JP6486368B2 - 改変されたグリコシル基を含む糖脂質を用いたヒトｉＮＫＴ細胞の活性化 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は、一般的に免疫療法薬の分野に関する。特に、本開示は、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞をモジュレートしてサイトカインおよび／またはケモカインの生成を刺激し、したがって下流の免疫細胞をトランス活性化し、それにより先天性免疫と適応免疫の橋渡しをする糖脂質およびそのバリアントに関する。

発明の背景
ナチュラルキラー様Ｔ（ＮＫＴ）細胞は、がんおよび自己免疫障害などの疾患の処置において数多くの治療的潜在性を有する区別可能なＴリンパ球集団である。インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞は、先天性免疫と適応免疫の両方の特長を有する調節性Ｔ細胞のサブセットを構成している。ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子によって提示されたペプチドによって活性化される通常のＴ細胞とは対照的に、ｉＮＫＴ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現される非古典的ＭＨＣ Ｉ分子であるＣＤ１ｄと関連して存在する脂質誘導体を認識する。
α−ＧａｌＣｅｒ（α−ガラクトシルセラミド）は、ａ−結合型ガラクトース、スフィンゴシンおよびアシル尾部で構成された糖脂質であり、アゲラスフィン（海綿Ａｇｅｌａｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎｕｓから単離）の構造の最適化によって得られた。これは、インビトロおよびインビボの両方で抗腫瘍活性を示すことがわかっており、マウスとヒトの両方のインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）について、これまで知られている最も強力なリガンドであることが示されている。

インバリアントＮＫＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）は、インバリアントＴＣＲ−α鎖（マウスではＶα１４／Ｊα１８、ヒトではＶα２４／Ｊα１８）を有しており、ＣＤ１６１抗原（マウスではＮＫ細胞マーカーＮＫ１．１、ヒトではＮＫＲ−Ｐ１Ａ）を共発現する。（１）Ｌａｎｔｚ，Ｏ．；Ｂｅｎｄｅｌａｃ，Ａ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，１０９７；（２）Ｄｅｌｌａｂｏｎａ，Ｐ．；Ｐａｄｏｖａｎ，Ｅ．；Ｃａｓｏｒａｔｉ，Ｇ．；Ｂｒｏｃｋｈａｕｓ，Ｍ．；Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ，Ａ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，１１７１；（３）Ｍａｋｉｎｏ，Ｙ．；Ｋａｎｎｏ，Ｒ．；Ｉｔｏ，Ｔ．；Ｈｉｇａｓｈｉｎｏ，Ｋ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，７，１１５７；ａｎｄ（４）Ｄａｖｏｄｅａｕ，Ｆ．；Ｐｅｙｒａｔ，Ｍ．Ａ．；Ｎｅｃｋｅｒ，Ａ．；Ｄｏｍｉｎｉｃｉ，Ｒ．；Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，Ｆ．；Ｌｅｇｅｔ，Ｃ．；Ｇａｓｃｈｅｔ，Ｊ．；Ｃｏｓｔａ，Ｐ．；Ｊａｃｑｕｅｓ，Ｙ．；Ｇｏｄａｒｄ，Ａ．；Ｖｉｅ，Ｈ．；Ｐｏｇｇｉ，Ａ．；Ｒｏｍａｇｎｅ，Ｆ．；Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ，Ｍ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７，１５８，５６０３．該細胞は、抗原提示細胞上のＣＤ１ｄ分子によって提示されるαＧａｌＣｅｒに応答して大量のＴｈ１（例えば，ＩＦＮ−γ，ＩＬ−２）およびＴｈ２（例えば，ＩＬ−４，ＩＬ−６）サイトカインを分泌する^５〜９。（５）Ｋａｗａｎｏ，Ｔ．；Ｃｕｉ，Ｊ．；Ｋｏｅｚｕｋａ，Ｙ．；Ｔｏｕｒａ，Ｉ．；Ｋａｎｅｋｏ，Ｙ．；Ｍｏｔｏｋｉ，Ｋ．；Ｕｅｎｏ，Ｈ．；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｒ．；Ｓａｔｏ，Ｈ．；Ｋｏｎｄｏ，Ｅ．；Ｋｏｓｅｋｉ，Ｈ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９７，２７８，１６２６；（６）Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．；Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１７９，１２８５；（７）Ａｒａｓｅ，Ｈ．；Ａｒａｓｅ，Ｎ．；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｋ．；Ｇｏｏｄ，Ｒ．Ａ．；Ｏｎｏｅ，Ｋ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３，２３，３０７；（８）Ｋａｗａｋａｍｉ，Ｋ．；Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｎ．；Ｋｉｎｊｏ，Ｙ．；Ｍｉｙａｇｉ，Ｋ．；Ｎａｋａｓｏｎｅ，Ｃ．；Ｕｅｚｕ，Ｋ．；Ｋｉｎｊｏ，Ｔ．；Ｎａｋａｙａｍａ，Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．；Ｓａｉｔｏ，Ａ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３，３３，３３２２；および（９）Ｎｉｅｕｗｅｎｈｕｉｓ，Ｅ．Ｅ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．；Ｅｘｌｅｙ，Ｍ．；Ｓｃｈｌｅｉｐｍａｎ，Ｒ．Ａ．；Ｇｌｉｃｋｍａｎ，Ｊ．；Ｂａｉｌｅｙ，Ｄ．Ｔ．；Ｃｏｒａｚｚａ，Ｎ．；Ｃｏｌｇａｎ，Ｓ．Ｐ．；Ｏｎｄｅｒｄｏｎｋ，Ａ．Ｂ．；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ，Ｒ．Ｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００２，８，５８８．分泌されたこのようなサイトカインにより次いで、下流の免疫細胞、例えば樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞がトランス活性化され得、それにより先天性免疫と適応免疫が橋渡しされ得る^{１０〜１２}。（１０）Ｅｂｅｒｌ，Ｇ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈ．Ｒ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００，３０，９８５；（１１）Ｅｂｅｒｌ，Ｇ．；Ｂｒａｗａｎｄ，Ｐ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈ．Ｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００，１６５，４３０５；および（１２）Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｈ．；Ｏｈｔａ，Ａ．；Ｓｅｋｉｍｏｔｏ，Ｍ．；Ｓａｔｏ，Ｍ．；Ｉｗａｋａｂｅ，Ｋ．；Ｎａｋｕｉ，Ｍ．；Ｙａｈａｔａ，Ｔ．；Ｍｅｎｇ，Ｈ．；Ｋｏｄａ，Ｔ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｓ．；Ｋａｗａｎｏ，Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｔ．Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００，１９９，３７．

しかしながら、Ｔｈ１サイトカインとＴｈ２サイトカインの拮抗するバランスにより、さまざまな障害の処置に対するαＧａｌＣｅｒの臨床適用が制限される場合があり得る^{１３〜１６}。（１３）Ｔａｈｉｒ，Ｓ．Ｍ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｏ．；Ｓｈａｕｌｏｖ，Ａ．；Ｋｏｅｚｕｋａ，Ｙ．；Ｂｕｂｌｅｙ，Ｇ．Ｊ．；Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓ．Ｂ．；Ｂａｌｋ，Ｓ．Ｐ．；Ｅｘｌｅｙ，Ｍ．Ａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６７，４０４６；（１４）Ｄｈｏｄａｐｋａｒ，Ｍ．Ｖ．；Ｇｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｄ．；Ｃｈａｎｇ，Ｄ．Ｈ．；Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｋ．；Ｆｕｊｉｉ，Ｓ．；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ，Ｋ．Ｍ．；Ｋｒａｓｏｖｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００３，１９７，１６６７；（１５）Ｇｉａｃｃｏｎｅ，Ｇ．；Ｐｕｎｔ，Ｃ．Ｊ．；Ａｎｄｏ，Ｙ．；Ｒｕｉｊｔｅｒ，Ｒ．；Ｎｉｓｈｉ，Ｎ．；Ｐｅｔｅｒｓ，Ｍ．；ｖｏｎ Ｂｌｏｍｂｅｒｇ，Ｂ．Ｍ．；Ｓｃｈｅｐｅｒ，Ｒ．Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌｉｅｔ，Ｈ．Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｅｒｔｗｅｇｈ，Ａ．Ｊ．；Ｒｏｅｌｖｉｎｋ，Ｍ．；Ｂｅｉｊｎｅｎ，Ｊ．；Ｚｗｉｅｒｚｉｎａ，Ｈ．；Ｐｉｎｅｄｏ，Ｈ．Ｍ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００２，８，３７０２；および（１６）Ｂｒｉｃａｒｄ，Ｇ．；Ｃｅｓｓｏｎ，Ｖ．；Ｄｅｖｅｖｒｅ，Ｅ．；Ｂｏｕｚｏｕｒｅｎｅ，Ｈ．；Ｂａｒｂｅｙ，Ｃ．；Ｒｕｆｅｒ，Ｎ．；Ｉｍ，Ｊ．Ｓ．；Ａｌｖｅｓ，Ｐ．Ｍ．；Ｍａｒｔｉｎｅｔ，Ｏ．；Ｈａｌｋｉｃ，Ｎ．；Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ，Ｊ．Ｃ．；Ｒｏｍｅｒｏ，Ｐ．；Ｐｏｒｃｅｌｌｉ，Ｓ．Ａ．；Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｈ．Ｒ．；Ｓｐｅｉｓｅｒ，Ｄ．Ｅ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９，１８２，５１４０．

Ｌａｎｔｚ，Ｏ．；Ｂｅｎｄｅｌａｃ，Ａ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，１０９７ Ｄｅｌｌａｂｏｎａ，Ｐ．；Ｐａｄｏｖａｎ，Ｅ．；Ｃａｓｏｒａｔｉ，Ｇ．；Ｂｒｏｃｋｈａｕｓ，Ｍ．；Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ，Ａ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，１１７１ Ｍａｋｉｎｏ，Ｙ．；Ｋａｎｎｏ，Ｒ．；Ｉｔｏ，Ｔ．；Ｈｉｇａｓｈｉｎｏ，Ｋ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，７，１１５７ Ｄａｖｏｄｅａｕ，Ｆ．；Ｐｅｙｒａｔ，Ｍ．Ａ．；Ｎｅｃｋｅｒ，Ａ．；Ｄｏｍｉｎｉｃｉ，Ｒ．；Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，Ｆ．；Ｌｅｇｅｔ，Ｃ．；Ｇａｓｃｈｅｔ，Ｊ．；Ｃｏｓｔａ，Ｐ．；Ｊａｃｑｕｅｓ，Ｙ．；Ｇｏｄａｒｄ，Ａ．；Ｖｉｅ，Ｈ．；Ｐｏｇｇｉ，Ａ．；Ｒｏｍａｇｎｅ，Ｆ．；Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ，Ｍ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７，１５８，５６０３ Ｋａｗａｎｏ，Ｔ．；Ｃｕｉ，Ｊ．；Ｋｏｅｚｕｋａ，Ｙ．；Ｔｏｕｒａ，Ｉ．；Ｋａｎｅｋｏ，Ｙ．；Ｍｏｔｏｋｉ，Ｋ．；Ｕｅｎｏ，Ｈ．；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｒ．；Ｓａｔｏ，Ｈ．；Ｋｏｎｄｏ，Ｅ．；Ｋｏｓｅｋｉ，Ｈ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９７，２７８，１６２６ Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．；Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１７９，１２８５ Ａｒａｓｅ，Ｈ．；Ａｒａｓｅ，Ｎ．；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｋ．；Ｇｏｏｄ，Ｒ．Ａ．；Ｏｎｏｅ，Ｋ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３，２３，３０７ Ｋａｗａｋａｍｉ，Ｋ．；Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｎ．；Ｋｉｎｊｏ，Ｙ．；Ｍｉｙａｇｉ，Ｋ．；Ｎａｋａｓｏｎｅ，Ｃ．；Ｕｅｚｕ，Ｋ．；Ｋｉｎｊｏ，Ｔ．；Ｎａｋａｙａｍａ，Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．；Ｓａｉｔｏ，Ａ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３，３３，３３２２ Ｎｉｅｕｗｅｎｈｕｉｓ，Ｅ．Ｅ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．；Ｅｘｌｅｙ，Ｍ．；Ｓｃｈｌｅｉｐｍａｎ，Ｒ．Ａ．；Ｇｌｉｃｋｍａｎ，Ｊ．；Ｂａｉｌｅｙ，Ｄ．Ｔ．；Ｃｏｒａｚｚａ，Ｎ．；Ｃｏｌｇａｎ，Ｓ．Ｐ．；Ｏｎｄｅｒｄｏｎｋ，Ａ．Ｂ．；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ，Ｒ．Ｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００２，８，５８８ Ｅｂｅｒｌ，Ｇ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈ．Ｒ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００，３０，９８５ Ｅｂｅｒｌ，Ｇ．；Ｂｒａｗａｎｄ，Ｐ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈ．Ｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００，１６５，４３０５ Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｈ．；Ｏｈｔａ，Ａ．；Ｓｅｋｉｍｏｔｏ，Ｍ．；Ｓａｔｏ，Ｍ．；Ｉｗａｋａｂｅ，Ｋ．；Ｎａｋｕｉ，Ｍ．；Ｙａｈａｔａ，Ｔ．；Ｍｅｎｇ，Ｈ．；Ｋｏｄａ，Ｔ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｓ．；Ｋａｗａｎｏ，Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｔ．Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００，１９９，３７ Ｔａｈｉｒ，Ｓ．Ｍ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｏ．；Ｓｈａｕｌｏｖ，Ａ．；Ｋｏｅｚｕｋａ，Ｙ．；Ｂｕｂｌｅｙ，Ｇ．Ｊ．；Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓ．Ｂ．；Ｂａｌｋ，Ｓ．Ｐ．；Ｅｘｌｅｙ，Ｍ．Ａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６７，４０４６ Ｄｈｏｄａｐｋａｒ，Ｍ．Ｖ．；Ｇｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｄ．；Ｃｈａｎｇ，Ｄ．Ｈ．；Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｋ．；Ｆｕｊｉｉ，Ｓ．；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ，Ｋ．Ｍ．；Ｋｒａｓｏｖｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００３，１９７，１６６７ Ｇｉａｃｃｏｎｅ，Ｇ．；Ｐｕｎｔ，Ｃ．Ｊ．；Ａｎｄｏ，Ｙ．；Ｒｕｉｊｔｅｒ，Ｒ．；Ｎｉｓｈｉ，Ｎ．；Ｐｅｔｅｒｓ，Ｍ．；ｖｏｎ Ｂｌｏｍｂｅｒｇ，Ｂ．Ｍ．；Ｓｃｈｅｐｅｒ，Ｒ．Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌｉｅｔ，Ｈ．Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｅｒｔｗｅｇｈ，Ａ．Ｊ．；Ｒｏｅｌｖｉｎｋ，Ｍ．；Ｂｅｉｊｎｅｎ，Ｊ．；Ｚｗｉｅｒｚｉｎａ，Ｈ．；Ｐｉｎｅｄｏ，Ｈ．Ｍ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００２，８，３７０２ Ｂｒｉｃａｒｄ，Ｇ．；Ｃｅｓｓｏｎ，Ｖ．；Ｄｅｖｅｖｒｅ，Ｅ．；Ｂｏｕｚｏｕｒｅｎｅ，Ｈ．；Ｂａｒｂｅｙ，Ｃ．；Ｒｕｆｅｒ，Ｎ．；Ｉｍ，Ｊ．Ｓ．；Ａｌｖｅｓ，Ｐ．Ｍ．；Ｍａｒｔｉｎｅｔ，Ｏ．；Ｈａｌｋｉｃ，Ｎ．；Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ，Ｊ．Ｃ．；Ｒｏｍｅｒｏ，Ｐ．；Ｐｏｒｃｅｌｌｉ，Ｓ．Ａ．；Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｈ．Ｒ．；Ｓｐｅｉｓｅｒ，Ｄ．Ｅ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９，１８２，５１４０

発明の概要
したがって、ｉＮＫＴ細胞の選択的Ｔｈ１またはＴｈ２サイトカイン応答を刺激するための多くの類似体が設計された。糖脂質は、マウスおよび人間の両方において著しいＴｈ１偏向を有し、インビボ卓越した腫瘍防除をもたらす。例えば、切断型スフィンゴシン尾部を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）はＴｈ２方向に免疫応答を誘導することができ、自己免疫性脳脊髄炎が予防された^１７。Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｋ．；Ｍｉｙａｋｅ，Ｓ．；Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｔ．Ｎａｔｕｒｅ ２００１，４１３，５３１．他方で、アシル鎖上にフェニル環を有するＧＳＬによりマウスおよびヒトにおいてＴｈ１偏向サイトカインが誘導され、マウスでは乳房、肺および黒色腫腫瘍に対してより強力な抗がん活性が示された^{１８，１９}。（１８）（Ｃｈａｎｇ，Ｙ．Ｊ．；Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｒ．；Ｔｓａｉ，Ｙ．Ｃ．；Ｈｕｎｇ，Ｊ．Ｔ．；Ｗｕ，Ｄ．；Ｆｕｊｉｏ，Ｍ．；Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．；Ｙｕ，Ａ．Ｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００７，１０４，１０２９９および（１９）Ｗｕ，Ｔ．Ｎ．；Ｌｉｎ，Ｋ．Ｈ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．Ｊ．；Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｒ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｙ．；Ｙｕ，Ａ．Ｌ．；Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１１，１０８，１７２７５．

ＣＤ１ｄと糖脂質間の二成分系相互作用、ならびにｉＮＫＴ ＴＣＲとＣＤ１ｄ−糖脂質複合体間の三成分系相互作用を調べることにより、その構造−活性相関（ＳＡＲ）の基礎となる機構が解明された。αＧａｌＣｅｒと比較すると、同じグリコシル基を有するフェニルＧＳＬでは、より強い二成分系相互作用および三成分系相互作用が示され、よりＴｈ１偏向性の応答がもたらされ、生物学的応答はマウスおよびヒトの両方において三元複合体の結合アビディティとの有意な相関を有した。１９−２１。（１９）Ｗｕ，Ｔ．Ｎ．；Ｌｉｎ，Ｋ．Ｈ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．Ｊ．；Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｒ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｙ．；Ｙｕ，Ａ．Ｌ．；Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１１，１０８，１７２７５；（２０）Ｌｉａｎｇ，Ｐ．Ｈ．；Ｉｍａｍｕｒａ，Ｍ．；Ｌｉ，Ｘ．；Ｗｕ，Ｄ．；Ｆｕｊｉｏ，Ｍ．；Ｇｕｙ，Ｒ．Ｔ．；Ｗｕ，Ｂ．Ｃ．；Ｔｓｕｊｉ，Ｍ．；Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００８，１３０，１２３４８；および（２１）Ｌｉ，Ｘ．；Ｆｕｊｉｏ，Ｍ．；Ｉｍａｍｕｒａ，Ｍ．；Ｗｕ，Ｄ．；Ｖａｓａｎ，Ｓ．；Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．；Ｈｏ，Ｄ．Ｄ．；Ｔｓｕｊｉ，Ｍ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１０，１０７，１３０１０．

α−ガラクトシル基（αＧａｌ）およびアシル鎖上にフェニル環を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞の刺激に対してα−ガラクトシルセラミド（αＧａｌＣｅｒ）よりも強力であることがわかった。マウスおよびヒトにおけるその活性は、ｉＮＫＴ ＴＣＲとＣＤ１ｄ−ＧＳＬ複合体間の三成分系相互作用の結合アビディティと充分に相関していた。

インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞は、大量のエフェクターサイトカインを産生する能力による著しい免疫調節能を有することが知られている。ヒトインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞を刺激し、ヒトにおけるサイトカインおよびケモカインの生成をモジュレートする改善されたスフィンゴ糖脂質の必要性が存在している。

したがって、本開示は、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）がα−ガラクトース（α−Ｇａｌ）を有するものよりも、ヒトにおいてサイトカインおよびケモカインならびに免疫細胞の増殖および／または活性化の強い（がマウスにおいては弱い）誘導を示すという予期しない知見に基づいたものである。グリコシル基の４’−ＯＨ方向の変化により、マウスおよびヒトにおいて異なる生理活性がもたらされた。また、グリコシル基の６位における改変により、生物学的応答に対してさまざまな効果が示された。α−Ｇｌｃならびに４位および／または６位にＦを有するα−Ｇｌｃの誘導体を有するＧＳＬを本明細書において開示する。α−Ｇｌｃおよびα−Ｇｌｃの誘導体を有するＧＳＬによるケモカインのｉＮＫＴ非依存的誘導のための方法を開示する。α−Ｇｌｃおよびそのα−Ｇｌｃの誘導体を有するＧＳＬを用いたヒトにおける免疫刺激のための方法を提供する。

本開示により、抗原の免疫原性の増大を、それを必要とする被験体において行なうための方法であって、一般式１のＧＳＬを含むアジュバント組成物との共投与（ｃｏｎａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）または共配合として前記抗原の併用投与を含む方法を提供する。

本発明によれば、ＧＳＬを免疫アジュバントとして使用することにより、抗原によって誘導される防御免疫の向上および／またはその持続期間の延長がもたらされ、少なくとも一部において抗原特異的Ｔｈ１型応答の向上および／または延長の一因となる。

本発明のＧＳＬ−ａ−Ｇｌｃ含有アジュバントは任意の抗原とともに、特に、感染因子または腫瘍に由来する抗原とともに共同的に投与され得る。好ましくは、アジュバントと抗原は同時に、最も好ましくは単回投薬形態で投与される。

さらなる一実施形態では、本発明により、被験体の疾患を処置するための予防方法および／または治療方法であって、前記被験体に免疫防御性抗原を、ＧＳＬを含むアジュバント組成物と一緒に投与することを含む方法を提供する。本明細書において明示しているように、この方法は、種々の感染性疾患または新生物性疾患の予防および／または処置に有用であり得る。

また、本発明の方法との関連において、免疫原性有効量の抗原および式１に含まれるＧＳＬから選択される免疫原性有効量のアジュバントならびに任意選択で薬学的に許容され得る担体または賦形剤を含む医薬組成物およびワクチン組成物を提供する。

したがって、一態様において、本開示は、式（Ｉ）：

の免疫アジュバント化合物の構造的および機能的典型またはその薬学的に許容され得る塩に関する；式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、ｎおよびｍは本明細書に記載のとおりである。

一部の実施形態では、Ｒ^４が式（ＩＩ）：

（式中、ｉおよびＲ^６は本明細書に記載のとおりである）
のものである。

一部の実施形態では、Ｒ^４が式（ＩＩＩ）：

（式中、ｊ、ｋ、Ｒ^７およびＲ^８は本明細書に記載のとおりである）
のものである。

また、本開示の諸態様は、（ｉ）被験体、例えばヒトに投与したとき免疫応答を刺激するのに充分な量の本明細書に開示した化合物および（ｉｉ）薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物に関する。

一部の実施形態では、医薬組成物は抗原とワクチンアジュバントを含む（ｃｏｍｐｒｓｅ）ものである。一部の特定の実施形態では、抗原が腫瘍抗原である。

一部の実施形態では、医薬組成物は抗がん治療薬を含むものである。

医薬組成物の一部の実施形態では、該化合物のＲ^４が置換または非置換のアリールおよび置換または非置換のヘテロアリールから選択され、該化合物が、ヒトにおいてＴｈ１サイトカインを、随伴するＴｈ２サイトカイン増加が最小限で増加させ得るものである。

本発明の諸態様は、免疫応答の刺激を、それを必要とするヒト被験体において行なうための方法であって：該被験体に治療有効量の本明細書に開示した組成物を投与することを含む方法に関する。

一部の態様では、該化合物が、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞を上昇させ得る量で投与される。

一部の態様では、該化合物の投与により、ヒトにおいてサイトカインおよび／またはケモカインの生成が増大する。一部の実施形態では、サイトカインの生成が下流の免疫細胞をトランス活性化するのに充分なものである。一部の実施形態では、下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞のうちの１種類またはそれより多くを含む。

一部の態様では、サイトカインがＴｈ１サイトカインを含む。一部の実施形態では、Ｔｈ１サイトカインが：インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１０から選択される。

一部の態様では、ケモカインが：ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される。

一部の態様では、該組成物の投与が抗がん効果を有する。一部の実施形態では、がんが、肺がん、乳がん、肝細胞癌、白血病、充実性腫瘍および癌からなる群より選択される。

一部の実施形態では、該化合物のＲ^４が置換または非置換のアリールおよび置換または非置換のヘテロアリールから選択され、ヒトにおけるＴｈ１サイトカインの増加がＴｈ２サイトカインのいずれかの増加を超えている。

本発明の諸態様は、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の生成を上昇させることを、それを必要とするヒト被験体において行なうための方法であって：該被験体に治療有効量の組成物を投与することを含み、該組成物が本明細書に開示した化合物を含むものである方法に関する。一部の実施形態では、ｉＮＫＴレベルの上昇が、グリコシル頭部基としてアルファ−ガラクトース（αＧａｌ）を含む等量の糖脂質類似体の投与により得られる上昇と比べた場合、大きくなる。

本発明の諸態様は、サイトカインおよび／またはケモカインの生成の刺激を、それを必要とするヒト被験体において行なうための方法であって：該被験体に治療有効量の組成物を投与することを含み、該組成物が、サイトカイン／ケモカインの生成を増大させるのに充分な量の本明細書に開示した化合物を含むものである方法に関する。

一部の態様では、サイトカインの生成が下流の免疫細胞をトランス活性化するのに充分なものである。一部の実施形態では、下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞のうちの１種類またはそれより多くを含む。

一部の態様では、サイトカインがＴｈ１サイトカインを含む。一部の実施形態では、サイトカインが：インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１０から選択される。

一部の態様では、ケモカインが：ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）：

（式中：
Ｒ ^１ は−ＯＨまたはハロゲンであり；
Ｒ ^２ は−ＯＨ、水素またはハロゲンであり；
Ｒ ^３ は水素またはハロゲンであり；
各場合のＲ ^４ およびＲ ^５ は独立して、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基または任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択され；
ｎは１〜１５（両端を含む）の整数であり；
ｍは１〜２０（両端を含む）の整数である）
を有する免疫アジュバント化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
（項目２）
Ｒ ^２ が−ＯＨである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ ^２ がハロゲンである、項目１に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ ^１ が−ＯＨである、項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ ^１ がハロゲンである、項目１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ ^４ が式（ＩＩ）：

（式中：
ｉは０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ ^６ は独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ _２ 、−Ｎ _３ 、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基または任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択される）
のものである、項目１に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ ^６ がハロゲンである、項目６に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ ^６ がＦである、項目６に記載の化合物。
（項目９）
Ｒ ^４ が式（ＩＩＩ）：

（式中：
ｊは０、１、２、３または４であり；
ｋは０、１、２、３、４または５であり；
各場合のＲ ^７ およびＲ ^８ は独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ _２ 、−Ｎ _３ 、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基または任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択される）
のものである、項目１に記載の化合物。
（項目１０）
各場合のＲ ^７ およびＲ ^８ が独立して、水素またはハロゲンである、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ ^７ が水素であり；Ｒ ^８ がＦであり；ｋが１、２または３である、項目９に記載の化合物。
（項目１２）
Ｒ ^７ がＦであり；Ｒ ^８ が水素であり；ｊが１、２または３である、項目９に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ ^７ およびＲ ^８ がともにＦであり；ｋが１、２または３であり；ｊが１、２または３である、項目９に記載の化合物。
（項目１４）
以下のもの：

のうちの１つから選択される、項目１に記載の化合物。
（項目１５）
（ｉ）抗原とともにヒト被験体に共投与した場合、免疫応答を刺激するのに充分な量の項目１〜１４のいずれかに記載の化合物および（ｉｉ）薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物。
（項目１６）
抗原の免疫原性の増大を、それを必要とする被験体において行なうための方法であって、該抗原を、一般式ＩのＧＳＬ化合物を含むアジュバント組成物とともに共投与することを含む方法。
（項目１７）
免疫応答の刺激を、それを必要とするヒト被験体において行なうための方法であって、該被験体に、薬学的に許容され得る担体中の治療有効量の免疫アジュバント組成物を投与することを含み、該組成物が項目１〜１４のいずれかに記載の化合物を含むものである方法。
（項目１８）
前記アジュバント組成物がワクチンアジュバントである、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記アジュバント組成物が、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞を上昇させることが可能な量で投与される、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記アジュバント組成物の投与により、ヒトにおいてサイトカインおよび／またはケモカインの生成が増大する、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記サイトカインの生成が下流の免疫細胞をトランス活性化するのに充分なものである、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４ ^＋ ＴおよびＣＤ８ ^＋ Ｔ細胞のうちの１種類またはそれより多くを含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記サイトカインがＴｈ１サイトカインを含む、項目２０に記載の方法。
（項目２４）
前記Ｔｈ１サイトカインが：インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１０を含む群のうちの少なくとも１種類から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記ケモカインが、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧを含む群のうちの少なくとも１種類から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２６）
前記組成物の投与が抗がん効果を有する、項目１６に記載の方法。
（項目２７）
前記がんが、肺がん、乳がん、肝細胞癌、白血病、充実性腫瘍および癌からなる群より選択される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
式Ｉの化合物のＲ ^４ が置換または非置換のアリールおよび置換または非置換のヘテロアリールから選択され、ヒトにおけるＴｈ１サイトカインの増加がＴｈ２サイトカインのいずれかの増加を超えている、項目１６に記載の方法。
（項目２９）
インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の生成の上昇を、それを必要とするヒト被験体において行なうための方法であって：該被験体に治療有効量の医薬組成物を投与することを含み、該組成物が項目１〜１４のいずれかに記載の化合物を含むものである方法。
（項目３０）
前記ｉＮＫＴレベルの上昇が、グリコシル頭部基としてアルファ−ガラクトース（αＧａｌ）を含む等量の糖脂質類似体の投与により得られる上昇と比べた場合、大きくなる、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
サイトカインおよび／またはケモカインの生成の刺激を、それを必要とするヒト被験体において行なうための方法であって：該被験体に治療有効量の医薬組成物を投与することを含み、該組成物が、サイトカイン／ケモカインの生成を増大させるのに充分な量の項目１〜１４のいずれかに記載の化合物を含むものである方法。
（項目３２）
前記サイトカインの生成が下流の免疫細胞をトランス活性化するのに充分なものである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４ ^＋ ＴおよびＣＤ８ ^＋ Ｔ細胞のうちの１種類またはそれより多くを含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記サイトカインがＴｈ１サイトカインを含む、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記サイトカインが：インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１０から選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ケモカインが：ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される、項目３１に記載の方法。
（項目３７）
ワクチンアジュバントである、項目１５に記載の医薬組成物。
（項目３８）
抗がん治療薬である、項目１５に記載の医薬組成物。
（項目３９）
前記化合物のＲ ^４ が置換または非置換のアリールおよび置換または非置換のヘテロアリールから選択され、該化合物が、ヒトにおいてＴｈ１サイトカインを、付随するＴｈ２サイトカイン増加を最小限にして増加させることが可能である、項目１６に記載の医薬組成物。
（項目４０）
被験体において抗原による免疫応答を増大させるための方法であって、該被験体に、１種類またはそれより多くの抗原と免疫原性有効量の項目１５に記載のアジュバント組成物とを含む有効量のワクチンを投与することを含む方法。
（項目４１）
前記１種類またはそれより多くの抗原が、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、プリオン抗原、新生抗原、腫瘍抗原および自己抗原からなる群より選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記ワクチンが、核酸、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、炭水化物、融合タンパク質、脂質、糖脂質、炭水化物−タンパク質コンジュゲート；細胞もしくはその抽出物；死細胞もしくは弱毒化細胞もしくはその抽出物；腫瘍細胞もしくはその抽出物；ウイルス粒子；アレルゲンまたはその混合物からなる群より選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
前記投与される抗原が腫瘍抗原である、項目４０に記載の方法。
（項目４４）
前記抗原の量が０．１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与される、項目４０に記載の方法。
（項目４５）
前記アジュバントの量が１０〜１００μｇ／ｋｇ体重の範囲である、項目４０に記載の方法。
（項目４６）
前記共投与される組成物が、式ＩのＧＳＬと薬学的に許容され得る担体とを含む共製剤化された薬学的に許容され得る組成物である、項目４０に記載の方法。
（項目４７）
式ＩのＧＳＬを含む製造物品。
（項目４８）
項目１〜１４のいずれか１項に記載のＧＳＬおよび使用のための説明書を備えたキット。

これらおよび他の態様は、好ましい実施形態の以下の説明から以下の図面を併せて考慮すると自明となろう。しかしながら、本開示の新規な概念の精神および範囲から逸脱することなく変形および修正が行なわれ（ａｆｆｅｃｔ）得る。

以下の図面は本明細書の一部を構成し、本開示の一部の特定の態様のさらなる実例を示すために含めている。本開示の発明は、この図面の１つまたはそれより多くを本明細書に提示した具体的な実施形態の詳細説明と合わせて参照することにより、さらによく理解することができよう。

図１は、αＧａｌまたはαＧｌｃを有する糖脂質の構造を示す。７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、αＭａｎを有する唯一の化合物である。 図１は、αＧａｌまたはαＧｌｃを有する糖脂質の構造を示す。７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、αＭａｎを有する唯一の化合物である。

図２は、αＧａｌを有する糖脂質類似体がαＧｌｃを有するものよりも、マウスにおいては強力であるがヒトにおいては弱い免疫調節物質であったことを示す。Ｂ６野生型およびＪα１８ノックアウトマウス（ｎ＝４）に、表示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクルをｉ．ｖ．注射した。注射の２時間後および１８時間後に収集した血清を、ＩＦＮ−γ（２Ａ）およびＩＬ−４（２Ｂ）などのサイトカインの分泌について解析した。ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４は、それぞれ注射の１８時間後および２時間後にピークになった。（２Ｃ）表示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中１％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６ ＷＴマウスを注射後７２時間目に致死させ、その脾細胞を、ＣＤ３＋細胞の総数の測定のためにＦＡＣＳ解析に供した。（２Ｄ）ヒトナイーブＶα２４＋ ｉＮＫＴ細胞を、２日目に１００ｎｇ／ｍｌの表示した糖脂質またはＤＭＳＯをパルスした自己未成熟ＣＤ１４＋ ＤＣとともに培養した。３日目に抗原を除去した後、ヒトｉＮＫＴ細胞をＩＬ−２の存在下で培養した。増殖したｉＮＫＴ細胞の数を、９日目に、Ｇｕａｖａ ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬を用いて計測した。７ＤＷ８−５と７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの差の解析にはスチューデントのｔ検定を選択した。ｐ＜０．００１，^＊＊＊。アッセイは、同様の傾向を有する２つの異なるドナーで行なった。

図３は、ＣＤ１ｄ−糖脂質複合体のｉＮＫＴ細胞との三成分系相互作用を示す。（３Ａ）ＤＮ３Ａ４−１．２ Ｖα１４＋ ｉＮＫＴハイブリドーマ細胞および（３Ｂ）７ＤＷ８−５増殖Ｖα２４＋ ｉＮＫＴ細胞を、種々の濃度の表示した二量体ｍＣＤ１ｄ−糖脂質およびｈＣＤ１ｄ−糖脂質複合体とともにそれぞれ４℃で３０分間インキュベートした。表示した濃度における結合複合体レベルを抗ｍＩｇＧ１二次抗体によって検出し、フローサイトメトリーによって解析した。ＣＤ１ｄｄｉ−糖脂質複合体の結合パーセンテージと濃度の関係をマウス（３Ａ）およびヒト（３Ｂ）においてプロットした。マウス（３Ｃ）およびヒト（３Ｄ）におけるＫＤ値を、それぞれプロット（３Ａ）および（３Ｂ）のスキャッチャード変換により計算した。アッセイは二連で行なった。

図４は、ｍＣＤ１ｄとｈＣＤ１ｄ（対比）のスワップアッセイを示す。（４Ａ）マウスＤＮ３Ａ４−１．２ Ｖα１４＋ ｉＮＫＴハイブリドーマ細胞または（４Ｂ）Ｃ１増殖Ｖα２４＋ ｉＮＫＴ細胞に、ｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ細胞）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞）のいずれかによって提示された表示した糖脂質を１、０．１および０．０１μｇ／ｍｌでパルスした。１８時間後、上清みを採取し、ＩＬ−２分泌をＥＬＩＳＡアッセイによって（４Ａ）またはＢｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｈｕｍａｎ ＣｙｔｏｋｉｎｅキットおよびＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００ＴＭ読取システムを使用することにより（４Ｂ）測定した。アッセイは三連で行なった。８−５は７ＤＷ８−５の略号とした。

図５は、ＣＤ１ｄ−ＧＳＬ−ｉＮＫＴ ＴＣＲの三元複合体のコンピュータモデル設計を示す。（５Ａ）／（５Ｂ）マウス（５Ａ）およびヒト（５Ｂ）のＣＤ１ｄ−Ｃ１−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体内の水素結合を示した。水素結合の形成は保存された残基において、例えば、ＣＤ１ｄのヒトＡｓｐ８０（マウスＡｓｐ８０）、ヒトＴｈｒ１５４（マウスＴｈｒ１５６）、ヒトＡｓｐ１５１（マウスＡｓｐ１５３）およびｉＮＫＴ ＴＣＲのヒトＧｌｙ９６（マウスＧｌｙ９６）においてみとめられた。その上、ｉＮＫＴ ＴＣＲのマウスＡｓｎ３０ならびにヒトＰｈｅ２９およびＳｅｒ３０は、Ｃ１の３’−ＯＨおよび／または４’−ＯＨとＨ−結合相互作用を形成する重要な残基であった。（５Ｃ）グルコースのエクアトリアル４’−ＯＨは、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ｐｈｅ５１およびｈＣＤ１ｄ−Ｔｒｐ１５３によって捕捉された結晶水とのより強い相互作用によってＰｈｅ２９の相互作用の低下を代償しているのかもしれない。（５Ｄ）芳香族相互作用による高エネルギーにより、Ｃ３４またはＣ３４−Ｇｌｃのアシル鎖がＣＤ１ｄ内のＡ’チャネルのより低い位置（Ｃｙｓ１２付近）に追いやられることになり、頭部基の向きに対して微妙な乱れがもたらされるのかもしれない。（５Ｅ）Ａｕｔｏｄｏｃｋ４．２を用いた三元複合体のコンピュータ計算による自由エネルギー

図６は、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって誘発された用量依存性ケモカイン分泌を示す。Ｂ６野生型マウスに０．１または１μｇ／マウスの７ＤＷ８−５−Ｇｌｃをｉ．ｖ．注射した。注射の２時間後および１８時間後に収集した血清を、ＩＰ−１０（６Ａ）、ＫＣ（６Ｂ）、ＭＣＰ−１（６Ｃ）およびＭＩＰ−１α（６Ｄ）などのケモカイン分泌について解析した。これらのケモカインは注射の２時間後にピークになった。

図７は、サイトカインおよびケモカインのｉＮＫＴ依存性生成を示す。Ｂ６野生型およびＪα１８ノックアウトマウスに、表示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクルをｉ．ｖ．注射した。注射の２時間後および１８時間後に収集した血清を、ＩＬ−２（７Ａ）、ＩＬ−６（７Ｂ）、ＧＭ−ＣＳＦ（７Ｃ）およびＴＮＦα（７Ｄ）などのサイトカインならびにＩＰ−１０（７Ｅ）、ＭＩＧ（７Ｆ）、ＫＣ（７Ｇ）およびＭＣＰ−１（７Ｈ）などのケモカインについて解析した。ＭＩＧだけが注射の１８時間後にピークになったが、その他は注射の２時間後にピークになった。

図８は、表示した糖脂質での刺激後のＷＴマウス免疫細胞のＦＡＣＳ解析を示す。表示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中１％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６ ＷＴマウスを注射後７２時間目に致死させ、その脾細胞をＦＡＣＳ解析に供した。（８Ａ）脾細胞の総数、（８Ｂ）ＣＤ１１Ｃｈｉ細胞の総数、（８Ｃ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８０＋細胞、（８Ｄ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８６＋細胞、（８Ｅ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞および（８Ｆ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞．

図９は、表示した糖脂質での刺激後のＪα１８ ＫＯマウス免疫細胞のＦＡＣＳ解析を示す。表示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６ Ｊα１８ ＫＯマウスを注射後７２時間目に致死させ、その脾細胞をＦＡＣＳ解析に供した。（９Ａ）脾細胞の総数、（９Ｂ）ＣＤ１１Ｃｈｉ細胞の総数、（９Ｃ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８０＋細胞、（９Ｄ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８６＋細胞、（９Ｅ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞および（９Ｆ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞（スチューデントのｔ検定：^＊，Ｄと比較したときｐ＜０．０５）

図１０は、ｍＣＤ１ｄと糖脂質の二元複合体の結合強度を示す。（１０Ａ，１０Ｂ）ＥＬＩＳＡプレート上にコートした異なる濃度のｍＣＤ１ｄ−糖脂質複合体を、ビオチンとコンジュゲートさせた飽和量のＬ３６３抗体とともにインキュベートした後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行った。（１０Ａ）Ｌ３６３抗体結合を反映するＯＤ値とＣＤ１ｄｄｉ−糖脂質複合体の濃度の関係をプロットした。（１０Ｂ）Ｌ３６３抗体と表示したｍＣＤ１ｄ−糖脂質複合体間の解離定数（ＫＤ）を、材料および方法に記載のようにして計算した。（１０Ｃ）Ｌ３６３抗体結合を反映するＯＤ値と糖脂質の濃度の関係をプロットした。（１０Ｄ）二元複合体のＫＤ値を、Ｌ３６３抗体の結合曲線のスキャッチャード変換の線形回帰により計算した（１０Ｃ）。

図１１は、インビボ Ｃ１パルス脾細胞のＣＤ１ｄ二量体染色を示す。Ｂ６ ＷＴ脾細胞（ｎ＝３）を、Ｃ１（１μｇ／マウス）の注射の３日後に採取し、ＣＤ３、ＣＤ４５ＲおよびＲＰＥとコンジュゲートさせた表示した二量体複合体で、セ氏４度にて１時間染色した。（１１Ａ）ＣＤ３＋／ＣＤ４５Ｒ−細胞をゲーティングして二量体染色を解析した。（１１Ｂ）未負荷二量体を対照として使用した。（１１Ｃ）７ＤＷ８−５−Ｇｌｃを負荷したｍＣＤ１ｄ二量体は１７．１±０．８％のＣ１パルス脾細胞を染色された。（１１Ｄ）７ＤＷ８−５を負荷したｍＣＤ１ｄ二量体は３６．２±５．０％のＣ１パルス脾細胞を染色した。

図１２は、ｍＣＤ１ｄとｈＣＤ１ｄ（対比）のスワップアッセイを示す。Ｃ１増殖Ｖα２４＋ ｉＮＫＴ細胞に、ｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ細胞）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞）のいずれかによって提示された表示した糖脂質抗原を１、０．１および０．０１μｇ／ｍｌでパルスした。１８時間後、上清みを、ＩＦＮ−γ（１２Ａ）分泌およびＩＬ−４（１２Ｂ）分泌の測定のために採取した。（１２Ｃ）ＩＬ−４に対するＩＦＮ−γの比を異なる濃度の糖脂質において計算した。異なる糖脂質のＩＬ−４に対するＩＦＮ−γの比をＣ１のものと、表示した濃度においてスチューデントのｔ検定によって比較した（^＊，ｐ＜０．０５；^＊＊，ｐ＜０．０１；^＊＊＊，ｐ＜０．００１）。アッセイは三連で行なった。

詳細説明
ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）は、固有の特性、例えば、ＣＤ１ｄによって提示された天然または合成の糖脂質に対する反応性およびインバリアントＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）アルファ鎖の発現を有するＴリンパ球のサブセットを表す。ＮＫＴは、機能的に区別される通常のαβＴ細胞と、ナチュラルキラー細胞とＴ細胞の両方の特性を共有しており、リガンドにより刺激されると（先天性免疫）、ＴＨ１型応答およびＴＨ２型応答の両方を速やかにもたらし得るという点で異なる。逆説的に、ＮＫＴの活性化は免疫応答の抑制または刺激のいずれかをもたらすことがあり得る。例えば、ＴＨ１サイトカインの生成は、抗腫瘍、抗ウイルス／抗菌およびアジュバント活性を伴う細胞性免疫を促進すると考えられているが、ＴＨ２サイトカインの生成は、自己免疫疾患を抑制し、抗体産生を促進すると考えられている。ＮＫＴは免疫系において調節的役割を果たしているため、免疫療法の魅力的な標的である。

上記のように、本開示は、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）がα−ガラクトース（α−Ｇａｌ）を有するものよりも、ヒトにおいてサイトカインおよびケモカインならびに免疫細胞の増殖および／または活性化の強い（がマウスにおいては弱い）誘導を示すという予期しない知見に基づいたものである。したがって、例示的なＧＳＬを含む方法および組成物を本明細書において提供する。

本発明の実施には、特に記載のない限り、当該技術分野の技能の範囲内である分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の慣用的な手法が使用される。かかる手法は文献に充分に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編，１９８５）；Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；学術論文Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，第１５４巻および第１５５巻（Ｗｕら編），Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８８）；ならびにＨａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編，１９８６）を参照のこと。また、免疫アジュバントの作製方法および使用方法は米国特許第７，４８８，４９１号および同第７，９２８，０７７号に記載されている。

本明細書で用いる場合、用語「脂質」は、細胞シグナル伝達経路に関与する任意の脂溶性（親油性）分子をいう。本明細書で用いる場合、用語「糖脂質」は、細胞による認識のためのマーカーとしての機能を果たす炭水化物結合型脂質をいう。

本明細書で用いる場合、用語「グリカン」は多糖またはオリゴ糖をいう。また、グリカンは、本明細書において、複合糖質の炭水化物部分、例えば糖タンパク質、糖脂質、糖ペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖またはプロテオグリカンの炭水化物部分を示すためにも用いている。グリカンは、通常、単糖間のＯ−グリコシド結合のみからなる。例えば、セルロースはベータ−１，４−結合Ｄ−グルコースで構成されたグリカン（またはより特別にはグルカン）であり、キチンはベータ−１，４−結合Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンで構成されたグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモポリマーであってもヘテロポリマーであってもよく、線状であっても分枝状であってもよい。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンの場合のようにタンパク質に結合した状態でみられ得る。これは、一般的に細胞の外表面上にみられる。Ｏ−結合型およびＮ−結合型のグリカンは真核生物において非常によくみられ、あまり一般的ではないが原核生物においてもみられる場合があり得る。Ｎ−結合型グリカンは、シークオンのアスパラギンのＲ基の窒素（Ｎ）に結合した状態でみられる。シークオンはＡｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列であり、ここで、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である。

本明細書で用いる場合、用語「糖タンパク質」は、グリカン（１種類または複数種）で共有結合により修飾されたタンパク質をいう。糖タンパク質には４つの型：１）Ｎ−結合型糖タンパク質、２）Ｏ−結合型糖タンパク質（ムチン）、３）グルコサミノグリカン（ＧＡＧ，これはプロテオグリカンとも称される）、４）ＧＰＩアンカー型が存在する。ほとんどの糖タンパク質は、構造の微視的不均一性（同じグリコシル化部位内に結合している多数の異なるグリカン構造）を有するもの、および構造の巨視的不均一性（多数のグリカン結合部位およびグリカン結合の型）を有するものである。

本明細書で用いる場合、用語「類似体」は、構造が別の化合物のものと関連しているが化学的特性および生物学的特性はかなり異なり得る化合物、例えば薬物をいう。

本明細書で用いる場合、用語「抗原」は、免疫応答を誘起し得る任意の物質と定義する。

本明細書で用いる場合、用語「病原体」は、その宿主に疾患または疾病を引き起こす生物学的因子である。身体には、一部の一般的な病原体（ニューモシスチス属など）に対してヒト免疫系の形態の多くの自然防御が含まれている。

本明細書で用いる場合、用語「免疫原」は抗原、または抗原の発生を誘導し得る物質、例えばＤＮＡワクチンをいう。

本明細書で用いる場合、用語「免疫原性」は、免疫原、抗原またはワクチンの免疫応答刺激能をいう。

本明細書で用いる場合、用語「免疫療法」は、予防目的および／または治療目的を達成するために免疫系を調節するという概念に基づいた一連の処置ストラテジーをいう。

他の定義

用語「処置する」および「処置」は、本明細書で用いる場合、有害な病状、障害または疾患に罹患している臨床症状を有する個体に、症状の重症度および／または頻度の低減がもたらされるように、症状および／またはその根本的原因が解消されるように、および／または損傷の改善もしくは修復が助長されるように薬剤または配合物の投与をいう。用語「予防する」および「予防」は、特定の有害な病状、障害または疾患に易罹患性であり、したがって症状および／またはその根本的原因の発生の予防に関連している臨床症状のない個体への薬剤または組成物の投与をいう。明示的または含蓄的のいずれかで本明細書において特に記載のない限り、用語「処置」（または「処置する」）が、考えられ得る予防に言及せずに使用されている場合、予防も同様に包含されていることを意図する。

「任意選択の置換基」または「任意選択で存在させる添加剤」の場合の「任意選択の」または「任意選択で存在させる」は、続いて記載される構成要素（例えば、置換基または添加剤）を存在させても存在させなくてもよいことを意味し、そのため、その記載は、該構成要素が存在する場合と、存在しない場合を包含している。

「薬学的に許容され得る」により、生物学的またはその他の様式で望ましくないものでない物質を意図し、例えば、該物質は、任意の望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、または投薬形態配合物の任意のその他の成分と有害な様式で相互作用することなく本発明の製剤に組み込まれ得る。しかしながら、用語「薬学的に許容され得る」を医薬用賦形剤をいうために用いる場合、これは、該賦形剤が毒物学的試験および製造試験の所要の基準を満たしたものであること、および／または米食品医薬品局によって作成されたＩｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅに含まれたものであることを意味する。後でさらに詳細に説明するように、「薬理学的に活性な」誘導体または類似体の場合の「薬理学的に活性な」（または単に「活性な」）は、親薬剤と同じ型の薬理学的活性を有する誘導体または類似体をいう。

本明細書で用いる場合、用語「免疫原」は抗原、または抗原の発生を誘導し得る物質、例えばＤＮＡワクチンをいう。

本明細書で用いる場合、用語「免疫原性」は、免疫原、抗原またはワクチンの免疫応答刺激能をいう。

本明細書で用いる場合、用語「免疫療法」は、予防目的および／または治療目的を達成するために免疫系を調節するという概念に基づいた一連の処置ストラテジーをいう。

本明細書で用いる場合、用語「サイトカイン」は、免疫応答の強度および持続期間を、免疫細胞の分化過程（通常、前駆細胞が相違する特殊化された細胞型になる遺伝子発現の変化を伴う）に影響を及ぼすことによって調節する数多くの小型の分泌タンパク質のいずれかをいう。サイトカインは、その推定される機能、細胞分泌または作用標的に基づいて、リンホカイン、インターロイキンおよびケモカインのように種々の名称で呼称されている。例えば、一部の一般的なインターロイキンとしては、限定されないがＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１およびＴＧＦ−βが挙げられる。「サイトカイン」は、別の細胞集団に対しては細胞間メディエータとして作用する一細胞集団によって放出される一群のタンパク質の総称である。かかるサイトカインの例はリンホカイン、モノカインおよび従来からのポリペプチドホルモンである。サイトカインには、インターフェロン（ＩＦＮ、とりわけＩＦＮ−γ）、インターロイキン（ＩＬ、とりわけＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、白血病阻止因子（ＬＩＦ）、ｋｉｔ−リガンド、成長ホルモン（ＧＨ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、レラキシン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、造血細胞増殖因子、肝細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ミューラー阻害物質、マウスゴナドトロピン結合ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インテグリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、骨誘導因子などが包含される。

本明細書で用いる場合、用語「ケモカイン」は、感染部位で放出され、リンパ球の動員および活性化のための手段をもたらす種々の小型の化学走性サイトカインのいずれかをいう。ケモカインは白血球を感染部位に誘引する。ケモカインは保存されたシステイン残基を有し、該残基によりケモカインは４つの群に割り当てられる。該群は、代表的なケモカインとともに、Ｃ−Ｃケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１β）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（ＩＬ−８）、Ｃケモカイン（リンホタクチン）、ならびにＣＸＸＸＣケモカイン（フラクタルキン）である。

本明細書で用いる場合、用語「エピトープ」は、抗体の抗原結合部位またはＴ細胞受容体と接触する抗原分子の一部分と定義する。

マウスおよび人間における三元複合体の結合アビディティの差をさらに説明するため、コンピュータモデル設計を、それぞれマウスおよびヒトのＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体（ＰＤＢアクセスコード３ＨＵＪ、３ＱＵＸ、３ＱＵＹ、３ＱＵＺおよび３ＨＥ６）のｘ線構造に基づいて行なった^{２７〜２９}。（２７）Ｂｏｒｇ，Ｎ．Ａ．；Ｗｕｎ，Ｋ．Ｓ．；Ｋｊｅｒ−Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｌ．；Ｗｉｌｃｅ，Ｍ．Ｃ．；Ｐｅｌｌｉｃｃｉ，Ｄ．Ｇ．；Ｋｏｈ，Ｒ．；Ｂｅｓｒａ，Ｇ．Ｓ．；Ｂｈａｒａｄｗａｊ，Ｍ．；Ｇｏｄｆｒｅｙ，Ｄ．Ｉ．；ＭｃＣｌｕｓｋｅｙ，Ｊ．；Ｒｏｓｓｊｏｈｎ，Ｊ．Ｎａｔｕｒｅ ２００７，４４８，４４；（２８）Ｐｅｌｌｉｃｃｉ，Ｄ．Ｇ．；Ｐａｔｅｌ，Ｏ．；Ｋｊｅｒ−Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｌ．；Ｐａｎｇ，Ｓ．Ｓ．；Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｌ．Ｃ．；Ｋｙｐａｒｉｓｓｏｕｄｉｓ，Ｋ．；Ｂｒｏｏｋｓ，Ａ．Ｇ．；Ｒｅｉｄ，Ｈ．Ｈ．；Ｇｒａｓ，Ｓ．；Ｌｕｃｅｔ，Ｉ．Ｓ．；Ｋｏｈ，Ｒ．；Ｓｍｙｔｈ，Ｍ．Ｊ．；Ｍａｌｌｅｖａｅｙ，Ｔ．；Ｍａｔｓｕｄａ，Ｊ．Ｌ．；Ｇａｐｉｎ，Ｌ．；ＭｃＣｌｕｓｋｅｙ，Ｊ．；Ｇｏｄｆｒｅｙ，Ｄ．Ｉ．；Ｒｏｓｓｊｏｈｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００９，３１，４７；および（２９）Ａｓｐｅｓｌａｇｈ，Ｓ．；Ｌｉ，Ｙ．；Ｙｕ，Ｅ．Ｄ．；Ｐａｕｗｅｌｓ，Ｎ．；Ｔｒａｐｐｅｎｉｅｒｓ，Ｍ．；Ｇｉｒａｒｄｉ，Ｅ．；Ｄｅｃｒｕｙ，Ｔ．；Ｖａｎ Ｂｅｎｅｄｅｎ，Ｋ．；Ｖｅｎｋｅｎ，Ｋ．；Ｄｒｅｎｎａｎ，Ｍ．；Ｌｅｙｂａｅｒｔ，Ｌ．；Ｗａｎｇ，Ｊ．；Ｆｒａｎｃｋ，Ｒ．Ｗ．；Ｖａｎ Ｃａｌｅｎｂｅｒｇｈ，Ｓ．；Ｚａｊｏｎｃ，Ｄ．Ｍ．；Ｅｌｅｗａｕｔ，Ｄ．ＥＭＢＯ Ｊ．２０１１，３０，２２９４．

本明細書で用いる場合、用語「ワクチン」は、完全体の疾患原因生物体（死滅もしくは弱体化したもの）またはかかる生物体の成分、例えばタンパク質、ペプチドもしくは多糖からなり、該生物体が原因の疾患に対して免疫を付与するために使用される抗原を含む調製物をいう。ワクチン調製物は天然のもの、合成のものまたは組換えＤＮＡ技術によって得たものであり得る。

本明細書で用いる場合、用語「免疫学的アジュバント」は、免疫原と共に使用され、該免疫原に対する免疫応答を向上または修飾する物質をいう。具体的には、用語「アジュバント」および「イムノアジュバント」は本発明において互換的に用いており、宿主に単独で投与した場合は非免疫原性であり得るが、別の抗原とともに共同的に投与した場合、該抗原に対する宿主の免疫応答を増大させる化合物または混合物をいう。アジュバント媒介性の免疫応答の向上および／またはその持続期間の延長は、当該技術分野で知られた任意の方法によって、例えば限定されないが、以下：（ｉ）抗原単独での免疫処置に応答して生成される抗体の数に対してアジュバント／抗原の併用での免疫処置に応答して生成される抗体の数の増加；（ｉｉ）抗原またはアジュバントを認識するＴ細胞の数の増加；および（ｉｉｉ）１種類またはそれより多くのＩ型サイトカインのレベルの増大のうちの１つまたはそれより多くによって評価され得る。

本発明の例示的なアジュバントは、一般式１で表され得る化合物を含むものである。

好ましくは、本発明の例示的なアジュバントはヒトにおける使用に薬学的に許容され得るものである。

本発明のアジュバントは、抗原を含む医薬組成物もしくはワクチン組成物の一部として、または独立した製剤（これを、抗原を含む第２の組成物とともに共同的に投与してもよい）として投与され得る。このような任意の組成物において、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は他のアジュバントおよび／または賦形剤／担体と合わされ得る。このような他のアジュバントとしては、限定されないが、油乳剤および乳化剤系アジュバント、例えば、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、ＭＦ５９もしくはＳＡＦ；鉱物ゲル、例えば、水酸化アルミニウム（ミョウバン）、リン酸アルミニウムもしくはリン酸カルシウム；微生物により得られるアジュバント、例えば、コレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素、大腸菌熱不安定性毒素（ＬＴ）、変異型毒素（例えば、ＬＴＫ６３もしくはＬＴＲ７２）、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、ＤＮＡ ＣｐＧモチーフ、ムラミルジペプチド、もしくはモノホスホリル脂質Ａ；微粒状アジュバント、例えば、免疫賦活複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、生分解性ミクロスフェア、もしくはサポニン（例えば、ＱＳ−２１）；サイトカイン、例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２もしくはＧＭ−ＣＳＦ；合成アジュバント、例えば、非イオン性ブロックコポリマー、ムラミルペプチド類似体（例えば、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン［ｔｈｒ−ＭＤＰ］、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−［１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ］−エチルアミン）、ポリホスファゼン、もしくは合成ポリヌクレオチド、および表面活性物質、例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、炭化水素乳剤、またはスカシガイヘモシアニン（ＫＬＨ）が挙げられる。好ましくは、このような追加のアジュバントもまた、ヒトにおける使用に薬学的に許容され得るものである。

本発明での意味の範囲において、用語「共同的投与または共投与」は、免疫アジュバントと抗原を１つの組成物で同時に投与すること、または異なる組成物で同時に投与すること、または逐次投与することをいうために用いている。しかしながら、「共同的」とみなされる逐次投与では、抗原とアジュバントは、依然として該アジュバントが該抗原に対する免疫応答を増大させることが可能な時間間隔で投与されなければならない。例えば、抗原がポリペプチドである場合、抗原とアジュバントは同じ日に、好ましくは互いに１時間以内に、最も好ましくは同時に投与される。しかしながら、核酸を被験体に送達し、ポリペプチド抗原を該被験体の細胞内で発現させる場合、アジュバントは核酸投与の２４時間以内、好ましくは６時間以内に投与される。

本明細書で用いる場合、用語「免疫原性の」は、薬剤が体液性または細胞性の免疫応答、好ましくは両方を誘起し得るものであることを意味する。免疫原性の実体は抗原性でもある。免疫原性組成物は、免疫系を有する動物に投与した場合、体液性もしくは細胞性の免疫応答または両方を誘起する組成物である。

用語「抗原」は、免疫系を有する宿主、動物またはヒトに導入されると（直接、または例えばＤＮＡワクチンの場合のように発現されると）、宿主の免疫系によって認識され、免疫応答を誘起し得る任意の因子（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖、糖タンパク質、糖脂質、核酸またはその組合せ）をいう。本明細書において定義している場合、抗原誘導性免疫応答は体液性または細胞媒介性または両方であり得る。因子は、免疫系の抗原認識分子、例えば免疫グロブリン（抗体）またはＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）と特異的に相互作用し得る場合、「抗原性」と称される。本発明での意味の範囲において、抗原は好ましくは「表面抗原」、すなわち、病原体の表面上、または感染細胞の表面上、または腫瘍細胞の表面上に天然に発現されるものである。抗原性である分子は、それ自体が免疫原性、すなわち、アジュバントまたは担体なしで免疫応答を誘起し得るものである必要はない。本明細書で用いる場合、用語「抗原特異的」は、特定の抗原または該抗原の断片を共有して細胞の特定の特質をもたらすような細胞集団の特性をいう。

用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、Ｂ細胞もしくはＴ細胞のいずれか、または両方によって認識される抗原の任意の部分をいう。好ましくは、かかるエピトープと免疫グロブリン（抗体）の抗原認識部位またはＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）の相互作用により、抗原特異的免疫応答の誘導がもたらされる。Ｔ細胞は、タンパク質がより小さいペプチドに切断され、別の細胞の表面上に存在する「主要組織適合複合体（ＭＨＣ）」と称される複合体に提示された場合にのみ、該タンパク質を認識する。ＭＨＣ複合体にはクラスＩとクラスＩＩの２つのクラスが存在し、各クラスは多くの異なる対立遺伝子で構成されている。クラスＩ ＭＨＣ複合体は事実上、どの細胞上にもみられ、生成タンパク質由来のペプチドを細胞内部に提示する。したがって、クラスＩ ＭＨＣ複合体は、ウイルスに感染した細胞または癌遺伝子の発現の結果、がん性になった細胞を死滅させるのに有用である。ＣＤ８と称されるタンパク質を表面上に有するＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介してＭＨＣクラスＩ／ペプチド複合体に特異的に結合する。これにより細胞溶解性エフェクター活性がもたらされる。クラスＩＩ ＭＨＣ複合体は抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のみにみられ、ＡＰＣによりエンドサイトーシスを受けた循環病原体に由来するペプチドを提示するために使用される。ＣＤ４と称されるタンパク質を有するＴ細胞は、ＴＣＲを介してＭＨＣクラスＩＩ／ペプチド複合体に結合する。これにより、免疫応答を刺激する特定のサイトカインの合成がもたらされる。ＭＨＣクラスＩ提示により免疫系によって有効に認識されるためには、抗原性ポリペプチドは少なくとも約８〜１０個のアミノ酸のエピトープを含むものでなければならず、一方、ＭＨＣクラスＩＩ提示により免疫系によって有効に認識されるためには、抗原性ポリペプチドは少なくとも約１３〜２５個のアミノ酸のエピトープを含むものでなければならない。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第３版，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ編，１９９９，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌを参照のこと。

用語「種特異的」抗原は、特定の種のみに存在するか、または特定の種のみに由来する抗原をいう。したがって、用語「マラリア由来」または「マラリア特異的」抗原は、プラスモジウム（前記プラスモジウムは限定されないが、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐ．ｏｖａｌｅ、Ｐ．ｒｅｉｃｈｅｎｏｗｉ、Ｐ．ｋｎｏｗｌｅｓｉ、Ｐ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ、Ｐ．ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ、Ｐ．ｙｏｅｌｉｉ、Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ、またはＰ．ｃｈａｂａｕｄｉである）を構成するタンパク質のいずれか１種類に由来する少なくとも１つのエピトープ（Ｂ細胞および／またはＴ細胞）を含み、少なくとも５〜１０個のアミノ酸残基を含むものである天然（例えば、放射線照射したスポロゾイト）または合成（例えば、化学的に作製した多抗原ペプチド［ＭＡＰ］もしくは組換え合成ポリペプチド）の抗原をいう。抗原作製のための好ましいプラスモジウムタンパク質はサーカムスポロゾイト（ＣＳ）タンパク質であるが、他のタンパク質、例えば、トロンボスポンジン関連接着（匿名）タンパク質（ＴＲＡＰ）（スポロゾイト表面タンパク質２（ＳＳＰ２）とも称される）、ＬＳＡ Ｉ、ｈｓｐ７０、ＳＡＬＳＡ、ＳＴＡＲＰ、Ｈｅｐ１７、ＭＳＡ、ＲＡＰ−１、ＲＡＰ−２などもまた使用され得る。

用語「ワクチン」は、レシピエントにおいて防御免疫を誘起するために使用され得る組成物（例えば、タンパク質またはベクター、例えば、アデノウイルスベクター、シンドビスウイルスベクターもしくはポックスウイルスベクターなど）をいう。有効であるとは、本発明のワクチンが、免疫処置された集団の一部において免疫を誘起するものでよいことに注意されたい。それは、一部の個体ではロバストもしくは防御的な免疫応答が現れないか、または一部の場合では全く免疫応答が現れないことがあり得るからである。この不能性は、個体の遺伝的背景が原因であり得るか、あるいは免疫不全状態（後天性もしくは先天性のいずれか）または免疫抑制（例えば、化学療法での処置もしくは例えば、器官拒絶を抑制するため、あるいは自己免疫状態を抑制するための免疫抑制薬の使用のため）によるものであり得る。ワクチンの有効性は動物モデルにおいて確立され得る。

用語「ＤＮＡワクチン」は正式でない専門用語であり、本明細書では、組換えベクターによって送達されるワクチンをいうために用いている。択一的な、より説明的な用語として本明細書で用いているのは「ベクターワクチン」である（レトロウイルスおよびレンチウイルスなどのいくつかの潜在的ベクターはＲＮＡウイルスであるため、および一部の場合では、ＤＮＡではなく非ウイルスＲＮＡがベクターによって細胞に送達されるため）。一般的に、ベクターはインビボで投与されるが、適切な抗原提示細胞（樹状細胞（ＤＣ）など）をエキソビボで形質導入し、該形質導入細胞をインビボ投与することもまた想定される。

用語「処置する」は本明細書において、被験体の疾患の少なくとも１つの症状を軽減または緩和することを意味するために用いている。本発明での意味の範囲において、用語「処置する」はまた、潜伏期間、すなわち感染から疾患の臨床発現までの期間を長くすることを意味している場合もあり得る。好ましくは、疾患は感染性疾患（例えば、ウイルス性、細菌性、寄生虫性もしくは真菌性）または悪性腫瘍（例えば、充実性もしくは血液の腫瘍、例えば、肉腫、癌、神経膠腫、芽細胞腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、リンパ腫、白血病、黒色腫など）のいずれかである。

用語「防御する」は本明細書において、適宜、被験体の疾患の発症または継続を予防もしくは処置すること、または両方を意味するために用いている。本発明での意味の範囲において、疾患は、感染（例えば、ウイルス性、細菌性、寄生虫性もしくは真菌性）および／または悪性腫瘍（例えば、充実性もしくは血液の腫瘍、例えば、肉腫、癌、神経膠腫、芽細胞腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、リンパ腫、白血病、黒色腫など）からなる群より選択され得る。例えば、本発明によれば、腫瘍特異的抗原を式１の例示的な薬剤を含むアジュバントとともに共同的に治療的に投与することにより抗腫瘍免疫応答が向上し、腫瘍の増殖および転移の遅滞、またはさらには腫瘍退縮がもたらされ得る。

用語「防御免疫」は、前記抗原の不活化および／またはその負荷量の低減をもたらし、長期持続性の免疫（これは、例えば抗体の生成による後天性である）の発生をもたらし、同じ抗原または関連抗原に反復して曝露されたときに疾患の発症を予防または遅延させる、宿主動物における免疫応答（能動／後天性もしくは受動／先天性のいずれか、または両方）をいう。「防御免疫応答」には、例えば、病原体もしくは感染細胞の負荷量を削減もしくは低減させるため（あるいは感染の任意の他の測定可能な緩和をもたらすため）、または免疫処置された（ワクチン接種された）被験体における全身腫瘍組織量を低減させるために有効な体液性（抗体）免疫または細胞性免疫または両方が包含される。本発明での意味の範囲において、防御免疫は一部性であってもよい。

免疫系は、「先天性」または「自然」免疫系と「後天性」または「適応的」免疫系の２つの一般的な系に分類される。先天性免疫系が最初に感染を制御下に維持し、適応免疫系が適切な応答を発現するための時間を許容すると考えられている。最近の研究により、先天性免疫系の種々の構成要素が適応免疫系の構成要素、例えば、抗原特異的ＢおよびＴリンパ球を誘発して増大させることが示唆された（ＦｅａｒｏｎおよびＬｏｃｋｓｌｅｙ（上掲）；Ｋｏｓ，１９９８，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，１７：３０３；Ｒｏｍａｇｎａｎｉ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１３：３７９；ＢａｎｃｈｅｒｅａｕおよびＳｔｅｉｎｍａｎ，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３９２：２４５）。

用語「先天性免疫」または「自然免疫」は、抗原と事前に接触することによって生じたものでない先天性免疫応答をいう。先天性免疫系の細胞、例えば、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）は、外来抗原をパターン認識受容体によって取り込み、このような抗原のペプチド断片をＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子と結合させ、それぞれナイーブＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋ Ｔ細胞を刺激する（ＢａｎｃｈｅｒｅａｕおよびＳｔｅｉｎｍａｎ（上掲）；Ｈｏｌｍｓｋｏｖら，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１５：６７；ＵｌｅｖｉｔｃｈおよびＴｏｂｉａｓ，１９９５，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：４３７）。プロフェッショナルな抗原提示細胞（ＡＰＣ）はこのようなＴ細胞と連絡して、ナイーブＣＤ４^＋ Ｔ細胞を、それぞれ細胞性免疫および体液性免疫を媒介するＴ−ヘルパー１（Ｔｈ１）またはＴ−ヘルパー２（Ｔｈ２）リンパ球に分化させる（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，１９９５，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：２５１；ＨｏｗａｒｄおよびＯ’Ｇａｒｒａ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１３：１９８；Ａｂｂａｓら，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８３：７８７；Ｏｋａｍｕｒａら，１９９８，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７０：２８１；ＭｏｓｍａｎｎおよびＳａｄ，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１７：１３８；Ｏ’Ｇａｒｒａ，１９９８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，８：２７５）。

用語「後天性免疫」または「適応免疫」は本明細書において、動物の一生の間に確立され、誘導抗原に特異的であり、前記抗原に反復して接触したときの応答の向上が著しい能動または受動の体液性または細胞性免疫を意味するために用いている。適応免疫系のＴリンパ球の重要な特長は、細胞表面上のＭＨＣ分子によって提示された微量濃度の病原体由来ペプチドを検出する能力である。

本明細書で用いる場合、用語「免疫応答を増大させる」とは、免疫応答を向上させること、もしくはその持続期間を長くすること、または両方を意味する。薬剤（例えば、アジュバント）の特性に言及している場合、用語「免疫原性を増大させ［得］る」とは、抗原の免疫原性を向上させる能力もしくは抗原に対する免疫応答の持続期間を長くする能力、または両方をいう。

語句「免疫応答を向上させる」は、本発明での意味の範囲において、所与の抗原に対する免疫反応性の規模および／または効率を増大させる性質またはプロセスをいい、前記免疫反応性は体液性免疫もしくは細胞性免疫のいずれか、または両方である。免疫応答は、抗原特異的免疫反応性の任意の測定可能なパラメータ（例えば、抗体力価、Ｔ細胞の生成）が少なくとも２倍、好ましくは１０倍、最も好ましくは３０倍増大した場合、向上したと考える。

用量または量に適用される用語「治療有効（な）」は、投与すると所望の活性がそれを必要とする哺乳動物にもたらされるのに充分な化合物または医薬組成物またはワクチンの量をいう。アジュバント含有および抗原含有の組成物またはワクチンに関して本明細書で用いる場合、用語「治療有効量／用量」は用語「免疫原性有効量／用量」と互換的に用いており、哺乳動物に投与したとき有効な免疫応答がもたらされるのに充分な、化合物（例えば、抗原および／またはα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントあるいは医薬組成物またはワクチンの量／用量をいう。

語句「薬学的に許容され得る」は、本発明の組成物との関連で用いる場合、かかる組成物の分子実体および他の成分が、ヒトに投与したとき生理学的に耐容可能であり、典型的には不都合な反応をもたらさないことをいう。好ましくは、本明細書で用いる場合、用語「薬学的に許容され得る」は、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されていること、または米薬局方または他の一般的に認知された薬局方に哺乳動物における使用、より特別にはヒトにおける使用に記載されていることを意味する。

本発明の医薬組成物またはワクチン組成物に適用される用語「担体」は、化合物（例えば、抗原および／またはα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバント）とともに投与される希釈剤、賦形剤またはビヒクルをいう。かかる医薬用担体は滅菌液状物、例えば水および油、例えば、石油系、動物系、植物系または合成起源のもの、例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであり得る。水または水溶液、生理食塩水溶液および水性のデキストロースおよびグリセロールの溶液が担体として、特に注射用液剤に好ましく使用される。好適な医薬用担体は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”第１８版に記載されている。

用語「ネイティブ（ｎａｔｉｖｅ）抗体」または「免疫グロブリン」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成された約１５０，０００ドルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質をいう。各軽鎖は重鎖に１つのジスルフィド共有結合によって連結されているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間でさまざまである。また、各重鎖および軽鎖は規則正しい間隔で鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、他端に定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと並んでおり、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基が軽鎖の可変ドメインと重鎖の可変ドメイン間のインターフェースを形成すると考えられている（Ｃｌｏｔｈｉａら，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１８６：６５１−６６３，１９８５；ＮｏｖｏｔｎｙおよびＨａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４５９２−４５９６，１９８５）。

用語「抗体」または「Ａｂ」は、最も広い意味で用いており、具体的には、ネイティブ抗体だけでなく、単独のモノクローナル抗体（例えば、アゴニストおよびアンタゴニスト抗体）、多エピトープ特異性を有する抗体組成物、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖおよびＦｖ）（所望の生物学的活性を示すものである限り）も包含している。

本明細書で用いる場合、用語「ＣＤ１ｄ」は、種々のヒト抗原提示細胞の表面上に発現される糖タンパク質のＣＤ１（分化抗原群１）ファミリーの構成員をいう。ＣＤ１ｄに提示された脂質抗原によりナチュラルキラーＴ細胞が活性化される。ＣＤ１ｄは深い抗原結合溝を有し、この溝内に糖脂質抗原が結合する。樹状細胞上に発現されるＣＤ１ｄ分子は糖脂質に結合して提示し得る。

本明細書で用いる場合、用語「適応免疫系」は、病原体による抗原刺激を排除する高度に特殊化された全身の細胞および全身性過程をいう。適応免疫系の細胞は、リンパ球と称される型の白血球である。Ｂ細胞とＴ細胞はリンパ球の主要な型である。

本明細書で用いる場合、用語「Ｔ細胞」および「Ｔ」は、細胞媒介性免疫において中心的な役割を果たすリンパ球として知られる一群の白血球をいう。Ｔ細胞は、Ｂ細胞およびＮＫなどの他のリンパ球型とは、細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と称される特殊化された受容体の存在によって区別され得る。Ｔ細胞のいくつかの異なるサブセットが報告されており、各々は相違する機能を有する。ヘルパーＴ（Ｔ_Ｈ）細胞は適応免疫系の「仲介者」である。活性化されたら、該細胞は速やかに分裂し、免疫応答を調節または「ヘルプ」するサイトカインと称される小型のタンパク質を分泌する。受け取るサイトカインシグナルに応じて、この細胞は、Ｔ_Ｈ１、Ｔ_Ｈ２、Ｔ_Ｈ１７または他のサブセットの１つに分化し、これらは異なるサイトカインを分泌する。

本明細書で用いる場合、用語「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）は、その表面上に、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）と複合体形成した外来抗原をディスプレイする細胞をいう。Ｔ細胞はこの複合体を、自身のＴＣＲを用いて認識し得る。ＡＰＣは２つのカテゴリー：プロフェッショナルまたは非プロフェッショナルに分類される。樹状細胞（ＤＣ）はプロフェッショナルカテゴリーに分類され、ＣＤ１との関連においてＴ細胞に抗原を提示し得る。例示的な実施において、本開示の方法で使用されるＤＣは、実施の一例ではリンパ球系から、または別の実施では骨髄系の骨髄前駆細胞から分化するいくつかのＤＣサブセットの任意のものであり得る。

本明細書で用いる場合、用語「ナイーブ細胞」は、まだ特定の病原体を認識するように特殊化されていない未分化の免疫系細胞（例えばＣＤ４ Ｔ細胞）をいう。

本明細書で用いる場合、用語「ナチュラルキラー細胞」および「ＮＫ」は、インターフェロンによって活性化されてウイルスおよび他の細胞内病原体に対する宿主の先天的防御に寄与する一類型のリンパ球系細胞をいう。

本明細書で用いる場合、用語「ナチュラルキラーＴ細胞」（ＮＫＴ）は、慣用的なＴおよびＮＫの両方と特徴／受容体を共有しているＴ細胞のサブセットをいう。このような細胞の多くは、自己および外来の脂質および糖脂質に結合する抗原提示分子である非多型性ＣＤ１ｄ分子を認識する。ＮＫＴのＴＣＲは、ＣＤ１ｄ分子によって提示された（シャペロン型）糖脂質抗原を認識し得る。ＮＫＴの主な応答は、刺激後のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０）の速やかな分泌であり、したがって多様な免疫応答および病原性過程に影響を及ぼす。ＮＫＴは均一な集団または不均一な集団であり得る。例示的な実施の一例では、該集団は「非インバリアントＮＫＴ」であり得、これはヒトおよびマウスの骨髄またはヒト肝臓のＴ細胞集団を含むものであり得、該Ｔ細胞集団は、例えば、多様なＴＣＲを発現し、また大量のＩＬ−４およびＩＦＮ−γも産生し得るＣＤ１ｄ反応性非インバリアントＴ細胞である。ＣＤ１ｄ依存性ＮＫＴの最もよく知られたサブセットはインバリアントＴＣＲ−アルファ（ＴＣＲ−α）鎖を発現するものである。このようなものは、Ｉ型またはインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）と称される。このような細胞はヒト（Ｖα２４ｉ ＮＫＴ）とマウス（Ｖα１４ｉ ＮＫＴ）間で保存されており、多くの免疫学的プロセスに関与している。

本明細書で用いる場合、用語「サイトカイン」は、免疫応答の強度および持続期間を、免疫細胞の分化過程（通常、前駆細胞が相違する特殊化された細胞型になる遺伝子発現の変化を伴う）に影響を及ぼすことによって調節する数多くの小型の分泌タンパク質のいずれかをいう。サイトカインは、その推定される機能、細胞分泌または作用標的に基づいて、リンホカイン、インターロイキンおよびケモカインのように種々の名称で呼称されている。例えば、一部の一般的なインターロイキンとしては、限定されないがＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１およびＴＧＦ−βが挙げられる。

本明細書で用いる場合、用語「ケモカイン」は、感染部位で放出され、リンパ球の動員および活性化のための手段をもたらす種々の小型の化学走性サイトカインのいずれかをいう。ケモカインは白血球を感染部位に誘引する。ケモカインは保存されたシステイン残基を有し、該残基によりケモカインは４つの群に割り当てられる。該群は、代表的なケモカインとともに、Ｃ−Ｃケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１β）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（ＩＬ−８）、Ｃケモカイン（リンホタクチン）、ならびにＣＸＸＸＣケモカイン（フラクタルキン）である。

本明細書で用いる場合、用語「Ｔ_Ｈ２型応答」は、特定の型のサイトカイン、インターフェロン、ケモカインが生成されるようなサイトカインの発現パターンをいう。典型的なＴ_Ｈ２サイトカインとしては、限定されないが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０が挙げられる。

本明細書で用いる場合、用語「Ｔ_Ｈ１型応答」は、特定の型のサイトカイン、インターフェロン、ケモカインが生成されるようなサイトカインの発現パターンをいう。典型的なＴ_Ｈ１サイトカインとしては、限定されないが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−βが挙げられる。

本明細書で用いる場合、用語「Ｔ_Ｈ１偏向型」は、Ｔ_Ｈ１サイトカインおよび／またはケモカインの生成がＴ_Ｈ２サイトカインおよび／またはケモカインの生成よりも大きくなる程度まで増大する免疫原性応答をいう。

本明細書で用いる場合、用語「抗菌（の）」は、物質が細菌、真菌またはウイルスなどの微生物を死滅させるか、またはその増殖を抑止するものであることをいう。

本明細書で用いる場合、用語「トキソイド」は、毒性が化学薬品（ホルマリン）または熱処理のいずれかによって弱毒化または抑制されているが、他の特性、典型的には免疫原性は維持されている細菌毒素をいう。トキソイドは、元の毒素に対して免疫応答を誘導するため、または別の抗原に対する応答を増大させるためワクチンに使用される。例えば、破傷風トキソイドは、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉによって生成され、破傷風を引き起こすテタノスパスミンから誘導される。破傷風トキソイドは、米国内の多くの血漿センター（ｐｌａｓｍａ ｃｅｎｔｅｒ）で血漿高含有ワクチンの開発のために使用されている。

本明細書で用いる場合、用語「ＤＮＡワクチン」は、細胞内に導入され、その後、特異的抗原性タンパク質に翻訳されるＤＮＡ構築物をいう。

本明細書で用いる場合、用語「プラスミド」は、複製能を有する環状の染色体外ＤＮＡをいい、これはクローニングベクターとして使用され得る。

本明細書で用いる場合、用語「微生物（“ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ”および“ｍｉｃｒｏｂｅ”）」は、微視的（小さすぎてヒトの裸眼では見えない）生物体をいう。微生物は信じられないほど多様であり、限定されないが細菌および真菌が挙げられる。

本明細書で用いる場合、用語「アジュバントまたは免疫学的アジュバント」は、免疫原とともに使用され、該免疫原に対する免疫応答を向上または修飾する物質をいう。本開示の例示的な化合物／類似体の一例では、ワクチンを投与された患者の免疫系を刺激することによりワクチンの効果を修飾または増大させるための免疫学的アジュバントとして、該ワクチンに対してより強力に応答させるために使用される。

本明細書で用いる場合、用語「ミョウバンアジュバント」は免疫アジュバント活性を有するアルミニウム塩をいう。この薬剤は溶液中でタンパク質抗原を吸着して沈殿させるものである；生じた沈殿物により、接種部位に形成されたワクチン貯留部からの抗原の低速放出が助長されることによってワクチンの免疫原性が改善される。

本明細書で用いる場合、用語「抗腫瘍免疫療法活性薬剤」は、腫瘍を抑止、低減および／または消失させる本開示の例示的な化合物／類似体をいう。

本明細書で用いる場合、用語「顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子」（ＧＭ−ＣＳＦ）は、白血球、特に顆粒球（好中球、好塩基球および好酸球）、マクロファージ、ならびに骨髄中において血小板の前駆細胞である細胞の生成を刺激するコロニー刺激因子としての機能を果たすサイトカインをいう。

本明細書で用いる場合、用語「抗原特異的」は、特定の抗原または該抗原の断片の供給により特異的な細胞増殖がもたらされるような細胞集団の特性をいう。

本明細書で用いる場合、用語「フローサイトメトリー」または「ＦＡＣＳ」は、流体流中に懸濁させた粒子または細胞の物理的および化学的特性を光学的および電子的検出デバイスによって調べるための手法を意味する。

ペプチドのアミノ酸残基は、以下、本明細書において以下のとおりに略記するものとする：Ｐ フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦであり；ロイシンはＬｅｕまたはＬであり；イソロイシンはＩｌｅまたはＩであり；メチオニンはＭｅｔまたはＭであり；バリンはＶａｌまたはＶであり；セリンはＳｅｒまたはＳであり；プロリンはＰｒｏまたはＰであり；トレオニンはＴｈｒまたはＴであり；アラニンはＡｌａまたはＡであり；チロシンはＴｙｒまたはＹであり；ヒスチジンはＨｉｓまたはＨであり；グルタミンはＧｌｎまたはＱであり；アスパラギンはＡｓｎまたはＮであり；リシンはＬｙｓまたはＫであり；アスパラギン酸はＡｓｐまたはＤであり；グルタミン酸はＧｌｕまたはＥであり；システインはＣｙｓまたはＣであり；トリプトファンはＴｒｐまたはＷであり；アルギニンはＡｒｇまたはＲであり；グリシンはＧｌｙまたはＧである。アミノ酸のさらなる説明については、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．Ｅ．によるＰｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８３を参照されたい。

哺乳動物および抗酸菌の脂質は、ヒトＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃおよびＣＤ１ｄによって提示されることが知られている。海綿Ａｇｅｌａｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎｕｓにみられる脂質であるα−ガラクトシルセラミドは最も広く研究されているＣＤ１ｄのリガンドである。α−ＧａｌＣｅｒによるマウス脾臓細胞のインビトロ刺激により、ＮＫＴの増殖ならびにそれぞれＴ_Ｈ１型応答およびＴ_Ｈ２型応答であるＩＦＮ−_□およびＩＬ−４の両方の生成がもたらされることが示されている。マウス試験では、α−ＧａｌＣｅｒを有する未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）によって細胞が速やかに活性化され得ること、および活性化されたｉＮＫＴがさらにＤＣの完全な成熟を誘導し得ることが示されている。

α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントの使用

一態様において、本発明により、哺乳動物において抗原の免疫原性を増大させるための方法であって、前記抗原を、式１のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバント組成物とともに共同的に投与することを含む方法を提供する。本発明によれば、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）をアジュバントとして使用することにより、抗原によって誘導される防御免疫の向上および／またはその持続期間の延長がもたらされる。例えば、本明細書に開示しているように、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）と、腫瘍抗原もしくはウイルス抗原のＴ細胞もしくはＢ細胞エピトープに相当するペプチドまたはこのような抗原を発現するＤＮＡ構築物との共同的投与により、抗原特異的免疫応答が向上する。

本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントは任意の抗原と、特に、感染因子または腫瘍に由来する抗原と共同的に投与され得る。

マウスおよびヒトにおける免疫刺激効果はどちらも、ＣＤ１ｄ分子の発現に依存し得、ＮＫＴ細胞によって媒介される。実際、本発明では、アジュバント活性は、少なくとも一部において、ＮＫＴ媒介性の抗原特異的Ｔｈ１型Ｔ細胞応答およびＣＤ８＋ Ｔ細胞（またはＴｃ）応答を向上および／または長引かせること能力によるものであることが示されている。

免疫療法の観点から、ＮＫＴ細胞系のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）による活性化は、その他の機構と比べて相違する利点を有するようであり、それは以下の理由のためである：（ａ）活性化ＮＫＴ細胞の細胞傷害性レベルが非常に高く、多種多様な腫瘍細胞または感染細胞に対して有効である；（ｂ）α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）によるＮＫＴ細胞の活性化は、個体間で単型であるＣＤ１ｄ分子に完全に依存性であり（Ｐｏｒｃｅｌｌｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５９：１−９８，１９９５）、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントが、ＭＨＣのハプロタイプに関係なく、すべての患者に利用され得ることを示す；（ｃ）ヒト患者のＤＣおよびＮＫＴの活性化の抗原提示機能は、免疫療法の前に、Ｖα１４ ＮＫＴ細胞状態をインジケータとして使用し、マウスにおけるインビボアッセイによって評価され得る。

本発明によれば、式１のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントと抗原は、２つの別々の製剤として、または同じ組成物の一部としてのいずれかで投与され得る。別々に投与される場合、アジュバントと抗原は逐次または同時のいずれかで投与され得る。本明細書に開示しているように、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントと抗原の同時投与が好ましく、一般的に、最も効率的な免疫刺激を得ることが可能になる。

本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントは、その免疫賦活活性を、複数の異なる抗原との組合せで発揮するものであるため、したがって予防適用および治療適用の両方に有用である。したがって、さらなる一態様において、本発明により、哺乳動物の疾患を処置するための予防方法および／または治療方法であって、前記哺乳動物に、抗原と、式１のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントを共同的に投与することを含む方法を提供する。この方法は、例えば、種々の感染に対する防御および／または種々の感染の処置ならびに種々の新生物性疾患の処置に有用であり得る。

本発明の免疫原性向上方法は感染に対処するために使用され得、感染としては、限定されないが、寄生虫感染（例えば、プラスモジウム属の種によって引き起こされるものなど）、ウイルス感染（例えば、インフルエンザウイルス、白血病ウイルス、免疫不全ウイルス（ＨＩＶなど）、乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポックスウイルス、ムンプスウイルス、サイトメガロウイルス［ＣＭＶ］、エプスタイン−バーウイルスによって引き起こされるものなど）、細菌感染（例えば、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、淋菌、ボレリア属、シュードモナス属によって引き起こされるものなど）、および真菌感染（例えば、カンジダ、白癬菌、ピティロスポリウムによって引き起こされるものなど）が挙げられる。

本発明の方法はまた、種々のがんの処置にも有用であり、がんとしては、限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、リンパ腫、白血病、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫が挙げられる。

本明細書においてさらに開示するように、本発明の免疫原性向上方法の最大効率は、抗原と、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントを同時に投与した場合に得られる。

本発明の方法は他の処置と共に使用され得る。例えば、腫瘍特異的抗原と本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントを使用する抗がん処置は、化学療法および／または放射線療法および／またはＩＬ−１２処置と併用して使用され得る。α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントを含む抗ウイルスワクチンはＩＦＮ−α処置と併用して使用され得る。

α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含有している医薬組成物およびワクチン組成物

本発明の方法との関連において、免疫原性有効量の抗原およびα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含む免疫原性有効量のアジュバントならびに、任意選択でさらなる免疫賦活薬、担体または賦形剤（好ましくは、すべて、薬学的に許容され得るもの）を含む医薬組成物およびワクチン組成物も提供する。前記抗原とアジュバントは、単一の組成物として製剤化されたもの、または２つの別々の組成物（これは同時もしくは逐次投与され得る）として製剤化されたもののいずれかであり得る。

本発明のアジュバントは、スフィンゴ糖脂質の類型、具体的にはα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）の類型に属する化合物を含むものであり、該化合物は一般式１で表され得るものである：

本発明の免疫原性（例えば、ワクチン）組成物に使用される抗原は、真核生物細胞（例えば、腫瘍、寄生虫、真菌）、細菌細胞、ウイルス粒子、またはその任意の一部分（例えば、弱毒化されたウイルス粒子もしくはウイルス成分）に由来するものであり得る。免疫原性応答が指令される物質の抗原性が不充分である場合、該物質は、さらにアルブミンまたはハプテンなどの担体分子に標準的な共有結合手法を用いて、例えば、いくつかの市販の試薬キットの１つを用いてコンジュゲートされ得る。

本発明の好ましい腫瘍抗原の例としては、腫瘍特異的タンパク質、例えば、ＥｒｂＢ受容体、メランＡ［ＭＡＲＴ１］、ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５およびＴＲＰ−２（黒色腫のもの）；ＭＡＧＥ−１およびＭＡＧＥ−３（膀胱癌、頭頸部癌および非小細胞癌のもの）；ＨＰＶ ＥＧおよびＥ７ タンパク質（子宮頸がんのもの）；ムチン［ＭＵＣ−１］（乳がん、膵臓がん、結腸がんおよび前立腺がんのもの）；前立腺特異的抗原［ＰＳＡ］（前立腺がんのもの）；癌胎児性抗原［ＣＥＡ］（結腸がん、乳がん、および消化管がんのもの）ならびにＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＢＡＧＥ−１、ＣＡＧＥ−１，２，８、ＣＡＧＥ−３〜７、ＬＡＧＥ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＮＡ−８８、ＧｎＴＶおよびＴＲＰ２−ＩＮＴ２などの共有された腫瘍特異的抗原が挙げられる。対象の抗原は任意の動物またはヒトの病原体または腫瘍から誘導され得るため、前述の抗原の列挙は例示的であることを意図している

具体的な一実施形態では、本発明の抗原は、前記抗原を発現する組換えウイルスによって提示され得るものである。好ましくは、ウイルスは、組換えアデノウイルス、組換えポックスウイルスおよび組換えシンドビスウイルスからなる群より選択される。

開示した組成物中、抗原およびα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントはどちらも免疫原性有効量で存在させる。具体的な各抗原に対して、最適な免疫原性有効量は、実験により（所与の患者の具体的な特徴および／または処置の型を考慮して）決定するのがよい。一般的に、この量は、体重１ｋｇあたり抗原が０．１μｇ〜１００ｍｇの範囲である。本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの場合は、最適な免疫原性有効量は、好ましくは体重１ｋｇあたりアジュバントが１０〜１００μｇの範囲である。

また、本発明により、少なくとも１種類の抗原と式１のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントとを含むワクチン組成物の調製方法を提供し、前記方法は、該アジュバントと該抗原、ならびに任意選択で１種類またはそれより多くの生理学的に許容され得る担体および／または賦形剤および／または補助物質を混合することを含むものである。

製剤および投与

本発明により、本発明の治療薬（単一の組成物または２つの別々の組成物（これは同時もしくは逐次投与され得る）のいずれかとしての抗原およびα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバント）を含有している医薬製剤およびワクチン製剤を提供し、該製剤は、上記の感染性または新生物性疾患の処置および予防のための抗原特異的防御免疫応答を誘起させるための投与に適したものである。本発明の組成物は任意の慣用的な様式で、１種類またはそれより多くの生理学的に許容され得る担体または賦形剤を用いて製剤化され得る。したがって、抗原および／または式１のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントは、経皮送達または経粘膜投与、例えば限定されないが、経口、口腔内、鼻腔内、経眼、経膣、経直腸、脳内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮膚切除（例えば、バイファケイテッドニードルを用いて皮膚の表層を引っ掻くこと）による皮下経路、吸入（経肺）あるいは吹送（口から、もしくは鼻からのいずれか）による投与のため、または抗原提示細胞へのエキソビボ投与の後、被験体への該細胞の投与のため、または任意の他の標準的な経路での免疫処置のために製剤化され得る。

好ましくは、本発明の免疫原性製剤は、非経口で、すなわち、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、真皮下（ｓ．ｄ．）もしくは皮内（ｉ．ｄ．）投与、直接注射（例えば、ボーラス注射、連続輸注により）、または遺伝子銃（例えば、ベクターワクチン（ネイキッドＤＮＡもしくはＲＮＡなど）を被験体に投与するため）によって送達され得る。注射用の製剤は単位投薬形態で、例えばアンプルまたは反復用量容器内に、保存料を添加して提示され得る。該組成物は、油性または水性ビヒクル中の賦形剤、懸濁剤、液剤または乳剤などの形態であり得、製剤化薬剤、例えば、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤が含有され得る。あるいはまた、活性成分は、使用前に適当なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水で再構成するための粉末形態であってもよい。

また、本発明では種々の粘膜ワクチン接種ストラテジーが想定される。ワクチンの局所送達によって粘膜が標的化され得るが、免疫原性組成物を粘膜に送達するための種々のストラテジーが使用されている。例えば、具体的な一実施形態では、免疫原性ポリペプチドまたはベクターワクチンは、コレラ毒素、例えばコレラ毒素Ｂまたはコレラ毒素Ａ／Ｂキメラと混合物された状態で、または該毒素とのコンジュゲートもしくはキメラ融合タンパク質として投与され得る（例えば、Ｈａｊｉｓｈｅｎｇａｌｌｉｓ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：４３２２−３２，１９９５；ＪｏｂｌｉｎｇおよびＨｏｌｍｅｓ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．，６０：４９１５−２４，１９９２；ＬｅｂｅｎｓおよびＨｏｌｍｇｒｅｎ，Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ Ｓｔａｎｄ ８２：２１５−２７，１９９４参照）。別の実施形態では、易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）との混合物が粘膜ワクチン接種用に調製され得る。他の粘膜免疫処置ストラテジーとしては、マイクロカプセル内への免疫原の封入（例えば、米国特許第５，０７５，１０９号；同第５，８２０，８８３号および同第５，８５３，７６３号参照）ならびに免疫増強性膜質担体の使用（例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ９８／０５５８参照）が挙げられる。経口投与される免疫原の免疫原性は、赤血球（ｒｂｃ）またはｒｂｃゴーストを使用すること（例えば、米国特許第５，６４３，５７７号参照）、またはブルータング抗原を使用すること（例えば、米国特許第５，６９０，９３８号参照）により向上させることができる。また、標的化対象免疫原の全身投与によっても粘膜免疫処置が施され得る（米国特許第５，５１８，７２５号参照）。また、粘膜組織内で発現させるための遺伝子を送達する種々のストラテジー、例えば、キメラライノウイルス（例えば、米国特許第５，７１４，３７４号参照）、アデノウイルス、ワクシニアウイルスの使用、または核酸の特異的標的化（例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ９７／０５２６７参照）が使用され得る。

経口投与のためには、本発明の製剤は慣用的な手段により、薬学的に許容され得る賦形剤、例えば、結合剤（例えば、アルファー化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースもしくはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクもしくはシリカ）；崩壊剤（例えば、イモデンプンもしくはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を用いて調製される、例えば錠剤またはカプセル剤の形態であり得る。錠剤を当該技術分野でよく知られた方法によってコーティングしもよい。また、本発明の組成物を、例えばポリグリコール酸／乳酸（ＰＧＬＡ）で製作されたミクロスフェアまたはマイクロカプセル内に導入してもよい（米国特許第５，８１４，３４４号；同第５，１００，６６９号および同第４，８４９，２２２号；ＰＣＴ公開公報番号ＷＯ９５／１１０１０およびＷＯ９３／０７８６１参照）。経口投与のための液状調製物は、例えば、液剤、シロップ剤、乳剤もしくは懸濁剤の形態であり得るか、または使用前に水または他の適当なビヒクルで再構成するための乾燥製剤品として提示され得る。かかる液状調製物は慣用的な手段により、薬学的に許容され得る添加剤、例えば、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水添食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分別植物油）；および保存料（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）を用いて調製され得る。また、該調製物に適宜、バッファー塩、フレーバー剤、着色剤および甘味剤を含有させてもよい。経口投与のための調製物は、活性化合物の制御放出がもたらされるように好適に製剤化され得る。

吸入による投与のためには、本発明による治療薬は、加圧パックまたはネブライザーからのエーロゾルスプレー提示の形態で、適当な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロ−メタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当なガスの使用を伴って簡便に送達され得る。加圧エーロゾル剤の場合、投薬単位は、定量を送達するための弁を設けることにより決定され得る。吸入器または吹送器における使用のための例えばゼラチン製のカプセル剤およびカートリッジは、該化合物と適当な粉末基剤（ラクトースもしくはデンプンなど）の粉末ミックスを含有させて製剤化され得る。

また、本発明の組成物は、例えば、慣用的な坐剤基剤（ココアバターまたは他のグリセリドなど）を含有させた坐剤または停留注腸剤などの経直腸組成物に製剤化され得る。

また、先に記載の製剤の他に、該組成物をデポー調製物として製剤化してもよい。かかる長期持続性製剤は、埋め込み（例えば、皮下もしくは筋肉内）または筋肉内注射によって投与され得る。したがって、例えば、該化合物は、適当な高分子物質もしくは疎水性物質を用いて（例えば、許容され得る油中の乳剤として）、またはイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）製剤化され得る。

本明細書に開示しているように、抗原および／またはα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントは、薬学的に許容され得、活性成分と適合性である賦形剤と混合され得る。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、滅菌等張性水性バッファーなど、およびその組合せである。また、所望により、該調製物にはまた、医薬組成物またはワクチンの有効性を向上させる少量の補助物質、例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤および／または免疫賦活薬（例えば、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）に加えて別のアジュバント）を含めてもよい。本発明の組成物の有効性を向上させ得るさらなる免疫賦活薬の非非限定的な例としては、免疫賦活性の免疫増強性または炎症誘発性サイトカイン、リンホカインもしくはケモカインまたはこれらをコードしている核酸が挙げられる（具体例としては、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、顆粒球−マクロファージ（ＧＭ）コロニー刺激因子（ＣＳＦ）および他のコロニー刺激因子、マクロファージ炎症性因子、Ｆｌｔ３リガンドが挙げられ、免疫賦活性サイトカインのさらなる例は、タイトル「定義」のセクションを参照のこと）。このようなさらなる免疫賦活分子は、タンパク質として、または該分子の発現をコードしているベクターの発現によって全身もしくは局所に送達され得る。抗原とα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの送達のための上記の手法はまた、さらなる免疫賦活分子の送達にも使用され得る。

また、本発明により、本発明の免疫原性製剤の成分のうちの１種類またはそれより多くが充填された１つまたはそれより多くの容器を備えた医薬パックまたはキットを提供する。関連する一実施形態において、本発明により、少なくとも１種類の抗原およびα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントを含む医薬組成物またはワクチン組成物の調製のためのキットを提供し、前記キットは、第１の容器に該抗原、および第２の容器に該アジュバント、ならびに任意選択で、該抗原と該アジュバントを混合するため、および／または該組成物の投与のための使用説明書を備えたものである。また、キットの各容器に任意選択で、１種類またはそれより多くの生理学的に許容され得る担体および／または賦形剤および／または補助物質を含めてもよい。かかる容器（１つまたは複数）に、医薬品または生物製剤品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められたフォームの通知書を随伴させてもよく、該通知書は、ヒト投与に対する製造、使用または販売の該機関による承認が反映されている。

該組成物は、所望により、活性成分（すなわち、抗原および／またはα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバント）を含有させた１つまたはそれより多くの単位投薬形態を含むものであり得るパックまたはディスペンサーデバイスで提示してもよい。パックは、例えば、金属またはプラスチックのホイルを備えたもの、例えばブリスターパックであり得る。パックまたはディスペンサーデバイスに投与のための使用説明書を付随させてもよい。また、適合性のある医薬用担体中に製剤化した本発明の組成物を調製し、適切な容器内に入れ、適応病状の処置のためにラベル表示してもよい。

有効用量および安全性評価

本発明の方法によれば、本明細書に記載の医薬組成物およびワクチン組成物は患者に免疫原性有効用量で、好ましくは毒性は最小限で投与される。タイトル「定義」のセクションに記載のように、開示した製剤の「免疫原性有効用量」または「治療有効用量」は、有効な免疫応答が処置対象被験体においてもたらされるのに充分であり、したがって健康面の有益性が前記被験体にもたらされるのに充分な抗原および／またはα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの量をいう。

当該技術分野で充分に確立された方法論（例えば、生物製剤評価センター（Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）（米食品医薬品局）と米国立アレルギー感染病研究所の共同作業における新規なアジュバントを含有するいくつかのワクチン製剤の評価に関する報告［Ｇｏｌｄｅｎｔｈａｌら，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ．ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，１９９３、９：５４５−９］参照）に従い、本発明の化合物および組成物の有効用量および毒性はまず、小動物モデル（例えば、マウス）を用いた前臨床試験において決定され、小動物モデルは、抗原およびα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントの両方が免疫原性であることがわかっており、ヒト臨床試験に提案されるものと同じ経路によって再現可能に免疫処置され得るものである。具体的には、本発明の方法に使用される任意の医薬組成物またはワクチンについて、治療有効用量は、最初に動物モデルから、ＩＣ_５０（すなわち、症状の最大阻害の半分が達成される試験化合物濃度）を含む循環血漿濃度範囲が得られるように推定され得る。次いで、動物系で作成した用量応答曲線を用いて、ヒトでの最初の臨床試験のための試験用量を決定する。各組成物の安全性の測定において、免疫処置の用量および頻度は、臨床試験における使用に予測されるものに応じたもの、あるいはそれを超えるものであるのがよい。

本明細書に開示しているように、本発明の組成物中のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）、抗原（１種類または複数種）および他の成分の用量は、連続的または断続的に投与される用量が、試験動物での結果および患者の個々の病状を考慮した一定量を超えないことが確実になるように決定される。具体的な用量は、当然、投薬手順、患者または被験体動物の条件、例えば、年齢、体重、性別、感受性、食事、投薬期間、併用薬物、疾患の重篤度に応じて異なる。ある条件下における適切な用量および投薬期間は、上記の指標に基づいた試験によって決定され得、医師の判断および各患者の状況に応じて標準的な臨床手法に従って決定されるのがよい。これとの関連において、抗原の用量は一般的に０．１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、該抗原に対する免疫応答を増大させるのに必要とされるα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの用量は一般的に１０〜１００μｇ／ｋｇ体重の範囲である。

本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有免疫原性組成物の毒性および治療有効性は、標準的な製薬手順により実験動物において、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％に対して致死性の用量）およびＥＤ_５０（集団の５０％において治療有効な用量）を測定することにより測定され得る。毒性効果と治療効果の用量比は治療指数であり、ＬＤ_５／ＥＤ_５０比で表示され得る。大きな治療指数を示す組成物が好ましい。毒性副作用を示す治療薬が使用される場合があり得るが（例えば、重度形態のがんまたは生命を脅かす感染を処置する場合）、他の組織および器官に対する潜在的ダメージを最小限にし、それにより副作用を低減させるために、かかる免疫原性組成物を特定の部位（例えば、免疫応答、腫瘍または感染因子の器官補助型複製を媒介するリンパ球系組織）に標的化させる送達系が設計されるように注意を払うべきである。本明細書に開示しているように（背景のセクションおよび実施例も参照のこと）、本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントは、比較的低用量（例えば、１０〜１００μｇのアジュバント／ｋｇ体重）で高度に免疫刺激性であるだけでなく、低毒性を有し、有意な副作用をもたらさないものである。

上記に明示したように、動物試験で得られたデータはヒトにおける使用のための投薬量範囲を設定するのに使用され得る。ヒトにおける本発明のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有組成物の治療有効投薬量は、好ましくは、ＥＤ_５０が含まれ、毒性がほとんどまたはまったくない循環濃度範囲内である。該投薬量はこの範囲内で、使用される投薬形態および使用される投与経路に応じて異なり得る。理想的には、単回用量を使用するのがよい。

化学構造に関する定義 具体的な官能基および化学用語の定義を以下にさらに詳細に記載する。化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ式，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，第７５版（中表紙）に従って特定されるものであり、具体的な官能基は、これに記載されたとおりに一般的に定義している。さらに、有機化学の一般原則ならびに具体的な官能性部分および反応性は、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；ＳｍｉｔｈおよびＭａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第５版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９；ならびにＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。

本明細書に記載の化合物は、１つまたはそれより多くの不斉中心を含み、したがって種々の異性体形態で、例えば、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーで存在し得るものであってもよい。例えば、本明細書に記載の化合物は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは幾何異性体の形態であってもよく、立体異性体の混合物、例えば、ラセミ混合物および１種類またはそれより多くの立体異性体を富化させた混合物の形態であってもよい。異性体は、混合物から当業者に知られた方法によって、例えば、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および晶出によって単離され得；あるいは好ましい異性体を不斉合成によって調製してもよい。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓら，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；およびＷｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ編，Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ，ＩＮ １９７２）を参照のこと。本開示はさらに、実質的に他の異性体を含んでいない個々の異性体としての、あるいはまた種々の異性体の混合物としての本明細書に記載の化合物を包含している。

値の範囲を記載している場合、これは、各値および該範囲内の下位範囲を包含していることを意図する。例えば、「Ｃ_１〜６」はＣ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_１〜６、Ｃ_１〜５、Ｃ_１〜４、Ｃ_１〜３、Ｃ_１〜２、Ｃ_２〜６、Ｃ_２〜５、Ｃ_２〜４、Ｃ_２〜３、Ｃ_３〜６、Ｃ_３〜５、Ｃ_３〜４、Ｃ_４〜６、Ｃ_４〜５およびＣ_５〜６を包含していることを意図する。

「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分枝状の飽和炭化水素基である原子団（「Ｃ_１〜２０アルキル」）をいう。一部の実施形態では、アルキル基は１〜１０個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜１０アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜９個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜９アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜８個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜８アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜７個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜７アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜６個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜６アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜５個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜５アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜４個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜４アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜３個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜３アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１〜２個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１〜２アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は１個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_１アルキル」）である。一部の実施形態では、アルキル基は２〜６個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_{２〜６アルキル}」）である。Ｃ_１〜６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ_１）、エチル（Ｃ_２）、ｎ−プロピル（Ｃ_３）、イソ−プロピル（Ｃ_３）、ｎ−ブチル（Ｃ_４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ_４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ_４）、イソ−ブチル（Ｃ_４）、ｎ−ペンチル（Ｃ_５）、３−ペンタニル（Ｃ_５）、アミル（Ｃ_５）、ネオペンチル（Ｃ_５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ_５）、ターシャリーアミル（Ｃ_５）およびｎ−ヘキシル（Ｃ_６）が挙げられる。アルキル基のさらなる例としてはｎ−ヘプチル（Ｃ_７）、ｎ−オクチル（Ｃ_８）などが挙げられる。特に指定のない限り、各場合のアルキル基は独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換アルキル」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換アルキル」）。一部の特定の実施形態では、アルキル基は非置換のＣ_１〜１０アルキル（例えば、−ＣＨ_３）である。一部の特定の実施形態では、アルキル基は置換型Ｃ_１〜１０アルキルである。

「アルケニル」は、２〜２０個の炭素原子、１つまたはそれより多くの炭素−炭素二重結合を有し、三重結合は有しない直鎖または分枝状の炭化水素基である原子団（「Ｃ_２〜２０アルケニル」）をいう。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜１０個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜１０アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜９個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜９アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜８個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜８アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜７個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜７アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜６個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜６アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜５個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜５アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜４個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜４アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２〜３個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜３アルケニル」）である。一部の実施形態では、アルケニル基は２個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２アルケニル」）である。１つまたはそれより多くの炭素−炭素二重結合は内部に存在していても（例えば、２−ブテニルの場合）、末端に存在していてもよい（例えば、１−ブテニルの場合）。Ｃ_２〜４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ_２）、１−プロペニル（Ｃ_３）、２−プロペニル（Ｃ_３）、１−ブテニル（Ｃ_４）、２−ブテニル（Ｃ_４）、ブタジエニル（Ｃ_４）などが挙げられる。Ｃ_２〜６アルケニル基の例としては、前述のＣ_２〜４アルケニル基ならびにペンテニル（Ｃ_５）、ペンタジエニル（Ｃ_５）、ヘキセニル（Ｃ_６）などが挙げられる。アルケニルのさらなる例としては、ヘプテニル（Ｃ_７）、オクテニル（Ｃ_８）、オクタトリエニル（Ｃ_８）などが挙げられる。特に指定のない限り、各場合のアルケニル基は独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換アルケニル」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換アルケニル」）。一部の特定の実施形態では、アルケニル基は非置換のＣ_２〜１０アルケニルである。一部の特定の実施形態では、アルケニル基は置換型Ｃ_２〜１０アルケニルである。

「アルキニル」は、２〜２０個の炭素原子、１つまたはそれより多くの炭素−炭素三重結合、および任意選択で１つまたはそれより多くの二重結合を有する直鎖または分枝状の炭化水素基である原子団（「Ｃ_２〜２０アルキニル」）をいう。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜１０個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜１０アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜９個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜９アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜８個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜８アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜７個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜７アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜６個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜６アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜５個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜５アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜４個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜４アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２〜３個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２〜３アルキニル」）である。一部の実施形態では、アルキニル基は２個の炭素原子を有するもの（「Ｃ_２アルキニル」）である。１つまたはそれより多くの炭素−炭素三重結合は内部に存在していても（例えば、２−ブチニルの場合）、末端に存在していてもよい（例えば、１−ブチニルの場合）。Ｃ_２〜４アルキニル基の例としては、限定されないが、エチニル（Ｃ_２）、１−プロピニル（Ｃ_３）、２−プロピニル（Ｃ_３）、１−ブチニル（Ｃ_４）、２−ブチニル（Ｃ_４）などが挙げられる。Ｃ_２〜６アルケニル基の例としては、前述のＣ_２〜４アルキニル基ならびにペンチニル（Ｃ_５）、ヘキシニル（Ｃ_６）などが挙げられる。アルキニルのさらなる例としては、ヘプチニル（Ｃ_７）、オクチニル（Ｃ_８）などが挙げられる。特に指定のない限り、各場合のアルキニル基は独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換アルキニル」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換アルキニル」）。一部の特定の実施形態では、アルキニル基は非置換のＣ_２〜１０アルキニルである。一部の特定の実施形態では、アルキニル基は置換型Ｃ_２〜１０アルキニルである。

「カルボシクリル」または「炭素環式」は、非芳香族環系内に３〜１０個の環内炭素原子（「Ｃ_３〜１０カルボシクリル」）およびゼロ個のヘテロ原子を有する非芳香族の環状炭化水素基である原子団をいう。一部の実施形態では、カルボシクリル基は３〜８個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_３〜８カルボシクリル」）である。一部の実施形態では、カルボシクリル基は３〜６個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_３〜６カルボシクリル」）である。一部の実施形態では、カルボシクリル基は３〜６個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_３〜６カルボシクリル」）である。一部の実施形態では、カルボシクリル基は５〜１０個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_５〜１０カルボシクリル」）である。例示的なＣ_３〜６カルボシクリル基としては、限定されないが、シクロプロピル（Ｃ_３）、シクロプロペニル（Ｃ_３）、シクロブチル（Ｃ_４）、シクロブテニル（Ｃ_４）、シクロペンチル（Ｃ_５）、シクロペンテニル（Ｃ_５）、シクロヘキシル（Ｃ_６）、シクロヘキセニル（Ｃ_６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ_６）などが挙げられる。例示的なＣ_３〜８カルボシクリル基としては、限定されないが、前述のＣ_３〜６カルボシクリル基ならびにシクロヘプチル（Ｃ_７）、シクロヘプテニル（Ｃ_７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ_７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ_７）、シクロオクチル（Ｃ_８）、シクロオクテニル（Ｃ_８）、３８イドロキシ［２．２．１］ヘプタニル（Ｃ_７）、３８イドロキシ［２．２．２］オクタニル（Ｃ_８）などが挙げられる。例示的なＣ_３〜１０カルボシクリル基としては、限定されないが、前述のＣ_３〜８カルボシクリル基ならびにシクロノニル（Ｃ_９）、シクロノネニル（Ｃ_９）、シクロデシル（Ｃ_１０）、シクロデセニル（Ｃ_１０）、オクタヒドロ−１Ｈ−インデニル（Ｃ_９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ_１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ_１０）などが挙げられる。前述の例に示したように、一部の特定の実施形態では、カルボシクリル基は単環式（「単環式カルボシクリル」）または縮合、橋絡もしくはスピロ環系、例えば二環式の系を含むもの（「二環式カルボシクリル」）のいずれかであり、飽和型であっても部分不飽和であってもよい。「カルボシクリル」にはまた、上記に定義した炭素環式の環が１つまたはそれより多くのアリールまたはヘテロアリール基と縮合しており、結合点が該炭素環式の環上に存在し、かかる場合、炭素数は該炭素環式の環系の指定炭素数に確保される環系も包含される。特に指定のない限り、各場合のカルボシクリル基は独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換カルボシクリル」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換カルボシクリル」）。一部の特定の実施形態では、カルボシクリル基は非置換のＣ_３〜１０カルボシクリルである。一部の特定の実施形態では、カルボシクリル基は置換型Ｃ_３〜１０カルボシクリルである。

一部の実施形態では、「カルボシクリル」は、３〜１０個の環内炭素原子を有する単環式の飽和カルボシクリル基（「Ｃ_３〜１０シクロアルキル」）である。一部の実施形態では、シクロアルキル基は３〜８個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_３〜８シクロアルキル」）である。一部の実施形態では、シクロアルキル基は３〜６個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_３〜６シクロアルキル」）である。一部の実施形態では、シクロアルキル基は５〜６個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_５〜６シクロアルキル」）である。一部の実施形態では、シクロアルキル基は５〜１０個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_５〜１０シクロアルキル」）である。Ｃ_５〜６シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル（Ｃ_５）およびシクロヘキシル（Ｃ_５）が挙げられる。Ｃ_３〜６シクロアルキル基の例としては、前述のＣ_５〜６シクロアルキル基ならびにシクロプロピル（Ｃ_３）およびシクロブチル（Ｃ_４）が挙げられる。Ｃ_３〜８シクロアルキル基の例としては、前述のＣ_３〜６シクロアルキル基ならびにシクロヘプチル（Ｃ_７）およびシクロオクチル（Ｃ_８）が挙げられる。特に指定のない限り、各場合のシクロアルキル基は独立して、非置換である（「非置換シクロアルキル」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。一部の特定の実施形態では、シクロアルキル基は非置換のＣ_３〜１０シクロアルキルである。一部の特定の実施形態では、シクロアルキル基は置換型Ｃ_３〜１０シクロアルキルである。

「ヘテロシクリル」または「複素環式」は、環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素、イオウ、ホウ素、リンおよびケイ素から独立して選択される３〜１０員の非芳香族環系である原子団（「３〜１０員のヘテロシクリル」）をいう。一部の特定の実施形態では、ヘテロ原子は、窒素、イオウおよび酸素から独立して選択される。１個またはそれより多くの窒素原子を含むヘテロシクリル基では、結合点は、結合価が許容される場合、炭素原子であっても窒素原子であってもよい。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）または縮合、橋絡もしくはスピロ環系、例えば二環式の系（「二環式ヘテロシクリル」）のいずれかであり得、飽和型であっても部分不飽和であってもよい。ヘテロシクリルである二環式の環系は、一方または両方の環に１個またはそれより多くのヘテロ原子を含むものであり得る。「ヘテロシクリル」にはまた、上記に定義した複素環式の環が１つもしくはそれより多くのカルボシクリル基と縮合しており、結合点が該カルボシクリル上もしくは該複素環式の環上のいずれかに存在する環系、または上記に定義した複素環式の環が１つもしくはそれより多くのアリールもしくはヘテロアリール基と縮合しており、結合点が該複素環式の環上に存在し、かかる場合、環構成員の数は該複素環式の環系の指定の環構成員の数に確保される環系も包含される。特に指定のない限り、各場合のヘテロシクリルは独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換ヘテロシクリル」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換ヘテロシクリル」）。一部の特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は非置換の３〜１０員のヘテロシクリルである。一部の特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は置換型の３〜１０員のヘテロシクリルである。

一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素、イオウ、ホウ素、リンおよびケイ素から独立して選択される５〜１０員の非芳香族環系（「５〜１０員のヘテロシクリル」）である。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素およびイオウから独立して選択される５〜８員の非芳香族環系（「５〜８員のヘテロシクリル」）である。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素およびイオウから独立して選択される５〜６員の非芳香族環系（「５〜６員のヘテロシクリル」）である。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素およびイオウから選択される１〜３個の環内ヘテロ原子を有するものである。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素およびイオウから選択される１〜２個の環内ヘテロ原子を有するものである。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素およびイオウから選択される１個の環内ヘテロ原子を有するものである。

１個のヘテロ原子を含む例示的な３員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、アジリジニル（ａｚｉｒｄｉｎｙｌ）、オキシラニルおよびチオレニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な４員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼチジニル、オキセタニルおよびチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリルおよびピロリル−２，５−ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、ジオキソラニル、オキサスルフラニル、ジスルフラニルおよびオキサゾリジン−２−オンが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアゾリニル、オキサジアゾリニルおよびチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニルおよびチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニルおよびジオキサニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアジンアニル（ｔｒｉａｚｉｎａｎｙｌ）が挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な７員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼパニル、オキセパニルおよびチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な８員のヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゾカニル、オキセカニルおよびチオカニルが挙げられる。Ｃ_６アリール環と縮合している例示的な５員のヘテロシクリル基（本明細書において５，６−二環式複素環式の環とも称する）としては、限定されないが、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリノニルなどが挙げられる。アリール環と縮合している例示的な６員のヘテロシクリル基（本明細書において６，６−二環式複素環式の環とも称する）としては、限定されないが、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどが挙げられる。

「アリール」は、芳香族環系内に６〜１４個の環内炭素原子およびゼロ個のヘテロ原子を有する単環式または多環式（例えば、二環式もしくは三環式）の４ｎ＋２芳香族環系である（例えば、環状アレイ内で共有された６、１０または１４個のπ電子を有する）原子団（「Ｃ_６〜１４アリール」）をいう。一部の実施形態では、アリール基は６個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_６アリール」；例えば、フェニル）である。一部の実施形態では、アリール基は１０個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_１０アリール」；例えば、ナフチル（１−ナフチルおよび２−ナフチルなど））である。一部の実施形態では、アリール基は１４個の環内炭素原子を有するもの（「Ｃ_１４アリール」；例えば、アントラシル）である。「アリール」にはまた、上記に定義したアリール環が１つまたはそれより多くのカルボシクリルまたはヘテロシクリル基と縮合しており、原子団または結合点が該アリール環上に存在し、かかる場合、炭素原子数は該アリール環系の指定の炭素原子数に確保される環系も包含される。特に指定のない限り、各場合のアリール基は独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換アリール」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換アリール」）。一部の特定の実施形態では、アリール基は非置換のＣ_６〜１４アリールである。一部の特定の実施形態では、アリール基は置換型Ｃ_６〜１４アリールである。

「アリールアルキル」は、本明細書に定義したアルキルおよびアリールのサブセットであり、任意選択的に置換されたアリール基で置換された任意選択的に置換されたアルキル基をいう。一部の特定の実施形態では、アラルキルは任意選択的に置換されたベンジルである。一部の特定の実施形態では、アラルキルはベンジルである。一部の特定の実施形態では、アラルキルは任意選択的に置換されたフェネチルである。一部の特定の実施形態では、アラルキルはフェネチルである。

「ヘテロアリール」は、芳香族環系内に環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を備えており、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素およびイオウから独立して選択される５〜１０員の単環式または二環式の４ｎ＋２芳香族環系である（例えば、環状アレイ内で共有された６または１０個のπ電子を有する）原子団（「５〜１０員のヘテロアリール」）をいう。１個またはそれより多くの窒素原子を含むヘテロアリール基では、結合点は、結合価が許容される場合、炭素原子であっても窒素原子であってもよい。ヘテロアリールである二環式の環系は、一方または両方の環に１個またはそれより多くのヘテロ原子を含むものであり得る。「ヘテロアリール」には、上記に定義したヘテロアリール環が１つまたはそれより多くのカルボシクリルまたはヘテロシクリル基と縮合しており、結合点が該ヘテロアリール環上に存在し、かかる場合、環構成員の数は該ヘテロアリール環系の指定の環構成員の数に確保される環系が包含される。「ヘテロアリール」にはまた、上記に定義したヘテロアリール環が１つまたはそれより多くのアリール基と縮合しており、結合点が該アリール上または該ヘテロアリール環上のいずれかに存在し、かかる場合、環構成員の数は該縮合（アリール／ヘテロアリール）環系の指定の環構成員の数である環系も包含される。一方の環がヘテロ原子を含まないものである二環式のヘテロアリール基（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）は、結合点がいずれかの環上、すなわち、ヘテロ原子を有する環上（例えば、２−インドリル）またはヘテロ原子を含んでいない環上（例えば、５−インドリル）のいずれかであり得る。

一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香族環系内に環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を備えており、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素およびイオウから独立して選択される５〜１０員の芳香族環系（「５〜１０員のヘテロアリール」）である。一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香族環系内に環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を備えており、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素およびイオウから独立して選択される５〜８員の芳香族環系（「５〜８員のヘテロアリール」）である。一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香族環系内に環内炭素原子および１〜４個の環内ヘテロ原子を備えており、該ヘテロ原子の各々が窒素、酸素およびイオウから独立して選択される５〜６員の芳香族環系（「５〜６員のヘテロアリール」）である。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素およびイオウから選択される１〜３個の環内ヘテロ原子を有するものである。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素およびイオウから選択される１〜２個の環内ヘテロ原子を有するものである。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素およびイオウから選択される１個の環内ヘテロ原子を有するものである。特に指定のない限り、各場合のヘテロアリール基は独立して任意選択的に置換されている、すなわち、非置換である（「非置換ヘテロアリール」）か、または１つもしくはそれより多くの置換基で置換されている（「置換ヘテロアリール」）。一部の特定の実施形態では、ヘテロアリール基は非置換の５〜１４員のヘテロアリールである。一部の特定の実施形態では、ヘテロアリール基は置換型の５〜１４員のヘテロアリールである。

１個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、限定されないが、ピロリル、フラニルおよびチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、限定されないが、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルおよびイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、限定されないが、トリアゾリル、オキサジアゾリルおよびチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、限定されないが、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリダジニル、ピリミジニルおよびピラジニルが挙げられる。３個または４個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロアリール基としては、限定されないが、それぞれトリアジニルおよびテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な７員のヘテロアリール基としては、限定されないが、アゼピニル、オキセピニルおよびチエピニルが挙げられる。例示的な５，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニルおよびプリニルが挙げられる。例示的な６，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニルおよびキナゾリニルが挙げられる。

「ヘテロアラルキル」は、本明細書に定義したアルキルおよびヘテロアリールのサブセットであり、任意選択的に置換されたヘテロアリール基で置換された任意選択的に置換されたアルキル基をいう。

二価の橋かけ基である本明細書に定義したアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、さらに接尾辞−エン（−ｅｎｅ）を用いて呼称される（例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、カルボシクリレン、ヘテロシクリレン、アリーレンおよびヘテロアリーレン）。

本明細書で用いる場合、用語「任意選択的に置換された」は、置換されている部分または非置換の部分をいう。

本明細書に定義したアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、任意選択的に置換されたもの（例えば、「置換」もしくは「非置換の」アルキル、「置換」もしくは「非置換の」アルケニル、「置換」もしくは「非置換の」アルキニル、「置換」もしくは「非置換の」カルボシクリル、「置換」もしくは「非置換の」ヘテロシクリル、「置換」もしくは「非置換の」アリールまたは「置換」もしくは「非置換の」ヘテロアリール基）である。一般に、用語「置換された」は、用語「任意選択的に」が前に記載されていようとそうでなかろうと、基（例えば、炭素原子または窒素原子）上に存在する少なくとも１個の水素が許容可能な置換基で、例えば、置換が起こると安定な化合物（例えば、転位、環化、脱離または他の反応によるものなどの変換を自発発生的に起こさない化合物）をもたらす置換基で置き換えられていることを意味する。特に記載のない限り、「置換された」基は、該基の１つまたはそれより多くの置換可能な位置に置換基を有し、任意の所与の構造内の１つより多くの位置が置換されている場合、置換基は各位置において同じであるか、または異なっているかのいずれかである。用語「置換された」は、有機化合物の許容可能なあらゆる置換基での置換を包含していることを想定しており、本明細書に記載の置換基はいずれも安定な化合物の形成をもたらすものである。本発明では、安定な化合物を得るためのかかる任意のあらゆる組合せを想定している。本発明の解釈上、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基および／または該ヘテロ原子の結合価を満たし、安定な部分の形成をもたらす本明細書に記載の任意の適当な置換基を有するものであってもよい。

炭素原子における例示的な置換基としては、限定されないが、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−ＯＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_３ ^＋Ｘ⁻、−Ｎ（ＯＲ^ｃｃ）Ｒ^ｂｂ、−ＳＨ、−ＳＲ^ａａ、−ＳＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＨＯ、−Ｃ（ＯＲ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＯＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＮＲ^ｂｂＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＮＲ^ｂｂＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、−ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２ＯＲ^ａａ、−ＯＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、−Ｏｓｉ（Ｒ^ａａ）_３−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−ＯＰ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２、−ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３、−ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_３、−Ｂ（Ｒ^ａａ）_２、−Ｂ（ＯＲ^ｃｃ）_２、−ＢＲ^ａａ（ＯＲ^ｃｃ）、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリールおよび５〜１４員のヘテロアリールが挙げられ、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｄｄ基で置換されているか；または炭素原子上の２個の水素が、基＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、＝ＮＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、＝ＮＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、＝ＮＮＲ^ｂｂＳ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、＝ＮＲ^ｂｂもしくは＝ＮＯＲ^ｃｃで置き換えられており；各場合のＲ^ａａは独立して、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリールおよび５〜１４員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲ^ａａ基が連接されて３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成しており、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｄｄ基で置換されており；各場合のＲ^ｂｂは独立して、水素、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、−ＳＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｃｃ）_２、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリールおよび５〜１４員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲ^ｂｂ基が連接されて３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成しており、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｄｄ基で置換されており；各場合のＲ^ｃｃは独立して、水素、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリールおよび５〜１４員のヘテロアリールから選択される、または２つのＲ^ｃｃ基が連接されて３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成しており、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｄｄ基で置換されており；各場合のＲ^ｄｄは独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ^ｅｅ、−ＯＮ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_３ ^＋Ｘ⁻、−Ｎ（ＯＲ^ｅｅ）Ｒ^ｆｆ、−ＳＨ、−ＳＲ^ｅｅ、−ＳＳＲ^ｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−ＯＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＮＲ^ｆｆＣ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−ＮＲ^ｆｆＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＮＲ^ｆｆＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｆｆ）ＯＲ^ｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｒ^ｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）ＯＲ^ｅｅ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＮＲ^ｆｆＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２，−ＮＲ^ｆｆＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｅｅ、−ＯＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−Ｓｉ（Ｒ^ｅｅ）_３、−Ｏｓｉ（Ｒ^ｅｅ）_３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｅｅ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｅｅ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ｅｅ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ｅｅ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｅｅ）_２、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１０員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１０アリール、５〜１０員のヘテロアリールから選択され、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｇｇ基で置換されているか、または２つのＲ^ｄｄ置換基が連接されて＝Ｏもしくは＝Ｓを形成していてもよく；各場合のＲ^ｅｅは独立して、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、Ｃ_６〜１０アリール、３〜１０員のヘテロシクリルおよび３〜１０員のヘテロアリールから選択され、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｇｇ基で置換されており；各場合のＲ^ｆｆは独立して、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１０員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲ^ｆｆ基が連接されて３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成しており、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｇｇ基で置換されており；各場合のＲ^ｇｇは独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、
−Ｎ_３、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣ_１〜６アルキル、−ＯＮ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_３ ^＋Ｘ⁻、−ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）_２ ^＋Ｘ⁻、−ＮＨ_２（Ｃ_１〜６アルキル）^＋Ｘ⁻、−ＮＨ_３ ^＋Ｘ⁻、−Ｎ（ＯＣ_１〜６アルキル）（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｎ（ＯＨ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨ（ＯＨ）、−ＳＨ、−ＳＣ_１〜６アルキル、−ＳＳ（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）ＯＣ_１〜６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＮＨＳＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＳＯ_２Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＳＯ_２ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＳＯ_２ＮＨ_２，−ＳＯ_２Ｃ_１〜６アルキル、−ＳＯ_２ＯＣ_１〜６アルキル、−ＯＳＯ_２Ｃ_１〜６アルキル、−ＳＯＣ_１〜６アルキル、−Ｓｉ（Ｃ_１〜６アルキル）_３、−Ｏｓｉ（Ｃ_１〜６アルキル）_３−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＣ_１〜６アルキル、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＣ_１〜６アルキル、−Ｐ（＝Ｏ）_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、Ｃ_６〜１０アリール、３〜１０員のヘテロシクリル、５〜１０員のヘテロアリールであるか；または２つのＲ^ｇｇ置換基が連接されて＝Ｏもしくは＝Ｓを形成していてもよく；ここで、Ｘ⁻は対イオンである。

「ハロ」または「ハロゲン」はフッ素（フルオロ，−Ｆ）、塩素（クロロ，−Ｃｌ）、臭素（ブロモ，−Ｂｒ）またはヨウ素（ヨード，−Ｉ）をいう。

「アシル」は、本明細書で用いる場合、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ，−ＣＨＯ、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａおよび−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ（ここで、Ｒ^ａａおよびＲ^ｂｂは本明細書に定義したとおりである）からなる群より選択される部分をいう。

窒素原子は、結合価が許容される場合、置換型であっても非置換であってもよく、第１級、第２級、第３級および第４級窒素原子が包含される。窒素原子における例示的な置換基としては、限定されないが、水素、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、−ＳＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｃｃ）_２、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリールおよび５〜１４員のヘテロアリールが挙げられるか、または窒素原子に結合している２つのＲ^ｃｃ基が連接されて３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成しており、このとき該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｄｄ基で置換されており、ここで、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂ、Ｒ^ｃｃおよびＲ^ｄｄは上記に定義したとおりである。

一部の特定の実施形態では、窒素原子上に存在する置換基は窒素保護基である（アミノ保護基とも称される）。窒素保護基としては、限定されないが、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、−ＳＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、Ｃ_１〜１０アルキル（例えば、アラルキル、ヘテロアラルキル）、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリールおよび５〜１４員のヘテロアリール基が挙げられ、該アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アラルキル、アリールおよびヘテロアリールの各々は独立して、０、１、２、３、４もしくは５つのＲ^ｄｄ基で置換されており、ここで、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂ、Ｒ^ｃｃおよびＲ^ｄｄは本明細書に定義したとおりである。窒素保護基は当該技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，第３版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９（引用により本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。

例えば、アミド基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ）などの窒素保護基としては、限定されないが、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトフェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド，（Ｎ’−ジチオベンジルオキシアシルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、およびｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミドが挙げられる。

カルバメート基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ）などの窒素保護基としては、限定されないが、メチルカルバメート、エチルカルバメート（ｃａｒｂａｍａｎｔｅ）、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオレニルメチル（ｆｌｕｏｒｏｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）カルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチル（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニルイル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトベンジルカルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチル（ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｏｅｔｈｙｌ）カルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシアシルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボルニル（ｉｓｏｂｏｒｙｎｌ）カルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、および２，４，６−トリメチルベンジルカルバメートが挙げられる。

スルホンアミド基（例えば、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ）などの窒素保護基としては、限定されないが、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドが挙げられる。

他の窒素保護基としては、限定されないが、フェノチアジニル−（１０）−アシル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノアシル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオアシル誘導体、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−ナフタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ヒドロキシル、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロオリン（ｐｙｒｏｏｌｉｎ）−３−イル）アミン、第４級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタアシルクロム−またはタングステン）アシル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミデート、ジベンジルホスホルアミデート、ジフェニルホスホルアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、および３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）が挙げられる。

一部の特定の実施形態では、酸素原子上に存在する置換基は酸素保護基である（ヒドロキシル保護基とも称される）。酸素保護基としては、限定されないが、−Ｒ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２が挙げられ、ここで、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂおよびＲ^ｃｃは本明細書に定義したとおりである。酸素保護基は当該技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，第３版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９（引用により本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。

例示的な酸素保護基としては、限定されないが、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４”−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４”−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、メチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、エチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、イソブチルカーボネート、ビニルカーボネート、アリルカーボネート、ｔ−ブチルカーボネート（ＢＯＣ）、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、ベンジルカーボネート、ｐ−メトキシベンジルカーボネート、３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、ｏ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、Ｓ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチル（ｎａｐｔｈｔｈｙｌ）カーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシアシル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、スルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、およびトシレート（Ｔｓ）が挙げられる。

一部の特定の実施形態では、イオウ原子上に存在する置換基はイオウ保護基である（チオール保護基とも称される）。イオウ保護基としては、限定されないが、−Ｒ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２が挙げられ、ここで、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂおよびＲ^ｃｃは本明細書に定義したとおりである。イオウ保護基は当該技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，第３版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９（引用により本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。

本明細書で用いる場合、用語「脱離基」は、合成有機化学の技術分野におけるその通常の意味で示しており、求核体で置き換えられ得る原子または基をいう。好適な脱離基の例としては、限定されないが、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、もしくはＩ（ヨウ素）など）、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルカンスルホニルオキシ、アレーンスルホニルオキシ、アルキル−カルボニルオキシ（例えば、アセトキシ）、アリールカルボニルオキシ、アリールオキシ、メトキシ、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミノ、ピキシル、およびハロホルメートが挙げられる。一部の場合では、脱離基はスルホン酸エステル、例えば、トルエンスルホネート（トシレート，−ＯＴｓ）、メタンスルホネート（メシレート，−ＯＭｓ）、ｐ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ（ブロシレート（ｂｒｏｓｙｌａｔｅ），−ＯＢｓ）、またはトリフルオロメタンスルホネート（トリフレート，−ＯＴｆ）である。一部の場合では、脱離基はブロシレート、例えば、ｐ−ブロモベンゼンスルホニルオキシである。一部の場合では、脱離基はノシレート（ｎｏｓｙｌａｔｅ）、例えば、２−ニトロベンゼンスルホニルオキシである。一部の実施形態では、脱離基はスルホネート含有基である。一部の実施形態では、脱離基はトシレート基である。また、脱離基はホスフィンオキシド（例えば、光延反応中に形成されるもの）または内部脱離基、例えば、エポキシドもしくは環状スルフェートであってもよい。脱離基の他の非限定的な例は水、アンモニア、アルコール、エーテル部分、チオエーテル部分、ハロゲン化亜鉛、マグネシウム部分、ジアゾニウム塩および銅部分である。

例示的なα−ＧａｌＣｅｒ類似体（ａ−Ｇｌｃを有するＧＳＬ）は、ワクチン接種された患者の免疫系を刺激することによりワクチンの効果を加速、向上、持続および／または修飾もしくは増大させるための免疫学的アジュバントとして使用される。例示的な実施の一例では、類似体Ｃ３４がアジュバントとして使用される。本明細書で用いる場合、用語「ミョウバンアジュバント」は免疫アジュバント活性を有するアルミニウム塩、例えば、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムなどをいう。このような例示的な薬剤は溶液中でタンパク質抗原を吸着して沈殿させ得るものである；生じた沈殿物により、接種部位に形成されたワクチン貯留部からの抗原の低速放出が助長されることによってワクチンの免疫原性が改善される。さらに、本明細書において想定されるアジュバントとしてはまた、適当な有機アジュバントおよび適当なビロソームも挙げられ得る。一部の特定の実施形態では、例示的な有機アジュバントとしては油系アジュバント、例えば、スクアレン、ＭＦ５９、ＱＳ−２１およびＡＳ０３が挙げられ得る。

本明細書で用いる場合、用語「抗腫瘍免疫療法活性薬剤」は、単独および／または他の相乗的薬剤との併用のいずれかで腫瘍を抑止、低減および／または消失させる本開示のワクチンによって生成する抗体をいう。

α−ガラクトシル基（αＧａｌ）およびアシル鎖上にフェニル環を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、マウスおよびヒトの両方のインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞の刺激に対してα−ガラクトシルセラミド（αＧａｌＣｅｒ）よりも強力であることが知られていた。マウスおよびヒトにおけるその活性は、ｉＮＫＴ ＴＣＲとＣＤ１ｄ−ＧＳＬ複合体間の三成分系相互作用の結合アビディティと相関していた。

本開示は、グルコース（αＧｌｃ）を有するＧＳＬが、αＧａｌを有するものよりもサイトカイン／ケモカインの誘導および免疫細胞の増殖／活性化においてヒトに対しては強力であるがマウスに対しては弱いという予期しない知見に関する。グルコース（αＧｌｃ）およびαＧｌｃのＦ誘導体を有するＧＳＬ、ならびにそのヒトにおける免疫賦活活性に対する影響を本明細書において開示する。各種に対する三成分系相互作用の強度と関連する免疫賦活効力を本明細書において記載する。本明細書に開示したｍＣＤ１ｄとｈＣＤ１ｄ（対比）のスワップアッセイによって実証されたように、種特異的応答を指示するのはＣＤ１ｄではなくｉＮＫＴ ＴＣＲである。αＧｌｃを有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）はαＧａｌを有するＧＳＬと比べて、ヒトにおいてより強い三成分系相互作用を有するものであり、よりＴｈ１偏向性の免疫を誘発した。αＧｌｃを有するＧＳＬはαＧａｌを有するＧＳＬより、マウスにおいて賦活性が低い。種特異的応答は、本明細書に記載のｍＣＤ１ｄとｈＣＤ１ｄ（対比）のスワップアッセイに裏付けられたマウスｉＮＫＴ ＴＣＲとヒトｉＮＫＴ ＴＣＲの差に反映される種間の三元複合体の結合アビディティの差によるものである。

このような新規な所見は種における差を示し、グリコシル基にヒトの治療に対してより有効な修飾を有するＧＳＬの新規な設計がもたらされる。

化合物

本開示は、式（Ｉ）：

例示的な免疫アジュバント化合物またはその薬学的に許容され得る塩に関する；式中、Ｒ^１は−ＯＨまたはハロゲンであり；Ｒ^２は−ＯＨ、水素またはハロゲンであり；Ｒ^３は水素またはハロゲンであり；Ｒ^４およびＲ^５は各々、独立して、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基または任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択され；ｎは１〜１５（両端を含む）の整数であり；ｍは１〜２０（両端を含む）の整数である。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２が−ＯＨである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２が水素である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２がハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２がＦである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２がＣｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２がＢｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２がＩである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１が−ＯＨである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がＦである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がＣｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がＢｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がＩである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３が水素である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３がハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３がＦである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３がＣｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３がＢｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３がＩである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１が−ＯＨであり；Ｒ^２が−ＯＨ、水素またはハロゲンであり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１が−ＯＨであり；Ｒ^２が−ＯＨであり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１が−ＯＨであり；Ｒ^２が水素であり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１が−ＯＨであり；Ｒ^２がハロゲンであり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がハロゲンであり；Ｒ^２が−ＯＨ、水素またはハロゲンであり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がハロゲンであり；Ｒ^２が−ＯＨであり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がハロゲンであり；Ｒ^２が水素であり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１がハロゲンであり；Ｒ^２がハロゲンであり；Ｒ^３が水素またはハロゲンである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^４がフェニルである。一部の実施形態では、Ｒ^４が式（ＩＩ）：

の任意選択的に置換されたフェニルであり、

式中、ｉ＝０、１、２、３、４または５；各場合のＲ^６は独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたフェニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基または任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ｉが０である。一部の特定の実施形態では、ｉが１である。一部の特定の実施形態では、ｉが２である。一部の特定の実施形態では、ｉが３である。一部の特定の実施形態では、ｉが４である。一部の特定の実施形態では、ｉが５である。一部の特定の実施形態では、ｉが１であり、Ｒ^６がハロゲンである。一部の特定の実施形態では、ｉが１であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｉが２であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｉが３であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｉが４であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｉが５であり、Ｒ^４が式

のものである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６がハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６がＦである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６がＣｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６がＢｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６がＩである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^４が、任意選択的に置換されたアリールである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^４が式（ＩＩＩ）：

のものであり、

式中、ｊは０、１、２、３または４であり；ｋは０、１、２、３、４または５であり；各場合のＲ^７およびＲ^８は独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたフェニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基または任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、ｋが０である。一部の特定の実施形態では、ｋが１である。一部の特定の実施形態では、ｋが２である。一部の特定の実施形態では、ｋが３である。一部の特定の実施形態では、ｋが４である。一部の特定の実施形態では、ｋが５である。一部の特定の実施形態では、ｋが１であり、Ｒ^８がハロゲンである。一部の特定の実施形態では、ｋが１であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｋが２であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｋが３であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｋが４であり、Ｒ^４が式：

のうちの１つである。一部の特定の実施形態では、ｋが５であり、Ｒ^４が式

のものである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが５〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１０〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１０である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１１である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１２である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１４である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎが１５である。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１〜２０（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが５〜２０（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが５〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１０〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１０である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１１である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１２である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１４である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍが１５である。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^７が水素であり；Ｒ^８がＦであり；ｋが１、２または３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^７がＦであり；Ｒ^８が水素であり；ｊが１、２または３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^７およびＲ^８がともにＦであり；ｋが１、２または３であり；ｊが１、２または３である。

式（Ｉ）の一部の実施形態では、提供する化合物は下記の化合物のうちの１つである：

医薬組成物

本開示により、本明細書に記載の例示的な化合物および薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示した組成物を、医薬組成物または栄養補助食品組成物中に、本開示を読むと当業者によって特定可能なさらなる活性薬剤、担体、ビヒクル、賦形剤または補助薬剤とともに含めてもよい。

医薬組成物は、好ましくは少なくとも１種類の薬学的に許容され得る担体を含むものである。かかる医薬組成物において、本明細書に開示した組成物は、「活性薬剤」とも称される「活性化合物」を構成する。本明細書で用いる場合、文言「薬学的に許容され得る担体」には、医薬の投与と適合性である溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などが包含される。また、補助的な活性化合物を該組成物に組み込んでもよい。医薬組成物は、意図される投与経路と適合性であるように製剤化される。投与経路の例としては非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（経表面）、経粘膜および経直腸投与が挙げられる。非経口、皮内または皮下適用に使用される液剤または懸濁剤には以下の成分：滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸；バッファー、例えば酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩および張度を調整するための薬剤、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロースが含められ得る。ｐＨは、酸または塩基（塩酸または水酸化ナトリウムなど）を用いて調整され得る。非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチック製の反復用量バイアル内に封入され得る。

被験体は、本明細書で用いる場合、ヒトおよび非ヒト霊長類（例えば、ゴリラ（ｇｕｅｒｉｌｌａ）、マカクザル、マーモセット）、家畜動物（例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ロバおよびブタ）、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコ）、実験用試験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター）、捕獲野生動物（例えば、キツネ、シカ）、ならびに本開示の薬剤の恩恵を被り得る任意の他の生物体をいう。本明細書に記載の薬剤の恩恵を被り得る動物の型に制限はない。被験体は、ヒトであるか非ヒト生物体であるかに関係なく、患者、個体、動物、宿主またはレシピエントと称され得る。

注射用途に適した医薬組成物としては、滅菌水性液剤（水溶性の場合）または分散剤および滅菌注射用液剤または分散剤の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与では、適当な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は滅菌されているのがよく、易注射針通過性が存在する程度に流動性であるのがよい。該組成物は、製造条件下および保存条件下で安定であるのがよく、微生物（細菌および真菌など）の汚染作用に対して保存されているのがよい。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコールなど）およびその適当な混合物を含有している溶媒または分散媒であり得る。適正な流動性は、例えば、コーティング（レシチンなど）の使用、分散剤の場合は必要とされる粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の抑制は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって得られ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤（例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を含めることによってもたらされ得る。

本明細書に記載の組成物の使用

本発明により、免疫応答の刺激をそれを必要とするヒト被験体において行なうのに有用な組成物、該被験体に治療有効量の本明細書に開示した組成物を投与することを含む方法を提供する。

本明細書に記載の組成物はまた、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の生成をそれを必要とするヒト被験体において上昇させるためにも使用され得、該方法は：それを必要とする該被験体に、治療有効量の薬学的に許容され得る組成物を投与することを含むものであり、ここで、該組成物は本明細書に開示した例示的な化合物を含むものである。

また、本明細書に記載の例示的な組成物は、サイトカインおよび／またはケモカインの生成の刺激をそれを必要とするヒト被験体において行なうためにも使用され得、該方法は：該被験体に治療有効量の薬学的に許容され得る組成物を投与することを含むものであり、ここで、該組成物はサイトカイン／ケモカインの生成を増大させるのに充分な量の本明細書に開示した化合物を含むものである。

活性薬剤の「有効」量または「治療有効」量により、有益な効果がもたらされる無毒性であるが充分な該薬剤の量を意図する。「有効」である活性薬剤の量は、個体の年齢および一般健康状態、具体的な活性薬剤（１種類または複数種）などに応じて被験体ごとに異なる。特に記載のない限り、用語「治療有効」量は、本明細書で用いる場合、有害な状態の予防および／または有害な状態の改善に有効な量（すなわち、有害な状態の処置に有効な量に加えて）を包含していることを意図する。

本明細書において定義している場合、治療有効量の活性化合物（すなわち、有効投薬量）は約０．００１〜１００ｇ／ｋｇ体重の範囲または必要以上に実験を行なうことなく当業者に自明であり得、理解され得る他の範囲であり得る。当業者には、一部の特定の要素が被験体を有効に処置するために必要とされる投薬量およびタイミングに影響を及ぼすことがあり得ることが認識され、限定されないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、被験体の一般健康状態または年齢、および他の疾患の存在が挙げられる。

有害な状態は、該用語を本明細書で用いる場合、個体においてよくみられる「通常の」状態であってもよく、指定の疾患と関連していてもそうでなくてもよい病的状態であってもよい。

本明細書で用いる場合、用語「脂質」は、細胞シグナル伝達経路に関与する任意の脂溶性（親油性）分子をいう。

本明細書で用いる場合、用語「糖脂質」は、細胞による認識のためのマーカーとしての機能を果たす炭水化物結合型脂質をいう。

別の態様によれば、１つまたはそれより多くのパーツキットが当業者によって想定され得、該パーツキットは、本明細書に開示した方法の少なくとも１つを行なうためのものであり、該パーツキットは２種類またはそれより多くの組成物を備えたものであり、該組成物は、上記の方法の少なくとも１つに従う有効量の本明細書に開示した組成物を単独または組合せで含むものである。

キットは、場合によっては、活性薬剤、生物学的事象の識別表示、または本開示を読むと当業者によって特定可能な他の化合物を含む組成物もまた含む。また、キットに、有効量の本明細書に開示した組成物または細胞株を含む少なくとも１種類の組成物を備えてもよい。当業者によって特定可能な手順に従って本明細書に開示した少なくとも１つの方法を実施するために使用されるパーツキットの組成物および細胞株。

本明細書で用いる場合、用語「特異的（に）結合（する）」とは、結合ペア（例えば、抗体と抗原）間の相互作用をいう。種々の場合において、特異的結合は、約１０^−６モル／リットル、約１０^−７モル／リットルもしくは約１０^−８モル／リットルまたはそれより小さい親和定数によって具体的に示され得る。

本発明を読むと当業者には自明であるように、本明細書に記載および図示した個々の各実施形態は独立した成分および特長を有し、これらは、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、その他の任意のいくつかの実施形態の特長から容易に分離され得、または該特長と組み合わせられ得る。記載の任意の方法は、記載の事象の順序で行なってもよく、論理的に可能な任意の他の順序で行なってもよい。

一態様において、本明細書に記載の免疫組成物は非経口投与され得る（例えば、静脈内注射、皮下注射または筋肉内注射）。あるいはまた、他の投与様式、例えば、坐剤および経口製剤が望ましい場合もあり得る。坐剤では、結合剤および担体としては、例えば、ポリアルカン（ｐｏｌｙａｌｋａｌｅｎｅ）グリコールまたはトリグリセリドが挙げられ得る。経口製剤には、通常使用される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉｅｎｔ）、例えば、医薬等級のサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどが含められ得る。このような組成物は、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放製剤または散剤の形態であり、１０〜９５％の本明細書に記載の免疫組成物を含有している。

免疫組成物は、投薬製剤と適合性である様式で、治療有効で防御的かつ免疫原性であるの量で投与される。投与される量は、処置対象の被験体に依存し、例えば、個体の免疫系が抗体を合成し、必要であれば細胞媒介性免疫応答をもたらす能力などに依存する。投与に必要とされる活性成分の厳密な量は医師の判断に依存する。しかしながら、適当な投薬量範囲は当業者によって容易に決定され得る。初期投与およびブースター投与のための好適なレジメンもまた種々であるが、初期投与に続いて後続投与が含められ得る。また、ワクチンの投薬量も投与経路に依存し得、宿主の大きさに応じて異なる。

本発明の免疫組成物は、抗体生成のための動物において抗体を生成させるためにも使用され得、該抗体は、がんの処置および診断の両方において使用され得る。動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジまたはウマ）におけるモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体ならびにその断片の作製方法は当該技術分野でよく知られている。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子ならびにその断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（一本鎖抗体）およびｄＡｂ（ドメイン抗体；Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ，３４１，５４４）が包含される。

特に定義していない限り、本明細書で用いる科学技術用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、本文書（定義を含む）に支配される。本明細書に記載のものと同様または同等の任意の方法および材料が本発明の実施または試験において使用され得るが、次に、好ましい方法および材料を記載する。本明細書に具体的に記載した刊行物および特許はすべて、本発明とともに使用されるかもしれない刊行物に報告されている化学薬品、細胞株、ベクター、動物、機器、統計解析および方法論の説明および開示を含むあらゆる目的のために引用により組み込まれる。本明細書において挙げた参考文献はすべて、当該技術分野の技術水準を示すものであると解釈されたい。本明細書において、本発明が先行発明によりかかる開示の日付を前にする資格がないという是認であると解釈されるべきものはない。

本発明の材料および方法を記載する前に、本発明は、記載の具体的な方法論、プロトコル、材料および試薬に限定されないことを理解されたい（これらは種々であり得るため）。また、本明細書で用いている専門用語は、具体的な実施形態を説明する目的のためのものにすぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲の限定を意図するものではないことも理解されたい。

値の範囲を示している場合、該範囲の上限と下限の間の各値（本文中にそうでないことを明記していない限り下限の単位の１０分の１まで）および記載の範囲内の任意の他の記載の値または間の値が本発明の範囲に包含されていることは理解されよう。このようなより小さい範囲の上限および下限は、独立してより小さい範囲に含まれ得、また本発明の範囲にも含まれ、記載の範囲で任意の具体的に除外される限界値の対象となる。記載の範囲が限界値の一方または両方を含む場合、含まれた限界値のいずれかまたは両方を除外した範囲

実施例
以下の実施例は、当業者に完全な本発明ならびに本発明による実施形態をどのようにして作製および使用するかの説明をもたらすために示しており、本発明者らが発見とみなす範囲の限定を意図するものではない。使用した数値（例えば、量、温度など）に関して精度が確実になるよう努力を行なったが、いくらかの実験誤差および偏差を考慮されたい。特に記載のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度はセ氏度であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。

総論：全ての試薬の化学薬品は試薬等級として購入し、さらに精製せずに使用した。無水溶媒、例えばジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、ピリジンはＡｃｒｏｓから購入した。ＨＰＬＣ等級の溶媒クロロホルム（ＣＨＣｌ_３）とメタノールはＭｅｒｃｋから購入した。グリコシル化のためのモレキュラーシーブス４Å（ＭＳ ４Å）はＡｃｒｏｓから購入し、火炎によって活性化した。反応は、ＥＭシリカゲル６０ Ｆ２５４プレートでの分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニタリングし、ＵＶ（２５４ｎｍ）下および／または酸性モリブデン酸アンモニウムセリウムもしくはニンヒドリンでの染色によって可視化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーはシリカゲル６０ Ｇｅｄｕｒａｎ（４０〜６３μｍ，Ｍｅｒｃｋ）で行なった。最終生成物の精製のためのＢｉｏｇｅｌ ＬＨ２０はＡｌｄｒｉｃｈから購入した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ Ｔｏｐｓｐｉｎ−６００（６００ＭＨｚ）分光計で２０℃にて記録した。化学シフト（δｐｐｍ）はＣＤＣｌ_３（δ＝７．２４ｐｐｍ）、ＭｅＯＤ（δ＝３．３１ｐｐｍ）およびピリジン−ｄ^５（δ＝７．５８ｐｐｍ）の内部標準シグナルに従って帰属させた。^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ Ｔｏｐｓｐｉｎ−６００（１５０ＭＨｚ）分光計で取得し、単位δｐｐｍメモリで報告し、較正にはＣＤＣｌ_３（δ＝７７．２３ｐｐｍ）、ＭｅＯＤ（δ＝４９．１５ｐｐｍ）のシグナルを使用した。結合定数（Ｊ）はＨｚで報告している。開裂パターンは、以下の略号：ｓ，一重項；ｄ，二重項；ｔ，三重項；ｄｄ，二重二重項；ｍ，多重項を使用することにより記載している。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはこの順：化学シフト；多重度；プロトン数；結合定数に報告している。

化学合成

グルコシルドナー８の合成

化合物２：１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース１（４０ｇ，１０２．５ｍｍｏｌ）の２００ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液にｐ−トルエンチオール（１５．４ｇ，１２３ｍｍｏｌ）とＢＦ_３ＯＥｔ_２（１５．４ｍＬ，１２３ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。得られた溶液を直接、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液とブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、エバポレートした。続いてＡｃＯＥｔ−ヘキサン溶液中で再結晶を行ない、２を白色固形物として得た（３２．６ｇ，７０％）。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）δ 7．36（2H，d，J = 7．2 Hz），7．10（2H，d，J = 7．8 Hz），5．18（1H，t，J = 9．0 Hz），5．00（1H，t，J = 9．6 Hz），4．91（1H，t，J = 9．0 Hz），4．61（1H，d，J = 10．2 Hz），4．14-4．20（2H，m），3．67（1H，s），2．33（3H，s），2．07（3H，s），2．06（3H，s,），1．99（3H，s），1．96（3H，s）．¹³C NMR（CDCl₃，150 MHz）δ 170．78，170．40，169．59，169．45，139．00，134．04，129．88，127．73，86．03，75．94，74．21，70．10，68．38，62．32，21．39，20．97，20．94，20．79，20．78．Ｃ_２１Ｈ_２６Ｏ_９ＳＮａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値４７７．１１９０，実測値４７７．１２０１．

化合物３：２（３２．６ｇ，７１．８ｍｍｏｌ）の５００ｍＬの乾燥ＭｅＯＨ中の溶液に触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加し、周囲温度で３時間撹拌した。反応液をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０の添加によって中和し、濾過し、得られた溶液を濃縮乾固し、３（２０．３ｇ，９９％）を白色固形物として得、これをさらに精製せずに直接、次の反応に使用した。¹H NMR（MeOD，600 MHz）δ 7．46（2H，d，J = 7．8 Hz），7．12（2H，d，J = 7．8 Hz），4．50（1H，d，J = 9．6 Hz），3．85（1H，d，J = 12．6，1．8 Hz），3．66（1H，dd，J = 12．0，5．4 Hz），3．36（1H，t，J = 9．0 Hz），3．24-3．28（2H，m），3．17（1H，t，J = 9．0 Hz），2．13（3H，s）．¹³C NMR（MeOD，150 MHz）δ 138．90，133．66，131．33，130．67，89．79，82．16，79．81，73．82，71．50，63．03，21．24．Ｃ_１３Ｈ_１８Ｏ_５ＳＮａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値３０９．０７６７，実測値３０９．０７７２．

化合物４：３（１１．１ｇ，３８．８ｍｍｏｌ）の４８ｍＬの乾燥ピリジン中の溶液にトリフェニルメチルクロリド（１３．５ｇ，４６．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応液をアルゴン下、６０℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ １：１：０．１）によって精製し、４（１２．３ｇ，６０％）を白色粉末として得た。¹H NMR（MeOD，600 MHz）δ 7．56（2H，d，J = 7．8 Hz），7．47（6H，d，J = 7．8 Hz），7．27（6H，t，J = 7．2 Hz），7．22（3H，t，J = 7．2 Hz），7．05（2H，d，J = 8．4 Hz），4．58（1H，d，J = 9．6 Hz），3．40-3．43（2H，m），3．31（1H，m），3．23-3．27（3H，m），2．27（3H，s）．¹³CNMR（MeOD，150 MHz）δ 145．69，138．71，133．62，131．51，130．77，130．16，128．87，128．13，89．46，87．88，80．98，80．02，73．93，71．85，65．14，21．34．Ｃ_３２Ｈ_３２Ｏ_５ＳＮａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値５５１．１８６３，実測値５５１．１８７６．

化合物５：４（２１．１ｇ，３９．９ｍｍｏｌ）の２００ｍＬの乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％）（５．８ｇ，１４３．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応液を１時間撹拌した後、臭化ベンジル（１７．２ｍＬ，１４３．６ｍｍｏｌ）を添加し、次いでアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。反応液をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ９：１）によって精製し、５（２２．３ｇ，７０％）を白色粉末として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）δ 7．60（2H，d，J = 7．8 Hz），7．50（6H，d，J = 7．8 Hz），7．42（2H，d，J = 7．2 Hz），7．34（2H，t，J = 7．2 Hz），7．24-7．32（12H，m），7．18-7．23（4H，m），7．14-7．17（2H，m），7．05（2H，d，J = 7．8 Hz），6．82（2H，d，J = 7．8 Hz），4．91（1H，d，J = 10．8 Hz），4．84（1H，d，J = 10．8 Hz），4．80（1H，d，J = 10．8 Hz），4．74（1H，d，J = 10．2 Hz），4．64（2H，dd，J = 9．6，5．4 Hz），4．30（1H，d，J = 10．2 Hz），3．74（1H，t，J = 9．6 Hz），3．64（1H，t，J = 8．4 Hz），3．60（1H，d，J = 9．6 Hz），3．55（1H，t，J = 9．6 Hz），3．42（1H，m），3．25（1H，dd，J = 10．2，4．2 Hz），2．30（3H，s）．¹³CNMR（CDCl₃，150 MHz）δ 144．14，138．57，138．43，137．94，137．90，133．01，130．10，129．96，129．07，128．73，128．67，128．45，128．42，128．31，128．20，128．16，128．15，128．07，128．01，127．89，127．20，87．90，87．07，86．70，80．96，79．04，78．04，76．25，75．61，75．21，62．68，45．18，21．37．Ｃ_５３Ｈ_５０Ｏ_５ＳＮａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値８２１．３２７１，実測値８２１．３３１０

化合物６：５（３０．０ｇ，３７．５ｍｍｏｌ）の１０６５ｍＬの酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ ４：１）中の溶液を７５℃で３時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ２：１）によって精製し、６（１６．７ｇ，８０％）を白色固形物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）δ 7．37-7．41（4H，m），7．25-7．33（13H，m），7．10（2H，d，J = 7．8 Hz），4．91（1H，d，J = 10．2 Hz），4．89（1H，d，J = 10．8 Hz），4．84（1H，d，J = 10．8 Hz），4．83（1H，d，J = 10．8 Hz），4．74（1H，d，J = 10．8 Hz），4．62（1H，d，J = 10．2 Hz），3．83-3．86（1H，m），3．65-3．71（2H，m），3．54（1H，t，J = 9．6 Hz），3．44（1H，t，J = 9．0 Hz），3．33-3．36（1H，m），2．31（3H，s），1．87（1H，t，J = 6．6 Hz）．¹³C NMR（CDCl₃，150 MHz）δ 138．51，138．24，138．14，138．02，132．85，129．99，129．63，128．71，128．66，128．63，128．40，128．22，128．16，128．09，127．98，127．94，87．99，86．75，81．27，79．43，77．81，76．01，75．69，75．30，62．34，21．31．Ｃ_３４Ｈ_３６Ｏ_５ＳＮａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値５７９．２１７６，実測値５７９．２１８８．

化合物７：６（５．０ｇ，９．０ｍｍｏｌ）の１８ｍＬの乾燥ピリジン中の溶液に無水酢酸（１．０ｍＬ）を添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物（ｍｉｘｕｔｒｅ）をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ５：１）によって精製し、７（５．３ｇ，９９％）を白色固形物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）δ 7．44（2H，d，J = 7．8 Hz），7．38（2H，d，J = 7．8 Hz），7．26-7．34（11H，m），7．22-7．24（2H，m），7．08（2H，d，J = 7．8 Hz），4．91（1H，d，J = 10．2 Hz），4．90（1H，d，J = 11．4 Hz），4．83（1H，d，J = 10．8 Hz），4．82（1H，d，J = 10．8 Hz），4．71（1H，d，J = 10．2 Hz），4．57（1H，d，J = 9．6 Hz），4．55（1H，d，J = 10．8 Hz），4．34（1H，d，J = 12．0 Hz），4．17-4．20（1H，m），3．67-3．70（1H，m），3．49-3．50（2H，m），3．45（1H，t，J = 9．6 Hz），2．32（3H，s），2．03（3H，s）．¹³CNMR（CDCl₃，150 MHz）δ 170．90，138．44，138．16，138．13，137．81，132．98，129．85，128．76，128．72，128．68，128．45，128．30，128．26，128．15，128．02，88．00，86．93，81．07，77．74，76．08，75．68，75．32，63．51，21．35，21．09．Ｃ_３６Ｈ_３８Ｏ_６ＳＮａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値６２１．２２８１，実測値６２１．２３０１．

化合物８：７（５．５ｇ，９．２ｍｍｏｌ）の１２９ｍＬのアセトン水溶液（アセトン：Ｈ_２Ｏ ４：１）中の溶液にＮ−ブロモスクシンイミド（１．７ｇ，９．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を周囲温度で１時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、チオ硫酸ナトリウム（ＮａＳ_２Ｏ_３）水溶液、ブラインで抽出し、次いでＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ２：１）によって精製し、８（３．１ｇ，６９％、α／β＝１：１）を白色固形物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）δ 7．24-7．35（30H，m），5．18（1H，t，J = 3．0 Hz），4．96（1H，d，J = 10．2 Hz），4．94（2H，d，J = 10．8 Hz），4．86（1H，d，J = 10．8 Hz），4．85（1H，d，J = 10．2 Hz），4．84（ 1H，d，J = 10．2 Hz），4．80（1H，d，J = 10．8 Hz），4．76（2H，d，J = 11．4 Hz），4．71（1H，dd，J = 7．2，5．4 Hz），4．68（1H，d，J = 12．0 Hz），4．55（2H，d，J = 10．8 Hz），4．34（1H，dd，J = 12．0，1．2 Hz），4．23-4．28（2H，m），4．17（1H，dd，J = 12．0，4．8 Hz），4．06-4．09（1H，m），3．98（1H，t，J = 9．6 Hz），3．67（1H，t，J = 8．4 Hz），3．50-3．56（3H，m），3．48（1H，t，J = 9．0 Hz），3．37-3．40（2H，m），3．01（1H，d，J = 3．0 Hz），2．02（3H，s），2．01（3H，s）．¹³CNMR（CDCl₃，150 MHz）δ 138．64，138．49，138．39，137．96，137．89，137．81，128．75，128．70，128．68，128．65，128．63，128．33，128．29，128．27，128．22，128．20，128．14，128．06，127．99，127．93，97．62，91．33，84．71，83．20，81．82，80．18，77．39，75．96，75．92，75．23，75．21，74．98，73．47，73．19，69．02，63．35，63．27，21．06．Ｃ_２９Ｈ_３２Ｏ_７Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値５１５．２０４０，実測値５１５．２０５２．

アクセプタ１８の合成

化合物１３：Ｄ−リキソース１２（２０ｇ，１３３ｍｍｏｌ）の２００ｍＬの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の溶液に２−メトキシプロペン（１５ｍＬ，１６０ｍｍｏｌ）とカンファー−１０−スルホン酸（ＣＳＡ）（３ｇ，１３．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶液を、トリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ）を用いてクエンチし、蒸発乾固させ、直接、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ １：１：０．２）によって精製し、１３（２１ｇ，８３％）を白色固形物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）：δ 5．22（s，1H），4．78（dd，1H，J = 6．0，3．6 Hz），4．53（d，1H，J = 6．0 Hz），4．17（m，1H，J = 6．6，4．8 Hz），3．82（dd，1H，J = 11．7，4．8 Hz），3．71（dd，1H，J = 11．7，6．6 Hz），1．40（s，3H），1．29（s，3H）．¹³C NMR（CDCl₃，150 MHz）：δ 113．62，102．27，87．42，81．73，81．35，61．37，26．46，25．02．Ｃ_８Ｈ_１４Ｏ_５Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値２１３．０７３３，実測値２１３．０７５１．

化合物１４：１３（２１ｇ，１１０ｍｍｏｌ）の１４０ｍＬの乾燥ピリジン中の撹拌溶液にトリフェニルメチルクロリド（３７．８ｇ，１３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応液をアルゴン下、６０℃で１６時間撹拌した。溶液を濃縮乾固し、残渣を酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）で溶解させ、Ｈ_２Ｏ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）上で乾燥させ、次いでエバポレートした。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ １：２）によって精製し、１４（３６．５ｇ，７７％）を白色粉末として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）：δ 7．46（m，6H），7．27（m，6H），7．21（m，3H），5．36（d，1H，J = 1．8 Hz），4．73（dd，1H，J = 6．0，4．8 Hz），4．57（d，1H，J = 6．0 Hz），4．31（ddd，1H，J = 4．8，4．8，7．8 Hz），3．41（dd，1H，J = 9．6，4．8 Hz），3．37（dd，1H，J = 9．6，7．8 Hz），2．41（m，1H，J = 1．8 Hz），1．27（s，3H），1．25（s，3H）．¹³CNMR（CDCl₃，150 MHz）：δ 143．95，128．82，127．75，126．95，112．48，101．22，86．85，85．41，80．11，79．70，61．85，26．02，25．09．Ｃ_２７Ｈ_２８Ｏ_５Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値４５５．１８２９，実測値４５５．１８３３．

化合物１５：１４（８．４ｇ，１９．４ｍｍｏｌ）の４０ｍＬの無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の撹拌溶液にリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）（２０ｍＬのＴＨＦ中１Ｍ溶液，２０ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応液をアルゴン下で１時間撹拌した。ウィッティヒ試薬Ｃ_１３Ｈ_２７ＰＰｈ_３Ｂｒ（２０．１ｇ，３８．２ｍｍｏｌ）（１−ブロモトリデカン（Ｃ_１３Ｈ_２７Ｂｒ）とトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ_３）（トルエン中で５日間還流）から調製）の８３ｍＬの無水ＴＨＦ中の撹拌溶液にＬＨＭＤＳ（４０ｍＬのＴＨＦ中１Ｍ溶液，４０ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応液をアルゴン下で１時間撹拌し、明るいオレンジ色のイリドを作製した。１４の溶液をこのイリドに０℃で滴下し、反応液を周囲温度まで昇温させ、アルゴン下で９時間撹拌した。得られた溶液を、ＭｅＯＨを用いてクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏとブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで濃縮した。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ １５：１）によって精製し、１５（８．７ｇ，７５％）を無色の油状物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）：δ 7．40-7．45（m，9H），7．25-7．30（m，9H），7．19-7．23（m，5H），5．49-5．57（m，3H，J = 6．6 Hz），4．90（t，1H，J = 6．6 Hz），4．43（t，1．5H，J = 6．6 Hz），4．25（dd，0．5H，J = 6．6，4．6 Hz），4．20（dd，1H，J = 6．6，4．5 Hz），3．74（m，1H），3．68（m，0．5H），3．22（dd，0．5H，J = 9．6，5．0 Hz），3．15（dd，1H，J = 9．3，5．1 Hz），3．10（m，1．5H），2．37（m，1．5H），1．90-2．00（m，2H），1．75（m，1H），1．47（m，5H），1．37（m，5H），1．19-1．33（m，35H），0．86（t，5H，J = 7．1 Hz）．¹³C NMR（CDCl₃，150 MHz）：δ 144．07，137．58，135．56，128．90，128．02，127．24，125．41，125．15，108．58，108．50，86．90，86．84，79．14，77．86，77．74，73．21，69．51，69．43，65．19，64．84，32．45，32．13，29．89，29．86，29．81，29．71，29．69，29．57，29．50，29．47，29．11，27．80，27．59，27．55，25．26，22．91，14．35．Ｃ_４０Ｈ_５４Ｏ_４Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値６２１．３９１４，実測値６２１．３９１９．

化合物１６：化合物１６は、１５（１ｇ，１．７ｍｍｏｌ）（触媒量の水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）を含む１０ｍＬの無水ＭｅＯＨ中）の接触水素化により調製した。懸濁液をＨ_２雰囲気中で４時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過して触媒を除去し、蒸発乾固させ、次いでシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ２０：１）によって精製し、１６（９０３ｍｇ，９０％）を白色固形物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）：δ 7．43（m，6H），7．27（m，6H），7．21（m，3H），4．12（dd，1H，J = 6．4，3．7 Hz），4．05（ddd，1H，J = 9．9，6．4，3．6 Hz），3．69（m，1H，J = 6．0，6．0，5．8，3．7 Hz），3．18（m，2H，J = 9．5，9．5，6．0，5．8 Hz），2．29（d，1H，J = 6．0 Hz），1．60-1．67（m，1H），1．45-1．49（m，1H），1．43（s，3H），1．34-1．38（m，1H），1．33（s，3H），1．20-1．30（m，23H），0．86（t，3H，J = 7．2 Hz）．¹³C NMR（CDCl₃，150 MHz）：δ 144．09，128．91，128．05，127．26，107．95，87．02，77．67，69．15，65．43，32．15，29．92，29．88，29．83，29．77，29．58，27．60，26．99，25．43，22．92，14．36．Ｃ_４０Ｈ_５６Ｏ_４Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値６２３．４０７１，実測値６２３．４１１２．

化合物１７：１６（５ｇ，８．３ｍｍｏｌ）と４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）の３９ｍＬの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液に２，６−ルチジン（３．５ｍＬ，３０ｍｍｏｌ）を周囲温度で添加した。溶液を−４５℃まで冷却すると、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ_２Ｏ）（２．６７ｍＬ，１５．９ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液をアルゴン下で１時間撹拌した。続いてテトラメチルグアニジニウムアジド（ＴＭＧＡ）（３．９ｇ，２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を周囲温度まで昇温させ、アルゴン下で１６時間撹拌した。得られた溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過して４Åモレキュラーシーブを除去し、残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、Ｈ_２Ｏとブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いでエバポレートした。混合物を単にシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ２０：１）によって精製して大部分の不純物を除去し、直接、次の工程に使用した。

化合物１８：１７の２０ｍＬの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液にテトラフルオロ酢酸／無水テトラフルオロ酢酸（ＴＦＡ／ＴＦＡＡ １．８Ｍ／１．８Ｍ（ＣＨ_２Ｃｌ_２中））（１４ｍＬ，２４．９ｍｍｏｌ）を４℃で添加し、アルゴン下で１５分間撹拌した。反応液を１０ｍＬのＥｔ_３Ｎの添加によってクエンチし、次いで２００ｍＬのメタノール（ＭｅＯＨ）に注入し、さらに１５分間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで抽出し、次いでＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。有機層を真空濃縮し、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ １０：１）によって精製し、１８（２ｇ，２工程で６３％）を黄色油状物として得た。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）：δ 4．16（ddd，1H，J = 9．7，5．6，3．6 Hz），3．97（dd，1H，J = 11．6，4．2 Hz），3．94（dd，1H，J = 9．4，5．6 Hz），3．85（dd，1H，J = 11．6，5．4 Hz），3．45（ddd，1H，J = 9．4，5．4，4．2 Hz），1．50-1．62（m，2H，J = 9．7，3．6 Hz），1．41（s，3H），1．31-1．37（m，6H），1．22-1．30（m，22H），0．86（t，3H，J = 6．9，6．9 Hz）．¹³CNMR（CDCl₃，150 MHz）：δ 108．66，77．96，76．91，64．18，61．39，32．14，29．90，29．87，29．81，29．80，29．75，29．60，29．58，28．25，26．74，25．77，22．91，14．34．Ｃ_２１Ｈ_４１Ｎ_３Ｏ_３Ｈ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値３８３．３１４８，実測値３５６．３１５７（−Ｎ_２）．

α−グルコシルセラミド類似体２４〜２６の合成

化合物１９：グルコシルドナー８（２．９ｇ，５．９ｍｍｏｌ）、ジメチルスルフィド（５９０μＬ，７．８ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ（５００ｍｇ）および２−クロロピリジン（１．８ｍＬ，１９．５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５ｍＬ）中の溶液にトリフルオロメタンスルホン酸無水物（１ｍＬ，６ｍｍｏｌ）をアルゴン下で−４５℃にて添加し、反応液を−４５℃で２０分間、０℃で２０分間および周囲温度でさらに２０分間撹拌した後、アクセプタ１８（１．５ｇ，３．９ｍｍｏｌ）（５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中）を添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過し、モレキュラーシーブを除去した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ １０：１）によって精製し、１９を無色の油状物として得た（２ｇ，６０％）。¹H NMR（CDCl₃，600 MHz）δ 7．36（2H，d，J = 7．8 Hz），7．24-7．33（13H，m），4．97（1H，d，J = 10．8 Hz），4．86（1H，d，J = 10．8 Hz），4．85（1H，d，J = 3．6 Hz），4．78（1H，d，J = 10．8 Hz），4．72（1H，d，J = 12．0 Hz），4．68（1H，d，J = 12．0 Hz），4．54（1H，d，J = 10．8 Hz），4．21-4．26（2H，m），4．08-4．11（1H，m），4．02-4．07（2H，m），3．97（1H，dd，J = 9．6，5．4 Hz），3．84-3．87（1H，m），3．60（1H，dd，J = 10．8，7．2 Hz），3．54（1H，dd，J = 9．6，3．6 Hz），3．44-3．48（2H，m），2．00（3H，s），1．57-1．61（1H，m），1．50-1．55（1H，m），1．37（3H，s），1．22-1．35（27H，m），0．86（3H，t，J = 7．2 Hz）．¹³C NMR（CDCl₃，150 MHz）δ 170．93，138．82，138．58，138．05，128．68，128．61，128．59，128．34，128．31，128．13，127．90，127．86，81．82，80．26，77．97，77．30，75．93，75．61，75．24，72．92，69．50，69．34，63．26，59．99，32．13，29．90，29．87，29．82，29．77，29．57，29．54，28．42，26．73，25．89，22．90，21．03，14．33．Ｃ_５０Ｈ_７１Ｎ_３Ｏ_９Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値８８０．５０８３，実測値８８０．５１２４．

化合物２０：１９（２６９ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）のピリジン／Ｈ_２Ｏ（１０：１，１２ｍＬ）中の溶液にトリフェニルホスフィン（１６５ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応液をアルゴン下、４５℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。混合物を事前に精製せずに次の工程に使用した。

化合物２１：化合物２０の３６ｍＬの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液にヘキサコサン酸（１５９ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（８８μＬ）、ＥＤＣ（９０ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）およびＨＢＴｕ（１７８ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ ４：１）によって精製し、２１を白色固形物として得た（２９３ｍｇ，７８％，２工程）。

化合物２２：２１（２９３ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）の５０ｍＬの共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２ １：１）中の溶液にナトリウムメトキシド（０．０２４ｍｍｏｌ）を添加し、アルゴン下、周囲温度で６時間撹拌した。反応液をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０によって中和し、濾過した。溶媒の除去後、残渣を事前に精製せずに次の工程に使用した。

化合物２３：加水分解した化合物２２を５０ｍＬの酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ ４：１）に溶解させ、６０℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ １：１：０．１）によって精製した。

化合物２４

デアセトニド誘導体２３を、水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）（触媒量）を含む５０ｍＬの共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３ ４：１）に溶解させ、Ｈ_２雰囲気中で１６時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過して触媒を除去し、蒸発乾固させ、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３ １：９）によって精製し、ＬＨ２０（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３ １：１）で溶出し、２４（７２ｍｇ，３工程で３５％）を白色固形物として得た。¹H NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，600 MHz）δ：4．83（s，1H），4．15（d，J = 4．2 Hz，1H），3．84（dd，J =10．8，4．2 Hz，1H），3．76（d，J = 12．0 Hz，1H），3．64-3．70（m，2H），3．60（t，J = 9．6 Hz，1H），3．51-3．57（m，3H），3．41（d，J = 9．6 Hz，1H），3．31（m，1H），2．17（t，J = 7．2 Hz，2H），1．50-1．65（m，4H），1．19-1．39（m，68H），0．85（t，J = 6．6 Hz，6H）．¹³C NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，150 MHz）δ：175．29，100．06，75．05，74．58，73．03，72．75，72．62，71．01，67．78，62．22，51．11，37．07，32．93，32．62，30．49，30．45，30．40，30．35，30．25，30．13，30．05，30．04，26．61，26．58，23．34，14．47．Ｃ_５０Ｈ_９９ＮＯ_９Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ） 計算値８８０．７２２３，実測値８８０．７２１２．

化合物２５

化合物２５を、化合物２４と同様の手順を用いて合成した。¹H NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，600 MHz）δ：7．09（dd，J = 8．4，5．4 Hz，2H），6．90（t，J = 9．0 Hz，2H），4．82（d，J = 3．6 Hz，1H），4．14-4．18（m，1H），3．84（dd，J = 10．2，4．8 Hz，1H），3．76（dd，J = 12．0，2．4 Hz，1H），3．64-3．68（m，2H），3．60（t，J = 9．0 Hz，1H），3．51-3．56（m，3H），3．41（dd，J = 9．6，3．6 Hz，1H），3．31（m，1H），2．54（t，J = 7．8 Hz，2H），2．17（t，J = 7．8 Hz，2H），1．51-1．65（m，6H），1．20-1．39（m，36H），0．85（t，J = 6．6 Hz，3H）．¹³C NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，150 MHz）δ：175．30，162．67，161．07，139．18，139．16，130．34，130．29，115．46，115．32，100．00，75．03，74．52，72．97，72．68，72．55，70．93，67．71，62．15，51．11，51．03，37．06，37．00，35．72，32．90，32．58，32．32，30．45，30．41，30．35，30．30，30．22，30．15，30．11，30．05，30．00，29．82，26．57，26．53，23．29，14．44．Ｃ_４１Ｈ_７２ＦＮＯ_９Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値７６４．５０８３，実測値７６４．５０６６．

化合物２６

化合物２６を、化合物２４と同様の手順を用いて合成した。¹H NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，600 MHz）δ：7．10（d，J = 8．4 Hz，2H），6．99（t，J = 7．8 Hz，2H），6．92（m，2H），6．84（d，J = 7．8 Hz，2H），4．83（d，J = 3．0 Hz，1H），3．85（dd，J = 10．2，4．2 Hz，1H），3．77（d，J = 11．4 Hz，1H），3．67（m，2H），3．61（t，J = 9．6 Hz，1H），3．55（m，3H），3．42（dd，J = 9．0，3．0 Hz，1H），3．33（m，1H），2．55（t，J = 7．8 Hz，2H），2．18（t，J = 7．8 Hz，2H），1．50-1．64（m，6H），1．20-1．40（m，36H），0．85（t，J = 6．6 Hz，3H）．¹³C NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，150 MHz）δ：175．34，160．27，158．67，156．22，154．38，138．73，130．34，120．76，120．71，119．10，116．87，116．72，100．15，75．10，74．66，73．15，72．85，72．65，71．09，67．80，62．26，51．21，37．09，35．90，32．95，32．68，32．44，30．55，30．51，30．47，30．40，30．35，30．28，30．26，30．17，30．11，30．00，26．67，26．63，23．38，14．47．Ｃ_４７Ｈ_７６ＦＮＯ_１０Ｎａ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値８３４．５５２６，実測値８３４．５５３８．

フッ素化ドナー３８の合成

化合物３２：１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース１の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液に４−メトキシフェノールとＢＦ_３ＯＥｔ_２を０℃で添加し、反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。得られた溶液を直接、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液とブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、エバポレートした。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサン溶液から再結晶させ、３２を白色固形物として得た。

化合物３３：３２の乾燥ＭｅＯＨ中の溶液に触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加し、周囲温度で３時間撹拌した。反応液をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０の添加によって中和し、濾過し、得られた溶液を濃縮乾固し、３３を白色固形物として得、これをさらに精製せずに直接、次の反応に使用した。

化合物３４：３３の乾燥共溶媒（ＤＭＦとＣＨ_３ＣＮ）中の溶液にベンズアルデヒドジメチルアセタールと触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加した。反応液を周囲温度で１６時間撹拌した。溶液をＥｔ_３Ｎの添加によって中和し、濃縮した。混合物を酢酸エチルに溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液とブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、エバポレートした。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサン溶液から再結晶させ、３４を白色固形物として得た。

化合物３５：３４の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％）を０℃で添加した。反応液を１時間撹拌した後、臭化ベンジルを添加し、反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶液をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサン溶液から再結晶させ、３５を白色固形物として得た。

化合物３６：３５のＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液にトリエチルシランとトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を０℃で添加した。反応液を周囲温度で３時間撹拌した。溶液を直接、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサン溶液から再結晶させ、３６を白色固形物として得た。

化合物３７：３６のＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液にジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）を添加した。反応液を４５℃で１６時間撹拌し、溶液を直接、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物３７を無色の油状物として得た。

化合物３８：３７の乾燥共溶媒（トルエン，Ｈ_２ＯおよびＣＨ_３ＣＮ）中の溶液に硝酸セリウムアンモニウム（ＣＡＮ）を添加した。反応液を周囲温度で１０分間撹拌した。溶液を酢酸エチルで抽出し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物３８を無色の油状物として得た。

フッ素化類似体４３の合成

化合物３９：ドナー３８、ジメチルスルフィド、４Åモレキュラーシーブおよび２−クロロピリジンの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液に、アルゴン下、−４５℃でトリフルオロメタンスルホン酸無水物を添加した。反応液を−４５℃で２０分間、０℃で２０分間および周囲温度でさらに２０分間撹拌した後、アクセプタ１８（ＣＨ_２Ｃｌ_２中）を添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過し、モレキュラーシーブを除去した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、３９を得た。

化合物４０：３９のピリジン／Ｈ_２Ｏ（１０：１）中の溶液にトリフェニルホスフィンを添加した。反応液をアルゴン下、４５℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。混合物を事前に精製せずに次の工程に使用した。

化合物４１：化合物４０の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液に４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルウンデカン酸、Ｅｔ_３Ｎ、ＥＤＣおよびＨＢＴｕを添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４１を得た。

化合物４２：化合物４１の酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ ４：１）中の溶液を６０℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物を酢酸エチルに溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液とブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、エバポレートした。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４２を得た。

化合物４３

デアセトニド誘導体４２を、水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）（触媒量）を含む共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３ ４：１）に溶解させ、Ｈ_２雰囲気中で１６時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過して触媒を除去し、蒸発乾固させ、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＬＨ２０で溶出し、４３を得た。¹H NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，600 MHz）δ：7．09（1H，d，J = 8．4 Hz），6．96-6．99（2H，m），6．91-6．92（2H，m），6．82-6．84（2H，m），4．84（1H，t，J = 3．6 Hz），4．25（0．5H，t，J = 9．0 Hz），4．15-4．18（2H，m），3．82-3．85（2H，m），3．75-3．77（1H，m），3．69-3．72（1H，m），3．64-3．68（2H，m），3．50-3．54（2H，m），3．44（1H，dd，J = 9．6，3．6 Hz），2．54（2H，t，J = 7．2 Hz），2．17（2H，t，J = 7．8 Hz），1．50-1．64（7H，m），1．22-1．27（41H，m），0．84（3H，t，J = 7．2 Hz）．¹³C NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，150 MHz）δ：175．28，160．20，158．61，156．16，154．30，138．67，130．28，120．70，120．64，119．04，116．81，116．66，99．94，90．61，89．41，75．04，72．72，72．59，72．56，72．42，72．37，70．82，70．66，67．82，61．21，51．10，37．05，35．83，32．91，32．61，32．36，30．46，30．43，30．39，30．33，30．27，30．19，30．18，30．09，30．03，29．92，26．63，26．55，23．32，14．41．Ｃ_４７Ｈ_７５Ｆ_２ＮＯ_９Ｈ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値８３６．５４９８，実測値８３６．５４８３．

フッ素化ドナー４８の合成

化合物４４：３２の乾燥ピリジン中の溶液にトリフェニルメチルクロリドを添加した。反応液をアルゴン下、６０℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４４を得た。

化合物４５：４４のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の溶液に水素化ナトリウム（鉱油中６０％）を０℃で添加した。反応液を１時間撹拌した後、臭化ベンジルを添加し、アルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。反応液をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４５を得た。

化合物４６：４５の酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ ４：１）中の溶液を７５℃で３時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４６を得た。

化合物４７：４６のＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液にジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）を添加した。反応液を４５℃で１６時間撹拌し、溶液を直接、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物を得た。

化合物４８：４７の乾燥共溶媒（トルエン，Ｈ_２ＯおよびＣＨ_３ＣＮ）中の溶液に硝酸セリウムアンモニウム（ＣＡＮ）を添加した。反応液を周囲温度で１０分間撹拌した。溶液を酢酸エチルで抽出し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物４８を無色の油状物として得た。

フッ素化類似体５３の合成

化合物４９：ドナー４８、ジメチルスルフィド、４Åモレキュラーシーブおよび２−クロロピリジンの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液に、アルゴン下、−４５℃でトリフルオロメタンスルホン酸無水物を添加した。反応液を−４５℃で２０分間、０℃で２０分間および周囲温度でさらに２０分間撹拌した後、アクセプタ１８（ＣＨ_２Ｃｌ_２中）を添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過し、モレキュラーシーブを除去した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏとブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ １０：１）によって精製し、４９を得た。

化合物５０：４９のピリジン／Ｈ_２Ｏ（１０：１）中の溶液にトリフェニルホスフィンを添加した。反応液をアルゴン下、４５℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。混合物を事前に精製せずに次の工程に使用した。

化合物５１：化合物５０の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液に４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルウンデカン酸、Ｅｔ_３Ｎ、ＥＤＣおよびＨＢＴｕを添加した。反応液をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、５１を得た。

化合物５２：化合物５１の溶液を酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ ４：１）に溶解させ、６０℃で１６時間撹拌した。溶媒の除去後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。

化合物５３

デアセトニド誘導体５２を、水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）（触媒量）を含む共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３ ４：１）に溶解させ、Ｈ_２雰囲気中で１６時間撹拌した。溶液をＣｅｌｉｔｅ ５４５に通して濾過して触媒を除去し、蒸発乾固させ、混合物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＬＨ２０で溶出し、５３を得た。¹H NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，600 MHz）δ：7．51（0．6H，d，J = 8．4 Hz），7．09-7．11（2H，m），6．97-7．00（2H，m），6．91-6．94（2H，m），6．83-6．85（2H，m），4．85（1H，d，J = 3．6 Hz），4．49-4．59（2H，m），4．15-4．18（1H，m），3．85（1H，dd，J = 10．8，4．8 Hz），3．61-3．71（3H，m），3．52-3．58（2H，m），3．43（1H，d，J = 9．6，3．6 Hz），3．36（1H，t，J = 9．0 Hz），2．55（2H，t，J = 7．8 Hz），2．18（2H，t，J = 7．8 Hz），1．51-1．64（6H，m），1．23-1．39（39H，m），0．85（3H，t，J = 7．2 Hz）．¹³C NMR（MeOD-CDCl₃ 1：1，150 MHz）δ：175．06，174．98，159．99，158．40，155．94，154．09，154．08，138．48，130．09，120．52，120．46，118．85，116．63，116．47，100．02，83．18，82．04，74．72，74．31，72．44，72．38，71．78，71．67，69．58，69．54，50．88，50．79，36．88，36．83，35．64，32．64，32．42，32．17，30．29，30．24，30．20，30．14，30．08，30．01，29．99，29．91，29．85，29．74，26．42，26．38，23．13，14．26．Ｃ_４７Ｈ_７５Ｆ_２ＮＯ_９Ｈ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ） 計算値８３６．５４８３，実測値８３６．５４９８．

生物学的試験

マウスへの糖脂質類似体の注射

糖脂質はすべて、１００％ＤＭＳＯに１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。インビボ実験では、化合物はすべて、マウスへの１００μｌの希釈糖脂質または１００μｌの１％ＤＭＳＯの注射の直前に生理食塩水中で１０μｇ／ｍｌに希釈した。６〜１２週齢の無菌Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスをＮａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（台北，台湾）から取得した。Ｊα１８ノックアウト（ＫＯ）Ｂ６マウスは、谷口克医博（理化学研究所の免疫アレルギー科学総合研究センター（ＲＩＫＥＮ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ），横浜，日本）の厚意によりご提供頂いた。マウスはすべて、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｏｒｇａｎｉｓｍｉｃ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ（台北，台湾）の無菌飼育器に維持した。

マウスのサイトカイン／ケモカイン分泌の測定

Ｂ６ ＷＴまたはＪα１８ ＫＯマウスにビヒクルまたは０．１もしくは１μｇ／マウスの糖脂質を静脈内注射した。注射後２時間目および１８時間目に、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｍｏｕｓｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＮＹ）でのサイトカイン／ケモカインの測定およびＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００（商標）システム（Ｌｕｍｉｎｅｘ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）での読取りのため、血清を収集した。

特異的糖脂質刺激後のマウス免疫細胞のＦＡＣＳ解析

特異的糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中１％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６ ＷＴまたはＪα１８ ＫＯマウスを注射後７２時間目に致死させ、脾臓を採取した。脾臓を７０ｕｍストレーナーで押圧し、赤血球を溶解させた後、有核細胞を、アジド（０．０５％）を含有するＰＢＳバッファー中に再懸濁させ、表示した細胞表面抗原を認識する抗体で４℃にて３０分間染色した。洗浄した後、脾細胞をＦＡＣＳ解析に供した。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８０およびＣＤ８６に対する抗体をＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから取得した。

ｍＣＤ１ｄと糖脂質の二元複合体の結合強度

ＥＬＩＳＡプレート上にコートした異なる濃度のｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質複合体を、ビオチンとコンジュゲートさせた飽和量のＬ３６３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）とともにインキュベートした後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行なった。Ｌ３６３抗体と表示したｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質複合体間のＫＤをＬ３６３抗体の結合曲線のスキャッチャード変換の線形回帰により、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算した。Ｌ３６３は、ｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体とｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−７ＤＷ８−５複合体を同様の結合強度で認識することがわかった。次に、この二元複合体のＫＤを以下のようにして測定した。異なる濃度の糖脂質を固定量のｍＣＤ１ｄ二量体とともに３７℃で一晩インキュベートし、次いで、ｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質複合体を９６ウェルＥＬＩＳＡプレート上に４℃で一晩コートした。洗浄および室温（ＲＴ）で１時間のＢＳＡでのブロック後、ビオチンとコンジュゲートさせたＬ３６３抗体を室温で３０分間添加した後、ストレプトアビジン−ＨＲＰとともに室温で３０分間インキュベーションし、ＥＬＳＩＡリーダーで検出を行なった。二元複合体のＫＤ値を、Ｌ３６３抗体の結合曲線のスキャッチャード変換の線形回帰により計算した。

ヒトｉＮＫＴ細胞の増殖

ヒトナイーブＶα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞を、１００ｎｇ／ｍｌの表示した糖脂質またはＤＭＳＯをパルスした自己未成熟ＣＤ１４^＋ ＤＣとともに２日目に１８時間培養した。３日目、懸濁細胞を新しい皿に移し、５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下で培養し、新鮮培地を３日間毎に補給した。Ｖα２４^＋／Ｖβ１１^＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって９日目に測定した。増殖後の細胞の総数をＧｕａｖａ ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）を用いて計算し、ＶｉａＣｏｕｎｔモジュールを含むＣｙｔｏＳｏｆｔ（商標）ソフトウェアを有するＧｕａｖａシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）によって検出した。

種々のＣＤ１ｄ負荷糖脂質のＶα１４＋ ｉＮＫＴ細胞に対する結合アビディティ

簡単には、マウスＣＤ１ｄ：Ｉｇ二量体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に、糖脂質を１：１０のモル比で、またはビヒクルを３７℃で一晩負荷した。マウス１．２Ｖα１４^＋ ｉＮＫＴ細胞を種々の用量の二量体−糖脂質複合体とともに、アジド（０．０５％）含有バッファー中で４℃にて３０分間インキュベートした。次いで、この細胞を抗マウスＩｇＧ１−ＰＥ ｍＡｂ（Ａ８５−１）で４℃にてさらに３０分間染色した後、洗浄し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定し、結合されたｍＣＤ１ｄ二量体複合体をフローサイトメトリーによって検出した。スキャッチャード変換の結合曲線および線形フィットをＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってプロットした。

ＣＤ１ｄ負荷糖脂質をＶα２４＋ ｉＮＫＴ細胞との結合アビディティ

１００ｎｇ／ｍｌの７ＤＷ８−５によって増殖したＶα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞に対するヒトＣＤ１ｄ−糖脂質複合体の結合アビディティを既報のようにして測定した^１９。

ヒトＶα２４＋ ｉＮＫＴ細胞株および未成熟単球由来樹状細胞の単離および作製

Ｖα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞およびＣＤ１４^＋細胞を末梢血細胞から既報のようにして単離した^１９。未成熟ＤＣはＣＤ１４^＋細胞から、３００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）および１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４（Ｒ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下で２日間インキュベーション後に作製された。

７ＤＷ８−５またはＣ１を用いて増殖したＶα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞株は以下のようにして作製した。２，０００ラドを照射した後、未成熟ＤＣをシンジェニックＶα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞とともに１００ｎｇ／ｍｌの７ＤＷ８−５またはＣ１の存在下で１日、共培養した。脂質の除去後、細胞を５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２の存在下で１０〜１４日間増殖した。ｉＮＫＴ細胞のさらなる刺激と増殖のために同じ手順を１回繰り返した。７ＤＷ８−５またはＣ１を用いて増殖させたｉＮＫＴ細胞株はＶα２４ Ｔ細胞抗原受容体（＞９５％純度）を発現していることが示された。

ｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄのスワップアッセイ

マウスＤＮ３Ａ４−１．２ Ｖα１４^＋ ｉＮＫＴハイブリドーマ細胞またはＣ１増殖Ｖα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞に、ｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ細胞）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞）のいずれかによって提示された表示した糖脂質抗原を１、０．１および０．０１μｇ／ｍｌでパルスした。１８時間後、サイトカイン分泌物（１種類または複数種）の測定のために上清みを採取した。Ｖα１４^＋ ｉＮＫＴ細胞から放出されたＩＬ−２をＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。Ｖα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞から分泌されたＩＦＮ−γ、ＩＬ−４およびＩＬ−２は、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＮＹ，ＵＳＡ）およびＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００（商標）読取システムを用いて検出した。

コンピュータモデル設計およびシミュレーション

α−ＧａｌＣｅｒをそのそれぞれのｉＮＫＴ ＴＣＲに提示するヒトおよびマウスの両方のＣＤ１ｄ（ｈＣＤ１ｄおよびｍＣＤ１ｄ）の結晶構造を、ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ；ＰＤＢのコードは３ＨＵＪ、３ＱＵＸ、３ＱＵＹ、３ＱＵＺおよび３ＨＥ６である）から検索した。これらの結晶構造を、３ＱＵＸの主鎖原子を基準にすることにより重ね合わせた。３ＨＥ６と３ＨＵＪから得た２つのα−ＧａｌＣｅｒ三元構造を用いて、異なるＧＳＬで構成されたその他の三元複合体を作成した。Ｃ３４を含む三元構造を、Ｃ１を含むものからＭｅａｓｔｒｏ（Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ ＬＬＣ，ＵＳＡ）上のアシル鎖を修飾することにより誘導した。Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃを有する三元構造は、それぞれＣ１およびＣ３４のＯ４キラリティーを反転させることにより作成した。残りの新しい三元複合体のモデル設計は、それぞれマウスおよびヒトの３ＱＵＸおよび３ＨＵＪのこれらのＧＳＬおよびＣＤ１ｄ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ構造を用いて構築した。構造はすべて、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎウィザード（Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ ＬＬＣ，ＵＳＡ）を用いて加工し、脂質尾部を、立体衝突が最小限となるように、ＭａｃｒｏＭｏｄｅｌの立体配座サーチを用いてさらに絞り込み、デフォルト法および水溶媒中でのＯＰＬＳ２００５力場によりエネルギー最小化を行なった。ＧＳＬのｉＮＫＴ ＴＣＲに対する結合様式を、Ａｕｔｏｄｏｃｋ４．２により半経験的自由エネルギー力場を用いて再コンピュータ計算し、シミュレーション中の立体配座を評価した。溶媒中の推定結合自由エネルギーを、Ａｕｔｏｄｏｃｋ４．２で構築された方程式：

ΔＧ＝ΔＶ^Ｌ（結合−未結合）＋ΔＶ^Ｐ（結合−未結合）＋ΔＶ^ＰＬ（結合−未結合＋ΔＳ_ｃｏｎｆ）
によってコンピュータ計算した。

式中、Ｌは「リガンド」を示し；Ｐは「タンパク質」を示し；Ｖはペアワイズエネルギー用語、例えば分散／反発力、水素結合および静電気の評価を示し；ΔＳ_ｃｏｎｆは結合時の配座エントロピー損失の推定値である。Ａｕｔｏｄｏｃｋ４の実行に必要とされる入力ファイルはすべて、ＭＧＬＴｏｏｌｓで作成した。６０×６０×６０Å^３のグリッドボックスおよび種々の原子タイプ別（−ｔｙｐｅｄ）エネルギーマップを作成した。各分子ドッキングの実施において、ヒドロキシル基はすべて、自由回転に設定し、２つの脂質尾部は、事前に絞り込んだポーズに割り付けた。Ｌａｍａｒｃｋｉａｎ遺伝的アルゴリズム（最大数５．０×１０^７のエネルギー評価および２７，０００世代ならびに交叉率０．８で０．０２の変異率）を検索に使用した。結果をＭＧＬＴｏｏｌｓで視覚化し、個々の残基に対する水素結合の寄与を組み込み関数によって取得した。グラフ表示はＭａｅｓｔｒｏで仕上げた。

結果

αＧｌｃを有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）はαＧａｌを有するものよりも、ヒトにおいて強力であるがマウスにおいては弱い免疫調節物質である

これまで、０．１μｇ／マウスの７ＤＷ８−５は免疫刺激に充分であった^１９が、グルコース類似体７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって免疫応答を誘導するには、より高い投薬量（１μｇ／マウス）が必要とされた（図６）。したがって、新しく合成した糖脂質の生物学的活性をＢ６マウスにおいて、１μｇ／マウスの糖脂質のｉ．ｖ．注射の２時間後および１８時間後に試験した。図２および図７に示されるように、マンノース類似体７ＤＷ８−５−Ｍａｎでは、いずれのサイトカイン／ケモカインも誘導されなかった。αＧｌｃを有するＧＳＬと比較した場合、αＧａｌを有するＧＳＬの方が、高レベルのサイトカインおよびケモカイン、例えばＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＰ−１０を誘導した。同様の傾向が、異なるグリコシル基を有するαＧａｌＣｅｒおよびＣ３４類似体でもみとめられた（図２Ａ、２Ｂおよび図７）。

Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃはサイトカインおよびケモカインの両方を誘発したが、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃが誘導したＴｈ１およびＴｈ２サイトカインは非常に低レベルであったが、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧケモカインは比較的高レベルであった。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによるケモカイン誘導にｉＮＫＴ細胞以外の免疫細胞が寄与しているかもしれないという可能性を調べるため、ｉＮＫＴ細胞を有しないＪα１８ ＫＯマウスに７ＤＷ８−５−Ｇｌｃまたは７ＤＷ８−５を１μｇ／マウスで注射した^２５。注射の２時間後および１８時間後に収集したマウスの血清では、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃのいずれかによるサイトカインの誘導は示されなかった（図２Ａ、２Ｂおよび図７）。驚くべきことに、７ＤＷ８−５では誘発されなかったが、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃでは、Ｊα１８ ＫＯマウスにおいて、いくつかのケモカイン、例えばＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧの分泌が誘発された。このような所見により、Ｊα１８ ＫＯマウスのｉＮＫＴ細胞以外の免疫細胞が、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで処置したＷＴマウスおよびＪα１８ ＫＯマウスにおいてケモカインの生成に寄与したはずであることが示唆された。

次に、本発明者らは、糖脂質刺激の３日後にＷＴマウスにおいて免疫細胞の増殖／活性化を解析した。Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞の総数は、αＧａｌ頭部を有するＧＳＬで処置したマウスの方がαＧｌｃを有するＧＳＬで処置したマウスよりも多かった（図２Ｃ、８Ｅおよび８Ｆ）。これは、マウスにおいて、αＧｌｃを有するＧＳＬよりもαＧａｌを有するＧＳＬによって、より多くのサイトカイン／ケモカインが誘導されるという観察結果と合致した（図２Ａ、２Ｂおよび７）。αＧｌｃを有するＧＳＬ間での免疫賦活活性のさらなる比較により、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃはどちらも、サイトカイン／ケモカインの誘導（図２Ａ、２Ｂおよび７）ならびにＤＣの増殖／活性化（図８Ｂ〜８Ｄ）において７ＤＷ８−５−Ｇｌｃよりも良好であることが明らかになった。Ｃ３４−Ｇｌｃは７ＤＷ８−５−Ｇｌｃよりも約２倍多くのＣＤ８０^＋またはＣＤ８６^＋ ＤＣを活性化した（図８Ｃおよび８Ｄ）が、これらが誘導した脾細胞およびＤＣの総数は同様であった（図８Ａおよび８Ｂ）。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃと比較した場合、Ｃ１−Ｇｌｃは、約１．３倍多くの脾細胞およびＤＣを増殖させただけでなく（図８Ａおよび８Ｂ）、約３．５倍多くのＣＤ８０^＋ ＤＣならびに約３倍多くのＣＤ８６^＋ ＤＣも活性化させた（図８Ｃおよび８Ｄ）。ＤＣの増殖／活性化の増大が、インビボで７ＤＷ８−５−Ｇｌｃと比べてＣ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃにより誘発される免疫原性の方が強いことに寄与しているのかもしれない。対照的に、７ＤＷ８−５−Ｍａｎはいずれの型の免疫細胞も増殖させず（図２Ｃおよび８）、サイトカイン／ケモカインの誘導の欠如と整合した（図２Ａ、２Ｂおよび７）。

予期せずに、本発明者らはまた、７ＤＷ８−５−ＧｌｃがＪα１８ ＫＯマウスにおいてケモカインを誘導することも観察した（図７）。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃまたは７ＤＷ８−５のｉ．ｖ．注射の３日後、Ｊα１８ ＫＯマウス脾細胞のＦＡＣＳ解析により、ＣＤ１１ｃ^ｈｉ単球由来ＤＣは有意に増殖し、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって活性化されるが７ＤＷ８−５によっては活性化されないことが明らかになった（図９Ｂ〜９Ｄ）。７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃのいずれかでの刺激後、脾細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞の総数に有意差はみとめられなかった（図９Ａ、９Ｅおよび９Ｆ）。このような所見により、単球が、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで処置したＪα１８ ＫＯマウスにおいてＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧなどのケモカインの誘導を担っている可能性があることが示された。

上記のように、αＧａｌを有する糖脂質類似体は、マウスにおいて、特に７ＤＷ８−５と７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ間の比較では、αＧｌｃを有するものよりも強力な免疫調節物質であった。同様の傾向がヒトｉＮＫＴ細胞にもあてはまるかどうかを調べるため、末梢血から単離したＶα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞を、２日目に１００ｎｇ／ｍｌの表示した糖脂質をパルスした未成熟ＤＣとともにインキュベートした。３日目に抗原を除去した後、ヒトｉＮＫＴ細胞をＩＬ−２の存在下で培養した。増殖したｉＮＫＴ細胞の数を、９日目に、Ｇｕａｖａ ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬を用いて計測した。驚くべきことに、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは７ＤＷ８−５よりも、インビトロでのヒトｉＮＫＴ細胞の増殖において有意に（ｐ＝０．０００９）良好であった（図２Ｄ）。総合すると、このような所見により、αＧａｌを有するＧＳＬの生理活性は、αＧｌｃを有するＧＳＬと比べて、マウスにおいてより強力であるが、ヒトにおいてはあまり強力でないことが示唆された。

ｍＣＤ１ｄと糖脂質間の二成分系相互作用

７ＤＷ８−５と７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの免疫調節活性の差の理由を理解するため、本発明者らは、ｍＣＤ１ｄと特異的糖脂質間の二成分系相互作用の結合強度を、糖脂質と複合体形成したｍＣＤ１ｄに結合し得るＬ３６３ ｍＡｂを用いて測定した^２６。種々の濃度の固定比率のｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質複合体を飽和量のＬ３６３−ビオチン抗体とともにインキュベートした後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行なった（図１０Ａ）。Ｌ３６３と表示したｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質複合体間の解離定数（ＫＤ）を、プロット（図１０Ａ）のスキャッチャード変換の線形回帰によりＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算した。Ｌ３６３はｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体を、ｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−７ＤＷ８−５複合体の場合と同様の結合強度で認識することがわかった（図１０Ｂ）。次に、本発明者らは、この二元複合体のＫＤを、異なる濃度の糖脂質を固定量のｍＣＤ１ｄ二量体およびＬ３６３−ビオチン抗体とともにインキュベートした後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行なうことにより調べた（図１０Ｃ）。ＫＤを、Ｌ３６３の検出読み出し情報から作成した結合曲線のスキャッチャード変換により計算した（図１０Ｄ）。予想どおり、７ＤＷ８−５と同一の脂質尾部を有する７ＤＷ８−５−ＧｌｃはｍＣＤ１ｄ二量体にαＧａｌＣｅｒと同様の強度で結合したが、その結合アビディティはαＧａｌＣｅｒよりも約２０倍大きかった。これにより、二成分系相互作用の強度は７ＤＷ８−５と７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの免疫賦活能の差の理由にはなり得ないことが示された。

ＣＤ１ｄ−ＧＳＬ複合体とｉＮＫＴ細胞間の三成分系相互作用

次に、本発明者らは、マウスおよびヒトにおけるＣＤ１ｄ−糖（ｇｌｃｏ）脂質複合体とｉＮＫＴ ＴＣＲ間の三成分系相互作用を測定した。異なる濃度のｍＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質とｈＣＤ１ｄ^ｄｉ−糖脂質複合体を、それぞれ固定量のＤＮ３Ａ４−１．２マウスｉＮＫＴハイブリドーマ細胞およびヒトＶα２４^＋／Ｖβ１１^＋ ｉＮＫＴ細胞とともにインキュベートした。表示した濃度における結合複合体レベルを抗ｍＩｇＧ１二次抗体によって検出し、フローサイトメトリーによって解析した（図３Ａおよび３Ｂ）。三元複合体のＫＤを図３Ａおよび３Ｂのプロットのスキャッチャード変換により、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算した。図３Ｃに示されるように、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５複合体はｉＮＫＴ ＴＣＲと、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体よりも約１０倍強い相互作用を示した。これは、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５複合体によって染色されたＣ１パルス脾細胞のパーセンテージ（３６．２±５．０％）がｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体（１７．１±０．８％）よりも大きいという観察結果と整合した（図１１）。ｍＣＤ１ｄと複合体形成させた場合Ｃ１（ＫＤ：１．２４０±０．００３ｎＭ）およびＣ３４（ＫＤ：０．７３５±０．０１０ｎＭ）はともに、ｉＮＫＴ ＴＣＲに対して、それぞれＣ１−Ｇｌｃ（ＫＤ：５．１３７±０．１１０ｎＭ）およびＣ３４−Ｇｌｃ（ＫＤ：７．９６０±１．２６９ｎＭ）よりも強い三成分系相互作用を示した（図３Ｃ）。

ヒトでは、ｈＣＤ１ｄとの複合体の状態で、αＧｌｃを有するＧＳＬ（Ｃ１−ＧｌｃのＫＤ：８．５５０±０．６１７；Ｃ３４−Ｇｌｃ：０．３７８±０．０１９；７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ：０．４８１±０．００８ｎＭ）は、Ｖα２４^＋／Ｖβ１１^＋ ｉＮＫＴ ＴＣＲに対して、αＧａｌを有するＧＳＬ（Ｃ１のＫＤ：１６．４１０±４．２００；Ｃ３４：０．４９８±０．００５；７ＤＷ８−５：０．７７７±０．０２２ｎＭ）よりも強い三成分系相互作用を示した（図３Ｄ）。したがって、脂質尾部の型に関係なく、αＧａｌを有するＧＳＬはαＧｌｃを有するＧＳＬよりも、マウスｉＮＫＴ ＴＣＲとは強い三成分系相互作用を示したが、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲとは弱い三成分系相互作用を示した（図３Ｃおよび３Ｄ）。これは、αＧａｌを有するＧＳＬがマウスにおいてより高レベルのサイトカイン／ケモカインおよびより大きな免疫細胞増殖を誘発した（図２Ａ〜２Ｃ、７および８）が、ヒトにおいて誘発したｉＮＫＴ細胞増殖は少なかった（図２Ｄ）という観察結果の説明となり得る。総合すると、ｉＮＫＴ ＴＣＲ、ＣＤ１ｄおよびＧＳＬ間の三成分系相互作用はＣＤ１ｄとＧＳＬ間の二成分系相互作用よりも糖脂質の生理活性に関連しているようである。

ｉＮＫＴ細胞に対するヒトとマウス（対比）のＣＤ１ｄ分子のスワップの効果

種特異的応答を説明するため、本発明者らは、ヒトとマウス（対比）のｉＮＫＴ細胞に対するヒトとマウス（対比）ＣＤ１ｄ分子のスワップの異なるグリコシル基を有するＧＳＬの賦活活性に対する効果を調べた。マウスｉＮＫＴハイブリドーマ細胞（図４Ａ）またはＣ１増殖ヒトＶα２４^＋ ｉＮＫＴ細胞（図４Ｂ）にｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）のいずれかによって提示された表示した糖脂質をパルスした。２４時間後に上清みを採取し、サイトカイン分泌物を測定した。ｍＣＤ１ｄによって提示されようとｈＣＤ１ｄによって提示されようと、αＧａｌを有するＧＳＬは、マウスｉＮＫＴ細胞で、αＧｌｃを有するＧＳＬよりも多くのＩＬ−２分泌を誘導した（図４Ａ）。これは、血清サイトカイン分泌の誘導に対して、αＧａｌを有するＧＳＬはαＧｌｃを有するＧＳＬより強力であるというインビボ所見と整合した（図２および７）。対照的に、ヒトｉＮＫＴ細胞では、ｍＣＤ１ｄまたはｈＣＤ１ｄのいずれかによって提示させた場合、αＧｌｃを有するＧＳＬはαＧａｌを有するＧＳＬよりも多くのＩＬ−２分泌を誘発した（図４Ｂ）。同様の傾向が、ヒトｉＮＫＴ細胞でのＩＦＮ−γ分泌およびＩＬ−４分泌についても観察された（図１２Ａおよび図１２Ｂ）。異なるグリコシル基を有するＧＳＬの種特異的賦活活性は、ＣＤ１ｄではなくマウスとヒト（対比）のｉＮＫＴ ＴＣＲによって指示された。比較において、７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、ｍＣＤ１ｄによる提示またはｈＣＤ１ｄによる提示に関係なく、マウスおよびヒトｉＮＫＴ細胞を刺激していずれかのサイトカインを分泌させることができなかった。注目すべきことに、αＧｌｃを有するＧＳＬはすべて、ＩＬ−４に対するＩＦＮ−γの比に基づいてＣ１よりも有意に多くのＴｈ１傾斜型（ｓｋｅｗｅｄ）応答を誘発した（図１２Ｃ）。その上、脂質尾部に関係なく、αＧｌｃを有するＧＳＬは、ヒトにおいてαＧａｌを有するＧＳＬよりもＴｈ１偏向のようであった（図１２Ｃ）。このような所見により、グリコシル基の４’−ＯＨの修飾によってＴｈ１方向へのヒトｉＮＫＴ細胞の応答が選択的に誘導され得ることが示された。

ＣＤ１ｄ−ＧＳＬ−ｉＮＫＴ ＴＣＲの三元複合体の構造モデル設計

マウスおよび人間における三元複合体の結合アビディティの差をさらに説明するため、コンピュータモデル設計を、それぞれマウスおよびヒトのＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体（ＰＤＢアクセスコード３ＨＵＪ、３ＱＵＸ、３ＱＵＹ、３ＱＵＺおよび３ＨＥ６）のｘ線構造に基づいて行なった^{２７〜２９}。

（１）糖鎖頭部基の相互作用

図３Ａおよび３Ｂに示されるように、Ｍａｎを有するＧＳＬは、ＣＤ１ｄと複合体形成させた場合、マウスおよびヒトのｉＮＫＴ細胞に結合し得なかった。マンノースの垂直な２’ＯＨはｉＮＫＴ ＴＣＲに立体障害をもたらし（人間ではＳｅｒ３０およびマウスではＡｓｎ３０）、ｉＮＫＴ ＴＣＲに対してガラクトースの２’ＯＨによって元々形成されていた２つの水素結合が失われた。（人間ではＧｌｙ９６とＡｓｐ１５１およびマウスではＧｌｙ９６とＡｓｐ１５３）。Ｇａｌを有するＧＳＬについて、マウスおよびヒトでのＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲに対するＣ１の結合を、それぞれ図５Ａおよび５Ｂに示した。水素結合（Ｈ−結合）相互作用の形成は、ほとんどの保存残基で、例えば、ＣＤ１ｄのヒトＡｓｐ８０（マウスＡｓｐ８０）、ヒトＴｈｒ１５４（マウスＴｈｒ１５６）、ヒトＡｓｐ１５１（マウスＡｓｐ１５３）およびｉＮＫＴ ＴＣＲのヒトＧｌｙ９６（マウスＧｌｙ９６）で観察された。他方で、Ｃ１の３’ＯＨ／４’ＯＨとヒトおよびマウスのｉＮＫＴ ＴＣＲとのＨ−結合相互作用はかなり異なっていた。マウスｉＮＫＴ ＴＣＲの残基Ａｓｎ３０はＣ１の３’−ＯＨおよび４’−ＯＨに対する結合に極めて重要であった。Ａｓｎ３０の自由エネルギーの寄与は、ＭＧＬＴｏｏｌｓを使用して−２．２７〜−３．３８Ｋｃａｌ／ｍｏｌであると推定された。比較において、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲのＳｅｒ３０はＣ１の４’−ＯＨからさらに遠く、３’−ＯＨのみとのより弱いＨ−結合相互作用がもたらされたが、Ｃ１の４’−ＯＨとＰｈｅ２９の主鎖Ｃ＝Ｏ基間にＨ−結合が形成され得た（図５Ｂ）。Ｓｅｒ３０とＣ１の３’−ＯＨおよび４’−ＯＨとＰｈｅ２９の自由エネルギーの寄与をコンピュータ計算すると約−１．２３〜−１．６３Ｋｃａｌ／ｍｏｌであった。したがって、４’ＯＨのアキシアル（Ｇａｌ）方向からエクアトリアル（Ｇｌｃ）方向への変化によりｉＮＫＴ ＴＣＲのマウスＡｓｎ３０およびヒトＰｈｅ２９とのＨ−結合相互作用が損なわれ得る。それぞれＣ１およびＣ３４と比較した場合、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−ＧｌｃにはマウスＡｓｎ３０とのＨ−結合相互作用がなく、自由エネルギーの低下がもたらされた（−０．７〜−０．９Ｋｃａｌ／ｍｏｌ（ＭＧＬＴｏｏｌｓによる計算））。これは、ガラクトースをグルコース頭部に変更した場合のＫＤ測定でのマウス三成分系相互作用の低下（図３Ｃ）と合致した。これに対して、ヒト三成分系相互作用はグルコースを有するＧＳＬの方が大きかった（図３Ｄ）。コンピュータモデル設計に基づき、本発明者らは、グルコースのエクアトリアル４’−ＯＨが、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ｐｈｅ５１およびｈＣＤ１ｄ−Ｔｒｐ１５３によって捕捉された結晶水とのより強い相互作用（約−１．８４Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）によってＰｈｅ２９相互作用の低下（−０．４Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）を代償しているのではないかということを見出した（図５Ｃ）。マウスでは疎水性空間の形成および捕捉水分子がないため、三成分系相互作用は、Ｇｌｃを有するＧＳＬの方がＧａｌを有するものより弱くなり得る。

（２）脂質尾部の相互作用

Ｃ３４のアシル尾部の２つの芳香族環は、ＣＤ１ｄのＰｈｅ７０およびＴｒｐ６３と芳香族相互作用を構成し得る。したがって、Ｃ１からＣ３４へのアシル尾部の変更によりＣＤ１ｄとの相互作用が増大し得る（モデル設計では−１．８〜−２．４Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）。また、芳香族相互作用による高エネルギーにより、Ｃ３４またはＣ３４−Ｇｌｃのアシル鎖がＣＤ１ｄ内のＡ’チャネルのより低い位置（Ｃｙｓ１２付近）に追いやられることになり、頭部基の向きに対して微妙な乱れがもたらされるのかもしれない（図５Ｄ）。したがって、マウスｉＮＫＴ ＴＣＲとグルコース頭部のエクアトリアル４’−ＯＨ間には適合した（ｃｏｎｇｅｎｉａｌ）力がないため、ｉＮＫＴ ＴＣＲに対するｍＣＤ１ｄ−Ｃ３４−Ｇｌｃの結合はｍＣＤ１ｄ−Ｃ１−Ｇｌｃよりも少し弱かった（図３Ｃ）。これは、なぜマウスにおいてＣ３４−ＧｌｃはＣ１−Ｇｌｃよりも強力さが低かったがＣ３４はＣ１よりも卓越していたのかの説明となり得る。

（３）ＡＵＴＯＤＯＣＫ４を用いたコンピュータ計算による自由エネルギー

ヒトおよびマウスのＣＤ１ｄ−ｉＮＫＴ ＴＣＲに結合している各ＧＳＬの自由エネルギーを三連でコンピュータ計算した。各回において、ＧＳＬをヒトおよびマウスのＣＤ１ｄ−Ｃ１−ｉＮＫＴ ＴＣＲにドッキングさせ、最高ランクの自由エネルギーを選択した。図５Ｅに示されるように、コンピュータ計算された自由エネルギーは一般に、マウス（図３Ｃ）およびヒト（図３Ｄ）について測定されたＫＤ値の傾向と相関していた。

さまざまな手段が、本発明の組成物を製剤化するために使用され得る。製剤化および投与のための手法は“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”第２０版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（１９９５）において知得され得る。ヒトまたは動物への投与では、調製物は、ＦＤＡが求めるものと同等の滅菌性、発熱原性ならびに一般的な安全性および純度基準を満たすものであるのがよい。医薬製剤の投与は本明細書に記載のさまざまな様式で行なわれ得る。

サイトカイン誘導およびＧＳＬ、ＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲ間の三成分系相互作用

αＧａｌＣｅｒと比較した場合、αＧｌｃＣｅｒは、マウスｉＮＫＴ細胞増殖に対する賦活性は低いことが報告されているが、ヒトｉＮＫＴ細胞増殖の刺激に対してはより強力なようであった^５，２２。また、本発明者らの試験では、サイトカイン誘導およびＧＳＬ、ＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲ間の三成分系相互作用に関して、マウスおよびヒトにおいてαＧａｌＣｅｒとαＧｌｃＣｅｒとで活性の差も観察された。さらに、αＧａｌまたはαＧｌｃ頭部を有するフェニルＧＳＬは同様の種特異的活性を示した。したがって、脂質尾部に関係なく、αＧａｌを有するＧＳＬはαＧｌｃを有するＧＳＬよりも、マウスにおいては良好であったが人間において劣っていた。これにより、マウスとヒトとの間でのＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲの高度に相同な配列にもかかわらず、マウスにおける糖脂質の生理活性はヒトにおけるものに置き換えることができないことが示された^３０。

種特異的応答は、ｍＣＤ１ｄとｈＣＤ１ｄ（対比）のスワップアッセイによって実証されたように、マウスと人間のｉＮＫＴ ＴＣＲの違いに最も起因していると思われた。ｍＣＤ１ｄまたはｈＣＤ１ｄのいずれかによって提示されたαＧａｌを有するＧＳＬはαＧｌｃを有するＧＳＬよりも、マウスｉＮＫＴ細胞の刺激に対しては強力であったが、ヒトｉＮＫＴ細胞に対する賦活性は低かった。ＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲの結晶構造によれば、ｉＮＫＴ ＴＣＲのＣＤＲ１α領域内のガラクトース頭部の４’−ＯＨと接触している残基はマウス（Ａｓｎ３０）とヒト（Ｐｈｅ２９）間で保存されていなかった^{２７，２８}。本発明者らのコンピュータモデル設計により、４’−ＯＨのアキシアル方向からエクアトリアル方向の変化によってマウスでは該４’ＯＨとｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ａｓｎ３０間の水素結合が失われ得ることが明らかになった。これに対して、グルコースのエクアトリアル４’−ＯＨは、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ｐｈｅ５１およびｈＣＤ１ｄ−Ｔｒｐ１５３によって捕捉された結晶水とのより強い相互作用によってＰｈｅ２９の相互作用の低下を代償しているのかもしれない。したがって、αＧｌｃを有するＧＳＬによって構成された三成分系相互作用はαＧａｌを有するＧＳＬよりも、ヒトにおいては強かったがマウスにおいては弱かった。総合すると、マウスおよびヒトＣＤ１ｄ−ＧＳＬ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体の構造モデル設計により種特異的生物学的活性に対する良好な説明が得られ、コンピュータ計算された自由エネルギー変化は三元複合体の結合アビディティの測定値の傾向と良好に相関していた。

同じ尾部を有するがグリコシル基は異なる本発明者らの類似体ペアとは反対に、種特異的免疫応答はまた、同じグリコシル基を有するが脂質尾部は異なる他の場合でもみられた^{３１，３２}。同様に、マウスおよび人間の２種類のＣ−グリコシド類似体の優先的活性を形成するのはＣＤ１ｄではなくｉＮＫＴ ＴＣＲであり、これは三元複合体の結合強度と良好に相関していた^３１。また、本発明者らの糖脂質でも、三成分系相互作用の方が二成分系相互作用よりも、マウスおよび人間における生物学的応答の予測において重要であった。７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃはどちらも、おそらくフェニル環の接触の増大およびＣＤ１ｄ Ａ’ポケットを有するフルオリド原子のため、Ｃ１よりもずっと強くｍＣＤ１ｄと結合した^３３。同じ脂質尾部を有するこの２種類の糖脂質がＣＤ１ｄに対して同様の結合強度を示したにもかかわらず、これらは異なる免疫賦活効力を示した。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは７ＤＷ８−５よりも、人間においては良好であったがマウスにおいては劣っており、三元複合体の結合アビディティと良好な関係を有していた。７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃに加えて、その他の２組の類似体ペア（Ｃ１とＣ１−Ｇｌｃ（対比）およびＣ３４とＣ３４−Ｇｌｃ（対比））の生理活性もまた、マウスおよび人間において三成分系相互作用の強度と良好に相関していた。すなわち、αＧａｌを有するＧＳＬはαＧｌｃを有するＧＳＬよりも、マウスにおいては強い三成分系相互作用および免疫賦活活性を示したが人間においてはその傾向が反対であった。したがって、インビトロでの三成分系相互作用の測定は、本発明者らの新しい糖脂質のインビボでの免疫賦活効力を予測するために使用できる可能性がある。

αＧｌｃを有するＧＳＬ間のさらなる比較により、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃはどちらも、マウスにおけるサイトカイン誘導において７ＤＷ８−５−Ｇｌｃよりも良好であることが明らかになった。しかしながら、マウス三元複合体の結合アビディティはＣ３４−Ｇｌｃと７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで同等であった。このような所見により、ＫＤ以外の要素によってインビボでの免疫応答が調節されているのかもしれないことが示唆された。実際、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃはどちらも、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃよりも多くのＣＤ８０^＋またはＣＤ８６^＋ ＤＣを活性化し、これが、マウスにおいてＣ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃのより強い生理活性に寄与している可能性がある。総合すると、いくつかの要素、例えば、三成分系相互作用の強度および免疫細胞の増殖／活性化がインビボで免疫刺激を調節しているのかもしれない。

αＧａｌまたはαＧｌｃを有するＧＳＬとは対照的に、αＭａｎＣｅｒおよび７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、マウスおよびヒトのどちらにおいてもｉＮＫＴ細胞増殖^５，２２、サイトカイン／ケモカインおよび／または免疫細胞の増殖／活性化を誘導することができなかった。これは、ｉＮＫＴ細胞においてＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５−Ｍａｎ二量体による染色がなかったことによって実証されたように、マウスｉＮＫＴ ＴＣＲもヒトｉＮＫＴ ＴＣＲもαＭａｎ頭部を認識できなかったという事実によるものであり得る。７ＤＷ８−５−Ｍａｎと比較した場合、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃはマウスにおいて、非常に低レベルではあったがＴｈ１サイトカインおよびＴｈ２サイトカインを誘導することができた。比較において、ＷＴマウスおよびＪα１８ ＫＯマウスでは７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって大量のＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧケモカインが誘発され、ｉＮＫＴ細胞以外の特定の型の免疫細胞がこのようなケモカイン分泌に寄与している可能性があることを示す。実際、単球は、Ｊα１８ ＫＯマウスにおいて７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって有意に増殖／活性化された。単球が刺激に応答してこのようなケモカインを産生しているのかもしれないことが報告されていた^{３４〜３７}。これにより、単球が、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ処置マウスにおけるケモカイン分泌を担っている可能性があることが示唆される。とはいえ、本発明者らは、Ｊα１８ ＫＯマウスに存在する他の考えられ得る供給源もまた、ある役割を果たしている可能性があることを排除することができなかった。Ｖα１０ ＮＫＴ細胞は、インビトロでαＧａｌＣｅｒおよびαＧｌｃＣｅｒに応答してＩＦＮ−γおよびＩＬ−４を産生することができたが^３８、αＧａｌＣｅｒで処置したＪα１８ ＫＯマウスの血清中にＩＦＮ−γは分泌されていなかった^３９。本発明者らは、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで処置したＪα１８ ＫＯマウスで、いずれのサイトカインの生成も検出することができなかった。このような所見により、Ｖα１０ ＮＫＴ細胞は、マウスにおいて７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって誘発されるケモカインにほとんど寄与していないことが示唆された。

しかしながら、ほとんどのサイトカインおよびケモカイン、例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦαは、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃのいずれかで刺激したＪα１８ ＫＯマウスにおいて生成しなかった。また、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞などの免疫細胞もＪα１８ ＫＯマウスにおいて増殖しなかった。したがって、ｉＮＫＴ細胞は、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによる上記のサイトカイン／ケモカイン誘導および免疫細胞増殖において依然として重要な役割因子であった。

要約すると、αＧｌｃを有するＧＳＬはαＧａｌを有するＧＳＬと比べて、ヒトにおいて、より強い三成分系相互作用を有しており、よりＴｈ１偏向性の免疫を誘発した。しかしながら、マウスにおいては、αＧｌｃを有するＧＳＬはαＧａｌを有するＧＳＬよりも賦活性が低かった。種特異的応答は、ｍＣＤ１ｄとｈＣＤ１ｄ（対比）のスワップアッセイに裏付けられたマウスｉＮＫＴ ＴＣＲとヒトｉＮＫＴ ＴＣＲの差に反映される種間の三元複合体の結合アビディティの差よるものであった。これは、マウスおよび人間におけるＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体の結晶構造に基づいたコンピュータモデル設計による予測と合致した^{２７〜２９}。ＣＤ１ｄ−糖脂質複合体とｉＮＫＴ ＴＣＲ間の三成分系相互作用に加えて、増殖／活性化された単球もまた、特にαＧｌｃを有するＧＳＬの場合、インビボでの免疫応答を調節しているのかもしれない。

本発明者らの試験では、グリコシル基上の４’ＯＨ方向の変化によりマウスおよびヒトにおいて異なる生理活性がもたらされた。これは、αＧａｌＣｅｒ頭部の４’ＯＨに導入された芳香族基がマウスにおけるｉＮＫＴ細胞のサイトカインの生成に影響しているのかもしれないが、ヒトにおけるその効果は調査されなかった報告と整合した^４０。また、グリコシル基の６位における改変でも、生物学的応答に対して多様な効果が示された^{２９，４１}。このような所見により、本発明者らの研究と合わせると、新しいＧＳＬの今後の設計および合成に対する新たな方向性がもたらされた。

本出願全体を通して、種々の刊行物、特許および公開特許出願を挙げている。本出願において言及したこれらの刊行物、特許および公開特許出願の発明は、引用により本明細書においてその全体が本発明に組み込まれる。本明細書における刊行物、特許または公開特許出願の列記は、該刊行物、特許または公開特許出願が先行技術であることを許容するものではない。

本明細書において挙げた刊行物および特許出願はすべて、引用により、あたかも個々の各刊行物または特許出願が具体的に個々に示されて引用により組み込まれているかのごとく、本明細書に組み込まれる。

前述の本発明は、理解を明瞭にする目的のための実例および実施例により、ある程度詳細に説明しているが、当業者には、本発明の教示に鑑みて、添付の特許請求の範囲の精神および範囲から逸脱することなく一定の変更および修正が行なわれ得ることが容易にわかるであろう。

Claims (48)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   （式中：
   Ｒ^１は−ＯＨまたはハロゲンであり；
   Ｒ^２は−ＯＨまたはハロゲンであり；
   Ｒ^３は水素であり；
   Ｒ ^４ は、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基、および任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択され；
   Ｒ^５は、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基、および任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択され；
   ｎは１〜１５（両端を含む）の整数であり；そして
   ｍは１〜２０（両端を含む）の整数である）
   を有するヒト免疫アジュバント化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
2. Ｒ^２が−ＯＨである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
3. Ｒ^２がハロゲンである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
4. Ｒ^１が−ＯＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
5. Ｒ^１がハロゲンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
6. Ｒ^４が式（ＩＩ）：
   

   

   （式中：
   ｉは０、１、２、３、４または５であり；
   Ｒ^６は独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基、および任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択される）
   のものである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
7. Ｒ^６がハロゲンである、請求項６に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
8. Ｒ^６がＦである、請求項６に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
9. Ｒ^４が式（ＩＩＩ）：
   

   

   （式中：
   ｊは０、１、２、３または４であり；
   ｋは０、１、２、３、４または５であり；
   各場合のＲ^７およびＲ^８は独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ基、および任意選択的に置換されたアシルからなる群より選択される）
   のものである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
10. 各場合のＲ^７およびＲ^８が独立して、水素またはハロゲンである、請求項９に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
11. Ｒ^７が水素であり；Ｒ^８がＦであり；ｋが１、２または３である、請求項９に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
12. Ｒ^７がＦであり；Ｒ^８が水素であり；ｊが１、２または３である、請求項９に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
13. Ｒ^７およびＲ^８がともにＦであり；ｋが１、２または３であり；ｊが１、２または３である、請求項９に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
14. 以下のもの：
    

    

    

    
    

    

    
    

    

    
    

    

    
    

    

    

    
    のうちの１つから選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
15. （ｉ）抗原とともにヒト被験体に共投与した場合、免疫応答を刺激するのに充分な量の請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩および（ｉｉ）薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物。
16. 抗原の免疫原性の増大を、それを必要とする被験体において行なうための、請求項１に記載の前記一般式Ｉの化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含むアジュバント組成物であって、該抗原とともに共投与されることを特徴とする、アジュバント組成物。
17. 免疫応答の刺激を、それを必要とするヒト被験体において行なうための、請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩と薬学的に許容され得る担体とを含む免疫アジュバント組成物。
18. 前記アジュバント組成物がワクチンアジュバントである、請求項１６に記載のアジュバント組成物。
19. 前記アジュバント組成物が、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞を上昇させることが可能な量で投与されることを特徴とする、請求項１６に記載のアジュバント組成物。
20. 前記アジュバント組成物の投与により、ヒトにおいてサイトカインおよび／またはケモカインの生成が増大する、請求項１９に記載のアジュバント組成物。
21. 前記サイトカインの生成が下流の免疫細胞をトランス活性化するのに充分なものである、請求項２０に記載のアジュバント組成物。
22. 前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞のうちの１種類またはそれより多くを含む、請求項２１に記載のアジュバント組成物。
23. 前記サイトカインがＴｈ１サイトカインを含む、請求項２０に記載のアジュバント組成物。
24. 前記Ｔｈ１サイトカインが：インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１０を含む群のうちの少なくとも１種類から選択される、請求項２３に記載のアジュバント組成物。
25. 前記ケモカインが、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧを含む群のうちの少なくとも１種類から選択される、請求項２０に記載のアジュバント組成物。
26. 前記組成物の投与が抗がん効果を有する、請求項１６に記載のアジュバント組成物。
27. 前記がんが、肺がん、乳がん、肝細胞癌、白血病、充実性腫瘍および癌からなる群より選択される、請求項２６に記載のアジュバント組成物。
28. 式Ｉの化合物のＲ^４が置換または非置換のアリールおよび置換または非置換のヘテロアリールから選択され、ヒトにおけるＴｈ１サイトカインの増加がＴｈ２サイトカインのいずれかの増加を超えている、請求項１６に記載のアジュバント組成物。
29. インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の生成の上昇を、それを必要とするヒト被験体において行なうための、請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物。
30. 前記ｉＮＫＴレベルの上昇が、グリコシル頭部基としてアルファ−ガラクトース（αＧａｌ）を含む等量の糖脂質類似体の投与により得られる上昇と比べた場合、大きくなる、請求項２９に記載の医薬組成物。
31. サイトカインおよび／またはケモカインの生成の刺激を、それを必要とするヒト被験体において行なうための、サイトカイン／ケモカインの生成を増大させるのに充分な量の請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物。
32. 前記サイトカインの生成が下流の免疫細胞をトランス活性化するのに充分なものである、請求項３１に記載の医薬組成物。
33. 前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋ ＴおよびＣＤ８^＋ Ｔ細胞のうちの１種類またはそれより多くを含む、請求項３２に記載の医薬組成物。
34. 前記サイトカインがＴｈ１サイトカインを含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
35. 前記サイトカインが：インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１０から選択される、請求項３４に記載の医薬組成物。
36. 前記ケモカインが：ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される、請求項３１に記載の医薬組成物。
37. ワクチンアジュバントである、請求項１５に記載の医薬組成物。
38. 抗がん治療薬である、請求項１５に記載の医薬組成物。
39. 前記化合物のＲ^４が置換または非置換のアリールおよび置換または非置換のヘテロアリールから選択され、該化合物が、ヒトにおいてＴｈ１サイトカインを、付随するＴｈ２サイトカイン増加を最小限にして増加させることが可能である、請求項１６に記載の医薬組成物。
40. 被験体において抗原による免疫応答を増大させるための、１種類またはそれより多くの抗原と免疫原性有効量の請求項１６に記載のアジュバント組成物とを含むワクチン組成物。
41. 前記１種類またはそれより多くの抗原が、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、プリオン抗原、新生抗原、腫瘍抗原および自己抗原からなる群より選択される、請求項４０に記載のワクチン組成物。
42. 前記ワクチン組成物が、核酸、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、炭水化物、融合タンパク質、脂質、糖脂質、炭水化物−タンパク質コンジュゲート；細胞もしくはその抽出物；死細胞もしくは弱毒化細胞もしくはその抽出物；腫瘍細胞もしくはその抽出物；ウイルス粒子；アレルゲンまたはその混合物からなる群より選択される、請求項４０に記載のワクチン組成物。
43. 前記投与される抗原が腫瘍抗原である、請求項４０に記載のワクチン組成物。
44. 前記抗原の量が０．１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与される、請求項４０に記載のワクチン組成物。
45. 前記アジュバントの量が１０〜１００μｇ／ｋｇ体重の範囲である、請求項４０に記載のワクチン組成物。
46. 前記共投与される組成物が、前記式Ｉの化合物と薬学的に許容され得る担体とを含む共製剤化された薬学的に許容され得る組成物である、請求項４０に記載のワクチン組成物。
47. 請求項１に記載の前記式Ｉの化合物を含む製造物品。
48. 請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物および使用のための説明書を備えたキット。

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