CN113365969A - 含有邻苯二甲醛的连接体及其用于制备抗体-药物缀合物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的含有邻苯二甲醛(OPA)的连接体(OPA‑L)以及经由苯并[c]吡咯酮的形成制备抗体药物缀合物(ADC)的OPA‑L的用途，所述苯并[c]吡咯酮通过在抗体上的伯胺(例如，赖氨酸的残基)和邻苯二甲醛的反应形成。该OPA‑L的优势是高反应性，且可被应用在不同类型的抗体中以形成稳定连接的缀合物。制备ADC的OPA‑L的用途对于温和且宽泛的缀合条件是有利的，例如，可以使用低百分比的所需有机溶剂、宽范围的pH和温度。

Description

含有邻苯二甲醛的连接体及其用于制备抗体-药物缀合物的 用途
技术领域
本发明涉及新的含有邻苯二甲醛(OPA)的连接体(linker)(OPA-L)以及经由苯并[c]吡咯酮的形成制备抗体药物缀合物(conjugate)(ADC)的OPA-L的用途，所述苯并[c]吡咯酮通过在抗体上的伯胺(例如，赖氨酸的残基)和邻苯二甲醛的反应形成。
背景技术
抗体-药物缀合物(ADC)是用于疾病治疗的新靶向药物。ADC含有用于靶向的抗体、用于药物连接的连接物(connector)和连接体以及作为效应物的高效力的有效负荷(payload)。自2011年Adcetris和2013年Kadcyla被美国FDA批准以来，ADC药物开发已经广泛用于癌症的治疗。
对于药物连接，使用在抗体和连接体-有效负荷(即，连接体-药物)上都具有高反应性和稳定性的官能团用于偶联(coupling)，以形成稳定的共价键。常规的抗体-药物缀合物通常通过两种化学策略产生，基于赖氨酸的缀合(conjugation)和基于来自链间的硫化物键还原的半胱氨酸的缀合。对于在赖氨酸残基上的伯胺基团的反应，在连接体-有效负荷上最广泛地使用的连接物是NHS酯(即N-羟基琥珀酰亚胺)。但是NHS酯在抗体-药物缀合物生产中的应用受到其固有性质的限制，例如，NHS酯和伯胺之间的反应在酸性条件下非常缓慢，因此需要在具有高pH值(即>7.0)的缓冲液中进行缀合，这对抗体有时是不友好的，并且NHS在碱性条件下易于水解，这使得缀合后游离药物的纯化和鉴定更加复杂。另外，由于NHS酯对在抗体上的伯胺的低反应性，该反应需要在高温(22℃)下进行。甚至由于低溶解度，由NHS酯制备的连接体-有效负荷(即SMCC-DM1)需要更多的有机溶剂以被完全溶解在反应体系中，这增加了抗体聚集的风险。
基于独特的生物物理、生物化学和药理学特性，重链抗体(HcAb)在抗体药物发现中变得越来越重要。但是，由于HcAb的小尺寸且缺少赖氨酸残基，使用含有NHS酯的连接体-有效负荷难以获得高的用于ADC的药物抗体比(DAR)。
由环境中的不稳定性引起的ADC药物的毒性是在疾病治疗中应用的另一个重要问题。在这种情况下，连接体的降解导致有毒药物从抗体中释放，并导致脱靶毒性。在这种情况下，当前的连接体(即SMCC)具有这种不稳定性问题。通过这种连接体产生的ADC在血浆中不稳定，因此它们在药理学和毒理学中可能具有较差的性质。
因此，在现有技术中迫切需要提供具有高反应性、高稳定性、高溶解度并且对用于缀合的抗体友好的连接体，这对于ADC的形成是有益的。
发明内容
本申请的发明人惊奇地发现，本文所描述的OPA-L比通过NHS酯形成的酰胺键更稳定，通过使用OPA-L可以测试宽的缀合条件，并且用OPA-L产生的ADC比用含有NHS酯的连接体产生的ADC具有更好的血浆稳定性。简言之，本文所描述的OPA-L具有高反应性、高稳定性、高溶解度，并且对用于缀合的抗体是友好的，且对基于HcAb的缀合也是友好的。
在本申请的第一方面中，涉及下式(I)的化合物：OPA-L(I)，其中OPA为
Figure BDA0003077577090000021
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自-NH、-C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；肽，像二肽、三肽、四肽、五肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代。
在一些实施方案中，L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，并且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000031
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数，且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000041
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数，且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000042
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数，且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000043
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003077577090000051
在本申请的第二方面中，涉及下式(II)的化合物：OPA-L-D(II)，其中OPA为
Figure BDA0003077577090000052
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂(anti-epigenetic agent)；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物(peptidomimetic)；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且杂芳基具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，并且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000061
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数，且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000062
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数，且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000071
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数，且杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000072
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003077577090000073
在本申请的第三方面中，涉及下式(III)的化合物：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括IgG，双特异性抗体，抗体片段诸如Fab、Fab’、F(ab’)2和scFv，仅重链抗体(Heavy-chain only antibody)或纳米抗体(nanobody)；OPA是
Figure BDA0003077577090000081
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇；p为整数，是指结合到细胞结合剂的活性剂的数目，其中p为0-15的整数。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且杂芳基具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数，且杂芳基具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000091
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000092
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000093
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数，且5至10元的杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000094
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述OPA-L-D选自：
Figure BDA0003077577090000101
在本申请的第四方面中，涉及用于制备下式(III)的缀合物的如上所定义的式OPA-L(I)的化合物的用途：Ab-(OPA-LD)p(III)，其中Ab、OPA、L、D和p如上所定义。
在本申请的第五方面中，涉及用于制备下式(III)的缀合物的如上所定义的式OPA-L-D(II)的化合物的用途：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中Ab、OPA、L、D和p如上定义。
在本申请的第六方面中，涉及用于制备下式(III)的缀合物的方法：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中所述缀合物包含通过在Ab上的伯胺和OPA-L的反应连接到Ab的D，所述方法包括以下步骤：(a)使D与OPA-L接触以将OPA-L共价连接到D并因此制备OPA-L-D，其中D、OPA和L如上所定义；(b)通过使OPA-L-D与Ab反应将Ab缀合到OPA-L-D以制备式(III)的缀合物，其中Ab和p如上定义；和(c)用下游步骤诸如缓冲液交换或柱纯化来纯化式(III)的缀合物。
附图说明
图1显示了曲妥珠单抗-ZY-889的SEC-HPLC。
图2显示了曲妥珠单抗-ZY-889的LC-MS光谱。
图3显示了曲妥珠单抗-ZY-948的SEC-HPLC。
图4显示了曲妥珠单抗-ZY-948的LC-MS光谱。
图5显示了HcAb-1-ZY-894的SEC-HPLC。
图6显示了HcAb-1-ZY-894的LC-MS光谱。
图7显示了HcAb-2-ZY-894的SEC-HPLC。
图8显示了HcAb-2-ZY-894的LC-MS光谱。
发明详述
定义
如本文所用，常见的有机缩写定义如下：
ADC 抗体药物缀合物
DAR 药物抗体比
DMA 二甲基乙酰胺
HPLC 高效液相色谱法
SEC 尺寸排阻色谱法
LC-MS 液相色谱法-质谱法
UV-vis UV-可见光分光光度计
eq 当量
TFA 三氟乙酸
IPA 异丙醇
EDTA 乙二胺四乙酸
如本文所用，“烷基”是指完全饱和(即，不包含双键或三键)的直或支烃链。烷基基团可具有1至20个碳原子(当诸如1至20的数字范围出现在本文中时，它是指在给定范围中的每个整数；例如，“1至20个碳原子”是指烷基基团可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，多至且包括20个碳原子组成，尽管本定义还涵盖了其中未指定数值范围的术语“烷基”的存在)。烷基基团也可以是具有1至10个碳原子的中等大小的烷基。烷基基团也可以是具有1-4个碳原子的低级烷基。烷基基团可以被指定为“C1-4烷基”或类似的名称(designation)。仅作为示例，“C1-4烷基”表示在烷基链中有1至4个碳原子，即，该烷基链选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。典型的烷基基团包括但绝不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
如本文所用，“烷氧基”是指式-OR，其中R是如上所定义的烷基，诸如“C1-9烷氧基”，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。
如本文所用，“烯基”是指含有一个或多个双键的直或支烃链。烯基基团可具有2至20个碳原子，尽管本定义也涵盖了其中未指定数值范围的术语“烯基”的存在。烯基基团也可以是具有2至9个碳原子的中等大小的烯基。烯基基团也可以是具有2-4个碳原子的低级烯基。烯基基团可以被指定为“C2-4烯基”或类似的名称。仅作为示例，“C2-4烯基”表示在烯基链中有2-4个碳原子，即，该烯基链选自乙烯基、丙烯-1-基、丙烯-2-基、丙烯-3-基、丁烯-1-基、丁烯-2-基、丁烯-3-基、丁烯-4-基、1-甲基-丙烯-1-基、2-甲基-丙烯-1-基、1-乙基-乙烯-1-基、2-甲基-丙烯-3-基、丁-1,3-二烯基、丁-1,2-二烯基和丁-1,2-二烯-4-基。典型的烯基基团包括但绝不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基等。
如本文所用，“炔基”是指含有一个或多个三键的直或支烃链。炔基基团可具有2至20个碳原子，尽管本定义也涵盖其中未指定数值范围的术语“炔基”的存在。炔基基团也可以是具有2至9个碳原子的中等大小炔基。炔基也可以是具有2-4个碳原子的低级炔基。炔基基团可以被指定为“C2-4炔基”或类似的名称。仅作为示例，“C2-4炔基”表示在炔基链中有2-4个碳原子，即，该炔基链选自乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基、丁炔-1-基、丁炔-3-基、丁炔-4-基和2-丁炔基。典型的炔基包括但绝不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基等。
如本文所用，“亚烷基”是指二价基团，例如“(C1-C12)亚烷基”，包括亚甲基(即，-CH2-)、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基、亚叔丁基、亚戊基、亚己基、亚辛基、亚壬基、亚癸基、亚十一烷基、亚十二烷基等。在衍生自相应烷烃的名称的可替代的通用名称下，上述二价基团也可被称为甲烷二基、乙烷二基、正丙烷二基、丙烷-1,2-二基等。
如本文所用，“亚烯基”是指二价基团，例如“(C2-C12)亚烯基”，包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基、亚壬烯基、亚癸烯基、亚十一碳烯基、亚十二碳烯基等。
如本文所用，“亚炔基”是指二价基团，例如“(C2-C6)亚炔基”，包括亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、亚戊炔基、亚己炔基等；否则通常被称为乙炔二基、丙炔二基、丁炔二基等。
如本文所用，“芳族”是指具有共轭π电子系统的环或环系统，并且包括碳环芳族基团(例如，苯基)和杂环芳族基团(例如，吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即，共享相邻原子对的环)基团，条件是整个环系统是芳族的。
如本文所用，“芳基”是指具有单环(例如，苯基)或多重稠合环(例如，萘基)的6至14个碳原子的不饱和芳族碳环基团。示例性的芳基基团包括苯基。
如本文所用，“杂芳基”是指在环骨架中含有一个或多个杂原子(即除碳以外的元素，包括但不限于氮、氧和硫)的芳族环或环系统(即，两个或更多个共享两个相邻原子的稠环)。当杂芳基是环系统时，系统中的每个环都是芳族的。杂芳基可具有5-18个环成员(即，构成环骨架的原子数，包括碳原子和杂原子)，尽管本定义还涵盖了其中未指定数值范围的术语“杂芳基”的存在。在一些实施方案中，杂芳基基团具有5至10个环成员或5至7个环成员。杂芳基基团可以被指定为“5-7元杂芳基”、“5-10元杂芳基”或类似的名称。杂芳基环的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、嗪酞基、吡咯基、
Figure BDA0003077577090000131
唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异
Figure BDA0003077577090000132
唑基、异噻唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并
Figure BDA0003077577090000141
唑基、苯并噻唑基、吲哚基、异吲哚基和苯并噻吩基。
如本文所用，“亚芳基”和“亚杂芳基”是指二价基团，例如亚苯基、亚联苯基和亚噻吩基。
如本文所用，“碳环基”是指在环系统骨架中仅含有碳原子的非芳族环的环或环系统。当碳环基为环系统时，两个或更多个环可以以稠合、桥连或螺连接方式被连接在一起。碳环基可以具有任何程度的饱和度，条件是在环系统中至少一个环不是芳族的。因此，碳环基包括环烷基、环烯基和环炔基。碳环基基团可以具有3至20个碳原子，尽管本定义也涵盖了其中未指定数值范围的术语“碳环基”的存在。碳环基也可以是具有3至10个碳原子的中等大小碳环基。碳环基基团也可以是具有3至6个碳原子的碳环基。碳环基基团可以被指定为“C3-6碳环基”或类似的名称。碳环基环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、2,3-二氢-茚、二环[2.2.2]辛基、金刚烷基和螺[4.4]壬基。
如本文所用，“环烷基”是指完全饱和的碳环基环或环系统。如本文所用的术语“C3-7环烷基”是指具有3至7个碳原子的完全饱和的碳环基环或环系统。合适的C3-7环烷基基团可以包含其苯并稠合类似物。示例性的C3-7环烷基基团包括环丙基、环丁基、苯并环丁烯基、环戊基、茚满基、环己基和环庚基。
如本文所用，“环烯基”是指具有至少一个双键的碳环基环或环系统，其中在该环系统中没有环是芳族的。实例是环己烯基。
如本文所用，“环炔基”是指具有至少一个三键的碳环基环或环系统，其中在该环系统中没有环是芳族的。
如本文所用，“杂环基”是指在环骨架中含有至少一个杂原子的非芳族环的环或环系统。杂环基可以以稠合、桥连或螺连接的方式被连接在一起。杂环基可以具有任何程度的饱和度，条件是在环系统中至少一个环不是芳族的。因此，杂碳环基包括杂环烷基、杂环烯基和杂环炔基。杂原子可以存在于环系统中非芳族环或芳族环中。杂环基基团可具有3至20个环成员(即，构成环骨架的原子数，包括碳原子和杂原子)，尽管本定义还涵盖了其中未指定数值范围的术语“杂环基”的存在。杂环基基团也可以是具有3至10个环成员的中等大小杂环基。杂环基基团也可以是具有3至6个环成员的杂环基。杂环基基团可以被指定为“3-6元杂环基”或类似的名称。在优选的六元单环杂环基中，杂原子选自O(氧)、N(氮)或S(硫)中的一至三个，并且在优选的五元单环杂环基中，杂原子选自一个或两个选自O(氧)、N(氮)或S(硫)的杂原子。
如本文所用，“杂环烷基”是指饱和环的环并且至少一个杂原子选自氧、硫和氮，并且可以包含其苯并稠合类似物，例如，C3-7杂环烷基。如本文所用的术语“C3-7杂环烷基”是指含有3至7个碳原子和至少一个选自氧、硫和氮的杂原子的饱和单环，并且可以包含其苯并稠合类似物。示例性的杂环烷基基团包括氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、吡咯烷基、吲哚啉基、二氢异吲哚啉基、异吲哚啉基、
Figure BDA0003077577090000151
唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡喃基、苯并二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、1,2,3,4-四氢喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、哌嗪基、1,2,3,4-四氢喹喔啉基、六氢-[1,2,5]噻二唑并[2,3-a]吡嗪基、高哌嗪基、吗啉基、苯并
Figure BDA0003077577090000152
嗪基、硫吗啉基、氮杂环庚烷基(azepanyl)、氧氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、硫杂二氮杂环庚烷基、氮杂环辛烷基(azocanyl)、(亚氨基)(氧代)噻嗪烷基((imino)(oxo)thiazinanyl)、(氧代)噻嗪烷基、(二氧代)噻嗪基、四氢噻吩基(thiophenyl)、(氧代)四氢噻吩基、(二氧代)四氢噻吩基和(氧代)硫吗啉基。
如本文所用，“杂环烯基”是指单不饱和或多不饱和单环的环并且至少一个杂原子选自氧、硫和氮，并且可以包含其苯并稠合类似物，例如C3-7杂环烯基。如本文所用的术语“C3-7杂环烯基”是指含有3至7个碳原子和至少一个选自氧、硫和氮的杂原子的单不饱和或多不饱和单环的环，并且可以包含其苯并稠合类似物。示例性的杂环烯基基团包括噻唑啉基、咪唑啉基、二氢吡喃基、二氢硫吡喃基(dihydrothiopyranyl)、1,2,3,6-四氢吡啶基、1,2-二氢吡啶基和1,2-二氢嘧啶基。
如本文所用，“亚环烷基”和“亚杂环烷基”在本文中是指二价基团，其中“亚环烷基”是指饱和的环烷烃二基和部分饱和的单环基团，诸如环烯-二基，而“亚杂环烷基”是指如上所定义的亚环烷基并且至少一个杂原子选自氧、硫和氮，例如“(C3-C8)亚环烷基”和“(C3-C8)亚杂环烷基”，包括亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基、二环[2.2.1]庚-2-亚基和亚奎宁环基、亚吡咯烷基、亚哌啶基、氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-亚基、氮
Figure BDA0003077577090000161
二环[2.2.2]亚辛烷基(octanylene)、[1.2.3.6]四氢吡啶基-[1.4]二基等。
如本文所用，氧代部分由(O)表示，其作为其他常见表示形式例(＝O)的替代。
如本文所用，“卤素”是指氟、氯、溴和碘原子，通常是氟、氯或溴原子。
在本申请的第一方面中，涉及下式(I)的化合物：OPA-L(I)，其中OPA为
Figure BDA0003077577090000162
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被选自-NH、-C＝O和-O-的一个或多个基团取代，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；肽，像二肽、三肽、四肽、五肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代。
在一些实施方案中，所述取代基包括但不限于卤素、卤代(C1-6)烷基、C1-6烷基、(C3-7)环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基、氨基-(C1-6)烷基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基氨基、甲酰基、乙酰基、C2-6烷基羰基、(C2-6)烷基-羰基氧基(C1-6)烷基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基氨基、氨基羰基或酰氨基。
在一些实施方案中，L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000181
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000182
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000191
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数(包括0、1、2、3、4或5，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7或8，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数(包括0、1、2、3、4、5或6，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000192
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003077577090000193
在本申请的第二方面中，涉及下式(II)的化合物：OPA-L-D(II)，其中OPA为
Figure BDA0003077577090000194
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇。
在一些实施方案中，所述取代基包括但不限于卤素、卤代(C1-6)烷基、C1-6烷基、(C3-7)环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、(C1-6)烷氧基(C1-6烷基、氨基-(C1-6)烷基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基氨基、甲酰基、乙酰基、C2-6烷基羰基、(C2-6)烷基-羰基氧基(C1-6)烷基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基氨基、氨基羰基或酰氨基。
在一些实施方案中，D独立地为活性剂，其中所述活性剂选自：PBD二聚体、喜树碱衍生物、阿霉素衍生物、卡奇霉素(Calicheamicin)、倍癌霉素(Duocarmycin)衍生物、鹅膏蕈碱、Tubulysin衍生物、白喉毒素、Azonafide、布地奈德、达沙替尼(Dasatinib)、去乙酰长春碱酰肼(Desacetylvinblastine hydrazide)、地塞米松、哈米特林(Hemiasterlin)类似物、艾日布林(Eribulin)、FK506、Na,K-ATP抑制剂、链黑霉素B、酞菁染料、PM050489、Rifalogue、甾体糖苷、噻吩并吲哚、钇-90。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000221
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000222
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000223
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数(包括0、1、2、3、4或5，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7或8，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数(包括0、1、2、3、4、5或6，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000224
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003077577090000231
在本申请的第三方面中，涉及下式(III)的化合物：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括IgG，双特异性抗体，抗体片段诸如Fab、Fab’、F(ab’)2和scFv，仅重链抗体或纳米抗体；OPA是
Figure BDA0003077577090000232
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇；p为整数，是指结合到细胞结合剂的活性剂的数目，其中p为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)。
在一些实施方案中，所述取代基包括但不限于卤素、卤代(C1-6)烷基、C1-6烷基、(C3-7)环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基、氨基-(C1-6)烷基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基氨基、甲酰基、乙酰基、C2-6烷基羰基、(C2-6)烷基-羰基氧基(C1-6)烷基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基氨基、氨基羰基或酰氨基。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基基团具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000251
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000252
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000253
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数(包括0、1、2、3、4或5，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7或8，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数(包括0、1、2、3、4、5或6，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000261
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，D是独立的活性试剂，其中所述活性试剂选自：PBD二聚体、喜树碱衍生物、阿霉素衍生物、卡奇霉素、倍癌霉素衍生物、鹅膏蕈碱、Tubulysin衍生物、白喉毒素、Azonafide、布地奈德、达沙替尼、去乙酰长春碱酰肼、地塞米松、哈米特林类似物、艾日布林、FK506、Na,K-ATP抑制剂、链黑霉素B、酞菁染料、PM050489、Rifalogue、甾体糖苷、噻吩并吲哚、钇-90。
在一些实施方案中，其中所述OPA-L-D选自：
Figure BDA0003077577090000262
在一些实施方案中，Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括选自以下的IgG：IgG 1(诸如曲妥珠单抗或西妥昔单抗)、IgG 2、IgG 3、IgG 4(诸如奥英妥珠单抗(Inotuzumab))，并且所述仅重链抗体包括但不限于HcAb-1或HcAb-2。
在一些实施方案中，式(III)的化合物包括但不限于曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、曲妥珠单抗-ZY-868、曲妥珠单抗-ZY-894、爱必妥(Erbitux)-ZY-889、奥英妥珠单抗-Zy-889、HcAb-1-ZY-894和HcAb-2-ZY-894。
在一些实施方案中，式(III)的化合物选自：曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、HcAb-1-ZY-894、HcAb-2-ZY-894和HcAb-2-ZY-894。
在本申请的第四方面中，涉及用于制备下式(III)的缀合物的如上所定义的式OPA-L(I)的化合物的用途：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中Ab、OPA、L、D和p如上所定义。
在一些实施方案中，OPA为
Figure BDA0003077577090000271
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自-NH、-C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；肽，像二肽、三肽、四肽、五肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇。
在一些实施方案中，所述取代基包括但不限于卤素、卤代(C1-6)烷基、C1-6烷基、(C3-7)环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基、氨基-(C1-6)烷基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基氨基、甲酰基、乙酰基、C2-6烷基羰基、(C2-6)烷基-羰基氧基(C1-6)烷基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基氨基、氨基羰基或酰氨基。
在一些实施方案中，L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000291
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000292
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000301
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数(包括0、1、2、3、4或5，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7或8，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数(包括0、1、2、3、4、5或6，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000302
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述OPA-L选自：
Figure BDA0003077577090000303
在一些实施方案中，D独立地为活性剂，其中所述活性剂选自：PBD二聚体、喜树碱衍生物、阿霉素衍生物、卡奇霉素、倍癌霉素衍生物、鹅膏蕈碱、Tubulysin衍生物、白喉毒素、Azonafide、布地奈德、达沙替尼、去乙酰长春碱酰肼、地塞米松、哈米特林类似物、艾日布林、FK506、Na,K-ATP抑制剂、链黑霉素B、酞菁染料、PM050489、Rifalogue、甾体糖苷、噻吩并吲哚、钇-90。
在一些实施方案中，Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括选自以下的IgG：IgG 1(诸如曲妥珠单抗或西妥昔单抗)、IgG 2、IgG 3、IgG 4(诸如奥英妥珠单抗)，并且所述仅重链抗体包括但不限于HcAb-1或HcAb-2。
在一些实施方案中，式(III)的化合物包括但不限于曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、曲妥珠单抗-ZY-868、曲妥珠单抗-ZY-894、爱必妥-ZY-889、奥英妥珠单抗-Zy-889、HcAb-1-ZY-894和HcAb-2-ZY-894。
在一些实施方案中，式(III)的化合物选自：曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、HcAb-1-ZY-894、HcAb-2-ZY-894和HcAb-2-ZY-894。
在本申请的第五方面中，涉及制备下式(III)的缀合物的如上所定义的式OPA-L-D(II)的化合物的用途：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中Ab、OPA、L、D和p如上所定义。
在一些实施方案中，OPA为
Figure BDA0003077577090000311
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自-NH、-C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇。
在一些实施方案中，所述取代基包括但不限于卤素、卤代(C1-6)烷基、C1-6烷基、(C3-7)环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基、氨基-(C1-6)烷基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基氨基、甲酰基、乙酰基、C2-6烷基羰基、(C2-6)烷基-羰基氧基(C1-6)烷基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基氨基、氨基羰基或酰氨基。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000331
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000332
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000341
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数(包括0、1、2、3、4或5，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7或8，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数(包括0、1、2、3、4、5或6，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000342
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述OPA-L-D选自：
Figure BDA0003077577090000351
在一些实施方案中，D独立地为活性剂，其中所述活性剂选自：PBD二聚体、喜树碱衍生物、阿霉素衍生物、卡奇霉素、倍癌霉素衍生物、鹅膏蕈碱、Tubulysin衍生物、白喉毒素、Azonafide、布地奈德、达沙替尼、去乙酰长春碱酰肼、地塞米松、哈米特林类似物、艾日布林、FK506、Na,K-ATP抑制剂、链黑霉素B、酞菁染料、PM050489、Rifalogue、甾体糖苷、噻吩并吲哚、钇-90。
在一些实施方案中，Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括选自以下的IgG：IgG 1(诸如曲妥珠单抗或西妥昔单抗)、IgG 2、IgG 3、IgG 4(诸如奥英妥珠单抗)，并且所述仅重链抗体包括但不限于HcAb-1或HcAb-2。
在一些实施方案中，式(III)的化合物包括但不限于曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、曲妥珠单抗-ZY-868、曲妥珠单抗-ZY-894、爱必妥-ZY-889、奥英妥珠单抗-Zy-889、HcAb-1-ZY-894和HcAb-2-ZY-894。
在一些实施方案中，式(III)的化合物选自：曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、HcAb-1-ZY-894、HcAb-2-ZY-894和HcAb-2-ZY-894。
在本申请的第六方面中，涉及用于制备下式(III)的缀合物的方法：Ab-(OPA-L-D)p(III)，其中所述缀合物包含通过在Ab上的伯胺和OPA-L的反应连接到Ab的D，所述方法包括以下步骤：(a)使D与OPA-L接触以将OPA-L共价连接到D并因此制备OPA-L-D，其中D、OPA和OPA-L-D如上所定义；(b)通过使OPA-L-D与Ab反应将Ab缀合到OPA-L-D以制备式(III)的缀合物，其中Ab和p如上所定义；和(c)用下游步骤诸如缓冲液交换或柱纯化来纯化式(III)的缀合物。
在一些实施方案中，其中OPA为
Figure BDA0003077577090000361
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇。
在一些实施方案中，所述取代基包括但不限于卤素、卤代(C1-6)烷基、C1-6烷基、(C3-7)环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基、氨基-(C1-6)烷基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、(C1-6)烷氧基(C1-6)烷基氨基、甲酰基、乙酰基、C2-6烷基羰基、(C2-6)烷基-羰基氧基(C1-6)烷基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基氨基、氨基羰基或酰氨基。
在一些实施方案中，D独立地为活性剂，其中所述活性剂选自：PBD二聚体、喜树碱衍生物、阿霉素衍生物、卡奇霉素、倍癌霉素衍生物、鹅膏蕈碱、Tubulysin衍生物、白喉毒素、Azonafide、布地奈德、达沙替尼、去乙酰长春碱酰肼、地塞米松、哈米特林类似物、艾日布林、FK506、Na,K-ATP抑制剂、链黑霉素B、酞菁染料、PM050489、Rifalogue、甾体糖苷、噻吩并吲哚、钇-90。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员；-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)，并且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000381
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000382
并且所述-CH3-任选地被卤素取代。
在一些实施方案中，其中L包括-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000391
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数(包括0、1、2、3、4或5，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7或8，以及所述整数之间的范围)；-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数(包括0、1、2、3、4、5或6，以及所述整数之间的范围)，并且所述杂芳基具有
Figure BDA0003077577090000392
并且所述-CH3-任选地被Cl取代。
在一些实施方案中，其中所述OPA-L-D选自：
Figure BDA0003077577090000393
在一些实施方案中，其中Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括IgG，双特异性抗体，抗体片段诸如Fab、Fab’、F(ab’)2和scFv，仅重链抗体或纳米抗体；D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇；p为整数，是指结合到细胞结合剂的活性剂的数目，其中p为0-15的整数(包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，以及所述整数之间的范围)。
在一些实施方案中，所述IgG包括但不限于IgG 1(诸如曲妥珠单抗或西妥昔单抗)、IgG 2、IgG 3、IgG 4(诸如奥英妥珠单抗)，并且所述仅重链抗体包括但不限于HcAb-1或HcAb-2。
在一些实施方案中，其中步骤(a)在具有pH7-12(包括pH7、pH8、pH9、pH10、pH11、pH12或所述pH之间的范围)的缓冲液(诸如PBS)中进行。此外，缓冲液包括但不限于硼酸盐缓冲液。
在一些实施方案中，其中步骤(b)在具有pH4-7(包括pH4、pH5、pH6、pH7或所述pH之间的范围，诸如pH5-7)的缓冲液中在4-37℃(包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38℃或所述温度之间的范围)下进行1h-24h(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24h或所述小时之间的范围，诸如2.5-4h)。
在一些实施方案中，其中步骤(b)中的缓冲液含有2.5％-20％(包括2.5％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％或所述含量之间的范围)的有机助溶剂(诸如DMA)，并且步骤(b)中的缀合是用5eq至30eq(5eq、6eq、7eq、8eq、9eq、10eq、11eq、12eq、13eq、14eq、15eq、16eq、17eq、18eq、19eq、20eq、21eq、22eq、23eq、24eq、25eq、26eq、27eq、28eq、29eq、30eq或所述当量之间的范围)的OPA-L-D/Ab进行的。
在一些实施方案中，其中使用0.5-15mg/ml(包括0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml或所述浓度之间的范围)的Ab溶液。
在一些实施方案中，在具有pH4-7的缓冲液(诸如PBS)中将5-30eq的含有连接体-有效负荷的OPA(OPA-L-D)与2.5％-20％有机助溶剂(诸如DMA)添加到0.5-15mg/ml的抗体(Ab)溶液中，并且反应在4-37℃下进行1h-24h，同时缓慢搅拌或摇动。用下游步骤诸如缓冲液交换或柱纯化来纯化所得产物。
实施例
实施例1.OPA-L和OPA-L-D的合成
Figure BDA0003077577090000411
(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(3a)
Figure BDA0003077577090000412
在冰浴中冷却在DCM(200mL)中的1,2-二氨基乙烷(13.5mL，200mmol)，在2小时内将Boc-酸酐(4.57ml，20mmol)逐滴添加到反应中。添加完成后，将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后温热至室温，并搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，然后将混合物在真空下蒸发，将残余物溶解在200ml 3N NaCO3(aq.)溶液中。将水溶液通过DCM萃取两次，将合并的有机层通过无水硫酸钠干燥、过滤并在真空下蒸发，以得到为无色油状物的纯产物3a(3g，94.4％)。
(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2a)
Figure BDA0003077577090000413
在0℃下，向化合物3a(1.4g，8.75mmol)和Et3N(2.4ml，17mmol)在无水DCM(50ml)中的溶液中逐滴添加氯乙酸酐(1.79g，10.4mmol)在DCM(8ml)中的溶液。将该溶液温热至室温并搅拌2小时。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过1N HCl溶液淬灭反应。将水溶液通过EtOAc萃取两次，将有机溶液通过无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，1:1v/v)，以得到为白色固体的化合物2a(1.531g，72.8％)。
N-(2-氨基乙基)-2-氯乙酰胺盐酸盐(1a)
Figure BDA0003077577090000421
向化合物2a(1.53g)在DCM(2ml)中的溶液中，添加在二
Figure BDA0003077577090000422
烷溶液(5ml)中的4NHCl，在室温下搅拌反应1小时。通过真空除去溶剂，并将残余物通过冷Et2O沉淀，以得到为白色固体的化合物1a(1.1g，98.2％)。
Figure BDA0003077577090000423
通过文献规程(参见Tung,C.L.；Wong,C.T.T.；Fung,E.Y.M.；Li,X.Org.Lett.2016,18,2600-2603)制备化合物3b。向化合物3b(2.5g，9.22mmol)在无水甲苯(200ml)中的溶液中，添加对甲苯磺酸(32mg，0.185mmol)和乙二醇(5.2ml，92.15mmol)。将混合物在迪安-斯塔克(dean-stark)装置中回流过夜。将反应冷却至室温后，将反应通过Et3N(0.8mL，5.7mmol)淬灭。然后将混合物在真空下蒸发并将残余物溶解在EtOAc中。将有机层用饱和NaHCO3(aq.)和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，2:1v/v)，以得到为黄色油状物的化合物2b(2.58g，90.5％)。向化合物2b(500mg，1.62mmol)在THF(10ml)中的溶液中，逐滴添加在水(5ml)中的LiOH(113mg，4.87mmol)到反应，并在室温下搅拌4h。在用1N HCl(aq.)酸化后，将反应混合物通过EtOAc萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在真空下蒸发，以得到为白色固体的化合物1b(477mg，100％)
N-(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)-3-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯基)丙酰胺(3)
Figure BDA0003077577090000431
向化合物1b(150mg，0.51mmol)在无水DMF(5ml)中的溶液中，添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003077577090000432
3-氧六氟磷酸盐(oxidhexafluorophosphate)(HATU)(194mg，0.51mmol)、DIPEA(0.33mL，1.8mmol)、化合物1a(150mg，0.867mmol)，并将该反应在室温下搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过真空除去溶剂。将残余物溶解在EtOAc中，然后通过1N HCl溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(DCM/EtOAc，1:2v/v)，以得到为白色固体的化合物3(183mg，89％)。
N-(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)-3-(3,4-二甲酰基苯基)丙酰胺(2)
Figure BDA0003077577090000433
向化合物3(133mg，0.96mmol)在DCM(2ml)中的溶液中缓慢加入TFA(8ml)。将反应在室温搅拌2h。然后将混合物在真空下蒸发，并将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(DCM/EtOAc，1:1v/v)，以得到为白色固体的化合物2(85mg，78％)。
Figure BDA0003077577090000441
合成从2b开始，该2b是通过所报道的方法(参见Tung,C.L.；Wong,C.T.T.；Fung,E.Y.M.；Li,X.Org.Lett.2016,18,2600-2603)从3-(4-羟苯基)丙酸获得的。首先用乙二醇与pTsOH一起处理化合物2b，以得到化合物OPA-COOMe(1b)。接着，将2-氯乙酰胺化合物(1a)与1b偶联，随后通过酸解，以得到化合物2。然后，在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中，用mertansine处理化合物2，以形成化合物ZY-868。
(14S,16S,33S,2R,4R,10E,12Z,14R)-86-氯-4-(((S)-16-(3,4-二甲酰基苯基)-2,3-二甲基-4,9,14-三氧代-7-硫杂-3,10,13-三氮杂十六烷酰基)氧基)-14-羟基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二氧代-7-氮杂-1(6,4)-oxazinana-3(2,3)-环氧乙烷(oxirana)-8(1,3)benzenacyclotetradecaphane-10,12-二烯-9-
Figure BDA0003077577090000442
(ZY-868)
Figure BDA0003077577090000443
将mertansine(7.38mg，0.01mmol)溶解在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中，最终浓度为0.5mM。将化合物2(9.7mg，0.029mmol)缓慢添加在DMSO中，并将反应在室温搅拌1h。通过RP-LCMS监测该反应。制备型HPLC纯化(具有0.1％TFA的10-60％ACN/H2O，在45min内)，随后在真空下浓缩并冻干，得到为白色固体的ZY-868(4.3mg，42.57％)。
1.2.关于11(ZY-889)的合成路线：
Figure BDA0003077577090000451
(1r,4r)-4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(5c)
Figure BDA0003077577090000452
在0℃下，向氨甲环酸(1g，6.36mmol)在无水DCM(50ml)中的溶液中添加Et3N(1.2ml，8.6mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.6ml，6.9mmol)，并搅拌过夜。通过真空除去溶剂，并将残余物溶解在水中，然后通过1N HCl溶液酸化并通过EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化，以得到为白色的化合物5c(728mg，44.6％)。
(((1r,4r)-4-((2-(2,5-二氧代环戊-3-烯-1-基)乙基)氨基甲酰基)环己基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(4c)
Figure BDA0003077577090000453
化合物4c是按照文献规程制备的(参见M.Richte,A.Chakrabarti,I.R.Ruttekolk,B.Wiesner,M.Beyermann,R.Brock,J.Rademann,Chem.Eur.J.2012,18,16708-16715)。向化合物5c(728mg，2.8mmol)在无水DMF(6ml)中的溶液中，添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003077577090000454
3-氧六氟磷酸盐(HATU)(1076mg，2.83mmol)、DIPEA(1.73mL，9.4mmol)、化合物2-(2-氨基乙基)环戊-4-烯-1,3-二酮盐酸盐(6c)(750mg，4.24mmol)，并将反应在室温搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过真空除去溶剂，并将残余物溶解在EtOAc中，然后通过1N HCl溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，1:5v/v)，以得到为白色固体的化合物4c(765mg，71.2％)。
(1r,4r)-4-(氨基甲基)-N-(2-(2,5-二氧代环戊-3-烯-1-基)乙基)环己烷-1-甲酰胺盐酸盐(3c)
Figure BDA0003077577090000461
向化合物4c(765mg)在DCM(5ml)中的溶液中，将在二
Figure BDA0003077577090000462
烷溶液(8ml)中的4N HCl逐滴添加到反应混合物。将混合物在室温搅拌1h，通过真空除去溶剂，并将残余物用冷Et2O洗涤，以得到为白色固体的化合物3c(732mg，100％)。
(1r,4r)-4-((3-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯基)丙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,5-二氧代环戊-3-烯-1-基)乙基)环己烷-1-甲酰胺(2c)
Figure BDA0003077577090000463
向化合物1b(300mg，1.02mmol)在无水DMF 3ml中的溶液中添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003077577090000464
3-氧六氟磷酸盐(HATU)(387.7mg，1.02mmol)、DIPEA(0.475mL，2.72mmol)、化合物3c(214.8mg，0.68mmol)，并将反应在室温搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过真空除去溶剂，将残余物溶解在EtOAc中，然后通过盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(EtOAc/MeOH，20:1v/v)，以得到为白色固体的化合物2c(187mg，49.7％)。
(1r,4r)-4-((3-(3,4-二甲酰基苯基)丙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,5-二氧代环戊-3-烯-1-基)乙基)环己烷-1-甲酰胺(1c)
Figure BDA0003077577090000471
向化合物2c(249mg，0.44mmol)在DCM(3ml)中的溶液中，将TFA(6ml)添加到该溶液。将混合物在室温搅拌2小时。然后将反应物在真空下蒸发，将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(DCM/MeOH，10:1v/v)，以得到为黄色固体的化合物1c(181.3mg，
Figure BDA0003077577090000472
合成从化合物6c开始，该化合物通过所报道的方法(参见M.Richte,A.Chakrabarti,I.R.Ruttekolk,B.Wiesner,M.Beyermann,R.Brock,J.Rademann,Chem.Eur.J.2012,18,16708-16715)从2-(2-氨基乙基)环戊-4-烯-1,3-二酮盐酸盐获得。将化合物6c与(1r,4r)-4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(5c)偶联以形成化合物4c。除去Boc后，将所得的3c与OPA-COOH(1b)偶联，随后通过酸解以生成化合物1c。然后使化合物1c与mertansine在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中反应以形成化合物ZY-889。
(14S,16S,33S,2R,4R,10E,12Z,14R)-86-氯-14-羟基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二氧代-7-氮杂-1(6,4)-oxazinana-3(2,3)-环氧乙烷-8(1,3)-benzenacyclotetradecaphane-10,12-二烯-4-基N-(3-((3-(2-((1r,4r)-4-((3-(3,4-二甲酰基苯基)丙酰氨基)甲基)环己烷-1-甲酰氨基)乙基)-2,4-二氧代环戊基)硫基(thio))丙酰基)-N-甲基-L-丙氨酸酯(ZY-889)
Figure BDA0003077577090000481
将mertansine(6.642mg，0.009mmol)溶解在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中，终浓度为0.5mM。缓慢添加在DMSO中的化合物1c(6.72mg，0.014mmol)，并将混合物在室温搅拌1h。通过RP-LCMS监测反应。制备型HPLC纯化(具有0.1％TFA的15-55％ACN/H2O，在45min内)，随后在真空下浓缩并冻干，得到ZY-889(6.25mg，59.5％)。
1.3.关于12(ZY-894)的合成路线：
(1r,4r)-4-((3-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯基)丙酰氨基)甲基)环己烷-1-甲酸甲酯(4d)
Figure BDA0003077577090000491
向化合物1b(100mg，0.34mmol)在无水DMF(2ml)中的搅拌的溶液中，添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003077577090000492
3-氧六氟磷酸盐(HATU)(130mg，0.34mmol)、DIPEA(0.119mL，0.69mmol)和反式-4-氨基甲基-环己烷甲酸甲酯(117mg，0.682mmol)，并将混合物在室温搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过真空除去溶剂，将残余物溶解在EtOAc中，然后通过盐水洗涤两次。将有机层用无水硫酸钠干燥，并在真空下蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，1:2v/v)，以得到为白色固体的化合物4d(138mg，90.1％)。
(1r,4r)-4-((3-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯基)丙酰氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(3d)
Figure BDA0003077577090000493
向化合物4d(137mg，0.306mmol)在THF(9ml)中的搅拌的溶液中，逐滴添加在水(3ml)中的LiOH(39.45mg，0.93mmol)。将混合物在室温搅拌4小时。用1N HCl(aq.)酸化后，将反应混合物通过EtOAc萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(EtOAc，0.1％AcOH)，以得到为白色固体的化合物3d(132mg，99.1％)。
(1r,4r)-N-(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)-4-((3-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯基)丙酰氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺(2d)
Figure BDA0003077577090000501
向化合物3d(132mg，0.304mmol)在无水DCM(15ml)中的溶液中，添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003077577090000502
3-氧六氟磷酸盐(HATU)(116.2mg，0.305mmol)、DIPEA(0.213mL，1.21mmol)、化合物1a(106mg，0.61mmol)，并将反应在室温搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过真空除去溶剂，将残余物溶解在EtOAc中，然后通过1N HCl溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(EtOAc/MeOH，15:1v/v)，以得到为白色固体的化合物2d(103mg，61.3％)。
(1r,4r)-N-(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)-4-((3-(3,4-二甲酰基苯基)丙酰氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺(1d)
Figure BDA0003077577090000511
向化合物2d(103mg，0.186mmol)在DCM(4ml)中的溶液中缓慢添加TFA(6ml)。将反应在室温搅拌2h。然后将混合物在真空下蒸发，并将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(DCM/MeOH，10:1v/v)，以得到为白色固体的化合物1d(52.9mg，60.4％)。
Figure BDA0003077577090000512
合成从反式-4-氨基甲基-环己烷甲酸甲酯(5d)与OPA-COOH(1b)的偶联开始，以形成化合物4d。甲酯脱保护并通过与化合物1a偶联而安装(installation)α-氯乙酰基基团后，得到化合物2d。酸解后，将所得的1d在室温下在硼酸缓冲液(pH＝10)中与mertansine反应，以得到化合物ZY-894。
(14S,16S,33S,2R,4R,10E,12Z,14R)-86-氯-14-羟基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二氧代-7-氮杂-1(6,4)-oxazinana-3(2,3)-环氧乙烷-8(1,3)-benzenacyclotetradecaphane-10,12-二烯-4-基(13S)-1-((1r,4r)-4-((3-(3,4-二甲酰基苯基)丙酰氨基)甲基)环己基)-12,13-二甲基-1,6,11-三氧代-8-硫杂-2,5,12-三氮杂十四烷-14-酸酯(oate)(ZY-894)
Figure BDA0003077577090000521
将mertansine(7.011mg，0.0095mmol)溶解在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中，最终浓度为0.5mM。缓慢添加在DMSO中的化合物1d(8.81mg，0.0189mmol)，并将反应在室温搅拌1h。通过RP-LCMS监测反应。制备型HPLC纯化(具有0.1％TFA的10-60％ACN/H2O，在45min内)，随后在真空下浓缩并冻干，得到为白色固体的ZY-894(5.15mg，47.68％)。
1.4.关于14(ZY-948)的合成路线：
4-(2-叠氮基乙基)苯酚(9f)
Figure BDA0003077577090000522
向酪胺(1.5g，10.9mmol)和碳酸氢钠在无水MeOH(30ml)中的搅拌的溶液中。在室温下将咪唑-1-磺酰基叠氮硫酸氢盐(8.48g，31.9mmol)添加到混合物，随后添加CuSO4.5H2O(7.4mg，0.03mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，将混合物浓缩，用水(50mL)稀释，用1N HCl溶液酸化，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(EtOAc，0.1％AcOH)，以得到为黄色油状物的化合物9f(1.39g，78.3％)(参见E.D.G.Borger,R.V.Stick,Org.Lett.,2007,Vol.9,No.19,3797-3800)。
5-(2-叠氮基乙基)-2-羟基苯甲醛(8f)
Figure BDA0003077577090000531
向化合物9f(1.39g，8.5mmol)、无水二氯化镁(1.2g，12.6mmol)和Et3N(5.45mL，39.2mmol)在无水CH3CN(70mL)的搅拌的溶液中添加多聚甲醛(1.73g，57.6mmol)。将反应混合物加热回流3小时并冷却至室温。然后通过1N HCl溶液酸化，并用EtOAc(200ml)萃取两次。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，2:1v/v)，以得到为无色油状物的化合物8f(1.29g，79.0％)。
4-(2-叠氮基乙基)邻苯二甲醛(6f)
Figure BDA0003077577090000532
向化合物8f(1.29g，6.74mmol)在EtOH(40mL)中的搅拌的溶液中，缓慢加入在EtOH(40mL)中的甲酰肼(809mg，13.4mmol)。将反应混合物回流2h。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，将反应混合物在冰浴中冷却，并将沉淀过滤并用己烷和冰冷的EtOH洗涤。将残余物(7f)在真空下干燥过夜。向化合物7f在无水THF(100ml)中的搅拌的溶液中，缓慢添加乙酸铅(IV)(6g，13.5mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌2.5h。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，将混合物穿过硅藻土过滤，并将滤液在真空下浓缩，以得到粗产物醛。将粗产物溶解在EtOAc(500ml)中，并通过盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，3:1v/v)，以得到为黄色固体的化合物6f(505mg，42.1％)。
2,2'-(4-(2-叠氮基乙基)-1,2-亚苯基)双(1,3-二氧杂环戊烷)(5f)
Figure BDA0003077577090000541
向化合物6f(895mg，4.40mmol)在无水甲苯(60ml)中的搅拌的溶液中，添加对甲苯磺酸(16mg，0.092mmol)和乙二醇(2.5ml，44mmol)。将混合物在迪安-斯塔克装置中回流过夜。混合物冷却至室温后，将反应通过Et3N(0.4mL，2.85mmol)淬灭。然后将混合物在真空下蒸发，并将残余物溶解在EtOAc中。将有机层用饱和NaHCO3(aq.)和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，2:1v/v)，以得到为黄色油状物的化合物5f(1.171g，91％)。
2-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯基)乙-1-胺(5)
Figure BDA0003077577090000542
向25mL的圆底烧瓶中，添加化合物5f(1.17g，4.02mmol)，随后添加炭载钯(10％w/w，50mg)和EtOAc(9ml)。将混合物在1atm H2气氛下搅拌直至反应完成，然后穿过硅藻土过滤以除去催化剂。在真空下浓缩溶剂，并得到为黄色油状物的产物5(1.01g，100％)。
(((1r,4r)-4-((3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯乙基)氨基甲酰基)环己基)甲基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(4e)
Figure BDA0003077577090000551
向(1r,4r)-4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(281mg，0.740mmol)在无水DMF(3ml)中的搅拌的溶液中。添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(142mg，0.741mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBt)(100mg，0.741mmol)、化合物5(178.3mg，0.672mmol)和DIEA(0.235ml，1.3mmol)，并将混合物在室温搅拌过夜。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，通过真空除去溶剂，将残余物溶解在EtOAc中，然后通过盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，1:2v/v)，以得到为黄色固体的化合物4e(224mg，53.2％)。
(1r,4r)-4-((2-氯乙酰氨基)甲基)-N-(3,4-二(1,3-二氧杂环戊-2-基)苯乙基)环己烷-1-甲酰胺(2e)
Figure BDA0003077577090000561
向化合物4e(73mg，0.116mmol)在DMF/MeCN(3:1)中的搅拌的溶液中，一次性加入二乙胺(1.4ml)。将混合物在室温搅拌过夜。通过在真空下蒸发除去溶剂，将残余物溶解在无水DCM中，并在冰浴中冷却。将氯乙酸酐(91.6mg，0.535mmol)和DIEA(0.4ml，0.23mmol)在DCM(5ml)中的溶液缓慢添加到反应混合物，将混合物在0℃至r.t.搅拌3小时。通过TLC板监测反应且反应被完全转化，将反应通过1N.HCl溶液(3ml)淬灭。将水溶液通过EtOAc萃取两次，将有机溶液通过无水硫酸钠干燥并蒸发。将残余物通过在硅胶上的快速柱色谱法纯化(己烷/EtOAc，1:3v/v)，以得到为白色固体的化合物2e(29g，33.7％)。
(1r,4r)-4-((2-氯乙酰氨基)甲基)-N-(3,4-二甲酰基苯乙基)环己烷-1-甲酰胺(1e)
Figure BDA0003077577090000571
向含有化合物2e(29mg，0.0604mmol)的25mL圆底烧瓶中添加TFA(5ml)。将混合物在室温搅拌2h。然后将混合物在真空下蒸发，随后用水和乙腈稀释。制备型HPLC纯化(具有0.1％TFA的15-50％ACN/H2O，在45min内)，随后在真空下浓缩并冻干，得到为白色固体的1e(19.8mg，80.5％)。
Figure BDA0003077577090000572
Figure BDA0003077577090000581
我们的ZY-948的合成从化合物5开始，该化合物是从酪胺以6步获得的。接着，将化合物5与(1r,4r)-4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸偶联，随后将甲酯去保护并安装α-氯乙酰基基团以得到化合物2e。酸化后得到化合物1e。然后在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中用mertansine处理化合物1e，以形成化合物ZY-948。
(14S,16S,33S,2R,4R,10E,12Z,14R)-86-氯-14-羟基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二氧代-7-氮杂-1(6,4)-oxazinana-3(2,3)-环氧乙烷-8(1,3)-benzenacyclotetradecaphane-10,12-二烯-4-基N-(3-((2-((((1r,4S)-4-((3,4-二甲酰基苯乙基)氨基甲酰基)环己基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)硫基)丙酰基)-N-甲基-L-丙氨酸酯(ZY-948)
Figure BDA0003077577090000591
将mertansine(9.8mg，0.0132mmol)溶解在硼酸盐缓冲液(pH＝10)中，最终浓度为0.5mM。缓慢添加在DMSO中的化合物1e(6.27mg，0.0159mmol)，并将反应在室温搅拌1h。通过RP-LCMS监测反应。反应完成后，制备型HPLC纯化(具有0.1％TFA的15-55％ACN/H2O，在45min内)，随后在真空下浓缩并冻干，得到为白色固体的ZY-948(3.1mg，21.3％)。
实施例2.抗体-药物缀合物的制备
实施例2.1.一般的缀合规程：
在具有pH 4-7的缓冲液(诸如PBS)中，向0.5-15mg/ml的抗体溶液中添加5-30eq的含有连接体-有效负荷的OPA与2.5％-20％有机助溶剂(诸如DMA)。将反应在4-37℃下进行1h-24h，同时缓慢搅拌或摇动。用下游步骤诸如缓冲液交换或柱纯化来纯化所得产物。有关详细信息，请参见实施例2.3-2.6。然而，技术人员将理解，本文的实施例并非旨在限制本发明的范围，而是用于举例说明本发明，并且在上述一般的缀合规程下可以进行并完成其他抗体和含有OPA的连接体-有效负荷(OPA-LD)之间的缀合。
实施例2.2.用于表征缀合的一般规程
在表1中列出了SEC-HPLC参数。
表1
Figure BDA0003077577090000601
用于表征缀合的LC-MS的一般规程
将40μg ADC溶液用50μl储存缓冲液(琥珀酸盐，pH 5.0)稀释，并用1.0M Tris-HCl(pH 8.0)补足至100μL的最终体积。添加1μL的PNGaseF(NEB)，并在37℃孵育过夜。然后用SEC-HPLC和LC-MS检测样品，通过每种物质的面积计算每种缀合物的分布。总体DAR是分布的加权平均值。
在表2和3中列出了HPLC和MR参数。
表2 HPLC参数
Figure BDA0003077577090000602
Figure BDA0003077577090000611
表3 MS参数
Figure BDA0003077577090000612
实施例2.3.曲妥珠单抗-ZY-889缀合物的制备
Figure BDA0003077577090000613
向35mM柠檬酸钠、150mM NaCl、2mM EDTA(pH 5.0)的溶液中添加曲妥珠单抗10mg/ml。将6.4eq的在DMA中的ZY-889添加到的抗体溶液中，DMA最终为10％。将混合物在22℃下孵育(温和的摇动)3小时。将产物通过40kD旋转脱盐柱纯化，同时使用缓冲液交换为20mM琥珀酸盐，pH 5.0。通过UV-vis、SEC-HPLC和LC-MS表征缀合产物。通过UV-vis确定的UV-DAR为3.59，通过SEC-HPLC确定的SEC-DAR为3.50，且通过SEC-HPLC确定的聚集为3.75％(参见图1)，在去糖基化后通过LC-MS确定的MS-DAR为3.17(参见图2)。
实施例2.4.曲妥珠单抗-ZY-948缀合物的制备
Figure BDA0003077577090000621
向35mM柠檬酸钠、150mM NaCl、2mM EDTA(pH 5.0)的溶液中添加曲妥珠单抗10mg/ml。将9.0eq的在DMA中的ZY-948添加到抗体溶液中，DMA最终为10％。将混合物在22℃下孵育(温和的摇动)3小时。将产物通过40KD旋转脱盐柱纯化，同时使用缓冲液交换为20mM琥珀酸盐，pH 5.0。通过UV-vis、SEC-HPLC和LC-MS表征缀合产物。通过UV-vis确定的UV，DAR为3.65，通过SEC-HPLC确定的SEC-DAR为3.51，且通过SEC-HPLC确定的聚集为3.63％(参见图3)，在去糖基化后通过LC-MS确定的MS-DAR为3.79(参见图4)。
实施例2.5.HcAb-1-ZY-894缀合物的制备
Figure BDA0003077577090000622
向35mM柠檬酸钠、150mM NaCl、2mM EDTA(pH 5.0)的溶液中添加HcAb-1(由药明生物生产的HcAb)，其为6mg/ml。将7.5eq的在DMA中的ZY-894添加到抗体溶液中，DMA最终为10％。将混合物在22℃孵育(温和的摇动)3小时。将产物通过40KD旋转脱盐柱纯化，同时使用缓冲液交换为20mM琥珀酸盐，pH 5.0。通过UV-vis、SEC-HPLC和LC-MS表征缀合产物。通过UV-vis确定的UV-DAR为3.78，通过SEC-HPLC确定的SEC-DAR为3.73，且通过SEC-HPLC确定的聚集为3.84％(参见图5)，在去糖基化后通过LC-MS确定的MS-DAR为3.10(参见图6)。
实施例2.6.HcAb-2-ZY-894缀合物的制备
向35mM柠檬酸钠、150mM NaCl、2mM EDTA(pH 5.0)的溶液中添加HcAb-2(由药明生物生产的HcAb)，其为6mg/ml。将7.5eq的在DMA中的ZY-894添加到抗体溶液中，DMA最终为10％。将混合物在22℃下孵育(温和的摇动)3小时。将产物通过40KD旋转脱盐柱纯化，同时使用缓冲液交换为20mM琥珀酸盐，pH 5.0。通过UV-vis、SEC-HPLC和LC-MS表征缀合产物。通过UV-vis确定的UV-DAR为2.70，通过SEC-HPLC确定的SEC-DAR为2.78，且通过SEC-HPLC确定的聚集为0.72％(参见图7)，在去糖基化后通过LC-MS确定的MS-DAR为3.19(参见图8)。
2.7.与含有OPA的连接体的缀合物的总结
除了在实施例2.3-2.6中的缀合物以外，基于一般的缀合规程还获得了另外的缀合物。所获得的所有缀合物(曲妥珠单抗-ZY-889、曲妥珠单抗-ZY-948、曲妥珠单抗-ZY-868、曲妥珠单抗-ZY-894、爱必妥-ZY-889、奥英妥珠单抗-Zy-889、HcAb-1-ZY-894和HcAb-2-ZY-894)总结在表4中。当然，技术人员将理解，在上述一般的缀合规程下可以进行并完成其他抗体和含有OPA的连接体-有效负荷(OPA-L-D)之间的缀合，并且其它含有OPA-L的缀合物也落入本发明的范围。
表4
Figure BDA0003077577090000631
Figure BDA0003077577090000641
从以上数据我们可以得出结论，缀合反应可以在宽范围的缓冲液组分、pH值(5.0-7.0)和反应温度(4-22℃)中进行。同时，该反应的副产物是水，因此在缀合后易于纯化。

Claims (20)

1.下式(I)的化合物：
OPA-L (I)
其中
OPA是
Figure FDA0003077577080000011
L包括
烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自-NH、-C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；
-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；
-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-20的整数；
-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；
肽，像二肽、三肽、四肽、五肽；
寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且
所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且杂芳基具有5至10个环成员；
-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；
-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-15的整数；
-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且
所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000021
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数；
-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-10的整数；
-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000022
并且
所述-CH3-任选地被卤素取代。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000031
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数；
-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-8的整数；
-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团取代，r为0-6的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000032
并且
所述-CH3-任选地被Cl取代。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003077577080000041
6.下式(II)的化合物：
OPA-L-D (II)
其中
OPA是
Figure FDA0003077577080000042
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；
D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员；
-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；
-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数；
-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且
所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000061
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数；
-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；
-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000062
并且
所述-CH3-任选地被卤素取代。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000063
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数；
-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数；
-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000071
并且
所述-CH3-任选地被Cl取代。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003077577080000072
11.下式(III)的化合物：
Ab-(OPA-L-D)p (III)
其中
Ab是细胞结合剂，其中所述细胞结合剂包括IgG，双特异性抗体，抗体片段诸如Fab、Fab’、F(ab’)2和scFv，仅重链抗体或纳米抗体；
OPA是
Figure FDA0003077577080000073
L包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基；-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-20的整数；-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数；-(CH2)o-杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-20的整数；-(CH2)q-环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，p为0-20的整数；-(CH2)r-环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-20的整数；肽；寡糖、聚乙二醇(PEG)及其组合，并且所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂环烷基、杂环炔基、芳基、杂芳基、-CH3、杂环烯基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基任选地被至少一个取代基取代；
D独立地为活性剂，其中所述活性剂包括抗癌剂，诸如Mertansine和MMAE；抗炎剂；荧光素，诸如FTIC；肽；蛋白质；核苷酸；寡核苷酸；化疗药物；天然产物；免疫调节剂；微管蛋白结合剂；DNA-烷化剂；HSP90抑制剂；DNA拓扑异构酶抑制剂；抗表观遗传剂；HDAC抑制剂；抗代谢剂；蛋白酶体抑制剂；肽模拟物；siRNA；反义DNA；埃博霉素A、埃博霉素B或紫杉醇；
p为整数，是指结合到细胞结合剂的活性剂的数目，其中p为0-15的整数。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-15的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员；
-(CH2)o-C3-7杂环烷基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-15的整数；
-(CH2)q-C3-7环烷基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-15的整数；
-(CH2)r-C3-7环烷基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-15的整数，且杂芳基基团具有5至10个环成员，并且
所述环烷基、杂环烷基、-CH3和杂芳基任选地被氧代和卤素取代。
13.根据权利要求11所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-20的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000091
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-10的整数；
-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-10的整数；
-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中一个或多个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-10的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000092
并且
所述-CH3-任选地被卤素取代。
14.根据权利要求11所述的化合物，其中L包括
-(CH2)m-，其中不超过CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，m为0-10的整数；
-(CH2)n-杂芳基，其中不超过八个CH2被一个或多个选自NH、C＝O和-O-的基团替换，n为0-18的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000093
-(CH2)o-哌嗪基-(CH2)o-CH3，其中一个CH2被一个选自NH和C＝O的基团替换，o为0-5的整数；
-(CH2)q-环己基-(CH2)q-CH3，其中不超过六个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，q为0-8的整数；
-(CH2)r-环己基-(CH2)r-杂芳基，其中不超过五个CH2被一个或多个选自NH和C＝O的基团替换，r为0-6的整数，且5至10元杂芳基具有
Figure FDA0003077577080000101
并且
所述-CH3-任选地被Cl取代。
15.根据权利要求11所述的化合物，其中所述OPA-L-D选自：
Figure FDA0003077577080000102
16.根据权利要求1-10中任一项的化合物用于制备下式(III)的缀合物的用途：
Ab-(OPA-L-D)p (III)
其中Ab、OPA、L、D和p如在权利要求11-15中任一项中定义。
17.用于制备下式(III)的缀合物的方法：
Ab-(OPA-L-D)p (III)
其中所述缀合物包含通过在Ab上的伯胺和OPA-L的反应连接到Ab的D，所述方法包括以下步骤：
(a)使D与OPA-L接触以将OPA-L共价连接到D并因此制备OPA-L-D，其中D、OPA和L如权利要求11-16中任一项所定义；
(b)通过使OPA-L-D与Ab反应将Ab缀合到OPA-L-D以制备式(III)的缀合物，其中Ab和p如权利要求11-16中任一项所定义；和
(c)用下游步骤诸如缓冲液交换或柱纯化来纯化式(III)的缀合物。
18.根据权利要求17所述的方法，其中步骤(a)在具有pH 7-12的缓冲液中进行。
19.根据权利要求17所述的方法，其中步骤(b)在具有pH 4-7的缓冲液中在4-37℃下进行1h-24h。
20.根据权利要求17所述的方法，其中步骤(b)中的缓冲液含有2.5％-20％的有机助溶剂，并且步骤(b)中的缀合是用5eq至30eq的OPA-L-D/Ab进行的。
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