EA010508B1 - Способ прицельного воздействия на определенные популяции клеток с помощью конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемый линкер, конъюгаты и способы получения таких конъюгатов - Google Patents

Способ прицельного воздействия на определенные популяции клеток с помощью конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемый линкер, конъюгаты и способы получения таких конъюгатов Download PDF

Info

Publication number
EA010508B1
EA010508B1 EA200600752A EA200600752A EA010508B1 EA 010508 B1 EA010508 B1 EA 010508B1 EA 200600752 A EA200600752 A EA 200600752A EA 200600752 A EA200600752 A EA 200600752A EA 010508 B1 EA010508 B1 EA 010508B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
binding agent
maytansinoid
cell binding
conjugate
antibody
Prior art date
Application number
EA200600752A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200600752A1 (ru
Inventor
Рита Стивс
Роберт Лутц
Рави Чари
Хонгсхенг Ксие
Елена Ковтун
Original Assignee
Иммьюноджен, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34467962&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA010508(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Иммьюноджен, Инк. filed Critical Иммьюноджен, Инк.
Publication of EA200600752A1 publication Critical patent/EA200600752A1/ru
Publication of EA010508B1 publication Critical patent/EA010508B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/04—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for inducing labour or abortion; Uterotonics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/04—Amoebicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • A61P33/12—Schistosomicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

В настоящем изобретении раскрыт способ прицельной доставки майтансиноидов к выбранной популяции клеток, включающий контактирование популяции клеток или ткани, предположительно содержащей выбранную популяцию клеток, с конъюгатом из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединены с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками выбранной популяции клеток.

Description

Данная заявка претендует на преимущества Ргоу18юиа1 и.8. Ра1еи1 ΑρρΙίοαΙίοη 8сг1а1 Νο. 60/509,901 от 10 октября 2003 г., все содержание которой включено путем отсылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Способ по настоящему изобретению касается прицельного воздействия на определенные популяции клеток с помощью конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемый линкер. Другой способ по настоящему изобретению представляет собой способ получения конъюгата. Композиция по настоящему изобретению касается новых конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, у которых майтансиноид соединен через нерасщепляемый линкер с агентом клеточного связывания. Другая композиция по настоящему изобретению касается новых сложных эфиров майтансиноидов.
Уровень техники
Майтансиноиды являются сильно цитотоксичными веществами. Майтансин был впервые выделен Кирсйап е! а1. из восточноафриканского кустарника Мау!ешк кегга!а и оказался в 100-1000 раз более цитотоксичным, чем традиционные средства химиотерапии рака типа метотрексата, даунорубицина и винкристина (и.8. Ра1еп1 Νο. 3,896,111). Впоследствии было установлено, что некоторые микробы тоже вырабатывают майтансиноиды, такие как майтансинол и С-3-эфиры майтансинола (И.8. Ра1еп1 Νο. 4,151,042). Также были описаны синтетические С-3-эфиры майтансинола и аналоги майтансинола (Кирсйап е! а1., 21 1. Меб. Сйет. 31-37 (1978); НщакЫбе е! а1., 270 №1Шге 721-722 (1977); Ка\\щ е! а1., 32 Сйет. Рйагт. Ви11. 3441-3451 (1984)). Примеры аналогов майтансинола, из которых были получены С-3-эфиры, включают майтансинол с модификациями в ароматическом кольце (напр., дехлоро) или на С-9, С-14 (напр., гидроксилированная метильная группа), С-15, С-18, С-20 и С-4,5.
Природные и синтетические С-3-эфиры можно разбить на две группы:
a) С-3-эфиры простых карбоновых кислот (И.8. Ра!еп! Νοκ. 4,248,870; 4,265,814; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,317,821; 4322,348; и 4,331,598), и
b) С-3-эфиры производных Ν-метил-Ь-аланина (И.8. Ра!еп! Νοκ. 4,137,230 и 4,260,608; Ка\\щ е! а1., 32 СИет. Рйагт. Ви11. 3441-3451 (1984)).
Эфиры группы (Ь) оказались значительно более цитотоксичными, чем эфиры группы (а).
Майтансин является ингибитором митоза. Обработка клеток Ь1210 майтансином ίη νίνο, как сообщалось, ведет к тому, что 67% клеток застревают в митозе. Необработанные контрольные клетки проявляли показатель митоза, составляющий от 3,2 до 5,8% (81еЬег е! а1., 43 В1Ь1. НаетаЮЙ 495-500 (1976)). Эксперименты с яйцеклетками морских ежей и двустворчатых моллюсков показали, что майтансин ингибирует митоз, препятствуя образованию микротрубочек путем ингибирования полимеризации белка микротрубочек -тубулина (ВетШагб е! а1., 189 8с1епсе 1002-1005 (1975)).
Ιη νίίτο майтансин ингибирует суспензии лейкемических клеток мышей Р388, Ь1210 и ЬУ5178 в дозах от 10-3 до 10-1 мкг/мл, причем линия Р388 оказалась наиболее чувствительной. Майтансин также оказался активным ингибитором роста клеток носоглоточной карциномы человека ίη νίίτο, а линия острого лимфобластного лейкоза человека С.Е.М. ингибировалась даже при таких низких концентрациях, как 10-7 мкг/мл (\VοΙρе^ι-^еΕ^ΙΙ^ρе8 е! а1., 24 Вюсйет. РИатта^. 1735-1738 (1975)).
Майтансин также оказался активным ίη νίνο. Рост опухолей в системе лимфоцитарной лейкемии Р388 ингибировался в 50-100-кратном диапазоне доз, что свидетельствует о высоком терапевтическом индексе; также наблюдалась значительная ингибиторная активность в системе лейкемии мышей Ь1210, в системе легочной карциномы человека Ре\\% и в системе меланокарциномы человека В-16 (Кирсйаи, 33 Ееб. Ргос. 2288-2295 (1974)).
Поскольку майтансиноиды сильно токсичны, ожидалось, что они окажутся полезными при лечении многих заболеваний, таких как рак. Эти ожидания пока еще не реализованы. Клинические испытания майтансина оказались неблагоприятными из-за целого ряда побочных эффектов (1кке1 е! а1., 5 Саисег Тгеа!. Ксу. 199-207 (1978)). Вредные эффекты на центральную нервную систему и желудочно-кишечные симптомы были ответственны за то, что некоторые пациенты отказались от дальнейшей терапии (188е1 а! 204), причем оказалось, что майтансин связан с периферической невропатией, которая может быть кумулятивной (188е1 а! 207).
Соответственно, стали применять прицельные методы для избирательной доставки лекарственных средств к намеченным клеткам. Исследовали как расщепляемые, так и нерасщепляемые линкеры для нескольких лекарств, но в большинстве случаев, включая и майтансиноиды, испытания на цитотоксичность ίη νί!το показали, что конъюгаты лекарств с антителами редко достигают такой же цитотоксической силы, как свободные неконъюгированные лекарства. Таким образом, установилось общее мнение, что для того, чтобы прицельная доставка майтансиноидов была эффективной, связь между майтансиноидом и агентом клеточного связывания должна быть расщепляемой.
Кроме того, в области иммунотоксинов конъюгаты, содержащие линкеры с дисульфидными мостиками между моноклональным антителом и каталитически активным белковым токсином, оказались более цитотоксичными, чем конъюгаты, содержащие другие линкеры. См. ЬатЬеП е! а1., 260 1. Вю1. СИет. 12035-12041(1985); ЬатЬег! е! а1., ίη Iттиηο!οx^и8 175-209 (Α. Ргаг1ке1. еб. 1988); и Сйейе е! а1., 48 Саисег Кек. 2610-2617 (1988). Это было приписано высокой внутриклеточной концентрации глутатиона, способ
- 1 010508 ствующей эффективному расщеплению дисульфидной связи между молекулой антитела и токсином. Недавно было показано, что конъюгаты из майтансиноидов, соединенных с антителом ТА.1 против клеток рака молочной железы Нег2 через нерасщепляемый линкер 8МСС, оказались в 200 раз менее активными, чем конъюгаты из майтансиноидов, соединенных с ТА.1 через линкер с расщепляемой дисульфидной связью (С’Нап е! а1., 52 Сапсег Кек. 127-133 (1992)).
Таким образом, велись поиски цитотоксических конъюгатов, соединенных через дисульфидсодержащие расщепляемые линкеры. 81еп е! а1. описали превращение метотрексата в производное меркаптоэтиламида с последующей конъюгацией его с поли-Э-лизином через дисульфидную связь (260 1. Вю1. С1ет. 10905-10908 (1985)). Также было описано получение конъюгата из содержащего трисульфид токсического препарата калихеамицина с антителом (Мепепбех е! а1., Роийй 1п!етайопа1 СопГегепсе оп Мопос1опа1 АпйЬобу 1ттипосопщда!ек Гог Сапсег, 8ап О|едо. АЬк!гас! 81 (1989)).
В патентах и.8. Ра!еп! Ыок. 5,208,020 и 5,416,064, все содержание которых явным образом включено в настоящее изобретение путем отсылки, раскрыты цитотоксические конъюгаты, включающие агенты клеточного связывания, связанные со специфическими производными майтансиноидов через расщепляемые линкеры типа линкеров, содержащих дисульфидные группы, линкеров, содержащих кислотолабильные группы, линкеров, содержащих фотолабильные группы, линкеров, содержащих пептидазолабильные группы, и линкеров, содержащих эстеразолабильные группы.
В патенте и.8. Ра!еп! Ыо. 6,333,410 В1, все содержание которого явным образом включено в настоящее изобретение путем отсылки, раскрыт способ получения и очистки тиолсодержащих майтансиноидов для присоединения агентов клеточного связывания, а в патенте и.8. Ра!еп! Ыо. 6,441,163 В1, все содержание которого явным образом включено в настоящее изобретение путем отсылки, раскрыт одностадийный способ получения цитотоксических конъюгатов из майтансиноидов и агентов клеточного связывания, в котором линкером служит дисульфидсодержащий расщепляемый линкер.
Кроме того, в патенте и.8. Ра!еп! Ыо. 5,208,020 приведены конъюгаты между майтансиноидами и антителами с нерасщепляемыми линкерами, у которых линкер включает малеимидную группу. Однако в этой ссылке не содержится каких-либо экспериментальных данных, свидетельствующих, что такие конъюгаты эффективны при лечении заболеваний.
И вот теперь неожиданно обнаружилось, что цитотоксические конъюгаты из майтансиноидов и агентов клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемые линкеры, являются чрезвычайно активными и во многих случаях имеют неожиданные преимущества перед конъюгатами из майтансиноидов и агентов клеточного связывания с расщепляемыми линкерами.
Сущность изобретения
Описанные ниже иллюстративные, неограничивающие воплощения настоящего изобретения преодолевают вышеизложенные недостатки и другие недостатки, не изложенные выше. К тому же от настоящего изобретения не требуется преодолевать недостатки, описанные выше, а описанное ниже иллюстративное, неограничивающее воплощение настоящего изобретения может и не преодолеть какие-то проблемы, изложенные выше.
Один из аспектов настоящего изобретения составляет способ прицельной доставки майтансиноидов к выбранной популяции клеток, включающий контактирование популяции клеток или ткани, предположительно содержащей клетки из данной выбранной клеточной популяции, с конъюгатом из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер.
Другой аспект настоящего изобретения составляет способ лечения опухолей, аутоиммунных заболеваний, отторжения трансплантатов, реакции трансплантат против хозяина, вирусных инфекций, паразитарных инфекций и других заболеваний, которые можно лечить методом прицельной терапии, в котором нацеливающим агентом служит агент клеточного связывания, причем данный способ включает введение нуждающемуся в лечении субъекту эффективного количества конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов соединено с агентом клеточного связывания либо фармацевтически приемлемой композиции или сольвата данного конъюгата.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет композиция, включающая вышеописанный конъюгат.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет способ получения вышеописанного конъюгата.
Следующий аспект настоящего изобретения составляют новые сложные эфиры майтансиноидов.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 представлена структура 8МСС.
На фиг. 2 представлена структура ΌΜ1.
На фиг. 3 в виде графика представлены результаты анализа связывания антитела 1шС242 по сравнению с конъюгатом антитело-майтансиноид 1иС242-8МСС-ОМ1 методом РАС8.
- 2 010508
На фиг. 4 в виде графика представлена цитотоксичность 1иС242-8МСС-ОМ1.
На фиг. 5 представлена эксклюзионная хроматография 1иС242-8МСС-ОМ1.
На фиг. 6А-С и фиг. 7 в виде графика представлена цитотоксичность 1иС242-8МСС-ОМ1 по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью дисульфидсодержащих линкеров.
На фиг. 8Α-Ό в виде графика представлена цитотоксичность конъюгатов 8МСС-ЭМ1, соединенных с различными агентами клеточного связывания.
На фиг. 9 в виде графика представлена цитотоксичность конъюгата антитело-майтансиноид 1иС242-81АВ-ПМ1.
На фиг. 10А в виде графика представлена противоопухолевая активность 1иС242-8МСС-ОМ1 против ксенотрансплантатов рака толстой кишки человека СОЬО205 на мышах 8СГО.
На фиг. 10В в виде графика представлена противоопухолевая активность 1иС242-8МСС-ОМ1 против ксенотрансплантатов рака желудка человека 8Νυ16 на мышах 8СШ.
На фиг. 10С в виде графика представлена противоопухолевая активность трастузумаб-8МСС-ОМ1 против ксенотрансплантатов опухоли человека МСЕ7 на мышах 8СШ.
На фиг. 11 в виде графика представлены показатели клиренса йиС242-8МСС-ОМ1 по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью дисульфид-содержащих линкеров.
На фиг. 12А-С в виде графика представлены результаты исследования острой токсичности 1шС2428МСС-ЭМ1 по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью дисульфидсодержащих линкеров.
На фиг. 13 представлена продолжительность остановки клеточного цикла и разрушение клеток под действием 1иС242-8МСС-ОМ1 по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью дисульфидсодержащих линкеров.
На фиг. 14А-С представлено минимальное постороннее действие 1иС242-8МСС-ОМ1 по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью дисульфидсодержащих линкеров.
На фиг. 15 представлены репрезентативные структуры перекрестно сшивающих реагентов на основе малеимида.
На фиг. 16 представлены репрезентативные структуры перекрестно сшивающих агентов на основе галоидацетила.
На фиг. 17 представлена структура конъюгатов антитело-8МСС-ОМ1.
На фиг. 18 представлена структура конъюгатов антитело-81АВ-ОМ1.
На фиг. 19 представлена структура конъюгатов антитело-8МСС-ОМ4.
На фиг. 20 представлена структура конъюгатов антитело-81АВ-ОМ1.
На фиг. 21 представлен синтез конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через не содержащий 8 нерасщепляемый линкер.
На фиг. 22 в виде графика представлена цитотоксичность конъюгата 1шС242-не содержащий 8 нерасщепляемый линкер-ЭМ1.
На фиг. 23 в виде графика представлены результаты анализа связывания конъюгата 1шС242-не содержащий 8 нерасщепляемый линкер-ЭМ1 методом ЕАС8.
На фиг. 24 в виде графика представлены результаты анализа связывания антитела трастузумаб по сравнению с конъюгатом антитело-майтансиноид трастузумаб-8МСС-ОМ1 на чашках ЕСЭ с НЕК.2.
На фиг. 25 в виде графика представлена цитотоксичность и специфичность трастузумаб-8МССБМ1.
На фиг. 26 представлена эксклюзионная хроматография трастузумаб-8МСС-ОМ1.
На фиг. 27 в виде графика представлены результаты анализа связывания антитела трастузумаб по сравнению с конъюгатом антитело-майтансиноид трастузумаб-81АВ-ОМ1 на чашках ЕСЭ с НЕК2.
На фиг. 28 в виде графика представлена цитотоксичность и специфичность трастузумаб-81АВ-ОМ 1.
На фиг. 29 представлена эксклюзионная хроматография трастузумаб-81АВ-ЭМ1.
Осуществление изобретения
В данной области известно, что существующие препараты очень трудно модифицировать без уменьшения их цитотоксического потенциала. Однако и.8. Ра1еи1 N08 6,441,163 В1, 6,333,410 В1, 5,416,064 и 5,208,029 свидетельствуют, что можно создать сильнодействующие цитотоксические вещества присоединением майтансиноидов к соответствующим агентам клеточного связывания через расщепляемые линкеры, в особенности расщепляемые линкеры, содержащие дисульфидные группы. Конъюгаты из майтансиноидов и агентов клеточного связывания позволяют в полной мере применять цитотоксическое действие майтансиноидов заданным образом только против нежелательных клеток, избегая при этом побочных эффектов, вызванных непреднамеренным повреждением здоровых клеток.
Авторы настоящего изобретения неожиданно открыли, что майтансиноиды, соединенные с агентами клеточного связывания через нерасщепляемые линкеры, во многих существенных отношениях превосходят майтансиноиды, соединенные через расщепляемые линкеры. В частности, по сравнению с конъюгатами, содержащими расщепляемые линкеры, конъюгаты с нерасщепляемыми линкерами проявляют эквивалентную противораковую активность ίη νίίτο и ίη νίνο, но проявляют заметное снижение коэффициента плазменного клиренса и токсичности.
Итак, настоящее изобретение предусматривает улучшенный способ прицельного воздействия на
- 3 010508 клетки, в особенности клетки, подлежащие разрушению, такие как раковые клетки (в особенности клетки твердых опухолей), зараженные вирусами клетки, зараженные микроорганизмами клетки, зараженные паразитами клетки, аутоиммунные клетки (клетки, вырабатывающие антитела), активированные клетки (участвующие в отторжении трансплантатов или реакции трансплантат против хозяина) или любого другого типа больные или аномальные клетки, и при этом проявляющий минимум побочных эффектов.
Используемый в способе изобретения конъюгат содержит один или несколько майтансиноидов, соединенных с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер. В одном способе получения конъюгата агент клеточного связывания, к примеру антитело, сначала подвергают модификации с помощью перекрестно сшивающего реагента типа 8МСС. На второй стадии реакционноспособный майтансиноид типа ΌΜ1, обладающий тиоловой группой, подвергают реакции с модифицированным антителом и получают конъюгаты антитело-майтансиноид. В качестве альтернативы майтансиноид может быть подвергнут модификации с помощью перекрестно сшивающего реагента перед проведением реакции с агентом клеточного связывания. См., к примеру, и.8. Ра!еп! Νο. 6,441,163 В1.
Подходящие майтансиноиды
Майтансиноиды, подходящие для применения в настоящем изобретении, хорошо известны в данной области и могут быть выделены из природных источников известными методами, получены методами генетической инженерии (см. Уи е! а1., 99 ΡΝΆ8 7986-7973 (2002)) или получены синтезом в соответствии с известными методами.
Примеры подходящих майтансиноидов включают майтансинол и аналоги майтансинола. Примеры подходящих аналогов майтансинола включают аналоги, содержащие модифицированное ароматическое кольцо, и аналоги, содержащие модификации по другим положениям.
Конкретные примеры подходящих аналогов майтансинола, содержащих модифицированное ароматическое кольцо, включают:
(1) С-19-дехлоро (И.8. Ра1еШ Νο. 4,256,746) (получают восстановлением ансамитоцина Р2 с помощью ЬАН);
(2) С-20-гидрокси (или С-20-деметил) ± С-19-дехлоро (И.8. Ра!еп! Νοκ. 4,361,650 и 4,307,016) (получают деметилированием с помощью 81гер1отусе5 или АеОпотуеех либо дехлорированием с помощью ЬАН);
(3) С-20-деметокси, С-20-ацилокси (-ОСОВ), ± дехлоро (И.8. Ра!еп! Νο. 4,294,757) (получают ацилированием с помощью ацилхлоридов).
Конкретные примеры подходящих аналогов майтансинола, содержащих модификации по другим положениям, включают:
(1) С-9-8Н (и.8. Ра!еп! Νο. 4,424,219) (получают реакцией майтансинола с Н28 или Р285);
(2) С-14-алкоксиметил (деметокси/СН2ОВ) (и.8. Ра!еп! Νο. 4,331,598);
(3) С-14-гидроксиметил или ацилоксиметил (СН2ОН или СН2ОАс) (И.8. Ра!еп! Νο. 4,450,254) (получают из №сагШа);
(4) С-15-гидрокси/ацилокси (и.8. Ра!еп! Νο. 4,364,866) (получают превращением майтансинола под действием 8ΐΐΌρΙοιη\^8);
(5) С-15-метокси (И.8. Ра!еп! Νοκ. 4,313,946 и 4,315,929) (выделяют из Тгетаа ηι.ι6ίΠοπι);
(6) С-18-Л-деметил (И.8. Ра1еп1 Νοκ. 4,362,663 и 4,322,348) (получают деметилированием майтансинола под действием 81герЮтусе5) и (7) 4,5-дезокси (и.8. Ра!еп! Νο. 4,371,533) (получают восстановлением майтансинола с помощью трихлорида титана/ЬАН).
Известно, что многие положения у майтансинола полезны в качестве положений для образования связей, в зависимости от типа связи. Например, для образования сложноэфирной связи подходят такие положения: положение С-3 с гидроксильной группой, положение С-14, модифицированное гидроксиметилом, положение С-15, модифицированное гидроксильной группой, и положение С-20 с гидроксильной группой. Однако предпочтительно положение С-3 и особенно предпочтительно положение С-3 у майтансинола.
В соответствии с настоящим изобретением предпочтительный майтансинол содержит свободную тиоловую группу. К особенно предпочтительным майтансинолам, содержащим свободную тиоловую группу, относятся С-3-сложные эфиры майтансинола и его аналогов, содержащие Ν-метилаланин и содержащие Ν-метилцистеин. К предпочтительным сложным эфирам относятся сложные эфиры майтансинола, содержащие Ν-метилаланин и содержащие Ν-метилцистеин. Синтез эфиров майтансинола, содержащих свободную тиоловую группу, был описан ранее, например в и.8. Ра!еп! Νο. 5,208,020; С.’11ап е! а1., 52 Сапсег Век., 127-131 (1992); и Ыи е! а1., 93 Ргос. ЫаИ. Асаб. 8с1., 8618-8623 (1996). Кроме того, и.8. Ра1еШ Νο. 6,333,410 В1, все содержание которого включено путем отсылки, предусматривает усовершенствованный способ получения и очистки тиолсодержащих майтансиноидов, пригодных для присоединения агентов клеточного связывания.
Во многих конъюгатах настоящего изобретения, приведенных ниже, используется тиолсодержащий майтансиноид ΌΜ1, который официально именуется Ν2-деацетил-Ν2-(3-меркапто-1
- 4 010508 оксопропил)майтансин. ΌΜ1 представлен следующей структурной формулой:
Синтез тиолсодержащего майтансиноида ΌΜ1 был описан ранее (И.8. Ра1еп1 Νο. 5,208,020).
В заявке И.8. Ра1еШ Αρρίίοαίίοη 10/849,136, все содержание которой включено путем отсылки, описаны стерически ограниченные тиол-содержащие майтансиноиды, несущие один или два алкильных заместителя на α-атоме углерода, несущем тиоловую функциональную группу. Кроме того, ацильная группа боковой цепи ацилированной аминокислоты майтансиноида, несущей сульфгидрильную группу, имеет линейную цепь длиной по меньшей мере в три атома углерода между карбонильной группой амида и атомом серы. Эти новые майтансиноиды пригодны для применения в настоящем изобретении.
Синтез майтансиноидов со стерически затрудненной тиоловой группой может быть описан на примере и.8. Ра1еШ Αρρίίοαίίοη 10/849,136, особенно ее фиг. 3.
В одном аспекте изобретения майтансиноид содержит стерически ограниченную тиоловую группу и представлен формулой П'-Ь, ΙΙ'-Ό или П'-О,Ь
где ^'означает (СП ΙΑΗίΊΑίΊΑ МС С).Ао(СН,К.)т|).(СН СН ).(С Ο.,Β-ΐίΊΑΗΔ.ίΊΑΗΑΙI:
А, В и Ό независимо друг от друга означают циклический алкил или циклический алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, простой или замещенный арил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал:
Р1-Я12 независимо друг от друга означают линейный алкил или алкенил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил либо гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал и, кроме того, В2-В12 могут означать Н:
1, т, η, о, р, ср г, 8, I и и независимо друг от друга означают 0 или целое число от 1 до 5 при условии, что по меньшей мере два из 1, т, η, о, р, ср г, 8, I и и не равны 0:
Мау означает майтансиноид, несущий боковую цепь на гидроксиле С-3, гидроксиметиле С-14, гидроксиле С-15 или десметиле С-20.
Другой майтансиноид, применимый в изобретении, представлен формулой ΙΙ-Ь, ΙΙ-Ό или П-О,Ь
где Υι означает (СВ7В8)1(СВ5В6)т(СВ3В4)пСВ1В28Н:
В|-Р8 независимо друг от друга означают линейный алкил или алкенил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил, гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал и, кроме того, Р2-Р8 могут означать Н:
1, т и η независимо друг от друга означают целое число от 1 до 5 и, кроме того, η может быть равно 0: Мау означает майтансиноид, несущий боковую цепь на гидроксиле С-3, гидроксиметиле С-14, гид
- 5 010508 роксиле С-15 или десметиле С-20.
Другой полезный майтансиноид представлен формулой 4'1
где заместители соответствуют определениям для приведенной выше формулы II'. Другой предпочтительный майтансиноид представлен формулой 41
где заместители соответствуют определениям для приведенной выше формулы II.
Предпочтительны любые из вышеописанных соединений, у которых К1 означает Н и К2 означает метил либо Я1 и К2 означают метил.
Особенно предпочтительны любые из вышеописанных соединений, у которых К1 означает Н, К2 означает метил, К5, К6, К7 и К8 означают Н, 1 и т равны 1 и η равно 0, а также те, у которых К1 и К2 означают метил, К5, К6, К7 и К8 означают Н, 1 и т равны 1 и η равно 0.
Кроме того, предпочтительны Ь-аминоацильные стереоизомеры.
Примеры линейных алкилов или алкенилов, содержащих от 1 до 10 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, пропенил, бутенил и гексенил.
Примеры разветвленных алкилов или алкенилов, содержащих от 3 до 10 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, 1-этилпропил, изобутенил и изопентенил.
Примеры циклических алкилов или алкенилов, содержащих от 3 до 10 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопентенил и цикло гексенил.
Простые арилы включают арилы, содержащие от 6 до 10 атомов углерода, а замещенные арилы включают арилы, содержащие от 6 до 10 атомов углерода и несущие по меньшей мере один алкильный заместитель, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, или алкоксильный заместитель типа метокси, этокси, либо галогеновый заместитель или нитрозаместитель.
Примеры простых арилов, содержащих от 6 до 10 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) фенил и нафтил.
Примеры замещенных арилов включают (не ограничиваясь этим) нитрофенил, динитрофенил.
Гетероциклические ароматические радикалы включают группы, содержащие 3-10-членное кольцо, содержащее один или два гетероатома, выбранных из Ν, О или 8.
Примеры гетероциклических ароматических радикалов включают (не ограничиваясь этим) пиридил, нитропиридил, пирролил, оксазолил, тиенил, тиазолил и фурил.
Гетероциклоалкильные радикалы включают циклические соединения, содержащие 3-10-членные кольцевые системы, содержащие один или два гетероатома, выбранных из Ν, О или 8.
Примеры гетероциклоалкильных радикалов включают (не ограничиваясь этим) дигидрофурил, тет
- 6 010508 рагидрофурил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил и морфолино.
К особенно предпочтительным майтансиноидам, имеющим боковую цепь, содержащую стерически затрудненную тиоловую связь, относятся майтансиноиды М2'-деацетил-Ы2'-(4-меркапто-1-оксопентил) майтансин (называемый ΌΜ3) и М2-деацетил-Ы2-(4-метил-4-меркато-1-оксопентил)майтансин (называемый ΌΜ4). ΌΜ3 и ΌΜ4 представлены следующими структурными формулами:
Эффективность соединений изобретения в качестве терапевтических средств зависит от тщательного выбора надлежащего агента клеточного связывания. Агенты клеточного связывания могут быть любого типа, известного в настоящее время или ставшего известным, и включают пептиды и непептиды. В общем, они могут представлять собой антитела (в особенности, моноклональные антитела), лимфокины, гормоны, факторы роста, витамины, молекулы-переносчики питательных веществ (типа трасферрина) или любые другие молекулы или вещества клеточного связывания, которые специфически связываются с мишенью.
Более конкретные примеры агентов клеточного связывания, которые могут быть использованы, включают поликлональные и моноклональные антитела, включая полностью человеческие антитела;
одноцепочечные антитела (поликлональные и моноклональные);
фрагменты антител (поликлональных и моноклональных), такие как ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2 и Εν (Рагйат, 131 1. 1ттипо1. 2895-2902 (1983); 8рпид е! а1., 113 1. 1ттипо1. 470-478 (1974); МкоооГГ е! а1., 89 Агсй. Вюсйет. Вюрйук. 230-244 (1960));
химерные антитела и их антиген-связывающие фрагменты;
доменные антитела (бАЬк) и их антиген-связывающие фрагменты, включая антитела сатейб (Эекту!ег е! а1., 3 №1иге 8!гис!. Βίο1. 752,1996);
антитела акул, называемые новыми рецепторами антигенов (ΙβΝΛΚ.) (СгееиЬегд е! а1., 374 №!иге 168,1995; 8!аийе1б е! а1., 305 Баеисе 1770-1773, 2004);
интерфероны (напр., α-, β-, γ-);
лимфокины типа 1Ь-2, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-6;
гормоны типа инсулина, ТКН (рилизинг-фактор тиреотропина), ΜδΗ (меланоцит-стимулирующий гормон), стероидные гормоны типа андрогенов и эстрогенов;
факторы роста и колониестимулирующие факторы типа ЕСЕ, ТСЕ-α, ΕΟΕ, УЕСЕ, С-С8Е, Μ-ΟδΕ и ΟΜ-ΟδΕ (Вигдекк, 5 1ттиио1оду Тобау 155-158 (1984));
трансферрин (О'КееГе е! а1., 260 1. Вю1. Сйет. 932-937 (1985)); и витамины типа фолата.
Методы моноклональных антител позволяют получать чрезвычайно специфичные агенты клеточного связывания в виде специфических моноклональных антител. Особенно хорошо в данной области известны методы получения моноклональных антител при иммунизации мышей, крыс, хомяков или любых других млекопитающих представляющим интерес антигеном, таким как интактные клетки-мишени, антигены, выделенные из клеток-мишеней, целые вирусы, ослабленные целые вирусы и вирусные белки типа белков вирусной оболочки. Также можно использовать сенситизированные клетки человека. Другой метод получения моноклональных антител состоит в использовании фаговых библиотек ^Εν (одноцепочечных вариабельных областей), в особенности ^Εν человека (напр., см. СпГГййк е! а1., υ.δ. Ра!еи! Νϋ8. 5,885,793 и 5,969,108; УсСаГГеОу е! а1., XVО 92/01047; Ыттд е! а1., XVО 99/06587). Кроме того, можно использовать и перестроенные (гекшТасеб) антитела, раскрытые в υ.δ. Ра!еи! №. 5,639,641, а также гуманизированные антитела.
Выбор надлежащего агента клеточного связывания является предметом выбора, который зависит от конкретной популяции клеток-мишеней, но в общем предпочтительны моноклональные антитела человека, если таковые доступны.
Например, моноклональное антитело 15 - это мышиное антитело типа 1дС2а, которое специфично к общему антигену острого лимфобластного лейкоза (САЕЬА) (Βί!ζ е! а1, 283 №Шге 583-585 (1980)) и мо
- 7 010508 жет использоваться, если клетки-мишени экспрессируют СЛЬЬЛ, как при заболевании острым лимфобластным лейкозом.
Моноклональное антитело ΜΥ9 - это мышиное антитело типа 1дС1, которое специфически связывается с антигеном СЭ33 (Ι.Ό. СпГПп е! а1., 8 Ьеикет1а Кек., 521 (1984)) и может использоваться, если клетки-мишени экспрессируют ί.Ό33. при заболевании острым миелогенным лейкозом (АМЬ).
Аналогичным образом моноклональное антитело анти-В4, также называемое В4, - это мышиный 1дС1, который связывается с антигеном СЭ19 на В-клетках (№1б1ег е! а1., 131 1. 1ттипо1. 244-250 (1983)) и может использоваться, если клетки-мишени представляют собой В-клетки или больные клетки, экспрессирующие этот антиген, как при не-Ходжкинской лимфоме или хроническом лимфобластном лейкозе.
Кроме того, моноклональное антитело С242, которое связывается с антигеном СапАд (И.З. Ра1еп1 Νο. 5,552,293), может использоваться для лечения экспрессирующих СапАд опухолей, таких как рак толстой и прямой кишки, поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легких и рак желудка. НиС242 это гуманизированная форма моноклонального антитела С242, которая описана в и.З. Ра1еп1 Νο. 5,552,293, а ее гибридома депонирована в ЕСАСС за номером 90012601. Гуманизированная форма может быть получена либо методом СЭК-дгаГйпд (и.З. Ра1еп1 Νοκ. 5,585,089; 5,693,761; и 5,693,762), либо методом восстановления (и.З. Ра1еп1 Νο. 5,639,641). НиС242 также может использоваться для лечения экспрессирующих СапАд опухолей, таких как рак толстой и прямой кишки, поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легких и рак желудка.
Кроме того, антитело трастузумаб может использоваться для лечения рака молочной железы и других форм рака, таких как рак простаты и рак яичников, при которых экспрессируется антиген Нег2.
Также полезны антитела против 1СЕ-1К, которые связываются с рецептором инсулинподобного фактора роста.
Для лечения рака яичников и рака простаты можно с успехом использовать, к примеру, антитела против МиС1 типа анти-НМЕС-2 (Тау1ог-Рараб1тйгюи е! а1., 28 1п!. 1. Сапсег 17-21, 1981) или 11СТМ01 (56 Сапсег Кек. 5179-5185, 1996) и против РЗМА (простата-специфичного мембранного антигена) типа 1591 (Ьш е! а1., Сапсег Кек. 3629-3634, 1997), соответственно.
Для прицельного воздействия на определенные популяции клеток можно использовать и другие молекулы, помимо антител. Например, СМ-СЗЕ, который связывается с миелоидными клетками, можно использовать в качестве агента клеточного связывания для прицельного воздействия на больные клетки при остром миелогенном лейкозе. Кроме того, 1Ь-2, который связывается с активированными Тклетками, можно использовать для профилактики отторжения трансплантатов, для терапии и предупреждения реакции трансплантат против хозяина и для лечения острого Т-клеточного лейкоза. МЗН, который связывается с меланоцитами, можно использовать для лечения меланомы. Фолиевая кислота может использоваться для прицельного воздействия на фолатный рецептор, экспрессируемый на опухолях яичников и других опухолях. Эпидермальный фактор роста (ЕСЕ) можно использовать для прицельного воздействия на плоскоклеточный рак при раке легких и головы и шеи. Соматостатин можно использовать для прицельного воздействия на нейробластомы и другие типы опухолей. На рак молочной железы и рак яичек можно с успехом воздействовать прицельно с помощью эстрогена (или его аналогов) или андрогена (или его аналогов), соответственно, в качестве агентов клеточного связывания.
Перекрестно сшивающие реагенты
Майтансиноид соединяется с агентом клеточного связывания при помощи перекрестно сшивающего реагента, который при реакции образует нерасщепляемый линкер между майтансиноидом и агентом клеточного связывания.
В настоящем изобретении линкер означает любую химическую группировку, которая ковалентно соединяет агента клеточного связывания с майтансиноидом. В некоторых случаях часть линкера происходит из майтансиноида. Например, тиол-содержащий майтансиноид ЭМ 1 (фиг. 2) является производным природного майтансиноида - майтансина и обеспечивает часть линкера. Боковая цепь при гидроксильной группе С-3 майтансина оканчивается на -СО-СН3, а боковая цепь ЭМ1 оканчивается на -СОСН2-СН2-ЗН. Поэтому конечный линкер собирается из двух кусков: перекрестно сшивающий реагент входит в состав агента клеточного связывания, а боковая цепь происходит из ЭМ1.
Расщепляемые линкеры - это линкеры, которые могут быть расщеплены в мягких условиях, т.е. условиях, при которых активность препарата на основе майтансиноида не затрагивается. Многие известные линкеры попадают в эту категорию и описаны ниже.
Дисульфид-содержащие линкеры - это линкеры, которые расщепляются путем обмена дисульфидов, который может происходить в физиологических условиях.
Кислотолабильные линкеры - это линкеры, которые расщепляются при кислом значении рН. Например, определенные внутриклеточные компартменты, такие как эндосомы и лизосомы, имеют кислое значение рН (рН 4-5) и обеспечивают условия, подходящие для расщепления кислотолабильных линкеров.
Фотолабильные линкеры полезны на поверхности тела и во многих полостях организма, которые доступны для освещения. Кроме того, инфракрасный свет может проникать в ткани.
Некоторые линкеры могут расщепляться пептидазами. Только некоторые пептиды легко расщеп
- 8 010508 ляются внутри клетки или снаружи, напр., см. Тгоие! с1 а1., 79 Ргос. Νηΐΐ. Асаб. 8с1. И8А, 626-629 (1982) и Итето1о е1 а1., 43 Ιηΐ. 1. Сапсег, 677-684 (1989). Кроме того, пептиды состоят из α-аминокислот и пептидных связей, которые в химическом отношении представляют собой амидные связи между карбоксильной группой одной аминокислоты и α-аминогруппой второй аминокислоты. Другие амидные связи, такие как связь между карбоксильной группой и ε-аминогруппой лизина, не считаются пептидными связями и считаются нерасщепляемыми.
Некоторые линкеры могут расщепляться эстеразами. Опять же только некоторые эфиры могут расщепляться эстеразами, находящимися внутри клетки или снаружи. Сложные эфиры образуются при конденсации карбоновой кислоты и спирта. Простые эфиры - это эфиры, образуемые простыми спиртами, такими как алифатические спирты и небольшие циклические и небольшие ароматические спирты. Так, авторы настоящего изобретения обнаружили, что эстеразы не расщепляют эфир в положении С-3 майтансина, так как спиртовый компонент этого эфира, майтансинол, является очень большим и сложным.
Нерасщепляемый линкер - это любая химическая группировка, которая способна соединить майтансиноид с агентом клеточного связывания устойчиво и ковалентно и не подпадает под категории, приведенные выше в качестве расщепляемых линкеров. Так, нерасщепляемые линкеры практически устойчивы к расщеплению под действием кислоты, расщеплению под действием света, расщеплению пептидазами, расщеплению эстеразами и расщеплению дисульфидной связи.
По существу, устойчив к расщеплению означает, что химическая связь в линкере или по соседству с линкером по меньшей мере у 80%, предпочтительно по меньшей мере у 85%, более предпочтительно по меньшей мере у 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере у 95% и наиболее предпочтительно по меньшей мере у 99% популяции конъюгата между агентом клеточного связывания и майтансиноидом остается нерасщепляемой под действием кислоты, фотолабильного расщепляющего реагента, пептидазы, эстеразы либо химического или физиологического соединения, расщепляющего химическую связь (к примеру, дисульфидную связь) в расщепляемом линкере, на протяжении нескольких часов или нескольких дней при обработке любым из вышеописанных реагентов.
Кроме того, нерасщепляемый означает способность химической связи в линкере или по соседству с линкером противостоять расщеплению, вызванному кислотой, фотолабильным расщепляющим реагентом, пептидазой, эстеразой либо химическим или физиологическим соединением, расщепляющим дисульфидную связь, в условиях, при которых майтансиноид или агент клеточного связывания не теряет своей активности.
Средний специалист в этой области сможет легко отличить нерасщепляемый линкер от расщепляемого линкера.
Примером соответствующего контроля при тестировании линкера, по существу, на устойчивость к расщеплению служит линкер с химической связью типа дисульфидной связи, который подвержен расщеплению любым из реагентов, описанных выше. Протестировать линкер на практическую устойчивость к расщеплению можно, измеряя стабильность конъюгатов методами ЕЬ18А, ВЭЖХ или иным подходящим способом за период времени, длящийся от нескольких часов до нескольких дней, обычно от 4 часов до 5 дней. Методом ЕЫ8А можно измерить уровень стабильного конъюгата в плазме.
Нерасщепляемые линкеры также отличаются тем, что время полужизни ίη νί\Ό у конъюгатов, содержащих нерасщепляемые линкеры, обычно примерно на 20% выше, чем у конъюгатов, содержащих расщепляемые линкеры. У мышей время полужизни ίη у1уо конъюгатов 1дС-майтансиноид, соединенных через нерасщепляемые линкеры, составляет по меньшей мере 4 дня.
Подходящие перекрестно сшивающие реагенты, образующие нерасщепляемые линкеры между майтансиноидом и агентом клеточного связывания, хорошо известны в данной области и могут образовывать нерасщепляемые линкеры, содержащие атом серы (к примеру, 8МСС) или без атома серы.
Предпочтительные перекрестно сшивающие реагенты, образующие нерасщепляемые линкеры между майтансиноидом и агентом клеточного связывания, включают малеимидную или галоидацетильную группировку. По настоящему изобретению такие нерасщепляемые линкеры происходят из малеимидной или галоидацетильной группировки. К сшивающим реагентам, содержащим малеимидную группировку, относятся №сукцинимидил-4-(малеимидометил)циклогексанкарбоксилат (8МСС), №сукцинимидил-4(№малеимидометил)циклогексан-1-карбокси-6-амидокапроат, представляющий собой длинноцепочечный аналог 8МСС (ЬС-8МСС), Ν-сукцинимидиловый эфир κ-малеимидоундекановой кислоты (КМИА), Ν-сукцинимидиловый эфир γ-малеимидомасляной кислоты (СМВ8), Ν-гидроксисукцинимидный эфир εмалеимидокапроновой кислоты (ЕМС8), т-малеимидобензоил-№гидроксисукцинимидный эфир (МВ8), №(а-малеимидацетокси)сукцинимидный эфир (АМА8), сукцинимидил-6-(в-малеимидопропионамидо) гексаноат (8МРН), №сукцинимидил-4-(р-малеимидофенил)бутират (8МРВ) и Ν-ф-малеимидофенил) изоцианат (РМР1) (см. репрезентативные структуры малеимидных перекрестно сшивающих реагентов на фиг. 15). Эти сшивающие реагенты образуют нерасщепляемые линкеры, происходящие из малеимидных группировок.
К сшивающим реагентам, содержащим галоидацетильную группировку, относятся Ν-сукцинимидил-4-(иодацетил)аминобензоат (8ЬАВ), Ν-сукцинимидилиодацетат (81А), Ν-сукцинимидилбром
- 9 010508 ацетат (8ВА) и М-сукцинимидил-3-(бромацетамидо)пропионат (8ВАР) (см. репрезентативные структуры галоидацетильных перекрестно сшивающих реагентов на фиг. 16). Эти перекрестно сшивающие реагенты образуют нерасщепляемые линкеры, происходящие из галоидацетильных группировок.
Несмотря на то, что активные эфиры, приведенные на фиг. 15 и 16, состоят из Ν-сукцинимидиловых и сульфосукцинимидиловых эфиров, можно использовать и другие активные эфиры, к примеру Ν-гидроксифталимидиловые эфиры, Ν-гидроксисульфофталимидиловые эфиры, ортонитрофениловые эфиры, паранитрофениловые эфиры, 2,4-динитрофениловые эфиры, 3-сульфонил-4-нитрофениловые эфиры, 3-карбокси-4-нитрофениловые эфиры, пентафторфениловые эфиры и сульфонилтетрафторфениловые эфиры.
Особенно предпочтительны перекрестно сшивающие реагенты, которые образуют нерасщепляемые линкеры, не содержащие атома серы. На фиг. 21 представлена молекула майтансиноида, обработанная сшивающим реагентом, происходящим из α,ω-дикарбоновой кислоты (алкан- или алкендиовая кислота, у которой алкан или алкен содержит 3-24 атома углерода). При реакции с агентом клеточного связывания такой сшивающий реагент образует нерасщепляемый линкер, не содержащий серы (не содержащий 8 нерасщепляемый линкер).
Молекулы майтансиноида на фиг. 21 получают следующим образом. Сначала получают моноэфир адипиновой кислоты (также известной как гександиовая кислота или 1,6-гександикарбоновая кислота) при обработке одним эквивалентом 2-триметил-силилэтанола в присутствии дициклогексилкарбодиимида. Активация оставшейся карбоксильной группы изобутилхлорформатом и последующая реакция с Νметил-Ь-аланином дает ацилированный Ν-метил-Ь-аланин. Реакция с майтансинолом в присутствии дициклогексилкарбодиимида и хлорида цинка и последующее удаление защитной группы триметилсилила с помощью тетрабутиламмония фторида дает эфир майтансиноида, несущий свободную карбоксильную группу. Этерификация карбоксильной группы при реакции с сульфо-Л-гидроксисукцинимидом в присутствии дициклогексилкарбодиимида дает активный эфир майтансинола, который может реагировать с агентом клеточного связывания с образованием нерасщепляемого конъюгата, не содержащего атома серы.
Нерасщепляемые линкеры, не содержащие атома серы, могут быть получены и из других молекул на основе дикарбоновых кислот, используя вышеописанный метод. К подходящим другим молекулам на основе дикарбоновых кислот относятся (не ограничиваясь этим) α,ω-дикарбоновые кислоты общей формулы IV ηοοο-Χι-υ,,-ζ,,,-οοοη (IV)
В формуле IV X означает линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 2 до 20 атомов углерода, Υ означает циклоалкил или циклоалкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, Ζ означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода, либо замещенную или незамещенную гетероциклическую группу, у которой гетероатом выбран из Ν, О или 8, причем 1, т и η поодиночке равны 0 или 1 при условии, что все вместе они не равны 0 одновременно.
Майтансиноиды, содержащие после обработки активный эфир, который может непосредственно реагировать с агентом клеточного связывания с образованием конъюгата, содержащего нерасщепляемый линкер, не содержащий 8, могут быть представлены формулой 5
где X, Υ, Ζ, 1, т и η определены выше как для формулы IV, а также Е вместе с карбонильной группой образует активный эфир, такой как Ν-гидроксисукцинимидиловый и сульфосукцинимидиловый эфиры, Ν-гидроксифталимидиловый эфир, Ν-гидроксисульфофталимидиловый эфир, ортонитрофениловый эфир, паранитрофениловый эфир, 2,4-динитрофениловый эфир, 3-сульфонил-4-нитрофениловый эфир, 3-карбокси-4-нитрофениловый эфир, пентафторфениловый эфир и сульфонилтетрафторфениловый эфир.
Предпочтительным является дериватизованный майтансиноид, представленный формулой 6
- 10 010508
где η означает целое число от 3 до 24, а Е соответствует определению для майтансиноида формулы 5.
Более предпочтительное воплощение составляет производный майтансиноид, представленный формулой 7
где К означает Н или 803 -Να'.
Соединения формул 5, 6 и 7 являются новыми майтансиноидами.
Примеры линейных алкилов, алкенилов или алкинилов, содержащих от 2 до 20 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) этил, пропил, бутил, пентил, гексил, пропенил, бутенил и гексенил.
Примеры разветвленных алкилов, алкенилов или алкинилов, содержащих от 2 до 20 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, изопентил, 1этилпропил, изобутенил, изопентенил, этинил, пропинил (пропаргил), 1-бутинил, 2-бутинил и 1 гексинил.
Примеры циклоалкилов или циклоалкенилов, содержащих от 3 до 10 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопентенил, циклогексенил и циклогептадиенил.
Примеры ароматических групп, содержащих от 6 до 10 атомов углерода, включают (не ограничиваясь этим) фенил и нафтил.
Примеры замещенных ароматических групп включают (не ограничиваясь этим) нитрофенил и динитрофенил.
Гетероциклические ароматические группы включают (не ограничиваясь этим) группы, содержащие 3-10-членное кольцо, содержащее один или два гетероатома, выбранных из Ν, О или 8.
Примеры замещенных и незамещенных гетероциклических ароматических групп включают (не ограничиваясь этим) пиридил, нитропиридил, пирролил, оксазолил, тиенил, тиазолил и фурил.
Гетероциклоалкильные радикалы включают (не ограничиваясь этим) циклические соединения, содержащие 3-10-членные кольцевые системы, содержащие один или два гетероатома, выбранных из Ν, О или 8.
Примеры гетероциклоалкильных радикалов включают (не ограничиваясь этим) дигидрофурил, тетрагидрофурил, тетрагидропирролил, пиперидинил, пиперазинил и морфолино.
Примеры α,ω-дикарбоновых кислот общей формулы Н00С-Х1-Уп-2т-С00Н включают (не ограничиваясь этим) адипиновую кислоту, глутаровую кислоту, пимелиновую кислоту, гексен-1,6-диовую кислоту, пентен-1,5-диовую кислоту, циклогександиовую кислоту и циклогексендиовую кислоту.
Синтез цитотоксических конъюгатов
Конъюгаты из агентов клеточного связывания и майтансиноидов могут быть образованы любыми методами, известными в настоящее время или разработанными позже.
Способы конъюгирования агентов клеточного связывания с майтансиноидами, в общем, включают две стадии реакции. В одном методе, описанном в и.8. Ра1еп1 Νο. 5,208,020, агент клеточного связывания типа антитела может быть модифицирован с помощью перекрестно сшивающего реагента для введения одной или нескольких, обычно 1-10, реакционноспособных групп. Затем модифицированный агент клеточного связывания подвергают реакции с одним или несколькими тиолсодержащими майтансиноидами для получения конъюгата.
- 11 010508
Альтернативно, как изложено в и.8. Ра!еп! Νο. 6,441,163 В1, можно сначала модифицировать тиолсодержащий майтансиноид с помощью перекрестно сшивающего реагента, после чего модифицированный майтансиноид подвергнуть реакции с агентом клеточного связывания. Например, тиолсодержащий майтансиноид можно подвергнуть реакции с малеимидными соединениями, приведенными на фиг. 15, либо с галоацетильными соединениями, приведенными на фиг. 16, получая тиоэфир майтансиноида, несущий активный сукцинимидиловый или сульфосукцинимидиловый эфир. Реакция этих майтансиноидов, содержащих активированную группировку линкера, с агентом клеточного связывания составляет другой метод получения нерасщепляемого конъюгата из агента клеточного связывания и майтансиноида.
В другом аспекте изобретения, как изложено выше, можно сначала обработать майтансиноид, не содержащий атома серы, перекрестно сшивающим реагентом на основе дикарбоновой кислоты, а затем провести реакцию с агентом клеточного связывания, получая конъюгат, в котором майтансиноид соединен с агентом клеточного связывания через не содержащий 8 нерасщепляемый линкер.
Как правило, в среднем присоединяют 1-10 майтансиноидов к одному антителу. Конъюгат можно подвергнуть очистке на колонке 8ерйабех С-25.
Все содержание и.8. Ра1еи1 Коз. 5,208,020 и 6,441,163 В1 явным образом включено в настоящее изобретение путем отсылки.
Репрезентативными конъюгатами по изобретению являются производные типа антителомайтансиноид, производные типа фрагмент антитела-майтансиноид, конъюгаты из майтансиноида и фактора роста типа производных эпидермального фактора роста (ЕСР) и майтансиноида, конъюгаты гормон-майтансиноид типа производных из меланоцит-стимулирующего гормона (М8Н) и майтансиноида, производных из тиреоид-стимулирующего гормона (Т8Н) и майтансиноида, производных из эстрогена и майтансиноида, производных из аналога эстрогена и майтансиноида, производных из андрогена и майтансиноида, производных из аналога андрогена и майтансиноида, а также конъюгаты витаминмайтансиноид, к примеру фолат-майтансиноид.
Конъюгаты майтансиноидов с антителами, фрагментами антител, белковыми гормонами, белковыми факторами роста и другими белками получают таким же образом. Например, пептиды и антитела можно модифицировать с помощью приведенных выше нерасщепляемых перекрестно сшивающих реагентов. Раствор антитела в водном буфере можно инкубировать с молярным избытком сшивающего реагента для модификации антител, такого как сукцинимидил-4-(№малеимидометил)циклогексан-1карбоксилат (8МСС), сульфо-8МСС, т-малеимидобензоил-Л-гидроксисукцинимидный эфир (МВ 8), сульфо-МВ8, сукцинимидилиодацетат или №сукцинимидил-4-(иодацетил)аминобензоат (81АВ), Νсукцинимидил-4-(№малеимидометил)циклогексан-1 -карбокси-6-амидокапроат, представляющий собой длинноцепочечный аналог 8МСС (ЬС-8МСС), сульфо-ЬС-8МСС, Ν-сукцинимидиловый эфир κ-малеимидоундекановой кислоты (КМИА), сульфо-КМИА, Ν-сукцинимидиловый эфир γ-малеимидомасляной кислоты (СМВ8), сульфо-СМВ8, Ν-гидроксисукцинимидный эфир ε-малеимидокапроновой кислоты (ЕМС8), сульфо-ЕМС8, №(а-малеимидацетокси)сукцинимидный эфир (АМА8), сульфо-АМА8, сукцинимидил-6-(в-малеимидопропионамидо)гексаноат (8МРН), сульфо-8МРН, №сукцинимидил-4-(р-малеимидофенил)бутират (8МРВ), сульфо-8МРВ, №(р-малеимидофенил)изоцианат (РМР1), Ν-сукцинимидил4-(иодацетил)аминобензоат (81АВ), Ν-сукцинимидилиодацетат (81А), Ν-сукцинимидилбромацетат (8ВА) и №сукцинимидил-3-(бромацетамидо)пропионат (8ВАР), как описано в литературе, см. Уозййаке е! а1., 101 Еиг. 1. Вюсйет. 395-399 (1979); НазЫба е! а1., 1. Аррйеб Вюсйет. 56-63 (1984); и Ыи е! а1., 18 690-697 (1979); И!о е! а1., 138 1. 1ттипо1. Ме!й. 87-94 (1991); К1сЬ е! а1., 18 1. Меб. Сйет. 1004-1010 (1975); Кйада\га апб АП<а\уа. 79 1. Вюсйет (Токуо) 233-236 (1976); Таштоп е! а1., 62 1. 1ттипо1. Ме1й. 123-128 (1983); НазЫба е! а1., 6 1. Аррйеб Вюсйет. 56-63 (1984); Тйогре е! а1., 140 Еиг. 1. Вюсйет. 63-71 (1984); СЫгзеу е! а1., 24 №с1. Ас1б Кез. 3031-3039 (1996); Аппип/1а1о е! а1., 4 Вюсоищда!е Сйет. 212-218 (1993); Кес!ог е! а1., 24 1. 1ттипо1. Ме!й. 321-336 (1978); и 1птап е! а1., 2 Вюсоищда!е Сйет. 458-463 (1991).
После этого модифицированные антитела обрабатывают тиолсодержащим майтансиноидом (1,25 молярных эквивалентов на малеимидную или иодацетильную группу) для получения конъюгата. Смеси инкубируют в течение ночи примерно при 4°С. Конъюгаты антитело-майтансиноид очищают гельфильтрацией на колонке 8ерйабех С-25. Число молекул майтансиноида, связанных с молекулой антитела, можно определить спектрофотометрически, измеряя соотношение значений поглощения при 252 нм и 280 нм. Как правило, в среднем, с одним антителом соединяются 1-10 майтансиноидов.
Предпочтительный способ заключается в модификации антител с помощью сукцинимидил-4-(№ малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (8МСС) для введения малеимидных групп с последующей реакцией модифицированных антител с тиолсодержащим майтансиноидом, получая соединенный через тиоэфир конъюгат. Опять же получают конъюгаты, содержащие 1-10 молекул препарата на молекулу антитела. Примеры конъюгатов антитело-майтансиноид представлены на фиг. 17-20.
Аналогичным образом, к примеру, можно подвергнуть этерификации агенты клеточного связывания - эстрогены и андрогены, такие как эстрадиол и андростендиол, по гидроксильной группе С-17 при реакции с содержащим защищенную тиоловую группу хлоридом карбоновой кислоты типа 3-8ацетилпропаноилхлорида. Можно использовать и другие способы этерификации, как описано в литера
- 12 010508 туре (Нак1ат, 36 Те!гайебгоп 2400-2433 (1980)). Затем андроген или эстроген, содержащий блокированный или свободный тиол, можно подвергнуть реакции с тиолсодержащим майтансиноидом для получения конъюгатов. Конъюгаты могут быть очищены методом колоночной хроматографии на силикагеле или методом ВЭЖХ.
Особенно предпочтительный способ заключается в модификации майтансинола перекрестно сшивающим реагентом, образующим линкер, не содержащий атомов серы, после чего модифицированный майтансиноид подвергают реакции с антителом для получения конъюгатов.
Терапевтическая эффективность цитотоксических конъюгатов изобретения
Конъюгаты из агента клеточного связывания и майтансиноида по изобретению можно оценить на их способность к подавлению пролиферации различных линий клеток т уйго. Например, для оценки цитотоксичности этих конъюгатов можно использовать такие клеточные линии, как линия карциномы толстой кишки человека СОБО205, линия клеток меланомы человека А375, линия клеток миелоидного лейкоза человека НБ60, линия карциномы молочной железы человека 8КВК3 или линия клеток эпидермоидной карциномы человека КВ. Исследуемые клетки можно подвергнуть воздействию соединений в течение 24 ч и измерить долю выживших клеток при прямом определении известными методами (напр., см. Со1йтасНег е! а1., 135 I. 1ттипо1. 3648-3651 (1985); и Со1йтасНег е! а1., 102 I. Се11 Вю1. 1312-1319 (1986)). Затем можно рассчитать значения 1С50 из результатов определения.
Высокая цитотоксичность может быть определена как проявление токсичности со значением 1С50 (ингибирующая концентрация токсического вещества, при которой доля выживших составляет 0,5) около 10-8 М или меньше при измерении т У1!го на клетках 8КВК3 после 24-часового воздействия препарата.
Активность т У1!го и специфичность к мишени конъюгатов антитело-майтансиноид настоящего изобретения представлены на фиг. 4. Конъюгаты 1шС242 с ЭМ1 с использованием перекрестно сшивающего реагента 8МСС обладают большой активностью в разрушении антиген-положительных клеток 8КВК3 со значением 1С50 в 3,5х10-12 М. Напротив, антиген-отрицательные клетки А375 примерно в 800 раз менее чувствительны, свидетельствуя, что конъюгаты майтансиноидов обладают большой активностью и высокой специфичностью.
Конъюгат НиС242-8МСС-ОМ1 обладал равной или большей активностью по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью дисульфидсодержащих линкеров, при определении клоногенным методом (фиг. 6А-С) и методом непрямой цитотоксичности (фиг. 7). Эти результаты были неожиданны в связи с опубликованными ранее данными, показывающими, что антитело против Нег2, конъюгированное с майтансиноидами через 8МСС, не проявляет специфической активности (С’Нап е! а1., 52 Сапсег Кек. 127133 (1992)).
Активность конъюгатов, полученных с помощью нерасщепляемого линкера 8МСС, не ограничивается конъюгатами НиС242. Специфическая активность ш уйго также наблюдалась с конъюгатами 8МССЭМ1 и трастузумаба, антитела против Нег2; Му9-6, антитела против СЭ33; К877, антитела против БОРК; и N901, антитела против СЭ56 (фиг. 8Λ-Ω и фиг. 25).
Кроме того, конъюгаты с нерасщепляемыми линкерами, проявляющие специфическую активность щ У1!го, не ограничиваются линкером 8МСС. Конъюгат из ЭМ1 и НиС242, синтезированный с помощью нерасщепляемого линкера 81АВ, проявлял сильную и антигенспецифичную цитотоксичность при определении клоногенным методом т уйго (фиг. 9). Также и конъюгат из ЭМ 1 и трастузумаба, синтезированный с помощью 81АВ, оказался цитотоксичным при определении клоногенным методом (фиг. 28). К тому же и конъюгат 1шС242-не содержащий 8 нерасщепляемый линкер-ЭМ1 проявлял сильную и антиген-специфичную цитотоксичность при определении клоногенным методом ш уйго (фиг. 22).
Конъюгаты антител и ЭМ1 с линкером 8МСС проявляют противораковую активность против ксенотрансплантатов опухолей человека у мышей (фиг. 10А-С). Во-первых, как показано на фиг. 10А, наблюдалось заметное ингибирование роста опухолей при обработке ксенотрансплантатов опухоли толстой кишки СОБО205 конъюгатом НиС242-8МСС-ОМ1. В этом эксперименте одну группу из 5 животных, несущих устоявшиеся подкожные опухоли, обрабатывали НиС242-8МСС-ОМ1 в дозе 150 мкг/кг конъюгированного ЭМ1. Размеры опухолей периодичеки измеряли и откладывали на графике как функцию времени после инокуляции опухоли. Все пять обработанных животных имели полную ремиссию, хотя трое животных дали рецидив в различные моменты времени, тогда как двое животных оставались свободными от опухоли до окнчания эксперимента (фиг. 10А). Кроме того, как показано на фиг. 10В, эта противораковая активность наблюдалась при таких дозах конъюгата, которые не влияют на вес тела мышей как критерий токсичности препарата. В этом эксперименте три группы по 5 животных, каждое из которых несло устоявшуюся подкожную опухоль 8Νυ, обрабатывали НиС242-8МСС-ОМ1 в дозах 15, 30 и 60 мкг/кг конъюгированного ЭМР соответственно. Размеры опухолей периодичеки измеряли и откладывали на графике как функцию времени после инокуляции опухоли. НиС242-8МСС-ОМ1 показал дозозависимый противоопухолевый эффект. Результаты показывают, что обработка мышей, несущих ксенотрансплантаты опухоли карциномы толстой кишки СОБО205, конъюгатом НиС242-8МСС-ОМ1 вела к полной регрессии опухолей, причем одна мышь оставалась свободной от заметных опухолей свыше 2 месяцев после обработки (фиг. 10А). Опять же такая активность была получена при такой концентрации
- 13 010508 конъюгата, которая не влияла на вес тела мышей. Конъюгат трастузумаб-8МСС-ОМ1 также проявлял заметную регрессию опухолей у мышей на модели ксенотрансплантата с клетками линии карциномы молочной железы МСЕ-7 (фиг. 10С).
Плазменный клиренс конъюгата антитело-майтансиноид, синтезированного с помощью нерасщепляемого линкера 8МСС, очень медленный и сравним с клиренсом самого антитела. Это резко отличается от плазменного клиренса конъюгатов типа 1иС242-8РР-ОМ1, полученных с относительно лабильными дисульфидными связями. Например, время полужизни для клиренса конъюгата 8МСС составляет около 320 ч, тогда как время полужизни у конъюгата 8РР находится в пределах 40-50 ч (фиг. 11). Однако клиренс антител, входящих в состав каждого типа конъюгатов, одинаков, свидетельствуя, что отличия по измеренному показателю клиренса конъюгатов обусловлены потерей майтансиноида из конъюгата с антителом в случае конъюгата 8РР-ЭМ1. Следовательно, нерасщепляемый линкер 8МСС значительно более устойчив к процессам расщепления связи майтансиноид-линкер ίη νίνο, чем конъюгат 8РР-ЭМ1. Кроме того, снижение показателя клиренса у конъюгатов 8МСС по сравнению с конъюгатами 8РР-ОМ1 ведет к возрастанию почти в 5 раз общей экспозиции животного майтансиноидом, судя по площади под кривой (АИС). Такая увеличенная экспозиция может иметь существенное влияние на эффективность препарата в некоторых случаях.
Конъюгаты майтансиноидов, полученные с помощью нерасщепляемых линкеров типа 8МСС, проявляют неожиданно высокую толерантность на мышах по сравнению с конъюгатами, полученными с помощью расщепляемых дисульфидных линкеров. Проводился тест на острую токсичность при однократном внутривенном введении на самках мышей СО-1. Проводили сравнение переносимости конъюгата йиС242-8МСС-ОМ1 (нерасщепляемого) с конъюгатами 1иС242, полученными с помощью линкеров, содержащих расщепляемые дисульфидные связи, учитывая смертность мышей (фиг. 12А и В) и признаки токсичности (фиг. 12С и Ό) на серии из четырех возрастающих доз каждого конъюгата. Максимальная переносимая доза (МТО) для конъюгата 8МСС-ЭМ1 превышала наибольшую тестированную дозу (150 мг/кг), тогда как МТО для соединенного через дисульфид конъюгата 8РР-ЭМ1 находилась в пределах 45-90 мг/кг. При 150 мг/кг выжили все мыши в группе, получавшей 8МСС-ЭМ1, тогда как у всех мышей в группе, получавшей 8РР-ЭМ1, наблюдалась летальная токсичность к 96 часам после обработки.
Конъюгаты майтансиноидов, как полагают, реализуют свою активность по разрушению клеток через ингибирование полимеризации микротрубочек. Ингибирование полимеризации микротрубочек ведет к остановке клеточного цикла на стадии О2/М. Антиген-зависимую остановку клеток на стадии О2/М под действием конъюгатов антитело-майтансиноид можно наблюдать методами проточной цитометрии (фиг. 13). Обработка клеток СОЬО205 конъюгатом йиС242-8РР-ОМ1 или 1иС2428МСС-ЭМ1 приводит к полной остановке на стадии О2/М через 6-10 ч. Однако через 30 ч после обработки некоторые из клеток, остановленных при обработке соединенным через дисульфид конъюгатом йиС242-8РР-ОМ1, выходили из блокировки клеточного цикла и возобновляли клеточное деление. Вне ожидания клетки, обработанные нерасщепляемым конъюгатом, не выходили из блокировки клеточного цикла в этот поздний момент времени. Различия в продолжительности действия этих двух конъюгатов также отражаются в процентном содержании мертвых клеток по прошествии 30 ч, судя по определению методом исключения красителя трипанового синего. Эти результаты свидетельствуют о неожиданной продолжительности молекулярных событий, вызванных обработкой конъюгатами с нерасщепляемым линкером 8МСС.
Дополнительный аспект конъюгатов, полученных с помощью нерасщепляемых линкеров, по сравнению с конъюгатами, содержащими расщепляемые дисульфидные линкеры, заключается в отсутствии активности по отношению к антиген-отрицательным клеткам, когда они находятся поблизости от антиген-положительных клеток, который мы назвали посторонним действием. При этом конъюгаты, полученные с помощью нерасщепляемых линкеров, обладают минимальной неспецифической активностью. Конъюгаты 1111С242-8РР-ОМ1 (расщепляемый) и йиС242-8МСС-ОМ 1 (нерасщепляемый) оба проявляют сильную активность по разрушению клеток в отношении антиген-положительных клеток линии СОЬО205 и не обладают активностью в отношении антиген-отрицательных клеток линии Ναιηα1\να при раздельном культивировании (фиг. 14А-С). Однако при обработке совместных культур клеток СОЬО205 и Ναιηα1\να конъюгатом йиС242-8РР-ОМ1 открывается впечатляющая активность конъюгата по разрушению клеток даже в отношении антиген-отрицательных клеток Ναιηα1\να. Напротив, конъюгат 1шС2428МСС-ЭМ1 не проявляет никакой неспецифической активности в этих условиях. У конъюгата 1шС2428МСС-ЭМ1 не наблюдается какой-либо активности по разрушению клеток в отношении клеток Ναιηα1\να даже при совместном культивировании с антиген-положительными клетками СОЬО205. Такая минимальная неспецифическая активность у нерасщепляемого конъюгата, судя по этому определению ίη νίΐτο, может способствовать повышенной переносимости конъюгата с нерасщепляемым линкером, наблюдавшейся в опытах по острой токсичности.
Результаты вышеприведенных экспериментов свидетельствуют, что конъюгаты майтансиноидов с нерасщепляемыми линкерами по настоящему изобретению обладают сильно улучшенной противоопухолевой активностью по сравнению с ранее описанными конъюгатами из агентов клеточного связывания и майтансиноидов.
- 14 010508
Способы применения
Вышеописанные конъюгаты могут применяться в способе прицельной доставки майтансиноидов к выбранной популяции клеток, который включает контактирование популяции клеток или ткани, предположительно содержащей выбранную популяцию клеток, с конъюгатом из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками выбранной популяции клеток.
Вышеописанные конъюгаты также могут применяться в способе разрушения клеток, который включает контактирование клеток с конъюгатом из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками.
Вышеописанные конъюгаты также могут применяться в способе лечения заболеваний, включая (но не ограничиваясь этим) злокачественные опухоли, аутоиммунные заболевания, отторжение трансплантатов, реакции трансплантат против хозяина, вирусные инфекции, микробные инфекции и паразитарные инфекции, причем способ включает введение нуждающемуся в лечении субъекту эффективного количества конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с больными или инфицированными клетками при данном заболевании.
Примеры медицинских заболеваний, которые можно лечить в соответствии со способами настоящего изобретения, включают (не ограничиваясь этим) злокачественные образования любого типа, в том числе, к примеру, рак легких, молочной железы, толстой кишки, простаты, почек, поджелудочной железы, яичников и лимфатических органов; аутоиммунные заболевания, такие как системная волчанка, ревматоидный артрит и множественный склероз; отторжение трансплантатов типа отторжения почечных трансплантатов, отторжения печеночных трансплантатов, отторжения легочных трансплантатов, отторжения сердечных трансплантатов и отторжения трансплантатов костного мозга; реакции трансплантат против хозяина; вирусные инфекции типа инфекции СМУ, инфекции ВИЧ, СПИД и др.; и паразитарные инфекции, такие как лямблиоз, амебиоз, шистосомоз и др., что определяется средним специалистом в этой области.
Способы могут осуществляться ίη νίΐτο или ίη νίνο.
Вышеописанные конъюгаты могут применяться в способе применения ίη νίίτο для обработки, к примеру, аутологичных клеток костного мозга перед их пересадкой тому же самому пациенту для того, чтобы разрушить больные или злокачественные клетки; клеток костного мозга или другой ткани перед их пересадкой для того, чтобы разрушить Т-клетки и другие лимфоидные клетки и предотвратить реакцию трансплантат против хозяина; клеточных культур для того, чтобы разрушить все клетки, кроме желательных вариантов, не экспрессирующих целевой антиген, либо клеточных культур для того, чтобы разрушить те клетки, которые экспрессируют нежелательный антиген, причем способ включает обработку клеток эффективным количеством конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками, подлежащими разрушению.
Условия клинического и неклинического применения ίη νίΐτο легко определяются средним специалистом в этой области.
Например, обработка может проводиться следующим образом. Костный мозг можно взять у пациента или иного индивидуума, а затем инкубировать в среде, содержащей сыворотку, в которую добавлено цитотоксическое вещество изобретения, причем концентрация составляет от 10 пМ до 1 нМ, в течение времени от 30 мин до 48 ч при 37°С. Точные условия концентрации и времени инкубации, например доза, легко определяются средним специалистом в этой области. После инкубации клетки костного мозга можно промыть средой, содержащей сыворотку, и ввести обратно пациенту внутривенно в соответствии с известными методами. В обстоятельствах, когда пациент подвергается другому лечению, скажем, курсу деструктивной химиотерапии или облучению всего тела в период между взятием костного мозга и реинфузией обработанных клеток, обработанные клетки костного мозга могут храниться замороженными в жидком азоте с применением стандартного медицинского оборудования.
Для клинического применения ίη νίνο цитотоксическое вещество может быть подано в виде раствора или лиофилизованного порошка, который протестирован на стерильность и на содержание эндотоксинов. Примеры подходящих методик введения конъюгата заключаются в следующем. Конъюгаты можно вводить еженедельно на протяжении 4 недель внутривенно болюсом каждую неделю. Болюсные дозы можно вводить в 50-500 мл обычного физраствора, в который можно добавить 5-10 мл сывороточного альбумина человека. Дозировка составляет от 10 до 2000 мг на введение, внутривенно (от 100 нг до 20 мг/кг в день). После 4 недель лечения пациент может продолжать лечение по еженедельной схеме.
Конкретные клинические методики ίη νίΐτο в отношении способа применения, наполнителей, разбавителей, дозировки, времени и т.д. могут быть определены средним специалистом в этой области, как
- 15 010508 того потребует клиническая ситуация.
При желании вместе с конъюгатом можно вводить и другие активные вещества, к примеру, другие противоопухолевые средства.
Новые конъюгаты, композиции и способы получения конъюгатов
В то время как некоторые конъюгаты из антител и майтансиноидов, соединенных через нерасщепляемый линкер, уже известны, другие являются новыми. Поэтому представлен конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором по меньшей мере один майтансиноид соединен с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, при условии, что линкер не содержит группы, происходящей из перекрестно сшивающего реагента, выбранного из группы, состоящей из сукцинимидил-4-(№малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (8МСС), сульфо-8МСС, т-малеимидобензоил-Ы-гидроксисукцинимидного эфира (МВ8), сульфо-МВ8 и сукцинимидил-иодацетата, если агентом клеточного связывания является антитело.
Новые конъюгаты могут быть получены и применены, как описано выше.
Композиция включает конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания и носитель. Носителем может быть фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, разбавители и наполнители хорошо известны и могут быть определены средними специалистами в этой области, как того потребует клиническая ситуация.
Примеры подходящих фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей и/или наполнителей включают: (1) фосфатно-солевой буфер Дюльбекко, рН около 7,4, содержащий или не содержащий от 1 до 25 мг/мл сывороточного альбумина человека; (2) 0,9% физраствор (0,9% №1С1) и (3) 5 мас.% декстроза; они могут также содержать антиоксидант типа триптамина и стабилизирующее вещество типа Тетееп 20.
Для этих новых конъюгатов также представлены способы синтеза.
Один из способов получения конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания включает:
(a) обеспечение агента клеточного связывания, (b) модифицирование агента клеточного связывания с помощью перекрестно сшивающего реагента, и (c) конъюгирование модифицированного агента клеточного связывания с майтансиноидом или тиолсодержащим майтансиноидом, обеспечивая при этом нерасщепляемый линкер между агентом клеточного связывания и майтансиноидом или тиолсодержащим майтансиноидом для образования конъюгата.
Другой способ получения конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания включает:
(a) обеспечение майтансиноида или тиолсодержащего майтансиноида, (b) модифицирование майтансиноида или тиолсодержащего майтансиноида с помощью перекрестно сшивающего реагента для образования нерасщепляемого линкера, и (c) конъюгирование модифицированного майтансиноида или тиолсодержащего майтансиноида с агентом клеточного связывания, обеспечивая при этом нерасщепляемый линкер между агентом клеточного связывания и майтансиноидом или тиолсодержащим майтансиноидом для образования конъюгата.
Дополнительный способ получения конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания включает:
(a) обеспечение майтансиноида, (b) модифицирование майтансиноида для получения не содержащего серы майтансинола, содержащего активный эфир, и (c) конъюгирование модифицированного майтансиноида с агентом клеточного связывания, обеспечивая при этом не содержащий 8 нерасщепляемый линкер между агентом клеточного связывания и майтансинолом для образования конъюгата.
Эти способы подробно описаны выше и в цитировавшихся патентах США и явным образом включены в настоящее изобретение путем отсылки.
ПРИМЕРЫ
Далее изобретение будет раскрыто на следующих неограничивающих примерах. Если не указано иначе, все проценты, отношения, весовые доли и т. п. выражены по массе.
В нижеследующих экспериментах использовали такие буферы: 50 мМ фосфат (ΚΡί)/50 мМ №0/2 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), рН 6,5 (буфер А); фосфатно-солевой буфер (РВ8), рН 6,5 (буфер В); и 0,1 М КР1-буфер/2 мМ ЭДТА, рН 7,5 (буфер для определения).
8МСС (№ продукта 22360, м.в. 334,33 г/моль) и 8IΑВ (№ продукта 22329, м.в. 402,15 г/моль) приобретали у фирмы Р1егсе. Антитело йиС242 представляет собой гуманизированную форму моноклонального антитела С242, описанного в и.8. Ра1еп1 Νο. 5,552,293, гибридома которого депонирована в ЕСАСС под номером 90012601. Антитело трастузумаб получали от 6епеп1ес11. ЭМ1 (форма со свободным тиолом, м.в. 737,5 г/моль) получали, как описано ранее в и.8. Ра1еп1 Νο§. 5,208,020 и 6,333,410 В1.
Хроматографию проводили на хроматографических колонках, приобретенных у фирмы ЛтегФаш Вю8С1епсе8 (готовые колонки ΝΑΡ-25, заполненные 8ерйабех 625 (Лтегкйат, 17-0852-02); колонки для обессоливания ШРгер 26/10 со смолой 8ерйабех 625 Пае. 3 колонки, соединенные последовательно (ЛтегФат. 17-5087-01)). Также использовали хроматографические колонки Т8К-6ЕЬ 630008^ХЬ (ТО8ОН
- 16 010508
Бю^еисе. 08541) вместе с защитной колонкой Т8К 8\У.х1 (ТО8ОН Бю^еисе. 08543).
В нижеследующих экспериментах использовали такие растворители: диметилсульфоксид (ΌΜ8Ο), диметилацетамид (ΌΜΑ), этанол (Е!ОН) и 100 мМ реагент Эллмана (ΌΤΝΕ, фирмы Саутаη СИет1са1) в ΌΜ8Ο.
Пример 1А. Получение конъюгата ИиС242-8МСС-ОМ1.
a) Получение и измерение антител 1шС242
Концентрацию антител измеряли, используя коэффициент экстинкции 1,48 (мг/мл)-1 при 280 нм и молекулярный вес 147000 г/моль.
b) Приготовление и измерение маточного раствора 8МСС
Готовили 20 мМ раствор 8МСС (6,69 мг/мл) в диметилсульфоксиде (ЭМ8О). Раствор разводили 1:40 буфером для определения и измеряли поглощение образцов при 302 нм. Концентрацию маточного раствора рассчитывали, используя коэффициент экстинкции 602 М-1см-1.
c) Приготовление и измерение маточного раствора ЭМ1
Готовили 10 мМ раствор ЭМ1 (форма со свободным тиолом) в диметилацетамиде (ОМА) (7,37 мг/мл) (фиг. 2). Измеряли поглощение разведений маточного раствора в этаноле (Е!ОН) при 280 нм. Концентрацию маточного раствора ЭМ1 рассчитывали, используя коэффициент экстинкции 5700 М-1 при 280 нм. Концентрацию свободных сульфгидрильных или тиоловых групп (8Н-групп) в маточном препарате ЭМ1 измеряли с помощью реактива Эллмана (ΌΤΝΕ). Готовили разведения маточного раствора в буфере для определения, доведенном до 3% об. ОМА, а затем добавляли 100 мМ ΩΤΝΕ в ЭМ8О (1/100 объема). Измеряли возрастание поглощения при 412 нм против холостой пробы и рассчитывали концентрацию, используя коэффициент экстинкции 14150 М-1 см-1. Полученную методом Эллмана концентрацию 8Н-групп использовали для представления концентрации маточного раствора ЭМ1 при расчетах условий конъюгирования.
б) Модификация 1иС242 сшивающим реагентом 8МСС
Антитела разделяли на два образца; один подвергали модификации, используя 7,5-кратный молярный избыток перекрестно сшивающего реагента 8МСС, а другой - при 8,5-кратном молярном избытке перекрестно сшивающего реагента 8МСС. Образцы подвергали реакции при концентрации антител 8 мг/мл. Реакции проводили в буфере А (95% об.) с ЭМ8О (5% об.) в течение 2 ч при комнатной температуре с перемешиванием.
е) Хроматография на 625 для удаления избытка 8МСС
Реакционные смеси 1шС242-8МСС подвергали гель-фильтрации через готовые колонки 1,5х4,9 см со смолой 8ер1абех 625, уравновешенной буфером А. Объемы нанесения и элюции соответствовали инструкциям изготовителя. Элюаты с модифицированными антителами подвергали анализу для определения концентрации антител, используя приведенный выше коэффициент экстинкции. Выход модифицированных антител составил 74,6% при реакции с 7,5-кратным молярным избытком 8МСС и 81,6% при реакции с 8,5-кратным молярным избытком 8МСС.
ί) Конъюгирование 1шС242-8МСС с ЭМ1
Образцы модифицированных антител подвергали реакции при 1,7-кратном избытке ЭМ1 относительно линкера (из расчета 5 линкеров на антитело). Реакции проводили при концентрации антител 2,5 мг/мл в буфере А (97% об.) с ОМА (3% об.). После добавления ЭМ1 реакции инкубировали при комнатной температуре в течение примерно 20 ч с перемешиванием.
д) Очистка конъюгатов хроматографией на 625
Смеси для реакции конъюгирования подвергали гель-фильтрации через готовые колонки 1,5х4,9 см со смолой 8ер1абех 625, уравновешенной буфером В. Объемы нанесения и элюции соответствовали инструкциям изготовителя. Число молекул ЭМ1 на моль 1шС242 определяли по измерению поглощения элюатов при 252 нм и 280 нм. Отношение ЭМ 1/антитело при 7,5-кратном молярном избытке 8МСС в образце оказалось равным 3,54, а при 8,5-кратном молярном избытке 8МСС - 3,65. На стадии конъюгации выход составил 83,7% и 75,4%, соответственно. Оба конъюгата объединяли, стерилизовали фильтрованием и повторяли определение концентраций препарата и антител. Объединенному образцу присвоили № препарата 1713-146С и подвергли анализу на связывание, цитотоксичность, специфичность, степень агрегации и содержание свободного препарата.
Таблица I. Характеристики 1иС242-8МСС-ОМ1
№ препарата Конечная конц. белка (мг/мл) Конечная конц. ОМ 1 (мкг/мл) ОМ1 /антитело
1713-146С 1,77 26,96 3,05
Пример 1В. Тестирование 1иС242-8МСС-ОМ1 ίη νίίτο
а) Связывание
Сродство связывания антитела 1шС242 и 1иС242-8МСС-ОМ1 сравнивали, используя непрямой метод на клетках СОЬО 205, в котором использовали 5х103 клеток на лунку при первичной инкубации на льду в течение 3 часов. Результаты представлены на фиг. 3. Немодифицированное антитело связывалось со значением Кс в 5,52х10-10 М, а его конъюгированный вариант связывался со значением Кс в 5,1х10-10
- 17 010508
М. Таким образом, конъюгация с ΌΜ1, очевидно, не изменяет сродство связывания 1шС242.
b) Цитотоксичность и специфичность
Цитотоксичность и специфичность конъюгата 1иС242-8МСС-ОМ1 ίη νίίΓο оценивали клоногенным методом при непрерывном воздействии. Результаты представлены на фиг. 4. Конъюгат 1иС242-8МССΌΜ1 эффективно разрушал антиген-положительные клетки 8КВК3 (1С50 = 3,5х10-12 М). Специфичность проявлялась при сравнении значений 1С50 на целевых клетках 8КВК3 и на клетках антигенотрицательной линии А375, на которых значение 1С50 конъюгата превышало 3,0х 10-9 М.
c) Анализ методом эксклюзионной хроматографии
Конъюгат подвергали анализу на эксклюзионной колонке Т8К300 (фиг. 5). Пик 4 пердставляет собой мономерную фракцию конъюгата, тогда как ранее сходящие пики представляют собой мультимер, а позднее сходящие пики представляют собой фрагмент. Площадь под каждой кривой, деленная на общую площадь пиков, представляет собой вклад пиков в образец. Было найдено, что образец конъюгата на 96,0% состоит из мономера.
б) Свободное лекарственное средство
Содержание свободного лекарственного средства измеряли методом ЕЬ18Л, и оно составило 4,4%.
Пример 2А. Получение конъюгата трастузумаб-8МСС-ЭМ1.
Антитела трастузумаб получали от Сепеп1есН для конъюгации с ЭМ1 с помощью нерасщепляемого гетеробифункционального перекрестно сшивающего реагента 8МСС.
Антитела подвергали замене буфера из 50 мМ фосфата калия/2 мМ ЭДТА, рН 6,0, на 50 мМ фосфата калия/20 мМ №С1/2 мМ ЭДТА, рН 6,5 (буфер А). Затем антитела подвергали реакции при 7,5кратном молярном избытке линкера 8МСС и очищали на смоле 8ер1абех 625 перед конъюгированием с ЭМ1. Конечный конъюгат снова очищали на смоле 8ер1абех 625. Полученный конъюгат содержал 3,1 моль ЭМ1 на моль антитела.
a) Получение и измерение антител трастузумаб
Антитела трастузумаб в буфере из 50 мМ фосфата калия/2 мМ ЭДТА, рН 6,0, пропускали через колонку 8ер1абех 625, уравновешенную буфером А, и элюировали буфером А. Все буфера, используемые в этом эксперименте, тестировали на отсутствие эндотоксина методом с хромогенным лизатом амебоцитов Бу 1111.111.15 (ЕЛЬ) (СатЬгех). Концентрацию антител измеряли, используя коэффициент экстинкции 1,45 мл-мг-1-см-1 при 280 нм и молекулярный вес 145423 г.
b) Приготовление и измерение маточного раствора 8МСС
Готовили 20 мМ раствор 8МСС (6,69 мг/мл) в диметилсульфоксиде (ЭМ8О). Раствор разводили 1:40 буфером для определения и измеряли поглощение образцов при 302 нм. Концентрацию маточного раствора рассчитывали, используя молярный коэффициент экстинкции 602 М-1см-1.
c) Приготовление и измерение маточного раствора ЭМ1
Готовили 10 мМ раствор ЭМ1 (форма со свободным тиолом) в диметилацетамиде (ОМА) (7,37 мг/мл) (фиг. 2). Измеряли поглощение разведений маточного раствора в Е1ОН при 280 нм. Концентрацию маточного раствора ИМ1 рассчитывали, используя молярный коэффициент экстинкции 5700 М-1см-1 при 280 нм. Концентрацию свободных 8Н-групп в маточном препарате ИМ1 измеряли с помощью реактива Эллмана (ΌΤΝΒ). Готовили разведения маточного раствора в буфере для определения, доведенном до 3% об. ЭМА. а затем добавляли 100 мМ ΌΤΝΒ в ИМ8О (1/100 объема). Измеряли возрастание поглощения при 412 нм против холостой пробы и рассчитывали концентрацию, используя коэффициент экстинкции 14150 М-1см-1. Полученную методом Эллмана концентрацию 8Н-групп использовали для представления концентрации маточного раствора ИМ1 при расчетах условий конъюгирования.
б) Модификация трастузумаб перекрестно сшивающим реагентом 8МСС
Антитела подвергали модификации, используя 7,5-кратный молярный избыток 8МСС при концентрации антител 20 мг/мл. Реакцию проводили в буфере А (95 об.%) с ИМ8О (5 об.%) в течение 2 ч при комнатной температуре с перемешиванием.
е) Хроматография на 625 для удаления избытка 8МСС
Реакционную смесь трастузумаб-8МСС подвергали гель-фильтрации через готовую колонку 1,5х4,9 см со смолой 8ер1абех 625, уравновешенной буфером А. Объемы нанесения и элюции соответствовали инструкциям изготовителя (Атегайат Вю5с1епсе5). Концентрацию модифицированных антител в растворе определяли спектрофотометрически, используя приведенный выше коэффициент экстинкции. Выход модифицированных антител составил 88% на основе концентрации белка.
Г) Конъюгирование трастузумаб-8МСС с ИМ1
Модифицированные антитела подвергали реакции при 1,7-кратном избытке ИМ1 относительно линкера (из расчета 5 линкеров на антитело). Реакцию проводили при концентрации антител 10 мг/мл в буфере А (94 об.%) с ИМА (6 об.%). После добавления ИМ1 реакцию инкубировали при комнатной температуре в течение 16,5 ч с перемешиванием.
д) Очистка конъюгатов хроматографией на 625
Смеси для реакции конъюгирования подвергали гель-фильтрации через готовые колонки 1,5х4,9 см со смолой 8ер1абех 625, уравновешенной буфером В. Объемы нанесения и элюции соответствовали ин
- 18 010508 струкциям изготовителя (Атегкйат В1О8С1епсе8). Число молекул ЭМ1 на моль трастузумаба определяли по измерению поглощения элюатов при 252 и 280 нм. Отношение ПМ1/антитело оказалось равным 3,13, а выход на стадии конъюгации составил 95,7%. Общий выход конъюгированного трастузумаба составил 84% в пересчете на исходные антитела. Полученный конъюгат подвергали анализу на связывание, цитотоксичность, специфичность, степень агрегации и содержание свободного препарата.
Таблица II. Характеристики трастузумаб-8МСС-ЭМ1
№ препарата Конечная конц. белка (мг/мл) Конечная конц. ϋΜΙ (мкг/мл) ϋΜΙ/антитело
1762-14 6,71 106 3,13
Пример 2В. Тестирование трастузумаб-8МСС-ЭМ1 ίη νίίτο.
Опыты по связыванию показали, что конъюгация антител с ЭМ1 не влияет на кажущееся значение Кс: как немодифицированные антитела трастузумаб, так и конъюгат трастузумаб-8МСС-ОМ1 обладали одинаковым сродством связывания на чашках ЕСЭ (5,5х10-11 М). Оценка цитотоксичности образца ίη νίίτο показала, что конъюгат трастузумаб-8МСС-ЭМ1 сильно токсичен (1С50 = 3,5х10-12 М на клетках антиген-положительной линии) и специфичен (1С50 конъюгата превышает 3,0 х10-9 М на клетках антигенотрицательной линии).
a) Связывание
Сродства связывания антитела трастузумаб и трастузумаб-8МСС-ОМ1 сравнивали, используя метод связывания на чашках НЕВ2-ЕСЭ фирмы СеиегИес! Результаты представлены на фиг. 24. И немодифицированное антитело, и его конъюгированный вариант связывались со значением кажущейся Кс в 5,5х10-11 М. Таким образом, конъюгация с ЭМ1 не меняет сродство связывания трастузумаба.
b) Цитотоксичность и специфичность
Цитотоксичность и специфичность конъюгата трастузумаб-8МСС-ОМ1 ίη νίίτο оценивали клоногенным методом при непрерывном воздействии. Результаты представлены на фиг. 25. Конъюгат трастузумаб-8МСС-ОМ1 эффективно разрушал антиген-положительные клетки 8КВК3 (1С50 = 3,6х10-12 М). Специфичность проявлялась при сравнении значений 1С50 на клетках-мишенях 8КВК.3 и на клетках антиген-отрицательной линии А375, на которых значение 1С50 конъюгата превышало 3,0х 10-9 М.
С) Анализ методом эксклюзионной хроматографии
Конъюгат подвергали анализу на эксклюзионной колонке Т8К300 (фиг. 26). Пик 1 пердставляет собой мультимер, пик 2 представляет собой димер, а пик 3 представляет собой мономер. Площадь под каждой кривой, деленная на общую площадь пиков, представляет собой вклад пиков в образец. Было найдено, что образец конъюгата на 95,3% состоит из мономера (фиг. 5).
ά) Анализ свободного лекарственного средства
Содержание свободного лекарственного средства измеряли методом ЕБ18А, и оно составило 3,4%. е) Содержание эндотоксина
Конъюгат проверяли хроматографическим методом ЬАЬ и получили, что он содержит 0,03 ед./мг. Пример 3А. Получение конъюгата трастузумаб-81АВ-ЭМ1.
Антитела трастузумаб получали от Сеηеηίесй для конъюгации с ЭМ1 с помощью нерасщепляемого гетеробифункционального перекрестно сшивающего реагента 81АВ. Антитела подвергали реакции при 7,0-кратном молярном избытке линкера 81АВ при рН 6,5 и очищали на смоле 8ерйабех С25Е. Содержащие антитела фракции объединяли и обрабатывали ЭМ1 в течение ночи в стандартных условиях конъюгирования при рН 6,5 и комнатной температуре, но в темноте. Отбирали аликвоту из реакционного сосуда и анализировали для определения включения ЭМ1. При измерении после фильтрования через NΑР-5 в ней содержалось только 1,4 молекулы препарата/антитело. В реакцию дополнительно вносили 8-кратный избыток 81АВ на 2 ч, а затем повышали рН до 8 перед самым добавлением дополнительного 1,5-кратного избытка ЭМ 1/81АВ. Реакцию оставляли для продолжения и очищали с помощью смолы 8ерйабех С25Е. Полученный конъюгат содержал 3,42 моль ЭМ1 на моль антитела.
a) Измерение антител трастузумаб
Концентрацию антител измеряли, используя коэффициент экстинкции 1,45 мл-мг-1-см-1 при 280 нм и молекулярный вес 145423 г.
b) Приготовление и измерение маточного раствора 81АВ
Готовили 18 мМ раствор 81АВ (7,2 мг/мл) в ОМ8О. Раствор, разведенный буфером рН 4, сканировали по шкале длин волн и регистрировали только для сведения.
c) Приготовление и измерение маточного раствора ЭМ1
Готовили приблизительно 30 мМ раствор ЭМ1 (форма со свободньм тиолом) в ОМА. Концентрацию свободных 8Н-групп в маточном препарате ЭМ1 измеряли с помощью реактива Эллмана (ΌΤΝΕ). Готовили разведения маточного раствора в буфере для определения, доведенном до 3 об.%. ОМА, а затем добавляли 100 мМ ΩΤΝΕ в ОМ8О (1/100 объема). Измеряли возрастание поглощения при 412 нм против холостой пробы и рассчитывали концентрацию, используя молярный коэффициент экстинкции 14150 М-1см-1. Полученную методом Эллмана концентрацию 8Н-групп использовали для представления концентрации маточного раствора ЭМ1 при расчетах условий конъюгирования.
- 19 010508
б) Модификация трастузумаб перекрестно сшивающим реагентом 81АВ
Антитела подвергали модификации, используя 7,0-кратный молярный избыток 81АВ при концентрации антител 20 мг/мл. Реакцию проводили в буфере А (95 об.%) с ΩΜ8Ο (5 об.%) в течение 2 ч при комнатной температуре с перемешиванием в темноте.
е) Хроматография на 625 для удаления избытка 81АВ
Реакционную смесь трастузумаб-81АВ подвергали гель-фильтрации через колонку для обессоливания Н1Ргер 26/10, уравновешенную буфером А. Наблюдались помехи при 280 нм от реагента 81АВ, поэтому выход модифицированных антител принимали равным 100% и степень модификации принимали за 5 линкеров на антитело при определении количества ΌΜ1 в реакции конъюгирования.
ί) Конъюгирование трастузумаб-81АВ с ΩΜ1
Модифицированные антитела подвергали реакции при 1,7-кратном избытке ΌΜ1 относительно линкера из расчета 100% выхода и 5 линкеров на антитело, как указано выше. Концентрация антител при реакции составляла 12,5 мг/мл, а реакция проводилась в буфере А (97 об.%) с ΩΜΆ (3 об.%). После добавления ΌΜ1 реакцию инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 16,5 ч с перемешиванием.
д) Анализ реакции конъюгации
Отбирали аликвоту в 0,25 мл реакционной смеси и подвергали гель-фильтрации через готовую колонку 8ерНабех 625, уравновешенную буфером В. Число молекул ΩΜ1 на моль трастузумаба определяли по измерению поглощения элюатов при 252 и 280 нм. Отношение ΩΜ 1/антитело составило лишь 1,4.
11) Дополнительная реакция модификации/конъюгации
Дополнительно вносили 8-кратный молярный избыток 81АВ и инкубировали 2 ч при комнатной температуре. Добавляли 1,5-кратный молярный избыток ΩΜ1 относительно 81АВ и повышали рН реакции до 8 добавлением 1 Ν ΝαΟΗ. Реакцию инкубировали при комнатной температуре в темноте и подвергали гель-фильтрации через колонку со смолой 625Е, уравновешенную буфером В.
ί) Объединение фракций и характеристика конъюгата
Белковые фракции объединяли, фильтровали и измеряли поглощение при 252 и 280 нм. Образцы конъюгата тестировали на содержание эндотоксина, связывание, специфическую и неспецифическую цитотоксичность, % мономера и содержание свободного лекарственного средства.
Таблица III. Характеристики трастузумаб-8IАВ-^Μ1
№ препарата Конечная конц. белка (мг/мл) Конечная конц. ΩΜ1 (мкг/мл) ΩΜ1/антитело
1806-32 5,62 97,3 3,42
Пример 3В. Тестирование трастузумаб-8IАВ-^Μ1 ίη νίίτο.
Опыты по связыванию показали, что конъюгация антител с ΩΜ1 не влияет на кажущееся значение Кс: как немодифицированные антитела трастузумаб, так и конъюгат трастузумаб-8IАВ-^Μ1 обладали близким сродством связывания (кажущиеся значения Кс: антитело 1,2х10-10 М, конъюгат 1,9х10-10 Μ). Оценка цитотоксичности образца ίη νίίτο показала, что конъюгат трастузумаб-8IАВ-^Μ1 сильно токсичен (ТС5о = 5х10-12 М на клетках антиген-положительной линии 8КВК3) и специфичен (ТС5о превышает 3,0х10-9 М на клетках антиген-отрицательной линии А375).
a) Связывание
Сродство связывания антитела трастузумаб и трастузумаб-8IАВ-^Μ1 сравнивали, используя метод связывания на чашках НЕК2-ЕСЭ фирмы беиеШесН. Результаты представлены на фиг. 27. Немодифицированное антитело и трастузумаб-8IАВ-^Μ1 обладали близким сродством связывания (кажущиеся значения Кс: 1,2х 10-10 М для антитела, 1,9х 10-10 М для конъюгата).
b) Цитотоксичность и специфичность
Оценка цитотоксичности образца ίη νίίτο показала, что конъюгат трастузумаб-8IАВ-^Μ1 сильно токсичен (КТ, 5х10-12 М на клетках антиген-положительной линии 8КВК3) и специфичен (ТС50 превышает 3,0х10-9 М на клетках антиген-отрицательной линии А375). См. фиг. 28.
c) Анализ методом эксклюзионной хроматографии
Конъюгат подвергали анализу на эксклюзионной колонке Т8К300 (фиг. 29). Пик 1 пердставляет собой димер, а пик 2 представляет собой мономер. Площадь под каждой кривой, деленная на общую площадь пиков, представляет собой вклад пиков в образец. Было найдено, что образец конъюгата на 96,4% состоит из мономера.
б) Свободное лекарственное средство
Содержание свободного лекарственного средства измеряли методом ЕЫ8А, и оно составило 0,35%. е) Содержание эндотоксина
Конъюгат проверяли хроматографическим методом ЬАЬ и получили, что он содержит <0,04 ед./мг.
Пример 4. Конъюгация 1шС242 с перекрестно сшивающим реагентом, образующим не содержащий 8 нерасщепляемый линкер.
а) Синтез
Готовили маточный раствор перекрестно сшивающего реагента (см. структуру на фиг. 21) в ΩΜΑ
- 20 010508 удаляли нерастворимый осадок центрифугированием и определяли концентрацию оставшегося раствора, используя коэффициент экстинкции ε280=5700 М-1см-1, который дает экстинкцию ЭМ1 на этой волне. Поскольку действительный коэффициент экстинкции для этого материала не был определен, то это дает лишь оценку концентрации. Следует отметить, что отношение ε /ε для ЭМ1 равно 4,7 (в Е1ОН), тогда как ε252/ε280 для данного раствора перекрестно сшивающего реагента (в буфере рН 7,5) составило 1,42, что свидетельствует либо о разных экстинкциях, либо о примесях.
Реакцию конъюгирования проводили в масштабе 2 мг, используя 2,8 мг/мл антител 1шС242 в 16% ОМА в буфере Е, рН 7,5 (буфер Е = 50 мМ фосфат натрия, 150 мМ №С1, 10 мМ ЭДТА). На основании оценки концентрации сшивающего реагента в маточном растворе использовали 30 эквивалентов сшивающего линкера на антитело (в более раннем эксперименте с использованием 10 экв. Перекрестно сшивающего линкера на антитело получили конъюгат, содержащий только 0,9 ОМ1/антитело). Реакцию проводили в течение 3 ч, после чего конъюгат очищали пропусканием через колонку Νηρ 10 (С25). После фильтрования (фильтр МШех СУ, размер пор 0,2 мкм) конъюгат содержал 2,56 ИМ1/антитело (препарат № 1749-119А, выход антител = 78%). Аликвоту конъюгата исследовали методом ВЭЖХ (колонка Н1Ргер) на свободный ЭМ1 и наблюдали измеряемый пик ЭМ1 на 12,09'. Образец поэтому подвергали диализу в буфере В, чтобы избавиться от этого пика, а затем повторяли определение. Конечный образец конъюгата (препарат № 1749-124А) не содержал свободного ЭМ1 по данным ВЭЖХ и содержал 1,84 ИМ1/антитело. Методом 8ЕС-ВЭЖХ получили, что конъюгат на 97% состоит из мономерного антитела.
Ь) Цитотоксичность и связывание
Авторы изобретения провели исследования связывания и цитотоксичности конъюгата 1шС242-несодержащий-8-нерасщепляемый линкер-ЭМ1. Сперва сравнивали сродство связывания антитела 1шС242. 1иС242-8М№-ОМ3 и 1иС242-не-содержащий-8-нерасщепляемый линкер-ЭМ1, используя непрямой метод на клетках СОЬО 205. Использовали 5x10 клеток на лунку при первичной инкубации во льду в течение 3 ч. Результаты представлены на фиг. 23, которая показывает, что конъюгат 1шС242-несодержащий-8-нерасщепляемый линкер-ЭМ1 проявлял примерно в два раза более высокую кажущуюся константу диссоциации, чем свободное антитело (см. фиг. 23). Дополнительно конъюгат 1шС242-несодержащий-8-нерасщепляемый линкер-ЭМ1 имел цитотоксичность ίη уйго, которая была сравнима с 1иС242-8М№-ОМ3 (1С50 конъюгата с не содержащим 8 нерасщепляемым линкером = 7,0х10-12 М) (см. фиг. 22).
Поскольку изобретение уже описано подробно и со ссылкой на его конкретные воплощения, то специалисту в этой области должно быть ясно, что в нем можно производить различные изменения и модификации, не отходящие от духа и не выходящие за рамки изобретения.
Все патенты, публикации и прочие ссылки, приведенные в настоящем изобретении, явным образом включены путем отсылки во всей полноте.

Claims (28)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1, т и η независимо друг от друга означают целое число от 1 до 5 и, кроме того, η может быть равно 0.
33. Способ по любому из пп.29-32, где В означает метил и В означает Н, либо В и В2 означают метил.
34. Способ по любому из пп.29-32, где В! означает метил, В2 означает Н, В5, В6, В7 и В8 означают Н, 1 и т равны 1 и η равно 0; либо в котором В! и В2 означают метил, В5, В6, В7 и В8 означают Н, 1 и т равны 1 и η равно 0.
35. Способ по любому из пп.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представляет собой ΌΜ1.
36. Способ по любому из п.п.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представляет собой ΌΜ3.
37. Способ по любому из пп.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представляет собой ΌΜ4.
38. Способ по любому из пп.5-13, в котором майтансиноид модифицирован не содержащим серы перекрестно сшивающим реагентом, образуя соединение формулы 5 где X означает линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 2 до 20 атомов углерода, Υ означает циклоалкил или циклоалкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, Ζ означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода, либо замещенную или незамещенную гетероциклическую группу, в которой гетероатом выбран из Ν, О или 8, причем 1, т и η поодиночке равны 0 или 1 при условии, что все вместе они не равны 0 одновременно, и Е вместе с карбонильной группой образует активный эфир, такой как Νгидроксисукцинимидиловый и сульфосукцинимидиловый эфиры, Ν-гидроксифталимидиловый эфир, Νгидроксисульфофталимидиловый эфир, ортонитрофениловый эфир, паранитрофениловый эфир, 2,4динитрофениловый эфир, 3-сульфонил-4-нитрофениловый эфир, 3-карбокси-4-нитрофениловый эфир, пентафторфениловый эфир и сульфонилтетрафторфениловый эфир.
39. Способ по любому из пп.5-13, в котором майтансиноид модифицирован не содержащим серы
1, т, η, о, р, с.|. г, 8, ΐ и и независимо друг от друга означают 0 или целое число от 1 до 5 при условии, что по меньшей мере два из 1, т, η, о, р, ς, г, 8, ΐ и и не равны 0.
32. Способ по любому из пп.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представлен формулой 41 где Υ1 означает (СВ/ВвХСВзВЦ^СВзВдЦСВ^гБ-, причем В1-В8 независимо друг от друга означают линейный алкил или алкенил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил, либо гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и кроме того, В2-В8 могут означать Н; и
1, т и п независимо друг от друга означают целое число от 1 до 5, и, кроме того, п может быть равно 0 и
Мау означает майтансиноид, несущий боковую цепь на гидроксиле С-3, гидроксиметиле С-14, гидроксиле С-15 или десметиле С-20.
31. Способ по любому из пп.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представлен формулой 41' где Υ1' означает (СК7К8)1(СК9=СК10)р(С^С)чА0(СК5К6)тОи(СК11=СК12)г(С^С)аВ4(СК3К4)пСК1К2З-, причем К1-К12 независимо друг от друга означают линейный алкил или алкенил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил, либо гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и, кроме того, К2-К12 могут означать Н;
А, В и Ό независимо друг от друга означают циклический алкил или циклический алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, простой или замещенный арил, либо гетероциклический ароматиче
1, т, п, о, р, ς, г, к, ! и и независимо друг от друга означают 0 или целое число от 1 до 5, при условии, что по меньшей мере два из 1, т, п, о, р, ς, г, к, ! и и не равны 0; и
Мау означает майтансиноид, несущий боковую цепь на гидроксиле С-3, гидроксиметиле С-14, гидроксиле С-15 или десметиле С-20.
30. Способ по любому из пп.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представлен формулой ΙΙ-Ь, ΙΙ-Ό или П-О,Ь где Υι означает (СК7К8)1(СК5К6)т(СКзК4)пСК1К2З-, причем К!-К8 независимо друг от друга означают линейный алкил или алкенил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил, либо гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и, кроме того, К2-К8 могут означать Н;
1. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания следующей формулы:
трастузумаб-8МСС-майтансиноид.
2. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания следующей формулы:
трастузумаб-8МСС-ОМ1 или трастузумаб-8МСС-1)М4.
3. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания следующей формулы:
ЬиС242-8МСС-майтансиноид.
4. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания следующей формулы:
ЬиС242-8МСС-ОМ1 или
ЬиС242-8МСС-ОМ4.
5. Способ прицельной доставки майтансиноидов к выбранной популяции клеток ίη уйго, включающий контактирование популяции клеток или ткани, предположительно содержащей выбранную популяцию клеток, с конъюгатом из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками выбранной популяции клеток.
6. Способ устранения клеток ίη уйго, включающий контактирование клеток с конъюгатом из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками.
7. Способ применения ίη уйго для обработки аутологичных клеток костного мозга перед их пересадкой тому же самому субъекту для того, чтобы устранить больные или раковые клетки; клеток костного мозга перед их пересадкой для того, чтобы устранить компетентные Т-клетки и предотвратить реакцию трансплантат против хозяина; клеточных культур для того, чтобы устранить все клетки за исключением желательных вариантов, не экспрессирующих целевой антиген; либо клеточных культур для то
8. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой антитело трастузумаб.
9. Способ по п.6, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (гекигГасеб) антитело С242.
10. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой антитело против СаиАд, антитело против СЭ19, антитело против СО33, антитело против САЬЬА, антитело против ΕΟΕΚ, антитело против СО56, антитело против ΙΟΕ-ΙΚ или антитело против Нег2.
11. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (гекшГасеб) антитело Му 9-6, Κδ77 или N901.
12. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой антитело трастузумаб, антитело В4 или антитело 1шС242.
13. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой антитело 1иС242.
14. Способ по любому из пп.5-13, где нерасщепляемый линкер, по существу, устойчив к расщеплению под действием кислоты, расщеплению под действием света, расщеплению пептидазами, расщеплению эстеразами или расщеплению дисульфидной связи.
15. Способ по любому из пп.5-13, где нерасщепляемый линкер не содержит атома серы.
16. Способ по п.15, где линкер происходит из молекулы на основе дикарбоновой кислоты.
17. Способ по п.16, где линкер происходит из молекулы на основе α,ω-дикарбоновой кислоты, причем α,ω-дикарбоновая кислота соответствует общей формуле Н00С-Х|-Ум-2ш-С00Н. где X означает линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 2 до 20 атомов углерода, Υ означает циклоалкил или циклоалкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, Ζ означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода, либо замещенную или незамещенную гетероциклическую группу, в которой гетероатом выбран из Ν, О или δ, причем 1, т и и поодиночке равны 0 или 1 при условии, что все вместе они не равны 0 одновременно.
18. Способ по п.17, где α,ω-дикарбоновая кислота представляет собой адипиновую кислоту, глутаровую кислоту, пимелиновую кислоту, гексен-1,6-диовую кислоту, пентен-1,5-диовую кислоту, циклогександиовую кислоту или циклогексендиовую кислоту.
19. Способ по любому из пп.5-13, где нерасщепляемый линкер содержит атом серы.
20. Способ по п.19, где нерасщепляемый линкер происходит из молекулы на основе малеимида.
21. Способ по п.20, где нерасщепляемый линкер происходит из молекулы на основе малеимида, выбранной из группы, состоящей из №сукцинимидил-4-(малеимидометил)циклогексанкарбоксилата (δΜСС), №сукцинимидил-4-(№малеимидометил)циклогексан-1 -карбокси-6-амидокапроата (БС-8УСС). Ν-сукцинимидилового эфира κ-малеимидоундекановой кислоты (КΜυА), Ν-сукцинимидилового эфира γ-малеимидомасляной кислоты (СΜΒδ), Ν-гидроксисукцинимидного эфира ε-малеимидокапроновой кислоты (ΕΜСδ), т-малеимидобензоил-№гидроксисукцинимидного эфира (ΜΒδ), №(а-малеимидацетокси)сукцинимидного эфира (ΛΜΛδ). сукцинимидил-6-((в-малеимидопропионамидо)гексаноата (δΜΡΗ), №сукцинимидил-4-(и-малеимидофенил)бутирата (δΜРΒ) и №(и-малеимидофенил)изоцианата (ΡΜΡΙ).
- 21 010508 го, чтобы устранить варианты клеток, экспрессирующие нежелательный антиген; причем способ включает обработку клеток эффективным количеством конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов ковалентно соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками, подлежащими устранению.
- 22 010508 где Υι' означает (СК7К8)1(СК9=СК10)р(С^С)чАо(СК5К6)тПи(СК11=СК12)г(С^С)кВ1(СК3К4)пСК1К2З-, причем К1-К12 независимо друг от друга означают линейный алкил или алкенил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил, либо гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и, кроме того, К2-К12 могут означать Н;
А, В и Ό независимо друг от друга означают циклический алкил или циклический алкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, простой или замещенный арил, либо гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
22. Способ по п.21, где нерасщепляемый линкер происходит из δΜСС.
- 23 010508 ский или гетероциклоалкильный радикал; и
23. Способ по п.19, где нерасщепляемый линкер происходит из молекулы на основе галоидацетила.
- 24 010508 перекрестно сшивающим реагентом, образуя соединение формулы 6 где п означает целое число от 3 до 24, а Е вместе с карбонильной группой образует активный эфир, такой как Ν-гидроксисукцинимидиловый и сульфосукцинимидиловый эфиры, Ν-гидроксифталимидиловый эфир, Ν-гидроксисульфофталимидиловый эфир, ортонитрофениловый эфир, паранитрофениловый эфир, 2,4-динитрофениловый эфир, 3-сульфонил-4-нитрофениловый эфир, 3-карбокси-4нитрофениловый эфир, пентафторфениловый эфир и сульфонилтетрафторфениловый эфир.
40. Способ по любому из пп.5-13, в котором майтансиноид модифицирован не содержащим серы перекрестно сшивающим реагентом, образуя соединение формулы 7 где В означает Н или 8О3 -№1'.
41. Способ по любому из пп.5-7, в котором агент клеточного связывания представляет собой антитело, одноцепочечное антитело или фрагмент антитела, который специфически связывается с клеткоймишенью.
42. Способ по любому из пп.5-7, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (гекшТасеб) антитело, перестроенное одноцепочечное антитело или фрагмент перестроенного антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью.
43. Способ по любому из пп.5-7, в котором агент клеточного связывания представляет собой гуманизированное антитело, гуманизированное одноцепочечное антитело или фрагмент гуманизированного антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью.
44. Способ по любому из пп.5-7, в котором агент клеточного связывания представляет собой моноклональное антитело, одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью.
45. Способ по любому из пп.5-7, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (гекигТасеб) моноклональное антитело, перестроенное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент перестроенного моноклонального антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью.
46. Способ по любому из пп.5-7, в котором агент клеточного связывания представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, гуманизированное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент гуманизированного моноклонального антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью.
47. Способ по любому из пп.5-7, в котором конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающий нерасщепляемый линкер, менее токсичен, чем конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающий по меньшей мере один майтансиноид, соединенный с агентом клеточного связывания через расщепляемый линкер.
48. Способ по любому из пп.5-7, в котором конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания обладает почти таким же плазменным клиренсом, как и само антитело.
49. Способ по любому из пп.5-7, в котором максимальная переносимая доза у конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающего нерасщепляемый линкер, больше, чем у конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающего по меньшей мере один майтансиноид, соединенный с агентом клеточного связывания через расщепляемый линкер.
24. Способ по п.23, где нерасщепляемый линкер происходит из молекулы на основе галоидацетила, выбранной из группы, состоящей из №сукцинимидил-4-(иодацетил)аминобензоата ^1АВ), Νсукцинимидилиодацетата ^1А), Ν-сукцинимидилбромацетата ^ВА) и №сукцинимидил-3(бромацетамидо)пропионата ^ВАР).
- 25 010508
50. Способ по любому из пп.5-7, в котором продолжительность биологической активности у конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающего нерасщепляемый линкер, больше, чем у конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающего по меньшей мере один майтансиноид, соединенный с агентом клеточного связывания через расщепляемый линкер.
51. Способ по любому из пп.5-7, в котором активность в отношении антиген-отрицательных клеток у конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающего нерасщепляемый линкер, меньше, чем у конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания, включающего по меньшей мере один майтансиноид, соединенный с агентом клеточного связывания через расщепляемый линкер.
52. Способ по любому из пп.5-7, в котором конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания проявляет минимальную неспецифическую активность (Ьу81а1'1бег асОуйу).
53. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания связывается с раковыми клетками: зараженными вирусами клетками, зараженными микроорганизмами клетками, зараженными паразитами клетками, аутоиммунными клетками, активированными клетками, миелоидными клетками, активированными Т-клетками, В-клетками или меланоцитами: клетками, экспрессирующими антигены СЭ33, СЭ19, СаиАд, САЬЬА или Нег2: либо клетками, экспрессирующими рецептор инсулиноподобного фактора роста, рецептор эпидермального фактора роста или рецептор фолата.
54. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания связывается с клетками, выбранными из группы, состоящей из клеток рака молочной железы, клеток рака простаты, клеток рака яичников, клеток рака толстой и прямой кишки, клеток рака желудка, клеток плоскоклеточного рака, клеток мелкоклеточного рака легких, клеток рака яичек и клеток нейробластомы.
55. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой антитело, одноцепочечное антитело, фрагмент антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью, моноклональное антитело, одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью, химерное антитело, фрагмент химерного антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью, доменное антитело, фрагмент доменного антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью, лимфокин, гормон, витамин, фактор роста, колониестимулирующий фактор или молекулу переносчика питательного вещества.
56. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой интерферон, ΙΕ-2, ΙΕ-3, ΙΕ-4, ΙΕ-6, инсулин, рилизинг-фактор тиреотропина, меланоцитстимулирующий гормон, стероидный гормон, соматостатин, ЕСЕ, ТСЕ-α, ЕСЕ, С-С8Е, УЕСЕ, МС8Е, СМ-С8Е, фолиевую кислоту, трансферрин, эстроген, аналог эстрогена, андроген или аналог андрогена.
57. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой химерное антитело, фрагмент химерного антитела, доменное антитело или фрагмент доменного антитела, который специфически связывается с клеткой-мишенью.
58. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой моноклональное антитело, одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела, который специфически связывается с раковыми клетками.
59. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (ге8шТаееб) моноклональное антитело, перестроенное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент перестроенного моноклонального антитела, который специфически связывается с раковыми клетками.
60. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, гуманизированное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент гуманизированного моноклонального антитела, который специфически связывается с раковыми клетками.
61. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой химерное антитело, фрагмент химерного антитела, доменное антитело или фрагмент доменного антитела, который специфически связывается с раковыми клетками.
62. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой моноклональное антитело, одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела, который специфически связывается с клетками рака толстой и прямой кишки или клетками рака молочной железы.
63. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (ге8шТасеб) моноклональное антитело, перестроенное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент перестроенного моноклонального антитела, который специфически связывается с клетками рака толстой и прямой кишки или клетками рака молочной железы.
64. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, гуманизированное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент гуманизированного моноклонального антитела, который специфически связывается с клетками рака толстой и прямой кишки или клетками рака молочной железы.
65. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой перестроенное (ге8шТасеб) моноклональное антитело, перестроенное одноцепочечное моноклональное антитело или
25. Способ по п.24, где нерасщепляемый линкер происходит из δIАΒ.
- 26 010508 фрагмент перестроенного моноклонального антитела, который специфически связывается с клетками рака молочной железы.
66. Способ по п.5 или 6, в котором агент клеточного связывания представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, гуманизированное одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент гуманизированного моноклонального антитела, который специфически связывается с клетками рака молочной железы.
67. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором один или несколько майтансиноидов соединено с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, а агент клеточного связывания связывается с клетками-мишенями, представляющими собой больные или инфицированные клетки при заболевании, для применения в способе лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из опухолей, аутоиммунных заболеваний, отторжения трансплантатов, реакции трансплантат против хозяина, вирусных инфекций и паразитарных инфекций, причем способ включает введение нуждающемуся в лечении субъекту эффективного количества данного конъюгата.
68. Конъюгат по п.67, где опухоли выбраны из группы, состоящей из рака легких, молочной железы, толстой кишки, простаты, почек, поджелудочной железы, яичников и лимфатических органов.
69. Конъюгат по п.67, где аутоиммунные заболевания выбраны из группы, состоящей из системной волчанки, ревматоидного артрита и множественного склероза.
70. Конъюгат по п.67, где отторжения трансплантатов выбраны из группы, состоящей из отторжения почечных трансплантатов, отторжения сердечных трансплантатов и отторжения трансплантатов костного мозга.
71. Конъюгат по п.67, где вирусные инфекции выбраны из группы, состоящей из СМУ, ВИЧ и СПИД.
72. Конъюгат по п.67, в котором паразитарные инфекции выбраны из группы, состоящей из лямблиоза, амебиоза и шистосомоза.
73. Конъюгат по любому из пп.67-72, в котором конъюгат является конъюгатом, охарактеризованным в любом из пп.14-40.
74. Конъюгат по п.67, в котором агент клеточного связывания является конъюгатом, охарактеризованным в любом из пп.9-13.
75. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания, в котором по меньшей мере один майтансиноид соединен с агентом клеточного связывания через нерасщепляемый линкер, при условии, что если агентом клеточного связывания является антитело, то линкер не происходит из перекрестно сшивающего реагента, выбранного из группы, состоящей из сукцинимидил-4-(Ы-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (8МСС), сульфо-8МСС, т-малеимидобензоил-Ы-гидроксисукцинимидного эфира (МВ8), сульфо-МВ8 и Ν-сукцинимидил-иодацетата (81А).
76. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75, при условии, что агентом клеточного связывания не является антитело.
77. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, в котором конъюгат является конъюгатом, охарактеризованным в любом из пп.14-40.
78. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, в котором агент клеточного связывания связывается с раковыми клетками; зараженными вирусами клетками, зараженными микроорганизмами клетками, зараженными паразитами клетками, аутоиммунными клетками, активированными клетками, миелоидными клетками, активированными Т-клетками, В-клетками или меланоцитами; клетками, экспрессирующими антигены СЭ33, СЭ19, СапАд, САЬЬА или Нег2; либо клетками, экспрессирующими рецептор инсулино-подобного фактора роста, рецептор эпидермального фактора роста или рецептор фолата.
79. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.78, в котором агент клеточного связывания связывается с клетками, выбранными из группы, состоящей из клеток рака молочной железы, клеток рака простаты, клеток рака яичников, клеток рака толстой и прямой кишки, клеток рака желудка, клеток плоскоклеточного рака, клеток мелкоклеточного рака легких, клеток рака яичек и клеток нейробластомы.
80. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75, в котором агент клеточного связывания является агентом, охарактеризованным в любом из пп.9, 13, 41-44, 55, 57-64 и 66.
81. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, в котором агент клеточного связывания представляет собой лимфокин, гормон, витамин, фактор роста, колониестимулирующий фактор или молекулу переносчика питательного вещества.
82. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, в котором агент клеточного связывания является агентом, охарактеризованным в любом из пп.47-52 и 56.
83. Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75, в котором агент клеточного связывания является агентом, охарактеризованным в любом из пп.10-12.
84 Конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.83, в котором майтансиноид представляет собой ЭМН ЭМ2 или ЭМ3.
85. Композиция, включающая конъюгат из майтансиноида и агента клеточного связывания по лю
26. Способ по любому из пп.5-13, где линкер находится на одной из групп: гидроксиле С-3, гидроксиметиле С-14, гидроксиле С-15 или десметиле С-20 по меньшей мере одного майтансиноида.
- 27 010508 бому из пп.75-84, а также носитель.
86. Способ получения конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, включающий:
(a) обеспечение агента клеточного связывания, (b) модифицирование агента клеточного связывания с помощью перекрестно сшивающего реагента и (c) конъюгирование модифицированного агента клеточного связывания с майтансиноидом или тиолсодержащим майтансиноидом, обеспечивая при этом нерасщепляемый линкер между агентом клеточного связывания и майтансиноидом или тиолсодержащим майтансиноидом для образования конъюгата.
87. Способ получения конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, включающий:
(a) обеспечение майтансиноида или тиолсодержащего майтансиноида, (b) модифицирование майтансиноида или тиолсодержащего майтансиноида с помощью перекрестно сшивающего реагента для образования нерасщепляемого линкера и (c) конъюгирование модифицированного майтансиноида или тиолсодержащего майтансиноида с агентом клеточного связывания, обеспечивая при этом нерасщепляемый линкер между агентом клеточного связывания и майтансиноидом или тиолсодержащим майтансиноидом для образования конъюгата.
88. Способ получения конъюгата из майтансиноида и агента клеточного связывания по п.75 или 76, включающий:
(a) обеспечение майтансиноида, (b) модифицирование майтансиноида с помощью не содержащего серы перекрестно сшивающего реагента для получения сложного эфира майтансиноида, и (c) конъюгирование сложного эфира майтансиноида с агентом клеточного связывания, обеспечивая при этом нерасщепляемый линкер между агентом клеточного связывания и майтансиноидом для образования конъюгата.
где Х означает линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 2 до 20 атомов углерода, Υ означает циклоалкил или циклоалкенил, содержащий от 3 до 10 атомов углерода, Ζ означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода, либо замещенную или незамещенную гетероциклическую группу, в которой гетероатом выбран из Ν, О или 8, причем 1, т и η поодиночке равны 0 или 1 при условии, что все вместе они не равны 0 одновременно, и Е вместе с карбонильной группой образует активный эфир, такой как Νгидроксисукцинимидиловый и сульфосукцинимидиловый эфиры, Ν-гидроксифталимидиловый эфир, Νгидроксисульфофталимидиловый эфир, ортонитрофениловый эфир, паранитрофениловый эфир, 2,4динитрофениловый эфир, 3-сульфонил-4-нитрофениловый эфир, 3-карбокси-4-нитрофениловый эфир, пентафторфениловый эфир и сульфонилтетрафторфениловый эфир.
90. Соединение формулы 6 где η означает целое число от 3 до 24, а Е вместе с карбонильной группой образует активный эфир, такой как Ν-гидроксисукцинимидиловый и сульфосукцинимидиловый эфиры, Ν-гидроксифталимидиловый эфир, Ν-гидроксисульфофталимидиловый эфир, ортонитрофениловый эфир, паранитрофениловый эфир, 2,4-динитрофениловый эфир, 3-сульфонил-4-нитрофениловый эфир, 3-карбокси-4нитрофениловый эфир, пентафторфениловый эфир и сульфонилтетрафторфениловый эфир.
91. Соединение формулы 7
27. Способ по любому из пп.5-13, где по меньшей мере один майтансиноид представляет собой сложный эфир майтансинола, содержащий Ν-метилаланин.
28. Способ по любому из пп.5-13, где по меньшей мере один майтансиноид представляет собой сложный эфир майтансинола, содержащий Ν-метилцистеин.
29. Способ по любому из пп.5-13, в котором по меньшей мере один майтансиноид представлен формулой ΙΙ'-Ь, ΙΙ'-Ό или П'-Э,Ь:
- 28 010508 где К означает Н или ЗО3 -№1'.
5МСС (сукцинимидил-4-(М-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат
EA200600752A 2003-10-10 2004-10-12 Способ прицельного воздействия на определенные популяции клеток с помощью конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемый линкер, конъюгаты и способы получения таких конъюгатов EA010508B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US50990103P 2003-10-10 2003-10-10
US10/960,602 US8088387B2 (en) 2003-10-10 2004-10-08 Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
PCT/US2004/030917 WO2005037992A2 (en) 2003-10-10 2004-10-12 Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200600752A1 EA200600752A1 (ru) 2007-08-31
EA010508B1 true EA010508B1 (ru) 2008-10-30

Family

ID=34467962

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200600752A EA010508B1 (ru) 2003-10-10 2004-10-12 Способ прицельного воздействия на определенные популяции клеток с помощью конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемый линкер, конъюгаты и способы получения таких конъюгатов

Country Status (25)

Country Link
US (10) US8088387B2 (ru)
EP (4) EP1689846B1 (ru)
JP (9) JP2007520450A (ru)
KR (4) KR20060130552A (ru)
CN (3) CN107198778A (ru)
AU (2) AU2004282491C1 (ru)
BE (1) BE2013C075I2 (ru)
BR (1) BRPI0415448A8 (ru)
CA (2) CA2542128C (ru)
CY (2) CY1113984T1 (ru)
DK (1) DK1689846T3 (ru)
EA (1) EA010508B1 (ru)
EC (1) ECSP066461A (ru)
ES (1) ES2404304T3 (ru)
HK (1) HK1244452A1 (ru)
HR (1) HRP20130412T1 (ru)
HU (1) HUS1300075I1 (ru)
IL (4) IL173625A (ru)
LU (1) LU92336I2 (ru)
NO (2) NO337458B1 (ru)
NZ (2) NZ583844A (ru)
PL (1) PL1689846T3 (ru)
PT (1) PT1689846E (ru)
SI (1) SI1689846T1 (ru)
WO (1) WO2005037992A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10570151B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses

Families Citing this family (289)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
US7097840B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
DK2163256T3 (en) 2001-05-11 2015-12-07 Ludwig Inst For Cancer Res Ltd Specific binding proteins and use thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US20110045005A1 (en) * 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
PL210412B1 (pl) * 2002-05-24 2012-01-31 Schering Corp Izolowane przeciwciało anty-IGFR lub jego fragment, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie, kwas nukleinowy, zrekombinowany wektor, komórka gospodarza, kompleks, polipeptyd i sposób jego wytwarzania
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) * 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005082023A2 (en) * 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CN102973947A (zh) * 2004-06-01 2013-03-20 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
CA2486285C (en) * 2004-08-30 2017-03-07 Viktor S. Goldmakher Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
US7521541B2 (en) 2004-09-23 2009-04-21 Genetech Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
EP1817059A2 (en) 2004-12-01 2007-08-15 Genentech, Inc. Conjugates of 1,8-bis-naphthalimides with an antibody
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
AU2006213662B2 (en) * 2005-02-11 2010-08-05 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
JP4875064B2 (ja) * 2005-04-15 2012-02-15 シェーリング コーポレイション 癌を処置または予防するための方法および組成物
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
EP1928503B1 (en) * 2005-08-24 2012-10-03 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
US8080534B2 (en) 2005-10-14 2011-12-20 Phigenix, Inc Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer
WO2007100385A2 (en) * 2005-10-31 2007-09-07 Genentech, Inc. Macrocyclic depsipeptide antibody-drug conjugates and methods
BRPI0706935A2 (pt) 2006-01-20 2011-04-19 Genentech Inc anticorpos anti-efrina b2 isolado, vetor, célula hospedeira, método de elaboração de anticorpo anti-efrina b2, método de elaboração de imunoconjugado anti-efrina b2, método de detecção de efrina b2, método de diagnóstico de disfunção, composição, método de inibição da angiogênese e uso de anticorpo anti-efrina b2
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
MX2008015132A (es) 2006-05-30 2008-12-10 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos.
LT2845866T (lt) 2006-10-27 2017-07-10 Genentech, Inc. Antikūnai ir imunokonjugatai bei jų panaudojimas
CN104013956B (zh) 2007-01-25 2018-12-18 达娜-法勃肿瘤研究所公司 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
MX2009009782A (es) 2007-03-15 2010-09-10 Ludwig Inst Cancer Res Metodo de tratamiento que utiliza anticuerpos egfr e inhibidores de src y formulaciones relacionadas.
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
CN101679974B (zh) 2007-03-27 2015-09-30 航道生物技术有限责任公司 包含抗体替代轻链序列的构建体和文库
US20090011060A1 (en) * 2007-07-06 2009-01-08 Peter Koepke Campsiandra angustifolia extract and methods of extracting and using such extract
PL2474557T3 (pl) 2007-07-16 2015-02-27 Genentech Inc Przeciwciała anty- CD79b i immunokoniugaty i sposoby stosowania
EP2641618A3 (en) 2007-07-16 2013-10-23 Genentech, Inc. Humanized anti-CD79B antibodies and immunoconjugates and methods of use
EP2188311B1 (en) 2007-08-14 2016-10-05 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof
EP3831380A3 (en) 2007-08-17 2021-12-01 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
US7879369B2 (en) 2007-09-18 2011-02-01 Selvamedica, Llc Combretum laurifolium Mart. extract and methods of extracting and using such extract
TWI640535B (zh) 2008-01-31 2018-11-11 建南德克公司 抗-ｃｄ７９ｂ抗體及免疫共軛物及使用方法
KR20210131473A (ko) 2008-03-18 2021-11-02 제넨테크, 인크. 항-ｈｅｒ２ 항체-약물 접합체와 화학요법제의 병용물, 및 사용 방법
CA2722109A1 (en) * 2008-04-30 2009-11-05 Immunogen, Inc. Potent conjugates and hydrophilic linkers
MY186725A (en) * 2008-04-30 2021-08-13 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
WO2009134870A1 (en) * 2008-04-30 2009-11-05 Immunogen, Inc. Potent cell-binding agent drug conjugates
US20100092495A1 (en) * 2008-04-30 2010-04-15 Immunogen Inc. Potent cell-binding agent drug conjugates
DK2318832T3 (da) 2008-07-15 2014-01-20 Academia Sinica Glycan-arrays på PTFE-lignende aluminiumcoatede objektglas og relaterede fremgangsmåder
JP5977522B2 (ja) 2009-02-05 2016-08-24 イミュノジェン・インコーポレーテッド 新規ベンゾジアゼピン誘導体
HRP20221471T1 (hr) * 2009-03-25 2023-02-03 Genentech, Inc. Protutijela anti-fgfr3 i postupci za njihovu uporabu
EP2414399A1 (en) 2009-04-01 2012-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-fcrh5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
AU2010230563A1 (en) 2009-04-02 2011-09-22 Roche Glycart Ag Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain Fab fragments
EP2424875B1 (en) 2009-04-29 2016-01-06 Bio-Rad Laboratories, Inc. Purification of immunoconjugates
WO2010126551A1 (en) 2009-04-30 2010-11-04 Immunogen, Inc. Potent conjugates and hydrophilic linkers
EP2430047B1 (en) 2009-05-13 2018-03-28 i2 Pharmaceuticals, Inc. Neutralizing molecules to influenza viruses
PT2437790T (pt) 2009-06-03 2019-06-04 Immunogen Inc Métodos de conjugação
KR20180056805A (ko) 2009-06-04 2018-05-29 노파르티스 아게 ＩｇＧ 콘쥬게이션을 위한 자리의 확인 방법
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
IN2012DN03025A (ru) * 2009-09-09 2015-07-31 Ct Se Llc
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
SG10201408401RA (en) 2009-09-16 2015-01-29 Genentech Inc Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
NZ621655A (en) * 2009-10-26 2015-08-28 Nestec Sa Assays for the detection of anti-tnf drugs and autoantibodies
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
JP6184695B2 (ja) 2009-12-04 2017-08-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体、抗体アナログ、組成物、及び方法
US20110165155A1 (en) * 2009-12-04 2011-07-07 Genentech, Inc. Methods of treating metastatic breast cancer with trastuzumab-mcc-dm1
DK2516465T3 (en) 2009-12-23 2016-06-06 Hoffmann La Roche ANTI-BV8 ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
JP5841072B2 (ja) 2010-02-10 2016-01-06 イミュノジェン・インコーポレーテッド Ｃｄ２０抗体およびその使用
CA2787657A1 (en) * 2010-02-23 2011-09-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
SG10201501342UA (en) 2010-02-24 2015-04-29 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
CN102971012B (zh) 2010-03-12 2016-05-04 伊缪诺金公司 Cd37结合分子及其免疫缀合物
AR080793A1 (es) 2010-03-26 2012-05-09 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos
US10338069B2 (en) 2010-04-12 2019-07-02 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
CN102946906B (zh) 2010-04-23 2015-07-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 生产异源多聚体蛋白质
CA2795972A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Genentech, Inc. Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
SG10201600791TA (en) 2010-06-08 2016-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
KR101586128B1 (ko) 2010-08-24 2016-01-15 에프. 호프만-라 로슈 아게 디술피드 안정화 ― Ｆｖ 단편을 포함하는 이중특이적 항체
AU2011320314B2 (en) 2010-10-29 2015-08-06 Immunogen, Inc. Novel EGFR-binding molecules and immunoconjugates thereof
AU2011320318B9 (en) * 2010-10-29 2015-11-19 Immunogen, Inc. Non-antagonistic EGFR-binding molecules and immunoconjugates thereof
JP5889912B2 (ja) * 2010-11-17 2016-03-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド アラニニルメイタンシノール抗体コンジュゲート
EP2655413B1 (en) 2010-12-23 2019-01-16 F.Hoffmann-La Roche Ag Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
AU2012211014A1 (en) 2011-01-24 2013-05-02 National Research Council Of Canada Antibodies selective for cells presenting EGFR at high density
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
RU2013140685A (ru) 2011-02-04 2015-03-10 Дженентек, Инк. ВАРИАНТЫ Fc, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
SG10201601046QA (en) 2011-02-15 2016-03-30 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
SG193997A1 (en) 2011-03-29 2013-11-29 Immunogen Inc Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
TR201902180T4 (tr) 2011-03-29 2019-03-21 Immunogen Inc Tek adimli bi̇r i̇şlem i̇le maytansi̇noi̇d anti̇kor konjugatlarinin hazirlanmasi
EP2691117A2 (en) * 2011-03-29 2014-02-05 Immunogen, Inc. Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
KR20230013283A (ko) 2011-04-01 2023-01-26 이뮤노젠 아이엔씨 Folr1 암 치료의 효능을 증가시키기 위한 방법
JP6018622B2 (ja) 2011-04-01 2016-11-02 イミュノジェン， インコーポレイテッド Ｃｄ３７結合性分子及びその免疫複合体
CA2835203A1 (en) 2011-05-09 2012-11-15 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating cancer
CN106432506A (zh) 2011-05-24 2017-02-22 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
WO2012171020A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
MX350954B (es) 2011-06-21 2017-09-26 Immunogen Inc Derivados de maitansinoides novedosos con enlazador de peptido y conjugados de estos.
WO2013016714A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Sea Lane Biotechnologies Sur-binding proteins against erbb3
PE20141151A1 (es) 2011-09-22 2014-09-25 Amgen Inc Proteinas de union al antigeno cd27l
US9364551B2 (en) 2011-09-29 2016-06-14 Virginia Commonwealth University Light-enabled drug delivery
IN2014CN03062A (ru) 2011-10-28 2015-07-31 Hoffmann La Roche
CN104168922A (zh) 2011-11-16 2014-11-26 安姆根有限公司 治疗表皮生长因子缺失突变体viii相关疾病的方法
KR20140105765A (ko) 2011-11-21 2014-09-02 이뮤노젠 아이엔씨 EGfr 항체 세포독성제 접합체에 의한 EGfr 치료에 내성을 나타내는 종양의 치료 방법
MX358680B (es) 2011-12-08 2018-08-31 Biotest Ag Usos de inmunoconjugados dirigidos a cd138.
CA2859744A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Sea Lane Biotechnologies, Llc Surrogate binding proteins
CA2858806A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
WO2013109994A1 (en) 2012-01-20 2013-07-25 Sea Lane Biotechnologies, Llc Surrobody cojugates
CN104105711B (zh) 2012-02-10 2018-11-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 单链抗体及其他异多聚体
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9764041B2 (en) 2012-04-04 2017-09-19 Perseus Proteomics Inc. Drug conjugate comprising anti-CDH3 (P-cadherin) antibody
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
EP2841093A4 (en) 2012-04-27 2016-04-06 Cytomx Therapeutics Inc ACTIVATABLE ANTIBODIES FOR BINDING THE RECEPTOR OF THE EPIDERMAL GROWTH FACTOR AND USE THEREOF
KR20150006000A (ko) 2012-05-01 2015-01-15 제넨테크, 인크. 항-pmel17 항체 및 면역접합체
WO2013173392A1 (en) 2012-05-15 2013-11-21 Concortis Biosystems, Corp Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
NZ630870A (en) 2012-05-15 2016-10-28 Seattle Genetics Inc Self-stabilizing linker conjugates
SG11201407561UA (en) 2012-05-21 2014-12-30 Genentech Inc ANTI-Ly6E ANTIBODIES AND IMMUNOCONJUGATES AND METHODS OF USE
MX354862B (es) 2012-06-27 2018-03-23 Hoffmann La Roche Método para la producción de entidades dirigidas altamente selectivas hechas a la medida y biespecíficas que contienen dos entidades de unión diferentes.
CN104411718B (zh) 2012-06-27 2018-04-24 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于制备包含特异性结合靶的至少一种结合实体的抗体Fc区缀合物的方法及其用途
CN104797270A (zh) 2012-08-02 2015-07-22 基因泰克公司 抗etbr抗体和免疫偶联物
CN104717979A (zh) 2012-08-02 2015-06-17 基因泰克公司 抗etbr抗体和免疫偶联物
WO2014031498A1 (en) 2012-08-18 2014-02-27 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
US8883979B2 (en) 2012-08-31 2014-11-11 Bayer Healthcare Llc Anti-prolactin receptor antibody formulations
RS58493B1 (sr) 2012-09-26 2019-04-30 Immunogen Inc Poboljšani postupak za acilaciju majtanzinola
WO2014055877A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
AU2013344778B2 (en) 2012-11-15 2018-03-22 Endocyte, Inc. Conjugates for treating diseases caused by PSMA expressing cells
JP6133431B2 (ja) 2012-11-24 2017-05-24 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 親水性連結体及び薬物分子と細胞結合分子との共役反応における親水性連結体の使用
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
CN103333246B (zh) * 2012-12-21 2015-09-16 百奥泰生物科技(广州)有限公司 一种抗egfr受体的肿瘤生长抑制剂及其制备方法和用途
CN103333179B (zh) * 2012-12-21 2017-06-16 百奥泰生物科技(广州)有限公司 类美登素衍生物及其制备方法和用途
EP2961434A2 (en) 2013-02-28 2016-01-06 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9901647B2 (en) 2013-02-28 2018-02-27 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9415118B2 (en) * 2013-03-13 2016-08-16 Novartis Ag Antibody drug conjugates
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
KR20150127199A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. 항-b7-h4 항체 및 면역접합체
WO2014140300A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Innate Pharma Solid phase tgase-mediated conjugation of antibodies
CN105007950B (zh) 2013-03-15 2019-01-15 诺华股份有限公司 抗体药物缀合物
US10233249B2 (en) 2013-03-19 2019-03-19 Beijing Shenogen Pharma Group Ltd. Antibodies and methods for treating estrogen receptor-associated diseases
CA2910945A1 (en) 2013-05-08 2014-11-13 Zymeworks Inc. Bispecific her2 and her3 antigen binding constructs
GB201309807D0 (en) 2013-05-31 2013-07-17 Pharma Mar Sau Antibody drug conjugates
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
BR112015030514A2 (pt) * 2013-06-04 2017-08-29 Cytomx Therapeutics Inc Composições e métodos para conjugação de anticorpos ativáveis
CN110251683A (zh) 2013-06-24 2019-09-20 Abl生物公司 具有改进的稳定性的抗体-药物缀合物及其用途
WO2014210397A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
EP3013347B1 (en) 2013-06-27 2019-12-11 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
AU2014286872B2 (en) 2013-07-05 2020-01-23 Formation Biologics Inc. EGFR antibody conjugates
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
RU2560699C2 (ru) * 2013-08-02 2015-08-20 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский ядерный университет МИФИ" (НИЯУ МИФИ) Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител
US9545451B2 (en) 2013-08-21 2017-01-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PRLR antibodies and methods for killing PRLR-expressing cells
TWI641620B (zh) 2013-08-21 2018-11-21 再生元醫藥公司 抗－ｐｒｌｒ抗體及其用途
SG11201601230RA (en) 2013-08-26 2016-03-30 Regeneron Pharma Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
EP3296408A1 (en) 2013-09-05 2018-03-21 The Jackson Laboratory Compositions for rna-chromatin interaction analysis and uses thereof
JP6486368B2 (ja) 2013-09-06 2019-03-20 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 改変されたグリコシル基を含む糖脂質を用いたヒトｉＮＫＴ細胞の活性化
CA2922889A1 (en) 2013-09-17 2015-03-26 Genentech, Inc. Methods of using anti-lgr5 antibodies
RU2696579C2 (ru) 2013-10-08 2019-08-05 Иммьюноджен, Инк. Схемы применения иммуноконъюгата анти-folr1
ES2754397T3 (es) 2013-10-11 2020-04-17 Asana Biosciences Llc Conjugados de proteína-polímero-fármaco
CA2926586C (en) 2013-10-11 2020-04-07 Mersana Therapeutics, Inc. Polymeric scaffold based on phf for targeted drug delivery
US11103593B2 (en) 2013-10-15 2021-08-31 Seagen Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
US10836821B2 (en) 2013-10-15 2020-11-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
EA037778B1 (ru) 2013-10-18 2021-05-20 Дойчес Кребсфоршунгсцентрум Меченые ингибиторы простатического специфического мембранного антигена (псма), их применение в качестве агентов для визуализации и фармацевтических агентов для лечения рака предстательной железы
RU2016118573A (ru) 2013-10-21 2017-11-28 Дженентек, Инк. Анти-ly6e антитела и способы применения
US9540440B2 (en) 2013-10-30 2017-01-10 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind epidermal growth factor receptor and methods of use thereof
EP3068892A4 (en) 2013-11-13 2017-05-31 Zymeworks Inc. Monovalent antigen binding constructs targeting egfr and/or her2 and uses thereof
WO2015077891A1 (en) 2013-11-27 2015-06-04 Zymeworks Inc. Bispecific antigen-binding constructs targeting her2
WO2015089283A1 (en) 2013-12-11 2015-06-18 Cytomx Therapeutics, Inc. Antibodies that bind activatable antibodies and methods of use thereof
TWI541022B (zh) 2013-12-18 2016-07-11 應克隆公司 針對纖維母細胞生長因子受體－３（ｆｇｆｒ３）之化合物及治療方法
TWI777502B (zh) 2013-12-19 2022-09-11 美商西雅圖遺傳學公司 與標的-藥物結合物併用之亞甲基胺基甲酸酯連接物
US9943606B2 (en) 2014-01-15 2018-04-17 Rutgers, The State University Of New Jersey Dendritic polypeptide-based nanocarriers for the delivery of therapeutic agents
WO2015108203A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社オーダーメードメディカルリサーチ 抗ｓｌｃ６ａ６抗体を用いたがん治療用医薬組成物
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
CA2937123A1 (en) 2014-01-16 2015-07-23 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
BR112016016490B1 (pt) 2014-01-27 2022-11-29 Pfizer Inc Compostos de agentes citotóxicos bifuncionais, composição farmacêutica compreendendo os referidos compostos e usos dos mesmos
KR20160111964A (ko) 2014-01-29 2016-09-27 샹하이 헨그루이 파마수티컬 컴퍼니 리미티드 리간드-세포독성 약물 접합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
KR102532137B1 (ko) 2014-02-11 2023-05-12 씨젠 인크. 단백질의 선택적 환원
ES2960619T3 (es) 2014-02-28 2024-03-05 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores cargados y sus usos para la conjugación
WO2015148915A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Academia Sinica Reactive labelling compounds and uses thereof
RU2727012C2 (ru) 2014-05-06 2020-07-17 Дженентек, Инк. Получение гетеромультимерных белков с использованием клеток млекопитающих
JP6894239B2 (ja) 2014-05-27 2021-06-30 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 増強された抗体の有効性のための普遍的グリコフォームに関する組成物および方法
US10005847B2 (en) 2014-05-27 2018-06-26 Academia Sinica Anti-HER2 glycoantibodies and uses thereof
JP2017518989A (ja) 2014-05-27 2017-07-13 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 抗ｃｄ２０糖操作抗体群およびその使用
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
US11332523B2 (en) 2014-05-28 2022-05-17 Academia Sinica Anti-TNF-alpha glycoantibodies and uses thereof
RU2695220C2 (ru) * 2014-06-30 2019-07-22 Тарведа Терапьютикс, Инк. Нацеленные конъюгаты и частицы и их составы
DK3160513T3 (da) 2014-06-30 2020-04-06 Glykos Finland Oy Saccharidderivat af en toksisk payload og antistofkonjugater deraf
EP3164420A4 (en) * 2014-06-30 2018-05-23 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted conjugates and particles and formulations thereof
WO2016008112A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Medshine Discovery Inc. Linkers and application towards adc thereof
WO2016024195A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates
KR20240011258A (ko) 2014-09-02 2024-01-25 이뮤노젠 아이엔씨 항체 약물 컨쥬게이트 조성물의 제형화 방법
WO2016036804A1 (en) 2014-09-03 2016-03-10 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
JP6606545B2 (ja) 2014-09-03 2019-11-13 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞障害性ベンゾジアゼピン誘導体
WO2016040369A2 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS
CN113827737A (zh) 2014-09-11 2021-12-24 西雅图基因公司 含叔胺药物物质的靶向递送
JP2017531620A (ja) 2014-09-12 2017-10-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド システイン操作抗体及びコンジュゲート
AR101848A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos de anti-b7-h4 e inmunoconjugados
DK3262071T3 (da) 2014-09-23 2020-06-15 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til anvendelse af anti-CD79b-immunkonjugater
JP2017534612A (ja) 2014-10-14 2017-11-24 ポリセリックス・リミテッド Ｐｅｇの部分を含めた脱離基を含む試薬を用いるペプチド又はタンパク質のコンジュゲーションのための方法
CN108064244B (zh) 2014-11-14 2021-09-17 诺华股份有限公司 抗体药物缀合物
JP6721590B2 (ja) 2014-12-03 2020-07-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性抗体
WO2016090157A1 (en) 2014-12-04 2016-06-09 Celgene Corporation Biomolecule conjugates
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10342858B2 (en) 2015-01-24 2019-07-09 Academia Sinica Glycan conjugates and methods of use thereof
CN107849090A (zh) 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物
US10870706B2 (en) 2015-03-20 2020-12-22 Pfizer Inc. Bifunctional cytotoxic agents containing the CTI pharmacophore
EP3286227A2 (en) 2015-04-24 2018-02-28 F. Hoffmann-La Roche AG Multispecific antigen-binding proteins
TW201711702A (zh) 2015-06-04 2017-04-01 應克隆公司 使用針對纖維母細胞生長因子受體３（ｆｇｆｒ３）之化合物的療法
MA44391A (fr) 2015-06-08 2019-01-23 Debiopharm Int Sa Combinaisons d'immunoconjugués anti-cd37 et d'anticorps anti-cd20
EP3308801A4 (en) * 2015-06-09 2019-02-27 XDCExplorer (Shanghai) Co., Ltd. ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATE, INTERMEDIATE, PREPARATION METHOD, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND USES THEREOF
EP3310813A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 Novartis AG Antibody drug conjugates
PT3313845T (pt) 2015-06-29 2020-11-19 Immunogen Inc Conjugados de anticorpos de engenharia de cisteína
WO2017003940A1 (en) * 2015-06-30 2017-01-05 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted conjugates and particles and formulations thereof
CN113350518A (zh) 2015-07-12 2021-09-07 杭州多禧生物科技有限公司 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
DK3325483T3 (da) 2015-07-21 2020-01-20 Immunogen Inc Fremgangsmåder til fremstilling af cytotoksiske benzodiazepinderivater
WO2017025458A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Gamamabs Pharma Antibodies, antibody drug conjugates and methods of use
JP6890581B2 (ja) 2015-08-28 2021-06-18 デビオファーム インターナショナル， エス． アー． Ｃｄ３７の検出のための抗体およびアッセイ
EP3347049A4 (en) * 2015-09-08 2019-01-30 Waters Technologies Corporation MULTIDIMENSIONAL CHROMATOGRAPHY METHOD FOR THE ANALYSIS OF ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATES
RU2749865C2 (ru) 2015-09-17 2021-06-17 Иммьюноджен, Инк. Терапевтические комбинации, содержащие анти-folr1 иммуноконъюгаты
RU2018116846A (ru) 2015-10-08 2019-11-08 Займворкс Инк. Антигенсвязывающие полипептидные конструкции, содержащие легкие цепи каппа и лямбда, и их применения
CN108473538B (zh) 2015-10-28 2022-01-28 塔弗达治疗有限公司 Sstr靶向缀合物及其颗粒和制剂
FI3380525T3 (fi) 2015-11-25 2024-01-30 Immunogen Inc Lääkeformulaatioita ja niiden käyttömenetelmiä
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
JP2019501131A (ja) 2015-12-04 2019-01-17 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 四級化チューブリシン化合物の複合体
US9950076B2 (en) 2016-01-25 2018-04-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
CA3013412C (en) 2016-02-04 2023-10-10 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Specific conjugation linkers, specific immunoconjugates thereof, methods of making and uses such conjugates thereof
AU2017213826A1 (en) 2016-02-04 2018-08-23 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
WO2017147240A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Tarveda Therapeutics, Inc. Hsp90 targeted conjugates and particles and formulations thereof
WO2017156192A1 (en) 2016-03-08 2017-09-14 Academia Sinica Methods for modular synthesis of n-glycans and arrays thereof
AU2017237186A1 (en) 2016-03-25 2018-11-01 Seagen Inc. Process for the preparation of PEGylated drug-linkers and intermediates thereof
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
JP7011764B2 (ja) 2016-07-07 2022-01-27 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 抗体アジュバント複合体
KR20240010534A (ko) 2016-08-09 2024-01-23 씨젠 인크. 개선된 물리화학적 특성을 갖는 자기 안정화 링커를 구비한 약물 접합체
US9950070B2 (en) * 2016-08-16 2018-04-24 Korea University Research And Business Foundation HER2 aptamer-anticancer drug complex for cancer cell chemotherapy
US10538592B2 (en) 2016-08-22 2020-01-21 Cho Pharma, Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
CN109843334A (zh) 2016-10-18 2019-06-04 西雅图基因公司 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸补救途径抑制剂的靶向递送
WO2018075692A2 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Invenra Inc. Antibody constructs
JP2020510608A (ja) 2016-11-02 2020-04-09 デビオファーム インターナショナル， エス． アー． 抗ｃｄ３７イムノコンジュゲート療法を改善するための方法
EP3538080A4 (en) 2016-11-14 2020-07-08 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. CONJUGATION LINERS, MEDICAMENT-MOLECULE CONJUGATES TO A CELL CONTAINING THE SAME, METHODS OF PREPARING AND USING SUCH CONJUGATES WITH THE BINDERS
CA3044391A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Immunogen, Inc. Selective sulfonation of benzodiazepine derivatives
CN110382534B (zh) 2016-11-29 2023-05-09 里珍纳龙药品有限公司 治疗prlr阳性乳腺癌的方法
JP7244987B2 (ja) 2016-12-14 2023-03-23 シージェン インコーポレイテッド 多剤抗体薬物コンジュゲート
CN110291107B (zh) 2016-12-22 2023-05-05 卡坦扎罗麦格纳格拉西亚大学 靶向cd43的独特唾液酸糖基化的癌症相关表位的单克隆抗体
EP3558391B1 (en) 2016-12-23 2022-02-02 Immunogen, Inc. Immunoconjugates targeting adam9 and methods of use thereof
WO2018129029A1 (en) 2017-01-04 2018-07-12 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
TWI781145B (zh) 2017-02-28 2022-10-21 美商伊繆諾金公司 具有自分解肽連接子之類美登素衍生物及其結合物
US11730822B2 (en) 2017-03-24 2023-08-22 Seagen Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
US20180346488A1 (en) 2017-04-20 2018-12-06 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof
US20180311375A1 (en) * 2017-04-27 2018-11-01 Cadila Healthcare Limited Process of preparing antibody-drug conjugate
JOP20190254A1 (ar) 2017-04-27 2019-10-27 Pharma Mar Sa مركبات مضادة للأورام
KR20190141181A (ko) 2017-04-27 2019-12-23 시애틀 지네틱스, 인크. 사차화된 니코틴아미드 아데닌 다이뉴클레오타이드 구제 경로 억제제 콘쥬게이트
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
MX2020002241A (es) 2017-08-28 2020-09-03 Angiex Inc Anticuerpos anti-tm4sf y métodos de uso de los mismos.
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
US11793885B2 (en) 2017-12-28 2023-10-24 Immunogen, Inc. Substituted benzo[5,6][1,4]diazepino[1,2-a]indoles for the treatment of proliferative disorders
WO2019150985A1 (ja) * 2018-01-31 2019-08-08 国立大学法人東京大学 抗体薬物複合体及びそれを含む医薬組成物
PE20201503A1 (es) 2018-04-13 2020-12-29 Genentech Inc Formulaciones de inmunoconjugado anti-cd79b estables
JP2021527047A (ja) 2018-06-05 2021-10-11 キングス・カレッジ・ロンドン 消化管系へのペイロード送達のための、ｂｔｎｌ３／８を標的とする構築物
CA3104511A1 (en) 2018-06-26 2020-01-02 Immunogen, Inc. Immunoconjugates targeting adam9 and methods of use thereof
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
KR20210038904A (ko) 2018-07-25 2021-04-08 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법
MX2021003382A (es) 2018-09-26 2021-05-27 Jiangsu Hengrui Medicine Co Conjugado de ligando y farmaco analogo de exatecan, metodo de preparacion del mismo y aplicacion del mismo.
TW202029980A (zh) 2018-10-26 2020-08-16 美商免疫遺傳股份有限公司 Ｅ ｐ Ｃ Ａ Ｍ 抗體、可活化抗體及免疫偶聯物以及其用途
AU2020241686A1 (en) 2019-03-15 2021-11-04 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting HER2
JP2022528020A (ja) 2019-03-19 2022-06-07 フンダシオ プリバダ インスティトゥト ディンベスティガシオ オンコロジカ デ バル エブロン 癌の治療のための併用療法
WO2020191342A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
EP3947395A1 (en) 2019-03-29 2022-02-09 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic bis-benzodiazepine derivatives and conjugates thereof with cell-binding agents for inhibiting abnormal cell growth or for treating proliferative diseases
US20230135930A1 (en) 2019-04-24 2023-05-04 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
DK3958977T3 (en) 2019-04-26 2023-12-11 Immunogen Inc Camptothecinderivater
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
MX2022000450A (es) 2019-07-10 2022-04-25 Cybrexa 3 Inc Conjugados peptídicos de agentes dirigidos a microtúbulos como terapéuticos.
US11634508B2 (en) 2019-07-10 2023-04-25 Cybrexa 2, Inc. Peptide conjugates of cytotoxins as therapeutics
CN112125915A (zh) 2019-09-18 2020-12-25 四川百利药业有限责任公司 一种喜树碱衍生物及其偶联物
EP4036149A4 (en) 2019-09-26 2023-10-25 NOF Corporation HETEROBIFUNCTIONAL MONODISPERSPERED POLYETHYLENE GLYCOL WITH PEPTIDE LINKER
WO2021136223A1 (en) 2019-12-31 2021-07-08 Beijing Ql Biopharmaceutical Co., Ltd. Fusion proteins of glp-1 and gdf15 and conjugates thereof
CN115322794A (zh) 2020-01-11 2022-11-11 北京质肽生物医药科技有限公司 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物
CN114845739A (zh) 2020-01-22 2022-08-02 上海森辉医药有限公司 艾日布林衍生物的药物偶联物、其制备方法及其在医药上的应用
CN115551552A (zh) 2020-02-25 2022-12-30 祐方有限公司 喜树碱衍生物及其缀合物
CN111195353B (zh) * 2020-03-19 2023-06-23 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用
CN115103858A (zh) 2020-03-25 2022-09-23 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物的制备方法
KR20220157998A (ko) 2020-03-25 2022-11-29 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 항체 약물 접합체를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 용도
EP4132588A1 (en) 2020-04-10 2023-02-15 Seagen Inc. Charge variant linkers
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer
WO2022010797A2 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Bionecure Therapeutics, Inc. Novel maytansinoids as adc payloads and their use for the treatment of cancer
US20220378929A1 (en) 2021-02-25 2022-12-01 MediBoston Limted Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
CN117279664A (zh) 2021-04-10 2023-12-22 普方生物制药美国公司 Folr1结合剂、其偶联物及其使用方法
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023169896A1 (en) 2022-03-09 2023-09-14 Astrazeneca Ab BINDING MOLECULES AGAINST FRα
WO2023170216A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Astrazeneca Ab A SCORING METHOD FOR AN ANTI-FRα ANTIBODY-DRUG CONJUGATE THERAPY
US20240108744A1 (en) 2022-07-27 2024-04-04 Mediboston Limited Auristatin derivatives and conjugates thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5416064A (en) * 1989-10-25 1995-05-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US20020001587A1 (en) * 2000-03-16 2002-01-03 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6531131B1 (en) * 1999-08-10 2003-03-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for Neisseria meningitidis

Family Cites Families (150)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
GB1603640A (en) 1977-07-20 1981-11-25 Gist Brocades Nv Enzyme particles
US4137230A (en) * 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4265814A (en) * 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
US4307016A (en) * 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5562090A (en) * 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) * 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) * 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55164687A (en) * 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55102583A (en) * 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) * 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) * 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164686A (en) * 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4309428A (en) * 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) * 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) * 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) * 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) * 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) * 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) * 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) * 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) * 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
JPS58167592A (ja) 1982-03-26 1983-10-03 Takeda Chem Ind Ltd 新規メイタンシノイド化合物
LU86212A1 (fr) 1985-12-16 1987-07-24 Omnichem Sa Nouveaux conjugues de la vinblastine et de ses derives,procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
US7838216B1 (en) 1986-03-05 2010-11-23 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services Human gene related to but distinct from EGF receptor gene
US5395924A (en) 1986-03-20 1995-03-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Blocked lectins; methods and affinity support for making the same using affinity ligands; and method of killing selected cell populations having reduced non-selective cytotoxicity
US4968603A (en) 1986-12-31 1990-11-06 The Regents Of The University Of California Determination of status in neoplastic disease
US4981979A (en) 1987-09-10 1991-01-01 Neorx Corporation Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity
JPS6484959A (en) 1987-09-25 1989-03-30 Nec Corp System for connecting test line
US5824311A (en) 1987-11-30 1998-10-20 Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of tumors with monoclonal antibodies against oncogene antigens
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US5720937A (en) 1988-01-12 1998-02-24 Genentech, Inc. In vivo tumor detection assay
US5217713A (en) 1988-12-27 1993-06-08 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cytotoxic bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5705157A (en) 1989-07-27 1998-01-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of treating cancerous cells with anti-receptor antibodies
US5154924A (en) 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
FR2656555B1 (fr) * 1989-12-29 1994-10-28 Serimer Systeme mecanique de guidage automatique d'une ou plusieurs torches d'une unite de soudage a l'arc.
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
IL101943A0 (en) 1991-05-24 1992-12-30 Genentech Inc Structure,production and use of heregulin
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
EP0656367A1 (en) 1991-08-22 1995-06-07 Becton, Dickinson and Company Method and composition for cancer therapy and for prognosticating responses to cancer theraphy
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
US6022541A (en) 1991-10-18 2000-02-08 Beth Israel Deaconess Medical Center Immunological preparation for concurrent specific binding to spatially exposed regions of vascular permeability factor bound in-vivo to a tumor associated blood vessel
ATE408012T1 (de) 1991-12-02 2008-09-15 Medical Res Council Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
EP0625200B1 (en) 1992-02-06 2005-05-11 Chiron Corporation Biosynthetic binding protein for cancer marker
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
WO1993021319A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 Cetus Oncology Corporation HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES
US7754211B2 (en) * 1992-04-10 2010-07-13 Research Development Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER-2/neu) related surface antigens
JP2861631B2 (ja) 1992-05-06 1999-02-24 日本電気株式会社 Ｆｓｋ受信機
US6217869B1 (en) 1992-06-09 2001-04-17 Neorx Corporation Pretargeting methods and compounds
CA2120745A1 (en) 1992-06-30 1994-01-06 Philip G. Kasprzyk A combination of anti-erbb-2 monoclonal antibodies and method of using
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1994022478A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania PREVENTION OF TUMORS WITH MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST $i(NEU)
US6680424B2 (en) 1994-11-21 2004-01-20 University Of Leeds Modified proteinase inhibitors
US5679648A (en) 1994-11-30 1997-10-21 The University Hospital Methods for the treatment and prevention of fungal infections by administration of 3'-deoxypurine nucleosides
US5837234A (en) 1995-06-07 1998-11-17 Cytotherapeutics, Inc. Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane
EP0873363B1 (en) 1995-06-14 2010-10-06 The Regents of The University of California High affinity human antibodies to tumor antigens
US5614692A (en) 1995-06-30 1997-03-25 Tracor Aerospace, Inc. Shaped-charge device with progressive inward collapsing jet
RU2497500C2 (ru) 1995-07-27 2013-11-10 Джинентех, Инк Стабильная изотоническая лиофилизированная протеиновая композиция
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
US5919815A (en) 1996-05-22 1999-07-06 Neuromedica, Inc. Taxane compounds and compositions
AU727283B2 (en) 1996-05-23 2000-12-07 Enzo Nutraceuticals Limited Process for extraction of proanthocyanidins from botanical material
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
EP0957912A1 (en) 1996-08-30 1999-11-24 Eli Lilly And Company Pharmaceutical compounds
JPH1084959A (ja) * 1996-09-06 1998-04-07 Nobuyoshi Shimizu 細胞表面レセプターに対するモノクローナル抗体ならびにそのフラグメントの結合体ならびに複合体、それらの製法ならびに細胞への嵌入方法および使用方法
EA001526B1 (ru) * 1996-09-20 2001-04-23 Мейдзи Сейка Кайся Лтд. Кристаллическое вещество цефдиторен пивоксил и его получение
AU4982097A (en) 1996-10-18 1998-05-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-erbb2 antibodies
DE19782096T1 (de) 1996-11-06 2000-03-23 Sequenom Inc Immobiliserung von Nucleinsäuren in hoher Dichte
CA2274641A1 (en) 1996-12-12 1998-06-18 David Richard Corbin Improved packaging composition
US7122636B1 (en) 1997-02-21 2006-10-17 Genentech, Inc. Antibody fragment-polymer conjugates and uses of same
US8173127B2 (en) 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
DE69839942D1 (de) 1997-10-29 2008-10-09 Genentech Inc Verwendung des wnt-1 induzierten sekretierten polypeptids wisp-1
ZA9811162B (en) 1997-12-12 2000-06-07 Genentech Inc Treatment with anti-ERBB2 antibodies.
US6914130B2 (en) 1998-06-17 2005-07-05 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US6747055B1 (en) * 1998-07-17 2004-06-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Water-soluble drugs and methods for their production
WO2000020579A1 (en) 1998-10-02 2000-04-13 Mcmaster University Spliced form of erbb-2/neu oncogene
PT1157041E (pt) 1999-03-01 2005-10-31 Genentech Inc Anticorpos para terapia e diagnostico de cancro
DK2266537T3 (en) 1999-04-01 2014-12-15 Talon Therapeutics Inc Compositions for treating cancer
US6416758B1 (en) 1999-04-28 2002-07-09 Board Of Regents, The University Of Texax System Antibody conjugate kits for selectively inhibiting VEGF
WO2000067796A1 (en) 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
AU4809299A (en) 1999-05-12 2000-12-05 Array Ab Direct printing device with cleaning unit
SI1187632T1 (sl) 1999-05-14 2009-04-30 Genentech Inc Zdravljenje z anti-ErbB2 protitelesi
CA2727172A1 (en) 1999-05-26 2001-01-04 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
US7041292B1 (en) 1999-06-25 2006-05-09 Genentech, Inc. Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies
EP1191944A2 (en) 1999-06-25 2002-04-03 Genentech, Inc. METHODS OF TREATMENT USING ANTI-ErbB ANTIBODY-MAYTANSINOID CONJUGATES
US20040013667A1 (en) 1999-06-25 2004-01-22 Genentech, Inc. Treatment with anti-ErbB2 antibodies
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
KR100754049B1 (ko) 1999-06-25 2007-08-31 제넨테크, 인크. 전립선암을 치료하기 위한 약제 제조에 사용되는 항-ErbB2 항체 및 조성물
US20030086924A1 (en) 1999-06-25 2003-05-08 Genentech, Inc. Treatment with anti-ErbB2 antibodies
US6362342B1 (en) 1999-06-29 2002-03-26 Lion Bioscience Ag Triazole compounds and methods of making same
KR20080075044A (ko) 1999-07-12 2008-08-13 제넨테크, 인크. Ｃｄ20에 결합하는 길항제를 사용한 외래 항원에 대한 면역반응 차단 방법
US6635677B2 (en) 1999-08-13 2003-10-21 Case Western Reserve University Methoxyamine combinations in the treatment of cancer
EP2111870A1 (en) 1999-08-27 2009-10-28 Genentech, Inc. Dosages for treatment of anti-erbB2 antibodies
US7030231B1 (en) 1999-09-30 2006-04-18 Catalyst Biosciences, Inc. Membrane type serine protease 1 (MT-SP1) and uses thereof
US7303749B1 (en) 1999-10-01 2007-12-04 Immunogen Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
BE1012928A6 (nl) 1999-10-07 2001-06-05 Hoeberigs Jean Marie Mathieu Cilinderoven voor verwarming van frites met hete lucht.
IL149116A0 (en) 1999-10-29 2002-11-10 Genentech Inc Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
AU765588C (en) 1999-11-24 2004-12-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
BR0108268A (pt) * 2000-02-11 2003-03-05 Lilly Co Eli N-acilação seletiva de análogos de glicopeptìdeo a82846
PL358187A1 (en) 2000-02-24 2004-08-09 Genentech, Inc. Caspase activated prodrugs therapy
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
AU2001247616B2 (en) 2000-04-11 2007-06-14 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
WO2002013843A2 (en) 2000-08-17 2002-02-21 University Of British Columbia Chemotherapeutic agents conjugated to p97 and their methods of use in treating neurological tumours
US6596503B1 (en) 2000-08-18 2003-07-22 East Carolina University Monoclonal antibody DS6, tumor-associated antigen CA6, and methods of use thereof
US6333410B1 (en) * 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
JP2004520806A (ja) 2000-08-24 2004-07-15 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
ATE457318T1 (de) 2000-12-28 2010-02-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Gegen das menschliche bst2 antigen gerichteter monoklonaler antikörper
US6441163B1 (en) * 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP2000148A1 (en) 2001-06-20 2008-12-10 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of prostate cancer
US20040235068A1 (en) 2001-09-05 2004-11-25 Levinson Arthur D. Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation and compositions useful for the treatment of such disorders
EP1432446B1 (en) * 2001-09-05 2011-04-27 Genentech, Inc. Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation
US20080085283A1 (en) 2001-09-05 2008-04-10 Levinson Arthur D Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation and compositions useful for the treatment of such disorders
US20030109682A1 (en) * 2001-09-07 2003-06-12 Daniel Santi Maytansines and maytansine conjugates
NZ531674A (en) 2001-09-18 2009-03-31 Genentech Inc Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20050238650A1 (en) 2002-04-17 2005-10-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US6716821B2 (en) * 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
NZ533657A (en) 2002-01-03 2008-01-31 Smithkline Beecham Corp Methods for the preparation of immunoconjugates, in particular maytansinoids conjugated to a monoclonal antibody
US7094579B2 (en) 2002-02-13 2006-08-22 Xoma Technology Ltd. Eukaryotic signal sequences for prokaryotic expression
JP2006502110A (ja) 2002-07-03 2006-01-19 イミュノジェン・インコーポレーテッド 非放出Ｍｕｃ１およびＭｕｃ１６に対する抗体、およびその使用
ATE499116T1 (de) * 2002-08-16 2011-03-15 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
JP2006510735A (ja) 2002-08-19 2006-03-30 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
CA2930485C (en) * 2003-05-14 2018-04-10 Immunogen, Inc. Maytansinoid-antibody conjugate compositions
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) * 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005009369A2 (en) 2003-07-21 2005-02-03 Immunogen, Inc. A ca6 antigen-specific cytotoxic conjugate and methods of using the same
US7754441B2 (en) 2003-11-17 2010-07-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
JP3991983B2 (ja) 2003-12-19 2007-10-17 日産自動車株式会社 車両の駆動制御装置
JP4658967B2 (ja) 2003-12-24 2011-03-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 造血系起源の腫瘍の治療のための組成物と方法
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CN102973947A (zh) 2004-06-01 2013-03-20 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
US7521541B2 (en) 2004-09-23 2009-04-21 Genetech Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
JP5196654B2 (ja) 2005-06-20 2013-05-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
US7195520B1 (en) 2006-07-18 2007-03-27 Chung-Chuan Huang Connector for antenna
KR20210131473A (ko) 2008-03-18 2021-11-02 제넨테크, 인크. 항-ｈｅｒ２ 항체-약물 접합체와 화학요법제의 병용물, 및 사용 방법
MY186725A (en) * 2008-04-30 2021-08-13 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
US20110165155A1 (en) 2009-12-04 2011-07-07 Genentech, Inc. Methods of treating metastatic breast cancer with trastuzumab-mcc-dm1
CN102971012B (zh) 2010-03-12 2016-05-04 伊缪诺金公司 Cd37结合分子及其免疫缀合物
AU2011338383A1 (en) 2010-12-09 2012-06-14 Genentech, Inc. Treatment of HER2-positive cancer with paclitaxel and trastuzumab-MCC-DM1

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5416064A (en) * 1989-10-25 1995-05-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6531131B1 (en) * 1999-08-10 2003-03-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for Neisseria meningitidis
US20020001587A1 (en) * 2000-03-16 2002-01-03 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10570151B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses

Also Published As

Publication number Publication date
CY2014002I1 (el) 2020-05-29
PL1689846T3 (pl) 2013-07-31
NZ545195A (en) 2010-07-30
EP1689846A2 (en) 2006-08-16
NO2016001I1 (no) 2016-01-26
HRP20130412T1 (en) 2013-06-30
NO2016001I2 (no) 2016-01-26
JP5926759B2 (ja) 2016-05-25
EA200600752A1 (ru) 2007-08-31
JP2020189854A (ja) 2020-11-26
US10844135B2 (en) 2020-11-24
KR20140033003A (ko) 2014-03-17
DK1689846T3 (da) 2013-05-06
US8198417B2 (en) 2012-06-12
US20050169933A1 (en) 2005-08-04
US20140154804A1 (en) 2014-06-05
CY1113984T1 (el) 2016-07-27
US20170226220A1 (en) 2017-08-10
BRPI0415448A (pt) 2006-12-05
EP1689846A4 (en) 2010-08-04
IL214788A0 (en) 2011-11-30
US8563509B2 (en) 2013-10-22
NO337458B1 (no) 2016-04-18
US7989598B2 (en) 2011-08-02
IL173625A (en) 2016-07-31
PT1689846E (pt) 2013-05-08
JP2019011363A (ja) 2019-01-24
JP2017200934A (ja) 2017-11-09
WO2005037992A2 (en) 2005-04-28
CY2014002I2 (el) 2020-05-29
EP2612682A2 (en) 2013-07-10
KR20120034800A (ko) 2012-04-12
NO20061772L (no) 2006-04-21
HK1244452A1 (zh) 2018-08-10
IL235253B (en) 2018-04-30
AU2010212291B2 (en) 2012-05-24
IL246605A (en) 2017-08-31
US20120226025A1 (en) 2012-09-06
JP2016135786A (ja) 2016-07-28
KR101476082B1 (ko) 2014-12-23
US20080145374A1 (en) 2008-06-19
US20080171865A1 (en) 2008-07-17
CN103223174A (zh) 2013-07-31
US20080114153A1 (en) 2008-05-15
BE2013C075I2 (ru) 2023-12-18
AU2004282491B2 (en) 2010-12-23
KR20060130552A (ko) 2006-12-19
AU2010212291C1 (en) 2012-11-29
JP2012006928A (ja) 2012-01-12
KR20130102649A (ko) 2013-09-17
NZ583844A (en) 2011-06-30
EP2612682A3 (en) 2013-09-25
JP5718745B2 (ja) 2015-05-13
BRPI0415448A8 (pt) 2019-08-13
ECSP066461A (es) 2007-05-30
WO2005037992A3 (en) 2009-04-23
CN108578710A (zh) 2018-09-28
CA3139478A1 (en) 2005-04-28
JP2022068295A (ja) 2022-05-09
CN108578710B (zh) 2021-11-19
CA2542128A1 (en) 2005-04-28
KR101573124B1 (ko) 2015-12-01
EP1689846B1 (en) 2013-03-27
AU2010212291A1 (en) 2010-09-02
EP2596803A2 (en) 2013-05-29
IL173625A0 (en) 2006-07-05
JP2014177463A (ja) 2014-09-25
EP2596803A3 (en) 2013-09-11
EP2596804A3 (en) 2013-09-18
EP2596804A2 (en) 2013-05-29
AU2004282491A1 (en) 2005-04-28
CN107198778A (zh) 2017-09-26
ES2404304T3 (es) 2013-05-27
US20110281856A1 (en) 2011-11-17
US20210261683A1 (en) 2021-08-26
HUS1300075I1 (hu) 2014-02-28
LU92336I9 (ru) 2019-01-16
CA2542128C (en) 2022-01-11
KR101343676B1 (ko) 2013-12-20
US8163888B2 (en) 2012-04-24
LU92336I2 (fr) 2014-02-17
JP2007520450A (ja) 2007-07-26
US20080171856A1 (en) 2008-07-17
JP2019142864A (ja) 2019-08-29
SI1689846T1 (en) 2013-06-28
US8088387B2 (en) 2012-01-03
AU2004282491C1 (en) 2011-06-30
US8685920B2 (en) 2014-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA010508B1 (ru) Способ прицельного воздействия на определенные популяции клеток с помощью конъюгатов из майтансиноида и агента клеточного связывания, соединенных через нерасщепляемый линкер, конъюгаты и способы получения таких конъюгатов
JP2008538365A (ja) 腫瘍内の不均一または混合細胞集団を排除する方法
EA013327B1 (ru) Способ приготовления очищенных конъюгатов лекарственных средств
ZA200601182B (en) Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
MXPA06002949A (en) Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
ND4A Extension of term of a eurasian patent