CN111195353B - 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用 - Google Patents

一种美登素类抗体药物偶联物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111195353B
CN111195353B CN202010193923.9A CN202010193923A CN111195353B CN 111195353 B CN111195353 B CN 111195353B CN 202010193923 A CN202010193923 A CN 202010193923A CN 111195353 B CN111195353 B CN 111195353B
Authority
CN
China
Prior art keywords
maytansine
preparation
pab
lcms
drug conjugate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010193923.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111195353A (zh
Inventor
李乐乐
黄长江
熊就凯
郭俊超
刘丽娜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mabplex International Co Ltd
Original Assignee
Mabplex International Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mabplex International Co Ltd filed Critical Mabplex International Co Ltd
Priority to CN202010193923.9A priority Critical patent/CN111195353B/zh
Publication of CN111195353A publication Critical patent/CN111195353A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111195353B publication Critical patent/CN111195353B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6843—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Abstract

本发明提供了种可裂解的美登素类抗体药物偶联物，其通过创新的结构设计，一端与美登素类药物连接，一端与连接子连接，利用缩醛的结构实现在细胞内酸性环境下可以自发水解，从而去掉美登素上引入的化学基团，释放出游离的未经修饰的美登素，从而实现可裂解的目的，进而产生旁观者效应，增强药效，对于实体瘤类癌症具有更优的效果；并且其在体内更加稳定，未进入细胞之前，不易发生降解，只有进入细胞被水解后，才会释放出美登素，发挥抗癌作用，因此不易产生非靶向降解，降低ADC药物的毒副作用，真正地实现增加ADC药物的治疗窗口，提高成药性。

Description

一种美登素类抗体药物偶联物及其应用
技术领域
本发明涉及抗体药物偶联物领域，具体涉及一种可裂解的美登素类抗体药物偶联物及其应用。
背景技术
抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate，ADC)是指通过化学连接子(Linker)将具有生物活性的药物(Drug)和抗体(Antibody)连接起来的一类生物药。ADC就像是精确制导武器体系，其中具有生物活性的药物做为杀伤性弹药，在抗体的指引下，精准打击癌变细胞。抗体和药物之间的适当连接子提供特异性缀合，有助于抗体选择性地将细胞毒性药物递送至肿瘤细胞并在肿瘤部位准确释放细胞毒性药物。除了缀合之外，连接子还在ADC的制备和储存阶段以及在体循环期间维持ADC的稳定性。目前正在进行临床评估的ADC连接子大多分为两类：可裂解连接子和不可裂解连接子，可裂解连接子依赖于细胞内的过程降解连接子释放毒素，例如细胞质的减少，溶酶体中的酸性条件的暴露，或细胞内特定蛋白酶的切割等，同时产生旁观者效应(bystander killing，又称旁效应)，杀伤效果更好；而不可裂解连接子需要ADC的抗体部分的蛋白水解降解成氨基酸以释放毒素，同时其将保留接头和与抗体连接的氨基酸，因此可裂解的连接子具有更高的血液循环内稳定性，且靶细胞内可实现药物的快速酶释放，是ADC药物很好的发展趋势。
美登素类药物及其衍生物是微管组装极强的抑制剂，在亚纳摩尔水平就可以表现出抗有丝分裂效应，且其ED50(有效剂量)在10-5～10-4μg/mL之间，是一种理想的抗癌药物，其中已上市的ADC药物中，罗氏的Kadcyla(上市时间为2013年)的生物活性药物部分采用的就是美登素类药物(DM1)，该药使用SMCC作为曲妥珠单抗抗体的赖氨酸残基与美登素DM1的巯基交联而成的ADC，其连接子-毒素(-MCC-DM1)不可裂解，当ADC进入靶向细胞后，需要把整个ADC分子水解后才能释放出起药效的带有DM1的小分子(Lys-MCC-DM1)，由于该分子中带有氨基和羧基，在体内环境下因带有电荷不能自由穿过细胞膜，因此不能杀死旁边的癌细胞，不具有旁观者效应，从一定程度上对其药效有所影响。
目前，临床中可裂解的美登素类抗体药物偶联物一般采用的是二硫键的形式，这种偶联形式的药物到达细胞后，利用肿瘤内高含量的谷胱甘肽来释放产生毒素(如DM1、DM4)，但是由于正常细胞内和细胞外也存在少量的谷胱甘肽，也会将二硫键还原，进而在正常细胞内外释放毒素，产生非靶性降解，从而产生毒副作用。因此，亟需提供更多的可裂解的美登素类抗体药物偶联物供临床选择。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种可裂解的美登素类抗体药物偶联物。具体的，本发明提供了如下技术方案：一种美登素类抗体药物偶联物，其结构如式(1)所示：
Figure BDA0002416886490000021
其中：
Ab为任一细胞结合剂；
L为任一连接单元；
X的结构如式(2)所示：
Figure BDA0002416886490000022
R1、R2各自独立地为H、C1-3烷基、芳香基；
R3为H、C1-3烷基；
Y选自如下结构：
Figure BDA0002416886490000023
D为美登素类衍生物；
n为1、2、3、4、5、6、7、8；
m为1、2、3、4、5、6、7、8。
进一步的，所述的R1、R2中至少有一个为H。
进一步的，所述的R1、R2中至少有一个为芳香基。
优选的，所述的R1为H，R2为芳香基。
优选的，所述的R1为H，R2为CH3。
进一步的，所述的R3为H或CH3；优选的，所述的R3为H。
进一步的，所述的美登素类衍生物D结构如式(3)所示：
Figure BDA0002416886490000031
进一步的，所述的L为包含2至20个氨基酸残基肽段的连接单元，所述的氨基酸残基肽段由选自Ala、Val、Cit、Gly、Phe、Lys、Arg的氨基酸通过脱水缩合的方式组成，所述的氨基酸可以相同，也可以不同。
进一步的，所述的L为包含2个氨基酸残基肽段、3个氨基酸残基肽段、4个氨基酸残基肽段的连接单元。
进一步的，所述的氨基酸残基肽段选自-缬氨酸-瓜氨酸-(-Val-Cit-)、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-(-Gly-Gly-Phe-Gly-)、-缬氨酸-丙氨酸-(-Val-Ala-)、-缬氨酸-赖氨酸-(-Val-Lys-)、-缬氨酸-精氨酸-(-Val-Arg-)、-苯丙氨酸-瓜氨酸-(-Phe-Cit-)、-苯丙氨酸-赖氨酸-(-Phe-Lys-)、-苯丙氨酸-精氨酸-(-Phe-Arg-)及它们的组合；优选的，所述的氨基酸残基肽段选自-缬氨酸-瓜氨酸-(-Val-Cit-)、-缬氨酸-丙氨酸-(-Val-Ala-)。
进一步的，所述的L还包含其他连接基团L’，所述的连接基团L’与所述的细胞结合剂Ab通过巯基或者氨基的共价连接，所述的连接基团L’选自如下结构：
Figure BDA0002416886490000041
进一步的，所述的L选自如下结构：
Figure BDA0002416886490000042
Figure BDA0002416886490000051
进一步的，所述的细胞结合剂Ab为特异性结合于靶细胞的抗体或其抗原结合片段、单链抗体、单链抗体片段、特异性结合于靶细胞的单克隆抗体、单链单克隆抗体或单克隆抗体片段、特异性结合于靶细胞的嵌合抗体、嵌合抗体片段、特异性结合于靶细胞的结构域抗体、结构域抗体片段、前抗体、纳米抗体、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养物运送分子；优选的，所述的细胞结合剂Ab为特异性结合于靶细胞的抗体或其抗原结合片段；更优选的，所述的细胞结合剂Ab为单克隆抗体或其单克隆抗体片段；更更优选的，所述的细胞结合剂Ab为人源化单克隆抗体或其人源化单克隆抗体片段。
进一步的，所述的抗体药物偶联物具有以下结构：
Figure BDA0002416886490000052
Figure BDA0002416886490000061
Figure BDA0002416886490000071
其中，所述的n为1、2、3、4、5、6、7、8。
进一步的，所述的抗体药物偶联物具有以下结构：
Figure BDA0002416886490000072
其中，所述的n为1、2、3、4。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含上述任一项所述的抗体药物偶联物和其药学上可接受的载体。
本发明还提供了上述任一项所述的抗体药物偶联物或药物组合物在制备治疗癌症药物中的用途。
本发明提供的美登素类抗体药物偶联物，其通过创新的结构设计，一端与美登素类药物连接，一端与连接子连接，利用缩醛的结构实现在细胞内酸性环境下可以自发水解，从而去掉美登素上引入的化学基团，释放出游离的未经修饰的美登素，从而实现可裂解的目的。本发明提供的美登素类抗体药物偶联物能够在体内释放出游离的美登素从而产生旁观者效应，增强药效，对于实体瘤类癌症具有更优的效果；并且本发明提供的美登素类抗体药物偶联物在体内更加稳定，未进入细胞之前，不易发生降解，只有进入细胞被水解后，才会释放出美登素，发挥抗癌作用，因此不易产生非靶向降解，降低ADC药物的毒副作用。综上所述，本发明提供的美登素类抗体药物偶联物，既能提升抗肿瘤活性，又能降低毒副作用，真正地实现增加ADC药物的治疗窗口，提高成药性。
具体实施方式
缩写
除非另有说明，本发明使用的所有缩写具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。如本发明所用，常用的缩写及其定义如下所示：
Figure BDA0002416886490000081
Figure BDA0002416886490000091
Figure BDA0002416886490000101
通用制备方法
通用制备例1：VA-PAB的制备
Figure BDA0002416886490000102
Cbz-VA(N-汴氧基碳酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酸)的制备：将N-汴氧基碳酰基-L-缬氨酸(25.1g)、TSTU(36.1g)、DIPEA(38.7g)溶于乙腈(400mL)室温搅拌2.5h。将L-丙氨酸溶液到水(400mL)中，加入到反应体系室温搅拌过夜。取样送LCMS，反应情况良好，滴加浓盐酸调节pH到1。旋干溶剂，加入水(2000mL)，打浆16h。过滤，滤饼干燥后，加入乙酸乙酯/二氯甲烷/正己烷＝500mL/500mL/1000mL打浆16h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品30.7g，产率93％。LC-MS:(M+H)+322.5
Cbz-VA-PAB(N-汴氧基碳酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴醇)的制备：将Cbz-VA(30g)、EEDQ(46g)、PAB(对氨基汴醇)(22.8)溶于DCM(600Ml)/甲醇(300mL)室温搅拌16h。取样送LCMS，反应情况良好，旋干溶剂，加入乙酸乙酯/二氯甲烷/正己烷＝200mL/200mL/600mL打浆16h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品20g，产率93％。LC-MS:(M+H)+427.6
VA-PAB(L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴醇)的制备：将Cbz-VA-PAB(5.1g)、Pd/C(1.5g)、甲醇(300mL)反应体系在10℃搅拌30mins。往体系内加入三乙基硅氢(27.8g)，体系在10℃搅拌16h，取样送LCMS，反应情况良好，硅藻土过滤，滤液旋干，固体加入甲基叔丁基醚/正己烷＝200mL/200mL打浆16h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品2.60g，产率74.3％。LC-MS:(M+H)+293.6
通用制备例2：VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1的制备
Figure BDA0002416886490000111
Teoc-VA-PAB(三甲硅基乙氧羰氧酰-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴醇)的制备：将Teoc-OSU(2-(三甲基硅基)乙氧羰氧酰琥珀酰亚胺)(1.9g)、VA-PAB(2.0g)、DIPEA(2.7g)溶于DMF(30mL)室温搅拌16h。取样送LCMS，反应液旋干，固体加入水400mL超声1h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品3.0g，产率62.5％。LC-MS:(M+H)+437.6
Teoc-VA-PAB-NH 2 (三甲硅基乙氧羰氧酰-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺)的制 备：将Teoc-VA-PAB(3.0g)、NPC(6.4g)、DIPEA(2.70g)溶于DMF(50mL)室温搅拌2h。将乙酸铵(5.4g)溶于乙醇(50mL)加入到反应体系室温搅拌16h，取样送LCMS，反应液旋干，固体用DCM和水洗2次，干燥后用甲基叔丁基醚(500mL)打浆16h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品2.20g，产率75.3％。LC-MS:(M+H3O)+498.1
Teoc-VA-PAB-NH-Ph-CH-SO 2 -Ph(三甲硅基乙氧羰氧酰-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺- 汴酰胺-苯甲基-苯亚砜)的制备：将Teoc-VA-PAB-NH2(480mg)、苯亚磺酸(350mg)、对甲基苯磺酸(1.3g)、苯甲醛(220mg)溶于DCM/甲醇＝15mL/4mL，室温搅拌24h。取样送LCMS，有反应新点，MS不匹配，反应液旋干，固体用正己烷和水洗2次，干燥后得固体900mg直接投下一步反应。
Teoc-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1(三甲硅基乙氧羰氧酰-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴 酰胺-苯甲基-美登素1)的制备：将Teoc-VA-PAB-NH-Ph-CH-SO2-Ph(386mg)、DIPEA(80mg)、DM1(美登素1)(150mg)溶于DMF(6mL)室温搅拌6h。取样送LCMS，反应情况良好，反应液旋干，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000121
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得固体160mg，产率57％。LC-MS:(M+H)+1306.5
VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1(L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1)的制 备：将Teoc-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1(100mg)、KF(222mg)、18-冠-6(400mg)溶于DMF(6mL)室温搅拌16h。取样送LCMS，反应基本完全，有大量杂质，反应液旋干，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000122
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得10mg，产率10.8％。LC-MS:(M+H)+1162.4
通用制备例3：HS-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1的制备
Figure BDA0002416886490000131
Bn-S-S-Pr-VA-PAB(汴硫醚丙酰胺-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴醇)的制备：将Bn-S-S-Pr(汴硫醚丙酸)、TSTU(2.28g)、DIPEA(3.68g)溶于DMF(200mL)室温搅拌5h。往体系内加入VA-PAB(2.52g)室温搅拌16h，取样送LCMS，反应液旋干，固体加入DCM/乙酸乙酯＝400mL/400mL打浆16h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品2.70g，产率62.5％。LC-MS:(M+H)+503.5
Bn-S-S-Pr-VA-PAB-NH 2 (汴硫醚丙酰胺-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺)的制 备：将Bn-S-S-Pr-VA-PAB(2.7g)、NPC(4.89g)、DIPEA(2.0g)溶于DMF(80mL)室温搅拌2h。将乙酸铵(4.0g)溶于乙醇(80mL)加入到反应体系室温搅拌16h，取样送LCMS，反应液旋干，固体用DCM和水洗2次，干燥后用甲基叔丁基醚(500mL)打浆16h。过滤用正己烷洗2次，干燥得产品2.20g，产率75.3％。LC-MS:(M+H)+546.9
Bn-S-S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-SO 2 -Ph(汴硫醚丙酰胺-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺- 汴酰胺-苯甲基-苯亚砜)的制备：将Bn-S-S-Pr-VA-PAB-NH2(547mg)、苯亚磺酸(350mg)、对甲基苯磺酸(1.3g)、苯甲醛(220mg)溶于DMF(8mL)室温搅拌36h。取样送LCMS，有反应新点，MS不匹配，反应液旋干，固体用正己烷和水洗2次，干燥后得固体1g直接投下一步反应。
Bn-S-S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1(汴硫醚丙酰胺-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰 胺-苯甲基-美登素1)的制备：将Bn-S-S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-SO2-Ph(386mg)、DIPEA(80mg)、DM1(美登素1)(150mg)溶于DMF(6mL)室温搅拌6h。取样送LCMS，反应情况良好，反应液旋干，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000141
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得固体160mg，产率57％。LC-MS:(M+H)+1372.3
HS-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1(巯基丙酰胺-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺-苯 甲基-美登素1)的制备：将Bn-S-S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1(100mg)、DIPEA(24mg)、DTT(二流酥糖醇)(55mg)溶于DMF(6mL)冰水浴搅拌1h。取样送LCMS，反应情况良好，反应液旋干，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000142
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得固体65mg，产率70％。LC-MS:(M-H)-1248.4
通用制备例4：Mal-PEG4-EBE-PEG4-Mal-DM1的制备
Figure BDA0002416886490000143
Mal-PEG4-EBE-PEG4-Mal(双(马来酰亚胺-四乙氧基酰基-乙氧基)乙烷)的制备：将Mal-PEG4-COOH(100mg)、DIPEA(72mg)、TSTU(101mg)溶于DMF(3mL)中，室温搅拌1h，降温至0℃，加入EBE(21mg)，恢复室温搅拌2h，取样送LCMS，反应完全。将溶剂旋出加入5mL乙腈，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000144
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得无色油状物40mg。LC-MS:(M+H)+802.6。
Mal-PEG4-EBE-PEG4-Mal-DM1(双(马来酰亚胺-四乙氧基酰基-乙氧基乙烷)-美登 素1)的制备：将DM1(16mg)、Mal-PEG4-EBE-PEG4-Mal(30mg)、DIPEA(8mg)溶于DMF(3mL)中，冰水浴搅拌3h，取样送LCMS，反应完全。将溶剂旋出加入3mL乙腈，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000151
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得9.0mg。LC-MS:(M+H)+1540.0
通用制备例5：Mal-PEG8-EBE-PEG8-Mal的制备
Figure BDA0002416886490000152
Mal-PEG8-EBE-PEG8-Mal(双马来酰亚胺-八乙氧基酰基-乙氧基乙烷)的制备：将Mal-PEG8-NHS(216mg)、DIPEA(86mg)、EBE(21mg)溶于DMF室温搅拌2h，溶液成凝胶状取样送LCMS，反应完全。制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000153
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mmColumn；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得40mg,产率20％。LC-MS:(M+H)+1297.2
通用制备例6：MP2-EBE-MP2的制备
Figure BDA0002416886490000154
MP2(马来酰亚胺乙二醇)的制备：将饱和NaHCO3溶液20mL加入50mL圆底烧瓶，量取2-氨基乙二醇420mg加入到体系，将体系置于0℃环境中，恒温搅拌20min，称取MOC-Mal620mg加入其中，保持温度搅拌20min后，取出，在室温条件下继续搅拌30min。通过LCMS法检测，反应结束。反应完成后，将体系用二氯甲烷萃取，有机相合并后水洗，无水硫酸钠干燥，过滤。LCMS监测收集产品得MP2液体510.2mg。收率68.9％。LC-MS:(M+H)+187.3
MP2-PNP(马来酰亚胺二乙氧基-对硝基苯基碳酸酯)的制备：将MP2500mg和氯甲酸-4-硝基苄酯653.8mg加入25mL三口烧瓶，加入二氯甲烷10mL，将体系置于0℃环境中，氮气保护，滴加三乙胺819.7mg，滴加完毕后，恢复室温继续搅拌2.5h。通过LCMS法检测，反应结束。旋干溶剂，制备板纯化，洗脱剂为正己烷：二氯甲烷＝1:4。LCMS监测收集产品得MP2-PNP固体570.0mg，收率为60.3％。LC-MS:(M+H)+351.3
MP2-EBE-MP2(双马来酰亚胺二乙氧酰基-乙氧基乙烷)的制备：将MP2-PNP(350mg)，DIPEA(700mg)溶于DMF(2mL)，加入EBE(双2-氨基乙氧基乙烷)(65mg)，室温搅拌6小时。取样送LCMS，反应完全，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000161
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得产品100mg，产率17.5％。LC-MS:(M+H)+570.3
实施例
下面将通过实施例对本发明进行进一步的阐述，需要说明的是，以下实施例是对本发明进行进一步的阐述和解释，而不应被看作是对本发明的限制。
实施例1化合物1(MC-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1)的制备
Figure BDA0002416886490000162
化合物1(MC-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1，马来酰亚胺己酰胺基-L-缬氨酰基-L-丙氨酰 胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1)的制备：将MC-NHS(9.2mg)、DIPEA(7mg)、VA-PAB-Ph-CH-DM1(8.0mg)加入DMF(3mL)，室温搅拌2h.LC-MS显示反应完全，将溶剂旋出，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000163
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得4.7mg。LC-MS:(M+H)+1354.8
实施例2化合物2(MP2-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1)的制备
Figure BDA0002416886490000171
化合物2(MP2-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1，马来酰亚胺二乙氧基-L-缬氨酰基-L-丙氨 酰胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1)的制备：将VA-PAB-Ph-CH-DM1(5.5mg)、MP2-PNP(6.2mg)、DIPEA(4mg)溶于DMF中，室温搅拌3h，取样送LCMS，反应完全。将溶剂旋出，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000172
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得3.0mg。LC-MS:(M+H)+1372.4
实施例3化合物3(Py-MAA-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1)的制备
Figure BDA0002416886490000173
化合物3(Py-MAA-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1，三丙烯酰基三嗪-巯基乙酰基-L-缬氨酰 基-L-丙氨酰胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1)的制备：将Py-MAA(三丙烯酰基三嗪-巯基乙酸)(9.2mg)、DIPEA(7mg)、TSTU(8.3mg)加入DMF(3mL)，室温搅拌1h，LC-MS监测生成活性酯，将反应液加入到VA-PAB-Ph-CH-DM1(8.0mg)的DMF中室温搅拌2h.LC-MS显示反应完全，将溶剂旋出，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000174
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得4.5mg。LC-MS:(M+H)+1484.6
实施例4化合物4(Mal-PEG4-EBE-PEG4-Mal–S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1)的制备
Figure BDA0002416886490000181
化合物4(Mal-PEG4-EBE-PEG4-Mal–S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1、双马来酰亚胺- 四乙氧基酰基-乙氧基乙烷)-硫丙酰基L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1) 的制备：将HS-Pr-VA-PAB-Ph-CH-DM1(23mg)、MP4-EBE-MP4(20mg)、DIPEA(7.8mg)溶于DMF(3mL)中，冰水浴搅拌3h，取样送LCMS，反应完全。将溶剂旋出，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000182
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得7mg。LC-MS:(M/2+H)+1026.4
实施例5
化合物5(Mal-PEG8-EBE-PEG8-Mal-S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1)的制备
Figure BDA0002416886490000191
化合物5
(Mal-PEG8-EBE-PEG8-Mal-S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1，双(马来酰亚胺-八乙氧 基酰基-乙氧基乙烷)-L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1)的制备：将HS-Pr-VA-PAB-Ph-CH-DM1(8mg)、Mal-PEG8-EBE-PEG8-Mal)(20mg)、DIPEA(4mg)溶于DMF(3mL)中，冰水浴搅拌3h，取样送LCMS，反应完全。将溶剂旋出，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000192
Prep C18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得3.0mg。LC-MS:(M/2+H)+1203.0
实施例6化合物6(MP2-EBE-MP2–S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1)的制备
Figure BDA0002416886490000201
化合物6(MP2-EBE-MP2–S-Pr-VA-PAB-NH-Ph-CH-DM1，双马来酰亚胺-二乙氧基酰 基-乙氧基乙烷)-硫丙酰基L-缬氨酰基-L-丙氨酰胺-汴酰胺-苯甲基-美登素1)的制备：将HS-Pr-VA-PAB-Ph-CH-DM1(12mg)、MP2-EBE-MP2(15mg)、DIPEA(4mg)溶于DMF(3mL)中，冰水浴搅拌3h，取样送LCMS，反应完全。将溶剂旋出，制备液相法纯化，制备柱：Sun
Figure BDA0002416886490000202
PrepC18 OBD TM 5um，30*250mm Column；流动相A：MeCN，流动相B：H2O。LCMS监测收集纯品得乙腈/水体系液体直接冻干得7mg。LC-MS:(M+H)+1820.9
实施例7抗体药物偶联物的制备
本实验涉及的抗体药物偶联物可以采用较为常见的方法，用pH＝7.4的PBS缓冲液，把抗体配制为10mg/mL的溶液，加入适量当量的TCEP，振荡混匀1小时，再加入5.0摩尔当量的连接子-毒素(即化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5或化合物6)，振荡混匀，反应1h，反应结束后，超滤除去残留的小分子，加载至疏水色谱(HIC-HPLC)进行DAR、药物分布、裸抗比例检测。我们采用上述通用的抗体药物偶联物制备方法制备了ADC-1(DAR值约为4)、ADC-4(DAR值约为4)、ADC-6(DAR值约为4)，本实施例中所用的抗体为Her2抗体。
实施例8 ADC对SK-BR-3肿瘤细胞株的抑制实验
消化SK-BR-3肿瘤细胞(人乳腺癌细胞，购自ATCC)，离心收集后，进行计数，并将细胞液稀释至0.5-1.5×105个/mL，96孔板中每孔加入100μL该细胞悬液。37℃、5％CO2培养箱孵育过夜；第二天加入相应9个浓度梯度的ADC药物，外加一组零浓度ADC药物的细胞对照。培养72h后采用Cell Counting Kit-8(简称CCK-8试剂盒)进行活性显色，显色后的96孔板通过酶标仪检测450nm处OD值。Prism软件通过OD值计算得出IC50值。当拟合的曲线呈“S型曲线”且R2≥0.95时，IC50值有效可报告。
我们选取了ADC1、ADC4、ADC6进行SK-BR-3肿瘤细胞株的抑制实验，其IC50值如表1所示，从表1中我们可以看出，ADC-1、4、6均表现出良好的细胞活性，起到了意料不到的技术效果。
表1 SK-BR-3肿瘤细胞株的抑制实验细胞评价
ADC IC50(10-3nmol/L) R2 最大抑制率
ADC-1 16.21 0.999 87.91％
ADC-4 61.63 0.996 91.74％
ADC-6 47.05 0.994 88.52％
本发明已通过各具体实施例作了举例说明。但是，本领域普通技术人员能够理解，本发明并不限于各具体实施方式，普通技术人员在本发明的范文内可以作出各种改动或变型，并且在本说明书中各处提及的各个技术特征可以相互组合，而仍不背离本发明的精神和范围。这样的改动和变型均在本发明的范围之内。

Claims (3)

1.一种美登素类抗体药物偶联物，其特征在于，所述的抗体药物偶联物具有以下结构：
Figure FDA0004240524770000011
其中：
所述的Ab为Her2抗体,
所述的n为1、2、3、4、5、6、7、8。
2.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体药物偶联物和其药学上可接受的载体。
3.权利要求1所述的抗体药物偶联物或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗癌症药物中的用途。
CN202010193923.9A 2020-03-19 2020-03-19 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用 Active CN111195353B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010193923.9A CN111195353B (zh) 2020-03-19 2020-03-19 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010193923.9A CN111195353B (zh) 2020-03-19 2020-03-19 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111195353A CN111195353A (zh) 2020-05-26
CN111195353B true CN111195353B (zh) 2023-06-23

Family

ID=70742552

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010193923.9A Active CN111195353B (zh) 2020-03-19 2020-03-19 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111195353B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005037992A3 (en) * 2003-10-10 2009-04-23 Immunogen Inc Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
CN105963711A (zh) * 2016-06-20 2016-09-28 杭州皓阳生物技术有限公司 一种抗人cd20单克隆抗体-dm1偶联物及其制备方法
CN110575548A (zh) * 2018-06-07 2019-12-17 中国科学院上海药物研究所 靶向于cd73的抗体-药物偶联物及其制法和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005037992A3 (en) * 2003-10-10 2009-04-23 Immunogen Inc Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
CN105963711A (zh) * 2016-06-20 2016-09-28 杭州皓阳生物技术有限公司 一种抗人cd20单克隆抗体-dm1偶联物及其制备方法
CN110575548A (zh) * 2018-06-07 2019-12-17 中国科学院上海药物研究所 靶向于cd73的抗体-药物偶联物及其制法和用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
樊代明.抗体偶联药物的研究概况.《肿瘤研究前沿 第17卷》.西安：西安交通大学出版社,2017, *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111195353A (zh) 2020-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111689980A (zh) 一种喜树碱药物及其抗体偶联物
JP4922535B2 (ja) チオール含有メイタンシノイド類の製造および精製方法
AU781735B2 (en) Manufacture of polyglutamate-therapeutic agent conjugates
AU2018288029B2 (en) Antibody-drug conjugate having acidic self-stabilization junction
KR100359005B1 (ko) 중합체결합된캠프토테신유도체,이의제조방법및이를함유하는약제학적조성물
CN109939242B (zh) 抗体前药偶联物及其制备和应用
FR2626882A1 (fr) Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3
AU777761B2 (en) Chlorophyll and bacteriochlorophyll esters, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
WO2017210288A1 (en) Antibody drug conjugates having derivatives of amatoxin as the drug
CN111001012A (zh) 一种亲水碳酸酯型抗体偶联药物
TW202216724A (zh) 一種喜樹鹼類藥物及其抗體偶聯物
Xiao et al. Development of bifunctional anti-PD-L1 antibody MMAE conjugate with cytotoxicity and immunostimulation
CN115105607A (zh) 一种用于adc的双药-接头的制备方法及其用途
AU2017340314B2 (en) Cysteine modified antibody-drug conjugate and preparation method thereof
WO2022022649A1 (zh) 一种双药链接组装单元及双药靶向接头-药物偶联物
CN111195353B (zh) 一种美登素类抗体药物偶联物及其应用
TW201818974A (zh) 抗體藥物複合體
CN111499685A (zh) 具有马来酰亚胺连接头的抗体偶联药物中间体及其合成方法
CN109125736B (zh) 非天然鹅膏毒肽类抗体偶联物
JP7153082B2 (ja) システイン改変抗体－毒素複合体（ｔｄｃ）の部位特異的結合サイトのスクリーニング
CN113365969A (zh) 含有邻苯二甲醛的连接体及其用于制备抗体-药物缀合物的用途
CN111560078A (zh) 具有马来酰亚胺接头的双臂中间体及其合成方法
CA3125289A1 (en) Targeted delivery of therapeutic molecules
US9260478B2 (en) Potent and efficient cytotoxic peptides and antibody-drug conjugates thereof and their synthesis
EP3442979A1 (en) Topoisomerase poisons

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: No.60, Beijing Middle Road, Yantai Development Zone, Yantai area, China (Shandong) pilot Free Trade Zone, Yantai City, Shandong Province 264006

Applicant after: Yantai maibairui international biomedical Co.,Ltd.

Address before: 264006 No.60, Beijing Middle Road, Yantai Economic and Technological Development Zone, Shandong Province

Applicant before: MABPLEX INTERNATIONAL, Ltd.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant