JP7189021B2 - 医療において使用するための、免疫チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、カーゴ、及びｔｌｒペプチドアゴニストを含む複合体との組合せ - Google Patents

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Description

本発明は、ワクチン接種、特に、癌ワクチンの分野に関する。
免疫系は、腫瘍細胞を認識し、そして、ある程度排除することができるが、この抗腫瘍応答は、多くの場合、小さく且つ非効率である。治療用ワクチンによりこの弱い抗腫瘍応答を強化することは、癌治療の待望のゴールであった。したがって、免疫系を調節して免疫応答を強化することは、標準的な癌治療と併用することができるので、腫瘍学において有望な治療アプローチとなっている。
有望な臨床前データ及び臨床試験の進行は、能動免疫が特定の種類の癌にとって安全且つ便利な治療法であることを示す。改変腫瘍細胞ワクチン、ペプチドワクチン、組み換えウイルスベクター、ＤＮＡ、タンパク質、又は樹状細胞ワクチンを含む様々なアプローチを用いた腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）介在性免疫応答の誘導が報告されている。しかし、ＣＴＬによって媒介される抗腫瘍免疫は、時偶腫瘍退縮と相関するだけであり、また、第ＩＩＩ相臨床段階に達したプロジェクトはほんの僅かである。
全体として、癌ワクチンは、これまで非常に限定的な臨床的有効性しか示していない。実際、２０１１年の終わりにおいて、３万の進行中の癌ワクチン臨床試験のうち第ＩＩＩ相試験が報告されたのは１９のみであった（非特許文献１）。その中には、乳癌用のペプチドワクチンであるＮｅｕＶａｘ、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び乳癌用のリポソーム系ワクチンであるＳｔｉｍｕｖａｘ、ＮＳＣＬＣ用のワクチニア系ワクチンであるＴＧ４０１０、並びにＮＳＣＬＣ用のアジュバントリポソームであるＧＳＫ１５７２９３２Ａが存在する。これら４つの癌ワクチンは、異なる技術に基づいており、１つの抗原を標的とする点が共通している。
治療用癌ワクチンは、個別化（自己）ワクチン及び標準化ワクチンの２つの主なカテゴリに分けることができ、技術プラットフォームに依存して更に分類される。現行の個別化ワクチンとしては、腫瘍溶解物ワクチン及び樹状細胞ベースのワクチン（以後、細胞ベースと呼ぶ）が挙げられる。後者の場合、抗原ロードは、腫瘍溶解物を用いるパルス又は腫瘍から抽出したＲＮＡによるトランスフェクションのいずれかで行ってよい。この場合、抗原は、腫瘍特異的であるか又は腫瘍に関連しているが、明確には定義されていない。また、樹状細胞にも、ペプチドパルス又はタンパク質（例えば、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）ワクチンを操作するために用いられる前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ））を用いて規定の抗原がロードされ得る。しかし、これら細胞ベース治療の製造プロセスは、時間も労力もかかると同時に、品質基準を達成及び維持することが困難である。免疫モニタリングは、更に面倒な事態を生じさせる。更に、規定の標準化されたワクチンとは異なり、自己癌ワクチンの大部分は、用いられる抗原のアイデンティティ又は量を管理することができない。
細胞ベース治療（ＡＰＣ、Ｔ細胞、ＣＡＲ、溶解物）とは対照的に、サブユニットワクチン（タンパク質又はペプチド）は、広範な患者に投与することができる、容易に製造でき且つバッチ間の再現性が著しく優れている標準化ワクチンの開発を可能にする。更に、より優れた免疫モニタリングを可能にし、ワクチン成分の望ましくない効果のリスクを低減する抗原を十分に規定する。
臨床前及び臨床開発において評価された様々なアプローチとしては、短ペプチドワクチン（非特許文献２）、長ペプチドワクチン（非特許文献３）、及びタンパク質が挙げられる。長ペプチドワクチン及びタンパク質ワクチンとは対照的に、短ペプチドワクチンは、非常に短い半減期を有し且つ免疫応答に対して負の結果を有し得る。
治療用癌ワクチンは、その免疫系が腫瘍細胞を認識し、殺傷する能力を強化するために癌患者に投与される。治療用癌ワクチンの主な目標は、腫瘍細胞に特異的なキラーＴ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球とも呼ばれる）を生成することである。この目的のために、そして、強力な免疫応答を達成するために、ワクチンは、腫瘍にも存在し且つ癌免疫を開始させるために抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）に送達される必要がある、抗原又は抗原エピトープを含有していなければならない。ＤＣは、これら腫瘍抗原を小ペプチドに加工し、それを、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ分子を発現している細胞表面においてＴ細胞に提示する。次いで、Ｔ細胞によって認識され、それによって刺激を誘導するペプチドは、エピトープと呼ばれる。ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩ分子による提示によって、それぞれ、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、及びＣＤ４＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の２つのクラスのＴ細胞を活性化することができる。更に、完全に活性化するために、抗原認識に加えて、Ｔ細胞は、抗原非特異的であり且つＡＰＣの表面上で発現する共刺激分子とＴ細胞との間の相互作用によって提供される第２のシグナルである共刺激シグナルを必要とする。したがって、効率的な治療用癌ワクチンの２つの主な要件は、（ｉ）腫瘍抗原の特異性及び（ｉｉ）それをＤＣに効率的に送達する能力である。
まとめると、腫瘍特異的免疫応答の誘導は、以下のように、３つの主な工程を必要とする：（ｉ）抗原をエピトープに加工する樹状細胞に抗原を送達しなければならない、（ｉｉ）樹状細胞が、好適な活性化シグナルを受容しなければならない、及び（ｉｉｉ）活性化された腫瘍抗原がロードされた樹状細胞が、リンパ器官においてＴ細胞介在性免疫応答を生じさせなければならない。
個々の抗原の発現をダウンレギュレートすることによって腫瘍細胞は免疫系から逃避することができるので（受動免疫逃避）、多エピトープ抗原送達が有益である。実際、タンパク質ベースのワクチンは、単一のＭＨＣアレルに拘束される制約なしに樹状細胞（ＤＣ）等の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に多エピトープ抗原を送達することができる。別の強みは、タンパク質がロードされた樹状細胞において最近報告された持続性エピトープ提示である（非特許文献４）。更に、タンパク質は、ＤＣによって取り込まれ、加工されて、その構成成分であるエピトープがＭＨＣ拘束的に提示されることを必要とする。これによって、かかるストリンジェントな加工要件を有しない短ペプチドをワクチン接種した後に示された通り、末梢寛容を誘導するリスクが低減される（非特許文献５）。
しかし、殆どの可溶性タンパク質は、一般的に、エンドリソソームにおいて分解され、ＭＨＣクラスＩ分子においてそれほど交差提示されないので、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答については免疫原性が低い（非特許文献６）。更に、成熟ＤＣは、初回刺激及びＴ細胞応答の惹起において未成熟ＤＣよりも強力である（非特許文献７）が、外因性抗原、特にＭＨＣクラスＩＩ拘束性抗原を効率的に取り込む能力が失われている（非特許文献８）。その結果、ワクチンとしてのペプチドでパルスされたＤＣは、幾つかの制約を有する。例えば、ペプチド分解、急速なＭＨＣクラスＩのターンオーバー、及びＤＣ／ペプチドの調製及び注射中におけるＭＨＣクラスＩ分子からのペプチドの解離によって、ＤＣ表面におけるＭＨＣクラスＩ／ペプチド複合体の半減期が短くなり、その結果、Ｔ細胞の応答が弱くなり得る。
タンパク質ベースのワクチン送達の有効性を改善するために、癌ペプチドをＤＣに細胞内送達するために細胞透過性ペプチドを使用することが提案された（非特許文献９）。細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、細胞膜を横断し、殆どの細胞型に侵入する能力を有する通常８残基～４０残基のペプチドである（非特許文献１０及び１１）。或いは、天然タンパク質中に存在したときの起源を反映してタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）とも呼ばれる。ヒト免疫不全ウイルスのＴａｔタンパク質、単純ヘルペスウイルスのＶＰ２２タンパク質、及び線維芽細胞成長因子を含む幾つかの強力なＣＰＰがタンパク質から同定されている（非特許文献１２～１６）。ＤＣ／ＴＡＴ－ＴＲＰ２によって惹起されるＴ細胞活性は、ＤＣ／ＴＲＰ２によって誘導されるものよりも３倍～１０倍高いことが見出された（非特許文献１７）。
ＤＣにおける共刺激分子のレベルを増大させて、標的抗原に対する免疫系の応答を増加させるために、アジュバントを用いることができる。アジュバントは、免疫系によって自然界で認識される、保存されている微生物成分を模倣することによってこの課題を達成することができる。アジュバントとしては、例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、細菌の細胞壁の成分、及び核酸、例えば、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、並びに非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド含有ＤＮＡが挙げられる。アジュバントが存在することによって、抗原に対する自然免疫応答を増大させることができる。更に、このアジュバントは、体液性免疫応答ではなくＣＴＬ及び型局在Ｔｈ１による適応免疫応答を促進して、抗体を産生させるはずである。様々なアジュバントが評価されているが、ヒトでの使用について規制上の承認が得られているのは限られた数だけである。これらとしては、米国ではＡｌｕｍ、ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ）及びＡＳＯ４（Ａｌｕｍ及びＭＰＬ）、欧州ではＭＦ５９（水中油型エマルション）、ＡＳＯ４、リポソームが挙げられる（非特許文献１８）。
近年、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドが有望なアジュバントのクラスとして浮上している（非特許文献１９）。したがって、癌ワクチン研究の著しい進歩は、ＴＬＲ－３（ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）、ＴＬＲ－４（モノホスホリルリピドＡ；ＭＰＬ）、ＴＬＲ－５（フラジェリン）、ＴＬＲ－７（イミキモド）、及びＴＬＲ－９（ＣｐＧ）を含む様々なＴＬＲアゴニストをワクチン製剤に含めることであった（非特許文献２０）。ＴＬＲ刺激後のシグナル伝達の種類及び免疫細胞によるサイトカインの種類は、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、及びＴｒｅｇ細胞への分化を制御する。殆どのＴＬＲベースのアジュバントによるＤＣ及びＴ細胞等の免疫細胞の刺激によって炎症促進性サイトカインが産生され、Ｔｈ１及びＣＤ８＋Ｔ応答を促進する（非特許文献２１）。
ワクチンをＴＬＲリガンドにコンジュゲートさせることは、（ｉ）ＴＬＲを発現する免疫細胞によって優先的に取り込まれる、（ｉｉ）免疫応答がより高い、及び（ｉｉｉ）末梢寛容を誘導するリスクが低いことを含む、コンジュゲートしていないワクチンに対する幾つかの利点を付与する魅力的なアプローチである。実際には、抗原がロードされた抗原提示細胞が全て同時に活性化される。様々なグループが、ペプチド又はタンパク質ワクチンに主に化学的に結合している様々なＴＬＲリガンドを用いてこのアプローチについて研究した（非特許文献２２）。ペプチドに対する化学結合が容易に実施できるので、ワクチンとのコンジュゲートについて最も高度に研究されたＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ２アゴニストであるＰａｍ２Ｃｙｓ及びＰａｍ３Ｃｙｓである（非特許文献２３）。
更に、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、及びＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）の最近のマーケティング承認で示されているように、最近、免疫チェックポイントモジュレータが癌免疫療法の新たな標的として注目されてきた。免疫チェックポイントは、免疫応答を開始するために活性化される（刺激性又は共刺激性チェックポイント分子）又は不活性化される（阻害性チェックポイント分子）必要がある、免疫系、特に、特定の免疫細胞上の分子である。免疫チェックポイントの多くは、特異的受容体とリガンドの対の相互作用によって調節される。多くの場合、癌は、免疫系による攻撃を避けるために、これらのチェックポイントを使用して免疫系から自身を保護する。
特に、２つのチェックポイント受容体ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１は、多くの注目を集めた。ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、及びそれらのリガンドは、Ｔ細胞機能及び他の細胞機能の全段階を通して重要な役割を果たす共シグナル伝達チェックポイント分子のＣＤ２８－Ｂ７ファミリーのメンバーである。
ＰＤ－１受容体は、活性化されたＴ細胞、及びＢ細胞などの他の免疫細胞の表面に発現する。そのリガンド（ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２）は、樹状細胞又はマクロファージなどの抗原提示細胞、及び他の免疫細胞の表面に発現する。ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２のＰＤ１への結合は、Ｔ細胞においてシグナルを誘発し、これは、本質的にＴ細胞をスイッチオフ又は阻害する。非病理学的条件下では、この相互作用は、Ｔ細胞が体内の他の細胞を攻撃するのを防ぐ。しかし、癌細胞は、しばしばこの系を利用し、その表面に高レベルのＰＤ－Ｌ１を発現する。これにより、癌細胞は、ＰＤ－１を発現するＴ細胞をスイッチオフすることができ、したがって、抗癌免疫応答を抑制することができる。ＰＤ１及び／又はそのリガンドの阻害剤、例えば、ＰＤ１又はそのリガンドに対する阻害／拮抗モノクローナル抗体などは、癌細胞に対する免疫応答を高めることができ、したがって、癌の治療において有望である。現在承認されているＰＤ１に対する阻害／拮抗モノクローナル抗体の例としては、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）が挙げられる。現在臨床段階ＩＩ及び／又はＩＩＩにあるＰＤ１経路の他の阻害剤は、Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＰＤ１を阻害するｍＡｂ；ＣｕｒｅＴｅｃｈ／Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ）、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＰＤ－Ｌ１を阻害するｍＡｂ；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、及びＡｔｅｚｏｌｉｍａｂ（ＰＤ－Ｌ１を阻害するｍＡｂ；Ｒｏｃｈｅ）を含む。
別の承認済み免疫チェックポイントモジュレータであるＹｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）に対する阻害／拮抗モノクローナル抗体である。ＣＴＬＡ４は、活性化されたＴ細胞の表面にも発現し、そのリガンドは、プロフェッショナルな抗原提示細胞の表面に発現する。ＣＴＬＡ－４は、主にリンパ節において免疫応答の初期にＴ細胞増殖を調節すると考えられ、調節性Ｔ細胞の機能に影響を及ぼす。現在臨床段階ＩＩにあるＣＴＬＡ－４の他の阻害剤は、例えば、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。
チェックポイントモジュレータ、特に、チェックポイント阻害剤を用いた癌免疫療法は、少なくとも被験者（「レスポンダ」）のサブグループにおいて非常に有効であることが示された。しかし、多くの患者は、チェックポイントモジュレータに応答せず、応答する集団においてさえ、応答は必ずしも完全又は最適である訳ではない。
したがって、有効性を高めることを目的としたＰＤ１－及びＣＴＬＡ４－経路の阻害の組合せが望ましい。そこで、ＮｉｖｏｌｕｍａｂとＩｐｉｌｉｍｕｍａｂとの併用療法が、ＢＲＡＦ Ｖ６００野生型、切除不能又は転移性メラノーマ患者の治療のために、２０１５年にＦＤＡによって承認された。更に、非小細胞肺癌におけるＤｕｒｖａｌｕｍａｂとＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂとの併用に関する第１ｂ相試験の成功が最近報告された（非特許文献２４）。
しかし、特に、腫瘍特異的抗原がないため、互いが内因性腫瘍特異的免疫のみを標的とするチェックポイントモジュレータの組合せがある。癌治療のための別のストラテジは、特定の腫瘍に対して特異性を提供する、上述した抗原又は抗原エピトープを含むワクチンと、チェックポイントモジュレータとを組み合わせることである。チェックポイントモジュレータと、抗原又は抗原エピトープを含むワクチンとの組合せは、被験体における抗腫瘍応答を強化又は延長することができる。更に、抗原又は抗原エピトープを含むワクチンと、チェックポイントモジュレータとの組合せは、チェックポイントモジュレータの効果を強化又は延長し、被験体がチェックポイントモジュレータに応答することを可能にする、又は、チェックポイントモジュレータ毒性又は用量の低減することを可能にする。例えば、チェックポイントモジュレータは、ワクチン投与によって、「治療ガスペダル」を踏む前の「免疫ブレーキ」を除去することができる。
したがって、レスポンダ及び非レスポンダの両方において、チェックポイントモジュレータの有効性を開始又は強化するための併用療法を開発する必要がある。この目的のために、チェックポイントモジュレータと強力なワクチンとの組合せが望まれている。しかし、今日まで、癌ワクチンの治験の大部分が、限定的な有効性しか示していない。１つの解釈は、同時に（ｉ）多エピトープ細胞傷害性Ｔ細胞介在性免疫を刺激し、（ｉｉ）Ｔｈ細胞を誘導し、（ｉｉｉ）免疫記憶を促進することができる治療法が存在していないことである。これら３つのパラメータは、強力で長続きする抗腫瘍免疫を生じさせるのに必須である。実際には、様々なエピトープに特異的なＣＴＬは、異種の腫瘍塊内でより多くの癌細胞を破壊し、抗原欠損変異体の増殖を回避することができる（腫瘍免疫逃避）。Ｔｈ細胞は、持続性の細胞免疫の維持に関与しており、また、Ｔｈ細胞による腫瘍浸潤は、ＣＤ８＋ＣＴＬの動員及び機能にとって必須の工程である。免疫記憶は、腫瘍再発から保護するのに必須である。
ｇｌｏｂａｌｄａｔａ，２０１２ Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆ ＣＬ，Ｊｒ．Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ：ｓｉｎｇｌｅ ｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ，ｌｏｎｇ ｏｒ ｓｈｏｒｔ，ａｌｏｎｅ ｏｒ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ？ Ｃａｎｃｅｒ ｊｏｕｒｎａｌ ２０１１；１７（５）：３４３－５０ Ｍｅｌｉｅｆ ＣＪ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｕｒｇ ＳＨ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ（ｐｒｅ）ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｏｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ ２００８；８（５）：３５１－６０ ｖａｎ Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔ Ｎ，Ｃａｍｐｓ ＭＧ，Ｋｈａｎ Ｓ，Ｆｉｌｉｐｐｏｖ ＤＶ，Ｗｅｔｅｒｉｎｇｓ ＪＪ，Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ＪＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｇｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ ｉｎ ｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｃｒｏｓｓ－ｐｒｉｍｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ２００９；１０６（１６）：６７３０－５ Ｔｏｅｓ ＲＥ，Ｏｆｆｒｉｎｇａ Ｒ，Ｂｌｏｍ ＲＪ，Ｍｅｌｉｅｆ ＣＪ，Ｋａｓｔ ＷＭ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｃａｎ ｌｅａｄ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １９９６；９３（１５）：７８５５－６０ Ｒｏｓａｌｉａ ＲＡ，Ｑｕａｋｋｅｌａａｒ ＥＤ，Ｒｅｄｅｋｅｒ Ａ，Ｋｈａｎ Ｓ，Ｃａｍｐｓ Ｍ，Ｄｒｉｊｆｈｏｕｔ ＪＷ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｃｅｓｓ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｏｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｗｈｏｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１３；４３（１０）：２５５４－６５ Ａｐｅｔｏｈ Ｌ，Ｌｏｃｈｅｒ Ｃ，Ｇｈｉｒｉｎｇｈｅｌｌｉ Ｆ，Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ，Ｚｉｔｖｏｇｅｌ Ｌ．Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１；２３：４２－４９ Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ Ｊ，Ｓｔｅｉｎｍａｎ ＲＭ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９８；３９２：２４５－２５２ Ｗａｎｇ ＲＦ，Ｗａｎｇ ＨＹ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｐｒｏｌｏｎｇｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００２；２０：１４９－１５６ Ｃｏｐｏｌｏｖｉｃｉ ＤＭ，Ｌａｎｇｅｌ Ｋ，Ｅｒｉｓｔｅ Ｅ，Ｌａｎｇｅｌ Ｕ．Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＡＣＳ ｎａｎｏ ２０１４；８（３）：１９７２－９４ Ｍｉｌｌｅｔｔｉ Ｆ．Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２０１２ Ｂｅｒｒｙ ＣＣ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＨＩＶ－１ ｔａｔ ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００８；３：３５７－３６５ Ｄｅｓｈａｙｅｓ Ｓ，Ｍｏｒｒｉｓ ＭＣ，Ｄｉｖｉｔａ Ｇ，Ｈｅｉｔｚ Ｆ．Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２００５；６２：１８３９－１８４９ Ｅｄｅｎｈｏｆｅｒ Ｆ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：Ｎｏｖｅｌ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．２００８；１４：３６２８－３６３６ Ｇｕｐｔａ Ｂ，Ｌｅｖｃｈｅｎｋｏ ＴＳ，Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｂｙ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２００５；５７：６３７－６５１ Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ．Ｒｅｃｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ＤＮＡ ａｎｄ ｏｒｇａｎｅｌｌｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ．２００６；８：３４３－３７５ Ｗａｎｇ ＨＹ，Ｆｕ Ｔ，Ｗａｎｇ Ｇ，Ｇａｎｇ Ｚ，Ｄｏｎｎａ ＭＰＬ，Ｙａｎｇ ＪＣ，Ｒｅｓｔｉｆｏ ＮＰ，Ｈｗｕ Ｐ，Ｗａｎｇ ＲＦ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ＴＡＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｔｏ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００２ａ；１０９：１４６３－１４７０ Ｌｉｍ，Ｙ．Ｔ．，Ｖａｃｃｉｎｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓ，２０１５．４（１）：ｐ．５４－８ Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，Ｃ．Ｎ．，Ｉ．Ｆ．Ｖｏｕｔｓａｓ，ａｎｄ Ｏ．Ｅ．Ｔｓｉｔｓｉｌｏｎｉｓ，Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ｕｔｉｌｉｔｙ ａｓ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｉｎ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１３．５（５）：ｐ．４９７－５１１ Ｄｕｔｈｉｅ ＭＳ，Ｗｉｎｄｉｓｈ ＨＰ，Ｆｏｘ ＣＢ，Ｒｅｅｄ ＳＧ．Ｕｓｅ ｏｆ ｄｅｆｉｎｅｄ ＴＬＲ ｌｉｇａｎｄｓ ａｓ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｗｉｔｈｉｎ ｈｕｍａｎ ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１１；２３９：１７８－１９６ Ｍａｎｉｃａｓｓａｍｙ Ｓ，Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ Ｂ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；２１：１８５－１９３ Ｚｏｍ ＧＧ，Ｋｈａｎ Ｓ，Ｆｉｌｉｐｐｏｖ ＤＶ，Ｏｓｓｅｎｄｏｒｐ Ｆ．ＴＬＲ ｌｉｇａｎｄ－ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ：ｔｏｗａｒｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；１１４：１７７－２０１ Ｆｕｊｉｔａ，Ｙ．ａｎｄ Ｈ．Ｔａｇｕｃｈｉ，Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ａｎｄ ｏｕｔｌｏｏｋ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｇａｎｄ－ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ，２０１２．３（６）：ｐ．７４９－６０ Ａｎｔｏｎｉａ， Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．， ２０１６， Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ ｐｌｕｓ ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ： ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ， ｐｈａｓｅ １ｂ ｓｔｕｄｙ； Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ． ２０１６ Ｆｅｂ ５． ｐｉｉ： Ｓ１４７０－２０４５（１５）００５４４－６． ｄｏｉ： １０．１０１６／Ｓ１４７０－２０４５（１５）００５４４－６． ［Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ］
上記に鑑みて、本発明の目的は、上に概説した現行の癌ワクチンの問題点を克服し、抗腫瘍活性が改善されたより強力なワクチン、特に癌ワクチンを表す癌免疫療法用途のための、免疫チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、カーゴ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せを提供することにある。したがって、本発明は、抗腫瘍免疫応答を開始する、可能にする、強化する、又は改善する併用療法、特に、チェックポイントモジュレータに対する被験体又は腫瘍の応答を可能にする、強化する、又は改善する併用療法に関する。
この目的は、以下に記載する発明主題及び添付の特許請求の範囲を用いて達成される。
以下に、添付図面の簡単な説明を記載する。図面は、本発明をより詳細に説明することを意図する。しかし、これらは、如何なる方法でも本発明の発明主題を限定することを意図するものではない。
図１は、実施例１について、１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長（Ａ）と生存率（Ｂ）（平均±ＳＥＭ）を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのに左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによって２回（ｄ５及びｄ１３）ワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１、＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１。 図２は、実施例２について、１群当たり８頭のマウスの腫瘍成長（平均±ＳＥＭ）を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウス右側腹部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによって２回（ｄ５及びｄ１３）ワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。 図３は、実施例２について、異なる実験群（Ａ）についての腫瘍部位（腫瘍浸潤細胞、ＴＩＬ）におけるマルチマー陽性細胞の割合（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）、及び腫瘍部位（ＴＩＬ）におけるマルチマー陽性細胞（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）の、腫瘍サイズ（Ｂ）との相関を示す。＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。 図４は、実施例２について、脾臓（Ａ）およびＴＩＬ（Ｂ）の異なる実験群についての顆粒球性ＭＤＳＣの割合（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の％）を示す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。 図５は、実施例２について、脾臓（Ａ）及びＴＩＬ（Ｂ）における異なる実験群についての顆粒球性ＭＤＳＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の％）と腫瘍サイズとの相関を示す。 図６は、実施例３について、異なる治療プロトコルにおいて、抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａで処置したマウスの腫瘍成長を示す。（Ａ）実施例１のプロトコルにしたがって抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａで処置したマウス。（Ｂ）Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａによるワクチン接種後にのみ抗ＰＤ１で処置したマウスの腫瘍成長。＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１。 図７は、実施例４について、血液中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の割合（Ａ）及びＢＩＬ中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の割合（Ｂ）を示す。図７Ｃは、血液及びＢＩＬにおけるＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のパーセンテージのまとめを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞を０日目に頭蓋内移植した。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、７日目及び２１日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによりワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を、マルチマー染色（１群当たり５～８頭のマウス）により、２８日目に血液中及び脳浸潤白血球（ＢＩＬ）中で定量した。＊、ｐ＜０．０５。 図８は、実施例４について、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドで６時間刺激した後の、ＢＩＬにおけるＩＦＮ－γ産生細胞の割合（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）（Ａ）及びＢＩＬ（Ｂ）におけるＩＦＮ－γ及び／又はＴＮＦα産生細胞（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）のまとめ示す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１。 図９は、実施例５について、マウスの生存率を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞を０日目に頭蓋内移植した。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、７、２１、及び３５日目のそれぞれで２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによりワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。７日目及び２１日目に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗体の両方を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後にｉ．ｐ．投与した。マウスの体重を毎日測定し、体重減少が１５％を超えたときに安楽死させた。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１。 図１０は、実施例６について、転移の数を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１×１０５個のＢ１６－ＯＶＡメラノーマ腫瘍細胞を０日目にｉ．ｖ．移植した。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」（「ワクチン＋抗ＰＤ１」）群のマウスの右側腹部に、０．５ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによって、０日目及び１０日目にワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」（「ワクチン＋抗ＰＤ１」）及び「抗ＰＤ１」の各群のマウスに、０、３、及び７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」群のマウスに、０、３、及び７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。１７日目にマウスを安楽死させ、肺を回収した。各肺について、転移巣の数を数えた。＊＊、ｐ＜０．０１（独立Ｔ検定）。 図１１は、実施例７について、ＥＧ７腫瘍モデルにおける腫瘍成長を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」群のマウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下にてワクチン接種した。１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を、「ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」の各群のマウスに、５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」群では、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、抗体をｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１を、「コントロール」群のマウスに、５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。（Ａ）全ての実験群のまとめ。（Ｂ）コントロール群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｃ）抗ＣＴＬＡ４単独群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｄ）Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４群の各マウスにおける腫瘍成長。＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。 図１２は、実施例８について、ＥＧ７腫瘍モデルにおける腫瘍成長に対する投与経路の影響を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｓｃ」の各群のマウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下にてワクチン接種した。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」群のマウスに、５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。５日目及び１３日目のそれぞれの「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｓｃ」群において、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの注射の１時間後に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａと同じ部位に１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を皮下投与した。コントロールとして、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１を、「コントロール」群のマウスに、５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。（Ａ）全ての実験群のまとめ。（Ｂ）コントロール群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｃ）Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｓｃ群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｄ）Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ群の各マウスにおける腫瘍成長。＊＊、ｐ＜０．０１。 図１３は、実施例９について、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＣＴＬＡ４阻害剤との組合せの、ＣＴ２６腫瘍モデルにおける効果を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、２×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４」の各群のマウスの右側腹部に、３日目及び９日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種し、（３日目及び９日目のＺ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に）１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロール群では、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１を、「コントロール」群のマウスに、３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。 図１４は、実施例１０について、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＰＤ１阻害剤と、ＣＴＬＡ４阻害剤との組合せの効果を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、２×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４」及び「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、３日目及び９日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａを皮下注射することによってワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」の各群のマウスに３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を、「ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４」、及び「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」の各群に、３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。３日目及び９日目に、Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ及び抗体を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後にｉ．ｐ．投与した。コントロール群では、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１及び２００μｇのアイソタイプ２Ａ３を、３、６、及び９日目のそれぞれで「コントロール」群のマウスにｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。（Ａ）全ての実験群のまとめ。（Ｂ）コントロール群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｃ）Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｄ）ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１群の各マウスにおける腫瘍成長。（Ｅ）Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１群の各マウスにおける腫瘍成長。 図１５は、実施例１１について、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＣＤ４０アゴニストとの組合せの効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり４頭のマウス）の右側腹部に、０、１４、２８、及び４２日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによってワクチン接種した。１００μｇの抗ＣＤ４０抗体を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＤ４０ ｖａｃ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ ＋ ａＣＤ４０ ｖａｃ１及びｖａｃ２」の各群のマウスに、０日目、０日目及び１４日目に、皮下投与した。（Ａ）異なる実験群のマルチマー陽性細胞の割合（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）。（Ｂ）マルチマー陽性細胞の中のＫＬＲＧ１陽性細胞の割合。全ての群は、ナイーブコントロール群と比較して有意に異なる。＊、ｐ＜０．０５。 図１６は、実施例１１（Ａ）について、（Ａ）ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を産生するＩＦＮ－γの量（Ｅｌｉｓｐｏｔアッセイ）及び（Ｂ）ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のＩＦＮ－γ、ＣＤ１０７、及びＴＮＦαの脾細胞の細胞内染色の結果を示す。 図１７は、実施例１１について、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１０７、及びＴＮＦαの脾細胞の細胞内染色のＦＡＣＳプロットを示す。 図１８は、実施例１２について、１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長を示す（平均±ＳＥＭ）；＊、ｐ＜０．０５ ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５対コントロール群（二要因分散分析）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に１０ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＭａｄ５、Ｍａｄ５、又はＭａｄ５及びＭＰＬＡ（ＥＤＡと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。腫瘍サイズをノギスで測定した。 図１９は、実施例１２について、個々の腫瘍性長曲線を示す（１群当たりマウス個体７頭）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に１０ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＭａｄ５、Ｍａｄ５、又はＭａｄ５及びＭＰＬＡ（ＥＤＡと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。腫瘍サイズをノギスで測定した。 図２０は、実施例１２について、（Ａ）１群当たり７頭のマウスの生存曲線；＊、ｐ＜０．０５ ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５対コントロール群（ログランク検定）及び（Ｂ）１群当たり７頭のマウスの腫瘍無増悪曲線；＊、ｐ＜０．０５ ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５対コントロール群（ログランク検定）。 図２１は、実施例１３について、免疫応答に対する様々なＣＰＰを有する複合体の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌ（Ａ）又は０．５ｎｍｏｌ（Ｂ）のＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａを５回（Ｗｋ０、Ｗｋ２、Ｗｋ４、Ｗｋ６、及びＷｋ８）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。２回目、３回目、４回目、及び５回目のワクチン接種の７日間後にマウスから採血し、マルチマー染色を実施した（１群当たりマウス４頭を用いて実験１回）。＊、ｐ＜０．０５ Ｚ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスのＶａｃ２後を除く各時点におけるワクチン接種したマウス対ナイーブマウス。 図２２は、実施例１４について、脾臓（Ａ）、排出リンパ節（Ｂ）、及び骨髄（Ｃ）におけるＣＤ８ Ｔ細胞に対する様々なＣＰＰを有する複合体の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａを５回（Ｗｋ０、Ｗｋ２、Ｗｋ４、Ｗｋ６、及びＷｋ８）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。５回目のワクチン接種の９日間後、マウスを安楽死させ、器官を摘出し、マルチマー染色を実施した。 図２３は、実施例１４について、脾臓におけるＴ細胞に対する様々なＣＰＰを有する複合体の効果を示す（ＣＤ８ Ｔ細胞応答（Ａ）及びＣＤ４ Ｔ細胞応答（Ｂ））。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａを５回（Ｗｋ０、Ｗｋ２、Ｗｋ４、Ｗｋ６、及びＷｋ８）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。（Ａ）５回目のワクチン接種の９日間後、ＳＩＩＮＦＥＫＬ ＯＶＡＣＤ８ペプチドで刺激した脾細胞に対してＥｌｉｓｐｏｔアッセイを実施した。（Ｂ）５回目のワクチン接種の９日間後、ＯＶＡＣＤ４ペプチドで刺激した脾細胞に対してＥｌｉｓｐｏｔアッセイを実施した。 図２４は、実施例１４について、ＣＤ８ Ｔ細胞エフェクタ機能に対する様々なＣＰＰを有する複合体の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａを５回（Ｗｋ０、Ｗｋ２、Ｗｋ４、Ｗｋ６、及びＷｋ８）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。５回目のワクチン接種の９日間後、ＳＩＩＮＦＥＫＬ ＯＶＡＣＤ８ペプチドで刺激した脾細胞に対して細胞内染色を実施した。 図２５は、実施例１５について、腫瘍成長（Ａ）及び生存率（Ｂ）に対する様々なＣＰＰを有する複合体の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に０．５ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａをｓ．ｃ．注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。（Ａ）１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長（平均±ＳＥＭ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１（２８日目における二要因分散分析）。（Ｂ）１群当たり７頭のマウスの生存曲線。生存期間中央値をグラフ上に示す（ｍ．ｓ．）。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１（ログランク検定）。 図２６は、実施例１６について、免疫応答に対する様々なＣＰＰを有する複合体の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌ（Ａ）又は０．５ｎｍｏｌ（Ｂ）のＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５、又はＥＤＡＺ１８Ｍａｄ５を３回（Ｗｋ０、Ｗｋ２、及びＷｋ４）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。３回目のワクチン接種の７日間後にマウスから採血し、マルチマー染色を実施した（１群当たりマウス４頭を用いて実験１回）。＊、ｐ＜０．０５。 図２７は、実施例１７について、腫瘍成長（Ａ）及び生存率（Ｂ）に対するＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に２ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５をｓ．ｃ．注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。左図：１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長（平均±ＳＥＭ）；＊＊、ｐ＜０．０１（２７日目における二要因分散分析）。右図：１群当たり７頭のマウスの生存曲線。生存期間中央値をグラフ上に示す（ｍ．ｓ．）。 図２８は、実施例１８について、１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長を示す（平均±ＳＥＭ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に１０ｎｍｏｌのＡｎａｘＺ１３Ｍａｄ５、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１３Ｍａｄ５＋Ｐａｍ３ＣＳＫ４の同時注射（Ａｎａｘａと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。腫瘍サイズをノギスで測定した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊＊、ｐ＜０．００１；＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１。 図２９は、実施例１８について、個々の腫瘍成長曲線（１群当たりマウス個体７頭）を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に１０ｎｍｏｌのＡｎａｘＺ１３Ｍａｄ５、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１３Ｍａｄ５＋Ｐａｍ３ＣＳＫ４の同時注射（Ａｎａｘａと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。腫瘍サイズをノギスで測定した。 図３０は、実施例１８について、１群当たり７頭のマウスの生存曲線を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に１０ｎｍｏｌのＡｎａｘＺ１３Ｍａｄ５、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１３Ｍａｄ５＋Ｐａｍ３ＣＳＫ４の同時注射（Ａｎａｘａと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。腫瘍サイズをノギスで測定した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１（ログランク検定）。 図３１は、実施例１９について、１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長を示す（平均±ＳＥＭ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に２ｎｍｏｌのＨｐ９１Ｚ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１３Ｍａｄ５ＥＤＡ、又はＺ１３Ｍａｄ５及びＭＰＬＡ（ＥＤＡと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１（２３日目における二要因分散分析）。 図３２は、実施例１９について、個々の腫瘍成長曲線（１群当たりマウス個体７頭）を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、右側腹部に２ｎｍｏｌのＨｐ９１Ｚ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１３Ｍａｄ５ＥＤＡ、又はＺ１３Ｍａｄ５及びＭＰＬＡ（ＥＤＡと等モル）を皮下注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ５及びｄ１３）。 図３３は、実施例１９について、１群当たりマウス７頭全ての生存曲線を示す。生存期間中央値をグラフ上に示す（ｍ．ｓ．）。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１（ログランク検定）。 図３４は、実施例２０について、Ｑｕａｄ－Ｇｌ２６１神経膠芽細胞腫モデルにおけるＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の定量を示す。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞をｉ．ｃ．移植し、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又は２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５及び２ｎｍｏｌのＡｎａｘａをｓ．ｃ．注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ７及びｄ２１）。マルチマー染色によってｄ２８に血液中及びＢＩＬ中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を定量した（１群当たりマウス７頭～１６頭）。 図３５は、実施例２０について、サイトカインの分泌を示す。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞をｉ．ｃ．移植し、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又は２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５及び２ｎｍｏｌのＡｎａｘａをｓ．ｃ．注射することによって２回ワクチン接種した（ｄ７及びｄ２１）。ＢＩＬを単離し、ブレフェルジンＡの存在下でＳｌｌＮＦＥＫＬペプチドをロードしたか又はしていない成熟ＢＭＤＣと共に６時間培養した後、サイトカインを細胞内染色した。サイトカイン分泌ＣＤ８ Ｔ細胞の％（１群当たりマウス７頭～１６頭）。 図３６は、実施例２１について、ナイーブマウスにおけるＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の定量を示す。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（群「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ」）又は２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５及び２ｎｍｏｌのＡｎａｘａ（群「Ｚ１３Ｍａｄ５＋Ａｎａｘａ」）をｓ．ｃ．注射することによって１回ワクチン接種した（０日目）。マルチマー染色によってｄ７に血液中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を定量した（１群当たりマウス４頭～８頭）。 図３７は、実施例２２について、１群当たり７頭のマウスの腫瘍増殖（Ａ）及び生存率（Ｂ）を示す（平均±ＳＥＭ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に、２×１０５個のＭＣ－３８腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの尾部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａを皮下注射することにより、３回（ｄ３、ｄ１０、及びｄ１７）ワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、６、１０、１３、１７、２０、２４、２７、及び３１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。各群の無腫瘍マウスの数を各腫瘍成長曲線について示す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。 図３８は、実施例２２について、１群当たり７頭のマウスの個々の腫瘍成長曲線を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に、２×１０５個のＭＣ－３８腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの尾部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａを皮下注射することにより、３回（ｄ３、ｄ１０、及びｄ１７）ワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、６、１０、１３、１７、２０、２４、２７、及び３１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。 図３９は、実施例２３について、１群当たり１３～１４頭のマウスの腫瘍増殖（Ａ）及び生存率（Ｂ）を示す（平均±ＳＥＭ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に、２×１０５個のＭＣ－３８腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの背部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａを皮下注射することにより、３回（ｄ３、ｄ１０、及びｄ１７）ワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、６、１０、１３、１７、２０、２４、及び２７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。各群の無腫瘍マウスの数を各腫瘍成長曲線について示す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１。 図４０は、実施例２３について、１群当たり１３～１４頭のマウスの個々の腫瘍成長曲線を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に、２×１０５個のＭＣ－３８腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの背部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａを皮下注射することにより、３回（ｄ３、ｄ１０、及びｄ１７）ワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、６、１０、１３、１７、２０、２４、及び２７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
本発明について以下に詳細に説明するが、この発明は本明細書に記載する特定の方法、プロトコル、及び試薬に限定されるものではない（これらは変更し得る）ことを理解すべきである。また、本明細書で使用する用語は、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解すべきである。特に規定しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、当業者が一般的に理解する意味と同じ意味を有する。
以下に、本発明の構成要素について説明する。これら構成要素は、特定の実施形態と共に列挙されるが、これらを任意の方式で任意の数組み合わせて更なる実施形態を生み出すことができると理解すべきである。様々に記載される実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に記載される実施形態のみに限定すると解釈すべきではない。この説明は、明示的に記載される実施形態を、任意の数の開示する及び／又は好ましい構成要素と組み合わせた実施形態をサポート及び包含すると理解すべきである。更に、特に文脈上示されていない限り、本願に記載する全ての構成要素の任意の順序及び組合せが、本願の記載によって開示されているとみなすべきである。
特に文脈上必要としない限り、以下の本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、用語「含む」並びに「含み」及び「含んでいる」等の変形は、指定の部材、整数、又は工程を含むことを意味するが、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程を除外するものではないと理解される。用語「からなる」は、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程が除外される、用語「含む」の特定の実施形態である。本発明の状況では、用語「含む」は、用語「からなる」を包含する。したがって、用語「を含む」は、「を含める」及び「からなる」を包含し、例えば、Ｘ「を含む」組成物は、Ｘのみからなっていてもよく、追加の要素を含んでいてもよい（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」、並びに（特に、特許請求の範囲において）本発明を説明する際に用いる類似の参照物は、本明細書において特に指定しない限り又は文脈上明らかに矛盾していない限り、単数及び複数の両方を網羅すると解釈すべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内の各個別の値に個々に参照する簡略な方法として機能することを意図する。本明細書において特に指定しない限り、各個別の値は、それが個々に本明細書に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。明細書中の如何なる言語も、本発明の実施に必須である任意の請求されていない構成要素を示すと解釈すべきではない。
用語「実質的に」は、「完全に」を除外するものではなく、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含んでいなくてもよい。必要な場合、用語「実質的に」を本発明の定義から省略する場合がある。
数値ｘに関する用語「約」は、ｘ±１０％を意味する。
チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との、医療において使用するための組合せ
本発明の第１の態様では、
（ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
（ｉｉ）複合体との、医療において使用するための組合せであって、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）（即ち、前記細胞透過性ペプチド、前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び前記少なくとも１つのＴＬＲペプチド）が共有結合している組合せを提供する。
以下において、本発明にかかる使用のための組合せの各成分、即ち、免疫チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体、並びにそれらの好ましい実施形態について詳細に記載する。（ｉ）本発明にかかる使用のための組合せの好ましい実施形態は、免疫チェックポイントモジュレータの好ましい実施形態を含む；（ｉｉ）本発明にかかる使用のための組合せの好ましい実施形態は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の好ましい実施形態を含む；（ｉｉｉ）本発明にかかる使用のための組合せのより好ましい実施形態は、免疫チェックポイントモジュレータの好ましい実施形態、及び細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の好ましい実施形態を含む。
免疫チェックポイントモジュレータ
本明細書中で（即ち、本明細書全体を通して）使用されるとき、用語「免疫チェックポイントモジュレータ」（「チェックポイントモジュレータ」とも称する）は、１つ以上のチェックポイント分子の機能を調節する（例えば、完全に又は部分的に低減する、阻害する、干渉する、活性化させる、刺激する、増加させる、強化する、又は支持する）分子又は化合物を意味する。したがって、免疫チェックポイントモジュレータは、「免疫チェックポイント阻害剤」（「チェックポイント阻害剤」又は「阻害剤」とも称される）又は「免疫チェックポイント活性化剤」（「チェックポイント活性化剤」又は「活性化剤」とも称される）であり得る。「免疫チェックポイント阻害剤」（「チェックポイント阻害剤」又は「阻害剤」とも称される）は、１つ以上のチェックポイント分子の機能を完全に又は部分的に低減する、阻害する、干渉する、又は負に調節する。「免疫チェックポイント活性化剤」（「チェックポイント活性化剤」又は「活性化剤」とも称される）は、１つ以上のチェックポイント分子の機能を完全に又は部分的に活性化する、刺激する、増加させる、強化する、支持する、又は正に調節する。免疫チェックポイントモジュレータは、通常、（ｉ）自己寛容及び／又は（ｉｉ）免疫応答の強度及び／又は持続時間を調節することができる。好ましくは、本発明にかかる使用のための免疫チェックポイントモジュレータは、１つ以上のヒトチェックポイント分子の機能を調節し、したがって、「ヒトチェックポイントモジュレータ」である。好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３から選択される１以上の免疫チェックポイント分子の活性化剤又は阻害剤である、又はそれらの１つ以上のリガンドの活性化剤又は阻害剤である。
チェックポイント分子は、タンパク質などの分子であり、典型的には、免疫経路に関与し、例えば、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、及び／又はＴ細胞機能を調節する。したがって、チェックポイントモジュレータによって調節される（例えば、完全に又は部分的に低減され、阻害され、干渉され、活性化され、刺激され、増加され、強化され、又は支持される）チェックポイント分子の機能は、典型的には、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、及び／又はＴ細胞機能（の調節）である。免疫チェックポイント分子は、生理学的免疫応答の自己寛容並びに持続時間及び強度を調節及び維持する。免疫チェックポイント分子の多くは、Ｂ７：ＣＤ２８ファミリー又は腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーに属し、特異的リガンドの結合によって、細胞質ドメインに動員されるシグナル伝達分子を活性化する（Ｓｕｓｕｍｕ Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１６： Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２０１６： ｄｏｉ： １０．１０９３／ｊｊｃｏ／ｈｙｖ２０１ ［Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ］参照；特に表１）。
１０年来、Ｂ７ファミリーの役割が解析され、これらの重要なＴ細胞調節分子の新たなメンバー及び新たな規機能が同定された（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ， Ｒ．Ｊ．， Ｇ．Ｊ． Ｆｒｅｅｍａｎ， ａｎｄ Ａ．Ｈ． Ｓｈａｒｐｅ， Ｔｈｅ Ｂ７ ｆａｍｉｌｙ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ． Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００５． ２３： ｐ． ５１５－４８）。今日、Ｂ７：ＣＤ２８ファミリーは、免疫チェックポイント研究において最も頻繁に使用される経路を含む。多くの免疫学的及び臨床的腫瘍微小環境に関連していることが示された非常に興味深いＰＤ－１－Ｂ７－Ｈ１（ＰＤＬ１）／Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）カップルによって、ＣＴＬＡ－４－Ｂ７－１／Ｂ７－２の初期の複雑なメカニズムが次第に明らかになった（Ｚｏｕ， Ｗ． ａｎｄ Ｌ． Ｃｈｅｎ， Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｂ７－ｆａｍｉｌｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｕｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００８． ８（６）： ｐ． ４６７－７７）。このファミリーの別のメンバーは、ＩＣＯＳ－ＩＣＯＳＬ／Ｂ７－Ｈ２であり、同時期に同定された。このファミリーの他のメンバーとしては、Ｂ７－Ｈ３（Ｃｈａｐｏｖａｌ， Ａ．Ｉ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂ７－Ｈ３： ａ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｆｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ＩＦＮ－ｇａｍｍａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００１． ２（３）： ｐ． ２６９－７４）及びＢ７－Ｈ４（Ｓｉｃａ， Ｇ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂ７－Ｈ４， ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｂ７ ｆａｍｉｌｙ， ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２００３． １８（６）： ｐ． ８４９－６１）が挙げられるが、これらのリガンド受容体は、まだ同定されていない。しかし、Ｂ７－Ｈ３の抗腫瘍免疫における役割（Ｌｏｏｓ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂ７－ｈ３ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｃｌｉｎ Ｄｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１０． ２０１０： ｐ． ６８３８７５）及び免疫腫瘍回避における役割（Ｈｏｆｍｅｙｅｒ， Ｋ．Ａ．， Ａ． Ｒａｙ， ａｎｄ Ｘ． Ｚａｎｇ， Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｂ７－Ｈ３． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳ Ａ， ２００８．１０５（３０）： ｐ． １０２７７－８）並びに多くの進行癌における過剰発現（Ｚｏｕ， Ｗ． ａｎｄ Ｌ． Ｃｈｅｎ， Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｂ７－ｆａｍｉｌｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｕｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００８． ８（６）： ｐ． ４６７－７７）、即ち、結腸直腸癌における過剰発現（Ｓｕｎ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｂ７－Ｈ３ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ， ２０１０． ５９（８）： ｐ． １１６３－７１）は、研究がその方向で進んでいくことを示唆する。同様に、Ｂ７－Ｈ４は最近、腫瘍免疫回避及び抗腫瘍応答に作用する可能性のある剤として（Ｄａｎｇａｊ， Ｄ． ａｎｄ Ｎ． Ｓｃｈｏｌｌｅｒ， Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｔｈｅ Ｂ７－Ｈ４ ｐａｔｈｗａｙ ｗｉｔｈ ｎｏｖｅｌ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ． Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２０１３． ２（８）： ｐ． ｅ２５９１３； Ｄａｎｇａｊ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎｏｖｅｌ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｂ７－ｈ４ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｔｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｅｓｃａｐｅ ｔｏ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２０１３． ７３（１５）： ｐ． ４８２０－９）又は多くのキナーゼ経路に相互作用する可能性のある剤として（Ｗａｎｇ， Ｘ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂ７－Ｈ４ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏ／Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＫ，］ＮＫ， ｐ３８， ａｎｄ ＡＫＴ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１２． ７（１）： ｐ． ｅ２８２３２）評価ループに入った。この関心の結果は、乳癌の治療のための抗Ｂ７－Ｈ４抗体－薬剤コンジュゲートに関する刊行物によって強調されている（Ｌｅｏｎｇ， Ｓ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｎ ａｎｔｉ－ｂ７－ｈ４ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ． Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ， ２０１５．１２（６）： ｐ．１７１７－２９）。
ＣＤ２８は、ほぼ全てのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及び全てのＣＤ８Ｔ細胞の約半分に恒常的に発現する。その２つのリガンドである、樹状細胞上に発現するＣＤ８０（Ｂ７－１）及びＣＤ８６（Ｂ７－２）との結合は、Ｔ細胞増殖を促す。共刺激性チェックポイント分子ＣＤ２８は、同一リガンド、ＣＤ８０及びＣＤ８６について、阻害性チェックポイント分子ＣＴＬＡ４と競合する（Ｂｕｃｈｂｉｎｄｅｒ Ｅ． Ｉ． ａｎｄ Ｄｅｓａｉ Ａ．， ２０１６： ＣＴＬＡ－４ ａｎｄ ＰＤ－１ Ｐａｔｈｗａｙｓ － Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ， Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｈｅｉｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ； Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ３９（１）： ９８－１０６参照）。
細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２としても知られる）は、Ｂ７に対する遥かに高い結合親和性を有するＣＤ２８ホモログである。ＣＴＬＡ－４のリガンドは、ＣＤ２８と同様に、ＣＤ８０（Ｂ７－１）及びＣＤ８６（Ｂ７－２）である。しかし、ＣＤ２８とは異なり、ＣＴＬＡ４のＢ７への結合は刺激シグナルを生じず、通常ＣＤ２８によってもたらされる共刺激シグナルを妨げる。更に、ＣＴＬＡ４のＢ７への結合は、ＣＤ２８：Ｂ７及びＴＣＲ：ＭＨＣ結合の刺激シグナルに対抗する阻害シグナルを生じるとさえ考えられている。ＣＴＬＡ－４は、ナイーブＴ細胞活性化の初期段階で、典型的にはリンパ節において、自己反応性Ｔ細胞を潜在的に停止させるので、阻害性免疫チェックポイントの「リーダー」と考えられている（Ｂｕｃｈｂｉｎｄｅｒ Ｅ． Ｉ． ａｎｄ Ｄｅｓａｉ Ａ．， ２０１６： ＣＴＬＡ－４ ａｎｄ ＰＤ－１ Ｐａｔｈｗａｙｓ： Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ， Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｈｅｉｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ； Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ３９（１）： ９８－１０６）。ＣＴＬＡ４の好ましいチェックポイント阻害剤としては、モノクローナル抗体Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）及びトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）が挙げられる。更に好ましいＣＴＬＡ－４阻害剤としては、ＷＯ２００１／０１４４２４、ＷＯ２００４／０３５６０７、ＵＳ２００５／０２０１９９４、及びＥＰ１２１２４２２ Ｂ１に開示された抗ＣＴＬＡ４抗体が挙げられる。更に好ましいＣＴＬＡ－４抗体は、ＵＳ５，８１１，０９７、ＵＳ５，８５５，８８７、ＵＳ６，０５１，２２７、ＵＳ６，９８４，７２０、ＷＯ０１／１４４２４、ＷＯ００／３７５０４、ＵＳ２００２／００３９５８１、及びＵＳ２００２／０８６０１４に記載されている。本発明の状況において使用することができる他の好ましい抗ＣＴＬＡ－４抗体としては、例えば、ＷＯ９８／４２７５２；ＵＳ６，６８２，７３６及びＵＳ６，２０７，１５６；Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９５（１７）：１００６７－１００７１ （１９９８）；Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ． ２５０５ （２００４） （ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＰ－６７５２０６）；Ｍｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５８：５３０１－５３０４ （１９９８）、ＵＳ５，９７７，３１８、ＵＳ６，６８２，７３６、ＵＳ７，１０９，００３、及びＵＳ７，１３２，２８１に記載されているものが挙げられる。
プログラム死１受容体（ＰＤ１）は、２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１及びＣＤ２７４としても知られる）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ及びＣＤ２７３としても知られる）を有する。ＰＤ１経路は、主に末梢組織における免疫応答の後期段階で、これまでに活性化されたＴ細胞を調節する。したがって、ＰＤ１を標的とすることの利点は、腫瘍微小環境における免疫機能を回復させることができる点である。ＰＤ１経路の好ましい阻害剤としては、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）、デュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ ２０１１／０６６３８９ Ａ１参照）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ， Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＵＳ８，２１７，１４９ Ｂ２参照）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１； ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４； ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アベルマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ， ＧＳＫ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ）及びランブロリズマブ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６９： １３４－１４４において、ｈＰＤ１０９Ａ、そのヒト誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示）。
誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８としても知られる）は、活性化されたＴ細胞上で発現する。そのリガンドは、Ｂ細胞及び樹状細胞上で主に発現するＩＣＯＳＬ（Ｂ７－Ｈ２；ＣＤ２７５）である。この分子は、Ｔ細胞エフェクタ機能において重要であると考えられている。
Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）は、もともと共刺激分子であると理解されていたが、現在は、共阻害とみなされている。Ｂ７－Ｈ３の好ましいチェックポイント阻害剤は、Ｆｃ最適化モノクローナル抗体Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ（ＭＧＡ２７１；ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ；ＵＳ２０１２／０２９４７９６ Ａ１参照）である。
Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても知られる）は、腫瘍細胞及び腫瘍関連マクロファージによって発現され、腫瘍エスケープに役割を果たす。好ましいＢ７－Ｈ４阻害剤は、Ｄａｎｇａｊ、Ｄ．ら、２０１３；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７３（１５）：４８２０－９及びＪｅｎｅｓｓａ Ｂ． Ｓｍｉｔｈら、２０１４：Ｂ７－Ｈ４の表１及び各記述において、婦人科癌のための免疫療法（より詳細には、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３４（１）：１８１－１８９）の潜在的標的として記載されている。Ｂ７－Ｈ４阻害剤の他の好ましい例としては、例えば、ＷＯ２０１３／０２５７７９ Ａ１及びＷＯ２０１３／０６７４９２ Ａ１などに開示されているヒトＢ７－Ｈ４、又はＵＳ２０１２／０１７７６４５ Ａ１に開示されているようなＢ７－Ｈ４の可溶性組み換え形態が挙げられる。
ＴＮＦスーパーファミリーは、特に、２９個のサイトカイン受容体に結合する１９個のタンパク質－リガンドを含む。それらは、アポトーシス、炎症、又は細胞生存のような多くの生理学的応答に関与している（Ｃｒｏｆｔ， Ｍ．， Ｃ．Ａ． Ｂｅｎｅｄｉｃｔ， ａｎｄ Ｃ．Ｆ． Ｗａｒｅ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦＲ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｅｓ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ， ２０１３．１２（２）： ｐ． １４７－６８）。これらの共通して見られる作用は、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーを、創薬において非常に魅力的なものとした（６０種を超えるＴＮＦファミリー薬剤が２０１３年に開発された（Ｃｒｏｆｔ， Ｍ．， Ｃ．Ａ． Ｂｅｎｅｄｉｃｔ， ａｎｄ Ｃ．Ｆ． Ｗａｒｅ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦＲ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｅｓ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ， ２０１３．１２（２）： ｐ． １４７－６８））が、同時に、バランスさせるべき反対作用のため管理が難しい（Ａｇｇａｒｗａｌ， Ｂ．Ｂ．， Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ ｔｈｅ ＴＮＦ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ： ａ ｄｏｕｂｌｅ－ｅｄｇｅｄ ｓｗｏｒｄ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００３． ３（９）： ｐ． ７４５－５６）。Ｃｒｏｆｔ， Ｍ．， Ｃ．Ａ． Ｂｅｎｅｄｉｃｔ， ａｎｄ Ｃ．Ｆ． Ｗａｒｅ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦＲ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｅｓ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ， ２０１３．１２（２）： ｐ． １４７－６８は、次の９つの受容体を癌の適応症に優先させることを提案している：ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０／０Ｘ４０Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦＳ（ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７／ＣＤ７０）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０／ＣＤ３０Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ／４－１ＢＢＬ）、ＴＮＦＲＳＦ１０（ＴＲＡＩＬＲ／ＴＲＡＩＬ））、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＦＮ１４／ＴＷＥＡＫ）、ＴＮＦＲＳＦ１３（ＢＡＦＦＲＴＡＣＩ／ＡＰＲＩＬ－ＢＡＦＦ）、及びＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ）（Ａｖｏｇａｄｒｉ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＴＬＡ－４ ａｎｄ ＧＩＴＲ／ｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１１． ３４４： ｐ． ２１１－４４； Ｎａｉｄｏｏ， Ｊ．， Ｄ．Ｂ． Ｐａｇｅ， ａｎｄ Ｊ．Ｄ． Ｗｏｌｃｈｏｋ， Ｉｍｍｕｎｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ， ２０１４．１１１（１２）： ｐ． ２２１４－９）．このリストは、Ｂｒｅｍｅｒ， Ｅ．， Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｍ ｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． ＩＳＲＮ Ｏｎｃｏｌ， ２０１３． ２０１３： ｐ． ３７１８５４）によって免疫療法について補われ、Ｆａｓ－ＬｉｇａｎｄとＴＮＦＲＳＦ１（ＴＮＦα／ＴＮＦＲ）が追加された。更に、ＣＴＬＡ－４遮断と同様に、Ｂリンパ球及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）／ヘルペスウイルスエントリメディエータ（ＨＶＥＭ）経路は、免疫応答を強化するための標的として考慮されるべきである（Ｃｒｏｆｔ， Ｍ．， Ｃ．Ａ． Ｂｅｎｅｄｉｃｔ， ａｎｄ Ｃ．Ｆ． Ｗａｒｅ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦＲ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｅｓ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ， ２０１３．１２（２）： ｐ． １４７－６８）。したがって、本発明の状況において、このようなチェックポイントモジュレータは、癌の治療及び／又は予防における使用に好ましく、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０／０Ｘ４０Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦＳ（ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７／ＣＤ７０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ／４－１ＢＢＬ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ）、ＦａｓＲ／ＤｃＲ３／Ｆａｓリガンド、ＴＮＦＲＳＦ１（ＴＮＦα／ＴＮＦＲ）、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、及びＣＴＬＡ４から選択される１つ以上のチェックポイント分子を調節する。
ＯＸ４０（ＣＤ１３４又はＴＮＦＲＳＦ４としても知られる）は、エフェクタ及び記憶Ｔ細胞の増殖を促進するが、Ｔ調節細胞の分化及び活性化を抑制し、サイトカイン産生を調節することもできる。ＯＸ４０のリガンドはＯＸ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ４又はＣＤ２５２としても知られる）である。ＯＸ４０は、Ｔ細胞受容体結合後に、一過性発現し、炎症性病変内の最も最近の抗原活性化Ｔ細胞上でのみアップレギュレートされる。ＯＸ４０の好ましいチェックポイントモジュレータとしては、ＭＥＤＩ６４６９（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ６３８３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ０５６２（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、及びＧＳＫ３１７４９９８（ＧＳＫ）が挙げられる。
ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５としても知られる）は、抗原提示細胞を含む種々の免疫系細胞によって発現される。そのリガンドは、ＣＤ１５４又はＴＮＦＳＦ５としても知られているＣＤ４０Ｌであり、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上で一過性発現する。ＣＤ４０シグナル伝達は、樹状細胞が成熟することを「許可」し、それによってＴ細胞の活性化及び分化を誘発する。しかしながら、ＣＤ４０はまた、腫瘍細胞によっても発現され得る。したがって、癌患者におけるＣＤ４０の刺激／活性化は、有益又は有害であり得る。したがって、この免疫チェックポイントの刺激及び阻害モジュレータが開発された（Ｓｕｆｉａ Ｂｕｔｔ Ｈａｓｓａｎ， Ｊｅｓｐｅｒ Ｆｒｅｄｄｉｅ Ｓｏｅｒｅｎｓｅｎ， Ｂａｒｂａｒａ Ｎｉｃｏｌａ Ｏｌｓｅｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓ Ｅｌｍ Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， ２０１４： Ａｎｔｉ－ＣＤ４０－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ａｎｄ ｏｎｇｏｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ， Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， ３６：２， ９６－１０４）。ＣＤ４０チェックポイントモジュレータの好ましい例としては、（ｉ）Ｓｕｆｉａ Ｂｕｔｔ Ｈａｓｓａｎ， Ｊｅｓｐｅｒ Ｆｒｅｄｄｉｅ Ｓｏｅｒｅｎｓｅｎ， Ｂａｒｂａｒａ Ｎｉｃｏｌａ Ｏｌｓｅｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓ Ｅｌｍ Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， ２０１４： Ａｎｔｉ－ＣＤ４０－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ａｎｄ ｏｎｇｏｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ， Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， ３６：２， ９６－１０４に記載されているアゴニスト性抗ＣＤ抗体、例えば、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）、ＣＰ－８７０８９３、ＦＧＫ ４．５／ＦＧＫ ４５、及びＦＧＫ１１５、好ましくはダセツズマブ、及び（ｉｉ）Ｓｕｆｉａ Ｂｕｔｔ Ｈａｓｓａｎ， Ｊｅｓｐｅｒ Ｆｒｅｄｄｉｅ Ｓｏｅｒｅｎｓｅｎ， Ｂａｒｂａｒａ Ｎｉｃｏｌａ Ｏｌｓｅｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓ Ｅｌｍ Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， ２０１４： Ａｎｔｉ－ＣＤ４０－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ａｎｄ ｏｎｇｏｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ， Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， ３６：２， ９６－１０４に記載されているアゴニスト性抗ＣＤ抗体、例えば、Ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ（ＨＣＤ１２２、ＣＨＩＲ－１２．１２）など、が挙げられる。ＣＤ４０の更に好ましい免疫チェックポイントモジュレータとしては、ＳＥＡ－ＣＤ４０（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＡＤＣ－１０１３（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＰＸ００５Ｍ（Ａｐｅｘｉｇｅｎ Ｉｎｃ）、及びＲＯ７００９７８９（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７としても知られる）は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的な増殖を支持し、Ｔ細胞記憶の生成において重要な役割を果たす。ＣＤ２７は、Ｂ細胞の記憶マーカーでもある。リンパ球及び樹状細胞上のそのリガンドであるＣＤ７０（ＴＮＦＳＦ７又はＣＤ２７Ｌとしても知られている）の一過性の利用可能性が、ＣＤ２７の活性を調節する。更に、ＣＤ２７共刺激は、Ｔｈ１７エフェクタ細胞機能を抑制することが知られている。ＣＤ２７の好ましい免疫チェックポイントモジュレータは、バリルマブ（Ｃｅｌｌｄｅｘ）である。ＣＤ７０の好ましい免疫チェックポイントモジュレータとしては、ＡＲＧＸ－１１０（ａｒＧＥＮ－Ｘ）及びＳＧＮ－ＣＤ７０Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）が挙げられる。
ＣＤ１３７（４－１ＢＢ又はＴＮＦＲＳＦ９としても知られる）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーであり、活性化されたＴ細胞の共刺激活性と非常に関連している。特に、ＣＤ１３７シグナル伝達（ＴＮＦＳＦ９又は４－１ＢＢＬとしても知られる、そのリガンドＣＤ１３７Ｌを介する）は、Ｔ細胞増殖をもたらし、Ｔ細胞、特にＣＤ８＋Ｔ細胞を、活性化誘導細胞死から保護する。ＣＤ１３７の好ましいチェックポイントモジュレータとしては、ＰＦ－０５０８２５６６（Ｐｆｉｚｅｒ）及びウレルマブ（ＢＭＳ）が挙げられる。
グルココルチコイド誘発ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲＳＦ１８としても知られる）は、Ｔｒｅｇ増殖を含むＴ細胞増殖を促進する。ＧＩＴＲ（ＧＩＴＲＬ、ＴＮＦＳＦ１８）のリガンドは、抗原提示細胞上で主に発現する。ＧＩＴＲに対する抗体は、Ｔｒｅｇ系統の安定性の喪失を通して抗腫瘍応答を促進することが示されている。ＧＩＴＲの好ましいチェックポイントモジュレータとしては、ＢＭＳ－９８６１５６（ブリストルマイヤーズスクイブ）、ＴＲＸ５１８（ＧＩＴＲ Ｉｎｃ）、及びＭＫ－４１６６（メルク）が挙げられる。
調節される別の好ましいチェックポイント分子は、ＢＴＬＡである。Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２としても知られる）は、特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現され、ＢＴＬＡの表面発現は、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞のナイーブからエフェクタ細胞表現型への分化の間に、徐々にダウンレギュレートされる。しかし、腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は、高レベルのＢＴＬＡを発現する。ＢＴＬＡ発現は、Ｔ細胞の活性化の間に誘導され、ＢＴＬＡは、Ｔｈ１細胞上に発現されたままであり、Ｔｈ２細胞上には発現されないままである。ＰＤ１及びＣＴＬＡ４と同様に、ＢＴＬＡは、Ｂ７ホモログ、Ｂ７Ｈ４と相互作用する。しかし、ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４とは異なり、ＢＴＬＡは、細胞表面受容体のＢ７ファミリーだけでなく、腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦ－Ｒ）との相互作用を介してＴ細胞阻害を示す。ＢＴＬＡは、ヘルペスウイルスエントリメディエータ（ＨＶＥＭ；ヘルペスウイルスエントリメディエータ、ＣＤ２７０としても知られる）としても知られている腫瘍壊死因子（受容体）スーパーファミリー、メンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）のリガンドである。ＢＴＬＡ－ＨＶＥＭ複合体は、Ｔ細胞免疫応答を負に調節する。好ましいＢＴＬＡ阻害剤は、Ａｌｉｓｏｎ Ｃｒａｗｆｏｒｄ ａｎｄ Ｅ． Ｊｏｈｎ Ｗｈｅｒｒｙ， ２００９： Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ： Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＢＴＬＡ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ８６： ５－８の表１に記載の抗体であり、特に、そのヒト抗体である。ヒトＢＴＬＡのそのリガンドとの相互作用をブロックする、この状況における他の好ましい抗体は、ＷＯ２０１１／０１４４３８に開示されており、例えば、ＷＯ２０１１／０１４４３８に記載されている「４Ｃ７」である。
別のチェックポイント分子ファミリーとしては、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主要なクラス（ＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ）に関連するチェックポイント分子が挙げられる。それぞれの経路（クラスＩの場合、キラーＩｇＧ様受容体（ＫＩＲ）、クラスＩＩの場合、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３））は、癌患者治療のための新たな免疫療法ストラテジを開くであろう（Ｈｅｍｏｎ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｂｙ ｉｔｓ ｌｉｇａｎｄ ＬＡＧ－３ （ＣＤ２２３） ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｍｅｌａｎｏｍａ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１１． １８６（９）： ｐ． ５１７３－８３； Ｔｈｉｅｌｅｎｓ， Ａ．， Ｅ． Ｖｉｖｉｅｒ， ａｎｄ Ｆ． Ｒｏｍａｇｎｅ， ＮＫ ｃｅｌｌ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ （ＫＩＲ）： ｆｒｏｍ ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１２． ２４（２）： ｐ． ２３９－４５）。
キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、ナチュラルキラー細胞上のＭＨＣクラスＩ分子の受容体である。ＫＩＲの例示的阻害剤は、モノクローナル抗体リリルマブ（ＩＰＨ ２１０２； Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／ＢＭＳ； ｃｆ． ＵＳ ８，１１９，７７５ Ｂ２ ａｎｄ Ｂｅｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｂｌｏｏｄ １２０：４３２４－４３３３）である。
リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３、ＣＤ２２３としても知られる）シグナル伝達は、Ｔｒｅｇに対する作用及びＣＤ８＋Ｔ細胞に対する直接作用によって免疫応答の抑制をもたらす。ＬＡＧ３阻害剤の好ましい例は、抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＬＡＧ３阻害剤の他の好ましい例としては、ＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）、ＷＯ２００９／０４４２７３ Ａ２及びＢｒｉｇｎｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １５： ６２２５－６２３１に開示されるようなＬＡＧ３－Ｉｇ、及びヒトＬＡＧ３をブロックするマウス又はヒト化抗体（例えば、ＷＯ２００８／１３２６０１ Ａ１に記載のＩＭＰ７０１）又はヒトＬＡＧ３をブロックする完全ヒト抗体（例えば、ＥＰ２３２０９４０ Ａ２に開示されているようなもの）が挙げられる。
別のチェックポイント分子経路は、ＴＩＭ－３／ＧＡＬ９経路である。Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３、ＨＡＶｃｒ－２としても知られる）は、活性化されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上で発現し、Ｔｈ１及びＴｈ１７サイトカインを調節する。ＴＩＭ－３は、そのリガンドであるガレクチン－９（ＧＡＬ９）と相互作用して細胞死を誘発することにより、Ｔｈ１／Ｔｃ１機能の負の調節因子として作用する。ＴＩＭ－３は、末梢性寛容の誘導を調節しているＴヘルパー１型特異的細胞表面分子である。最近の研究は、ＴＩＭ－３抗体が抗腫瘍免疫を有意に強化できることを実証している（Ｎｇｉｏｗ， Ｓ．Ｆ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉ－ＴＩＭ３ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ ＩＦＮ－ｇａｍｍａｍｅｄｉａｔｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｔｕｍｏｒｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２０１１． ７１（１０）： ｐ． ３５４０－５１）。ＴＩＭ－３阻害剤の好ましい例としては、ヒトＴＩＭ３を標的とする抗体（例えば、ＷＯ２０１３／００６４９０ Ａ２に開示されるようなもの）、又は特に、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ ．， ２００８， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． ２０５ （１２）： ２７６３－７９に開示される抗ヒトＴＩＭ３ブロッキング抗体Ｆ３８－２Ｅ２が挙げられる。
最近の研究により、癌に関連する免疫応答を調節するＣＥＡＣＡＭファミリーのメンバーの役割が示され（Ｈｕａｎｇ， Ｙ．Ｈ．， ｅｔ ａｌ．， ＣＥＡＣＡＭ１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＴＩＭ－３－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ， ２０１５． ５１７（７５３４）： ｐ． ３８６－９０； Ｇｒａｙ－Ｏｗｅｎ， Ｓ．Ｄ． ａｎｄ Ｒ．Ｓ． Ｂｌｕｍｂｅｒｇ， ＣＥＡＣＡＭ１： ｃｏｎｔａｃｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００６． ６（６）： ｐ． ４３３－４６）、より最近では、ＣＥＡＣＡＭ１（癌胎児性抗原関連細胞接着分子１）という新たな標的が示唆された。ＣＥＡＣＡＭ１の好ましいチェックポイントモジュレータは、ＣＭ－２４（ｃＣＡＭ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）である。
別の新たな免疫チェックポイント分子は、ＧＡＲＰであり、これは腫瘍が患者の免疫系から逃れる能力に役割を果たす。現在、臨床試験では、候補化合物（ＡＲＧＸ－１１５）が、興味深い効果を発揮している。したがって、ＡＲＧＸ－１１５は、好ましいＧＡＲＰチェックポイントモジュレータである。
更に、様々な研究グループが、別のチェックポイント分子が、ホスファチジルセリン（「ＰＳ」とも称される）であり、癌治療の標的となり得ることを示している（Ｃｒｅｅｌａｎ， Ｂ．Ｃ．， Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ， ２０１４． ２１（１）： ｐ． ８０－９； Ｙｉｎ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎｄｕｃｅｓ Ｍｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ， ２０１３． １（４）： ｐ． ２５６－６８）。ホスファチジルセリン（ＰＳ）の好ましいチェックポイントモジュレータは、バビツキシマブ（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）である。
別のチェックポイント経路は、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒである（Ｚｈｕ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｓ Ｔｕｍｏｒ－Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｔ－ｃｅｌｌ Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｏｄｅｌｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２０１４． ７４（１８）： ｐ． ５０５７－ ５０６９）。ＣＳＦ１Ｒの好ましいチェックポイントモジュレータにとしては、ＦＰＡ００８（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ）、ＩＭＣ－ＣＳ４（Ｅｌｉ－Ｌｉｌｌｙ）、ＰＬＸ３３９７（Ｐｌｅｘｘｉｃｏｎ）、及びＲＯ５５０９５５４（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
更に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａナチュラルキラー細胞受容体は、子宮頸癌における役割について評価されており（Ｓｈｅｕ， Ｂ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ ｗｉｔｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｅｒｆｏｒｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ＣＤ８＋ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２００５． ６５（７）： ｐ． ２９２１－９）、白血病における役割について評価されている（Ｔａｎａｋａ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ＮＫ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ）－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ． Ｌｅｕｋｅｍｉａ， ２００５． １９（３）： ｐ． ４８６－９）。ＮＫＧ２Ａの好ましいチェックポイントモジュレータは、ＩＰＨ２２０１（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）である。
別の好ましいチェックポイント分子は、キヌレニン経路由来のインドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ酵素であるＩＤＯである（Ｂａｌｌ， Ｈ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２； ａ ｎｅｗ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎ ｔｈｅ ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ ｐａｔｈｗａｙ． Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ， ２００９． ４１（３）： ｐ． ４６７－７１）。インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、免疫阻害特性を有するトリプトファン分解酵素である。ＩＤＯは、Ｔ及びＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇと骨髄由来サプレッサー細胞を生成及び活性化し、腫瘍血管新生を促進することが知られている。ＩＤＯ１は、多くの癌において過剰発現しており、腫瘍細胞が免疫系から逃れることを可能にし
（Ｌｉｕ， Ｘ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＩＤ０１ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｂｌｏｏｄ， ２０１０． １１５（１７）： ｐ． ３５２０－３０； Ｉｎｏ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｖｅｒｓｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｕｍｏｒａｌ ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ： ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２００８． １４（８）： ｐ． ２３１０－７）、局所的な炎症によって誘発された場合に、慢性腫瘍の進行を促進することが示された（Ｍｕｌｌｅｒ， Ａ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｃｒｅａｔｅｓ ｌｏｃａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３ ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳ Ａ， ２００８． １０５（ ４４）： ｐ． １７０７３－８）。好ましいＩＤＯ阻害剤としては、Ｅｘｉｇｕａｍｉｎｅ Ａ、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；ＩｎＣｙｔｅ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＧＤＣ－０９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／ＢＭＳ）、及び１－メチル－トリプトファン、特に１－メチル－［Ｄ］－トリプトファンなどの低分子、並びに、Ｓｈｅｒｉｄａｎ Ｃ．， ２０１５： ＩＤＯ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｍｏｖｅ ｃｅｎｔｅｒ ｓｔａｇｅ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ－ｏｎｃｏｌｏｇｙ； Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３３： ３２１－３２２の表１に挙げられているＩＤＯ阻害剤が挙げられる。
調節される別の好ましい免疫チェックポイント分子は、キヌレニン代謝経路のメンバーである：ＴＤＯ（トリプトファン－２，３－ジオキシゲナーゼ）。いくつかの研究は、既に、癌免疫及び自己免疫におけるＴＤＯに対する関心を示している（Ｇａｒｂｅｒ， Ｋ．， Ｅｖａｄｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ： ｎｅｗ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ， ２０１２． １０４（５）： ｐ． ３４９－５２； Ｐｌａｔｔｅｎ， Ｍ．， Ｗ． Ｗｉｃｋ， ａｎｄ Ｂ．Ｊ． Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ， Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ： ｂｅｙｏｎｄ ！ＤＯ ａｎｄ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２０１２． ７２（２１）： ｐ． ５４３５－４０； Ｐｌａｔｔｅｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＩＤＯｌ／ＴＤＯ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ Ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ． Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１４． ５： ｐ． ６７３）。
調節される別の好ましい免疫チェックポイント分子は、Ａ２ＡＲである。アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）は、癌治療における重要なチェックポイントとみなされており、これは、腫瘍微小環境が、典型的には、Ａ２ＡＲを活性化しているアデノシンを比較的高濃度で有しているからである。そのようなシグナル伝達は、免疫微小環境において負の免疫フィードバックループを提供する（Ｒｏｂｅｒｔ Ｄ． Ｌｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１５： Ａ２ａＲ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ： Ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １３： ２６５－２７２参照）。好ましいＡ２ＡＲ阻害剤としては、イストラデフィリン、ＰＢＳ－５０９、ＳＴ１５３５、ＳＴ４２０６、トザデナント、Ｖ８１４４４、Ｐｒｅｌａｄｅｎａｎｔ、Ｖｉｐａｄｅｎａｎｔ、ＳＣＨ５８２６１、ＳＹＮ１１５、ＺＭ２４１３６５、及びＦＳＰＴＰが挙げられる。
調節される別の好ましい免疫チェックポイント分子は、ＶＩＳＴＡである。Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ；Ｃ１０ｏｒｆ５４としても知られる）は、造血細胞上で主に発現し、腫瘍内の白血球上のＶＩＳＴＡの一貫した発現により、広範囲の固形腫瘍に亘ってＶＩＳＴＡ遮断を有効とすることができる。好ましいＶＩＳＴＡ阻害剤は、最近、第１相臨床試験に入った抗ＶＩＳＴＡ抗体であるＪＮＪ－６１６１０５８８（ＩｍｍｕＮｅｘｔ）である。
別の免疫チェックポイント分子は、ＣＤ１２２である。ＣＤ１２２は、インターロイキン－２受容体ベータサブユニットである。ＣＤ１２２は、ＣＤ８＋エフェクタＴ細胞の増殖を増加させる。
チェックポイント分子の最も好ましい例としては、ＣＴＬＡ４及びそのリガンドＣＤ８０及びＣＤ８６、並びにＰＤ１とそのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２を伴う「ＣＴＬＡ４経路」と「ＰＤ１経路」が挙げられる（ＣＴＬＡ４及びＰＤ－１経路並びに更なる関与物質についての詳細が、Ｂｕｃｈｂｉｎｄｅｒ Ｅ． Ｉ． ａｎｄ Ｄｅｓａｉ Ａ．， ２０１６： ＣＴＬＡ－４ ａｎｄ ＰＤ－１ Ｐａｔｈｗａｙｓ － Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ， Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｈｅｉｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ； Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ３９（１）： ９８－１０６に記載されている）。より一般的には、チェックポイント分子の好ましい例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３、並びに特にそれらのリガンドが挙げられる。
免疫チェックポイント分子は、Ｔ細胞応答の共刺激又は阻害相互作用を司る。したがって、チェックポイント分子は、（ｉ）（共）刺激性チェックポイント分子と（ｉｉ）阻害性チェックポイント分子とに分けることができる。典型的には、（共）刺激性チェックポイント分子は、抗原刺激によって誘導されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達と協同して正に作用し、阻害性チェックポイント分子は、ＴＣＲシグナル伝達を負に調節する。（共）刺激性チェックポイント分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及びＩＣＯＳが挙げられる。阻害性チェックポイント分子の例としては、ＣＴＬＡ４並びにリガンドＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２を伴うＰＤ１；Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及びＦａｓＲ／ＤｃＲ３が挙げられる。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、（共）刺激性チェックポイント分子の活性化剤若しくは阻害性チェックポイント分子の阻害剤又はそれらの組合せである。したがって、免疫チェックポイントモジュレータは、（ｉ）ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び／又はＩＣＯＳの活性化剤、又は（ｉｉ）Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＤｃＲ３がより好ましい。
上述したように、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＩＤＯ、ＬＡＧ－３、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３モジュレータ（阻害剤／活性化剤）が知られており、これらのうちのいくつかは、既に臨床試験中であるか、又は承認されているものもある。これらの知られた免疫チェックポイントモジュレータに基づいて、代替免疫チェックポイントモジュレータが、（近い）将来開発されるかも知れない。特に、好ましい免疫チェックポイント分子の知られたモジュレータを、そのまま使用することができる、又はそのアナログ、特に、抗体のキメラ化、ヒト化、又はヒト形態を使用することができる。
より好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、阻害性チェックポイント分子の阻害剤である（しかし、好ましくは、刺激性チェックポイント分子の阻害剤ではない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレータは、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＤｃＲ３の阻害剤、又はそれらのリガンドの阻害剤であることが更により好ましい。
また、免疫チェックポイントモジュレータは、刺激又は共刺激性チェックポイント分子の活性化剤であることが好ましい（しかし、好ましくは、阻害性チェックポイント分子の活性化剤ではない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び／又はＩＣＯＳの活性化剤、又はそれらのリガンドの活性化剤であることがより好ましい。
免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０経路、ＩＤＯ経路、ＣＴＬＡ－４経路、及び／又はＰＤ－１経路のモジュレータであることが更により好ましい。特に、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯのモジュレータであることが好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯの阻害剤又はＣＤ４０の活性化剤であることがより好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯの阻害剤であることが更により好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１の阻害剤であることが最も好ましい。
免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０経路、ＩＤＯ経路、ＬＡＧ３経路、ＣＴＬＡ－４経路、及び／又はＰＤ－１経路のモジュレータであることが更により好ましい。特に、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯのモジュレータであることが好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、及び／又はＩＤＯの阻害剤又はＣＤ４０の活性化剤であることがより好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、及び／又はＩＤＯの阻害剤であることが更により好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、及び／又はＰＤ－１の阻害剤であることが更により好ましく、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１の阻害剤であることが最も好ましい。
したがって、チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０経路、ＣＴＬＡ－４経路、又はＰＤ－１経路の知られたモジュレータから選択することができる。好ましくは、チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０経路、ＬＡＧ３経路、ＣＴＬＡ－４経路、又はＰＤ－１経路の知られたモジュレータから選択することができる。ＣＴＬＡ－４経路及びＰＤ－１経路の好ましい阻害剤としては、モノクローナル抗体Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ ／ ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ２０１１／０６６３８９ Ａ１参照）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＵＳ８，２１７，１４９ Ｂ２参照）、Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、及びＬａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄ ｅｔ ａｌ．， ２０１３； Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６９： １３４－１４４に、ｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示されている）が挙げられる。より好ましいチェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ－４阻害剤Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＰＤ－１阻害剤Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）、Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１； ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４； ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＭＰ－２２４、及びＬａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄ Ｏ． ｅｔ ａｌ．， ２０１３； Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６９： １３４－１４４に、ｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示されている）が挙げられる。上述したように、ＬＡＧ３阻害剤の好ましい例は、抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＬＡＧ３阻害剤の他の好ましい例としては、ＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）、及びＷＯ２００９／０４４２７３ Ａ２及びＢｒｉｇｎｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １５： ６２２５－６２３１に開示されているＬＡＧ３－Ｉｇ、並びにヒトＬＡＧ３をブロックするマウス又はヒト化抗体（例えば、ＷＯ２００８／１３２６０１ Ａ１に記載されているＩＭＰ７０１）、又はヒトＬＡＧ３をブロックする完全ヒト抗体（ＥＰ２３２０９４０ Ａ２に開示されているようなもの）が挙げられる。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０のモジュレータではない。特に、免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＤ４０リガンドではないことが好ましい。免疫チェックポイントモジュレータは、また、抗ＣＤ４０抗体でないことが好ましい。
本発明の状況においては、好ましくは、１超の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられ、特に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられ、２、３、４、又は５個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが好ましく、２、３、又は４個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることがより好ましく、２又は３個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが更により好ましく、２個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが最も好ましい。「異なる」免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）とは、特に、それらが異なるチェックポイント分子経路を調節する（例えば、阻害する）ことを意味する。
好ましくは、ＰＤ－１経路の阻害剤は、ＣＴＬＡ－４経路の阻害剤と組み合わされる。例えば、上述したように、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（抗ＰＤ１）とＩｐｉｌｉｍｕｍａｂ（抗ＣＴＬＡ４）との併用療法は、ＢＲＡＦ Ｖ６００野生型、切除不能又は転移性メラノーマ患者の治療のために２０１５年にＦＤＡによって承認された。更に、非小細胞肺癌におけるＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（抗ＰＤ－Ｌ１）とＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（抗ＣＴＬＡ４）の併用に関する第１ｂ相試験の成功が最近報告された（Ａｎｔｏｎｉａ， Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．， ２０１６， Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ ｐｌｕｓ ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ： ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ， ｐｈａｓｅ １ｂ ｓｔｕｄｙ； Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ． ２０１６ Ｆｅｂ ５． ｐｉｉ： Ｓ１４７０－２０４５（１５）００５４４－６． ｄｏｉ： １０．１０１６／Ｓ１４７０－２０４５（１５）００５４４－６． ［Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ］）。したがって、ＰＤ－１経路とＣＴＬＡ－４経路の免疫チェックポイントモジュレータの好ましい組合せは、（ｉ）Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（抗ＰＤ１）とＩｐｉｌｉｍｕｍａｂ（抗ＣＴＬＡ４）又は（ｉｉ）Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭＥＤＩ４７３６；抗ＰＤ－Ｌ１）とＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（抗ＣＴＬＡ４）である。それらの組み合わせ、例えば、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（抗ＰＤ１）とＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（抗ＣＴＬＡ４）又はＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭＥＤＩ４７３６；抗ＰＤ－Ｌ１）とＩｐｉｌｉｍｕｍａｂ（抗ＣＴＬＡ４）も好ましい。
本発明の状況における少なくとも２つの異なる免疫チェックポイントモジュレータの他の好ましい組合せは、（ｉ）ＫＩＲ阻害剤とＣＴＬＡ－４阻害剤との組合せ、例えば、Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ／Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ；（ｉｉ）Ｋｉｒ阻害剤とＰＤ－１経路の阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）との組合せ、例えば、Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ／Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ；（ｉｉｉ）ＬＡＧ３阻害剤とＰＤ－１経路の阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤など）（例えば、Ｗｏｏ ｅｔ ａｌ ．， ２０１２， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ７２： ９１７－２７ ｏｒ ｉｎ Ｂｕｔｌｅｒ Ｎ． Ｓ． ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３： １８８－９５に記載されているもの）、そのような組合せの好ましい例としては、Ｎｏｖｉｌｕｍａｂ／ＢＭＳ－９８６０１６及びＰＤＲ００１／ＬＡＧ５２５が挙げられる；（ｉｖ）ＩＣＯＳを標的とするチェックポイントモジュレータと、ＣＴＬＡ－４の阻害剤との組合せ、例えば、Ｆｕ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ７１： ５４４５－５４に記載されているもの；（ｖ）例えば、Ｃｕｒｒａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（４）： ｅｌ ９４９９に記載されているような、４－１ＢＢを調節するチェックポイントモジュレータとＣＴＬＡ－４の阻害剤との組合せ；（ｖｉ）ＰＤ１とＣＤ２７を標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｎｏｖｉｌｕｍａｂ／ＶａｒｌｉｌｕｍａｂとＡｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ／Ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ；（ｖｉｉ）ＯＸ４０とＣＴＬＡ－４を標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、ＭＥＤＩ６４６９／Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ；（ｖｉｉｉ）ＯＸ４０とＰＤ－１を標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、ＭＥＤＩ６４６９／ＭＥＤＩ４７３６、ＭＯＸＲ０９１６／ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ６３８３／ＭＥＤＩ４７３６、及びＧＳＫ３１７４９９８／Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ；（ｉｘ）ＰＤ－１と４－１ＢＢを標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｎｏｖｉｌｕｍａｂ／Ｕｒｅｌｕｍａｂ、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ／ＰＦ－０５０８２５６６、及びＡｖｅｌｕｍａｂ／ＰＦ－０５０８２５６６；（ｘ）ＰＤ－１とＩＤＯを標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ／Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ／ＩＮＣＢ０２４３６０、ＭＥＤＩ４７３６／ＩＮＣＢ０２４３６０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＧＤＣ－０９１９、及びＡｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ／ＩＮＣＢ０２４３６０；（ｘｉ）ＰＤ－１とＣＳＦ１Ｒを標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ／ＰＬＸ３３９７、Ｎｏｖｉｌｕｍａｂ／ＦＰＡ００８、及びＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＯ５５０９５５４；（ｘｉｉ）ＰＤ－１とＧＩＴＲを標的とするチェックポイントモジュレータの組み合わせ、例えば、Ｎｏｖｉｌｕｍａｂ／ＢＭＳ－９８６１５６及びＰｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ／ＭＫ－４１６６；（ｘｉｉｉ）ＰＤ－１とＣＤ４０を標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＯ７００９７８９；（ｘｉｖ）ＰＤ－１とＢ７－Ｈ３を標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ／ＭＧＡ２７１；（ｘｖ）ＣＴＬＡ－４とＢ７－Ｈ３を標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ／ＭＧＡ２７１、及び（ｘｖｉ）Ｋｉｒと４－１ＢＢを標的とするチェックポイントモジュレータの組合せ、例えば、Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ／Ｕｒｅｌｕｍａｂから選択される組合せを含んでよい。
最も好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との、本発明にかかる使用のための組合せは、少なくとも（ｉ）ＣＴＬＡ－４の阻害剤と（ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、又はＰＤ－Ｌ２の阻害剤、好ましくは、少なくとも（ｉ）ＣＴＬＡ－４の阻害剤と（ｉｉ）ＰＤ－１の阻害剤を含む。そのような好ましい組合せの例としては、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＭＥＤＩ４７３６ （ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ２０１１／０６６３８９ Ａ１参照）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＵＳ８，２１７，１４９ Ｂ２参照）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＰｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１； ＣｕｒｅＴｅｃｈ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４； ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＡＭＰ－２２４との組合せ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）とＬａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとの組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＥＤＩ４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ２０１１／０６６３８９ Ａ１参照）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＵＳ８，２１７，１４９ Ｂ２参照）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＰｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１； ＣｕｒｅＴｅｃｈ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４； ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）との組合せ、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＡＭＰ－２２４との組合せ、及びＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＬａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとの組合せ、を挙げることができる。
本発明の状況においては、好ましくは、同一のチェックポイント経路の１超の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられ、特に、同一のチェックポイント経路の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられ、同一のチェックポイント経路の少なくとも２、３、４、又は５個の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが好ましく、同一のチェックポイント経路の２、３、又は４個の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることがより好ましく、同一のチェックポイント経路の２又は３個の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが更により好ましく、同一のチェックポイント経路の２個の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが最も好ましい。調節される好ましいチェックポイント経路は、ＰＤ－１経路、ＣＴＬＡ－４経路、ＣＤ４０経路、又はＩＤＯ経路であり、より好ましくはＰＤ－１経路、ＣＴＬＡ－４経路、又はＣＤ４０経路、更により好ましくはＰＤ－１経路又はＣＴＬＡ－４経路である。例えば、ＭＥＤＩ４７３６とＭＥＤＩ０６８０との組合せを用いて、ＰＤ－１経路を調節する、特に、阻害することができる。
本発明の状況においては、免疫チェックポイントモジュレータは、前記１つ以上のチェックポイント分子の機能を完全に又は部分的に、低減する、阻害する、干渉する、活性化する、刺激する、増加する、強化する、又は支持する限り、任意の種類の分子又は剤であってよい。特に、免疫チェックポイントモジュレータは、チェックポイントタンパク質などの１つ以上のチェックポイント分子又はその前駆体（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡレベル）に結合して、上述したように１つ以上のチェックポイント分子の機能を調節する（例えば、完全に又は部分的に、低減する、阻害する、干渉する、活性化する、刺激する、増加する、強化する、又はは支持する）。好ましい免疫チェックポイントモジュレータは、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、リボザイム、アンチセンスＲＮＡ分子、免疫毒素、低分子阻害剤、及び（例えば、チェックポイント分子のアンタゴニスト又はアゴニストをブロックするチェックポイント分子）抗体又はそれらの抗原結合断片である。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、オリゴヌクレオチドである。このようなオリゴヌクレオチドは、好ましくは、タンパク質発現を減少させるために用いられ、特に、チェックポイントタンパク質（例えば、上述したチェックポイント受容体又はリガンド）の発現を減少させるために用いられる。オリゴヌクレオチドは、典型的には、２～５０ヌクレオチド、好ましくは３～４０ヌクレオチド、より好ましくは４～３０ヌクレオチド、更により好ましくは５～２５ヌクレオチド、例えば、４、５、６、７、８、９、又は１０ヌクレオチドを含む短いＤＮＡ又はＲＮＡ分子である。オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成によって実験室で作られる。オリゴヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖であってもよいが、本発明の状況では、オリゴヌクレオチドは、一本鎖であることが好ましい。より好ましくは、チェックポイントモジュレータオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、選ばれた配列、特に、チェックポイントタンパク質のＤＮＡ又はＲＮＡ配列（又はその断片）から選ばれた配列に相補的なＤＮＡ又はＲＮＡの一本鎖である。アンチセンスＲＮＡは、典型的には、メッセンジャーＲＮＡ鎖、例えば、チェックポイントタンパク質のｍＲＮＡに結合することにより、ｍＲＮＡのタンパク質翻訳を防ぐために使用される。アンチセンスＤＮＡは、典型的には、特異的で相補的な（コード又は非コード）ＲＮＡを標的とするために使用される。結合が生じると、そのようなＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドは、酵素ＲＮアーゼＨによって分解され得る。更に、モルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチドは、脊椎動物における遺伝子ノックダウンのために使用することができる。例えば、Ｋｒｙｃｚｅｋら、２００６（Ｋｒｙｃｚｅｋ Ｉ， Ｚｏｕ Ｌ， Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｐ， Ｚｈｕ Ｇ， Ｗｅｉ Ｓ， Ｍｏｔｔｒａｍ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｂ７－Ｈ４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． ２００６； ２０３：８７１－８１）は、マクロファージにおけるＢ７－Ｈ４発現を特異的に遮断し、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）特異的Ｔ細胞を有するマウスにおけるＴ細胞増殖の増加及び腫瘍体積の減少をもたらすＢ７－Ｈ４特異的モルホリノを設計した。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、ｓｉＲＮＡである。短い干渉ＲＮＡ又はサイレンシングＲＮＡとしても知られる低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、典型的には、２０～２５塩基対の長さの二本鎖ＲＮＡ分子のクラスである。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路において、ｓｉＲＮＡは、チェックポイントタンパク質をコードする遺伝子などの特異的遺伝子の発現に、相補的なヌクレオチド配列で干渉する。ｓｉＲＮＡは、転写後のｍＲＮＡの分解を引き起こすことによって、翻訳されないようにすることで機能する。外因性ｓｉＲＮＡのトランスフェクションは、遺伝子ノックダウンのために使用され得るが、その効果は、特に分裂が早い細胞において、一過性なものであるに過ぎない場合がある。これは、例えば、ＲＮＡ修飾又はｓｉＲＮＡ用の発現ベクターを用いることによって克服することができる。ｓｉＲＮＡ配列は、また、２つの鎖の間に短いループを導入するように改変されてもよい。得られた転写産物は、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、又は「低分子ヘアピンＲＮＡ」）であり、これは、通常の方法でダイサーによって機能的ｓｉＲＮＡにプロセシングされ得る。ｓｈＲＮＡは、比較的低い分解速度及び代謝回転率を有する点で、ＲＮＡｉの有利なメディエータである。したがって、免疫チェックポイントモジュレータは、好ましくは、ｓｈＲＮＡである。ｓｈＲＮＡは、典型的には、発現ベクター、例えば、プラスミド又はウイルス若しくは細菌ベクターの使用を必要とする。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、免疫毒素である。免疫毒素は、典型的には、癌細胞などの特定の細胞上の抗原を標的とする標的部分（抗体など）を、毒素に結合されて含むキメラタンパク質である。本発明の状況においては、チェックポイント分子を標的とする標的部分を含む免疫毒素が好ましい。免疫毒素が抗原（例えば、チェックポイント分子）を有する細胞に結合すると、それはエンドサイトーシスを介して取り込まれ、毒素が細胞を殺すことができる。免疫毒素は、好ましくは、毒素（の断片）に結合された、（修飾された）抗体又は抗体断片を含む。結合のための方法は、当該技術分野においてよく知られており、複合体の各成分の結合について本明細書に記載されるのと同じ方法を用いることができる。免疫毒素の標的部分は、典型的には、特定の細胞型を標的とする抗体のＦａｂ部分を含む。毒素は、通常、細胞傷害性であり、免疫毒素の標的部分が毒素を標的細胞上の抗原に向けるように天然結合ドメインが除去された細菌又は植物タンパク質に由来するタンパク質などである。しかし、免疫毒素は、成長因子などの抗体又は抗体断片以外の標的部分を含むこともできる。例えば、毒素及び成長因子を含む組み換え融合タンパク質は、組み換え免疫毒素とも称される。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、低分子医薬（「低分子阻害剤」とも称される）である。低分子医薬は、典型的には、生物学的プロセス（の調節）と相互作用する低分子量（最大９００ダルトン）の有機化合物である。本発明の状況においては、免疫チェックポイントモジュレータである低分子医薬は、上述した１つ以上のチェックポイント分子の機能を、完全に又は部分的に低減する、阻害する、干渉する、又は負に調節する分子量が９００ダルトン以下の有機化合物である。９００ダルトンの上限分子量は、細胞膜を横切って迅速に拡散する可能性、経口バイオアベイラビリティーを可能にする。より好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータである低分子医薬の分子量は、５００ダルトン以下である。例えば、当該分野で知られた様々なＡ２ＡＲアンタゴニストは、５００ダルトン未満の分子量を有する有機化合物である。
最も好ましくは、免疫チェックポイントモジュレータは、免疫チェックポイント受容体又は免疫チェックポイント受容体リガンドに結合する、抗体又はその抗原結合断片、特に、抗体又はその抗原結合断片である。好ましくは、そのような抗体又はその抗原結合断片は、免疫チェックポイント受容体又は免疫チェックポイント受容体リガンドのアゴニスト又はアンタゴニストである。抗体型チェックポイントモジュレータの例としては、上述したような現在承認されている免疫チェックポイントモジュレータ、即ち、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ； Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、及びＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ； Ｍｅｒｃｋ）と、上述した更なる抗チェックポイント受容体抗体又は抗チェックポイントリガンド抗体が挙げられる。
本明細書中で使用されるとき、用語「抗体」は、本発明の特徴的な性質が保持される限り、即ち、抗体（又は抗原結合断片）が上述した１つ以上のチェックポイント分子の機能を調節する（例えば、完全に又は部分的に低減する、阻害する、干渉する、活性化する、刺激する、増加する、強化する、又は支持する）限り、種々の形態の抗体、好ましくはモノクローナル抗体を包含し、例えば、抗体全体、抗体断片、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び遺伝子組み換え抗体（変異体又は突然変異抗体）を含むが、これらに限定されない。特に、抗体（又は抗原結合断片）は、チェックポイント分子に結合することによってこの機能を媒介する。したがって、抗体（又は抗原結合断片）は、好ましくは、「ブロッキング」抗体（又は抗原結合断片）、特に「アンタゴニスト」抗体（又は抗原結合フラ断片）、又は「アゴニスト」抗体（又は抗原結合断片）である。特に、用語「抗体」は、特段の言及がない限り、任意のアイソタイプ又はサブクラス（好ましくは、ＩｇＧ）のグリコシル化免疫グロブリン及び非グリコシル化免疫グロブリンの両方、又は特異的結合のためにインタクトな抗体と競合するその抗原結合領域に対するものを含む。抗体の好ましい例としては、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニ抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、ドメイン抗体、合成抗体、抗体模倣物、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物、抗体コンジュゲート、一本鎖抗体、抗体誘導体、抗体アナログ、及びそれらの断片が挙げられる。特段の言及がない限り、用語「抗体」は、２つの全長重鎖及び２つの全長軽鎖を含む抗体に加えて、それらの誘導体、変異体、及び断片を含む。場合によっては、「抗体」は、より少ない鎖を含んでよい。ヒト又はヒト化モノクローナル抗体及び／又は組み換え抗体が特に好ましく、特に、組み換えヒトモノクローナル抗体として好ましい。ヒトＩｇＧ型抗体が特に好ましい。
用語「ヒト抗体」は、本明細書中で使用されるとき、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は、現在の技術水準においてよく知られている（ｖａｎ Ｄｉｊｋ， Ｍ． Ａ．， ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｊ． Ｇ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ５ （２００１） ３６８－３７４）。ヒト抗体は、内在性免疫グロブリン産生の非存在下で、免疫付与時に、ヒト抗体の完全レパートリー又は選択物を産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス）において産生させることもできる。そのような生殖系列突然変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイのトランスファーにより、抗原感作時にヒト抗体の産生がもたらされる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０ （１９９３） ２５５１－２５５５； Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３６２ （１９９３） ２５５－２５８； Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７ （１９９３） ３３４０参照）。ヒト抗体は、また、ファージディスプレイライブラリにおいても産生することができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ， Ｈ． Ｒ．， ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ， Ｇ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７ （１９９２） ３８１－３８８； Ｍａｒｋｓ， Ｊ． Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２ （１９９１） ５８１－５９７）。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技法は、ヒトモノクローナル抗体の調製にも利用可能である（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， ｐ． ７７ （１９８５）； ａｎｄ Ｂｏｅｒｎｅｒ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７ （１９９１） ８６－９５）。本明細書で使用する「ヒト抗体」という用語は、また、本発明の性質を生成するように、例えば、可変領域において改変される抗体も含む。
本明細書中で使用されるとき、用語「組み換え抗体」は、例えば、ＣＨＯ細胞などの宿主細胞から単離された抗体、又は宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを用いて発現されるヒト免疫グロブリン遺伝子又は抗体などについてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体などの、組み換え手段によって調製、発現、作製、又は単離される全ての抗体を含むことを意図する。したがって、組み換え抗体は、（ｉ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）又はそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｉｉ）抗体を発現するようにトランスフェクトされた宿主細胞（例えば、トランスフェクトーマ）から単離された抗体、（ｉｉｉ）組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、及び（ｉｖ）免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作製、又は単離された抗体である。そのような抗体は、２つの異なる種の動物の生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有し得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発に供される抗体（又は、ヒト免疫グロブリン配列についてトランスジェニックである動物が使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）も好ましいが、そのような抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、特定の種（例えば、ヒト）の生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列から、及びそれに関連しているが、ｉｎ ｖｉｖｏでその種の抗体生殖系列レパートリ内に天然には存在し得ない配列であってよい。組み換え抗体は、再編成された形態の可変及び定常領域、及び／又は、例えば、天然には存在しない特定の突然変異を有していてよい。
本明細書中で使用されるとき、用語「抗原結合断片」、「断片」、及び「抗体断片」は、本発明にかかる抗体の特異的結合活性を保持する本発明の抗体の任意の断片を指すために相互変換可能に使用される。抗体断片の例としては、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体の断片は、ペプシン又はパパインなどの酵素による消化及び／又は化学的還元によるジスルフィド結合の切断を含む方法によって抗体から得ることができる。或いは、抗体の断片は、重鎖及び／又は軽鎖の配列の一部のクローニング及び発現によって得ることができる。「断片」には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片が含まれるが、これらに限定されない。本発明はまた、本発明の抗体の重鎖及び軽鎖に由来する一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を包含する。例えば、本発明は、本発明の抗体由来のＣＤＲを含むｓｃＦｖを含む。重鎖及び軽鎖の単量体及び二量体、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体、並びに重鎖及び軽鎖可変ドメインがペプチドリンカーによって連結された一本鎖Ｆｖなどの一本鎖抗体も含まれる。本発明の抗体断片は、一価又は多価の相互作用を付与し得、上述したような様々な構造に含まれ得る。例えば、ｓｃＦｖ分子は、３価の「トリアボディ」又は４価の「テトラボディ」を作製するために合成され得る．ｓｃＦｖ分子は、２価のミニボディを生じるＦｃ領域のドメインを含み得る。更に、本発明の配列は、多重特異性分子の成分であってもよく、多重特異性分子において、本発明の配列がチェックポイント分子を標的とし、分子の他の領域が他の標的に結合する。例示的分子としては、二重特異性Ｆａｂ２、三重特異性Ｆａｂ３、二重特異性ｓｃＦｖ、及びダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ， ２００５， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９： １１２６－１１３６）が挙げられるが、これらに限定されない。特許請求の範囲を含む本明細書は、抗体の抗原結合断片、抗体断片、変異体、及び／又は誘導体に明示的に言及している場合があるが、用語「抗体」又は「本発明の抗体」は、抗体の全てのカテゴリー、即ち、抗体の抗原結合断片、抗体断片、変異体、及び誘導体を含む。更に、本明細書で使用される用語「抗体」は、抗体と、その抗原結合フラグメントの両方を含む。
好ましくは、本発明にしたがって使用される組合せにおける免疫チェックポイントモジュレータは、ＰＤ－１経路を部分的又は完全に遮断することができる抗体又は抗原結合断片であり（例えば、それらは、ＰＤ－１経路の部分的又は完全なアンタゴニストであり得る）、特に、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、又はＰＤ－Ｌ２であり、前記抗体は、ＰＤ－１を部分的又は完全に遮断することができることがより好ましい（例えば、それらはＰＤ－１の部分的又は完全なアンタゴニストであり得る）。このような抗体又は抗原結合フラグメントは、抗ＰＤ－１抗体、ヒト抗ＰＤ－１抗体、マウス抗ＰＤ－１抗体、哺乳動物抗ＰＤ－１抗体、ヒト化抗ＰＤ－１抗体、モノクローナル抗ＰＤ－１抗体、ポリクローナル抗ＰＤ－１抗体、キメラ抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＰＤ－１アドネクチン、抗ＰＤ－１ドメイン抗体、一本鎖抗ＰＤ－１断片、重鎖抗ＰＤ－１断片、及び軽鎖抗ＰＤ－１断片を含む。例えば、抗ＰＤ－１抗体は、抗原結合断片であってもよい。好ましくは、抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の活性を部分的又は完全に遮断することができ（例えば、それらはＰＤ－１の部分的又は完全なアンタゴニストであり得る）、それにより、特に、ＰＤ－１を発現する免疫細胞の機能を解放する。
好ましくは、本発明にしたがって使用される組合せにおける免疫チェックポイントモジュレータは、ＣＴＬＡ－４経路を部分的又は完全に遮断することができる抗体又は抗原結合断片である（例えば、それらはＣＴＬＡ－４経路の部分的又は完全なアンタゴニストであり得る）。そのような抗体又は抗原結合断片は、抗ＣＴＬＡ４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ４抗体、哺乳動物抗ＣＴＬＡ４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ）、トレメリムマブ、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ４ドメイン抗体、一本鎖抗ＣＴＬＡ４断片、重鎖抗ＣＴＬＡ４断片、及び軽鎖抗ＣＴＬＡ４断片を含む。例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗原結合断片であってもよい。好ましくは、抗ＣＴＬＡ４抗体は、ヒトＣＴＬＡ４に結合し、ＣＴＬＡ４の活性を部分的又は完全に遮断することができ（例えば、それらはＣＴＬＡ－４の部分的又は完全なアンタゴニストであり得る）、それにより、特に、ＣＴＬＡ４発現する免疫細胞の機能を解放する。
細胞透過性ペプチドと、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープとを含む複合体
前記免疫チェックポイントモジュレータに加えて、本発明にかかる使用のための組合せは、複合体を含み、前記複合体は、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）（即ち、前記細胞透過性ペプチド、前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び前記少なくとも１つのＴＬＲペプチド）が共有結合している。以下では、「複合体」又は「本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体」という用語を使用することによって、共有結合している細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原性エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体について述べる。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、（ｉ）多エピトープ細胞傷害性Ｔ細胞介在性免疫の刺激、（ｉｉ）Ｔｈ細胞の誘導、及び（ｉｉｉ）免疫記憶の促進を同時に行う。それによって、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、特に抗腫瘍活性が改善された強力なワクチンを提供する。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ポリペプチド又はタンパク質、特に、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質、好ましくは、組み換え融合タンパク質又は組み換え融合ポリペプチドである。用語「組み換え」とは、本明細書で使用するとき（即ち、明細書全体）、それ（ここでは、ポリペプチド又はタンパク質）が自然界には存在しないことを意味する。したがって、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質である本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、典型的には、成分ａ）～ｃ）を含み、前記成分ａ）～ｃ）は、起源が異なる、即ち、自然界においてこの組合せでは存在しない。
本発明の状況では、即ち、本願全体を通して、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」、及びこれら用語の変形は、それぞれ、好ましくは正常ペプチド結合によって、或いは修飾ペプチド結合によって（例えば、同配体ペプチドの場合）互いに結合している少なくとも２つのアミノ酸を含む、ペプチド、オリゴペプチド、オリゴマー、又はタンパク質（融合タンパク質を含む）を指す。ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｌアミノ酸及び／又はＤアミノ酸で構成され得る。好ましくは、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、（完全に）Ｌアミノ酸又は（完全に）Ｄアミノ酸で構成され、それによって、「レトロ－インベルソペプチド配列」を形成する。用語「レトロ－インベルソ（ペプチド）配列」は、配列の方向が逆であり且つ各アミノ酸残基のキラリティが逆である直鎖状ペプチド配列の異性体を指す（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，７４４－７４６（１９９４）；Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，６９２－６９３（１９９４）を参照）。特に、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」は、また、ペプチドが天然親ペプチドの生物学的作用を模倣するか又は前記作用に拮抗することができる非ペプチド性構造要素を含有するペプチドアナログとして定義される「ペプチド模倣体」も含む。ペプチド模倣体は、酵素で切断しやすいペプチド結合等の古典的なペプチドの特徴を有していない。特に、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、遺伝子コードによって定義される２０アミノ酸に加えてこれらアミノ酸以外のアミノ酸を含んでいてもよく、遺伝子コードによって定義される２０アミノ酸以外のアミノ酸で構成されていてもよい。特に、本発明の状況におけるペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、等しく、当業者に周知の天然プロセス（例えば、翻訳後成熟プロセス又は化学的プロセス）によって修飾されたアミノ酸で構成されていてよい。かかる修飾は、文献に詳細に説明されている。これら修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸鎖、又は更にはカルボキシ末端若しくはアミノ末端等、ポリペプチドの何処に存在していてもよい。特に、ペプチド又はポリペプチドは、ユビキチン化後に分岐してもよく、分岐のある又は分岐のない環状であってもよい。この種の修飾は、当業者に周知の天然又は合成翻訳後プロセスの結果であり得る。また、本発明の状況における用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」は、特に、修飾ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を含む。例えば、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合性固定、脂質又は脂質誘導体の共有結合性固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合性固定、共有結合性又は非共有結合性の架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、ペグ化を含むグリコシル化、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセス、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレニル化（ｓｅｎｅｌｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アミノ酸付加（例えば、アルギニル化）、又はユビキチン化を含み得る。かかる修飾は、文献に詳細に説明されている（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（１９９３）２ｎｄ Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８３）Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｓｅｉｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６－６４６、及びＲａｔｔａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，６６３：４８－６２）。したがって、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」は、好ましくは、例えば、リポペプチド、リポタンパク質、糖ペプチド、糖タンパク質等を含む。
しかし、特に好ましい実施形態では、本発明に記載の複合体は、「古典的な」ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、「古典的な」ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、典型的には、正常ペプチド結合によって互いに結合している、遺伝子コードによって定義される２０アミノ酸から選択されるアミノ酸で構成されている。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体がポリペプチド又はタンパク質である場合、少なくとも５０アミノ酸残基、少なくとも６０アミノ酸残基、少なくとも７０アミノ酸残基、好ましくは少なくとも８０アミノ酸残基、少なくとも９０アミノ酸残基、より好ましくは少なくとも１００アミノ酸残基、少なくとも１１０アミノ酸残基、更により好ましくは少なくとも１２０アミノ酸残基、少なくとも１３０アミノ酸残基、特に好ましくは少なくとも１４０アミノ酸残基、又は最も好ましくは少なくとも１５０アミノ酸残基を含むことが好ましい。
成分ａ）－細胞透過性ペプチド
ＣＰＰによって、特に少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に、樹状細胞（ＤＣ）、延いては樹状細胞の抗原プロセシング機構に効率的に送達、即ち、輸送及びロードすることができる。
用語「細胞透過性ペプチド」（「ＣＰＰ」）は、一般的に、原形質膜を横断して様々な種類のカーゴ分子を輸送し、それによって、様々な分子カーゴ（ナノサイズの粒子から小さな化学分子及び大きなＤＮＡ断片まで）の細胞内取り込みを促進することができる短いペプチドを示すために用いられる。細胞透過性ペプチドに結合しているカーゴ分子の「細胞内部移行」とは、一般的に、原形質膜を横断するカーゴ分子の輸送と、それによるカーゴ分子の細胞への侵入を意味する。具体的な場合に応じて、カーゴ分子は、次いで、細胞質に放出され、細胞内オルガネラに誘導されるか又は細胞表面に更に提示され得る。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる細胞透過性ペプチド又は（前記細胞透過性ペプチドを含む）複合体の細胞透過能若しくは内部移行は、生細胞及び固定細胞のフローサイトメトリー又は蛍光顕微鏡法、前記ペプチド又は複合体を形質導入した細胞の免疫組織化学法、及びウエスタンブロットを含む、当業者に公知の標準的な方法によって確認することができる。
細胞透過性ペプチドは、典型的には、正に荷電したアミノ酸（例えば、リジン又はアルギニン）を比較的大量に含有しているか又は極性／荷電アミノ酸及び非極性疎水性アミノ酸を交互に含有する配列を有するアミノ酸組成を有する。これら２種類の構造は、それぞれ、ポリカチオン性又は両親媒性と称される。細胞透過性ペプチドは、異なるサイズ、アミノ酸配列、及び電荷を有するが、全てのＣＰＰは、原形質膜を転位させ、様々な分子カーゴの細胞質又は細胞のオルガネラへの送達を促進する能力である共通の特徴を有する。現在、ＣＰＰ転位の理論では、３つの主な侵入機序が識別されている：膜における直接透過、エンドサイトーシスを介した侵入、及び一時的構造体の形成を通じた転位。ＣＰＰの形質導入は、現在進行中の研究領域である。細胞透過性ペプチドは、癌及びウイルス阻害剤を含む様々な疾患の治療における薬物送達剤として、並びに細胞を標識及び画像化するためのコントラスト剤として、医学分野において多数の用途が見出されている。
典型的には、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、細胞膜を横断し、殆どの細胞型に侵入する能力を有する８残基～５０残基のペプチドである。或いは、天然タンパク質中に存在したときの起源を反映してタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）とも呼ばれる。Ｆｒａｎｋｅｌ及びＰａｂｏは、Ｇｒｅｅｎ及びＬｏｗｅｎｓｔｅｉｎと同時に、ヒト免疫不全ウイルス１のトランス活性化転写活性化因子（ＨＩＶ－ＴＡＴ）の細胞に透過する能力について報告した（Ｆｒａｎｋｅｌ，Ａ．Ｄ．ａｎｄ Ｃ．Ｏ．Ｐａｂｏ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ．Ｃｅｌｌ，１９８８．５５（６）：ｐ．１１８９－９３）。１９９１年に、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）由来のアンテナペディアホメオドメイン（ＤＮＡ結合ドメイン）の神経細胞への形質導入が報告された（Ｊｏｌｉｏｔ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｎｅｕｒａｌ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ，１９９１．８８（５）：ｐ．１８６４－８）。１９９４年には、アミノ酸配列ＲＱＩＫＩＹＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １））を有するペネトラチンと呼ばれる最初の１６ｍｅｒペプチドＣＰＰが、アンテナペディアのホメオドメインの３番目のヘリックスから特徴付けられ（Ｄｅｒｏｓｓｉ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｈｅｌｉｘ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｈｏｍｅｏｄｏｍａｉｎ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９４．２６９（１４）：ｐ．１０４４４－５０）、続いて、１９９８年には、タンパク質の形質導入に必要なアミノ酸配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２）を有するＴＡＴの最小ドメインが同定された（Ｖｉｖｅｓ，Ｅ．，Ｐ．Ｂｒｏｄｉｎ，ａｎｄ Ｂ．Ｌｅｂｌｅｕ，Ａ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ＨＩＶ－１ Ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｓｉｃ ｄｏｍａｉｎ ｒａｐｉｄｌｙ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅｕｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９７．２７２（２５）：ｐ．１６０１０－７）。過去２０年間に亘って、ウイルスタンパク質、例えば、ＶＰ２２（Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｇ．ａｎｄ Ｐ．Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｂｙ ａ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｃｅｌｌ，１９９７．８８（２）：ｐ．２２３－３３）及びＺＥＢＲＡ（Ｒｏｔｈｅ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＺＥＢＲＡ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１０．２８５（２６）：ｐ．２０２２４－３３）、又は毒液、例えば、メリチン（Ｄｅｍｐｓｅｙ，Ｃ．Ｅ．，Ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｅｌｉｔｔｉｎ ｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１９９０．１０３１（２）：ｐ．１４３－６１）、マストポラン（ｍａｓｔｏｐｏｒａｎ）（Ｋｏｎｎｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｅｕｍｅｎｉｎｅ ｍａｓｔｏｐａｒａｎ－ＡＦ（ＥＭＰ－ＡＦ），ａ ｎｅｗ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｖｅｎｏｍ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｉｔａｒｙ ｗａｓｐ（Ａｎｔｅｒｈｙｎｃｈｉｕｍ ｆｌａｖｏｍａｒｇｉｎａｔｕｍ ｍｉｃａｄｏ）．Ｔｏｘｉｃｏｎ，２０００．３８（１１）：ｐ．１５０５－１５）、マウロカルシン（Ｅｓｔｅｖｅ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｃｏｒｐｉｏｎ ｔｏｘｉｎ ｍａｕｒｏｃａｌｃｉｎｅ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｘｉｎ ｃｒｏｓｓｅｓ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００５．２８０（１３）：ｐ．１２８３３－９）、クロタミン（Ｎａｓｃｉｍｅｎｔｏ，Ｆ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｏｔａｍｉｎｅ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｈｅｐａｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００７．２８２（２９）：ｐ．２１３４９－６０）、若しくはブフォリン（ｂｕｆｏｒｉｎ）（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｕｆｏｒｉｎ ２．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４．４３（４９）：ｐ．１５６１０－６）を含む様々な起源由来の数十のペプチドが報告されている。また、ポリアルギニン（Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１２）（Ｆｕｔａｋｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｇｉｎｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ａｎ ａｂｕｎｄａｎｔ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｅｒｍｅａｂｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００１．２７６（８）：ｐ．５８３６－４０）又はトランスポータン（Ｐｏｏｇａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ．ＦＡＳＥＢ Ｊ，１９９８．１２（１）：ｐ．６７－７７）を含む合成ＣＰＰも設計された。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において、上記ＣＰＰのいずれを細胞透過性ペプチド、即ち、成分ａ）として用いてもよい。特に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体における成分ａ）、即ち、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２）を有するＴＡＴの最小ドメインを含んでいてよい。特に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体における成分ａ）、即ち、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＱＩＫＩＹＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１）を有するペネトラチンを含んでいてよい。
また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において細胞透過性ペプチド、即ち、成分ａ）として用いることができる様々なＣＰＰは、以下の総説にも開示されている：Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２。言い換えれば、Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，２０１２，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０に開示されているＣＰＰを、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において細胞透過性ペプチド、即ち、成分ａ）として用いることができる。これは、特に、カチオン性ＣＰＰ、両親媒性ＣＰＰ、及び疎水性ＣＰＰ、並びにヘパラン－、ＲＮＡ－、及びＤＮＡ－結合タンパク質由来のＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表１を参照）、シグナルペプチド由来のＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表２を参照）、抗微生物性ペプチド由来のＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表３を参照）、ウイルスタンパク質由来のＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表４を参照）、様々な天然タンパク質由来のＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表５を参照）、並びに設計されたＣＰＰ及びペプチドライブラリ由来のＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表６を参照）を含む。
好ましくは、前記複合体に含まれる細胞透過性ペプチドは、
ｉ）合計５アミノ酸～５０アミノ酸、好ましくは合計１０アミノ酸～４５アミノ酸、より好ましくは合計１５アミノ酸～４５アミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列長を有する、及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片であって、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に延び（ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ）し、任意で、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている断片、又はかかる断片の配列変異体を含むアミノ酸配列を有する。
したがって、前記複合体に含まれる細胞透過性ペプチドは、
ｉ）合計５アミノ酸～５０アミノ酸、好ましくは合計１０アミノ酸～４５アミノ酸、より好ましくは合計１５アミノ酸～４５アミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列長を有する、及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片であって、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に延び、任意で、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている断片、又はかかる断片の配列変異体を含むアミノ酸配列を有することが好ましい。
かかる好ましいＣＰＰは、ＷＯ２０１４／０４１５０５に開示されている。
用語「ＺＥＢＲＡ」（Ｚｔａ、Ｚ、ＥＢ１、又はＢＺＬＦ１としても知られている）は、一般的に、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）の塩基性ロイシンジッパー（ｂＺＩＰ）転写活性化因子を意味する。細胞透過特性を示すＺＥＢＲＡの最小ドメインは、ＺＥＢＲＡの残基１７０～残基２２０に及ぶと同定された。ＺＥＢＲＡのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＹＰ＿４０１６７３として開示されており、配列番号３に表される２４５アミノ酸を含む。
Figure 0007189021000001
近年、ウイルスタンパク質ＺＥＢＲＡ由来のＣＰＰが、（ｉ）直接転位及び（ｉｉ）脂質ラフト媒介性エンドサイトーシスの両方によって、生物学的膜を横断してタンパク質カーゴを形質導入すると報告された（Ｒｏｔｈｅ Ｒ，Ｌｉｇｕｏｒｉ Ｌ，Ｖｉｌｌｅｇａｓ－Ｍｅｎｄｅｚ Ａ，Ｍａｒｑｕｅｓ Ｂ，Ｇｒｕｎｗａｌｄ Ｄ，Ｄｒｏｕｅｔ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＺＥＢＲＡ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１０；２８５（２６）：２０２２４－３３）。本発明者らは、それぞれ、これら２つの侵入機序が、カーゴ抗原のＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞へのＭＨＣクラスＩ及びＩＩ拘束性提示の両方を促進するはずであると推測する。したがって、かかるＣＰＰは、多エピトープペプチドを樹状細胞（ＤＣ）に送達し、続いて、ＣＴＬ及びＴｈ細胞の活性化並びに抗腫瘍機能を促進することができる。したがって、かかるＣＰＰは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体を抗原提示細胞（ＡＰＣ）に効率的に送達し、多エピトープＭＨＣクラスＩ及びＩＩ拘束性提示を導くことができる。
本発明の状況において、用語「ＭＨＣクラスＩ」とは、主要組織適合複合体分子の２つの主なクラスのうちの一方を意味する。ＭＨＣクラスＩ（「ＭＨＣ Ｉ」とも呼ばれる）分子は、身体の全ての有核細胞でみられる。ＭＨＣクラスＩの機能は、エピトープを細胞傷害性細胞（ＣＴＬ）に提示することである。ヒトでは、ＭＨＣクラスＩ分子は、２本のポリペプチド鎖α－及びβ２－マイクログロブリン（ｂ２ｍ）からなる。α鎖のみが、多形性であり、ＨＬＡ遺伝子によってコードされており、一方、ｂ２ｍサブユニットは、多形性ではなく、ベータ－２マイクログロブリン遺伝子によってコードされている。本発明の状況において、用語「ＭＨＣクラスＩＩ」とは、主要組織適合複合体分子の他方の主なクラスを意味する。ＭＨＣクラスＩＩ（「ＭＨＣ ＩＩ」とも呼ばれる）分子は、マクロファージ、樹状細胞、及びＢ細胞（これらは全て専用の抗原提示細胞（ＡＰＣ）である）を含む幾つかの特殊な細胞型でしかみられない。
好ましくは、上記ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片の配列変異体は、細胞透過性ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに、上記ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片と、特に全長に亘って、少なくとも７０％、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を共有する。特に、上に定義したＺＥＢＲＡの最小ドメインの「断片」は、好ましくは、ネイティブ配列のアミノ酸配列と比べてＮ末端、Ｃ末端、及び／又は配列内で切断されている、その切断型配列、即ち、アミノ酸配列であると理解される。更に、かかるＺＥＢＲＡの最小ドメインの「断片」は、好ましくは、合計５アミノ酸長～５０アミノ酸長、好ましくは、合計１０アミノ酸長～４５アミノ酸長、より好ましくは、合計１５アミノ酸長～４５アミノ酸長である。
したがって、用語「配列変異体」は、本発明の状況において使用するとき、即ち、本願全体を通して、レファレンス配列における任意の改変を指す。用語「配列変異体」は、ヌクレオチド配列変異体及びアミノ酸配列変異体を含む。好ましくは、レファレンス配列は、「配列及び配列番号の表」（配列表）に列挙されている配列のいずれか、即ち、配列番号１～配列番号４７である。好ましくは、配列変異体は、特に配列の全長に亘って、レファレンス配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を共有し、この配列同一性は、下記の通り計算される。特に、配列変異体は、レファレンス配列の特定の機能を維持している。配列同一性は、下記の通り計算される。特に、アミノ酸配列変異体は、レファレンス配列におけるアミノ酸のうちの１以上が欠失若しくは置換されているか又はレファレンスアミノ酸配列の配列に１以上のアミノ酸が挿入されている改変配列を有する。改変の結果、アミノ酸配列変異体は、レファレンス配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する。例えば、少なくとも９０％同一である変異体配列は、レファレンス配列のアミノ酸１００個当たり１０個以下の改変、即ち、欠失、挿入、又は置換の任意の組合せを有する。
本発明の状況において、本発明のクエリーアミノ酸配列に対して例えば少なくとも９５％の「配列同一性を共有している」アミノ酸配列は、サブジェクトアミノ酸配列がクエリーアミノ酸配列のアミノ酸各１００個当たり５個以下のアミノ酸改変を含み得ることを除いて、サブジェクトアミノ酸配列の配列がクエリー配列と同一であることを意味することを意図する。言い換えれば、クエリーアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である配列を有するアミノ酸配列を得るためには、好ましくは変異体又は断片の上記定義内で、サブジェクト配列におけるアミノ酸残基の５％以下（１００個のうちの５個）を挿入してもよく、別のアミノ酸で置換してもよく、欠失させてもよい。これは、無論、核酸配列にも同様に適用される。
正確には一致していない（アミノ酸又は核酸）配列について、第１の配列の「同一性％」は、第２の配列に対して決定してよい。一般的には、これら比較される２つの配列を、配列間の相関が最大になるようにアラインメントする。これは、アラインメントの程度を高めるために、一方又は両方の配列に「ギャップ」を挿入することを含んでいてよい。次いで、比較される各配列の全長に亘って（所謂グローバルアラインメント）（これは、特に同じ又は類似の長さの配列に特に好適である）又はより短い規定の長さに亘って（所謂ローカルアラインメント）（これは、等しくない長さの配列により好適である）同一性％を決定してよい。
２以上の配列の同一性及び相同性を比較する方法は、当技術分野において周知である。２つの配列が同一である割合は、例えば、数学的アルゴリズムを用いて決定することができる。用いることができる数学的アルゴリズムの好ましいが非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３），ＰＮＡＳ ＵＳＡ，９０：５８７３－５８７７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＮＣＢＩのホームページ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）を通してアクセス可能なＢＬＡＳＴファミリーのプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴ又はＮＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０又はＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２５：３３８９－３４０２も参照）、及びＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９０），Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３，６３－９８；Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ８５，２４４４－２４４８．）に組み込まれている。ある程度他の配列と同一である配列は、これらプログラムによって同定することができる。更に、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８７－３９５）において利用可能なプログラム、例えば、ＢＥＳＴＦＩＴ及びＧＡＰプログラムを用いて、２つのポリヌクレオチド間の同一性％及び２つのポリペプチド配列間の同一性％及び相同性又は同一性％を決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴは、（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７，１９５－１９７．）の「ローカルホモロジー」アルゴリズムを使用し、２つの配列間で類似性が最も高い単一領域を見出す。
より好ましくは、細胞透過性ペプチドの断片又は上記その変異体は、更に、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子において、抗原提示細胞等の細胞の表面に抗原又は抗原エピトープ等のカーゴ分子を提示する前記ペプチドの能力を保持する。これらエピトープに特異的なＮＨＣ拘束性ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖及び／又は機能を刺激する能力を含む、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子において細胞の表面に抗原又は抗原エピトープ等のカーゴ分子を提示する細胞透過性ペプチド又は前記細胞透過性ペプチドを含む複合体の能力は、当業者に公知の標準的な方法によって確認することができる。
ｉ）合計５アミノ酸～５０アミノ酸、好ましくは合計１０アミノ酸～４５アミノ酸、より好ましくは合計１５アミノ酸～４５アミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列長を有する、及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片であって、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に延び、任意で、ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている断片、又はかかる断片の変異体を含むアミノ酸配列を有する好ましい細胞透過性ペプチドは、
好ましくは、レファレンス配列と比べて少なくとも１つの保存的に置換されているアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む、即ち、所与のアミノ酸残基が類似の生理化学的特徴を有する残基によって置換されている。
一般的に、レファレンスアミノ酸配列中に存在する１以上のアミノ酸の置換は、保存的に行わなければならない。保存的置換の例としては、ある脂肪族残基を別の脂肪族残基で置換する、例えば、Ｉｌｅ、ＶａＩ、Ｌｅｕ、若しくはＡｌａを互いに置換するか、又はある極性残基を別の極性残基で置換する、例えば、Ｌｙｓ及びＡｒｇ；Ｇｌｕ及びＡｓｐ；又はＧｌｎ及びＡｓｎ間で置換することが挙げられる。他のかかる保存的置換、例えば、類似の疎水性を有する領域全体の置換は周知である（Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７（１）：１０５－１３２）。１以上のＤアミノ酸による１以上のＬアミノ酸の置換は、本発明の状況において保存的置換であるとみなすべきである。例示的なアミノ酸置換を以下の表１に示す。
Figure 0007189021000002
特に好ましくは、好ましい細胞透過性ペプチドであって、
ｉ）合計５アミノ酸～５０アミノ酸、好ましくは合計１０アミノ酸～４５アミノ酸、より好ましくは合計１５アミノ酸～４５アミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列長を有する、及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片であって、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に延び、任意で、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている断片、又はかかる断片の変異体を含むアミノ酸配列を有する好ましい細胞透過性ペプチドは、
配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列に対して、１８９位と等価な位置にＳｅｒ（Ｓ）に置換されたＣｙｓ（Ｃ）を含む。
したがって、かかる好ましい細胞透過性ペプチドは、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに、０個、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が、置換、欠失、及び／又は付加されている、以下の一般式（Ｉ）：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７
（式中、
Ｘ１は、Ｋ、Ｒ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ１は、Ｋ又はＲであり；
Ｘ２は、Ｒ、Ｋ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ２は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ３は、Ｙ、Ｗ、又はＦであり、好ましくは、Ｘ３は、Ｙ、Ｗ、又はＦであり；
Ｘ４は、Ｋ、Ｒ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ４は、Ｋ又はＲであり；
Ｘ５は、Ｎ又はＱであり；
Ｘ６は、Ｒ、Ｋ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ６は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ７は、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｌ、Ｆ、又はＡであり、好ましくは、Ｘ７は、Ｖ、Ｉ、Ｍ、又はＬであり；
Ｘ８は、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、又はＧであり、好ましくは、Ｘ８は、Ａ又はＧであり；
Ｘ９は、Ｓ又はＴであり；
Ｘ１０は、Ｒ、Ｋ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ１０は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ１１は、Ｋ、Ｒ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ１１は、Ｋ又はＲであり；
Ｘ１３は、Ｒ、Ｋ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ１３は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ１４は、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、又はＧであり、好ましくは、Ｘ１４は、Ａ又はＧであり；
Ｘ１５は、Ｋ、Ｒ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ１５は、Ｋ又はＲであり；
Ｘ１６は、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｙ、Ｗ、又はＭであり、好ましくは、Ｘ１６は、Ｆ、Ｙ、又はＷであり；
Ｘ１７は、Ｋ、Ｒ、又はＨであり、好ましくは、Ｘ１７は、Ｋ又はＲである）
にかかる配列を含むアミノ酸配列を有することが好ましい。
好ましくは、かかるペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、（完全に）Ｌアミノ酸又は（完全に）Ｄアミノ酸で構成され、それによって、「レトロ－インベルソペプチド配列」を形成する。用語「レトロ－インベルソ（ペプチド）配列」は、配列の方向が逆であり且つ各アミノ酸残基のキラリティが逆である直鎖状ペプチド配列の異性体を指す（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，７４４－７４６（１９９４）；Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，６９２－６９３（１９９４）を参照）。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１がＫである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ２がＲである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ３がＹである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ４がＫである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ５がＮである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ６がＲである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ７がＶである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ８がＡである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ９がＳである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１０がＲである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１１がＫである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１３がＲである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１４がＡである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１５がＫである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１６がＦである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、Ｘ１７がＫである一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般式（Ｉ）に対して１２位と等価な位置のアミノ酸がＳｅｒ（Ｓ）である一般式（Ｉ）によって上に一般的に定義されている。
また、細胞透過性ペプチドであって、
ｉ）合計５アミノ酸～５０アミノ酸、好ましくは合計１０アミノ酸～４５アミノ酸、より好ましくは合計１５アミノ酸～４５アミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列長を有する、及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片であって、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に延び、任意で、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている断片、又はかかる断片の変異体を含むアミノ酸配列を有する好ましい細胞透過性ペプチドは、
配列番号４～１３にかかるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を抑制しないその配列変異体、好ましくは、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに０個、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている配列変異体を含むか又はからなることが特に好ましい。

Figure 0007189021000003
したがって、細胞透過性ペプチドであって、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、若しくは配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）にかかる、又は前記ペプチドの細胞透過能を抑制しないその配列変異体、好ましくは、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに０個、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている配列変異体アミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列を有する細胞透過性ペプチドが特に好ましい。更に、細胞透過性ペプチドであって、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）若しくは配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）にかかるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を抑制しないその配列変異体、好ましくは、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに０個、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている配列変異体を含むか若しくはからなるアミノ酸配列を有する細胞透過性ペプチドがより好ましい。更に、細胞透過性ペプチドであって、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）にかかるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を抑制しないその配列変異体、好ましくは、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに０個、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が置換、欠失、及び／又は付加されている配列変異体を含むか若しくはからなるアミノ酸配列を有する細胞透過性ペプチドが最も好ましい。
１つの好ましい実施形態では、本発明にかかる細胞透過性ペプチドは、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）を含むか又はからなるアミノ酸配列を有する。
別の好ましい実施形態では、本発明にかかる細胞透過性ペプチドは、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）を含むか又はからなるアミノ酸配列を有する。
別の好ましい実施形態では、本発明にかかる細胞透過性ペプチドは、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）を含むか又はからなるアミノ酸配列を有する。
別の好ましい実施形態では、本発明にかかる細胞透過性ペプチドは、配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）を含むか又はからなるアミノ酸配列を有する。
前記細胞透過性ペプチドの一次アミノ酸配列は、本発明から逸脱することなしに、例えば、グリコシル化又はリン酸化等、更に翻訳後修飾されてもよいことが当業者には理解される。
更なる実施形態では、細胞透過性ペプチドは、上記アミノ酸配列に加えて、
（ｉ）核局在化シグナル（ＮＬＳ）（かかるシグナルは、当業者に周知であり、Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００３，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１（１）：３９７－３９９）に記載されている）
（ｉｉ）例えば、Ｋａｐｏｏｒ ｅｔ ａｌ．（２０１２，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７（４）：ｅ３５１８７）に記載されているもの及びｈｔｔｐ：／／ｃｒｄｄ．ｏｓｄｄ．ｎｅｔ／ｒａｇｈａｖａ／ｔｕｍｏｒｈｏｐｅ／ｇｅｎｅｒａｌ．ｐｈｐ？に列挙されているもの等、腫瘍ホーミングペプチドを含むターゲティングペプチド
のいずれか１つ又は任意の組合せを更に含んでいてもよい。
好ましくは、細胞透過性ペプチドは、抗原又は抗原エピトープに結合し、前記抗原又は抗原エピトープの細胞内部移行を促進する。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１つの細胞透過性ペプチドを含んでいてもよく、１超の細胞透過性ペプチドを含んでいてもよい。好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、５つ以下の細胞透過性ペプチドを含み、より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、４つ以下の細胞透過性ペプチドを含み、更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、３つ以下の細胞透過性ペプチドを含み、特に好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、２つ以下の細胞透過性ペプチドを含み、最も好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１つの細胞透過性ペプチドを含む。
成分ｂ）－抗原／抗原エピトープ
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、成分ｂ）として少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。
本明細書で使用するとき、「抗原」は、適応免疫応答の受容体の標的として、特に、抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体の標的として機能する任意の構造物質である。また、「抗原決定基」としても知られている「エピトープ」は、免疫系、特に、抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体によって認識される抗原の一部（又は断片）である。したがって、１つの抗原は、少なくとも１つのエピトープを有する、即ち、単一の抗原が、１以上のエピトープを有する。本発明の状況において、用語「エピトープ」は、主にＴ細胞エピトープを意味するために用いられ、前記Ｔ細胞エピトープは、抗原提示細胞の表面に提示され、そこで、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）に結合する。ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるＴ細胞エピトープは、典型的には、８アミノ酸長～１１アミノ酸長のペプチドであるが、これに限定されず、一方、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、一般的に１２アミノ酸長～２５アミノ酸長であるが、これに限定されない、より長いペプチドを提示する。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体では、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、（ｉ）ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質、（ｉｉ）多糖、（ｉｉｉ）脂質、（ｉｖ）リポタンパク質又はリポペプチド、（ｖ）糖脂質、（ｖｉ）核酸、及び（ｖｉｉ）低分子医薬又は毒素からなる群から選択される。したがって、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ペプチド、タンパク質、多糖、脂質、リポタンパク質及び糖脂質を含むこれらの組合せ、核酸（例えば、ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイＤＮＡ、プラスミド）、若しくは低分子医薬（例えば、シクロスポリンＡ、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、５－アミノレブリン酸）、又は特に、１超の抗原若しくは抗原エピトープが本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれている場合、これらの任意の組合せであってよい。
少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、例えば、互いに及び／又は少なくとも１つ、即ち、１以上の核酸（例えば、それぞれが１つのペプチド又はポリペプチドをコードしている）と結合している少なくとも１つ、即ち、１以上のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質を含んでいてよいことが理解される。また、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、リポタンパク質及び糖脂質を含む、タンパク質、脂質、及び／又は多糖の組合せであってもよい。したがって、特に本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体が１超の抗原又は抗原エピトープを含む場合、１超のペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質、１超の多糖、１超の脂質、１超のリポタンパク質、１超の糖脂質、１超の核酸、１超の低分子医薬若しくは毒素、又はこれらの組合せを含んでいてよい。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、癌／腫瘍関連抗原、癌／腫瘍特異的抗原、及び／又は病原体由来の抗原タンパク質（ウイルス、細菌、真菌、原生動物、及び多細胞寄生虫の抗原タンパク質を含む）由来の１以上のエピトープを含む少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。
より好ましくは、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、（ｉ）少なくとも１つの病原体エピトープ、及び／又は（ｉｉ）少なくとも１つの癌／腫瘍エピトープ、特に少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなる。最も好ましくは、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つの癌／腫瘍エピトープ、特に、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなる。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、かかる抗原又は抗原エピトープ（癌／腫瘍関連抗原、癌／腫瘍特異的抗原、及び／又は癌／腫瘍エピトープ、特に、腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原、及び／又は腫瘍エピトープ）のみを含む。
本明細書で使用するとき、「癌エピトープ」は、癌関連抗原又は癌特異的抗原由来のエピトープを意味する。したがって、「腫瘍エピトープ」は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原由来のエピトープを意味する。かかるエピトープは、典型的には、特定の種類の癌／腫瘍に特異的である（又は関連している）。例えば、癌／腫瘍エピトープは、神経膠腫エピトープを含む。特に、癌／腫瘍関連（癌／腫瘍関係ともいう）抗原は、癌／腫瘍細胞及び正常細胞の両方で発現する抗原である。したがって、これら抗原は、生後（又はそれ以前でさえも）普通に存在する。したがって、免疫系がこれら抗原に対して自己寛容を発現する可能性がある。対照的に、癌／腫瘍特異的抗原は、癌／腫瘍細胞で特異的に発現するが、正常細胞では発現しない抗原である。癌／腫瘍特異的抗原は、特に、ネオ抗原を含む。一般的に、ネオ抗原は、それ以前には存在しなかった抗原であり、したがって、免疫系にとっては「新規」である。ネオ抗原は、典型的には、体細胞突然変異によって生じる。癌／腫瘍において、癌／腫瘍特異的ネオ抗原は、典型的には、癌／腫瘍の発現前には存在しておらず、癌／腫瘍特異的ネオ抗原は、通常、癌性細胞／腫瘍細胞における体細胞遺伝子突然変異によってコードされている。ネオ抗原は、免疫系にとって新規であるので、これら抗原の自己寛容のリスクは、癌／腫瘍関連抗原と比べて著しく低い。しかし、全ての癌の腫瘍特異的突然変異のセットは固有のものであると考えられる。したがって、本発明の状況において、かかる癌／腫瘍特異的抗原、特に、ネオ抗原は、当業者に公知の方法、例えば、癌ゲノムシーケンシングによって、癌であると診断された被験体において同定されることが好ましい。同定後、それぞれの癌／腫瘍特異的ネオ抗原及び／又は癌／腫瘍特異的ネオ抗原エピトープは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において用いられる。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１以上の癌／腫瘍関連エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍関連抗原を含む（が、好ましくは、癌／腫瘍特異的エピトープは含まない）。また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１以上の癌／腫瘍特異的エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍特異的抗原を含む（が、好ましくは、癌／腫瘍特異的エピトープは含まない）ことが好ましい。また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、好ましくは、（ｉ）１以上の癌／腫瘍関連エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍関連抗原、並びに（ｉｉ）１以上の癌／腫瘍特異的エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍特異的抗原の両方を含んでいてよい。
好適な癌／腫瘍エピトープは、癌／腫瘍エピトープデータベース、例えば、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるヒト腫瘍抗原がその発現パターンに基づいて４つの主なグループに分類されているｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ Ｐ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｖｉｇｎｅｒｏｎ Ｎ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ ２０１３；ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ／、又はデータベース「Ｔａｎｔｉｇｅｎ」（ＴＡＮＴＩＧＥＮバージョン１．０、２００９年１２月１日；Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ ａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって開発；ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｃｖｃ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｔａｄｂ／）から検索することができる。癌／腫瘍エピトープの例としては、例えば、ＴＲＰ２由来エピトープ、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）メラノーマ抗原由来エピトープ、糖タンパク質７０（ｇｐ７０）抗原由来エピトープ、サバイビンエピトープ、ＩＥａエピトープ、ＩＬ１３ｒα２、Ｅｐｈａ２（エフリンＡ型受容体２）、これらの免疫原性断片、並びにかかる抗原及び／又は断片の融合体が挙げられる。更に、癌／腫瘍エピトープの例としては、ネオ抗原、例えば、Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１４ Ｎｏｖ ２７；５１５（７５２８）：５７２－６に記載のＭＣ－３８腫瘍細胞株由来のネオ抗原のエピトープが挙げられる。上記の通り、ネオ抗原は、正常ヒトゲノムには全く存在しない抗原である。非突然変異型自己抗原と比べて、ネオ抗原は、腫瘍管理に適しているが、その理由は、これら抗原が利用可能なＴ細胞プールの品質が中枢性Ｔ細胞寛容によって影響を受けないためである。特に、ネオ抗原は、個々の腫瘍ゲノムに基づいていてよい。潜在的ネオ抗原は、当業者に公知の方法、例えば、癌ゲノムシーケンシング又は（癌）ゲノムのタンパク質をコードしている部分内の突然変異を同定するディープシーケンシング技術によって予測することができる。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において有用な癌／腫瘍関連、特に、腫瘍関連又は組織特異的抗原の具体例としては、以下の抗原が挙げられるが、これらに限定されない：前立腺：前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＡＰ、ＰＳＣＡ（ＰＮＡＳ ９５（４）１７３５－１７４０ １９９８）、前立腺ムチン抗原（ＰＭＡ）（Ｂｅｃｋｅｔｔ ａｎｄ Ｗｒｉｇｈｔ，１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６２：７０３－７１０）、プロスターゼ、Ｈｅｒ－２ｎｅｕ、ＳＰＡＳ－１、メラノーマ：ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ Ａ／Ｍａｒｔ－１、ｇｐｌＯＯ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＧＭ２ガングリオシド；乳房：Ｈｅｒ２－ｎｅｕ、カイネシン２、ＴＡＴＡエレメント調節因子１、腫瘍タンパク質Ｄ５２、ＭＡＧＥ Ｄ、ＩＮＧ２、ＨＩＰ－５５、ＴＧＦ－１抗アポトーシス因子、ＨＯＭ－Ｍｅｌ－４０／ＳＳＸ２、上皮抗原（ＬＥＡ １３５）、ＤＦ３１ＭＵＣ１抗原（Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７４：４５７－４６４；Ｐａｎｄｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：４０００－４００３）；精巣：ＭＡＧＥ－１、ＨＯＭ－Ｍｅｌ－４０／ＳＳＸ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１；結腸直腸：ＥＧＦＲ、ＣＥＡ；肺：ＭＡＧＥ Ｄ、ＥＧＦＲ、卵巣：Ｈｅｒ－２ｎｅｕ；膀胱：移行上皮癌（ＴＣＣ）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：６８５－６８７）、幾つかの癌：Ｅｐｈａ２、Ｅｐｈａ４、ＰＣＤＧＦ、ＨＡＡＨ、メソテリン；ＥＰＣＡＭ；ＮＹ－ＥＳＯ－１、糖タンパク質ＭＵＣ１及びＮＩＵＣ１０ムチンｐ５（特に突然変異バージョン）、ＥＧＦＲ；種々の腫瘍：癌関連血清抗原（ＣＡＳＡ）及び癌抗原１２５（ＣＡ １２５）（Ｋｉｅｒｋｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．５９：２５１－２５４）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）（Ｋｉｅｖｉｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７１：２３７－２４５）、扁平上皮癌抗原（ＳＣＣ）（Ｌｏｚｚａ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：５２５－５２９）、カテプシン Ｅ（Ｍｏｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｍ．Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．１５０：１２２３－１２２９）、メラノーマにおけるチロシナーゼ（Ｆｉｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｃａｎｃｅｒ ７９：１４６１－１４６４）、大脳海綿腫の細胞核抗原（ＰＣＮＡ）（Ｎｏｔｅｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｓｕｒｇ．Ｎｅｕｒｏｌ．４７：３６４－３７０）、甲状腺乳頭癌における３５ｋＤ腫瘍関連自己抗原（Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：２４９３－２４９６）、ＣＤＣ２７（タンパク質の突然変異型を含む）、抗原トリオースリン酸イソメラーゼ、７０７－ＡＰ、Ａ６０ミコバクテリア抗原（Ｍａｃｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２２：２９６－３００）、アネキシンＩＩ、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、ＢＡＧＥ、β－カテニン／ｍ、ＢＣＬ－２、ｂｃｒ－ａｂｌ、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ１９０、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ２１０、ＢＲＣＡ－１、ＢＲＣＡ－２、ＣＡ １９－９（Ｔｏｌｌｉｖｅｒ ａｎｄ Ｏ’Ｂｒｉｅｎ，１９９７，Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ．Ｊ．９０：８９－９０；Ｔｓｕｒｕｔａ ａｔ ａｌ．，１９９７ Ｕｒｏｌ．Ｉｎｔ．５８：２０－２４）、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＥＡ（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒ Ｒｅｖ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００２）１：４９－６３）、ＣＴ９、ＣＴ１０、Ｃｙｐ－Ｂ、Ｄｅｋ－ｃａｉｎ、ＤＡＭ－６（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＤＡＭ－１０（ＭＡＧＥ－Ｂ１）、ＥｐｈＡ２（Ｚａｎｔｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．（１９９９）１０：６２９－３８；Ｃａｒｌｅｓ－Ｋｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００２）６２：２８４０－７）、ＥｐｈＡ４（Ｃｈｅｎｇ ａｔ ａｌ．，２００２，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１３：７５－８５）、腫瘍関連Ｔｈｏｍｓｅｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原（Ｄａｈｌｅｎｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７０：６３－７１）、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７Ｂ、ＧＡＧＥ－８、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ１００（Ｚａｊａｃ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７１：４９１－４９６）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ－Ｅ７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、アポトーシスの阻害剤（例えば、サバイビン）、ＫＨ－１腺癌抗原（Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ ａｎｄ Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ ３８７：１６４－１６６）、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ－ｒａｓ、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｂ５、ＭＡＧＥ－Ｂ６、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ Ｄ、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｋａｗａｋａｍｉ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、１９９７，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１７３－１９２）、ＭＣ１Ｒ、ＭＤＭ－２、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ネオ－ポリＡポリメラーゼ、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１ａ（ＣＡＧ－３）、ＰＡＧＥ－４、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３（Ｍｏｌｌｄｒｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９９６）８８：２４５０－７；Ｍｏｌｌｄｒｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９９７）９０：２５２９－３４）、Ｐ１５、ｐ１９０、Ｐｍ１／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＲＡＳ、ＲＣＡＳ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＳＰ１７、ＳＰＡＳ－１、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＰＩ／ｍ、チロシナーゼ、ＴＡＲＰ、ＴＲＰ－１（ｇｐ７５）、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＷＴ－１、並びにＮＹ－ＥＳＯ－１及びＬＡＧＥ－１遺伝子に由来するオルタナティブに翻訳されたＮＹ－ＥＳＯ－ＯＲＦ２及びＣＡＭＥＬタンパク質。多数の他の癌抗原が当技術分野において周知である。
好ましくは、癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープは、組み換え癌／腫瘍抗原又は組み換え癌／腫瘍エピトープである。かかる組み換え癌／腫瘍抗原又は組み換え癌／腫瘍エピトープは、ネイティブな癌／腫瘍抗原又はネイティブな癌／腫瘍エピトープのアミノ酸配列全体において特定のアミノ酸を変化させる（付加、欠失、又は置換）突然変異を導入することによって設計することができる。突然変異の導入は、哺乳類の被験体、好ましくは、ヒト又はイヌの被験体にまたがって普遍的に適用することができないほどは癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープを変化させないが、免疫応答を生じさせるために、得られるアミノ酸が寛容を破壊するか又は外来抗原とみなされるのに十分な程度変化させる。別の方法は、その対応するネイティブな癌／腫瘍抗原又はネイティブな癌／腫瘍エピトープに対して少なくとも８５％且つ９９％以下のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％且つ９８％以下の配列同一性、より好ましくは少なくとも９３％且つ９８％以下の配列同一性、又は更により好ましくは少なくとも９５％且つ９８％以下の配列同一性を有するコンセンサス組み換え癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープを作製することであり得る。幾つかの例では、組み換え癌／腫瘍抗原又は組み換え癌／腫瘍エピトープは、その対応するネイティブな癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープに対して９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のアミノ酸配列同一性を有する。ネイティブな癌／腫瘍抗原は、特定の癌又は癌腫瘍に正常に結合する抗原である。癌／腫瘍抗原に依存して、癌／腫瘍抗原のコンセンサス配列は、哺乳類種にまたがって存在していてもよく、種の亜型内に存在していてもよく、ウイルス株又は血清型にまたがって存在していてもよい。幾つかの癌／腫瘍抗原は、癌／腫瘍抗原の野生型アミノ酸配列と大きくは異ならない。最終的な組み換え癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープが上述のネイティブな癌抗原のアミノ酸配列と類似性パーセントを有するように、上述のアプローチを組み合わせてもよい。しかし、好ましくは、本明細書に記載する癌／腫瘍抗原のエピトープのアミノ酸配列は、突然変異しておらず、したがって、レファレンスエピトープ配列と同一である。
本明細書で使用するとき、「病原体エピトープ」は、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、及び多細胞寄生虫を含む病原体由来の抗原タンパク質、抗原多糖、抗原液体、抗原リポタンパク質、又は抗原糖脂質由来のエピトープを意味する。本明細書では、病原体由来の抗原タンパク質、多糖、脂質、リポタンパク質、又は糖脂質としては、それぞれ、例えば、アメーバ症、炭疽病、ブルーリ潰瘍（マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ））、カリシウイルス関連下痢、カンピロバクター下痢、子宮頸癌（ヒトパピローマウイルス）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）関連生殖器疾患、コレラ、クリミア・コンゴ出血熱、デング熱、ジフテリア、エボラ出血熱、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）下痢、胃癌（ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ））、淋病、Ａ群レンサ球菌関連疾患、Ｂ群レンサ球菌関連疾患、ヘモフィルス・インフルエンゼ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）Ｂ肺炎及び侵襲性疾患、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｅ型肝炎下痢、２型単純ヘルペス外陰部潰瘍、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、鉤虫症、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、リーシュマニア症、レプトスピラ症、肝癌（Ｂ型肝炎）、肝癌（Ｃ型肝炎）、ライム病、マラリア、マールブルグ病、はしか、おたふくかぜ、鼻咽頭癌（エプスタイン・バーウイルス）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）髄膜炎、パラインフルエンザ関連肺炎、百日咳、ペスト、小児まひ、狂犬病、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）肺炎、リフトバレー熱、ロタウイルス下痢、風疹、住血吸虫症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、細菌性赤痢、天然痘、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）関連疾患、胃癌（ヘリコバクター・ピロリ）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及び侵襲性疾患、破傷風、だに媒介脳炎、トラコーマ、結核、野兎病、腸チフス、ウエストナイルウイルス関連疾患、黄熱病を含むワクチン接種の標的となり得る疾患の原因となる病原体に由来するタンパク質、多糖、脂質、リポタンパク質、及び糖脂質が挙げられる。
好ましくは、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ、及び／又はＣＤ１において細胞表面に提示され、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩにおいて細胞表面に提示されることが好ましい。語句「ＭＨＣクラスＩにおけるエピトープ提示」は、特に、細胞の表面におけるＭＨＣクラスＩ分子の溝に存在するＣＤ８＋エピトープを指す。語句「ＭＨＣクラスＩＩにおけるエピトープ提示」は、特に、細胞の表面におけるＭＨＣクラスＩＩ分子の溝に存在するＣＤ４＋エピトープを指す。語句「ＣＤ１におけるエピトープ提示」は、特に、細胞の表面における分化抗原群１分子の溝に存在する脂質性エピトープを指す。
有利には、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、細胞透過性ペプチドと少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープとを含み、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩにおいて前記エピトープの輸送及び抗原提示細胞の細胞表面における提示を可能にするので、ワクチン接種及び免疫療法において有用である。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープである、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。
用語「ＣＤ４＋エピトープ」又は「ＣＤ４＋拘束性エピトープ」は、本明細書で使用するとき、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって認識されるエピトープを意味し、前記エピトープは、特に、ＭＨＣクラスＩＩ分子の溝に存在する抗原断片からなる。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれる単一のＣＤ４＋エピトープは、好ましくは、約１２アミノ酸～約２５アミノ酸からなる。また、それは、例えば、約８アミノ酸～約２５アミノ酸又は約６アミノ酸～約１００アミノ酸からなり得る。
用語「ＣＤ８＋エピトープ」又は「ＣＤ８＋拘束性エピトープ」は、本明細書で使用するとき、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるエピトープを意味し、前記エピトープは、特に、ＭＨＣクラスＩ分子の溝に存在する抗原断片からなる。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれる単一のＣＤ８＋エピトープは、好ましくは、約８アミノ酸～約１１アミノ酸からなる。また、それは、例えば、約８アミノ酸～約１５アミノ酸又は約６アミノ酸～約１００アミノ酸からなり得る。
好ましくは、少なくとも１つの抗原は、癌／腫瘍関連抗原、癌／腫瘍特異的抗原、又は病原体に由来する抗原タンパク質の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含んでいてよく、或いは、少なくとも１つの抗原エピトープは、前記ＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなっていてよい。より好ましくは、少なくとも１つの抗原は、癌／腫瘍関連抗原又は癌／腫瘍特異的抗原の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含んでいてよく、或いは、少なくとも１つの抗原エピトープは、前記ＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなっていてよい。最も好ましくは、少なくとも１つの抗原は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含んでいてよく、或いは、少なくとも１つの抗原エピトープは、前記ＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなっていてよい。
また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ＣＤ４＋エピトープを含むか又はからなり、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ＣＤ８＋エピトープを含むか又はからなることが好ましい。Ｔｈ細胞（ＣＤ４＋）は、腫瘍部位におけるＤＣライセンシング並びにＣＴＬ（ＣＤ８＋）の動員及び維持の両方において、抗腫瘍免疫応答で中心的な役割を果たしていることが現在立証されている。したがって、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがＣＤ４＋エピトープを含むか又はからなり、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがＣＤ８＋エピトープを含むか又はからなる少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含む本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ＣＴＬ及びＴｈ細胞の同時初回免疫が可能な統合型免疫応答を提供し、したがって、ＣＤ８＋エピトープ１つだけ又はＣＤ４＋エピトープ１つだけに対する免疫が好ましい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、好ましくは、Ｅａｌｐｈａ－ＣＤ４＋エピトープ及びｇｐ１００－ＣＤ８＋エピトープを含んでいてよい。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、前記少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも２、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又はそれ以上のＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも２、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又はそれ以上のＣＤ８＋エピトープを含むか又はからなる。したがって、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、好ましくは、異なる抗原又は抗原エピトープであり、より好ましくは、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、互いに異なるが同種の腫瘍に関連している。多抗原ワクチンは、（ｉ）抗原欠損変異体の増殖を回避し、（ｉｉ）不均質な腫瘍塊内で異なる腫瘍細胞を標的とし、（ｉｉｉ）患者間の腫瘍の多様性に対処する。したがって、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、特に好ましくは、少なくとも４つの抗原又は抗原エピトープ、特に、少なくとも２つのＣＤ８＋エピトープ及び少なくとも２つのＣＤ４＋エピトープを含む。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、相乗的に機能して腫瘍細胞に対抗し、効率的な抗腫瘍免疫を促進するように、多エピトープＣＤ８ ＣＴＬ及びＣＤ４ Ｔｈ細胞を誘導する。また、Ｔｈ細胞は、ワクチン接種後にモニタリングした持続性の細胞免疫の維持に関与していた。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ポリクローナルな多エピトープ性免疫応答並びに多機能性ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋ Ｔ細胞を誘導し、延いては、効率的な抗腫瘍活性を誘導する。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも３つの抗原又は抗原エピトープを含み、更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも４つの抗原又は抗原エピトープを含み、特に好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも５つの抗原又は抗原エピトープを含み、最も好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも６つの抗原又は抗原エピトープを含む。前記複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープは、同じであっても異なっていてもよく、好ましくは、前記複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープは、互いに異なる。好ましくは、前記複合体は、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープを含む。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１超のＣＤ４＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原由来の２以上のＣＤ４＋エピトープを含み、好ましくは、ＣＤ８＋エピトープを含まない。また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、同じ抗原又は異なる抗原由来の１超のＣＤ８＋エピトープ、例えば、２以上のＣＤ８＋エピトープを含み、好ましくは、ＣＤ４＋エピトープを含まないことも好ましい。しかし、最も好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、（ｉ）同じ抗原又は異なる抗原由来の少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ、例えば、２以上のＣＤ４＋エピトープ、及び（ｉｉ）同じ抗原又は異なる抗原由来の少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープ、例えば、２以上のＣＤ８＋エピトープを含む。
例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、好ましくは、ｇｐ１００－ＣＤ８＋エピトープ、Ｅａｌｐｈａ－ＣＤ４＋エピトープ、並びに更なるＣＤ４＋エピトープ及び更なるＣＤ８＋エピトープを含んでいてよい。更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ｇｐ１００－ＣＤ８＋エピトープ及びＥａｌｐｈａ－ＣＤ４＋エピトープを含むポリペプチド又はタンパク質を含んでいてよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるかかるポリペプチド又はタンパク質は、配列番号１４にかかるアミノ酸配列又は上に定義したその配列変異体を含むか又はからなる。
Figure 0007189021000004
例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ｇ７０－ＣＤ８＋エピトープ及び／又はｇ７０－ＣＤ４＋エピトープを含んでいてもよい。更により好ましく、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ｇ７０－ＣＤ８＋エピトープ及び／又はｇ７０－ＣＤ４＋エピトープを含むポリペプチド又はタンパク質を含んでいてよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるかかるポリペプチド又はタンパク質は、配列番号３６にかかるアミノ酸配列又は上に定義したその配列変異体を含むか又はからなる。
Figure 0007189021000005
例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、好ましくは、少なくとも１つのサバイビンエピトープ、例えば、サバイビンＣＤ８＋エピトープ及び／又はサバイビンＣＤ４＋エピトープを含んでいてよい。より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、サバイビンＣＤ８＋エピトープ及び／又はサバイビンＣＤ４＋エピトープを含むポリペプチド又はタンパク質を含んでいてよい。より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１超のサバイビンＣＤ８＋エピトープ及び／又は１超のサバイビンＣＤ４＋エピトープ、例えば、２つの異なるＣＤ８＋エピトープを含むポリペプチド又はタンパク質を含んでいてよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるかかるポリペプチド又はタンパク質は、配列番号３７にかかるアミノ酸配列又は上に定義したその配列変異体を含むか又はからなる。
Figure 0007189021000006
例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、好ましくは、ネオ抗原由来のエピトープを含んでいてよい。更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ネオ抗原、例えば、Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１４ Ｎｏｖ ２７；５１５（７５２８）：５７２－６によって同定されたＭＣ－３８腫瘍細胞株由来のネオ抗原に由来するエピトープを含むポリペプチド又はタンパク質を含んでいてよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるかかるポリペプチド又はタンパク質は、配列番号３８にかかるアミノ酸配列又は上に定義したその配列変異体を含むか又はからなる。
Figure 0007189021000007
例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、好ましくは、ネオ抗原由来の１超、例えば、２つ又は３つのエピトープを含んでいてよい。更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、ネオ抗原、例えば、Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１４ Ｎｏｖ ２７；５１５（７５２８）：５７２－６によって同定されたＭＣ－３８腫瘍細胞株由来のネオ抗原に由来するエピトープを１超、例えば、２つ又は３つ含むポリペプチド又はタンパク質を含んでいてよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるかかるポリペプチド又はタンパク質は、配列番号３９にかかるアミノ酸配列又は上に定義したその配列変異体を含むか又はからなる。
Figure 0007189021000008
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。本発明において有用なペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の性質の抗原又は抗原エピトープの例としては、癌／腫瘍抗原若しくはその抗原エピトープ、アレルギー抗原若しくはその抗原エピトープ、自己免疫自己抗原若しくはその抗原エピトープ、病原体抗原若しくはその抗原エピトープ、及びウイルス（好ましくは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、オルソポックスウイルス属天然痘ウイルス（ｏｒｔｈｏｐｏｘ ｖａｒｉｏｌａ ｖｉｒｕｓ）、オルソポックス属牛痘ウイルス（ｏｒｔｈｏｐｏｘ ａｌａｓｔｒｉｍ ｖｉｒｕｓ）、パラポックスウイルス属羊痘ウイルス（ｐａｒａｐｏｘ ｏｖｉｓ ｖｉｒｕｓ）、伝染性軟属腫ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヘルペスＢウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、ヒトサイトメガリウイルス（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｙ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、チクングニアウイルス、オニョンニョンウイルス、ルビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＧＢウイルスＣ、ウエストナイルウイルス、デングウイルス、黄熱病ウイルス、跳躍病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、Ｂ型日本脳炎ウイルス、ポワッサンウイルス、ＦＳＭＥウイルス、ＳＡＲＳ、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ、ヒトコロナウイルスＯｃ４３、トロウイルス、ヒトＴ細胞リンホトロピックウイルスＩ型、ヒトＴ細胞リンホトロピックウイルスＩＩ型、ＨＩＶ（ＡＩＤＳ）、即ち、ヒト免疫不全ウイルス１型又はヒト免疫不全ウイルス２型、インフルエンザウイルス、ラッサウイルス、リンパ性脈絡髄膜炎ウイルス、タカリベウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、ボルナ病ウイルス、ブニヤムウェラウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、サシチョウバエ熱ウイルス、トスカーナウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハザーラウイルス、ハサンウイルス、ハンタンウイルス、ソウルウイルス、プロスペクトヒルイルス、プーマラウイルス、ドブラバ・ベルグレドウイルス、ツラウイルス、シンノンブルウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ザイールエボラウイルス、スーダンエボラウイルス、アイボリコーストエボラウイルス、インフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイルスＢ型、インフルエンザウイルスＣ型、パラインフルエンザウイルス、マラリア原虫（熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、二日熱マラリア原虫）、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、ＲＳウイルス、ヒトメタニューモウイルス、水疱性口内炎インディアナウイルス、狂犬病ウイルス、モコラウイルス、デュベンヘイジウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス１＋２、オーストラリアコウモリリッサウイルス、アデノウイルスＡ型～Ｆ型、ヒトパピローマウイルス、コンジロームウイルス６型、コンジロームウイルス１１型、ポリオーマウイルス、アデノ随伴ウイルス２型、ロタウイルス、オルビウイルス、水痘帯状疱疹等を含む水痘）に由来する抗原若しくは抗原エピトープ、又はリーシュマニア、トリパノソーマ、アメーバ（ａｍｉｂｅｓ）、細菌等に由来する抗原若しくは抗原エピトープが挙げられ、或いはエピトープ又は上記抗原若しくは抗原エピトープの変異体から選択してもよい。好ましくは、上に定義した抗原のエピトープ及び変異体は、上に示したか又は記載した抗原又は抗原配列のうちの１つに対して約１０％、特に少なくとも１０％、約２０％、特に少なくとも２０％、約３０％、特に少なくとも３０％、約４０％、特に少なくとも４０％、約５０％、特に少なくとも５０％、約６０％、特に少なくとも６０％、約７０％、特に少なくとも７０％、約８０％、特に少なくとも８０％、約９０％、特に少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列相同性又は同一性を示す。この状況において、定義したのと同様のエピトープ及び変異体の定義が適用される。
ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質のカテゴリにおける抗原又は抗原エピトープの例としては、Ｎｏｖｅｌｌｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００５，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，５４（３）：１８７－２０７）、Ｖｉｇｎｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ．１３：１５）に記載されているもの等の複数の神経膠腫エピトープの組合せが挙げられる。しかし、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる１つの複合体は、あるサブセットのみ、即ち、全ての前記神経膠腫エピトープのうちの１以上を含んでいてもよい。かかる場合、好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる異なる複合体は、全ての前記神経膠腫エピトープのうちの異なるサブセットを含み、その結果、例えば、異なる複合体を含む本発明にかかるワクチンは、前記神経膠腫エピトープの全てを含むが、様々な複合体に分布している。
更に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含んでいてもよく、前記抗原又は抗原エピトープは、多糖、脂質、リポタンパク質、及び／又は糖脂質、特に、例えば本明細書に定義した通りの病原体エピトープであってよい多糖、脂質、リポタンパク質、及び／又は糖脂質のエピトープである。
特に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含んでいてよく、前記抗原又は抗原エピトープは、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、及び多細胞寄生虫の抗原又は抗原エピトープを含む、多糖、脂質、リポタンパク質、及び／又は糖脂質である。
好ましくは、前記エピトープは、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩにおいて細胞表面に提示される。
好ましくは、前記脂質エピトープは、ＣＤ１（分化抗原群１分子）において細胞表面に提示される。
また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含んでいてもよく、前記抗原又は抗原エピトープは、低分子医薬又は毒素である。
本発明において有用な低分子医薬又は毒素のカテゴリ内のカーゴ分子の例としては、シクロスポリンＡ、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、５－アミノレブリン酸、ジフテリア毒素、スニチニブ、及びＤｅ ｗｉｔ Ａｍｅｒ（２０１０，Ｎｅｕｒｏ Ｏｎｃｏｌ，１２（３）：３０４－１６）に概説されている分子が挙げられる。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含み、好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の抗原又は抗原エピトープを含み、より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）２つ又は３つの抗原又は抗原エピトープを含み、更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）４つ又は５つの抗原又は抗原エピトープを含む。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に１超の抗原又は抗原エピトープが含まれている場合、前記抗原又は抗原エピトープは、特に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において、例えば、別の抗原若しくは抗原エピトープ、及び／又は成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチド、及び／又は成分ｃ）、即ち、ＴＬＲペプチドアゴニストにも共有結合していることが理解される。
前記複合体に含まれている様々な抗原又は抗原エピトープは、同じであっても異なっていてもよい。好ましくは、前記複合体に含まれる様々な抗原又は抗原エピトープは、互いに異なっており、したがって、多抗原及び／又は多エピトープ性の複合体が得られる。
更に、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の抗原又は抗原エピトープが、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において連続して位置することが好ましい。これは、特に、複合体に含まれている全ての抗原及び／又は抗原エピトープが、成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチドも成分ｃ）、即ち、ＴＬＲペプチドアゴニストも介在することなしに一続きに位置することを意味する。むしろ、成分ａ）及び成分ｃ）は、複合体において、かかる一続きの全ての抗原及び／又は抗原エピトープの前又は後に位置する。しかし、このように連続して位置する抗原及び／又は抗原エピトープは、例えば、成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチドも成分ｃ）、即ち、ＴＬＲペプチドアゴニストでもない下記スペーサ又はリンカーによって互いに結合していてよい。
しかし、様々な抗原及び／又は抗原エピトープは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において任意の他の方式で位置していてもよく、例えば、２以上の抗原及び／又は抗原エピトープ間に成分ａ）及び／又は成分ｃ）が位置する、即ち、成分ａ）と成分ｃ）との間に１以上の抗原及び／又は抗原エピトープが位置し（逆も同様である）、そして、任意で、成分ａ）及び／又は成分ｃ）のそれぞれの他端に１以上の抗原及び／又は抗原エピトープが位置していてもよい。
有利なことには、同一種の疾患、特に同一種の腫瘍に関連する多数の異なる抗原又は抗原エピトープが、単一の複合体に含まれていてよいことが理解される。或いは、同一種の疾患、特に同一種の腫瘍にに関連する多数の異なる抗原又は抗原エピトープが、様々な複合体に含まれる異なる抗原又は抗原エピトープのサブセット、特に、或る種の疾患、例えば、腫瘍の状況において互いに補完的なサブセットに分布していてもよく、それによって、有利なことに、様々なサブセットを含むかかる様々な複合体を、例えば単一のワクチンで、それを必要としている被験体に同時に投与することができる。
好ましくは、本発明にかかる複合体は、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含み、これは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＣＭＶ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ｇｐ１００、ｈＴｅｒｔ、ＴＲＰ－２、ＹＫＬ－４０、ブレビカン、ニューロリジン４、及びＰＴＰＲｚ１からなる群から選択される抗原のエピトープである。より好ましくは、本発明にかかる複合体は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＣＭＶ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ｇｐ１００、ｈＴｅｒｔ、ＴＲＰ－２、ＹＫＬ－４０、ブレビカン、ニューロリジン４、及びＰＴＰＲｚ１からなる群から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原若しくはこれらの断片、又は腫瘍抗原の配列変異体若しくはその断片の配列変異体を含む。また、本発明にかかる複合体は、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことが好ましく、これは、Ｒｅａｒｄｏｎ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆｏｒ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２０１３．１２（６）：ｐ．５９７－６１５によって開示されている神経膠腫抗原から選択される抗原のエピトープである。
本明細書で使用するとき、抗原の「断片」は、抗原の少なくとも１０個の連続するアミノ酸、好ましくは、抗原の少なくとも１５個の連続するアミノ酸、より好ましくは、抗原の少なくとも２０個の連続するアミノ酸、更により好ましくは、抗原の少なくとも２５個の連続するアミノ酸、最も好ましくは、抗原の少なくとも３０個の連続するアミノ酸を含む。「配列変異体」とは、上に定義した通りである、即ち、配列変異体は、レファレンス配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％同一の（アミノ酸）配列を有する。「機能的」配列変異体とは、抗原／抗原断片／エピトープに関連して、例えば、抗原（断片）に含まれるエピトープの機能が損なわれることもなく消失することもないことを意味する。しかし、好ましくは、例えば、本明細書に記載する癌／腫瘍抗原（断片）に含まれるエピトープのアミノ酸配列は、突然変異していない、即ち、レファレンスエピトープ配列と同一である。
上記の通り、抗原の好適な癌／腫瘍エピトープは、文献から公知であるか、又は癌／腫瘍エピトープデータベース、例えば、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるヒト腫瘍抗原が発現パターンに基づいて４つの主なグループに分類されているｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ Ｐ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｖｉｇｎｅｒｏｎ Ｎ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ ２０１３；ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ／、若しくはデータベース「Ｔａｎｔｉｇｅｎ」（ＴＡＮＴＩＧＥＮバージョン１．０、２００９年１２月１日；Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ ａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって開発；ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｃｖｃ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｔａｄｂ／）によって同定することができる。
成分ｃ）－ＴＬＲペプチドアゴニスト
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体では、ＴＬＲペプチドアゴニストによって、自己アジュバント活性と共に、樹状細胞に対するワクチンのターゲティング能を増大させることができる。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体におけるＴＬＲペプチドアゴニストのＣＰＰ及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープへの物理的結合によって、抗原を内部移行させ、代謝し、提示する抗原提示細胞、特に、樹状細胞の同時刺激による免疫応答が強化される。
本発明の状況において使用するとき、「ＴＬＲペプチドアゴニスト」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストであり、即ち、ＴＬＲに結合し、ＴＬＲを活性化して、特に、生物学的応答を生じさせる。更に、ＴＬＲペプチドアゴニストは、上に定義した通りのペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。好ましくは、ＴＬＲペプチドアゴニストは、１０アミノ酸～１５０アミノ酸、より好ましくは、１５アミノ酸～１３０アミノ酸、更により好ましくは、２０アミノ酸～１２０アミノ酸、特に好ましくは、２５アミノ酸～１１０アミノ酸、最も好ましくは、３０アミノ酸～１００アミノ酸を含む。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞基質ドメインを特徴とする膜貫通タンパク質である。蹄鉄形状のロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）を含有する細胞外ドメインは、多様な微生物に由来する共通の分子パターンの認識に関与している。Ｔｏｌｌ様受容体としては、ＴＬＲ１～ＴＬＲ１０が挙げられる。ＴＬＲ受容体並びにその改変体及び誘導体を活性化することができる化合物は、当技術分野において明確に文書化されている。ＴＬＲ１は、細菌のリポタンパク質及びそのアセチル化型によって活性化され得、ＴＬＲ２は、更に、グラム陽性菌の糖脂質、ＬＰＳ、ＬＰＡ、ＬＴＡ、采、外膜タンパク質、病原菌又は宿主由来の熱ショックタンパク質、並びにマイコバクテリアのリポアラビノマンナンによって活性化され得る。ＴＬＲ３は、特にウイルス起源のｄｓＲＮＡによって、又は化学化合物ポリ（ＬＣ）によって活性化され得る。ＴＬＲ４は、グラム陰性菌ＬＰＳ、ＬＴＡ、宿主又は細菌起源の熱ショックタンパク質、ウイルスのコートタンパク質又はエンベロープタンパク質、タキソール又はその誘導体、オリゴ糖及びフィブロネクチンを含有するヒアルロナンによって活性化され得る。ＴＬＲ５は、細菌の鞭毛又はフラジェリンによって活性化され得る。ＴＬＲ６は、マイコバクテリアのリポタンパク質及びＢ群レンサ球菌易熱性可溶性因子（ＧＢＳ－Ｆ）、又はブドウ球菌のモジュリンによって活性化され得る。ＴＬＲ７は、イミダゾキノリンによって活性化され得る。ＴＬＲ９は、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ又はクロマチン－ＩｇＧ複合体によって活性化され得る。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ１、２、４、５、６及び／又は１０のアゴニストである。ＴＬＲは、細胞表面（ＴＬＲ１、２、４、５、６、及び１０）又はエンドソーム等の細胞内オルガネラの膜（ＴＬＲ３、４、７、８、及び９）のいずれかで発現する。エンドソーム受容体の天然リガンドは、核酸ベースの分子であることが分かっている（ＴＬＲ４を除いて）。細胞表面で発現するＴＬＲ１、２、４、５、６、及び１０は、細胞外病原菌の分子パターンを認識する（Ｍｏｎｉｅ，Ｔ．Ｐ．，Ｂｒｙａｎｔ，Ｃ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．２００９：Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＴＬＲｓ ａｎｄ ＮＬＲｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．３４（１１），５５３－５６１）。ＴＬＲは、幾つかの細胞型で発現するが、実質的に全てのＴＬＲがＤＣで発現して、この特殊な細胞が可能な限りあらゆる病原体及び危険シグナルを感知できるようにする。
しかし、ＴＬＲ２、４、及び５は、ＤＣの表面で構成的に発現する。したがって、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、より好ましくは、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、及び／又はＴＬＲ５のペプチドアゴニストである。更により好ましくは、ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストである。特に好ましくは、ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ４ペプチドアゴニストである。最も好ましくは、ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ２及びＴＬＲ４アゴニストの両方である１つのＴＬＲペプチドアゴニストである。ＴＬＲ２は、細菌、ウイルス、寄生虫、及び真菌に由来する広範なリガンドを検出することができる。リガンドの特異性は、多くの場合、ＴＬＲ２と他のＴＬＲ、例えば、ＴＬＲ１、６、若しくは１０、又は非ＴＬＲ分子、例えば、デクチン－１、ＣＤ１４、若しくはＣＤ３６との相互作用によって決定される。ＴＬＲ１とヘテロダイマーを形成することによって、ＴＬＲ２は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４及びペプチドグリカン等の（マイコ）バクテリア起源のトリアシルリポタンパク質又はリポペプチドを特定することができるようになる（ＰＧＡ；Ｇａｙ，Ｎ．Ｊ．，ａｎｄ Ｇａｎｇｌｏｆｆ，Ｍ．（２００７）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｌｉｇａｎｄｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７６，１４１－１６５；Ｓｐｏｈｎ，Ｒ．，Ｂｕｗｉｔｔ－Ｂｅｃｋｍａｎｎ，Ｕ．，ｅｔ ａｌ．（２００４）：Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ａｎｄ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２－Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｖａｃｃｉｎｅ ２２（１９），２４９４－２４９９）。ＴＬＲ２及び６のヘテロダイマー化によって、ジアシルリポペプチド及びザイモサンを検出することができるようになる。リポ多糖（ＬＰＳ）及びその誘導体は、ＴＬＲ４のリガンドであり、ＴＬＲ５についてはフラジェリンである（Ｂｒｙａｎｔ，Ｃ．Ｅ．，Ｓｐｒｉｎｇ，Ｄ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）．Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｓｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８（１），８－１４）。
ＴＬＲ２は、病原体及び真菌が発現する分子を含む、広い範囲の構造的に多様なリガンドと相互作用する。天然及び合成リポペプチド（例えば、マイコプラズマ・ファーメンタンス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）のマクロファージ活性化リポペプチド（ＭＡＬＰ－２））、ペプチドグリカン（黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）由来のもの等のＰＧ）、様々な細菌株由来のリポ多糖（ＬＰＳ）、多糖（例えば、ザイモサン）、グラム陽性菌由来のグリコシルホスファチジルイノシトール固定構造（例えば、リポテイコ酸（ＬＴＡ）及びマイコバクテリア由来のリポアラビノマンナン及び結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のリポマンナン）を含む複数のＴＬＲ２アゴニストが同定されている。特定のウイルス決定基は、ＴＬＲ２を介して惹起することもできる（Ｂａｒｂａｌａｔ Ｒ，Ｌａｕ Ｌ，Ｌｏｃｋｓｌｅｙ ＲＭ，Ｂａｒｔｏｎ ＧＭ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｖｉｒａｌ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｇａｎｄｓ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９：１０（１１）：１２００－７）。細菌リポペプチドは、細胞壁の構造的成分である。これは、システイン残基を介してペプチドがコンジュゲートすることができるアセチル化ｓ－グリセリルシステイン部分からなる。細菌リポペプチドであるＴＬＲ２アゴニストの例としては、ＭＡＬＰ－２及びその合成アナログであるジ－パルミトイル－Ｓ－グリセリルシステイン（Ｐａｍ２Ｃｙｓ）又はトリ－パルミトイル－Ｓ－グリセリルシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）が挙げられる。
サルモネラ・ミネソタ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）Ｒ５９５（ＭＰＬＡ）由来のモノホスホリルリピドＡ、リポ多糖（ＬＰＳ）、マンナン（カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ））、グリコイノシトールリン脂質（トリパノソーマ）、ウイルスエンベロープタンパク質（ＲＳＶ及びＭＭＴＶ）、並びにフィブロネクチン及び熱ショックタンパク質を含む内因性抗原を含む多様なリガンドが、ＴＬＲ４と相互作用する。かかるＴＬＲ４のアゴニストは、例えば、Ａｋｉｒａ Ｓ，Ｕｅｍａｔｓｕ Ｓ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｏ．Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｅｌｌ．Ｆｅｂ ２４；２００６：１２４（４）：７８３－８０１又はＫｕｍａｒ Ｈ，Ｋａｗａｉ Ｔ，Ａｋｉｒａ Ｓ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｏｃｔ ３０；２００９ ３８８（４）：６２１－５に記載されている。グラム陰性菌の外膜でみられるＬＰＳは、最も広く研究されているＴＬＲ４リガンドである。好適なＬＰＳ由来のＴＬＲ４アゴニストペプチドは、例えば、ＷＯ２０１３／１２００７３（Ａ１）に記載されている。
ＴＬＲ５は、殆ど全ての運動性細菌が発現するフラジェリン分子の領域によって誘導される。したがって、フラジェリン、又はフラジェリンに由来するペプチド若しくはタンパク質、及び／又はフラジェリンの変異体若しくは断片も、前記複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストとして好適である。
ＴＬＲペプチドアゴニストの例としては、ＴＬＲ２リポペプチドアゴニストであるＭＡＬＰ－２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、及びＰａｍ３Ｃｙｓ、又はこれらの改変体、ＴＬＲ４アゴニストであるＬＰＳの様々な形態、例えば、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）野生型Ｌ３－ＬＰＳ及び突然変異型ペンタアシル化ＬｐｘＬ１－ＬＰＳ、及びＴＬＲ５アゴニストであるフラジェリンが挙げられる。
しかし、前記複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、リポペプチドでもリポタンパク質でもなく、糖ペプチドでも糖タンパク質でもないことが好ましく、より好ましくは、前記複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、本明細書に定義する古典的なペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。
好ましいＴＬＲ２ペプチドアゴニストは、アネキシンＩＩ又はその免疫調節性断片であり、これは、ＷＯ２０１２／０４８１９０（Ａ１）及び米国特許出願公開第１３／０３３１５４６号に詳細に記載されており、特に、ＷＯ２０１２／０４８１９０（Ａ１）の配列番号４又は配列番号７にかかるアミノ酸配列を含むＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、又はその断片若しくは変異体が好ましい。
それによって、配列番号１５にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、又は上記のその配列変異体が、前記複合体に含まれる成分ｃ）として、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして特に好ましい。
Figure 0007189021000009
配列番号１５にかかるＴＬＲペプチドアゴニストの特に好ましい機能的配列変異体は、配列番号４７にかかるＴＬＲペプチドアゴニストである。
Figure 0007189021000010
 したがって、上述した配列番号４７にかかるアミノ酸配列又はその配列変異体を含むか又はからなるＴＬＲ２ペプチドアゴニストが、複合体に含まれる成分Ｃ）、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして特に好ましい。
ＴＬＲ４に関して、ＴＬＲ４に結合するモチーフ、特に、（ｉ）天然のＬＰＳリガンドを模倣するペプチド（ＲＳ０１：Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ及びＲＳ０９：Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ）及び（ｉｉ）フィブロネクチン由来のペプチドに対応するＴＬＲペプチドアゴニストが特に好ましい。細胞の糖タンパク質であるフィブロネクチン（ＦＮ）は、３つのエクソンのオルタナティブスプライシングによって１つの遺伝子から生じる複数のアイソフォームを有する。これらアイソフォームのうちの１つは、エキストラドメインＡ（ＥＤＡ）であり、これは、ＴＬＲ４と相互作用する。
更に好適なＴＬＲペプチドアゴニストは、フィブロネクチンＥＤＡドメイン又はその断片若しくは変異体を含む。かかる好適なフィブロネクチンＥＤＡドメイン又はその断片若しくは変異体は、欧州特許第１９１３９５４（Ｂ１）号、欧州特許出願公開第２４７６４４０（Ａ１）号、米国特許出願公開第２００９／０２２０５３２（Ａ１）号、及びＷＯ２０１１／１０１３３２（Ａ１）に開示されている。それによって、配列番号４０にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、又は上記のその配列変異体が、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれる成分ｃ）として、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして特に好ましい。
Figure 0007189021000011
更に、高移動群ボックス１タンパク質（ＨＭＧＢ１）及びそのペプチド断片は、ＴＬＲ４アゴニストであると推測される。かかるＨＭＧＢ１由来ペプチドは、例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２３６４０６（Ａ１）号に開示されている。
更に、配列番号１５にかかるＴＬＲアゴニスト及び配列番号４７にかかるＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ４アゴニストとしても作用し得る。したがって、配列番号１５又は４７にかかるアミノ酸配列又はその機能的配列変異体を含むか又はからなるＴＬＲ４ペプチドアゴニストが、複合体に含まれる成分ｃ）として、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして、特に好ましい。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含み、好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１超のＴＬＲペプチドアゴニスト、特に、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上のＴＬＲペプチドアゴニストを含み、より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）２つ又は３つのＴＬＲペプチドアゴニストを含み、更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）４つ又は５つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む。１超のＴＬＲペプチドアゴニストが前記複合体に含まれている場合、前記ＴＬＲペプチドアゴニストは、特に、前記複合体において、例えば、別のＴＬＲペプチドアゴニスト及び／又は成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチド、及び／又は成分ｂ）、即ち、抗原又は抗原エピトープと共有結合していると理解される。
特に好ましい実施形態では、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む。特に、この特に好ましい実施形態では、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含み、記載されている前記１つのＴＬＲペプチドアゴニストを除いてＴＬＲアゴニスト特性を有する更なる成分を含まない。
前記複合体に含まれる様々なＴＬＲペプチドアゴニストは、同じであっても異なっていてもよい。好ましくは、前記複合体に含まれる様々なＴＬＲペプチドアゴニストは、互いに異なる。
更に、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個の抗原又は抗原エピトープ、又はより多くのＴＬＲペプチドアゴニスト、特に、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個のＴＬＲアゴニストは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において連続して位置することが好ましい。これは、特に、複合体に含まれている全てのＴＬＲアゴニストが、成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチドも成分ｂ）、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープも介在することなしに一続きに位置することを意味する。むしろ、成分ａ）及び成分ｂ）は、複合体において、例えば、かかる一続きの全てのＴＬＲペプチドアゴニストの前又は後に位置する。しかし、このように連続して位置するＴＬＲアゴニストは、例えば、成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチドも成分ｂ）、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープでもない下記スペーサ又はリンカーによって互いに結合していてよい。
しかし、様々なＴＬＲペプチドアゴニストは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において任意の他の方式で位置していてもよく、例えば、２以上のＴＬＲペプチドアゴニスト間に成分ａ）及び／又は成分ｂ）が位置する、即ち、成分ａ）と成分ｂ）との間に１以上のＴＬＲペプチドアゴニストが位置し（逆も同様である）、そして、任意で、成分ａ）及び／又は成分ｂ）のそれぞれの他端に１以上のＴＬＲペプチドアゴニストが位置していてもよい。
有利なことに、同じ又は異なるＴＬＲ受容体を活性化する多数の異なるＴＬＲペプチドアゴニストが、単一の複合体に含まれていてよいことが理解される。或いは、同じ又は異なるＴＬＲ受容体を活性化する多数の異なるＴＬＲペプチドアゴニストが、異なる複合体に含まれる同じ又は異なるＴＬＲ受容体を活性化する異なるＴＬＲペプチドアゴニストのサブセットに分布していてもよく、それによって、有利なことに、異なるサブセットを含むかかる異なる複合体を、例えば単一のワクチンで、それを必要としている被験体に同時に投与することができる。
複合体における成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の結合
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、共有結合している、即ち、前記複合体の３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つの間の結合は、共有結合である。好ましくは、前記複合体の３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つは、互いに共有結合しており（即ち、「第１」及び「第２」の成分）、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの第３の成分は、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの第１の成分又は３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの第２の成分のいずれかと共有結合している。それによって、好ましくは、直鎖状分子が形成される。しかし、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）はそれぞれ、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの他の両成分に共有結合しているとも考えられる。
「共有結合」（共有連結ともいう）は、本発明の状況において使用するとき、原子間で電子対を共有することを必要とする化学結合を指す。「共有結合」（共有連結ともいう）は、特に、電子を共有するときに原子間の引力及び斥力の安定なバランスを必要とする。多くの分子について、電子を共有することにより、各原子が、安定な電子配位に対応する完全外殻の等価物を得ることができるようになる。共有結合としては、例えば、σ結合、π結合、金属間結合、アゴスチック相互作用、及び三中心二電子結合を含む多くの種類の相互作用が挙げられる。したがって、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、「化合物」と称する場合もあり、特に、「分子」と称することもある。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体では、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、当技術分野において公知の任意の好適な方法、例えば、架橋法において化学カップリングによって共有結合している。しかし、多くの公知の化学的架橋法は非特異的である、即ち、カップリング点を成分ａ）、ｂ）、及びｃ）における任意の特定の部位にすることができないという事実が注目を集めている。したがって、非特異的架橋剤の使用によって、機能的部位が攻撃されたり、活性部位が立体的にブロックされたりすることがあり、その結果、前記複合体の融合成分が生物学的に不活性になる。適切な保護基を用いることによって潜在的反応性基をブロックするという当業者の知見を参照する。或いは、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の架橋に適用可能な化学選択的実体である強力且つ汎用的なオキシム及びヒドラゾンライゲーション技術を使用してもよい。この結合技術は、例えば、Ｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４），ＪＡＣＳ １１６，３０に記載されている。
成分ａ）、ｂ）、及び／又はｃ）において１回だけ又は数回みられ、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの別の成分に架橋するはずの官能基に対する直接化学カップリングによってカップリング特異性を増大させることができる。一例として、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）中にシステイン残基が１つだけ存在する場合、システインチオール基を用いてよい。また、例えば、特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）がリジン残基を含有しない場合、一級アミンに特異的な架橋試薬は、それぞれの成分のアミノ末端に対して選択的になる。或いは、架橋は、その側鎖を通してアミド結合が生成され得るように、ペプチドのＮ末端に位置するグルタミン酸残基の側鎖を介して実施してもよい。したがって、特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）のＮ末端にグルタミン酸残基を結合させることが有利であり得る。しかし、システイン残基を特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）に導入する場合、そのＮ末端若しくはＣ末端に又はこれらの近傍に導入することが好ましい。１以上の追加のアミノ酸、例えば、特にシステイン残基を転位配列に付加するか又はそれぞれの成分に含まれる転位配列の少なくとも１つの残基を置換することによる特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）の改変に基づいてかかるアミノ酸配列を変更するために従来の方法を利用可能である。システイン側鎖をカップリング目的のために用いる場合、特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）は、好ましくは、１つのシステイン残基を有する。好ましくは、任意の第２のシステイン残基を避けるべきであり、前記複合体に含まれるそれぞれの成分に第２のシステイン残基が存在しているとき、任意で置換してもよい。特定の成分ａ）、ｂ）、又はｃ）のオリジナル配列におけるシステイン残基を置換するとき、典型的には、それぞれの成分のペプチドの折り畳みにおける変化を最小化することが望ましい。置換物が化学的且つ立体的にシステインと類似しているとき、折り畳みにおける変化が最小化される。したがって、システインの置換物としてはセリンが好ましい。
３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つのカップリングは、ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ、ＤＩＣＩ、ＴＢＴＵ等の標準的なペプチド合成カップリング試薬を含むカップリング剤又はコンジュゲート剤を介して実施することができる。幾つかの分子間架橋剤を利用することもできる。例えば、Ｍｅａｎｓ ａｎｄ Ｆｅｅｎｅｙ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｈｏｌｄｅｎ－Ｄａｙ，１９７４，ｐｐ．３９－４３を参照。中でも、これら試薬は、例えば、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）若しくはＮ，Ｎ’－（１，３－フェニレン）ビスマレイミド；Ｎ，Ｎ’－エチレン－ビス－（ヨードアセトアミド）、又は６個～１１個の炭素メチレン架橋を有する他のかかる試薬；並びに１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンである。この目的のために有用な他の架橋剤としては、ｐ，ｐ’－ジフルオロ－ｍ，ｍ’－ジニトロジフェニルスルホン；ジメチルアジピミデート；フェノール－１，４－ジスルホニルクロリド；ヘキサメチレンジイソシアネート若しくはジイソチオシアネート、又はアゾフェニル－ｐ－ジイソシアネート；グルタルアルデヒド及びジスジアゾベンジジンが挙げられる。架橋剤は、ホモ二官能性であってよい、即ち、同じ反応を受ける２つの官能基を有していてよい。好ましいホモ二官能性架橋剤は、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）である。ＢＭＨは、２つのマレイミド官能基を含有し、これらは穏やかな条件（ｐＨ６．５～７．７）下でスルフヒドリル含有化合物と特異的に反応する。２つのマレイミド基は、炭化水素鎖によって接続される。したがって、ＢＭＨは、システイン残基を含有するタンパク質（又はポリペプチド）の不可逆的架橋にとって有用である。架橋剤は、ヘテロ二官能性であってもよい。ヘテロ二官能性架橋剤は、２つの異なる官能基、例えば、それぞれ遊離アミン及びチオールを有する２つのタンパク質を架橋するアミン反応性基及びチオール反応性基を有する。ヘテロ二官能性架橋剤の例は、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、及びスクシンイミド－４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、ＭＢＳの伸長鎖アナログである。これら架橋剤のスクシンイミジル基は、一級アミンと反応し、チオール反応性マレイミドは、システイン残基のチオールと共有結合を形成する。架橋剤は、水に対する可溶性が低いことが多いので、スルホネート基等の親水性部分を架橋剤に付加して水溶性を改善してもよい。スルホ－ＭＢＳ及びスルホ－ＳＭＣＣは、水溶性について改変された架橋剤の例である。多くの架橋剤によって、細胞条件下で本質的に切断不可能なコンジュゲートが得られる。したがって、一部の架橋剤は、細胞条件下で切断可能な共有結合、例えば、ジスルフィドを含有する。例えば、トラウト試薬、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ＤＳＰ）、及びＮ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）は、周知の切断可能な架橋剤である。切断可能な架橋剤の使用によって、前記複合体に含まれる細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを、標的細胞への送達後に互いに分離させることができる。この目的のために、直接ジスルフィド結合も有用であり得る。化学的架橋は、スペーサアームの使用を含んでいてもよい。スペーサアームは、分子内可撓性を提供するか又はコンジュゲートされる分子間の分子内距離を調整して、生物学的活性の維持を支援し得る。スペーサアームは、スペーサアミノ酸、例えば、プロリンを含むタンパク質（又はポリペプチド）部分の形態であってよい。或いは、スペーサアームは、例えば、「長鎖ＳＰＤＰ」（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，カタログ番号２１６５１ Ｈ）等において架橋剤の一部であってよい。上で論じたものを含む多数の架橋剤は、市販されている。それを使用するための詳細な説明書は、商業的供給元から容易に入手可能である。前記複合体に含まれる成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の結合の状況において有用なタンパク質の架橋及びコンジュゲートの調製に関するより詳細な情報は、Ｗｏｎｇ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ－Ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）から検索することができる。
ペプチド又はタンパク質を架橋させるための架橋剤としては、例えば、（ｉ）アミン－アミン間架橋剤、例えば、短い、長い、切断可能な、不可逆的な、膜透過性の、及び多様な細胞表面で利用可能な、一級アミンを選択的にコンジュゲートさせるためのＮＨＳエステル及びイミドエステル反応性基に基づくホモ二官能性アミン特異的タンパク質架橋剤；（ｉｉ）スルフヒドリル－炭化水素間架橋剤、例えば、コンジュゲート及び共有結合性架橋の形成のためのマレイミド及びヒドジド反応性基に基づく架橋剤；（ｉｉｉ）スルフヒドリル－スルフヒドリル間架橋剤、例えば、安定なチオエステル結合を形成するためのタンパク質とペプチドチオール（還元システイン）との選択的共有結合性コンジュゲートのためのマレイミド又はピリジルジチオール反応性基に基づくホモ二官能性スルフヒドリル特異的架橋試薬；（ｉｖ）光反応性架橋剤、例えば、二段階の活性化を介して受容体－リガンド相互作用複合体に含まれるタンパク質、核酸、及び他の分子構造をコンジュゲートさせるための、アリールアジド、ジアジリン、及び他の光反応性（光活性化）化学的ヘテロ二官能性架橋試薬；（ｖ）アミン－スルフヒドリル間架橋剤、例えば、様々な長さ及び種類のスペ－サーアームで利用可能な、タンパク質及び他の分子の一級アミン（リジン）基とスルフヒドリル（システイン）基との間をコンジュゲートさせるためのヘテロ二官能性タンパク質架橋試薬；並びに（ｖｉ）アミン－アミン間架橋剤、例えば、カルボキシル－アミン間架橋剤、例えば、カルボキシル基（グルタミン酸、アスパラギン酸、Ｃ末端）を一級アミン（リジン、Ｎ末端）にコンジュゲートさせるためのカルボジイミド架橋試薬、ＤＣＣ、及びＥＤＣ（ＥＤＡＣ）、また、アミン－コンジュゲーションのためにカルボキシレートを安定に活性化させるためのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）が挙げられる。
一般的に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において用いることができる架橋剤の例としては、Ｎ－（α－マレイミドアセトキシ）－スクシンイミドエステル、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンジルオキシ－スクシンイミド、１，４－ビス－マレイミドブタン、１，４－ビス－マレイミジル－２，３－ジヒドロキシ－ブタン、ビス－マレイミドヘキサン、ビス－マレイミドエタン、Ｎ－（β－マレイミドプロピオン酸）ヒドラジド＊ＴＦＡ、Ｎ－（β－マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル、１，８－ビス－マレイミドジエチレン－グリコール、１，１１－ビス－マレイミドトリエチレングリコール、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート、ビス（スルホスクシンイミジル）グルタレート－ｄ０、ビス（スルホスクシンイミジル）２，２，４，４－グルタレート－ｄ４、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート－ｄ０、ビス（スルホスクシンイミジル）２，２，７，７－スベレート－ｄ４、ビス（ＮＨＳ）ＰＥＧ５、ビス（ＮＨＳ）ＰＥＧ９、ビス（２－［スクシンイミドキシカルボニルオキシ］エチル）スルホン、Ｎ，Ｎ－ジシクロへキシルカルボジイミド、１－５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジメチルアジピミデート＊２ＨＣＩ、ジメチルピメリミデータ＊２ＨＣＩ、ジメチルスベリミデート＊２ＨＣｌ、ジスクシンイミジルグルタレート、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ローマント試薬）、ジスクシンイミジルスベレート、ジスクシンイミジルタータレート、ジメチル３，３’－ジチオビスプロピオンイミデート＊２ＨＣＩ、ジチオビス－マレイミドエタン、３，３’－ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸、Ｎ－（ε－マレイミドカプロン酸）ヒドラジド、Ｎ－（ε－マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル、Ｎ－（γ－マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル、Ｎ－（κ－マレイミドウンデカン酸）ヒドラジド、ＮＨＳ－ＬＣ－ジアジリン、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシ－（６－アミドカプロエート、スクシンイミジル６－（３’－［２－ピリジルジチオ］プロピオンアミド）ヘキサノエート、Ｌ－フォト－ロイシン、Ｌ－フォト－メチオニン、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）－酪酸ヒドラジド＊ＨＣＩ、２－［Ｎ２－（４－アジド－２，３，５，６－テトラフルオロベンゾイル）－Ｎ６－（６－ビオチンアミドカプロイル）－Ｌ－リジニル］エチルメタンチオスルフェート、２－｛Ｎ２－［Ｎ６－（４－アジド－２，３，５，６－テトラフルオロベンゾイル）－Ｎ６－（６－ビオチンアミドカプロイル）－Ｌ－リジニル］｝エチルメタンチオスルフェート、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルエタンアジド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルテトラオキサペンタデカンアジド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルドデカオキサノナトリアコンタンアジド、ＮＨＳ－ホスフィン、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド、２－ピリジルジチオール－テトラオキサテトラデカン－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、２－ピリジルジチオール－テトラオキサオクタトリアコンタン－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ－（ｐ－マレイミドフェニル）イソシアネート、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート、ＮＨＳ－ジアジリン、ＮＨＳ－ＳＳ－ジアジリン、Ｎ－スクシンイミジルヨードアセテート、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミド－メチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート、ＮＨＳ－ＰＥＧ２－マリエミド、ＮＨＳ－ＰＥＧ４－マリエミド、ＮＨＳ－ＰＥＧ６－マレイミド、ＮＨＳ－ＰＥＧ８－マリエミド、ＮＨＳ－ＰＥＧ１２－マリエミド、ＮＨＳ－ＰＥＧ２４－マレイミド、スクシンイミジル４－（ｐ－マレイミド－フェニル）ブチレート、スクシンイミジル－６－（β－マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン、スクシンイミジル－（４－プソラレン－８－イルオキシ）ブチレート、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート、エチレングリコールビス（スルホ－スクシンイミジルスクシネート）、Ｎ－（ε－マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル、Ｎ－（γ－マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル、Ｎ－（κ－マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル、スルホ－ＮＨＳ－ＬＣ－ジアジリン、スルホスクシンイミジル６－（３’－［２－ピリジルジチオ］プロピオンアミド）ヘキサノエート、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、スルホ－ＮＨＳ－ホスフィン、スルホスクシンイミジル６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート、スルホ－ＮＨＳ－（２－６－［ビオチンアミド］－２－（ｐ－アジドベンズアミド）、スルホ－ＮＨＳ－ジアジリン、スルホ－ＮＨＳ－ＳＳ－ジアジリン、スルホスクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾエート、スルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート、スルホスクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート、トリス－（２－マレイミドエチル）アミン（三官能性）、及びトリス－（スクシンイミジルアミノトリアセテート）（三官能性）が挙げられる。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つ間の結合は、直接であっても間接的であってもよく、即ち、２つの成分が直接隣接していてもよく、又は例えば、スペーサ又はリンカー等の複合体の更なる成分によって結合されてもよい。
結合する成分が反応性アミノ又はカルボキシ基を有する場合、直接結合は、好ましくは、アミド架橋によって実現し得る。より具体的には、結合する成分がペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である場合、ペプチド結合が好ましい。かかるペプチド結合は、結合される両成分（一方の成分のＮ末端及び他方の成分のＣ末端）を含む化学合成を用いて形成してもよく、両成分のペプチド配列全体のタンパク質合成を介して直接形成してもよく、この場合、両（タンパク質又はペプチド）成分は、好ましくは、一工程で合成される。かかるタンパク質合成法としては、例えば、これらに限定するものではないが、液相ペプチド合成法又は固体ペプチド合成法、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによる固体ペプチド合成法、ｔ－Ｂｏｃ固相ペプチド合成、Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス－（ジメチルアミノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）に基づく固相ペプチド合成等が挙げられる。或いは、エステル又はエーテル結合が好ましい。
更に、特に結合される成分がペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である場合、結合は、例えばジスルフィド架橋によって、側鎖を介して生じ得る。他の化学的性質の更なる成分、例えば、ペプチド性ではない場合の少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、同様に、ペプチド性の成分、例えば、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト、及びペプチド性である場合の少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープに結合し得る。側鎖を介する結合は、好ましくは、例えば、アミド又はエステル又はエーテル結合を介する、側鎖アミノ、チオール、又はヒドロキシル基に基づく。また、ペプチド性主鎖と別の成分のペプチド性側鎖との結合は、イソペプチド結合を介していてもよい。イソペプチド結合は、タンパク質の主鎖には存在しないアミド結合である。あるペプチド又はタンパク質のカルボキシル末端と別の（標的）ペプチド又はタンパク質におけるリジン残基のアミノ基との間に結合が形成される。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、非免疫原性部分であり、好ましくは切断可能であり、且つ成分ａ）とｂ）、及び／又は成分ａ）とｃ）、及び／又は成分ｂ）とｃ）、及び／又は連続する抗原若しくは抗原エピトープ、及び／又は連続するＴＬＲペプチドアゴニスト、及び／又は連続する細胞透過性ペプチドを結合させ、及び／又は成分ｂ）及び／又はｃ）のＣ末端部分に位置し得るスペーサ又はリンカーを任意で含んでいてもよい。リンカー又はスペーサは、好ましくは、成分を結合させ、好ましくは、切断可能であり、より好ましくは、例えば酵素的切断によって標的細胞内部で自然に切断可能であることに加えて、更なる機能を提供することができる。しかし、かかる更なる機能は、特に、免疫機能を全く含まない。特に融合タンパク質におけるリンカーに関して、更なる機能の例は、Ｃｈｅｎ Ｘ．ｅｔ ａｌ．，２０１３：Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｎｋｅｒｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｙ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に見出すことができ、ここには、例えば、インビボで切断可能なリンカーも開示されている。更に、Ｃｈｅｎ Ｘ．ｅｔ ａｌ．，２０１３：Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｎｋｅｒｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｙ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９には、様々なリンカー、例えば、可撓性リンカー及び剛性リンカー、並びに本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において有用であり得るか又は前記複合体において用いられるリンカーを設計するために有用であり得るリンカー設計ツール及びデータベースも開示されている。
前記スペーサは、ペプチドであっても非ペプチドであってもよく、好ましくは、スペーサは、ペプチドである。好ましくは、ペプチドスペーサは、約１アミノ酸、約２アミノ酸、約３アミノ酸、約４アミノ酸、約５アミノ酸、約６アミノ酸、約７アミノ酸、約８アミノ酸、約９アミノ酸、又は約１０アミノ酸からなり、より好ましくは、約１アミノ酸、約２アミノ酸、約３アミノ酸、約４アミノ酸、又は約５アミノ酸からなる。ペプチドスペーサのアミノ酸配列は、成分ａ）、ｂ）、又はｃ）のいずれかのＮ末端又はＣ末端の隣接領域のアミノ酸配列と同一であってよい。或いは、ペプチドスペーサは、前記天然隣接領域、又はエンテロキナーゼ標的部位（アミノ酸配列：ＤＤＤＫ、配列番号１６）、第Ｘａ因子標的部位（アミノ酸配列：ＩＥＤＧＲ、配列番号１７）、トロンビン標的部位（アミノ酸配列：ＬＶＰＲＧＳ、配列番号１８）、プロテアーゼＴＥＶ標的部位（アミノ酸配列：ＥＮＬＹＦＱＧ、配列番号１９）、プレシジョンプロテアーゼ標的部位（アミノ酸配列ＬＥＶＬＦＱＧＰ、配列番号２０）、ポリカチオン性アミノ酸、例えば、ポリＫ、フリン標的部位（アミノ酸配列ＲＸ（Ｒ／Ｋ）Ｒ、配列番号２１）等のプロテアーゼの公知の切断部位の配列の保存的アミノ酸置換から得られるアミノ酸配列等の非天然アミノ酸配列からなっていてもよい。特定の実施形態では、ペプチドスペーサは、Ｃｙｓ（Ｃ）残基を全く含有しない。好ましい実施形態では、リンカー配列は、少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも４０％、更により好ましくは少なくとも５０％のＧｌｙ又はβ－アラニン残基、例えば、ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ（配列番号２２）、ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ（配列番号２３）、ＧｌｙＧｌｙＧｌｙ、ＣｙｓＧｌｙＧｌｙ、又はＧｌｙＧｌｙＣｙｓ等を含有する。適切なリンカー配列は、当業者によって容易に選択及び調製することができる。前記リンカー配列は、Ｄ及び／又はＬアミノ酸で構成され得る。ペプチドスペーサの更なる例としては、アミノ酸配列ＥＱＬＥ（配列番号２４）若しくはＴＥＷＴ（配列番号２５）又はこれらの任意の保存的置換が挙げられる。
非ペプチドスペーサは、エステル、チオエステル、及びジスルフィドを含んでいてもよく、又はこれらであってもよい。
特に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、成分ａ）とｂ）、及び／又は成分ａ）とｃ）、及び／又は成分ｂ）とｃ）との間に位置するスペーサ又はリンカー、特に、ペプチドスペーサを含んでいてよい。当業者であれば、細胞透過性ペプチド及びカーゴ分子を含む複合体が内部に移行したら、細胞機構によって切断され得るように、ペプチドスペーサを選択することができる。
複合体が幾つかの抗原又は抗原エピトープを含むとき又は複合体が幾つかのＴＬＲペプチドアゴニストを含むとき、前記複合体に含まれる各抗原若しくは抗原エピトープ及び／又は各ＴＬＲペプチドアゴニストは、互いに直接結合していてもよく、又は例えば、幾つかのアミノ酸からなるペプチドスペーサ等のスペーサ又はリンカーを介して結合していてもよいことが当業者は明らかである。或いは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体が幾つかの抗原若しくは抗原エピトープを含むとき又は複合体が幾つかのＴＬＲペプチドアゴニストを含むとき、前記複合体に含まれる幾つかの抗原若しくは抗原エピトープ及び／又は幾つかのＴＬＲペプチドアゴニストが互いに直接結合しており、幾つかの他の抗原若しくは抗原エピトープ及び／又は幾つかの他のＴＬＲペプチドアゴニストが幾つかのアミノ酸からなるペプチドスペーサ等のスペーサ又はリンカーを介して結合していることも可能である。
例えば、前記複合体に含まれる２つの連続する抗原若しくは抗原エピトープ又は２つの連続するＴＬＲペプチドアゴニストは、それぞれ前記抗原若しくは抗原エピトープ又は前記ＴＬＲペプチドアゴニストの天然隣接領域からなるスペーサによって互いに結合している。例えば、第１の抗原／抗原エピトープ又は第１のＴＬＲペプチドアゴニストを、それぞれ第２の抗原／抗原エピトープ又は第２のＴＬＲペプチドアゴニストに結合させるために用いられるスペーサは、第１の抗原／抗原エピトープ又は第１のＴＬＲペプチドアゴニストのＮ末端又はＣ末端の隣接領域の約４個以下のアミノ酸と、それに続く、第２の抗原／抗原エピトープ又は第２のＴＬＲペプチドアゴニストのＮ末端又はＣ末端の隣接領域の約４個以下のアミノ酸とに対応する約８個以下のアミノ酸からなり得る。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の実例では、第１の抗原／抗原エピトープ又は第１のＴＬＲペプチドアゴニスト（「抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１」）を第２のエピトープ（「抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２」）に結合させるために用いられるスペーサは、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の０個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の８個の隣接アミノ酸から、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の８個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の０個の隣接アミノ酸に及ぶ任意の可能な組合せ（即ち、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の１個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の７個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の２個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の６個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の３個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の５個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の４個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の４個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の５個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の３個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の６個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の２個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の７個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の１個の隣接アミノ酸、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１の８個の隣接アミノ酸及び抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２の０個の隣接アミノ酸を含む）に対応する約８個のアミノ酸からなる。２つの連続する抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニストを結合するスペーサを構成する合計８個のアミノ酸は、絶対的な値ではなく、スペーサは、例えば、合計で３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、９個のアミノ酸、又は１０個のアミノ酸で構成されていてもよいことが理解される。同様に、上述の等価な組合せも、スペーサが８個未満又は８個超のアミノ酸を有する状況における複合体の実例である。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の別の特定の実例では、第１の抗原／抗原エピトープ又は第１のＴＬＲペプチドアゴニスト（「抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１」）をそれぞれ第２の抗原／抗原エピトープ又は第２のＴＬＲペプチドアゴニスト（「抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２」）に結合させるために用いられるスペーサは、例えば、１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、又は５個のアミノ酸からなる。より具体的には、前記スペーサのアミノ酸配列は、抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト１又は抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニスト２のＮ末端又はＣ末端隣接領域の４個のアミノ酸に対応し得る。上記スペーサは、前記複合体に含まれる最後の抗原／エピトープ／ＴＬＲペプチドアゴニストのＣ末端部分に位置していてもよい。
３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つを結合させる技術は、文献に明確に文書化されており、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの性質に依存し得る。例えば、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つの間の結合は、段階的固相全合成又は液相若しくは固相断片カップリング、安定なアミド、チアゾリジン、オキシム、及びヒドラジン結合、ジスルフィド結合、安定なチオマレイミド結合、ペプチド結合（融合タンパク質のアミノ酸間のペプチド結合を含む）、又は静電的若しくは疎水性相互作用を通して切断可能なジスルフィド結合を介して行ってよい。
好ましくは、前記複合体に含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び前記複合体に含まれる任意のスペーサ又はリンカーは、ペプチド性である。より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の全ての成分、例えば、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である）、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト、及び任意のペプチドリンカー又はスペーサは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体においてペプチド結合によって結合している。最も好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、したがって、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質（例えば、組み換え融合タンパク質等の融合タンパク質）である。
この状況では、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、若しくは配列番号４５にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体、又は配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、若しくは配列番号４５のいずれかと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体が好ましい。配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、若しくは配列番号４５にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体、又は配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、若しくは配列番号４５のいずれかと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体がより好ましい。配列番号２８、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、若しくは配列番号４５にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体、又は配列番号２８、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、若しくは配列番号４５と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体が更により好ましい。配列番号２８、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、若しくは配列番号４５にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体、又は配列番号２８、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、若しくは配列番号４５と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むか若しくはからなる複合体が特に好ましい。
Figure 0007189021000012
Figure 0007189021000013
複合体における成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の配置
成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において如何様に配置されてもよい。
特に、１超の細胞透過性ペプチド及び／又は１超の抗原若しくは抗原エピトープ及び／又は１超のＴＬＲペプチドアゴニストが前記複合体に含まれている場合、１超の細胞透過性ペプチドを非連続的に配置してもよい、即ち、少なくとも１つの抗原若しくは抗原エピトープ（成分ｂ））及び／又は少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト（成分ｃ））が、連続して配置されている一続きの細胞透過性ペプチドに介在していてもよい、及び／又は細胞透過性ペプチドが、成分ｂ）及び／又は成分ｃ）と交互に配置されていてもよい。同様に、１超の抗原若しくは抗原エピトープを非連続的に配置してもよい、即ち、少なくとも１つの細胞透過性ペプチド（成分ａ））及び／又は少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト（成分ｃ））が、連続して配置されている一続きの抗原若しくは抗原エピトープに介在していてもよい、及び／又は抗原若しくは抗原エピトープが、成分ａ）及び／又は成分ｃ）と交互に配置されていてもよい。同様に、１超のＴＬＲペプチドアゴニストを非連続的に配置してもよい、即ち、少なくとも１つの細胞透過性ペプチド（成分ａ））及び／又は少なくとも１つの抗原若しくは抗原エピトープ（成分ｂ））が、連続して配置されている一続きのＴＬＲペプチドアゴニストに介在してもよく、及び／又はＴＬＲペプチドアゴニストは、成分ａ）及び／又は成分ｂ）と交互に配置されていてもよい。
しかし、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において１超の細胞透過性ペプチドが連続して配置される、及び／又は本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において１超の抗原若しくは抗原エピトープが連続して配置される、及び／又は本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において１超のＴＬＲペプチドアゴニストが連続して配置されることが好ましい。これは、特に、特定の成分の全ての単一単位、即ち、前記複合体に含まれる全ての細胞透過性ペプチド、全ての抗原若しくは抗原エピトープ、又は全てのＴＬＲペプチドアゴニストが、他の２つの成分のいずれも介在せずに一続きに配置されることを意味する。むしろ、他の２つの成分は、前記複合体において、例えば、かかる一続きの前記特定の成分の全ての単一単位の前又は後に配置される。しかし、このように連続して配置される前記特定の成分の単一単位は、例えば、他の２つの成分ではない、本明細書に記載するスペーサ又はリンカーによって互いに結合され得る。
成分ａ）、ｂ）、及びｃ）がそれぞれ連続して配置されることが特に好ましい。
構造的に、各成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、典型的には、１本の主鎖及び少なくとも１本の側鎖を含む。用語「主鎖」（「骨格鎖」ともいう）は、本発明の状況において用いられるとき、分子における共有結合原子の主な連続する鎖を指す。例えば、ペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質では、主鎖（骨格）は、典型的には、ペプチド結合によって結合している構成アミノ酸のアルファ炭素原子及び窒素原子を含む。骨格は、側鎖を含まない。用語「側鎖」（「ペンダント鎖」ともいう）は、本発明の状況において使用するとき、「主鎖」又は骨格と呼ばれる分子のコア部分に結合している化学基を指す。例えば、ペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質では、側鎖は、典型的には、骨格のアルファ炭素原子に結合している、構成アミノ酸の（主な）部分を表す。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体では、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、本明細書に記載するリンカー又はスペーサを介して共有結合していてもよく、直接共有結合していてもよい。スペーサ又はリンカーが共有結合に用いられるか否かとは関係なく、原則として、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において３つの成分のうちの２つが互いに結合する方法には４つの選択肢が存在する：
（ｉ） 主鎖／主鎖結合を介する、
（ｉｉ） 主鎖／側鎖結合を介する、
（ｉｉｉ） 側鎖／主鎖結合を介する、又は
（ｉｖ） 側鎖／側鎖結合を介する。
好ましくは、３つ全ての成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、主鎖／主鎖結合を介して結合し、その結果、特に、１つ以上の細胞透過性ペプチドの主鎖、１つ以上の抗原若しくは抗原エピトープの主鎖、及び１つ以上のＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖を含む、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の主鎖が得られる。言い換えれば、１以上の細胞透過性ペプチドの主鎖、１以上の抗原若しくは抗原エピトープの主鎖、及び１以上のＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖が、任意で更なる成分（例えば、リンカー、スペーサ等）と共に、前記複合体の主鎖を構成する。したがって、特に少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である場合、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の以下の配置が好ましく、この好ましい配置を、複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向で以下に示す。３つ全ての成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、主鎖／主鎖結合を介して結合しており、任意で、リンカー、スペーサ、又は別の追加成分によって結合していてもよい：
（α） 成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）；
（β） 成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；
（γ） 成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；
（δ） 成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）；
（ε） 成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）；又は
（ζ） 成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）。
特に、３つ全ての成分ａ）、ｂ）、及びｃ）が主鎖／主鎖結合を介して結合する場合、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが細胞透過性ペプチドのＣ末端に配置されることが好ましく、細胞透過性ペプチド及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、任意で更なる成分（例えば、リンカー、スペーサ等）によって又は少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストによって結合される。したがって、これは、上記配置のうちの配置（α）、（β）、及び（γ）に対応する、即ち、上記配置のうち配置（α）、（β）、及び（γ）がより好ましい。
更により好ましくは、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは細胞透過性ペプチドのＣ末端に配置され、細胞透過性ペプチド及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、任意で更なる成分（例えば、リンカー、スペーサ等）によって結合されるが、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストによっては結合されない。したがって、これは、上記配置のうちの配置（α）及び（β）に対応する、即ち、上記配置のうち配置（α）及び（β）が更により好ましい。特に好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質であり、成分ａ）～ｃ）は、以下の順序で、前記複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向に配置される：
（α） 成分ａ）－成分ｂ）－成分ｃ）；又は
（β） 成分ｃ）－成分ａ）－成分ｂ）、
ここで、前記成分は、更なる成分、特に、リンカー又はスペーサによって結合され得る。
例えば、下記のような、少なくとも１つのＴＬＲアゴニストが少なくとも１つのＴＬＲ２アゴニストを含むか又はからなる配置（α）が特に好ましい：
（α１） 成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト；
（α２） 成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、１以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト；
（α３） 成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト；又は
（α４） 成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト。
或いは、ＴＬＲ２ペプチドアゴニストを含むかかる配置では、例えば、下記のように、複合体の他の位置に追加のＴＬＲペプチドアゴニストを配置してもよい：
（α５） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト；
（α６） １以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト；又は
（α７） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト。
例えば、下記のような、少なくとも１つのＴＬＲアゴニストが少なくとも１つのＴＬＲ４アゴニストを含むか又はからなる配置（β）が特に好ましい：
（β１） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；
（β２） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；
（β３） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；又は
（β４） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）。
或いは、ＴＬＲ４ペプチドアゴニストを含むかかる配置では、例えば、下記のように、複合体の他の位置に追加のＴＬＲペプチドアゴニストを配置してもよい：
（β５） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト；
（β６） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト；又は
（β７） １以上のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ４ペプチドアゴニスト－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－１以上のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ２ペプチドアゴニスト、及び１以上のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト、例えば、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のＴＬＲ５ペプチドアゴニスト。
或いは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つだけが主鎖／主鎖結合を介して結合される。
例えば、成分ａ）及びｂ）は、主鎖／主鎖結合を介して結合され、その結果、複合体において成分ａ）及びｂ）は以下の通り配置される（前記複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向に示す）。成分ａ）及びｂ）は、任意で、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサ等）によって結合され得る：
（１） 細胞透過性ペプチド（ａ）－抗原／抗原エピトープ（ｂ）；又は
（２） 抗原／抗原エピトープ（ｂ）－細胞透過性ペプチド（ａ）。
かかる場合、次いで、成分ｃ）、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを、主鎖／側鎖結合を介して、側鎖／主鎖結合を介して、又は側鎖／側鎖結合を介して、細胞透過性ペプチド（ａ）若しくは抗原／抗原エピトープ（ｂ）に、又は存在する場合、例えば細胞透過性ペプチド（ａ）と抗原／抗原エピトープ（ｂ）との間に配置され得るスペーサ若しくはリンカー等の追加成分に配置してよい。この配置としては、以下が挙げられる：
（ｉ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ａ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－細胞透過性ペプチドの側鎖に共有結合する；
（ｉｉ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ａ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－細胞透過性ペプチドの主鎖に共有結合する；
（ｉｉｉ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ａ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－細胞透過性ペプチドの側鎖に共有結合する；
（ｉｖ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ｂ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖に共有結合する；
（ｖ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ｂ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの主鎖に共有結合する；
（ｖｉ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ｂ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖に共有結合する；
（ｖｉｉ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ａ）と成分ｂ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ａ）と成分ｂ）との間に位置するリンカー又はスペーサの側鎖に共有結合する；
（ｖｉｉｉ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ａ）と成分ｂ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ａ）と成分ｂ）との間に位置するリンカー又はスペーサの主鎖に共有結合する；又は
（ｉｘ） 成分ｃ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ａ）と成分ｂ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ａ）と成分ｂ）との間に位置するリンカー又はスペーサの側鎖に共有結合する。
例えば、成分ｂ）及びｃ）は、主鎖／主鎖結合を介して結合され、その結果、複合体において成分ｂ）及びｃ）は以下の通り配置される（前記複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向に示す）。成分ｂ）及びｃ）は、任意で、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサ等）によって結合され得る：
（３） 抗原／抗原エピトープ（ｂ）－ＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）；又は
（４） ＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）－抗原／抗原エピトープ（ｂ）。
かかる場合、次いで、成分ａ）、即ち、細胞透過性ペプチドを、主鎖／側鎖結合を介して、側鎖／主鎖結合を介して、又は側鎖／側鎖結合を介して、抗原／抗原エピトープ（ｂ）若しくはＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）に、又は存在する場合、例えば抗原／抗原エピトープ（ｂ）とＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）の間に配置され得るスペーサ若しくはリンカー等の追加成分に配置してよい。この配置としては、以下が挙げられる：
（ｘ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ｂ）に結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖に共有結合する；
（ｘｉ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ｂ）に結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの主鎖に共有結合する；
（ｘｉｉ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ｂ）に結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖に共有結合する；
（ｘｉｉｉ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ｃ）に結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖に共有結合する；
（ｘｉｖ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ｃ）に結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖に共有結合する；
（ｘｖ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ｃ）に結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖に共有結合する；
（ｘｖｉ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ｂ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ｂ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサの側鎖に共有結合する；
（ｘｖｉｉ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ｂ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ｂ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサの主鎖に共有結合する；又は
（ｘｖｉｉｉ） 成分ａ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ｂ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、細胞透過性ペプチドの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ｂ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサの側鎖に共有結合する。
例えば、成分ａ）及びｃ）は、主鎖／主鎖結合を介して結合され、その結果、複合体において成分ａ）及びｂ）は以下の通り配置される（前記複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向に示す）。成分ａ）及びｃ）は、任意で、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサ等）によって結合され得る：
（５） 細胞透過性ペプチド（ａ）－ＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）；又は
（６） ＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）－細胞透過性ペプチド（ａ）。
かかる場合、次いで、成分ｂ）、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを、主鎖／側鎖結合を介して、側鎖／主鎖結合を介して、又は側鎖／側鎖結合を介して、細胞透過性ペプチド（ａ）若しくはＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）に、又は存在する場合、例えば細胞透過性ペプチド（ａ）とＴＬＲペプチドアゴニスト（ｃ）の間に配置され得るスペーサ若しくはリンカー等の追加成分に配置してよい。この配置としては、以下が挙げられる：
（ｘｉｘ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ａ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－細胞透過性ペプチドの側鎖に共有結合する；
（ｘｘ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ａ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－細胞透過性ペプチドの主鎖に共有結合する；
（ｘｘｉ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ａ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－細胞透過性ペプチドの側鎖に共有結合する；
（ｘｘｉｉ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ｃ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖に共有結合する；
（ｘｘｉｉｉ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ｃ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖に共有結合する；
（ｘｘｉｖ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ｃ）に結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストの側鎖に共有結合する；
（ｘｘｖ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－主鎖／側鎖結合を介して成分ａ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの主鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ａ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサの側鎖に共有結合する；
（ｘｘｖｉ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／主鎖結合を介して成分ａ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ａ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサの主鎖に共有結合する；又は
（ｘｘｖｉｉ） 成分ｂ）は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－側鎖／側鎖結合を介して成分ａ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサに結合し得る、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの側鎖は、－任意でスペーサ又はリンカーを介して－成分ａ）と成分ｃ）との間に位置するリンカー又はスペーサの側鎖に共有結合する。
或いは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体において、３つ全ての成分ａ）、ｂ）、及びｃ）を、任意で例えばスペーサ又はリンカー等の追加成分を介して、主鎖／側鎖結合を介して、側鎖／主鎖結合を介して、又は側鎖／側鎖結合を介して配置することも考えられる。
好ましい免疫チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む好ましい複合体との好ましい組合せ
上述したように、本発明にかかる使用のための好ましい組合せは、本明細書に記載の好ましい免疫チェックポイントモジュレータを含む。更に、本発明にかかる使用のための好ましい組合せは、（好ましい）細胞透過性ペプチドと、少なくとも１つの（好ましい）抗原又は抗原エピトープと、少なくとも１つの（好ましい）ＴＬＲペプチドアゴニストとを含む、本明細書に記載の好ましい複合体を含む。
本発明にかかる使用のためのより好ましい組合せは、（ｉ）本明細書に記載の好ましい免疫チェックポイントモジュレータと、（ｉｉ）（好ましい）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの（好ましい）抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つの（好ましい）ＴＬＲペプチドアゴニストを含む、本明細書に記載の複合体、とを含む。以下において、本発明にかかる使用のための好ましい組合せの好ましい実施形態を記載する。
本発明にかかる使用のための好ましい組合せにおいては、前記複合体は、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質であり、
ａ）前記細胞透過性ペプチドが、本明細書に記載される、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、若しくは配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しないその配列変異体を有し；
ｂ）前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、好ましくは、少なくとも１つの癌エピトープ又は腫瘍エピトープを含むか又はからなり；
ｃ）前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストである。
本発明にかかる使用のための組合せにおいては、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯのモジュレータであり、好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯの阻害剤、又はＣＤ４０の活性化剤であり、より好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯの阻害剤であり、更により好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１の阻害剤である、ことも好ましい。
本発明にかかる使用のための組合せにおいては、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯのモジュレータであり、好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯの阻害剤、又はＣＤ４０の活性化剤であり、より好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、及び／又はＩＤＯの阻害剤であり、更により好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、及び／又はＰＤ－１の阻害剤である、ことも好ましい。
例えば、本発明にかかる使用のための好ましい組合せにおいては、
－前記複合体が、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質であり、
ａ）前記細胞透過性ペプチドが、本明細書に記載される、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、若しくは配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しないその配列変異体を有し；
ｂ）前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、好ましくは、少なくとも１つの癌エピトープ又は腫瘍エピトープを含むか又はからなり；
ｃ）前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであり、
－前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＤ４０経路、ＣＴＬＡ－４経路、及び／又はＰＤ－１経路のモジュレータであり、特に、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＤ４０の活性化剤又はＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、及び／又はＰＤ－１の阻害剤であり、より好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、及び／又はＰＤ－１の阻害剤であり、更により好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１の阻害剤である。
例えば、本発明にかかる使用のための好ましい組合せにおいては、
－前記複合体が、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質であり、
ａ）前記細胞透過性ペプチドが、本明細書に記載される、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、若しくは配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しないその配列変異体を有し；
ｂ）前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、好ましくは、少なくとも１つの癌エピトープ又は腫瘍エピトープを含むか又はからなり；
ｃ）前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであり、
－前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＤ４０経路、ＣＴＬＡ－４経路、ＬＡＧ３経路、及び／又はＰＤ－１経路のモジュレータであり、特に、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＣＤ４０の活性化剤又はＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、及び／又はＰＤ－１の阻害剤であり、より好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、及び／又はＰＤ－１の阻害剤であり、更により好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータが、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４、及び／又はＰＤ－１の阻害剤である。
本明細書に記載される使用のための好ましい組合せにおいては、特に、上述した使用ための好ましい組合せにおいては、１超の免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが好ましく、特に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられ、２、３、４、又は５個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが好ましく、２、３、又は４個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることがより好ましく、２又は３個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが更により好ましく、２個の異なる免疫チェックポイントモジュレータ（例えば、チェックポイント阻害剤）が用いられることが最も好ましい。
好ましくは、少なくとも（ｉ）ＣＴＬＡ－４経路の阻害剤、特に、ＣＴＬＡ－４の阻害剤と（ｉｉ）ＰＤ－１経路の阻害剤、特に、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、又はＰＤ－Ｌ２の阻害剤が用いられ、好ましくは、少なくとも（ｉ）ＣＴＬＡ－４の阻害剤と（ｉｉ）ＰＤ－１の阻害剤が用いられる。
医療における使用
本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、医療における使用のためのものである。
本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体とのこのような組み合わせは、チェックポイントモジュレータの有効性を開始又は強化することができる。更に、本明細書に記載されるそのような組合せは、同時に（ｉ）多エピトープ細胞傷害性Ｔ細胞介在性免疫を刺激し、（ｉｉ）Ｔｈ細胞を誘導し、（ｉｉｉ）免疫記憶を促進することによって、強力で長期間の（抗腫瘍）免疫を生成する。再発、特に腫瘍の再発を防ぐためには、免疫学的記憶が不可欠である。まとめると、本発明は、免疫応答を開始する、可能にする、強化する、又は改善することができる、特に、チェックポイントモジュレータに対する被験体の応答又は腫瘍の応答を可能にする、強化する、又は改善する、本明細書に記載の組合せを提供する。
本発明にかかる使用のための組合せは、種々の疾患において有用であり得る。好ましくは、本明細書に記載の組合せは、癌、感染性疾患、自己免疫障害、血液学的疾患、及び移植拒絶反応などの、免疫療法によって治療することができる疾患又は障害などの予防、治療、又は安定化のための（医薬の調製のための）使用のためのものである。したがって、癌、感染性疾患、自己免疫障害、血液学的疾患、及び移植拒絶反応などの、免疫療法によって治療することができる疾患又は障害の予防、治療、又は安定化における使用のための、本明細書に記載の組合せが好ましい。
本発明の状況においては、特に好ましくは、本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と組合せは、癌の予防及び／又は治療に使用される。
用語「疾患」は、本発明で使用するとき、正常機能を障害し、典型的には特徴的な徴候及び症状によって顕在化し、且つヒト又は動物の生存期間又は生活の質を低下させるヒト又は動物の身体又はその部分のうちの１つの異常な状態を全て反映しているという点で、用語「障害」及び「病態」（医学的状態のように）と概して同義であり、互換的に用いられることを意図する。
本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せを使用することによって治療及び／又は予防される疾患としては、癌、血液学的障害、感染性疾患、自己免疫障害、及び移植拒絶反応が挙げられる。したがって、癌及び感染性疾患の治療及び／又は予防が好ましく、癌の治療及び／又は予防がより好ましい。癌、脳の悪性新生物、又はリンパ組織、造血組織、及び関連組織の悪性新生物が好ましく、神経膠芽腫がより好ましい。
好ましくは、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、不完全なアポトーシスによって引き起こされる疾患、好ましくは、聴神経鞘腫、肛門癌腫、星状細胞腫、基礎細胞癌、ベーチェット症候群、膀胱癌、芽腫、骨癌、脳転移、脳腫瘍、脳癌（神経膠芽腫）、乳癌（乳房癌腫）、バーキットリンパ腫、カルチノイド、頸癌、結腸癌腫、結腸直腸癌、内体癌腫、頭蓋咽頭腫、ＣＵＰ症候群、子宮内膜癌腫、胆嚢癌、泌尿生殖管の癌を含む生殖器腫瘍、神経膠芽腫、神経膠腫、頭部／頸部腫瘍、ヘパトーム、組織球増殖性リンパ腫、ホジキン症候群又はリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫、下垂体腫瘍、小腸癌の腫瘍を含む腸癌、及び胃腸癌、カポージ肉腫、腎臓癌、腎臓癌腫、喉頭癌又はこう頭癌；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、赤白血病、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む白血病；眼瞼腫瘍、肝臓癌、肝臓転移、肺癌腫（＝肺癌＝気管支癌腫）、小細胞肺癌腫及び非小細胞肺癌腫、及び肺腺癌、リンパ腫、リンパ腺癌、悪性黒色腫、乳房癌腫（＝乳癌）、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、菌状息肉腫、新生物性疾患鞘腫、食道癌、食道癌腫（＝食道癌）、希突起神経膠腫、卵巣癌（＝卵巣癌腫）、卵巣癌腫、膵臓癌腫（＝膵臓癌）、陰茎癌、ペニス癌、咽頭癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、前立腺癌（＝前立腺腫瘍）、直腸癌腫、直腸腫瘍、腎臓癌、腎臓癌腫、網膜芽腫、肉腫、シュナイダー病；基底細胞及び扁平上皮癌腫、並びに乾癬を含む皮膚癌、例えば黒色腫又は非黒色腫皮膚癌；尋常性天疱瘡、軟組織腫瘍、棘細胞腫、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌腫、舌癌、尿道癌、子宮癌、膣癌；様々なウイルス誘導性腫瘍、例えば乳頭腫ウイルス誘導性癌腫（例えば、子宮頸癌腫＝子宮頸癌）、腺癌、ヘルペスウイルス誘導性腫瘍（例えば、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘導性Ｂ細胞リンパ腫、頸癌腫）、Ｂ型肝炎誘導性腫瘍（肝細胞癌腫）、ＨＴＬＶ－１及びＨＴＬＶ－２誘導性リンパ腫；外陰部癌、いぼ状態又は合併症などから選択される疾患を含む癌又は腫瘍疾患の予防、治療、及び／又は寛解（のための医薬を調製するため）に使用することができる。本状況では、用語「療法」及び「療法的」は、好ましくは、生体に投与されたとき少なくとも幾つかの最低限の生理学的効果を有することを意味する。例えば、「療法的」抗腫瘍化合物を投与したときの生理学的効果は、腫瘍成長の阻害、又は腫瘍の大きさの減少、又は腫瘍の再発防止であり得る。好ましくは、癌又は新生物性疾患の治療において、腫瘍成長を阻害するか、腫瘍の大きさを減少させるか、又は腫瘍の再発を防止する化合物が、療法的に有効であるとみなされる。したがって、用語「抗腫瘍薬」は、好ましくは、腫瘍、新生物性疾患、又は癌に対する療法的効果を有する任意の療法剤を意味する。
本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せによって治療される癌の例としては、脳癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、肺癌、肝臓癌、腎臓癌、メラノーマ、腸癌腫、肺癌腫、頭頸部扁平上皮癌腫、慢性骨髄白血病、結腸直腸癌腫、胃癌腫、子宮内膜癌腫、骨髄性白血病、肺扁平上皮癌腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、膀胱腫瘍、前骨髄球性白血病、非小細胞肺癌腫、肉腫が挙げられる。最も好ましくは、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、結腸直腸癌を治療するために用いられる。
癌は、固形腫瘍、血液癌、又はリンパ性癌であり得る。癌は、良性又は転移性であり得る。
好ましくは、予防及び／又は治療される癌は、神経膠腫であり、より好ましくは、高浸潤性多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）である。神経膠腫は、成人における原発性脳腫瘍の最も頻度の高い形態であり、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）の予後が最も悪い。この腫瘍は、高い浸潤性及び攻撃的挙動で悪名高い。特に、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、神経膠腫、より具体的には高浸潤性ＧＢＭに対する既存の治療法と併用することができる。Ｔリンパ球は、脳内の新生細胞を能動的に捜し出すことができ、周囲の健常組織に損傷を与えることなしに特異的腫瘍細胞を安全に排除する能力を有する。
更に、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、感染性疾患、好ましくは、ウイルス、レトロウイルス、細菌、又は原生動物の感染性疾患の予防、治療、及び／又は寛解（のための医薬の調製）のために用いることができる。かかる感染性疾患は、典型的には、ＡＩＤＳ、炭疽、日本脳炎、細菌感染性疾患、例えば、流産（前立腺炎症）、炭疽、虫垂炎、ボレリア症、ボツリスム、カンピロバクター、トラコーマクラミジア（尿道の炎症、結膜炎）、コレラ、ジフテリア、ドノヴァン症、喉頭蓋炎、チフス熱、ガス壊疽、淋病、野兎熱、ヘリコバクターピロリ、百日咳、鼠径リンパ肉芽腫、骨髄炎、レジオネラ症、鶏痘、尖圭コンジローム、巨細胞性ウイルス（ＣＭＶ）、デング熱、初夏髄膜脳炎（ＥＳＭＥ）、エボラウイルス、風邪、第五病、口蹄疫、単純ヘルペスＩ型、単純ヘルペスＩＩ型、帯状ヘルペス、ＨＳＶ、寄生虫、原生動物、又は真菌により引き起こされる感染性疾患、例えば、アメーバ症、ビルハルツ住血吸虫症、シャーガス病、エキノコックス、魚類条虫類、魚毒（シグアテラ）、キツネ条虫類、汗疱状白癬、イヌ条虫類、カンジダ症、酵母菌斑、疥癬、皮膚リーシュマニア症、ラムブル鞭毛虫症（ジアルジア鞭毛虫症）、シラミ、オンコセルカ症（河川盲目症）、真菌性疾患、ウシ条虫類、住血吸虫症、ブタ条虫類、トキソプラスマ症、トリコモナス症、トリパノソーマ症（睡眠病）、内臓リーシュマニア症、おむつかぶれ／おむつ皮膚炎又は小条虫類、感染性紅斑、インフルエンザ、カポージ肉腫、ラッサ熱、リーシュマニア症、らい病、リステリア症、ライムボレリア症、マラリア、マルブルクウイルス感染、麻疹、細菌性髄膜炎を含む髄膜炎、伝染性軟属腫、単核細胞症、流行性耳下腺炎、マイコプラズマホミニス、新生児敗血症（絨毛羊膜炎）、水癌、ノーウォークウイルス感染、中耳炎、パラチフス、プファイファー腺熱、悪疫、肺炎、ポリオ（灰白髄炎、小児跛行）、偽性クループ、狂犬病、ライタン症候群、ロッキー山紅斑熱、サルモネラパラチフス、サルモネラチフス、ＳＡＲＳ、猩紅熱、帯状疱疹、肝炎、痘瘡、軟性下疳、梅毒、破傷風、三日熱、トリッパー（ｔｒｉｐｐｅｒ）、ツツガムシ病、ヒト型結核菌、チフス、膣炎（膣の炎症）、以下のウイルスにより引き起こされるウイルス性疾患、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、オルソポックス属痘瘡ウイルス、オルソポックス属アラストリムウイルス、ヒツジパラポックスウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヘルペスＢウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、ヒト巨細胞ウイルス、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型、エプスタイン－バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、チクングニヤウイルス、オニョンニョンウイルス、ルビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＧＢウイルスＣ、西ナイルウイルス、デング熱ウイルス、黄熱病ウイルス、跳躍病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、Ｂ型日本脳炎ウイルス、ポーワッサンウイルス、ＦＳＭＥウイルス、ＳＡＲＳ、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ、ヒトコロナウイルスＯｃ４３、トロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩＩ型、ＨＩＶ（ＡＩＤＳ）、即ち、ヒト免疫不全ウイルス１型又はヒト免疫不全ウイルス２型、インフルエンザウイルス、ラッサウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、タカリベウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、ボルナ病ウイルス、ブニヤムウェラウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、サシチョウバエ熱ウイルス、トスカーナウイルス、クリミア－コンゴ出血性熱ウイルス、ハザラウイルス、ハサンウイルス、ハンターンウイルス、ソウルウイルス、プロスペクトヒルウイルス、プーマラウイルス、ドブラバベオグラードウイルス、トゥーラウイルス、シンノンブルウイルス、ビクトリア湖マルブルクウイルス、ザイールエボラウイルス、スーダンエボラウイルス、コートジボアールエボラウイルス、インフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイルスＢ型、インフルエンザウイルスＣ型、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ＲＳウイルス、ヒトメタニューモウイルス、水疱性口内炎インディアナウイルス、狂犬病ウイルス、モコラウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス１＋２型、オーストラリアコウモリリッサウイルス、アデノウイルスＡ－Ｆ型、ヒトパピローマウイルス、コンジロームウイルス６型、コンジロームウイルス１１型、ポリオーマウイルス、アデノ関連ウイルス２型、ロタウイルス、又はオルビウイルス、水痘帯状疱疹を含む水痘、及びマラリア原虫（熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、二日熱マラリア原虫）、ＡＩＤＳなどのウイルス感染性疾患、尖圭コンジロームにより引き起こされる感染性疾患、中空いぼ、デング熱、三日熱、エボラウイルス、風邪、初夏髄膜脳炎（ＦＳＭＥ）、流感、帯状疱疹、肝炎、単純ヘルペスＩ型、単純ヘルペスＩＩ型、帯状ヘルペス、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、マルブルクウイルス、いぼ、西ナイル熱、黄熱病等から選択される。
感染性疾患の更に好ましい例としては、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、及び多細胞寄生虫によって引き起こされる疾患が挙げられる。これらとしては、例えば、アメーバ症、炭疽、ブルーリ潰瘍（マイコバクテリウム・ウルセランス）、カリシウイルス関連下痢症、カンピロバクター下痢症、子宮頸癌（ヒトパピローマウイルス）、クラミジア・トラコマチス関連生殖器疾患、コレラ、クリミア・コンゴ出血熱、デング熱、ジフテリア、エボラ出血熱、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）下痢症、胃癌（ヘリコバクター・ピロリ）、淋病、Ａ群ストレプトコッカス関連疾患、Ｂ群ストレプトコッカス関連疾患、ヘモフィルスインフルエンザＢ菌による肺炎及び侵襲性疾患、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｅ型肝炎下痢症、単純ヘルペス２型外陰部潰瘍、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、鉤虫症、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、リーシュマニア症、レプトスピラ症、肝癌（Ｂ型肝炎）、肝癌（Ｃ型肝炎）、ライム病、マラリア、マールブルグ出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、上咽頭癌（エプスタイン・バーウイルス）、髄膜炎菌髄膜炎、パラインフルエンザ関連肺炎、百日咳、ペスト、灰白髄炎、狂犬病、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）肺炎、リフトバレー熱、ロタウイルス下痢症、風疹、住血吸虫症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、細菌性赤痢、天然痘、黄色ブドウ球菌関連疾患、胃癌（ヘリコバクター・ピロリ）、肺炎球菌及び侵襲性疾患、破傷風、ダニ媒介脳炎、トラコーマ、結核、野兎病、腸チフス、西ナイルウイルス関連疾患、黄熱病が挙げられる。
更に、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、自己免疫障害、例えば、ＣＮＳの自己免疫疾患、自己炎症性疾患、セリアック病、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス等の予防、治療、及び／又は寛解（のための医薬の調製）のために用いることができる。典型的には、自己免疫疾患は、体内に通常存在する物質及び組織に対する身体の異常な免疫応答（自己免疫）から生じる。これは、特定の器官に限定されていてもよく（例えば、自己免疫性甲状線炎）、様々な箇所における特定の組織で発症していてもよい（例えば、肺及び腎臓の両方の基底膜で発症し得るグッドパスチャー病）。自己免疫疾患は、過敏症Ｉ型（即ち、自家血清によって誘導されるじんましん）、ＩＩ型、ＩＩＩ型、又はＩＶ型の対応する種類によって分類され得る。
自己免疫疾患の例としては、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、癌、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、慢性再発性多巣性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素病、補体成分２欠乏症、接触性皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、びまん性全身性皮膚硬化症、ドレスラー症候群、ループス、円板状エリテマトーデス、湿疹、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病ともいう、運動ニューロン疾患）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、抗合成酵素症候群、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性末梢ニューロパチー、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌腺症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、バロー病／バロー同心円性硬化症、ベーチェット病、ベルガー病、ビッカースタッフ脳炎、子宮内膜症、付着部炎関連関節炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、胎児赤芽球症、エヴァンズ症候群、化骨性線維異形成、線維化性肺胞炎（又は特発性肺線維症）、胃炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、妊娠性類天疱瘡、化膿性汗腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（自己免疫性血小板減少性紫斑病）、ＩｇＡ腎症、眼瘢痕性類天疱瘡、封入体筋炎、関節リウマチ、慢性炎症性リウマチ熱、脱髄性多発ニューロパチー、サルコイドーシス、回帰性リウマチ、間質性膀胱炎、若年性特発性精神分裂病、ＰＡＮＤＡＳ（若年性自己免疫関節リウマチとしても知られている小児関節炎）、シュミット症候群、ＡＰＳの別の形態である精神神経性川崎病、シュニッツラー症候群、傍腫瘍性小脳筋無力症症候群、白血球破壊性血清病、扁平苔癬、シェーグレン症候群、硬化性苔癬、パーソナージュ・ターナー、線状ＩｇＡ病、スティル病、尋常性天疱瘡、ルポイド肝炎、自己免疫性肝炎、全身硬直症候群、悪性貧血、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、ＰＯＥＭＳ症候群、エリテマトーデス、スイート症候群、交感性眼炎、メニエール病、全身性狼瘡、原発性胆汁性肝硬変、ミラー・フィッシャー症候群、高安動脈炎、胆道炎、進行性炎症性ニューロパチー、ムッハ・ハーベルマン病、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、多発性硬化症、赤芽球癆、ラスムッセン脳炎、重症筋無力症、横断性脊髄炎、レイノー現象、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性大腸炎、筋炎、特発性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、視神経脊髄炎、デビック病、及び神経性筋強直症が挙げられる。
更に、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、典型的には血液が主に罹患する障害である血液学的障害の予防、治療、及び／又は寛解（のための医薬の調製）のために用いることができる。したがって、血液悪性腫瘍が好ましい。
血液学的疾患の例としては、骨髄の障害、例えば、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビン分子又はヘモグロビン合成速度の先天性異常）、例えば、鎌状赤血球症、地中海貧血症、メトヘモグロビン血症；貧血（赤血球細胞又はヘモグロビンの欠損）、例えば、鉄欠乏性貧血、ビタミンＢ１２欠乏症を含む巨大赤芽球性貧血、悪性貧血、及び葉酸欠乏症、ＲＢＣ膜の遺伝性障害（例えば、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、及び先天性赤血球異形成貧血）を含む溶血性貧血（赤血球細胞の破壊）、ＲＢＣ代謝の遺伝性障害（例えば、グルコース－６－リン酸脱水素酵素欠乏症（Ｇ６ＰＤ）及びピルビン酸キナーゼ欠乏症）、免疫介在性溶血性貧血（直接クームス試験が陽性である）（例えば、温式抗体自己免疫性溶血性貧血（例えば、特発性全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びエバンス症候群（抗血小板抗体及び溶血抗体）等）及び冷式抗体自己免疫性溶血性貧血（例えば、特発性寒冷凝集素症候群、伝染性単核球症、及び発作性寒冷ヘモグロビン尿症）を含む自己免疫溶血性貧血、新生児溶血性疾患（ＨＤＮ）（例えば、Ｒｈ病（ＲｈＤ）、新生児ＡＢＯ型溶血性疾患、新生児抗Ｋｅｌｌ溶血性疾患、新生児Ｒｈｃ型溶血性疾患、新生児ＲｈＥ型溶血性疾患、及び他の血液型不適合（ＲｈＣ、Ｒｈｅ、Ｋｉｄ、Ｄｕｆｆｙ、ＭＮ、Ｐ、及びその他）を含む同種免疫溶血性貧血、ペニシリン型（高用量）及びメチルドーパ型を含む薬剤惹起性免疫性溶血性貧血、異常ヘモグロビン症（即ち、不安定な又は結晶質のヘモグロビンが存在する）、発作性夜間血色素尿症（赤血球表面タンパク質の稀な後天性クローナル障害）、微小血管症性溶血性貧血及び二次→人工弁を含むＲＢＣに対する直接物理的損傷、ファンコニー貧血、ダイアモンド－ブラックファン貧血（遺伝性赤芽球癆）、及び後天性赤芽球癆等の再生不良性貧血；細胞数の減少、例えば、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、及びヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）を含む、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、好中球減少症（好中球数の減少）、無顆粒球症、グランツマン血小板無力症、及び血小板減少症（血小板数の減少）；骨髄増殖性疾患（細胞数の増加）、例えば、真性多血症（全体的な細胞数の増加）、赤血球増加症（赤血球数の増加）、白血球増加症（白血球数の増加）、血小板増加症（血小板数の増加）、及び骨髄増殖性障害；凝固障害（出血及び凝固の障害）、例えば、血小板増加症、再発性血栓症、播種性血管内凝固、血友病Ａ、血友病Ｂ（クリスマス病としても知られている）、及び血友病Ｃ等の血友病、フォンビルブランド病、播種性血管内凝固、プロテインＳ欠乏症、及び抗リン脂質症候群を含む凝固タンパク質の障害；並びに血小板減少症、グランツマン血小板無力症、及びウィスコット－アルドリッチ症候群を含む血小板の障害が挙げられる。更に、血液学的疾患の例としては、血液悪性腫瘍、例えば、ホジキン病及び非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）、未分化大細胞リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫，及び血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＬＴ）を含むリンパ腫；多発性骨髄腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、及び形質細胞腫等の骨髄腫；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性特発性骨髄線維症（ＭＦ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｔ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病（Ｔ－ＬＧＬ）、及び侵攻性ＮＫ細胞性白血病等の白血病を含む血液悪性腫瘍も挙げられる。更に、血液学的疾患の例としては、ヘモクロマトーシス、無脾症、脾機能亢進症（例えば、ゴーシェ病）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、血球貪食性リンパ組織球症、及びＴｅｍｐｉ症候群を含む種々の血液学的疾患も挙げられる。更に、血液学的疾患の例としては、慢性疾患の貧血性、伝染性単核球症、ＡＩＤＳ、マラリア、及びリーシュマニア症を含む非血液学的障害に続いて生じる血液学的変化も挙げられる。
更に、本明細書に記載される免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、移植拒絶反応（例えば、移植片対宿主反応）の予防、治療、及び／又は寛解（のための医薬の調製）のために用いることができる。移植拒絶反応としては、移植片の超急性拒絶反応、急性拒絶反応、及び慢性拒絶反応が挙げられる。移植拒絶反応の例としては、皮膚、腎臓、心臓、肺、膵臓、肝臓、血液細胞、骨髄、角膜、事故で切断された四肢、特に、指、手、足、顔、鼻、骨、心臓弁、血管、又は腸の移植拒絶反応が挙げられる。
一般に、「本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せ」は、本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータによる治療を、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体による治療と組み合わせることを意味する。換言すれば、一方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体）が、例えば、他方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体の他方）と同日に投与されなくても、それらの治療スケジュールは、典型的には絡み合っている。このことは、本発明の状況における「組合せ」は、特に、他方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体の他方）による治療が終了した後に、一方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体）による治療を開始することを含まないことを意味する。「終了した」治療とは、特に、活性成分がもはやその効果を発揮しないことを意味する。即ち、「治療」は、特に、活性成分がその効果を発揮する期間に応じて、活性成分の最後の投与の数分後、数時間後、又は数日後に終了することができる。より一般的には、前記チェックポイントモジュレータと前記複合体との「絡み合った」治療スケジュール、即ち、前記チェックポイントモジュレータと前記複合体との組合せは、以下を意味する。
（ｉ）複合体の最初の投与（即ち、複合体による完全な治療）が開始する前の１週間を超えて（好ましくは３日間を超えて、より好ましくは２日間を超えて、更により好ましくは１日間を超えて）、チェックポイントモジュレータの全ての投与（即ち、完全なチェックポイントモジュレータ治療）が完了するとは限らない；又は
（ｉｉ）チェックポイントモジュレータの最初の投与（即ち、完全なチェックポイントモジュレータ治療）が開始する前の１週間を超えて（好ましくは３日間を超えて、より好ましくは２日間を超えて、更により好ましくは１日間を超えて）、複合体の全ての投与（即ち、複合体による完全な治療）が完了するとは限らない。
例えば、本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せにおいて、一方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体）は、１週間に１回投与し、他方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体の他方）は、１ヶ月間に１回投与することができる。この例において、本発明の意味における「組合せ」を達成するためには、１週間に１回投与される他の成分が投与されるのと同じ週に、１ヶ月間に１回投与される成分を少なくとも１回投与する。
上述したように、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータ及び／又は複合体の投与は、複数回の連続投与、例えば、複数回の注射を必要とする場合がある。したがって、投与は、例えば、一次免疫注射として１回、及びその後に追加免疫注射として１回の少なくとも２回繰り返してよい。
特に、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータ及び／又は複合体は、繰り返し又は連続的に投与してよい。本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータ及び／又は複合体は、少なくとも１週間、２週間、３週間、若しくは４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、８ヶ月間、１０ヶ月間、若しくは１２ヶ月間、又は２年間、３年間、４年間、若しくは５年間の期間に亘って繰り返し又は連続的に投与してよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、１日間に２回、１日間に１回、２日間毎、３日間毎、１週間に１回、２週間毎、３週間毎、１ヶ月間に１回、又は２ヶ月間毎に投与してよい。例えば、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、１日間に２回、１日間に１回、２日間毎、３日間毎、１週間に１回、２週間毎、３週間毎、１ヶ月間に１回、又は２ヶ月間毎に投与してよい。好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、例えば、１週間に１回又は２週間毎に（１回）繰り返し投与してよい。
本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との、本発明にかかる使用のための組合せにおいては、免疫チェックポイントモジュレータと複合体は、好ましくは、ほぼ同時に投与される。
本明細書中で使用される「ほぼ同時に」は、特に、同時投与を意味するか、又は免疫チェックポイントモジュレータの投与直後に複合体が投与される、若しくは、複合体の投与直後に免疫チェックポイントモジュレータが投与されることを意味する。当業者であれば、「直後」が、第２投与の準備に必要な時間、特に、第２投与のための場所の曝露及び消毒、並びに「投与装置」（例えば、注射器、ポンプなど）の適切な調整に必要な時間を含むことを理解しよう。同時投与はまた、チェックポイントモジュレータと複合体の投与期間が重複する場合、又は、例えば、一方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体）が注入などによって、３０分間、１時間、２時間、又はそれ以上の期間などのより長い期間に亘って投与され、他方の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体）が、そのような長い期間のある時点で投与される場合も含む。異なる投与経路及び／又は異なる投与部位を用いる場合、免疫チェックポイントモジュレータと複合体のほぼ同時での投与が特に好ましい。
本明細書に記載の免疫チェックポイントモジュレータと、本明細書に記載の、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との、本発明にかかる使用のための組合せにおいて、免疫チェックポイントモジュレータ及び複合体は、連続的に投与されるも好ましい。例えば、免疫チェックポイントモジュレータは、好ましくは、複合体の前に投与される。免疫チェックポイントモジュレータが、複合体の後に投与されることも好ましい。
連続投与では、第１の成分（チェックポイントモジュレータ又は複合体）の投与と第２の成分（チェックポイントモジュレータと複合体の他方）の投与との間の時間は、好ましくは１週間以下、より好ましくは３日間以下、更により好ましくは２日間以下、最も好ましくは２４時間以下である。チェックポイントモジュレータ及び複合体は、第１の成分（複合体のチェックポイントモジュレータ）の投与と第２の成分（チェックポイントモジュレータ及び複合体の他方）の投与との間の時間が、好ましくは６時間以下、より好ましくは３時間以下、更により好ましくは２時間以下、最も好ましくは１時間以下である同日に投与されることが特に好ましい。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータ及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体は、治療的に有効な量で投与される。本明細書で使用される「治療的に有効な量」とは、治療される疾患又は状態の症状の緩和及び／又は予防される疾患又は状態の症状の予防に十分な量である。換言すれば、「治療的に有効な量」は、疾患又は障害の正の変化を有意にもたらすのに十分な複合体及び／又はチェックポイントモジュレータの量、即ち、対象としている組織、系、動物、又はヒトにおいて生物学的又は医学的応答を誘導する複合体及び／又はチェックポイントモジュレータの量を意味する。この用語はまた、疾患の進行を低減する、特に、腫瘍成長又は感染を低減又は阻害し、求められている応答を誘導する（特に、そのような応答は、複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープに対する免疫応答であり得る）のに十分な複合体及び／又は免疫チェックポイントモジュレータの量も含む（即ち、「阻害有効量」）。しかし、同時に、「治療的に有効な量」は、重篤な副作用を回避するのに十分少ない、即ち、利点とリスクとの間の合理的な関係を可能にするのに十分少ないことが好ましい。これらの限度の決定は、通常、合理的な医学的判断の範囲内にある。複合体及び／又はチェックポイントモジュレータの「治療的に有効な量」は、更に、治療される特定の状態及び治療される患者の年齢及び身体的状態、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、排出速度、併用薬、具体的成分（チェックポイントモジュレータ及び複合体）の活性、状態の重篤度、治療の持続時間、付随する療法の性質、使用される特定の薬学的に許容し得る担体の性質、及び同様の因子に関連して、医師の知識及び経験の範囲内で変わる。
したがって、個体に単回用量又は複数回用量として投与される投薬量は、薬物動態特性、被験体の状態及び特徴（性別、年齢、体重、健康、身長）、症状の程度、併用療法、治療の頻度、及び望ましい効果を含む様々な要因に依存して変動する。
好ましくは、癌治療の場合、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の治療的に有効な用量は、約０．００１ｍｇ～約１０ｍｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ～約５ｍｇ、より好ましくは注射１回当たり約０．１ｍｇ～約２ｍｇ、又は注射１回当たり約０．０１ｎｍｏｌ～１ｍｍｏｌ、特に、注射１回当たり１ｎｍｏｌ～１ｍｍｏｌ、好ましくは、注射１回当たり１μｍｏｌ～１ｍｍｏｌである。また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体の治療的に有効な用量（体重１ｋｇ当たり）は、特に癌治療の場合、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、更により好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇであることが好ましい。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータの治療的に有効な用量（体重１ｋｇ当たり）は、特に癌治療の場合、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、更により好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、例えば、全身又は局所投与など、各種投与経路で投与することができる。全身投与のための経路としては、一般的に、例えば、経皮経路、経口経路、非経口経路（皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、及び腹腔内注射、及び／又は鼻腔内投与経路を含む）が挙げられる。局所投与のための経路としては、一般的に、例えば、局部投与経路だけでなく、腫瘍内投与など、患部に直接投与することも挙げられる。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、非経口投与経路で投与される。より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、静脈内、腫瘍内、皮内、皮下、筋肉内、鼻腔内、又は節内経路で投与される。更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、静脈内及び／又は皮下投与される。また、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、皮内及び／又は皮下投与されることがより好ましい。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、同一の投与経路で投与される、好ましくは同一の非経口投与経路で投与される、より好ましくは静脈内又は皮下投与される。
しかし、より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、異なる投与経路で投与され、好ましくは異なる非経口投与経路で投与され、より好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータが静脈内投与され、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体が腫瘍内、皮内、皮下、筋肉内、鼻腔内、又は節内経路で投与され、好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体が皮下投与される。更により好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータが静脈内投与される、及び／又は本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体が皮下又は皮内投与される。
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、同一又は異なる組成物に設けることができる。
好ましくは、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体及び本発明にかかる使用のための組合せに含まれる免疫チェックポイントモジュレータは、異なる組成物に設けられる。これにより、各種他の成分、例えば、各種ビヒクルを、前記複合体と前記チェックポイントモジュレータのために用いることができる。更に、前記複合体と前記免疫チェックポイントモジュレータは、各種投与経路で投与することができ、それらの用量（特に、用量の関係）は、実際の必要に応じて調整することができる。
しかし、前記免疫チェックポイントモジュレータ及び前記複合体は、同一の組成物に設けられることも好ましい。両者、即ち、前記免疫チェックポイントモジュレータ及び前記複合体を含むそのような組成物について、以下、より詳細に説明する（「本発明にかかる組成物」）。
組成物が前記免疫チェックポイントモジュレータのみを含むか（前記複合体は含まない）、前記複合体のみを含むか（前記チェックポイントモジュレータは含まない）、又はその両方を含むかにかかわらず、かかる組成物は、医薬組成物及び／又はワクチン組成物であってもよい。
特に、前記免疫チェックポイントモジュレータのみを含むか（前記複合体は含まない）、前記複合体のみを含むか（前記チェックポイントモジュレータは含まない）、又はその両方を含むそのような組成物は、任意で、薬学的に許容し得る担体及び／又はビヒクル、又は任意の賦形剤、バッファ、安定剤、若しくは当業者に周知の他の物質とを含む（医薬）組成物であることが好ましい。
更なる成分として、前記（医薬）組成物は、特に、薬学的に許容し得る担体及び／又はビヒクルを含んでいてよい。本発明の状況では、薬学的に許容し得る担体は、典型的には、前記（医薬）組成物の液体又は非液体基剤を含む。前記（医薬）組成物が液体形態で提供される場合、担体は、典型的には、パイロジェンフリー水；等張生理食塩水又は緩衝（水性）溶液、例えば、リン酸、クエン酸等の緩衝溶液である。特に前記（医薬）組成物を注射する場合、ナトリウム塩、好ましくは少なくとも３０ｍＭのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは少なくとも０．０５ｍＭのカルシウム塩、及び任意でカリウム塩、好ましくは少なくとも１ｍＭのカリウム塩を含有する水又は好ましくはバッファ、より好ましくは水性バッファを使用してよい。好ましい実施形態によれば、ナトリウム塩、カルシウム塩、及び任意でカリウム塩は、ハロゲン化物、例えば、塩化物、ヨウ化物、又は臭化物の形態、水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、又は硫酸塩等の形態で存在し得る。以下に限定されるものではないが、ナトリウム塩の例としては、例えば、ＮａＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＳＯ４が挙げられ、任意のカリウム塩の例としては、例えば、ＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢｒ、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＳＯ４が挙げられ、カルシウム塩の例としては、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＩ２、ＣａＢｒ２、ＣａＣＯ３、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＯＨ）２が挙げられる。更に、上述のカチオンの有機アニオンがバッファに含有されていてもよい。より好ましい実施形態によれば、上に定義した注射目的に好適なバッファは、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、及び任意で塩化カリウム（ＫＣｌ）から選択される塩を含有していてよく、塩化物に加えて更なるアニオンが存在していてもよい。また、ＣａＣｌ２をＫＣｌ等の別の塩によって置換してもよい。典型的には、注射用バッファ中の塩は、少なくとも３０ｍＭの塩化ナトリウムＮａＣｌ）、少なくとも１ｍＭの塩化カリウム（ＫＣｌ）、及び少なくとも０．０５ｍＭの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）の濃度で存在する。注射用バッファは、特定のレファレンス媒体に対して高張、等張、又は低張であってよい、即ち、バッファは、特定のレファレンス媒体よりも高い、同一の、又は低い塩含量を有していてよく、好ましくは、浸透圧又は他の濃度効果に起因して細胞を損傷させることのないかかる濃度の上述の塩を用いてよい。レファレンス媒体は、例えば「インビボ」法で得られる液体、例えば、血液、リンパ、サイトゾル液、若しくは他の体液、又は例えば、「インビトロ」法においてレファレンス媒体として用いることができる液体、例えば、一般的なバッファ若しくは液体である。かかる一般的なバッファ又は液体は、当業者に公知である。生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）及び乳酸加リンゲル液が液体基剤として特に好ましい。
好ましくは、本明細書に記載される前記免疫チェックポイントモジュレータ及び／又は前記複合体を含む前記（医薬）組成物は、Ｌ－アルギニンなどのアルギニンを更に含む。
しかし、１以上の相溶性固体若しくは液体の充填剤又は希釈剤又は封入成分を、治療される被験体に投与するのに好適な前記（医薬）組成物に更に使用してよい。用語「相溶性」とは、本明細書で使用するとき、典型的な使用条件下で前記（医薬）組成物の薬学的有効性を実質的に低減する相互作用が生じないように、前記（医薬）組成物のこれら構成成分を上に定義した本発明にかかる複合体と混合できることを意味する。薬学的に許容し得る担体、充填剤、及び希釈剤は、無論、治療される被験体に投与するのに好適である程度に十分に高い純度及び十分に低い毒性を有していなければならない。薬学的に許容し得る担体、充填剤、又はこれらの構成成分として用いることができる化合物の幾つかの例は、糖、例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロース；デンプン、例えば、コーンスターチ又はバレイショデンプン；セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロース；粉末トラガカント；モルト；ゼラチン；タロー；固体滑剤、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム；硫酸カルシウム；植物油、例えば、落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及びカカオ植物の油；ポリオール、例えば、ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール；アルギン酸である。
前記したように、前記（医薬）組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸内に、鼻腔内に、口腔内に、膣内に、又は移植されたリザーバを介して投与してよい。非経口という用語は、本明細書で使用するとき、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内、及び舌下注射、又は点滴技術が挙げられる。
好ましくは、前記（医薬）組成物は、非経口注射によって、より好ましくは、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内、及び舌下注射によって、又は点滴技術を介して投与してよい。前記（医薬）組成物の滅菌注射用形態は、水性又は油性の懸濁液であってよい。これら懸濁液は、好適な分散剤又は湿潤剤、及び懸濁剤を用いて当技術分野において公知の技術に従って製剤化してよい。滅菌注射用製剤は、例えば、１，３－ブタンジオール溶液として、非毒性の非経口的に許容し得る希釈剤又は溶媒の滅菌注射用溶液又は懸濁液であってもよい。特に、使用することができる許容し得るビヒクル及び溶媒は、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液である。更に、滅菌した固定油が溶媒又は懸濁媒体として従来使用されている。この目的のために、合成モノ－又はジ－グリセリドを含む任意の銘柄の固定油を使用してよい。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体等の脂肪酸が注射剤の調製において有用であるが、その理由は、天然の薬学的に許容し得る油、例えば、特にポリオキシエチル化されたオリーブ油又はヒマシ油であるためである。これら油溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えば、エマルション及び懸濁液を含む薬学的に許容し得る剤形の製剤化において一般的に用いられるカルボキシメチルセルロース又は類似の分散剤等を含有していてもよい。他の一般的に用いられる界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ、及び他の乳化剤、又は薬学的に許容し得る固体、液体、若しくは他の剤形の製造において一般的に用いられるバイオアベイラビリティ増強剤を、前記（医薬）組成物の製剤化の目的のために用いてもよい。
静脈内、皮膚、若しくは皮下注射、又は患部における注射の場合、活性成分は、好ましくは、パイロジェンフリーであり且つ好適なｐＨ、等張性、及び安定性を有する非経口的に許容し得る水溶液の形態である。当業者は、例えば、等張ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液を用いて好適な溶液を調製することが十分可能である。必要に応じて、保存剤、安定剤、バッファ、酸化防止剤、及び／又は他の添加剤を含んでいてもよい。それがポリペプチド、ペプチド、又は核酸分子、個体に投与される本発明にかかる他の薬学的に有用な化合物であろうとなかろうと、好ましくは、「治療的に有効な量」が投与され、これは、個体に対して効果を示すのに十分である。投与される実際の量、並びに投与の速度及び経時変化は、治療されるものの性質及び重篤度に依存する。
本明細書に記載の（医薬）組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤又は液剤を含むが、これらに限定されない任意の経口的に許容し得る剤形で経口投与してもよい。経口的に使用するための錠剤の場合、一般的に用いられる担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムも典型的に添加される。カプセル形態で経口投与する場合、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口的に使用するために水性懸濁剤が必要な場合、活性成分、即ち、上に定義した本発明の輸送体カーゴコンジュゲート分子を乳化剤及び懸濁化剤と合わせる。必要に応じて、特定の甘味剤、着香剤、又は着色剤を添加してもよい。
特に、治療の標的が、例えば皮膚又は任意の他のアクセス可能な上皮組織の疾患を含む、局所塗布によって容易にアクセス可能な領域又は器官を含むとき、前記（医薬）組成物を局所的に投与してもよい。これら領域又は器官のそれぞれに好適な局所製剤が容易に調製される。局所塗布の場合、前記（医薬）組成物は、１以上の担体に懸濁又は溶解している本発明の免疫刺激組成物、特に、上に定義したその成分を含有する好適な軟膏剤に製剤化してよい。局所投与のための担体としては、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。或いは、前記（医薬）組成物は、好適なローション剤又はクリーム剤に製剤化してもよい。本発明の状況では、好適な担体としては、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。
この状況では、前記（医薬）組成物を用いるときの治療法の処方、例えば、判断及び投薬量等は、典型的には、一般医及び他の医師の責任の範囲内であり、典型的には、治療する疾患、個々の患者の状態、送達部位、投与方法、及び一般医に公知の他の要因を考慮する。上述の技術及びプロトコルの例は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０に見出すことができる。
したがって、前記（医薬）組成物は、典型的には、治療的に有効な量の前記（医薬）組成物の成分、特に、前記複合体及び／又は前記チェックポイントモジュレータを含む。前記（医薬）組成物は、ヒトの医療目的、また、獣医学的目的のために用いてよく、好ましくは、ヒトの医療目的のために、広くは（医薬）組成物又はワクチンとして用いてよい。
本発明にかかる（医薬）医薬組成物、特にワクチン組成物、又は製剤は、本明細書に記載する任意の形態の、本明細書に記載する前記複合体及び／又は本明細書に記載するチェックポイントモジュレータを含有し得る医薬製剤として投与してよい。
用語「医薬製剤」及び「医薬組成物」は、本発明の状況において使用するとき、特に、活性成分の生物学的活性が明確に有効になるような形態であり且つ前記製剤が投与される被験体にとって毒性である追加成分を含有しない調製品を指す。
本発明の状況では、治療の「有効性」は、本発明にかかる使用又は方法に応答する疾患の経過の変化に基づいて測定することができる。例えば、癌の治療の有効性は、腫瘍体積の低減、及び／又は無増悪生存期間の延長、及び／又は原発性癌については摘出後の再発のリスクの減少によって測定することができる。より具体的には、免疫療法によって治療される癌の場合、有効性の評価は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ （ＲＥＣＩＳＴ）及びＷｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ （ＷＨＯ）ｃｒｉｔｅｒｉａ（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．２０１０，１０２（１８）：１３８８－１３９７）を改変した新規免疫関連応答基準（ｉｒＲＣ）を通して免疫療法剤についての抗腫瘍応答の臨床パターンのスペクトルによって行うことができる。感染性疾患の予防の有効性は、最終的に、血清中の中和抗体の力価及び多機能性病原体特異的Ｔ細胞応答の誘導と相関していることが多い、ヒト集団における疫学的研究によって評価される。前臨床評価は、感染性病原体で刺激した後の感染に対する抵抗性を含んでいてよい。感染性疾患の治療は、病原体特異的抗体及び／又はＴ細胞免疫応答と相関する、病原体の成長の阻害又は病原体の排除（延いては、病原体が検出されないこと）によって測定することができる。
本発明にかかる（医薬）組成物、特にワクチン組成物、又は製剤は、本明細書に記載する任意の形態の本明細書に記載する複合体をロードした抗原提示細胞を含有し得る医薬製剤として投与してもよい。
本発明にかかるワクチン及び／又は組成物は、特に、従来使用されているアジュバント、免疫調節物質、担体、希釈剤、又は上記若しくは下記賦形剤と共に、（医薬）組成物及びその単位剤形として製剤化してもよく、かかる形態では、錠剤若しくは充填カプセル剤等の固体として、又は液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤等の液体として、又はそれを充填したカプセル剤として（これらは全て経口用）、或いは注射又は持続点滴による非経口（皮下及び皮内を含む）用の滅菌注射用溶液の形態で使用してよい。
本発明の状況において、特に、本発明にかかる（医薬）組成物及びワクチンの状況において、注射用組成物は、典型的には、注射用滅菌生理食塩水若しくはリン酸緩衝生理食塩水、又は当技術分野において公知の他の注射用担体に基づく。かかる（医薬）組成物及びその単位剤形は、追加の活性化合物又は原理を用いて又は用いずに、従来の比率で成分を含んでいてよく、また、かかる単位剤形は、意図された使用される日用量範囲と同等の任意の好適な有効量の活性成分を含有し得る。
本発明の状況において好適なアジュバント及び／又は免疫調節物質の例としては、ＭＰＬ（登録商標）（Ｃｏｒｉｘａ）、アルミニウム化合物（一般的にＡｌｕｍと呼ばれる）を含むアルミニウム系鉱物、ＡＳＯ１－４、ＭＦ５９、リン酸カルシウム、リポソーム、イスコム、安定型ポリ－ＩＣＬＣ（ヒルトノール）を含むポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐｏｌｙＩＣ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、モンタニド、ポリラクチド－コ－グリコリド（ＰＬＧ）、フラジェリン、シャボンノキサポニン（ＱＳ２１）、アミノアルキルグルコサミド化合物（例えば、ＲＣ５２９）、合成オリゴデオキシヌクレオチドを含む二成分抗菌ペプチド（例えば、ＩＣ３１）、イミキモド、レシキモド、免疫刺激性配列（ＩＳＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、及び線維芽細胞刺激リポペプチド（ＦＳＬ１）が挙げられる。
本発明にかかる組成物、特に、医薬組成物及びワクチンは、水性又は油性の懸濁剤、液剤、乳剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない液体製剤であってよい。組成物は、また、使用前に水又は他の好適なビヒクルで再構成するための乾燥製品として製剤化してもよい。かかる液体調製品は、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル、及び保存剤が挙げられるが、これらに限定されない添加剤を含有していてよい。懸濁剤としては、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、及び水素添加された食用脂が挙げられるが、これらに限定されない。乳化剤としては、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、及びアラビアゴムが挙げられるが、これらに限定されない。保存剤としては、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル又はプロピル、及びソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。分散剤又は湿潤剤としては、ポリ（エチレングリコール）、グリセロール、ウシ血清アルブミン、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｓｐａｎ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明にかかる組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、移植又は筋肉内注射によって投与し得るデポー製剤として製剤化してもよい。
本発明にかかる組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、従来通り製剤化された錠剤又はロゼンジ剤の形態であり得る固体組成物であってもよい。例えば、経口投与するための錠剤及びカプセル剤は、結合剤、充填剤、滑沢剤、崩壊剤、及び湿潤剤が挙げられるが、これらに限定されない従来の賦形剤を含有していてよい。結合剤としては、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプン糊、及びポリビニルピロリドンが挙げられるが、これらに限定されない。充填剤としては、ラクトース、糖、微結晶性セルロース、コーンスターチ、リン酸カルシウム、及びソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、及びシリカが挙げられるが、これらに限定されない。崩壊剤としては、バレイショデンプン及びデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。湿潤剤としては、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。錠剤は、当技術分野において周知の方法に従ってコーティングしてよい。
本発明にかかる組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、持続放出形態又は持続放出薬物送達系で投与してもよい。
更に、本発明にかかる組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、反復投与による送達に適応させてもよい。
本発明にかかる組成物、特に医薬組成物及びワクチンの状況において、又はその調製の状況において有用な更なる材料及び製剤加工技術等は、“Ｐａｒｔ ５ ｏｆ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ “Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ”に記載されている。
本発明にかかるキット
更なる態様では、本発明は、また、
（ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
（ｉｉ）複合体と、を含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合しているキット、特に、キットオブパーツを提供する。
特に、本発明にかかるそのようなキットは、（ｉ）前記免疫チェックポイントモジュレータ（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）及び（ｉｉ）前記複合体（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）を含む。即ち、前記免疫チェックポイントモジュレータ（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）の好ましい実施形態は、本発明にかかる前記キットにおいても好ましい。したがって、前記複合体（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）の好ましい実施形態は、本発明にかかる前記キットにおいても好ましい。
前記キットの様々な成分は、１以上の容器に包装してよい。前記成分は、凍結乾燥形態又は乾燥形態で提供されてもよく、好適なバッファに溶解していてもよい。例えば、前記キットは、前記免疫チェックポイントモジュレータを含む（医薬）組成物と、前記複合体を含む（医薬）組成物とを、例えば、各組成物が別の容器に入った状態で含んでよい。また、前記キットは、両者、即ち、前記免疫チェックポイントモジュレータ及び前記複合体を含む（医薬）組成物を含んでよい。
前記キットは、例えば、保存剤、成長培地、及び／又は上記成分の保存用及び／又は再構成用のバッファ、洗浄溶液等を含む追加の試薬を含んでいてよい。
更に、本発明にかかるキットオブパーツは、任意で、使用説明書を含んでいてよい。好ましくは、前記キットは、本明細書に記載の疾患（例えば、癌など）を、前記免疫チェックポイントモジュレータと前記複合体との組合せを用いて治療するための指示を含むパッケージインサート又はラベルを更に含む。
そのようなキットは、好ましくは、本明細書に記載する医療、特に、本明細書に記載する癌の予防及び／又は治療において使用するためのものであってよい。
更に、本発明は、本明細書に記載する免疫チェックポイントモジュレータを含む医薬組成物と、本明細書に記載する複合体を含む医薬組成物（特に、ワクチン）（これらの医薬組成物は同一であっても異なっていてもよい）と、前記医薬組成物又は前記ワクチンの使用のための指示とを含む、疾患（例えば、癌又は感染性疾患など）を治療、予防、及び／又は安定させるためのワクチンキットも提供する。
本発明にかかる組成物
更なる態様では、本発明は、また、
（ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
（ｉｉ）複合体と、を含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合している組成物を提供する。
特に、本発明にかかるそのようなキットは、（ｉ）前記免疫チェックポイントモジュレータ（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）及び（ｉｉ）前記複合体（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）を含む。即ち、前記免疫チェックポイントモジュレータ（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）の好ましい実施形態は、本発明にかかる前記組成物においても好ましい。したがって、前記複合体（本発明にかかる使用のための組合せの文脈における）の好ましい実施形態は、本発明にかかる前記組成物においても好ましい。
更に、前記免疫チェックポイントモジュレータ及び前記複合体を含む組成物、並びにそのような組成物の好ましい実施形態は、（本発明にかかる使用のための組合せの文脈において）前記した通りである。同一の記載、特に、前記組成物について前記した同一の好ましい実施形態が、ここで記載する組成物に当てはまることが理解される。
したがって、前記組成物は、好ましくは、薬学的に許容し得る担体を含む。そのような薬学的に許容し得る担体の好ましい例は、前記した通りである。
前記組成物は、また、少なくとも２つの異なる複合体を含むことが好ましい。更に、好ましい組成物は、少なくとも２つの異なるチェックポイントモジュレータを含む。
そのような組成物は、好ましくは、本明細書に記載する医療において使用するためのものであってよく、特に、本明細書に記載する癌の予防及び／又は治療において使用するためのものであってよい。
更に、前記組成物は、ワクチンであることが好ましい。
本発明の状況において使用するとき、用語「ワクチン」は、典型的には、特定の疾患、好ましくは癌に対する自然免疫及び／又は適応免疫を提供する生物学的製剤を指す。したがって、ワクチンは、特に、治療される被験体の免疫系の自然及び／又は適応免疫応答を支援する。例えば、前記複合体の抗原又は抗原エピトープは、典型的には、治療される患者における適応免疫応答を導くか又は支援し、前記複合体のＴＬＲペプチドアゴニストは、自然免疫応答を導くか又は支援し得る。
前記ワクチンは、本発明の医薬組成物について以下に定義する薬学的に許容し得る担体、アジュバント、及び／又はビヒクルも含み得る。前記ワクチンの特定の状況では、薬学的に許容し得る担体の選択は、原則として、本発明のワクチンを投与する方法によって決定される。本発明のワクチンは、例えば、前記したように全身又は局所投与してよい。より好ましくは、ワクチンは、静脈内、皮内、皮下、又は筋肉内経路で投与してよい。したがって、前記ワクチンは、好ましくは、液体（又は時には固体）形態に製剤化される。前記ワクチンの好適な量は、動物モデルを用いたルーチンな実験によって決定することができる。かかるモデルとしては、全く限定するものではないが、ウサギ、ヒツジ、マウス、ラット、イヌ、及び非ヒト霊長類のモデルが挙げられる。注射用の好ましい単位剤形は、水、生理学的食塩水、又はこれらの混合物の滅菌溶液を含む。かかる溶液のｐＨは、約７．４に調整しなければならない。注射に好適な担体としては、ヒドロゲル、制御又は遅延放出用装置、ポリ乳酸、及びコラーゲンマトリクスが挙げられる。局所的に塗布するための好適な薬学的に許容し得る担体としては、ローション、クリーム、ゲル等において使用するのに好適なものが挙げられる。本発明のワクチンを経口投与する場合、錠剤、カプセル剤等が好ましい単位剤形である。経口投与のために用いることができる単位剤形を調製するための薬学的に許容し得る担体は、関連技術において周知である。その選択は、本発明の目的にとってそれほど重要ではない味、コスト、及び貯蔵性等の副次的検討事項に依存し、当業者であれば容易に行うことができる。
前記ワクチンは、その免疫原性を更に増大させるために、１以上の補助物質を更に含有していてもよい。それによって、好ましくは、上に定義した本発明の複合体と、任意で上記本発明のワクチンに含有され得る補助物質との相乗作用が得られる。様々な種類の補助物質に応じて、これに関する様々な機序を考慮することができる。例えば、樹状細胞（ＤＣ）を成熟させる化合物、例えば、リポ多糖、又はＴＮＦ－アルファが、好適な補助物質の第１の分類を形成する。一般的に、本発明に従って免疫刺激アジュバントによって生じる免疫応答を標的として強化する及び／又は影響を与えることができる、「危険シグナル」（ＬＰＳ、ＧＰ９６等）又はサイトカイン、例えば、ＧＭ－ＣＳＦのように免疫系に影響を与える任意の剤を補助物質として使用することができる。特に好ましい補助物質は、自然免疫応答を更に促進するサイトカイン、例えば、モノカイン、リンホカイン、インターロイキン、又はケモカイン、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＦＮ－アルファ、ＩＦＮ－ベータ、ＩＦＮ－ガンマ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＬＴ－ベータ、又はＴＮＦ－アルファ、成長因子、例えば、ｈＧＨである。
前記ワクチンに含まれ得る更なる添加剤は、乳化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）；湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム；着色剤；味付与剤；医薬担体；錠剤成形剤；安定剤；酸化防止剤；保存剤である。
本発明のワクチンは、任意の更なる化合物を更に含んでいてもよく、これは、ヒトＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０に対する（リガンドとしての）結合親和性に起因して、又はマウスＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、若しくはＴＬＲ１３に対する（リガンドとしての）結合親和性に起因して、免疫刺激性であることが知られている。
この状況において前記ワクチンに添加し得る化合物の別の分類は、ＣｐＧ核酸、特に、ＣｐＧ－ＲＮＡ又はＣｐＧ－ＤＮＡであってよい。ＣｐＧ－ＲＮＡ又はＣｐＧ－ＤＮＡは、一本鎖ＣｐＧ－ＤＮＡ（ｓｓＣｐＧ－ＤＮＡ）、二本鎖ＣｐＧ－ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＣｐＧ－ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ－ＲＮＡ）、又は二本鎖ＣｐＧ－ＲＮＡ（ｄｓＣｐＧ－ＲＮＡ）であってよい。ＣｐＧ核酸は、好ましくは、ＣｐＧ－ＲＮＡの形態、より好ましくは、一本鎖ＣｐＧ－ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ－ＲＮＡ）の形態である。ＣｐＧ核酸は、好ましくは、少なくとも１以上の（分裂促進的）シトシン／グアニンジヌクレオチド配列（ＣｐＧモチーフ）を含有する。第１の好ましい変形例によれば、これら配列に含有される少なくとも１つのＣｐＧモチーフ、特に、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）及びＧ（グアニン）は、メチル化されていない。任意でこれら配列に含有される全ての更なるシトシン又はグアニンは、メチル化されていてもよく、メチル化されていなくてもよい。しかし、更に好ましい変形例によれば、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）及びＧ（グアニン）は、メチル化形態で存在していてもよい。
好ましくは、前記（医薬）組成物、特に前記ワクチンは、例えば癌、血液学的障害、感染性疾患、自己免疫障害、及び移植拒絶反応を含む疾患又は障害（癌が好ましい）の予防及び／又は治療において使用するためのものである。
好ましくは、また、前記（医薬）組成物、特に前記ワクチンは、疾患又は障害、特に免疫療法によって治療することができる障害、例えば、癌、感染性疾患、自己免疫障害、及び移植拒絶反応に罹患している被験体、好ましくは哺乳類被験体、最も好ましくはヒト被験体を治療する方法を提供する。
核酸分子
別の態様においては、本発明は、（ポリ）ペプチド又はタンパク質である、本発明にかかる前記免疫チェックポイントモジュレータ及び／又は（ポリ）ペプチド又はタンパク質、特に、融合（ポリ）ペプチド又は融合タンパク質である、本発明にかかる前記複合体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子も提供する。最も好ましくは、前記核酸（分子）は、少なくとも、本明細書に記載する例示複合体又はその機能的配列バリアントをコードする。したがって、前記核酸（分子）は、最も好ましくは、配列番号２６～３２又は４１～４５のいずれかにかかるアミノ酸配列、又は配列番号２６～３２又は４１～４５のいずれかと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を共有するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む。
核酸分子及び／ポリヌクレオチドの例としては、例えば、組み換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子、又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子などが挙げられる。
用語「ベクター」は、核酸分子、好ましくは、組み換え核酸分子、即ち、自然界には存在しない核酸分子を指す。本発明の状況におけるベクターは、所望の核酸配列を組み込むか又は保有するのに好適である。かかるベクターは、ストレージベクター、発現ベクター、クローニングベクター、トランスファーベクター等であってよい。ストレージベクターは、核酸分子を便利に保存することができるベクターである。したがって、前記ベクターは、前記した本発明にかかる所望の複合体などに対応する配列、及び／又は前記した本発明にかかる所望の免疫チェックポイントモジュレータなどに対応する配列を含んでよい。発現ベクターは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、又はペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質等の発現産物を生成するために用いることができる。例えば、発現ベクターは、ベクターの一続きの配列、例えば、プロモータ配列の転写に必要な配列を含んでいてよい。クローニングベクターは、典型的には、核酸配列をベクターに組み込むために用いることができるクローニングサイトを含有するベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであってよい。トランスファーベクターは、細胞又は生物、例えば、ウイルスベクターに核酸分子を導入するのに好適なベクターであってよい。本発明の状況におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクター又はＤＮＡベクターであってよい。好ましくは、ベクターは、ＤＮＡ分子である。例えば、本願の意味におけるベクターは、クローニングサイト、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性因子）、及びベクターの増殖に好適な配列（例えば、複製開始点）を含む。好ましくは、本願の意味におけるベクターは、プラスミドベクターである。
特に、本発明は、
（ｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質である免疫チェックポイントモジュレータをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子と、
（ｉｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質、特に、融合（ポリ）ペプチド又は融合タンパク質である複合体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子と、を含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと、
を含むキットを提供する。
本発明にかかるそのようなキットにおいて、好ましい免疫チェックポイントモジュレータは、本明細書に記載する通りであり、好ましい複合体は、本明細書に記載する通りである。
更に、キットは、好ましくは、前記免疫チェックポイントモジュレータと前記複合体を表示する及び／又は前記免疫チェックポイントモジュレータと前記複合体との組合せを用いて癌を治療するための指示などを含むパッケージインサート又はラベルも含む。
そのようなキットは、好ましくは、医療において使用するためのもの、特に、癌の予防及び／又は治療において使用するためのものである。
前記したように、前記キットにおける前記核酸分子は、好ましくは、発現ベクターなどの前記したベクター；ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子；又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子からなる群から選択される。
本発明にかかるキットにおいて、前記免疫チェックポイントモジュレータと前記複合体は、同一核酸分子によってコードされていてよく、好ましくは、異なる核酸分子によってコードされる。
したかって、本発明は、
（ｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質である免疫チェックポイントモジュレータをコードするポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質、特に、融合（ポリ）ペプチド又は融合タンパク質である複合体をコードするポリヌクレオチドと、を含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと、
を含む核酸分子も提供する。
本発明にかかるそのようなキットにおいて、好ましい免疫チェックポイントモジュレータは、本明細書に記載する通りであり、好ましい複合体は、本明細書に記載する通りである。更に、前記核酸分子は、好ましくは、発現ベクターなどの前記したベクター；ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子；又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子からなる群から選択される。例えば、前記核酸分子は、発現ベクター又はＲＮＡ分子、例えば、前記複合体と前記免疫チェックポイント阻害剤とを２シストロン性でコードするｍＲＮＡ分子であってよい。
更に、本発明は、
（ｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質である免疫チェックポイントモジュレータをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子と、
（ｉｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質、特に、融合（ポリ）ペプチド又は融合タンパク質である複合体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子と、を含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと、
を含む組成物も提供する。
本発明にかかるそのような組成物において、好ましい免疫チェックポイントモジュレータは、本明細書に記載する通りであり、好ましい複合体は、本明細書に記載する通りである。更に、前記核酸分子は、好ましくは、発現ベクターなどの前記したベクター；ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子；又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子からなる群から選択される。
前記組成物は、更なる成分、例えば、前記複合体及び／又は前記チェックポイント阻害剤を含む本発明にかかる（医薬）組成物について前記したものも含んでよい。
本発明にかかる方法及び組合せ療法
更なる態様において、本発明は、疾患又は障害、特に免疫療法によって治療することができる障害、例えば、癌、感染性疾患、自己免疫障害、及び移植拒絶反応に罹患している被験体、好ましくは哺乳類被験体、最も好ましくはヒト被験体を治療する方法であって、前記方法が、前記被験体に、
（ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
（ｉｉ）複合体と、を投与することを含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合している複合体である方法を提供する。
特に、本発明は、それを必要としている被験体において、癌を治療する又は抗腫瘍応答を開始、強化、又は延長する方法であって、前記被験体に、
（ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
（ｉｉ）複合体と、を投与することを含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合している複合体である方法を提供する。
より一般的には、本発明は、特に本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体に含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの特異性に依存して、任意の疾患又は障害に罹患している任意の被験体に適用することができる。特に、前記複合体の治療効果は、前記抗原又は抗原エピトープに対する免疫応答、特に、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞及び／又はＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞に依存する、及び／又はＭＨＣクラスＩ分子及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子に拘束される応答を惹起することであり得、前記免疫チェックポイントモジュレータの治療効果は、前記複合体のそのような効果を可能にする又は強化することであり得る。
好ましくは、本発明にかかる被験体は、癌、例えば、脳、結腸、頭部若しくは頸部の癌、又は子宮頸癌に罹患している被験体である。より好ましくは、本発明にかかる被験体は、神経膠腫を含む脳癌に罹患している被験体である。
また、本発明にかかる被験体は、腫瘍が外科的に切除されていることも好ましい。
或いは、本発明にかかる被験体は、好ましくは、感染性疾患に罹患している被験体であり得る。
更なる態様において、本発明は、癌を予防及び／又は治療するための組合せ療法であって、前記組合せ療法が、前記被験体に、
（ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
（ｉｉ）複合体と、を投与することを含み、
前記複合体が、
ａ）細胞透過性ペプチドと、
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
を含み、
前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合している複合体である組合せ療法も提供する。
そのような組合せ療法の好ましい実施形態は、前記複合体の好ましい実施形態であり、前記免疫チェックポイントモジュレータの実施形態であり、及び／又は、より一般的には、本発明にかかる使用のための組合せの好ましい実施形態である。本発明にかかるキット及び本発明にかかる（医薬）組成物、特にワクチンを、本発明にかかる組合せ療法に用いてよい。そのような組合せ療法で治療されるべき被験体は、本発明にかかる方法に関して記載した被験体と同一であり、予防及び／又は治療されるべき疾患は、本発明にかかる使用のための組合せの文脈において前記した疾患と同一である。
以下に、本発明の様々な実施形態及び態様を説明する具体例を提示する。しかし、本発明は、本明細書に記載する特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。以下の調製及び実施例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することができるように与えられるものである。しかし、本発明は、例示される実施形態によって範囲が限定されるものではなく、前記実施形態は、本発明の１つの態様を説明することのみを意図し、機能的に等価な方法は、本発明の範囲内である。実際、本明細書に記載するものに加えて本発明の様々な変形例は、上述の記載、添付図面、及び以下の実施例から当業者に容易に明らかになる。全てのかかる変形例は、添付の特許請求の範囲の範囲内である。
実施例１：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、腫瘍成長及び生存率に対する効果
ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、癌治療における効果を評価するために、Ｅ．Ｇ７腫瘍モデルを用いた。Ｅ．Ｇ７は、ＥＬ４胸腺腫細胞系統に由来するＯＶＡトランスフェクタントである。
この目的のために、本明細書に記載する細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体である「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ」を準備した。具体的には、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ」は、細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」、ＯＶＡ－ＣＤ４＋、ｇｐ１００－ＣＤ８＋、Ｅａｌｐｈａ－ＣＤ４＋、及びＯＶＡ－ＣＤ８＋エピトープを含む抗原カーゴ「ＭＡＤ５」、及びＴＬＲペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」を含む融合タンパク質である。以下に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのアミノ酸配列を示す。細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」を下線で示し、ＴＬＲペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」をイタリック体で示す。
Figure 0007189021000014
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり７頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。５日目及び１３日目に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗体の両方を投与した場合、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、抗体をｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
図１に示すように、ＰＤ１阻害剤単独又はＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ単独での処置により、コントロール群（「アイソタイプ」）と比較して、有意に腫瘍体積が減少し（図１Ａ）、生存率が上昇した（図１Ｂ）。しかし、ＰＤ１阻害剤とＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの両方の組合せは、最も顕著な改善、即ち、腫瘍体積の大幅な減少及び生存率の大幅な上昇をもたらした。これらのデータは、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の両方の組合せが、抗ＰＤ１療法単独又はＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種単独よりも効率的であることを示す。したがって、これらの結果は、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の相乗効果を示す。
実施例２：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、Ｔ細胞のＥ．Ｇ７腫瘍部位へのホーミング及びＭＤＳＣに対する効果
Ｔ細胞の腫瘍部位へのホーミング及びＭＤＳＣ（骨髄由来のサプレッサー細胞）に対する、ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの効果を評価するために、上述の実験（実施例１）を、１群当たり８頭のマウスを用いて繰り返し、２２日目にマウスを安楽死させ、ＦＡＣＳ染色を行って、ＯＶＡ特異的免疫応答、脾臓における腫瘍微小環境、及びＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）をモニターした。
図２は、実験群（実施例１と同じ実験方法）における腫瘍成長を示す。再度、ＰＤ１阻害剤単独又はＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ単独での処置により、コントロール群（「アイソタイプ」）と比較して、有意に腫瘍体積が減少した（図２）。しかし、ＰＤ１阻害剤とＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの両方の組合せは、最も顕著な改善、即ち、腫瘍体積の大幅な減少及び生存率の大幅な上昇をもたらした。したがって、これらのデータは、実施例１の結果と一致する（図１Ａ参照）。このように、このデータは、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の両方の組合せが、抗ＰＤ１療法単独又はＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種単独よりも有効であることを裏付けており、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の相乗効果を示している。
図３は、異なる実験群（図３Ａ）についての腫瘍部位（ＴＩＬ）におけるマルチマー陽性細胞の割合（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）及びＴＩＬにおけるマルチマー陽性細胞（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）の腫瘍サイズとの相関（図３Ｂ）を示す。これらのデータは、抗原特異的Ｔ細胞がワクチン接種されたマウスにおける腫瘍部位に蓄積することを示す。マルチマー陽性細胞の最も低いパーセンテージは、コントロールマウスと、抗ＰＤ１のみで処置されたマウス（「抗ＰＤ１」群）において見出された。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａでワクチン接種されたマウスでは、マルチマー陽性細胞のパーセンテージが有意に増加し、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗ＰＤ１の両方で処置したマウスにおいて、最も強力で最も顕著な増加が観察された。更に、マルチマー陽性細胞のパーセンテージ（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）と腫瘍サイズとの間に有意な逆相関が観察された。即ち、マルチマー陽性細胞のパーセンテージ（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）がより高いほど、腫瘍はより小さい。
図４は、脾臓（図４Ａ）及びＴＩＬ（図４Ｂ）における異なる実験群についての顆粒球性ＭＤＳＣの割合（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の％）を示す。末梢（脾臓）及び腫瘍部位（ＴＩＬ）におけるコントロール群（「アイソタイプ」）で、顆粒球性ＭＤＳＣの最も高いパーセンテージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の％）が観察された。顆粒球性ＭＤＳＣの有意により低いパーセンテージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の％）が、他の全ての実験群において観察され、最も強力で最も顕著な顆粒球性ＭＤＳＣの減少が、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗ＰＤ１の両方で処置したマウスで観察された。図５は、脾臓（図５Ａ）及びＴＩＬ（図５Ｂ）における異なる実験群について、顆粒球性ＭＤＳＣのパーセンテージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の％）と腫瘍サイズとの間の有意な相関を示す。
まとめると、このＴ細胞データ及びＭＤＳＣデータは、腫瘍成長及び生存率について観察される、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の組合せの相乗効果を強く支持している。
実施例３：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの治療スケジュールの腫瘍成長に対する効果
ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの治療スケジュールの、癌治療における効果を評価するために、再度、Ｅ．Ｇ７腫瘍モデルを使用した。
第１の実験群「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」において、ＰＤ１阻害剤とＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを実施例１に記載したように投与した。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり６～７頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、マウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。それぞれのコントロール群において、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、５、９、及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。５日目及び１３日目に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗体の両方を投与した場合、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、抗体をｉ．ｐ．投与した。
第２の実験群「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」において、ＰＤ１阻害剤及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを以下のように投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり６～７頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。（第０日）。腫瘍移植後、第１実験群と同様に、マウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。しかし、第１の実験群とは異なり、第２の実験群では、２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、１７日目と２０日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。換言すれば、抗ＰＤ１治療は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ治療の終了後にのみ開始した。それぞれのコントロール群において、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、１７日目と２０日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。
結果を図６に示す。ここで、図６Ａは、第１の実験群（実施例１にしたがうプロトコル）と各コントロール群における腫瘍成長を示し、図６Ｂは、第２の実験群（Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ治療が終了した後にのみ抗ＰＤ１治療を開始した）と各コントロール群における腫瘍成長を示す。図６から分かるように、後者の治療プロトコル（即ち、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ治療が終了した後にのみ抗ＰＤ１治療を開始した）では、僅かな改善をもたらした（腫瘍成長が僅かに減少した、図６Ｂ参照）が、一方で、抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの「真の組合せ」（実施例１のプロトコル、図６Ａ参照）では、遥かに強い改善、即ち、腫瘍成長の非常に顕著な減少をもたらした。
これらのデータは、上述の実施例で観察された抗ＰＤ１療法とＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の組合せの相乗効果を更に支持する。それは、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の終了後にのみ抗ＰＤ１療法を開始した場合には、その効果が遥かに小さいからである。
実施例４：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、神経膠芽腫モデルにおける腫瘍部位でのＴ細胞ホーミングに対する効果
異なる腫瘍モデル（実施例１～３で使用したＥ．Ｇ７モデル以外）における、ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの効果を調べるために、マウス神経膠芽腫モデルを用いた。腫瘍部位におけるＴ細胞ホーミングを、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチンで２回ワクチン接種し（腫瘍移植後１週目及び３週目）、抗ＰＤ１で処置した又は処置していないＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍保有マウスにおいて分析した。４週目に、血液及び脳浸潤白血球（ＢＩＬ）を分析した。
具体的には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに０日目に５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞を頭蓋内移植した。腫瘍移植後、７日目及び２１日目に、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによりワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。７日目及び２１日目に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗体の両方を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後にｉ．ｐ．投与した。ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を、マルチマー染色（１群当たり５～８頭）により、２８日目における血液中及び脳浸潤白血球（ＢＩＬ）において定量した。
結果を図７に示す。ここで、図７Ａには、血液中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のパーセンテージが示され、図７Ｂには、ＢＩＬ中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のパーセンテージが示される。図７Ｃは、血液及びＢＩＬにおけるＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のパーセンテージのまとめを示す。これまでに見られたように、低頻度のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が、血液中で定量された。しかし、より高いパーセンテージのＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が、抗ＰＤ１で処置した又は処置しなかった、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａでワクチン接種したマウスの血液中で観察された。全ての群において、血液中よりもＢＩＬ中において、ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の著しく強い蓄積があった。重要なことに、抗ＰＤ１療法は、特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度をワクチン接種なしで４２％に上昇させることができ、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種と組み合わせた場合には、６１％にまで上昇させることができ、このことは、ワクチン接種及び抗ＰＤ１療法の相乗効果を再度示唆している。
更に、サイトカイン産生細胞のパーセンテージも評価した。この目的のために、細胞内サイトカインを、Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓ）の存在下で、６時間ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドで再刺激後に、ＩＦＮ－γに対するｍＡＢ（ＸＭＧ１．２）、腫瘍壊死因子（ＭＰ６－ＸＴ２２）、及び対応するアイソタイプコントロール（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。
結果を図８に示す。図８Ａには、ＩＦＮ－γ産生細胞のパーセンテージ（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）が示され、図８Ｂには、ＩＦＮ－γ及び／又はＴＮＦα産生細胞（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）のまとめが示される。これらのデータは、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ単独によるワクチン接種及び抗ＰＤ１単独での処置が、サイトカイン産生細胞、特にＩＦＮ－γ産生細胞のパーセンテージの上昇をもたらすことを示す。しかし、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗ＰＤ１の組合せで処置された動物において、サイトカイン産生細胞、特にＩＦＮ－γ産生細胞のパーセンテージの上昇が最も大きいことがはっきりと観察された。
まとめると、強力なエフェクタ機能を有する腫瘍保有マウスの脳における最も強いＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答が、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗ＰＤ１の組合せで処置された動物ではっきりと観察された。これらの知見はまた、神経膠芽腫モデルにおけるＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗ＰＤ１の相乗効果を示す。
実施例５：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、神経膠芽細胞腫モデルにおける生存に対する効果
次に、抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの組合せで処置したマウスの生存率を、独立した実験で神経膠芽腫モデルにおいて評価した。
この目的のために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞を０日目に頭蓋内移植した。腫瘍移植後、７、２１、及び３５日目に、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによりワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋アイソタイプ」の各群のマウスに、７、１０、１４、１７、及び２１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。７日目及び２１日目に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗体の両方を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後にｉ．ｐ．投与した。マウスの体重を毎日測定し、体重減少が１５％を超えたときに安楽死させた。
結果を図９に示す。これらの結果は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ治療ワクチン接種単独が、コントロール群よりも有効であり、生存期間中央値に１０日間の差があることを示す。再度、これら効果、即ち、生存率の上昇は、抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの組合せで最も強力である。特に、抗ＰＤ１／Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ併用療法は、神経膠芽腫の成長を制御することができる。
まとめると、抗ＰＤ１併用療法は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａによるワクチン接種の効果を増加させた。実施例４に示されるように、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａと抗ＰＤ１との組合せは、脳における抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞によるサイトカインの最も強い分泌を促進することができた。
実施例６：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、肺転移モデルにおける転移の数に対する効果
この実験では、ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せを、再度、異なる腫瘍モデル（実施例１～３で使用したＥ．Ｇ７モデル及び実施例４及び５で使用した神経膠芽腫モデル以外）で調べた。
この目的ために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１×１０５個のＢ１６－ＯＶＡメラノーマ腫瘍細胞を０日目にｉ．ｖ．移植した。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」（「ワクチン＋抗ＰＤ１」）群のマウスの右側腹部に、０日目及び１０日目に、０．５ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下注射することによりワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」（「ワクチン＋抗ＰＤ１」）及び「抗ＰＤ１」の各群のマウスに、０、３、及び７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、２００μｇのアイソタイプｍＡＢ ２Ａ３を、「アイソタイプ」群のマウスに、０、３、及び７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。０日目に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及び抗体の両方を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、ｉ．ｐ．投与した。１７日目にマウスを安楽死させ、肺を回収した。各肺について、転移巣の数を数えた。＊＊、ｐ＜０．０１（独立Ｔ検定）。
結果を図１０に示す。抗ＰＤ１単独による治療ではなく、抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａとの併用治療だけが、転移の数の有意な減少をもたらした。したがって、抗ＰＤ１及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａとの併用治療は、肺におけるメラノーマ転移の成長を阻害するのに非常に効果的であった。
実施例７：ＣＴＬＡ４阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、ＥＧ７モデルにおける腫瘍成長に対する効果
細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、異なるチェックポイント阻害剤との組合せの効果を評価するために、本実験においてＣＴＬＡ４の阻害剤を使用した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」群のマウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体９Ｄ９（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」の各群のマウスに、５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」群では、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、ｉ．ｐ．投与した。コントロールとして、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、コントロール群のマウスに５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
図１１に示されるように、ＣＴＬＡ４阻害剤単独での処置は、コントロール群と比較して腫瘍成長に如何なる効果ももたらさなかった。しかし、ＣＴＬＡ４阻害剤とＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの療法の組合せは、腫瘍体積の有意な減少をもたらした。これらのデータは、抗ＣＴＬＡ４療法及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の両方の組合せが、腫瘍成長の減少に有効である一方で、抗ＣＴＬＡ４療法単独は、如何なる効果ももたらさなかったことを示す。
実施例８：免疫チェックポイントモジュレータの投与経路の腫瘍成長に対する効果
細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、チェックポイントモジュレータとの併用療法における免疫チェックポイントモジュレータの投与経路の効果を評価するために、ＥＧ７腫瘍モデルを使用した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｓｃ」の各群のマウスの右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｉｐ」群のマウスに、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。５日目及び１３日目のそれぞれの「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４ ｓｃ」群において、１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの注射の１時間後にＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａと同一部位にｓ．ｃ．投与した。コントロールとして、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１を、「コントロール」群のマウスに５日目及び１３日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
図１２に示されるように、チェックポイントモジュレータを腹腔内投与したときに、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、チェックポイントモジュレータとの併用療法の、腫瘍成長の減少における最も顕著な効果が達成された。チェックポイントモジュレータの皮下投与も、腫瘍成長の減少をもたらしたが、その効果は、ｉ．ｐ．投与後よりも顕著ではなかった。
実施例９：ＣＴＬＡ４阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、ＣＴ２６結腸癌腫モデルにおける腫瘍成長に対する効果
この実験では、ＣＴＬＡ４阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せを、異なる腫瘍モデル（実施例７及び８で使用したＥ．Ｇ７モデル以外）で調べた。
この目的ために、マウスＣＴ２６結腸癌腫モデルを使用し、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む別の複合体を設計した（「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ」）。Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａは、抗原カーゴがＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（実施例１に記載）とは異なる。具体的には、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ」は、細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」、糖タンパク質７０のＣＤ８及びＣＤ４エピトープを含む抗原カーゴ「ＭＡＤ８」、及びＴＬＲペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」を含む融合タンパク質である。以下に、Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａのアミノ酸配列を示す。細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」を下線で示し、ＴＬＲペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」をイタリック体で示す。
Figure 0007189021000015
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群当たり７頭のマウス）の左側腹部に、２×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４」群のマウスの右側腹部に、３日目及び９日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種し、１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体９Ｄ９（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、３、６、及び９日目のそれぞれ（Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後の３日目及び９日目）でｉ．ｐ．投与した。コントロール群では、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１を、「コントロール」群のマウスに、３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
結果を図１３に示す。これらのデータは、ＣＴＬＡ４の阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せが、ＣＴ２６結腸癌腫瘍モデルにおいても腫瘍成長を制御することができることを示す。
実施例１０：細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、２つの異なる免疫チェックポイントモジュレータとの組合せの、腫瘍成長に対する効果
この実験では、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、２つの異なる免疫チェックポイントモジュレータ、即ち、ＰＤ１の阻害剤及びＣＴＬＡ４の阻害剤との組合せの効果を評価した。この実験の目的は、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体に加えて、２つの異なるチェックポイントモジュレータを含む組合せが、単一のチェックポイントモジュレータとの組合せよりも更に効果的であるか否かを決めることであった。
「床効果」及び「天井効果」を避けるために、適切な腫瘍モデルの選択に注意しなければならない。１つのチェックポイントモジュレータとの組合せの効果（例えば、腫瘍体積の減少など）を、例えば、腫瘍体積の更なる減少などにより、更に改善することができなければならないからである。したがって、ＣＴ２６結腸癌腫モデルを選択した。
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群当たり５～６頭のマウス）の左側腹部に、２×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４」及び「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」の各群のマウスの右側腹部に、３日目及び９日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａを皮下注射することによってワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」の各群のマウスに、３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。１００μｇの抗ＣＴＬＡ４抗体を、「ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」、「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４」、及び「Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ＋ａＣＴＬＡ４／ａＰＤ１」の各群に、３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。３日目及び９日目に、Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ及び抗体を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後に、ｉ．ｐ．投与した。コントロール群では、１００μｇのアイソタイプｍＡＢ ＭＰＣ－１１を、「コントロール」群のマウスに、３、６、及び９日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
結果を図１４に示す。実施例９に示されるように、Ｚ１３Ｍａｄ８ＡｎａｘａとＣＴＬＡ４阻害剤との組合せ（更なるチェックポイントモジュレータはなし）による治療は、腫瘍成長の減少をもたらした。同様に、Ｚ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａなしの、チェックポイントモジュレータ（抗ＣＴＬＡ４及び抗ＰＤ１）の組合せによる治療も、腫瘍成長の減少をもたらした。しかし、３つ全て、即ち、２つの異なるチェックポイントモジュレータ及びＺ１３Ｍａｄ８Ａｎａｘａ、の組合せは、最も顕著な改善、即ち、腫瘍体積の強力な減少をもたらした。したがって、これらのデータは、３つ全て、即ち、抗ＰＤ１療法、抗ＣＴＬＡ４療法、及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種、の組合せが、２つの成分のみの組合せよりも有効であることを示す。これらの結果は、抗ＰＤ１療法、抗ＣＴＬＡ４療法、及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種の相乗効果を示す。
実施例１１：ＣＤ４０アゴニストと、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの免疫原性
細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、再度、異なるチェックポイントモジュレータとの組合せの可能性を評価するために、ＣＤ４０を標的とするアゴニスト抗体を本実験に使用した。
この目的のために、ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり４頭）の右側腹部に、０、１４、２８、及び４２日目（０、２、４、及び６週目）に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。１００μｇの抗ＣＤ４０抗体ＦＧＫ４５（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＤ４０ ｖａｃ１」群のマウスに０日目に、「Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ＋ａＣＤ４０ ｖａｃ１及びｖａｃ２」群のマウスに０日目及び１４日目（１回目及び２回目のワクチン接種と同じ日）に、ｓ．ｃ．投与した。抗ＣＤ４０抗体を、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの注射の１時間後に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａと同じ部位にｓ．ｃ．投与した。マウスを、２１、３５、及び４９日目（３、５、及び７週目）に採血し、７週目に脾臓を評価した。マルチマー染色を血液細胞に対して行った。更に、サイトカイン産生細胞のパーセンテージも、脾臓で評価した。この目的のために、細胞内サイトカインを、Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓ）の存在下で、６時間ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドで再刺激後に、ＩＦＮ－γに対するｍＡＢ（ＸＭＧ１．２）、腫瘍壊死因子（ＭＰ６－ＸＴ２２）、ＣＤ１０７ａ（１Ｄ４Ｂ）、及び対応するアイソタイプコントロール（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。
図１５は、異なる実験群についてのマルチマー陽性細胞のパーセンテージ（ＣＤ８ Ｔ細胞の％）（図１５Ａ）及びマルチマー陽性細胞中のＫＬＲＧ１陽性細胞のパーセンテージを示す（図１５Ｂ）。全ての群は、ナイーブコントロール群と比較して有意に異なり、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａの免疫原性を裏付けている。しかし、抗ＣＤ４０抗体で更に処置した群は、より多くのマルチマー陽性細胞及びＫＬＲＧ１陽性細胞を示し、これは、抗ＣＤ４０による２回の処置を受けた群で最も顕著であった。これらの結果は、ＣＤ４０アゴニストとＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａとの組合せの、免疫原性に対する相乗効果を示す。
これらのデータは、ＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のエフェクタ機能に関する図１６及び図１７に示される結果によって支持されており、これは、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａによるワクチン接種を、アゴニスト性抗ＣＤ４０抗体による処置と組み合わせた場合に、サイトカイン産生細胞の最も強い増加を示す。
実施例１２：異なるＴＬＲアゴニストを有する複合体の、ベンチマークＥＧ．７－ＯＶＡ腫瘍モデルにおける腫瘍成長に対する有効性
この試験の目的は、異なるＴＬＲアゴニスト、即ち、「Ｚ１３」ではなく「ＥＤＡ」を有する、本明細書に記載の複合体の、腫瘍成長及び生存に対する効果について調べることであった。本試験では、複合体は、細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」と、様々な抗原由来の異なるＣＤ８＋及びＣＤ４＋エピトープからなるタンパク質「ＭＡＤ５」と、ＴＬＲ４ペプチドアゴニスト「ＥＤＡ」とを含む融合タンパク質である。したがって、Ｎ末端位置にＥＤＡペプチドを有する融合タンパク質と、Ｚ１３若しくはＥＤＡ又は両方を有しない様々なコントロールコンジュゲートタンパク質とを設計した。
即ち、以下のコンストラクトを設計した。アミノ酸配列において、細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」を下線付きで示し、ＴＬＲペプチドアゴニスト「ＥＤＡ」をイタリック体で示す。
ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５
配列：
Figure 0007189021000016
Ｍａｄ５
配列：
Figure 0007189021000017
ＥＤＡＭａｄ５
配列
Figure 0007189021000018
腫瘍成長の管理に対するＥＤＡコンストラクトタンパク質の効果を評価するために、ＥＧ．７－ＯＶＡ胸腺腫細胞のｓ．ｃ．モデルを選択した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。腫瘍移植後、５日目及び１３日目に、１０ｎｍｏｌの以下のコンストラクト（コンストラクトの説明については実施例１及び２を参照）：ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＭａｄ５、Ｍａｄ５、又はＭａｄ５及びＭＰＬＡ（ＥＤＡと等モル）のうちの１つをマウスの右側腹部にｓ．ｃ．ワクチン接種した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
図１８は、１群当たり７頭のマウスの腫瘍成長（平均±ＳＥＭ）を示す；＊、ｐ＜０．０５ ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５対コントロール群（二要因分散検定）。図１９は、個々の腫瘍成長曲線（１群当たり７頭の個々のマウス）を示す。図２０Ａは、１群当たり７頭のマウスの生存曲線を示す；＊、ｐ＜０．０５ ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５対コントロール群（ログランク検定）。図２０Ｂは、１群当たり７頭のマウスの腫瘍無増悪曲線を示す；＊、ｐ＜０．０５ ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５対コントロール群（ログランク検定）。
結果は、治療設定において、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５が、コントロール群に比べて腫瘍成長を有意に管理し、有意に優れた腫瘍無増悪曲線及び生存曲線を有する唯一のタンパク質ワクチンであったことを示す。
したがって、結果は、コンストラクトタンパク質ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５が治療設定において腫瘍成長を管理するための非常に強力なワクチンであることを示唆する。
実施例１３：様々な細胞透過性ペプチドを有する複合体の免疫応答の動態の比較
本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体における様々なＣＰＰの効果を調べるために、上記融合タンパク質Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａを用いた。
更に、Ｚ１３以外のＣＰＰを含む更なる融合タンパク質、即ち、Ｚ１４（配列番号７）又はＺ１８（配列番号１１）を設計した。融合タンパク質は、様々な抗原由来の異なるＣＤ８＋及びＣＤ４＋エピトープからなるタンパク質「ＭＡＤ５」と、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」とも含む。したがって、以下のコンストラクトを更に設計した。
Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ
配列：
Figure 0007189021000019
Ｚ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａ
配列：
Figure 0007189021000020
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを８つの異なる群（１群当たりマウス４頭）に割り付けた：２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａのいずれかを投与した３つの群、及びそれぞれのコントロール、０．５ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａのいずれかを投与した３つの群、及びそれぞれのコントロール。マウスに５回（０週目、２週目、４週目、６週目、及び８週目）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。２回目、３回目、４回目、及び５回目のワクチン接種の７日間後にマウスから採血し、マルチマー染色を実施した（１群当たりマウス４頭を用いて実験１回）。
結果を図２１に示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種した全ての群は、コントロール群と比べてマルチマー陽性細胞のパーセンテージの増大を示した（Ｚ１８Ｍａｄ５Ａｎａｘａの２回目のワクチン接種を除いて）。これら結果は、様々な細胞透過性ペプチドを有する本発明にかかる複合体が、様々な用量で免疫応答を惹起できることを示す。
実施例１４：様々な細胞透過性ペプチドを有する複合体のＴ細胞免疫応答の比較
より詳細にＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答を調べるために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを３つの異なる群に割り付けた（１群当たりマウス３頭～４頭）：ナイーブ、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ。
Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ群及びＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ群のＣ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌの、上述のＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａを５回（０週目、２週目、４週目、６週目、及び８週目）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。５回目のワクチン接種の９日間後、マウスを安楽死させ、器官を摘出し、マルチマー染色を実施して、脾臓、骨髄、及び排出リンパ節（鼠径及び腋窩）におけるＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のパーセンテージを特定した。
結果を図２２に示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスは、マルチマー陽性細胞、特に、脾臓及び骨髄において同様の増加を示すと共に、排出リンパ節において僅かな増加を示す。
上記マウスの同じ群において様々なＣＰＰを有する複合体をワクチン接種した後のＣＤ８ Ｔ細胞エフェクタ機能を更に調べるために、ＩＦＮ－γ産生細胞を定量するために５回目のワクチン接種の９日間後にＳＩＩＮＦＥＫＬ ＯＶＡＣＤ８ペプチド（配列番号３５）で刺激した脾細胞に対してＥｌｉｓｐｏｔアッセイを実施した。
結果を図２３Ａに示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスは、ナイーブマウスに比べてＩＦＮ－γ産生細胞の有意な増加を示した。また、Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスも、ナイーブマウスに比べてＩＦＮ－γ産生細胞の増加を示したが、この増加は有意ではなかった。これは、マウスの数が少ないことに起因している可能性がある（Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ群はマウス３頭）。
上記マウスの同じ群において様々なＣＰＰを有する複合体をワクチン接種した後のＣＤ４ Ｔ細胞の応答について調べるために、ＩＦＮ－γ産生細胞を定量するために５回目のワクチン接種の９日間後にＯＶＡＣＤ４ペプチド（配列番号３６）で刺激した脾細胞に対してＥｌｉｓｐｏｔアッセイを実施した。
結果を図２３Ｂに示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスは、ナイーブマウスに比べてＩＦＮ－γ産生細胞の高度に有意な増加を示した。また、Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスも、ナイーブマウスに比べてＩＦＮ－γ産生細胞の増加を示したが、この増加は有意ではなかった。これは、マウスの数が少ないことに起因している可能性がある（Ｚ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ群はマウス３頭）。
更に、マウスの上記群において、ＳＩＩＮＦＥＫＬ ＯＶＡＣＤ８ペプチド（配列番号３５）で刺激した脾細胞に対して細胞内染色を実施して、ＣＤ１０７ａ＋ＩＦＮ－γ＋ＴＮＦ－α＋細胞を同定した。結果を図２４に示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスは、ＣＤ１０７ａ＋ＩＦＮ－γ＋ＴＮＦ－α＋細胞において同様の増加を示した。
実施例１５：ＥＧ．７－ＯＶＡ ｓ．ｃ．モデルにおける腫瘍成長及び生存に対する様々な細胞透過性ペプチドを有する複合体の効果の比較
腫瘍成長及び生存に対する様々な細胞透過性ペプチドを有する複合体の効果を調べるために、ＥＧ．７－ＯＶＡ ｓ．ｃ．モデルを用いた。ｄ０に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、３つの異なる群に割り付けた（ナイーブ、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、及びＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａ）。マウスの右側腹部に０．５ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａをｓ．ｃ．注射することによって、腫瘍移植後ｄ５及びｄ１３に２回ワクチン接種した。
結果を図２５に示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又はＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａのワクチン接種によって、コントロールマウスに比べて腫瘍体積が有意に減少する（図２５Ａ）と共に、コントロールマウスに比べて生存率が有意に増加した（図２５Ｂ）。これら結果は、両複合体Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及びＺ１４Ｍａｄ５Ａｎａｘａが、腫瘍体積を有意に減少させ且つ生存期間を有意に延長することができることを示す。
実施例１６：様々な細胞透過性ペプチドを有する複合体をワクチン接種した後の免疫応答の比較
この実験では、ＴＬＲアゴニスト「ＥＤＡ」を有する複合体を用いることによって、本発明にかかる使用のための組合せに含まれる複合体における様々なＣＰＰの効果を調べた。したがって、上記融合タンパク質ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５を用いた。
更に、Ｚ１３以外のＣＰＰを含む更なる融合タンパク質、即ち、Ｚ１４（配列番号７）又はＺ１８（配列番号１１）を設計した。これら融合タンパク質は、様々な抗原由来の異なるＣＤ８＋及びＣＤ４＋エピトープからなるタンパク質「ＭＡＤ５」及びＴＬＲ４ペプチドアゴニスト「ＥＤＡ」も含む。したがって、以下のコンストラクトを更に設計した。
ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５
配列：
Figure 0007189021000021
ＥＤＡＺ１８Ｍａｄ５
配列：
Figure 0007189021000022
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを８つの異なる群に割り付けた（１群当たりマウス４頭）：２ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５、又はＥＤＡＺ１８Ｍａｄ５のいずれかを投与した３つの群にびそれぞれのコントロール、０．５ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５、又はＥＤＡＺ１８Ｍａｄ５のいずれかを投与した３つの群及びそれぞれのコントロール群。マウスに３回（０週目、２週目、及び４週目）ｓ．ｃ．ワクチン接種した。２回目及び３回目のワクチン接種の７日間後にマウスから採血し、マルチマー染色を実施した（１群当たりマウス４頭を用いて実験１回）。
結果を図２６に示す。ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５、又はＥＤＡＺ１８Ｍａｄ５をワクチン接種した全ての群が、コントロール群に比べてマルチマー陽性細胞の割合の増加を示した。これら結果は、様々な細胞透過性ペプチドを有する本発明にかかる複合体が様々な用量で免疫応答を惹起することができることを示す。
実施例１７：ＥＧ．７－ＯＶＡ ｓ．ｃ．モデルにおける腫瘍成長及び生存に対するＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５の効果
腫瘍成長及び生存に対するＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５の効果を調べるために、ＥＧ．７－ＯＶＡ ｓ．ｃ．モデルを用いた（同モデルにおけるＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５の効果については実施例１２及び図１８～２０を参照）。
ｄ０に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植し、２つの異なる群に割り付けた（ナイーブ及びＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５）。マウスの右側腹部に０．５ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５をｓ．ｃ．注射することによって、腫瘍移植後ｄ５及びｄ１３に２回ワクチン接種した。
結果を図２７に示す。ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５（実施例１２、図１８～２０を参照）と同様に、ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５のワクチン接種によって、コントロールマウスに比べて腫瘍体積が有意に減少する（図２７Ａ）と共に、コントロールマウスに比べて生存率が著しく増加した（図２７Ｂ）。これら結果は、ＥＤＡＺ１４Ｍａｄ５が、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５（実施例１２、図１８～２０を参照）と同様に、腫瘍体積を有意に減少させ且つ生存期間を著しく延長することができることを示す。
実施例１８：別々に投与されたＺ１３Ｍａｄ５及びＴＬＲアゴニストによりも優れたＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ融合コンストラクトの有効性
Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（配列番号２８）中のコンジュゲートされたＴＬＲアゴニスト「Ａｎａｘａ」の腫瘍成長制御に対する効果を評価するために、ベンチマーク腫瘍モデルを用いた（即ち、ＥＧ．７－ＯＶＡ胸腺腫細胞のｓ．ｃ．移植）。比較のために、コンストラクト「ＡｎａｘａＺ１３Ｍａｄ５」（配列番号２７；Ｎ末端ＴＬＲアゴニスト「Ａｎａｘａ」及びＣ末端抗原カーゴ「Ｍａｄ５」）とコンストラクト「Ｚ１３Ｍａｄ５」（配列番号４６；ＴＬＲアゴニストなし）を用いた。後者は、別のＴＬＲアゴニスト（Ｐａｍ３ＣＳＫ４）と共に投与した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に３×１０５個のＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した。腫瘍移植後、５日目及び１３日目に、７頭のマウス３群のそれぞれの右側腹部に１０ｎｍｏｌのＡｎａｘＺ１３Ｍａｄ５（群１）、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（群２）、又はＺ１３Ｍａｄ５及びＰａｍ３ＣＳＫ４（Ａｎａｘａと等モル、群３）を皮下注射することによって、ｓ．ｃ．ワクチン接種した。腫瘍サイズをノギスで測定した。結果を図２８～３０に示す。
治療スケジュールにおいて、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及びＡｎａｘａＺ１３Ｍａｄ５は、コントロール群（即ち、Ｚ１３Ｍａｄ５及びＰａｍ３ＣＳＫ４の同時注射）に比べて腫瘍成長を管理するためのより優れたタンパク質ワクチンであり、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及びＡｎａｘａＺ１３Ｍａｄ５は、有意に優れた生存曲線を示す。特に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及びＡｎａｘａＺ１３Ｍａｄ５は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４とは別々に投与したＺ１３Ｍａｄ５よりも有意に高い有効性を示す。したがって、結果は、コンストラクトタンパク質Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ及びＡｎａｘａＺ１３Ｍａｄ５が治療設定において腫瘍成長を管理するための有望なコンジュゲートワクチンであることを示唆する。
実施例１９：腫瘍成長に対する治療効果－異なるＴＬＲアゴニストとのコンストラクトの比較
この研究の目的は、異なるＴＬＲアゴニスト、即ち、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５（配列番号２６）及びＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（配列番号２８）とコンジュゲートした異なるコンストラクトタンパク質ワクチンの腫瘍増殖制御に対する有効性を比較することであった。この目的のために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左側腹部に、３×１０５個のＥＧ．７－ＯＶＡ胸腺腫細胞を、上述したようにｓ．ｃ．移植した。マウス（１群当たり７頭のマウス）の右側腹部に、５日目及び１３日目に、２ｎｍｏｌのＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、又はＺ１３Ｍａｄ５＋ＭＰＬＡ（ＥＤＡと等モル）の同時注射でｓ．ｃ．ワクチン接種した。
結果を図３１、３２、及び３３に示す。この実験設定では、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（配列番号２８）、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５（配列番号２６）、及びＺ１３Ｍａｄ５（配列番号４６）＋ＭＰＬＡは、同様に有意に腫瘍成長を管理することができた。更に、これらデータは、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａが腫瘍成長を有意に管理する最も優れたコンストラクトであり、ＥＤＡＺ１３Ｍａｄ５は、この実験設定においてＺ１３Ｍａｄ５＋ＭＰＬＡよりも僅かに優れていたことを示す。
実施例２０：神経膠芽腫モデルにおけるＺ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａよりも優れたＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ融合コンストラクトの有効性
本発明にかかる複合体の有効性について調べるために、神経膠芽腫モデルを選択した。即ち、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（配列番号２８）をマウスのある群に投与し、一方、Ｚ１３Ｍａｄ５（配列番号１６）及びＡｎａｘａ（配列番号１５）を（両方一緒に）マウスの別の群に投与した。
２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチンを２回（即ち、腫瘍移植（０日目）後７日目及び２１日目に）ワクチン接種したＧｌ２６１－Ｑｕａｄ担腫瘍マウス（１群当たりマウス７頭～１６頭）において、腫瘍部位におけるＴ細胞ホーミングを分析した。Ｚ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａ（Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａと等モル）の両方をワクチン接種した群をコントロールとして用いた。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞をｉ．ｃ．（脳内）移植し、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（群１）又は２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５及び２ｎｍｏｌのＡｎａｘａ（群２）をｓ．ｃ．注射することによって２回（移植後ｄ７及びｄ２１）ワクチン接種した。２８日目に、血液及び脳浸潤性リンパ球（ＢＩＬ）を分析し、マルチマー染色によってｄ２８における血液及びＢＩＬ中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を定量した（１群当たり７頭～１６頭のマウス）。
結果を図３４に示す。Ｚ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａの両方をワクチン接種したマウスに比べて、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスの血液中では有意に高い割合のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が観察された（図３４Ａ）。同様に、Ｚ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａを別々にワクチン接種したマウスに比べて、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウスのＢＩＬ中ではＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のより多い蓄積が観察された（図３４Ｂ、ｐ＝０．０５３９）。
次に、サイトカイン分泌を評価した。この目的のために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５×１０５個のＧｌ２６１－Ｑｕａｄ腫瘍細胞をｉ．ｃ．移植し、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ又は２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５及び２ｎｍｏｌのＡｎａｘａをｓ．ｃ．注射することによって２回（ｄ７及びｄ２１）ワクチン接種した。ＢＩＬを単離し、ブレフェルジンＡの存在下でＳｌｌＮＦＥＫＬペプチド（配列番号３５）をロードした又はロードしなかった成熟ＢＭＤＣと共に６時間培養した後、サイトカインの細胞内染色を行った。
結果を図３５に示す。一般的に、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウス由来の脳浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞において高レベルのサイトカイン分泌が観察された。特に、Ｚ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａを別々にワクチン接種したマウスに比べて、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａをワクチン接種したマウス由来の脳浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞では、総ＩＦＮ－γとＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αとの有意に多い分泌が観察された。
まとめると、これら結果は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチンが（別々に投与されたＺ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａと比べて）、強力なエフェクタ機能を用いて担腫瘍マウスの脳においてより強いＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答を惹起することができたことを示す。
得られた結果は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａが高脳浸潤性ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８免疫応答を惹起するのに有効であることを示す。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａは、脳における抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞によるサイトカインの分泌を促進することができる。
実施例２１：ナイーブマウスにおけるＺ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａよりも優れたＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ融合コンストラクトの有効性
次に、本発明にかかる複合体の有効性をナイーブマウスで調べた。即ち、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（配列番号２８）をマウスのある群に投与し、一方、Ｚ１３Ｍａｄ５（配列番号４６）及びＡｎａｘａ（配列番号１５）を（両方一緒に）マウスの別の群に投与した。
Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ群及びＺ１３Ｍａｄ５＋Ａｎａｘａ群のＣ５７ＢＬ／６マウスに２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（群１）又は２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ５及び２ｎｍｏｌのＡｎａｘａ（群２）をｓ．ｃ．注射することによって１回（０週目）ワクチン接種した。１４日目に、血液を分析し、マルチマー染色によって血液中のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を定量した（１群当たりマウス４頭～８頭）。
結果を図３６に示す。Ｚ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａを別々にワクチン接種したマウスに比べて、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチン接種マウスの血液中では有意に高い割合のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が観察された（図３６）。
まとめると、これら結果は、Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａワクチンは、（別々に投与されたＺ１３Ｍａｄ５及びＡｎａｘａと比べて）末梢においてより強いＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答を惹起することができたことを示す。
実施例２２：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、結腸癌腫モデルにおける腫瘍成長及び生存率に対する効果
ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、結腸直腸癌の治療における効果を評価するために、ＭＣ－３８腫瘍モデルを使用した。ＭＣ－３８は結腸癌腫細胞株である。
この目的のために、「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」を準備した。これは、細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」、Ｙａｄａｖら（Ｎａｔｕｒｅ．２０１４ Ｎｏｖ ２７；５１５（７５２８）：５７２－６）がＭＣ－３８腫瘍細胞株から同定した３つの新生抗原を含む抗原カーゴ「ＭＡＤ１２」、及びＴＬＲペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」を含む複合体である。以下に、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａのアミノ酸配列を示す。
Figure 0007189021000023
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり７頭、雌、７週齢）の左側腹部に、２×１０５個のＭＣ－３８腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの尾部に、３、１０、及び１７日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、６、１０、１３、１７、２０、２４、２７、及び３１日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。１０日目及び１７日目に、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａと抗ＰＤ１抗体の両方を「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」群に投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後にｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
図３７及び図３８に示されるように、ＰＤ１阻害剤単独又はＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ単独での処置は、コントロール群と比較して、有意な腫瘍体積の減少（図３７Ａ）と生存の増加（図３７Ｂ）をもたらした。しかし、ＰＤ１阻害剤とＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａの両方の組合せは、最も顕著な改善、即ち、腫瘍体積の大幅な減少及び生存率の大幅な上昇をもたらした。これらのデータは、抗ＰＤ１療法とＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａワクチン接種の両方の組合せが、抗ＰＤ１療法単独又はＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａワクチン接種単独よりも有効であることを示す。更に、コントロール群では、全てのマウスが腫瘍を示した（０／７が腫瘍なしマウス）が、一方で、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ群では、２／７マウスに腫瘍がなく、抗ＰＤ１群では、３／７のマウスに腫瘍がなかった。興味深いことに、「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」では、１頭のみのマウスが腫瘍を示した。即ち、６／７のマウスに腫瘍がなかった。これは、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ群（２／７）及び抗ＰＤ１群（３／７）の無腫瘍マウスの合計よりも多い。まとめると、これらの結果は、抗ＰＤ１療法とＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａワクチン接種との組合せの強力な相乗効果を示している。
実施例２３：ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、結腸癌腫モデルにおける腫瘍成長及び生存率に対する効果
実施例２３では、実施例２２の異なる実験群の群サイズを拡大するために、更なる動物を実施例２２の実験試験に用いた。したがって、実験結果は、実施例２２の動物及び更なる動物の結果を「含む」。
簡潔に述べると、ＰＤ１阻害剤と、細胞透過性ペプチド、異なる抗原、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せの、癌の治療における効果に、ＭＣ－３８腫瘍モデルを使用した。Ｃ－３８は結腸癌腫細胞株である。
「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」を準備した。これは、細胞透過性ペプチド「Ｚ１３」、Ｙａｄａｖら（Ｎａｔｕｒｅ．２０１４ Ｎｏｖ ２７；５１５（７５２８）：５７２－６）がＭＣ－３８腫瘍細胞株から同定した３つの新生抗原を含む抗原カーゴ「ＭＡＤ１２」、及びＴＬＲペプチドアゴニスト「Ａｎａｘａ」を含む複合体である。以下に、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａのアミノ酸配列を示す。
Figure 0007189021000024
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群当たり１３～１４頭のマウス、雌、７週齢）の左側腹部に、２×１０５個のＭＣ－３８腫瘍細胞をｓ．ｃ．移植した（０日目）。腫瘍移植後、「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスの尾部に、３、１０、及び１７日目に、２ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａを皮下でワクチン接種した。２００μｇの抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）を、「抗ＰＤ１」及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋抗ＰＤ１」の各群のマウスに、６、１０、１３、１７、２０、２４、及び２７日目のそれぞれでｉ．ｐ．投与した。１０日目及び１７日目に、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａと抗体の両方を投与した場合、抗体は、Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａのｓ．ｃ．投与の直後にｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズをノギスで測定した。
図３９及び図４０に示されるように、ＰＤ１阻害剤単独又はＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ単独による治療は、コントロール群と比較して、有意な腫瘍体積の減少（図３９Ａ）及び生存率の増加（図３９Ｂ）をもたらした。しかし、ＰＤ１阻害剤とＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａの両方の組合せは、最も顕著な改善、即ち、腫瘍体積の大幅な減少及び生存率の大幅な上昇をもたらした。注目すべきことには、「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ＋ａＰＤ１」群では、３頭のマウスのみが腫瘍を発症した（一方、１０頭のマウスは腫瘍がないままであった）が、一方で、「ａＰＤ１」群及び「Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ」群では、それぞれ８及び１０マウスが腫瘍を発生した。コントロール群では、全てのマウスが腫瘍を発症した。
これらのデータは、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａワクチン接種の両方の組合せが、抗ＰＤ１療法単独又はＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａワクチン接種単独よりも有効であることを示す。したがって、これらの結果は、抗ＰＤ１療法及びＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａワクチン接種の相乗効果を示す。


Figure 0007189021000025

Figure 0007189021000026
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Claims (12)

  1. 癌の予防及び／又は治療のための免疫チェックポイントモジュレータとの併用療法に使用するための複合体であって、
    前記複合体が、
    ａ）細胞透過性ペプチドと、
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
    ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
    を含み、
    前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合しており、
    前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなり、
    前記少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであり、
    前記免疫チェックポイントモジュレータが、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、及び抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される少なくともいずれかであることを特徴とする複合体。
  2. 前記複合体が、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質である請求項１に記載の複合体。
  3. 前記複合体に含まれる前記細胞透過性ペプチドが、
    （ｉ）合計１７アミノ酸～４５アミノ酸のアミノ酸配列長を有する、及び／又は
    （ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片を含むアミノ酸配列を有し、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の１７０番目の残基から２２０番目の残基まで延び、任意で、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が、置換、欠失、及び／又は付加されている、及び／又は
    （ｉｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体を含むアミノ酸配列を有し、前記最小ドメインが、配列番号３にかかるＺＥＢＲＡアミノ酸配列の１７０番目の残基から２２０番目の残基まで延び、任意で、前記ペプチドの細胞透過能を抑制することなしに、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸が、置換、欠失、及び／又は付加されている、
    請求項１から２のいずれかに記載の複合体。
  4. 前記複合体に含まれる前記細胞透過性ペプチドが、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）にかかるアミノ酸配列、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）にかかるアミノ酸配列、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）にかかるアミノ酸配列、配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）にかかるアミノ酸配列、前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号６にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号７にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号８にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号１１にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列、好ましくは、前記複合体に含まれる前記細胞透過性ペプチドが、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）にかかるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号６にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列を有する請求項３に記載の複合体。
  5. 前記複合体が、１個超の抗原又は抗原エピトープ、特に、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上の抗原又は抗原エピトープを含み、好ましくは、前記１個超の抗原又は抗原エピトープ、特に、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上の抗原又は抗原エピトープが、前記複合体中に連続して位置する請求項１から４のいずれかに記載の複合体。
  6. 前記複合体に含まれる前記少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストが、配列番号１５若しくは４７にかかるアミノ酸配列、配列番号１５にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、又は配列番号４７にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列を含むか又はからなる請求項１から５のいずれかに記載の複合体。
  7. 少なくとも（ｉ）抗ＣＴＬＡ４抗体と（ｉｉ）抗ＰＤ１抗体の２個の異なる免疫チェックポイントモジュレータが用いられる請求項１から６のいずれかに記載の複合体。
  8. 前記免疫チェックポイントモジュレータが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、アベルマブ、イピリムマブ、及びトレメリムマブのうちの１つである請求項１から７のいずれかに記載の複合体。
  9. 前記複合体が、組み換えポリペプチド又は組み換えタンパク質であり、
    ａ）前記細胞透過性ペプチドが、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）にかかるアミノ酸配列、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）にかかるアミノ酸配列、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）にかかるアミノ酸配列、配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）にかかるアミノ酸配列、前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号６にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号７にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号８にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過性能を抑制しない配列番号１１にかかるアミノ酸配列と全長に亘って少なくとも９０％の配列同一性を共有する変異体にかかるアミノ酸配列を含むか若しくはからなるアミノ酸配列を有し；
    ｂ）前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなり；及び
    ｃ）前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストである
    請求項１から８のいずれかに記載の複合体。
  10. （ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
    （ｉｉ）複合体と、
    を含む癌の予防用及び／又は治療用キットであって、
    前記複合体が、
    ａ）細胞透過性ペプチドと、
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
    ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
    を含み、
    前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合しており、
    前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなり、
    前記少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであり；
    好ましくは、前記複合体が、請求項２から９のいずれかに定義されている複合体であり、
    前記免疫チェックポイントモジュレータが、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、及び抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される少なくともいずれかであることを特徴とする癌の予防用及び／又は治療用キット。
  11. （ｉ）免疫チェックポイントモジュレータと、
    （ｉｉ）複合体と、
    を含む癌の予防用及び／又は治療用組成物であって、
    前記複合体が、
    ａ）細胞透過性ペプチドと、
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
    ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと
    を含み、
    前記複合体に含まれる前記成分ａ）～ｃ）が共有結合しており、
    前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなり、
    前記少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであり；
    好ましくは、前記複合体が、請求項２から９のいずれかに定義されている複合体であり、
    前記免疫チェックポイントモジュレータが、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、及び抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される少なくともいずれかであることを特徴とする癌の予防用及び／又は治療用組成物。
  12. （ｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質である免疫チェックポイントモジュレータをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子と、
    （ｉｉ）（ポリ）ペプチド又はタンパク質、特に、融合（ポリ）ペプチド又は融合タンパク質である複合体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子と、
    を含む癌の予防用及び／又は治療用組成物であって、
    前記複合体が、
    ａ）細胞透過性ペプチドと、
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと、
    ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストと、
    を含み、
    前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むか又はからなり、
    前記少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであり：
    好ましくは、前記複合体が、請求項２から９のいずれかに定義されている複合体であり、
    前記免疫チェックポイントモジュレータが、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、及び抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される少なくともいずれかであることを特徴とする癌の予防用及び／又は治療用組成物。
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