JP2022528020A - 癌の治療のための併用療法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、Ｏｍｏｍｙｃまたはその機能的に同等な改変体、Ｏｍｏｍｙｃまたはその機能的に同等な改変体を含むコンジュゲート、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、当該ポリヌクレオチドを含むベクター、または前記ポリペプチドまたは前記コンジュゲートを分泌することができる細胞と、癌免疫剤との組み合わせ物に関する。本発明はまた、本発明の組み合わせ物を含む医薬組成物、およびその医学的使用、特に、癌の治療におけるその使用に関する。

Description

本発明は、癌の分野、より詳しくは、ポリペプチドおよび癌免疫剤を含む組み合わせ物、および医学分野、より具体的には、癌の予防および／または治療におけるその使用に関する。
理想的な抗癌薬は、腫瘍維持に持続的に必要だが、あらゆく正常組織の維持および機能にとって不必要な非冗長機能を標的にすべきである。したがって、最も一般的な論理は、とりわけ癌において変異される遺伝子産物を標的にすることであり、これらの変異体分子が、おそらく癌の「ドライバー」であり、多分正常な組織にとってあまり重要でない、ということに基づいている。これらの理由から、多くの注目が、特定の癌タイプにおける再発性病巣を分類することに向けられてきた。残念ながら、このアプローチには、いくつかの問題がある。第一に、ほとんどのヒト固形癌は、ゲノム不安定性のエピソードを経験し、「ドライバー」変異および付随するそれらのエフェクター経路を不明瞭にすることができる変異ノイズを示す。第二に、癌は、複数の進化論的ボトルネックを経た変遷を伴うプロセスの最終結果である。各ボトルネックは、特定のタイプの変異を必要とし得るが、それらの機能は、その後、腫瘍維持にとって不必要であり、結果的に、腫瘍の成長におけるその時点の後では、良好な治療標的ではなくなる。
Ｍｙｃは、成長制御および癌に関与する、基本的なヘリックス－ループ－ヘリックスロイシンジッパー（ｂ－ＨＬＨ－ＬＺ）タンパク質であり、それは、構造的に関連するタンパク質Ｍａｘ、Ｍａｄ、およびＭｎｔとのネットワークにおいて作動する。Ｍｙｃ／Ｍａｘ二量体は、遺伝子転写を活性化し、細胞増殖またはアポトーシスを誘導する。Ｍａｄ／ＭａｘおよびＭｎｔ／Ｍａｘ複合体は、リプレッサーとして機能し、細胞増殖停止および分化を引き起こす。全ての二量体は、同じＤＮＡコンセンサス部位であるＣＡＣＧＴＧ Ｅ－ｂｏｘを認識する。
Ｍｙｃは、正常細胞において厳密に調節され、そのレベルは、増殖性細胞においてより高く、非増殖性細胞においてより低い。異常に高いおよび／または調節解除されたＭｙｃ活性は、ほとんどの癌と因果的に関係しており、ならびに、多くの場合、活動的で分化の乏しい脈管原性の腫瘍に関連する。Ｍｙｃ発現の脱調節は、遺伝子増幅、転写制御の損失、分解障害、または安定化の増加による過剰発現に起因する。これは、結果として、異常増殖、生存の増加、代謝の変化、脈管形成、および炎症を生じ、その全てが、癌の主要な特徴を表している。複数の研究が、腫瘍発生の細胞内および細胞外の様相の管理におけるＭｙｃの重要な役割を実証しており、Ｍｙｃの機能を標的にすることが、治療的に価値があるであろうことを示唆している。
ＢＥＴブロモドメイン阻害剤によるＭｙｃの下方調節は、結果として、複数の腫瘍タイプの寛解を生じさせることは既知である。このアプローチは、良好な可能性を示すと同時に、いくつかの限界、例えば、毒性および多数のオフターゲット効果を提示する。Ｍｙｃ／Ｍａｘ相互作用を混乱させる多くの小分子は、細胞において低い特異性を示してきた。
しかしながら、Ｍｙｃ阻害剤は、依然として、臨床的利用可能となっておらず、その設計は、様々な警告を提示しており、すなわち、第一に、Ｍｙｃは、核転写因子であり、その結果、膜分子または細胞質分子よりも到達するのがより困難であり、第二に、Ｍｙｃは、標的にすることができる酵素的「活性部位」を有さず、第三に、Ｍｙｃファミリーは、３つの異なるタンパク質ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、およびＬ－Ｍｙｃを含み、それらは、ある特定の条件下において、機能的に冗長であり、そのため、それらの全ては、同時阻害を必要とする。その上、Ｍｙｃ阻害が、正常細胞の増殖を阻害することによって重篤な副作用を誘導することが懸念されてきた。これらのすべての理由から、Ｍｙｃ阻害薬の作製は、困難な課題である。
Ｏｍｏｍｙｃは、Ｍｙｃのｂ－ＨＬＨ－ＬＺドメインを含み、Ｍｙｃのロイシンジッパーに４つのアミノ酸置換基を有する、支配的ネガティブＭＹＣ変異体である（Ｓｏｕｃｅｋ， Ｌ． ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １７， ２４６３－２４７２； Ｓｏｕｃｅｋ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． （２００２）， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２： ３５０７－３５１０）。当該アミノ酸置換基Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、およびＲ７５Ｎは、変更された二量体化特異性を当該タンパク質に付与し、それは、その天然パートナーＭａｘに結合する能力、およびそれ自体とホモ二量体を形成する能力、ならびに野生型ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、およびＬ－Ｍｙｃとヘテロ二量体を形成する能力を保持する。
これらの特性により、Ｏｍｏｍｙｃは、そのＤＮＡ認識結合部位Ｅ ｂｏｘに結合するＭｙｃの能力を無効にすることによって、インビトロおよびインビボの両方においてＭｙｃ依存性遺伝子トランス活性化機能を防ぐことができる。同時に、Ｏｍｏｍｙｃは、Ｍｙｃ発現レベルに依存する方式においてＭｙｃ誘導アポトーシスを強力に増強し、それにより、Ｍｙｃトランス抑制活性を強化する。したがって、Ｏｍｏｍｙｃは、プロモーターへのＭｉｚ－１依存性結合およびトランス抑制を保持しつつ、ＭｙｃがプロモーターＥ－ｂｏｘに結合すること、および標的遺伝子のトランス活性化を防ぐ。Ｏｍｏｍｙｃの存在下において、Ｍｙｃインタラクトームは、抑制するためのチャネルを開き、ならびにその活性は、発癌性（ｐｒｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ）から腫瘍抑制性へと切り替わる。
ＥＰ２８０１３７０Ａ１において、Ｏｍｏｍｙｃペプチド自体が、細胞膜を越えて効率的に形質導入することができ、ならびに核へ移行し、その場所で、その腫瘍抑制効果を発揮することが実証された。
しかしながら、現状技術水準では、癌の治療のための新規の改良された治療アプローチを開発することが依然として必要とされている。
第一態様において、本発明は、
ｉ）下記からなる群：
ａ）配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、
ｂ）配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と、当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲート、
ｃ）ａ）のポリペプチドまたはｂ）のコンジュゲートをコードするポリヌクレオチド、
ｄ）ｃ）のポリヌクレオチドを含むベクター、および、
ｅ）ａ）のポリペプチドまたはｂ）のコンジュゲートを培地中へと分泌することができる細胞、
から選択される第１成分と、
ｉｉ）癌免疫剤である第２成分と
を含む組み合わせ物に関する。
第二態様において、本発明は、本発明による組み合わせ物の薬学的有効量と薬学的に許容される賦形剤と含む医薬組成物に関する。
第三態様において、本発明は、医薬品における使用のための、本発明による組み合わせ物または本発明による医薬組成物に関する。
第四態様において、本発明は、癌の予防および／または治療における使用のための、本発明による組み合わせ物または本発明による医薬組成物に関する。
Ｏｍｏｍｙｃの鼻腔内投与は、腫瘍部位へＴ細胞を動員する。ＫＲａｓＧ１２Ｄ駆動ＮＳＣＬＣを有するマウスを、４週間にわたって週４回、鼻腔内によりＯｍｏｍｙｃで治療した。（Ａ）Ｏｍｏｍｙｃ投与は、治療開始後早くも１週間で腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導し、Ｔ細胞は、治療の間中、そこに留まった。＊は、ｐ＜０．０５を表し；＊＊は、ｐ＜０．０１を表す。（Ｂ）Ｏｍｏｍｙｃが、腫瘍へのＣＤ４Ｔ細胞の動員を誘導し、特に、ＰＤ－１および両方のＰＤ－１Ｔｉｍ－３分子のより高いレベルを示すＣＤ４Ｔ細胞を活性化したことを示すＦＡＣＳ分析。Ｏｍｏｍｙｃは、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇｓ）の発現も誘導する。 Ｏｍｏｍｙｃ全身投与は、腫瘍部位へＴ細胞を動員する。Ｋｒａｓ／ｐ５３変異ＮＳＣＬＣ ＭｕＨ－１６３細胞系を同系マウスに皮下において接種させた。マウスを、３週間にわたってＯｍｏｍｙｃで全身的に治療した。Ｏｍｏｍｙｃは、それらのビヒクルカウンターパート（Ｂ）と比較して、より多くのＣＤ＋Ｔ細胞を腫瘍部位（Ａ）へ動員し、ならびに著しく多いＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞が、ＰＤ－１およびＴｉｍ－３分子の両方を発現する。＊＊は、ｐ＜０．０１を表す。 抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃは、腫瘍へＣＤ４＋ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３－ Ｔ細胞を動員する。ＫＲａｓＧ１２Ｄ駆動ＮＳＣＬＣを有するマウスを、４週間にわたって、鼻腔内によりＯｍｏｍｙｃで週４回、および腹腔内により抗ＰＤ－１（２５０μｇ）で週１回治療した。抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃは、腫瘍部位へのＣＤ４＋ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３－Ｔ細胞の動員を誘導した。 抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃは、ＩＦＮ－γの産生を誘導する。Ｏｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１の併用療法は、腫瘍内ＣＤ４（Ａ）およびＣＤ８（Ｂ）Ｔ細胞によるＩＦＮ－γの産生を誘導した。 抗ＰＤ－１抗体とのＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物は、健康な肺の割合を相乗効果的に増加させ、腫瘍部位へＴ細胞を動員する。ＫＲａｓＧ１２Ｄ駆動ＮＳＣＬＣを有するマウスを、鼻腔内によりＯｍｏｍｙｃで週４回、腹腔内により抗ＰＤ－１抗体で週１回治療した。（Ａ）抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃで治療した動物は、ビヒクルおよび治療のみと比較して、健康な肺の割合の増加を示した。（Ｂ）治療開始時およびエンドポイントに撮影された各実験群からの代表的横方向平面ＣＴ画像。暗いエリアは健康な肺に対応し、灰色のエリアは影響を受けた肺に対応する。（Ｃ）ＦＡＣＳ分析は、組み合わせて投与されたＯｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１が、特にＣＤ４Ｔ細胞およびＴｈ１／Ｔｈ１７ｃ細胞の、腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導することを示した。＊は、ｐ＜０．０５を表し；＊＊は、ｐ＜０．０１を表し；＊＊＊は、ｐ＜０．０００１を表す。 抗ＣＴＬＡ－４抗体とのＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物は、腫瘍成長を相乗効果的に低下させ、腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を動員する。ＫＲａｓＧ１２Ｄ駆動ＮＳＣＬＣを有するマウスを、鼻腔内によりＯｍｏｍｙｃで週４回、腹腔内により抗ＣＴＬＡ－４抗体で週１回治療した。（Ａ）抗ＣＴＬＡ－４と組み合わせたＯｍｏｍｙｃで治療した動物は、ビヒクルおよび治療のみと比較して、腫瘍成長の低下を示した。表は、全ての治療群に対する腫瘍成長の平均を示している。（Ｂ）ＦＡＣＳ分析は、組み合わせて投与されたＯｍｏｍｙｃおよび抗ＣＴＬＡ－４が、特に、ＣＤ４Ｔ細胞のおよびＣＤ８ＰＤ－１＋Ｔ細胞の両方の、腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導することを示した。＊は、ｐ＜０．０５を表し；＊＊は、ｐ＜０．０１を表し；＊＊＊は、ｐ＜０．０００１を表す。 抗ＰＤ－１抗体とのＯｍｏｍｙｃの連続併用は、腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を相乗効果的に動員する。ＫＲａｓＧ１２Ｄ駆動ＮＳＣＬＣを有するマウスを、静脈内により４日に１回、１０日間にわたってＯｍｏｍｙｃで治療し、次いで、腹腔内により抗ＰＤ－１抗体で週１回治療した。ＦＡＣＳ分析は、Ｏｍｏｍｙｃおよび、次いで抗ＰＤ－１による連続治療が、特に、ＰＤ－１およびＴｉｍ－３分子の両方を発現するＣＤ４Ｔ細胞、およびＰＤ－１を発現するＴｈ１／Ｔｈ１７Ｔ細胞の腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導することを示した。＊は、ｐ＜０．０５を表し；＊＊は、ｐ＜０．０１を表す。 抗ＰＤ－１抗体とのＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物は、腫瘍部位へＴ細胞を相乗効果的に動員する。ＫＲａｓＧ１２Ｄ／ｐ５３駆動ＮＳＣＬＣを有するマウスを、同時に週に１回、Ｏｍｏｍｙｃ（静脈内）および抗ＰＤ－１（腹腔内）で治療した。（Ａ）ＩＨＣ染色は、Ｏｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１の同時治療が、腫瘍部位へＴ細胞を著しく動員することを示した。（Ｂ）ＦＡＣＳ分析は、抗ＰＤ－１を伴うＯｍｏｍｙｃによる治療が、腫瘍部位への免疫細胞動員全体を誘導することを示した。＊は、ｐ＜０．０５を表し；＊＊は、ｐ＜０．０１を表した。 ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬ－１７、およびＩＦＮ－γの高発現は、より高い生存率に相関する。ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬ－１７、およびＩＦＮ－γの発現を考慮したＮＳＣＬＣ患者の代表的カプラン－マイヤー曲線。グラフの下の表は、上位四分位数の生存を示している。グラフは、カプラン－マイヤープロッターｈｔｔｐ：／／ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍ／ａｎａｌｙｓｉｓ／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ｐ＝ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄを用いて行った。
本発明は、癌の予防および治療のための新規の治療組み合わせ物の提供に関する。
特に明記されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
本発明の態様に関連して開示される全ての実施形態は、他の態様にも適用可能である。
本発明の組み合わせ物および医薬組成物
本発明の全ての他の態様と共に当該態様において提供される定義は、本発明全体に対して等しく適用可能である。
本発明者らは、Ｏｍｏｍｙｃの鼻腔内投与および全身投与が腫瘍部位へＴ細胞を動員することを実証した（図１および２）。したがって、Ｏｍｏｍｙｃは、癌免疫剤と組み合わせた癌の治療において有用であり得る。その上、Ｏｍｏｍｙｃと癌免疫剤との組み合わせが、癌の治療において相乗効果を有することが見出された。例えば、Ｏｍｏｍｙｃと抗ＰＤ－１療法との組み合わせは、ビヒクルおよび抗ＰＤ－１のみで治療した両方の群と比較して、腫瘍部位への、ＰＤ－１を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の動員を著しく増加させるが、Ｔｉｍ－３の動員は増加しない。（図３）。さらに、Ｏｍｏｍｙｃと抗ＰＤ－１療法の組み合わせは、それらのビヒクルカウンターパートと比較して、ＣＤ４＋ヘルパーおよびＣＤ８＋細胞傷害性腫瘍内Ｔ細胞の両方によるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の産生を著しく誘導し（図４）、そのことは、Ｏｍｏｍｙｃで治療した群でも、抗ＰＤ－１で治療した群でも観察されなかった。腫瘍部位へのＴ細胞の動員は、肺癌を患う対象が治療される場合、結果として健康な肺の割合の相乗的増加となる（図５）。この相乗効果は、投与の経路、用量、および投薬計画にかかわらず維持される（図７および８）。Ｏｍｏｍｙｃと抗ＣＴＬＡ－４療法との組み合わせが、腫瘍成長を相乗効果的に低下させ、腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を動員することも見出された（図６）。
したがって、第一態様において、本発明は、
ｉ）下記からなる群：
ａ）配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、
ｂ）配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と、当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲート、
ｃ）ａ）のポリペプチドまたはｂ）のコンジュゲートをコードするポリヌクレオチド、
ｄ）ｃ）のポリヌクレオチドを含むベクター、および
ｅ）ａ）のポリペプチドまたはｂ）のコンジュゲートを培地中へと分泌することができる細胞
から選択される第１成分と、
ｉｉ）癌免疫剤である第２成分と
を含む組み合わせ物に関する。
本発明によれば、表現「組み合わせ物」は、例えば、単一製剤として製剤化された組成物において、それぞれの成分の別々の製剤から構成された組み合わされた混合物、例えば、組み合わされた調製物として併用使用のために組み合わされ得る「タンクミックス」など、において、ならびに連続方式において、すなわち、数時間または数日などの適度に短い期間において交互に適用される場合の、単一の有効成分の組み合わせ使用において、あるいは、同時投与においての、化合物（ｉ）および（ｉｉ）の様々な組み合わせ物を表す。本発明において、化合物（ｉ）は、治療有効量の、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体を意味するか、または、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲートを意味するか、または、当該ポリペプチドまたは当該コンジュゲートをコードするポリヌクレオチドを意味するか、または、当該ポリヌクレオチドを含むベクターを意味するか、または、当該ポリペプチドまたは当該コンジュゲートを培地中へと分泌することができる細胞を意味する。本発明において、化合物（ｉｉ）は、治療有効量の癌免疫剤を意味する。好ましくは、本発明を扱うことにおいて化合物（ｉ）および（ｉｉ）を適用する順序は本質的ではない。
当該組み合わせ物は、各成分が個別に製剤化またはパッケージされるパーツキット（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔ）であり得る。
化合物（ｉ）および（ｉｉ）の組み合わせ物は、その同時投与、個別投与、または連続投与のために製剤化することができる。特に、投与が同時でない場合、当該化合物は、互いに近接するタイミング（ｃｌｏｓｅ ｔｉｍｅ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ）において投与される。その上、化合物は、同じまたは異なる投薬形態において、または同じまたは異なる投与経路によって投与され、例えば、一方の化合物は、経口投与することができ、他方の化合物は、静脈内投与することができる。好ましくは、化合物（ｉ）は、鼻腔内投与され、化合物（ｉｉ）は、全身投与、より好ましくは非経口投与、さらより好ましくは腹腔内投与される。別の実施形態において、化合物（ｉ）は、静脈内投与され、化合物（ｉｉ）は、非経口投与、さらにより好ましくは腹腔内投与される。
２つの化合物（ｉ）および（ｉｉ）の組み合わせ物は、
－ 同じ医薬製剤の一部であり、通常、当該２つの化合物が同時に投与される、組み合わせ物として、
－ それぞれの物質が他方と共に、同時投与、連続投与、または個別投与の可能を生じさせるような、２つのユニットの組み合わせ物として、投与することができる。
特定の実施形態において、本発明の組み合わせ物の化合物（ｉ）は、化合物（ｉｉ）とは独立して、すなわち、２つのユニットにおいて、ただし同時に、投与される。
別の特定の実施形態において、本発明の組み合わせ物の化合物（ｉ）は、最初に投与され、次いで、化合物（ｉｉ）が投与され、すなわち、化合物（ｉｉ）は、個別にまたは連続して投与される。
さらに別の特定の実施形態において、本発明の組み合わせ物の化合物（ｉｉ）が最初に投与され、次いで、化合物（ｉ）が投与され、すなわち、定義されるように、化合物（ｉ）は、個別にまたは連続して投与される。個別に投与される場合、本発明の組み合わせ物の化合物（ｉ）および（ｉｉ）は、互いからある期間内に、例えば、互いから１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、または２４時間以内に、投与することができる。別の実施形態において、本発明の組み合わせ物の化合物（ｉ）および（ｉｉ）は、互いから１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、１０日以内、１１日以内、１２日以内、１３日以内、１４日以内、１５日以内、１６日以内、１７日以内、１８日以内、１９日以内、２０日以内、２１日以内、２２日以内、２３日以内、または２４日以内に、好ましくは、互いから１日以内に、より好ましくは互いから１０日以内に、投与することができる。好ましい実施形態において、化合物（ｉｉ）は、化合物（ｉ）の最初の投与の１０日後に投与される。ある実施形態において、第１化合物の投与は、第２化合物の投与を開始する前に中止される。
別の態様において、本発明は、本発明の第一態様による第１化合物の相乗効果的有効量と、癌免疫剤とを含む組み合わせ物または医薬組成物に関する。
好ましい実施形態において、本発明の化合物（ｉ）は、配列番号１の配列またはその機能的に同等な改変体を含むポリペプチドである。
用語「ポリペプチド」および「ペプチド」は、任意の長さのアミノ酸の高分子を意味するために、本明細書において相互互換的に使用される。本発明のポリペプチドは、修飾されたアミノ酸を含むことができ、それは、非アミノ酸を割り込ませることができる。好ましい実施形態において、当該ポリペプチドは、アミノ酸によって排他的に形成される。好ましくは、当該組み合わせ物のアイテム（ｉ）を形成するポリペプチドは、８０から５００の間のアミノ酸、より好ましくは８０から３００の間のアミノ酸、より好ましくは８０から２５０の間のアミノ酸、より好ましくは８０から１５０の間のアミノ酸、さらにより好ましくは８０から１３０の間のアミノ酸、好ましくは９０から１３０の間のアミノ酸、好ましくは１２５以下のアミノ酸、より好ましくは１００以下のアミノ酸の長さを有する。好ましい実施形態において、当該ポリペプチドは、９０から９８の間のアミノ酸、好ましくは９０から９５の間のアミノ酸、より好ましくは９１のアミノ酸の長さを有する。
用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式において機能するアミノ酸類似物およびアミノ酸模倣物を意味する。その上、用語「アミノ酸」は、Ｄ－アミノ酸およびＬ－アミノ酸（立体異性体）の両方を包含する。好ましくは、当該アミノ酸類は、Ｌ－アミノ酸である。
用語「天然アミノ酸」または「天然に存在するアミノ酸」は、２０の天然に存在するアミノ酸；多くの場合に翻訳後にインビボにおいて修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、ホスホセリン、およびホスホトレオニンなど；ならびに他の異常アミノ酸、例えば、これらに限定されるわけではないが、２－アミノアジピン酸、ヒドロキシリシン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシン、およびオルニチンなど、を含む。
本明細書において使用される場合、用語「非天然アミノ酸」または「合成アミノ酸」は、位置「ａ」においてアミノ基で置換され、構造的に天然アミノ酸に関連する、カルボン酸またはその誘導体を意味する。修飾アミノ酸または非一般的アミノ酸の例示的非限定的な例としては、２－アミノアジピン酸、３－アミノアジピン酸、β－アラニン、２－アミノ酪酸、４－アミノ酪酸、６－アミノカプロン酸、２－アミノヘプタン酸、２－アミノイソ酪酸、３－アミノイソ酪酸、２－アミノピメリン酸、２，４－ジアミノ酪酸、デスモシン、２，２’－ジアミノピメリン酸、２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリジン、３－ヒドロキシプロリン、４－ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、６－Ｎ－メチル－リジン、Ｎ－メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチンなど、が挙げられる。
本発明のポリペプチドは、ペプチドに結合した非アミノ酸部分、例えば、疎水性部分など（様々な直鎖状、分岐鎖状、環式、多環式、または複素環式炭水化物および炭水化物誘導体）；分解を減らすために化合物の末端に結合させた様々な保護基、も含み得る。好適な保護官能基は、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｗｕｔｓ， ”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｃｈａｐｔｅｒｓ ５ ａｎｄ ７， １９９１に記載される。
当該ポリペプチド中に存在する化学（非アミノ酸）基は、様々な生理学的特性、例えば、分解またはクリアランスの減少；様々な細胞ポンプによる反発の減少、改良された投与の様々な様式、特異性の増加、親和性の増加、安定性の増加、バイオアベイラビリティ、溶解性、毒性の減少など、を向上させるために含ませられ得る。
「模倣物」は、ペプチド構造の化学構造を模倣しかつ当該ペプチド構造の機能的特性を保持する分子を包含する。ペプチド類似物、誘導体、および模倣物を設計する際のアプローチは、当分野において既知である。
ある実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号１からなるポリペプチド、または配列番号１の機能的に同等な改変体からなるポリペプチドであり、好ましくは配列番号１の配列からなるポリペプチドである。配列番号１は、
TEENVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAETQKLISEIDLLRKQNEQLKHKLEQLRNSCA（配列番号１）
に対応する。
配列番号１の配列の当該ポリペプチドは、Ｏｍｏｍｙｃタンパク質配列に対応する。用語「Ｏｍｏｍｙｃ」は、本明細書において使用される場合、Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、およびＲ７５Ｎ変異を有するＭｙｃのｂＨＬＨＺｉｐドメインの変異バージョンからなるポリペプチドである（ここで、当該変異位置の付番は、２０１５年３月１５日リリースの、ＮＣＢＩデータベースにおけるアクセッション番号ＮＰ＿００２４５８において定義されるポリペプチドのアミノ酸３６５～４５４に対応するＭｙｃ領域の配列に関して与えられる）。アクセッション番号ＮＰ＿００２４５８においてＮＣＢＩデータベースで提供されるｃ－Ｍｙｃの配列は、下記に示され（配列番号２）、ここで、Ｏｍｏｍｙｃが由来する領域は、下線にて示される：
Figure 2022528020000001
Ｏｍｏｍｙｃは、配列ＲＱＲＲＮＥＬＫＲＳＦ（配列番号３）を有する、ｃ－ＭｙｃのＭ２ドメインも含み（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｌｅｅ， Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， １９８８， ８：４０４８－４０５４を参照されたい）（上記において二重下線が引かれている）、それらは、核局在化シグナルに対応する。
Ｏｍｏｍｙｃは、全ての３つの発癌性Ｍｙｃタンパク質（ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、およびＬ－Ｍｙｃ）との二量体化能力の増加を示すことにおいて特徴付けられる。Ｏｍｏｍｙｃは、結果として腫瘍抑制効果を生じるような変異が保存される限りにおいて、当技術分野において既知の任意のＭｙｃタンパク質のｂＨＬＨＺｉｐドメインに由来し得る。したがって、本発明において使用することができるＯｍｏｍｙｃは、任意の哺乳動物、例えば、これらに限定されるわけではないが、家畜および農場動物（ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、または齧歯動物）、霊長類、およびヒトなど、に由来し得る。好ましくは、当該Ｏｍｏｍｙｃタンパク質は、ヒトＭｙｃタンパク質（アクセッション番号ＮＰ＿００２４５８、２０１９年３月１２日リリース）に由来し得る。
用語「Ｍｙｃ」は、本明細書において使用される場合、ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、およびＬ－Ｍｙｃを含む転写因子のファミリーを意味する。Ｍｙｃタンパク質は、コンセンサス配列ＣＡＣＧＴＧ（エンハンサーボックス配列またはＥ－ボックス、ならびにヒストンアセチル－トランスフェラーゼまたはＨＡＴを動員する）での結合によって、多くの遺伝子の発現を活性化する。しかしながら、Ｍｙｃは、転写抑制因子としても機能することができる。それは、Ｍｉｚ－１転写因子を結合させ、ｐ３００コアクティベーターを置き換えることによって、Ｍｉｚ－１標的遺伝子の発現を阻害する。Ｍｙｃは、ＤＮＡ複製の制御において、直接的な役割も有する。
Ｍｙｃ ｂ－ＨＬＨ－ＬＺまたはＭｙｃ塩基性領域ヘリックス－ループ－ヘリックスロイシンジッパードメインは、Ｍａｘタンパク質とのＭｙｃ二量体化およびＭｙｃ－標的遺伝子への結合を決定する領域を意味する。この領域は、ヒトＭｙｃのアミノ酸３６５～４５４に対応し、ループによって接続された２つのαヘリックスによって特徴付けられる（Ｎａｉｒ， Ｓ． Ｋ．， ＆ Ｂｕｒｌｅｙ， Ｓ． Ｋ．， ２００３， Ｃｅｌｌ， １１２： １９３－２０５）。
好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは、下記に示される配列番号４を含むか、配列番号４からなるか、配列番号４から実質的になるポリペプチドである。
MTEENVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAETQKLISEIDLLRKQNEQLKHKLEQLRNSCA（配列番号４）
これに関連して、「から実質的になる」は、指定された分子が、配列番号４の活性化を変更するようなあらゆる追加の配列を含まないことを意味する。
好ましくは、当該ポリペプチドは、配列番号４からなる。
用語「機能的に同等な改変体」は、１つまたは複数のアミノ酸の挿入または追加および／または１つまたは複数のアミノ酸の欠失および／または配列番号１のポリペプチドに関して１つまたは複数のアミノ酸の保存的置換によって生じる任意のポリペプチド、ならびに／あるいは配列番号１のポリペプチド化学修飾によって生じ、かつ配列番号１の腫瘍抑制活性を実質的に保存する、任意のポリペプチドを意味する。好ましくは、機能的に同等な改変体は、１つまたは複数のアミノ酸の挿入または追加および／または１つまたは複数のアミノ酸の欠失、によって生じる任意のポリペプチド、ならびに／あるいは配列番号１のポリペプチドに関して１つまたは複数のアミノ酸の保存的置換によって生じ、かつ配列番号１の腫瘍抑制活性を実質的に保存する任意のポリペプチド、より好ましくは、配列番号１のポリペプチドに関して１つまたは複数のアミノ酸の挿入または追加によって生じる任意のポリペプチド、を意味する。
当業者は、腫瘍抑制活性の保存は、当該改変体が、Ｍｙｃおよび／またはその必須パートナーｐ２１／ｐ２２Ｍａｘと二量体を形成し、Ｍｙｃ活性を阻害することができること、それが、細胞膜を越えて移行することができること、ならびにそれが、核エンベロープを越えて移行することができることを必要とすることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドの機能的に同等な改変体は、Ｏｍｏｍｙｃほどホモ二量体化しないか、またはジスルフィド結合の形成によってホモ二量体へと強制されない。特に、本発明のポリペプチドのある特定の実施形態のホモ二量体形態におけるジスルフィドブリッジ形成は、ポリペプチドＯｍｏｍｙｃにおいてより少ない。
「より少ないホモ二量体化」は、本明細書において使用される場合、還元条件下でさえ本発明のポリペプチドのホモ二量体を形成するより低い能力に関する。好ましい実施形態において、当該能力は、Ｏｍｏｍｙｃのホモ二量体を形成する能力の少なくとも５％未満、少なくとも１０％未満、少なくとも１５％未満、少なくとも２０％未満、少なくとも２５％未満、少なくとも３０％未満、少なくとも３５％未満、少なくとも４０％未満、少なくとも４５％未満、少なくとも５０％未満、少なくとも５５％未満、少なくとも６０％未満、少なくとも６５％未満、少なくとも７０％未満、少なくとも７５％未満、少なくとも８０％未満、少なくとも８５％未満、少なくとも９０％未満、少なくとも９５％未満である。
本明細書において使用される場合、還元条件は、還元剤、すなわち、レドックス化学反応において別の化学種に電子を供与する化合物、の存在に関する。還元剤の例示的非限定的な例は、ＤＴＴ（ジチオトレイトール）、ｂ－メルカプトエタノール、またはＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）である。ホモ二量体の量がインビトロにおいて同じであること、および、機能的同等な改変体とＯｍｏｍｙｃとの間の違いが、ジスルフィドの不在がヘテロ二量体のより高い潜在的形成を可能にするようなヘテロ二量体化パートナーの存在下の細胞にのみ存在すること、は可能である。
例示的非限定的な例として、円二色性によってモニターされる熱変性によってペプチドのホモ二量体化を特定するために、いくつかのアッセイが使用され得、そのため、二量体化は、フォールディングおよび熱安定性の定量化によって検出され得る。
好適な機能的に同等な改変体は、配列番号１のポリペプチドから実質的になるポリペプチドを含む。これに関連して、「から実質的になる」は、指定された分子が、配列番号１の活性化を変更するようなあらゆる追加の配列を含まないことを意味する。
好ましい実施形態において、配列番号１の機能的に同等な改変体は、配列番号１のポリペプチドに関して１つまたは複数のアミノ酸の挿入または追加によって生じるポリペプチドである。ある実施形態において、当該機能的に同等な改変体は、１０未満のアミノ酸、より好ましくは５未満のアミノ酸の挿入によって生じ、より好ましくは、１つのアミノ酸の挿入によって生じる。好ましい実施形態において、当該機能的に同等な改変体は、メチオニンである１つのアミノ酸の挿入によって生じる。
別の実施形態において、配列番号１の機能的に同等な改変体は、配列番号１のポリペプチドに関して１つまたは複数のアミノ酸の欠失によって生じるポリペプチドである。ある実施形態において、当該機能的に同等な改変体は、１０未満のアミノ酸、より好ましくは５未満のアミノ酸の欠失によって生じ、より好ましくは、１つのアミノ酸の欠失によって生じる。
ターゲティングペプチドの好適な機能的改変体は、約２５％を超えるアミノ酸配列同一性、例えば、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性など、の配列番号１のペプチドに関してある程度の同一性を示すものである。２つのポリペプチドの間の同一性の程度は、コンピュータアルゴリズムおよび当業者に広く知られる方法を使用して特定される。好ましくは、２つのアミノ酸配列の間の同一性は、上記で説明したＢＬＡＳＴＰアルゴリズム（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ， Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， ＮＣＢＩ ＮＬＭ ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． ２０８９４， Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９９０；２１５： ４０３－４１０）を使用することによって特定される。好ましい実施形態において、当該配列同一性は、配列番号１のポリペプチドの全長にわたって、または改変体の全長にわたって、またはその両方において、特定される。
本発明のポリペプチドの機能的に同等な改変体は、翻訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、イソプレニル化、ミリストイル化、タンパク質分解的プロセシングなど、も含み得る。
別の実施形態において、ターゲティングペプチドの好適な機能的改変体は、本発明のポリペプチド内の１つまたは複数の位置が、上記において言及したタンパク質に存在するアミノ酸の保存的置換であるアミノ酸を含むものである。「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸を同様の構造および／または化学特性を有する別のアミノ酸で置換することによって生じる。例えば、以下の６つの群のそれぞれは、互いに保存的置換であるアミノ酸１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。を含む。そのような保存的アミノ酸置換の選択は、当業者の技術内であり、例えば、Ｄｏｒｄｏ ｅｔ ａｌ．， （Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ， １９９９， ２１７；７２１－７３９）およびＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．， （Ｊ． Ｔｈｅｏｒ． Ｂｉｏｌ．， １９８６， １１９：２０５－２１８）によって説明されている。
Ｏｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体が、ヒトｃ－Ｍｙｃ由来のＯｍｏｍｙｃに見出される変異Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、およびＲ７５Ｎに対応する位置に変異を含むことは理解されるであろう。当該機能的に同等な改変体において変異が生じなければならない位置は、様々なＭｙｃ配列の多重配列アラインメントによって特定することができ、ならびにヒトｃ－Ｍｙｃに由来するＯｍｏｍｙｃの配列内の位置６１、６８、７４、および７５に対応する位置のアラインメントによって識別することができる。ある実施形態において、Ｏｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体は、ヒトｃ－Ｍｙｃ由来のＯｍｏｍｙｃに見出される変異Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、およびＲ７５Ｎに対応する位置に変異を含む。
別の実施形態において、Ｏｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体は、Ｏｍｏｍｙｃの配列内のＥ６１、Ｅ６８、Ｒ７４、およびＲ７５に対応する位置に変異を含み、その場合、Ｅ６１は、Ｅ６１ＡまたはＥ６１Ｓに変異しており；Ｅ６８は、Ｅ６８Ｌ、Ｅ６８Ｍ、またはＥ６８Ｖに変異しており；Ｒ７４は、Ｒ７４Ｎに変異しており；ならびにＲ７５は、Ｒ７５Ｑに変異している。
多重配列アラインメントは、一度に２つより多い配列を組み入れるための対状配列の拡張である。多重アラインメント法は、所定のクエリーセットにおいて配列の全てを揃える。好ましい多重配列アラインメントプログラム（およびそのアルゴリズム）は、ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓａｌ２Ｗ、またはＣｌｕｓｔａｌＷ ＸＸＬである（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２２：４６７３－４６８０を参照されたい）。一度、異なる有機体または改変体由来のｃ－Ｍｙｃの配列を、本明細書において説明されるように比較すると（揃えると）、熟練技術者は、Ｏｍｏｍｙｃに見出される位置Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、およびＲ７５Ｎに対応する各配列内の位置を容易に識別することができ、ならびに、ヒトｃ－Ｍｙｃ由来のＯｍｏｍｙｃに見出されるＥ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、およびＲ７５Ｎの変異に対応する変異をＯｍｏｍｙｃ改変体内に導入することができる。
あるポリペプチドをＯｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体と見なすことができるか否かに対する好適なアッセイとしては、これらに限定されるわけではないが、以下が挙げられる。
－ ＭａｘおよびＭｙｃと二量体複合体を形成する当該ポリペプチドの能力を測定するアッセイ、例えば、Ｓｏｕｃｅｋ ｅｔ ａｌ． （Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， １９９８， １７： ２４６３ － ２４７２）に記載されるようなリポーター遺伝子の発現に基づくアッセイ、ならびにＰＬＡ（タンパク質ライゲーションアッセイ）または共免疫沈降法など、
－ ＤＮＡ内のＭｙｃ／Ｍａｘ認識部位（ＣＡＣＧＴＧ部位）に結合するポリペプチドの能力を測定するアッセイ、例えば、Ｓｏｕｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（上掲）によって説明される電気泳動移動度シフト解析（ＥＭＳＡ）など、
－ Ｍｙｃ誘導トランス活性化を抑制する能力を測定するアッセイ、例えば、Ｓｏｕｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（上掲）によって説明されるようなＭｙｃ／Ｍａｘに特異的なＤＮＡ結合部位の制御下でのレポーター遺伝子の発現に基づくアッセイなど、
－ Ｓｏｕｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（上掲）によって説明されるような、Ｍｙｃ腫瘍性遺伝子を発現する細胞の増殖を阻害するポリペプチドの能力に基づくアッセイ、
－ Ｍｙｃ誘導アポトーシスを増強するポリペプチドの能力を測定するアッセイ、例えば、Ｓｏｕｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， １９９８： １７， ２４６３ － ２４７２）によって説明されるアッセイなど。さらに、細胞におけるアポトーシスを評価するための当技術分野において一般的に知られる任意のアッセイ、例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）またはアネキシンＶ染色、トリパンブルー、ＤＮＡラダー／断片化、およびＴＵＮＥＬなど、を使用することができる。
好ましい実施形態において、ポリペプチドは、上記のアッセイの１つまたは複数において、元のＯｍｏｍｙｃの少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の活性を示す場合、Ｏｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体であると考えられる。
特定の実施形態において、配列番号１のポリペプチドの機能的に同等な改変体は、配列番号１の位置８９における残基Ｘがシステインではない配列番号１のポリペプチドを含む。好ましくは、配列番号１の位置８９における残基Ｘは、脂肪族アミノ酸、または硫化アミノ酸（ｓｕｌｆｕｒｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）、またはジカルボキシルアミノ酸もしくはそのアミド、または２つの塩基性基を有するアミノ酸、または芳香族アミノ酸、または環状アミノ酸、またはヒドロキシル化アミノ酸である。より好ましいのは、セリン、トレオニン、およびアラニンから選択されるアミノ酸であり、好ましくはセリンおよびアラニンから選択されるアミノ酸である。
システインではない配列番号の位置８９における残基Ｘを有する好適な配列番号１の機能的に同等な改変体は、下記の表において開示される。
Figure 2022528020000002
したがって、好ましい実施形態において、配列番号１のポリペプチドの機能的に同等な改変体は、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、および配列番号１０からなる群から選択される。
さらに、Ｏｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体は、当該改変体が細胞に接触した後、当該細胞を形質導入することもできる。Ｏｍｏｍｙｃの機能的に同等な改変体は、天然Ｏｍｏｍｙｃに見出されるタンパク質形質導入ドメインまたは別の機能性タンパク質形質導入ドメインを含むことは理解されるであろう。
好ましい実施形態において、ポリペプチドは、それが、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％、配列番号１と同じ程度に効率的に標的細胞を形質導入することができる場合、配列番号１の機能的に同等な改変体として見なされる。
さらに、配列番号１の機能的に同等な改変体は、標的の腫瘍細胞の核へ移行することもできる。
好ましい実施形態において、ポリペプチドは、それが、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％、配列番号１と同じ程度に効率的に標的の腫瘍細胞の核へ移行することができる場合、配列番号１の機能的に同等な改変体として見なされる。
細胞膜を越えて核へ移行するその能力に関して、あるポリペプチドが配列番号１の機能的に同等な改変体であるか否かを特定するために好適なアッセイとしては、当該ポリペプチドに特異的な試薬と当該細胞の核を特異的に標識する染料（例えば、ＤＡＰＩまたはヘキスト染料など）とを用いた細胞の二重標識法が挙げられる。本発明のポリペプチドの検出は、共焦点顕微鏡または蛍光顕微鏡によって実施することができる。
別の好ましい実施形態において、本発明の化合物（ｉ）は、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲートである。
用語「コンジュゲート」は、本明細書において使用される場合、当該コンジュゲートにおいて各化合物の機能が維持されるように互いに共有結合している２つ以上の化合物を意味する。
用語「化学的部分」は、少なくとも１つの炭素原子を含む任意の化学化合物を意味する。化学的部分の例としては、これらに限定されるわけではないが、疎水性アミノ酸および疎水性化学的部分が富化された任意のペプチド鎖が挙げられる。
好ましい実施形態において、本発明によるコンジュゲートは、当該ポリペプチドまたは当該ポリペプチドの機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、またはそれ以上の化学的部分を含む。
一実施形態において、当該ポリペプチドの細胞内取り込みを促進する当該化学的部分は、脂質または脂肪酸である。
脂肪酸は、一般的に、鎖の末端に酸性部分（例えば、カルボン酸）を有する炭素鎖を含む分子である。脂肪酸の炭素鎖は、任意の長さであってよいが、ただし、当該炭素鎖の長さは、少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれ以上の炭素原子、ならびにこれらの中で導き出せる任意の範囲であることは好ましい。ある特定の実施形態において、当該炭素鎖の長さは、脂肪酸の鎖部分における４個から１８個の炭素原子である。ある特定の実施形態において、当該脂肪酸の炭素鎖は、奇数の炭素原子を含み得るが、ただし、ある特定の実施形態においては、当該鎖における偶数の炭素原子が好ましい場合もある。炭素鎖中に単結合のみを含む脂肪酸は、飽和していると呼ばれ、その一方で、炭素鎖中に少なくとも１つの二重結合を含む脂肪酸は、不飽和であると呼ばれる。当該脂肪酸は分岐していてもよいが、本発明の好ましい実施形態において、それは不飽和である。具体的な脂肪酸としては、これらに限定されるわけではないが、リノール酸、オレイン酸、パルミチン酸、リノレン酸、ステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸が挙げられる。
好ましい実施形態において、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分は、細胞膜透過性ペプチド配列であり、その場合、当該コンジュゲートは、配列番号１を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と細胞膜透過性ペプチド配列とを含む融合タンパク質を含むであろう。
用語「融合タンパク質」は、異なるタンパク質に由来する２つ以上の機能的ドメインからなる、遺伝子技術によって生成されたタンパク質に関する。融合タンパク質は、従来の方法、例えば、好適な細胞において当該融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列の遺伝子発現によって、得られ得る。当該細胞膜透過性ペプチドが、配列番号１を含むポリペプチドの一部または配列番号１の機能的に同等な改変体の一部を形成する細胞膜透過性ペプチドとは異なる細胞膜透過性ペプチドを意味することは理解されるであろう。
用語「細胞膜透過性ペプチド配列」は、本明細書において、「ＣＰＰ」、「タンパク質形質導入ドメイン」、または「ＰＴＤ」と相互互換的に使用される。それは、細胞内のタンパク質の輸送を方向付けする様々な長さのペプチド鎖を意味する。細胞内への送達プロセスは、一般的に、エンドサイトーシスによって引き起こされるが、当該ペプチドは、直接的な膜移行によって細胞内へ内在化させることもできる。ＣＰＰは、典型的には、正に帯電したアミノ酸、例えば、リジンまたはアルギニンなど、の高い相対的存在量を含有するか、または極性アミノ酸／帯電したアミノ酸と非極性の疎水性アミノ酸との交互のパターンを含有する配列を有するような、アミノ酸組成物を有する。
本発明において使用することができるＣＰＰの例としては、これらに限定されるわけではないが、ショウジョウバエアンテナペディアタンパク質（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ、配列番号１３）に見出されるＣＣＰ、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）ＶＰ２２ ＤＮＡ結合タンパク質（ＤＡＡＴＡＴＲＧＲＳＡＡＳＲＰＴＥＲＰＲＡＰＡＲＳＡＳＲＰＲＲＰＶＥ、配列番号１４）に見出されるＣＣＰ、Ｂａｃ－７（ＲＲＩＲＰＲＰＰＲＬＰＲＰＲＰＲＰＬＰＦＰＲＰＧ；配列番号１５）のＣＰＰ、アミノ酸４９～５７（ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ、配列番号１６）、アミノ酸４８～６０（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＴＰＱ、配列番号１７）、アミノ酸４７～５７（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１８）からなるＨＩＶ－１ ＴＡＴタンパク質のＣＰＰ；Ｓ４１３－ＰＶペプチド（ＡＬＷＫＴＬＬＫＫＶＬＫＡＰＫＫＫＲＫＶ；配列番号１９）のＣＰＰ、ペネトラチン（ＲＱＩＫＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；配列番号２０）のＣＰＰ、ＳｙｎＢ１（ＲＧＧＲＬＳＹＳＲＲＲＦＳＴＳＴＧＲ；配列番号２１）のＣＰＰ、ＳｙｎＢ３（ＲＲＬＳＹＳＲＲＲＦ；配列番号２２）のＣＰＰ、ＰＴＤ－４（ＰＩＲＲＲＫＫＬＲＲＬＫ；配列番号２３）のＣＰＰ、ＰＴＤ－５（ＲＲＱＲＲＴＳＫＬＭＫＲ；配列番号２４）のＣＰＰ、ＦＨＶ Ｃｏａｔ－（３５～４９）（ＲＲＲＲＮＲＴＲＲＮＲＲＲＶＲ；配列番号２５）のＣＰＰ、ＢＭＶ Ｇａｇ－（７～２５）（ＫＭＴＲＡＱＲＲＡＡＡＲＲＮＲＷＴＡＲ；配列番号２６）のＣＰＰ、ＨＴＬＶ－ＩＩ Ｒｅｘ－（４～１６）（ＴＲＲＱＲＴＲＲＡＲＲＮＲ；配列番号２７）のＣＰＰ、Ｄ－Ｔａｔ（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ；配列番号２８）のＣＰＰ、Ｒ９－Ｔａｔ（ＧＲＲＲＲＲＲＲＲＲＰＰＱ；配列番号２９）のＣＰＰ、ＭＡＰ（ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＬＡＬＡＬＫＬＡ；配列番号３０）のＣＰＰ、ＳＢＰ（ＭＧＬＧＬＨＬＬＶＬＡＡＡＬＱＧＡＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ；配列番号３１）のＣＰＰ、ＦＢＰ（ＧＡＬＦＬＧＷＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ；配列番号３２）のＣＰＰ、ＭＰＧ（ａｃ－ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ－ｃｙａ；配列番号３３）のＣＰＰ、ＭＰＧ（ＥＮＬＳ）（ａｃ－ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＫＳＫＲＫＶ－ｃｙａ；配列番号３４）のＣＰＰ、Ｐｅｐ－１（ａｃ－ＫＥＴＷＷＥＴＷＷＴＥＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ－ｃｙａ；配列番号３５）のＣＰＰ、Ｐｅｐ－２（ａｃ－ＫＥＴＷＦＥＴＷＦＴＥＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ－ｃｙａ；配列番号３６）のＣＰＰ、構造ＲＮ（ここで、Ｎは、４から１７の間である）を有するポリアルギニン配列、ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ配列（配列番号３７）、ＲＲＲＲＲＲＬＲ配列（配列番号３８）、ＲＲＱＲＲＴＳＫＬＭＫＲ配列（配列番号－３９）；トランスポータンＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＧＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＫＩＬ（配列番号４０）；ＫＡＬＡＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＣＥＡ（配列番号４１）；ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号４２）、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ配列（配列番号４３）；ＲＫＫＲＲＱＲＲ配列（配列番号４４）；ＹＡＲＡＡＡＲＱＡＲＡ配列（配列番号４５）；ＴＨＲＬＰＲＲＲＲＲＲ配列（配列番号４６）；ＧＧＲＲＡＲＲＲＲＲＲ配列（配列番号４７）が挙げられる。
好ましい実施形態において、上記細胞膜透過性ペプチドは、配列番号１に含まれる内因性ペプチドではない。
好ましい実施形態において、当該ＣＰＰは、アミノ酸４９～５７（ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ、配列番号１６）からなるＨＩＶ－１ ＴＡＴタンパク質のＣＰＰである。別の好ましい実施形態において、当該ＣＰＰは、ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ配列（配列番号３７）またはＲＲＲＲＲＲＬＲ（配列番号３８）である。別の実施形態において、当該ＣＰＰは、ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ配列（配列番号３７）またはＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号６５）である。
いくつかの実施形態において、ＣＰＰは、ＷＯ２０１９／０１８８９８に記載されるＣＰＰであり、なお、当該文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
一実施形態において、当該細胞膜透過性ペプチド配列は、本発明のポリペプチドまたは当該ポリペプチド機能的に同等な改変体のＮ末端において融合される。別の実施形態において、当該細胞膜透過性ペプチドは、本発明のポリペプチドまたは当該ポリペプチド機能的に同等な改変体のＣ末端において融合される。
好ましい実施形態において、本発明による組み合わせ物のコンジュゲートまたは融合タンパク質は、配列番号１のポリペプチドまたは当該ポリペプチド機能的に同等な改変体において見出される自身の細胞膜透過性ペプチドに加えて、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、またはそれ以上の追加の細胞膜透過性ペプチドを含む。
本発明の好適な融合タンパク質は、下記において定義されるポリペプチドＯｍｏｍｙｃ＊ＴＡＴおよびＯｍｏｍｙｃ＊ＬＺＡｒｇを含む。
Figure 2022528020000003
したがって、好ましい実施形態において、当該融合タンパク質は、配列番号１１および１２から選択されるポリペプチドである。
コンジュゲートがＯｍｏｍｙｃの細胞膜移行能力を保存するか否かを特定するための好適なアッセイとしては、これらに限定されるわけではないが、培養において細胞を形質導入する当該コンジュゲートの能力を測定するアッセイが挙げられる。このアッセイは、当該コンジュゲートを培養細胞に接触させて、細胞内位置における当該コンジュゲートの存在を検出することに基づいている。
別の好ましい実施形態において、本発明の組み合わせ物のコンジュゲートは、さらに、さらなる核局在化シグナルを含む。
用語「核局在化シグナル」（ＮＬＳ）は、本明細書において使用される場合、タンパク質を核へと方向付けするのに役立つ約４～２０のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を意味する。典型的には、核局在化配列は、塩基性アミノ酸が豊富であり、ならびに例示的配列は、当技術分野において周知である（Ｇｏｒｌｉｃｈ Ｄ．（１９９８）ＥＭＢＯ ５．１７：２７２１－７）。いくつかの実施形態において、当該ＮＬＳは、ＳＶ４０ラージＴ抗原ＮＬＳ（ＰＫＫＫＲＫＶ、配列番号４８）；ヌクレオプラスミンＮＬＳ（ＫＲＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡＫＫＫＫ、配列番号４９）；ＣＢＰ８０ ＮＬＳ（ＲＲＲＨＳＤＥＮＤＧＧＱＰＨＫＲＲＫ、配列番号５０）；ＨＩＶ－Ｉ Ｒｅｖタンパク質ＮＬＳ（ＲＱＡＲＲＮＲＲＲＷＥ、配列番号５１）；ＨＴＬＶ－Ｉ Ｒｅｘ（ＭＰＫＴＲＲＲＰＲＲＳＱＲＫＲＰＰＴ、配列番号５２）；ｈｎＲＮＰ Ａ ＮＬＳ（ＮＱＳＳＮＦＧＰＭＫＧＧＮＦＧＧＲＳＳＧＰＹＧＧＧＧＱＹＦＫＰＲＮＱＧＧＹ、配列番号５３）；ｒｐＬ２３ａ ＮＬＳ（ＶＨＳＨＫＫＫＫＩＲＴＳＰＴＦＴＴＰＫＴＬＲＬＲＲＱＰＫＹＰＲＫＳＡＰＲＲＮＫＬＤＨＹ、配列番号５４）からなる群から選択される。本発明の一実施形態において、当該核局在化シグナルは、モチーフＫ（Ｋ／Ｒ）Ｘ（Ｋ／Ｒ）（配列番号５５）を含む。
さらにより好ましい実施形態において、当該核局在化シグナルは、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４８）、ＰＡＡＫＲＶＫＬＤ（配列番号５６）、およびＫＲＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡＫＫＫＫ（配列番号４９）からなる群から選択される。
別の好ましい実施形態において、ＮＬＳは、配列番号１のポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体を含むコンジュケートまたは融合タンパク質に対するＮ端またはＣ末端であり得る。
当業者は、本発明のコンジュゲートがさらに、配列番号１を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と、当該細胞膜透過性ペプチド配列および／またはＮＬＳとを接続する１つまたは複数の柔軟なペプチドを含むことは望ましくあり得ることを理解するであろう。したがって、特定の実施形態において、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体は、当該細胞膜透過性ペプチド配列に直接接続される。別の特定の実施形態において、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体は、柔軟なペプチドによって当該細胞膜透過性ペプチド配列に接続される。ある実施形態において、配列番号１を含むポリペプチドまたは機能的なその改変体は、当該ＮＬＳに直接接続される。別の実施形態において、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体は、柔軟なペプチドによって当該ＮＬＳに接続される。
特定の実施形態において、本発明によるコンジュゲートのポリペプチドは、細胞膜透過性ペプチド配列およびＮＬＳに直接接続される。
一実施形態において、当該ＮＬＳは、Ｍｙｃ配列に内因的に現れるＮＬＳのうちの１つ例えば、Ｍ１ペプチド（ＰＡＡＫＲＶＫＬＤ、配列番号５６）またはＭ２ペプチド（ＲＱＲＲＮＥＬＫＲＳＦ、配列番号５７）など、である。
別の実施形態において、追加のＮＬＳは、配列番号１を含むポリペプチドまたは配列番号１の機能的に同等な改変体において見出される内因性ＮＬＳとは異なるＮＬＳを意味する。
好ましい実施形態において、本発明によるコンジュゲートまたは融合タンパク質は、本発明のポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体において見出される内因性ＮＬＳに加えて、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０のＮＬＳを含む。
別の特定の実施形態において、本発明による使用のためのコンジュゲートのポリペプチドは、第１柔軟なペプチドリンカーによって細胞膜透過性ペプチド配列に、ならびに第２柔軟なペプチドリンカーによってＮＬＳに接続される。
本明細書において使用される場合、用語「柔軟なペプチド」、「スペーサーペプチド」、または「リンカーペプチド」は、２つのタンパク質または部分に共有結合させるが、どちらのポリペプチドの一部ではなく、当該タンパク質または当該部分のどちらの機能に対しても実質的な有害効果を生じることなく、他方に対して一方の動きを許容する、ペプチドを意味する。したがって、当該柔軟なリンカーは、ポリペプチド配列の腫瘍追跡活性、細胞膜透過性ペプチドの細胞膜透過活性、またはＮＬＳの核局在化能力に影響を及ぼさない。
当該柔軟なペプチドは、少なくとも１のアミノ酸、少なくとも２のアミノ酸、少なくとも３のアミノ酸、少なくとも４のアミノ酸、少なくとも５のアミノ酸、少なくとも６のアミノ酸、少なくとも７のアミノ酸、少なくとも８のアミノ酸、少なくとも９のアミノ酸、少なくとも１０のアミノ酸、少なくとも１２のアミノ酸、少なくとも１４のアミノ酸、少なくとも１６のアミノ酸、少なくとも１８のアミノ酸、少なくとも２０のアミノ酸、少なくとも２５のアミノ酸、少なくとも３０のアミノ酸、少なくとも３５のアミノ酸、少なくとも４０のアミノ酸、少なくとも４５のアミノ酸、少なくとも５０のアミノ酸、少なくとも６０のアミノ酸、少なくとも７０のアミノ酸、少なくとも８０のアミノ酸、少なくとも９０のアミノ酸、または約１００のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、当該柔軟なペプチドは、タンパク質の溶解性を増加させるため、および／またはその活性を向上させるために、他方のタンパク質に対して一方のたんぱく質の動きを可能にするであろう。好適なリンカー領域としては、ポリグリシン領域、グリシン残基とプロリン残基とアラニン残基との組み合わせのＧＰＲＲＲＲ配列（配列番号５８）が挙げられる。
特定の実施形態において、本発明によるコンジュゲートは、当該コンジュゲートに結合したタグ、あるいは当該ポリペプチドまたは融合タンパク質またはその改変体のＣ末端ドメインまたはＮ末端ドメインに結合したタグを含む。概して、当該タグは、当該融合タンパク質の単離または精製において使用することができるペプチドまたはアミノ酸配列である。したがって、当該タグは、１つまたは複数のリガンド、例えば、高親和性のクロマトグラフィ支持体またはビーズなどのアフィニティーマトリックスの１つまたは複数のリガンドに結合することができる。当該タグの例は、高親和性を有するニッケル（Ｎｉ２＋）またはコバルト（Ｃｏ２＋）のカラムに結合することができる、ヒスチジンタグ（ＨｉｓタグまたはＨＴ）、例えば、ヒスチジンの６つの残基を含むタグ（Ｈｉｓ６またはＨ６）など、である。Ｈｉｓタグは、ほとんどのタンパク質へと変性し、ほとんどのタンパク質－タンパク質相互作用を崩壊させるような条件下においてそのリガンドに結合することができるという、望ましい特徴を有する。したがって、それは、おとりタンパク質が参加しているタンパク質－タンパク質相互作用の崩壊の後に、Ｈ６でタグ付けされた当該おとりタンパク質を除去するために使用することができる。
コンジュゲートまたは配列番号１を含むポリペプチドまたはその改変体または融合タンパク質を単離または精製するために有用なタグの追加の例示的非限定的な例としては、Ａｒｇタグ、ＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ；配列番号５９）、Ｓｔｒｅｐタグ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ、配列番号６０）、抗体が認識することができるエピトープ、例えば、ｃ－ｍｙｃタグ（抗ｃ－ｍｙｃ抗体によって認識される）、ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ、配列番号６１）、Ｖ５タグ（ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴ、配列番号６２）、ＳＢＰタグ、Ｓタグ、カルモジュリン結合ペプチド、セルロース結合ドメイン、キチン結合ドメイン、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼタグ、マルトース結合タンパク質、ＮｕｓＡ、ＴｒｘＡ、ＤｓｂＡ、Ａｖｉ－タグなど（Ｔｅｒｐｅ Ｋ．， Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００３， ６０：５２３－５２５）、ＡＨＧＨＲＰ（配列番号６３）またはＰＩＨＤＨＤＨＰＨＬＶＩＨＳＧＭＴＣＸＸＣ（配列番号６４）などのアミノ酸配列、βガラクトシダーゼなどが挙げられる。
当該タグは、所望の場合、上記融合タンパク質の単離または精製のために使用することができる。
別の好ましい実施形態において、本発明の化合物（ｉ）は、上記において開示されたポリペプチドまたは融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドである。好ましい実施形態において、本発明の化合物（ｉ）は、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体をコードするポリヌクレオチドである。別の実施形態において、本発明の化合物（ｉ）は、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と、当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲートをコードするポリヌクレオチドであり、より好ましくは、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と、細胞膜透過性ペプチド配列との間の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドである。
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸分子」は、任意の長さのヌクレオチドの重合形態を意味するために、相互互換的に使用される。ポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそれらの類似物を含有し得る。ヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し得、ならびに既知または未知の任意の機能を実行し得る。用語「ポリヌクレオチド」は、例えば、１本鎖分子、二本鎖分子、および三重ヘリックス状分子、遺伝子または遺伝子断片、エキソン、イントロン、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐鎖状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、単離された任意の配列のＤＮＡ、単離された任意の配列のＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマーを包含する。本発明の核酸分子は、天然核酸分子に加えて、改変された核酸分子も含み得る。本明細書において使用される場合、ｍＲＮＡは、細胞において翻訳され得るＲＮＡを意味する。
好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。
ｍＲＮＡは、化学的に合成することができ、インビトロ転写によって得ることもでき、または標的細胞においてインビボで合成することもできる。本発明のコンジュゲートまたは融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを形成するヌクレオチド配列は、それらの発現にとっての正しい同じリーディングフレームに存する。
好ましい実施形態において、本発明の組み合わせ物の成分（ｉ）は、配列番号１の配列からなるポリペプチドまたは配列番号１の機能的に同等な改変体からなるポリペプチドまたは配列番号４からなるポリペプチド、をコードするｍＲＮＡである。
別の実施形態において、本発明の組み合わせ物の成分（ｉ）は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターである。
用語「ベクター」は、本明細書において使用される場合、細胞において配列を転写および翻訳した後に、本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが生成されるように必要な配列を含む核酸配列を意味する。当該配列は、目的の宿主細胞において自己複製を提供する追加のセグメントに作動可能に連結される。好ましくは、当該ベクターは、宿主細胞における自己複製の領域に加えて、本発明の核酸に作動可能に連結された領域を含むベクターとして定義され、ならびに本発明による核酸の産物の発現を増強することができる、発現ベクターである。本発明のベクターは、当技術分野において広く知られる技術によって得ることができる。
ベクターの例としては、これらに限定されるわけではないが、ウイルスベクター、裸の（ｎａｋｅｄ）ＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、ならびにある特定の真核細胞、例えば、
プロデューサー細胞など、が挙げられる。本発明のポリヌクレオチドを含む好適なベクターは、原核生物における発現ベクター、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔおよびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲｌ、ＲＰ４、ファージおよび「シャトル」ベクター、例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８など、酵母における発現ベクター、例えば、２ミクロンプラスミドタイプのベクター、インテグレーションプラスミド（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ）、ＹＥＰベクター、動原体性プラスミドおよび同様のものなど、昆虫細胞における発現ベクター、例えば、ｐＡＣシリーズおよびｐＶＬシリーズのベクターなど、植物における発現ベクター、例えば、シリーズｐＩＢＩ、ｐＥａｒｌｅｙＧａｔｅ、ｐＡＶＡ、ｐＣＡＭＢＩＡ、ｐＧＳＡ、ｐＧＷＢ、ｐＭＤＣ、ｐＭＹ、ｐＯＲＥのベクターおよび同様のものなど、ならびにウイルスベクターに基づく優れた真核細胞における発現ベクター（アデノウイルス、アデノウイルスに関連付けられたウイルス、ならびにレトロウイルス、特に、レンチウイルス）、ならびに非ウイルス性ベクター、例えば、ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ４．１－ＣＭＶ（アンビオン）、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇ、ｐＨＣＭＶ／Ｚｅｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＥＦｌ／Ｈｉｓ、ｐＩＮＤ／ＧＳ、ｐＲｃ／ＨＣＭＶ２、ｐＳＶ４０／Ｚｅｏ２、ｐＴＲＡＣＥＲ－ＨＣＭＶ、ｐＵＢ６／Ｖ５－Ｈｉｓ、ｐＶＡＸｌ、ｐＺｅｏＳＶ２、ｐＣＩ、ｐＳＶＬ、ｐＫＳＶ－１０、ｐＢＰＶ－１、ｐＭＬ２ｄ、およびｐＴＤＴ１など、に由来するベクターである。好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ｐＥＧＦＰもしくはｐＢａｂｅレトロウイルスベクターおよびｐＴＲＩＰＺもしくはｐＳＬＩＫレンチウイルスベクターからなる群から選択されるベクターに含まれる。
本発明のベクターは、当該ベクターによって形質転換、トランスフェクト、または感染させることができる細胞を形質転換、トランスフェクト、または感染させるために使用され得る。当該細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。
好ましくは、当該ベクターは、本発明のポリヌクレオチドの発現を調節する配列に操作的に結合した本発明のポリヌクレオチドを含む。本発明における使用の調節配列は、核プロモーターであり得るか、あるいは、エンハンサー配列および／または異種核酸配列の発現を増加させる他の制御配列であり得る。原則として、本発明において任意のプロモーターを使用することができるが、ただし、当該プロモーターが、ポリヌクレオチドが発現されるべき細胞と適合性である場合に限る。したがって、本発明を実現するために好適なプロモーターとしては、必ずしもこれらに限定されるわけではないが、構成プロモーター、例えば、真核生物ウイルスゲノムの誘導体など、例えば、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ＳＶ４０、ＣＭＶ、トリ肉腫ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスなど、メタロチオネイン遺伝子プロモーター、ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子プロモーター、レトロウイルスのＬＴＲ領域、免疫グロブリン遺伝子プロモーター、アクチン遺伝子プロモーター、ＥＦ－１α遺伝子プロモーター、ならびにタンパク質の発現が、分子または外因性シグナルの追加に依存する誘導性プロモーター、例えば、テトラサイクリン系、ＮＦκＢ／ＵＶ光系、Ｃｒｅ／Ｌｏｘ系、およびヒートショック遺伝子プロモーターなど、ＷＯ２００６／１３５４３６に記載される調節可能なＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、および組織特異的プロモーターが挙げられる。
別の実施形態において、本発明の組み合わせ物の成分（ｉ）は、本発明のポリペプチドまたは本発明のコンジュゲート、好ましくは本発明のポリペプチド、または本発明の融合タンパク質を培地中に分泌することができる細胞である。
本発明のポリペプチドを分泌することができる好適な細胞としては、これらに限定されるわけではないが、心筋細胞、脂肪細胞、内皮細胞、上皮細胞、リンパ球（Ｂ細胞およびＴ細胞）、マスト細胞、好酸球、血管内膜細胞、異なる臓器の単離細胞、好ましくはランゲルハンス島から単離された細胞、の初代培養、肝細胞、白血球、例えば、単核白血球など、間葉、臍帯、または成人（皮膚、肺、腎臓、および肝臓の）、破骨細胞、軟骨細胞、および他の結合組織細胞、が挙げられる。確立された細胞株の細胞、例えば、ＪｕｒｋａｔＴ細胞、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＣＨＯ、Ｃｏｓ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３細胞、Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞、およびＷ１３８細胞も好適である。当業者は、本発明のポリペプチドを培地中へと分泌することができる細胞は、当該細胞が患者におけるより有用な人生を過ごすように、微小粒子またはマイクロカプセルを形成することが見出され得ることを理解するであろう。本発明の微小粒子オブジェクトの形成にとって好適な材料としては、治療薬の連続分泌を可能にし、かつ当該細胞の支持体として機能する、任意の生態的合成高分子材料が挙げられる。したがって、当該生体適合性高分子材料は、例えば、熱可塑性ポリマーまたはヒドロゲルポリマーであり得る。熱可塑性ポリマーのうち、本発明者らは、アクリル酸、アクリルアミド、２－アミノエチルメタクリレート、ポリ（テトラフルオロエチレン－コヘキサフルオロプロピレン）、メタクリル酸－（７－クマロキシ）エチルエステル酸、Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリアミドアミン、ポリ（アミノ）－ｐ－キシリレン、ポリ（クロロエチルビニルエーテル）、ポリカプロラクトン、ポリ（カプロラクトン－コ－トリメチレンカーボネート）、ポリ（カーボネート尿素）ウレタン、ポリ（カーボネート）ウレタン、ポリエチレン、ポリエチレンおよびアクリルアミドコポリマー、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールメタクリレート、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（４－ヒドロキシブチルアクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（Ｎ－２－ヒドロキシプロピルメタクリレート）、ポリ（乳酸グリコール酸）、ポリ（Ｌ－乳酸）、ポリ（γ－メチル、Ｌ－グルタミン酸）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポポリ（プロピレンフマレート）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリピロール、ポリスチレン、ポリ（テトラフルオロエチレン）、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、超高分子量のポリエチレン、６－（ｐ－ビニルベンズアミド）－ヘキサン酸Ｎ－ｐ－ビニルベンジル－Ｄ－マロンアミド、および２つ以上の当該ポリマーを含むコポリマーを有する。ヒドロゲルタイプのポリマーのうち、本発明者らは、アルギン酸塩、アガロース、コラーゲン、デンプン、ヒアルロン酸、ウシ血清アルブミン、セルロースおよびその誘導体、ペクチン、コンドロイチン硫酸、フィブリンおよびフィブロインの天然材料、ならびに合成ヒドロゲル、例えば、セファロース（登録商標）およびセファデックス（登録商標）など、を有する。
本発明の組み合わせ物の化合物（ｉｉ）は、癌免疫剤である。
本明細書において使用される場合、用語「癌免疫剤」は、対象における免疫反応を高め、刺激し、および／または上方調節するのに有効な薬剤を意味する。いくつかの実施形態において、本発明の組み合わせ物の化合物（ｉ）を伴う癌免疫剤の投与は、癌の治療において相乗効果を有する。
癌免疫剤は、例えば、小分子薬、抗体、または生体分子もしくは小分子であり得る。生物学的癌免疫剤の例としては、これらに限定されるわけではないが、癌ワクチン、抗体、およびサイトカインが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、サイトカインである。
「サイトカイン」は、免疫反応を調節する目的のために免疫系の細胞を合成する、異なるサイズおよび分子量のペプチドとして理解され、ならびにそれらは、ホルモン、増殖因子、懐死因子、ケモカインなどであり得る。それらは、自然起源のものであり得、または組換え細胞培養および天然配列サイトカインの生物学的に活性な同等物に由来し得る。例示的サイトカインは、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン、例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ、および他の免疫抑制サイトカイン；または免疫反応を刺激するためにＴ細胞活性化を刺激するサイトカインであり得る。抗体とのそれらのコンジュゲーションは、免疫サイトカインをもたらす。いくつかの実施形態において、サイトカインは、組換えヒトインターロイキン１５（ｒｈＩＬ－１５）、組換えヒトインターロイキン１２（ｒｈＩＬ－１２）例えば、ＩＬ－ＮＭ１２（Ｎｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｉｎｃ．）またはヘテロ二量体ＩＬ－１５（ｈｅｔＩＬ－１５、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ａｄｍｕｎｅ）など、可溶性ＩＬ－１５結合タンパク質ＩＬ－１５受容体α鎖（ＩＬ１５：ｓＩＬ－１５ＲＡ）に複合体化された内因性ＩＬ－１５の合成形態で構成される融合複合体である。
別の実施形態において、当該サイトカインは、ＩＬ２、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ２１、ＩＬ１、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＸＣＬ８、ＩＬ９、ＩＩ、１０、ＩＬＩＩ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、１１，３１、１Ｌ３２、ＩＬ３３、１１，３５、ＩＬ３６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１α／ＩＬ－ｌＦｌ、ＩＬ－１β／ＩＬ－ｌＦ２、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１２／ＩＬ－３５ｐ３５、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７／１Ｌ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ａ／Ｆヘテロ二量体、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－１８／ＩＬ－１Ｆ４、１Ｌ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－３２、ＴＬ－３２β、ＩＬ－３２γ、ｉＬ－３３、ＬＡＰ（ＴＧＦ－β１）、リンホトキシン－α／ＴＮＦ－β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、ＴＲＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦｌ ｌ／ＲＡＮＫ Ｌ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
好ましい実施形態において、当該癌免疫剤は、サイトカインではない。したがって、好ましい実施形態において、サイトカインは、本発明の範囲から除外される。好ましくは、本発明の範囲から除外されるサイトカインは、ＴＮＦ因子α、ＩＮＦ－γ、ＧＭ－ＧＳＦ因子、およびＩＬ－２である。
別の好ましい実施形態において、サイトカインは、組み合わせ物の成分（ｉ）が（ｉ） （ａ）または（ｉ）（ｂ）である場合にのみ、本発明の範囲から除外される。したがって、ある実施形態において、組み合わせ物の成分（ｉ）が、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体あるいは配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲートである場合、当該癌免疫剤は、サイトカインではなく、好ましくは、ＴＮＦ因子α、ＩＮＦ－γ、ＧＭ－ＧＳＦ因子、およびＩＬ－２からなる群から選択されるサイトカインではない。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）受容体のアゴニスト、または（ｉｉ）Ｔ細胞上の阻害性（共阻害性を含む）シグナルのアンタゴニストであり、両方とも、結果として、抗原特異的Ｔ細胞反応を増幅する。
ある特定の刺激性および阻害性分子は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである。共刺激性または共阻害性受容体に結合する膜結合リガンドの重要なファミリーの１つは、Ｂ７ファミリーであり、これは、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）、およびＢ７－Ｈ６を含む。
共刺激性または共阻害性受容体に結合する膜結合リガンドの別のファミリーは、同族ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーに結合する分子のＴＮＦファミリーであり、それらは、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ＮＧＦＲを含む。
いくつかの実施形態において、本発明の化合物（ｉ）と癌免疫剤との組み合わせ物は、Ｔ細胞反応を刺激することができる。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニスト（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、およびＴＩＭ－４など；または（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト、例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３、およびＣＤ２８Ｈなど、である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストである。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＫＩＲのアンタゴニスト、例えば、リリルマブなど、である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、マクロファージまたは単球を阻害するかまたは枯渇させる薬剤であり、そのようなものとしては、これらに限定されるわけではないが、ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、例えば、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ－００８（ＷＯ１１／１４０２４９；ＷＯ１３１６９２６４；ＷＯ１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト抗体など、が挙げられる。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ポジティブ共刺激受容体をリゲートする作動剤（ａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、阻害性受容体によるシグナル伝達を弱める遮断剤、アンタゴニスト、および抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる１種または複数種の薬剤、腫瘍の微小環境内の異なる免疫抑制経路に打ち勝つ（例えば、阻害性受容体連結（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用）を遮断する、Ｔｒｅｇを枯渇または阻害する（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えば、ダクリズマブ）を使用して、またはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって）、ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害する、あるいはＴ細胞エネルギーまたは消耗を逆にする／予防する）薬剤、ならびに腫瘍部位での生来の免疫活性化および／または炎症を引き起こす薬剤から選択される。
用語「細胞傷害性Ｔリンパ関連タンパク質４」（「ＣＴＬＡ－４」と略され、分化抗原群１５２（ＣＤ１５２）としても知られる）は、本明細書で使用される場合、免疫チェックポイントとして機能するタンパク質受容体を意味する。ＣＴＬＡ－４は、活性化されたＴ細胞によって発現され、かつＴ細胞へと阻害シグナルを伝達する、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞共刺激性タンパク質ＣＤ２８と同族であり、ならびに両方の分子は、抗原提示細胞上のそれぞれＢ７－１およびＢ７－２と呼ばれるＣＤ８０およびＣＤ８６に結合する。ＣＴＬＡ－４ は、ＣＤ２８より強い親和性および結合力によってＣＤ８０およびＣＤ８６を結合し、その結果、それらがそのリガンドのためにＣＤ２８を打ち負かすことを可能にする。ＣＴＬＡ－４は、阻害シグナルをＴ細胞へと伝達し、その一方で、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ－４は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）にも見出され、ならびにそれらの阻害機能に貢献する。Ｔ細胞受容体およびＣＤ２８によるＴ細胞活性化は、ＣＴＬＡ－４の発現の増加をもたらす。ＣＴＬＡ－４タンパク質は、ヒトにおいてＣＴＬＡ－４遺伝子によってコードされる（Ｅｎｓｅｍｂｌ ｒｅｆ：ＥＮＳＧ０００００１６３５９９）。通常、Ｔ細胞活性化の後、ＣＴＬＡ－ ４は、それが様々なメカニズム、例えば、そのリガンドＢ７のためにＣＤ２８を打ち負かすことよって、およびさらにＴ細胞サイクル停止を誘導することによって共刺激を防ぐことなど、によってＴ細胞機能を下方調節するように機能する細胞膜上において上方調節される（Ｐｏｓｔｏｗ ｅｔ ａｌ （２０１５） Ｊ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ３３， ｐａｇｅｓ １９７４－１９８３； Ｐａｒｄｏｌｌ， Ｄ． ｅｔ ａｌ （２０１２）， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２， ２５２－２６４）。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。用語「ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト」は、本明細書において使用される場合、制限なしに、ＣＴＬＡ－４とその配位子Ｂ７－１および／またはＢ７－２との結合を遮断する任意の化学化合物または薬剤または生物学的分子を意味する。本発明との関連において、対象（例えば、ヒト個体）が、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、ＣＴＬＡ－４抗体）で治療されている場合、当該ＣＴＬＡ－４アンタゴニストは、（ヒト）Ｂ７－１および／またはＢ７－２への（ヒト）ＣＴＬＡ－４の結合を遮断することは理解されよう。
癌の治療における臨床用途のために現在考えられるＣＴＬＡ－４アンタゴニスト化合物の非限定的な例としては、ＣＴＬＡ－４に対するアンタゴニスト抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストは、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト抗体は、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブである。
ＣＴＬＡ－４アンタゴニストの他の非限定的な例としては、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合することができ、Ｂ７－１および／またはＢ７－２へのその結合を遮断する化合物である、イムノアドヘシン（融合タンパク質としても知られる）が挙げられる。
用語「プログラム死－１（ＰＤ－１）」受容体は、本明細書において使用される場合、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫阻害性受容体を意味する。ヒトにおいて、ＰＤ－１は、ＰＤＣＤ１遺伝子によってコードされる。ＰＤ－１は、インビボにおいて、以前に活性化されたＴ細胞上において支配的に発現され、２つのリガンドＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２に結合する。用語「ＰＤ－１」は、本明細書において使用される場合、ヒトＰＤ－１（ｈＰＤ－１）、改変体、イソ体、およびｈＰＤ－１の同族の種ならびにｈＰＤ－１を有する少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似物を包含する。完全なｈＰＤ－１配列は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号Ｕ６４８６３において見出すことができる。ＰＤ－１は、免疫細胞、例えば、活性化Ｔ細胞（エフェクターＴ細胞を含む）、Ｂ細胞、骨髄系細胞、胸腺細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞など、において発現される（Ｓｕｙａ Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．， （２０１４） Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ：２９０， ｐａｇｅｓ ７２－７９； Ｇｉａｎｃｈｅｃｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， （２０１３）， Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ． Ｒｅｖ． １２ １０９１－１ １００）。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＰＤ－１アンタゴニストである。用語「ＰＤ－１アンタゴニスト」は、本明細書において使用される場合、制限なしに、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫＴ細胞）上に発現したＰＤ－１への、癌細胞上に発現したＰＤ－Ｌ１の結合を遮断し、および／またはＰＤ－１を発現した免疫細胞への、癌細胞上に発現したＰＤ－Ｌ２の結合を遮断する、任意の化学化合物または薬剤または生物学的分子（例えば、抗体）を意味する。本発明との関連において、対象（例えば、ヒト個体）が、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、ＰＤ－１抗体）で治療されている場合、当該ＰＤ－１アンタゴニストは、（ヒト）ＰＤ－１への（ヒト）ＰＤ－Ｌ１の結合を遮断するか、または（ヒト）ＰＤ－１への（ヒト）ＰＤ－Ｌ２の結合を遮断し、好ましくは、（ヒト）ＰＤ－１への（ヒト）ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２の両方の結合を遮断する。ヒトＰＤ－１アミノ酸配列は、ＮＣＢＩ Ｌｏｃｕｓ Ｎｏ．：ＮＰ＿００５００９に見出すことができる。ヒトＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２アミノ酸配列は、それぞれ、ＮＣＢＩ Ｌｏｃｕｓ Ｎｏ．：ＮＰ＿０５４８６２およびＮＰ＿０７９５１５に見出すことができる。
ＰＤ－１アンタゴニストの非限定的な例は、ＰＤ－１に対する抗体（ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体と呼ばれる）、例えば、ＰＤ－１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、またはその抗原結合性断片など、であり、それらは、ＰＤ－１に特異的に結合し、好ましくは、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する。ｍＡｂは、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり得、ならびにヒト定常領域を含み得る。ＰＤ－１アンタゴニスト化合物の非限定的な例としては、ＰＤ１抗体、例えば、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）、ＢＧＢ－Ａ３１７、および他のもの、例えば、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）など、が挙げられる。ＰＤ－１アンタゴニストの他の非限定的な例としては、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＭＰ－５１４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、およびセミプリマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ ａｎｄ Ｓａｎｏｆｉ）が挙げられる。さらなるＰＤ－１アンタゴニストとしては、ＵＳ８００８４４９、ＵＳ７５２１０５１、およびＵＳ８３５４５０９に記載される任意の抗ＰＤ－１抗体も挙げられる。
ＰＤ－１アンタゴニストの他の非限定的な例としては、ＰＤ－１特異的に結合することができ、ＰＤ－Ｌ１へのその結合を遮断する化合物である、イムノアドヘシン（融合タンパク質としても知られる）が挙げられる。ＰＤ－１に特異的に結合するイムノアドヘシン分子の例は、ＷＯ２０１０／０２７８２７、ＵＳ２０１６／０３０４９６９、およびＷＯ２０１１／０６６３４２に記載される。例えば、本発明においてＰＤ－１アンタゴニストとして使用され得る融合タンパク質の非限定的な例は、ＡＭＰ－２２４（ＰＤ－１リガンドプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインとヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１のＦｃ領域とで構成される組換えＢ７－ＤＣ Ｆｃ融合タンパク質である）である。
用語「抗体」（例えば、ＰＤ－１抗体およびＣＴＬＡ－４抗体）は、本明細書において使用される場合、所望の生物学的活性または結合活性を示す（例えば、上記において説明されるように、そのリガンドへのＰＤ－１の結合を遮断するか、またはそのリガンドへのＣＴＬＡ－４の結合を遮断する）抗体の任意の形態およびその断片を意味する。したがって、それは、最も広い意味で使用され、明確に、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）およびその断片、ポリクローナル抗体およびその断片、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）およびその断片、ヒト化された完全ヒト抗体およびその断片、キメラ抗体およびその断片、ならびにラクダ化シングルドメイン抗体およびその断片を網羅するが、これらに限定されるわけではない。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、プログラム死－１（ＰＤ－１）受容体に特異的に結合してＰＤ－１活性を阻害する抗体またはその抗原結合性部分である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ１アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＰＤ１アンタゴニスト抗体は、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）である。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１）であり得る。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインで構成される組換えタンパク質である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６； ＷＯ２０１０／０７７６３４）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４）、およびＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＬＡＧ－３アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３アンタゴニストは、ＬＡＧ－３アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３アンタゴニスト抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６（ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８）、またはＩＭＰ－７３１またはＩＭＰ－３２１（ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ００９／４４２７３）である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストは、ＣＤ１３７アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１３７抗体は、ウレルマブまたはＰＦ－０５０８２５６６（ＷＯ１２／３２４３３）である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＧＩＴＲアゴニストである。いくつかの実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲアゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＧＩＴＲ抗体は、ＢＭＳ－９８６１５３、ＢＭＳ－９８６１５６、ＴＲＸ－５１８（ＷＯ００６／１０５０２１、ＷＯ００９／００９１１６）、またはＭＫ－４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、インドールアミン（２，３）－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、（ＩＤＯ）アンタゴニストは、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０、Ｉｎｃｙｔｅ）；インドキシモド（ＮＬＧ－８１８９、ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；カプマチニブ（ｃａｐｍａｎｉｔｉｂ）（ＩＮＣ２８０、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＤＣ－０９１９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ＰＦ－０６８４０００３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＢＭＳ：Ｆ００１２８７（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；Ｐｈｙ９０６／ＫＤ１０８（Ｐｈｙｔｏｃｅｕｔｉｃａ）；キヌレニンを破壊する酵素（キヌレニナーゼ（ＫＹＮａｓｅ）、Ｋｙｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；およびＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ００９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）から選択される。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＯＸ４０アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０抗体は、ＭＥＤＩ－６３８３またはＭＥＤＩ－６４６９である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＯＸ４０Ｌアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌアンタゴニストは、ＯＸ４０Ｌアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌアンタゴニストは、ＲＧ－７８８８（ＷＯ０６／０２９８７９）である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＣＤ４０アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０アゴニストは、ＣＤ４０アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＣＤ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０アンタゴニストは、ＣＤ４０アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０抗体は、ルカツムマブまたはダセツズマブである。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＣＤ２７アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ２７アゴニストは、ＣＤ２７アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ２７抗体は、ヴァルリルマブである。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（ＷＯ１１／１０９４００）である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アナツモマブマフェナトキス、アポリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ブリナツモマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、カツマキソマブ、デュルバルマブ、エパカドスタット、エプラツズマブ、インドキシモド、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、イピリムマブ、イサツキシマブ、ランブロリズマブ、ＭＥＤ１４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、サマリズマブ、またはトレメリムマブである。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、免疫刺激薬である。例えば、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１阻害軸を遮断する抗体は、活性化された腫瘍反応性Ｔ細胞を解き放つことができ、ならびに慣習的に免疫療法感応性であると考えられてきたいくつかの腫瘍タイプを含む、腫瘍組織構造の数が増加する中において継続的な抗腫瘍反応を誘導することが臨床治験において示されている。抗ＰＤ－１抗体ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、ＯＮＯ－４５３８、ＭＤＸ１１０６、およびＢＭＳ－９３６５５８としても知られる）は、以前の抗血管新生療法の際または後に疾患進行を経験しているＲＣＣを有する患者の全生存を向上させる可能性を示している。
いくつかの実施形態において、免疫調節治療薬は、特に、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する。本発明において使用され得る承認された免疫調節治療薬としては、ポマリドミド（Ｐｏｍａｌｙｓｔ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ）；レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ）；インゲノールメブテート（Ｐｉｃａｔｏ（登録商標）、ＬＥＯＰｈａｒｍａ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、癌ワクチンである。いくつかの実施形態において、当該癌ワクチンは、シプロイセルＴ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）、Ｄｅｎｄｒｅｏｎ／Ｖａｌｅａｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびタリモジーン・ラハーパレプベック（Ｉｍｌｙｇｉｃ（登録商標）、ＢｉｏＶｅｘ／Ａｍｇｅｎ、以前にＴ－ＶＥＣとして知られる）から選択される。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、腫瘍溶解性ウイルス療法、例えば、ペキサスチモジンデバシレプベク（ＰｅｘａＶｅｃ／ＪＸ－５９４， ＳｉｌｌａＪｅｎ／以前はＪｅｎｎｅｒｅｘ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、エナデノツシレフ（ＮＧ－３４８、ＰｓｉＯｘｕｓ、以前はＣｏｌｏＡｄ１として知られる）、 ＯＮＣＯＳ－１０２（Ｔａｒｇｏｖａｘ／以前はＯｎｃｏｓ）など、β－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ））／β－グルコロニダーゼ（β－ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄａｓｅ）および／またはβ－－ｇａｌ／ヒトヨウ化ナトリウムシンポーター（ｈＮＩＳ）を発現するように操作されたワクシニアウイルス、例えば、ＧＬ－ＯＮＣ１（ＧＬＶ－１ｈ６８／ＧＬＶ－１ｈ１５３、Ｇｅｎｅｌｕｘ ＧｍｂＨ）およびＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ Ｇｅｎｅｓｙｓ）などのＧＭ－ＣＳＦを発現するように操作されたアデノウイルスなど、から選択される。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＪＸ－９２９（ＳｉｌｌａＪｅｎ／以前はＪｅｎｎｅｒｅｘ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＴＧ０１およびＴＧ０２（Ｔａｒｇｏｖａｘ／以前はＯｎｃｏｓ）、ＴＩＬＴ－１２３（ＴＩＬＴ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、およびＶＳＶ－ＧＰ（ＶｉｒａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）から選択される。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞である。そのようなキメラ抗原受容体を発現するように操作されたＴ細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞と呼ばれる。ＣＡＲは、細胞表面抗原に対して特異的なモノクローナル抗体に由来し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の機能的末端であるエンドドメイン、例えば、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成することができる、ＴＣＲからのＣＤ３－ζシグナル伝達ドメインなど、に融合した、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とからなるように構成されている。抗原結合に関して、そのようなＣＡＲは、エフェクター細胞において内因性シグナル伝達経路に結合し、ならびにＴＣＲ複合体によって開始されるのと同様の活性化シグナルを生成する。
例えば、いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原結合性ドメイン（例えば、ＣＤ１９に結合するドメインなど）を有する細胞外ドメインを含むように操作されたＣＡＲ－Ｔ細胞を開示するＵＳ８，９０６，６８２（Ｊｕｎｅ；参照によりその全体が本明細書に組み入れられる）に記載されるものの１つであって、Ｔ細胞抗原受容体複合体ζ鎖（例えば、ＣＤ３ζ）の細胞内シグナル伝達ドメインに融合するものである。Ｔ細胞において発現する場合、当該ＣＡＲは、抗原結合特異性に基づいて抗原認識を再度方向付けすることができる。ＣＤ１９の場合、当該抗原は、悪性Ｂ細胞において発現される。様々な指標において、ＣＡＲ－Ｔを用いた２００を超える臨床治験が、現在進行している［ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｒｅｓｕｌｔｓ？ｔｅｒｍ＝ｃｈｉｍｅｒｉｃ＋ａｎｔｉｇｅｎ＋ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ＆ｐｇ＝１］。
いくつかの実施形態において、免疫刺激薬は、レチノイン酸受容体関連オーファン受容体γ（ＲＯＲγｔ）のアクティベーターである。ＲＯＲγｔは、ＣＤ４＋（Ｔｈ１７）およびＣＤ８＋（ＴＣ１７）Ｔ細胞のタイプ１７エフェクターサブセットの分化および維持において、ならびにＮＫ細胞などの生来の免疫細胞サブ集団を発現するＩＬ－１７の分化において、重要な役割を有する転写因子である。いくつかの実施形態において、ＲＯＲγｔのアクティベーターは、固形腫瘍の治療に対して臨床治験（ＮＣＴ０２９２９８６２）において現在評価中であるＬＹＣ－５５７１６（Ｌｙｃｅｒａ）である。
いくつかの実施形態において、免疫刺激薬は、トール様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストまたはアクティベーターである。ＴＬＲの好適なアクティベーターとしては、ＴＬＲ９のアゴニストまたはアクティベーター、例えば、ＳＤ－１０１（Ｄｙｎａｖａｘ）など、が挙げられる。本発明において使用され得るＴＬＲ９のアゴニストまたはアクティベーターとしては、モトリモド（ＶＴＸ－２３３７、ＶｅｎｔｉＲｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
本発明において使用され得る他の癌免疫剤としては、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体；ヴァルリルマブ（ＣＤＸ－１１２７、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体；ＢＭＳ－９８６１７８（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体；リリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ－９８６０１５、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＫＩＲモノクローナル抗体；モナリズマブ（ｍｏｎａｌｉｚｕｍａｂ）（ＩＰＨ２２０１、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ， ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、抗ＮＫＧ２Ａモノクローナル抗体；アンデカリキシマブ（ＧＳ－５７４５、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ＭＭＰ９抗体；ＭＫ－４１６６（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．）、抗ＧＩＴＲモノクローナル抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態において、免疫刺激薬は、エロツズマブ、ミファムルチド、トール様受容体のアゴニストまたはアクティベーター、およびＲＯＲγｔのアクティベーターから選択される。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ． Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．， ”Ｂｉｇ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏ－ｏｎｃｏｌｏｇｙ，” Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１５， Ｖｏｌ． １４， ｐａｇｅｓ ６０３－６２２に記載されるものから選択され、なお、当該文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ． Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．の表１に記載される実施例から選択される。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ． Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．の表２に一覧されるものから選択される癌免疫剤を標的とする小分子である。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ． Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．の表２に一覧されるものから選択される小分子薬である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｐｅｔｅｒ Ｌ． Ｔｏｏｇｏｏｄ， ”Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｍｍｕｎｏ－ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ，” Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１８， Ｖｏｌ． ２８， ｐａｇｅｓ ３１９－３２９に記載される小分子癌免疫剤から選択され、なお、当該文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｐｅｔｅｒ Ｌ． Ｔｏｏｇｏｏｄに記載されるような経路を標的にする薬剤である。
いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｓａｎｄｒａ Ｌ． Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．， ”Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ （ＢｉＴＥ（登録商標）） ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ ｃａｎ ｍｅｄｉａｔｅ ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ”， ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（８）：ｅ０１８３３９０に記載されるものから選択され、なお、当該文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクトである。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクトは、ＣＤ１９／ＣＤ３二重特異性抗体コンストラクトである。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクトは、ＥＧＦＲ／ＣＤ３二重特異性抗体コンストラクトである。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクトは、Ｔ細胞を活性化する。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクトは、Ｔ細胞を活性化し、それらは、バイスタンダー細胞上での細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ－１）およびＦＡＳの上方調節を誘導するサイトカインを放出する。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクトは、結果としてバイスタンダー細胞の溶解を誘導するＴ細胞を活性化する。いくつかの実施形態において、バイスタンダー細胞は、固形腫瘍に存する。いくつかの実施形態において、溶解されるバイスタンダー細胞は、ＢｉＴＥ（登録商標）活性化Ｔ細胞の近くに存する。いくつかの実施形態において、バイスタンダー細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ネガティブ癌細胞を含む。いくつかの実施形態において、バイスタンダー細胞は、ＥＧＦＲネガティブ癌細胞を含む。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ１軸および／またはＣＴＬＡ４を遮断する抗体である。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、エクスビボ拡大腫瘍浸潤性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、癌免疫剤は、Ｔ細胞を腫瘍関連表面抗原（ＴＡＡ）と直接接続する、二重特異性抗体コンストラクトまたはキメラ抗原受容器（ＣＡＲ）である。
別の実施形態において、本発明の組み合わせ物の癌免疫剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニストまたは免疫チェックポイント阻害剤である。
用語「チェックポイント阻害剤」は、本明細書において使用される場合、癌細胞が患者の免疫系を避けるのを防ぐことにおいて有用な薬剤に関する。抗腫瘍免疫破壊の主要なメカニズムの１つは、阻害受容体の上方調節につながる抗原への慢性曝露の結果として生じる、「Ｔ細胞の疲弊」として知られている。これらの阻害受容体は、非制御の免疫反応を防ぐために、免疫チェックポイントとしての機能を果たす。
ＰＤ－１および共阻害受容体、例えば、細胞傷害性Ｔリンパ抗原４（ＣＴＬＡ－４）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン－３３（Ｔｉｍ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（Ｌａｇ－３；ＣＤ２２３）、および他のものなど、は、多くの場合、チェックポイントレギュレーターと呼ばれる。それらは、細胞外情報によって細胞周期の進行および他の細胞内シグナル伝達プロセスが継続するべきか否かを決定することを可能にする分子「ゲートキーパー」として機能する。
いくつかの実施形態において、免疫のチェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体である。ＰＤ－１は、プログラム細胞死１受容体（ＰＤ－１）に結合することにより、当該受容体が阻害リガンドＰＤＬ－１に結合するのを防ぎ、その結果、宿主抗腫瘍免疫反応を抑制する腫瘍の能力を無効にする。
一態様において、チェックポイント阻害剤は、生物学的治療薬または小分子である。別の態様において、チェックポイント阻害剤は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、融合タンパク質、またはそれらの組み合わせである。さらなる態様において、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２、ＰＤｌ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ－７ファミリーリガンド、またはそれらの組み合わせから選択されるチェックポイントタンパク質を阻害する。追加の態様において、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４，ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２，ＰＤｌ、Ｂ７－Ｈ３，Ｂ７－Ｈ４，ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３，ＧＡＬ９，ＬＡＧ３，ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４，ＣＤ１６０，ＣＧＥＮ－１５０４９，ＣＨＫ１，ＣＨＫ２，Ａ２ａＲ、Ｂ－７ファミリーリガンド、またはそれらの組み合わせから選択されるチェックポイントタンパク質のリガンドと相互作用する。ある態様において、チェックポイント阻害剤は、免疫刺激薬、Ｔ細胞増殖因子、インターロイキン、抗体、ワクチン、またはそれらの組み合わせである。さらなる態様において、インターロイキンは、ＩＬ－７またはＩＬ－１５である。特定の態様において、インターロイキンは、グリコシル化ＩＬ－７である。追加の態様において、ワクチンは、樹枝状細胞（ＤＣ）ワクチンである。
チェックポイント阻害剤は、免疫系の阻害経路を統計的に有意な方式において遮断または阻害する任意の薬剤を含む。そのような阻害剤は、小分子阻害剤を含み得るか、または免疫チェックポイント受容体に結合してそれを遮断または阻害する抗体またはその抗原結合性断片、または免疫チェックポイントリガンドに結合してそれを遮断または阻害する抗体を含み得る。遮断または阻害の標的にされ得る例示的チェックポイント分子としては、これらに限定されるわけではないが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（分子のＣＤ２ファミリーに属し、全てのＮＫ細胞、γδ細胞、および記憶ＣＤ８＋（αβ）細胞において発現される）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ならびに様々なＢ７ファミリーリガンドが挙げられる。Ｂ７ファミリーリガンドとしては、これらに限定されるわけではないが、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６およびＢ７－Ｈ７が挙げられる。チェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、およびＣＧＥＮ－１５０４９のうちの１つまたは複数に結合して、その活性を遮断または阻害する、抗体またはその抗原結合性断片、他の結合タンパク質、生物学的治療薬、または、小分子が挙げられる。例示的免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ－Ｌｌモノクローナル抗体（抗Ｂ７－Ｈｌ；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１遮断薬）、ニボルマブ（抗ＰＤｌ抗体）、ＣＴ－０１１（抗ＰＤｌ抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬｌ抗体）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤＬｌ抗体）、ＭＰＬＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤＬｌ抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬｌ抗体）、およびイピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤）が挙げられる。チェックポイントタンパク質リガンドとしては、これらに限定されるわけではないが、ＰＤ－Ｌｌ、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２８、ＣＤ８６、およびＴＩＭ－３が挙げられる。
ある特定の実施形態において、免疫のチェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、およびＣＴＬＡ－４アンタゴニストから選択される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、およびペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（抗ＰＤ－１抗体、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；ペンブロリズマブ（抗ＰＤ－１抗体、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）；イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４抗体、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体、Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）； およびアテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）から選択される。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ランブロリズマブ（ＭＫ－３４７５）、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＡＭＰ－２２４、ＭＤＸ－１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ－９３６５５９、イピリムマブ、イピリムマブ、ＩＰＨ２１０１、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、およびトレメリムマブからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫のチェックポイント阻害剤は、基底細胞腺癌（ＮＣＴ０３１３２６３６）の患者において試験された抗ＰＤ－１抗体であるＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）；ＮＳＣＬＣ（ＮＣＴ０３０８８５４０）；皮膚扁扁平上皮癌（ＮＣＴ０２７６０４９８）；リンパ腫（ＮＣＴ０２６５１６６２）；および黒色腫（ＮＣＴ０３００２３７６）；ＣＴ－０１１としても知られ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および多発性骨髄腫に対する臨床治験中の、ＰＤ－１に結合する抗体であるピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）；ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られ、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、中皮腫、固形腫瘍、腎癌、卵巣癌、膀胱癌、頭部および頸部癌、および胃癌に対する臨床治験中の、完全ヒトＩｇＧ１抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）；あるいは、非小細胞肺癌、黒色腫、三重陰性乳癌および進行型、または転移固形腫瘍に対する臨床治験中の、ＰＤ－１に結合する阻害抗体であるＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、である。トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６；Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）は、いくつかの適応症、例えば、中皮腫、結直腸癌、腎癌、乳癌、肺癌および非小細胞肺癌、膵管腺癌、膵癌、生殖細胞癌腫、頭頚部の扁平上皮癌、肝細胞癌、前立腺癌、子宮内膜癌、肝臓の転移癌、肝臓癌、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、卵巣癌、子宮頸癌、転移性甲状腺未分化癌、尿路上皮性癌腫、卵管癌、多発性骨髄腫、膀胱癌、軟部組織肉腫、および黒色腫など、に対して臨床治験において研究されているＣＴＬＡ－４に対する完全ヒトモノクローナル抗体である。ＡＧＥＮ－１８８４（Ａｇｅｎｕｓ）は、進行固形腫瘍（ＮＣＴ０２６９４８２２）に対するフェーズ１臨床治験において研究されている抗ＣＴＬＡ４抗体である。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、タンパク質３（ＴＩＭ－３）を含むＴ細胞免疫グロブリンムチンの阻害剤である。本発明において使用され得るＴＩＭ－３阻害剤としては、ＴＳＲ－０２２、ＬＹ３３２１３６７、およびＭＢＧ４５３が挙げられる。ＴＳＲ－０２２（Ｔｅｓａｒｏ）は、固形腫瘍（ＮＣＴ０２８１７６３３）において研究されている抗ＴＩＭ－３抗体である。ＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）は、固形腫瘍（ＮＣＴ０３０９９１０９）において研究されている抗ＴＩＭ－３抗体である。ＭＢＧ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、進行悪性腫瘍（ＮＣＴ０２６０８２６８）において研究されている抗ＴＩＭ－３抗体である。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ある特定のＴ細胞およびＮＫ細胞上の免疫受容体である、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体ＴＩＧＩＴ、の阻害剤である。本発明において使用され得るＴＩＧＩＴ阻害剤としては、ＢＭＳ－９８６２０７（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（ＮＣＴ０２９１３３１３）；ＯＭＰ－３１３Ｍ３２（Ｏｎｃｏｍｅｄ）；および抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（ＮＣＴ０３１１９４２８）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、リンパ球活性化遺伝子－３（Ｌａｇ－３）の阻害剤である。本発明において使用され得るＬＡＧ－３阻害剤としては、ＢＭＳ－９８６０１６およびＲＥＧＮ３７６７およびＩＭＰ３２１が挙げられる。抗ＬＡＧ－３抗体であるＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）は、グリア芽腫および神経膠肉腫（ＮＣＴ０２６５８９８１）において研究されている。ＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）も抗ＬＡＧ－３抗体であり、悪性腫瘍（ＮＣＴ０３００５７８２）において研究されている。ＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ Ｓ．Ａ．）は、黒色腫（ＮＣＴ０２６７６８６９）；腺癌（ＮＣＴ０２６１４８３３）；および転移性乳癌（ＮＣＴ００３４９９３４）において研究されているＬＡＧ－３－Ｉｇ融合タンパク質、である。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＯＸ４０アゴニストが挙げられる。臨床治験において研究されているＯＸ４０アゴニストとしては、転移性腎癌（ＮＣＴ０３０９２８５６）および進行癌腫および新生物（ＮＣＴ０２５５４８１２；ＮＣＴ０５０８２５６６）における抗ＯＸ４０アゴニスト抗体であるＰＦ－０４５１８６００／ＰＦ－８６００（Ｐｆｉｚｅｒ）；フェーズ１癌治験（ＮＣＴ０２５２８３５７）における抗ＯＸ４０アゴニスト抗体であるＧＳＫ３１７４９９８（Ｍｅｒｃｋ）；進行固形腫瘍（ＮＣＴ０２３１８３９４およびＮＣＴ０２７０５４８２）における抗ＯＸ４０アゴニスト抗体であるＭＥＤＩ０５６２（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；結直腸癌（ＮＣＴ０２５５９０２４）、乳癌（ＮＣＴ０１８６２９００）、頭部および頸部癌（ＮＣＴ０２２７４１５５）、および転移性前立腺癌（ＮＣＴ０１３０３７０５）の患者における抗ＯＸ４０アゴニスト抗体であるＭＥＤＩ６４６９（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ならびに進行癌（ＮＣＴ０２７３７４７５）における抗ＯＸ４０アゴニスト抗体であるＢＭＳ－９８６１７８（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとも呼ばれる）アゴニストが挙げられる。臨床治験において研究されているＣＤ１３７アゴニストとしては、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＮＣＴ０２９５１１５６）および進行癌および新生物（ＮＣＴ０２５５４８１２およびＮＣＴ０５０８２５６６）における抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６、Ｐｆｉｚｅｒ）；黒色腫および皮膚癌（ＮＣＴ０２６５２４５５）およびグリア芽腫および神経膠肉腫（ＮＣＴ０２６５８９８１）における抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ２７アゴニストが挙げられる。臨床治験において研究されているＣＤ２７アゴニストとしては、扁平細胞頭部および頸部癌、卵巣癌腫、結直腸癌、腎細胞癌、およびグリア芽腫（ＮＣＴ０２３３５９１８）における抗ＣＤ２７アゴニスト抗体であるヴァルリルマブ（ＣＤＸ－１１２７、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；リンパ腫（ＮＣＴ０１４６０１３４）；および神経膠腫および星状細胞腫（ＮＣＴ０２９２４０３８）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）アゴニストが挙げられる。臨床治験において研究されているＧＩＴＲアゴニストとしては、悪性黒色腫および他の悪性固形腫瘍（ＮＣＴ０１２３９１３４およびＮＣＴ０２６２８５７４）における抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体であるＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；固形腫瘍およびリンパ腫（ＮＣＴ ０２７４０２７０）における抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体であるＧＷＮ３２３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；進行癌（ＮＣＴ０２６９７５９１およびＮＣＴ０３１２６１１０）における抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体であるＩＮＣＡＧＮ０１８７６（Ｉｎｃｙｔｅ／Ａｇｅｎｕｓ）；固形腫瘍（ＮＣＴ０２１３２７５４）における抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体であるＭＫ－４１６６（Ｍｅｒｃｋ）、ならびに進行固形腫瘍（ＮＣＴ０２５８３１６５）における、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインを有するアゴニスト六量体ＧＩＴＲ－リガンド分子であるＭＥＤＩ１８７３（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、誘導性Ｔ細胞共同刺激因子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られる）アゴニストが挙げられる。臨床治験において研究されているＩＣＯＳアゴニストとしては、リンパ腫（ＮＣＴ０２５２０７９１）における抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体であるＭＥＤＩ－５７０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；フェーズ１（ＮＣＴ０２７２３９５５）における抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体であるＧＳＫ３３５９６０９（Ｍｅｒｃｋ）；フェーズ１（ＮＣＴ０２９０４２２６）における抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体であるＪＴＸ－２０１１（Ｊｏｕｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、キラーＩｇＧ様受容体（ＫＩＲ）阻害剤が挙げられる。臨床治験において研究されているＫＩＲ阻害剤としては、白血病（ＮＣＴ０１６８７３８７、ＮＣＴ０２３９９９１７、ＮＣＴ０２４８１２９７、ＮＣＴ０２５９９６４９）、多発性骨髄腫（ＮＣＴ０２２５２２６３）、およびリンパ腫（ＮＣＴ０１５９２３７０）における抗ＫＩＲ抗体であるリリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ－９８６０１５、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；骨髄腫（ＮＣＴ０１２２２２８６およびＮＣＴ０１２１７２０３）におけるＩＰＨ２１０１（１－７Ｆ９、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）；ならびにリンパ腫（ＮＣＴ０２５９３０４５）における長い細胞質尾部（ＫＩＲ３ＤＬ２）の３つのドメインに結合する抗ＫＩＲ抗体であるＩＰＨ４１０２（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ４７とシグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰａ）との間の相互作用のＣＤ４７阻害剤が挙げられる。臨床治験において研究されているＣＤ４７／ＳＩＲＰａ阻害剤としては、フェーズ１（ＮＣＴ０３０１３２１８）における、ＣＤ４７に結合しかつＣＤ４７／ＳＩＲＰａ媒介シグナル伝達を防ぐ（ＳＩＲＰａ）のアンタゴニスト改変体であるＡＬＸ－１４８（Ａｌｅｘｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；ＳＩＲＰａのＮ末端ＣＤ４７結合ドメインをヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに連結することによって作製され、ヒトＣＤ４７を結合させ、それがその「食べるな」という信号をマクロファージに送達するのを防ぐことによって活動し、フェーズ１（ＮＣＴ０２８９０３６８およびＮＣＴ０２６６３５１８）の臨床治験中である、可溶性組換え融合タンパク質であるＴＴＩ－６２１（ＳＩＲＰａ－Ｆｃ， Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；白血病（ＮＣＴ０２６４１００２）における抗ＣＤ４７抗体であるＣＣ－９０００２（Ｃｅｌｇｅｎｅ）；ならびに結腸直腸新生物および固形腫瘍（ＮＣＴ０２９５３７８２）、急性骨髄白血病（ＮＣＴ０２６７８３３８）、およびリンパ腫（ＮＣＴ０２９５３５０９）におけるＨｕ５Ｆ９－Ｇ４（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ， Ｉｎｃ．）、が挙げられる。好ましい実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ４７阻害剤である。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ７３阻害剤が挙げられる。臨床治験において研究されているＣＤ７３阻害剤としては、固形腫瘍（ＮＣＴ０２５０３７７４）における抗ＣＤ７３抗体であるＭＥＤＩ９４４７（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；および固形腫瘍（ＮＣＴ０２７５４１４１）における抗ＣＤ７３抗体であるＢＭＳ－９８６１７９（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、インターフェロン遺伝子タンパク質（ＳＴＩＮＧ、膜貫通タンパク質１７３、またはＴＭＥＭ１７３としても知られる）の刺激物質のアゴニストが挙げられる。臨床治験において研究されているＳＴＩＮＧのアゴニストとしては、リンパ腫（ＮＣＴ０３０１０１７６）におけるアゴニスト合成環状ジヌクレオチドであるＭＫ－１４５４（Ｍｅｒｃｋ）；およびフェーズ１（ＮＣＴ０２６７５４３９およびＮＣＴ０３１７２９３６）におけるアゴニスト合成環状ジヌクレオチドであるＡＤＵ－Ｓ１００（ＭＩＷ８１５、Ａｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤が挙げられる。臨床治験において研究されているＣＳＦ１Ｒ阻害剤としては、結直腸癌、膵癌、転移性癌および進行癌（ＮＣＴ０２７７７７１０）および黒色腫、非小細胞肺癌、扁平細胞頭部および頸部癌、消化管間葉系腫瘍（ＧＩＳＴ）および卵巣癌（ＮＣＴ０２４５２４２４）におけるＣＳＦ１Ｒ小分子阻害剤であるペキシダルチニブ（ＰＬＸ３３９７、Ｐｌｅｘｘｉｋｏｎ）；および膵癌（ＮＣＴ０３１５３４１０）、黒色腫（ＮＣＴ０３１０１２５４）、および固形腫瘍（ＮＣＴ０２７１８９１１）における抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体であるＩＭＣ－ＣＳ４（ＬＹ３０２２８５５、Ｌｉｌｌｙ）；および進行固形腫瘍（ＮＣＴ０２８２９７２３）におけるＣＳＦ１Ｒの経口的に利用可能な阻害剤であるＢＬＺ９４５（４－［２（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシルアミノ）－ベンゾチアゾール－６－イルオキシル］－ピリジン－２－カルボン酸メチルアミド、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が挙げられる。
本発明において使用され得るチェックポイント阻害剤としては、ＮＫＧ２Ａ受容体阻害剤が挙げられる。臨床治験において研究されているＮＫＧ２Ａ受容体阻害剤としては、頭部および頸部新生物（ＮＣＴ０２６４３５５０）および慢性リンパ球性白血病（ＮＣＴ０２５５７５１６）における抗ＮＫＧ２Ａ抗体であるモナリズマブ（ｍｏｎａｌｉｚｕｍａｂ）（ＩＰＨ２２０１、ＩｎｎａｔｅＰｈａｒｍａ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、当該免疫のチェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、イピリムマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、またはピジリズマブから選択される。
好ましい実施形態において、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニストは、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ－４から選択される。
好ましい実施形態において、当該癌免疫剤は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、好ましくはＣＴＬＡ－４抗体、より好ましくはイピリムマブまたはトレメリムマブである。
より好ましい実施形態において、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニストは、抗ＰＤ－１である。好ましい実施形態において、当該抗ＰＤ－１は、抗体またはその抗原結合性部分、好ましくは、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）、およびピディリズマブ（ＣＴ－０１１）からなる群から選択される抗体である。別の好ましい実施形態において、当該抗ＰＤ－１は、ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインで構成される組換えタンパク質である。
ある実施形態において、本発明の組み合わせ物は、本発明の組み合わせ物の成分（ｉ）および成分（ｉｉ）の間のコンジュゲートであり、特に、配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と癌免疫剤との間のコンジュゲートである。
いくつかの実施形態において、成分（ｉ）と（ｉｉ）との間のコンジュゲートは、切断不可能なリンカーによって介される。いくつかの実施形態において、成分（ｉ）と（ｉｉ）との間のコンジュゲートは、切断可能なリンカーによって介される。例示的切断不可能なリンカーおよび切断可能なリンカーは、ＵＳ８０８８３８７、ＵＳ８１４２７８４、ＷＯ２０１３０７５０４８、ＵＳ６６３０５７９、ＵＳ８５１２７０７、ＵＳ９１２０８５４、ＵＳ９０２３３５１、ＵＳ２０１６００９５９３８、ＵＳ９４４６１４６、ＷＯ２００５００９３６９、ＵＳ５７７３００１、ＵＳ６２１４３４５、ＵＳ１０１１１９５４、ＵＳ８１５３７６８、ＵＳ７８２９５３１、ＵＳ２０１６００８２１１９、ＷＯ２０１８２１８００４、ＵＳ８５６８７２８、ＷＯ２０１５０５７６９９、ＵＳ２０１７０１８２１８１、ＵＳ９１９８９７９に記載され、なお、当該文献のそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
別の態様において、本発明は、薬学的に許容される賦形剤と一緒に本発明の組み合わせ物の薬学的有効量を含む医薬組成物に関する。
本発明において使用される場合、表現「医薬組成物」は、所定の用量の１種または複数種の治療的に有用な薬剤を、細胞、細胞群、臓器、組織、または細胞分裂が非制御である動物、例えば、癌など、に投与するために適合されている製剤に関する。
本発明の医薬組成物は、本発明による組み合わせ物の薬学的有効量と薬学的に活性な担体とを含有する。本発明の医薬組成物は、配列番号１の配列を含むポリペプチド、その機能的に同等な改変体、本発明によるコンジュゲート、当該ポリペプチドまたは当該コンジュゲートをコードするポリヌクレオチド、当該ポリヌクレオチドを含むベクターまたは当該ポリペプチドもしくは当該コンジュゲートを培地中へと分泌することができる細胞と、癌免疫剤とを含む。本発明による医薬組成物での使用のための、配列番号１のポリペプチドの好適な機能的に同等な改変体、好適なコンジュゲート、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、または細胞は、上記において定義されるとおりである。
表現「薬学的に有効な量」は、本明細書で使用される場合、治療効果を提供することができる量として理解され、一般的に使用される手段により当業者によって決定することができる。Ｏｍｏｍｙｃポリペプチド、その機能的に同等な改変体、当該コンジュゲート、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または本発明による医薬組成物において組み合わせられ得る癌免疫剤、の量は、対象および投与の特定の様式に応じて変わるであろう。当業者は、投与量は、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｏｌｄｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｎｉｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （１９９６）， Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＩ， ｐｐ． １７０７－１７１１およびＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｏｌｄｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （２００１）， Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＩ， ｐｐ． ４７５－４９３のガイダンスによっても決定され得ることを理解するであろう。
当該医薬組成物内の有効成分の適切な投与量は、治療される癌のタイプ、疾患の重篤度および経過、当該組成物が予防目的で投与されるのか、それとも治療目的で投与されるのか、薬歴、患者の病歴および当該ペプチドまたはポリペプチドに対する反応、ならびに主治医の裁量に応じて変わるであろう。
配列番号１の配列を含むポリペプチド、その機能的に同等な改変体、融合タンパク質、コンジュゲート、ポリヌクレオチド、ベクター、または細胞、の量は、一度に、または一連の治療にわたって、適宜、患者に投与される。疾患のタイプおよび重篤度に応じて、適切な投与量レベルは、一般的に、単回投与（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）または複数回投与（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅ）において投与することができる約０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）／日であろう。好ましくは、投与量レベルは、約０．１～約２５０ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは、約０．５～約１００ｍｇ／ｋｇ／日であろう。
好ましい実施形態において、第１成分の量は、好ましくは鼻腔内投与によって、好ましくは週４回投与される、約３．７５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）／日の量である。好ましい実施形態において、第１成分の量は、好ましくは鼻腔内投与によって、好ましくは週４回投与される、約８ｍｇ／ｍ２／日から１５ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは１０ｍｇ／ｍ２／日から１２ｍｇ／ｍ２／日、より好ましくは１１．２５ｍｇ／ｍ２／日の量である。
好ましい実施形態において、第１成分の量は、好ましくは静脈内投与によって、好ましくは週２回投与される、約５０ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）／日の量である。好ましい実施形態において、第１成分の量は、好ましくは静脈内投与によって、好ましくは週２回投与される、約１００ｍｇ／ｍ２／日から２００ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは１２５ｍｇ／ｍ２／日から１７５ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは１４０ｍｇ／ｍ２／日から１６０ｍｇ／ｍ２／日、より好ましくは１５０ｍｇ／ｍ２／日の量である。
好適な投与量レベルは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から２５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日から１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．１ｍｇ／ｋｇ／日から５０ｍｇ／ｋｇ／日であり得る。この範囲内において、投与量は０．０５ｍｇ／ｋｇ／日から０．５ｍｇ／ｋｇ／日，０．５ｍｇ／ｋｇ／日から５ｍｇ／ｋｇ／日、または５ｍｇ／ｋｇ／日から５０ｍｇ／ｋｇ／日であり得る。経口投与の場合、当該組成物は、好ましくは、治療される患者への投与量の対症的調節のために、１．０ミリグラムから１０００ミリグラムの有効成分、特に、１．０ミリグラム、５．０ミリグラム、１０．０ミリグラム、１５．０ミリグラム、２０．０ミリグラム、２５．０ミリグラム、５０．０ミリグラム、７５．０ミリグラム、１００．０ミリグラム、１５０．０ミリグラム、２００．０ミリグラム、２５０．０ミリグラム、３００．０ミリグラム、４００．０ミリグラム、５００．０ミリグラム、６００．０ミリグラム、７５０．０ミリグラム、８００．０ミリグラム、９００．０ミリグラム、および１０００．０ミリグラムの有効成分、を含有する錠剤の形態において提供される。当該化合物は、１回／日から４回／日、好ましくは１回／日または２回／日の投与計画において投与され得る。
ある実施形態において、当該組み合わせ物または組成物は、週１回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、週７回投与することができる。ある実施形態において、当該組み合わせ物または組成物は、週１回投与することができる。別の実施形態において、当該組み合わせ物または組成物は、週２回投与することができる。別の実施形態において、当該組み合わせ物または組成物は、週４回投与することができる。別の好ましい実施形態において、当該組み合わせ物または組成物の第１成分は、週４回投与され、ならびに当該組み合わせ物または組成物の第２成分は、週１回投与される。別の実施形態において、当該組み合わせ物または組成物の第１成分は、週２回投与され、ならびに当該組み合わせ物または組成物の第２成分は、週１回投与される。両方の化合物は、同時に投与することができ、または連続して投与することができる。当該化合物が、連続して投与される場合、第１化合物の投与は、第２化合物の投与を開始する前に中止される。
治療の継続期間は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間以上、またはそれ以上であり得る。好ましくは、治療の継続期間は、少なくとも４週間である。別の実施形態において、治療の継続期間は、少なくとも３週間である。
当該癌免疫剤の量は、使用される特定の薬剤に応じて変わり、ならびに、所望の治療効果を得るために、１日１回または数回、約０．０１ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）／日から約５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日から約２５ｍｇ／ｋｇ／日であり得る。好ましい実施形態において、当該癌免疫剤の量は、好ましくは週１回投与される、より好ましくは非経口によって投与される、さらにより好ましくは腹腔内投与によって投与される、約２．５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）／日または７．５ｍｇ／ｍ２／日の量である。好ましい実施形態において、当該癌免疫剤の量は、好ましくは週１回投与される、より好ましくは非経口によって投与される、さらにより好ましくは腹腔内投与によって投与される、約５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）／日または１５ｍｇ／ｍ２／日の量である。別の好ましい実施形態において、当該癌免疫剤の量は、好ましくは週１回投与される、より好ましくは非経口によって投与される、さらにより好ましくは腹腔内投与によって投与される、約１０ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）／日または３０ｍｇ／ｍ２／日の量である。
本発明による、配列番号１を含むポリペプチド、その機能的に同等な改変体、融合タンパク質、コンジュゲート、ポリヌクレオチド、ベクター、または細胞から選択される第１成分（ｉ）と、癌免疫剤である第２成分（ｉｉ）とを含有する、本発明による医薬組成物は、単一製剤（例えば、当該成分のそれぞれの定量を含む錠剤またはカプセル剤として）として提示され得るか、または、その一方で、同時投与（ｊｏｉｎｔ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、連続投与、個別投与（ｓｅｐａｒａｔｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）のために後で組み合わされる別々の製剤として提示することもできる。本発明の組成物は、成分が別々に製剤化されるが同じ容器においてパッケージされるパーツキットとしての製剤も包含する。当業者は、本発明による医薬組成物中の異なる成分の製剤化は、同様であってもよく、言い換えれば、（錠剤または丸薬において）同様に製剤化してもよく、それらは同じ経路によるそれらの投与を許容する、ということを理解するであろう。本発明の異なる成分が別々に製剤化される場合、当該２つの成分は、ブリスターにおいて提示することができる。各ブリスターは、１日の間に消費されなければならない薬物を収容する。当該薬物が、１日に数度、投与されなければならない場合、各投与に対応する薬物は、ブリスターの異なるセクションに入れることができ、好ましくは薬物が投与されるべき時刻をブリスターの各セクションにおいて記録する。あるいは、本発明の組成物の成分は、異なる成分が別々に投与されるように、別々に製剤化することもできる。したがって、第１成分を経口投与用に錠剤またはカプセル剤として製剤化し、第２成分を静脈内投与用に製剤化することも、またその逆も可能である。本発明による組み合わせ物または医薬組成物の一部である成分の間の比率は、各特定の病状に使用される抗腫瘍薬ならびに所望の指標に応じて、当業者が調節することができる。したがって、本発明は、成分（ｉ）の量と成分（ｉｉ）の量の間の比率が５０：１から１：５０、特に、２０：１から１：２０、１：１０から１０：１、または５：１から１：５の範囲であり得るような組成物を想定する。より特定の実施形態において、量の間の比率は、１：１から１：５、好ましくは１：１から１：３の範囲である。より好ましい実施形態において、当該比率は、１：１から１：１．５、好ましくは１：１．３から１：１．４の範囲であり、より好ましくは１：１．３４である。別の好ましい実施形態において、当該比率は、１：１から１：２．８、好ましくは１：２．６から１：２．７の範囲であり、より好ましくは１：２．６７である。別の特定の実施形態において、量の間の比率は、３０：１から５：１、好ましくは３０：１から８：１、より好ましくは２５：１から１５：１、より好ましくは２０：１から１０：１の範囲である。ある実施形態において、当該比率は、２０：１である。別の実施形態において、当該比率は、１０：１である。好ましくは、これらの比率は、ｗ／ｗ比である。
本発明の医薬組成物または組み合わせ物の成分は、同時に投与することができる。「同時投与（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、それぞれの薬剤の投与の相対頻度またはタイミングにかかわらず、２つの治療薬の並行投与（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）を包含する。したがって、同時投与は、投与の同じタイミングおよび同じ頻度での２つの治療薬の併用投与を包含する。加えて、同時投与は、一方の薬剤が他方の薬剤よりも頻繁に投与されるような２つの治療薬の併用投与も意味する。加えて、同時投与は、一方の薬剤が他方の薬剤の投与の間に１回のみ投与されるような、２つの治療薬の併用投与も意味する。
ある実施形態において、成分（ｉ）は、鼻腔内投与される。別の実施形態において、成分（ｉ）は、静脈内投与される。別の実施形態において、成分（ｉ）は、非経口投与、特に腹腔内投与される。
好ましい実施形態において、本発明の組み合わせ物または医薬組成物の成分（ｉ）は、鼻腔内投与され、その一方で、癌免疫剤は、非経口投与、特に腹腔内投与または静脈内投与される。鼻腔内投与の場合、本発明の組み合わせ物または組成物の成分（ｉ）の好ましい用量、好ましくは、当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、融合タンパク質、またはコンジュゲートの好ましい用量は、単回投与または複数回投与において投与することができる０．０１ｍｇ／ｋｇから２５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、より好ましくは１日あたり０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの間の範囲である。腹腔内投与にとっての癌免疫剤の好ましい用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇの間である。
別の実施形態において、本発明の組み合わせ物または医薬組成物の成分（ｉ）は、静脈内投与され、その一方で、癌免疫剤は、非経口投与、特に腹腔内投与または静脈内投与される。
本発明の医薬組成物は、非制御の細胞分裂が存在するような病理、例えば、癌など、の予防および／または治療のための１つまたは複数の追加の化合物も含有することができる。当該追加の化合物、例えば、抗腫瘍剤など、は、独立した実体として当該医薬組成物の一部を形成することができる。好ましい実施形態において、本発明の組み合わせ物または医薬組成物は、細胞毒性薬剤、血管新生阻害剤、抗転移薬、および抗増殖剤、からなる群から選択される１つまたは複数の抗腫瘍剤を含む。
本発明の医薬組成物は、１つまたは複数の追加の薬学的に許容される賦形剤も含有する。「薬学的に許容される賦形剤」は、有効成分を組み入れるために使用されると考えられている治療的に不活性な物質であって、薬理学的／毒物学的観点から患者にとって、ならびに組成、製剤化、安定性、患者の容認性、およびバイオアベイラビリティに関して物理的／化学的観点からそれを製造する薬剤師にとって、許容可能である物質として理解される。当該賦形剤は、担体であり得る。本明細書において使用される場合、「担体」は、医薬組成物内において有効成分の送達および有効性を向上させるのに役立つ任意の物質を意味する。好ましい実施形態において、担体は、細胞の細胞質への成分（ｉ）および／または（ｉｉ）の直接送達を許可せず、すなわち、担体は、標的細胞の血漿膜と融合することができない。薬学的に許容される担体の例としては、水、塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせのうちの１つまたは複数が挙げられる。多くの場合、当該組み合わせ物または組成物に、等張剤、例えば、糖など、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、など、または塩化ナトリウムを含ませることは好ましいであろう。薬学的に許容される担体は、さらに、本発明の組み合わせ物または組成物の一部を形成する成分の貯蔵期限または有効性を高める少量の補助剤、例えば、湿潤剤および乳化剤、防腐剤および緩衝剤など、含んでもよい。適切な担体の例は、文献において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ， １９９５を参照されたい）。担体の例は、一連の糖、例えば、ラクトース、デキストロース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、およびマルチトールなど；一連のデンプン、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、およびジャガイモデンプンなど；一連のセルロース、例えば、セルロース、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、およびヒドロキシルプロピルメチルセルロースなど；ならびに一連の充填剤、例えば、ゼラチンおよびポリビニルピロリドンなど、である。場合によって、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはアルギン酸ナトリウムなど、を加えてもよい。
当該薬学的に許容される賦形剤の数および性質は、所望の投薬形態に応じて変わる。薬学的に許容される賦形剤は、当業者に既知である（Ｆａｕｌｉｙ Ｔｒｉｌｌｏ Ｃ． （１９９３） ”Ｔｒａｔａｄｏ ｄｅ Ｆａｒｍａｃｉａ Ｇａｌｅｎｉｃａ”， Ｌｕｚａｎ ５， Ｓ．Ａ． Ｅｄｉｃｉｏｎｅｓ， Ｍａｄｒｉｄ）。当該組成物は、現状技術水準において既知である従来法によって調製することができる（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」， ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ （２００３） Ｇｅｎａｒｏ Ａ．Ｒ．， ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＵＳ）。
核酸分子である薬剤を含む医薬組成物の場合、当該核酸分子は、当業者に既知の様々な任意の送達システム内に存在し得、そのような例としては、核酸、ならびに細菌、ウイルス、および哺乳動物の発現システム、例えば、本明細書において提供されるような組換え発現コンストラクトなど、が挙げられる。ＤＮＡをそのような発現システム中に組み入れるための技術は、当業者にとって周知である。当該ＤＮＡは、例えば、Ｕｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１７４５－４９， １９９３ ａｎｄ ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｂｙ Ｃｏｈｅｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１６９１－１６９２， １９９３に記載されるように、「裸（ｎａｋｅｄ）」であってもよい。裸のＤＮＡの取り込みは、生体分解性ビーズ上に当該ＤＮＡをコーティングすることによって、増加され得、それらは、効率的に細胞内へと輸送される。
核酸分子は、当技術分野において説明されるいくつかの方法のいずれかによって細胞内に送達され得る（例えば、Ａｋｈｔａｒ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ． ２：１３９ （１９９２）； Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ｅｄ． Ａｋｈｔａｒ， １９９５， Ｍａｕｒｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｍｅｍｂｒ． Ｂｉｏｌ． １６：１２９－４０ （１９９９）； Ｈｏｆｌａｎｄ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ， Ｈａｎｄｂ． Ｅｘｐ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １３７：１６５－９２ （１９９９）； Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．， ＡＣＳ Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ． ７５２：１８４－９２ （２０００）； ＵＳ６，３９５，７１３；ＷＯ ９４／０２５９５）； Ｓｅｌｂｏ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ８７：８５３－５９ （２０００）； Ｓｅｌｂｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｕｍｏｕｒ Ｂｉｏｌ． ２３：１０３－１２ （２００２）； ＵＳ２００１／０００７６６６、およびＵＳ２００３／０７７８２９を参照されたい）。当業者に既知のそのような送達方法としては、これらに限定されないが、イオン導入（ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）による、または他のビヒクル、例えば、生分解性高分子；ヒドロゲル；シクロデキストリン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． １０： １０６８－７４ （１９９９）； Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， 国際出願公開ＷＯ ０３／４７５１８およびＷＯ ０３／４６１８５を参照されたい）；ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）酸（ＰＬＧＡ）およびＰＬＣＡミクロスフェア（ペプチドおよびポリペプチドおよび他の物質の送達にとっても有用）（例えば、ＵＳ６，４４７，７９６；ＵＳ２００２／１３０４３０を参照されたい）；生体分解性ナノカプセルならびに生体付着性ミクロスフェアなど、への組み込みによる、あるいはタンパク質性ベクター（国際出願公開ＷＯ ００／５３７２２）による、リポソームへの封入が挙げられる。別の実施形態において、当該核酸分子は、ポリエチレンイミンおよびその誘導体、例えば、ポリエチレンイミン－ポリエチレングリコール－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ－ＰＥＧ－ＧＡＬ）またはポリエチレンイミン－ポリエチレングリコール－トリ－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ－ＰＥＧ－トリＧＡＬ）誘導体によって、製剤化または複合体化することもできる（例えば、ＵＳ２００３／００７７８２９も参照されたい）。
特定の実施形態において、本発明による化合物が核酸を含む場合、当該医薬組成物は、遺伝子療法における使用のために意図された組成物として製剤化され得；実例としてであって、限定としてではなく、その医薬組成物は、好適なポリヌクレオチドまたは遺伝子構築物を含むウイルスベクターまたは非ウイルスベクターを含有し得る。実例としてであって、限定としてではなく、当該ベクターは、例えば、レトロウイルス、アデノウイルスなどをベースとするウイルス性であり得るか、または、例えば、ＡＤＮ－リポソーム、ＡＤＮ－ポリマー、ＡＤＮ－ポリマー－ リポソーム複合体、などをベースとする非ウイルス性であり得る［”Ｎｏｎｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｈｕａｎｇ， Ｈｕｎｇ ａｎｄ Ｗａｇｎｅｒ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （１９９９）を参照されたい］。対応するポリヌクレオチドまたは遺伝子構築物を含有する当該ベクターは、従来法によって対象に直接投与され得る。あるいは、当該ベクターは、エクスビボにおいて、細胞、例えば、哺乳動物細胞、例えば、ヒトなど、を形質転換するため、トランスフェクトするため、または感染させるために使用され得、続いて、それらは、所望の治療効果を得るために人体または動物に移植されるであろう。人体または動物への投与のために、当該細胞は、細胞生存に悪影響を及ぼさないであろう好適な媒体において製剤化されるであろう。
本発明の組み合わせ物または医薬組成物は、所望の剤形の製剤化にとって必要な薬学的に許容される賦形剤が含まれるような任意のタイプの好適な経路、例えば、経口経路、局所経路によって、吸入経路または非経口経路によって、投与することができる。投与の他の経路は、経直腸、大槽内、または腟内であり得る。当該組み合わせ物または医薬組成物の投与の好ましい経路は、静脈内経路である。
「経口経路」は、嚥下の後に有機体に取り込まれる医薬組成物として理解される。特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、固体か液体かにかかわらず経口経路による投与にとって好適な投薬形態であり得る。経口経路による投与にとって好適な投薬形態は、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、または溶液剤であり得、ならびに当技術分野において既知の任意の従来の賦形剤、例えば、結合剤、例えば、シロップ剤、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、またはポリビニルピロリドンなど；充填剤、例えば、ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、またはグリシンなど；圧縮のための潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；崩壊剤、例えば、デンプン、ポリビニルピロリドン、デンプンのグリコール酸ナトリウム、または微結晶性セルロースなど；あるいは薬学的に許容される湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど、を含むことができる。固体経口組成物は、混合、充填、または圧縮の従来プロセスによって調製することができる。反復混合操作を使用することにより、多量の充填剤を使用するそれらの組成物に活性薬剤を完全に分配させることができる。当該操作は、当技術分野において慣習的である。錠剤は、例えば、湿式または乾式造粒によって、ならびに、場合により一般的な薬務において知られるプロセスに従って、腸溶コーティン剤を用いて、それらをコーティングすることよって、調製することができる。
その一方で、「局所経路」は、非全身経路による投与として理解され、ならびにそれらがほとんど血流に入らないような、表皮上への、口腔においての、ならびに耳、目、および鼻への当該組成物の滴下投与による、外部的な本発明の医薬組成物の適用を包含する。本発明の化合物の局所投与または経皮投与のための投薬形態としては、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、粉末剤、溶液剤、噴霧剤、吸入剤、またはパッチ剤が挙げられる。
眼科製剤、点耳液、および点眼剤も、本発明の範囲内にあることが想到される。さらに、本発明は、身体への化合物の制御送達を提供する追加された利点を有する、経皮パッチ剤の使用も想到する。そのような投薬形態は、適切な媒体中に当該化合物を溶解または分散させることによって作製することができる。皮膚を超えての当該化合物の流れを増加させるために、吸収促進薬を使用することもできる。当該速度は、速度制御膜を備えさせることによって、または高分子マトリックスまたはゲルに当該化合物を分散させることによって、制御することができる
ある実施形態において、当該組み合わせ物または医薬組成物は、全身投与される。
「全身経路」は、経口経路、静脈内経路、腹腔内経路、および筋肉内経路による投与として理解される。治療効果または予防効果のために必要な成分（ｉ）および（ｉｉ）の量は、選出された化合物、治療される病気の性質および重篤度、ならびに患者によって、当然ながら変わるであろう。
別の実施形態において、当該組み合わせ物または医薬組成物は、鼻腔内投与される。好ましい実施形態において、鼻腔内投与は、滴下投与または鼻腔内吸入によって実施される。
「吸入」は、鼻腔内経路による投与および経口吸入による投与として理解される。当該投与にとって好適な投薬形態、例えば、エアロゾルまたは定量吸入器における製剤など、は、従来技術によって調製することができる。ある実施形態において、当該投与経路は、鼻腔内経路である。
本明細書において使用される場合、用語「非経口」は、静脈内経路、腹腔内経路、筋肉内経路、または皮下経路による投与を包含する。非経口投与の皮下、筋肉内、および静脈内投薬形態は、概して好ましい。
一実施形態において、本発明の組み合わせ物または医薬組成物は、それらの非経口投与、例えば、適切な投薬単位形態での、無菌溶液剤、懸濁剤、または凍結乾燥製品など、に適合させることができる。その注射用途にとって好適な組み合わせ物または医薬組成物は、無菌水溶液（水に可溶性の場合）、または無菌の注入可能な溶液もしくは分散液の即座の調製のための分散液および無菌粉末を含む。静脈内経路による投与の場合、いくつかの好適な担体は、リン酸塩で緩衝された塩水溶液（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、当該組み合わせ物または組成物は、無菌でなければならず、ならびに、容易に注入できる程度には流体でなければならない。それは、調製および貯蔵条件において安定していなければならず、ならびに細菌および糸状菌などの微生物の混入動作から保護されなければならない。当該担体は、例えば、水、エタノール、薬学的に許容されるポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど、およびそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。好適な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用すること、分散液の場合に必要な粒子サイズを維持すること、ならびに界面活性物質を使用することによって、維持することができる。微生物の混入動作の予防は、様々な抗菌剤および防かび剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チオメルサールなどによって、実現することができる。ほとんどの場合、当該組成物中に、等張剤、例えば、糖など；ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトールなど；あるいは塩化ナトリウムを含ませることは好ましいであろう。当該注射可能の組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含ませることによって、生じさせられ得る。
当該注射可能な無菌溶液は、必要な量の活性化合物を、前述の原材料の１つまたは組み合わせと共に好適な溶媒に加え、必要に応じて、その後に無菌膜を通した濾過による滅菌によって、調製することができる。概して、当該分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒と前に一覧したもののうちの必要な原材料の残りとを含有する無菌ビヒクルに加えることによって調製される。注射可能な無菌溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製プロセスは、真空乾燥および凍結乾燥であり、それにより、活性原材料と、前に濾過したその無菌溶液からの任意の所望の追加の原材料とを伴う粉末が形成される。
本発明の組み合わせ物または医薬組成物は、例えば、当該組成物の用量の減少を伴うパルス注入（ｐｕｌｓｅ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）によって、好適に投与することができる。好ましくは、当該用量は、投与が緊急であるか持続的であるかに部分的に応じて、注射、より好ましくは静脈内注射または皮下注射によって投与される。好ましい実施形態において、ＰＤ－１アンタゴニストは、点滴によって投与される。
あるいは、前述のように、当該組成物における異なる成分は、別々に投与される。
したがって、ある実施形態において、本発明の、組み合わせ物または組成物の成分（ｉ）、好ましくは、ポリペプチドまたは機能的に同等な改変体またはコンジュゲート、は、鼻腔内投与され、その一方で、癌免疫剤は、全身投与される。
別の好ましい実施形態において、当該組み合わせ物または組成物の成分（ｉ）、好ましくは、ポリペプチドまたは機能的に同等な改変体、または当該組成物のコンジュゲートは、鼻腔内投与されるか、または吸入によって投与される。
鼻腔内投与および肺内投与のために意図される組成物の投薬形態は、好ましくは、液体、懸濁液、または固体である。懸濁液は、液体ビヒクル中に分散させた固体粒子を含有する液体調製物である。当該投薬形態は、好ましくは計量される。例えば、計量された滴剤／噴霧剤は、当該滴剤／噴霧剤を含むディスペンサーが、本発明による使用のための当該組成物の計量された用量（所定の量）を含有する当該滴剤／噴霧剤を送達することを意味する。
鼻腔内投与経路との関連における好ましい投薬形態の１つとしては、点鼻液が挙げられる。滴剤は、ほとんど鼻の後方部分に被着され、したがって、咽頭鼻部へと急速に除去される。滴剤に関する懸念は、多くの場合、当該組成物の投与にとって特に重要である当該薬物の用量を正確に制御する方法である。
本発明の医薬組成物を投与することができる別の鼻腔内投薬形態は、スプレー式点鼻薬である。スプレー式点鼻薬は、典型的には、非加圧ディスペンサーにおける、賦形剤（例えば、防腐剤、粘度調整剤、乳化剤、緩衝薬）の溶液または混合物に溶解または懸濁させたコンジュゲートを含有する。スプレー式点鼻薬は、例えば、送達デバイスのコンパクトさ、便利さ、使用の簡単さ、および２５ｐＬから２００ｐＬの投薬量を送達する正確さなどのいくつかの利点を有する。スプレー式点鼻薬は、鼻の後方部分に被着され、粘膜せん毛クリアランスによって咽頭鼻部へゆっくりと除去される。スプレー式点鼻薬は、本明細書において使用される場合、液体または懸濁液であり得る。
別の鼻腔内投薬形態は、鼻エアロゾルである。鼻エアロゾルは、組成物を分配する方法においてスプレー式点鼻薬とは異なっており、エアロゾルにおいて、化合物は、過剰な圧力と放出によってバルブを通って分配される。スプレーにおいて、化合物は、マイクロポンプバケットによって強制的に放出されることにより分配され、その一方で、バイアル瓶の圧力は大気圧と同様である。エアロゾルは、スプレーと同様の利点を有する。
あるいは、本明細書による組成物は、好ましくは、鼻エマルジョン、軟膏剤、ゲル剤、ペースト剤、またはクリーム剤によって投与され得る。これらは、鼻粘膜に適用される非常に粘着性の溶液または懸濁液である。
鼻粘膜へと効率的に送達することができる組成物の限界量に起因して、液体鼻腔内投薬形態は、通常、対応する静脈内投薬形態よりも高い濃度を有する。物質が液体形態において難溶性になるかまたは不溶性である場合、本発明の組成物を投与するために、粉末薬を使用することができる。粉末薬のさらなる利点は、それらは防腐剤を必要とせず、ならびに通常、液体製剤と比較して、より高い安定性を有することである。鼻腔内粉末薬適用に関する主な制限は、鼻粘膜に対するその刺激性効果に関連する。
肺内投与との関連における投薬形態の１つは、吸入エアロゾルである。吸入エアロゾルは、通常、加圧下においてパッケージされ、本発明による組成物を含有し、それらは、バルブシステムの作動時に呼吸気管、特に肺、の中に放出される。放出されたエアロゾルは、空気中または別の気体中において、固体微粒子のコロイド（懸濁液）または液滴（溶液）である。したがって、当該エアロゾルは、溶液エアロゾルまたは懸濁液エアロゾルであり得る。当該液滴または固体粒子は、好ましくは、１００ｐｍ未満、より好ましくは１０ｐｍ未満、最も好ましくは１ｐｍ未満、の直径を有する。
肺内投与との関連における投薬形態の１つは、吸入スプレー剤である。吸入スプレー剤は、典型的には、水性塩基であり、いかなる噴射剤も含有しない。それらは、経口吸入によって当該コンジュゲートを肺へと送達する。
噴霧化された吸入溶液および吸入懸濁液も、肺内経路によってコンジュゲートを送達するために使用され得る。噴霧化された吸入溶液および吸入懸濁液は、典型的には、本発明による組成物を含有する水ベースの製剤である。当該噴霧化された吸入溶液および吸入懸濁液は、全身性効果のための経口吸入によって当該組成物を肺へ送達し、ならびにネブライザーを用いて使用される。
乾燥粉末薬吸入は、エアロゾル吸入に対する代替手段である。当該組成物は、通常、手動によるローディングのためにカプセル中にまたは吸入器内に含まれる。乾燥粉末薬は、典型的には、吸入器による経口吸入によって肺へと送達される。乾燥粉末薬は、本明細書において使用される場合、純粋に製剤化することができる。純粋な製剤（ｎｅａｔ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）は、例えば、噴霧乾燥粉末薬として、薬物のみまたは疑似薬物のみを含有する。乾燥粉末薬は、本明細書において使用される場合、ラクトースなどの担体と共に製剤化することもできる。
肺内投薬形態は、好ましくは計量され、すなわち、所定の量において肺へ送達される。
本発明との関連における鼻腔内送達のためのデバイスとしては、スプレーポンプシステム、滴剤を送達するためのピペット、定用量スプレーポンプ（ｍｅｔｅｒｅｄ－ｄｏｓｅ ｓｐｒａｙ ｐｕｍｐ）、鼻加圧式計量吸入器（ｎａｓａｌ ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ ｍｅｔｅｒｅｄ－ｄｏｓｅ ｉｎｈａｌｅｒ）、粉末薬スプレーシステム、呼吸作動式粉末薬吸入器（ｂｒｅａｔｈ－ａｃｔｕａｔｅｄ ｐｏｗｄｅｒ ｉｎｈａｌｅｒ）、および鼻粉末薬注入器（ｎａｓａｌ ｐｏｗｄｅｒ ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）が挙げられる。当該鼻腔内送達デバイスは、単回投与または複数回投与の鼻腔内用製剤で満たされ得る。
肺内経路を使用することにより、当該コンジュゲートは、定用量吸入器（ｍｅｔｅｒｅｄ ｄｏｓｅ ｉｎｈａｌｅｒ）によって投与され得る。定用量吸入器（ＭＤＩ）は、概して５ｐｍ未満の空気力学的粒子サイズのコンジュゲートの微細な霧を提供する。
乾燥粉末薬は、組成物を肺内に送達するための代替方法として使用することができる。乾燥粉末薬吸入器は、単回投与または複数回投与粉末薬として粉末薬を提示する。
肺内送達のための別のデバイスは、超音波噴霧器および空気噴流噴霧器などの噴霧器である。超音波噴霧器では、電気的に励起されたときに振動するセラミック圧電結晶によって、超音波噴霧器チャンバーにおいて超音波が形成される。これは、溶液表面においてエアロゾル雲を発生させる。空気噴流噴霧器によって生成されるエアロゾルは、圧縮空気が強制的に流出孔を通させられる時に発生する。エアロゾル雲の形成を促進するためにバッフルを使用して原子化された空気噴流と混合するために、垂直ノズルから液体が引き出され得る（ベルヌーイ効果）。
一実施形態において、本発明の組み合わせ物または医薬組成物の各成分は、例えば、
移植およびマイクロカプセル化投与システムを含む制御放出製剤などのように、身体からの急速な排除から当該成分、特に成分（ｉ）、を保護する担体を用いて調製される。生体分解性の生体適合性ポリマー、例えば、ビニル酢酸エチレン、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸など、を使用することができる。当該製剤を調製するためのプロセスは、当業者にとって明らかであろう。材料は、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． から商業的に得ることもできる。
当該徐放性組成物は、結晶を懸濁状態に維持することができる好適な配合物に懸濁させた結晶の調製物も含む。これらの調製物は、それらが皮下経路または腹腔内経路によって注入される場合、徐放効果を生じ得る。他の組成物も、リポソームに補捉された成分（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む。そのような化合物を含有するリポソームは、既知の方法、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， （１９８５） ８２：３６８８－３６９２； Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， （１９８０） ７７：４０３０－４０３４；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９など、によって調製される。好ましい実施形態において、成分（ｉ）および／または（ｉｉ）は、リポソームに含有され、好ましくは、両方の成分は、リポソーム、より好ましくは同じリポソームに含まれる。
Ｏｍｏｍｙｃ、その機能的に同等な改変体、本発明のコンジュケートおよび融合タンパク質は、生体膜を超えて移動することができるという事実にもかかわらず、Ｏｍｏｍｙｃ、任意のその機能的に同等な改変体、コンジュゲート、ポリヌクレオチド、ベクター、または細胞をナノ粒子中において製剤化することが可能である。当該ナノ粒子は、当該成分が標的臓器に達するまで生体液中での当該成分の完全性を保存することに貢献し得る。その上、成分（ｉｉ）または他の抗腫瘍薬を含む組成物の場合、当該組成物のカプセル化は、当該抗腫瘍薬によって引き起こされる二次効果を減少させ得る。加えて、ナノ粒子は、当該ナノ粒子が目的の臓器を標的化するのを可能にする部分を含むように、変更することもできる。この方法において、本発明の組み合わせ物または組成物の成分（ｉ）は、標的臓器の近くに送達され、生物活性が必要とされる細胞の内部への成分（ｉ）のアクセスを促進する。
したがって、別の実施形態において、本発明の組み合わせ物または組成物の成分（ｉ）は、ナノ粒子の一部を形成するように提供される。別の実施形態において、本発明の組み合わせ物または組成物の両方の成分は、ナノ粒子の一部を形成するように提供され、好ましくは、両方の成分は、同じナノ粒子の中において提供される。
本明細書において使用される場合、用語「ナノ粒子」は、１～１，０００ｎｍ範囲の寸法を有する任意の材料を意味する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、２～２００ｎｍ範囲、好ましくは２～１５０ｎｍ範囲、さらにより好ましくは２～１００ｎｍ範囲の寸法を有する。本発明において使用することができるナノ粒子としては、例えば、脂質ベースのナノ粒子、超常磁性微粒子、ナノシェル、半導体ナノ結晶、量子ドット、ポリマーベースのナノ粒子、シリコンベースのナノ粒子、シリカベースのナノ粒子、金属ベースのナノ粒子、フラーレン、およびナノチューブなどのナノスケール材料が挙げられる。分子は、ナノ粒子マトリックスに組み込むこともできるし、またはその表面に吸着させてもよく、好ましくは、分子は、ナノ粒子に組み込まれ得る。
好ましい実施形態において、当該ナノ粒子は、リポソームである。
標的送達は、リガンドを加えることによって、その内容物を送達するナノ粒子の能力を犠牲にすることなく、達成することができる。これによって特定の細胞、組織、および臓器への送達が可能になることが想到される。リガンドベースの送達システムの標的特異性は、異なる細胞タイプへのリガンド受容体の分配に基づいている。ターゲッティングリガンドは、非共有結合的または共有結合的にナノ粒子と会合させてもよく、ならびに本明細書において説明される様々な方法によってナノ粒子にコンジュゲートさせることができる。
ナノ粒子を標的にするために使用することができるタンパク質またはペプチドの例としては、トランスフェリン、ラクトフェリン、ＴＧＦ－β、神経成長因子、アルブミン、ＨＩＶ Ｔａｔペプチド、ＲＧＤペプチド、およびインスリンおよび他のものが挙げられる。
ナノ粒子中の本発明の製剤は、細胞の内部への成分（ｉ）および／または（ｉｉ）のアクセスを促進することを意図するものではないかまたは単に意図するものではないが、分解から成分（ｉ）および／または（ｉｉ）を保護することならびに／あるいは当該ナノ粒子が目的の臓器を標的にするのを促進することは意図されることは理解されるであろう。
一実施例において、当該ナノ粒子は、生分解性ポリマー、例えば、ポリ（ブチルシアノアクリレート）（ＰＢＣＡ）など、で作成され得る。元素ナノ粒子の例としては、炭素ナノ粒子および酸化鉄ナノ粒子が挙げられ、それらは、オレイン酸（ＯＡ）－Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（Ｒ）でコーティングすることができる。このアプローチにおいて、薬物（例えば、疎水性または水不溶性薬物）は、ナノ粒子内に装入される。他のナノ粒子は、シリカで作製される。
ナノ粒子は、任意の有用なポリマーから形成することができる。ポリマーの例としては、生体分解性ポリマー、例えば、ポリ（ブチルシアノアクリレート）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ－ｓ－カプロラクトン、ポリ（コハク酸ブチレン）、ポリ（コハク酸エチレン）、およびポリ（ｐ－ジオキサノン）など；ポリ（エチレングリコール）；ポリ－２－ヒドロキシエチルメタクリレート（ポリ（ＨＥＭＡ））；コポリマー、例えば、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）、ポリ（ラクチド）－ポリ（エチレングリコール）、ポリ（ポリ（エチレングリコール）シアノアクリレート－コヘキサデシルシアノアクリレート、およびポリ［ＨＥＭＡ－コ－メタクリル酸］など；タンパク質、例えば、フィブリノゲン、コラーゲン、ゼラチン、およびエラスチンなど；ならびに多糖、例えば、アミロペクチン、アミロース、およびキトサンなど、が挙げられる。
他のナノ粒子としては、固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）が挙げられる。固体脂質ナノ粒子のための脂質分子の例としては、ステアリン酸および修飾されたステアリン酸例えば、ステアリン酸－ＰＥＧ２０００など；大豆レシチン；および乳化ワックスが挙げられる。固体脂質ナノ粒子は、場合により、他の成分、例えば、界面活性物質、例えば、Ｅｐｉｃｕｒｏｎ（登録商標） ２００、ポロクサマー１８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標） Ｆ６８）Ｂｒｉｊ７２、Ｂｒｉｊ７８、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）など；ならびに塩、例えば、タウロコール酸ナトリウムなど、を含むことができる。薬剤は、リポソームに対して説明したいつくかの方法によって、固体脂質ナノ粒子中に導入することができ、そのような方法は、さらに、高圧ホモジナイゼーション、およびマイクロエマルションの分散液を含むことができる。
ナノ粒子は、ナノメートルサイズのミセルも含むことができる。ミセルは、本明細書において説明される任意のポリマーから形成することができる。ミセルを形成するための例示的ポリマーとしては、ブロックコポリマー、例えば、ポリ（エチレングリコール）およびポリ（ε－カプロラクトン）（例えば、ε－カプロラクトンおよびα－メトキシ－ω－ヒドロキシ－ポリ（エチレングリコール））のポリマーを含むａＰＥＯ－ｂＰＣＬブロックコポリマー）など、が挙げられる。
ある特定の実施形態において、ナノ粒子の特性は、界面活性剤でコーティングすることよって変更される。任意の生体適合性界面活性剤、例えば、ポリソルベート界面活性剤
例えば、ポリソルベート２０、４０、６０、および８０（Ｔｗｅｅｎ８０）など；Ｅｐｉｃｕｒｏｎ（登録商標）２００；ポロクサマー界面活性剤、例えば、１８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８）ポロクサマー９０８および１５０８など；ならびにＢｒｉｊ界面活性剤、例えば、Ｂｒｉｊ７２およびＢｒｉｊ７８など、が使用され得る。
ナノ粒子は、場合により、例えば、親水性ポリマー基を表面に共有結合させることによって、または、そのような親水性ポリマー基を有するポリマー（例えば、ポリ［メトキシポリ（エチレングリコール）シアノアクリレート－コ－ヘキサデシルシアノアクリレート］）を使用することによって、親水性ポリマー基（例えば、ポリ（エチレングリコール）またはポリ（プロピレングリコール））を含むように修飾することができる。ナノ粒子は、場合により、架橋させることもでき、それは、タンパク質ベースのナノ粒子の場合に特に有用であり得る。
別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、ナノエマルションである。「ナノエマルション」は、本明細書において使用される場合、液滴の少なくともいくらかがナノメートルサイズの範囲の直径を有するような液滴（または粒子）のコロイド分散液を意味する。当該ナノエマルションは、水相中におけるω－３、－６、または－９脂肪酸リッチなオイルで構成され、ならびに界面膜を生成する両親媒性界面活性剤によって熱動力学的に安定化され、通常、約８０～２２０ｎｍの範囲内の液滴直径による、高剪断微少溶液操作（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）プロセスを使用して生成される。
本発明の治療用途
ある態様において、本発明は、医学分野での使用のための本発明の組み合わせ物または医薬組成物に関する。
さらなる態様において、本発明は、癌の予防および／または治療における使用のための本発明の組み合わせ物または医薬組成物に関する。
別の態様において、本発明は、癌の予防および／または治療のための医薬の調製のための本発明の組み合わせ物または医薬組成物を意味する。
別の態様において、本発明は、治療有効量の本発明の組み合わせ物または医薬組成物をそれを必要とする対象に投与する工程を含む、癌の予防および／または治療のための方法も意味する。
別の態様において、本発明は、腫瘍部位にＴ細胞を動員することによる癌の予防および／または治療のための方法であって、治療有効量の本発明の組み合わせ物または医薬組成物をそれを必要とする対象に投与する工程を含む方法も意味する。ある実施形態において、腫瘍部位へ動員されるＴ細胞は、活性化されたＣＤ４Ｔ細胞であり、より詳細にはＣＤ４＋ＰＤ－１＋Ｔ細胞であり、さらにより詳細にはＣＤ４＋ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３－Ｔ細胞である。別の実施形態において、腫瘍部位へ動員されるＴ細胞は、ＣＤ４＋ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、腫瘍部位へ動員されるＴ細胞は、ＣＤ８Ｔ細胞であり、より詳細にはＣＤ８＋ＰＤ－１＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、腫瘍部位へ動員されるＴ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、腫瘍部位へ動員されるＴ細胞は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、腫瘍部位へ動員されるＴ細胞は、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、特にＴｈ１／Ｔｈ１７ＰＤ－１＋細胞、より詳細にはＣＤ４＋ＩＦＮ＋ＩＬ－１７＋Ｔ細胞さらにより詳細にはＣＤ４＋ＰＤ－１＋ＩＦＮ＋ＩＬ－１７＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、腫瘍部位へ動員される細胞は、ＣＤ４５＋細胞である。
別の態様において、本発明は、Ｔ制御細胞の増殖を引き起こすことによる癌の予防および／または治療のための方法であって、治療有効量の本発明の組み合わせ物または医薬組成物をそれを必要とする対象に投与する工程を含む方法も意味する。
別の態様において、本発明は、腫瘍内ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞によってＩＦＮ－γの産生を引き起こすことによる癌の予防および／または治療のための方法であって、治療有効量の本発明の組み合わせ物または医薬組成物をそれを必要とする対象に投与する工程を含む方法も意味する。
好ましい実施形態において、本発明による予防方法または治療方法は、Ｏｍｏｍｙｃを含むポリペプチド、その機能的に同等な改変体、コンジュゲート、または融合タンパク質、を含む組み合わせ物または医薬組成物の直接使用を伴う。したがって、好ましい実施形態において、本発明による予防方法または治療方法は、Ｏｍｏｍｙｃを含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体または融合タンパク質をコードする核酸の投与、あるいはこの核酸をコードするベクター、または当該核酸を含む細胞の投与を伴わない。
「予防」は、疾患の初期または早期における、またはその発症も防ぐための、本発明の組み合わせ物または組成物の投与として理解される。
用語「治療」は、臨床兆候が現れる前または後に疾患の進行を制御するための本発明の組み合わせ物または組成物の投与を示すために使用される。疾患の進行の制御は、これらに限定されるわけではないが、症状の軽減、疾患の持続期間の減少、病的状態の固定化（特に、さらなる障害を避ける）、疾患の進行の遅延、病的状態の改善、および、寛解（部分的および完全の両方）などの、有益なまたは所望の臨床結果として理解される。疾患の進行の制御は、治療が適用されなかった場合に予想される生存と比較した生存の延長も伴う。好ましい実施形態において、疾患の進行の制御は、健康な肺／胸郭容積比として測定される。別の実施形態において、疾患の進行の制御は、腫瘍体積の減少として測定される。
用語「癌」は、非制御の細胞分裂（または、生存またはアポトーシス抵抗性の増大）、隣接する他の組織に侵入する細胞の能力（浸潤）、またはリンパ管および血管を通じた細胞が通常は位置されていない身体の他のエリアへの広がり（転移）によって特徴づけられる疾患を指す。腫瘍が浸潤および転移によって広がることができるか否かに応じて、腫瘍は、良性または悪性のどちらかに分類され、良性腫瘍は、浸潤または転移によって広がることができない腫瘍であり、すなわち、それらは、局所的に成長するだけであり、その一方で、悪性腫瘍は、浸潤および転移によって広がることができる腫瘍である。本発明による方法は、局所の悪性腫瘍の治療にとって有用である。
一実施形態において、癌としては、これらに限定されるわけではないが、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病）、ヘアリー細胞白血病、真正赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病または非ホジキン病）、ＡＩＤＳ関連白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、重鎖病、および固形腫瘍、例えば、肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、結腸癌腫、膵癌、乳癌、胆道癌、食道癌、卵巣癌、前立腺癌、口腔癌例えば、扁平上皮癌など、基底細胞癌種、腺癌、汗腺癌種、脂腺癌種、乳頭癌種、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌種、髄様癌種、気管支原生癌種、腎細胞癌種、肝細胞癌、胆汁腺管癌種、奇形腫、絨毛癌種、精上皮腫、胎生期癌種、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌腫、上皮内新生物、例えば、ボーエン病およびパジェット病など、神経膠腫、神経膠腫、星状細胞腫、多形膠芽腫（ＧＢＭ、グリア芽腫としても知られる）、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、稀突起神経膠腫、神経線維腫、神経線維肉腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜胚種細胞腫）など、が挙げられる。
いくつかの実施形態において、当該癌は、神経膠腫、星状細胞腫、多形膠芽腫（ＧＢＭ、グリア芽腫としても知られる）、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、稀突起神経膠腫、神経線維腫、神経線維肉腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、または網膜胚種細胞腫である。
いくつかの実施形態において、当該癌は、聴神経腫、星状細胞腫、（例えば、グレードＩ－毛様細胞性星状細胞腫、グレードＩＩ－低グレード星状細胞腫、グレードＩＩＩ－未分化星状細胞腫、またはグレードＩＶ－グリア芽腫（ＧＢＭ））、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、脳幹膠腫、上衣細胞腫、混合膠腫、視神経膠腫、上衣下細胞腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、稀突起神経膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性（ＰＮＥＴ）腫瘍、または神経線維腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、一般的に成人より小児において見出されるタイプ、例えば、脳幹膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、若年性毛細胞性星細胞腫（ＪＰＡ）、髄芽腫、視神経膠腫、松果体腫瘍、原始神経外胚葉腫瘍（ＰＮＥＴ）、またはラブドイド腫瘍など、である。いくつかの実施形態において、患者は成人である。いくつかの実施形態において、患者は、小児または小児科患者である。
別の実施形態において、癌としては、これらに限定されるわけではないが、中皮腫、肝胆道（肝臓および胆道管）、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭頚部の癌、皮膚または眼内の黒色腫、卵巣癌、大腸癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、消化管癌（胃、結腸直腸、および十二指腸）、子宮癌、卵管癌、子宮内膜の癌腫、頚の癌腫、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、精巣癌、慢性または急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または輸尿管の癌、腎細胞癌種、腎盂癌、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹膠腫、脳下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜胚種細胞腫、または先述の癌の１つまたは複数の組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、当該癌は、肝細胞癌、卵巣癌、上皮性卵巣癌、または卵管癌；乳頭状漿液嚢胞腺癌または子宮乳頭状漿液性癌（ＵＰＳＣ）；前立腺癌；精巣癌；胆嚢癌；肝臓胆管癌；軟部組織および骨の滑膜肉腫；横紋筋肉腫；骨肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；甲状腺未分化癌；副腎皮質腺腫；膵癌；膵性腺管癌または膵臓腺癌；消化管／胃（ＧＩＳＴ）癌；リンパ腫；頭頚部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）；唾液腺癌；神経膠腫または脳腫瘍；神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）；ワルデンストレームマクログロブリン血症；または髄芽腫から選択される。
いくつかの実施形態において、当該癌は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝芽腫、大腸癌、直腸癌、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵管癌、乳頭状漿液嚢胞腺癌、子宮乳頭状漿液性癌（ＵＰＳＣ）、肝臓胆管癌、軟部組織および骨の滑膜肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、甲状腺未分化癌、副腎皮質腺腫、膵癌、膵性腺管癌、膵臓腺癌、神経膠腫、神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、または髄芽腫から選択される。
いくつかの実施形態において、癌は、固形腫瘍、例えば、肉腫、癌腫、またはリンパ腫など、である。固形腫瘍は一般的に、典型的には包嚢または液体領域を含まない異常な組織の塊を含む。いくつかの実施形態において、当該癌は、腎細胞癌種、または腎癌；肝細胞癌（ＨＣＣ）または肝芽腫、または肝臓癌；黒色腫；乳癌；結腸直腸癌、または結直腸癌；大腸癌；直腸癌；肛門癌；肺癌、例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）または肺小細胞癌（ＳＣＬＣ）など；卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣癌腫、または卵管癌など；乳頭状漿液嚢胞腺癌または子宮乳頭状漿液性癌（ＵＰＳＣ）；前立腺癌；精巣癌；胆嚢癌；肝臓胆管癌；軟部組織および骨の滑膜肉腫；横紋筋肉腫；骨肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；甲状腺未分化癌；副腎皮質癌；膵癌；膵性腺管癌または膵臓腺癌；消化管／胃（ＧＩＳＴ）癌；リンパ腫；頭頚部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）；唾液腺癌；神経膠腫、または脳腫瘍；神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）；ワルデンストレームマクログロブリン血症；または髄芽腫から選択される。
いくつかの実施形態において、当該癌は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝芽腫、大腸癌、直腸癌、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣癌腫、卵管癌、乳頭状漿液嚢胞腺癌、子宮乳頭状漿液性癌（ＵＰＳＣ）、肝臓胆管癌、軟部組織および骨の滑膜肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、甲状腺未分化癌、副腎皮質癌、膵癌、膵性腺管癌、膵臓腺癌、神経膠腫、神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、または髄芽腫から選択される。
いくつかの実施形態において、当該癌は、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。いくつかの実施形態において、当該癌は、肝芽腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、大腸癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、直腸癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、卵巣癌、または卵巣癌腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、上皮性卵巣癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、卵管癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、乳頭状漿液嚢胞腺癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、子宮乳頭状漿液性癌（ＵＰＳＣ）である。いくつかの実施形態において、当該癌は、肝臓胆管癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、軟部組織および骨の滑膜肉腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、横紋筋肉腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、骨肉腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、甲状腺未分化癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、副腎皮質癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、膵癌、または膵性腺管癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、膵臓腺癌である。いくつかの実施形態において、当該癌は、神経膠腫である。いくつかの実施形態において、当該癌は、悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）である。いくつかの実施形態において、当該癌は、神経線維腫症－１関連ＭＰＮＳＴである。いくつかの実施形態において、当該癌は、ワルデンストレームマクログロブリン血症である。
いくつかの実施形態において、当該癌は、髄芽腫である。いくつかの実施形態において、癌は、ウイルス関連癌、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）関連固形腫瘍、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）－１６陽性不治固形腫瘍（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎｃｕｒａｂｌｅ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒ）、および、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）によって引き起こされ、白血病細胞におけるＨＴＬＶ－Ｉのクローン組み込みによって特徴付けられるＣＤ４＋Ｔ細胞性白血病の非常に攻撃的な形態である、成人型Ｔ細胞白血病（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ｓｔｕｄｙ／ ＮＣＴ０２６３１７４６を参照されたい）；ならびに胃癌におけるウイルス関連腫瘍、上咽頭癌、子宮頸癌、腟癌、外陰部癌、頭頚部の扁平上皮癌、およびメルケル細胞癌などである（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ｓｔｕｄｙ／ＮＣＴ０２４８８７５９を参照されたく；また、ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ｓｔｕｄｙ／ＮＣＴ０２４０８８６； ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ ＮＣＴ０２４２６８９２も参照されたい）。
他の癌は、当業者に既知であろう。
いくつかの実施形態において、癌は、黒色腫癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌である。
別の実施形態において、当該癌は、グリア芽腫である。
グリア芽腫およびグレードＩＶ星状細胞腫としても知られる「グリア芽腫」は、脳内で始まる最も一般的で最も攻撃的な癌である。
好ましい実施形態において、当該癌は、肺癌である。
用語「肺癌」または「肺腫瘍」は、肺の組織での無秩序な細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物の生理的状態を意味する。用語「肺癌」は、肺の任意の癌を意味することが意図され、ならびに非小細胞肺癌および小細胞肺癌を含む。ある実施形態において、肺癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。別の実施形態において、肺癌は、肺小細胞癌（ＳＣＬＣ）である。
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）なる用語は、本明細書で使用される場合、一緒に分類された異種疾患の群を意味し、というのも、彼らの予後と管理はおよそ同じであるためであり、ならびにその例として、世界保健機構／国際肺癌学会（Ｔｒａｖｉｓ ＷＤ ｅｔ ａｌ． Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｌｕｎｇ ａｎｄ ｐｌｅｕｒａｌ ｔｕｍｏｕｒｓ． ３ｒｄ ｅｄ． Ｂｅｒｌｉｎ： Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， １９９９）の組織学的分類に従って、以下：
（ｉ）扁平上皮癌（ＳＣＣ）、ＮＳＣＬＣの３０％から４０％を占め、より大きい呼吸管において発症するが、よりゆっくりと成長し、それは、これらの腫瘍のサイズが診断の際に変化することを意味する。
（ｉｉ）腺癌、ＮＳＣＬＣの最も一般的なサブタイプであり、ＮＳＣＬＣの５０％から６０％を占め、肺の気体交換表面の近くで発症し、ならびにサブタイプである気管支肺胞上皮癌を含み、それは、治療に対して異なる反応を有する場合がある。
（ｉｉｉ）大細胞癌、肺の表面近くで成長する急激に成長する形態である。それは主として除外診断であり、より多くの調査が完了している場合、それは、通常、扁平上皮細胞癌または腺癌に再分類される。
（ｉｖ）腺扁平細胞癌、２つのタイプの細胞：扁平細胞（特定の臓器を内張りする薄くて平坦な細胞）および腺様細胞を含む癌のタイプである。
（ｖ）多形性、肉腫様、または、肉腫性要素を有する癌腫。これは、組織学的不均一ならびに上皮および間葉の分化における連続性を反映するまれな腫瘍の群である。
（ｖｉ）カルチノイド腫瘍、成長が遅い神経内分泌肺腫瘍であり、神経系による刺激に対応してホルモンを放出することができる細胞において発症する。
（ｖｉｉ）唾腺タイプの癌腫、肺の大きい気道内に位置された唾液腺細胞において発症する。
（ｖｉｉｉ）未分類の癌腫、前述の肺癌カテゴリのいずれにも収まらない癌を含む。
が挙げられる。
特定の実施形態において、当該ＮＳＣＬＣは、肺の扁平上皮癌、肺の大細胞癌、および肺の腺癌から選択される。
肺小細胞癌（ＳＣＬＣ）なる用語は、本明細書で使用される場合、独特で厳密な形態学的特徴を有する小細胞の増殖を意味し、関連する内分泌性／傍腫瘍性症候群をこの腫瘍に与える濃密な神経分泌顆粒を含む。ほとんどの症例が、より大きい気道（一次および二次気管支）において生じる。これらの癌は急速に成長し、疾患の経過中の早期に広がる。
さらにより好ましい実施形態において、肺癌は、腺癌、より好ましくはＫＲａｓ駆動肺腺癌、好ましくは、ＫＲＡＳ遺伝子における変異に関連する癌である。一実施形態において、ＫＲＡＳ遺伝子における当該変異は、位置１２のグリシン、位置１３のグリシン、または位置６１のグルタミンにおける変異である。より好ましい実施形態において、当該変異は、Ｇ１２Ｓ変異、Ｇ１２Ｖ変異、Ｇ１２Ｄ変異、Ｇ１３Ｄ変異、Ｇ１２Ｃ変異、Ｇ１２Ｒ変異、Ｇ１２Ｆ変異、Ｇ１２Ｉ変異、Ｇ１３Ｃ変異、Ｇ１３Ｒ変異、またはＱ６１Ｌ変異からなる群から選択される。好ましい実施形態において、当該変異は、Ｇ１２Ｄ変異である。別の実施形態において、当該肺癌は、ＫＲａｓＧＤ１２／ｐ５３駆動肺癌、好ましくはＫＲａｓＧＤ１２／ｐ５３駆動ＮＳＣＬＣである。
ある実施形態において、癌は、一次腫瘍である。用語「一次腫瘍」は、本明細書で使用される場合、位置または臓器において生じた腫瘍であって、その位置に存在するが別の位置へ転移はしていない腫瘍を意味する。
別の実施形態において、当該癌は、癌転移である。本発明との関連において、「転移」は、癌が生じた臓器から別の臓器への癌の伝播として理解される。それは、一般的に、血液またはリンパ系を通じて生じる。癌細胞が広がり、新たな腫瘍を形成する場合、後者は、二次腫瘍または転移性腫瘍と呼ばれる。二次腫瘍を形成する癌細胞は、元の腫瘍の癌細胞と同様である。例えば、乳癌が肺に広がった（転移した）場合、二次腫瘍は、悪性乳癌細胞で形成される。肺の疾患は、転移性乳癌であって、肺癌ではない。本発明者らは、本発明の組み合わせ物または組成物は、癌が、Ｍｙｃタンパク質の発現または活性の増加を示すか否かにかかわらず、細胞増殖を低下させることができることも観察した。好ましい実施形態において、予防または治療される癌は、Ｍｙｃ誘導癌である。
ある実施形態において、当該癌は、固形腫瘍である。
本発明の化合物の組み合わせ物および癌のタイプの全ては、本発明に含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組み合わせ物または組成物は、腫瘍の成長の停止を生じる。いくつかの実施形態において、本発明の組み合わせ物または組成物は、治療前の腫瘍のサイズに対して、少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７５％、９０％、または９９％の腫瘍サイズ（例えば、体積または質量）の減少を生じる。いくつかの実施形態において、本発明の組み合わせ物または組成物は、治療前の腫瘍の量に対して、少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７５％、９０％、または９９％の、患者における腫瘍の量の減少を生じる。
「対象」は、本明細書で使用される場合、癌を有するかまたは癌の症状を示すかまたは癌を患うリスクまたは癌の症状を示すリスクがある任意の動物を含む。好適な対象（患者）としては、実験室動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはモルモットなど）、農場動物、および家畜動物またはペット（例えば、ネコまたはイヌなど）が挙げられる。非ヒト霊長動物、好ましくはヒト患者が含まれる。好ましくは、当該対象は、哺乳動物、最も好ましくはヒトである。
癌の予防および／または治療における使用のための当該組み合わせ物または組成物は、癌の治療または重篤度の低下にとって効果的な任意の量および任意の投与経路を使用して投与され得る。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、および全身状態、疾患または状態の重篤度、特定の薬剤、投与様式などに応じて、対象ごとに変わるであろう。本発明の化合物は、好ましくは、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために単位投薬形態において製剤化される。表現「単位投薬形態」は、本明細書で使用される場合、治療される患者にとって適切な物理的に別々に分けられた１回分の薬剤を意味する。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内において主治医によって決定されるであろう。任意の特定の患者または有機体のための特定の有効用量レベルは、様々な要因、例えば、治療される障害および障害の重症度；用いられた特定の化合物の活性；用いられた特定の組成物、患者の年齢、体重が、健康全般、性別、および食物；投与のタイミング、投与の経路、および用いられた特定の化合物の排泄速度；治療の継続期間；用いられる特定の化合物と組み合わせて、またはそれらと同時に使用される薬物、ならびに医学分野において周知の要因など、に依存するであろう。
好ましい実施形態において、本発明の成分（ｉ）、好ましくはポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、またはコンジュゲートは、（治療効果を達成するため）癌の治療における当該組み合わせ物または組成物の癌免疫剤と相乗効果的に相互作用する。
特に、より好ましい実施形態において、癌の予防および／または治療における使用のための当該組み合わせ物または医薬組成物は、当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、またはコンジュゲートが、癌の治療において癌免疫剤と相乗効果的に相互作用する量である、組み合わせ物または医薬組成物である。
用語「相乗作用」または「相乗効果的に相互作用する」は、相互互換的に使用される。相乗効果は、インビトロでの個々の薬剤の実際の効果を合計することによって予想される相加効果を超える効果である。インビボにおいて、相乗効果は、生理的効果であり、特に、インビボでの個々の薬剤の実際の効果を合計することによって予想される相加効果を超える効果である治療効果である。
したがって、２種類の薬剤が投与される場合、併用される薬剤による実際の効果が、個々の薬剤による実際の治療効果を合計することによって予想されるのを上回る場合に、それらは一緒に、測定可能な生理的効果、特に治療効果を提供する。特に、第１薬剤が単独で、いくらかの測定可能な効果を提供し、第２薬剤が単独で、いくらかの測定可能な効果を提供し、当該２種の薬剤が一緒に、両方の個別の薬剤の合計によって提供される効果を上回る測定可能な効果を提供する場合に、相乗効果が提供される。より詳しくは、第１薬剤が単独で、測定可能な効果を全く提供せず、第２薬剤が単独で、いくらかの測定可能な効果を提供し、当該２種の薬剤が一緒に、第２薬剤単独によって提供される効果を上回る測定可能な効果を提供する場合に、相乗効果が提供される。さらにより詳しくは、第１薬剤単独でも、第２薬剤単独でも、測定可能な効果を全く提供しないが、当該２種の薬剤が一緒に、測定可能な効果を提供する場合に、相乗効果が提供される。成分（ｉ）および（ｉｉ）は相乗効果的に作用するため、本発明の組み合わせ物または組成物の成分（ｉ）および／または（ｉｉ）の量は、治療薬としてそれらの一方のみを用いる単独療法において必要とされるより少なくあり得る。好ましくは、これらの組み合わせ物または組成物において、一方または他方の治療薬の０．０１～１．０００μ／ｋｇ体重／日の間の投与量を、投与することができる。
当該組み合わせ物または組成物中に存在する当該治療薬の量は、活性薬剤としてその治療薬を含む組成物において通常投与される量以下であり得る。好ましくは、本組成物中の治療薬の量は、唯一の治療的活性薬剤としてその薬剤を含む組成物中に通常存在する量の約５０％から１００％の範囲であろう。いくつかの実施形態において、１つの治療薬は、その薬剤が通常投与される量の約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％の投与量において投与される。本明細書において使用される場合、語句「通常投与される」は、ＦＤＡ承認治療薬がＦＤＡラベル挿入ごとに投薬に対して承認される量を意味する。
本発明の組み合わせ物または組成物は、既知の治療プロセスとの組み合わせにおいて、例えば、化学療法、放射線治療法、免疫療法、光線療法、外科的介入、ホルモン、またはこれらの組み合わせとの組み合わせにおいても使用され得る。
好ましい実施形態において、癌の治療および／または予防における使用のための当該組み合わせ物または医薬組成物は、肺癌、好ましくはＮＳＣＬＣ、より好ましくはＫＲａｓ駆動癌、さらにより好ましくはＫＲＡＳＧ１２Ｄ駆動癌の治療用であり、この場合、第１成分、好ましくは配列番号１の配列を含むポリペプチド、より好ましくは配列番号４からなるポリペプチド、は、鼻腔内投与され、ならびに第２成分、好ましくはＴ細胞活性化阻害するタンパク質のアンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ－１または抗ＣＴＬＡ－４、さらにより好ましくは抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体、は、全身投与、好ましくは非経口投与、さらにより好ましくは腹腔内投与される。好ましい実施形態において、第１成分は、週４回投与される。好ましい実施形態において、第２成分は、週１回投与される。より好ましい実施形態において、第１成分は、週４回投与され、第２成分は、週１回投与される。ある実施形態において、第１成分および第２成分は、連続して投与され、すなわち、第１成分の投与は、第２成分の投与を開始する前に中止される。好ましい実施形態において、当該治療は、少なくとも４週間継続する。好ましい実施形態において、第１成分および第２成分は、異なる日に投与される。好ましい実施形態において、第１成分は、１日目、２日目、４日目、および５日目に投与され、第２成分は、３日目に投与される。併用投与の好ましい実施形態において、第１成分および第２成分は、異なる日に投与され、好ましくは、第１成分は、１日目、２日目、４日目、および５日目に投与され、第２成分は、３日目に投与される。好ましい実施形態において、成分（ｉ）と成分（ｉｉ）との間の比率は、５０：１から１：５０、特に、２０：１から１：２０、１：１０から１０：１、または５：１から１：５、好ましくは１：１から１：５、より好ましくは１：１から１：３の範囲であり得る。より好ましい実施形態において、当該比率は、１：１から１：１．５、好ましくは１：１．３から１：１．４の範囲であり得、より好ましくは１：１．３４であり得る。別の好ましい実施形態において、当該比率は、１：１から１：２．８、好ましくは１：２．６から１：２．７の範囲であり、より好ましくは１：２．６７である。これらの比率は、好ましくはｗ／ｗ比である。
好ましい実施形態において、癌の治療および／または予防における使用のための当該組み合わせ物または医薬組成物は、肺癌、好ましくはＮＳＣＬＣ、より好ましくはＫＲａｓ駆動癌、さらにより好ましくはＫＲＡＳＧ１２Ｄ駆動癌、好ましくはＫＲＡＳＧ１２Ｄ／ｐ５３駆動癌、の治療用であり、この場合、第１成分、好ましくは配列番号１の配列を含むポリペプチド、より好ましくは配列番号４からなるポリペプチド、は、静脈内投与され：ならびに第２成分、好ましくはＴ細胞活性化阻害するタンパク質のアンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ－１または抗ＣＴＬＡ－４、さらにより好ましくは抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体、さらにより好ましくは抗ＰＤ－１抗体、は、全身投与、好ましくは非経口投与、さらにより好ましくは腹腔内投与される。好ましい実施形態において、第１成分は、週２回投与される。好ましい実施形態において、第２成分は、週１回投与される。より好ましい実施形態において、第１成分は、週２回投与され、第２成分は、週１回投与される。ある実施形態において、第１成分および第２成分は、連続して投与され、すなわち、第１成分の投与は、第２成分の投与を開始する前に中止される。別の実施形態において、第１成分および第２成分は、好ましくは週１回、同時投与される。好ましい実施形態において、当該治療は、少なくとも３週間、好ましくは少なくとも４週間継続される。好ましい実施形態において、第１成分および第２成分は、異なる日に投与される。好ましい実施形態において、第１成分は、２日目および５日目に投与され、ならびに第２成分は、３日目に投与される。併用投与の好ましい実施形態において、第１成分および第２成分は、異なる日に投与され、好ましくは、第１成分は、２日目および５日目に投与され、第２成分は、３日目に投与される。より好ましい実施形態において、第１成分は、第２成分を投与する前に、ある期間、好ましくは少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、より好ましくは１０日間、投与される。ある実施形態において、第１成分の投与は、第２化合物の投与を開始する前に中止される。好ましい実施形態において、成分（ｉ）と成分（ｉｉ）との間の比率は、５０：１から１：５０、特に２０：１から１：２０、１：１０から１０：１、または５：１から１：５の範囲であり得る。別の特定の実施形態において、量の間の比率は、３０：１から５：１、好ましくは３０：１から８：１、より好ましくは２５：１から１５：１、より好ましくは２０：１から１０：１の範囲である。ある実施形態において、当該比率は、２０：１である。別の実施形態において、当該比率は、１０：１である。これらの比率は、好ましくはｗ／ｗ比である。
本発明の組み合わせ物の全ての実施形態は、本発明の治療方法にも適用可能である。
製造物品およびキット
本開示は、１または複数の容器において、本明細書において開示される組み合わせ物または医薬組成物のうちのいずれか一方を含む製造物品も提供する。いくつかの実施形態において、当該製造物品は、癌の予防および／または治療のために当該製造物品の組成物を組み合わせるためおよび／または使用するために、例えば、小冊子、印刷された取扱説明書、ラベル、またはユーザー（例えば、販売業者または最終ユーザー）を対象とする添付文書、を含む。
いくつかの実施形態において、当該製造物品は、例えば、ボトル、バイアル瓶、カートリッジ、箱、注射器、注入器、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ラベルは、本明細書において開示される方法による製造物品における当該組み合わせ物または当該医薬組成物の使用または投与を意味する。いくつかの態様において、ラベルは、例えば、使用のための投与計画、癌を治療、予防、または改善するための投与計画などを示す。
本願全体を通して引用され得る全ての列記された参考文献（参考文献、特許、特許出願、およびウェブサイトを含む）の内容は、任意の目的のために、そこで引用される参考文献のままに参照によりその全体が本明細書に明確に組み入れられる。
本明細書で使用される全ての用語は、特に明記しない限り、当技術分野で知られているそれらの普通の意味において理解されるであろう。本願において使用されるある特定の用語に対する他のより特異的な定義は、以下において詳しく説明され、ならびに別の明確に指定された定義がより広い定義を提供しない限り、説明および特許請求の範囲全体を通して一様に適用することが意図される。説明および特許請求の範囲全体を通して、言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および当該言葉の変形は、他の技術的特徴、添加剤、成分、または工程を排除することを意図しないその上、言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）の場合を包含する。本発明のさらなる目的、利点、および特徴は、説明を熟読すれば、当業者に明らかとなるか、または本発明の実施によって学習され得る。その上、本発明は、本明細書において説明される特定の実施形態の全ての可能な組み合わせを網羅する。
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明確に否定されない限り、複数の指示対象を含む。用語「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに用語「１つまたは複数」および「少なくとも１つ」は、本明細書において相互互換的に使用することができる。その上、本明細書において使用される「および／または」は、他方を伴うかまたは伴わない２つの指定された特徴または構成要素のそれぞれの特定の開示として理解される。したがって、用語「および／または」は、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」のような語句において使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（のみ）、および「Ｂ」（のみ）を含むことが意図される。同様に、用語「および／または」は、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句において使用される場合、以下の態様：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；Ａ、またはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（のみ）；Ｂ（のみ）；およびＣ（ａのみ）、のそれぞれを包含することが意図される。用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、本明細書および特許請求全体を通してある数値に関連して使用される場合、当業者に対して精度、親密度、および許容性の区間を指示する。一般的に、精度のそのような区間は、１５％±である。特に明記されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。単位、接頭語、および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）に受け入れられた形態において指示される。数値範囲は、当該範囲を定義する数値を含む。特に明記しない限り、アミノ酸配列は、カルボキシ方向にアミノにおいて左から右へと記述される。本明細書において提供される見出しは、本開示の様々な態様の限定ではなく、それらは、全体として、本明細書を参照することにより得ることができる。従って、このすぐ後に定義される用語は、本明細書を参照することによって、より完全に定義される。
本発明は、下記の実施例によって説明され、当該実施例は、単なる例示と見なされ、本発明の範囲の限定とは見なされない。
Ｏｍｏｍｙｃの作製および精製
Ｎ末端にメチオニンを含む配列番号４のＯｍｏｍｙｃペプチド配列を、逆転写し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）での発現に対してコドン最適化し、ｐＥＴ３ａ発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）においてクローンし、ならびにＪ．－Ｆ． Ｎａｕｄ ｅｔ ａｌ． ２００３． Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ， ３２６：１５７７－１５９５； Ｆ．－Ｏ． ａｎｄ Ｍｃｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ． ２００９． Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ， ２２：２６１－２６９に記載のＭａｘ°精製プロトコルから適合させたプロトコルを使用してＢＬ２１（ＤＥ３）アラビノース誘導性（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標））菌株から精製した。得られた精製コンストラクトは、配列番号４のポリペプチドであった。各精製コンストラクトの同一性を、質量分析法およびウェスタンブロット分析によって確認した。Ｏｍｏｍｙｃをカチオン性交換クロマトグラフィによって精製し、純度を、質量スペクトル分析、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および紫外分光法によって確認した。インビボ投与の場合、ＴｏｘｉｎＥｒａｓｅｒ（商標） Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ Ｒｅｍｏｖａｌ Ｋｉｔ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を使用してエンドトキシンを除去するために、追加の精製工程を実施した。エンドトキシン濃度を、Ｐｉｅｒｃｅ（登録商標） ＬＡＬ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して定量化した。緩衝液交換を、３ｋＤａ排除限界を有するアミコンウルトラ（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ）－１５（ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ）において行った。
Ｏｍｏｍｙｃ鼻腔内治療は特異的に腫瘍部位へのＴリンパ球の動員を増加させた
ＫＲａｓＬＳＬ－Ｇ１２Ｄ／＋マウスをＴｒａｎｓｎｅｔｙｘによってジェノタイピングし、上記で説明したように、雄および雌の両方において肺腫瘍の生成を実施した（Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｅ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ， ２００１． １５（２４）： ｐ． ３２４３－８）。動物は、混合Ｃ５７ＢＬ／６ＪｘＦＶＢＮバックグラウンドにおいて維持した。１時点および条件あたり最低５匹のマウスをランダマイズし、Ａｄｅｎｏ－Ｃｒｅ感染後、マウスが、マイクロＣＴによって検出可能な腫瘍を示した後、１４～１６週間の治療を開始した。動物に、イソフルラン（ＡｂｂＶｉｅ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｓ．Ｌ．Ｕ．）を吸入させて麻酔し、Ｏｍｏｍｙｃポリペプチド（２．４ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ｐＨ６．５の１０ｍＭ酢酸ナトリウム）のいずれかにより、１週間または４週間のどちらかにおいて、１週間あたり４回（１１０１１００）による３０μＬの総量において、鼻腔内により治療した。
エンドポイントにおいて、マウスを安楽死させ、肺を切除し、気管を通して４％ＰＦＡで灌流し、一晩かけて固定させ、７０％エタノールに移し、パラフィンに包埋し、４μｍの切片を切断した。ＣＤ３免疫蛍光のため、ｐＨ６．０の０．０１Ｍクエン酸緩衝液において４００Ｗのマイクロ波で２０分加熱することによって、抗原回復を実施した。３％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０において１時間ブロッキング処理した後、Ｄａｋｏ Ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ希釈剤（Ｄａｋｏ Ｓ２０２２）において１／１００に希釈した抗ＣＤ３（Ｄａｋｏ Ａ０４５２）を用いて、スライドを４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳ洗浄後、ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ－１１００８）を用いて、スライドをインキュベートし、１／１００００に希釈したＤＡＰＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｄ１３０６）によって染色し、ＰＢＳで洗浄し、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｄａｋｏ Ｓ３０２３）によって取り付けた。ニコンＣ２＋共焦点顕微鏡およびＮＩＳ－ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して画像を撮影した。代表的な腫瘍の写真をマウス１匹あたり５枚撮影し、１エリアあたりのＣＤ３＋細胞の平均が示される。
抗ＣＤ３による免疫染色により、Ｏｍｏｍｙｃ治療が、治療開始後早くも１週間で、特異的に腫瘍部位へのＴリンパ球の動員を増加させること、およびＴ細胞は、全ての治療の間中、そこに留まり（図１Ａ）、それが、Ｏｍｏｍｙｃポリペプチドの作用のメカニズムの一部としての可能な免疫貢献を証明することが判明した。
Ｏｍｏｍｙｃ鼻腔内治療は活性化されたＣＤ４Ｔ細胞を腫瘍部位へ動員する
実験モデルおよびＯｍｏｍｙｃ治療は、上記で説明したものと同じである。
エンドポイントにおいて、マウスを安楽死させ、肺を切除し、Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して分離し、フローサイトメトリーによって免疫細胞含有物を分析するために、コンジュゲート化した抗体で染色した。染色の前に、死亡細胞を、製造業者の使用説明書に従ってＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎ ５１０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６４４０６）を用いて染色した。次いで、室温で１０分間の抗ＣＤ１６／３２抗体を用いたインキュベーションによって、非特異的結合体を遮断した。表面染色のために、細胞を、当該抗体を用いて暗所において４℃で２０分間インキュベートした。使用した抗体を第１表に一覧する。ＦｏｘＰ３細胞内染色のため、ＦｏｘＰ３ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ００－５５２３－００）を、製造業者の取扱説明書に従って使用した。細胞をＣｙｔｏＦｌｅｘ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して獲得し、データを、ＣｙｔｏＥｘｐｅｒｔ ２．０ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して解析した。
図１Ｂは、Ｏｍｏｍｙｃが、腫瘍へのＣＤ４Ｔ細胞の動員を誘導し。それらが活性化されることを示すＦＡＣＳ分析を示している。実際に、これらの細胞は、ＰＤ－１および両方のＰＤ－１Ｔｉｍ－３分子におけるより高いレベルを示し、それは、Ｏｍｏｍｙｃが抗腫瘍免疫反応を誘導することを示唆している。加えて、Ｏｍｏｍｙｃは、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇｓ）の発現も誘導する。
Ｏｍｏｍｙｃ全身投与は腫瘍部位へＴ細胞を動員する
Ｋｒａｓ／ｐ５３同系モデルによる研究のため、１ｘ１０６のＭｕＨ－１６３細胞を、７週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６（ＪＡＮＶＩＥＲ ＬＡＢＳ）の背中側脇腹に皮下において接種させた。腫瘍が確立し、約１００ｍｍ３の体積に達した後、マウスを２つの群にランダマイズし、ビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ７．０）またはＯｍｏｍｙｃ（３２ｍｇ／ｋｇ）を用いて、週１回、静脈内により治療した。３週間の治療の後で、マウスを安楽死させ、腫瘍を切除し、それを２つに切断した。次いで、当該腫瘍の半分の一方を、４％のＰＦＡを用いて一晩かけて固定化させ、７０％エタノールに移し、パラフィンに包埋し、４μｍの切片を切断した。ＣＤ３免疫蛍光のため、ｐＨ６．０の０．０１Ｍクエン酸緩衝液において４００Ｗのマイクロ波で２０分加熱することによって、抗原回復を実施した。３％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０において１時間ブロッキング処理した後、Ｄａｋｏ Ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ希釈剤（Ｄａｋｏ Ｓ２０２２）において１／１００に希釈した抗ＣＤ３（Ｄａｋｏ Ａ０４５２）を用いて、スライドを４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳ洗浄後、ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ－１１００８）を用いてスライドをインキュベートし、１／１００００に希釈したＤＡＰＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｄ１３０６）によって染色し、ＰＢＳで洗浄し、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｄａｋｏ Ｓ３０２３）によって取り付けた。ニコンＴｉｅ蛍光顕微鏡およびＮＩＳ－ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して画像を撮影した。腫瘍の代表的なエリアの写真をマウス１匹あたり４枚撮影し、１フィールドあたりのＣＤ３＋細胞の平均が示される。
フローサイトメトリー分析のため、腫瘍の半分のもう片方を、Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して分離し、フローサイトメトリーによって免疫細胞含有物を分析するために、コンジュゲート化した抗体で染色した。染色の前に、死亡細胞を、製造業者の使用説明書に従ってＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎ ５１０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６４４０６）を用いて染色した。次いで、室温で１０分間の抗ＣＤ１６／３２抗体を用いたインキュベーションによって、非特異的結合体を遮断した。表面染色のために、細胞を、当該抗体を用いて暗所において４℃で２０分間インキュベートした。使用した抗体を第１表に一覧する。細胞をＣｙｔｏＦｌｅｘ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して獲得し、データを、ＣｙｔｏＥｘｐｅｒｔ ２．０ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して解析した。
Ｏｍｏｍｙｃ投与は、腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導した（図２Ａ）。Ｏｍｏｍｙｃは、腫瘍へのより多くのＣＤ８Ｔ細胞を動員し、ＰＤ－１およびＴｉｍ－３分子の両方を発現するＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞が大幅に増加した（図２Ｂ）。
抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃは、腫瘍へＣＤ４ ＋ ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３ － Ｔ細胞を動員する
ＫＲａｓＬＳＬ－Ｇ１２Ｄ／＋マウスをＴｒａｎｓｎｅｔｙｘによってジェノタイピングし、雄および雌の両方での肺腫瘍の生成を、上記で説明したように実施した（Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｅ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ， ２００１． １５（２４）： ｐ． ３２４３－８）。動物は、純粋なＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドにおいて養った。１時点あたり最低５匹のマウスと条件をランダマイズし、Ａｄｅｎｏ－Ｃｒｅ感染後、マウスが、マイクロＣＴによって検出可能な腫瘍を示した後、１４～１６週間の治療を開始した。マウスを４つの群：ビヒクル＋アイソタイプネズミＩｇＧ２ａ，ｋ、Ｏｍｏｍｙｃ＋アイソタイプネズミＩｇＧ２ａ，ｋ、ビヒクル＋抗ＰＤ－１、およびＯｍｏｍｙｃ＋抗ＰＤ－１、にランダマイズした。Ｏｍｏｍｙｃ治療のために、動物にイソフルラン（ＡｂｂＶｉｅ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｓ．Ｌ．Ｕ．）を吸入させて麻酔し、およびＯｍｏｍｙｃポリペプチド（２．４ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ＝７）のいずれかにより、１週間あたり４回（１１０１１００）による３０μＬの総量において、鼻腔内により治療した。抗ＰＤ－１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ０１４６）またはそのアイソタイプＲａｔ ＩｇＧ２ａ，ｋ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ００８９）を、４週間の間、２００μｇ／マウスの用量において、週１回（００１００００）、腹腔内により与えた。
エンドポイントにおいて、マウスを安楽死させ、肺を切除し、Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して分離し、フローサイトメトリーによって免疫細胞含有物を分析するために、コンジュゲート化した抗体で染色した。染色の前に、死亡細胞を、製造業者の使用説明書に従ってＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎ ５１０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６４４０６）を用いて染色した。室温で１０分間の抗ＣＤ１６／３２抗体を用いたインキュベーションによって、非特異的相互作用を遮断した。表面染色のために、細胞を、当該抗体を用いて暗所において４℃で２０分間インキュベートした。使用した抗体を第１表に一覧する。細胞をＣｙｔｏＦｌｅｘ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して獲得し、データを、ＣｙｔｏＥｘｐｅｒｔ ２．０ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して解析した。
Ｏｍｏｍｙｃと抗ＰＤ－１療法の組み合わせは、ＰＤ－１を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の動員を著しく増加させるが、ビヒクルおよび抗ＰＤ－１のみの両方で治療した群と比較して、腫瘍部位へのＴｉｍ－３の動員は増加しない（図３）。この知見は、抗ＰＤ－１とのＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物が、抗腫瘍免疫反応を促進するために相乗効果を与えることを示している。最近の知見は、腫瘍侵入リンパ球（ＴＩＬ）でのＰＤ－１発現が、クローン的に増殖させた腫瘍反応細胞のレパートリーを正確に識別することを実証している（Ｇｒｏｓ Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ （２０１４） １２４（５）： ２２４６－２２５９）。この考え方において、そのリガンド（ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）とのライゲーションに対する阻害シグナルにつながるが、最初、ＰＤ－１発現は、Ｔ細胞活性化の、ならびに腫瘍抗原に特異的な高結合活性ＴＩＬのマーカーであることは明らかである（Ｓｉｍｏｎ Ｓ ａｎｄ Ｌａｂａｒｒｉｅｒｅ Ｎ．． ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１８）． ７：１， ｅ１３６４８２８において概説される）。
抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃはＩＦＮ－γの産生を誘導する
実験モデルであるＯｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１治療は、上記において説明されるものと同じである。
エンドポイントにおいて、マウスを安楽死させ、肺を切除し、およびＭｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して分離し、フローサイトメトリーによって免疫細胞含有物を分析するために、コンジュゲート化した抗体で染色した。染色の前に、死亡細胞を、製造業者の使用説明書に従ってＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎ ５１０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６４４０６）を用いて染色した。室温で１０分間の抗ＣＤ１６／３２抗体を用いたインキュベーションによって、非特異的相互作用を遮断した。表面染色のために、細胞を、当該抗体を用いて暗所において４℃で２０分間インキュベートした。使用した抗体を第１表に一覧する。ＩＦＮ－γ染色のため、収穫し分離させた腫瘍細胞を、モネンシンおよびブレフェルジン（ｂｅｆｅｌｄｒｉｎ）Ａ（両方ともＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）の存在下において、ＰＭＡおよびイオノマイシン（ｉｏｎｏｍｉｃｉｎ）（両方ともＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）によって１２時間刺激した。次いで、細胞を収穫し、フローサイトメトリー分析のために染色した。ＩＦＮ－γの細胞内染色のため、製造業者の使用説明書に従ってＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ緩衝剤セットを使用した（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５５４７２２）。細胞をＣｙｔｏＦｌｅｘ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して獲得し、データを、ＣｙｔｏＥｘｐｅｒｔ ２．０ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して解析した。
これらの実験は、Ｏｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１の併用療法が、それらのビヒクルカウンターパートと比較して、ＣＤ４＋ヘルパーおよびＣＤ８＋細胞傷害性腫瘍内Ｔ細胞の両方によるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の産生を著しく誘導する（図４）ことを示しており、実際に、Ｏｍｏｍｙｃで治療した群でも、抗ＰＤ－１で治療した群でも、観察されなかった。
ここ数年間、腫瘍拒絶およびクリアランスを促進する際のＩＦＮ－γにとっての重要な役割を実証するかなりの量の証拠が蓄積されている。このサイトカインは、活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞によって主に産生され、腫瘍細胞に対して抗増幅効果、アポトーシス促進効果、および壊死効果（ｎｅｃｒｏｐｔｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）を直接誘導すること、および主要組織適合性分子の上方調節を誘導することにより免疫原性を増強することによって、その抗腫瘍効果を発揮する（Ｃａｓｔｒｏ Ｆ ｅｔ ａｌ．， Ｆｒｏｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （２０１８）． ９：８４７ ａｎｄ ｉｎ Ｉｋｅｄａ Ｈ ｅｔ ａｌ．， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ＆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ （２００２）． １３ ９５－１０９において広範囲にわたって概説される）。その上、このサイトカインは、腫瘍内微小環境にも影響を及ぼし、腫瘍を囲む内皮細胞の増幅および生存を阻害することにより脈管形成を損ない、結果として、腫瘍拒絶につながる重要なメカニズムである腫瘍部位での虚血を誘導する（Ｂｅａｔｔｙ Ｇ ａｎｄ Ｐａｔｅｒｓｏｎ Ｙ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００１） １６６：２２７６－８２， Ｋａｍｍｅｒｔｏｅｎｓ Ｔ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ （２０１７） ５４５：９８－１０２およびＢｒｉｅｓｅｍｅｉｓｔｅｒ Ｄ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ （２０１１） １２８：３７１－８）。その上、このサイトカインは、腫瘍部位へのＴ細胞およびＮＫ細胞の輸送にとって重要であるため、Ｔｈ１ ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γの産生は、腫瘍クリアランスを高める（Ｍｅｌｅｒｏ Ｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ （２０１４） ４：５２２－６）。加えて、ＩＦＮ－γは、マクロファージの活性化およびそれらの殺腫瘍活性の促進において極めて重要な役割も果たす（Ｃｅｌａｄａ Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （１９８４） １６０：５５－７４）。重要なことに、ＩＦＮ－γのレベル増加は、化学治療法および放射線治療法、ならびに抗ＰＤ－１およびＣＬＴＡ－４免疫療法の両方、対する反応の予測的バイオマーカーである（Ｋａｒａｃｈａｌｉｏｕ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ （２０１８） １０：１７５８８３４０１７７４９７４８ ａｎｄ Ｍｏ Ｘ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ （２０１８） ７８：４３６－５０）。一貫して、最近の臨床試験は、ＩＦＮ－γ産生エフェクターＴ細胞と腫瘍成長阻害との間の関連性を示す有望な結果を既に有している（Ｌｉａｋｏｕ ＣＩ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ （２００８） １０５：１４９８７－９２， Ｐｅｎｇ Ｗ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ （２０１２） ７２：５２０９－１８およびＯｖｅｒａｃｒｅ－Ｄｅｌｇｏｆｆｅ ＡＥ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ （２０１７） １６９：１１３０－４１．ｅ１１）。
Figure 2022528020000004
抗ＰＤ－１抗体とのＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物は、健康な肺の割合を相乗効果的に増加させ、Ｔ腫瘍部位へＴ細胞を動員する
ＴｒａｎｓｎｅｔｙｘによってＫＲａｓＬＳＬ－Ｇ１２Ｄ／＋マウスの遺伝子型を同定し、上記で説明したように雄および雌の両方における肺腫瘍の生成を実施した（Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｅ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｒ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ Ｋ－ｒａｓ． Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ， ２００１． １５（２４）： ｐ． ３２４３－８）。動物を純粋なＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドにおいて維持した。アデノ－Ｃｒｅ感染の１４～１６週後、マウスがマイクロＣＴによって検出可能な腫瘍を示したら、それらを、以下のように、４週間にわたって治療した４つの群：ビヒクル＋アイソタイプタイプＲａｔ ＩｇＧ２ａ，ｋ、Ｏｍｏｍｙｃ＋アイソタイプタイプＲａｔ ＩｇＧ２ａ，ｋ、ビヒクル＋抗ＰＤ－１、およびＯｍｏｍｙｃ＋抗ＰＤ－１、へとランダマイズした。Ｏｍｏｍｙｃ治療の場合、動物を、イソフルラン（ＡｂｂＶｉｅ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｓ．Ｌ．Ｕ．）を吸入させることによって麻酔し、３０μＬの総量において週４回（１１０１１００）、Ｏｍｏｍｙｃポリペプチド（３．７５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ＝７）のどちらかによって鼻腔内により治療した。抗ＰＤ－１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ０１４６）またはそのアイソタイプＲａｔ ＩｇＧ２ａ，ｋ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ００８９）を、４週間にわたって、週１回（００１００００）、５ ｍｇ／ｋｇを腹腔内により与えた。
マイクロＣＴ研究は、Ｑｕａｎｔｕｍ ＦＸイメージングシステム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、９４０ウインターストリート、 ウォルサム、マーマサチュセッツ、ＥＥＵＵ）によって得て、画像再構築は、Ｆｅｌｄｋａｍｐ法に基づいた。胸郭容積に対しては、量子ＦＸ解析ソフトウェアを使用した。第一に、対側の肋骨の間の距離を竜骨レベルにおいて測定した（ｒ２）。第二測定は、竜骨レベルから横隔膜殻斗までの最大距離として定義した。最終測定は、横隔膜殻斗レベルでの胸骨と腰下筋系との間の距離として定義される、胸郭高さであった（ｒ１）。これらの３つの値を用いて、以下の数式を使用して円すい台の容積を計算した。
容積＝高さ＊π／３＊（ｒ１３－ｒ２３）／（ｒ１－ｒ２）
肺の健全な組織を、ＡＭＩＤＥソフトウェア（Ａｍｉｄｅ（登録商標） Ａｎｄｒｅａｓ Ｌｏｅｎｉｎｇ）を用いて、閾値法を使用して計算した。この閾値は、－９５０／－３５０グレーの範囲に含まれる強度値を有する、画像におけるボクセルの完全な量を選択する。このグレースケールの範囲は、異なる研究を調べた後に手動において選択した。
最後に、完全な胸郭容積は維持されるが、その一方で、健康な肺の容積は、病理の進行と共に徐々に減少するという概念に基づいて、健康な肺／胸郭容積比を計算した。抗ＰＤ－１と組み合わせたＯｍｏｍｙｃで治療した動物は、ビヒクルおよび治療のみと比較して、健康な肺の割合の増加を示した（図５Ａおよび５Ｂ）。
エンドポイントにおいて、マウスを安楽死させ、肺を切除し、Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して分離させ、コンジュゲート化した抗体で染色した。染色する前に、製造業者の使用説明書に従って、死んだ細胞をＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎ ５１０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６４４０６）で染色した。室温で１０分間の抗ＣＤ１６／３２抗体を用いたインキュベーションによって、非特異的交差反応を遮断した。表面染色のために、細胞を、当該抗体を用いて暗所において４℃で２０分間インキュベートした。使用した抗体を第２表に一覧する。
Figure 2022528020000005
ＩＦＮ－γおよびＩＬ－１７染色のために、収穫し分離した腫瘍細胞を、モネンシンおよびブレフェルジン（ｂｅｆｅｌｄｒｉｎ）Ａ（両方ともＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）の存在下において、ＰＭＡおよびイオノマイシン（ｉｏｎｏｍｉｃｉｎ）（両方ともＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）によって刺激した。次いで、細胞を収穫し、フローサイトメトリー分析のために染色した。ＩＦＮ－γの細胞内染色の場合、製造業者の使用説明書に従って、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ緩衝剤セット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５５４７２２）を使用した。細胞をＣｙｔｏＦｌｅｘ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して獲得し、データを、ＣｙｔｏＥｘｐｅｒｔ ２．０ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して解析した。
図５Ｃは、組み合わせて投与されたＯｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１が、特にＣＤ４Ｔ細胞およびＴｈ１／Ｔｈ１７ｃ細胞の、腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導することを示している。第３表は、得られた効果が相乗的であることを示している。目的の免疫細胞集団における増加が、個々の治療の増加の合計より大きい場合に、それは相乗効果と見なされる。
Figure 2022528020000006
抗ＣＴＬＡ－４抗体とのＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物は、腫瘍成長を相乗効果的に低下させ、腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を動員する
実験モデル、マイクロＣＴスキャン、およびＦＡＣＳ染色は、図５において説明したものと同じであった。
アデノ－Ｃｒｅ感染の１４～１６週後、マウスがマイクロＣＴによって検出可能な腫瘍を示したら、それらを、以下のように、４週間にわたって治療した４つの群：ビヒクル＋アイソタイプシリアンハムスターＩｇＧ、Ｏｍｏｍｙｃ＋アイソタイプシリアンハムスターＩｇＧ、ビヒクル＋抗ＣＴＬＡ－４、およびＯｍｏｍｙｃ＋抗ＣＴＬＡ－４、へとランダマイズした。Ｏｍｏｍｙｃ治療の場合、動物に、イソフルラン（ＡｂｂＶｉｅ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｓ．Ｌ．Ｕ．）を吸入させて麻酔し、３０μＬの総量において週４回（１１０１１００）、Ｏｍｏｍｙｃポリペプチド（３．７５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ＝７）のどちらかによって鼻腔内により治療した。抗ＣＴＬＡ－４（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ０１３１）またはそのアイソタイプシリアンハムスターＩｇＧ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ００８７）に、４週間にわたって、週１回（００１００００）、１０ ｍｇ／ｋｇを腹腔内により与えた。
図６Ａは、抗ＣＴＬＡ－４と併用したＯｍｏｍｙｃで治療した動物は、ビヒクルおよび治療のみと比較して、腫瘍成長の低下を示すことを示している。図６Ｂは、組み合わせて投与されたＯｍｏｍｙｃおよび抗ＣＴＬＡ－４が、特にＣＤ４Ｔ細胞の、およびＣＤ８ＰＤ－１＋Ｔ細胞の両方の、腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導することを示している。第４表は、得られた効果が相乗的であることを示している。目的の免疫細胞集団における増加が、個々の治療の増加の合計より大きい場合、それは相乗効果と見なされる。
Figure 2022528020000007
抗ＰＤ－１抗体と共に静脈内投与されるＯｍｏｍｙｃの連続併用は、腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を相乗効果的に動員する
実験モデル、マイクロＣＴスキャン、およびＦＡＣＳ染色は、図５に対して説明したものと同じであった。
アデノ－Ｃｒｅ感染の１４～１６週後、マウスがマイクロＣＴによって検出可能な腫瘍を示したら、それらを、以下のように、４週間にわたって治療した４つの群：ビヒクル、Ｏｍｏｍｙｃ、ビヒクル＋抗ＰＤ－１、およびＯｍｏｍｙｃ＋抗ＰＤ－１、へとランダマイズした。Ｏｍｏｍｙｃ治療の場合、１０日間にわたっての週２回のＯｍｏｍｙｃポリペプチド（５０ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクル（ＮａＡｃ ２４ｍＭ＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム）（０１００１００）のどちらかによって静脈内により治療した。組み合わせ物を受けさせた群を、最初の１０日間、Ｏｍｏｍｙｃによって週２回、治療した。１０日間のＯｍｏｍｙｃ治療の後、組み合わせ物を受けさせた群のＯｍｏｍｙｃ治療を中止し、実験の終了まで、週１回（００１００００）、腹腔内により２．５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ ＢＥ０１４６）を受けさせることを開始した。Ｏｍｏｍｙｃのみの単独療法の群に、最初の１０日間はＯｍｏｍｙｃを週２回受けさせ、次いで、治療を継続したが、実験の終了まで、週１回のみ受けさせた。
図７は、Ｏｍｏｍｙｃおよび、次いで抗ＰＤ－１による連続治療は、特に、ＰＤ－１およびＴｉｍ－３分子の両方を発現するＣＤ４Ｔ細胞の、およびＰＤ－１を発現するＴｈ１／Ｔｈ１７Ｔ細胞の、腫瘍部位へのＴ細胞動員を誘導した。第５表は、得られた効果が相乗的であることを示している。目的の免疫細胞集団における増加が、個々の治療の増加の合計より大きい場合に、それは、相乗効果と見なされる。
Figure 2022528020000008
抗ＰＤ－１抗体と同時に静脈内投与されるＯｍｏｍｙｃの組み合わせ物は、相乗効果的に、腫瘍部位へＴ細胞を動員する
非常に攻撃的なＫｒａｓ／ｐ５３変異ＮＳＣＬＣ ＭｕＨ－１６３細胞系を、Ｃ５７／ＢＬ６同系マウスに、皮下において接種させた（１×１０６細胞）。腫瘍が確立されると、マウスを４つの群：ビヒクル、Ｏｍｏｍｙｃ、ビヒクル＋抗ＰＤ－１、およびＯｍｏｍｙｃ＋抗ＰＤ－１、にランダマイズした。３週間にわたって、同時に、週１回、Ｏｍｏｍｙｃ治療を５０ｍｇ／ｋｇ（００１００００）静脈内投与され、抗ＰＤ－１抗体を５ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与された。マウスを週２回モニターし、腫瘍成長をノギスで測定した。
エンドポイントにおいて、腫瘍を収集し、その半分を４％のＰＦＡで固定して、ＩＨＣ分析のためにパラフィンに包埋し、その一方で、もう半分は、Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して消化させ、フローサイトメトリーによって免疫細胞内容物を分析するために、コンジュゲート化した抗体で染色した。ＦＡＣＳ染色および分析は、図５のために説明したとおりに実施した。
ＣＤ３免疫蛍光のため、４００Ｗに設定したマイクロ波を使用して、ｐＨ６．０の０．０１Ｍクエン酸緩衝液において２０分加熱することによって、抗原回復を実施した。３％のＢＳＡにおいて４５分間ブロッキングし、ＰＢＳで洗浄した後、Ｄａｋｏ Ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ希釈剤（Ｄａｋｏ Ｓ２０２２）において１／１００に希釈した抗ＣＤ３（Ｄａｋｏ Ａ０４５２）を用いて、スライドを４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳ洗浄後、１／２００に希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ－１１００８）を用いて、スライドをインキュベートし、１／１００００に希釈したＤＡＰＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｄ１３０６）によって染色し、水で１回洗浄し、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｄａｋｏ Ｓ３０２３）によって取り付けた。ＣＤ３陽性度を、２０倍率で撮影した動物１匹あたり５枚の代表的蛍光顕微鏡画像から測定した。
図８は、Ｏｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１の同時治療が、腫瘍部位にＴ細胞を著しく補充することを示している。第６表は、得られた効果が相乗的であることを示している。目的の免疫細胞集団における増加が、個々の治療の増加の合計より大きい場合に、それは、相乗効果と見なされる。
Figure 2022528020000009
ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬ－１７、およびＩＦＮ－γの高発現は、より高い生存率と相関する
カプラン－マイヤープロットを、カプラン－マイヤープロッター（ｈｔｔｐ：／／ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍ／ａｎａｌｙｓｉｓ／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ｐ＝ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）を使用して行った。それを行うために、肺癌患者のデータベースを選択した。ＮＳＣＬＣの全ての組織学的タイプ、全てのステージ、および全てのグレードを、解析のために含ませた。
図９は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬ－１７、およびＩＦＮ－γの高発現がＮＳＣＬＣ患者におけるより高い生存率と相関することを示している。
結論
抗ＰＤ－１抗体と鼻腔内Ｏｍｏｍｙｃとの組み合わせは、Ｏｍｏｍｙｃ（０．８６）および抗ＰＤ－１（０．９２）療法単独によって示される改善と比較して、総胸郭容積に対して健康な肺の割合を相乗効果的に増加させた（平均７．９６９）（図５Ａおよび５Ｂ）。加えて、同時に投与された治療は、強力な抗腫瘍性効果を発揮することが知られている、特にＣＤ４Ｔ細胞およびＴｈ１／Ｔｈ１７ｃ細胞の、腫瘍部位へのＴ細胞の動員を著しく誘導した（Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， ＣＤ３８－ＮＡＤ（＋）Ａｘｉｓ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉ－Ｔｕｍｏｒ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ． Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ， ２０１８． ２７（１）： ｐ． ８５－１００ ｅ８）（図５Ｃ）。
これらの結果に沿って、抗ＣＴＬＡ－４と鼻腔内Ｏｍｏｍｙｃとの組み合わせは、ビヒクル（３．８５）および両方の単独での投与の治療（Ｏｍｏｍｙｃ：２．３；ａ－ＣＴＬＡ－４：３．０）と比較して、腫瘍成長の減少（１．１１）を示した（図６Ａ）。
腫瘍成長に対するこの直接的な効果に加えて、当該治療併用は、特にＣＤ４Ｔ細胞ならびにＰＤ－１分子を発現するＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の両方（腫瘍特異的Ｔ細胞を識別することが知られている細胞（Ｇｒｏｓ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， ＰＤ－１ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８（＋） ｔｕｍｏｒ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ， ２０１４． １２４（５）： ｐ． ２２４６－５９） ）の、腫瘍部位へのＴ細胞動員も、相乗効果的に誘導した（図６Ｂ）。まとめると、抗ＰＤ－１または抗ＣＴＬＡ－４と組み合わせて鼻腔内投与されたＯｍｏｍｙｃは、腫瘍成長を低下させ、腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を相乗効果的に動員する。
その上、同じマウスモデル（ＫｒａｓＧ１２Ｄ－駆動ＮＳＣＬＣ）を使用することにより、本発明者らは、連続して投与された抗ＰＤ－１と組み合わせた静脈内Ｏｍｏｍｙｃ（最初にＯｍｏｍｙｃを投与し、次いで抗ＰＤ－１抗体を投与する）も、相乗効果を与え、ならびに、特に、ＰＤ－１およびＴｉｍ－３分子の両方を発現する腫瘍特異的ＣＤ４ならびにＴｈ１／Ｔｈ１７抗腫瘍Ｔ細胞の、腫瘍部位へのＴ細胞の動員を誘導する（図７）。
別のモデルにおいてこの相乗効果を検証するために、本発明者らは、Ｋｒａｓおよびｐ５３の両方における変異によって駆動されるＮＳＣＬＣの別の非常に攻撃的なモデルにおいて、Ｏｍｏｍｙｃおよび抗ＰＤ－１を組み合わせた。やはり、両方の薬物は相乗効果を与え、腫瘍部位へより多くのＴ細胞を著しく動員し（図８Ａ）、さらに、より全体的な免疫細胞も動員した（図８Ｂ）。
まとめると、本発明者らは、抗ＰＤ－１およびＣＴＬＡ－４療法の両方と組み合わせたＯｍｏｍｙｃの治療は、腫瘍成長を低下させることができ、ならびに腫瘍部位へ抗腫瘍Ｔ細胞を相乗効果的に動員することができると結論付けた。この治療効果は、異なる投与経路、異なるＯｍｏｍｙｃ用量、ならびに抗ＰＤ－１およびＣＴＬＡ－４における異なる用量を使用することにより、観察された。
ＩＦＮ－ｇおよびＩＬ－１７を分泌するＣＤ３Ｔ細胞、ＣＤ４細胞、およびＴ細胞全体の割合の増加は、生存の増加に相関するため（図９）、この免疫細胞動員は、ＮＳＣＬＣ癌患者に明確な治療的影響を有する。この証拠は、Ｏｍｏｍｙｃと癌免疫剤との組み合わせに関する、上記において説明した知見の重要性を強調する。免疫サインに基づくデータが、強い免疫細胞成分は、高い腫瘍侵入リンパ球（ＴＩＬ）がネオアジュバント療法に対するより高い反応率に関連しているような、乳癌における化学療法に対する良好な反応を予測することを立証している場合、他のタイプの癌に対して、同じ結論を推定することができる。結直腸癌の肝転移において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の高い浸潤は、化学療法に対する良好な反応および長期生存を予測する。黒色腫において、免疫サインの発現（すなわち、Ｔｈ１細胞および細胞障害性関連遺伝子の高発現）は、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥＡ３）を使用する治療ワクチンに対する良好な臨床応答に相関する（Ｆｒｉｄｍａｎ， Ｗ．Ｈ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｎｔｅｘｔｕｒｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ， ２０１７． １４（１２）： ｐ． ７１７－７３４において概説される）。
ここ数年間、両方の腫瘍根絶のための、および癌免疫剤の有効性のための、ＴＩＬとっての重要な役割を実証する、かなりの量の証拠が蓄積されている。実際に、癌免疫療法に対する耐性にかかわる主要な要因は、いわゆる「非炎症性腫瘍（ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒ）」を特徴付ける、腫瘍Ｔ細胞浸潤の欠如である。癌免疫剤によるこの免疫不活性腫瘍の治療は、当該腫瘍に対していかなる適応的免疫反応も示さず、ならびにこのタイプの療法に反応しないため、非常な困難を示す（Ｂｏｎａｖｅｎｔｕｒａ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｌｄ Ｔｕｍｏｒｓ： Ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１９． １０： ｐ． １６８）。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断に対する臨床応答または安定化された疾患を全く示さない患者は、療法に対して「一次抵抗」を有すると見なされる。対照的に、臨床治験からの早期データは、それぞれＴ細胞および腫瘍細胞上の共存するＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１の発現と併せて、腫瘍内およびその周囲における既存のＴＩＬの存在が、抗ＰＤ－１療法に対する治療応答を予測することを実証した（Ｎｏｗｉｃｋｉ， Ｔ．Ｓ．， Ｓ． Ｈｕ－Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ， ａｎｄ Ａ． Ｒｉｂａｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＰＤ－１ ａｎｄ ＰＤ－Ｌ１ Ｂｌｏｃｋａｄｅ． Ｃａｎｃｅｒ Ｊ， ２０１８． ２４（１）： ｐ． ４７－５３）。同じ証拠に沿って、ペンブロリズマブ（抗ＰＤ－１）の有効性は、強力な抗腫瘍反応のための要件としての腫瘍内Ｔ細胞の存在およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の発現（Ｔｕｍｅｈ， Ｐ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， ＰＤ－１ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｎａｔｕｒｅ， ２０１４． ５１５（７５２８）： ｐ． ５６８－７１）ならびに抗ＰＤ－１剤の有効性（Ｒｉｂａｓ， Ａ．， Ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ａｔ ＰＤ－１． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ２０１２． ３６６（２６）： ｐ． ２５１７－９）と相関する。
この証拠の全てを考慮すると、Ｏｍｏｍｙｃと癌免疫剤との組み合わせは、Ｔ細胞浸潤を相乗効果的に誘導し、ならびに刺激は、最終的に、癌免疫療法に対する臨床応答率の向上につながるであろうことが実証される。

Claims (20)

  1. ｉ）下記からなる群：
    ａ）配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、
    ｂ）配列番号１の配列を含むポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体と、当該ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分とを含むコンジュゲート、
    ｃ）ａ）のポリペプチドまたはｂ）のコンジュゲートをコードするポリヌクレオチド、
    ｄ）ｃ）のポリヌクレオチドを含むベクター、および
    ｅ）ａ）のポリペプチドまたはｂ）のコンジュゲートを培地中へと分泌することができる細胞
    から選択される第１成分と、
    ｉｉ）癌免疫剤である第２成分と
    を含む組み合わせ物。
  2. 配列番号１の機能的に同等な改変体が、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、および配列番号１０からなる群から選択される、請求項１に記載の組み合わせ物。
  3. 前記ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体の細胞内取り込みを促進する化学的部分が、細胞膜透過性ペプチド配列であり、さらに当該細胞膜透過性ペプチド配列および前記ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体が、融合タンパク質を形成する、請求項１または２のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
  4. 前記細胞膜透過性ペプチド配列が、ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号３７）およびＲＲＲＲＲＲＬＲ（配列番号３８）からなる群から選択される、請求項３に記載の組み合わせ物。
  5. 前記コンジュゲートが、さらなる核局在化シグナルをさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
  6. 前記癌免疫剤がサイトカインではない、請求項１～５のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
  7. 前記癌免疫剤が、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニストまたは免疫チェックポイント阻害剤である、請求項１～６のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
  8. Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニストが、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ－４から選択される、請求項７に記載の組み合わせ物。
  9. Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニストが、抗ＰＤ－１である、請求項８に記載の組み合わせ物。
  10. 前記アンタゴニストが、アンタゴニスト抗体である、請求項８または９のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
  11. 前記アンタゴニスト抗体が、ペンブロリズマブである、請求項１０に記載の組み合わせ物。
  12. 前記第１成分が、配列番号１の配列を含むポリペプチドである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
  13. 治療有効量の請求項１～１２のいずれか一項に記載の組み合わせ物と、薬学的に許容される賦形剤と含む医薬組成物。
  14. 医療における使用のための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組み合わせ物または請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 癌の予防および／または治療における使用のための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組み合わせ物または請求項１３に記載の医薬組成物。
  16. 前記癌が肺癌である、請求項１５に記載の使用のための組み合わせ物または医薬組成物。
  17. 前記組成物が、全身投与されるかまたは鼻腔内投与される、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の組み合わせ物または医薬組成物。
  18. 前記鼻腔内投与が、滴下投与または鼻腔内吸入によって実施される、請求項１７に記載の使用のための組み合わせ物または医薬組成物。
  19. 前記第１成分が、鼻腔内投与または静脈内投与され、さらに前記第２成分が、全身投与される、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ物または医薬組成物。
  20. 前記ポリペプチドまたはその機能的に同等な改変体、または前記コンジュゲートが、癌の治療において、前記癌免疫剤と相乗効果的に相互作用する、請求項１４～１９のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ物または医薬組成物。
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