KR20210038904A - 항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법 - Google Patents

항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법 Download PDF

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다츠야 야마구치
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다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
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Abstract

식 (1) 로 나타내는 약물 링커 (식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다) 와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서, (i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정, (ii) 약물 링커 중간체를 (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, (iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하여 (ii) 의 공정에서 잔존한 약물 링커 중간체와 반응시키는 공정, 이어서, (iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해 약물 링커 중간체 유래의 부생성물을 제거하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 제조 방법, 및 그 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.

Description

항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법
본 발명은, 응집체의 생성을 줄이면서 부생성물을 효과적으로 제거하기 위한 정제 공정을 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법, 및 그 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
암세포 표면에 발현하는 항원에 결합하고, 또한 세포에 내재화할 수 있는 항체에, 세포 독성을 갖는 약물을 결합시킨 항체-약물 콘쥬게이트 (Antibody-Drug Conjugate ; ADC) 는, 암세포에 선택적으로 약물을 송달할 수 있는 것에 의해, 암세포 내에 약물을 축적시켜, 암세포를 사멸시키는 것을 기대할 수 있다 (비특허문헌 1 ∼ 5).
특허문헌 1 ∼ 9 의 실시예에는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법이 기재되어 있다. 이들 제조 방법에서는, 소수성 크로마토그래피나 겔 여과 크로마토그래피 등의 크로마토그래피에 의한 정제 공정이 포함되어 있다.
항체-약물 콘쥬게이트의 하나의 예로서, 항체와 토포이소머라아제 I 저해제인 엑사테칸의 유도체를 구성 요소로 하는 항체-약물 콘쥬게이트가 알려져 있다 (특허문헌 10 ∼ 14, 비특허문헌 6 ∼ 9). 이들 항체-약물 콘쥬게이트는, 우수한 항종양 효과와 안전성을 갖는 점에서, 현재, 임상시험이 진행 중이다.
특허문헌 10 ∼ 14 에는, 상기 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하기 위한 방법으로서, 항체와 약물 링커 중간체를 콘쥬게이션하는 방법, 및, 얻어진 항체-약물 콘쥬게이트를 정제하는 방법이 기재되어 있다.
특허문헌 11 ∼ 13 의 실시예에는, 상기 항체-약물 콘쥬게이트를, 소르비톨 함유 아세트산 완충액을 사용한 한외 여과에 의해 정제한 취지가 기재되어 있다. 또, 특허문헌 14 에는, 상기 항체-약물 콘쥬게이트를, 아세트산 완충액, 히스티딘 완충액, 또는 인산 완충액을 사용한 한외 여과에 의해 정제할 수 있는 취지가 기재되어 있었다. 그러나, 공업적으로 보다 우수한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법의 개발이 요망되고 있다.
국제 공개 제2002/098883호 국제 공개 제2005/037992호 국제 공개 제2005/084390호 국제 공개 제2006/086733호 국제 공개 제2007/024536호 국제 공개 제2010/141566호 국제 공개 제2011/039724호 국제 공개 제2012/135517호 국제 공개 제2015/104359호 국제 공개 제2014/057687호 국제 공개 제2015/098099호 국제 공개 제2015/115091호 국제 공개 제2015/155998호 국제 공개 제2017/002776호
Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13. Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537. Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452. Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637. Howard A. et al., J Clin Oncol 29 : 398-405. Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research (2016) 22(20), 5097-5108. Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046. Doi T, et al., Lancet Oncol 2017 ; 18 : 1512-22. Takegawa N, et al., Int. J. Cancer : 141, 1682-1689 (2017).
본 발명의 제조 방법에 관련된 항체-약물 콘쥬게이트는, 식 (1)
[화학식 1]
Figure pct00001
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트이다.
이러한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 2]
Figure pct00002
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, 이어서,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정을 포함하는 제조 방법을 들 수 있다.
그러나, 그 항체-약물 콘쥬게이트, 특히, 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하기 위해서는, 대량의 식 (2) 로 나타내는 화합물이 필요로 되고, 이것에 수반하여, 식 (2) 로 나타내는 화합물 유래의 부생성물이 대량으로 생성될 수 있다. 또, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 있어서는, 응집체의 생성을 억제하는 것이 요구되고 있어, 항체 부분 및 약물 링커 부분 각각에 특유의 물성도 고려에 넣은, 반응·정제 조건의 검토가 필요로 된다.
본 발명의 하나의 과제는, 식 (2) 로 나타내는 화합물 유래의 부생성물을 효과적으로 제거하기 위한 정제 공정을 포함하고, 또한 응집체의 생성을 억제한, 공업적으로 우수한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법을 제공하는 것이다. 또한 그 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 공업적으로 우수한 제조 방법을 구축하는 것을 다른 하나의 과제로 한다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 예의 검토를 실시한 바, 항체-약물 콘쥬게이트의 정제 공정에 있어서, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과를 실시함으로써, 식 (2) 로 나타내는 화합물 유래의 부생성물을 효과적으로 제거할 수 있는 것을 알아냈다. 또한, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 공정 및 정제 공정에 있어서, 응집체의 생성을 억제할 수 있는 반응·정제 조건을 알아냈다. 이로써 그 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 공업적으로 우수한 제조 방법이 제공되었다.
즉, 본 발명은, 이하의 [1] ∼ [410] 을 제공한다.
[1]
식 (1)
[화학식 3]
Figure pct00003
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 4]
Figure pct00004
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정, 이어서,
(iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물, 및, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물을 제거하는 공정
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[2]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 또는 그 염인, [1] 에 기재된 제조 방법.
[3]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염인, [1] 에 기재된 제조 방법.
[4]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [1] 내지 [3] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[5]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [4] 에 기재된 제조 방법.
[6]
완충액이, 아세트산 완충액인, [4] 또는 [5] 에 기재된 제조 방법.
[7]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [1] 내지 [6] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[8]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [7] 에 기재된 제조 방법.
[9]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [4] 내지 [8] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[10]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [9] 에 기재된 제조 방법.
[11]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [9] 에 기재된 제조 방법.
[12]
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이, N-아세틸시스테인인, [1] 내지 [11] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[13]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [1] 내지 [12] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[14]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [1] 내지 [12] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[15]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [1] 내지 [12] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[16]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [1] 내지 [12] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[17]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [1] 내지 [12] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[18]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [1] 내지 [17] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[19]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [1] 내지 [18] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[20]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [1] 내지 [18] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[21]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [1] 내지 [18] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[22]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [1] 내지 [18] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[23]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염이, 염화나트륨인, [1] 내지 [22] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[24]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 제거하는 공정
을 포함하는, [1] 내지 [23] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[25]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [24] 에 기재된 제조 방법.
[26]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [24] 에 기재된 제조 방법.
[27]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [24] 에 기재된 제조 방법.
[28]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [24] 에 기재된 제조 방법.
[29]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [24] 에 기재된 제조 방법.
[30]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [24] 에 기재된 제조 방법.
[31]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [24] 내지 [30] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[32]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [1] 내지 [31] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[33]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [1] 내지 [31] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[34]
항체가, 항 HER2 항체인, [1] 내지 [33] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[35]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [34] 에 기재된 제조 방법.
[36]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [34] 에 기재된 제조 방법.
[37]
항체가, 항 HER3 항체인, [1] 내지 [33] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[38]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [37] 에 기재된 제조 방법.
[39]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [38] 에 기재된 제조 방법.
[40]
항체가, 항 GPR20 항체인, [1] 내지 [33] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[41]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [40] 에 기재된 제조 방법.
[42]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [41] 에 기재된 제조 방법.
[43]
항체가, 항 CDH6 항체인, [1] 내지 [33] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[44]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [43] 에 기재된 제조 방법.
[45]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [44] 에 기재된 제조 방법.
[46]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [1] 내지 [45] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[47]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [46] 에 기재된 제조 방법.
[48]
[1] 내지 [47] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[49]
완충액이 히스티딘 완충액인, [48] 에 기재된 제조 방법.
[50]
부형제가 수크로오스인, [48] 또는 [49] 에 기재된 제조 방법.
[51]
부형제가 트레할로오스인, [48] 또는 [49] 에 기재된 제조 방법.
[52]
[48] 내지 [51] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[53]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [52] 에 기재된 제조 방법.
[54]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [52] 에 기재된 제조 방법.
[55]
식 (1)
[화학식 5]
Figure pct00005
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염으로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 6]
Figure pct00006
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
(iii) N-아세틸시스테인을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정, 이어서,
(iv) 염화나트륨을 함유하는 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (3)
[화학식 7]
Figure pct00007
으로 나타내는 화합물, 및, 식 (4)
[화학식 8]
Figure pct00008
로 나타내는 화합물을 제거하는 공정
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[56]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [55] 에 기재된 제조 방법.
[57]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [56] 에 기재된 제조 방법.
[58]
완충액이, 아세트산 완충액인, [56] 또는 [57] 에 기재된 제조 방법.
[59]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [55] 내지 [58] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[60]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [59] 에 기재된 제조 방법.
[61]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [56] 내지 [60] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[62]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [61] 에 기재된 제조 방법.
[63]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [61] 에 기재된 제조 방법.
[64]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [55] 내지 [63] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[65]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [55] 내지 [63] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[66]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [55] 내지 [63] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[67]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [55] 내지 [63] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[68]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [55] 내지 [63] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[69]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [55] 내지 [68] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[70]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [55] 내지 [68] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[71]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [55] 내지 [68] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[72]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [55] 내지 [68] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[73]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 염화나트륨을 제거하는 공정
을 포함하는, [55] 내지 [72] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[74]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [73] 에 기재된 제조 방법.
[75]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [73] 에 기재된 제조 방법.
[76]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [73] 에 기재된 제조 방법.
[77]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [73] 에 기재된 제조 방법.
[78]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [73] 에 기재된 제조 방법.
[79]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [73] 에 기재된 제조 방법.
[80]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [55] 내지 [79] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[81]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [55] 내지 [79] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[82]
항체가, 항 HER2 항체인, [55] 내지 [81] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[83]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [82] 에 기재된 제조 방법.
[84]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [82] 에 기재된 제조 방법.
[85]
항체가, 항 HER3 항체인, [55] 내지 [81] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[86]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [85] 에 기재된 제조 방법.
[87]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [86] 에 기재된 제조 방법.
[88]
항체가, 항 GPR20 항체인, [55] 내지 [81] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[89]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [88] 에 기재된 제조 방법.
[90]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [89] 에 기재된 제조 방법.
[91]
항체가, 항 CDH6 항체인, [55] 내지 [81] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[92]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [91] 에 기재된 제조 방법.
[93]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [92] 에 기재된 제조 방법.
[94]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [55] 내지 [93] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[95]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [94] 에 기재된 제조 방법.
[96]
[55] 내지 [95] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[97]
완충액이 히스티딘 완충액인, [96] 에 기재된 제조 방법.
[98]
부형제가 수크로오스인, [96] 또는 [97] 에 기재된 제조 방법.
[99]
부형제가 트레할로오스인, [96] 또는 [97] 에 기재된 제조 방법.
[100]
[96] 내지 [99] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[101]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [100] 에 기재된 제조 방법.
[102]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [100] 에 기재된 제조 방법.
[103]
식 (1)
[화학식 9]
Figure pct00009
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 10]
Figure pct00010
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, 이어서,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하는 공정에 의해 얻어진, 그 항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물 (粗精製物) 을 포함하는 용액을,
(iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물, 및, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물을 제거하는 공정
에 의해 정제하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[104]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 또는 그 염인, [103] 에 기재된 제조 방법.
[105]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염인, [103] 에 기재된 제조 방법.
[106]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [103] 내지 [105] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[107]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [106] 에 기재된 제조 방법.
[108]
완충액이, 아세트산 완충액인, [106] 또는 [107] 에 기재된 제조 방법.
[109]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [103] 내지 [108] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[110]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [109] 에 기재된 제조 방법.
[111]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [106] 내지 [110] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[112]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [111] 에 기재된 제조 방법.
[113]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [111] 에 기재된 제조 방법.
[114]
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이, N-아세틸시스테인인, [103] 내지 [113] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[115]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [103] 내지 [114] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[116]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [103] 내지 [114] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[117]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [103] 내지 [114] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[118]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [103] 내지 [114] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[119]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [103] 내지 [114] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[120]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [103] 내지 [119] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[121]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [103] 내지 [120] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[122]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [103] 내지 [120] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[123]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [103] 내지 [120] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[124]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [103] 내지 [120] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[125]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염이, 염화나트륨인, [103] 내지 [124] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[126]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 제거하는 공정
을 포함하는, [103] 내지 [125] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[127]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [126] 에 기재된 제조 방법.
[128]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [126] 에 기재된 제조 방법.
[129]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [126] 에 기재된 제조 방법.
[130]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [126] 에 기재된 제조 방법.
[131]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [126] 에 기재된 제조 방법.
[132]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [126] 에 기재된 제조 방법.
[133]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [126] 내지 [132] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[134]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [103] 내지 [133] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[135]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [103] 내지 [133] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[136]
항체가, 항 HER2 항체인, [103] 내지 [135] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[137]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [136] 에 기재된 제조 방법.
[138]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [136] 에 기재된 제조 방법.
[139]
항체가, 항 HER3 항체인, [103] 내지 [135] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[140]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [139] 에 기재된 제조 방법.
[141]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [140] 에 기재된 제조 방법.
[142]
항체가, 항 GPR20 항체인, [103] 내지 [135] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[143]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [142] 에 기재된 제조 방법.
[144]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [143] 에 기재된 제조 방법.
[145]
항체가, 항 CDH6 항체인, [103] 내지 [135] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[146]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [145] 에 기재된 제조 방법.
[147]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [146] 에 기재된 제조 방법.
[148]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [103] 내지 [147] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[149]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [148] 에 기재된 제조 방법.
[150]
[103] 내지 [149] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[151]
완충액이 히스티딘 완충액인, [150] 에 기재된 제조 방법.
[152]
부형제가 수크로오스인, [150] 또는 [151] 에 기재된 제조 방법.
[153]
부형제가 트레할로오스인, [150] 또는 [151] 에 기재된 제조 방법.
[154]
[150] 내지 [153] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[155]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [154] 에 기재된 제조 방법.
[156]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [154] 에 기재된 제조 방법.
[157]
식 (1)
[화학식 11]
Figure pct00011
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염으로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 12]
Figure pct00012
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, 이어서,
(iii) N-아세틸시스테인을 첨가하는 공정에 의해 얻어진, 그 항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물을 포함하는 용액을,
(iv) 염화나트륨을 함유하는 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (3)
[화학식 13]
Figure pct00013
으로 나타내는 화합물, 및, 식 (4)
[화학식 14]
Figure pct00014
로 나타내는 화합물을 제거하는 공정
에 의해 정제하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[158]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [157] 에 기재된 제조 방법.
[159]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [158] 에 기재된 제조 방법.
[160]
완충액이, 아세트산 완충액인, [158] 또는 [159] 에 기재된 제조 방법.
[161]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [157] 내지 [160] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[162]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [161] 에 기재된 제조 방법.
[163]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [158] 내지 [162] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[164]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [163] 에 기재된 제조 방법.
[165]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [163] 에 기재된 제조 방법.
[166]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [157] 내지 [165] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[167]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [157] 내지 [165] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[168]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [157] 내지 [165] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[169]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [157] 내지 [165] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[170]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [157] 내지 [165] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[171]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [157] 내지 [170] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[172]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [157] 내지 [170] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[173]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [157] 내지 [170] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[174]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [157] 내지 [170] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[175]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 염화나트륨을 제거하는 공정
을 포함하는, [157] 내지 [174] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[176]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [175] 에 기재된 제조 방법.
[177]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [175] 에 기재된 제조 방법.
[178]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [175] 에 기재된 제조 방법.
[179]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [175] 에 기재된 제조 방법.
[180]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [175] 에 기재된 제조 방법.
[181]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [175] 에 기재된 제조 방법.
[182]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [157] 내지 [181] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[183]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [157] 내지 [181] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[184]
항체가, 항 HER2 항체인, [157] 내지 [183] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[185]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [184] 에 기재된 제조 방법.
[186]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [184] 에 기재된 제조 방법.
[187]
항체가, 항 HER3 항체인, [157] 내지 [183] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[188]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [187] 에 기재된 제조 방법.
[189]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [188] 에 기재된 제조 방법.
[190]
항체가, 항 GPR20 항체인, [157] 내지 [183] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[191]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [190] 에 기재된 제조 방법.
[192]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [191] 에 기재된 제조 방법.
[193]
항체가, 항 CDH6 항체인, [157] 내지 [183] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[194]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [193] 에 기재된 제조 방법.
[195]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [194] 에 기재된 제조 방법.
[196]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [157] 내지 [195] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[197]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [196] 에 기재된 제조 방법.
[198]
[157] 내지 [197] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[199]
완충액이 히스티딘 완충액인, [198] 에 기재된 제조 방법.
[200]
부형제가 수크로오스인, [198] 또는 [199] 에 기재된 제조 방법.
[201]
부형제가 트레할로오스인, [198] 또는 [199] 에 기재된 제조 방법.
[202]
[198] 내지 [201] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[203]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [202] 에 기재된 제조 방법.
[204]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [202] 에 기재된 제조 방법.
[205]
식 (6)
[화학식 15]
Figure pct00015
(식 중, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있고, n 은 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다)
으로 나타내는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 16]
Figure pct00016
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정, 이어서,
(iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물, 및, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물을 제거하는 공정
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[206]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 또는 그 염인, [205] 에 기재된 제조 방법.
[207]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염인, [205] 에 기재된 제조 방법.
[208]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [205] 내지 [207] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[209]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [208] 에 기재된 제조 방법.
[210]
완충액이, 아세트산 완충액인, [208] 또는 [209] 에 기재된 제조 방법.
[211]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [205] 내지 [210] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[212]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [211] 에 기재된 제조 방법.
[213]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [208] 내지 [212] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[214]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [213] 에 기재된 제조 방법.
[215]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [213] 에 기재된 제조 방법.
[216]
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이, N-아세틸시스테인인, [205] 내지 [215] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[217]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [205] 내지 [216] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[218]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [205] 내지 [216] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[219]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [205] 내지 [216] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[220]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [205] 내지 [216] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[221]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [205] 내지 [216] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[222]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [205] 내지 [221] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[223]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [205] 내지 [222] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[224]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [205] 내지 [222] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[225]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [205] 내지 [222] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[226]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [205] 내지 [222] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[227]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염이, 염화나트륨인, [205] 내지 [226] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[228]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 제거하는 공정
을 포함하는, [205] 내지 [227] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[229]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [228] 에 기재된 제조 방법.
[230]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [228] 에 기재된 제조 방법.
[231]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [228] 에 기재된 제조 방법.
[232]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [228] 에 기재된 제조 방법.
[233]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [228] 에 기재된 제조 방법.
[234]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [228] 에 기재된 제조 방법.
[235]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [228] 내지 [234] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[236]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [205] 내지 [235] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[237]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [205] 내지 [235] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[238]
항체가, 항 HER2 항체인, [205] 내지 [237] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[239]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [238] 에 기재된 제조 방법.
[240]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [238] 에 기재된 제조 방법.
[241]
항체가, 항 HER3 항체인, [205] 내지 [237] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[242]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [241] 에 기재된 제조 방법.
[243]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [242] 에 기재된 제조 방법.
[244]
항체가, 항 GPR20 항체인, [205] 내지 [237] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[245]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [244] 에 기재된 제조 방법.
[246]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [245] 에 기재된 제조 방법.
[247]
항체가, 항 CDH6 항체인, [205] 내지 [237] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[248]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [247] 에 기재된 제조 방법.
[249]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [248] 에 기재된 제조 방법.
[250]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [205] 내지 [249] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[251]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [250] 에 기재된 제조 방법.
[252]
[205] 내지 [251] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[253]
완충액이 히스티딘 완충액인, [252] 에 기재된 제조 방법.
[254]
부형제가 수크로오스인, [251] 또는 [252] 에 기재된 제조 방법.
[255]
부형제가 트레할로오스인, [251] 또는 [252] 에 기재된 제조 방법.
[256]
[252] 내지 [255] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[257]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [256] 에 기재된 제조 방법.
[258]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [256] 에 기재된 제조 방법.
[259]
식 (6)
[화학식 17]
Figure pct00017
(식 중, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있고, n 은 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다)
으로 나타내는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염으로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 18]
Figure pct00018
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
(iii) N-아세틸시스테인을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정, 이어서,
(iv) 염화나트륨을 함유하는 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (3)
[화학식 19]
Figure pct00019
으로 나타내는 화합물, 및, 식 (4)
[화학식 20]
Figure pct00020
로 나타내는 화합물을 제거하는 공정
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[260]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [259] 에 기재된 제조 방법.
[261]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [260] 에 기재된 제조 방법.
[262]
완충액이, 아세트산 완충액인, [260] 또는 [261] 에 기재된 제조 방법.
[263]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [259] 내지 [262] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[264]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [263] 에 기재된 제조 방법.
[265]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [260] 내지 [264] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[266]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [265] 에 기재된 제조 방법.
[267]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [265] 에 기재된 제조 방법.
[268]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [259] 내지 [267] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[269]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [259] 내지 [267] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[270]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [259] 내지 [267] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[271]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [259] 내지 [267] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[272]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [259] 내지 [267] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[273]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [259] 내지 [272] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[274]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [259] 내지 [272] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[275]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [259] 내지 [272] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[276]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [259] 내지 [272] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[277]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 염화나트륨을 제거하는 공정
을 포함하는, [259] 내지 [276] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[278]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [277] 에 기재된 제조 방법.
[279]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [277] 에 기재된 제조 방법.
[280]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [277] 에 기재된 제조 방법.
[281]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [277] 에 기재된 제조 방법.
[282]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [277] 에 기재된 제조 방법.
[283]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [277] 에 기재된 제조 방법.
[284]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [259] 내지 [283] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[285]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [259] 내지 [283] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[286]
항체가, 항 HER2 항체인, [259] 내지 [285] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[287]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [286] 에 기재된 제조 방법.
[288]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [286] 에 기재된 제조 방법.
[289]
항체가, 항 HER3 항체인, [259] 내지 [285] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[290]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [289] 에 기재된 제조 방법.
[291]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [290] 에 기재된 제조 방법.
[292]
항체가, 항 GPR20 항체인, [259] 내지 [285] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[293]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [292] 에 기재된 제조 방법.
[294]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [293] 에 기재된 제조 방법.
[295]
항체가, 항 CDH6 항체인, [259] 내지 [285] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[296]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [295] 에 기재된 제조 방법.
[297]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [296] 에 기재된 제조 방법.
[298]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [259] 내지 [297] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[299]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [298] 에 기재된 제조 방법.
[300]
[259] 내지 [299] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[301]
완충액이 히스티딘 완충액인, [300] 에 기재된 제조 방법.
[302]
부형제가 수크로오스인, [300] 또는 [301] 에 기재된 제조 방법.
[303]
부형제가 트레할로오스인, [300] 또는 [301] 에 기재된 제조 방법.
[304]
[300] 내지 [303] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[305]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [304] 에 기재된 제조 방법.
[306]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [304] 에 기재된 제조 방법.
[307]
식 (6)
[화학식 21]
Figure pct00021
(식 중, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있고, n 은 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다)
으로 나타내는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 22]
Figure pct00022
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, 이어서,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하는 공정에 의해 얻어진, 그 항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물을 포함하는 용액을,
(iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물, 및, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물을 제거하는 공정
에 의해 정제하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[308]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 또는 그 염인, [307] 에 기재된 제조 방법.
[309]
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염인, [307] 에 기재된 제조 방법.
[310]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [307] 내지 [309] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[311]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [310] 에 기재된 제조 방법.
[312]
완충액이, 아세트산 완충액인, [310] 또는 [311] 에 기재된 제조 방법.
[313]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [307] 내지 [312] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[314]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [313] 에 기재된 제조 방법.
[315]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [310] 내지 [314] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[316]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [315] 에 기재된 제조 방법.
[317]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [315] 에 기재된 제조 방법.
[318]
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이, N-아세틸시스테인인, [307] 내지 [317] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[319]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [307] 내지 [318] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[320]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [307] 내지 [318] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[321]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [307] 내지 [318] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[322]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [307] 내지 [318] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[323]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [307] 내지 [318] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[324]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [307] 내지 [323] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[325]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [307] 내지 [324] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[326]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [307] 내지 [324] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[327]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [307] 내지 [324] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[328]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [307] 내지 [324] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[329]
(iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염이, 염화나트륨인, [307] 내지 [328] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[330]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 제거하는 공정
을 포함하는, [307] 내지 [329] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[331]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [330] 에 기재된 제조 방법.
[332]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [330] 에 기재된 제조 방법.
[333]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [330] 에 기재된 제조 방법.
[334]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [330] 에 기재된 제조 방법.
[335]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [330] 에 기재된 제조 방법.
[336]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [330] 에 기재된 제조 방법.
[337]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, [330] 내지 [336] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[338]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [307] 내지 [337] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[339]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [307] 내지 [337] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[340]
항체가, 항 HER2 항체인, [307] 내지 [339] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[341]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [340] 에 기재된 제조 방법.
[342]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [340] 에 기재된 제조 방법.
[343]
항체가, 항 HER3 항체인, [307] 내지 [339] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[344]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [343] 에 기재된 제조 방법.
[345]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [344] 에 기재된 제조 방법.
[346]
항체가, 항 GPR20 항체인, [307] 내지 [339] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[347]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [346] 에 기재된 제조 방법.
[348]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [347] 에 기재된 제조 방법.
[349]
항체가, 항 CDH6 항체인, [307] 내지 [339] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[350]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [349] 에 기재된 제조 방법.
[351]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [350] 에 기재된 제조 방법.
[352]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [307] 내지 [351] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[353]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [352] 에 기재된 제조 방법.
[354]
[307] 내지 [353] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[355]
완충액이 히스티딘 완충액인, [354] 에 기재된 제조 방법.
[356]
부형제가 수크로오스인, [354] 또는 [355] 에 기재된 제조 방법.
[357]
부형제가 트레할로오스인, [354] 또는 [355] 에 기재된 제조 방법.
[358]
[354] 내지 [357] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[359]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [358] 에 기재된 제조 방법.
[360]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [358] 에 기재된 제조 방법.
[361]
식 (6)
[화학식 23]
Figure pct00023
(식 중, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있고, n 은 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다)
으로 나타내는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
(i) 항체를, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염으로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 24]
Figure pct00024
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, 이어서,
(iii) N-아세틸시스테인을 첨가하는 공정에 의해 얻어진, 그 항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물을 포함하는 용액을,
(iv) 염화나트륨을 함유하는 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (3)
[화학식 25]
Figure pct00025
으로 나타내는 화합물, 및, 식 (4)
[화학식 26]
Figure pct00026
로 나타내는 화합물을 제거하는 공정
에 의해 정제하는 것을 특징으로 하는, 제조 방법.
[362]
(i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, [361] 에 기재된 제조 방법.
[363]
완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, [362] 에 기재된 제조 방법.
[364]
완충액이, 아세트산 완충액인, [362] 또는 [363] 에 기재된 제조 방법.
[365]
(i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, [361] 내지 [364] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[366]
킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, [365] 에 기재된 제조 방법.
[367]
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, [362] 내지 [366] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[368]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [367] 에 기재된 제조 방법.
[369]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [367] 에 기재된 제조 방법.
[370]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [361] 내지 [369] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[371]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [361] 내지 [369] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[372]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [361] 내지 [369] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[373]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [361] 내지 [369] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[374]
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [361] 내지 [369] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[375]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, [361] 내지 [374] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[376]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, [361] 내지 [374] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[377]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.4 ∼ 0.6 중량％ 인, [361] 내지 [374] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[378]
(iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.5 중량％ 인, [361] 내지 [374] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[379]
(iv) 의 공정에 이어서,
(v) 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 염화나트륨을 제거하는 공정
을 포함하는, [361] 내지 [378] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[380]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, [379] 에 기재된 제조 방법.
[381]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, [379] 에 기재된 제조 방법.
[382]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.7 ∼ 5.3 의 범위인, [379] 에 기재된 제조 방법.
[383]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.8 ∼ 5.2 의 범위인, [379] 에 기재된 제조 방법.
[384]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4.9 ∼ 5.1 의 범위인, [379] 에 기재된 제조 방법.
[385]
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 5.0 인, [379] 에 기재된 제조 방법.
[386]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [361] 내지 [385] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[387]
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [361] 내지 [385] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[388]
항체가, 항 HER2 항체인, [361] 내지 [387] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[389]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [388] 에 기재된 제조 방법.
[390]
항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [388] 에 기재된 제조 방법.
[391]
항체가, 항 HER3 항체인, [361] 내지 [387] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[392]
항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [391] 에 기재된 제조 방법.
[393]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [392] 에 기재된 제조 방법.
[394]
항체가, 항 GPR20 항체인, [361] 내지 [387] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[395]
항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [394] 에 기재된 제조 방법.
[396]
항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [395] 에 기재된 제조 방법.
[397]
항체가, 항 CDH6 항체인, [361] 내지 [387] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[398]
항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, [397] 에 기재된 제조 방법.
[399]
항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [398] 에 기재된 제조 방법.
[400]
크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, [361] 내지 [399] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법.
[401]
크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, [400] 에 기재된 제조 방법.
[402]
[361] 내지 [401] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[403]
완충액이 히스티딘 완충액인, [402] 에 기재된 제조 방법.
[404]
부형제가 수크로오스인, [401] 또는 [402] 에 기재된 제조 방법.
[405]
부형제가 트레할로오스인, [401] 또는 [402] 에 기재된 제조 방법.
[406]
[402] 내지 [405] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
(x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
[407]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, [406] 에 기재된 제조 방법.
[408]
계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, [406] 에 기재된 제조 방법.
[409]
[1] 내지 [47], [55] 내지 [95], [103] 내지 [149], [157] 내지 [197], [205] 내지 [251], [259] 내지 [299], [307] 내지 [353], 및 [361] 내지 [401] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해 제조된 항체-약물 콘쥬게이트.
[410]
[48] 내지 [54], [96] 내지 [102], [150] 내지 [156], [198] 내지 [204], [252] 내지 [258], [300] 내지 [306], [354] 내지 [360], 및 [402] 내지 [408] 중 어느 1 항에 기재된 제조 방법에 의해 제조된 의약 조성물.
본 발명에 의해, 응집체의 생성을 억제하면서 식 (2) 로 나타내는 화합물 유래의 부생성물을 효과적으로 제거하기 위한 정제 공정을 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법을 제공할 수 있다. 또한 그 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 공업적으로 우수한 제조 방법을 제공할 수 있다.
도 1 은 히스티딘 완충액 (pH 5.0), 또는 0.5 ％ 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 사용하여 한외 여과를 실시한 경우의, 화합물 (3) 및 화합물 (4) 의 함유율을 나타낸 도면이다.
도 2 는 히스티딘 완충액 (pH 5.0, 혹은 pH 5.8), 또는 0.4 ％ 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.0, 혹은 pH 5.8) 을 사용하여 한외 여과를 실시한 경우의, 응집체의 함유율을 나타낸 도면이다.
도 3 은 항 HER2 항체 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 1) 을 나타낸 도면이다.
도 4 는 항 HER2 항체 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 2) 을 나타낸 도면이다.
도 5 는 항 HER3 항체 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 3) 을 나타낸 도면이다.
도 6 은 항 HER3 항체 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 4) 을 나타낸 도면이다.
도 7 은 항 GPR20 항체 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 5) 을 나타낸 도면이다.
도 8 은 항 GPR20 항체 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 6) 을 나타낸 도면이다.
도 9 는 항 CDH6 항체 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 7) 을 나타낸 도면이다.
도 10 은 항 CDH6 항체 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 8) 을 나타낸 도면이다.
이하, 본 발명을 실시하기 위한 바람직한 형태에 대해 도면을 참조하면서 설명한다. 또한, 이하에 설명하는 실시형태는, 본 발명의 대표적인 실시형태의 일례를 나타낸 것이며, 이것에 의해 본 발명의 범위가 좁게 해석되는 일은 없다.
1. 항체-약물 콘쥬게이트
본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트는,
식 (1)
[화학식 27]
Figure pct00027
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트이다.
본 발명에 있어서는, 항체-약물 콘쥬게이트 중, 링커 및 약물로 이루어지는 부분 구조를 「약물 링커」로 칭한다. 이 약물 링커는 항체의 사슬 간의 디술파이드 결합 부위 (2 지점의 중사슬-중사슬 간, 및 2 지점의 중사슬-경사슬 간) 에 있어서 생성된 티올기 (바꿔 말하면, 시스테인 잔기의 황 원자) 에 결합하고 있다.
본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트의 약물 링커는, 토포이소머라아제 I 저해제인 엑사테칸을 구성 요소로 하고 있다. 엑사테칸은,
식 (5)
[화학식 28]
Figure pct00028
로 나타내는, 항종양 효과를 갖는 캄프토테신 유도체이다.
본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트는,
식 (6)
[화학식 29]
Figure pct00029
으로 나타낼 수도 있다.
여기서, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있다. 또, n 은 이른바 평균 약물 결합수 (DAR ; Drug-to-Antibody Ratio) 와 동일한 의미이며, 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다.
본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트는, 암세포 내로 이행한 후에,
식 (7)
[화학식 30]
Figure pct00030
로 나타내는 화합물을 유리한다.
식 (7) 로 나타내는 화합물은, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트의 항종양 활성의 본체라고 생각되고, 토포이소머라아제 I 저해 작용을 갖는 것이 확인되어 있다 (Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research, 2016, Oct 15 ; 22(20) : 5097-5108, Epub 2016 Mar 29).
식 (7) 로 나타내는 화합물은, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트의 링커 부분이 절단됨으로써 생성된다고 생각되는, 식 (8)
[화학식 31]
Figure pct00031
로 나타내는 화합물의 아미날 구조가 분해됨으로써 생성된다고 생각된다.
본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트는, 바이스탠더 효과를 갖는 것도 알려져 있다 (Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046). 이 바이스탠더 효과는, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트가, 표적 발현 암세포에 내재화한 후, 식 (7) 로 나타내는 화합물이 유리되고, 표적을 발현하고 있지 않은 근방의 암세포에 대해서도 항종양 효과를 미치는 것에 의해 발휘된다.
2. 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 항체
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 항체는, 어느 종에서 유래해도 되지만, 바람직하게는, 인간, 래트, 마우스, 및 토끼에서 유래하는 항체이다. 항체가 인간 이외의 종에서 유래하는 경우에는, 주지의 기술을 이용하여, 키메라화 또는 인간화하는 것이 바람직하다. 본 발명의 항체는, 폴리클로날 항체여도 되고, 모노클로날 항체여도 되지만, 모노클로날 항체가 바람직하다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 항체는, 바람직하게 암세포를 표적으로 할 수 있는 성질을 갖는 것이며, 암세포를 인식할 수 있는 특성, 암세포에 결합할 수 있는 특성, 암세포 내에 도입되어 내재화하는 특성, 및/또는 암세포에 대한 살세포 활성 등을 구비하고 있는 것이 바람직하다.
항체의 암세포에의 결합성은, 플로 사이토메트리를 사용하여 확인할 수 있다. 암세포 내에의 항체의 도입은, (1) 치료 항체에 결합하는 2 차 항체 (형광 표지) 를 사용하여 세포 내에 도입된 항체를 형광 현미경으로 가시화하는 어세이 (Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761), (2) 치료 항체에 결합하는 2 차 항체 (형광 표지) 를 사용하여 세포 내에 도입된 형광량을 측정하는 어세이 (Molecular Biology of the Cell Vol.15, 5268-5282, December 2004), 또는 (3) 치료 항체에 결합하는 이뮤노톡신을 사용하여, 세포 내에 도입되면 독소가 방출되어 세포 증식이 억제된다는 Mab-ZAP 어세이 (Bio Techniques 28 : 162-165, January 2000) 를 사용하여 확인할 수 있다. 이뮤노톡신으로는, 디프테리아 독소의 촉매 영역과 프로테인 G 의 리콤비넌트 복합 단백질도 사용 가능하다.
항체의 항종양 활성은, in vitro 에서는, 세포의 증식의 억제 활성을 측정함으로써 확인할 수 있다. 예를 들어, 항체의 표적 단백질을 과잉 발현하고 있는 암세포주를 배양하고, 배양계에 다양한 농도로 항체를 첨가하여, 포커스 형성, 콜로니 형성 및 스페로이드 증식에 대한 억제 활성을 측정할 수 있다. in vivo 에서는, 예를 들어, 표적 단백질을 고발현하고 있는 암세포주를 이식한 누드 마우스에 항체를 투여하고, 암세포의 변화를 측정함으로써, 항종양 활성을 확인할 수 있다.
항체 자체가 항종양 효과를 갖는 것은, 바람직하지만, 항체-약물 콘쥬게이트는 항종양 효과를 발휘하는 화합물을 결합시키고 있으므로, 항체 자체의 항종양 효과는 필수는 아니다. 항종양성 화합물의 세포 장애성을 암세포에 있어서 특이적·선택적으로 발휘시킬 목적에서는, 항체가 내재화하여 암세포 내로 이행하는 성질이 있는 것이 중요하고, 바람직하다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 항체는, 공지된 수단에 의해 취득할 수 있다. 예를 들어, 이 분야에서 통상 실시되는 방법을 이용하여, 항원이 되는 폴리펩티드를 동물에 면역하고, 생체 내에서 생산되는 항체를 채취, 정제함으로써 얻을 수 있다. 항원의 유래는 인간으로 한정되지 않고, 마우스, 래트 등 인간 이외의 동물에서 유래하는 항원을 동물에 면역할 수도 있다. 이 경우에는, 취득된 이종 (異種) 항원에 결합하는 항체와 인간 항원의 교차성을 시험함으로써, 인간의 질환에 적용 가능한 항체를 선별할 수 있다.
또, 공지된 방법 (예를 들어, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497 ; Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N.Y. (1980)) 에 따라, 항원에 대한 항체를 생산하는 항체 생산 세포와 미엘로마 세포를 융합시키는 것에 의해 하이브리도마를 수립하여, 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다.
또한, 항원은 항원 단백질을 코드하는 유전자를 유전자 조작에 의해 숙주 세포에 생산시키는 것에 의해 얻을 수 있다. 구체적으로는, 항원 유전자를 발현 가능한 벡터를 제조하고, 이것을 숙주 세포에 도입하여 그 유전자를 발현시키고, 발현한 항원을 정제하면 된다. 상기 유전자 조작에 의한 항원 발현 세포, 혹은 항원을 발현하고 있는 세포주를 동물에 면역하는 방법을 이용하는 것에 의해서도 항체를 취득할 수 있다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 항체는, 인간에 대한 이종 항원성을 저하시키는 것 등을 목적으로 하여 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체, 예를 들어, 키메라 (Chimeric) 항체, 인간화 (Humanized) 항체인 것이 바람직하고, 또는 인간 유래의 항체의 유전자 서열만을 갖는 항체, 즉 인간 항체인 것이 바람직하다. 이들 항체는, 이미 알려진 방법을 이용하여 제조할 수 있다.
키메라 항체로는, 항체의 가변 영역과 정상 영역이 서로 이종인 항체, 예를 들어 마우스 또는 래트 유래 항체의 가변 영역을 인간 유래의 정상 영역에 접합한 키메라 항체를 들 수 있다 (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855, (1984)).
인간화 항체로는, 이종 항체의 상보성 결정 영역 (CDR ; complementarity determining region) 만을 인간 유래의 항체에 삽입한 항체 (Nature (1986) 321, p.522-525), CDR 이식법에 의해, 이종 항체의 CDR 의 서열에 추가하여, 이종 항체의 일부의 프레임 워크의 아미노산 잔기도 인간 항체에 이식한 항체 (국제 공개 제90/07861호), 유전자 변환 돌연변이 유발 (gene conversion mutagenesis) 스트레티지를 사용하여 인간화한 항체 (미국 특허 제5821337호) 를 들 수 있다.
인간 항체로는, 인간 항체의 중사슬과 경사슬의 유전자를 포함하는 인간 염색체 단편을 갖는 인간 항체 생산 마우스를 사용하여 제조한 항체 (Tomizuka, K. et al., Nature Genetics (1997) 16, p.133-143 ; Kuroiwa, Y. et. al., Nucl. Acids Res. (1998) 26, p.3447-3448 ; Yoshida, H. et. al., Animal Cell Technology : Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999 ; Tomizuka, K. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97, p.722-727 등을 참조.) 를 들 수 있다. 혹은, 인간 항체 라이브러리에서 선별한 파지 디스플레이에 의해 취득한 항체 (Wormstone, I. M. et. al, Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (7), p.2301-2308 ; Carmen, S. et. al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1(2), p.189-203 ; Siriwardena, D. et. al., Ophthalmology (2002) 109(3), p.427-431 등 참조.) 도 들 수 있다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 항체에는, 항체의 수식체도 포함된다. 당해 수식체란, 본 발명에 관련된 항체에 화학적 또는 생물학적인 수식이 실시되어 이루어지는 것을 의미한다. 화학적인 수식체에는, 아미노산 골격에의 화학 부분의 결합, N-결합 또는 O-결합 탄수화물 사슬에의 화학 부분의 결합을 갖는 화학 수식체 등이 포함된다. 생물학적인 수식체에는, 번역 후 수식 (예를 들어, N-결합 또는 O-결합형 당사슬의 부가, N 말단 또는 C 말단의 프로세싱, 탈아미드화, 아스파르트산의 이성화, 메티오닌의 산화 등) 된 것, 원핵 생물 숙주 세포를 사용하여 발현시키는 것에 의해 N 말단에 메티오닌 잔기가 부가된 것 등이 포함된다. 또, 본 발명에 관련된 항체 또는 항원의 검출 또는 단리를 가능하게 하기 위해서 표지된 것, 예를 들어, 효소 표지체, 형광 표지체, 어피니티 표지체도 이러한 수식체의 의미에 포함된다. 이와 같은 본 발명에 관련된 항체의 수식체는, 항체의 안정성 및 혈중 체류성의 개선, 항원성의 저감, 항체 또는 항원의 검출 또는 단리 등에 유용하다.
또, 본 발명에 관련된 항체에 결합하고 있는 당사슬 수식을 조절하는 것 (글리코실화, 탈푸코오스화 등) 에 의해, 항체 의존성 세포 상해 활성을 증강시킬 수 있다. 항체의 당사슬 수식의 조절 기술로는, 국제 공개 제99/54342호, 국제 공개 제00/61739호, 국제 공개 제02/31140호 등이 알려져 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 관련된 항체에는 당해 당사슬 수식이 조절된 항체도 포함된다.
또한, 포유류 배양 세포에서 생산되는 항체에서는, 그 중사슬의 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실하는 것이 알려져 있고 (Journal of Chromatography A, 705 : 129-134 (1995)), 또, 동일하게 중사슬 카르복실 말단의 글리신, 리신의 2 아미노산 잔기가 결실하고, 새롭게 카르복실 말단에 위치하는 프롤린 잔기가 아미드화되는 것이 알려져 있다 (Analytical Biochemistry, 360 : 75-83 (2007)). 그러나, 이들 중사슬 서열의 결실 및 수식은, 항체의 항원 결합능 및 이펙터 기능 (보체의 활성화나 항체 의존성 세포 장애 작용 등) 에는 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명에 관련된 항체에는, 당해 수식을 받은 항체 및 당해 항체의 기능성 단편도 포함되고, 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 의 아미노산이 결실한 결실체, 및 아미드화된 당해 결실체 (예를 들어, 카르복실 말단 부위의 프롤린 잔기가 아미드화된 중사슬) 등도 포함된다. 단, 항원 결합능 및 이펙터 기능이 유지되고 있는 한, 본 발명에 관련된 항체의 중사슬의 카르복실 말단의 결실체는 상기 종류로 한정되지 않는다. 본 발명에 관련된 항체를 구성하는 2 개의 중사슬은, 완전장 및 상기 결실체로 이루어지는 군에서 선택되는 중사슬 중 어느 1 종이어도 되고, 어느 2 종을 조합한 것이어도 된다. 각 결실체의 양비 (量比) 는 본 발명에 관련된 항체를 생산하는 포유류 배양 세포의 종류 및 배양 조건에 영향을 받을 수 있지만, 본 발명에 관련된 항체는, 바람직하게는 2 개의 중사슬의 쌍방에서 카르복실 말단의 하나의 아미노산 잔기가 결실되어 있는 것을 들 수 있다.
본 발명에 관련된 항체의 아이소 타입으로는, 예를 들어 IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) 등을 들 수 있지만, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG2 를 들 수 있다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용할 수 있는 항체는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 TROP2 항체, 항 B7-H3 항체, 항 CD3 항체, 항 CD30 항체, 항 CD33 항체, 항 CD37 항체, 항 CD56 항체, 항 CD98 항체, 항 DR5 항체, 항 EGFR 항체, 항 EPHA2 항체, 항 FGFR2 항체, 항 FGFR4 항체, 항 FOLR1 항체, 항 VEGF 항체, 항 CD20 항체, 항 CD22 항체, 항 CD70 항체, 항 PSMA 항체, 항 CEA 항체, 항 Mesothelin 항체, 항 A33 항체, 항 CanAg 항체, 항 Cripto 항체, 항 G250 항체, 항 MUC1 항체, 항 GPNMB 항체, 항 Integrin 항체, 항 Tenascin-C 항체, 항 SLC44A4 항체, 항 GPR20 항체, 및 항 CDH6 항체를 들 수 있고, 바람직하게는, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 TROP2 항체, 항 B7-H3 항체, 항 GPR20 항체, 및 항 CDH6 항체를 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 GPR20 항체, 및 항 CDH6 항체를 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항 HER2 항체」란, HER2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 2 ; ErbB-2) 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, HER2 와 결합함으로써 HER2 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
항 HER2 항체로는, 예를 들어, 트라스투주맙 (Trastuzumab) (미국 특허 제 5821337호), 및, 퍼투주맙 (Pertuzumab) (국제 공개 제01/00245호) 을 들 수 있고, 바람직하게는 트라스투주맙을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항 HER3 항체」란, HER3 (Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 3 ; ErbB-3) 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, HER3 과 결합함으로써 HER3 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
항 HER3 항체로는, 예를 들어, 파트리투맙 (Patritumab ; U3-1287), U1-59 (국제 공개 제2007/077028호), MM-121 (Seribantumab), 국제 공개 2008/100624호에 기재된 항 ERBB3 항체, RG-7116 (Lumretuzumab), 및 LJM-716 (Elgemtumab) 을 들 수 있고, 바람직하게는, 파트리투맙, 및 U1-59 를 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항 TROP2 항체」란, TROP2 (TACSTD2 : Tumor-associated calcium signal transducer 2 ; EGP-1) 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, TROP2 와 결합함으로써 TROP2 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
항 TROP2 항체로는, 예를 들어, hTINA1-H1L1 (국제 공개 제2015/098099호) 을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항 B7-H3 항체」란, B7-H3 (B cell antigen ＃7 homolog 3 ; PD-L3 ; CD276) 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, B7-H3 과 결합함으로써 B7-H3 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
항 B7-H3 항체로는, 예를 들어, M30-H1-L4 (국제 공개 제2014/057687호) 를 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항 GPR20 항체」란, GPR20 (G Protein-coupled receptor 20) 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, GPR20 과 결합함으로써 GPR20 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
항 GPR20 항체로는, 예를 들어, h046-H4e/L7 (국제 공개 제2018/135501호) 을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항 CDH6 항체」란, CDH6 (Cadherin-6) 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, CDH6 과 결합함으로써 CDH6 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
항 CDH6 항체로는, 예를 들어, H01L02 (국제 공개 제2018/212136호) 를 들 수 있다.
3. 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 약물 링커 중간체
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용되는 약물 링커 중간체는,
식 (2) 로 나타내는 화합물이다.
[화학식 32]
Figure pct00032
식 (2) 로 나타내는 화합물은, 국제 공개 제2014/057687호, 국제 공개 제2015/098099호, 국제 공개 제2015/115091호, 국제 공개 제2015/155998호, 및 국제 공개 제2019/044947호 등의 기재를 참고로 제조할 수 있다.
4. 항체와 약물 링커 중간체의 콘쥬게이션
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 있어서의, 항체와 약물 링커 중간체의 콘쥬게이션은,
(i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2) 로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정
을 포함한다.
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제는, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 혹은 그 염, 디티오트레이톨, 또는 2-메르캅토에탄올을 사용할 수 있고, 바람직하게는, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 혹은 그 염을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염을 사용할 수 있다.
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제의 항체 1 분자당의 당량 (이하, 본 발명에 있어서 「당량」이란, 몰당량을 의미한다.) 은, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수, 및 항체의 종류에 따라, 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 환원제는, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 4.1 ∼ 5.1 당량, 보다 바람직하게는, 4.4 ∼ 4.8 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 4.6 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 4.6 당량」이란, 바람직하게는, 4.5 ∼ 4.7 당량이며, 보다 바람직하게는 4.6 당량이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 환원제는, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 5.5 ∼ 6.5 당량, 보다 바람직하게는, 5.8 ∼ 6.2 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 6 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 6 당량」이란, 바람직하게는, 5.9 ∼ 6.1 당량이며, 보다 바람직하게는 6.0 당량이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 GPR20 항체 (바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 환원제는, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 4.3 ∼ 5.3 당량, 보다 바람직하게는, 4.6 ∼ 5 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 4.8 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 4.8 당량」이란, 바람직하게는, 4.7 ∼ 4.9 당량이며, 보다 바람직하게는 4.8 당량이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 CDH6 항체 (바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 환원제는, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 4.3 ∼ 5.3 당량, 보다 바람직하게는, 4.6 ∼ 5 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 4.8 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 4.8 당량」이란, 바람직하게는, 4.7 ∼ 4.9 당량이며, 보다 바람직하게는 4.8 당량이다.
(i) 의 공정은, 바람직하게는, 완충액 중에서 실시할 수 있다.
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 는, 바람직하게는 6 ∼ 8 이며, 보다 바람직하게는 6.5 ∼ 7.5 이며, 더욱 보다 바람직하게는 6.9 ∼ 7.4 이며, 더욱 보다 바람직하게는, 7.0 ∼ 7.3 이다.
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 항체의 사슬 간 디술파이드의 환원 시에 사용될 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 아세트산 완충액, 히스티딘 완충액, 인산 완충액, Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid) (이하, 「PIPES」라고도 한다) 완충액, 4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine ethanesulfonic acid (이하, 「HEPES」라고도 한다) 완충액을 사용할 수 있다.
예를 들어, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 바람직하게는, pH 6 ∼ 8 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6.8 ∼ 7.8 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 가 약 7.3 으로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있다. 여기서, 「약 7.3」이란, 바람직하게는, 7.1 ∼ 7.5 의 범위이며, 보다 바람직하게는, 7.2 ∼ 7.4 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는, 7.3 이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 바람직하게는, pH 6 ∼ 8 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6.5 ∼ 7.5 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 가 약 7 로 조정된 아세트산 완충액을 사용할 수 있다. 여기서, 「약 7」이란, 바람직하게는, 6.8 ∼ 7.2 의 범위이며, 보다 바람직하게는, 6.9 ∼ 7.1 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는 7.0 이다.
이러한 완충액을 사용함으로써, 응집체의 생성을 최소화할 수 있다. 또한, (i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 항체 제조 유래의 완충액을 함유하고 있어도 된다.
(i) 의 공정은, 바람직하게는, 킬레이트제의 존재하에서 실시된다. 킬레이트제는, 항체의 사슬 간 디술파이드의 환원 시에 사용될 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 에틸렌디아민 4 아세트산 (이하, 「EDTA」라고도 한다), 디에틸렌트리아민 5 아세트산, 또는, 글리콜에테르디아민 4 아세트산을 사용할 수 있고, 바람직하게는, 에틸렌디아민 4 아세트산을 사용할 수 있다.
킬레이트제는, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 1 ∼ 20 당량 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 3 ∼ 8 당량 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 4 ∼ 6 당량 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 5 당량 사용할 수 있다.
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 계면 활성제를 함유하고 있어도 된다. 본 발명에 있어서 「계면 활성제」란, 친수성 기와 소수성 기를 갖고, 의약품 제제의 구성 성분의 하나로서 사용될 수 있는 물질을 나타낸다. 이와 같은 계면 활성제로는, 예를 들어, 폴리소르베이트 (폴리소르베이트 80 (Tween80), 폴리소르베이트 20 (Tween20), 및 폴리소르베이트 60 (Tween60) 을 포함한다), 폴리옥시에틸렌 (160) 폴리옥시프로필렌 (30) 글리콜, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 또는 라우릴황산나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80 을 들 수 있다.
(i) 의 공정에서 사용되는 완충액이 계면 활성제를 함유하는지 여부, 및, 계면 활성제의 종류는, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수, 및 항체의 종류에 따라, 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, (i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 바람직하게는 계면 활성제를 함유하지 않는다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, (i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 폴리소르베이트 20 을 함유하고, 바람직하게 사용할 수 있다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 GPR20 항체 (바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, (i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 폴리소르베이트 80 을 함유하고, 바람직하게 사용할 수 있다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 CDH6 항체 (바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, (i) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 폴리소르베이트 80 을 함유하고, 바람직하게 사용할 수 있다.
(i) 의 공정은, 바람직하게는, 25 ∼ 50 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다.
제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, (i) 의 공정은, 바람직하게는, 30 ∼ 40 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는, 약 35 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다. 여기서, 「약 35 ℃」란, 바람직하게는, 33 ℃ ∼ 37 ℃ 이며, 보다 바람직하게는, 34 ℃ ∼ 36 ℃ 이며, 더욱 보다 바람직하게는 35 ℃ 이다.
제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, (i) 의 공정은, 바람직하게는, 30 ∼ 40 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는, 약 35 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다. 여기서, 「약 35 ℃」 란, 바람직하게는, 33 ℃ ∼ 37 ℃ 이며, 보다 바람직하게는, 34 ℃ ∼ 36 ℃ 이며, 더욱 보다 바람직하게는 35 ℃ 이다.
제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 GPR20 항체 (바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, (i) 의 공정은, 바람직하게는, 25 ∼ 35 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는, 약 30 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다. 여기서, 「약 30 ℃」 란, 바람직하게는, 28 ℃ ∼ 32 ℃ 이며, 보다 바람직하게는, 29 ℃ ∼ 31 ℃ 이며, 더욱 보다 바람직하게는 30 ℃ 이다.
제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 CDH6 항체 (바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, (i) 의 공정은, 바람직하게는, 25 ∼ 35 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는, 약 30 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다. 여기서, 「약 30 ℃」란, 바람직하게는, 28 ℃ ∼ 32 ℃ 이며, 보다 바람직하게는, 29 ℃ ∼ 31 ℃ 이며, 더욱 보다 바람직하게는 30 ℃ 이다.
(i) 의 공정의 반응 시간은, 바람직하게는, 1 ∼ 4 시간이다.
(ii) 의 공정에서 사용되는 식 (2) 로 나타내는 화합물의 항체 1 분자당의 당량은, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수, 및 항체의 종류에 따라, 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 식 (2) 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 8 ∼ 10 당량, 보다 바람직하게는, 8.2 ∼ 9.2 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 8.7 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 8.7 당량」이란, 바람직하게는, 8.5 ∼ 8.9 당량이며, 보다 바람직하게는, 8.6 ∼ 8.8 당량이며, 더욱 보다 바람직하게는 8.7 당량이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 식 (2) 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 8 ∼ 10 당량, 보다 바람직하게는, 9 ∼ 10 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 9.5 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 9.5 당량」이란, 바람직하게는, 9.3 ∼ 9.7 당량이며, 보다 바람직하게는, 9.4 ∼ 9.6 당량이며, 더욱 보다 바람직하게는 9.5 당량이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 GPR20 항체 (바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 식 (2) 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 8 ∼ 10 당량, 보다 바람직하게는, 8.3 ∼ 9.3 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 8.8 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 8.8 당량」이란, 바람직하게는, 8.6 ∼ 9.0 당량이며, 보다 바람직하게는, 8.7 ∼ 8.9 당량이며, 더욱 보다 바람직하게는 8.8 당량이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 CDH6 항체 (바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 식 (2) 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 8 ∼ 10 당량, 보다 바람직하게는, 8.6 ∼ 9.6 당량, 더욱 보다 바람직하게는, 약 9.1 당량 사용할 수 있다. 여기서, 「약 9.1 당량」이란, 바람직하게는, 8.9 ∼ 9.3 당량이며, 보다 바람직하게는, 9.0 ∼ 9.2 당량이며, 더욱 보다 바람직하게는 9.1 당량이다.
식 (2) 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는, 용매에 용해한 상태에서 (i) 의 공정에서 얻어진 반응액에 첨가할 수 있다. 이러한 용매로는, 항체와의 결합 반응 시에 사용될 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는, 디메틸술폭사이드, 디메틸술폭사이드 수용액, 아세톤, 또는, 아세톤 수용액을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는, 디메틸술폭사이드 수용액을 사용할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액을 사용할 수 있다. 또한, 이들 용매는, 바람직하게는 아세트산을 함유한 상태에서 사용할 수 있다. 그 아세트산은, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 9 ∼ 10 당량 사용할 수 있다.
(ii) 의 공정은, 바람직하게는, 5 ∼ 25 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는, 10 ∼ 20 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 약 15 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다. 여기서, 「약 15 ℃」란, 바람직하게는, 13 ℃ ∼ 17 ℃ 이며, 보다 바람직하게는, 14 ℃ ∼ 16 ℃ 이며, 더욱 보다 바람직하게는 15 ℃ 이다.
(ii) 의 공정의 반응 시간은, 바람직하게는 0.5 ∼ 2 시간이다.
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약은, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키기 위해서 사용할 수 있다. 바꿔 말하면, (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약은, 잉여의 식 (2) 로 나타내는 화합물을 퀀치시키기 위해서 사용할 수 있다.
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약으로는, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기와 반응할 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, N-아세틸시스테인, 및 시스테인을 사용할 수 있고, 바람직하게는, N-아세틸시스테인을 사용할 수 있다.
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약은, 바람직하게는, 항체 1 분자에 대해 10 ∼ 50 당량 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는, 10 ∼ 30 당량 사용할 수 있다.
(iii) 의 공정은, 바람직하게는, 5 ∼ 25 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는, 10 ∼ 20 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 약 15 ℃ 의 내온하에서 실시할 수 있다. 여기서, 「약 15 ℃」란, 바람직하게는, 13 ℃ ∼ 17 ℃ 이며, 보다 바람직하게는, 14 ℃ ∼ 16 ℃ 이며, 더욱 보다 바람직하게는 15 ℃ 이다.
(iii) 의 공정의 반응 시간은, 바람직하게는 0.5 ∼ 2 시간이다.
5. 항체-약물 콘쥬게이트의 정제
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법은, (i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
(ii) 식 (2)
[화학식 33]
Figure pct00033
로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정, 이어서,
(iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하는 공정에 의해 얻어진, 그 항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물을 포함하는 용액을,
(iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물, 및, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물을 제거하는 공정
에 의해 정제하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서 「항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물」이란, (i) ∼ (iii) 의 공정을 실시한 직후의 미정제 상태의 항체-약물 콘쥬게이트, 또는, 크로마토그래피 이외의 조작 (예를 들어, 한외 여과 이외의 간이한 여과) 으로 조정제한 상태의 항체-약물 콘쥬게이트를 의미한다. 한외 여과 이외의 간이한 여과로는, 예를 들어 정밀 여과 (멤브레인 필터 여과) 를 들 수 있다.
또, 상기 「항체-약물 콘쥬게이트의 미정제물 또는 조정제물」은, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액이 적절한 pH 가 되도록, pH 조정된 것이어도 된다. 이러한 pH 조정은, 바람직하게는 아세트산 수용액을 사용하여 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여 실시할 수 있다.
본 발명에 있어서 「한외 여과」란, 약 0.001 ㎛ 내지 약 0.05 ㎛ 의 범위의 세공경을 가지는 막 (한외 여과막) 을 통과시켜 여과함으로써, 큰 용질 분자와 작은 용질 분자를, 또는 용질 분자와 용매 분자를 분별하는 정제 방법을 의미한다. 한외 여과막은 일반적으로 1 kDa ∼ 1000 kDa 의 범위의 분자량의 컷오프 (MWCO) 를 갖는다. MWCO 는, 일반적으로 그 막에 의해 90 ％ 유지되는 구상의 용질의 분자량으로서 정의된다. 본 발명의 한외 여과는, 바람직하게는 MWCO 가 1 kDa ∼ 100 kDa 인 한외 여과막을 사용하여 실시할 수 있고, 보다 바람직하게는 30 kDa 의 한외 여과막을 사용하여 실시할 수 있다. 또, 한외 여과막의 재질로는, 예를 들어, 재생 셀룰로오스, 아세트산 셀룰로오스, 방향족 폴리아미드, 폴리비닐알코올, 폴리술폰, 폴리에테르술폰, 폴리불화비닐리덴, 폴리에틸렌, 폴리아크릴로니트릴, 나일론, 및 세라믹을 들 수 있다. 본 발명의 한외 여과는, 바람직하게는, 재생 셀룰로오스를 재질로 하는 한외 여과막을 사용하여 실시할 수 있지만, 이것으로 한정되지 않는다. 본 발명에서 사용하는 한외 여과막의 예로는, Pellicon (등록상표) XL Cassette Ultracel (등록상표) (머크사 제조), Pellicon (등록상표) 2 Ultracel (등록상표) (머크사 제조), 및 Pellicon (등록상표) 3 Ultracel (등록상표) (머크사 제조) 을 들 수 있다. 또한, 한외 여과는, 협의로는 압력 조작 또는 원심 조작에 의해 강제적으로 여과하는 방법을 의미하는 경우도 있고, 한편으로, 수동 확산에 의해 여과하는 방법은 일반적으로 「투석 여과」로 불리는 경우도 있지만, 한외 여과막을 사용하는 방법이면, 어느 경우도 본 발명에 있어서의 「한외 여과」에 포함된다.
본 발명에 있어서, 「응집체」란, 광범위의 pH 및 전기 전도율의 조건하에서 안정적일 수 있는, 단백질 분자의 회합물과 기타 임의 성분으로 이루어지는 미립자를 의미한다. 항체-약물 콘쥬게이트 제제에 있어서의 응집체의 형성은, 그 제제의 투여를 받는 환자에게 면역원성이나 정맥 장애를 주는 요인이 될 수 있는 등, 의료상, 바람직하지 않은 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 항체-약물 콘쥬게이트의 제제화에 있어서는, 응집체의 형성을 억제하는 것이 요구되고 있다.
(i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염인 경우, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물은, 식 (3)
[화학식 34]
Figure pct00034
으로 나타내는 화합물이다.
(iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 N-아세틸시스테인인 경우, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물은, 식 (4)
[화학식 35]
Figure pct00035
로 나타내는 화합물이다.
식 (3) 으로 나타내는 화합물, 및, 식 (4) 로 나타내는 화합물은, (iv) 의 공정을 실시하는 것에 의해, (iv) 의 공정을 실시하기 전과 비교해, 바람직하게는, 97 ％ 제거할 수 있고, 보다 바람직하게는, 98 ％ 제거할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는 99 ％ 제거할 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는 100 ％ 제거할 수 있다.
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 는, 약 5 이다. 여기서, 「약 5」란, 바람직하게는, 4.7 ∼ 5.3 의 범위이며, 보다 바람직하게는, 4.8 ∼ 5.2 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는, 4.9 ∼ 5.1 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는 5.0 이다. 이러한 pH 로 한외 여과를 실시함으로써, 응집체의 생성을 억제할 수 있다. 본 공정 후의 응집체량은, 바람직하게는 4 ％ 이하이며, 보다 바람직하게는 2 ％ 이하이다. 또한, 응집체는, 원료의 항체 자체에도 일정 정도 포함되어 있어, 본 공정에 있어서의 응집체량은, 그것들도 포함한 합계량으로서 검출된다.
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액은, 예를 들어, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 히스티딘 완충액, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 아세트산 완충액, 또는 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 인산 완충액을 들 수 있고, 바람직하게는, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 히스티딘 완충액을 들 수 있다.
강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도는, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해, 바람직하게는, 0.2 ∼ 1 중량％ 이며, 보다 바람직하게는, 0.3 ∼ 0.9 중량％ 이며, 더욱 보다 바람직하게는, 0.3 ∼ 0.8 중량％ 이며, 더욱 보다 바람직하게는, 0.4 ∼ 0.7 중량％ 이며, 더욱 보다 바람직하게는, 약 0.5 중량％ 이다. 여기서, 「약 0.5 중량％」 란, 바람직하게는, 0.4 ∼ 0.6 중량％ 이며, 더욱 보다 바람직하게는, 0.5 중량％ 이다.
(iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 포함되는 강산과 강염기로 이루어지는 염은, 본 발명의 효과를 나타내는 한에 있어서 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 염화나트륨, 염화칼륨, 황산나트륨, 및 황산칼륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나의 염, 또는 2 종류 이상의 조합의 염이며, 바람직하게는, 염화나트륨이다.
본 발명의 제조 방법은, 바람직하게는, (iv) 의 공정에 이어서, (v) 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 제거하는 공정을 포함한다.
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 는, 본 발명의 효과를 나타내는 한에 있어서 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 4 ∼ 6 의 범위이며, 바람직하게는, 약 5 이다. 여기서, 「약 5」란, 바람직하게는, 4.7 ∼ 5.3 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는, 4.8 ∼ 5.2 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는, 4.9 ∼ 5.1 의 범위이며, 더욱 보다 바람직하게는 5.0 이다.
(v) 의 공정에서 사용되는 완충액으로는, 본 발명의 효과를 나타내는 한에 있어서 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는, 히스티딘 완충액을 사용할 수 있다. 이 히스티딘 완충액은, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 실질적으로 함유하지 않는다.
이상의 방법에 의하면, 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물 유래의 부생성물을 제거할 수 있고, 또한, 응집체의 생성도 최소화할 수 있기 때문에, 크로마토그래피 (예를 들어, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나) 에 의한 정제가 불필요한 공업적으로 우수한 정제 방법을 제공할 수 있다.
6. 항체-약물 콘쥬게이트의 평균 약물 결합수의 산출
제조한 항체-약물 콘쥬게이트의 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수의 산출은, 예를 들어, 280 nm 및 370 nm 의 2 파장에 있어서의 항체-약물 콘쥬게이트와 그 콘쥬게이션 전구체의 UV 흡광도를 측정함으로써 산출하는 방법 (UV 법) 이나, 항체-약물 콘쥬게이트를 환원제로 처리하여 얻어진 각 프래그먼트를 HPLC 측정에 의해 정량하여 산출하는 방법 (HPLC 법) 에 의해 실시할 수 있다.
항체-약물 콘쥬게이트의 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수의 산출은, 국제 공개 제2014/057687호, 국제 공개 제2015/098099호, 국제 공개 제2015/115091호, 국제 공개 제2015/155998호, 국제 공개 제2018/135501호, 및 국제 공개 제2018/212136호 등의 기재를 참고로 실시할 수 있다.
HPLC 법은, 예를 들어, 이하의 방법에 의해 실시할 수 있다.
(1) HPLC 분석용 샘플의 조제 (항체-약물 콘쥬게이트의 환원)
항체-약물 콘쥬게이트 용액 (약 1 mg/mL, 60 μL) 을 디티오트레이톨 (DTT) 수용액 (100 mM, 15 μL) 과 혼합한다. 혼합물을 37 ℃ 에서 30 분 인큐베이트함으로써, 항체-약물 콘쥬게이트의 사슬 간의 디술파이드를 절단한 샘플을, HPLC 분석에 사용한다.
(2) HPLC 분석
HPLC 분석은, 각 항체의 성질에 따른 측정 조건으로 실시할 수 있다.
예를 들어, 항체가, 항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체), 또는 항 HER3 항체 (서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, HPLC 분석을, 하기 측정 조건으로 실시할 수 있다.
HPLC 시스템 : Agilent 1290 HPLC 시스템 (Agilent Technologies)
검출기 : 자외 흡광도계 (측정 파장 : 280 nm)
칼럼 : PLRP-S (2.1 × 50 mm, 8 ㎛, 1000 Å ; Agilent Technologies, P/N PL1912-1802)
칼럼 온도 : 80 ℃
이동상 A : 0.04 ％ 트리플루오로아세트산 (TFA) 수용액
이동상 B : 0.04 ％ TFA 를 포함하는 아세토니트릴 용액
그레이디언트 프로그램 : 29 ％-36 ％ (0 분-12.5 분), 36 ％-42 ％ (12.5-15 분), 42 ％-29 ％ (15 분-15.1 분), 29 ％-29 ％ (15.1 분-25 분)
샘플 주입량 : 15 μL
또, 항체가, 항 GPR20 항체 (서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체), 또는 항 CDH6 항체 (서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, HPLC 분석을, 하기 측정 조건으로 실시할 수 있다.
HPLC 시스템 : Agilent 1290 HPLC 시스템 (Agilent Technologies)
검출기 : 자외 흡광도계 (측정 파장 : 280 nm)
칼럼 : ACQUITY UPLC BEH Phenyl (2.1 × 50 mm, 1.7 ㎛, 130 Å ; Waters, P/N 186002884)
칼럼 온도 : 80 ℃
이동상 A : 0.10 ％ 트리플루오로아세트산 (TFA), 15 ％ 2-프로판올을 포함하는 수용액
이동상 B : 0.075 ％ TFA, 15 ％ 2-프로판올을 포함하는 아세토니트릴 용액
그레이디언트 프로그램 : 14 ％-36 ％ (0 분-15 분), 36 ％-80 ％ (15 분-17 분), 80 ％-14 ％ (17 분-17.01 분), 14 ％ (17.01 분-25 분)
샘플 주입량 : 10 μL
(3) 데이터 해석
약물이 결합하고 있지 않은 항체의 경사슬 (L0) 및 중사슬 (H0) 에 대해, 약물이 결합한 경사슬 (약물이 1 개 결합한 경사슬 : L1) 및 중사슬 (약물이 1 개 결합한 중사슬 : H1, 약물이 2 개 결합한 중사슬 : H2, 약물이 3 개 결합한 중사슬 : H3) 은, 결합한 약물의 수에 비례하여 소수성이 증가하고 유지 시간이 커지는 점에서, L0, L1, H0, H1, H2, H3 의 순서로 용출된다. L0 및 H0 과의 유지 시간 비교에 의해 검출 피크를 L0, L1, H0, H1, H2, H3 중 어느 것에 할당할 수 있다.
약물 링커에 UV 흡수가 있기 때문에, 약물 링커의 결합수에 따라, 경사슬, 중사슬 및 약물 링커의 몰 흡광 계수를 사용하여 하기 식에 따라 피크 면적값의 보정을 실시한다.
Figure pct00036
Figure pct00037
여기서, 각 항체에 있어서의 경사슬 및 중사슬의 몰 흡광 계수 (280 nm) 는, 이미 알려진 계산 방법 (Protein Science, 1995, vol.4, 2411-2423) 에 의해, 각 항체의 경사슬 및 중사슬의 아미노산 서열로부터 추정되는 값을 사용할 수 있다.
예를 들어, 항체가, 항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 경사슬의 몰 흡광 계수로서 26150 을, 중사슬의 몰 흡광 계수로서 81290 을 추정값으로서 사용할 수 있다.
또, 항체가, 항 HER3 항체 (서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 경사슬의 몰 흡광 계수로서 34690 을, 중사슬의 몰 흡광 계수로서 95000 을 추정값으로서 사용할 수 있다.
또, 항체가, 항 GPR20 항체 (서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 경사슬의 몰 흡광 계수로서 26210 을, 중사슬의 몰 흡광 계수로서 68990 을 추정값으로서 사용할 수 있다.
또, 항체가, 항 CDH6 항체 (서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 경사슬의 몰 흡광 계수로서 31710 을, 중사슬의 몰 흡광 계수로서 79990 을 추정값으로서 사용할 수 있다.
약물 링커의 몰 흡광 계수 (280 nm) 는, 각 약물 링커 중간체를 메르캅토에탄올 또는 N-아세틸시스테인으로 반응시켜, 말레이미딜기를 숙신이미드티오에테르로 변환한 화합물의 실측의 몰 흡광 계수 (280 nm) 를 사용할 수 있다.
피크 면적 보정값 합계에 대한 각 사슬 피크 면적비 (％) 를 하기 식에 따라 계산한다.
Figure pct00038
항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 평균 약물 결합수를, 하기 식에 따라 계산한다.
평균 약물 결합수 = (L0 피크 면적비 × 0 ＋ L1 피크 면적비 × 1 ＋ H0 피크 면적비 × 0 ＋ H1 피크 면적비 × 1 ＋ H2 피크 면적비 × 2 ＋ H3 피크 면적비 × 3)/100 × 2
본 발명에 있어서, 「항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트」란, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 항체가 항 HER2 항체인 항체-약물 콘쥬게이트를 나타낸다.
항 HER2 항체는, 바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체이다.
항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수는, 바람직하게는 7 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 7.5 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 약 8 이다.
본 발명에 있어서, 「항 HER3 항체-약물 콘쥬게이트」란, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 항체가 항 HER3 항체인 항체-약물 콘쥬게이트를 나타낸다.
항 HER3 항체는, 바람직하게는, 서열 번호 3 에 있어서 아미노산 번호 26 내지 35 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 3 에 있어서 아미노산 번호 50 내지 65 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 에 있어서 아미노산 번호 98 내지 106 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 에 있어서 아미노산 번호 24 내지 39 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 4 에 있어서 아미노산 번호 56 내지 62 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 4 에 있어서 아미노산 번호 95 내지 103 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이며,
보다 바람직하게는, 서열 번호 3 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 117 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 4 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 113 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이며,
더욱 보다 바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체이다.
항 HER3 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수는, 바람직하게는 7 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 7.5 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 약 8 이다.
본 발명에 있어서, 「항 GPR20 항체-약물 콘쥬게이트」란, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 항체가 항 GPR20 항체인 항체-약물 콘쥬게이트를 나타낸다.
항 GPR20 항체는, 바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 45 내지 54 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 69 내지 78 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 118 내지 131 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 44 내지 54 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 70 내지 76 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 109 내지 117 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이며,
보다 바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 142 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 129 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이며,
더욱 보다 바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체이다.
항 GPR20 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수는, 바람직하게는 2 내지 8 이며, 보다 바람직하게는 3 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 7 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 7.5 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 약 8 이다.
본 발명에 있어서, 「항 CDH6 항체-약물 콘쥬게이트」란, 본 발명에 의해 제조되는 항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 항체가 항 CDH6 항체인 항체-약물 콘쥬게이트를 나타낸다.
항 CDH6 항체는, 바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 45 내지 54 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 69 내지 78 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 118 내지 130 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 44 내지 54 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 70 내지 76 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 109 내지 116 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이며,
보다 바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 141 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 128 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이며,
더욱 보다 바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체이다.
항 CDH6 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수는, 바람직하게는 2 내지 8 이며, 보다 바람직하게는 3 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 7 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 7.5 내지 8 이며, 더욱 보다 바람직하게는 약 8 이다.
7. 의약 조성물의 제조
본 발명에 관련된 의약 조성물은, 본 발명에 관련된 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물이다.
이러한 의약 조성물은, 상기 서술한 방법에 의해 제조 (정제를 포함한다) 한, 항체-약물 콘쥬게이트를, 또한,
(vi) 항체-약물 콘쥬게이트 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
(vii) 항체-약물 콘쥬게이트 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
(viii) 항체-약물 콘쥬게이트 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
그리고,
(ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의해, 제조할 수 있다.
(vi) 의 공정에서 첨가되는 완충액은, 바람직하게는, (v) 의 공정에서 사용되는 완충액과 동일하다. 따라서, (vi) 의 공정에서 사용되는 완충액으로는, 바람직하게는, 히스티딘 완충액을 사용할 수 있다.
(viii) 의 공정에서 실시되는 pH 의 조정은, (vi) 의 공정에서 사용되는 완충액이 히스티딘 완충액인 경우, 바람직하게는, 히스티딘 수용액을 사용하여 실시할 수 있다.
본 발명에 있어서 「부형제」란, 의약품의 성형, 취급, 및 복약에 있어서의 편리성의 향상 등을 위해서, 일정한 크기나 농도로 할 목적으로 첨가되는 물질을 나타낸다. 이와 같은 부형제로는, 본 발명의 효과를 나타내는 한에 있어서 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 수크로오스, 트레할로오스, 소르비톨을 들 수 있다.
(ix) 의 공정에서 첨가되는 부형제로는, 바람직하게는, 수크로오스를 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 관련된 의약 조성물은, 바람직하게는, 추가로 계면 활성제를 포함한다. 즉, 본 발명에 관련된 의약 조성물은, 보다 바람직하게는, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물이다.
이러한 의약 조성물은, 상기 서술한 (ix) 의 공정 후, 추가로, (x) 계면 활성제를 첨가하는 공정을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의해, 제조할 수 있다.
(x) 의 공정에서 첨가되는 계면 활성제로는, 바람직하게는, 폴리소르베이트 80, 또는 폴리소르베이트 20 을 사용할 수 있다.
의약 조성물에 있어서의, 완충액, 부형제, 계면 활성제, 및, 항체-약물 콘쥬게이트의 농도, 그리고, 의약 조성물의 pH 는, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수, 및 항체의 종류에 따라, 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 의약 조성물에 있어서의, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제로는, 바람직하게는, 히스티딘 완충액 (바람직하게는 25 mM 히스티딘 완충액), 수크로오스 (바람직하게는 9 ％ 수크로오스), 및 폴리소르베이트 80 (바람직하게는 0.03 ％ 폴리소르베이트 80) 을 사용할 수 있고, 의약 조성물에 있어서의 항체-약물 콘쥬게이트의 농도는, 바람직하게는, 20 mg/mL 이며, 의약 조성물의 pH 는, 바람직하게는, 5.5 이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 의약 조성물에 있어서의, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제로는, 바람직하게는, 히스티딘 완충액 (바람직하게는 25 mM 히스티딘 완충액), 수크로오스 (바람직하게는 9 ％ 수크로오스), 및 폴리소르베이트 20 (바람직하게는 0.03 ％ 폴리소르베이트 20) 을 사용할 수 있고, 의약 조성물에 있어서의 항체-약물 콘쥬게이트의 농도는, 바람직하게는, 20 mg/mL 이며, 의약 조성물의 pH 는, 바람직하게는, 5.4 이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 GPR20 항체 (바람직하게는, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 의약 조성물에 있어서의, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제로는, 바람직하게는, 히스티딘 완충액 (바람직하게는 10 mM 히스티딘 완충액), 수크로오스 (바람직하게는 9 ％ 수크로오스), 및 폴리소르베이트 80 (바람직하게는 0.03 ％ 폴리소르베이트 80) 을 사용할 수 있고, 의약 조성물에 있어서의 항체-약물 콘쥬게이트의 농도는, 바람직하게는, 20 mg/mL 이며, 의약 조성물의 pH 는, 바람직하게는, 5.4 이다.
또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 CDH6 항체 (바람직하게는, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 의약 조성물에 있어서의, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제로는, 바람직하게는, 히스티딘 완충액 (바람직하게는 10 mM 히스티딘 완충액), 수크로오스 (바람직하게는 9 ％ 수크로오스), 및 폴리소르베이트 80 (바람직하게는 0.03 ％ 폴리소르베이트 80) 을 사용할 수 있고, 의약 조성물에 있어서의 항체-약물 콘쥬게이트의 농도는, 바람직하게는, 20 mg/mL 이며, 의약 조성물의 pH 는, 바람직하게는, 5.4 이다.
8. 의약 조성물의 사용
본 발명의 의약 조성물은, 환자에 대해서는 전신 요법으로서 적용하는 외에, 암조직에 국소적으로 적용하여 치료 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은, 포유 동물에 대해 바람직하게 사용할 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간에 대해 사용할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물을 투여하기 위해서 사용될 수 있는 도입 경로로는, 예를 들어, 정맥내, 피내, 피하, 근육내, 및 복강내의 경로를 들 수 있지만, 바람직하게는, 정맥내이다.
본 발명의 의약 조성물이 수성 주사제인 경우, 바람직하게는, 적절한 희석액으로 희석한 후, 정맥내에 점적 투여할 수 있다. 희석액으로는, 포도당 용액이나, 생리 식염액 등을 들 수 있고, 바람직하게는, 포도당 용액을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 5 ％ 포도당 용액을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물이 동결 건조 주사제인 경우, 바람직하게는, 주사용수에 의해 용해한 후, 필요량을 적절한 희석액으로 희석한 후, 정맥내에 점적 투여할 수 있다. 희석액으로는, 포도당 용액이나, 생리 식염액 등을 들 수 있고, 바람직하게는, 포도당 용액을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 5 ％ 포도당 용액을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 항원에 대한 친화성, 즉, 항원에 대한 해리 정수 (Kd 값) 의 점에 있어서, 친화성이 높을수록 (Kd 값이 낮을수록), 소량의 투여량이어도 약효를 발휘시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 의약 조성물의 투여량은, 항원과의 친화성의 상황에 기초하여 설정할 수도 있다. 본 발명의 의약 조성물을 인간에 대해 투여할 때에는, 예를 들어, 항체-약물 콘쥬게이트로서, 약 0.001 ∼ 100 mg/kg (여기서, 「mg/kg」이란, 인간의 체중 1 kg 당의 항체-약물 콘쥬게이트의 투여량을 의미한다) 을 1 회 혹은 1 ∼ 180 일 동안에 1 회의 간격으로 복수회 투여하면 되지만, 바람직하게는, 0.8 mg/kg ∼ 8 mg/kg 을 3 주에 1 회 투여하는 방법을 들 수 있다.
항체-약물 콘쥬게이트의 투여량 및 투여 간격은, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수, 및 항체의 종류에 따라, 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER2 항체 (바람직하게는, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 인 경우, 바람직하게는, 0.8 mg/kg, 1.6 mg/kg, 3.2 mg/kg, 5.4 mg/kg, 6.4 mg/kg, 7.4 mg/kg, 또는 8 mg/kg 의 항체-약물 콘쥬게이트를 3 주에 1 회 투여하는 방법을 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 5.4 mg/kg, 6.4 mg/kg, 7.4 mg/kg, 또는 8 mg/kg 의 항체-약물 콘쥬게이트를 3 주에 1 회 투여하는 방법을 들 수 있고, 더욱 보다 바람직하게는, 5.4 mg/kg, 또는 6.4 mg/kg 의 항체-약물 콘쥬게이트를 3 주에 1 회 투여하는 방법을 들 수 있다. 또, 제조하는 항체-약물 콘쥬게이트의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위이며, 항체가, 항 HER3 항체 (바람직하게는, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체, 또는, 그 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체) 인 경우, 바람직하게는, 1.6 mg/kg, 3.2 mg/kg, 4.8 mg/kg, 5.6 mg/kg, 6.4 mg/kg, 8.0 mg/kg, 9.6 mg/kg, 또는 12.8 mg/kg 의 항체-약물 콘쥬게이트를 3 주에 1 회 투여하는 방법을 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 4.8 mg/kg, 5.6 mg/kg, 또는 6.4 mg/kg 의 항체-약물 콘쥬게이트를 3 주에 1 회 투여하는 방법을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은, 암의 치료를 위해서 사용할 수 있고, 바람직하게는, 유암, 위암 (위선암이라고 부르는 경우도 있다), 대장암 (결장직장암이라고 부르는 경우도 있고, 결장암 및 직장암을 포함한다), 폐암 (소세포폐암 및 비소세포폐암을 포함한다), 식도암, 두경부암 (타액선암 및 인두암을 포함한다), 위식도 접합부 선암, 담도암 (담관암을 포함한다), 파제트병, 췌장암, 난소암, 자궁암 육종, 요로상피암, 전립선암, 방광암, 소화관 간질 종양, 자궁경암, 편평상피암, 복막암, 간장암, 간세포암, 자궁체암, 신장암, 외음부암, 갑상선암, 음경암, 백혈병, 악성 림프종, 형질 세포종, 골수종, 다형신경교아종, 골육종, 및 멜라노마로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 암의 치료를 위해서 사용할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은, 암 치료의 주요한 치료법인 약물 요법을 위한 약제로서 선택하여 사용할 수 있고, 그 결과로서, 암세포의 성장을 늦춰, 증식을 억제하고, 나아가서는 암세포를 파괴할 수 있다. 이들의 작용에 의해, 암 환자에 있어서, 암에 의한 증상으로부터의 해방이나, QOL 의 개선을 달성할 수 있고, 암 환자의 생명을 유지하여 치료 효과가 달성된다. 암세포의 파괴에는 이르지 않는 경우여도, 암세포의 증식 억제나 컨트롤에 의해 암 환자에 있어서 보다 높은 QOL 을 달성하면서 보다 장기의 생존을 달성시킬 수 있다.
이와 같은 약물 요법에 있어서의 약물 단독으로의 사용 외에, 본 발명의 의약 조성물은, 아쥬반트 요법에 있어서 다른 요법과 조합하여 사용할 수도 있고, 외과 수술이나, 방사선 요법, 호르몬 요법 등과 조합할 수 있다. 나아가서는 네오아쥬반트 요법에 있어서의 약물 요법으로서 사용할 수도 있다.
이상과 같은 치료적 사용 외에, 본 발명의 의약 조성물은, 미세한 전이암 세포의 증식을 억제하고, 나아가서는 파괴한다는 예방 효과도 기대할 수 있다. 예를 들어, 전이 과정에서 체액 중에 있는 암세포를 억제하여 파괴하는 효과나, 어느 조직에 착상한 직후의 미세한 암세포에 대한 억제, 파괴 등의 효과를 기대할 수 있다. 따라서, 특히 외과적인 암의 제거 후에 있어서의 암 전이의 억제, 예방 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은, 다른 암 치료제와 병용하여 투여할 수도 있고, 이로써 항종양 효과를 증강시킬 수 있다. 이와 같은 목적으로 사용되는 다른 암치료제는, 본 발명의 의약 조성물과 동시에, 각각, 혹은 연속하여 개체에 투여되어도 되고, 각각의 투여 간격을 변경하여 투여되어도 된다. 이와 같은 암 치료제로는, 항종양 활성을 갖는 약제이면 한정되지 않지만, 예를 들어, 이리노테칸 (Irinotecan, CPT-11), 시스플라틴 (Cisplatin), 카르보플라틴 (Carboplatin), 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 플루오로우라실 (Fluorouracil, 5-FU), 겜시타빈 (Gemcitabine), 카페시타빈 (Capecitabine), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 도세탁셀 (Docetaxel), 독소루비신 (Doxorubicin), 에피루비신 (Epirubicin), 시클로포스파미드 (Cyclophosphamide), 마이토마이신 C (Mitomycin C), 테가푸르 (Tegafur)·기메라실 (Gimeracil)·오테라실 (Oteracil) 배합제, 세툭시맙 (Cetuximab), 파니투무맙 (Panitumumab), 베바시주맙 (Bevacizumab), 라무시루맙 (Ramucirumab), 레고라페닙 (Regorafenib), 트리플루리딘 (Trifluridine)·티피라실 (Tipiracil) 배합제, 게피티닙 (Gefitinib), 에를로티닙 (Erlotinib), 아파티닙 (Afatinib), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 페메트렉세드 (Pemetrexed), 트라스투주맙엠탄신 (Trastuzumabemtansin), 트라스투주맙 (Trastuzumab), 퍼투주맙 (Pertuzumab), 타목시펜 (Tamoxifen), 토레미펜 (Toremifene), 풀베스트란트 (Fulvestrant), 류프로렐린 (Leuprorelin), 고세렐린 (Goserelin), 레트로졸 (Letrozole), 아나스트로졸 (Anastrozole), 및 프로게스테론 제제 (Progesterone formilation) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나를 들 수 있다.
실시예
이하에 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 완충액의 검토
항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액을 각종 완충액 (10 mM 아세트산 완충액, 10 mM 인산 완충액, 또는 20 mM PIPES 완충액) 으로 희석하고, 0.5 mol/L 의 EDTA 수용액을 첨가한 후, 각종 약알칼리성 수용액 (0.3 mol/L 의 인산수소 2 나트륨 수용액 (이하, 「aq. Na2HPO4」라고도 부른다), 포화 아세트산나트륨 수용액 (이하, 「aq. CH3COONa」라고도 부른다), 또는 0.5 mol/L 의 탄산수소나트륨 수용액 (이하, 「aq. NaHCO3」이라고도 부른다) 을 첨가하여, pH 7 로 조정했다. 37 ℃ 교반하에서, 항체 1 분자에 대해 4.8 당량 또는 4.9 당량의 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 (이하, 「TCEP」라고도 부른다) 수용액 (1 mg/mL) 을 첨가하여 교반해, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 내온 15 ℃ 또는 25 ℃ 에서 교반하면서, 항체 1 분자에 대해 9.2 당량 또는 9.8 당량의 식 (2)
[화학식 36]
Figure pct00039
로 나타내는 화합물 (화합물 (2) 라고도 부른다) 을 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액에 용해시킨 상태에서 첨가하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로, 50 mmol/L 의 N-아세틸시스테인 수용액을 첨가하여, 잉여의 화합물 (2) 을 퀀치시켰다. 이로써, 식
[화학식 37]
Figure pct00040
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER2 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 얻었다.
얻어진 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트의 DAR 을 HPLC 법으로 측정했다. 또, 응집체의 함유율을 SEC 로 측정했다.
결과를 표 1 에 나타낸다.
Figure pct00041
표 1 의 결과 중에서는, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 조정된 아세트산 완충액을 사용한 경우가, 응집체의 함유율은 가장 낮은 값을 나타냈다.
[실시예 2] 한외 여과 공정의 검토 (1)
항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액을 10 mM 아세트산 완충액 (pH 5.5) 으로 희석하고, 0.5 mol/L 의 EDTA 수용액 (항체 1 분자에 대해 5 당량) 을 첨가한 후, 0.3 mol/L 의 인산수소 2 나트륨 수용액을 첨가하여, pH 7.4 로 조정했다.
35 ∼ 39 ℃ 교반하에서, 0.010 mol/L 의 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 수용액 (항체 1 분자에 대해 6 당량) 을 첨가하여 내온 35 ∼ 39 ℃ 에서 2.5 시간 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 내온 13 ∼ 17 ℃ 에서 교반하면서, 화합물 (2) (항체 1 분자에 대해 12.5 당량) 를 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액에 용해시킨 상태에서 첨가하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로, 0.1 mol/L 의 N-아세틸시스테인 수용액 (항체 1 분자에 대해 35 당량) 을 첨가하고, 추가로 동일 온도에서 1 시간 교반하여, 잉여의 화합물 (2) 를 퀀치시킨 후, 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여, 반응액을 pH 5.0 으로 조정했다. 이로써, 식
[화학식 38]
Figure pct00042
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER2 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 반응액을 얻었다.
얻어진 반응액을, 한외 여과막인 Pellicon (등록상표) XL Cassette Ultracel (등록상표) (머크사 제조) 을 사용하고, 롤러 펌프로, 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0), 또는 0.5 ％ 염화나트륨 함유 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시켜, 한외 여과를 실시했다. 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0), 및 0.5 ％ 염화나트륨 함유 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 은, 각각, 얻어진 반응액에 대해, 5 배, 10 배, 또는 15 배의 양을 사용하고, 한외 여과 후의 화합물 (2) 유래의 부생성물의 항체-약물 콘쥬게이트에 대한 함유율을 측정했다. 또, 비교로서, 한외 여과를 실시하지 않은 경우의, 화합물 (2) 유래의 부생성물의 함유율을 측정했다 (이러한 경우, 사용한 완충액량을 0 으로서 나타냈다).
여기서, 화합물 (2) 유래의 부생성물로는, 화합물 (2) 의 말레이미딜기에 트리스(2-카르복시에틸)포스핀이 부가한 화합물, 즉,
식 (3)
[화학식 39]
Figure pct00043
으로 나타내는 화합물 (화합물 (3) 이라고도 부른다.), 및, 화합물 (2) 의 말레이미딜기에 N-아세틸시스테인이 부가한 화합물, 즉,
식 (4)
[화학식 40]
Figure pct00044
로 나타내는 화합물 (화합물 (4) 라고도 부른다.) 을 들 수 있다. 화합물 (2) 유래의 부생성물의 함유율의 측정은, 화합물 (3) 및 화합물 (4) 각각의 항체-약물 콘쥬게이트에 대한 함유율을 HPLC 법으로 측정함으로써 실시했다. 결과를 표 2 및 도 1 에 나타낸다.
Figure pct00045
표 2 의 결과에서는, 동일한 완충액량/반응액량으로 비교한 경우, 히스티딘 완충액을 사용한 경우보다, 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액을 사용한 경우가, 화합물 (3) 및 화합물 (4) 의 함유율은 낮은 값을 나타냈다.
[실시예 3] 한외 여과 공정의 검토 (2)
항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액을 10 mM 아세트산 완충액으로 희석하고, 0.5 mol/L 의 EDTA 수용액을 첨가한 후, 0.3 mol/L 의 인산수소 2 나트륨 수용액을 첨가하여, pH 7.3 으로 조정했다. 1 mg/mL 의 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 수용액을 첨가하여 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액에, 화합물 (2) 를 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액에 용해시킨 상태에서 첨가하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로, 50 mmol/L 의 N-아세틸시스테인 수용액을 첨가하여, 잉여의 화합물 (2) 을 퀀치시켰다. 이로써, 식
[화학식 41]
Figure pct00046
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER2 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 반응 용액을 얻었다.
얻어진 반응 용액을, Pellicon (등록상표) XL Cassette Ultracel (등록상표) (머크사 제조) 을 사용하고, 롤러 펌프로, 히스티딘 완충액 (pH 5.0, 혹은 pH 5.8), 또는 0.4 ％ 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.0, 혹은 pH 5.8) 을 첨가하면서 순환시켜, 한외 여과를 실시했다. 또한, 히스티딘 완충액의 농도는, 모두 10.8 mM 인 것을 사용했다. 또, 히스티딘 완충액 (pH 5.0 및 pH 5.8) 은, 각각, 얻어진 반응 용액에 대해, 15 배의 양을 사용했다. 0.4 ％ 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.0 및 pH 5.8) 은, 각각, 얻어진 반응 용액에 대해, 10 배의 양을 사용했다. 한외 여과 후의 응집체의 함유율을 SEC 로 측정했다. 또, 비교로서, 한외 여과를 실시하지 않은 경우의, 응집체의 함유율을 측정했다 (이러한 경우, 사용한 완충액량을 0 으로서 나타냈다). 결과를 표 3 및 도 2 에 나타낸다.
Figure pct00047
표 3 의 결과에서는, pH 5.8 의 완충액을 사용하여 한외 여과를 실시한 경우, 히스티딘 완충액을 사용한 경우보다, 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액을 사용한 경우가 응집체의 함유율은 높은 값을 나타냈다. 한편, pH 5.0 의 완충액을 사용하여 한외 여과를 실시한 경우, 히스티딘 완충액을 사용한 경우여도, 염화나트륨 함유 히스티딘 완충액을 사용한 경우여도, 응집체의 함유율은 동일한 정도의 값을 나타냈다.
[실시예 4] 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조 (1)
항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액 (액중량 5.4 kg : 항체 120 g 상당) 을 유리 반응 용기에 넣고, 또한, 0.01 mol/L 아세트산 완충액 (4.3 L, pH 5.5) 을 첨가했다. 본 용액에, 0.5 mol/L EDTA 수용액 (8.3 mL ; 항체에 대해 5 당량) 을 첨가한 후, 0.3 mol/L 인산수소 2 나트륨 수용액을 첨가하여 pH 7.3 으로 조정했다. 35 ∼ 39 ℃ 교반하에서, 0.010 mol/L 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 수용액 (390 mL ; 항체 1 분자에 대해 4.7 당량) 을 첨가하고, 내온을 35 ∼ 39 ℃ 에서 2 시간 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 냉각하고, 내온 13 ∼ 17 ℃ 에서, 교반하, 화합물 (2) (8.2 g ; 항체 1 분자에 대해 9.7 당량) 를 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액 (900 mL) 으로 용해시킨 것을 20 분에 걸쳐 첨가하고, 동일 온도에서 1 시간 교반하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로, 0.1 mol/L N-아세틸시스테인 수용액 (210 mL ; 항체 1 분자에 대해 25 당량) 을 첨가하고, 추가로 동일 온도에서 1 시간 교반하여, 잉여의 화합물 (2) 를 퀀치시킨 후, 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여, pH 5.0 으로 조정했다. 이로써, 식
[화학식 42]
Figure pct00048
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER2 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 얻었다.
얻어진 용액을, Pellicon (등록상표) 2 Mini Cassette Ultracel (등록상표) (머크사 제조, 0.1 ㎡) 3 장을 사용하고, 롤러 펌프로, 0.5 ％ 염화나트륨 함유 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 화합물 (2) 유래의 부생성물을 제거했다. 또한, 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시키는 것으로 한외 여과를 실시하여, 염화나트륨을 제거했다. 다음으로, 히스티딘 수용액으로 pH 5.5 로 조정하고, 추가로 농축을 실시함으로써, 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 함유하는 용액을 약 4 L 취득했다.
또한, 상기 용액 중 3.86 kg 분 (分) 에 대해, 수크로오스 364 g 을 첨가하여 용해시켰다. 또한 9 ％ 수크로오스 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.5) 을 첨가하여, 단백질 농도를 약 20 mg/mL 로 조정해, 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물 (5.7 kg) 을 얻었다. 얻어진 의약 조성물은, 단백질 농도 : 20.4 mg/mL, 단백질 수량 (收量) : 112 g, 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수 (n) : 7.7 이었다.
[실시예 5] 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조 (2)
항 HER2 항체 (서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액 (액중량 89 g : 항체 2.0 g 상당) 을 유리 반응 용기에 넣고, 추가로, 0.01 mol/L 아세트산 완충액 (72 mL, pH 5.5) 을 첨가했다. 본 용액에, 0.5 mol/L EDTA 수용액 (0.14 mL ; 항체에 대해 5 당량) 을 첨가한 후, 0.3 mol/L 인산수소 2 나트륨 수용액을 첨가하여 pH 7.3 으로 조정했다. 35 ∼ 39 ℃ 교반하에서, 0.010 mol/L 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 수용액 (6.3 mL ; 항체 1 분자에 대해 4.6 당량) 을 첨가하고, 내온을 35 ∼ 39 ℃ 에서 2 시간 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 냉각하고, 내온 13 ∼ 17 ℃ 에서 교반하, 화합물 (2) (140 mg ; 항체 1 분자에 대해 9.6 당량) 를 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액 (13 mL) 으로 용해시킨 것을 첨가하고, 동일 온도에서 1 시간 교반하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로, 0.1 mol/L N-아세틸시스테인 수용액 (3.4 mL ; 항체 1 분자에 대해 25 당량) 을 첨가하고, 추가로 동일 온도에서 40 분 교반하여, 잉여의 화합물 (2) 를 퀀치시킨 후, 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여, pH 5.0 으로 조정했다. 이로써, 식
[화학식 43]
Figure pct00049
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER2 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 얻었다.
얻어진 용액에 염화나트륨 1 g 을 첨가한 후, Pellicon (등록상표) XL Ultracel (등록상표) (머크사 제조, 50 ㎠) 을 사용하고, 롤러 펌프로, 0.5 ％ 염화나트륨 함유 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시해, 화합물 (2) 유래의 부생성물을 제거했다. 또한, 26 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 염화나트륨을 제거했다. 다음으로, 히스티딘 수용액으로 pH 5.5 로 조정하면서 농축을 실시함으로써, 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 함유하는 용액을 약 65 g (64.5 g, 64.1 mL, 단백질 농도 : 28.5 mg/mL, 단백질 수량 : 1.83 g) 취득했다.
또한, 상기 용액 중 64 g 분에 대해, 수크로오스 7.7 g 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.5) 19 mL 를 첨가하고, 추가로 9 ％ 수크로오스 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.5) 을 첨가하여, 단백질 농도를 약 20 mg/mL 로 조정하여, 항 HER2 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물 (93 g) 을 얻었다. 얻어진 의약 조성물은, 단백질 농도 : 20.3 mg/mL, 단백질 수량 : 1.8 g, 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수 (n) : 7.8 이었다.
[실시예 6] 항 HER3 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조
항 HER3 항체 (서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액 (액중량 43.95 kg : 항체 3.00 kg 상당) 을 400 L 싱글 유스 리액터에 넣고, 또한, 폴리소르베이트 20 (60.0 g), 0.5 mol/L EDTA 수용액 (224.5 g ; 항체에 대해 5 당량) 을 포함하는 0.01 mol/L 아세트산 완충액 (pH 5.5, 255 kg) 을 첨가했다. 본 용액에, 0.3 mol/L 인산수소 2 나트륨 수용액을 첨가하여 pH 7.0 으로 조정했다. 33 ∼ 37 ℃ 교반하에서, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 (35.1 g ; 항체 1 분자에 대해 6.0 당량) 을 포함하는 수용액 (12.3 kg) 첨가하고, 내온을 33 ∼ 37 ℃ 에서 2.5 시간 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 냉각하고, 내온 12 ∼ 17 ℃ 에서 교반하, 화합물 (2) (200.5 g ; 항체 1 분자에 대해 9.5 당량) 를, 10 ％ 아세트산 수용액 (116.4 g) 을 포함하는 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액 (21.1 kg) 으로 용해시킨 것을 50 분에 걸쳐 첨가하고, 동일 온도에서 0.5 시간 교반하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로, 0.1 mol/L N-아세틸시스테인 수용액 (3.11 kg ; 항체 1 분자에 대해 15 당량) 을 첨가하고, 추가로 동일 온도에서 0.5 시간 교반하여, 잉여의 화합물 (2) 를 퀀치시킨 후, 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여, pH 5.0 으로 조정했다. 이로써, 식
[화학식 44]
Figure pct00050
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 얻었다.
얻어진 용액을, Pellicon (등록상표) 2 Ultracel (등록상표) (머크사 제조, 2.5 ㎡) 을 4 장 사용하고, 자동 한외 여과 장치로, 0.5 ％ 염화나트륨 함유 26.5 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 화합물 (2) 유래의 부생성물을 제거했다. 또한, 26.5 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시키는 것으로 한외 여과를 실시하여, 염화나트륨을 제거했다. 다음으로, 26.5 mM 히스티딘 수용액으로 pH 5.4 로 조정하면서 농축을 실시함으로써, 항 HER3 항체-약물 콘쥬게이트를 함유하는 용액을 97.4 kg (96.5 L, 단백질 농도 : 30.5 mg/mL, 단백질 수량 : 2.94 kg) 취득했다.
또한, 상기 용액 중 48.6 kg 분에 대해, 수크로오스 6.29 kg 을 포함하는 히스티딘 완충액 (pH 5.4, 24.3 kg) 을 첨가하고, 추가로 폴리소르베이트 20 (7.6 g) 을 포함하는 9 ％ 수크로오스 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.4, 4.25 kg) 을 첨가하여, 단백질 농도를 약 20 mg/mL 로 조정하여, 항 HER3 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물 (77.1 kg) 을 얻었다. 얻어진 의약 조성물은, 단백질 농도 : 19.9 mg/mL, 단백질 수량 : 1.49 kg, 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수 (n) : 7.6 이었다.
[실시예 7] 항 GPR20 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조
항 GPR20 항체 (서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액 (액중량 24.2 kg : 항체 0.94 kg 상당) 을 200 L 리액터에 넣고, 추가로 폴리소르베이트 80 (14.4 g) 을 포함하는 26 mM 히스티딘 수용액 (57.6 kg) 을 첨가했다. 30 ℃ 로 승온하고, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 (9.06 g ; 항체 1 분자에 대해 4.9 당량) 을 포함하는 수용액 (3.17 kg) 첨가하고, 내온 30 ℃ 에서 3 시간 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 냉각하고, 내온 15 ℃ 에서 교반하, 화합물 (2) (63.5 g ; 항체 1 분자에 대해 9.0 당량) 를, 아세트산 (3.7 g) 을 포함하는 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액 (7.26 kg) 으로 용해시킨 것을 55 분에 걸쳐 첨가하고, 동일 온도에서 0.5 시간 교반하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로 0.1 M N-아세틸시스테인 수용액 (1.00 kg ; 항체 1 분자에 대해 15 당량) 을 첨가하고, 추가로 동일 온도에서 0.5 시간 교반하여, 잉여의 화합물 (2) 를 퀀치시킨 후, 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여, pH 5.0 으로 조정했다. 이로써, 식
[화학식 45]
Figure pct00051
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 GPR20 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 GPR20 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 얻었다.
얻어진 용액을, Pellicon (등록상표) 2 Ultracel (등록상표) (머크사 제조, 2.5 ㎡) 을 2 장 사용하고, 한외 여과 장치로, 0.5 ％ 염화나트륨 함유 11 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 화합물 (2) 유래의 부생성물을 제거했다. 또한 11 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 염화나트륨을 제거했다. 다음으로 11 mM 히스티딘 수용액으로 pH 5.4 로 조정하면서 농축을 실시함으로써, 항 GPR20 항체-약물 콘쥬게이트를 함유하는 용액 (31.8 kg, 단백질 농도 : 29.9 mg/mL, 단백질 수량 : 0.94 kg) 을 취득했다.
또한 상기 용액에 대해, 수크로오스 4.00 kg 을 포함하는 히스티딘 완충액 (pH 5.4, 14.9 kg) 을 첨가하고, 추가로 폴리소르베이트 80 (4.5 g) 을 포함하는 9 ％ 수크로오스 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.4, 3.00 kg) 을 첨가하여, 단백질 농도를 약 20 mg/mL 로 조정하여, 항 GPR20 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물 (49.3 kg) 을 얻었다. 얻어진 의약 조성물은, 단백질 농도 : 19.9 mg/mL, 단백질 수량 : 0.94 kg, 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수 (n) : 7.8 이었다.
[실시예 8] 항 CDH6 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물의 제조
항 CDH6 항체 (서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체) 를 포함하는 용액 (액중량 2.56 kg : 항체 100 g 상당) 을 14 L 리액터에 넣고, 추가로 폴리소르베이트 80 (1.50 g), 0.5 M EDTA 수용액 (7.54 g ; 항체에 대해 5 당량) 을 포함하는 100 mM 히스티딘 수용액 (6.00 kg) 을 첨가했다. 30 ℃ 로 승온하고, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 (945 mg ; 항체 1 분자에 대해 4.8 당량) 을 포함하는 수용액 (330 g) 첨가하고, 내온 30 ℃ 에서 3 시간 교반하여, 항체의 사슬 간 디술파이드를 환원했다.
얻어진 반응액을 냉각하고, 내온 15 ℃ 에서 교반하, 화합물 (2) (6.96 g ; 항체 1 분자에 대해 9.1 당량) 를, 10 ％ 아세트산 수용액 (3.89 g) 을 포함하는 80 ％ 디메틸술폭사이드 수용액 (687 g) 으로 용해시킨 것을 41 분에 걸쳐 첨가하고, 동일 온도에서 0.4 시간 교반하여, 항체에 결합시켰다. 다음으로 0.1 M N-아세틸시스테인 수용액 (103 g ; 항체 1 분자에 대해 15 당량) 을 첨가하고, 추가로 동일 온도에서 0.6 시간 교반하여, 잉여의 화합물 (2) 를 퀀치시킨 후, 10 ％ 아세트산 수용액을 사용하여, pH 5.0 으로 조정했다. 이로써, 식
[화학식 46]
Figure pct00052
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 CDH6 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 CDH6 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 얻었다.
얻어진 용액을, Pellicon (등록상표) 2 Ultracel (등록상표) (머크사 제조, 0.5 ㎡) 을 1 장 사용하고, 한외 여과 장치로, 0.5 ％ 염화나트륨 함유 11 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 화합물 (2) 유래의 부생성물을 제거했다. 또한 11 mM 히스티딘 완충액 (pH 5.0) 을 첨가하면서 순환시킴으로써 한외 여과를 실시하여, 염화나트륨을 제거했다. 다음으로 11 mM 히스티딘 수용액으로 pH 5.4 로 조정하면서 농축을 실시함으로써, 항 CDH6 항체-약물 콘쥬게이트를 함유하는 용액 (2.97 kg, 단백질 농도 : 31.8 mg/mL, 단백질 수량 : 93.7 g) 을 취득했다.
또한 상기 용액에 대해, 수크로오스 (401 g) 를 포함하는 히스티딘 완충액 (pH 5.4, 1.67 kg) 을 첨가하고, 추가로 폴리소르베이트 80 (437 mg) 을 포함하는 9 ％ 수크로오스 함유 히스티딘 완충액 (pH 5.4, 276 g) 을 첨가하여, 단백질 농도를 약 20 mg/mL 로 조정하여, 항 CDH6 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 의약 조성물 (4.81 kg) 을 얻었다. 얻어진 의약 조성물은, 단백질 농도 : 20.2 mg/mL, 단백질 수량 : 93.2 g, 항체 1 분자당의 평균 약물 결합수 (n) : 7.8 이었다.
서열표 프리텍스트
서열 번호 1 : 항 HER2 항체 중사슬의 아미노산 서열
서열 번호 2 : 항 HER2 항체 경사슬의 아미노산 서열
서열 번호 3 : 항 HER3 항체 중사슬의 아미노산 서열
서열 번호 4 : 항 HER3 항체 경사슬의 아미노산 서열
서열 번호 5 : 항 GPR20 항체 중사슬의 아미노산 서열
서열 번호 6 : 항 GPR20 항체 경사슬의 아미노산 서열
서열 번호 7 : 항 CDH6 항체 중사슬의 아미노산 서열
서열 번호 8 : 항 CDH6 항체 경사슬의 아미노산 서열
SEQUENCE LISTING <110> DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED <120> EFFECTIVE MANUFACTURING METHOD OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATE <130> DSPCT-FP1910 <150> JP2018-139633 <151> 2018-07-25 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of anti-HER2 antibody <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of anti-HER2 antibody <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 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Val Glu Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Lys Trp Thr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 4 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of anti-HER3 antibody <400> 4 Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 5 <211> 472 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of anti-GPR20 antibody <400> 5 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Tyr Ile Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Lys Tyr Met Gly Phe Ile Asn Pro Gly Ser Gly His Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Thr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Leu Arg Ile Ile Thr Lys 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 145 150 155 160 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 210 215 220 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 225 230 235 240 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 325 330 335 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 340 345 350 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 355 360 365 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 370 375 380 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 385 390 395 400 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 405 410 415 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 420 425 430 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 435 440 445 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 450 455 460 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 6 <211> 234 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of anti-GPR20 antibody <400> 6 Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Asp Thr Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser 35 40 45 Val Ser Thr Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Gln Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Gly Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn 100 105 110 Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 7 <211> 471 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of anti-CDH6 antibody <400> 7 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Arg Asn Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Glu Tyr Ala 65 70 75 80 Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Val Tyr Gly Gly Phe Ala Gly Gly Tyr Phe 115 120 125 Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 130 135 140 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 145 150 155 160 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 165 170 175 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 180 185 190 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 195 200 205 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 210 215 220 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 225 230 235 240 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 245 250 255 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 305 310 315 320 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 340 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 370 375 380 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 8 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of anti-CDH6 antibody <400> 8 Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn 35 40 45 Ile Tyr Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Asn Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr 100 105 110 Ser Gly Trp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 130 135 140 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 145 150 155 160 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 165 170 175 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 195 200 205 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 210 215 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230

Claims (82)

  1. 식 (1)
    Figure pct00053

    (식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
    로 나타내는 약물 링커와, 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
    (i) 항체를, 환원제로 환원하는 공정,
    (ii) 식 (2)
    Figure pct00054

    로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
    (iii) 티올기를 갖는 시약을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정, 이어서,
    (iv) 강산과 강염기로 이루어지는 염을 함유하는 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가 부가한 화합물, 및, 식 (2) 로 나타내는 화합물의 말레이미딜기에 (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이 부가한 화합물을 제거하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 또는 그 염인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    (i) 의 공정에서 사용되는 환원제가, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  6. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,
    완충액이, 아세트산 완충액인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  8. 제 7 항에 있어서,
    킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  9. 제 4 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  10. 제 9 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  11. 제 9 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iii) 의 공정에서 사용되는 티올기를 갖는 시약이, N-아세틸시스테인인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  16. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 강산과 강염기로 이루어지는 염이, 염화나트륨인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에 이어서,
    (v) 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 강산과 강염기로 이루어지는 염을 제거하는 공정을 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    (v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  20. 제 18 항에 있어서,
    (v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  21. 제 18 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (v) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 히스티딘 완충액인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  23. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 HER2 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  25. 제 24 항에 있어서,
    항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  26. 제 24 항에 있어서,
    항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  27. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 HER3 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  29. 제 28 항에 있어서,
    항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  30. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 GPR20 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  31. 제 30 항에 있어서,
    항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  32. 제 31 항에 있어서,
    항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  33. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 CDH6 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  34. 제 33 항에 있어서,
    항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  35. 제 34 항에 있어서,
    항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서,
    크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  37. 제 36 항에 있어서,
    크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
    (vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
    (vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
    (viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
    으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
    그리고,
    (ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
    을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
    항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
  39. 제 38 항에 있어서,
    완충액이 히스티딘 완충액인, 의약 조성물의 제조 방법.
  40. 제 38 항 또는 제 39 항에 있어서,
    부형제가 수크로오스인, 의약 조성물의 제조 방법.
  41. 제 38 항 또는 제 39 항에 있어서,
    부형제가 트레할로오스인, 의약 조성물의 제조 방법.
  42. 제 38 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
    (x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
    을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
    항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
  43. 제 42 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, 의약 조성물의 제조 방법.
  44. 제 42 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, 의약 조성물의 제조 방법.
  45. 식 (6)
    Figure pct00055

    (식 중, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있고, n 은 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다)
    으로 나타내는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법으로서,
    (i) 항체를, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염으로 환원하는 공정,
    (ii) 식 (2)
    Figure pct00056

    로 나타내는 화합물을, (i) 의 공정에서 환원된 항체와 반응시키는 공정,
    (iii) N-아세틸시스테인을 첨가하여, (ii) 의 공정에서 잔존한 식 (2) 로 나타내는 화합물과 반응시키는 공정, 이어서,
    (iv) 염화나트륨을 함유하는 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 식 (3)
    Figure pct00057

    으로 나타내는 화합물, 및, 식 (4)
    Figure pct00058

    로 나타내는 화합물을 제거하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  46. 제 45 항에 있어서,
    (i) 의 공정이 완충액 중에서 실시되는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  47. 제 46 항에 있어서,
    완충액이, 인산수소 2 나트륨 수용액으로 pH 6 ∼ 8 로 조정된 완충액인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  48. 제 46 항 또는 제 47 항에 있어서,
    완충액이, 아세트산 완충액인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  49. 제 45 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 의 공정이, 킬레이트제의 존재하에서 실시되는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  50. 제 49 항에 있어서,
    킬레이트제가, 에틸렌디아민 4 아세트산인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  51. 제 45 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 의 공정에서 사용되는 완충액이, 계면 활성제를 함유하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  52. 제 51 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  53. 제 51 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  54. 제 45 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  55. 제 45 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 0.2 ∼ 1 중량％ 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  56. 제 45 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에서 사용되는 염화나트륨의 농도가, (iv) 의 공정에서 사용되는 완충액에 대해 약 0.5 중량％ 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  57. 제 45 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 의 공정에 이어서,
    (v) 히스티딘 완충액을 사용한 한외 여과에 의해, 염화나트륨을 제거하는 공정을 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  58. 제 57 항에 있어서,
    (v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 4 ∼ 6 의 범위인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  59. 제 57 항에 있어서,
    (v) 의 공정에서 사용되는 완충액의 pH 가 약 5 인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  60. 제 45 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  61. 제 45 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체-약물 콘쥬게이트에 있어서의 1 항체당의 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  62. 제 45 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 HER2 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  63. 제 62 항에 있어서,
    항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 449 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 있어서 아미노산 번호 1 내지 214 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  64. 제 62 항에 있어서,
    항 HER2 항체가, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  65. 제 45 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 HER3 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  66. 제 65 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  67. 제 66 항에 있어서,
    항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  68. 제 45 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 GPR20 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  69. 제 68 항에 있어서,
    항 GPR20 항체가, 서열 번호 5 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 472 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 6 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 234 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  70. 제 69 항에 있어서,
    항 GPR20 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  71. 제 45 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가, 항 CDH6 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  72. 제 71 항에 있어서,
    항 CDH6 항체가, 서열 번호 7 에 있어서 아미노산 번호 20 내지 471 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 8 에 있어서 아미노산 번호 21 내지 233 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  73. 제 72 항에 있어서,
    항 CDH6 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  74. 제 45 항 내지 제 73 항 중 어느 한 항에 있어서,
    크로마토그래피에 의한 정제 공정을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  75. 제 74 항에 있어서,
    크로마토그래피가, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 및 어피니티 크로마토그래피로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, 항체-약물 콘쥬게이트의 제조 방법.
  76. 제 45 항 내지 제 75 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트를 제조하고, 또한,
    (vi) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 완충액을 첨가하는 공정,
    (vii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 농축하는 공정, 및,
    (viii) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액을 소정의 pH 로 조정하는 공정
    으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 공정,
    그리고,
    (ix) 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는 용액에 부형제를 첨가하는 공정
    을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
    항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
  77. 제 76 항에 있어서,
    완충액이 히스티딘 완충액인, 의약 조성물의 제조 방법.
  78. 제 76 항 또는 제 77 항에 있어서,
    부형제가 수크로오스인, 의약 조성물의 제조 방법.
  79. 제 76 항 또는 제 77 항에 있어서,
    부형제가 트레할로오스인, 의약 조성물의 제조 방법.
  80. 제 76 항 내지 제 79 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해, 항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 및 부형제를 포함하는 의약 조성물을 제조하고, 또한,
    (x) 그 의약 조성물에 계면 활성제를 첨가하는 공정
    을 포함하는 공정을 실시하는 것에 의한,
    항체-약물 콘쥬게이트, 완충액, 부형제, 및 계면 활성제를 포함하는 의약 조성물의 제조 방법.
  81. 제 80 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 80 인, 의약 조성물의 제조 방법.
  82. 제 80 항에 있어서,
    계면 활성제가, 폴리소르베이트 20 인, 의약 조성물의 제조 방법.
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