JP2023515055A - 阻害性キメラ受容体アーキテクチャ - Google Patents

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Abstract

阻害性キメラ抗原受容体組成物及びそのような組成物を含む細胞が本明細書に提供される。阻害性キメラ抗原受容体及び細胞を使用する方法も提供される。【選択図】図２１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年２月２０日に出願された米国仮出願第６２／９７９，３０９号、２０２０年６月２６日に出願された同第６３／０４４，５９７号、及び２０２１年１月１１日に出願された同第６３／１３６，１３４号の利益を主張し、これらの各々は、すべての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願には、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出され、その全体が参照により本明細書に援用される配列表が含まれる。２０ＸＸ年ＸＸ月に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、ＸＸＸＸＸＵＳ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと称され、サイズがＸ，ＸＸＸ，ＸＸＸバイトである。
背景
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞などの免疫調節細胞の標的インビボ活性化を可能にする。これらの組換え膜受容体は、抗原結合ドメイン及び１つ以上のシグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞活性化ドメイン）を有する。これらの特殊な受容体は、Ｔ細胞が腫瘍細胞上の特定のタンパク質抗原を認識し、Ｔ細胞活性化及びシグナル伝達経路を誘導することを可能にする。キメラ受容体発現Ｔ細胞を用いた最近の臨床試験の結果は、がん免疫療法の薬剤としてのそれらの有用性の説得力のある支持を提供している。しかし、これらの有望な結果にもかかわらず、ＣＡＲ Ｔ細胞治療薬に関連するいくつかの副作用が同定され、重大な安全性の懸念が提起された。１つの副作用は、ＴＣＲ及びＣＡＲ操作Ｔ細胞からの「オンターゲットであるがオフ組織（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ ｂｕｔ ｏｆｆ－ｔｉｓｓｕｅ）」の有害事象であり、ＣＡＲ Ｔ細胞は、標的腫瘍組織の外側でそのリガンドに結合し、免疫応答を誘導する。したがって、適切なＣＡＲ標的を識別する能力は、同じ標的抗原を発現する正常な細胞を損傷することなく、腫瘍を効果的に標的化及び治療するために重要である。
阻害性キメラ抗原受容体（ｉＣＡＲとしても知られる）は、標的細胞上のそれらの同族リガンドに結合した後に免疫調節細胞活性を阻害または低下させるタンパク質構築物である。現在のｉＣＡＲ設計は、阻害のためにＰＤ－１細胞内ドメインを利用するが、再現が困難であることが証明されている。したがって、ｉＣＡＲで使用するための代替の阻害ドメインが必要である。
概要
本明細書では、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されており、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体が提供される。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインは、同じタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、タンパク質細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、第１のタンパク質に由来し、細胞内シグナル伝達ドメインは、第１のタンパク質とは異なる第２のタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、
Figure 2023515055000002
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、
Figure 2023515055000003
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来する。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、
Figure 2023515055000004
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、
Figure 2023515055000005
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来する。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、
Figure 2023515055000006
（配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、
Figure 2023515055000007
（配列番号１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000008
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000009
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＴＬＡ４に由来する。いくつかの態様では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＰＤ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＣＴＬＡ４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、タンパク質は、標的腫瘍上で発現されない。
いくつかの態様では、タンパク質は、非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの態様では、タンパク質は、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの態様では、細胞外タンパク質結合ドメインは、リガンド結合ドメインを含む。
いくつかの態様では、細胞外タンパク質結合ドメインは、受容体結合ドメインを含む。
いくつかの態様では、細胞外タンパク質結合ドメインは、抗原結合ドメインを含む。
いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。
いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。
いくつかの態様では、各ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。
いくつかの態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーによって分離される。
いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む：
Figure 2023515055000010
。
いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、タンパク質結合ドメインは、高い結合親和性を有する。
いくつかの態様では、タンパク質結合ドメインは、低い結合親和性を有する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、活性化免疫調節細胞によるサイトカイン産生を抑制することができる。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
いくつかの態様では、標的細胞は腫瘍細胞である。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の改変を含む。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む：
Figure 2023515055000011
。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置付けられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置付けられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、阻害性キメラ受容体は、酵素阻害性ドメインをさらに含む。
いくつかの態様では、酵素阻害性ドメインは、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる。
いくつかの態様では、酵素阻害性ドメインは、酵素触媒ドメインを含む。
いくつかの態様では、酵素触媒ドメインは、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する。
いくつかの態様では、酵素阻害性ドメインは、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの態様では、免疫調節細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。
また、本明細書には、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されており、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体が提供される。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、各々、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つと同じタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、第１のタンパク質に由来し、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、第１のタンパク質とは異なるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＢＴＬＡに由来する。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000012
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000013
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＬＩＲ１に由来する。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000014
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000015
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＰＤ－１に由来する。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000016
（配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000017
（配列番号１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000018
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、
Figure 2023515055000019
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＣＴＬＡ４に由来する。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＣＴＬＡ４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインをさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む。
いくつかの態様では、タンパク質は、標的腫瘍上で発現されない。
いくつかの態様では、タンパク質は、非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの態様では、タンパク質は、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞で発現する。
いくつかの態様では、細胞外タンパク質結合ドメインは、リガンド結合ドメインを含む。
いくつかの態様では、細胞外タンパク質結合ドメインは、受容体結合ドメインを含む。
いくつかの態様では、細胞外タンパク質結合ドメインは、抗原結合ドメインを含む。
いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。
いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。
いくつかの態様では、各ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。
いくつかの態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーによって分離される。
いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む：
Figure 2023515055000020
。
いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、タンパク質結合ドメインは、高い結合親和性を有する。
いくつかの態様では、タンパク質結合ドメインは、低い結合親和性を有する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、活性化免疫調節細胞によるサイトカイン産生を抑制することができる。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
いくつかの態様では、標的細胞は腫瘍細胞である。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、１つ以上の改変を含む。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む：
Figure 2023515055000021
。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、膜貫通ドメインと２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置付けられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、膜貫通ドメインと２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置付けられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、阻害性キメラ受容体は、酵素阻害性ドメインをさらに含む。
いくつかの態様では、酵素阻害性ドメインは、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる。
いくつかの態様では、酵素阻害性ドメインは、酵素触媒ドメインを含む。
いくつかの態様では、酵素触媒ドメインは、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する。
いくつかの態様では、酵素阻害性ドメインは、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。
いくつかの態様では、１つ以上の改変は、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの態様では、免疫調節細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。いくつかの態様では、免疫調節細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
また、本明細書に記載されるキメラ阻害性受容体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物も、本明細書に提供される。
また、本明細書に記載のキメラ阻害性受容体をコードする操作された核酸も、本明細書に提供される。
また、本明細書に記載の操作された核酸を含む発現ベクターも、本明細書に提供される。
また、本明細書に記載のキメラ阻害性受容体をコードする操作された核酸、または本明細書に記載の発現ベクターを含む単離された免疫調節細胞も、本明細書に提供される。
また、本明細書に記載される操作された核酸または本明細書に記載される発現ベクター、及び薬学的に許容される担体を含む組成物も、本明細書に提供される。
また、本明細書に記載のキメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞も、本明細書に提供される。
いくつかの態様では、細胞は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する。
また、本明細書には、キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞も提供され、キメラ阻害性受容体は、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、細胞は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。
また、本明細書には、キメラ阻害性受容体と、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含む単離された免疫調節細胞も提供され、キメラ阻害性受容体は、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、組換え的に発現される。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体は細胞を活性化することができる。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
また、本明細書には、キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞も提供され、キメラ阻害性受容体は、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、細胞は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。
また、本明細書には、（ａ）キメラ阻害性受容体であって、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含む、単離された免疫調節細胞も提供され、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、組換え的に発現される。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体は細胞を活性化することができる。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、標的細胞は腫瘍細胞である。
いくつかの態様では、細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。いくつかの態様では、免疫調節細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
いくつかの態様では、細胞は、自家である。
いくつかの態様では、細胞は、同種異系である。
また、本明細書に記載される単離された細胞と、薬学的に許容される担体とを含む組成物も、本明細書に提供される。
また、本明細書には、免疫調節細胞の表面上に本明細書に記載のキメラ阻害性受容体を発現させるように免疫調節細胞を操作することを含み、同族タンパク質のキメラ阻害性受容体への結合時に、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法も提供される。
また、本明細書には、本明細書に記載される単離された細胞または本明細書に記載される組成物を、キメラ阻害性受容体の同族タンパク質と、キメラ阻害性受容体が同族タンパク質に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、タンパク質のキメラ阻害性受容体への結合時に、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法も提供される。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの態様では、ＣＡＲは、腫瘍細胞の表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する。
また、本明細書には、キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞も提供され、キメラ阻害性受容体は、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、細胞は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。
また、本明細書には、（ａ）キメラ阻害性受容体であって、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体タンパク質と、を含む、単離された免疫調節細胞も提供され、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、組換え的に発現される。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体は細胞を活性化することができる。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
また、本明細書には、キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞も提供され、キメラ阻害性受容体は、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、細胞は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。
また、本明細書には、（ａ）キメラ阻害性受容体であって、細胞外タンパク質結合ドメインと、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含む、単離された免疫調節細胞も提供され、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、組換え的に発現される。
いくつかの態様では、キメラ阻害性受容体は、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体は細胞を活性化することができる。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する。
いくつかの態様では、タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。
いくつかの態様では、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの態様では、標的細胞は腫瘍細胞である。
いくつかの態様では、細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。いくつかの態様では、免疫調節細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
いくつかの態様では、細胞は、自家である。
細胞が同種異系である、単離された細胞が本明細書に記載される。
また、本明細書に記載される単離された細胞と、薬学的に許容される担体とを含む組成物も、本明細書に提供される。
また、本明細書には、免疫調節細胞の表面上に本明細書に記載のキメラ阻害性受容体を発現させるように免疫調節細胞を操作することを含み、同族タンパク質のキメラ阻害性受容体への結合時に、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法も提供される。
また、本明細書には、本明細書に記載される単離された細胞または本明細書に記載される組成物を、キメラ阻害性受容体の同族タンパク質と、キメラ阻害性受容体が同族タンパク質に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、タンパク質のキメラ阻害性受容体への結合時に、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法も提供される。
いくつかの態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの態様では、ＣＡＲは、腫瘍細胞の表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する。
本発明のこれら及び他の特徴、態様、及び利点は、以下の説明、及び添付の図面に関してよりよく理解されるであろう。
Ａは、ＣＤ１９を発現する標的細胞に接触する、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲと抗ＣＤ１９－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を示す。Ｂは、いずれのＣＡＲ構築物の発現もない陰性対照細胞を示す。Ｃは、形質導入Ｔ細胞における抗ＣＤ１９－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲの発現を示す。Ｄは、形質導入Ｔ細胞における抗ＣＤ１９－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲ及び抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲの発現を示す。
Ａは、Ｔ細胞によるＴＮＦ－α産生が、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。Ｂは、Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生が、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。Ｃは、Ｔ細胞によるＩＬ－２産生が、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。
Ｔ細胞細胞傷害性が、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。
Ａは、ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現する標的細胞に接触する、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲと抗ＣＤ２０－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を示す。Ｂは、いずれのＣＡＲ構築物の発現もない陰性対照細胞を示す。Ｃは、形質導入Ｔ細胞における抗ＣＤ２０－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲの発現を示す。Ｄは、形質導入Ｔ細胞における抗ＣＤ２０－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲ及び抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲの発現を示す。
Ａは、Ｔ細胞によるＴＮＦ－α産生が、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。Ｂは、Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生が、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。Ｃは、Ｔ細胞によるＩＬ－２産生が、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲ単独と比較して、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲと抗ＣＤ１９ ｉＣＡＲとの共発現によって低下することを示す。
示される抗Ｈｅｒ２阻害性ドメインｉＣＡＲを共発現するピューロマイシン選択Ｔ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ ａＣＡＲ発現を示す。
Ａは、Ａｘｌ、Ｈｅｒ２、ＡｘｌとＨｅｒ２を発現するか、またはいずれのタンパク質も発現しない標的細胞に接触する、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲと抗Ｈｅｒ２阻害性ドメインｉＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を示す。Ｂは、示される標的細胞に接触した後の抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲと示された抗Ｈｅｒ２阻害性ドメインｉＣＡＲとを共発現するＴ細胞によるＩＬ－２分泌を示す。Ｃは、示される標的細胞に接触した後の抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲと示された抗Ｈｅｒ２阻害性ドメインｉＣＡＲとを共発現するＴ細胞によるＩＦＮ－γ分泌を示す。
Ａは、未形質導入ＮＫ細胞、及び形質導入ＮＫ細胞における抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ－ＧＦＰ ｉＣＡＲの発現を示す。Ｂは、単一または二重形質導入ＮＫ細胞における抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ－ＧＦＰ ｉＣＡＲ及び抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ ａＣＡＲの発現の蛍光顕微鏡画像を示す。
Ａは、抗Ａｘｌ ａＣＡＲ、抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲ、またはａＣＡＲ及びｉＣＡＲの両方を発現するＮＫ細胞と４時間インキュベーションした後の標的細胞の溶解率を示す。Ｂは、抗Ａｘｌ ａＣＡＲ、抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲ、またはａＣＡＲ及びｉＣＡＲの両方を発現するＮＫ細胞と８時間インキュベーションした後の標的細胞の溶解率を示す。
フローサイトメトリーによって評価される、ＮＫ細胞の形質導入後の、共発現を含む、ａＣＡＲと様々なｉＣＡＲのフォーマットの発現を示す。
親標的細胞のＮＫ細胞媒介性殺傷（１列目）、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（２列目）、またはａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原を発現する標的細胞（３列目）を示す。殺傷は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＮＫ細胞について示されている。
混合集団においてａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（１列目）、または混合集団においてａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原を発現する標的細胞（２列目）のＮＫ細胞媒介性殺傷を示す。殺傷は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＮＫ細胞について示されている。
親標的細胞（１列目）、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（２列目）、ａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原とを発現する標的細胞（３列目）、またはａＣＡＲ抗原のみを発現するか、もしくはａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原とを発現するかのいずれかの標的細胞の混合集団とともに共培養した後のＮＫ細胞媒介性のＴＮＦα（左上）、グランザイムＢ（左下）、及びＩＦＮγ（右上）の産生を示す。サイトカイン産生は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＮＫ細胞について示されている。
親標的細胞（１列目）、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（２列目）、ａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原とを発現する標的細胞（３列目）、混合集団においてａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（４列目）、または混合集団においてａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原とを発現する標的細胞（５列目）のＮＫ細胞媒介性殺傷を示す。殺傷は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＮＫ細胞について示されている。
フローサイトメトリーによって評価される、ＮＫ細胞の形質導入後の、共発現を含む、ａＣＡＲと様々なｉＣＡＲのフォーマットの発現を示す。
親標的細胞（１列目）、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（２列目）、またはａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原を発現する標的細胞（３列目）のＮＫ細胞媒介性殺傷を示す。殺傷は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＮＫ細胞について示されている。
フローサイトメトリーによって評価される、Ｔ細胞の形質導入後の、共発現を含む、ａＣＡＲと様々なｉＣＡＲのフォーマットの発現を示す。
親標的細胞（１列目）、ｉＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（２列目）、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（３列目）、またはａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原とを発現する標的細胞（４列目）のＴ細胞媒介性殺傷を示す。殺傷は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＴ細胞について示されている。
親標的細胞（１列目）、ｉＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（２列目）、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（３列目）、またはａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原とを発現する標的細胞（４列目）のＴ細胞媒介性ＩＬ－２分泌を示す。殺傷は、ａＣＡＲのみを発現するように操作された、またはａＣＡＲと示されたｉＣＡＲとを共発現するように操作された様々なＴ細胞について示されている。
フローサイトメトリーによって評価される、ＮＫ細胞の形質導入後の、共発現を含む、ａＣＡＲと様々なｉＣＡＲのフォーマットの発現プロファイルを示す。条件ごとに１～３個の生物学的複製（別々の点として示される）。
ＮＫ細胞媒介性殺傷（上パネル）及びサイトカイン分泌（下パネル）を示す。ａＣＡＲ及び示されたｉＣＡＲを共発現するように操作された様々なＮＫ細胞について示されている。「別個」＝別々に提示された各タイプのＳＥＭ細胞。「混合」＝同じ培養物中で一緒に混合された両方のタイプのＳＥＭ細胞。条件ごとに１～３個の生物学的複製（別々の点として示される）。測定ごとに３個の技術的複製、該当する場合にはＸ及びＹのＳＥＭをプロットする。
定義
請求項及び明細書で使用される用語は、特に明記しない限り、以下に記載するように定義する。
本明細書で使用される「阻害性キメラ受容体」または「キメラ阻害性受容体」という用語は、免疫エフェクター細胞で発現されると、細胞に標的細胞に対する特異性を提供し、阻害性細胞内シグナル生成を提供するポリペプチドまたはポリペプチドのセットを指す。阻害性キメラ受容体は、典型的には、細胞外タンパク質結合ドメイン（例えば、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメイン、抗原結合ドメイン、抗原結合ドメインとしての抗体断片）、スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達／共シグナル伝達ドメインを含む。阻害性キメラ受容体は、「ｉＣＡＲ」と呼ばれることもある。
本明細書で使用される「阻害性キメラ抗原受容体」または「ｉＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞で発現されると、細胞に標的細胞に対する特異性を提供し、阻害性細胞内シグナル生成を提供するポリペプチドまたはポリペプチドのセットを指す。阻害性キメラ抗原受容体は、典型的には、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、抗体、または抗原結合ドメインもしくはその断片）、スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達／共シグナル伝達ドメインを含む。
「腫瘍標的化キメラ受容体」という用語は、活性化キメラ受容体、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、または操作されたＴ細胞受容体を指す。キメラ受容体を標的とする腫瘍は、「ａＣＡＲ」または「活性化ＣＡＲ」と呼ばれることもある。
本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」または代替的に「ＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞で発現されると、細胞に標的細胞に対する特異性を提供し、細胞内シグナル生成を提供するポリペプチドまたはポリペプチドのセットを指す。ＣＡＲは、典型的には、細胞外タンパク質結合ドメイン（例えば、抗原結合ドメインとしての抗体断片）、スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達／共シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び阻害性分子または刺激分子及び／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）を含む。いくつかの態様では、阻害性キメラ受容体または腫瘍標的化キメラ受容体を含むポリペプチドのセットは互いに隣接している。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体または腫瘍標的化キメラ受容体は、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサードメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、ポリペプチドを互いに結合させることができる、二量体化または多量体化ドメインなどの動員ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び阻害性分子または刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様では、阻害性キメラ受容体は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び阻害性分子に由来する機能的阻害性ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様では、腫瘍標的化キメラ受容体は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインと刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインとを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。
本明細書で使用される「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内に位置する阻害性キメラ受容体または腫瘍標的化キメラ受容体の機能的ドメインを指す。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、阻害性シグナル伝達ドメインである。分子結合ドメインが抗原またはリガンドなどのタンパク質に結合した後、例えば、阻害性シグナル伝達ドメインは受容体シグナル伝達を抑制し、一方で活性化シグナル伝達ドメインは細胞にシグナル（例えば、増殖性／生存シグナル）を伝達する。
本明細書で使用される「膜貫通ドメイン」という用語は、細胞膜を貫通するドメインを指す。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、疎水性アルファヘリックスを含む。
本明細書で使用される「細胞外タンパク質結合ドメイン」という用語は、典型的にはリガンドもしくはリガンド結合ドメイン、細胞受容体のエクトドメイン、または抗体の抗原結合ドメインであり、細胞外に位置し、細胞外空間に曝露される分子結合ドメインを指す。細胞外抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインとしてのリガンド、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメイン、または抗原結合ドメインもしくは抗体断片を含む、別のタンパク質またはペプチドに結合することができる任意の分子（例えば、タンパク質またはペプチド）を含むことができる。いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質または抗原結合ドメインは、リガンド、リガンド結合ドメイン、または受容体結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質結合ドメインまたは抗原結合ドメインは、抗体、その抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質または抗原結合ドメインは、細胞表面リガンド（例えば、がん抗原などの抗原、または細胞の表面上で発現されたタンパク質）に結合する。
本明細書で使用される「細胞外抗原結合ドメイン」という用語は、典型的には抗体の抗原結合ドメインであり、細胞外に位置し、細胞外空間に曝露される分子抗原結合ドメインを指す。細胞外抗原結合ドメインは、抗原タンパク質またはペプチドに結合することができる任意の分子（例えば、タンパク質またはペプチド）を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質結合ドメインまたは抗原結合ドメインは、抗体、その抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、細胞表面リガンド（例えば、がん抗原などの抗原、または細胞の表面上で発現されたタンパク質）に結合する。
用語「腫瘍」は、腫瘍細胞及び関連する腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍は、腫瘍細胞または腫瘍塊を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍は、腫瘍微小環境を指す。
「発現されない」という用語は、腫瘍標的化キメラ抗原受容体の活性化をもたらす非腫瘍細胞における発現のレベルよりも少なくとも２倍低い発現を指す。いくつかの実施形態では、発現は、腫瘍標的化キメラ抗原受容体の活性化をもたらす非腫瘍細胞における発現レベルよりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍以上低い。
「改善する」という用語は、疾患状態、例えば、予防、その重症度または進行の緩和、寛解または治癒を含むがん疾患状態の治療における任意の治療的に有益な結果を指す。
「インサイチュ」という用語は、生体から離れて成長する生細胞、例えば、組織培養物中で成長する生細胞内で生じるプロセスを指す。
「インビボ」という用語は、生体内で生じるプロセスを指す。
本明細書で使用される「哺乳動物」という用語には、ヒト及び非ヒトの両方が含まれ、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ウシ、ウマ、及びブタが挙げられるが、これらに限定されない。
「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸配列またはポリペプチド配列に関して、以下に記載される配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮ、または当業者に利用可能な他のアルゴリズム）の１つを使用して、または目視検査によって測定される、最大一致に対して比較及び整列させたときに同じである核酸残基またはアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列または部分列を指す。用途に応じて、「同一性」パーセントは、比較される配列の領域にわたって、例えば、機能ドメインにわたって存在することができるか、または代替的に、比較される２つの配列の完全長にわたって存在することができる。
配列比較のため、典型的には、１つの配列が基準配列の役割を果たし、これと試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、テスト配列及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、部分列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対するテスト配列（複数可）の配列同一性のパーセントを計算する。
比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似探索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視検査によって（一般に、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，以下を参照されたい）実施することができる。
配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの１つの例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、アメリカ国立生物工学情報センター（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を介して公的に利用可能である。
用語「十分な量」は、所望の効果を生じさせるのに十分な量、例えば、細胞内のタンパク質凝集を調節するのに十分な量を意味する。
「治療的有効量」という用語は、疾患の症状を改善するのに有効な量である。予防は治療とみなすことができるため、治療的有効量は「予防的有効量」であることができる。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。
キメラ阻害性受容体
一態様では、本明細書には、（ｉ）細胞外タンパク質結合ドメイン（例えば、抗原結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメインなど）と、（ｉｉ）膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されており、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体が提供される。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、２つ以上、３つ以上、４つ以上、または５つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、３つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、４つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、５つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
２、３、４、５、またはそれ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、同じ細胞内ドメインまたは異なる細胞内ドメインであり得る。例えば、１つの細胞内ドメインは、１つのタンパク質（例えば、ＢＴＬＡ）に由来することができ、第２の細胞内ドメインは、異なるタンパク質（例えば、ＬＩＲ１）に由来することができる。３つ以上の細胞内ドメインを有する場合、３つの細胞内ドメインの各々は、同じタンパク質、３つの異なるタンパク質、または２つのタンパク質に由来することができる。例えば、細胞内ドメインが２つのタンパク質に由来する場合、キメラ阻害性受容体は、ＢＴＬＡ由来の２つのドメイン及びＬＩＲ１由来の１つのドメイン、または本明細書に開示される細胞内ドメインの任意の他の組み合わせを有することができる。別の例では、細胞内ドメインが３つのタンパク質に由来する場合、キメラ阻害性受容体は、ＢＴＬＡから１つのドメイン、ＬＩＲ１から１つのドメイン、及びＰＤ－１から１つのドメインを有することができる。
一般に、阻害性キメラ受容体または腫瘍標的化キメラ受容体は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞のために設計され、細胞内シグナル伝達ドメイン及びタンパク質認識ドメイン（例えば、受容体結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、または抗原結合ドメイン、例えば、抗体の一本鎖断片（ｓｃＦｖ））のキメラである（Ｅｎｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．２０１５；２６（８）：４９８ー５０５を参照されたい）。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞として当該技術分野で知られている。活性化ＣＡＲまたは腫瘍標的化ＣＡＲは、一般に、Ｔ細胞の活性化及び免疫応答をもたらす細胞内シグナル伝達ドメインを介してその同族リガンドに結合すると、Ｔ細胞シグナル伝達経路を誘導する。活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）ＣＡＲ、活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）ＣＡＲ、及び腫瘍標的化ＣＡＲは、交換可能な用語である。
阻害性キメラ受容体は、一般に、細胞によって発現された抗原、リガンド、または受容体などのタンパク質を認識し、それに結合するように操作された人工免疫細胞受容体である。阻害性キメラ受容体は、一般に、腫瘍細胞上で発現されないタンパク質（例えば、抗原、リガンド、受容体など）を認識するが、活性化キメラ受容体または腫瘍標的化キメラ受容体（例えば、ａＣＡＲ）は、一般に、腫瘍細胞上で発現される抗原を認識する。キメラ受容体は、一般に、典型的には、抗原結合ドメイン、スペーサーまたはヒンジドメイン、疎水性αヘリックス膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達／共シグナル伝達ドメインとして抗体断片を含む。
阻害性キメラ受容体は、一般に、活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）の構造に従うが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に由来する活性化シグナル伝達ドメインの代わりに、細胞内シグナル伝達ドメインに阻害性ドメインを使用する。細胞内シグナル伝達／共シグナル伝達ドメインは、同じ細胞内の他の受容体タンパク質によるシグナル伝達を低下または阻害する阻害性ドメインである。阻害性キメラ受容体細胞は、例えば、腫瘍外標的発現に起因し得る非特異的免疫活性化をブロックするために、タンパク質特異的阻害性受容体（例えば、抗原特異的阻害性受容体、リガンド特異的阻害性受容体、受容体特異的阻害性受容体など）を含有し得る。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、その内因性Ｔ細胞受容体または活性化もしくは腫瘍標的化ＣＡＲのいずれかによって活性化されたＴ細胞におけるＴ細胞応答をブロックする。例えば、免疫調節細胞は、非腫瘍抗原標的を認識する阻害性キメラ受容体、及び腫瘍抗原を認識する腫瘍標的化キメラ受容体の両方を発現することができる。そのような免疫調節細胞が腫瘍細胞に接触するとき、腫瘍標的受容体のみがその同族リガンドを認識してそれに結合し、活性化され、細胞シグナル伝達経路の誘導及び免疫細胞の活性化をもたらす。対照的に、免疫調節細胞が非腫瘍標的に接触すると、阻害性キメラ受容体は、その同族タンパク質（例えば、同族リガンド、受容体、抗原など）に結合し、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化によって誘導された任意のシグナル伝達を抑制または阻害する。したがって、免疫調節細胞は、細胞が腫瘍細胞に接触したときにのみ免疫シグナル伝達が生じるように構築され得る。
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体によって結合されるタンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）は、標的腫瘍上で発現されない。いくつかの実施形態では、発現は、腫瘍標的化キメラ抗原受容体の活性化をもたらす非腫瘍細胞における発現レベルよりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍以上低い。
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体によって結合されるタンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）は、非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体によって結合されるタンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）は、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、配列番号５６に示す配列を含む。
細胞内シグナル伝達ドメイン
本開示の阻害性キメラ受容体は、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。
いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
阻害性ドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、１つ以上の阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、２つ以上の阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、３つ以上の阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、４つ以上の阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、５つ以上の阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、１つの阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、２つの阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、３つの阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、４つの阻害性細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、５つの阻害性細胞内ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、２つ以上の阻害性細胞内ドメインを有するＣＡＲについては、阻害性細胞内ドメインのうちの２つ以上は異なるドメインである。いくつかの実施形態では、２つ以上の阻害性細胞内ドメインを有するＣＡＲについては、阻害性細胞内ドメインの各々は異なるドメインである。例示的な非限定的な例として、ＣＡＲは、ＬＩＲ１阻害性細胞内ドメインに連結されたＫＩＲ３ＤＬ１阻害性細胞内ドメインを有することができる。いくつかの実施形態では、２つ以上の阻害性細胞内ドメインを有するＣＡＲについては、阻害性細胞内ドメインのうちの２つ以上は同じドメイン（すなわち、同じドメインのコンカテマー）である。いくつかの実施形態では、２つ以上の阻害性細胞内ドメインを有するＣＡＲについては、阻害性細胞内ドメインの各々は同じドメインである。例示的な非限定的な例として、ＣＡＲは、第２のＫＩＲ３ＤＬ１阻害性細胞内ドメインに連結された第１のＫＩＲ３ＤＬ１阻害性細胞内ドメインを有することができるか、または第２のＬＩＲ１阻害性細胞内ドメインに連結された第１のＬＩＲ１阻害性細胞内ドメインを有することができる。
いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内ドメインのうちの１つは、Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内ドメインのうちの１つは、ＢＴＬＡ細胞内ドメインである。ＢＴＬＡ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ７Ｚ６Ａ９）は、Ｂ細胞、樹状細胞及びナイーブＴ細胞、ならびに活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞上で発現された膜貫通タンパク質である。ＢＴＬＡ受容体の細胞内ドメインは、ＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２の両方に結合することができる免疫受容体チロシン依存性阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）配列を含む。ＢＴＬＡの細胞外ドメインがそのリガンドＨＶＥＭに結合すると、ＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２ホスファターゼはＴＣＲを介したシグナル伝達を阻害し、ＣＤ２８などの補助活性化因子もブロックし得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内ドメインのうちの１つはＬＩＲ１ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内ドメインのうちの１つは、ＬＩＲ１細胞内ドメインである。ＬＩＲ１は、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ８ＮＨＬ６）としても知られている。ＬＩＲ１は、免疫細胞上で発現された膜貫通タンパク質であり、抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子に結合する。ＬＩＲ１の同族ＭＨＣ Ｉリガンドへの結合は、免疫応答の刺激を抑制する阻害性シグナル伝達を誘導する。ＬＩＲファミリー受容体は、２～４個の細胞外免疫グロブリンドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭ配列を有する２～４個の細胞内ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内ドメインのうちの１つは、ＰＤ－１ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内ドメインのうちの１つは、ＰＤ－１細胞内ドメインである。ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ１５１１６）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びマクロファージ上で発現され、Ｔ細胞制御因子のＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリー及び免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＰＤ－１は、細胞外ＩｇＶリガンド結合ドメイン及びＩＴＩＭ配列及び免疫受容体チロシンベーススイッチモチーフ配列を有する細胞内ドメインを有する膜貫通タンパク質である。ＰＤ－１の２つのリガンドのうちの１つであるＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の結合後、ＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２は、ＰＤ－１の細胞内ドメインに結合し、ＴＣＲシグナル伝達を負に調節する。
いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内シグナル伝達ドメインの各々は、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の阻害性キメラ受容体は、１つ以上の阻害性細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の阻害性細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＢＴＬＡドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＢＴＬＡに由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＣＴＬＡ４ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＣＴＬＡ４に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＰＤ－１ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＰＤ－１に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＴＩＭ３ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＴＩＭ３に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＫＩＲ３ＤＬ１ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＬＩＲ１ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＬＩＲ１に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＮＫＧ２Ａドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＮＫＧ２Ａに由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＴＩＧＩＴドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＴＩＧＩＴに由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つはＬＡＧ３ドメインである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、ＬＡＧ３に由来する。
例示的な阻害性細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列を、表１に示す。例示的な阻害性細胞内シグナル伝達ドメインの核酸配列を、表２に示す。
（表１）例示的な阻害性細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列
Figure 2023515055000022
（表２）例示的な阻害性細胞内シグナル伝達ドメインの核酸配列
Figure 2023515055000023
Figure 2023515055000024
Figure 2023515055000025
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000026
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000027
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000028
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000029
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000030
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000031
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000032
（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、
Figure 2023515055000033
（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９３と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１０５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメイン及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、同じタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、第１のタンパク質に由来し、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインの各々は、第１のタンパク質とは異なるタンパク質に由来する。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、２つの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む。第１及び第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、任意の順序であり得る。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、３つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、３つの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインをさらに含む。第１、第２、及び第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、任意の順序であり得る。例えば、ＰＤ－１、ＬＩＲ１、及びＢＴＬＡの３つのシグナル伝達ドメインを含む阻害性キメラ受容体において、細胞内シグナル伝達ドメインの順序は、ＰＤ－１－ＬＩＲ１－ＢＴＬＡ、またはＰＤ－１－ＢＴＬＡ－ＬＩＲ１、またはＬＩＲ１－ＰＤ－１－ＢＴＬＡ、またはＬＩＲ１－ＢＴＬＡ－ＰＤ－１、またはＢＴＬＡ－ＰＤ－１－ＬＩＲ１、またはＢＴＬＡ－ＬＩＲ１－ＰＤ－１であり得る。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、４つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４つの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択される。第１、第２、第３、及び第４の細胞内シグナル伝達ドメインは、任意の順序であり得る。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、５つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、５つの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択される。第１、第２、第３、第４、及び第５の細胞内シグナル伝達ドメインは、任意の順序であり得る。いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、５つを超える細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、５つを超える細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択される。第１、第２、第３、第４、第５、及び追加の細胞内シグナル伝達ドメインは、任意の順序であり得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号４を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインポリペプチドのうちの１つは、配列番号４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号６を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号６と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５１を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５２を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５３を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５３と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５４を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５５を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号５５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号８４を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号８４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号８５を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号８５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号８６を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号８６と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９４を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９６を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号９６と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１０６を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１０６と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１３０を含む核酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、配列番号１３０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。
酵素阻害性ドメイン
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、酵素阻害性ドメインを含む。いくつかの実施形態では、酵素阻害性ドメインは、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、キメラ受容体の活性化の防止、減弱、または阻害することもできる。
いくつかの実施形態では、酵素阻害性ドメインは、酵素触媒ドメインを含む。いくつかの実施形態では、酵素触媒ドメインは、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する。
いくつかの実施形態では、酵素阻害性ドメインは、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。いくつかの実施形態では、１つ以上の改変は、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
活性化及び共刺激ドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、活性化細胞内ドメインまたは共刺激細胞内ドメインを含む少なくとも１つの腫瘍標的化キメラ受容体またはＴ細胞受容体をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、細胞は、少なくとも１つの阻害性キメラ受容体及び少なくとも１つの腫瘍標的化キメラ受容体を含む。細胞は、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個以上の腫瘍標的化ＣＡＲと、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個以上の阻害性キメラ受容体と、を含むことができる。
いくつかの実施形態では、活性化シグナル伝達ドメインは、３つの免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ（ＩＴＡＭ））を含むＣＤ３－ゼータタンパク質である。活性化シグナル伝達ドメインの他の例としては、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＯＸ４０が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞受容体は、各々共刺激ドメインと称される、２つ以上の活性化シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、腫瘍標的化キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、腫瘍細胞の表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、抗原がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体は細胞を活性化することができる。
いくつかの実施形態では、腫瘍標的化キメラ抗体は、配列番号５１に示す配列を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的化キメラ抗体は、配列番号５２に示す配列を含む。
膜貫通ドメイン
阻害性キメラ受容体は、タンパク質結合ドメインを細胞内ドメインに結合する膜貫通ドメインを含有することができる。異なる膜貫通ドメインは、異なる受容体安定性をもたらす。好適な膜貫通ドメインとしては、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ４膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＯＸ４０膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＩＣＯＳ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、２Ｂ４膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ２５膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ７膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＬＡＸ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＬＡＴ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＰＤ－１膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＣＬＴＡ４膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＴＩＭ３膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＮＫＧ２Ａ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＴＩＧＩＴ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞受容体の膜貫通ドメインは、ＬＡＧ３膜貫通ドメインである。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡの細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＰＤ－１の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ４の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＩＭ３の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＮＫＧ２Ａの細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＡＧ３の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの一部と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＩＲ１細胞外ドメインの一部と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＰＤ－１細胞外ドメインの一部と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの一部と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの一部と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８細胞外ドメインの一部と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号７と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号５９と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６８と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６９と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む。
例示的な膜貫通ドメインのアミノ酸配列を、表３に示す。例示的な膜貫通ドメインの核酸配列を、表４に示す。
（表３）例示的な膜貫通ドメインのアミノ酸配列
Figure 2023515055000034
（表４）例示的な膜貫通ドメインの核酸配列
Figure 2023515055000035
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つは、膜貫通ドメインに物理的に連結される。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号７と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１３と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１３の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１４の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６１の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６２の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６３と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６３の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６４の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６５の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８０の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８１の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８２の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８３と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号８３の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９０の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９２の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０８と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０８の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１３１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１３１の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１３２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１３２の核酸配列を含む。
細胞外タンパク質結合ドメイン
本明細書に記載の阻害性キメラ受容体は、例えば、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメイン、抗原結合ドメインなどの細胞外タンパク質結合ドメインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体を発現する免疫細胞は、複数の標的またはタンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）を認識するように遺伝子改変され、これは、腫瘍細胞上の独自の標的またはタンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）の発現パターンの認識を可能にする。
いくつかの実施形態では、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）は、標的腫瘍上で発現されない。いくつかの実施形態では、非腫瘍細胞における発現は、腫瘍標的化キメラ抗原受容体の活性化をもたらす発現レベルよりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍以上低い。
いくつかの実施形態では、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）は、非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの実施形態では、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）は、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される。
いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体の細胞外タンパク質結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的な一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）などの抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質結合ドメインは、抗体、その抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。
「一本鎖」という用語は、ペプチド結合によって直鎖状に連結されたアミノ酸単量体を含む分子を指す。特定のそのような実施形態では、Ｆａｂ軽鎖のＣ末端は、一本鎖Ｆａｂ分子内のＦａｂ重鎖のＮ末端に接続している。本明細書でより詳細に記載されるように、ｓｃＦｖは、ポリペプチド鎖によって、そのＣ末端から重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）のＮ末端に接続される軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）を有する。あるいは、ｓｃＦｖは、ポリペプチド鎖を含み、ここで、ＶＨのＣ末端は、ポリペプチド鎖によってＶＬのＮ末端に接続されている。
「Ｆａｂ断片」（断片抗原結合とも称される）は、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を、それぞれ軽鎖及び重鎖上の可変ドメインＶＬ及びＶＨとともに含有する。可変ドメインは、抗原結合に関与する相補性決定ループ（ＣＤＲ、超可変領域とも称される）を含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数個の残基の付加により、Ｆａｂ断片とは異なる。
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によって結合された２つのＦａｂ’断片を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えば、組換え方法によって、またはインタクトな抗体のペプシン消化によって生成され得る。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えば、β－メルカプトエタノールによる処理によって解離され得る。
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合二量体を含む。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一本鎖ポリペプチド中に存在する。一実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。
用語「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」は、抗体の１つの可変ドメインが、他の可変ドメインの存在なしに抗原に特異的に結合する分子を指す。単一ドメイン抗体及びその断片は、Ａｒａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４１４：５２１－５２６及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２００１，２６：２３０－２４５に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる。単一ドメイン抗体は、ｓｄＡｂまたはナノボディとしても知られている。ｓｄａｂはかなり安定であり、抗体のＦｃ鎖と融合パートナーとして発現しやすい（Ｈａｒｍｓｅｎ ＭＭ，Ｄｅ Ｈａａｒｄ ＨＪ（２００７）．“Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃａｍｅｌｉｄ ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ”．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２）。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、例えば、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片は、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片、及びｓｃＦｖ－Ｆｃ断片を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、各ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーによって分離される。
いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質結合ドメインは、リガンド結合ドメインを含む。リガンド結合ドメインは、受容体に由来のドメインであってもよく、受容体は、ＴＣＲ、ＢＣＲ、サイトカイン受容体、ＲＴＫ受容体、セリン／スレオニンキナーゼ受容体、ホルモン受容体、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体、及び受容体のＴＮＦＲ－スーパーファミリーからなる群から選択される。
結合ドメインの選択は、標的細胞の表面を画定するリガンドの種類及び数に依存する。例えば、タンパク質結合ドメインは、「自己」または正常組織などの非疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとしての役割を果たすリガンドを認識するように選択され得る。または、タンパク質結合ドメインは、がんまたは自己免疫疾患などの特定の疾患状態に関連する標的上の細胞表面マーカーとして作用するリガンドを認識するように選択され得る。一般に、阻害性キメラ受容体結合ドメインは、非疾患状態細胞表面マーカーから選択されてもよく、腫瘍標的化キメラ受容体結合ドメインは、疾患状態細胞表面マーカーから選択されてもよい。したがって、本開示の阻害性キメラ受容体におけるタンパク質結合ドメインのリガンドとして作用し得る細胞表面マーカーの例としては、正常組織に関連するものが挙げられ、腫瘍標的化キメラ受容体におけるタンパク質結合ドメインのリガンドとして作用し得る細胞表面マーカーの例としては、がん細胞及び／または疾患細胞の他の形態に関連するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、操作された核酸によってコードされる非腫瘍細胞上の抗原またはタンパク質に特異的に結合する所望の抗原またはタンパク質結合ドメインを操作することによって、目的の非腫瘍抗原またはタンパク質を標的化するように操作される。
いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質結合ドメインは、受容体結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外タンパク質結合ドメインは、抗原結合ドメインを含む。
標的またはエピトープに特異的に結合するタンパク質結合ドメイン（例えば、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメイン、またはｓｃＦｖなどの抗原結合ドメイン）は、当該技術分野で理解されている用語であり、かかる特異的結合を決定する方法も、当該技術分野で既知である。分子は、代替標的と反応するよりも、特定の標的抗原とより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、及び／またはより大きい親和性で反応または会合する場合、特異的結合を示すと言われている。第１の標的抗原に特異的に結合するタンパク質結合ドメイン（例えば、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメイン、またはｓｃＦｖなどの抗原結合ドメイン）は、第２の標的抗原に特異的に結合してもしなくてもよい。そのため、特異的結合は必ずしも排他的結合を必要としない（ただし、それは排他的結合を含み得る）。
いくつかの実施形態では、タンパク質結合ドメインは、高い結合親和性を有する。
いくつかの実施形態では、タンパク質結合ドメインは、低い結合親和性を有する。
リンカー
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、ペプチドリンカーを含む。リンカーは、一般に、タンパク質結合ドメイン（例えば、抗原結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメインなど）の２つのペプチド、例えば、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂのペプチドを結合するために使用される。グリセリン－セリン系リンカーを含む、当該技術分野で既知の任意の適切なリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、ペプチドリンカーによって分離される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。
いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、ペプチドリンカーを含む。リンカーは、一般に、タンパク質結合ドメイン（例えば、抗原結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメインなど）の２つのペプチド、例えば、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂのペプチドを結合するために使用される。グリセリン－セリン系リンカーを含む、当該技術分野で既知の任意の適切なリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、ペプチドリンカーによって分離される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、
Figure 2023515055000036
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３０に示す核酸配列を含む。
例示的なリンカーアミノ酸配列を、表５に示す。例示的なリンカー核酸配列を、表６に示す。
（表５）例示的なリンカーのアミノ酸配列
Figure 2023515055000037
（表６）例示的なリンカーの核酸配列
Figure 2023515055000038
スペーサー／ヒンジ
キメラ受容体はまた、ポリペプチド内にスペーサーまたはヒンジドメインを含有することができる。いくつかの実施形態では、スペーサードメインまたはヒンジドメインは、（例えば、タンパク質結合ドメインを含む）細胞外ドメインと、阻害性キメラ受容体もしくは腫瘍標的化キメラ受容体の膜貫通ドメインとの間、または細胞内シグナル伝達ドメインと、阻害性キメラ受容体もしくは腫瘍標的化キメラ受容体の膜貫通ドメインとの間に位置する。スペーサーまたはヒンジドメインは、ポリペプチド鎖内の膜貫通ドメインを細胞外ドメイン及び／または細胞内シグナル伝達ドメインに連結するよう機能する任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドである。スペーサーまたはヒンジドメインは、阻害性キメラ受容体もしくは腫瘍標的化キメラ受容体、またはそれらのドメインに柔軟性を提供するか、あるいは阻害性キメラ受容体もしくは腫瘍標的化キメラ受容体、またはそれらのドメインの立体障害を防止する。いくつかの実施形態では、スペーサードメインまたはヒンジドメインは、最大３００個のアミノ酸（例えば、１０～１００個のアミノ酸、または５～２０個のアミノ酸）を含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のスペーサードメイン（複数可）が、阻害性キメラ受容体または腫瘍標的化キメラ受容体の他の領域に含まれてもよい。
例示的なスペーサーまたはヒンジドメインのアミノ酸配列を、表７に示す。例示的なスペーサーまたはヒンジドメインの核酸配列を、表８に示す。
（表７）例示的なスペーサまたはヒンジドメインのアミノ酸配列
Figure 2023515055000039
（表８）例示的なスペーサまたはヒンジドメインの核酸配列
Figure 2023515055000040
いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサー領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃγＲＩＩＩα、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む：
Figure 2023515055000041
。
いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３１と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３３と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３４と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３５と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３６と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３７と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３８と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３９と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、配列番号７０と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、膜貫通ドメインと１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置付けられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、膜貫通ドメインと１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置付けられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサーを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する。
いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または阻害を調節する。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる。いくつかの実施形態では、細胞内スペーサー領域は、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる。
阻害性キメラ受容体をコードするポリヌクレオチド
阻害性キメラ受容体をコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット、及びそのようなポリヌクレオチドを含むベクターも、本明細書に提示される。阻害性キメラ受容体が多鎖受容体である場合、ポリヌクレオチドのセットが使用される。この場合、ポリヌクレオチドのセットは、単一のベクターまたは複数のベクターにクローニングすることができる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、阻害性キメラ受容体をコードする配列を含み、細胞外タンパク質結合ドメインをコードする配列は、細胞内シグナル伝達ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする配列と連続しており、かつ同じリーディングフレーム内にある。
ポリヌクレオチドは、哺乳動物細胞における発現のためにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの配列全体は、哺乳動物細胞内での発現のためにコドン最適化されている。コドン最適化は、ＤＮＡをコードする同義コドン（すなわち、同じアミノ酸をコードするコドン）の出現頻度が異なる種で偏っているという発見を指す。そのようなコドン縮退は、同一のポリペプチドが様々な核酸配列によってコードされることを可能にする。様々なコドン最適化方法が当該技術分野で知られており、例えば、少なくとも米国特許第５，７８６，４６４号及び同第６，１１４，１４８号に開示される方法が挙げられる。
阻害性キメラ受容体をコードするポリヌクレオチドは、例えば、ポリヌクレオチドを発現する細胞からライブラリーをスクリーニングすることによって、またはそれを含むことが知られているベクターから誘導することによって、またはそれを含む細胞及び組織から標準的な技法を使用して直接単離することによって、当該技術分野において既知の組換え方法を使用して得ることができる。代替的に、ポリヌクレオチドは、クローニングされるのではなく、合成的に産生され得る。
ポリヌクレオチドは、ベクターにクローニングされ得る。いくつかの実施形態では、当該技術分野において既知の発現ベクターが使用される。したがって、本開示は、細胞に直接形質導入され得る阻害性キメラ受容体を発現するレトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物を含む。
本開示はまた、細胞に直接トランスフェクトすることができるＲＮＡ構築物を含む。トランスフェクションで使用するためのｍＲＮＡの生成方法は、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）（例えば、本明細書に記載の３’及び／または５’ＵＴＲ）、５’キャップ（例えば、本明細書に記載の５’キャップ）、及び／または内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、本明細書に記載のＩＲＥＳ）、発現される核酸、及びポリＡ尾部を含有する構築物を産生するために、特別に設計されたプライマーを有する鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）、続いてポリＡ添加を伴う。このようにして産生されたＲＮＡは、異なる種類の細胞を効率的にトランスフェクションすることができる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ阻害性キメラ受容体ベクターは、エレクトロポレーションによって細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。
細胞
一態様では、本開示は、阻害性キメラ受容体改変細胞を提供する。細胞は、本明細書に記載の阻害性キメラ受容体を発現するために改変された幹細胞、前駆細胞、及び／または免疫細胞であり得る。いくつかの実施形態では、免疫細胞に由来する細胞株を使用する。細胞の非限定的な例としては、本明細書で提供されるように、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、マクロファージ、好中球、間葉系幹細胞、樹状細胞、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、及び制御性Ｔ細胞（ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋））、及びＢ細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞は、多能性幹細胞、胚性幹細胞、成人幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯幹細胞、または他の幹細胞などの幹細胞。
細胞は、本明細書で提供される阻害性キメラ受容体を発現するように改変され得る。したがって、本開示は、阻害性キメラ受容体を発現するように操作される細胞（例えば、細胞集団）を提供し、阻害性キメラ受容体は、タンパク質結合ドメイン（例えば、抗原結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメインなど）、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の阻害性細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、３つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、４つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、５つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、３つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、４つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、５つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、免疫調節細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫調節細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
いくつかの実施形態では、細胞は、自家である。いくつかの実施形態では、細胞は、同種異系である。
いくつかの実施形態では、免疫調節細胞は、キメラ阻害性受容体を含み、キメラ阻害性受容体は、細胞外タンパク質結合ドメイン（例えば、細胞外抗原結合ドメイン、細胞外リガンド結合ドメイン、細胞外受容体結合ドメインなど）と、膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）がキメラ阻害性受容体に結合すると、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、３つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、４つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、５つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、３つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、４つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、阻害性キメラ受容体は、５つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、細胞は、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、組換え的に発現される。
いくつかの実施形態では、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体は細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態では、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する。いくつかの実施形態では、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。いくつかの実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は非腫瘍細胞である。
複数のキメラ受容体を発現する細胞
細胞は、本明細書で提供される阻害性キメラ受容体を発現するように改変され得る。細胞はまた、阻害性キメラ受容体（例えば、ｉＣＡＲ）及び腫瘍標的化ＣＡＲ（例えば、ａＣＡＲ）を発現するように改質され得る。細胞が、少なくとも１つの阻害性キメラ受容体及び少なくとも１つの腫瘍標的化ＣＡＲを発現するように改質される場合、細胞は、複数の阻害性及び／または腫瘍標的化キメラ受容体タンパク質及び／またはポリヌクレオチドを発現することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０個以上の阻害性キメラ受容体ポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、細胞は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０個以上の腫瘍標的化受容体ポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドを発現する。
阻害性キメラ受容体改質細胞の調製方法
一態様では、本開示は、実験または治療的使用のために、阻害性キメラ受容体を含む改変された免疫細胞を調製する方法を提供する。
治療的阻害性キメラ受容体改変細胞を作製するためのエクスビボ手順は、当該技術分野において周知である。例えば、細胞は、哺乳動物（例えば、ヒト）から単離され、本明細書に開示される阻害性キメラ受容体を発現するベクターを用いて遺伝子改変される（すなわち、インビトロで形質導入またはトランスフェクションされる）。阻害性キメラ受容体改変細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療的利益を提供することができる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであってもよく、阻害性キメラ受容体改変細胞は、レシピエントに対して自家であってもよい。代替的に、細胞は、レシピエントに関して同種、同系、または異種であり得る。造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖の手順は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本開示の細胞に適用することができる。他の好適な方法は、当該技術分野において既知であり、したがって、本開示は、細胞のエクスビボ増殖の任意の特定の方法に限定されない。簡潔に述べると、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）のエクスビボ培養及び増殖は、（１）末梢採血または骨髄移植片からの哺乳動物由来のＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞を採取することと、（２）そのような細胞をエクスビボで増殖することと、を含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載されている細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３－Ｌ、ＩＬ－１、ＩＬ－３及びｃ－キットリガンドなどの他の因子が、細胞の培養及び増殖に使用され得る。
いくつかの実施形態では、本方法は、細胞集団（例えば、細胞培養培地中）を所望の細胞密度（例えば、特定の細胞に基づく療法に十分な細胞密度）まで培養することを含む。いくつかの実施形態では、細胞集団は、抑制可能なプロテアーゼの活性を抑制する薬剤の不在下で、または抑制可能なプロテアーゼの活性を抑制する薬剤の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、細胞集団は、開始集団の細胞の少なくとも２倍の数を含む増殖した細胞集団の産生をもたらす期間培養される。いくつかの実施形態では、細胞集団は、開始集団の細胞の少なくとも４倍の数を含む増殖した細胞集団の産生をもたらす期間培養される。いくつかの実施形態では、細胞集団は、開始集団の細胞の少なくとも１６倍の数を含む増殖した細胞集団の産生をもたらす期間培養される。
使用方法
がんなどの免疫関連障害の治療方法もまた包含される。該方法は、本明細書に記載される阻害性キメラ受容体または免疫応答性阻害性キメラ受容体改変細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態では、そのようなキメラ受容体を発現するキメラ受容体または遺伝子組換え免疫応答性細胞を含む組成物は、がんなどの増殖性障害の治療のために、全身的にまたは直接的に対象に提供することができる。
一態様では、本開示は、実験または治療的使用のために、少なくとも１つの阻害性キメラ受容体を含む改変された免疫細胞（例えば、阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）改変細胞）を調製する方法を提供する。いくつかの実施形態では、改変免疫細胞は、少なくとも１つの腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む（例えば、ｉＣＡＲ及びａＣＡＲ改変細胞）。
いくつかの態様では、使用方法は、免疫調節細胞の表面上で本明細書に記載のキメラ阻害性受容体を発現させるように免疫調節細胞を操作することを含み、同族タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）のキメラ阻害性受容体への結合時に、細胞内シグナル伝達ドメインが、キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、免疫調節細胞の表面上で発現されたキメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法を包含する。他の態様では、使用方法は、本明細書に記載の単離された細胞または組成物を、キメラ阻害性受容体の同族タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）と、キメラ阻害性受容体が同族タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、タンパク質（例えば、リガンド、受容体、抗原など）のキメラ阻害性受容体への結合時に、細胞内シグナル伝達ドメインが、キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、免疫調節細胞の表面上で発現させたキメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法を包含する。
一般に、阻害性キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体（例えば、活性化ＣＡＲ）によって開始される免疫応答を防止、減弱、阻害、または抑制するために使用される。例えば、免疫調節細胞は、タンパク質標的１（例えば、非腫瘍標的リガンド、受容体、抗原など）を認識する阻害性キメラ受容体及びタンパク質標的２（例えば、腫瘍標的抗原）を認識する腫瘍標的化キメラ受容体を発現する。例示的な免疫調節細胞が標的細胞に接触するとき、阻害性キメラ受容体及び腫瘍標的化キメラ受容体は、それらの同族タンパク質に結合するか、または結合しない場合がある。標的細胞が、タンパク質標的１及びタンパク質標的２の両方を発現する非腫瘍細胞である例示的な例では、阻害性キメラ受容体及び腫瘍標的化受容体の両方が活性化され得る。そのような場合、阻害性キメラ受容体の活性化は、腫瘍標的化キメラ受容体のシグナル伝達の防止、減弱、または阻害をもたらし、免疫調節細胞は活性化されない。同様に、標的細胞がタンパク質標的１のみを発現する非腫瘍細胞である例示的な例では、阻害性キメラ受容体のみが活性化され得る。対照的に、標的細胞がタンパク質標的２のみを発現する腫瘍細胞である例示的な例では、腫瘍標的化キメラ受容体が活性化され得る間、阻害性キメラ受容体は活性化され得ず、免疫調節細胞の活性化をもたらすシグナル伝達をもたらす。
腫瘍標的化キメラ受容体によって開始される免疫応答の減弱は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の減少もしくは低下、腫瘍標的化キメラ受容体のシグナル伝達の減少もしくは低下、または免疫調節細胞の活性化の減少もしくは低下であり得る。阻害性キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、腫瘍標的化キメラ受容体によるシグナル伝達、または腫瘍標的化キメラ受容体による免疫調節細胞の活性化を、阻害性キメラ受容体を欠く免疫調節細胞と比較するときの腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、シグナル伝達、免疫調節細胞の活性化と比較して、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍以上減弱させることができる。いくつかの実施形態では、減弱は、腫瘍標的化キメラ受容体が活性化された後の、その活性の減少または低下を指す。
腫瘍標的化キメラ受容体によって開始される免疫応答の防止は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の阻害もしくは低下、腫瘍標的化キメラ受容体のシグナル伝達の減少もしくは低下、または免疫調節細胞の活性化の阻害もしくは低下であり得る。阻害性キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、腫瘍標的化キメラ受容体によるシグナル伝達、または腫瘍標的化キメラ受容体による免疫調節細胞の活性化を、阻害性キメラ受容体を欠く免疫調節細胞と比較するときの腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、シグナル伝達、免疫調節細胞の活性化と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍以上防止することができる。いくつかの実施形態では、防止は、腫瘍標的化キメラ受容体が活性化される前の、その活性の遮断を指す。
腫瘍標的化キメラ受容体によって開始される免疫応答の阻害は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の阻害もしくは低下、腫瘍標的化キメラ受容体のシグナル伝達の減少もしくは低下、または免疫調節細胞の活性化の阻害もしくは低下であり得る。阻害性キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、腫瘍標的化キメラ受容体によるシグナル伝達、または腫瘍標的化キメラ受容体による免疫調節細胞の活性化を、阻害性キメラ受容体を欠く免疫調節細胞と比較するときの腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、シグナル伝達、免疫調節細胞の活性化と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍以上阻害することができる。いくつかの実施形態では、阻害は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の前後の、その活性の減少または低下を指す。
腫瘍標的化キメラ受容体によって開始される免疫応答の抑制は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の阻害もしくは低下、腫瘍標的化キメラ受容体のシグナル伝達の減少もしくは低下、または免疫調節細胞の活性化の阻害もしくは低下であり得る。阻害性キメラ受容体は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、腫瘍標的化キメラ受容体によるシグナル伝達、または腫瘍標的化キメラ受容体による免疫調節細胞の活性化を、阻害性キメラ受容体を欠く免疫調節細胞と比較するときの腫瘍標的化キメラ受容体の活性化、シグナル伝達、免疫調節細胞の活性化と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍以上抑制することができる。いくつかの実施形態では、抑制は、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の前後の、その活性の減少または低下を指す。
免疫応答は、活性化された免疫調節細胞からのサイトカインまたはケモカイン産生及び分泌であり得る。免疫応答は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答であり得る。
いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、活性化免疫調節細胞からのサイトカイン産生を抑制することができる。いくつかの実施形態では、キメラ阻害性受容体は、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答は、免疫調節細胞の活性化によって誘導される。
一態様では、本開示は、免疫細胞を、本明細書に提供される阻害性キメラ受容体を発現するように遺伝子改変し、改変された免疫細胞を、それを必要とする対象に投与する、ある種の細胞療法を提供する。
したがって、いくつかの実施形態では、本方法は、状態または障害を治療するために細胞ベースの療法を必要とする対象に、増殖させた細胞集団の細胞を送達することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト対象である。いくつかの実施形態では、状態または障害は、自己免疫状態である。いくつかの実施形態では、状態または障害は、免疫関連状態である。いくつかの実施形態では、状態または障害は、がん（例えば、原発性がんまたは転移性がん）である。いくつかの実施形態では、がんは、固形がんである。いくつかの実施形態では、がんは、骨髄性障害などの液性がんである。
薬学的組成物
阻害性キメラ受容体または免疫応答性細胞は、薬学的組成物中に製剤化することができる。本開示の薬学的組成物は、本明細書に記載の阻害性キメラ受容体（例えば、ｉＣＡＲ）または免疫応答性細胞（例えば、複数の阻害性キメラ受容体発現細胞）を、１つ以上の薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含み得る。そのような材料は無毒でなければならず、活性成分の有効性を干渉してはならない。担体または他の材料の正確な性質は、例えば、経口、静脈内、皮膚または皮下、鼻、筋肉内、腹腔内経路の投与経路に依存し得る。特定の実施形態では、組成物は、目的の臓器（例えば、障害によって影響を受ける臓器）に直接的に注入される。代替的に、組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍脈管系）への投与によって、目的の臓器に間接的に提供され得る。インビトロまたはインビボでのＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＣＴＬ細胞の産生を増加させるために、組成物の投与前、投与中、または投与後に、増殖剤及び分化剤を提供することができる。
特定の実施形態では、組成物は、免疫応答性細胞またはそれらの前駆細胞などの遺伝子改変細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物である。投与は、自家または異種であり得る。例えば、免疫応答性細胞または前駆体は、１つの対象から得ることができ、同じ対象または異なる適合性の対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、本開示の免疫応答性細胞またはその子孫は、末梢血細胞（例えば、インビボ、エクスビボ、またはインビトロ由来）に由来し得、カテーテル投与を含む局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を介して投与され得る。本開示の治療用組成物（例えば、本開示の遺伝子組修飾細胞を含む薬学的組成物）を投与する場合、一般に、単位用量の注入可能な形態（溶液、懸濁液、乳剤）で製剤化される。
本開示のある特定の態様は、本開示のキメラ受容体またはかかるキメラ受容体を発現する遺伝子改変細胞（例えば、本開示の免疫応答性細胞）を含む組成物の製剤に関する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞を含む本開示の組成物は、選択されたｐＨに緩衝され得る等張性水溶液、懸濁液、乳剤、分散液、及び粘性組成物が含まれるが、これらに限定されない滅菌液体調製物として提供されてもよい。液体調製物は、典型的には、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物よりも調製が容易である。追加的に、液体組成物は、特に注入によって、より便利に投与することができる。いくつかの実施形態では、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘度範囲内で製剤化され得る。液体または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る担体を含み得る。
経口投与のための薬学的組成物は、錠剤、カプセル、粉末または液体形態であり得る。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体担体を含み得る。液体薬学的組成物は、一般に、水、石油、動物油もしくは植物油、鉱物油、または合成油などの液体担体を含む。生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他の糖溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールなどのグリコールを含むことができる。
静脈内、皮膚または皮下注射、または患部での注射の場合、活性成分は、発熱物質を含まず、好適なｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態である。当業者であれば、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、乳酸加リンガー注射液などの等張ビヒクルを使用して好適な溶液を調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、及び／または他の添加剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、等張性、すなわち、血液及び涙液と同じ浸透圧を有することができる。いくつかの実施形態では、所望の等張性は、例えば、塩化ナトリウム、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、または他の無機もしくは有機溶質を使用して達成され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、組成物の安定性及び滅菌性を増強し得る様々な添加剤をさらに含み得る。かかる添加剤の例には、抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、及び緩衝液が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、微生物汚染は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含むがこれらに限定されない様々な抗菌剤及び抗真菌剤のいずれかを含めることによって防止することができる。本開示の注入可能な製剤の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる好適な薬剤の使用によってもたらすことができる。いくつかの実施形態では、滅菌注入可能溶液は、本開示の遺伝子改変細胞を、所望の様々な量の任意の他の成分とともに、十分な量の適切な溶媒に組み込むことによって調製することができる。かかる組成物は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの好適な担体、希釈剤、または賦形剤と混合され得る。いくつかの実施形態では、組成物はまた、凍結乾燥され得る。組成物は、投与経路及び所望の調製物に応じて、湿潤剤、分散剤、ｐＨ緩衝剤、及び抗菌剤などの補助物質を含むことができる。
いくつかの実施形態では、本開示の製剤の成分は、化学的に不活性であり、本開示の遺伝子改変細胞の生存率または有効性に影響を及ぼさないように選択される。
本開示の遺伝子改変細胞の治療的使用に関する１つの考慮事項は、最適な有効性を達成するために必要な細胞の量である。いくつかの実施形態では、投与される細胞の量は、治療される対象によって変化する。ある特定の実施形態では、遺伝子組換え細胞を必要とする対象に投与される遺伝子改変細胞の量は、１×１０４細胞～１×１０１０細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、有効用量とみなされる細胞の正確な量は、特定の対象のサイズ、年齢、性別、体重、及び状態を含む、各対象に個々に因子に基づき得る。投薬量は、本開示及び当業者の知識に基づいて、当業者によって容易に確認することができる。
個体に投与されるべき本発明によるポリペプチド、抗体、核酸、小分子または他の薬学的に有用な化合物であろうと、投与は、好ましくは、「治療有効量」または「予防有効量」であり（場合によっては、予防は治療とみなすことができるが）、これは、個体に利益を示すのに十分なものである。実際の投与量、及び投与の速度及び時間経過は、治療されるタンパク質凝集疾患の性質及び重症度に依存することになる。治療の処方、例えば投薬量の決定などは、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内であり、通常、治療すべき障害、個々の患者の状態、送達部位、投与方法、及び開業医に知られている他の要因を考慮する。上記の技術及びプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０に見出すことができる。
組成物は、治療すべき状態に応じて、単独で、または他の治療と組み合わせて、同時投与または逐次投与することができる。
キット
本開示のある特定の態様は、がんまたは他の疾患（例えば、免疫関連または自己免疫性障害）の治療及び／または予防のためのキットに関する。特定の実施形態では、キットは、有効量の本開示の１つ以上のキメラ受容体、本開示の単離核酸、本開示のベクター、及び／または本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）を含む治療組成物または予防組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、滅菌容器を含む。いくつかの実施形態では、そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、または当該技術分野で知られる他の適切な容器形態であり得る。容器は、プラスチック、ガラス、積層紙、金属箔、または医薬品を保持するのに適した他の材料で作製され得る。
いくつかの実施形態では、治療用または予防用組成物は、がんまたは免疫関連疾患を有する対象に、またはがんまたは免疫関連疾患を発症するリスクがある対象に治療用または予防用組成物を投与するための説明書とともに提供される。いくつかの実施形態では、指示は、障害の治療及び／または予防のための組成物の使用に関する情報を含み得る。いくつかの実施形態では、指示には、治療または予防組成物、投薬スケジュール、障害もしくはその症状の治療または予防のための投与スケジュール、注意事項、警告、適応症、対症療法、過剰投与情報、有害反応、動物薬理学、臨床研究、及び／または参考文献の記載が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、指示は、（存在する場合）容器上に、または容器に適用されるラベルとして、または容器内もしくは容器とともに供給される別個のシート、パンフレット、カード、またはフォルダとして、直接印刷され得る。
追加の実施形態
本発明の特定の実施形態を記載する実施形態を以下に列挙する。
実施形態１：キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、キメラ阻害性受容体。
実施形態２：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３：膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが、同じタンパク質に由来する、実施形態１または実施形態２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４：膜貫通ドメインが、同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５：膜貫通ドメインが、第１のタンパク質に由来し、細胞内シグナル伝達ドメインが、第１のタンパク質とは異なる第２のタンパク質に由来する、実施形態１または実施形態２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡに由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000042
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000043
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む、実施形態６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＬＩＲ１に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000044
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000045
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む、実施形態９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000046
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000047
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＤ－１に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000048
（配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000049
（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＴＬＡ４に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む、実施形態１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２４：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２５：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態２２～２４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２６：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２７：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２８：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２９：膜貫通ドメインが、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３０：キメラ阻害性受容体が、ＣＴＬＡ４に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３１：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３２：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３３：膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３４：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３５：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３６：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む、実施形態３４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３７：膜貫通ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３４～３６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３８：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３９：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４０：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４１：膜貫通ドメインが、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３８～４０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４２：キメラ阻害性受容体が、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４３：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４４：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４５：膜貫通ドメインが、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態４２～４４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４６：タンパク質が、標的腫瘍上では発現されない、実施形態１～４５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４７：タンパク質が、非腫瘍細胞上で発現される、実施形態１～４６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４８：タンパク質が、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される、実施形態４７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４９：細胞外タンパク質結合ドメインが、リガンド結合ドメインを含む、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５０：細胞外タンパク質結合ドメインが、受容体結合ドメインを含む、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５１：細胞外タンパク質結合ドメインが、抗原結合ドメインを含む、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５２：抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、実施形態５１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５３：抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態５１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５４：各ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態５３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５５：ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーによって分離されている、実施形態５４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５６：ペプチドリンカーが、
Figure 2023515055000050
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態５５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５７：ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、実施形態５４～５６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５８：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態１～５７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５９：細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結される、実施形態１～５８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６０：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態１～５７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６１：細胞外タンパク質結合ドメインが、高結合親和性を有する、実施形態１～６０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６２：細胞外タンパク質結合ドメインが、低結合親和性を有する、実施形態１～６０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６３：キメラ阻害性受容体が、活性化免疫調節細胞によるサイトカイン産生を抑制することができる、実施形態１～６２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６４：キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導される、実施形態１～６３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６５：標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態１～６４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６６：細胞内シグナル伝達ドメインが、１つ以上の改変を含む、実施形態１～６５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６７：１つ以上の改変が、その点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態６６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６８：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態６６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６９：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態６６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７０：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態６６～６９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７１：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態７０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７２：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態７０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７３：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたとき、腫瘍標的化キメラ受容体の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態６６～７２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７４：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態７３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７５：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態７３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７６：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１～７５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７７：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１～７５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７８：スペーサー領域が、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態７６または実施形態７７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７９：スペーサー領域が、
Figure 2023515055000051
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態７６または実施形態７７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８０：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態７６～７９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８１：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態８０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８２：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態８０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８３：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態７６～８２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８４：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態８３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８５：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態８３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８６：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態７６～８５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８７：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態８６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８８：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態８６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８９：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１～８８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９０：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１～８８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９１：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態８９または実施形態９０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９２：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態９１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９３：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態９１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９４：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態８９～９３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９５：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態９４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９６：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態９４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９７：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態８９～９６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９８：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態９７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９９：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態９７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１００：阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインをさらに含む、実施形態１～９９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０１：酵素阻害性ドメインが、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、実施形態１００に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０２：酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、実施形態１００または実施形態１０１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０３：酵素触媒ドメインが、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する、実施形態１０２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０４：酵素阻害性ドメインが、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む、実施形態１００～１０３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０５：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態１０４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０６：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態１０４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０７：腫瘍標的化キメラ受容体が、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１～１０６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０８：免疫調節細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０９：免疫調節細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態１～１０８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１０：キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、キメラ阻害性受容体。
実施形態１１１：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、各々、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１１０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１２：膜貫通ドメインが、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つと同じタンパク質に由来する、実施形態１１０または実施形態１１１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１３：膜貫通ドメインが、同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１１２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１４：膜貫通ドメインが、第１のタンパク質に由来し、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、第１のタンパク質とは異なるタンパク質に由来する、実施形態１１０または実施形態１１１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１５：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＢＴＬＡに由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１６：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000052
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１７：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000053
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む、実施形態１１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１８：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＬＩＲ１に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１９：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000054
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２０：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000055
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む、実施形態１１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２１：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＰＤ－１に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２２：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000056
（配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２３：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000057
（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２４：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２５：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000058
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２６：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000059
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２７：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＴＬＡ４に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２８：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000060
（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２９：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000061
（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３０：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１１０～１２９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３１：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３２：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３３：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む、実施形態１３１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３４：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３５：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３６：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３７：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む、実施形態１３５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３８：膜貫通ドメインが、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３９：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４０：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４１：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む、実施形態１３９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４２：膜貫通ドメインが、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１３９～１４１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４３：キメラ阻害性受容体が、ＣＴＬＡ４に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４４：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１４３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４５：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む、実施形態１４３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４６：膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１４３～１４５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４７：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４８：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１４７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４９：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む、実施形態１４７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５０：膜貫通ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１４７～１４９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５１：キメラ阻害性受容体が、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５２：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号Ｘ）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１５１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５３：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号Ｘ）のアミノ酸配列を含む、実施形態１５１のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５４：膜貫通ドメインが、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１５１～１５３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５５：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５６：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５７：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５８：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５９：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１５５～１５８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６０：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６１：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６２：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１６０または実施形態１６１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６３：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６４：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６５：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１６３または実施形態１６４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６６：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６７：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６８：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１６６または実施形態１６７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６９：タンパク質が、標的腫瘍上では発現されない、実施形態１１０～１６８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７０：タンパク質が、非腫瘍細胞上で発現される、実施形態１１０～１６９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７１：タンパク質が、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される、実施形態１７０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７２：細胞外タンパク質結合ドメインが、リガンド結合ドメインを含む、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７３：細胞外タンパク質結合ドメインが、受容体結合ドメインを含む、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７４：細胞外タンパク質結合ドメインが、抗原結合ドメインを含む、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７５：抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、実施形態１７４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７６：抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１７４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７７：各ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態１７６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７８：ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーによって分離されている、実施形態１７７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７９：ペプチドリンカーが、
Figure 2023515055000062
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１７８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８０：ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、実施形態１７７～１７９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８１：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態１１０～１８０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８２：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態１１０～１８１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８３：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８４：細胞外タンパク質結合ドメインが、高結合親和性を有する、実施形態１１０～１８３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８５：細胞外タンパク質結合ドメインが、低結合親和性を有する、実施形態１１０～１８３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８６：キメラ阻害性受容体が、活性化免疫調節細胞によるサイトカイン産生を抑制することができる、実施形態１１０～１８５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８７：キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導された、実施形態１１０～１８６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８８：標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態１１０～１８７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８９：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、１つ以上の改変を含む、実施形態１１０～１８８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９０：１つ以上の改変が、その点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態１８９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９１：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態１８９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９２：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態１８９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９３：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態１８９～１９２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９４：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態１９３のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９５：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態１９３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９６：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたとき、腫瘍標的化キメラ受容体の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態１８９～１９５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９７：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態１９６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９８：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態１９６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９９：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～１９８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２００：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～１９８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０１：スペーサー領域が、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１９９または実施形態２００に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０２：スペーサー領域が、
Figure 2023515055000063
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１９９または実施形態２００に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０３：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態１９９～２０２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０４：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態２０３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０５：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態２０３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０６：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態１９９～２０５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０７：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態２０６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０８：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態２０６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０９：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態１９９～２０８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１０：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態２０９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１１：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態２０９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１２：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～２１１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１３：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～２１１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１４：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態２１２または実施形態２１３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１５：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態２１４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１６：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態２１４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１７：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態２１２～２１６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１８：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態２１７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１９：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態２１７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２０：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態２１２～２１９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２１：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態２２０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２２：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態２２０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２３：阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインをさらに含む、実施形態１１０～２２２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２４：酵素阻害性ドメインが、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、実施形態２２３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２５：酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、実施形態２２３または実施形態２２４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２６：酵素触媒ドメインが、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する、実施形態２２５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２７：酵素阻害性ドメインが、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む、実施形態２２３～２２６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２８：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態２２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２９：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態２２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３０：腫瘍標的化キメラ受容体が、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１１０～２２９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３１：免疫調節細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態１１０～２３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３２：免疫調節細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態１１０～２３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３３：実施形態１～２３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２３４：実施形態１～２３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体をコードする操作された核酸。
実施形態２３５：実施形態２３４に記載の操作された核酸を含む、発現ベクター。
実施形態２３６：実施形態２３４に記載の操作された核酸または実施形態２３５に記載の発現ベクターを含む、単離された免疫調節細胞。
実施形態２３７：実施形態２３４に記載の操作された核酸または実施形態２３５に記載の発現ベクターと、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２３８：実施形態１～２３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体を含む、単離された免疫調節細胞。
実施形態２３９：細胞が、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態２３８に記載の単離された細胞。
実施形態２４０：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、実施形態２３９に記載の単離された細胞。
実施形態２４１：キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞であって、キメラ阻害性受容体が、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２４２：細胞が、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態２４１に記載の単離された細胞。
実施形態２４３：単離された免疫調節細胞であって、
（ａ）キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、
（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２４４：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態２４１～２４３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４５：キメラ阻害性受容体が、組換え発現される、実施形態２３８～２４４のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４６：キメラ阻害性受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、実施形態２３８～２４５のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４７：腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、実施形態２３８～２４６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４８：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体が細胞を活性化することができる、実施形態２３８～２４７のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２４９：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する、実施形態２３８～２４８のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５０：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導される、実施形態２３８～２４９のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５１：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態２４１～２５０のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５２：細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２４１～２５１のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５３：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２４１～２５０のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５４：キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞であって、キメラ阻害性受容体が、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２５５：細胞が、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態２５２に記載の単離された細胞。
実施形態２５６：単離された免疫調節細胞であって、
（ａ）キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、
（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２５７：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインの各々が、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態２５４～２５６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２５８：キメラ阻害性受容体が、組換え発現される、実施形態２５４～２５７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２５９：キメラ阻害性受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、実施形態２５４～２５８のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６０：腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、実施形態２５４～２５９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６１：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体が細胞を活性化することができる、実施形態２５４～２６０のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６２：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する、実施形態２５４～２６１のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６３：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導される、実施形態２５４～２６２のうちのいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６４：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態２５４～２６３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６５：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２５４～２６４のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６６：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２５４～２６３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６７：標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態２３８～２６６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６８：細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態２３８～２６７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６９：細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態２３８～２６７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２７０：細胞が、自家である、実施形態２３８～２６９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２７１：細胞が同種異系である、実施形態２３８～２６９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２７２：実施形態２３８～２７１のいずれか１つに記載の単離された細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２７３：免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法であって、
免疫調節細胞を操作して、免疫調節細胞の表面上に、実施形態１～２３１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体を発現させることを含み、
同族タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、方法。
実施形態２７４：免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法であって、
実施形態２３８～２７１のいずれか１つに記載の単離された細胞または実施形態２７２に記載の組成物を、キメラ阻害性受容体の同族タンパク質と、キメラ阻害性受容体が同族タンパク質に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、方法。
実施形態２７５：腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態２７３または実施形態２７４に記載の方法。
実施形態２７６：ＣＡＲが、腫瘍細胞の表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する、実施形態２７５に記載の方法。
以下は、本発明を実行するための特定の実施形態の実施例である。これらの実施例は、例証目的で提示されているにすぎず、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に対する正確さを確保する努力がなされているが、当然いくつかの実験による誤差及び偏差が許容されるはずである。
本発明の実施は、別途指示のない限り、当業者の範囲内で、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ手法、及び薬理学の従来の方法を用いるであろう。そのような手法は、文献で完全に説明される。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）、Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）、Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３ｒｄ Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）Ｖｏｌｓ Ａ ａｎｄ Ｂ（１９９２）を参照されたい。
実施例１：様々なシグナル伝達ドメインを有する阻害性ＣＡＲは、Ｔ細胞活性化を低下させる。
方法及び材料
阻害性キメラ受容体及び腫瘍標的化キメラ受容体構築物
ＢＴＬＡ細胞内シグナル伝達ドメインを有する阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を合成した。ｉＣＡＲは、ＩｇＧκ分泌シグナル、ＦＬＡＧタグを有する抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＢＴＬＡ膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。ｉＣＡＲ内のｓｃＦｖのＮ末端（シグナル配列の後）にＦＬＡＧタグを融合させた。２つの活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）も構築した。１つのａＣＡＲは、ＣＤ８分泌シグナル、Ｍｙｃタグを有する抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８ならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを有していた。他方のａＣＡＲは、ＣＤ８分泌シグナル、Ｍｙｃタグを有する抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８ならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを有していた。ａＣＡＲにおけるｓｃＦｖのＣ末端（ヒンジの前）にＭＹＣタグを融合させた。どちらの場合も、３×（Ｇ４Ｓ）リンカーを、ｓｃＦｖ及びｓｃＦｖを膜貫通ドメインに接続するＣＤ８ヒンジにおいて使用した。
ＣＤ１９を発現する標的細胞に接触する、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲと抗ＣＤ１９－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を、図１Ａに示す。
ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現する標的細胞に接触する、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲと抗ＣＤ２０－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を、図４Ａに示す。
ＢＴＬＡ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＮＫＧ２Ａ、またはＬＩＲ１細胞内シグナル伝達ドメイン及びＧＦＰに融合した抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖを有する追加の阻害性キメラ受容体も合成した。これらの阻害性キメラ受容体は、上記のようなＦＬＡＧタグ及びＧＦＰ蛍光タンパク質を有していた。ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン及びｍＣｈｅｒｒｙに融合した抗Ａｘｌ ｓｃＦｖを含む追加のａＣＡＲも合成した。Ａｘｌ、Ｈｅｒ２、Ａｘｌ及びＨｅｒ２の両方を発現する標的細胞、またはＡｘｌもＨｅｒ２も発現しない標的細胞、ならびに一般的な細胞内阻害性ドメインを有する抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲと抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を、図７Ａに示す。
表９は、合成された阻害性及び腫瘍標的化キメラ受容体の配列を提供する。
（表９）阻害性及び腫瘍標的化キメラ受容体
Figure 2023515055000064
ＢＴＬＡ細胞内シグナル伝達ドメインを有する抗ＣＤ１９ ＢＴＬＡ阻害性キメラ受容体の配列を、配列番号５６として示す。抗ＣＤ１９－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ腫瘍標的化ＣＡＲの配列を、配列番号５７として示す。抗ＣＤ２０－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ腫瘍標的化ＣＡＲの配列を、配列番号５８として示す。
抗ＣＤ１９または抗ＣＤ２０活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）及び／または抗ＣＤ１９阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）によるＴ細胞形質導入及び増殖
１日目に、１×１０６個の精製されたＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞を解凍し、３×１０６個のダイナビーズで刺激し、次いで０．２ｕｇ／ｍＬのＩＬ－２で１ｍＬのＯｐｔｉｍｉｚｅｒ ＣＴＳ Ｔ細胞増殖培地（Ｇｉｂｃｏ）で培養した。Ｔ細胞を、抗ＣＤ１９もしくは抗ＣＤ２０活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）及び／または抗ＣＤ１９阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）のいずれかの構成的発現をコードするレンチウイルス（各１００，０００、ＧｏＳｔｉｘ（Ｔｅｋａｒａ）によって定量化される）とともに、２日目に単一もしくは同時形質導入した。
３日目に、ダイナビーズを磁石によって除去した。Ｔ細胞を計数し、継代させた（０．５×１０６細胞／ｍＬ）。これらの細胞のアリコートを、ＰＥコンジュゲート抗ＭＹＣ及びＢＶ４２１コンジュゲート抗ＦＬＡＧ抗体（ａＣＡＲ及びｉＣＡＲに対応する）で染色し、それらの導入遺伝子発現を、ＬＸ ＣｙｔｏＦｌｅｘフローサイトメトリーマシンを使用して定量化した。その後の増殖の間、細胞を２日ごとに継代させた（０．５×１０６細胞／ｍＬ）。
抗ＣＤ１９／ＣＤ２０ ｉＣＡＲ及びａＣＡＲのＴ細胞共培養アッセイ
８日目に、Ｔ細胞を計数し、共培養アッセイのために９６ウェルプレートに分配した。各ウェルは、細胞トレースバイオレット色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した５×１０５個のＮａｌｍ６標的細胞、及び５×１０５個のａＣＡＲプラスまたはマイナスのｉＣＡＲ Ｔ細胞を含有した。共培養物を５％のＣＯ２とともに、３７℃で１８時間インキュベートした。
９日目に、共培養物中の細胞をＮＩＲ生死判定用（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）染料（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色し、標的細胞の死滅パーセントをＬＸ ＣｙｔｏＦｌｅｘフローサイトメトリーマシンを使用して定量化した。殺傷パーセントは、標的細胞に対してのみ正規化された。同じ共培養物由来の培地中のサイトカインを、ヒト磁気ルミネクスアッセイ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）及びＭＡＧＰＩＸアナライザ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）を使用して測定した。
抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）及び／または抗Ｈｅｒ２阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）によるＴ細胞形質導入及び増殖
１日目に、１×１０６個の精製されたＣＤ４＋Ｔ細胞を解凍し、３×１０６個のダイナビーズで刺激し、次いで０．２ｕｇ／ｍＬのＩＬ－２で１ｍＬのＯｐｔｉｍｉｚｅｒ ＣＴＳ Ｔ細胞増殖培地（Ｇｉｂｃｏ）で培養した。Ｔ細胞を、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）及び／または様々な抗Ｈｅｒ２阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）の個々のいずれかの構成的発現をコードするレンチウイルス（各１００，０００、ＧｏＳｔｉｘ（Ｔｅｋａｒａ）によって定量化される）とともに、２日目に単一もしくは同時形質導入した。ｉＣＡＲ発現プラスミドには、ピューロマイシン耐性遺伝子が含まれていた。
４日目に、Ｔ細胞を、ピューロマイシンを含有する培地とインキュベートして、示されるｉＣＡＲの発現を選択した。抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ活性化ＣＡＲのみで形質導入された対照細胞は、ピューロマイシンで選択しなかった。
ダイナビーズを磁石によって除去した。Ｔ細胞を計数し、継代させた（０．５×１０６細胞／ｍＬ）。抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ ａＣＡＲの発現を、ｍＣｈｅｒｒｙ発現についてフローサイトメトリーによってチェックした。その後の増殖の間、細胞を２日ごとに継代させた（０．５×１０６細胞／ｍＬ）。
抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲ及び抗Ａｘｌ ａＣＡＲのＴ細胞共培養アッセイ
７日目に、Ｔ細胞を計数し、共培養アッセイのために、ヒト抗体で補充したＸ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）を含む９６ウェルプレートに分配した。各ウェルは、Ａｌｘ、Ｈｅｒ２のいずれか、Ａｘｌ及びＨｅｒ２の両方を発現するか、またはＡｘｌもＨｅｒ２も発現しない（ｗｔ）１×１０５個のＮａｌｍ６標的細胞、ならびに抗Ａｘｌ活性化ＣＡＲ及び示された抗Ｈｅｒ２阻害性ＣＡＲの両方を発現する１×１０５個のＣＤ４＋Ｔ細胞を含有した。抗Ａｘｌ活性化ＣＡＲのみを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞を対照として使用した。共培養物を５％のＣＯ２とともに、３７℃で１８時間インキュベートした。
８日目に、上清を採取し、ＥＬＩＳＡを介してサイトカインを分析した。
結果
阻害性キメラ受容体及び腫瘍標的化キメラ受容体は、同じ抗原に結合する。
同じ抗原に結合するｉＣＡＲ及びａＣＡＲを発現する細胞におけるＴ細胞活性化を低下または阻害するｉＣＡＲの能力を評価した。ＣＤ１９を発現する標的細胞に接触する、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲと抗ＣＤ１９ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を、図１Ａに示す。抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ－ｉＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ａＣＡＲで形質導入された細胞は、初代Ｔ細胞中で高レベルの表面発現を示した。ａＣＡＲのみで形質導入されたＴ細胞は、高いａＣＡＲ発現を示し、ｉＣＡＲ発現を示さなかった（図１Ｃ）が、ａＣＡＲとｉＣＡＲとの両方で同時形質導入されたＴ細胞は、両方のＣＡＲタンパク質の高レベルの発現を示した（図１Ｄ）。陰性対照細胞は、いずれの構築物の発現も示さなかった（図１Ｂ）。
抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲは、ＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６細胞との共培養後、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ（ａＣＤ１９－２８ｚ）により誘導されたＴ細胞サイトカイン産生を抑制した。ＣＤ１９発現Ｎａｌｍ６細胞と抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ Ｔ細胞との共培養は、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の産生を誘導した（それぞれ、図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ）。しかしながら、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＢＴＬＡ－ｉＣＡＲの両方を発現するＴ細胞は、Ｎａｌｍ６標的細胞との共培養後に、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の産生を有意に低下させた（＊ｐ＞０．０５、＊＊ｐ＞０．０１）。したがって、ｉＣＡＲの標的細胞上のその同族リガンドへの結合は、ａＣＡＲ誘導サイトカイン産生を成功裏に低下させた。
加えて、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲは、ＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６細胞との共培養後に、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲによって誘導されたＴ細胞の細胞傷害性を抑制した。図３に示すように、ＣＤ１９を発現する標的Ｎａｌｍ６細胞と抗ＣＤ１９ ａＣＡＲのみを発現するＴ細胞との共培養は、標的細胞の有意な殺傷をもたらした。しかしながら、抗ＣＤ１９ ａＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＢＴＬＡ ｉＣＡＲの両方を発現するＴ細胞は、Ｎａｌｍ６標的細胞と共培養したときに、細胞傷害性が統計的に有意に低下した。したがって、ｉＣＡＲの標的細胞上のその同族リガンドへの結合は、Ｔ細胞のａＣＡＲ誘導細胞傷害活性を成功裏に低下させた。
阻害性キメラ受容体及び腫瘍標的化キメラ受容体は、異なる抗原に結合する
次に、各々が異なる抗原に結合するｉＣＡＲ及びａＣＡＲを発現するＴ細胞におけるＴ細胞活性化を低下または阻害するｉＣＡＲの能力を評価した。ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現する標的細胞に接触する、抗ＣＤ２０－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲと抗ＣＤ１９ ａＣＡＲとを共発現するＴ細胞の例示的な図を、図４Ａに示す。抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ａＣＡＲで形質導入された細胞は、初代Ｔ細胞中で高レベルの表面発現を示した。ａＣＡＲのみで形質導入されたＴ細胞は、高いａＣＡＲ発現を示し、ｉＣＡＲ発現を示さなかった（図４Ｃ）が、ａＣＡＲとｉＣＡＲとの両方で同時形質導入されたＴ細胞は、両方のＣＡＲタンパク質の高レベルの発現を示した（図４Ｄ）。陰性対照細胞は、いずれの構築物の発現も示さなかった（図４Ｂ）。
抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現するＲａｊｉ細胞との共培養後、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲ（ａＣＤ２０－２８ｚ）により誘導されたＴ細胞サイトカイン産生を抑制した。Ｒａｊｉ細胞と抗ＣＤ２０ ａＣＡＲ Ｔ細胞との共培養は、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の産生を誘導した（それぞれ、図５Ａ、５Ｂ、及び５Ｃ）。しかしながら、抗ＣＤ２０ ａＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＢＴＬＡ－ｉＣＡＲの両方を発現するＴ細胞は、Ｒａｊｉ標的細胞との共培養後に、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の産生を有意に低下させた（＊＊ｐ＞０．０１、＊＊＊＊ｐ＞０．０００１）。したがって、ｉＣＡＲの標的細胞上のその同族リガンドへの結合は、ａＣＡＲ誘導サイトカイン産生を成功裏に低下させた。
したがって、抗ＣＤ１９－ＢＴＬＡ融合物（ｉＣＡＲ）は、その後の濃縮を伴わずにレンチウイルス形質導入ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞において高レベルで発現された。重要なことに、ｉＣＡＲとａＣＡＲとの高レベルの共発現が、同時形質導入後に観察された。加えて、ＣＤ１９－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲは、ｉ）ｉＣＡＲがａＣＡＲ（ＣＤ１９受容体）と同じ細胞表面リガンドを共有する場合、及びｉｉ）ｉＣＡＲ及びａＣＡＲが異なる細胞表面リガンド（それぞれＣＤ１９及びＣＤ２０）を標的とする場合の２つの状況において、複数のＴ細胞活性化応答（細胞傷害性及びサイトカインＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の産生）を抑制した。
追加のｉＣＡＲドメインの機能
図６は、ｍＣｈｅｒｒｙのフローサイトメトリー定量によって決定した、ＣＤ４＋Ｔ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ ａＣＡＲの発現を示す。示される抗Ｈｅｒ２阻害性ＣＡＲの発現を、ピューロマイシン耐性選択を介して決定し、その後耐性選択されたＴ細胞のｍＣｈｅｒｒｙフローサイトメトリー定量化を行った。抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲのみを発現する対照細胞は、ピューロマイシンとともにインキュベートしなかった。したがって、図６におけるすべての二重形質導入Ｔ細胞は、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲ及び示された抗Ｈｅｒ２阻害性ＣＡＲの両方を発現する。
二重発現Ｔ細胞によるＩＬ－２（図７Ｂ）及びＩＦＮ－γ（図７Ｃ）分泌を、Ａｘｌ単独、Ｈｅｒ２単独、またはＡｘｌ及びＨｅｒ２（ＨＡＭＬ細胞）を発現する標的Ｎａｍｌ６細胞でのインキュベーション後に評価した。ＡｘｌまたはＨｅｒ２のいずれかを発現するＷＴ Ｎａｌｍ６細胞を対照として使用した。
図７Ｂに示すように、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲと、抗Ｈｅｒ２－ＰＤ－１ ｉＣＡＲもしくは抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲのいずれかとの両方を発現する細胞は、ＩＬ－２分泌アッセイにおいて最も高い特異性を有した。これらの試料において、Ａｘｌを発現するＮａｌｍ６細胞はＴ細胞によるＩＬ－２分泌を誘導したが、Ａｘｌ及びＨｅｒ２を発現するＮａｌｍ６細胞ＨＡＭＬはＩＬ－２分泌を誘導せず、Ｔ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲの活性化及びシグナル伝達に対する抗Ｈｅｒ２－ＰＤ－１ ｉＣＡＲもしくは抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲの阻害活性を成功裏に示した。抗Ｈｅｒ２－ＮＫＧ２Ａ ｉＣＡＲはまた、ＨＡＭＬ二重発現標的細胞に接触した後、Ｔ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲによって誘導されたＩＬ－２分泌を成功裏に低下させた。
図７Ｃに示すように、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲと、抗Ｈｅｒ２－ＰＤ－１ ｉＣＡＲ、抗Ｈｅｒ２－ＫＩＲ３ＤＬ１ ｉＣＡＲ、もしくは抗Ｈｅｒ２－ＬＩＲ１ ｉＣＡＲのいずれかとの両方を発現する細胞は、ＩＦＮ－γ分泌アッセイにおいて最も高い特異性を有した。これらの試料において、Ａｘｌを発現するＮａｌｍ６細胞はＴ細胞によるＩＦＮ－γ分泌を誘導したが、Ａｘｌ及びＨｅｒ２を発現するＮａｌｍ６細胞ＨＡＭＬはＩＦＮ－γ分泌を誘導せず、Ｔ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲの活性化及びシグナル伝達に対する抗Ｈｅｒ２－ＰＤ－１ ｉＣＡＲ、抗Ｈｅｒ２－ＫＩＲ３ＤＬ１ ｉＣＡＲ、もしくは抗Ｈｅｒ２－ＬＩＲ１ ｉＣＡＲの阻害活性を成功裏に示した。抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲ及び抗Ｈｅｒ２－ＮＫＧ２Ａ ｉＣＡＲはまた、ＨＡＭＬ二重発現標的細胞に接触した後、Ｔ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲによって誘導されたＩＦＮ－γ分泌を成功裏に低下させた。
実施例２：ＢＴＬＡシグナル伝達ドメインを有する阻害性キメラ受容体は、ＮＫ細胞活性化を低下させる。
材料及び方法
形質導入及び増幅
ＮＫ細胞を、照射されたａＡＰＣ（Ｋ５６２ ｍＩＬ－１５／４－１ＢＢＬ／ＣＤ８６）と１：１の比率で共培養して、１日目に増殖を推進した。７日目に、２４ウェルプレートのウェルをＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（Ｔｅｋａｒａ、７ｕｇ／ウェル）で一晩４°でコーティングすることによって、アッセイプレートを調製した。
ＮＫ細胞を、８日目に、製造業者のプロトコルに従って、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（ＭＯＩ：５～１０）を使用して、活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）及び／または阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）のいずれかの構成的発現をコードするレンチウイルスで同時形質導入した。ａＣＡＲは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン及びｍＣｈｅｒｒｙに融合した抗Ａｘｌ ｓｃＦｖであった。ｉＣＡＲは、ＢＴＬＡ細胞内シグナル伝達ドメイン及びＧＦＰに融合した抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖであった。形質導入を９日目に繰り返した。ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ導入遺伝子の発現を、蛍光顕微鏡及びフローサイトメトリーによってチェックした。
共培養アッセイ
ａＣＡＲ及び／またはｉＣＡＲを発現するＮＫ細胞を、操作されたＮａｌｍ６標的細胞（Ｈｅｒ２＋、Ａｘｌ＋）とともに、エフェクター対標的細胞比（Ｅ：Ｔ）を増加させながらインキュベートした。ＬＤＨ－Ｇｌｏ（商標）細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の指示に従って使用して、Ｎａｌｍ６標的細胞のＮＫ細胞殺傷を行った。
結果
抗Ｈｅｒ２ ＢＴＬＡ－ｉＣＡＲは、抗Ａｘｌ ＣＤ３ゼータ－ａＣＡＲとの同時形質導入において、初代ＮＫ細胞において高レベルの表面発現を示した。図８Ａは、非形質導入ＮＫ細胞（陰性対照、上パネル）及び抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲ発現構築物のみで形質導入されたＮＫ細胞（下パネル）のフローサイトメトリードットプロットを示す。図８Ｂは、非形質導入細胞、抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲで形質導入された細胞、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲで形質導入された細胞、及びｉＣＡＲとａＣＡＲとの両方で形質導入された細胞の免疫蛍光顕微鏡からのＧＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、及び合流チャネルを示す。単一及び二重形質導入細胞はともに、融合ｍＣｈｅｒｒｙまたはＧＦＰレポータータンパク質の発現によって示されるように、ＣＡＲの良好な発現を示した。非形質導入細胞は、ＧＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、または合流チャネルにシグナルを示さない。Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ－ＧＦＰ細胞は、ＧＦＰチャネルにおけるシグナルを示す。Ａｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ細胞は、ｍＣｈｅｒｒｙチャネルにシグナルを示す。Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ－ＧＦＰ及びＡｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ細胞は、合流チャネル内で重複する対応するチャネル内でＧＦＰ及びｍＣｈｅｒｒｙ発現を示し、これは、二重形質導入細胞が、Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ－ＧＦＰ ｉＣＡＲ及びＡｘｌ－ＣＤ３ζ－ｍＣｈｅｒｒｙ ａＣＡＲ構築物の両方を成功裏に発現することを示している。
抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲは、初代ＮＫ細胞における抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲ細胞傷害性を抑制した。図９Ａは、抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲ及び抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲを単独でまたは共発現するＮＫ細胞との４時間のインキュベーション後の標的Ｈｅｒ２＋Ａｘｌ＋Ｎａｌｍ６細胞の細胞溶解パーセントを示す。抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲのみを発現するＮＫ細胞は、未形質導入ＮＫ細胞と比較して細胞溶解を誘導しなかったが、抗Ａｘｌ－ＣＤ３ζ ａＣＡＲのみを発現するＮＫ細胞は、未形質導入ＮＫ細胞と比較してかなりの量の細胞溶解を誘導した。重要なことに、ｉＣＡＲとａＣＡＲとを共発現するＮＫ細胞は、ａＣＡＲを単独で発現するＮＫ細胞よりも低レベルの標的細胞溶解を誘導した。これは、標的細胞上の同族リガンドによるｉＣＡＲの活性化がａＣＡＲのシグナル伝達を阻害し、したがってＮＫ細胞の活性化を阻害したことを示す。同様の結果は、８時間のインキュベーション後に見られ（図９Ｂ）、同時形質導入ＮＫ細胞におけるａＣＡＲシグナル伝達に対するｉＣＡＲのより大きな阻害活性を有する。
したがって、抗Ｈｅｒ２－ＢＴＬＡ融合物（ｉＣＡＲ）は、その後の濃縮を伴わずにレンチウイルス形質導入ＮＫ細胞において高レベルで発現された。重要なことに、ｉＣＡＲとａＣＡＲとの共発現は、同時形質導入後に見られた。さらに、ｓｃＦｖ－ＢＴＬＡ ｉＣＡＲは、標的細胞のａＣＡＲ媒介性細胞傷害性を抑制した。
実施例３：ＮＫ細胞の活性化の低下におけるＬＩＲ１及びＫＩＲ３ＤＬ１阻害性キメラ受容体の評価
材料及び方法
形質導入及び増幅
ＮＫ細胞を、マイトマイシンＣ処理されたＫ５６２フィーダー細胞とともに１０日間増殖させ、続いて、７．５ｅ５ ｐｇのａＣＡＲウイルス（ＳＦＦＶ ＦＬＡＧｔａｇ ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）単独で、または７．５ｅ５ ｐｇのｉＣＡＲ１もしくはｉＣＡＲ２ウイルス（それぞれ、ＳＦＦＶ ａＨｅｒ２ Ｖ５ｔａｇ ＬＩＲ１ Ｐ２Ａ ＰｕｒｏＲまたはＳＦＦＶ ａＨｅｒ２ Ｖ５ｔａｇ ＫＩＲ３ＤＬ１ Ｐ２Ａ ＰｕｒｏＲ）のいずれかとともに、形質導入を行った。評価したｉＣＡＲ構築物の配列を、表１０Ａに示す。評価したａＣＡＲ構築物の配列を、表１０Ｂに示す。各ｉＣＡＲ構築物フォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１－阻害性細胞質ドメイン２（存在する場合）である。ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－タグ－ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメイン１－細胞内シグナル伝達ドメイン２である。４日後、ピューロマイシンを選択のために細胞に添加した。
さらに３日後、操作されたＮＫ細胞及び親ＮＡＬＭ６標的（ＷＴ）、またはＡｘｌもしくはＡｘｌとＨｅｒ２抗原との両方を過剰発現するように操作されたＮＡＬＭ６標的を共インキュベートすることによって、細胞傷害性アッセイを実施した。各操作されたＮＫ細胞を、（１）それぞれの標的細胞タイプを別々に２５，０００個のＮＫ細胞対５０，０００個のＮＡＬＭ６細胞の比率で３連で、または（２）指示されたタイプの２５，０００個のＮＫ細胞とともに、１：１：１の比率で共インキュベートした、２５，０００個の単一抗原Ａｘｌ＋のみと２５，０００個の二重抗原Ａｘｌ＋Ｈｅｒ２＋ＮＡＬＭ６細胞との混合物として（二重抗原標的を、異なる膜色素で染色し、フローによってそれらを区別できるようにした）のいずれかとインキュベートした。一晩インキュベーションした後、細胞を生死判定用色素で染色し、フローサイトメトリーを介して計数した。標的細胞減少を１００％×（１－標的数／標的数（ＮＶ））として定量化した。細胞傷害性アッセイから上清も採取し、ＴＮＦａ、グランザイムＢ、及びＩＦＮｇを含むＮＫ細胞分泌細胞傷害性因子の存在について、ＥＬＩＳＡ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）によって分析した。
（表１０Ａ）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000065
Figure 2023515055000066
（表１０Ｂ）ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ ａＣＡＲドメイン
Figure 2023515055000067
Figure 2023515055000068
結果
ＮＫ細胞は、ＬＩＲ１及びＫＩＲ３ＤＬ１阻害性ドメインを有する活性化キメラ受容体（ａＣＡＲ）及び阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を発現するように操作された。次に、操作されたＮＫ細胞を、ＮＫ細胞のａＣＡＲ媒介性活性化を低下させるｉＣＡＲについて評価した。
ＮＫ細胞を、ａＣＡＲのみ（抗Ａｘｌ－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ；「αＡｘｌ ２８ζ」）、または抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲ１（ＬＩＲ１阻害ドメイン；「αＨｅｒ２ ＬＩＲ１」）もしくはｉＣＡＲ２（ＫＩＲ３ＤＬ１阻害ドメイン；「αＨｅｒ２ ＫＩＲ３ＤＬ１」）と組み合わせて、ウイルス形質導入した。図１０に示すように、ＣＡＲは、ａＣＡＲ単独で、ＮＫ細胞の約５０％で発現した（右上パネル）。ｉＣＡＲで共操作されたＮＫ細胞は、約５０％の細胞（各下パネルの右上の領域）において共発現（ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋）を実証した。注目すべきことに、共操作されたＮＫ細胞は、細胞の約５～６％がａＣＡＲのみを発現することを示した（ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ－：各下パネルの右下領域）。この発現結果は、ＮＫ細胞を成功裏に操作して、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲを共発現させることができることを実証する。
次に、操作されたＮＫ細胞を、標的細胞のａＣＡＲ誘導性ＮＫ細胞媒介性殺傷を低下させるｉＣＡＲについて評価した。図１１に示すように、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞ならびにａＣＡＲのみで形質導入されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲ抗原を発現しない親標的細胞（ＮＡＬＭ６ ＷＴ；各操作条件１列目）の殺傷と比較して、少なくともａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞を殺傷し（ＮＡＬＭ６ Ａｘｌ＋；各操作条件の２列目）、ａＣＡＲ抗原依存性抗原特異的殺傷を実証する。ａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原の両方を発現する標的細胞と共インキュベートした場合（ＮＡＬＭ６ Ａｘｌ＋Ｈｅｒ２＋；各操作条件の３列目）、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞の殺傷と比較して、著しく低下した殺傷を示した（ａＣＡＲ／ｉＣＡＲ１及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ２は、それぞれ、３列目を２列目と比較した）。対照的に、ａＣＡＲのみを発現するように操作されたＮＫ細胞は、殺傷の著しい低下を示さなかった（ａＣＡＲは、それぞれ、３列目を２列目と比較しただけであった）。この結果は、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲを共発現するように操作されたＮＫ細胞が、ｉＣＡＲリガンドの不在下で標的細胞を成功裏に殺傷し、ｉＣＡＲリガンドの存在下でＮＫ媒介性殺傷を成功裏に低下させることを実証する。
次いで、操作されたＮＫ細胞を、混合標的集団の状況においてａＣＡＲ誘導性ＮＫ細胞媒介性殺傷を低下させるｉＣＡＲについて評価した。図１２に示すように、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲのみを発現するように操作されたＮＫ細胞（ａＣＡＲのみ、それぞれ２列目を１列目と比較）とは対照的に、混合集団内でａＣＡＲリガンドのみを発現する標的細胞の殺傷と比較して、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ抗原の両方を発現する標的細胞の殺傷が著しく低下したことを示した（ａＣＡＲ／ｉＣＡＲ１及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ２、それぞれ２列目を１列目と比較）。この結果は、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞が、細胞の混合集団においてｉＣＡＲリガンドを発現しない標的細胞を成功裏に選択的に殺傷することを示す。
次いで、操作されたＮＫ細胞を、サイトカイン産生によって評価されるＮＫ細胞のａＣＡＲ媒介性活性化を低下させるｉＣＡＲについて評価した。図１３に示すように、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲリガンドのみを発現する標的細胞（ａＣＡＲ／ｉＣＡＲ１及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ２ ２列目）またはａＣＡＲリガンドのみを発現するものが半数である標的細胞の混合集団（ａＣＡＲ／ｉＣＡＲ１及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ２、４列目を比較）と共インキュベートした場合に、サイトカインＴＮＦα、グランザイムＢ、及びＩＦＮγを分泌したが、一方で、サイトカイン分泌は、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ抗原の両方を発現する標的細胞との共インキュベーション後に低下した（ａＣＡＲ／ｉＣＡＲ１及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ２、３列目を比較）。
この結果は、ＮＫ細胞が、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように成功裏に操作することができ、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞が、ｉＣＡＲリガンドの不在下で標的細胞を成功裏に殺傷して炎症性サイトカイン産生を止めさせ、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞が、ｉＣＡＲリガンド依存的様式で、ＮＫ媒介性殺傷及びサイトカイン産生を成功裏に低下させることを実証する。
実施例４：ＮＫ細胞活性化の低下における種々の阻害性キメラ受容体の評価
材料及び方法
形質導入及び増幅
ＮＫ細胞を、マイトマイシンＣで処理したＫ５６２フィーダー細胞で１０日間増殖させ、続いて、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ構築物についての各レンチウイルス７．５ｅ５ ｐｇで形質導入した。評価したｉＣＡＲ構築物の配列を、表１１に示す。評価したａＣＡＲ構築物の配列を、表１０Ｂに示す。各ｉＣＡＲ構築物フォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１－阻害性細胞質ドメイン２（存在する場合）である。ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－タグ－ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメイン１－細胞内シグナル伝達ドメイン２である。４日後、ピューロマイシンを選択のために細胞に添加した。
さらに３日後、操作されたＮＫ細胞及び親ＳＥＭ標的細胞（ＷＴ）、またはＡｘｌもしくはＡｘｌとＨｅｒ２抗原との両方を過剰発現するように操作されたＳＥＭ標的を共インキュベートすることによって、細胞傷害性アッセイを実施した。各操作されたＮＫ細胞を、（１）それぞれの標的細胞タイプを別々に２５，０００個のＮＫ細胞対５０，０００個のＳＥＭ細胞の比率で３連で、または（２）指示されたタイプの２５，０００個のＮＫ細胞とともに、１：１：１の比率で共インキュベートした、２５，０００個の単一抗原Ａｘｌ＋のみと２５，０００個の二重抗原Ａｘｌ＋Ｈｅｒ２＋ＳＥＭ細胞との混合物として（二重抗原標的を、異なる膜色素で染色し、フローによってそれらを区別できるようにした）のいずれかとインキュベートした。一晩インキュベーションした後、細胞を生死判定用色素で染色し、フローサイトメトリーを介して計数した。標的細胞減少を１００％×（１－標的数／標的数（ＮＶ））として定量化した。
（表１１）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000069
Figure 2023515055000070
Figure 2023515055000071
Figure 2023515055000072
結果
ＮＫ細胞は、様々な阻害性ドメインを有する活性化キメラ受容体（ａＣＡＲ）及び阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を発現するように操作された。ＮＫ細胞を、ａＣＡＲのみ（抗Ａｘｌ－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ；「αＡｘｌ ２８ζ」）、または示された種々の阻害性ドメインを有する抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲと組み合わせて、ウイルス形質導入した。次いで、操作されたＮＫ細胞を、標的細胞のａＣＡＲ誘導性ＮＫ細胞媒介性殺傷を低下させるｉＣＡＲについて評価した。図１４に示すように、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞ならびにａＣＡＲでのみ形質導入したＮＫ細胞は、ａＣＡＲ抗原を発現しない親標的細胞（各操作条件の１列目）の殺傷と比較して、少なくともａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（「Ａｘｌ＋」）を別個の標的集団として（各操作条件の２列目）または混合標的集団において（各操作条件の４列目）殺傷し、抗原特異的殺傷を実証する。特に、ＬＩＲ１及びＫＩＲ３ＤＬ１阻害性ドメインを有する抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲを共発現するように操作されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞と比較して、ａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原を発現する標的細胞（「Ａｘｌ＋Ｈｅｒ＋」）を別個の標的集団（各操作条件の３列目）として、または混合された標的集団（各操作条件の５列目）において、殺傷の低下を実証したが、ＮＫＧ２Ａ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、またはＢＴＬＡ阻害性ドメインを有する抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲを共発現するように操作されたＮＫ細胞においては差は観察されなかった。結果は、ａＣＡＲ及び選択されたｉＣＡＲを共発現するように操作されたＮＫ細胞が、ｉＣＡＲリガンドの不在下で標的細胞を成功裏に殺傷し、ｉＣＡＲリガンド依存的様式でＮＫ媒介性殺傷を成功裏に低下させるが、一方で異なる天然の阻害性共受容体に由来する阻害性ドメインを有するｉＣＡＲは、相互に関連するＮＫ細胞活性化のｉＣＡＲ抗原依存的な抑制において変化し得ることも示唆する。
実施例５：ＮＫ細胞活性化の低下におけるタンデム阻害性キメラ受容体の評価
材料及び方法
形質導入及び増幅
ＮＫ細胞を、マイトマイシンＣで処理したＫ５６２フィーダー細胞で１０日間増殖させ、続いて、タンデム阻害性ドメインを有するａＣＡＲ及びｉＣＡＲ構築物についての各レンチウイルス７．５ｅ５ ｐｇで形質導入した。評価したｉＣＡＲ構築物の配列を、表１２に示す。評価したａＣＡＲ構築物の配列を、表１０Ｂに示す。各ｉＣＡＲ構築物フォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１－阻害性細胞質ドメイン２（存在する場合）である。ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－タグ－ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメイン１－細胞内シグナル伝達ドメイン２である。４日後、ピューロマイシンを選択のために細胞に添加した。
さらに３日後、操作されたＮＫ細胞及び親ＳＥＭ標的細胞（ＷＴ）、またはＡｘｌもしくはＡｘｌとＨｅｒ２抗原との両方を過剰発現するように操作されたＳＥＭ標的を共インキュベートすることによって、細胞傷害性アッセイを実施した。各操作されたＮＫ細胞を、（１）それぞれの標的細胞タイプを別々に２５，０００個のＮＫ細胞対５０，０００個のＳＥＭ細胞の比率で３連で、または（２）指示されたタイプの２５，０００個のＮＫ細胞とともに、１：１：１の比率で共インキュベートした、２５，０００個の単一抗原Ａｘｌ＋のみと２５，０００個の二重抗原Ａｘｌ＋Ｈｅｒ２＋ＳＥＭ細胞との混合物として（二重抗原標的を、異なる膜色素で染色し、フローによってそれらを区別できるようにした）のいずれかとインキュベートした。一晩インキュベーションした後、細胞を生死判定用色素で染色し、フローサイトメトリーを介して計数した。標的細胞減少を１００％×（１－標的数／標的数（ＮＶ））として定量化した。
（表１２）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000073
Figure 2023515055000074
結果
ＮＫ細胞は、タンデムな阻害性ドメインを有する細胞内ドメインを備えた活性化キメラ受容体（ａＣＡＲ）及び阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を発現するように操作された。ＮＫ細胞を、ａＣＡＲのみ（抗Ａｘｌ－ＣＤ２８／ＣＤ３ζ；「αＡｘｌ ２８ζ」）で、または示された種々のタンデム阻害性ドメインを有する抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲと組み合わせて、ウイルス形質導入した。図１５に示すように、ＣＡＲは、ａＣＡＲ単独で、ＮＫ細胞の約４０％で発現した（右上パネル）。ｉＣＡＲで共操作されたＮＫ細胞は、細胞の約４０～４５％（各下パネルの右上の領域）において共発現（ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋）を実証した。注目すべきことに、共操作されたＮＫ細胞は、細胞の５％未満がａＣＡＲのみを発現することを示した（ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ－：各下パネルの右下領域）。この発現結果は、ＮＫ細胞を成功裏に操作して、タンデム細胞内阻害性ドメインを有するａＣＡＲ及びｉＣＡＲを共発現させることができることを実証する。
次に、操作されたＮＫ細胞を、標的細胞のａＣＡＲ誘導性ＮＫ細胞媒介性殺傷を低下するｉＣＡＲについて評価した。図１６に示すように、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲ抗原を発現しない親標的細胞（ＷＴ ＳＥＭ）の殺傷と比較して、Ａｘｌ＋標的細胞を殺傷した（各操作条件の２列目）が、同じようにａＣＡＲでのみ形質導入したＮＫ細胞（ＧＦＰ－ＰｕｒｏＲ）は殺傷せず（各操作条件の１列目）、ａＣＡＲ抗原依存性抗原特異的殺傷を実証する。ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ抗原の両方を発現する標的細胞（Ａｘｌ＋Ｈｅｒ２＋ＳＥＭ細胞；各操作条件の３列目）と共インキュベートした場合、タンデムＬＩＲ１／ＰＤ－１組織化を有するａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現させるように操作されたＮＫ細胞は、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞の殺傷と比較して、著しく低下した殺傷を示し、タンデムＬＩＲ１／ＢＴＬＡ組織化を有するｉＣＡＲを共発現するように操作されたＮＫ細胞は、観察できるほど（ｐ＝０．０５５）低下した殺傷を示した（３列目を２列目と比較）。対照的に、ａＣＡＲのみを発現するように操作されたＮＫ細胞は、殺傷の観察可能なほどの低下を示さなかった（ＧＦＰ－ＰｕｒｏＲ、それぞれ、３列目を２列目と比較）。この結果は、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＮＫ細胞が、ｉＣＡＲリガンドの不在下で標的細胞を成功裏に殺傷し、ｉＣＡＲリガンド依存性の方式でＮＫ媒介性殺傷を成功裏に低下させることを実証する。
実施例６：阻害性ドメインからの細胞外ドメインを有するか、または有しない阻害性キメラ受容体のＴ細胞活性化の低下における評価
材料及び方法
形質導入及び増幅
ヒトドナーＰＢＭＣから初代Ｔ細胞を単離し、凍結した。１日目に、１×１０６個の精製されたＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞を解凍し、３×１０６個のダイナビーズで刺激し、次いで０．２ｕｇ／ｍＬのＩＬ－２で１ｍＬのＯｐｔｉｍｉｚｅｒ ＣＴＳ Ｔ細胞増殖培地（Ｇｉｂｃｏ）で培養した。Ｔ細胞を、レンチウイルス（各１００，０００、ＧｏＳｔｉｘ（Ｔｅｋａｒａ）によって定量化される）を用いて、２日目に単一もしくは同時形質導入した。評価されたｉＣＡＲ構築物の配列を、表１３Ａに示す。各ｉＣＡＲ構築物フォーマットは、Ｎ末端からＣ末端に向かって（「完全」と表記されたものを除く）：シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１－阻害性細胞質ドメイン２（存在する場合）である。ＥＣＤを有する各ｉＣＡＲ構築物フォーマット（「完全」と表記された）は、Ｎ末端からＣ末端に向かって（ＮＫＧ２Ａ「完全」を除く）：シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＥＣＤ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１である。ＮＫＧ２Ａ「完全」ｉＣＡＲフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、阻害性細胞質ドメイン１－ＴＭ－ＥＣＤ－ヒンジ－タグ－シグナル配列１－ｓｃＦｖである。ａＣＡＲ構築物ａＡｘｌ ＣＤ３ｚについての配列を、表１３Ｂに示す。ａＡｘｌ ＣＤ３ｚフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメインである。
ダイナビーズを磁石によって除去した。細胞を増殖させ、ピューロマイシンで１０日間処理した。各条件のアリコートを、ＰＥコンジュゲート抗ＭＹＣ及びＢＶ４２１コンジュゲート抗ＦＬＡＧ抗体（ａＣＡＲ及びｉＣＡＲに対応する）で染色し、それらの導入遺伝子発現を、ＬＸ ＣｙｔｏＦｌｅｘフローサイトメトリーマシンを使用して定量化した。
Ｔ細胞共培養殺傷アッセイ
Ｔ細胞を計数し、共培養アッセイのために９６ウェルプレートに分配した。操作されたＴ細胞及び親ＮＡＬＭ６標的（ＷＴ）、またはＡｘｌ、Ｈｅｒ２、もしくはＡｘｌとＨｅｒ２抗原との両方を過剰発現するように操作されたＮＡＬＭ６標的を共インキュベートすることによって、細胞傷害性アッセイを実施した。各ウェルは、細胞トレースバイオレット色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で前染色した１×１０５個のＮａｌｍ６標的細胞、及び１×１０５個の操作されたＴ細胞を含有した。共培養物を５％のＣＯ２とともに、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞を７－ＡＡＤ生死判定色素で染色し、標的細胞の死滅パーセントをフローサイトメトリーによって定量化した。殺傷パーセントは、標的細胞に対してのみ正規化された。同じ共培養物由来の培地中のサイトカインを、ヒト磁気ルミネクスアッセイ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）及びＭＡＧＰＩＸアナライザ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）を使用して測定した。
（表１３Ａ）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000075
Figure 2023515055000076
Figure 2023515055000077
Figure 2023515055000078
Figure 2023515055000079
Figure 2023515055000080
（表１３Ｂ）ａＡｘｌ ＣＤ３ｚ ａＣＡＲドメイン
Figure 2023515055000081
Figure 2023515055000082
結果
Ｔ細胞を操作して、様々な阻害性ドメインを有する活性化キメラ受容体（ａＣＡＲ）及び阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を発現させ、これには、阻害性受容体の細胞質ドメイン（ＣＤ）のみを特徴とするまたはそれぞれの阻害受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ；「完全」）もまた特徴とするフォーマットを具体的に含む。
ＮＫ細胞を、ａＣＡＲのみ（ａＡｘｌ－ＣＤ３ｚ－ｍＣｈｅｒｒｙ）、または示された種々の阻害性ドメインを有する抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲと組み合わせて、ウイルス形質導入した。図１７に示されるように、共発現（ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋）を示す細胞のより高いパーセンテージは、ＬＩＲ１の細胞質ドメインのみまたは完全（ＣＤ＋ＥＣＤ）ＫＩＲ３ＤＬ１配列を有するｉＣＡＲで観察され、完全（ＣＤ＋ＥＣＤ）ＰＤ－１またはＴＩＧＩＴ配列を有するｉＣＡＲでは共発現の細胞は観察可能であったがより低いパーセンテージで観察され、完全なＣＴＬＡ－４配列、完全なＮＫＧ２Ａ配列、またはＴＩＧＩＴの細胞質ドメインを有するｉＣＡＲの共発現は最小限観察可能であった。
次いで、操作されたＴ細胞を、ｉＣＡＲがａＣＡＲ誘導性Ｔ細胞活性化を低下することについて評価した。図１８に示されるように、ａＣＡＲ抗原を発現しない親標的細胞（ＷＴ ＮＡＬＭ６；各操作条件の１列目）またはｉＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（Ｈｅｒ２ ＮＡＬＭ６；各操作条件の１列目）の殺傷と比較して、ａＣＡＲのみを発現するように（「ａＡｘａｌ－ＣＤ３ｚ」）、またはａＣＡＲ及び様々なｉＣＡＲフォーマットを共発現するように操作されたＴ細胞はすべて、ａＣＡＲ抗原のみを発現する標的細胞（Ａｘｌ ＮＡＬＭ６；各操作条件の３列目）の殺傷を実証し、ａＣＡＲ抗原依存性抗原特異的殺傷を実証した。ａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原の両方を発現する標的細胞（Ｈｅｒ２ Ａｘｌ ＮＡＬＭ６；各操作条件の４列目）と共インキュベートした場合、ＬＩＲ１の細胞質ドメインのみ（「ａＣＡＲ＋ＬＩＲ１ ｉｃｄ ｉＣＡＲ」）または完全な（ＣＤ＋ＥＣＤ）ＫＩＲ３ＤＬ１配列（「ａＣＡＲ＋ＫＩＲ３ＤＬ１完全なｉＣＡＲ」）を有するｉＣＡＲについてのみを発現する標的細胞の殺傷（それぞれ、４列目を３列目と比較）と比較して、ａＣＡＲとｉＣＡＲとを共発現するように操作されたＴ細胞が顕著に低下した殺傷を示し、一方、ｉＣＡＲの他のフォーマットは、概してａＣＡＲ唯一の条件に沿って、より穏やかな低下を示した。図１９に示されるように、Ｔ細胞ＩＬ－２分泌のｉＣＡＲ依存性低下も評価し、Ｔ細胞殺傷と相関させた。特に、ｉＣＡＲの発現と相関するＴ細胞殺傷及びサイトカイン産生のｉＣＡＲ依存性低下、すなわち、より高い発現を示したＬＩＲ１の細胞質ドメインのみまたは完全な（ＣＤ＋ＥＣＤ）ＫＩＲ３ＤＬ１配列を有するｉＣＡＲが、Ｔ細胞のａＣＡＲ媒介性活性化の最大の調節も示した。
この結果は、選択されたフォーマットのために、ａＣＡＲと選択ｉＣＡＲとを成功裏に共発現するように、Ｔ細胞を操作させることができることを実証している。加えて、ｉＣＡＲは、Ｔ細胞における共発現に対応するｉＣＡＲリガンド依存的な様式で、Ｔ細胞媒介性殺傷及びサイトカイン産生の低下させることを実証した。
実施例７：ＮＫ細胞活性化の低下における種々の阻害性キメラ受容体の評価
材料及び方法
形質導入及び増幅
ＮＫ細胞を、マイトマイシンＣで処理したＫ５６２フィーダー細胞で１０日間増殖させ、続いて、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ構築物についての各レンチウイルス７．５ｅ５ ｐｇで形質導入する。評価したｉＣＡＲ構築物の配列を、表１４に示す。各ｉＣＡＲ構築物フォーマットは、Ｎ末端からＣ末端に向かって（「完全」と表記されたものを除く）：シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１－阻害性細胞質ドメイン２（存在する場合）である。ＥＣＤを有する各ｉＣＡＲ構築物フォーマット（「完全」と表記された）は、Ｎ末端からＣ末端に向かって（ＮＫＧ２Ａ「完全」を除く）：シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＥＣＤ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１である。ＮＫＧ２Ａ「完全」ｉＣＡＲフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、阻害性細胞質ドメイン１－ＴＭ－ＥＣＤ－ヒンジ－タグ－シグナル配列１－ｓｃＦｖである。抗Ａｘｌ ａＣＡＲフォーマットａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚまたはａＡｘｌ ＣＤ３ｚを使用する。ａＡｘｌ－ＣＤ２８／ＣＤ３ｚ ａＣＡＲ構築物の配列が、表１０Ｂに示される。ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－タグ－ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメイン１－細胞内シグナル伝達ドメイン２である。ａＣＡＲ構築物ａＡｘｌ ＣＤ３ｚについての配列を、表１３Ｂに示す。ａＡｘｌ ＣＤ３ｚフォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメインである。４日後、ピューロマイシンを選択のために細胞に添加する。
さらに３日後、細胞障害性アッセイを、操作されたＮＫ細胞及び親標的細胞（ＷＴ）、またはａＣＡＲ抗原（例えば、Ａｘｌ）またはａＣＡＲ抗原とｉＣＡＲ抗原との両方（例えば、ＡｘｌとＨｅｒ２との両方）を過剰発現するように操作された標的を共インキュベートすることによって実施する。各操作されたＮＫ細胞を、（１）それぞれの標的細胞タイプを別々に２５，０００個のＮＫ細胞対５０，０００個の標的細胞の比率で３連で、または（２）指示されたタイプの２５，０００個のＮＫ細胞とともに、１：１：１の比率で共インキュベートした、２５，０００個のａＣＡＲ抗原のみと２５，０００個の二重抗原標的細胞との混合物として（二重抗原標的を、異なる膜色素で染色し、フローによってそれらを区別できるようにした）のいずれかとインキュベートする。一晩インキュベーションした後、細胞を生死判定用色素で染色し、フローサイトメトリーを介して計数する。標的細胞減少を１００％×（１－標的数／標的数（ＮＶ））として定量化する。
（表１４）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000083
Figure 2023515055000084
Figure 2023515055000085
Figure 2023515055000086
Figure 2023515055000087
Figure 2023515055000088
Figure 2023515055000089
Figure 2023515055000090
Figure 2023515055000091
Figure 2023515055000092
結果
様々な阻害性ドメインフォーマット、例えば、異なる阻害性受容体に由来する様々な阻害性ドメイン、様々なＣＡＲ配列（例えば、様々な膜貫通もしくはヒンジ配列）、及び／または阻害性ドメインの様々なタンデム組織を有する活性化キメラ受容体（ａＣＡＲ）及び阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を発現するように、ＮＫ細胞を操作する。評価されたフォーマットは、表１４に記載している。ＮＫ細胞に、ａＣＡＲのみで、または示される様々な阻害性ドメインを有するｉＣＡＲと組み合わせてウイルス形質導入する。次いで、操作されたＮＫ細胞を、標的細胞のａＣＡＲ誘導性ＮＫ細胞媒介性殺傷及びＮＫ細胞サイトカイン産生を低下させるｉＣＡＲについて評価した。この結果は、ＮＫ細胞が、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲを共発現するように成功裏に操作され、ｉＣＡＲリガンドの不在下でａＣＡＲリガンド依存的様式で標的細胞を成功裏に殺傷し、サイトカインを産生し、ｉＣＡＲリガンド依存的様式でＮＫ媒介性殺傷及びサイトカイン産生を成功裏に低下させることを実証する。
実施例８：ＮＫ細胞活性化の低下における種々の阻害性キメラ受容体のさらなる評価
材料及び方法
５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２及び２０ｎｇ／ｕＬのＩＬ－１５を用いてＫ５６２フィーダー細胞で１０日間の増殖後に、個々のｉＣＡＲ及びａＣＡＲ構築物をレンチウイルス粒子にパッケージングし、初代ＮＫ細胞を形質導入するために使用した。ウイルス量は、ｐ２４力価（形質導入当たり７５０，０００ｐｇ）により設定した。ｐｕｒｏＲカセットを含有するｉＣＡＲ構築物及びピューロマイシンを、形質導入後４～７日目のＮＫ細胞培養物に添加し、その際にフローサイトメトリーにより発現を評価し、１２，５００個のＮＫ細胞及び５０，０００個の総腫瘍細胞での殺傷アッセイのためにＮＫ細胞をマイクロウェルプレートに移した。ＮＫ細胞を、（１）ａＣＡＲ抗原のみを発現する腫瘍細胞（ＳＥＭ細胞）、（２）ａＣＡＲ抗原及びｉＣＡＲ抗原の両方を発現する腫瘍細胞、または（３）混合された両方の腫瘍細胞タイプと培養した。１６～１８時間後、培養物をフローサイトメトリーによって分析し、各タイプの残りの生きた標的細胞を計数した。所与のＮＫ細胞型のａＣＡＲ媒介性殺傷（基底減算）を、まず全殺傷（標的のみの条件と比較した標的の減少）を計算し、次に対照（ｉＣＡＲのみ）ＮＫ細胞による全殺傷を減算することによって定量した。ｉＣＡＲ媒介性保護を、ｉＣＡＲ抗原有りまたは無しでの標的間のａＣＡＲ媒介性殺傷の変化として定量した。殺傷アッセイの上清を、ＴＮＦα分泌について分析し、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲ性能測定基準を、殺傷と同様に計算した。発現分析については、ｉＣＡＲをａＶ５－Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ ６４７で染色し、ａＣＡＲをａＦＬＡＧ－ＢＶ－４２１で染色した。細胞は、ｉＣＡＲ＋／－及びａＣＡＲ＋／－発現状態に基づいて４つの領域に割り当てられ、「ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋の％」及び「ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ－ではない％」（ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ－はゲート化されておらず、潜在的に傷害性のあるＣＡＲ－ＮＫ細胞であり、回避されるべきである）を評価することを可能にした。発現レベルをさらに分析するために、我々は、ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋亜集団のａＣＡＲ及びｉＣＡＲの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を測定し、それぞれの蛍光チャネルにおける未形質導入ＮＫ細胞のＭＦＩによって正規化した。各ｉＣＡＲについて、１～３個の生物学的複製を行った（同じマーカータイプを有する異なる点として示される）。Ｘ及びＹ誤差ライン（該当する場合）：＋／－平均値の標準誤差。
評価したｉＣＡＲ構築物の配列を、表１５に示す。各ｉＣＡＲ構築物フォーマットは、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列１－シグナル配列２－ｓｃＦｖ－タグ－ヒンジ－ＴＭ－阻害性細胞質ドメイン１－阻害性細胞質ドメイン２（存在する場合）である。評価されたＮＫＧ２Ａフォーマットは、シグナル配列２を含まなかった。ａＣＡＲフォーマットは、ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフォーマット、Ｎ末端からＣ末端まで、シグナル配列－タグ－ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＴＭ－細胞内シグナル伝達ドメイン１－細胞内シグナル伝達ドメイン２を使用する（表１０Ｂに示した配列を参照されたい）。
（表１５）ＮＫ細胞についてのｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000093
Figure 2023515055000094
Figure 2023515055000095
結果
様々な阻害性ドメインフォーマット、例えば、異なる阻害性受容体に由来する様々な阻害性ドメイン、様々なＣＡＲ配列（例えば、様々な膜貫通もしくはヒンジ配列）、及び／または阻害性ドメインの様々なタンデム組織を有する活性化キメラ受容体（ａＣＡＲ）及び阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を発現するように、ＮＫ細胞を操作した。評価されたフォーマットは、表１５に記載している。ＮＫ細胞に、ａＣＡＲのみで、または示される様々な阻害性ドメインを有するｉＣＡＲと組み合わせてウイルス形質導入した。
操作されたＮＫ細胞を、ＣＡＲ発現について評価した。図２０に示すように、ａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋ＮＫ細胞（上パネル）のうち、ａＣＡＲ発現は、一般にバックグラウンドを１０倍上回り、ｉＣＡＲは一般に、１００倍超である。ＬＩＲ１構築物は、他の構築物と比較して顕著に高い発現を示した。ＣＡＲ発現集団のプロファイルも評価し（下パネル）、総集団が５％未満のａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ－細胞を含有し、種々のｉＣＡＲフォーマットについてａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋集団の様々なパーセンテージを有していることを示した。ここでも、ＬＩＲ１含有ｉＣＡＲは、一般に、他の構築物と比較してより大きな比率のａＣＡＲ＋ｉＣＡＲ＋細胞を示した。
次に、ｉＣＡＲによる、標的細胞のａＣＡＲ誘導性ＮＫ細胞媒介性殺傷及びＮＫ細胞サイトカイン産生の低下を評価した。標的ＳＥＭ細胞のそれぞれについて、別々に（「別個」：ａＣＡＲ抗原のみのＳＥＭ細胞及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ抗原共発現ＳＥＭ細胞を別々に）、または標的及び非標的細胞の混合集団（「混合」：ａＣＡＲ抗原のみのＳＥＭ細胞及びａＣＡＲ／ｉＣＡＲ抗原共発現ＳＥＭ細胞を同じ培養物中で一緒に）に関して、低下を評価した。図２１に示すように、ＬＩＲ１、ＬＩＲ１（２×）、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ１（２×）ｉＣＡＲフォーマットを発現するＮＫ細胞は、殺傷（上パネル）及びサイトカイン低下（下パネル）の両方において、殺傷（上パネル）及びｉＣＡＲ媒介性保護において一貫したａＣＡＲ媒介性能を実証し、ＢＴＬＡ及びＮＫＧ２Ａ構築物は、それらの性能がより異なっていた。
この結果は、ＮＫ細胞が、ａＣＡＲ及びｉＣＡＲを共発現するように成功裏に操作され、ｉＣＡＲリガンドの不在下でａＣＡＲリガンド依存的様式で標的細胞を成功裏に殺傷し、サイトカインを産生し、ｉＣＡＲリガンド依存的様式でＮＫ媒介性殺傷及びサイトカイン産生を成功裏に低下させることを実証する。
参照による組み込み
本出願に引用された公開文献、特許、特許出願、及び他の文献はすべて、あたかも各個別の公開文献、特許、特許出願、または他の文献があらゆる目的のために参照により援用されるように個別に示されるのと同じ範囲まで、あらゆる目的のために、それらの全体において参照により本明細書に援用される。
均等物
様々な特定の実施形態が図示及び記載されてきたが、上記明細書は制限的ではない。本開示（複数可）の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解されるであろう。多くの変型は、本明細書を確認すれば当業者に明らかとなるであろう。
[本発明1001]
キメラ阻害性受容体であって、
（ａ）細胞外タンパク質結合ドメインと、
（ｂ）前記細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
（ｃ）前記膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと
を含み、
前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインの各々が、ＢＴＬＡ、ＰＤ－1、ＣＴＬＡ4、ＴＩＭ3、ＫＩＲ3ＤＬ1、ＬＩＲ1、ＮＫＧ2Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ3からなる群から選択されるタンパク質に由来し、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも1つが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、
前記キメラ阻害性受容体。
[本発明1002]
（ａ）前記膜貫通ドメインと、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つとが、同じタンパク質に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、前記同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、または
（ｂ）前記膜貫通ドメインが、第1のタンパク質に由来し、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、前記第1のタンパク質とは異なる第2のタンパク質に由来する、
本発明1001のキメラ阻害性受容体。
[本発明1003]
（ａ）前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、ＢＴＬＡに由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000145
（配列番号3）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000146
（配列番号3）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
（ｂ）前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、ＬＩＲ1に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000147
（配列番号50）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000148
（配列番号50）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
（ｃ）前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、ＫＩＲ3ＤＬ1に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000149
（配列番号66）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000150
（配列番号66）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
（ｄ）前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、ＰＤ－1に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000151
（配列番号1）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000152
（配列番号1）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
（ｅ）前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、ＣＴＬＡ4に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000153
（配列番号67）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000154
（配列番号67）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
（ｆ）前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つが、ＮＫＧ2Ａに由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000155
と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000156
の前記アミノ酸配列を含む、
本発明1001または本発明1002のキメラ阻害性受容体。
[本発明1004]
（ａ）前記膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ、ＣＤ8、ＣＤ28、ＣＤ3ゼータ、ＣＤ4、4－ＩＢＢ、ＯＸ40、ＩＣＯＳ、2Ｂ4、ＣＤ25、ＣＤ7、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－1、ＣＴＬＡ4、ＴＩＭ3、ＫＩＲ3ＤＬ1、ＬＩＲ1、ＮＫＧ2Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ3からなる群から選択されるタンパク質に由来するか、あるいは
（ｂ）前記膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡに由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号12）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号12）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
（ｃ）前記膜貫通ドメインが、ＰＤ－1に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号60）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号60）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＰＤ－1細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
（ｄ）前記膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ4に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号68）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号68）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ4細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
（ｅ）前記膜貫通ドメインが、ＫＩＲ3ＤＬ1に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号69）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号69）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＫＩＲ3ＤＬ1細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
（ｆ）前記膜貫通ドメインが、ＬＩＲ1に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号59）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号59）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＬＩＲ1細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
（ｇ）前記膜貫通ドメインが、ＣＤ28に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号11）と少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは約100％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号11）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ28細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、
本発明1001～1003のいずれかのキメラ阻害性受容体。
[本発明1005]
（ａ）前記タンパク質結合ドメインが、標的腫瘍上で発現されないタンパク質に結合するか、または前記タンパク質結合ドメインが、非腫瘍細胞上で発現されるタンパク質に結合し、任意選択で、前記非腫瘍細胞が、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来し、
（ｂ）前記細胞外タンパク質結合ドメインが、リガンド結合ドメインを含むか、または前記細胞外タンパク質結合ドメインが、受容体結合ドメインを含むか、または前記細胞外タンパク質結合ドメインが、抗原結合ドメインを含み、任意選択で前記細胞外タンパク質結合ドメインが抗原結合ドメインを含む場合、前記抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、任意選択で前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖを含む場合、前記ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがペプチドリンカーによって分離され、任意選択で前記ペプチドリンカーが、
Figure 2023515055000157
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
本発明1001～1004のいずれかのキメラ阻害性受容体。
[本発明1006]
前記キメラ阻害性受容体が、
前記細胞外タンパク質結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、かつ前記細胞外タンパク質結合ドメイン及び前記膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されているかもしくは物理的に連結されている、スペーサー領域
をさらに含み、
任意選択で、前記キメラ阻害性受容体が、
前記膜貫通ドメインと前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの1つとの間に位置付けられ、かつ前記膜貫通ドメイン及び前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの前記1つの各々に作動可能に連結されているかもしくは物理的に連結されている、細胞内スペーサー領域
をさらに含み、
任意選択で、前記スペーサー領域が、ＣＤ8アルファ、ＣＤ4、ＣＤ7、ＣＤ28、ＩｇＧ1、ＩｇＧ4、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来するか、または前記スペーサー領域が、
Figure 2023515055000158
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
本発明1001～1005のいずれかのキメラ阻害性受容体。
[本発明1007]
前記腫瘍標的化キメラ受容体が、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、本発明1001～1006のいずれかのキメラ阻害性受容体。
[本発明1008]
前記免疫調節細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ8＋Ｔ細胞、ＣＤ4＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、本発明1001～1007のいずれかのキメラ阻害性受容体。
[本発明1009]
（ａ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｂ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｃ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ3ＤＬ1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｄ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｅ）前記キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｆ）前記キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｇ）前記阻害性受容体が、ＰＤ－1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｈ）前記キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｉ）前記キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ3ＤＬ1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
（ｊ）前記キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ3ＤＬ1に由来する第1の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ3ＤＬ1に由来する第2の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、
本発明1001～1008のいずれかのキメラ阻害性受容体。
[本発明1010]
本発明1001～1009のいずれかのキメラ阻害性受容体をコードする、操作された核酸。
[本発明1011]
本発明1010の操作された核酸を含む、発現ベクター。
[本発明1012]
本発明1001～1009のいずれかのキメラ阻害性受容体、本発明1010の操作された核酸、または本発明1011の発現ベクターを含む、単離された免疫調節細胞であって、
任意選択で、前記細胞が、前記細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含み、任意選択で、前記タンパク質が前記キメラ阻害性受容体に結合すると、前記キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、前記腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、
前記単離された免疫調節細胞。
[本発明1013]
（ａ）本発明1001～1009のいずれかのキメラ阻害性受容体、本発明1010の操作された核酸、本発明1011の発現ベクター、または本発明1012の単離された細胞と、
（ｂ）薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、またはそれらの組み合わせと
を含む、組成物。
[本発明1014]
免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法であって、
前記免疫調節細胞を操作して、前記免疫調節細胞の前記表面上に、本発明1001～1009のいずれかのキメラ阻害性受容体を発現させることを含み、
同族タンパク質が前記キメラ阻害性受容体に結合すると、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、前記腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害し、
任意選択で、前記腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、任意選択で、前記ＣＡＲが、腫瘍細胞の前記表面上で発現された1つ以上の抗原に結合する、
前記方法。
[本発明1015]
免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法であって、
本発明1012の単離された細胞または本発明1013の組成物を、前記キメラ阻害性受容体の同族タンパク質と、前記キメラ阻害性受容体が前記同族タンパク質に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、
前記タンパク質が前記キメラ阻害性受容体に結合すると、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、前記腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害し、
任意選択で、前記腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、任意選択で、前記ＣＡＲが、腫瘍細胞の前記表面上で発現された1つ以上の抗原に結合する、
前記方法。
本発明のこれら及び他の特徴、態様、及び利点は、以下の説明、及び添付の図面に関してよりよく理解されるであろう。
（表４）例示的な膜貫通ドメインの核酸配列
Figure 2023515055000159
（表６）例示的なリンカーの核酸配列
Figure 2023515055000160
追加の実施形態
本発明の特定の実施形態を記載する実施形態を以下に列挙する。
実施形態１：キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、キメラ阻害性受容体。
実施形態２：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３：膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが、同じタンパク質に由来する、実施形態１または実施形態２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４：膜貫通ドメインが、同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５：膜貫通ドメインが、第１のタンパク質に由来し、細胞内シグナル伝達ドメインが、第１のタンパク質とは異なる第２のタンパク質に由来する、実施形態１または実施形態２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡに由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000161
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000162
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む、実施形態６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＬＩＲ１に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000163
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000164
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む、実施形態９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000165
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000166
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＤ－１に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000167
（配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000168
（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＴＬＡ４に由来する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＡＶＳＬＳＫＭＬＫＫＲＳＰＬＴＴＧＶＧＶＫＭＰＰＴＥＰＥＣＥＫＱＦＱＰＹＦＩＰＩＮ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む、実施形態１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２４：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２５：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態２２～２４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２６：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２７：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２８：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２９：膜貫通ドメインが、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３０：キメラ阻害性受容体が、ＣＴＬＡ４に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３１：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３２：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３３：膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３４：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３５：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３６：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む、実施形態３４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３７：膜貫通ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３４～３６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３８：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態３９：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４０：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４１：膜貫通ドメインが、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態３８～４０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４２：キメラ阻害性受容体が、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４３：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４４：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４５：膜貫通ドメインが、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態４２～４４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４６：タンパク質が、標的腫瘍上では発現されない、実施形態１～４５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４７：タンパク質が、非腫瘍細胞上で発現される、実施形態１～４６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４８：タンパク質が、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される、実施形態４７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態４９：細胞外タンパク質結合ドメインが、リガンド結合ドメインを含む、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５０：細胞外タンパク質結合ドメインが、受容体結合ドメインを含む、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５１：細胞外タンパク質結合ドメインが、抗原結合ドメインを含む、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５２：抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、実施形態５１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５３：抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態５１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５４：各ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態５３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５５：ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーによって分離されている、実施形態５４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５６：ペプチドリンカーが、
Figure 2023515055000169
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態５５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５７：ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、実施形態５４～５６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５８：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態１～５７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態５９：細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結される、実施形態１～５８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６０：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態１～５７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６１：細胞外タンパク質結合ドメインが、高結合親和性を有する、実施形態１～６０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６２：細胞外タンパク質結合ドメインが、低結合親和性を有する、実施形態１～６０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６３：キメラ阻害性受容体が、活性化免疫調節細胞によるサイトカイン産生を抑制することができる、実施形態１～６２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６４：キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導される、実施形態１～６３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６５：標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態１～６４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６６：細胞内シグナル伝達ドメインが、１つ以上の改変を含む、実施形態１～６５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６７：１つ以上の改変が、その点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態６６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６８：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態６６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態６９：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態６６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７０：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態６６～６９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７１：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態７０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７２：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態７０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７３：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたとき、腫瘍標的化キメラ受容体の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態６６～７２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７４：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態７３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７５：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態７３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７６：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１～７５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７７：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１～７５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７８：スペーサー領域が、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態７６または実施形態７７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態７９：スペーサー領域が、
Figure 2023515055000170
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態７６または実施形態７７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８０：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態７６～７９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８１：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態８０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８２：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態８０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８３：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態７６～８２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８４：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態８３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８５：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態８３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８６：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態７６～８５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８７：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態８６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８８：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態８６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態８９：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１～８８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９０：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１～８８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９１：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態８９または実施形態９０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９２：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態９１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９３：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態９１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９４：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態８９～９３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９５：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態９４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９６：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態９４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９７：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態８９～９６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９８：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態９７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態９９：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態９７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１００：阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインをさらに含む、実施形態１～９９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０１：酵素阻害性ドメインが、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、実施形態１００に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０２：酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、実施形態１００または実施形態１０１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０３：酵素触媒ドメインが、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する、実施形態１０２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０４：酵素阻害性ドメインが、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む、実施形態１００～１０３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０５：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態１０４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０６：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態１０４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０７：腫瘍標的化キメラ受容体が、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１～１０６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０８：免疫調節細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１０９：免疫調節細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態１～１０８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１０：キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、キメラ阻害性受容体。
実施形態１１１：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、各々、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１１０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１２：膜貫通ドメインが、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つと同じタンパク質に由来する、実施形態１１０または実施形態１１１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１３：膜貫通ドメインが、同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１１２に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１４：膜貫通ドメインが、第１のタンパク質に由来し、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、第１のタンパク質とは異なるタンパク質に由来する、実施形態１１０または実施形態１１１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１５：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＢＴＬＡに由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１６：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000171
（配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１７：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000172
（配列番号３）のアミノ酸配列を含む、実施形態１１５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１８：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＬＩＲ１に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１１９：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000173
（配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２０：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000174
（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む、実施形態１１８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２１：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＰＤ－１に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２２：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000175
（配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２３：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000176
（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２４：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２５：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000177
（配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２６：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000178
（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２７：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＴＬＡ４に由来する、実施形態１１０～１１４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２８：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、
Figure 2023515055000179
（配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１２９：細胞内シグナル伝達ドメインが、
Figure 2023515055000180
（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む、実施形態１２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３０：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１１０～１２９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３１：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３２：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３３：膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む、実施形態１３１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３４：膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３５：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３６：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３７：膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む、実施形態１３５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３８：膜貫通ドメインが、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１３９：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４０：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４１：膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む、実施形態１３９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４２：膜貫通ドメインが、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１３９～１４１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４３：キメラ阻害性受容体が、ＣＴＬＡ４に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４４：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１４３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４５：膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む、実施形態１４３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４６：膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１４３～１４５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４７：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４８：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１４７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１４９：膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む、実施形態１４７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５０：膜貫通ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１４７～１４９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５１：キメラ阻害性受容体が、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１１０～１３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５２：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１５１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５３：膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む、実施形態１５１のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５４：膜貫通ドメインが、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、実施形態１５１～１５３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５５：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５６：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５７：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５８：キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１５９：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＬＩＲ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１５５～１５８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６０：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６１：キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６２：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡに由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１６０または実施形態１６１に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６３：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６４：キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６５：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＤ－１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１６３または実施形態１６４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６６：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６７：キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１０～１５４のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６８：第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１６６または実施形態１６７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１６９：タンパク質が、標的腫瘍上では発現されない、実施形態１１０～１６８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７０：タンパク質が、非腫瘍細胞上で発現される、実施形態１１０～１６９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７１：タンパク質が、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される、実施形態１７０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７２：細胞外タンパク質結合ドメインが、リガンド結合ドメインを含む、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７３：細胞外タンパク質結合ドメインが、受容体結合ドメインを含む、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７４：細胞外タンパク質結合ドメインが、抗原結合ドメインを含む、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７５：抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、実施形態１７４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７６：抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１７４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７７：各ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態１７６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７８：ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーによって分離されている、実施形態１７７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１７９：ペプチドリンカーが、
Figure 2023515055000181
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１７８に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８０：ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、実施形態１７７～１７９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８１：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態１１０～１８０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８２：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態１１０～１８１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８３：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態１１０～１７１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８４：細胞外タンパク質結合ドメインが、高結合親和性を有する、実施形態１１０～１８３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８５：細胞外タンパク質結合ドメインが、低結合親和性を有する、実施形態１１０～１８３のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８６：キメラ阻害性受容体が、活性化免疫調節細胞によるサイトカイン産生を抑制することができる、実施形態１１０～１８５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８７：キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制することができ、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導された、実施形態１１０～１８６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８８：標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態１１０～１８７のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１８９：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、１つ以上の改変を含む、実施形態１１０～１８８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９０：１つ以上の改変が、その点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態１８９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９１：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態１８９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９２：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態１８９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９３：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態１８９～１９２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９４：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態１９３のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９５：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態１９３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９６：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたとき、腫瘍標的化キメラ受容体の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態１８９～１９５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９７：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態１９６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９８：１つ以上の改変が、その他の点では同一の非改変受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態１９６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態１９９：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～１９８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２００：キメラ阻害性受容体が、細胞外タンパク質結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、細胞外タンパク質結合ドメイン及び膜貫通ドメインの各々に物理的に連結されたスペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～１９８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０１：スペーサー領域が、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態１９９または実施形態２００に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０２：スペーサー領域が、
Figure 2023515055000182
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１９９または実施形態２００に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０３：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態１９９～２０２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０４：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態２０３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０５：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態２０３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０６：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態１９９～２０５のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０７：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態２０６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０８：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態２０６に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２０９：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態１９９～２０８のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１０：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態２０９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１１：スペーサー領域が、スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態２０９に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１２：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に作動可能に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～２１１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１３：キメラ阻害性受容体が、膜貫通ドメインと２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置し、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの各々に物理的に連結された細胞内スペーサー領域をさらに含む、実施形態１１０～２１１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１４：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を調節する、実施形態２１２または実施形態２１３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１５：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を増加させる、実施形態２１４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１６：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の感受性を低下させる、実施形態２１４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１７：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を調節する、実施形態２１２～２１６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１８：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を増加させる、実施形態２１７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２１９：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の効力を低下させる、実施形態２１７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２０：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化の基底的な防止、減弱、または活性化の阻害を調節する、実施形態２１２～２１９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２１：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態２２０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２２：細胞内スペーサー領域が、細胞内スペーサー領域を欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態２２０に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２３：阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインをさらに含む、実施形態１１０～２２２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２４：酵素阻害性ドメインが、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、免疫調節細胞上で発現されたときに、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、実施形態２２３に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２５：酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、実施形態２２３または実施形態２２４に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２６：酵素触媒ドメインが、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、及びＲａｓＧＡＰからなる群から選択される酵素に由来する、実施形態２２５に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２７：酵素阻害性ドメインが、１つ以上の改変を欠くその他の点では同一の酵素阻害性ドメインと比較して、基底的な防止、減弱、または阻害を調節する１つ以上の改変を含む、実施形態２２３～２２６のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２８：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を低下させる、実施形態２２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２２９：１つ以上の改変が、酵素阻害性ドメインを欠くその他の点では同一のキメラ阻害性受容体と比較して、キメラ阻害性受容体の基底的な防止、減弱、または阻害を増加させる、実施形態２２７に記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３０：腫瘍標的化キメラ受容体が、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１１０～２２９のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３１：免疫調節細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態１１０～２３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３２：免疫調節細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態１１０～２３０のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体。
実施形態２３３：実施形態１～２３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２３４：実施形態１～２３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体をコードする操作された核酸。
実施形態２３５：実施形態２３４に記載の操作された核酸を含む、発現ベクター。
実施形態２３６：実施形態２３４に記載の操作された核酸または実施形態２３５に記載の発現ベクターを含む、単離された免疫調節細胞。
実施形態２３７：実施形態２３４に記載の操作された核酸または実施形態２３５に記載の発現ベクターと、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２３８：実施形態１～２３２のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体を含む、単離された免疫調節細胞。
実施形態２３９：細胞が、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態２３８に記載の単離された細胞。
実施形態２４０：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、実施形態２３９に記載の単離された細胞。
実施形態２４１：キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞であって、キメラ阻害性受容体が、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２４２：細胞が、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態２４１に記載の単離された細胞。
実施形態２４３：単離された免疫調節細胞であって、
（ａ）キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、
（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２４４：細胞内シグナル伝達ドメインが、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態２４１～２４３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４５：キメラ阻害性受容体が、組換え発現される、実施形態２３８～２４４のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４６：キメラ阻害性受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、実施形態２３８～２４５のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４７：腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、実施形態２３８～２４６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２４８：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体が細胞を活性化することができる、実施形態２３８～２４７のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２４９：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する、実施形態２３８～２４８のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５０：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導される、実施形態２３８～２４９のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５１：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態２４１～２５０のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５２：細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２４１～２５１のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５３：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２４１～２５０のいずれか１つに記載の細胞。
実施形態２５４：キメラ阻害性受容体を含む単離された免疫調節細胞であって、キメラ阻害性受容体が、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体は、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２５５：細胞が、細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態２５２に記載の単離された細胞。
実施形態２５６：単離された免疫調節細胞であって、
（ａ）キメラ阻害性受容体であって、
－細胞外タンパク質結合ドメインと、
－膜貫通ドメインであって、細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
－２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインであって、膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ阻害性受容体と、
（ｂ）細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体と、を含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、単離された免疫調節細胞。
実施形態２５７：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインの各々が、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態２５４～２５６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２５８：キメラ阻害性受容体が、組換え発現される、実施形態２５４～２５７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２５９：キメラ阻害性受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、実施形態２５４～２５８のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６０：腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、実施形態２５４～２５９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６１：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合する前に、腫瘍標的化キメラ受容体が細胞を活性化することができる、実施形態２５４～２６０のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６２：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が活性化細胞からのサイトカイン産生を抑制する、実施形態２５４～２６１のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６３：タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、キメラ阻害性受容体が、標的細胞に対する細胞媒介性免疫応答を抑制し、免疫応答が、免疫調節細胞の活性化によって誘導される、実施形態２５４～２６２のうちのいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６４：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結されている、実施形態２５４～２６３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６５：２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２５４～２６４のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６６：膜貫通ドメインが、細胞外タンパク質結合ドメインに物理的に連結され、２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、膜貫通ドメインに物理的に連結されている、実施形態２５４～２６３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６７：標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態２３８～２６６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６８：細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態２３８～２６７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２６９：細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態２３８～２６７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２７０：細胞が、自家である、実施形態２３８～２６９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２７１：細胞が同種異系である、実施形態２３８～２６９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
実施形態２７２：実施形態２３８～２７１のいずれか１つに記載の単離された細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２７３：免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法であって、
免疫調節細胞を操作して、免疫調節細胞の表面上に、実施形態１～２３１のいずれか１つに記載のキメラ阻害性受容体を発現させることを含み、
同族タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、方法。
実施形態２７４：免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法であって、
実施形態２３８～２７１のいずれか１つに記載の単離された細胞または実施形態２７２に記載の組成物を、キメラ阻害性受容体の同族タンパク質と、キメラ阻害性受容体が同族タンパク質に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、
タンパク質がキメラ阻害性受容体に結合すると、細胞内シグナル伝達ドメインが、腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、方法。
実施形態２７５：腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態２７３または実施形態２７４に記載の方法。
実施形態２７６：ＣＡＲが、腫瘍細胞の表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する、実施形態２７５に記載の方法。
実施例１：様々なシグナル伝達ドメインを有する阻害性ＣＡＲは、Ｔ細胞活性化を低下させる。
方法及び材料
阻害性キメラ受容体及び腫瘍標的化キメラ受容体構築物
ＢＴＬＡ細胞内シグナル伝達ドメインを有する阻害性キメラ受容体（ｉＣＡＲ）を合成した。ｉＣＡＲは、ＩｇＧκ分泌シグナル、ＦＬＡＧタグを有する抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＢＴＬＡ膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。ｉＣＡＲ内のｓｃＦｖのＮ末端（シグナル配列の後）にＦＬＡＧタグを融合させた。２つの活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）も構築した。１つのａＣＡＲは、ＣＤ８分泌シグナル、Ｍｙｃタグを有する抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８ならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを有していた。他方のａＣＡＲは、ＣＤ８分泌シグナル、Ｍｙｃタグを有する抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８ならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを有していた。ａＣＡＲにおけるｓｃＦｖのＣ末端（ヒンジの前）にＭＹＣタグを融合させた。どちらの場合も、３×（Ｇ４Ｓ）リンカー（配列番号２７）を、ｓｃＦｖ及びｓｃＦｖを膜貫通ドメインに接続するＣＤ８ヒンジにおいて使用した。
（表１０Ａ）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000183
Figure 2023515055000184
（表１０Ｂ）ａＡｘｌ ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ ａＣＡＲドメイン
Figure 2023515055000185
Figure 2023515055000186
（表１１）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000187
Figure 2023515055000188
Figure 2023515055000189
Figure 2023515055000190
（表１２）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000191
Figure 2023515055000192
（表１３Ａ）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000193
Figure 2023515055000194
Figure 2023515055000195
Figure 2023515055000196
Figure 2023515055000197
Figure 2023515055000198
（表１３Ｂ）ａＡｘｌ ＣＤ３ｚ ａＣＡＲドメイン
Figure 2023515055000199
Figure 2023515055000200
（表１４）抗Ｈｅｒ２ ｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000201
Figure 2023515055000202
Figure 2023515055000203
Figure 2023515055000204
Figure 2023515055000205
Figure 2023515055000206
Figure 2023515055000207
Figure 2023515055000208
Figure 2023515055000209
Figure 2023515055000210
（表１５）ＮＫ細胞についてのｉＣＡＲフォーマット及びドメイン
Figure 2023515055000211
Figure 2023515055000212
Figure 2023515055000213

Claims (15)

  1. キメラ阻害性受容体であって、
    （ａ）細胞外タンパク質結合ドメインと、
    （ｂ）前記細胞外タンパク質結合ドメインに作動可能に連結されている、膜貫通ドメインと、
    （ｃ）前記膜貫通ドメインに作動可能に連結されている、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと
    を含み、
    前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインの各々が、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来し、前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、免疫調節細胞上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害することができる、
    前記キメラ阻害性受容体。
  2. （ａ）前記膜貫通ドメインと、前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとが、同じタンパク質に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、前記同じタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、または
    （ｂ）前記膜貫通ドメインが、第１のタンパク質に由来し、前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、前記第１のタンパク質とは異なる第２のタンパク質に由来する、
    請求項１に記載のキメラ阻害性受容体。
  3. （ａ）前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、ＢＴＬＡに由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000096
    （配列番号３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000097
    （配列番号３）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
    （ｂ）前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、ＬＩＲ１に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000098
    （配列番号５０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000099
    （配列番号５０）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
    （ｃ）前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000100
    （配列番号６６）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000101
    （配列番号６６）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
    （ｄ）前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、ＰＤ－１に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000102
    （配列番号１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000103
    （配列番号１）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
    （ｅ）前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、ＣＴＬＡ４に由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000104
    （配列番号６７）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000105
    （配列番号６７）の前記アミノ酸配列を含むか、あるいは
    （ｆ）前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つが、ＮＫＧ２Ａに由来し、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000106
    と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
    Figure 2023515055000107
    の前記アミノ酸配列を含む、
    請求項１または請求項２に記載のキメラ阻害性受容体。
  4. （ａ）前記膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、２Ｂ４、ＣＤ２５、ＣＤ７、ＬＡＸ、ＬＡＴ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ３からなる群から選択されるタンパク質に由来するか、あるいは
    （ｂ）前記膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡに由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＣＬ（配列番号１２）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＢＴＬＡ細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
    （ｃ）前記膜貫通ドメインが、ＰＤ－１に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号６０）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＰＤ－１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
    （ｄ）前記膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ４に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＤＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６８）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＣＴＬＡ４細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
    （ｅ）前記膜貫通ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＩＬＩＧＴＳＶＶＩＩＬＦＩＬＬＬＦＦＬＬ（配列番号６９）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＫＩＲ３ＤＬ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
    （ｆ）前記膜貫通ドメインが、ＬＩＲ１に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩ（配列番号５９）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＬＩＲ１細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含むか、あるいは
    （ｇ）前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８に由来し、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、または前記膜貫通ドメインが、ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１１）の前記アミノ酸配列を含み、任意選択で、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８細胞外ドメインの少なくとも一部をさらに含む、
    請求項１～３のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体。
  5. （ａ）前記タンパク質結合ドメインが、標的腫瘍上で発現されないタンパク質に結合するか、または前記タンパク質結合ドメインが、非腫瘍細胞上で発現されるタンパク質に結合し、任意選択で、前記非腫瘍細胞が、脳、神経細胞組織、内分泌、内皮、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、胃腸管、腎臓、膀胱、男性生殖器、女性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来し、
    （ｂ）前記細胞外タンパク質結合ドメインが、リガンド結合ドメインを含むか、または前記細胞外タンパク質結合ドメインが、受容体結合ドメインを含むか、または前記細胞外タンパク質結合ドメインが、抗原結合ドメインを含み、任意選択で前記細胞外タンパク質結合ドメインが抗原結合ドメインを含む場合、前記抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、任意選択で前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖを含む場合、前記ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがペプチドリンカーによって分離され、任意選択で前記ペプチドリンカーが、
    Figure 2023515055000108
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
    請求項１～４のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体。
  6. 前記キメラ阻害性受容体が、
    前記細胞外タンパク質結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に位置付けられ、かつ前記細胞外タンパク質結合ドメイン及び前記膜貫通ドメインの各々に作動可能に連結されているかもしくは物理的に連結されている、スペーサー領域
    をさらに含み、
    任意選択で、前記キメラ阻害性受容体が、
    前記膜貫通ドメインと前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１つとの間に位置付けられ、かつ前記膜貫通ドメイン及び前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインのうちの前記１つの各々に作動可能に連結されているかもしくは物理的に連結されている、細胞内スペーサー領域
    をさらに含み、
    任意選択で、前記スペーサー領域が、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＦｃガンマＲＩＩＩアルファ、ＬＮＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるタンパク質に由来するか、または前記スペーサー領域が、
    Figure 2023515055000109
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
    請求項１～５のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体。
  7. 前記腫瘍標的化キメラ受容体が、腫瘍標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項１～６のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体。
  8. 前記免疫調節細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球、マスト細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、ＥＳＣ由来細胞、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体。
  9. （ａ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｂ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｃ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｄ）前記キメラ阻害性受容体が、ＬＩＲ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｅ）前記キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｆ）前記キメラ阻害性受容体が、ＢＴＬＡに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＰＤ－１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｇ）前記阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｈ）前記キメラ阻害性受容体が、ＰＤ－１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＢＴＬＡに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｉ）前記キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＬＩＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含むか、または
    （ｊ）前記キメラ阻害性受容体が、ＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン及びＫＩＲ３ＤＬ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、
    請求項１～８のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体。
  10. 請求項１～９のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体をコードする、操作された核酸。
  11. 請求項１０に記載の操作された核酸を含む、発現ベクター。
  12. 請求項１～９のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体、請求項１０に記載の操作された核酸、または請求項１１に記載の発現ベクターを含む、単離された免疫調節細胞であって、
    任意選択で、前記細胞が、前記細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含み、任意選択で、前記タンパク質が前記キメラ阻害性受容体に結合すると、前記キメラ阻害性受容体が、キメラ阻害性受容体を欠くその他の点では同一の細胞と比較して、前記腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する、
    前記単離された免疫調節細胞。
  13. （ａ）請求項１～９のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体、請求項１０に記載の操作された核酸、請求項１１に記載の発現ベクター、または請求項１２に記載の単離された細胞と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、またはそれらの組み合わせと
    を含む、組成物。
  14. 免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体によって誘導された細胞媒介性免疫応答を防止、減弱、または阻害する方法であって、
    前記免疫調節細胞を操作して、前記免疫調節細胞の前記表面上に、請求項１～９のいずれか１項に記載のキメラ阻害性受容体を発現させることを含み、
    同族タンパク質が前記キメラ阻害性受容体に結合すると、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、前記腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害し、
    任意選択で、前記腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、任意選択で、前記ＣＡＲが、腫瘍細胞の前記表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する、
    前記方法。
  15. 免疫調節細胞の表面上で発現された腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害する方法であって、
    請求項１２に記載の単離された細胞または請求項１３に記載の組成物を、前記キメラ阻害性受容体の同族タンパク質と、前記キメラ阻害性受容体が前記同族タンパク質に結合するのに好適な条件下で接触させることを含み、
    前記タンパク質が前記キメラ阻害性受容体に結合すると、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、前記腫瘍標的化キメラ受容体の活性化を防止、減弱、または阻害し、
    任意選択で、前記腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、任意選択で、前記ＣＡＲが、腫瘍細胞の前記表面上で発現された１つ以上の抗原に結合する、
    前記方法。
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