WO2023068226A1

WO2023068226A1 - 抗ｃｄ３７抗体－薬物コンジュゲート

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Publication number: WO2023068226A1
Application number: PCT/JP2022/038604
Authority: WO
Inventors: 智子寺内; 雄司新上; 肇菅原; 佑介須知; 力後藤
Original assignee: 第一三共株式会社
Priority date: 2021-10-18
Filing date: 2022-10-17
Publication date: 2023-04-27
Also published as: AU2022368385A1; CO2024003299A2; TW202330041A; CA3235358A1

Abstract

Ｂ細胞性悪性リンパ腫等のＣＤ３７陽性腫瘍細胞に対して特異的に結合する抗体、該抗体を含む抗体－薬物コンジュゲート、該抗体を用いた腫瘍に対する治療効果を有する医薬組成物、当該医薬組成物、を用いた腫瘍の治療方法、該抗体の製造方法及び該抗体－薬物コンジュゲートの製造方法等を提供すること。　下式（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）で示される薬物リンカーと抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート、具体的には、内在化活性を有するヒト化抗ＣＤ３７抗体及び該抗体を含有する抗体－薬物コンジュゲートを提供する。

Description

抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート

　本発明は、ＣＤ３７に結合する抗ＣＤ３７抗体、該抗体の製造方法、並びに該抗体を含む抗体－薬物コンジュゲート、該抗体－薬物コンジュゲートを含む抗腫瘍剤等に関する。

　がんは死亡原因の上位を占め、その罹患数は人口の高齢化と共に増加することが予想されているが、未だ治療ニーズは充分に満たされていない。従来の化学療法剤は、その選択性の低さから腫瘍細胞だけでなく正常細胞に対しても傷害性を持つことによる副作用や、充分な薬剤量を投与できないことで薬剤の効果を充分に得ることが出来ないことが問題となっている。このため近年では、がん細胞に特徴的な変異や高発現を示す分子、細胞のがん化に関与する特定の分子を標的としたより選択性の高い分子標的薬や抗体医薬の開発が行われている。

　ＲｉｔｕｘｉｍａｂはＣＤ２０を標的とする抗体医薬品であり、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療薬として１９９７年にＦＤＡに承認された（非特許文献１）。Ｒｉｔｕｘｉｍａｂの主な作用期序としては、直接的なアポトーシス誘導、ＡＤＣＣ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）、ＣＤＣ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）であり、標的であるＣＤ２０を発現するびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）をはじめＢ細胞性ＮＨＬに対し劇的な治療効果を示すことから現在も広く使用されている。しかしながら、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ不応答性患者が一定数存在することに加え、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ応答性患者であっても標的であるＣＤ２０の発現低下やそれぞれの作用期序に対する耐性機構が獲得され、最終的には多くの患者で再発することが臨床におけるＢ細胞性ＮＨＬ治療の課題である（非特許文献２）。このような背景から、現在ＣＤ２０以外を標的とする抗体医薬、あるいはＲｉｔｕｘｉｍａｂとは異なった作用期序を有する抗体医薬が臨床で開発されている。

　抗体は血中安定性が高く、標的抗原に特異的に結合することから副作用の軽減が期待されており、がん細胞表面に高発現している分子に対する抗体医薬が多数開発されている。抗体の抗原特異的な結合能を利用した技術の一つとして、抗体－薬物コンジュゲート（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；ＡＤＣ）を挙げることができる。ＡＤＣは、がん細胞表面に発現している抗原に結合し、その結合によって抗原を細胞内に内在化できる抗体に、細胞傷害活性を有する薬物を結合させたものである。ＡＤＣは、がん細胞に効率的に薬物を送達できることによって、がん細胞内に薬物を蓄積させ、がん細胞を死滅させることが期待できる（非特許文献３、特許文献１及び２）。ＡＤＣとして例えば、モノクローナル抗体にカリケアマイシン誘導体を結合させ、ＣＤ３３を標的とするマイロターグ（登録商標）（ゲムツズマブ　オゾガマイシン）が急性骨髄性白血病の治療薬として、ＣＤ２２を標的とするベスポンサ（登録商標）（イノツズマブ　オゾガマイシン）が再発、難治性の前駆Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療薬として認可されている。また、モノクローナル抗体にモノメチルアウリスタチンＥを結合させＣＤ３０を標的とするアドセトリス（登録商標）（ブレンツキシマブ　ベドチン）がホジキンリンパ腫と未分化大細胞リンパ腫の治療薬として、ＣＤ７９ｂを標的とするＰｏｌｉｖｙ（登録商標）（ポラツズマブ　ベドチン）がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療薬として、ネクチン－４を標的とするＰＡＤＣＥＶ（登録商標）（エンホルツマブ　ベドチン）が、局所進行性、転移性尿路上皮癌の治療薬として認可され、モノメチルアウリスタチンＦを抗Ｂ細胞成熟抗原モノクローナル抗体に結合させたＢＬＥＮＲＥＰ（登録商標）（ベランタマブ　マフォドチン）が再発、難治性多発性骨髄腫の治療薬として認可されている。また、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体にエムタンシンを結合させたカドサイラ（登録商標）（トラスツズマブ　エムタンシン）がＨＥＲ２陽性の進行、再発乳癌の治療に用いられており、抗ＴＲＯＰ２モノクローナル抗体イリノテカンの活性代謝産物ＳＮ－３８を結合させたＴｒｏｄｅｌｖｙ（登録商標）（サシツズマブゴビテカン）が進行トリプルネガティブ乳癌の治療に用いられている。

　抗腫瘍薬としてのＡＤＣに適した標的抗原の特徴としては、がん細胞表面で特異的に高発現し、正常細胞では低発現又は発現していないこと、細胞内に内在化できること、抗原が細胞表面から分泌されないことなどを挙げることができる。また、ＡＤＣに適した抗体の重要な特徴としては、標的となる抗原に特異的に結合することに加えて、高い内在化能を有することを挙げることができる。抗体の内在化能は標的抗原と抗体の両方の性質に依存するものであり、標的の分子構造から内在化に適した抗原結合部位を推定したり、抗体の結合強度や物性等から容易に内在化能の高い抗体を推測したりすることは困難である。このため、標的抗原に対して高い内在化能を有する抗体を取得することは、有効性の高いＡＤＣを開発する上で重要な課題となっている（非特許文献４）。

　ＣＤ３７は、テトラスパニンスーパーファミリーの４回膜貫通型タンパクである（非特許文献５）。これまでの研究によれば、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化等を介した細胞生存の制御、あるいはＣＤ３７を欠損したマウスの解析においてＩｇＧ１の産生低下等が報告されているが厳密な生理学的機能は不明である（非特許文献６、７）。ＣＤ３７は前駆Ｂ細胞から成熟Ｂ細胞までの分化段階で広く発現しているが形質細胞には発現していない。また、Ｔ細胞・ＮＫ細胞・単球にも発現が認められるが、その発現レベルは低く、赤血球や血小板などの血球細胞には発現していない。腫瘍細胞では、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）に高発現しており、このような発現プロファイルはＢ細胞性悪性リンパ腫における有望な治療標的となることが示唆され、ＣＤ３７を標的としたいくつかの抗体医薬がこれまで臨床試験に進んでいる（非特許文献８）。この内、ＣＤ３７は高い内在化活性を有していることから、ＡＤＣの標的としても有望と考えられており、抗ＣＤ３７抗体にＤＭ１を結合させたＩＭＧＮ５２９が現在臨床試験中である（非特許文献９、特許文献３）。しかしながら、ＩＭＧＮ５２９は再発・難治性Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）患者を対象としたＰｈａｓｅＩ試験において、Ｏｖｅｒａｌｌ　ｒｅｓｏｐｏｎｓｅ　ｒａｔｅが１２．８％と、特定の患者にのみにしか有効性を示していない（非特許文献１０）。現在ＣＤ３７を標的とした薬剤としては、Ｂｅｔａｌｕｔｉｎ（Ｌｕｔｅｔｉｕｍ－１７７標識抗ＣＤ３７抗体）、ＧＥＮ３００９（抗ＣＤ３７バイパラトピック抗体）、ＣＡＲ３７　Ｔ　ｃｅｌｌｓ（ＣＤ３７標的ＣＡＲ　Ｔ細胞）が臨床試験中である（非特許文献１１、１２、１３）。

　カンプトテシン誘導体であるデルクステカンを抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体に結合したエンハーツ（登録商標）（トラスツズマブ　デルクステカン）がＨＥＲ２陽性の進行、再発乳癌治療に用いられている（非特許文献１４）。また、デルクステカンを結合したＡＤＣとしては、ＨＥＲ３－ＤＸｄ（非特許文献１５）、Ｔｒｏｐ２－ＤＸｄ（非特許文献１６）等が現在臨床試験中であるが、抗ＣＤ３７抗体にデルクステカンを結合させたＡＤＣ、さらにはＢ細胞性非ホジキンリンパ腫を対象疾患としたデルクステカン結合ＡＤＣは、これまで報告がない。

国際公開第２０１４／０５７６８７号米国特許出願公開第２０１６／０２９７８９０号明細書国際公開第２０１１／１１２９７８号Ｇｉｌｌｅｓ　Ｓ．，ｅｔ　ａｌ．，Ａｄｖ　Ｔｈｅｒ，　２２３２－２２７３，３４，２０１７Ａｎｄｒｅｗ　Ｒ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｂｅｓｔ　Ｐｒａｃｔ　Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｈａｅｍａｔｏｌ，　２０３－２１６，２４，２０１１Ｐｏｌａｋｉｓ　Ｐ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，３－１９，６８，２０１６Ｐｅｔｅｒｓ　Ｃ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，１－２０，３５，２０１５ＣｈａｒｒｉｎＳ．, ｅｔａｌ.，ＪＣｅｌｌＳｃｉ. ３６４１－３６４８，１２７，２０１４Ｍａｇｄａｌｅｎａ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇ　Ｄｒｕｇ．１７１－１７７，２７，２０１８ＫｎｏｂｅｌｏｃｈＫＰ, ｅｔａｌ.，ＭｏｌｌＣｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，５３６３－５３６９，２０，２０００ＺａｈｒａＰｅｔａｌ.，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｌｅｔｔｅｒｓ，１４５９－１４６６，４０，２０１８ＪｕｔｔａＤｅｔａｌ.，Ｂｌｏｏｄ，３５００－３５１０，１２２，２０１３Ａｎａｓｔａｓｉｏｓ　Ｓｅｔａｌ.，Ｉｎｖｅｓｔ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ，８６９－８７６，３６，２０１８Ａｌｅｘａｎｄｒｅ　Ｐｅｔａｌ.，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１３１５－１３２８，３４，２０２０Ｓｉｍｏｎｅ　Ｃ　ｅｔ　ａｌ.，Ｂｌｏｏｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｊｏｕｒｎａｌ，１０，３０，２０２０Ｉｒｅｎｅ　Ｓ　ｅｔ　ａｌ.，Ｂｌｏｏｄ，１４９５－１５０６，１３２，２０１８Ｓｕｓａｎ　Ｊ　ｅｔ　ａｌ.，Ｄｒｕｇｓ，５０１－５０８，８０，２０２０Ｋｉｍｉｏ　Ｙ　ｅｔ　ａｌ.，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１３９８－１４０９，３８，２０１９ https://mct.aacrjournals.org/content/early/2021/08/19/1535-7163.MCT-21-0206.abstract

　本発明の課題は、Ｂ細胞性悪性リンパ腫等のＣＤ３７陽性腫瘍細胞に対して特異的に結合する抗体、該抗体を含む抗体－薬物コンジュゲート、該抗体－薬物コンジュゲートを用いた腫瘍に対する治療効果を有する医薬組成物、当該医薬組成物を用いた腫瘍の治療方法、該抗体の製造方法及び該抗体－薬物コンジュゲートの製造方法等を提供することである。

　本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意検討し、抗ＣＤ３７抗体に、細胞内で毒性を発揮する薬剤を特定の構造のリンカーを介して結合させた抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、Ｂ細胞性悪性リンパ腫等のＣＤ３７陽性悪性腫瘍に対して抗腫瘍効果を発揮することを見出すことにより、本発明を完成させた。即ち、本発明は以下の発明を包含する。
［１］　抗ＣＤ３７抗体が、次式（ａ）～（ｆ）：
（ａ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｂ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｃ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｄ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｅ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、及び
（ｆ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
からなる群より選択されるいずれか１の式で示される薬物－リンカー構造と結合している抗体－薬物コンジュゲート。

（ここで、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－は次式：

で示される構造であり、このものの３位で抗体と結合し、１位の窒素原子上でこれを含むリンカー構造内のメチレン基と結合し、
ＧＧＦＧは、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシンからなるペプチド結合で連結しているアミノ酸配列を示し、
－（ＮＨ－ＤＸ）は、次式：

で示される、１位のアミノ基の窒素原子が結合部位となっている基であり、
抗ＣＤ３７抗体は、配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列又は配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列と９０％以上の相同性であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列又は配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列と９０％以上の相同性であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体である。）
［２］　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｇ）乃至（ｊ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体である［１］の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｇ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｉ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；及び
（ｊ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域。
［３］　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｈ）乃至（ｊ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体である［１］又は［２］の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｈ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｉ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；及び
（ｊ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域。
［４］　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｋ）乃至（ｎ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖及び軽鎖を含む抗体である、［１］乃至［３］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート：
（ｋ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｌ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｍ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；及び
（ｎ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖。
［５］　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｌ）乃至（ｎ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖及び軽鎖を含む抗体である、［１］乃至［４］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート：
（ｌ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｍ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；及び
（ｎ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖。
［６］　薬物－リンカー構造が、以下の（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）からなる群より選択されるいずれか１の式で示される［１］乃至［５］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート：
（ｃ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｄ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｅ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
［７］　薬物－リンカー構造が、以下の（ｃ）又は（ｅ）の式で示される［１］乃至［６］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート：
（ｃ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｅ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
［８］　以下の式（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）：

で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した、［１］乃至［７］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［９］　以下の式：

で示される［１］乃至［８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
（ここで、ＡＢは抗体を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体とリンカーは抗体由来のスルフヒドリル基を介して結合している。）
［１０］　抗体重鎖がＮ結合型糖鎖付加、Ｏ結合型糖鎖付加、アミノ末端のプロセッシング、カルボキシル末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、トリプトファンの酸化、アミノ末端にメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を受けている、［１］乃至［９］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１１］　抗体重鎖のカルボキシル末端において１つ又は２つのアミノ酸が欠失している［１０］の抗体－薬物コンジュゲート。
［１２］　２本の抗体重鎖の双方のカルボキシル末端において１つのアミノ酸が欠失している［１０］又は［１１］の抗体－薬物コンジュゲート。
［１３］　抗体重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている［１０］乃至［１２］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１４］　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１から１０個の範囲である［１］乃至［１３］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１５］　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２から８個の範囲である［１］乃至［１４］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１６］　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が３から８個の範囲である［１］乃至［１５］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１７］　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７から８個の範囲である［１］乃至［１６］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１８］　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が８である［１］乃至［１７］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート。
［１９］　［１］乃至［１８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を含むことを特徴とする医薬組成物。
［２０］　抗腫瘍薬であることを特徴とする、［１９］の医薬組成物。
［２１］　腫瘍がＣＤ３７を発現している腫瘍であることを特徴とする、［２０］の医薬組成物。
［２２］　腫瘍がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁体リンパ腫、バーキットリンパ腫及び慢性リンパ性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、［２０］又は［２１］の医薬組成物。
［２３］　腫瘍が末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のＴ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群及び急性骨髄性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、［２０］又は［２１］の医薬組成物。
［２４］　［１］乃至［１８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を個体に投与する工程を含む、腫瘍の治療方法。
［２５］　腫瘍がＣＤ３７を発現している腫瘍であることを特徴とする、［２４］の治療方法。
［２６］　腫瘍がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁体リンパ腫、バーキットリンパ腫及び慢性リンパ性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、［２４］又は［２５］の治療方法。
［２７］　腫瘍が末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のＴ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群及び急性骨髄性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、［２４］又は［２５］の治療方法。
［２８］　［１］乃至［１８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を含む腫瘍の治療剤。
［２９］　腫瘍の治療のための［１］乃至［１８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物の使用。
［３０］　腫瘍を治療するための薬剤の調製のための［１］乃至［１８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物の使用。
［３１］　［１］乃至［１８］のいずれか１つの抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を、０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ含む生理食塩水溶液製剤。

　さらに、本発明は以下の発明も包含する。
（ｉ）ＣＤ３７に特異的に結合し、以下の（ａ）乃至（ｄ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体又は当該抗体の機能性断片：
（ａ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｃ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；及び
（ｄ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域。
（ｉｉ）ＣＤ３７に特異的に結合し、以下の（ｅ）乃至（ｈ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖及び軽鎖を含む（ｉ）に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片：
（ｅ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｆ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｇ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；及び
（ｈ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖。
（ｉｉｉ）（ｉ）又は（ｉｉ）に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片をコードするポリヌクレオチド。
（ｉｖ）（ｉｉｉ）に記載のポリヌクレオチドを含有する発現ベクター。
（ｖ）（ｉｖ）に記載の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞。
（ｖｉ）宿主細胞が真核細胞である（ｖ）に記載の宿主細胞。
（ｖｉｉ）（ｖ）又は（ｖｉ）に記載の宿主細胞を培養する工程、及び当該工程で得られた培養物から目的の抗体を採取する工程を含むことを特徴とする抗体又は当該抗体の機能性断片の製造方法。
（ｖｉｉｉ）（ｖｉｉ）に記載の製造方法により得られることを特徴とする抗体又は当該抗体の機能性断片。
（ｉｘ）Ｎ結合型糖鎖付加、Ｏ結合型糖鎖付加、アミノ末端のプロセッシング、カルボキシル末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、トリプトファンの酸化、アミノ末端にメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を含む（ｖｉｉｉ）に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片。
（ｘ）重鎖のカルボキシル末端において１つ又は２つのアミノ酸が欠失している（ｉｘ）に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片。
（ｘｉ）２本の重鎖の双方でカルボキシル末端において１つのアミノ酸が欠失している（ｉｘ）又は（ｘ）に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片。
（ｘｉｉ）重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている（ｉｘ）乃至（ｘｉ）のいずれか１に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片。
（ｘｉｉｉ）（ｖｉｉｉ）乃至（ｘｉｉ）のいずれか１に記載の抗体又は当該抗体の機能性断片に薬物が結合している抗体－薬物コンジュゲート。
（ｘｉｖ）（ｖ）又は（ｖｉ）に記載の宿主細胞を培養する工程、当該工程で得られた培養物から目的の抗体又は当該抗体の機能性断片を採取する工程、及び当該工程で得られた抗体又は当該抗体の機能性断片と薬物－リンカー中間化合物を反応させる工程を含むことを特徴とする、抗体－薬物コンジュゲートの製造方法。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体は、Ｂ細胞性悪性リンパ腫等のＣＤ３７陽性腫瘍細胞に対して特異的に結合することを特徴とする。該抗体に、細胞内で毒性を発揮する薬剤を特定の構造のリンカーを介して結合させた抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは、ＣＤ３７を発現するがん細胞を有する患者に投与することによって、優れた抗腫瘍効果及び安全性を達成することが期待できる。即ち、本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは、Ｂ細胞性悪性リンパ腫等に対する抗腫瘍剤として有用である。また、本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは生理食塩水中の回収率が良好であり、生理食塩水中で取り扱いが可能である。

ｈｍＡｂ－Ｌ１１軽鎖をコードするヌクレオチド配列及びｈｍＡｂ－Ｌ１１軽鎖のアミノ酸配列を示した図である。ｈｍＡｂ－Ｈ１１重鎖をコードするヌクレオチド配列及びｈｍＡｂ－Ｈ１１重鎖のアミノ酸配列を示した図である。ｈｍＡｂ－Ｈ５４１重鎖をコードするヌクレオチド配列及びｈｍＡｂ－Ｈ５４１重鎖のアミノ酸配列を示した図である。ｈｍＡｂ－Ｈ５５１重鎖をコードするヌクレオチド配列及びｈｍＡｂ－Ｈ５５１重鎖のアミノ酸配列を示した図である。ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ重鎖をコードするヌクレオチド配列及びｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ重鎖のアミノ酸配列を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートのＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７に対する結合性を評価した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７に対して示すｉｎ　ｖｉｔｒｏ細胞増殖抑制活性を評価した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－８を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート、ＰＯＬＩＶＹ（登録商標）及びＩＭＧＮ５２９が、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート、ＰＯＬＩＶＹ及びＩＭＧＮ５２９が、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－８を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート、ＰＯＬＩＶＹ及びＩＭＧＮ５２９が、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＮＵ－ＤＵＬ－１を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－４を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ、Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ及びＴＲＥＡＫＩＳＹＭ（登録商標）が、ＣＤ３７陽性ヒト慢性リンパ性白血病細胞株ＪＶＭ－３を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート、ＰＯＬＩＶＹ及びＩＭＧＮ５２９が、ＣＤ３７陽性ヒト濾胞性リンパ腫細胞株ＤＯＨＨ－２を移植したＳＣＩＤマウスに対して示すｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図である。

定義
　本発明において、「遺伝子」とは、タンパク質のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列が含まれる核酸分子又はその相補鎖を意味し、例えば、タンパク質のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列又はその配列に相補的なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ等は「遺伝子」の意味に含まれる。かかる遺伝子は一本鎖、二本鎖又は三本鎖以上のヌクレオチドであり、ＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖の会合体、一本のヌクレオチド鎖上にリボヌクレオチド（ＲＮＡ）とデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）が混在するもの及びそのようなヌクレオチド鎖を含む二本鎖又は三本鎖以上のヌクレオチドも「遺伝子」の意味に含まれる。本発明の「ＣＤ３７遺伝子」としては、例えば、ＣＤ３７タンパク質のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列が含まれるＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ等を挙げることができる。

　本発明において、「ヌクレオチド」と「核酸」及び「核酸分子」は同義であり、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プローブ、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、プライマー等もそれらの意味に含まれる。かかるヌクレオチドは一本鎖、二本鎖又は三本以上の鎖からなるヌクレオチドであり、ＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖の会合体、一本のヌクレオチド鎖上にリボヌクレオチド（ＲＮＡ）とデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）が混在するもの及びそのようなヌクレオチド鎖を含む二本鎖又は三本以上の鎖の会合体も「ヌクレオチド」の意味に含まれる。

　本発明において、「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は同義である。

　本発明において、「タンパク質」は別途指摘しない限り、霊長類（例えばヒト及びサル）及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からの「タンパク質」を指す。

　本発明において、「抗原」を「免疫原」の意味に用いることがある。

　本発明において、「細胞」には、動物個体に由来する各種細胞、継代培養細胞、初代培養細胞、細胞株、組換え細胞及び微生物等も含まれる。

　本発明において、抗体が結合する「部位」、即ち抗体が認識する「部位」とは、抗体が結合又は認識する抗原上の部分ペプチド又は部分高次構造を意味する。本発明においては、かかる部位のことをエピトープ、抗体の結合部位とも呼ぶ。本発明の抗ＣＤ３７抗体が結合又は認識するＣＤ３７タンパク質上の部位としては、ＣＤ３７タンパク質上の部分ペプチド又は部分高次構造等を例示することができる。

　本発明において、「ＣＤＲ」とは、相補性決定領域（ＣＤＲ：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ）を意味し、「ＦＲ」とは、フレームワーク領域（ＦＲ：Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　Ｒｅｇｉｏｎ）を意味する。抗体分子の重鎖及び軽鎖にはそれぞれ３箇所のＣＤＲがあることが知られている。ＣＤＲは、超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ　ｄｏｍａｉｎ）とも呼ばれ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域内にあって、一次構造の変異性が特に高い部位であり、重鎖及び軽鎖のポリペプチド鎖の一次構造上において、通常、それぞれ３ヶ所に分離している。本発明においては、抗体の相補性決定領域について、重鎖の相補性決定領域を重鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３と表記し、軽鎖の相補性決定領域を軽鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３と表記する。これらの部位は立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。重鎖可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３以外の部分をＦＲと呼び、アミノ末端からＣＤＲＨ１の手前まで、ＣＤＲＨ１の次からＣＤＲＨ２の手前まで、ＣＤＲＨ２の次からＣＤＲＨ３の手前まで、及び、ＣＤＲＨ３の次からカルボキシル末端までを、それぞれＦＲＨ１乃至ＦＲＨ４と呼ぶ。同様に、軽鎖可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３以外の部分もＦＲであり、アミノ末端からＣＤＲＬ１の手前まで、ＣＤＲＬ１の次からＣＤＲＬ２の手前まで、ＣＤＲＬ２の次からＣＤＲＬ３の手前まで、及び、ＣＤＲＬ３の次からカルボキシル末端までを、それぞれＦＲＬ１乃至ＦＲＬ４と呼ぶ。即ち、重鎖及び軽鎖の可変領域（のアミノ酸配列）においては、ＦＲＨ１－ＣＤＲＨ１－ＦＲＨ２－ＣＤＲＨ２－ＦＲＨ３－ＣＤＲＨ３－ＦＲＨ４及びＦＲＬ１－ＣＤＲＬ１－ＦＲＬ２－ＣＤＲＬ２－ＦＲＬ３－ＣＤＲＬ３－ＦＲＬ４の順でアミノ末端側からカルボキシル末端に向けて連続的に並んでいる。

　本発明において、「抗体の機能性断片」とは、元の抗体が奏する機能の少なくとも一部を奏する抗体断片を意味する。「抗体の機能性断片」としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、一本鎖免疫グロブリン等を挙げることができるが、それらに限定されるものではない。かかる抗体の機能性断片は、抗体タンパク質の全長分子をパパイン、ペプシン等の酵素で処理することによって得られたものに加え、組換え遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された組換えタンパク質であってもよい。「抗体の機能性断片」のうち、抗原即ちヒトＣＤ３７への結合活性を有するものを、「抗体の結合断片」という。

１．ＣＤ３７
　ＣＤ３７は、テトラスパニンスーパーファミリーに属する４回膜貫通型タンパクである（ＣｈａｒｒｉｎＳ．, ｅｔａｌ.，ＪＣｅｌｌＳｃｉ. ３６４１－３６４８，１２７，２０１４）。２８１アミノ酸からなる膜タンパク質であり、アミノ末端側、カルボキシル末端側共に細胞内に持ち、ＮＭ＿００１７７４、ＮＰ_００１７６５（ＮＣＢＩ）等のアクセッション番号により参照可能である。

　本発明で用いるＣＤ３７タンパク質は、ヒト、非ヒト哺乳動物（ラット、マウス、サル等）のＣＤ３７発現細胞から直接精製して使用するか、あるいは当該細胞の細胞膜画分を調製して使用することができ、また、ＣＤ３７をｉｎ　ｖｉｔｒｏにて合成する、あるいは遺伝子操作によって宿主細胞に産生させることによって得ることができる。遺伝子操作では、具体的には、ＣＤ３７　ｃＤＮＡを発現可能なベクターに組み込んだ後、転写と翻訳に必要な酵素、基質及びエネルギー物質を含む溶液中で合成する、あるいは他の原核生物、又は真核生物の宿主細胞を形質転換させることによってＣＤ３７を発現させることによって、該タンパク質を得ることが出来る。また、前記の遺伝子操作によるＣＤ３７発現細胞、あるいはＣＤ３７を発現している細胞株をＣＤ３７タンパク質として使用することも可能である。また、ＣＤ３７のｃＤＮＡを組み込んだ発現ベクターを直接被免疫動物に投与し被免疫動物の体内でＣＤ３７を発現させることもできる。

　また、上記ＣＤ３７タンパク質のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が置換、欠失及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、当該タンパク質と同等の生物活性を有するタンパク質もＣＤ３７に含まれる。なお、本明細書中における「数個」とは、１乃至１０個、１乃至９個、１乃至８個、１乃至７個、１乃至６個、１乃至５個、１乃至４個、１乃至３個、又は１若しくは２個を意味する。

　ヒトＣＤ３７タンパク質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する。ヒトＣＤ３７タンパク質の細胞外領域は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列の３９～５９番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン１（本明細書中、ＥＣ１とも称する。）、配列番号１８に記載のアミノ酸配列の１１２～２４１番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン２（本明細書中、ＥＣ２とも称する。）から構成される。

配列番号１８
MSAQESCLSL　IKYFLFVFNL　FFFVLGSLIF　CFGIWILIDK　TSFVSFVGLA　FVPLQIWSKV　LAISGIFTMG　IALLGCVGAL　KELRCLLGLY　FGMLLLLFAT　QITLGILIST　QRAQLERSLR　DVVEKTIQKY　GTNPEETAAE　ESWDYVQFQL　RCCGWHYPQD　WFQVLILRGN　GSEAHRVPCS　CYNLSATNDS　TILDKVILPQ　LSRLGHLARS　RHSADICAVP　AESHIYREGC　AQGLQKWLHN　NLISIVGICL　GVGLLELGFM　TLSIFLCRNL　DHVYNRLARY　R

　ヒトＣＤ３７タンパク質の配列は、以下の記載を参照することも可能である。
https://www.uniprot.org/uniprot/P11049

２．抗ＣＤ３７抗体の製造
（２－１）抗体
　本発明においては、ＣＤ３７と結合する抗体及びＣＤ３７を認識する抗体を、いずれも「抗ＣＤ３７抗体」と表記するか又は「ＣＤ３７抗体」と略記することがある。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体は、いずれの種に由来してもよいが、好ましくは、ヒト、ラット、マウス及びウサギを例示できる。ヒト以外の種に由来する場合は、既知の技術を用いて、キメラ化又はヒト化することが望ましい。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体は腫瘍細胞を標的にできる抗体であり、即ち腫瘍細胞を認識できる特性、腫瘍細胞に結合できる特性、そして腫瘍細胞内に取り込まれて内在化する特性等を備えている。したがって、本発明の抗ＣＤ３７抗体と抗腫瘍活性を有する化合物を、リンカーを介して結合させて抗体－薬物コンジュゲートとすることができる。

　抗体の腫瘍細胞への結合性は、フローサイトメトリーを用いて確認できる。腫瘍細胞内への抗体の取り込みは、（１）治療抗体に結合する二次抗体（蛍光標識）を用いて細胞内に取り込まれた抗体を蛍光顕微鏡で可視化するアッセイ（Ｃｅｌｌ　Ｄｅａｔｈ　ａｎｄ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　（２００８）　１５，　７５１－７６１）、（２）治療抗体に結合する二次抗体（蛍光標識）を用いて細胞内に取り込まれた蛍光量を測定するアッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｅｌｌ　Ｖｏｌ．　１５，　５２６８－５２８２，　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２００４）又は（３）治療抗体に結合するイムノトキシンを用いて、細胞内に取り込まれると毒素が放出されて細胞増殖が抑制されるというＭａｂ－ＺＡＰアッセイ（Ｂｉｏ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　２８：１６２－１６５，　Ｊａｎｕａｒｙ　２０００）を用いて確認できる。イムノトキシンとしては、ジフテテリア毒素の触媒領域とプロテインＧとのリコンビナント複合タンパク質も使用可能である。

　本明細書で言う「高い内在化能」とは、当該抗体とサポリン標識抗ラットＩｇＧ抗体を投与したＣＤ３７発現細胞の生存率（抗体未添加時の細胞生存率を１００％とした相対率で表したもの）が、好ましくは７０％以下、より好ましくは６０％以下であることを意味する。

　本発明の抗体－薬物コンジュゲートは抗腫瘍効果を発揮する化合物を結合させてあるので、抗体自体が抗腫瘍効果を有することは、好ましいが、必須ではない。抗腫瘍性化合物の細胞傷害性を腫瘍細胞において特異的・選択的に発揮させる目的からは、抗体が内在化して腫瘍細胞に移行する性質のあることが重要であり、好ましい。

　抗ＣＤ３７抗体は、この分野で実施される方法を用いて、抗原となるポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができるが、ＣＤ３７が４回膜貫通型のタンパク質であることから、立体構造を保持したＣＤ３７を抗原として用いることが好ましい。そのような方法として、ＤＮＡ免疫を挙げることができる。

　抗原の由来はヒトに限定されず、マウス、ラット等のヒト以外の動物に由来する抗原を動物に免疫することもできる。この場合には、取得された異種抗原に結合する抗体とヒト抗原との交差性を試験することによって、ヒトの疾患に適用可能な抗体を選抜できる。

　また公知の方法として（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６，　ｐ．４９５－４９７、Ｋｅｎｎｅｔ，　Ｒ．ｅｄ．，　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，　ｐ．３６５－３６７，　Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎ．Ｙ．（１９８０））に従って、抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させることによってハイブリドーマを樹立し、モノクローナル抗体を得ることもできる。
以下具体的にＣＤ３７に対する抗体の取得方法を説明する。

（１）抗原の調製
　抗原は抗原タンパク質をコードする遺伝子を遺伝子操作によって宿主細胞に産生させることによって得ることができる。具体的には、抗原遺伝子を発現可能なベクターを作製し、これを宿主細胞に導入して該遺伝子を発現させ、発現した抗原を精製すればよい。上記の遺伝子操作による抗原発現細胞、あるいは抗原を発現している細胞株を動物に免疫する方法を用いることによっても抗体を取得できる。

　また、抗原タンパク質を用いずに、抗原タンパク質のｃＤＮＡを発現ベクターに組み込んで被免疫動物に投与し、被免疫動物の体内で抗原タンパク質を発現させ、抗原タンパク質に対する抗体を産生させることによっても抗体を取得することができる。
（２）抗ＣＤ３７モノクローナル抗体の製造
　本発明で使用される抗ＣＤ３７抗体は、特に制限はないが、例えば、本願の配列表で示されたアミノ酸配列で特定される抗体を好適に使用することができる。本発明において使用される抗ＣＤ３７抗体としては、以下の特性を有するものが望ましい。
（１）以下の特性を有することを特徴とする抗体；
　（ａ）ＣＤ３７に特異的に結合する。

　（ｂ）ＣＤ３７と結合することによってＣＤ３７発現細胞に内在化する活性を有する。
（２）ＣＤ３７がヒトＣＤ３７である上記（１）に記載の抗体。
（３）ＣＤ３７の高次構造を認識する上記（１）又は（２）に記載の抗体。

　本発明のＣＤ３７に対する抗体の取得方法は、抗ＣＤ３７抗体を取得できる限りにおいて、特に制限されないが、ＣＤ３７が膜貫通型のタンパク質であることから、高次構造を保持したＣＤ３７を抗原として用いることが好ましい。

　好ましい抗体の取得方法の一例としてＤＮＡ免疫法を挙げることができる。ＤＮＡ免疫法とは、抗原の発現プラスミドをマウスやラットなどの動物個体に遺伝子導入し、抗原を個体内で発現させることによって、抗原に対する免疫を誘導する手法である。遺伝子導入の手法には、直接プラスミドを筋肉に注射する方法や、リポソームやポリエチレンイミンなどの導入試薬を静脈注射する方法、ウイルスベクターを用いる手法、プラスミドを付着させた金粒子をＧｅｎｅ　Ｇｕｎにより射ち込む手法、急速に大量のプラスミド溶液を静脈注射するＨｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ法などが存在する。発現プラスミドの筋注による遺伝子導入法に関して、発現量を向上させる手法として、プラスミドを筋注後、同部位にエレクトロポレーションを加えるｉｎ　ｖｉｖｏ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎという技術が知られている（Ａｉｈａｒａ　Ｈ，　Ｍｉｙａｚａｋｉ　Ｊ．　Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．　１９９８　Ｓｅｐ；１６（９）：８６７－７０又はＭｉｒ　ＬＭ，　Ｂｕｒｅａｕ　ＭＦ，　Ｇｅｈｌ　Ｊ，　Ｒａｎｇａｒａ　Ｒ，　Ｒｏｕｙ　Ｄ，　Ｃａｉｌｌａｕｄ　ＪＭ，　Ｄｅｌａｅｒｅ　Ｐ，　Ｂｒａｎｅｌｌｅｃ　Ｄ，　Ｓｃｈｗａｒｔｚ　Ｂ，　Ｓｃｈｅｒｍａｎ　Ｄ．　Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ．　１９９９　Ａｐｒ　１３；９６（８）：４２６２－７．）。本手法はプラスミドの筋注前にヒアルロニダーゼで筋肉を処理することにより、さらに発現量が向上する（ＭｃＭａｈｏｎ　ＪＭ１，　Ｓｉｇｎｏｒｉ　Ｅ，　Ｗｅｌｌｓ　ＫＥ，　Ｆａｚｉｏ　ＶＭ，　Ｗｅｌｌｓ　ＤＪ．　Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ．　２００１　Ａｕｇ；８（１６）：１２６４－７０）。また、ハイブリドーマの作製は公知の方法によって行うことができ、例えば、Ｈｙｂｒｉｍｕｎｅ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｔｏ　Ｐｕｌｓｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて行うこともできる。

　具体的なモノクローナル抗体の取得例としては、以下をあげることもできる。
（ａ）ＣＤ３７のｃＤＮＡを発現ベクターに組み込み、エレクトロポレーションや遺伝子銃等の方法によって、そのベクターを直接被免疫動物に投与することによって、動物体内においてＣＤ３７を発現させることによって、免疫反応を惹起させることができる。エレクトロポレーション等によるベクターの投与は抗体価を挙げるために必要であれば、１回でも複数回でもよく、好ましくは複数回である、
（ｂ）免疫反応を惹起された上述の動物より、抗体産生細胞を含む組織（例えばリンパ節）の採取、
（ｃ）骨髄腫細胞（以下「ミエローマ」という）の調製、
（ｄ）抗体産生細胞とミエローマとの細胞融合、
（ｅ）目的とする抗体を産生するハイブリドーマ群の選別、
（ｆ）単一細胞クローンへの分割（クローニング）、
（ｇ）モノクローナル抗体を大量に製造するためのハイブリドーマ培養、又はハイブリドーマを移植した動物の飼育。

　得られるモノクローナル抗体は、ＣＤ３７に対して高い抗原特異性を有する。当該のモノクローナル抗体としては、特に制限はないが、抗ＣＤ３７マウスモノクローナル抗体ＨＨ１（Ｓｍｅｌａｎｄ　Ｅ，　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２１（３），２０５－２１４（１９８５））を挙げることができる。
（ｈ）このようにして製造されたモノクローナル抗体の生理活性（内在化活性）、及びその結合特異性の検討、あるいは標識試薬としての特性の検定
　ここで用いられる抗体価の測定法としては、例えば、フローサイトメトリー又はＣｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ法を挙げることができるがこれらの方法に制限されない。
さらに、「２．抗ＣＤ３７抗体の製造」記載の具体的なモノクローナル抗体の取得例（ａ）乃至（ｈ）の工程を再度実施して別途に独立してモノクローナル抗体を取得した場合や他の方法によって別途モノクローナル抗体を取得した場合においても、（ｇ）の工程で得られた抗ＣＤ３７抗体と同等の細胞傷害活性を有する抗体を取得することが可能である。この様な抗体の一例として、（ｇ）の工程で得られた抗ＣＤ３７抗体と同一のエピトープに結合する抗体を挙げることができる。新たに作製されたモノクローナル抗体が、前記抗ＣＤ３７抗体の結合する部分ペプチド又は部分立体構造に結合すれば、該モノクローナル抗体が同一のエピトープに結合すると判定することができる。また、前記抗ＣＤ３７抗体のＣＤ３７に対する結合に対して該モノクローナル抗体が競合する（即ち、該モノクローナル抗体が、前記抗ＣＤ３７抗体とＣＤ３７の結合を妨げる）ことを確認することによって、具体的なエピトープの配列又は構造が決定されていなくても、該モノクローナル抗体が前記抗ＣＤ３７と同一のエピトープに結合すると判定することができる。エピトープが同一であると確認された場合、該モノクローナル抗体が前記抗ＣＤ３７抗体と同等の抗原結合能又は生物活性を有していることが強く期待される。

（３）その他の抗体
　本発明の抗体には、上記ＣＤ３７に対するモノクローナル抗体に加え、ヒトに対する異種抗原能を低下させること、抗体－薬物コンジュゲートの物性の改善等を目的として人為的に改変した遺伝子組み換え型抗体、例えば、キメラ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、ヒト化（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）抗体、ヒト（Ｈｕｍａｎ）抗体等も含まれる。これらの抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。

　キメラ抗体としては、抗体の可変領域と定常領域が互いに異種である抗体、例えばマウス又はラット由来抗体の可変領域をヒト由来の定常領域に接合したキメラ抗体を挙げることができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１，６８５１－６８５５，（１９８４）参照）。

　ヒト化抗体としては、ＣＤＲのみをヒト由来の抗体に組み込んだ抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２１，ｐ．５２２－５２５参照）、ＣＤＲ移植法によって、ＣＤＲの配列に加え一部のフレームワークのアミノ酸残基もヒト抗体に移植した抗体（国際公開第９０／０７８６１号）、更に、抗原に対する結合能を維持しつつ、一部のＣＤＲのアミノ酸配列を改変した抗体を挙げることができる。

　抗ＣＤ３７マウスモノクローナル抗体ＨＨ１のヒト化抗体の実例としては、ｈｍＡｂ－Ｌ１１の軽鎖可変領域、並びにｈｍＡｂ－Ｈ１１、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１又はｈｍＡｂ－Ｈ１１ａのいずれかの重鎖可変領域を含んでなる抗体を含む。ｈｍＡｂ－Ｌ１１のアミノ酸配列を、配列番号２に示し、ｈｍＡｂ－Ｈ１１、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１又はｈｍＡｂ－Ｈ１１ａのアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４、６、８又は１０に示す。ｈｍＡｂにおいて、軽鎖可変領域は配列番号２で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至１２８に示される配列からなり、重鎖可変領域はそれぞれの配列番号で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至１３８に示される配列からなる。さらに、本発明の抗体はｈｍＡｂ－Ｌ１１の軽鎖全長、並びにｈｍＡｂ－Ｈ１１、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１又はｈｍＡｂ－Ｈ１１ａのいずれかの重鎖全長を含んでなる抗体を含む。ｈｍＡｂ－Ｌ１１の軽鎖全長アミノ酸配列は、配列番号２で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３４に示される配列を含んでなり、ｈｍＡｂ－Ｈ１１、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１又はｈｍＡｂ－Ｈ１１ａの重鎖全長アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４、６、８又は１０で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６８に示される配列を含んでなる。具体的にはｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１又はｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１を挙げることができる。

　配列番号２において、４４乃至５４番目のアミノ酸残基からなる配列（ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＤ：配列番号１９）はＣＤＲＬ１、７０乃至７６番目のアミノ酸残基からなる配列（ＷＡＳＴＲＨＴ：配列番号２０）はＣＤＲＬ２、１０９乃至１１７番目のアミノ酸残基からなる配列（ＲＱＨＹＳＴＰＦＴ：配列番号２１）はＣＤＲＬ３を示す。配列番号４、６、８及び１０において、４５乃至５４番目のアミノ酸残基からなる配列（ＧＹＳＦＴＤＹＮＭＹ：配列番号２２）はＣＤＲＨ１、６９乃至７８番目のアミノ酸残基からなる配列（ＹＩＤＰＹＮＧＤＴＴ：配列番号２３）はＣＤＲＨ２、１１８乃至１２７番目のアミノ酸残基からなる配列（ＳＰＹＧＨＹＡＭＤＹ：配列番号２４）はＣＤＲＨ３を示す。なお、記載したＣＤＲ配列はＡｂＭ定義（Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，　Ｃｈａｐｔｅｒ　５　，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　Ｔｏｏｌｓ　ｆｏｒ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ａｎｄｒｅｗ　Ｃ．　Ｒ．　Ｍａｒｔｉｎ，　Ｊａｍｅｓ　Ａｌｌｅｎ，　２００７）に準じて記載した。

　また、本明細書中におけるアミノ酸の置換としては保存的アミノ酸置換が好ましい。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸側鎖に関連のあるアミノ酸グループ内で生じる置換である。好適なアミノ酸グループは、以下のとおりである：酸性グループ＝アスパラギン酸、グルタミン酸；塩基性グループ＝リシン、アルギニン、ヒスチジン；非極性グループ＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；及び非帯電極性ファミリー＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。他の好適なアミノ酸グループは次のとおりである：脂肪族ヒドロキシグループ＝セリン及びスレオニン；アミド含有グループ＝アスパラギン及びグルタミン；脂肪族グループ＝アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；並びに芳香族グループ＝フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン。かかるアミノ酸置換は元のアミノ酸配列を有する物質の特性を低下させない範囲で行うのが好ましい。

　上記の重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列と高い相同性を示す配列を組み合わせることによって、上記の各抗体と同等の生物活性を有する抗体を選択することが可能である。このような相同性は、一般的には８０％以上の相同性であり、好ましくは８５％以上の相同性であり、より好ましくは９０％以上の相同性であり、さらに好ましくは９５％以上の相同性であり、最も好ましくは９９％以上の相同性である。また、重鎖又は軽鎖のアミノ酸配列に１乃至数個のアミノ酸残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を組み合わせることによっても、上記の各抗体と同等の生物活性を有する抗体を選択することが可能である。

　二種類のアミノ酸配列間の相同性は、Ｂｌａｓｔ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍ　ｖｅｒｓｉｏｎ　２．２．２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，　Ｓｔｅｐｈｅｎ　Ｆ．，Ｔｈｏｍａｓ　Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ，Ａｌｅｊａｎｄｒｏ　Ａ．Ｓｃｈaｆｆｅｒ，　Ｊｉｎｇｈｕｉ　Ｚｈａｎｇ，　Ｚｈｅｎｇ　Ｚｈａｎｇ，　Ｗｅｂｂ　Ｍｉｌｌｅｒ，　ａｎｄ　Ｄａｖｉｄ　Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９９７），「Ｇａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴ　ａｎｄ　ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄａｔａｂａｓｅ　ｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒａｍｓ」，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２）のデフォルトパラメーターを使用することによって決定することができる。Ｂｌａｓｔ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍは、インターネットでｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔにアクセスすることによっても使用することができる。

　なお、配列表の配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列中で、１乃至２０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１乃至１２８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１２９乃至２３４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号２の配列は図１に記載されている。

　また、配列番号４、６、８又は１０に示される重鎖アミノ酸配列中で、１乃至１９番目のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０乃至１３８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１３９乃至４６８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号３、５、７又は９の配列は図２、３、４又は５に記載されている。

　本発明の抗体としては、さらに、ＣＤ３７に結合する、ヒト抗体を挙げることができる。抗ＣＤ３７ヒト抗体とは、ヒト染色体由来の抗体の遺伝子配列のみを有するヒト抗体を意味する。抗ＣＤ３７ヒト抗体は、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子を含むヒト染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを用いた方法（Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）１６，ｐ．１３３－１４３，；Ｋｕｒｏｉｗａ，Ｙ．ｅｔ．ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．（１９９８）２６，ｐ．３４４７－３４４８；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｖｏｌ．１０，ｐ．６９－７３（Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｙ．，Ｍａｔｓｕｄａ，Ｔ．ａｎｄ　Ｉｉｊｉｍａ，Ｓ．ｅｄｓ．），Ｋｌｕｗｅｒ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９．；Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ｅｔ．ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００）９７，ｐ．７２２－７２７等を参照。）によって取得することができる。

　このようなヒト抗体産生マウスは、具体的には、内在性免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の遺伝子座が破壊され、代わりに酵母人工染色体（Ｙｅａｓｔ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＹＡＣ）ベクター等を介してヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の遺伝子座が導入された遺伝子組み換え動物として、ノックアウト動物及びトランスジェニック動物の作製及びこれらの動物同士を掛け合わせることによって作り出すことができる。

　また、遺伝子組換え技術によって、そのようなヒト抗体の重鎖及び軽鎖の各々をコードするｃＤＮＡ、好ましくは該ｃＤＮＡを含むベクターによって真核細胞を形質転換し、遺伝子組換えヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞を培養することによって、この抗体を培養上清中から得ることもできる。

　ここで、宿主としては例えば真核細胞、好ましくはＣＨＯ細胞、リンパ球やミエローマ等の哺乳動物細胞を用いることができる。

　また、ヒト抗体ライブラリーより選別したファージディスプレイ由来のヒト抗体を取得する方法（Ｗｏｒｍｓｔｏｎｅ，Ｉ．Ｍ．ｅｔ．ａｌ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ　＆　Ｖｉｓｕａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ．（２００２）４３（７），ｐ．２３０１－２３０８；Ｃａｒｍｅｎ，Ｓ．ｅｔ．ａｌ．，Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ　ｉｎ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９－２０３；Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）１０９（３），ｐ．４２７－４３１等参照。）も知られている。

　例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージ表面に発現させて、抗原に結合するファージを選択するファージディスプレイ法（Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５－１１１６）を用いることができる。

　抗原に結合することで選択されたファージの遺伝子を解析することによって、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。

　抗原に結合するｓｃＦｖのＤＮＡ配列が明らかになれば、当該配列を有する発現ベクターを作製し、適当な宿主に導入して発現させることによってヒト抗体を取得することができる（国際公開第９２／０１０４７号、同９２／２０７９１号、同９３／０６２１３号、同９３／１１２３６号、同９３／１９１７２号、同９５／０１４３８号、同９５／１５３８８号、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３－４５５、Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５－１１１６）。

　新たに作製されたヒト抗体が、本明細書に記載のＣＤ３７抗体の結合する部分ペプチド又は部分立体構造に結合すれば、該ヒト抗体が同一のエピトープに結合すると判定することができる。また、本明細書に記載のＣＤ３７抗体のＣＤ３７に対する結合に対して該ヒト抗体が競合する（即ち、該ヒト抗体が本明細書に記載のＣＤ３７抗体とＣＤ３７の結合を妨げる）ことを確認することによって、具体的なエピトープの配列又は構造が決定されていなくても、該ヒト抗体が本明細書に記載のＣＤ３７抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。エピトープが同一であると確認された場合、該ヒト抗体が本明細書に記載のＣＤ３７抗体と同等の抗原結合能又は生物活性を有していることが強く期待される。

　以上の方法によって得られたキメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体は、公知の方法等によって抗原に対する結合性を評価し、好適な抗体を選抜することができる。

　抗体の性質を比較する際の別の指標の一例としては、抗体の安定性を挙げることができる。示差走査カロリメトリー（ＤＳＣ）は、タンパクの相対的構造安定性のよい指標となる熱変性中点（Ｔｍ）を素早く、また正確に測定することができる装置である。ＤＳＣを用いてＴｍ値を測定し、その値を比較することによって、熱安定性の違いを比較することができる。抗体の保存安定性は、抗体の熱安定性とある程度の相関を示すことが知られており（Ｌｏｒｉ　Ｂｕｒｔｏｎ，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７）１２，ｐ．２６５－２７３）、熱安定性を指標に、好適な抗体を選抜することができる。抗体を選抜するための他の指標としては、適切な宿主細胞における収量が高いこと、及び水溶液中での凝集性が低いことを挙げることができる。例えば収量の最も高い抗体が最も高い熱安定性を示すとは限らないので、以上に述べた指標に基づいて総合的に判断して、ヒトへの投与に最も適した抗体を選抜する必要がある。

　本発明の抗体には抗体の修飾体も含まれる。当該修飾体とは、本発明の抗体に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ－結合又はＯ－結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ結合型又はＯ結合型糖鎖付加、アミノ末端又はカルボキシル末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、トリプトファンの酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによってアミノ末端にメチオニン残基が付加したもの等が含まれる。また、本発明の抗体又は抗原の検出又は単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾物の意味に含まれる。このような本発明の抗体の修飾物は、抗体の安定性及び血中滞留性の改善、抗原性の低減、抗体又は抗原の検出又は単離等に有用である。

　また、本発明の抗体に結合している糖鎖修飾を調節すること（グリコシル化、脱フコース化等）によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、国際公開第１９９９／５４３４２号、同２０００／６１７３９号、同２００２／３１１４０号、同２００７／１３３８５５号、同２０１３/１２００６６号等が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明の抗体には当該糖鎖修飾を調節された抗体も含まれる。

（２－２）抗体の製造方法
　抗体遺伝子を一旦単離した後、適当な宿主に導入して抗体を作製する場合には、適当な宿主と発現ベクターの組み合わせを使用することができる。抗体遺伝子の具体例としては、本明細書に記載された抗体の重鎖配列をコードする遺伝子、及び軽鎖配列をコードする遺伝子を組み合わせたものを挙げることができる。宿主細胞を形質転換する際には、重鎖配列遺伝子と軽鎖配列遺伝子は、同一の発現ベクターに挿入されていることが可能であり、又別々の発現ベクターに挿入されていることも可能である。

　真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞、真核微生物を用いることができる。特に動物細胞としては、哺乳類細胞、例えば、サルの細胞であるＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．Ｃｅｌｌ（１９８１）２３，ｐ．１７５－１８２、ＡＴＣＣ　ＣＲＬ－１６５０）、マウス線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ－１６５８）やチャイニーズ・ハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞、ＡＴＣＣ　ＣＣＬ－６１）のジヒドロ葉酸還元酵素欠損株（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ａｎｄ　Ｃｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８０）７７，ｐ．４１２６－４２２０）、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ　２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を挙げることができる。

　原核細胞を使用する場合は、例えば、大腸菌、枯草菌を挙げることができる。

　これらの細胞に目的とする抗体遺伝子を形質転換によって導入し、形質転換された細胞をｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養することによって抗体が得られる。当該培養においては抗体の配列によって収量が異なる場合があり、同等な結合活性を持つ抗体の中から収量を指標に医薬としての生産が容易なものを選別することが可能である。よって、本発明の抗体には、上記形質転換された宿主細胞を培養する工程、及び当該工程で得られた培養物から目的の抗体又は当該抗体の機能性断片を採取する工程を含むことを特徴とする当該抗体の製造方法によって得られる抗体も含まれる。

　なお、哺乳類培養細胞で生産される抗体の重鎖のカルボキシル末端のリシン残基が欠失することが知られており（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ，７０５：１２９－１３４（１９９５））、また、同じく重鎖カルボキシル末端のグリシン、リシンの２アミノ酸残基が欠失し、新たにカルボキシル末端に位置するプロリン残基がアミド化されることが知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６０：７５－８３（２００７））。しかし、これらの重鎖配列の欠失及び修飾は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能（補体の活性化や抗体依存性細胞傷害作用等）には影響を及ぼさない。従って、本発明に係る抗体には、当該修飾を受けた抗体及び当該抗体の機能性断片も含まれ、重鎖カルボキシル末端において１又は２つのアミノ酸が欠失した欠失体、及びアミド化された当該欠失体（例えば、カルボキシル末端部位のプロリン残基がアミド化された重鎖）等も包含される。但し、抗原結合能及び/又はエフェクター機能が保たれている限り、本発明に係る抗体の重鎖のカルボキシル末端の欠失体は上記の種類に限定されない。本発明に係る抗体を構成する２本の重鎖は、完全長及び上記の欠失体からなる群より選択される重鎖のいずれか一種であってもよいし、いずれか二種を組み合わせたものであってもよい。各欠失体の量比は本発明に係る抗体を産生する哺乳類培養細胞の種類及び培養条件に影響を受け得るが、本発明に係る抗体の主成分としては２本の重鎖の双方でカルボキシル末端の１つのアミノ酸残基が欠失している場合を挙げることができる。

　本発明の抗体のアイソタイプとしては、例えばＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）等を挙げることができるが、好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ２を挙げることができる。

　抗体の生物活性としては、一般的には抗原結合活性、抗原と結合することによって該抗原を発現する細胞に内在化する活性、抗原の活性を中和する活性、抗原の活性を増強する活性、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性及び抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）を挙げることができるが、本発明に係る抗体が有する機能は、ＣＤ３７に対する結合活性であり、好ましくはＣＤ３７と結合することによってＣＤ３７発現細胞に内在化する活性である。さらに本発明の抗体は、細胞内在化活性に加えて、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＰ活性を併せ持っていても良い。

　得られた抗体は、均一にまで精製することができる。抗体の分離、精製は通常のタンパク質で使用されている分離、精製方法を使用すればよい。例えばカラムクロマトグラフィー、フィルター濾過、限外濾過、塩析、透析、調製用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動等を適宜選択、組み合わせれば、抗体を分離、精製することができる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｃｏｕｒｓｅ　Ｍａｎｕａｌ，Ｄａｎｉｅｌ　Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ　ｅｔ　ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ　Ｈａｒｌｏｗ　ａｎｄ　Ｄａｖｉｄ　Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８））が、これらに限定されるものではない。

　クロマトグラフィーとしては、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等を挙げることができる。

　これらのクロマトグラフィーは、ＨＰＬＣやＦＰＬＣ等の液体クロマトグラフィーを用いて行うことができる。

　アフィニティークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムを挙げることができる。例えばプロテインＡカラムを用いたカラムとして、Ｈｙｐｅｒ　Ｄ，ＰＯＲＯＳ，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆ．Ｆ．（ファルマシア）等を挙げることができる。

　また抗原を固定化した担体を用いて、抗原への結合性を利用して抗体を精製することも可能である。

３．抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート
　（１）薬物
　上記「２．抗ＣＤ３７抗体の製造」にて取得された抗ＣＤ３７抗体はリンカー構造部分を介して薬物を結合させることによって、抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートとすることができる。薬物としては、リンカー構造に結合できる置換基、部分構造を有するものであれば特に制限はない。抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは結合する薬物に応じて種々の用途に用いることができる。そのような薬物の例としては、抗腫瘍活性を有する物質、血液疾患に対する効果を有する物質、自己免疫疾患に対する効果を有する物質、抗炎症物質、抗菌物質、抗真菌物質、抗寄生虫物質、抗ウイルス物質、抗麻酔物質等を挙げることができる。

　（１）－１　抗腫瘍化合物
　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートに結合される化合物として抗腫瘍性化合物を用いる例について以下に述べる。抗腫瘍性化合物としては、抗腫瘍効果を有する化合物であって、リンカー構造に結合できる置換基、部分構造を有するものであれば特に制限はない。抗腫瘍性化合物は、リンカーの一部又は全部が腫瘍細胞内で切断されて抗腫瘍性化合物部分が遊離されて抗腫瘍効果が発現される。リンカーが薬物との結合部分で切断されれば抗腫瘍性化合物が本来の構造で遊離され、その本来の抗腫瘍効果が発揮される。

　本発明で使用される抗腫瘍性化合物の一つの例として、カンプトテシン誘導体であるエキサテカン（（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）－ジオン；次式：）

を好適に使用することができる。同化合物は、例えば、米国特許公開公報２０１６／０２９７８９０号に記載の方法やその他の公知の方法で容易に取得でき、１位のアミノ基をリンカー構造への結合部位として好適に使用することができる。また、エキサテカンはリンカーの一部が結合した状態で腫瘍細胞内に遊離される場合もあるが、この様な状態でも優れた抗腫瘍効果が発揮される化合物である。

　エキサテカンはカンプトテシン構造を有するので、酸性水性媒体中（例えばｐＨ３程度）ではラクトン環が形成された構造（閉環体）に平衡が偏り、一方、塩基性水性媒体中（例えばｐＨ１０程度）ではラクトン環が開環した構造（開環体）に平衡が偏ることが知られている。このような閉環構造及び開環構造に対応するエキサテカン残基を導入した薬物コンジュゲートであっても同等の抗腫瘍効果が期待され、いずれのものも本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。

　他の抗腫瘍性化合物として例えば、文献（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，　６８，ｐ３－１９，２０１６）記載の抗腫瘍化合物を挙げることができ、その一例として、ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、カルケマイシン（Ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎｅ）、ドラスタチン（Ｄｏｒａｓｔａｔｉｎ）１０、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）等のアウリスタチン類（Ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）、ＤＭ１、ＤＭ４等のメイタンシノイド類（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）、ピロロベンゾジアゼピン（Ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）二量体のＳＧ２０００（ＳＪＧ－１３６）、カンプトテシンの誘導体であるＳＮ－３８、ＣＣ－１０６５等のデュオカルマイシン類（Ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）、アマニチン（Ａｍａｎｉｔｉｎ）、ダウノルビシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、シクロシチジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキセート、白金系抗腫瘍剤（シスプラチン若しくはその誘導体）、タキソール若しくはその誘導体等を挙げることができる。

　抗体－薬物コンジュゲートにおいて、抗体１分子への薬物の結合数は、その有効性、安全性に影響する重要因子である。抗体－薬物コンジュゲートの製造は、薬物の結合数が一定の数となるよう、反応させる原料・試薬の使用量等の反応条件を規定して実施されるが、低分子化合物の化学反応とは異なり、異なる数の薬物が結合した混合物として得られるのが通常である。抗体１分子への薬物の結合数は平均値、即ち、薬物平均結合数として特定され、表記される。本発明でも原則として断りのない限り、即ち、異なる薬物結合数をもつ抗体－薬物コンジュゲート混合物に含まれる特定の薬物結合数をもつ抗体－薬物コンジュゲートを示す場合を除き、薬物の結合数は平均値を意味する。抗体分子へのエキサテカンの結合数はコントロール可能であり、１抗体あたりの薬物平均結合数として、１～１０個程度のエキサテカンを結合させることができるが、好ましくは２～８個、３～８個、４～８個、５～８個、６～８個、７～８個であり、より好ましくは５～８個であり、更に好ましくは７～８個であり、更により好ましくは約８個又は８個である。なお、当業者であれば本願の実施例の記載から抗体に必要な数の薬物を結合させる反応を設計することができ、エキサテカンの結合数をコントロールした抗体－薬物コンジュゲートを取得することができる。

　（２）リンカー構造
　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートにおいて薬物を抗ＣＤ３７抗体に結合させるリンカー構造について述べる。

　本願の抗体－薬物コンジュゲートにおいて、抗ＣＤ３７抗体と薬物とを結合するリンカー構造は、抗体－薬物コンジュゲートとして用いることができる限りにおいて特に制限されず、使用目的に応じて適宜選択して用いることもできる。リンカー構造の一例としては、公知文献（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｒｅｖ　６８：３－１９，　Ｊａｎｕａｒｙ　２０１６、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｅｌｌ　ＤＯＩ　１０．１００７／ｓ１３２３８－０１６－０３２３－０等）に記載のリンカーを挙げることができ、更に具体的な例としては、ＶＣ（バリン－シトルリン：ｖａｌｉｎｅ－ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ）、ＭＣ（マレインアミドカプロイル：ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ）、ＳＭＣＣ（スクシニミジル　４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート：ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　４－（Ｎ－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ）　ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ－１－ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＰＰ（Ｎ－スクシニミジル　４－（２－ピリジルジチオ）ペンタン酸：Ｎ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　４－（２－ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）ｐｅｎｔａｎｏａｔｅ、ＳＳ（ジスルフィド：ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシミジル　４－（２－ピリジルジチオ）ブチラート）Ｎ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　４－（２－ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）ｂｕｔｙｒａｔｅ、ＳＳ／ヒドラゾン、ヒドラゾン、カルボネートを挙げることができる。

　他の一例としては、例えば、米国特許公開公報２０１６／０２９７８９０に記載のリンカー構造（一例として、当該公開公報の段落［０２６０］～［０２８９］に記載のもの）を挙げることができ、以下の構造のものを好適に使用することができる。なお以下に示す構造の左端が抗体との結合部位であり、右端が薬物との結合部位である。また、下記のリンカー構造中のＧＧＦＧは、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン（ＧＧＦＧ）からなるペプチド結合でつながっているアミノ酸配列を示す。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－。

　より好ましくは、次のものを挙げることができる。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－。
さらにより好ましくは、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－。
を挙げることができる。

　抗体は－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）の末端、（例えば、『－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－』においては、（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）が結合するのとは反対側の末端（左末端））で結合し、抗腫瘍性化合物は－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）とは反対側の末端（上記例では右末端の、ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－のカルボニル基で結合する。『－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－』は、次式：

で示される構造を有する。この部分構造における３位が抗ＣＤ３７抗体への結合部位である。この３位での該抗体との結合は、チオエーテルを形成して結合することが特徴である。この構造部分の１位の窒素原子は、この構造が含まれるリンカー内に存在するメチレンの炭素原子と結合する。

　薬物をエキサテカンとする本発明の抗体－薬物コンジュゲートにおいては、下記の構造の薬物－リンカー構造部分を抗体に結合させたものが好ましい。これらの薬物－リンカー構造部分は、１抗体あたりの平均結合数として、１から１０を結合させればよいが、好ましくは２から８であり、より好ましくは５から８であり、更に好ましくは７から８であり、更により好ましくは８である。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。

　より、好ましくは、次のものである。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。

　さらに、より好ましくは、次のものを挙げることができる。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。

　また、－（ＮＨ－ＤＸ）は次式：

で示される構造であり、エキサテカンの１位のアミノ基の水素原子１個が除かれて生成する基を示す。

　（３）抗体－薬物コンジュゲートの製造方法
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートに用いることができる抗体は、上記「２．抗ＣＤ３７抗体の製造」の項及び実施例に記載の内在化活性を有する抗ＣＤ３７抗体及び該抗体の機能性断片であれば特に制限がない。

　次に、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの代表的な製造方法について説明する。なお、以下において、化合物を示すために、各反応式中に示される化合物の番号を用いる。即ち、『式（１）の化合物』、『化合物（１）』等と称する。また、これ以外の番号の化合物についても同様に記載する。

　（３）－１　製造方法１
　下記式（１）で示される抗体－薬物コンジュゲートのうち、チオエーテルを介して抗ＣＤ３７抗体とリンカー構造が結合しているものは抗ＣＤ３７抗体を還元してジスルフィド結合をスルヒドリル基に変換した抗体ＡＢに対して、既知の方法によって入手しうる化合物（２）（例えば、米国特許公開公報２０１６／２９７８９０号に記載の方法（例えば当該公開公報の段落［０３３６］～［０３７４］に記載の方法）で入手可能）を反応させることによって製造することができる。例えば下記の方法によって製造することができる。

［式中、ＡＢは、スルフヒドリル基を有する抗体を示す。
ここで、Ｌ^１は、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－の構造で示される。
Ｌ^１’は次式で示される、マレイミジル基を示す。］

－Ｌ^１－Ｌ^Ｘは、以下の式で示されるいずれかの構造を有する。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－。

　これらのうちでより好ましくは、次のものである。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－。

　さらに、好ましくは、次のものを挙げることができる。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－。

　また、上記の反応式において抗体－薬物コンジュゲート（１）では、薬物からリンカー末端までの構造部分１個が１個の抗体に対して結合した構造として記載されているが、これは説明のための便宜的な記載であって、実際には当該構造部分が１個の抗体分子に対して複数個が結合している場合が多い。この状況は以下の製造方法の説明においても同様である。

　即ち、既知の方法によって入手しうる化合物（２）（例えば、米国特許公開公報２０１６／２９７８９０号に記載の方法（例えば段落［０３３６］～［０３７４］に記載の方法）で入手可能）で入手可能）と、スルフヒドリル基を有する抗体を反応させることによって、抗体－薬物コンジュゲート（１）を製造することができる。

　スルフヒドリル基を有する抗体は、当業者周知の方法で得ることができる（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、ｐｐ．５６－１３６、ｐｐ．４５６－４９３、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９９６））。例えば、Ｔｒａｕｔ’ｓ試薬を抗体のアミノ基に作用させる；Ｎ－サクシンイミジルＳ－アセチルチオアルカノエート類を抗体のアミノ基に作用させた後、ヒドロキシルアミンを作用させる；Ｎ－サクシンイミジル　３－（ピリジルジチオ）プロピオネートを作用させた後、還元剤を作用させる；ジチオトレイトール、２－メルカプトエタノール、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）等の還元剤を抗体に作用させて抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元しスルフヒドリル基を生成させる；等の方法を挙げることができるがこれらに限定されることはない。

　具体的には、還元剤としてＴＣＥＰを、抗体内鎖間部ジスルフィド一個当たりに対して０．３乃至３モル当量用い、キレート剤を含む緩衝液中で、抗体と反応させることで、抗体内鎖間部ジスルフィドが部分的もしくは完全に還元された抗体を得ることができる。キレート剤としては、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）やジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）等を挙げることができる。これらを１ｍＭ乃至２０ｍＭの濃度で用いればよい。緩衝液としては、リン酸ナトリウムやホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム溶液等を用いることができる。具体的な例において、抗体は４℃乃至３７℃にて１時間乃至４時間ＴＣＥＰと反応させることで部分的もしくは完全に還元されたスルフヒドリル基を有する抗体を得ることが出来る。

　なお、ここでスルフヒドリル基を薬物－リンカー部分に付加させる反応を実施させることでチオエーテル結合によって薬物－リンカー部分を結合させることができる。

　次に、スルフヒドリル基を有する抗体１個あたり、２乃至２０モル当量の化合物（２）を使用して、抗体１個当たり２個乃至８個の薬物が結合した抗体―薬物コンジュゲート（１）を製造することができる。具体的には、スルフヒドリル基を有する抗体を含む緩衝液に、化合物（２）を溶解させた溶液を加えて反応させればよい。ここで、緩衝液としては、酢酸ナトリウム溶液、リン酸ナトリウムやホウ酸ナトリウム、等を用いればよい。反応時のｐＨは５乃至９であり、より好適にはｐＨ７付近で反応させればよい。化合物（２）を溶解させる溶媒としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ－メチル－２－ピリドン（ＮＭＰ）等の有機溶媒を用いることができる。化合物（２）を溶解させた有機溶媒溶液を、スルフヒドリル基を有する抗体を含む緩衝液に１乃至２０％ｖ／ｖを加えて反応させればよい。反応温度は、０℃乃至３７℃、より好適には１０℃乃至２５℃であり、反応時間は、０．５時間乃至２時間である。反応は、未反応の化合物（２）の反応性をチオール含有試薬によって失活させることによって終了できる。チオール含有試薬は例えば、システイン又はＮ－アセチル－Ｌ－システイン（ＮＡＣ）である。より具体的には、ＮＡＣを、用いた化合物（２）に対して、１乃至２モル当量加え、室温で１０分乃至３０分インキュベートすることにより反応を終了できる。

　（４）抗体－薬物コンジュゲートの同定
　製造した抗体－薬物コンジュゲート（１）は、以下の共通操作によって濃縮、バッファー交換、精製、抗体濃度及び抗体一分子あたりの薬物平均結合数の測定を行い、抗体－薬物コンジュゲート（１）の同定を行うことができる。

　（４）－１　共通操作Ａ：抗体もしくは抗体－薬物コンジュゲート水溶液の濃縮
　Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ（５０，０００　ＭＷＣＯ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の容器内に抗体もしくは抗体－薬物コンジュゲート溶液を入れ、遠心機（Ａｌｌｅｇｒａ　Ｘ－１５Ｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）を用いた遠心操作（２０００Ｇ乃至３８００Ｇにて５乃至２０分間遠心）にて、抗体もしくは抗体－薬物コンジュゲート溶液を濃縮した。

　（４）－２　共通操作Ｂ：抗体の濃度測定
　ＵＶ測定器（Ｎａｎｏｄｒｏｐ　１０００，Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｉｎｃ．）を用いて、メーカー規定の方法に従い、抗体濃度の測定を行った。その際に、抗体ごとに異なる２８０ｎｍ吸光係数（１．３ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１乃至１．８ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１）を用いた。

　（４）－３　共通操作Ｃ：抗体のバッファー交換
　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ－２５担体を使用したＮＡＰ－２５カラム（Ｃａｔ．Ｎｏ．１７－０８５２－０２，ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ　Ｊａｐａｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を、メーカー規定の方法に従い、塩化ナトリウム（５０ｍＭ）及びＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含むリン酸緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ６．０）（本明細書でＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡと称する。）にて平衡化させた。このＮＡＰ－２５カラム一本につき、抗体水溶液２．５ｍＬをのせたのち、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡ３．５ｍＬで溶出させた画分（３．５ｍＬ）を分取した。この画分を共通操作Ａによって濃縮し、共通操作Ｂを用いて抗体濃度の測定を行ったのちに、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡを用いて１０ｍｇ／ｍＬに抗体濃度を調整した。

　（４）－４　共通操作Ｄ：抗体－薬物コンジュゲートの精製
　市販のＳｏｒｂｉｔｏｌ（５％）を含む酢酸緩衝液（１０ｍＭ，ｐＨ５．５；本明細書でＡＢＳと称する。）のいずれかの緩衝液でＮＡＰ－２５カラムを平衡化させた。このＮＡＰ－２５カラムに、抗体－薬物コンジュゲート反応水溶液（約２．５ｍＬ）をのせ、メーカー規定の量の緩衝液で溶出させることで、抗体画分を分取した。この分取画分を再びＮＡＰ－２５カラムにのせ緩衝液で溶出させるゲルろ過精製操作を計２乃至３回繰り返すことで、未結合の薬物リンカーや低分子化合物（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ），Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン（ＮＡＣ），ジメチルスルホキシド）を除いた抗体－薬物コンジュゲートを得た。

　（４）－５　共通操作Ｅ：抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び抗体一分子あたりの薬物平均結合数の測定（１）
　抗体－薬物コンジュゲートにおける結合薬物濃度は、抗体－薬物コンジュゲート水溶液の２８０ｎｍ及び３７０ｎｍの二波長におけるＵＶ吸光度を測定したのちに下記の計算を行うことで、算出することができる。

　ある波長における全吸光度は系内に存在する全ての吸収化学種の吸光度の和に等しい［吸光度の加成性］ことから、抗体と薬物のコンジュゲーション前後において、抗体及び薬物のモル吸光係数に変化がないと仮定すると、抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び薬物濃度は、下記の関係式で示される。
Ａ_２８０＝Ａ_{Ｄ，２８０}＋Ａ_{Ａ，２８０}＝ε_{Ｄ，２８０}Ｃ_Ｄ＋ε_{Ａ，２８０}Ｃ_Ａ式（１）
Ａ_３７０＝Ａ_{Ｄ，３７０}＋Ａ_{Ａ，３７０}＝ε_{Ｄ，３７０}Ｃ_Ｄ＋ε_{Ａ，３７０}Ｃ_Ａ式（２）
　ここで、Ａ_２８０は２８０ｎｍにおける抗体－薬物コンジュゲート水溶液の吸光度を示し_、Ａ_３７０は３７０ｎｍにおける抗体－薬物コンジュゲート水溶液の吸光度を示し、Ａ_{Ａ，２８０}は２８０ｎｍにおける抗体の吸光度を示し、Ａ_{Ａ，３７０}は３７０ｎｍにおける抗体の吸光度を示し、Ａ_{Ｄ，２８０}は２８０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体の吸光度を示し、Ａ_{Ｄ，３７０}は３７０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体の吸光度を示し、ε_{Ａ，２８０}は２８０ｎｍにおける抗体のモル吸光係数を示し、ε_{Ａ，３７０}は３７０ｎｍにおける抗体のモル吸光係数を示し、ε_{Ｄ，２８０}は２８０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数を示し、ε_{Ｄ，３７０}は３７０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数を示し、Ｃ_Ａは抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体濃度を示し、Ｃ_Ｄは抗体－薬物コンジュゲートにおける薬物濃度を示す。

　ここで、ε_{Ａ，２８０、}ε_{Ａ，３７０、}ε_{Ｄ，２８０、}ε_{Ｄ，３７０}は、事前に用意した値（計算推定値もしくは化合物のＵＶ測定から得られた実測値）が用いられる。例えば、ε_{Ａ，２８０}は、抗体のアミノ酸配列から、既知の計算方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，ｖｏｌ．４，２４１１－２４２３）によって推定することが出来る。ε_{Ａ，３７０}は、通常、ゼロである。ε_{Ｄ，２８０}及びε_{Ｄ，３７０}は、用いるコンジュゲート前駆体をあるモル濃度に溶解させた溶液の吸光度を測定することで、ランベルト・ベールの法則（吸光度＝モル濃度×モル吸光係数×セル光路長）によって、得ることができる。抗体－薬物コンジュゲート水溶液のＡ_２８０及びＡ_３７０を測定し、これらの値を式（１）及び（２）に代入して連立方程式を解くことによって、Ｃ_Ａ及びＣ_Ｄを求めることができる。さらにＣ_ＤをＣ_Ａで除することで１抗体あたりの薬物平均結合数が求めることができる。

　（４）－６　共通操作Ｆ：抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体一分子あたりの薬物平均結合数の測定（２）
　抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体一分子あたりの薬物平均結合数は、前述の「（４）－５　共通操作Ｅ」に加え、以下の方法を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によっても求めることができる。以下に、抗体と薬物リンカーがジスルフィド結合している場合のＨＰＬＣによる薬物平均結合数の測定方法を記載する。当業者は、この方法を参照して、抗体と薬物リンカーとの結合様式に依存して適宜、ＨＰＬＣにより薬物平均結合数を測定し得る。

　Ｆ－１．ＨＰＬＣ分析用サンプルの調製（抗体－薬物コンジュゲートの還元）
　抗体－薬物コンジュゲート溶液（約１ｍｇ／ｍＬ、６０μＬ）をジチオトレイトール（ＤＴＴ）水溶液（１００ｍＭ、１５μＬ）と混合する。混合物を３７℃で３０分インキュベートすることで、抗体－薬物コンジュゲートの軽鎖及び重鎖間のジスルフィド結合を切断したサンプルを、ＨＰＬＣ分析に用いる。

　Ｆ－２．ＨＰＬＣ分析
　ＨＰＬＣ分析を、下記の測定条件にて行う。

　ＨＰＬＣシステム：Ａｇｉｌｅｎｔ　１２９０　ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
　検出器：紫外吸光度計（測定波長：２８０ｎｍ）
　カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ　ＢＥＨ　Ｐｈｅｎｙｌ（２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Å；Ｗａｔｅｒｓ、Ｐ／Ｎ　１８６００２８８４）
　カラム温度：８０℃
　移動相Ａ：０．１０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１５％２－プロパノールを含む水溶液
　移動相Ｂ：０．０７５％ＴＦＡ、１５％２－プロパノールを含むアセトニトリル溶液
　グラジエントプログラム：１４％－３６％（０分－１５分）、３６％－８０％（１５分－１７分）、８０％－１４％（１７分―１７．０１分）、１４％（１７．０１分―２５分）
　サンプル注入量：１０μＬ
　Ｆ－３．データ解析
　Ｆ－３－１　薬物の結合していない抗体の軽鎖（Ｌ０）及び重鎖（Ｈ０）に対して、薬物の結合した軽鎖（薬物がi個結合した軽鎖：Ｌ_ｉ）及び重鎖（薬物がｉ個結合した重鎖：Ｈ_ｉ）は、結合した薬物の数に比例して疎水性が増し保持時間が大きくなることから、例えば、Ｌ０、Ｌ１、Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３の順に溶出される。Ｌ０及びＨ０との保持時間比較により検出ピークをＬ０、Ｌ１、Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３のいずれかに割り当てることができる。薬物結合数は、当業者によって定義され得るが、好ましくは、Ｌ０、Ｌ１、Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３である。

　Ｆ－３－２　薬物リンカーにＵＶ吸収があるため、薬物リンカーの結合数に応じて、軽鎖、重鎖及び薬物リンカーのモル吸光係数を用いて下式に従ってピーク面積値の補正を行う。

　ここで、各抗体における軽鎖及び重鎖のモル吸光係数（２８０ｎｍ）は、既知の計算方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　１９９５，　ｖｏｌ．４，　２４１１－２４２３）によって、各抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列から推定される値を用いることができる。Ｈ０１Ｌ０２の場合、そのアミノ酸配列に従って、軽鎖のモル吸光係数として３１７１０を、重鎖のモル吸光係数として７９９９０を推定値として用いた。また、薬物リンカーのモル吸光係数（２８０ｎｍ）は、各薬物リンカーをメルカプトエタノール又はＮ－アセチルシステインで反応させ、マレイミド基をサクシニイミドチオエーテルに変換した化合物の実測のモル吸光係数（２８０ｎｍ）を用いた。吸光度を測定する波長は、当業者によって適宜設定され得るが、好ましくは、抗体のピークが測定され得る波長であり、より好ましくは２８０ｎｍである。

　Ｆ－３－３　ピーク面積補正値合計に対する各鎖ピーク面積比（％）を下式に従って計算する。

　Ｆ－３－４　抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体一分子あたりの薬物平均結合数を、下式に従って計算する。

　薬物平均結合数＝（Ｌ_０ピーク面積比ｘ０＋Ｌ_１ピーク面積比ｘ１＋Ｈ_０ピーク面積比ｘ０＋Ｈ_１ピーク面積比ｘ１＋Ｈ_２ピーク面積比ｘ２＋Ｈ_３ピーク面積比ｘ３）／１００ｘ２
　なお、抗体－薬物コンジュゲートの量を確保するために、同様な条件で作製して得られた薬物平均結合数が同程度の複数の抗体－薬物コンジュゲート（例えば±１程度）を混合して新たなロットにすることができる。その場合、薬物平均結合数は混合前の薬物平均結合数の間に収まる。

　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの一つの具体例としては次式：

又は次式：

で示される構造を有するものを挙げることができる。

　ここで、ＡＢは本明細書で開示される抗ＣＤ３７抗体を示し、抗体由来のスルフヒドリル基を介して結合リンカーと結合している。ここで、ｎはいわゆるＤＡＲ（Ｄｒｕｇ－ｔｏ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒａｔｉｏ）と同義であり、１抗体あたりの薬物抗体比を示す。即ち、抗体１分子への薬物の結合数を示すが、これは平均値、即ち、薬物平均結合数として特定され、表記される数値である。本発明の化９及び化１０で示される抗体－薬物コンジュゲートの場合、共通操作Ｆによる測定で、ｎは、２から８であればよく、好ましくは５から８であり、更に好ましくは７から８であり、更により好ましく８である。

　本発明の抗体薬物－コンジュゲートの一例として、上記式化９又は化１０に示される構造において、ＡＢで示される抗体が、以下の（ａ）乃至（ｅ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖及び軽鎖の抗体又はその機能性断片を含む、抗体－薬物コンジュゲート又はその薬理学上許容される塩を挙げることができる：
（ａ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｂ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｃ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｄ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；又は
（ｅ）重鎖又は軽鎖がＮ結合型糖鎖付加、Ｏ結合型糖鎖付加、アミノ末端のプロセッシング、カルボキシル末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、トリプトファンの酸化、アミノ末端にメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、アミノ末端グルタミンやアミノ末端グルタミン酸のピログルタミン酸化などに代表される翻訳後修飾、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を含む、（ａ）～（ｄ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の抗体。

４．医薬
　上記、「２．抗ＣＤ３７抗体の製造」の項及び実施例に記載された本発明の抗ＣＤ３７抗体及び当該抗体の機能性断片は、腫瘍細胞表面のＣＤ３７に結合し、内在化活性を有することから、医薬として、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁体リンパ腫（ＭＺＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、あるいは慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、また末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）等のＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、さらには骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療剤として用いることができる。

　また、ＣＤ３７を発現している細胞の検出に用いることができる。

　更に、本発明の抗ＣＤ３７抗体及び当該抗体の機能性断片は、内在化活性を有することから、抗体－薬物コンジュゲートに用いる抗体として供することができる。

　上記「３．抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲート」の項及び実施例に記載の本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートのうちで薬物として細胞傷害活性等の抗腫瘍活性を有する薬物が用いられているものは、内在化活性を有する抗ＣＤ３７抗体及び／又は当該抗体の機能性断片と細胞傷害活性等の抗腫瘍活性を有する薬物のコンジュゲートであり、ＣＤ３７を発現しているがん細胞に対して抗腫瘍活性を示すことから、医薬として、特にがんに対する治療剤及び／又は予防剤として使用することができる。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは、大気中に放置したり、又は再結晶や精製操作をしたりすることにより、水分を吸収し、あるいは吸着水が付着するなどして、水和物になる場合があり、そのような水を含む化合物又は薬理学的に許容され得る塩も本発明に包含される。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、アミノ基などの塩基性基を有する場合、所望により薬理学的に許容され得る酸付加塩を形成することができる。そのような酸付加塩としては、例えばフッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩などのアリ－ルスルホン酸塩；蟻酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、りんご酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；又はオルニチン酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩などを挙げることができる。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが、カルボキシ基などの酸性基を有する場合、所望により薬理学的に許容され得る塩基付加塩を形成することができる。そのような塩基付加塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩などの無機塩；ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ－ベンジル－Ｎ－（２－フェニルエトキシ）アミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩などの有機アミン塩などを挙げることができる。

　本発明はまた、抗体－薬物コンジュゲートを構成する原子の１以上が、その原子の同位体で置換された抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートを包含し得る。同位体には放射性同位体及び安定同位体の２種類が存在し、同位体の例としては、例えば、水素の同位体（２Ｈ及び３Ｈ）、炭素の同位体（１１Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃ）、窒素の同位体（１３Ｎ及び１５Ｎ）、酸素の同位体（１５Ｏ、１７Ｏ及び１８Ｏ）、フッ素の同位体（１８Ｆ）などを挙げることができる。同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物は、例えば、治療剤、予防剤、研究試薬、アッセイ試薬、診断剤、インビボ画像診断剤などとして有用である。同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲート、及び、同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲートの任意の割合の混合物もすべて本発明に包含される。同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲートは、当該分野で公知の方法により、例えば、後述する本発明の製造方法における原料の代わりに同位体で標識された原料を用いることにより、製造することができる。

　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの殺細胞活性は例えば、細胞の増殖抑制活性で測定することができる。例えば、ＣＤ３７を過剰発現している癌細胞株を培養し、培養系に種々の濃度で抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートを添加し、フォーカス活性、コロニー形成及びスフェロイド増殖に対する抑制活性を測定することができる。ここで、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）由来がん細胞株等を用いることで、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）等に対する細胞増殖抑制活性を調べることができる。

　Ｉｎ　ｖｉｖｏでの実験動物を用いたがんに対する治療効果は、例えば、ＣＤ３７を高発現している腫瘍細胞株を移植したＳＣＩＤマウスに抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートを投与し、がん細胞の変化を測定することができる。ここで、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁体リンパ腫（ＭＺＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）等のＢ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）あるいは慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）等のＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、さらには骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）由来の細胞を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いることで、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁体リンパ腫（ＭＺＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に対する治療効果を測定することができる。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが適用されるがんの種類としては、治療対象となるがん細胞においてＣＤ３７を発現しているがんであれば特に制限されないが、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁体リンパ腫、バーキットリンパ腫、あるいは慢性リンパ性白血病由来の細胞を挙げることができるが、ＣＤ３７を発現している限りこれらに制限されない。本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが適用されるより好ましいがんの種類の例としては、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病を挙げることができる。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは、哺乳動物に対して好適に投与することができるが、より好ましくはヒトである。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートが含まれる医薬組成物において使用される物質としては、投与量や投与濃度において、この分野において通常使用される製剤添加物その他から適宜選択して適用することができる。

　本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは、１種以上の薬学的に適合性の成分を含む薬学的組成物として投与され得る。例えば、上記薬学的組成物は、代表的には、１種以上の薬学的キャリア（例えば、滅菌した液体（例えば、水及び油（石油、動物、植物、又は合成起源の油（例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ごま油など）を含む））を含む。水は、上記薬学的組成物が静脈内投与される場合に、より代表的なキャリアである。食塩水溶液、並びにデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液もまた、液体キャリアとして、特に、注射用溶液のために使用され得る。適切な薬学的賦形剤は、当該分野で公知である。上記組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤もしくは乳化剤、又はｐＨ緩衝化剤を含み得る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。その処方は、投与の態様に対応する。

　種々の送達システムが公知であり、本発明の抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートを投与するために使用され得る。導入方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、及び皮下の経路を挙げることができるが、これらに限定されない。投与は、例えば、注入又はボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態において、上記抗体－薬物コンジュゲートの投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。

　代表的実施形態において、上記薬学的組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した薬学的組成物として、常習的手順に従って処方される。代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌の等張性の水性緩衝液中の溶液である。必要である場合、上記医薬はまた、可溶化剤及び注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤（例えば、リグノカイン）を含み得る。一般に、上記成分は、（例えば、活性剤の量を示すアンプル又はサシェなどに密封してシールされた容器中の乾燥凍結乾燥粉末又は無水の濃縮物として、別個に、又は単位剤形中で一緒に混合して、のいずれかで供給される。上記医薬が注入によって投与される予定である場合、それは、例えば、滅菌の製薬グレードの水又は食塩水を含む注入ボトルで投薬され得る。上記医薬が注射によって投与される場合、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルは、例えば、上記成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。上記食塩水は、例えば、生理食塩水であり得る。

　このような医薬組成物は、選択された組成と必要な純度を持つ製剤として、凍結乾燥製剤あるいは液状製剤として製剤化すればよい。凍結乾燥製剤として製剤化する際には、この分野において使用される適当な製剤添加物が含まれる製剤であってもよい。また液剤においても同様にして、この分野において使用される各種の製剤添加物を含む液状製剤として製剤化することができる。

　医薬組成物の組成及び濃度は投与方法によっても変化するが、本発明の医薬組成物に含まれる抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートは、抗体－薬物コンジュゲートの抗原に対する親和性、即ち、抗原に対する解離定数（Ｋｄ値）の点において、親和性が高い（Ｋｄ値が低い）ほど、少量の投与量であっても薬効を発揮させることができる。したがって、抗体－薬物コンジュゲートの投与量の決定に当たっては、抗体－薬物コンジュゲートと抗原との親和性の状況に基づいて投与量を設定することもできる。本発明の抗体－薬物コンジュゲートをヒトに対して投与する際には、例えば、約０．００１～１００ｍｇ／ｋｇを１回あるいは１～１８０日間に１回の間隔で複数回投与すればよい。好適には、０．１～５０ｍｇ／ｋｇを、さらに好適には、０．１～３０ｍｇ／ｋｇを１～４週間に１回、好ましくは２～３週間に１回の間隔で複数回投与すればよい。

［実施例１：ヒト化抗ＣＤ３７抗体の作製］
１）－１　抗ＣＤ３７ヒト化抗体の設計
１）－１－１　抗ＣＤ３７抗体の可変領域の分子モデリング
　ホモロジーモデリングとして公知の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３，１２１－１５３（１９９１））を利用した。市販のタンパク質立体構造解析プログラムＤｉｓｃｏｖｅｒｙＳｔｕｄｉｏ（ダッソー・システムズ社製）を用いて、可変領域に対して高い配列相同性を有するＰｒｏｔｅｉｎ　ｄａｔａ　Ｂａｎｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ　Ｒｅｓ．３５，Ｄ３０１－Ｄ３０３（２００７））に登録されている構造を検索した。ヒットした重鎖、軽鎖及び重鎖と軽鎖の界面構造を鋳型として、三次元モデル構造を作成した。

１）－１－２　ヒト化の設計方法
　抗ＣＤ３７マウスモノクローナル抗体ＨＨ１（Ｓｍｅｌａｎｄ　Ｅ，　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２１（３），２０５－２１４（１９８５））のヒト化抗体の構築を、ＣＤＲグラフティング（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６，１００２９－１００３３（１９８９））として一般的に公知な方法によって実施した。抗ＣＤ３７ヒトキメラ抗体のフレームワーク領域は、ＫＡＢＡＴ　ｅｔ　ａｌ．（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ　Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））において規定されるヒトκ鎖サブグループ１とヒトγ鎖サブグループ１のコンセンサス配列に、高い相同性を有することから、それらが抗ＣＤ３７ヒトキメラ抗体の軽鎖と重鎖のアクセプタとしてそれぞれ選択された。また、ＩＭＧＴ（登録商標）（ＴＨＥ　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ　ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ　ＳＹＳＴＥＭ）において規定されるヒトγ鎖のＩＧＨＶ１－２＊０２とＩＧＨＪ６＊０１を抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートの物性の改善を目的に重鎖のアクセプタとして選択した。アクセプタ上に移入すべきドナー残基は、Ｑｕｅｅｎ　ｅｔ　ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６，１００２９－１００３３（１９８９））によって与えられる規準等を参考に、三次元モデルを分析し、各配列に応じて独自に設計した。

１）－１－３　抗ＣＤ３７ヒトキメラ抗体軽鎖のヒト化
　設計した抗ＣＤ３７ヒト化抗体軽鎖の可変領域に、ヒトＩｇＧ１のκ鎖定常領域を接続したヒト化抗体軽鎖を設計し、ｈｍＡｂ－Ｌ１１と命名した。ｈｍＡｂ－Ｌ１１の全長アミノ酸配列を配列番号２に記載する。配列番号２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を配列番号１に記載する。

１）－１－４　抗ＣＤ３７ヒトキメラ抗体重鎖のヒト化　ｈｍＡｂ－Ｈ１１
　抗ＣＤ３７ヒトキメラ抗体と相同性が最も高いヒトγ鎖サブグループ１のコンセンサス配列へのグラフティングによって、設計した抗ＣＤ３７ヒト化抗体重鎖の可変領域に、ヒトＩｇＧ１のγ鎖定常領域を接続したヒト化抗体重鎖を設計し、ｈｍＡｂ－Ｈ１１と命名した。ｈｍＡｂ－Ｈ１１の全長アミノ酸配列を配列番号４に記載する。配列番号４のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を配列番号３に記載する。

１）－１－５　抗ＣＤ３７ヒトキメラ抗体重鎖のヒト化　ｈｍＡｂ－Ｈ５４１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１、ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ
　抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートの物性の改善を目的に設計した抗ＣＤ３７ヒト化抗体重鎖の可変領域に、ヒトＩｇＧ１のγ鎖定常領域を接続したヒト化抗体重鎖をそれぞれ、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１、ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａと命名した。ｈｍＡｂ－Ｈ５４１の全長アミノ酸配列を配列番号６に記載する。配列番号６のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を配列番号５に記載する。ｈｍＡｂ－Ｈ５５１の全長アミノ酸配列を配列番号８に記載する。配列番号８のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を配列番号７に記載する。ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａの全長アミノ酸配列を配列番号１０に記載する。配列番号１０のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を配列番号９に記載する。

１）－２　抗ＣＤ３７ヒト化抗体の発現ベクターの構築と抗体の調製
１）－２－１　軽鎖発現ベクターｐＣＭＡ－ＬＫの構築
　プラスミドｐｃＤＮＡ３．３－ＴＯＰＯ／ＬａｃＺ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を制限酵素ＸｂａＩ及びＰｍｅＩで消化して得られる約５．４ｋｂのフラグメントと、配列番号１１に示すヒト軽鎖シグナル配列及びヒトκ鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ断片をＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ　ＨＤ　ＰＣＲクローニングキット（Ｔａｋｒａ　Ｂｉｏ　ＵＳＡ社製）を用いて結合し、ｐｃＤＮＡ３．３／ＬＫを作製した。

　ｐｃＤＮＡ３．３／ＬＫからネオマイシン耐性遺伝子を除去することによりｐＣＭＡ－ＬＫを構築した。

１）－２－１－１　ｈｍＡｂ－Ｌ１１発現ベクターの構築
　配列番号１２に示すｈｍＡｂ－Ｌ１１可変領域のヌクレオチド配列のＤＮＡ断片を合成した（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ　ＨＤ　ＰＣＲクローニングキットを用い、実施例１）－２－１で構築したｐＣＭＡ－ＬＫを制限酵素ＢｓｉＷＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することにより、ｈｍＡｂ－Ｌ１１発現ベクターを構築した。

１）－２－２　重鎖発現ベクターｐＣＭＡ－Ｇ１の構築
　配列番号１３に示す重鎖シグナル配列及びヒト重鎖Ｇ１定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ断片を合成した（ユーロフィンジェノミクス社製）。このＤＮＡ断片を制限酵素ＸｂａＩ及びＰｍｅＩで切断後、アガロースゲル電気泳動により、１．１ｋｂのＤＮＡ断片を切り出し、Ｗｉｚａｒｄ　ＳＶ　Ｇｅｌ　ａｎｄ　ＰＣＲ　Ｃｌｅａｎ－Ｕｐ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）により精製した。実施例１）－２－１で構築したｐＣＭＡ－ＬＫを制限酵素ＸｂａＩ及びＰｍｅＩで消化して得られる約３．４ｋｂのフラグメントと、１．１ｋｂのＤＮＡ断片をＬｉｇａｔｉｏｎ　Ｈｉｇｈ（東洋紡社製）を用いて結合し、ｐＣＭＡ－Ｇ１を構築した。

１）－２－２－１　ｈｍＡｂ－Ｈ１１発現ベクターの構築
　配列番号１４に示すｈｍＡｂ－Ｈ１１のヌクレオチド配列のＤＮＡ断片を合成した。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ　ＨＤ　ＰＣＲクローニングキットを用いて、実施例１）－２－２で構築したｐＣＭＡ－Ｇ１を制限酵素ＢｌｐＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することにより、ｈｍＡｂ－Ｈ１１発現ベクターを構築した。

１）－２－２－２　ｈｍＡｂ－Ｈ５４１発現ベクターの構築
　配列番号１５に示すｈｍＡｂ－Ｈ５４１のヌクレオチド配列のＤＮＡ断片を合成した。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ　ＨＤ　ＰＣＲクローニングキットを用いて、実施例１）－２－２で構築したｐＣＭＡ－Ｇ１を制限酵素ＢｌｐＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することにより、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１発現ベクターを構築した。

１）－２－２－３　ｈｍＡｂ－Ｈ５５１発現ベクターの構築
　配列番号１６に示すｈｍＡｂ－Ｈ５５１のヌクレオチド配列のＤＮＡ断片を合成した。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ　ＨＤ　ＰＣＲクローニングキットを用いて、実施例１）－２－２で構築したｐＣＭＡ－Ｇ１を制限酵素ＢｌｐＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することにより、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１発現ベクターを構築した。

１－２－２－４　ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ発現ベクターの構築
　配列番号１７に示すｈｍＡｂ－Ｈ１１ａのヌクレオチド配列のＤＮＡ断片を合成した。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ　ＨＤ　ＰＣＲクローニングキットを用いて、実施例１）－２－２で構築したｐＣＭＡ－Ｇ１を制限酵素ＢｌｐＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することにより、ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ発現ベクターを構築した。

１）－２－２－５　抗ＣＤ３７ヒト化抗体の重鎖発現ベクターと軽鎖発現ベクターの組み合わせ
　ｈｍＡｂ－Ｈ１１を重鎖とし、ｈｍＡｂ－Ｌ１１を軽鎖とする抗ＣＤ３７ヒト化抗体をｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１と命名した。ｈｍＡｂ－Ｈ５４１を重鎖とし、ｈｍＡｂ－Ｌ１１を軽鎖とする抗ＣＤ３７ヒト化抗体をｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１と命名した。ｈｍＡｂ－Ｈ５５１を重鎖とし、ｈｍＡｂ－Ｌ１１を軽鎖とする抗ＣＤ３７ヒト化抗体をｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１と命名した。ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａを重鎖とし、ｈｍＡｂ－Ｌ１１を軽鎖とする抗ＣＤ３７ヒト化抗体をｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１と命名した。

１）－２－３　抗ＣＤ３７ヒト化抗体の生産
　ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ　２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）はマニュアルに従い、継代、培養をおこなった。対数増殖期のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ　２９３Ｆ細胞をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ２９３　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）で希釈して２．０×１０^６細胞／ｍＬに調整し、３Ｌ　Ｆｅｒｎｂａｃｈ　Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ　Ｆｌａｓｋ（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に６００ｍＬ播種した。１．８ｍｇのＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）をＯｐｔｉ－Ｐｒｏ　ＳＦＭ培地（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）２０ｍＬに添加した。次に３００μｇの重鎖発現ベクターと３００μｇの軽鎖発現ベクターを２０ｍＬのＯｐｔｉ－Ｐｒｏ　ＳＦＭ培地に添加した。Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ／Ｏｐｔｉ－Ｐｒｏ　ＳＦＭ混合液に、発現ベクター／Ｏｐｔｉ－Ｐｒｏ　ＳＦＭ混合液を加え穏やかに攪拌し、さらに５分間静置した後にＦｒｅｅＳｔｙｌｅ　２９３Ｆ細胞に添加した。３７℃、８％ＣＯ_２インキュベーターで４時間、９５ｒｐｍで振とう培養後に６００ｍＬのＥＸ－ＣＥＬＬ　ＶＰＲＯ培地（ＳＡＦＣ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）、及び、４３．４ｇ/ＬのＢＤ　Ｒｅｃｈａｒｇｅ　ＣＤ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）を３０ｍＬ添加し、３７℃、８％ＣＯ_２インキュベーターで６日間、９５ｒｐｍで振とう培養して得られた培養上清を孔径０．２μｍのボトルトップフィルター（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）でろ過した。

１）－２－４　抗ＣＤ３７ヒト化抗体の精製
　実施例１）－２－３で得られた培養上清からｒＰｒｏｔｅｉｎ　Ａアフィニティークロマトグラフィーとセラミックハイドロキシアパタイトの２段階工程で抗体を精製した。培養上清をＰＢＳで平衡化し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅが充填されたカラム（Ｃｙｔｉｖａ社製）にアプライした後に、カラム容量の２倍以上のＰＢＳでカラムを洗浄した。次に２Ｍアルギニン塩酸塩溶液（ｐＨ４．０）で抗体を溶出した。抗体の含まれる画分をＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ　Ｄｉａｌｙｓｉｓ　Ｃａｓｓｅｔｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、透析によりＰＢＳにバッファー置換し、５ｍＭリン酸ナトリウム／５０ｍＭ　ＭＥＳ／ｐＨ７．０のバッファーで５倍希釈した後に、５ｍＭ　ＮａＰｉ／５０ｍＭ　ＭＥＳ／３０ｍＭ　ＮａＣｌ／ｐＨ７．０のバッファーで平衡化したセラミックハイドロキシアパタイトカラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）にアプライした。塩化ナトリウムによる直線的濃度勾配溶出を実施し、抗体の含まれる画分を集めた。その画分をＤｉａｌｙｓｉｓ　Ｃａｓｓｅｔｔｅを用いて、透析によりＨＢＳｏｒ（２５ｍＭ　ヒスチジン／５％　ソルビトール、ｐＨ６．０）へバッファー置換した。ＶＩＶＡＳＰＩＮ　２０（分画分子量ＵＦ１０Ｋ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ　Ｓｔｅｄｉｍ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）にて抗体を濃縮し、ＩｇＧ濃度を２０～２５ｍｇ／ｍＬに調整した。最後にＭｉｎｉｓａｒｔ　Ｐｌｕｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ　Ｓｔｅｄｉｍ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）でろ過し、精製サンプルとした。

［実施例２：抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートの作製１］
２）－１　抗体－薬物コンジュゲートの作製（１）　ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄ
　以下に示される工程によって、ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄを合成した。

　抗体の還元：実施例１）－２にて調製したｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５０ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１０．６７ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（０．５ｍＬ）に１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．００７５ｍＬ）及び、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．０２２ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ　ジメチルスルホキシド溶液（０．０３６７ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ　ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．００３７ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）を加え撹拌後、さらに室温にて２０分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。

　精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＡＤＣ」を含有する溶液を３．５ｍＬ得た。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ及びＦ（ε_{Ｄ，２８０}＝５４４０、ε_{Ｄ，３７０}＝２１８００を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：１．３０ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：４．５７ｍｇ（８６％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：５．６；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：７．５。

２）－２　抗体－薬物コンジュゲートの作製（２）　ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄ
　以下に示される工程によって、ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄを合成した。

　抗体の還元：実施例１）－２にて調製したｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５０ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１０．６７ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（０．５ｍＬ）に１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．００７５ｍＬ）及び、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．０２９４ｍＬ；抗体一分子に対して８．０当量）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ　ジメチルスルホキシド溶液（０．０４４１ｍＬ；抗体一分子に対して１２．０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ　ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．００４４ｍＬ；抗体一分子に対して１２．０当量）を加え撹拌後、さらに室温にて２０分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ及びＦ（ε_{Ｄ，２８０}＝５４４０、ε_{Ｄ，３７０}＝２１８００を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：１．３４ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：４．６９ｍｇ（８８％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：５．９；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：７．７。

２）－３　抗体－薬物コンジュゲートの作製（３）　ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄ
　以下に示される工程によって、ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄを合成した。

　抗体の還元：実施例１）－２にて調製したｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５０ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１０．６７ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（８．３ｍＬ）に１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．１２４ｍＬ）及び、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．４８６ｍＬ；抗体一分子に対して８．０当量）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ　ジメチルスルホキシド溶液（０．７２８ｍＬ；抗体一分子に対して１２．０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ　ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０７３ｍＬ；抗体一分子に対して１２．０当量）を加え撹拌後、さらに室温にて２０分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。

　精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＡＤＣ」を含有する溶液を３１．５ｍＬ得た。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ及びＦ（ε_{Ｄ，２８０}＝５４４０、ε_{Ｄ，３７０}＝２１８００を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．２３ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：７０．２９ｍｇ（８０％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：５．６；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：７．４。

２）－４　抗体－薬物コンジュゲートの作製（４）　ｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ
　以下に示される工程によって、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄを合成した。

　抗体の還元：実施例１）－２にて調製したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５０ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１０．６３ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（８．９ｍＬ）に１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．１３３ｍＬ）及び、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．３８９ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ　ジメチルスルホキシド溶液（０．６４９ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ　ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０６５ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）を加え撹拌後、さらに室温にて２０分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。

　精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＡＤＣ」を含有する溶液を３１．５ｍＬ得た。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ及びＦ（ε_{Ｄ，２８０}＝５４４０、ε_{Ｄ，３７０}＝２１８００を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．６８ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：８４．２６ｍｇ（８９％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：５．９；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：７．８。

２）－５　抗体－薬物コンジュゲートの作製（５）　ｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１－ＤＸｄ
　以下に示される工程によって、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１－ＤＸｄを合成した。

　抗体の還元：実施例１）－２にて調製したｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５０ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１０．６２ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（９．４ｍＬ）に１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．１４１ｍＬ）及び、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．４１１ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ　ジメチルスルホキシド溶液（０．６８６ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ　ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０６９ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）を加え撹拌後、さらに室温にて２０分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。

　精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１－ＡＤＣ」を含有する溶液を３５．０ｍＬ得た。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ及びＦ（ε_{Ｄ，２８０}＝５４４０、ε_{Ｄ，３７０}＝２１８００を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．４３ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：８５．０８ｍｇ（８５％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：５．７；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：７．８。

２）－６　抗体－薬物コンジュゲートの作製（６）　ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１－ＤＸｄ
　以下に示される工程によって、ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１－ＤＸｄを合成した。

　抗体の還元：実施例１）－２にて調製したｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５０ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１０．５９ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（１０．０ｍＬ）に１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．１５０ｍＬ）及び、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．５１０ｍＬ；抗体一分子に対して７．０当量）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ　ジメチルスルホキシド溶液（０．８０１ｍＬ；抗体一分子に対して１１．０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ　ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０８０ｍＬ；抗体一分子に対して１１．０当量）を加え撹拌後、さらに室温にて２０分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。

　精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１－ＡＤＣ」を含有する溶液を３５．０ｍＬ得た。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ及びＦ（ε_{Ｄ，２８０}＝５４４０、ε_{Ｄ，３７０}＝２１８００を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．６２ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：９１．５７ｍｇ（８６％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：５．７；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：７．６。

　ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄの作製において、５ｍｇスケールでは１０ｍＭ　ＴＣＥＰ水溶液、抗体一分子に対して６．０当量を用いた場合、薬物平均結合数が７．５であった。そこで１０ｍＭ　ＴＣＥＰ水溶液、抗体一分子に対して８．０当量に増加したところ、薬物平均結合数が７．７と改善が認められた。ところが１００ｍｇスケールでの作製においては、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ水溶液、抗体一分子に対して８．０当量を用いても薬物平均結合数が７．４であった。１００ｍｇスケールで作製する場合、ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄの薬物平均結合数を上げるためには、より多くの１０ｍＭ　ＴＣＥＰ水溶液が必要になると推測される。これに比べて他のｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ－Ｈ５５１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａＬ１１－ＤＸｄの１００ｍｇスケールでの作製においては、１０ｍＭ　ＴＣＥＰ水溶液、抗体一分子に対して６．０－７．０当量において、薬物平均結合数は７．６－７．８に達していた。

［実施例３：抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートの生理食塩水中の回収率評価］
　２０ｍｇ／ｍＬでＡＢＳｏｒ（ナカライテスク社製）に溶解した抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートを大塚生理食塩水（大塚製薬工場社製）で２ｍｇ／ｍＬへ希釈し、室温又は４℃で５時間静置した。この上清１０μＬをＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（島津製作所社製）によって、ＹＭＣ－Ｐａｃｋ　Ｄｉｏｌ－３００　ＳＥＣ，３０ｎｍ，Ｓ－２μｍ，３００×４．６ｍｍ（ワイエムシィ社製）へ注入し、移動相として３×ＰＢＳ、８％イソプロパノール（ＰＢＳタブレット（タカラバイオ社製）３粒を９２０ｍＬの超純水に溶解し、８０ｍＬのイソプロパノールを添加した溶液）を用いて、サイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートの回収率は以下の式で算出した。
回収率（％）＝（４℃静置検体の回収率／室温静置検体の回収率）×１００
表１に示すとおり、抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートの物性改善を目的に実施例１）－１－５でアミノ酸配列を設計した抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートは、実施例１）－１－４でアミノ酸配列を設計した抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートよりも、４℃、生理食塩水中での回収率が向上した。４℃、生理食塩水中での回収率が向上したことにより、当該の抗ＣＤ３７ヒト化抗体－薬物コンジュゲートが生理食塩水中で取り扱い可能であることが示された。一方で、ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄは、生理食塩水中での取り扱いが困難であることが示された。この場合、ブドウ糖液の使用が検討されるが、当該溶液は抗体の糖化の原因となることが知られており（ＭＡｂｓ，ｖ．９（４），５８６－５９４，（２０１７））、抗体－薬物コンジュゲートの薬効低下につながる可能性がある。また、ブドウ糖液との混合によりタンパク凝集が報告されている抗体医薬品もあり、希釈液の選択肢があることは望ましい。さらにブドウ糖液を使用した場合、電解質喪失の恐れから糖尿病、尿崩症、腎不全患者で慎重投与が必要となる。ｈｍＡｂ－Ｈ１１Ｌ１１は、抗ＣＤ３７マウスモノクローナル抗体ＨＨ１に最も相同性の高いヒトコンセンサス配列をアクセプタとしてヒト化し、抗原結合活性を維持していたことから、ヒト化抗体として妥当性が高いと判断し選択した。しかしながら、前述の理由より改変が必要であると考え実施例１）－１－５に示すアミノ酸配列を新たに設計した。

［実施例４：抗体－薬物コンジュゲートのｉｎ　ｖｉｔｒｏ活性評価］
４）－１　ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートの結合性評価　
　実施例２で作製した抗体－薬物コンジュゲート４種（クローン名はｈｍＡｂ-Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ-Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ-Ｈ５５１Ｌ１１－ＤＸｄ及びｈｍＡｂ-Ｈ１１ａＬ１１－ＤＸｄ）の結合性をフローサイトメトリー法により評価した。３７℃、５％　ＣＯ_２の条件下で２０％ＦＢＳ含有ＩＭＤＭ培地で培養したＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７（ＤＳＭＺ）を回収し遠心した。上清を除去後、各濃度の抗体－薬物コンジュゲート４種又は陰性対照としてヒトＩｇＧを用いて作製した抗体－薬物コンジュゲート（ｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ）を加えて懸濁し、４℃で１時間静置した。５％　ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％　ＦＢＳ含有ＰＢＳで１００倍に希釈したＦＬＵＯＲＥＳＣＥＩＮ（ＦＩＴＣ）―ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ　Ｆ（ａｂ‘）２　Ｆｒａｇｍｅｎｔ　Ｇｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ　ＩｇＧ，　Ｆｃγ　Ｆｒａｇｍｅｎｔ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｉｍｍｕｎｏ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を加えて懸濁し、４℃で３０分間静置した。５％　ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＢＤ　ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ　ＴＭ　Ｘ－２０、ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。その結果を図６に示す。図６において横軸は抗体濃度（μｇ／ｍｌ）、縦軸はＭＦＩ（ｍｅａｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）による抗体結合量を示す。図６に示す通り、ヒト化抗ＣＤ３７抗体及び抗体－薬物コンジュゲートはＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７において濃度依存的な結合量の増加が観察された。

４）－２　ヒト化抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートの細胞増殖抑制活性評価
　ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７（ＤＳＭＺ）を２０％ＦＢＳ含有ＩＭＤＭ培地中５ｘ１０^２細胞／１００μＬ／ｗｅｌｌになるよう９６ウェルプレートに播種し、実施例２で作製した抗体－薬物コンジュゲート４種（クローン名はｈｍＡｂ-Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ-Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ-Ｈ５５１Ｌ１１－ＤＸｄ及びｈｍＡｂ-Ｈ１１ａＬ１１－ＤＸｄ）を終濃度０．００６４ｎＭから２０ｎＭとなるように添加した。３７℃、５％　ＣＯ_２の条件下で６日間培養後に生存細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ^ＴＭ　Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によるＡＴＰの定量で測定し、Ｖｅｈｉｃｌｅ群を１００％としたときの細胞生存率を定量化した。図７に抗体－薬物コンジュゲートを各々添加した際の濃度依存的な細胞増殖抑制活性を示す。実験におけるｈｍＡｂ－ＩｇＧ－ＤＸｄは、ＣＤ３７とは無関係な抗原を認識するヒトＩｇＧ１から作製した抗体－薬物コンジュゲートであり、陰性コントロールとして使用した。

［実施例５：抗体－薬物コンジュゲートのｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果１］
　抗体－薬物コンジュゲートの抗腫瘍効果は、ＣＤ３７陽性ヒト腫瘍細胞株の細胞を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。５週齢のＳＣＩＤマウス（ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃ［ｓｃｉｄ］／ＣｒｌＣｒｌｊ、日本チャールス・リバー）を実験使用前にＳＰＦ条件化で３日間以上馴化した。マウスには滅菌した固形飼料（ＦＲ－２，Ｆｕｎａｂａｓｈｉ　Ｆａｒｍｓ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を給餌し、滅菌した水道水（５－１５ｐｐｍ次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加して調製）を与えた。移植した腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルノギス（ＣＤ－１５ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ　Ｃｏｒｐ．）で１週間に２回測定し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ^３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］^２
　抗体－薬物コンジュゲートは全てＡＢＳ緩衝液（１０ｍＭ－Ａｃｅｔａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ，　５％　Ｓｏｒｂｉｔｏｌ，　ｐＨ５．５）（ＮＡＣＡＬＡＩ）で希釈し、各実施例に示す用量にて尾静脈内投与した。また、コントロール群（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）としてＡＢＳ緩衝液を同様に投与した。１群あたり６匹のマウスを実験に用いた。

５）－１　抗腫瘍効果（１）
　ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７（ＤＳＭＺ）を５０％マトリゲル（コーニング社、生理食塩水で希釈）に懸濁し、１×１０^７ｃｅｌｌｓを雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ９に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、実施例２で作製した抗体－薬物コンジュゲート４種（クローン名はｈｍＡｂ-Ｈ１１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ-Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ、ｈｍＡｂ-Ｈ５５１Ｌ１１－ＤＸｄ及びｈｍＡｂ-Ｈ１１ａＬ１１－ＤＸｄ）を１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。陰性対照としてヒトＩｇＧを用いて作製した抗体－薬物コンジュゲート（ｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ）を３ｍｇ／ｋｇの用量で同様に投与した。結果を図８に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　実施例２で作成した抗体－薬物コンジュゲート４種はいずれも用量依存的に腫瘍体積が著しく減少し、３ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍増殖が完全に抑制された。

５）－２　抗腫瘍効果（２）
　実施例５）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２（ＤＳＭＺ）を１×１０^７ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ１１に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、実施例２で作製した抗体－薬物コンジュゲート４種及びｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ（陰性対象）を１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図９に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　実施例２で作成した抗体－薬物コンジュゲート４種はいずれも用量依存的に腫瘍体積が著しく減少し、３ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍退縮効果を示した。

５）－３　抗腫瘍効果（３）
実施例５）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－８（ＡＴＣＣ）を５×１０⁶ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ７に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、実施例２で作製した抗体－薬物コンジュゲート４種及びｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ（陰性対象）を１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図１０に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

［実施例６：抗ＣＤ３７抗体－薬物コンジュゲートの作製２］
　以下に示される工程によって、ＩＭＧＮ５２９を合成した。

　抗体の調製：Ｎａｒａｔｕｘｉｍａｂ（抗ＣＤ３７抗体、ＩＭＧＴ／２Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ＤＢ　ｃａｒｄ　ｆｏｒ　ＩＮＮ　１０２３９）を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５３１ｍＬｍｇ^－１ｃｍ^－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて１２．１２ｍｇ／ｍＬに調製した。

　抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記の抗体溶液０．４ｍＬに、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）の１０ｍＭ　Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド溶液（０．０３３８ｍＬ；抗体一分子に対して１０．０当量）及び、メイタンシン誘導体（ＤＭ１）の１０ｍＭ　Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド溶液（０．０５０７ｍＬ；抗体一分子に対して１５．０当量）を加え撹拌後、室温にて１６時間ローテートした。

　精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ＩＭＧＮ５２９」を含有する溶液を２．５ｍＬ得た。
この０．４ｍＬスケールの反応を６回繰り返し、合わせて取得した。

　特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（ε_{Ｄ，２８０}＝５７００、ε_{Ｄ，２５２}＝２６７９０を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：１．２９ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：１５．６１ｍｇ（５４％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物平均結合数（ｎ）：３．６。

［実施例７：抗体－薬物コンジュゲートのｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果２］
　抗体－薬物コンジュゲートの抗腫瘍効果は、ＣＤ３７陽性ヒト腫瘍細胞株の細胞を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。４－６週齢のＳＣＩＤマウス（ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃ［ｓｃｉｄ］／ＣｒｌＣｒｌｊ：日本チャールス・リバー、ＣＢ１７／ＩｃｒＪｃｌ－Ｐｒｋｄｃ［ｓｃｉｄ］：日本クレア）を実験使用前にＳＰＦ条件化で３日間以上馴化した。マウスには滅菌した固形飼料（ＦＲ－２，Ｆｕｎａｂａｓｈｉ　Ｆａｒｍｓ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を給餌し、滅菌した水道水（５－１５ｐｐｍ次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加して調製）を与えた。移植した腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルノギス（ＣＤ－１５ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ　Ｃｏｒｐ．）で１週間に２回測定し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ^３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］^２
　抗体－薬物コンジュゲートは全てＡＢＳ緩衝液（１０ｍＭ－Ａｃｅｔａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ，　５％　Ｓｏｒｂｉｔｏｌ，　ｐＨ５．５）（ＮＡＣＡＬＡＩ）で希釈し、各実施例に示す用量にて尾静脈内投与した。また、コントロール群（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）としてＡＢＳ緩衝液を同様に投与した。対照群として、ＰＯＬＩＶＹ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社製）、ＩＭＧＮ５２９、ＲＩＴＵＸＡＮ（全薬工業社製）を尾静脈内投与、Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ（当業者に周知の方法で合成）、Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ（当業者に周知の方法で合成）を１日１回経口投与、ＴＲＥＡＫＩＳＹＭ（シンバイオ製薬社製）を１日１回２日間腹腔内投与した。１群あたり５－６匹のマウスを実験に用いた。

７）－１　抗腫瘍効果（１）
　ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ７（ＤＳＭＺ）を５０％マトリゲル（コーニング社、生理食塩水で希釈）に懸濁し、１×１０^７ｃｅｌｌｓを雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ１０に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、各抗体－薬物コンジュゲートを尾静脈内投与した。結果を図１１に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　ＰＯＬＩＶＹやＩＭＧＮ５２９、陰性対照であるｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ投与群では腫瘍退縮が認められないのに対し、実施例２）－４で作成したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ投与群では、１ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍の増殖が顕著に抑制され、３ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍が完全に退縮した。

７）－２　抗腫瘍効果（２）
　実施例７）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－８（ＡＴＣＣ）を１×１０⁷ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ８に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、各抗体－薬物コンジュゲートを尾静脈内投与した。結果を図１２に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　ＰＯＬＩＶＹやＩＭＧＮ５２９、陰性対照であるｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ投与群では腫瘍退縮が認められないのに対し、実施例２）－４で作成したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ投与群では、３ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍が完全に退縮した。

７）－３　抗腫瘍効果（３）
　実施例７）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＮＵ－ＤＵＬ－１（ＤＳＭＺ）を１×１０⁷ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ１４に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、各抗体－薬物コンジュゲートを尾静脈内投与した。結果を図１３に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　ＰＯＬＩＶＹやＩＭＧＮ５２９、陰性対照であるｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ投与群では腫瘍退縮が認められない、あるいは退縮後、再び増殖するのに対し、実施例２）－４で作成したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ投与群では、１ｍｇ／ｋｇ投与で顕著な腫瘍の増殖を抑制し、３ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍が完全に退縮した。

７）－４　抗腫瘍効果（４）
　実施例７）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－４（ＤＳＭＺ）を１×１０⁷ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ１６に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、各抗体－薬物コンジュゲートを尾静脈内投与した。結果を図１４に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　実施例２）－４で作成したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ　３ｍｇ／ｋｇ投与群は、ＩＭＧＮ５２９　１０ｍｇ／ｋｇ投与群と同等以上の抗腫瘍効果を示した。

７）－５　抗腫瘍効果（５）
　実施例７）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒト慢性リンパ性白血病細胞株ＪＶＭ－３（ＤＳＭＺ）を３×１０^６ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ１３に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、各抗体－薬物コンジュゲートを尾静脈内投与した。また、ＲＩＴＵＸＡＮを尾静脈内投与、Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ、Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘを１日１回経口投与、ＴＲＥＡＫＩＳＹＭを１日１回２日間腹腔内投与した。結果を図１５に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　対照薬剤投与群では腫瘍退縮が認められないのに対し、実施例２）－４で作成したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ投与群では、１ｍｇ／ｋｇ投与で顕著な腫瘍の増殖を抑制し、３ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍が完全に退縮した。

７）－６　抗腫瘍効果（６）
　実施例７）－１と同様に、ＣＤ３７陽性ヒト濾胞性リンパ腫細胞株ＤＯＨＨ－２（ＤＳＭＺ）を１×１０^６ｃｅｌｌｓで雌ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ２１に無作為に群分けを実施した。群分け実施日に、ｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄを尾静脈内投与した。結果を図１６に示す。横軸は日数、縦軸は腫瘍体積、誤差範囲はＳＥ値を示す。

　ＩＭＧＮ５２９、陰性対照であるｈｍＡｂ－ＩｇＧ１－ＤＸｄ投与群では腫瘍退縮が認められないのに対し、実施例２）－４で作成したｈｍＡｂ－Ｈ５４１Ｌ１１－ＤＸｄ投与群では、１ｍｇ／ｋｇで腫瘍退縮し３ｍｇ／ｋｇ投与では、ＰＯＬＩＶＹ投与群と同様、腫瘍が完全に退縮した。

　本発明により、内在化活性を有する抗ＣＤ３７抗体及び該抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートが提供された。該抗体－薬物コンジュゲートはＢ細胞性悪性リンパ腫等に対する治療薬等として用いることができる。

配列番号１：ｈｍＡｂ－Ｌ１１軽鎖をコードするヌクレオチド配列
配列番号２：ｈｍＡｂ－Ｌ１１軽鎖のアミノ酸配列
配列番号３：ｈｍＡｂ－Ｈ１１重鎖をコードするヌクレオチド配列
配列番号４：ｈｍＡｂ－Ｈ１１重鎖のアミノ酸配列
配列番号５：ｈｍＡｂ－Ｈ５４１重鎖をコードするヌクレオチド配列
配列番号６：ｈｍＡｂ－Ｈ５４１重鎖のアミノ酸配列
配列番号７：ｈｍＡｂ－Ｈ５５１重鎖をコードするヌクレオチド配列
配列番号８：ｈｍＡｂ－Ｈ５５１重鎖のアミノ酸配列
配列番号９：ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ重鎖をコードするヌクレオチド配列
配列番号１０：ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ重鎖のアミノ酸配列
配列番号１１：軽鎖シグナル配列及びヒトκ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むヌクレオチド断片
配列番号１２：ｈｍＡｂ－Ｌ１１軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列
配列番号１３：重鎖シグナル配列及びヒトＧ１重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むヌクレオチド断片
配列番号１４：ｈｍＡｂ－Ｈ１１重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列
配列番号１５：ｈｍＡｂ－Ｈ５４１重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列
配列番号１６：ｈｍＡｂ－Ｈ５５１重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列
配列番号１７：ｈｍＡｂ－Ｈ１１ａ重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列
配列番号１８：ヒトＣＤ３７のアミノ酸配列
配列番号１９：ヒト化抗ＣＤ３７抗体のＣＤＲＬ１配列
配列番号２０：ヒト化抗ＣＤ３７抗体のＣＤＲＬ２配列
配列番号２１：ヒト化抗ＣＤ３７抗体のＣＤＲＬ３配列
配列番号２２：ヒト化抗ＣＤ３７抗体のＣＤＲＨ１配列
配列番号２３：ヒト化抗ＣＤ３７抗体のＣＤＲＨ２配列
配列番号２４：ヒト化抗ＣＤ３７抗体のＣＤＲＨ３配列

Claims

　抗ＣＤ３７抗体が、次式（ａ）～（ｆ）：
（ａ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｂ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｃ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｄ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｅ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、及び
（ｆ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
からなる群より選択されるいずれか１の式で示される薬物－リンカー構造と結合している抗体－薬物コンジュゲート。
（ここで、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－は次式：

で示される構造であり、このものの３位で抗体と結合し、１位の窒素原子上でこれを含むリンカー構造内のメチレン基と結合し、
ＧＧＦＧは、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシンからなるペプチド結合で連結しているアミノ酸配列を示し、
－（ＮＨ－ＤＸ）は、次式：

で示される、１位のアミノ基の窒素原子が結合部位となっている基であり、
抗ＣＤ３７抗体は、配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列又は配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列と９０％以上の相同性であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列又は配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列と９０％以上の相同性であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体である。）
　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｇ）乃至（ｊ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体である請求項１に記載の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｇ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｉ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；及び
（ｊ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域。
　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｈ）乃至（ｊ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体である請求項１又は２に記載の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｈ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｉ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；及び
（ｊ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～１２８番目のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～１３８番目のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域。
　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｋ）乃至（ｎ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖及び軽鎖を含む抗体である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｋ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号４に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｌ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｍ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；及び
（ｎ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖。
　抗ＣＤ３７抗体が、以下の（ｌ）乃至（ｎ）からなる群より選択されるいずれか１に記載の重鎖及び軽鎖を含む抗体である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｌ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；
（ｍ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号８に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖；及び
（ｎ）配列番号２に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３４番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号１０に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４６８番目のアミノ酸配列からなる重鎖。
　薬物－リンカー構造が、以下の（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）からなる群より選択されるいずれか１の式で示される請求項１乃至５のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｃ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｄ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｅ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
　薬物－リンカー構造が、以下の（ｃ）又は（ｅ）の式で示される請求項１乃至６のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート：
（ｃ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（ｅ）－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
　以下の式（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）：

で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　以下の式：

で示される請求項１乃至８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（ここで、ＡＢは抗体を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体とリンカーは抗体由来のスルフヒドリル基を介して結合している。）
　抗体重鎖がＮ結合型糖鎖付加、Ｏ結合型糖鎖付加、アミノ末端のプロセッシング、カルボキシル末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、トリプトファンの酸化、アミノ末端にメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を受けている、請求項１乃至９のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　抗体重鎖のカルボキシル末端において１つ又は２つのアミノ酸が欠失している請求項１０に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　２本の抗体重鎖の双方のカルボキシル末端において１つのアミノ酸が欠失している請求項１０又は請求項１１に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　抗体重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている請求項１０乃至１２のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１から１０個の範囲である請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２から８個の範囲である請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が３から８個の範囲である請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７から８個の範囲である請求項１乃至１６のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が８である請求項１乃至１７のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
　請求項１乃至１８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を含むことを特徴とする医薬組成物。
　抗腫瘍薬であることを特徴とする、請求項１９に記載の医薬組成物。
　腫瘍がＣＤ３７を発現している腫瘍であることを特徴とする、請求項２０に記載の医薬組成物。
　腫瘍がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁体リンパ腫、バーキットリンパ腫及び慢性リンパ性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、請求項２０又は２１に記載の医薬組成物。
　腫瘍が末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のＴ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群及び急性骨髄性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、請求項２０又は２１に記載の医薬組成物。
　請求項１乃至１８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を個体に投与する工程を含む、腫瘍の治療方法。
　腫瘍がＣＤ３７を発現している腫瘍であることを特徴とする、請求項２４に記載の治療方法。
　腫瘍がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁体リンパ腫、バーキットリンパ腫及び慢性リンパ性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、請求項２４又は２５に記載の治療方法。
　腫瘍が末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫等のＴ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群及び急性骨髄性白血病からなる群より選択されるいずれか１の腫瘍であることを特徴とする、請求項２４又は２５に記載の治療方法。
　請求項１乃至１８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を含む腫瘍の治療剤。
　腫瘍の治療のための請求項１乃至１８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物の使用。
　腫瘍を治療するための薬剤の調製のための請求項１乃至１８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物の使用。
　請求項１乃至１８のいずれか１項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、その薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの水和物を、０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ含む生理食塩水溶液製剤。