクハイト（Likehite）の米国特許第４，３７２，９４５号およびアーマー（Armor）らの米国特許第４，４７４，７５７号に開示されている。
ワクチン１回分の抗原量は、典型的なワクチンの有意かつ不利な効果を伴わずに免疫防御応答を誘導する量として選択される。かかる量は、使用される個々の免疫原により変更される。一般的には、１回分は全免疫原１〜１０００μｇ、好ましくは２〜１００μｇ、最も好ましくは４〜４０μｇからなる。個々のワクチンの最適量は、対象中の抗体力価および他の応答の観察をはじめとする標準的研究により確認することができる。最初のワクチン接種の後、約４週間たってから対象に追加免疫を行ってもよい。
本発明のさらなる態様において、抗原を担体およびＭＰＬと混合することからなる、感染の予防または治療に有効なワクチンの製造方法が提供される。ここに、粒子サイズは１２０ｎｍ未満、通常は６０〜１２０ｎｍ、好ましくは約１００ｎｍまたはそれ未満である。
以下の実施例は本発明およびその利点を説明する。
実施例１： ６０〜１２０ｎｍの粒子サイズのＭＰＬの調製
モンタナ州のリビ・イミュノケム（Ribi Immunochem）社製の凍結乾燥した３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）の入ったバイアルに、シリンジを用いて、注射用水を添加して、１ｍｌあたり１ないし２ｍｇの濃度とする。ボルテックス（vortex）用いて混合することにより予備的な懸濁液を得る。次いで、バイアルの内容物を２５ｍｌの丸底コルテックス試験管（Cortex tubes)（１本あたり懸濁液１０ｍｌ）中に移し、水浴ソニケーターを用いて懸濁液を超音波処理する。懸濁液が透明になったら、ダイナミック・ライト・スキャッタリング（dynamic light scattering）（マルバーン・ゼータサイザー３（Malvern Zetasizer3））を用いて粒子サイズを測定する。ＭＰＬ粒子のサイズが６０〜１２０ｎｍの範囲になるまで処理を繰り返す。
いくつかの場合には、懸濁液は、有意な凝集を伴わずに、４℃で５カ月まで保存される。等張ＮａＣｌ（０．１５Ｍ）または等張ＮａＣｌに１０ｍＭリン酸を添加したものは急激な凝集（サイズ＞３〜５μｍ）を誘導する。
実施例２： 粒子サイズ１００ｎｍ未満の滅菌可溶性ＭＰＬの大規模生産
３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡをリビ・イミュノケムから得、注射用水（ＷＦＩ）に懸濁した。懸濁液をポンプで超音波フローセル（ultrasound flow cell）に通過させた。典型的には、フローセルは、ＧＭＰ圧に対抗するためにＰＴＦＥシールのついたガラスまたはステンレス鋼でできている。ウンダチム・ウルトラソニックス（Undatim Ultrasonic）社製（ベルギーのルーベン−ラ−ヌーブ（Louvain-La-Nouve））の超音波発生装置およびチタン製ホーン（ソノトロード（sonotrode））を用いて超音波を発生させる。ループ中に熱交換器を設けて生成物の熱分解を回避する。フローセルの入り口と出口との間にあるＭＰＬの温度を＋４℃ないし３０℃の間に維持し、入り口と出口との間の温度差を２０℃未満に維持する。熱は、さらに器具中を伝導して除去されることが理解されよう。
使用装置を図１に図式的に示す。
２．１ 超音波処理
ＭＰＬ粉末（５０ないし５００ｍｇ）を、１ないし２ｍｇ／ｍｌの濃度でＷＦＩに懸濁する。
ＭＰＬ懸濁液（攪拌条件下）を、１分間に５０ないし１００ｍｌの流速で連続的に超音波処理ループを通過させて（図１参照）＋４℃ないし＋１５℃の間の系の平衡温度に到達させる。
システム配置中の超音波ホーンの固有周波数スペクトル（出力、フローセル、流速、Ｔ°）を、装置の供給者の説明に従ってセットする。前以て設定された範囲は、２００００ヘルツの変換器に関しては１９０００ヘルツないし２１０００ヘルツの間に固定される。
超音波発生装置は、一定の時間間隔における超音波処理の最適有効性（より発熱が少なく、よりエネルギー伝導が多い）の調節が可能である。
処理を行っている間の温度を３０℃未満に維持してＭＰＬの分解を回避する。
粒子サイズが１００ｎｍ未満になり、溶液が肉眼で観察して透明になった時、処理を完了する。超音波処理中、実施例１と同じやり方でマルバーン・ゼータサイザー３型を用いる光相関分光法（photocorrelation spectroscopy）（ダイナミック・ライト・スキャッタリング）による粒子サイズ測定のために、超音波処理試料を取る。超音波処理フローセルにおける液体の全滞留時間は、フローセル体積２０ｍｌ、循環流速５０ｍｌ／分を用いると、２．５ないし３．５分であると計算される（表１参照）。この流速は、１サイクルあたり２５秒の平均滞留時間を与え、通常、小型粒子ＭＰＬに対する所望の効果を得るには１０サイクル未満が必要である。
２．２ 滅菌処理
得られた「可溶性」ＭＰＬを、親水性ＰＶＤＦ０．２２ミクロン膜によるデッドエンド濾過により滅菌する。観察される圧力は、通常、１バール未満である。１平方センチメーターあたり、少なくとも２５ｍｇの「可溶性」ＭＰＬが容易に処理され、回収率は約８５％である。
２．３ 保存／安定性
滅菌「可溶性」ＭＰＬを＋２℃ないし＋８℃で保存する。安定性のデータ（マルバーン（Malvern））によれば、６カ月保存後の実際の粒子サイズについて有意な差異はまったく示されていない（表２参照）。
実施例３： Ｂ型肝炎ワクチン処方
実施例１と同様にして、ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を得た。水酸化アルミニウム（アルハイドロゲル（Alhydrogel）をスーパーフォス（Superfos）社から得た。
ＭＰＬを、０．２ないし１ｍｇ／ｍｌの種々の濃度で注射用水に再懸濁し、水浴中での超音波処理により、粒子サイズを光相関スキャッタリングにより測定した場合に８０ないし５００ｎｍの間となるようにした。
リン酸緩衝溶液中の１ないし２０μｇのＨＢｓＡｇ（エンジェリックスＢ中と同様のＳ−抗原）を、３０ないし１００μｇの水酸化アルミニウムに室温で１時間攪拌しながら吸着させる。体積およびオスモル濃度を注射用水および５倍濃度のリン酸緩衝液で調節して６００μｌとする。溶液を室温で１時間インキュベーションし、使用するまで４℃で保存する。処方の成熟が保存中に起こる。これにより、マウスにおいて１０回分の注射用量が得られる。
実施例４： Ａ型肝炎ワクチン処方
実施例１に記載のようにして、ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を得た。水酸化アルミニウム（アルハイドロゲル（Alhydrogel））をスーパーフォス（Superfos）社から得た。
ＨＡＶ（１回分あたり３６０ないし２２ＥＵ）を、最終濃度１０％の水酸化アルミニウムに吸着させる（０．５ｍｇ／ｍｌ）。ＭＰＬ（１回分あたり１２．５ないし１００μｇ）を溶液に添加する。
残りの水酸化アルミニウムを溶液に添加し、室温でさらに１時間放置する。リン酸緩衝液（リン酸１０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で体積を調節し、次いで、最終処方を使用するまで４℃で保存する。
実施例５： 組み換え型単純ヘルペスウイルス糖蛋白Ｄサブユニットワクチンに対するアジュバント効果の比較
５．１ この研究において、２型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ２）（ｒｇＤ２ｔ）由来の切断された糖蛋白Ｄの防御的免疫性を改善する種々のＡｌ（ＯＨ）3処方の能力を、モルモットを用いた予防的および治療的もでるにおいて評価した。霊長類における免疫原性の研究も行った。これらの実験の目的は、げっ歯類および霊長類におけるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬの免疫原性および防御有効性に対する３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）のサイズの影響を調べることであった。小型ＭＰＬの３種の異なるＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方を試験した：
Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ（上記のものと同じ）
ソルビトールを伴うＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
ツインを伴うＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
５．２ 抗原−アジュバント標品および免疫スケジュール
５．２．１ 抗原処方
水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）3）を、デンマークのスーパーフォス（Superfos）社から得た。ＭＰＬを、リビ・イミュノケム・リサーチ・インコーポレイテッド（Ribi Immunochem Research Inc.）から得た。
５．２．１．１ ｒｇＤ2ｔ（Ａｌ（ＯＨ）3）／ＭＰＬ ＴＥＡ
ＭＰＬを水浴で超音波処理することにより再懸濁して２００ないし６００ｎｍの間のサイズとした。特許出願ＷＯ９２／１６２３１の方法により標品を調製し、使用するまで４℃で保存した。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．２．１．２ ｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3／ＭＰＬ １００ｎｍ
実施例１に記載のようにして、ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を得た。ｒｇＤ2ｔを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。ＭＰＬを溶液に添加して所望濃度とし、室温でさらに１時間インキュベーションした。
ＰＢＳを添加して、最終濃度を１０ｍＭ ＰＯ4、１５０ｍＭ ＮａＣｌとして標品を完成した。最終処方を室温でさらに３０分間インキュベーションし、使用するまで４℃で保存した。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．２．１．３ ｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3／ＭＰＬ １００ｎｍ ソルビトール
実施例１記載のごとくＭＰＬを調製した。ｒｇＤ2ｔを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。次いで、５０％ソルビトール溶液を添加して最終濃度５％とした。次いで、１０ｍＭのＴｒｉｓ溶液を添加して最終的な所望体積とし、溶液を攪拌しながら室温で１時間インキュベーションした。
使用するまで処方を４℃で保存した。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．２．１．４ ｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3／ＭＰＬ １００ｎｍ ツイン
実施例１記載のごとくＭＰＬを調製した。ＭＰＬサイズを１００ｎｍに維持するために、ツイン８０を最終濃度０．０１％に等しくなるように溶液に添加した。次いで、上記処方５．２．１．３に記載のごとく処方を調製する。
１回分は、５μｇのｒｇＤ2ｔ、０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3および５０μｇのＭＰＬを含有していた。
５．３ モルモットでの予防実験
これらの実験において、０日目および２８日目において、２種の異なる水酸化アルミニウムＭＰＬ処方中５μｇのｒｇＤ２ｔをモルモットに接種した。０．５ｍｌ用量で皮下的に免疫を行った。２回目の免疫の１カ月後、モルモットに１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株を膣内感染させした。モルモットを、一次および再発性ＨＳＶ２疾患について毎日モニターした（感染させてから４ないし３９日目まで）。
５．３．１ モルモットでの治療実験
これらの実験において、０日目において、モルモットに１０5ｐｆｕのＨＳＶ２のＭＳ株を感染させた。最初の感染から回復後、モルモットを、再発性の肝炎疾患について毎日（１３日目から２１日目まで）モニターした。２１日目および４２日目に、モルモットにｒｇＤ２ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬワクチンを投与した。ワクチンは０．５ｍｌ用量で皮下的に投与された。±６０または±８４日目まで、ヘルペス性障害について、動物を毎日モニターした。
５．３．２ 霊長類での免疫原性の研究
ソルビトール中でＭＰＬと混合されたｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性を、アフリカミドリザル（African Green Monkeys）において評価した。０日目および２８日目に、サルのグループに、ソルビトール中の５０、２０または５μｇのＭＰＬと混合された２０μｇのｒｇＤ2ｔおよび０．５ｍｇのＡｌ（ＯＨ）3を投与した。特異的な体液性免疫応答（ＥＬＩＳＡおよび中和抗体力価）およびエフェクター細胞により媒介される免疫応答（遅延型過敏性応答）を評価した。各サルのグループは５匹の動物からなっていた。処方を１ｍｌ用量として筋肉内投与した。処方標品は上記用量であった。抗体の測定のために、各２週間ごとに動物から採血した。
２回目のワクチン投与後１４日目にＤＴＨ応答を試験した。皮膚試験の説明を以下に行う。
５．４ データの読み出し
ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方でのワクチン接種により誘導される特異的抗体応答（抗−ｒｇＤ2ｔ ＥＬＩＳＡ力価および抗−ＨＳＶ２中和力価）を評価するためにアッセイを行った。これらのｇＤ２処方の防御能を、予防的および治療的モルモットモデルにおいて評価した。サルにおいて免疫原性の研究も行った。特異的体液性応答およびＤＴＨ応答を評価した。
５．４．１ ＥＬＩＳＡおよび中和力価
抗−ｒｇＤ2ｔ抗体力価および抗−ＨＳＶ２中和活性を、特許出願ＷＯ９２／１６２３１記載の方法により測定した。
５．４．２ 遅延型過敏性（ＤＴＨ）
遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答の誘導により測定される、サルにおけるＴ細胞特異的免疫応答を誘導する能力についても、ｒｇＤ2ｔ処方を試験した。
０および２８日目に、アフリカミドリザルに２０μｇのｇＤ２ワクチン処方を筋肉内投与した。２回目のワクチン接種後１４日目に、セイライン中１５または５μｇのｒｇＤ2ｔを腹部に皮内注射することにより、アフリカミドリザルについて皮膚試験を行った。２４および４８時間後に、紅斑および硬化について注射部位を検査し、これらの局部的反応のサイズを測定した。
５．４．３ モルモットに対する膣内投与感染モデル
性器からのＨＳＶ感染に関するモルモットモデルは、エル・スタンベリー（L.Stanberry）ら（ジャーナル・オブ・インクシャス・ディジージズ（J.of Infectious Diseases）１９８２年第１４６巻：３９７〜４０３頁；インターウイロロジー（Intervirology）１９８５年第２４巻：２２６〜２３１頁）により記載されている。簡単に説明すると、予防実験においては、最終接種から１カ月後にモルモットを１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株で感染させた。感染後４〜１２日の間における性器の皮膚の障害の発生率および程度を毎日観察することにより、最初の疾病の臨床的変化をモニターした。次いで、１３ないし３９日目において、ヘルペス性損傷の証拠について動物を試験した。治療実験においては、０日目に１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株で感染させた。一次感染から回復後、再発性ヘルペス性障害について毎日（１３日目から２１日目にかけて）動物を評価し、次いで、一次および再発性のスコアにしたがってランダム化して（各グループにおいて温和から重篤にいたるまでの感染に関する動物の均等な分散を提供）、未処理またはワクチン接種を行った。感染後２０および４１日目にワクチン投与を行った。再発性疾病のパターンは、一般的には、感染後±７０日目まで観察された。０から３２点までの範囲の障害スコアを用いてヘルペス性障害を定量化した。
スコア付けシステム
一次感染
−障害の程度＝感染後４ないし１２日における毎日のスコアの合計
障害の程度を算術平均±標準偏差ならびにメジアン（非パラメーター試験にはより適当）で表す。
−一次感染の発生率＝０、０．５、１、２、４、８または１６（まれに３２）のうちの最大障害スコアを記録した動物の％値
一次感染インデックス＝Σｉ（最大スコア）ｘ（発生率％）
（ｉ＝０、０．５、２、４、８、１６）
再発性疾病
−再発日数＝感染後１３ないし３９日目の間の再発日数。１回の再発は、障害のない１日が先行またはこれに続くものとし、紅斑を伴う少なくとも２日または水胞を伴う１日により特徴づけられる。再発日数を算術平均±標準偏差ならびにメジアンで表す。
−再発の程度＝感染後１３ないし３９日目の間の毎日のスコアの合計。結果を算術平均±標準偏差ならびにメジアンで表す。
５．５ 結果
異なるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の防御能を、モルモットにおける予防および治療実験において比較した。さらに、霊長類における免疫原性の研究も行った。これらの実験の目的は、異なるＭＰＬ粒子サイズを有するｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性および防御能を比較することであった。
５．５．１ 予防実験
２つの実験を行って、膣内ウイルス接種前にモルモットに投与した場合の異なるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬワクチンの一次および再発性ＨＳＶ２疾病に対する防御能を評価した。
実験例１： ＭＰＬ ＴＥＡに対するＭＰＬ １００ｎｍ ソルビトールの比較
０日目および２８日目において、メスのハートレイモルモット（hartley guinea pigs）のグループを、小サイズのＭＰＬ粒子（１００ｎｍ；ソルビトール中ＭＰＬ）またはより大きなサイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）と混合されたｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3（各５μｇ）で免疫した。対照の動物には、同じプロトコールに従って、アジュバントのみを注射するかまたは処理を行わなかった。２回目のワクチン接種から１４日目および２８日目に、ＥＬＩＳＡによる抗体測定および中和アッセイのために動物から採血した。２回目のワクチン接種後２９日目に、動物を１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株に膣内感染させた。感染後、急性感染（感染合計４ないし１２日）の臨床的徴候および再発性ヘルペス性疾病（感染後１３日ないし３９日）の証拠について、モルモットを毎日モニターした。
ａ）体液性免疫の誘導
表３に示すように、小サイズのＭＰＬ粒子をｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3処方に使用した場合、高いＥＬＩＳＡおよび中和力価が誘導された。
ｂ）霊長類のＨＳＶ２感染に対するワクチン接種の効果（表３）
感染され急性の一次感染を経験した対照と比較すると、両方のワクチン接種グループは有意な障害の程度の低下を示した（ｐ＜０．００００５）。
ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍでワクチン接種されたグループにおいて、有意に低い皮膚障害の発生率が観察された（ｐ＜０．０６）。
ｃ）再発性ＨＳＶ２疾病に対するワクチン接種の効果
結果を表４に示す。対照と比較すると、両ワクチンは、再発回数の減少により測定される再発性ヘルペス性疾病の進行を抑制することができた（ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍに関してＰ＜０．０２）。
ｄ）結論
両処方とも、最初の感染に対して有意な防御を行い、再発性疾病を抑制することができた。これらの結果は、小サイズのＭＰＬ含んでいるｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3処方は非常に有効な予防効果を有することを示す。
実験例２： Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍの有効性
０日目および２８日目において、ハートレイモルモット（Hartley guinea pigs）（体重２００〜２５０ｇ）に、Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ中に処方したｇＤ２（５μｇ）を接種した。１回分０．５ｍｌとして皮下的に免疫を行った。Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方中に５０μｇのＭＰＬ用量を使用した。同じプロトコールに従い、対照の動物にァジュバントのみを投与するかまたは処理を行わなかった。ＥＬＩＳＡによる抗体測定および中和アッセイのために、２回目のワクチン接種後１４および２８日目に動物から採血した。最後の免疫を行った後２９日目に、１０5ｐｆｕのＨＳＶ ＭＳ株をモルモットに膣内接種した。
ａ）体液性免疫の誘導
表３に示すように、ワクチン接種されたグループは良好なＥＬＩＳＡおよび中和力価を生じた。対照群は検知可能な抗体応答を示さなかった。
ｂ）最初のＨＳＶ２感染に対するワクチン接種の効果（表３）
感染され急性の一次感染を経験した対照と比較すると、ワクチン接種されたグループは有意に低下した障害の程度（Ｐ＜０．００００５）および障害の発生率（ｐ＜０．００２）を示した。いずれのワクチン接種されたモルモットにおいても外的皮膚障害の証拠は存在しなかった。
ｃ）対照と比較すると、ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬワクチンは、再発の程度（ｐ＜０．００００５）および再発の発生率（ｐ＜０．０１）の有意な低下により測定される再発性ヘルペス性疾病の進行を抑制することができた。
ｄ）結論
小サイズのＭＰＬ粒子に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3は、モルモットにおける一次および再発性のＨＳＶ２感染に対する防御を提供することにおいて非常に有効である。
上記実験から、２つの異なる方法により得られた小サイズの
ＭＰＬ Ａｌ（ＯＨ）3処方は、少なくとも、大きなサイズのＭＰＬを有する
ＭＰＬ Ａｌ（ＯＨ）3処方と同様の有効な予防的応答を誘導すると結論できる。さらに、小サイズのＭＰＬは、使用前に容易に滅菌されるという利点を有する。
５．５．２ 治療実験
これらの実験の目的は、ＨＳＶ２感染させたモルモットにおける再発性疾病の経過に対するｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の治療能を比較することであった。
０日目に１０5ｐｆｕのＨＳＶ２ ＭＳ株をモルモットに膣内接種した。急性感染（４ないし１２日目）の臨床的徴候ならびに再発性ヘルペス性疾病（１３ないし２０日目）の証拠に関して、毎日モルモットをモニターした。一次および再発性のスコアに応じて、動物を異なる実験群にランダム化し、各グループにおいて軽度の感染から重篤な感染に至るまでの動物の均等な分散を行った。感染の臨床的徴候の証拠を示さないモルモットをプロトコールから除外した。感染後２１および４２日目にワクチンを皮下投与した。
ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の治療有効性を、３つの異なる実験において評価した。
実験例１： 大サイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の有効性
再発性疾病にかかったモルモットをランダム化して大サイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3を２０μｇ、またはジュバンとのみのいずれかを投与した。感染後２１および４２日目にワクチンを投与した。再発性疾病のパターンを８４日目まで観察した。
表３に示すように、ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ ＴＥＡ処方は、進行中の再発性疾病の抑制には効果がなかった。
実験例２： ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍの有効性
２つのグループのモルモットを、２０μｇの小サイズ粒子ＭＰＬ（ＭＰＬ １００ｎｍ）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3でワクチン接種するかまたは処理しなかった。
感染後２０および４１日目にワクチン接種を行った。再発性疾病を６９日目まで追跡した。
表５に示すように、大サイズのＭＰＬが用いられた実験例１のデータとは対照的に、ｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍワクチンでの接種は、対照グループと比較すると、再発の程度の有意な低下（−３９％，ｐ＜０．０５）および再発日数の減少（−２８％，ｐ＜０．１）により、確立されたＨＳＶ２疾病の再発を抑制した。
実験例３： 小サイズのＭＰＬ粒子に結合したＡｌ（ＯＨ）3の有効性の比較
この実験において、小サイズのＭＰＬ粒子を得るための第３の方法： 例えばツイン８０のごときツインの添加を用いた。
実験グループは以下の通り：
グループ１（ｎ＝１５）： ツインを伴う２０μｇのｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
グループ２（ｎ＝１５）： ソルビトールを伴う２０μｇのｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ １００ｎｍ
グループ３（ｎ＝１６）： 対照
対照については、処理しないかまたはＡｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬのみで処理した。感染後２１および４２日目にワクチンを接種した。再発性疾病のパターンを感染後６０日目まで観察した。
結果を表５に示す。２種のｒｇＤ2ｔ／Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方でワクチン接種した動物において、明確かつ有意な治療効果が観察された。両処方とも、再発の程度、再発日数および発生回数を有意に減少させた。
結論
小サイズのＭＰＬ粒子（約１００ｎｍ）を含有するｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬに関して、確立された再発性ＨＳＶ２性器疾病に対する非常に有効な効果が観察された。対照的に、大サイズのＭＰＬ粒子（ＴＥＡ中ＭＰＬ）をｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3ワクチンに添加した場合にはこのような治療効果は観察されなかった。
結論として、モルモットにおいて得られた結果は、小サイズのＭＰＬ粒子とともに調製されたｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3 ＭＰＬ処方の予防における有効性を示すものである。これらの処方は、大サイズのＭＰＬ粒子に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3と比較すると、改善された治療有効性を有する。
５．５．３ 霊長類における小サイズのＭＰＬ粒子に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性の研究
小サイズのＭＰＬ粒子（ＭＰＬ １００ｎｍ ソルビトール）に結合したｒｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3の免疫原性を霊長類（アフリカミドリザル）において評価した。１００ｎｍのＭＰＬ５０、２０または５μｇ用量を２０μｇのｒｇＤ2ｔおよびＡｌ（ＯＨ）3（０．５ｍｇ）と混合した。０および１カ月目に２回にワクチン接種を行った。特異的体液性免疫応答（ＥＬＩＳＡおよび中和力価）およびエフェクター細胞により媒介される免疫応答（ＤＴＨ）を測定した。
ａ）実験プロトコール
５匹のアフリカミドリザルからなる３つのグループに、０日目および２８日目に、５０、２０または５μｇのＭＰＬ含有する２０μｇのｇＤ２ｔ水酸化アルミニウム処方を接種した。１ｍｌ用量として筋肉内に免疫を行った。ＥＬＩＳＡによる抗体測定（抗−ｇＤ２力価）および中和アッセイのために、２週間おきに動物から採血した。さらに、特異的遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答の誘導により測定されるインビボにおけるＴ細胞により媒介される免疫性を誘導する能力について、３種のワクチン処方を比較した。セイライン中１５または５μｇのｇＤ2ｔでの腹部への２回目のワクチン接種後１４日目に、各グループのサルを皮膚試験した。さらに、セイラインのみを与えた動物も、対象として皮膚試験した。皮内接種部位の紅斑および硬化を、２４時間後および４８時間後にモニターした。
ｂ）結果
血清学的およびＤＴＨ応答を表６に示す。５０または２０μｇのＭＰＬを含有するｇＤ2ｔ Ａｌ（ＯＨ）3処方でワクチン接種したサルのグループは、用量５μｇのＭＰＬを与えられたグループよりも有意に多い中和抗体を産生した（それぞれＰ＜０．００３およびｐ＜０．００８）。５０または２０μｇのＭＰＬのグループにはＥＬＩＳＡまたは中和力価の有意な相違は存在しなかった。ＭＰＬ用量とエフェクター細胞により媒介される免疫応答との間の相関を調べた。５０または２０μｇのＭＰＬ処方でワクチン接種されたサルの大多数（３／４）において強力なＤＴＨ応答が検出された。対照的に、５μｇのＭＰＬのグループのうち１匹のサルだけが皮膚試験応答を示した。
ｃ）結論
上記データは、小サイズのＭＰＬ粒子に結合したＡｌ（ＯＨ）3のアジュバント効果は、霊長類においても有効であり、小動物種に限定されないことを示す。ＭＰＬ用量とｒｇＤ2ｔ水酸化アルミニウムＭＰＬ処方との間の相関は、サルにおいても観察することができ、２０および５０μｇの場合に最良の血清学的応答およびＤＴＨ応答が示された。
実施例６： ライム病ならびにＢ型肝炎ワクチンおよび小さいＭＰＬでの臨床的研究
６．１ インフルエンザウイルス由来のＮＳ１（１−８１）とビー・ブルグドルフェリ（B.burgdorferi）ＺＳ７由来のＯｓｐＡとの融合蛋白からなるライム病ワクチン
処方の調製
６．１．１ ＮＳ１−ＯｓｐＡ／水酸化アルミニウム
ＷＯ９３／０４１７５に記載の方法に従って調製されたＮＳ１−ＯｓｐＡを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。リン酸緩衝液（ＰＯ4 １０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で最終体積を調節した。処方を使用するまで４℃で保存した。
１回分は、ＮＳ１−ＯｓｐＡ １０μｇ／水酸化アルミニウム ５００μｇを含有する。
６．１．２ ＮＳ１−ＯｓｐＡ／水酸化アルミニウム／ＭＰＬ
ＮＳ１−ＯｓｐＡを水酸化アルミニウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。次いで、上記のごとく調製されたＭＰＬを処方に添加し、さらに１時間室温でインキュベーションした。次いで、リン酸緩衝液処方（ＰＯ4 １０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で処方の最終体積を調節した。処方を使用するまで４℃で保存した。
１回分は、ＯｓｐＡ １０μｇ／Ａｌ（ＯＨ）3 ５００μｇ／ＭＰＬ ５０μｇを含有する。
６．１．３ 免疫スケジュール
ボランティアの人に、１ｍｌの所定の処方を０、３１および６２日目に３回筋肉内注射した。Ｉ、IIおよびIII回目の接種から３０日後に血清を採取した。
次いで、抗ＯｓｐＡ全ＩｇＧおよび阻害試験におけるＬＡ−２様抗体応答（ＬＡ−２モノクローナル抗体はマウスにおいて感染に対する防御的抗体であることが示された）について、彼らをＥＬＩＳＡにより分析した。
６．２． ヒトにおけるＨＢｓＡｇ／ＭＰＬ処方
６．２．１． 処方の調製
ＨＢｓＡｇ ２０μｇ／水酸化アルミニウム ５００μｇ
ＨＢｓＡｇを全最終量の水酸化アルミニウムに吸着させ、リン酸緩衝液セイライン（ＰＯ4 １０ｍＭ，ＮａＣｌ １５０ｍＭ）で最終体積を１回分あたり１ｍｌに調節した。処方を使用するまで４℃で保存した。
６．２．２． ＨＢｓＡｇ ２０μｇ／水酸化アルミニウム １００μｇ
わずか１００μｇのＡｌ（ＯＨ）3に吸着させた以外は上記のごとくＨＢｓＡｇを処方した。最終体積は１回分あたり１ｍｌであった。
６．２．３． ＨＢｓＡｇ ２０μｇ／水酸化アルミニウム １００μｇ／ＭＰＬ ５０μｇ
ＨＢｓＡｇを１００μｇの水酸化アルミミウムに吸着させ、室温で１時間インキュベーションした。次いで、ＭＰＬを所望濃度で添加し、室温で１時間インキュベーションした。次いで、適当な緩衝液（上記）にて処方を最終体積（１回分あたり１ｍｌ）に調節し、使用まで４℃で保存した。
６．２．４． 免疫スケジュール
ボランテイアの人（グループあたり２０人）に、１ｍｌの所定の処方のうちの１つを筋肉内注射した。０、１、３および６カ月目に血清を集めた。それらを、市販のアボット試験（Abbot test）により中和抗体について分析した。
６．３． 結果
表８は、水酸化アルミニウムおよびＮＳ１−ＯｓｐＡと一緒に使用された１００ｎｍの粒子形態のＭＰＬは、水酸化アルミニウム上の抗原よりも阻害特性を有する高い抗体力価の産生に有効であり、血清変換が早いことを示す。
このことにより、ＮＳ１−ＯｓｐＡのような可溶性抗原については、小さな粒子として処方されたＭＰＬが、すでに動物において他の可溶性抗原について示されているアジュバント特性をヒトにおいて保持することが確認された。
表７は、Ｂ型肝炎処方中に存在する水酸化アルミニウム処方の量を減じることにより失われるアジュバント効果を、本明細書において記載された形態のＭＰＬを添加することにより回復させることができることを示す。さらにＭＰＬは血清変換速度を改善する。
実施例７： 複合ワクチン処方−Ｂ型肝炎＋Ａ型肝炎
最終量（０．５ｍｇ／ｍｌ）の９０％の水酸化アルミニウムにＨＢｓＡｇを吸着させ、室温で一晩インキュベーションする。ｐＨを６．２に調節し、標品を室温に１４時間放置して熟成させる。
ＨＭ−１７５株の不活性化誘導体の形態の（ハービックス中と同様）３６０ないし２２ＥＵ用量のＡ型肝炎抗原を、最終濃度（０．５ｍｇ／ｍｌ）の水酸化アルミニウムのうちの１０％に吸着させる。次いで、残りの水酸化アルミニウムを溶液に添加し、室温で１時間攪拌する。次いで、水酸化アルミニウムに吸着したＨＡＶをＨＢｓＡｇ処方に添加する。
ＭＰＬ（粒子サイズ１００ｎｍ未満）を、最終濃度が１ｍｌの１回分において１２．５ないし１００μｇとなるようＨＡＶ／ＨＢｓＡｇ溶液に添加し、体積を最終剤型の体積に調節し、使用するまで処方を４℃で保存する。
実施例８： さらなる抗原を含有する複合ワクチン
１種またはそれ以上の所望抗原を上記実施例２または実施例３もしくは実施例４記載の処方に添加することにより、複合ワクチンを調製することができる。
実施例９： 水酸化アルミニウムおよびＭＰＬとともに処方されたＨＢｓＡｇでのマウスに対する免疫による、体液性免疫の増大および細胞により媒介される免疫の誘導
９．１． 抗−ＨＢｓ抗体に対するＡｌ（ＯＨ）3＋ＭＰＬの効果
アジュバントとしてのＭＰＬを伴うＡｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇで、皮下経路または皮内経路によりＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した。ＨＢｓＡｇ／Ａｌ／ＭＰＬ処方でマウスを２回免疫し、１回目および２回目の投与後に抗体応答を測定した。ＥＬＩＳＡまたはＡＵＳＡＢ（アボット・ラブ，III（Abbot Lab,III））により全Ｉｇを測定したところ、ＩｇＧ２ａイソタイプ抗体の誘導が特に注意を引いた。なぜなら、このイソタイプは主にγ−インターフェロンの分泌により誘導されるからである。したがって、このイソタイプの誘導は、細胞により媒介される免疫の活性化、すなわちＴｈ１の活性化を間接的に反映するものである。
ＭＰＬ粒子のサイズのみならずＨＢｓＡｇ／ＭＰＬ比についても調べた。
９．１．１． 実験例Ｉ−Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇの免疫原性に対するＭＰＬ（＞５００ｎｍ）投与の効果
１０匹のメスのＢａｌｂ／ｃマウスからなるグループに、粒子サイズが５００ｎｍを越える５０ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として、ＭＰＬ量を増加させて（３．１から５０ｍｃｇまで））に吸着した２．５ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇを皮下注射した。体積１００ｍｃｌとして２週間間隔で２回マウスに注射した。最初の注射から２週間後（部分採血）および追加免疫から１週間後に、マウスから採血した。捕捉抗体として組み換え型ＨＢｓＡｇを用いるＥＬＩＳＡにより全抗−ＨＢｓＡｇ ＩｇＧおよび特異的ＩｇＧ２ａを測定した。最大値の５０％に対応する希釈倍率の逆数で力価を表した（中点希釈（mid-point dilution））。結果は、ＭＰＬ用量の増加、とりわけ１２．５から５０ｍｃｇまでの用量に伴う特異的ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａ双方の増加を示す。該効果は、一次応答および二次応答の両方に関して見られ、特にＩｇＧ２ａについて顕著であり（２０倍までの増加）、ＭＰＬでの免疫により誘導されたγ−インターフェロンの分泌を間接的に示すものである。
９．１．２． 実験例II−ＭＰＬ（＞５００ｎｍ）含有または不含の吸着組み換え型ＨＢｓＡｇの臨床的ロットの比較
Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇの３種の臨床用ロットを調製した。ロットＤＳＡＨ１６はＭＰＬ不含であり、対照として役立つ。ロットＤＳＡＲ５０１および５０２は同様に調製（０．５ｍｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）に吸着した２０ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇ）されたが、５０ｍｃｇのＭＰＬ（＞５００ｎｍ）を含有していた。
１０匹のマウスからなるグループに該３つのロットを２週間間隔で２回皮下注射した（ＨＢｓＡｇ２．５ｍｇ、Ａｌ+++１００ｍｃｇおよびＭＰＬ６．２５ｍｃｇを含有する２００ｍｃｌ）。１４日目および追加免疫後１週間目にマウスから採血した。ＡＵＳＡＢキットまたはイン−ハウスＥＬＩＳＡ（in-house ELISA）を用いて、抗−ＨＢｓＡｇ抗体をＩｇＧまたはＩｇＧ２ａいずれかについて測定した。結果を表１０に示す。それらにより、最初の注射から２週間後に、ＭＰＬを含有する２つのロットは有意な抗−ＨＢｓ応答（１２．４および４１．９ｍＩＵ／ｍｌ）を誘導したが、ＭＰＬ不含ロットは最低の応答（０．７５ｍＩＵ／ｍｌ）しか誘導しなかったことが示される。応答者数もＭＰＬ含有ロットについては多かった（ＭＰＬ不含ロットは１／１０であるのに対し９／１０および９／１０）。ロットＤＳＡＲ５０１および５０２について得られる力価はＭＰＬ不含ロットについて得られる力価よりも約６倍高いため、ＭＰＬの効果は追加免疫後に確認される。
このことは、少なくともマウスにおいては、ＭＰＬ（＞５００ｎｍ）は抗−ＨＢｓ応答の動力学および抗−ＨＢｓ応答のレベルの双方を向上させうることを示すものである。
ロットＤＳＡＨ１６（ＭＰＬ不含）およびＤＳＡＲ５０２（ＭＰＬ含有）での免疫後に特異的ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａを測定した場合に、これらの結果が確認された。ＭＰＬが存在する場合、抗−ＨＢｓ ＩｇＧ力価は５倍（一次応答）および３倍（二次応答）高い。
ＩｇＧ２ａ応答に関しては、少なくとも２回目の投与後においてはＭＰＬの効果はより衝撃的でさえあり、ＩｇＧ２ａの優先的な誘導が示される。このことは、ＭＰＬ含有標品による細胞により媒介される免疫の活性化を間接的に反映している。
９．１．３． 実験例III： Ａｌ（ＯＨ）3に吸着組したみ換え型ＨＢｓＡｇの免疫性に対するＭＰＬ（＜１００ｎｍ）投与の影響
１０匹のマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、メス、７週齢）からなるグループに、ＭＰＬ（＜１００ｎｍ）の量を増加させて（３．１から２５ｍｃｇまで）、５０ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇ １ｍｃｇを皮下注射した。マウスに２００ｍｃｌの体積で２週間間隔で２回注射した。最初の注射２週間後および追加免疫１週間後にマウスから採血した。ＥＬＩＳＡにより抗−ＨＢｓ応答（全Ｉｇ、ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａ）を貯留しておいた血清について評価した。力価を、中点希釈率（最高値の５０％を与える希釈率の逆数）として表した。結果は、３．１ｍｃｇ程度の少ないＭＰＬでも、一次および二次応答の双方に対して強力な抗体応答の増大を誘導することを示す。応答最高値は６．２５ｍｃｇについて得られ、高用量のＭＰＬ（２５ｍｃｇ）を用いた場合、ＭＰＬ不含のものにおいて見られるのと同様にその後減少する。抗体応答のパターンはＩｇＧ、ＩｇＧ２ａおよび全Ｉｇについて同様である。該パターンは、より大きなサイズのＭＰＬについて得られた結果とは対照をなし、最大効果を得るためにより少量のＭＰＬが必要とされることから、小サイズ（＜１００ｎｍ）のＭＰＬ粒子は大サイズ（＞５００ｎｍ）の粒子よりも効果的であることを示す。小サイズのＭＰＬの最大活性はいくつかの実験において確認された。
大サイズＭＰＬ（＞５００ｎｍ）について示すように、ＭＰＬのアジュバント効果はＩｇＧまたは全Ｉｇに対してよりもＩｇＧ２ａに対して大きい。二次応答の最大効果において（６．２５ｍｃｇのＭＰＬ）、２５倍のＩｇ２ａ増加がみられたが、ＩｇＧまたは全Ｉｇの増加はそれぞれ７．６倍および４．３倍であった。
９．２． Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇによる細胞により媒介される免疫の応答−ＭＰＬの効果
体液性免疫がＢ型肝炎に対して防御を行うに十分である場合、細胞により媒介される免疫（ＣＴＬ，Ｔｈ１）は疾病の治療にとり特に重要となりうるであろう。
しかしながら、Ａｌ（ＯＨ）3は体液性免疫を向上させるが細胞により媒介される免疫を向上させないため、治療用ワクチンには新たな処方が必要とされる。
我々は、ＩＬ−２およびｇ−（すなわちガンマ）インターフェロンを分泌する能力のα−Ｔｈ１細胞の誘導に対するＭＰＬの効果を、Ａｌ（ＯＨ）3に吸着した組み換え型ＨＢｓＡｇで免疫されたＢａｌｂ／ｃマウスにおいて調べた。
９．２．１． 実験例Ｉ−Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇでＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した後の、Ｔｈ１細胞の誘導に対するＭＰＬ（＞５００ｎｍ）の影響
１０匹のＢａｌｂ／ｃマウス（メス、５週齢）からなるグループに、１０ｍｃｇのＨＢｓＡｇ、１５ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）および１５ｍｃｇのＭＰＬを含有する３０ｍｃｌを各マウスの足の甲に注射することにより免疫した。対照マウスに、ＦＣＡと混合した同量のＨＢｓＡｇ（陽性対照）またはＭＰＬなしでＡｌ（ＯＨ）3に吸着した同量のＨＢｓＡｇ（陰性対照）のいずれかを同様に注射した。
免疫後６日目にマウスを殺し、膝窩リンパ節を取った。リンパ節細胞（ＬＮＣ，２ｘ１０5個／ｍｌ）を、組み換え型ＨＢｓＡｇ５ｍｃｇを含有する、陰性マウス血清１％を補足したＲＰＭＩ培地中において異なる時間（２４時間ないし７４時間）培養した。培養終了後、培地中に分泌されたＩＬ−２、ＩＮＦ−ｇおよびＩＬ−４の量を測定した。ＩＬ−２依存性ＣＴＬ細胞系（ＶＤＡ２細胞）の分化を刺激する能力によりＩＬ−２を評価し（３Ｈ−チミジンの取り込みにより評価）、刺激インデックスＳＩ（ＳＩ＝刺激された細胞に取り込まれた３Ｈ−チミジン量／刺激されない細胞に取り込まれた３Ｈ−チミジン量）として力価を表した。ＩＬ−４およびＩＮＦ−ｇの量を、市販のＥＬＩＳＡキット（ＩＦＮ−ｇにはホーランド・バイオテクノロジー（Holland Biotechnology）社製のものおよびＩＬ−４にはエンドジェン（Endogen）社製のもの）を用いて測定した。力価を１ｍｌあたりのＩＦＮ−ｇのピコグラム数（ｐｇ）で表した。
結果は、Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇで免疫されたマウス由来のＬＮＣによっては有意な量のＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＮＦ−ｇは分泌されないことを示す。対照的に、高レベルのＩＬ−２（４８時間目にＩ．Ｓ．＝３８）および有意な量のＩＮＦ−ｇは、ＭＰＬを伴うＡｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇで免疫されたマウス由来のＬＮＣにより分泌される。この分泌は、ＦＣＡを伴うＨＢｓＡｇで免疫されたマウスについて観察された分泌と同様であるかまたはそれより多く、インビトロ分泌はより早く起こる。
ＭＰＬ存在下でＡｌ（ＯＨ）3に吸着したＨｂｓＡｇでの免疫後であっても、ＩＬ−４は検出されなかった。
この分泌特性は、Ｔｈ１細胞（ＩＬ−２、ＩＮＦ−ｇ）はＭＰＬ存在下で吸着したＨＢｓＡｇでの免疫により誘導されたが、ＭＰＬ不存在下においては誘導されなかったことを示す。しかしながら、これらの免疫条件において、Ｔｈ２（ＩＬ−４）は検出されなかった。
９．２．２． 実験例II−Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇでＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した後の、Ｔｈ１細胞の誘導に対するＭＰＬ（＜１００ｎｍ）の影響
５匹のＢａｌｂ／ｃマウスからなるグループに、ＭＰＬ量を増加させて（１００ｎｍ、０ないし１５ｍｃｇ）、１５ｍｃｇのＡｌ+++（Ａｌ（ＯＨ）3として）に吸着した１０ｍｃｇの組み換え型ＨＢｓＡｇを含有する３０ｍｃｌを、２本の足の甲に免疫した。
注射後６日目に、マウスを殺し、膝窩リンパ節を取った。リンパ節細胞（ＬＮＣ）を、２ｘ１０6個／ｍｌとして、組み換え型ＨＢｓＡｇ５ｍｃｇ／ｍｌの存在下、陰性マウス血清１％を補足したＲＰＭＩ培地中において異なる時間（２４ないし９６／２５時間）培養した。
ＶＤＡ２細胞の分化に対する刺激によりＩＬ−２の分泌を測定し、ＩＬ−２濃度を刺激インデックス（ＳＩ）として表した。ＩＮＦ−ｇの分泌を市販キットを用いて測定し、ｐｇ／ｍｌで表した。
低用量のＭＰＬ（７．５ｍｃｇ）によりＩＬ−２の分泌は劇的に増加し、その最大効果は１５ｍｃｇのＭＰＬについて得られることがわかった。
一般的に、ＩＬ−２の分泌は４８時間目または７２時間目よりも２４時間目において重要である。
ＭＰＬ不存在下においてＨＢｓＡｇをＡｌ（ＯＨ）3に吸着させた場合、ＩＮＦ−ｇの分泌はない。低用量のＭＰＬ（７．５ｍｃｇ）はＩＮＦ−ｇの分泌を誘導し、さらに、その最大効果は１５ｍｃｇのＭＰＬについて得られる。ＩＬ−２について観察されたこととは対照的に、培地中におけるＩＮＦ−ｇの分泌は遅れ、９６時間目まで継時的に増加する。
これらのデータを総合すると、ＭＰＬ（＜１００ｎｍ）は、Ａｌ（ＯＨ）3に吸着したＨＢｓＡｇに結合した場合、Ｔｈ１の有効な誘導物質であることが示される。
Ａｌ（ＯＨ）3およびＭＰＬに吸着したＨＢｓＡｇを含有する処方の、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける体液性免疫および細胞により媒介される免疫の双方に対する影響を調べた。結果は、一次および二次いずれの免疫の後にも、ずっと多くの抗−ＨＢｓ抗体が見いだされるので、ＭＰＬは抗−ＨＢｓ応答の動力学をはっきりと向上させることが示される。抗−ＨＢｓの量も変化し、ＩｇＧ２ａの優先的な誘導が観察され、このことはＩＮＦ−ｇの分泌、すなわち細胞により媒介される免疫の誘導を間接的に反映する。
ＨＢｓＡｇ、Ａｌ（ＯＨ）3およびＭＰＬを含有する処方によるＴｈ１細胞の誘導の直接的評価が、ＭＰＬは、ＩＬ−２およびＩＮＦ−ｇ双方を分泌するＴｈ１細胞の有効な誘導物質であることを明確に示す。よって、この種の処方は、治療用ワクチンの開発において重要である。
１００ｎｍ未満の粒子サイズのＭＰＬを用いて最良の結果が得られた。
上記実験結果を示す表については、以下の表９〜１４を参照のこと。
１３． 結論
全データは、ヒトを含む霊長類において、小さいＭＰＬは大きいサイズのＭＰＬに優る改善された免疫刺激物質であることを示す。このことにより、大規模の滅菌ロットを製造しうることと相俟って、小さいＭＰＬは、ヒトおよび動物の健康のためのワクチンの範囲に用いられる適当な免疫刺激剤となる。
Claims (29)
- ３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（3-O-deacylated monophosphoryl lipid A）（ＭＰＬ）と抱合した抗原および適当な担体を含み、ＭＰＬの粒子サイズが１２０ｎｍを超えないワクチン組成物。
- ＭＰＬの粒子サイズが６０〜１２０ｎｍの範囲にある請求項１記載のワクチン組成物。
- ＭＰＬの粒子サイズが１００ｎｍより小さい請求項１または請求項２記載のワクチン組成物。
- 担体が水酸化アルミニウムである請求項１ないし３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 担体が水中油エマルジョンまたは他の脂質を基礎とした賦形剤である請求項１ないし３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 抗原がウイルス抗原である請求項１ないし５のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 抗原がＡ型肝炎に対する抗原である請求項１〜６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- Ａ型肝炎抗原がＨＭ−１７５株由来の不活性化された全細胞組成物である請求項７記載のワクチン組成物。
- 抗原がＢ型肝炎に対する抗原である請求項１ないし６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 抗原がＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）またはその変種からなる請求項９記載のワクチン組成物。
- ＨＢｓＡｇがＨＢｓＡｇのＳ抗原（２２６個のアミノ酸）からなる請求項１０記載のワクチン組成物。
- ＨＢｓＡｇがさらにプレ−Ｓ配列（pre-S sequence）からなる請求項１０記載のワクチン組成物。
- ＨＢｓＡｇが、式（Ｌ*，Ｓ）：
［式中、Ｌ*がＬ蛋白の残基１２〜５２、１３３〜１４５および１７５〜４００からなるアミノ酸配列を有するＢ型肝炎ウイルスの修飾Ｌ蛋白を意味し、ＳがＨＢｓＡｇのＳ−蛋白を意味する］
で示される混成粒子である請求項１１または請求項１２記載のワクチン組成物。 - さらにＡ型肝炎抗原からなる請求項９ないし１３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- １種またはそれ以上の肝炎抗原および以下のもの：
ジフテリア、破傷風、百日咳、ヘモフィルス・インフルエンゼｂ（Haemophilus influenzae ｂ）（Ｈｉｂ）、およびポリオ
のうちの１つまたはそれ以上に対する防御を提供する非肝炎抗原から選択される少なくとも１種の他の成分を含む請求項１〜１４のいずれか１項に記載のワクチン組成物。 - ＤＴＰ（ジフテリア−破傷風−百日咳）−ＨＢｓＡｇ混合物、Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ混合物、ＤＴＰ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ混合物およびＩＰＶ（不活性化ポリオワクチン）−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ混合物から選択される請求項１５記載のワクチン組成物。
- さらにＡ型肝炎抗原からなる請求項１６記載のワクチン組成物。
- ＨＳＶ糖蛋白Ｄまたはその免疫学的フラグメントを含む請求項１ないし６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 糖蛋白Ｄが切断された蛋白である請求項１８記載のワクチン組成物。
- 切断された蛋白がＨＳＶｇＤ２でありＣ末端アンカー領域
（anchor region）を欠くものである請求項１９記載のワクチン組成物。 - ＨＩＶ ｇｐ１６０またはその誘導体を含む請求項１ないし６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- ｇｐ１６０の誘導体がｇｐ１２０である請求項２１記載のワクチン組成物。
- ３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡが、１回分あたり１０μｇ〜１００μｇの範囲で存在する請求項１〜２２のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- さらにツイン （登録商標） ８０（Ｔｗｅｅｎ （登録商標） ８０）またはソルビトールのいずれかからなる請求項１〜２３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 医療に使用する請求項１〜２４のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
- 粒子サイズが１２０ｎｍより小さい３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ。
- ３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの透明滅菌溶液を抗原と混合することを含む請求項１〜２５のいずれか１項に記載のワクチン組成物の製造法。
- 感染の予防または治療のための医薬の製造における、１２０ｎｍを超えない粒子サイズを有する３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡと抱合した抗原の使用方法。
- １２０ｎｍより小さい粒子サイズを有する医薬用途の３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9306029.1 | 1993-03-23 | ||
| GB939306029A GB9306029D0 (en) | 1993-03-23 | 1993-03-23 | Vaccine compositions |
| GB9403417A GB9403417D0 (en) | 1994-02-23 | 1994-02-23 | Vaccine compositions |
| GB9403417.0 | 1994-02-23 | ||
| PCT/EP1994/000818 WO1994021292A1 (en) | 1993-03-23 | 1994-03-14 | Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004229276A Division JP4837906B2 (ja) | 1993-03-23 | 2004-08-05 | ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドａの透明滅菌溶液およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08508722A JPH08508722A (ja) | 1996-09-17 |
| JP4028593B2 true JP4028593B2 (ja) | 2007-12-26 |
Family
ID=26302633
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52064094A Expired - Lifetime JP4028593B2 (ja) | 1993-03-23 | 1994-03-14 | ３−ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドａ含有ワクチン組成物 |
| JP2004229276A Expired - Lifetime JP4837906B2 (ja) | 1993-03-23 | 2004-08-05 | ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドａの透明滅菌溶液およびその製造法 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004229276A Expired - Lifetime JP4837906B2 (ja) | 1993-03-23 | 2004-08-05 | ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドａの透明滅菌溶液およびその製造法 |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5776468A (ja) |
| EP (3) | EP0812593B8 (ja) |
| JP (2) | JP4028593B2 (ja) |
| KR (1) | KR100310510B1 (ja) |
| CN (1) | CN1087176C (ja) |
| AP (1) | AP515A (ja) |
| AT (2) | ATE204762T1 (ja) |
| AU (1) | AU685443B2 (ja) |
| BR (1) | BR9405957A (ja) |
| CZ (1) | CZ289476B6 (ja) |
| DE (2) | DE69405551T3 (ja) |
| DK (2) | DK0812593T4 (ja) |
| DZ (1) | DZ1763A1 (ja) |
| ES (2) | ES2109685T5 (ja) |
| FI (1) | FI110844B (ja) |
| GR (1) | GR3025483T3 (ja) |
| HK (3) | HK1011930A1 (ja) |
| HU (1) | HU219056B (ja) |
| IL (1) | IL109056A (ja) |
| MA (1) | MA23143A1 (ja) |
| NO (2) | NO322578B1 (ja) |
| NZ (1) | NZ263538A (ja) |
| PL (1) | PL178578B1 (ja) |
| PT (1) | PT812593E (ja) |
| SA (1) | SA94140762B1 (ja) |
| SG (1) | SG48309A1 (ja) |
| SK (1) | SK117395A3 (ja) |
| WO (1) | WO1994021292A1 (ja) |
Families Citing this family (422)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9105992D0 (en) * | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| US6620414B2 (en) * | 1992-03-27 | 2003-09-16 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Hepatitis vaccines containing 3-0-deacylated monophoshoryl lipid A |
| EP2289548A3 (en) * | 1992-05-23 | 2012-08-08 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Combined vaccines comprising hepatitis B surface antigen and other antigens |
| JP3734263B2 (ja) * | 1993-05-25 | 2006-01-11 | ワイス・ホールディングズ・コーポレイション | 呼吸器シンシチウムウイルスに対するワクチンのためのアジュバント |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| GB9503863D0 (en) * | 1995-02-25 | 1995-04-19 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine compositions |
| US6488934B1 (en) | 1995-02-25 | 2002-12-03 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Hepatitis B vaccine |
| UA56132C2 (uk) * | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
| US6696065B1 (en) * | 1995-05-04 | 2004-02-24 | Aventis Pastuer Limited | Acellular pertussis vaccines and methods of preparation thereof |
| DE69737413T2 (de) | 1996-01-04 | 2007-10-31 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc., Emeryville | Bakterioferritin aus helicobacter pylori |
| US20060024301A1 (en) * | 1997-02-25 | 2006-02-02 | Corixa Corporation | Prostate-specific polypeptides and fusion polypeptides thereof |
| US20060269532A1 (en) * | 1997-02-25 | 2006-11-30 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US20030185830A1 (en) * | 1997-02-25 | 2003-10-02 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US7517952B1 (en) * | 1997-02-25 | 2009-04-14 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US6491919B2 (en) | 1997-04-01 | 2002-12-10 | Corixa Corporation | Aqueous immunologic adjuvant compostions of monophosphoryl lipid A |
| JP5019494B2 (ja) * | 1997-04-01 | 2012-09-05 | コリクサ コーポレーション | モノホスホリルリピドａの水性免疫アジュバント組成物 |
| GB9706957D0 (en) * | 1997-04-05 | 1997-05-21 | Smithkline Beecham Plc | Formulation |
| US6368604B1 (en) * | 1997-09-26 | 2002-04-09 | University Of Maryland Biotechnology Institute | Non-pyrogenic derivatives of lipid A |
| GB9724531D0 (en) | 1997-11-19 | 1998-01-21 | Smithkline Biolog | Novel compounds |
| US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US7964192B1 (en) * | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
| US6913745B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-07-05 | Neuralab Limited | Passive immunization of Alzheimer's disease |
| US6905686B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-06-14 | Neuralab Limited | Active immunization for treatment of alzheimer's disease |
| US7588766B1 (en) | 2000-05-26 | 2009-09-15 | Elan Pharma International Limited | Treatment of amyloidogenic disease |
| US6787523B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
| US6750324B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-06-15 | Neuralab Limited | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies |
| US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US7179892B2 (en) * | 2000-12-06 | 2007-02-20 | Neuralab Limited | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US6923964B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-08-02 | Neuralab Limited | Active immunization of AScr for prion disorders |
| TWI239847B (en) * | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
| US6761888B1 (en) * | 2000-05-26 | 2004-07-13 | Neuralab Limited | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease |
| DE19803453A1 (de) * | 1998-01-30 | 1999-08-12 | Boehringer Ingelheim Int | Vakzine |
| GB9808866D0 (en) | 1998-04-24 | 1998-06-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| US20030147882A1 (en) * | 1998-05-21 | 2003-08-07 | Alan Solomon | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
| WO1999061048A1 (en) * | 1998-05-22 | 1999-12-02 | Smithkline Beecham Corporation | CORRELATIVE PROTECTION USING OspA ANTIBODY TITERS |
| US6306404B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-10-23 | American Cyanamid Company | Adjuvant and vaccine compositions containing monophosphoryl lipid A |
| AU763770B2 (en) * | 1998-07-14 | 2003-07-31 | Wyeth Holdings Corporation | Adjuvant and vaccine compositions containing monophosphoryl lipid A |
| US20040213806A1 (en) * | 1998-08-28 | 2004-10-28 | Smithkline Beecham Biologicals, S.A. | Salmonella typhi vaccine compositions |
| GB9819898D0 (en) * | 1998-09-11 | 1998-11-04 | Smithkline Beecham Plc | New vaccine and method of use |
| US6692752B1 (en) | 1999-09-08 | 2004-02-17 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Methods of treating human females susceptible to HSV infection |
| GB9820525D0 (en) * | 1998-09-21 | 1998-11-11 | Allergy Therapeutics Ltd | Formulation |
| GB9822714D0 (en) | 1998-10-16 | 1998-12-09 | Smithkline Beecham Sa | Vaccines |
| US7357936B1 (en) * | 1998-10-16 | 2008-04-15 | Smithkline Beecham Biologicals, Sa | Adjuvant systems and vaccines |
| ATE527360T1 (de) | 1998-12-08 | 2011-10-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Neue verbindungen abgeleitet von neisseria meningitidis |
| DK1163343T3 (da) | 1999-03-12 | 2010-04-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Neisseria meningitidis antigene polypeptider, tilsvarende polynukleotider og beskyttende antistoffer |
| GB9909077D0 (en) * | 1999-04-20 | 1999-06-16 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compositions |
| MY125387A (en) | 1999-03-19 | 2006-07-31 | Smithkline Beecham Biologicals S A | Vaccine |
| IL145982A0 (en) | 1999-04-19 | 2002-07-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| US6558670B1 (en) | 1999-04-19 | 2003-05-06 | Smithkline Beechman Biologicals S.A. | Vaccine adjuvants |
| GEP20053446B (en) * | 1999-05-13 | 2005-02-25 | Wyeth Corp | Adjuvant Combination Formulations |
| US6787637B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
| UA81216C2 (en) * | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
| US6635261B2 (en) | 1999-07-13 | 2003-10-21 | Wyeth Holdings Corporation | Adjuvant and vaccine compositions containing monophosphoryl lipid A |
| GB9921146D0 (en) | 1999-09-07 | 1999-11-10 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
| GB9921147D0 (en) * | 1999-09-07 | 1999-11-10 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
| GB9923176D0 (en) | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
| US8017590B1 (en) | 1999-10-22 | 2011-09-13 | Sanofi Pasteur Limited | Method of inducing and/or enhancing an immune response to tumor antigens |
| EP1104767A1 (en) | 1999-11-30 | 2001-06-06 | Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek | Mono- and disaccharide derivatives containing both fatty acid ester and sulfate ester groups |
| GB0000891D0 (en) * | 2000-01-14 | 2000-03-08 | Allergy Therapeutics Ltd | Formulation |
| EP1282702B1 (en) | 2000-05-10 | 2006-11-29 | Sanofi Pasteur Limited | Immunogenic polypeptides encoded by mage minigenes and uses thereof |
| US6821519B2 (en) * | 2000-06-29 | 2004-11-23 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of herpes simplex virus infection |
| GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| CA2436107C (en) * | 2000-10-06 | 2012-05-22 | H. Henrich Paradies | Kyberdrug as autovaccines with immune-regulating effects |
| PL211151B1 (pl) | 2000-10-18 | 2012-04-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Kompozycja immunogenna oraz zastosowanie połączenia saponiny, oligonukleotydu immunostymulującego i lipopolisacharydu |
| EP2284183A1 (en) | 2000-10-27 | 2011-02-16 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A and B |
| US7048931B1 (en) * | 2000-11-09 | 2006-05-23 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| EE200300172A (et) * | 2000-11-10 | 2003-06-16 | Wyeth Holdings Corporation | Antigeenne kompositsioon ja adjuvantsegu |
| US7700751B2 (en) | 2000-12-06 | 2010-04-20 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide |
| PE20020574A1 (es) | 2000-12-06 | 2002-07-02 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta |
| WO2002046477A2 (en) | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Chiron Corporation | Endogenous retroviruses up-regulated in prostate cancer |
| AU2002254901A1 (en) | 2001-02-23 | 2002-10-03 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Influenza vaccine formulations for intradermal delivery |
| US20030031684A1 (en) | 2001-03-30 | 2003-02-13 | Corixa Corporation | Methods for the production of 3-O-deactivated-4'-monophosphoryl lipid a (3D-MLA) |
| GB0109297D0 (en) | 2001-04-12 | 2001-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| US20100221284A1 (en) | 2001-05-30 | 2010-09-02 | Saech-Sisches Serumwerk Dresden | Novel vaccine composition |
| MY134424A (en) | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| US8481043B2 (en) | 2001-06-22 | 2013-07-09 | Cpex Pharmaceuticals, Inc. | Nasal immunization |
| GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
| GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| US7361352B2 (en) | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| ES2607431T3 (es) | 2002-02-20 | 2017-03-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Micropartículas con moléculas que contienen polipéptidos adsorbidos |
| US7351413B2 (en) | 2002-02-21 | 2008-04-01 | Lorantis, Limited | Stabilized HBc chimer particles as immunogens for chronic hepatitis |
| MY139983A (en) | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| GB0206360D0 (en) | 2002-03-18 | 2002-05-01 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Viral antigens |
| AU2003276679A1 (en) | 2002-06-13 | 2003-12-31 | Chiron Corporation | Vectors for expression of hml-2 polypeptides |
| JP4697706B2 (ja) | 2002-10-11 | 2011-06-08 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 高毒性髄膜炎菌系統に対する広範な防御のためのポリペプチド−ワクチン |
| WO2004037189A2 (en) | 2002-10-23 | 2004-05-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Methods for vaccinating against malaria |
| US7858098B2 (en) | 2002-12-20 | 2010-12-28 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Vaccine |
| CA3042073C (en) | 2003-01-30 | 2022-09-13 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups |
| TWI374893B (en) | 2003-05-30 | 2012-10-21 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| CA2528007C (en) | 2003-06-02 | 2012-03-27 | Chiron Corporation | Immunogenic compositions based on microparticles comprising adsorbed toxoid and a polysaccharide-containing antigen |
| GB0321615D0 (en) | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
| JP4738339B2 (ja) | 2003-10-02 | 2011-08-03 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 複数の髄膜炎菌血清群についての液体ワクチン |
| ATE474595T1 (de) | 2003-10-02 | 2010-08-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | B. pertussis antigene und ihre verwendung bei der vakzinierung |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| EP1722815A1 (en) | 2004-03-09 | 2006-11-22 | Chiron Corporation | Influenza virus vaccines |
| GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
| EP1740217B1 (en) | 2004-04-30 | 2011-06-15 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Meningococcal conjugate vaccination |
| GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
| GB0410866D0 (en) | 2004-05-14 | 2004-06-16 | Chiron Srl | Haemophilius influenzae |
| JP4896021B2 (ja) | 2004-05-21 | 2012-03-14 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド | 呼吸器系病原体ワクチンのためのアルファウイルスベクター |
| ATE491467T1 (de) | 2004-05-28 | 2011-01-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Impfstoffzusammensetzungen mit virosomen und einem saponin-adjuvans |
| US7758866B2 (en) | 2004-06-16 | 2010-07-20 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Vaccine against HPV16 and HPV18 and at least another HPV type selected from HPV 31, 45 or 52 |
| US20090317420A1 (en) | 2004-07-29 | 2009-12-24 | Chiron Corporation | Immunogenic compositions for gram positive bacteria such as streptococcus agalactiae |
| GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| EP2305294B1 (en) | 2004-09-22 | 2015-04-01 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Immunogenic composition for use in vaccination against staphylococcei |
| GB0424092D0 (en) | 2004-10-29 | 2004-12-01 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
| EP2923711A1 (en) * | 2004-11-03 | 2015-09-30 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Influenza vaccination |
| US7625560B2 (en) * | 2004-12-15 | 2009-12-01 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| CA2590337C (en) | 2004-12-15 | 2017-07-11 | Neuralab Limited | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
| CN101107007B (zh) | 2005-01-27 | 2011-08-17 | 奥克兰儿童医院及研究中心 | 对脑膜炎奈瑟球菌所致疾病具有广谱保护作用的gna1870囊泡疫苗 |
| GB0502095D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Conjugation of streptococcal capsular saccharides |
| BRPI0608430A2 (pt) * | 2005-02-16 | 2009-12-29 | Novartis Vaccines & Diagnostics Inc | composição adjuvante, processo para preparar a mesma e uso da mesma |
| GB0503337D0 (en) | 2005-02-17 | 2005-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Compositions |
| NZ580974A (en) | 2005-02-18 | 2011-05-27 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Immunogens from uropathogenic escherichia coli |
| NZ561042A (en) | 2005-02-18 | 2011-03-31 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli - SEQ ID: 7052 |
| GB0504436D0 (en) | 2005-03-03 | 2005-04-06 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| WO2006100110A1 (en) | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel composition |
| SG175456A1 (en) | 2005-04-18 | 2011-11-28 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Expressing hepatitis b virus surface antigen for vaccine preparation |
| CN101273055B (zh) | 2005-04-29 | 2016-03-16 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于预防或治疗结核分枝杆菌感染的新方法 |
| GB0513421D0 (en) | 2005-06-30 | 2005-08-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
| CN101355960A (zh) | 2005-10-18 | 2009-01-28 | 诺华疫苗和诊断公司 | 使用α病毒复制子颗粒进行粘膜和全身免疫 |
| US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| US10842867B2 (en) | 2005-11-04 | 2020-11-24 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| AU2006310163B2 (en) | 2005-11-04 | 2011-09-15 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant |
| KR20080069232A (ko) * | 2005-11-04 | 2008-07-25 | 노바티스 백신즈 앤드 다이아그노스틱스 에스.알.엘. | 스플리트 인플루엔자 백신에 대한 보조제로서 유리 수성상계면활성제를 갖는 에멀젼 |
| NZ567979A (en) | 2005-11-04 | 2012-02-24 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Adjuvanted influenza vaccines including a cytokine-inducing agents which is an agonist of Toll-Like Receptor 7 |
| WO2007052058A1 (en) | 2005-11-04 | 2007-05-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Srl | Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators |
| GB0522765D0 (en) * | 2005-11-08 | 2005-12-14 | Chiron Srl | Combination vaccine manufacture |
| CA2630220C (en) | 2005-11-22 | 2020-10-13 | Doris Coit | Norovirus and sapovirus antigens |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
| KR101515078B1 (ko) | 2005-12-22 | 2015-04-24 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| ES2809167T3 (es) | 2006-01-17 | 2021-03-03 | Forsgren Arne | Una novedosa proteína de Haemophilus influenzae expuesta en la superficie (proteína E; pE) |
| BRPI0707300B8 (pt) | 2006-01-27 | 2021-05-25 | Novartis Ag | vacina contra vírion influenza dividido ou antígeno de superfície purificado e método para a preparação de uma composição imunogênica |
| US8063063B2 (en) | 2006-03-23 | 2011-11-22 | Novartis Ag | Immunopotentiating compounds |
| CA2646539A1 (en) | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Novartis Ag | Imidazoquinoxaline compounds as immunomodulators |
| AU2007231027B2 (en) | 2006-03-24 | 2013-10-03 | Novartis Influenza Vaccines Marburg Gmbh | Storage of influenza vaccines without refrigeration |
| EA020459B1 (ru) | 2006-03-30 | 2014-11-28 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Иммуногенная композиция |
| US9839685B2 (en) | 2006-04-13 | 2017-12-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods of inducing human immunodeficiency virus-specific immune responses in a host comprising nasally administering compositions comprising a naonemulsion and recombinant GP120 immunogen |
| US10138279B2 (en) | 2006-04-13 | 2018-11-27 | Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for Bacillus anthracis vaccination |
| WO2009017467A1 (en) | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Elan Pharma International Limited | Treatment of amyloidogenic diseases |
| US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
| EP2035035A2 (en) | 2006-06-09 | 2009-03-18 | Novartis AG | Immunogenic compositions for streptococcus agalactiae |
| PL2422810T3 (pl) | 2006-07-17 | 2015-03-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Szczepionka przeciw grypie |
| BRPI0715581A2 (pt) | 2006-07-18 | 2013-04-24 | Glaxosmithkline Biolog Sa | proteÍna de fusço hÍbrida imunogÊnica, composiÇço, uso de uma proteÍna ou uma partÍcula, mÉtodo para tratar um paciente suscetÍvel À infecÇço por plasmàdio, sequÊncia de nucleotÍdeo, hospedeiro, e, processo para a produÇço de proteÍna |
| GB0614460D0 (en) | 2006-07-20 | 2006-08-30 | Novartis Ag | Vaccines |
| EP2040744B1 (en) | 2006-07-25 | 2016-03-09 | The Secretary of State for Defence | Live vaccine strains of francisella |
| EP2586790A3 (en) | 2006-08-16 | 2013-08-14 | Novartis AG | Immunogens from uropathogenic Escherichia coli |
| MX2009002408A (es) | 2006-09-11 | 2009-03-20 | Novartis Ag | Elaboracion de vacunas para el virus de la influenza sin utilizar huevos. |
| AU2007354917B2 (en) | 2006-09-26 | 2013-06-06 | Access To Advanced Health Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| CA2664157C (en) | 2006-09-29 | 2015-12-01 | Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. | Norovirus vaccine formulations |
| EP2433648A3 (en) | 2006-10-12 | 2012-04-04 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine comprising an oil in water emulsion adjuvant |
| PT2086582E (pt) | 2006-10-12 | 2013-01-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina compreendendo uma emulsão adjuvante óleo em água |
| EP2121011B1 (en) | 2006-12-06 | 2014-05-21 | Novartis AG | Vaccines including antigen from four strains of influenza virus |
| LT2137210T (lt) | 2007-03-02 | 2016-12-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Naujas būdas ir kompozicijos |
| US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
| US9452209B2 (en) | 2007-04-20 | 2016-09-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Influenza vaccine |
| ES2552366T3 (es) | 2007-06-26 | 2015-11-27 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vacuna que comprende conjugados de polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae |
| PT2185191E (pt) | 2007-06-27 | 2012-11-27 | Novartis Ag | Vacinas contra a gripe com baixo teor de aditivos |
| GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
| WO2009016639A2 (en) * | 2007-08-02 | 2009-02-05 | Biondvax Pharmaceuticals Ltd. | Multimeric multiepitope influenza vaccines |
| CA2695421A1 (en) | 2007-08-03 | 2009-02-12 | President And Fellows Of Harvard College | Chlamydia antigens |
| KR20100068390A (ko) | 2007-08-13 | 2010-06-23 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
| MX2010002773A (es) | 2007-09-12 | 2010-03-31 | Novartis Ag | Antigenos mutantes de gas57 y anticuerpos de gas57. |
| JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
| GB0810305D0 (en) | 2008-06-05 | 2008-07-09 | Novartis Ag | Influenza vaccination |
| EP2227250A4 (en) | 2007-12-03 | 2011-07-06 | Harvard College | ANTIGENS OF CHLAMYDIA |
| ES2664753T3 (es) | 2007-12-07 | 2018-04-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composiciones de inducción de respuestas inmunes |
| AU2008352942B2 (en) | 2007-12-19 | 2013-09-12 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Soluble forms of Hendra and Nipah virus F glycoprotein and uses thereof |
| GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
| CN104292312A (zh) | 2007-12-21 | 2015-01-21 | 诺华股份有限公司 | 链球菌溶血素o的突变形式 |
| SI2222710T1 (sl) | 2007-12-24 | 2016-11-30 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Rekombinatni RSV antigeni |
| US9579372B2 (en) | 2008-02-21 | 2017-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Meningococcal fHBP polypeptides |
| US8506966B2 (en) * | 2008-02-22 | 2013-08-13 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use |
| AU2009223613B2 (en) | 2008-03-10 | 2014-09-25 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Chimeric factor H binding proteins (fHBP) containing a heterologous B domain and methods of use |
| CA2718430A1 (en) | 2008-03-18 | 2009-09-24 | Novartis Ag | Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens |
| PT2271360E (pt) | 2008-04-16 | 2015-12-07 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina |
| WO2009143524A2 (en) | 2008-05-23 | 2009-11-26 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
| CA2731194A1 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Chimeric respiratory syncytial virus polypeptide antigens |
| GB0815872D0 (en) | 2008-09-01 | 2008-10-08 | Pasteur Institut | Novel method and compositions |
| CN102223876A (zh) | 2008-09-26 | 2011-10-19 | 纳米生物公司 | 纳米乳剂治疗性组合物及其使用方法 |
| US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
| EP2376089B1 (en) | 2008-11-17 | 2018-03-14 | The Regents of the University of Michigan | Cancer vaccine compositions and methods of using the same |
| BRPI0922132A2 (pt) | 2008-12-03 | 2018-10-23 | Protea Vaccine Tech Ltd | fragmentos glutamil trna sintetase (gts). |
| AU2009325950B2 (en) | 2008-12-09 | 2013-03-07 | Pfizer Vaccines Llc | IgE CH3 peptide vaccine |
| WO2010079081A1 (en) | 2009-01-07 | 2010-07-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Methods for recovering a virus or a viral antigen produced by cell culture |
| NZ594029A (en) | 2009-01-12 | 2014-01-31 | Novartis Ag | Cna_b domain antigens in vaccines against gram positive bacteria |
| GB0901423D0 (en) | 2009-01-29 | 2009-03-11 | Secr Defence | Treatment |
| GB0901411D0 (en) | 2009-01-29 | 2009-03-11 | Secr Defence | Treatment |
| US20110293660A1 (en) | 2009-02-06 | 2011-12-01 | Bruno Rene Andre | Novel method |
| EA201500910A1 (ru) | 2009-02-10 | 2016-04-29 | Новартис Аг | Вакцины против гриппа со сниженным количеством сквалена |
| US9265821B2 (en) | 2009-02-17 | 2016-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant |
| DK2403507T3 (en) | 2009-03-05 | 2018-06-06 | Jenny Colleen Mccloskey | TREATMENT OF INFECTION |
| JP2012519482A (ja) | 2009-03-06 | 2012-08-30 | ノバルティス アーゲー | クラミジア抗原 |
| GB0906234D0 (en) | 2009-04-14 | 2009-05-20 | Secr Defence | Vaccine |
| DK2510947T3 (en) | 2009-04-14 | 2016-03-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Compositions for Immunization against Staphylococcus aureus. |
| WO2010125480A1 (en) | 2009-04-30 | 2010-11-04 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Pneumococcal vaccine and uses thereof |
| CA2764374C (en) | 2009-06-05 | 2019-11-19 | Infectious Disease Research Institute | Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants |
| GB0910046D0 (en) * | 2009-06-10 | 2009-07-22 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compositions |
| CN102802665B (zh) | 2009-06-15 | 2015-11-25 | 新加坡国立大学 | 流感疫苗、组合物及使用方法 |
| EP2442827B1 (en) | 2009-06-16 | 2016-01-06 | The Regents of the University of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
| MX2012000036A (es) | 2009-06-24 | 2012-02-28 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna. |
| WO2010149745A1 (en) | 2009-06-24 | 2010-12-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Recombinant rsv antigens |
| EP2451833B1 (en) | 2009-07-07 | 2018-01-17 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Conserved escherichia coli immunogens |
| ES2563730T3 (es) | 2009-07-15 | 2016-03-16 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Composiciones de proteína RSV F y procedimientos de fabricación de las mismas |
| DK2464658T3 (en) | 2009-07-16 | 2014-12-15 | Novartis Ag | Detoxified escherichia coli immunogens |
| RU2518291C2 (ru) | 2009-07-30 | 2014-06-10 | Пфайзер Вэксинс ЭлЭлСи | Антигенные tau-пептиды и их применения |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| GB0913681D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| US20110076300A1 (en) | 2009-08-27 | 2011-03-31 | Mariagrazia Pizza | Hybrid Polypeptides Including Meningococcal fHBP Sequences |
| CA2771770A1 (en) | 2009-09-03 | 2011-03-10 | Pfizer Vaccines Llc | Pcsk9 vaccine |
| WO2011030218A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Novartis Ag | Combination vaccines against respiratory tract diseases |
| WO2011036220A1 (en) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunodiffusion assay for influenza virus |
| GB0917003D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Purification of bacterial vesicles |
| GB0917002D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Improved shigella blebs |
| AU2010352695B2 (en) | 2009-09-30 | 2014-08-21 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Conjugation of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides |
| EP2483390A2 (en) | 2009-09-30 | 2012-08-08 | Novartis AG | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
| GB0918392D0 (en) | 2009-10-20 | 2009-12-02 | Novartis Ag | Diagnostic and therapeutic methods |
| CA2779816A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-05-05 | Novartis Ag | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
| GB0919690D0 (en) | 2009-11-10 | 2009-12-23 | Guy S And St Thomas S Nhs Foun | compositions for immunising against staphylococcus aureus |
| WO2011067758A2 (en) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Protea Vaccine Technologies Ltd. | Immunogenic fragments and multimers from streptococcus pneumoniae proteins |
| DE102009056871A1 (de) * | 2009-12-03 | 2011-06-22 | Novartis AG, 4056 | Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben |
| CA2785585A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Celldex Therapeutics, Inc. | Vaccine compositions |
| US9173954B2 (en) | 2009-12-30 | 2015-11-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Polysaccharide immunogens conjugated to E. coli carrier proteins |
| GB201003333D0 (en) | 2010-02-26 | 2010-04-14 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| GB201003920D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method of treatment |
| GB201003924D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| MX2012011189A (es) | 2010-03-26 | 2013-02-07 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna contra el virus e inmunodeficiencia humana. |
| BR122021020829B8 (pt) | 2010-03-30 | 2022-12-27 | Children´S Hospital & Res Center At Oakland | Proteína de ligação ao fator h de ocorrência não natural (fhbp), composição, e célula hospedeira de neisseria meningitidis geneticamente modificada |
| GB201005625D0 (en) | 2010-04-01 | 2010-05-19 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| EP2556151A1 (en) | 2010-04-07 | 2013-02-13 | Novartis AG | Method for generating a parvovirus b19 virus-like particle |
| CA2796314A1 (en) | 2010-04-13 | 2011-10-20 | Novartis Ag | Benzonapthyridine compositions and uses thereof |
| BR112012027643A2 (pt) | 2010-05-03 | 2016-08-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | métodos para a inativação de um orthomixovírus, para a preparação de uma vacina, e , composição imunogênica |
| JP2013532008A (ja) | 2010-05-28 | 2013-08-15 | テトリス オンライン インコーポレイテッド | 対話式ハイブリッド非同期コンピュータ・ゲーム・インフラストラクチャ |
| GB201009273D0 (en) | 2010-06-03 | 2010-07-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel vaccine |
| CA2800774A1 (en) | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Pfizer Vaccines Llc | Ige ch3 peptide vaccine |
| EP2576613A1 (en) | 2010-06-07 | 2013-04-10 | Pfizer Inc. | Her-2 peptides and vaccines |
| GB201009861D0 (en) | 2010-06-11 | 2010-07-21 | Novartis Ag | OMV vaccines |
| US8658603B2 (en) | 2010-06-16 | 2014-02-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for inducing an immune response |
| MX2013000163A (es) | 2010-07-06 | 2013-03-05 | Novartis Ag | Metodos y composiciones inmunogenicas derivadas de norovirus. |
| US9192661B2 (en) | 2010-07-06 | 2015-11-24 | Novartis Ag | Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles |
| GB201101665D0 (en) | 2011-01-31 | 2011-03-16 | Novartis Ag | Immunogenic compositions |
| US9168292B2 (en) | 2010-09-27 | 2015-10-27 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime boost vaccination regimen against malaria |
| US20130280322A1 (en) | 2010-09-27 | 2013-10-24 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine |
| AU2011315447A1 (en) | 2010-10-15 | 2013-05-09 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Cytomegalovirus gB antigen |
| GB201017519D0 (en) | 2010-10-15 | 2010-12-01 | Novartis Vaccines Inst For Global Health S R L | Vaccines |
| FR2966044B1 (fr) * | 2010-10-18 | 2012-11-02 | Sanofi Pasteur | Procede de conditionnement d'un vaccin contenant un adjuvant d'aluminium |
| WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
| WO2012072088A1 (en) | 2010-12-02 | 2012-06-07 | Bionor Immuno As | Peptide scaffold design |
| CN103260642B (zh) | 2010-12-14 | 2018-03-16 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 分枝杆菌抗原组合物 |
| EP2655389A2 (en) | 2010-12-24 | 2013-10-30 | Novartis AG | Compounds |
| GB201022007D0 (en) | 2010-12-24 | 2011-02-02 | Imp Innovations Ltd | DNA-sensor |
| MX346475B (es) | 2011-01-06 | 2017-03-22 | Bionor Immuno As | Peptidos inmunogenicos monomericos y multimericos. |
| DK2667892T3 (da) | 2011-01-26 | 2019-05-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | RSV-vaccineringsprogram |
| CN103517713A (zh) | 2011-02-22 | 2014-01-15 | 彼昂德瓦克斯医药有限公司 | 在改善的季节性和大流行性流感疫苗中的多聚体多表位多肽 |
| WO2012131504A1 (en) | 2011-03-02 | 2012-10-04 | Pfizer Inc. | Pcsk9 vaccine |
| GB201106357D0 (en) | 2011-04-14 | 2011-06-01 | Pessi Antonello | Composition and uses thereof |
| NZ616304A (en) | 2011-04-08 | 2016-01-29 | Immune Design Corp | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| TW201302779A (zh) | 2011-04-13 | 2013-01-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 融合蛋白質及組合疫苗 |
| HUE034673T2 (en) | 2011-05-13 | 2018-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pre-fusion Rsv F antigens |
| US20140072622A1 (en) | 2011-05-17 | 2014-03-13 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine against streptococcus pneumoniae |
| AU2012279154A1 (en) | 2011-07-01 | 2014-02-20 | The Regents Of The University Of California | Herpes virus vaccine and methods of use |
| ES2656050T3 (es) | 2011-07-06 | 2018-02-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composiciones de combinación inmunogénica y usos de las mismas |
| CA2841047A1 (en) | 2011-07-06 | 2013-01-10 | Novartis Ag | Immunogenic compositions and uses thereof |
| US9149541B2 (en) | 2011-07-08 | 2015-10-06 | Novartis Ag | Tyrosine ligation process |
| EP2731621B1 (en) | 2011-07-11 | 2017-11-01 | Takeda Vaccines, Inc. | Parenteral norovirus vaccine formulations |
| ES2687129T3 (es) | 2011-07-25 | 2018-10-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composiciones y métodos para evaluar la inmunogenicidad funcional de vacunas contra parvovirus |
| GB201114923D0 (en) | 2011-08-30 | 2011-10-12 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| KR20140066212A (ko) | 2011-09-01 | 2014-05-30 | 노파르티스 아게 | 스타필로코쿠스 아우레우스 항원의 보조제 첨가된 조제물 |
| US9358284B2 (en) | 2011-09-14 | 2016-06-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods for making saccharide-protein glycoconjugates |
| PE20141547A1 (es) | 2011-09-16 | 2014-10-25 | Ucb Pharma Sa | Anticuerpos neutralizantes frente a las exotoxinas principales tcda y tcdb de clostridium difficile |
| GB201116248D0 (en) | 2011-09-20 | 2011-11-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Liposome production using isopropanol |
| CA2854934A1 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Novartis Ag | Carrier molecule comprising a spr0096 and a spr2021 antigen |
| US20130122038A1 (en) | 2011-11-14 | 2013-05-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department | Heterologous prime-boost immunization using measles virus-based vaccines |
| WO2013108272A2 (en) | 2012-01-20 | 2013-07-25 | International Centre For Genetic Engineering And Biotechnology | Blood stage malaria vaccine |
| US20150030630A1 (en) | 2012-03-07 | 2015-01-29 | Novartis Ag | Adjuvanted formulations of rabies virus immunogens |
| WO2013131983A1 (en) | 2012-03-07 | 2013-09-12 | Novartis Ag | Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens |
| EP2822584A1 (en) | 2012-03-08 | 2015-01-14 | Novartis AG | Combination vaccines with tlr4 agonists |
| RU2014140521A (ru) | 2012-03-08 | 2016-04-27 | Новартис Аг | Адъювантные составы бустерных вакцин |
| EP2827891A1 (en) | 2012-03-18 | 2015-01-28 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Method of vaccination against human papillomavirus |
| ES2702278T3 (es) | 2012-04-01 | 2019-02-28 | Technion Res & Dev Foundation | Péptidos de inductor de metaloproteinasa de matriz extracelular (emmprin) y anticuerpos de unión |
| EP2659907A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
| EP2659906A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
| EP2659908A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
| MX359257B (es) | 2012-05-04 | 2018-09-19 | Pfizer | Antígenos asociados a próstata y regímenes de inmunoterapia basados en vacuna. |
| SI2850431T1 (en) | 2012-05-16 | 2018-08-31 | Immune Design Corp. | Vaccine against HSV-2 |
| ES2820898T3 (es) | 2012-05-22 | 2021-04-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Conjugado del serogrupo X de meningococos |
| EP2666785A1 (en) | 2012-05-23 | 2013-11-27 | Affiris AG | Complement component C5a-based vaccine |
| NZ702146A (en) | 2012-06-06 | 2016-11-25 | Bionor Immuno As | Peptides derived from viral proteins for use as immunogens and dosage reactants |
| JP2015522580A (ja) | 2012-07-06 | 2015-08-06 | ノバルティス アーゲー | 免疫学的組成物およびその使用 |
| JP2015525794A (ja) | 2012-08-06 | 2015-09-07 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 乳児においてｒｓｖ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起するための方法 |
| US20140037680A1 (en) | 2012-08-06 | 2014-02-06 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel method |
| EP2703483A1 (en) | 2012-08-29 | 2014-03-05 | Affiris AG | PCSK9 peptide vaccine |
| RU2015106930A (ru) | 2012-09-06 | 2016-10-20 | Новартис Аг | Комбинированные вакцины с менингококком серогруппы в и к/д/с |
| EP4056198A3 (en) | 2012-09-18 | 2022-12-07 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Outer membrane vesicles |
| EP2903650B1 (en) | 2012-10-02 | 2018-04-04 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Nonlinear saccharide conjugates |
| WO2014053612A1 (en) | 2012-10-03 | 2014-04-10 | Novartis Ag | Immunogenic composition |
| JP6440619B2 (ja) | 2012-10-12 | 2018-12-19 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 混合ワクチン用の架橋されていない無細胞百日咳抗原 |
| ES2826555T3 (es) | 2012-11-30 | 2021-05-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antígenos de Pseudomonas y combinación de antígenos |
| JP6290918B2 (ja) | 2012-12-05 | 2018-03-07 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組成物 |
| TW201502136A (zh) | 2013-03-15 | 2015-01-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 疫苗 |
| EA032326B1 (ru) | 2013-04-18 | 2019-05-31 | Иммьюн Дизайн Корп. | Монотерапия gla для применения в лечении рака |
| US20210145963A9 (en) | 2013-05-15 | 2021-05-20 | The Governors Of The University Of Alberta | E1e2 hcv vaccines and methods of use |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| GB201310008D0 (en) | 2013-06-05 | 2013-07-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition for use in therapy |
| EP3492097A1 (en) | 2013-08-05 | 2019-06-05 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Combination immunogenic compositions |
| US10392603B2 (en) | 2013-08-30 | 2019-08-27 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Method of viral purification |
| WO2015063611A2 (en) | 2013-11-01 | 2015-05-07 | University Of Oslo | Albumin variants and uses thereof |
| EP2870974A1 (en) | 2013-11-08 | 2015-05-13 | Novartis AG | Salmonella conjugate vaccines |
| DK3069138T3 (en) | 2013-11-15 | 2019-04-08 | Univ Oslo Hf | CTL PEPTID EPITOPES AND ANTIGEN-SPECIFIC T-CELLS, METHODS OF RECOGNITION THEREOF, AND APPLICATIONS THEREOF |
| WO2015092710A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Contralateral co-administration of vaccines |
| US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| NZ759686A (en) | 2014-01-21 | 2023-07-28 | Pfizer | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2015123291A1 (en) | 2014-02-11 | 2015-08-20 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Pcsk9 vaccine and methods of using the same |
| TW201620927A (zh) | 2014-02-24 | 2016-06-16 | 葛蘭素史密斯克藍生物品公司 | Ｕｓｐａ２蛋白質構築體及其用途 |
| MX2016012166A (es) * | 2014-03-25 | 2017-03-15 | The Government Of The Us Secretary Of The Army | Metodos para mejorar la potencia de inmunoestimulacion de vacunas adsorbidas con sales de aluminio. |
| BR112016022011A2 (pt) | 2014-03-26 | 2017-10-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | ?antígeno de proteína estafilocócica a mutante, proteína de fusão, e, composição imunogênica? |
| MX2016016533A (es) | 2014-06-13 | 2017-05-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Combinaciones inmunogenas. |
| MX2016017094A (es) | 2014-06-25 | 2017-05-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composicion inmunógena de clostridium difficile. |
| WO2016011386A1 (en) | 2014-07-18 | 2016-01-21 | University Of Washington | Cancer vaccine compositions and methods of use thereof |
| WO2016012385A1 (en) | 2014-07-21 | 2016-01-28 | Sanofi Pasteur | Vaccine composition comprising ipv and cyclodextrins |
| CN106715464B (zh) | 2014-07-23 | 2021-03-16 | 奥克兰儿童医院及研究中心 | 因子h结合蛋白变体及其使用方法 |
| JP7158853B2 (ja) | 2014-10-10 | 2022-10-24 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 対象における食物アレルギーまたは呼吸器アレルギーを処置するための、かつ上記対象の鼻腔内に投与するための免疫原性組成物 |
| AU2015252119A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-26 | Takeda Vaccines, Inc. | Hand, foot, and mouth vaccines and methods of manufacture and use thereof |
| AR102547A1 (es) | 2014-11-07 | 2017-03-08 | Takeda Vaccines Inc | Vacunas contra la enfermedad de manos, pies y boca y métodos de fabricación y su uso |
| AU2015359503B2 (en) | 2014-12-10 | 2019-05-09 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Method of treatment |
| KR102149760B1 (ko) | 2015-01-15 | 2020-08-31 | 화이자 인코포레이티드 | 폐렴구균 백신에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 |
| WO2016141320A2 (en) | 2015-03-05 | 2016-09-09 | Northwestern University | Non-neuroinvasive viruses and uses thereof |
| US20180071380A1 (en) | 2015-03-20 | 2018-03-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Immunogenic compositions for use in vaccination against bordetella |
| JP2018521016A (ja) | 2015-06-03 | 2018-08-02 | アフィリス・アクチェンゲゼルシャフトＡｆｆｉｒｉｓ Ａｇ | ＩＬ−２３−ｐ１９ワクチン |
| AU2016281904B2 (en) | 2015-06-26 | 2022-08-11 | Seqirus UK Limited | Antigenically matched influenza vaccines |
| CA2991544A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | Affiris Ag | Vaccines for the treatment and prevention of ige mediated diseases |
| TWI756893B (zh) | 2015-07-21 | 2022-03-01 | 美商輝瑞股份有限公司 | 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途 |
| GB201518684D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| GB201518668D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic Comosition |
| US10786561B2 (en) | 2015-11-20 | 2020-09-29 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
| BE1024160B9 (fr) | 2015-12-22 | 2017-12-06 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Formulation immunogène |
| TN2018000301A1 (en) | 2016-03-14 | 2020-01-16 | Univ Oslo | Engineered immunoglobulins with altered fcrn binding |
| WO2017158421A1 (en) | 2016-03-14 | 2017-09-21 | University Of Oslo | Anti-viral engineered immunoglobulins |
| US11173207B2 (en) | 2016-05-19 | 2021-11-16 | The Regents Of The University Of Michigan | Adjuvant compositions |
| GB201610599D0 (en) | 2016-06-17 | 2016-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic Composition |
| WO2017221072A2 (en) | 2016-06-21 | 2017-12-28 | University Of Oslo | Hla binding vaccine moieties and uses thereof |
| WO2018037045A1 (en) | 2016-08-23 | 2018-03-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Fusion peptides with antigens linked to short fragments of invariant chain (cd74) |
| GB201614799D0 (en) | 2016-09-01 | 2016-10-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions |
| BE1024774B1 (fr) | 2016-09-29 | 2018-07-02 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions et procedes de traitement |
| GB201616904D0 (en) | 2016-10-05 | 2016-11-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine |
| WO2018096396A1 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | University Of Oslo | Albumin variants and uses thereof |
| EP3551222A1 (en) | 2016-12-07 | 2019-10-16 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Novel process |
| GB201620968D0 (en) | 2016-12-09 | 2017-01-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adenovirus polynucleotides and polypeptides |
| MX2019006349A (es) | 2016-12-16 | 2019-08-22 | Inst Res Biomedicine | Proteinas recombinantes rsv f de prefusion nuevas y usos de las mismas. |
| GB201621686D0 (en) | 2016-12-20 | 2017-02-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods for inducing an immune response |
| EP3570879B1 (en) | 2017-01-20 | 2022-03-30 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
| WO2018178265A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Immunogenic composition, use and method of treatment |
| BR112019020209A2 (pt) | 2017-03-31 | 2020-06-02 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Composição imunogênica, uso de uma composição imunogênica, método de tratamento ou prevenção de uma recorrência de uma exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica, e, terapia de combinação. |
| SG11201909265QA (en) | 2017-04-19 | 2019-11-28 | Inst Res Biomedicine | Plasmodium sporozoite npdp peptides as vaccine and target novel malaria vaccines and antibodies binding to |
| WO2018198085A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccination |
| GB201707700D0 (en) | 2017-05-12 | 2017-06-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Dried composition |
| BR112019025193A2 (pt) | 2017-05-30 | 2020-06-23 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Métodos de fabricação de um adjuvante lipossomal, de fabricação de um concentrado lipossomal, para a preparação de uma composição imunogênica com adjuvante e para a preparação de uma solução, adjuvante lipossomal, composição imunogênica com adjuvante, e, solução |
| US11723966B2 (en) | 2017-08-14 | 2023-08-15 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods of boosting immune responses |
| EP3678699A1 (en) | 2017-09-07 | 2020-07-15 | University Of Oslo | Vaccine molecules |
| US20220118076A1 (en) | 2017-09-07 | 2022-04-21 | University Of Oslo | Vaccine molecules |
| US20200276299A1 (en) | 2017-09-08 | 2020-09-03 | Infectious Disease Research Institute | Liposomal formulations comprising saponin and methods of use |
| SG11202003800YA (en) | 2017-11-03 | 2020-05-28 | Takeda Vaccines Inc | Zika vaccines and immunogenic compositions, and methods of using the same |
| GB201721068D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B immunisation regimen and compositions |
| GB201721069D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B Immunisation regimen and compositions |
| GB201721582D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | S aureus antigens and immunogenic compositions |
| GB201721576D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hla antigens and glycoconjugates thereof |
| MX2020013553A (es) | 2018-06-12 | 2021-02-26 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Polinucleotidos y polipeptidos de adenovirus. |
| EP3581201A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Escherichia coli o157:h7 proteins and uses thereof |
| CN110680909A (zh) * | 2018-07-04 | 2020-01-14 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种速释b型流感嗜血杆菌结合疫苗可溶性微针贴及其制备方法 |
| US20210292395A1 (en) | 2018-07-31 | 2021-09-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antigen purification method |
| MX2021001479A (es) | 2018-08-07 | 2021-04-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novedosos procesos y vacunas. |
| JP2021534761A (ja) | 2018-08-23 | 2021-12-16 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性タンパク質および組成物 |
| US11260119B2 (en) | 2018-08-24 | 2022-03-01 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
| US20220000779A1 (en) | 2018-12-06 | 2022-01-06 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic compositions |
| US20220016229A1 (en) | 2018-12-12 | 2022-01-20 | Pfizer Inc. | Immunogenic Multiple Hetero-Antigen Polysaccharide-Protein Conjugates and uses thereof |
| WO2020128012A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods of inducing an immune response |
| JP7239509B6 (ja) | 2019-02-22 | 2023-03-28 | ファイザー・インク | 細菌多糖類を精製するための方法 |
| TW202102256A (zh) | 2019-03-05 | 2021-01-16 | 比利時商葛蘭素史密斯克藍生物品公司 | B型肝炎免疫法及組合物 |
| CA3136278A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
| US20220221455A1 (en) | 2019-04-18 | 2022-07-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antigen binding proteins and assays |
| EP3770269A1 (en) | 2019-07-23 | 2021-01-27 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Quantification of bioconjugate glycosylation |
| WO2021014385A1 (en) | 2019-07-24 | 2021-01-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified human cytomegalovirus proteins |
| BR112021026565A2 (pt) | 2019-08-05 | 2022-05-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composição imunogênica |
| EP4009951A1 (en) | 2019-08-05 | 2022-06-15 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Process for preparing a composition comprising a protein d polypeptide |
| EP3777884A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-17 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| CN114466659A (zh) | 2019-09-09 | 2022-05-10 | 葛兰素史克生物有限公司 | 免疫治疗组合物 |
| WO2021084429A1 (en) | 2019-11-01 | 2021-05-06 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
| WO2021122551A1 (en) | 2019-12-19 | 2021-06-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | S. aureus antigens and compositions thereof |
| AU2021211012A1 (en) | 2020-01-24 | 2022-08-25 | Aim Immunotech Inc. | Methods, compositions, and vaccines for treating a virus infection |
| US20230109142A1 (en) | 2020-02-14 | 2023-04-06 | Immunor As | Corona virus vaccine |
| CN115362177A (zh) | 2020-02-21 | 2022-11-18 | 辉瑞公司 | 糖类的纯化 |
| JP2023514697A (ja) | 2020-02-23 | 2023-04-07 | ファイザー・インク | 大腸菌組成物およびその方法 |
| MX2022013855A (es) | 2020-05-05 | 2022-11-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Dispositivos de mezcla de microfluidos y metodos de uso. |
| US20230293659A1 (en) | 2020-08-03 | 2023-09-21 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Truncated fusobacterium nucleatum fusobacterium adhesin a (fada) protein and immunogenic compositions thereof |
| KR20230096033A (ko) | 2020-10-27 | 2023-06-29 | 화이자 인코포레이티드 | 에스케리키아 콜라이 조성물 및 그의 방법 |
| CN116744965A (zh) | 2020-11-04 | 2023-09-12 | 辉瑞大药厂 | 用于肺炎球菌疫苗的免疫原性组合物 |
| EP4243863A2 (en) | 2020-11-10 | 2023-09-20 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| MX2023006320A (es) | 2020-12-02 | 2023-06-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Cadena donante complementada fimh. |
| US20220202923A1 (en) | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Pfizer Inc. | E. coli fimh mutants and uses thereof |
| WO2022147373A1 (en) | 2020-12-31 | 2022-07-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibody-guided pcsk9-mimicking immunogens lacking 9-residue sequence overlap with human proteins |
| US20220226465A1 (en) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | ConserV Bioscience | Coronavirus Immunogenic Compositions, Methods and Uses Thereof |
| CA3210363A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hpv vaccine manufacture |
| JP2024507828A (ja) | 2021-02-19 | 2024-02-21 | サノフィ パスツール インコーポレイテッド | Ｂ群髄膜炎菌組換えワクチン |
| JP2024510717A (ja) | 2021-02-22 | 2024-03-11 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組成物、使用及び方法 |
| TW202305125A (zh) | 2021-04-30 | 2023-02-01 | 美商凱立凡爾免疫治療股份有限公司 | 用於經修飾mhc表現之溶瘤病毒 |
| TW202306969A (zh) | 2021-05-28 | 2023-02-16 | 美商輝瑞大藥廠 | 包含結合之莢膜醣抗原的免疫原組合物及其用途 |
| AU2022281543A1 (en) | 2021-05-28 | 2023-11-23 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2023020994A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods |
| WO2023020993A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods |
| WO2023020992A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods |
| WO2023092090A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Matrivax, Inc. | Immunogenic fusion protein compositions and methods of use thereof |
| WO2023135515A1 (en) | 2022-01-13 | 2023-07-20 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2023144665A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified human cytomegalovirus proteins |
| WO2023161817A1 (en) | 2022-02-25 | 2023-08-31 | Pfizer Inc. | Methods for incorporating azido groups in bacterial capsular polysaccharides |
| WO2023218322A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Pfizer Inc. | Process for producing of vaccine formulations with preservatives |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US703355A (en) * | 1901-11-05 | 1902-06-24 | Bertt H Brockway | Current-motor. |
| US4196192A (en) * | 1977-10-28 | 1980-04-01 | American Cyanamid Company | Combined Haemophilus influenzae type b and pertussis vaccine |
| US4620978A (en) * | 1982-04-07 | 1986-11-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Hepatitis A virus purified and triply cloned |
| GB8508685D0 (en) * | 1985-04-03 | 1985-05-09 | Minor P D | Peptides |
| US4806352A (en) * | 1986-04-15 | 1989-02-21 | Ribi Immunochem Research Inc. | Immunological lipid emulsion adjuvant |
| US4877611A (en) * | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
| US5026557A (en) * | 1987-09-09 | 1991-06-25 | The Liposome Company, Inc. | Adjuvant composition |
| JPH085804B2 (ja) * | 1988-04-28 | 1996-01-24 | 財団法人化学及血清療法研究所 | Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン |
| US4912094B1 (en) * | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
| DE3916595A1 (de) * | 1989-05-22 | 1990-11-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur nichtradioaktiven messung der nucleinsaeuresynthese in eukaryontischen zellen |
| ES2109921T3 (es) * | 1989-07-25 | 1998-02-01 | Smithkline Beecham Biolog | Nuevos antigenos y procedimientos para su preparacion. |
| US5100662A (en) * | 1989-08-23 | 1992-03-31 | The Liposome Company, Inc. | Steroidal liposomes exhibiting enhanced stability |
| CH678394A5 (ja) * | 1990-08-22 | 1991-09-13 | Cerny Erich H | |
| KR100194079B1 (ko) * | 1990-09-28 | 1999-06-15 | 장 스테판느 | Hiv 감염 예방 또는 치료용 제약학적 조성물 및 이의 제조방법 |
| GB9106048D0 (en) * | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| JPH06503821A (ja) * | 1990-12-20 | 1994-04-28 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） | Ｂ型肝炎表面抗原に基づくワクチン |
| GB9028038D0 (en) * | 1990-12-24 | 1991-02-13 | Nycomed Pharma As | Test method and reagent kit therefor |
| GB9105992D0 (en) * | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| MA22842A1 (fr) * | 1992-03-27 | 1993-10-01 | Smithkline Beecham Biolog | Procede de preparation de compositions de vaccin. |
| AU6141094A (en) * | 1993-02-19 | 1994-09-14 | Smithkline Beecham Biologicals (Sa) | Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a |
-
1994
- 1994-03-14 DE DE69405551T patent/DE69405551T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 AU AU64264/94A patent/AU685443B2/en not_active Expired
- 1994-03-14 BR BR9405957A patent/BR9405957A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-03-14 PL PL94310598A patent/PL178578B1/pl unknown
- 1994-03-14 DE DE69428136T patent/DE69428136T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 ES ES94911894T patent/ES2109685T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 SG SG1996008821A patent/SG48309A1/en unknown
- 1994-03-14 HU HU9501979A patent/HU219056B/hu unknown
- 1994-03-14 EP EP97101617A patent/EP0812593B8/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 ES ES97101617T patent/ES2162139T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 NZ NZ263538A patent/NZ263538A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-14 CN CN94191582A patent/CN1087176C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 AT AT97101617T patent/ATE204762T1/de active
- 1994-03-14 SK SK1173-95A patent/SK117395A3/sk unknown
- 1994-03-14 KR KR1019950704133A patent/KR100310510B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-03-14 JP JP52064094A patent/JP4028593B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 WO PCT/EP1994/000818 patent/WO1994021292A1/en active IP Right Grant
- 1994-03-14 PT PT97101617T patent/PT812593E/pt unknown
- 1994-03-14 US US08/525,638 patent/US5776468A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 DK DK97101617T patent/DK0812593T4/da active
- 1994-03-14 EP EP94911894A patent/EP0689454B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-14 AT AT94911894T patent/ATE157882T1/de active
- 1994-03-14 CZ CZ19952467A patent/CZ289476B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-03-14 DK DK94911894T patent/DK0689454T4/da active
- 1994-03-14 EP EP01112703A patent/EP1175912A1/en not_active Ceased
- 1994-03-21 AP APAP/P/1994/000629A patent/AP515A/en active
- 1994-03-21 IL IL109056A patent/IL109056A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-21 DZ DZ940026A patent/DZ1763A1/fr active
- 1994-03-21 MA MA23451A patent/MA23143A1/fr unknown
- 1994-06-05 SA SA94140762A patent/SA94140762B1/ar unknown
-
1995
- 1995-09-22 FI FI954514A patent/FI110844B/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-09-22 NO NO19953759A patent/NO322578B1/no not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-11-26 GR GR970403132T patent/GR3025483T3/el unknown
-
1998
- 1998-12-10 HK HK98113156A patent/HK1011930A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-10 HK HK00100407A patent/HK1023499A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-07-30 HK HK02105614.3A patent/HK1045935A1/zh unknown
-
2004
- 2004-08-05 JP JP2004229276A patent/JP4837906B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-10-12 NO NO20054701A patent/NO20054701D0/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4028593B2 (ja) | ３−ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドａ含有ワクチン組成物 | |
| JP3881015B2 (ja) | Ｂ型肝炎ワクチン | |
| RU2121849C1 (ru) | Вакцинная композиция против гепатита, способ профилактики гепатита | |
| JP4125781B2 (ja) | ワクチン | |
| AU705739B2 (en) | A method of preparing vaccine compositions containing 3-0-deacylated monophosphoryl lipid A | |
| CA2157376C (en) | Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a | |
| CA2555911C (en) | Adjuvant compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a | |
| AU687494C (en) | Vaccines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040302 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20040601 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20040716 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040805 |
|
| A72 | Notification of change in name of applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A721 Effective date: 20040805 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040830 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20050927 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051114 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20060105 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070731 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070822 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20070925 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20071012 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| S202 | Request for registration of non-exclusive licence |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R315201 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| S202 | Request for registration of non-exclusive licence |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R315201 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101019 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111019 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111019 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121019 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131019 Year of fee payment: 6 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |