JP2013519682A - 抗ｃｄ２００抗体を使用する治療方法 - Google Patents

抗ｃｄ２００抗体を使用する治療方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、抗ＣＤ２００抗体、ならびに自己免疫障害および癌を処置するための方法における上記抗体の使用に関する。また、自己免疫障害および／もしくは癌を有する患者の処置モダリティーを選択もしくは処方することにおいて使用するためのバイオマーカーを特徴とする。さらに、本開示は、１種以上のさらなる治療剤（例えば、抗ＣＤ２０治療剤）と組み合わせて、抗ＣＤ２００抗体を使用して処置するための方法を特徴とする。一実施形態において、ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法が提供され、この方法は、自己免疫障害を有するヒトに、ヒトにおいて、自己免疫障害と関連する自己抗体の濃度を低下させ、それによって自己免疫障害を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する。

Description

（関連出願の引用）
この出願は、２０１０年２月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／３３７，９６２号（この開示内容は、その全体が参考として本明細書に援用される）に対する優先権およびその利益を主張する。
（配列表）
本願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂによって提出された配列表を含み、その全体は、本明細書に参考として援用される。そのＡＳＣＩＩコピー（２０１１年２月９日に作製）は、ＡＬＸＮ１５２０．ｔｘｔと名前を付けられ、サイズ１９，５９２バイトである。
（技術分野）
本発明の分野は、医療、免疫学、分子生物学、およびタンパク質化学である。
（背景）
ヒトＣＤ２００タンパク質は、胸腺細胞（例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞）、ニューロン、および内皮細胞上で通常発現される１ａ型膜貫通糖タンパク質である。その同系レセプターＣＤ２００Ｒとの結合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）を介して、ＣＤ２００タンパク質は、Ｔ細胞媒介性免疫応答を抑制し得る免疫調節シグナルを伝達する。ＣＤ２００ノックアウト動物研究、ならびにアンタゴニスト抗ＣＤ２００抗体および組換えＣＤ２００−Ｆｃ融合タンパク質を使用する実験は、ＣＤ２００タンパク質が自己免疫障害においておよび移植の間の免疫抑制剤であることを示した。例えば、非特許文献１および非特許文献２を参照のこと。ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用は、変化したサイトカインプロフィールを生じ、ＴＨ１応答よりもＴＨ２ Ｔ細胞応答を促進する（例えば、非特許文献３を参照のこと）。
Ｈｏｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２９０：１７６８〜１７７１ Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９９）１６３：１６５４〜１６６０ Ｋｒｅｔｚ−Ｒｏｍｍｅｌ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００７）１７８：５５９５〜５６０５
（要旨）
本開示は、少なくとも一部、自己免疫疾患（自己免疫性溶血性疾患）の動物モデルへの抗ＣＤ２００抗体の投与が、疾患関連自己抗体の動物による生成の顕著な減少を生じたという本発明者らによる発見に基づく。上記抗ＣＤ２００抗体の投与はまた、マウスにおける自己抗体の生成の開始において顕著な遅延を生じた。宿主による自己抗体の生成は、多くの自己免疫障害（例えば、重症筋無力症およびギラン・バレー症候群）の原因であるかもしくはこれと関連するので、本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体が、種々の自己免疫障害のうちのいずれか１つに罹患している患者を処置するために有用であると考える。
よって、一局面において、本開示は、ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法を特徴とする。上記方法は、自己免疫障害を有するヒトに、上記ヒトにおいて、上記自己免疫障害と関連する自己抗体の濃度（または自己抗体の生成もしくは発現）を低下させて、それによって、上記自己免疫障害を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記ヒトの血液中の上記自己抗体濃度を、少なくとも１０％、２０％、５０％、７５％、７５％超、低下させ得る。いくつかの実施形態において、上記ヒトへの上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記ヒトにおける検出可能な自己抗体を完全に排除し得る。
本開示はまた、自己免疫障害を予防するか、または上記自己免疫障害の開始を遅らせるための方法を特徴とし、上記方法は、自己免疫障害を有するヒトに、（ｉ）上記ヒトによる上記自己免疫障害と関連する自己抗体の発生、生成もしくは発現を予防するか、（ｉｉ）上記ヒトによる上記自己免疫障害と関連する自己抗体の発生を遅らせるか、もしくはその生成もしくは発現の開始を遅らせて、それによって、上記自己免疫障害の開始を予防するかもしくは遅らせるに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する。
さらに別の局面において、本開示は、ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法を特徴とし、上記方法は、自己免疫障害を有するヒトに、ヒトにおいて、上記自己免疫障害と関連する自己抗体の低下した濃度を維持して、それにより上記自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で抗ＣＤ２００抗体を長期的に投与する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記抗ＣＤ２００抗体を投与する前の上記自己抗体濃濃度と比較して、上記自己抗体の濃度において１０％より多い、２０％、５０％、７５％、もしくは７５％より多い低下を維持する量および頻度で、上記ヒトに投与され得る。
本発明者らはまた、自己免疫障害を有する動物に投与される抗ＣＤ２００抗体による免疫調節効果のヒトにおける発生を証明する、いくつかのバイオマーカーを発見した。例えば、本発明者らは、動物への抗ＣＤ２００抗体の投与後に、いくつかの白血球および骨髄細胞サブセットの濃度は、上記動物において低下されることを観察した。本発明者らはまた、脾臓における例えば、Ｆ４／８０＋リンパ球の濃度が、上記動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与後に増大されることを発見した。本開示は、いかなる特定の理論にも作用機構にも束縛されないが、本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体で処置した患者をこれらバイオマーカーのうちの１種以上の存在についてモニターすることが、実際は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記抗体が投与される上記ヒトにおいて免疫調節効果を生じ得るか否かを決定するために有用であると考える。さらに、上記バイオマーカーのうちの１種以上はまた、上記ヒトにおけるその免疫調節効果によって、上記疾患に対して臨床的に意味のある効果を達成するのに十分（すなわち、疾患（例えば、癌もしくは自己免疫障害）を処置するのに十分）である抗ＣＤ２００抗体（例えば、サマリズマブ（ｓａｍａｌｉｚｕｍａｂ）（ＡＬＸＮ６０００））の用量（閾値用量）を同定するために有用である。すなわち、実用的な実施例に記載されるように、抗ＣＤ２００抗体は、自己免疫疾患のマウスモデルにおいて自己免疫抗体の発現を低下させることができた。
よって、本開示はまた、ヒトにおける障害を処置するための方法を特徴とし、上記方法は、それを必要とするヒトに、上記ヒトにおける以下の生理学的状態：（ｉ）コントロール濃度と比較して、減少した（低下した）濃度の少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセット；（ｉｉ）コントロール濃度と比較して、増大した濃度のＦ４／８０＋細胞；および（ｉｉｉ）コントロール濃度と比較して、減少した（低下した）濃度の少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセット、のうちの１つ以上を維持することによって、上記障害を処置するのに十分な量および頻度で、抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する。上記障害は、医療従事者（ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ）が治療的抗ＣＤ２００抗体によって処置され得ると合理的に考える任意の障害であり得る。このような疾患としては、例えば、癌もしくは自己免疫疾患が挙げられる。
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセットは、ＣＤ３＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ５＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞、およびＣＤ２００Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞からなる群より選択されるものであり得る。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセットは、ＣＤ２００＋骨髄細胞、Ｉｇｋ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、およびｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋／Ｌｉｎ−／ｌｏｗ骨髄細胞からなる群より選択されるものであり得る。いくつかの実施形態において、上記Ｆ４／８０＋細胞は、Ｆ４／８０＋マクロファージであり得る。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセットもしくは上記Ｆ４／８０＋細胞は、上記ヒトの末梢血に存在し得る。いくつかの実施形態において、上記白血球もしくは細胞は、脾臓にある。
いくつかの実施形態において、上記抗体は、上記ヒトにおける生理学的状態のうちの少なくとも２つ、もしくは３つすべてを維持する量および頻度で上記ヒトに投与され得る。
いくつかの実施形態において、上記自己免疫障害は、溶血障害もしくは自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（例えば、医学分野で公知のＡＩＨＡのうちのいずれか（以下を参照のこと））であり得る。いくつかの実施形態において、上記自己免疫障害は、慢性閉塞性肺疾患、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、ＩｇＡ腎症、強皮症、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫、尋常性天疱瘡、関節リウマチ、寒冷血球凝集素病（ｃｏｌｄ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ）、抗リン脂質症候群（ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、温暖自己免疫性溶血性貧血（ｗａｒｍ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、発作性寒冷血色素尿症、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、肺胆汁性肝硬変（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、およびミラー・フィッシャー症候群（Ｍｉｌｌｅｒ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）からなる群より選択されるものであり得る。
いくつかの実施形態において、上記自己免疫障害は、上記ヒトにおける癌の結果であり得るか、または上記ヒトにおける癌と関連し得る。上記癌は、液状腫瘍（ｌｉｑｕｉｄ ｔｕｍｏｒ）（例えば、慢性リンパ性白血病（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）もしくは多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、上記ヒトに、自己免疫障害もしくは癌を処置するための少なくとも１種のさらなる治療剤を投与する工程を包含し得る。
本発明者らは、動物への抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記動物の脾臓におけるＣＤ５＋細胞（例えば、ＣＤ５＋白血球）の濃度において顕著な低下を生じることを発見した。ＣＤ５は、Ｔ細胞および「Ｂ１細胞」といわれるＢ細胞のサブセットによって発現される６７ｋＤａ膜貫通糖タンパク質である。例えば、Ｈｏｌｏｄｉｃｋら（２００９）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３９（９）：２３８３−２３９４を参照のこと。Ｂ１細胞は、感染に対する宿主防御に全体的に関与し、ＣＤ５＋ Ｂ１細胞は、免疫グロブリンを自発的にかつ構成的に発現する。同書。ＣＬＬ細胞によるＣＤ５発現はまた、検出された。１９９２年に、Ａｌｍａｓｒｉらは、ＣＤ５＋ ＣＬＬ細胞が、フローサイトメトリーによって決定される場合、より低いレベルのＣＤ２０を発現することを報告した。Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ ４０：２５９，２６１。Ｍａｒｔｉら（１９９２）「ＣＤ２０ ａｎｄ ＣＤ５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｂ−ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ」Ａｎｎ Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６５１：４８０−４８３もまた参照のこと。
リツキシマブは、とりわけ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置について臨床的に承認されたキメラモノクローナル抗ＣＤ２０抗体である。例えば、Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ ａｎｄ Ｌｉｎ（２００８）Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ４５（２）：９５−１０３を参照のこと。リツキシマブは、単一薬剤としておよび例えば、ＣＨＯＰレジメン（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）との組み合わせの両方で、ＣＬＬを処置するために有効であった。同書。しかし、Ｅｎｎｉｓｈｉらは、ＣＬＬ細胞によるＣＤ５発現と、組み合わせＲＣＨＯＰレジメン（リツキシマブおよびＣＨＯＰレジメン）で処置したＣＬＬ患者における不十分な転帰との間の相関を報告した。（２００８）Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １９：１９２１，１９２４（図１）。上記報告は、リツキシマブ治療から利益をあまり受容しないかつ代替の治療を必要とし得る患者の集団が存在することを示唆する。
本開示は、いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、ＣＤ２０の低下した発現が少なくとも一部原因で、ＣＤ５＋ ＣＬＬ細胞がリツキシマブ治療に抵抗性があり得ることは、もっともらしいことである。本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体を含む治療用組成物が、動物におけるＣＤ５＋細胞集団を減少させるために有効であることを示した。本発明者らは、従って、上記組成物が、抗ＣＤ２０治療での処置に抗療性（例えば、リツキシマブ抵抗性）であるＣＬＬ患者のサブセットを処置するために特に有用であると考える。
よって、本開示はまた、癌もしくは自己免疫障害に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とし、上記方法は、癌もしくは自己免疫障害に罹患したヒトに、上記癌もしくは自己免疫障害を処置するために十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで上記癌もしくは自己免疫障害は、抗ＣＤ２０治療剤での治療に抵抗性であるか、もしくは抵抗性であると疑われるか、もしくは抵抗性になる可能性がある。
別の局面において、本開示は、癌に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とし、上記方法は、癌に罹患したヒトに、上記癌を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで上記癌は、抗ＣＤ２０治療剤での治療に抵抗性であるか、もしくは抵抗性であると疑われるか、もしくは抵抗性になる可能性がある。
別の局面において、本開示は、癌に罹患したヒトを処置するための別の方法を特徴とし、上記方法は、抗ＣＤ２０治療剤での処置に抵抗性であるか、もしくは抵抗性であると疑われる癌を有するヒトを同定する工程；および上記ヒトに、上記癌を処置するのに有効な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、上記癌は、ＣＤ５を発現する癌細胞を含み得るか、上記癌細胞からなり得る。
いくつかの実施形態において、１より多い用量（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０またはより多くの用量）の上記抗ＣＤ２００抗体が、上記ヒトに投与される。いくつかの実施形態において、１０より多く（例えば、１５より多い、２０、２５、３０、もしくは３５またはそれより多い）の用量の上記抗ＣＤ２００抗体は、上記ヒトに投与される。
いくつかの実施形態において、上記癌は、固形腫瘍である。固形腫瘍としては、以下が挙げられる：例えば、肺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、腎臓癌、胃癌、肝臓癌、骨癌（ｂｏｎｅ ｃａｎｃｅｒ）、神経組織癌（例えば、神経芽腫）、黒色腫、甲状腺癌、卵巣癌、精巣癌、前立腺癌、子宮頸癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、膣癌、および膀胱癌。いくつかの実施形態において、上記癌は、液状腫瘍である。液状腫瘍としては、以下が挙げられる：例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病（例えば、Ｂ細胞もしくはＴ細胞タイプの慢性リンパ性白血病）および多発性骨髄腫。骨癌としては、骨肉腫および骨癌腫（ｏｓｔｅｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）が挙げられるが、これらに限定されない。
さらに別の局面において、本開示は、液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とする。上記方法は、液状腫瘍に罹患したヒトに、上記液状腫瘍を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで上記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも一部は、ＣＤ５を発現する。上記方法は、上記液状腫瘍細胞のうちの一部が、ＣＤ５を発現するか否かを決定する工程を包含し得る。
別の局面において、本開示は、液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とし、上記方法は、ヒトを、ＣＤ５を発現する細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および上記ヒトに、上記ヒトにおける上記ＣＤ５発現液状腫瘍細胞の濃度を低下させ、それによって、上記液状腫瘍を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する。
別の局面において、本開示は、液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とし、上記方法は、液状腫瘍に罹患したヒトに、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、それによって上記液状腫瘍を処置する工程を包含し、ここで上記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも一部は、上記抗体および薬剤を投与する前に、ＣＤ５を発現する。
別の局面において、本開示は、液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とし、ここで上記方法は、ヒトを、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍に罹患していると同定する工程；および上記ヒトに、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、それによって、上記液状腫瘍を処置する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤は、上記抗ＣＤ２００抗体の投与前に投与され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記抗ＣＤ２０治療剤の投与前に投与される。上記抗ＣＤ２００抗体および上記抗ＣＤ２０治療剤は、同時に投与され得る。上記抗体は、同じ投与経路（例えば、静脈内投与）もしくは異なる経路を使用して投与され得る。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤は、ヒトＣＤ２００およびヒトＣＤ２０に結合する二重特異的抗体として、同時に上記ヒトに投与され得る。すなわち、上記ヒトに投与される治療剤は、抗ＣＤ２００抗体の特性および上記抗ＣＤ２０治療剤の特性の両方を有する。いくつかの実施形態において、上記二重特異的抗ＣＤ２００抗体／抗ＣＤ２０抗体は、ＤＶＤ−Ｉｇ抗体である。
いくつかの実施形態において、上記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、もしくは６０％以上が、ＣＤ５を発現する。
上記液状腫瘍は、例えば、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫であり得る。上記液状腫瘍は、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病であり得る。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ（ｖｅｌｔｕｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ（ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、もしくはＡＭＥ−１３３ｖが挙げられるが、これらに限定されない）である。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤は、毒素に結合体化される。例えば、いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤は、毒素−抗体結合体である。上記毒素は、例えば、低分子薬物もしくは毒性ポリペプチド（例えば、リシンもしくはサポリン）であり得る。いくつかの実施形態において、上記毒素は、細菌毒素、真菌毒素、もしくは植物毒素であり得る。いくつかの実施形態において、上記毒素は、放射性薬剤（例えば、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、２１１Ａｔ、３２Ｐ、１７７Ｌｕ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１５３Ｓｍ、もしくは１９９Ａｕが挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。いくつかの実施形態において、上記毒素−抗体結合体は、９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタンもしくは１３１Ｉ−トシツモマブである。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害する。
本明細書に記載される方法のうちの任意のものの一部の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤＲの以下の対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＧＦＴＦＳＧＦＡＭＳ（配列番号４）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；アミノ酸配列：ＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬＤＳＶＫＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；アミノ酸配列：ＧＮＹＹＳＧＴＳＹＤＹ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；アミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；アミノ酸配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；およびアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＲＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）。
本明細書に記載される方法のうちの任意のものの一部の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤＲの以下の対になったセットを含む：アミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＭＨ（配列番号１０）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１１）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＫＮＹＹＶＳＮＹＮＦＦＤＶ（配列番号１２）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＳＡＳＳＳＶＲＹＭＹ（配列番号１３）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１４）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＦＱＧＳＧＹＰＬＴ（配列番号１５）を含むＬＣＤＲ３。
本明細書に記載される方法のうちの任意のものの一部の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤＲの以下の対になったセットを含む：アミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＩＨ（配列番号１６）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＩＧＡＴＫＹＶＰＫＦＱＧ（配列番号１７）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＬＹＧＮＹＤＲＹＹＡＭＤＹ（配列番号１８）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号１９）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＡＳＮＲＨＴ（配列番号２０）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＨＷＮＹＰＬＴ（配列番号２１）を含むＬＣＤＲ３。
本明細書に記載される方法のうちの任意のものの一部の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤＲの以下の対になったセットを含む：アミノ酸配列：ＧＹＳＦＴＤＹＩＩＬ（配列番号２２）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＨＩＤＰＹＹＧＳＳＮＹＮＬＫＦＫＧ（配列番号２３）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＫＲＤＹＦＤＹ（配列番号２４）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号２５）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＲＡＮＲＬＶＤ（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号２７）を含むＬＣＤＲ３。
本明細書に記載される方法のうちの任意のものの一部の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤＲの以下の対になったセットを含む：アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（配列番号２８）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＧＶＮＰＮＮＧＧＡＬＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２９）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＲＳＮＹＲＹＤＤＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＬＤＩＤＥＫＴＹＬＮ（配列番号３１）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３２）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＷＱＧＴＨＦＰＱＴ（配列番号３３）を含むＬＣＤＲ３。
本明細書に記載される方法のうちの任意のものの一部の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤＲの以下の対になったセットを含む：アミノ酸配列：ＡＦＮＩＫＤＨＹＭＨ（配列番号３４）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＳＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＦＮＧＹＱＡＬＤＱ（配列番号３６）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨ（配列番号３７）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３８）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＲＱＹＨＲＳＰＰＩＦＴ（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体および／もしくは上記抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、ＩｇＧ３抗体、ＩｇＧ４抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ１抗体、ＩｇＡ２抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、もしくはＩｇＥ抗体である。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体および／もしくは上記抗ＣＤ２０抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、もしくはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体もしくは上記抗ＣＤ２０抗体は、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、ミニボディー（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ダイアボディー（ｄｉａｂｏｄｙ）、もしくはトリボディー（ｔｒｉａｂｏｄｙ）からなる群より選択される抗原結合抗体フラグメントである。
さらに別の局面において、本開示は、液状腫瘍に罹患した患者の治療を選択するための方法を特徴とし、上記方法は、患者を、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および上記液状腫瘍の処置に使用するための抗ＣＤ２００抗体を上記患者のために選択する工程を包含する。
別の局面において、本開示は、液状腫瘍に罹患した患者の治療を処方するための方法を特徴とし、上記方法は、患者を、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および上記液状腫瘍の処置に使用するための抗ＣＤ２００抗体を、上記患者に処方する工程を包含する。上記抗ＣＤ２００抗体は、二重特異的抗体（例えば、第１の抗原結合部位（ａｎｔｉｇｅｎ−ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｓｉｔｅ）および第２の抗原結合部位を含むもの）であり得、ここで上記第１の抗原結合部位は、ＣＤ２００に結合し、上記第２の抗原結合部位は、ＣＤ２０に結合する。
さらに別の局面において、本開示は、第１の抗原結合部位および第２の抗原結合部位を含む二重特異的抗体を特徴とし、ここで上記第１の抗原結合部位は、ＣＤ２００に結合し、上記第２の抗原結合部位は、ＣＤ２０に結合する。上記二重特異的抗体は、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、ＩｇＧ３抗体、ＩｇＧ４抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ１抗体、ＩｇＡ２抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、もしくはＩｇＥ抗体であり得る。いくつかの実施形態において、上記二重特異的抗ＣＤ２００／抗ＣＤ２０抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、もしくはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、上記二重特異的抗体は、本明細書で記載される方法（例えば、癌もしくは自己免疫疾患を処置する）のうちのいずれかにおいて使用され得る。
さらに別の局面において、本開示は、以下を特徴とする：（ｉ）上記二重特異的抗体をコードする核酸；（ｉｉ）上記核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）；および（ｉｉｉ）上記ベクターを含む細胞。別の局面において、本開示は、上記抗体を生成するための方法を特徴とし、上記方法は、上記細胞を、上記細胞において上記抗体の生成を可能にするのに十分な時間および条件下で培養する工程を包含する。上記方法はまた、上記細胞もしくは上記細胞が培養される培地から上記二重特異的抗体を単離する工程を包含し得る。
いくつかの実施形態において、上記二重特異的抗体は、一本鎖ダイアボディー、タンデム一本鎖Ｆｖフラグメント、タンデム一本鎖ダイアボディー、もしくは一本鎖ダイアボディーおよび免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの少なくとも一部を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、上記二重特異的抗体は、二重可変性ドメイン免疫グロブリンである。
いくつかの実施形態において、上記第１の抗原結合部位は、ヒトＣＤ２００タンパク質（例えば、配列番号１〜３のうちのいずれかにおいて示されるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ２００タンパク質）に結合する。いくつかの実施形態において、上記第２の抗原結合部位は、ヒトＣＤ２０タンパク質（例えば、配列番号４０〜４２のうちのいずれかに示されるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ２０タンパク質）に結合する。いくつかの実施形態において、上記第２の抗原結合部位は、配列番号４１に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも一部（例えば、少なくとも４アミノ酸）および配列番号４２に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも一部（例えば、少なくとも４アミノ酸）を含むエピトープにおいて、ヒトＣＤ２０タンパク質に結合する。
いくつかの実施形態において、上記第１の抗原結合部位は、サマリズマブから得られる。いくつかの実施形態において、上記第２の抗原結合部位は、リツキシマブ、オファツムマブ、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ、オクレリズマブ、もしくはＡＭＥ−１３３ｖから得られる。上記二重特異的抗体は、異種部分（例えば、検出可能な標識もしくは毒素）に結合体化され得るか、または上記異種部分を含み得る。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、交換可能に使用され、長さもしくは翻訳後修飾にかかわらず、アミノ酸の任意のペプチド結合鎖を意味する。本明細書に記載されるＣＤ２００タンパク質は、野生型タンパク質を含み得るかもしくは野生型タンパク質であり得るか、または５０個以下（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下、１０個以下、１２個以下、１５個以下、２０個以下、２５個以下、３０個以下、３５個以下、４０個以下、もしくは５０個以下）の保存的アミノ酸置換を有する改変体であり得る。保存的置換は、代表的には、以下の群内の置換を含む：グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシン、およびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリンおよびスレオニン；リジン、ヒスチジンおよびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン。
本明細書に記載されるＣＤ２００タンパク質およびＣＤ２０タンパク質はまた、上記タンパク質の「抗原性ペプチドフラグメント」を含み、上記抗原性ペプチドフラグメントは、全長タンパク質より短いが、上記全長タンパク質が哺乳動物における抗原性応答を誘導する能力のうちの少なくとも１０％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％以上）を保持する（以下の「抗体を生成するための方法」を参照のこと）。ＣＤ２００タンパク質もしくはＣＤ２０タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントは、上記タンパク質の末端および内部の欠失改変体を含む。欠失改変体は、（２個以上のアミノ酸の）１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、もしくは２０個のアミノ酸セグメントまたは非連続の単一のアミノ酸を欠失し得る。抗原性ペプチドフラグメントは、長さが少なくとも６個の（例えば、少なくとも７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、もしくは２００個以上の）アミノ酸残基（例えば、配列番号１〜３のうちのいずれかにおける少なくとも６個の連続するアミノ酸残基）であり得る。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ２００タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントは、長さが２２５個未満の（例えば、２００個未満、１９０個未満、１８０個未満、１７０個未満、１６０個未満、１５０個未満、１４０個未満、１３０個未満、１２０個未満、１１０個未満、１００個未満、９５個未満、９０個未満、８５個未満、８０個未満、７５個未満、６０個未満、５０個未満、４９個未満、４８個未満、４７個未満、４６個未満、４５個未満、４４個未満、４３個未満、４２個未満、４１個未満、４０個未満、３９個未満、３８個未満、３７個未満、３６個未満、３５個未満、３４個未満、３３個未満、３２個未満、３１個未満、３０個未満、２９個未満、２８個未満、２７個未満、２６個未満、２５個未満、２４個未満、２３個未満、２２個未満、２１個未満、２０個未満、１９個未満、１８個未満、１７個未満、１６個未満、１５個未満、１４個未満、１３個未満、１２個未満、１１個未満、１０個未満、９個未満、８個未満、もしくは７個未満の）アミノ酸残基（例えば、配列番号１〜３のうちのいずれか１つにおける２２５個未満の連続するアミノ酸残基未満）である。いくつかの実施形態において、全長ＣＤ２００タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントは、長さが少なくとも６個であるが、２２５個未満のアミノ酸残基である。
いくつかの実施形態において、上記ヒトＣＤ２００タンパク質は、配列番号１もしくは配列番号２（以下を参照のこと）に示されるアミノ酸配列を有する上記ヒトＣＤ２００タンパク質に７０％（例えば、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一であるか、またはそれ以上のアミノ酸配列を有し得る。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ２０タンパク質は、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を有する上記ヒトＣＤ２００タンパク質に対して７０％（例えば、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一であるか、またはそれ以上のアミノ酸配列を有し得る。
パーセント（％）アミノ酸配列同一性は、参照配列および候補配列をアラインし、必要であればギャップを導入して、最大％配列同一性を達成した後の、参照配列中のアミノ酸に同一である候補配列中のアミノ酸のパーセンテージとして定義される。％配列同一性を決定する目的のアラインメントは、当該分野の技術の範囲内にある種々の方法で、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２もしくはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア）を使用して、達成され得る。アラインメントを測定するための適切なパラメーター（比較されている配列の全長にわたり最大アラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む）は、公知の方法によって決定され得る。
例示的なヒトＣＤ２００タンパク質およびヒトＣＤ２０タンパク質、ならびにこれらの抗原性ペプチドフラグメントのアミノ酸配列は、当該分野で公知であり、以下に記載される。
本明細書に記載される場合、用語「抗体」とは、完全抗体分子もしくはインタクトな抗体分子（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ（ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＥ）またはこれらの任意の抗原結合フラグメントをいう。用語抗体は、例えば、キメラ化抗体もしくはキメラ抗体、ヒト化抗体、脱免疫化抗体（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、および完全ヒト抗体を含む。抗体の抗原結合フラグメントとしては、例えば、一本鎖抗体、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、もしくはＦ（ａｂ’）２フラグメントが挙げられる。ｓｃＦｖフラグメントは、上記ｓｃＦｖが由来する抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方を含む単一のポリペプチド鎖である。さらに、イントラボディー、ミニボディー、トリアボディー、およびダイアボディー（例えば、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら（２００１） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８（１）：４７−６６；Ｈｕｄｓｏｎ ａｎｄ Ｋｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１（１）：１７７−１８９；Ｐｏｌｊａｋ（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２（１２）：１１２１−１１２３；Ｒｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｍａｒａｓｃｏ（１９９７）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ５１：２５７−２８３（これらのうちの各々の本開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される））はまた、抗体の定義に含まれ、本明細書に記載される方法における使用に適合性である。二重特異的抗体（ＤＶＤ−Ｉｇ抗体を含む；以下を参照のこと）はまた、用語「抗体」に包含される。二重特異的抗体は、少なくとも２個の異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくは、ヒト抗体もしくはヒト化抗体である。
別段定義されなければ、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合には、定義を含め、本明細書が支配する。好ましい方法および材料は、以下に記載されるが、本明細書に記載されるものに類似もしくは等価な方法および材料はまた、本開示の方法および組成物の実施もしくは試験において使用され得る。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、それらの全体が本明細書に参考として援用される。
本開示の他の特徴および利点、例えば、リツキシマブ抵抗性癌（例えば、慢性リンパ性白血病）を処置するための方法は、以下の説明、実施例、および特許請求の範囲から明らかになる。
図１は、抗ＣＤ２００抗体で処置される自己免疫性溶血性疾患を有するマウスにおける抗マウスＲＢＣ自己抗体生成の遅延を示す線グラフである。Ｙ軸は、各群におけるマウスの自己抗体生成の発生率（％）を表す。Ｘ軸は、各マウスにおける自己抗体の存在が検出された時間を表す。評価されるマウスの７つの群は、以下を含んだ：ラットＲＢＣで免疫したが、抗体で処置しなかったマウス（Ｒｘなし）；ラットＲＢＣで免疫し、コントロール抗体で処置したマウス（Ｃｎｔｒｌ Ａｂ）；ラットＲＢＣで免疫し、抗ＣＤ２００抗体で処置したマウス（抗体１）；ラットＲＢＣで免疫し、シクロスポリンで処置したマウス（ＣｓＡ）；ラットＲＢＣで免疫し、コントロール抗体およびシクロスポリンＡで処置したマウス（Ｃｎｔｒｌ Ａｂ＋ＣｓＡ）；ラットＲＢＣで免疫し、抗ＣＤ２００抗体およびシクロスポリンＡで処置したマウス（抗体１＋ＣｓＡ）；ならびにラットＲＢＣで免疫もせず、抗体でもシクロスポリンＡでも処置しなかったマウス（免疫なしＲｘなし）。 図２は、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおける抗ＲＢＣ抗体力価に対する抗ＣＤ２００抗体の効果を示す線グラフである。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、研究０日目に１回、次いで、その後、上記研究の残りの間に１週間に１回、２×１０８個のラットＲＢＣを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。次いで、上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、５ｍｇ／ｋｇもしくは１ｍｇ／ｋｇにおいてエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（抗体１；Ａｂ１）；５ｍｇ／ｋｇにおいてエフェクター機能を有さない抗ＣＤ２００抗体（抗体２；Ａｂ２）；もしくは５ｍｇ／ｋｇにおいてコントロール抗体（Ｃｎｔｌ）で処置した。マウス群をまた、ビヒクルのみで処置した。最後のマウス群には、免疫も抗体処置も受けさせなかった（ＮＣ）。Ｙ軸は、ＯＤ４０５×血清希釈係数として反映される相対蛍光強度を示し、Ｘ軸は、上記研究の開始後の日数を表す。 図３は、抗ＣＤ２００抗体で処置したマウスから単離した脾細胞の抗原誘導性増殖の低下を示す棒グラフである。Ｙ軸は、各細胞集団から単離された核酸中の３Ｈ−チミジン放射能の１分あたりの平均カウントを表す。Ｘ軸は、各群に示される３匹の個々のマウスを表す。各マウスについて、４つの測定値は、培地のみ、マウス赤血球（ｍＲＢＣ）、ラット赤血球（ｒＲＢＣ）、もしくはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）によって誘導される脾細胞の増殖に関するものである。群１のマウスを、用量５ｍｇ／ｋｇにおいてエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（抗体１）で処置した。群２のマウスを、用量１ｍｇ／ｋｇにおいて抗体１で処置した。群３のマウスを、ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体で処置し、群４のマウスについては、抗体での処置も、ラット赤血球での免疫もしなかった。 図４は、抗ＣＤ２００抗体で処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の低下を示す棒グラフである。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、研究０日目に１回、および次いで、その後、上記研究の残りの間に１週間に１回、２×１０８個のラットＲＢＣを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。次いで、上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、５ｍｇ／ｋｇもしくは１ｍｇ／ｋｇにおいて、エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（抗体１；Ａｂ１）；５ｍｇ／ｋｇにおいてエフェクター機能を有さない抗ＣＤ２００抗体（抗体２；Ａｂ２）；もしくは５ｍｇ／ｋｇにおいてコントロール抗体（Ｃｎｔｌ）で処置した。マウスの群をまた、ビヒクルのみで処置した。最後の群のマウスには、免疫も、抗体処置も受けさせなかった（非免疫、Ａｂなし）。Ｙ軸は、生存脾細胞の全集団中のＣＤ２００＋細胞のパーセンテージを表す。Ｘ軸は、各群に示される３匹の個々のマウスを表す。
（詳細な説明）
本開示は、抗ＣＤ２００抗体、および自己免疫障害もしくは癌を処置するための方法における抗体の使用に関する。自己免疫障害および／もしくは癌を有する患者の処置モダリティーを選択もしくは処方するにおいて使用するためのバイオマーカーもまた、特徴とする。さらに、本開示は、１種以上のさらなる治療剤（例えば、抗ＣＤ２０治療剤）との組み合わせにおいて抗ＣＤ２００抗体を使用する処置の方法を特徴とする。限定されることは決して意図しないが、例示的な抗ＣＤ２００抗体およびそのＣＤ２００結合フラグメント、結合体、薬学的組成物および処方物、バイオマーカー、ならびに前述のうちのいずれかを使用する方法は、以下で詳細に述べられ、実用的な実施例において例示される。
（抗ＣＤ２００抗体）
本開示は、ヒトＣＤ２００ポリペプチドに結合する抗体（ときおり、上記抗体は、本明細書において「抗ＣＤ２００抗体」といわれる）を特徴とする。また、上記抗体の抗原結合（ＣＤ２００結合）フラグメントを特徴とする。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ヒトＣＤ２００タンパク質におけるエピトープに結合する。例えば、上記抗ＣＤ２００抗体は、以下のアミノ酸配列：
を含むか、もしくは上記アミノ酸配列からなる上記ヒトＣＤ２００タンパク質におけるエピトープに結合し得る。配列番号１は、全長の前駆ヒトＣＤ２００アイソフォームＡタンパク質のアミノ酸配列を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、以下のアミノ酸配列：
を含むか、もしくは上記アミノ酸配列からなる上記ヒトＣＤ２００タンパク質中のエピトープに結合する。配列番号２は、全長ＣＤ２００アイソフォームＢタンパク質のアミノ酸配列を示す。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、以下のアミノ酸配列：
（配列番号３； Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号 ＣＡＡ２８９４３．１；ＭｃＣａｕｇｈａｎら（１９８７） Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２５：３２９−３３５の図３）を有するヒトＣＤ２００タンパク質に存在するエピトープに結合する。配列番号３は、全長ヒトＣＤ２００タンパク質の例示的配列である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００タンパク質の細胞外部分内のエピトープに結合する。例えば、いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、（ｉ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２３３；（ｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２５８；または（ｉｉｉ）配列番号３に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２２９の中にあるかもしくはこれらと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、リーダー配列を欠いている上記ヒトＣＤ２００タンパク質中のエピトープに結合する。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、配列番号１（これは、上記アミノ末端リーダー配列を除いたヒトＣＤ２００アイソフォームＡの成熟形態の細胞外部分に対応する）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸３１〜２３３の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、配列番号２（これは、上記アミノ末端リーダー配列を除いたヒトＣＤ２００アイソフォームＢの成熟形態の細胞外部分に対応する）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸５６〜２５８の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、配列番号３（これは、上記アミノ末端リーダー配列を除いたヒトＣＤ２００の成熟形態の細胞外部分に対応する）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７〜２２９の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。
「エピトープ」とは、抗体によって結合されるタンパク質（例えば、ヒトＣＤ２００タンパク質）の部位をいう。「重複エピトープ」は、少なくとも１個（例えば、２個、３個、４個、５個、もしくは６個）の共通するアミノ酸残基を含む。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する上記ヒトＣＤ２００タンパク質、または上記ＣＤ２００タンパク質の成熟形態の細胞外ドメイン）に特異的に結合する。用語「特異的結合」もしくは「特異的に結合する」とは、生理学的条件下で比較的安定な複合体（例えば、抗ＣＤ２００抗体とＣＤ２００タンパク質との間の複合体）を形成する２つの分子に言及する。代表的には、結合は、会合定数（Ｋａ）が１０６Ｍ−１より高い場合に特異的とみなされる。従って、抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００タンパク質に少なくとも１０６（もしくはこれより高い）（例えば、少なくとも１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、もしくは１０１５以上、もしくはこれらより高い）Ｍ−１のＫａで特異的に結合し得る。ヒトＣＤ２００タンパク質に特異的に結合する抗体の例は、以下に記載される：例えば、米国特許第７，４０８，０４１号；同第７，４２７，６６５号；同第７，４３５，４１２号；および同第７，５９８，３５３号（これらの各々の開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）。
いくつかの例示的な抗ＣＤ２００抗体のアミノ酸配列は、例えば、米国特許第７，４０８，０４１号に記載される。例えば、上記抗ＣＤ２００抗体は、米国特許第７，４０８，０４１の図２３に示されるＦａｂ抗体（ｄ１Ｂ１０、ｄ１Ａ５、ｄ１Ｂ５、ｃ２ａＢ７、ｃ１Ａ１０、もしくはｃ２ａＡ１０）のうちの１つの重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を含み得る。図２３に示される配列は、それらの全体が本明細書に参考として援用される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、米国特許第７，４０８，０４１号の図２３に示されるＦａｂ抗体のうちの１つの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの対になったセットを含む。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｄ１Ｂ１０ Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含む：以下の配列：ＧＦＴＦＳＧＦＡＭＳ（配列番号４）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；以下の配列：ＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬＤＳＶＫＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；以下の配列：ＧＮＹＹＳＧＴＳＹＤＹ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；以下の配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；以下の配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；および以下の配列：ＱＱＳＮＥＤＰＲＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）。
別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｄ１Ａ５ Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：（ｉ）以下の配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＭＨ（配列番号１０）を含むＨＣＤＲ１；以下の配列：ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１１）を含むＨＣＤＲ２；以下の配列：ＫＮＹＹＶＳＮＹＮＦＦＤＶ（配列番号１２）を含むＨＣＤＲ３；以下の配列：ＳＡＳＳＳＶＲＹＭＹ（配列番号１３）を含むＬＣＤＲ１；以下の配列：ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１４）を含むＬＣＤＲ２；および以下の配列：ＦＱＧＳＧＹＰＬＴ（配列番号１５）を含むＬＣＤＲ３。
別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｄ１Ｂ５ Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：以下のアミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＩＨ（配列番号１６）を含むＨＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＩＧＡＴＫＹＶＰＫＦＱＧ（配列番号１７）を含むＨＣＤＲ２；以下のアミノ酸配列：ＬＹＧＮＹＤＲＹＹＡＭＤＹ（配列番号１８）を含むＨＣＤＲ３；以下のアミノ酸配列：ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号１９）を含むＬＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＬＡＳＮＲＨＴ（配列番号２０）を含むＬＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＬＱＨＷＮＹＰＬＴ（配列番号２１）を含むＬＣＤＲ３。
別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｃ２ａＢ７ Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＧＹＳＦＴＤＹＩＩＬ（配列番号２２）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＨＩＤＰＹＹＧＳＳＮＹＮＬＫＦＫＧ（配列番号２３）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＫＲＤＹＦＤＹ（配列番号２４）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号２５）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＲＡＮＲＬＶＤ（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号２７）を含むＬＣＤＲ３。サマリズマブ（ＡＬＸＮ６０００）は、米国特許第７，４０８，０４１号の図２３にもともと示された上記ｃ２ａＢ７ Ｆａｂ抗体の前述の対になったＣＤＲのセットを含む。
なお別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｃ１Ａ１０ Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（配列番号２８）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＧＶＮＰＮＮＧＧＡＬＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２９）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＲＳＮＹＲＹＤＤＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＬＤＩＤＥＫＴＹＬＮ（配列番号３１）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３２）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＷＱＧＴＨＦＰＱＴ（配列番号３３）を含むＬＣＤＲ３。
そしてなお別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｃ２ａＡ１０ Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＡＦＮＩＫＤＨＹＭＨ（配列番号３４）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＳＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＦＮＧＹＱＡＬＤＱ（配列番号３６）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨ（配列番号３７）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３８）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＲＱＹＨＲＳＰＰＩＦＴ（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ３。
抗ＣＤ２００抗体のＣＤＲのさらなる例示的なセットは、例えば、米国特許第７，４２７，６６５号に記載される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、サマリズマブ（ＡＬＸＮ６０００）である。
抗体がタンパク質抗原に結合するか否か、そして／またはタンパク質抗原に対する抗体の親和性を決定するための方法は、当該分野で公知である。例えば、タンパク質抗原に対する抗体の結合は、種々の技術（例えば、ウェスタンブロット、ドットブロット、表面プラズモン共鳴法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム；Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、もしくは酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）が挙げられるが、これらに限定されない）を使用して検出および／もしくは定量され得る。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８） 「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」 Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｂｅｎｎｙ Ｋ．Ｃ．Ｌｏ（２００４） 「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：１５８８２９０９２１）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９２） 「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ」，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ＮＹ；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９５） 「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｏｘｆｏｒｄ；Ｊｏｈｎｅら（１９９３） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ １６０：１９１−１９８；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９３）Ａｎｎ Ｂｉｏｌ Ｃｌｉｎ ５１：１９−２６；およびＪｏｎｓｓｏｎら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０−６２７を参照のこと。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープに結合する別の抗体の結合を交差ブロック（ｃｒｏｓｓｂｌｏｃｋ）する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質のペプチドフラグメントの中にあるかもしくはこれと重複するエピトープに結合する抗体の結合を交差ブロックし得る。上記ペプチドフラグメントは、例えば、配列番号１〜３のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有するヒトＣＤ２００タンパク質のフラグメントであり得る。本明細書に記載される場合、用語「交差ブロック抗体」とは、上記抗体の非存在下での上記エピトープへの上記抗ＣＤ２００抗体の結合の量と比較して、ＣＤ２００タンパク質上のエピトープへの抗ＣＤ２００抗体の結合の量を低下させる抗体をいう。第１の抗体が、エピトープへの第２の抗体の結合を交差ブロックするか否かを決定するために適した方法は、当該分野で公知である。
特定の抗体（例えば、抗ＣＤ２００抗体）が結合する上記エピトープを同定するための方法はまた、当該分野で公知である。例えば、抗ＣＤ２００抗体の結合エピトープは、ＣＤ２００タンパク質のいくつかの（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、もしくは３０個以上の）重複するペプチドフラグメント（例えば、例えば、配列番号１〜３のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質のいくつかの重複するフラグメント）に対する上記抗体の結合を測定することによって同定され得る。次いで、種々の重複するペプチドの各々は、固体支持体（例えば、マルチウェルアッセイプレートの別個のウェル）上の特有のアドレスに結合される。次に、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記抗ＣＤ２００抗体を、上記抗体がそのエピトープに結合するのを可能にする時間量および条件下で、上記アッセイプレートにおける上記ペプチドの各々に接触させることによって、問い合わせされる。結合しない抗ＣＤ２００抗体は、上記ウェルの各々を洗浄することによって除去される。次に、上記抗ＣＤ２００抗体に結合する、検出可能に標識された二次抗体を、上記プレートのウェルに存在する場合、上記ウェルの各々に接触させ、結合しない二次抗体は、洗浄工程によって除去される。ウェルにおける上記検出可能に標識された二次抗体によって生成される検出可能なシグナルの存在もしくは量は、上記抗ＣＤ２００抗体が、上記ウェルと関連した特定のペプチドフラグメントに結合するという指標である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（前出），Ｂｅｎｎｙ Ｋ．Ｃ．Ｌｏ（前出）、および米国特許出願公開第２００６０１５３８３６号（その開示は、その全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと。抗体が結合する特定のエピトープはまた、ＢＩＡｃｏｒｅクロマトグラフィー技術を使用して同定され得る（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＢＩＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ」，Ｓｅｃｔｉｏｎ ６．３．２，（Ｍａｙ １９９４）；およびＪｏｈｎｅら（１９９３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １６０：２０１９１−８を参照のこと）。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体、もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントは、細胞の表面に発現されるヒトＣＤ２００ポリペプチドに結合する。抗体が、細胞の表面に発現されるタンパク質に結合するか否かを決定するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｐｅｔｅｒｍａｎｎら（２００７） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１７（１２）：３９２２−９；Ｒｉｊｋｅｒｓら（２００８） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４５（４）：１１２６−３５；およびＫｒｅｔｚ−Ｒｏｍｍｅｌ（２００７） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７８（９）：５５９５−６０５に記載される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントは、ＣＤ２００タンパク質とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する。薬剤（例えば、抗体）が、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害するか否かを決定するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｈａｔｈｅｒｌｙ ａｎｄ Ｂａｒｃｌａｙ（２００４） Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４（６）：１６８８−９４に記載される。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントは、インビトロおよび／もしくはインビボでの破骨細胞の形成を阻害する。抗体が破骨細胞の形成を阻害するか否かを決定するために適した方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ２００８／０８９０２２およびＣｕｉら（２００７） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０４（３６）：１４４３６−１４４４１に記載される。例えば、マウス骨髄細胞は、抗ＣＤ２００抗体の存在下もしくは非存在下で、例えば、ＲＡＮＫＬおよびＭ−ＣＳＦの存在下で培養され得る。上記抗体の非存在下で形成される破骨細胞のパーセンテージと比較した、上記抗体の存在下での上記骨髄細胞から形成される破骨細胞のパーセンテージの低下は、上記抗体がインビトロでの破骨細胞形成を阻害することを示す。
ＣＤ２００は、癌細胞よりも低いレベルにも関わらず、正常細胞（例えば、内皮細胞）で発現されるので、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介しないか、もしくは媒介する能力が低下するように改変された定常領域を有する改変抗ＣＤ２００抗体（もしくはそのＣＤ２００結合フラグメント）を投与し、それによって、抗体がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞もしくはマクロファージ上のＦｃレセプターを結合し、細胞死、もしくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）（これは、補体カスケードの活性化を介して誘導される細胞死である）をもたらすことは、いくつかの実施形態において有利であり得る（Ｄａｅｒｏｎ（１９９７） Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：２０３−２３４；Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｇｈｅｔｉｅ（１９９５） Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：７７−９４；およびＲａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ（１９９１） Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９：４５７−４９２において総説される）。このような改変は、正常細胞に対する損傷を制限するために有用である。ＣＤ２００発現はまた、いくらかの活性化された正常細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）上でアップレギュレートされ、このような細胞をエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体による死滅に弱くする。エフェクター機能を欠いている抗ＣＤ２００抗体を使用して、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣによるこれら細胞の死滅を回避することは、有利であり得る。抗ＣＤ２００抗体のエフェクター機能は、エフェクター機能を有する免疫グロブリン定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常ドメイン）を、エフェクター機能を有さない定常領域（例えば、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４融合定常領域）で置換することによって排除され得る。例えば、Ｂｕｒｔｏｎら（１９９２） Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎ ５１：１−１８；Ｃａｎｆｉｅｌｄら（１９９１） Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７３：１４８３−１４９１；およびＭｕｅｌｌｅｒら（１９９７） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４（６）：４４１−４５２）を参照のこと。例えば（およびＫａｂａｔ番号付けに従って）、上記ＩｇＧｌおよびＩｇＧ４の定常領域は、Ｇ２４９Ｇ２５０残基を含むのに対して、上記ＩｇＧ２定常領域は、残基２４９を含まないが、Ｇ２５０を含む。上記２４９〜２５０領域がＧ２配列に由来するＧ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域において、上記定常領域は、Ｇ２４９／Ｇ２５０を有するＧ２／Ｇ４融合物を生成するために２４９位においてグリシン残基を導入するようにさらに改変され得る。エフェクター機能を排除するためのさらなる方法は、以下に記載される。
上記抗ＣＤ２００抗体のうちのいずれかが、本明細書に記載される二重特異的抗ＣＤ２００／抗ＣＤ２０抗体に組み込まれ得ることは理解される。
（抗ＣＤ２０治療剤）
本開示はまた、ＣＤ２０タンパク質を発現する細胞（例えば、癌細胞）を、上記細胞の表面上のＣＤ２０に特異的に結合することによって、特異的に標的とする治療剤を特徴とする。上記抗ＣＤ２０治療剤は、例えば、ＣＤ２０に結合する低分子化合物、タンパク質（例えば、ＣＤ２０の天然もしくは合成のリガンド）またはそのフラグメント、ＲＮＡアプタマー、Ｌ−ＲＮＡアプタマー、またはシュピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）であり得る。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤は、ＣＤ２０ポリペプチドに結合する抗体（ときおり、上記抗体は、本明細書で「抗ＣＤ２０抗体」といわれる）である。また、上記抗体の抗原結合（ＣＤ２０結合）フラグメントを特徴とする。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体は、上記ヒトＣＤ２０タンパク質におけるエピトープに結合する。例えば、上記抗ＣＤ２０抗体は、以下のアミノ酸配列：
を含むかもしくは上記アミノ酸配列からなる上記ヒトＣＤ２０タンパク質におけるエピトープに結合し得る。配列番号４０は、全長の前駆ヒトＣＤ２０アイソフォームＡタンパク質のアミノ酸配列を示す。全長のヒトＣＤ２０ポリペプチドの上記アミノ酸配列はまた、例えば、Ｔｅｄｄｅｒら（１９８８） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５（１）：２０８−２１２に記載される。
本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０タンパク質の細胞外部分の中にあるエピトープに結合する。例えば、いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０抗体は、（ｉ）配列番号４０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸７２〜８０；もしくは（ｉｉ）配列番号４０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４０〜１８６の中にあるエピトープもしくはこれらと重複するエピトープにおいてＣＤ２０タンパク質に結合し得る。例えば、Ｔｅｅｌｉｎｇら（２００６） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７７：３６２−３６７を参照のこと。すなわち、本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体は、アミノ酸配列 ＩＰＡＧＩＹＡＰＩ（配列番号４１）もしくはＮＩＫＩＳＨＦＬＫＭＥＳＬＮＦＩＲＡＨＴＰＹＩＮＩＹＮＣＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰＳＴＱＹＣＹＳＩ（配列番号４２）の中にあるか、もしくはこれと重複するヒトＣＤ２０のエピトープに結合し得る。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＣＤ２０タンパク質（例えば、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を有する上記ヒトＣＤ２０タンパク質もしくは上記ヒトＣＤ２０タンパク質の細胞外ループのうちの１個以上）に特異的に結合する。ヒトＣＤ２０タンパク質に特異的に結合する抗体の例は、例えば、３６３におけるＴｅｅｌｉｎｇら（２００６）（前出）；Ｌｅｖｅｎｅら（２００５） Ｊ Ｒ Ｓｏｃ Ｍｅｄ ９８：１４６−１５２；および米国特許第７，４３５，８０３号；同第５，５９５，７２１号；および同第７，４２２，７３９号（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）に記載される。
本明細書に記載される方法において使用され得る例示的な治療的抗ＣＤ２０抗体（これは、臨床的使用について承認されているか、または臨床開発中である）としては、リツキシマブ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、９０Ｙ−イブリツモマブチウキセタン（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、１３１Ｉ−トシツモマブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、オファツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ）、ＴＲＵ−０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ−１０６；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、オクレリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）、およびＡＭＥ−１３３ｖ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｌｅｖｅｎｅら（２００５）（前出）；Ｂｕｒｇｅら（２００８） Ｃｌｉｎ Ｔｈｅｒ ３０（１０）：１８０６−１８１６；Ｋａｕｓａｒら（２００９） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ ９（７）：８８９−８９５；Ｍｏｒｓｃｈｈａｕｓｅｒら（２００９） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２７（２０）：３３４６−３３５３；およびＭｉｌａｎｉ ａｎｄ Ｃａｓｔｉｌｌｏ（２００９） Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １１（２）：２００−２０７を参照のこと。
抗体がＣＤ２０に結合するか否かおよび／もしくは抗体のＣＤ２０に対する親和性を決定するための方法は、当該分野で公知である。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＣＤ２０タンパク質の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープに結合する別の抗体の結合を交差ブロックし得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＣＤ２０タンパク質のペプチドフラグメントの中にあるかもしくはこれと重複するエピトープに結合する抗体の結合を交差ブロックし得る。上記ペプチドフラグメントは、例えば、配列番号４１もしくは配列番号４２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有するヒトＣＤ２００タンパク質のフラグメントであり得る。
上記抗ＣＤ２００抗体のうちのいずれかが、本明細書に記載される二重特異的抗ＣＤ２００／抗ＣＤ２０抗体へと組み込まれ得ることは理解される。
（薬学的組成物および処方物）
抗ＣＤ２００抗体、抗ＣＤ２０治療剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体）、もしくはその両方を含む組成物は、薬学的組成物として、例えば、ヒトに投与して、癌もしくは自己免疫障害を処置するために処方され得る。上記薬学的組成物は、一般に、薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書に記載される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」とは、生理的に適合性である任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などをいい、これらを含む。上記組成物は、薬学的に受容可能な塩（例えば、酸付加塩もしくは塩基付加塩）を含み得る。例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ６６：１−１９を参照のこと。
上記組成物は、標準的方法に従って処方され得る。薬学的処方物は、十分に確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００） 「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌら（１９９９） 「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；およびＫｉｂｂｅ（２０００） 「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ」，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに記載される。いくつかの実施形態において、組成物は、例えば、適切な濃度において緩衝化溶液として処方され得、および２〜８℃における貯蔵に適切であり得る。いくつかの実施形態において、組成物は、０℃未満の温度（例えば、−２０℃もしくは−８０℃）における貯蔵のために処方され得る。
上記薬学的組成物は、種々の形態にあり得る。これら形態としては、例えば、液体、半固体および固体の投与形態（例えば、溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散物もしくは懸濁物、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤が挙げられる。上記好ましい形態は、意図された投与様式および治療適用に一部依存する。例えば、抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体を含み、全身送達もしくは局所送達が意図された組成物は、注射用溶液もしくは注入用溶液の形態にあり得る。よって、上記組成物は、非経口態様（例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、もしくは筋肉内注射）による投与のために処方され得る。「非経口投与」、「非経口投与される」および他の文法的に等価な語句は、本明細書に記載される場合、経腸投与および表面投与（ｔｏｐｉｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）以外の投与様式（通常は、注射による）に言及し、静脈内、鼻内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、大脳内、頭蓋内、頸動脈内（ｉｎｔｒａｃａｒｏｔｉｄ）および胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）の注射および注入（以下を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
上記組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、もしくは高濃度での安定な貯蔵に適した他の整理された構造として処方され得る。滅菌注射用溶液は、本明細書に記載される抗体を、必要とされる場合、上記に列挙された成分のうちの１つもしくは組み合わせと適切な溶媒中で必要とされる量において組み込み、続いて、濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、本明細書で記載される抗ＣＤ２００抗体（および／もしくは抗ＣＤ２０治療剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体））を、塩基性分散媒および上記に列挙されるものから必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルの中に組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌散剤の場合、調製法は、本明細書に記載される抗体と任意のさらなる所望の成分の粉末を、予め滅菌濾過されたその溶液から得る真空乾燥および凍結乾燥する工程を包含する。溶液の適切な流動性は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合には必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射用組成物の長期化した吸収は、上記組成物中に吸収を遅延させる試薬（例えば、モノステアレート塩およびゼラチン）を含めることによってもたらされ得る。
特定の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体（および／もしくは上記抗ＣＤ２０治療剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体））は、迅速な放出に対して上記化合物を保護するキャリアとともに調製され得る（例えば、制御放出処方物（移植物および微小被包送達系（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）が挙げられる））。生分解性の生体適合性ポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）が、使用され得る。このような処方物を調製するための多くの方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８） 「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、哺乳動物（例えば、ヒト）への肺内投与に（例えば、ネブライザを介する投与に）適切な組成物に処方され得る。このような組成物を調製するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、米国特許出願公開第２００８０２０２５１３号；米国特許第７，１１２，３４１号および同第６，０１９，９６８号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ ００／０６１１７８およびＷＯ ０６／１２２２５７（これら各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）に記載される。乾燥粉末吸入器処方物および上記処方物の投与に適したシステムは、例えば、米国特許出願公開第２００７０２３５０２９号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ００／６９８８７；および米国特許第５，９９７，８４８号に記載される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体（および／もしくは抗ＣＤ２０治療剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体））は、例えば、その安定化および／もしくは循環（例えば、血液、血清、もしくは他の組織）中での保持を改善する部分で改変され得る。上記安定化部分は、少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、もしくは５０倍以上）上記抗体の安定性もしくはその保持を改善し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、癌を処置するかもしくはその症状を改善するために有用な１種以上のさらなる活性薬剤とともに処方され得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体は、抗ＣＤ２０治療剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体（例えば、本明細書で記載される抗ＣＤ２０抗体のうちのいずれか））、遺伝子毒性因子もしくは化学療法剤、または１種以上のキナーゼインヒビターとともに処方され得る。上記遺伝子毒性因子もしくは化学療法剤は、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド、ポドフィロトキシン、タキソール、サトラプラチン（ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎｕｍ）、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、ａｒａ−Ｃ、タキソテール、ゲムシタビン、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、アドリアマイシン（ＡＤＲ）、もしくは前述のうちのいずれかのアナログであり得るが、これらに限定されない。キナーゼインヒビターとしては、例えば、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イマチニブメシレート、もしくはスニチニブリンゴ酸塩のうちの１種以上が挙げられる。さらなる薬剤は、当該分野で公知であり、本明細書に記載される。
上記抗ＣＤ２００抗体が第２の活性薬剤と組み合わせて使用されるべき場合、もしくは２種以上の異なる抗ＣＤ２００抗体が使用されるべき場合、上記薬剤は、別個にもしくは一緒に処方され得る。例えば、上記それぞれの薬学的組成物は、例えば、投与の直前に混合され得、一緒に投与され得るか、または例えば、同時にもしくは異なるときに別個に投与され得る（以下を参照のこと）。
上記に記載されるように、組成物は、これが治療上有効な量の抗ＣＤ２００抗体を含むように処方され得るか、または上記組成物は、治療量以下（ｓｕｂ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｍｏｕｎｔ）の上記抗体および治療量以下の１種以上のさらなる活性薬剤を、上記成分が全部で、癌もしくは自己免疫障害を処置するために治療上有効であるように含むために処方され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、２種以上の抗ＣＤ２００抗体（各々、治療量以下の用量）を、組み合わせた上記抗体が、ヒトにおける癌もしくは自己免疫障害を処置するために治療上有効である濃度にあるように、含むように処方され得る。治療上有効用量の抗ＣＤ２００抗体を決定するための方法は、当該分野で公知であり、本明細書に記載される。
（抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体を生成するための方法）
本開示に従った抗体（例えば、抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体）またはその抗原結合フラグメントを生成するために適した方法は、当該分野で公知であり（例えば、米国特許第７，４２７，６６５号；同第７，４３５，４１２号；および同第７，４０８，０４１号（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと）、本明細書に記載される。例えば、モノクローナル抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００発現細胞、ヒトＣＤ２００ポリペプチド、もしくは免疫原としてのヒトＣＤ２００ポリペプチドの抗原性フラグメントを使用して生成され得、従って、抗体生成細胞および続いてモノクローナル抗体が単離され得る動物における免疫応答を惹起し得る。同様に、モノクローナル抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＣＤ２０発現細胞、ヒトＣＤ２０ポリペプチド、もしくは動物における免疫原としての上記ヒトＣＤ２０ポリペプチドの抗原性フラグメントを使用して生成され得る。このような抗体の配列が決定され得、上記抗体もしくはその改変体が、組換え技術によって生成され得る。組換え技術は、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体を、上記モノクローナル抗体、ならびに目的の抗原（例えば、ＣＤ２００もしくはＣＤ２０）に結合し得るポリペプチドの配列に基づいて生成するために使用され得る。
さらに、組換えライブラリーから得られる抗ＣＤ２００抗体（「ファージ抗体」）は、ベイト（ｂａｉｔ）として、標的特異性に基づいて上記抗体もしくはポリペプチドを単離するために、ＣＤ２００発現細胞、もしくはそれから得られるポリペプチドを使用して選択され得る。非ヒトおよびキメラ抗ＣＤ２００抗体の生成および単離は、十分に当業者の技術範囲内である。抗ＣＤ２０抗体は、上記の方法の単なる慣用的適合を使用して、選択され得ることは、理解される。
組換えＤＮＡ技術は、非ヒト細胞において生成される抗体の１つ以上の特徴を改変するために使用され得る。従って、キメラ抗体は、診断適用もしくは治療適用においてその免疫原性を低下させるために構築され得る。さらに、免疫原性は、ＣＤＲグラフト化、および必要に応じて、フレームワーク改変によって、上記抗体をヒト化することによって最小限にされ得る。米国特許第５，２２５，５３９号および同第７，３９３，６４８号（これらの各々の内容は、本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
抗体は、動物血清から得られ得るか、またはモノクローナル抗体もしくはそのフラグメントの場合には、細胞培養物において生成され得る。組換えＤＮＡ技術は、確立された手順（細菌細胞培養物もしくは好ましくは、哺乳動物細胞培養物における手順が挙げられる）に従って上記抗体を生成するために使用され得る。上記選択された細胞培養システムは、好ましくは、上記抗体生成物を分泌する。
別の実施形態において、本明細書で開示される抗体の生成のためのプロセスは、宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉもしくは哺乳動物細胞）を培養する工程を包含し、上記宿主は、ハイブリッドベクターで形質転換されている。上記ベクターは、１個以上の発現カセットを含み、上記発現カセットは、上記抗体タンパク質をコードする第２のＤＮＡ配列に適切なリーディングフレームで連結されたシグナルペプチドをコードする第１のＤＮＡ配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む。次いで、上記抗体タンパク質は、集められ、単離される。必要に応じて、上記発現カセットは、抗体タンパク質（各々個々に、適切なリーディングフレームでシグナルペプチドに作動可能に連結される）をコードするポリシストロン性（例えば、二シストロン性）ＤＮＡ配列に作動可能に連結されたプロモーターを含み得る。
インビトロでのハイブリドーマ細胞もしくは哺乳動物宿主細胞の増殖は、適切な培養培地中で行われ、上記培養培地は、哺乳動物血清（例えば、ウシ胎仔血清）、もしくは微量元素および増殖持続補助物質（例えば、フィーダー細胞（例えば、正常マウス腹腔滲出細胞）、脾細胞、骨髄マクロファージ、２−アミノエタノール、インスリン、トランスフェリン、低密度リポタンパク質、オレイン酸など）が必要に応じて補充された習慣的な標準培養培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）もしくはＲＰＭＩ １６４０培地）を含む。細菌細胞もしくは酵母細胞である宿主細胞の増殖は、同様に、当該分野で公知の適切な培養培地中で行われる。例えば、細菌に関して、適切な培養培地としては、ＬＥ培地、ＮＺＣＹＭ培地、ＮＺＹＭ培地、ＮＺＭ培地、Ｔｅｒｒｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ培地、ＳＯＢ培地、ＳＯＣ培地、２ｘＹＴ培地、もしくはＭ９最小培地が挙げられる。酵母に関しては、適切な培養培地としては、ＹＰＤ培地、ＹＥＰＤ培地、最小培地、もしくは完全ミネラルドロップアウト培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｄｒｏｐｏｕｔ Ｍｅｄｉｕｍ）が挙げられる。
インビトロ生成は、比較的純粋な抗体調製物を提供し、スケールアップ生成を可能にして、大量の所望の抗体を与える。細菌細胞、酵母、植物、もしくは哺乳動物細胞培養の技術は、当該分野で公知であり、均質な懸濁培養（例えば、エアリフトリアクター中もしくは連続撹拌リアクター中で）、および固定化されたもしくは閉じ込められた細胞培養（例えば、中空繊維、マイクロカプセル中、アガロースマイクロビーズもしくはセラミックカートリッジ上で）が挙げられる。
大量の所望の抗体はまた、インビボで哺乳動物細胞を増殖させることによって得られ得る。この目的のために、上記所望の抗体を生成するハイブリドーマ細胞が、組織適合性哺乳動物の中に注射されて、抗体生成腫瘍の増殖を引き起こす。必要に応じて、上記動物は、注射前に、炭化水素（特に、ミネラルオイル（例えば、プリスタン（テトラメチル−ペンタデカン）））で刺激される。１〜３週間後、上記抗体は、それら哺乳動物の体液から単離される。例えば、適切なメラノーマ細胞と、Ｂａｌｂ／ｃマウスに由来する抗体生成脾細胞との融合によって得られるハイブリドーマ細胞または上記所望の抗体を生成するハイブリドーマ細胞株Ｓｐ２／０に由来するトランスフェクトされた細胞は、必要に応じて、プリスタンで予め処理したＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔内に注射される。１〜２週間後に、腹水を上記動物から採取する。
前述のおよび他の技術は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５） Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７；米国特許第４，３７６，１１０号；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（１９８８） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（これらの開示はすべて、本明細書に参考として援用される）おいて考察されている。組換え抗体分子の調製のための技術は、上記参考文献に記載され、そして例えば：ＷＯ９７／０８３２０；米国特許第５，４２７，９０８号；米国特許第５，５０８，７１７号；Ｓｍｉｔｈ（１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２５：１３１５−１３１７；Ｐａｒｍｌｅｙ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（１９８８） Ｇｅｎｅ ７３：３０５−３１８；Ｄｅ Ｌａ Ｃｒｕｚら（１９８８） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６３：４３１８−４３２２；米国特許第５，４０３，４８４号；米国特許第５，２２３，４０９号；ＷＯ８８／０６６３０；ＷＯ９２／１５６７９；米国特許第５，７８０，２７９号；米国特許第５，５７１，６９８号；米国特許第６，０４０，１３６号；Ｄａｖｉｓら（１９９９） Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖ．１８（４）：４２１−５；およびＴａｙｌｏｒら（１９９２） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：６２８７−６２９５；Ｔｏｍｉｚｕｋａら（２０００） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７（２）：７２２−７２７（これらの各々の内容は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）においても記載される。
上記細胞培養上清は、ＣＤ２００発現細胞の免疫蛍光染色によって、イムノブロッティングによって、酵素イムノアッセイ（例えば、サンドイッチアッセイもしくはドットアッセイ、またはラジオイムノアッセイ）によって、優先的に上記所望の抗体についてスクリーニングされる。
上記抗体の単離のために、上記培養上清もしくは腹水中の免疫グロブリンは、例えば、硫酸アンモニウムでの沈殿、吸湿性物質（例えば、ポリエチレングリコール）に対する透析、選択膜を介する濾過などによって、濃縮され得る。必要な場合および／もしくは所望される場合、上記抗体は、習慣的なクロマトグラフィー法（例えば、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ−セルロースに対するクロマトグラフィーおよび／もしくは（イムノ−）アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＣＤ２００発現細胞株に由来する１種以上の表面ポリペプチドもしくは合成ＣＤ２００フラグメントポリペプチド、またはプロテインＡもしくはプロテイン−Ｇでのアフィニティークロマトグラフィー））によって精製される。
別の実施形態は、適切な哺乳動物におけるヒトＣＤ２００タンパク質もしくはヒトＣＤ２０（生成される抗体に依存する）に対して指向される抗体を分泌する細菌細胞株の調製のためのプロセスを提供する。例えば、ウサギは、ＣＤ２００発現組織もしくは細胞またはＣＤ２００ポリペプチドもしくはそのフラグメントに由来するプールされたサンプルで免疫される。上記免疫されたウサギから生成されるファージディスプレイライブラリーが構築され、当該分野で周知の方法（例えば、本明細書に参考として援用される種々の文献中で開示される方法）に従って所望の抗体についてパニング（ｐａｎ）される。
上記モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞がまた、開示される。上記好ましいハイブリドーマ細胞は、一般に、安定であり、所望の特異性の本明細書に記載されるモノクローナル抗体を分泌し、インビトロでの融解および増殖によって極低温で凍結した培養物から増殖させられ得るか、もしくはインビボで腹水として増殖させられ得る。
別の実施形態において、ヒトＣＤ２００タンパク質に対するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞株の調製のためのプロセスが提供される。そのプロセスにおいて、適切な哺乳動物（例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウス）は、ＣＤ２００の１種以上のポリペプチドもしくは抗原性フラグメントで、またはＣＤ２００発現細胞に由来する１種以上のポリペプチドもしくは抗原性フラグメント、上記ＣＤ２００発現細胞自体、もしくは記載されるように精製ポリペプチドを含む抗原性キャリアで免疫される。上記免疫された哺乳動物の抗体生成細胞は、培養において短時間増殖させられるか、または適切な骨髄腫細胞株の細胞と融合される。上記融合において得られたハイブリッド細胞は、クローニングされ、望ましい抗体を分泌する細胞クローンが選択される。例えば、ヒトＣＤ２００のタンパク質フラグメントで免疫したＢａｌｂ／ｃマウスの脾細胞は、骨髄腫細胞株ＰＡＩもしくは骨髄腫細胞株Ｓｐ２／０−Ａｇ １４の細胞と融合される。次いで、得られたハイブリッド細胞は、望ましい抗体の分泌についてスクリーニングされ、陽性のハイブリドーマ細胞がクローニングされる。
ハイブリドーマ細胞株を調製するための方法は、ヒトＣＤ２００のペプチドフラグメントを数回（例えば、４〜６回）数ヶ月にわたって（例えば、２〜４ヶ月の間）皮下注射および／もしくは腹腔内注射することによってＢａｌｂ／ｃマウスを免疫する工程を包含する。上記免疫したマウス由来の脾細胞は、最後の注射の２〜４日後に採取され、融合促進剤（好ましくは、ポリエチレングリコール）の存在下で、骨髄腫細胞株ＰＡＩの細胞と融合される。好ましくは、上記骨髄腫細胞は、分子量約４０００の約３０％〜約５０％ ポリエチレングリコールを含む溶液中に、上記免疫したマウスに由来する３〜２０倍過剰の脾細胞と融合される。融合後、上記細胞を前述で記載されるように、通常の骨髄腫細胞が所望のハイブリドーマ細胞よりも多く増殖させないようにするために、周期的な間隔で、選択培地（例えば、ＨＡＴ培地）を補充した適切な培養培地中で増殖される。
上記抗体およびそのフラグメントは、「キメラ」であり得る。キメラ抗体およびその抗原結合フラグメントは、２種以上の異なる種（例えば、マウスおよびヒト）に由来する部分を含む。キメラ抗体は、ヒト定常ドメイン遺伝子セグメントの中にスプライシングされた所望の特異性のマウス可変領域とともに生成され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）。この様式において、非ヒト抗体は、これをヒト臨床適用（例えば、ヒト被験体における癌を処置もしくは予防するための方法）により適切にするように改変され得る。
本開示のモノクローナル抗体は、上記非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態を含む。ヒト化もしくはＣＤＲグラフト化ｍＡｂは、ヒトのための治療剤として特に有用である。なぜなら、それらは、マウス抗体ほど迅速には循環から浄化されず、代表的には、有害な免疫反応を誘起しないからである。一般に、ヒト化抗体は、その中に導入された非ヒト供給源に由来する１個以上のアミノ酸残基を有する。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基といわれ、これらは、代表的には、「輸入」可変ドメインからとられる。ヒト化抗体を調製する方法は、一般には、当該分野で周知である。例えば、ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法に従って、齧歯類ＣＤＲもしくはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列の代わりに使用することによって本質的に行われ得る（例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６） Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８） Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６を参照のこと）。また、例えば、Ｓｔａｅｌｅｎｓら（２００６） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４３：１２４３−１２５７を参照のこと。いくつかの実施形態において、非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、ヒト抗体（レシピエント抗体）であり、ここで、上記レシピエント抗体の超可変（ＣＤＲ）領域残基が、所望の特異性、親和性、および結合能を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギ、もしくは非ヒト霊長類）に由来する超可変領域残基で置換されている。いくつかの例において、上記ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域残基はまた、対応する非ヒト残基によって置換される（いわゆる、「復帰変異」）。さらに、ファージディスプレイライブラリーは、上記抗体配列内の選択された位置においてアミノ酸を変動させるために使用され得る。ヒト化抗体の特性はまた、上記ヒトフレームワークの選択によって影響を受ける。さらに、ヒト化抗体およびキメラ抗体は、抗体特性（例えば、親和性もしくはエフェクター機能）をさらに改善するために、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見いだされない残基を含むように改変され得る。
完全ヒト抗体はまた、本開示において提供される。用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって導入される変異もしくはインビボでの体性変異）。しかし、用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフト化された抗体（すなわち、ヒト化抗体）を含まない。完全ヒト抗体もしくはヒト抗体は、ヒト抗体遺伝子（可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、結合（Ｊ）、および定常（Ｃ）エキソン）を有するトランスジェニックマウスまたはヒト細胞に由来し得る。例えば、いまや、免疫の際に、内因性免疫グロブリン生成の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを生成し得るトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成することは可能である。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３） Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら（１９９３） Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３；およびＤｕｃｈｏｓａｌら（１９９２） Ｎａｔｕｒｅ ３５５：２５８を参照のこと。トランスジェニックマウス系統は、再配列されていないヒト免疫グロブリン遺伝子に由来する遺伝子配列を含むように操作され得る。上記ヒト配列は、ヒト抗体の重鎖および軽鎖両方をコードし得、マウスにおいて正確に機能し、再配列を受けて、ヒトにおけるものと類似の広い抗体レパートリーを提供し得る。上記トランスジェニックマウスは、上記標的タンパク質（例えば、ヒトＣＤ２００タンパク質、そのフラグメント、またはＣＤ２００タンパク質を発現する細胞；またはヒトＣＤ２０タンパク質、そのフラグメント、もしくはＣＤ２０タンパク質を発現する細胞）で免疫されて、特異的抗体の多様なアレイおよびそれらのコードＲＮＡを作製し得る。このような抗体の上記抗体鎖成分をコードする核酸は、次いで、上記動物からディスプレイベクターへとクローニングされ得る。代表的には、重鎖および軽鎖の配列をコードする別個の核酸集団は、クローニングされ、上記別個の集団は、次いで、ベクターへの挿入の際に組換えられ得、その結果、上記ベクターの任意の所定のコピーは、重鎖および軽鎖のランダム組換えを受容する。上記ベクターは、抗体鎖を発現するように設計され、その結果、それらは、組み立てられ得、上記ベクターを含むディスプレイパッケージ（ｄｉｓｐｌａｙ ｐａｃｋａｇｅ）の外側表面にディスプレイされ得る。例えば、抗体鎖は、上記ファージの外側表面のファージコートタンパク質との融合タンパク質として発現され得る。その後、ディスプレイパッケージは、標的へ結合する抗体のディスプレイについてスクリーニングされ得る。
さらに、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーに由来し得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１） Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら（１９９１） Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２２：５８１−５９７；およびＶａｕｇｈａｎら（１９９６） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １４：３０９（１９９６））。合成ファージライブラリーが作製され得、これは、合成ヒト抗体Ｖ領域のランダム化組み合わせを使用する。抗原に対する選択によって、完全ヒト抗体が作製され得、これは、上記Ｖ領域が本質的にヒトのものに非常に類似している。例えば、米国特許第６，７９４，１３２号、同第６，６８０，２０９号、同第４，６３４，６６６号、およびＯｓｔｂｅｒｇら（１９８３） Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１−３６７（これらの各々の内容は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
ヒト抗体の生成に関しては、Ｍｅｎｄｅｚら（１９９８） Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６，Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８） Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８８：４８３−４９５（それらの開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）もまた参照のこと。ヒト抗体は、米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１１４，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１６２，９６３号；同第６，１５０，５８４号；同第６，７１３，６１０号；および同第６，６５７，１０３号、ならびに米国特許公開第２００３０２２９９０５ Ａ１号、同第２００４００１０８１０ Ａ１号、同第ＵＳ ２００４００９３６２２ Ａ１号、同第２００６００４０３６３ Ａ１号、同第２００５００５４０５５ Ａ１号、同第２００５００７６３９５ Ａ１号、同第２００５０２８７６３０ Ａ１号においてさらに考察されかつ詳述される。国際公開番号ＷＯ ９４／０２６０２、ＷＯ ９６／３４０９６、およびＷＯ ９８／２４８９３、ならびに欧州特許第ＥＰ ０ ４６３ １５１ Ｂ１号もまた参照のこと。上記で引用される特許、出願、および参考文献の各々の開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される。
代替のアプローチにおいて、他のもの（ＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含む）は、「ミニ遺伝子座」アプローチを利用した。上記ミニ遺伝子座アプローチにおいて、外因性Ｉｇ遺伝子座は、上記Ｉｇ遺伝子座から構成要素（ｐｉｅｃｅ）（個々の遺伝子）を含めることを介して模倣される。従って、１個以上のＶＨ遺伝子、１個以上のＤＨ遺伝子、１個以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域、および第２の定常領域（好ましくは、ガンマ定常領域）は、動物への挿入のために構築物へと形成される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，６２５，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，７７０，４２９号；同第５，７８９，６５０号；および同第５，８１４，３１８号；同第５，５９１，６６９号；同第５，６１２，２０５号；同第５，７２１，３６７号；同第５，７８９，２１５号；同第５，６４３，７６３号；同第５，５６９，８２５号；同第５，８７７，３９７号；同第６，３００，１２９号；同第５，８７４，２９９号；同第６，２５５，４５８号；および同第７，０４１，８７１号（これらの開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）において記載される。欧州特許第０ ５４６ ０７３ Ｂ１号、国際特許公開番号ＷＯ ９２／０３９１８、ＷＯ ９２／２２６４５、ＷＯ ９２／２２６４７、ＷＯ ９２／２２６７０、ＷＯ ９３／１２２２７、ＷＯ ９４／００５６９、ＷＯ ９４／２５５８５、ＷＯ ９６／１４４３６、ＷＯ ９７／１３８５２、およびＷＯ ９８／２４８８４（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）もまた参照のこと。Ｔａｙｌｏｒら（１９９２） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２０：６２８７；Ｃｈｅｎら（１９９３） Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５：６４７；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：３７２０−４；Ｃｈｏｉら（１９９３） Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４：１１７；Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４） Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９；Ｔａｙｌｏｒら（１９９４） Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：５７９−５９１；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９５） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４：６４５３−６５；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５；およびＴｕａｉｌｌｏｎら（２０００） Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０：２９９８−３００５（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）をさらに参照のこと。
特定の実施形態において、脱免疫化抗ＣＤ２００抗体もしくはその抗原結合フラグメントが提供される。脱免疫化抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、所定の種に対して上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを非免疫原性にするかもしくは免疫原性を低くするように改変されたものである。脱免疫化は、当業者に公知の種々の技術のうちのいずれかを利用して、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを改変することによって達成され得る（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０４／１０８１５８およびＷＯ ００／３４３１７を参照のこと）。例えば、抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列内の潜在的なＴ細胞エピトープおよび／もしくはＢ細胞エピトープを同定し、上記潜在的なＴ細胞エピトープおよび／もしくはＢ細胞エピトープのうちの１個以上を、例えば、組み換え技術を使用して、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントから除去することによって、脱免疫化され得る。次いで、上記改変された抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、必要に応じて、生成され得、試験されて、１個以上の所望の生物学的活性（例えば、結合親和性）を保持するが、免疫原性が低下した抗体もしくはその抗原結合フラグメントを同定する。潜在的なＴ細胞エピトープおよび／もしくはＢ細胞エピトープを同定するための方法は、当該分野で公知の技術（例えば、コンピューター化方法（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０２／０６９２３２を参照のこと）、インビトロもしくはインシリコ技術、および生物学的アッセイもしくは物理的方法（例えば、ＭＨＣ分子へのペプチドの結合の決定、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを受容するための上記種に由来する上記Ｔ細胞レセプターへのペプチド：ＭＨＣ複合体の結合の決定、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを受容するための上記種のＭＨＣ分子を有するトランスジェニック動物を使用する上記タンパク質もしくはそのペプチド部分の試験、または上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを受容するための上記種に由来する免疫系細胞で再構成したトランスジェニック動物での試験など）を使用して行われ得る。種々の実施形態において、本明細書に記載される脱免疫化抗体（例えば、脱免疫化抗ＣＤ２００抗体もしくは脱免疫化抗ＣＤ２０抗体）としては、脱免疫化抗原結合フラグメント、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、モノクローナル抗体、マウス抗体、操作された抗体（例えば、キメラ抗体、一本鎖抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、および人工的に選択された抗体）、合成抗体および半合成抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードする挿入物を含む組換えＤＮＡ、またはＣＤ２００タンパク質発現細胞株が生成される。用語ＤＮＡは、コード一本鎖ＤＮＡ、上記コードＤＮＡおよびこれに相補的なＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ、またはこれらの相補的な（一本鎖）ＤＮＡ自体を含む。
さらに、抗ＣＤ２００抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡ、または上記ＣＤ２００発現細胞株は、重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメイン、またはこれらの変異体をコードする忠実なＤＮＡ配列を含むように、酵素的にもしくは化学的に合成され得る。上記忠実なＤＮＡの変異体は、１もしくはそれより多いアミノ酸が欠失されるか、挿入されるか、もしくは１もしくはそれより多い他のアミノ酸と交換された、上述の抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡである。好ましくは、上記改変は、ヒト化および発現最適化の適用において上記抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインのＣＤＲの外にある。用語である変異体ＤＮＡはまた、１もしくはそれより多いヌクレオチドが、同じアミノ酸をコードする新たなコドンを有する他のヌクレオチドによって置換されるサイレント変異体を包含する。用語である変異体配列はまた、縮重配列を含む。縮重配列は、非制限数のヌクレオチドが、元々コードされるアミノ酸配列の変更を生じることなしに他のヌクレオチドによって置換されるという点で上記遺伝子コードの意味の範囲内で縮重である。このような縮重配列は、上記重鎖マウス可変ドメインおよび／もしくは軽鎖マウス可変ドメインの最適な発現を得るために、それらの異なる制限部位および／もしくは特定の宿主（特に、Ｅ．ｃｏｌｉ）によって好まれる特定のコドンの頻度に起因して有用であり得る。
用語である変異体は、当該分野で公知の方法に従って、上記忠実なＤＮＡのインビトロ変異誘発によって得られるＤＮＡ変異体を含むことが意図される。
完全な四量体免疫グロブリン分子の組み立ておよびキメラ抗体の発現に関しては、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインをコードする上記組換えＤＮＡ挿入物は、重鎖および軽鎖の定常ドメインをコードする対応するＤＮＡと融合され、次いで、例えば、ハイブリッドベクターの中へ組み込んだ後に、適切な宿主細胞の中に移される。
抗ＣＤ２００抗体の重鎖マウス可変ドメインをコードする挿入物を含む組換えＤＮＡもしくはヒト定常ドメインＩｇＧ（例えば、γ１、γ２、γ３もしくはγ４、特定の実施形態においては、γ１もしくはγ４）に融合されたＣＤ２００発現細胞株が、使用され得る。ヒト定常ドメインκもしくはλ（好ましくは、κ）に融合された抗体の軽鎖マウス可変ドメインをコードする挿入物を含む組換えＤＮＡもまた、提供される。
別の実施形態は、上記重鎖可変ドメインおよび上記軽鎖可変ドメインが、スペーサー基（必要に応じて、上記宿主細胞における上記抗体のプロセシングを促進するシグナル配列および／または上記抗体の精製を促進するペプチドをコードするＤＮＡ配列および／または切断部位および／またはペプチドスペーサーおよび／もしくは因子を含む）によって連結された組換えポリペプチドをコードする組換えＤＮＡに関する。因子をコードするＤＮＡは、診断適用もしくは治療適用において有用な上記因子をコードするＤＮＡであると意図される。従って、毒素もしくは酵素（特に、プロドラッグの活性化を触媒し得る酵素）である因子の分子は、特に必要とされる。このような因子をコードする上記ＤＮＡは、天然に存在する酵素もしくは毒素をコードするＤＮＡ、またはその変異体の配列を有し、当該分野で周知の方法によって調製され得る。
よって、本開示のモノクローナル抗体もしくは抗原結合フラグメントは、他の因子（例えば、治療剤もしくは検出可能な標識）に結合体化されていない裸の抗体もしくは抗原結合フラグメントであり得る。あるいは、上記モノクローナル抗体もしくは抗原結合フラグメントは、因子（例えば、細胞傷害性薬剤、低分子、ホルモン、酵素、増殖因子、サイトカイン、リボザイム、ペプチド摸倣物、化学物質、プロドラッグ、コード配列を含む核酸分子（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、遺伝子標的化構築物など）もしくは検出可能な標識（例えば、ＮＭＲもしくはＸ線造影剤、蛍光分子など）に結合体化され得る。特定の実施形態において、抗ＣＤ２００抗体もしくは抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、一本鎖ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２）は、上記抗体もしくは抗原結合フラグメントの半減期を増大させる分子に連結される（上記を参照のこと）。
いくつかの考えられるベクター系は、哺乳動物細胞での、クローニングされた重鎖および軽鎖の遺伝子の発現のために利用可能である。１つのクラスのベクターは、所望の遺伝子配列の宿主細胞ゲノムへの組み込みに依拠する。安定に組み込まれたＤＮＡを有する細胞は、薬物耐性遺伝子（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ａｎｄ Ｂｅｒｇ（１９８１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，７８：２０７２）もしくはＴｎ５ ｎｅｏ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ａｎｄ Ｂｅｒｇ（１９８２） Ｍｏｌ Ａｐｐｌ Ｇｅｎｅｔ １：３２７）を同時に導入することによって選択され得る。上記選択マーカー遺伝子は、発現されるべきＤＮＡ遺伝子配列に連結され得るか、または同時トランスフェクションによって同じ細胞に導入され得るかのいずれかである（Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９） Ｃｅｌｌ １６：７７）。第２のクラスのベクターは、染色体外プラスミドに自律的に複製する能力を付与するＤＮＡエレメントを利用する。これらベクターは、動物ウイルス（例えば、ウシパピローマウイルス（Ｓａｒｖｅｒら（１９８２） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，７９：７１４７）、ポリオーマウイルス（Ｄｅａｎｓら（１９８４） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８１：１２９２）、もしくはＳＶ４０ウイルス（Ｌｕｓｋｙ ａｎｄ Ｂｏｔｃｈａｎ（１９８１） Ｎａｔｕｒｅ ２９３：７９））に由来し得る。
免疫グロブリンｃＤＮＡは、抗体タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡを表す配列のみから構成されるので、上記遺伝子の転写および上記ＲＮＡのプロセシングを調節するさらなる遺伝子発現エレメントは、免疫グロブリンｍＲＮＡの合成に必要とされる。これらエレメントは、スプライシングシグナル、転写プロモーター（誘導性プロモーターが挙げられる）、エンハンサー、および終止シグナルを含み得る。このようなエレメントを組み込むｃＤＮＡ発現ベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ（１９８３） Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２８０；Ｃｅｐｋｏら（１９８４） Ｃｅｌｌ ３７：１０５３；およびＫａｕｆｍａｎ（１９８５） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２：６８９によって記載されるものを含む。
本開示から明らかなように、上記抗ＣＤ２００抗体および／もしくは抗ＣＤ２０抗体は、治療（例えば、癌を処置するための治療（組み合わせ治療を含む））において、および疾患進行のモニタリングにおいて使用され得る。
本開示の治療実施形態において、二重特異的抗体が企図される。二重特異的抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくは、ヒトもしくはヒト化抗体である。この場合、上記結合特異性のうちの１つは、細胞（例えば、免疫細胞）上の上記ＣＤ２００抗原に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものであり、好ましくは、細胞表面タンパク質もしくはレセプターもしくはレセプターサブユニットに対するものである。いくつかの実施形態において、上記二重特異的抗体は、ヒトＣＤ２００およびヒトＣＤ２０に結合するものである。
二重特異的抗体を作製するための方法は、当業者の範囲内である。伝統的には、二重特異的抗体の組換え生成は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、上記２つの重鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ（１９８３） Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７−５３９）。所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。上記融合は、好ましくは、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン（ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域のうちの少なくとも一部を含む）とのものである。上記免疫グロブリン重鎖融合物、および所望であれば、上記免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時トランスフェクトされる。二重特異的抗体を生成するための例示的な現在公知の方法のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら（１９８６） Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０；ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９６／２７０１１；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１；Ｓｈａｌａｂｙら Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ（１９９２） １７５：２１７−２２５；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８（５）：１５４７−１５５３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８；Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５２：５３６８；およびＴｕｔｔら（１９９１） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：６０を参照のこと。二重特異的抗体はまた、架橋された抗体もしくは異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体を含む。異種結合体抗体は、任意の都合のよい架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤は、当該分野で周知であり、多くの架橋技術とともに、米国特許第４，６７６，９８０号に開示される。
二重特異的抗体フラグメントを作製し、組換え細胞培養物から直接単離するための種々の技術はまた、記載されてきた。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して生成された。例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８（５）：１５４７−１５５３を参照のこと。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質に由来するロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結され得る。上記抗体ホモダイマーは、モノマーを形成するためのヒンジ領域において還元され得、次いで、上記抗体ヘテロダイマーを形成するために再酸化され得る。この方法はまた、抗体ホモダイマーの生成のために利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８によって記載される上記「ダイアボディー」技術は、二重特異的抗体フラグメントを作製するための代替機構を提供した。上記フラグメントは、リンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、ここで、上記リンカーは、あまりに短くて、同じ鎖上の上記２つのドメインの間で対形成をさせない。よって、１つのフラグメントの上記ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと対形成させられ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ダイマーの使用による二重特異的抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーがまた、報告された。例えば、Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５２：５３６８を参照のこと。あるいは、上記抗体は、例えば、Ｚａｐａｔａら（１９９５） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ８（１０）：１０５７−１０６２に記載されるように「直線状抗体」であり得る。簡潔には、これら抗体は、抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｄセグメントの対（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直線状抗体は、二重特異的もしくは単一特異的（ｍｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ）であり得る。
本開示はまた、二重特異的抗体（例えば、Ｗｕら（２００７） Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５（１１）：１２９０−１２９７に記載される四価二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子）の改変体形態を包含する。上記ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体に由来する２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって、タンデムで直接、もしくは短いリンカーを介して連結され、続いて、上記軽鎖定常ドメインが連結されるように設計される。２つの親抗体に由来するＤＶＤ−Ｉｇ分子を生成するための方法は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０８／０２４１８８およびＷＯ ０７／０２４７１５（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）にさらに記載される。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体および／もしくは抗ＣＤ２０抗体は、例えば、循環中（例えば、血中、血清中、もしくは他の組織中）での上記抗体自体の安定化および／もしくは保持を改善する部分で改変され得る。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、例えば、Ｌｅｅら（１９９９） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １０（６）：９７３−８；Ｋｉｎｓｔｌｅｒら（２００２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｉｅｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４７７−４８５；およびＲｏｂｅｒｔｓら（２００２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４５９−４７６に記載されるように、ＰＥＧ化され得る。上記安定化部分は、少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、もしくは５０倍以上）、被験体の身体（例えば、血液もしくは組織）中の上記抗体の安定性もしくは保持を改善し得る。
（抗体もしくはその抗原結合フラグメントの改変）
上記抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントは、それらの発現および精製の後に改変され得る。上記改変は、共有結合的もしくは非共有結合的な改変であり得る。このような改変は、例えば、上記ポリペプチドの標的とされたアミノ酸残基と、選択された側鎖もしくは末端残基と反応し得る有機性誘導体化剤とを反応させることによって、上記抗体もしくはフラグメントに導入され得る。改変に適切な部位は、種々の基準（例えば、上記抗体もしくはフラグメントの構造分析もしくはアミノ酸配列分析を含む）のうちのいずれかを使用して選択され得る。
いくつかの実施形態において、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、異種部分に結合体化され得る。上記異種部分は、例えば、異種ポリペプチド、治療剤（例えば、毒素もしくは薬物）、または検出可能な標識（例えば、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、もしくは発光標識が挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。適切な異種ポリペプチドとしては、上記抗体もしくはフラグメントの精製に使用するために、例えば、抗原性タグ（例えば、ＦＬＡＧ、ポリヒスチジン、ヘマグルチニン（ＨＡ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、もしくはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ））が挙げられる。異種ポリペプチドはまた、診断マーカーもしくは検出可能なマーカーとして有用なポリペプチド（例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、もしくはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ））が挙げられる。適切な放射性標識としては、例えば、３２Ｐ、３３Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、および３Ｈが挙げられる。適切な蛍光標識としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８、フィコエリスリン（ＰＥ）、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標） ７００、Ｃｙ５、アロフィコシアニン、およびＣｙ７が挙げられるが、これらに限定されない。発光標識としては、例えば、種々の発光ランタニド（例えば、ユーロピウムもしくはテルビウム）キレートのうちのいずれかが挙げられる。例えば、適切なユーロピウムキレートとしては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）もしくはテトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）のユーロピウムキレートが挙げられる。酵素標識としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ＣＡＴ、ルシフェラーゼ、および西洋ワサビペルオキシダーゼが挙げられる。異種ポリペプチドは、融合タンパク質として上記抗ＣＤ２００抗体の中に組み込まれ得る。抗体−異種ポリペプチド融合タンパク質をコードする核酸を生成するための方法は、抗体操作の分野において周知であり、例えば、Ｄａｋａｐｐａｇａｒｉら（２００６） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７６：４２６−４４０に記載されている。
いくつかの実施形態において、上記異種ポリペプチドは、細胞に対して毒性であるものである。例えば、上記毒性ポリペプチドは、シュードモナス属のエキソトキシン（ＰＥ）、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、ゲロニン、アスペルギリン、レストリクトシン、アンギオゲニン、サポリン、アブリン、原核生物リボヌクレアーゼ、真核生物リボヌクレアーゼ、リシン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、アポトーシス促進（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）ポリペプチド、リボソーム阻害タンパク質、または前述のうちのいずれかの生物学的に活性なフラグメントからなる群より選択され得る。アポトーシス促進ポリペプチドとしては、例えば、Ｂａｘ、Ｂａｄ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｋ、Ｂｏｋ、Ｈｒｋ、ＦａｓＬ、ＴＲＡＩＬ、およびＴＮＦ−α、ならびにこれらのアポトーシス促進性の、生物学的に活性なフラグメントが挙げられる。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体、抗ＣＤ２０抗体、もしくはこれらの抗原結合フラグメントは、細胞に対して毒性である低分子もしくは放射性薬剤に結合体化され得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体は、シスプラチン、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、カンプトテシン、アドリアマイシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、白金、プリカマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、モノメチルオーリスタチン、オーリスタチンＥ、マイトマイシン、エトポシド、ベラムピル（ｖｅｒａｍｐｉｌ）、ポドフィロトキシン、タモキシフェン、タキソール、トランス白金（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、または上述のうちのいずれかのアナログからなる群より選択される毒性低分子に結合体化され得る。上記抗体もしくはフラグメントは、細胞に対して毒性である放射性薬剤に結合体化され得る。このような放射性薬剤としては、例えば、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、２１１Ａｔ、３２Ｐ、１７７Ｌｕ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１５３Ｓｍ、および１９９Ａｕが挙げられる。
２つのタンパク質（例えば、抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体および異種部分）は、公知の化学的架橋剤のうちのいずれかを使用して架橋され得る。このような架橋剤の例としては、「ヒンダード（ｈｉｎｄｅｒｅｄ）」ジスルフィド結合を含む連結を介して２個のアミノ酸残基を連結するものである。これら連結において、架橋ユニットの中のジスルフィド結合は、例えば、還元型グルタチオンもしくは酵素ジスルフィドレダクターゼの作用による還元から保護される（上記ジスルフィド結合のいずれかの側上の基を妨げることによって）。１つの適切な試薬である４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、上記タンパク質のうちの一方の上の末端リジンおよび他方のタンパク質の末端システインを利用して、２個のタンパク質の間でこのような連結を形成する。各タンパク質の上の異なるカップリング部分によって架橋するヘテロ二官能性試薬はまた、使用され得る。他の有用な架橋剤としては、２個のアミノ基（例えば、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド）、２個のスルフヒドリル基（例えば、１，４−ビス−マレイミドブタン）、アミノ基とスルフヒドリル基（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基とカルボキシル基（例えば、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、およびアミノ基とアルギニンの側鎖に存在するグアニジウム基（例えば、ｐ−アジドフェニルグリオキサール一水和物）を連結する試薬が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、放射性標識は、上記抗体のアミノ酸骨格に直接結合体化され得る。あるいは、上記放射性標識は、遊離アミノ基に結合して、関連タンパク質のメタ−ヨードフェニル（ｍＩＰ）誘導体（例えば、Ｒｏｇｅｒｓら（１９９７） Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ３８：１２２１−１２２９を参照のこと）もしくは次に上記タンパク質の骨格に結合するキレート（例えば、ＤＯＴＡもしくはＤＴＰＡに）を形成するより大きな分子の一部（例えば、メタ−［１２５Ｉ］ヨードフェニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドにおける１２５Ｉ（［１２５Ｉ］ｍＩＰＮＨＳ））として含まれ得る。上記放射性標識もしくはこれらを含むより大きな分子／キレートを、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体に結合体化するための方法は、当該分野で公知である。このような方法は、上記タンパク質を、上記放射性標識もしくはキレートを上記タンパク質に結合するのを促進させる条件（例えば、ｐＨ、塩濃度、および／もしくは温度）下で上記放射性標識とインキュベートする工程を包含する（例えば、米国特許第６，００１，３２９号を参照のこと）。
蛍光標識（ときおり「フルオロフォア」といわれる）をタンパク質（例えば、抗ＣＤ２００抗体、抗ＣＤ２０抗体もしくは前述のうちのいずれかの抗原結合フラグメント）に結合体化するための方法は、タンパク質化学の分野で公知である。例えば、フルオロフォアは、上記フルオロフォアに結合されるスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル部分もしくはテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル部分を使用して、タンパク質の遊離アミノ基（例えば、リジンの）もしくはスルフヒドリル基（例えば、システイン）に結合体化され得る。いくつかの実施形態において、上記フルオロフォアは、ヘテロ二官能性架橋剤部分（例えば、スルホ−ＳＭＣＣ）に結合体化され得る。適切な結合体化法は、抗体タンパク質、もしくはそのフラグメントを、上記フルオロフォアと、上記タンパク質への上記フルオロフォアの結合を促進する条件下でインキュベートする工程を包含する。例えば、Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｒｅｄｖａｎｌｙ（２００３） 「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（ＩＳＢＮ ０４７１４９５６０３）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体は、例えば、循環中（例えば、血中、血清中、もしくは組織中）での上記抗体の安定化および／もしくは保持を改善する部分で改変され得る。例えば、上記抗体もしくはフラグメントは、例えば、Ｌｅｅら（１９９９） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １０（６）：９７３−８；Ｋｉｎｓｔｌｅｒら（２００２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｉｅｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４７７−４８５；およびＲｏｂｅｒｔｓら（２００２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４５９−４７６に記載されるように、ＰＥＧ化され得る。上記安定化部分は、上記抗体（またはフラグメント）の安定性もしくは保持を、少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、もしくは５０倍以上）、改善し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体、もしくはその抗原結合フラグメントは、グリコシル化され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、上記抗体もしくはフラグメントが、還元されるかもしくはグリコシル化されないように、酵素処理もしくは化学的処理に供され得るかもしくは細胞から生成され得る。還元されたグリコシル化を有する抗体を生成するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第６，９３３，３６８号；Ｗｒｉｇｈｔら（１９９１） ＥＭＢＯ Ｊ １０（１０）：２７１７−２７２３；およびＣｏら（１９９３） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０：１３６１に記載される。
（生物学的サンプルおよびサンプル収集）
本明細書に記載される方法において使用するための適切な生物学的サンプルは、任意の生物学的流体、細胞集団、もしくは組織またはその画分を含み、これらは、１個以上の白血球および／もしくは１個以上の赤血球を含む。生物学的サンプルは、例えば、被験体（例えば、ヒトのような哺乳動物）から得られる標本であり得るか、またはこのような被験体に由来し得る。例えば、サンプルは、生検によって得られる組織切片、または組織培養物中に配置されるかもしくは組織培養に適合させられる細胞であり得る。生物学的サンプルはまた、生物学的流体（例えば、尿、全血もしくはその画分（例えば、血漿）、唾液、精液、痰、脳脊髄液、涙液、もしくは粘液）であり得る。生物学的サンプルは、所望であれば、特定の細胞タイプを含む画分へとさらに分画され得る。例えば、全血サンプルは、血清へと、もしくは特定の血球タイプ（例えば、赤血球もしくは白血球（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）））を含む画分へと分画され得る。所望であれば、生物学的サンプルは、被験体由来の異なる生物学的サンプルの組み合わせ（例えば、組織および流体サンプルの組み合わせ）であり得る。
上記生物学的サンプルは、被験体（例えば、癌（例えば、ＣＤ２００およびＣＤ２０のうちの一方もしくは両方を発現する癌）（例えば、Ｂ−ＣＬＬ）を有するか、それを有すると疑われるか、もしくはそれを発症するリスクがある被験体）から得られ得る。上記生物学的サンプルを得るための任意の適切な方法が使用され得るが、例示的な方法は、例えば、瀉血、スワブ（例えば、口内スワブ）、洗浄液、もしくは細いニードルの吸引による生検手順が挙げられる。細いニードルで吸引しやすい組織の非限定的な例としては、リンパ節、肺、甲状腺、乳房および肝臓が挙げられる。生物学的サンプルはまた、骨髄から得られ得る。サンプルはまた、例えば、顕微解剖（例えば、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法（ｌａｓｅｒ ｃａｐｔｕｒｅ ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ）（ＬＣＭ）もしくはレーザーマイクロダイセクション法（ｌａｓｅｒ ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ（ＬＭＤ））、膀胱洗浄、スミア（ＰＡＰスミア）もしくは乳管洗浄細胞診（ｄｕｃｔａｌ ｌａｖａｇｅ）によって集められ得る。
上記生物学的サンプル中の細胞の活性もしくは完全性を保つ、サンプルを得るおよび／もしくは貯蔵するための方法は、当業者に周知である。例えば、生物学的サンプルは、１種以上のさらなる薬剤（例えば、適切な緩衝剤および／もしくはインヒビター（プロテアーゼインヒビターを含む））とさらに接触させられ得、上記薬剤は、上記細胞を保存するか、上記細胞における変化（例えば、容量オスモル濃度もしくはｐＨにおける変化）を最小限にするか、または上記細胞の細胞表面タンパク質（例えば、ＧＰＩ結合タンパク質）もしくは表面上のＧＰＩ部分を保存するか、それらの変性を最小限にすることが意図される。このようなインヒビターとしては、例えば、キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ））、プロテアーゼインヒビター（例えば、フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、アプロチニン、およびロイペプチン）が挙げられる。適切な緩衝剤および全細胞を貯蔵するかもしくは別の方法で操作するための条件は、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ ＰｒｅｓｓのＰｏｌｌａｒｄ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ（１９９７），「Ｂａｓｉｃ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，第７５巻；Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｓｅｒｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＰｒｅｓｓのＭａｓｔｅｒｓ（２０００） 「Ａｎｉｍａｌ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ」，第２３２巻；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｈｕｍａｎａ ＰｒｅｓｓのＪｏｎｅｓ（１９９６） 「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，第２巻に記載される。
サンプルはまた、干渉物質の存在を排除するかもしくは最小限にするように加工処理され得る。例えば、生物学的サンプルは、目的でない１種以上の材料（例えば、細胞）を除去するように分画もしくは精製され得る。生物学的サンプルを分画もしくは精製するための方法としては、フローサイトメトリー、蛍光活性化セルソーティング、および沈殿が挙げられるが、これらに限定されない。
（適用）
本明細書に記載される組成物は、多くの治療適用および診断適用において使用され得る（例えば、上記本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、癌もしくは自己免疫障害を処置もしくは診断するための方法において使用され得る）。例えば、患者が、抗ＣＤ２０治療剤（例えば、リツキシマブのような抗ＣＤ２０抗体）での処置に抵抗性である癌に罹患していることが決定された後に、医療従事者は、上記ヒトに、上記患者の癌を処置するのに十分な量および頻度で上記抗ＣＤ２００抗体を投与することを選択し得る。いくつかの実施形態において、医療従事者は、患者の癌が、ＣＤ５を発現する癌細胞を含むと決定した後に、癌（例えば、液状腫瘍）に罹患した上記患者に、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、上記癌を処置し得る。抗ＣＤ２００抗体をヒトに治療的に投与するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、米国特許第７，４０８，０４１号に記載される。
（自己免疫障害を処置するための方法）
本開示はまた、自己免疫障害を処置するための治療適用および診断適用を、例えば、上記障害に罹患した被験体における自己免疫疾患関連自己抗体の濃度を低下させることによって、提供する。例えば、医療従事者は、自己免疫障害（例えば、自己免疫性溶血性疾患）を有するヒトに、上記疾患関連自己抗体の発現（もしくは産生）を低下させるか、または上記患者の血中の上記自己抗体の濃度を低下させて、それによって、上記患者の自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で、抗ＣＤ２００抗体を投与することを選択し得る。抗ＣＤ２００抗体をヒトに治療的に投与するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、米国特許第７，４０８，０４１号に記載される。
「自己免疫障害」とは、本明細書に記載される場合、白血球（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、単球、もしくは樹状細胞）の作用を介して、病的免疫応答（例えば、持続時間および／もしくは大きさにおいて病的）が、宿主生物内に通常存在する物質もしくは組織に対して上記宿主生物において発生した疾患の状態をいう。自己免疫疾患のタイプとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：慢性閉塞性肺疾患、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、ＩｇＡ腎症、強皮症、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫、尋常性天疱瘡、関節リウマチ、クローン病、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症（ＭＧ）、肺胆汁性肝硬変、およびミラー・フィッシャー症候群。自己免疫障害としてはまた、特定の自己免疫性溶血障害（例えば、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、劇症型抗リン脂質症候群（ＣＡＰＳ）、典型的もしくは非定型溶血性尿毒症性症候群（ＨＵＳ）、および自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）が挙げられる。ＡＩＨＡとは、宿主赤血球に対する自己抗体の生成によって特徴付けられる関連疾患のファミリーに言及する。ＡＩＨＡとしては、例えば、温式ＡＩＨＡ（ＷＡＩＨＡ）、冷式ＡＩＨＡ（ＣＡＤ）、発作性寒冷血色素尿症（ＰＣＨ）、および薬物誘導性溶血性貧血（ＤＩＨＡ）が挙げられる。
「自己免疫障害を発症するリスク」があるヒトとは、自己免疫障害の家族歴（例えば、１種以上の炎症性障害に対する遺伝的素因）を有するか、または１つ以上の自己免疫障害／自己抗体誘導状態に曝されたヒトをいう。例えば、志賀毒素に曝されたヒトは、典型的ＨＵＳを発症するリスクがある。特定の癌（例えば、液状腫瘍（例えば、多発性骨髄腫もしくは慢性リンパ性白血病））を有するヒトは、患者を、特定の自己免疫性溶血性疾患を発症することに罹りやすくし得る。例えば、ＰＣＨは、種々の感染症（例えば、梅毒）もしくは新生物（例えば、非ホジキンリンパ腫）の次に起こり得る。別の例において、ＣＡＤは、ＨＩＶ感染、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ感染、非ホジキンリンパ腫、もしくはワルデンストレームマクログロブリン血症と関連し得る。さらに別の例において、自己免疫性溶血性貧血は、ヒト慢性リンパ性白血病の周知の合併症であり、疾患が進行したＣＬＬ患者のうちの約１１％が、ＡＩＨＡを発症する。ＣＬＬのうちの３０％程度が、ＡＩＨＡを発症するリスクがあり得る。例えば、Ｄｉｅｈｌら（１９９８） Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２５（１）：８０−９７およびＧｕｐｔａら（２００２） Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６（１０）：２０９２−２０９５を参照のこと。上記から、「自己免疫障害を発症するリスク」があるヒトは、目的の種内ですべてのヒトであるわけではないことは明らかである。
「自己免疫障害を有すると疑われる」ヒトは、自己免疫障害の１つ以上の症状を示すヒトである。自己免疫障害の症状は、特定の自己免疫障害とともに、重篤度およびタイプにおいて変動し得、発赤、腫脹（例えば、関節腫張）、触ると温かい関節、関節痛、強直（ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ）、関節機能の喪失、発熱、悪寒、疲労、気力の喪失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｅｎｅｒｇｙ）、疼痛、発熱、蒼白、黄疸、蕁麻疹の皮膚での発疹、ヘモグロビン尿症、ヘモグロビン血症、および貧血（例えば、重度の貧血）、頭痛、食欲喪失、筋硬直、不眠症、そう痒、鼻づまり、くしゃみ、咳、１つ以上の神経症状（例えば、目眩、発作、もしくは疼痛）が挙げられるが、これらに限定されない。上記から、すべてのヒトが、「自己免疫障害を有すると疑われる」わけではないことは明らかである。
いくつかの実施形態において、上記医療従事者は、ヒトにおける自己免疫障害関連自己抗体の発現もしくは生成を低下させるに有効な量の抗ＣＤ２００抗体を、上記ヒトに投与し得る。例えば、ＰＣＨは、被験体による低温で赤血球のＰ抗原に結合する自己抗体（「ドナート・ランドシュタイナー抗体」として公知）の生成からもっとも一般的に生じる。上記赤血球にいったん結合すると、上記抗体は、より温かい温度において上記細胞の補体媒介性溶血を促進する。小児における免疫性溶血性貧血のうちの約４０％程度が、ドナート・ランドシュタイナー抗体と関連している。例えば、Ｓｏｋｏｌら（１９８２） Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ ６８（４）：２６８−７７を参照のこと。従って、例えば、抗ＣＤ２００抗体は、ＰＣＨ患者に、上記ヒトにおけるドナート・ランドシュタイナー抗体の生成もしくは発現を低下させるに十分な量において投与されて、それによって、上記ヒトのＰＣＨを処置し得る。
同様に、ＣＡＤ（もしくは寒冷血球凝集素病もしくはＣＨＤ／ＣＨＡＤ）は、低温において赤血球上のＩ抗原に結合する自己抗体によって特徴付けられる自己免疫障害である。いったん結合すると、上記抗体は、赤血球凝集、および上記細胞の補体媒介性溶血を促進する。従って、医療従事者は、上記ヒトにおける抗Ｉ抗原抗体の生成もしくは発現を低下させるに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与して、それによって上記ヒトのＣＡＤを処置し得る。
別の例において、ＭＧを有する多数の患者は、ニコチン性アセチルコリンレセプター（ＡＣｈＲ）に結合しその活性を阻害する抗体を発現する。上記抗体は、アセチルコリンレセプターの喪失および成熟神経筋接合部の筋終板（ｍｕｓｃｌｅ ｅｎｄ−ｐｌａｔｅ）において低下したレセプター機能を引き起こす。検出可能な抗ＡＣｈＲ抗体を欠如しているいくらかの患者は、代わりに、筋特異的レセプターチロシンキナーゼ（ＭｕＳＫ）に対する自己抗体を発現する。例えば、Ｈｏｃｈら（２００１） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ７（３）：３６５−３６８）を参照のこと。従って、医療従事者は、上記ヒトにおける抗ＡＣｈＲ抗体もしくは抗ＭｕＳＫ抗体の生成もしくは発現を低下させるに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与して、それによって、上記ヒトのＭＧを処置し得る。
ヒトにおける自己免疫障害関連自己抗体の存在もしくは量を検出するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、Ｂｕｒｂｅｌｏら（２００９） Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ７：８３；Ｈａｎｋｅら（２００９） Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ １１（１）：Ｒ２２；Ｈｏｃｈら（２００１），前出；Ｖｅｒｎｉｎｏら（２００８） Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ １９７（１）：６３−６９；Ｓｏｋｏｌら（１９８２），前出；およびＬｉｔｔｌｅｔｏｎら（２００９） Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ８（７）：１６８８−１６９６に記載されている。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記自己免疫障害関連自己抗体の低下した濃度（もしくは低下した発現もしくは生成）を維持するための量および頻度で被験体に投与される。自己抗体の発現もしくは濃度の変化を検出するための方法は、当該分野で周知であり（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、およびフローサイトメトリー技術）、本明細書に記載されている。反復プロセスを介して、医療従事者は、上記患者における自己免疫障害関連自己抗体の低下した濃度を維持するために必要とされる、適切な投与量、および各用量の投与頻度を決定し得る。例えば、医療従事者は、自己免疫障害（例えば、ＡＩＨＡ）を有する患者に、１回以上（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、もしくは１０回以上、または例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、４回、５回、６回、７回、もしくは８回以上）、上記ヒトにおける自己抗体の濃度を低下させる（もしくは少なくとも低下させるように期待される）量の抗ＣＤ２００抗体を投与し得る。上記少なくとも２用量は、少なくとも１日（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、もしくはさらに１４日）、時間において間隔を空けられるべきである。上記自己抗体を含む生物学的サンプル（例えば、血液サンプル）は、種々の時間において（例えば、１回目の抗ＣＤ２００抗体投与の前、第１の用量と、少なくとも１回のさらなる用量との間、および第２の用量の後の少なくとも１回の生物学的サンプル収集）、上記患者から得られる。いくつかの実施形態において、生物学的サンプルは、用量間で少なくとも２回および／もしくは上記患者に最後の用量が投与された後に少なくとも１回集められ得る。得られる各生物学的サンプル中の自己抗体は、次いで、上記自己免疫疾患関連自己抗体の相対的力価について問い合わせされて、上記抗ＣＤ２００抗体の量および／もしくは投与頻度が、上記患者における自己抗体の低下した濃度を維持するために十分であるか否かを決定する。上記医療従事者（および／もしくはコンピューター）は、上記処置の過程にわたって上記患者における自己免疫障害関連自己抗体の低下した濃度を維持するのに十分である、上記患者の抗ＣＤ２００抗体投与スケジュールを決定し得る。
いくつかの実施形態において、上記ヒトへの上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記自己抗体濃度を、少なくとも５％（例えば、少なくとも６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、もしくは８５％以上）低下させる。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記ヒトに長期的に投与され得る。本明細書に記載される場合、「長期的に投与される」、「長期的処置」、「長期的に処置する」、もしくはその類似の文法的バリエーションは、長期間にわたって、上記患者における特定の状態を維持するために、患者の血中に治療剤の特定の閾値濃度を維持するのに使用される処置レジメンに言及する。例えば、抗ＣＤ２００抗体は、長期間にわたって上記患者の血中の抗ＡＣｈＲ抗体の低下した濃度を維持するために、ＭＧを有する患者に長期的に投与され得る。よって、抗ＣＤ２００抗体が長期的に投与される患者は、２週間以上の期間（例えば、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２１週間、２２週間、２３週間、２４週間、２５週間、２６週間、２７週間、２８週間、２９週間、３０週間、３１週間、３２週間、３３週間、３４週間、３５週間、３６週間、３７週間、３８週間、３９週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、もしくは５２週間；１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月；または１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、１０．５年、もしくは１２年、あるいは上記患者の寿命の残りの期間）にわたって処置され得る。
本発明者らは、ヒトに投与される抗ＣＤ２００抗体による免疫調節効果の上記ヒトにおける生成と一致するいくつかのバイオマーカーを本明細書で同定および提供する。すなわち、自己免疫疾患（自己免疫性溶血性疾患）を有するマウスに上記抗体を投与すると、多くの脾細胞および骨髄細胞サブセットの濃度が、上記マウスにおいて変化した。「免疫調節効果」および文法的に類似の用語は、本明細書に記載される場合、動物（例えば、ヒト）に投与される抗ＣＤ２００抗体の生物学的活性に原因があり得る、動物（例えば、ヒト）における測定可能な免疫学的効果をいう。例えば、本発明者らは、マウスへの抗ＣＤ２００抗体の投与後に、以下のＣＤ２００＋白血球集団の濃度が低下することを観察した：ＣＤ３＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ５＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞、およびＣＤ２００Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞。いくつかの実施形態において、上記ＣＤ２００＋白血球は、脾臓に局在する。前述のＣＤ２００＋細胞サブセットの低下は、末梢血においても観察され得る。抗ＣＤ２００抗体をマウスに投与した際に、以下のＣＤ２００＋骨髄細胞サブセットの濃度が低下することもまた観察された：ＣＤ２００＋骨髄細胞、Ｉｇｋ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、およびｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋／Ｌｉｎ−骨髄細胞。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、本発明者らは、これらバイオマーカーのうちの１個以上の発生について、抗ＣＤ２００抗体で処置される患者をモニターすることが、上記抗ＣＤ２００抗体が投与される上記ヒトにおいて上記抗体が生物学的効果を生じ得るか否かを決定するために実際に有用であると考える。さらに、上記バイオマーカーのうちの１個以上はまた、上記ヒトにおける免疫調節効果のために、上記疾患における臨床的に意義ある効果を達成するのに十分（すなわち、自己免疫障害もしくは癌のような疾患を処置するために十分）である抗ＣＤ２００抗体（例えば、サマリズマブ（ＡＬＸＮ６０００））の用量（閾値用量）を同定するために有用である。すなわち、抗ＣＤ２００抗体で処置した自己免疫性溶血性疾患を有するマウスは、上記マウスにおける上記疾患関連自己抗体の低下した濃度を示した。
従って、本開示によれば、医療従事者は、必要なヒトに、上記ヒトにおける以下の生理学的状態（免疫学的効果）のうちの１つ以上を維持することによって、上記自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で、抗ＣＤ２００抗体を投与し得る：（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセット（例えば、少なくとも１つのＣＤ２００＋脾細胞サブセット）の減少した濃度；（ｉｉ）脾臓もしくは末梢のＦ４／８０＋細胞の増大した濃度；および（ｉｉｉ）少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセットの減少した濃度。上記ＣＤ２００＋白血球サブセットは、例えば、ＣＤ３＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ５＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞、およびＣＤ２００Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞であり得る。上記ＣＤ２００＋骨髄細胞サブセットは、例えば、ＣＤ２００＋骨髄細胞、Ｉｇｋ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、およびｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋／Ｌｉｎ−骨髄細胞であり得る。上記脾臓もしくは末梢のＦ４／８０＋細胞は、マクロファージであり得る。いくらかの場合には、上記生理学的状態のうちの少なくとも２つは、維持される。いくつかの実施形態においては、上記状態のすべてが、上記処置期間全体にわたって、上記ヒトにおいて維持される。
ＣＤ２００＋細胞（例えば、上記ＣＤ２００＋白血球もしくは骨髄細胞サブセットのうちのいずれか）の濃度を測定するための方法は、当該分野で周知であり、方法のなかでも、フローサイトメトリーが挙げられる。Ｓｅｅ，例えば、Ｃｈｅｎら（２００９） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４６（１０）：１９５１−１９６３を参照のこと。ＣＤ２００＋ 骨髄細胞、脾細胞、もしくは末梢血白血球サブセットの濃度を検出および／もしくは測定するために適した方法はまた、実用的な実施例に示される。いくつかの実施形態において、医療従事者は、処置後患者（抗ＣＤ２００抗体を投与した患者）から得られる生物学的サンプルに、ＣＤ２００＋細胞の特定のサブセットの細胞濃度について問い合わせし得る。例えば、医療従事者は、処置後患者に由来する生物学的サンプルに存在するＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２００＋白血球の濃度および／もしくはｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋／Ｌｉｎ−骨髄細胞の濃度を決定し得る。
いくつかの実施形態において、ヒトへの抗ＣＤ２００抗体の投与後に、ＣＤ２００＋白血球（例えば、脾臓におけるＣＤ２００＋白血球集団）もしくは骨髄細胞サブセットの濃度は、上記処置前のヒトにおける対応するサブセットの濃度より少なくとも５％少ない。いくつかの実施形態において、処置後ＣＤ２００＋脾細胞もしくは骨髄細胞サブセット濃度は、上記抗体での処置前の対応するサブセットの濃度より少なくとも１０％（例えば、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、もしくは８０％超）低い。
本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、炎症状態を処置もしくは予防するために有用な１種以上のさらなる治療剤と同時投与され得る。上記１種以上の薬剤としては、例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、疾患改変抗リウマチ薬（ｄｉｓｅａｓｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ａｎｔｉ−ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｒｕｇ）（ＤＭＡＲＤ）、生物学的応答改変因子（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）、もしくはコルチコステロイドが挙げられる。生物学的応答改変因子としては、例えば、抗ＴＮＦ剤（例えば、可溶性ＴＮＦレセプターもしくはＴＮＦに特異的な抗体（例えば、アダリムマブ（ａｄｕｌｉｍｕｍａｂ）、インフリキシマブ、もしくはエタネルセプト））が挙げられる。いくつかの実施形態において、上記１種以上のさらなる治療剤は、例えば、ステロイド、抗マラリア剤、アスピリン、非ステロイド系抗炎症薬、免疫抑制剤、細胞傷害薬、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびプレドニゾロン）、メトトレキサート、メチルプレドニゾロン、マクロライド系免疫抑制剤（例えば、シロリムスおよびタクロリムス）、有糸分裂インヒビター（例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびメトトレキサート）、Ｔリンパ球の活性を阻害する真菌代謝産物（例えば、シクロスポリン）、ミコフェノレートモフェチル、酢酸グラチラマー、および細胞傷害剤およびＤＮＡ損傷剤（例えば、クロラムブシルまたは本明細書に記載されるかもしくは当該分野で公知の任意の他のＤＮＡ損傷剤）であり得る。
（癌を処置するための方法）
本開示はまた、癌を処置するための治療適用および診断適用を提供する。例えば、ヒトが、ＣＤ２００を発現する腫瘍細胞を含む腫瘍を有すると決定された後に、医療従事者は、上記ヒトに、上記患者の癌を処置するのに十分な量および頻度で、上記抗ＣＤ２００抗体を投与することを選択し得る。抗ＣＤ２００抗体をヒトに治療的に投与するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、米国特許第７，４０８，０４１号に記載される。
癌は、細胞の制御されない分裂およびこれらが拡がる能力によって、侵襲を介する隣接する組織への直接増殖、もしくは転移による遠隔部位への移植（ここで癌細胞は、血流もしくはリンパ系を介して移動させられる）のいずれかによって、特徴付けられる疾患もしくは障害のクラスである。癌は、すべての年齢の人々に罹り得るが、リスクは、年齢とともに増大する傾向にある。癌のタイプとしては、例えば、肺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、腎癌、胃癌、肝臓癌、骨癌、血液学的な癌、神経組織の癌（例えば、神経芽腫）、黒色腫、甲状腺癌、卵巣癌、液状腫瘍、精巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、膣癌、もしくは膀胱癌が挙げられ得る。液状腫瘍としては、例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病（例えば、Ｂ細胞もしくはＴ細胞タイプの慢性リンパ性白血病））および多発性骨髄腫が挙げられる。骨癌としては、骨肉腫および骨癌腫が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される場合、「癌を発症するリスク」があるヒトとは、癌を発症する素因（すなわち、癌抑制遺伝子における変異のような癌を発症する遺伝的素因（例えば、ＢＲＣＡｌ、ｐ５３、ＲＢ、もしくはＡＰＣにおける変異または他の遺伝的再配列）を有するか、または癌を生じ得る状態にさらされたヒトである。従って、ヒトはまた、上記ヒトが、特定の化合物（例えば、煙草の煙中の発癌性化合物（例えば、アクロレイン）、ヒ素、ベンゼン、ベンゾ｛ａ｝アントラセン、ベンゾ｛ａ｝ピレン、ポロニウム−２１０（ラドン）、ウレタン、もしくは塩化ビニル）の変異促進性レベルもしくは発癌性レベルに曝された場合に、「癌を発症するリスク」があるヒトであり得る。さらに、上記ヒトは、上記ヒトが、例えば、大線量の紫外線もしくはＸ線照射に曝されたか、または腫瘍を引き起こす／腫瘍に関連したウイルス（例えば、パピローマウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、もしくはヒトＴ細胞白血病−リンパ腫ウイルス）に感染した場合に、「癌を発症するリスク」があり得る。上記から、すべてのヒトが、「癌を発症するリスク」があるわけではないことは、明らかである。
「癌を有すると疑われる」ヒトは、癌の１つ以上の症状を有するヒトである。癌の症状は、当業者に周知であり、乳房腫瘤、疼痛、体重減少、虚弱、過度の疲労、摂食困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｅａｔｉｎｇ）、食欲喪失、慢性の咳、息切れの悪化、喀血、血尿、血便、悪心、嘔吐、肝臓転移、肺転移、骨転移、腹部膨満、鼓脹、腹膜腔中の流体（ｆｌｕｉｄ ｉｎ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｃａｖｉｔｙ）、膣出血、便秘、腹部膨大（ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ）、結腸穿孔、急性腹膜炎（感染、発熱、疼痛）、疼痛、吐血、多汗、発熱、高血圧、貧血、下痢、黄疸、目眩、悪寒、筋痙攣、および嚥下困難が挙げられるが、これらに限定されない。原発性癌（例えば、大きな原発性癌）の症状としては、例えば、結腸転移、肺転移、膀胱転移、肝臓転移、骨転移、腎臓転移、および膵臓転移のうちのいずれか１つが挙げられ得る。
本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体の動物への投与が、上記動物の脾臓におけるＣＤ５＋細胞の濃度の顕著な低下を生じることを発見した。本開示は、いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、ＣＤ５＋ ＣＬＬ細胞が、リツキシマブ治療に対して、ＣＤ２０の細胞による低下した発現が原因で少なくとも一部難治性であり得る可能性がある。本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体を含む治療組成物が、動物におけるＣＤ５＋細胞集団を低下させるために有用であることを示したので、上記組成物が、抗ＣＤ２０治療での処置に難治性（例えば、リツキシマブ抵抗性）であるＣＬＬ患者のサブセットを処置するために特に有用であると考える。
よって、本開示は、癌を処置するための、特に、どの癌が、抗ＣＤ２００抗体での処置から最も利益を受け得るかを選択もしくは同定するための種々の方法を特徴とする。例えば、本開示は、抗ＣＤ２０治療剤（例えば、リツキシマブ）での処置に抵抗性であるか、抵抗性であると疑われるか、もしくは抵抗性である可能性がある癌に罹患したヒトを処置するための方法を特徴とする。治療に対する「抵抗性」、治療に対して「難治性」および同様の文法的語句は、本明細書に記載される場合、所定の障害（例えば、癌）の処置もしくは治癒における所定の処置（例えば、抗ＣＤ２０治療剤での処置）の有効性の低下、または上記障害と関連した１つ以上の症状の改善における上記処置の有効性の低下が存在する、患者の臨床状態に言及する。例えば、液状腫瘍（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）に罹患した患者に対する抗ＣＤ２０治療の治療的利益は、経時的に減少し得、上記癌が、上記治療の存在下ですら再発するか、残存するか、もしくは進行するようになる。治療剤（例えば、抗ＣＤ２０治療剤）に対する癌の抵抗性は、医療分野において十分に記録されており、例えば、Ｒｅｄｄｙら（２００６） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２４（１８Ｓ）：１７５０９；Ｂｅｌｌｏ ａｎｄ Ｓｏｔｏｍａｙｏｒ（２００７） Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ １：２３３；Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｉｌｉｚａｌｉｔｕｒｒｉ ら（２００９） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２７（１５ｓ）：８５４３；およびＦｒｉｅｄｂｅｒｇら（２００５） Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ １：３２９に記載されている。
いくつかの実施形態において、患者は、抗ＣＤ２０治療に抵抗性であると疑われるか、または抵抗性になる可能性がある癌を有し得る。癌が、抗ＣＤ２０治療剤（例えば、リツキシマブ）に抵抗性になる可能性があるか否かを評価するにおいて有用な１つのバイオマーカーは、集団におけるＣＤ５＋癌細胞の存在もしくは濃度である。上記のように、上記ＣＤ５＋細胞は、低下したレベルのＣＤ２０を発現するので、上記細胞は、上記抗ＣＤ２０治療に余り影響を受けず、よって、より高いレベルのＣＤ２０を発現する癌細胞に対する増殖の利点に起因して選択され得る。ＣＤ５の発現を検出するための方法は、分子生物学の分野において周知であり、ウェスタンブロッティング、ドットブロッティング、およびフローサイトメトリー（上記方法は、ＣＤ５タンパク質の発現を定量するために有用である）、ＣＤ５ ｍＲＮＡの発現を定量するための逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）およびノーザンブロッティング分析が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｅｎｎｉｓｈｉら（２００８），前出；Ｈｏｌｏｄｉｃｋら（２００９），前出；Ｇａｒａｕｄら（２００９） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８２（９）：５６２３−５６３２；およびＭｃＮａｂら（２００９） Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ ３９（２）：１０８−１１３を参照のこと。一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９） 「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ」， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９９２） 「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓを参照のこと。細胞によるＣＤ５の発現を検出および／もしくは定量するために、または集団中のＣＤ５発現細胞のパーセンテージを決定するために適した方法は、フローサイトメトリーであり、実用的な実施例において例示される。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０治療剤に抵抗性である可能性がある癌は、ＣＤ５を発現する癌細胞（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病細胞）のうちの少なくとも複数もしくは一部（例えば、２以上；少なくとも０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．５％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、もしくは４５％以上）を含む。いくつかの実施形態において、患者の癌細胞のうちの４５％より多く（例えば、５０％より高い、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、もしくは８０％以上）は、ＣＤ５を発現し得る。いくつかの実施形態において、上記癌は、ＣＤ５（例えば、ＣＤ５タンパク質および／もしくはＣＤ５ ｍＲＮＡ）を発現するかもしくは過剰発現する細胞（例えば、複数の細胞もしくは細胞のうちの大部分）を含む。いくつかの実施形態において、上記ヒトの癌の癌細胞のうちの少なくとも１０％（もしくは１０％を超える）（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％）は、ＣＤ５を過剰発現する。いくつかの実施形態において、すべてのアッセイされた癌細胞は、通常の細胞と比較してＣＤ５を過剰発現する。いくつかの実施形態において、癌細胞（例えば、複数の癌細胞、癌細胞のうちの少なくとも１０％、またはすべてのアッセイされた癌細胞）は、同じ組織タイプの通常の細胞に見いだされる発現レベルより、もしくは癌を有さない１名以上の患者に由来する通常の細胞の平均発現より少なくとも約１．４倍（例えば、少なくとも約１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．２倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４．０倍、４．５倍、もしくは５倍以上）高いレベルでＣＤ５タンパク質を発現し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、上記ヒトが癌を有するか否かを決定する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、ヒトの癌の１個以上の癌細胞が、ＣＤ２００を発現するか否かを決定する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ヒトの癌の１個以上の癌細胞が、コントロールサンプルと比較してＣＤ２００を過剰発現するか否かを決定する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、上記コントロールサンプルは、同一のヒトから得られ、上記ヒトの癌と同じ組織タイプの正常細胞を含む。例えば、当業者は、患者に由来する正常の結腸細胞と比較して、上記患者に由来する結腸癌細胞に存在するＣＤ２００タンパク質のレベルを測定し得る。いくつかの実施形態において、上記コントロールサンプルは、癌を有さない１名以上のヒトから得られる細胞の発現レベル（もしくは平均発現レベル）であり得る。いくつかの実施形態において、上記癌は、ＣＤ２００（例えば、ＣＤ２００タンパク質および／もしくはＣＤ２００ ｍＲＮＡ）を発現するかもしくは過剰発現する細胞（例えば、複数の細胞もしくは細胞のうちの大部分）を含む。いくつかの実施形態において、上記ヒトの癌の癌細胞のうちの少なくとも１０％（もしくは１０％より高く）（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％）は、ＣＤ２００を過剰発現する。いくつかの実施形態において、すべてのアッセイされた癌細胞は、正常細胞と比較してＣＤ２００を過剰発現する。いくつかの実施形態において、癌細胞（例えば、複数の癌細胞、癌細胞のうちの少なくとも１０％、もしくはすべてのアッセイされた癌細胞）は、同じ組織タイプの正常細胞に見いだされる発現レベルより、もしくは癌を有さない１名以上の患者に由来する正常細胞の平均発現より少なくとも約１．４倍（例えば、少なくとも約１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．２倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４．０倍、４．５倍、もしくは５倍以上）高いレベルでＣＤ２００タンパク質を発現し得る。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、ヒトの癌が、ＣＤ２００を発現するかもしくは過剰発現する場合に、上記ヒトに投与され得るに過ぎない。ＣＤ２００の発現を検出するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、およびフローサイトメトリー技術が挙げられる。ＣＤ２００発現を検出するために適した方法は、例えば、Ｋｒｅｔｚ−Ｒｏｍｍｅｌら（２００７） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７８：５５９５−５６０５およびＫｒｅｔｚ−Ｒｏｍｍｅｌら（２００８） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０：６９９−７０５において詳細に記載される。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、ヒトの癌が、ＣＤ２００およびＣＤ５を発現するかもしくは過剰発現する場合に、上記ヒトに投与されるに過ぎない。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００を発現する癌細胞を標的とすることによって、癌における免疫抑制をブロックする。これら癌細胞の根絶、もしくは阻害は、上記免疫系を刺激し得、癌細胞のさらなる根絶を可能にし得る。
いくつかの実施形態において、直接的な癌細胞死滅および免疫応答をＴｈ１プロフィールへと駆動することの組み合わせは、癌処置において増強された効力を提供する。従って、一実施形態において、ＣＤ２００に結合し、そしてａ）ＣＤ２００とそのレセプターとの間の相互作用をブロックしかつｂ）上記ＣＤ２００を発現する癌細胞を直接死滅させる抗体もしくは抗体フラグメントが、癌患者に投与される癌処置が、提供される。上記癌細胞が死滅される機構としては、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣ；毒素との融合；毒性放射性薬剤との融合；毒性ポリペプチド（例えば、グランザイムＢもしくはパーフォリン）との融合；細胞傷害性ウイルスとの融合（例えば、細胞傷害性レオウイルス（例えば、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）））；またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦ−αもしくはＩＦＮ−α）との融合が挙げられ得るが、これらに限定されない。代替の実施形態において、癌処置は、ａ）ＣＤ２００とそのレセプターとの間の相互作用をブロックしかつｂ）腫瘍に対する細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞の活性を増強する抗体を投与する工程を包含する。上記細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞の活性のこのような増強は、例えば、上記抗体とサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−１３、およびＩＬ−５）とを融合することによって合わせられ得る。さらに、このような増強は、インヒビター（例えば、ＩＭｉＤ、サリドマイド、もしくはサリドマイドアナログ）との組み合わせにおいて、抗ＣＤ２００抗体の投与によって達成され得る。
なお別の実施形態において、上記癌処置は、ａ）ＣＤ２００とそのレセプターとの間の相互作用をブロックしかつｂ）上記腫瘍細胞へＴ細胞を誘引する抗体を投与する工程を包含する。Ｔ細胞誘引は、上記Ａｂとケモカイン（例えば、ＭＩＧ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ５もしくはＬＩＧＨＴ）とを融合することによって、達成され得る。また、化学療法剤での処置は、ＬＩＧＨＴの所望のアップレギュレーションを生じ得る。免疫抑制および上記腫瘍細胞を標的とする抗体を直接介する死滅の組み合わせ作用は、増大した効力を提供する特有のアプローチである。
本開示はまた、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤の組み合わせ治療を使用して、癌を処置するための方法を提供する。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体の投与が、難治性である可能性がある癌細胞（すなわち、上記ＣＤ５＋癌細胞）の割合を低下させることによって、抗ＣＤ２０治療剤の効力を増強すると考える。上記抗ＣＤ２０治療剤は、本明細書中に記載されるかもしくは当該分野で公知のもの（例えば、リツキシマブ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、９０Ｙ−イブリツモマブチウキセタン（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、１３１Ｉ−トシツモマブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、オファツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ）、ＴＲＵ−０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ−１０６；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、オクレリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）、およびＡＭＥ−１３３ｖ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ））のうちのいずれかであり得る。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体および上記抗ＣＤ２０治療剤は、別個の薬剤である。よって、上記抗ＣＤ２００抗体および上記抗ＣＤ２０治療剤は、同時に投与され得る。他の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、１回目に投与され、上記抗ＣＤ２０治療剤は、２回目に投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療は、１回目に投与され、上記抗ＣＤ２００抗体は、２回目に投与される。
上記抗ＣＤ２００抗体は、以前に施された治療もしくは現在施されている治療（例えば、抗ＣＤ２０治療剤）に取って代わるかもしくは増加し得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体もしくはその抗原結合フラグメントでの処置の際に、上記抗ＣＤ２０治療剤の投与は、中止され得るかもしくは減少させられ得る（例えば、より低いレベルにおいて投与され得る）。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤の投与は、維持され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２０治療剤の投与は、上記抗ＣＤ２００抗体のレベルが、治療効果を提供するのに十分なレベルに達するまで維持される。上記２つの治療は、単一薬剤として組み合わせて施され得る（例えば、ＣＤ２００およびＣＤ２０の両方に結合する二重特異的抗体（上記を参照のこと））。
本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体はまた、１種以上のさらなる治療用抗癌剤とともに、癌を有するヒトに同時投与され得る。同様に、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、抗ＣＤ２０治療剤および１種以上のさらなる治療用抗癌剤とともに、癌を有するヒトに同時投与され得る。抗癌剤としては、例えば、化学療法剤、電離放射線、免疫治療剤、もしくは温熱療法剤（ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｇｅｎｔ）が挙げられる。化学療法剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、ｂｃｇ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コルヒチン、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエネストロール、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、ゲニステイン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトータン、ミトキサントロン、ニルタミド、ノコダゾール、オクトレオチド、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、スラミン、タモキシフェン、タキソール、テモゾロミド、テニポシド、テストステロン、チオグアニン、チオテパ、チタノセンジクロリド、トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビン。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントを含む薬学的組成物は、前述の薬剤もしくは本明細書に記載される任意の他の抗癌剤のうちのいずれかの１種以上と同時投与され得る。
これら化学療法的抗腫瘍化合物は、それらの作用機構によって、例えば、以下を含む群へと分類され得る：代謝拮抗物質／抗癌剤（例えば、ピリミジンアナログ（５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビン）およびプリンアナログ、葉酸アンタゴニスト、および関連インヒビター（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；抗増殖剤／抗有糸分裂剤（天然生成物（例えば、ビンカ・アルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）が挙げられる）、微小管破壊剤、例えば、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビン、エピジポドフィロトキシン（ｅｐｉｄｉｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、サイトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミン、オキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスファミドおよびエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシン Ｄ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）およびマイトマイシン）；酵素（Ｌ−アスパラギナーゼ（これは、Ｌ−アスパラギンを全体にわたって代謝し、それ自身のアスパラギンを合成する能力を有しない細胞を得させない））；抗血小板剤；抗増殖剤／抗有糸分裂アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミドおよびアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、アルキルスルホネート−ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびアナログ、ストレプトゾシン）、トラゼン−ダカルバジン（ＤＴＩＣ）；抗増殖剤／抗有糸分裂代謝拮抗物質（例えば、葉酸アナログ（メトトレキサート））；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトータン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）およびアロマターゼインヒビター（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩およびトロンビンの他のインヒビター）；線維素溶解素（ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、組織プラスミノゲンアクチベーター、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼ）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキマブ；移動抑制剤（ａｎｔｉｍｉｇｒａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）；分泌抑制剤（ａｎｔｉｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）（ブレフェルジン（ｂｒｅｖｅｌｄｉｎ））；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノレートモフェチル））；免疫調節剤（サリドマイドおよびそのアナログ（例えば、レナリドミド（レブリミド、ＣＣ−５０１３）ならびにＣＣ−４０４７（アクチミド））、シクロホスファミド）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ−４７０、ゲニステイン）および増殖因子インヒビター（血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）インヒビター、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）インヒビター）；アンギオテンシンレセプター遮断剤；酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期インヒビターおよび分化インヒビター（トレチノイン）；ｍＴＯＲインヒビター、トポイソメラーゼインヒビター（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシンおよびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、およびプレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼインヒビター；ミトコンドリア機能不全誘導剤（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｒ）およびカスパーゼアクチベーター；ならびにクロマチン破壊因子。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、上記抗ＣＤ２００抗体を投与した後に、上記ヒトを、上記障害および／もしくはその１つ以上の症状における改善についてモニターする工程を包含し得る。本明細書中に定義されるように、障害（例えば、癌、炎症状態、もしくは骨損失と関連した障害）における改善についてヒトをモニターする工程は、疾患パラメーターの変化（例えば、上記疾患の１つ以上の症状の改善）について上記被験体を評価することを意味する。いくつかの実施形態において、上記評価は、投与後、少なくとも１時間（例えば、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、もしくは４８時間、または少なくとも１日、２日、４日、１０日、１３日、２０日以上、または少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間以上で行われる。上記ヒトは、以下の期間のうちの１つ以上において評価され得る：処置の開始前；上記処置の間；または上記処置のうちの１つ以上の要素が投与された後。評価は、さらなる処置の必要性を評価する工程を包含し得る（例えば、投与量、投与頻度、もしくは処置期間が変更されるべきか否かを評価する工程）。それはまた、選択された治療モダリティーを追加するかもしくは終わらせる（例えば、本明細書に記載される障害のための処置のうちのいずれかを追加するかもしくは終わらせる）必要性を評価する工程を包含し得る。
いくつかの実施形態において、治療的処置の進行および／もしくは有効性をモニターする工程は、処置の前後で癌細胞によるＣＤ２００発現のレベルをモニターする工程を包含する。いくつかの実施形態において、治療的処置の進行および／もしくは有効性をモニターする工程は、処置の前後に癌細胞によるＣＤ５発現のレベルをモニターする工程を包含する。いくつかの実施形態において、治療的処置の進行および／もしくは有効性をモニターする工程は、処置の前後に癌細胞によるＣＤ２００およびＣＤ５の発現のレベルをモニターする工程を包含する。例えば、癌細胞によるＣＤ２００および／もしくはＣＤ５の発現の処置前レベルが確認され得、上記治療を少なくとも１回施した後に、ＣＤ２００および／もしくはＣＤ５のレベルが、再び決定され得る。癌細胞によるＣＤ２００および／もしくはＣＤ５の発現の低下は、有効な処置（以下を参照のこと）の指標であり得る。上記癌細胞によるＣＤ２００および／もしくはＣＤ５の発現レベルの測定は、投与量もしくは上記治療の頻度を増大させるためのガイドとして、上記医療従事者によって使用され得る。ＣＤ２００および／もしくはＣＤ５のレベルが、直接モニターされ得るか、または代わりに、ＣＤ２００および／もしくはＣＤ５と相関する任意のマーカーがモニターされ得ることは、当然のことながら理解されるべきである。
動物への抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記動物におけるＣＤ５＋細胞の濃度を低下させるので、特に、上記に記載される理由でＣＤ５＋慢性リンパ性白血病の場合に、ヒトにおけるＣＤ５＋細胞の低下した濃度を保持するのに十分な量および頻度で上記ヒトに、抗ＣＤ２００抗体を投与することは有益であると考えられる。細胞（例えば、癌細胞（例えば、Ｂ細胞 ＣＬＬ細胞）によるＣＤ５の発現もしくは発現の変化を検出するための方法は、当該分野で周知であり（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、およびフローサイトメトリー技術）、本明細書中で記載される。例えば、ヒトへの抗ＣＤ２００抗体の投与後に、上記ヒトにおけるＣＤ５＋癌細胞の濃度は、患者から得られた生物学的サンプル中に存在する上記癌細胞のフローサイトメトリー分析によって決定され得る。処置後のＣＤ５＋癌細胞の濃度は、コントロール濃度（例えば、上記抗体での処置前の上記ヒトにおけるＣＤ５＋癌細胞の濃度）に対して比較され得る。ここでＣＤ５＋癌細胞の濃度の低下は、上記抗ＣＤ２００抗体が、上記ヒトにおけるＣＤ５＋細胞の濃度を低下させるに十分な量および頻度で上記ヒトに投与されており、よって、治療上有効であることを示す。
反復プロセスを介して、医療従事者は、上記患者におけるＣＤ５＋癌細胞の低下した濃度を維持するために必要とされる適切な用量、および各用量の投与頻度を決定し得る。例えば、医療従事者は、癌患者に、１回以上（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、もしくは１０回以上（例えば、少なくとも３回、４回、５回、６回、７回、もしくは８回以上））、ＣＤ５＋癌細胞の濃度を低下させる（もしくは低下させると少なくとも予測される）量の抗ＣＤ２００抗体を投与し得る。上記少なくとも２用量は、少なくとも１日（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、もしくはさらに１４日）、時間において間隔が開けられるべきである。癌細胞を含む生物学的サンプル（例えば、血液サンプル）は、種々の時間（例えば、１回目の抗ＣＤ２００抗体投与の前、１回目の用量と、少なくとも１回のさらなる用量との間、および２回目の用量後の少なくとも１回の生物学的サンプル収集）に上記患者から得られる。いくつかの実施形態において、生物学的サンプルは、用量間で少なくとも２回および／もしくは上記患者に最後の用量が投与された後に少なくとも１回、集められ得る。得られた各生物学的サンプル中の上記癌細胞は、次いで、上記抗ＣＤ２００抗体の投与の量および／もしくは投与頻度が、ＣＤ５＋癌細胞の低下した濃度を維持するのに十分であるか否かを決定するために、ＣＤ５＋癌細胞に相対的パーセンテージについて問い合わされる。上記患者における経時的なＣＤ５＋癌細胞濃度に関する情報および上記患者への上記抗ＣＤ２００抗体の投与による経時的なＣＤ５＋癌細胞の濃度に対する効果が用意されれば、医療従事者（および／もしくはコンピューター）は、上記処置の過程にわたり上記患者におけるＣＤ５＋癌細胞の低下した濃度を維持するのに十分である、上記患者のための抗ＣＤ２００抗体投与スケジュールを決定し得る。上記のように、上記処置は、抗ＣＤ２０治療（例えば、リツキシマブ）とともに行われ得る。
本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体もしくは抗ＣＤ２００抗体）は、固定された用量として、もしくは１キログラムあたりのミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）用量において、投与され得る。いくつかの実施形態において、上記用量はまた、上記組成物中の活性な抗体のうちの１種以上に対する抗体の生成、もしくはこれに対する他の宿主免疫応答を低下または回避するように選択され得る。限定するとは決して意図していないが、抗体の例示的投与量としては、例えば、１〜１００μｇ／ｋｇ、０．５〜５０μｇ／ｋｇ、０．１〜１００μｇ／ｋｇ、０．５〜２５μｇ／ｋｇ、１〜２０μｇ／ｋｇ、および１〜１０μｇ／ｋｇ、１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２５ｍｇ／ｋｇ、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、および１〜１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。本明細書に記載される抗体の例示的投与量としては、０．１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、および８μｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、および８ｍｇ／ｋｇが挙げられるが、これらに限定されない。例示的用量としてはまた、例えば、５０ｍｇ／ｍ２以上、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、４５０ｍｇ／ｍ２、５００ｍｇ／ｍ２、５５０ｍｇ／ｍ２、および／もしくは６００ｍｇ／ｍ２が挙げられる。
薬学的組成物は、本明細書に記載される抗体の治療上有効な量を含み得る。このような有効量は、上記投与される抗体の効果、もしくは１種より多くの薬剤が使用される場合には、上記抗体および１種以上のさらなる活性薬剤の組み合わせ効果に一部基づいて、当業者によって容易に決定され得る。本明細書に記載される抗体の治療上有効な量はまた、上記疾患の状態、上記個体の年齢、性別、および体重、ならびに上記抗体（および１種以上のさらなる活性薬剤）が上記個体において所望の応答を誘発する能力（例えば、少なくとも１つの状態パラメーターの改善（例えば、上記癌の少なくとも１つの症状の改善および／もしくは本明細書中に記載の免疫調節効果のバイオマーカーのうちの少なくとも１つの存在））のような要因に従って変動し得る。治療上有効な量はまた、治療上有益な効果が、上記組成物の任意の毒性効果もしくは有害な効果に勝る量である。
このような組成物の毒性および治療上の効力は、細胞培養もしくは実験動物（例えば、癌もしくは自己免疫障害の動物モデル）における公知の薬学的手順によって決定され得る。これら手順は、例えば、ＬＤ５０（集団のうちの５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団のうちの５０％において治療上有効な用量）を決定するために使用され得る。毒性効果と治療上の効果との間の用量比は、治療指数であり、これは、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。高い治療指数を示す抗ＣＤ２００抗体および／もしくは抗ＣＤ２０治療剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体）が好ましい。毒性の副作用を示す組成物が使用され得るが、このような化合物を罹患組織の部位に標的化する送達系を設計しかつ正常細胞に対する潜在的損傷を最小限にし、それによって、副作用を低下させるために、注意が払われるべきである。
以下の実施例は、本発明を例示するのであって、限定するとは解釈されない。
（実施例１．自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおける抗ＣＤ２００抗体の効力）
研究０（予防モデル）。 治療的抗ＣＤ２００抗体を、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルを使用して、上記疾患と関連した自己抗体の生成を予防し、遅延させ、もしくはその重篤度を低下させる能力について試験した。例えば、Ｐｌａｙｆａｉｒ ａｎｄ Ｍａｒｓｈａｌｌ−Ｃｌａｒｋｅ（１９７３） Ｎａｔ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌ ２４３：２１３−２１４；Ｎａｙｓｍｉｔｈら（１９８１） Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ５５：５５−８７を参照のこと。
マウス赤血球（ＲＢＣ）に結合する自己抗体の生成をマウスにおいて誘発するために、２×１０８個のラットＲＢＣを、研究０日目に、雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１回腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次に、上記研究の残りにわたってその後１週間に１回投与した。上記免疫したマウスによる抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の生成を、上記研究の第２週目まで観察し、上記マウスによる抗マウスＲＢＣ自己抗体の生成を、第３週目まで観察した。
上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、以下に指定される６つの実験群に分けた：群１（６匹のマウス）、群２（６匹のマウス）、群３（８匹のマウス）、群４（７匹のマウス）、群５（９匹のマウス）、および群６（９匹のマウス）。さらなる１群（群７（６匹のマウス））もまた、コントロールとして評価した。上記群７のマウスには、ラットＲＢＣで免疫もせず、以下に記載のさらなる処置のうちのいずれも受けさせなかった。
０日目（すなわち、上記ラットＲＢＣの第１の投与の日）に開始して、群２〜６の各々のマウスに、以下のスケジュールの下で治療剤もしくはビヒクルを投与した：上記研究の各週について、５連続日にわたって、１用量／日として投与される、５用量の投与される薬剤もしくはビヒクル。群１のマウスを、ビヒクル−リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）のみで処置した。群２のマウスを、上記処置スケジュールの下で、５ｍｇ／ｋｇの、ＣＤ２００に結合しないがエフェクター機能を有するコントロール抗体（ＩｇＧ２ａ）を使用して処置した。群３のマウスを、前述の処置スケジュールの下で、抗体１（エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（ＩｇＧ２ａ））（各用量は、５ｍｇ／ｋｇである）で処置した。群４のマウスを、１５ｍｇ／ｋｇの用量においてシクロスポリンで処置した。群５のマウスを、５ｍｇ／ｋｇにおいて上記コントロール抗体および１５ｍｇ／ｋｇにおいてシクロスポリンで処置した。群６のマウスを、５ｍｇ／ｋｇの用量において抗体１および１５ｍｇ／ｋｇの用量においてシクロスポリンで処置した。上記抗体処置を、腹腔内に施した。シクロスポリンを、上記マウスに皮下（ｓ．ｃ．）投与した。各群についての群設計および処置スケジュールを、表１にまとめる。
毎週、上記処置の前、その間、およびその後に、群１〜７のマウスから採血して、処置が上記マウスにおいて抗マウスＲＢＣ自己抗体および／もしくは抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の力価に影響を及ぼしたか否かを、フローサイトメトリーによって評価した。被験体マウス（例えば、群３の処置マウス）において生成された抗マウス自己抗体の相対的濃度を決定するために、上記マウスから得た全血を、蛍光標識した抗マウス抗体の調製物とともにインキュベートして、それによって、上記動物の血中のマウスＲＢＣの表面に存在する抗マウスＲＢＣ抗体の存在を検出した。上記細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで、フローサイトメトリーに供して、平均蛍光強度の関数として、上記マウスＲＢＣに結合したマウス抗マウスＲＢＣの相対的量を評価した。１３日目と２７日目との間に、群１、群２、群４、群５、および群６のマウスにおける抗マウスＲＢＣ自己抗体の濃度は、増大した。対照的に、群３のマウスにおける抗マウスＲＢＣ自己抗体の濃度は、他の群における自己抗体の濃度と比較して、顕著に減少した。さらに、群３におけるマウスによる自己抗体の生成は、他の群におけるマウスと比較して、顕著に遅延した（図１）。例えば、群１、群２、群４、群５、および群６におけるマウスのうちの５０％は、上記研究の２０日目と２７日目との間に自己抗体を発生させた。対照的に、群３におけるマウスのうちの少なくとも５０％における自己抗体生成は、２７日目と３４日目との間までに起こらなかった。これら結果は、５ｍｇ／ｋｇにおける抗体１（抗ＣＤ２００抗体）は、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおける抗マウスＲＢＣ自己抗体の濃度を減少させることができただけでなく、上記マウスにおける自己抗体の生成を顕著に遅延させることもできたことを示す。
被験体マウス（例えば、群３の処置マウス）において生成された同種異系抗体の相対的濃度を決定するために、上記マウスから得た血清を、上記血清中に存在する任意のラットＲＢＣ特異的同種異系抗体が上記ラットＲＢＣに結合するのに十分な時間および条件下で、単離されたラットＲＢＣのサンプルとともにインキュベートした。上記細胞を、ＰＢＳで洗浄し、次いで、マウス抗体に結合する蛍光標識した抗体とともにインキュベートした。さらなる洗浄工程の後、上記細胞を、フローサイトメトリーに供して、平均蛍光強度として上記ラットＲＢＣに結合したマウス抗ラットＲＢＣの相対的量を評価した。群１、群２、群４、群５、および群６のマウスから得た血清は、上記実験の過程にわたり、抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の増大する濃度を含んだ。対照的に、群３のマウスから得た血清は、他の群と比較して、はるかに少ない検出可能な抗ラットＲＢＣ自己抗体を含んでいた。これら結果は、５ｍｇ／ｋｇにおける抗体１（抗ＣＤ２００抗体）が、ＲＢＣ特異的同種異系抗体、ならびに自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおいて生じた抗ＲＢＣ自己抗体の力価を低下させることができたことをさらに示した。
（研究１（処置モデル））。 治療的抗ＣＤ２００抗体を、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルを使用して、上記疾患と関連した自己抗体の生成を低下させるそれらの能力について試験した。マウス赤血球（ＲＢＣ）に結合する自己抗体の生成をマウスにおいて誘発するために、２×１０８個のラットＲＢＣを、研究０日目に１回雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いで、上記研究の残りにわたってその後１週間に１回投与した。上記免疫したマウスによる抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の生成を、上記研究の第２週目まで観察し、上記マウスによる抗マウスＲＢＣ自己抗体の生成を、３週目まで観察した。
上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、群１（８匹のマウス）、群２（８匹のマウス）、群３（８匹のマウス）、群４（７匹のマウス）、および群５（８匹のマウス）と指定される５群に分けた。第６の群のマウス（群６と指定される；６匹のマウス）もまた、コントロールとして評価した。上記群６のマウスには、ラットＲＢＣでの免疫も、以下に記載されるさらなる処置のうちのいずれも受けさせなかった。
１１２日目に開始して、上記群１〜５の各々のマウスに、以下のスケジュールの下で投与される１４用量の治療剤もしくはビヒクルコントロールのさらなる処置を受けさせた：（ｉ）５連続日にわたって１用量／日として投与される５用量の薬剤もしくはビヒクル；（ｉｉ）処置において２日間の中断；（ｉｉｉ）５連続日にわたって１用量／日として投与されるさらに５用量の上記薬剤もしくはビヒクル；処置において別の２日間の中断；ならびに（ｉｖ）４連続日にわたって１用量／日として投与されるさらに４用量の薬剤もしくはビヒクル。群１のマウスを、ビヒクル（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））のみで処置した。群２のマウスを、抗体１（エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（ＩｇＧ２ａ））（各々の用量は、５ｍｇ／ｋｇである）での前述の処置スケジュールの下で処置した。群３のマウスを、用量１ｍｇ／ｋｇにおいて抗体１で処置した。群４のマウスを、抗体２（エフェクター機能を欠いた抗ＣＤ２００抗体）（各用量は、５ｍｇ／ｋｇ）で上記処置スケジュールの下で処置した。群５のマウスを、ＣＤ２００に結合しないがエフェクター機能（ＩｇＧ２ａ）を有する用量５ｍｇ／ｋｇのコントロール抗体を使用して、上記処置スケジュールの下で処置した。各群の群設計および処置スケジュールを、表２にまとめる。
毎週、上記処置の前、その間、およびその後に、群１〜６のマウスから採血して、処置が上記マウスにおいて抗マウスＲＢＣ自己抗体および／もしくは抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の力価に影響を及ぼしたか否かを、フローサイトメトリーによって評価した。上記研究の１３３日目と１３７日目との間に、上記マウスを屠殺し、それらの脾臓を採取した。被験体マウス（例えば、群２の処置されたマウス）において生成された同種異系抗体の相対的濃度を決定するために、上記マウスから得られた血清（例えば、１３３日目）を、上記血清中に存在する任意のラットＲＢＣ特異的同種異系抗体が上記ラットＲＢＣに結合するのに十分な時間および条件下で、単離されたラットＲＢＣのサンプルに接触させた。上記細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで、マウス抗体に結合する蛍光標識した抗体とともにインキュベートした。さらなる洗浄工程の後、上記細胞を、フローサイトメトリーに供して、平均蛍光強度として、上記ラットＲＢＣに結合したマウス抗ラットＲＢＣの相対的量を評価した。本発明者らは、上記群１、群３、群４、および群５のマウスから得られた処置後血清が、上記処置前のマウスから得られた対応する血清と比較して、抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の増大した濃度を含むことを観察した。対照的に、群２の処置後のマウスから得られた血清は、上記処置前のマウスから得られた対応する血清と比較して、より少ない抗ラットＲＢＣ同種異系抗体を含んでいた。これら結果は、抗体１、抗ＣＤ２００抗体は、５ｍｇ／ｋｇにおいて、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおいてＲＢＣ特異的抗体の生成を低下させる能力を有することを示した。
本発明者らは、その後、抗体２が、抗体１の半減期と比較して、上記処置したマウスにおいて顕著に短い半減期を有することを観察した。従って、研究１においておよび本明細書に記載される他の研究において上記抗体２で観察された結果は、上記自己免疫性溶血性疾患モデルにおける上記抗体２の真の効果も、動物における上記抗体の免疫調節効果も十分には反映していない可能性がある。
（研究２（予防モデル））。 治療的抗ＣＤ２００抗体を、上記疾患の上記マウスモデルを使用して、自己免疫性溶血性疾患と関連した自己抗体の生成を予防するか、遅延させるかもしくはその重篤度を低下させるそれらの能力について試験した。
マウス赤血球（ＲＢＣ）に結合する自己抗体の生成をマウスにおいて誘発するために、ラットＲＢＣを、研究０日目に１回雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いで、上記研究の残りにわたってその後１週間に１回投与した。上記のように、上記免疫したマウスによる抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の生成を、上記研究の第２週目まで観察し、上記マウスによる抗マウスＲＢＣ自己抗体の生成を、３週目まで観察した。
上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、群１（８匹のマウス）、群２（８匹のマウス）、群３（８匹のマウス）、群４（８匹のマウス）、および群５（８匹のマウス）と指定される５群に分けた。第６の群のマウス（群６と指定される；６匹のマウス）もまた、コントロールとして評価した。上記群６のマウスには、ラットＲＢＣでの免疫も、以下に記載されるさらなる処置のうちのいずれも受けさせなかった。
０日目（すなわち、上記ラットＲＢＣの第１の投与の日）に開始して、上記群１〜５の各々のマウスを、治療薬剤もしくはビヒクルを、以下のスケジュールの下で投与した：上記研究の各週について、５連続日にわたって１用量／日として投与される、５用量の薬剤もしくはビヒクル。群１のマウスは、ビヒクル（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））のみで処置した。群２のマウスを、抗体１（エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（ＩｇＧ２ａ））（各用量は、５ｍｇ／ｋｇである）での前述の処置スケジュールの下で処置した。群３のマウスを、用量１ｍｇ／ｋｇにおいて抗体１で処置した。群４のマウスを、抗体２（エフェクター機能を欠いた抗ＣＤ２００抗体）（各用量は、５ｍｇ／ｋｇ）での上記処置スケジュールの下で処置した。群５のマウスを、５ｍｇ／ｋｇの、ＣＤ２００に結合しないがエフェクター機能を有するコントロール抗体（ＩｇＧ２ａ）を使用して、上記処置スケジュールの下で処置した。各群についての上記群設計および処置スケジュールを、表３にまとめる。
毎週、上記処置の前、その間、およびその後に、群１〜６のマウスから採血して、処置が上記マウスにおいて抗マウスＲＢＣ自己抗体および／もしくは抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の力価に影響を及ぼしたか否かを、フローサイトメトリーによって評価した。上記研究の６４日目および６５日目に、上記マウスを屠殺し、それらの脾臓を採取した（各群において４匹のマウスを、６４日目に屠殺し、各群における他の４匹のマウスを、６５日目に屠殺した）。被験体マウス（例えば、群３の処置されたマウス）において生成された同種異系抗体の相対的濃度を決定するために、上記マウスから得られた血清を、上記血清中に存在する任意のラットＲＢＣ特異的同種異系抗体が、上記ラットＲＢＣに結合するのに十分な時間および条件下で、単離されたラットＲＢＣのサンプルに接触させた。上記細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで、マウス抗体に結合する蛍光標識された抗体とともにインキュベートした。さらなる洗浄工程の後に、上記細胞を、フローサイトメトリーに供して、平均蛍光強度として、上記ラットＲＢＣに結合したマウス抗ラットＲＢＣの相対的量を評価した。図２に示されるように、群１、群３、群４、および群５のマウスから得られた血清は、上記実験の過程にわたって、抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の増大する濃度を含んでいた。対照的に、群２の処置後のマウスから得られた血清は、他の群と比較して、はるかに少ない検出可能な抗ラットＲＢＣ同種異系抗体を含んでいた。これら結果は、抗体１（抗ＣＤ２００抗体）が、５ｍｇ／ｋｇにおいて、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおいて生成されたＲＢＣ特異的同種異系抗体の力価を低下させる能力があることをさらに示した。
（研究３（処置モデル））。 治療的抗ＣＤ２００抗体を、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルを使用して、上記疾患を処置するそれらの能力について試験した。マウス赤血球（ＲＢＣ）に結合する自己抗体の生成をマウスにおいて誘発するために、ラットＲＢＣを、研究０日目に１回雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いで、上記研究の残りにわたってその後１週間に１回投与した。上記のように、上記免疫したマウスによる抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の生成を、上記研究の第２週目まで観察し、上記マウスによる抗マウスＲＢＣ自己抗体の生成を、３週目まで観察した。上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、群１（６匹のマウス）、群２（３匹のマウス）、群３（５匹のマウス）と指定される３群に分けた。
８６日目に開始して、群１〜３の各々のマウスに、以下のスケジュールの下で投与される１０用量の治療薬剤もしくはビヒクルコントロールのさらなる処置を受けさせた：（ｉ）５連続日にわたって１用量／日として投与される、５用量の薬剤もしくはビヒクル；（ｉｉ）処置において２日間の中断；および（ｉｉｉ）５連続日にわたって１用量／日として投与される、上記薬剤もしくはビヒクルのさらに５用量。群１のマウスを、抗体１（エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（ＩｇＧ２ａ））（各用量は、５ｍｇ／ｋｇである）で前述の処置スケジュールの下で処置した。群２のマウスを、用量１ｍｇ／ｋｇにおいて、抗体１で処置した。群３のマウスを、抗体２（エフェクター機能を欠いた抗ＣＤ２００抗体）（各用量は、５ｍｇ／ｋｇ）で、上記の処置スケジュールの下で処置した。各群の群設計および処置スケジュールを、表４にまとめる。
上記研究の最後に、上記マウスを屠殺し、それらの脾臓を採取した。上記マウスへの抗体１の投与が、上記マウスにおける抗ＲＢＣ抗体の生成に影響を及ぼすことに加えて、ＲＢＣによる脾細胞の活性化に影響を及ぼしたか否かを決定するために、ＲＢＣの存在下における脾細胞活性化を、インビトロ増殖アッセイを使用して評価した。簡潔には、単離された脾細胞を、３種の異なる抗原（マウスＲＢＣ、ラットＲＢＣ、もしくはウシ血清アルブミン（コントロール））のうちの１種と培養するか、または培地単独で培養した。上記脾細胞と上記抗原とを接触させた後に、３Ｈ−チミジンを、約１６時間にわたって上記脾細胞培養培地に添加した。上記培地を除去し、上記細胞を採取した。次いで、上記抗原による上記脾細胞の相対的活性化を、上記脾細胞のＤＮＡへと組み込まれた３Ｈ−チミジンの量の関数として測定した。
図３に示されるように、群２および群３のマウスに由来する脾細胞は、ラットＲＢＣとの接触後に、強い増殖応答を示した。対照的に、群１のマウスに由来する脾細胞は、ラットＲＢＣの存在下でもほとんど増殖しなかった。このことは、５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２００抗体の投与が、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおけるラットＲＢＣによる脾細胞の活性化を阻害する能力があったことを示す。
（研究４（処置モデル））。 上記に記載されるように、マウス赤血球（ＲＢＣ）に結合する自己抗体の生成をマウスにおいて誘発するために、ラットＲＢＣを、研究０日目に１回、雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いで、上記研究の残りにわたって、その後１週間に１回投与した。
上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、群１、群２、群３、群４、群５、群６、および群７と指定される７つの群に分けた。第８の群のマウス（群８と指定される）もまた、コントロールとして評価した。上記群８のマウスには、ラットＲＢＣでの免疫も、以下に記載されるさらなる処置のうちのいずれも、受けさせなかった。１０匹のマウスが各群にいた。
２１日目に開始して、群１〜７の各々のマウスに、以下のスケジュールの下で投与される１種以上の治療薬剤もしくはビヒクルコントロールのさらなる処置を受けさせた：上記研究の各週について、５連続日にわたって１用量／日として投与される５用量の、１種以上の薬剤もしくはビヒクル。群１のマウスを、ビヒクル（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））のみで処置した。群２のマウスを、用量５ｍｇ／ｋｇの、ＣＤ２００に結合しないがエフェクター機能を有するコントロール抗体（ＩｇＧ２ａ）を使用して、上記処置スケジュールの下で処置した。群３のマウスを、抗体１（エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（ＩｇＧ２ａ））（各用量は、５ｍｇ／ｋｇである）で、前述の処置スケジュールの下で処置した。群４のマウスを、１５ｍｇ／ｋｇ シクロスポリンで、上記スケジュールの下で処置した。群５のマウスを、コントロール抗体（５ｍｇ／ｋｇ）およびシクロスポリン（１５ｍｇ／ｋｇ）の両方で、上記の投与スケジュールの下で処置した。群６のマウスを、抗体１（５ｍｇ／ｋｇ）およびシクロスポリン（１５ｍｇ／ｋｇ）の両方で、上記投与スケジュールの下で処置した。群７のマウスを、抗体１（１ｍｇ／ｋｇ）およびシクロスポリン（１５ｍｇ／ｋｇ）の両方で、上記投与スケジュールの下で処置した。各群についての群設計および処置スケジュールを、表５にまとめる。
毎週、上記処置の前、その間、およびその後に、群１〜８のマウスから採血して、処置が上記マウスにおいて抗マウスＲＢＣ自己抗体および／もしくは抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の力価に影響を及ぼしたか否かを、フローサイトメトリーによって評価した。上記研究の３７日目に、上記マウスを屠殺し、それらの脾臓を採取した。骨髄細胞もまた、２本のマウス大腿骨および脛骨から得た。上記脾臓細胞および骨髄細胞を、以下に記載される（実施例２）ように、フローサイトメトリーに供した。
抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の低下した濃度は、その対応する処置前血清と比較して、群３および群４のマウスから得られた処置後血清中に存在した。抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の処置後低下は、群６および群７のマウスにおいてさらに大きかった。このことは、シクロスポリンおよび抗体１が、上記マウスにおける同種異系抗体生成を低下させることに対して相乗的効果を有することを示す。これら結果は、抗ＣＤ２００抗体が自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルにおいて生成されるＲＢＣ特異的抗体の力価を低下させる能力があったこと、および抗ＣＤ２００抗体が上記疾患を処置するために有用であることをさらに示した。
（実施例２．マウスへの抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記マウスにおける脾細胞集団および骨髄細胞集団の濃度に影響を及ぼす）
研究１のマウスから得た脾細胞を評価して、ＣＤ２００を発現する細胞のパーセンテージを決定した。細胞を上記マウスの脾臓から採取し、ＣＤ２００（上記細胞に存在する場合）への上記抗体の結合を可能にするのに十分な時間量および条件下で、ビオチン標識抗ＣＤ２００抗体（ポリクローナル）の組成物とインキュベートした。上記ポリクローナル抗体調製物を使用して、上記細胞に対する残余の治療的抗ＣＤ２００抗体（例えば、抗体１もしくは抗体２）の存在に起因するいかなるマスキング効果をも防止もしくは低下させた。上記細胞を洗浄し、蛍光標識ストレプトアビジン部分とインキュベートした。さらなる洗浄工程の後、上記細胞を、フローサイトメトリーに供した。図４に示されるように、ビヒクル、上記コントロール抗体、もしくは抗体２で処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較して、１４の５ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１で処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度が顕著に低下した。
研究２のマウスの脾臓から採取した脾細胞もまた、上記のように染色およびフローサイトメトリー分析に供した。ビヒクルもしくは上記コントロール抗体で処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１で長期間処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度が顕著に低下した。また、１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１で処置した群３のマウスおよび５ｍｇ／ｋｇの抗体２で処置した群４のマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度に変化はなかった。
研究４のマウスの脾臓から採取した脾細胞もまた、上記のように染色およびフローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較すると、５ｍｇ／ｋｇの抗体１と、シクロスポリンありもしくはなしで処置したマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度が、顕著に低下した。また、シクロスポリンおよび１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１の組み合わせスケジュールで処置した上記群７のマウスにおけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度には、変化がなかった。各マウスのＣＤ２００＋脾細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）（これは、各ＣＤ２００＋脾細胞によるＣＤ２００の相対的発現レベルの尺度である）の分析もまた、行った。群４および群７のＣＤ２００＋脾細胞のＭＦＩは、残りの群（群８を除く）におけるＣＤ２００＋脾細胞のＭＦＩと比較して、顕著に低下した。このことは、上記マウスへの抗体１の用量投与が、ＣＤ２００＋脾細胞の総数を減少させるのみならず、抗体１処置マウスにおけるＣＤ２００＋を発現する残りの細胞が、遙かに低いレベルのＣＤ２００しか発現しないことも示した。
まとめると、これら結果から、動物への抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記動物におけるＣＤ２００＋脾細胞の濃度を低下させることが確認される。上記結果はまた、ＣＤ２００＋脾細胞における上記抗ＣＤ２００抗体媒介性の低下が、シクロスポリンによって正にも負にも影響を受けないことを示す。
本発明者らはまた、以下に対する抗ＣＤ２００抗体の効果をさらに試験した：（ｉ）研究４のマウスに由来する脾細胞の特定のＣＤ２００＋リンパ球サブセットの濃度、および（ｉｉ）研究４のマウスの骨髄由来細胞の特定のＣＤ２００＋サブセットの濃度。
（研究４のマウスにおける脾臓リンパ球サブセットの濃度）
ＣＤ３＋／ＣＤ２００＋リンパ球サブセット。 研究４のマウスの各々に由来する脾細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物、およびＣＤ３に結合する検出可能に標識した抗体とともにインキュベートして、それによって群１〜８のマウスの脾臓におけるＣＤ３＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。細胞の上記ＣＤ３＋集団は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のようなＴ細胞を含む。上記標識された細胞を、フローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ３＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１とシクロスポリンありもしくはなしで長期的に処置したマウスにおけるＣＤ３＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度は、顕著に低下した。シクロスポリンおよび１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１の組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおいては、ＣＤ３＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度に顕著な変化はなかった。
ＣＤ５＋／ＣＤ２００＋リンパ球サブセット。 研究４のマウスの各々に由来する脾細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物、およびＣＤ５に結合する検出可能に標識した抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの脾臓におけるＣＤ５＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。細胞の上記ＣＤ５＋集団は、Ｔ細胞、ならびにＢ細胞（Ｂ１細胞集団）を含む。上記標識した細胞を、フローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ５＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１とシクロスポリンありもしくはなしで長期的に処置したマウスにおけるＣＤ５＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度が顕著に低下した。また、シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１の組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＣＤ５＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度において、顕著な変化はなかった。
ＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋リンパ球サブセット。 研究４のマウスの各々に由来する脾細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物、およびＣＤ１９に結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの脾臓におけるＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。細胞のＣＤ１９＋集団は、Ｂ細胞を含む。上記標識された細胞を、フローサイトメトリーに供した。ＣＤ５＋／ＣＤ２００＋細胞およびＣＤ３＋／ＣＤ２００＋細胞と同様に、ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１とシクロスポリンありもしくはなしで長期的に処置したマウスにおけるＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度もまた顕著に低下した。シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度もまた、顕著に変化しなかった。
ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋リンパ球サブセット。 研究４のマウスの各々に由来する脾細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物およびＣＤ１３８に結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの脾臓におけるＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。細胞のＣＤ１３８＋集団は、形質細胞を含む。上記標識された細胞を、フローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１とシクロスポリンありもしくはなしで長期的に処置したマウスにおけるＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度は、顕著に低下した。また、シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋脾細胞の濃度において、顕著な変化はなかった。
Ｆ４／８０＋リンパ球サブセット。 Ｆ４／８０は、成熟マウスマクロファージの細胞表面に存在する１２５ｋＤａ膜貫通タンパク質である。抗ＣＤ２００抗体の投与が脾臓にいるマクロファージの濃度に影響を及ぼすか否かを決定するために、研究４の各マウスに由来する脾細胞のサンプルを、Ｆ４／８０に結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートした。上記標識した細胞を、フローサイトメトリーに供して、それによって、群１〜８のマウスの脾臓におけるＦ４／８０＋細胞の割合を同定した。Ｆ４／８０＋脾細胞の濃度は、ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＦ４／８０＋脾細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１（１０用量）とシクロスポリンありもしくはなしで処置したマウスにおいて増大した。また、シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＦ４／８０＋脾細胞の濃度において、顕著な変化はなかった。
まとめると、これら結果から、抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記処置した動物において、種々のＣＤ２００＋脾細胞サブセットを低下させるが、特定のマクロファージサブセットを増大させることが示される。
（研究４のマウスにおける骨髄細胞サブセットの濃度）
ＣＤ３４＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞サブセット。 上記マウスの各々に由来する骨髄細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物およびＣＤ３４に結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの骨髄におけるＣＤ３４＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。上記ＣＤ３４＋細胞は、造血幹細胞（ＨＳＣ）の集団を含む。上記標識された細胞を、系統ｌｏｗである細胞（Ｌｉｎ−／Ｌｏｗ）についても選択するフローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ３４＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１（１０用量）とシクロスポリンありもしくはなしで処置したマウスにおいてＣＤ３４＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度は顕著に低下した。また、シクロスポリンおよび１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１の組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＣＤ３４＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度において顕著な変化はなかった。
Ｓｃａ−１＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞サブセット。 上記マウスの各々に由来する骨髄細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物およびＳｃａ−１に結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの骨髄におけるＳｃａ−１＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。上記Ｓｃａ−１＋細胞は、ＨＳＣおよび間葉性幹細胞（ＭＳＣ）の集団を含む。上記標識された細胞を、系統ｌｏｗである細胞（Ｌｉｎ−／Ｌｏｗ）についても選択するフローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＳｃａ−１＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１（１０用量）とシクロスポリンありもしくはなしで処置したマウスにおいてＳｃａ−１＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度が顕著に低下した。また、シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおいては、Ｓｃａ−１＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度に顕著な変化はなかった。
Ｓｃａ−１＋／ＣＤ３４＋骨髄細胞サブセット。 上記マウスの各々に由来する骨髄細胞のサンプルを、ＣＤ３４に結合する第１の検出可能に標識された抗体およびＳｃａ−１に結合する第２の検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの骨髄におけるＳｃａ−１＋／ＣＤ３４＋細胞の割合を同定した。上記標識された細胞を、系統ｌｏｗである細胞（Ｌｉｎ−／Ｌｏｗ）についても選択するフローサイトメトリーに供した。上記Ｓｃａ−１＋／ＣＤ３４＋／Ｌｉｎ−細胞は、ＭＳＣの集団を含む。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＳｃａ−１＋／ＣＤ３４＋骨髄細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１（１０用量）とシクロスポリンありもしくはなしで処置したマウスにおいてＳｃａ−１＋／ＣＤ３４＋骨髄細胞の濃度が顕著に低下した。また、シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＳｃａ−１＋／ＣＤ３４＋骨髄細胞の濃度において、顕著な変化はなかった。
ｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞サブセット。 上記マウスの各々に由来する骨髄細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物およびｃ−ｋｉｔに結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの骨髄におけるｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋細胞の割合を同定した。上記ｃ−ｋｉｔ＋細胞は、ＨＳＣおよびＭＳＣの集団を含む。上記標識された細胞を、系統ｌｏｗである細胞（Ｌｉｎ−／Ｌｏｗ）についても選択するフローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１とシクロスポリンありもしくはなしで長期間処置したマウスにおいてｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度が顕著に低下した。シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞の濃度において、顕著な変化はなかった。
ＣＤ２００＋／ＣＤ２００Ｒ＋骨髄細胞サブセット。 上記マウスの各々に由来する骨髄細胞のサンプルを、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物およびＣＤ２００Ｒに結合する検出可能に標識された抗体とともにインキュベートして、それによって、群１〜８のマウスの骨髄におけるＣＤ２００＋／ＣＤ２００Ｒ＋細胞の割合を同定した。上記標識された細胞を、フローサイトメトリーに供した。ビヒクル、上記コントロール抗体、シクロスポリン単独、または上記コントロール抗体とシクロスポリンとの組み合わせで処置したマウスにおけるＣＤ２００＋／ＣＤ２００Ｒ＋骨髄細胞の濃度と比較して、５ｍｇ／ｋｇの抗体１とシクロスポリンありもしくはなしで長期的に処置されたマウスにおいてＣＤ２００＋／ＣＤ２００Ｒ＋骨髄細胞の濃度は顕著に低下した。また、シクロスポリンと１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体１との組み合わせスケジュールで処置した群７のマウスにおけるＣＤ２００＋／ＣＤ２００Ｒ＋骨髄細胞の濃度において、顕著な変化はなかった。
（実施例３．抗ＣＤ２００治療の中断後の骨髄細胞およびＣＤ２００＋脾細胞サブセットの回復）
研究５（処置モデル）。 上記治療的抗ＣＤ２００抗体を、脾細胞および骨髄細胞の特定のサブセット集団の濃度を調節するそれらの能力について再び試験した。上記抗体を、自己免疫性溶血性疾患のマウスモデルの状況において、上記マウスに投与した。上記のように、マウス赤血球（ＲＢＣ）に結合する自己抗体の生成をマウスにおいて誘発するために、２×１０８個のラットＲＢＣを、研究０日目に１回雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、次いで、上記研究の残りにわたり、その後１週間に１回投与した。上記免疫したマウスによる抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の生成を、上記研究の２週目まで観察し、抗マウスＲＢＣ自己抗体の上記マウスによる生成を３週目まで観察した。
上記ラットＲＢＣ免疫マウスを、群２（２０匹のマウス）、群３（２０匹のマウス）、群４（２０匹のマウス）、群５（１５匹のマウス）、および群６（１５匹のマウス）と指定される５つの群に分けた。第６の群のマウス（群１と指定される；２０匹のマウス）をまた、コントロールとして評価した。上記群１のマウスには、ラットＲＢＣでの免疫も、以下に記載されるさらなる処置のいずれをも、受けさせなかった。
２１日目に開始して、群２〜６の各々のマウスに、以下のスケジュールの下で投与される１０用量の治療薬剤もしくはビヒクルコントロールのさらなる処置を受けさせた：（ｉ）５連続日にわたって１用量／日として投与される５用量の薬剤もしくはビヒクル；（ｉｉ）処置において２日の中断；および（ｉｉｉ）５連続日にわたって１用量／日として投与されるさらに５用量の上記薬剤もしくはビヒクル。群６のマウスを、ビヒクル（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））のみで処置した。群２のマウスを、抗体１（エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（ＩｇＧ２ａ））（各用量は、５ｍｇ／ｋｇである）での前述の処置スケジュールの下で処置した。群３のマウスを、抗体２（エフェクター機能を欠いた抗ＣＤ２００抗体）（各用量は５ｍｇ／ｋｇ）での前述の処置スケジュールの下で処置した。群４のマウスを、用量５ｍｇ／ｋｇの、ＣＤ２００に結合しないがエフェクター機能を有するコントロール抗体（ＩｇＧ２ａ）を使用して、上記処置スケジュールの下で処置した。群５のマウスを、用量５ｍｇ／ｋｇの、ＣＤ２００に結合せずエフェクター機能を有しないコントロール抗体を使用して、上記処置スケジュールの下で処置した。各群についての群設計および処置スケジュールを、表６にまとめる。
毎週、上記処置の前、その間、およびその後に、群１〜６のマウスから採血して、処置が上記マウスにおいて抗マウスＲＢＣ自己抗体および／もしくは抗ラットＲＢＣ同種異系抗体の力価に影響を及ぼしたか否かを、フローサイトメトリーによって評価した。上記研究の３５日目に、各群におけるマウスのうちの３匹を屠殺し、それらの脾臓を採取した。骨髄もまた、各マウスの大腿骨および脛骨から単離した。上記のように、上記細胞を、検出可能に標識された抗体（例えば、上記ポリクローナル抗ＣＤ２００抗体調製物およびさらなる蛍光標識された抗体）で標識し、フローサイトメトリーに供した。上記結果のまとめを、以下の表７に示す。
３５日目〜９１日目まで、各群における残りのマウスは、さらなるＲＢＣ免疫を受けさせたが、上記抗体での処置は受けさせなかった。その目的は、脾細胞および骨髄細胞の集団が経時的に回復するか否かを決定することである。各群における３匹のマウスを９１日目に屠殺し、それらの脾臓および骨髄を、上記のように採取した。フローサイトメトリー分析を、上記単離された細胞に対して行って、脾細胞および骨髄細胞の特定の集団サブセット（３５日目に低下した）が、９１日目までに回復したか否かを決定した。上記細胞集団の各々は、９１日目までに完全に回復した。このことは、骨髄細胞および脾細胞サブセットの濃度に対する上記抗ＣＤ２００抗体の調節効果が、上記抗体の中止に際して可逆性であることを示す。
本開示は、その特定の具体的実施形態を参照しながら記載されてきたが、本開示の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更が行われ得、等価物が置き換わり得ることは、当業者によって理解されるべきである。さらに、多くの改変は、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスの工程を、本開示の目的、趣旨および範囲に対して適合させるように行われ得る。全てのこのような改変は、本開示の範囲内であると意図される。
本開示の他の特徴および利点、例えば、リツキシマブ抵抗性癌（例えば、慢性リンパ性白血病）を処置するための方法は、以下の説明、実施例、および特許請求の範囲から明らかになる。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、自己免疫障害を有するヒトに、該ヒトにおいて、該自己免疫障害と関連する自己抗体の濃度を低下させ、それによって該自己免疫障害を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する、方法。
（項目２）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記自己抗体の濃度を少なくとも１０％低下させる、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記自己抗体の濃度を少なくとも２０％低下させる、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記自己抗体の濃度を少なくとも５０％低下させる、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、自己免疫障害を有するヒトに、該ヒトにおいて該自己免疫障害と関連する自己抗体の低下した濃度を維持して、それによって、該自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で抗ＣＤ２００抗体を長期的に投与する工程を包含する、方法。
（項目６）
上記抗ＣＤ２００抗体が、該抗ＣＤ２００抗体の投与前の上記自己免疫抗体の濃度と比較して、該自己免疫抗体の濃度において５０％超の低下を維持する量および頻度で上記ヒトに投与される、項目５に記載の方法。
（項目７）
ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、自己免疫障害の処置を必要とするヒトに、該ヒトにおける以下の生理学的状態のうちの１つ以上：
（ｉ）コントロール濃度と比較して、少なくとも１つのＣＤ２００ ＋ 白血球サブセットの低下した濃度；
（ｉｉ）コントロール濃度と比較して、Ｆ４／８０ ＋ 細胞の増大した濃度；および
（ｉｉｉ）コントロール濃度と比較して、少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセットの低下した濃度、
を維持することによって、該自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する、方法。
（項目８）
上記少なくとも１つのＣＤ２００ ＋ 白血球サブセットが、ＣＤ３ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 細胞、ＣＤ４５Ｒ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 細胞、ＣＤ５ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 細胞、ＣＤ１９ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 細胞、ＣＤ１３８ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 細胞、およびＣＤ２００Ｒ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 細胞からなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
上記少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセットが、ＣＤ２００ ＋ 骨髄細胞、Ｉｇｋ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 骨髄細胞、ＣＤ１３８ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 骨髄細胞、ｃ−ｋｉｔ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ 骨髄細胞、およびｃ−ｋｉｔ ＋ ／ＣＤ２００ ＋ ／Ｌｉｎ − 骨髄細胞からなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目１０）
上記Ｆ４／８０ ＋ 細胞が、Ｆ４／８０ ＋ マクロファージである、項目７に記載の方法。
（項目１１）
上記少なくとも１つのＣＤ２００ ＋ 白血球サブセットもしくは上記Ｆ４／８０ ＋ 細胞が、上記ヒトの末梢血中に存在する、項目７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
上記抗体が、上記ヒトにおける上記生理学的状態のうちの３つすべてを維持する量および頻度で該ヒトに投与される、項目７〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
上記自己免疫障害が、溶血障害である、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
上記自己免疫障害が、自己免疫性溶血性貧血である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
上記自己免疫障害が、慢性閉塞性肺疾患、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、ＩｇＡ腎症、強皮症、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫、尋常性天疱瘡、関節リウマチ、寒冷血球凝集素病、抗リン脂質症候群、温暖自己免疫性溶血性貧血、発作性寒冷血色素尿症、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、肺胆汁性肝硬変、およびミラー・フィッシャー症候群からなる群より選択される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
上記自己免疫障害が、上記ヒトにおける癌と関連する、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
上記癌が、液状腫瘍である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
上記液状腫瘍が、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
上記慢性リンパ性白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
上記ヒトに、自己免疫障害を処置するために、少なくとも１種のさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
癌に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、癌に罹患したヒトに、該癌を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで該癌は、抗ＣＤ２０治療剤での治療に抵抗性であるか、または抗ＣＤ２０治療剤での治療に抵抗性であると疑われる、方法。
（項目２２）
癌に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、
ヒトを、抗ＣＤ２０治療剤での処置に抵抗性であるか、または抗ＣＤ２０治療剤での処置に抵抗性であると疑われる癌を有すると同定する工程；および
該ヒトに、該癌を処置するのに有効な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２３）
上記癌が、ＣＤ５を発現する癌細胞を含む、項目２１または２２に記載の方法。
（項目２４）
上記抗ＣＤ２００抗体のうちの１より多い用量が、上記ヒトに投与される、項目２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
上記抗ＣＤ２００抗体の１０より多い用量が、上記ヒトに投与される、項目２１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
上記癌が、液状腫瘍である、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
上記液状腫瘍が、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
上記慢性リンパ性白血病は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、液状腫瘍に罹患したヒトに、該液状腫瘍を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで該液状腫瘍細胞のうちの少なくとも一部は、ＣＤ５を発現する、方法。
（項目３０）
上記液状腫瘍細胞のうちの一部がＣＤ５を発現するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は：
ヒトを、ＣＤ５を発現する細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および
該ヒトに、該ヒトにおける該ＣＤ５発現液状腫瘍細胞の濃度を低下させるに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与して、それによって、該液状腫瘍を処置する工程
を包含する、方法。
（項目３２）
液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、液状腫瘍に罹患したヒトに、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、それによって、該液状腫瘍を処置する工程を包含し、ここで該液状腫瘍細胞のうちの少なくとも一部は、該抗体および該薬剤を投与する前に、ＣＤ５を発現する、方法。
（項目３３）
液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は：
ヒトを、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍に罹患していると同定する工程；および
該ヒトに、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、それによって、該液状腫瘍を処置する工程、
を包含する、方法。
（項目３４）
上記抗ＣＤ２０治療剤が、上記抗ＣＤ２００抗体の投与前に投与される、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記抗ＣＤ２０治療剤の投与前に投与される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
上記抗ＣＤ２００抗体および上記抗ＣＤ２０治療剤が、同じ経路によって投与される、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３７）
上記抗ＣＤ２００抗体および上記抗ＣＤ２０治療剤が、ヒトＣＤ２００およびヒトＣＤ２０に結合する二重特異的抗体として同時に投与される、項目３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
上記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも１％が、ＣＤ５を発現する、項目２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
上記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも５％が、ＣＤ５を発現する、項目２９〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
上記液状腫瘍のうちの少なくとも１０％が、ＣＤ５を発現する、項目２９〜３９のいずれか１項に記載の方法。
（項目４１）
上記液状腫瘍が、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫である、項目２９〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
上記慢性リンパ性白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
上記抗ＣＤ２０治療剤が、抗ＣＤ２０抗体である、項目２１〜２８または３２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
上記抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブである、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
上記抗ＣＤ２０抗体が、オファツムマブ、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ、オクレリズマブ、もしくはＡＭＥ−１３３ｖである、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
上記抗ＣＤ２０抗体が、毒素−抗体結合体である、項目４３に記載の方法。
（項目４７）
上記毒素が、低分子薬物もしくは毒性ポリペプチドである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
上記毒素が、放射性薬剤である、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
上記放射性薬剤が、 ９０ Ｙ、 １８６ Ｒｅ、 １８８ Ｒｅ、 ６４ Ｃｕ、 ６７ Ｃｕ、 ２１２ Ｐｂ、 ２１２ Ｂｉ、 ２１３ Ｂｉ、 １２３ Ｉ、 １２５ Ｉ、 １３１ Ｉ、 １１１ Ｉｎ、 ２１１ Ａｔ、 ３２ Ｐ、 １７７ Ｌｕ、 ４７ Ｓｃ、 １０５ Ｒｈ、 １０９ Ｐｄ、 １５３ Ｓｍ、もしくは １９９ Ａｕである、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
上記毒素−抗体結合体が、 ９０ Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタンもしくは １３１ Ｉ−トシツモマブである、項目４６，４８、または４９に記載の方法。
（項目５１）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害する、項目１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
アミノ酸配列：ＧＦＴＦＳＧＦＡＭＳ（配列番号４）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；アミノ酸配列：ＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬＤＳＶＫＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；アミノ酸配列：ＧＮＹＹＳＧＴＳＹＤＹ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；アミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；アミノ酸配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；およびアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＲＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）、
を含む、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
アミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＭＨ（配列番号１０）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１１）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＫＮＹＹＶＳＮＹＮＦＦＤＶ（配列番号１２）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＳＡＳＳＳＶＲＹＭＹ（配列番号１３）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１４）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＦＱＧＳＧＹＰＬＴ（配列番号１５）を含むＬＣＤＲ３
を含む、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５４）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
アミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＩＨ（配列番号１６）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＩＧＡＴＫＹＶＰＫＦＱＧ（配列番号１７）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＬＹＧＮＹＤＲＹＹＡＭＤＹ（配列番号１８）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号１９）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＡＳＮＲＨＴ（配列番号２０）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＨＷＮＹＰＬＴ（配列番号２１）を含むＬＣＤＲ３
を含む、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５５）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
アミノ酸配列：ＧＹＳＦＴＤＹＩＩＬ（配列番号２２）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＨＩＤＰＹＹＧＳＳＮＹＮＬＫＦＫＧ（配列番号２３）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＫＲＤＹＦＤＹ（配列番号２４）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号２５）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＲＡＮＲＬＶＤ（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号２７）を含むＬＣＤＲ３
を含む、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（配列番号２８）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＧＶＮＰＮＮＧＧＡＬＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２９）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＲＳＮＹＲＹＤＤＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＬＤＩＤＥＫＴＹＬＮ（配列番号３１）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３２）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＷＱＧＴＨＦＰＱＴ（配列番号３３）を含むＬＣＤＲ３
を含む、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
アミノ酸配列：ＡＦＮＩＫＤＨＹＭＨ（配列番号３４）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＳＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＦＮＧＹＱＡＬＤＱ（配列番号３６）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨ（配列番号３７）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３８）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＲＱＹＨＲＳＰＰＩＦＴ（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ３
を含む、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、ＩｇＧ３抗体、ＩｇＧ４抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ１抗体、ＩｇＡ２抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、もしくはＩｇＥ抗体である、項目１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
（項目５９）
上記抗ＣＤ２００抗体が、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、もしくはヒト抗体である、項目１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
上記抗ＣＤ２００抗体が、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’） ２ フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、ミニボディー、ダイアボディー、もしくはトリアボディーからなる群より選択されるＣＤ２００結合抗体フラグメントである、項目１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
液状腫瘍に罹患した患者の治療を選択するための方法であって、該方法は：
患者を、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および
該液状腫瘍の処置に使用するための抗ＣＤ２００抗体を該患者のために選択する工程、を包含する、方法。
（項目６２）
液状腫瘍に罹患した患者の治療を処方するための方法であって、該方法は：
患者を、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および
該液状腫瘍の処置に使用するための抗ＣＤ２００抗体を該患者のために処方する工程
を包含する、方法。
（項目６３）
上記抗ＣＤ２００抗体が、二重特異的抗体である、項目６１または６２に記載の方法。
（項目６４）
上記二重特異的抗体が、第１の抗原結合部位および第２の抗原結合部位を含み、該第１の抗原結合部位は、ＣＤ２００に結合し、該第２の抗原結合部位は、ＣＤ２０に結合する、項目６１または６２に記載の方法。
（項目６５）
ＣＤ２００タンパク質に結合する第１の抗原結合部位およびＣＤ２０タンパク質に結合する第２の抗原結合部位を含む、二重特異的抗体。
（項目６６）
上記抗体が、一本鎖ダイアボディー、タンデム一本鎖Ｆｖフラグメント、タンデム一本鎖ダイアボディー、もしくは一本鎖ダイアボディーおよび免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの少なくとも一部を含む融合タンパク質である、項目６５に記載の二重特異的抗体。
（項目６７）
上記抗体が、二重可変性ドメイン免疫グロブリンである、項目６５に記載の二重特異的抗体。
（項目６８）
上記第１の抗原結合部位が、ヒトＣＤ２００タンパク質に結合する、項目６５〜６７のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
（項目６９）
上記ヒトＣＤ２００タンパク質が、配列番号１〜３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、項目６８に記載の二重特異的抗体。
（項目７０）
上記第２の抗原結合部位が、ヒトＣＤ２０タンパク質に結合する、項目６５〜６９のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
（項目７１）
上記ヒトＣＤ２０タンパク質が、配列番号４０〜４２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、項目７０に記載の二重特異的抗体。
（項目７２）
上記第２の抗原結合部位が、配列番号４１に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも一部、および配列番号４２に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも一部を含むエピトープにおいて、ヒトＣＤ２０タンパク質に結合する、項目７０または７１に記載の二重特異的抗体。
（項目７３）
上記第１の抗原結合部位が、サマリズマブから得られる、項目６５〜７２のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
（項目７４）
上記第２の抗原結合部位が、リツキシマブ、オファツムマブ、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ、オクレリズマブ、もしくはＡＭＥ−１３３ｖから得られる、項目６５〜７２のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
（項目７５）
項目６５〜７４のいずれか１項に記載の二重特異的抗体をコードする、核酸。
（項目７６）
項目７５に記載の核酸を含む、発現ベクター。
（項目７７）
項目７６に記載のベクターを含む、細胞。

Claims (77)

  1. ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、自己免疫障害を有するヒトに、該ヒトにおいて、該自己免疫障害と関連する自己抗体の濃度を低下させ、それによって該自己免疫障害を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する、方法。
  2. 前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、前記自己抗体の濃度を少なくとも１０％低下させる、請求項１に記載の方法。
  3. 前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、前記自己抗体の濃度を少なくとも２０％低下させる、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、前記自己抗体の濃度を少なくとも５０％低下させる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  5. ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、自己免疫障害を有するヒトに、該ヒトにおいて該自己免疫障害と関連する自己抗体の低下した濃度を維持して、それによって、該自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で抗ＣＤ２００抗体を長期的に投与する工程を包含する、方法。
  6. 前記抗ＣＤ２００抗体が、該抗ＣＤ２００抗体の投与前の前記自己免疫抗体の濃度と比較して、該自己免疫抗体の濃度において５０％超の低下を維持する量および頻度で前記ヒトに投与される、請求項５に記載の方法。
  7. ヒトにおける自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、自己免疫障害の処置を必要とするヒトに、該ヒトにおける以下の生理学的状態のうちの１つ以上：
    （ｉ）コントロール濃度と比較して、少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセットの低下した濃度；
    （ｉｉ）コントロール濃度と比較して、Ｆ４／８０＋細胞の増大した濃度；および
    （ｉｉｉ）コントロール濃度と比較して、少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセットの低下した濃度、
    を維持することによって、該自己免疫障害を処置するのに十分な量および頻度で抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する、方法。
  8. 前記少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセットが、ＣＤ３＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ５＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１９＋／ＣＤ２００＋細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋細胞、およびＣＤ２００Ｒ＋／ＣＤ２００＋細胞からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
  9. 前記少なくとも１つの骨髄幹細胞サブセットが、ＣＤ２００＋骨髄細胞、Ｉｇｋ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ＣＤ１３８＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、ｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋骨髄細胞、およびｃ−ｋｉｔ＋／ＣＤ２００＋／Ｌｉｎ−骨髄細胞からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
  10. 前記Ｆ４／８０＋細胞が、Ｆ４／８０＋マクロファージである、請求項７に記載の方法。
  11. 前記少なくとも１つのＣＤ２００＋白血球サブセットもしくは前記Ｆ４／８０＋細胞が、前記ヒトの末梢血中に存在する、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記抗体が、前記ヒトにおける前記生理学的状態のうちの３つすべてを維持する量および頻度で該ヒトに投与される、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記自己免疫障害が、溶血障害である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記自己免疫障害が、自己免疫性溶血性貧血である、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記自己免疫障害が、慢性閉塞性肺疾患、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、ＩｇＡ腎症、強皮症、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫、尋常性天疱瘡、関節リウマチ、寒冷血球凝集素病、抗リン脂質症候群、温暖自己免疫性溶血性貧血、発作性寒冷血色素尿症、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、肺胆汁性肝硬変、およびミラー・フィッシャー症候群からなる群より選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記自己免疫障害が、前記ヒトにおける癌と関連する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記癌が、液状腫瘍である、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記液状腫瘍が、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記慢性リンパ性白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記ヒトに、自己免疫障害を処置するために、少なくとも１種のさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 癌に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、癌に罹患したヒトに、該癌を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで該癌は、抗ＣＤ２０治療剤での治療に抵抗性であるか、または抗ＣＤ２０治療剤での治療に抵抗性であると疑われる、方法。
  22. 癌に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、
    ヒトを、抗ＣＤ２０治療剤での処置に抵抗性であるか、または抗ＣＤ２０治療剤での処置に抵抗性であると疑われる癌を有すると同定する工程；および
    該ヒトに、該癌を処置するのに有効な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程、
    を包含する、方法。
  23. 前記癌が、ＣＤ５を発現する癌細胞を含む、請求項２１または２２に記載の方法。
  24. 前記抗ＣＤ２００抗体のうちの１より多い用量が、前記ヒトに投与される、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記抗ＣＤ２００抗体の１０より多い用量が、前記ヒトに投与される、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記癌が、液状腫瘍である、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記液状腫瘍が、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記慢性リンパ性白血病は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病である、請求項２７に記載の方法。
  29. 液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、液状腫瘍に罹患したヒトに、該液状腫瘍を処置するのに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含し、ここで該液状腫瘍細胞のうちの少なくとも一部は、ＣＤ５を発現する、方法。
  30. 前記液状腫瘍細胞のうちの一部がＣＤ５を発現するか否かを決定する工程をさらに包含する、請求項２９に記載の方法。
  31. 液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は：
    ヒトを、ＣＤ５を発現する細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および
    該ヒトに、該ヒトにおける該ＣＤ５発現液状腫瘍細胞の濃度を低下させるに十分な量の抗ＣＤ２００抗体を投与して、それによって、該液状腫瘍を処置する工程
    を包含する、方法。
  32. 液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は、液状腫瘍に罹患したヒトに、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、それによって、該液状腫瘍を処置する工程を包含し、ここで該液状腫瘍細胞のうちの少なくとも一部は、該抗体および該薬剤を投与する前に、ＣＤ５を発現する、方法。
  33. 液状腫瘍に罹患したヒトを処置するための方法であって、該方法は：
    ヒトを、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍に罹患していると同定する工程；および
    該ヒトに、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２０治療剤を投与して、それによって、該液状腫瘍を処置する工程、
    を包含する、方法。
  34. 前記抗ＣＤ２０治療剤が、前記抗ＣＤ２００抗体の投与前に投与される、請求項３２または３３に記載の方法。
  35. 前記抗ＣＤ２００抗体が、前記抗ＣＤ２０治療剤の投与前に投与される、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記抗ＣＤ２００抗体および前記抗ＣＤ２０治療剤が、同じ経路によって投与される、請求項３２または３３に記載の方法。
  37. 前記抗ＣＤ２００抗体および前記抗ＣＤ２０治療剤が、ヒトＣＤ２００およびヒトＣＤ２０に結合する二重特異的抗体として同時に投与される、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも１％が、ＣＤ５を発現する、請求項２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記液状腫瘍細胞のうちの少なくとも５％が、ＣＤ５を発現する、請求項２９〜３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記液状腫瘍のうちの少なくとも１０％が、ＣＤ５を発現する、請求項２９〜３９のいずれか１項に記載の方法。
  41. 前記液状腫瘍が、慢性リンパ性白血病もしくは多発性骨髄腫である、請求項２９〜４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記慢性リンパ性白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記抗ＣＤ２０治療剤が、抗ＣＤ２０抗体である、請求項２１〜２８または３２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブである、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記抗ＣＤ２０抗体が、オファツムマブ、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ、オクレリズマブ、もしくはＡＭＥ−１３３ｖである、請求項４３に記載の方法。
  46. 前記抗ＣＤ２０抗体が、毒素−抗体結合体である、請求項４３に記載の方法。
  47. 前記毒素が、低分子薬物もしくは毒性ポリペプチドである、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記毒素が、放射性薬剤である、請求項４６に記載の方法。
  49. 前記放射性薬剤が、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、２１１Ａｔ、３２Ｐ、１７７Ｌｕ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１５３Ｓｍ、もしくは１９９Ａｕである、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記毒素−抗体結合体が、９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタンもしくは１３１Ｉ−トシツモマブである、請求項４６，４８、または４９に記載の方法。
  51. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害する、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
    アミノ酸配列：ＧＦＴＦＳＧＦＡＭＳ（配列番号４）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；アミノ酸配列：ＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬＤＳＶＫＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；アミノ酸配列：ＧＮＹＹＳＧＴＳＹＤＹ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；アミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；アミノ酸配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；およびアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＲＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）、
    を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
    アミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＭＨ（配列番号１０）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１１）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＫＮＹＹＶＳＮＹＮＦＦＤＶ（配列番号１２）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＳＡＳＳＳＶＲＹＭＹ（配列番号１３）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１４）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＦＱＧＳＧＹＰＬＴ（配列番号１５）を含むＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
    アミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＩＨ（配列番号１６）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＩＧＡＴＫＹＶＰＫＦＱＧ（配列番号１７）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＬＹＧＮＹＤＲＹＹＡＭＤＹ（配列番号１８）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号１９）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＡＳＮＲＨＴ（配列番号２０）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＨＷＮＹＰＬＴ（配列番号２１）を含むＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
    アミノ酸配列：ＧＹＳＦＴＤＹＩＩＬ（配列番号２２）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＨＩＤＰＹＹＧＳＳＮＹＮＬＫＦＫＧ（配列番号２３）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＫＲＤＹＦＤＹ（配列番号２４）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号２５）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＲＡＮＲＬＶＤ（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号２７）を含むＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
    アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（配列番号２８）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＧＶＮＰＮＮＧＧＡＬＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２９）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＲＳＮＹＲＹＤＤＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＬＤＩＤＥＫＴＹＬＮ（配列番号３１）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３２）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＷＱＧＴＨＦＰＱＴ（配列番号３３）を含むＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤＲの対になった以下のセット：
    アミノ酸配列：ＡＦＮＩＫＤＨＹＭＨ（配列番号３４）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＳＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＦＮＧＹＱＡＬＤＱ（配列番号３６）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨ（配列番号３７）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３８）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＲＱＹＨＲＳＰＰＩＦＴ（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記抗ＣＤ２００抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、ＩｇＧ３抗体、ＩｇＧ４抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ１抗体、ＩｇＡ２抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、もしくはＩｇＥ抗体である、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記抗ＣＤ２００抗体が、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、もしくはヒト抗体である、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記抗ＣＤ２００抗体が、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、ミニボディー、ダイアボディー、もしくはトリアボディーからなる群より選択されるＣＤ２００結合抗体フラグメントである、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
  61. 液状腫瘍に罹患した患者の治療を選択するための方法であって、該方法は：
    患者を、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および
    該液状腫瘍の処置に使用するための抗ＣＤ２００抗体を該患者のために選択する工程、
    を包含する、方法。
  62. 液状腫瘍に罹患した患者の治療を処方するための方法であって、該方法は：
    患者を、ＣＤ５を発現する腫瘍細胞を含む液状腫瘍を有すると同定する工程；および
    該液状腫瘍の処置に使用するための抗ＣＤ２００抗体を該患者のために処方する工程
    を包含する、方法。
  63. 前記抗ＣＤ２００抗体が、二重特異的抗体である、請求項６１または６２に記載の方法。
  64. 前記二重特異的抗体が、第１の抗原結合部位および第２の抗原結合部位を含み、該第１の抗原結合部位は、ＣＤ２００に結合し、該第２の抗原結合部位は、ＣＤ２０に結合する、請求項６１または６２に記載の方法。
  65. ＣＤ２００タンパク質に結合する第１の抗原結合部位およびＣＤ２０タンパク質に結合する第２の抗原結合部位を含む、二重特異的抗体。
  66. 前記抗体が、一本鎖ダイアボディー、タンデム一本鎖Ｆｖフラグメント、タンデム一本鎖ダイアボディー、もしくは一本鎖ダイアボディーおよび免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの少なくとも一部を含む融合タンパク質である、請求項６５に記載の二重特異的抗体。
  67. 前記抗体が、二重可変性ドメイン免疫グロブリンである、請求項６５に記載の二重特異的抗体。
  68. 前記第１の抗原結合部位が、ヒトＣＤ２００タンパク質に結合する、請求項６５〜６７のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
  69. 前記ヒトＣＤ２００タンパク質が、配列番号１〜３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の二重特異的抗体。
  70. 前記第２の抗原結合部位が、ヒトＣＤ２０タンパク質に結合する、請求項６５〜６９のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
  71. 前記ヒトＣＤ２０タンパク質が、配列番号４０〜４２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載の二重特異的抗体。
  72. 前記第２の抗原結合部位が、配列番号４１に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも一部、および配列番号４２に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも一部を含むエピトープにおいて、ヒトＣＤ２０タンパク質に結合する、請求項７０または７１に記載の二重特異的抗体。
  73. 前記第１の抗原結合部位が、サマリズマブから得られる、請求項６５〜７２のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
  74. 前記第２の抗原結合部位が、リツキシマブ、オファツムマブ、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ、オクレリズマブ、もしくはＡＭＥ−１３３ｖから得られる、請求項６５〜７２のいずれか１項に記載の二重特異的抗体。
  75. 請求項６５〜７４のいずれか１項に記載の二重特異的抗体をコードする、核酸。
  76. 請求項７５に記載の核酸を含む、発現ベクター。
  77. 請求項７６に記載のベクターを含む、細胞。
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