KR20210027523A - 접합된 캡슐형 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물, 그를 포함하는 키트 및 그의 용도 - Google Patents

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웬디 조 왓슨
루이스 파스쿠알 호다르 마르틴-몬탈보
라울 엔리케 이스투리스
랄프 레네 라이네르트
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Abstract

본 발명은 접합된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 캡슐형 사카라이드 항원 (당접합체)을 포함하는 새로운 면역원성 조성물, 상기 면역원성 조성물을 포함하는 키트 및 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 면역원성 조성물은 전형적으로 프레브나르®, 신플로릭스® 및/또는 프레브나르 13®에서는 발견되지 않는 에스. 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함할 것이다. 본 발명은 또한 상기 신규 면역원성 조성물을 사용한 인간 대상체, 특히 영아 및 노인의 폐렴구균 감염에 대한 백신접종에 관한 것이다.

Description

접합된 캡슐형 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물, 그를 포함하는 키트 및 그의 용도 {IMMUNOGENIC COMPOSITIONS COMPRISING CONJUGATED CAPSULAR SACCHARIDE ANTIGENS, KITS COMPRISING THE SAME AND USES THEREOF}
본 발명은 접합된 캡슐형 사카라이드 항원 (당접합체)을 포함하는 새로운 면역원성 조성물, 상기 면역원성 조성물을 포함하는 키트 및 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 면역원성 조성물은 전형적으로 당접합체를 포함할 것이며, 여기서 사카라이드는 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae)의 혈청형으로부터 유래된다. 본 발명은 또한 상기 신규 면역원성 조성물 및 키트를 사용한 인간 대상체, 특히 영아 및 노인의 폐렴구균 감염에 대한 백신접종에 관한 것이다.
폐렴구균에 의해 유발되는 감염은 전세계적으로 이환율 및 사망률의 주요 원인이다. 폐렴, 열성 박테리아혈증 및 수막염은 침습성 폐렴구균 질환의 가장 흔한 징후인 한편, 기도 내 박테리아 확산은 중이 감염, 부비동염 또는 재발성 기관지염을 야기할 수 있다. 침습성 질환과 비교하여, 비-침습성 징후는 통상적으로 덜 중증이지만, 상당히 더 흔하다.
유럽 및 미국에서, 폐렴구균 폐렴은 매년 100,000명의 성인당 대략 100명에게 영향을 미치는 것으로 추정되는, 가장 흔한 지역사회 획득 박테리아성 폐렴이다. 열성 박테리아혈증 및 수막염에 상응하는 수치는 각각 100,000명당 15-19명 및 100,000명당 1-2명이다. 이들 징후 중 1종 이상에 대한 위험은 영아 및 고령의 인간, 뿐만 아니라 임의의 연령의 면역 손상자에서 훨씬 더 높다. 경제 선진국에서 조차도, 침습성 폐렴구균 질환은 높은 사망률을 보유하고; 폐렴구균 폐렴을 갖는 성인의 경우에 사망률은 평균 10%-20%이며, 이는 고-위험군에서 50%를 초과할 수 있다. 폐렴은 단연 전세계 폐렴구균 사망의 가장 흔한 원인이다.
폐렴구균 질환의 병인체인 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 (폐렴구균)는 폴리사카라이드 캡슐에 의해 둘러싸인 그람-양성 캡슐화된 구균이다. 이러한 캡슐의 조성에서의 차이는 약 91종의 캡슐 유형 사이의 혈청학적 구별을 가능하게 하고, 그 중 일부가 폐렴구균 질환과 빈번하게 연관되며, 다른 것은 드물다. 침습성 폐렴구균 감염은 폐렴, 수막염 및 열성 박테리아혈증을 포함하며; 그 중 흔한 비-침습성 징후는 중이염, 부비동염 및 기관지염이다.
폐렴구균 접합체 백신 (PCV)은 에스. 뉴모니아에 (폐렴구균)에 의해 유발되는 질환의 보호를 위해 사용되는 폐렴구균 백신이다. 현재 세계 시장에서 입수가능한 3종의 PCV 백신: 프레브나르(PREVNAR)® (일부 국가에서 프레베나르(PREVENAR)®) (7가 백신), 신플로릭스(SYNFLORIX)® (10가 백신) 및 프레브나르 13® (일부 국가에서 프레베나르 13®) (13가 백신)이 존재한다.
최근 필수적 항생제에 대한 광범위한 미생물 저항성의 발생 및 증가하는 수의 면역손상자는 보다 넓게 보호하는 폐렴구균 백신에 대한 필요를 강조한다.
특히, 프레브나르 13®에서 발견되지 않는 혈청형 및 비 프레브나르 13® 혈청형의 출현 잠재성으로 인한 폐렴구균 질환의 적용범위에 대한 남아있는 미충족 의료 필요를 다룰 필요가 존재한다. 프레브나르 13®의 13종을 넘어 질환을 유발하는 특이적 혈청형은 지역마다, 인구마다 다르고, 항생제 저항성의 획득, 폐렴구균 백신 도입 및 비공지 기원의 세속적 추세로 인해 시간의 경과에 따라 변할 수 있다. 인간 및 특히 2세 미만의 소아에서 추가의 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형에 대한 면역 반응을 유도하는데 사용될 수 있는 면역원성 조성물에 대한 필요가 존재한다.
본 발명의 새로운 면역원성 조성물의 목적은 프레브나르 13®에서 발견되지 않는 에스. 뉴모니아에 혈청형에 대해 적절한 보호를 제공하는 것이다. 한 측면에서, 본 발명의 면역원성 조성물의 목적은 프레브나르® (7가 백신), 신플로릭스® 및/또는 프레브나르 13®에 의해 현재 커버되는 혈청형에 대한 면역 반응을 유지하면서, 상기 백신에서 발견되지 않는 에스. 뉴모니아에 혈청형에 대해 적절한 보호를 제공하는 것이다.
항원 경쟁 (또는 간섭) 현상은 다가 백신의 개발을 복잡하게 한다. 항원 간섭은 다중 항원을 투여하는 것이 이러한 항원을 개별적으로 투여하는 경우에 관찰되는 면역 반응에 비해 특정 항원에 대해 감소된 반응을 야기할 수 있는 관찰을 지칭한다. 항원의 새로운 조합이 만들어질 때 그의 발생은 예측불가능하다.
본 발명의 면역원성 조성물, 키트 및 투여 스케줄의 목적은 현재 프레브나르 13®에 의해 커버되는 혈청형에 대한 면역 반응을 유지하고 면역 간섭의 위험을 최소화하면서 상기 백신에서 발견되지 않는 에스. 뉴모니아에 혈청형에 대해 적절한 보호를 제공하는 것이다.
이들 및 다른 필요를 충족시키기 위해, 본 발명은 신규 면역원성 조성물, 그를 포함하는 키트 및 그의 용도에 관한 것이다. 하기 내용은 본 발명의 일부 측면 및 실시양태를 기재한다.
본 발명의 한 측면은 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이다.
한 측면에서 본 발명은 (a) 상기 면역원성 조성물을 포함하는 제1 면역원성 조성물; 및 (b) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 제2 면역원성 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한 상기 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 측면은 백신접종 스케줄로 사용하기 위한 상기 면역원성 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 백신접종 스케줄은 단일 용량 스케줄이다. 또 다른 실시양태에서, 백신접종 스케줄은 다중 용량 스케줄이다.
한 측면에서, 상기 키트는 제1 및 제2 면역원성 조성물의 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 의약으로서 사용하기 위한 상기 면역원성 조성물 또는 상기 키트를 제공한다.
본 발명의 한 측면에서, 상기 면역원성 조성물 또는 상기 키트는 백신으로서 사용하기 위한 것이다.
또 다른 측면에서 본 발명은 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키는 방법에 사용하기 위한 상기 면역원성 조성물 또는 상기 키트를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 면역원성 조성물 또는 상기 키트는 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태를 예방하는 방법에 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 한 측면은 상기 면역원성 조성물을 전신 또는 점막 경로를 통해 투여하는 것에 의해, 폐렴구균 감염에 영향받기 쉬운 인간을 보호하거나 치료하는 방법에 사용하기 위한 상기 면역원성 조성물 또는 상기 키트를 제공한다.
도 1은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8 (Pn-8) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 2는 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A (Pn-10A) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 3은 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A (Pn-11A) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 4는 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F (Pn-12F) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 5는 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B (Pn-15B) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 6은 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F (Pn-22F) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 7은 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F (Pn-33F) 캡슐형 폴리사카라이드의 반복되는 폴리사카라이드 구조를 보여준다.
도 8은 Pn-33F 당접합체의 제조에 사용될 수 있는 활성화 (A) 및 접합 (B) 공정에 대한 대표적인 공정 흐름도를 보여준다.
도 9는 TEMPO/NCS 산화 반응에서 NCS의 양이 달라짐에 따른 DO에 대한 영향을 보여준다.
도 10은 Pn-12F 당접합체 안정성의 평가를 보여준다.
도 11 교차-기능적 OPA 반응. 13가 폐렴구균 접합체 백신으로 백신접종된 성인으로부터의 59종의 혈청의 하위세트 (미국 연구 6115A1-004; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00427895)를 혈청형 9V, 9A, 9L, 및 9N에 대한 기능적 항체의 존재에 대해 OPA에서 평가하였다. OPA 양성 역가 (즉, ≥1:8)를 갖는 샘플의 퍼센트를 각각의 군 위에 나타낸다. 기하 평균 역가 (GMT)를 x 축에 각각의 군 아래에 열거한다.
도 12 66종의 매칭되는 전/후 혈청의 교차-기능적 OPA 반응. 13가 폐렴구균 접합체 백신으로 백신접종된 성인으로부터의 66종의 매칭되는 백신접종-전 및 -후의 혈청 패널의 하위세트 (연구 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572)를 혈청형 9V, 9A, 9L, 및 9N에 대한 기능적 항체의 존재에 대해 OPA에서 평가하였다. OPA 양성 역가 (즉, ≥1:8)를 갖는 샘플의 퍼센트를 각각의 군 위에 나타낸다. 기하 평균 역가 (GMT)를 x 축에 각각의 군 아래에 열거한다.
도 13 면역화 전 및 후의 역 누적 분포 곡선 (RCDC) - 폐렴구균 혈청형 9V (Pn9V).
13가 폐렴구균 접합체 백신으로 백신접종된, 매칭되는 백신접종-전 및 -후 혈청 패널 (N = 66)로부터의 혈청형 9V에 대한 OPA 역가의 역 누적 분포 곡선 (연구 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). 플롯은 OPA 양성 역가 (즉, ≥1:8)를 갖는 혈청의 퍼센트를 나타낸다.
도 14 면역화 전 및 후의 역 누적 분포 곡선 (RCDC) - 폐렴구균 혈청형 9A (Pn9A).
13가 폐렴구균 접합체 백신으로 백신접종된, 매칭되는 백신접종-전 및 -후 혈청 패널 (N = 66)로부터의 혈청형 9A에 대한 OPA 역가의 역 누적 분포 곡선 (연구 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). 플롯은 OPA 양성 역가 (즉, ≥1:8)를 갖는 혈청의 퍼센트를 나타낸다.
도 15 면역화 전 및 후의 역 누적 분포 곡선 (RCDC) - 폐렴구균 혈청형 9L (Pn9L).
13가 폐렴구균 접합체 백신으로 백신접종된, 매칭되는 백신접종-전 및 -후 혈청 패널 (N = 66)로부터의 혈청형 9L에 대한 OPA 역가의 역 누적 분포 곡선 (연구 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). 플롯은 OPA 양성 역가 (즉, ≥1:8)를 갖는 혈청의 퍼센트를 나타낸다.
도 16 면역화 전 및 후의 역 누적 분포 곡선 (RCDC) - 폐렴구균 혈청형 9N (Pn9N).
13가 폐렴구균 접합체 백신으로 백신접종된, 매칭되는 백신접종-전 및 -후 혈청 패널 (N = 66)로부터의 혈청형 9N에 대한 OPA 역가의 역 누적 분포 곡선 (연구 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). 플롯은 OPA 양성 역가 (즉, ≥1:8)를 갖는 혈청의 퍼센트를 나타낸다.
1. 본 발명의 당접합체
본 발명의 면역원성 조성물은 전형적으로 접합된 캡슐형 사카라이드 항원 (당접합체로도 명명됨)을 포함할 것이며, 여기서 사카라이드는 에스. 뉴모니아에의 혈청형으로부터 유래된다.
단백질 담체가 조성물에서 2종 이상의 사카라이드에 대해 동일한 경우에, 사카라이드는 단백질 담체의 동일한 분자에 접합될 수 있다 (담체 분자는 그에 접합된 2종 이상의 상이한 사카라이드를 가짐) [예를 들어 WO2004/083251 참조].
바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 단백질 담체의 상이한 분자에 각각 개별적으로 접합된다 (단백질 담체의 각각의 분자는 그에 접합된 1종의 유형의 사카라이드만을 가짐). 상기 실시양태에서, 캡슐형 사카라이드는 개별적으로 담체 단백질에 접합된 것으로 언급된다.
본 발명의 목적상, 용어 '당접합체'는 담체 단백질에 공유 연결된 캡슐형 사카라이드를 나타낸다. 한 실시양태에서, 캡슐형 사카라이드는 담체 단백질에 직접 연결된다. 제2 실시양태에서, 박테리아 사카라이드는 스페이서/링커를 통해 단백질에 연결된다.
1.1 본 발명의 담체 단백질
본 발명의 당접합체의 한 성분은 사카라이드가 접합되는 담체 단백질이다. 용어 "단백질 담체" 또는 "담체 단백질" 또는 "담체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 담체 단백질은 표준 접합 절차에 적용가능한 것이어야 한다.
바람직한 실시양태에서, 당접합체의 담체 단백질은 DT (디프테리아 독소), TT (파상풍 톡시드) 또는 TT의 단편 C, CRM197 (비독성이나 디프테리아 독소와 항원상 동일한 변이체), 다른 DT 돌연변이체 (예컨대 CRM176, CRM228, CRM45 (Uchida et al. (1973) J. Biol. Chem. 218:3838-3844), CRM9, CRM102, CRM103 또는 CRM107; 및 문헌 [Nicholls and Youle in Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc. (1992)]에 기재된 다른 돌연변이; Glu-148의 결실 또는 Asp, Gln 또는 Ser로의 돌연변이 및/또는 Ala 158의 결실 또는 GIy로의 돌연변이 및 미국 특허 번호 4,709,017 및 4,950,740에 개시된 다른 돌연변이; 적어도 1종 이상의 잔기 Lys 516, Lys 526, Phe 530 및/또는 Lys 534의 돌연변이 및 미국 특허 번호 5,917,017 및 6,455,673에 개시된 다른 돌연변이; 또는 미국 특허 번호 5,843,711에 개시된 단편, 일부 방식으로 해독된 폐렴구균용혈소 (ply), 예를 들어 dPLY-GMBS (WO 2004/081515, WO 2006/032499) 또는 dPLY-포르몰을 포함한 ply (Kuo et al. (1995) Infect lmmun 63:2706-2713), PhtA, PhtB, PhtD, PhtE를 포함한 PhtX (PhtA, PhtB, PhtD 또는 PhtE의 서열은 WO 00/37105 및 WO 00/39299에 개시됨) 및 Pht 단백질의 융합체, 예를 들어 PhtDE 융합체, PhtBE 융합체, Pht A-E (WO 01/98334, WO 03/054007, WO 2009/000826), 통상적으로 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis) 혈청군 B (EP0372501)로부터 추출된 OMPC (수막구균 외막 단백질), PorB (엔. 메닌기티디스로부터), PD (헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae) 단백질 D; 예를 들어, EP0594610 B 참조), 또는 그의 면역학적 기능적 등가물, 합성 펩티드 (EP0378881, EP0427347), 열 쇼크 단백질 (WO 93/17712, WO 94/03208), 백일해 단백질 (WO 98/58668, EP0471177), 시토카인, 림포카인, 성장 인자 또는 호르몬 (WO 91/01146), 다양한 병원체 유래 항원으로부터의 다중 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함하는 인공 단백질 (Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824), 예컨대 N19 단백질 (Baraldoi et al. (2004) Infect lmmun 72:4884-4887) 폐렴구균 표면 단백질 PspA (WO 02/091998), 철 흡수 단백질 (WO 01/72337), 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile)의 독소 A 또는 B (WO 00/61761), 트랜스페린 결합 단백질, 폐렴구균 부착 단백질 (PsaA), 재조합 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 외독소 A (특히 그의 비-독성 돌연변이체 (예컨대 글루탐산 553에서 치환을 보유하는 외독소 A (Douglas et al. (1987) J. Bacteriol. 169(11):4967-4971))로 이루어진 군에서 선택된다. 다른 단백질, 예컨대 오브알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 소 혈청 알부민 (BSA) 또는 투베르쿨린의 정제된 단백질 유도체 (PPD)가 또한 담체 단백질로서 사용될 수 있다. 다른 적합한 담체 단백질은 불활성화된 박테리아 독소 예컨대 콜레라 톡소이드 (예를 들어, WO 2004/083251에 기재된 바와 같음), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) LT, 이. 콜라이 ST, 및 피. 아에루기노사로부터의 외독소 A를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 당접합체의 담체 단백질은 TT, DT, DT 돌연변이체 (예컨대 CRM197), 에이치. 인플루엔자에 단백질 D, PhtX, PhtD, PhtDE 융합체 (특히 WO 01/98334 및 WO 03/054007에 기재된 것), 해독된 폐렴구균용혈소, PorB, N19 단백질, PspA, OMPC, 씨. 디피실레의 독소 A 또는 B, 및 PsaA로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 당접합체의 담체 단백질은 DT (디프테리아 톡소이드)이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 당접합체의 담체 단백질은 TT (파상풍 톡시드)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 당접합체의 담체 단백질은 PD (에이치. 인플루엔자에 단백질 D; 예를 들어, EP0594610 B 참조)이다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 CRM197 단백질에 접합된다. CRM197 단백질은 디프테리아 독소의 비독성 형태이지만, 디프테리아 독소와 면역학적으로 구별불가능하다. CRM197은 독소생성 코리네파지 베타의 니트로소구아니딘 돌연변이유발에 의해 생성된 비독소생성 파지 β197tox-에 의해 감염된 코리네박테리움 디프테리아에(Corynebacterium diphtheriae)에 의해 생산된다 (Uchida et al. (1971) Nature New Biology 233:8-11). CRM197 단백질은 디프테리아 독소와 동일한 분자량을 갖지만, 구조 유전자에서 단일 염기 변화 (구아닌에서 아데닌으로)에 의해 상기 독소와 상이하다. 이러한 단일 염기 변화는 성숙 단백질에서 아미노산 치환 (글리신에서 글루탐산으로)을 유발하고, 디프테리아 독소의 독성 특성을 제거한다. CRM197 단백질은 사카라이드를 위한 안전하고 효과적인 T-세포 의존성 담체이다. CRM197 및 그의 생산에 대한 추가의 세부사항은 예를 들어 미국 특허 번호 5,614,382에서 확인할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 CRM197 단백질 또는 CRM197의 A 쇄에 접합된다 (CN103495161 참조). 한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 유전자 재조합 이. 콜라이에 의한 발현을 통해 수득되는 CRM197의 A 쇄에 접합된다 (CN103495161 참조). 한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 모두 CRM197에 접합된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 모두 CRM197의 A 쇄에 접합된다.
따라서, 빈번한 실시양태에서, 본 발명의 당접합체는 담체 단백질로서 CRM197을 포함하며, 여기서 캡슐형 폴리사카라이드는 CRM197에 공유 연결된다.
1.2 본 발명의 캡슐형 사카라이드
본 명세서 전반에서 용어 "사카라이드"는 폴리사카라이드 또는 올리고사카라이드를 나타낼 수 있고, 이들 둘 다를 포함한다. 빈번한 실시양태에서, 사카라이드는 폴리사카라이드, 특히 에스. 뉴모니아에 캡슐형 폴리사카라이드이다.
캡슐형 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 기술에 의해 제조된다.
본 발명에서, 캡슐형 폴리사카라이드는, 예를 들어 에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터 제조될 수 있다. 전형적으로 캡슐형 폴리사카라이드는 각각의 에스. 뉴모니아에 혈청형을 배지에서 (예를 들어, 대두-기재 배지에서) 성장시킴으로서 생산되고, 이어서 박테리아 배양물로부터 폴리사카라이드가 제조된다. 본 발명의 당접합체에 사용되는 각각의 폴리사카라이드를 제조하기 위해 사용되는 에스. 뉴모니아에의 박테리아 균주는 확립된 배양 수집물 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
종종 유기체의 집단 (각각 에스. 뉴모니아에 혈청형)은, 생산 규모 발효 부피에 도달할 때까지, 시드 바이알에서 시드 병으로 규모확대되고, 증가하는 부피의 1개 이상의 시드 발효기를 통해 계대배양된다. 성장 사이클의 말미에, 세포는 용해되고, 이어서 하류 (정제) 프로세싱을 위해 용해물 브로쓰가 수거된다 (예를 들어, WO 2006/110381, WO 2008/118752, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2008/0102498 및 2008/0286838 참조).
개별 폴리사카라이드는 전형적으로 원심분리, 침전, 한외-여과 및/또는 칼럼 크로마토그래피를 통해 정제된다 (예를 들어, WO 2006/110352 및 WO 2008/118752 참조).
정제된 폴리사카라이드는, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 그것이 (예를 들어, eTEC 스페이서와) 반응할 수 있도록 활성화 (예를 들어, 화학적으로 활성화)될 수 있고, 이어서 본 발명의 당접합체 내로 혼입될 수 있다.
에스. 뉴모니아에 캡슐형 폴리사카라이드는 최대 8개의 당 잔기를 함유할 수 있는 반복되는 올리고사카라이드 단위를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 1개의 올리고사카라이드 단위일 수 있거나, 또는 반복되는 올리고사카라이드 단위의 천연 길이 사카라이드 쇄보다 더 짧을 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 적절한 혈청형의 1개의 반복되는 올리고사카라이드 단위이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 캡슐형 사카라이드는 올리고사카라이드일 수 있다. 올리고사카라이드는 적은 수의 반복 단위 (전형적으로 5-15개의 반복 단위)를 갖고, 전형적으로 합성적으로 또는 폴리사카라이드의 가수분해에 의해 유래된다.
그러나 바람직하게는, 본 발명의 및 본 발명의 면역원성 조성물에서 모든 캡슐형 사카라이드는 폴리사카라이드이다. 높은 분자량 캡슐형 폴리사카라이드는 항원 표면 상에 존재하는 에피토프로 인해 특정 항체 면역 반응을 유도할 수 있다. 바람직하게는, 높은 분자량 캡슐형 폴리사카라이드의 단리 및 정제가 본 발명의 접합체, 조성물 및 방법에서의 사용을 위해 고려된다.
일부 실시양태에서, 정제된 폴리사카라이드는 접합 전 10 kDa 내지 4,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 4,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가로 이러한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 3,500 kDa; 50 kDa 내지 3,000 kDa; 50 kDa 내지 2,500 kDa; 50 kDa 내지 2,000 kDa; 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 4,000 kDa; 100 kDa 내지 3,500 kDa; 100 kDa 내지 3,000 kDa; 100 kDa 내지 2,500 kDa; 100 kDa 내지 2,250 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 4,000 kDa; 200 kDa 내지 3,500 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 2,500 kDa; 200 kDa 내지 2,250 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 기계적 또는 화학적 사이징이 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다. 기계적 사이징은 고압 균질화 전단을 사용하여 수행될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
바람직한 실시양태에서, 정제된 폴리사카라이드는 에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 또는 33F로부터의 캡슐형 폴리사카라이드이며, 여기서 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 본원에 기재된 바와 같은 분자량 범위 중 하나 내에 속하는 분자량을 갖는다.
본원에 사용된 용어 폴리사카라이드의 또는 담체 단백질-폴리사카라이드 접합체의 "분자량"은 다중각도 레이저 광 산란 검출기 (MALLS)와 조합된 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 계산된 분자량을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 9V, 18C, 11A, 15B, 22F 및/또는 33F로부터의 폐렴구균 사카라이드는 O-아세틸화된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 9V, 11A, 15B, 22F 및/또는 33F로부터의 폐렴구균 사카라이드는 O-아세틸화된다.
본원에 기재된 정제된 폴리사카라이드는 사카라이드가 담체 단백질과 반응할 수 있도록 화학적으로 활성화된다. 이들 폐렴구균 접합체는 하기 기재된 바와 같이 개별 공정에 의해 제조되어 단일 투여 제제로 제제화된다.
1.2.1 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 폐렴구균 폴리사카라이드
에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 캡슐형 사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 기술에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어 WO 2006/110381 참조). 캡슐형 폴리사카라이드는 각각의 에스. 뉴모니아에 혈청형을 배지에서 성장시킴으로써 생산될 수 있고; 성장 사이클의 말미에 세포는 용해되고, 이어서 하류 (정제) 프로세싱을 위해 용해물 브로쓰가 수거된다. 개별 폴리사카라이드는 전형적으로 원심분리, 침전, 한외-여과 및/또는 칼럼 크로마토그래피를 통해 정제된다 (예를 들어 WO 2006/110352 및 WO 2008/118752 참조). 정제된 폴리사카라이드는 본 발명의 당접합체를 제조하기 위해 본원에 추가로 기재된 바와 같이 추가로 프로세싱될 수 있다.
일부 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및/또는 23F로부터의 정제된 폴리사카라이드는 접합 전 10 kDa 내지 4,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 4,000 kDa; 50 kDa 내지 3,000 kDa 또는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 3,500 kDa; 50 kDa 내지 3,000 kDa; 50 kDa 내지 2,500 kDa; 50 kDa 내지 2,000 kDa; 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 4,000 kDa; 100 kDa 내지 3,500 kDa; 100 kDa 내지 3,000 kDa; 100 kDa 내지 2,500 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 4,000 kDa; 200 kDa 내지 3,500 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 2,500 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 9V 및/또는 18C로부터의 폐렴구균 사카라이드는 O-아세틸화된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 9V로부터의 폐렴구균 사카라이드는 O-아세틸화되고, 본 발명의 혈청형 18C로부터의 폐렴구균 사카라이드는 탈-O-아세틸화된다.
1.2.2 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 8
혈청형 8의 폴리사카라이드 반복 단위는 1개의 글루쿠론산 (GlcpA), 2개의 글루코피라노스 (Glcp) 및 1개의 갈락토피라노스 (Galp)를 갖는 선형 테트라사카라이드 단위로 이루어진다 (Jones et al. (1957) The Journal of the American Chemical Society. 79(11):2787-2793). 모든 4개의 모노사카라이드는 도 1에 제시된 바와 같이 1,4-연결을 통해 연결된다.
혈청형 8 사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득될 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 또한, 이는 합성 프로토콜을 사용하여 생산될 수 있다.
혈청형 8 에스. 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합 전 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 정제된 폴리사카라이드는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 1,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 70 kDa 내지 900 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 800 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 600 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 150 kDa 내지 600 kDa; 150 kDa 내지 500 kDa; 150 kDa 내지 400 kDa; 200 kDa 내지 600 kDa; 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 600; 250 kDa 내지 500 kDa; 250 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 350 kDa; 300 kDa 내지 600 kDa; 300 kDa 내지 500 kDa; 300 kDa 내지 400 kDa; 400 kDa 내지 600 kDa; 500 kDa 내지 600 kDa; 및 유사한 목적 분자량 범위의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
1.2.3 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 10A
혈청형 10A의 폴리사카라이드 반복 단위는 2개의 갈락토푸라노스 (Galf), 3개의 갈락토피라노스 (Galp), 1개의 N-아세틸갈락토사민 (GalpNAc) 및 백본 포스포리비톨을 갖는 분지형 헥사사카라이드 반복 단위로 이루어진다 (Jones, C. (2005) Carbohydrate Research 269(1):175-181). 도 2에 제시된 바와 같이 β-GalpNAc 모이어티에서 2개의 분지화 모노사카라이드 (β-3-Galp 및 β-6-Galf)가 존재한다.
혈청형 10A 사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득될 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 또한, 이는 합성 프로토콜을 사용하여 생산될 수 있다.
혈청형 10A 에스. 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합 전 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 정제된 폴리사카라이드는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 1,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 70 kDa 내지 900 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 800 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 600 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 150 kDa 내지 600 kDa; 150 kDa 내지 500 kDa; 150 kDa 내지 400 kDa; 200 kDa 내지 600 kDa; 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 600 kDa; 250 kDa 내지 500 kDa; 250 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 350 kDa; 300 kDa 내지 600 kDa; 300 kDa 내지 500 kDa; 300 kDa 내지 400 kDa; 400 kDa 내지 600 kDa; 500 kDa 내지 600 kDa; 및 유사한 목적 분자량 범위의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
1.2.4 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 11A
혈청형 11A의 폴리사카라이드 반복 단위는 도 3에 제시된 바와 같이 선형 테트라사카라이드 백본 (2개의 갈락토피라노스 (Galp) 및 2개의 글루코피라노스 (Glcp)) 및 팬던트 포스포글리세롤로 이루어진다 (Richards et al. (1988) Adv. Exp. Med. Biol. 228:595-597). 폴리사카라이드는 다중 위치에서 O-아세틸화되고, 문헌 (Calix et al. (2011) J Bacteriol. 193(19):5271-5278)에 보고된 데이터에 기초하면, 11A 폴리사카라이드에서의 O-아세틸화의 총량은 폴리사카라이드 반복 단위당 약 2.6개 O-아세틸 기이다.
혈청형 11A 사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득될 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 또한, 이는 합성 프로토콜을 사용하여 생산될 수 있다.
혈청형 11A 에스. 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
에스. 뉴모니아에 용해물로부터의 혈청형 11A 폴리사카라이드의 정제 및 임의로 정제된 폴리사카라이드의 사이징에 의해 수득된 단리된 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드는, 예를 들어, 분자량 (MW) 및 상기 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM을 포함한 상이한 속성에 의해 특징화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합 전 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 정제된 폴리사카라이드는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 1,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 70 kDa 내지 900 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 800 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 600 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 100 kDa 내지 300 kDa; 100 kDa 내지 200 kDa; 150 kDa 내지 600 kDa; 150 kDa 내지 500 kDa; 150 kDa 내지 400 kDa; 150 kDa 내지 300 kDa; 150 kDa 내지 200 kDa; 200 kDa 내지 600 kDa; 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 600 kDa; 250 kDa 내지 500 kDa; 250 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 350 kDa; 300 kDa 내지 600 kDa; 300 kDa 내지 500 kDa; 300 kDa 내지 400 kDa; 400 kDa 내지 600 kDa; 500 kDa 내지 600 kDa; 및 유사한 목적 분자량 범위의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
한 실시양태에서, 정제된 혈청형 11A 폴리사카라이드의 크기는 고압 균질화에 의해 감소된다. 고압 균질화는 직경이 충분히 작은 유동 경로를 통해 공정 스트림을 펌핑함으로써 높은 전단율을 달성한다. 전단율은 보다 크게 인가되는 균질화 압력을 사용함으로써 증가되고, 노출 시간은 균질화기를 통해 공급 스트림을 재순환시킴으로써 증가될 수 있다.
고압 균질화 공정은 폴리사카라이드의 구조적 특색 예컨대 O-아세틸 기의 존재를 보존하면서, 정제된 혈청형 11A 폴리사카라이드의 크기를 감소시키는데 특히 적절하다.
정제된, 단리된 또는 활성화된 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드 또는 혈청형 11A 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체 내의 O-아세틸의 존재는 상기 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM 수로서 또는 폴리사카라이드 반복 단위당 O-아세틸 기의 수로서 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 정제된 폴리사카라이드는 상기 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드의 μmol당 적어도 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4 또는 1.6 μmol 아세테이트를 갖는다.
1.2.5 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 12F
혈청형 12F의 폴리사카라이드 반복 단위는, 도 4에 제시된 바와 같이, 2개의 분지: FucpNAc의 C3에 연결된 팬던트 α-갈락토피라노스 (Galp) 및 ManpNAcA의 C3에 연결된 α-Glcp-(1→2)-α-Glcp 디사카라이드 분지를 갖는, 선형 트리사카라이드 백본 (1개의 N-아세틸푸코사민 (FucpNAc), 1개의 N-아세틸갈락토사민 (GalpNAc) 및 1개의 N-아세틸만누론산 (ManpNAcA))으로 이루어진다 (Leontein et al. (1983) Carbohydrate Research 114(2):257-266).
혈청형 12F 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 캡슐형 사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 기술에 의해 제조된다. 전형적으로 캡슐형 폴리사카라이드는 각각의 에스. 뉴모니아에 혈청형을 배지에서 (예를 들어, 대두-기반 배지에서) 성장시킴으로서 생산되고, 이어서 박테리아 배양물로부터 폴리사카라이드가 제조된다. 종종 유기체의 집단 (에스. 뉴모니아에 혈청형 12F)은, 생산 규모 발효 부피에 도달할 때까지, 시드 바이알에서 시드 병으로 규모확대되고, 증가하는 부피의 1개 이상의 시드 발효기를 통해 계대배양된다. 성장 사이클의 말미에, 세포는 용해되고, 이어서 하류 (정제) 프로세싱을 위해 용해물 브로쓰가 수거된다 (예를 들어 WO 2006/110381 및 WO 2008/118752, 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2008/0102498 및 US2008/0286838 참조). 폴리사카라이드는 전형적으로 원심분리, 침전, 한외-여과 및/또는 칼럼 크로마토그래피를 통해 정제된다 (예를 들어 WO 2006/110352 및 WO 2008/118752 참조).
혈청형 12F로부터의 정제된 폴리사카라이드는, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 그것이 반응할 수 있도록 활성화 (예를 들어, 화학적으로 활성화)될 수 있고, 이어서 본 발명의 당접합체 내로 혼입될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합 전 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 정제된 폴리사카라이드는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 1,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 70 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 90 kDa 내지 250 kDa; 90 kDa 내지 150 kDa; 90 kDa 내지 120 kDa; 80 kDa 내지 120 kDa; 70 kDa 내지 100 kDa; 70 kDa 내지 110 kDa; 70 kDa 내지 120 kDa; 70 kDa 내지 130 kDa; 70 kDa 내지 140 kDa; 70 kDa 내지 150 kDa; 70 kDa 내지 160 kDa; 80 kDa 내지 110 kDa; 80 kDa 내지 120 kDa; 80 kDa 내지 130 kDa; 80 kDa 내지 140 kDa; 80 kDa 내지 150 kDa; 80 kDa 내지 160 kDa; 90 kDa 내지 110 kDa; 90 kDa 내지 120 kDa; 90 kDa 내지 130 kDa; 90 kDa 내지 140 kDa; 90 kDa 내지 150 kDa; 90 kDa 내지 160 kDa; 100 kDa 내지 120 kDa; 100 kDa 내지 130 kDa; 100 kDa 내지 140 kDa; 100 kDa 내지 150 kDa; 100 kDa 내지 160 kDa; 및 유사한 목적 분자량 범위의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
1.2.6 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 15B
도 5에 제시된 바와 같이, 혈청형 15B의 폴리사카라이드 반복 단위는 GlcpNAc의 C4 히드록실 기에 연결된 αGalp-βGalp 디사카라이드 분지를 갖는 분지형 트리사카라이드 백본 (1개의 N-아세틸글루코사민 (GlcpNAc), 1개의 갈락토피라노스 (Galp) 및 1개의 글루코피라노스 (Glcp))으로 이루어진다. 포스포글리세롤은 디사카라이드 분지 내의 βGalp 잔기의 C3 히드록실 기에 연결된다 (Jones et al. (2005) Carbohydrate Research 340(3):403-409). 혈청형 15C 혈청형으로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 혈청형 15B와 동일한 백본 구조를 갖지만, O-아세틸화가 결여되어 있다.
혈청형 15B 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득될 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 이는 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 합성 프로토콜을 사용하여 생산될 수 있다.
혈청형 15B 에스. 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC, 미국 버지니아주 마나사스) (예를 들어, 기탁 균주 번호 ATCC10354) 또는 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 미국 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
박테리아 세포를 배지에서, 바람직하게는 대두 기반 배지에서 성장시킨다. 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 생산하는 박테리아 세포의 발효 후, 박테리아 세포를 용해하여 세포 용해물을 생산한다. 이어서, 원심분리, 심층 여과, 침전, 한외-여과, 활성탄 처리, 투석여과 및/또는 칼럼 크로마토그래피의 사용을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 정제 기술을 사용하여 세포 용해물로부터 혈청형 15B 폴리사카라이드를 단리할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752 참조). 이어서 정제된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 면역원성 접합체의 제조에 사용할 수 있다.
에스. 뉴모니아에 용해물로부터의 혈청형 15B 폴리사카라이드의 정제 및 임의로 정제된 폴리사카라이드의 사이징에 의해 수득된 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는, 예를 들어 분자량 (MW), 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 글리세롤의 mM을 포함한 상이한 파라미터에 의해 특징화될 수 있다.
바람직하게는, 유리한 여과능 특징 및/또는 수율을 갖는 15B 접합체를 생성하기 위해, 담체 단백질에의 접합 전 표적 분자량 범위로 폴리사카라이드를 사이징하는 것이 수행된다. 유리하게는, 폴리사카라이드 구조의 중요한 특색, 예컨대 예를 들어 O-아세틸 기의 존재가 보존되면서, 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드의 크기가 감소된다. 바람직하게는, 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드의 크기는 기계적 균질화에 의해 감소된다.
바람직한 실시양태에서, 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드의 크기는 고압 균질화에 의해 감소된다. 고압 균질화는 직경이 충분히 작은 유동 경로를 통해 공정 스트림을 펌핑함으로써 높은 전단율을 달성한다. 전단율은 보다 크게 인가되는 균질화 압력을 사용함으로써 증가되고, 노출 시간은 균질화기를 통해 공급 스트림을 재순환시킴으로써 증가될 수 있다.
고압 균질화 공정은 폴리사카라이드의 구조적 특색 예컨대 O-아세틸 기의 존재를 보존하면서, 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드의 크기를 감소시키는데 특히 적절하다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 5 kDa 내지 500 kDa, 50 kDa 내지 500 kDa, 50 kDa 내지 450kDa, 100 kDa 내지 400kDa, 및 100 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 350kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 300kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150kDa 내지 300kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150kDa 내지 350kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 100 kDa 내지 300 kDa; 100 kDa 내지 200 kDa; 150 kDa 내지 500 kDa; 150 kDa 내지 400 kDa; 150 kDa 내지 300 kDa; 150 kDa 내지 200 kDa; 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 500 kDa; 250 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 350 kDa; 300 kDa 내지 500 kDa; 300 kDa 내지 400 kDa; 및 유사한 목적 분자량 범위의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
혈청형 15B 폴리사카라이드는 O-아세틸화되고, O-아세틸화의 총량은 폴리사카라이드 반복 단위당 대략 0.8-0.9개 O-아세틸 기이다. 폴리사카라이드의 O-아세틸화도는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 양성자 NMR에 의해 결정될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Lemercinier et al. (1996) Carbohydrate Research 296:83-96; Jones et al. (2002) J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30:1233-1247]; WO 2005/033148 및 WO 00/56357 참조). 또 다른 통상적으로 사용되는 방법은 문헌 [Hestrin, S. (1949) J. Biol. Chem. 180:249-261]에 기재되어 있다. 바람직하게는, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
정제된, 단리된 또는 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 또는 혈청형 15B 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체 내의 O-아세틸의 존재는 상기 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM 수로서 또는 폴리사카라이드 반복 단위당 O-아세틸 기의 수로서 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함한다.
글리세롤포스페이트 측쇄의 존재는, 폴리사카라이드를 플루오린화수소산 (HF)으로 처리하는 것에 의한 글리세롤의 방출 후 고성능 음이온 교환 크로마토그래피 및 펄스형 전류측정 검출 (HPAEC-PAD)을 사용하여 글리세롤을 측정함으로써 결정된다. 정제된, 단리된 또는 활성화된 혈청형 15B 폴리사카라이드 또는 혈청형 15B 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체 내의 글리세롤의 존재는 혈청형 15B 폴리사카라이드의 mM당 글리세롤의 mM 수로서 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.7 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 150 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
1.2.7 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 22F
도 6에 제시된 바와 같이, 혈청형 22F의 폴리사카라이드 반복 단위는 βRhap의 C3 히드록실 기에 연결된 αGlcp 분지를 갖는 분지형 펜타사카라이드 백본 (1개의 글루쿠론산 (GlcpA), 1개의 글루코피라노스 (Glcp), 1개의 갈락토푸라노스 (Galf) 및 2개의 람노피라노스 (Rhap))으로 이루어진다 (Richards et al. (1989) Canadian Journal of Chemistry 67(6):1038-1050). 폴리사카라이드 반복 단위 내의 βRhap 잔기의 C2 히드록실 기의 대략 80%는 O-아세틸화된다.
혈청형 22F 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득될 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 또한, 이는 합성 프로토콜을 사용하여 생산될 수 있다.
혈청형 22F 에스. 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
에스. 뉴모니아에 용해물로부터의 혈청형 22F 폴리사카라이드의 정제 및 임의로 정제된 폴리사카라이드의 사이징에 의해 수득된 단리된 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드는, 예를 들어, 분자량 (MW) 및 상기 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM을 포함한 상이한 파라미터에 의해 특징화될 수 있다.
바람직하게는, 유리한 여과능 특징 및/또는 수율을 갖는 혈청형 22F 접합체를 생성하기 위해, 담체 단백질에의 접합 전 표적 분자량 범위로 폴리사카라이드를 사이징하는 것이 수행된다. 유리하게는, 폴리사카라이드 구조의 중요한 특색, 예컨대 예를 들어 O-아세틸 기의 존재가 보존되면서, 정제된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 크기가 감소된다. 바람직하게는, 정제된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 크기는 기계적 균질화에 의해 감소된다.
바람직한 실시양태에서, 정제된 폴리사카라이드의 크기는 고압 균질화에 의해 감소된다. 고압 균질화는 직경이 충분히 작은 유동 경로를 통해 공정 스트림을 펌핑함으로써 높은 전단율을 달성한다. 전단율은 보다 크게 인가되는 균질화 압력을 사용함으로써 증가되고, 노출 시간은 균질화기를 통해 공급 스트림을 재순환시킴으로써 증가될 수 있다.
고압 균질화 공정은 폴리사카라이드의 구조적 특색 예컨대 O-아세틸 기의 존재를 보존하면서, 정제된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 크기를 감소시키는데 특히 적절하다.
일부 실시양태에서, 접합 전 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 정제된 폴리사카라이드는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 1,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 70 kDa 내지 900 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 800 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 200 kDa 내지 600 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 400 kDa 내지 700 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 900 kDa; 100 kDa 내지 800 kDa; 100 kDa 내지 700 kDa; 100 kDa 내지 600 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 100 kDa 내지 300 kDa; 150 kDa 내지 1,000 kDa; 150 kDa 내지 900 kDa; 150 kDa 내지 800 kDa; 150 kDa 내지 700 kDa; 150 kDa 내지 600 kDa; 150 kDa 내지 500 kDa; 150 kDa 내지 400 kDa; 150 kDa 내지 300 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 900 kDa; 200 kDa 내지 800 kDa; 200 kDa 내지 700 kDa; 200 kDa 내지 600 kDa; 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa; 200 kDa 내지 300 kDa; 250 kDa 내지 1,000 kDa; 250 kDa 내지 900 kDa; 250 kDa 내지 800 kDa; 250 kDa 내지 700 kDa; 250 kDa 내지 600 kDa; 250 kDa 내지 500 kDa; 250 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 350 kDa; 300 kDa 내지 1,000 kDa; 300 kDa 내지 900 kDa; 300 kDa 내지 800 kDa; 300 kDa 내지 700 kDa; 300 kDa 내지 600 kDa; 300 kDa 내지 500 kDa; 300 kDa 내지 400 kDa; 400 kDa 내지 1,000 kDa; 400 kDa 내지 900 kDa; 400 kDa 내지 800 kDa; 400 kDa 내지 700 kDa; 400 kDa 내지 600 kDa; 500 kDa 내지 600 kDa; 및 유사한 목적 분자량 범위의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 상기 기재된 바와 같이, 22F 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
폴리사카라이드의 O-아세틸화도는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 양성자 NMR에 의해 결정될 수 있다 (Lemercinier et al. (1996) Carbohydrate Research 296:83-96; Jones et al. (2002) J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30:1233-1247; WO 2005/033148 및 WO 00/56357). 또 다른 통상적으로 사용되는 방법은 문헌 [Hestrin, S. (1949) J. Biol. Chem. 180:249-261]에 기재되어 있다. 바람직하게는, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
정제된, 단리된 또는 활성화된 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드 또는 혈청형 22F 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체 내의 O-아세틸의 존재는 상기 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM 수로서 또는 폴리사카라이드 반복 단위당 O-아세틸 기의 수로서 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 정제된 폴리사카라이드는 상기 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드의 μmol당 적어도 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4 또는 1.6 μmol 아세테이트를 갖는다.
1.2.8 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형 33F
도 7에 제시된 바와 같이, 혈청형 33F의 폴리사카라이드 반복 단위는 백본 내의 αGalp 잔기의 C2 히드록실 기에 연결된 말단 αGalp를 갖는, 분지형 펜타사카라이드 백본 (2개의 갈락토피라노스 (Galp), 2개의 갈락토푸라노스 (Galf) 및 1개의 글루코피라노스 (Glcp))로 이루어진다 (Lemercinier et al. (2006) Carbohydrate Research 341(1):68-74.). 백본 3-β-Galf 잔기의 C2 히드록실 기가 O-아세틸화된 것으로 문헌에 보고된 바 있다.
혈청형 33F 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득될 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 또한, 이는 합성 프로토콜을 사용하여 생산될 수 있다.
혈청형 33F 에스. 뉴모니아에 균주는 확립된 배양 수집물 (예컨대 예를 들어 스트렙토코쿠스 표준 실험실 (질병 관리 예방 센터, 조지아주 애틀랜타)) 또는 임상 시편으로부터 수득될 수 있다.
혈청형 33F로부터의 정제된 폴리사카라이드는, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 그것이 반응할 수 있도록 활성화 (예를 들어, 화학적으로 활성화)될 수 있고, 이어서 본 발명의 당접합체 내로 혼입될 수 있다.
에스. 뉴모니아에 용해물로부터의 혈청형 33F 폴리사카라이드의 정제 및 임의로 정제된 폴리사카라이드의 사이징에 의해 수득된 단리된 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드는, 예를 들어, 분자량 및 상기 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM을 포함한 상이한 파라미터에 의해 특징화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합 전 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 정제된 폴리사카라이드는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
폴리사카라이드는 정상적인 정제 절차 동안 크기가 약간 감소하게 될 수 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 바와 같이, 폴리사카라이드는 접합 전 사이징 기술에 적용될 수 있다. 상기 언급된 분자량 범위는 최후의 사이징 단계 후 접합 전 (예를 들어, 활성화 전) 정제된 폴리사카라이드를 지칭한다.
정제된, 단리된 또는 활성화된 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드 또는 혈청형 33F 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체 내의 O-아세틸의 존재는 상기 폴리사카라이드의 mM당 아세테이트의 mM 수로서 또는 폴리사카라이드 반복 단위당 O-아세틸 기의 수로서 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 정제된 폴리사카라이드는 상기 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드의 μmol당 적어도 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4 또는 1.6 μmol 아세테이트를 갖는다.
1.3 본 발명의 당접합체
정제된 사카라이드는 화학적으로 활성화되어 사카라이드 (즉, 활성화된 사카라이드)는 담체 단백질과 반응할 수 있게 된다. 활성화되면, 각각의 캡슐형 사카라이드는 개별적으로 담체 단백질에 접합되어 당접합체를 형성한다. 한 실시양태에서, 각각의 캡슐형 사카라이드는 동일한 담체 단백질에 접합된다. 사카라이드의 화학적 활성화 및 담체 단백질에의 후속 접합은 본원에 개시된 활성화 및 접합 방법에 의해 달성될 수 있다.
1.3.1 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체
에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 기술에 의해 제조된다 (예를 들어 WO 2006/110381, WO 2008/118752, WO 2006/110352, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2008/0102498 및 2008/0286838 참조).
한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)에 의해 활성화되어 시아네이트 에스테르를 형성한다. 이어서, 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 (바람직하게는 CRM197) 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링된다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, N-[γ-말레이미도부티릴옥시]숙신이미드 에스테르 (GMBS)를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, N-숙신이미딜 브로모아세테이트 (SBA; SIB), N-숙신이미딜(4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), 술포숙신이미딜(4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (술포-SIAB), N-숙신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 또는 숙신이미딜 3-[브로모아세트아미도]프로프리오네이트 (SBAP)를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질 (예를 들어, CRM197)에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
접합을 위한 다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI)의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 캡슐형 폴리사카라이드 중 적어도 1종은 환원성 아미노화 (예컨대 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2007/0231340, 2007/0184071 및 2007/0184072, WO 2006/110381, WO 2008/079653, 및 WO 2008/143709에 기재됨)에 의해 담체 단백질에 접합된다. 바람직한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 모두 환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질의 환원을 수반한다. 산화 전, 폴리사카라이드는 임의로 가수분해된다. 기계적 또는 화학적 가수분해가 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다. 산화 단계는 퍼아이오데이트와의 반응을 수반할 수 있다. 본 발명의 목적상, 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고; 상기 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4 -) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6 5-) 둘 다 및 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 칼륨 퍼아이오데이트)을 포함한다.
한 실시양태에서 에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 또는 23F로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 메타퍼아이오데이트의 존재 하에, 바람직하게는 소듐 퍼아이오데이트 (NaIO4)의 존재 하에 산화된다. 또 다른 실시양태에서 에스. 뉴모니아에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 오르토퍼아이오데이트의 존재 하에, 바람직하게는 과아이오딘산의 존재 하에 산화된다.
폴리사카라이드의 산화 단계 후, 폴리사카라이드는 활성화된 것으로 언급되고, 이는 본원에서 이하 "활성화된 폴리사카라이드"로 지칭된다. 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 독립적으로 (별도의 동결건조) 또는 함께 (공동-동결건조) 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다. 한 실시양태에서, 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 공동-동결건조된다. 또 다른 실시양태에서, 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 독립적으로 동결건조된다.
한 실시양태에서, 동결건조는 비환원당의 존재 하에 일어나고, 가능한 비환원당은 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트를 포함한다.
접합 공정의 제2 단계는 환원제를 사용하여 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원시켜 접합체를 형성하는 것이다 (소위 환원성 아미노화). 적합한 환원제는 시아노보로히드라이드, 예컨대 소듐 시아노보로히드라이드, 보란-피리딘 또는 보로히드라이드 교환 수지를 포함한다. 한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이다.
한 실시양태에서, 환원 반응은 수성 용매 중에서 수행되고, 또 다른 실시양태에서 반응은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. 한 실시양태에서, 환원 반응은 DMSO (디메틸술폭시드) 또는 DMF (디메틸포름아미드) 용매 중에서 수행된다. DMSO 또는 DMF 용매는 동결건조되어 있는 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 재구성하는데 사용될 수 있다.
환원 반응의 말미에, 접합체에 미반응 알데히드 기가 남아 있을 수 있고, 이는 적합한 캡핑제를 사용하여 캡핑될 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 캡핑제는 수소화붕소나트륨 (NaBH4)이다. 접합 (환원 반응 및 임의로 캡핑) 후, 당접합체는 정제될 수 있다. 당접합체는 투석여과 및/또는 이온 교환 크로마토그래피 및/또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다. 한 실시양태에서, 당접합체는 투석여과 또는 이온 교환 크로마토그래피 또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제된다. 한 실시양태에서, 당접합체는 멸균 여과된다.
일부 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 9V 및/또는 18C로부터의 당접합체는 10% 내지 100%, 20% 내지 100%, 30% 내지 100%, 40% 내지 100%, 50% 내지 100%, 60% 내지 100%, 70% 내지 100%, 75% 내지 100%, 80% 내지 100%, 90% 내지 100%, 50% 내지 90%, 60% 내지 90%, 70% 내지 90% 또는 80% 내지 90%의 O-아세틸화도를 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 실시양태에서, O-아세틸화도는 ≥ 10%, ≥ 20%, ≥ 30%, ≥ 40%, ≥ 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, 또는 ≥ 90%, 또는 약 100%이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 에스. 뉴모니아에 혈청형 9V 및/또는 18C로부터의 당접합체는 O-아세틸화된다. 일부 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 9V로부터의 당접합체는 O-아세틸화되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 탈-O-아세틸화된다.
1.3.2 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체
한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체는 폴리사카라이드를 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)로 활성화시켜 시아네이트 에스테르를 형성함으로써 수득된다. 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB,SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다. 환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 개별 헥사사카라이드 단위 내의 이웃자리 디올로부터 알데히드 관능기를 생성하기 위한 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질 (예를 들어, CRM197)의 환원을 수반한다.
바람직하게는, 산화 전, 혈청형 22F 폴리사카라이드의 표적 분자량 (MW) 범위로의 사이징이 수행된다. 유리하게는, 폴리사카라이드 구조의 중요한 특색, 예컨대 예를 들어 O-아세틸 기의 존재가 보존되면서, 정제된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 크기가 감소된다. 바람직하게는, 정제된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 크기는 기계적 균질화에 의해 감소된다 (상기 섹션 1.2.7 참조).
한 실시양태에서, 혈청형 폴리사카라이드는
(a) 단리된 혈청형 22F 폴리사카라이드를 산화제와 반응시키는 단계; 및
(b) 켄칭제의 첨가에 의해 산화 반응을 켄칭하여 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드를 생성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 활성화된다 (산화된다).
바람직한 실시양태에서, 산화제는 퍼아이오데이트이다. 본 발명의 목적상, 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고; 상기 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4 -) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6 5-) 둘 다 및 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 칼륨 퍼아이오데이트)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 산화제는 소듐 퍼아이오데이트이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 폴리사카라이드의 산화에 사용되는 퍼아이오데이트는 메타퍼아이오데이트이다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 22F 폴리사카라이드의 산화에 사용되는 퍼아이오데이트는 소듐 메타퍼아이오데이트이다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 이웃자리 디올, 1,2-아미노알콜, 아미노산, 글루타티온, 술파이트, 비술페이트, 디티오나이트, 메타비술파이트, 티오술페이트, 포스파이트, 하이포포스파이트 또는 아인산으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 화학식 (I)의 1,2-아미노알콜이다:
Figure pat00001
여기서 R1 은 H, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 술파이트, 비술페이트, 디티오나이트, 메타비술파이트, 티오술페이트, 포스파이트, 하이포포스파이트 또는 아인산의 나트륨 및 칼륨 염으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 아미노산이다. 이러한 실시양태에서, 상기 아미노산은 세린, 트레오닌, 시스테인, 시스틴, 메티오닌, 프롤린, 히드록시프롤린, 트립토판, 티로신, 및 히스티딘으로부터 선택될 수 있다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 술파이트 예컨대 비술페이트, 디티오나이트, 메타비술파이트, 티오술페이트이다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 2개의 이웃자리 히드록실 기 (이웃자리 디올), 즉 2개의 인접한 탄소 원자에 공유 연결된 2개의 히드록실 기를 포함하는 화합물이다.
바람직하게는, 켄칭제는 화학식 (II)의 화합물이다:
Figure pat00002
여기서 R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필로부터 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 켄칭제는 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 프로판-1,2-디올, 부탄-1,2-디올 또는 부탄-2,3-디올 또는 아스코르브산이다. 바람직한 실시양태에서, 켄칭제는 부탄-2,3-디올이다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 22F 폴리사카라이드는
(a) 단리된 혈청형 22F 폴리사카라이드를 퍼아이오데이트와 반응시키는 단계; 및
(b) 부탄-2,3-디올의 첨가에 의해 산화 반응을 켄칭하여 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드를 생성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 활성화된다.
폴리사카라이드의 산화 단계 후, 폴리사카라이드는 활성화된 것으로 언급되고, 이는 본원에서 이하 "활성화된 폴리사카라이드"로 지칭된다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 정제된다. 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법, 예컨대 겔 투과 크로마토그래피 (GPC), 투석 또는 한외여과/투석여과에 따라 정제된다. 예를 들어, 활성화된 22F 폴리사카라이드는 한외여과 장치를 사용하여 농축 및 투석여과에 의해 정제된다.
바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 산화도는 2 내지 30, 2 내지 25, 2 내지 20, 2 내지 15, 2 내지 10, 2 내지 5, 5 내지 30, 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 30, 10 내지 25, 10 내지 20, 10 내지 15, 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 20, 20 내지 30, 또는 20 내지 25이다. 바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드의 산화도는 2 내지 10, 4 내지 8, 4 내지 6, 6 내지 8, 6 내지 12, 8 내지 14, 9 내지 11, 10 내지 16, 12 내지 16, 14 내지 18, 16 내지 20, 16 내지 18, 18 내지 22, 또는 18 내지 20이다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 25 kDa 내지 1,000 kDa, 100 kDa 내지 1,000 kDa, 300 kDa 내지 800 kDa, 300 kDa 내지 700 kDa, 300 kDa 내지 600 kDa, 400 kDa 내지 1,000 kDa, 400 kDa 내지 800 kDa, 400 kDa 내지 700 kDa 또는 400 kDa 내지 600kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 300 kDa 내지 800kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 400 kDa 내지 600 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 400 kda 내지 600 kDa의 분자량 및 10 내지 25, 10 내지 20, 12 내지 20, 또는 14 내지 18의 산화도를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 400 kDa 내지 600 kDa의 분자량 및 10 내지 20의 산화도를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6 또는 0.7 또는 약 0.8 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 400 kDa 내지 800 kDa의 분자량을 갖고, mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 400 kDa 내지 800 kDa의 분자량 및 12 내지 20의 산화도를 갖고, mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다.
활성화된 폴리사카라이드 및/또는 담체 단백질은 독립적으로 (별도의 동결건조) 또는 함께 (공동-동결건조) 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다.
한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 임의로 사카라이드의 존재 하에 동결건조된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스이다. 한 실시양태에서, 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드는 이어서 담체 단백질을 포함하는 용액과 배합된다.
또 다른 실시양태에서, 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 공동-동결건조된다. 이러한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는 담체 단백질과 배합되고, 임의로 사카라이드의 존재 하에 동결건조된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스이다. 공동-동결건조된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 이어서 용액 중에 재현탁될 수 있고, 환원제와 반응될 수 있다.
접합 공정의 제2 단계는 환원제를 사용하여 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원시켜 접합체를 형성하는 것이다 (환원성 아미노화).
활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드는
(c) 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드를 담체 단백질과 배합하는 단계; 및
(d) 배합된 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원제와 반응시켜 혈청형 22F 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체를 형성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 담체 단백질에 접합될 수 있다.
한 실시양태에서, 환원 반응은 수성 용매 중에서 수행된다. 또 다른 실시양태에서 반응은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. 한 실시양태에서, 환원 반응은 DMSO (디메틸술폭시드) 또는 DMF (디메틸포름아미드)) 용매 중에서 수행된다. DMSO 또는 DMF 용매는 동결건조되어 있는 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 재구성하는데 사용될 수 있다.
디메틸술폭시드 (DMSO) 중 환원성 아미노화에 의한 활성화된 혈청형 22F 폴리사카라이드와 단백질 담체의 접합은, 예를 들어, 폴리사카라이드의 O-아세틸화 수준이 유의하게 감소될 수 있는 수성 상에서의 환원성 아미노화와 비교하여 폴리사카라이드의 O-아세틸 함량을 보존하는데 적합하다. 따라서 바람직한 실시양태에서, 단계 (c) 및 단계 (d)는 DMSO 중에서 수행된다.
한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드, 소듐 트리아세톡시보로히드라이드, 브뢴스테드 또는 루이스 산의 존재 하에서의 수소화붕소나트륨 또는 수소화붕소아연, 아민 보란 예컨대 피리딘 보란, 2-피콜린 보란, 2,6-디보란-메탄올, 디메틸아민-보란, t-BuMeiPrN-BH3, 벤질아민-BH3 또는 5-에틸-2-메틸피리딘 보란 (PEMB)이다. 바람직한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이다.
환원 반응의 말미에, 접합체에 미반응 알데히드 기가 남아 있을 수 있고, 이는 적합한 캡핑제를 사용하여 캡핑될 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 캡핑제는 수소화붕소나트륨 (NaBH4)이다.
혈청형 22F 폴리사카라이드의 담체 단백질에의 접합 후, 당접합체는 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술에 의해 정제 (폴리사카라이드-단백질 접합체의 양과 관련하여 풍부화)될 수 있다. 이들 기술은 투석, 농축/투석여과 작업, 접선 흐름 여과 침전/용리, 칼럼 크로마토그래피 (DEAE 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피), 및 심층 여과를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 70 kDa 내지 900 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 100 kDa 내지 800 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 200 kDa 내지 600 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 900 kDa; 100 kDa 내지 800 kDa; 100 kDa 내지 700 kDa; 100 kDa 내지 600 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 100 kDa 내지 300 kDa; 150 kDa 내지 1,000 kDa; 150 kDa 내지 900 kDa; 150 kDa 내지 800 kDa; 150 kDa 내지 700 kDa; 150 kDa 내지 600 kDa; 150 kDa 내지 500 kDa; 150 kDa 내지 400 kDa; 150 kDa 내지 300 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 900 kDa; 200 kDa 내지 800 kDa; 200 kDa 내지 700 kDa; 200 kDa 내지 600 kDa; 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa; 200 kDa 내지 300 kDa; 250 kDa 내지 1,000 kDa; 250 kDa 내지 900 kDa; 250 kDa 내지 800 kDa; 250 kDa 내지 700 kDa; 250 kDa 내지 600 kDa; 250 kDa 내지 500 kDa; 250 kDa 내지 400 kDa; 250 kDa 내지 350 kDa; 300 kDa 내지 1000 kDa; 300 kDa 내지 900 kDa; 300 kDa 내지 800 kDa; 300 kDa 내지 700 kDa; 300 kDa 내지 600 kDa; 300 kDa 내지 500 kDa; 300 kDa 내지 400 kDa; 400 kDa 내지 1,000 kDa; 400 kDa 내지 900 kDa; 400 kDa 내지 800 kDa; 400 kDa 내지 700 kDa; 400 kDa 내지 600 kDa; 500 kDa 내지 600 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 400 kDa 내지 15,000 kDa; 500 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 8,000 kDa; 또는 3,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체는 500 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체는 1,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체는 2,000 kDa 내지 8,000 kDa 또는 3,000 kDa 내지 7,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 200 kDa 내지 20,000 kDa; 200 kDa 내지 15,000 kDa; 200 kDa 내지 10,000 kDa; 200 kDa 내지 7,500 kDa; 200 kDa 내지 5,000 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 500 kDa 내지 20,000 kDa; 500 kDa 내지 15,000 kDa; 500 kDa 내지 12,500 kDa; 500 kDa 내지 10,000 kDa; 500 kDa 내지 7,500 kDa; 500 kDa 내지 6,000 kDa; 500 kDa 내지 5,000 kDa; 500 kDa 내지 4,000 kDa; 500 kDa 내지 3,000 kDa; 500 kDa 내지 2,000 kDa; 500 kDa 내지 1,500 kDa; 500 kDa 내지 1,000 kDa; 750 kDa 내지 20,000 kDa; 750 kDa 내지 15,000 kDa; 750 kDa 내지 12,500 kDa; 750 kDa 내지 10,000 kDa; 750 kDa 내지 7,500 kDa; 750 kDa 내지 6,000 kDa; 750 kDa 내지 5,000 kDa; 750 kDa 내지 4,000 kDa; 750 kDa 내지 3,000 kDa; 750 kDa 내지 2,000 kDa; 750 kDa 내지 1,500 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 12,500 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 6,000 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 2,500 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 또는 2,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 3,000 kDa 내지 20,000 kDa; 3,000 kDa 내지 15,000 kDa; 3,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 7,500 kDa; 3,000 kDa 내지 5,000 kDa; 4,000 kDa 내지 20,000 kDa; 4,000 kDa 내지 15,000 kDa; 4,000 kDa 내지 12,500 kDa; 4,000 kDa 내지 10,000 kDa; 4,000 kDa 내지 7,500 kDa; 4,000 kDa 내지 6,000 kDa; 또는 4,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 5,000 kDa 내지 20,000 kDa; 5,000 kDa 내지 15,000 kDa; 5,000 kDa 내지 10,000 kDa; 5,000 kDa 내지 7,500 kDa; 6,000 kDa 내지 20,000 kDa; 6,000 kDa 내지 15,000 kDa; 6,000 kDa 내지 12,500 kDa; 6,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 6,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다.
당접합체의 분자량은 SEC-MALLS에 의해 측정된다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6 또는 0.7 또는 약 0.8 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다.
바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다.
본 발명의 혈청형 22F 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다. 폴리사카라이드에의 공유 연결로 인한 담체 단백질의 리신 변형에 대한 증거는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 상용 방법을 사용한 아미노산 분석에 의해 수득될 수 있다. 접합은 접합체 물질을 생성하는데 사용된 CRM197 단백질 출발 물질과 비교하여 회수되는 리신 잔기의 수의 감소를 발생시킨다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체의 접합도는 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 3 내지 15, 3 내지 13, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체의 접합도는 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 22F 당접합체의 접합도는 4 내지 7이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
본 발명의 혈청형 22F 당접합체는 또한 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량/중량)에 의해 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 당접합체 내의 혈청형 22F 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)는 0.5 내지 3.0 (예를 들어, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 또는 약 3.0)이다. 다른 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.5 내지 2.0, 0.5 내지 1.5, 0.8 내지 1.2, 0.5 내지 1.0, 1.0 내지 1.5 또는 1.0 내지 2.0이다. 추가 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.8 내지 1.2이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.9 내지 1.1이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
본 발명의 혈청형 22F 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체는 혈청형 22F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% 또는 15% 미만의 유리 혈청형 22F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 22F 당접합체는 혈청형 22F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 40% 미만의 유리 혈청형 22F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 22F 당접합체는 혈청형 22F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 25% 미만의 유리 혈청형 22F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 22F 당접합체는 혈청형 22F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 20% 미만의 유리 혈청형 22F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 22F 당접합체는 혈청형 22F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 15% 미만의 유리 혈청형 22F 폴리사카라이드를 포함한다.
혈청형 22F 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다. 접합체의 분자 크기 분포를 프로파일링하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)가 중력 공급 칼럼에서 사용된다. 매질 내 공극에서 배제된 대형 분자는 소형 분자보다 더 신속하게 용리된다. 분획 수집기를 사용하여 칼럼 용리물을 수집한다. 분획을 사카라이드 검정에 의해 비색 시험한다. Kd의 결정을 위해, 칼럼을 보정하여 분자가 완전히 배제된 분획 (V0), (Kd=0), 및 최대 보유를 나타내는 분획 (Vi), (Kd=1)을 확립한다. 명시된 샘플 속성에 도달한 분획 (Ve)은 Kd와 관련되며, Kd = (Ve - V0)/ (Vi - V0)로 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체의 적어도 30%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체의 적어도 40%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체의 적어도 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체의 50% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 22F 당접합체의 65% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
1.3.3 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체
한 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체는 폴리사카라이드를 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)로 활성화시켜 시아네이트 에스테르를 형성함으로써 수득된다. 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB, SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다. 이러한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 수성 상 (RAC/수성)에서의 환원성 아미노화를 사용하여 제조될 수 있다. 수성 상에서의 환원성 아미노화는 폐렴구균 접합체 백신을 생산하기 위해 성공적으로 적용되어 왔다 (예를 들어, WO 2006/110381 참조). 그러나 바람직하게는, 환원성 아미노화를 사용하는 경우에, 혈청형 33F 당접합체는 DMSO (RAC/DMSO)에서의 환원성 아미노화를 통해 제조된다. RAC/수성 공정을 사용하여 O-아세틸 관능기를 보존하는 것과 연관된 도전과제를 고려하여, DMSO에서의 환원성 아미노화가 바람직하다. RAC/DMSO는 폐렴구균 접합체 백신을 생산하기 위해 성공적으로 적용되어 왔다 (예를 들어, WO 2006/110381 참조).
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 예컨대 실시예 1, 2 및 3 및 WO 2014/027302에 기재된 eTEC 접합을 사용하여 제조된다 (이하 "혈청형 33F eTEC 연결된 당접합체"). 상기 33F 당접합체는 1개 이상의 eTEC 스페이서를 통해 담체 단백질에 공유 접합된 사카라이드를 포함하며, 여기서 사카라이드는 카르바메이트 연결을 통해 eTEC 스페이서에 공유 접합되고 담체 단백질은 아미드 연결을 통해 eTEC 스페이서에 공유 접합된다. 본 발명의 eTEC 연결된 당접합체는 화학식 (III)에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pat00003
여기서 eTEC 스페이서를 구성하는 원자는 중앙 박스 안에 들어 있다.
eTEC 스페이서는 7개의 선형 원자 (즉, -C(O)NH(CH2)2SCH2C(O)-)를 포함하고, 사카라이드와 담체 단백질 사이에 안정한 티오에테르 및 아미드 결합을 제공한다. eTEC 연결된 당접합체의 합성은, 사카라이드의 활성화된 히드록실 기와 티오알킬아민 시약, 예를 들어 시스타민 또는 시스테인아민 또는 그의 염의 아미노 기를 반응시켜 사카라이드에 카르바메이트 연결을 형성하여 티올화된 사카라이드를 제공하는 것을 수반한다. 환원제와의 반응에 의해 1개 이상의 유리 술프히드릴 기의 생성이 달성되어, 활성화된 티올화된 사카라이드가 제공된다. 활성화된 티올화된 사카라이드의 유리 술프히드릴 기와 아민 함유 잔기 상에 1개 이상의 α-할로아세트아미드 기를 갖는 활성화된 담체 단백질의 반응은 티오에테르 결합을 생성하여 접합체를 형성하며, 여기서 담체 단백질은 아미드 결합을 통해 eTEC 스페이서에 부착된다.
본 발명의 혈청형 33F 당접합체에서, 사카라이드는 폴리사카라이드 또는 올리고사카라이드일 수 있다. 담체 단백질은 본원에 기재되거나 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 임의의 적합한 담체로부터 선택될 수 있다. 빈번한 실시양태에서, 사카라이드는 폴리사카라이드이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 일부 이러한 실시양태에서, eTEC 연결된 당접합체는 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다.
특히 바람직한 실시양태에서, eTEC 연결된 당접합체는 eTEC 스페이서를 통해 CRM197에 공유 접합된 Pn-33F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다 (혈청형 33F eTEC 연결된 당접합체).
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 50 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체는 500 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체는 200 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체는 1,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 200 kDa 내지 20,000 kDa; 200 kDa 내지 15,000 kDa; 200 kDa 내지 10,000 kDa; 200 kDa 내지 7,500 kDa; 200 kDa 내지 5,000 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 500 kDa 내지 20,000 kDa; 500 kDa 내지 15,000 kDa; 500 kDa 내지 12,500 kDa; 500 kDa 내지 10,000 kDa; 500 kDa 내지 7,500 kDa; 500 kDa 내지 6,000 kDa; 500 kDa 내지 5,000 kDa; 500 kDa 내지 4,000 kDa; 500 kDa 내지 3,000 kDa; 500 kDa 내지 2,000 kDa; 500 kDa 내지 1,500 kDa; 500 kDa 내지 1,000 kDa; 750 kDa 내지 20,000 kDa; 750 kDa 내지 15,000 kDa; 750kDa 내지 12,500 kDa; 750kDa 내지 10,000 kDa; 750kDa 내지 7,500 kDa; 750 kDa 내지 6,000 kDa; 750 kDa 내지 5,000 kDa; 750 kDa 내지 4,000 kDa; 750 kDa 내지 3,000 kDa; 750 kDa 내지 2,000 kDa; 750 kDa 내지 1,500 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 12,500 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 6,000 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 2,500 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 2,000 kDa 내지 3,000 kDa; 3,000 kDa 내지 20,000 kDa; 3,000 kDa 내지 15,000 kDa; 3,000 kDa 내지 12,500 kDa; 3,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 9,000 kDa; 3,000 kDa 내지 8,000 kDa; 3,000 kDa 내지 7,000 kDa; 3,000 kDa 내지 6,000 kDa; 3,000 kDa 내지 5,000 kDa 또는 3,000 kDa 내지 4,000 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
본 발명의 혈청형 33F 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 접합도는 2 내지 20, 4 내지 16, 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 3 내지 15, 3 내지 13, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 접합도는 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19 또는 약 20이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 접합도는 4 내지 16이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
바람직한 실시양태에서, 담체 단백질은 39개의 리신 잔기를 함유하는 CRM197을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, CRM197은 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 4 내지 16개의 리신 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 파라미터를 표현하는 또 다른 방법은 약 10% 내지 약 41%의 CRM197 리신이 사카라이드에 공유 연결된다는 것이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, CRM197은 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 2 내지 20개의 리신 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 파라미터를 표현하는 또 다른 방법은 약 5% 내지 약 50%의 CRM197 리신이 사카라이드에 공유 연결된다는 것이다. 일부 실시양태에서, CRM197은 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 또는 약 16개의 리신 잔기를 포함할 수 있다.
빈번한 실시양태에서, 담체 단백질은 담체 단백질 상의 리신 잔기의 1개 이상의 ε-아미노 기에의 아미드 연결을 통해 eTEC 스페이서에 공유 접합된다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 사카라이드에 공유 접합된 2 내지 20개의 리신 잔기를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 사카라이드에 공유 접합된 4 내지 16개의 리신 잔기를 포함한다.
본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 또한 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량/중량)에 의해 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.2 내지 4.0 (예를 들어, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 약 3.0, 약 3.1, 약 3.2, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9 또는 약 4.0)이다. 다른 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 1.0 내지 2.5이다. 추가 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.4 내지 1.7이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
담체 단백질 상의 리신에 사카라이드 쇄가 부착되는 빈도는 본 발명의 혈청형 33F 당접합체를 특징화하기 위한 또 다른 파라미터이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 적어도 1개의 공유 연결은 폴리사카라이드의 4개의 사카라이드 반복 단위마다 발생한다. 또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 10개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 15개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 추가 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다.
빈번한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이고, CRM197과 폴리사카라이드 사이의 eTEC 스페이서를 통한 공유 연결은 폴리사카라이드의 4, 10, 15 또는 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다.
다른 실시양태에서, 접합체는 담체 단백질과 사카라이드 사이에 5 내지 10개의 사카라이드 반복 단위마다; 2 내지 7개의 사카라이드 반복 단위마다; 3 내지 8개의 사카라이드 반복 단위마다; 4 내지 9개의 사카라이드 반복 단위마다; 6 내지 11개의 사카라이드 반복 단위마다; 7 내지 12개의 사카라이드 반복 단위마다; 8 내지 13개의 사카라이드 반복 단위마다; 9 내지 14개의 사카라이드 반복 단위마다; 10 내지 15개의 사카라이드 반복 단위마다; 2 내지 6개의 사카라이드 반복 단위마다, 3 내지 7개의 사카라이드 반복 단위마다; 4 내지 8개의 사카라이드 반복 단위마다; 6 내지 10개의 사카라이드 반복 단위마다; 7 내지 11개의 사카라이드 반복 단위마다; 8 내지 12개의 사카라이드 반복 단위마다; 9 내지 13개의 사카라이드 반복 단위마다; 10 내지 14개의 사카라이드 반복 단위마다; 10 내지 20개의 사카라이드 반복 단위마다; 4 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 또는 2 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결을 포함한다. 빈번한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 사카라이드 사이의 적어도 1개의 연결은 폴리사카라이드의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 사카라이드 반복 단위마다 발생한다. 한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
접합 동안 중요하게 고려해야 할 것은 개별 성분의 잠재적으로 민감한 비-사카라이드 치환기 관능기, 예컨대 사카라이드 에피토프의 일부를 형성할 수 있는 O-아실, 포스페이트 또는 글리세롤 포스페이트 측쇄의 잔류를 허용하는 조건의 개발이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 10% 내지 100%의 O-아세틸화도를 갖는 사카라이드를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50% 내지 100%의 O-아세틸화도를 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 75% 내지 100%의 O-아세틸화도를 갖는다. 추가 실시양태에서, 사카라이드는 70% 이상 (≥70%)의 O-아세틸화도를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다.
바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다.
본 발명의 혈청형 33F 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체는 혈청형 33F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만의 유리 혈청형 33F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직하게는, 혈청형 33F 당접합체는 15% 미만의 유리 사카라이드, 보다 바람직하게는 10% 미만의 유리 사카라이드, 및 보다 더 바람직하게는 5% 미만의 유리 사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 33F 당접합체는 혈청형 33F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 25% 미만의 유리 혈청형 33F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 33F 당접합체는 혈청형 33F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 20% 미만의 유리 혈청형 33F 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 33F 당접합체는 혈청형 33F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 15% 미만의 유리 혈청형 33F 폴리사카라이드를 포함한다.
특정의 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 하기 특색 중 1종 이상을 단독으로 또는 조합하여 갖는 혈청형 33F 당접합체를 제공한다: 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 가짐; 당접합체는 500 kDa 내지 10,000 KDa의 분자량을 가짐; 담체 단백질은 사카라이드에 공유 연결된 2 내지 20개의 리신 잔기를 포함함; 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.2 내지 4.0임; 당접합체는 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이에 폴리사카라이드의 4, 10, 15 또는 25 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결을 포함함; 사카라이드는 75% 내지 100%의 O-아세틸화도를 가짐; 접합체는 총 폴리사카라이드 대비 약 15% 미만의 유리 폴리사카라이드를 포함함; 담체 단백질은 CRM197임.
혈청형 33F 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 적어도 15%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 적어도 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 적어도 35%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 33F 당접합체의 적어도 70%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체의 40% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체의 50% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 33F 당접합체의 65% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
1.3.4 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체
한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체는 폴리사카라이드를 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)로 활성화시켜 시아네이트 에스테르를 형성함으로써 수득된다. 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB, SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다. 환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 개별 헥사사카라이드 단위 내의 이웃자리 디올로부터 알데히드 관능기를 생성하기 위한 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질의 환원을 수반한다.
바람직하게는, 산화 전, 혈청형 15B 폴리사카라이드의 표적 분자량 (MW) 범위로의 사이징이 수행된다. 유리하게는, 폴리사카라이드 구조의 중요한 특색, 예컨대 예를 들어 O-아세틸 기의 존재가 보존되면서, 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드의 크기가 감소된다. 바람직하게는, 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드의 크기는 기계적 균질화에 의해 감소된다 (상기 섹션 1.2.6 참조).
산화 단계는 퍼아이오데이트와의 반응을 수반할 수 있다. 본 발명의 목적상, 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고; 상기 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4 -) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6 5-) 둘 다 및 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 칼륨 퍼아이오데이트)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 산화에 사용되는 퍼아이오데이트는 메타퍼아이오데이트이다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 산화에 사용되는 퍼아이오데이트는 소듐 메타퍼아이오데이트이다.
바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 0.01 내지 10.0, 0.05 내지 5.0, 0.1 내지 1.0, 0.5 내지 1.0, 0.7 내지 0.8, 0.05 내지 0.5, 0.1 내지 0.3 몰 당량의 산화제와 반응된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 약 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35, 0.4, 0.45, 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 몰 당량의 산화제와 반응된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 약 0.15 몰 당량의 산화제와 반응된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 약 0.25 몰 당량의 산화제와 반응된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 약 0.5 몰 당량의 산화제와 반응된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 약 0.6 몰 당량의 산화제와 반응된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리사카라이드는 약 0.7 몰 당량의 산화제와 반응된다.
바람직한 실시양태에서, 반응의 지속시간은 1시간 내지 50시간, 10시간 내지 30시간, 15시간 내지 20시간, 15시간 내지 17시간 또는 약 16시간이다.
바람직한 실시양태에서, 반응 온도는 15℃ 내지 45℃, 15℃ 내지 30℃, 20℃ 내지 25℃에서 유지된다. 바람직한 실시양태에서, 반응 온도는 약 23℃에서 유지된다.
바람직한 실시양태에서, 산화 반응은 인산나트륨, 인산칼륨, 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES) 또는 비스-트리스로부터 선택된 완충제에서 실시된다. 바람직한 실시양태에서, 완충제는 인산칼륨이다.
바람직한 실시양태에서, 완충제는 1 mM 내지 500 mM, 1 mM 내지 300 mM, 또는 50 mM 내지 200 mM의 농도를 갖는다. 바람직한 실시양태에서 완충제는 약 100 mM의 농도를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 산화 반응은 pH 4.0 내지 8.0, 5.0 내지 7.0, 또는 5.5 내지 6.5에서 실시된다. 바람직한 실시양태에서, pH는 약 6.0이다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 단리된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 0.5 mg/mL 내지 5 mg/mL를 퍼아이오데이트 0.2 내지 0.3 몰 당량과 20℃ 내지 25℃의 온도에서 반응시킴으로써 수득된다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 정제된다. 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법 예컨대 겔 투과 크로마토그래피 (GPC), 투석 또는 한외여과/투석여과에 따라 정제된다. 예를 들어, 활성화된 캡슐형 폴리사카라이드는 한외여과 장치를 사용하여 농축 및 투석여과에 의해 정제된다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 산화도는 2 내지 20, 2 내지 15, 2 내지 10, 2 내지 5, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 20, 10 내지 15, 또는 15 내지 20이다. 바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 산화도는 2 내지 10, 4 내지 8, 4 내지 6, 6 내지 8, 6 내지 12, 8 내지 12, 9 내지 11, 10 내지 16, 12 내지 16, 14 내지 18, 16 내지 20, 16 내지 18, 또는 18 내지 20이다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 5 kDa 내지 500 kDa, 50 kDa 내지 500 kDa, 50 kDa 내지 450 kDa, 100 kDa 내지 400 kDa, 100 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 250 kDa의 분자량을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.7 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 250 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 250 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 250 kDa의 분자량을 갖고, 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트 및 상기 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다.
한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 임의로 사카라이드의 존재 하에 동결건조된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스이다. 동결건조된 활성화된 캡슐형 폴리사카라이드는 이어서 담체 단백질을 포함하는 용액과 배합될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 담체 단백질과 배합되고, 임의로 사카라이드의 존재 하에 동결건조된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스이다. 공동-동결건조된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 이어서 용액 중에 재현탁될 수 있고 환원제와 반응될 수 있다.
활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는
(a) 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 담체 단백질과 배합하는 단계, 및
(b) 배합된 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원제와 반응시켜 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체를 형성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 담체 단백질에 접합될 수 있다.
디메틸술폭시드 (DMSO)에서의 환원성 아미노화에 의한 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드와 단백질 담체의 접합은, 예를 들어, 폴리사카라이드의 O-아세틸화 수준이 유의하게 감소되는 수성 용액에서의 환원성 아미노화와 비교하여, 폴리사카라이드의 O-아세틸 함량을 보존하는데 적합하다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (a) 및 단계 (b)는 DMSO에서 실시된다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (a)는 동결건조된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 담체 단백질 및 DMSO를 포함하는 용액에 용해시키는 것을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (a)는 공동-동결건조된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 DMSO에 용해시키는 것을 포함한다.
단계 (a) 및 (b)가 수용액에서 실시되는 경우에, 단계 (a) 및 (b)는 바람직하게는 PBS, MES, HEPES, Bis-tris, ADA, PIPES, MOPSO, BES, MOPS, DIPSO, MOBS, HEPPSO, POPSO, TEA, EPPS, 비신 또는 HEPB로부터 선택된 완충제 중 pH 6.0 내지 8.5, 7.0 내지 8.0 또는 7.0 내지 7.5에서 실시된다. 바람직한 실시양태에서 완충제는 PBS이다. 바람직한 실시양태에서 pH는 약 7.3이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서의 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 농도는 0.1 mg/mL 내지 10 mg/mL, 0.5 mg/mL 내지 5 mg/mL, 또는 0.5 mg/mL 내지 2 mg/mL이다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서의 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 농도는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3.0 mg/mL이다.
바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 초기 투입 비 (중량 기준 중량)는 5:1 내지 0.1:1, 2:1 내지 0.1:1, 2:1 내지 1:1, 1.5:1 내지 1:1, 0.1:1 내지 1:1, 0.3:1 내지 1:1, 또는 0.6:1 내지 1:1이다.
바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 초기 투입 비는 약 0.6:1 내지 1:1이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 초기 투입 비는 약 0.6:1 내지 1.5:1이다. 이러한 초기 투입 비는 당접합체 내 낮은 수준의 유리 폴리사카라이드를 수득하기 위해 특히 적합하다.
바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 초기 투입 비는 약 0.4:1, 0.5:1, 0.6:1, 0.7:1, 0.8:1, 0.9:1, 1:1, 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1 또는 2:1이다.
한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드, 소듐 트리아세톡시보로히드라이드, 브뢴스테드 또는 루이스 산의 존재 하에서의 수소화붕소나트륨 또는 수소화붕소아연, 아민 보란 예컨대 피리딘 보란, 2-피콜린 보란, 2,6-디보란-메탄올, 디메틸아민-보란, t-BuMeiPrN-BH3, 벤질아민-BH3 또는 5-에틸-2-메틸피리딘 보란 (PEMB)이다. 바람직한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이다. 바람직한 실시양태에서, 환원제는 소듐 2-피콜린 보란이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서 사용되는 환원제의 양은 약 0.1 내지 10.0 몰 당량, 0.5 내지 5.0 몰 당량, 또는 1.0 내지 2.0 몰 당량이다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서 사용되는 환원제의 양은 약 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9 또는 2.0 몰 당량이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (b)의 지속시간은 1시간 내지 60시간, 10시간 내지 50시간, 40시간 내지 50시간, 또는 42시간 내지 46시간이다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (b)의 지속시간은 약 44시간이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서의 반응 온도는 10℃ 내지 40℃, 15℃ 내지 30℃, 또는 20℃ 내지 26℃에서 유지된다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서의 반응 온도는 약 23℃에서 유지된다.
바람직한 실시양태에서, 담체 단백질에 공유 연결된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 당접합체의 제조 공정은 NaBH4의 첨가에 의해 미반응 알데히드를 캡핑하는 (켄칭하는) 단계 (단계 (c))를 추가로 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (c)에서 사용되는 NaBH4의 양은 0.1 내지 10 몰 당량, 0.5 내지 5.0 몰 당량 또는 1.0 내지 3.0 몰 당량이다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (c)에서 사용되는 NaBH4의 양은 약 2.0 몰 당량이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (c)의 지속시간은 0.1시간 내지 10시간, 0.5시간 내지 5시간, 또는 2시간 내지 4시간이다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (c)의 지속시간은 약 3시간이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 (c)에서의 반응 온도는 15℃ 내지 45℃, 15℃ 내지 30℃ 또는 20℃ 내지 26℃에서 유지된다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (c)에서의 반응 온도는 약 23℃에서 유지된다.
바람직한 실시양태에서 접합 단계의 수율은 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 또는 90%를 초과한다. 바람직한 실시양태에서 접합 단계 (단계 b)의 수율은 60%를 초과한다. 바람직한 실시양태에서 접합 단계 (단계 b)의 수율은 70%를 초과한다. 수율은 접합체 내의 혈청형 15B 폴리사카라이드의 양 x 100 / 접합 단계에 사용된 활성화된 폴리사카라이드의 양이다.
바람직한 실시양태에서, 담체 단백질에 공유 연결된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 당접합체의 제조 공정은
(a) 정제된 혈청형 15B 폴리사카라이드를 고압 균질화에 의해 사이징하는 단계;
(b) 사이징된 혈청형 15B 폴리사카라이드를 산화제와 반응시키는 단계;
(c) 활성화된 혈청형 15B 폴리사카라이드를 담체 단백질과 배합하는 단계;
(d) 배합된 활성화된 혈청형 15B 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원제와 반응시켜 혈청형 15B 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체를 형성하는 단계; 및
(e) NaBH4의 첨가에 의해 미반응 알데히드를 캡핑하는 (켄칭하는) 단계
를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 공정의 접합 단계 (단계 d)의 수율은 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 또는 90%를 초과한다. 바람직한 실시양태에서, 접합 단계 (단계 d)의 수율은 60%를 초과한다. 바람직한 실시양태에서, 접합 단계 (단계 d)의 수율은 70%를 초과한다. 수율은 접합체 내의 혈청형 15B 폴리사카라이드의 양 x 100 / 접합 단계에 사용된 활성화된 폴리사카라이드의 양이다.
혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 담체 단백질에의 접합 후, 폴리사카라이드-단백질 접합체는 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술에 의해 정제 (폴리사카라이드-단백질 접합체의 양과 관련하여 풍부화)될 수 있다. 이들 기술은 투석, 농축/투석여과 작업, 접선 흐름 여과, 침전/용리, 칼럼 크로마토그래피 (DEAE 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피), 및 심층 여과를 포함한다.
한 실시양태에서 담체 단백질은 섹션 1.1에 정의된 바와 같다. 한 실시양태에서 담체 단백질은 DT (디프테리아 독소), TT (파상풍 톡시드), CRM197, 다른 DT 돌연변이체, PD (헤모필루스 인플루엔자에 단백질 D), 또는 그의 면역학적 기능적 등가물로 이루어진 군에서 선택된다. 한 실시양태에서 담체 단백질은 CRM197이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197)에 접합되고, 5 kDa 내지 1,500 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 10 kDa 내지 1,500 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 50 kDa 내지 250 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 250 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa; 또는 200 kDa 내지 400 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 50 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 1,000 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 3,000 kDa 내지 20,000 kDa, 5,000 kDa 내지 10,000 kDa, 5,000 kDa 내지 20,000 kDa, 8,000 kDa 내지 20,000 kDa, 8,000 kDa 내지 16,000 kDa 또는 10,000 kDa 내지 16,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 약 1,000 kDa, 약 1,500 kDa, 약 2,000 kDa, 약 2,500 kDa, 약 3,000 kDa, 약 3,500 kDa, 약 4,000 kDa, 약 4,500 kDa, 약 5,000 kDa, 약 5,500 kDa, 약 6,000 kDa, 약 6,500 kDa, 약 7,000 kDa, 약 7,500 kDa, 약 8,000 kDa, 약 8,500 kDa, 약 9,000 kDa, 약 9,500 kDa 약 10,000 kDa, 약 10,500 kDa, 약 11,000 kDa, 약 11,500 kDa, 약 12,000 kDa, 약 12,500 kDa, 약 13,000 kDa, 약 13,500 kDa, 약 14,000 kDa, 약 14,500 kDa, 약 15,000 kDa, 약 15,500 kDa, 약 16,000 kDa, 약 16,500 kDa, 약 17,000 kDa, 약 17,500 kDa, 약 18,000 kDa, 약 18,500 kDa 약 19,000 kDa, 약 19,500 kDa 또는 약 20,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 1,000 kDa 내지 20,000 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 3,000 kDa; 2,000 kDa 내지 20,000 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 또는 2,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 3,000 kDa 내지 20,000 kDa; 3,000 kDa 내지 15,000 kDa; 3,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 7,500 kDa; 3,000 kDa 내지 5,000 kDa; 3,000 kDa 내지 4,000 kDa; 4,000 kDa 내지 20,000 kDa; 4,000 kDa 내지 15,000 kDa; 4,000 kDa 내지 12,500 kDa; 4,000 kDa 내지 10,000 kDa; 4,000 kDa 내지 7,500 kDa; 4,000 kDa 내지 6,000 kDa 또는 4,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 5,000 kDa 내지 20,000 kDa; 5,000 kDa 내지 15,000 kDa; 5,000 kDa 내지 10,000 kDa; 5,000 kDa 내지 7,500 kDa; 6,000 kDa 내지 20,000 kDa; 6,000 kDa 내지 15,000 kDa; 6,000 kDa 내지 12,500 kDa; 6,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 6,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다.
당접합체의 분자량은 SEC-MALLS에 의해 측정된다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다. 한 실시양태에서, 상기 혈청형 15B 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 또한 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량/중량)에 의해 특징화될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 접합체에서 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량 기준 중량)는 0.5 내지 3.0 (예를 들어, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9 또는 약 3.0)이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.4 내지 2이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.5 내지 2.0, 0.5 내지 1.5, 0.5 내지 1.0, 1.0 내지 1.5, 1.0 내지 2.0이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.7 내지 0.9이다.
본 발명의 혈청형 15B 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% 또는 15% 미만의 유리 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 25% 미만의 유리 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 20% 미만의 유리 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 15% 미만의 유리 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다.
혈청형 15B 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 적어도 20%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 면역원성 접합체의 적어도 30%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 적어도 40%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15 당접합체의 적어도 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 적어도 70%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체의 40% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체의 50% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체의 65% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다. 바람직한 실시양태에서, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다. 바람직한 실시양태에서, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 또는 0.8 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.5, 0.6 또는 0.7 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 글리세롤을 포함한다.
본 발명의 혈청형 15B 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다. 폴리사카라이드에의 공유 연결로 인한 담체 단백질의 리신 변형에 대한 증거는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 상용 방법을 사용한 아미노산 분석에 의해 수득될 수 있다. 접합은 접합체 물질을 생성하는데 사용된 CRM197 단백질 출발 물질과 비교하여 회수되는 리신 잔기의 수의 감소를 발생시킨다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 접합도는 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 3 내지 15, 3 내지 13, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 접합도는 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 15B 당접합체의 접합도는 2 내지 5이다.
1.3.5 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체
본 발명의 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체에서, 사카라이드는 폴리사카라이드 및 올리고사카라이드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 담체 단백질은 본원에 기재되거나 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 임의의 적합한 담체로부터 선택된다. 일부 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 폴리사카라이드이다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 CDAP를 사용하여 제조된다. 폴리사카라이드는 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)에 의해 활성화되어 시아네이트 에스테르를 형성한다. 이어서, 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 (바람직하게는 CRM197) 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링된다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB, SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질 (예를 들어, CRM197)에 접합된다.
접합을 위한 다른 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
한 실시양태에서, 혈청형 12F 에스. 뉴모니아에로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다. 환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 개별 헥사사카라이드 단위 내의 이웃자리 디올로부터 알데히드 관능기를 생성하기 위한 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질의 환원을 수반한다.
산화 전, 혈청형 12F 폴리사카라이드는 임의로 가수분해된다 (사이징된다). 기계적 또는 화학적 가수분해가 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다.
한 실시양태에서, 산화제는 퍼아이오데이트이다. 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함한다 (하기 참조).
바람직한 실시양태에서, 산화제는 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 (TEMPO) 자유 라디칼 및 공산화제로서 N-클로로숙신이미드 (NCS)이다. 이러한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는, 예컨대 실시예 7 및 WO 2014/097099에 기재된 바와 같이, 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 (TEMPO) 자유 라디칼을 사용하고 공산화제로서 N-클로로숙신이미드 (NCS)를 사용하여 사카라이드의 1급 알콜을 알데히드로 산화시킴으로써 제조된다 (이하 "TEMPO/NCS 산화"). 따라서 한 측면에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 a) 12F 사카라이드를 수성 용매 중 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 (TEMPO) 및 N-클로로숙신이미드 (NCS)와 반응시켜 활성화된 사카라이드를 생산하는 단계; 및 b) 활성화된 사카라이드를 1개 이상의 아민 기를 포함하는 담체 단백질과 반응시키는 단계 (이하 "TEMPO/NCS-환원성 아미노화")를 포함하는 방법에 의해 수득가능하다. 한 측면에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 상기 방법에 의해 수득된다. 한 실시양태에서, 활성화된 12F 사카라이드의 산화도는 1 내지 50, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 5, 3 내지 40, 3 내지 30, 3 내지 20, 3 내지 10, 4 내지 40, 4 내지 30, 4 내지 20, 4 내지 10, 5 내지 30, 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 10, 6 내지 50, 6 내지 40, 6 내지 30, 6 내지 20, 6 내지 15, 6 내지 14, 6 내지 13, 6 내지 12, 6 내지 11, 6 내지 10, 7 내지 40, 7 내지 30, 7 내지 20, 7 내지 15, 7 내지 14, 7 내지 13, 7 내지 12, 7 내지 11, 7 내지 10, 8 내지 40, 8 내지 30, 8 내지 20, 8 내지 15, 8 내지 14, 8 내지 13, 8 내지 12, 8 내지 11, 8 내지 10, 9 내지 40, 9 내지 30, 9 내지 20, 9 내지 15, 10 내지 40, 10 내지 30, 10 내지 20, 또는 10 내지 15 범위이다. 추가 측면에서, 활성화된 사카라이드의 산화도는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40이다. 바람직하게는, 담체 단백질은 CRM197이다.
한 실시양태에서, 단계 a) 전, 12F 사카라이드는 100 kDa 내지 400 kDa 범위의 분자량으로 가수분해된다. 예를 들어, 한 측면에서, 분자량은 100 kDa 내지 350 kDa, 100 kDa 내지 300 kDa, 100 kDa 내지 250 kDa, 100 kDa 내지 200 kDa, 100 kDa 내지 150 kDa, 200 kDa 내지 400 kDa, 200 kDa 내지 350 kDa, 200 kDa 내지 300 kDa, 200 kDa 내지 250 kDa, 300 kda 내지 400 kDa, 또는 300 kDa 내지 350 kDa 범위이다.
추가 측면에서, 방법은 단계 b) 전에 활성화된 폴리사카라이드를 정제하는 단계를 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 방법은 단계 b) 후에 환원제를 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 한 측면에서, 환원제는 NaCNBH3이다. 추가 측면에서, 방법은 NaCNBH3의 첨가 후 NaBH4를 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 방법은 NaBH4의 첨가 후 정제 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 개시된 임의의 방법에 의해 생산되거나 수득가능한 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체를 제공한다. 예를 들어, 한 측면에서 본 개시내용은 a) 사카라이드를 수성 용매 중 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 (TEMPO) 및 N-클로로숙신이미드 (NCS)와 반응시켜 활성화된 사카라이드를 생산하는 단계; 및 b) 활성화된 사카라이드를 1개 이상의 아민 기를 포함하는 담체 단백질과 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 생산되거나 수득가능한, 담체 단백질에 접합된 사카라이드를 포함하는 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 약 50 kDa 내지 약 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체는 약 200 kDa 내지 약 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 약 500 kDa 및 약 5,000 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 약 1,000 kDa 및 약 3,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 약 600 kDa 내지 약 2,800 kDa; 약 700 kDa 내지 약 2,700 kDa; 약 1,000 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 1,800 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 1,100 kDa 내지 약 2,200 kDa; 약 1,900 kDa 내지 약 2,700 kDa; 약 1,200 kDa 내지 약 2,400 kDa; 약 1,700 kDa 내지 약 2,600 kDa; 약 1,300 kDa 내지 약 2,600 kDa; 약 1,600 kDa 내지 약 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체는 1,000 kDa 내지 20,000 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 3,000 kDa; 2,000 kDa 내지 20,000 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 또는 2,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
본 발명의 혈청형 12F 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체의 접합도는 2 내지 20, 4 내지 16, 4 내지 15, 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 3 내지 15, 3 내지 13, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체의 접합도는 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19 또는 약 20이다.
사카라이드에 접합된 담체 단백질 내의 리신 잔기의 수는 또한 몰비로 표현될 수 있다. 예를 들어, CRM197의 4 내지 15개의 리신 잔기가 사카라이드에 공유 연결된 당접합체에서, 당접합체 내의 접합된 리신 대 CRM197의 몰비는 약 10:1 내지 약 40:1이다. CRM197의 2 내지 20개의 리신 잔기가 사카라이드에 공유 연결된 면역원성 조성물에서, 당접합체 내의 접합된 리신 대 CRM197의 몰비는 약 5:1 내지 약 50:1이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체에서 접합된 리신 대 담체 단백질의 몰비는 약 10:1 내지 약 25:1이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 일부 실시양태에서, CRM197는 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개의 리신 잔기를 포함할 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체에서 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.2 내지 4.0 (예를 들어, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 약 3.0, 약 3.1, 약 3.2, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9 또는 약 4.0)이다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체에서 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 1.1 내지 1.7이다. 다른 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.8 내지 1.8 (예를 들어, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7 또는 약 1.8)이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
담체 단백질 상의 리신에 사카라이드 쇄가 부착되는 빈도는 개시내용의 혈청형 12F 당접합체를 특징화하기 위한 또 다른 파라미터이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이에 폴리사카라이드의 100개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결이 존재한다. 한 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이에 폴리사카라이드의 50개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결이 존재한다. 한 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이에 폴리사카라이드의 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결이 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 4개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 10개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 추가 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 15개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 빈번한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이고, CRM197과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 4, 10, 15 또는 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다.
다른 실시양태에서, 접합체는 담체 단백질과 사카라이드 사이에 5 내지 10개의 사카라이드 반복 단위마다; 2 내지 7개의 사카라이드 반복 단위마다; 3 내지 8개의 사카라이드 반복 단위마다; 4 내지 9개의 사카라이드 반복 단위마다; 6 내지 11개의 사카라이드 반복 단위마다; 7 내지 12개의 사카라이드 반복 단위마다; 8 내지 13개의 사카라이드 반복 단위마다; 9 내지 14개의 사카라이드 반복 단위마다; 10 내지 15개의 사카라이드 반복 단위마다; 2 내지 6개의 사카라이드 반복 단위마다, 3 내지 7개의 사카라이드 반복 단위마다; 4 내지 8개의 사카라이드 반복 단위마다; 6 내지 10개의 사카라이드 반복 단위마다; 7 내지 11개의 사카라이드 반복 단위마다; 8 내지 12개의 사카라이드 반복 단위마다; 9 내지 13개의 사카라이드 반복 단위마다; 10 내지 14개의 사카라이드 반복 단위마다; 10 내지 20개의 사카라이드 반복 단위마다; 4 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 또는 2 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결을 포함한다. 빈번한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
또 다른 실시양태에서, CRM197과 사카라이드 사이의 적어도 1개의 연결은 폴리사카라이드의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 사카라이드 반복 단위마다 발생한다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이에 폴리사카라이드의 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 4개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 또 다른 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 10개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 추가 실시양태에서, 담체 단백질과 폴리사카라이드 사이의 공유 연결은 폴리사카라이드의 15개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1회 발생한다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
본 발명의 혈청형 12F 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 45% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 30% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 20% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 추가 실시양태에서, 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 10% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 혈청형 12F 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 5% 미만의 유리 혈청형 12F 폴리사카라이드를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa; 또는 200 kDa 내지 400 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체는 TEMPO/NCS-환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된다.
혈청형 12F 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체의 적어도 35%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 12F 당접합체의 적어도 70%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체의 40% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체의 50% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 12F 당접합체의 65% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
1.3.6 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체
한 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 폴리사카라이드를 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)로 활성화시켜 시아네이트 에스테르를 형성함으로써 수득된다. 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB, SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다. 환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 개별 헥사사카라이드 단위 내의 이웃자리 디올로부터 알데히드 관능기를 생성하기 위한 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질의 환원을 수반한다.
산화 전, 혈청형 10A 폴리사카라이드는 임의로 가수분해된다 (사이징된다). 기계적 또는 화학적 가수분해가 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다.
한 실시양태에서, 혈청형 폴리사카라이드는
(a) 단리된 혈청형 10A 폴리사카라이드를 산화제와 반응시키는 단계; 및
(b) 켄칭제의 첨가에 의해 산화 반응을 켄칭하여 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드를 생성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 활성화된다 (산화된다).
바람직한 실시양태에서, 산화제는 퍼아이오데이트이다. 본 발명의 목적상, 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고, 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4 -) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6 5-) 둘 다 및 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 칼륨 퍼아이오데이트)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 산화제는 소듐 퍼아이오데이트이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 10A 폴리사카라이드의 산화에 사용되는 퍼아이오데이트는 메타퍼아이오데이트이다. 바람직한 실시양태에서 혈청형 10A 폴리사카라이드의 산화에 사용되는 퍼아이오데이트는 소듐 메타퍼아이오데이트이다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 이웃자리 디올, 1,2-아미노알콜, 아미노산, 글루타티온, 술파이트, 비술페이트, 디티오나이트, 메타비술파이트, 티오술페이트, 포스파이트, 하이포포스파이트 또는 아인산으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 화학식 (I)의 1,2-아미노알콜이다:
Figure pat00004
여기서 R1은 H, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 술파이트, 비술페이트, 디티오나이트, 메타비술파이트, 티오술페이트, 포스파이트, 하이포포스파이트 또는 아인산의 나트륨 및 칼륨 염으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 아미노산이다. 이러한 실시양태에서, 상기 아미노산은 세린, 트레오닌, 시스테인, 시스틴, 메티오닌, 프롤린, 히드록시프롤린, 트립토판, 티로신 및 히스티딘으로부터 선택될 수 있다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 술파이트 예컨대 비술페이트, 디티오나이트, 메타비술파이트, 티오술페이트이다.
한 실시양태에서, 켄칭제는 2개의 이웃자리 히드록실 기 (이웃자리 디올), 즉 2개의 인접한 탄소 원자에 공유 연결된 2개의 히드록실 기를 포함하는 화합물이다.
바람직하게는, 켄칭제는 화학식 (II)의 화합물이다:
Figure pat00005
여기서 R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필로부터 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 켄칭제는 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 프로판-1,2-디올, 부탄-1,2-디올 또는 부탄-2,3-디올, 아스코르브산이다. 바람직한 실시양태에서, 켄칭제는 부탄-2,3-디올이다.
바람직한 실시양태에서, 단리된 혈청형 10A 폴리사카라이드는
(a) 단리된 혈청형 10A 폴리사카라이드를 퍼아이오데이트와 반응시키는 단계; 및
(b) 부탄-2,3-디올의 첨가에 의해 산화 반응을 켄칭하여 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드를 생성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 활성화된다.
폴리사카라이드의 산화 단계 후, 폴리사카라이드는 활성화된 것으로 언급되고, 이하 "활성화된 폴리사카라이드"로 지칭된다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 정제된다. 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법 예컨대 겔 투과 크로마토그래피 (GPC), 투석 또는 한외여과/투석여과에 따라 정제된다. 예를 들어, 활성화된 10A 폴리사카라이드는 한외여과 장치를 사용하여 농축 및 투석여과에 의해 정제된다.
바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드의 산화도는 2 내지 30, 2 내지 25, 2 내지 20, 2 내지 15, 2 내지 10, 2 내지 5, 5 내지 30, 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 30, 10 내지 25, 10 내지 20, 10 내지 15, 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 20, 20 내지 30, 또는 20 내지 25이다. 바람직한 실시양태에서 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드의 산화도는 2 내지 10, 4 내지 8, 4 내지 6, 6 내지 8, 6 내지 12, 8 내지 14, 9 내지 11, 10 내지 16, 12 내지 16, 14 내지 18, 16 내지 20, 16 내지 18, 18 내지 22, 또는 18 내지 20이다.
바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 400 kDa, 50 kDa 내지 350 kDa, 50 kDa 내지 300 kDa, 50 kDa 내지 250 kDa, 50 kDa 내지 200 kDa, 100 kDa 내지 300 kDa, 100 kDa 내지 250 kDa 또는 100 kDa 내지 200 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 200 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 200 kDa의 분자량 및 5 내지 20, 5 내지 15, 8 내지 14, 8 내지 12 또는 9 내지 11의 산화도를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 100 kDa 내지 200 kDa의 분자량 및 9 내지 11의 산화도를 갖는다.
활성화된 폴리사카라이드 및/또는 담체 단백질은 독립적으로 (별도의 동결건조) 또는 함께 (공동-동결건조) 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다.
한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 임의로 사카라이드의 존재 하에 동결건조된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스이다. 한 실시양태에서, 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드는 이어서 담체 단백질을 포함하는 용액과 배합된다.
또 다른 실시양태에서 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 공동-동결건조된다. 이러한 실시양태에서, 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는 담체 단백질과 배합되고, 임의로 사카라이드의 존재 하에 동결건조된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 사카라이드는 수크로스이다. 공동-동결건조된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 이어서 용액 중에 재현탁될 수 있고 환원제와 반응될 수 있다.
접합 공정의 제2 단계는 환원제를 사용하여 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원시켜 접합체를 형성하는 것이다 (환원성 아미노화).
활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드는
(c) 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드를 담체 단백질과 배합하는 단계; 및
(d) 배합된 활성화된 혈청형 10A 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원제와 반응시켜 혈청형 10A 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체를 형성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 담체 단백질에 접합될 수 있다.
한 실시양태에서, 환원 반응은 수성 용매 중에서 수행되고, 또 다른 실시양태에서 반응은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. 한 실시양태에서, 환원 반응은 DMSO (디메틸술폭시드) 또는 DMF (디메틸포름아미드) 용매 중에서 수행된다. DMSO 또는 DMF 용매는 동결건조되어 있는 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 재구성하는데 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드, 소듐 트리아세톡시보로히드라이드, 브뢴스테드 또는 루이스 산의 존재 하에서의 수소화붕소나트륨 또는 수소화붕소아연, 아민 보란 예컨대 피리딘 보란, 2-피콜린 보란, 2,6-디보란-메탄올, 디메틸아민-보란, t-BuMeiPrN-BH3, 벤질아민-BH3 또는 5-에틸-2-메틸피리딘 보란 (PEMB)이다. 바람직한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이다.
환원 반응의 말미에, 접합체에 미반응 알데히드 기가 남아 있을 수 있고, 이는 적합한 캡핑제를 사용하여 캡핑될 수 있다. 한 실시양태에서 이러한 캡핑제는 수소화붕소나트륨 (NaBH4)이다.
혈청형 10A 폴리사카라이드의 담체 단백질에의 접합 후, 당접합체는 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술에 의해 정제 (폴리사카라이드-단백질 접합체의 양과 관련하여 풍부화)될 수 있다. 이들 기술은 투석, 농축/투석여과 작업, 접선 흐름 여과 침전/용리, 칼럼 크로마토그래피 (DEAE 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피), 및 심층 여과를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa; 또는 200 kDa 내지 400 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 이러한 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 50 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 50 kDa 내지 15,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 500 kDa 내지 15,000 kDa, 500 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 또는 3,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 1,000 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 1,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체는 2,000 kDa 내지 8,000 kDa 또는 3,000 kDa 내지 7,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 200 kDa 내지 20,000 kDa; 200 kDa 내지 15,000 kDa; 200 kDa 내지 10,000 kDa; 200 kDa 내지 7,500 kDa; 200 kDa 내지 5,000 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 500 kDa 내지 20,000 kDa; 500 kDa 내지 15,000 kDa; 500 kDa 내지 12,500 kDa; 500 kDa 내지 10,000 kDa; 500 kDa 내지 7,500 kDa; 500 kDa 내지 6,000 kDa; 500 kDa 내지 5,000 kDa; 500 kDa 내지 4,000 kDa; 500 kDa 내지 3,000 kDa; 500 kDa 내지 2,000 kDa; 500 kDa 내지 1,500 kDa; 500 kDa 내지 1,000 kDa; 750 kDa 내지 20,000 kDa; 750 kDa 내지 15,000 kDa; 750kDa 내지 12,500 kDa; 750kDa 내지 10,000 kDa; 750kDa 내지 7,500 kDa; 750 kDa 내지 6,000 kDa; 750 kDa 내지 5,000 kDa; 750 kDa 내지 4,000 kDa; 750 kDa 내지 3,000 kDa; 750 kDa 내지 2,000 kDa; 750 kDa 내지 1,500 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 12,500 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 6,000 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 2,500 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 또는 2,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 3,000 kDa 내지 20,000 kDa; 3,000 kDa 내지 15,000 kDa; 3,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 7,500 kDa; 3,000 kDa 내지 5,000 kDa; 4,000 kDa 내지 20,000 kDa; 4,000 kDa 내지 15,000 kDa; 4,000 kDa 내지 12,500 kDa; 4,000 kDa 내지 10,000 kDa; 4,000 kDa 내지 7,500 kDa; 4,000 kDa 내지 6,000 kDa; 또는 4,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 5,000 kDa 내지 20,000 kDa; 5,000 kDa 내지 15,000 kDa; 5,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 5,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 6,000 kDa 내지 20,000 kDa; 6,000 kDa 내지 15,000 kDa; 6,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 6,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 7,000 kDa 내지 20,000 kDa; 7,000 kDa 내지 15,000 kDa; 7,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 7,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 8,000 kDa 내지 20,000 kDa; 8,000 kDa 내지 15,000 kDa; 또는 8,000 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다.
임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다. 당접합체의 분자량은 SEC-MALLS에 의해 측정된다.
본 발명의 혈청형 10A 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다. 폴리사카라이드에의 공유 연결로 인한 담체 단백질의 리신 변형에 대한 증거는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 상용 방법을 사용한 아미노산 분석에 의해 수득될 수 있다. 접합은 접합체 물질을 생성하는데 사용된 CRM197 단백질 출발 물질과 비교하여 회수되는 리신 잔기의 수의 감소를 발생시킨다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체의 접합도는 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 3 내지 15, 3 내지 13, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체의 접합도는 6 내지 8이다. 바람직한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 또한 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량/중량)에 의해 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.5 내지 3.0 (예를 들어, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9 또는 약 3.0)이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 10A 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.5 내지 2.0, 0.5 내지 1.5, 0.5 내지 1.0, 1.0 내지 1.5 또는 1.0 내지 2.0이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 10A 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.8 내지 1.4이다. 바람직한 실시양태에서, 접합체 내의 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비는 0.8 내지 1.2 (예를 들어, 약 0.8, 약 0.9 약 1.0, 약 1.1, 또는 약 1.2)이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
본 발명의 혈청형 10A 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체는 10A 사카라이드의 총량 대비 약 50% 미만의 유리 사카라이드, 약 45% 미만의 유리 사카라이드, 약 40% 미만의 유리 사카라이드, 약 35% 미만의 유리 사카라이드, 약 30% 미만의 유리 사카라이드, 약 25% 미만의 유리 사카라이드, 약 20% 미만의 유리 사카라이드, 약 15% 미만의 유리 사카라이드, 약 10% 미만의 유리 사카라이드, 또는 약 5% 미만의 유리 사카라이드를 포함한다. 바람직하게는, 혈청형 10A 당접합체는 15% 미만의 유리 사카라이드, 보다 바람직하게는 10% 미만의 유리 사카라이드, 및 보다 더 바람직하게는 5% 미만의 유리 사카라이드를 포함한다.
혈청형 10A 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체의 적어도 30%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체의 적어도 40%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체의 적어도 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 10A 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 10A 당접합체의 50% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
1.3.7 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체
한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 폴리사카라이드를 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)로 활성화시켜 시아네이트 에스테르를 형성함으로써 수득된다. 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB, SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979). Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다. 환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 개별 헥사사카라이드 단위 내의 이웃자리 디올로부터 알데히드 관능기를 생성하기 위한 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질의 환원을 수반한다.
산화 전, 혈청형 11A 폴리사카라이드는 그의 점도를 감소시키기 위해 임의로 가수분해된다. 기계적 또는 화학적 가수분해가 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다. 기계적 사이징은 고압 균질화 전단을 사용하여 수행될 수 있다.
산화 단계는 퍼아이오데이트와의 반응을 수반할 수 있다. 본 발명의 목적상, 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고; 상기 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4 -) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6 5-) 둘 다 및 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 칼륨 퍼아이오데이트)을 포함한다. 한 실시양태에서 에스. 뉴모니아에의 혈청형 11A로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 메타퍼아이오데이트의 존재 하에, 바람직하게는 소듐 퍼아이오데이트 (NaIO4)의 존재 하에 산화된다. 또 다른 실시양태에서 혈청형 11A로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 오르토퍼아이오데이트의 존재 하에, 바람직하게는 과아이오딘산의 존재 하에 산화된다.
폴리사카라이드의 산화 단계 후, 폴리사카라이드는 활성화된 것으로 언급되고, 이는 본원에서 이하 "활성화된 폴리사카라이드"로 지칭된다. 활성화된 폴리사카라이드는 정제 및 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다.
활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 독립적으로 (별도의 동결건조) 또는 함께 (공동-동결건조) 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다. 한 실시양태에서, 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 공동-동결건조된다. 또 다른 실시양태에서, 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 독립적으로 동결건조된다.
한 실시양태에서, 동결건조는 비환원당의 존재 하에 일어나고, 가능한 비환원당은 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트를 포함한다.
접합 공정의 제2 단계는 환원제를 사용하여 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원시켜 접합체를 형성하는 것이다 (환원성 아미노화). 적합한 환원제는 시아노보로히드라이드, 예컨대 소듐 시아노보로히드라이드, 보란-피리딘 또는 보로히드라이드 교환 수지를 포함한다. 한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이다.
한 실시양태에서, 환원 반응은 수성 용매 중에서 수행되고, 또 다른 실시양태에서 반응은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. 한 실시양태에서, 환원 반응은 DMSO (디메틸술폭시드) 또는 DMF (디메틸포름아미드) 용매 중에서 수행된다. DMSO 또는 DMF 용매는 동결건조되어 있는 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 재구성하는데 사용될 수 있다.
한 실시양태에서 0.1 내지 3.0, 0.15 내지 2.0, 0.2 내지 2.0, 또는 0.5 내지 1.5 몰 당량의 소듐 시아노보로히드라이드가 환원 반응에 사용된다. 한 실시양태에서 약 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3.0 몰 당량의 소듐 시아노보로히드라이드가 환원 반응에 사용된다
한 실시양태에서 환원제는 소듐 트리아세톡시보로히드라이드이다. 추가 실시양태에서 1.0 내지 6.0 몰 당량, 2.0 내지 5.0 몰 당량 또는 약 3.0 몰 당량의 소듐 트리아세톡시보로히드라이드가 환원 반응에 사용된다.
환원 반응의 말미에, 접합체에 미반응 알데히드 기가 남아 있을 수 있고. 이는 적합한 캡핑제를 사용하여 캡핑될 수 있다. 한 실시양태에서 이러한 캡핑제는 수소화붕소나트륨 (NaBH4)이다. 한 실시양태에서 캡핑은 환원 반응을 0.5 내지 5.0 몰 당량의 NaBH4, 예를 들어 약 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 또는 3.0 몰 당량의 NaBH4와 혼합함으로써 달성된다.
접합 (환원 반응 및 임의로 캡핑) 후, 당접합체는 정제될 수 있다. 당접합체는 투석여과 및/또는 이온 교환 크로마토그래피 및/또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다. 한 실시양태에서, 당접합체는 투석여과 또는 이온 교환 크로마토그래피 또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제된다.
한 실시양태에서, 당접합체는 멸균 여과된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197)에 접합되고, 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 50 kDa 내지 400 kDa; 50 kDa 내지 300 kDa; 50 kDa 내지 200 kDa; 50 kDa 내지 100 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 400 kDa; 100 kDa 내지 300 kDa; 100 kDa 내지 200 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 400 kDa 또는 200 kDa 내지 300 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 50 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 50 kDa 내지 15,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 500 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 200 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 1,000 kDa 내지 8,000 kDa 또는 2,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 200 kDa 내지 20,000 kDa; 200 kDa 내지 17,500 kDa; 200 kDa 내지 15,000 kDa; 200 kDa 내지 10,000 kDa; 200 kDa 내지 7,500 kDa; 200 kDa 내지 5,000 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 500 kDa 내지 20,000 kDa; 500 kDa 내지 17,500 kDa; 500 kDa 내지 15,000 kDa; 500 kDa 내지 12,500 kDa; 500 kDa 내지 10,000 kDa; 500 kDa 내지 7,500 kDa; 500 kDa 내지 6,000 kDa; 500 kDa 내지 5,000 kDa; 500 kDa 내지 4,000 kDa; 500 kDa 내지 3,000 kDa; 500 kDa 내지 2,000 kDa; 500 kDa 내지 1,500 kDa; 500 kDa 내지 1,000 kDa; 700 kDa 내지 20,000 kDa; 700 kDa 내지 17,500 kDa; 700 kDa 내지 15,000 kDa; 700kDa 내지 12,500 kDa; 700kDa 내지 10,000 kDa; 700kDa 내지 7,500 kDa; 700 kDa 내지 6,000 kDa; 700 kDa 내지 5,000 kDa; 700 kDa 내지 4,500 kDa; 700 kDa 내지 4,000 kDa; 700 kDa 내지 3,500 kDa; 700 kDa 내지 3,000 kDa; 700 kDa 내지 2,000 kDa; 700 kDa 내지 1,500 kDa; 1,000 kDa 내지 20,000 kDa; 1,000 kDa 내지 17,500 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 12,500 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 6,000 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 2,500 kDa; 2,000 kDa 내지 20,000 kDa; 2,000 kDa 내지 17,500 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 또는 2,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 3,000 kDa 내지 20,000 kDa; 3,000 kDa 내지 17,500 kDa; 3,000 kDa 내지 15,000 kDa; 3,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 7,500 kDa; 3,000 kDa 내지 5,000 kDa; 4,000 kDa 내지 20,000 kDa; 4,000 kDa 내지 17,500 kDa; 4,000 kDa 내지 15,000 kDa; 4,000 kDa 내지 12,500 kDa; 4,000 kDa 내지 10,000 kDa; 4,000 kDa 내지 7,500 kDa; 4,000 kDa 내지 6,000 kDa; 또는 4,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 5,000 kDa 내지 20,000 kDa; 5,000 kDa 내지 17,500 kDa; 5,000 kDa 내지 15,000 kDa; 5,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 5,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다.
한 실시양태에서, 상기 혈청형 11A 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.3, 0.5, 0.6, 1.0, 1.4, 1.8, 2.2, 2.6, 3.0, 3.4, 3.8, 4.2, 4.6 또는 5.0 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 1.8, 2.2 또는 2.6 mM 아세테이트를 포함한다. 한 실시양태에서, 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.6, 1.0, 1.4, 1.8, 2.2, 2.6, 3.0, 3.4, 3.8, 4.2 또는 4.6 mM 아세테이트 및 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 약 5.0 mM 미만의 아세테이트를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.6, 1.0, 1.4, 1.8, 2.2, 2.6, 또는 3.0 mM 아세테이트 및 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 약 3.4 mM 미만의 아세테이트를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.6, 1.0, 1.4, 1.8, 2.2, 2.6, 또는 약 3.0 mM 아세테이트 및 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 약 3.3 mM 미만의 아세테이트를 포함한다. 임의의 상기 수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다. 바람직한 실시양태에서, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 또는 0.95이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.7이다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비는 적어도 0.9이다. 바람직한 실시양태에서, O-아세틸 기의 존재는 이온-HPLC 분석에 의해 결정된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1.0 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.2, 0.3 또는 0.4 mM 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 또는 0.9 mM 글리세롤 및 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 약 1.0 mM 미만의 글리세롤을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 적어도 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 또는 0.7 mM 글리세롤 및 mM 혈청형 11A 폴리사카라이드당 약 0.8 mM 미만의 글리세롤을 포함한다. 임의의 상기 수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
본 발명의 혈청형 11A 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다.
폴리사카라이드에의 공유 연결로 인한 담체 단백질의 리신 변형에 대한 증거는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 상용 방법을 사용한 아미노산 분석에 의해 수득될 수 있다. 접합은 접합체 물질을 생성하는데 사용된 CRM197 단백질 출발 물질과 비교하여 회수되는 리신 잔기의 수의 감소를 발생시킨다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 접합도는 1 내지 15, 1 내지 13, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 접합도는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 접합도는 1 내지 6 또는 2 내지 5이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 또한 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량/중량)에 의해 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.2 내지 4.0 (예를 들어, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 약 3.0, 약 3.1, 약 3.2, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9 또는 약 4.0)이다. 다른 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.7 내지 2.5, 0.8 내지 2.0, 0.7 내지 2.0, 0.8 내지 1.5, 0.7 내지 1.5, 0.7 및 1.4, 0.8 내지 1.4, 0.7 내지 1.45 또는 0.8 내지 1.45이다. 추가 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.8 내지 1.6 (예를 들어, 약 0.8, 약 0.9 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5 또는 약 1.6)이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 한 실시양태에서, 상기 혈청형 11A 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
본 발명의 혈청형 11A 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체는 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드, 약 45% 미만의 유리 사카라이드, 약 40% 미만의 유리 사카라이드, 약 35% 미만의 유리 사카라이드, 약 30% 미만의 유리 사카라이드, 약 25% 미만의 유리 사카라이드, 약 20% 미만의 유리 사카라이드, 약 15% 미만의 유리 사카라이드, 약 10% 미만의 유리 사카라이드, 또는 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 5% 미만의 유리 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다. 바람직하게는, 혈청형 11A 당접합체는 15% 미만의 유리 사카라이드, 보다 바람직하게는 10% 미만의 유리 사카라이드, 및 보다 더 바람직하게는, 5% 미만의 유리 사카라이드를 포함한다.
혈청형 11A 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 적어도 30%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 11A 당접합체의 적어도 65%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
1.3.8 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체
한 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체는 폴리사카라이드를 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)로 활성화시켜 시아네이트 에스테르를 형성함으로써 수득된다. 활성화된 폴리사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노 기에 직접적으로 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있으며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어, GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어, 아이오도아세트이미드, SIB, SlAB, 술포-SIAB, SIA, 또는 SBAP를 사용함)과의 반응 후 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있는 티올화 폴리사카라이드를 제공한다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)가 헥산 디아민 또는 아디프산 디히드라지드 (ADH)와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드가 카르보디이미드 (예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 단백질 담체 상의 카르복실 기를 통해 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 예를 들어 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S--NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것이 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/42721에 기재되어 있다. 접합은 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI의 반응에 의해 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 수반할 수 있고 (문헌 [Bethell et al. (1979) J. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr.218:509-518] 참조), 이어서 단백질과의 반응에 의해 카르바메이트 연결이 형성된다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, 1급 히드록실 기의 임의적인 보호/탈보호, 1급 히드록실 기와 CDI의 반응에 의한 CDI 카르바메이트 중간체의 형성, 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다. 환원성 아미노화는 2개의 단계: (1) 개별 헥사사카라이드 단위 내의 이웃자리 디올로부터 알데히드 관능기를 생성하기 위한 폴리사카라이드의 산화 및 (2) 접합체를 형성하기 위한 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질의 환원을 수반한다.
산화 전, 혈청형 8 폴리사카라이드는 그의 점도를 감소시키기 위해 임의로 가수분해된다. 기계적 또는 화학적 가수분해가 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다.
산화 단계는 퍼아이오데이트와의 반응을 수반할 수 있다. 본 발명의 목적상, 용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고; 상기 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4 -) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6 5-) 둘 다 및 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 칼륨 퍼아이오데이트)을 포함한다. 한 실시양태에서 에스. 뉴모니아에의 혈청형 8로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 메타퍼아이오데이트의 존재 하에, 바람직하게는 소듐 퍼아이오데이트 (NaIO4)의 존재 하에 산화된다. 또 다른 실시양태에서 혈청형 8로부터의 캡슐형 폴리사카라이드는 오르토퍼아이오데이트의 존재 하에, 바람직하게는 과아이오딘산의 존재 하에 산화된다.
폴리사카라이드의 산화 단계 후, 폴리사카라이드는 활성화된 것으로 언급되고, 이는 본원에서 이하 "활성화된 폴리사카라이드"로 지칭된다. 활성화된 폴리사카라이드는 정제 및 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다.
활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 독립적으로 (별도의 동결건조) 또는 함께 (공동-동결건조) 동결건조 (냉동-건조)될 수 있다. 한 실시양태에서 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 공동-동결건조된다. 또 다른 실시양태에서 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질은 독립적으로 동결건조된다.
한 실시양태에서 동결건조는 비환원당의 존재 하에 일어나고, 가능한 비환원당은 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 스타키오스, 멜레지토스, 덱스트란, 만니톨, 락티톨 및 팔라티니트를 포함한다.
접합 공정의 제2 단계는 환원제를 사용하여 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 환원시켜 접합체를 형성하는 것이다 (환원성 아미노화). 적합한 환원제는 시아노보로히드라이드, 예컨대 소듐 시아노보로히드라이드, 보란-피리딘 또는 보로히드라이드 교환 수지를 포함한다. 한 실시양태에서, 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이다.
한 실시양태에서, 환원 반응은 수성 용매 중에서 수행되고, 또 다른 실시양태에서 반응은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. 한 실시양태에서, 환원 반응은 DMSO (디메틸술폭시드) 또는 DMF (디메틸포름아미드) 용매 중에서 수행된다. DMSO 또는 DMF 용매는 동결건조되어 있는 활성화된 폴리사카라이드 및 담체 단백질을 재구성하는데 사용될 수 있다.
한 실시양태에서 0.1 내지 3.0, 0.15 내지 2.0, 0.2 내지 1.0, 또는 0.25 내지 0.5 몰 당량의 소듐 시아노보로히드라이드가 환원 반응에 사용된다. 한 실시양태에서 약 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3.0 몰 당량의 소듐 시아노보로히드라이드가 환원 반응에 사용된다.
한 실시양태에서 환원제는 소듐 트리아세톡시보로히드라이드이다. 추가 실시양태에서 1.0 내지 6.0 몰 당량, 2.0 내지 5.0 몰 당량 또는 약 3.0 몰 당량의 소듐 트리아세톡시보로히드라이드가 환원 반응에 사용된다.
환원 반응의 말미에, 접합체에 미반응 알데히드 기가 남아 있을 수 있고, 이는 적합한 캡핑제를 사용하여 캡핑될 수 있다. 한 실시양태에서 이러한 캡핑제는 수소화붕소나트륨 (NaBH4)이다. 한 실시양태에서 캡핑은 환원 반응을 0.5 내지 5.0 몰 당량의 NaBH4, 예를 들어 약 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 또는 3.0 몰 당량의 NaBH4와 혼합함으로써 달성된다.
접합 (환원 반응 및 임의로 캡핑) 후, 당접합체는 정제될 수 있다. 당접합체는 투석여과 및/또는 이온 교환 크로마토그래피 및/또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다. 한 실시양태에서, 당접합체는 투석여과 또는 이온 교환 크로마토그래피 또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제된다.
한 실시양태에서, 당접합체는 멸균 여과된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197)에 접합되고, 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가의 이러한 실시양태에서, 사카라이드는 50 kDa 내지 1,750 kDa; 50 kDa 내지 1,500 kDa; 50 kDa 내지 1,250 kDa; 50 kDa 내지 1,000 kDa; 50 kDa 내지 750 kDa; 50 kDa 내지 500 kDa; 100 kDa 내지 2,000 kDa; 100 kDa 내지 1,750 kDa; 100 kDa 내지 1,500 kDa; 100 kDa 내지 1,250 kDa; 100 kDa 내지 1,000 kDa; 100 kDa 내지 750 kDa; 100 kDa 내지 500 kDa; 200 kDa 내지 2,000 kDa; 200 kDa 내지 1,750 kDa; 200 kDa 내지 1,500 kDa; 200 kDa 내지 1,250 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 200 kDa 내지 750 kDa; 또는 200 kDa 내지 500 kDa; 또는 200 kDa 내지 400 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 상기 혈청형 8 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 50 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체는 50 kDa 내지 15,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체는 500 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체는 200 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체는 1,000 kDa 내지 8,000 kDa 또는 2,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 200 kDa 내지 20,000 kDa; 200 kDa 내지 15,000 kDa; 200 kDa 내지 10,000 kDa; 200 kDa 내지 7,500 kDa; 200 kDa 내지 5,000 kDa; 200 kDa 내지 3,000 kDa; 200 kDa 내지 1,000 kDa; 500 kDa 내지 20,000 kDa; 500 kDa 내지 15,000 kDa; 500 kDa 내지 12,500 kDa; 500 kDa 내지 10,000 kDa; 500 kDa 내지 7,500 kDa; 500 kDa 내지 6,000 kDa; 500 kDa 내지 5,000 kDa; 500 kDa 내지 4,000 kDa; 500 kDa 내지 3,000 kDa; 500 kDa 내지 2,000 kDa; 500 kDa 내지 1,500 kDa; 500 kDa 내지 1,000 kDa; 750 kDa 내지 20,000 kDa; 750 kDa 내지 15,000 kDa; 750kDa 내지 12,500 kDa; 750kDa 내지 10,000 kDa; 750kDa 내지 7,500 kDa; 750 kDa 내지 6,000 kDa; 750 kDa 내지 5,000 kDa; 750 kDa 내지 4,000 kDa; 750 kDa 내지 3,000 kDa; 750 kDa 내지 2,000 kDa; 750 kDa 내지 1,500 kDa; 1,000 kDa 내지 15,000 kDa; 1,000 kDa 내지 12,500 kDa; 1,000 kDa 내지 10,000 kDa; 1,000 kDa 내지 7,500 kDa; 1,000 kDa 내지 6,000 kDa; 1,000 kDa 내지 5,000 kDa; 1,000 kDa 내지 4,000 kDa; 1,000 kDa 내지 2,500 kDa; 2,000 kDa 내지 15,000 kDa; 2,000 kDa 내지 12,500 kDa; 2,000 kDa 내지 10,000 kDa; 2,000 kDa 내지 7,500 kDa; 2,000 kDa 내지 6,000 kDa; 2,000 kDa 내지 5,000 kDa; 2,000 kDa 내지 4,000 kDa; 또는 2,000 kDa 내지 3,000 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 3,000 kDa 내지 20,000 kDa; 3,000 kDa 내지 15,000 kDa; 3,000 kDa 내지 10,000 kDa; 3,000 kDa 내지 7,500 kDa; 3,000 kDa 내지 5,000 kDa; 4,000 kDa 내지 20,000 kDa; 4,000 kDa 내지 15,000 kDa; 4,000 kDa 내지 12,500 kDa; 4,000 kDa 내지 10,000 kDa; 4,000 kDa 내지 7,500 kDa; 4,000 kDa 내지 6,000 kDa; 또는 4,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 5,000 kDa 내지 20,000 kDa; 5,000 kDa 내지 15,000 kDa; 5,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 5,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 6,000 kDa 내지 20,000 kDa; 6,000 kDa 내지 15,000 kDa; 6,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 6,000 kDa 내지 7,500 kDa의 분자량을 갖는다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 7,000 kDa 내지 20,000 kDa; 7,000 kDa 내지 15,000 kDa; 7,000 kDa 내지 10,000 kDa 또는 7,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 8,000 kDa 내지 20,000 kDa; 8,000 kDa 내지 15,000 kDa; 또는 8,000 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는다.
한 실시양태에서, 상기 혈청형 8 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
본 발명의 혈청형 8 당접합체를 특징화하는 또 다른 방법은 사카라이드에 접합되는 담체 단백질 (예를 들어, CRM197) 내의 리신 잔기의 수에 의하는 것으로, 이는 접합된 리신의 범위 (접합도)로서 특징화될 수 있다.
폴리사카라이드에의 공유 연결로 인한 담체 단백질의 리신 변형에 대한 증거는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 상용 방법을 사용한 아미노산 분석에 의해 수득될 수 있다. 빈번한 실시양태에서, 담체 단백질은 담체 단백질 상의 리신 잔기의 1개 이상의 ε-아미노 기에의 아민 연결을 통해 활성화된 폴리사카라이드에 공유 접합된다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 사카라이드에 공유 접합된 2 내지 20개의 리신 잔기를 포함한다. 다른 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 사카라이드에 공유 접합된 4 내지 16개 또는 6 내지 14개의 리신 잔기를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 접합도는 2 내지 20, 2 내지 15, 2 내지 13, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 3 내지 15, 3 내지 13, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 5 내지 15, 5 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 12, 10 내지 15 또는 10 내지 12이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 접합도는 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 접합도는 4 내지 16 또는 6 내지 14이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다.
바람직한 실시양태에서, 담체 단백질은 39개의 리신 잔기를 함유하는 CRM197을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, CRM197은 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 4 내지 16개 또는 6 내지 14개의 리신 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 파라미터를 표현하는 또 다른 방법은 약 10% 내지 약 41% 또는 약 15% 내지 약 36%의 CRM197 리신이 사카라이드에 공유 연결된다는 것이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, CRM197은 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 2 내지 20개의 리신 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 파라미터를 표현하는 또 다른 방법은 약 5% 내지 약 50%의 CRM197 리신이 사카라이드에 공유 연결된다는 것이다. 일부 이러한 실시양태에서, CRM197은 사카라이드에 공유 연결된 39개 중 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개의 리신 잔기를 포함할 수 있다.
본 발명의 혈청형 8 당접합체는 또한 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (중량/중량)에 의해 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.2 내지 4.0 (예를 들어, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 약 3.0, 약 3.1, 약 3.2, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9 또는 약 4.0)이다. 다른 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.7 내지 2.5이다. 추가 실시양태에서, 사카라이드 대 담체 단백질 비 (w/w)는 0.8 내지 1.5 (예를 들어, 약 0.8, 약 0.9 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4 또는 약 1.5)이다. 일부 이러한 실시양태에서, 담체 단백질은 CRM197이다. 한 실시양태에서, 상기 혈청형 8 당접합체는 환원성 아미노화를 사용하여 제조된다.
본 발명의 혈청형 8 당접합체 및 면역원성 조성물은 담체 단백질에 공유 접합되지 않았지만 그럼에도 불구하고 당접합체 조성물 내에 존재하는 유리 사카라이드를 함유할 수 있다. 유리 사카라이드는 당접합체와 비공유 회합될 수 있다 (즉, 그에 비공유 결합되거나, 그에 흡착되거나, 또는 그 안에 또는 그와 함께 포획됨).
일부 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체는 혈청형 8 사카라이드의 총량 대비 약 50% 미만의 유리 사카라이드, 약 45% 미만의 유리 사카라이드, 약 40% 미만의 유리 사카라이드, 약 35% 미만의 유리 사카라이드, 약 30% 미만의 유리 사카라이드, 약 25% 미만의 유리 사카라이드, 약 20% 미만의 유리 사카라이드, 약 15% 미만의 유리 사카라이드, 약 10% 미만의 유리 사카라이드, 또는 약 5% 미만의 유리 사카라이드를 포함한다. 바람직하게는, 혈청형 8 당접합체는 15% 미만의 유리 사카라이드, 보다 바람직하게는 10% 미만의 유리 사카라이드, 및 보다 더 바람직하게는, 5% 미만의 유리 사카라이드를 포함한다.
혈청형 8 당접합체는 또한 그의 분자 크기 분포 (Kd)에 의해 특징화될 수 있다. 접합체의 상대적인 분자 크기 분포를 결정하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 매질 (CL-4B)이 사용될 수 있다. 접합체의 분자 크기 분포를 프로파일링하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)가 중력 공급 칼럼에서 사용된다. 매질 내 공극에서 배제된 대형 분자는 소형 분자보다 더 신속하게 용리된다. 분획 수집기를 사용하여 칼럼 용리물을 수집한다. 분획을 사카라이드 검정에 의해 비색 시험한다. Kd의 결정을 위해, 칼럼을 보정하여 분자가 완전히 배제된 분획 (V0), (Kd=0), 및 최대 보유를 나타내는 분획 (Vi), (Kd=1)을 확립한다. 명시된 샘플 속성에 도달한 분획 (Ve)은 Kd와 관련되며, Kd = (Ve - V0)/ (Vi - V0)로 표현된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 적어도 40%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 적어도 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 또는 85%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 적어도 60%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 혈청형 8 당접합체의 적어도 70%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체의 40% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체의 50% 내지 90%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 혈청형 8 당접합체의 65% 내지 80%는 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는다.
2. 본 발명의 면역원성 조성물
한 실시양태에서, 면역원성 조성물의 에스. 뉴모니아에 캡슐형 사카라이드의 수는 1종 혈청형 (또는 "v", 원자가) 내지 7종의 상이한 혈청형 (7v)의 범위일 수 있다. 한 실시양태에서 1종의 혈청형이 존재한다. 한 실시양태에서 2종의 상이한 혈청형이 존재한다. 한 실시양태에서 3종의 상이한 혈청형이 존재한다. 한 실시양태에서 4종의 상이한 혈청형이 존재한다. 한 실시양태에서 5종의 상이한 혈청형이 존재한다. 한 실시양태에서 6종의 상이한 혈청형이 존재한다. 한 실시양태에서 7종의 상이한 혈청형이 존재한다. 본원에서 상기 기재된 바와 같이 캡슐형 사카라이드는 담체 단백질에 접합되어 당접합체를 형성한다.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체), 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.2의 당접합체), 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.3의 당접합체), 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.5의 당접합체), 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.6의 당접합체), 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.7의 당접합체) 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.8의 당접합체)로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 당접합체를 포함한다.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체, 예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체를 포함한다. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 적어도 1종의 당접합체, 예컨대 상기 섹션 1.3.2에 개시된 것을 포함한다. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.3에 개시된 것을 포함한다. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.5에 개시된 것을 포함한다. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.6에 개시된 것을 포함한다. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.7에 개시된 것을 포함한다. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.8에 개시된 것을 포함한다.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 15B 및 22F, 15B 및 33F, 15B 및 12F, 15B 및 10A, 15B 및 11A, 15B 및 8, 22F 및 33F, 22F 및 12F, 22F 및 10A, 22F 및 11A, 22F 및 8, 33F 및 12F, 33F 및 10A, 33F 및 11A, 33F 및 8, 12F 및 10A, 12F 및 11A, 12F 및 8, 10A 및 11A , 10A 및 8, 및 11A 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 2종의 에스. 뉴모니아에 혈청형의 각각의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 3종의 하기 에스. 뉴모니아에 혈청형의 각각의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다:
15B 및 22F 및 33F,
15B 및 22F 및 12F,
15B 및 22F 및 10A,
15B 및 22F 및 11A,
15B 및 22F 및 8,
15B 및 33F 및 12F,
15B 및 33F 및 10A,
15B 및 33F 및 11A,
15B 및 33F 및 8,
15B 및 12F 및 10A,
15B 및 12F 및 11A,
15B 및 12F 및 8,
15B 및 10A 및 11A,
15B 및 10A 및 8,
15B 및 11A 및 8,
22F 및 33F 및 12F,
22F 및 33F 및 10A,
22F 및 33F 및 11A,
22F 및 33F 및 8,
22F 및 12F 및 10A,
22F 및 12F 및 11A,
22F 및 12F 및 8,
22F 및 10A 및 11A,
22F 및 10A 및 8,
22F 및 11A 및 8,
33F 및 12F 및 10A,
33F 및 12F 및 11A,
33F 및 12F 및 8,
33F 및 10A 및 11A,
33F 및 10A 및 8,
33F 및 11A 및 8,
12F 및 10A 및 11A,
12F 및 10A 및 8,
12F 및 11A 및 8, 또는
10A 및 11A 및 8.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 4종의 하기 에스. 뉴모니아에 혈청형의 각각의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다:
15B 및 22F 및 33F 및 12F,
15B 및 22F 및 33F 및 10A,
15B 및 22F 및 33F 및 11A,
15B 및 22F 및 33F 및 8,
15B 및 22F 및 12F 및 10A,
15B 및 22F 및 12F 및 11A,
15B 및 22F 및 12F 및 8,
15B 및 22F 및 10A 및 11A,
15B 및 22F 및 10A 및 8,
15B 및 22F 및 11A 및 8,
15B 및 33F 및 12F 및 10A,
15B 및 33F 및 12F 및 11A,
15B 및 33F 및 12F 및 8,
15B 및 33F 및 10A 및 11A,
15B 및 33F 및 10A 및 8,
15B 및 33F 및 11A 및 8,
15B 및 12F 및 10A 및 11A,
15B 및 12F 및 10A 및 8,
15B 및 12F 및 11A 및 8,
15B 및 10A 및 11A 및 8,
22F 및 33F 및 12F 및 10A,
22F 및 33F 및 12F 및 11A,
22F 및 33F 및 12F 및 8,
22F 및 33F 및 10A 및 11A,
22F 및 33F 및 10A 및 8,
22F 및 33F 및 11A 및 8,
22F 및 12F 및 10A 및 11A,
22F 및 12F 및 10A 및 8,
22F 및 12F 및 11A 및 8,
22F 및 10A 및 11A 및 8,
33F 및 12F 및 10A 및 11A,
33F 및 12F 및 10A 및 8,
33F 및 12F 및 11A 및 8,
33F 및 10A 및 11A 및 8 또는
12F 및 10A 및 11A 및 8.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 5종의 하기 에스. 뉴모니아에 혈청형의 각각의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다:
15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 10A,
15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 11A,
15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 8,
15B 및 22F 및 33F 및 10A 및 11A,
15B 및 22F 및 33F 및 10A 및 8,
15B 및 22F 및 33F 및 11A 및 8,
15B 및 22F 및 12F 및 10A 및 11A,
15B 및 22F 및 12F 및 10A 및 8,
15B 및 22F 및 12F 및 11A 및 8,
15B 및 22F 및 10A 및 11A 및 8,
15B 및 33F 및 12F 및 10A 및 11A,
15B 및 33F 및 12F 및 10A 및 8,
15B 및 33F 및 12F 및 11A 및 8,
15B 및 33F 및 10A 및 11A 및 8,
15B 및 12F 및 10A 및 11A 및 8,
22F 및 33F 및 12F 및 10A 및 11A,
22F 및 33F 및 12F 및 10A 및 8,
22F 및 33F 및 12F 및 11A 및 8,
22F 및 33F 및 10A 및 11A 및 8,
22F 및 12F 및 10A 및 11A 및 8 또는
33F 및 12F 및 10A 및 11A 및 8.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 6종의 하기 에스. 뉴모니아에 혈청형의 각각의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다:
15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 10A 및 11A,
15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 10A 및 8,
15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 11A 및 8,
15B 및 22F 및 33F 및 10A 및 11A 및 8,
15B 및 22F 및 12F 및 10A 및 11A 및 8,
15B 및 33F 및 12F 및 10A 및 11A 및 8 또는
22F 및 33F 및 12F 및 10A 및 11A 및 8.
한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 7종의 하기 에스. 뉴모니아에 혈청형: 15B 및 22F 및 33F 및 12F 및 10A 및 11A 및 8의 각각의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다.
한 실시양태에서 본 섹션에 정의된 면역원성 조성물 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B, 22F, 33F, 12F, 10A, 11A 및/또는 8로부터의 당접합체는 상기 섹션 1.3.2 내지 1.3.8에 개시된 바와 같다.
바람직하게는, 상기 면역원성 조성물의 모든 당접합체는 개별적으로 담체 단백질에 접합된다.
상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체는 모두 개별적으로 CRM197에 접합된다.
상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체는 모두 개별적으로 PD에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체는 모두 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체는 모두 개별적으로 DT에 접합된다.
상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F, 33F, 15B, 12F, 10A, 11A 및/또는 8로부터의 당접합체는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F, 33F, 15B, 12F, 10A, 11A 및/또는 8로부터의 당접합체는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F, 33F, 15B, 12F, 10A, 11A 및/또는 8로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합된다.
상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 DT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에로부터의 다른 당접합체(들)는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 TT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 PD에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 PD에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 TT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 PD에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 DT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 PD에 접합된다.
상기 면역원성 조성물 중 임의의 것의 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 CRM197에 접합되고, 에스. 뉴모니아에로부터의 다른 당접합체(들)는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 CRM197에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 CRM197에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 PD에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 DT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 CRM197에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 TT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 CRM197에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 PD에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에의 1 내지 7종의 상이한 혈청형을 포함한다. 한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 6-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이다.
1. 한 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체, 예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체를 포함한다.
2. 또 다른 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 적어도 1종의 당접합체, 예컨대 상기 섹션 1.3.2에 개시된 것을 포함한다.
3. 또 다른 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1 또는 2에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.3에 개시된 것을 포함한다.
4. 또 다른 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2 또는 3에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.5에 개시된 것을 포함한다.
5. 또 다른 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3 또는 4에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.6에 개시된 것을 포함한다.
6. 또 다른 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3, 4 또는 5에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.7에 개시된 것을 포함한다.
7. 또 다른 실시양태에서 본 발명의 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3, 4, 5 또는 6에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.8에 개시된 것을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 접합된 에스. 뉴모니아에 사카라이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물의 당접합체는 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
바람직하게는, 본 발명의 면역원성 조성물의 모든 당접합체 (예를 들어, 상기 포인트 1 내지 7 중 임의의 것)는 개별적으로 담체 단백질에 접합된다.
상기 포인트 1 내지 7 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 포인트 2 내지 7 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 포인트 3 내지 7 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 포인트 4 내지 7 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 포인트 5 내지 7 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 포인트 6 내지 7 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 포인트 7의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합된다. 한 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체는 개별적으로 TT에 접합된다. 한 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체는 개별적으로 DT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 DT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에로부터의 다른 당접합체(들)는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 TT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 PD에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 PD에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 TT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 PD에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 DT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 PD에 접합된다.
또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 CRM197에 접합되고, 에스. 뉴모니아에로부터의 다른 당접합체(들)는 개별적으로 DT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 CRM197에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 TT에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 CRM197에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 PD에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 DT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 CRM197에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 TT에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 CRM197에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 포인트 1 내지 7의 면역원성 조성물의 당접합체 중 적어도 하나는 개별적으로 PD에 접합되고, 다른 당접합체(들)는 개별적으로 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 6-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이다.
캡슐형 폴리사카라이드의 담체 단백질에의 접합 후에, 당접합체는 다양한 기술에 의해 정제된다 (폴리사카라이드-단백질 접합체의 양과 관련하여 풍부화됨). 이들 기술은 농축/투석여과 작업, 침전/용리, 칼럼 크로마토그래피, 및 심층 여과를 포함한다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2007/0184072 또는 WO 2008/079653 참조). 개별 당접합체가 정제된 후, 이들은 배합되어 본 발명의 면역원성 조성물이 제제화된다.
한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물의 투여량은 하기 섹션 5에 개시된 바와 같다.
한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 다른 병원체로부터의, 특히 예컨대 하기 섹션 6에 개시된 박테리아 및/또는 바이러스로부터의 항원(들)을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 하기 섹션 6에 개시된 바와 같은 1종 이상의 아주반트를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서 상기 면역원성 조성물은 하기 섹션 8에 개시된 바와 같이 제제화된다.
3. 본 발명의 면역원성 조성물과 조합되어 사용될 수 있는 면역원성 조성물
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것 중 임의의 것)은 제2 면역원성 조성물과 조합되어 사용된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함한다.
1. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
2. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
3. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1 또는 2에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6A 및 19A로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
4. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2 또는 3에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 3으로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
5. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3 또는 4에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 적어도 1종의 당접합체, 예컨대 상기 섹션 1.3.2에 개시된 것을 포함한다.
6. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3, 4 또는 5에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.3에 개시된 것을 포함한다.
바람직하게는, 상기 제2 면역원성 조성물의 모든 당접합체는 개별적으로 담체 단백질에 접합된다.
상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6A 및 19A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 3으로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 당접합체는 모두 개별적으로 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에의 7 내지 15종의 상이한 혈청형을 포함한다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15종의 상이한 혈청형으로부터의 당접합체를 포함한다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 10 내지 15종의 상이한 혈청형으로부터의 당접합체를 포함한다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 10-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 12-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 13-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 7종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 7종의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 10-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 10종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체 및 DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 12-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 12종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체, CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 13-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 13종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 15종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성의 투여량은 하기 섹션 5에 개시된 바와 같다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 다른 병원체(들)로부터의, 특히 예컨대 하기 섹션 6에 개시된 박테리아 및/또는 바이러스로부터의 항원(들)을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 하기 섹션 7에 개시된 바와 같은 1종 이상의 아주반트를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 하기 섹션 8에 개시된 바와 같이 제제화된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것 중 임의의 것)은 프레브나르® (일부 국가에서 프레베나르®) (7가 백신), 신플로릭스® (10가 백신) 및/또는 프레브나르 13® (일부 국가에서 프레베나르 13®) (13가 백신)과 조합되어 사용된다.
4. 본 발명의 키트
한 측면에서, 본 발명은 (a) 상기 섹션 2에 정의된 바와 같은 제1 면역원성 조성물; 및 (b) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 제2 면역원성 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 상기 섹션 2에 정의된 바와 같은 제1 면역원성 조성물; 및 (b) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 제2 면역원성 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 상기 섹션 2에 정의된 바와 같은 제1 면역원성 조성물; 및 (b) 상기 섹션 3에 정의된 바와 같은 제2 면역원성 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
1. 한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))은 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
2. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
3. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1 또는 2에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6A 및 19A로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
4. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2 또는 3에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 3으로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
5. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3 또는 4에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 적어도 1종의 당접합체, 예컨대 상기 섹션 1.3.2에 개시된 것을 포함한다.
6. 또 다른 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은, 상기 포인트 1, 2, 3, 4 또는 5에 더하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 적어도 1종의 당접합체 예컨대 상기 섹션 1.3.3에 개시된 것을 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))은 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1 및 1.3.2의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1 및 1.3.3의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1, 1.3.2 및 1.3.3의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1 및 1.3.2의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1 및 1.3.3의 당접합체)를 포함한다.
한 실시양태에서 키트의 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.1, 1.3.2 및 1.3.3의 당접합체)를 포함한다.
바람직하게는, 키트의 제2 면역원성 조성물의 모든 당접합체는 개별적으로 담체 단백질에 접합된다.
상기 키트 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 키트 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 키트 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6A 및 19A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 상기 키트 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 3으로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 키트 중 임의의 것의 당접합체는 모두 개별적으로 CRM197에 접합된다.
또 다른 실시양태에서, 상기 키트 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 키트 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 키트 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 키트 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 키트 중 임의의 것의 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 에스. 뉴모니아에의 7 내지 15종의 상이한 혈청형을 포함한다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15종의 상이한 혈청형으로부터의 당접합체를 포함한다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 10 내지 15종의 상이한 혈청형으로부터의 당접합체를 포함한다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 10-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 12-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 13-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 7-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 7종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 7종의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 10-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 10종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체 및 DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 12-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 12종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체, CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 13-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 13종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 제2 면역원성 조성물은 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이며, 여기서 상기 15종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성의 투여량은 하기 섹션 5에 개시된 바와 같다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 다른 병원체로부터의, 특히 예컨대 하기 섹션 6에 개시된 박테리아 및/또는 바이러스로부터의 항원을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 하기 섹션 7에 개시된 바와 같은 1종 이상의 아주반트를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 하기 섹션 8에 개시된 바와 같이 제제화된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것 중 임의의 것)은 프레브나르® (일부 국가에서 프레베나르®) (7가 백신), 신플로릭스® (10가 백신) 및/또는 프레브나르 13® (일부 국가에서 프레베나르 13®) (13가 백신)과 조합되어 사용된다.
본 발명의 한 측면에서, 키트는 2개의 용기의 형식을 취한다. 따라서, 본 발명의 한 실시양태에서 키트의 면역원성 조성물 각각 (즉, 제1 면역원성 조성물 및 제2 면역원성 조성물)은 개별 용기 내에 포함된다.
한 실시양태에서, 키트의 제1 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a))은 바이알, 시린지, 플라스크, 발효기, 생물반응기, 백, 병, 앰플, 카트리지 및 일회용 펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 용기 내에 포함된다. 특정 실시양태에서, 용기는 실리콘처리된다.
한 실시양태에서, 키트의 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))은 바이알, 시린지, 플라스크, 발효기, 생물반응기, 백, 병, 앰플, 카트리지 및 일회용 펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 용기 내에 포함된다. 특정 실시양태에서, 용기는 실리콘처리된다.
한 실시양태에서, 용기는 유리, 금속 (예를 들어, 스틸, 스테인레스 스틸, 알루미늄 등) 및/또는 중합체 (예를 들어, 열가소성, 엘라스토머, 열가소성-엘라스토머)로 제조된다. 한 실시양태에서, 용기는 유리로 제조된다.
한 실시양태에서, 키트의 제1 및 제2 면역원성 조성물은 시린지 또는 일회용 펜 내에 포함된다. 한 실시양태에서, 키트의 제1 및 제2 면역원성 조성물은 시린지 내에 포함된다. 특정 실시양태에서, 시린지는 실리콘처리된다. 특정 실시양태에서, 실리콘처리된 시린지는 유리로 제조된다.
한 실시양태에서, 키트의 제1 및 제2 면역원성 조성물은 동시 투여를 위해 즉석 혼합된다.
한 실시양태에서, 제1 및 제2 면역원성 조성물은 액체 형태이며, 바람직하게는 2개의 용기 내에 담긴다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 용기는, 작동 시 제1 용기 내의 액체가 제2 용기 내에 도입되도록 한, 이중-챔버 시린지 내의 개별 챔버이다. 생성된 혼합물은 이어서 시린지에서 배출될 수 있다. 2종의 면역원성 조성물은 혼합 준비 시까지 개별적으로 유지된다.
한 실시양태에서, 키트의 제1 및/또는 제2 면역원성 조성물은 동결건조 형태이다.
한 실시양태에서, 키트의 제1 면역원성 조성물은 동결건조 형태이고, 제2 면역원성 조성물은 액체 형태이다. 또 다른 실시양태에서, 키트의 제2 면역원성 조성물은 동결건조 형태이고, 제1 면역원성 조성물은 액체 형태이다. 상기 실시양태에서, 동결건조된 면역원성 조성물은 면역원성 조성물 둘 다의 동시 투여를 위한 액체 면역원성 조성물로 즉석 재구성될 수 있다.
상기 실시양태에서, 키트는 2개의 용기를 함유하며, 1개의 용기는 재구성을 위한 액체 물질을 포함하고, 제2 용기는 동결건조된 물질을 포함한다. 한 실시양태 제2 용기는 기밀 밀봉된다. 한 실시양태에서, 액체 물질은 제1 바늘을 통해 제2 용기에 도입되며, 그로 인해 동결건조된 물질이 액체 형태로 재구성된다. 생성된 혼합물은 이어서, 환자에의 투여를 위해 용기 (예컨대 시린지) 내로 취출된다. 한 실시양태에서 취출 단계는 제1 바늘을 통한다. 또 다른 실시양태에서, 취출 단계는 제2 바늘을 통한다. 한 실시양태에서, 취출 단계에 사용되는 바늘은 환자 주사에 사용되는 것과 동일한 바늘이다. 또 다른 실시양태에서, 취출 단계에 사용되는 바늘은 환자 주사에 사용되는 바늘과 상이하다.
한 실시양태에서, 제2 용기는 바이알이다. 추가 실시양태에서 제1 및 제2 용기는, 작동 시 액체 물질이 제1 용기로부터 제2 용기 내에 도입되도록 한, 이중-챔버 시린지 내의 개별 챔버이다. 생성된 혼합물은 액체 형태로 시린지에서 배출된다. 바람직한 실시양태에서, 동결건조된 물질 및 액체 물질은 혼합 준비 시까지 개별적으로 유지된다.
한 실시양태에서, 키트는 즉시-충전 시린지 및 바이알을 포함한다. 한 실시양태에서 시린지는 제1 면역원성 조성물의 단일 용량을 포함하고, 바이알은 제2 면역원성 조성물의 단일 용량을 포함한다. 한 실시양태에서 시린지는 제2 면역원성 조성물의 단일 용량을 포함하고, 바이알은 제1 면역원성 조성물의 단일 용량을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 시린지 및 바이알은 다중 용량을 포함한다.
5. 면역원성 조성물의 투여량
각각의 용량에서 당접합체(들)의 양은 전형적인 백신에서 유의한 유해 부작용 없이 면역보호 반응을 유도하는 양으로서 선택된다. 이러한 양은 어떤 특이적 면역원이 사용되는지 및 그것이 어떻게 제시되는지에 따라 달라질 것이다.
5.1 당접합체 양
면역원성 조성물 중 특정한 당접합체의 양은 그러한 접합체에 대한 총 폴리사카라이드 (접합 및 비-접합)에 기초하여 계산될 수 있다. 예를 들어, 20% 유리 폴리사카라이드를 갖는 당접합체는 100 μg 폴리사카라이드 용량 중 약 80 μg의 접합된 폴리사카라이드 및 약 20 μg의 비접합된 폴리사카라이드를 갖는다. 당접합체의 양은 폐렴구균 혈청형에 따라 달라질 수 있다. 사카라이드 농도는 우론산 검정에 의해 결정될 수 있다.
면역원성 조성물 중의 상이한 폴리사카라이드 성분의 "면역원성 양"은 분기될 수 있고, 각각 약 1 μg, 약 2 μg, 약 3 μg, 약 4 μg, 약 5 μg, 약 6 μg, 약 7 μg, 약 8 μg, 약 9 μg, 약 10 μg, 약 15 μg, 약 20 μg, 약 30 μg, 약 40 μg, 약 50 μg, 약 60 μg, 약 70 μg, 약 80 μg, 약 90 μg, 또는 약 100 μg의 임의의 특정한 폴리사카라이드 항원을 포함할 수 있다.
일반적으로, 각각의 용량은 주어진 혈청형에 대한 폴리사카라이드를 0.1 μg 내지 100 μg, 특히 0.5 μg 내지 20 μg, 보다 특히 1.0 μg 내지 10 μg, 및 보다 더 특히 2.0 μg 내지 5.0 μg 포함한다. 임의의 상기 범위 내의 임의의 정수는 개시내용의 한 실시양태로서 고려된다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 각각의 특정한 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 1.0 μg, 약 1.2 μg, 약 1.4 μg, 약 1.6 μg, 약 1.8 μg, 약 2.0 μg, 약 2.2 μg, 약 2.4 μg, 약 2.6 μg, 약 2.8 μg, 약 3.0 μg, 약 3.2 μg, 약 3.4 μg, 약 3.6 μg, 약 3.8 μg, 약 4.0 μg, 약 4.2 μg, 약 4.4 μg, 약 4.6 μg, 약 4.8 μg, 약 5.0 μg, 약 5.2 μg, 약 5.4 μg, 약 5.6 μg, 약 5.8 μg 또는 약 6.0 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및/또는 33F로부터의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 1.1 μg, 약 1.2 μg, 약 1.3 μg, 약 1.4 μg, 약 1.5 μg, 약 1.6 μg, 약 1.7 μg, 약 1.8 μg, 약 1.9 μg, 약 2.0 μg, 약 2.1 μg, 약 2.2 μg, 약 2.3 μg, 약 2.4 μg, 약 2.5 μg, 약 2.6 μg, 약 2.7 μg, 약 2.8 μg, 약 2.9 μg, 또는 약 3.0 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 1.1 μg, 약 1.2 μg, 약 1.3 μg, 약 1.4 μg, 약 1.5 μg, 약 1.6 μg, 약 1.7 μg, 약 1.8 μg, 약 1.9 μg, 약 2.0 μg, 약 2.1 μg, 약 2.2 μg, 약 2.3 μg, 약 2.4 μg, 약 2.5 μg, 약 2.6 μg, 약 2.7 μg, 약 2.8 μg, 약 2.9 μg, 또는 약 3.0 μg 포함할 것이다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 6B로부터의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 2.0 μg, 약 2.2 μg, 약 2.4 μg, 약 2.6 μg, 약 2.8 μg, 약 3.0 μg, 약 3.2 μg, 약 3.4 μg, 약 3.6 μg, 약 3.8 μg, 약 4.0 μg, 약 4.2 μg, 약 4.4 μg, 약 4.6 μg, 약 4.8 μg, 약 5.0, 약 5.2 μg, 약 5.4 μg, 약 5.6 μg, 약 5.8 μg 또는 약 6.0 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및/또는 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 1.5 μg 내지 약 3.0 μg, 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 6B로부터의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 3.0 μg 내지 약 6.0 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및/또는 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 2.0 μg 내지 약 2.5 μg, 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 6B로부터의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 4.0 μg 내지 약 4.8 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및/또는 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 2.2 μg, 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 6B로부터의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 4.4 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 1.5 μg 내지 약 3.0 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 2.0 μg 내지 약 2.5 μg 포함한다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 2.2 μg 포함한다.
5.2 담체 양
일반적으로, 본 발명의 면역원성 조성물의 각각의 용량은 담체 단백질을 1 μg 내지 150 μg, 특히 담체 단백질을 10 μg 내지 100 μg, 보다 특히 담체 단백질을 15 μg 내지 50 μg, 및 보다 더 특히 담체 단백질을 16 μg 내지 40 μg 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 담체 단백질은 CRM197이다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 담체 단백질을 약 1 μg, 약 2 μg, 약 3 μg, 약 4 μg, 약 5 μg, 약 6 μg, 약 7 μg, 약 8 μg, 약 9 μg, 약 10 μg, 약 11 μg, 약 12 μg, 약 13 μg, 약 14 μg, 약 15 μg, 약 16 μg, 약 17 μg, 약 18 μg, 약 19 μg, 약 20 μg, 약 21 μg, 약 22 μg, 약 23 μg, 약 24 μg, 약 25 μg, 약 26 μg, 약 27 μg, 약 28 μg, 약 29 μg, 약 30 μg, 약 31 μg, 약 32 μg, 약 33 μg, 약 34 μg, 약 35 μg, 약 36 μg, 약 37 μg, 약 38 μg, 약 39 μg, 약 40 μg, 약 41 μg, 약 42 μg, 약 43 μg, 약 44 μg, 약 45 μg, 약 46 μg, 약 47 μg, 약 48 μg, 약 49 μg, 약 50 μg, 약 51 μg, 약 52 μg, 약 53 μg, 약 54 μg, 약 55 μg, 약 56 μg, 약 57 μg, 약 58 μg, 약 59 μg, 약 60 μg, 약 61 μg, 약 62 μg, 약 63 μg, 약 64 μg, 약 65 μg, 약 66 μg, 약 67 μg, 약 68 μg, 약 69 μg, 약 70 μg, 약 71 μg, 약 72 μg, 약 73 μg, 약 74 μg 또는 약 75 μg 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 담체 단백질은 CRM197이다.
한 실시양태에서, 각각의 용량은 담체 단백질을 약 10 μg, 약 11 μg, 약 12 μg, 약 13 μg, 약 14 μg, 약 15 μg, 약 16 μg, 약 17 μg, 약 18 μg, 약 19 μg, 약 20 μg, 약 21 μg, 약 22 μg, 약 23 μg, 약 24 μg, 약 25 μg, 약 26 μg, 약 27 μg, 약 28 μg, 약 29 μg, 또는 약 30 μg 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 담체 단백질은 CRM197이다.
6. 추가 항원
본원에 개시된 면역원성 조성물은 접합된 에스. 뉴모니아에 사카라이드 항원(들) (당접합체(들))을 포함한다. 이들은 또한 다른 병원체로부터의, 특히 박테리아 및/또는 바이러스로부터의 적어도 1종의 항원을 추가로 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 추가로, 디프테리아 톡소이드 (D), 파상풍 톡소이드 (T), 백일해 항원 (P), 무세포성 백일해 항원 (Pa), B형 간염 바이러스 (HBV) 표면 항원 (HBsAg), A형 간염 바이러스 (HAV) 항원, 접합된 헤모필루스 인플루엔자에 b형 캡슐형 사카라이드 (Hib), 및 불활성화된 폴리오바이러스 백신 (IPV)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 항원을 포함한다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 D-T-Pa를 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 D-T-Pa-Hib, D-T-Pa-IPV 또는 D-T-Pa-HBsAg를 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 D-T-Pa-HBsAg-IPV 또는 D-T-Pa-HBsAg-Hib를 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib를 포함한다.
백일해 항원: 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis)는 백일해를 유발한다. 백신 내 백일해 항원은 세포성 (전세포, 불활성화된 비. 페르투시스 세포의 형태) 또는 무세포성이다. 세포성 백일해 항원의 제조는 널리 문서화되어 있다 (예를 들어, 이는 비. 페르투시스의 I상 배양물의 열 불활성화에 의해 수득될 수 있음). 그러나, 바람직하게는 본 발명은 무세포성 항원을 사용한다. 무세포성 항원이 사용되는 경우, 하기 항원 중 1, 2 또는 (바람직하게는) 3종을 사용하는 것이 바람직하다: (1) 해독된 백일해 독소 (백일해 톡소이드, 또는 PT); (2) 사상 헤마글루티닌 (FHA); (3) 페르탁틴 (69 킬로달톤의 외막 단백질로도 공지됨). FHA 및 페르탁틴은 본 발명에 따라 사용 전 포름알데히드로 처리될 수 있다. PT는 바람직하게는 포름알데히드 및/또는 글루타르알데히드로의 처리에 의해 해독된다. 무세포성 백일해 항원은 바람직하게는 1종 이상의 알루미늄 염 아주반트 상에 흡착된다. 대안으로서, 이는 흡착되지 않은 상태로 첨가될 수 있다. 페르탁틴을 첨가하는 경우, 이는 바람직하게는 미리 수산화알루미늄 아주반트 상에 흡착된다. PT 및 FHA는 수산화알루미늄 아주반트 또는 인산알루미늄 상에 흡착될 수 있다. PT, FHA 및 페르탁틴 모두를 수산화알루미늄에 흡착시키는 것이 가장 바람직하다.
불활성화된 폴리오바이러스 백신: 폴리오바이러스는 회색질척수염을 유발한다. 경구 폴리오바이러스 백신을 사용하기보다는, 본 발명의 바람직한 실시양태는 IPV를 사용한다. 환자에게 투여하기 전, 폴리오바이러스는 불활성화되어야 하고, 이는 포름알데히드 처리에 의해 달성될 수 있다. 회색질척수염은 3종의 유형의 폴리오바이러스 중 1종에 의해 유발될 수 있다. 3종의 유형은 유사하고, 동일한 증상을 유발하지만, 이들은 항원상 상이하고, 1종의 유형에 의한 감염은 다른 것에 의한 감염을 보호하지 않는다. 따라서, 본 발명에서는 3종의 폴리오바이러스 항원: 폴리오바이러스 1형 (예를 들어, 마호니(Mahoney) 균주), 폴리오바이러스 2형 (예를 들어, MEF-1 균주), 및 폴리오바이러스 3형 (예를 들어, 사우케트(Saukett) 균주)을 사용하는 것이 바람직하다. 바람직하게는 바이러스를 성장시키고, 정제하고, 개별적으로 불활성화시킨 다음, 조합하여, 본 발명에서 사용하기 위한 벌크 3가 혼합물을 제공한다.
디프테리아 톡소이드: 코리네박테리움 디프테리아에는 디프테리아를 유발한다. 디프테리아 독소를 (예를 들어, 포르말린 또는 포름알데히드를 사용하여) 처리하여, 주사 후에 특이적 항-독소 항체를 유도하는 능력은 유지하면서 독성을 제거할 수 있다. 이들 디프테리아 톡소이드는 디프테리아 백신에 사용된다. 바람직한 디프테리아 톡소이드는 포름알데히드 처리에 의해 제조되는 것이다. 디프테리아 톡소이드는 씨. 디프테리아에를 성장 배지에서 성장시킨 후, 포름알데히드 처리, 한외여과 및 침전에 의해 수득될 수 있다. 이어서, 톡소이드화된 물질은 멸균 여과 및/또는 투석을 포함하는 공정에 의해 처리될 수 있다. 바람직하게는 디프테리아 톡소이드는 수산화알루미늄 아주반트 상에 흡착된다.
파상풍 톡소이드: 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani)는 파상풍을 유발한다. 파상풍 독소는 보호성 톡소이드를 제공하기 위해 처리될 수 있다. 톡소이드는 파상풍 백신에 사용된다. 바람직한 파상풍 톡소이드는 포름알데히드 처리에 의해 제조된 것이다. 파상풍 톡소이드는 씨. 테타니를 성장 배지에서 성장시킨 후, 포름알데히드 처리, 한외여과 및 침전에 의해 수득될 수 있다. 이어서, 물질은 멸균 여과 및/또는 투석을 포함하는 공정에 의해 처리될 수 있다.
A형 간염 바이러스 항원: A형 간염 바이러스 (HAV)는 바이러스성 간염을 유발하는 공지된 작용제 중 하나이다. 바람직한 HAV 성분은 불활성화된 바이러스에 기초하고, 불활성화는 포르말린 처리에 의해 달성될 수 있다.
B형 간염 바이러스 (HBV)는 바이러스성 간염을 유발하는 공지된 작용제 중 하나이다. 캡시드의 주요 성분은 HBV 표면 항원, 또는 보다 통상적으로 HBsAg로 공지된 단백질이며, 이는 전형적으로 ~24 kDa의 분자량을 갖는 226-아미노산 폴리펩티드이다. 모든 존재하는 B형 간염 백신은 HBsAg를 함유하고, 이 항원이 정상 백신에 투여되는 경우에, 이는 HBV 감염을 보호하는 항-HBsAg 항체의 생산을 자극한다.
백신 제조를 위해, HBsAg는 2가지 방식으로 제조된다: 만성 B형 간염 보균자의 혈장으로부터 항원의 미립자 형태로의 정제, 또는 재조합 DNA 방법에 의한 단백질의 발현 (예를 들어, 효모 세포에서의 재조합 발현). 천연 HBsAg (즉, 혈장-정제된 생성물로서)와는 달리, 효모-발현된 HBsAg은 일반적으로 비-글리코실화되고, 이는 본 발명에서 사용하기에 가장 바람직한 HBsAg 형태이다.
접합된 헤모필루스 인플루엔자에 b형 항원: 헤모필루스 인플루엔자에 b형 (Hib)은 박테리아성 수막염을 유발한다. Hib 백신은 전형적으로 캡슐형 사카라이드 항원을 기초로 하며, 그의 제조는 널리 문서화되어 있다. 특히 소아에서 그의 면역원성을 증진시키기 위해 Hib 사카라이드는 담체 단백질에 접합될 수 있다. 전형적인 담체 단백질은 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 에이치. 인플루엔자에 단백질 D, 및 혈청군 B 메닝고코쿠스(meningococcus)로부터의 외막 단백질 복합체이다. 접합체의 사카라이드 모이어티는 Hib 박테리아로부터 제조된 바와 같은 전장 폴리리보실리비톨 포스페이트 (PRP), 및/또는 전장 PRP의 단편을 포함할 수 있다. Hib 접합체는 알루미늄 염 아주반트에 흡착될 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다.
한 실시양태에서 본원에 개시된 면역원성 조성물은 추가로, 접합된 엔. 메닌기티디스(N. meningitidis) 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY), 및/또는 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 포함한다.
한 실시양태에서 본원에 개시된 면역원성 조성물은 추가로, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 캡슐형 사카라이드 (MenA), 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐형 사카라이드 (MenW135), 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY), 및/또는 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 포함한다.
한 실시양태에서 본원에 개시된 면역원성 조성물은 추가로, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐형 사카라이드 (MenW135), 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY), 및/또는 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 상기 추가의 항원(들) 중 임의의 것은 제1 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a))의 일부이다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 상기 추가의 항원(들) 중 임의의 것은 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))의 일부이다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 상기 추가의 항원(들) 중 임의의 것은 제1 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a))의 일부이고, 상기 추가의 항원(들) 중 임의의 것은 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))의 일부이다.
7. 아주반트(들)
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 적어도 1, 2 또는 3종의 아주반트를 추가로 포함할 수 있다. 용어 "아주반트"는 항원에 대한 면역 반응을 증진시키는 화합물 또는 혼합물을 지칭한다. 항원은 주로 전달 시스템으로서 작용할 수 있거나, 주로 면역 조정제로서 작용할 수 있거나, 또는 둘 다의 강력한 특색을 가질 수 있다. 적합한 아주반트는 인간을 포함한 포유동물에서 사용하기에 적합한 것을 포함한다.
인간에서 사용될 수 있는 공지된 적합한 전달-시스템 유형 아주반트의 예는 명반 (예를 들어, 인산알루미늄, 황산알루미늄 또는 수산화알루미늄), 인산칼슘, 리포좀, 수중유 에멀젼, 예컨대 MF59 (4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v 폴리소르베이트 80 (트윈(TWEEN)® 80), 0.5% w/v 소르비탄 트리올레에이트 (스팬(Span) 85)), 유중수 에멀젼, 예컨대 몬타니드(MONTANIDE)™, 및 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLG) 마이크로입자 또는 나노입자를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 아주반트로서 알루미늄 염 (명반) (예를 들어, 인산알루미늄, 황산알루미늄 또는 수산화알루미늄)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 아주반트로서 인산알루미늄 또는 수산화알루미늄을 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL 또는 0.2 mg/mL 내지 0.3 mg/mL 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 약 0.25 mg/mL 포함한다.
인간에서 사용될 수 있는 공지된 적합한 면역 조정 유형 아주반트의 예는 아퀼라(Aquilla) 나무의 목피로부터의 사포닌 추출물 (QS21, QUILA®), TLR4 효능제, 예컨대 MPL (모노포스포릴 지질 A), 3DMPL (3-O-탈아실화 MPL) 또는 GLA-AQ, LT/CT 돌연변이체, 시토카인, 예컨대 다양한 인터류킨 (예를 들어, IL-2, IL-12) 또는 GM-CSF 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
인간에서 사용될 수 있는 전달 및 면역 조정 특색 둘 다를 갖는 공지된 적합한 면역 조정 유형 아주반트의 예는 ISCOMS (예를 들어, 문헌 [Sjoelander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64:713]; WO 90/03184, WO 96/11711, WO 00/48630, WO 98/36772, WO 00/41720, WO 2006/134423 및 WO 2007/026190 참조), 또는 TLR4 효능제 및 수중유 에멀젼의 조합물인 GLA-EM을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
동물 실험을 포함하나 이에 제한되지는 않는 수의학적 적용을 위해, 완전 프로인트 아주반트 (CFA), 프로인트 불완전 아주반트 (IFA), 에멀시겐(EMULSIGEN)®, N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민 (thr-MDP), N-아세틸-노르-뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (CGP 11637, 노르-MDP로 지칭됨), N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴옥시)-에틸아민 (CGP 19835A, MTP-PE로 지칭됨), 및 2% 스쿠알렌/트윈® 80 에멀젼 중 박테리아로부터 추출된 3종의 성분인 모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 디미콜레이트 및 세포벽 골격 (MPL+TDM+CWS)을 함유하는 리비(RIBI)™를 사용할 수 있다.
본원에 개시된 바와 같은 폐렴구균 백신의 유효성을 증진시키기 위한 추가의 예시적인 아주반트는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: (1) 수중유 에멀젼 제제 (다른 특이적 면역자극제, 예컨대 뮤라밀 펩티드 (하기 참조) 또는 박테리아 세포벽 성분을 함유하거나 함유하지 않음), 예컨대 예를 들어 (a) 서브마이크로미터 에멀젼으로 마이크로유동화되거나 보다 큰 입자 크기 에멀젼을 생성하기 위해 볼텍싱된, 10% 스쿠알란, 0.4% 트윈® 80, 5% 플루로닉-차단된 중합체 L121, 및 thr-MDP를 함유하는 SAF, 및 (b) 2% 스쿠알렌, 0.2% 트윈® 80, 및 1종 이상의 박테리아 세포벽 성분, 예컨대 모노포스포리피드 A (MPL), 트레할로스 디미콜레이트 (TDM), 및 세포벽 골격 (CWS), 바람직하게는 MPL + CWS (데톡스(DETOX)™)를 함유하는 리비™ 아주반트 시스템 (RAS), (리비 이뮤노켐(Ribi Immunochem), 몬타나주 해밀턴); (2) 사포닌 아주반트, 예컨대 QS21, 스티뮬론(STIMULON)™ (캠브리지 바이오사이언스(Cambridge Bioscience), 매사추세츠주 우스터), 아비스코(ABISCO)® (이스코노바(Isconova), 스웨덴), 또는 이스코매트릭스(ISCOMATRIX)® (커먼웰스 세럼 래보러토리즈(Commonwealth Serum Laboratories), 호주)가 사용될 수 있거나, 또는 그로부터 생성된 입자, 예컨대 ISCOM (면역자극 복합체), (ISCOM은 추가의 세제가 없을 수 있음) (예를 들어, WO 00/07621); (3) 완전 프로인트 아주반트 (CFA) 및 불완전 프로인트 아주반트 (IFA); (4) 시토카인, 예컨대 인터류킨 (예를 들어, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 (예를 들어, WO 99/44636)), 인터페론 (예를 들어, 감마 인터페론), 대식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF), 종양 괴사 인자 (TNF) 등; (5) 모노포스포릴 지질 A (MPL) 또는 3-O-탈아실화 MPL (3dMPL) (예를 들어, GB-2220221, EP0689454 참조), (임의로 폐렴구균 사카라이드와 함께 사용 시 명반의 실질적인 부재 하) (예를 들어, WO 00/56358 참조); (6) 3dMPL과 예를 들어 QS21 및/또는 수중유 에멀젼의 조합물 (예를 들어, EP0835318, EP0735898, EP0761231 참조); (7) 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 폴리옥시에틸렌 에스테르 (예를 들어, WO 99/52549 참조); (8) 옥톡시놀과 조합된 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 계면활성제 (예를 들어, WO 01/21207), 또는 적어도 1종의 추가의 비-이온성 계면활성제, 예컨대 옥톡시놀과 조합된 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 계면활성제 (예를 들어, WO 01/21152); (9) 사포닌 및 면역자극 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, CpG 올리고뉴클레오티드) (예를 들어, WO 00/62800); (10) 면역자극제 및 금속 염의 입자 (예를 들어, WO 00/23105 참조); (11) 사포닌 및 수중유 에멀젼 (예를 들어, WO 99/11241); (12) 사포닌 (예를 들어, QS21) + 3dMPL + IM2 (임의로 + 스테롤), (예를 들어, WO 98/57659); (13) 조성물의 효능을 증진시키기 위해 면역자극제로서 작용하는 다른 물질. 뮤라밀 펩티드는 N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민 (thr-MDP), N-25 아세틸-노르뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (노르-MDP), N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타르니닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴옥시)-에틸아민 MTP-PE) 등을 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역원성 조성물은 아주반트로서 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 CpG 올리고뉴클레오티드는 면역자극 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG ODN)를 지칭하며, 따라서 이들 용어는 달리 나타내지 않는 한 상호교환가능하게 사용된다. 면역자극 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드는 임의로 특정의 바람직한 염기 문맥 내에서 비메틸화된 시토신-구아닌 디뉴클레오티드인 1개 이상의 면역자극 CpG 모티프를 함유한다. CpG 면역자극 모티프의 메틸화 상태는 일반적으로 디뉴클레오티드에서 시토신 잔기를 지칭한다. 적어도 1개의 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드를 함유하는 면역자극 올리고뉴클레오티드는 포스페이트 결합에 의해 3' 구아닌에 연결된 5' 비메틸화 시토신을 함유하고 톨-유사 수용체 9 (TLR-9)에의 결합을 통해 면역계를 활성화시키는 올리고뉴클레오티드이다. 또 다른 실시양태에서, 면역자극 올리고뉴클레오티드는, CpG 모티프(들)가 비메틸화된 경우만큼은 강력하지 않게 TLR9를 통해 면역계를 활성화시킬, 1개 이상의 메틸화 CpG 디뉴클레오티드를 함유할 수 있다. CpG 면역자극 올리고뉴클레오티드는 CpG 디뉴클레오티드를 결국 포괄할 수 있는 1개 이상의 팔린드롬을 포함할 수 있다. CpG 올리고뉴클레오티드는 미국 특허 번호 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116; 및 6,339,068을 포함한 수많은 허여된 특허, 공개 특허 출원, 및 다른 공개에 기재되어 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역원성 조성물은 WO 2010/125480의 제3면 제22행 내지 제12면 제36행에 기재된 CpG 올리고뉴클레오티드 중 임의의 것을 포함한다.
상이한 부류의 CpG 면역자극 올리고뉴클레오티드가 확인된 바 있다. 이들은 A, B, C 및 P 부류로 지칭되며, WO 2010/125480의 제3면 제22행 내지 제12면 제36행에 보다 상세히 기재되어 있다. 본 발명의 방법은 이들 상이한 부류의 CpG 면역자극 올리고뉴클레오티드의 사용을 포괄한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역원성 조성물은 A 부류 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 "A 부류" CpG 올리고뉴클레오티드는 하기 핵산 서열: 5' GGGGACGACGTCGTGGGGGGG 3' (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)을 갖는다. A-부류 올리고뉴클레오티드의 일부 비제한적 예는 5' G*G*G_G_A_C_G_A_C_G_T_C_G_T_G_G*G*G*G*G*G 3' (서열식별번호: 2)을 포함하며; 여기서 "*"는 포스포로티오에이트 결합을 지칭하고, "_"는 포스포디에스테르 결합을 지칭한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역원성 조성물은 B 부류 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명에 사용하기 위한 CpG 올리고뉴클레오티드는 적어도 하기 식으로 나타내어지는 B 부류 CpG 올리고뉴클레오티드이며:
5' X1X2CGX3X4 3', 여기서 X1, X2, X3, 및 X4는 뉴클레오티드이다. 한 실시양태에서, X2는 아데닌, 구아닌 또는 티민이다. 또 다른 실시양태에서, X3은 시토신, 아데닌, 또는 티민이다.
본 발명의 B 부류 CpG 올리고뉴클레오티드 서열은 상기에 광범위하게 기재된 것뿐만 아니라 WO 96/02555, WO 98/18810 및 미국 특허 번호 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116 및 6,339,068에 개시된 것이다. 예시적인 서열은 이들 후자의 출원 및 특허에 개시된 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 본 발명의 "B 부류" CpG 올리고뉴클레오티드는 하기 핵산 서열을 갖는다:
5' TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3' (서열식별번호: 3), 또는
5' TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3' (서열식별번호: 4), 또는
5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3' (서열식별번호: 5), 또는
5' TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3' (서열식별번호: 6), 또는
5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3' (서열식별번호: 7).
이들 서열 중 임의의 것에서, 모든 연결은 모두 포스포로티오에이트 결합일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 이들 서열 중 임의의 것에서 연결 중 1개 이상은, 반-연질 CpG 올리고뉴클레오티드를 만드는, 바람직하게는 CpG 모티프의 "C"와 "G" 사이의 포스포디에스테르일 수 있다. 이들 서열 중 임의의 것에서, 에틸-우리딘 또는 할로겐이 5' T를 치환할 수 있고; 할로겐 치환의 예는 브로모-우리딘 또는 아이오도-우리딘 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
B-부류 올리고뉴클레오티드의 일부 비제한적 예는 하기를 포함한다:
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*G*C*T*T*T*T 3' (서열식별번호: 8), 또는
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*C*G*T*T*T*T 3' (서열식별번호: 9), 또는
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (서열식별번호: 10), 또는
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (서열식별번호: 11), 또는
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3' (서열식별번호: 12).
여기서 "*"는 포스포로티오에이트 결합을 지칭한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역원성 조성물은 C 부류 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 "C 부류" CpG 올리고뉴클레오티드는 하기 핵산 서열을 갖는다:
5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 13), 또는
5' TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 14), 또는
5' TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 15), 또는
5' TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 16), 또는
5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 17), 또는
5' TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 18), 또는
5' TCGACGTTCGGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 19), 또는
5' TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3' (서열식별번호: 20), 또는
5' TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 21), 또는
5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 22), 또는
5' TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3' (서열식별번호: 23), 또는
5' TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3' (서열식별번호: 24), 또는
5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3' (서열식별번호: 25).
이들 서열 중 임의의 것에서, 모든 연결은 모두 포스포로티오에이트 결합일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 이들 서열 중 임의의 것에서 연결 중 1개 이상은, 반-연질 CpG 올리고뉴클레오티드를 만드는, 바람직하게는 CpG 모티프의 "C"와 "G" 사이의 포스포디에스테르일 수 있다.
C-부류 올리고뉴클레오티드의 일부 비제한적 예는 하기를 포함한다:
5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 26), 또는
5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 27), 또는
5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 28), 또는
5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 29), 또는
5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 30), 또는
5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 31), 또는
5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 32), 또는
5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 33), 또는
5' T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 34), 또는
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 35), 또는
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*G*C*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 36), 또는
5' T*C*G*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*C*C_G*T*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 37), 또는
5' T*C_G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G*T 3' (서열식별번호: 38)
여기서 "*"는 포스포로티오에이트 결합을 지칭하고, "_"는 포스포디에스테르 결합을 지칭한다.
이들 서열 중 임의의 것에서, 에틸-우리딘 또는 할로겐이 5' T를 치환할 수 있고; 할로겐 치환의 예는 브로모-우리딘 또는 아이오도-우리딘 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역원성 조성물은 P 부류 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명에 사용하기 위한 CpG 올리고뉴클레오티드는 5' TLR 활성화 도메인 및 적어도 2개의 팔린드롬 영역을 함유하는 P 부류 CpG 올리고뉴클레오티드이며, 1개의 팔린드롬 영역은 적어도 6개의 뉴클레오티드 길이의 5' 팔린드롬 영역으로, 적어도 8개의 뉴클레오티드 길이의 3' 팔린드롬 영역에 직접적으로 또는 스페이서를 통해 연결되고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 적어도 1개의 YpR 디뉴클레오티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G (서열식별번호: 27)가 아니다. 한 실시양태에서, P 부류 CpG 올리고뉴클레오티드는 적어도 1개의 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, TLR 활성화 도메인은 TCG, TTCG, TTTCG, TYpR, TTYpR, TTTYpR, UCG, UUCG, UUUCG, TTT, 또는 TTTT이다. 또 다른 실시양태에서, TLR 활성화 도메인은 5' 팔린드롬 영역 내에 있다. 또 다른 실시양태에서, TLR 활성화 도메인은 5' 팔린드롬 영역에 대해 바로 5'이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 "P 부류" CpG 올리고뉴클레오티드는 하기 핵산 서열: 5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (서열식별번호: 39)을 갖는다.
상기 서열에서, 모든 연결은 모두 포스포로티오에이트 결합일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 연결 중 1개 이상은, 반-연질 CpG 올리고뉴클레오티드를 만드는, 바람직하게는 CpG 모티프의 "C"와 "G" 사이의 포스포디에스테르일 수 있다. 이들 서열 중 임의의 것에서, 에틸-우리딘 또는 할로겐이 5' T를 치환할 수 있고; 할로겐 치환의 예는 브로모-우리딘 또는 아이오도-우리딘 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
P-부류 올리고뉴클레오티드의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (서열식별번호: 40)
여기서 "*"는 포스포로티오에이트 결합을 지칭하고, "_"는 포스포디에스테르 결합을 지칭한다.
한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드의 모든 뉴클레오티드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 또 다른 실시양태에서 올리고뉴클레오티드는 적어도 1개의 포스포디에스테르-유사 연결을 포함한다. 또 다른 실시양태에서 포스포디에스테르-유사 연결은 포스포디에스테르 연결이다. 또 다른 실시양태에서 친지성 기는 올리고뉴클레오티드에 접합된다. 한 실시양태에서 친지성 기는 콜레스테롤이다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 CpG 올리고뉴클레오티드의 모든 뉴클레오티드간 연결은 포스포디에스테르 결합이다 (WO 2007/026190에 기재된 바와 같은, "연질" 올리고뉴클레오티드). 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 CpG 올리고뉴클레오티드는 분해에 대해 저항성이게 된다 (예를 들어, 안정화됨). "안정화된 올리고뉴클레오티드"는 (예를 들어, 엑소- 또는 엔도-뉴클레아제를 통한) 생체내 분해에 대해 상대적으로 저항성인 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 핵산 안정화는 백본 변형을 통해 달성될 수 있다. 포스포로티오에이트 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드는 최대 활성을 제공하고, 세포내 엑소- 및 엔도-뉴클레아제에 의한 분해로부터 올리고뉴클레오티드를 보호한다.
면역자극 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 연결의 조합을 갖는 키메라 백본을 가질 수 있다. 본 발명의 목적상, 키메라 백본은 부분적으로 안정화된 백본을 지칭하며, 여기서 적어도 1개의 뉴클레오티드간 연결은 포스포디에스테르 또는 포스포디에스테르-유사 연결이고, 여기서 적어도 1개의 다른 뉴클레오티드간 연결은 안정화된 뉴클레오티드간 연결이고, 여기서 적어도 1개의 포스포디에스테르 또는 포스포디에스테르-유사 연결 및 적어도 1개의 안정화된 연결은 상이하다. 포스포디에스테르 연결이 CpG 모티프 내에 우세하게 위치하는 경우에, 이러한 분자는 WO 2007/026190에 기재된 바와 같이 "반-연질"로 불린다.
다른 변형된 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르, 포스포로티오에이트, 메틸포스포네이트, 메틸포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 및/또는 p-에톡시 연결의 조합을 포함한다.
혼합된 백본 변형된 ODN은 WO 2007/026190에 기재된 바와 같이 합성될 수 있다.
CpG 올리고뉴클레오티드의 크기 (즉, 올리고뉴클레오티드의 길이를 따라 뉴클레오티드 잔기의 수)가 또한 올리고뉴클레오티드의 자극 활성에 기여할 수 있다. 세포로의 흡수를 촉진하기 위해, 본 발명의 CpG 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 6개 뉴클레오티드 잔기의 최소 길이를 갖는다. 보다 큰 올리고뉴클레오티드가 세포 내에서 분해되기 때문에, 6개 뉴클레오티드 초과의 임의의 크기 (심지어 수 kb 길이)의 올리고뉴클레오티드가, 충분한 면역자극 모티프가 존재한다면, 면역 반응을 유도할 수 있다. 특정 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 6 내지 100개 뉴클레오티드 길이, 우선적으로 8 내지 30개 뉴클레오티드 길이이다. 중요한 실시양태에서, 본 발명의 핵산 및 올리고뉴클레오티드는 플라스미드 또는 발현 벡터가 아니다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 CpG 올리고뉴클레오티드는 WO 2007/026190의 단락 134 내지 147에 기재된 바와 같이 예컨대 염기 및/또는 당에서 치환 또는 변형을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 CpG 올리고뉴클레오티드는 화학적으로 변형된다. 화학적 변형의 예는 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Uhlmann et al. (1990) Chem. Rev. 90:543; S. Agrawal, Ed., Humana Press, Totowa, USA 1993; Crooke et al. (1996) Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 36:107-129; 및 Hunziker et al. (1995) Mod. Synth. Methods 7:331-417]에 기재되어 있다. 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 1개 이상의 변형을 가질 수 있으며, 여기서 각각의 변형은 천연 DNA 또는 RNA를 구성하는 동일한 서열의 올리고뉴클레오티드와 비교하여 특정한 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 가교에, 및/또는 특정한 β-D-리보스 단위에, 및/또는 특정한 천연 뉴클레오시드 염기 위치에 위치한다.
본 발명의 일부 실시양태에서, CpG-함유 핵산은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 따라 면역원성 담체와 간단히 혼합될 수 있다 (예를 들어, WO 03/024480 참조).
본 발명의 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것은 2 μg 내지 100 mg의 CpG 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 0.1 mg 내지 50 mg CpG 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 0.2 mg 내지 10 mg CpG 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 0.3 mg 내지 5 mg CpG 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 0.3 mg 내지 5 mg CpG 올리고뉴클레오티드, 보다 더 바람직하게는 0.5 내지 2 mg CpG 올리고뉴클레오티드, 보다 더 바람직하게는 0.75 내지 1.5 mg CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것은 약 1 mg CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2에 정의됨)은 상기 정의된 바와 같은 아주반트, 바람직하게는 알루미늄 염 (명반) (예를 들어, 인산알루미늄, 황산알루미늄 또는 수산화알루미늄)을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 아주반트로서 인산알루미늄 또는 수산화알루미늄을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3에 정의됨)과 조합되어 사용될 수 있는 면역원성 조성물은 상기 정의된 바와 같은 아주반트, 바람직하게는 알루미늄 염 (명반) (예를 들어, 인산알루미늄, 황산알루미늄 또는 수산화알루미늄)을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 면역원성 조성물은 아주반트로서 인산알루미늄 또는 수산화알루미늄을 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 오직 제1 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a))만이 상기 정의된 바와 같은 아주반트를 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 오직 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))만이 상기 정의된 바와 같은 아주반트를 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 상기 정의된 바와 같은 아주반트를 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 인산알루미늄, 황산알루미늄 및 수산화알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 아주반트를 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 아주반트로서 인산알루미늄을 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 아주반트로서 수산화알루미늄을 포함한다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 아주반트로서 황산알루미늄을 포함한다.
8. 제제화
본원에 개시된 면역원성 조성물은 액체 형태로 (즉, 용액 또는 현탁액) 또는 동결건조 형태로 제제화될 수 있다. 액체 제제는 유리하게는 그의 포장된 형태로부터 직접 투여될 수 있고, 따라서 동결건조된 조성물에 대해 달리 요구되는 바와 같은 수성 매질 중 재구성에 대한 필요 없이, 주사하는데 이상적이다.
본원에 개시된 면역원성 조성물의 제제화는 관련 기술분야-인식 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 개별 폐렴구균 접합체를 생리학상 허용되는 비히클과 함께 제제화하여 조성물을 제조할 수 있다. 이러한 비히클의 예는 물, 완충 염수, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 덱스트로스 용액을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 개시내용은 본원에 개시된 당접합체 및 제약상 허용되는 부형제, 담체, 또는 희석제의 임의의 조합을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 액체 형태, 바람직하게는 수성 액체 형태이다.
개시내용의 면역원성 조성물은 완충제, 염, 2가 양이온, 비-이온성 세제, 동결보호제 예컨대 당, 및 항산화제 예컨대 자유 라디칼 스캐빈저 또는 킬레이트화제, 또는 그의 임의의 조합 중 1종 이상을 포함할 수 있다
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 완충제를 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 완충제는 약 3.5 내지 약 7.5의 pKa를 갖는다. 일부 실시양태에서, 완충제는 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트이다. 특정 실시양태에서, 완충제는 최종 농도 1 mM 내지 10 mM의 숙시네이트이다. 하나의 특정한 실시양태에서, 숙시네이트 완충제의 최종 농도는 약 5 mM이다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 염을 포함한다. 일부 실시양태에서, 염은 염화마그네슘, 염화칼륨, 염화나트륨 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정한 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 하나의 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 150 mM의 염화나트륨을 포함한다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 계면활성제를 포함한다. 한 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20 (트윈™20), 폴리소르베이트 40 (트윈™40), 폴리소르베이트 60 (트윈™60), 폴리소르베이트 65 (트윈™65), 폴리소르베이트 80 (트윈™80), 폴리소르베이트 85 (트윈™85), 트리톤(TRITON)™ N-101, 트리톤™ X-100, 옥스톡시놀 40, 노녹시놀-9, 트리에탄올아민, 트리에탄올아민 폴리펩티드 올레에이트, 폴리옥시에틸렌-660 히드록시스테아레이트 (PEG-15, 솔루톨 H 15), 폴리옥시에틸렌-35-리시놀레에이트 (크레모포르(CREMOPHOR)® EL), 대두 레시틴 및 폴록사머로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정한 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 일부 상기 실시양태에서, 제제 중 폴리소르베이트 80의 최종 농도는 적어도 0.0001% 내지 10% 폴리소르베이트 80 중량/중량 (w/w)이다. 일부 상기 실시양태에서, 제제 중 폴리소르베이트 80의 최종 농도는 적어도 0.001% 내지 1% 폴리소르베이트 80 중량/중량 (w/w)이다. 일부 상기 실시양태에서, 제제 중 폴리소르베이트 80의 최종 농도는 적어도 0.01% 내지 1% 폴리소르베이트 80 중량/중량 (w/w)이다. 다른 실시양태에서, 제제 중 폴리소르베이트 80의 최종 농도는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리소르베이트 80 (w/w)이다. 또 다른 실시양태에서, 제제 중 폴리소르베이트 80의 최종 농도는 1% 폴리소르베이트 80 (w/w)이다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 5.5 내지 7.5의 pH, 보다 바람직하게는 5.6 내지 7.0의 pH, 보다 더 바람직하게는 5.8 내지 6.0의 pH를 갖는다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것으로 채워진 용기를 제공한다. 한 실시양태에서, 용기는 바이알, 시린지, 플라스크, 발효기, 생물반응기, 백, 병, 앰플, 카트리지 및 일회용 펜으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 용기는 실리콘처리된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 용기는 유리, 금속 (예를 들어, 스틸, 스테인레스 스틸, 알루미늄 등) 및/또는 중합체 (예를 들어, 열가소성, 엘라스토머, 열가소성-엘라스토머)로 제조된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 용기는 유리로 제조된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 면역원성 조성물을 채워진 시린지를 제공한다. 특정 실시양태에서, 시린지는 실리콘처리되고/거나 유리로 제조된다.
주사를 위한 본원에 개시된 면역원성 조성물의 전형적 용량은 0.1 mL 내지 2 mL의 부피, 보다 바람직하게는 0.2 mL 내지 1 mL, 보다 더 바람직하게는 약 0.5 mL의 부피를 갖는다.
따라서, 상기 정의된 바와 같은 용기 또는 시린지는 0.1 mL 내지 2 mL의 부피, 보다 바람직하게는 0.2 mL 내지 1 mL, 보다 더 바람직하게는 약 0.5 mL의 부피의 본원에 정의된 면역원성 조성물 중 임의의 것으로 채워진다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2에 정의됨)은 상기 개시된 바와 같이 제제화된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3에 정의됨)과 조합되어 사용될 수 있는 면역원성 조성물은 상기 개시된 바와 같이 제제화된다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 상기 기재된 바와 같이 제제화된다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 액체 형태로 제제화된다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 둘 다의 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a) 및 (b))은 동결건조 형태로 제제화된다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 제1 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a))은 액체 형태이고, 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))은 동결건조 형태이다.
본 발명의 측면은 상기 섹션 4에 정의된 바와 같은 키트를 제공하며, 여기서 제1 면역원성 조성물 (키트의 파트 (a))은 동결건조 형태이고, 제2 면역원성 조성물 (키트의 파트 (b))은 액체 형태이다.
9. 본 발명의 면역원성 조성물 및 키트의 사용
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 의약으로서 사용하기 위한 것이다.
본원에 기재된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태의 예방, 치료 또는 개선을 위한 다양한 치료 또는 예방 방법에 사용될 수 있다. 특히, 본원에 기재된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 에스. 뉴모니아에 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키기 위해 사용될 수 있다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 면역학적 유효량의 본원에 기재된 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 에스. 뉴모니아에와 연관된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키는 방법을 제공한다.
일부 이러한 실시양태에서, 감염, 질환 또는 상태는 폐렴, 부비동염, 중이염, 급성 중이염, 수막염, 박테리아혈증, 패혈증, 흉막 농흉, 결막염, 골수염, 패혈성 관절염, 심내막염, 복막염, 심막염, 유양돌기염, 연조직염, 연부 조직 감염 및 뇌 농양으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 면역학적 유효량의 본 발명의 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 에스. 뉴모니아에에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 백신으로서 사용하기 위한 것이다. 이러한 실시양태에서 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 에스. 뉴모니아에 감염을 예방하는데 사용될 수 있다. 따라서 한 측면에서, 본 발명은 면역학적 유효량의 본 발명의 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 에스. 뉴모니아에에 의한 감염을 예방하는 방법을 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 감염은 폐렴, 부비동염, 중이염, 급성 중이염, 수막염, 박테리아혈증, 패혈증, 흉막 농흉, 결막염, 골수염, 패혈성 관절염, 심내막염, 복막염, 심막염, 유양돌기염, 연조직염, 연부 조직 감염 및 뇌 농양으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 측면에서, 백신접종될 대상체는 포유동물, 예컨대 인간, 고양이, 양, 돼지, 말, 소 또는 개이다.
한 측면에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 에스. 뉴모니아에와 연관된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키는 방법에서 사용된다. 일부 이러한 실시양태에서, 감염, 질환 또는 상태는 폐렴, 부비동염, 중이염, 급성 중이염, 수막염, 박테리아혈증, 패혈증, 흉막 농흉, 결막염, 골수염, 패혈성 관절염, 심내막염, 복막염, 심막염, 유양돌기염, 연조직염, 연부 조직 감염 및 뇌 농양으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 백신으로서 사용하기 위한 것이다. 이러한 실시양태에서 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 에스. 뉴모니아에 감염을 예방하는데 사용될 수 있다. 따라서 한 측면에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 에스. 뉴모니아에에 의한 감염을 예방하는 방법에서 사용된다. 일부 이러한 실시양태에서, 감염은 폐렴, 부비동염, 중이염, 급성 중이염, 수막염, 박테리아혈증, 패혈증, 흉막 농흉, 결막염, 골수염, 패혈성 관절염, 심내막염, 복막염, 심막염, 유양돌기염, 연조직염, 연부 조직 감염 및 뇌 농양으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 측면에서, 백신접종될 대상체는 포유동물, 예컨대 인간, 고양이, 양, 돼지, 말, 소 또는 개이다.
본 발명의 면역원성 조성물 및 키트는 면역원성 조성물을 전신 또는 점막 경로를 통해 투여함으로써 폐렴구균 감염에 걸리기 쉬운 인간을 보호 또는 치료하는데 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 근육내, 복강내, 피내 또는 피하 경로에 의해 투여된다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 근육내, 복강내, 피내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 대상체에게 투여되는 경우에, 표준 ELISA 검정에 의해 측정되는 바와 같이, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B, 15A 및/또는 15C에 결합할 수 있는 항체의 형성을 유도할 수 있다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 대상체에게 투여되는 경우에, 표준 ELISA 검정에 의해 측정되는 바와 같이, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 및 15C에 결합할 수 있는 항체의 형성을 유도할 수 있다.
ELISA (효소-연결된 면역흡착 검정) 방법에서, 백신접종된 대상체의 혈청으로부터의 항체는 고체 지지체에 흡착된 폴리사카라이드와 함께 인큐베이션된다. 결합된 항체는 효소-접합된 2차 검출 항체를 사용하여 검출된다.
한 실시양태에서, 상기 표준 ELISA 검정은 'Training manual for Enzyme linked immunosorbent assay for the quantitation of Streptococcus pneumoniae serotype specific IgG (Pn PS ELISA)' (http://www.vaccine.uab.edu/ELISA%20protocol.pdf에서 엑세스가능; 2014년 3월 31일에 최종 엑세스됨)에서 WHO에 의해 정의된 바와 같은 표준화된 (WHO) ELISA 검정이다.
ELISA는 인간 혈청에 존재하는 유형 특이적 IgG 항-에스. 뉴모니아에 캡슐형 폴리사카라이드 (PS) 항체를 측정한다. 인간 혈청의 희석물을 유형-특이적 캡슐형 PS-코팅된 마이크로타이터 플레이트에 첨가하는 경우에, 그러한 캡슐형 PS에 특이적인 항체가 마이크로타이터 플레이트에 결합한다. 플레이트에 결합된 항체는 염소 항-인간 IgG 알칼리성 포스파타제-표지된 항체에 이어 p-니트로페닐 포스페이트 기질을 사용하여 검출된다. 유색의 최종 생성물의 광학 밀도는 혈청에 존재하는 항캡슐형 PS 항체의 양에 비례한다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 인간에서 ELISA 검정에 의해 결정 시 적어도 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.35, 0.4 또는 0.5 μg/ml의 농도에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 폴리사카라이드에 결합할 수 있는 IgG 항체를 도출할 수 있다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 인간에서 ELISA 검정에 의해 결정 시 적어도 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.35, 0.4 또는 0.5 μg/ml의 농도에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C 폴리사카라이드에 결합할 수 있는 IgG 항체를 도출할 수 있다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 인간에서 ELISA 검정에 의해 결정 시 적어도 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.35, 0.4 또는 0.5 μg/ml의 농도에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 및 15C 폴리사카라이드에 결합할 수 있는 IgG 항체를 도출할 수 있다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 대상체에게 투여되는 경우에, 본원에 개시된 바와 같은 옵소닌식세포작용 검정 (예컨대 실시예 12의 OPA 검정)에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B를 사멸시킬 수 있는 항체의 형성을 유도할 수 있다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 본원에 개시된 바와 같은 OPA 검정 (예컨대 실시예 12의 OPA 검정)에서 시험되는 경우에, 비접합된 천연 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드에 의해 수득되는 OPA 역가보다 더 큰 OPA 역가를 갖는다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 대상체에게 투여되는 경우에, 본원에 개시된 바와 같은 옵소닌식세포작용 검정 (예컨대 실시예 12의 OPA 검정)에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C를 사멸시킬 수 있는 항체의 형성을 유도할 수 있다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 본원에 개시된 바와 같은 OPA 검정 (예컨대 실시예 12의 OPA 검정)에서 시험되는 경우에, 비접합된 천연 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드에 의해 수득되는 OPA 역가보다 더 큰 OPA 역가를 갖는다.
기능적 항체 및 보체의 존재 하에 식세포 이펙터 세포에 의한 에스. 뉴모니아에 세포의 사멸을 측정하는 폐렴구균 옵소닌식세포 검정 (OPA)은 폐렴구균 백신의 유효성을 평가하는 중요한 대용물인 것으로 간주된다.
스트렙토코쿠스 뉴모니아에 세포, 시험될 열-불활성화된 인간 혈청, 분화된 HL-60 세포 (식세포) 및 외인성 보체 공급원 (예를 들어, 새끼 토끼 보체)의 혼합물을 함께 인큐베이션함으로써 옵소닌식세포 검정 (OPA)을 수행할 수 있다. 인큐베이션 동안 옵소닌식세포작용이 진행되고, 옵소닌식세포작용 시 항체 및 보체로 코팅된 박테리아 세포가 사멸된다. 옵소닌식세포작용에서 벗어난 생존 박테리아의 콜로니 형성 단위 (cfu)는 검정 혼합물을 플레이팅함으로써 결정된다. OPA 역가는 시험 혈청이 없는 대조군 웰에 비해 박테리아 카운트의 50% 감소를 발생시키는 역수 희석으로서 정의된다. OPA 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
1:8 이상의 종점 역가는 이들 사멸 유형 OPA에서 양성 결과로 간주된다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 옵소닌식세포 사멸 검정 (OPA)에 의해 결정 시 대상체의 적어도 50%에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B에 대해 적어도 1:8의 역가를 도출할 수 있다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 옵소닌식세포 사멸 검정 (OPA)에 의해 결정 시 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 적어도 93%에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B에 대해 적어도 1:8의 역가를 도출할 수 있다.
한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 옵소닌식세포 사멸 검정 (OPA)에 의해 결정 시 대상체의 적어도 50%에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C에 대해 적어도 1:8의 역가를 도출할 수 있다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은 옵소닌식세포 사멸 검정 (OPA)에 의해 결정 시 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 적어도 95%에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C에 대해 적어도 1:8의 역가를 도출할 수 있다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물 중 임의의 것의 치료 또는 예방 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C와 연관된 에스. 뉴모니아에 감염, 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 대상체에게 투여되는 경우에, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B, 15A 및/또는 15C에 결합할 수 있는 항체의 형성을 유도한다. 한 실시양태에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물은, 대상체에게 투여되는 경우에, 본원에 개시된 바와 같은 옵소닌식세포작용 검정 (예컨대 실시예 12의 OPA 검정)에서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B, 15C 및/또는 15A를 사멸시킬 수 있는 항체의 형성을 유도한다.
개시내용의 한 실시양태는 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물 중 임의의 것의 면역원성 양을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C에 의한 감염에 대해 대상체를 보호하는 방법, 또는 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C에 의한 감염을 예방하는 방법, 또는 에스. 뉴모니아에 혈청형 15C에 의해 유발되는 감염과 연관된 적어도 하나의 증상의 중증도를 감소시키거나 그의 발병을 지연시키는 방법을 제공한다. 개시내용의 한 실시양태는 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물 중 임의의 것의 치료 또는 예방 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)와 연관된 에스. 뉴모니아에 감염, 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시양태는 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물 중 임의의 것으로부터 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 제제를 생성하고, 상기 항체 제제를 사용하여 대상체에게 수동 면역을 부여하는 것을 포함하는, 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)와 연관된 에스. 뉴모니아에 감염, 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 개시내용은 에스. 뉴모니아에에 의한 감염에 대해 대상체를 보호하고/거나, 에스. 뉴모니아에에 의한 감염을 예방하고/거나, 에스. 뉴모니아에에 의해 유발되는 감염과 연관된 적어도 하나의 증상의 중증도를 감소시키거나 그의 발병을 지연시키고/거나, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)에 의한 감염에 대해 대상체를 보호하고/거나, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)에 의한 감염을 예방하고/거나, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)에 의해 유발되는 감염과 연관된 적어도 하나의 증상의 중증도를 감소시키거나 그의 발병을 지연시키기 위한 의약의 제조를 위한, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물 중 임의의 것의 용도에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 개시내용은 에스. 뉴모니아에에 의한 감염에 대해 대상체를 보호하고/거나, 에스. 뉴모니아에에 의한 감염을 예방하고/거나, 에스. 뉴모니아에에 의해 유발되는 감염과 연관된 적어도 하나의 증상의 중증도를 감소시키거나 그의 발병을 지연시키고/거나, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)에 의한 감염에 대해 대상체를 보호하고/거나, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)에 의한 감염을 예방하고/거나, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15A, 15B 및/또는 15C (바람직하게는 15B 및/또는 15C, 보다 바람직하게는 15B)에 의해 유발되는 감염과 연관된 적어도 하나의 증상의 중증도를 감소시키거나 그의 발병을 지연시키기 위한, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체 (예컨대 상기 섹션 1.3.4의 당접합체)를 포함하는 본 개시내용의 면역원성 조성물 중 임의의 것의 용도에 관한 것이다.
10. 본 발명의 면역원성 조성물 및 키트에 의해 치료될 대상체
본원에 개시된 바와 같이, 본원에 기재된 면역원성 조성물 및 키트는 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키기 위한 다양한 치료 또는 예방 방법에 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 인간이다. 가장 바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 신생아 (즉, 3개월 미만의 연령), 영아 (즉, 3개월에서 1세의 연령) 또는 유아 (즉, 1세에서 4세의 연령)이다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 및 키트는 백신으로서 사용하기 위한 것이다.
이러한 실시양태에서, 백신접종될 대상체는 1세 미만의 연령일 수 있다. 예를 들어, 백신접종될 대상체는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11 또는 약 12개월의 연령일 수 있다. 한 실시양태에서, 백신접종될 대상체는 약 2, 약 4 또는 약 6개월의 연령이다. 또 다른 실시양태에서, 백신접종될 대상체는 2세 미만의 연령이다. 예를 들어, 백신접종될 대상체는 약 12 내지 약 15개월 연령일 수 있다. 일부 경우에, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 1회 용량만큼 적은 용량이 필요하지만, 일부 상황 하에, 제2, 제3 또는 제4 용량이 주어질 수 있다 (하기 섹션 11 참조).
본 발명의 한 실시양태에서, 백신접종될 대상체는 50세 연령 이상의 인간 성인, 보다 바람직하게는 55세 연령 이상의 인간 성인이다. 한 실시양태에서, 백신접종될 대상체는 65세 연령 이상, 70세 연령 이상, 75세 연령 이상 또는 80세 연령 이상의 인간 성인이다.
한 실시양태에서, 백신접종될 대상체는 면역손상된 개체, 특히 인간이다. 면역손상된 개체는 일반적으로 감염원에 의한 챌린지에 대해 정상적인 체액성 또는 세포성 방어를 개시하는 능력의 감쇠 또는 감소를 나타내는 자로서 정의된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 면역계를 손상시키고 폐렴구균 질환에 대한 보호 또는 치료에 불충분한 항체 반응을 발생시키는 질환 또는 상태를 앓고 있다.
한 실시양태에서, 상기 질환은 원발성 면역결핍 장애이다. 바람직하게는, 상기 원발성 면역결핍 장애는 조합된 T- 및 B-세포 면역결핍, 항체 결핍, 널리-규정된 증후군, 면역 조절이상 질환, 식세포 장애, 선천성 면역 결핍, 자가염증성 장애, 및 보체 결핍으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 상기 원발성 면역결핍 장애는 WO 2010/125480의 제24면 제11행 내지 제25면 제19행에 개시된 것으로부터 선택된다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 HIV-감염, 후천성 면역결핍 증후군 (AIDS), 암, 만성 심장 또는 폐 장애, 울혈성 심부전, 당뇨병, 만성 간 질환, 알콜중독, 간경변증, 척수액 누출, 심근병증, 만성 기관지염, 기종, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 비장 기능장애 (예컨대 겸상 적혈구 질환), 비장 기능 결여 (비장결손), 혈액 악성종양, 백혈병, 다발성 골수종, 호지킨병, 림프종, 신부전, 신증후군 및 천식으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 앓고 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 영양실조를 앓고 있다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 감염에 대한 신체의 저항성을 낮추는 약물 또는 치료를 받고 있다. 한 실시양태에서, 상기 약물은 WO 2010/125480의 제26면 제33행 내지 제26면 제4행에 개시된 것으로부터 선택된다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 흡연자이다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 5 x 109개 세포/리터 미만, 또는 4 x 109개 세포/리터 미만, 또는 3 x 109개 세포/리터 미만, 또는 2 x 109개 세포/리터 미만, 또는 1 x 109개 세포/리터 미만, 또는 0.5 x 109개 세포/리터 미만, 또는 0.3 x 109개 세포/리터 미만, 또는 0.1 x 109개 세포/리터 미만의 백색 혈액 세포 카운트 (백혈구 카운트)를 갖는다.
백색 혈액 세포 카운트 (백혈구 카운트): 혈액 중 백색 혈액 세포 (WBC)의 수. WBC는 통상적으로 CBC (완전 혈액 카운트)의 일부로서 측정된다. 백색 혈액 세포는 혈액 중 감염과 싸우는 세포이고, 적혈구로 공지된 적색 (산소-보유) 혈액 세포와 구별된다. 호중구 (다형핵 백혈구; PMN), 밴드 세포 (약간 미성숙 호중구), T-유형 림프구 (T-세포), B-유형 림프구 (B-세포), 단핵구, 호산구 및 호염기구를 포함한, 상이한 유형의 백색 혈액 세포가 존재한다. 모든 유형의 백색 혈액 세포가 백색 혈액 세포 카운트에 반영된다. 백색 혈액 세포 카운트에 대한 정상 범위는 통상적으로 혈액의 세제곱 밀리미터당 4,300 내지 10,800개 세포이다. 이는 또한 백혈구 카운트로도 지칭될 수 있고, 리터당 4.3 - 10.8 x 109개 세포로서 국제 단위로 표현될 수 있다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 호중구감소증을 앓고 있다. 본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 2 x 109개 세포/리터 미만, 또는 1 x 109개 세포/리터 미만, 또는 0.5 x 109개 세포/리터 미만, 또는 0.1 x 109개 세포/리터 미만, 또는 0.05 x 109개 세포/리터 미만의 호중구 카운트를 갖는다.
낮은 백색 혈액 세포 카운트 또는 "호중구감소증"은 순환 혈액 중에서 호중구의 비정상적으로 낮은 수준을 특징으로 하는 상태이다. 호중구는 감염을 예방하고 그와 싸우는데 도움이 되는 특정 유형의 백색 혈액 세포이다. 암 환자가 호중구감소증을 겪는 가장 흔한 이유는 화학요법의 부작용 때문이다. 화학요법-유도된 호중구감소증은 환자의 감염 위험을 증가시키고, 암 치료를 방해한다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 백신접종될 면역손상된 대상체는 500개/mm3 미만의 CD4+ 세포 카운트, 또는 300개/mm3 미만의 CD4+ 세포 카운트, 또는 200개/mm3 미만의 CD4+ 세포 카운트, 100개/mm3 미만의 CD4+ 세포 카운트, 75개/mm3 미만의 CD4+ 세포 카운트, 또는 50개/mm3 미만의 CD4+ 세포 카운트를 갖는다.
CD4 세포 시험은 통상적으로 mm3 내 세포의 수로서 보고된다. 정상적인 CD4 카운트는 500 내지 1,600이고, CD8 카운트는 375 내지 1,100이다. CD4 카운트는 HIV를 갖는 사람에서 극적으로 저하된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 면역손상된 대상체는 인간 남성 또는 인간 여성이다.
11. 면역화 스케줄
일부 경우에, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 1회 용량만큼 적은 용량이 필요하지만, 일부 상황, 예컨대 보다 큰 면역 결핍 또는 면역 미성숙 상태 하에, 제2, 제3 또는 제4 용량이 주어질 수 있다. 초기 백신접종 후, 대상체는 1회, 또는 적절히 이격된 수회의 부스터 면역화를 제공받을 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 백신접종 스케줄은 단일 용량이다. 특정한 실시양태에서, 상기 단일 용량 스케줄은 적어도 2세의 연령인 건강한 사람에 대한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 백신접종 스케줄은 다중 용량 스케줄이다. 다중 용량 스케줄은 면역 결핍 (예컨대 인간 노인 또는 인간 면역손상된 개체) 또는 면역 미성숙 (예컨대 인간 신생아 (즉, 3개월 미만의 연령), 영아 (즉, 3개월에서 1세의 연령) 또는 유아 (즉, 1세에서 4세의 연령))과 같은 상태에서 빈번하게 사용된다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 1세 연령에서의 적어도 1회의 용량 (예를 들어, 1, 2 또는 3회 용량)에 이어서, 적어도 1회의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에서의 일련의 4-용량 백신으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 제0일에 프라임 용량이 주어지고, 용량 사이에 약 2 내지 약 24주 범위의 간격으로, 바람직하게는 4-8주의 투여 간격으로 1회 이상의 부스터 용량이 주어진다.
한 실시양태에서, 제0일에 프라임 용량이 주어지고, 약 3개월 후에 부스트가 주어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다.
본 발명의 측면은 제2 면역원성 조성물과의 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한, 본 발명의 임의의 면역원성 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 측면은 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한, 본원에 개시된 임의의 키트에 관한 것이다.
"동시 투여"는 치료 유효 용량의 제1 및 제2 면역원성 조성물의 단일 단위 투여 형태로의 투여를 의미된다.
"공동 투여"는 치료 유효 용량의 제1 및 제2 면역원성 조성물의, 동일한 접근 부위를 통하지만 개별 단위 투여 형태로의, 서로 짧은 기간 내에서의 투여를 의미한다. 공동 투여는 본질적으로, 2종의 면역원성 조성물을 거의 동일한 시간에, 그러나 개별 투여 형태로, 동일한 접근 부위를 통해 투여하는 것이다. 제1 및 제2 면역원성 조성물의 공동 투여는 종종 동일한 의사 사무실 방문 동안 일어난다.
"병용 투여"는 치료 유효 용량의 제1 및 제2 면역원성 조성물의, 개별 단위 투여 형태로 서로 짧은 기간 내에 상이한 해부학적 부위에서의 투여를 의미한다. 병용 투여는 본질적으로, 2종의 면역원성 조성물을 거의 동일한 시간에, 그러나 개별 투여 형태로, 상이한 해부학적 부위에서 투여하는 것이다. 제1 및 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 종종 동일한 의사 사무실 방문 동안 일어난다.
"순차적 투여"는 치료 유효 용량의 제1 또는 제2 면역원성 조성물 단독의 투여에 이어, 적어도 약 1개월의 간격 후, 치료 유효 용량의 나머지 면역원성 조성물의 투여를 의미한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 제1 면역원성 조성물이 단일 투여 형태로 투여되고, 이어서 적어도 약 1개월의 간격 후에, 제2 면역원성 조성물이 개별 단일 투여 형태로 투여된다. 대안적 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물이 단일 투여 형태로 투여되고, 이어서 적어도 약 1개월의 간격 후에, 제1 면역원성 조성물이 개별 단일 투여 형태로 투여된다. 제1 및 제2 면역원성 조성물의 순차적 투여는 종종 상이한 의사 사무실 방문 동안 일어난다.
본 발명의 한 측면에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)은 제2 면역원성 조성물과 동시에, 공동으로, 병용으로 또는 순차적으로 투여된다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
따라서, 본 발명의 측면은 제2 면역원성 조성물과의 동시, 공동, 병용 또는 순차적 사용을 위한, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)에 관한 것이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
일부 경우에, 각각의 면역원성 조성물의 1회 용량만큼 적은 용량이 필요하지만, 일부 상황 하에, 면역원성 조성물 중 하나 또는 각각의 제2, 제3 또는 제4 용량이 주어질 수 있다. 초기 백신접종 후, 대상체는 1회, 또는 적절히 이격된 수회의 부스터 면역화를 제공받을 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 제2 면역원성 조성물과의 동시 투여를 위한, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)에 관한 것이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 상기 동시 투여의 백신접종 스케줄은 단일 용량이다. 특정한 실시양태에서, 상기 단일 용량 스케줄은 적어도 2세의 연령인 건강한 사람에 대한 것이다.
한 실시양태에서, 상기 동시 투여의 백신접종 스케줄은 다중 용량 스케줄이다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 1세 연령에서의 적어도 1회의 용량 (예를 들어, 1, 2 또는 3회 용량)에 이어서, 적어도 1회의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에 투여되는 일련의 4-용량 백신으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 제0일에 프라임 용량이 주어지고, 용량 사이에 약 2 내지 약 24주 범위의 간격으로, 바람직하게는 4-8주의 투여 간격으로 1회 이상의 부스터 용량이 주어진다.
한 실시양태에서, 제0일에 프라임 용량이 주어지고, 약 3개월 후에 부스터 용량이 주어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 본 발명은 제2 면역원성 조성물과의 병용 투여를 위한, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)에 관한 것이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 상기 병용 투여의 백신접종 스케줄은 단일 용량이다 (개별 단위 투여 형태이지만, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 투여는 면역화 스케줄을 규정하는 목적상 단일 용량으로 간주됨). 특정한 실시양태에서, 상기 단일 용량 스케줄은 적어도 2세의 연령인 건강한 사람에 대한 것이다.
한 실시양태에서, 상기 병용 투여의 백신접종 스케줄은 다중 용량 스케줄이다 (개별 단위 투여 형태이지만, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 투여는 면역화 스케줄을 규정하는 목적상 단일 용량으로 간주됨). 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 1세 연령에서의 적어도 1회의 용량 (예를 들어, 1, 2 또는 3회 용량)에 이어서, 적어도 1회의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에 투여되는 일련의 4-용량 백신으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 제0일에 프라임 용량이 주어지고, 약 2 내지 약 24주 범위의 간격으로, 바람직하게는 4-8주의 투여 간격으로 1회 이상의 부스터 용량이 주어진다.
한 실시양태에서, 제0일에 프라임 용량이 주어지고, 약 3개월 후에 부스트가 주어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 제2 면역원성 조성물과의 공동 투여를 위한, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)에 관한 것이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 상기 공동 투여의 백신접종 스케줄은 단일 용량이다 (개별 단위 투여 형태이지만, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 투여는 면역화 스케줄을 규정하는 목적상 단일 용량으로 간주됨). 특정한 실시양태에서, 상기 단일 용량 스케줄은 적어도 2세의 연령인 건강한 사람에 대한 것이다.
한 실시양태에서, 상기 공동 투여의 백신접종 스케줄은 다중 용량 스케줄, 특히 병용 투여에 대해 상기 개시된 다중 스케줄 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 제2 면역원성 조성물과의 순차적 투여를 위한, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)에 관한 것이다. 한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제2로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 2, 3 또는 4회 용량으로 이루어진다
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진다.
상기 2-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제2로 투여된다.
상기 2-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 및 제2 용량은 1세 연령에 투여된다. 상기 2-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 용량은 1세 연령에 투여되고, 제2 용량은 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 유아 용량은 12-18개월 연령에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 유아 용량은 12-15개월 연령에 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진다.
상기 3-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 및 제2 용량은 1세 연령에 투여되고, 제3 용량은 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 용량은 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 제3 용량은 12-18개월 연령에서의 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 용량은 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 제3 용량은 12-15개월 연령에서의 유아 용량이다.
상기 3-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 2회 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여된다.
상기 3-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 2회 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여된다.
상기 3-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제2 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여된다.
상기 3-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여된다.
상기 3-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제2 및 제3 용량으로서 투여된다.
상기 3-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 및 제3 용량으로서 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 4회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량으로 이루어진다.
상기 4-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제3 용량 및 제3 용량의 약 1개월 내지 약 2개월 후의 제4 용량으로 이루어진다.
상기 4-용량 스케줄의 한 실시양태에서 제1 및 제2 용량은 1세 연령에 투여되고, 제3 및 제4 용량은 유아 용량이다.
상기 4-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 용량은 1세 연령에 투여되고, 제4 용량은 유아 용량이다.
한 실시양태에서, 상기 4-용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 다중 용량 스케줄은 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에서의 일련의 4-용량 백신으로 이루어진다.
상기 4-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 3회 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 3회 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제3 및 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 및 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여되고 제2 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제2 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제3 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제2 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 및 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제3 및 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
상기 4-용량 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제4 용량으로서 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 5회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 5-용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 3개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 용량으로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량 및 제4 용량의 약 1개월 내지 약 2개월 후의 제5 용량으로 이루어진다.
상기 5-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 용량은 1세 연령에 투여되고, 제4 및 제5 용량은 유아 용량이다.
상기 5-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 용량은 1세 연령에 투여되고, 제5 용량은 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 5-용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
상기 5-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것, 하기 표에서 1st IC로 지정됨) 및 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3에 개시됨, 하기 표에서 2nd IC로 지정됨)은 하기 순서로 투여된다:
Figure pat00006
상기 표는 상이한 용량에 대한 제1 및 제2 면역원성 조성물 (각각 1st IC 및 2nd IC로 지정됨)의 투여 순서를 제공하며, 예를 들어 스케줄 번호 1은 다음과 같이 판독된다: 상기 5-용량 스케줄의 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1, 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제5 용량으로서 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 투여 순서는 스케줄 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21에 따른다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 용량의 백신접종 스케줄은 일련의 6회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 6-용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 용량으로 이루어진다.
상기 6-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 용량은 1세 연령에 투여되고, 제6 용량은 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 6-용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
상기 6-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것) 및 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3에 개시됨)은 5-용량 스케줄에 대해 제공된 30개의 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 표, 스케줄 1 내지 30 참조), 제6 용량이 이어진다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제6 용량으로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물이 제6 용량으로서 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 용량의 백신접종 스케줄은 일련의 7회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 7-용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제7 용량으로 이루어진다.
상기 7-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 용량은 1세 연령에 투여되고, 제7 용량은 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 7-용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
상기 7-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것) 및 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3에 개시됨)은 6-용량 스케줄에 대해 제공된 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 참조), 제7 용량이 이어진다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제7 용량으로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물이 제7 용량으로서 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 용량의 백신접종 스케줄은 일련의 8회 용량으로 이루어진다.
특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량으로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량, 또는 각각의 용량이 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 용량으로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 8-용량 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제8 용량으로 이루어진다.
상기 8-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 용량은 1세 연령에 투여되고, 제8 용량은 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 8-용량 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진다.
상기 8-용량 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것) 및 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3에 개시됨)은 7-용량 스케줄에 대해 제공된 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 참조), 제8 용량이 이어진다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제8 용량으로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물이 제8 용량으로서 투여된다.
한 실시양태에서, 본 발명은
(a) 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것) 및
(b) 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여
의 순차적 투여에 관한 것이다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 2회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 백신접종 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 백신접종 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다.
상기 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2로 투여된다.
상기 2-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 1세 연령에 투여된다. 상기 2-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 투여는 1세 연령에 투여되고, 제2 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 유아 투여는 12-18개월 연령에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 유아 투여는 12-15개월 연령에 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 3회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다.
상기 3-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 1세 연령에 투여되고, 제3 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제3 투여는 12-18개월 연령에서의 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제3 투여는 12-15개월 연령에서의 유아 투여이다.
상기 3-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 및 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 및 제3 투여로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 4회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다.
상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다.
상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 투여는 1세 연령에 투여되고, 제4 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 4-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 4-투여 스케줄은 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에서의 일련의 투여로 이루어진다.
상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1, 제2 및 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1, 제2 및 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2, 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2, 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 및 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제2 및 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 5회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 3개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진다.
상기 5-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 투여는 1세 연령에 투여되고, 제5 투여는 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 5- 투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 5-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (하기 표에서 1st IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)는 하기 순서로 투여된다:
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상기 표는 상이한 용량에 대한 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (하기 표에서 1st IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)의 투여 순서를 제공하며, 예를 들어 스케줄 번호 1은 다음과 같이 판독된다: 상기 5-투여 스케줄의 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1, 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제5 용량으로서 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 투여 순서는 스케줄 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 22 또는 23에 따른다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 용량의 백신접종 스케줄은 일련의 6회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 6-투여 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여로 이루어진다.
상기 6-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 투여는 1세 연령에 투여되고, 제6 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 6-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 6-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 5-투여 스케줄에 대해 제공된 30종의 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 표, 스케줄 1 내지 30 참조), 제6 투여가 이어진다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제6 투여로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제6 투여로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 7회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 7-투여 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제7 투여로 이루어진다.
상기 7-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 투여는 1세 연령에 투여되고, 제7 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 7-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 7-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 6-투여 스케줄에 대해 제공된 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 참조), 제7 투여가 이어진다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제7 투여로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제7 투여로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 8회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 8-투여 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제8 투여로 이루어진다.
상기 8-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 투여는 1세 연령에 투여되고, 제8 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 8-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일), 및 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 8-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 7-투여 스케줄에 대해 제공된 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 참조), 제8 용량이 이어진다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물은 제8 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제8 용량으로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 투여 스케줄에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 본 발명은
(a) 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) 및
(b) 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여
의 순차적 투여에 관한 것이다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 투여 스케줄은 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여의 순차적 투여에 대해 상기 개시된 스케줄 중 임의의 것이고 (페이지 152- 하단에서 페이지 164), 여기서 (a)의 상기 제2 면역원성 조성물의 투여는 상기 스케줄에서 (a)의 제1 면역원성 조성물의 투여를 대체한다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
따라서 한 실시양태에서, 본 발명은
(a) 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) 및
(b) 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여
의 순차적 투여에 관한 것이다.
한 실시양태에서 상기 제2 면역원성 조성물은 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것이다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 2회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 백신접종 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 백신접종 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여, 또는 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진다.
상기 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2로 투여된다.
상기 2-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 1세 연령에 투여된다. 상기 2-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 투여는 1세 연령에 투여되고, 제2 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 유아 투여는 12-18개월 연령에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 유아 투여는 12-15개월 연령에 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 2-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 3회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 제1 2회의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제3 투여로 이루어진다.
상기 3-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 1세 연령에 투여되고, 제3 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제3 투여는 12-18개월 연령에서의 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 투여는 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제3 투여는 12-15개월 연령에서의 유아 투여이다.
상기 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)의 병용 투여는 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)의 병용 투여는 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)의 병용 투여는 제2 및 제3 투여로 투여된다.
상기 3-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2 및 제3 투여로 투여된다.
따라서 상기 3-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) (하기 표에서 2nd IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)는 하기 순서로 투여된다:
Figure pat00008
상기 표는 상이한 용량에 대한 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) (하기 표에서 2nd IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)의 투여 순서를 제공하며, 예를 들어 스케줄 번호 1은 다음과 같이 판독된다: 상기 3-투여 스케줄의 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 용량으로서 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 투여 순서는 스케줄 1에 따른다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 3-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 4회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여로 이루어진다.
상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 투여로 이루어진다.
상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 투여는 1세 연령에 투여되고, 제4 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 4-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 및 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 4-투여 스케줄은 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에서의 일련의 투여로 이루어진다.
상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1, 제2 및 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1, 제2 및 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 및 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2, 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2, 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제3 및 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제1 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제2 및 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제4 투여로 투여된다.
상기 4-투여 스케줄의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것)은 제2 및 제3 투여로 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 투여로 투여된다.
따라서 상기 4-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) (하기 표에서 2nd IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)는 하기 순서로 투여된다:
Figure pat00009
상기 표는 상이한 용량에 대한 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) (하기 표에서 2nd IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)의 투여 순서를 제공하며, 예를 들어 스케줄 번호 1은 다음과 같이 판독된다: 상기 3-투여 스케줄의 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제1, 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제4 용량으로서 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 투여 순서는 스케줄 1, 3 또는 5에 따른다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 4-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 5회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 3개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 용량이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진다.
상기 5-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 투여는 1세 연령에 투여되고, 제5 투여는 유아 용량이다. 한 실시양태에서, 상기 5- 투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 및 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 및 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 5-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) (하기 표에서 2nd IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)는 하기 순서로 투여된다:
Figure pat00010
상기 표는 상이한 용량에 대한 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) (하기 표에서 2nd IC로 지정됨) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 (하기 표에서 1st IC/2nd IC로 지정됨)의 투여 순서를 제공하며, 예를 들어 스케줄 번호 1은 다음과 같이 판독된다: 상기 5-투여 스케줄의 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제1, 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물은 제5 용량으로서 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 투여 순서는 스케줄 16, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 30에 따른다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 5-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 용량의 백신접종 스케줄은 일련의 6회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 6-투여 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여로 이루어진다.
상기 6-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 투여는 1세 연령에 투여되고, 제6 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 6-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 및 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 6-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 5-용량 스케줄에 대해 제공된 30개의 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 표, 스케줄 1 내지 30 참조), 제6 투여가 이어진다. 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제6 투여로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제6 투여로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 6-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 7회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 7-투여 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제7 투여로 이루어진다.
상기 7-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 투여는 1세 연령에 투여되고, 제7 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 7-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 7-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 6-투여 스케줄에 대해 제공된 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 참조), 제7 투여가 이어진다. 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물은 제7 투여로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제7 투여로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 7-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄은 일련의 8회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 특정한 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 상기 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여, 또는 각각의 투여가 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 8회 투여로 이루어진다.
한 실시양태에서 상기 8-투여 스케줄은 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제8 투여로 이루어진다.
상기 8-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 투여는 1세 연령에 투여되고, 제8 투여는 유아 투여이다. 한 실시양태에서, 상기 8-투여 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다. 한 실시양태에서, 상기 스케줄은 2개월 연령에 시작되는, 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여 (예를 들어, 투여들 사이에 28-40일)에 이어서, 12-15개월 연령에서의 유아 투여로 이루어진다.
상기 8-투여 스케줄의 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 3의 것) 및 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물 (예컨대 상기 섹션 2의 것)과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 7-투여 스케줄에 대해 제공된 스케줄 중 임의의 것에 따른 순서로 투여되고 (상기 참조), 제8 용량이 이어진다. 한 실시양태에서, 제2 면역원성 조성물 제8 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물과 상기 제2 면역원성 조성물의 병용 투여는 제8 용량으로 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 개시된 8-투여 스케줄 중 임의의 것에서 병용 투여(들)는 공동 투여에 의해 대체된다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.
한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 넓적다리 또는 팔에 근육내 주사에 의해 투여된다. 한 실시양태에서, 주사 부위는 전외측 넓적다리 근육 또는 삼각근이다.
한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 넓적다리 또는 팔에 피하 주사에 의해 투여된다. 한 실시양태에서, 주사 부위는 전외측 넓적다리 근육 위의 지방 조직 또는 삼두근 위의 지방 조직이다.
병용 투여의 경우에, 제1 주사는 한쪽 넓적다리에서 이루어지고 제2는 다른쪽 넓적다리 (바람직하게는 전외측 넓적다리 근육)에서 이루어질 수 있다. 대안적으로, 제1 주사는 한쪽 팔에서 이루어지고 제2는 다른쪽 팔 (바람직하게는 삼각근)에서 이루어질 수 있다. 제1 주사는 또한 넓적다리에서 이루어지고 제2는 팔에서 이루어지거나, 또는 제1 주사가 팔에서 제2가 넓적다리에서 이루어질 수 있다.
한 측면에서 본 발명은 상기 개시된 면역화 스케줄 중 임의의 것에 사용하기 위한 본 발명의 키트 (예컨대 상기 섹션 4의 것)에 관한 것이다.
본 발명의 특정한 실시양태가 하기 넘버링된 단락에 제시된다:
1. 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 당접합체를 포함하며, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
2. 제1 단락에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 제1 또는 제2 단락에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
4. 제1 내지 제3 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
5. 제1 내지 제4 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
6. 제1 내지 제5 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
7. 제1 내지 제6 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
8. 제1 내지 제7 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
9. 제1 내지 제8 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체를 포함하고, 7-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
10. 제1 내지 제9 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 당접합체가 개별적으로 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
11. 제1 내지 제9 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 당접합체가 개별적으로 PD에 접합된 것인 면역원성 조성물.
12. 제1 내지 제9 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 당접합체가 개별적으로 TT에 접합된 것인 면역원성 조성물.
13. 제1 내지 제9 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 당접합체가 개별적으로 DT에 접합된 것인 면역원성 조성물.
14. 제1 내지 제13 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 1,000 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
15. 제1 내지 제14 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 10,000 kDa 및 16,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
16. 제1 내지 제15 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 15B 당접합체 내의 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.5 내지 3인 면역원성 조성물.
17. 제1 내지 제16 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 15B 당접합체 내의 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.7 내지 0.9인 면역원성 조성물.
18. 제1 내지 제17 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
19. 제1 내지 제18 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 15B 당접합체의 적어도 40%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
20. 제1 내지 제19 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
21. 제1 내지 제20 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
22. 제1 내지 제21 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
23. 제1 내지 제22 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
24. 제1 내지 제23 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
25. 제1 내지 제24 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.5 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
26. 제1 내지 제25 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
27. 제1 내지 제26 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체의 접합도가 2 내지 15인 면역원성 조성물.
28. 제1 내지 제27 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 10 kDa 및 1,500 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
29. 제1 내지 제28 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
30. 제1 내지 제29 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
31. 제1 및 제3 내지 제30 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 400 kDa 및 15,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
32. 제1 및 제3 내지 제31 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 1,000 kDa 및 8,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
33. 제1 및 제3 내지 제32 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 22F 당접합체 내의 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.5 내지 3인 면역원성 조성물.
34. 제1 및 제3 내지 제33 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 22F 당접합체 내의 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.9 내지 1.1인 면역원성 조성물.
35. 제1 및 제3 내지 제34 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
36. 제1 및 제3 내지 제35 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 22F 당접합체의 적어도 30%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
37. 제1 및 제3 내지 제36 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
38. 제1 및 제3 내지 제37 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
39. 제1 및 제3 내지 제38 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 22F 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
40. 제1 및 제3 내지 제39 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 22F 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
41. 제1 및 제3 내지 제40 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체의 접합도가 2 내지 15인 면역원성 조성물.
42. 제1 및 제3 내지 제41 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 10 kDa 및 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
43. 제1 및 제3 내지 제42 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
44. 제1 및 제3 내지 제43 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
45. 제1 및 제4 내지 제44 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 50 kDa 및 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
46. 제1 및 제4 내지 제45 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 1,000 kDa 및 5,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
47. 제1 및 제4 내지 제46 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 33F 당접합체 내의 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.2 내지 4인 면역원성 조성물.
48. 제1 및 제4 내지 제47 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 33F 당접합체 내의 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.4 내지 1.7인 면역원성 조성물.
49. 제1 및 제4 내지 제48 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 40% 미만의 유리 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인인 면역원성 조성물.
50. 제1 및 제4 내지 제49 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 33F 당접합체의 적어도 35%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
51. 제1 및 제4 내지 제50 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
52. 제1 및 제4 내지 제51 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
53. 제1 및 제4 내지 제52 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 33F 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
54. 제1 및 제4 내지 제53 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 33F 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
55. 제1 및 제4 내지 제54 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체의 접합도가 2 내지 20인 면역원성 조성물.
56. 제1 및 제4 내지 제55 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 10 kDa 및 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
57. 제1 및 제4 내지 제56 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 담체 단백질과 사카라이드 사이에 2 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
58. 제1 및 제4 내지 제57 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
59. 제1 및 제4 내지 제58 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
60. 제1 및 제4 내지 제59 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 eTEC 접합을 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
61. 제60 단락에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 화학식 (III)에 의해 나타내어지는 것인 면역원성 조성물:
Figure pat00011
여기서 eTEC 스페이서를 구성하는 원자는 중앙 박스 안에 들어 있다.
62. 제1 및 제5 내지 제61 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 50 kDa 및 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
63. 제1 및 제5 내지 제62 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 500 kDa 및 5,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
64. 제1 및 제5 내지 제63 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 12F 당접합체 내의 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.2 내지 4인 면역원성 조성물.
65. 제1 및 제5 내지 제64 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 12F 당접합체 내의 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.8 내지 1.8인 면역원성 조성물.
66. 제1 및 제5 내지 제65 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
67. 제1 및 제5 내지 제66 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 12F 당접합체의 적어도 35%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
68. 제1 및 제5 내지 제67 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체의 접합도가 2 내지 20인 면역원성 조성물.
69. 제1 및 제5 내지 제68 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 10 kDa 및 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
70. 제1 및 제5 내지 제69 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 담체 단백질과 사카라이드 사이에 2 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 적어도 1개의 공유 연결을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
71. 제1 및 제5 내지 제70 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
72. 제1 및 제5 내지 제71 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
73. 제1 및 제5 내지 제72 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 TEMPO/NCS-환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
74. 제1 및 제6 내지 제73 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 50 kDa 및 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
75. 제1 및 제6 내지 제74 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 1,000 kDa 및 10,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
76. 제1 및 제6 내지 제75 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 10A 당접합체 내의 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.5 내지 3인 면역원성 조성물.
77. 제1 및 제6 내지 제76 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 10A 당접합체 내의 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.8 내지 1.2인 면역원성 조성물.
78. 제1 및 제6 내지 제77 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
79. 제1 및 제6 내지 제78 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 10A 당접합체의 적어도 30%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
80. 제1 및 제6 내지 제79 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체의 접합도가 2 내지 15인 면역원성 조성물.
81. 제1 및 제6 내지 제80 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 10 kDa 및 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
82. 제1 및 제6 내지 제81 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
83. 제1 및 제6 내지 제82 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
84. 제1 및 제7 내지 제83 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 50 kDa 및 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
85. 제1 및 제7 내지 제84 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 500 kDa 및 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
86. 제1 및 제7 내지 제85 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 11A 당접합체 내의 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.2 내지 4인 면역원성 조성물.
87. 제1 및 제7 내지 제86 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 11A 당접합체 내의 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.8 내지 1.6인 면역원성 조성물.
88. 제1 및 제7 내지 제87 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
89. 제1 및 제7 내지 제88 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 11A 당접합체의 적어도 30%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
90. 제1 및 제7 내지 제89 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.3 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
91. 제1 및 제7 내지 제90 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 1.8 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
92. 제1 및 제7 내지 제91 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 단리된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
93. 제1 및 제7 내지 제92 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
94. 제1 및 제7 내지 제93 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
95. 제1 및 제7 내지 제94 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.4 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
96. 제1 및 제7 내지 제95 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체의 접합도가 1 내지 15인 면역원성 조성물.
97. 제1 및 제7 내지 제96 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 10 kDa 및 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
98. 제1 및 제7 내지 제97 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
99. 제1 및 제7 내지 제98 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
100. 제1 및 제8 내지 제99 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 50 kDa 및 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
101. 제1 및 제8 내지 제100 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 1,000 kDa 및 15,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
102. 제1 및 제8 내지 제101 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 8 당접합체 내의 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.2 내지 4인 면역원성 조성물.
103. 제1 및 제8 내지 제102 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 8 당접합체 내의 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)가 0.8 내지 1.5인 면역원성 조성물.
104. 제1 및 제8 내지 제103 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
105. 제1 및 제8 내지 제104 단락 중 어느 하나에 있어서, 혈청형 8 당접합체의 적어도 30%가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
106. 제1 및 제8 내지 제105 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체의 접합도가 2 내지 20인 면역원성 조성물.
107. 제1 및 제8 내지 제106 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 10 kDa 및 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
108. 제1 및 제8 내지 제107 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
109. 제1 및 제8 내지 제108 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조된 것인 면역원성 조성물.
110. 제1 내지 제109 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각각의 용량이 각각의 혈청형의 폴리사카라이드를 0.1 μg 내지 100 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
111. 제1 내지 제110 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각각의 용량이 각각의 혈청형의 폴리사카라이드를 1.0 μg 내지 10 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
112. 제1 내지 제111 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각각의 용량이 각각의 혈청형 당접합체에 대한 폴리사카라이드를 약 1.0 μg, 약 1.2 μg, 약 1.4 μg, 약 1.6 μg, 약 1.8 μg, 2.0 μg, 약 2.2 μg, 약 2.4 μg, 약 2.6 μg, 약 2.8 μg, 약 3.0 μg, 약 3.2 μg, 약 3.4 μg, 약 3.6 μg, 약 3.8 μg, 약 4.0 μg, 약 4.2 μg, 약 4.4 μg, 약 4.6 μg, 약 4.8 μg, 약 5.0 μg, 약 5.2 μg, 약 5.4 μg, 약 5.6 μg, 약 5.8 μg 또는 약 6.0 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
113. 제1 내지 제112 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각각의 용량이 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F, 및/또는 33F로부터의 각각의 당접합체에 대한 폴리사카라이드를, 존재하는 경우에, 약 1.5 μg 내지 약 3.0 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
114. 제1 내지 제113 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각각의 용량이 담체 단백질을 10 μg 내지 150 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
115. 제1 내지 제114 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각각의 용량이 담체 단백질을 약 1 μg, 약 2 μg, 약 3 μg, 약 4 μg, 약 5 μg, 약 6 μg, 약 7 μg, 약 8 μg, 약 9 μg, 약 10 μg, 약 11 μg, 약 12 μg, 약 13 μg, 약 14 μg, 약 15 μg, 약 16 μg, 약 17 μg, 약 18 μg, 약 19 μg, 약 20 μg, 약 21 μg, 약 22 μg, 약 23 μg, 약 24 μg, 약 25 μg, 약 26 μg, 약 27 μg, 약 28 μg, 약 29 μg, 약 30 μg, 약 31 μg, 약 32 μg, 약 33 μg, 약 34 μg, 약 35 μg, 약 36 μg, 약 37 μg, 약 38 μg, 약 39 μg, 약 40 μg, 약 41 μg, 약 42 μg, 약 43 μg, 약 44 μg, 약 45 μg, 약 46 μg, 약 47 μg, 약 48 μg, 약 49 μg, 약 50 μg, 약 51 μg, 약 52 μg, 약 53 μg, 약 54 μg, 약 55 μg, 약 56 μg, 약 57 μg, 약 58 μg, 약 59 μg, 약 60 μg, 약 61 μg, 약 62 μg, 약 63 μg, 약 64 μg, 약 65 μg, 약 66 μg, 약 67 μg, 약 68 μg, 약 69 μg, 약 70 μg, 약 71 μg, 약 72 μg, 약 73 μg, 약 74 μg 또는 약 75 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
116. 제1 내지 제115 단락 중 어느 하나에 있어서, 다른 병원체로부터의 적어도 1종의 항원을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
117. 제1 내지 제116 단락 중 어느 하나에 있어서, 디프테리아 톡소이드 (D), 파상풍 톡소이드 (T), 백일해 항원 (P), 무세포성 백일해 항원 (Pa), B형 간염 바이러스 (HBV) 표면 항원 (HBsAg), A형 간염 바이러스 (HAV) 항원, 접합된 헤모필루스 인플루엔자에 b형 캡슐형 사카라이드 (Hib), 및 불활성화된 폴리오바이러스 백신 (IPV)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 항원을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
118. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T 및 Pa를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
119. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T, Pa 및 Hib를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
120. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T, Pa 및 IPV를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
121. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T, Pa 및 HBsAg를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
122. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T, Pa, HBsAg 및 IPV를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
123. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T, Pa, HBsAg 및 Hib를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
124. 제1 내지 제117 단락 중 어느 하나에 있어서, D, T, Pa, HBsAg, IPV 및 Hib를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
125. 제1 내지 제124 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
126. 제1 내지 제125 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
127. 제1 내지 제126 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 캡슐형 사카라이드 (MenA)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
128. 제1 내지 제127 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐형 사카라이드 (MenW135)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
129. 제1 내지 제128 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY) 및 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
130. 제1 내지 제124 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐형 사카라이드 (MenW135), 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY), 및/또는 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
131. 제1 내지 제124 단락 중 어느 하나에 있어서, 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 캡슐형 사카라이드 (MenA), 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐형 사카라이드 (MenW135), 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐형 사카라이드 (MenY), 및/또는 접합된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐형 사카라이드 (MenC)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
132. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
133. 제1 내지 제132 단락 중 어느 하나에 있어서, 인산알루미늄, 황산알루미늄 또는 수산화알루미늄, 인산칼슘, 리포솜, 수중유 에멀젼, MF59 (4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v 폴리소르베이트 80, 0.5% w/v 소르비탄 트리올레에이트), 유중수 에멀젼, 몬타니드™, 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLG) 마이크로입자 및 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLG) 나노입자로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
134. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 인산알루미늄, 황산알루미늄 및 수산화알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
135. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 아주반트로서 인산알루미늄을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
136. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 아주반트로서 황산알루미늄을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
137. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 아주반트로서 수산화알루미늄을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
138. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL 포함하는 면역원성 조성물.
139. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 0.2 mg/mL 내지 0.3 mg/mL 포함하는 면역원성 조성물.
140. 제1 내지 제131 단락 중 어느 하나에 있어서, 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 약 0.25 mg/mL 포함하는 면역원성 조성물.
141. 제1 내지 제140 단락 중 어느 하나에 있어서, CpG 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
142. 제1 내지 제141 단락 중 어느 하나에 있어서, 액체 형태로 제제화된 면역원성 조성물.
143. 제1 내지 제141 단락 중 어느 하나에 있어서, 동결건조 형태로 제제화된 면역원성 조성물.
144. 제1 내지 제142 단락 중 어느 하나에 있어서, 수성 액체 형태로 제제화된 면역원성 조성물.
145. 제1 내지 제144 단락 중 어느 하나에 있어서, 완충제, 염, 2가 양이온, 비-이온성 세제, 동결보호제 예컨대 당, 및 항산화제 예컨대 자유 라디칼 스캐빈저 또는 킬레이트화제, 또는 그의 임의의 조합 중 1종 이상을 포함하는 면역원성 조성물.
146. 제1 내지 제145 단락 중 어느 하나에 있어서, 완충제를 포함하는 면역원성 조성물.
147. 제146 단락에 있어서, 상기 완충제가 약 3.5 내지 약 7.5의 pKa를 갖는 것인 면역원성 조성물.
148. 제146 또는 제147 단락에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트인 면역원성 조성물.
149. 제146 내지 제148 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 완충제가 1.0 mM 내지 10 mM의 최종 농도의 숙시네이트인 면역원성 조성물.
150. 제146 내지 제149 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 완충제가 약 5.0 mM의 최종 농도의 숙시네이트인 면역원성 조성물.
151. 제1 내지 제150 단락 중 어느 하나에 있어서, 염을 포함하는 면역원성 조성물.
152. 제151 단락에 있어서, 상기 염이 염화마그네슘, 염화칼륨, 염화나트륨 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
153. 제151 또는 제152 단락에 있어서, 상기 염이 염화나트륨인 면역원성 조성물.
154. 제151 내지 제153 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 염이 약 150 mM의 농도의 염화나트륨인 면역원성 조성물.
155. 제1 내지 제154 단락 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제를 포함하는 면역원성 조성물.
156. 제155 단락에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 85, 트리톤 N-1 01, 트리톤 X-100, 옥스톡시놀 40, 노녹시놀-9, 트리에탄올아민, 트리에탄올아민 폴리펩티드 올레에이트, 폴리옥시에틸렌-660 히드록시스테아레이트, 폴리옥시에틸렌-35-리시놀레에이트, 대두 레시틴 및 폴록사머로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
157. 제155 또는 제156 단락에 있어서, 상기 계면활성제가 군 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 85 및 폴록사머로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
158. 제155 내지 제157 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 80인 면역원성 조성물.
159. 제155 내지 제158 단락 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제가 적어도 0.0001% 내지 10% 중량/중량 (w/w)의 최종 농도의 폴리소르베이트 80인 면역원성 조성물.
160. 제155 내지 제159 단락 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제가 적어도 0.001% 내지 1% 중량/중량 (w/w)의 최종 농도의 폴리소르베이트 80인 면역원성 조성물.
161. 제155 내지 제160 단락 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제가 적어도 0.01% 내지 1% 중량/중량 (w/w)의 최종 농도의 폴리소르베이트 80인 면역원성 조성물.
162. 제155 내지 제161 단락 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제가 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 중량/중량 (w/w)의 최종 농도의 폴리소르베이트 80인 면역원성 조성물.
163. 제1 내지 제162 단락 중 어느 하나에 있어서, 5.5 내지 7.5의 pH를 갖는 면역원성 조성물.
164. 제1 내지 제163 단락 중 어느 하나에 있어서, 5.6 내지 7.0의 pH를 갖는 면역원성 조성물.
165. 제1 내지 제164 단락 중 어느 하나에 있어서, 5.8 내지 6.0의 pH를 갖는 면역원성 조성물.
166. (a) 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나의 상기 면역원성 조성물을 포함하는 제1 면역원성 조성물; 및 (b) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 제2 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
167. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
168. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
169. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
170. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
171. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
172. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
173. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
174. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
175. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
176. 제166 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 키트.
177. 제166 내지 제176 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
178. 제166 내지 제177 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
179. 제166 내지 제178 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6A 및 19A로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
180. 제166 내지 제179 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 3으로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
181. 제166 내지 제180 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
182. 제166 내지 제181 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
183. 제166 내지 제182 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 당접합체가 모두 개별적으로 CRM197에 접합된 것인 키트.
184. 제166 내지 제176 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 상기 당접합체가 개별적으로 PD에 접합된 것인 키트.
185. 제166 내지 제176 및 제184 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 상기 당접합체가 TT에 접합된 것인 키트.
186. 제166 내지 제176, 제184 및 제185 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 상기 당접합체가 DT에 접합된 것인 키트.
187. 제166 내지 제176 및 제184 내지 제186 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 상기 당접합체가 개별적으로 PD에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 상기 당접합체가 TT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 상기 당접합체가 DT에 접합된 것인 키트.
188. 제184 내지 제187 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 키트.
189. 제184 내지 제188 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 키트
190. 제166 내지 제189 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물인 키트.
191. 제166 내지 제190 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 10, 11, 12, 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물인 키트.
192. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 13-가 폐렴구균 접합체 조성물인 키트.
193. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
194. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
195. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 12-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 12종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체, CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
196. 제166 내지 제192 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 13-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 13종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
197. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
198. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
199. 제166 내지 제191 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 15종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 키트.
200. 제166 내지 제199 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물의 상기 당접합체가 모두 환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된 것인 키트.
201. 제166 내지 제200 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 각각의 용량이 각각의 혈청형의 폴리사카라이드를 1.0 μg 내지 10 μg 포함하는 것인 키트.
202. 제166 내지 제201 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 각각의 용량이 담체 단백질을 10 μg 내지 150 μg 포함하는 것인 키트.
203. 제166 내지 제202 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 각각의 용량이 담체 단백질을 약 15 μg, 약 16 μg, 약 17 μg, 약 18 μg, 약 19 μg, 약 20 μg, 약 21 μg, 약 22 μg, 약 23 μg, 약 24 μg, 약 25 μg, 약 26 μg, 약 27 μg, 약 28 μg, 약 29 μg, 약 30 μg, 약 31 μg, 약 32 μg, 약 33 μg, 약 34 μg, 약 35 μg, 약 36 μg, 약 37 μg, 약 38 μg, 약 39 μg, 약 40 μg, 약 41 μg, 약 42 μg, 약 43 μg, 약 44 μg, 약 45 μg, 약 46 μg, 약 47 μg, 약 48 μg, 약 49 μg 또는 약 50 μg 포함하는 것인 키트.
204. 제166 내지 제203 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 다른 병원체로부터의 적어도 1종의 항원을 추가로 포함하는 것인 키트.
205. 제166 내지 제204 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 것인 키트.
206. 제166 내지 제204 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 인산알루미늄, 황산알루미늄 및 수산화알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 것인 키트.
207. 제166 내지 제204 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 아주반트로서 인산알루미늄을 추가로 포함하는 것인 키트.
208. 제166 내지 제204 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 0.2 mg/mL 내지 0.3 mg/mL 추가로 포함하는 것인 키트.
209. 제166 내지 제204 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 약 0.25 mg/mL 추가로 포함하는 것인 키트.
210. 제166 내지 제209 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 완충제를 추가로 포함하는 것인 키트.
211. 제210 단락에 있어서, 상기 완충제가 약 3.5 내지 약 7.5의 pKa를 갖는 것인 키트.
212. 제210 또는 제211 단락에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트인 키트.
213. 제212 단락에 있어서, 상기 완충제가 약 5.0 mM의 최종 농도의 숙시네이트인 키트.
214. 제166 내지 제213 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 염을 추가로 포함하는 것인 키트.
215. 제214 단락에 있어서, 상기 염이 염화마그네슘, 염화칼륨, 염화나트륨 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
216. 제166 내지 제215 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 150 mM의 최종 농도의 염화나트륨을 포함하는 것인 키트.
217. 제166 내지 제216 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 계면활성제를 추가로 포함하는 것인 키트.
218. 제217 단락에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 80인 키트.
219. 제218 단락에 있어서, 폴리소르베이트 80의 최종 농도가 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% (w/w)인 키트.
220. 제166 내지 제219 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 5.8 내지 6.0의 pH를 갖는 것인 키트.
221. 제166 내지 제220 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 면역원성 조성물 및 상기 제2 면역원성 조성물이 개별 용기 내에 존재하는 것인 키트.
222. 제166 내지 제221 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 및 제2 면역원성 조성물이 액체 형태로 제제화된 것인 키트.
223. 제166 내지 제221 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 및 제2 면역원성 조성물이 동결건조 형태로 제제화된 것인 키트.
224. 제166 내지 제221 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 면역원성 조성물이 액체 형태이고, 상기 제2 면역원성 조성물이 동결건조 형태인 키트.
225. 제166 내지 제221 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 면역원성 조성물이 동결건조 형태이고, 상기 제2 면역원성 조성물이 액체 형태인 키트.
226. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물과 동시에, 공동으로, 병용으로 또는 순차적으로 투여되는 면역원성 조성물.
227. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물과의 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한 면역원성 조성물.
228. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 섹션 3에 개시된 면역원성 조성물 중 임의의 것과의 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한 면역원성 조성물.
229. 제226 내지 제228 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형으로부터의 적어도 1종의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
230. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
231. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
232. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
233. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
234. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
235. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
236. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
237. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
238. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
239. 제229 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
240. 제229 내지 제239 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
241. 제229 내지 제240 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
242. 제229 내지 제241 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6A 및 19A로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
243. 제229 내지 제242 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 3으로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
244. 제229 내지 제243 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
245. 제229 내지 제244 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
246. 제229 내지 제246 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 당접합체가 모두 개별적으로 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
247. 제229 내지 제239 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 상기 당접합체가 개별적으로 PD에 접합된 것인 면역원성 조성물.
248. 제229 내지 제239 및 제247 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 상기 당접합체가 TT에 접합된 것인 면역원성 조성물.
249. 제229 내지 제239, 제247 및 제248 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 상기 당접합체가 DT에 접합된 것인 면역원성 조성물.
250. 제229 내지 제239 및 제247 내지 제249 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 상기 당접합체가 개별적으로 PD에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 상기 당접합체가 TT에 접합되고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 상기 당접합체가 DT에 접합된 것인 면역원성 조성물.
251. 제247 내지 제250 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
252. 제247 내지 제251 단락 중 어느 하나에 있어서, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 상기 당접합체가 CRM197에 접합된 것인 면역원성 조성물.
253. 제226 내지 제252 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
254. 제226 내지 제253 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 10, 11, 12, 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
255. 제226 내지 제254 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 13, 14 또는 15-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
256. 제226 내지 제255 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 13-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
257. 제226 내지 제254 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
258. 제226 내지 제254 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 11-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 11종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
259. 제226 내지 제254 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 12-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 12종의 접합체는 개별적으로 PD에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F로부터의 당접합체, TT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 18C로부터의 당접합체, DT에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 19F로부터의 당접합체, CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체 및 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
260. 제226 내지 제256 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 13-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 13종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
261. 제226 내지 제255 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 22F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
262. 제226 내지 제255 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 14-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 14종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
263. 제226 내지 제255 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 15-가 폐렴구균 접합체 조성물이고, 여기서 상기 15종의 접합체는 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 22F 및 33F로부터의 당접합체로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
264. 제229 내지 제263 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물의 상기 당접합체가 모두 환원성 아미노화에 의해 담체 단백질에 접합된 것인 면역원성 조성물.
265. 제229 내지 제264 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 각각의 용량이 각각의 혈청형의 폴리사카라이드를 1 내지 10 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
266. 제229 내지 제265 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 각각의 용량이 담체 단백질을 10 μg 내지 150 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
267. 제229 내지 제266 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 각각의 용량이 담체 단백질을 약 15 μg, 약 16 μg, 약 17 μg, 약 18 μg, 약 19 μg, 약 20 μg, 약 21 μg, 약 22 μg, 약 23 μg, 약 24 μg, 약 25 μg, 약 26 μg, 약 27 μg, 약 28 μg, 약 29 μg, 약 30 μg, 약 31 μg, 약 32 μg, 약 33 μg, 약 34 μg, 약 35 μg, 약 36 μg, 약 37 μg, 약 38 μg, 약 39 μg, 약 40 μg, 약 41 μg, 약 42 μg, 약 43 μg, 약 44 μg, 약 45 μg, 약 46 μg, 약 47 μg, 약 48 μg, 약 49 μg 또는 약 50 μg 포함하는 것인 면역원성 조성물.
268. 제229 내지 제267 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 다른 병원체로부터의 항원을 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
269. 제229 내지 제268 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
270. 제229 내지 제268 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 인산알루미늄, 황산알루미늄 및 수산화알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아주반트를 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
271. 제229 내지 제268 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 아주반트로서 인산알루미늄을 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
272. 제229 내지 제268 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 0.2 mg/mL 내지 0.3 mg/mL 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
273. 제229 내지 제268 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 아주반트로서 인산알루미늄 형태로 원소 알루미늄을 약 0.25 mg/mL 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
274. 제229 내지 제273 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 완충제를 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
275. 제229 내지 제274 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 약 3.5 내지 약 7.5의 pKa를 갖는 완충제를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
276. 제274 또는 제275 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 상기 완충제가 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트인 면역원성 조성물.
277. 제274 내지 제276 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 상기 완충제가 약 5.0 mM의 최종 농도의 숙시네이트인 면역원성 조성물.
278. 제229 내지 제277 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 염을 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
279. 제229 내지 제278 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 상기 염이 염화마그네슘, 염화칼륨, 염화나트륨 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
280. 제229 내지 제179 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 150 mM의 최종 농도의 염화나트륨을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
281. 제229 내지 제280 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 계면활성제를 추가로 포함하는 것인 면역원성 조성물.
282. 제281 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물의 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 80인 면역원성 조성물.
283. 제281 또는 제282 단락에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물 중 폴리소르베이트 80의 최종 농도가 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% (w/w)인 면역원성 조성물.
284. 제229 내지 제283 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 면역원성 조성물이 5.8 내지 6.0의 pH를 갖는 것인 면역원성 조성물.
285. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 단일 용량 스케줄인 면역원성 조성물.
286. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 다중 용량 스케줄인 면역원성 조성물.
287. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
288. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
289. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
290. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
291. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 6개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
292. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
293. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
294. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
295. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 2개월 연령에 시작되는, 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
296. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 2개월 연령에 시작되는, 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
297. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에 투여되는 4 용량 백신으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
298. 제1 내지 제165 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종에 사용하기 위한 것으로 백신접종 스케줄이 제0일에 주어지는 프라임 용량 및 약 2 내지 약 24주 범위의 간격으로 주어지는 1회 이상의 부스터 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물.
299. 제166 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 동시, 공동, 병용 또는 순차적 투여를 위한 키트.
300. 제226 내지 제284 및 제299 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 동시 투여 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
301. 제300 단락에 있어서, 상기 동시 투여의 백신접종 스케줄이 단일 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
302. 제300 단락에 있어서, 상기 동시 투여의 백신접종 스케줄이 다중 용량 스케줄인 면역원성 조성물 또는 키트.
303. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
304. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
305. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
306. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
307. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄은 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
308. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 각각의 용량이 약 1, 2, 3 또는 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
309. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 1세 연령에서의 적어도 1회의 용량 (예를 들어, 1, 2 또는 3회 용량)에 이어서, 적어도 1회의 유아 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
310. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 2개월 연령에 시작되는, 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어지는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
311. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에 투여되는 일련의 4회 용량 백신으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
312. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 제0일에 주어지는 프라임 용량 및 약 2 내지 약 24주 범위의 간격, 바람직하게는 4-8주의 투여 간격으로 주어지는 1회 이상의 부스터 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
313. 제302 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 제0일에 주어지는 프라임 용량 및 약 3개월 후에 주어지는 부스터 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
314. 제226 내지 제284 및 제299 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 병용 투여 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
315. 제314 단락에 있어서, 상기 병용 투여의 백신접종 스케줄이 단일 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
316. 제314 단락에 있어서, 상기 병용 투여의 백신접종 스케줄이 다중 용량 스케줄인 면역원성 조성물 또는 키트.
317. 제226 내지 제284 및 제299 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 공동 투여 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
318. 제317 단락에 있어서, 상기 공동 투여의 백신접종 스케줄이 단일 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
319. 제317 단락에 있어서, 상기 공동 투여의 백신접종 스케줄이 다중 용량 스케줄인 면역원성 조성물 또는 키트.
320. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
321. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
322. 제315 또는 제318 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
323. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
324. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
325. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
326. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 1세 연령에서의 적어도 1회의 용량 (예를 들어, 1, 2 또는 3회 용량)에 이어서, 적어도 1회의 유아 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
327. 제316 내지 제319 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 2개월 연령에 시작되는, 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일)에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어지는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
328. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에 투여되는 일련의 4-용량 백신으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
329. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 제0일에 주어지는 프라임 용량 및 약 2 내지 약 24주 범위의 간격, 바람직하게는 4-8주의 투여 간격으로 주어지는 1회 이상의 부스터 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
330. 제316 또는 제319 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 제0일에 주어지는 프라임 용량 및 약 3개월 후에 주어지는 부스터 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
331. 제226 내지 제284 및 제299 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 면역원성 조성물의 순차적 투여 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
332. 제331 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
333. 제331 또는 제332 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 2, 3 또는 4회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
334. 제331 내지 제333 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
335. 제331 내지 제333 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
336. 제331 내지 제335 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어지는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
337. 제331 내지 제335 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
338. 제331 내지 제338 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 용량이 1세 연령에 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
339. 제331 내지 제338 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 용량이 1세 연령에 투여되고, 제2 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
340. 제339 단락에 있어서, 상기 유아 용량이 12-18개월 연령에 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
341. 제332 또는 제333 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
342. 제341 단락에 있어서, 상기 스케줄이 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
343. 제341 단락에 있어서, 상기 스케줄이 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
344. 제341 내지 제343 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 용량이 1세 연령에 투여되고, 제3 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
345. 제341 내지 제344 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 용량이 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 제3 용량이 12-18개월 연령에서의 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
346. 제341 내지 제345 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
347. 제341 내지 제345 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
348. 제341 내지 제345 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
349. 제341 내지 제345 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
350. 제341 내지 제345 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 및 제3 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
351. 제341 내지 제345 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 및 제3 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
352. 제332 또는 제333 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 4회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
353. 제352 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 용량이 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리되고, 이어서 제4 용량이 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후인 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
354. 제352 또는 제353 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고, 이어서 제4 용량이 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후인 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
355. 제352 내지 제354 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2 및 제3 용량이 1세 연령에 투여되고, 제4 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
356. 제352 내지 제355 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2 및 제3 용량이 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 용량들 사이에 28-56일), 제4 용량이 12-18개월 연령에서의 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
357. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1, 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
358. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1, 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
359. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
360. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
361. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
362. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
363. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
364. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
365. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
366. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
367. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
368. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
369. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
370. 제352 내지 제356 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
371. 제331 또는 제332 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 5회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
372. 제371 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 3개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
373. 제371 또는 제372 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3 및 제4 용량이 1세 연령에 투여되고, 제5 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
374. 제371 또는 제372 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물 (1st IC) 및 제2 면역원성 조성물 (2nd IC)이 하기 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트:
Figure pat00012
375. 제331 또는 제332 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 6회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
376. 제375 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
377. 제375 또는 제376 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 용량이 1세 연령에 투여되고, 제6 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
378. 제375 내지 제377 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 및 제2 면역원성 조성물이 제374 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제6 용량이 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
379. 제378 단락에 있어서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제6 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
380. 제378 단락에 있어서, 본 발명에 따른 제2 면역원성 조성물이 제6 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
381. 제331 또는 제332 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 7회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
382. 제381 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제7 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
383. 제381 내지 제382 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 용량이 1세 연령에 투여되고, 제7 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
384. 제381 내지 제383 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 및 제2 면역원성 조성물이 제379 또는 제380 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제7 용량이 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
385. 제384 단락에 있어서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제7 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
386. 제384 단락에 있어서, 본 발명에 따른 제2 면역원성 조성물이 제7 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
387. 제331 또는 제332 단락에 있어서, 상기 순차적 투여의 백신접종 스케줄이 일련의 8회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
388. 제387 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제8 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
389. 제387 또는 제388 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 용량이 1세 연령에 투여되고, 제7 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
390. 제387 내지 제389 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 및 제2 면역원성 조성물이 제385 또는 제386 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제8 용량이 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
391. 제390 단락에 있어서, 본 발명에 따른 제1 면역원성 조성물이 제8 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
392. 제390 단락에 있어서, 본 발명에 따른 제2 면역원성 조성물이 제8 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
393. 제331 내지 제333 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종 스케줄이
(a) 제1 면역원성 조성물 및
(b) 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여
의 순차적 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
394. 제393 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 일련의 2회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
395. 제393 내지 제395 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
396. 제393 내지 제396 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
397. 제393 내지 제396 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1로 투여되고, 제1 면역원성 조성물에 제2로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
398. 제393 내지 제398 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 투여가 1세 연령에 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
399. 제393 내지 제398 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 투여가 1세 연령에 투여되고, 제2 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
400. 제399 단락에 있어서, 상기 유아 투여가 12-18개월 연령에 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
401. 제393 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 일련의 3회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
402. 제401 단락에 있어서, 상기 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
403. 제401 또는 제402 단락에 있어서, 제1 및 제2 투여가 1세 연령에 투여되고, 제3 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
404. 제401 내지 제403 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 투여가 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제3 투여가 12-18개월 연령에서의 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
405. 제401 내지 제404 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
406. 제401 내지 제404 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
407. 제401 내지 제404 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
408. 제401 내지 제404 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동이 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
409. 제401 내지 제404 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 및 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
410. 제401 내지 제404 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 및 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
411. 제393 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 일련의 4회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
412. 제411 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리되고, 이어서 제4 투여가 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후인 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
413. 제411 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고, 이어서 제4 투여가 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후인 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
414. 제411 내지 제413 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 1세 연령에 투여되고, 제4 투여가는 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
415. 제411 내지 제414 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제4 투여가 12-18개월 연령에서의 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
416. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1, 제2 및 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
417. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1, 제2, 및 제3 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
418. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
419. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
420. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
421. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
422. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2, 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
423. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2, 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
424. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
425. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
426. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
427. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
428. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 및 제3 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
429. 제411 내지 제415 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 및 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
430. 제393 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 5회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
431. 제430 단락에 있어서, 스케줄이 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 3개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
432. 제430 또는 제431 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3 및 제4 투여가 1세 연령에 투여되고, 제5 투여가 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
433. 제430 내지 제432 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 (1st IC) 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여 (1st IC/2nd IC)가 하기 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트:
Figure pat00013
434. 제393 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 6회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
435. 제434 단락에 있어서, 스케줄이 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
436. 제434 또는 제435 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 투여가 1세 연령에 투여되고, 제6 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
437. 제434 내지 제436 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제433 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제6 투여가 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
438. 제437 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제6 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
439. 제437 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제6 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
440. 제393 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 7회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
441. 제440 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제7 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
442. 제440 또는 제441 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 투여가 1세 연령에 투여되고, 제7 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
443. 제440 내지 제442 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여가 제438 또는 제439 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제7 투여가 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
444. 제443 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제7 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
445. 제443 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제7 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
446. 제393 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 8회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
447. 제446 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제8 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
448. 제446 또는 제447 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 투여가 1세 연령에 투여되고, 제7 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
449. 제446 내지 제448 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 면역원성 조성물 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제444 또는 제445 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제8 투여가 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
450. 제449 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제8 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
451. 제449 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제8 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
452. 제331 내지 제333 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종 스케줄이
(a) 제2 면역원성 조성물 및
(b) 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여
의 순차적 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
453. 제452 단락에 있어서, 상기 스케줄이 제394 내지 제451 단락 중 어느 하나에 따른 스케줄 중 어느 하나이고, 여기서 (a)의 상기 제2 면역원성 조성물의 투여는 상기 단락에서 (a)의 제1 면역원성 조성물의 투여를 대체하는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
454. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
455. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신으로서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
456. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키는 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
457. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태를 예방하는 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
458. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물을 전신 또는 점막 경로를 통해 투여하는 것에 의해, 폐렴구균 감염에 영향받기 쉬운 인간을 보호하거나 치료하는 방법에 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
459. 제458 단락에 있어서, 상기 면역원성 조성물(들)이 근육내, 복강내, 피내 또는 피하 경로에 의해 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
460. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신으로서 사용하기 위한 것으로 백신접종될 대상체가 1세 연령 미만의 인간인 면역원성 조성물 또는 키트.
461. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신으로서 사용하기 위한 것으로 백신접종될 대상체가 2세 연령 미만의 인간인 면역원성 조성물 또는 키트.
462. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신으로서 사용하기 위한 것으로 백신접종될 대상체가 50세 연령 이상의 인간 성인인 면역원성 조성물 또는 키트.
463. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신으로서 사용하기 위한 것으로 백신접종될 대상체가 면역손상된 인간인 면역원성 조성물 또는 키트.
464. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 단일 용량 스케줄로 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
465. 제1 내지 제225 단락 중 어느 하나에 있어서, 다중 용량 스케줄로 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 키트.
466. 제465 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
467. 제465 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
468. 제465 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
469. 제465 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 1세 연령에서의 적어도 1회의 용량에 이어서, 적어도 1회의 유아 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
470. 제465 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 2개월 연령에 시작되는, 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2 또는 3회 용량에 이어서, 12-18개월 연령에서의 유아 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
471. 제465 단락에 있어서, 상기 다중 용량 스케줄이 2, 4, 6, 및 12-15개월 연령에 투여되는 일련의 4회 용량 백신으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
472. 제331 내지 제333 단락 중 어느 하나에 있어서, 백신접종 스케줄이
(a) 제2 면역원성 조성물 및
(b) 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여
의 순차적 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
473. 제472 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 2회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
474. 제472 또는 제473 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
475. 제472 내지 제474 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
476. 제472 내지 제474 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
477. 제472 내지 제476 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 투여가 1세 연령에 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
478. 제472 내지 제476 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 투여가 1세 연령에 투여되고, 제2 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
479. 제478 단락에 있어서, 상기 유아 투여가 12-18개월 연령에 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
480. 제472 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 3회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
481. 제480 단락에 있어서, 상기 스케줄이 약 1개월 내지 약 12개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
482. 제480 또는 제481 단락에 있어서, 제1 및 제2 투여가 1세 연령에 투여되고, 제3 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
483. 제480 내지 제482 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 투여가 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제3 투여가 12-18개월 연령에서의 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
484. 제480 내지 제483 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
485. 제480 내지 제483 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
486. 제480 내지 제483 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
487. 제480 내지 제483 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동이 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
488. 제480 내지 제483 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 및 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
489. 제480 내지 제483 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 및 제3 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
490. 제472 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 4회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
491. 제490 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 약 1개월 내지 약 4개월의 간격으로 분리되고, 이어서 제4 투여가 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후인 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
492. 제490 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고, 이어서 제4 투여가 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후인 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
493. 제490 내지 제492 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 1세 연령에 투여되고, 제4 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
494. 제490 내지 제493 단락 중 어느 하나에 있어서, 제1, 제2 및 제3 투여가 2개월 연령에 시작되어 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리되고 (예를 들어, 투여들 사이에 28-56일), 제4 투여가 12-18개월 연령에서의 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
495. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1, 제2 및 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
496. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1, 제2, 및 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
497. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
498. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
499. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
500. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 및 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
501. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2, 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
502. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2, 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
503. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
504. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
505. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
506. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제3 및 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
507. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제2 및 제3 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
508. 제490 내지 제494 단락 중 어느 하나에 있어서, 병용 또는 공동 투여가 제1 투여로 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 및 제3 투여로 투여되고, 병용 또는 공동 투여가 제4 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
509. 제472 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 5회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
510. 제509 단락에 있어서, 스케줄이 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 3개월의 간격으로 분리된 일련의 4회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제5 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
511. 제509 또는 제510 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3 및 제4 투여가 1세 연령에 투여되고, 제5 투여가 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
512. 제509 내지 제511 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물 (2nd IC) 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여 (1st IC/2nd IC)가 하기 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트:
Figure pat00014
513. 제472 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 6회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
514. 제513 단락에 있어서, 스케줄이 각각의 투여가 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 5회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제6 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
515. 제513 또는 제514 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 투여가 1세 연령에 투여되고, 제6 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
516. 제513 내지 제515 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제512 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제6 투여가 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
517. 제516 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제6 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
518. 제516 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제6 투여로 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
519. 제472 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 일련의 7회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
520. 제519 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 6회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제7 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
521. 제519 또는 제520 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 투여가 1세 연령에 투여되고, 제7 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
522. 제519 내지 제521 단락 중 어느 하나에 있어서, seconnd 면역원성 조성물 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 투여가 제517 또는 제518 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제7 투여가 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
523. 제522 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제7 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
524. 제522 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제7 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
525. 제472 단락에 있어서, 백신접종의 스케줄이 일련의 8회 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
526. 제525 단락에 있어서, 백신접종 스케줄이 각각의 투여가 약 1개월의 간격으로 분리된 일련의 7회 투여에 이어서, 제1 투여의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제8 투여로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
527. 제525 또는 제526 단락에 있어서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 투여가 1세 연령에 투여되고, 제7 투여가 유아 투여인 면역원성 조성물 또는 키트.
528. 제525 내지 제527 단락 중 어느 하나에 있어서, 제2 면역원성 조성물 및 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제523 또는 제524 단락의 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되고, 이어서 제8 투여가 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
529. 제528 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제8 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
530. 제528 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물과 제2 면역원성 조성물의 병용 또는 공동 투여가 제8 투여로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
531. 제352 단락에 있어서, 제1 및 제2 용량이 1세 연령에 투여되고, 제3 및 제4 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
532. 제352 단락에 있어서, 스케줄이 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 2회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제3 용량 및 제3 용량의 약 1개월 내지 약 2개월 후의 제4 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
533. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1, 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
534. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1, 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
535. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
536. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
537. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
538. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 및 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
539. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
540. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2, 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
541. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
542. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
543. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
544. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제3 및 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
545. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
546. 제531 또는 제532 단락에 있어서, 제2 면역원성 조성물이 제1 용량으로서 투여되고, 제1 면역원성 조성물이 제2 및 제3 용량으로서 투여되고, 제2 면역원성 조성물이 제4 용량으로서 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
547. 제371 단락에 있어서, 제1, 제2 및 제3 용량이 1세 연령에 투여되고, 제4 및 제5 용량이 유아 용량인 면역원성 조성물 또는 키트.
548. 제371 단락에 있어서, 스케줄이 각각의 용량이 약 1개월 내지 약 2개월의 간격으로 분리된 일련의 3회 용량에 이어서, 제1 용량의 약 10개월 내지 약 13개월 후의 제4 용량 및 제4 용량의 약 1개월 내지 약 2개월 후의 제5 용량으로 이루어진 것인 면역원성 조성물 또는 키트.
549. 제547 또는 제548 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물 (1st IC) 및 제2 면역원성 조성물 (2nd IC)이 하기 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트:
Figure pat00015
550. 제547 또는 제548 단락에 있어서, 제1 면역원성 조성물 (1st IC) 및 제2 면역원성 조성물 (2nd IC)이 하기 스케줄 중 임의의 것에 따라 투여되는 것인 면역원성 조성물 또는 키트:
Figure pat00016
본원에 사용된 용어 "약"은 언급된 농도 범위, 시간 프레임, 분자량, 온도 또는 pH와 같은, 통계상 의미있는 범위 내의 값을 의미한다. 이러한 범위는 주어진 값 또는 범위의 한 자릿수 내, 전형적으로 20% 내, 보다 전형적으로 10% 내, 및 보다 더 전형적으로 5% 내 또는 1% 내일 수 있다. 때때로, 이러한 범위는 주어진 값 또는 범위의 측정 및/또는 결정에 사용된 전형적인 표준 방법의 실험 오차 내일 수 있다. 용어 "약"에 의해 포괄되는 허용가능한 편차는 연구 중인 특정한 시스템에 좌우될 것이고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인지될 수 있다. 범위가 본 출원 내에서 인용될 때마다, 범위 내의 모든 정수가 또한 본 개시내용의 실시양태로서 고려된다.
본원에서 용어 "포함하는", "포함하다" 및 "포함한다"는 본 발명자들에 의해 모든 경우에 각각 용어 "로 본질적으로 이루어진", "로 본질적으로 이루어지다", "로 본질적으로 이루어진다", "로 이루어진', "로 이루어지다' 및 "로 이루어진다'에 의해 임의적으로 대체가능한 것으로 의도된다.
각각이 본원에서 상호교환가능하게 사용된 "면역원성 양", "면역학적 유효량", "치료 유효량", "예방 유효량" 또는 "용량"은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 검정에 의해 측정된 바와 같은, 세포성 (T 세포) 또는 체액성 (B 세포 또는 항체) 반응 중 하나, 또는 둘 다의 면역 반응을 도출하기에 충분한 항원 또는 면역원성 조성물의 양을 지칭한다.
본 특허 명세서 내에서 언급되는 모든 참고문헌 및 특허 출원은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 첨부된 실시예에 의해 예시된다. 하기 실시예는 달리 상세하게 기재된 경우를 제외하고는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되고 상용적인 표준 기술을 사용하여 수행된다. 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 본 발명을 제한하지 않는다.
실시예
실시예 1. eTEC 연결된 당접합체의 제조를 위한 일반적 공정
사카라이드의 활성화 및 시스타민 디히드로클로라이드에 의한 티올화
사카라이드를 무수 디메틸술폭시드 (DMSO) 중에 재구성한다. 용액의 수분 함량은 칼 피셔 (KF) 분석에 의해 결정하고, 0.1 내지 0.4%, 전형적으로 0.2%의 수분 함량에 도달하도록 조정한다.
활성화를 개시하기 위해, 1,1'-카르보닐-디-1,2,4-트리아졸 (CDT) 또는 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI)의 용액을 DMSO 중에서 100 mg/mL의 농도로 새롭게 제조한다. 사카라이드를 다양한 양의 CDT/CDI (1 - 10 몰 당량)로 활성화시키고, 23 ± 2℃에서 1시간 동안 반응이 진행되도록 한다. 활성화 수준은 HPLC에 의해 결정할 수 있다. 시스타민 디히드로클로라이드를 무수 DMSO 중에서 50 mg/mL의 농도로 새롭게 제조한다. 활성화된 사카라이드를 시스타민 디히드로클로라이드 1 몰 당량 (mol. eq.)과 반응시킨다. 대안적으로, 활성화된 사카라이드를 시스테아민 히드로클로라이드 1 mol. eq.과 반응시킨다. 티올화 반응이 23 ± 2℃에서 21 ± 2시간 동안 진행되도록 하여 티올화된 사카라이드를 생성한다. CDT/CDI의 첨가된 양에 의해 티올화 수준을 결정한다.
100 mM 사붕산나트륨, pH 9.0 용액을 첨가하여 활성화 반응 용액 중 잔류 CDT/CDI를 켄칭한다. 사붕산염의 첨가된 양을 결정하고 최종 수분 함량이 총 수성의 최대 1-2%가 되도록 조정하기 위한 계산을 수행한다.
활성화된 티올화된 사카라이드의 환원 및 정제
티올화된 사카라이드 반응 혼합물을 0.9% 염수, pH 6.0 중의 사전-냉각된 5 mM 숙신산나트륨에 첨가하여 10-배 희석하고, 5 μm 필터를 통해 여과한다. WFI의 40-배 정용부피에 대해 티올화된 사카라이드의 투석여과를 수행한다. 보유물에 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액, 1 - 5 mol. eq.를, 10% 부피의 0.1M 인산나트륨 완충제, pH 6.0에 의한 희석 후 첨가한다. 이러한 환원 반응이 5 ± 3℃에서 20 ± 2시간 동안 진행되도록 한다. 활성화된 티올화된 사카라이드의 정제는 바람직하게는, 사전-냉각된 10 mM 일염기성 인산나트륨, pH 4.3에 대한 한외여과/투석여과에 의해 수행한다. 대안적으로, 티올화된 사카라이드를 표준 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 절차 또는 이온 교환 크로마토그래피 방법에 의해 정제한다. 활성화된 티올화된 사카라이드 보유물의 분취물을 추출하여 사카라이드 농도 및 티올 함량 (엘만(Ellman)) 검정을 결정한다.
활성화된 티올화된 사카라이드의 대안적 환원 및 정제
상기 기재된 정제 절차에 대한 대안으로서, 활성화된 티올화된 사카라이드를 또한 하기와 같이 정제하였다.
티올화된 사카라이드 반응 혼합물에 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액, 5 - 10 mol. eq.를 첨가하고, 23 ± 2℃에서 3 ± 1시간 동안 진행되도록 하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0.9% 염수, pH 6.0 중의 사전-냉각된 5 mM 숙신산나트륨에 첨가하여 5-배 희석하고, 5 μm 필터를 통해 여과하였다. 사전-냉각된 10 mM 일염기성 인산나트륨, pH 4.3의 40-배 정용부피를 사용하여 티올화된 사카라이드의 투석여과를 수행하였다. 활성화된 티올화된 사카라이드 보유물의 분취물을 추출하여 사카라이드 농도 및 티올 함량 (엘만) 검정을 결정하였다.
브로모아세틸화 담체 단백질의 활성화 및 정제
담체 단백질의 유리 아미노 기를 브로모아세틸화제, 예컨대 브로모아세트산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (BAANS), 브로모아세틸브로마이드, 또는 또 다른 적합한 시약과 반응시켜 브로모아세틸화한다.
담체 단백질 (0.1 M 인산나트륨, pH 8.0 ± 0.2 중)을 먼저, 활성화 전 8 ± 3℃에서 약 pH 7로 유지한다. 단백질 용액에 스톡 디메틸술폭시드 (DMSO) 용액 (20 mg/mL)으로서 브로모아세트산의 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (BAANS)를 0.25-0.5 BAANS:단백질 (w/w)의 비로 첨가한다. 반응물을 5 ± 3℃에서 30 - 60분 동안 온화하게 혼합한다. 생성된 브로모아세틸화 (활성화) 단백질을, 예를 들어 10 mM 포스페이트 (pH 7.0) 완충제를 사용하여 10 kDa MWCO 막을 사용하여 한외여과/투석여과에 의해 정제한다. 정제 후, 브로모아세틸화 담체 단백질의 단백질 농도를 로우리 단백질 검정에 의해 평가한다.
억제된 전도성 검출 (이온 크로마토그래피)과 커플링된 이온-교환 액체 크로마토그래피에 의한 총 브로마이드 검정에 의해 활성화 정도를 결정한다. 활성화된 브로모아세틸화 단백질 상의 결합된 브로마이드를 검정 샘플 제제 중의 단백질로부터 절단하고, 존재할 수 있는 모든 유리 브로마이드와 함께 정량화한다. 단백질 상의 임의의 나머지 공유 결합된 브로마이드는 알칼리 2-메르캅토에탄올 중 샘플을 가열함으로써 이온 브로마이드로의 전환에 의해 방출시킨다.
브모로아세틸화 CRM197의 활성화 및 정제
CRM197을 10 mM 포스페이트 완충된 0.9% NaCl pH 7 (PBS)을 사용하여 5 mg/mL로 희석한 다음, 1 M 원액을 사용하여 0.1 M NaHCO3, pH 7.0을 제조하였다. 20 mg/mL DMSO의 BAANS 원액을 사용하여 CRM197 : BAANS 비 1 : 0.35 (w:w)로 BAANS를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3℃ 내지 11℃에서 30분-1시간 동안 인큐베이션한 다음, 10K MWCO 막 및 10mM 인산나트륨/0.9% NaCl, pH 7.0을 사용하여 한외여과/투석여과에 의해 정제하였다. 정제된 활성화된 CRM197을 로우리 검정에 의해 검정하여 단백질 농도를 결정한 다음, PBS를 사용하여 5 mg/mL로 희석하였다. 동결보호제로서 수크로스를 5% wt/vol로 첨가하고, 활성화된 단백질을 동결시키고, 접합을 위해 필요할 때까지 -25℃에서 저장하였다.
CRM197의 리신 잔기의 브로모아세틸화는 매우 일관되어, 이용가능한 39개의 리신으로부터 15 내지 25개의 리신이 활성화되었다. 상기 반응은 고수율의 활성화된 단백질을 생산하였다.
브로모아세틸화된 담체 단백질에의 활성화된 티올화된 사카라이드의 접합
접합 반응을 시작하기 전에, 반응 용기를 5℃로 사전-냉각시킨다. 이어서 브로모아세틸화된 담체 단백질 및 활성화된 티올화된 사카라이드를 첨가하고, 150-200 rpm의 교반 속도로 혼합한다. 사카라이드/단백질 투입 비는 0.9 ± 0.1이다. 1 M NaOH 용액을 사용하여 반응 pH를 8.0 ± 0.1로 조정한다. 접합 반응은 5℃에서 20 ± 2시간 동안 진행되도록 한다.
잔류 반응성 관능기의 캡핑
담체 단백질 상의 미반응 브로모아세틸화 잔기는 캡핑 시약으로서 2 mol. eq.의 N-아세틸-L-시스테인과 5℃에서 3시간 동안 반응시킴으로써 켄칭한다. 잔류 유리 술프히드릴 기는 4 mol. eq.의 아이오도아세트아미드 (IAA)를 사용하여 5℃에서 20시간 동안 캡핑한다.
eTEC-연결된 당접합체의 정제
접합 반응 (IAA-캡핑-후) 혼합물을 0.45 μm 필터를 통해 여과한다. 당접합체의 한외여과/투석여과를 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수, pH 6.0에 대해 수행한다. 이어서, 당접합체 보유물을 0.2 μm 필터를 통해 여과한다. 검정을 위해 당접합체의 분취물을 추출한다. 나머지 당접합체를 5℃에서 저장한다.
실시예 2. Pn-33F eTEC 접합체의 제조
활성화 공정
Pn33F 폴리사카라이드의 활성화
Pn-33F 폴리사카라이드를 500 mM의 1,2,4-트리아졸 (WFI 중)과 배합하여 폴리사카라이드 그램당 10 그램의 트리아졸을 수득하였다. 혼합물을 드라이 아이스-에탄올 조에서 쉘-냉동시킨 다음, 동결건조시켰다. 동결건조된 33F 폴리사카라이드를 무수 디메틸술폭시드 (DMSO)에 재구성하였다. 동결건조된 33F/DMSO 용액의 수분 함량을 칼 피셔 (KF) 분석에 의해 결정하였다. WFI를 33F/DMSO 용액에 첨가함으로써 수분 함량을 조정하여 0.2%의 수분 함량에 도달하게 하였다.
활성화를 개시하기 위해, 1,1'-카르보닐-디-1,2,4-트리아졸 (CDT)을 DMSO 용액 중 100 mg/mL로서 신선하게 제조하였다. 티올화 단계 전에 다양한 양의 CDT를 사용하여 Pn33F 폴리사카라이드를 활성화하였다. CDT 활성화는 23 ± 2℃에서 1시간 동안 수행하였다. 활성화 수준은 HPLC (A220/A205)에 의해 결정하였다. 사붕산나트륨, 100mM, pH 9.0 용액을 첨가하여 활성화 반응 용액 중 임의의 잔류 CDT를 켄칭하였다. 사붕산염의 첨가된 양을 결정하고 최종 수분 함량이 총 수성의 1.2%가 되도록 하기 위한 계산을 수행한다. 반응은 23 ± 2℃에서 1시간 동안 진행되도록 하였다.
활성화된 Pn-33F 폴리사카라이드의 티올화
시스타민-디히드로클로라이드를 무수 DMSO 중에서 새롭게 제조하고, 1 mol. eq.의 시스타민 디히드로클로라이드를 활성화된 폴리사카라이드 반응 용액에 첨가하였다. 반응이 23 ± 2℃에서 21 ± 3시간 동안 진행되도록 하였다. 티올화된 사카라이드 용액을 0.9% 염수, pH 6.0 중의 사전-냉각된 5 mM 숙신산나트륨에 첨가하여 10-배 희석하였다. 희석된 반응 용액을 5 μm 필터를 통해 여과하였다. 주사용수 (WFI)를 사용하여, 100K MWCO 한외여과 막 카세트를 사용하여 티올화 Pn-33F 폴리사카라이드의 투석여과를 수행하였다.
활성화된 티올화 Pn-33F 폴리사카라이드의 환원 및 정제
보유물에 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액, 5 mol. eq.를, 10% 부피의 0.1 M 인산나트륨 완충제, pH 6.0에 의한 희석 후 첨가하였다. 이러한 환원 반응이 23 ± 2℃에서 2 ± 1시간 동안 진행되도록 하였다. 티올화 33F 폴리사카라이드의 투석여과는 100K MWCO 한외여과 막 카세트를 사용하여 수행하였다. 사전-냉각된 10 mM 인산나트륨, pH 4.3에 대해 투석여과를 수행하였다. 사카라이드 농도 및 티올 (엘만) 검정 둘 다를 위해 티올화 33F 폴리사카라이드 보유물을 추출하였다.
활성화된 티올화 Pn-33F 폴리사카라이드의 대안적 환원 및 정제
상기 기재된 정제 절차에 대한 대안으로서, 33F 활성화된 티올화된 사카라이드를 또한 하기와 같이 정제하였다.
티올화된 사카라이드 반응 혼합물에 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액, 5 mol. eq.를 첨가하고, 23 ± 2℃에서 3 ± 1시간 동안 진행되도록 하였다. 이어서 반응 혼합물을 0.9% 염수, pH 6.0 중의 사전-냉각된 5 mM 숙신산나트륨에 첨가하여 5-배 희석하고, 5 μm 필터를 통해 여과하였다. 100K MWCO 한외여과 막 카세트를 사용하여 40-배 정용부피의 사전-냉각된 10 mM 일염기성 인산나트륨, pH 4.3을 사용하여 티올화된 사카라이드의 투석여과를 수행하였다. 사카라이드 농도 및 티올 (엘만) 검정 둘 다를 위해 티올화 33F 폴리사카라이드 보유물을 추출하였다. 활성화 공정의 흐름도를 도 8(A)에 제공한다.
접합 공정
티올화 Pn-33F 폴리사카라이드의 브로모아세틸화된 CRM197에의 접합
CRM197 담체 단백질을 실시예 1에 기재된 바와 같이 브로모아세틸화에 의해 개별적으로 활성화시킨 다음, 접합 반응을 위해 활성화된 Pn-33F 폴리사카라이드와 반응시켰다. 접합 반응을 시작하기 전에, 반응 용기를 5℃로 사전-냉각시켰다. 브로모아세틸화된 CRM197 및 티올화 33F 폴리사카라이드를 150-200 rpm의 교반 속도로 반응 용기 내에서 함께 혼합하였다. 사카라이드/단백질 투입 비는 0.9 ± 0.1이었다. 반응 pH를 8.0 - 9.0으로 조정하였다. 접합 반응은 5℃에서 20 ± 2시간 동안 진행되도록 하였다.
브로모아세틸화 CRM197 및 티올화 Pn33F 폴리사카라이드 상의 반응성 기의 캡핑
CRM197 단백질 상의 미반응 브로모아세틸화 잔기는 2 mol. eq.의 N-아세틸-L-시스테인과 5℃에서 3시간 동안 반응시킴으로써 캡핑하고, 이어서 5℃에서 20시간 동안 4 mol. eq.의 아이오도아세트아미드 (IAA)에 의해 티올화 33F-폴리사카라이드의 임의의 잔류 유리 술프히드릴 기를 캡핑하였다.
eTEC-연결된 Pn-33F 당접합체의 정제
접합 용액을 0.45 μm 또는 5 μm 필터를 통해 여과하였다. 33F 당접합체의 투석여과를, 300K MWCO 한외여과 막 카세트를 사용하여 수행하였다. 투석여과를 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수, pH 6.0에 대해 수행하였다. 이어서, Pn-33F 당접합체 300K 잔류물을 0.22 μm 필터를 통해 여과하고, 5℃에서 저장하였다. 접합 공정의 흐름도를 도 8(B)에 제공한다.
결과
Pn-33F eTEC 당접합체의 여러 배치에 대한 반응 파라미터 및 특징화 데이터를 표 1에 제시한다. 시스타민 디히드로클로라이드에 의한 CDT 활성화-티올화는 63% 내지 90% 사카라이드 수율 및 <1% 내지 13% 유리 사카라이드를 갖는 당접합체를 생성하였다.
표 1. Pn33F eTEC 접합체의 실험 파라미터 및 특징화 데이터
Figure pat00017
N/A= 이용가능하지 않음
CRM197에 대한 Pn-33F eTEC 당접합체의 OPA 역가
마우스에서의 Pn-33F OPA 역가를 표준 조건 (10A 및 22F 접합체에 대해 하기 기재된 OPA 절차와 유사함) 하에 결정하였다. 4주 및 7주의 OPA 역가 (95% CI를 갖는 GMT)를 표 2에 제시하며, 이는 혈청형 33F Pn 당접합체가 뮤린 면역원성 모델에서 OPA 역가를 도출한다는 것을 입증하였다.
표 2. Pn-33F OPA 역가 (95% CI를 갖는 GMT)
Figure pat00018
실시예 3. 추가의 Pn-33F eTEC 접합체의 제조
실시예 2에 기재된 공정을 사용하여 추가의 Pn-33F eTEC 접합체를 생성하였다. 이들 추가의 배치의 Pn-33F eTEC 당접합체에 대한 반응 파라미터 및 특징화 데이터를 표 3에 제시한다.
표 3. 추가의 Pn33F eTEC 접합체의 실험 파라미터 및 특징화 데이터
Figure pat00019
LOQ=정량 한계; N/A= 이용가능하지 않음.
상기 및 표 3에 제시된 바와 같이, 상기 eTEC 접합을 사용하여 여러 Pn-33F 접합체를 수득하였다. eTEC 화학은 고수율, 낮은 % 유리 사카라이드 및 높은 접합도 (접합된 리신)를 갖는 접합체의 제조를 가능하게 하였다. 추가적으로, eTEC 접합 공정을 사용하여 80% 초과의 아세틸 관능기를 보존하는 것이 가능하였다.
실시예 4. Pn-33F eTEC 당접합체 안정성의 평가: %유리 사카라이드 추세
접합체 배치 33F-2B (표 1 참조)의 분취물을 폴리프로필렌 튜브 내로 분배하고, 각각 4℃, 25℃ 및 37℃에서 저장하고, %유리 사카라이드 추세에 대해 모니터링하였다. 데이터 (% 유리 사카라이드)를 표 4에 제시한다. 이 표에 제시된 바와 같이, % 유리 사카라이드에는 어떠한 유의한 변화도 존재하지 않았다.
표 4. 4℃, 25℃ 및 37℃에서의 Pn-33F eTEC 당접합체에 대한 % 유리 사카라이드 안정성
Figure pat00020
wk= 주; M=개월; N/A= 이용가능하지 않음.
또 다른 접합체 로트 (배치 33F-3C)의 가속 안정성을 또한, 37℃에서 최대 1개월 수행하였다. 표 5에 제시된 바와 같이, 최대 1개월까지 37℃에서 % 유리 사카라이드에 대해 어떠한 유의한 변화도 존재하지 않았다.
표 5. 37℃에서의 Pn-33F eTEC 당접합체에 대한 % 유리 사카라이드 안정성
Figure pat00021
eTEC 접합체의 안정성을 추가로 확인하기 위해, 4℃에서 저장된 추가의 접합체 배치 (33F-3C 및 33F-5E (표 1 참조))를 %유리 사카라이드에서의 잠재적 추세에 대해 대략 최대 1년까지 모니터링하였다. 표 6에 제시된 바와 같이, 대략 최대 1년까지 연장된 기간 동안 4℃에서 저장된 접합체에 대해 % 유리 사카라이드 수준에서 어떠한 유의한 변화도 존재하지 않았다.
표 6. 4℃에서의 Pn-33F eTEC 당접합체에 대한 % 유리 사카라이드 안정성
Figure pat00022
M=개월; N/A= 이용가능하지 않음.
33F eTEC 화학에 의해 생성된 혈청형 33F 접합체는, 다양한 온도에서 유리 사카라이드 추세에 의해 모니터링된 바와 같이, 인지가능한 분해 없이 안정한 것으로 입증되었다 (실시간 및 가속).
실시예 5. CRM197에의 Pn-8 접합체의 제조
Pn-8 RAC/DMSO 당접합체의 제조
동결된 폴리사카라이드를 해동시키고, 반응 용기로 옮겼다. 2 M 아세트산 및 WFI (주사용수)를 폴리사카라이드 용액에 첨가하여 약 2.5 g/L의 최종 폴리사카라이드 농도 및 0.2 M의 최종 아세트산 농도를 달성하였다.
폴리사카라이드의 가수분해
천연 폴리사카라이드를 활성화 전 화학적으로 가수분해하였다. 희석된 폴리사카라이드 용액을 70℃로 가열하고, 이어서 이 온도에서 3.5시간 동안 유지하였다.
폴리사카라이드의 산화
소듐 퍼아이오데이트 용액을 첨가하여 폴리사카라이드의 산화를 개시하고, 이어서 반응이 23℃에서 20시간 동안 계속 진행되게 하였다.
활성화된 폴리사카라이드의 정제
활성화된 폴리사카라이드를 한외여과 카세트를 사용하여 농축시켰다. 투석여과를 WFI의 20-배 정용부피에 대해 수행하였다.
동결건조
활성화된 폴리사카라이드를 수크로스와, 활성화된 폴리사카라이드 그램당 25 그램의 수크로스의 비로 배합하였다. 활성화된 사카라이드 및 수크로스가 담긴 병을 에탄올 조에서 쉘 냉동시키고, 동결건조시켰다.
활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합 및 캡핑
동결건조된 활성화된 폴리사카라이드를 DMSO 중 2 mg/mL로 재구성하였다. 재구성을 위해 DMSO를 동결건조된 CRM197에 첨가하였다. 재구성된 CRM197을 재구성된 활성화된 폴리사카라이드에 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물에 소듐 시아노보로히드라이드를 첨가하여 접합을 개시하고, 23℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 접합 반응의 종결은 수소화붕소나트륨 2 MEq를 첨가하여 수행하였다. 이러한 캡핑 반응은 23℃에서 3시간 동안 진행되었다.
접합체의 정제
이어서, 접합체 용액을 냉각된 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH 6.0) 중에 희석하고, 여과하고, 300K 셀룰로스 막을 사용하여 2 - 4 g/L로 농축시키고, 제1-단계 투석여과를 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH6.0)에 대해 수행하였다. 최종 정제 단계는 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수, pH 6.0 완충제를 사용한 투석여과에 의해 수행하였다. 투석여과가 완료된 후, 정제된 접합체를 0.22 μm 필터를 통해 수집 탱크로 옮겼다.
1가 벌크 접합체의 희석
접합체를 5 mM 숙시네이트 / 0.9% 염수 (pH 6)로, 0.5 mg/mL의 표적 사카라이드 농도로 추가로 희석하였다. 최종 0.22 μm 여과 단계를 완료하여 제제화를 위한 1가 벌크 접합체 (MBC) 생성물을 제조하였다.
상이한 파라미터 (예를 들어, 사카라이드-단백질 투입 비, 반응 농도 및 소듐 시아노보로히드라이드의 Meq)를 달리하여 상기 기재된 공정을 사용하여 여러 접합체를 수득하였다. CRM197에의 대표적인 Pn-8 당접합체에 대한 특징화를 표 7에 제공한다.
표 7. Pn8-CRM197 접합체의 특징화
Figure pat00023
마우스에서의 혈청형 8-CRM197 접합체에 대한 옵소닌식세포 활성 (OPA) 역가를 마우스에서 표준 조건 하에 결정하였다 (10A 및 22F 접합체에 대해 하기 기재된 OPA 절차와 유사함). 혈청형 8 접합체 (샘플 1-9; 이들 접합체의 특징화 데이터에 대해 또한 표 7 참조)가 뮤린 면역원성 모델에서 OPA 역가를 도출한다는 것을 입증하는, 상이한 용량에서의 4주에서의 OPA 역가 (95% 신뢰 구간 (CI)을 갖는 기하 평균 역가 (GMT))를 표 8 및 9에 제시한다 (2개의 개별 실험).
표 8에 제시된 바와 같이, 혈청형 8 접합체는 불량한 항체 역가를 갖는 대조군 비접합된 폴리사카라이드와 비교하여, 유의하게 더 높은 항체 역가를 갖는 것으로 제시되었다.
표 8. 혈청형 8-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00024
표 9. 혈청형 8-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00025
상기 환원성 아미노화 공정에 의해 제조된 접합체로부터 생성된 전체적 데이터는 그것이 우수한 접합 수율, 낮은 % 유리 사카라이드 및 우수한 안정성을 갖는 접합체의 제조를 가능하게 한다는 것을 입증하였다. 추가적으로, 제조된 접합체는 뮤린 면역원성 모델에서 우수한 OPA 역가를 도출하였다.
실시예 6. 혈청형 10A 폴리사카라이드 - CRM197 접합체의 제조
단리된 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A 폴리사카라이드의 제조
혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득할 수 있다 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0228380, 2006/0228381, 2007/0184071, 2007/0184072, 2007/0231340, 및 2008/0102498 및 WO 2008/118752에 개시된 방법 참조). 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형 10A를 시드 병에서 성장시킨 다음, 시드 발효기로 옮겼다. 표적화된 광학 밀도에 도달하면, 세포를 생산 발효기로 옮겼다. N-라우로일 사르코신을 첨가하여 발효 브로쓰를 불활성화시키고, 한외여과 및 투석여과에 의해 정제하였다.
단리된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드의 산화
요구되는 pH가 대략 6.0으로 조정된 경우, 계산된 부피의 0.1 M 인산칼륨 완충제 (pH 6.0) 및 주사용수 (WFI)를 폴리사카라이드 용액에 첨가하여, 2.5 g/L의 최종 폴리사카라이드 농도 및 25 mM 인산칼륨 완충제의 최종 농도를 달성하였다. 이어서 희석된 폴리사카라이드를 5℃로 냉각시켰다. 0.25 몰 당량 (MEq)의 소듐 퍼아이오데이트 용액을 첨가하여 산화를 개시하였다. 산화 반응 시간은 5℃에서 대략 4시간이었다. 5℃에서 1-2시간 동안 계속 교반하면서 1 MEq의 2,3-부탄디올로 산화 반응을 켄칭하였다.
표적 반응 시간에 도달한 후, 활성화된 폴리사카라이드를 30K MWCO 밀리포어(Millipore) 한외여과 카세트를 사용하여 농축하였다. 이어서, 20-배 정용부피의 WFI에 대해 투석여과를 수행하였다. 정제된 활성화된 폴리사카라이드를 5℃에서 저장하였다. 정제된 활성화된 사카라이드를 특히 (i) SEC-MALLS에 의한 분자량 및 (ii) 산화도에 의해 특징화하였다.
활성화된 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A 폴리사카라이드의 CRM197과의 접합
접합 공정 하기 단계로 이루어졌다:
a. 수크로스 부형제와의 배합, 및 동결건조;
b. 동결건조된 폴리사카라이드 및 CRM197의 재구성;
c. 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합 및 캡핑; 및
d. 접합체의 정제
a. 수크로스와의 배합
활성화된 폴리사카라이드를 수크로스와, 활성화된 폴리사카라이드 그램당 25 그램의 수크로스의 비로 배합하였다. 이어서 배합된 혼합물의 병을 동결건조시켰다. 동결건조 후, 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드가 담긴 병을 -20℃에서 저장하였다.
b. 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197 단백질의 재구성
동결건조된 활성화된 폴리사카라이드를 무수 디메틸 술폭시드 (DMSO)에서 재구성하였다. 폴리사카라이드가 완전 용해되면, 재구성을 위해 동일한 양의 DMSO를 계산된 CRM197에 첨가하였다.
c. 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합 및 캡핑
재구성된 CRM197 (DMSO 중)을 접합 반응기 내의 재구성된 활성화된 폴리사카라이드에 첨가하였다. 최종 폴리사카라이드 농도는 1 g/L였다. 1.2 MEq의 소듐 시아노보로히드라이드를 반응 혼합물에 첨가하여 접합을 수행하였다. 반응물을 23℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 2 MEq의 수소화붕소나트륨을 첨가하여 접합 반응을 종결시켰다. 캡핑 반응물을 23℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다.
2 MEq의 수소화붕소나트륨을 첨가하여 접합 반응의 종결을 수행하였다. 이러한 캡핑 반응은 23℃에서 3시간 동안 진행되었다.
d. 접합체의 정제
이어서, 접합체 용액을 5x (부피 기준) 냉각된 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH 6.0) 내로 희석하고, 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH6.0)를 사용하여 20X 투석여과를 수행하였다. 초기 투석여과가 완료된 후, 접합체 보유물을 0.22 μm 필터를 통해 옮겼다. 접합체를 5 mM 숙시네이트 / 0.9% 염수 (pH 6)로 추가로 희석하고, 최종 0.22 μm 여과 단계 후 2-8℃에서 저장하였다.
상이한 파라미터 (예를 들어, 사카라이드-단백질 투입 비, 반응 농도 및 소듐 시아노보로히드라이드의 MEq)를 달리하여 상기 기재된 공정을 사용하여 여러 접합체를 수득하였다. 상기 화학은 다양한 온도에서 유리 사카라이드 추세에 의해 모니터링된 바와 같이 인지가능한 분해 없이 안정한 것으로 입증된 혈청형 10A 접합체의 생성을 가능하게 하였다 (실시간 및 가속). CRM197에의 대표적인 Pn-10A 당접합체에 대한 특징화를 표 10에 제공한다.
표 10. Pn-10A-CRM197 접합체의 특징화
Figure pat00026
마우스에서의 혈청형 10A-CRM197 접합체에 대한 옵소닌식세포 활성 (OPA) 역가를 표준 조건 하에 결정하였다. 30마리의 6-7주령 암컷 스위스 웹스터(Swiss Webster) 마우스의 군을 제0주에 피하 경로를 통해 0.001 μg, 0.01 μg, 또는 0.1 μg의 시험 접합체로 면역화하였다. 제3주에 동일한 용량의 접합체로 마우스를 부스팅한 다음, 제4주에 채혈하였다. 제4주의 혈청 샘플에서 혈청형-특이적 OPA를 수행하였다.
옵소닌식세포 활성 (OPA) 검정을 사용하여 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A에 특이적인 뮤린 혈청 내의 기능적 항체를 측정하였다. 캡슐형 폴리사카라이드 특이적 이뮤노글로불린이 박테리아를 옵소닌화하고 보체 침착을 촉발하여, 식세포작용을 촉진하고 식세포에 의해 박테리아를 사멸시키는 능력을 측정하는 검정 반응에 시험 혈청을 세팅하였다. OPA 역가는 시험 혈청이 없는 대조군 웰에 비해 박테리아 카운트의 50% 감소를 발생시키는 희석의 역수로서 정의된다. OPA 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
OPA 절차는 문헌 [Hu et al. (2005) Clin Diagn Lab Immunol12 (2):287-295]에 기재된 방법에 기초하고, 하기 변형을 포함한다. 시험 혈청을 2.5-배 연속 희석하고, 마이크로타이터 검정 플레이트에 첨가하였다. 살아있는 혈청형 10A 표적 박테리아 균주를 웰에 첨가하고, 플레이트를 30분 동안 37℃에서 진탕시켰다. 분화된 HL-60 세포 (식세포) 및 새끼 토끼 혈청 (3- 내지 4-주령, 펠-프리즈(PEL-FREEZ)®, 12.5% 최종 농도)을 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 60분 동안 진탕시켰다. 반응을 종결시키기 위해, 80 μL의 0.9% NaCl을 모든 웰에 첨가하고, 혼합하고, 10μL 분취물을 200 μL의 물이 담긴 멀티스크린(MULTISCREEN)® HTS HV 필터 플레이트 (밀리포어®)로 옮겼다. 액체를 진공 하에서 플레이트를 통해 여과하고, 150 μL의 하이소이(HYSOY)® 배지를 각각의 웰에 첨가하고, 여과하였다. 이어서, 필터 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션한 다음, 디스테인 솔루션(Destain Solution) (바이오-라드 래보러토리즈, 인크.(Bio-Rad Laboratories, Inc.), 캘리포니아주 허큘레스)으로 고정시켰다. 이어서, 플레이트를 쿠마시 블루로 염색하고 1회 탈색하였다. 콜로니를 셀룰라 테크놀로지 리미티드(Cellular Technology Limited) (CTL) (오하이오주 셰이커 하이츠) 이뮤노스팟(IMMUNOSPOT)® 분석기 상에서 영상화하고 나열하였다. 미가공 콜로니 카운트를 사용하여 사멸 곡선을 플롯팅하고 OPA 역가를 계산하였다.
혈청형 10A 접합체 (샘플 1-3; 이들 접합체의 특징화 데이터에 대해 또한 표 10 참조)가 뮤린 면역원성 모델에서 OPA 역가를 도출한다는 것을 입증하는, 상이한 용량에서의 4주에서의 OPA 역가 (95% 신뢰 구간 (CI)을 갖는 기하 평균 역가 (GMT))를 표 11에 제시한다. 표 11에 제시된 바와 같이, 혈청형 10A 접합체는 불량한 OPA 반응을 갖는 대조군 비접합된 폴리사카라이드와 비교하여, 유의하게 더 높은 OPA 역가를 갖는 것으로 제시되었다.
표 11. 혈청형 10A-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00027
실시예 7. TEMPO/NCS를 사용한 Pn 혈청형-12F의 접합
혈청형 12F-CRM197 당접합체의 안정성을 개선시키기 위해, 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 자유 라디칼 (TEMPO) 및 공산화제로서 N-클로로숙신이미드 (NCS)를 사용하는 대안적 화학을 연구하여 1급 알콜을 알데히드 기로 산화시켰다. GC/MS 분석은 산화 부위가 퍼아이오데이트-매개 산화 부위와 상이하다는 것을 제시하였다. TEMPO-NCS 산화의 경우에 α-D-Glcp 및 2-Glcp가 산화되는 반면에, 퍼아이오데이트가 사용되는 경우에 α-D-Galp가 주요 산화 부위였다 (도 4 참조). 본원에 추가로 상세하게 기재된 바와 같이, TEMPO를 촉매량 (≤ 0.1 몰 당량)으로 사용하였고, 사용된 NCS의 양을 변화시켜 목적 산화도 (DO)를 달성하였다. 후속해서 여러 접합체를 합성하고 특징화하였다. 일반적으로, 혈청형 12F 당접합체의 생산을 하기와 같이 여러 단계로 수행하였다:
a) 혈청형 12F 폴리사카라이드의, 분자량 50 kDa 내지 500 kDa으로의 가수분해;
b) 혈청형 12F 폴리사카라이드의 TEMPO/NCS에 의한 활성화;
c) 활성화된 폴리사카라이드의 정제;
d) 활성화된 혈청형 12F의 CRM197 단백질에의 접합; 및
e) 혈청형 12F - CRM197 접합체의 정제.
혈청형 12F의 가수분해 및 산화
폴리사카라이드의 가수분해를 전형적으로 산성 조건 하에 가열하면서 수행하여 100 kDa 내지 350 kDa의 목적 범위의 평균 분자량을 수득하였다. 전형적인 실험은 하기에 기재되어 있다.
가수분해
혈청형 12F 폴리사카라이드 용액을 재킷 반응 용기에 첨가하였다. 여기에, 요구되는 부피의 0.30 M 아세트산 및 주사용수 (WFI)를 첨가하여 ~ 0.1 M 아세트산 농도를 유지하였다. 용액의 pH를 1 N NaOH 또는 빙초산을 사용하여 3.2 ± 0.3으로 조정하였다. 반응 혼합물의 온도를 70 ± 5℃로 증가시켰다. 반응 혼합물을 70 ± 5℃에서 90 -120분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 23 ± 2℃로 냉각시키고, 1 M NaOH 용액을 첨가하여 중화시켰다 (pH 7.0). 가수분해된 폴리사카라이드를 30K MWCO 막을 사용하여 WFI에 대해 한외여과/투석여과하여 정제하였다. 용액을 0.22 μm 필터를 통해 여과하고, 산화될 때까지 2 내지 8℃에서 저장하였다. 가수분해된 폴리사카라이드의 분자량을 SEC-MALLS에 의해 분석하여 분자량이 100 kDa 내지 350 kDa의 표적 범위를 충족시키는 것을 확실하게 하였다.
부분 산화
하나의 실험에서, 혈청형 12F 폴리사카라이드를 미세유동화기를 사용하여 압력 균질화에 의해 기계적으로 사이징하여 분자량을 대략 100 kDa 내지 500 kDa으로 감소시켰다. 사이징된 폴리사카라이드를 4.0 mg/mL의 농도로 반응 용기에 첨가하고, 비카르보네이트/카르보네이트 완충제 (0.5 M NaHCO3/0.05 M Na2CO3 완충제, pH 8.6)와 1:1 v/v의 비로 혼합하였다. 교반 혼합물에 ≤ 0.1 몰 당량의 TEMPO를 첨가하였다. 반응을 0.6 내지 1.0 몰 당량의 NCS의 첨가에 의해 시작하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 후 활성화된 폴리사카라이드를 30K 한외여과 막을 사용하여 WFI로 투석여과하여 정제하였다. 정제된 폴리사카라이드를 수집하고, 산화도 (DO)를 알데히드 (3-메틸-2-베노티아졸리논 히드라존 (MBTH) 검정 사용) 및 폴리사카라이드 (안트론 검정 사용)의 정량적 측정에 의해 결정하였다.
또 다른 실험에서, 혈청형 12F 폴리사카라이드를 가수분해하여 분자량을 대략 100 kDa 내지 500 kDa의 분자량으로 감소시켰다. 혈청형 12F 폴리사카라이드를 반응 용기에 첨가하고, 0.5 M NaHCO3/0.05 M Na2CO3 완충제 (pH 8.6)와 1:1 v/v의 비로 혼합하였다. 교반 혼합물에 WFI 중에 용해된 0.6 내지 1.0 몰 당량의 NCS를 첨가하였다. 활성화는 WFI 중에 용해된 대략 0.1 몰 당량의 TEMPO의 첨가에 의해 개시하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 후 활성화된 폴리사카라이드를 30K 한외여과 막을 사용하여 WFI로 투석여과하여 정제하였다. 정제된 활성화된 폴리사카라이드를 0.2 μm 필터를 통해 여과하고, 사용 전 4℃에서 저장하였다.
TEMPO/NCS 매개된 산화를 또한 pH 6.5, 7.0, 7.5 및 8.0의 인산나트륨 완충제 중에서 성공적으로 수행하였다. 일부 활성화 실험에서 사카라이드 과다산화를 피하기 위해 1급 알콜, 예컨대 n-프로판올을 사용하여 시약을 켄칭하였다. 또 다른 세트의 실험에서, 화학적으로 가수분해된 폴리사카라이드를 한외여과/투석여과 정제 단계 없이 직접 산화에 적용하였다.
혈청형 12F 산화된 폴리사카라이드의 접합
하나의 실험에서, 정제된 산화된 혈청형 12F 폴리사카라이드를 반응 용기에 첨가하고, 이어서 0.5 M 인산나트륨 완충제 (pH 6.5)를 0.1 M의 최종 완충제 농도로 첨가하였다. 이 용액에, 이전에 동결건조된 CRM197을 첨가하고, 균질 용액을 수득하기 위해 철저히 혼합하였다. pH를 묽은 HCl 또는 1 N NaOH 용액을 사용하여 6.8로 조정하였다. 이어서, 1.5 몰 당량의 NaCNBH3을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온 (23℃)에서 24시간 동안 및 37℃에서 2.5일 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 1X 0.9 % 염수로 희석하고, 미반응 알데히드 기를 2 몰 당량의 수소화붕소나트륨으로 "캡핑"하였다. 캡핑 반응 시간은 3시간이었다.
또 다른 실험에서, 정제된 활성화된 혈청형 12F를 반응 용기에 첨가하고, 이어서 0.5 M 인산나트륨 완충제 (pH 6.5)를 0.1 M의 최종 완충제 농도로 첨가하였다. 이 용액에, 이전에 동결건조된 CRM197을 첨가하고, 균질 용액을 수득하기 위해 철저히 혼합하였다. pH를 묽은 HCl 또는 1 N NaOH 용액을 사용하여 6.8로 조정하였다. 이어서, 3 몰 당량의 NaCNBH3을 첨가하였다. 반응 혼합물을 23℃에서 24시간 동안 및 37℃에서 48시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 교반하면서 1X 0.9% 염수로 희석하고, 미반응 알데히드 기를 1 몰 당량의 수소화붕소나트륨 NaBH4로 "캡핑"하였다. 캡핑 반응 시간은 3시간이었다.
또 다른 실험에서, 정제된 활성화된 혈청형 12F를 반응 용기에 첨가하고, CRM197 용액과 혼합하였다. 혼합물을 동결건조시키고, 분말을 0.1 M 인산나트륨 완충제 (pH 6.8) 중에 5 mg/mL의 최종 사카라이드 농도로 용해시켰다. 필요한 경우에, pH를 묽은 HCl 또는 1N NaOH 용액을 사용하여 6.8로 조정하였다. 이어서, 3 몰 당량의 NaCNBH3을 첨가하였다. 반응 혼합물을 23℃에서 24시간 동안 및 37℃에서 48시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 1X 0.9% 염수로 희석하고, 미반응 알데히드 기를 1 몰 당량의 수소화붕소나트륨 NaBH4로 "캡핑"하였다. 캡핑 반응 시간은 3시간이었다.
접합체 정제
캡핑된 반응 혼합물을 5 μm 필터를 사용하여 여과한 다음, 100K MWCO 한외 여과 막을 사용하여 정제하였다. 접합체를 먼저 10 mM 숙시네이트/0.9 % 염수, pH 6.0 완충제를 사용하여 투석여과하였다. 이어서, 정제된 접합체를 0.45/0.22 μm 필터를 통해 여과하여 벌크 접합체를 수득하였다.
산화도
혈청형 12F 폴리사카라이드에서의 1급 알콜의 성공적 산화를 TEMPO/NCS 시스템을 사용하여 달성하였다. 가수분해된 혈청형 12F 폴리사카라이드를, NCS 공산화제의 양을 조정하여 상이한 산화도 (DO) 수준으로 산화시켰다. 상이한 폴리사카라이드 배치 및 분자량을 사용한, NCS의 양을 변화시키는 것에 의한 DO에 대한 영향을 도 9에 제시한다. 2시간 이후로는 DO에서 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않기 때문에, 전형적으로 산화 반응은 2시간 내에 완료된다.
여러 혈청형 12F 접합체를 TEMPO/NCS 산화된 폴리사카라이드를 사용하여 생성하고 특징화하였다. 결과를 표 12에 요약한다.
표 12. 폐렴구균 혈청형 12F-CRM197 접합체
Figure pat00028
실시예 8. TEMPO/NCS 산화 방법을 사용한 Pn-혈청형 12F-CRM197 접합체의 면역원성
마우스에서의 혈청형 12F-CRM197 접합체에 대한 옵소닌식세포 활성 (OPA) 역가를 마우스에서 표준 조건 하에 결정하였다. 혈청형 12F-CRM197 접합체 (배치 12F-97B; 이러한 접합체의 특징화 데이터에 대해 또한 표 12 참조)가 뮤린 면역원성 모델에서 OPA 역가를 도출한다는 것을 입증하는, 4 및 7주에서의 OPA 역가 (95% 신뢰 구간 (CI)을 갖는 기하 평균 역가 (GMT))를 표 13에 제시한다. TEMPO-NCS에 의해 생성된 접합체는 퍼아이오데이트 산화로부터 생성된 대조군 접합체 (171B)보다 더 면역원성이었다.
표 13. 혈청형 12F-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00029
실시예 9. Pn-12F 당접합체 안정성의 평가
퍼아이오데이트 산화 vs. TEMPO/NCS 산화에 의해 생성된 접합체의 안정성 (25℃에서)의 비교 (도 10 참조)는 Pn-12F 폴리사카라이드의 산화에 의해 생성된 접합체가 상대적으로 보다 안정하다는 것을 입증하였다. 도 10에 제시된 바와 같이, 25℃에서 Pn-12F 폴리사카라이드의 퍼아이오데이트 산화에 의해 생성된 당접합체에 대해 시간에 따른 유리 사카라이드의 증가가 관찰되었다. 대조적으로, Pn-12F 폴리사카라이드의 TEMPO/NCS 산화를 사용하여 제조된 당접합체는 유사한 조건 하에 유리 사카라이드에 대해 어떠한 유의한 경향도 나타내지 않았다.
실시예 10. 혈청형 15B 폴리사카라이드 - CRM197 접합체의 제조
단리된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형 15B 폴리사카라이드의 제조
혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 단리 절차를 사용하여 박테리아로부터 직접 수득할 수 있다. 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B를 시드 병에서 성장시킨 다음, 시드 발효기로 옮겼다. 표적화된 광학 밀도에 도달하면, 세포를 생산 발효기로 옮겼다. N-라우로일 사르코신을 첨가하여 발효 브로쓰를 불활성화시키고, 한외여과 및 투석여과에 의해 정제하였다.
이어서 정제된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 폴리사카라이드를 판다 2K(PANDA 2K)® 균질화기 (게아 니로 소아비, 파르마(GEA Niro Soavi, Parma), 이탈리아)를 사용하여 고압 균질화에 의해 사이징하여, 단리된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 폴리사카라이드를 생산하였다.
바람직하게는, 상기 공정에 의해 수득된 단리된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함하고, 50 kDa 내지 500 kDa, 바람직하게는 150 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖는다.
단리된 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 산화
2.0 g/L의 최종 폴리사카라이드 농도를 제공하기 위해 계산된 양의 500 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.0) 및 WFI를 순차적으로 첨가하여 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.0)에서 폴리사카라이드 산화를 수행하였다. 필요한 경우에, 반응 pH를 대략 pH 6.0으로 조정하였다. pH 조정 후, 반응 온도를 23℃로 조정하였다. 산화를 대략 0.25 몰 당량의 소듐 퍼아이오데이트의 첨가에 의해 개시하였다. 산화 반응을 대략 23℃에서 16시간 동안 수행하였다.
활성화된 폴리사카라이드의 농축 및 투석여과를 10K MWCO 한외여과 카세트를 사용하여 수행하였다. 투석여과를 20-배 정용부피의 WFI에 대해 수행하였다. 이어서 정제된 활성화된 폴리사카라이드를 5℃에서 저장하였다. 정제된 활성화된 사카라이드를 특히 (i) 비색 검정에 의한 사카라이드 농도; (ii) 비색 검정에 의한 알데히드 농도; (iii) 산화도 (iv) SEC-MALLS에 의한 분자량 및 (v) O-아세틸 및 글리세롤의 존재에 의해 특징화하였다.
SEC-MALLS는 폴리사카라이드 및 폴리사카라이드-단백질 접합체의 분자량을 결정하는데 사용된다. SEC는 폴리사카라이드를 유체역학 부피에 의해 분리하는데 사용된다. 굴절률 (RI) 및 다중-각도 레이저 광 산란 (MALLS) 검출기는 분자량을 결정하는데 사용된다. 광이 물질과 상호작용할 때, 광이 산란되고, 산란광의 양은 농도, dn/dc의 제곱 (특이적 굴절률 증분), 및 물질의 몰 질량과 관련된다. MALLS 검출기로부터의 산란광 신호 및 RI 검출기로부터의 농도 신호로부터의 판독치에 기초하여 분자량 측정치가 계산된다.
활성화된 폴리사카라이드의 산화도 (DO = 당 반복 단위의 몰 / 알데히드의 몰)를 하기와 같이 결정하였다:
다양한 비색 방법에 의해, 예를 들어, 안트론(Anthrone) 방법을 사용하여 당 반복 단위의 몰을 결정한다. 먼저 폴리사카라이드를 황산 및 열의 작용에 의해 모노사카라이드로 분해한다. 안트론 시약은 헥소스와 반응하여 황록색 복합체를 형성하고 그의 흡광도를 625 nm에서 분광광도계로 판독한다. 검정의 범위 내에서, 흡광도는 존재하는 헥소스의 양에 정비례한다.
또한 동시에 MBTH 비색 방법을 사용하여 알데히드의 몰을 결정한다. MBTH 검정은 알데히드 기 (주어진 샘플로부터의 것)를 3-메틸-2-벤조티아졸론 히드라존 (MBTH 검정 시약)과 반응시키는 것에 의한 아진 화합물의 형성을 수반한다. 과량의 3-메틸-2-벤조티아졸론 히드라존은 산화되어 반응성 양이온을 형성한다. 반응성 양이온 및 아진은 반응하여 청색 발색단을 형성한다. 이어서 형성된 발색단을 650 nm에서 분광학적으로 판독한다.
바람직하게는, 상기 공정에 의해 수득된 활성화된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함하고, 50 kDa 내지 500 kDa, 바람직하게는 150 kDa 내지 350 kDa의 분자량을 갖는다.
활성화된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 CRM197과의 접합
접합 공정은 하기 단계로 이루어졌다:
a) 수크로스 부형제와의 배합, 및 동결건조;
b) 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197의 재구성;
c) 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합 및 캡핑; 및
d) 접합체의 정제
a) 수크로스와의 배합, 및 동결건조
활성화된 폴리사카라이드를 수크로스와, 활성화된 폴리사카라이드 그램당 25 그램의 수크로스의 비로 배합하였다. 이어서 배합된 혼합물의 병을 동결건조시켰다. 동결건조 후, 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드가 담긴 병을 -20℃에서 저장하였다. 계산된 양의 CRM197 단백질을 개별적으로 쉘-냉동시키고, 동결건조시켰다. 동결건조된 CRM197을 -20℃에서 저장하였다.
b) 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197 단백질의 재구성
동결건조된 활성화된 폴리사카라이드를 무수 디메틸 술폭시드 (DMSO)에서 재구성하였다. 폴리사카라이드가 완전 용해되면, 재구성을 위해 동등량의 무수 DMSO를 동결건조된 CRM197에 첨가하였다.
c) 접합 및 캡핑
재구성된 활성화된 폴리사카라이드를 반응 용기 내의 재구성된 CRM197과 배합한 후 (투입 비: 0.8:1), 소듐 시아노보로히드라이드로 접합을 개시하기 전에 철저하게 혼합하여 투명한 용액을 수득하였다. 반응 용액 내의 최종 폴리사카라이드 농도는 대략 1 g/L였다. 1.0 - 1.5 MEq의 소듐 시아노보로히드라이드를 반응 혼합물에 첨가하여 접합을 개시하고, 23℃에서 40-48시간 동안 인큐베이션하였다. 2 MEq의 수소화붕소나트륨 (NaBH4)을 첨가하여 미반응 알데히드를 캡핑함으로서 접합 반응을 종결시켰다. 이러한 캡핑 반응은 23℃에서 3시간 동안 계속하였다.
d) 접합체의 정제
접합체 용액을 100-300K MWCO 막을 사용한 접선 흐름 여과에 의한 정제를 위한 제제로, 냉각된 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH 6.0)로 1:10 희석하였다. 희석된 접합체 용액을 5 μm 필터에 통과시키고, 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH 6.0)를 매질로 사용하여 투석여과를 수행하였다. 투석여과가 완료된 후, 접합체 보유물을 0.22 μm 필터를 통해 옮겼다.
접합체를 5 mM 숙시네이트 / 0.9% 염수 (pH 6)로, 대략 0.5 mg/mL의 표적 사카라이드 농도로 추가로 희석하였다. 최종 0.22 μm 여과 단계를 완료하여 당접합체를 수득하였다.
바람직하게는, 상기 공정에 의해 수득된 접합체는 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 mM당 적어도 0.6 mM 아세테이트를 포함하고, 3,000 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖고, 2 내지 6의 접합도를 갖는다.
실시예 11. CRM197에 공유 연결된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 당접합체의 특징화
접합체 1을 실시예 10의 공정에 의해 제조하였다. 상이한 양의 산화제를 사용하여 유사한 공정에 의해 접합체 2 및 3을 제조하였다. 정제된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 사이징하지 않고, 더 낮은 DO (더 높은 산화 수준)로 활성화하고, 수성 매질에서 접합을 수행한 것을 제외하고, 유사한 공정에 의해 접합체 4를 제조하였다. 정제된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 화학적 가수분해에 의해 사이징하고, 수성 매질에서 접합을 수행한 것을 제외하고, 유사한 공정에 의해 접합체 5를 제조하였다. 정제된 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 사이징하지 않은 것을 제외하고, 유사한 공정에 의해 접합체 6 및 7을 제조하였다.
수득된 접합체를 특징화하였고, 결과를 표 14에 요약한다.
표 14. 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드-CRM197 접합체
Figure pat00030
N/A= 이용가능하지 않음
유리 폴리사카라이드의 백분율은 원심분리에 의한 제거를 위해 단백질 및 공유 결합된 사카라이드가 결합되는 수산화알루미늄 겔을 사용하는 절차에 의해 측정된다. 샘플을 포스페이트 완충된 수산화알루미늄 겔과 혼합하고, 원심분리한다. 결합된 사카라이드는 겔과 함께 펠릿화되고, 유리 사카라이드는 상청액 중에 남는다. 생성된 상청액 및 대조군 샘플을 적절한 비색 검정에 의해 정량화하여, 유리 사카라이드의 백분율을 결정하고, 충분한 단백질 제거 및 사카라이드 회수를 확인한다.
아미노산 분석을 위해, 먼저 진공 및 열 (15분 동안 160℃) 하에 6 N 염산 (HCl) 가수분해를 사용하여 폴리사카라이드-단백질 샘플을 유리 아미노산으로서의 그의 개별 성분으로 가수분해한다. 가수분해 후, 샘플을 아미노산 분석기를 사용하여 분석한다. 개별 아미노산은 온도 및 유량 변화와 함께 시트르산나트륨 완충제의 단계 구배를 사용하여 이온 교환 크로마토그래피를 통해 분리한다. 분리 후, 각각의 아미노산 잔기의 양을 칼럼후 닌히드린 커플링 검출 시스템을 사용하여 정량적으로 결정한다. 이러한 시스템에서, 닌히드린을 칼럼후 반응기 시스템에서 칼럼 용리액과 혼합하고, 혼합물을 광도계 내로 통과시킨다. 닌히드린과 용리된 아미노산의 반응은 570 nm에서 최대로 흡수하는 자주색 화합물을 생성한다. 이러한 흡광도는 존재하는 α-아미노 기의 양의 선형 반응 (함수)이고, 이러한 반응은 α-아미노 기를 갖는 모든 유기 화합물에 대한 정량적 비색 검정을 제공한다. 유리 아미노 기를 갖지 않는 이미노산 예컨대 프롤린 및 히드록시프롤린과의 반응에서는, 밝은 황색 화합물이 생성되고, 440 nm에서 모니터링된다. 570 nm 및 440 nm 파장 출력 둘 다를 사용하여 각각의 아미노산에 대한 피크 면적을 계산한다.
수율은 하기와 같이 계산된다: (접합체 중 폴리사카라이드의 양 x100) / 활성화된 폴리사카라이드의 양.
수성 매질을 사용하여 생성된 접합체 (4 및 5)는 O-아세틸 수준의 유의한 손실을 입증하였다. MW 사이징 없이 천연 폴리사카라이드를 사용하여 DMSO 용매에서 생성된 접합체 (6 및 7)는 O-아세틸 수준에서 손실을 입증하지 않았다. 그러나, 불량한 여과능 특징에 더하여 접합체 수율이 매우 불량하였다. 고압 균질화에 의해 사이징된 폴리사카라이드를 사용하여 DMSO에서 생성된 접합체 (1, 2 및 3)는 O-아세틸 수준이 유의하게 보존되면서 높은 수율 및 보다 우수한 여과능 특징을 가졌다. 또한 이들 접합체는 매우 낮은 수준의 유리 폴리사카라이드를 가졌다.
실시예 12. Pn-혈청형 15B-CRM197 접합체를 사용한 옵소닌식세포 활성 (OPA) 검정
본 발명의 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 접합체의 면역원성은 하기 기재된 OPA 검정을 사용하여 평가할 수 있다.
30마리의 6-7주령 암컷 스위스 웹스터 마우스의 군을 제0주에 피하 경로를 통해 0.001 μg, 0.01 μg, 또는 0.1 μg의 시험 접합체로 면역화하였다. 제3주에 동일한 용량의 접합체로 마우스를 부스팅한 다음, 제4주에 채혈하였다. 제4주의 혈청 샘플에서 혈청형-특이적 OPA를 수행하였다.
OPA를 사용하여 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B에 특이적인 뮤린 혈청 내의 기능적 항체를 측정하였다. 캡슐형 폴리사카라이드 특이적 이뮤노글로불린이 박테리아를 옵소닌화하고 보체 침착을 촉발하여, 식세포작용을 촉진하고 식세포에 의해 박테리아를 사멸시키는 능력을 측정하는 검정 반응에 시험 혈청을 세팅하였다. OPA 역가는 시험 혈청이 없는 대조군 웰에 비해 박테리아 카운트의 50% 감소를 발생시키는 희석의 역수로서 정의된다. OPA 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
OPA 절차는 문헌 [Hu et al. (2005) Clin Diagn Lab Immunol12 (2):287-295]에 기재된 방법에 기초하고, 하기 변형을 포함한다. 시험 혈청을 2.5-배 연속 희석하고, 마이크로타이터 검정 플레이트에 첨가하였다. 살아있는 혈청형 15B 표적 박테리아를 웰에 첨가하고, 플레이트를 30분 동안 37℃에서 진탕시켰다. 분화된 HL-60 세포 (식세포) 및 새끼 토끼 혈청 (3- 내지 4-주령, 펠-프리즈®, 6.25% 최종 농도)을 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 45분 동안 진탕시켰다. 반응을 종결시키기 위해, 80 μL의 0.9% NaCl을 모든 웰에 첨가하고, 혼합하고, 10 μL 분취물을 200 μL의 물이 담긴 멀티스크린® HTS HV 필터 플레이트 (밀리포어®)로 옮겼다. 액체를 진공 하에서 플레이트를 통해 여과하고, 150 μL의 하이소이® 배지를 각각의 웰에 첨가하고, 여과하였다. 이어서, 필터 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션한 다음, 디스테인 솔루션 (바이오-라드 래보러토리즈, 인크., 캘리포니아주 허큘레스)으로 고정시켰다. 이어서, 플레이트를 쿠마시 블루로 염색하고 1회 탈색하였다. 콜로니를 셀룰라 테크놀로지 리미티드 (CTL) (오하이오주 셰이커 하이츠) 이뮤노스팟® 분석기 상에서 영상화하고 나열하였다. 미가공 콜로니 카운트를 사용하여 사멸 곡선을 플롯팅하고 OPA 역가를 계산하였다.
접합체 1 및 2의 면역원성을 상기 언급된 검정에 따라 시험하였다. 1종의 추가의 접합체 및 비접합된 천연 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 (비접합된 PS)를 또한 동일한 검정에서 시험하였다:
접합체 9는 수용액에서 환원성 아미노화에 의해 천연 (즉, 사이징되지 않은) 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 CRM197에 접합시킴으로써 제조하였다.
결과를 표 15에 제시한다.
표 15. 혈청형 15B-CRM197 접합체를 사용한 동물 시험의 OPA 역가
Figure pat00031
상기 표 15에 제시된 바와 같이, 접합체 1 및 2는 마우스에 투여되었을 때, 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B를 옵소닌화하고, 보체 침착을 촉발하여, 식세포작용을 촉진하고, 식세포에 의해 박테리아를 사멸시킬 수 있는 항체를 생성하였다. 또한, 보다 낮은 분자량에도 불구하고, 이들은 사이징되지 않은 접합체 9와 비교하여 유사한 수준의 면역원성을 또한 나타내었다.
실시예 13. 혈청형 22F 폴리사카라이드 - CRM197 접합체의 제조
단리된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F 폴리사카라이드의 제조
에스. 뉴모니아에 혈청형 22F를 시드 병에서 성장시킨 다음, 시드 발효기로 옮겼다. 표적화된 광학 밀도에 도달하면, 세포를 생산 발효기로 옮겼다. N-라우로일 사르코신을 첨가하여 발효 브로쓰를 불활성화시키고, 한외여과 및 투석여과에 의해 정제하였다.
정제된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F 폴리사카라이드를 판다 2K® 균질화기 (게아 니로 소아비, 파르마, 이탈리아)를 사용하여 고압 균질화에 의해 사이징하여, 단리된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F 폴리사카라이드를 생산하였다.
단리된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드의 산화
2.0 g/L의 최종 폴리사카라이드 농도를 제공하기 위해 계산된 양의 500 mM 인산칼륨 완충제 (pH 5.8) 및 WFI를 순차적으로 첨가하여 수득된 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 5.8)에서 폴리사카라이드 산화를 수행하였다. 필요한 경우에, 반응 pH를 대략 5.8로 조정하였다. pH 조정 후, 반응 온도를 5℃로 낮추었다. 산화를 0.10 몰 당량 (MEq)의 소듐 퍼아이오데이트의 첨가에 의해 개시하였다. 표적 산화 반응 시간은 5℃에서 16시간이다.
5℃에서 1-2시간 동안 계속적인 교반 하에 2 MEq의 2,3-부탄디올을 사용하여 산화 반응을 켄칭하였다.
활성화된 폴리사카라이드의 농축 및 투석여과를 100K MWCO 한외여과 카세트를 사용하여 수행하였다. 35-배 정용부피의 WFI에 대해 투석여과를 수행하였다. 정제된 활성화된 폴리사카라이드를 5℃에서 저장하였다. 정제된 활성화된 사카라이드를 특히 (i) SEC-MALLS에 의한 분자량 (ii) O-아세틸의 존재 및 (iii) 산화도에 의해 특징화하였다.
SEC-MALLS는 폴리사카라이드 및 폴리사카라이드-단백질 접합체의 분자량을 결정하는데 사용된다. SEC는 폴리사카라이드를 유체역학 부피에 의해 분리하는데 사용된다. 굴절률 (RI) 및 다중-각도 레이저 광 산란 (MALLS) 검출기는 분자량을 결정하는데 사용된다. 광이 물질과 상호작용할 때, 광이 산란되고, 산란광의 양은 농도, dn/dc의 제곱 (특이적 굴절률 증분), 및 물질의 몰 질량과 관련된다. MALLS 검출기로부터의 산란광 신호 및 RI 검출기로부터의 농도 신호로부터의 판독치에 기초하여 분자량 측정치가 계산된다.
활성화된 폴리사카라이드의 산화도 (DO = 당 반복 단위의 몰 / 알데히드의 몰)를 하기와 같이 결정하였다:
다양한 비색 방법에 의해, 예를 들어, 안트론 방법을 사용하여 당 반복 단위의 몰을 결정한다. 먼저 폴리사카라이드를 황산 및 열의 작용에 의해 모노사카라이드로 분해한다. 안트론 시약은 헥소스와 반응하여 황록색 복합체를 형성하고 그의 흡광도를 625nm에서 분광광도계로 판독한다. 검정의 범위 내에서, 흡광도는 존재하는 헥소스의 양에 정비례한다.
또한 동시에 MBTH 비색 방법을 사용하여 알데히드의 몰을 결정한다. MBTH 검정은 알데히드 기 (주어진 샘플로부터의 것)를 3-메틸-2-벤조티아졸론 히드라존 (MBTH 검정 시약)과 반응시키는 것에 의한 아진 화합물의 형성을 수반한다. 과량의 3-메틸-2-벤조티아졸론 히드라존은 산화되어 반응성 양이온을 형성한다. 반응성 양이온 및 아진은 반응하여 청색 발색단을 형성한다. 이어서 형성된 발색단을 650 nm에서 분광학적으로 판독한다.
활성화된 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F 폴리사카라이드의 CRM197과의 접합
접합 공정은 하기 단계로 이루어졌다:
a. 수크로스 부형제와의 배합, 및 동결건조;
b. 동결건조된 폴리사카라이드 및 CRM197의 재구성;
c. 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합 및 캡핑; 및
d. 접합체의 정제
a. 수크로스와의 배합 및 동결건조
활성화된 폴리사카라이드를 수크로스 (WFI 중 50% w/v)와, 활성화된 폴리사카라이드 그램당 25 그램의 수크로스의 비로 배합하였다. 이어서 배합된 혼합물의 병을 동결건조시켰다. 동결건조 후, 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드가 담긴 병을 -20℃에서 저장하였다. 계산된 양의 CRM197 단백질 (표적 S/P 투입 비 = 1)을 개별적으로 쉘 냉동시키고, 동결건조시켰다. 동결건조된 CRM197을 -20℃에서 저장하였다.
b. 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197 단백질의 재구성
동결건조된 활성화된 폴리사카라이드를 무수 디메틸 술폭시드 (DMSO)에서 재구성하였다. 폴리사카라이드가 완전 용해되면, 재구성을 위해 동등량의 무수 DMSO를 동결건조된 CRM197에 첨가하였다.
c. 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합 및 캡핑
재구성된 CRM197 (DMSO 중)을 접합 반응 용기에서 재구성된 활성화된 폴리사카라이드와 합하였다. 반응 용액 중 최종 폴리사카라이드 농도는 1 g/L였다. 1.5 MEq의 소듐 시아노보로히드라이드를 반응 혼합물에 첨가하여 접합을 개시하고, 반응물을 23℃에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 2 MEq의 수소화붕소나트륨을 첨가하여 접합 반응을 종결시켰다. 캡핑 반응물을 23℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다.
d. 접합체의 정제
접합체 용액을 100K MWCO 막을 사용한 접선 흐름 여과에 의한 정제를 위한 제제로, 냉각된 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH 6.0)로 1:5 희석하고, 5 mM 숙시네이트-0.9% 염수 (pH6.0)를 매질로 사용하여 20X 투석여과를 수행하였다. 투석여과가 완료된 후, 접합체 보유물을 추가로 희석하고, 0.22 μm 필터를 통해 여과하고, 2-8℃에서 저장하였다.
상이한 파라미터 (예를 들어, 사카라이드-단백질 투입 비, 반응 농도 및 소듐 시아노보로히드라이드의 Meq)를 달리하여 상기 기재된 공정을 사용하여 여러 접합체를 수득하였다. CRM197에의 대표적인 Pn-22F 당접합체에 대한 특징화를 표 16에 제공한다.
표 16. 폐렴구균 혈청형 22F-CRM197 접합체
Figure pat00032
N/A= 이용가능하지 않음
최종 접합체 내 %O-아세틸 (보존된) 수준을 폴리사카라이드의 O-아세틸 함량 (혈청형 22F 사카라이드 반복 단위의 μmol당 μmol O-아세틸) 대비 접합체의 O-아세틸 함량 (혈청형 22F 사카라이드 반복 단위의 μmol당 μmol O-아세틸)의 비로부터 계산하였다.
상기 수득된 접합체의 면역원성을 하기 기재된 옵소닌식세포 검정 (OPA)을 사용하여 평가하였다.
30마리의 6-7주령 암컷 스위스 웹스터 마우스의 군을 제0주에 피하 경로를 통해 0.001 μg, 0.005 μg 또는 0.01 μg의 시험 접합체로 면역화하였다. 제3주에 동일한 용량의 접합체로 마우스를 부스팅한 다음, 제4주에 채혈하였다. 제4주의 혈청 샘플에서 혈청형-특이적 OPA를 수행하였다.
옵소닌식세포 활성 (OPA) 검정을 사용하여 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F에 특이적인 뮤린 혈청 내의 기능적 항체를 측정하였다. 캡슐형 폴리사카라이드 특이적 이뮤노글로불린이 박테리아를 옵소닌화하고 보체 침착을 촉발하여, 식세포작용을 촉진하고 식세포에 의해 박테리아를 사멸시키는 능력을 측정하는 검정 반응에 시험 혈청을 세팅하였다. OPA 역가는 시험 혈청이 없는 대조군 웰에 비해 박테리아 카운트의 50% 감소를 발생시키는 희석의 역수로서 정의된다. OPA 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
OPA 절차는 문헌 [Hu et al. (2005) Clin Diagn Lab Immunol12(2):287-295]에 기재된 방법에 기초하고, 하기 변형을 포함한다. 시험 혈청을 2.5-배 연속 희석하고, 마이크로타이터 검정 플레이트에 첨가하였다. 살아있는 혈청형 22F 표적 박테리아 균주를 웰에 첨가하고, 플레이트를 25℃에서 30분 동안 진탕시켰다. 분화된 HL-60 세포 (식세포) 및 새끼 토끼 혈청 (3- 내지 4-주령, 펠-프리즈®, 12.5% 최종 농도)을 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 45분 동안 진탕시켰다. 반응을 종결시키기 위해, 80 μL의 0.9% NaCl을 모든 웰에 첨가하고, 혼합하고, 10 μL 분취물을 200 μL의 물이 담긴 멀티스크린® HTS HV 필터 플레이트 (밀리포어®)로 옮겼다. 액체를 진공 하에서 플레이트를 통해 여과하고, 150 μL의 하이소이® 배지를 각각의 웰에 첨가하고, 여과하였다. 이어서, 필터 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션한 다음, 디스테인 솔루션 (바이오-라드 래보러토리즈, 인크., 캘리포니아주 허큘레스)으로 고정시켰다. 이어서, 플레이트를 쿠마시 블루로 염색하고 1회 탈색하였다. 콜로니를 셀룰라 테크놀로지 리미티드 (CTL) (오하이오주 셰이커 하이츠) 이뮤노스팟® 분석기 상에서 영상화하고 나열하였다. 미가공 콜로니 카운트를 사용하여 사멸 곡선을 플롯팅하고 OPA 역가를 계산하였다.
혈청형 22F-CRM197 접합체에 대한 옵소닌식세포 활성 (OPA) 역가를 상기 언급된 바와 같이 결정하였다. 혈청형 22F 접합체 (배치 1-7; 이들 접합체의 특징화 데이터에 대해 또한 표 16 참조)가 뮤린 면역원성 모델에서 OPA 역가를 도출한다는 것을 입증하는, 상이한 용량에서의 4주에서의 OPA 역가 (95% 신뢰 구간 (CI)을 갖는 기하 평균 역가 (GMT))를 표 17 및 18에 제시한다 (2개의 개별 실험).
표 17. 혈청형 22F-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00033
표 18. 혈청형 22F-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00034
실시예 14. CRM197에의 Pn-11A 접합체의 제조
Pn-11A RAC 당접합체의 제조
탈이온수 또는 25 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.0) 중에 저장된, 동결된 사이징된 폴리사카라이드를 5℃에서 해동시켰다.
폴리사카라이드의 산화
2.0 g/L의 최종 폴리사카라이드 농도를 제공하기 위해 500 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.0) 및 WFI를 첨가하여 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.0)에서 폴리사카라이드 산화를 수행하였다. 산화 반응은 23℃에서 수행하였다. 산화를 소듐 퍼아이오데이트의 첨가에 의해 개시하였다. 교반 속도는 100 - 140 rpm 범위이다.
활성화된 11A 폴리사카라이드의 정제
활성화된 폴리사카라이드의 농축 및 투석여과를 한외여과 카세트를 사용하여 수행하였다. 투석여과를 20-배 정용부피의 WFI에 대해 수행하였다. 0.22 μm 여과 후, 정제된 활성화된 폴리사카라이드를 5℃에서 저장하였다.
접합 공정 설명
접합 공정은 하기 단계로 이루어졌다:
a. CRM197 단백질의 쉘 냉동 및 동결건조;
b. 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197의 재구성;
c. 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합; 및
d. 접합체의 정제 및 희석
a. CRM197 단백질의 쉘 냉동 및 동결건조
CRM197 단백질을 쉘-냉동시키고, 동결건조시켰다.
b. 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197 단백질의 재구성
활성화된 폴리사카라이드 용액 (~10g/L)을 반응기에 채운 다음, 계산된 양의 0.5 N 인산나트륨 완충제 (pH 7.2)를 첨가하였다. 교반 하에, 동결건조된 CRM197을 첨가하고, CRM197의 완전 용해에 도달하도록 반응 혼합물을 2 - 4시간 동안 교반하였다.
c. 접합 및 캡핑
시아노보로히드라이드를 첨가하여 접합을 개시하였다. 반응 혼합물을 23℃에서 72 - 96시간 동안 인큐베이션하였다. 0.5 X WFI에 이어 2 MEq의 수소화붕소나트륨을 첨가하여 접합 반응을 종결시켰다. 이러한 캡핑 반응은 23℃에서 3 - 4시간 동안 유지하였다.
d. 접합체의 희석 및 초기 정제
접합체 용액을 접선 흐름 여과 (TFF)에 의한 정제를 위한 제제로, 0.15 N 인산나트륨 완충제 (pH 8.0)로 1:5 (반응 부피) 희석하였다. 희석된 접합체를 희석 용기에서 혼합한 다음, 5 μm 필터를 통과시켰다. 이어서 여과된 접합체 용액을 1 - 2 g/L로 농축시켰다. 2-단계 투석여과 공정을 수행하였다. 단계 1에서, 30X (투석여과 부피)의 0.15 N 인산나트륨 완충제 (pH 8.0)에 이어 20X의 5mM 숙시네이트-0.9% NaCl (pH6.0)을 사용하여 TFF를 수행하였다. 초기 투석여과가 완료된 후, 접합체 보유물을 0.45 μm 필터를 통해 수집 탱크로 옮겼다.
접합체의 최종 투석여과
최종 정제 단계는 재생 셀룰로스 막을 사용한 5 mM 숙시네이트-0.9% NaCl, pH 6.0 매질에 의한 20X 투석여과였다.
1가 벌크 접합체 (MBC)의 희석
접합체를 5 mM 숙시네이트 / 0.9% NaCl, pH 6으로, 0.5 mg/mL의 표적 사카라이드 농도로 추가로 희석하였다. 최종 0.22 μm 여과 단계를 완료하여 제제화를 위한 1가 벌크 접합체 (MBC) 생성물을 제조하였다.
상이한 파라미터 (예를 들어, 사카라이드-단백질 투입 비, 반응 농도 및 소듐 시아노보로히드라이드의 Meq)를 달리하여 상기 기재된 공정을 사용하여 여러 접합체를 수득하였다. CRM197에의 대표적인 Pn-11A 당접합체에 대한 특징화를 표 19에 제공한다 (배치 1 내지 5).
RAC/DMSO를 사용한 Pn-11A 당접합체의 제조
상기 기재된 바와 같이 산화된 폴리사카라이드를 제조하고 정제하였다 (Pn-11A RAC 당접합체의 제조 참조).
DMSO (RAC/DMSO) 중 환원성 아미노화를 통한 접합
RAC/DMSO를 통한 11A의 접합은 하기 단계로 이루어졌다.
a. 수크로스와의 배합, 쉘 냉동 및 동결건조;
b. 동결건조된 폴리사카라이드 및 CRM197의 재구성;
c. 활성화된 폴리사카라이드의 CRM197에의 접합; 및
d. 접합체의 정제 및 희석.
a. 수크로스와의 배합, 쉘 냉동 및 동결건조
사이징된 폴리사카라이드로부터 제조된 활성화된 폴리사카라이드를 수크로스 (WFI 중 50% w/v)와, 활성화된 폴리사카라이드 그램당 25 그램의 수크로스의 비로 배합하였다. 성분을 혼합한 다음, 배합된 혼합물의 쉘-냉동된 병을 동결건조시켰다. CRM197 단백질을 개별적으로 쉘-냉동시키고, 동결건조시켰다.
b. 동결건조된 활성화된 폴리사카라이드 및 CRM197 단백질의 재구성
동결건조된 활성화된 폴리사카라이드를 DMSO에서 2 mg/mL 농도로 재구성하였다. 폴리사카라이드가 완전 용해되면, 재구성을 위해 DMSO를 동결건조된 CRM197에 첨가하였다.
c. 접합 및 캡핑
재구성된 CRM197 (DMSO 중)을 접합 반응 용기에서 재구성된 활성화된 폴리사카라이드와 합하였다. 반응 용액 중 최종 폴리사카라이드 농도는 1 g/L였다. 시아노보로히드라이드를 반응 혼합물에 첨가하여 접합을 개시하고, 23℃에서 22시간 동안 인큐베이션하였다. 2 MEq의 수소화붕소나트륨을 첨가하여 접합 반응을 종결시켰다. 이러한 캡핑 반응을 23℃에서 3 - 4시간 동안 유지하였다.
d. 접합체의 정제 및 희석
상기 기재된 바와 유사한 공정을 사용하여 접합체 용액을 정제하고 희석하였다.
상이한 파라미터 (예를 들어, 사카라이드-단백질 투입 비, 반응 농도 및 소듐 시아노보로히드라이드의 Meq)를 달리하여 상기 기재된 공정을 사용하여 여러 접합체를 수득하였다. 상기 공정에 의해 수득된 CRM197에의 대표적인 Pn-11A 당접합체에 대한 특징화를 표 19에 제공한다 (배치 6 내지 8).
표 19. 폐렴구균 혈청형 11A-CRM197 접합체
Figure pat00035
N/A= 이용가능하지 않음
*글리세롤은 플루오린화수소산 (HF)에 의해 폴리사카라이드로부터 방출시킨 후, 고성능 음이온 교환 크로마토그래피 및 펄스형 전류측정 검출 (HPAEC-PAD)에 의해 정량화함.
상기 환원성 아미노화 공정에 의해 제조된 접합체로부터 생성된 전체적 데이터는 그것이 우수한 접합 수율, 낮은 % 유리 사카라이드 및 우수한 안정성을 갖는 접합체의 제조를 가능하게 한다는 것을 입증하였다.
상기 수득된 접합체의 면역원성을 하기 기재된 옵소닌식세포 검정 (OPA)을 사용하여 평가하였다.
30마리의 6-7주령 암컷 스위스 웹스터 마우스의 군을 제0주에 피하 경로를 통해 0.001 μg, 0.005 μg, 0.01 μg, 또는 0.1 μg의 시험 접합체로 면역화하였다. 제3주에 동일한 용량의 접합체로 마우스를 부스팅한 다음, 제4주에 채혈하였다. 제4주의 혈청 샘플에서 혈청형-특이적 OPA를 수행하였다.
옵소닌식세포 활성 (OPA) 검정을 사용하여 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A에 특이적인 뮤린 혈청 내의 기능적 항체를 측정하였다. 캡슐형 폴리사카라이드 특이적 이뮤노글로불린이 박테리아를 옵소닌화하고 보체 침착을 촉발하여, 식세포작용을 촉진하고 식세포에 의해 박테리아를 사멸시키는 능력을 측정하는 검정 반응에 시험 혈청을 세팅하였다. OPA 역가는 시험 혈청이 없는 대조군 웰에 비해 박테리아 카운트의 50% 감소를 발생시키는 희석의 역수로서 정의된다. OPA 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
OPA 절차는 문헌 [Hu et al. (2005) Clin Diagn Lab Immunol12 (2):287-295]에 기재된 방법에 기초하고, 하기 변형을 포함한다. 시험 혈청을 2.5-배 연속 희석하고, 마이크로타이터 검정 플레이트에 첨가하였다. 살아있는 혈청형 22F 표적 박테리아 균주를 웰에 첨가하고, 플레이트를 25℃에서 30분 동안 진탕시켰다. 분화된 HL-60 세포 (식세포) 및 새끼 토끼 혈청 (3- 내지 4-주령, 펠-프리즈®, 12.5% 최종 농도)을 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 60분 동안 진탕시켰다. 반응을 종결시키기 위해, 80 μL의 0.9% NaCl을 모든 웰에 첨가하고, 혼합하고, 10 μL 분취물을 200 μL의 물이 담긴 멀티스크린® HTS HV 필터 플레이트 (밀리포어®)로 옮겼다. 액체를 진공 하에서 플레이트를 통해 여과하고, 150 μL의 하이소이® 배지를 각각의 웰에 첨가하고, 여과하였다. 이어서, 필터 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션한 다음, 디스테인 솔루션 (바이오-라드 래보러토리즈, 인크., 캘리포니아주 허큘레스)으로 고정시켰다. 이어서, 플레이트를 쿠마시 블루로 염색하고 1회 탈색하였다. 콜로니를 셀룰라 테크놀로지 리미티드 (CTL) (오하이오주 셰이커 하이츠) 이뮤노스팟® 분석기 상에서 영상화하고 나열하였다. 미가공 콜로니 카운트를 사용하여 사멸 곡선을 플롯팅하고 OPA 역가를 계산하였다.
마우스에서의 혈청형 11A-CRM197 접합체에 대한 옵소닌식세포 활성 (OPA) 역가를 상기 언급된 바와 같이 결정하였다. 혈청형 11A 접합체 (배치 2-4 및 8; 이들 접합체의 특징화 데이터에 대해 또한 표 19 참조)가 뮤린 면역원성 모델에서 OPA 역가를 도출한다는 것을 입증하는, 상이한 용량에서의 4주에서의 OPA 역가 (95% 신뢰 구간 (CI)을 갖는 기하 평균 역가 (GMT))를 표 20에 제시한다.
표 20. 혈청형 11A-CRM197 접합체의 면역원성
Figure pat00036
실시예 15. 16-가 폐렴구균 접합체 백신의 제제화
모두 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 16-가 접합체 조성물 (16vPnC)을 제제화하였다.
혈청형 15B, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체는 상기 개시된 바와 같이 생산하였고, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 당접합체는 WO 2006/110381에 개시된 바와 같이 생산하였다.
벌크 농축물의 필요 부피를 배치 부피 및 벌크 사카라이드 농도에 기초하여 계산하였다. 숙시네이트 5.0 mM 및 150mM NaCl의 최종 표적 완충제 농도를 수득하기 위해 필요 부피의 NaCl / 숙시네이트 완충제 (pH 5.8)를 첨가하여 제제화된 벌크 백신을 제조하였다. 폴리소르베이트 80을 0.02%의 최종 농도로, 및 16종의 폐렴구균 접합체를 첨가하였다. 제제를 0.2 μm 밀리포어 PES 막을 통해 여과한 다음, AlPO4를 첨가하였다. 제제를 혼합하여 결합되게 하고 균질성을 달성하였다.
이어서 0.5 mL의 용량 부피를 전달하기 위해 제제를 유리 시린지에 채웠다.
최종 투여 형태는 0.5mL 용량의 경우에, CRM197에 개별적으로 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 각각의 당접합체 2.2 μg, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6B로부터의 당접합체 4.4μg, 5 mM 숙시네이트 완충제 pH 5.8, 0.02% (w/w) PS80, 150 mM NaCl 및 AlPO4로서 알루미늄 0.25 mg/mL로 이루어졌다. CRM197 함량은 0.5 mL의 용량의 경우에 약 38 μg이었다.
실시예 16. 20-가 폐렴구균 접합체 백신의 제제화
모두 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 20가 접합체 조성물 (20vPnC)을 제제화하였다.
혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체는 상기 개시된 바와 같이 생산하였고, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 당접합체는 WO 2006/110381에 개시된 바와 같이 생산하였다.
벌크 농축물의 필요 부피를 배치 부피 및 벌크 사카라이드 농도에 기초하여 계산하였다. 숙시네이트 5.0 mM 및 150mM NaCl의 최종 표적 완충제 농도를 수득하기 위해 필요 부피의 NaCl / 숙시네이트 완충제 (pH 5.8)를 첨가하여 제제화된 벌크 백신을 제조하였다. 폴리소르베이트 80을 0.02%의 최종 농도로, 및 20종의 폐렴구균 접합체를 첨가하였다. 제제를 0.2 μm 밀리포어 PES 막을 통해 여과한 다음, AlPO4를 첨가하였다. 알루미늄에의 접합체의 최대 결합을 수득하기 위해 제제를 잘 혼합하였다.
이어서 0.5 mL의 용량 부피를 전달하기 위해 제제를 유리 시린지에 채웠다.
최종 투여 형태는 0.5mL 용량의 경우에, CRM197에 개별적으로 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 각각의 당접합체 2.2 μg, 에스. 뉴모니아에 혈청형 6B로부터의 당접합체 4.4μg, 5 mM 숙시네이트 완충제 pH 5.8, 0.02% (w/w) PS80, 150 mM NaCl 및 AlPO4로서 알루미늄 0.25 mg/mL로 이루어졌다. CRM197 함량은 0.5mL의 용량의 경우에 약 46 μg이었다.
실시예 17. 16-가 면역원성 조성물의 면역원성
16-가 면역원성 조성물 (실시예 15 참조)의 면역원성을 토끼에서 멀티플렉스화 직접 루미넥스 면역검정 (dLIA)을 사용하여 평가하여, 혈청 및 혈청형-특이적 OPA에서 혈청형-특이적 IgG 농도를 측정하였다.
10마리의 2.5 kg 내지 3.5 kg의 암컷 뉴질랜드 백색 토끼 군을 제0주에 근육내 경로를 통해 제안되는 인간 임상 용량 (접합체 2.2 μg, 단 혈청형 6B는 4.4 μg; 플러스 AlPO4로서 0.1 mg 알루미늄)으로 면역화하였다. 제2주에 동일한 용량의 접합체 백신으로 토끼를 부스팅한 다음, 제4주에 채혈하였다. 제0주 및 제4주의 혈청 샘플에서 혈청형-특이적 dLIA 및 OPA를 수행하였다.
각각의 폐렴구균 폴리사카라이드 (PnPS)에 특이적인 총 폴리사카라이드 결합 항체 (IgG)를 정량화하기 위해, 토끼 혈청을 2가지 직접 루미넥스 면역검정 (dLIA; 13-플렉스 dLIA, 프레브나르 13® 혈청형 및 7-플렉스 dLIA, 추가의 혈청형)에서 평가하였다. 13-플렉스 검정은 13-가 폐렴구균 접합체 (PnC) 백신에 포함된 13종의 혈청형 (1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F)에 특이적인 항-PnPS 항체를 측정하고, 7-플렉스 검정은 추가의 혈청형 (15B, 22F, 33F)에 대한 항-PnPS 항체를 측정한다. 각각의 검정은 PnPS 접합체 (PnPS-PLL 접합체: 폴리-L-리신에 접합된 PnPS)에 커플링된 13 또는 7종의 스펙트럼상 별개의 자기 마이크로구체의 조합을 함유한다.
간략하게, 참조 표준물, 대조군 및 시험 혈청을 먼저 2개의 Pn 흡수제; CWPS1 (C-폴리사카라이드를 함유하는 PnA로부터의 세포벽 폴리사카라이드) 및 CWPS2 (무캡슐형 에스. 뉴모니아에 혈청형 2로부터의 CWP)와 사전-흡착시켜 비-특이적 항체가 PnPS 코팅 항원에 결합하는 것을 차단하였다. 사전흡착 후, PnPS-커플링된 마이크로구체를 적절하게 희석된 참조 표준물 혈청, 대조군 또는 토끼 시험 혈청과 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 각각의 혼합물을 세척하고, R-피코에리트린-접합된 염소 항-토끼 IgG 2차 항체를 첨가하였다. 형광 신호 (중앙 형광 강도 (MFI)로 표현됨)를 바이오-플렉스 판독기를 사용하여 측정하였고, 이는 결합된 PnPS-특이적 IgG의 양과 상관되었다. 시험 혈청에 대한 값은 (단위/mL, U/mL)로 보고된다.
혈청형-특이적 OPA를 상기 기재된 바와 같이 수행하였다. OPA 역가는 혈청이 없는 대조군 (배경 박테리아 콜로니 형성 단위 (CFU)로 정의됨)과 비교 시 CFU의 수의 50% 감소를 발생시키는 최대 혈청 희석의 역수이다. 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
표 21. 16vPnC 총 IgG 농도 및 OPA 역가
Figure pat00037
결과는 16vPnC에 의한 2가지 면역화 후 혈청형-특이적 IgG 및 기능적 OPA 항체 반응에서의 유의한 증가를 보여주었다 (표 21). 혈청 IgG 수준은 기준선에서 2-로그 초과하여 증가하였다. 유사하게, 강건한 기능적 OPA 항체 반응이 OPA GMT에서 기준선의 최소 22-배 증가로 도출되었다. 면역-전 혈청 (제0주)은, 혈청형 14 및 33F를 제외하고, 대부분의 16v Pn 혈청형에 대해 검출불가능한 수준의 PnPS-특이적 IgG 및 기능적 OPA 항체를 나타내었다. 이들 혈청형에 대해 낮은 수준 OPA 역가가 제시되었지만, 이들 기준선 반응은 백신접종 후 항체 반응에 유해한 영향은 미치지 않았다.
실시예 18. 20-가 면역원성 조성물의 면역원성
20-가 면역원성 조성물 (실시예 16에서 제조된 바와 같음)의 면역원성을 토끼에서 멀티플렉스화 직접 루미넥스 면역검정 (dLIA)을 사용하여 평가하여, 혈청 및 혈청형-특이적 OPA에서 혈청형-특이적 IgG 농도를 측정하였다.
10마리의 2.5 kg 내지 3.5 kg의 암컷 뉴질랜드 백색 토끼 군을 제0주에 근육내 경로를 통해 제안되는 인간 임상 용량 (접합체 2.2 μg, 단 혈청형 6B는 4.4 μg; 플러스 AlPO4로서 0.1 mg 알루미늄)으로 면역화하였다. 제2주에 동일한 용량의 접합체 백신으로 토끼를 부스팅한 다음, 제4주에 채혈하였다. 제0주 및 제4주의 혈청 샘플에서 혈청형-특이적 dLIA 및 OPA를 수행하였다.
각각의 폐렴구균 폴리사카라이드 (PnPS)에 특이적인 총 폴리사카라이드 결합 항체 (IgG)를 정량화하기 위해, 토끼 혈청을 2가지 직접 루미넥스 면역검정 (dLIA; 13-플렉스 dLIA, 프레브나르 13® 혈청형 및 7-플렉스 dLIA, 추가의 혈청형)에서 평가하였다. 13-플렉스 검정은 13-가 폐렴구균 접합체 (PnC) 백신에 포함된 13종의 혈청형 (1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F)에 특이적인 항-PnPS 항체를 측정하고, 7-플렉스 검정은 추가의 혈청형 (15B, 22F, 33F)에 대한 항-PnPS 항체를 측정한다. 각각의 검정은 PnPS 접합체 (PnPS-PLL 접합체: 폴리-L-리신에 접합된 PnPS)에 커플링된 13 또는 7종의 스펙트럼상 별개의 자기 마이크로구체의 조합을 함유한다.
간략하게, 참조 표준물, 대조군 및 시험 혈청을 먼저 2개의 Pn 흡수제; CWPS1 (C-폴리사카라이드를 함유하는 PnA로부터의 세포벽 폴리사카라이드) 및 CWPS2 (무캡슐형 에스. 뉴모니아에 혈청형 2로부터의 CWP)와 사전-흡착시켜 비-특이적 항체가 PnPS 코팅 항원에 결합하는 것을 차단하였다. 사전흡착 후, PnPS-커플링된 마이크로구체를 적절하게 희석된 참조 표준물 혈청, 대조군 또는 토끼 시험 혈청과 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 각각의 혼합물을 세척하고, R-피코에리트린-접합된 염소 항-토끼 IgG 2차 항체를 첨가하였다. 형광 신호 (중앙 형광 강도 (MFI)로 표현됨)를 바이오-플렉스 판독기를 사용하여 측정하였고, 이는 결합된 PnPS-특이적 IgG의 양과 상관되었다. 시험 혈청에 대한 값은 (단위/mL, U/mL)로 보고된다.
혈청형-특이적 OPA를 상기 기재된 바와 같이 수행하였다. OPA 역가는 혈청이 없는 대조군 (배경 박테리아 콜로니 형성 단위 (CFU)로 정의됨)과 비교 시 CFU의 수의 50% 감소를 발생시키는 최대 혈청 희석의 역수이다. 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
20vPnC로 면역화된 토끼도 또한 16v 및 20v 제제에 공통인 혈청형 뿐만 아니라 추가의 4종의 혈청형 (8, 10A, 11A, 및 12F)에 대해 총 IgG 및 기능적 OPA 항체 역가에서 유의한 증가를 입증하였다 (표 22). 2종의 면역화 후 20종의 혈청형에 걸쳐 혈청 IgG 수준에서 2-로그 증가가 유도되었다. 백신에 의해 도출된 OPA GMT는 기준선의 적어도 27-배 초과였다. 혈청형 14 및 33F에 대해 면역전 혈청에서 낮은 수준의 OPA 역가가 20vPnC 백신접종 후 유사하게 관찰되었지만, 이것 역시 백신접종-후 항체 반응의 강건성을 변경시키지 않았다.
16vPnC 및 20vPnC 제제는 폐렴구균 폴리사카라이드에 특이적이면서 또한 박테리아의 기능적 사멸과 연관된 강건한 체액성 반응을 도출하였다 (표 21 및 22 참조). 결론적으로, 실시예 17 및 18에 제시된 연구는 16vPnC 및 20vPnC 제제 둘 다의 우수한 면역원성을 입증하였다.
표 22. 20vPnC 총 IgG 농도 및 OPA 역가
Figure pat00038
실시예 19. 스트렙토코쿠스 뉴모니아에의 혈청군 9 내에서 교차-반응성 옵소닌식세포 면역 반응의 평가
기능적 항체 및 보체의 존재 하에 식세포 이펙터 세포에 의한 에스. 뉴모니아에 세포의 사멸을 측정하는 폐렴구균 옵소닌식세포 검정 (OPA)은 폐렴구균 백신의 유효성을 평가하는 중요한 대용물인 것으로 간주된다.
물질 및 방법
13-가 폐렴구균 접합체 백신 (13v PnC)으로 백신접종된 성인으로부터의 면역 혈청의 무작위로 선택된 2개의 하위세트를 혈청형 9V, 9A, 9L 및 9N에 대해 OPA 검정에서 시험하였다. 혈청은 각각 미국 임상 시험 6115A1-004 (N=59, 백신접종-후) 및 6115A1-3005 (N=66, 매칭되는 백신접종-전 및 -후)로부터 수집하였다.
연구 6115A1-3005 (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572)는, 연구에 등록되기 적어도 5년 전에 23vPS를 1회 용량 제공받은 보행가능한 70세 이상의 노인 개체에서, 23-가 폐렴구균 폴리사카라이드 백신 (23vPS)과 비교하여, 프레브나르 13®의 안전성, 내약성, 및 면역원성을 평가하는 3상, 무작위, 활성-대조, 변형된 이중-맹검 시험이었다 (http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00546572 참조, 2014년 3월 31일에 엑세스됨).
연구 6115A1-004 (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00427895)는, 23-가 폐렴구균 폴리사카라이드 백신 (23vPS)과 비교하여, 23vPS에 대해 나이브한 60 내지 64세의 성인에서 13-가 폐렴구균 접합체 백신 (13vPnC)의 안전성, 내약성, 및 면역원성을 평가하고, 23vPS에 대해 나이브한 18 내지 59세의 성인에서 13vPnC의 안전성, 내약성, 및 면역원성을 평가하는 3상, 무작위, 활성-대조, 변형된 이중-맹검 시험이었다 (http://clinicaltrials.gov/show/NCT00427895 참조, 2014년 3월 31일에 엑세스됨).
이들 연구에서 시험된 13-가 폐렴구균 접합체 백신 (13vPnC)은 디프테리아 교차-반응 물질 197 (CRM197) 개별적으로 담체 단백질에 접합된 폐렴구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터의 접합체를 함유하였다.
OPA를 사용하여, 에스. 뉴모니아에 혈청형 9V, 9N, 9A 및/또는 9L에 대한 기능적 항체를 인간 혈청에서 측정하였다. 캡슐형 폴리사카라이드 특이적 이뮤노글로불린이 박테리아를 옵소닌화하고 보체 침착을 촉발하여, 식세포작용을 촉진하고 식세포에 의해 박테리아를 사멸시키는 능력을 측정하는 검정 반응에 시험 혈청을 세팅하였다. OPA 역가는 시험 혈청이 없는 대조군 웰에 비해 박테리아 카운트의 50% 감소를 발생시키는 희석의 역수로서 정의된다. OPA 역가는 이러한 50% 사멸 컷-오프를 포괄하는 2개 희석으로부터 내삽된다.
OPA 절차는 문헌 [Hu et al. (2005) Clin Diagn Lab Immunol122):287-295]에 기재된 방법에 기초하였다. 시험 열-불활성화된 혈청을 2.5-배 연속 희석하고, 표적 박테리아와 함께 검정 플레이트에 첨가하고, 진탕하면서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 분화된 HL-60 세포 (식세포) 및 새끼 토끼 혈청 (3- 내지 4-주령, 펠-프리즈®, 아칸소주, 12.5% 최종 농도)을 대략 이펙터 대 표적 비 200:1로 웰에 첨가하고, 진탕하면서 37℃에서 인큐베이션하였다. 반응을 종결시키기 위해, 80 μL의 0.9% NaCl을 모든 웰에 첨가하고, 혼합하고, 10 μL 분취물을 200 μL의 물이 담긴 멀티스크린® HTS HV 필터 플레이트 (밀리포어®)로 옮겼다. 액체를 진공 하에서 플레이트를 통해 여과하고, 150 μL의 하이소이® 배지를 각각의 웰에 첨가하고, 여과하였다. 이어서, 필터 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션한 다음, 디스테인 솔루션 (바이오-라드 래보러토리즈, 인크., 캘리포니아주 허큘레스)으로 고정시켰다. 이어서, 플레이트를 쿠마시 블루로 염색하고 1회 탈색하였다. 콜로니를 셀룰라 테크놀로지 리미티드 (CTL) (오하이오주 셰이커 하이츠) 이뮤노스팟® 분석기 상에서 영상화하고 나열하였다.
통계적 분석: 피어슨 양측 상관관계를 계산하였다.
결과 - 9V, 9A, 9L 및 9N에서 OPA 반응
혈청형 9A, 9L 및 9N에 대해 13vPnC로 면역화된 성인의 면역 혈청으로부터의 교차-기능적 반응을, 혈청형 9V에 대한 상동 기능적 반응과 함께, 각각의 마이크로콜로니 옵소닌식세포 검정 (mcOPA)에서 평가하였다. 13vPnC로 백신접종된 성인으로부터의 면역 혈청의 무작위로 선택된 2개의 하위세트를 시험하였다. 혈청은 각각 미국 임상 시험 6115A1-004 (N=59, 백신접종-후) 및 6115A1-3005 (N=66, 매칭되는 백신접종-전 및 -후)로부터 수집하였다.
연구 6115A1-004에서 대상체는 이전에 어떠한 폐렴구균 백신접종에 대해서도 나이브하고, 연구 프로토콜의 일부로서 13vPnC의 단일 용량을 제공받았다. 연구 6115A1-004로부터의 면역 혈청은, 9V, 9A, 9L 및 9N에 대해 각각 98.3%, 98.3%, 100% 및 93.2%의 값으로 모든 혈청군에 대해 유사한 백분율의 반응자를 나타내었고 (도 11), 이는 6115A1-3005로부터의 결과를 지지한다 (도 12). 관련된 우수한 OPA 역가 상관관계가 혈청형 9V와 9A (피어슨 상관관계 ρ = 0.5456, p < 0.0001) 또는 9L (ρ = 0.7353, p < 0.0001) 사이에서 관찰되었지만, 9N (ρ = 0.1217, p < 0.3627) 사이에서는 관찰되지 않았다.
연구 6115A1-3005에서 대상체는 연구에 등록되기 적어도 5년 전에 23vPS를 이미 1회 용량을 제공받은 적이 있었고, 연구 프로토콜의 일부로서 13vPnC의 단일 용량을 제공받았다. 13vPnC로 면역화된 성인으로부터의 매칭되는 백신접종-전 및 -후의 혈청 패널 (N=66) (연구 6115A1-3005)을 혈청형 9V에 대한 상동 반응 및 혈청형 9A, 9L 및 9N에 대한 항-9V 항체의 교차-반응성에 대해 OPA로 평가하였다. 도 12에 제시된 바와 같이, OPA 검정에서 9V (84%), 9A (66%), 9L (82%) 및 9N (86%)에 대해 비교적 높은 면역 (백분율 반응자)이 검출되었고, 이는 아마도 혈청형 9V 및 9N으로부터의 비접합된 폴리사카라이드를 포함하는 23vPS로의 사전 면역화로 인한 것일 수 있다. 그러나, 혈청군 9로부터의 혈청형 9V 접합체만을 함유하는 13vPnC로 백신접종한 후, 모든 4종의 혈청형에 대해 백분율 반응자가 95% 이상까지 증가하였다. 역가 값에서의 배수-상승을 표 23에 제시하고, 이는 혈청형 사이에 유사하여, 또한 교차-반응성을 시사한다.
표 23. 매칭되는 13vPnC 백신접종-전 및 -후의 OPA 역가 배수-상승
Figure pat00039
OPA 역가 분포의 보다 포괄적인 분석을 도 13-16에서 역 누적 분포 곡선 (RCDC)으로 제시한다. RCDC는 혈청형 9V, 9A, 9L 및 보다 적은 정도로 9N에 대해 백신접종 후 혈청형-특이적 면역 반응에서의 증가를 제시한다. 9V 9A, 9V/9L, 및 9V/9N 사이의 개별 매칭 / 샘플의 역가의 배수-상승의 상관관계를 또한 피어슨 상관관계를 사용하여 분석하였다. 역가의 배수-상승의 상대적으로 우수한 상관관계가 혈청형 9V 및 9A (피어슨 상관관계 ρ = 0.8720, p < 0.0001) 또는 9N (ρ = 0.5801, p < 0.0001) 사이에서 관찰되었지만, 9L (ρ = 0.1804, p < 0.1640)와는 보다 낮은 정도로 관찰되었다.
결론
이들 데이터에 기초하여, 13vPnC 백신은 혈청형 9A, 9L 및 9N에 대한 추가의 보호를 제공함으로써 보다 광범위한 혈청형 적용범위를 제공할 수 있다.
실시예 20: 혈청형 15B와 혈청형 15C 사이의 교차-기능적 OPA 반응
폐렴구균 혈청군 15는 4종의 구조상-관련된 혈청형: 15A, 15B, 15C 및 15F를 포함한다. 혈청형 15B 및 15C는 유전자형 결정 기술에 의해 구별불가능하며, 15B-PS가 15C-PS의 O-아세틸화된 변이체인 것을 제외하고, 유사한 캡슐형 폴리사카라이드 (PS) 조성을 갖는다. 혈청형 15B에 대한 항-캡슐형 PS 항체가 혈청형 15C와 기능적으로 교차-반응하는지 여부를 이해하기 위해, 둘 다 그의 제제의 일부로서 본원에 개시된 바와 같은 CRM197에 공유 연결된 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 면역원성 접합체를 함유하는 16vPnC (실시예 15 참조) 및 20vPnC (실시예 16 참조) 백신으로 10마리의 토끼를 면역화하였다. 백신접종-전 및 -후 혈청을 OPA 검정에서 혈청형 15B 및 15C 표적 폐렴구균 균주에 대해 시험하였다.
각각의 군으로부터의 10마리의 토끼 중에서, 100%가 혈청형 15B 접합체로의 면역화 후에 혈청형 15B에 대한 OPA 반응을 가졌다. 이들 동일한 샘플 중에서, 100%가 또한 혈청형 15C에 대한 OPA 반응을 가졌다 (표 24 및 표 25). 15C OPA에서 백신접종전 혈청에서 낮은 OPA 역가가 관찰되었다. 그러나, 백신접종-전과 비교하여 백신접종-후 혈청으로의 10-배 초과 GMT OPA 역가 증가는 본 발명의 면역원성 접합체가 OPA에서 혈청형 15B 및 15C 스트렙토코쿠스 뉴모니아에를 사멸시킬 수 있는 항체의 형성을 유도한다는 것을 입증하였다.
표 24. 16vPnC로의 백신접종 전 및 후의 토끼 혈청에서의 혈청형 15B 및 15C 균주에 대한 OPA 역가
Figure pat00040
표 25. 20vPnC로의 백신접종 전 및 후의 토끼 혈청에서의 혈청형 15B 및 15C 균주에 대한 OPA 역가
Figure pat00041
*역가는 불량한 사멸 곡선으로 인해 결정될 수 없음
실시예 21. 7-가 폐렴구균 접합체 백신의 제제화
모두 개별적으로 CRM197에 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 당접합체를 포함하는 7가 접합체 조성물 (7vPnC)을 제제화하였다.
혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에로부터의 당접합체를 상기 개시된 바와 같이 생산하였다.
벌크 농축물의 필요 부피를 배치 부피 및 벌크 사카라이드 농도에 기초하여 계산하였다. 5.0 mM 숙시네이트 및 150 mM NaCl의 최종 표적 완충제 농도를 수득하기 위해 필요 부피의 NaCl / 숙시네이트 완충제 (pH 5.8)를 첨가하여 제제화된 벌크 백신을 제조하였다. 폴리소르베이트 80을 0.02%의 최종 농도로, 및 7종의 폐렴구균 접합체를 첨가하였다. 제제를 0.2 μm 밀리포어 PES 막을 통해 여과한 다음, AlPO4를 첨가하였다. 알루미늄에의 접합체의 최대 결합을 수득하기 위해 제제를 잘 혼합하였다.
이어서 0.5mL의 용량 부피를 전달하기 위해 제제를 유리 시린지에 채웠다.
최종 투여 형태는 0.5 mL 용량의 경우에, CRM197에 개별적으로 접합된 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 각각의 당접합체 2.2 μg, 5.0 mM 숙시네이트 완충제 pH 5.8, 0.02% (w/w) PS80, 150 mM NaCl 및 AlPO4로서 알루미늄 0.25 mg/mL로 이루어졌다.
명세서에 언급된 모든 공개 및 특허 출원은 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 수준을 나타낸다. 모든 공개 및 특허 출원은 각각의 개별 공개 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 표시되는 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다.
상기 본 발명이 이해의 명료함을 위해 예시 및 예의 방식으로 다소 상세하게 기재되었지만, 첨부된 청구범위의 범주 내에서 특정 변화 및 변형이 이루어질 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Pfizer Inc. <120> Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof <130> PC72217A <150> US 62/194,965 <151> 2015-07-21 <160> 40 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "A class" CpG oligonucleotide <400> 1 ggggacgacg tcgtgggggg g 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "A class" CpG oligonucleotide <400> 2 ggggacgacg tcgtgggggg g 21 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "B class" CpG oligonucleotide <400> 3 tcgtcgtttt tcggtgcttt t 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "B class" CpG oligonucleotide <400> 4 tcgtcgtttt tcggtcgttt t 21 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "B class" CpG oligonucleotide <400> 5 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "B class" CpG oligonucleotide <400> 6 tcgtcgtttc gtcgttttgt cgtt 24 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> "B class" CpG oligonucleotide <400> 7 tcgtcgtttt gtcgtttttt tcga 24 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Class oligonucleotide <400> 8 tcgtcgtttt tcggtgcttt t 21 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Class oligonucleotide <400> 9 tcgtcgtttt tcggtcgttt t 21 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Class oligonucleotide <400> 10 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 11 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Class oligonucleotide <400> 11 tcgtcgtttc gtcgttttgt cgtt 24 <210> 12 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Class oligonucleotide <400> 12 tcgtcgtttt gtcgtttttt tcga 24 <210> 13 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C class CpG Oligonucleotide <400> 13 tcgcgtcgtt cggcgcgcgc cg 22 <210> 14 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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<213> Artificial Sequence <220> <223> C class CpG Oligonucleotide <400> 22 tcgtcgtttt cggcgcgcgc cg 22 <210> 23 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C class CpG Oligonucleotide <400> 23 tcgtcgtttt cggcggccgc cg 22 <210> 24 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C class CpG Oligonucleotide <400> 24 tcgtcgtttt acggcgccgt gccg 24 <210> 25 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C class CpG Oligonucleotide <400> 25 tcgtcgtttt cggcgcgcgc cgt 23 <210> 26 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotides <400> 26 tcgcgtcgtt cggcgcgcgc cg 22 <210> 27 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 27 tcgtcgacgt tcggcgcgcg ccg 23 <210> 28 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 28 tcggacgttc ggcgcgcgcc g 21 <210> 29 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 29 tcggacgttc ggcgcgccg 19 <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 30 tcgcgtcgtt cggcgcgccg 20 <210> 31 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 31 tcgacgttcg gcgcgcgccg 20 <210> 32 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 32 tcgacgttcg gcgcgccg 18 <210> 33 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 33 tcgcgtcgtt cggcgccg 18 <210> 34 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 34 tcgcgacgtt cggcgcgcgc cg 22 <210> 35 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 35 tcgtcgtttt cggcgcgcgc cg 22 <210> 36 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 36 tcgtcgtttt cggcggccgc cg 22 <210> 37 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 37 tcgtcgtttt acggcgccgt gccg 24 <210> 38 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-Class oligonucleotide <400> 38 tcgtcgtttt cggcgcgcgc cgt 23 <210> 39 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P class CpG oligonucleotide <400> 39 tcgtcgacga tcggcgcgcg ccg 23 <210> 40 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P class CpG oligonucleotide <400> 40 tcgtcgacga tcggcgcgcg ccg 23

Claims (80)

  1. 에스. 뉴모니아에 혈청형 15B로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 22F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 33F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 12F로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 10A로부터의 당접합체, 에스. 뉴모니아에 혈청형 11A로부터의 당접합체 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 8로부터의 당접합체 중 하나 이상을 포함하는, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7-가 폐렴구균 접합체 조성물인 면역원성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 당접합체가 개별적으로 CRM197, PD, TT 또는 DT에 접합된 것인 면역원성 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 1,000 kDa 내지 20,000 kDa 또는 10,000 kDa 내지 16,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 혈청형 15B 당접합체 내의 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.5 내지 3 또는 0.7 내지 0.9인 면역원성 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 적어도 40%의 혈청형 15B 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  7. 제4항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 아세테이트 또는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  8. 제4항에 있어서, 혈청형 15B 당접합체 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
  9. 제4항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1, 적어도 0.5 또는 적어도 0.7 mM 글리세롤 또는 mM 혈청형 15B 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.5 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  10. 제4항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체의 접합도가 2 내지 15인 면역원성 조성물.
  11. 제4항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 10 kDa 내지 1,500 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  12. 제4항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 15B 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 400 kDa 내지 15,000 kDa 또는 1,000 kDa 내지 8,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 혈청형 22F 당접합체 내의 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.5 내지 3 또는 0.9 내지 1.1인 면역원성 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 적어도 30%의 혈청형 22F 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  18. 제15항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 또는 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  19. 제15항에 있어서, 혈청형 22F 당접합체 내의 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 22F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
  20. 제15항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체의 접합도가 2 내지 15인 면역원성 조성물.
  21. 제15항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  22. 제15항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  23. 제14항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 50 kDa 내지 20,000 kDa 또는 1,000 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 혈청형 33F 당접합체 내의 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.2 내지 4 또는 0.4 내지 1.7인 면역원성 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 40% 미만의 유리 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 적어도 35%의 혈청형 33F 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  28. 제25항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 또는 적어도 0.7 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  29. 제25항에 있어서, 혈청형 33F 당접합체 내의 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 33F 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
  30. 제25항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체의 접합도가 2 내지 20인 면역원성 조성물.
  31. 제25항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  32. 제25항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 2 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 담체 단백질 및 사카라이드 사이에 적어도 하나의 공유 연결을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  33. 제25항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  34. 제24항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 33F 당접합체가 eTEC 접합을 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  35. 제1항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 50 kDa 내지 20,000 kDa 또는 500 kDa 내지 5,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 혈청형 12F 당접합체 내의 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.2 내지 4 또는 0.8 내지 1.8인 면역원성 조성물.
  37. 제36항에 있어서, 상기 혈청형 22F 당접합체가 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 12F 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 적어도 35%의 혈청형 12F 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  39. 제36항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체의 접합도가 2 내지 20인 면역원성 조성물.
  40. 제36항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  41. 제36항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 2 내지 25개의 사카라이드 반복 단위마다 담체 단백질 및 사카라이드 사이에 적어도 하나의 공유 연결을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  42. 제36항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  43. 제35항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  44. 제35항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 12F 당접합체가 TEMPO/NCS-환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  45. 제1항에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 50 kDa 내지 20,000 kDa 또는 1,000 kDa 내지 10,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 혈청형 10A 당접합체 내의 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.5 내지 3 또는 0.8 내지 1.2인 면역원성 조성물.
  47. 제46항에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 10A 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  48. 제47항에 있어서, 적어도 30%의 혈청형 10A 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  49. 제46항에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체의 접합도가 2 내지 15인 면역원성 조성물.
  50. 제46항에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  51. 제46항에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  52. 제45항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 10A 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  53. 제1항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 50 kDa 내지 20,000 kDa 또는 500 kDa 내지 20,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  54. 제53항에 있어서, 혈청형 11A 당접합체 내의 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.2 내지 4 또는 0.8 내지 1.6인 면역원성 조성물.
  55. 제54항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  56. 제55항에 있어서, 적어도 30%의 혈청형 11A 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  57. 제54항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.3 mM 아세테이트 또는 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 1.8 mM 아세테이트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  58. 제54항에 있어서, 혈청형 11A 당접합체 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트 대 활성화된 폴리사카라이드 내의 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 mM 아세테이트의 비가 적어도 0.6인 면역원성 조성물.
  59. 제54항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 mM 혈청형 11A 캡슐형 폴리사카라이드당 적어도 0.1 mM 또는 적어도 0.4 mM 글리세롤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  60. 제54항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체의 접합도가 1 내지 15인 면역원성 조성물.
  61. 제54항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  62. 제54항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  63. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 11A 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  64. 제1항에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 50 kDa 내지 20,000 kDa 또는 1,000 kDa 내지 15,000 kDa의 분자량을 갖는 것인 면역원성 조성물.
  65. 제64항에 있어서, 혈청형 8 당접합체 내의 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드 대 담체 단백질의 비(w/w)가 0.2 내지 4 또는 0.8 내지 1.5인 면역원성 조성물.
  66. 제65항에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드의 총량과 비교하여 약 50% 미만의 유리 혈청형 8 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  67. 제66항에 있어서, 적어도 30%의 혈청형 8 당접합체가 CL-4B 칼럼에서 0.3 이하의 Kd를 갖는 것인 면역원성 조성물.
  68. 제65항에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체의 접합도가 2 내지 20인 면역원성 조성물.
  69. 제65항에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 10 kDa 내지 2,000 kDa의 분자량을 갖는 사카라이드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  70. 제65항에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체의 담체 단백질이 CRM197인 면역원성 조성물.
  71. 제64항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청형 8 당접합체가 환원성 아미노화를 사용하여 제조되는 것인 면역원성 조성물.
  72. 제1항에 있어서, 상기 면역원성 조성물의 각 용량이 1.0 μg 내지 10 μg의 각 혈청형의 폴리사카라이드 및 10 μg 내지 150 μg의 담체 단백질을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  73. 제72항에 있어서, 인산알루미늄, 황산알루미늄 및 수산화알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아주반트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  74. 제73항에 있어서, 완충제를 포함하는 면역원성 조성물.
  75. 제74항에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트인 면역원성 조성물.
  76. 제74항에 있어서, 상기 완충제가 약 5.0 mM의 최종 농도의 숙시네이트인 면역원성 조성물.
  77. 제76항에 있어서, 약 150 mM의 농도의 염화나트륨을 포함하는 면역원성 조성물.
  78. 제74항에 있어서, 계면활성제를 포함하는 면역원성 조성물.
  79. 제78항에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 85 및 폴록사머로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 면역원성 조성물.
  80. 제74항에 있어서, 5.5 내지 7.5의 pH를 갖는 면역원성 조성물.
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