TWI756893B - 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明關於包含經共軛之肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)莢膜糖抗原(糖共軛物)之新穎致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途。本發明的致免疫性組成物典型上包含至少一種來自未發現於PREVNAR®、SYNFLORIX®及/或PREVNAR 13®的肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物。本發明亦關於使用該新穎致免疫性組成物以免疫接種人個體(特別是嬰兒和老人)以對抗肺炎球菌感染。

Description

包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途
本發明關於包含經共軛之莢膜糖抗原(糖共軛物)之新穎致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途。本發明的致免疫性組成物通常包含糖共軛物，其中糖係衍生自肺炎鏈球菌血清型。本發明亦關於使用該新穎致免疫性組成物及套組以免疫接種人個體(特別是嬰兒和老人)以對抗肺炎球菌感染。
由肺炎球菌引起的感染為全世界發病率及死亡率的主要原因。肺炎、發熱性菌血症和腦膜炎為侵襲性肺炎球菌性疾病的最常見表現，而在呼吸道內的細菌性擴散可導致中耳感染、鼻竇炎或復發性支氣管炎。與侵襲性疾病相比，非侵襲性表現通常較不嚴重，但更為常見。
在歐洲及美國，肺炎球菌性肺炎為最常見的社區獲得 性細菌性肺炎，估計每年以每100,000位成人中有100人受影響。發熱性菌血症和腦膜炎之相應數值分別為每100,000人中有15至19人及每100,000人中有1至2人。該等表現中之一或多者的風險係在嬰兒和老年人以及免疫受損之任何年齡的人中更高。即使在經濟發達地區，侵襲性肺炎球菌性疾病仍具有高死亡率；患有肺炎球菌性肺炎的成人之死亡率平均為10%至20%，而其在高風險群組中可能超過50%。肺炎迄今為全世界的肺炎球菌性死亡的最常見原因。
肺炎球菌性疾病之致病因子肺炎鏈球菌(肺炎球菌)為由多糖莢膜包圍之革蘭氏陽性包封球菌。此莢膜組成的差異允許在約91種莢膜類型之間的血清學分化，其中一些時常與肺炎球菌性疾病相關，其他很少與該疾病相關。侵襲性肺炎球菌感染包括肺炎、腦膜炎和發熱性菌血症；常見的非侵襲性表現尤其為中耳炎、鼻竇炎和支氣管炎。
肺炎球菌共軛物疫苗(PCV)為用於抵抗由肺炎鏈球菌(肺炎球菌)所引起的疾病之肺炎球菌疫苗。目前在全球市場可取得三種PCV疫苗：PREVNAR®(在一些國家為PREVENAR®)(七價疫苗)、SYNFLORIX®(十價疫苗)及PREVNAR 13®(在一些國家為PREVENAR 13®)(十三價疫苗)。
對基本抗生素的廣譜微生物抗性之最新發展及數量漸增的免疫受損之人突顯對具有甚至更廣泛保護之肺炎球菌疫苗的需求。
特定言之，對致力於涵蓋由於未發現於PREVNAR 13®的血清型及出現非PREVNAR 13®血清型的可能性之肺炎球菌性疾病的其餘未滿足之醫學需求仍有需求。在PREVNAR 13®中超過13種引起疾病的特異性血清型因地區、族群而而改變，且可能由於獲得抗生素抗性、肺炎球菌疫苗引入及未知來源的長期趨勢而隨時間變化。對可用於誘導人類且特別是不滿2歲的兒童對抗額外的肺炎鏈球菌血清型之免疫反應的致免疫性組成物仍有需求。
本發明的新穎致免疫性組成物之目的係提供對抗未發現於PREVNAR 13®的肺炎鏈球菌血清型之適當防護。在一個態樣中，本發明的致免疫性組成物之目的係提供對抗未發現於PREVNAR®(七價疫苗)、SYNFLORIX®及/或PREVNAR 13®的肺炎鏈球菌血清型之適當防護，同時維持對抗目前由該等疫苗所涵蓋的血清型之免疫反應。
抗原競爭(或干擾)的現象使多價疫苗的發展複雜化。抗原干擾係指下列觀察：相對於以此等抗原個別投予時所觀察到的免疫反應，以投予多重抗原可導致縮減對特定抗原的反應。當製成新的抗原組合時，該干擾的發生是不可預測的。
本發明的致免疫性組成物、套組及投予時程之目的係提供未發現於PREVNAR 13®的肺炎鏈球菌血清型之適當防護，同時維持對抗目前由該等疫苗所涵蓋的血清型之免疫反應及使免疫干擾風險減至最低。
為了滿足該等及其他需求，本發明關於新穎致免疫性組成物、包含該等致免疫性組成物之套組及彼等之用途。下列的條文說明本發明的一些態樣及實施態樣。
本發明的一個態樣關於致免疫性組成物，其包含至少一種選自由下列所組成之群組的糖共軛物：來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物及來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物，其中該組成物為1、2、3、4、5、6或7價肺炎球菌共軛組成物。
在一態樣中，本發明提供套組，其包含：(a)第一致免疫性組成物，其包含該致免疫性組成物；及(b)第二致免疫性組成物，其包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物，該肺炎鏈球菌血清型係選自由下列所組成之群組：血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F。
在另一態樣中，本發明提供用於同時、並行、相伴或依序投予之該致免疫性組成物。
本發明的一個態樣提供用於免疫接種的時程之該致免疫性組成物。在一個實施態樣中，免疫接種的時程為單一劑量時程。在另一實施態樣中，免疫接種的時程為多劑量時程。
在一態樣中，該套組係用於同時、並行、相伴或依序投予第一及第二致免疫性組成物。
本發明的另一態樣提供用作為藥品之該致免疫性組成物或該套組。
本發明的一個態樣中，該致免疫性組成物或該套組係用作為疫苗。
在另一態樣中，本發明提供該致免疫性組成物或該套組用於預防、治療或改善個體的細菌感染、疾病或病況之方法。
本發明的另一態樣中，該致免疫性組成物或該套組係用於預防個體的細菌感染、疾病或病況之方法。
本發明的一個態樣提供該致免疫性組成物或該套組用於防護或治療易受肺炎球菌感染的人之方法，其係藉助於經由全身或黏膜途徑投予該致免疫性組成物。
圖形
圖1顯示肺炎鏈球菌血清型8(Pn-8)莢膜多糖之重複的多糖結構。
圖2顯示肺炎鏈球菌血清型10A(Pn-10A)莢膜多糖之重複的多糖結構。
圖3顯示肺炎鏈球菌血清型11A(Pn-11A)莢膜多糖之重複的多糖結構。
圖4顯示肺炎鏈球菌血清型12F(Pn-12F)莢膜多糖 之重複的多糖結構。
圖5顯示肺炎鏈球菌血清型15B(Pn-15B)莢膜多糖之重複的多糖結構。
圖6顯示肺炎鏈球菌血清型22F(Pn-22F)莢膜多糖之重複的多糖結構。
圖7顯示肺炎鏈球菌血清型33F(Pn-33F)莢膜多糖之重複的多糖結構。
圖8顯示可用於製備Pn-33F糖共軛物之活化(A)及共軛(B)方法之代表性方法流程圖。
圖9顯示在TEMPO/NCS氧化反應中以不同量的NCS對DO之效應。
圖10顯示對Pn-12F糖共軛物穩定性之評估。
圖11：交叉功能性OPA反應。以OPA在對抗血清型9V、9A、9L和9N之功能性抗體的存在下評定來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(US研究6115A1-004；ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00427895)免疫接種之成人的59份血清亞組。各組具有OPA正效價(亦即
Figure 109137693-A0101-12-0006-6
1：8)之樣品的百分比指示於圖上方。各組的幾何平均效價(GMT)列示於x軸下方。
圖12：66份匹配的免疫前/後血清之交叉功能性OPA反應。以OPA在對抗血清型9V、9A、9L和9N之功能性抗體的存在下評定來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(研究6115A1-3005；ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00546572)免疫接種之成人的66份匹配的免疫接種 前及後之血清盤亞組。各組具有OPA正效價(亦即
Figure 109137693-A0101-12-0007-7
1：8)之樣品的百分比指示於圖上方。各組的幾何平均效價(GMT)列示於x軸下方。
圖13：免疫前及後之逆累積分布曲線(RCDC)-肺炎球菌血清型9V(Pn9V)。OPA效價對來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(研究6115A1-3005；ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00546572)免疫接種之匹配的免疫接種前及後之血清盤(N=66)的血清型9V之逆累積分布曲線。該圖代表具有OPA正效價(亦即
Figure 109137693-A0101-12-0007-8
1：8)之血清的百分比。
圖14：免疫前及後之逆累積分布曲線(RCDC)-肺炎球菌血清型9A(Pn9A)。OPA效價對來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(研究6115A1-3005；ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00546572)免疫接種之匹配的免疫接種前及後之血清盤(N=66)的血清型9V之逆累積分布曲線。該圖代表具有OPA正效價(亦即
Figure 109137693-A0101-12-0007-9
1：8)之血清的百分比。
圖15：免疫前及後之逆累積分布曲線(RCDC)-肺炎球菌血清型9L(Pn9L)。OPA效價對來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(研究6115A1-3005；ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00546572)免疫接種之匹配的免疫接種前及後之血清盤(N=66)的血清型9L之逆累積分布曲線。該圖代表具有OPA正效價(亦即
Figure 109137693-A0101-12-0007-10
1：8)之血清的百分比。
圖16：免疫前及後之逆累積分布曲線(RCDC)-肺炎球菌血清型9N(Pn9N)。OPA效價對來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(研究6115A1-3005；ClinicalTrials.gov識別 碼：NCT00546572)免疫接種之匹配的免疫接種前及後之血清盤(N=66)的血清型9N之逆累積分布曲線。該圖代表具有OPA正效價(亦即
Figure 109137693-A0101-12-0008-11
1：8)之血清的百分比。
1.本發明的糖共軛物
本發明的致免疫性組成物通常包含經共軛之莢膜糖抗原(亦稱為糖共軛物)，其中糖係衍生自肺炎鏈球菌血清型。
若組合物中的2或更多種糖的蛋白質載體相同，則糖可與相同分子的蛋白質載體(載體分子具有2或更多種與其共軛的不同糖)共軛〔參見例如WO2004/083251〕。
但在較佳的實施態樣中，糖各自個別地與不同分子的蛋白質載體共軛(蛋白質載體的各分子僅具有一種與其共軛的糖類型)。在該實施態樣中，宣稱莢膜糖個別地與載體蛋白質共軛。
就本發明的目的而言，術語〝糖共軛物〞表明與載體蛋白質經共價連接之莢膜糖。在一個實施態樣中，莢膜糖係與載體蛋白質直接連接。在第二個實施態樣中，細菌糖係經由間隔子/連接子與蛋白質連接。
1.1 本發明的載體蛋白質
本發明的糖共軛物之組份為與糖共軛之載體蛋白質。術語〝蛋白質載體〞或〝載體蛋白質〞或〝載體〞可在本 文交換使用。載體蛋白質應該經得起標準的共軛程序。
在較佳的實施態樣中，糖共軛物之載體蛋白質係選自下列所組成之群組：DT(白喉毒素)、TT(破傷風類毒素)或TT之片段C、CRM197(白喉毒素之無毒但抗原相同的變體)、其他的DT突變體(諸如CRM176、CRM228、CRM45(Uchida等人之(1973)J.Biol.Chem.218：3838-3844)、CRM9、CRM102、CRM103或CRM107；及由Nicholls和Youle在Genetically Engineered Toxins,Ed：Frankel,Maecel Dekker Inc.(1992)中所述之其他突變；Glu-148至Asp、Gln或Ser及/或Ala 158之缺失或突變及美國專利案號4,709,017和4,950,740中所揭示之其他突變；至少一或多個殘基Lys 516、Lys 526、Phe 530及/或Lys 534之突變及美國專利案號5,917,017和6,455,673號中所揭示之其他突變；或美國專利案號5,843,711中所揭示之片段；肺炎球菌溶血素(ply)(Kuo等人之(1995)Infect lmmun 63：2706-2713)，包括以某種方式去毒之ply，例如dPLY-GMBS(WO 2004/081515、WO 2006/032499)或dPLY-甲醛、PhtX，包括PhtA、PhtB、PhtD、PhtE(PhtA、PhtB、PhtD或PhtE之序列揭示於WO 00/37105和WO 00/39299中)；及Pht蛋白質融合物，例如PhtDE融合物、PhtBE融合物、Pht A-E(WO 01/98334、WO 03/054007、WO2009/000826)；OMPC(腦膜炎球菌外膜蛋白)，其通常係自腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis)血清群B提取(EP0372501)、 PorB(來自腦膜炎雙球菌)、PD(流感嗜血桿菌蛋白質D；參見例如EP0594610 B)或其免疫功能等效物；合成肽(EP0378881、EP0427347)、熱休克蛋白質(WO 93/17712、WO 94/03208)、百日咳蛋白質(WO 98/58668、EP0471177)、細胞介素、淋巴介質、生長因子或激素(WO 91/01146)；人工蛋白質，包含來自多種病原體源性抗原之多種人類CD4+ T細胞表位(Falugi等人之(2001)Eur J Immunol 31：3816-3824)，諸如N19蛋白質(Baraldoi等人之(2004)Infect lmmun 72：4884-4887)、肺炎球菌表面蛋白質PspA(WO 02/091998)、鐵吸收蛋白質(WO 01/72337)、難養芽孢梭菌(Clostridium difficile)之毒素A或B(WO 00/61761)、運鐵蛋白結合蛋白質、肺炎球菌黏著蛋白質(PsaA)、重組綠膿桿菌外毒素A(特別是其無毒突變體(諸如攜有在麩胺酸553上取代之外毒素A(Douglas等人之(1987)J.Bacteriol.169(11)：4967-4971))。亦可使用其他的蛋白質作為載體蛋白質，諸如卵白蛋白、鑰孔帽貝血藍蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或結核菌素的經純化蛋白質衍生物(PPD)。其他適合的載體蛋白質包括失活之細菌毒素，諸如霍亂類毒素(例如WO 2004/083251中所述)、大腸桿菌(Escherichia coli)LT、大腸桿菌ST和來自綠膿桿菌之外毒素A。
在較佳的實施態樣中，糖共軛物之載體蛋白質係獨立地選自由下列所組成之群組：TT、DT、DT突變體(諸如 CRM197)、流感嗜血桿菌蛋白質D、PhtX、PhtD、PhtDE融合物(特別是那些在WO 01/98334和WO 03/054007中所述者)、去毒肺炎球菌溶血素、PorB、N19蛋白質、PspA、OMPC、難養芽孢梭菌之毒素A或B及PsaA。
在一實施態樣中，本發明的糖共軛物之載體蛋白質為DT(白喉類毒素)。在另一實施態樣中，本發明的糖共軛物之載體蛋白質為TT(破傷風類毒素)。
在另一實施態樣中，本發明的糖共軛物之載體蛋白質為PD(流感嗜血桿菌蛋白質D；參見例如EP0594610B)。
在較佳的實施態樣中，本發明的莢膜糖係與CRM197蛋白質共軛。CRM197蛋白質為白喉毒素的無毒形式，但在免疫上無異於白喉毒素。CRM197係藉由產毒素之棒狀噬菌體β之亞硝基胍突變所產生的不產毒素之噬菌體β197tox-感染的白喉棒狀桿菌而產生(Uchida等人之(1971)Nature New Biology 233：8-11)。CRM197蛋白質具有與白喉毒素相同的分子量，但是由結構基因中的單一鹼基變化(鳥嘌呤至腺嘌呤)而藉此有差別。此單一鹼基變化引起成熟蛋白質中的胺基酸取代(麩胺酸取代甘胺酸)且消除白喉毒素的毒性性質。CRM197蛋白質對糖為安全且有效的T細胞依賴性載體。關於CRM197及其生產的更多細節可見於例如美國專利案號5,614,382中。
在一實施態樣中，本發明的莢膜糖係與CRM197蛋白質或CRM197之A鏈共軛(參見CN103495161)。在一實 施態樣中，本發明的莢膜糖係與經由基因重組的大腸桿菌表現所獲得的CRM197之A鏈共軛(參見CN103495161)。在一實施態樣中，本發明的莢膜糖全部皆與CRM197共軛。在一實施態樣中，本發明的莢膜糖全部皆與CRM197之A鏈共軛。
因此，在常見的實施態樣中，本發明的糖共軛物包含CRM197作為載體蛋白質，其中莢膜多糖係與CRM197經共價連接。
1.2 本發明的莢膜糖
在整個申請案中的術語〝糖〞可表明多糖或寡糖且包括二者。在常見的實施態樣中，該糖為多糖，特別是肺炎鏈球菌莢膜多糖。
莢膜多糖係藉由那些一般熟習本技術領域者已的標準技術製備。
在本發明中，莢膜多糖可自例如肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F製備。莢膜多糖通常係藉由各肺炎鏈球菌血清型於培養基中(例如以大豆為基底之培養基)生長而生產，接著多糖係自細菌培養物製備。用於製造在本發明的糖共軛物中使用之各別多糖的肺炎鏈球菌之細菌菌株可自已建立之培養物收集中心或臨床樣本獲得。
時常將有機體族群(各肺炎鏈球菌血清型)自一種子 小瓶按比例放大至多個種子瓶且通過一或多個遞增體積的種子發酵罐傳代，直至達成生產規模的發酵體積為止。在生長週期結束時，將細胞溶解且接著收成溶解液而用於下游(純化)處理(參見例如WO 2006/110381、WO 2008/118752及美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2008/0102498和2008/0286838)。
個別的多糖通常係通過離心、沈澱、超過濾及/或管柱層析術純化(參見例如WO 2006/110352和WO 2008/118752)。
可將經純化之多糖活化(例如經化學活化)，使其能夠反應(例如與eTEC間隔子)且接著併入本發明的糖共軛物中，如本文進一步說明。
肺炎鏈球菌莢膜多糖包含可含有至多8個糖殘基的重複寡糖單元。
在一實施態樣中，本發明的莢膜糖可為一個寡糖單元或比重複寡糖單元之天然長度糖鏈更短。在一實施態樣中，本發明的莢膜糖為相關的血清型之一個重複寡糖單元。
在一實施態樣中，本發明的莢膜糖可為寡糖。寡糖具有較少的重複單元數目(通常為5-15個重複單元)且通常經合成或藉由多糖水解而衍生。
但較佳地，本發明及本發明的致免疫性組成物中之所有莢膜糖皆為多糖。高分子量莢膜多糖由於抗原表面上存在的表位而能夠誘導特定的抗體免疫反應。預期高分子量 莢膜多糖的分離及純化較佳地用於本發明的共軛物、組成物及方法。
在一些實施態樣中，經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與4,000kDa之間的分子量。在其他的此等實施態樣中，多糖具有介於50kDa與4,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，多糖具有介於50kDa與3,500kDa之間；介於50kDa與3,000kDa之間；介於50kDa與2,500kDa之間；介於50kDa與2,000kDa之間；介於50kDa與1,750kDa之間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於100kDa與4,000kDa之間；介於100kDa與3,500kDa之間；介於100kDa與3,000kDa之間；介於100kDa與2,500kDa之間；介於100kDa與2,250kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於200kDa與4,000kDa之間；介於200kDa與3,500kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與2,500kDa之間；介於200kDa與2,250kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於 200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。可能使用機械或化學粒度分級。化學水解可能使用乙酸來進行。機械粒度分級可能使用高壓均質化剪切來進行。上文所提及之分子量範圍係指在共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
在較佳的實施態樣中，經純化之多糖為來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F或33F之莢膜多糖，其中莢膜多糖具有落在上文所述分子量範圍中之一範圍內的分子量範圍內。
如本文所使用的術語多糖或載體蛋白質-多糖共軛物之〝分子量〞係指藉由粒徑排阻層析術(SEC)與多角雷射光散射檢測器(MALLS)組合所計算之分子量。
在一些實施態樣中，本發明的來自血清型9V、18C、11A、15B、22F及/或33F之肺炎球菌糖經O-乙醯化。在一些實施態樣中，本發明的來自血清型9V、11A、15B、22F及/或33F之肺炎球菌糖經O-乙醯化。
本文所述的經純化之多糖係經化學活化，使得糖能夠與載體蛋白質反應。該等肺炎球菌共軛物係藉由個別的方法製備且調配成如下文所述之單一劑量調配物。
1.2.1 來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之肺炎球菌多糖
來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之莢膜糖可以那些一般熟習本技術領域者已知的標準技術製備(參見例如WO 2006/110381)。莢膜多糖可藉由使各肺炎鏈球菌血清型在培養基中生長而生產；在生長週期結束時，將細胞溶解且接著收成溶解液而用於下游(純化)處理。個別的多糖通常係通過離心、沈澱、超過濾及/或管柱層析術純化(參見例如WO 2006/110352和WO 2008/118752)。經純化之多糖可如本文更多說明而進一步處理，以製備本發明的糖共軛物。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及/或23F的經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與4,000kDa之間的分子量。在其他的此等實施態樣中，多糖具有介於50kDa與4,000kDa之間；介於50kDa與3,000kDa之間；或介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，多糖具有介於50kDa與3,500kDa之間；介於50kDa與3,000kDa之間；介於50kDa與2,500kDa之間；介於50kDa與2,000kDa；50kDa與1,750kDa之間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa 與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於100kDa與4,000kDa之間；介於100kDa與3,500kDa之間；介於100kDa與3,000kDa之間；介於100kDa與2,500kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於200kDa與4,000kDa之間；介於200kDa與3,500kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與2,500kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
在一些實施態樣中，本發明的來自血清型9V及/或18C之肺炎球菌糖經O-乙醯化。在一些實施態樣中，本發明的來自血清型9V之肺炎球菌糖經O-乙醯化及本發明的來自血清型18C之肺炎球菌糖經脫O-乙醯化。
1.2.2 肺炎球菌多糖血清型8
血清型8之多糖重複單元係由具有一個葡萄糖醛酸(GlcpA)、兩個吡喃葡萄糖(Glcp)和一個吡喃半乳糖(Galp)之直鏈四糖單元所組成(Jones等人之(1957)The Journal of the American Chemical Society.79(11)：2787-2793)。所有四個單糖皆經由1,4-鍵連接，如圖1所示。
血清型8糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。另外，該等糖可使用合成方案生產。
血清型8肺炎鏈球菌菌株可自已建立之培養物收集中心(諸如鏈球菌參考實驗室(Streptococcal Reference Laboratory)(疾病控制及預防中心(Centers for Disease Control and Prevention)，Atlanta,GA))或臨床樣本獲得。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8的經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與2,000kDa之間的分子量。在一個實施態樣中，莢膜多糖具有介於50kDa與1,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於70kDa與900kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於100kDa與800kDa之間的分 子量。
在更多的實施態樣中，莢膜多糖具有100kDa至600kDa；100kDa至500kDa；100kDa至400kDa；150kDa至600kDa；150kDa至500kDa；150kDa至400kDa；200kDa至600kDa；200kDa至500kDa；200kDa至400kDa；250kDa至600；250kDa至500kDa；250kDa至400kDa；250kDa至350kDa；300kDa至600kDa；300kDa至500kDa；300kDa至400kDa；400kDa至600kDa；500kDa至600kDa之分子量；及類似的所欲分子量範圍。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
1.2.3 肺炎球菌多糖血清型10A
血清型10A之多糖重複單元係由具有兩個呋喃半乳糖(Galf)、三個吡喃半乳糖(Galp)、一個N-乙醯基半乳糖胺(GalpNAc)之支鏈六糖重複單元及主鏈磷酸核糖醇所組成(Jones,C.之(2005)Carbohydrate Research 269(1)：175-181)。有兩個分枝單糖在β-GalpNAc部分上(β-3-Galp和β-6-Galf)，如圖2所示。
血清型10A糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分 離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。另外，該等糖可使用合成方案生產。
血清型10A肺炎鏈球菌菌株可自已建立之培養物收集中心(諸如鏈球菌參考實驗室(疾病控制及預防中心，Atlanta,GA))或臨床樣本獲得。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型10A的經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與2,000kDa之間的分子量。在一個實施態樣中，莢膜多糖具有介於50kDa與1,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於70kDa與900kDa。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於100kDa與800kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，莢膜多糖具有100kDa至600kDa；100kDa至500kDa；100kDa至400kDa；150kDa至600kDa；150kDa至500kDa；150kDa至400kDa；200kDa至600kDa；200kDa至500kDa；200kDa至400kDa；250kDa至600kDa；250kDa至500kDa；250kDa至400kDa；250kDa至350kDa；300kDa至600kDa；300kDa至500kDa；300kDa至400kDa；400kDa至600kDa；500kDa至600kDa之分子量；及類似的所欲分子量範圍。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
1.2.4 肺炎球菌多糖血清型11A
血清型11A之多糖重複單元係由直鏈四糖主鏈(兩個吡喃半乳糖(Galp)和兩個吡喃葡萄糖(Glcp))及側鏈磷甘油所組成(Richards等人之(1988)Adv.Exp.Med.Biol.228：595-597)，如圖3所示。多糖係在多個位置上O-乙醯化，且以文獻中所報導之數據為基準(Calix等人之(2011)J Bacterio.193(19)：5271-5278)，在11A多糖中的O-乙醯化總量為以每一多糖重複單元計約2.6個O-乙醯基。
血清型11A糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。另外，該等糖可使用合成方案生產。
血清型11A肺炎鏈球菌菌株可自已建立之培養物收集中心(諸如鏈球菌參考實驗室(疾病控制及預防中心，Atlanta,GA))或臨床樣本獲得。
藉由純化來自肺炎鏈球菌溶解物之血清型11A多糖且 隨意地粒度分級經純化之多糖所獲得的經分離之血清型11A莢膜多糖可藉由不同的屬性特徵化，包括例如分子量(MW)及以每一mM該血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型11A的經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與2,000kDa之間的分子量。在一個實施態樣中，莢膜多糖具有介於50kDa與1,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於70kDa與900kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於100kDa與800kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，莢膜多糖具有100kDa至600kDa；100kDa至500kDa；100kDa至400kDa；100kDa至300kDa；100kDa至200kDa；150kDa至600kDa；150kDa至500kDa；150kDa至400kDa；150kDa至300kDa；150kDa至200kDa；200kDa至600kDa；200kDa至500kDa；200kDa至400kDa；250kDa至600kDa；250kDa至500kDa；250kDa至400kDa；250kDa至350kDa；300kDa至600kDa；300kDa至500kDa；300kDa至400kDa；400kDa至600kDa；500kDa至600kDa之分子量；及類似的所欲分子量範圍。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。 上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
在一實施態樣中，經純化之血清型11A多糖的大小係藉由高壓均質化減小。高壓均質化係藉由泵送製程流通過具有足夠小的尺寸之流動路徑來達成高剪切速率。剪切速率係藉由使用較大的施加均質壓力來增加且暴露時間可藉由進料流再循環通過均質機來延長。
高壓均質化製程特別適合於減小經純化之血清型11A多糖的大小，同時維持多糖的結構特徵，諸如O-乙醯基的存在。
在經純化、分離或活化之血清型11A莢膜多糖或在血清型11A多糖-載體蛋白質共軛物中存在的O-乙醯基係以每一mM該多糖計的mM乙酸酯數目表示或以每一多糖重複單元計的O-乙醯基數目表示。
在較佳的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型11A的經純化之多糖具有以每μmol該血清型11A莢膜多糖計至少0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4或1.6μmol乙酸酯。
1.2.5 肺炎球菌多糖血清型12F
血清型12F之多糖重複單元係由直鏈三糖主鏈(一個N-乙醯基岩藻糖胺(FucpNAc)、一個N-乙醯基半乳糖胺(GalpNAc)和一個N-乙醯基甘露糖醛酸(ManpNAcA))與兩個分枝：連接在FucpNac之C3上的 側鏈α-吡喃半乳糖(Galp)和連接在ManpNacA之C3上的Glcp-(1→2)-α-Glcp二糖分枝所組成(Leontein等人之(1983)Carbohydrate Research 114(2)：257-266)，如圖4所示。
血清型12F肺炎鏈球菌菌株可自已建立之培養物收集中心(諸如鏈球菌參考實驗室(疾病控制及預防中心，Atlanta,GA))或臨床樣本獲得。
來自肺炎鏈球菌血清型12F之莢膜糖係藉由那些一般熟習本技術領域者已知的標準技術製備。莢膜多糖通常係藉由各肺炎鏈球菌血清型於培養基中(例如在以大豆為基底之培養基中)生長而生產，接著多糖係自細菌培養物製備。時常將有機體族群(肺炎鏈球菌血清型12F)自一種子小瓶按比例放大至多個種子瓶且通過一或多個遞增體積的種子發酵罐傳代，直至達成生產規模的發酵體積為止。在生長週期結束時，將細胞溶解且接著收成溶解液而用於下游(純化)處理(參見例如WO 2006/110381和WO 2008/118752、美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2008/0102498和US2008/0286838)。多糖通常係通過離心、沈澱、超過濾及/或管柱層析術純化(參見例如WO 2006/110352和WO 2008/118752)。
可將來自血清型12F的經純化之多糖活化(例如經化學活化)，使其能夠反應且接著併入本發明的糖共軛物中，如本文進一步說明。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F的經 純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與2,000kDa之間的分子量。在一個實施態樣中，莢膜多糖具有介於50kDa與1,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於50kDa與300kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於70kDa與300kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，莢膜多糖具有90kDa至250kDa；90kDa至150kDa；90kDa至120kDa；80kDa至120kDa；70kDa至100kDa；70kDa至110kDa；70kDa至120kDa；70kDa至130kDa；70kDa至140kDa；70kDa至150kDa；70kDa至160kDa；80kDa至110kDa；80kDa至120kDa；80kDa至130kDa；80kDa至140kDa；80kDa至150kDa；80kDa至160kDa；90kDa至110kDa；90kDa至120kDa；90kDa至130kDa；90kDa至140kDa；90kDa至150kDa；90kDa至160kDa；100kDa至120kDa；100kDa至130kDa；100kDa至140kDa；100kDa至150kDa；100kDa至160kDa之分子量；及類似的所欲分子量範圍。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
1.2.6 肺炎球菌多糖血清型15B
如圖5所示，血清型15B之多糖重複單元係由分枝之三糖主鏈(一個N-乙醯基葡糖胺(GlcpNAc)、一個吡喃半乳糖(Galp)和一個吡喃葡萄糖(Glcp))與連接至GlcpNac之C4羥基的αGalp-βGalp二糖分枝所組成。磷甘油連接至二糖分枝中的βGalp殘基之C3羥基(Jones等人之(2005)Carbohydrate Research 340(3)：403-409)。來自血清型15C血清型之莢膜多糖具有與血清型15B相同的主鏈結構，但缺乏O-乙醯化。
血清型15B多糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。彼等亦可使用熟習本技術領域者已知的合成方案生產。
血清型15B肺炎鏈球菌菌株可自已建立之培養物收集中心(諸如美國菌種保存中心(the American Type Culture Collection)(ATCC，Manassas,VA USA)(例如寄存菌株編號ATCC10354)或鏈球菌參考實驗室(疾病控制及預防中心，Atlanta,GA USA))或自臨床樣本獲得。
細菌細胞係在培養基中生長、較佳地在以大豆為基底之培養基中。在生產肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖之細菌細胞發酵之後，使細菌細胞溶解以生產細胞溶解物。接著可將血清型15B多糖使用本技術中已知的純化技術自細 胞溶解物分離，該等純化技術包括使用離心、深度過濾、沈澱、超過濾、以活性碳處理、滲濾及/或管柱層析術(參見例如美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752)。經純化之血清型15B莢膜多糖接著可用於製備致免疫性共軛物。
藉由純化來自肺炎鏈球菌溶解物之血清型15B多糖且隨意地粒度分級經純化之多糖所獲得的經分離之血清型15B莢膜多糖可藉由不同的參數特徵化，包括例如分子量(MW)、以每一mM該血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯及每一mM該血清型15B莢膜多糖計的mM甘油。
為了產生具有有利的可過濾性特徵及/或產率之15B共軛物，使多糖粒度分級至標的分子量範圍較佳地在與載體蛋白質共軛前進行。最好減小經純化之血清型15B多糖的大小，同時維持多糖結構的關鍵特徵，諸如O-乙醯基的存在。經純化之血清型15B多糖的大小較佳地以機械均質化減小。
在較佳的實施態樣中，經純化之血清型15B多糖的大小係藉由高壓均質化減小。高壓均質化係藉由泵送製程流通過具有足夠小的尺寸之流動路徑來達成高剪切速率。剪切速率係藉由使用較大的施加均質壓力來增加且暴露時間可藉由進料流再循環通過均質機來延長。
高壓均質化製程特別適合於減小經純化之血清型15B多糖的大小，同時維持多糖的結構特徵，諸如O-乙醯基 的存在。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於5kDa與500kDa之間，介於50kDa與500kDa之間，介於50kDa與450kDa之間，介於100kDa與400kDa之間，及介於100kDa與350kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與350kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與300kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與300kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與350kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，莢膜多糖具有100kDa至500kDa；100kDa至400kDa；100kDa至300kDa；100kDa至200kDa；150kDa至500kDa；150kDa至400kDa；150kDa至300kDa；150kDa至200kDa；200kDa至500kDa；200kDa至400kDa；250kDa至500kDa；250kDa至400kDa；250kDa至350kDa；300kDa至500kDa；300kDa至400kDa之分子量；及類似的所欲分子量範圍。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
血清型15B多糖經O-乙醯化且O-乙醯化之總量為每一多糖重複單元計約0.8-0.9個O-乙醯基。多糖之O-乙醯化程度可藉由本技術中已知的任何方法來測定，例如藉由 質子NMR(參見例如Lemercinier等人之(1996)Carbohydrate Research 296：83-96；Jones等人(2002)J.Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30：1233-1247；WO 2005/033148及WO 00/56357)。另一常使用的方法說明於Hestrin,S.之(1949)J.Biol.Chem.180：249-261中。O-乙醯基的存在較佳地藉由離子HPLC分析來測定。
在經純化、分離或活化之血清型15B莢膜多糖或在血清型15B多糖-載體蛋白質共軛物中存在的O-乙醯基係以每一mM該多糖計的mM乙酸酯數目表示或以每一多糖重複單元計的mM O-乙醯基數目表示。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。
甘油磷酸酯側鏈的存在係藉由使用高性能陰離子交換層析術與脈衝安培檢測(HPAEC-PAD)測量在以氫氟酸(HF)處理多糖釋放後的甘油來測定。在經純化、分離或活化之血清型15B多糖中或在血清型15B多糖-載體蛋 白質共軛物中存在的甘油係以每一mM血清型15B多糖計的mM甘油數目表示。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM甘油。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM甘油。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與350kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與350kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與300kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與300kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖 具有介於150kDa與350kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與350kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯及以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與350kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯及以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與300kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯及以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型15B莢膜多糖具有介於150kDa與350kDa之間的分子量且包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯及以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
1.2.7 肺炎球菌多糖血清型22F
如圖6所示，血清型22F之多糖重複單元係由分枝之 五糖主鏈(一個葡糖醛酸(GlcpA)、一個吡喃葡萄糖(Glcp)、一個呋喃半乳糖(Galf)和兩個吡喃鼠李糖(Rhap))與連接至βRhap之C3羥基的αGlcp分枝所組成(Richards等人之(1989)Canadian Journal of Chemistry 67(6)：1038-1050)。在多糖重複單元中的βRhap殘基之約80% C2羥基經O-乙醯化。
血清型22F多糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。另外，該等糖可使用合成方案生產。
血清型22F肺炎鏈球菌菌株係自已建立之培養物收集中心(諸如鏈球菌參考實驗室(疾病控制及預防中心，Atlanta,GA))或臨床樣本獲得。
藉由純化來自肺炎鏈球菌溶解物之血清型22F多糖且隨意地粒度分級經純化之多糖所獲得的經分離之血清型22F莢膜多糖可藉由不同的參數特徵化，包括例如分子量(MW)及以每一mM該血清型22F莢膜多糖計的mM乙酸酯。
為了產生具有有利的可過濾性特徵及/或產率之血清型22F共軛物，使多糖粒度分級至標的分子量範圍較佳地在與載體蛋白質共軛前進行。最好減小經純化之血清型22F多糖的大小，同時維持多糖結構的關鍵特徵，諸如O- 乙醯基的存在。經純化之血清型22F多糖的大小較佳地以機械均質化減小。
在較佳的實施態樣中，經純化之多糖的大小係藉由高壓均質化減小。高壓均質化係藉由泵送製程流通過具有足夠小的尺寸之流動路徑來達成高剪切速率。剪切速率係藉由使用較大的施加均質壓力來增加且暴露時間可藉由進料流再循環通過均質機來延長。
高壓均質化製程特別適合於減小經純化之血清型22F多糖的大小，同時維持多糖的結構特徵，諸如O-乙醯基的存在。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F的經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與2,000kDa之間的分子量。在一個實施態樣中，莢膜多糖具有介於50kDa與1,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於70kDa至900kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於100kDa至800kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於200kDa至600kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，莢膜多糖具有介於400kDa至700kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，莢膜多糖具有100kDa至1,000kDa；100kDa至900kDa；100kDa至800kDa；100kDa至700kDa；100kDa至600kDa；100kDa至500kDa；100kDa至400kDa；100kDa至300kDa；150kDa至1,000kDa；150kDa至900kDa；150kDa至800 kDa；150kDa至700kDa；150kDa至600kDa；150kDa至500kDa；150kDa至400kDa；150kDa至300kDa；200kDa至1,000kDa；200kDa至900kDa；200kDa至800kDa；200kDa至700kDa；200kDa至600kDa；200kDa至500kDa；200kDa至400kDa；200kDa至300kDa；250kDa至1,000kDa；250kDa至900kDa；250kDa至800kDa；250kDa至700kDa；250kDa至600kDa；250kDa至500kDa；250kDa至400kDa；250kDa至350kDa；300kDa至1,000kDa；300kDa至900kDa；300kDa至800kDa；300kDa至700kDa；300kDa至600kDa；300kDa至500kDa；300kDa至400kDa；400kDa至1,000kDa；400kDa至900kDa；400kDa至800kDa；400kDa至700kDa；400kDa至600kDa；500kDa至600kDa之分子量；及類似的所欲分子量範圍。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使22F多糖在共軛前經受粒度分級技術。上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
多糖之O-乙醯化程度可藉由本技術中已知的任何方法來測定，例如藉由質子NMR(參見例如Lemercinier等人之(1996)Carbohydrate Research 296：83-96；Jones等人(2002)J.Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30：1233-1247；WO 2005/033148和WO 00/56357)。另一常使用的方法說明於Hestrin,S.之(1949)J.Biol.Chem.180：249-261中。O-乙醯基的存在較佳地藉由離子HPLC分析來測定。
在經純化、分離或活化之血清型22F莢膜多糖中或在血清型22F多糖-載體蛋白質共軛物中存在的O-乙醯基係以每一mM該多糖計的mM乙酸酯數目表示或以每一多糖重複單元計的O-乙醯基數目表示。
在較佳的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F的經純化之多糖具有以每一μmol該血清型22F莢膜多糖計至少0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4或1.6μmol乙酸酯。
1.2.8 肺炎球菌多糖血清型33F
如圖7所示，血清型33F之多糖重複單元係由分枝之五糖主鏈(兩個吡喃半乳糖(Galp)、兩個呋喃半乳糖(Galf)和一個吡喃葡萄糖(Glcp)與連接至主鏈內的αGalp殘基之C2羥基的末端αGalp所組成(Lemercinier等人(2006)Carbohydrate Research 341(1)：68-74.)。曾於文獻中報導主鏈3-β-Galf殘基之C2羥基經O-乙醯化。
血清型33F多糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。另外，該等糖可使用合成方案生產。
血清型33F肺炎鏈球菌菌株可自已建立之培養物收集中心(諸如鏈球菌參考實驗室(疾病控制及預防中心，Atlanta,GA))或臨床樣本獲得。
可將來自血清型33F的經純化之多糖活化(例如經化學活化)，使其能夠反應且接著併入本發明的糖共軛物中，如本文進一步說明。
藉由純化來自肺炎鏈球菌溶解物之血清型33F多糖且隨意地粒度分級經純化之多糖所獲得的經分離之血清型33F莢膜多糖可藉由不同的參數特徵化，包括例如分子量及以每一mM該血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型33F的經純化之多糖在共軛前具有介於10kDa與2,000kDa之間的分子量。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,750kDa之間的分子量；介於50kDa與1,500kDa之間的分子量；介於50kDa與1,250kDa之間的分子量；介於50kDa與1,000kDa之間的分子量；介於50kDa與750kDa之間的分子量；介於50kDa與500kDa之間的分子量；介於100kDa與2,000kDa之間的分子量；介於100kDa與1,750kDa之間的分子量；介於100kDa與1,500kDa之間的分子量；介於100kDa與1,250kDa之間的分子量；介於100kDa與1,000kDa 之間的分子量；介於100kDa與750kDa之間的分子量；介於100kDa與500kDa之間的分子量；介於200kDa與2,000kDa之間的分子量；介於200kDa與1,750kDa之間的分子量；介於200kDa與1,500kDa之間的分子量；介於200kDa與1,250kDa之間的分子量；介於200kDa與1,000kDa之間的分子量；介於200kDa與750kDa之間的分子量；或介於200kDa與500kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
多糖的大小可在正常的純化程序期間略微減小。另外，如本文所述，可使多糖在共軛前經受粒度分級技術。上文所提及之分子量範圍係指在最終的粒度分級步驟之後於共軛前(例如活化前)的經純化之多糖。
在經純化、分離或活化之血清型33F莢膜多糖或在血清型33F多糖-載體蛋白質共軛物中存在的O-乙醯基係以每一mM該多糖計的mM乙酸酯數目表示或以每一多糖重複單元計的O-乙醯基數目表示。
在較佳的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型33F的經純化之多糖具有以每一mM該血清型33F莢膜多糖計至少0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4或1.6μmol乙酸酯。
1.3 本發明的糖共軛物
經純化之糖經化學活化以製造能夠與載體蛋白質反應 的糖(亦即經活化之糖)。一經活化時，各莢膜糖單獨地與載體蛋白質共軛以形成糖共軛物。在一個實施態樣中，各莢膜糖係與相同的載體蛋白質共軛。糖之化學活化及接著與載體蛋白質共軛可藉由本文所揭示之活化及共軛方法來達成。
1.3.1 來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物
來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之莢膜多糖係以那些一般熟習本技術領域者已知的標準技術製備(參見例如WO 2006/110381、WO 2008/118752、WO 2006/110352及美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2008/0102498和2008/0286838)。
在一實施態樣中，多糖係以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡錠(CDAP)活化以形成氰酸酯。接著將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團載體蛋白質(較佳為CRM197)上的胺基偶合。例如，間隔子可為得到硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用N-〔γ-馬來醯亞胺基丁醯氧基〕琥珀醯亞胺酯(GMBS))或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、溴乙酸N-琥珀醯亞胺酯(SBA；SIB)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸N-琥珀醯亞胺酯(SIAB)、(4-碘乙 醯基)胺基苯甲酸磺基琥珀醯亞胺酯(磺基-SIAB)、碘乙酸N-琥珀醯亞胺酯(SIA)或3-〔溴乙醯胺基〕丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP))反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且將經胺基衍生之糖使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質(例如CRM197)共軛。該等共軛物說明於例如WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合於共軛的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S-NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與1,1’-羰基二咪唑(CDI)反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在較佳的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之莢膜多糖中之至少一者係藉由還原胺化反應與載體蛋白質共軛(諸如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2007/0231340、2007/0184071和2007/0184072、WO 2006/110381、WO 2008/079653和WO 2008/143709中所述)。在較佳的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之莢膜多糖全部皆藉由還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物。多糖在氧化前隨意地水解。可使用機械或化學水解。化學水解可使用乙酸進行。氧化步驟可包含與過碘酸鹽反應。就本發明的目的而言，術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者；該術語亦包括偏過碘酸鹽(IO4 -)和原過碘酸鹽(IO6 5-)二者及過碘酸鹽的各種鹽(例如過碘酸鈉和過碘酸鉀)。
在一實施態樣中，來自肺炎.鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之莢膜多糖係在偏過碘酸鹽的存在下氧化，較佳地在過碘酸鈉鹽(NaIO4)的存在下。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之莢膜多糖係在原過碘酸鹽的存在下氧化，較佳地在過碘酸的存在下。
在多糖的氧化步驟之後，宣稱多糖經活化且在下文稱為〝經活化之多糖〞。可將經活化之多糖及載體蛋白質獨立地(分開凍乾)或一起(共凍乾)凍乾(冷凍乾燥)。在一個實施態樣中，將經活化之多糖及載體蛋白質共凍乾。在另一實施態樣中，將經活化之多糖及載體蛋白質獨 立地凍乾。
在一個實施態樣中，凍乾係在非還原糖的存在下進行，可能的非還原糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。
共軛方法的第二步驟為使用還原劑還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物(又稱為還原胺化反應)。適合的還原劑包括氰基硼氫化物(諸如氰基硼氫化鈉)、硼烷-吡啶或硼氫化物交換樹脂。在一個實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉。
在一實施態樣中，還原反應係在水性溶劑中進行，在另一實施態樣中，反應係在非質子性溶劑中進行。在一實施態樣中，還原反應係在DMSO(二甲基亞碸)或DMF(二甲基甲醯胺)溶劑中進行。DMSO或DMF溶劑可用於再建構凍乾的經活化之多糖及載體蛋白質。
在還原反應結束時，有未反應的醛基團剩餘在共軛物中，可將該等使用適合的封端劑封端。在一個實施態樣中，此封端劑為硼氫化鈉(NaBH4)。在共軛(還原反應及隨意地封端)之後，可將糖共軛物純化。糖共軛物可藉由滲濾及/或離子交換層析術及/或粒徑排阻層析術來純化。在一個實施態樣中，糖共軛物係藉由滲濾或離子交換層析術或粒徑排阻層析術來純化。在一個實施態樣中，糖共軛物經無菌過濾。
在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型9V及/或18C之糖共軛物包含具有介於10%與100%之間，介於 20%與100%之間，介於30%與100%之間，介於40%與100%之間，介於50%與100%之間，介於60%與100%之間，介於70%與100%之間，介於75%與100%之間，介於80%與100%之間，介於90%與100%之間，介於50%與90%之間，介於60%與90%之間，介於70%與90%，或介於80%與90%之間的O-乙醯化程度之糖。在其他的實施態樣中，O-乙醯化程度為
Figure 109137693-A0101-12-0042-12
10%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-13
20%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-14
30%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-15
40%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-16
50%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-17
60%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-18
70%、
Figure 109137693-A0101-12-0042-19
80%或
Figure 109137693-A0101-12-0042-20
90%或約100%。
在一些實施態樣中，本發明的來自肺炎鏈球菌血清型9V及/或18C之糖共軛物經O-乙醯化。在一些實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型9V之糖共軛物經O-乙醯化及來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物經脫O-乙醯化。
1.3.2 來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物
在一實施態樣中，血清型22F糖共軛物係藉由以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯而獲得。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質上的胺基偶合。例如，間隔子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經 胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質共軛。此等共軛物說明於例如WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S-NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物係使用還原胺化反應製備。還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖而自個別的六糖單元中之鄰位二醇產生醛官能基，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質(例如CRM197)以形成共軛物。
使血清型22F多糖粒度分級至標的分子量(MW)範圍較佳地在氧化前進行。最好減小經純化之血清型22F多糖的大小，同時維持多糖結構的關鍵特徵，諸如O-乙醯基的存在。經純化之血清型22F多糖的大小較佳地以機械 均質化減小(參見上文章節1.2.7)。
在一實施態樣中，血清型多糖係藉由包含下列步驟之方法活化(氧化)：
(a)將經分離之血清型22F多糖與氧化劑反應；及
(b)將氧化反應以添加淬滅劑淬滅，得到經活化之血清型22F多糖。
在較佳的實施態樣中，氧化劑為過碘酸鹽。就本發明的目的而言，術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者；該術語亦包括偏過碘酸鹽(IO4 -)和原過碘酸鹽(IO6 5-)二者及過碘酸鹽的各種鹽(例如過碘酸鈉和過碘酸鉀)。在較佳的實施態樣中，氧化劑為過碘酸鈉。在較佳的實施態樣中，用於氧化血清型22F多糖的過碘酸鹽為偏過碘酸鹽。在較佳的實施態樣中，用於氧化血清型22F多糖的過碘酸鹽為偏過碘酸鈉。
在一個實施態樣中，淬滅劑係選自鄰位二醇、1,2-胺基醇、胺基酸、麩胱甘肽、亞硫酸鹽、硫酸氫鹽、二硫亞磺酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽、亞磷酸鹽、次磷酸鹽或亞磷酸。
在一個實施態樣中，淬滅劑為式(I)之1,2-胺醇：
Figure 109137693-A0101-12-0044-1
 其中R1係選自H、甲基、乙基、丙基或異丙基。
在一個實施態樣中，淬滅劑係選自亞硫酸鹽、硫酸氫 鹽、二硫亞磺酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽、亞磷酸鹽、次磷酸鹽或亞磷酸之鈉鹽及鉀鹽。
在一個實施態樣中，淬滅劑為胺基酸。在此等實施態樣中，該胺基酸可選自絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、胱胺酸、甲硫胺酸、脯胺酸、羥基脯胺酸、色胺酸、酪胺酸和組胺酸。
在一個實施態樣中，淬滅劑為亞硫酸鹽，例如硫酸氫鹽、二硫亞磺酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽。
在一個實施態樣中，淬滅劑為包含兩個鄰位羥基之化合物(鄰位二醇)，亦即兩個羥基與兩個相鄰的碳原子經共價連接。
淬滅劑較佳為式(II)化合物：
Figure 109137693-A0101-12-0045-2
 其中R1和R2分別獨立地選自H、甲基、乙基、丙基或異丙基。
在較佳的實施態樣中，淬滅劑為甘油、乙二醇、丙-1,2-二醇、丁-1,2-二醇或丁-2,3-二醇或抗壞血酸。在較佳的實施態樣中，淬滅劑為丁-2,3-二醇。
在較佳的實施態樣中，經分離之血清型22F多糖係藉由包含下列步驟之方法活化：
(a)將經分離之血清型22F多糖與過碘酸鹽反應；及
(b)將氧化反應以添加丁-2,3-二醇淬滅，得到經活化之 血清型22F多糖。
在多糖的氧化步驟之後，宣稱多糖經活化且在下文稱為〝經活化之多糖〞。
在較佳的實施態樣中，將經活化之血清型22F多糖純化。經活化之血清型22F多糖係根據熟習本技術領域者已知的方法純化，諸如凝膠滲透層析術(GPC)、透析或超過濾/滲濾。例如，經活化之22F多糖係藉由使用超過濾裝置濃縮及滲濾來純化。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖的氧化程度係介於2與30之間，介於2與25之間，介於2與20之間，介於2與15之間，介於2與10之間，介於2與5之間，介於5與30之間，介於5與25之間，介於5與20之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於10與30之間，介於10與25之間，介於10與20之間，介於10與15之間，介於15與30之間，介於15與25之間，介於15與20之間，介於20至30之間，或介於20至25之間。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖的氧化程度係介於2與10之間，介於4與8之間，介於4與6之間，介於6與8之間，介於6與12之間，介於8與14之間，介於9與11之間，介於10與16之間，介於12與16之間，介於14與18之間，介於16與20之間，介於16與18之間，介於18與22之間，或介於18與20之間。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有 介於25kDa與1,000kDa之間，介於100kDa與1,000kDa之間，介於300kDa與800kDa之間，介於300kDa與700kDa之間，介於300kDa與600kDa之間，介於400kDa與1,000kDa之間，介於400kDa與800kDa之間，介於400kDa與700kDa之間，或介於400kDa與600kDa之間的分子量。在一實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有介於300kDa與800kDa之間的分子量。在一實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有介於400kDa與600kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有介於400kDa與600kDa之間的分子量及介於10與25之間，介於10與20之間，介於12與20之間，或介於14與18之間的氧化程度。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有介於400kDa與600kDa之間的分子量及介於10與20之間的氧化程度。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.7或約0.8mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.5、0.6或0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.7mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有介於400kDa與800kDa之間的分子量及包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.6mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型22F多糖具有介於400kDa與800kDa之間的分子量、介於12與20之間的氧化程度及包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.6mM乙酸酯。
可將經活化之多糖及/或載體蛋白質獨立地(分開凍乾)或一起(共凍乾)凍乾(冷凍乾燥)。
在一實施態樣中，經活化之血清型22F多糖係隨意地在糖的存在下凍乾。在較佳的實施態樣中，糖係選自蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。在較佳的實施態樣中，糖為蔗糖。在一個實施態樣中，接著將凍乾的經活化之多糖與包含載體蛋白質的溶液化合。
在另一實施態樣中，將經活化之多糖與載體蛋白質共凍乾。在此等實施態樣中，將經活化之血清型22F多糖與載體蛋白質化合且隨意地在糖的存在下凍乾。在較佳的實施態樣中，糖係選自蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。在較佳的實施態樣中，糖為蔗糖。接著可將共凍乾之多糖及載體蛋白質再懸浮於溶液中且與還原劑反應。
共軛方法的第二步驟係使用還原劑還原經活化之多糖及載體蛋白質，以形成共軛物(還原胺化反應)。
經活化之血清型22F多糖可藉由包含下列步驟之方法與載體蛋白質共軛：
(c)將經活化之血清型22F多糖與載體蛋白質化合；及
(d)將化合的經活化之血清型22F多糖及載體蛋白質與還原劑反應，以形成血清型22F多糖-載體蛋白質共軛物。
在一實施態樣中，還原反應係在水性溶劑中進行。在另一實施態樣中，反應係在非質子性溶劑中進行。在一實施態樣中，還原反應係在DMSO(二甲基亞碸)或在DMF(二甲基甲醯胺)溶劑中進行。DMSO或DMF溶劑可用於再建構凍乾的經活化之多糖及載體蛋白質。
與例如其中可顯著地降低多糖的O-乙醯化程度之水相中的還原胺化反應相比，藉由在二甲基亞碸(DMSO)中的還原胺化反應使經活化之血清型22F多糖與蛋白質載體共軛適合於保持多糖的O-乙醯基含量。因此，在較佳的實施態樣中，步驟(c)及步驟(d)係在DMSO中進行。
在一實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉、三乙醯氧基硼氫化鈉、在布氏酸(Bronsted acid)或路易士酸(Lewis acid)存在下之硼氫化鈉或硼氫化鋅、胺硼烷，諸如吡啶硼烷、2-甲吡啶硼烷、2,6-二硼烷-甲醇、二甲胺-硼烷、t-BuMeiPrN-BH3、苯甲基胺-BH3或5-乙基-2-甲基吡啶硼烷(PEMB)。在較佳的實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉。
在還原反應結束時，可能有未反應之醛基團剩餘在共軛物中，可將該等使用適合的封端劑封端。在一個實施態樣中，此封端劑為硼氫化鈉(NaBH4)。
在血清型22F多糖與載體蛋白質共軛之後，可將糖共軛物以熟習本技術領域者已知的各種技術純化(富集關於多糖-蛋白質共軛物量)。該等技術包括透析、濃縮/滲濾操作、切向流過濾沈澱/溶析、管柱層析術(DEAE或疏水性交互作用層析術)及深度過濾。
在一些實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物包含分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,000kDa之間的分子量。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於70kDa與900kDa之間的分子量。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於100kDa與800kDa之間的分子量。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於200kDa與600kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有100kDa至1,000kDa；100kDa至900kDa；100kDa至800kDa；100kDa至700kDa；100kDa至600kDa；100kDa至500kDa；100kDa至400kDa；100kDa至300kDa；150kDa至1,000kDa；150kDa至900kDa；150kDa至800kDa；150kDa至700kDa；150kDa至600kDa；150kDa至500kDa；150kDa至400kDa；150kDa至300kDa；200kDa至1,000kDa；200kDa至900kDa；200kDa至800kDa；200kDa至700kDa；200kDa至600kDa；200kDa 至500kDa；200kDa至400kDa；200kDa至300kDa；250kDa至1,000kDa；250kDa至900kDa；250kDa至800kDa；250kDa至700kDa；250kDa至600kDa；250kDa至500kDa；250kDa至400kDa；250kDa至350kDa；300kDa至1000kDa；300kDa至900kDa；300kDa至800kDa；300kDa至700kDa；300kDa至600kDa；300kDa至500kDa；300kDa至400kDa；400kDa至1,000kDa；400kDa至900kDa；400kDa至800kDa；400kDa至700kDa；400kDa至600kDa；500kDa至600kDa之分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。在一些此等實施態樣中，血清型22F糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
在一些實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物具有介於400kDa與15,000kDa之間；介於500kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與8,000kDa之間；或介於3,000kDa與5,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型22F糖共軛物具有介於500kDa與10,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型22F糖共軛物具有介於1,000kDa與8,000kDa之間的分子量。在又其他的實施態樣中，血清型22F糖共軛物具有介於2,000kDa與8,000kDa之間或介於3,000kDa與7,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物具有介於200kDa與20,000kDa之間；介於200kDa與 15,000kDa之間；介於200kDa與10,000kDa之間；介於200kDa與7,500kDa之間；介於200kDa與5,000kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於500kDa與20,000kDa之間；介於500kDa與15,000kDa之間；介於500kDa與12,500kDa之間；介於500kDa與10,000kDa之間；介於500kDa與7,500kDa之間；介於500kDa與6,000kDa之間；介於500kDa與5,000kDa之間；介於500kDa與4,000kDa之間；介於500kDa與3,000kDa之間；介於500kDa與2,000kDa之間；介於500kDa與1,500kDa之間；介於500kDa與1,000kDa之間；介於750kDa與20,000kDa之間；介於750kDa與15,000kDa之間；介於750kDa與12,500kDa之間；介於750kDa與10,000kDa之間；介於750kDa與7,500kDa之間；介於750kDa與6,000kDa之間；介於750kDa與5,000kDa之間；介於750kDa與4,000kDa之間；介於750kDa與3,000kDa之間；介於750kDa與2,000kDa之間；介於750kDa與1,500kDa之間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa與12,500kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與6,000kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與2,500kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與 10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；或介於2,000kDa與3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物具有介於3,000kDa與20,000kDa之間；介於3,000kDa與15,000kDa之間；介於3,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與7,500kDa之間；介於3,000kDa與5,000kDa之間；介於4,000kDa與20,000kDa之間；介於4,000kDa與15,000kDa之間；介於4,000kDa與12,500kDa之間；介於4,000kDa與10,000kDa之間；介於4,000kDa與7,500kDa之間；介於4,000kDa與6,000kDa之間；或介於4,000kDa與5,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物具有介於5,000kDa與20,000kDa之間；介於5,000kDa與15,000kDa之間；介於5,000kDa與10,000kDa之間；介於5,000kDa與7,500kDa之間；介於6,000kDa與20,000kDa之間；介於6,000kDa與15,000kDa之間；介於6,000kDa與12,500kDa之間；介於6,000kDa與10,000kDa之間；或介於6,000kDa與7,500kDa之間的分子量。
糖共軛物的分子量係以SEC-MALLS測量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.7或約0.8mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.5,0.6或0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型22F多糖計至少0.7mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或095。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.9。
在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型22F多糖計的 mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型22F多糖計的mM乙酸酯之比為至至少0.9。
使本發明的血清型22F糖共軛物特徵化的另一方式為在載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。以至多糖的共價鍵所致之載體蛋白質的離胺酸修飾之證據可藉由使用那些熟習本技術領域者已知的常規方法之胺基酸分析而獲得。與用於產生共軛物材料之CRM197蛋白質起始材料相比，共軛造成回收的離胺酸殘基數減少。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物之共軛程度係介於2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於3與15之間，介於3與13之間，介於3與10之間，介於3與8之間，介於3與6之間，介於3與5之間，介於3與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在一實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物之共軛程度為約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14或約15。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型22F糖共軛物之共軛程度係介於4與7之間。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
本發明的血清型22F糖共軛物亦可以糖對載體蛋白質之比(重量/重量)為特徵。在一些實施態樣中，在糖共軛物中的血清型22F多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3.0之間(例如約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9或約3.0)。在其他的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與2.0之間，介於0.5與1.5之間，介於0.8與1.2之間，介於0.5與1.0之間，介於1.0與1.5之間，或介於1.0與2.0之間。在更多的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.2之間。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型22F莢膜多糖對載體蛋白質之比係介於0.9與1.1之間。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
本發明的血清型22F糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物中或與其一起包埋)。
在較佳的實施態樣中，血清型22F糖共軛物包含與血清型22F多糖的總量相比而少於約50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%或15%之游離血清型22F多糖。在較佳的實施態樣中，血清型22F糖共軛物包含與血清型 22F多糖的總量相比而少於約40%之游離血清型22F多糖。在較佳的實施態樣中，血清型22F糖共軛物包含與血清型22F多糖的總量相比而少於約25%之游離血清型22F多糖。在較佳的實施態樣中，血清型22F糖共軛物包含與血清型22F多糖的總量相比而少於約20%之游離血清型22F多糖。在較佳的實施態樣中，血清型22F糖共軛物包含與血清型22F多糖的總量相比而少於約15%之游離血清型22F多糖。
血清型22F糖共軛物亦可以其分子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物的相對分子大小分布。在重力進料管柱中使用粒徑排阻層析術(SEC)以定出共軛物的分子大小分布。在介質溶析物中的大分子比小分子更快自孔排阻。使用流份收集器收集管柱溶析物。流份係以糖檢定法經比色方式測試。校準用於測定Kd之管柱以確立完全排阻分子之流份(V0)，(Kd=0)及代表最大滯留之流份(Vi)，(Kd=1)。達到指定的樣品屬性之流份(Ve)係以下式而與Kd有關：Kd=(Ve-V0)/(Vi-V0)。
在較佳的實施態樣中，至少30%之血清型22F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少40%之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%之血清型22F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之 Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之血清型22F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於50%與80%之間的血清型22F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於65%與80%之間的血清型22F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
1.3.3 來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物
在一實施態樣中，血清型33F糖共軛物係藉由以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯而獲得。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質上的胺基偶合。例如，間隔子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質共軛。該等共軛物說明於WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S--NHS、 EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在特定的實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物係使用還原胺化反應製備。在此等實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物可能使用在水相中的還原胺化反應(RAC/水性)製備。在水相中的還原胺化反應已成功地應用於生產肺炎球菌共軛物疫苗(參見例如WO 2006/110381)。但較佳地，當使用還原胺化反應時，血清型33F糖共軛物係經由在DMSO中的還原胺化反應(RAC/DMSO)製備。鑑於與使用RAC/水性方法以保存O-乙醯基官能度相關的挑戰，以在DMSO中的還原胺化反應較佳。RAC/DMSO已成功地應用於生產肺炎球菌共軛物疫苗(參見例如WO 2006/110381)。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物係使用eTEC共軛來製備(下文的〝經血清型33F eTEC連接之糖共軛物〞)，諸如實施例1、2和3及WO 2014/027302中所述。該33F糖共軛物包含經由一或多個 eTEC間隔子與載體蛋白質共價共軛之糖，其中糖係經由胺甲酸酯鍵與eTEC間隔子共價共軛，且其中載體蛋白質係經由醯胺鍵與eTEC間隔子共價共軛。經eTEC連接之本發明的糖共軛物可以通式(III)代表：
Figure 109137693-A0101-12-0060-3
 其中包含eTEC間隔子之原子內含在中間方塊內。
eTEC間隔子包括七個直鏈原子(亦即-C(O)NH(CH2)2SCH2C(O)-)且提供在糖與載體蛋白質之間穩定的硫醚及醯胺鍵。經eTEC連接之糖共軛物的合成包含糖的經活化之羥基與硫烷基胺試劑(例如胱胺或半胱胺酸胺或其鹽)之胺基反應，形成至糖的胺甲酸酯鍵，以提供硫醇化糖。一或多個游離硫氫基的產生係藉由與還原劑反應而完成，以提供經活化之硫醇化糖。經活化之硫醇化糖的游離硫氫基與在含胺殘基上具有一或多個α-鹵乙醯胺基團的經活化之載體蛋白質的反應產生硫醚鍵，以形成共軛物，其中載體蛋白質係經由醯胺鍵附著至eTEC間隔子。
在本發明的血清型33F糖共軛物中，糖可為多糖或寡糖。載體蛋白質可選自如本文所述或那些熟習本技術領域者已知的任何適合的載體。在常見的實施態樣中，糖為多糖。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在 一些此等實施態樣中，經eTEC連接之糖共軛物包含肺炎鏈球菌血清型33F莢膜多糖。
在特別佳的實施態樣中，經eTEC連接之糖共軛物包含Pn-33F莢膜多糖，其係經由eTEC間隔子與CRM197共價共軛(經血清型33F eTEC連接之糖共軛物)。
在一些實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,750kDa之間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
在一些實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。在其他的實 施態樣中，血清型33F糖共軛物具有介於500kDa與10,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型33F糖共軛物具有介於200kDa與10,000kDa之間的分子量。在又其他的實施態樣中，血清型33F糖共軛物具有介於1,000kDa與3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物具有介於200kDa與20,000kDa之間；介於200kDa與15,000kDa之間；介於200kDa與10,000kDa之間；介於200kDa與7,500kDa之間；介於200kDa與5,000kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於500kDa與20,000kDa之間；介於500kDa與15,000kDa之間；介於500kDa與12,500kDa之間；介於500kDa與10,000kDa之間；介於500kDa與7,500kDa之間；介於500kDa與6,000kDa之間；介於500kDa與5,000kDa之間；介於500kDa與4,000kDa之間；介於500kDa與3,000kDa之間；介於500kDa與2,000kDa之間；介於500kDa與1,500kDa之間；介於500kDa與1,000kDa之間；介於750kDa與20,000kDa之間；介於750kDa與15,000kDa之間；介於750kDa與12,500kDa之間；介於750kDa與10,000kDa之間；介於750kDa與7,500kDa之間；介於750kDa與6,000kDa之間；介於750kDa與5,000kDa之間；介於750kDa與4,000kDa之間；介於750kDa與3,000kDa之間；介於750kDa與2,000kDa之間；介於750kDa與1,500kDa之 間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa與12,500kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與6,000kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與2,500kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；介於2,000kDa與3,000kDa之間；介於3,000kDa與20,000kDa之間；介於3,000kDa與15,000kDa之間；介於3,000kDa與12,500kDa之間；介於3,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與9,000kDa之間；介於3,000kDa與8,000kDa之間；介於3,000kDa與7,000kDa之間；介於3,000kDa與6,000kDa之間；介於3,000kDa與5,000kDa之間；或介於3,000kDa與4,000kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
使本發明的血清型33F糖共軛物特徵化的另一方式為載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物之共軛程度係介於2與20之間，介於4與16之間，介於 2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於3與15之間，介於3與13之間，介於3與10之間，介於3與8之間，介於3與6之間，介於3與5之間，介於3與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在一實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物之共軛程度為約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19或約20。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物之共軛程度係介於4與16之間。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
在較佳的實施態樣中，載體蛋白質包含含有39個離胺酸殘基之CRM197。在一些此等實施態樣中，CRM197可包含在39個中之4至16個與糖共價連接之離胺酸殘基。表示此參數的另一方式為約10%至約41%之CRM197離胺酸與糖共價連接。在另一此等實施態樣中，CRM197可包含在39個中之2至20個與糖共價連接之離胺酸殘基。表示此參數的另一方式為約5%至約50%之CRM197離胺酸與糖共價連接。在一些實施態樣中，CRM197可包含在39個中之約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15或約16個與糖共價連接之離胺酸殘基。
在常見的實施態樣中，載體蛋白質係通過至載體蛋白質上的離胺酸殘基之一或多個ε-胺基的醯胺鍵與eTEC間隔子共價共軛。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質包含與糖共價共軛的2至20個離胺酸殘基。在其他的此等實施態樣中，載體蛋白質包含與糖共價共軛的4至16個離胺酸殘基。
本發明的血清型33F糖共軛物亦可以糖對載體蛋白質之比(重量/重量)為特徵。在一些實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4.0之間(例如約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9或約4.0)。在其他的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於1.0與2.5之間。在更多的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.4與1.7之間。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
糖鏈至載體蛋白質上的離胺酸之附著頻率為使本發明的血清型33F糖共軛物特徵化的另一參數。例如，在一些實施態樣中，以多糖的每4個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。在另一實施態樣中，以多糖的每10個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與 多糖之間的共價鏈。在另一實施態樣中，以多糖的每15個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鏈。在另外的實施態樣中，以多糖的每25個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鏈。
在常見的實施態樣中，載體蛋白質為CRM197，且以多糖的每4、10、15或25個糖重複單元出現至少一個在CRM197與多糖之間經由eTEC間隔子之共價鍵。
在其他的實施態樣中，共軛物係以每5至10個糖重複單元；每2至7個糖重複單元；每3至8個糖重複單元；每4至9個糖重複單元；每6至11個糖重複單元；每7至12個糖重複單元；每8至13個糖重複單元；每9至14個糖重複單元；每10至15個糖重複單元；每2至6個糖重複單元；每3至7個糖重複單元；每4至8個糖重複單元；每6至10個糖重複單元；每7至11個糖重複單元；每8至12個糖重複單元；每9至13個糖重複單元；每10至14個糖重複單元；每10至20個糖重複單元；每4至25個糖重複單元；或每2至25個糖重複單元包含至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。在常見的實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
在另一實施態樣中，以多糖的每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與糖之間的鍵。在一實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為 本發明的實施態樣。
在共軛期間的重要考慮為允許保留個別組份可形成糖表位的一部分之潛在敏感的非糖取代基官能基(諸如O-醯基、磷酸酯或甘油磷酸酯側鏈)之發展條件。
在一個實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物包含具有O-乙醯化程度介於10%與100%之間的糖。在一些此等實施態樣中，糖具有介於50%與100%之間的O-乙醯化程度。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於75%與100%之間的O-乙醯化程度。在更多的實施態樣中，糖具有大於或等於70%(
Figure 109137693-A0101-12-0067-21
70%)之O-乙醯化程度。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物包含以每一mM血清型33F莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型33F莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型33F莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型33F莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，O-乙醯基的存在係以離子-HPLC分析測定。
在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣 中，在糖共軛物中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.9。
在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在糖共軛物中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型33F多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.9。
本發明的血清型33F糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物中或與其一起包埋)。
在一些實施態樣中，本發明的血清型33F糖共軛物包含與血清型33F多糖的總量相比而少於約50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%之游離血 清型33F多糖。血清型33F糖共軛物較佳地包含少於15%之游離糖，更佳地少於10%之游離糖，且又更佳地少於5%之游離糖。在較佳的實施態樣中，血清型33F糖共軛物包含與血清型33F多糖的總量相比而少於約25%之游離血清型33F多糖。在較佳的實施態樣中，血清型33F糖共軛物包含與血清型33F多糖的總量相比而少於約20%之游離血清型33F多糖。在較佳的實施態樣中，血清型33F糖共軛物包含與血清型33F多糖的總量相比而少於約15之游離血清型33F多糖。
在特定的較佳實施態樣中，本發明提供具有下列單獨或組合特徵中之一或多者的血清型33F糖共軛物：多糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量；糖共軛物具有介於500kDa至10,000KDa之間的分子量；載體蛋白質包含2至20個與糖共價連接之離胺酸殘基；糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4.0之間；糖共軛物係以多糖的每4、10、15或25糖重複單元包含至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵；糖具有介於75%與100%之間的O-乙醯化程度；共軛物包含相對於總多糖而少於約15%之游離多糖；載體蛋白質為CRM197。
血清型33F糖共軛物亦可以其分子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物之相對分子大小分布，如上文所提及。
在一實施態樣中，至少15%之本發明的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在一 實施態樣中，至少15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%或90%之本發明的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
在較佳的實施態樣中，至少35%之本發明的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%之本發明的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之本發明的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少70%之本發明的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
在較佳的實施態樣中，介於40%與90%之間的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於50%與90%之間的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於65%與80%之間的血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
1.3.4 來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物
在一實施態樣中，血清型15B糖共軛物係藉由以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯而獲得。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質上的胺基偶合。例如，間隔 子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質共軛。此等共軛物說明於例如WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S--NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物係使用還原胺化反應製備。還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖而自個別的六糖單元中之鄰位二醇產生醛 官能基，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物。
使血清型15B多糖粒度分級至標的分子量(MW)範圍較佳地在氧化前進行。最好減小經純化之血清型15B多糖的大小，同時維持多糖結構的關鍵特徵，諸如O-乙醯基的存在。經純化之血清型15B多糖的大小較佳地以機械均質化減小(參見上文章節1.2.6)。
氧化步驟可包含與過碘酸鹽的反應。就本發明的目的而言，術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者；該術語亦包括偏過碘酸鹽(IO4 -)和原過碘酸鹽(IO6 5-)二者及過碘酸鹽的各種鹽(例如過碘酸鈉鹽和過碘酸鉀)。在較佳的實施態樣中，用於氧化血清型15B莢膜多糖的過碘酸鹽為偏過碘酸鹽。在較佳的實施態樣中，用於氧化血清型15B莢膜多糖的過碘酸鹽為偏過碘酸鈉。
在較佳的實施態樣中，多糖係與0.01至10.0、0.05至5.0、0.1至1.0、0.5至1.0、0.7至0.8、0.05至0.5、0.1至0.3莫耳當量氧化劑反應。在較佳的實施態樣中，多糖係與約0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95莫耳當量氧化劑反應。在較佳的實施態樣中，多糖係與約0.15莫耳當量氧化劑。在較佳的實施態樣中，多糖係與約0.25莫耳當量氧化劑反應。在較佳的實施態樣中，多糖係與約0.5莫耳當量氧化劑反應。在較佳的實施態樣中，多糖係與約0.6莫耳當量氧化劑反應。在 較佳的實施態樣中，多糖係與約0.7莫耳當量氧化劑反應。
在較佳的實施態樣中，反應期間係介於1小時與50小時之間，介於10小時與30小時之間，介於15小時與20小時之間，介於15小時與17小時之間或約16小時。
在較佳的實施態樣中，反應溫度係維持在介於15℃與45℃之間，介於15℃與30℃之間，介於20℃與25℃之間。在較佳的實施態樣中，反應溫度係維持在約23℃。
在較佳的實施態樣中，氧化反應係在選自磷酸鈉、磷酸鉀、2-(N-嗎啉基)乙烷磺酸(MES)或Bis-Tris之緩衝液中進行。在較佳的實施態樣中，緩衝液為磷酸鉀。
在較佳的實施態樣中，緩衝液具有介於1mM與500mM之間的濃度，介於1mM與300mM之間，或介於50mM與200mM之間的濃度。在較佳的實施態樣中，緩衝液具有約100mM之濃度。
在較佳的實施態樣中，氧化反應係在介於4.0與8.0之間，介於5.0與7.0之間，或介於5.5與6.5之間的pH下進行。在較佳的實施態樣中，pH為約6.0。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖係藉由0.5mg/mL至5mg/mL的經分離之血清型15B莢膜多糖與0.2至0.3莫耳當量過碘酸鹽在介於20℃與25℃之間的溫度下反應而獲得。
在較佳的實施態樣中，將經活化之血清型15B莢膜多 糖純化。經活化之血清型15B莢膜多糖係根據熟習本技術領域者已知的方法純化，諸如凝膠滲透層析術(GPC)、透析或超過濾/滲濾。例如，經活化之莢膜多糖係藉由使用超過濾裝置濃縮及滲濾來純化。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖的氧化程度係介於係介於2與20之間，介於2與15之間，介於2與10之間，介於2與5之間，介於5與20之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於10與20之間，介於10與15之間，或介於15與20之間。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖的氧化程度係介於2與10之間，介於4與8之間，介於4與6之間，介於6與8之間，介於6與12之間，介於8與12之間，介於9與11之間，介於10與16之間，介於12與16之間，介於14與18之間，介於16與20之間，介於16與18之間，或介於18與20之間。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖具有介於5kDa與500kDa之間，介於50kDa與500kDa之間，介於50kDa與450kDa之間，介於100kDa與400kDa之間，介於100kDa與350kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與350kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與300kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與250kDa之間的 分子量。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM甘油。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM甘油。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與250kDa之間的分子量及包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖 具有介於100kDa與250kDa之間的分子量及包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯及以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖具有介於100kDa與250kDa之間的分子量及包含以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯和以每一mM該血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。
在一實施態樣中，將經活化之血清型15B莢膜多糖隨意地在糖的存在下凍乾。在較佳的實施態樣中，糖係選自蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。在較佳的實施態樣中，糖為蔗糖。接著可將凍乾的經活化之莢膜多糖與包含載體蛋白質之溶液化合。
在另一實施態樣中，將經活化之血清型15B莢膜多糖與載體蛋白質化合且隨意地在糖的存在下凍乾。在較佳的實施態樣中，糖係選自蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。在較佳的實施態樣中，糖為蔗糖。接著可將共凍乾之多糖及載體蛋白質再懸浮於溶液中且與還原劑反應。
經活化之血清型15B莢膜多糖可藉由包含下列步驟之方法與載體蛋白質共軛：
(a)將經活化之血清型15B莢膜多糖與載體蛋白質化合；及
(b)將化合的經活化之血清型15B莢膜多糖及載體蛋白質與還原劑反應，以形成血清型15B莢膜多糖-載體蛋白質共軛物。
與例如其中可顯著地降低多糖的O-乙醯化程度之水溶液中的還原胺化反應相比，藉由在二甲基亞碸(DMSO)中的還原胺化反應使經活化之血清型15B莢膜多糖與蛋白質載體共軛適合於保持多糖的O-乙醯基含量。在較佳的實施態樣中，步驟(a)和步驟(b)係在DMSO中進行。
在較佳的實施態樣中，步驟(a)包含將凍乾的血清型15B莢膜多糖溶解在包含載體蛋白質及DMSO之溶液中。在較佳的實施態樣中，步驟(a)包含將共凍乾的血清型15B莢膜多糖及載體蛋白質溶解在DMSO中。
當步驟(a)和(b)係在水溶液中進行時，步驟(a)和(b)係在緩衝液中在介於6.0與8.5之間，介於7.0與8.0之間，或介於7.0與7.5之間的pH下進行，該緩衝液較佳地選自PBS、MES、HEPES、Bis-tris、ADA、PIPES、MOPSO、BES、MOPS、DIPSO、MOBS、HEPPSO、POPSO、TEA、EPPS、Bicine或HEPB。在較佳的實施態樣中，緩衝液為PBS。在較佳的實施態樣中，pH為約7.3。
在較佳的實施態樣中，在步驟(b)中的經活化之血 清型15B莢膜多糖的濃度係介於0.1mg/mL與10mg/mL之間，介於0.5mg/mL與5mg/mL之間，或介於0.5mg/mL與2mg/mL之間。在較佳的實施態樣中，在步驟(b)中的經活化之血清型15B莢膜多糖的濃度為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mg/mL。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質的初始輸入比(重量比重量)係介於5：1與0.1：1之間，介於2：1與0.1：1之間，介於2：1與1：1之間，介於1.5：1與1：1之間，介於0.1：1與1：1之間，介於0.3：1與1：1之間，或介於0.6：1與1：1之間。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質的初始輸入比為約0.6：1至1：1。在另一較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質的初始輸入比為約0.6：1至1.5：1。此等初始輸入比特別適合獲得在糖共軛物中低含量的游離多糖。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質的初始輸入比為約0.4：1、0.5：1、0.6：1、0.7：1、0.8：1、0.9：1、1：1、1.1：1、1.2：1、1.3：1、1.4：1、1.5：1、1.6：1、1.7：1、1.8：1、1.9：1或2：1。
在一實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉、三乙醯氧基硼氫化鈉、在布氏酸或路易士酸存在下之硼氫化鈉或硼氫化鋅、胺硼烷，諸如吡啶硼烷、2-甲吡啶硼烷、2,6-二 硼烷-甲醇、二甲胺-硼烷、t-BuMeiPrN-BH3、苯甲基胺-BH3或5-乙基-2-甲基吡啶硼烷(PEMB)。在較佳的實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉。在較佳的實施態樣中，還原劑為2-甲吡啶硼烷鈉。
在較佳的實施態樣中，在步驟(b)中所使用的還原劑量係介於約0.1與10.0莫耳當量之間，介於0.5與5.0莫耳當量之間，或介於1.0與2.0莫耳當量之間。在較佳的實施態樣中，在步驟(b)中所使用的還原劑量為約1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0莫耳當量。
在較佳的實施態樣中，步驟(b)的期間係介於1小時與60小時之間，介於10小時與50小時之間，介於40小時與50小時之間，或介於42小時與46小時之間。在較佳的實施態樣中，步驟(b)的期間約44小時。
在較佳的實施態樣中，在步驟(b)中的反應時間維持在介於10℃與40℃之間，介於15℃與30℃之間，或介於20℃與26℃之間。在較佳的實施態樣中，在步驟(b)中的反應時間維持在約23℃。
在較佳的實施態樣中，用於製備包含與載體蛋白質共價連接的肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖之糖共軛物的方法另外包含未反應之醛(淬滅)以添加NaBH4來封端的步驟(步驟(c))。
在較佳的實施態樣中，在步驟(c)中所使用的NaBH4量係介於0.1與10莫耳當量之間，介於0.5與5.0 莫耳當量之間，或介於1.0與3.0莫耳當量之間。在較佳的實施態樣中，在步驟(c)中所使用的NaBH4量為約2.0莫耳當量。
在較佳的實施態樣中，步驟(c)的期間係介於0.1小時與10小時之間；介於0.5小時與5小時之間，或介於2小時與4小時之間。在較佳的實施態樣中，步驟(c)的期間為約3小時。
在較佳的實施態樣中，在步驟(c)中的反應時間維持在介於15℃與45℃之間，介於15℃與30℃之間，或介於20℃與26℃之間。在較佳的實施態樣中，在步驟(c)中的反應時間維持在約23℃。
在較佳的實施態樣中，共軛步驟的產率大於50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%或90%。在較佳的實施態樣中，共軛步驟(步驟b)的產率大於60%。在較佳的實施態樣中，共軛步驟(步驟b)的產率大於70%。產率為(在共軛物中的血清型15B多糖量x100)/在共軛步驟中所使用的經活化之多糖量。
在較佳的實施態樣中，用於製備與載體蛋白質共價連接的肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖之糖共軛物的方法包含步驟：
(a)經純化之血清型15B多糖以高壓均質化進行粒度分級；
(b)將經粒度分級之血清型15B多糖與氧化劑反應；
(c)將經活化之血清型15B多糖與載體蛋白質化合；
(d)將化合的經活化之血清型15B多糖及載體蛋白質與還原劑反應，以形成血清型15B多糖-載體蛋白質共軛物；及
(e)將未反應之醛以添加NaBH4來封端(淬滅)。
在較佳的實施態樣中，上述方法的共軛步驟(步驟d)之產率大於50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%或90%。在較佳的實施態樣中，共軛步驟(步驟d)之產率大於60%。在較佳的實施態樣中，共軛步驟(步驟d)之產率大於70%。產率為(在共軛物中的血清型15B多糖量x100)/在共軛步驟中所使用的經活化之多糖量。
在血清型15B莢膜多糖與載體蛋白質共軛之後，可將多糖-蛋白質共軛物以熟習本技術領域者已知的各種技術純化(富集關於多糖-蛋白質共軛物量)。該等技術包括透析、濃縮/滲濾操作、切向流過濾沈澱/溶析、管柱層析術(DEAE或疏水性交互作用層析術)及深度過濾。
在一實施態樣中，載體蛋白質係如章節1.1中所定義。在一實施態樣中，載體蛋白質係選自由下列所組成之群組：DT(白喉毒素)、TT(破傷風類毒素)、CRM197、其他的DT突變體、PD(流感嗜血桿菌蛋白質D)或其免疫功能性等效物。在一實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
在一些實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物係與載體蛋白質(例如CRM197)共軛且包含具有分子量介 於5kDa與1,500kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於10kDa與1,500kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於50kDa與250kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於100kDa與250kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間；或介於200kDa與400kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。在一些實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。在一些實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物具有介於1,000kDa與20,000kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物具有介於3,000kDa與20,000kDa之間，介於5,000kDa與10,000kDa之間，介於5,000kDa與20,000kDa之間，介於8,000kDa與20,000kDa之間，介於8,000kDa與16,000kDa之間，或介於10,000kDa與16,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物 具有約1,000kDa、約1,500kDa、約2,000kDa、約2,500kDa、約3,000kDa、約3,500kDa、約4,000kDa、約4,500kDa、約5,000kDa、約5,500kDa、約6,000kDa、約6,500kDa、約7,000kDa、約7,500kDa、約8,000kDa、約8,500kDa、約9,000kDa、約9,500kDa、約10,000kDa、約10,500kDa、約11,000kDa、約11,500kDa、約12,000kDa、約12,500kDa、約13,000kDa、約13,500kDa、約14,000kDa、約14,500kDa、約15,000kDa、約15,500kDa、約16,000kDa、約16,500kDa、約17,000kDa、約17,500kDa、約18,000kDa、約18,500kDa約19,000kDa、約19,500kDa或約20,000kDa之分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物具有介於1,000kDa與20,000kDa之間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與3,000kDa之間；介於2,000kDa與20,000kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；或介於2,000kDa與3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物具有介於3,000kDa與20,000kDa之間；介於3,000kDa與15,000kDa之間；介於3,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與7,500kDa之間；介於3,000kDa與5,000kDa之間；介於3,000kDa與4,000kDa之間；介於4,000kDa與20,000kDa之間；介於4,000kDa與15,000kDa之間；介於4,000kDa與12,500kDa之間；介於4,000kDa與10,000kDa之間；介於4,000kDa與7,500kDa之間；介於4,000kDa與6,000kDa之間；或介於4,000kDa與5,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物具有介於5,000kDa與20,000kDa之間；介於5,000kDa與15,000kDa之間；介於5,000kDa與10,000kDa之間；介於5,000kDa與7,500kDa之間；介於6,000kDa與20,000kDa之間；介於6,000kDa與15,000kDa之間；介於6,000kDa與12,500kDa之間；介於6,000kDa與10,000kDa之間；或介於6,000kDa與7,500kDa之間的分子量。
糖共軛物的分子量係以SEC-MALLS測量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。在一實施態樣中，該血清型15B糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
本發明的血清型15B糖共軛物亦可以糖對載體蛋白質之比(重量/重量)為特徵。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比(重量比 重量)係介於0.5與3.0之間(例如約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9或約3.0)。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比係介於0.4與2之間。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比係介於0.5與2.0、約0.5與1.5、約0.5與1.0、約1.0與1.5、約1.0與2.0之間。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比係介於0.7與0.9之間。
本發明的血清型15B糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物中或與其一起包埋)。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含與血清型15B莢膜多糖的總量相比而少於約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%或15%之游離血清型15B莢膜多糖。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含與血清型15B莢膜多糖的總量相比而少於約25%之游離血清型15B莢膜多糖。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含與血清型15B莢膜多糖的總量相比而少於約20%之游離血清型 15B莢膜多糖。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含與血清型15B莢膜多糖的總量相比而少於約15%之游離血清型15B莢膜多糖。
血清型15B糖共軛物亦可以其分子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物之相對分子大小分布，如上文所提及。
在較佳的實施態樣中，至少20%之本發明的血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少30%之致免疫性共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少40%之本發明的血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%或85%之本發明的血清型15糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之本發明的血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少70%之本發明的血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
在較佳的實施態樣中，介於40%與90%之間的血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於50%與90%之間的血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於65%與80%之間的血清型15B糖 共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，O-乙醯基的存在係以離子-HPLC分析測定。
在較佳的實施態樣中，在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣中，在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.9。在較佳的實施態樣中，O-乙醯基的存在係以離子-HPLC分析測定。
在較佳的實施態樣中，在血清型15B糖共軛物中以每 一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣中，在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.9。在較佳的實施態樣中，O-乙醯基的存在係以離子-HPLC分析測定。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8mM甘油。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.5、0.6或0.7mM甘油。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM甘油。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM甘油。
使本發明的血清型15B糖共軛物特徵化之另一方式為在載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。以至多糖的共價鍵所致之載體蛋白質的離胺酸修飾之證據 可藉由使用那些熟習本技術領域者已知的常規方法之胺基酸分析而獲得。與用於產生共軛物材料之CRM197蛋白質起始材料相比，共軛造成回收的離胺酸殘基數減少。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物之共軛程度係介於2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於3與15之間，介於3與13之間，介於3與10之間，介於3與8之間，介於3與6之間，介於3與5之間，介於3與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在一實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物之共軛程度為約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14或約15。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型15B糖共軛物之共軛程度係介於2與5之間。
1.3.5 來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物
在本發明的來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物中，糖係選自由游離多糖及寡糖所組成之群組，且載體蛋白質係選自如本文所述或那些熟習本技術領域者已知的任何適合的載體。在一些較佳的實施態樣中，糖為來自肺炎鏈球菌血清型12F之多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共 軛物係使用CDAP來製備。多糖係以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化以形成氰酸酯。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質(較佳為CRM197)上的胺基偶合。例如，間隔子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質(例如CRM197)共軛。
其他的共軛技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S--NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在一實施態樣中，來自血清型12F肺炎鏈球菌之莢膜多糖係藉由還原胺化反應與載體蛋白質共軛。還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖而自個別的六糖單元中之鄰位二醇產生醛官能基，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物。
血清型12F多糖係在氧化前隨意地水解(粒度分級)。可能使用機械或化學水解。化學水解可能使用乙酸進行。
在一實施態樣中，氧化劑為過碘酸鹽。術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者(參見下文)。
在較佳的實施態樣中，氧化劑為2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)自由基及作為共氧化劑的N-氯琥珀醯亞胺(NCS)。在此等實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物係使用2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)自由基及使用N-氯琥珀醯亞胺(NCS)作為共氧化劑氧化糖的一級醇成為醛來製備(下文的〝TEMPO/NCS氧化反應〞)，諸如實施例7及WO 2014/097099中所述。因此，在一個態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物可藉由包含下列步驟之方法獲得：a)將12F糖與2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)及N-氯琥珀醯亞胺(NCS)在水性溶劑中反應，以生產經活化之糖；及b)將經活化之糖與包含一或多個胺基團的載體蛋白質反應(下文的〝TEMPO/NCS-還原胺化反應〞)。在一個態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型 12F之糖共軛物可以該方法獲得。在一實施態樣中，經活化之12F糖的氧化程度係在從1至50，從1至40，從1至30，從1至20，從1至10，從1至5，從3至40，從3至30，從3至20，從3至10，從4至40，從4至30，從4至20，從4至10，從5至30，從5至25，從5至20，從5至10，從6至50，從6至40，從6至30，從6至20，從6至15，從6至14，從6至13，從6至12，從6至11，從6至10，從7至40，從7至30，從7至20，從7至15，從7至14，從7至13，從7至12，從7至11，從7至10，從8至40，從8至30，從8至20，從8至15，從8至14，從8至13，從8至12，從8至11，從8至10，從9至40，從9至30，從9至20，從9至15，從10至40，從10至30，從10至20，或從10至15之範圍內。在另外的態樣中，經活化之糖的氧化程度為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40。載體蛋白質較佳為CRM197。
在一實施態樣中，12F糖係在步驟a)前水解至從100kDa至400kDa之分子量範圍。例如，在一個態樣中，分子量係在從100kDa至350kDa，從100kDa至300kDa，從100kDa至250kDa，從100kDa至200kDa，從100kDa至150kDa，從200kDa至400kDa，從200kDa至350kDa，從200kDa至300kDa，從200kDa 至250kDa，從300kDa至400kDa，或從300kDa至350kDa之範圍內。
在另外的態樣中，該方法另外包含在步驟b)之前純化經活化之多糖的步驟。在另外的態樣中，該方法另外包含在步驟b)之後添加還原劑的步驟。在一個態樣中，還原劑為NaCNBH3。在另外的態樣中，該方法另外包含在添加NaCNBH3之後添加NaBH4的步驟。在另外的態樣中，該方法包含在添加NaBH4之後的純化步驟。
在另一態樣中，本發明提供以上文所揭示之方法中之任一者所生產或可獲得的來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物。例如，在一個態樣中，本發明提供包含與載體蛋白質共軛之糖的來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物，其係以包含下列步驟之方法生產或獲得：a)將糖與2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)及N-氯琥珀醯亞胺(NCS)在水性溶劑中反應以生產經活化之糖；及b)將經活化之糖與包含一或多個胺基團的載體蛋白質反應。
在一個實施態樣中，本發明的來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物具有介於約50kDa與約20,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，糖共軛物具有介於約200kDa與約10,000kDa之間的分子量。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物具有介於約500kDa與約5,000kDa之間的分子量。在一個實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物具有介於約1,000kDa與約3,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣 中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物具有介於約600kDa與約2,800kDa之間；介於約700kDa與約2,700kDa之間；介於約1,000kDa與約2,000kDa之間；介於約1,800kDa與約2,500kDa之間；介於約1,100kDa與約2,200kDa之間；介於約1,900kDa與約2,700kDa之間；介於約1,200kDa與約2,400kDa之間；介於約1,700kDa與約2,600kDa之間；介於約1,300kDa與約2,600kDa之間；介於約1,600kDa與約3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型12F糖共軛物具有介於1,000kDa與20,000kDa之間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與3,000kDa之間；介於2,000kDa與20,000kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；或介於2,000kDa與3,000kDa之間的分子量。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由TEMPO/NCS-還原胺 化反應與載體蛋白質共軛。
使本發明的血清型12F糖共軛物特徵化之另一方式為在載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型12F糖共軛物之共軛程度係介於2與20之間，介於4與16之間，介於4與15之間，介於2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於3與15之間，介於3與13之間，介於3與10之間，介於3與8之間，介於3與6之間，介於3與5之間，介於3與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在一實施態樣中，本發明的血清型12F糖共軛物之共軛程度為約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19或約20。
在載體蛋白質中與糖共軛之離胺酸殘基數亦可以莫耳比表示。例如，在其中CRM197中之4至15個離胺酸殘基與糖共價連接之糖共軛物中，在糖共軛物中的經共軛之離胺酸對CRM197之莫耳比係介於約10：1至約40：1之間。在其中CRM197中之2至20個離胺酸殘基與糖共價連接之致免疫性組成物中，在糖共軛物中的經共軛之離胺酸對CRM197之莫耳比係介於約5：1與約50：1之間。在一個實 施態樣中，在本發明的來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物中，經共軛之離胺酸對載體蛋白質之莫耳比係從約10：1至約25：1。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在一些實施態樣中，CRM197可包含在39個中之約4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個與糖共價連接之離胺酸殘基。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由TEMPO/NCS-還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
在一個實施態樣中，在來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物中的糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4.0之間(例如約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9或約4.0)。在另一實施態樣中，在來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物中的糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於1.1與1.7之間。在其他的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.8之間(例如約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7或約1.8)。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由 TEMPO/NCS-還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
糖鏈至載體蛋白質上的離胺酸之附著頻率為使本發明的血清型12F糖共軛物特徵化的另一參數。例如，在一個實施態樣中，以多糖的每100個糖重複單元有至少一個在載體蛋白質與多糖之間共價鍵。在一個實施態樣中，以多糖的每50個糖重複單元有至少一個在載體蛋白質與多糖之間共價鏈。在一個實施態樣中，以多糖的每25個糖重複單元有至少一個在載體蛋白質與多糖之間共價鏈。在另一實施態樣中，以多糖的每4個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鏈。在另一實施態樣中，以多糖的每10個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鏈。在另外的實施態樣中，以多糖的每15個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鏈。在常見的實施態樣中，載體蛋白質為CRM197，且以多糖的每4、10、15或25個糖重複單元出現至少一個在CRM197與多糖之間的共價鏈。
在其他的實施態樣中，共軛物係以每5至10個糖重複單元；以每2至7個糖重複單元；以每3至8個糖重複單元；以每4至9個糖重複單元；以每6至11糖重複單元；以每7至12糖重複單元；以每8至13糖重複單元；以每9至14糖重複單元；以每10至15糖重複單元；以每2至6糖重複單元；以每3至7糖重複單元；以每4至8糖重複單元；以每6至10糖重複單元；以每7至11糖重複單元；以每8至12糖重複單元；以每9至13糖重複 單元；以每10至14糖重複單元；以每10至20糖重複單元；以每4至25糖重複單元或以每2至25糖重複單元包含至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。在常見的實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
在另一實施態樣中，以多糖的每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個糖重複單元出現至少一個在CRM197與糖之間的鍵。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由TEMPO/NCS-還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
在一個實施態樣中，本發明的來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物係以多糖的每25個糖重複單元包含至少一個在載體蛋白質與糖之間的共價鍵。在另一實施態樣中，以多糖的每4個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。在另一實施態樣中，以多糖的每10個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。在另外的實施態樣中，以多糖的每15個糖重複單元出現至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由TEMPO/NCS-還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
本發明的血清型12F糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物 中或與其一起包埋)。
在一些實施態樣中，本發明的血清型12F糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%之游離血清型12F多糖。在一個實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約50%之游離血清型12F多糖。在一個實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約45%之游離血清型12F多糖。在另一實施態樣中，糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約30%之游離血清型12F多糖。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約20%之游離血清型12F多糖。在另外的實施態樣中，糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約10%之游離血清型12F多糖。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物包含與血清型12F多糖的總量相比而少於約5%之游離血清型12F多糖。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由TEMPO/NCS-還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
在一些實施態樣中，本發明的血清型12F糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,750kDa之間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於 50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間；或介於200kDa與400kDa之間的分子量。在一些此等實施態樣中，血清型12F糖共軛物係藉由TEMPO/NCS-還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
血清型12F糖共軛物亦可以其分子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物之相對分子大小分布，如上文所提及。
在較佳的實施態樣中，至少35%之本發明的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%之本發明的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之本發明的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較 佳的實施態樣中，至少70%之本發明的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
在較佳的實施態樣中，介於40%與90%之間的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於50%與90%之間的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於65%與80%之間的血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
1.3.6 來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物
在一實施態樣中，血清型10A糖共軛物係藉由以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯而獲得。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質上的胺基偶合。例如，間隔子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質共軛。此等共軛物說明於例如WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S--NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物係使用還原胺化反應製備。還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖而自個別的六糖單元中之鄰位二醇產生醛官能基，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物。
血清型10A多糖係在氧化前隨意地水解(粒度分級)。可能使用機械或化學水解。化學水解可能使用乙酸進行。
在一實施態樣中，血清型多糖係藉由包含下列步驟之方法活化(氧化)：
(a)將經分離之血清型10A多糖與氧化劑反應；及
(b)將氧化反應以添加淬滅劑淬滅，得到經活化之血清型10A多糖。
在較佳的實施態樣中，氧化劑為過碘酸鹽。就本發明的目的而言，術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者，該術語亦包括偏過碘酸鹽(IO4 -)和原過碘酸鹽(IO6 5-)二者及過碘酸鹽的各種鹽(例如過碘酸鈉和過碘酸鉀)。在較佳的實施態樣中，氧化劑為過碘酸鈉。在較佳的實施態樣中，用於氧化血清型10A多糖的過碘酸鹽為偏過碘酸鹽。在較佳的實施態樣中，用於氧化血清型10A多糖的過碘酸鹽為偏過碘酸鈉。
在一個實施態樣中，淬滅劑係選自鄰位二醇、1,2-、1,2-胺基醇、胺基酸、麩胱甘肽、亞硫酸鹽、硫酸氫鹽、二硫亞磺酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽、亞磷酸鹽、次磷酸鹽或亞磷酸。
在一個實施態樣中，淬滅劑為式(I)之1,2-胺醇：
Figure 109137693-A0101-12-0103-4
 其中R1係選自H、甲基、乙基、丙基或異丙基。
在一個實施態樣中，淬滅劑係選自亞硫酸鹽、硫酸氫鹽、二硫亞磺酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽、亞磷酸鹽、次磷酸鹽或亞磷酸之鈉鹽及鉀鹽。
在一個實施態樣中，淬滅劑為胺基酸。在此等實施態樣中，該胺基酸可選自絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、胱胺酸、甲硫胺酸、脯胺酸、羥基脯胺酸、色胺酸、酪胺酸和組胺酸。
在一個實施態樣中，淬滅劑為亞硫酸鹽，例如硫酸氫 鹽、二硫亞磺酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫代硫酸鹽。
在一個實施態樣中，淬滅劑為包含兩個鄰位羥基之化合物(鄰位二醇)，亦即兩個羥基與兩個相鄰的碳原子共價連接。
淬滅劑較佳為式(II)化合物：
Figure 109137693-A0101-12-0104-5
 其中R1和R2分別獨立地選自H、甲基、乙基、丙基或異丙基。
在較佳的實施態樣中，淬滅劑為甘油、乙二醇、丙-1,2-二醇、丁-1,2-二醇或丁-2,3-二醇、抗壞血酸。在較佳的實施態樣中，淬滅劑為丁-2,3-二醇。
在較佳的實施態樣中，分離之血清型10A多糖係藉由包含下列步驟之方法活化：
(a)將分離之血清型10A多糖與過碘酸鹽反應；及
(b)將氧化反應以添加丁-2,3-二醇淬滅，得到經活化之血清型10A多糖。
在多糖的氧化步驟之後，宣稱多糖經活化且在下文稱為〝經活化之多糖〞。
在較佳的實施態樣中，將經活化之血清型10A多糖純化。經活化之血清型10A多糖係根據熟習本技術領域者已知的方法純化，諸如凝膠滲透層析術(GPC)、透析或超過濾/滲濾。例如，經活化之10A多糖係藉由使用超過濾 裝置濃縮及滲濾來純化。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型10A多糖的氧化程度係介於2與30之間，介於2與25之間，介於2與20之間，介於2與15之間，介於2與10之間，介於2與5之間，介於5與30之間，介於5與25之間，介於5與20之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於10與30之間，介於10與25之間，介於10與20之間，介於10與15之間，介於15與30之間，介於15與25之間，介於15與20之間，介於20與30之間，或介於20與25之間。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型10A多糖的氧化程度係介於2與10之間，介於4與8之間，介於4與6之間，介於6與8之間，介於6與12之間，介於8與14之間，介於9與11之間，介於10與16之間，介於12與16之間，介於14與18之間，介於16與20之間，介於16與18之間，介於18與22之間，或介於18與20之間。
在較佳的實施態樣中，經活化之血清型10A多糖具有介於50kDa與400kDa之間，介於50kDa與350kDa之間，介於50kDa與300kDa之間，介於50kDa與250kDa之間，介於50kDa與200kDa之間，介於100kDa與300kDa之間，介於100kDa與250kDa之間，或介於100kDa與200kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型10A多糖具有介於50kDa與300kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清 型10A多糖具有介於100kDa與200kDa之間的分子量。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型10A多糖具有介於100kDa與200kDa之間的分子量及介於5與20之間，介於5與15之間，介於8與14之間，介於8與12之間，或介於9與11之間的氧化程度。在較佳的實施態樣中，經活化之血清型10A多糖具有介於100kDa與200kDa之間的分子量及介於9與11之間的氧化程度。
經活化之多糖及/或載體蛋白質獨立地(分開凍乾)或一起(共凍乾)凍乾(冷凍乾燥)。
在一實施態樣中，經活化之血清型10A多糖隨意地在糖的存在下凍乾。在較佳的實施態樣中，糖係選自蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。在較佳的實施態樣中，糖為蔗糖。在一個實施態樣中，接著將凍乾的經活化之多糖與包含載體蛋白質的溶液化合。
在另一實施態樣中，經活化之多糖與載體蛋白質共凍乾。在此等實施態樣中，將經活化之血清型10A多糖與載體蛋白質化合且隨意地在糖的存在下凍乾。在較佳的實施態樣中，糖係選自蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。在較佳的實施態樣中，糖為蔗糖。接著可將共凍乾之多糖及載體蛋白質再懸浮於溶液中且與還原劑反應。
共軛方法的第二步驟係使用還原劑還原經活化之多糖及載體蛋白質，以形成共軛物(還原胺化反應)。
經活化之血清型10A多糖可藉由包含下列步驟之方法與載體蛋白質共軛：
(c)將經活化之血清型10A多糖與載體蛋白質化合；及
(d)將化合的經活化之血清型22F多糖及載體蛋白質與還原劑反應，以形成血清型10A多糖-載體蛋白質共軛物。
在一實施態樣中，還原反應係在水性溶劑中進行，在另一實施態樣中，反應係在非質子性溶劑中進行。在一實施態樣中，還原反應係在DMSO(二甲基亞碸)或DMF(二甲基甲醯胺)溶劑中進行。DMSO或DMF溶劑可用於再建構凍乾的經活化之多糖及載體蛋白質。
在一實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉、三乙醯氧基硼氫化鈉、在布氏酸或路易士酸存在下之硼氫化鈉或硼氫化鋅、胺硼烷，諸如吡啶硼烷、2-甲吡啶硼烷、2,6-二硼烷-甲醇、二甲胺-硼烷、t-BuMeiPrN-BH3、苯甲基胺-BH3或5-乙基-2-甲基吡啶硼烷(PEMB)。在較佳的實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉。
在還原反應結束時，可能有未反應之醛基團剩餘在共軛物中，可將該等使用適合的封端劑封端。在一個實施態樣中，此封端劑為硼氫化鈉(NaBH4)。
在血清型10A多糖與載體蛋白質共軛之後，可將糖共軛物以熟習本技術領域者已知的各種技術純化(富集關於多糖-蛋白質共軛物量)。該等技術包括透析、濃縮/滲濾操作、切向流過濾沈澱/溶析、管柱層析術(DEAE或疏水 性交互作用層析術)及深度過濾。
在一些實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,750kDa之間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間；或介於200kDa與400kDa之間的分子量。在一些此等實施態樣中，血清型10A糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
在一些實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型10A糖共軛物具有介於50kDa與15,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型10A糖共軛物具有介於500kDa與15,000kDa之間，介於 500kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；或介於3,000kDa與8,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型10A糖共軛物具有介於1,000kDa與10,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型10A糖共軛物具有介於1,000kDa與8,000kDa之間的分子量。在又其他的實施態樣中，血清型10A糖共軛物具有介於2,000kDa與8,000kDa之間或介於3,000kDa與7,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物具有介於200kDa與20,000kDa之間；介於200kDa與15,000kDa之間；介於200kDa與10,000kDa之間；介於200kDa與7,500kDa之間；介於200kDa與5,000kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於500kDa與20,000kDa之間；介於500kDa與15,000kDa之間；介於500kDa與12,500kDa之間；介於500kDa與10,000kDa之間；介於500kDa與7,500kDa之間；介於500kDa與6,000kDa之間；介於500kDa與5,000kDa之間；介於500kDa與4,000kDa之間；介於500kDa與3,000kDa之間；介於500kDa與2,000kDa之間；介於500kDa與1,500kDa之間；介於500kDa與1,000kDa之間；介於750kDa與20,000kDa之間；介於750kDa與15,000kDa之間；介於750kDa與12,500kDa之間；介於750kDa與10,000kDa之間；介於750kDa與7,500kDa之間；介於750kDa與6,000kDa之間；介於750kDa與 5,000kDa之間；介於750kDa與4,000kDa之間；介於750kDa與3,000kDa之間；介於750kDa與2,000kDa之間；介於750kDa與1,500kDa之間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa與12,500kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與6,000kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與2,500kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；或介於2,000kDa與3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物具有介於3,000kDa與20,000kDa之間；介於3,000kDa與15,000kDa之間；介於3,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與7,500kDa之間；介於3,000kDa與5,000kDa之間；介於4,000kDa與20,000kDa之間；介於4,000kDa與15,000kDa之間；介於4,000kDa與12,500kDa之間；介於4,000kDa與10,000kDa之間；介於4,000kDa與7,500kDa之間；介於4,000kDa與6,000kDa之間；或介於4,000kDa與5,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物 具有介於5,000kDa與20,000kDa之間；介於5,000kDa與15,000kDa之間；介於5,000kDa與10,000kDa之間；或介於5,000kDa與7,500kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物具有介於6,000kDa與20,000kDa之間；介於6,000kDa與15,000kDa之間；介於6,000kDa與10,000kDa之間；或介於6,000kDa與7,500kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物具有介於7,000kDa與20,000kDa之間；介於7,000kDa與15,000kDa之間；介於7,000kDa與10,000kDa之間；或介於7,000kDa與8,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物具有介於8,000kDa與20,000kDa之間；介於8,000kDa與15,000kDa之間；或介於8,000kDa與10,000kDa之間的分子量。
涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。糖共軛物的分子量係以SEC-MALLS測量。
使本發明的血清型10A糖共軛物特徵化之另一方式為在載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。以至多糖的共價鍵所致之載體蛋白質的離胺酸修飾之證據可藉由使用那些熟習本技術領域者已知的常規方法之胺基酸分析而獲得。與用於產生共軛物材料之CRM197蛋白質起始材料相比，共軛造成回收的離胺酸殘基數減少。
在較佳的實施態樣中，血清型10A糖共軛物的共軛程 度係介於2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於3與15之間，介於3與13之間，介於3與10之間，介於3與8之間，介於3與6之間，介於3與5之間，介於3與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在較佳的實施態樣中，血清型10A糖共軛物的共軛程度係介於6與8之間。在較佳的實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
本發明的血清型10A糖共軛物亦可以糖對載體蛋白質之比(重量/重量)為特徵。在一些實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3.0之間(例如約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9或約3.0)。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型10A糖對載體蛋白質之比係介於0.5與2.0、0.5與1.5、0.5與1.0、1.0與1.5或1.0與2.0之間。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型10A糖對載體蛋白質之比係介於0.8與1.4之間。在較佳的實施態樣中，在共軛物中的血清型10A莢膜多糖對載體蛋白質之比係介於0.8與1.2之間(例如約0.8、約0.9約1.0、約1.1或約1.2)。在一些此等實施態樣中，載體蛋 白質為CRM197。
本發明的血清型10A糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物中或與其一起包埋)。
在一些實施態樣中，本發明的血清型10A糖共軛物包含相對於10A糖的總量而少於約50%之游離糖，少於約45%之游離糖，少於約40%之游離糖，少於約35%之游離糖，少於約30%之游離糖，少於約25%之游離糖，少於約20%之游離糖，少於約15%之游離糖，少於約10%之游離糖，或少於約5%之游離糖。血清型10A糖共軛物較佳地包含少於15%之游離糖，更佳為少於10%之游離糖，且又更佳為少於5%之游離糖。
血清型10A糖共軛物亦可以其子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物之相對分子大小分布，如上文所提及。
在較佳的實施態樣中，至少30%之本發明的血清型10A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少40%之本發明的血清型10A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%之本發明的血清型10A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之 Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之血清型10A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，介於50%與80%之間的本發明的血清型10A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
1.3.7 來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物
在一實施態樣中，血清型11A糖共軛物係藉由以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯而獲得。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質上的胺基偶合。例如，間隔子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質共軛。此等共軛物說明於例如WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S--NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979).Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物係使用還原胺化反應製備。還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖而自個別的六糖單元中之鄰位二醇產生醛官能基，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物。
血清型11A多糖係在氧化前隨意地水解以降低其黏度。可能使用機械或化學水解。化學水解可能使用乙酸進行。機械粒度分級可能使用高壓均質化剪切進行。
氧化步驟可包含與過碘酸鹽的反應。就本發明的目的而言，術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者；該術語亦包括偏過碘酸鹽(IO4 -)和原過碘酸鹽(IO6 5-)二者及過碘酸鹽的各種鹽(例如過碘酸鈉和過碘酸鉀)。在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型11A之莢膜多糖係在偏過碘酸鹽的存在下氧化，較佳地在過碘酸鈉(NaIO4)的存在下。在另一實施態樣中，來自血清型11A之莢膜多糖係在原過碘酸鹽的存在下氧化，較佳地在 過碘酸的存在下。
在多糖的氧化步驟之後，宣稱多糖經活化且在下文稱為〝經活化之多糖〞。可能將經活化之多糖純化且凍乾(冷凍乾燥)。
可將經活化之多糖及載體蛋白質獨立地(分開凍乾)或一起(共凍乾)凍乾(冷凍乾燥)。在一個實施態樣中，將經活化之多糖及載體蛋白質共凍乾。在另一實施態樣中，將經活化之多糖及載體蛋白質獨立地凍乾。
在一個實施態樣中，凍乾係在非還原糖的存在下進行，可能的非還原糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。
共軛方法的第二步驟為使用還原劑還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物(又稱為還原胺化反應)。適合的還原劑包括氰基硼氫化物(諸如氰基硼氫化鈉)、硼烷-吡啶或硼氫化物交換樹脂。在一個實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉。
在一實施態樣中，還原反應係在水性溶劑中進行，在另一實施態樣中，反應係在非質子性溶劑中進行。在一實施態樣中，還原反應係在DMSO(二甲基亞碸)或DMF(二甲基甲醯胺)溶劑中進行。DMSO或DMF溶劑可用於再建構凍乾的經活化之多糖及載體蛋白質。
在一個實施態樣中，以介於0.1與3.0之間，介於0.15與2.0之間，介於0.2與2.0之間，或介於0.5與1.5莫耳當量之間的氰基硼氫化鈉用於還原反應中。在一個實 施態樣中，以約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0莫耳當量氰基硼氫化鈉用於還原反應中。
在一個實施態樣中，還原劑為三乙醯氧基硼氫化鈉。在另外的實施態樣中，以介於1.0與6.0莫耳當量之間，介於2.0與5.0莫耳當量之間或約3.0莫耳當量三乙醯氧基硼氫化鈉用於還原反應中。
在還原反應結束時，可能有未反應之醛基團剩餘在共軛物中。可將該等使用適合的封端劑封端。在一個實施態樣中，此封端劑為硼氫化鈉(NaBH4)。在一實施態樣中，封端係藉由將還原反應物與介於0.5與5.0莫耳當量之間的NaBH4(例如約1.0、1.5、2.0、2.5或3.0莫耳當量NaBH4)混合而達成。
在共軛(還原反應及隨意地封端)之後，可將糖共軛物純化。糖共軛物可能藉由滲濾及/或離子交換層析術及/或粒徑排阻層析術來純化。在一實施態樣中，糖共軛物係藉由滲濾或離子交換層析術或粒徑排阻層析術來純化。
在一個實施態樣中，糖共軛物經無菌過濾。
在一些實施態樣中，將本發明的血清型11A糖共軛物與載體蛋白質(例如CRM197)共軛且包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,750kDa之 間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於50kDa與400kDa之間；介於50kDa與300kDa之間；介於50kDa與200kDa之間；介於50kDa與100kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於100kDa與400kDa之間；介於100kDa與300kDa之間；介於100kDa與200kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間；介於200kDa與400kDa之間；或介於200kDa與300kDa之間的分子量。
在一些實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型11A糖共軛物具有介於50kDa與15,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型11A糖共軛物具有介於500kDa與10,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型11A糖共軛物具有介於200kDa與10,000kDa之間的分子量。在又其他的實施態 樣中，血清型11A糖共軛物具有介於1,000kDa與8,000kDa之間或介於2,000kDa與8,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物具有介於200kDa與20,000kDa之間；.介於200kDa與17,500kDa之間；介於200kDa與15,000kDa之間；介於200kDa與10,000kDa之間；介於200kDa與7,500kDa之間；介於200kDa與5,000kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於500kDa與20,000kDa之間；介於500kDa與17,500kDa之間；介於500kDa與15,000kDa之間；介於500kDa與12,500kDa之間；介於500kDa與10,000kDa之間；介於500kDa與7,500kDa之間；介於500kDa與6,000kDa之間；介於500kDa與5,000kDa之間；介於500kDa與4,000kDa之間；介於500kDa與3,000kDa之間；介於500kDa與2,000kDa之間；介於500kDa與1,500kDa之間；介於500kDa與1,000kDa之間；介於700kDa與20,000kDa之間；介於700kDa與17,500kDa之間；介於700kDa與15,000kDa之間；介於700kDa與12,500kDa之間；介於700kDa與10,000kDa之間；介於700kDa與7,500kDa之間；介於700kDa與6,000kDa之間；介於700kDa與5,000kDa之間；介於700kDa與4,500kDa之間；介於700kDa與4,000kDa之間；介於700kDa與3,500kDa之間；介於700kDa與3,000kDa之間；介於700kDa與2,000kDa之 間；介於700kDa與1,500kDa之間；介於1,000kDa與20,000kDa之間；介於1,000kDa與17,500kDa之間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa與12,500kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與6,000kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與2,500kDa之間；介於2,000kDa與20,000kDa之間；介於2,000kDa與17,500kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；或介於2,000kDa與3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物具有介於3,000kDa與20,000kDa之間；介於3,000kDa與17,500kDa之間；介於3,000kDa與15,000kDa之間；介於3,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與7,500kDa之間；介於3,000kDa與5,000kDa之間；介於4,000kDa與20,000kDa之間；介於4,000kDa與17,500kDa之間；介於4,000kDa與15,000kDa之間；介於4,000kDa與12,500kDa之間；介於4,000kDa與10,000kDa之間；介於4,000kDa與7,500kDa之間；介於4,000kDa與6,000kDa之間；或介於4,000kDa與 5,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物具有介於5,000kDa與20,000kDa之間；介於5,000kDa與17,500kDa之間；介於5,000kDa與15,000kDa之間；介於5,000kDa與10,000kDa之間；或介於5,000kDa與7,500kDa之間的分子量。
在一實施態樣中，該血清型11A糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.3、0.5、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6、3.0、3.4、3.8、4.2、4.6或5.0mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少1.8、2.2或2.6mM乙酸酯。在一實施態樣中，糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.6mM乙酸酯。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6、3.0、3.4、3.8、4.2或4.6mM乙酸酯及以每一mM血清型11A多糖計少於約5.0mM乙酸酯。在一實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6或3.0mM乙酸酯及以每一mM血清型11A多糖計少於約3.4mM乙酸酯。在一實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6或約3.0mM乙酸酯及以每一mM血清型11A多糖計少於 約3.3mM乙酸酯。涵蓋上文數字中之任一者為本發明的實施態樣。
在較佳的實施態樣中，在血清型11A糖共軛物中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣中，在血清型11A糖共軛物中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在血清型11A糖共軛物中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.9。在較佳的實施態樣中，O-乙醯基的存在係以離子-HPLC分析測定。
在較佳的實施態樣中，在血清型11A糖共軛物中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9或0.95。在較佳的實施態樣中，在血清型11A糖共軛物中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.7。在較佳的實施態樣中，在血清型11A糖共軛物中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計 的mM乙酸酯之比為至少0.9。在較佳的實施態樣中，O-乙醯基的存在係以離子-HPLC分析測定。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0mM甘油。在較佳的實施態樣中，血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.2、0.3或0.4mM甘油。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9mM甘油及以每一mM血清型11A多糖計少於約1.0mM甘油。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A多糖計至少0.3、0.4、0.5、0.6或0.7mM甘油及以每一mM血清型11A多糖計少於約0.8mM甘油。涵蓋上文數字中之任一者為本發明的實施態樣。
使本發明的血清型11A糖共軛物特徵化的另一方式為載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。
以至多糖的共價鍵所致之載體蛋白質的離胺酸修飾之證據可藉由使用那些熟習本技術領域者已知的常規方法之胺基酸分析而獲得。與用於產生共軛物材料之CRM197蛋白質起始材料相比，共軛造成回收的離胺酸殘基數減少。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物之共軛程度係介於1與15之間，介於1與13之間，介於 1與10之間，介於1與8之間，介於1與6之間，介於1與5之間，介於1與4之間，介於2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在一實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物之共軛程度為約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14或約15。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物之共軛程度係介於1與6之間或介於2與5之間。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
本發明的血清型11A糖共軛物亦可以糖對載體蛋白質之比(重量/重量)為特徵。在一些實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4.0之間(例如約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9或約4.0)。在其他的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.7與2.5之間，介於0.8與2.0之間，介於0.7與2.0之間，介於0.8與1.5之間，介於0.7與1.5之間，介於0.7與1.4之間，介於 0.8與1.4之間，介於0.7與1.45之間，或介於0.8與1.45之間。在更多的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.6之間(例如約0.8、約0.9約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5或約1.6)。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在一實施態樣中，該血清型11A糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
本發明的血清型11A糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物中或與其一起包埋)。
在一些實施態樣中，本發明的血清型11A糖共軛物包含與血清型11A莢膜多糖的總量相比而少於約50%之游離血清型11A莢膜多糖，包含與血清型11A莢膜多糖的總量相比而少於約45%之游離糖，少於約40%之游離糖，少於約35%之游離糖，少於約30%之游離糖，少於約25%之游離糖，少於約20%之游離糖，少於約15%之游離糖，少於約10%之游離糖，或少於約5%之游離血清型11A莢膜多糖。血清型11A糖共軛物較佳地包含少於15%之游離糖，更佳為少於10%之游離糖，且又更佳為少於5%之游離糖。
血清型11A糖共軛物亦可以其分子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物 之相對分子大小分布，如上文所提及。
在較佳的實施態樣中，至少30%之本發明的血清型11A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%之本發明的血清型11A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之本發明的血清型11A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少65%之本發明的血清型11A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
1.3.8 來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物
在一實施態樣中，血清型8糖共軛物係藉由以四氟磷酸1-氰基-4-二甲基胺基吡啶錠(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯而獲得。可將經活化之多糖直接或經由間隔子(連接子)基團與載體蛋白質上的胺基偶合。例如，間隔子可為給出硫醇化多糖之胱胺或半胱胺，該硫醇化多糖可經由硫醚鍵與載體偶合，該硫醚鍵係在與經馬來醯亞胺活化之載體蛋白質(例如使用GMBS)或鹵乙醯化載體蛋白質(例如使用碘乙醯亞胺、SIB、S1AB、磺基-SIAB、SIA或SBAP)反應後獲得。氰酸酯(隨意地藉由CDAP化學製得)較佳地與己二胺或己二酸二醯肼(ADH)偶合且經胺基衍生之糖係使用碳二醯亞胺(例如EDAC或EDC)化 學經由在蛋白質載體上的羧基與載體蛋白質共軛。此等共軛物說明於例如WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/129094中。
其他適合的技術係使用碳二醯亞胺、醯肼、活性酯、降莰烷、對-硝基苯甲酸、N-羥基琥珀醯亞胺、S--NHS、EDC、TSTU。許多技術說明於國際專利申請公開案號WO 98/42721中。共軛可包含羰基連接子，其可藉由糖之游離羥基與CDI反應而形成(參見Bethell等人之(1979)J.Biol.Chern.254：2572-2574；Hearn等人之(1981)J.Chromatogr.218：509-518)，接著與蛋白質反應以形成胺甲酸酯鍵。這可包含將變旋異構體末端還原成一級羥基，隨意地保護/去保護一級羥基，將一級羥基與CDI反應以形成CDI胺甲酸酯中間物及將CDI胺甲酸酯中間物與蛋白質上的胺基偶合。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物係使用還原胺化反應製備。還原胺化反應包含兩個步驟：(1)氧化多糖而自個別的六糖單元中之鄰位二醇產生醛官能基，及(2)還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物。
血清型8多糖係在氧化前隨意地水解以降低其黏度。可能使用機械或化學水解。化學水解可能使用乙酸進行。
氧化步驟可包含與過碘酸鹽的反應。就本發明的目的而言，術語〝過碘酸鹽〞包括過碘酸鹽和過碘酸二者；該術語亦包括偏過碘酸鹽(IO4 -)和原過碘酸鹽(IO6 5-)二 者及過碘酸鹽的各種鹽(例如過碘酸鈉和過碘酸鉀)。在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8之莢膜多糖係在偏過碘酸鹽的存在下氧化，較佳地在過碘酸鈉(NaIO4)的存在下。在另一實施態樣中，來自血清型8之莢膜多糖係在原過碘酸鹽的存在下氧化，較佳地在過碘酸的存在下。
在多糖的氧化步驟之後，宣稱多糖經活化且在下文稱為〝經活化之多糖〞。可能將經活化之多糖純化且凍乾(冷凍乾燥)。
可將經活化之多糖及載體蛋白質獨立地(分開凍乾)或一起(共凍乾)凍乾(冷凍乾燥)。在一個實施態樣中，將經活化之多糖及載體蛋白質共凍乾。在另一實施態樣中，將經活化之多糖及載體蛋白質獨立地凍乾。
在一個實施態樣中，凍乾係在非還原糖的存在下進行，可能的非還原糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、松三糖、聚葡萄糖、甘露醇、乳糖醇和益壽糖。
共軛方法的第二步驟為使用還原劑還原經活化之多糖及載體蛋白質以形成共軛物(還原胺化反應)。適合的還原劑包括氰基硼氫化物(諸如氰基硼氫化鈉)、硼烷-吡啶或硼氫化物交換樹脂。在一個實施態樣中，還原劑為氰基硼氫化鈉。
在一實施態樣中，還原反應係在水性溶劑中進行，在另一實施態樣中，反應係在非質子性溶劑中進行。在一實施態樣中，還原反應係在DMSO(二甲基亞碸)或DMF (二甲基甲醯胺)溶劑中進行。DMSO或DMF溶劑可用於再建構凍乾的經活化之多糖及載體蛋白質。
在一個實施態樣中，以介於0.1與3.0之間，介於0.15與2.0之間，介於0.2與1.0之間，或介於0.25與0.5莫耳當量之間的氰基硼氫化鈉用於還原反應中。在一個實施態樣中，以約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0莫耳當量氰基硼氫化鈉用於還原反應中。
在一個實施態樣中，還原劑為三乙醯氧基硼氫化鈉。在另外的實施態樣中，以介於1.0與6.0莫耳當量之間，介於2.0與5.0莫耳當量或約3.0莫耳當量三乙醯氧基硼氫化鈉用於還原反應中。
在還原反應結束時，可能有未反應之醛基團剩餘在共軛物中，可將該等使用適合的封端劑封端。在一個實施態樣中，此封端劑為硼氫化鈉(NaBH4)。在一實施態樣中，封端係藉由將還原反應物與介於0.5與5.0莫耳當量之間的NaBH4(例如約1.0、1.5、2.0、2.5或3.0莫耳當量NaBH4)混合而達成。
在共軛(還原反應及隨意地封端)之後，可將糖共軛物純化。糖共軛物可能藉由滲濾及/或離子交換層析術及/或粒徑排阻層析術來純化。在一實施態樣中，糖共軛物係藉由滲濾或離子交換層析術或粒徑排阻層析術來純化。
在一個實施態樣中，糖共軛物經無菌過濾。
在一些實施態樣中，將本發明的血清型8糖共軛物與載體蛋白質(例如CRM197)共軛且包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。在其他的此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與2,000kDa之間的分子量。在更多此等實施態樣中，糖具有介於50kDa與1,750kDa之間；介於50kDa與1,500kDa之間；介於50kDa與1,250kDa之間；介於50kDa與1,000kDa之間；介於50kDa與750kDa之間；介於50kDa與500kDa之間；介於100kDa與2,000kDa之間；介於100kDa與1,750kDa之間；介於100kDa與1,500kDa之間；介於100kDa與1,250kDa之間；介於100kDa與1,000kDa之間；介於100kDa與750kDa之間；介於100kDa與500kDa之間；介於200kDa與2,000kDa之間；介於200kDa與1,750kDa之間；介於200kDa與1,500kDa之間；介於200kDa與1,250kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於200kDa與750kDa之間；或介於200kDa與500kDa之間；或介於200kDa與400kDa之間的分子量。在一實施態樣中，該血清型8糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
在一些實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型8糖共軛物具有介於50kDa與15,000kDa之間的分子量。在其他的實施態樣中，血清型8糖共軛物具有介於500kDa與10,000kDa之間的分子量。在其 他的實施態樣中，血清型8糖共軛物具有介於200kDa與10,000kDa之間的分子量。在又其他的實施態樣中，血清型8糖共軛物具有介於1,000kDa與8,000kDa之間或介於2,000kDa與8,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於200kDa與20,000kDa之間；介於200kDa與15,000kDa之間；介於200kDa與10,000kDa之間；介於200kDa與7,500kDa之間；介於200kDa與5,000kDa之間；介於200kDa與3,000kDa之間；介於200kDa與1,000kDa之間；介於500kDa與20,000kDa之間；介於500kDa與15,000kDa之間；介於500kDa與12,500kDa之間；介於500kDa與10,000kDa之間；介於500kDa與7,500kDa之間；介於500kDa與6,000kDa之間；介於500kDa與5,000kDa之間；介於500kDa與4,000kDa之間；介於500kDa與3,000kDa之間；介於500kDa與2,000kDa之間；介於500kDa與1,500kDa之間；介於500kDa與1,000kDa之間；介於750kDa與20,000kDa之間；介於750kDa與15,000kDa之間；介於750kDa與12,500kDa之間；介於750kDa與10,000kDa之間；介於750kDa與7,500kDa之間；介於750kDa與6,000kDa之間；介於750kDa與5,000kDa之間；介於750kDa與4,000kDa之間；介於750kDa與3,000kDa之間；介於750kDa與2,000kDa之間；介於750kDa與1,500kDa之間；介於1,000kDa與15,000kDa之間；介於1,000kDa 與12,500kDa之間；介於1,000kDa與10,000kDa之間；介於1,000kDa與7,500kDa之間；介於1,000kDa與6,000kDa之間；介於1,000kDa與5,000kDa之間；介於1,000kDa與4,000kDa之間；介於1,000kDa與2,500kDa之間；介於2,000kDa與15,000kDa之間；介於2,000kDa與12,500kDa之間；介於2,000kDa與10,000kDa之間；介於2,000kDa與7,500kDa之間；介於2,000kDa與6,000kDa之間；介於2,000kDa與5,000kDa之間；介於2,000kDa與4,000kDa之間；或介於2,000kDa與3,000kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於3,000kDa與20,000kDa之間；介於3,000kDa與15,000kDa之間；介於3,000kDa與10,000kDa之間；介於3,000kDa與7,500kDa之間；介於3,000kDa與5,000kDa之間；介於4,000kDa與20,000kDa之間；介於4,000kDa與15,000kDa之間；介於4,000kDa與12,500kDa之間；介於4,000kDa與10,000kDa之間；介於4,000kDa與7,500kDa之間；介於4,000kDa與6,000kDa之間；或介於4,000kDa與5,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於5,000kDa與20,000kDa之間；介於5,000kDa與15,000kDa之間；介於5,000kDa與10,000kDa之間；或介於5,000kDa與7,500kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於6,000 kDa與20,000kDa之間；介於6,000kDa與15,000kDa之間；介於6,000kDa與10,000kDa之間；或介於6,000kDa與7,500kDa之間的分子量。
在更多的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於7,000kDa與20,000kDa之間；介於7,000kDa與15,000kDa之間；介於7,000kDa與10,000kDa之間；或介於7,000kDa與8,000kDa之間的分子量。在更多的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物具有介於8,000kDa與20,000kDa之間；介於8,000kDa與15,000kDa之間；或介於8,000kDa與10,000kDa之間的分子量。
在一實施態樣中，該血清型8糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
使本發明的血清型8糖共軛物特徵化的另一方式為載體蛋白質(例如CRM197)中與糖共軛之離胺酸殘基數，其可以經共軛之離胺酸的範圍(共軛程度)為特徵。
以至多糖的共價鍵所致之載體蛋白質的離胺酸修飾之證據可藉由使用那些熟習本技術領域者已知的常規方法之胺基酸分析而獲得。在常見的實施態樣中，載體蛋白質係通過至載體蛋白質上的離胺酸殘基之一或多個ε-胺基的胺鍵與經活化之多糖共價共軛。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質包含與糖共價共軛的2至20個離胺酸殘基。在其他的此等實施態樣中，載體蛋白質包含與糖共價共軛的4至16或6至14個離胺酸殘基。
在較佳的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物之 共軛程度係介於2與20之間，介於2與15之間，介於2與13之間，介於2與10之間，介於2與8之間，介於2與6之間，介於2與5之間，介於2與4之間，介於3與15之間，介於3與13之間，介於3與10之間，介於3與8之間，介於3與6之間，介於3與5之間，介於3與4之間，介於5與15之間，介於5與10之間，介於8與15之間，介於8與12之間，介於10與15之間，或介於10與12之間。在一實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物之共軛程度為約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14或約15。在較佳的實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物之共軛程度係介於4與16之間或介於6與14之間。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。
在較佳的實施態樣中，載體蛋白質包含含有39個離胺酸殘基的CRM197。在一些此等實施態樣中，CRM197可包含在39個中之介於4與16個或介於6與14個與糖共價連接之離胺酸殘基。表示此參數的另一方式為約10%至約41%或約15%至約36%之CRM197離胺酸與糖共價連接。在另一此等實施態樣中，CRM197可包含在39個中之2至20個與糖共價連接之離胺酸殘基。表示此參數的另一方式為約5%至約50%之CRM197離胺酸與糖共價連接。在一些此等實施態樣中，CRM197可包含在39個中之約4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個與糖共價連接之離胺酸殘基。
本發明的血清型8糖共軛物亦可以糖對載體蛋白質之比(重量/重量)為特徵。在一些實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4.0之間(例如約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9或約4.0)。在其他的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.7與2.5之間。在更多的實施態樣中，糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.5之間(例如約0.8、約0.9約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4或約1.5)。在一些此等實施態樣中，載體蛋白質為CRM197。在一實施態樣中，該血清型8糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
本發明的血清型8糖共軛物及致免疫性組成物可含有不與載體蛋白質共價共軛，但是卻存在於糖共軛物組成物中的游離糖。游離糖可與糖共軛物非共價締合(亦即非共價連結至糖共軛物、吸附至糖共軛物或包埋於糖共軛物中或與其一起包埋)。
在一些實施態樣中，本發明的血清型8糖共軛物包含相對於血清型8糖的總量計少於約50%之游離糖，少於約45%之游離糖，少於約40%之游離糖，少於約35%之游離糖，少於約30%之游離糖，少於約25%之游離糖，少於約 20%之游離糖，少於約15%之游離糖，少於約10%之游離糖，或少於約5%之游離糖。血清型8糖共軛物較佳地包含少於15%之游離糖，更佳為少於10%之游離糖，且又更佳為少於5%之游離糖。
血清型8糖共軛物亦可以其分子大小分布(Kd)特徵化。可使用粒徑排阻層析介質(CL-4B)測定共軛物的相對分子大小分布。在重力進料管柱中使用粒徑排阻層析術(SEC)以定出共軛物的分子大小分布。在介質溶析物中的大分子比小分子更快自孔排阻。使用流份收集器收集管柱溶析物。流份係以糖檢定法經比色方式測試。校準用於測定Kd之管柱以確立完全排阻分子之流份(V0)，(Kd=0)及代表最大滯留之流份(Vi)，(Kd=1)。達到指定的樣品屬性之流份(Ve)係以下式而與Kd有關：Kd=(Ve-V0)/(Vi-V0)。
在較佳的實施態樣中，至少40%之本發明的血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%之本發明的血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少60%之本發明的血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，至少70%之本發明的血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
在較佳的實施態樣中，以介於40%與90%之間的血清 型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，以介於50%與90%之間的血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。在較佳的實施態樣中，以介於65%與80%之間的血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
2.本發明的致免疫性組成物
在一實施態樣中，致免疫性組成物之肺炎鏈球菌莢膜糖的數量範圍可從1種血清型(或〝v〞，價)至7種不同的血清型(7v)。在一個實施態樣中，有1個血清型。在一個實施態樣中，有2種不同的血清型。在一個實施態樣中，有3種不同的血清型。在一個實施態樣中，有4種不同的血清型。在一個實施態樣中，有5種不同的血清型。在一個實施態樣中，有6種不同的血清型。在一個實施態樣中，有7種不同的血清型。莢膜糖係與載體蛋白質共軛以形成糖共軛物，如上文所述。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自由下列所組成之群組的糖共軛物：來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)、來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物(諸如以上章節1.3.2之糖共軛物)、來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物(諸如以上章節1.3.3之糖共軛物)、來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物之糖共軛物(諸如以上章節 1.3.5之糖共軛物)、來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物(諸如糖以上章節1.3.6之糖共軛物)、來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物(諸如以上章節1.3.7之糖共軛物)及來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物(諸如以上章節1.3.8之糖共軛物)。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物，諸如以上章節1.3.4之糖共軛物。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物，諸如在以上章節1.3.2中所揭示者。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物，諸如在以上章節1.3.3中所揭示者。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物，諸如在以上章節1.3.5中所揭示者。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物，諸如在以上章節1.3.6中所揭示者。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物，諸如在以上章節1.3.7中所揭示者。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物，諸如在以上章節1.3.8中所揭示者。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自由下列所組成之群組的兩種肺炎鏈球菌血清型中 之每一者的糖共軛物：15B與22F，15B與33F，15B與12F，15B與10A，15B與11A，15B與8，22F與33F，22F與12F，22F與10A，22F與11A，22F與8，33F與12F，33F與10A，33F與11A，33F與8，12F與10A，12F與11A，12F與8，10A與11A，10A與8，及11A與8。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自三種下列肺炎鏈球菌血清型中之每一者的糖共軛物：15B與22F與33F，15B與22F與12F，15B與22F與10A，15B與22F與11A，15B與22F與8，15B與33F與12F，15B與33F與10A，15B與33F與11A，15B與33F與8，15B與12F與10A，15B與12F與11A，15B與12F與8，15B與10A與11A，15B與10A與8，15B與11A與8， 22F與33F與12F，22F與33F與10A，22F與33F與11A，22F與33F與8，22F與12F與10A，22F與12F與11A，22F與12F與8，22F與10A與11A，22F與10A與8，22F與11A與8，33F與12F與10A，33F與12F與11A，33F與12F與8，33F與10A與11A，33F與10A與8，33F與11A與8，12F與10A與11A，12F與10A與8，12F與11A與8，或10A與11A與8。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自四種下列肺炎鏈球菌血清型中之每一者的糖共軛物：15B與22F與33F與12F， 15B與22F與33F與10A，15B與22F與33F與11A，15B與22F與33F與8，15B與22F與12F與10A，15B與22F與12F與11A，15B與22F與12F與8，15B與22F與10A與11A，15B與22F與10A與8，15B與22F與11A與8，15B與33F與12F與10A，15B與33F與12F與11A，15B與33F與12F與8，15B與33F與10A與11A，15B與33F與10A與8，15B與33F與11A與8，15B與12F與10A與11A，15B與12F與10A與8，15B與12F與11A與8，15B與10A與11A與8，22F與33F與12F與10A，22F與33F與12F與11A，22F與33F與12F與8，22F與33F與10A與11A，22F與33F與10A與8， 22F與33F與11A與8，22F與12F與10A與11A，22F與12F與10A與8，22F與12F與11A與8，22F與10A與11A與8，33F與12F與10A與11A，33F與12F與10A與8，33F與12F與11A與8，33F與10A與11A與8，或12F與10A與11A與8。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自五種下列肺炎鏈球菌血清型中之每一者的糖共軛物：15B與22F與33F與12F與10A，15B與22F與33F與12F與11A，15B與22F與33F與12F與8，15B與22F與33F與10A與11A，15B與22F與33F與10A與8，15B與22F與33F與11A與8，15B與22F與12F與10A與11A，15B與22F與12F與10A與8，15B與22F與12F與11A與8，15B與22F與10A與11A與8，15B與33F與12F與10A與11A， 15B與33F與12F與10A與8，15B與33F與12F與11A與8，15B與33F與10A與11A與8，15B與12F與10A與11A與8，22F與33F與12F與10A與11A，22F與33F與12F與10A與8，22F與33F與12F與11A與8，22F與33F與10A與11A與8，22F與12F與10A與11A與8，或33F與12F與10A與11A與8。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自六種下列肺炎鏈球菌血清型中之每一者的糖共軛物：15B與22F與33F與12F與10A與11A，15B與22F與33F與12F與10A與8，15B與22F與33F與12F與11A與8，15B與22F與33F與10A與11A與8，15B與22F與12F與10A與11A與8，15B與33F與12F與10A與11A與8，或22F與33F與12F與10A與11A與8。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種選自七種下列肺炎鏈球菌血清型中之每一者的糖共軛物：15B與22F與33F與12F與10A與11A與8。
在一實施態樣中，在此章節中所定義之致免疫性組成 物中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型15B、22F、33F、12F、10A、11A及/或8之糖共軛物係如以上章節1.3.2至1.3.8中所揭示者。
上述致免疫性組成物之所有的糖共軛物較佳地個別與載體蛋白質共軛。
在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物係與CRM197共軛。
在上述致免疫性組成物中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌之糖共軛物全部皆個別與CRM197共軛。
在上述致免疫性組成物中之任一者的另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌之糖共軛物全部皆個別與PD共軛。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌之糖共軛物全部皆個 別與TT共軛。在又另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌之糖共軛物全部皆個別與DT共軛。
在上述致免疫性組成物中之任一者的另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F、33F、15B、12F、10A、11A及/或8之糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F、33F、15B、12F、10A、11A及/或8之糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F、33F、15B、12F、10A、11A及/或8之糖共軛物係個別地與PD共軛。
在上述致免疫性組成物中之任一者的另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌之糖共軛物中之至少一者係個別地與DT共軛及其他的糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與TT共軛及其他的糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與PD共軛及其他的糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與PD共軛及其他的糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與TT共軛及其他的糖共軛物係個別地與PD共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與DT共軛及其他的糖共軛物係個別地與PD共軛。
在上述致免疫性組成物中之任一者的另一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌之糖共軛物中之至少一者係個別地與 CRM197共軛及其他的糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與CRM197共軛及其他的糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與CRM197共軛及其他的糖共軛物係個別地與PD共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與DT共軛及其他的糖共軛物係個別地與CRM197共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與TT共軛及其他的糖共軛物係個別地與CRM197共軛。在另一實施態樣中，糖共軛物中之至少一者係個別地與PD共軛及其他的糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述致免疫性組成物包含從1至7種不同的肺炎鏈球菌血清型。在一個實施態樣中，上述致免疫性組成物為1、2、3、4、5、6或7價肺炎球菌共軛組成物。在一個實施態樣中，上述致免疫性組成物為6價肺炎球菌共軛組成物。在一個實施態樣中，上述致免疫性組成物為7價肺炎球菌共軛組成物。
1.在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物，諸如上文章節1.3.4之糖共軛物。
2.在另一實施態樣中，除了上述第1點以外，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.2中所揭示者。
3.在另一實施態樣中，除了上述第1或2點以外， 本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.3中所揭示者。
4.在另一實施態樣中，除了上述第1、2或3點以外，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.5中所揭示者。
5.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3或4點以外，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物，諸如上文章節1.3.6中所揭示者。
6.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3、4或5點以外，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物，諸如上文章節1.3.7中所揭示者。
7.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3、4、5或6點以外，本發明的致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物，諸如上文章節1.3.8中所揭示者。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含經共軛之來自血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之肺炎鏈球菌糖。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物之糖共軛物係由來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之糖共軛物所組成。
本發明的致免疫性組成物之所有糖共軛物(例如在上述第1至7點中之任一點中)較佳地個別與載體蛋白質共軛。
在上述第1至7點中之任一點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第2至7點中之任一點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第3至7點中之任一點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第4至7點中之任一點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第5至7點中之任一點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第6至7點中之任一點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第7點的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物係與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物係個別地與PD共軛。在一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物係個別地與TT共軛。在一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物係個別地與DT共軛。
在一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物 之糖共軛物中之至少一者係個別地與DT共軛及來自肺炎鏈球菌之其他的糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與TT共軛及其他的糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與PD共軛及其他的糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與PD共軛及其他的糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與TT共軛及其他的糖共軛物係個別地與PD共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與DT共軛及其他的糖共軛物係個別地與PD共軛。
在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與CRM197共軛及來自肺炎鏈球菌之其他的糖共軛物係個別地與DT共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與CRM197共軛及其他的糖共軛物係個別地與TT共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與CRM197共軛及其他的糖共軛物係個別地與PD共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成 物之糖共軛物中之至少一者係個別地與DT共軛及其他的糖共軛物係個別地與CRM197共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與TT共軛及其他的糖共軛物係個別地與CRM197共軛。在另一實施態樣中，上述第1至7點的致免疫性組成物之糖共軛物中之至少一者係個別地與PD共軛及其他的糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述致免疫性組成物為1、2、3、4、5、6或7價肺炎球菌共軛組成物。在一個實施態樣中，上述致免疫性組成物為6價肺炎球菌共軛組成物。在一個實施態樣中，上述致免疫性組成物為7價肺炎球菌共軛組成物。
在莢膜多糖與載體蛋白質共軛之後，將糖共軛物以各種技術純化(富集關於多糖-蛋白質共軛物量)。該等技術包括濃縮/滲濾操作、沉澱/溶析及深度過濾(參見例如美國專利申請公開案號2007/0184072或WO 2008/079653)。在個別的糖共軛物純化之後，將該等化合以調配本發明的致免疫性組成物。
在一實施態樣中，上述致免疫性組成物之劑量係如下文章節5中所揭示。
在一實施態樣中，上述致免疫性組成物另外包含來自其他病原體的抗原，特別是來自細菌及/或病毒，諸如下文章節6中所揭示。
在一實施態樣中，上述致免疫性組成物另外包含一或 多種佐劑，如下文章節6中所揭示。
在一實施態樣中，上述致免疫性組成物經調配，如下文章節8中所揭示。
3.可與本發明的致免疫性組成物組合使用的致免疫性組成物
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物中之任一者)係與第二致免疫性組成物組合使用。
在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自選自由下列所組成之群組的肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物：血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F。
在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自選自由下列所組成之群組的肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物：血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F。
1.在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
2.在另一實施態樣中，除了上述第1點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型1、5和7F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛 物)。
3.在另一實施態樣中，除了上述第1或2點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型6A和19A之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
4.在另一實施態樣中，除了上述第1、2或3點以外，該第第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型3之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
5.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3或4點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.2中所揭示者。
6.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3、4或5點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.3中所揭示者。
上述第二致免疫性組成物之所有糖共軛物較佳地個別與載體蛋白質共軛。
在上述第二致免疫性組成物中之至少一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第二致免疫性組成物中之至少一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、5和7F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第 二致免疫性組成物中之至少一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型6A和19A之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第二致免疫性組成物中之至少一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型3之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第二致免疫性組成物中之至少一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述第二致免疫性組成物中之至少一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物中之任一者之糖共軛物全部皆個別地與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛，來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛，及來自肺炎鏈球 菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛，來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與DT共軛，來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛，來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛，及來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物包含來自7至15種不同的肺炎鏈球菌血清型。在一個實施態樣中，上述第二致免疫性組成物包含來自7、8、9、10、11、12、13、14或15種不同的血清型之糖共軛物。在一個實施態樣中，上述第二致免疫性組成物包含來自10至15種不同的血清型之糖共軛物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為7、8、9、10、11、12、13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為10價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為12價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為15價肺炎球菌共軛組成物。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為7價肺炎球菌共軛組成物，其中該7種共軛物係由7種來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物所組成，該糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為10價肺炎球菌共軛組成物，其中該10種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物及與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為12價肺炎球菌共軛組成物，其中該12種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物、與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物，其中該13種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物其中該14共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為15價 肺炎球菌共軛組成物，其中該15共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二免疫原之既量係如下文章節5中所揭示。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物另外包含來自其他病原體的抗原，特別是來自細菌及/或病毒，諸如下文章節6中所揭示。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物另外包含一或多種佐劑，如下文章節7中所揭示。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物經調配，如下文章節8中所揭示。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物中之任一者)係與PREVNAR®(在一些國家為PREVENAR®)(七價疫苗)、SYNFLORIX®(十價疫苗)及/或PREVNAR 13®(在一些國家為PREVENAR 13®)(十三價疫苗)組合使用。
4.本發明套組
在一態樣中，本發明提供套組，其包含：(a)第一致免疫性組成物，如上文章節2中所定義；及(b)第二致免疫性組成物，其包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物，該肺炎鏈球菌血清型係選自血清型1、3、 4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F。
在一態樣中，本發明提供套組，其包含：(a)第一致免疫性組成物，如上文章節2中所定義；及(b)第二致免疫性組成物，其包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物，該肺炎鏈球菌血清型係選自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F。
在一態樣中，本發明提供套組，其包含：(a)第一致免疫性組成物，如上文章節2中所定義；及(b)第二致免疫性組成物，如上文章節3中所定義。
1.在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
2.在另一實施態樣中，除了上述第1點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型1、5和7F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
3.在另一實施態樣中，除了上述第1或2點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型6A和19A之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
4.在另一實施態樣中，除了上述第1、2或3點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌 血清型3之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
5.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3或4點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.2中所揭示者。
6.在另一實施態樣中，除了上述第1、2、3、4或5點以外，該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物，諸如上文章節1.3.3中所揭示者。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、 14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F和22F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1和1.3.2之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F和33F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1和1.3.3之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F、22F和33F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1、1.3.2和1.3.3之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1和1.3.2之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1和1.3.3之糖共軛物)。
在一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、 14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物(諸如上文章節1.3.1、1.3.2和1.3.3之糖共軛物)。
套組的第二致免疫性組成物之所有的糖共軛物較佳地個別與載體蛋白質共軛。
在上述套組中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述套組中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、5和7F之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述套組中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型6A和19A之糖共軛物係與CRM197共軛。在上述套組中之任一者的實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型3之糖共軛物係與CRM197共軛。
在上述套組中之任一者的實施態樣中，糖共軛物全部皆個別地與CRM197共軛。
在另一實施態樣中，上述套組中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛。
在一實施態樣中，上述套組中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛。
在一實施態樣中，上述套組中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
在一實施態樣中，上述套組中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛，來自肺炎鏈球菌血清型18C之 糖共軛物係與TT共軛，及來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
在一實施態樣中，上述套組中之任一者的來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛，來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛，來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛，來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛，及來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物包含從7至15個不同的肺炎鏈球菌血清型。在一個實施態樣中，上述第二致免疫性組成物包含來自7、8、9、10、11、12、13、14或15種不同的血清型之糖共軛物。在一個實施態樣中，上述第二致免疫性組成物包含來自10至15種不同的血清型之糖共軛物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為7、8、9、10、11、12、13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為10價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為12價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物。在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為15價 肺炎球菌共軛組成物。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為7價肺炎球菌共軛組成物，其中該7種共軛物係由7種來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物所組成，該糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為10價肺炎球菌共軛組成物，其中該10種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物及與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌 血清型33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為12價肺炎球菌共軛組成物，其中該12種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物、與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物，其中該13種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物is a 14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物為15價肺炎球菌共軛組成物，其中該15種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物所組成。
在一實施態樣中，上述第二免疫原之劑量係如下文章節5中所揭示。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物另外包含來自其他病原體之抗原，特別是來自細菌及/或病毒，諸如下文章節6中所揭示。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物另外包含一或多種佐劑，如下文章節7中所揭示。
在一實施態樣中，上述第二致免疫性組成物經調配，如下文章節8中所揭示。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物中之任一者)係與PREVNAR®(在一些國家為PREVENAR®)(七價疫苗)、SYNFLORIX®(十價疫苗)及/或PREVNAR 13®(在一些國家為PREVENAR 13®)(十三價疫苗)組合使用。
在本發明的態樣中，套組係呈兩種容器的形式。因此，在本發明的一個實施態樣中，套組的致免疫性組成物中之各者(亦即第一致免疫性組成物及第二致免疫性組成物)係裝入分開的容器中。
在一個實施態樣中，將套組的第一致免疫性組成物 (套組的(a)部分)裝入選自由下列所組成之群組的容器中：小瓶、注射器、燒瓶、發酵罐、生物反應器、袋、罐、安瓶、卡管及可棄式筆。在特定的實施態樣中，容器經矽化。
在一個實施態樣中，將套組的第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)裝入選自由下列所組成之群組的容器中：小瓶、注射器、燒瓶、發酵罐、生物反應器、袋、罐、安瓶、卡管及可棄式筆。在特定的實施態樣中，容器經矽化。
在一實施態樣中，容器係由玻璃、金屬(例如鋼、不銹鋼、鋁等等)及/或聚合物(例如熱塑性體、彈性物、熱塑性彈性物)製成。在一實施態樣中，容器係由玻璃製成。
在一個實施態樣中，將套組的第一及第二致免疫性組成物裝入注射器或可棄式筆中。在一個實施態樣中，將套組的第一及第二致免疫性組成物裝入注射器中。在特定的實施態樣中，注射器經矽化。在特定的實施態樣中，矽化注射器係由玻璃製成。
在一實施態樣中，將套組的第一及第二致免疫性組成物即時混合而同時投予。
在一實施態樣中，第一及第二致免疫性組成物係呈液體形式，較佳地裝入兩個容器中。在一個實施態樣中，第一及第二容器為雙室注射器中分開的室，在啟動時，使第一容器中的液體引入第二容器中。接著所得混合物可自容 器排出。將兩種致免疫性組成物分開保存，直到準備好混合為止。
在一實施態樣中，套組的第一及/或第二致免疫性組成物係呈凍乾形式。
在一實施態樣中，套組的第一致免疫性組成物係呈凍乾形式及第二致免疫性組成物係呈液體形式。在另一實施態樣中，套組的第二致免疫性組成物係呈凍乾形式及第一致免疫性組成物係呈液體形式。在該實施態樣中，凍乾的致免疫性組成物可與液體致免疫性組成物即時再建構而用於同時投予兩種致免疫性組成物。
在該實施態樣中，套組含有兩個容器，一個容器包括用於再建構的液體材料及第二容器包括凍乾的材料。在一個實施態樣中，將第二容器密封。在一實施態樣中，將液體材料經由第一針引入第二容器中，由此再建構凍乾的材料成為液體形式。接著將所得混合物抽出至容器中(諸如注射器)而投予患者。在一個實施態樣中，抽出步驟係經由第一針。在另一實施態樣中，抽出步驟係經由第二針。在一實施態樣中，用於抽出步驟的針與用於患者注射的針相同。在另一實施態樣中，用於抽出步驟的針與用於患者注射的針不相。
在一個實施態樣中，第二容器為小瓶。在另外的實施態樣中，第一及第二容器為雙室注射器中分開的室，在啟動時，使液體材料自第一容器引入第二容器中。所得混合物以液體形式自容器排出。在較佳的實施態樣中，將經凍 乾及液體材料分開保存，直到準備好混合為止。
在一實施態樣中，套組包含準備好填充注射器及小瓶。在一個實施態樣中，注射器包含單一劑量的第一致免疫組成物及小瓶包含單一劑量的第二致免疫性組成物。在一實施態樣中，注射器包含單一劑量的第二致免疫組成物及小瓶包含單一劑量的第一致免疫性組成物。在另一實施態樣中，注射器及小瓶包含多劑量。
5.致免疫性組成物之劑量
選擇在各劑量中的糖共軛物之量為在典型的免疫接種者中誘導免疫抑制反應而沒有顯著相反的副作用之量。此量將取決於所使用的特異性免疫原及其如何呈示而改變。
5.1 糖共軛物量
在致免疫性組成物中特定的糖共軛物之量可以用於共軛物(經共軛及未經共軛)的多糖總量為基準來計算。例如，具有20%之游離多糖的糖共軛物以100μg多糖劑量具有約80μg經共軛之多糖及約20μg未經共軛多糖。糖共軛物之量可取決於肺炎球菌血清型而改變。糖濃度可藉由糖醛酸檢定法來測定。
在致免疫性組成物中不同的多糖組份之〝致免疫量〞可不同且各者可包含約1μg、約2μg、約3μg、約4μg、約5μg、約6μg、約7μg、約8μg、約9μg、約10μg、約15μg、約20μg、約30μg、約40μg、約50μg、 約60μg、約70μg、約80μg、約90μg或約100μg任何特定的多糖抗原。
以給出之血清型的各劑量通常包含0.1μg至100μg多糖，特別為0.5μg至20μg，更特別為1.0μg至10μg，且甚至更特別為2.0μg至5.0μg。涵蓋以上述範圍的任一者內的任何整數作為本發明的實施態樣。
在一實施態樣中，各特定的糖共軛物之各劑量包含約1.0μg、約1.2μg、約1.4μg、約1.6μg、約1.8μg、約2.0μg、約2.2μg、約2.4μg、約2.6μg、約2.8μg、約3.0μg、約3.2μg、約3.4μg、約3.6μg、約3.8μg、約4.0μg、約4.2μg、約4.4μg、約4.6μg、約4.8μg、約5.0μg、約5.2μg、約5.4μg、約5.6μg、約5.8μg或約6.0μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之糖共軛物的各劑量包含約1.1μg、約1.2μg、約1.3μg、約1.4μg、約1.5μg、約1.6μg、約1.7μg、約1.8μg、約1.9μg、約2.0μg、約2.1μg、約2.2μg、約2.3μg、約2.4μg、約2.5μg、約2.6μg、約2.7μg、約2.8μg、約2.9μg或約3.0μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之糖共軛物的各劑量包含約1.1μg、約1.2μg、約1.3μg、約1.4μg、約1.5μg、約 1.6μg、約1.7μg、約1.8μg、約1.9μg、約2.0μg、約2.1μg、約2.2μg、約2.3μg、約2.4μg、約2.5μg、約2.6μg、約2.7μg、約2.8μg、約2.9μg或約3.0μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型6B之糖共軛物的各劑量包含約2.0μg、約2.2μg、約2.4μg、約2.6μg、約2.8μg、約3.0μg、約3.2μg、約3.4μg、約3.6μg、約3.8μg、約4.0μg、約4.2μg、約4.4μg、約4.6μg、約4.8μg、約5.0、約5.2μg、約5.4μg、約5.6μg、約5.8μg或約6.0μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之糖共軛物的各劑量包含約1.5μg至約3.0μg多糖，及來自肺炎鏈球菌血清型6B之糖共軛物的各劑量包含約3.0μg至約6.0μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之各糖共軛物的各劑量包含約2.0μg至約2.5μg多糖，及來自肺炎鏈球菌血清型6B之糖共軛物的各劑量包含約4.0μg至約4.8μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之各糖共軛物的各劑量包含約2.2μg多糖，及來自肺炎鏈球菌血清型6B之糖共軛 物的各劑量包含約4.4μg多糖。
在一實施態樣中，來自來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之各糖共軛物的各劑量包含約1.5μg至約3.0μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之各糖共軛物的各劑量包含約2.0μg至約2.5μg多糖。
在一實施態樣中，來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之各糖共軛物的各劑量包含約2.2μg多糖。
5.2 載體量
本發明的致免疫性組成物之各劑量通常包含1μg至150μg載體蛋白質，特別為10μg至100μg載體蛋白質，更特別為15μg至50μg載體蛋白質，且甚至更特別為16μg至40μg載體蛋白質。在一實施態樣中，該載體蛋白質為CRM197。
在一實施態樣中，各劑量包含約1μg、約2μg、約3μg、約4μg、約5μg、約6μg、約7μg、約8μg、約9μg、約10μg、約11μg、約12μg、約13μg、約14μg、約15μg、約16μg、約17μg、約18μg、約19μg、約20μg、約21μg、約22μg、約23μg、約24μg、約25μg、約26μg、約27μg、約28μg、約29μg、約30μg、約31μg、約32μg、約33μg、約34μg、約35μg、約 36μg、約37μg、約38μg、約39μg、約40μg、約41μg、約42μg、約43μg、約44μg、約45μg、約46μg、約47μg、約48μg、約49μg、約50μg、約51μg、約52μg、約53μg、約54μg、約55μg、約56μg、約57μg、約58μg、約59μg、約60μg、約61μg、約62μg、約63μg、約64μg、約65μg、約66μg、約67μg、約68μg、約69μg、約70μg、約71μg、約72μg、約73μg、約74μg或約75μg載體蛋白質。在一實施態樣中，該載體蛋白質為CRM197。
在一實施態樣中，各劑量包含約10μg、約11μg、約12μg、約13μg、約14μg、約15μg、約16μg、約17μg、約18μg、約19μg、約20μg、約21μg、約22μg、約23μg、約24μg、約25μg、約26μg、約27μg、約28μg、約29μg或約30μg載體蛋白質。在一實施態樣中，該載體蛋白質為CRM197。
6.另外的抗原
本文所揭示之致免疫性組成物包含經共軛之肺炎鏈球菌糖抗原(糖共軛物)。彼等亦可另外包括至少一種來自其他的病原體之抗原，特別是來自細菌及/或病毒。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物另外包含至少一種選自由下列所組成之群組的抗原：白喉類毒素(D)、破傷風類毒素(T)、百日咳抗原(P)、非細胞的百日咳抗原(Pa)、B型肝炎病毒(HBV)表面抗原 (HBsAg)、A型肝炎病毒(HAV)抗原、共軛之b型流感嗜血桿菌莢膜糖(Hib)及失活之脊髓灰白質炎病毒疫苗(IPV)。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含D-T-Pa。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含D-T-Pa-Hib、D-T-Pa-IPV或D-T-Pa-HBsAg。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含D-T-Pa-HBsAg-IPV或D-T-Pa-HBsAg-Hib。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib。
百日咳抗原：百日咳嗜血桿菌引起哮咳。疫苗中之百日咳抗原為細胞(呈失活之百日咳嗜血桿菌細胞的完整細胞)或非細胞。細胞百日咳抗原之製備完整記載於文獻中(例如其可藉由熱失活百日咳嗜血桿菌的I期培養物而獲得)。然而，本發明較佳地使用非細胞抗原。在使用非細胞抗原時，較佳的是使用下列抗原中之一者、兩者或(較佳)三者：(1)去毒百日咳毒素(百日咳類毒素或PT)；(2)絲狀血球凝集素(FHA)；(3)百日咳菌素(亦稱為69千道爾頓外膜蛋白質)。FHA及百日咳菌素可在根據本發明使用前以甲醛處理。PT較佳地藉由以甲醛及/或戊二酵處理而去毒。使非細胞百日咳抗原較佳地吸附至一或多種鋁鹽佐劑上。其可以作為另一選擇的未吸附狀態添加。在添加百日咳菌素時，其較佳地已吸附至氫氧化鋁佐劑上。PT及FHA可吸附至氫氧化鋁佐劑或磷酸 鋁上。以所有的PT、FHA及百日咳菌素吸附至氫氧化鋁最佳。
失活之脊髓灰白質炎病毒疫苗：脊髓灰白質炎病毒引起脊髓灰質炎。本發明較佳的實施態樣係使用IPV而不使用經口脊髓灰白質炎病毒疫苗。在投予患者前，脊髓灰白質炎病毒必須失活，且這可藉由以甲醛處理而達成。脊髓灰質炎可由三種類型的脊髓灰白質炎病毒中之一者引起。該三種類型相似且引起相同的症狀，但彼等抗原性不同且受到一種類型的感染不抵抗以其他類型的感染。因此，較佳的是在本發明中使用三種脊髓灰白質炎病毒抗原：1型脊髓灰白質炎病毒(例如Mahoney株)、2型脊髓灰白質炎病毒(例如MEF-1株)及3型脊髓灰白質炎病毒(例如Saukett株)。較佳地使病毒個別地生長、純化及失活，且接著組合以給出與本發明使用的三價主體混合物。
白喉類毒素：白喉棒狀桿菌引起白喉。可處理白喉毒素(例如使用福馬林或甲醛)以去除毒性，同時保留在注射後誘導特異性抗毒素抗體的能力。將該等白喉類毒素用於白喉疫苗中。較佳的白喉類毒素為那些藉由以甲醛處理而製備之白喉類毒素。白喉類毒素可藉由使白喉棒狀桿菌於生長培養基中生長、隨後藉由甲醛處理、超濾及沈澱而獲得。接著可將類毒素材料以包含無菌過濾及/或透析之方法處理。白喉類毒素較佳地吸附至氫氧化鋁佐劑上。
破傷風類毒素：破傷風梭菌(Clostridium tetani)引起破傷風。可處理破傷風毒素而得到保護性類毒素。將類 毒素用於破傷風疫苗中。較佳的破傷風類毒素為那些藉由以甲醛處理而製備之破傷風類毒素。破傷風類毒素可藉由使破傷風梭菌於生長培養基中生長、隨後藉由甲醛處理、超濾及沈澱而獲得。接著可將材料以包含無菌過濾及/或透析之方法處理。
A型肝炎病毒抗原：A型肝炎病毒(HAV)為引起病毒性肝炎之已知的劑中之一者。較佳HAV組份係建基於失活之病毒，且失活可藉由以福馬林處理而達成。
B型肝炎病毒(HBV)為引起病毒性肝炎之已知的劑中之一者。殼體的主要組份為蛋白質，稱為HBV表面抗原或更常稱為HBsAg，其通常為具有分子量~24kDa的226個胺基酸多肽。所有現有B型肝炎疫苗皆含有HBsAg，且當此抗原投予正常免疫接種者時，其刺激抵抗HBV感染的抗HBsAg抗體之生產。
用於疫苗製造的HbsAg已以兩種方式製成：自慢性B型肝炎載體之血漿純化呈微粒形式的抗原或藉由重組DNA方法(例如酵母細胞中的重組表現)表現蛋白質。與天然HBsAg(亦即如在經血漿純化之產物中)不同，經酵母表現之HBsAg通常未經糖化，且此為與本發明使用之HbsAg的最佳形式。
經共軛之b型流感嗜血桿菌抗原：b型流感嗜血桿菌(Hib)引起細菌性腦膜炎。Hib疫苗通常係建基於莢膜糖抗原，彼等之製備完整記載於文獻中。Hib糖可與載體蛋白質共軛，以增強其致免疫性，尤其在兒童中。典型的 載體蛋白質為破傷風類毒素、白喉類毒素、CRM197、流感嗜血桿菌蛋白質D和來自血清群B腦膜炎球菌之外膜蛋白複合物。共軛物之糖部分可包含如自Hib細菌所製備的全長磷酸多核糖基核糖醇(PRP)及/或全長PRP之片段。Hib共軛物可吸附或可不吸附至作為佐劑之鋁鹽。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物另外包括經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)及/或經共軛之腦膜炎雙球菌血清群C莢膜糖(MenC)。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物另外包括經共軛之腦膜炎雙球菌血清群A莢膜糖(MenA)、經共軛之腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜糖(MenW135)、經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)及/或經共軛之腦膜炎雙球菌血清群C莢膜糖(MenC)。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物另外包括經共軛之腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜糖(MenW135)、經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)及/或經共軛之腦膜炎雙球菌血清群C莢膜糖(MenC)。
本發明的態樣係提供如上文章節4中所定義之套組，其中上述另外的抗原中之任一者為第一致免疫性組成物(套組的(a)部分)的一部分。
本發明的態樣係提供如上文章節4中所定義之套組，其中上述另外的抗原中之任一者為第二致免疫性組成物 (套組的(b)部分)的一部分。
本發明的態樣係提供如上文章節4中所定義之套組，其中上述另外的抗原中之任一者為第一致免疫性組成物(套組的(a)部分)的一部分及上述另外的抗原中之任一者為第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)的一部分。
7.佐劑
在一些實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物可另外包含至少一種、兩種或三種佐劑。術語〝佐劑〞係指增強對抗原的免疫反應之化合物或混合物。抗原主要可充當為遞送系統、主要充當為免疫調節劑或具有二者的強大特徵。適合的佐劑包括那些適用於哺乳動物(包括人類)的佐劑。
已知可用於人類之適合的遞送系統型佐劑的實例包括但不限於明礬(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)、磷酸鈣、脂質體、水包油乳液(諸如MF59(4.3% w/v之鯊烯、0.5% w/v之聚山梨醇酯80(TWEEN® 80)、0.5% w/v之去水山梨醇三油酸酯(Span 85)))，油包水乳液(諸如MONTANIDETM)和聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)微粒或奈米粒子。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含鋁鹽(明礬)作為佐劑(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)。在較佳的實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成 物包含磷酸鋁或氫氧化鋁作為佐劑。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含從0.1mg/mL至1mg/mL或從0.2mg/mL至0.3mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含約0.25mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁。
已知可用於人類之適合的免疫調節型佐劑的實例包括但不限於來自阿奎拉(Aquilla)樹樹皮之皂素萃取物(QS21，QUILA®)、TLR4激動劑(諸如MPL，單磷醯基脂質A))、3DMPL(3-O-去醯基化MPL)或GLA-AQ、LT/CT突變體、細胞介素(諸如各種介白素(例如IL-2、IL-12)或GM-CSF)及類似者。
已知可用於人類之具有遞送及免疫調節劑特徵二者之適合的免疫調節型佐劑包括但不限於ISCOMS(參見例如Sjölander等人之(1998)J.Leukocyte Biol.64：713；WO 90/03184、WO 96/11711、WO 00/48630、WO 98/36772、WO 00/41720、WO 2006/134423和WO 2007/026190)或GLA-EM，其為TLR4激動劑與水包油乳液之組合。
關於獸醫應用(包括但不限於動物實驗)，可使用完全弗氏(Complete Freund’s)佐劑(CFA)、弗氏不完全佐劑(IFA)、Emulsigen、N-乙醯基-胞壁醯基-L-蘇胺醯基-D-異麩醯胺酸(thr-MDP)、N-乙醯基-去甲胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺酸(CGP 11637，稱為nor-MDP)、N-乙醯基胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺醯基-L-丙胺酸-2-(1’-2’-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-羥基磷醯基氧 基)-乙胺(CGP 19835A，稱為MTP-PE)和RIBITM(其含有三種自細菌萃取之組份：單磷醯基脂質A、海藻糖二黴菌酸酯和細胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)於2%鯊烯/TWEEN® 80乳液中)。
增強本文所揭示之肺炎球菌疫苗之有效性的其他例示性佐劑包括但不限於：(1)水包油乳液調配物(具有或不具有其他的特異性免疫刺激劑，諸如胞壁醯基肽(參見下文)或細菌細胞壁組份)，諸如(a)SAF，其含有10%鯊烷、0.4% TWEEN® 80、5%普盧蘭尼克(pluronic)嵌段聚合物L121和thr-MDP，將其微流化成次微米乳液或渦旋以產生較大的粒徑乳液，及(b)RIBITM佐劑系統(RAS)(Ribi Immunochem，Hamilton,MT)，其含有2%鯊烯、0.2% TWEEN® 80和一或多種細菌細胞壁組份，諸如單磷醯脂質A(MPL)、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)和細胞壁骨架(CWS)，較佳為MPL+CWS(DETOXTM)；(2)可使用皂素佐劑，諸如QS21、STIMULONTM(Cambridge Bioscience，Worcester,MA),ABISCO®(Isconova，Sweden)或ISCOMATRIX®(Commonwealth Serum Laboratories，Australia)，或自其產生之粒子，諸如ISCOMs(免疫刺激複合物)，該ISCOMS可不含有另外的清潔劑(例如WO 00/07621)；(3)完全弗氏佐劑(CFA)和不完全弗氏佐劑(IFA)；(4)細胞介素，諸如介白素(例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12(例如WO 99/44636))、干擾 素(例如γ干擾素)、巨噬細胞菌落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)等等；(5)單磷醯基脂質A(MPL)或3-O-去醯基化MPL(3dMPL)(參見例如GB-2220221、EP0689454)，當與肺炎球菌糖使用時，隨意地在沒有實質的明礬存在下(參見例如WO 00/56358)；(6)3dMPL與例如QS21及/或水包油乳液之組合(參見例如EP0835318、EP0735898、EP0761231)；(7)聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯(參見例如WO 99/52549)；(8)聚氧乙烯去水山梨醇酯界面活性劑與辛苯昔醇(octoxynol)之組合(例如WO 01/21207)或聚氧乙烯烷醚或酯界面活性劑與至少一種另外的非離子界面活性劑(諸如辛苯昔醇)之組合(例如WO 01/21152)；(9)皂素和免疫刺激性寡核苷酸(例如CpG寡核苷酸)(例如WO 00/62800)；(10)免疫刺激劑和金屬鹽粒子(參見例如WO 00/23105)；(11)皂素和水包油乳液(例如WO 99/11241)；(12)皂素(例如QS21)+3dMPL+IM2(隨意地+固醇)(例如WO 98/57659)；(13)充當免疫刺激劑以增強組成物效能的其他物質。胞壁醯基肽包括N-乙醯基-胞壁醯基-L-蘇胺醯基-D-異麩醯胺酸(thr-MDP)、N-25乙醯基-去甲胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺酸(nor-MDP)、N-乙醯基胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺醯基-L-丙胺酸-2-(1’-2’-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-羥基磷醯基氧基)-乙胺MTP-PE)等等。
在本發明的實施態樣中，如本文所揭示之致免疫性組成物包含CpG寡核苷酸作為佐劑。如本文所使用的CpG寡核苷酸係指免疫刺激性CpG寡去氧核苷酸(CpGODN)，且因此該等術語可交換使用，除非另有其他指示。免疫刺激性CpG寡去氧核苷酸含有一或多個免疫刺激性CpG基序，其為隨意地在特定的較佳鹼基背景內的未甲基化之胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸。CpG免疫刺激性基序之甲基化狀態通常係指在二核苷酸中的胞嘧啶殘基。含有至少一個未甲基化CpG二核苷酸之免疫刺激性寡核苷酸為含有藉由磷酸酯鍵連接至3’鳥嘌呤之5’未甲基化胞嘧啶且通過結合至類鐸受體9(TLR-9)來活化免疫系統之寡核苷酸。在另一實施態樣中，免疫刺激性寡核苷酸可含有一或多個甲基化CpG二核苷酸，其通過TLR9來活化免疫系統，但不如CpG基序未甲基化時強。CpG免疫刺激性寡核苷酸可包含一或多個進而可包含CpG二核苷酸之迴折結構。CpG寡核苷酸已說明於許多已頒佈之專利、公開專利申請案及其他公開案中，包括美國專利案號6,194,388、6,207,646號、6,214,806、6,218,371、6,239,116和6,339,068。
在本發明的實施態樣中，如本文所揭示之致免疫性組成物包含WO 2010/125480的第3頁第22行至第12頁第36行所述之CpG寡核苷酸中之任一者。
已鑑定出不同類別的CpG免疫刺激性寡核苷酸。該等類別稱為A類、B類、C類和P類，且更詳細地說明於 WO 2010/125480的第3頁第22行至第12頁第36行中。本發明的方法包含該等不同類別的CpG免疫刺激性寡核苷酸之用途。
在本發明的實施態樣中，如本文所揭示之致免疫性組成物包含A類CpG寡核苷酸。本發明的〝A類〞CpG寡核苷酸較佳地具有以下的核酸序列：5’GGGGACGACGTCGTGGGGGGG 3’(SEQ ID NO：1)。A類寡核苷酸的一些非限制性實例包括：5’G*G*G_G_A_C_G_A_C_G_T_C_G_T_G_G*G*G*G*G*G 3’(SEQ ID NO：2)；其中〝*〞係指硫代磷酸酯鍵及〝_〞係指磷酸二酯鍵。
在本發明的實施態樣中，如本文所揭示之致免疫性組成物包含B類CpG寡核苷酸。在一個實施態樣中，用於本發明的CpG寡核苷酸為以至少下式代表的B類CpG寡核苷酸：5’X1X2CGX3X4 3’，其中X1、X2、X3和X4為核苷酸。在一個實施態樣中，X2為腺嘌呤、鳥嘌呤或胸腺嘧啶。在另一實施態樣中，X3為胞嘧啶、腺嘌呤或胸腺嘧啶。
本發明的B類CpG寡核苷酸序列為那些上文廣泛說明以及揭示於WO 96/02555、WO 98/18810及美國專利案號6,194,388、6,207,646、6,214,806、6,218,371、6,239,116和6,339,068中者。例示性序列包括但不限於那些在該等後續申請案及專利中所揭示者。
在一實施態樣中，本發明的〝B類〞CpG寡核苷酸具 有下列的核酸序列：5’TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3’(SEQ ID NO：3)，或5’TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3’(SEQ ID NO：4)，或5’TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3’(SEQ ID NO：5)，或5’TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3’(SEQ ID NO：6)，或5’TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3’(SEQ ID NO：7)。
在該等序列中之任一者中，所有的鍵皆可為硫代磷酸酯鍵。在另一實施態樣中，在該等序列中之任一者中，該鍵中之一或多者可為磷酸二酯，較佳為介於CpG基序的〝C〞與〝G〞之間，製成半軟性CpG寡核苷酸。在該等序列中之任一者中，乙基-尿苷或鹵素可取代5’T；以鹵素取代的實例包括但不限於溴-尿苷或碘-尿苷取代。
B類寡核苷酸的一些非限制性實例包括：5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*G*C*T*T*T*T 3’(SEQ ID NO：8)，或5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*C*G*T*T*T*T 3’(SEQ ID NO：9)，或5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3’(SEQ ID NO：10)，或5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3’(SEQ ID NO：11)，或5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3’(SEQ ID NO：12)。其中〝*〞係指硫代磷酸酯鍵。
在本發明的實施態樣中，如本文所揭示之致免疫性組成物包含C類CpG寡核苷酸。在一實施態樣中，本發明的〝C類〞CpG寡核苷酸具有下列的核酸序列： 5’TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：13)，或5’TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：14)，或5’TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：15)，或5’TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：16)，或5’TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：17)，或5’TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：18)，或5’TCGACGTTCGGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：19)，或5’TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3’(SEQ ID NO：20)，或5’TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：21)，或5’TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：22)，或5’TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3’(SEQ ID NO：23)，或5’TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3’(SEQ ID NO：24)，或5’TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3’(SEQ ID NO：25)。
在該等序列中之任一者中，所有的鍵皆可為硫代磷酸酯鍵。在另一實施態樣中，在該等序列中之任一者中，該鍵中之一或多者可為磷酸二酯、較佳為介於CpG基序的C〞與〝G〞之間，製成半軟性CpG寡核苷酸。
C類寡核苷酸的一些非限制性實例包括：5’T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：26)，或5’T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：27)，或5’T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：28)，或5’T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：29)，或5’T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：30)，或 5’T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：31)，或5’T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：32)，或5’T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：33)，或5’T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：34)，或5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：35)，或5’T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*G*C*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：36)，或5’T*C*G*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*C*C_G*T*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：37)，或5’T*C_G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G*T3’(SEQ ID NO：38)其中〝*〞係指硫代磷酸酯鍵及〝_〞係指磷酸二酯鍵。
在該等序列中之任一者中，乙基-尿苷或鹵素可取代5’T；以鹵素取代之實例包括但不限於溴-尿苷或碘-尿苷取代。
在本發明的實施態樣中，如本文所揭示之致免疫性組成物包含P類CpG寡核苷酸。在一實施態樣中，用於本發明的CpG寡核苷酸為含有5’TLR活化結構域及至少兩個迴折結構地區的P類CpG寡核苷酸，一個迴折結構地區為至少6個核苷酸長度的5’迴折結構地區且直接或經由間隔子連接至至少8個核苷酸長度的3’迴折結構地區，其中寡核苷酸包括至少一個YpR二核苷酸。在一實施態樣中，該寡核苷酸不為T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G(SEQ ID NO：27)。在一個實施態樣中，P類CpG寡核苷酸包括至少一個未甲基化CpG二核苷酸。在另一實施態樣中，TLR活化結構域為TCG、TTCG、TTTCG、TYpR、TTYpR、TTTYpR、UCG、UUCG、UUUCG、TTT 或TTTT。在又另一實施態樣中，TLR活化結構域係在5’迴折結構地區。在另一實施態樣中，TLR活化結構域為緊鄰5’迴折結構地區之5’。
在一實施態樣中，本發明的〝C類〞CpG寡核苷酸具有下列的核酸序列：5’TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3’(SEQ ID NO：39)。
在該等序列中，所有的鍵皆可為硫代磷酸酯鍵。在另一實施態樣中，一或多個鍵可為磷酸二酯、較佳為介於CpG基序的的〝C〞與〝G〞之間，製成半軟性CpG寡核苷酸。在該等序列中之任一者中，乙基-尿苷或鹵素可取代5’T；以鹵素取代的實例包括但不限於溴-尿苷或碘-尿苷取代。
P類寡核苷酸的非限制性實例包括：5’T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3’(SEQ ID NO：40)其中〝*〞係指硫代磷酸酯鍵及〝_〞係指磷酸二酯鍵。
在一個實施態樣中，寡核苷酸包括至少一個硫代磷酸酯鍵。在另一實施態樣中，寡核苷酸的所有核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵。在另一實施態樣中，寡核苷酸包括至少一個似磷酸二酯鍵。在另一實施態樣中，磷酸二酯樣鍵為磷酸二酯鍵。在另一實施態樣中，親脂性基團係與寡核苷酸共軛。在一個實施態樣中，親脂性基團為膽固醇。
在一實施態樣中，本文所揭示之CpG寡核苷酸的所有核苷酸間鍵為磷酸二酯鍵(〝軟性〞寡核苷酸，如WO 2007/026190中所闡述)。在另一實施態樣中，使本發明的CpG寡核苷酸抵抗降解(例如穩定)。〝穩定的寡核苷酸〞係指相對抵抗活體內降解(例如經由外切酶或內切酶)之寡核苷酸。核酸穩定可經由主鏈修飾來完成。具有硫代磷酸酯鍵之寡核苷酸提供最大的活性且保護寡核苷酸免於細胞內外切酶及內切酶的降解。
免疫刺激性寡核苷酸可具有嵌合主鏈，其具有磷酸二酯與硫代磷酸酯鍵之組合。就本發明的目的而言，嵌合主鏈係指部分穩定的主鏈，其中至少一個核苷酸間鍵為磷酸二酯鍵或似磷酸二酯鍵，且其中至少一個其他的核苷酸間鍵為穩定的核苷酸間鍵，其中至少一個磷酸二酯鍵或似磷酸二酯鍵與至少一個穩定之鍵不同。當磷酸二酯鍵優先位於CpG基序內時，則該等分子稱為〝半軟性〞分子，如WO 2007/026190中所述。
其他經修飾之寡核苷酸包括磷酸二酯、硫代磷酸酯、膦酸甲酯、硫代磷酸甲酯、二硫代磷酸酯及/或對乙氧基鍵之組合。
混合型主鏈的經修飾之ODN可如WO 2007/026190中所述方式合成。
CpG寡核苷酸的大小(亦即沿著寡核苷酸長度的核苷酸殘基數)亦可促成寡核苷酸的刺激活性。為了加速吸收至細胞中，本發明的CpG寡核苷酸較佳地具有6個核苷酸殘基的最小長度。若有足夠的免疫刺激性基序存在，則大於6個核苷酸(甚至許多kb長度)的任何大小之寡核 苷酸能夠誘導免疫反應，因為較大的寡核苷酸在細胞內部降解。在特定的實施態樣中，CpG寡核苷酸之為6至100個核苷酸長度，優先為8至30個核苷酸長度。在重要的實施態樣中，本發明的核酸及寡核苷酸不為質體或表現載體。
在一實施態樣中，本文所揭示之CpG寡核苷酸包含諸如在鹼基及/或糖中的取代或修飾，如在WO 2007/026190之段落134至147中所述。
在一實施態樣中，本發明的CpG寡核苷酸經化學修飾。化學修飾的實例為熟習本技術領域者已知且說明於例如Uhlmann等人之(1990)Chem.Rev.90：543；S.Agrawal,Ed.,Humana Press,Totowa,USA 1993；Crooke等人之(1996)Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.36：107-129；及Hunziker等人之(1995)Mod.Synth.Methods 7：331-417中。與由天然DNA或RNA所組成之相同序列的寡核苷酸相比，根據本發明的寡核苷酸可具有一或多個修飾，其中各修飾係位於特定的磷酸二酯核苷間橋及/或特定的β-D-核糖單元及/或特定的天然核苷鹼基位置上。
在本發明的一些實施態樣中，含CpG之核酸可根據那些熟習本技術領域者已知的方法與免疫原載體簡單地混合(參見例如WO 03/024480)。
在本發明特別的實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物中之任一者包含從2μg至100mg CpG寡核苷酸，較佳為從0.1mg至50mg CpG寡核苷酸，較佳為從0.2 mg至10mg CpG寡核苷酸，較佳為從0.3mg至5mg CpG寡核苷酸，較佳為從0.3mg至5mg CpG寡核苷酸，甚至更佳為從0.5至2mg CpG寡核苷酸，甚至更佳為從0.75至1.5mg CpG寡核苷酸。在較佳的實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物中之任一者包含約1mg CpG寡核苷酸。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物(諸如上文章節2中所定義)包含如上文所定義之佐劑，較佳為鋁鹽(明礬)(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)。在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物包含磷酸鋁或氫氧化鋁作為佐劑。
在一實施態樣中，可與本發明的致免疫性組成物組合使用的致免疫性組成物(諸如以上文章節3中所定義)包含如上文所定義之佐劑，較佳為鋁鹽(明礬)(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)。在一實施態樣中，該致免疫性組成物包含磷酸鋁或氫氧化鋁作為佐劑。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中僅第一致免疫性組成物(套組的(a)部分)包含如上文所定義之佐劑。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中僅第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)包含如上文所定義之佐劑。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)包含 如上文所定義之佐劑。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)包含選自由下列所組成之群組的：磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)包含磷酸鋁作為佐劑。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)包含氫氧化鋁作為佐劑。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)包含硫酸鋁作為佐劑。
8.調配物
本文所揭示之致免疫性組成物可調配成液體形式(亦即溶液或懸浮液)或凍乾形式。液體調配物可有利地直接自其包裝形式投予且因此非常適合於注射而不需要在水性介質中再建構，如凍乾的組合物所必需的其他方面。
本文所揭示之致免疫性組成物的調配物可使用本技術認可之方法完成。例如，個別的肺炎球菌共軛物可以生理上可接受之媒劑調配，以製備組成物。此等媒劑的實例包括但不限於水、緩衝食鹽水、多元醇(例如甘油、丙二 醇、液體聚乙二醇)和右旋糖溶液。
本發明提供包含本文所揭示之糖共軛物與醫藥上可接受之賦形劑、載體或稀釋劑的任何組合之致免疫性組成物。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物係呈液體形式，較佳為水性液體形式。
本發明的致免疫性組成物可包含下列中之一或多者：緩衝液、鹽、二價陽離子、非離子清潔劑、低溫保護劑(諸如糖)和抗氧化劑(諸如自由基清除劑或螯合劑)或其任何組合。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含緩衝液。在一實施態樣中，該緩衝液具有約3.5至約7.5之pKa。在一些實施態樣中，緩衝液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。在特定的實施態樣中，緩衝液為最終濃度1mM至10mM之琥珀酸鹽。在一個特別的實施態樣中，琥珀酸鹽緩衝液的最終濃度為約5mM。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含鹽。在一些實施態樣中，鹽係選自由下列所組成之群組：氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。在一個特別的實施態樣中，鹽為氯化鈉。在一個特別的實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含150mM之氯化鈉。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物包含界面活性劑。在一實施態樣中，界面活性劑係選自由下列所組成之群組：聚山梨醇酯20(TWEENTM20)、聚山梨 醇酯40(TWEENTM40)、聚山梨醇酯60(TWEENTM60)、聚山梨醇酯65(TWEENTM65)、聚山梨醇酯80(TWEENTM80)、聚山梨醇酯85(TWEENTM85)、TRITONTM N-101、TRITONTM X-100、辛苯醇醚40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸酯、聚氧乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG-15、Solutol H 15)、聚氧乙烯-35-蓖麻油酸酯(CREMOPHOR® EL)、大豆卵磷脂和泊洛沙姆(poloxamer)。在一個特別的實施態樣中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。在一些該等實施態樣中，在調配物中的聚山梨醇酯80之最終濃度為至少0.0001%至10%聚山梨醇酯80(重量對重量，w/w)。在一些該等實施態樣中，在調配物中的聚山梨醇酯80之最終濃度為至少0.001%至1%聚山梨醇酯80(重量對重量，w/w)。在一些該等實施態樣中，在調配物中的聚山梨醇酯80之最終濃度為至少0.01%至1%聚山梨醇酯80(重量對重量，w/w)。在其他的實施態樣中，在調配物中的聚山梨醇酯80之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%聚山梨醇酯80(w/w)。在另一實施態樣中，在調配物中的聚山梨醇酯80之最終濃度為1%聚山梨醇酯80(w/w)。
在特定的實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物具有5.5至7.5之pH，更佳為5.6至7.0之pH，甚至更佳為5.8至6.0之pH。
在一個實施態樣中，本發明提供由本文所揭示之致免 疫性組成物中之任一者填充之容器。在一個實施態樣中，容器係選自由下列所組成之群組：小瓶、注射器、燒瓶、發酵罐、生物反應器、袋、罐、安瓶、卡管及可棄式筆。在特定的實施態樣中，容器經矽化。
在一實施態樣中，本發明的容器係由玻璃、金屬(例如鋼、不銹鋼、鋁等等)及/或聚合物(例如熱塑性體、彈性物、熱塑性彈性物)製成。在一實施態樣中，本發明的容器係由玻璃製成。
在一個實施態樣中，本發明提供由本文所揭示之致免疫性組成物中之任一者填充之注射器。在特定的實施態樣中，注射器經矽化及/或由玻璃製成。
用於注射的本文所揭示之致免疫性組成物的典型劑量具有0.1mL至2mL，更佳為0.2mL至1mL，甚至更佳為約0.5mL體積。
因此，如上文所定義之容器或注射器係由0.1mL至2mL，更佳為0.2mL至1mL，甚至更佳為約0.5mL體積的本文所定義之致免疫性組成物填充。
在一實施態樣中，本發明的致免疫性組成物(諸如以上文章節2中所定義)係如上文所揭示之方式調配。
在一實施態樣中，可與本發明的致免疫性組成物組合使用的致免疫性組成物(諸如以上文章節3中所定義)係如上文所揭示之方式調配。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)係如 上文所揭示之方式調配。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)經調配成液體形式。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中兩種致免疫性組成物(套組的(a)和(b)部分)經調配成凍乾形式。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中第一致免疫性組成物(套組的(a)部分)係呈液體形式及第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)係呈凍乾形式。
本發明的態樣提供如上文章節4中所定義之套組，其中第一致免疫性組成物(套組的(a)部分)係呈凍乾形式及第二致免疫性組成物(套組的(b)部分)係呈液體形式。
9.本發明的致免疫性組成物及套組之用途
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物及套組係用作為藥品。
本文所述之致免疫性組成物及套組可於各種治療性或預防性方法中用於預防、治療或改善個體的細菌感染、疾病或病況。特定言之，本文所述之致免疫性組成物及套組可用於預防、治療或改善個體的肺炎鏈球菌感染、疾病或病況。
因此，在一個態樣中，本發明提供預防、治療或改善個體的與肺炎鏈球菌相關的感染、疾病或病況之方法，其包含對個體投予免疫有效量的本文所述之致免疫性組成物。
在一些此等實施態樣中，感染、疾病或病況係選自由下列所組成之群組：肺炎、鼻竇炎、中耳炎、急性中耳炎、腦膜炎、菌血症、敗血症、胸膜積膿、結膜炎、骨髓炎、敗血性關節炎、心內膜炎、腹膜炎、心包炎、乳突炎、蜂巢性組織炎、軟組織感染和腦膿瘍。
在一實施態樣中，本發明提供誘導個體對肺炎鏈球菌的免疫反應之方法，其包含對個體投予免疫有效量之本發明的致免疫性組成物。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物及套組係用作為疫苗。在此等實施態樣中，本文所述之致免疫性組成物及套組可用於預防個體的肺炎鏈球菌感染。因此，在一個態樣中，本發明提供預防個體受到肺炎鏈球菌感染之方法，其包含對個體投予免疫有效量之本發明的致免疫性組成物。在一些此等實施態樣中，感染係選自由下列所組成之群組：肺炎、鼻竇炎、中耳炎、急性中耳炎、腦膜炎、菌血症、敗血症、胸膜積膿、結膜炎、骨髓炎、敗血性關節炎、心內膜炎、腹膜炎、心包炎、乳突炎、蜂巢性組織炎、軟組織感染和腦膿瘍。在一個態樣中，欲經免疫接種之個體為哺乳動物，諸如人類、貓、綿羊、豬、馬、牛或狗。
在一個態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物及套組係用於預防、治療或改善個體的與肺炎鏈球菌相關的感染、疾病或病況之方法。在一些此等實施態樣中，感染、疾病或病況係選自由下列所組成之群組：肺炎、鼻竇炎、中耳炎、急性中耳炎、腦膜炎、菌血症、敗血症、胸膜積膿、結膜炎、骨髓炎、敗血性關節炎、心內膜炎、腹膜炎、心包炎、乳突炎、蜂巢性組織炎、軟組織感染和腦膿瘍。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物及套組係用作為疫苗。在此等實施態樣中，本文所述之致免疫性組成物及套組可用於預防個體的肺炎鏈球菌感染。因此，在一個態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物及套組預防個體受到肺炎鏈球菌感染之方法。在一些此等實施態樣中，感染係選自由下列所組成之群組：肺炎、鼻竇炎、中耳炎、急性中耳炎、腦膜炎、菌血症、敗血症、胸膜積膿、結膜炎、骨髓炎、敗血性關節炎、心內膜炎、腹膜炎、心包炎、乳突炎、蜂巢性組織炎、軟組織感染和腦膿瘍。在一個態樣中，欲經免疫接種之個體為哺乳動物，諸如人類、貓、綿羊、豬、馬、牛或狗。
本發明的致免疫性組成物及套組可用於預防或治療易受肺炎球菌感染之人類，其係藉助於經由全身或黏膜途徑來投予致免疫性組成物。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物係藉由肌內、腹膜內、皮內或皮下途徑來投予。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物係 藉由肌內、腹膜內、皮內或皮下注射來投予。在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物係藉由肌內或皮下注射來投予。
在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物投予個體時，其能夠誘導形成能夠與肺炎鏈球菌血清型15B、15A及/或15C結合之抗體，如以標準的ELISA檢定法所測量。在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物投予個體時，其能夠誘導形成能夠與肺炎鏈球菌血清型15B和15C結合之抗體，如以標準的ELISA檢定法所測量。
在ELISA(酶聯免疫吸附檢定)方法中，將來自免疫接種個體之血清的抗體與已吸附至固體撐體之多糖培育。經結合之抗體係使用經酶共軛之二級檢測抗體檢測。
在一實施態樣中，該標準的ELISA檢定法為標準化(WHO)ELISA檢定法，如由WHO在‘Training manual for Enzyme linked immunosorbent assay for the quantitation of Streptococcus pneumoniae serotype specific IgG(Pn PS ELISA).’(在http：//www.vaccine.uab.edu/ELISA%20protocol.pdf取得；最後於2014年3月31日取得)中所定義。
ELISA係測量存在於人類血清中的類型特異性IgG抗肺炎鏈球菌莢膜多糖(PS)抗體。在將人類血清稀釋液添 加至經類型特異性莢膜PS塗佈之微量滴定盤時，對莢膜PS具有特異性的抗體與微量滴定盤結合。與盤結合之抗體係使用經鹼性磷酸酶標記之山羊抗人類IgG抗體，接著以磷酸對-硝基苯酯受質檢測。著色之最終產物的光學密度係與存在於血清中的抗莢膜PS抗體之量成正比。
在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物能夠激發人類中的IgG抗體，該抗體能夠以至少0.05、0.1、0.2、0.3、0.35、0.4或0.5μg/ml之濃度結合肺炎鏈球菌血清型15B多糖，如以ELISA檢定法所測定。
在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物能夠激發人類中的IgG抗體，該抗體能夠以至少0.05、0.1、0.2、0.3、0.35、0.4或0.5μg/ml之濃度結合肺炎鏈球菌血清型15C多糖，如以ELISA檢定法所測定。
在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物能夠激發人類中的IgG抗體，該抗體能夠以至少0.05、0.1、0.2、0.3、0.35、0.4或0.5μg/ml之濃度結合肺炎鏈球菌血清型15B和15C多糖，如以ELISA檢定法所測定。
在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血 清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物投予個體時，其能夠誘導形成能夠在如本文所揭示之調理吞噬檢定法(諸如實施例12之OPA檢定法)中殺死肺炎鏈球菌血清型15B之抗體。
在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物在如本文所揭示之OPA檢定法(諸如實施例12之OPA檢定法)中測試時，其具有比以未共軛之天然肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖所獲得的OPA效價更大的OPA效價。
在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物投予個體時，其能夠誘導形成能夠在如本文所揭示之調理吞噬檢定法(諸如實施例12之OPA檢定法)中殺死肺炎鏈球菌血清型15C之抗體。
在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物在如本文所揭示之OPA檢定法(諸如實施例12之OPA檢定法)中測試時，其具有比以未共軛之天然肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖所獲得的OPA效價更大的OPA效價。
肺炎球菌調理吞噬檢定法(OPA)被認為是評估肺炎球菌疫苗的有效性之重要的替代方式，該檢定法係測量在功能性抗體及補體存在下以吞噬效應子細胞殺死肺炎鏈球 菌細胞。
調理吞噬檢定法(OPA)可藉由以下方式進行：培育肺炎鏈球菌細胞、欲測試之熱失活人類血清、分化之HL-60細胞(吞噬細胞)與外源性補體來源(例如幼兔補體)的混合物。調理吞噬係在培育期間進行，且經抗體及補體塗佈之細菌細胞係在調理吞噬時殺死。自調理吞噬逃脫之存活細菌的菌落形成單位(cfu)係藉由塗覆檢定混合物來測定。OPA效價經定義為造成細菌計數比沒有試驗血清之對照槽孔減少50%之稀釋度倒數。OPA效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
1：8或更高的終點效價被認為是該等殺死型OPA中的陽性結果。
在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物能夠在至少50%之個體中激發對抗肺炎鏈球菌血清型15B的至少1：8之效價，如以調理吞噬殺死檢定法(OPA)所測定。在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物能夠在至少60%、70%、80%、90%或至少93%之個體中激發對抗肺炎鏈球菌血清型15B的至少1：8之效價，如以調理吞噬殺死檢定法(OPA)所測定。
在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之 本發明的致免疫性組成物能夠在至少50%之個體中激發對抗肺炎鏈球菌血清型15C的至少1：8之效價，如以調理吞噬殺死檢定法(OPA)所測定。在一實施態樣中，包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物能夠在至少60%、70%、80%、90%或至少93%之個體中激發對抗肺炎鏈球菌血清型15C的至少1：8之效價，如以調理吞噬殺死檢定法(OPA)所測定。
在另外的態樣中，本發明提供治療或預防個體的與肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C相關的肺炎鏈球菌感染、疾病或病況之方法，該方法包含投予治療或預防有效量的包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物中之任一者的步驟。在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物投予個體，其誘導形成能夠與肺炎鏈球菌血清型15B、15A及/或15C結合之抗體。在一實施態樣中，當包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物投予個體時，其誘導形成能夠在如本文所揭示之調理吞噬檢定法(諸如實施例12之OPA檢定法)中殺死肺炎鏈球菌血清型15B、15C及/或15A之抗體。
本發明的一個實施態樣提供個體抵抗肺炎鏈球菌血清 型15C感染之方法或預防肺炎鏈球菌血清型15C感染之方法或減輕至少一種與肺炎鏈球菌血清型15C所引起之感染相關的症狀之嚴重性或延遲發作之方法，該等方法包含對個體投予致免疫量的包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物中之至少一種。本發明的一個實施態樣提供治療或預防個體的與肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C，更佳15B)相關的肺炎鏈球菌感染、疾病或病況之方法，該方法包含對個體投予治療或預防有效量的包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物中之任一者的步驟。另一實施態樣提供治療或預防個體的與肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C，更佳15B)相關的肺炎鏈球菌感染、疾病或病況之方法，該方法包含自包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物產生多株或單株抗體製劑，且使用該抗體製劑賦予個體被動免疫。
在一個實施態樣中，本發明關於包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物中之任一者用於製造具有下列作用的藥品之用途：使個體抵抗肺炎鏈球菌感染，及/或預防肺炎鏈球菌感染，及/或減輕至少一種與肺 炎鏈球菌所引起之感染相關的症狀之嚴重性或延遲發作，及/或使個體抵抗肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C，更佳15B)感染，及/或預防肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C、更佳15B)感染，及/或減輕至少一種與肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C，更佳15B)所引起之感染相關的症狀之嚴重性或延遲發作。
在一個實施態樣中，本發明關於包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物(諸如以上章節1.3.4之糖共軛物)之本發明的致免疫性組成物中之任一者之用途：使個體抵抗肺炎鏈球菌感染，及/或預防肺炎鏈球菌感染，及/或減輕至少一種與肺炎鏈球菌所引起之感染相關的症狀之嚴重性或延遲發作，及/或使個體抵抗肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C，更佳15B)感染，及/或預防肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C、更佳15B)感染，及/或減輕至少一種與肺炎鏈球菌血清型15A、15B及/或15C(較佳15B及/或15C，更佳15B)所引起之感染相關的症狀之嚴重性或延遲發作。
10.欲以本發明的致免疫性組成物及套組治療之個體
如本文所揭示，本文所述之致免疫性組成物及套組可用於預防、治療或改善個體的細菌感染、疾病或病況之各種治療性或預防性方法。
在較佳的實施態樣中，該個體為人類。在最佳的實施態樣中，該個體為新生兒(亦即三個月以下)、嬰兒(亦即為從3個月至一歲)或學步幼兒(亦即從一歲至四歲)。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物及套組係用作為疫苗。
在此等實施態樣中，欲免疫接種之個體的年齡可小於1歲。例如，欲免疫接種之個體的年齡可為約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月或約12個月。在一實施態樣中，欲免疫接種之個體的年齡為約2個月、約4個月或約6個月。在另一實施態樣中，欲免疫接種之個體的年齡小於2歲。例如，欲免疫接種之個體的年齡可為約12個月至約15個月。在一些例子中，需要少至一個劑量之根據本發明的致免疫性組成物，但是在一些情況下，可給出第二、第三或第四劑量(參見下文章節11)。
在本發明的實施態樣中，欲免疫接種之個體為50歲或以上的成年人，更佳為55歲或以上的成年人。在一實施態樣中，欲免疫接種的個體為65歲或以上、70歲或以上、75歲或以上或80歲或以上的成年人。
在一實施態樣中，欲免疫接種之個體為免疫受損的個體，特別為人類。免疫受損的個體通常經定義為顯出經減弱或降低之發動正常體液或細胞防禦感染物攻擊之能力。
在本發明的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體患有損害免疫系統且造成不足以抵抗或治療肺炎球菌性疾病的抗體反應之疾病或病況。
在一實施態樣中，該疾病為原發性免疫缺陷病症。該原發性免疫缺陷病症較佳地選自由下列所組成之群組：組合的T細胞和B細胞免疫缺陷、抗體缺陷、經明確定義之症候群、免疫失調疾病、吞噬細胞病症、固有免疫缺陷、自體發炎性病症及補體缺陷。在一實施態樣中，該原發性免疫缺陷病症係選自WO 2010/125480的第24頁第11行至第25頁第19行中所揭示者。
在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體患有選自由以下組成之群組的疾病：HIV感染、後天免疫缺乏症候群(AIDS)、癌症、慢性心臟或肺病症、充血性心臟衰竭、糖尿病、慢性肝疾病、酒精中毒、肝硬化、脊髓液露、心肌病、慢性支氣管炎、肺氣腫、慢性阻塞性肺病(COPD)、脾功能障礙(例如鐮形血球疾病)、脾功能缺乏(無脾症)、惡性血液病、白血病、多發性骨髓瘤、霍奇金(Hodgkin)氏病、淋巴瘤、腎衰竭、腎病症候群及氣喘病。
在本發明的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體患有營養失調。
在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體正服用降低對感染的身體抗性之藥物或治療。在一實施態樣中，該藥物係選自WO 2010/125480的第26頁第 33行至第26頁第4行中所揭示者。
在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體為吸煙者。
在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體具有少於5 x 109個細胞/公升，或少於4 x 109個細胞/升，或少於3 x 109個細胞/升，或少於2 x 109個細胞/公升，或少於1 x 109個細胞/公升，或少於0.5 x 109個細胞/公升，或少於0.3 x 109個細胞/公升，或少於0.1 x 109個細胞/公升之白血細胞計數(白血球計數)。
白血細胞計數(白血球計數)：血液中的白血細胞數(WBC)。WBC通常經測量作為CBC(全血計數)的部分。白血細胞為血液中的抗感染細胞且不同於稱為紅血球的紅(攜載氧)血細胞。有不同類型的白血細胞，包括嗜中性球(多形核白血球；PMN)、帶狀核細胞(稍不成熟之嗜中性球)、T型淋巴球(T細胞)、B型淋巴球(B細胞)、單核球、嗜伊紅血球和嗜鹼性球。白血細胞的所有類型係以白血細胞計數來反映。白血細胞計數的正常範圍通常介於4,300與10,800個細胞/立方毫米血液之間。此亦可稱為白血球計數且可以國際單位表示為4.3-10.8 x 109個細胞/公升。
在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體患有嗜中性球減少症。在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體具有少於2 x 109個細胞/公升。或少於1 x 109個細胞/公升。或少於0.5 x 109 個細胞/公升。或少於0.1 x 109個細胞/公升。或少於0.05 x 109個細胞/公升之嗜中性球計數。
低白血細胞計數或〝嗜中性球減少症〞為以循環血液中的嗜中性球量異常低之病況為特徵。嗜中性球為有助於預防及抵抗感染之特定種類的白血細胞。癌症患者經歷嗜中性球減少症的最常見原因為化學療法的副作用。經化學療法誘導之嗜中性球減少症增加患者感染的風險且破壞癌症治療。
在本發明特別的實施態樣中，欲免疫接種之免疫受損的個體具有少於500/mm3之CD4+細胞計數，或少於300/mm3之CD4+細胞計數，或少於200/mm3之CD4+細胞計數，少於100/mm3之CD4+細胞計數，少於75/mm3之CD4+細胞計數，或少於50/mm3之CD4+細胞計數。
CD4細胞試驗通常係以mm3計之細胞數目報導。正常的CD4計數係介於500與1,600之間，且CD8計數係介於375與1,100之間。CD4計數在患有HIV的個人中顯著下降。
在本發明的實施態樣中，本文所揭示之免疫受損的個體中之任一者為男人或女人。
11.免疫時程
在一些例子中，需要少至一個劑量之根據本發明的致免疫性組成物，但是在一些情況下(諸如較大免疫缺陷或免疫不成熟的病況)下，可給出第二、第三或第四劑量。 在初始免疫接種後，個體可接受一或數個適當間隔之加強免疫。
在一實施態樣中，根據本發明的致免疫性組成物之免疫接種的時程為單一劑量。在特別的實施態樣中，該單一劑量時程係用於至少2歲健康的人。
在一實施態樣中，根據本發明的致免疫性組成物之免疫接種的時程為多劑量時程。多劑量時程常用於下列病況：諸如免疫缺陷(諸如老年人或免疫受損的人類個體)或免疫不成熟性(諸如人類新生兒(亦即三個月以下)、嬰兒(亦即從三個月至一歲)或學步幼兒(亦即從一歲至四歲))。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月的2個劑量或相隔約2個月的2個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的3個劑量系列所組成。在 特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的4個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的4個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的4個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3或4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量 系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成，或其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在一歲內至少一個劑量(例如1、2或3個劑量)，接著至少一個在學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的2或3個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該多劑量時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的3個劑量系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由以2個月齡開始的相隔約2個月間隔的2個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在2、4、6及12至15個月齡的4個疫苗劑量系列所組成。
在一實施態樣中，初次劑量係在第0天給出及一或多個加強劑量係以在劑量間範圍從約2至約24週的間隔給出，較佳為4至8週的給藥間隔。
在一實施態樣中，初次劑量係在第0天給出及加強劑量係在約3個月後給出。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的5個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的5個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的5個劑量系列所組成月。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的5個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的5個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約2個月間隔的6、7或8個劑量系列所組成。
本發明的態樣關於同時、並行、相伴或依序投予本發明的任何致免疫性組成物與第二致免疫性組成物。本發明的態樣關於同時、並行、相伴或依序投予的本文所揭示之任何套組。
以〝同時投予〞意指治療性有效劑量的第一及第二致 免疫性組成物以單一單位劑型投予。
以〝並行投予〞意指治療性有效劑量的第一及第二致免疫性組成物通過相同的進入位置，但是以單獨的單位劑型彼此在短期間內投予。並行投予基本上係在約相同的時間，但是以單獨的劑型通過相同的進入位置投予。第一及第二致免疫性組成物的並行投予常發生在相同的醫師門診期間。
以〝相伴投予〞意指治療性有效劑量的第一及第二致免疫性組成物以單獨的單位劑型彼此在短期間內於不同的解剖學位置上投予。相伴投予原則上在約相同的時間，但是以單獨的劑型及在不同的解剖學位置上投予兩種致免疫性組成物。第一及第二致免疫性組成物的相伴投予常發生在相同的醫師門診期間。
以〝依序投予〞意指單獨投予治療性有效劑量的第一或第二致免疫性組成物，接著在至少約1個月間隔後投予治療性有效劑量之其餘的致免疫性組成物。例如，在一個實施態樣中，第一致免疫性組成物係以單一劑型投予及接著第二致免疫性組成物係在至少約1個月間隔後以單獨的單一劑型投予。在替代的實施態樣中，第二致免疫性組成物係以單一劑型投予及接著第一致免疫性組成物係在至少約1個月間隔後以單獨的單一劑型投予。依序投予第一及第二致免疫性組成物常發生在不同的醫師門診時間。
在本發明的態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與第二致免疫性 組成物係同時、並行、相伴或依序投予。在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
因此，本發明的態樣關於與第二致免疫性組成物同時、並行、相伴或依序使用之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)。在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一些例子中，需要少至一個劑量的致免疫性組成物中之任一者，但是在一些情況下，可給出第二、第三或第四劑量的一種或每一種致免疫性組成物。在初始免疫接種之後，個體可接受一或數個適當間隔之加強免疫。
在一實施態樣中，本發明關於與第二致免疫性組成物同時投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)。在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，該同時投予之免疫接種的時程為單一劑量。在特別的實施態樣中，該單一劑量時程係用於至少2歲健康的人。
在一實施態樣中，該同時投予之免疫接種的時程為多劑量時程。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月間隔的2個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的3個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月間隔的3個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的4個 劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月間隔的4個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的4個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3或4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成，或其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在一歲內至少一個劑量(例如1、2或3個劑量)，接著至少一個在學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間 有28至56天)的2或3個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該多劑量時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的3個劑量系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在另一實施態樣中，該多劑量時程係由以2個月齡開始的相隔約2個月間隔的2個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在2、4、6及12至15個月齡投予的4個疫苗劑量系列所組成。
在一實施態樣中，初次劑量係在第0天給出及一或多個加強劑量係以在劑量間範圍從約2至約24週的間隔給出，較佳為4至8週的給藥間隔。
在一實施態樣中，初次劑量係在第0天給出及加強劑量係在約3個月後給出。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係 由相隔約1個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，本發明關於與第二致免疫性組成物相伴投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)。在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，該相伴投予之免疫接種的時程為單一劑量(就定義免疫時程的目的而言，第一及第二致免疫性組成物的投予被認為是單一劑量，雖然呈單獨的單位劑型)。在特別的實施態樣中，該單一劑量時程係用於至少2歲健康的人。
在一實施態樣中，該相伴投予之免疫接種的時程為多劑量時程(就定義免疫時程的目的而言，第一及第二致免疫性組成物的投予被認為是單一劑量，雖然呈單獨的單位劑型)。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程 係由相隔約1個月間隔的2個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的3個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的4個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的4個劑量系列所組 成。
在另一實施態樣中，該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3或4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在一歲內至少一個劑量(例如1、2或3個劑量)，接著至少一個在學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的2或3個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的2或3個劑量系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組 成。在另一實施態樣中，該時程係由其中以2個月齡開始的各劑量相隔約2個月間隔的2個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在2、4、6及12至15個月齡投予的4個疫苗劑量系列所組成。
在一實施態樣中，初次劑量係在第0天給出及一或多個加強劑量係以在劑量間範圍從約2至約24週的間隔給出，較佳為4至8週的給藥間隔。
在一實施態樣中，初次劑量係在第0天給出及加強劑量係在約3個月後給出。
在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的5、6、7或8個劑量系列所組成。
在另一實施態樣中，本發明關於與第二致免疫性組成物並行投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上 文章節2的致免疫性組成物)。在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，該並行投予之免疫接種的時程為單一劑量(就定義免疫時程的目的而言，第一及第二致免疫性組成物的投予被認為是單一劑量，雖然呈單獨的單位劑型)。在特別的實施態樣中，該單一劑量時程係用於至少2歲健康的人。
在一實施態樣中，該並行投予之免疫接種的時程為多劑量時程，特別為上文用於相伴投予所揭示之多時程中之任一者。
在一實施態樣中，本發明關於與第二致免疫性組成物依序投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)。在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，先投予根據本發明的第一致免疫性組成物及接著投予第二致免疫性組成物。在另一實施態樣中，先投予第二致免疫性組成物及接著投予根據本發明的第一致免疫性組成物。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由2、3、4、5、6、7或8個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由2、3或4個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由2個劑量系列所組成。在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的2個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由一系列相隔約1個月至約6個月間隔的2個劑量所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由一系列相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的2個劑量所組成。在特別的實施態樣中，該多劑量時程係由相隔約1個月間隔的2個劑量系列所組成，或由相隔約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
在該2個劑量時程的實施態樣中，先投予根據本發明的第一致免疫性組成物及接著投予第二致免疫性組成物。在另一實施態樣中，先投予第二致免疫性組成物及接著投予根據本發明的第一致免疫性組成物。
在該2個劑量時程的實施態樣中，第一和第二劑量係在一歲之內投予。在該2個劑量時程的實施態樣中，第一劑量係在一歲之內投予及第二劑量為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該學步幼兒期劑量係在年齡12至18個月時投予。在一實施態樣中，該學步幼兒期劑量係年齡12至15個月時投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由 其中各劑量相隔約1至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的3個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約2個月間隔的3個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
在該3個劑量時程的實施態樣中，第一和第二劑量係在一歲之內投予及第三劑量為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，第一和第二劑量係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)，及第三劑量為在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量。在一實施態樣中，第一和第二劑量係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)，及第三劑量為在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量。
在該3個劑量時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為前兩個劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
在該3個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性 組成物係作為前兩個劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
在該3個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
在該3個劑量時程的在又另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
在該3個劑量時程的又另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予。
在該3個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由4個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約12個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的 實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的4個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約2個月間隔的4個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的4個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的4個劑量系列所組成。
在該4個劑量時程的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3或4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第三劑量及在第三劑量後約1個月至約2個月的第四劑量所組成。
在該4個劑量時程的實施態樣中，第一和第二劑量係在一歲內投予及第三和第四劑量為學步幼兒期劑量。
在該4個劑量時程的實施態樣中，第一、第二和第三劑量係在一歲內投予及第四劑量為學步幼兒期劑量。
在一實施態樣中，該4個劑量時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的3個劑量系列，接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的3個劑量系列，接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在一實施態樣中，多劑量時程係由在2、4、6及12至15個月齡的4個疫苗劑量系列所組成。
在該4個劑量時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為前三個劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為前三個劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及根據本發明的第一致 免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第二、第三和第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第二、第三和第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作 為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予。根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在該4個劑量時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由5個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約12個月間隔的5個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的5個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相 隔約1至約6個月間隔的5個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的5個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約2個月間隔的5個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的5個劑量系列，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的5個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該5個劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月至約3個月間隔的4個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第五劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的4個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第五劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的4個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第五劑量所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的4個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第五劑量所組成。
在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量及在第四劑量後約1個月至約2個月的第五劑量所組成。
在該5個劑量時程的實施態樣中，第一、第二和第三劑量係在一歲內投予及第四和第五劑量為學步幼兒期劑 量。
在該5個劑量時程的實施態樣中，第一、第二、第三和第四劑量係在一歲內投予及第五劑量為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該5個劑量時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的4個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的4個劑量系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在該5個劑量時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2中的致免疫性組成物，在下表中標示為1st IC)及第二致免疫性組成物(諸如上文章節2中所揭示者，在下表中標示為2nd IC)係以下列順序投予：
Figure 109137693-A0101-12-0231-22
上表提供不同劑量的第一及第二致免疫性組成物(分別標示為1st IC及2nd IC)之投予順序，例如時程編號1經解讀為：在該5個劑量時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一、第二、第三和第四劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第五劑量投予。
在較佳的實施態樣中，第一及第二致免疫性組成物之投予順序係根據時程1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、16、17、18、19、20或21。
在一實施態樣中，該依序劑量之免疫接種的時程係由6個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約12個月間隔的6個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的6個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約6個月間隔的6個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的6個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約2個月間隔的6個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的6個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的6個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該6個劑量時程係由其中各劑量相 隔約1個月至約2個月間隔的5個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第六劑量所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的5個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第六劑量，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的5個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第六劑量所組成。
在該6個劑量時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四和第五劑量係在一歲內投予及第六劑量為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該6個劑量時程係由其中在第2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的5個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在第2個月齡開始的各劑量相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的5個劑量系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在該6個劑量時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中所揭示者)係根據以5個劑量時程所提供的30個時程中之任一者(參見上表，時程1至30)，接著以第六劑量之順序投予。在一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第六劑量投予。在另一實施態樣中，第二致免疫性組成物 係作為第六劑量投予。
在一實施態樣中，該依序劑量之免疫接種的時程係由7個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約12個月間隔的7個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的7個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約6個月間隔的7個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的7個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約2個月間隔的7個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的7個劑量系列所組成，或由其中各劑量相隔約2個月間隔的7個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該7個劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的6個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第七劑量所組成。
在該7個劑量時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四、第五和第六個劑量係在一歲內投予及第七劑量為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該7個劑量時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月間隔(例如在劑量間有28至40天)的6個劑量系列及接著在12至 18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月間隔(例如在劑量間有28至40天)的6個劑量系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在該7個劑量時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中所揭示者)係根據以6個劑量時程所提供的時程中之任一者(參見上表)，接著以第七劑量投予。在一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第七劑量投予。在另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第七劑量投予。
在一實施態樣中，該依序劑量之免疫接種的時程係由8個劑量系列所組成。
在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約12個月間隔的8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約6個月間隔的8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的8個劑量系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1至約2個月間隔的8個劑量系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的8個劑量系列所組成， 或由其中各劑量相隔約2個月間隔的8個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該8個劑量時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的7個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第八劑量所組成。
在該8個劑量時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七個劑量係在一歲內投予及第八個劑量為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該8個劑量時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月間隔(例如在劑量間有28至40天)的7個劑量系列，及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各劑量相隔約1個月間隔(例如在劑量間有28至40天)的7個劑量系列，及接著在12至15個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
在該8個劑量時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中所揭示者)係根據以7個劑量時程所提供的時程中之任一者(參見上表)，接著以第八劑量投予。在一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第八劑量投予。在另一實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第八劑量投予。
在一實施態樣中，本發明關於下列的依序投予：
(a)根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節 2的致免疫性組成物)，及
(b)相伴投予根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與第二致免疫性組成物。
在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由2次投予系列所組成。在一實施態樣中，免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的2次投予系列所組成。在一實施態樣中，免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的2次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的2次投予系列所組成。
在該時程的實施態樣中，先投予根據本發明的第一致免疫性組成物及接著相伴投予根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物。在另一實施態樣中，先相伴投予根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物及接著投予根據本發明的第一致免疫性組成物。
在該2次投予時程的實施態樣中，第一和第二次投予 係在一歲之內投予。在該2次投予時程的實施態樣中，第一次投予係在一歲之內投予及第二次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該學步幼兒期投予係在12至18個月齡投予。在一實施態樣中，該學步幼兒期投予係在12至15個月齡投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由3次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的3次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的3次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的3次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的3次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的3次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的3次投予系列所組成。
在該3次投予時程的實施態樣中，第一和第二次投予係在一歲內投予及第三次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，第一和第二次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第三次投予為在12至18個月齡的學步幼兒期投予。在一實施態樣中，第一和第二次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第 三次投予為在12至15個月齡的學步幼兒期投予。
在該3次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一和第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的又另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的又另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二和第三次投予時投予。
在該3次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第二和第三次投予時投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由4次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的4次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的4次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的4次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的4次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的4次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的4次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的4次投予系列所組成。
在該4次投予時程的實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月至約4個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1、2、3或4個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月至約2 個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成，或由其中各投予相隔約2個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。
在該4次投予時程的實施態樣中，第一、第二和第三次投予係在一歲內投予及第四次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該4次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的3次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的3次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在一實施態樣中，該4次投予時程係由在2、4、6和12至15個月齡的投予系列所組成。
在該4次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一、第二和第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係 在第一、第二和第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一和第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一和第二次時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一和第二次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投 予係在第二、第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第二、第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第二次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物在第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二和第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第二和第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由5次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的5次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的5次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的5次投 予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的5次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的5次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的5次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的5次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約3個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程該時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成，或由其中各投予相隔約2個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。
在該5次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三和第四投予係在一歲內投予及第五次投予為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該5次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的4次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個 月間隔(例如在劑量間有28至56天)的4次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該5次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(在下表中標示為1st IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物之相伴投予((在下表中標示為1st IC/2nd)係以下列順序投予：
Figure 109137693-A0101-12-0247-23
根據本發明的第一致免疫性組成物(在下表中標示為1st IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd IC) 之投予順序，例如時程編號1經解讀為：在該5次投予時程的實施態樣中，相伴投予之根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物係作為第一、第二、第三和第四劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第五劑量投予。
在較佳的實施態樣中，根據本發明的投予順序係根據時程1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、22或23。
在一實施態樣中，該依序劑量之免疫接種的時程係由6個劑量系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的6次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的6次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的6次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的6次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的6次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的6次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的6次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該6次投予時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成。在 另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成，或由其中各投予相隔約2個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成。
在該6次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四和第五次投予係在一歲內投予及第六次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該6次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的5次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的5次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該6次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係根據以5個投予時程所提供的30個時程中之任一者(參見上表，時程1至30)，接著以第六次投予之順序投予。在一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第六次投予時投予。在另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第六次投予時投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由 7次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的7次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的7次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的7次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的7次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的7次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的7次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的7次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該7次投予時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的6次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第七次投予所組成。
在該7次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四、第五和第六次投予係在一歲內投予及第七次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該7次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的6次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的6次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該7次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係根據以6次投予時程所提供的時程中之任一者(參見上文)，接著以第七次投予之順序投予。在一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係在第七次投予時投予。在另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係在第七次投予時投予。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由8次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的8次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的8次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的8次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的8次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的8次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的8次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的8次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該8次投予時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的7次投予系列，接著在第一次投予後約 10個月至約13個月的第8次投予所組成。
在該8次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七次投予係在一歲內投予及地八次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該8次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的7次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的7次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該8次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)及根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係根據以7次投予時程所提供的時程中之任一者(參見上文)，接著以第八劑量之順序投予。在一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物係以第八劑量投予。在另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係以第八劑量投予。
在一實施態樣中，將上文所揭示之投予時程中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，本發明關於依序投予：
(a)第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)，及
(b)相伴投予根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物。
在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，投予時程為上文以依序投予根據本發明的第一致免疫性組成物及相伴投予根據本發明的第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物所揭示的時程中之任一者(第152頁底至第164頁)，其中(a)的該第二致免疫性組成物之投予替換在該時程中(a)的第一致免疫性組成物之投予。
在一實施態樣中，將上文所揭示之投予時程中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
因此，在一實施態樣中，本發明關於依序投予：
(a)第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)，及
(b)相伴投予根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物。
在一實施態樣中，該第二致免疫性組成物為上文章節3中所揭示之致免疫性組成物中之任一者。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由2次投予系列所組成。在一實施態樣中，免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2次投予系列所組 成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的2次投予系列所組成。在一實施態樣中，免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的2次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的2次投予系列所組成。
在該時程的實施態樣中，先投予第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)及接著投予相伴投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物。在另一實施態樣中，先投予相伴投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物，接著投予第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)。
在該2次投予時程的實施態樣中，第一和第二次投予係在一歲之內投予。在該2次投予時程的實施態樣中，第一次投予係在一歲之內投予及第二次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該學步幼兒期投予係在12至18個月齡投予。在一實施態樣中，該學步幼兒期投予係在12至15個月齡投予。
在一實施態樣中，將上文所揭示之2次投予時程中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由3次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的3次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的3次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的3次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的3次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的3次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的3次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中前兩次投予相隔約1個月至約2個月間隔，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第三次投予的3次投予系列所組成。
在該3次投予時程的實施態樣中，第一和第二次投予係在一歲內投予及第三次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，第一和第二次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第三次投予為在12至18個月齡的學步幼兒期投予。在一實施態樣中，第一和第二次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第 三次投予為在12至15個月齡的學步幼兒期投予。
在該時程的實施態樣中，先投予第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)及接著投予相伴投予之根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物。
在該3次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一和第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一和第二次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)的相伴投予係在第二次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的又另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)的相伴投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組 成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)的相伴投予係在第三次投予時投予。
在該3次投予時程的又另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)的相伴投予係在第二和第三次投予時投予。
在該3次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)的相伴投予係在第一次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第二和第三次投予時投予。
因此，在該3次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)(在下表中標示為2nd IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd IC)係以下列順序投予：
Figure 109137693-A0101-12-0258-24
上表提供不同劑量的第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)(在下表中標示為2nd IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd IC)之投予順序，例如時程編號1經解讀為：在該3次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予係作為第三劑量投予。
在較佳的實施態樣中，投予順序係根據時程1。
在一實施態樣中，將上文所揭示之3次投予中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由4次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的4次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的4次投予系列所組成。在特別的實施態 樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的4次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的4次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的4次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的4次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的4次投予系列所組成。
在該4次投予時程的實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月至約4個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1、2、3或4個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成，或由其中各投予相隔約2個月間隔的3次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予所組成。
在該4次投予時程的實施態樣中，第一、第二和第三次投予係在一歲內投予及第四次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該4次投予時程係由其中在2個月齡開 始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的3次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的3次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在一實施態樣中，該4次投予時程係由在2、4、6和12至15個月齡的投予系列所組成。
在該4次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一、第二和第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一、第二和第三次投予時投予及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一和第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的 第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一和第二次投予時投予及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一和第二次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一和第二次投予時投予，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二、第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)在第二、第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二次投予時投予，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第二次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三次投予時投予，及第二致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一 次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第二次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第三和第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第一次投予時投予，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第二和第三次投予時投予，及第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)係在第四次投予時投予。
在該4次投予時程的另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免 疫性組成物)係在第二和第三次投予時投予，及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第四次投予時投予。
因此，在該4次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)(在下表中標示為2nd IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd)係以下列順序投予：
Figure 109137693-A0101-12-0264-25
上表提供以不同劑量的第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)(在下表中標示為2nd IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd)之投予順序，例如時程編號1經解讀為：在該3次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物係作為第一、第二和第三劑量投予及根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予係作為第四劑量投予。
在較佳的實施態樣中，投予順序係根據時程1、3或5。
在一實施態樣中，將上文所揭示之4次投予中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由5次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的5次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的5次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的5次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的5次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的5次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的5次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的5次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約3個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各劑量相隔約1個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成，或4次投予系列其中各投予相隔約2個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。
在該5次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三和第四次投予係在一歲內投予及第五次投予為學步幼兒期劑量。在一實施態樣中，該5次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的4次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的4次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該5次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)(在下表中標示為2nd IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物 的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd IC)係以下列順序投予：
Figure 109137693-A0101-12-0267-26
上表提供以不同劑量的第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)(在下表中標示為2nd IC)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予(在下表中標示為1st IC/2nd IC)之投予順序，例如時程編號1經解讀為：在該5次投予時程的實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予係作為第一、第二、第三和第四劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第五劑量投予。
在較佳的實施態樣中，投予時程係根據時程16、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、28或30。
在一實施態樣中，將上文所揭示之5次投予中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，該依序劑量之免疫接種的時程係由6次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的6次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的6次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的6次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的6次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的6次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由 相隔約1個月間隔的次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的6次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該6次投予時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成。在另一實施態樣中，該時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成，或由其中各投予相隔約2個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成。
在該6次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四和第五次投予係在一歲內投予及第六次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該6次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的5次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)的5次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該6次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係根據以5次投 予時程所提供的30個時程中之任一者(參見上表，時程1至30)，接著以第六劑量之順序投予。在一實施態樣中，第二致免疫性組成物係在第六次投予時投予。在另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第六次投予時投予。
在一實施態樣中，將上文所揭示之6次投予中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由7次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的7次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月間隔的7次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的7次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的7次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的7次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的7次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的7次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該7次投予時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的6次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第七次投予所組成。
在該7次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第 三、第四、第五和第六次投予係在一歲內投予及第七次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該7次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的6次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的6次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該7次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係根據以6次投予時程所提供的時程中之任一者(參見上文)，接著以第七次投予之順序投予。在一實施態樣中，第二致免疫性組成物係在第七次投予時投予。在另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予係在第七次投予時投予。
在一實施態樣中，將上文所揭示之7次投予中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，該依序投予之免疫接種的時程係由8次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的8次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11 或12個月間隔的8次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的8次投予系列所組成。在特別的實施態樣中，該時程係由相隔約1、2、3、4、5或6個月間隔的8次投予系列所組成。在一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的8次投予系列所組成。在另一實施態樣中，該時程係由相隔約1個月間隔的8次投予系列所組成，或由相隔約2個月間隔的8次投予系列所組成。
在一實施態樣中，該8次投予時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的7次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第八次投予所組成。
在該8次投予時程的實施態樣中，第一、第二、第三、第四、第五、第六、和第七次投予係在一歲內投予及第八次投予為學步幼兒期投予。在一實施態樣中，該8次投予時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的7次投予系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期投予所組成。在一實施態樣中，該時程係由其中在2個月齡開始的各投予相隔約1個月間隔(例如在投予間有28至40天)的7次投予系列及接著在12至15個月齡的學步幼兒期投予所組成。
在該8次投予時程的實施態樣中，第二致免疫性組成物(諸如上文章節3中的致免疫性組成物)及根據本發明的第一致免疫性組成物(諸如上文章節2的致免疫性組成物)與該第二致免疫性組成物的相伴投予係根據以7次投 予時程所提供的時程中之任一者(參見上文)，接著以第八劑量之順序投予。在一實施態樣中，第二致免疫性組成物係以第八劑量投予。在另一實施態樣中，根據本發明的第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物的相伴投予係以第八劑量投予。
在一實施態樣中，將上文所揭示之8次投予中之任一者中的相伴投予以並行投予替換。
在一實施態樣中，本文所揭示之致免疫性組成物係經肌內或皮下注射投予。
在一實施態樣中，致免疫性組成物係經大腿或手臂的肌內注射投予。在一實施態樣中，注射位置為前外側大腿肌或三角肌。
在一實施態樣中，致免疫性組成物係經大腿或手臂的皮下注射投予。在一實施態樣中，注射位置為前外側大腿肌上的脂肪組織或三角肌上的脂肪組織。
在相伴投予的例子中，第一注射可在大腿上及第二注射可在另一大腿上進行(較佳為前外側大腿肌上)。另一選擇地，第一注射可在一個手臂上及第二注射可在另一手臂上進行(較佳為三角肌上)。第一注射亦可在大腿上及第二注射可在手臂上進行或第一注射可在手臂上及第二注射可在大腿上進行。
在一態樣中，本發明關於用於上文所揭示之免疫時程中之任一者的本發明套組(諸如上文章節4的套組)。
將本發明特別的實施態樣列舉在下列編號的段落中：
1.一種致免疫性組成物，其包含至少一種選自由下列所組成之群組的糖共軛物：來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物及來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物，其中該組成物為1、2、3、4、5、6或7價肺炎球菌共軛組成物。
2.段落1之致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物。
3.段落1至2中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物。
4.段落1至3中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物。
5.段落1至4中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物。
6.段落1至5中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物。
7.段落1至6中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共 軛物。
8.段落1至7中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物。
9.段落1至8中之任一者的致免疫性組成物，其中該組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物及來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物，其中該組成物為7價肺炎球菌共軛組成物。
10.段落1至9中之任一者的致免疫性組成物，其中該糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
11.段落1至9中之任一者的致免疫性組成物，其中該糖共軛物係個別地與PD共軛。
12.段落1至9中之任一者的致免疫性組成物，其中該糖共軛物係個別地與TT共軛。
13.段落1至9中之任一者的致免疫性組成物，其中該糖共軛物係個別地與DT共軛。
14.段落1至13中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物具有介於1,000kDa與20,000kDa之間的分子量。
15.段落1至14中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物具有介於10,000kDa與16,000 kDa之間的分子量。
16.段落1至15中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型15B糖共軛物中的血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3之間。
17.段落1至16中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型15B糖共軛物中的血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.7與0.9之間。
18.段落1至17中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含與血清型15B莢膜多糖之總量相比而少於約50%之游離血清型15B莢膜多糖。
19.段落1至18中之任一者的致免疫性組成物，其中至少40%之血清型15B糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
20.段落1至19中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.1mM乙酸酯。
21.段落1至20中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。
22.段落1至21中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
23.段落1至22中之任一者的致免疫性組成物，其 中在血清型15B糖共軛物中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
24.段落1至23中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.1mM甘油。
25.段落1至24中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.5mM甘油。
26.段落1至25中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.7mM甘油。
27.段落1至26中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物之共軛程度係介於2與15之間。
28.段落1至27中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與1,500kDa之間的糖。
29.段落1至28中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
30.段落1至29中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型15B糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
31.段落1或3至30中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物具有介於400kDa與 15,000kDa之間的分子量。
32.段落1或3至31中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物具有介於1,000kDa與8,000kDa之間的分子量。
33.段落1或3至32中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型22F糖共軛物中的血清型22F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3之間。
34.段落1或3至33中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型22F糖共軛物中的血清型22F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.9與1.1之間。
35.段落1或3至34中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物包含與血清型22F莢膜多糖之總量相比而少於約50%之游離血清型22F莢膜多糖。
36.段落1或3至35中之任一者的致免疫性組成物，其中至少30%之血清型22F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
37.段落1或3至36中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物包含以每一mM血清型22F莢膜多糖計至少0.1mM乙酸酯。
38.段落1或3至37中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物包含以每一mM血清型22F莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。
39.段落1或3至38中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型22F糖共軛物中以每一mM血清型22F 莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型22F莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
40.段落1或39至中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型22F糖共軛物中以每一mM血清型22F莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型22F莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
41.段落1或3至40中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物之共軛程度係介於2與15之間。
42.段落1或3至41中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
43.段落1或3至42中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
44.段落1或3至43中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
45.段落1或4至44中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。
46.段落1或4至45中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物具有介於1,000kDa與5,000kDa之間的分子量。
47.段落1或4至46中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型33F糖共軛物中的血清型33F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間。
48.段落1或4至47中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型33F糖共軛物中的血清型33F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.4與1.7之間。
49.段落1或4至48中之任一者的致免疫性組成物，48，其中該血清型33F糖共軛物包含與血清型33F莢膜多糖之總量相比而少於約40%之游離血清型33F莢膜多糖。
50.段落1或4至49中之任一者的致免疫性組成物，其中至少35%之血清型33F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
51.段落1或4至50中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物包含以每一mM血清型33F莢膜多糖計至少0.1mM乙酸酯。
52.段落1或4至51中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物包含以每一mM血清型33F莢膜多糖計至少0.7mM乙酸酯。
53.段落1或4至52中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型33F糖共軛物中以每一mM血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
54.段落1或4至53中之任一者的致免疫性組成 物，其中在血清型33F糖共軛物中以每一mM血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
55.段落1或4至54中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物之共軛程度係介於2與20之間。
56.段落1或4至55中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
57.段落1或4至56中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物係以每2至25個糖重複單元包含至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。
58.段落1或4至57中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
59.段落1或4至58中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
60.段落1或4至59中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物係使用eTEC共軛來製備。
61.段落60之致免疫性組成物，其中該血清型33F糖共軛物係以通式(III)代表：
Figure 109137693-A0101-12-0282-27
 其中包含eTEC間隔子之原子內含在中間方塊內。
62.段落1或5至61中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。
63.段落1或5至62中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物具有介於500kDa與5,000kDa之間的分子量。
64.段落1或5至63中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型12F糖共軛物中的血清型12F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間。
65.段落1或5至64中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型12F糖共軛物中的血清型12F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.8之間。
66.段落1或5至65中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型22F糖共軛物包含與血清型12F莢膜多糖之總量相比而少於約50%之游離血清型12F莢膜多糖。
67.段落1或5至66中之任一者的致免疫性組成物，其中至少35%之血清型12F糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
68.段落1或5至67中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物之共軛程度係介於2與 20之間。
69.段落1或5至68中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
70.段落1或5至69中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物以每2至25個糖重複單元包含至少一個在載體蛋白質與多糖之間的共價鍵。
71.段落1或5至70中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
72.段落1或5至71中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
73.段落1或5至72中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型12F糖共軛物係使用TEMPO/NCS-還原胺化反應製備。
74.段落1或6至73中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。
75.段落1或6至74中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物具有介於1,000kDa與10,000kDa之間的分子量。
76.段落1或6至75中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型10A糖共軛物中的血清型10A莢膜多 糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3之間。
77.段落1或6至76中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型10A糖共軛物中的血清型10A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.2之間。
78.段落1或6至77中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物包含與血清型10A莢膜多糖之總量相比少於約50%之游離血清型10A莢膜多糖。
79.段落1或6至78中之任一者的致免疫性組成物，其中至少30%之血清型10A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
80.段落1或6至79中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物之共軛程度係介於2與15之間。
81.段落1或6至80中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
82.段落1或6至81中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
83.段落1或6至82中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型10A糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
84.段落1或7至83中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物具有介於50kDa與 20,000kDa之間的分子量。
85.段落1或7至84中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物具有介於500kDa與20,000kDa之間的分子量。
86.段落1或7至85中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型11A糖共軛物中的血清型11A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間。
87.段落1或7至86中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型11A糖共軛物中的血清型11A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.6之間。
88.段落1或7至87中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物包含與血清型11A莢膜多糖之總量相比而少於約50%之游離血清型11A莢膜多糖。
89.段落1或7至88中之任一者的致免疫性組成物，其中至少30%之血清型11A糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
90.段落1或7至89中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A莢膜多糖計至少0.3mM乙酸酯。
91.段落1或7至90中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A莢膜多糖計至少1.8mM乙酸酯。
92.段落1或7至91中之任一者的致免疫性組成 物，其中在血清型11A糖共軛物以每一mM血清型11A莢膜多糖中的mM乙酸酯對經分離之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
93.段落1或7至92中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型11A糖共軛物以每一mM血清型11A莢膜多糖中的mM乙酸酯對經活化之多糖中以每一mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比為至少0.6。
94.段落1或7至93中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A莢膜多糖計至少0.1mM甘油。
95.段落1或7至94中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物包含以每一mM血清型11A莢膜多糖計至少0.4mM甘油。
96.段落1或7至95中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物之共軛程度係介於1與15之間。
97.段落1或7至96中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
98.段落1或7至97中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
99.段落1或7至98中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型11A糖共軛物係使用還原胺化反應製 備。
100.段落1或8至99中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量。
101.段落1或8至100中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物具有介於1,000kDa與15,000kDa之間的分子量。
102.段落1或8至101中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型8糖共軛物中的血清型8莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間。
103.段落1或8至102中之任一者的致免疫性組成物，其中在血清型8糖共軛物中的血清型8莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.5之間。
104.段落1或8至103中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物包含與血清型8莢膜多糖之總量相比而少於約50%之游離血清型8莢膜多糖。
105.段落1或8至104中之任一者的致免疫性組成物，其中至少30%之血清型8糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
106.段落1或8至105中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物之共軛程度係介於2與20之間。
107.段落1或8至106中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物包含具有分子量介於10kDa 與2,000kDa之間的糖。
108.段落1或8至107中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物之載體蛋白質為CRM197。
109.段落1或8至108中之任一者的致免疫性組成物，其中該血清型8糖共軛物係使用還原胺化反應製備。
110.段落1至109中之任一者的致免疫性組成物，其中各血清型的該致免疫性組成物之各劑量包含0.1μg至100μg多糖。
111.段落1至110中之任一者的致免疫性組成物，其中各血清型的該致免疫性組成物之各劑量包含1.0μg至10μg多糖。
112.段落1至111中之任一者的致免疫性組成物，其中各血清型糖共軛物的該致免疫性組成物之各劑量包含約1.0μg、約1.2μg、約1.4μg、約1.6μg、約1.8μg,2.0μg、約2.2μg、約2.4μg、約2.6μg、約2.8μg、約3.0μg、約3.2μg、約3.4μg、約3.6μg、約3.8μg、約4.0μg、約4.2μg、約4.4μg、約4.6μg、約4.8μg、約5.0μg、約5.2μg、約5.4μg、約5.6μg、約5.8μg或約6.0μg多糖。
113.段落1至112中之任一者的致免疫性組成物，其中若存在，各來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F及/或33F之糖共軛物的該致免疫性組成物之各劑量包含約1.5μg至約3.0μg多糖。
114.段落1至113中之任一者的致免疫性組成物，其 中該致免疫性組成物之各劑量包含10μg至150μg載體蛋白質。
115.段落1至114中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物之各劑量包含約1μg、約2μg、約3μg、約4μg、約5μg、約6μg、約7μg、約8μg、約9μg、約10μg、約11μg、約12μg、約13μg、約14μg、約15μg、約16μg、約17μg、約18μg、約19μg、約20μg、約21μg、約22μg、約23μg、約24μg、約25μg、約26μg、約27μg、約28μg、約29μg、約30μg、約31μg、約32μg、約33μg、約34μg、約35μg、約36μg、約37μg、約38μg、約39μg、約40μg、約41μg、約42μg、約43μg、約44μg、約45μg、約46μg、約47μg、約48μg、約49μg、約50μg、約51μg、約52μg、約53μg、約54μg、約55μg、約56μg、約57μg、約58μg、約59μg、約60μg、約61μg、約62μg、約63μg、約64μg、約65μg、約66μg、約67μg、約68μg、約69μg、約70μg、約71μg、約72μg、約73μg、約74μg或約75μg載體蛋白質。
116.段落1至115中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含至少一種來自其他病原體之抗原。
117.段落1至116中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含至少一種選自由下列所組成之群組的抗原：白喉類毒素(D)、破傷風類毒素 (T)、百日咳抗原(P)、非細胞的百日咳抗原(Pa)、B型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)、A型肝炎病毒(HAV)抗原、共軛之b型流感嗜血桿菌莢膜糖(Hib)和失活之脊髓灰白質炎病毒疫苗(IPV)。
118.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含D、T和Pa。
119.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含D、T、Pa和Hib。
120.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含D、T、Pa和IPV。
121.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含D、T、Pa和HBsAg。
122.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，中該致免疫性組成物另外包含D、T、Pa、HBsAg和IPV。
123.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，中該致免疫性組成物另外包含D、T、Pa、HBsAg和Hib。
124.段落1至117中之任一者的致免疫性組成物，中該致免疫性組成物另外包含D、T、Pa、HBsAg、IPV和Hib。
125.段落1至124中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)。
126.段落1至125中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血 清群C莢膜糖(MenC)。
127.段落1至126中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血清群A莢膜糖(MenA)。
128.段落1至127中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜糖(MenW135)。
129.段落1至128中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)及經共軛之腦膜炎雙球菌血清群C莢膜糖(MenC)。
130.段落1至124中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜糖(MenW135)、經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)及/或經共軛之腦膜炎雙球菌血清群C莢膜糖(MenC)。
131.段落1至124中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含經共軛之腦膜炎雙球菌血清群A莢膜糖(MenA)、經共軛之腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜糖(MenW135)、經共軛之腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜糖(MenY)及/或經共軛之腦膜炎雙球菌血清群C莢膜糖(MenC)。
132.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含至少一種佐劑。
133.段落1至132中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含至少一種選自由下列所組成之群組的佐劑：磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁、磷酸鈣、磷酸鈣、脂質體、水包油乳液、MF59(4.3% w/v之鯊烯、0.5% w/v之聚山梨醇酯80、0.5% w/v之去水山梨醇三油酸酯)、油包水乳液、MONTANIDETM、聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)微粒和聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)奈米粒子。
134.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含至少一種選自由下列所組成之群組的佐劑：磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁。
135.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含磷酸鋁作為佐劑。
136.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含硫酸鋁作為佐劑。
137.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含氫氧化鋁作為佐劑。
138.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物包含從0.1mg/mL至1mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
139.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物包含從0.2mg/mL至0.3mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
140.段落1至131中之任一者的致免疫性組成物，其 中該致免疫性組成物包含約0.25mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
141.段落1至140中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物另外包含CpG寡核苷酸。
142.段落1至141中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物經調配成液體形式。
143.段落1至141中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物經調配成冷凍形式。
144.段落1至142中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物經調配成水性液體形式。
145.段落1至144中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物包含下列中之一或多者：緩衝液、鹽、二價陽離子、非離子清潔劑、低溫保護劑(諸如糖)和抗氧化劑(諸如自由基清除劑或螯合劑)或其任何組合。
146.段落1至145中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物包含緩衝液。
147.段落146之致免疫性組成物，其中該緩衝液具有約3.5至約7.5之pKa。
148.段落146至147中之任一者的致免疫性組成物，其中該緩衝液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。
149.段落146至148中之任一者的致免疫性組成物，其中該緩衝劑為最終濃度1.0mM至10mM之琥珀酸鹽。
150.段落146至149中之任一者的致免疫性組成物， 其中該緩衝劑為最終濃度約5.0mM之琥珀酸鹽。
151.段落1至150中之任一者的致免疫性組成物，其中致免疫性組成物包含鹽。
152.段落151之致免疫性組成物，其中該鹽係選自由下列所組成之群組：氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。
153.段落151至152中之任一者的致免疫性組成物，其中該鹽為氯化鈉。
154.段落151至153中之任一者的致免疫性組成物，其中該鹽為濃度約150mM之氯化鈉。
155.段落1至154中之任一者的致免疫性組成物，其中致免疫性組成物包含界面活性劑。
156.段落155之致免疫性組成物，其中該界面活性劑係選自由下列所組成之群組：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、Triton N-101、Triton X-100、辛苯醇醚40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸酯、聚氧乙烯-660羥基硬脂酸酯、聚氧乙烯-35-蓖麻油酸酯、大豆卵磷脂和泊洛沙姆。
157.段落155至156中之任一者的致免疫性組成物，其中該界面活性劑係選自下列群組：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85和泊洛沙姆。
158.段落155至157中之任一者的致免疫性組成物，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯80。
159.段落155至158中之任一者的致免疫性組成物，其中界面活性劑為最終濃度至少0.0001%至10%(重量對重量，w/w)之聚山梨醇酯80。
160.段落155至159中之任一者的致免疫性組成物，其中界面活性劑為最終濃度至少0.001%至1%(重量對重量，w/w)之聚山梨醇酯80。
161.段落155至160中之任一者的致免疫性組成物，其中界面活性劑為最終濃度至少0.01%至1%(重量對重量，w/w)之聚山梨醇酯80。
162.段落155至161中之任一者的致免疫性組成物，其中界面活性劑為最終濃度0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%(重量對重量，w/w)之聚山梨醇酯80。
163.段落1至162中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物具有5.5至7.5之pH。
164.段落1至163中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物具有5.6至7.0之pH。
165.段落1至164中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物具有5.8至6.0之pH。
166.一種套組，其包含(a)第一致免疫性組成物，其包含段落1至165中之任一者的該致免疫性組成物；及(b)第二致免疫性組成物，其包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物，該肺炎鏈球菌血清型係選自由下列所組成之群組：血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、 9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F。
167.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物。
168.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物。
169.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物。
170.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物。
171.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F和22F之糖共軛物。
172.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F和33F之糖共軛物。
173.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F、22F和33F之糖共軛物。
174.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、 9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物。
175.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物。
176.段落166之套組，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物。
177.段落166至176中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物係與CRM197共軛。
178.段落166至177中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型1、5和7F之糖共軛物係與CRM197共軛。
179.段落166至178中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型6A和19A之糖共軛物係與CRM197共軛。
180.段落166至179中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型3之糖共軛物係與CRM197共軛。
181.段落166至180中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。
182.段落166至181中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
183.段落166至182中之任一者的套組，其中該糖共 軛物全部皆個別地與CRM197共軛。
184.段落166至176中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物係個別地與PD共軛。
185.段落166至176或184中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛。
186.段落166至176或184至185中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
187.段落166至176或184至186中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛，該來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛及該來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
188.段落184至187中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。
189.段落184至188中之任一者的套組，其中該來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
190.段落166至189中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為7、8、9、10、11、12、13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。
191.段落166至190中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為10、11、12、13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。
192.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物.
193.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物所組成。
194.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所組成。
195.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為12價肺炎球菌共軛組成物，其中該12種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物、與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物經共軛及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所 組成。
196.段落166至192中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物，其中該13種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物所組成。
197.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物所組成。
198.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物所組成。
199.段落166至191中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物為15價肺炎球菌共軛組成物，其中該15種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物所組成。
200.段落166至199中之任一者的套組，其中第二致免疫性組成物之該糖共軛物全部皆藉由還原胺化反應而與載體蛋白質共軛。
201.段落166至200中之任一者的套組，其中各血清型的該第二致免疫性組成物之各劑量包含1.0μg至10μg多糖。
202.段落166至201中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物之各劑量包含10μg至150μg載體蛋白質。
203.段落166至202中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物之各劑量包含約15μg、約16μg、約17μg、約18μg、約19μg、約20μg、約21μg、約22μg、約23μg、約24μg、約25μg、約26μg、約27μg、約28μg、約29μg、約30μg、約31μg、約32μg、約33μg、約34μg、約35μg、約36μg、約37μg、約38μg、約39μg、約40μg、約41μg、約42μg、約43μg、約44μg、約45μg、約46μg、約47μg、約48μg、約49μg或約50μg載體蛋白質。
204.段落166至203中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含至少一種來自其他病原體之抗原。
205.段落166至204中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含至少一種佐劑。
206.段落166至204中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含至少一種選自由下列所組成之群組的佐劑：磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁。
207.段落166至204中之任一者的套組，其中該第二 致免疫性組成物另外包含磷酸鋁作為佐劑。
208.段落166至204中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含從0.2mg/mL至0.3mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
209.段落166至204中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含從0.25mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
210.段落166至209中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含緩衝劑。
211.段落210之套組，其中該緩衝液具有約3.5至約7.5之pKa。
212.段落210至211中之任一者的套組，其中該緩衝液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。
213.段落212之套組，其中該緩衝劑為最終濃度約5.0mM之琥珀酸鹽。
214.段落166至213中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物另外包含鹽。
215.段落214之套組，其中該鹽選自由下列所組成之群組：氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。
216.段落166至215中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物包含濃度約150mM之氯化鈉。
217.段落166至216中之任一者的套組，216，其中該第二致免疫性組成物另外包含界面活性劑。
218.段落217之套組，其中該界面活性劑為聚山梨醇 酯80。
219.段落218之套組，其中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%(w/w)。
220.段落166至219中之任一者的套組，其中該第二致免疫性組成物具有5.8至6.0之pH。
221.段落166至220中之任一者的套組，其中該第一致免疫性組成物及該第二致免疫性組成物係於分開的容器中。
222.段落166至221中之任一者的套組，其中該第一及第二致免疫性組成物經調配成液體形式。
223.段落166至221中之任一者的套組，其中該第一及第二致免疫性組成物經調配成凍乾形式。
224.段落166至221中之任一者的套組，其中該第一致免疫性組成物係呈液體形式及該第二致免疫性組成物係呈凍乾形式。
225.段落166至221中之任一者的套組，其中該第一致免疫性組成物係呈凍乾形式及該第二致免疫性組成物係呈液體形式。
226.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其中該致免疫性組成物係與第二致免疫性組成物同時、並行、相伴或依序投予。
227.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係與第二致免疫性組成物同時、並行、相伴或依序投予。
228.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係與上文章節3所揭示之致免疫性組成物中之任一者同時、並行、相伴或依序投予。
229.段落226至228中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含至少一種來自肺炎鏈球菌血清型之糖共軛物，該肺炎鏈球菌血清型選自由下列所組成之群組：血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F。
230.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物。
231.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物。
232.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物。
233.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物。
234.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F和22F之糖共軛物。
235.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫 性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F和33F之糖共軛物。
236.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F、22F和33F.
237.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物。
238.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物。
239.段落229之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物。
240.段落229至239中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F之糖共軛物係與CRM197共軛。
241.段落229至240中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型1、5和7F之糖共軛物係與CRM197共軛。
242.段落229至241中之任一者的致免疫性組成物， 其中該來自肺炎鏈球菌血清型6A和19A之糖共軛物係與CRM197共軛。
243.段落229至242中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型3之糖共軛物係與CRM197共軛。
244.段落229至243中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。
245.段落229至244中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
246.段落229至245中之任一者的致免疫性組成物，其中該糖共軛物全部皆與CRM197共軛。
247.段落229至239中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物係個別地與PD共軛。
248.段落229至239或247中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛。
249.段落229至239或247至248中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
250.段落229至239或247至249中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14及/或23F之糖共軛物係個別地與PD共軛，該來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物係與TT共軛及該來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物係與DT共軛。
251.段落247至250中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係與CRM197共軛。
252.段落247至251中之任一者的致免疫性組成物，其中該來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物係與CRM197共軛。
253.段落226至252中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為7、8、9、10、11、12、13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。
254.段落226至253中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為10、11、12、13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。
255.段落226至254中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為13、14或15價肺炎球菌共軛組成物。
256.段落226至255中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物。
257.段落226至254中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成 物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物所組成。
258.段落226至254中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為11價肺炎球菌共軛組成物，其中該11種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所組成。
259.段落226至254中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為12價肺炎球菌共軛組成物，其中該12種共軛物係由個別地與PD共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F之糖共軛物、與TT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型18C之糖共軛物、與DT共軛之來自肺炎鏈球菌血清型19F之糖共軛物、與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物係及與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物所組成。
260.段落226至256中之任一者的致免疫性組成物， 其中該第二致免疫性組成物為13價肺炎球菌共軛組成物，其中該13種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物所組成。
261.段落226至255中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和22F之糖共軛物所組成。
262.段落226至255中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為14價肺炎球菌共軛組成物，其中該14種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F和33F之糖共軛物所組成。
263.段落226至255中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物為15價肺炎球菌共軛組成物，其中該15種共軛物係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F、22F和33F之糖共軛物所組成。
264.段落229至263中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之糖共軛物全部皆藉由還原胺化反應與載體蛋白質共軛。
265.段落229至264中之任一者的致免疫性組成物，其中各血清型的該第二致免疫性組成物之各劑量包含1至 10μg多糖。
266.段落229至265中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之各劑量包含10μg至150μg載體蛋白質。
267.段落229至266中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之各劑量包含約15μg、約16μg、約17μg、約18μg、約19μg、約20μg、約21μg、約22μg、約23μg、約24μg、約25μg、約26μg、約27μg、約28μg、約29μg、約30μg、約31μg、約32μg、約33μg、約34μg、約35μg、約36μg、約37μg、約38μg、約39μg、約40μg、約41μg、約42μg、約43μg、約44μg、約45μg、約46μg、約47μg、約48μg、約49μg或約50μg載體蛋白質。
268.段落229至267中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含來自其他病原體之抗原。
269.段落229至268中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含至少一種佐劑。
270.段落229至268中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含至少一種選自由下列所組成之群組的佐劑：磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁。
271.段落229至268中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含磷酸鋁作為佐劑。
272.段落229至268中之任一者的致免疫性組成物， 其中該第二致免疫性組成物另外包含從0.2mg/mL至0.3mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
273.段落229至268中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含約0.25mg/mL之呈磷酸鋁形式的元素鋁作為佐劑。
274.段落229至273中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含緩衝液。
275.段落229至274中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含具有約3.5至約7.5之pKa的緩衝液。
276.段落274至275中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之該緩衝液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。
277.段落274至276中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之該緩衝劑為最終濃度約5.0mM之琥珀酸鹽。
278.段落229至277中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含鹽。
279.段落229至278中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之該鹽係選自由下列所組成之群組：氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。
280.段落229至279中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物包含最終濃度150mM之氯化鈉。
281.段落229至280中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物另外包含界面活性劑。
282.段落281之致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物之該界面活性劑為聚山梨醇酯80。
283.段落281至282中之任一者的致免疫性組成物，其中在該第二致免疫性組成物之聚山梨醇酯80的最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%(w/w)。
284.段落229至283中之任一者的致免疫性組成物，其中該第二致免疫性組成物具有5.8至6.0之pH。
285.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程為單一劑量時程。
286.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程為多劑量時程。
287.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。
288.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的2個劑量系列所組成。
289.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
290.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其 係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。
291.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約6個月間隔的3個劑量系列所組成。
292.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
293.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
294.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
295.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔的2或3個劑量系列，接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
296.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由在2個月齡開始相隔約2個月間隔的2個劑量系列，接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
297.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由在2、4、6和12至15個月齡投予的4個疫苗劑量所組成。
298.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物，其係用於免疫接種中，其中免疫接種時程係由在第0天給出之初次劑量及在從約2至約24週範圍內的間隔給出之一或多個加強劑量所組成。
299.段落166至225中之任一者的套組，其係用於同時、並行、相伴或依序投予第一及第二致免疫性組成物。
300.段落226至284中之任一者的致免疫性組成物或段落299之套組，其係用於同時投予第一及第二致免疫性組成物之方法。
301.段落300之致免疫性組成物或套組，其中該同時投予之免疫接種的時程為單一劑量。
302.段落300之致免疫性組成物或套組，其中該同時投予之免疫接種的時程為多劑量時程。
303.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。
304.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
305.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系 列所組成。
306.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
307.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
308.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由其中各劑量相隔約1、2、3或4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
309.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在一歲內的至少一個劑量(例如1、2或3個劑量)，接著至少一個在學步幼兒期之劑量所組成。
310.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的2或3個劑量系列，接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
311.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在2、4、6和12至15個月齡投予的4個疫苗劑量所組成。
312.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在第0天給出之初次劑量及在從約2至約24 週範圍內的間隔(較佳為4至8週的給藥間隔)給出之一或多個加強劑量所組成。
313.段落302之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在第0天給出之初次劑量及約3個月後給出之加強劑量所組成。
314.段落226至284中之任一者的致免疫性組成物或段落299之套組，其係用於相伴投予第一及第二致免疫性組成物之方法。
315.段落314之致免疫性組成物或套組，其中該相伴投予之免疫接種的時程為單一劑量。
316.段落314之致免疫性組成物或套組，其中該相伴投予之免疫接種的時程為多劑量時程。
317.段落226至284中之任一者的致免疫性組成物或段落299之套組，其係用於並行投予第一及第二致免疫性組成物之方法。
318.段落317之致免疫性組成物或套組，其中該並行投予之免疫接種的時程為單一劑量。
319.段落317之致免疫性組成物或套組，其中該並行投予之免疫接種的時程為多劑量時程。
320.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。
321.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑 量系列所組成。
322.段落315或318中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。
323.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
324.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約4個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
325.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
326.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在一歲內的至少一個劑量(例如1、2或3個劑量)，接著至少一個在學步幼兒期之劑量所組成。
327.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)的2或3個劑量系列，接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
328.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中 該多劑量時程係由在2、4、6和12至15個月齡投予的4個疫苗劑量所組成。
329.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在第0天給出之初次劑量及在從約2至約24週範圍內的間隔(較佳為4至8週的給藥間隔)給出之一或多個加強劑量所組成。
330.段落316或319之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在第0天給出之初次劑量及約3個月後給出之加強劑量所組成。
331.段落226至284中之任一者的致免疫性組成物或段落299之套組，其係用於依序投予第一及第二致免疫性組成物之方法。
332.段落331之致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由2、3、4、5、6、7或8個劑量系列所組成。
333.段落331或332之致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由2、3或4個劑量系列所組成。
334.段落331至333中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中先投予第一致免疫性組成物及接著投予第二致免疫性組成物。
335.段落331至333中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中先投予第二致免疫性組成物及接著投予第一致免疫性組成物。
336.段落331至335中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2個劑量系列所組成。
337.段落331至335中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
338.段落331至338中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二劑量係在一歲內投予。
339.段落331至338中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一劑量係在一歲之內投予及第二劑量為學步幼兒期劑量。
340.段落339之致免疫性組成物或套組，其中該學步幼兒期劑量係在12至18個月齡投予。
341.段落332或333之致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由3個劑量系列所組成。
342.段落341之致免疫性組成物或套組，其中該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約12個月間隔的3個劑量系列所組成。
343.段落341之致免疫性組成物或套組，其中該時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
344.段落341至343中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二劑量係在一歲內投予及第三劑量為學步幼兒期劑量。
345.段落341至344中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二劑量係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)及第三劑量為在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量。
346.段落341至345中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
347.段落341至345中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
348.段落341至345中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
349.段落341至345中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予。
350.段落341至345中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予。
351.段落341至345中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予。
352.段落332或333之致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由4個劑量系列所組成。
353.段落352之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三劑量相隔約1個月至約4個月間隔，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量。
354.段落352或353之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三劑量相隔約1個月至約2個月間隔，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量。
355.段落352至354中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三劑量係在一歲內投予及第四劑量為學步幼兒期劑量。
356.段落352至355中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三劑量係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在劑量間有28至56天)及第四劑量為在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量。
357.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一、第二和第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
358.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一、第二和第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
359.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
360.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
361.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
362.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
363.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第二、第三和第四劑量投予。
364.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第二、第三和第四劑量投予。
365.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
366.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第 一致免疫性組成物係作為第二劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
367.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
368.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
369.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予.
370.段落352至356中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
371.段落331至332中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由5個劑量系列所組成。
372.段落371之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約3個月間隔的4個劑量系 列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第五劑量所組成。
373.段落371至372中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一，第二、第三和第四劑量係在一歲內投予及第五劑量為學步幼兒期劑量。
374.段落371至372中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物(1st IC)及第二致免疫性組成物(2nd IC)係根據下列時程中之任一者投予：
Figure 109137693-A0101-12-0325-104
375.段落331至332中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由6個劑量系列所組成。
376.段落375之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的5個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第六劑量所組成。
377.段落375至376中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四和第五劑量係在一歲內投予及第六劑量為學步幼兒期劑量。
378.段落375至377中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物及第二致免疫性組成物係根據段落374的時程中之任一者投予，接著以第六劑量投予。
379.段落378中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第六劑量投予。
380.段落378中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中根據本發明的第二致免疫性組成物係作為第六劑量投予。
381.段落331至332中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由7個劑量系列所組成。
382.段落381之致免疫性組成物或套組，其中免疫接 種時程係由相隔約1個月間隔的6個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第七劑量所組成。
383.段落381至382中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四、第五和第六劑量係在一歲內投予及第七劑量為學步幼兒期劑量。
384.段落381至383中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物及第二致免疫性組成物係根據段落379或380的時程中之任一者投予，接著以第七劑量投予。
385.段落384之致免疫性組成物或套組，其中根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第七劑量投予。
386.段落384之致免疫性組成物或套組，其中根據本發明的第二致免疫性組成物係作為第七劑量投予。
387.段落331至332中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中該依序投予之免疫接種的時程係由8個劑量系列所組成。
388.段落387之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月間隔的7個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第八劑量所組成。
389.段落387至388中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七劑量係在一歲內投予及第七劑量為學步幼兒期劑量。
390.段落387至389中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物及第二致免疫性組成物係 根據段落385或386的時程中之任一者投予，接著以第八劑量投予。
391.段落390中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中根據本發明的第一致免疫性組成物係作為第八劑量投予。
392.段落390中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中根據本發明的第二致免疫性組成物係作為第八劑量投予。
393.段落331至333中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由依序投予下列者所組成：
(a)第一致免疫性組成物，及
(b)相伴或並行投予第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物。
394.段落390中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由2次投予系列所組成。
395.段落393至395中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2次投予系列所組成。
396.段落393至396中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中先投予第一致免疫性組成物及接著投予相伴或並行投予。
397.段落393至396中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中先投予相伴或並行投予及接著投予第一致免疫性組成物。
398.段落393至398中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二次投予係在一歲內投予。
399.段落393至398中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一次投予係在一歲之內投予及第二次投予為學步幼兒期投予。
400.段落399之致免疫性組成物或套組，其中該學步幼兒期投予係在12至18個月齡投予。
401.段落393之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由3次投予系列所組成。
402.段落401之致免疫性組成物或套組，其中該時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的3次投予系列所組成。
403.段落401至402中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二次投予係在一歲內投予及第三次投予為學步幼兒期投予。
404.段落401至403中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第三次投予為在12至18個月齡的學步幼兒期投予。
405.段落401至404中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予及相伴或並行投予係在第三次投予時投予。
406.段落401至404中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一和第二次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予。
407.段落401至404中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予。
408.段落401至404中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第一致免疫性組成物係在第二次投予時投予及相伴或並行係在第三次投予時投予。
409.段落401至404中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予及相伴或並行投予係在第二和第三次投予時投予。
410.段落401至404中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第二和第三次投予時投予。
411.段落393之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由4次投予系列所組成。
412.段落411之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予相隔約1個月至約4個月間隔，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予。
413.段落411之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予相隔約1個月至約2個月間隔，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第四次投予。
414.段落411至413中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予係在一歲內投予及第 四次投予為學步幼兒期投予。
415.段落411至414中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第四次投予為在12至18個月齡的學步幼兒期投予。
416.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一、第二和第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
417.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其相伴或並行投予係在第一、第二和第三次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
418.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，係在第一、第二和第三次投予時投予及其中第一致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予及相伴或並行投予係在第三和第四次投予時投予。
419.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一和第二次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第三和第四次投予時投予。
420.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予，相伴或並行投予係在第三次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
421.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一和第二次投予時投 予，第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
422.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予及相伴或並行投予係在係在第二、第三和第四次投予時投予。
423.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予及第一致免疫性組成物係在係在第二、第三和第四次投予時投予。
424.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二次投予時投予，第一致免疫性組成物係在第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
425.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第一致免疫性組成物係在第二次投予時投予，相伴或並行投予係在第三次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
426.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第三和第四次投予時投予。
427.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第一 致免疫性組成物係在第二次投予時投予及相伴或並行投予係在第三和第四次投予時投予。
428.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二和第三次投予時投予及第一致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
429.段落411至415中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第一致免疫性組成物係在第二和第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
430.段落393之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由5次投予系列所組成。
431.段落430之致免疫性組成物或套組，其中時程係由其中各劑量相隔約1個月至約3個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。
432.段落430至431中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三和第四次投予係在一歲內投予及第五次投予為學步幼兒期劑量。
433.段落430至432中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物(1st IC)及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物(1st IC/2nd IC)的相伴或並行投予係根據下列時程中之任一者投予：
Figure 109137693-A0101-12-0334-105
434.段落393之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由6次投予系列所組成。
435.段落434之致免疫性組成物或套組，其中時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成。
436.段落434至435中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四和第五次投予係在一歲內投予及第六次投予為學步幼兒期投予。
437.段落434至436中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係根據段落433的時程中之任一者投予，接著以第六次投予。
438.段落437中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第六次投予時投予。
439.段落437中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係在第六次投予時投予。
440.段落393之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由7次投予系列所組成。
441.段落440之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的6次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第七次投予所組成。
442.段落440至441中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四、第五和第六次投予係在一歲內投予及第七次投予為學步幼兒期投予。
443.段落440至442中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴投予係根據段落438至439的時程中之任一者投予，接著以第七次投予。
444.段落443之致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第七次投予時投予。
445.段落443之致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係在第七次投予時投予。
446.段落393之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由8次投予系列所組成。
447.段落446之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的7次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第八次投予所組成。
448.段落446至447中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七次投予係在一歲內投予及第七次投予為學步幼兒期投予。
449.段落446至448中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係根據段落444至 445的時程中之任一者投予，接著以第八次投予。
450.段落449之致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係在第八次投予時投予。
451.段落449之致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係在第八次投予時投予。
452.段落331至333中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由依序投予下列者所組成：
(a)第二致免疫性組成物，及
(b)相伴或並行投予第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物。
453.段落452之致免疫性組成物或套組，其中該時程為根據段落394-451的時程中之任一者，其中(a)的該第二致免疫性組成物之投予替換在該段落中(a)的第一致免疫性組成物之投予。
454.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用作為藥品。
455.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用作為疫苗。
456.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用於預防、治療或改善個體中的細菌感染、疾病或病況之方法。
457.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用於預防個體中的 細菌感染、疾病或病況之方法。
458.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用於預防或治療易受肺炎球菌感染的人之方法，其係藉助於經由全身或黏膜途徑投予該致免疫性組成物。
459.段落458之致免疫性組成物或套組，其中該致免疫性組成物係藉由肌內、腹膜內、皮內或皮下途徑來投予。
460.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用作為疫苗，其中欲免疫接種之個體的年齡小於1。
461.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用作為疫苗，其中欲免疫接種之個體的年齡小於2。
462.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用作為疫苗，其中欲免疫接種之個體為50歲或以上的成年人。
463.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用作為疫苗，其中欲免疫接種之個體為免疫受損之人類。
464.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段落166至225中之任一者的套組，其係用於單一劑量時程中。
465.段落1至165中之任一者的致免疫性組成物或段 落166至225中之任一者的套組，其係用於多劑量時程中。
466.段落465之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑量系列所組成。
467.段落465之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列所組成。
468.段落465之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成。
469.段落465之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在一歲以內的至少一個劑量，接著至少一個在學步幼兒期之劑量所組成。
470.段落465之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔的2或3個劑量系列及接著在12至18個月齡的學步幼兒期之劑量所組成。
471.段落465之致免疫性組成物或套組，其中該多劑量時程係由在2、4、6和12至15個月齡投予的4個疫苗劑量系列所組成。
472.段落331至333中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由依序投予下列者所組成：
(a)第二致免疫性組成物，及
(b)相伴或並行投予第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物。
473.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由2次投予系列所組成。
474.段落472至473中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由相隔約1個月至約12個月間隔的2次投予系列所組成。
475.段落472至474中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中先投予第二致免疫性組成物及接著投予相伴或並行投予。
476.段落472至474中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中先投予相伴或並行投予及接著投予第二致免疫性組成物。
477.段落472至476中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二次投予係在一歲內投予。
478.段落472至476中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一次投予係在一歲之內投予及第二次投予為學步幼兒期投予。
479.段落478之致免疫性組成物或套組，其中該學步幼兒期投予係在12至18個月齡投予。
480.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由3次投予系列所組成。
481.段落480之致免疫性組成物或套組，其中該時程 係由相隔約1個月至約12個月間隔的3次投予系列所組成。
482.段落480至481中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二次投予係在一歲內投予及第三次投予為學步幼兒期投予。
483.段落480至482中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一和第二次投予在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第三次投予為在12至18個月齡的學步幼兒期投予。
484.段落480至483中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予及相伴或並行投予係在第三次投予時投予。
485.段落480至483中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一和第二次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第三次投予時投予。
486.段落480至483中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第三次投予時投予。
487.段落480至483中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組成物係在第二次投予時投予及相伴或並行係在第三次投予時投予。
488.段落480至483中之任一者的致免疫性組成物或 套組，其中第二致免疫性組成物係在第一次投予時投予及相伴或並行投予係在第二和第三次投予時投予。
489.段落480至483中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第二和第三次時投予。
490.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由4次投予系列所組成。
491.段落490之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予相隔約1個月至約4個月間隔，接著在第一次投予後約10個月至約13個月第四次投予。
492.段落490之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予相隔約1個月至約2個月間隔，接著在第一次投予後約10個月至約13個月第四次投予。
493.段落490至492中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予係在一歲內投予及第四次投予為學步幼兒期投予。
494.段落490至493中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三次投予係在2個月齡開始相隔約1個月至約2個月間隔(例如在投予間有28至56天)及第四次投予為在12至18個月齡的學步幼兒期投予。
495.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一、第二和第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
496.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一、第二和第三次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
497.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予及相伴或並行投予係在第三和第四次投予時投予。
498.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一和第二次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第三和第四次投予時投予。
499.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一和第二次投予時投予，相伴或並行投予係在第三次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
500.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一和第二次投予時投予，第二致免疫性組成物係在第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
501.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一次投予時投予及相伴或並行投予係在係在第二、第三和第四次投予時投予。
502.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第二、第三和第四次投予時投予。
503.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二次投予時投予，第二致免疫性組成物係在第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
504.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組成物係在第二次投予時投予，相伴或並行投予係在第三次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
505.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第三和第四次投予時投予。
506.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第二致免疫性組成物係在第二次投予時投予及相伴或並行投予係在第三和第四次投予時投予。
507.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物在第一次投予時投予，相伴或並行投予係在第二和第三次投予時投予及第二致免疫性組成物係在第四次投予時投予。
508.段落490至494中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中相伴或並行投予係在第一次投予時投予，第二 致免疫性組成物係在第二和第三次投予時投予及相伴或並行投予係在第四次投予時投予。
509.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由5次投予系列所組成。
510.段落509之致免疫性組成物或套組，其中時程係由其中各劑量相隔約1個月至約3個月間隔的4次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第五次投予所組成。
511.段落509至510中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三和第四次投予係在一歲內投予及第五次投予為學步幼兒期劑量。
512.段落509至511中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物(2nd IC)及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物(1st IC/2nd IC)的相伴或並行投予係根據下列時程中之任一者投予：
Figure 109137693-A0101-12-0346-106
513.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接 種時程係由6次投予系列所組成。
514.段落513之致免疫性組成物或套組，其中時程係由其中各投予相隔約1個月至約2個月間隔的5次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第六次投予所組成。
515.段落513至514中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四和第五投予係在一歲內投予及第六次投予為學步幼兒期投予。
516.段落513至515中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係根據段落512的時程中之任一者投予，接著以第六次投予。
517.段落516中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第六次投予時投予。
518.段落516中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係在第六次投予時投予。
519.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由7次投予系列所組成。
520.段落519之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的6次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第七次投予所組成。
521.段落519至520中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四、第五和第六次投予係在一歲內投予及第七次投予為學步幼兒期投予。
522.段落519至521中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係根據段落517或518的時程中之任一者投予，接著以第七次投予。
523.段落522之致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第七次投予時投予。
524.段落522之致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係在第七次投予時投予。
525.段落472之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由8次投予系列所組成。
526.段落525之致免疫性組成物或套組，其中免疫接種時程係由其中各投予相隔約1個月間隔的7次投予系列，接著在第一次投予後約10個月至約13個月的第八次投予所組成。
527.段落525至526中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七次投予係在一歲內投予及第七次投予為學步幼兒期投予。
528.段落525至527中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物及第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係根據段落523或524的時程中之任一者投予，接著以第八次投予。
529.段落528之致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係在第八次投予時投予。
530.段落528之致免疫性組成物或套組，其中第一致 免疫性組成物與第二致免疫性組成物的相伴或並行投予係在第八次投予時投予。
531.段落352之致免疫性組成物或套組，其中第一和第二劑量係在一歲內投予及第三和第四劑量為學步幼兒期劑量。
532.段落352之致免疫性組成物或套組，其中時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的2個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第三劑量及在第三劑量後約1個月至約2個月的第四劑量所組成。
533.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一、第二和第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
534.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一、第二和第三劑量及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
535.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
536.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
537.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
538.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一和第二劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
539.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第二、第三和第四劑量投予。
540.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第二、第三和第四劑量投予。
541.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
542.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
543.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
544.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第二劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第三和第四劑量投予。
545.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第二致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予及第一致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
546.段落531至532中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第二致免疫性組成物係作為第一劑量投予，第一致免疫性組成物係作為第二和第三劑量投予及第二致免疫性組成物係作為第四劑量投予。
547.段落371之致免疫性組成物或套組，其中第一、第二和第三劑量係在一歲內投予及第四和第五劑量為學步幼兒期劑量。
548.段落371之致免疫性組成物或套組，其中時程係由其中各劑量相隔約1個月至約2個月間隔的3個劑量系列，接著在第一劑量後約10個月至約13個月的第四劑量所組成及在第四劑量後約1個月至約2個月的第五劑量所組成。
549.段落547至548中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物(1st IC)及第二致免疫性組成物(2nd IC)係根據下列時程中之任一者投予：
Figure 109137693-A0101-12-0352-107
550.段落547至548中之任一者的致免疫性組成物或套組，其中第一致免疫性組成物(1st IC)及第二致免疫性組成物(2nd IC)係根據下列時程中之任一者投予：
Figure 109137693-A0101-12-0353-108
如本文所使用的術語〝約〞意指在統計學上有意義的值之範圍內，諸如所述之濃度範圍、時段、分子量、溫度或pH。此一範圍可在一定數量級內，通常為給出之值或範圍的20%內、更通常為10%內，且甚至更通常為5%內或1%內。有時此一範圍可在用於測量及/或確定給出之值或範圍的標準方法之典型的實驗誤差內。以術語〝約〞所包含的容許變異係取決於研究的特殊系統而定且可由熟習本技術領域者輕易地理解。每當列舉在本申請案內的範圍時，亦涵蓋在上述範圍內的每一整數作為本發明的實施態樣。
本發明者在本文意欲使術語〝包含(comprising、comprise及comprises)〞在每一情況下分別隨意地經術語〝基本上由...組成(consisting essentially of、consist essentially of)〞、〝由...組成(consisting of、consist of 和consists of)〞取代。
可於本文交換使用的〝致免疫量〞、〝免疫有效 量〞、〝治療有效量〞、〝預防有效量〞或〝劑量〞之各者通常係指足以激發細胞(T細胞)或體液(B細胞或抗體)反應之任一者或二者的免疫反應之抗原或致免疫性組成物的量，如以熟習本技術領域者已知的標準檢定法所測量。
將本專利說明書內所引用的所有參考文獻或專利申請案併入本文以供參考。
本發明係在隨附的實施例中例證。下列的實施例係使用標準的技術進行，其為那些熟習本技術領域者熟知且為常規技術，除非另有其他詳細的說明。該等實施例為例證，但不限制本發明。
實施例
實施例1. 用於製備經eTEC連接之糖共軛物的通用方法糖之活化及以胱胺二鹽酸鹽之硫醇化
將糖在無水二甲基亞碸(DMSO)中再建構。溶液的水分含量係以Karl Fischer(KF)分析法測定且經調節以達到介於0.1%與0.4%之間(通常為0.2%)之水分含量。
為了引發活化，在DMSO中新鮮製備濃度100mg/mL之1,1’-羰基-二-1,2,4-三唑(CDT)或1,1’-羰基二咪唑(CDI)溶液。將糖以不同量的CDT/CDI(1-10莫耳當量)活化且容許反應在23℃±2℃下進行1小時。活化程度可以HPLC測定。在無水DMSO中新鮮製備濃度50mg/mL之胱胺二鹽酸鹽。將經活化之糖與1莫耳當量 (mol.eq.)之胱胺二鹽酸鹽反應。另一選擇地，將經活化之糖與1莫耳當量半胱胺鹽酸鹽反應。容許硫醇化反應在23℃±2℃下進行21±2小時，以產生硫醇化糖。以CDT/CDI之添加量測定硫醇化程度。
在活化反應溶液中的殘餘CDT/CDI係藉由添加100mM四硼酸鈉(pH 9.0)溶液而淬滅。進行計算以測定四硼酸鹽之添加量且調整最終水分含量至總水溶液的至多1%-2%。
經活化之硫醇化糖的還原及純化
將硫醇化糖反應混合物以添加至0.9%食鹽水中的預驟冷之5mM琥珀酸鈉(pH 6.0)中而稀釋10倍且通過5μm過濾器過濾。硫醇化糖之滲濾係以40倍滲濾體積之WFI來進行。在以10%體積之0.1M磷酸鈉緩衝液(pH 6.0)稀釋之後，將1-5莫耳當量參(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液添加至滲餘物中。容許此還原反應在5℃±3℃下進行20±2小時。進行經活化之硫醇化糖的純化，較佳地藉由以預驟冷之10mM磷酸二氫鈉(pH 4.3)超濾/滲濾。另一選擇地，硫醇化糖係以標準的粒徑排阻層析(SEC)程序或離子交換層析方法純化。取出等份的經活化之硫醇化糖滲餘物以測定糖濃度及硫醇含量(Ellman)檢定。
經活化之硫醇化糖的替代還原及純化
經活化之硫醇化糖亦如下文方式純化，作為上述純化程序之替代法。
將5至10莫耳當量參(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液添加至硫醇化糖反應混合物中且容許其在23℃±2℃下進行3±1小時。接著將反應混合物以添加至0.9%食鹽水中的預驟冷之5mM琥珀酸鈉(pH 6.0)中而稀釋5倍且通過5μm過濾器過濾。硫醇化糖之滲濾係使用40倍滲濾體積的預驟冷之10mM磷酸二氫鈉(pH 4.3)來進行。取出等份的經活化之硫醇化糖滲餘物以測定糖濃度及硫醇含量(Ellman)檢定。
溴乙醯化載體蛋白質的活化及純化
載體蛋白質之游離胺基係藉由與溴乙醯化劑(諸如溴乙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(BAANS)、溴乙醯基溴)或另一適合的試劑反應而溴乙醯化。
在活化前，先將載體蛋白質(在0.1M磷酸鈉中，pH 8.0±0.2)保持在8℃±3℃，約pH 7下。將成為二甲基亞碸(DMSO)原液(20mg/mL)之N-羥基琥珀醯亞胺酯(BAANS)以0.25-0.5的BAANS：蛋白質(w/w)之比添加至蛋白質溶液中。將反應物在5±3℃下溫和地混合30-60分鐘。將所得溴乙醯化(經活化)蛋白質純化，例如藉由使用10kDa MWCO膜及使用10mM磷酸鹽(pH 7.0)緩衝液之超濾/滲濾。在純化後，將溴乙醯化載體蛋白質之蛋白質濃度以Lowry蛋白質檢定法估計。
活化程度係藉由與阻抑導電率檢測耦合之離子交換液相層析術(離子層析術)的總溴分析來測定。使經活化之溴乙醯化蛋白質上的結合溴化物自分析樣品製劑中的蛋白質裂解且與可能存在的任何游離溴化物一起量化。在蛋白質上的任何剩餘的共價結合之溴係藉由加熱在鹼性2-巰基乙醇中的樣品以轉化成離子型溴化物而釋放。
溴乙醯化CRM197的活化及純化
將CRM197以經10mM磷酸鹽緩衝之0.9% NaCl pH 7(PBS)稀釋至5mg/mL且接著使用1M原液製成0.1M NaHCO3(pH 7.0)。使用20mg/mL之DMSO中的BAANS原液以1：0.35(w：w)之CRM197：BAANS比添加BAANS。將反應混合物在3℃與11℃之間培育30分鐘至1小時，接著藉由使用10K MWCO膜及10mM磷酸鈉/0.9% NaCl(pH 7.0)之超濾/滲濾來純化。將純化的經活化之CRM197以Lowry檢定法檢定以測定蛋白質濃度，且接著以PBS稀釋至5mg/mL。將蔗糖添加至5% wt/vol作為低溫保護劑，且將經活化之蛋白質冷凍且儲存在-25℃下，直至為共軛所需為止。
CRM197之離胺酸殘基的溴乙醯化非常一致，使得自可用的39個離胺酸中活化15至25個離胺酸。該反應生產高產率的經活化之蛋白質。
經活化之硫醇化糖與溴乙醯化載體蛋白質共軛
在開始共軛反應之前，將反應容器預冷卻至5℃。隨後添加溴乙醯化載體蛋白質及經活化之硫醇化糖且在150-200rpm之攪動速度下混合。糖/蛋白質輸入比為0.9±0.1。將反應pH以1M NaOH溶液調整至8.0±0.1。容許共軛反應在5℃下進行20±2小時。
殘餘反應性官能基之封端
在載體蛋白質上的未反應之溴乙醯化殘基係藉由在5℃下與作為封端試劑的2莫耳當量N-乙醯基-L-半胱胺酸反應3小時而淬滅。將殘餘游離硫氫基在5℃下使用4莫耳當量碘乙醯胺(IAA)經20小時封端。
經eTEC連接之糖共軛物的純化
將共軛反應(IAA封端後)混合物通過0.45μm過濾器過濾。糖共軛物之超濾/滲濾係以5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)來進行。接著將糖共軛物滲餘物通過0.2μm過濾器過濾。取出等份的糖共軛用於於檢定。將剩餘糖共軛物儲存在5℃下。
實施例2. Pn-33F eTEC共軛物之製備
活化方法
Pn33F多糖的活化
將Pn-33F多糖與500mM 1,2,4-三唑(在WFI中)化合，獲得以每克多糖計10克三唑。將混合物在乾冰-乙醇 浴中經套管冷凍(shell-frozen)且接著凍乾至乾燥。將凍乾之33F多糖在無水二甲基亞碸(DMSO)中再建構。凍乾的33F/DMSO溶液之水分含量係以Karl Fischer(KF)分析法測定。水分含量係藉由添加WFI至33F/DMSO溶液中來調節以達成0.2%之水分含量。
為了引發活化，新鮮製備成為100mg/mL之DMSO溶液的1,1’-羰基-二-1,2,4-三唑(CDT)。在硫醇化步驟前，將Pn33F多糖以不同量的CDT活化。CDT活化係在23±2℃下進行1小時。活化程度可以HPLC(A220/A205)測定。添加100mM四硼酸鈉溶液(pH 9.0)以淬滅活化反應溶液中的任何殘餘CDT。進行計算以測定四硼酸鹽之添加量且容許最終水分含量為總水溶液的1.2%。容許反應在23℃±2℃下進行1小時。
經活化之Pn-33F多糖的硫醇化
在無水DMSO中新鮮製備胱胺二鹽酸鹽且將1莫耳當量胱胺二鹽酸鹽添加至經活化之多糖反應溶液中。容許反應在23℃±2℃下進行21±3小時。將硫醇化糖溶液以添加至0.9%食鹽水中的預驟冷之5mM琥珀酸鈉(pH 6.0)中而稀釋10倍。將稀釋之反應溶液通過5μm過濾器過濾。以使用注射用水(WFI)的100K MWCO超濾膜匣進行硫醇化Pn-33F多糖之滲濾。
經活化之硫醇化Pn-33F多糖的還原及純化
在以10%體積之0.1M磷酸鈉緩衝液(pH 6.0)稀釋之後，將5莫耳當量參(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液添加至滲餘物中。容許此還原反應在23℃±2℃下進行2±1小時。硫醇化33F多糖之滲濾係以100K MWCO超濾膜匣來進行。滲濾係以預驟冷之10mM磷酸鈉(pH 4.3)來進行。取出硫醇化33F多糖滲餘物用於糖濃度及硫醇(Ellman)檢定二者。
經活化之硫醇化Pn-33F多糖的替代還原及純化
經活化之33F硫醇化糖亦如下文方式純化，作為上述純化程序之替代法。
將5莫耳當量參(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液添加至硫醇化糖反應混合物中且容許其在23℃±2℃下進行3±1小時。接著將反應混合物以添加至0.9%食鹽水中的預驟冷之5mM琥珀酸鈉(pH 6.0)中而稀釋5倍且通過5μm過濾器過濾。硫醇化糖之滲濾係以100K MWCO超濾膜匣使用40倍滲濾體積的預驟冷之10mM磷酸二氫鈉(pH 4.3)來進行。取出硫醇化33F多糖滲餘物用於糖濃度及硫醇含量(Ellman)檢定。活化方法之流程圖提供於圖8(A)中。
共軛方法
硫醇化Pn33F多糖與溴乙醯化CRM197共軛
CRM197載體蛋白質係以溴乙醯化單獨活化，如實施 例1中所述，且接著與用於共軛反應的經活化之Pn-33F多糖反應。在開始共軛反應之前，將反應容器預冷卻至5℃。將溴乙醯化CRM197與硫醇化33F多糖在反應容器中於150-200rpm之攪動速度下混合在一起。糖/蛋白質輸入比為0.9±0.1。將反應pH調整至8.0-9.0。容許共軛反應在5℃下進行20±2小時。
在溴乙醯化CRM197及硫醇化Pn33F多糖上的反應性基團之封端
將CRM197蛋白質上的未反應之溴乙醯化殘基藉由在5℃下與2莫耳當量N-乙醯基-L-半胱胺酸反應3小時而封端，接著將硫醇化33F-多糖之任何殘餘游離硫氫基在5℃下以4莫耳當量碘乙醯胺(IAA)經20小時封端。
經eTEC連接之Pn-33F糖共軛物的純化
將共軛溶液通過0.45μm或5μm過濾器過濾。33F糖共軛物糖之滲濾係以300K MWCO超濾膜匣來進行。滲濾係以5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)來進行。接著將Pn-33F糖共軛物300K滲餘物通過0.22μm過濾器過濾且儲存在5℃下。共軛方法之流程圖提供於圖8(B)中。
結果
Pn-33F eTEC糖共軛物的各批組之反應參數及特徵顯 示於表1中。與胱胺二鹽酸鹽之CDT活化-硫醇化會產生具有從63%至90%之糖產率及<1%至13%之游離糖的糖共軛物。
Figure 109137693-A0101-12-0362-109
Pn-33F eTEC糖共軛物對CRM197之OPA效價
在小鼠中的Pn-33F OPA效價係在標準條件下測定(類似於下文以10A及22F共軛物所述之OPA程序)。在四週及七週之OPA效價(具有95% CI之GMT)顯示於表2中，證明血清型33F Pn糖共軛物在鼠類致免疫性模型中激發OPA效價。
Figure 109137693-A0101-12-0362-110
實施例3. 額外的Pn-33F eTEC共軛物之製備
額外的Pn-33F eTEC共軛物係使用實施例2中所述之方法產生。該等額外的Pn-33F eTEC糖共軛物批組之反應參數及特徵顯示於表3中。
Figure 109137693-A0101-12-0363-111
如上文及表3中所示，許多Pn-33F共軛物係使用上述eTEC共軛而獲得。eTEC化學容許製備具有高產率、低游離糖%及高共軛程度(經共軛之離胺酸)之共軛物。另外，有可能使用eTEC共軛方法保持大於80%之乙醯基官能度。
實施例4. Pn-33F eTEC糖共軛物穩定性之評估：游離糖%之趨勢
將等份的共軛物批組33F-2B(參見表1)分配於聚丙烯管中，分別儲存在4℃、25℃和37℃下且監測游離糖%之趨勢。數據(游離糖%)顯示於表4中。如此表中所示，沒有顯著的游離糖%變化。
Figure 109137693-A0101-12-0364-112
另一共軛物批號(批組33F-3C)之加速穩定性亦在37℃下進行至多1個月。如表5中所示，在37℃下至多1個月沒有顯著的游離糖%變化。
Figure 109137693-A0101-12-0364-113
為了進一步確認eTEC共軛物之穩定性，將儲存在4℃下另外的共軛物批組(33F-3C和33F-5E(參見表1))監測至多約一年，用於游離糖%之潛在趨勢。如表6中所示，儲存在4℃下的共軛物之游離糖含量%在至多約一年之延長時期內沒有顯著的變化。
Figure 109137693-A0101-12-0365-114
以33F eTEC化學所產生之血清型33F共軛物經證明為穩定的，沒有顯著的降解，如以不同溫度下的游離糖趨勢所監測(實時及加速)。
實施例5. 與CRM197的Pn-8共軛物之製備
Pn-8 RAC/DMSO糖共軛物之製備
將冷凍之多糖解凍且轉移至反應容器中。將2M乙酸及WFI(注射用水)添加至多糖溶液中以達成約2.5g/L之最終多糖濃度及0.2M之最終乙酸濃度。
多糖之水解
在活化前，將天然多糖以化學方式水解。將稀釋之多糖溶液加熱至70℃且接著固定在此溫度下3.5小時。
多糖的氧化
多糖的氧化係藉由添加過碘酸鈉溶液而引發且將反應保持在23℃下進行20小時。
經活化之多糖的純化
將經活化之多糖使用超濾匣濃縮。滲濾係以20倍滲濾體積之WFI來進行。
凍乾
經活化之多糖係與蔗糖以每克經活化之多糖計25克蔗糖之比化合。將含有經活化之糖及蔗糖的瓶在乙醇浴中以套管凍乾。
經活化之多糖與CRM197的共軛及封端
將凍乾的經活化之多糖在DMSO中再建構至2mg/mL。將DMSO添加至凍乾之CRM197中用於再建構。將再建構之CRM197添加至再建構的經活化之多糖中。接著共軛係藉由添加氰基硼氫化鈉至反應混合物中而引發且在23℃下培育24小時。共軛反應的終止係藉由添加2MEq硼氫化鈉而完成。將此封端反應在23℃下進行3小時。
共軛物的純化
接著將共軛物溶液稀釋至驟冷之5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)中，過濾，使用300K纖維素膜濃縮至2-4g/L，且第一階段滲濾係以5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)進行。最終純化步驟係藉由以5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)緩衝液滲濾而完成。在完成滲 濾後，將純化之共軛物通過0.22μm過濾器轉移至收集罐中。
單價主體共軛物的稀釋
將共軛物以5mM琥珀酸鹽/0.9%食鹽水(pH 6)進一步稀釋至0.5mg/mL之標的糖濃度。完成最終0.22μm過濾步驟，以製備用於調配之單價主體共軛物(MBC)產物。
許多共軛物係使用上述方法以不同的變化參數(例如糖-蛋白質輸入比、反應濃度及Meq之氰基硼氫化鈉)獲得。與CRM197之代表性Pn-8糖共軛物之特徵提供於表7中。
Figure 109137693-A0101-12-0367-115
血清型8-CRM197共軛物在小鼠中的調理吞噬活性(OPA)效價係在標準的條件測定(類似於下文以10A和22F共軛物所述之OPA程序)。將在四週時以不同劑量之OPA效價(具有95%信賴區間(CI)之幾何平均效價(GMT))顯示於表8和9(兩個單獨的實驗)中，證明 血清型8共軛物(樣品1-9；亦參見關於該等共軛物之特徵數據的表7)在鼠類致免疫性模型中激發OPA效價。
如表8中所示，血清型8共軛物顯示與具有較差的抗體效價的對照用未經共軛之多糖相比而具有顯著較高的抗體效價。
Figure 109137693-A0101-12-0368-116
Figure 109137693-A0101-12-0368-117
自上述還原胺化反應方法所製備之共軛物產生的總體數據證明容許製備具有良好共軛產率、低游離糖%及具有 良好穩定性之共軛物。另外，經製備之共軛物在鼠類致免疫性模型中激發良好的OPA效價。
實施例6. 血清型10A多糖-CRM197共軛物之製備
經分離之肺炎鏈球菌血清型10A多糖之製備
血清型10A莢膜多糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得(參見例如在美國專利申請公開案號2006/0228380、2006/0228381、2007/0184071、2007/0184072、2007/0231340和2008/0102498及WO 2008/118752中所揭示之方法)。肺炎鏈球菌血清型10A係在種子瓶中生長且接著轉移至種子發酵罐。一旦達成標的光學密度時，將細胞轉移至生產發酵罐。發酵液係藉由添加N-月桂醯基肌胺酸而失活且以超濾及滲濾純化。
經分離之肺炎鏈球菌血清型10A莢膜多糖的氧化
將計算出體積之0.1M磷酸鉀緩衝液(pH 6.0)及注射用水(WFI)添加至多糖溶液中以達成2.5g/L之最終多糖濃度及25mM磷酸鉀緩衝液之最終濃度，若需要，將pH調節至約6.0。接著將稀釋之多糖冷卻至5℃。氧化反應係藉由添加0.25莫耳當量(MEq)過碘酸鈉溶液而引發。氧化反應時間在5℃下為約4小時。將氧化反應在5℃的持續攪拌下以1MEq 2,3-丁二醇經1-2小時淬滅。
在到達標的反應時間之後，將經活化之多糖使用30K MWCO Millipore超濾匣濃縮。接著滲濾係以20倍滲濾體 積之WFI來進行。將純化的經活化之多糖儲存在5℃。純化的經活化之糖尤其藉由(i)以SEC-MALLS之分子量及(ii)氧化程度特徵化。
經活化之肺炎鏈球菌血清型10A多糖與CRM197共軛
共軛方法係由下列步驟所組成：
a.與蔗糖賦形劑化合且凍乾；
b.凍乾的多糖與CRM197再建構；
c.經活化之多糖與CRM197共軛且封端；及
d.純化共軛物。
a.與蔗糖化合
將經活化之多糖與蔗糖以每克經活化之多糖計25克蔗糖之比化合。接著將化合之混合物的瓶凍乾。在凍乾後，將含有凍乾的經活化之多糖的瓶儲存在-20℃下。
b.凍乾的經活化之多糖與CRM197蛋白質再建構
凍乾的經活化之多糖係在無水二甲基亞碸(DMSO)中再建構。在多糖完全溶解時，將相同量的DMSO添加至經計算之CRM197中用於再建構。
c.經活化之多糖與CRM197共軛且封端
將再建構之CRM197(在DMSO中)添加至共軛反應器中的再建構的經活化之多糖中。最終的多糖濃度為1 g/L。共軛係藉由將1.2MEq氰基硼氫化鈉添加至反應混合物中來進行。將反應在23℃下培育24小時。共軛反應的終止係藉由添加2MEq硼氫化鈉而完成。將封端反應在23℃下培育3小時。
共軛反應的終止藉由添加2MEq硼氫化鈉而完成。將此封端反應在23℃下進行3小時。
d.純化共軛物
接著將共軛物溶液稀釋至5x(以體積計)經驟冷之5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)中且20X滲濾係使用5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)來進行。在完成最初滲濾之後，將共軛物滲餘物通過0.22μm過濾器轉移。將共軛物以5mM琥珀酸鹽/0.9%鹽水(pH 6)進一步稀釋，且在最終0.22μm過濾步驟後，將其儲存在2至8℃下。
許多共軛物係使用上述方法以不同的變化參數(例如糖-蛋白質輸入比、反應濃度及氰基硼氫化鈉之MEq)獲得。上述化學容許產生血清型10A共軛物，經證明為穩定的，沒有顯著的降解，如以不同溫度下的游離糖趨勢所監測(實時及加速)。與CRM197之代表性Pn-10A糖共軛物之特徵提供於表10中。
Figure 109137693-A0101-12-0372-118
在小鼠中的血清型10A-CRM197共軛物之調理吞噬活性(OPA)效價係在標準條件下測定。將30隻6至7週齡雌性Swiss Webster小鼠組在第0週以0.001μg、0.01μg或0.1μg試驗共軛物經由皮下途徑免疫。將小鼠在第3週以相同劑量的共軛物加強且接著在第4週採血。血清型特異性OPA係以第4週血清樣品進行。
調理吞噬活性(OPA)檢定法係用於測量對肺炎鏈球菌血清型10A具有特異性之鼠類血清中的功能性抗體。試驗血清係在檢定反應中準備，其測量莢膜多糖特異性免疫球蛋白調理細菌、觸發補體沈積的能力，由此加速吞噬細胞的吞噬作用及殺死細菌。OPA效價經定義為造成細菌計數比沒有試驗血清之對照槽孔減少50%之稀釋度倒數。OPA效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
OPA程序係以Hu等人之(2005)Clin Diagn Lab Immunol12(2)：287-295所述之方法為基準，具有下列的 修改。將試驗血清連續稀釋2.5倍且添加至微量滴定檢定盤中。將活血清型10A標的細菌菌株添加至槽孔中，且將盤在37℃下振盪30分鐘。將分化之HL-60細胞(吞噬細胞)及幼兔血清(3至4週齡，PEL-FREEZ®，12.5%最終濃度)添加至槽孔中且將盤在37℃下振盪60分鐘。為了終止反應，將80μL 0.9% NaCl添加至所有槽孔中，混合且將10μL等份轉移至含有200μL水的MULTISCREEN® HTS HV過濾盤(MILLIPORE®)之槽孔中。將液體在真空下通過盤過濾且將150μL HYSOY®培養基添加至各槽孔中且過濾。接著將過濾盤在37℃，5% CO2下經隔夜培育且接著使用脫色溶液(Destain Solution)(Bio-Rad Laboratories,Inc.，Hercules,CA)固定。接著將盤以考馬斯藍(Coomassie Blue)染色及脫色一次。使菌落成像且在Cellular Technology Limited(CTL)(Shaker Heights，OH)IMMUNOSPOT®分析儀上計算。使用生菌落計數繪製殺死曲線且計算OPA效價。
將在四週時以不同劑量之OPA效價(具有95%信賴區間(CI)之幾何平均效價(GMT))顯示於表11中，證明血清型10A共軛物(樣品1至3；亦參見關於該等共軛物之特徵數據的表10)在鼠類致免疫性模型中激發OPA效價。如表11中所示，血清型10A共軛物顯示與具有較差的OPA反應的對照用未經共軛之多糖相比而具有顯著較高的OPA效價。
Figure 109137693-A0101-12-0374-119
實施例7. 使用TEMPO/NCS的Pn血清型-12F之共軛
為了改進血清型12F-CRM197糖共軛物的穩定性，探究使用2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基自由基(TEMPO)及作為共氧化劑的N-氯琥珀醯亞胺(NCS)氧化一級醇成為醛基團之替代化學。GC/MS分析顯示氧化位點與過碘酸鹽媒介之氧化位點不同。在TEMPO-NCS氧化的例子中，α-D-Glcp及2-Glcp皆氧化，而使用過碘酸鹽時，α-D-Galp為主要的氧化位點(參見圖4)。如本文更詳細說明，TEMPO係以催化量(
Figure 109137693-A0101-12-0374-98
0.1莫耳當量)使用且所欲氧化程度(DO)係藉由改變所使用的NCS量而達成。接著合成許多共軛物且特徵化。血清型12F糖共軛物的生產通常係以如下的許多階段進行：
a)將血清型12F多糖水解成分子量50kDa至500kDa；
b)以TEMPO/NCS活化血清型12F多糖；
c)純化經活化之多糖；
d)使經活化之血清型12F與CRM197蛋白質共軛；及
e)純化血清型12F-CRM197共軛物。
血清型12F的水解及氧化
多糖之水解通常係在酸性條件下以加熱進行，獲得在100kDa至350kDa之所欲範圍內的平均分子量。典型的實驗於下文說明。
水解
將血清型12F多糖溶液添加至夾套反應容器中。將維持~0.1M乙酸濃度的所需體積之0.30M乙酸及注射用水(WFI)添加至容器中。將溶液的pH使用1N NaOH或冰乙酸調整至3.2±0.3。將反應混合物的溫度增加至70±5℃。將反應混合物在70±5℃下攪拌90-120分鐘。將反應混合物冷卻至23±2℃且藉由添加1M NaOH溶液中和(pH 7.0)。將水解之多糖使用30K MWCO膜以WFI超濾/滲濾來純化。將通過0.22μm過濾器過濾且儲存在2至8℃下，直至氧化為止。將水解之多糖的分子量以SEC-MALLS分析以確保分子量滿足100kDa至350kDa之標的範圍。
部分氧化
在一個實驗中，將血清型12F多糖使用壓力均質化及使用微流化器以機械方式粒度分級，使分子量減小至約100kDa至500kDa。將粒度分級之多糖以4.0mg/mL之濃度添加至反應容器中且與碳酸氫鹽/碳酸鹽緩衝液(0.5M NaHCO3/0.05M Na2CO3，pH 8.6)以1：1 v/v之比混 合。將
Figure 109137693-A0101-12-0376-99
0.1莫耳當量TEMPO添加至攪拌混合物中。反應係藉由添加0.6至1.0莫耳當量NCS開始。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，隨後將經活化之多糖使用30K超濾膜以WFI滲濾來純化。收集經純化之多糖且氧化程度(DO)係藉由量化醛(使用3-甲基-2-苯並噻唑啉酮腙(MBTH)檢定法)及多糖(使用蒽酮檢定法)的量度來測定。
在另一實驗中，將血清型12F多糖水解，使分子量減小至約100kDa至500kDa之分子量。將血清型12F多糖添加至反應容器中且與0.5M NaHCO3/0.05M Na2CO3緩衝液(pH 8.6)以1：1 v/v之比混合。將溶解在WFI中的0.6至1.0莫耳當量NCS添加至攪拌混合物中。活化係藉由添加溶解在WFI中的約0.1莫耳當量TEMPO而引發。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，隨後將經活化之多糖使用30K超濾膜以WFI滲濾來純化。將純化的經活化之多糖通過0.2μm過濾器過濾且儲存在4℃，直到使用為止。
亦在pH 6.5、7.0、7.5和8.0之磷酸鈉緩衝液中成功地進行經TEMPO/NCS媒介之氧化。在一些活化實驗中，使用一級醇(諸如正丙醇)淬滅試劑以避免糖過度氧化。在另一組實驗中，使經化學水解之多糖直接經受氧化，而沒有超濾/滲濾純化步驟。
經氧化之血清型12F多糖的共軛
在一個實驗中，將純化的經氧化之血清型12F多糖添加至反應容器中，接著添加0.5M磷酸鈉緩衝液(pH 6.5)至0.1M之最終緩衝劑濃度。將先前凍乾之CRM197添加至此溶液中且充分混合，以獲得均質溶液。將pH使用稀釋的HCl或1N NaOH溶液調整至6.8。接著添加1.5莫耳當量NaCNBH3。將反應混合物在室溫(23℃)下攪拌24小時及在37℃下攪拌2.5天。接著將反應混合物以1×0.9%食鹽水稀釋且將未反應之醛基團以2莫耳當量硼氫化鈉〝封端〞。封端反應時間為3小時。
在另一實驗中，將純化的經活化之血清型12F添加至反應容器中，接著添加0.5M磷酸鈉緩衝液(pH 6.5)至0.1M之最終緩衝劑濃度。將先前凍乾之CRM197添加至此溶液中且充分混合，以獲得均質溶液。將pH使用稀釋的HCl或1N NaOH溶液調整至6.8。接著添加3莫耳當量NaCNBH3。將反應混合物在23℃下攪拌24小時及在37℃下攪拌48小時。接著將反應混合物以1×0.9%食鹽水稀釋且攪拌，將未反應之醛基團以1莫耳當量硼氫化鈉NaBH4〝封端〞。封端反應時間為3小時。
在另一實驗中，將純化的經活化之血清型12F添加至反應容器中且與CRM197溶液混合。將混合物凍乾且將粉末溶解在0.1M磷酸鈉緩衝液(pH 6.8)中至5mg/mL之最終糖濃度。若必要時，將pH使用稀釋的HCl或1N NaOH溶液調整至6.8。接著添加3莫耳當量NaCNBH3。將反應混合物在23℃下攪拌24小時及在37℃下攪拌48 小時。接著將反應混合物以1×0.9%食鹽水稀釋，將未反應之醛基團以1莫耳當量硼氫化鈉NaBH4〝封端〞。封端反應時間為3小時。
共軛物純化
將封端之反應混合物使用5μm過濾器過濾且接著使用100K MWCO超濾膜純化。先將共軛物使用10mM琥珀酸鹽/0.9%食鹽水(pH 6.0)緩衝液滲濾。接著將經純化之共軛物通過0.45/0.22μm過濾器過濾，以獲得主體共軛物。
氧化程度
使用TEMPO/NCS系統達成在血清型12F多糖中之一級醇的成功氧化。將水解之血清型12F多糖藉由調整NCS共氧化劑量而氧化至不同的氧化程度(DO)值。使用不同的多糖批組及分子量之不同量的NCS對DO的效應顯示於圖9中。氧化反應通常在2小時內完成，因為在2小時後未觀察到顯著的DO變化。
許多血清型12F共軛物係使用TEMPO/NCS氧化之多糖而產生及特徵化。將結果總結表12中。
Figure 109137693-A0101-12-0379-120
實施例8. 使用TEMPO/NCS氧化方法的Pn-血清型12F-CRM197共軛物之致免疫性
血清型12F-CRM197共軛物在小鼠中的調理吞噬活性(OPA)效價係在標準的條件下測定。在四週和七週時的OPA效價(具有95%信賴區間(CI)之幾何平均效價(GMT))顯示於表13中，證明血清型12F共軛物(批組12F-97B；亦參見關於此共軛物之特徵數據的表12)在鼠類致免疫性模型中激發OPA效價。
Figure 109137693-A0101-12-0379-121
實施例9. Pn-12F糖共軛物穩定性之評估
比較以過碘酸鹽氧化相對於TEMPO/NCS氧化所產生的共軛物之穩定性(在25℃下)(參見圖10)證明以氧 化Pn-12F多糖所產生的共軛物相對更穩定。如圖10中所示，在25℃下以過碘酸鹽氧化Pn-12F多糖所產生的糖共軛物觀察到隨時間增加的游離糖。相對之下，使用TEMPO/NCS氧化Pn-12F多糖所製備的糖共軛物顯示在類似的條件下對游離糖沒有顯著的趨勢。
實施例10. 血清型15B多糖-CRM197共軛物之製備
經分離之肺炎鏈球菌血清型15B多糖之製備
血清型15B莢膜多糖可使用一般熟習本技術領域者已知的分離程序自細菌直接獲得。肺炎鏈球菌血清型15B係在種子瓶中生長且接著轉移至種子發酵罐。一旦達成標的光學密度時，將細胞轉移至生產發酵罐。發酵液係藉由添加N-月桂醯基肌胺酸而失活且以超濾及滲濾純化。
接著將經純化之肺炎鏈球菌血清型15B多糖使用PANDA 2K®均質機(GEA Niro Soavi，Parma,Italy)以高壓均質化粒度分級，以生產經分離之肺炎鏈球菌血清型15B多糖。
以上述方法所獲得的經分離之肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖較佳地包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯且具有介於50kDa與500kDa，較佳為150kDa至350kDa之間的分子量。
經分離之肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖的氧化
多糖氧化係藉由在依序添加計算出用量的500mM磷 酸鉀緩衝液(pH 6.0)及WFI的100mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.0)中進行，得到2.0g/L之最終多糖濃度。若需要，將反應pH調整至約pH 6.0。在調整pH之後，將反應溫度調整至23℃。氧化反應係藉由添加約0.25莫耳當量過碘酸鈉而引發。將氧化反應在23℃下進行約16小時。
經活化之多糖的濃縮及滲濾係使用10K MWCO超濾匣進行。滲濾係以20倍滲濾體積之WFI進行。接著將純化的經活化之多糖儲存在5℃下。純化的經活化之糖尤其以下列者特徵化：(i)以比色檢定法之糖濃度；(ii)以比色檢定法之醛濃度；(iii)氧化程度；(iv)以SEC-MALLS之分子量；及(v)O-乙醯基及甘油的存在。
SEC-MALLS係用於測定多糖及多糖-蛋白質共軛物之分子量。SEC係用於以流體力學體積來分離多糖。折射率(RI)及多角雷射光散射(MALLS)檢測器係用於測定分子量。當光與物質交互作用時會散射且散射光之量與濃度、dn/dc之平方(比折射率增量)及物質的莫耳質量有關。分子量量度係以來自MALLS檢測器之散射光信號及來自RI檢測器之濃度信號的讀數為基準來計算。
經活化之多糖的氧化程度(DO=糖重複單元莫耳數/醛莫耳數)係如下方式測定：
糖重複單元莫耳數係以多種比色方法來測定，例如使用蒽酮方法。先將多糖以硫酸及熱的作用而分解成單糖。將蒽酮試劑與己糖反應以形成黃綠色複合物，在625nm 下以分光光度方式讀取其吸光度。在檢定範圍內的吸光度與存在的己糖量成正比。
醛之莫耳數亦同時使用MBTH比色方法來測定。MBTH檢定法包含藉由將醛基團(來自給出之樣品)與3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH檢定試劑)反應以形成吖
Figure 109137693-A0101-12-0382-100
(azine)化合物。將過量3-甲基-2-苯并噻唑酮腙氧化以形成反應性陽離子。將反應性陽離子與吖
Figure 109137693-A0101-12-0382-101
反應以形成藍色發色團。接著在650nm下以光譜方式讀取所形成之發色團。
以上述方法所獲得的經活化之肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖較佳地包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯且具有介於50kDa與500kDa，較佳為150kDa與350kDa之間的分子量。
經活化之肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖與CRM197共軛
共軛方法係由下列步驟所組成：
a)與蔗糖賦形劑化合且凍乾；
b)凍乾的經活化之多糖與CRM197再建構；
c)經活化之多糖與CRM197共軛且封端；及
d)純化共軛物。
a)與蔗糖賦形劑化合且凍乾
將經活化之多糖與蔗糖以每克經活化之多糖計25克蔗糖之比化合。接著將化合之混合物的瓶凍乾。在凍乾 後，將含有凍乾的經活化之多糖的瓶儲存在-20℃下。將計算出用量之CRM197蛋白質單獨以套管冷凍且凍乾。將凍乾之CRM197儲存在-20℃下。
b)凍乾的經活化之多糖與CRM197蛋白質再建構
將凍乾的經活化之多糖係在無水二甲基亞碸(DMSO)中再建構。在多糖完全溶解時，將相同量的無水DMSO添加至凍乾的CRM197中用於再建構。
c)共軛且封端
將再建構的經活化之多糖與再建構之CRM197(輸入比：0.8：1)在反應容器中組合，接著充份混合，以獲得澄清溶液，隨後以氰基硼氫化鈉引發共軛。在反應溶液中的最終多糖濃度為約1g/L。共軛係藉由添加1.0-1.5MEq氰基硼氫化鈉至反應混合物中而引發且在23℃下培育40-48小時。將共軛反應藉由添加2MEq硼氫化鈉(NaBH4)而終止，將未反應之醛封端。將此封端反應在23℃下持續3小時。
d)純化共軛物
將共軛物溶液在製備中以經驟冷之5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)以1：10稀釋，使用100-300K MWCO膜以切向流過濾來純化。將稀釋之共軛物溶液通過5μm過濾器且滲濾係使用5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水 (pH 6.0)作為介質來進行。在完成滲濾之後，將共軛物滲餘物通過0.22μm過濾器轉移。
將共軛物以5mM琥珀酸鹽/0.9%鹽水(pH 6)進一步稀釋成約0.5mg/mL之標的糖濃度。完成最終0.22μm過濾步驟，獲得糖共軛物。
以上述方法所獲得的共軛物包含以每一mM血清型15B莢膜多糖計至少0.6mM乙酸酯，具有介於3,000kDa與20,000kDa之間的分子量及具有介於2與6之間的共軛程度。
實施例11. 包含與CRM197共價連接之肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖之糖共軛物的特徵
共軛物1係藉由實施例10之方法製備。共軛物2和3係藉由類似的方法使用不同量的氧化劑製備。共軛物4係藉由類似的方法製備，除了經純化之血清型15B莢膜多糖未經粒度分級且活化至較低的DO(較高氧化程度)，且共軛係在水性介質中進行以外。共軛物5係藉由類似的方法製備，除了經純化之血清型15B莢膜多糖係藉由化學水解來粒度分級且共軛係在水性介質中進行以外。共軛物6和7係藉由類似的方法製備，除了經純化之血清型15B莢膜多糖未經粒度分級以外。
將獲得的共軛物特徵化且將結果總結於表14中。
Figure 109137693-A0101-12-0385-122
游離多糖百分比係藉由以下程序測量：利用氫氧化鋁凝膠結合蛋白質及以離心去除經共價連結之糖。將樣品與磷酸鹽緩衝之氫氧化鋁凝膠混合且離心。將經結合之糖與凝膠沈澱及游離糖保留在上清液中。將所得上清液及對照樣品以適當的比色檢定法量化，以測定游離糖百分比且確認充分去除的蛋白質及回收的糖。
先將用於胺基酸分析的多糖-蛋白質樣品在真空及加熱下使用6N鹽酸(HCl)水解作用而水解成其呈游離胺基酸的個別組份(160℃經15分鐘)。在水解後，將樣品使用胺基酸分析儀分析。個別胺基酸係通過使用檸檬酸鈉 緩衝液之分級梯度的離子交換層析術以溫度及流速變化來分離。在分離後，各胺基酸殘餘物的量係使用管柱後茚三酮偶合檢測系統以定量方式測定。在此系統中，將茚三酮與管柱後反應器系統中的管柱溶析物混合且將該混合物通過光度計。茚三酮與經溶析之胺基酸的反應產生在570nm的最大吸收之紫色化合物。此吸光度為存在的α-胺基之量的線性反應(函數)且此反應提供具有α-胺基的所有有機化合物的定量比色檢定。在與不具游離胺基的亞胺基酸(諸如脯胺酸和羥基脯胺酸)之反應中，產生亮黃色化合物且在440nm下監測。各胺基酸之峰面積係使用570nm及440nm波長輸出二者來計算。
產率係以如下方式計算：(共軛物中的多糖量×100)/經活化之多糖量。
使用水性介質所產生的共軛物(4和5)證明O-乙醯基含量的顯著損失。在DMSO溶劑中使用天然多糖而沒有MW粒度分級所產生的共軛物(6及7)未證明O-乙醯基含量的損失。然而，除了差的可過濾性特徵以外，共軛物產率亦非常低。在DMSO中使用以高壓均質化粒度分級之多糖所產生的共軛物(1、2和3)具有高產率及更好的可過濾性特徵與顯著保存的O-乙醯基含量。該等共軛物亦具有非常低的游離多糖含量。
實施例12. 使用Pn-血清型15B-CRM197共軛物之調理吞噬活性(OPA)檢定法
本發明的肺炎鏈球菌血清型15B共軛物之致免疫性可使用下文所述之OPA檢定法評定。
將30隻6至7週齡雌性Swiss Webster小鼠組在第0週以0.001μg、0.01μg或0.1μg試驗共軛物經由皮下途徑免疫。將小鼠在第3週以相同劑量的共軛物加強且接著在第4週採血。血清型特異性OPA係以第4週血清樣品進行。
OPA係用於測量對肺炎鏈球菌血清型15B具有特異性之鼠類血清中的功能性抗體。試驗血清係在檢定反應中準備，其測量莢膜多糖特異性免疫球蛋白調理細菌、觸發補體沈積的能力，由此加速吞噬細胞的吞噬作用及殺死細菌。OPA效價經定義為造成細菌計數比沒有試驗血清之對照槽孔減少50%之稀釋度倒數。OPA效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
OPA程序係以Hu等人之(2005)Clin Diagn Lab Immunol12(2)：287-295所述之方法為基準，具有下列的修改。將試驗血清連續稀釋2.5倍且添加至微量滴定檢定盤中。將活血清型15B標的細菌添加至槽孔中且將盤在37℃下振盪30分鐘。將分化之HL-60細胞(吞噬細胞)及幼兔血清(3至4週齡，PEL-FREEZ®，6.25%最終濃度)添加至槽孔中且將盤在37℃下振盪60分鐘。為了終止反應，將80μL 0.9% NaCl添加至所有槽孔中，混合且將10μL等份轉移至含有200μL水的MULTISCREEN® HTS HV過濾盤(MILLIPORE®)之槽孔中。將液體在真 空下通過盤過濾且將150μL HYSOY®培養基添加至各槽孔中且過濾。接著將過濾盤在37℃，5% CO2下經隔夜培育且接著使用脫色溶液(Bio-Rad Laboratories,Inc.，Hercules,CA)固定。接著將盤以考馬斯藍染色及脫色一次。使菌落成像且在Cellular Technology Limited(CTL)(Shaker Heights，OH)IMMUNOSPOT®分析儀上計算。使用生菌落計數繪製殺死曲線且計算OPA效價。
共軛物1和2之致免疫性係根據上述檢定法測試。一種額外的共軛物及未經共軛之天然肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖(未經共軛之PS)亦在相同的檢定法中測試：
共軛物9係藉由將天然(亦即未經粒度分級)血清型15B莢膜多糖與CRM197在水溶液中以還原胺化反應共軛而製備。
將結果顯示於表15。
Figure 109137693-A0101-12-0388-123
如上表15中所示，在投予小鼠時，共軛物1和2產生能夠調理肺炎鏈球菌血清型15B、觸發補體沈積之抗體，由此加速吞噬細胞的吞噬作用及殺死細菌。另外，儘 管其分子量較低，但其亦顯出與未經粒度分級之共軛物9相比而類似的致免疫性程度。
實施例13. 血清型22F多糖-CRM197共軛物之製備
經分離之肺炎鏈球菌血清型22F多糖之製備
肺炎鏈球菌血清型22F係在種子瓶中生長且接著轉移至種子發酵罐。一旦達成標的光學密度時，將細胞轉移至生產發酵罐。發酵液係藉由添加N-月桂醯基肌胺酸而失活且以超濾及滲濾純化。
經純化之肺炎鏈球菌血清型22F多糖係使用PANDA 2K®均質機(GEA Niro Soavi，Parma,Italy)以高壓均質化粒度分級，以生產經分離之肺炎鏈球菌血清型22F多糖。
經分離之肺炎鏈球菌血清型22F莢膜多糖的氧化
多糖氧化係在藉由依序添加經計算出用量的500mM磷酸鉀緩衝劑(pH 5.8)及WFI而獲得的100mM磷酸鉀緩衝劑(pH 5.8)中進行，得到2.0g/L之最終多糖濃度。若需要，將反應pH調整至約pH 5.8。在調整pH之後，將反應溫度下降至5℃。氧化反應係藉由添加約0.10莫耳當量(MEq)過碘酸鈉而引發。標的氧化反應時間係在5℃下進行約16小時。
將氧化反應在5℃的持續攪拌下以2Meq之2,3-丁二醇經1至2小時萃滅。
經活化之多糖的濃縮及滲濾係使用100K MWCO超濾匣進行。滲濾係以35倍滲濾體積之WFI進行。將純化的經活化之多糖儲存在5℃下。純化的經活化之糖尤其以下列者特徵化：(i)以SEC-MALLS之分子量；(ii)O-乙醯基的存在；及(iii)氧化程度。
SEC-MALLS係用於測定多糖及多糖-蛋白質共軛物之分子量。SEC係用於以流體力學體積來分離多糖。折射率(RI)及多角雷射光散射(MALLS)檢測器係用於測定分子量。當光與物質交互作用時會散射且散射光之量與濃度、dn/dc之平方(比折射率增量)及物質的莫耳質量有關。分子量量度係以來自MALLS檢測器之散射光信號及來自RI檢測器之濃度信號的讀數為基準來計算。
經活化之多糖的氧化程度(DO=糖重複單元莫耳數/醛莫耳數)係如下方式測定：
糖重複單元莫耳數係以多種比色方法來測定，例如使用蒽酮方法。先將多糖以硫酸及熱的作用而分解成單糖。將蒽酮試劑與己糖反應以形成黃綠色複合物，在625nm下以分光光度方式讀取其吸光度。在檢定範圍內的吸光度與存在的己糖量成正比。
醛之莫耳數亦同時使用MBTH比色方法來測定。MBTH檢定法包含藉由將醛基團(來自給出之樣品)與3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH檢定試劑)反應以形成吖
Figure 109137693-A0101-12-0390-102
化合物。將過量3-甲基-2-苯并噻唑酮腙氧化以形成反應性陽離子。將反應性陽離子與吖
Figure 109137693-A0101-12-0390-103
反應以形成藍色發色 團。接著在650nm下以光譜方式讀取所形成之發色團。
經活化之肺炎鏈球菌血清型22F多糖與CRM197共軛
共軛方法係由下列步驟所組成：
a.與蔗糖賦形劑化合且凍乾；
b.凍乾的經活化之多糖與CRM197再建構；
c.經活化之多糖與CRM197共軛且封端；及
d.純化共軛物。
a.與蔗糖賦形劑化合且凍乾
將經活化之多糖與蔗糖(50% w/v於WFI中)以每克經活化之多糖計25克蔗糖之比化合。接著將化合之混合物的瓶凍乾。在凍乾後，將含有凍乾的經活化之多糖的瓶儲存在-20℃下。將計算出用量之CRM197蛋白質(標的S/P之輸入比=1)單獨以套管冷凍且凍乾。將凍乾之CRM197儲存在-20℃下。
b.凍乾的經活化之多糖與CRM197蛋白質再建構
凍乾的經活化之多糖係在無水二甲基亞碸(DMSO)中再建構。在多糖完全溶解時，將相同量的無水DMSO添加至凍乾的CRM197中用於再建構。
c.經活化之多糖與CRM197共軛且封端
將再建構之CRM197(在DMSO中)與再建構的經活 化之多糖在反應容器中組合。在反應溶液中的最終多糖濃度為約1g/L。共軛係藉由添加1.5MEq氰基硼氫化鈉至反應混合物中而引發且將反應在23℃下培育20小時。共軛反應的終止係藉由添加2MEq硼氫化鈉而完成，將封端反應在23℃下培育3小時。
d.純化共軛物
將共軛物溶液在製備中以經驟冷之5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)以1：5稀釋，使用100K MWCO膜以切向流過濾來純化，且20X滲濾係使用5mM琥珀酸鹽-0.9%食鹽水(pH 6.0)作為介質來進行。在完成滲濾之後，將共軛物滲餘物進一步稀釋，通過0.22μm過濾器過濾且儲存在2-8℃下。
許多共軛物係使用上述方法以不同的變化參數(例如糖-蛋白質輸入比、反應濃度及氰基硼氫化鈉之MEq)獲得。與CRM197之代表性Pn-22F糖共軛物之特徵提供於表16中。
Figure 109137693-A0101-12-0392-124
在最終共軛物中的O-乙醯基含量%(經保持)係自共軛物之O-乙醯基含量(每一微莫耳血清型22F糖重複單元計的O-乙醯基微莫耳數)相對於多糖之O-乙醯基含量(每一微莫耳血清型22F糖重複單元計的O-乙醯基微莫耳數)之比率來計算。
以上文所獲得的共軛物之致免疫性係使用下文所述之調理吞噬檢定法(OPA)來評定。
將30隻6至7週齡雌性Swiss Webster小鼠組在第0週以0.001μg、0.005μg或0.01μg試驗共軛物經由皮下途徑免疫接種。將小鼠在第3週以相同劑量的共軛物加強且接著在第4週採血。血清型特異性OPA係以第4週血清樣品進行。
調理吞噬活性(OPA)檢定法係用於測量對肺炎鏈球菌血清型22F具有特異性之鼠類血清中的功能性抗體。試驗血清係在檢定反應中準備，其測量莢膜多糖特異性免疫球蛋白調理細菌、觸發補體沈積的能力，由此加速吞噬細胞的吞噬作用及殺死細菌。OPA效價經定義為造成細菌計數比沒有試驗血清之對照槽孔減少50%之稀釋度倒數。OPA效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
OPA程序係以Hu等人之(2005)Clin Diagn Lab Immunol12(2)：287-295所述之方法為基準，具有下列的修改。將試驗血清連續稀釋2.5倍且添加至微量滴定檢定盤中。將活血清型22F標的細菌菌株添加至槽孔中且將盤在25℃下振盪30分鐘。將分化之HL-60細胞(吞噬細 胞)及幼兔血清(3至4週齡，PEL-FREEZ®，12.5%最終濃度)添加至槽孔中且將盤在37℃下振盪45分鐘。為了終止反應，將80μL 0.9% NaCl添加至所有槽孔中，混合且將10μL等份轉移至含有200μL水的MULTISCREEN® HTS HV過濾盤(MILLIPORE®)之槽孔中。將液體在真空下通過盤過濾且將150μL HYSOY®培養基添加至各槽孔中且過濾。接著將過濾盤在37℃，5% CO2下經隔夜培育且接著使用脫色溶液(Bio-Rad Laboratories,Inc.，Hercules,CA)固定。接著將盤以考馬斯藍染色及脫色一次。使菌落成像且在Cellular Technology Limited(CTL)(Shaker Heights，OH)IMMUNOSPOT®分析儀上計算。使用生菌落計數繪製殺死曲線且計算OPA效價。
血清型22F-CRM197共軛物的調理吞噬活性(OPA)效價係如上文提及方式測定。將在四週時以不同劑量之OPA效價(具有95%信賴區間(CI)之幾何平均效價(GMT))顯示於表17和18(兩個單獨的實驗)中，證明血清型22F共軛物(批組1至7；亦參見關於該等共軛物之特徵數據的表16)在鼠類致免疫性模型中激發OPA效價。
Figure 109137693-A0101-12-0395-125
Figure 109137693-A0101-12-0395-126
實施例14. 與CRM197之Pn-11A共軛物之製備
Pn-11A RAC糖共軛物之製備
將儲存在去離子水或25mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.0)中冷凍的經粒度分級之多糖在5℃下解凍。
多糖的氧化
多糖氧化係藉由在添加500mM磷酸鉀緩衝劑(pH 6.0)及WFI的100mM磷酸鉀緩衝劑(pH 6.0)中進行，得到2.0g/L之最終多糖濃度。將氧化反應在23℃下進行。氧化反應係藉由添加過碘酸鈉而引發。攪動速度的範圍係從100至140rpm。
經活化之11A多糖的純化
經活化之多糖的濃縮及滲濾係使用超濾匣進行。滲濾係以20倍滲濾體積之WFI來進行。在0.22μm過濾後，將純化的經活化之多糖儲存在5℃下。
共軛方法說明
共軛方法係由下列步驟所組成：
a.CRM197蛋白質之套管冷凍且凍乾；
b.經活化之多糖與CRM197再建構；
c.經活化之多糖與CRM197共軛；及
d.純化且稀釋共軛物。
a.CRM197蛋白質之套管冷凍且凍乾
將CRM197蛋白質經套管冷凍且凍乾。
b.經活化之多糖與CRM197再建構
將經活化之多糖溶液(~10g/L)裝入反應器中，接著添加計算出用量之0.5N磷酸鈉緩衝液(pH 7.2)。在攪拌下添加凍乾的CRM197且將反應混合物攪拌2至4小時以達成CRM197完全溶解。
c.共軛且封端
共軛係藉由添加氰基硼氫化物來引發。將反應混合物 在23℃下培育72至96小時。共軛反應的終止係藉由添加0.5 X WFI，接著添加2MEq硼氫化鈉來完成。將此封端反應在23℃下保持3至4小時。
d.共軛物的稀釋及初步純化
將共軛物溶液在製備中以0.15N磷酸鈉緩衝液(pH 8.0)以1：5(反應體積)稀釋，以切向流過濾(TFF)來純化。將稀釋之共軛物在稀釋容器中混合且接著通過5μm過濾器。接著將過濾之共軛物溶液濃縮至1至2g/L。進行兩步驟滲濾方法。在步驟1中，TFF係使用30X(滲濾體積)0.15N磷酸鈉緩衝液(pH 8.0)，接著以20X 5mM琥珀酸鹽-0.9% NaCl(pH6.0)進行。在完成初步滲濾後，將共軛物滲餘物通過0.45μm過濾器轉移至收集罐中。
共軛物的最終滲濾
最終純化步驟為使用再生纖維素膜以5mM琥珀酸鹽-0.9% NaCl(pH 6.0)介質的20X滲濾。
單價主體共軛物(MBC)的稀釋
將共軛物進一步以5mM琥珀酸鹽/0.9% NaCl(pH 6)稀釋至0.5mg/mL之標的糖濃度。完成最終0.22μm過濾以製備用於調配之單價主體共軛物(MBC)產物。
許多共軛物係使用上述方法以不同的變化參數(例如 糖-蛋白質輸入比、反應濃度及氰基硼氫化鈉之MEq)獲得。與CRM197之代表性Pn-11A糖共軛物之特徵提供於表19中(批組1至5)。
使用RAC/DMSO製備Pn-11A糖共軛物
經氧化之多糖係如上述方法製備及純化(參見Pn-11A RAC糖共軛物之製備)。
經由在DMSO中的還原胺化反應(RAC/DMSO)共軛
經由RAC/DMSO的11A之共軛係由下列步驟所組成：
a.與蔗糖化合，套管冷凍且凍乾；
b.凍乾的多糖與CRM197再建構；
c.經活化之多糖與CRM197共軛，及
d.純化且稀釋共軛物。
a.與蔗糖化合，套管冷凍且凍乾
自粒度分級之多糖所製備的經活化之多糖係與蔗糖以每克經活化之多糖計25克蔗糖之比化合。將組份混合，接著將化合之混合物的套管冷凍瓶凍乾。將CRM197蛋白質單獨經套管冷凍且凍乾。
b.凍乾的經活化之多糖與CRM197蛋白質再建構
將凍乾的經活化之多糖以2mg/mL之濃度於DMSO 中再建構。在多糖完全溶解後，將DMSO添加至凍乾的CRM197中用於再建構。
c.共軛且封端
將再建構之CRM197(在DMSO中)與再建構的經活化之多糖在共軛反應容器中組合。在反應溶液中的最終多糖濃度為1g/L。共軛係藉由添加氰基硼氫化物至反應混合物中而引發且在23℃下培育22小時。共軛反應的終止係藉由添加2MEq硼氫化鈉來完成。將此封端反應在23℃下保持3至4小時。
d.純化且稀釋共軛物
共軛物溶液係使用如上文所述之類似方法純化且稀釋。
許多共軛物係使用上述方法以不同的變化參數(例如糖-蛋白質輸入比、反應濃度及氰基硼氫化鈉之MEq)獲得。與CRM197之代表性Pn-11A糖共軛物之特徵提供於表19中(批組6至8)。
Figure 109137693-A0101-12-0400-127
自上述還原胺化反應方法所製備的共軛物產生之總體數據證明其容許製備具有良好的共軛產率、低游離糖%及良好的穩定性之共軛物。
上文所獲得的共軛物之致免疫性已使用下文所述之調理吞噬檢定法(OPA)評定。
將30隻6至7週齡雌性Swiss Webster小鼠組在第0週以0.005μg、0.01μg或0.1μg試驗共軛物經由皮下途徑免疫接種。將小鼠在第3週以相同劑量的共軛物加強且接著在第4週採血。血清型特異性OPA係以第4週血清樣品進行。
調理吞噬活性(OPA)檢定法係用於測量對肺炎鏈球菌血清型11A具有特異性之鼠類血清中的功能性抗體。試驗血清係在檢定反應中準備，其測量莢膜多糖特異性免疫球蛋白調理細菌、觸發補體沈積的能力，由此加速吞噬細胞的吞噬作用及殺死細菌。OPA效價經定義為造成細菌計數比沒有試驗血清之對照槽孔減少50%之稀釋度倒數。OPA效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
OPA程序係以Hu等人之(2005)Clin Diagn Lab Immunol12(2)：287-29所述之方法為基準，具有下列的修改。將試驗血清連續稀釋2.5倍且添加至微量滴定檢定盤中。將活血清型22F標的細菌菌株添加至槽孔中且將盤在25℃下振盪30分鐘。將分化之HL-60細胞(吞噬細胞)及幼兔血清(3至4週齡，PEL-FREEZ®，12.5%最終濃度)添加至槽孔中且將盤在37℃下振盪60分鐘。為了終止反應，將80μL 0.9% NaCl添加至所有槽孔中，混合且將10μL等份轉移至含有200μL水的MULTISCREEN® HTS HV過濾盤(MILLIPORE®)之槽孔中。將液體在真空下通過盤過濾且將150μL HYSOY®培養基添加至各槽孔中且過濾。接著將過濾盤在37℃，5% CO2下經隔夜培育且接著使用脫色溶液(Bio-Rad Laboratories,Inc.，Hercules,CA)固定。接著將盤以考馬斯藍染色及脫色一次。使菌落成像且在Cellular Technology Limited(CTL)(Shaker Heights，OH)IMMUNOSPOT®分析儀上計算。使用生菌落計數繪製殺死曲線且計算OPA效價。
血清型11A-CRM197共軛物在小鼠中的調理吞噬活性(OPA)效價係如上文提及之方式測定。將在四週時以不同劑量之OPA效價(具有95%信賴區間(CI)之幾何平均效價(GMT))顯示於表20中，證明血清型11A共軛物(批組2至4和8；亦參見關於該等共軛物之特徵數據的表19)在鼠類致免疫性模型中激發OPA效價。
Figure 109137693-A0101-12-0402-128
實施例15. 16價肺炎球菌共軛物疫苗之調配
調配包含全部皆個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F之糖共軛物的16價共軛物組成物(16vPnC)。
來自肺炎鏈球菌血清型15B、22F和33F之糖共軛物係如上所揭示之方式生產及來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物係如WO 2006/110381中所揭示之方式生產。
主體濃縮物的所需體積係以批組體積及主體糖濃度為基準計算。經調配之主體疫苗係藉由下列方式製備：添加獲得5.0mM琥珀酸鹽及150mM NaCl之最終標的緩衝液濃度的所需體積之NaCl/琥珀酸鹽緩衝液(pH 5.8)。添加最終濃度至0.02%之聚山梨醇酯80及16價肺炎球菌共軛物。將製劑通過0.2μm Millipore PES膜，接著添加AlPO4來過濾。將調配物混合以容許結合及達成均質性。
接著將調配物填充至玻璃注射器中以遞送0.5mL劑量體積。
最終劑量形式係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F之2.2μg各糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型6B之4.4μg糖共軛物、5mM琥珀酸鹽緩衝液pH 5.8、0.02%(w/w)PS80、150mM NaCl及呈AlPO4之0.25mg/mL鋁所組成之0.5mL劑量。0.5mL劑量之CRM197含量為約38μg。
實施例16. 20價肺炎球菌共軛物疫苗之調配
調配包含全部皆個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F之糖共軛物的20價共軛物組成物(20vPnC)。
來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之糖共軛物係如上所揭示之方式生產及來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之糖共軛物係如WO 2006/110381中所揭示之方式生產。
主體濃縮物的所需體積係以批組體積及主體糖濃度為基準計算。經調配之主體疫苗係藉由下列方式製備：添加獲得5.0mM琥珀酸鹽及150mM NaCl之最終標的緩衝液濃度的所需體積之NaCl/琥珀酸鹽緩衝液(pH 5.8)。添 加最終濃度至0.02%之聚山梨醇酯80及20價肺炎球菌共軛物。將製劑通過0.2μm Millipore PES膜，接著添加AlPO4來過濾。將調配物充份混合以獲得共軛物與鋁的最大結合。
接著將調配物填充至玻璃注射器中以遞送0.5mL劑量體積。
最終劑量形式係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F之2.2μg各糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型6B之4.4μg糖共軛物、5mM琥珀酸鹽緩衝液pH 5.8、0.02%(w/w)PS80、150mM NaCl及呈AlPO4之0.25mg/mL鋁所組成之0.5mL劑量。0.5mL劑量之CRM197含量為約46μg。
實施例17. 16價致免疫性組成物之致免疫性
16價致免疫性組成物(參見實施例15)之致免疫性係在兔中使用測量在血清中的血清型特異性IgG濃度及血清型特異性OPA的多倍體直接Luminex免疫檢定法(dLIA)來評定。
將10隻2.5kg至3.5kg之雌性New Zealand白兔組在第0週以提議之人類臨床劑量(2.2μg共軛物，除了血清型6B為4.4μg；加上呈AlPO4之0.1mg鋁)經由肌內途徑免疫。兔子在第2週以相同劑量的共軛物疫苗加強且 接著在第4週採血。血清型特異性dLIA和OPA係以第0週和第4週血清樣品進行。
為了量化對各肺炎球菌多糖(PnPS)具有特異性之總多糖結合抗體(IgG)，將兔子血清以兩種直接Luminex免疫檢定法(dLIA；13-plex Dlia(PREVNAR 13®血清型)和7-plex dLIA(額外的血清型))評估。13-plex檢定法係測量對包括在13價肺炎球菌共軛物(PnC)疫苗中的13種血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F)具有特異性的抗PnPS抗體，及7-plex檢定法係測量對額外的血清型(15B、22F、33F)之抗PnPS抗體。各檢定法含有與PnPS共軛物(PnPS-PLL共軛物：與聚-L-離胺酸共軛之PnPS)偶合之13或7個光譜性不同的磁性微球之組合。
簡言之，先將參考標準物、對照物及試驗血清以兩種Pn吸收劑CWPS1(來自含有PnA之C-多糖的細胞壁多糖)及CWPS2(來自莢膜肺炎鏈球菌血清型2之CWP)預吸附，以阻斷非特異性抗體與PnPS塗佈抗原結合。在預吸附後，將PnPS偶合之微球與適當稀釋之參考標準血清、對照物或兔子試驗血清培育。在培育後，清洗各混合物且添加經R-藻紅素共軛之山羊抗兔IgG二級抗體。使用Bio-Plex讀數器測量螢光信號(以中值螢光強度(MFI)表示)且該信號與經結合之PnPS特異性IgG的量相互關聯。試驗血清之值係以(單位/mL，U/mL)記述。
血清型特異性OPA係如上述方式進行。OPA效價為造成細菌菌落形成單位(CFU)數目比沒有血清之對照物(定義為背景CFU)減少50%之最高血清稀釋度倒數。該效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
Figure 109137693-A0101-12-0406-129
結果顯示在以16vPnC兩次免疫後顯著增加血清型特異性IgG及功能性OPA抗體反應(表21)。血清IgG含量比基線增加2-log。同樣地激發比基線增加最少22倍的OPA GMT之加強的功能性OPA抗體反應。免疫前血清(第0週)顯示無法檢測出大部分的16v Pn血清型之PnPS特異性IgG含量及功能性OPA抗體含量，除了血清 型14和33F以外。該等血清型出現低的OPA效價值，但該等基線反應對免疫接種後的抗體反應沒有不利的影響。
實施例18. 20價致免疫性組成物之致免疫性
20價致免疫性組成物(如以實施例16所製備)之致免疫性係在兔中使用測量在血清中的血清型特異性IgG濃度及血清型特異性OPA的多倍體直接Luminex免疫檢定法(dLIA)評定。
將10隻2.5kg至3.5kg之雌性New Zealand白兔組在第0週以提議之人類臨床劑量(2.2μg共軛物，除了血清型6B為4.4μg；加上呈AlPO4之0.1mg鋁)經由肌內途徑免疫。兔子在第2週以相同劑量的共軛物疫苗加強且接著在第4週採血。血清型特異性dLIA和OPA係以第0週和第4週血清樣品進行。
為了量化對各肺炎球菌多糖(PnPS)具有特異性之總多糖結合抗體(IgG)，將兔子血清以兩種直接Luminex免疫檢定法(dLIA；13-plex Dlia(PREVNAR 13®血清型)和7-plex dLIA(額外的血清型))評估。13-plex檢定法係測量對包括在13價肺炎球菌共軛物(PnC)疫苗中的13種血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F)具有特異性的抗PnPS抗體，及7-plex檢定法係測量對額外的血清型(15B、22F、33F)之抗PnPS抗體。各檢定法含有與PnPS共軛物(PnPS-PLL共軛物：與聚-L-離胺酸共軛之PnPS)偶合之13或7 個光譜性不同的磁性微球之組合。
簡言之，先將參考標準物、對照物及試驗血清以兩種Pn吸收劑CWPS1(來自含有PnA之C-多糖的細胞壁多糖)及CWPS2(來自莢膜肺炎鏈球菌血清型2之CWP)預吸附，以阻斷非特異性抗體與PnPS塗佈抗原結合。在預吸附後，將PnPS偶合之微球與適當稀釋之參考標準血清、對照物或兔子試驗血清培育。在培育後，清洗各混合物且添加經R-藻紅素共軛之山羊抗兔IgG二級抗體。使用Bio-Plex讀數器測量螢光信號(以中值螢光強度(MFI)表示)且該信號與經結合之PnPS特異性IgG的量相互關聯。試驗血清之值係以(單位/mL，U/mL)記述。
血清型特異性OPA係如上述方式進行。OPA效價為造成細菌菌落形成單位(CFU)數目比沒有血清之對照物(定義為背景CFU)減少50%之最高血清稀釋度倒數。該效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
經20vPnC免疫之兔子亦證明顯著增加總IgG及對抗常見於16v及20v調配物的血清型以及額外的四種血清型(8、10A、11A及12F)之功能性OPA抗體效價(表22)。在兩次免疫後誘導20種血清型之血清IgG含量增加2-log。以疫苗激發之OPA GMT比基線高至少27倍。在20vPnC免疫接種後，同樣地觀察到血清型14和33F在免疫前血清中低的OPA效價值，但亦不改變免疫接種後抗體反應的加強性。
16vPnC和20vPnC調配物激發加強的體液反應，二者對肺炎球菌多糖具有特異性且與殺死細菌的功能相互關聯(參見表21及22)。總之，在實施例17和18中所顯示的研究證明16vPnC及20vPnC調配物二者良好的致免疫性。
Figure 109137693-A0101-12-0409-130
實施例19. 肺炎鏈球菌之血清群9內的交叉反應性調理吞噬免疫反應之評估
肺炎球菌調理吞噬檢定法(OPA)被認為是評估肺炎 球菌疫苗之有效性的重要替代方式，其測量在功能性抗體及補體的存在下以吞噬效應子細胞殺死肺炎鏈球菌細胞。
材料及方法
在OPA檢定法中對血清型9V、9A、9L及9N測試來自以13價肺炎球菌共軛物疫苗(13v PnC)免疫接種之成人的免疫血清之兩個隨機選擇的亞組。分別自美國臨床試驗6115A1-004(N=59，免疫接種後)及6115A1-3005(N=66，匹配之免疫接種前及後)收集血清。
研究6115A1-3005(ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00546572)為第3期隨機式、主動控制、經修改之雙盲試驗，以評估在入選研究前接受1劑量23vPS至少5年的70歲及以上的可行動老年人個體中以PREVNAR 13®與23價肺炎球菌多糖疫苗(23vPS)相比的安全性、耐受性和致免疫性(參見：http：//clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00546572：在2014年3月31日取得)。
研究6115A1-004(ClinicalTrials.gov識別碼：NCT00427895)為第3期隨機式、主動控制、經修改之雙盲試驗，以評估在沒用過23vPS的60至64歲成人中以13價肺炎球菌共軛物疫苗(13vPnC)與23價肺炎球菌多糖疫苗(23vPS)相比的安全性、耐受性和致免疫性及13vPnC在沒用過23vPS的18至59歲成人中的安全性、耐受性和免疫原性(參見：http：//clinicaltrials.gov/show/NCT00427895：在2014年3月31日取得)。
在該等研究中測試的13價肺炎球菌共軛物疫苗(13vPnC)含有個別地與白喉交叉反應材料197(CRM197)載體蛋白質共軛之來自肺炎球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F之共軛物。
OPA係用於測量對抗肺炎鏈球菌血清型9V、9N、9A及/或9L之人類血清中的功能性抗體。試驗血清係在檢定反應中準備，其測量莢膜多糖特異性免疫球蛋白調理細菌、觸發補體沈積的能力，由此加速吞噬細胞的吞噬作用及殺死細菌。OPA效價經定義為造成細菌計數比沒有試驗血清之對照槽孔減少50%之稀釋度倒數。OPA效價係自兩種包含此50%之殺死截止值的稀釋內插。
OPA程序係以Hu等人之(2005)Clin Diagn Lab Immunol122)：287-295所述之方法為基準。將經熱失活之試驗血清連續稀釋2.5倍，與標的細菌一起添加至檢定盤中且以振盪培育30分鐘。將分化之HL-60細胞(吞噬細胞)及幼兔血清(3至4週齡，PEL-FREEZ®，12.5%最終濃度)以200：1的近似效應子對標的之比添加至槽孔中且在37℃下以振盪培育。為了終止反應，將80μL 0.9% NaCl添加至所有槽孔中，混合且將10μL等份轉移至含有200μL水的MULTISCREEN® HTS HV過濾盤(MILLIPORE®)之槽孔中。將液體在真空下通過盤過濾且將150μL HYSOY®培養基添加至各槽孔中且過濾。接著將過濾盤在37℃，5% CO2下經隔夜培育且接著使用脫 色溶液(Bio-Rad Laboratories,Inc.，Hercules,CA)固定。接著將盤以考馬斯藍染色及脫色一次。使菌落成像且在Cellular Technology Limited(CTL)(Shaker Heights，OH)IMMUNOSPOT®分析儀上計算。使用生菌落計數繪製殺死曲線且計算OPA效價。
統計分析：計算個人雙尾相關分析法(two-tailed correlation)。
結果-在9V、9A、9L和9N中的OPA反應
來自以對抗血清型9A、9L和9N之13vPnC免疫的成人之免疫血清的交叉功能性反應與對血清型9V之同源功能性反應一起在各自的微菌落調理吞噬檢定法(mcOPA)中評估。測試來自以13vPnC免疫接種之成人的免疫血清之兩個隨機選擇的亞組。分別自美國臨床試驗6115A1-004(N=59，免疫接種後)及6115A1-3005(N=66，匹配之免疫接種前及後)收集血清。
在6115A1-004中的個體先前沒用過任何肺炎球菌免疫接種且接受單一劑量的13vPnC作為研究方案的一部分。來自研究6115A1-004之免疫血清顯示類似的反應者百分比，所有的血清群對9V、9A、9L和9N分別具有98.3%、98.3%、100%和93.2%之值(圖11)，其支持來自6115A1-3005的結果(圖12)。在血清型9V與9A(皮爾森相關性(Pearson correlation)ρ=0.5456，p<0.0001)或9L(ρ=0.7353，p<0.0001)而非9N (ρ=0.1217，p<0.3627)之間觀察到相對良好的OPA效價相關性。
在6115A1-3005中的個體在入選研究前接受1劑量23vPS至少5年且接受單一劑量的13vPnC作為研究方案的一部分。來自以13vPnC免疫之成人匹配的免疫接種前及後血清盤(N=66)(研究6115A1-3005)係以OPA對血清型9V的同源反應及抗9V抗體對血清型9A、9L和9N之交叉反應性來評估。如圖12中所示，以OPA檢定法檢測出對9V(84%)、9A(66%)、9L(82%)和9N(86%)相對較高的免疫性(反應者百分比)，這有可能由於其先前以包括來自血清型9V和9N的未經共軛之多糖的23vPS免疫。然而，以僅含有來自血清群9之血清型9V共軛物的13vPnC免疫接種後，對所有四種血清型的反應者百分比增加至95%或更大。效價值之增加倍數顯示於表23中且在血清型之間類似，此亦示意交叉反應性。
Figure 109137693-A0101-12-0413-131
OPA效價分布的更全面分析顯示於圖13至16中的逆累積分布曲線(RCDC)中。RCDC顯示免疫接種後對血 清型9V、9A、9L和9N(增加程度較小)之血清型特異性免疫反應增加。亦使用皮爾森氏相關性分析9V/9A之間、9V/9L之間和9V/9N之間個別匹配的樣品之效價增加倍數的相關性。在血清型9V與9A(皮爾森相關性ρ=0.8720，p<0.0001)或9N(ρ=0.5801，p<0.0001)(但是以較低程度)與9L(ρ=0.1804，p<0.1640)之間觀察到效價增加倍數之相對良好的相關性。
結論
基於該等數據，13vPnC疫苗有可能藉由提供額外抵抗血清型9A、9L及9N而提供更寬的血清型涵蓋率。
實施例20. 在血清型15B與血清型15C之間的交叉功能性OPA反應
肺炎球菌血清群15包括四種結構上相關的血清型：15A、15B、15C和15F。血清型15B和15C不可以遺傳分型技術來區分且具有類似的莢膜多糖(PS)組成，除了15B-PS為15C-PS之O-乙醯化變體。為了理解血清型15B之抗莢膜PS抗體是否在功能上與血清型15C交叉反應，將10隻兔子以16vPnC(參見實施例15)及20vPnC(參見實施例16)疫苗免疫，該兩種疫苗含有如本文所揭示之包含與CRM197共價連接之肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖的致免疫性共軛物作為其調配物的一部分。在OPA檢定法中測試來自免疫接種前及後之血清對抗血清型15B 和15C標的肺炎球菌菌株。
在每組10隻兔子中，在以血清型15B共軛物免疫後，100%對血清型15B具有OPA反應。在該等相同的樣品中，亦以100%對血清型15C具有OPA反應(表24和表25)。以免疫接種前血清在15C OPA中觀察到低的OPA效價。然而，與免疫接種前相比，以免疫接種後血清的OPA效價增加超過10倍GMT，此證明本發明的致免疫性共軛物誘導形成能夠在OPA中殺死血清型15B和15C肺炎鏈球菌之抗體。
Figure 109137693-A0101-12-0415-132
Figure 109137693-A0101-12-0416-133
實施例21. 7價肺炎球菌共軛物疫苗之調配
調配包含全部皆個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之糖共軛物的7價共軛組成物(7vPnC)。
來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之糖共軛物係如上文揭示之方式生產。
主體濃縮物的所需體積係以批組體積及主體糖濃度為基準計算。經調配之主體疫苗係藉由下列方式製備：添加獲得5.0mM琥珀酸鹽及150mM NaCl之最終標的緩衝液濃度的所需體積之NaCl/琥珀酸鹽緩衝液(pH 5.8)。添加最終濃度至0.02%之聚山梨醇酯80及7價肺炎球菌共 軛物。將製劑通過0.2μm Millipore PES膜，接著添加AlPO4來過濾。將調配物充份混合以獲得共軛物與鋁的最大結合。
接著將調配物填充至玻璃注射器中以遞送0.5mL劑量體積。
最終劑量形式係由個別地與CRM197共軛之來自肺炎鏈球菌血清型8、10A、11A、12F、15B、22F和33F之2.2μg各糖共軛物、5.0mM琥珀酸鹽緩衝液pH 5.8、0.02%(w/w)PS80、150mM NaCl及呈AlPO4之0.25mg/mL鋁所組成之0.5mL劑量。
本說明書中所提及之所有公開案及專利申請案指示那些熟習本發明所屬領域技術者的技術水準。將所有的公開案及專利申請案特此併入本文以供參考，如同每一個別公開案及專利申請案係以相同的程度具體且個別地併入以供參考。
雖然前述發明係以清楚理解為目的而以例證及實施例方式部分詳細說明，但是特定的變化及修改可於隨附的申請專利範圍之範疇內實施。
<110> 美商輝瑞股份有限公司(Pfizer Inc.)
<120> 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途
<140>
<141> 2016-07-18
<150> US 62/194,965
<151> 2015-07-21
<160> 40
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> "A類" CpG寡核苷酸
<400> 1
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<210> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> "A類" CpG寡核苷酸
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<223> "B類" CpG寡核苷酸
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<213> 人工序列
<220>
<223> "B類" CpG寡核苷酸
<400> 4
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<210> 5
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<213> 人工序列
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<223> "B類" CpG寡核苷酸
<400> 5
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<210> 6
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<213> 人工序列
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<223> "B類" CpG寡核苷酸
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<223> "B類" CpG寡核苷酸
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<223> B類寡核苷酸
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<223> B類寡核苷酸
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<213> 人工序列
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<223> B類寡核苷酸
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<223> B類寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<223> C類CpG寡核苷酸
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<220>
<223> C類CpG寡核苷酸
<400> 25
Figure 109137693-A0101-12-0422-158
<210> 26
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 26
Figure 109137693-A0101-12-0422-159
<210> 27
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 27
Figure 109137693-A0101-12-0422-160
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 28
Figure 109137693-A0101-12-0422-161
<210> 29
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 29
Figure 109137693-A0101-12-0422-162
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 30
Figure 109137693-A0101-12-0422-163
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 31
Figure 109137693-A0101-12-0423-164
<210> 32
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 32
Figure 109137693-A0101-12-0423-165
<210> 33
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 33
Figure 109137693-A0101-12-0423-166
<210> 34
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 34
Figure 109137693-A0101-12-0423-167
<210> 35
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 35
Figure 109137693-A0101-12-0423-168
<210> 36
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 36
Figure 109137693-A0101-12-0423-169
<210> 37
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 37
Figure 109137693-A0101-12-0423-170
<210> 38
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C類寡核苷酸
<400> 38
Figure 109137693-A0101-12-0424-171
<210> 39
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P類CpG寡核苷酸
<400> 39
Figure 109137693-A0101-12-0424-172
<210> 40
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P類CpG寡核苷酸
<400> 40
Figure 109137693-A0101-12-0424-173

Claims (80)

  1. 一種第一致免疫性組成物與第二致免疫性組成物之組合於製備對抗肺炎球菌感染的疫苗或套組之用途，其中該第一致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型15B之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型22F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型33F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型12F之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型10A之糖共軛物、來自肺炎鏈球菌血清型11A之糖共軛物及來自肺炎鏈球菌血清型8之糖共軛物，其中該血清型15B之糖共軛物具有介於1,000kDa與20,000kDa之間的分子量且該血清型15B之糖共軛物中血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3之間，其中該血清型22F之糖共軛物具有介於400kDa與15,000kDa之間的分子量且該血清型22F之糖共軛物中血清型22F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.5與3之間，其中該血清型33F之糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量且該血清型33F之糖共軛物中血清型33F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間，其中該血清型12F之糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量且該血清型12F之糖共軛物中血清型12F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間，其中該血清型10A之糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量且該血清型10A之糖共軛物中血清型10A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係 介於0.5與3之間，其中該血清型11A之糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量且該血清型11A之糖共軛物中血清型11A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間，其中該血清型8之糖共軛物具有介於50kDa與20,000kDa之間的分子量且該血清型8之糖共軛物中血清型8莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.2與4之間，其中該第一致免疫性組成物為7價肺炎球菌共軛組成物，且該第二致免疫性組成物包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F及23F之糖共軛物，其中該等糖共軛物係個別地與選自CRM197、PD、TT或DT之載體蛋白質共軛，且其中該第一致免疫性組成物與該第二致免疫性組成物經並行、相伴或依序投予。
  2. 根據請求項1之用途，其中該等糖共軛物係個別地與CRM197共軛。
  3. 根據請求項1之用途，其中該血清型15B之糖共軛物具有介於10,000kDa與16,000kDa之間的分子量。
  4. 根據請求項3之用途，其中該血清型15B之糖共軛物中血清型15B莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.7與0.9之間。
  5. 根據請求項4之用途，其中該血清型15B之糖共軛物包含與血清型15B莢膜多糖的總量相比較少於約50%之游離血清型15B莢膜多糖。
  6. 根據請求項5之用途，其中至少40%之血清型15B之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
  7. 根據請求項4之用途，其中該血清型15B之糖共軛物包含以每mM血清型15B莢膜多糖計至少0.1mM乙酸酯。
  8. 根據請求項4之用途，其中在該血清型15B之糖共軛物中以每mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯對在活化多糖中以每mM血清型15B莢膜多糖計的mM乙酸酯之比係至少0.6。
  9. 根據請求項4之用途，其中該血清型15B之糖共軛物包含以每mM血清型15B莢膜多糖計的至少0.1mM甘油。
  10. 根據請求項4之用途，其中該血清型15B之糖共軛物的共軛程度係介於2與15之間。
  11. 根據請求項4之用途，其中該血清型15B之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與1,500kDa之間的糖。
  12. 根據請求項4之用途，其中該血清型15B之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  13. 根據請求項1至12中任一項之用途，其中使用還原胺化反應以製備該血清型15B之糖共軛物。
  14. 根據請求項1之用途，其中該血清型22F之糖共軛物具有介於1,000kDa與8,000kDa之間的 分子量。
  15. 根據請求項14之用途，其中該血清型22F之糖共軛物中血清型22F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.9與1.1之間。
  16. 根據請求項15之用途，其中該血清型22F之糖共軛物包含與血清型22F莢膜多糖的總量相比較少於約50%之游離血清型22F莢膜多糖。
  17. 根據請求項16之用途，其中至少30%之血清型22F之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
  18. 根據請求項15之用途，其中該血清型22F之糖共軛物包含以每mM血清型22F莢膜多糖計至少0.1mM乙酸酯。
  19. 根據請求項15之用途，其中在該血清型22F之糖共軛物中以每mM血清型22F莢膜多糖計的mM乙酸酯對在活化多糖中以每mM血清型22F莢膜多糖計的mM乙酸酯之比係至少0.6。
  20. 根據請求項15之用途，其中該血清型22F之糖共軛物的共軛程度係介於2與15之間。
  21. 根據請求項15之用途，其中該血清型22F之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
  22. 根據請求項15之用途，其中該血清型22F之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  23. 根據請求項14至22中任一項之用途，其中使用還原胺化反應以製備該血清型22F之糖共軛物。
  24. 根據請求項1之用途，其中該血清型33F之糖共軛物具有介於1,000kDa與5,000kDa之間的分子量。
  25. 根據請求項24之用途，其中該血清型33F之糖共軛物中血清型33F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.4與1.7之間。
  26. 根據請求項25之用途，其中該血清型33F之糖共軛物包含與血清型33F莢膜多糖的總量相比較少於約40%之游離血清型33F莢膜多糖。
  27. 根據請求項26之用途，其中至少35%之血清型33F之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
  28. 根據請求項25之用途，其中該血清型33F之糖共軛物包含以每mM血清型33F莢膜多糖計至少0.1mM乙酸酯。
  29. 根據請求項25之用途，其中在該血清型33F之糖共軛物中以每mM血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯對在活化多糖中以每mM血清型33F莢膜多糖計的mM乙酸酯之比係至少0.6。
  30. 根據請求項25之用途，其中該血清型33F之糖共軛物的共軛程度係介於2與20之間。
  31. 根據請求項25之用途，其中該血清型33F之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
  32. 根據請求項25之用途，其中該血清型33F之糖共軛物以每2至25個糖重複單元包含至少一個在該載體蛋白質與糖之間的共價鍵。
  33. 根據請求項25之用途，其中該血清型33F之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  34. 根據請求項24至33中任一項之用途，其中使用eTEC共軛以製備該血清型33F之糖共軛物。
  35. 根據請求項1之用途，其中該血清型12F之糖共軛物具有介於500kDa與5,000kDa之間的分子量。
  36. 根據請求項35之用途，其中該血清型12F之糖共軛物中血清型12F莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.8之間。
  37. 根據請求項36之用途，其中該血清型12F之糖共軛物包含與血清型12F莢膜多糖的總量相比較少於約50%之游離血清型12F莢膜多糖。
  38. 根據請求項37之用途，其中至少35%之血清型12F之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
  39. 根據請求項36之用途，其中該血清型 12F之糖共軛物的共軛程度係介於2與20之間。
  40. 根據請求項36之用途，其中該血清型12F之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
  41. 根據請求項36之用途，其中該血清型12F之糖共軛物以每2至25個糖重複單元包含至少一個在該載體蛋白質與糖之間的共價鍵。
  42. 根據請求項36之用途，其中該血清型12F之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  43. 根據請求項35至42中任一項之用途，其中使用還原胺化反應以製備該血清型12F之糖共軛物。
  44. 根據請求項35至42中任一項之用途，其中使用TEMPO/NCS還原胺化反應以製備該血清型12F之糖共軛物。
  45. 根據請求項1之用途，其中該血清型10A之糖共軛物具有介於1,000kDa與10,000kDa之間的分子量。
  46. 根據請求項45之用途，其中該血清型10A之糖共軛物中血清型10A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.2之間。
  47. 根據請求項46之用途，其中該血清型10A之糖共軛物包含與血清型10A莢膜多糖的總量相比較少於約50%之游離血清型10A莢膜多糖。
  48. 根據請求項47之用途，其中至少30%之血清型10A之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
  49. 根據請求項46之用途，其中該血清型10A之糖共軛物的共軛程度係介於2與15之間。
  50. 根據請求項46之用途，其中該血清型10A之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
  51. 根據請求項46之用途，其中該血清型10A之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  52. 根據請求項45至51中任一項之用途，其中使用還原胺化反應以製備該血清型10A之糖共軛物。
  53. 根據請求項1之用途，其中該血清型11A之糖共軛物具有介於500kDa與20,000kDa之間的分子量。
  54. 根據請求項53之用途，其中該血清型11A之糖共軛物中血清型11A莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.6之間。
  55. 根據請求項54之用途，其中該血清型11A之糖共軛物包含與血清型11A莢膜多糖的總量相比較少於約50%之游離血清型11A莢膜多糖。
  56. 根據請求項55之用途，其中至少30%之血清型11A之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等 於0.3之Kd。
  57. 根據請求項54之用途，其中該血清型11A之糖共軛物包含以每mM血清型11A莢膜多糖計至少0.3mM乙酸酯。
  58. 根據請求項54之用途，其中在該血清型11A之糖共軛物中以每mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯對在活化多糖中以每mM血清型11A莢膜多糖計的mM乙酸酯之比係至少0.6。
  59. 根據請求項54之用途，其中該血清型11A之糖共軛物包含以每mM血清型11A莢膜多糖計的至少0.1mM甘油。
  60. 根據請求項54之用途，其中該血清型11A之糖共軛物的共軛程度係介於1與15之間。
  61. 根據請求項54之用途，其中該血清型11A之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
  62. 根據請求項54之用途，其中該血清型11A之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  63. 根據請求項53至62中任一項之用途，其中使用還原胺化反應以製備該血清型11A之糖共軛物。
  64. 根據請求項1之用途，其中該血清型8之糖共軛物具有介於1,000kDa與15,000kDa之間的分子量。
  65. 根據請求項64之用途，其中該血清型8之糖共軛物中血清型8莢膜多糖對載體蛋白質之比(w/w)係介於0.8與1.5之間。
  66. 根據請求項65之用途，其中該血清型8之糖共軛物包含與血清型8莢膜多糖的總量相比較少於約50%之游離血清型8莢膜多糖。
  67. 根據請求項66之用途，其中至少30%之血清型8之糖共軛物在CL-4B管柱中具有小於或等於0.3之Kd。
  68. 根據請求項65之用途，其中該血清型8之糖共軛物的共軛程度係介於2與20之間。
  69. 根據請求項65之用途，其中該血清型8之糖共軛物包含具有分子量介於10kDa與2,000kDa之間的糖。
  70. 根據請求項65之用途，其中該血清型8之糖共軛物的載體蛋白質係CRM197。
  71. 根據請求項64至70中任一項之用途，其中使用還原胺化反應以製備該血清型8之糖共軛物。
  72. 根據請求項1之用途，其中該第一致免疫性組成物之各劑量包含1.0μg至10μg之各血清型的多糖和10μg至150μg之載體蛋白質。
  73. 根據請求項72之用途，其中該第一致免疫性組成物另包含至少一種選自磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧 化鋁之佐劑。
  74. 根據請求項73之用途，其中該第一致免疫性組成物包含緩衝液。
  75. 根據請求項74之用途，其中該緩衝液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。
  76. 根據請求項74之用途，其中該緩衝液為最終濃度約5.0mM之琥珀酸鹽。
  77. 根據請求項76之用途，其中該第一致免疫性組成物包含濃度約150mM之氯化鈉。
  78. 根據請求項74之用途，其中該第一致免疫性組成物包含界面活性劑。
  79. 根據請求項78之用途，其中該界面活性劑係選自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85或泊洛沙姆(poloxamer)。
  80. 根據請求項74之用途，其中該第一致免疫性組成物之pH係介於5.5與7.5之間。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2953638B1 (en) 2013-02-07 2023-07-05 Children's Medical Center Corporation Protein antigens that provide protection against pneumococcal colonization and/or disease
US11160855B2 (en) * 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
KR102099741B1 (ko) 2014-01-21 2020-04-10 화이자 인코포레이티드 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체
RU2688831C2 (ru) * 2014-01-21 2019-05-22 Пфайзер Инк. Капсульные полисахариды Streptococcus pneumoniae и их конъюгаты
MX2018000867A (es) * 2015-07-21 2018-05-15 Pfizer Composiciones inmunogenas que comprenden antigenos de sacarido capsular conjugados, kits que las comprenden y sus usos.
WO2017085586A1 (en) * 2015-11-20 2017-05-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
US11058757B2 (en) 2016-03-31 2021-07-13 Pogona, LLC Saccharide-polypeptide conjugate compositions and methods of use thereof
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
US11197921B2 (en) 2017-01-31 2021-12-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for making polysaccharide-protein conjugates
US11246918B2 (en) 2017-02-03 2022-02-15 Eva Barbara Schadeck Haemophilus influenzae saccharide-carrier conjugate compositions and uses thereof
WO2018156491A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Enhancing immunogenicity of streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
US10688170B2 (en) 2017-06-10 2020-06-23 Inventprise, Llc Multivalent conjugate vaccines with bivalent or multivalent conjugate polysaccharides that provide improved immunogenicity and avidity
MX2020002558A (es) * 2017-09-07 2020-07-13 Merck Sharp & Dohme Procesos para la formulacion de polisacaridos neumococicos para la conjugacion a una proteina transportadora.
JP2020533437A (ja) * 2017-09-07 2020-11-19 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 肺炎球菌多糖体および免疫原性多糖体−キャリアタンパク質コンジュゲートでのその使用
US11524076B2 (en) 2017-09-07 2022-12-13 Merck Sharp & Dohme Llc Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates
BR112020004471A8 (pt) 2017-09-07 2022-11-01 Merck Sharp & Dohme Polissacarídeos pneumocócicos e uso dos mesmos em conjugados imunogênicos polissacarídeo-proteína carreadora
CA3074711A1 (en) 2017-09-07 2019-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates
EP3678654A4 (en) * 2017-09-07 2021-04-21 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIPNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES AND THEIR USE IN POLYSACCHARIDE-CARRIER PROTEIN IMMUNOGENIC CONJUGATES
US20200330579A1 (en) * 2017-10-04 2020-10-22 Liffey Biotech Limited Saccharide-polypeptide conjugate compositions and methods of use thereof
MX2020005779A (es) 2017-12-06 2020-10-28 Merck Sharp & Dohme Composiciones que comprenden conjugados de polisacarido de streptococcus pneumoniae con proteina y metodos de uso de estos.
KR20210005161A (ko) * 2018-04-30 2021-01-13 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 리오스피어로부터 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 담체 단백질 접합체를 제조하는 방법
US11896656B2 (en) 2018-04-30 2024-02-13 Merck Sharp & Dohme Llc Methods for providing a homogenous solution of lyophilized mutant diptheria toxin in dimethylsulfoxide
PE20211112A1 (es) 2018-09-12 2021-06-22 Affinivax Inc Vacunas neumococicas multivalentes
US20220296695A1 (en) 2018-12-19 2022-09-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
CN110302375A (zh) * 2019-06-27 2019-10-08 康希诺生物股份公司 一种糖缀合物及其用途
CN112741901A (zh) * 2019-10-31 2021-05-04 北京科兴中维生物技术有限公司 一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的疫苗及其制备方法
EP4061412A1 (en) * 2019-11-22 2022-09-28 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine
US20230183765A1 (en) * 2020-05-14 2023-06-15 Serum Institute Of India Private Limited Methods for simultaneous fragmentation and purification of bacterial polysaccharides
GB202016165D0 (en) 2020-10-12 2020-11-25 Optivalent Ltd Vaccine
CN115381844B (zh) * 2021-09-29 2024-03-22 北京大学 一种细菌荚膜寡糖衍生物及其制备方法、药物组合物和用途
GB2614916A (en) * 2022-01-25 2023-07-26 Optivalent Ltd Intradermal vaccine complement
CN115671274B (zh) * 2022-09-29 2024-03-12 普大生物科技(泰州)有限公司 一种载体蛋白与多糖共价键连接成结合物的方法及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010125480A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Pneumococcal vaccine and uses thereof
CN103656631A (zh) * 2012-09-24 2014-03-26 北京科兴中维生物技术有限公司 多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白缀合物组合物及其制备方法

Family Cites Families (117)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4686102A (en) * 1984-04-12 1987-08-11 American Cyanamid Company Multivalent pneumococcal vaccine and preparation thereof
US4709017A (en) 1985-06-07 1987-11-24 President And Fellows Of Harvard College Modified toxic vaccines
US4950740A (en) 1987-03-17 1990-08-21 Cetus Corporation Recombinant diphtheria vaccines
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
GB8815795D0 (en) 1988-07-02 1988-08-10 Bkl Extrusions Ltd Glazing bead
NZ230747A (en) 1988-09-30 1992-05-26 Bror Morein Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
EP0378881B1 (en) 1989-01-17 1993-06-09 ENIRICERCHE S.p.A. Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
EP0482068A1 (en) 1989-07-14 1992-04-29 American Cyanamid Company Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
EP0471177B1 (en) 1990-08-13 1995-10-04 American Cyanamid Company Filamentous hemagglutinin of bordetella pertussis as a carrier molecule for conjugate vaccines
EP0625910B1 (en) 1992-02-11 2003-07-23 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Dual carrier immunogenic construct
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
JP3506431B2 (ja) 1992-05-06 2004-03-15 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ジフテリア毒素受容体結合領域
ATE156710T1 (de) 1992-06-25 1997-08-15 Smithkline Beecham Biolog Adjuvantien enthaltende impfstoffzusammensetzung
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
PT616034E (pt) 1993-03-05 2005-02-28 Wyeth Corp Plasmideo para a producao de proteina crm e toxina da difteria
ES2162139T5 (es) 1993-03-23 2008-05-16 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado.
CA2171942C (en) 1993-09-22 2010-12-14 Andrew Lees Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
US5416349A (en) 1993-12-16 1995-05-16 National Semiconductor Corporation Increased-density flash EPROM that requires less area to form the metal bit line-to-drain contacts
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5917017A (en) 1994-06-08 1999-06-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain
US6455673B1 (en) 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
ATE509102T1 (de) 1994-07-15 2011-05-15 Univ Iowa Res Found Immunomodulatorische oligonukleotide
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
CA2215933C (en) 1995-03-22 2009-10-13 Andrew Lees Producing immunogenic constructs using soluble carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
GB9513261D0 (en) 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
AUPO517897A0 (en) 1997-02-19 1997-04-11 Csl Limited Chelating immunostimulating complexes
AU738513B2 (en) 1997-02-28 2001-09-20 University Of Iowa Research Foundation, The Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide in the treatment of LPS-associated disorders
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
ATE370740T1 (de) 1997-05-20 2007-09-15 Ottawa Health Research Inst Verfahren zur herstellung von nukleinsäurekonstrukten
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
AU1145699A (en) 1997-09-05 1999-03-22 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Oil in water emulsions containing saponins
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
ES2284247T3 (es) 1998-04-03 2007-11-01 University Of Iowa Research Foundation Metodos y productos para estimular el sistema inmunitario usando oligonucleotidos y citoquinas inmunoterapeuticos.
IL138000A0 (en) 1998-04-09 2001-10-31 Smithkline Beecham Biolog Adjuvant compositions
GB9817052D0 (en) 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CZ301212B6 (cs) 1998-10-16 2009-12-09 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Vakcinacní prostredek
EP2050464B1 (en) 1998-12-21 2019-08-07 Medimmune, Inc. Streptococcus pneumoniae proteins and immunogenic fragments for vaccines
EP1141306B1 (en) 1998-12-23 2008-05-07 ID Biomedical Corporation Streptococcus antigens
AUPP807399A0 (en) 1999-01-08 1999-02-04 Csl Limited Improved immunogenic lhrh composition and methods relating thereto
AU783344B2 (en) 1999-02-17 2005-10-20 Csl Limited Immunogenic complexes and methods relating thereto
US6936258B1 (en) 1999-03-19 2005-08-30 Nabi Biopharmaceuticals Staphylococcus antigen and vaccine
DE60043930D1 (de) * 1999-03-19 2010-04-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Impfstoff gegen kapsulare polysaccharide von streptococcus pneumoniae
EP1165796A2 (en) 1999-04-09 2002-01-02 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
CZ303515B6 (cs) 1999-04-19 2012-11-07 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Adjuvantní prostredek
MXPA02003068A (es) 1999-09-24 2002-09-30 Smithkline Beecham Biolog Adyuvante que comprende un eter o ester alquilo de polioxietileno y al menos un tensioactivo no ionico..
KR20020038770A (ko) 1999-09-24 2002-05-23 장 스테판느 애쥬번트로서의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와옥톡시놀의 조합물의 용도 및 백신과 관련된 이의 용도
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
MXPA03000103A (es) 2000-06-20 2003-06-19 Shire Biochem Inc Antigenos de streptococcus.
GB0108364D0 (en) 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
AU2002309706A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
JP4360906B2 (ja) 2001-09-14 2009-11-11 サイトス バイオテクノロジー アーゲー ウィルス様粒子によって誘導される免疫応答を高めるための、抗原提示細胞のインビボでの活性化
EP1456231A2 (en) 2001-12-20 2004-09-15 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
KR101052996B1 (ko) 2003-03-13 2011-07-29 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 박테리아 세포용해소에 대한 정제 공정
WO2004083251A2 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
CA2574090A1 (en) 2004-07-18 2006-12-21 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Methods and compositions for inducing innate immune responses
JP2008506789A (ja) 2004-07-18 2008-03-06 シーエスエル、リミテッド インターフェロン−ガンマ応答強化を誘発するための免疫刺激複合体及びオリゴヌクレオチド処方物
GB0421083D0 (en) 2004-09-22 2004-10-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Purification process
GB0428394D0 (en) * 2004-12-24 2005-02-02 Chiron Srl Saccharide conjugate vaccines
GB0502095D0 (en) * 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Conjugation of streptococcal capsular saccharides
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7709001B2 (en) 2005-04-08 2010-05-04 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US20060228380A1 (en) 2005-04-08 2006-10-12 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
CN101155833B (zh) 2005-04-08 2011-04-20 惠氏公司 通过pH操作将污染物与肺炎链球菌多糖分离
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
MX2007016237A (es) * 2005-06-27 2008-03-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
LT2384765T (lt) * 2005-12-22 2017-01-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Streptococcus pneumoniae vakcina
TW200806315A (en) * 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
ES2346929T3 (es) 2006-10-10 2010-10-21 Wyeth Llc Procedimientos mejorados para la separacion de polisacaridos de streptococcus pneumoniae de tipo 3.
EP3406635B1 (en) 2007-03-23 2022-05-11 Wyeth LLC Shortened purification process for the production of capsular streptococcus pneumoniae polysaccharides
AU2008248640A1 (en) 2007-05-02 2008-11-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN105267974A (zh) * 2007-06-20 2016-01-27 辉瑞爱尔兰制药公司 用于缀合疫苗的经过修饰的多糖
BRPI0813307C1 (pt) * 2007-06-26 2021-05-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa composição imunogênica, vacina, e, processo para fabricar a vacina
BRPI1011753B8 (pt) * 2009-06-22 2021-05-25 Wyeth Llc conjugados imunogênicos de polissacarídeo capsular de staphylococcus aureus de sorotipos 5 e 8, seu uso e composições que os compreendem
TW201136603A (en) * 2010-02-09 2011-11-01 Merck Sharp & Amp Dohme Corp 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
CN101785857B (zh) 2010-03-05 2012-09-26 成都安特金生物技术有限公司 一种新的肺炎球菌结合疫苗及其制备方法
WO2011130332A1 (en) * 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
AU2011338723A1 (en) 2010-12-10 2013-05-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel formulations which mitigate agitation-induced aggregation of immunogenic compositions
GB201103836D0 (en) * 2011-03-07 2011-04-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
US9878029B2 (en) * 2011-03-22 2018-01-30 Serum Institute Of India Private Limited Process for preparation of polysaccharides
JP2015510872A (ja) * 2012-03-07 2015-04-13 ノバルティス アーゲー Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原の増強された製剤
KR102057217B1 (ko) * 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
IN2015DN00694A (zh) * 2012-08-16 2015-06-26 Pfizer
GB201218660D0 (en) * 2012-10-17 2012-11-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AU2013331781A1 (en) * 2012-10-17 2015-05-07 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition comprising 1 or more Streptococcus pneumoniae capsular saccharide conjugates and a protein component comprising Protein E and/or PilA from Haemophilus influenzae.
KR20140075201A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
DK2935299T3 (da) * 2012-12-20 2019-11-18 Pfizer Glycokonjugationsfremgangsmåde
ITMI20130142A1 (it) * 2013-01-31 2014-08-01 Biosynth Srl Vaccini glicoconiugati comprendenti unita' di base di un costrutto molecolare esprimente epitopi multipli incorporati
US20150079132A1 (en) * 2013-09-17 2015-03-19 Path Evoking protection against streptotoccus pneumoniae incorporating b-cell and t-cell pneumococcal protein antigens and pneumococcal polysaccharides delivered concomitantly
CN103495161B (zh) 2013-10-08 2019-06-18 江苏康泰生物医学技术有限公司 一种多元肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质结合物的混合物及其制备方法
CN110787290A (zh) * 2014-01-21 2020-02-14 辉瑞公司 包含缀合荚膜糖抗原的免疫原性组合物及其用途
RU2688831C2 (ru) * 2014-01-21 2019-05-22 Пфайзер Инк. Капсульные полисахариды Streptococcus pneumoniae и их конъюгаты
KR102099741B1 (ko) * 2014-01-21 2020-04-10 화이자 인코포레이티드 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체
US11160855B2 (en) * 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2015121783A1 (en) 2014-02-14 2015-08-20 Pfizer Inc. Immunogenic glycoprotein conjugates
US10220083B2 (en) * 2014-09-26 2019-03-05 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 8
SI3244917T1 (sl) 2015-01-15 2023-07-31 Pfizer Inc. Imunogenske kompozicije za uporabo v pnevmokoknih cepivih
US10716839B2 (en) * 2015-04-13 2020-07-21 University Of Maryland, Baltimore Compositions and methods for producing bacterial conjugate vaccines
ES2857474T3 (es) * 2015-06-23 2021-09-29 Biological E Ltd Vacuna conjugada neumocócica multivalente
MX2018000867A (es) * 2015-07-21 2018-05-15 Pfizer Composiciones inmunogenas que comprenden antigenos de sacarido capsular conjugados, kits que las comprenden y sus usos.
EP3474890A1 (en) * 2016-06-22 2019-05-01 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften E. V. Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
SG11201900794PA (en) * 2016-08-05 2019-02-27 Sanofi Pasteur Inc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US11951165B2 (en) * 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
CN110366428A (zh) * 2016-12-30 2019-10-22 Sutrovax公司 具有非天然氨基酸的多肽-抗原缀合物
AU2018208844B2 (en) * 2017-01-20 2021-02-25 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
CN110392690B (zh) * 2017-02-24 2024-01-30 默沙东有限责任公司 肺炎球菌缀合物疫苗制剂
WO2018156491A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Enhancing immunogenicity of streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates
WO2018169303A1 (ko) * 2017-03-15 2018-09-20 주식회사 엘지화학 다가 폐렴구균 백신 조성물
US10688170B2 (en) * 2017-06-10 2020-06-23 Inventprise, Llc Multivalent conjugate vaccines with bivalent or multivalent conjugate polysaccharides that provide improved immunogenicity and avidity
US20200330579A1 (en) * 2017-10-04 2020-10-22 Liffey Biotech Limited Saccharide-polypeptide conjugate compositions and methods of use thereof
MX2020005779A (es) * 2017-12-06 2020-10-28 Merck Sharp & Dohme Composiciones que comprenden conjugados de polisacarido de streptococcus pneumoniae con proteina y metodos de uso de estos.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010125480A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Pneumococcal vaccine and uses thereof
CN103656631A (zh) * 2012-09-24 2014-03-26 北京科兴中维生物技术有限公司 多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白缀合物组合物及其制备方法

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