TW205553B - - Google Patents

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TW205553B TW081103237A TW81103237A TW205553B TW 205553 B TW205553 B TW 205553B TW 081103237 A TW081103237 A TW 081103237A TW 81103237 A TW81103237 A TW 81103237A TW 205553 B TW205553 B TW 205553B
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Description

經濟部中央»準局Λ工消费含作社_* A6 '_B6_ 五、發明説明（1 ) 本發明乃人類間白素一 6受體（以下簡稱為I L 一 6R之重組人類抗體有關者。詳言之，對於I L 一 6R的 鼠類單株抗體的可變領域（簡稱V領域），對於I L 一 6R的人類/鼠類嵌合抗體，人類輕鏈（簡稱L鏈）V領 域以及人類重鍵（簡稱Η鏈）V領域的互補決定領域（簡 稱CDR)為對於人類IL—6R的鼠類單株抗體CDR 所取代而構成之重組人類抗體有關者。本發明還提供上述 抗體或其部分的编碼DNA。本發明也有關於含有上述 DNA所構成的載體（Vector ),特別是表達載體，以 及由上述的載體所轉形或轉移的宿主。本發明還提供製造 對人類IL一6R的嵌合抗體的方法，以及抗人類IL— 6 R的重組人類抗體的製造方法。 IL-6乃經由多細胞所生産多功能性胞質分裂素。 具有調節免疫反應、急性相反應以造血等作用，而在宿主 防禦機構上扮演重要角色。所作用的組織範圍很廣，隨其 靶細胞性質而發揮成長誘導功能，成長阻礙功能以分化誘 導功能等作用。對於I L_6具有專一性的受體（簡稱為 IL—6R)隨IR—6的多功能性而出現在淋巴条統的 細胞以及非淋巴糸統的細胞上。據文獻可知IL一6基因 的異常表達和各種疾病，特別是自我免疫疾病、絲球體脈 管膜細胞增殖性絲球體腎炎以及漿細胞瘤/骨發瘤等發病 有關（參考平野等人，Immunol. Today，1 1 . 4 4 3 — 449,1990年綜說）。據觀察已知人類骨餹瘤細胞 會生産I L — 6並顯現I L — 6R。 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) ’丨裝- 訂· 本紙張尺度適用中國國家標準<CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 一 3 - 81.9.25,000 A6 B6 20挪3 五、發明説明（2 ) 據試驗結果顯示抗IL—6的抗體會阻礙試管中的骨 發瘤細胞的增殖，因此，暗示人類骨發瘤發病時有自我增 殖調節琛發揮其功能（參考Kawano等人，Nature, 3 3 2· 8 3，1 9 8 8 年）0 I L 一 6R存在於各種動物細胞表面上，而跟I L 一 6發生專一性的結合，並已有細胞表面上IL一6R分子 數相關報告（參考多賀等人，J. Exp. Med. 19 6· 967，1987年）。另外，人類IL 一 6R的编碼有 關cDNA已獲選殖成功，也有IL一6R的一级結構的 相關報告（參考山崎等人，Science, 2 4 1· 8 2 5, 1 9 8 8 年）。 鼠類的單株抗體在人體上有高度免疫性（或云抗原性 ),據此在人類醫療利用價值上有所限制。但在人體中鼠 類抗體的半衰期較短。再加上人類抗鼠類抗體不但能妨礙 預定效果，當屢次投與使用時也不可能避免引起具有不良 過敏反應的危險相關的免疫反應。 為解決上述困難，研究開發有人類化抗體（humanized antibody ) 的製造方法。鼠類抗體有二種方法可以 變成人類化抗體。比較簡單的方法乃像可變領域為來源於 原來的鼠類單株抗體，然後恒定領域（簡稱c領域）來源 於適當人類抗體而製成嵌合抗體的方法。據此所製得嵌合 抗體含有鼠類抗體的整個可變領域，可期待具有原來的鼠 類抗體相同專一性而跟抗原結合。另外，在嵌合抗體中來 源於人類以外的蛋白質順序比率，實際上已經減少，所以 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -4 - -裝------tr------Μ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準扃S工消费合作杜_« 81.9.25,000 經濟部中央櫺準局霣工消费合作杜褽 A6 B6 五、發明説明（3 ) 跟原來的鼠類抗體比較，可預測其免疫性較低。嵌合抗體 跟抗原的結合性很好，並且其免疫性較低，但仍然可能産 生對於鼠類可變領域的免疫反應（參考LoBuglio等人， Proc. Natl. Acad. Sci· USA, 8 4 . 4 2 2 0 — 4224, 1989 年）。 鼠類抗體變為人類化抗體的第二種方法較為複雜，但 能大幅度降低鼠類抗體的潛在免疫性。該方法係從鼠類抗 體的可變領域中的互補決定領域移植到人類可變領域而再 構築成為人類可變領域。然後將上述重組人類可變領域結 合在人類恒定領域。最後所製成的重組人類化抗體中，來 源人類以外的蛋白質順序部分僅存CDR和極少部分的 FR部分。CDR由超可變蛋白質順序所構成，並不表現 種的專一性順序。因此，保持有鼠類CDR的重組人類抗 體不再具備比較含有人類CDR的天然人類抗體更強的免 疫性才對。 據上述可知重組人類抗體在醫療上應有其利用價值， 但是目前為止，尚無抗人類IL—6R的重組人類抗體問 市。另外在製造重組人類抗體的方法中，也沒有能普通適 用於任意特定抗體的方法存在。所以要製造對於特定抗原 具有充分活性的重組人類抗體必需下很多研究工夫。目前 抗人類IL 一 6R的鼠類單株抗體，卽簡稱PMI和 MT 18已獲製成功（參考日本專利特願平2 — 1 89420)。本發明研究者也調製有對於人類I L_ 6尺的鼠類單株抗體八111<12 — 20,八1；1^64 — 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -5 一 81.9.25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) -裝- 訂- 經濟部中央標準局霣工消费合作杜_製 五、發明説明（4) 以及AUK 146 — 15,但本發明研究者等尚未看到任 何製造抗人類IL-6R的重組人類抗體有關文獻。 本發明研究者發現在移植有人類骨髄瘤細胞株的裸鼠 髏中，注射以抗人類IL — 6R的鼠類單株抗體時，腫瘤 的增殖會顯著受到阻礙的事實，此乃暗示抗人類IL一 6R抗體在骨髄瘤的治療上有藥劑用途。據此，本發明目 的在提供抗人類IL一6R的低免疫性抗體。 換言之，本發明以提供抗人類IL一6R的重組人類 抗體為目的。本發明還提供製造該重組人類抗體過程中有 用的人類/鼠類嵌合抗體。本發明也提供製造局部重組人 類抗體，以及重組人類抗體和其局部，以及其嵌合抗體時 所需表達条統。 更具體而言之，本發明乃提供抗人類IL一6R的鼠 類單株抗體的L鍵V領域；和抗人類IL—6R的鼠類單 株抗體的Η鏈V領域。 本發明也能提供含有下列L鏈和Η鏈所構成對於人類 IL一6R的嵌合抗體： (1) 含有人類L鍵C領域，以及抗人類IL一6R 的鼠類單株抗體的L鏈V領域所構成L斜； (2) 含有人類Η鏈C領域，以及抗人類IL—6R 的鼠類單株抗體的Η鏈V領域所構成Η鏈； 本發明又能提供抗人類IL-6R的鼠類單株抗體的 L鍵V領域的CDR;以及抗人類IL一6R的鼠類單株 抗體的Η鏈V領域的CDR。 A6 B6 {請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) —裝. 訂· 表紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -6 _ 81.9.25,000 A6 B6 五、發明説明（5 ) 本發明能提供含有下列（1) ， （2)項而構成的抗 人類IL—6R抗體的重組人類L鏈V領域： (1 )人類L鏈V領域的F R領域， (2)抗人類IL一6R的鼠類單株抗體的L鍵V領 域的C D R ; 以及能提供含有下列（1) ， （2)項而構成的抗人 類IL—6R的重組人類Η鏈V領域： (1) 人類Η鏈V領域的FR領域， (2) 抗人類IL一6R的鼠類單株抗體的Η鍵V領 域的C D R 〇 本發明能提供含有， (1) 人類L鏈C領域，以及 (2) 含有人類FR以及抗人類IL 一 61^的鼠類單 株抗體的C D R而構成L鏈V領域， 所構成抗人類I L-6R抗體的重組人類L鏈； 以及含有， (1 )人類Η鏈C領域，以及 (2)含有人類FR,以及抗人類IL—6R的鼠類 單株抗體的CDR而構成Η鏈V領域， 所構成抗人類IL—6R抗髏的重組人類Η鏈。 本發明還能提供， (Α)含有（1)人類L鐽C領域，以及（2)含有 人類L鍵FR,以及抗人類IL一6R抗體的重組人類L 鍵；以及 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 訂· 經濟部中央櫺準局霣工消费合作杜t-褽 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ·飞一 81.9.25,000 A6 B6 五、發明説明（6) (B)含有（1)人類Η鐽C領域，以及（2)含有 人類Η鍵FR·和抗人類IL—6R的鼠類單株抗體的Η 鍵CDR所構成Η鍵， 所構成抗人類IL一6R的重組人類抗體。 本發明更有關構成前述各種抗體的多肽，或其局部的 编碼D N A 〇 本發明也有關含有上述DNA的載體，例如表達載體 〇 本發明能提供由上述載體所轉形成轉移的宿主。 本發明也提供抗人類IL-6R的嵌合抗體的製造方 法，以及抗人類IL—6R的重組人類抗體的製造方法。 圖面的簡單說明： 圖1示含有顯現本發明的抗體狀有用的人類細胞巨大 病毒（簡稱為H CM V)啓動因子/強化因子条統所構成 的表達載體。 經濟部中央標準局霣工消费合作社，* 圖2示為確認結合於人類I L 一 6 R的本發明嵌合抗 體AUK 1 2 — 20能力而進行酶免疫測定結果。 匾3示為確認阻礙人類IL一6和人類IL-6R的 結合有關本發明嵌合抗體AUK 1 2 — 20的能力而進行 酶免疫測定結果。 圖4示本發明的嵌合抗體PMla和PM1b抗人類 IL—6R的結合並行酶免疫測定結果。 圖5示阻礙人類IL一6抗人類IL一6R的結合有 81.9.25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 本紙張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）-8 - A6 B6 五、發明説明（7 ) 關本發明的嵌合抗體PM1a和PM1b的能力試驗而進 行酶免疫測定結果。 圖6示製造重組人類PM_1抗體Η鏈V領域的第一 車專變部分（簡稱a version )的過程。 圖7示製造重組人類PM—1抗體L鏈V領域的第一 轉變部分（簡稱a version )的過程。 圔8示製造含有表達Η鏈有用的人類生長因子一 1 α (簡稱Η E F — 1 α)啓動因子/強化因子所構成的表達 質體HEF-12h-g<y 1的過程。 圖9示製造含有表逹L鏈有用的人類生長因子一 1 α 啓動因子/強化因子条而構成表達質體Η E F — 1 2 k_ g k的過程。 圖1 0示製造含有表逹Η鏈有用，為增ιέ而結合在缺 失的SV40啓動因子/強化因子順序中的二氫葉酸還原 酶（簡稱為dhfr)和HCMV啓動因子/強化因子所 構成的表達質體DHFR—PMh—g71的過程。 圖11示製造含有表逹Η鍵有用，為增幅而結合在缺 失的SV4啓動因子/強化因子順序中的二氫葉酸還原酶 基因以及E F 1 α啓動因子/強化因子所構成的表達質體 DHFR—AE—RVh—PMl—f的過程。 圖12示結合在人類IL一6R上的重組人類PM-1抗體L鏈V領域的a轉變部分和b轉變部分的能力曲線 0 圖13示結合在人類IL—6R上的重組人類PM— 衣紙張尺度適用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210X297公釐） -9 - 81.9*25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .•裝· 訂· «濟部中央標準局β工消#含作社<f褽
«濟部t央標準扃W工消*合作杜_製 五、發明説明（8) 玉抗體Η鍵V領域时f轉變部分和重組人類PM—1抗體 L_V領域a轉變部分的能力曲線。 圖14示阻礙IL一6結合在人類IL—6R上的重 組人類PM-1抗體Η鏈V領域的f轉變部分和重組人類 pM_1抗體Η鏈V領域a轉變部分的能力曲線。 圖15示含有分別為表達L鍵和Η鍵而有用的人類 Ε： F 1 — α啓動因子/強化因子而構成的表達質體Η E F 圖1 6示製造重組人類AUK 1 2 — 20抗體L鏈V 領域a轉變部分的编碼DNA的過程。 圖17示為確認結合在人類IL—6R上的重組人類 AUK 1 2 — 20抗體L鏈V領域的能力進行酶免疫測定 結果。圖中，標準AUK12 — 20 (嵌合體）係藉 CH0細胞大量製造嵌合AUK 1 2 — 20抗體就再行精 製者所得結果。 圖18示結合在人類IL一6R上的重組人類AUK 12 — 20抗體（L鍵a轉變部分和Η鍵b轉變部分）的 能力而進行酶免疫測定結果。 圖1 9示結合在人類I L — 6R上的重組人類AUK 1 2 — 20抗體（L鍵a轉變部分和Η鏈d轉變部分）的 能力而進行酶免疫測定結果。 圖20示重組人類sie 1220H抗體Η鏈V領 域的化學合成過程。 圖21示阻礙IL一6結合在人類IL—6R上的重 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) i裝. 訂· 本紙張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）"10 - 81.9.25,000 經濟部中央櫺準屬員工消♦合作社t-製 A6 B6 五、發明説明（9 ) 组人類s 1 e 1220H抗體（L鍵a轉變部分和Η鍵 a轉變部分）的能力而進行酶免疫測定結果。 圖22不阻礙IL一6結合在人類IL一6R上的重 組人類s 1 e 1220抗體（L鏈a轉變部分和Η鏈b 轉變ά分）的能力而行酶免疫测定結果。 圖23示阻礙IL一6結合在人類IL一6R上的重 組人類s 1 e 1 220抗體（L鏈a轉變部分和H_c 轉變部分）的能力而行酶免疫测定結果。 圖24示阻礙IL—6結合在人類IL一6R上的重 組人類s 1 e 1 220抗體（L鐽a轉變部分和Η鏈d 轉變部分）的能力而行酶免疫測定結果。 實施本發明的最佳方法詳述如下： 鼠類V铕城的组碾DNA的蓰铕 要選殖抗人類IL一6R的鼠類單株抗體V領域有鼷 编碼DNA,必須製造能生産抗人類IL一6R的單株抗 體的融合瘤（hybridoma )做為基因供源。該融合瘤有 關資料可參考日本專利特願平189420號的詳細 說明，記載能生産單株抗體PM1的鼠類融合瘤PM1和 該抗體之特性。該說明書中的參考例2則記載有融合瘤 PM1的製造方法。本發明研究者分別製造有能生産抗人 類IL—6R的鼠類單株抗體有闋融合瘤AUK12— 20, AUK64-7以及AUK146—15。該融合 瘤的製造方法詳述於本說明書的參考例3中。 以選殖鼠類單株抗體可變領域的编碼DNA為目的， 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS)甲4規格（210 X 297公犛）-11 - 81.9,25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝· 訂. A6 B6 _ 五、發明説明（ίο) 破壊融合瘤細胞，再依照chirewin等人所報告方法（參 考 Biochemi stry 1 8 . 5294，1977 年）取得整 套RNA。繼之，利用總RNA,依照J· W. Larrick 等人所報告方法（參考Biotechnology, 9 3 4, 1 989年）合成單股cDNA。 然後利用聚合酶鏈反應（Polymerase chain reaction. 簡稱 PC R 法） 就前述 cDNA 的有用部分進行專 一性增幅。為增幅鼠類單株抗體的*型L鏈V領域，使 用順序號碼：1〜1 1所示的1 1種的低聚核苷酸引物（ 源自Mouse Kappa Variable; MKV )以及順序號碼： 1 2所示的低聚核替酸引物（源自Mouse Kappa Consta-nt ; MKC )分別做為5 ’ _末端引物以及3 · —末端引物 。上述MKV引物可和鼠類《型！^鍵前導順序的编碼 DNA順序形成雜種。另外上述MKC引物可和鼠類λ 型L鏈C領域的编碼DNA順序形成雜種。為增幅鼠類單 株抗體的Η鍵V領域，使用順序號碼：13〜22所示的 1 0種低聚核替酸引物（源自Mouse Heavy Variable; MHV )以及順序號碼：23所示低聚核苷酸引物（源自 Mouse Heavy Constant; MHC )分別做為 5 ’ —末端引物 和3 ’ 一末端引物。 另外，5’ 一末端引物在其5__末端附近含有可供 限制酶Sa 1 I切割部位的核苷酸順序GTCGAC,然 後3’ _末端引物在其5_末端附近含有可供限制酶 Xma I切割部位的核苷酸順序CCCGGG。這些限制 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) _裝. 訂· 經濟部t央標準局員工消费合作社_褽 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐）_ 12 - 81.9.25,000 A6 B6 205挪 五、發明説明（11) 酶切割部位使用在可變領域编碼用DNA片段移植到選殖 載體（’cloning vector )之用途。 其次，利用限制酶s a 1 I和X m a I切割增幅的生 成物，而得鼠類單株抗體為目的物的可變領域编碼用 DNA片段。另一方面，例如將質體PUC19等適當的 選殖載體用相同的限制酶S a 1 I和X m a I加以切割， 然後接合前述DNA片段在pUC19而得含有以鼠類單 株抗體為目的物之可變領域编碼用DNAH段的質體。 選殖過的DNA順序可藉任意常用方法決定其構造。 實施例1〜3中具體説明目的物的DNA的選殖過程 和其順序決定之情形。 百補件決宙領域（CDR) 本發明還可以提供本發明中的各V領域的超可變或互 補性決定領域。L鍵和Η鍵的各對V領域形成了抗原結合 部位。L鏈和Η鍵上的該領域具有整套相同構造，各領域 含有比較保存著順序的四個FR領域，並由3値超可變領 域或CDR所連接（參考Kabat Ε· Α·等人著Sequences of Proteins of Immunolgical Interest . US. Dept· Health and Human Services，1 9 8 3 年）。上述四値 FR領域的大部分呈現3—面構造，CDR則形成環狀。 有時CDR也形成>3 —面構造之一部分。CDR藉FR而 保持非常相近位置，跟其他領域的CDR—起貢獻在抗原 結合部位的形成上。本發明也提供上述對人類化抗體材料 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）_ 13 - (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) ··裝· 訂. 經濟部中央標準局S工消费合作杜*« 81.9.25,000 A6 B6 經濟部中央標竿局S工消#合作社<f« 〇[>^ί>ν- 五、發明説明（12) 有用的CDR以及其编碼DNA。該CDR領域藉跟V領 域的已知胺基酸順序互相對照後，可參照Kabat· Ε· A· 等人的經驗法則而發現（參考Sequcences of Proteins of Immunological Interest ),將具體說明於實施例4 中。 嵌会杭體的魁诰 在設計抗人類IL一6R的抗體的重組人類V領域之 前，必須確認所使用CD R真正能形成抗原結合領域。該 目的之下製造嵌合抗體。更進一步從實施例1和2所記載 的4種單株抗體的選殖DNA的核苷酸順序可推测的鼠類 抗人類I L - 6 R抗體的胺基酸順序加以互相比較，同時 跟已知的鼠類和人類的抗體的V領域也做比較。從四種單 株抗體的每一種選殖一套典型功能的鼠類L鍵和Η鐽V領 域。但是這四種的鼠類抗人類I L — 6 R抗體皆具有比較 不相同的V領域。這四種抗體相互間的差異並不小。利用 選殖的鼠類V領域製造得四種嵌合抗人類IL一6R抗體 〇 製造嵌合抗體的基本方法，包括了PCR—選殖 cDNA所見的過程，將鼠類前導順序和V領域順序連接 在已存於哺乳類細胞表達載體中的人類C領域编碼順序而 達成。上述四種單株抗體中，由單株抗體AUK 12 — 2 0所製造嵌合抗體的過程介紹於實施例5中。 由單株抗體PM—1製造嵌合抗體的方法記載在實施 (請先閲讀背面之注意事項再蜞寫本頁) —裝. 訂. 本紙張尺廋適用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）―14 一 81·9·25,0⑻ Λ 6 Π 6 五、發明説明（13) 例6中。採用PCR法選殖了含有鼠類PM—1KL鍵前 導領域和V領域编碼c DNA在保有人類L鏈C領域编碼 人類基因組DNA的表逹載體。將鼠類PM— 1抗體（以 下或簡稱PM— 1抗體或PM)的Η鐽前導和V領域的编 c D N A ,利用P C R法次選殖（Subcloning )在含有 人類7 — 1 C領域的编碼基因組DNA的表逹載體。使用 特別設計的PCR引物，將鼠類PM—1抗體的V領域编 碼cDNA分別在其5’ 一末端和3· —末端處導入適當 的鹽基順序，並（1)令之容易插入表達載體，同時（2 )令之在該表達載體中能適當發揮功能。其次，利用這些 引物藉PCR法增幅而得鼠類PM—1抗體的V領域，插 入在已含有所欲人類C_領域的HCMV表逹載體中（參照
I 圖1)。這些載體很適用於表達各種哺乳類細胞条中經操 作基因的抗體的過渡性（transient )表達或表達的安 定性。 經濟部屮央櫺準局β工消费合作杜印製 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 % Η 製造具有存在於鼠類PM—1抗體中的V領域相同V 領域的嵌合PM—1抗體（a轉變部分）之外，也製造嵌 合PM— 1抗髏的b轉變部分。嵌合PM—1抗體b轉變 部分中，L鐽V領域的107位置上的胺基酸係由天冬醛 胺變為賴胺酸。因此從鼠類PM-1抗髏而得L鍵V領域 跟其他鼠類L鏈V領域比較時，107位置的天冬醛胺的 存在是一種異狀而受到注目。在鼠類KL鍵V領域中， 1 0 7位置的最典型的胺基酸仍然是賴胺酸。為要評估鼠 類PM_1抗體的L鍵V領域中107位置上具有非典型 S1. 2. 20,000 t紙ft尺Α进用中/1 家榣毕(CNS)甲4規格(210X297公Λ) -15 - Λ 6 Β6 五、發明説明（14) 胺基酸的天冬醯胺的重要性，將107位置的胺基酸改變 為典型胺基酸的賴胺酸。上述變更方法可藉PCR—突變 誘導法（參考 Μ · Kamman 等人，Nuc 1 . Ac i ds Res . 17 ,5404, 1 987年），在L鍵V領域编碼DNA順 序中加以必要的變化而逹成。 嵌合PM-1抗體a轉變部分顯示對人類IL—6R 的結合活性。嵌合PM_1抗體b轉變部分也和上述a轉 變部分一樣能結合在人類I I： 一 6R上。依照同樣方法， 從其他二種的單株抗體AUK64 — 7和AUK 1 46 — 1 5也製造得嵌合抗體。所有的四種嵌合抗體都能結合在 人類IL一6R上，從測定功能上顯示選殖有正確的鼠類 V領域並完成好順序。 經濟部屮央梂準局貝工消费合作社印製
Tk 閲 ih 背 而 之 >主 意 事 項 % Η 從四種鼠類抗人類IL一6R抗體中選擇鼠類PM— 1抗體作為設計並製造對人類I L 一 6R的重組人類抗體 之材料。選擇鼠類PM—1抗體主要根據研究了對於移植 在裸鼠的人類骨饉瘤細胞的鼠類抗人類IL一6R和嵌合 抗體的功效所得結果而決定者。四種鼠類抗人類IL— 6R抗體中，以PM—1抗體顯示最強有力的抗腫瘤細胞 活性。另外，嵌合PM—1抗體所表達的抗腫瘤性也較之 嵌合AUK12—20抗體為強。 鼠類單·株抗體PM — 1中V铕城和R知的鼠類以及人 額的抗體中V頜城的hh齡结里 為製造在人類單株抗體中移植有鼠類單株抗體的 S1. 2. 20,000 t紙張尺度遑用中國國家《準(CNS)甲4規格(210父297公龙） 一 16 一 Λ 6 It 6 五、發明説明（15) CDR而構成的重组人類抗體，自然希望在鼠類單株抗體 的F R和人類單株抗體的F R之間存在有很高的相同性質 。因此，將鼠類PΜ-1抗體的L鐽和Η鏈V領域跟文獻 中（參考OWL (或Leeds )蛋白質順序資料庫）所有 已知鼠類和人類的V領域進行比較。 有關鼠類抗體的V領域部分，PM—1抗體的L鐽V 領域跟鼠類抗體musiskcko (參考chen. Η. T.等人， J. Biol. Chem. 262： 1 3579- 1 3583, 1 987年）的L_V領域最為相似。大致存在有 93. 5% 的同一性（identity.)。另外，P.M — 1 抗 睡的Η鏈V領域和鼠類抗體musisvhr 2 (參考F. J· Grant 等人，Nucl. Ac.ids Res· 1 5 :5 4 9 6, 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 ih 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 # 填 % h 1 987年）的H鰱V領域最為相似，存在有8 4. 0% 的同一性。鼠類PM-1抗體的V領域顯示跟已知鼠類V 領域有高比率的同一性。表示鼠類ΡΜ—1抗體的V領域 乃屬典型的鼠類V領域。此事更能間接的證實選殖的 DNA順序是正確的。一般而言，L鏈V領域之間比較Η 鏟V領域之間保存有更高比率的同一性。這恐怕是起因於 L鐽V領域較之Η鍵V領域存在有較之一般所能觀察到的 較為少量的多元性之故。 人類抗體V領域有關部分，鼠類ΡΜ—1抗體的L鐽 V領域跟簡稱R Ε I的人類抗體Klhure (參考W· Palm 等人，Physiol . Chem. 3 5 6： 167-191, 1975年）的L鍵V領域最為相似，存在有72. 2% 81. 2. 20,000 f紙Λ尺度遑用中β國家《孕(CNS) T4規格(210 X 297公*) -17 - Λ 6 Π 6 五、發明説明（16) 的同一性。另外，ΡΜ_1抗體的Η鋪V領域跟人類抗體 humighvap (簡稱 VAP,參考 H. W. Schroeder 等人 ,Science. 2 3 8 ： 791—793, 1987 年）最 為相似，存在有71. 8%的同一性。為考慮如何從鼠類 PM— 1抗體設計重組抗體，最重要者還要跟人類V領域 進行比較。跟人類V領域的同一性比率較之鼠類V領域的 同一性比率為低。這是因為鼠類PM—1抗體的V領域類 似於鼠類V領域，然而不類似人類V領域的一種間接性證 據。此事更能顯示要解決人類疾病的免疫原性問題，最好 的解決方法還是要把鼠類PM-1的V領域進行人類化（ humanize )的事實。 鼠類P Μ - 1抗體的V領域再進一步跟E· A. Kabat 等人所定義的人類V領域的不同亞群比較其共同順序（參 考 Sequences of Proteins of Immunological Interest • Fourth Edition· U· S. Department of Health and Human Services , U. S· Government Printing Off ice )。就V領域的FR之間進行比較結果示於表1中。
Tk 先 閲 ih 背 而 之 注 意 事 項 m 寫 經濟部+央標準局员工消#合作社印31 81. 2. 20,000 各紙ft尺度边用中β國家《竿(CNS)T4規格(210X297公¢) -18 -
Λ 6 Η 6 五、發明説明（17) 表
» 鼠類PM—IV領域的FR和各種不同亞群的人類V 領域的共同順序（2;的F R之間的同一性（％ )比較結果 A . L鍵V領域的F R HSGI HSGII 70.1 53.3 B. H鍵V領域的F R HSGI HSGII 44.1 52.9 HSGIII 60.7 HSGIII 49.2 HSGIV 59.8 該（1)共同順序記載於Kabat等人的報告中（ 1 9 8 7 年）〇 (請先W讀背而之注意事項-4¾:寫本j 經濟部中央櫺準局e：工消赀合作杜印製 鼠類PM— 1抗體的L鐽V領域的F R跟人類L_V 領域的亞群I (HSGI)的共同順序中的FR最為相似 ,存在有70.1%的同一性。鼠類PM—1的Η鍵V領 域的FR跟人類Η鏈V領域的亞群I I (HSGI I)的 共同順序中的FR最為相似。存在有5 2. 9%的同一性 。上述结果支持跟已知人類抗體所比較而得結果。人類 RE I中的L鏈V領域屬於人類L鏈V領域的亞群I，同 時人類VAP中的Η鏈V領域則屬於人類Η鏈V領域的亞 群I 〇 由上述.跟人類抗體中V領域的比較結果，可以選擇做 為重組人類ΡΜ—1抗體V領域的設計基礎有關人類V領 域。設計重組人類ΡΜ — 1抗體L鏈V領域，得使用屬於 本紙張尺度逍用中a a家楳率(CNS)甲4規格(2丨0x297公 S1. 2. 20,000 -19 -
Λ 6 Π 6 五、發明説明（18) 請 閲 讀 背 而 之 /i 意 事 項 再 堝 % 亞群I (HSG I)的人類L鏈V領域，另外設計重組人 類PM— 1抗體Η鏈V領域乃以使用屬於亞群I (HSG I)的人類抗體Η鐽V領域為最上策。 重甜人類Ρ Μ 抗鵲V領城之設計 設計重組人類PM-1抗體V領域的第一步驟乃選擇 做為人類抗體V領域的設計上的基礎。鼠類PM—1抗體 L鍵V領域中的FR最類似於屬於亞群I的人類抗體L鐽1 V領域中的FR (參考表1)。如前逑，鼠類PM— 1抗 體的L鏈V領域和已知人類抗體L鍵V領域在比較下，跟 人類L鏈V領域的亞群I的组成中的人類L鏈V領域 RE I最為相似。因此^設計重組人類PM—1抗鼯L鏈 V領域時。採用由RE I所得FR，另外，製造重組人類 PM— 1抗體L鍵V領域的原料也使用R E I的F R。 這些來源於RE I的人類FR中，較之原來的人類 RE I存在有5個不同地方（參考Kabat等人， 1987年的資料，可知差異在位置一39, —71, _U 經濟部中央標準局EX工消#合作社印製 —104, — 105 和一 107,參照表2) FR4 中的 三個變化（在位置一 104, - 105和一 107)基於 其他人類KL鍵的J領域，因此，不能說成為脫離得自人 類的範圍（參考L . R i echmann等人，Na t ure，3 2 2: 21 — 25 ·, 1988 年）。另外，位置一 39 和一 71 的2個變化乃係回歸到鼠類CAMPATH—1抗體的L 鍵V領域中的FR中所存在胺基酸的變化（參考Riechm- S1. 2. 20,000 本紙張尺度遑用中國國家«毕(CNS)甲4規格(210X297公釐） -20 - Λ 6 U6 五、發明説明（19) ann 等人，1 988 年）。 請 先 閲 請 背 而 之 注 意 事 項 再 寫 另外，設計了重組人類PM—1抗體1鋪V領域的兩 値轉受部分，第一値轉變部分（a轉變部分）中，人類 F R和存在於重组人類CAMPATH— 1 Η抗器[中的基 於RE I的FR (參考Riechmann等人，1 9 8 8年） 相同，而鼠類CDR和鼠類PM — 1抗體的L鏈V領域中 的CDR相同。第二値轉變部分（b轉變部分）乃基於a 轉變部分，僅在人類FR3中的位置一71的一傾胺基酸% 不相同而已。依照C. Chothia等人的定義（參考J.M-〇l. Biol. 1 9 6. 901 — 917, 1987 年），殘 經濟部屮央標準局B3:工消#合作社印製 基7 1乃L鍵V領域的CDR1的榡準構造（canonical structure )的一部兮。_該位置的胺基酸對於L鐽V領 域的CDR1環可推測有直接影逛。因此/對於抗體結合 有重大影繼。鼠類PM-1抗體的L鐽V領域中，位置一 7 1的胺基酸為酪胺酸。設計重組人類PM— 1抗體的L 綾V領域的a轉變部分所使用的修飾RE I的FR中，位 置一71的胺基酸為苯丙胺酸。在重組人類PM-1抗體 L鐽V領域的b轉變部分中，位置一71的苯丙胺酸也能 顯現在鼠類PM—1抗體L鍵V領域中改變為酪胺酸。表 2示為鼠類PM—1抗體的L鏈V領域，重組人類 CAM PATH — 1 Η抗體中所使用而經修飾的RE I的 F R (參考· Riechmann等人，1 988年）以及重組人 類PM—1抗體的L鐽V領域的兩種轉變部分的各個胺基 酸順序。 . 81. 2. 20,000 卜紙張尺度A用中B B家楳準(CNS)甲4規格(210x297公*) -21 Λ 6 Π 6 五、發明説明（2〇) FR1 Μ
M a b PI L L L E V V V R β R
12345678901234567890123 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
CDR1 3 45678901234 RASQDISSYLN RASQDISSYLN
un a b p I L L LE V V V R R R
FR2 CDR2 4 5 567890123456789 '0123456 WYQQKPDGTIKLLIY ' YTSRLHS WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKLLIY YTSRLHS (請先閲讀背而之注意事項#蜞寫本
up a b PI L L LEV V V R R R -· FR3 6 7 8 78901234567890123456789012345678 GVPSRFSGSGSGTDYSLTINNLEQBDIATYFC GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC ..................Y-----------------
CDR3 9 901234567 QQGNTLPYT QQGNTLPYT 經濟部屮央標準局员工消费合作杜印製
M a b PILL〆 LE V V V R R R
FR4 10 8901234567 FGGGTKLBIN FGQGTKVEI^ FGQGTKVBIK 本紙張尺度遑用+ «家«毕(CNS) T4規格(210X297公釐） 81. 2. 20,000 22 A 6 Π6 r〇5553 五、發明説明（21) 請 Ml 讀 背 而 之 注 意 事 項 堝 寫 註：RE I的FR傜在重組人類CAMPATH-1 Η抗體中發現者（參考Riechmann等人，1 9 8 8年 )。RE I的FR中，在下面奎有直線的五個胺基酸乃不 同於人類RE I的胺基酸順序（參照Plam等人， 1 9 7 5 年；0 . Epp 等人，B i 〇-chem i s t ry，14 : 4 9 4 3 — 4 9 5 2, 1 9 7 5年）的胺基酸。鼠類PM 一 1抗體的Η鋪V領域中的F R最相似於屬於亞群I的人 類Η鐽V領域（參考表1)。如前述中，比較鼠類ΡΝί — Η 1抗體的Η鍵V領域和已知的人類Η鍵V領域時，發現最 類似於人類Η鐽V領域的亞群I的組成中之一的人類Η鐽 V領域VAP。採用人類Η鏈V領域的亞群I以外的組成 中的人類H_V領域的NEW做為製造重組人類ΡΜ—1 抗體的Η雄V領域的原料，並做為設計重組人類PM—1 抗體的Η鐽V領域的基礎使用之。 經濟部中央標準局ΚΧ工消费合作社印3i 設計重组人類ΡΜ—1抗體H_V領域的六種轉變部 分。所有六種轉變部分中，人類FR乃基於存在於重組D 1.3中NEW FR,而鼠類CDR和鼠類PM—1抗 體Η鍵V領域中的CDR相同。人類FR中的七値胺基酸 殘基（位置在 1, 27, 28, 29, 30, 48 和71 處；參考表3)被認同為具有對抗原結合不良影響的可能 性存在。在鼠類ΡΜ—1抗體的V領域的模式中，Η鍵V 領域中的殘基1為存在於CDR環附近的表面殘基。殘基 27, 28 / 29和30,依據C. Chothia等人所推測 乃傜Η鏈V領域的CDR1的標準構造（ canonical s t- 81. 2. 20,000 本紙張尺度逍用中國β家楳毕(CNS) T4規格(210x29/公*) 一 23 - Λ 6 η 6 五、發明説明（22) ructure )的一部分（參照 Nature，3 4 : 8 7 7 ~~ 882, 1 989年），以及/或在鼠類PM-1抗體V 領域楔式中也觀察得構成Η鏈V領域的第一構造瓖部分（ Chothia等人，1 987年）。殘基48在鼠類ΡΜ-1抗體的V領域的模式中，所觀察結果是一種埋設（buried) 殘基。造種殘基的變化 有破壊 V 領域以及其抗原 結合部分的整體構造的可能性。殘基7 1依照Chothia 等人（1 9 89年）所推測乃係Η鍵V領域的CDR2的 標準構造（canonical structure )的一部分。重組人 類PM—1抗體的六種轉變部分包含人類NRW FR中 的上述t値位置的胺基酸的不同排列組合者（參照表3) ih k, Μ 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 %
Jk 經濟部屮央櫺準局ex工消#合作社印製 ΜΑΛ尺度遑用中β β家《率(CNS>f4規格(210 x 297公*) S1. 2. 20,000 -24 - 五、發明説明（23) 衷
VhP«-1 NEW RV«a RV„b RVhc RV„d RVKe · RV„f'
FR1 1 2 3 123456789012345678901234567890 DVQLQESGPVLVKPSQSLSLTCTVTGYSIT QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFS QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGYTFT ..... Y--T D-.................-......Y--T ..........-............---Y--T D------------- Y--T --------------------------YSIT
CDR1 123455 A SDHAWS SDHAWS
un abed e f pw HMHHHH HEVVVVVV VNRRRRRR FR2 4 67890123456789 WIRQFPGNKLEWHG WVRQPPGRGLEWIG WVRQPPGRGLEWIG.
CDR2 5 6 01223456789012345 A YIS-YSGITTYNPSLKS YIS-YSGITTYNPSLKS (請先閱讀背而之注意事項洱蜞寫本/¾) FR3 7 8 9 67890123456789012222345678901234 ABC VhPM-1 RISITRDTSKNQFFLQLNSVTTGDTSTYYCAR NEW RVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYyCAR RVKa RVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYyCAR RVHb .....R.......................... RV„c -----R---......----------------- RV„d .....R......-................... RVHe .....R.....'..................... RV„f -----R ..............-.......-....... 經濟部中央標準局KS工消赀合作杜印製
VhPM-1 NEW RV„a RV„b RV„c RV„d RV„e RV„f
CDR3 10 5678900012 AB SLARTTAMDY SLARTTAMDY
FR4 11 34567890123 WGQGTSVTVSS WGQGSLVTVSS WGQGSLVTVSS 衣紙張足度遑用+ Β β家《準(CNS) T4規格(210X297公Λ) S1. 2. 20,000 -25 - Λ 6 Β6 五、發明説明（24) 註：NEW FR乃在重組人類CAMPATH — 1 Η抗體的第一轉變部分中（參照Riechmann等人， 1 988年）所發現者。
製诰重紐人類PM-1抗鵲V铕城的缗碾DNA 經濟部屮央標準而ΚΧ工消伢合作杜印製 (請先閲讀背而之注意事項!/>埸窍 利用新穎的PCR法製造重組人類PM—1抗體L鍵 .以及Η鐽V領域的各個第一轉變部分的编碼DNA。摘要 而言，利用PCR引物修飾已經含有適當人類FR的编碼 重組人類V領域的質體，將原料的人類V領域中所存在的 CDR以來源於鼠類ΡΜ-1抗體的CDR加以取代。製 造重組人類ΡΜ—1抗體L鏈V領域的编碼DNA所使用 原料，乃傜含有重组人pDl. 3L鍵V領域的编碼DN A的質體DNA。上述重組人類Dl. 3L鍵V領域乃基 於存在於人類L鍵V領域RE I中的FR而製造之。製造 重組人類PM—1抗髏Η鐽V領域的编碼DNA所採用原 料像重組人類Dl. 3Η鋳V領域的编碼DNA。這種重 組人類D1. 3抗體Η鏈V領域的编碼DNA乃基於存在 於人類Η鐽V領域NEW (參考W. Verh〇eyen等人。 Science, 2 3 9： 1534-1536, 1988 年） 的编碼DNA中的FR的编碼DNA而製造之。 選擇好含有所要人類F R的编碼DNA的原料質體 DNA之後·，再設計並合成能取代鼠類Dl. 3CDR的 鼠類ΡΜ-l抗體CDR用的PCR引物。就各値重組人 類PM — 1抗體V領域，三種的引物設計好含有鼠類 S1. 2. 20,000 本紙張尺A遑用中國家《毕(CHS) T 4規格(210X297公；tt) 一 26 _ 經濟部屮央標準局BX工消赀合作社印製 20挪3 五、發明説明（25) PM—1抗體CDR的编碼DNA順序，兩種的引物則設 計好夾有重組人類V領域的编碼整體DNA順序。一連串 的PCR反應中，使用上述五種的PCR引物，能製造得 由原料重組人類V領域中所保存人類F R的编碼DNA, 以及鼠類PM—1抗體V領域中所保存CDR的编碼 ,DNA所構成的PCR生成物（參照實施例7,圖7和圖 .8)。選殖上述PCR生成物，並分析其胺基酸順序而確 認了重組人類PM—1抗體L鏈V領域的a轉變部分的整 體DNA順序能達成正確地胺基酸順序编碼工作。重組人 類PM-1抗體L鏈V領域a轉變部分的順序示於順序號 碼5 5。 製造重組人類PM-_. 1抗體V領域的其他轉變部分的 编碼DNA的方法，乃將已公開的PCR_突變誘導方法 (參考Kamman等人，1 9 8 9年）稍加修改後使用之。 如同設計重組人頚PM—1抗體V領域時所記載。先製造 重組人類PM — 1抗體L鍵V領域的一個追加轉變部分（ 例如b轉變部分）的编碼DNA,然後製造重組人類PM 一 1抗體Η鏈V領域的五種追加轉變部分（b , c , d， e, f轉變部分）的编碼DNA。這種追加轉變部分包含 /由第一轉變部分的一連串微細的變化。胺基酸順序中的上 述微細變化可利用PC R突變誘導方法就DNA順序進行 微細變化而達成。設計好導入必要的變化到DNA順序所 用PCR引物。繼一連串的PCR反應，選殖PCR生成 物，分析其胺基酸順序而確認D N A順序中的變化是否依 Λ 6 η 6 (請先閲讀背而之注意事項再填寫4{"‘ 裝· 訂- 線- 81. 2. 20,000 -27 - Λ 6 η 6 五、發明説明（26) 照計畫而進行。重組人類ΡΜ—1抗體Η鏈V領域f轉變 部分的胺基酸順序示如順序號碼5 4。 利用順序分析確認重組人類PM-1抗體V領域的各 種轉變部分的DAN順序之後，將重組人類PM—1抗體 V領域的编碼DNA,次選殖在已含有人類C領域的编碼 DNA的哺乳類細胞表達載體中。然後將重組人類PM-1抗體V鏈L領域的编碼DNA接合在人類L鏈C領域的 编碼D N A順序上。重組人類P Μ — 1抗體Η鍵V領域的 编碼DNA則接合在人類7 - 1 C領域的编碼DNA順序 上。為逹成重組人類ΡΜ-l抗體的更高水準的顯現，将 圖1中所示HCMV表達載體加以修飾，以人類生長因子 (簡稱HEF — 1 a)梦動因子/強化因子取代了 HCMV啓動因子/強化因子的領域（參考圖15)。 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 % 其次，就重组人類L鏈V領域a轉變部分以及Η鐽V 領域（a )〜（f )轉變部分的所有排列组合跟人類I L 一6R的結合情形進行試驗，其结果如詳載於實施例11 ,顯示含L鏈a轉變部分和Η鐽f轉變部分而構成重組人 類抗體具有跟嵌合PM—1抗體（a)相同水準的結合 I L — 6 R的能力。
為改准弄镲水進戀审重組人額91^1一1抗體乂領域的 编碼D N A 當檢討C： 〇 S細胞中所生産重組人類PM — 1抗體的 表達水準時》發現重組人類Η鏈的表達，跟重組人類L鏈 S1. 2. 20,000 ΜΛ張尺尽遑用+ 8 «家牢(CHS) Ή規格(210x297公;*) -28 - Λ 6 η 6 五、發明説明（27) ih 先 閲 背 \1& 之 注 意 事 項 m % 或嵌合L鏈或Η銻的表達水準比較起來，往往只有大約十 分之一程度。逭種低水準的表逹，問題可能出在重組人類 Η鏈V領域上。為瞭解低表達水準是否為低水準的轉錄之 结果，利用表達重組人類ΡΜ—1抗體L鏈和Η鍵的各種 載體，同時轉移感染C 0 S細胞，並由之調製RNA。然 後依照前面的鼠類PM—1抗體V領域的编碼DNA所採 用PCR選殖法所記載方法，合成得單股CDNA。利用 設計好能夾住重組人類L鋪或Η鍵V領域的编碼DNA順 序的兩端之PCR引物，然後由相對應於重組人類L鐽V 領域或重組人類Η鍵V領域的前述單股c DNΑ製成 P C R生成物。 經濟部中央榣準扃α：工消#合作杜印製 重組人類L鏈V領域的编碼DNA存在有兩種PC R 生成物，其一保持有予測的長度為408bp,另一為較 短的PCR生成物，僅為299bp。具有正確大小的\ PCR生成物占總生成物置的大約90%,較短的PCR 生成物大約占總PCR生成物量的10%。重组人類Η鏈 V領域也一樣存在有兩種PCR生成物，其一仍然保持有 所予測的444bρ長度，另一為較短的370bρ的 PCR生成物。但是不正確的較短的PCR生成物卻占總 PCR生成物量的大部分，大約為90%。正確大小的 PCR生成物僅占總PCR生成物量的大約10%而已。 這些結果暗示重組人類V領域的编碼RNA有部分含有缺 失者。 ’ 為瞭解那些順序缺失，選殖較短的PCR生成物，然 S1. 2. 20,000 本紙》尺度逍用中a Η家桴準(CNS)甲4規格(210X297公；it) -29 Λ 6 η 6 五、發明説明（28) 请 先 閲 m 背 而 之 注 意 事 項 後分析其構造。由DNA順序發現在L鐽和ίΐ鏈V領域僅 缺少了DNA的待定部分。由檢討夾在缺失的順序的 DNA序列，發現這些順序傑相當於接合供體-受體順序 _用的共同順序（參照Breathnach，R.等人，Ann. Rev· B i ochem · 5 0 : 349 — 383，1981 年）。據此 可以說明重組人類Η鋪的低水準的表達，可能是所設計的 重组人類Η鍵V領域，或許不小心地形成了較有效的接合 供體一受體部位所致。另外，重組人類L鏈V領域的設計 ,或許不小心地較能形成非效性的接合供體一受體部位。 為要去除上述接合供體一受體部分，利用前述PCR—突 變誘導方法在人類PM—1抗體L鍵和Η鍵V領域的a轉 變部分以及f轉變部分编碼D N A順序上稍加以變更。 表逹水準下降的原因，推測係重组人類L鐽和Η鐽V 領域（順序號碼：5 4和，5 5 )二者的前導順序的编碼 DNA中所存在的插入序列（intron )所致。這些插入 序列原本來自製造重組人類D1. 3抗體的V領域（參考 Verhoeyen等人，1 988年）编碼DNA時所使用的鼠 類以？1鍵前導順序（參照^1，3.^1^6犷861：等人， 經濟部屮央標準局貝工消费合作社印製
Nature 3 14： 268 — 270, 1985 年）的编碼 DNA。重組人類D1. 3抗體的编碼DNA,表逹在使 用鼠類免疫球蛋白啓動因子的哺乳類細胞載髏，因此鼠類 前導插入序列的存在是很重要的。前導插入序列在表達免 疫球蛋白啓動因子上雖然重要，但如HCMV由病毒啓動 因子就含有不重要的（參考M. S. Neuberger等人， S1. 2. 20,000 本紙》•尺度遑用中B Η家《率(CNS) T4規格(210父297公*> -30 - Λ 6 Π 6 五、發明説明（29)
Nuc1. Acids· Res. 16 ： 67 1 3 — 6724, 1988年）順序。當重組人類PM—1抗體L鐽和H鋪 的编碼DNA像由免疫球蛋白啓動因子以外的啓動因子做 為載體上表達時，前導順序中的插入序列就在重组人類V 領域的编碼DNA的PCR —選殖時去除（參照實施例 12)〇 表達水準降低的其他可能的原因，推測為在重组人類 PM_ 1抗體Η鏈V領域的编碼DNA和人類7 — 1 C領 域的编碼DNA之間的插入序列中所存在的大約190 bp的非機能性的DNA。因此，從本來起源於重组人類 BI — 8H 鍵 V 領域（參考 Ρ· T· Jones 等人，Nature ,3 2 1 :522 — 5 2 5, 1986 年）的编碼 DNA 的DNA顒序製備了重组人類PM—1抗髖Η鏈V領域的 编碼DNA。其最初的重組V領域的编碼DNA係由鼠類 Ν Ρ的Η鍵V領域（參考M . S . Neuberger等人，^^-re; M. S · Neuberger 等人，Ε Μ B 0 J . 2 ♦ 經濟部中央櫺準局工消费合作社印製 先 閲 ik 背 之 注 意 事 項 % Hi Λ 1373 — 1378, 1983年）製造之。為要連結重 組人類V領域在表逹載體上用的BamHI部位和重组人 類Η鐽V領域之間的插入序列中所存的大約1 90b p的 伸長部分則在重组人類V領域的编碼DNA的PCR選殖 過程中加以除去。 為改善表達水準而加以變形的重組人類PM—1抗體 L鍵和Η鏡V領域的最終轉變部分的DNA順序以及胺基 酸順序示於順序號碼：5 7和5 6。上述D Ν Α順序為表 S1. 2. 20,000 t紙》尺度遑用中Β國家《毕(CHS)甲4規格(210x297公釐） -31 - 經濟部中央標準局CX工消费合作杜印製 ( ( Λ 6 It 6 五、發明説明（30) 2所示重组人類PM—1抗體L鏈V領域的a轉變部分， 以及表3所示重组人類PM—1抗體Η鍵V領域的f轉變 部分的编碼者。插入HEF-1 α表達載髖（參照圖15 )之際，造些載體在轉移的C 0 S細胞中過渡性的能生産 大約2wg/mi的抗髏。為要穩定地能生産更多量的重 組人類PM— 1抗體，製造了重組有d h f r基因的新穎 的HE F—1 α表達載饈（參照實施例10以及圖1 1) 。將結合有缺失（殘障者）的SV40啓動因子的 d hf r基因。按照人類7 — 1 Η鍵的表達HCMV載體 有關記述同樣方法，導入在人類7 — 1 Η鍵的表速用HE F — 1 α載體中。然後將重組人類PM— 1抗«L鐽的表 達用Η E F - 1 c(載體以及重紐人類P Μ — 1抗醴Η鏈的 表達用HEF—Ια—dhfr載體，同時轉移到CHO dhf r ( —）細胞中。然後在不含有核苔的1 0% FCS以及含有500/z g/mi的G4 1 8的α —最低 基本培養基（簡稱為α —MEM)中選擇已經轉變好的穩 定的CHO細胞条。在基因增幅過程之前，CHO細胞糸 已觀察得能生産重組人類PM_ 1抗體到日産1 0 /i g/ 1 0 β細胞之程度。 鼠類簞株抗體AUK 1 2 — 20的V铕M ftlR知人類 抗勝V铕城間之hh較 表4中示鼠類單株抗體AUK12—20的K—L 鏈（/cL) V領域的FR和人類《L鍵V領域的亞群（ 本紙»尺度连用中國國家楳1MCNS)T4規格(210 X297公*) 31. 2. 20,000
Th 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 -32 - Λ 6 Π 6 五、發明説明（31) HSG) I —IV的FR間的類似性，以及鼠類單株抗體 AUK 1 2 — 2 0的Η鏈V領域的FR和人類Η鏈V領域 的亞群（HSG) I〜皿的FR間的類似性的比較结果。 ^__4 严 HSG I HSGI HSG1V 64.0 67.6 67.6 F R HSGI HSGI 35.3 49.1 鼠類AUK 1 2 - 20抗髏的V領域的FR和各種不 同亞群的人類V領域的共同順序的FR間的同一性（％) A . L鏈V領域中的F R HSGI 65.8
B
HSGI 58.6 _^__ 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 如表4中所示，鼠類單株抗體AUK12—20的K L鏈V領域和人類KL鏈V領域的亞群（HSG) I〜IV 之間分別顯示大約相同程度（64〜68%)的同一性。 由蛋白質的資料庫a LEEDS "撿索得屬於HSG — IV 的人類抗體L e η (參考M. Schneider等人，Physiol.
Chem. 3 5 6· 507 — 557, 1975 年）的 L鍵 V領域顯示最高的68%的同一性。另一方面，鼠類單株 抗體PM— 1的人類化所用的人類抗體RE I則屬於 H S G _ I ,而跟鼠類單株抗體A UK12 — 20的L鍵 V領域之間顯示有6 2%的同一性。又調査鼠類單株抗體 S1. 2. 20,000 先 W1 讀 背 Λ 之 注 意 事 項 # 填 本紙張尺度遑用+ β 家《毕(CNS) ΤΜ規格(2丨0父297公釐） 33 - Λ 6 Π 6 五、發明説明（32) AUK 12 — 2 0 的 L 鏈的標準構造（canonical structure ) 的结果 （參考 C· Chothia 等人， J. Mol· Bio-1· 1 9 R ： 901 〜917, 1987 年），發現 L2 較之LEN跟RE I具有同一性質。 據以上事實，為了鼠類單株抗體AUK 1 2_20的 L鍵V領域的人類型化所用人類抗體不一定要從屬於 HSG-IV的抗髏中選擇，鼠類單株抗體AUK12 — 2 0的丄鐽V領域的人類型化可以跟鼠類單株抗釅P Μ — 1的L鐽V領域的人類型化同樣地可採用RE I。 如表4中所示，AUK12—20抗體的Η鐽V領域 跟人類Η鐽V領域的亞群I (HSGI)顯示有最好的同 一性。另外，由資料庫J LEEDS 〃檢索結果，仍然是 於HSGI的人類抗體HAZ (參考Stellar. B. D. 等人，J. Immunol · 1 3 9. 2496 — 2501， _^ 經濟部屮央楳準历β工消费合作社印製 1 987年）對於AUK 12 - 20抗體的Η鏈V領域顯 示有大約66%的同一性。因此，在設計重組人類AUK 12—20抗豳的Η鍵V領域時，羼於HSGI的人類抗 體HAZ的F R以及含有同樣屬於H SG 1的F R的人類 型化4 2 5抗醱Η鐽V領域（參考Kettleboroush C· Α. 等人，Pro t e i n Eng i neer i ng，4 : T T 3 — 7 8 3 , 1991年）的FR可供使用。AUK12 — 20抗體H 鏈V領域和人類型化4 2 5抗體Η鏈V領域的a轉受部分 之間大約為64%的同一性。 81. 2. 20,000 Λ» 閲 背 而 之 注 意 事 項 堝 i 本紙ft尺度边用中Η困家«孕(CNS) T 4規格(2】ί»χ297公;Jt) 34 Λ 6 Η 6 r 五、發明说明（33) 奮紺人類AUK 1 2 — 20抗體L鐽V領域的設Hi 根據上述理由，使用RE I的FR做為重組人類 AUK12 — 20抗髖L鏈V領域的FR，依照表5所示 設計重组人類AUK 1 2 — 20抗髏L鍵V領域。 Μ
VlAUK12-20 REI RV.
FR11 2 12345678901234567890123 DIVLTQSPASLGVSLGQRATISC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
CDR1 3 45677778901234 ABCO RASKSVSTSGySYMH RASKSVSTSGYSYMH (請先閲讀背而之注意事項#填寫{-
FR2 CDR2 4 567890123456789 5 0123456 VlAUK12-20 WYQQKPGQTPKLLIY ASNLBS REI WYQQTPGKAPKLLIY ASNLES rvl WYQQKPGKAPKLLIY
VlAUK12-20 REI RV,
FR3 CDR3 6 7 8 9 78901234567890123456789012345678 901234567 GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC QHSRBNPYT GVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYyC QHSRENPYT 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製
VlAUK12-20 REI RV,
FR4 10 8901234567 FGGGTKLEIK FGQGTKLQIT FGQGTKVEIK 本紙張尺度送用中面B家《华(CHS) T4規格(210 X 297公*) S1. 2. 20,000 -35 - A 6 η 6 £05553 五、發明説明（34) 註：上表中下面畫線的五値核苷酸係在設計 CAMPATH — 1Η抗體之際變更者（參考表2中附註 重甜人額A IJK1 2 — 20抗艚Η鎗V铕城的褂計 根據上述理由，設計重組人類AUK12—20抗醱 Η鏈V領域可使用重組人類V«a 4 25的FR。據此設 計而成的重組人類A U K 1 2 — 2 0抗睡Η鏈V領域的编 碼DNΑ的核苷酸順序被發現和接合供應順序顯示有非常 一致的順序。由此可知，跟重组人類PM—1抗鼸的情形 一樣，不正常的接合在表連重组人類AUK12—20抗 饅時也可能會發生。所#改變局部的核砮酸順序而去除類 似接合供應順序的顒序部分。上述修正的順序稱之為a轉 變部分。 另外，設計了重組人類AUK 1 2 — 20抗《Η鏈V 領域的b〜d轉變部分。表6中示a〜d轉變部分的胺基 酸順序如下： ik 先 WJ 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 % Ml 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印製 81. 2. 20,000 本紙張尺度遑用中家铒準(CHS)T4規格(210X297公*) -36 - 五、發明説明（35) Μ. A 6 Π6 V„AUK12-20 HSGI RV„a RV„b RV„c RV„d
FR1 CDR1 12 3 123456789012345678901234567890 12345 EIQLQQSGPELMKPGASVKISCKASGYSFT SYYIH ZVQLVQSGAEVKKPGXSVXVSCKASGYTFS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFT SYYIH V„AUK12-20 HSGI RV„a RV„b RV„c RVHd
FR2 4 67890123456789 WVKQSHGKSLEWIG WVRQAPGXGLEWVG WVRQAPGQGLEWVG
CDR2 5 6 01223456789012345 A YIDPFNGGTSYNQKFKG YIDPFNGGTSYNQKFKG (請先閲讀背而之注意事項Λ-填寫才頁) 裝-
VhAUK12-20 HSGI RV„a RV„b RV„c RV„d FR3 7 8 9 67890123456789012222345678901234 ABC KATLTVDKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYYCAR RVTXTXDXSXNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR RVTMTLDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR K——V............................ K——V.....................-........ 線< 經濟部屮央櫺準局β工消费合作社印製 V„AUK12-20 HSGI RV„a RV„b RV„c RV„d
CDR3 10 5678900012 AB GGN-RF--AY GGN-RF--AY
FR4 11 34567890123 WGQGTLVTVSA WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS 本紙ft尺度遑用中B B家榣毕(CNS) T4規格(210X297公*) SI. 2. 20,000 -37 - Λ 6 η 6 五、發明説明（36) 註：在人類亞群IV〃領域（HSGI)中，無法用 一種共同的胺基酸表示者用X符號表示之。下面畫線的兩 個胺基酸跟HSGI共商順序中的胺基酸有異。蘭於 RV»b, RVtfC和RV//d僅掲示有不同於RV〃a的胺 基酸殘基。
另外用人類抗體HAZ (參考J· Immunology 139. 2496—2501， 1987年，生産SLE 病患來源的B細胞供源的融合瘤21/28細胞的抗體， 其胺基酸順序記載於本文獻中的圖6中，其编碼DNA的 核苷酸順序示於圖4和圖5中）的FR,浚計重組人類抗 髖s 1 e 1 220抗體的Η鏈V領域的a〜d轉變部分示 於表7中。 先 閲 讀 背 而 之 /i 意 事 項 A\ 项 % £ 經濟部屮央梂準局CX工消#合作社印製 S1. 2. 20,000 本紙ft疋度逍用中B明家《準(CHS) T4規格(210x29/公it) -38 - Λ 6 Π6 Ο
五、發明説明了） 表 7 FR1 12 3 CDR1 123456789012345678901234567890 12345 V„AUK12-20 HAX EIQLQQSGPELMKPGASVKISCKASGYSFT QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SYYIH s 1 e: 1220Ha QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFT SYYIH 1220Hb Τ'-..........................S 1220Hc ,...............................S 1220Hd ...........................S
VhAUK12-20 HAX s 1 e: 1220Ha 1220Hb 1220Hc 1220Hd
FR2 4 67890123456789 ,WVKQSHGKSLEWIG WVR9APGQRLEWMG
CDR2 5 6 0122223456789012345 ABC YIDP--FNGGTSYNQKFKG
WVRQAPGQRLEWMG YI DP--FNGGTSYN0KFKG (請先閲讀背而之注意事項洱填貝) 絮· 經濟部十央櫺準局员工消费合作社印製 V„A(JK12-20 HAX s 1 e : 1220Ha 1220Hb 1220Hc 1220Hd · V„AUK12-20 HAX s 1 e: 1220Ha 1220Hb 1220Hc 1220Hd FR3 7 8 9 67890123456789012222345678901234 ABC KATLTVDKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYYCAR RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR RVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR .....V......................... κ Κ
V V CDR3 10 5678900012 ΛΒ GGN-RF--AY.
GGN-RF--AY
FR4 11 34567890123 WGQGTLVTVSA WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS 本紙張尺度逍用中B B家《準(CNS)甲4規格(210x297公*) S1. 2. 20,000 -39 - A6 B6 05553 五、發明説明（38) 註：s1el220Ha中下面畫線的兩個殘基示由 HAZ的FR變更而來。關於s 1 e 1 220Hc和 s1el220Hd,僅示跟HAZ的FR中的胺基酸有 異的F R中的胺基酸部分。 為製造抗人類IL一6R用的本發明嵌合抗«或重組 人類抗體，可使用任意表達条，例如真核細胞之動物細胞 ,已確立哺乳類細胞条，真絲狀菌細胞和酵母細胞，還有 原核細胞之細菌細胞，大腸菌細胞等均可使用。其中，本 發明的嵌合抗體或重組抗體在哺乳類細胞中，例如COS 細胞或CHO細胞中最能表達出來。 上述倩形下，為了在哺乳類細胞中的表達，可採用一 般常用且有益的啓動因子。例如以使用人類細胞巨大病毒 前期啓動因子（簡稱HCMV)為最宜。含有HCMV啓 動因子的表達載體的例舉有HCMV_Ve — HC7 1、 HCMV-Vi-HCa、HCMV-12h-g7l、Η CMV — 12«-g«等，包括來源於pSV2„e。者（ 參考圖1 )。 本發明有用的啓動因子的其他具體例舉有人類生長因 子一let (簡稱HEF — lot)啓動因子。含有該啓動因 子的表達載髏包括有HEF—12h—g71以及HEF 一 12k — gx (參考圖8和圖9)以及HEF—V//— -87ΐ*ΗΕΡ-νι-8Α (參考圖 15)。 為要在宿主細胞中增幅基因，表達載體還可以含有 d h f r基因。含有d h f r基因的表逹載體的例舉有 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨装· 訂. 經 濟 部 中 央 標 準 Μι 霣 工 消 费 合 作 杜 褽 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS)甲4规格（210 X 297公洚）-40 ~ 81.9.25,000 A6 B6 經濟♦中央標率局員工消费合作杜印髮 205553 五、發明説明（39) DHFR-△E — PMh — g^yl(參考圖10), DHFR-ΛΕ — RVh-PMl-ί (參考圖 11)等 〇 簡言之，本發明首先提供抗人類IL一6R的鼠類單 株抗體的L鏈V領域和Η鏈V領域，以及該L鍵V領域的 编碼DNA和Η鍵V領域的编碼DNA。這些有用於製造 抗人類IL一6R的人類/鼠類嵌合抗體和重組人類抗體 。單株抗體之例舉有AUK12—20, ΡΜ—1, AUK64 — 7以及AUK146 — 15。L鍵V領域具 有例如順序號碼：24, 26, 28或30所示胺基酸順 序，另外Η鏈V領域具有例如順序號碼：25, 27, 2 9或3 1所示胺基酸順序。上述胺基酸順序分別由順序 號碼：24〜31所示核苷酸順序而编碼者。 本發明也有關於含有下列（1) , (2)項所構成的 對人類I L — 6 R的嵌合抗體者。 (1) 人類L鏈C領域以及鼠類L鏈V領域；以及 (2) 人類Η鏈C領域以及鼠類Η鏈V領域。 鼠類L鏈V領域和鼠類Η鏈V領域以及其编碼DNA 有如前述。前述人類L鏈C領域可屬於任意的人類L鍵C 領域，其例如人類KC領域。前述人類Η鏈C領域也可屬 於任意的人類Η鍵C領域，其例舉有人類7 _ 1 C領域。 為製造嵌合抗體必須先製造兩種下列表達載體。一為 如強化因子/啓動因子条的表逹控制領域的控制下，含有 鼠類L鐽V領域以及人類L鍊C領域的编碼DNA而構成 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
本紙張尺廋適用中國國家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐）- 41 - 81.9.25,000 A6 B6 2〇挪3 五、發明説明（40) 的表達載體，另一為如強化因子/啓動因子条的表達控制 領域下含有鼠類Η鐽V領域以及人類Η鐽C領域的編碼 DNA而構成的表逹載體。其次，利用上述表逹載體將宿 主細胞，例如哺乳類細胞同時轉移感染，然後再將該轉移 感染的細胞在身體内或試管中加以培養而製造嵌合抗體。 或將鼠類L鏈V領域和人類L鍵C領域的编碼DNA 以及鼠類Η鍵V領域和人類Η鏈C領域的编碼DNA導入 單一的表達載體中，再利用該載體轉移宿主細胞，然後在 身體内或試管中培養上述轉移的宿主而生産目的之嵌合抗 體。 本發明還能提供含有下列（Α)、 （Β)項而構成的 抗人類IL一6R的重組人類抗體： (Α)含有（1)人類L鏈C領域，以及 (2)人類L鍵FR,和含抗人類IL一6R的鼠類 單株抗體的L鍵CDR而構成L鏈V領域， 所構成L鏈；以及 (Β)含有（1)人類Η鏈C領域，以及 (2)人類Η鏈FR,和含抗人類IL一6R的鼠類 單株抗體的Η鍵CDR而構成Η鏈V領域， 所構成Η鐽。 本發明的較佳情況如下：前述L鍵CDR為順序號碼 :24, 26, 28和30的任意一個所示胺基酸順序， 該胺基酸順序的範圍具備表9處所定義的胺基酸順序，前 述Η鏈CDR為順序號碼：25, 27, 29和31的任 ----------.------1^------裝------訂------Μ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局霣工消费合作杜印« 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）-42 - 81.9.25,000 Λ 6 Η 6 五、發明説明（41) (請先閲讀背而之注意事項#填寫气 意一値所示胺基酸順序，該胺基酸順序的範圍具備表9所 定義的胺基酸順序；前述人類L鏈FR為來源於REI ; 前述人類Η鍵FR為來源於NEW或HGSI共同顒序或 HAX者；前述人類L鏈C領域為人類aC領域；而前述 人類Η鍵C領域為人類7 — 1 C所構成者。 本發明的較佳情況中，LIIV領域具有表2中以 RV4aK示胺基酸順序，H_V領域具有表3中以 R V a , RV/rb, RV«ct R V „ ό , R V j e 或 RV »f所示胺基酸順序。其中胺基酸順序以RVfff為 最理想。 經濟部屮央梂準局Μ工消$：：合作社印製 為製造重組抗體，必須製造下列兩種表達載體，其一 為含有如強化因子/啓_因子条表達控制領域控制下，前 面已下定義的重組人類L鏈的编碼DNA而構成表達載體 ，另一為含有如強化因子/啓動因子条表達控制領域下， 前面已下定義的重組人類Η鏈的编碼DNA而構成的表達 載髖。其次，利用上述表達載體同時轉移感染如哺乳類細 胞的宿主細胞，然後將上述已轉移感染的細胞在身體中或 試管中培養而生産重組人類抗體。 或將重組人類L鍵的编碼DNA以及重組人類Η鍵的 编碼DNA導入單一的表逹載體中，再利用該載體轉移感 染宿主，继之，將已轉移感染的宿主細胞在身體中或試管 中培養而生産目的物之重組人類抗體。 按上述方法所生産嵌合抗體或重組人類抗體，可依照 一般方法，例如蛋白質Α親和性色層分離法，離子交換層 81. 2. 20,000 本紙》足度遑用中《國家楳準(CNS)甲4規格(210X29/公*) -43 - Λ 6 η 6___ 五、發明説明（42) 析法，膠濾法等分離而精製之。 (請先閲讀背而之注意事項#構寫f 本發明的嵌合L鐽或重組人類L鏈，可跟Η鏈配合而 應用在製造更完全的抗體用途。同樣地本發明的嵌合Η鐽 或重组人類Η鍵，可和L雄配合而應用在製造更完全的抗 體。 本發明的鼠類L鏈V領域，重组人類L鏈V領域，鼠 類H_V領域，以及重組人類Η鏈V領域，本來羼於跟抗 原的人類IL一6R结合的領域，其本身或跟其他蛋白質 構成融合蛋白質，被認為在醫藥。診斷藥劑等方面有其用 途。 另外，本發明的L鏈V領域的CDR和Η鐽V領域的 CDR也屬於跟抗原的Λ類IL一6R结合的部分，所以 其本身或和其他蛋白質所構成融合蛋白質也被認為在Β藥 ,診斷藥劑等方面有其用途。 經濟部中央梂準灼员工消伢合作杜印製 本發明的鼠類L鏈V領域的编碼DNA為製造嵌合L 鍵的编碼DNA或重組人類L銻的编碼DNA上有其用途 。同樣地，鼠類Η鍵V領域的编碼DNA可使用在製造嵌 合Η鍵的编碼DNA或重組人類Η鍵的编碼DNA之用途 Ο 另外，本發明的L鏈V領域CDR的编碼DNA可提 供製造重組人類L鍵V領域的编碼DNA以及重組人類L 鏈的编碼DNA之用途。同樣地，本發明的Η鏈V領域 C D R的编碼DNA也可提供製造重組人類Η鏈V領域的 编碼DNA以及重组人類Η鏈的编碼DNA之用途。 81. 2. 20,000 * 44 - 經濟部中央標準屬典工消费含作杜_褽 A6 B6 五、發明説明（43) 本發明藉下列實施例具體説明之，但本發明範圍不受 其限制不待赘述。 實施例1 抗人類T L-6R的窟.額罝抶杭體的V領域的編碼 D N A之撰殖 依照下列方法選殖對人類IL一6R的鼠類單株抗體 的可變領域的编碼DNA。 1 .嫉R N A的謳魁
依照文獻記載方法（參考Chirgwin等人，Biochemistry ， 18 ； 5294, 1 979 年）從融合瘤 AUK 12 — 20調製得總RNA。換言之，將2. lxlOe 個融合瘤AUK 1 2 — 20的細胞放在20mi的4Μ的 脈基異氰酸鹽（Fulka )中完全均質化。均質液積層在 離心管中的5. 3M氛化絶溶液層上面，繼之在Beckma-n SW40離心機中以31, OOOrpm, 201C下離 心處理24小時而使RNA沈澱下來。使用80%乙醇洗 淨RNA沈澱物，然後溶解於含有ImM EDTA以及 含有◦. 5%的SDS的10mM的Tr i s_鹽酸（ pH7. 5) 150//芡中，再添加蛋白酶（Boehr ing-
er )使其濃度為0. 5mg/mi之後，在37t：下保 持20分鐘。用苯酚和氣彷萃取混合物，然後用乙醇使 RNA沈澱。繼之，溶解RNA沈澱物在200/ζί的含 有 ImM EDTA 的 ΙΟιώΜ Tr is — 鹽酸（pH I n I !— —i 1 -- rn t I m I -1 n I -(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 81.9.25,000 205553 Λ 6 Π6 經濟部屮央櫺準局CX工消t合作杜印3i 五、發明説明（44) 7 · 5 )中 〇 2.合成單股cDNA 為合成單股cDNA,將前述調製好的大約5/ig的 總RNA,依照文獻所記載方法（參考j. W. Larrick 等人》B i otechno 1 ogy，7 . 934，1989 年）溶解 .在1 〇 ju 的含有4 OmM氣化鉀，6mM.二氣化参ϋ, 10mM二硫蘇糖醇，〇. 5mMdATP, 0· 5 mM dGTP, 0. 5mM dCTP, 0. 5mM dTTP, 35/iM 低聚 dT 引物（Amershaai ) , 4 8 單位的RAV — 2逆轉錄酶（ Rous associated v i r u s 2 ;簡稱為尺八\/一2,六|1^”^^111製品）以及2 5單位的 人類胎盤核糖核酸酶阻礙劑（Amersham )的5 0mM TΓis—鹽酸缓衝液（PH8.3)中，然後在3 7tlC 下培養上述反應混合物60分鐘，並直接提供下述聚合海 結合反應（簡稱PCR法）之用途。 3 .藉P C R法增蝠杭賻可礬铕Μ的组碾甚闵 使用熱循環模式卩只（3 — 2(1^611111&10>^161^1〇£1--el p H C — 2 , Techne )藉 P c R 法進行。 (1 )增幅鼠類L鍊V!iM的缗碼某因 PCR法所使用引物為順序號碼：1〜11所示 MKV (鼠類K可變性）引物（可融合鼠類鏈前導順 (犄先IKI讀背而之注意事項#填窍(0 本紙Λ尺度边用中a Η家楳準（CNS) «Ρ4規格（210X297公址) 81. 2. 20,000 Λ 6 Π 6 五、發明説明（45) 序）（參考 S. Τ· Jones 等人，Biotechnology，_9_, 88, 1991年）以及順序號碼：12所示MKC (鼠 類K恒常性）引物（可融合鼠類aL鏈C領域）（參考 S · T · Jones 等人，B i otechno 1 ogy , 9 · δ δ > 1 9 9 1 年）。 首先，將lOOw又的含有lOmM Tris—鹽 酸（PH8. 3) , 50mM氣化鉀，0. lmM d A T P , 0 . 1 m M dGTP, 0. lmM dCTP, 0.lmM dTTP,1. 5mM二氛化鎂 ,.2. 5 單位的 D ΝΑ聚合酶 AmpliTaq (Perkin Elmer
Cent us製品），以及分別〇 . 2 5 /i M的Μ K V引物， 3/iM的MKC引物和i單股c DNA合成的反應混 合物所構成的PCR溶液，在初溫94*C下加熱1. 5分 鐘，然後.在941C下1分鐘，50*C下1分鐘以及72t： 下1分鐘依序加熱之。反復上述熱循環25次後，再於 72C下培養反應混合物10分鐘。 經濟部+央標準局员工消#合作杜印31
(2 )増幅鼠類Η銻V铕域的组碼DNA 為PCR法使用的引物為順序號碼：13〜22所示 的MHV (鼠類重可變性）引物1〜10 (參考S. Τ. Jone s 等人，B i 〇 t echno 1 ogy , 9_, 88, 1991 年） ,以及順序號碼：23所示的MHC (鼠類重恒常性）引 物（參考 S. T · Jones 等人，B i otechno 1 〇ey，9 . 88 ,1991年）。按照前述3 (1)項中，增幅L鏈V領 81. 2. 20,000 (請先閲請背而之注意事項再填寫《0 本紙》尺度逍用+ β B家«準(CNS) T4規格(210X297公*) -47 - ( 經濟部屮央樣準局β工消费合作社印驳 ^055bc Λ 6 I) 6 五、發明説明谷6) 域基因所記載相同方法而進行增幅。 4 · P C R生成物的焙剪和Η段彳h成揮 使用QIAGEN PCR生成物精製組剤（美國 QUgen公司製品）精製按照前述PCR法所增幅而得 DNAH段，然後在含有10mM二氮化鎂和150mM 氛化納的10 0 m Μ 丁1*13—鹽酸（？卞7.6)中 ，使用10單位的限制酶Sai^I ( GIBCO BRL ),在 3 7 t：下消化3小時。再用苯酚和氣仿萃取該消化混合物 ，然後以乙醇沈澱法收回DNA。其次，用10單位的限 制酶 Xma I ( New England Biolabs )在 37¾ 下消 化上述DNA沈澱2小時。所産生DΝΑ片段利用低熔點 的瓊脂糖（FMC Bioproducts公司製品，美國）進行琪 脂糖電泳分離。 切取含有大約450b p長的DNA片段的瑱脂糖片 部分，在6 5*C下熔融5分鐘，然後加入相同容置而含有 2 m M EDTA和 200mM氣化鈉的20mM Tris —鹽酸（PH7.5)。再用苯酚和氣仿萃取該 混合物，以乙醇沈澱法回收其DNA片段，再溶解於含有 -1 m M EDTA的 10mM Tr i s —鹽酸（pH 7. 5)中。據此獲得含有鼠類《L鏈V領域的编碼基因 而成DNA片段以及含有鼠類Η鐽V領域的编碼基因而成 DNA片段。上述DNA片段皆在其5’ 一末端具有 Sai I接合末端，同時其3· —末端具有Xma I接合 (請先閲讀背而之注意事項Λ-填寫f 〇 裝· 訂· -線- 81. 2. 20,000 _ 48 - Λ 6 Π 6 五、發明説明（47) 末端。 (請先閱讀背而之注意事項枰蜞寫f 〇 5 .接合和鷓搴彬皙 取大約0· 3wg的按照上述方法諝製而含有鼠類 /cL鍵V領域的编碼基因而構成Sa 1 I — Xma I DNA片段，以及大約〇. 1/ig的由Sa 1 I和 Xma I消化質體pUC 1 9而調製所得的pUC 1 9載 鎳·在含有50mM Tr i s —鹽酸（pH7. 4), 10mM二氯化鎂，l〇m,M二硫蘇糖醇，ImM亞精胺 ，ImM ATP, O. l/ig/mi的牛血清白蛋白以 及2單位的T4DNA連接酶（New Engand Biolabs製 品）的反應混合物中，16Ό下反應16小時而結合之。 經濟部中央榣準局貝工消费合作社印Μ 其次，將的i;述接合混合物加入200 «)?的 大腸菌DH5c(的競爭性細胞中，然後將該細胞靜置在冰 上30分鐘，42t：下1分鐘，再在冰上1分鐘。繼之， 加入800/i又的SQC培養基（參考Molecular Cion i 8 : A Laboratory Manual > Sambrook 等人，.Cold Spr i n~ g Harbor Laboratory Press 出販， 1 9 8 9 年），在 3 7 t：下加溫培養1小時後，將該大腸菌播種在2 XY瓊 脂培養基（參考 Molecular Cloning: A Laboratory Manual， Sambrook 等人， Cold Spring Harbor Laborato- ry Press出販，1 989年）上，在371C下培養一夜 而得大腸菌轉化物。 將上述轉化物在含有5 0 w g/mi的氨苄青徽素的 的2XYT培養中，37Ό下培養一夜，然後利用 81. 2. 20,000 t紙ft尺度逍用中a B家樣準(CNS)T4規怙（210x297公;it) -49 ** Λ 6 116 經濟部屮央榀準釣κχ工消t合作杜印3i 五、發明説明（48) 驗性法（參考 Molecular Clonine: A Laboratory Manual, Sambrook 等人，Co 1 d Spring Harbor Laboratory Press出販，1 989年）從上述培養物中諝製得質體 D N A 〇 據此所得的來源於融合瘤AUK 1 2 — 20並含有鼠 類/c L鍵V領域的编碼基因而成質體，命名為p 1 2 — k 2 〇 依照上述相同方法，從來源於融合瘤AUK 1 2 — 2 0並含有鼠類Η鐽V領域的编碼基因的質體，從Sa 1 I -X m a I DNA片段製造並命名為p 12 — h2。 實施例2 鼠類單株抗體的V铕Μ组碼DNA夕费箝 依照實施例1所記載的實質上相同方法，從融合瘤 PM—1, AUK64—7以及AUK146—15製得 下列質體： 來源於融合瘤PM1的含有/cL鏈V領域的编碼基因 的質體PPM—k3; 來源於融合瘤PM 1的含有Η鏈V領域的编碼基因的 ，質體pPM—hi; 來源於融合瘤AUK64 — 7的含有aL鏈V領域的 编碼基因的質體p64 — k4 ; 來源於融合瘤AUK64—7的含有Η鐽V領域的编 碼基因的質體Ρ64—h2; (請先閲讀背而之注意事項#填寫{«) 裝. 訂- -線· 81. 2. 20,000 -50 - ,055&3 Λ 6 Π6 五、發明説明（49 ) 來源於融合瘤A U Κ 1 4 6 - 1 5的含有/c L鏈V領 域的纗碼基因的質體Pl46_k3;以及 來源於融合瘤AUΚ146—15的含有Η鍵V領域 的编碼基因的質體Ρ 1 46 — h 1。 另外，含有上述質體的大腸菌種，皆依據布達佩士特 條約在1 99 1年2月1 1日寄託在National Collect-i ons of Industrial and Marine Bacteria Limited,並 得表8中所示登記號碼。 ih 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 場 八 % 質髏 順序號碼 登記號碼 il 經濟部中央梂準局貝工消炽合作社印ai 3 1 2 2 3142kh khkhkh | 一 I I I I I 1 6 6 22-MM444.4 11PP6 6 11 45678901 22222233
73628495 66666666 33333333 0 0000000 44444444 BBBBBBBB MMMMM MMM I I I I I I I I CCCCCCCCNNNNNNNN ^...... < 本紙5IL尺度边用中B因家《毕(CNS)<fM規格（210X297公龙） 81. 2. 20,000 51 - A6 B6 2055^3 五、發明説明（50) (請先閱讀背面之注意事項再蜞寫本頁) 實施例3 DNA的核苷酸順序之決定 使用順序酶ίτ〜轉換2. 0組劑（美國U. S· Biochemical 公司 製品， Sequenase(’ Version 2 . 0 kit )決定前述質體中的cDNA纗碼領域的核苷酸順序。 首先，利用0. 2N氫氧化鈉將大約3Wg的前項所 得質體加以變性，再以決定順序用引物退火處理後，依照 組劑的配方用33硫一dATP標記之。繼之，將標記過 的DNA在含有8M尿素的6%聚丙烯醯胺凝膠中電泳處 理後，再用10%甲醇和10%乙酸固定凝膠，乾燥，經 由放射自顯術而決定了核苷酸順序。 各質體的c DNA編碼領域的核苷酸順序以順序號碼 :2 4〜3 1表示之。 訂·
實施例4 決定C D R 經濟部中央樣準局Λ工消♦合作杜_製 L鏈和Η鏈的V領域的全部構造具有相互類似物，個 別的四個FR部分由三個超可變領域，也就是互補決定領 域（CDR)所連接。FR的胺基酸順序比較保持得良好 。但另一方面，CDR領域的胺基酸順序的可變性極高（ 參考 Kabat，E. A.等人，r Sequences of Proteins of Immunological Interest」 US Dept· Health and Human
Services, 1 9 8 3 年）〇 根據抗人類IL一6R的鼠類單株抗體的可變領域的 上述胺基酸順序，再依照Kabat等人的報告，決定對人 類IL一6R的鼠類單株抗體的各V領域的CDR並示於 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）-52 - 81.9.25,000 -05553 Λ 6 Η 6 五、發明説明（51) 表9 0 9 質體 順序號碼 CDR(l) CDR(2) CDR(3) (胺基酸號碼> 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 存 填 % P 1 2 一 k 2 24 24-38 54-60 93-101 P 1 2 一 h 2 25 31-35 50-66 99-105 k P P Μ 一 k 3 26 24-34 50-56 89-97 P P Μ _ h 1 27 31-36 51-66 99-108 h P 6 4 一 k 4 28 24-38 54-60 93-101 P 6 4 一 h 2 29 31-35 50-66 99-109 k P 1 4 6 — k 3 30 24-34 50-56 89-97 P 1 4 6 一 h 1 31 31-35 50-66 99-106 經濟部屮央樣準而|3:工消费合作社印$1 實施例5 撰殖cDNA的表镩的確亩（1)表達質植 的奘備 ' 藉PCR法由選殖AUK12 — 20抗髏的aL鍵和 Η纊的V領域的编碼cDNA,製備嵌合L鏈/H鐽的编 碼 D N A 〇 在含有人類細胞巨大病毒（HCMV)的強化因子和 本紙張尺度逍用中BB家«準(CNS)T4規格(210><297公《:) S1. 2. 20,000 -53 - 經濟部中央橾準局员工消费合作社印Μ 05553 Λβ ____Π_6_ 五、發明説明（52) 啓動因子的哺乳類細胞表達載體（以下簡稱HCMV表達 載體，參照圖1，實施例8)中，將鼠類A U Κ 1 2 — 2 OV領域的编碼c DAN簡易地結合到人類C領域的编 碼DNA,必須在AUK12 - 20抗體的V領域的编碼 有關鼠類cDNA順序中的5’ 一末端和3’末端導入方 便的限制酶切割部位。 利用PCR法實施上述5' —末端和3’ 一末端的修 飾操作。設計兩組P C R引物並加以合成。就鼠類L鍵V 領域和H_V領域的雙方，將前導順序的開始有關编碼 DNA和上記引物融合，並維持有致鹌譯上必須的DNA 順序（參考 Kozak, Μ.，J. Mol . Biol . 196 ： 947 一 950, 1 98 7年）.，然後為形成HCMV表逹載體 上選殖用H i n dill部位，諝製L·鐽V領域負向引物（順 序號碼：3 2 )以及Η鐽V領域負向引物（順序號碼： 33)。前段PC R —引物和J領域末端的编碼DNA融 合，為接合在C領域而雒持必須的D N A順序，然後，在 HCMV表達載體為連結人類C領域而形成好Bam HI 部位，諝製得L鏈V領域正向引物（順序號碼3 4)以及 Η鏈V領域正向引物（ί頃序號碼3 5 )。 - 繼P C R法的增幅操作，用H i n d HI和B a m Η I 消化P C R生成物，選殖含有人類K鐽或、一 1鐽C領域 DNA的HCMV載體，然後分析其核苷酸順序，確認在 利用P C R法增幅中沒有發生錯誤。所得表達載體稱為 HCMV — 12k-gk以及HCMV— 12h — g7 1 (請先閲讀背而之注意事項#填Λ« 裝· 訂_ 線· 本紙Λ尺度逍用中《«家楳毕(CNS) f 4規格(210X297公龙) 81. 2. 20,000 經濟部中央標準局ex工消伢合作社印製 ：05553___ΐΛ 五、發明説明63) Ο HCMV表達載塍的構造示於圔1。質體HCMV — Vt_HC«中，Vi領域可為任意的鼠類L鏈V領域的 编碼順序。本例舉中，藉插入AUK 12 — 20 kL鐽V 領域而得HCMV — 1 2k-g k。質體HCMV - V〃 一HCtI中，Ve領域可為任意的鼠類Η鐽V領域的编 碼順序。本例舉中，藉插入AUK 12 — 20的Η鏈V領 域而得 H C Μ V - 1 2 h — g 7 1。 C O S細朐中的渦溏件宪褸 為要觀察嵌合AUK 12 — 20抗體在C Ο SJ胞中 的過度性表逹，在C Ο S細朐中利用前述表逵載體進行試 驗。使用基因脈波裝置（BioRad製品，Gene Pulsar ) 藉電穿孔法將DNA琪入COS細胞中。換言之，將C 0 i細胞接1 X 1 07個/mi?濃度懸濁在磷酸鹽缓衝食鹽 水中（PBS),再加入DNA (各質體分別為lOug )於上述細胞浮遊液8mi?中。使用19 00伏特（V) ,2 5 w F的電容量施與脉搏。 在室溫下經過10分鐘的恢復期間之後，將上述電穿 孔過的細胞加入在含有1 0%牛胎兒血清的DMEM培養 基（GIBC0) 8ιηβ中。經過培養72小時後，收集 培養液的上澄液部分，經離心除去細胞碎片，在無菌條件 下於4 *0短時間貯藏，或在—2 ου下長期保存之。 (請先閲讀背而之注意事項#填寫Α ΐ) 裝- 訂_ 線. 81. 2. 20,000 -55 - 鱷濟部中央螵準«員工消费合作杜一-製 A6 B6 五、發明説明（54) 利用豳免疮測亩法（簡稱EL I SA)亩S嵌合杭體 利用酶免疫測定法分析經轉化的C 0 S細胞的培養液 上澄液，而確認産生有嵌合抗體。為檢査嵌合抗體，使用 山羊的抗人類I gG的整値分子（Sigma製品）塗布在 培養板上，經過封阻後，從C 0 S細胞培養液所得上澄液 經分段稀釋後加入每一個孔（Well )中。經培養和洗淨 後，加入鹼性磷酸酶結合有山羊抗人類IgG (7鍵專一 性，Sigma製品）^再經培養和洗淨後，加入基質缓衝液 。培養後終止反應，並測定波長405nm處的吸光值。 並用精製人類I g G ( Sigma製品）做為對照組測定之 為確認抗人類IL-6R的結合能力而淮行的豳免疮 利用酶免疫测定法分析從轉化的C Ο S細胞所得培養 基，決定所生産的嵌合抗體是否有結合在抗原的能力。為 檢査對抗原的結合情形，使用MT18鼠類單株抗體（參 考例1)塗布培養板。再用1%BSA封阻後，加入可溶 性重組人類IL—6R (SR344)。 洗淨後，分段稀釋由C Ο S細胞所得培養上澄液，並 加入在各値孔中。經培養和洗淨後，加入鹼性磷酸酶結合 山羊抗人類I gG。再經培養和洗淨後，加入基質缓衝液 。培養後終止反應，並测定波長405nm處的吸光值。 上述結果示於圖2。進行嵌合抗體AUK 1 2 — 20 本纸張尺度適用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）-56 - 81.9.25,000 I I________-__t/ l· I l· I (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) -丨裝. 訂 Λ 6 i\6 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印製 ,05553- 五、發明説明（55 ) 的组碼基因對cos细胞的轉化操作。該c◦s細胞的培 養上澄液樣品顯示對I L 一 6 R有強結合能力，圖2中用 符號Ο所示隨樣品稀釋度（即抗體濃度）出現4 0 5 n m 波長處的吸光值變化，確認樣品中含有對I L_6R受暖 的抗體存在。 阳礙人類I L 一 6 R和I L 一 6銪会能力$測亩 测定從轉化的C Ο S細胞所得培養上澄液，並為諝査 存在於培養基中的抗體，是否會阻礙IL-6R和IL— 6間的結合，調査跟生物素I L 一 6間的競爭性結合阻礙 能力。使用MT1/鼠類單株抗體（參考例1)塗布培養 板。經過封阻後，加入可溶性重组人類I L 一 6 R ( S R 344)。洗淨後，分段稀釋從COS细胞所得樣品，然 後跟生物素IL一6—起加入各個孔中。 洗淨後，加入鹼性磷酸酶結合鐽徽抗生物素蛋白。經 培養和洗淨後，加入基質缓衝液。培養後終止反應。然後 測定波長4 0 5 n m的吸光值。使用精製鼠類A U K 1 2 -20單株抗體做為陽性對照组。另外，使用表達沒有相 關的抗體的C 0 S細胞所得培養基做為陰性對照組。 ， 上述結果不於圖3。轉化有嵌.合抗體AUK 1 2 — 2 0的编碼基因的^细胞的培養上澄液表現在最高和 次高濃度下有阻礙IL一6R和IL一6的結合能力。換 言之，圖3中以符號參所示隨樣品稀釋濃度（則抗體濃度 )在波長4 0 5 η Π1的吸光值有相關性變化出現，確認樣 (請先閲讀背而之注意事項再填寫Α 裝< 订· -線- 81. 2, 20,000 -57 - Λ 6 Π 6 五、發明説明66 ) 品中的抗體有阻礙I L 一 6R和I L 一，6的结合。該情形 尚可從陽性對照組的吸光值跟抗體濃度的相蘭性變化（圖 3中以符號Ο示之）有相當一致的结果確認之。 另外，陰性對照组（圖3中以符號△示之）完全看不 到阻礙活性。 實施例6 费99 c DNA的表镩夕確親（2)(製備嵌合 P Μ — 1抗鵲） 毅樓表镩載體 為製造嵌合ΡΜ—1抗體的表達載體，分別利用 P C R法將鼠類Ρ Μ — 1 «L鏈和Η鏈V領域的编碼 cDNA選殖pPM—k.3和PPM— hi加以變形，然 後導入H C Μ V表達載體（參照圖1 )中。為L鍵V領域 將負向引物P m k — s (順序號碼·· 3 8 )以及為Η鏈V 領域將負向引物P m k — s (順序號碼：4 0 )雜化在前 導順序的编碼DN A上，同時設計好具有Kozak共同順 序和H i n d m限制部位。另外，為L鏈V領域正向引物 pmk—a (順序號碼：36)以及為Η鍵V領域將正向 引物p m k - a (順序號碼：3 9 )雜化在J領域末端的 编碼D N A順序上，同時設計好具有接合供體順序以及 B a m Η I限制部位。 為《L鏈V領域合成兩種正向引物。幾乎所有的kL 鏈中在其1 0 7位置保存有賴胺酸。但鼠類P Μ -1 «L 鐽中1 07位置卻是天冬醯胺。為檢討上述變化對嵌合 本紙張尺度逍用中ΒΗ家《毕(CNS)T4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 (請先W請背而之注意事項许構寫木 裝- 線. 經濟部中央櫺準局貝工消费合作社印3i -58 - Λ 6 Β 6 五、發明説明67 ) (請先w-ift背而之注意事項#堝寫< ) PM—1抗體的抗原結合活性的影轡，設計好正向引物 pmk-b (順序號碼：37)中107位置的天冬醒胺 變為賴胺酸。繼PCR反應之後，精製得PCR生成物， 用H i nd Μ和BamH I消化，然後次選殖在pUC 1 9 載睡（參考 Yanishe_Perron 等人，Gene» 3.3 : 103 — 109, 1985年）。決定DNA順序之後， 切割出Hindi。BamHI片段，就Η鐽V領域，選 殖表逹載體匕0 14〃一/^/一义€：71而得1^〇1^乂一 PMh-g71,另就L鐽V領域，選殖HCMV—Vi 一 HCx 而得HCMV - PMKa — gk和HCMV — Ρ Μ K b — g k 〇 C 0 S细朐的鵪移感染 經濟部中央標準而只工消坨合作社印製 為觀察嵌合PM- 1抗體的過渡性表達，在C O S細 胞中進行前述表逹載體有闋試驗。使用基因脉波裝置（ Biorad製品）藉電穿孔法，將H C Μ V — p m h _ g^yl和HCMV—pmka — gk或HCMV — pmkb — g k之任意一方來同時轉移感染C 0 S細胞。 將DNA (各個質體計10wg)加入含有以每mi計有 -1X107値細胞的0. 8mi的水溶液的PBS中，在 1 900伏待，25wF的電容量下施與脈博。室溫下經 10分鐘的恢復期間後，將電穿孔處理過的細胞，加入含 有無7—球蛋白的10%牛胎兒血清的DMEM培養基（ D u 1 b e c c 〇 ’ s Μ 〇 d i f i e d E a g 1 e M e d i u m，G I B C 0 製品）中 * 81. 2. 20,000 -59 - Λ 6 It 6 〇[)姐 五、發明説明68) (請先ΚΙ讀背而之注意事項Λ-填寫Α) 。經72小時培養後收集培養上澄液，由離心除去细胞碎 片，然後在無菌條件，4¾下行短期貯藏，或在一 201C 下長期貯藏之。 嵌会PM — 1抗鵲耒蘀和分析 經過三日的過渡性表逹之後，收集由C O S细胞所得 \ 經濟部屮央梂準局貝工消俾合作杜印製 培養基，就嵌合PM-1抗體進行試驗。首先利用酶免疫 測定法分析培養基，決定從轉移感染的C 0 S細胞中是否 産生了人類化抗體。上述分析中使用已知量的精製人類 I g G做為標準，可推定從C 0 S細胞而得並存在於培養 基中的人類化抗體（本例舉中乃係嵌合P Μ— 1抗體）之 量。為檢査人類抗體，用!山羊抗人類I g G全部分子（ SiSma製品）塗布培養板。經封阻後，分段稀釋由C 0 S 細胞所得樣品，然後加入各値孔（Well )中。經培養和 洗淨之後，加入鹼性磷酸酶結合山羊抗人類IgG (7鐽 專一性，Sigma製品）。再經培養和洗淨之後，加入基質 缓衝液。培養之後終止反應，並測定波長405nm處的 吸光值。使用精製人類I gG ( Sigma製品）做為標準 樣品。 使用帶有嵌合PM—1抗體的编碼基因的載體所轉化 感染過的C0S細胞所得培養基.顯示表逹人類化抗體的 陽性反應，因此依照上述方法測定其大約的份量。 繼之，分析使用帶有嵌合PM—1抗體的编碼基因的 載體所轉化感染過的C 0 S細胞所得相同培養基對人類 81. 2. 20,000 尺度遑用中a Η家桴毕(CNS) T4規格(210x297公*) -60 _ 經濟部中央櫺準局霣工消费合作社<f« A6 B6 五、發明説明（59) IL—6R的結合能力。為測定對抗原的結合能力，使用 抗人類IL 一 6R的抗體之MT 18鼠類單株抗體（參考 例1)塗布培養板。封阻之後，加入可溶性人類IL 一 6R (SR344)。洗淨後，將樣品分段稀釋並加入各 個孔中。培養和洗淨後，添加鹹性磷酸酶結合山羊抗人類 I gG (7鏈專一性，Sigma製品）。培養和洗淨後加入 基質缓衝液。培養後終止反應，測定波長405nm處的 吸光值。本測定中未用標準樣品。 兩個樣品中之一為具有在鼠類PM—1抗體中所見V 領域相同V領域的嵌合抗體（嵌合PM—l a抗體，參考 圖4)的编碼基因所轉移感染而得之樣品。另一樣品為在 L鍵V領域中位置107處按照前述具有一値胺基酸變異 的嵌合抗體（嵌合PM — lb抗體，參考圖4)的编碼基 因所轉移感染而得之樣品。這兩種樣品皆對於隨著稀釋而 減少的IL一6R顯示強力的結合能力。換言之，所製成 嵌合PM—1抗體具有機能性而能強力的結合在抗原上。 最重要的是功能生嵌合PM—1抗體證實正確的鼠類 PM—1v抗體領域獲得選殖並為決定其順序的直接證據 。乙鍵乂領域中位置107上具有任何胺基酸的嵌合抗體 也都能結合在抗原I L 一 6R。鼠類PM—1抗體的L嫌 V領域中107位置在抗原結合上並不重要，因此該位置 不論天冬醛胺和賴胺酸均能發揮其功能。鼠類PM - 1抗 體在其L鏈V領域的該位置上具有天冬醛胺，因此使用嵌 合PM — 1抗體的以後的所有研究，均使用鼠類PM — 1 衣紙張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）-61 - 81.9.25,000 {請先閲讀背面之注意事項再«窝本頁) .·裝· 訂· Λ 6 Η 6 &45Ιι2. 五、發明説明60 ) 抗體中所發現相同的a轉變部分而進行之。 (請先閲讀背而之注意事項界蜞窝Λ 線· 為更穩定地生産更大量的PM—1抗髏，製进含有 dhfr基因的新穎的HCMV表達載體。為達成嵌合P M-1抗體的更高水準的表達，第一値步驟是將載體HC MV — V* - HC7;(參考圖1)加以變化，使該載饈 含有由缺失的SV40啓動因子強化因子所表逹的 d h f r基因為其先決問題。從口5乂2 — 3111:1'*載 體（參考 S. Subramani 等人，Mol. Cell· Biol. 1 : 854—864,1981年）除去SV40強化因子， 然後代替由SV4 0啓動因子而表達的新基因（ne〇 sene ),用由有缺失的SV40啓動因子表達的dhf r基因，插入HCMV—.V 〃一 HC*y /中。继之，插入鼠 類P Μ — 1 V領域於上述新穎的H C Μ V — V 〃一 H C 7 2 — d h f Γ載體中。製造上述改良的新穎表達載 體的方法詳載於實施例1 0。 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 利用兩種質體DNA同時轉移感染處理CH0 d h f r (-）細胞（參考 G. VrUub 等人 Proc. Natl .Acad. Sci. USA 7 7 ： 4216-4220, 1 9 8 0年）。上述兩種質體DNA分別為：表達嵌合 PM—l aL 鍵用的 HCMV-Vl—HC* 載體（ HCMV—PMKa-gk)以及表逹嵌合PM-1H鏈 用的HCMV — V//—HC^y:—dhfr'載體（DHFR 一ΔΕ—PMh-g7l;參考實施例10)。加入 DNA (按各種質體計lOjug/min於PBS中含有 81. 2. 20,000 |^紙張尺度边用中B Η家楳準(CNS) T 4規格（210x297公:St) -62 - A6 B6 五、發明説明（61) 1 X 1 07値細胞/mi而成0. 8m5的水溶液中。再 用1 900伏持電壓和25/iF電容量條件下施與脉搏處 理。室溫下經過10分鐘的恢復期間後，將經電穿孔法處 理的細胞，加入含有核旮和10%FCS的α—最低基本 培養基（簡稱為ot_MEM) 10mi?中。經過一夜的培 養後，將培養基改為不含有核替但含有10%FCS和 500wg/mi?的 G418 (GIBCO 製品）的 α — MEM,再進行筛選dhfr^和neo*轉移感染細胞。 篩選後，利用選殖者進行基因增幅操作。在2X 1 0_8M 的葉酸衍生物（Methotrexate ,簡稱MTX)中進行第 一次增幅後，篩選得具有能生産嵌合PM— 1 a抗體而生 産力大約為3. 9iLtg/105細胞/日的細胞条（ Ρ Μ 1 k 3 - 7 ) 〇 阻礙IL一6抗人類IL一6R的結合有關嵌合抗體 的能力的酶免疫測定。 對經轉移感染的C 0 S細胞或在穩定地CH0細胞条 中就所生産抗體，分析是否會跟對IL一6R的生物素 I L — 6的結合能力有競爭性。先用鼠類抗體MT 1 8塗 布培養板。經封阻後加入可溶性重組人類I L 一 6R ( SR344)。洗淨後，分段稀釋得自一 C 0 S細胞的樣 品，然後和生物素IL 一 6 —起加入各個孔（Well )中 。洗淨後，加入鹼性磷酸酶結合鏈徽抗生物素蛋白。培養 和洗淨後加入基質缓衝液。培養後終止反應，测定波長 405nm處之吸光值，其結果示如圔5。 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）-63 _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝· 訂· *濟部中央標準局β工消费合作杜4-« 81.9.25,000 Λ 6 Π6 五、發明説明（62) 實施例7 製诰雷甜人萌PM— 1抗體 為達成更有效率而更迅速的CDR移植目的下，研究 開發了利用PCR法的逐次CDR移植法。該方法基於 P C R變異誘發法（參考Kamman等人，Nucl· Acid· lies. 17 ： 5404, 1989 年）〇 經濟部屮央櫺準劝员工消赀合作社印製 為調製CDR移植用且含有所選定人類F R的编碼 DNA的模板DNA,必須將適當的重组人類V領域的编 碼DNA再選殖在方便的載體上。質體a 1 ys 1 1和 F 1 0的D N F分別為重組人類D 1 . 3的1鏈以及^1鍵 的编碼者，分別含有來自人類RE I的FR有關编碼 DNA以及來自NEW的F R有關编碼DNA。從 alys11切割得大約500bp長而含有重组人類D 1 . 3的L鏈V領域的编碼DNA順序而成的Nc ο I — BamH I片段，然後次選殖在經H i nd I和BamH 1處理而開裂的口8只327,並得質體乂1一173— PBR327。從VI- 1 ys — pBR 3 27所得 Hi ndM-BamHI片段插入在經Hi nd班和 BamH I裂開的pUC 1 9中而製得質體VI — 1 ys -P U C 1 9 〇 從F 1 0切割得大約700b p長且含有重組人類 D1 . 3的Η鏈V領域的编碼DNA順序而成Nc ο I — BamHI片段，然後使H i ndM—Nco I接合體次 選殖在PBR327的Hindn — BamHI部位，而 81. 2. 20,000 (請先間讀背而之注意事項#蜞寫A ) 本紙張尺度逍用中β明家«孕(CNS) T4規！3(210x297公*) -64 - Λ 6 |{ 6 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 五、發明説明$3) 得Vh-lys — pBR327。雄之，由上述質艨切割 得Hindn — Bam HI片段，然後次蘧殖在經 Hi ndM和BamHI裂開的PUC19而得Vh — lys-pUC19〇 質體a 1 ys 1 1以及重組人類D1. 3的L鍵V領 域F R的编碼DNA順序和人類化CAMPATH_1H 抗體者符合一致（參考Nature 3 3 2： 3 2 3 - 3 2 7 .... 、 ,1 988年）。做為模板所使用的質體F 1 0中的重組 人類D 1 . 3的Η鐽V領域的编碼D N A順序記載在文獻 (參考 V. Verhoey 等人，Science, 2 3 7： 15 3 4 一 1 5 3 6，1 9 8 8 年）的圖 2 中。 圖6示為製造重組人類PM—1的Η鐽V領域第一轉 變部分的编碼DNA所使用引物和PCR反應的模式圔。 負向引物A ( A P C R 1 ;順序號碼：4 1 )和正向引物 E (A P C R 4 ;順序號碼：4 2 )雜化在該載體上的 D N A 順序上。A_ P C R 1 和 A P C R 4 為 p U C 1 9 載 體而特別設計者，但也可以使用全適性Μ 1 3順序引物。 CDR1移植/突變誘導引物B(phv—1;順序 號碼：4 3 ) , C D R 2移植引物C ( p h v - 2 ;順序 /號碼：4 4 ),以及C D R 3移植D ( p h V — 3 ;順序 號碼：4 5 )由具有4 0〜6 0 b p長，而夾有鼠類P Μ 一1的Η缠V領域CDR的编碼DNA以及該CDR的编 碼D N A的模板D N A中的人類F R的编碼D N A順序所 構成。在第一次的PCR反應中，使用正向引物 (請先閲讀背而之注意事項#填寫八 訂- 線. 本紙張尺度逍用中BB家《毕(CNS)甲4規格(210X297公放） 81. 2. 20,000 65 -
66 ΛΒ 經濟部+央標準局β工消赀合作社印製 五、發明説明64 ) APCR4和負向引物D。精製含有鼠類P Μ — 1的 CDR3顒序的编碼DNA的首次PCR生成物，然後在 第二次PCR反應中跟做為負向引物用引物C一起做為正 向引物使用上述生成物。同樣地，使用含有鼠類Ρ Μ— 1 的CDR2以及CDR3的编碼DNA而成第二次PCR 生成物，還有含有鼠類ΡΜ—1的所有3傾CDR的编碼 D Ν Α.而成第三次生成物，分別做為其下一値Ρ C R階段 的引物而使用。精製具有完整地重組人類PM—1H_V 領域的编碼D ΝΑ而成第四次PCR生成物，再經 H i n d ϋ和B a m Η I消化，然後為分析用途次選殖在 P U C 1 9 〇 ’ 為製造重組人類ΡΜ—1抗體Η鐽V領域的编碼 D N A，合成 P h ν - 1，p h ν _ 2 和 p h ν — 3 的三 種突變誘導引物。然後使用含有8 Μ尿素的1 2釤聚丙烯 醯胺凝膠而加以精製之。突變誘導引物P h ν — 1不僅為 鼠類ΡΜ—1抗體CDR1的移植而設計，也為人類 F R 1中的位置2 7和位置3 0分別由胺基酸的S e r變 成Tyr以及Ser變成Thr的變異而設計者。各為 100/ii2的PCR反應物，典型上含有10mM Tr i s —鹽酸（ρΗ8· 3) , 50mM氣化鉀， 1 · 5 m Μ 二氣化鎂，2 5 0 /i Μ d Ν Τ Ρ , 5 0 η g 的模板 DNA (Vh_lys — PUC19) , 2. 5 單 位的 AmpliTaq ( Perkin Elmer Cetus 製品）以.及引物 在内。使用各為1wM的phv—3引物和APCR4引 (請先閲讀背而之注意事項再填寫f 装· 線· 本紙5Jt尺度边用中《國家«準(CNS)肀4規格（210X297公龙> 81. 2. 20,000 -66 - 66 ΛΒ *<;··ϊ 經濟部屮央榡準局貝工消费合作社印製 五、發明説明¢5) 物進行首次的PCR反應，在94Ό下進行1· 5分鐘的 最初變性處理後，再按9 4 *0—分鐘，3 7 υ下1分鐘以 及72*0下1分鐘的30次循環處理。退火過程和合成過 程之間的變溫時間為2. 5分鐘。最後循琛的反應完成後 ，在72*0下進行10分鐘的最後延伸反應。5 23b ρ 長的PCR生成物利用1. 6%低熔點瓊脂糖凝睡而精製 後，提供後面的第二次PCR反應中做引物而使用之。 在第二次P C R反應中以大約1 w g並經精製的第一 次PCR生成物和25pmo 1 e的突變誘導引物phv 一2做為引物而使用之。PCR的條件跟第一次PCR反 應中所記述者相同。同樣地，由第二次PC R反應而得 665bp長的PCR丰成物，再和引物phv—1—起 使用在第三次PCR反應，然後由第三次PCR反應所得 737b p長的PCR生成物跟引物APCR 1 —起使用 在第四次PCR反應中。由第四次PCR反應所得 1. 172kb長PCR生成物，經精製後以Hindi 和B a m Η I消化，然後將含有重组人類P Μ — 1抗體Η 鏈V領域的大約700b ρ長的片段次選殖在pUC 1 9 載體中。經決定順序的4個選殖糸中，有二値具有正確胺 基酸順序的编碼DNA順序，被命名為。11(：一11〃11一 Ρ Μ 1 a 〇 為製造重組PM—1抗體Η鏈V領域其他變換部分的 编碼DNA,合成五種的突變誘導PCR引物。各値 PCR反應按照前述反應條件實質上相同條件下進行。為 本紙》尺度逍用中a B家標毕（CNS)肀4規格（210X297公龙） (請先閲讀背而之注意事項#填寫^·*) 81. 2. 20,000 -67 - 經濟部中央標準局Κ5工消费合作社印Μ 五、發明説明66 ) b轉變部分，在第一次PCR反應中使用突變誘發引物 Phv-m4 (Vai?-71->Arg-71)(顒序號 碼依據Kabat等人文獻；參考表4)(順序號碼：46 ).APCR4,以及模板DNA的pUC_RVh_ P Ml a。第一次PCR反應的上述PCR生成物經精製 後，跟引物APCR1—起在第二次PCR反應中做為正 向引物而使用。由第二次PCR反應中所得PCR生成物 ，使用1 . 6%低熔點瓊脂糖凝膠精製，再以H i n d I 和B a m Η I消化，經p U C 1 9次選殖而得p U C — RVh — PMlb。同樣地，使用突變誘發引物Phv~ nm (Asp-l-^Gln-1)(順序號碼：47) ' 以 及模板pUC — RVh，PM1 b而得C轉變部分的编碼 DNA (pUC—RVh—PMlc),使用突變誘導引 物 phv—mb (ILe — 48->M.et “一 48)(順序 號碼：48)以及模板pUC—RVh—PMlb而得d 轉變部分的编碼DNA (pUC - RVh — PM Id)， 使用突變誘導引物Phv—nm和模板pUC—RVh— PMlc而得e轉變部分的编碼DNA (pUC—RVh 一PMle),也使用突變誘導引物Phv—m7 ( (Thr — 2 8 ~^ S θ r — 28，和 Phe _ 2 9 ~^ I L θ 一29)(順序號碼：49)以及模板PUC—RVh— PMlb而得f轉變部分的编碼DNA (pUC—RVh 一 PMlf)。重組Η鐽V領域f轉變部分的胺基酸順序 以及其编碼核Μ酸順序示於順序號碼5 4。 (請先閲讀背而之注意事項#填寫-S0 裝· 訂· 線. 表紙張疋度边用中a Η家標毕(CNS)甲4規格（210X297公; 81. 2. 20,000 -68 - 05553 Λ 6 It 6 經濟部屮央標準：^貝工消费合作社印3i 五、發明説明67) 圖7示製造重組人類PM-1抗體L鏈V領域第一轉 變部分的结碼DNA所使用引物以及PCR反應的模式圖 。為製造重組人類PM—1抗體L鐽V領域第一轉變部分 的编碼D NA ,合成C D R 1移植引物p K V - 1 (順序 號碼·· 50) , CDR2移植引物pKV — 2 (順序號碼 :5 1 )以及C D R 3移植引物p K V - 3.(順序號碼： 52)，然後在含有8M尿素的1 2%聚丙烯醛胺凝膠上 精製之。再依照前述方法進行P C R反應。第一次P C R 反應物各含有1 itM置的pKV-3引物以及APCR4 引物。從第一次P C R反應所得3 5 0 b p長的P C R生 成物用1. 5 %低熔點瓊脂糖凝膠精製，然後做為第二次 PCR反應中的正向引物使用。從第二次PCR反應所得 P C R生成物經精製後，用B a m Η I和H i n d ϋ消化 ，然後為決定D Ν Α順序，將含有移植CD R 3的5 0 0 b P長的片段次選殖在p U C 1 9載體上。認同具有正確 順序的質體DNA,並在繼行的PCR反應中做為模板 DNA使用。第三次PCR反應中使用25pmo 1 e的 突變誘導引物pKV - 2以及A PC R4。從第三次 PCR反應所得PCR生成物經精製後，跟引物PKV— 1 一起做為第四次PCR反應中的引物使用。同樣地，將 第四次P CR反應所得PC R圭成物和A P C R 1引物一 起做為第五次P C R反應中的引物使用之。 從第五次P C R反應所得9 7 2 b p長的P C R生成 物，經精製後，用B a m Η I和H i n d Μ消化，然後為 (請先閲諸背而之注意事項*構寫{ 0 裝· 訂* 線- 本紙51尺度遑用中a Η家楳準(CNS)甲4規格(210父297公龙） 81. 2. 20,000 69 - Λ 6 Π 6 經濟部+央標準局A工消费合作杜印製 五、發明説明68 ) 決定DNA順序，次選殖在PUC19載體中。在CDR 2領域中發現問題，必須再行兩次PCR反應。在第六次 PCR反應和第七次PCR反應中，將第5次PCR反應 所得PCR生成物次選殖在P UC 1 9載體並做為模板 DNA而使用。第六次PCR反應中的引物為pKV—2 和APCR4。從六次PCR反應所得PCR生成物，經 精製後跟A P C R 1引物一起在第七次P C R反應中做為 引物使用。精製第七次PCR反應所得PCR生成物後， 用B a m Η I和H i n d Μ消化，然後為決定D N A順序 ，將5 Ο 0 b p D N A片段次選殖在P U C 1 9載體中。 決定順序的五値選殖糸中有兩個選殖糸具有正確的D A N 順序。該選殖糸被命名為iPUC-RVl — PMla。其 順序以順序號碼：5 5表示之。 為製造重組人類PM-1L鐽V領域的其他轉受部分 的编碼D N A ,合成突變誘導引物p v k - m 1 (順序號 碼·· 5 3 )。P C R反應實質上和前述相同。第一次 PCR反應中，將突變誘發引物pkv— ml (Phe — 7 1今T y r — 7 1 )和A P C R 4引物跟做為模板 0凡八的1>1；〇一11乂1一？1^1&一起使用。精製好第 一次P C R反應所得P C R生成物，然後和A P C R 1引 物一起做為第二次PCR反應中的引物使用。精製好第二 次P C R反應所得p C R生成物，用B a m Η I和 Ή i n d HI消化，然後為決定D Ν Α順序，次選殖在 口口（：19載體中。該選殖条被命名為？1；(：一尺乂1~ (請先閲讀背而之注意事項再填寫乂〕 6紙珉尺度遑用中β B家«毕(CHS)T4規格(210X297公;tt) 81. 2. 20,000 -70 Λ 6 Π 6 經濟部屮央橾準扃貝工消费合作社印製 五、發明説明69 ) Ρ Μ 1 b 〇 實施例8 為蓉#瞄乳額細睢中砉镲铒某闵工珲而辑抗勝 .所用人類細朐曰女病羞前期fH C Μ V)辟動闵芊的黻 體之魁诰（參老匾Ί ) 分別將嵌合ΡΜ—1抗體的L鍵V領域的编碼DNA 片段以及嵌合PM—1抗體的Η鏈V領域的编碼DNΑ片 段插入在設計好可以在晡乳類細胞中能表達/L鍵或人類 7 — 1H鍵的HCMV表達載體（參照圖1)的HCMV 一 Vi-KCk 和 HCMV — V»-HC*r 1 中。製造該 Η CM V表逹載體的詳細方法已公開在文獻中（參考Maeda 等人，Human Antibadies and Hy.bridomes，_2_: 1 2 4 — 134， （1991 _ ) ; C . A · Ke 111 eborough 等· 人，Protein Engeneering , · 7 7 3 — 7 8 3 , 1991年）。上述兩種載體莫基在pSV2neo (參 考 P · J . Southern 等人，J . Mol· App 1 · Genet · 1 : 327-341, 1982年），而為高水準的轉錄免疫 球蛋白L鏈或Η鏈含有人類細胞巨大病毒（HCMV)啓 動因子和強化因子（參考M. Boshart等人，Cell. 4 1 :521-530, 1985 年）〇 L鍵表達載體含有人類《C領域（參考T. H· Rabb-itts 等人，Curr. Top. Microbiol. Immunol. 114 : 166 — 171, 1984年）的编碼基因組DNA,另 外，Η鏈表達載體含有人類7 - 1C領域（參考Ν· Tak-ahashi 等人，Cel 1 . 29 ： 671—679,1982 iii 先κι 背 而 之 注 意 事 項 A 小· π 綿 紙51尺度逍用中团8家楳毕(CNS)肀4規格(210x297公;«：) S1. 2. 20,000 -71 - ,05551. Λ 6 It 6 五、發明説明（；0) 年）的编碼基因組DNA。這些HCMV表達載體為多功 能的，因此可提供在各種哺乳類細胞型中做過渡性和穩定 性的表逹而使用。 實施例Θ 為要#晡乳顔细朐中差葎猓某因工稈而爯杭體 .所用人類生長因子la (HEF_lot)啓動因子的 經濟部屮央標準局A工消t合作社印製 體之靱诰（參者圖8和圓9 ) 人類多肽鍵生長因子la (HEF—1«)乃最豊富 的蛋白質的一種。幾乎在任何細胞中都能表達它。人類 E F — ；I. cx啓動因子一強化因子的轉錄活性和S V 4 0早 期啓動因子-強化因子的轉錄活性比較，前者大約100 倍於後者（參考D. W. JKim等人，Gene. 9 1 ： 2 17 一 223, 1 990 年以及 T. Uetsuki 等人，J. Biol. Chem. 2 6 4： 5791-5798, 1 9 89 年）。 2· 5kb的HEF — lc(啓動因子、強化因子領域由連 接於該基因的5·-末端的大約1. 5kb的DNA,第 一表達序列中的33bp,第一插入序列中的943bp ，以及第二表達序列的第一部分的1 〇b p所構成。然後 將2· 5kb的HindBI — EcoRI片段從質體 PEF321 — CAT 切離（參考 D. W. Kim 等人，Gene, 9 1··.: 217 — 223, 1990 年，以及 T. Uet- suki 等人，J· Biol . Chem. 2 6 4： 5 7 9 1 -579 8, 1989年），再選殖在pdKCR載體上（ 參考 M. Tsuchiya 等人，EMBO J. 6 ： 6 1 1 - 6 1 6 (請先WJ讀背而之注意事項洱填寫γ 裝· -訂- -線- 本紙張尺度遑用中9«家樣毕(0胳>肀4規格(210乂297公*) 81. 2. 20,000 -72 - 經濟部中央標準局Μ工消费合作社印3i Λ 6 Π6 五、發明説明（71) ，1987 年），（K. O.Hara 等人，？1*〇〇.“<:1.八〇-ad. Sci. USA Vo 1.7 8 , No. 3 , 1 5 2 7 -1531，1.9 81 年）（R. Fukunaga 等人，？1*〇。· Natl . Acad. Sci. USA, Vol . 8 1，5 0 8 6 - 5090,1984年）而得含有SV40早期啓動因子 一強化因子而取代有大約3 0 0 b p的11丨11(1111一 E c o R I 片段的 p T E F — 1。 利用E c o R I消化p T E F — 1 ,再用Klenow聚 合酶充入，並接合在H i n d II連接物上，繼從上述修飾 過的P T E F — 1載體D N A切割得大約1 · 6 k b的 Ή .i n d 皿一 .S m a I 片段。 利用E c o R I局萍消化H C Μ V — 1 2 h — g 7 1 ，再用Klemow聚合酶充入，然後自行連接，藉此從實施 例5中所製造的H C M V — 1 2 h — g 7 1製迪得質體 H C Μ V - 1 2 h - g 7 1 ( Δ E *2 ) 〇 利用E c o R I消化質體H C Μ V -12h — g7l (△Ε2)，再以Klenow聚合酶充入，再用H.ind頂 消化之。將含有人類7 — 1 C領域的编碼DNA順序的大 約7 kb的片段，連接在含有riEF — Ια啓動因子一強 化因子的前述的1. 6kb的H ind 1D — Sma I片段 上而得HEF-12h-g7 1。這載體中的HEF — 1α啓動因子一強化因子領域除去建接5· —領域的 380bp的DNA,而跟pTEF—l中的情形相同。 以H i nd DI — BamH I片段而存在的該Η鏈V領域， 81. 2. 20,000 (請先閲讀背而之注意事項#填寫|0 裝· 線. -73 - Λ 6 Π 6 經濟部中央櫺準局EC工消费合作杜印製 五、發明説明（72) 可很容易和其他L鏈V領域更換。 將含有重组人類Η鐽V領域的编碼DNA的 Hi ndl-BamHI D N A 片段自從 pUC_ RVh — PMla, pUC- RVh — PMlb, pUC -RVh-PMl c, pUC-RVh-PMl d, P U C — R V h - P M 1 e 以及 p U C — R V h — P M 1 f (實施例7 )切離，然後插入前述質賭1^£心一 1 2 h — g7 1 的H i ndltt — BamHI 部分，而分別 得到表達載體RV h - ΡΜ 1 a , P V h - ΡΜ 1 b , RVh-PMl c , RVh-PMl d , R V h -P Μ 1 e ,以及P V h — P Μ 1 f。表逹載體卩乂^!-PMl a, PVh-PMlb, RVh-PMl c, R V h - P M 1 d , R V h - P M 1 e , iP R V h - P M 1 f ,以及Η E F - P M h - g 1分別含有重组人 類PM—1抗體H銻V領域a, b, c, d, e,f轉變 部分以及鼠類P M — 1抗體H鏈V領域的编碼D N A。 為製造L鏈表逹載體HEF—12k — gk,從 Η E F — 1 2 h — g 7 1切離含有日飞？一1«—啓動因 子、強化因子領域的大約3. Okb的Pvu)2 — H i n d BIH段•然後連接在實施例5所製成HCMV — L鐽表達載體HCMV—12k-gk而得大約7. 7 kb 的 Pvui? — Hi nd DI 片段而獲得 HEF - 1 2k 一 g k。跟Η鏈表達載體HEF — l 2h-g 7 1的情形 一樣，做為H i nd Μ — BamH I片段而存在的HEF 本紙張尺度A用中βΗ家樣毕(CNS)T4規格(210X297公*) 一 81. 2. 20,000 -74 " (請先閲讀背而之注意事項#填A頁) Λ 6 Η 6 055^3 五、發明説明（73) —12k — gk中L鍵V領域的编碼DNA,可以和其他 L鏈V領域的编碼DNA很容易互換。另外，質體HEF 一 PMh_g 7 1 係藉HEF-l 2h-g 7 1(參考圖 _8)的EF I α啓動因子領域（Pvui—H i nd斑片 段）取代HCMV — pmh-g7 1的H C Μ V啓動因子 領域（Pvui2-HindII片段）而製造者。 從 pUC — RVl - PMla 和 pUC-RVI-PMla (參考實施例7)切取含有重組人類L鏈V領域 的编碼DNA的H i nd Π-BamH I D NAM段， 然後插入 HEF — 1 2k—gk 的1"11110]11一 B a m Η I部位，分別獲得表達載體R V 1 — P Μ 1 a和 RVl-PMlb。表孽載體 RV1 — 卩1^11&和1^¥1 一 PM1 b,以及^1£卩一戸河*一8让分別含有重组人 類L鍵V領域a和b轉變部分，以及鼠類PM-1L鏈V 領域的编碼DNA。另外，質體HEF-PMit-sk係 以HEF_12k —.gk (參考圖9)的EFlct啓動因 子領域（Pvu 1 — H i nd I片段）取代HCMV — pmka — gk的HCMV啓動因子領域（Pvul — H i n d BI片段）而製造者。 實施例10 為要在CHO細朐中以窩水進表葎猙基因工 稈的抗體.而使用镩接#缺生SV40斡動因罕一強化因 平順序的二氣Μ酸潭原醅（dhfr)基因的載體^斛诰 (參者圖10和園1 1) 表紙張尺度边用中8國家楳準(CNS) T4規格(210x297公；jt) ik 先 «J 背 之 注 意 事 項 # 填 % il 線 經濟部中央標準局貝工消#合作社印31 81. 2. 20,000 -75 - 055¾3 Λ 6 Π 6 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印製 五、發明説明（74) 為要從SV40早期啓動因子去除強化因子順序，使 用Sph 1和Pvul消化質體PSV2 — dhf Γ (參 考 S. Subramani 等人，Mol. Cell. Biol. 1 . 8 5 4 一 864, 1981 年）（ATCC33694),再以 Klenow聚合酶充入，然後自行接合而得pSV2 — dhfr —ΔΕ (參考圖10)。藉EcoRI的局部消 化，從HCMV — PMh — g<y 1切取含有HCMV啓動 因子，Η鍵V領域的编碼DNA以及人類7—1C領域的 编碼DNA的大約3. 7kb的EcoRI片段。將上述 片段連接在EcoRI消化PSV2 — dhfr-ΔΕ而 得 DHFR—·ΔΕ — PMh — g*rl0 依據使用HE F — 1. α啓動因子一強化因子的Η鍵表 達載體製造類似的載體（參考圔1 1)。將來自HCMV _ 1 2h — g 7 1的大約3. 7kb的E'c_o R I片段.連 接在 Ec oR I -消化 PSV2 - dhf γ·-ΔΕ 而得 DHFR~AE-12h-g7l〇 DHFE-AE-12h-g7 1中將接在dhfr順序的BamHI部位 ，以B a m Η I局部消化，用Klenow聚合酶充入並自行 接合而加以去除之。將含有dhf r cDNA的大約4 一kb的PvuI—BamHIH段，從上述修飾過的 DHFR—ΛΕ—12h-g71切離，然後連接在實施 例12中所製造的RVh—PM1f—4所得大約3kb 的Pvu1—BamHI片段上，而製成DHFR—ΛΕ — RVh — PMlf〇 (請先Μ讀背而之注意事項孙填寫^〈) 本紙»Λ度遑用中β明家«毕(CHS) Τ4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 -76 - Λ 6 Η 6 經濟部中央梂準局员工消费合作社印製 五、發明説明75 ) 上述經改良的質體可提供製造本發明的重组人類PΜ _ 1抗體而使用。 實施例11 表葎#分析重紐人類ΡΜ-1抗艚之客種轉 祭部分 將表逹重组人類Ρ Μ - 1抗體的L鐽和Η鐽的各値 Η E F - 1 α載體同時轉化感染在C 0 S細胞。另外以表 達嵌合Ρ Μ — 1抗體的L鍵和Η鍵的各値Η Ε F — 1 c(載 體也同時轉化感染在C 0 S細胞而做為檫準對照組。3日 後收集轉化感染過的C 0 S細胞而得培養基，利用酶免疫 法测定（1 )上澄液中所存在的人類I g G抗體的量，以 及（2 )該180結合在11^一6>的能力。繼之，利用 相同標品再藉酶免疫法就該抗體阻礙人類I L 一 6結合人 · . · · - 類IL—6R的能力進行試驗。 利用表達重组人類Ρ Μ - 1抗體L鏈的兩種載體之一 種（RV1 - PMla或RVl-PMlb)以及表達嵌 合PM — 1抗體Η鏈的載體（HCMV — PMh_g7 l ),同時轉化慼染COS細胞，再進行重組人類ΡΜ—1 抗體L銻V領域的兩種轉變部分之評估。再用表逹嵌合 ΡΜ- 1抗體L鍵和Η鏈的各個載體（HCMV — ΡΜΚ a - g k和H C Μ V — PMh-g7l)同時轉化感染細 胞。使用未縴精製的COS细胞上澄液而分析對人類I L 一 6 R的結合能力之結果，重组人類Ρ Μ — 1抗體L鏈的 a轉變部分和嵌合ΡΜ—1抗體L鏈表現相同結果。但重 (請先wllft背而之注意事項再填Λ«) 裝- 訂- 線. 本紙張尺/t边用中國Β家楳準(CNS) Τ4規格(210X297公龙） 81. 2. 20,000 77 3 b β r' Λ 2 66 ΛΙΙ 五、發明説明呢） (請先閲讀背而之注意事項再墦寫木 组人類PM—1抗體L鏈的b轉變部分在實質上未保持對 人類IL一6R的結合能力。由上述结果可得FR3中的 位置一 7 1的苯丙胺酸（存在於為CAMPAHTH-1 Η而修飾的人類R E I中）改愛為酪胺酸（存在於天然 人類REI和鼠類ΡΜ-1抗體中），對於機能性抗原結 合部位之形成非常不利之結論。 評估重紐人類Ρ Μ — 1抗體Η鏈V領域的各種轉變部 Λ 分的以下試驗中均採用重组人類Ρ Μ — 1抗體L鏈V領域 的a轉變部分而進行。 線- 經濟部中央櫺準局ΚΧ工消费合作杜印製 使用表逹重组人類PM—1抗體Η鐽的六種載體中之 一種（R V h - Ρ Μ 1 a , R V h — Ρ Μ 1 b , R V h — PMlc，RVh-PMld, RVh-PMle或 R V h — Ρ Μ 1 f )以及表逹重組人類Ρ M — 1抗體L鐽 a轉變部分的載鼸（R V 1 — Ρ Μ 1 a ),同時轉化感染 C 0 S細胞，再來評估重組人類PM— 1抗體Η鍵V領域 的六種轉變部分。另外，也用表達嵌合ΡΜ—1抗饅L鏈 和Η鏈的各値載體（HEF — PMk — gk和HEF — PMh_g 71)同時轉移感染细胞。依使用未精製的 C 0 S細胞上澄液所得預試驗结果，測定對人類I L 一 / 6 R的結合能力，顯示重組人類Ρ Μ — 1抗體L鐽的a轉 變部分和重組人類ΡΜ-l抗體Η鐽的f轉變部分，跟嵌 合ΡΜ_1抗體丄鍵和Η鐽相同。 為確認上述預試驗所得結果，從細胞上澄液濃 縮得嵌合PM—1抗體以及重組人類PM—1抗體，然後 81. 2. 20,000 冬紙張尺度逍用中β國家«^(CNS) T4規格(210x297公*) -78 - ο r''ϊ Λ 6 116 五、發明説明（77)
(請先閲讀背而之注意事項再墦寫A 利蛋白質Α加以精製之。換言之.由CO S细朐而搏摈赛 液藉lOOkb切除用超级過濾設傭（Am icon裂品）而 濃縮之。濃缩後的培養液再用蛋白質A瓊脂糖（1££10^ 1 Protein A MAPS I Kit, BioRad 製品）精製之。摘要 之，濃缩培養液放入經5倍（容量計）的結合缓衝液所均 衡過的蛋白質A瑱脂糖分離管中，再用15倍（容置計） 的結合缓衝液洗淨，然後用5倍（容量計）的溶出缓衝液 溶洗之.。最後用微濃縮器（Cent r_ icon 1 0，Amicon.製 品）濃縮上述溶出液，再用P B S取代溶出缓衝液。’ 由嵌合PM—1抗體，以及重组人類L雄V領域的a 轉變部分和重組人類Η鍵V領域的a, b, c, d, e或 f轉變部分所構成人類PM—1抗體，經過精製後再進行 分析。結果確知L鐽的a轉變部分加Η鏈的f轉變部分顯 然為最佳重組人類PM—1抗體。該抗體跟嵌合PM—1 抗體同樣地能結合在人類I L 一 6 R上（參考圖1 3 )。 同時又跟鼠類抗體和嵌合抗體一樣地能阻礙人類IL— 6 結合在人類IL — 6R上（參考圖14)。 經濟部中央櫺準局CX工消费合作社印製 實施例1 2 為改善表蘀水進所准行簠紺人額PM - 1 V 領城夕修飾 為要去除重組人類PM_ 1抗體L鏈和^1_的乂領域 (順序號碼：5 4和5 5 )的前導順序的编碼D N A順序 内的插入序列，使用PCR引物再選殖V領域的编碼 cDNA。將L鏈和Η鍵的表達載體PV1 — PMl a和 81. 2. 20,000 ^紙51尺度边用中B國家標毕(CNS)甲4規格(210x297公*) -79 - w ί 經濟部中央標準局EX工消#合作社印製 五、發明説明（78) PVh — PMl f同時轉化感染在C 0 S细胞中。4 8小 時後，調裂總RNA (參考Chirgwin等人，Biochenis-try, 1 8 ： 5294 — 5299，1979 年），然後 依照鼠類抗體V領域的PCR選殖所記載方法，使用5 以g的總R NA合成單股c DNA。設計好三種的P C R 引物，並加以合成之。L E V — P 1 (順序號碼：6 0 ) 和Η E V — P 1 (順序號碼：5 8 )合有接合供體順序和 B a m Η 1部位。然後分別做為L鏈和Η鏈的V領域用途 的正向引物而使用之。 HEV — Ρ2 (順序號碼：59)含有Hindi部 位和AT G起始密碼子前的Kozak共同順序，然後做為 L鏟和Η鏟的V領域用逯的負向引物而使用。各為100 wi的PCR反應物含有20mM Tr i s —鹽酸（ ρΗ8· 8),10mM氯化鉀，lOmM硫酸銨，2m Μ 硫酸金舅，0. 1% TritonX—100, 〇. lju.g 的 BSA, 250wM dNTP, 2. 5 單位的 Vent DNA 聚合酶（Bio.Labs，U· K.製），50%的單股 cDNA合成反應物以及各為l〇〇pmo1e的正向引 物和負向引物。各値PCR管用50 的鍍油覆蓋，然 /後在9下以1. 5分鐘進行第一次變性後，再於94 t：下進行反應1分鐘，繼在50t：下1分鐘以及72C下 1分鐘進行30次的循環反應，然後在72*C下培養10 分鐘。使用2. 0%低熔點瓊脂糖精製含有L鍵V領域的 408b p的PCR生成物以及含有Η鐽V領域的444 (請先W1請背而之注意事項#堪寫Α 錄· 泰紙》尺度逍用中家«毕<CNS) Τ4規格(210X297公:Jt) SI. 2. 20,000 -80 Λ 6 Η 6 五、發明説明（79) bp的PCR生成物，然後用BamH I和H i nd DI消 化，再選殖在PUC19載體，而分別得pUC—PV1 一 PM1, a — 3以及 pUC — RVh — PM1 f — 3〇 重组人類PM—1抗醱L鍵和Η鍵V領域的DNf順 序確知含有不適當的接合供髓部位和受腥部位（參照顒序 號碼：5 4和5 5)。L鏈V領域内的該項部位雖然不會 离頻度的使用（mRNA的大約10%),但Η鏈V領域 内的該部位其使用頻率甚离（m R ΝΑ的大約9 0 %)。 這項異常的接合帶來重組人類PM—1抗體的低水準的表 逹。為迴避V領域的異常接合，利用PCR法去除其接合 供體部位。就Η鏈V領域合成負向引物NEW—SP1( 順序號碼：6 1)以及;向引物NEW — SP2 (順序號 碼：62)。該引物能將DNA順序TGG GTG AGA改變為DNA順序TGG GTT CGC。 經濟部+央標準局β工消#合作社印製 PCR反應條件如同前述cDNA的選殖，但模板DNA 為50ng的pUC—RVh—PMlf—3,而引物為 HEW—P2以及NEW—SP2,或HEF-P 1 和 N E W_ S P 1二者中之一種。 由兩値PCR反應所得PCR生成物，使用2%低熔 點璜脂糖精製，並在PCR接合反應中使用之。含有 0.5wg的第一個PCR生成物的的PCR反 應物以及5單位的Vent DNA聚合酶，在94t!下2分 鐘，50TC下2分鐘以及72TC下5分鐘條件進行培養後 ，雄之加入分別為lOOpmo 1 e的HEV — P1引物 81. 2. 20,000 (請先wift背面之注意事項#構窍4-) 本紙張足度遑用中《«家«準(CNS>T4規格(210X297公*) -81 - r U-· Λ 6 II 6 五、發明説明（80) 以及HEV — P2引物。PCR管用30//又的鍍油覆蓋 ，然後在94t：下1分鐘，50t：下1分鐘，72t：下1 分鐘進行25循琛的PCR反應，进之在72*0下培養 1 0分鐘。 依照相同方法，使用PCR引物REI — SP1 (顒 序號碼：63)和REI-SP2 (顒序號碼：6 4)除 去重组人類PM—1抗體L鍵V領域的接合供體領域，該 引物可將DNA順序CAG GTA AGG改變為DN A順序CAG GAA AGG。兩種PCR生成物，也 就是L鏈V領域的40 8 b P的DNA片段以及Η鏈V領 域的444bρ的DNA片段，用2. 0%低熔點瓊脂糖 加以精製，經H i n d夏和B a m Η I消化，為決定順序 而選殖在 PUC — 1 9並得 pUC — RVl— ΡΜ1 a — 4以及pUC-RVh—RM1f-4。 RVh — PMlf 的 Hi ndlE — BamHI 片段用 pUC-RVh - PM1 f-4 的H i ndl-BamH I領域取代而得RVh_PMl f — 4。 經濟部+央標準局貝工消合作社印製 以順序號碼57表示除去重组人類PM—1抗體L鐽 V領域的插入序列而呈a轉受部分的順序。除去重組人類 PM—1抗體Η趙V領域的插入序列的f轉變部分的順序 則用順序號碼：5 6表示之。
實施例13 製诰重甜人類AUK12_20抗篇L铖V 铕城的组碾DNA 81. 2. 20,000 ih 先 Ml 背 而 之 注 意 事 項 填 及 本紙》尺度遑用中国《家榣毕(CNS)甲4規格(210X29/公Λ) -82 - Λ 6 Π6 經濟部中央標準局KX工消#合作杜印¾ 五、發明説明（81) 圖1 6示製造重組人類AUK 1 2 — 20抗體L鏈V 領域的编碼DNA的工程圔。做為棋板的人類抗髏L鐽V 領域的编碼基因，使用限制酶Η i nd I以及BamH I 部位滲入在PUC19載體中。準備8侮PCR引物（A 〜Η),利用第一値PCR,將V領域的编碼基因分為4 値領域而加增幅。引物Α和Η，跟pUC19載體上的 D N A順序具有互補性。引物B , C ,以及D為分別具有 將移植的CD R領域的基因順序的4 0〜6 0b p的引物 。引物E , F ,以及G分別跟引物B , C以及D的5 ·端 15〜20b p的DNA順序具有互補性。4種第一 P C R ,分別採用引物A和E ,引物B和F ,引物C和G ，引物D和H。PCR生成為A-E编碼FR1, B — F 编碼CDR1和FR2。A — E片段的3·端和B — F片 段的5’端具有15〜20bp的互補性，因此，這些片 段在後面可以接合起來。同樣地，B—FH段跟CDR2 和FR3的编碼C — G片段也具有互補性。C — G片段更 和CDR3以及FR4的编碼D—Η片段具有互補性。因 此上述四種Η段藉相互間的互補性而可能接合一起。在 PCR反應液中就上述四種片段進行接合反應後，加入引 物Α和Η,連接有正確的4種片段者，得藉第二PCR反 應而增幅。所得第二PCR生成物，具有3値移植的 CDR,經H i nd Π和BamH I消化後，次選殖在 P U C 1 9載體上。 更具體言之，使用質體PUC19上插入有重組人類 先 閲 背 1¾ 之 注 意 事 項 再 填 % il 均 本紙張尺度遑用中《國家標毕(CNS)甲<1規格(210X297公龙） 81. 2. 20,000 -83 - Λ 6 Η 6 .0555^ 五、發明説明（82) PM—1抗體L鏈V領域a轉變部分的编碼DNA而成的 質髖PUC—RV1-PM1a—4做為模板。 前述引物A〜Η具備下列順序： 負向引物 順序號碼 正向引物 順序號碼 請 先 Ml 請 背 而 之 注 意 事 項 填 % A、 REVERSE 83 E, 1220-Llb 66 B、 1220-L1 65 F. 1220-L2b 68 C、 1220-L2 67 G, 1220-L3b 70 D、 1220-L3 69 Η, UNIVERSAL 82 經濟部屮央標準局员工消#合作社印91 CDR移植用的負肉引物1220—L1,1220 一 L2以及1 220 — L3,經使用含有12%聚丙烯醛 胺凝膠精製後再使用之。 各為1 ΟΟ/i ί的PCR反應物含有20mM Tris —鹽酸（pH8. 8) , 10m Μ氯化鉀，10 m Μ 硫酸銨，2 τη Μ 硫酸鎂，◦ . 1 % Tr i ton X — 100,0.1Wg 的 BSA,250ium d N T P , 5單位的Vent DNA聚合酶（BioLabs. U. K.製品） …50ng 的 pUC - RVl-PMla-4 D N A , ，還有各為100pmo1es的正向引物和負向引物。 各個管用PCR管用的鑛油覆蓋，然後在94t： 下變性處理1. 5分鐘後，在94*0下1分鐘，50t：下 1分鐘以及72¾下1分鐘進行3◦循琛的反應，然後在 本紙張尺度遑用中β S家《準(CNS)甲4規格(210x297公¢) 訂 線 81. 2. 20,000 -84 - Λ 6 It 6 五、發明説明63 ) 7 2 t：下培養1 0分鐘。 請 先 閱 背 而 之 注 意 事 項 填 % 使用2. 0%的低熔點瓊脂糖（FMC, Bio· Products. USA 製品） 精製 252bp (A— E) , 96bb ( B-F) , 130bp (C-G)以及 123bp (D — H)的各種PCR生成物。換言之，將含有各俚DNA片 段的瓊脂糖部分切取，在65*0下熔融5分鐘，加入含有 2mM EDTA以及200mM氰化納的相同容量的^ 2 0 m M Tr is-盏酸（pH 7. 5),該混合物以 苯'酣和氛仿萃取，然後以乙醇沈澱法回收DNA片段，再 溶解於含有ImM EDTA的10mM Tris—鹽 酸（PH7. 5)中，提供PCR接合反應之用途。 線 經濟部t央標準局KK工消伢合作社印製 其次，將含有各為2wg的第一PCR生成物和 5單位的"Vent DN A聚合酶的9 8//文的PC R反應液 ，在94t!下2分鐘，50*0下2分鐘以及72Ό下培養 5分鐘而進行接合反應。然後加入各為10 Opmo 1 e 的A ( REVERSE )以及Η ( UVIVERSAL )引物，使反應 液量成為lOOiui?後，再用50//文的鑛油覆蓋，然後 在94t：下1分鐘，5 0 t：下1分鐘以及7 2 t： 1分鐘進 行30次循環反應，然後在72T：下培養10分鐘。 含有移植了鼠類單株抗體AUK 1 2_20的L鏈 CDR的L鋪V領域的编碼DNA在内的558b P的第 2PCR生成物，用2. 0%低熔點瓊脂糖精製，經 BamH I和H i ndltt消化後，次選殖在pUC 1 9載 體，確認鹽基順序而得PUC — RVi—1 220a。所 81. 2. 20,000 卜紙ft尺度逍用中B國家«毕(CNS)T4規格(210X297公址） -85 - Λ 6 Π6 五、發明説明(84) 得L鍵V領域的胺基酸順序和其编碼核苷酸順序示如順序 號碼：71。 雄之，為構築L鏈表達載體，從上述質體PUC—R Vi — 1 22 0 a切取含有重组人類1 2 — 2 0抗體L鐽 V領域的H i nd Π — BamH I DNA片段，插入L 鏈表達 HEF — 1 2k — g k 的H i n'd H — BarnH I 部位，而得重组人類AUK 12 — 20抗暖L鐽V領域a 轉變部位的表達載饈之R Vi— 1 2 2 0 a。 實施例1 4 重組人類A UK 1 2 — 20抗》1.嫌的耒葎 和分析CO S細朐中的摘溏袢弃洎
經濟部中央標準局貝工消费合作杜印$L 利用重組人類AUf12—20抗體L鐽的表達載體 RVi — 1 220 a以及嵌合12 - 2 0抗體Η雄的表逹 載睡HEF — 12h - g^l (參考實施例5)同時轉移 感染C 0 SM胞而進行重組人類AUK 1 2 — 20抗駸L _&轉變部分的評估。換言之將C Ο S细胞按1 X 1 0 7 個/mi濃度懸濁在PBS溶液中，再將DNA (以質體 計各為1 0./z g)加入0. 上述細胞浮遊液中。使 用基因脈波裝置（BioRad製品），用1 9 0 0伏特（V ),2 5 // F的電容量與以脈搏。 室溫下經過10分鐘的恢復期間後，經電穿孔的細胞 加入在的含有1 0%牛胎兒血清（不含7 —球蛋 白）的DMEM培養基（GIBCO製品）中。培養72 小時後，收集培養上澄液，經離心而去除細胞碎片，在無 81. 2. 20,000 ih 先 K1 背 1¾ 之 注 意 事 項 # 填 2 本紙ΛΛ度遑用中《 Β家榣毕(CHS) Τ4規格(210 X297公*> 86
(J 經濟部屮央橒準局κχ工消费合作社印Μ Λ 6 Μ 6 五、發明説明¢5 ) 菌條件4 υ下可短期貯藏，或在一 2 0 t：下長期貯藏之 利用豳免疮測亩法鼉人額仆.杭餺 經轉移感染的g_ _0 S細胞的培養上澄液藉酶免疫測定 而確認産生有嵌合抗體。為檢査得人類化抗體，用山羊抗 人類I g G (整値分子，Si ema製品）塗布培養板。封 阻後分段稀釋從C 0 S細胞而得培養上澄液並加入各孔中 〇 培餐和洗淨培養板之後，加入鹺性磷酸酶结合山羊抗 人類IgG (7鏈專一性，Sigma裂品）。經過培餐並洗 淨後加入基質缓衝液。再經培養後終止反應並測定波長 405nm處的吸光值。使用精製人類IgG ( SUi»a 製品）做為對照標準樣品β 為確認對人類I L-β R的结会能力而行醅免疮搏I亩 藉酶免疫法测定經轉移感染的cos細胞所得上澄液 ，決定所生産人類化抗鼸是否能結合在抗原IL — 6R上 。為檢査跟抗原的结合，用MT 1 8鼠類單株抗體（參考 例1)塗布培養板。用1%BSA封阻後，加入可溶性重 組人類IL_6R (SR344)於培養板上。 洗淨培餐板後，分段稀釋從C 0 S細胞而得培養上澄 液，然後加入各孔中。培養並洗淨後，加入鹼性磷酸酶結 合山羊抗人類I gG於各孔中。培餐並洗淨後，加入基質 缓衝液。培養後終止反應，並測定波長405nm之吸光 本紙張尺度遑用中國困家《卒(CNS)T4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 先 閲 it 背 而 之 注 意 事 項 # 填 3 % -87 - A6 B6 經濟部中央標準屬工消费合作社<f« 3_ 五、發明説明（85) 菌條件4 *C下可短期貯藏，或在一 2 0 t：下長期貯藏之。 利用酯免痔測亩法量人類化杭體 經轉移感染的C 0 S細胞的培養上澄液藉酶免疫測定 而確認産生有嵌合抗體。為檢査得人類化抗體，用山羊抗 人類IgG (整値分子，Si s«a製品）塗布培養板。封 阻後分段稀釋從C 0 S細胞而得培養上澄液並加入各孔中 〇 培養和洗淨培養板之後，加入鹾性磷酸酶結合山羊抗 人類I gG (7鍵專一性，Sigma製品）。經過培養並洗 淨後加入基質缓衝液。再經培養後終止反應並測定波長 405nm處的吸光值。使用精製人類IgG ( Sigma 製品）做為對照標準樣品。 為確認抗人類I L — 6R的結合能力而行酯免痔測亩 藉酶免疫法測定經轉移感染的C 0 S細胞所得上澄液 ,決定所生産人類化抗體是否能結合在抗原IL 一 6 R上 。為檢査跟抗原的結合，用MT 1 8鼠類單株抗體（參考 例1)塗布培養板。用1%BSA封阻後，加入可溶性重 組人類IL一6R (SR344)於培養板上。 洗淨培養板後，分段稀釋從C 0 S細胞而得培養上澄 液，然後加入各孔中。培養並洗淨後，加入驗性磷酸酶結 合山羊抗人類I gG於各孔中。培養並洗淨後，加入基質 缓衝液。培養後終止反應，並測定波長405nm之吸光 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —裝. 訂· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）_ 88 _ 81.9.25.000 ,055^^ ,055^^ 經濟部中央標準居霣工消费含作杜*« A6 B6 五、發明説明（86) 值。 其結果如圖1 7。重组人類AUK 1 2 — 20抗體L 鏈a轉變部分和嵌合12—20抗髏Η鏈所組成的人類化 抗體，跟嵌合12 — 20抗體一樣表現抗人類I L — 6R 具有強大結合能力，隨樣品的稀釋顯示405nm處的吸 光值有相關性變化，而確知樣品中含有抗IL—6R的抗 體。另外，該結果表示重組人類AUK12—20抗髏L 鏈a轉變部分跟嵌合AUK 1 2_20抗HL鐽同樣具有 抗原結合能力。 實施例1 5 使用人類亞群I (HSGT)#固順序嫌築 重組人類12—20抗體Η鋪某因 依照實施例13所示同樣方法，將AUK 12 — 20 抗體Η鍵V領域的C D R移植在具有人類亞群I的共同順 序做為FR的重組人類a 4 2 5 (參考Kettleboro-ugh 等人，Prote i n Eng i neer i ng，4 . 7 7 3 — 7 8 3 ,1991年）。首先，從質體HCMV — RV〃 a — 425 — 7 1切取重組人類V// a425 (參考上述文獻 中圖3)為编碼對象的H i ndl — BamHI D N A H段，次選殖在PUC19載體的Hindi — BamHI部位而得pUC — RVfl - 425a。然後利 用上述所得者做為模板DNA使用。合成得PCR法所要 用八種引物（A1〜H1)。引物1220 — H1設計好 移植CDR1以及由Thr—28變更為Ser—28的 本紙張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐）_ 89 - 81.9.25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) -丨装· 訂_ 經
央 標 準 Μ) A 工 消 fi· 合 作 社 印 製 Λ 6 116 五、發明説明β8) AUK1 2 — 20抗蘼的Η鏈V領域CDR的人類Η雄V 領域的495bρ的PCR生成物，再用2. 0%低熔黏 瓊脂糖凝謬精製之，然後用BamH I和H i n d Π消化 後，所得8&1111^1—1^丨11(5111片段次選殖在 PUC19載饅中，確認其鹽基順序而得pUC—RVff —1 2 2 0 a 〇
調査重组人類AUK 1 2 — 2 0抗鳢,Η鏈V領域的编 碼DNΑ順序的结果，發現跟接合供與順序有很好的符合 一致的顒序。由此可知在製造重组人類PM—1抗髖時成 為問題的異常接合有被引發的可能性存在。因此，利用 PCR法改變該順序。合成SG1 — SP1 (順序號碼： 9 7 )以及S G 1 — S $ 2 (順序號碼：9 8 )做為突變 誘導引物使用。該引物可將DNDA順序A A G GTG AGC變更為DNA順序AAA GTC AGC。 PCR反應條件和前述反應·條件相同進行，棋板DN A為 50ng的pUC — RV «— 1 220a,而引物則使用 SG1 — SP1 和UNIVERSAL (順序號碼：82 )或 SG1 — SP2 和 REVERSE (順序號碼：83 )的二者中之任意一種。 由兩値PCR反應所得PCR生成物，用2%低熔點 瑗脂耱凝膠精製後，使用在PCR接合反應中。將各為 0. 2 wg的第一 PC R生成物以及含有5單位的Vent DNA聚合酶的98W ί的PCR反應液在94TC下2分 鐘，50t：下20分鐘，以及72Ϊ：下5分鐘培養，而進 請 先 «I 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 填 寫 線 本紙Λ尺度遑用中國B家棋毕(CNS)Ή規格（210X297公;it) 81. 2. 20,000 Λ 6 Η 6 五、發明説明®9) 行接合反應。其次•加入各為lOOpmo 1 e的引物 UNIVERSAL和REVERSE,用50"又的鑛 油覆蓋後，在94t!下1分鐘，50t!下1分鐘·然後在 7 2亡下1分鐘，進行第2PCR反應的循琛反應30次 ,最後在72X3下培養1〇分鐘。第2PCR反應中所得 495bp的DNA片段用2. 0%低熔點瑷脂糖凝謬精 裂，以H i n d I以及B a m Η I消化後，次選殖在 PUC19載體中，經確認鹽基順序而得pUC—RV* ih 先 閲 讀 背 注 意 事 項 再 填 寫 -12 2 0 a 2 經濟部+央標準局β工消费合作社印91 雄之，從上述pUC — RV# — 1 2 20 a — 2切取 得含有重組人類AUK12—20抗KH鐽V領域的缳碼 DNA的H i n d Μ — 尽 amH I DNAH段•導入Η 表達載體HEF—12h—g7l的Hindn-BamH I部分，而得重组人類AUK 12 — 20抗體Η _&轉變部分的表達載體之只7»—1220&。 為製造重組人類AUK 1 2- 20抗體Η鍵V領域的 其他轉變部分（b〜d)的编碼DNA,合成兩種突變誘 導PCR引物。各個PCR反應基本上跟前述PCR反應 條件相同。為製造b轉變部分的编碼DNA。兩種的第一 PCR法中，使用UNIVERSAL引物（順序號碼： 8 2 )和突變誘導引物1 2 2 Ο Η - m l a (順序號碼·· 78),或REVERSE引物（順序號碼：83)和突 變誘導引物1220H_mlb (順序號碼：79)的各 種PCR引物，以及pUC — RV// — 1220a做為模 1紙》1尺度逍用中_ B家楳华(CNS)甲4規格（210x297公:¢) 81. 2. 20,000 -91 ftc6 五、發明説明（90) 請 先 «I 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 填 % 板DNA。分別為202b p和323b p之第一PCR 生成物用2. 0%低熔點瓊脂糖凝腰精製後，按照前述相 同反應條件進行第二PCR反應（包括PC R接合反應） ，而得4 9 5bp的生成物（b轉變部分）。再用 HindJ[ — BamHI消化，並次選植在 PUC19載體而得pUC—RVff—1220b。 同樣地，將突受誘導引物1 2 2 0 Η — m 2 a (順序 . . ..... 號碼：8 0 ) , 1 2 2 Ο Η — m 2 b (順序號碼：8 1 ) 以及其生成物，使用模板pUC_RVir —1220a而 得PCR生成物（C轉變部分的编碼DΝΑ),用 H i n d里和B a m Η I消化，插入p U C 1 9載鳢的 H i n d 夏一B a m Η I 部位而得 p U C — R V、一 1 2 2 0 c。另外，使用突變誘導引物1 2 2 0 Η — m l a (順序號碼：7 8) ，1 2 2 0 Η — m 1 b (順序 號碼：7 9 )以及做為模板的p U C — R V « — 1 2 2 0 c而得P C R生成物（d轉變部分），用 H ind HI — BamH I消化後插入pUCl 9載髖之 H i n d 班 一 B a m Η I 部位而得 p U C — R V « — 經濟部屮央樣準局Μ工消费合作社印51 1 2 2 0 d 〇 编碼在質醚pUC — RV// _ 1 220b中的重组人 類Η鍵V領域b轉變部分的胺基酸順序以及其编碼的核苷 酸順序示於順序號碼：8 4 ,另外编碼在p U C — R V 一 1 2 2 0 d中的重组人類Η鐽V領域d轉變部分的胺基 酸順序以及其编碼的核；酸順序示於順序號碼：8 5。 S1. 2. 20,000 本紙張尺度遑用中《 B家搵準(CNS) T4規格（210X297公*) -92 - 五、發明説明机） § 先 Ml 讀 背 注 意 事 項 # 填 % Ml 其次•為構築重組人類AUK12—20抗饈Η鍵的 各種轉變部分的表逹載《，從P U C — R V* — 1 2 2 0 b, pUC — RVtf — 1220c 以及 pUC-RVff — 1 22 0 d切取得含有重组人類AUK12 — 20抗體 Η鏈V領域的编碼DNA的H i n d I — BamH I片段 ，插入H鏈表達載體Η E F — 1 2 h — s 7 1的 H i n d I — B a m Η I部位而分別得各種轉變部分的表
. S 達載體RV« —1220b, RV* — 1 2 20 c,以及 R V 〃 - 1 2 2 0 d 0 實施例16 弃璩祐分析重紺人額12—20抗靄的夂蒱 雄礬部分 利用四種表逹重組人類1 2 — 2 0抗髖Η鐽的載體中 之一種（R V* _ 1 2 2 0 a , R V» — 1 2 2 0 b , RV* - 12 2 0c,或RV«— 12 2 0 d)以及重组 經濟部屮央梂準扃员工消¢:合作社印$1 人類AUK12 — 20抗體L鐽的表逹載體之RVi — 1220a,同時轉移感染COS細胞而評估重組人類 12-20抗體Η鏡V領域的四種轉變部分。為比較起見 ，表達嵌合12 - 20抗體L鐽和Η鍵的各種載饈（ 1^已卩一1211 — 8 7 1以及日£卩一121^ — 81〇用 以同時轉移感染C 0 S细胞。對人類IL — 6R的结合能 力的測定結果，重组人類AUK12—20抗體L鋪和重 組人類AUK 1 2 — 20抗體Η鐽的b轉變部分，或重组 人類AUK 1 2 — 2 ◦抗體L鏈和重組人類AUK 1 2 — 拿紙ft尺度边用中BB家楳毕(CNS)T4規格(210X297公;it) 81/ 2. 20,000 -93 - A 6 It 6 五、發明説明(92) 20抗翻[H鍵的d轉變部分所组成重组人類1 2 — 2 0抗 鼸表現跟嵌合12-20抗醱相同的结合活性。其结果示 於匯18和圖19。 經濟部中央標準局EX工消费合作社印製 實施例17 使用人類抗體Η ΑΧ所准行重紐人額s θ 12 2 0 Η抗靄Η銪某因嫌簕 根據蛋白資料庫〜Leeds"的檢索，跟鼠類單株抗嫌 A U K 1 2 - 2 0的Η鏈V領域同一性最高的人類抗髏乃 Η ΑΧ (參考 J· Immunology·· 13 9 ί 2 4 9 6 — 2501， 1987年* SLE病患者來源的Β細胞融合 釋 21/28 ( Β. cell hybridoma 2 1 / 2 8 )所生 産抗體，其基因順序示@圖4,圔5,按基酸順序示於圖 6中）。使用H A X抗篇的FR領域和鼠頚單株抗體 AUK1 2-20的^1鏈乂領域〇01^,設計重组人爽 s 1 e 1 2 2 0 Η抗體Η鐽V領域。 利用化學合成方法製造含有鼠類單株抗體AUK 1 2 -20的Η鍵V領域的CDR的重組人類sie1220 Η抗體Η鐽V領域的编碼總DNA。換言之，將全長為 439bp的s 1 el220H抗體Η鐽V領域的编碼 DNA,.分成為各含有2 1 b ρ的重後部位的9 ◦〜94 bp長的6支低聚核苷酸（si el2^0 hi〜6 ;其 順序號碼分別為8 6〜9 1 )而設計之。設計低聚核苷酸 之際，進行二级結構（secondary structure )之檢索 ,结構上有問題之部位，為避免胺基酸發生取代，改變其 先 «1 ih 背 而 之 注 意 事 項 再 填 % % Μ 绵 1紙張尺度遑用中《Β家楳毕(CNS)IM規格(210X297公:》) 81. 2. 20,000 -94 - Λ 6 Η 6 經濟部+央標準局貝工消费合作社印31 五、發明説明(93) 编碼的第3鹽基。造些低聚核苷酸的相互鼷係以及完成雙 股DNA的合成過程示於圖20。 使用PCR法按照圖20所示反應進行。換言之，將 6支合成的低聚核眘酸加入同一値PCR反應管中，進行 第一PCR反應。據此，得進行2個低聚核苔酸的退火成 長，更進而完成四値低聚核苷酸，或獲得金長的低聚核苷 酸。趙之，加入末端引物A (順序號碼：9 2 )和B (順 序號碼：9 3 ),再進行第二P C R反應，始得完成具有 正確且全長度的低聚核苷酸的增幅。精製所得生成物，用 B a m Η I和H i n d IK消化後，次選殖在p U C 1 9載 髏中，然後進行決定順序。 具體而言，將含有丨0 0 m Μ T r i s —鹽酸（ p Η 8 · 3 ) , 5 0 m M 氣化鉀，0 · 1 m M d A T P ,0 . 1 m M d G TP , 0 . 1 m M dCTP, 0. ImM dTTP, l. 5mM二氛化鎂以及2. 5 單位的 DAN 聚合酶之 AmpliTaq ( Perkin Elmer Cet-us製品）以及各種低聚核替酸5 p mo 1 e的9 8 /i i 的反應混合物，先在94t；下經1. 5分鐘變性處理後， 再進行9 4 t：下3分鐘，5 Ο υ下2分鐘，72衧下5分 .鐘的循琛反應三次，继在72TC下培養1 0分鐘。反應液 中加入各為lwi的50mM的末端引物Α和Β，用80 •/i 的鑛油覆蓋後，在94C下變性處理1 . 5分鐘，然 後在94t：下1分鐘，50Ό下1分鐘，721C下1分鐘 進行30循琛的反應，繼在72*0下培養10分鐘。使用 ih 先 閲 讀 背 Λ 之 注 意 事 項 # 填 % 装 ij 琮 ^紙»尺度遑用中國困家«準(CNS) T 4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 -95 - Λ 6 1(6 經濟部中央櫺準局A工消贽合作社印31 五、發明説明(94) 1. 5%的低熔點瓊脂糖凝謬精製439bp的PCR生 成物，用限制酶B a m Η I和H i n d Π消化後•次選殖 在pUC 1 9載釀中，並確認其鹽基顒序。所得選殖糸命 名為pUC — RVff — s i el220Ha。該質髖中所 编碼的重組人類s 1 e 1220H抗體的Η鏈V領域a轉 變部分的胺基酸順序以及其编碼核苷酸順序示於顒序號碼 :9 4 〇 其次，從 P U C — R V，一 s 1 e 1 2 2 0 H a 切取 得含有重组人類1 2 — 2 Ο ( s 1 e 1 2 2 Ο Η)抗體 Η鐽V領域的編碼基因的Η i η d HI - Β a m Η I DNA片段，導入H鏈表達載體HEF-12h-g71 的 H i n d 1Γ— B a m p I 部位•而得 R V * — s 1 e 1 2 2 Ο H a 〇 為要製造重组人類s 1 e 1 2 2 Ο H抗體H鋪V領域 的其他轉受部分（b〜d轉變部分），合成兩値突變誘導 引物s 1 e 1 2 2 Ο H m 1 (順序號碼·· 9 5 )以及s 1 e 1 2 2 Ο H m 2 (順序號碼：9 6 )。各値P C R反應 中，使用實施例1 3中所示Vent D N A聚合酶以及反應 液組成。各値PCR反應中，b轉變部分和c轉變部分時 ，將做為模板的 PUC — RV* — s 1 el 220Ha, 5 0pmol e的突變誘導引物s 1 el220Hml或 s 1 el 220Hm2以及50pmo 1 e的末端引物B 所構成反應混合物，在9 41C下變性處理1. 5分鐘後， 再進行94t：下1分鐘，5 0¾下1分鐘，72t：下1分 先 K1 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 填 % % il 韓 I紙張疋度遑用中家《旱(CHS) T 4規格(2丨0父297公*) 81. 2. 20,000 -96 - Λ 6 η 6 —JL—、發 W说明—(95) 鐘的3 0循環反應，然後在7 2 下培餐1 0分鐘。使用 1 . 5 %的低熔點瓊脂糖凝膠精製2 3 5 b ρ或1 7 8 bp的生成物，做為第二PCR反應的引物而使用。換言 之，加入5 Opm o le的末端引物A和Ο . 2 /ig的 PCR生成物，以 pUC — RV* — s 1 el 220Ha « 為棋板而進行第二PCR反應，所得439bp的生成物 用1 · 5 %低熔點瓊脂糖凝膠精製，經B a m Η I和 H i n d Μ消化後，次選殖在p U C 1 9載體中，分別獲 得重组人類s 1 e 1 2 2 Ο Η抗體Η鏈V領域b或c轉變 部分的编碼質體pUC- R V、一 s 1 e 1 2 2 0 H b或 Ρ U C - R V\ - s 1 e 1 2 2 Ο Η c 0 經濟部屮央榇準局A工消费合作社印31 ih 先 間 讀 背 而 之 注 意 事 項 構 % 依照下述方法製造重組人類s 1 e 1 2 2 0 H抗體Η 鏈V領域d轉變部分的编碼DNA。使用pUC — RVe 一 s 1 e 1 2 2 0 H b做為模板。使用各為5 0 P m ο 1 e的突受導引物s 1 e 1 2 2 0 H m 2以及末端 引物B進行第一PC R反應的3 0次循環反應。所得 178bp的PCR生成物用1. 6%的低熔點瓊脂耱凝 膠精製，做為第二PCR反應的引物使用，使用該引物和 5 0 p m ο 1 e的末端引物A進行第二P C R反應，而得 439b p約DNA片段。經精製，用Bam HI和 H i nd BI消化後，次選殖在PUC 19載體中，經確認 核苷酸順序而得pUC — RV// — si el 220Hd。 逛之，為構築重組人類si e 1 220H抗髖Η鍵的 各轉變部分的表達載體，從pUC — RVn — s 1 e 本紙張尺度遑用+國國家«毕(CNS)T4規格(210 X 297公*> 81. 2. 20,000 -97 - Λ 6 Η 6 經濟部中央揼準局员工消#合作杜印9ί 五、發明说明（96) - …一 1220Hb, pUC-RVw-slel22 0 Hc, 以及PUC - RV» — s 1 el 220Hd切取得含有重 組人類s 1 el 2 2 OH抗醴Η鏈V領域的编碼DNA的 B a m Η I — H i n d I Η段，插入Η鐽表達載饅Η E F 一 12h_g7l 的Hi ndl - BamH Γ 部位，而分 別得到各表達載體R V « — s 1 e 1 2 2 0 H b , R V » 一 s 1 e 1 2 2 0 H c 以及 R V 〃一 s 1 e 1 2 2 0 H d 〇 分析 使用四種表建重組人類s 1 el220H抗體H鐽的 載體中之一種（R V * — s 1 e 1 2 2 0 H a，R V // — s 1 e - 1 2 20Hb, RVff-slel22CrHcS R V广-s 1 e 1 2 2 0 H d )以及重組人類1 2 _ 2 0 抗體L鍵的表達載體RV、-1220a,將C 0 S細胞 同時轉化感染，藉此評估重组人類s 1 e 1 2 2 0 H抗體 Η鐽V領域的四種轉變部分對於阻礙IL一6結合在IL -6R的能力，其结果示如圖21〜24。又上述结果乃 使用蛋白質A精製所生産抗體後所得者。 依照上述據本發明，嵌合L鐽或重组L鐽，嵌合Η鍵 或重组Η鏈的V領域，其中特別是RF中的一個或複數値 胺基酸以其他胺基酸取代，尚能維持結合在人類IL-6 R的能力。因此，本發明中包括有抵要能維持本來有的 性質，一値或複數値胺基酸為其他胺基酸取代的嵌合抗體 以及重组人類抗鼸，嵌合L鐽以及重組L鍵，嵌合Η鐽以 先 Μ m 背 而 之 注 意 事 項 # 填 % % i-i 絲 本紙Λ尺度遑用中國《家榫準(CNS> T4規格(210x297公 81. 2. 20,000 98 Λ 6 Π 6 五、發明説明（97) 及重组Η鍵，重組L鐽V領域，以及重组Η鍵V領域，還 有其编碼D Ν Α全部在内。 參者例 本發明中所使用原料融合瘤依照下述方法.製造之。 參考例1 融合瘤MT18的製造 * 為製造可生産對人類I L 一 6 R的單株抗醴用故合® ，依照下列方法製造在細胞表面表達人類I L 一 6 R的鼠 類T细胞做為免疫原。換言之，先將文獻（參考Y. Hir-a t a 等人，J · I m’muno 1 · 1 4 3 : 2 9 0 0 一 2 9 Ο 6 , 1 9 8 9年）所公開的寧髏pZipneo I L — 6 R依照一 般方法轉移感染鼠類T細胞CTLL一2 (ATCC T I B 2 14),所産生轉移物按一般方法使用G 4 1 8 篩選而得每一個細胞可以表達大約3 0 , 0 0 0値人類 I L 一 6R的细胞条。該細胞条稱為CTBC3。 經濟部屮央櫺準局es工消#合作社印Μ (請先閲讀背而之注意事項洱填寫γ .) 按常法在RPMI1640中培養CTBC3細胞， 然後用PBS缓衝液洗淨培養細胞四次，將IX 10 7個 細胞行腹腔内注射在C 5 7 B L/6鼠類中而進行免疫作 用。上述免疫作用毎週一次進行六週。 由經過免疫作用的鼠體取得脾臓細胞，依照常法使用 聚乙二醇將骨發瘤P3U1細胞融合，再按照下述方法篩 選融合細胞。將IL一6R陰性人類T細胞条 JURKAT (ATCC CRL 8163)藉質體 本紙ft尺度遑用中a Β家«毕(CNS)甲4規格(210X297公放) 81. 2. 20,000 經濟部中央樣準局貝工消费合作杜<f« A6 B6 五、發明説明（97) 及重組Η鏈，重組L鏈V領域，以及重組Η鍵V領域，還 有其编碼DNA全部在内。 參者例 本發明中所使用原料融合瘤依照下述方法製造之。 參考例1 融合瘤ΜΤ18的製造 為製造可生産抗人類IL一6R的單株抗體用融合瘤 ，依照下列方法製造在細胞表面表達人類一6R的鼠 類Τ細胞做為免疫原。換言之，先將文獻（參考Y. Hi r-ata 等人，J. Immunol. 14 3 : 2900 — 2906， 1 989年）所公開的質體pZipneo I L _ 6 R依照一 般方法轉移感染鼠類T細胞CTLL — 2 (ATCC TIB214),所産生轉移物按一般方法使用G418 篩選而得毎一個細胞可以表達大約30， 000値人類 I L — 6R的細胞条。該細胞条稱為CTBC3。 按常法在RPMI1640中培養CTBC3細胞， 然後用PBS缓衝液洗淨培養細胞四次，將1 X 1 07個 細胞行腹腔内注射在C 5 7 B L/6鼠類中而進行免疫作 用。上述免疫作用每週一次進行六週。 由經過免疫作用的鼠體取得脾臓細胞，依照常法使用 聚乙二醇將骨链瘤P3U1細胞融合，再按照下述方法筛 選融合細胞。將IL·一6R陰性人類T細胞糸 JURKAT (ATCC CRL 8163)藉質體 本纸張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4規格（210 X 297公楚）-100 一 81.9.25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂· 經濟部中央標準«霣工消费含作社印« A6 B6 五、發明説明（98) pZipneo I L — 6R同時轉移感染，然後篩選轉移細胞， 而得每細胞能表達大約100, 000個IL—6R的細 胞条。該細胞条被命名為NJBC8。 選殖能生産抗體的融合瘤細胞糸，並命名為MT18 。上述抗體乃能認知在NP-40内细胞溶解的NJBC 8,卻不能認知在NP—40内細胞溶解的JURKAT 者。融合瘤MT 1 8依據布達佩士特條約於1 990年7 月10日以微工研條寄記第2999號（FERM BP 一2999)登記並寄存在日本工業技術院微生物工業技 術研究所（簡稱FRI)。 參考例2 製造融合瘤PM1 為製造能生産抗人類IL一6R的單株抗體的融合瘤 ，依照下列方法萃取人類IL一6R做為抗原。將3X 10 3個人類骨發瘤細胞（IL 一 6 R生産細胞）溶解在 lmi的1%毛地黃皂苷，10mM三乙醇胺缓衝液（ PH7. 4), 0.15M氛化納，以及ImM RMS F (苯基甲磺醯氟；日本和光純藥公司製品）中。 另外，將參考例1所調製成融合瘤MT18所生産MT 18抗體，依照常法結合在用溴化氣活化的瓊脂糖4B ( Pharmacia製品）上。將前述細胞溶解物混合在該結合 有MT18的瓊脂糖4B,藉此得將前述可溶性IL一 6 R結合在瓊脂糖4 B上的MT 1 8抗體。將非特異性的 結合在瓊脂糖4 B上的物質洗淨去除，並以介MT 1 8抗 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公犛）-101 - 81.9.25,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. 訂. Λ 6 Η 6 _發观説明…(1娜— — 6R(SR 344)做為抗原鱧。 換言之，將含有自N —末端起第3 4 5傾密碼子為終 止密碼子所取代的IL一6R的编碼cDNA的質體 P E C E d h f r 3 4 4 ,,轉移感染 C Η 0 ( 5 E 2 7 )細胞，培養上述轉移感染細胞在無血淸培養基（SF-0培養基，日本三光純藥公司製品）中，所得上澄液藉 HF‘一 Labi.条（Tosoh)濃缩，：並以,.Bl..ue—· • .. .5 P W分離管和Phenyl - 5 P W分離管精製之。所精製 得可溶性I L 一 6 R在S D S - P A G E中顯示單一成分 〇 雌性 B A L B / c A η N C r j 鼠（日本 C R E A ) 體中，以一次抗饈重計10Wg /鼠和Freund氏的完全 佐助劑（..Bac t.o .Adjuvant Complete ·Η 3 7 R. a..,· Di. fco 公司製品）一起施予皮下注射，然後分別在最初注射二週 和三週後，再用Freund氏的不完全佐肋劑（Bacto Ad-juvant I.ncomplete:Freund，Bifuco 製品）+ —起將同量 的抗原體做第二次和第三次追加免疫處理進行皮下注射。 最终免疫作用（第四次注射）在第三次注射的一週後不用 佐肋劑注入尾靜脉内。由免疫作用處理的鼠體採取血清試 ，料，以稀釋缓衝液分段稀釋，然後依照文獻所記載方法（ · ... 參考 Goldsmith，Ρ·. K.，Analytical Biochemistry. X 1 7 > 5 3 — 6 0 , 1 9 8 1年）進行酶免疫測定。換 言之，使用SR344 (0. 1/ig/miM塗布的培養 板以1%BSA封阻，然後加入前述稀釋的試料。再將結 本紙張尺度逍用中國β家括毕(CHS) T 4規格(210 X297公；St) 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 % il 線 經濟部屮央榣準扃员工消你合作社印91 81. 2. 20,000 -102 Λ 6 |{ 6 五一、發一明説明（1〇方-- ................. ..................... ih 先 閲 ih 背 而 之 注 意 事 項 再 構 % 合在SR344的鼠類IgG使用山羊抗鼠類IgG/篇 性磷酸酶（A/P) (ZYMED)以及鹺性磷酸酶用基 質（Sigma— 1 〇 4 )加以分析之。確認血淸中的抗一 SR344抗體之增加後，從最終免疫作用起三日後，由 5隻BALB/C鼠取得脾臓細胞。按照25:1的比率 混合脾臟細胞和骨髄細胞条（P3U1) ,使用PEG .1 5 0 0融合，然後在2 0 0 0掴孔中以0.7〜1.1 X 1 Ο β細胞/孔的細胞濃度培養之。由孔中所得上橙液 ，就其结合S R 3 4 4的能力（稱為R 3 4 4識別分析的 第一次篩選）以及阻礙S R 3 4 4和I L 一 6 R之结合能 力（藉I L - 6 / s i L —6 R結合阻礙分析（R Β I A ))加以篩選之。由第一次篩選得2 4 0傾陽性孔（P〇-341^货6113),而從第二次篩選得36値陽性孔。 經濟部中央楳準局员工消费合作社印製 上述S R 3 4 4識別分析乃依照下述方法進行。用山 羊的抗鼠類Ig ('Cappel) (1 it g /mi?)·塗布的培 養板（Maxisorp, Nunc ),經1%BSA封阻，然後添 加1 0 ◦ /z 孔的融合瘤培養上澄液於其中，雄之.，在 室溫下培養一小時。洗淨培養板後，加入2 0 n g /m β 的S R 3 4 4於孔中，再於室溫下培養1小時。將來源於 上澄液的固定化抗體所捕捉的SR344量，經添加兔子 抗 SR344IgG (#2, ，山羊的抗 兔子IgG，鹼性磷酸酶（A/P) (l :3 0 00， Tago)以及基質（lmg/mi, Si gma - 1 0 4 ) ，並在波長405〜600nm下測定其吸光值而定董之 81. 2. 20,000 t紙Λ尺度边用中β β家«準(CNS) T4規格(210X297公就） -103 - Λ 6 Π 6
五、~_發明説明（L02J 先 間 背 而 之 注 意 事 項 # 填 % 前述酶免疫測定依照下述方法進行之。用Μ T 1 8抗 體塗布的培養板以1 〇 〇 n g /m又的S R 3 4 4 ( 1 0 0 w /孔）充谋後，在室溫下培餐一小時。洗淨培 餐板後，分別將5 0 w i? /孔的融合瘤培養上澄液以及 5 0 w 孔的生物素一 I L 一 6结合物（20.n g/· m文）同時加入孔中，並在室溫下培養一小時。添加鎗徽 抗生物素蛋白A / P ( 1 : 7 0 0 0 , PIERCE )以及相 對應的基質（S i gma — 1 〇 4 ),測定波長4 0 5〜 6 0 Onm的吸光值而定量结合在S R 344的生物素一 I L· _ 6的量。 最後重複二次極限稀釋法而純化陽性選殖条，而得三 個能阻礙S R 3 4 4和I L 一 6的結合的融合瘤選殖条， 則A U K 1 2 — 2 0，A U K 1 4 6 — 1 5 以及 A U K 6 4 — 7，以及不阻礙S R 3 4 4和I L 一 6的結合的融 合瘤選殖条A U K 1 8 1 - 6。 本發明在産業上之利用可行性分述如下： 經濟部屮央標準局κχ工消费合作社印製 本發明乃提供對人類I L — 6R的重組人類抗體，該 抗醱中人類抗龌V領域CDR為對人類IL一6R的鼠類 單株抗體的CD R所取代。該重組人類抗體的大部分來源 於人類抗體，同時其抗原性低，因此，本發明的重組人類 抗體對於人類的抗原性低，所以可期得發療上用途9 依照布達佩士特條約第13條第2項寄存微生物有開 參考資料如下： 81. 2. 20,000 本紙ΛΛ度遑用中 β家《早(CNS) f 4規格(210X29/公*) 104 k:0 娜 3 A6 B6 經濟部中央櫺準扃R工消费合作社*-« 五、發明説明（102) 〇 前述酶免疫測定依照下述方法進行之。用MT 1 8抗 體塗布的培養板以10〇118/1115的31^344( 1 00 wi/孔）充滿後，在室溫下培養一小時。洗淨培 養板後，分別將5 0 //5/孔的融合瘤培養上澄液以及 50wi? /孔的生物素一 IL 一 6結合物（20ng/ mi)同時加入孔中，並在室溫下培養一小時。添加鐽徽 抗生物素蛋白A/P (1 : 7000, PIERCE )以及相 對應的基質（Sigma- 104),測定波長405〜 6 0 0 nm的吸光值而定量結合在S R344的生物素一 I L 一 6的量。 最後重複二次極限稀釋法而純化陽性選殖条，而得三 個能阻礙SR344和IL—6的結合的融合瘤選殖条， 則AUK12-20,AUK146—15以及AUK 64-7,以及不阻礙SR344和IL-6的結合的融 合瘤選殖糸A U K 1 8 1 — 6。 本發明在産業上之利用可行性分述如下： 本發明乃提供抗人類IL—6R的重組人類抗醱，該 抗體中人類抗體V領域CDR為抗人類IL—6R的鼠類 單株抗體的CDR所取代。該重組人類抗體的大部分來源 於人類抗體，同時其抗原性低，因此，本發明的重組人類 抗體對於人類的抗原性低，所以可期得醫療上用途。 依照布逹佩士特條約第13條第2項寄存撤生物有開 參考資料如下： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，•裝. 訂· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）~ 105 ~ 81.9.25,000 Λ 6 Π6
五、發明説明（1〇今 〔順序目錄〕 順序號碼：1 順序長度：4 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直缠狀 順序種類：合成DNA 順序 ACTAGTCGAC ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG 先 閲 ih 背 而 之 注 意 事 項
順序號碼：2 順序長度：3 Θ 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成D N A 順序 ACTAGTCGAC ATGGAGWCAG ACACACTCCT GYTATGGGT 經濟部中央櫺準局κχ工消$：：合作杜印3i 順序號碼：3 順序長度：4 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 本紙張尺度遑用中《國家描毕(CMS) T 4規格(210X297公¢) 81. 2. 20,000 -106 - Λ 6 Β6 05553 五、發明説明α〇3 —— 一 C請先閲讀背而之注意事項再構κ-φ-ί) 順序種類：合成DNA 順序
ACTAGTCGAC ATGAGTGTGC TCACTCAGGT CCTGGSGTTG 順序號碼：4 順序長度：4 3 順序型：核酸 股數：單股 局部解部：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGAGGRCCC CTGCTCAGWT TYTTGGMWTC TTG 經濟部屮央橾準历貝工消费合作社印製 順序號碼：5 順序長度：4 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGGATTTWC AGGTGCAGAT TWTCAGCTTC 順序號碼：6 順序長度：3 7 本紙5艮尺度逍用中BB家榣毕(CNS)甲4規格(210x297公*) 81. 2 . 20,000 -107 - Λ 6 Η 6 ,* .. *- — ··—··— -- - --- .....— · - - — - - - - ......... _ . …五一»一發''明_说明辽敗 ih 先 KI 讀 背 1¾ 之 注 意 事 項 填 %
順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鋪狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGAGGTKCY YTGYTTSAGYT YCTGRGG ♦ - 順序號碼：7 順序長度：41 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖:直鍵狀
順序種類:合成DNA 順序
ACTAGTCGAC ATGGGCWTCA AGATGGAGTC ACAKWYYCWG G —s 順序號碼：8 順序長度：41 經濟部中央標準扃13:工消费合作社印32. / 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直銪狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGTGGGGAY CTKTTTYCMM TTTTCAATT G 81. 2. 20,000 本紙》尺度遑用中 Β家«毕(CNS) Τ4規格(210X297公*) 108 A 6 |{ 6 05bb： 五、發明説明CIO力 順序號碼：9 先 閲 背 而 之 注 意 事 項 填 % 順序長度：3 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀
順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGGTRTCCW CASCTCAGTT CCTTG 順序號碼：1 0 順序長度、3 7 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGTATATAT GTTTGTTGTC TATTTCT 經濟部屮央標準局貝工消费合作社印製 順序號碼：1 1 順序長度：3 8 順序型：核酸 股數：單股·
局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 81. 2. 20,000 尺度遑用中國《家«毕(CNS) f 4規格（210X297公；tt) -109 - Λ 6 Π6
-明説昕(i〇9-------------------------- 順序 ACTAGTCGAC ATGGAAGCCC CAGCTCAGCT TCTCTTCC
順序號碼：12 順序長度：2 7 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 GGATCCCGGG TGGATGGTGG GAAGATG 先 W 背 而 之 注 意 事 項 再 填 寫Li 經濟部中央標準局EX工消赀合作社印Μ
順序號碼：13 順序長度：3 7 順序型:核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序 ACTAGTCGAC ATGAAATGCA GCTGGGTCAT STTCTTC 順序號碼：1 4 順序長度：3 6 順序型：核酸 本紙»尺度遑用中β國家楳毕(CHS)甲4規格（210X29?公*) 81. 2. 20,000 -110 - Λ 6 Π 6
經濟部中央標準局貝工消费合作社印M
5L明说明 110穸 ^ — - — 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序 ACTAGTCGAC ATGGGATGGA GCTRTATCAT SYTCTT 順序號碼：15 順序長度：3 7 順序型：核酸 睽數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序 ACTAGTCGAC ATGAAGWTGT GGTTAAACTG GGTTTTT 順序號碼：16 順序長度：3 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類.：合成D N A 順序 ACTAGTCGAC ATGRACTTTG GGYTCAGCTT GRTTT 請 先 Ml 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 填 窍 本紙Λ尺度遑用中a B家«毕(CHS) T4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 111 - Λ 6 Η6 五、發明説明（up 順序號碼：17 ih 先 閲 ih 背 之 注 意 事 項 填 % 順序長度：4 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀
順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGGACTCCA GGCTCAATTT AGTTTTCCTT * 順序號碼：18 順序長度：3 7 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGGCTGTCY TRGSGCTRCT CTTCTGC 經濟部中央標準扃3工消费合作社印31
順序號碼：1 9 順序長度：3 6 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 81. 2. 20,000 本紙張Λ度边用中因《家«毕(CNS) Τ4規格(210X297公《：) -112 - Λ 6 Π6
五、—發明説明（11J 順序
ACTAGTCGAC ATGGRATGGA GCKGGRTCTT TMTCTT 顒序號碼：20 順序長度：3 3 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀
順序種類：合成D N A 顒序 ·
ACTAGTCGAC ATGAGAGTGC TGATTCTTTT GTG 經濟部+央楳準局员工消φί合作社印製 順序號碼：21 順序長度'40 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖••直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序
ACTAGTCGAC ATGGMTTGGG TGTGGAMCTT GCTATTCCTG 順序號碼：2 2 順序長度：3 7 順序型：核酸 本紙張尺度逍用中家《毕(CNS)甲4規格(210父297公龙) 81. 2. 20,000 A 6 Η 6 五X發明説明（112 — 股數：單股 局部解剖：直鋪狀 順序種類：合成DNA 順序
ACTAGTCGAC ATGGGCAGAC TTACATTCTC ATTCCTG 順序號碼：2 3 順序長度：2 8 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類·•合成D N A 順序
GGATCCCGGG CCAGTGGATA GACAGATG 經濟部中央櫺準局β工消费合作社印Μ 順序號碼：2 4 順序長度：3 9 3 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：c D N A 起源 生物名：鼠· 直接起源 81. 2. 20,000 本紙诋尺度遑用中B Η家«毕(CNS) T4規怙（210X297公¢) -114 Λ 6 Π 6 五、發明説明—（11Β — 選殖条：ρ12 — k2 特歡：1..60 sig peptide 6 1 . . 3 Θ 3 mat peptide 順序 請 先 IKJ 背 而 之 注 意 事 項 再 填 寫
經濟部十央榀準局貝工消费合作社印M 本蛛ft尺度边用中國《家«準(CNS) «Μ規格（210X297公*) 81. 2. 20,000 -115 - Λ 6 |{6 ATG GAG TCA GAC ACA Met Glu Ser Asp Thr -20 GGT TCC ACT GGT GAC Gly Ser Thr Gly Asp «.濟部中央橒準局貝工消#合作社印製 GTA TCT Val Ser GTC AGT Val Ser 30 GGA CAG Gly Gin 45 GGG GTC Gly Val CTC AAC Leu Asn CAG CAC Gin His GAA ATA Glu lie 110 CTG GGG CAG Leu Gly Gin 15 ACA TCT GGC Thr Ser Gly ACA CCC AAA Thr Pro Lys CCT GCC AGG Pro Ala Arg 65 ATC CAT CCT lie His Pro 80 AGT AGG GAG Ser Arg Glu 95 AAA Lys CTC CTG CTA Leu Leu' Leu -15 ATT GTG CTG lie Val Leu AGG GCC ACC Arg Ala Thr .20 TAT AGT TAT Tyr Ser Tyr 35 CTC CTC ATC Leu Leu fie 50 HC AGT GGC Phe Ser Gly GTG GAG^GAG Val Glu Glu AAT CCG TAC Asn Pro Tyr 100 TGG GTA Trp Val ACA CAG Thr Gin 5 ATC TCA lie Ser I ATG CAC Met His ‘ TAT CTT Tyr Leu AGT GGG Ser Gly 70 GAG GAT Glu Asp 85 ACG TTC Thr Phe CTG CTG Leu Leu -10 TCT CCT Ser Pro TGC AGG Cys Arg TGG TAC Trp Tyr 40 GCA TCC Ala Ser 55 TCT GGG Ser Gly CTC TGG Leu Trp GCT TCC Ala Ser 10 GCC AGC Ala Ser 25 CAA CAG Gin Gin AAC CTA Asn Leu ACA GAC Thr/ Asp GTT CCA Val Fro 5 TTA GGT Leu Gly AAA AGT Lys Ser AAA CCA Lys Pro 48 96 144 先 閲 ih 背 而 之 注 意 事 項 蜞 %Li GCT GCA ACC TAT Ala Ala Thr Tyr 90 GGA GGG GGG ACC Gly Gly Gly Thr 105 192 GAA TCT 240 Glu Ser 60 TTC ACC 288 Phe Thr 75 TAC TGT , 336 Tyr Cys AAG CTG Lys Leu 384 393 本紙張疋度遑用中家《準(CNS)甲4規格(210x29/公*) 81. 2. 20,000 116 Λ 6 It 6 五、發明説明（11$---------------------------------------------------------- 順序號碼：2 5 順序長度：‘ 4 0 5 順'序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：cDNA 起源 生物名：鼠 直接起源 選殖条：P12—h2_ 待徽：1 · . 5 7 sig peptide 5 8 . . 405 mat peptide 順序 先 Μ ih 背 而 之 注 意 事 項 存 % -*"^ί 經濟部中央標準局ΕΧ工消费合作社印製 本紙張尺度逡用中Β β家棋準(CNS)甲4規格(210X297公龙） S1. 2. 20,000 -117 - 經濟部屮央榣準局sc工消费合作社印3i 飞、發明説明---------------------------------- ATG GGA TGG AGC GGG ATC TTT CTC TTC CTT CTG TCA GGA ACT GCA GGT 48 Met Gly Trp Ser Gly He Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -15 -10 -5 GTC CAC TCT GAG ATC CAG CTG CAG CAG TCT GGA CCT GAG CTG ATG AAG 96 Val His Ser Glu lie Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys -1 5 10 CCT GGG GCT TCA GTG AAG ATA TCC TGC AAG GCT TCT GGT TAC TCA TTC 144 Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 15 20 25 ACT AGC TAT TAC ΑΤΛ CAC TGG GTG AAG CAG AGC CAT GGA AAG AGC CTT 192 Thr Ser Tyr Tyr lie His Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu / 30 35 40 45 GAG TGG ATT GGA TAT ATT GAT CCT TTC AAT GGT GGT ACT AGC TAC AAC 240 Glu Trp lie Gly Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 50 55 60 CAG AAA TTC AAG GGC AAG GCC ACA TTG ACT GTT GAC AAA TCT TCC AGC 288 Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 65 70 75 ACA GCC TAC ATG CAT CTC AGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCA GTC 336 Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 80 85 90 TAT TAC TGT GCA AGG GGG GGT AAC CGC TTT GCT TAC TGG GGC CAA GGG 384 ，Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Asn Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly 95 100 105 ACT CTG GTC ACT GTC TCT GCA 405 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 110 115 (請先閲讀背而之注意事項#填寫^ 裝- 奵. 線· 本紙ft尺度遑用中《 B家榣率(CNS>甲4規格（210X25)7公;《:) 81. 2. 20,000 -118 Λ 6 II 6 —説 <riii7---------- 順序號碼：2 6 順序長度：3 8 1 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：cDNA 起源 生物名：鼠 直接起源選殖条：pPM— k3 特歡：1 · . 6 0 sig peptide 6 1 . . 381 mat peptide 順序 請 先 閲 ift 背 而 之 注 意 事 項 再 填 % 經濟部中央標準局cx工消费合作社印51 本紙張尺度遑用中a B家標準(CNS) τ 4規格(210x297公;《：) 81. 2. 20,000 -119 - Λ 6 Π 6 五、發町飞11¾---—--—------------- ATG GTG TCC TCA GCT CAG TTC CTT GGT CTC CTG TTG CTC TGT TTT CAA 48
Met Val Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gin -20 -15 -10 -5 GGT ACC AGA TGT GAT ATC CAG ATG ACA CAG ACT ACA TCC TCC CTG TCT 96
Gly Thr Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser 1 5 10 -GCC TCT CTG GGfl GAC AGA GTC ACC ATC AGT TGC AGG GCA AGT CAG GAC 144
Ala Ser Leu Gly flsp Arg Val Thr lie. Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp 15 20 25 ATT AGC AGT TAT TTA AAC TGG TAT CAG CAG AAA CCA CAT GGA ACT ATT 192 lie Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr lie 30 35 40 AAA CTC CTG ATC TAC TAC ACA TCA AGA TTA/ CAC TCA GGA GTC CCA TCA 240
Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser 45 50 55 60 ； » AGG TTC AGT GGC/AGT GGG TCT GGA ACA GAT TAT TCT CTC ACC ATT AAC 288
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr flsp Tyr Ser Leu Thr lie Asn 65 70 75 AAC CTG GAG CftA GAA GAC ATT GCC ACT TAC TTT TGC CAA CAG GGT AAC 336 經濟部中央樣準屌貝工消费合作社印製
Asn Leu Glu Gin Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Asn 80 85 90 ACG CTT CCG TAC ACG TTC GGA GGG GGG ACC AAG CTG GAA ΑΤΑ AAT 381
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He Asn 95 100 105 81. 2. 20,000 (請先閲讀背而之注意事項再填寫4) 本紙》尺度边用中B B家«毕(CNS) Ή規格(210X297公;it) -120 - ^05553 Λ 6 ___ 五、發明説明(11$ ； 順序號碼：2 7 順序長度：411 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：c D N A 起源 生物名：鼠 直接起源 選殖条：P P Μ — h 1 特激：1 . · 5 4 sig peptide 5 5 . . 411 mat peptide 順序 經濟部中央橾準局β工消#合作社印製 本紙》又度边用中B國家楳毕(CNS)甲4規格(210x297公;it) 81. 2. 20,000 -121 - 經濟部+央楳準局β工消费合作社印9i ATG AGA GTG CTG ATT CTT TTG TGG CTG TTC ACA GCC TTT CCT GGT ATC 48 • / Met Arg Val Leu lie Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly lie -15 -10 -5 CTG TCT GAT GTG CAG CTT CAG GAG TCG GGA CCT GTC CTG GTG AAG CCT 96 Leu Ser Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly^Pro Val Leu Val Lys Pro -1 5 10 TCT CAG TCT CTG TCC CTC ACC TGC ACT GTC ACT GGC TAC TCA ATC ACC 144 Ser Gin Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser lie Thr 15 20 25 30 AGT GAT CAT GCC TGG AGC TGG ATC CGG CAG TTT CCA GGA AAC AAA CTG 192 Ser Asp His Ala Trp Ser Trp lie Arg Gin Phe Pro Gly Asn Lys Leu 35 40 45 t GAG TGG ATG GGC TAC ATA AGT TAC AGT GGT ATC ACT ACC TAC AAC CCA 240 Glu Trp Met Gly Tyr lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro 50 55 60 TCT CTC AAA AGT CGA ATC TCT ATC ACT CGA GAC ACA TCC AAG AAC CAG 288 Ser Leu Lys Ser Arg lie Ser lie Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin 65 70 75 TTC TTC CTA CAG TTG AAT TCT GTG ACT ACT GGG GAC ACG TCC ACA TAT 336 Phe Phe Leu Gin Leu Asn Ser Val Thr Thr Gly Asp Thr Ser Thr Tyr 80 85 90 TAC TGT GCA AGA TCC CTA GCT CGG ACT ACG GCT ATG GAC TAC TGG GGT 384 Tyr Cys Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 95 100 105 110 CAA GGA ACC TCA GTC ACC GTC TCC TCA 411 Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 本紙ΛΛ度遑用中國家《平(邙s) T4規格(210 X297公at) 81. 2. 20,000 (請先w1ft背而之注意事項#填寫Α) 装· -订· >線< -122 - Λ 6 It 6 i a： m turn 順序號碼：2 8 順序長度：3 9 3 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鐽狀
順序種類：cDNA 起源 生物名：鼠 直接起源 選殖条：P64—k4 特微：1. . . 60 sig peptide 6 1 . . 393 mat peptide 順序 (請先閲讀背而之注意事項#填寫+ V 經濟部中央樣準局员工消费合作社印製 本紙張尺度逍用中a國家楳準(〇路）〒4規格（210X297公;a：) 81. 2. 20,000 -123 - 055 Λ 6 H6 五、發明％W U22 ATG GAG TCA GAC ACA Met Glu Ser Asp Thr -20 GGT TCC ACA GGT GAC Gly Ser Thr Gly Asp 經濟部屮央櫺準局貝工消费合作社印製 GTG TCT Val Ser l GTT GAT Val Asp 30 GGA CAG Gly Gin 45 bGG.ATC Gly lie CTC ACC Leu Thr CAG CAA Gin Gin GAG CTG Glu Leu 110 CTA GGG CAG Leu Gly Gin 15 AGT TAT GGC Ser Tyr Gly CTC CTG Leu Leu -15 ATT GTG lie Val AGG GCC Arg Ala AAT AGT Asn Ser 35 CCA CCC ΑΑΛ CTC CTC Pro Pro Lys CCT GCC AGG Pro Ala Arg 65 ATT AAT CCT lie Asn Pro 80 AGT AAT GAG Ser Asn Glu 95 AAA Lys
Leu Leu 50 TTC AGT Phe Ser GTG GAG Val Glu GAT CCT Asp Pro CTA TGG Leu Trp TTG ATC Leu lie 5 ACC ATA Thr lie 20 TTT ATG Phe Met ATC TAT lie Tyr GGC AGT Gly Ser v GCT GAT Ala Asp 85 CCC ACG Pro Thr 100 GTG CTG Val Leu -10 CAA TCT Gin Ser TCC TGC Ser Cys CAC TGG His Trp CGT GCA Arg Ala 55 j GGG TCT Gly Ser 70 GAT GTT Asp Val TTC GGT Phe Gly CTG CTC Leu Leu CCA GCT Pro Ala AGA GCC Arg Ala 25 TAC CAG Tyr Gin 40 TCC AAC Ser Asn AGG ACA Arg Thr GCA ACC Ala Thr GCT GGG Ala Gly 105 TGG GTT CCA Trp Val Pro -5 TCT TTG GCT Ser Leu Ala 10 AGT GAA AGT Ser Glu Ser CAG AAA CCA Gin Lys Pro CTA GAA TCT Leu Glu Ser 60 GAC TTC ACC Asp Phe Thr 75 TAT TAC TGT Tyr Tyr Cys 90 ACC AAG CTG Thr Lys Leu 48 96 144 192 240 288 336 384 393 先 閲 ifi 背 之 注 意 事 項 存 構 % 装 燦 本《•張尺A遑用中B β家榣毕(CNS>T4規格(210X297公 81. 2. 20,000 -124 - Λ 6 Π 6 五、發明説明（123~--------- 順序號碼：2 9 順序長度：417 順序型：核豳 股數：雙股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：c D N A 起源 生物名：鼠 直接起源 選殖条：p64 — h2 待徽：1··· 5_7 .sig peptide 5 8 . . 417 mat peptide 順序 V 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印32. 本《•張尺度遑用中a B家«率(CNS)T4規格(210x29/公*) 81. 2. 20,000 -125 - ,0 挪 3__Λ|_ 五、發明说";·丨（12各 " ' ATG GGA TGG AGC GGG GTC TTT ATC TTC CTC CTG TCA GTA ACT GCA GGT 48
Met Gly Trp Ser Gly Val Phe lie Phe.Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly -15 -10 -5 GTC CAC TCC CAG GTT CAA TTG CAG CAG TCT GGA GCT GAG TTG ATG AAG 96
Val His Ser Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys -1 5 10 CCT GGG GCC TCA GTG AAG ATC TCC TGC AAG GCT ACT GGC TAC ACA TTC 144
Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 ACT AGT TAT TGG ATA GTG TGG ATA AAG CAG AGG CCT GGA CAT GGC CTT 192
Ser Ser Tyr Trp lie Val Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly His Gly Leu 30 35 40 45 GAG TGG ATT GGA GAG ATT ΤΤΛ CCT GGA ACC GGT AGT ACT AAC TAC AAT 240
Glu Trp lie Gly Glu lie Leu Pro Gly Thr Gly Ser Thr Asn Tyr Asn 50 55 60 GAG AAA TTC AAG GGC AAG GCC ACA TTC ACT GCA GAT ACA TCT TCC AAC 288
Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn 65 70 75 i ' ACA GCC TAC ATG CAA CTC AGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCC GTC 336
Thr Ala Tyr Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 80 85 90 TAT TAC TGT GCA AGT CTA GAC AGC TCG GGC TAC TAT GCT ATG GAC TAT 384
Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 95 100 105 TGG GGT CAA GGA ACC TCA GTC ACC GTC TCC TCA 417 、
Trp Gly Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 110 115 120 本紙張尺度遑用+ e家準(CHS) Ή規格(210x29/公：St) (請先Μ讀背而之注意事項Λ·構寫乂 裝< -<!· 練. 經濟部中央楳準局R工消费合作社印製 81. 2. 20,000 -126 - Λ 6 It 6 一五、發明説明C12j5 "" 順序號碼：3 Ο 順序長度：3 8 1 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：c D N A 起源 生物名：鼠 直接起源 選殖糸：P 1 4 6 — k 3 特徽：1 . . 6 0 s i g peptide 6 1 . . 381 mat peptide 順序 (請先閲讀背而之注意事項#堪寫^ - 综- 經濟部中央楛準扃A工消费合作社印製 本紙張尺度遑用中B H家楳毕(CNS) T4規格（210x297公;Jt) 81. 2. 20,000 -127 - ,055^ 五、發明liT明Ci2l Λ 6 |{6 經濟部中央榣準庙员工消#合作社印91 ATG GTG TCC ACA CCT CAG TTC CTT GGT CTC CTG TTG ATC TGT TTT CAA Met Val Ser Thr Pro Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu lie Cys Phe Gin -20 -15 -10. -5 GGT ACC AGA TGT GAT ATC CAG ATG ACA CAG ACT ACA TCC TCC CTG TCT Gly Thr Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser -1 5 10 GCC TCT CTG GGA GAC AGA GTC ACC ATC AGT TGC AGG GCA AGT CAG GAC Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp 15 20 25 ATT AGT AAT TAT TTA AAC TGG TAT CAA CAG AAA CCA GAT GGA ACT GTT I lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val 30 35 40 i ..· AAA CTC CTG ATC TAC TAT ACA TCA AGA TTA CAC TCA GGA GTC CCA TCA Lys Leu Leu Me Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser ;45 50 55 60 AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGA ACA GAT TAT TCT CTC ACC ATT AGC Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser 65 70 75 AAC CTG GAG CAA GAA GAT ATT GCC AGT TAC TTT TGC CAA CAG GGT TAT Asn Leu Glu Gin Glu Asp lie Ala Ser Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Tyr 80 85 90 ，ACG CCT CCG TGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAG TTG GAA ATC AAA Thr Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 95 100 105 48 96 144 192 240 288 336 381 (請先WJ-ift背而之注意事項存堪¾^ 裝- J7 , 線. 本紙张尺度遑用中S國家榣毕(CNS)肀4規格(210X297公;¢) 81. 2. 20,000 -128 - Λ 6 Η 6 五、發明现tt/i、 順序號碼：31 順序長度：4 0 2 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：cDNA 起源 生物名：鼠 直接起源 選殖条：P 1 4 6 — h 1 特徽：1 · . 5 1 . s i g pept i de 52..402 mat peptide 順序 (請先閲讀背而之注意事項再填窍Λ)
T 經濟部中央櫺準局貝工消#合作社印3i 本紙Jl尺度逍用中βΒ家榣準(CNS)T4規格(210父297公龙） 81. 2. 20,000 -129 - 五、發明説明（1¾ ATG GAG CTG GAT CTT TAT CTT ATT CTG TCA GTA ACT TCA GGT GTC TAC 48
I
Met Glu Leu Asp Leu Tyr Leu lie Leu Ser Val Thr Ser Gly Val Tyr '-15 -10 -5 、、 TCA-CAG GTT CAG CTC CAG CAG TCT GGG GCT GAG CTG GCA AGA CCT GGG 96
Ser Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly -1 5 10 15 GCT TCA GTG AAG TTG TCC TGC AAG GCT TCT GGC TAC ACC TTT ACT AAC 144
Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn 20 25 30 TAC TGG GTG CAG TGG GTA AAA CAG AGG CCT GGA CAG^GGT CTG GAA TGG 192
Tyr Trp Val Gin Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp 35 40 45 ATT GGG TCT ATT TAT CCT GGA GAT GGT GAT ACT AGG AAC ACT CAG AAG 240 lie Gly Ser lie Tyr Pro Gly Asp fily Asp Thr Arg Asn Thr Gin Lys 50 55 60 TTC AAG GGC AAG GCC ACA TTG ACT GCA GAT AAA TCC TCC ATC^CA GCC 288
Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser lie Thr Ala 65 70 75 TAC ATG CAA CTC ACC AGC TTG GCA TCT GAG GAC TCT GCG GTC TAT TAC 336
Tyr Met Gin Leu Thr Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr 80 85 90 95 TGT GCA AGA TCG ACT GGT AAC CAC TTT GAC TAC TGG GGC CAA GGC ACC 384
Cys Ala Arg Ser Thr Gly Asn His Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 ACT CTC ACA GTC TCC TCA 402 v
Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 本紙張尺Λ遑用中《家«率(CHS)T4規格(210x297公*) " 81· 2. 20,000 (請先W讀背而之注意事項再蜞窍< 裝< 訂- 線. 經濟部中央櫺準屈貝工消费合作社印製 -130 - Λ 6 116 CI2 萝 順序號碼：3 2 順序長度：3 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA .順序
ACAAAGCTTC CACCATGGAG TCAGACACAC TCCTG 順序號碼：3 3 順序長度：3 6 順序型：核酸 股數：單股 ^ 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
GGCTAAGCTT CCACCATGGG ATGGAGCGGG ATCTTT 經濟部中央楳準局只工消合作社印製
順序號碼：3 4 順序長度：3 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 81. 2. 20,000 本紙張尺度逍用中B Η家楳毕(CHS) T4規格(210X2974*) -131 - Λ 6 Η 6 經濟部屮央標準屈β工消费合作社印製 ~~五、發明货「叨~ ¢3(^ —~~~ 順序 CTTGGATCCA CTCACGTTTT ATTTCCAGCT TGGTC 順序號碼：3 5 順序長度：3 6 順序型：核酸 .股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成DNA 順序 GTTGGATCCA CTCACCTGCA GAGACAGTTA CCAGAG 順序號碼：3 6 順序長度：3 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直_狀 順序種類·•合成D N A 順序 CTTGGATCCA CTCACGATTT ATTTCCAGCT TGGTC 順序號碼：3 7 順序長度：3 5 順序型：核酸 (請先閲讀背而之注意事項再填窍4 裝· 訂· 線· 紙張尺度遑用中《 家猱华(CNS) T 4規格(210x297公*) 81. 2. 20,000 -132 - Λ 6 Η 6 055&3 —mrow飞3ΐτ ^----------------------------------- -— 股數：單股 局部解剖：直鍵狀
順序種類：合成D N A 順序
CTTGGATCCA CTCACGTTTT ATTTCCAGCT TGGTC .順序號碼：3 8 順序長度：3 6 順序型：核酸 股教:單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA、 煩序
ACAAAGCTTC CACCATGGTG TCCTCAGCTC AGTTCC 經濟部+央標準历貝工消费合作社印製 順序號碼：3 g 顒序長度：3 Θ 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 ·
TGTTAGATCT ACTCACCTGA GGAGACAGTG ACTGAGGTT 81. 2. 20,000 本紙張尺度遑用+ 觸家《準(CNS)T 4規格(210x297公 -133 - Λ 6 Π 6 經濟部中央橾準局KX工消费合作社印製
—直—、—發-吼説^明…奠.32)--------------------------------------------------------------- 順序號碼：4 0 順序長度：3 6 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序 GTCTAAGCTT CCACCATGAG AGTGCTGATT CTTTTG 順序號碼：41 順序長度：17 順序型：核酸 -·% 股數：單股’ 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 TACGCAAACC GCCTCTC 順序號碼：4 2 順序長度：1 8 順序型：核酸 股數：單股· 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA ih 先 «I ih 背 而 之 注 意 事 項 # 填 寫 ΜΑ»足度边用中寒《毕(CNS)T 4規格(210X297公《> 81. 2. 20,000 -134 - Λ 6 It 6 05553 — -* 二—._ * _ -冰 V·· — - — — — - - _ 五、發明説明|33) 順序
GAGTGCACCA TATGCGGT 順序號碼：4 3 順序長度：5 5 順序型：核酸 .股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
ACCGTGTCTG GCTACACCTT CACCAGCGAT CATGCCTGGA GCTGGGTGAG ACAGC 經濟部屮央榣準局貝工消费合作社印製 順序號碼：4 4 順序長度：6 3 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成DNA 順序
TGAGTGGATT GGATACATTA GTTATAGTGG AATCACAACC TATAATCCAT CTCTCAAATC CAG S1, 2. 20,000 本紙ft尺度逍用中8 B家«毕(CNS)T4規格(210X297公《:) -135 - Λ 6 It 6 c〇5b53 説听尤34) ----------------------------------------------------
順序號碼：4 5 順序長度：5 4 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA .順序 "
TATTATTGTG CAAGATCCCT AGCTCGGACT ACGGCTATGG ACTACTGGGG TCAA 順序號碼：4 6 順序長度·· 2 7 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成DNA 順序
GTGACAATGC TGAGAGACAC CAGCAAG
經濟部中央標準局sc工消费合作社印M 順序號碼：4 7 順序長度：2 4 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 本紙張尺度边用中a Η家榣毕(CNS) «Ρ4規格(210X297公:《:) 81. 2. 20,000 055^^ Λ 6 It 6 一1、1^贺昕135> :------------- -------------------- 順序種類：合成D β A 順序
GGTGTCCACT CCGATGTCCA ACTG 順序號碼：4 8 順序長度：2 7 .順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序
GGTCTTGAGT GGATGGGATA CATTAGT 經濟部中央標準局β工消费合作杜印製 順序號碼：4 9 順序長度：2 9 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成DNA 順序
GTGTCTGGCT ACTCAATTAC CAGCATCAT 順序號碼·· 5 0 順序長度：4 8 本紙》尺度边用中国家樣準(CHS)甲4規格(210 x 297公;it) 81. 2. 20,000 05^3 Λ 6 It 6 經濟部屮央標準而^工消费合作杜印製 项夏明 136Γ -------------------------------------------------------- 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 TGTAGAGCCA GCCAGGACAT CAGCAGTTAC CTGAACTGGT •ACCAGCAG 順序號碼：51 順序長度：4 2 順序型：核酸 股數：單股 ' 局郜解剖：直鐽狀 順序種類：合成D N A 順序 ATCTACTACA CCTCCAGACT GCACTCTGGT GTGCCAAGCA GA 順序號碼：5 2 順序長度：5 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 ih 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 構 寫 裝 訂 線 卜紙張尺度逡用中β B家«毕(CNS)甲4規格(210X2町公*) 81. 2. 20,000 -138 - A 6 Π6
|37) ACCTACTACT GCCAACAGGG TAACACGCTT CCATACACGT TCGGCCAAGG 經濟部屮央標準：iT貝工消#合作杜印製 順序號碼：5 3 順序畏度：2 7 順序型··核酸 .股數••單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 AGCGGTACCG ACTACACCTT CACCATC 順序號碼：5 4 順序長度：7 0 6 順序型：核酸 股數：雙股 · 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成 起源 生物名：鼠和人類 選殖糸：PUC—RVh—PMlf 特徽：對人類I L — 6R的重組人類化PM— 1抗體Η鏈 V領域f轉變部分以及其编碼基因 胺基酸 19— 1 : leader 卜紙張尺Λ遑用中《«家榣毕(CNS)TM規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 先 閲ίϋ 背 1¾ 之 注 意 事 項 填 % 裝 訂 線 -139 - .«# \ 丽+ ++ 丽·· ........— — ... . — *· 飞、—發明说明丨 胺基酸1 一 3 0 : F R 1 胺基酸 31_36:CDR1 胺基酸 37—50:FR2 胺基酸 51—66:CDR2 胺基酸 67—98:FR3 胺基酸 99—108:CDR3 胺基酸 109—119:FR4 核替酸 1 一 6:HindlII部位 核Μ酸 5 4 - 1 3 5 :雁入序列 核苷酸 258 — 348:插入序列/畸形接合 核苷酸 505—706:插入序列 核旮酸 7 0 1 — 7 0 6 : B a m Η I部位 順序 AAGCTTC ATG GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA GCT 49
Met Gly Tr.p Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala -15 -10 經濟部中央榣準局ISC工消赀合作社印製 ACA G GTAAGGGGCT CACAGTAGCA GGCTTGAGGT CTGGACATAT ATATGGGTGA 103 Thr -5 CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AG GT GTC CAC TCC CAG GTC CAA 155
Gly Val His Ser Gin Val Gin 81. 2. 20,000 本紙》疋度遑用中a B家«毕(CNS) T4規格(210x297公*) 一 140 - Λ 6 Η 6 五、發明说明ί39) CTG CAG GAG AGC GGT CCA GGT CTT GTG AGA CCT AGC CAG ACC CTG AGC 203
Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser 5 10 15 CTG ACC TGC ACC GTG TCT GGC TAC TCA ATT ACC AGC GAT CAT GCC TGG 251
Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp His Ala Trp 20 25 30 35 AGC TGG GTG AGA CAG CCA CCT GGA CGA GGT CTT GAG TGG ATT GGA TAC 299
Ser Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly Tyr 40 45 50 ATT' AGT TAT ACT GGA ATC ACA ACC TAT AAT CCA TCT CTC AAA TCC AGA 347 lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg 55 60 65 ：GTG ACA ATG CTG AGA GAC ACC AGC AAG AAC CAG TTC AGC CTG AGA CTC 395 !
Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu 70 75 80 AGC AGC GTG ACA GCC GCC GAC ACC GCG GTT TAT TAT TGT GCA AGA TCC 443
Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala flrg Ser 85 90 95 CTA GCT CGG ACT ACG GCT ATG GAC TAC TGG GGT CAA GGC AGC CTC GTC 491
Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val 經濟部中央標準局ΒΪ工消费合作社印製 100 105 110 115 ACA GTC TCC TCA G GTGAGTCCTT ACAACCTCTC TCTTCTATTC AGCTTAflATA 544 Thr Val Ser Ser GATTTTACTG CATTTGTTGG GGGGGAAATG TGTGTATCTG AATTTCAGGT CATGAAGGAC 604 TAGGGACACC TTGGGAGTCA GAArtGGGTCA TTGGGAGCCC GGGCTGATGC AGACAGACAT 664 CCTCAGCTCC CAGACTTCAT GGCCAGAGAT TTATAGGGAT CC 706 81. 2. 20,000 私紙张足度遑用中家«準(CHS>T4規格(210 x 297公 141 - Λ 6 Η 6 五、發明説明14〇) 順序號碼：5 5 順序長度：5 Ο β 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖'直鏈狀 順序種類：合成D N A :起源 ^ . : 生物名：鼠和人類 直接起源 選殖条：P U C — R V 1 — Ρ Μ 1 a 待徴：對人類I L 一 6 R的重組人類化P Μ — 1抗體的L 鏈V領域（a)轉變部分以及其編碼基因 ih 先 閱 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 % 裝 經濟部中央樣準局貝工消费合作社印製 胺基锻 1 9 一 1 • • 1 e a d e r 胺基酸 1 一 2 3 • F R 1 胺基酸 2 4 一 3 4 C DR 1 胺基酸 3 5 一 4 9 F R 2 胺基酸 5 0 一 5 6 C D R 2 胺基酸 5 7 一 8 8 F R 3 胺基酸 8 9 一 9 7 C D R 3 胺基酸 9 8 一 1 1 7 F R 4 核苷酸 1 一 6 _ Η * n d HI部位 核苷酸 5 4 一 1 3 5 • • 插入序列 核砮酸 2 6 8 一 3 7 6 :插入序列/畸形接合 核苷酸 4 6 9 一 5 0 6插入序列 線 81. 2. 20,000 本紙ΛΛ度逍和+ «顔家祺毕(CNS)T4規格(210x297公Λ) -142 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印31 Λ 6 1)6 五、發明説明Χ41) 核苷酸 501—506 :BamHI部位 順序 AAGCTTC ATG GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA GCT 49
Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala -15 -10 ACA G GTAAGGGGCT CACAGTAGCA GGCTTGAGGT CTGGACATAT ATATGGGTGA 103
Thr -5 CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AG GT GTC CAC TCC GAC ATC CAG 155
Gly Val His Ser Asp He Gin \ 1 ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC CTG AGC GCC AGC GTG GGT GAC AGA GTG 203
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 5 10 15 ACC ATC ACC TGT AGA GCC AGC CAG GAC ATC AGC AGT TAC CTG AAT TGG 251
Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr Leu Asn Trp 20 25 30 35 TAC CAG CAG AAG CCA GGT AAG GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC TAC ACC 299
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr 40 45 50 TCC AGA CTG CAC TCT GGf 'GTG CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC 347
Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 55 60 65 GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC 395
Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie 7〇 75 80 本紙張疋idt遑用+ a B家《準(CNS)T4規格(210X297公 81. 2/20,000 (請先w1ft背而之注意事項#填寫 t
T -143 - 五、發明説明Ϊ42) Λ 6 It 6 經濟部中央榣準局貝工消费合作社印製 GCT ACC TAC TAC TGC CAA CAG GGT AAC ACG CTT CCA TAC ACG TTC GGC 443 Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 85 90 95 CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA C GTGAGTAGAA TTTAAACTTT 488 Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 GCTTCCTCAG TTGGATCC 5〇g 順序號碼：5 6 順序長度：4 3 8 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 起源 生物名：鼠和人類 直接起源 « 選殖条：pUC-RVh — PMlf-4 特激：對人類IL-6R的重組人類化PM—1抗體的Η 鍵V領域f轉變部分以及其编碼基因而去除插入序 列者 胺基酸 19 一 l:leader 胺基酸 1 一 30:FR1 胺基酸 31—36:pDRl 胺基酸 37—50:FR2 先 m ih 背 而 之 注 意 事 項 寫 裝 訂 線 本紙張尺度逍用中Η Η家«準(CNS) T4規格(210x297公;it) 81. 2. 20,000 -144 - Λ 6 Π 6
經濟部中央榣準历貝工消#合作社印SI 五、發明说明I43) 胺基酸 51 — 66:CDR2 胺基酸6 7 — 9 8 : F R 3 胺基酸 9 9 一 1 0 8 7 C D R 3 胺基酸 1 0 9 — 1 1 9 : F R 4 核替酸 1 一 6: Hindlll部位 核替酸 43 2 —438:8&111111部位 順序 AAGCTTCCAC C ATG GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA 50 Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr 15 ~l〇 GCT ACA GGT GTC CAC TCC CAG GTC CAA CTG CAG GAG AGC GGT CCA GGT 98 <Ala Thr Gly Val His Ser Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly -5 1 5 10 CTT GTG AGA CCT AGC CAG ACC CTG AGC CTG ACC TGC ACC GTG TCT GGC 146 Leu Val ftrg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 15、 20 25 TAC TCA ATT ACC AGC GAT CAT GCC TGG AGC TGG GTT CGC CAG CCA CCT 194 Tyr Ser lie Thr Ser Asp His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gin Pro Pro ' 30 35 40 GGA CGA GGT CTT GAG TGG ATT GGA TAC ATT AGT TAT AGT GGA ATC ACA 242 Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly Tyr lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr 45 _ 50 55 - ACC TAT AAT CCA TCT CTC AAA TCC AGA GTG ACA ATG CTG AGA GAC ACC 290 Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr 60 65 70 AGC AAG AAC CAG TTC^AGC CTG AGA CTC AGC AGC GTG ACA GCC GCC GAC 338 Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp 75 80 85 90 本紙ΛΛ度逍用中《 B家樣準(CNS) T4規格(210 X 297公*) 81. 2. 20,000 -145 - Λ 6 It 6 05553 五、發明説明ί44) — ACC GCG GTT TAT TAT TGT GCA AGA TCC CTA GCT CGG ACT ACG GCT ATG 386 請 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 % 1Λ
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met 95 100 105 GAC TAC TGG GGT CAA GGC AGC CTC GTC ACA GTC TCC TCA G GTGAGTGGAT 436
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 110 . 115 CC 438 順序號碼：5 7 順序長度：4 Ο 2 順序型：核酸 股數:雙股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成DNA 起源 生物名：嵐和人類 直接起源 選殖糸：P U C — R V 1 - Ρ Μ 1 a 經濟部中央榇準局A工消费合作社印31 待擞••對人類I L - 6 R的重組人類化P Μ — 1抗體L缠 V領域a轉變部分以及其编碼基因，而去除插入序 列者。 胺基酸.19—1 ： leader 胺基酸 1二23:FR1 胺基酸 2 4 — 3 4 : C D R 1 胺基酸 35-49:FR2 81. 2. 20,000 本紙張尺度逍用中國Η家«毕(CHS)甲4規格（210x297公*) -146 - -05553 Λ β Η 6 五、發明説明ί45) 胺基酸 胺基酸 胺基酸 5 0-56 5 7-88 8 9-97 胺基酸 核苷酸 核苷酸 .順序
C D R 2 F R 3 C D R 3 98-107：FR4 l-6:Hind!lI 部位 397 — 402 · BamH 部位
Tk 先 閲 讀 背 而 注 意 事 項 堝 % 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印製 本紙Λ尺度逡用中困國家«準(CNS) f 4規格(210x297公*) 81. 2. 20,000 -147 - A. Λ 6 Η 6 經濟部屮央標準局员工消费合作社印製 五、發明説明灰#) AAGCTTCCAC C ATG GGfl TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA 50 Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr '15 -10 GCT ACA GGT GTC CAC TCC GAC ATC CAG ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC 98 Ala Thr Gly Val His Ser Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser -5 1 5 10 CTG AGC GCC AGC GTG GGT GAC AGrt GTG ACC ATC ACC TGT AGA GCC .AGC 146 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 15 20 25 •CAG GAC ATC AGC ACT TAC CTG AAT TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGA AAG 194 Gin Asp lie Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 30 35 40 GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC TAC ACC TCC AGA CTG CAC TCT GGT GTG 242 .Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val 45 50 55 CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC 290 ?τβ Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr 60 65 70 ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCT ACC TAC TAC TGC CAA CAG 338 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 75 80 85 90 GGT AAC ACG CTT CCA TAC ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC 386 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie 95 100 105 AAA C GTGAGTGGAT CC 4〇2 Lys (請先閲讀背而之注意事項#埸窝^.) t
T 本紙Λ凡度遍用中B B家《毕(CHS)甲4規格(210x297公*) 81. 2. 20,000 148 - Λ 6 Π 6 五、發明説明ί47) 順序號碼：5 8 先 閲 背 而 之 注 意 事 項 # 填 寫 順序長度：3 6 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀
順序種類：合成DNA .順序
TAAGGATCCA CTCACCTGAG GAGACTGTGA CGAGGC 順序號碼：5 9 順序長度：3 2 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
ATCAAGCTTC CACCATGGGA TGGAGGTGTA TC 經濟部屮央楳準局ΕΧ工消f合作社印3i 順序號碼：6 0 順序長度：3 0 順序型：核酸 股數：單股_
局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 81. 2. 20,000 ΜΛΛ度逍用中B國家榣毕(CNS)甲4規格（210x297公*) -149 - Λ 6 Η 6
五、發明説明ί48) 順序 AATGGATCCA CTCACGTTTG ATTTCCACCT 經濟部中央揺準局貝工消费合作社印製 順序號碼：6 1 順序長度：3 3 順序型：核酸 .股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 CATGCCTGGA GCTGGGTTCG CCAGCCACCT GGA 順序號碼：β 2 順序長度：3 3 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 TCCAGGTGGC TGGCGAACCC AGCTCCAGGC ATG 順序號碼：6 3 順序長度：3 0 順序型：核酸
Tk 先 Μ 背 1¾ 之 注 意 事 項 填 % >4 k紙張尺度遑用中.國國家榣毕(CNS) T4規格(210X297公龙） 81. 2. 20,000 -150 - 0½❽ Λ 6 Π6 五、發明説明ί49) 股數：單股 請 先 閲 背 而 之 注 意 事 項 # 蜞 寫 Li 局部解剖：直鍵狀
順序種類：合成DNA 順序
CAGCAGAAGC CAGGAAAGGC TCCAAAGCTG 順序號碼：6 4 順序長度：3 0 順序型：核酸 * 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成D N A 順序
CAGCTTTGGA GCCTTTCCTG GCTTCTGCTG 經濟部屮央標準局貝工消#合作杜印3i 順序號碼：6 5 順序長度：6 6 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序
ACCTGTAGAG CCAGCAAGAG TGTTAGTACA TCTGGCTATA GTTATATGCA CTGGTACCAG CAGAAG 81. 2. 20,000 本紙张尺度逍用中8 Η家楳毕(CNS) Ή規格（210x297公;it) -151 - Λ 6 It 6 c〇55^- 五、發明説明支50) 順序號碼：6 6
Tk 先 κι 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 寫 順序長度：1 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直缠狀
順序種類：合成DNA 順序
GCTGGCTCTA CAGGT 順序號碼：6 7 順序長度：4 8 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序
AAGCTGCTGA TCTACCTTCC ATCCACCCTG GAATCTGGTG TGCCAAGC 經濟部屮央樣準局貝工消费合作社印3i 順序號碼：6 8 順序長度：1 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 81. 2. 20,000 本紙Λ尺度逡用中a B家«毕（CNS) T4規格（210X297公:¢) 152 - 五、發明説明Ϊ51)
順序種類：合成DNA 請 先 閱 背 而 之 注 意 事 項 再 蜞 % 順序
GTAGATCAGC AGCTT 疇 順序號碼：6 9 順序長度：4 8 .順序型：核酸 股數··單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序
GCTACCTACT ACTGCCAGCAr CAGTAGGGAG ACCCCATACA CGTTCGGC 經濟部屮央橾準局Εζ工消$：：合作杜印製 順序號碼：7 0 順序長度：15 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 /順序種類：合成D N A 順序
CTGGCAGTAG GTAGC 81. 2. 20,000 本紙》又度遑用中B Η家榣毕<CNS) T4規格(210X297公*) -153 - Λ 6 \\ 6 05553 五、發明説明ί52) 順序號碼：71 順序長度：414 順序型、：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏡狀
順序種類：合成D N A .起源 生物名：鼠和人類 直接起源 選殖条：卩11(：一1^^1一122 0 & 特擞：對人類I L 一 6R的重組人類化AUK 1 2 — 2 0 抗體L鐽V領域#轉變部分以及其编碼基因，而去 除插入序列者。 胺基酸 19-1: leader 胺基酸 1—23:FR1 胺基酸 24—38:CDR1 胺基酸 39—53:FR2 胺基酸 54—60:CDR2 胺基酸 6 1 — 92:FR3 胺基酸 93-101 :CDR3 胺基酸 102 — 111:FR4 核苷酸 l-6:HindM部位 核苷酸 408 — 414:BamHI部位 順序 本紙張尺度逍用中明《家«华(CHS) TM規格(210x29·/公;«:) 先 閏 讀 背 1¾ 之 注 意 事 項 填 訂 線 經濟部屮央楳準扃员工消伢合作社印31 81. 2. 20,000 -154 - 經濟部中央榣準局C5工消#合作社印製 五、發明説明ί53) AAGCTTCCAC C ATG GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA 50 Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr -15 -10 GCT ACA GG.T GTC CAC TCC GAC ATC CAG ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC 98 Ala Thr Gly Val His Ser Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser -5 -1 1 · 5 10 CTG AGC GCC AGC GTG GGT GAC AGA GTG ACC ATC ACC TGT AGA GCC AGC 146 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 15 20 25 AAG AGT GTT ACT ACA TCT GGC TAT ACT TAT ATG CAC TGG TAC CAG CAG 194 Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin 30 35 40 AAG CCA GGA AAG GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC CTT GCA TCC AAC CTG 242 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Leu Ala Ser Asn Leu 45 50 55 GAA TCT GGT GTG CCA AGC AGA 1TC AGC GGT AGC GGT‘AGC GGT ACC GAC 290 Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 60 65 70 TTC ACC TTC ACC ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCT ACC TAC 338 Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr 75 80 85 90 1 TAC TGC CAG CAC AGT AGG GAG AAC CCA TAC ACG TTC GGC CAA GGG ACC 386 Tyr Cys Gin His Ser Arg Glu Asn Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr I 95 100 105 AAG GTG GAA ATC AAA CGTGAGTGGA TCC 414 Lys Val Glu lie Lys 110 先 閲 背 而 之 注 意 事 項 # 填1¾ 裝 訂 線 本紙»又度遑用中«家«毕(CNS) τ 4規格（210X2974*) 81. 2. 20,000 -155 - Λ 6 It 6 I -1 » *·^· k 五、發明説明I54) 順序號碼：7 2 順序長度·· 4 5 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直_狀 順序種類：合成D N A 順序
GGTTATTCAT TCACTAGTTA TTACATACAC TGGGTTAGAC AGGCC 順序號碼：7 3 順序長度：2 7 順序型：核酸 _ 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序
AGTGAATGAA TAACCGCTAG CTTTACA
順序號碼：7 4 順序長度：6 9 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 本紙張尺度边用中Η B家«準(CNS)T 4規格(210X297公款） 請 先 閲 背 1¾ 注 意 事 項 孙 填 寫 % 經濟部中央標準扃β工消费合作杜印51 81. 2. 20,000 -156 - Λ 6 Η 6 五、發明説明t55) 順序 5 先 «] 背 而 之 注 意· 事 項 # 填 %
GAGTGGGTGG GCTATATTGA TCCTTTCAAT GGTGGTACTA GCTATAATCA GAAGTTCAAG GGCAGGGTT .. · · 順序號碼：7 5 順序長度：15 .順序型：核酸 * » , . · ·- . 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類··合成D N A 順序
ATAGCCCACC CACTC 經濟部中央樣準局貝工消#合作社印製 .順序號碼：7 6 順序長度：3 6 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 順序
GGGGGTAACC GCTTTGCTTA CTGGGGACAG GGTACC 順序號碼：7 7 順序長度：3 6 81. 2. 20,000 本紙張反度边和十 Η家«準(CNS)甲4規格(210X25)7公釐） -157 - Λ 6 It 6
五、發明説明156) 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：Λ鍵狀 順序種類：合成DNA 順序 AGCAAAGCGG TTACCCCCTC TGGCGCAGTA GTAGAC 順序號碼：7 8 順序長度：3 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序 CAAGGTTACC ATGACCGTGG ACACCTCTAC 先 閲 背 而 之 注 意 事 項 再 填 寫 經濟部中央楛準局貝工消费合作社印製
順序號碼：7 9 順序長度：3 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成D N A 順序 CACGGTCATG GTAACCTTGC CCTTGAACTT 本紙ΪΙ疋度进用中國Η家榣半(CNS) T4規格(210x297公*) 81. 2. 20,000 158 ,05½¾ Λ 6 Η 6 五、發明説明ί57) 順序號碼：8 Ο ih 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 寫 順序長度：3 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀
順序種類：合成D N A 順序 GGGCTCGAAT GGATTGGCTA TATTGATCCT 順序號碼：81 順序長度：3 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成DNA 順序
AGGATCAATA TAGCCAATCC ATTCGAGCCC 經濟部屮央橾準局as工消費合作杜印製 順序號碼：8 2 順序長度：16 順序型：核酸 股數：單股·
局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成D N A 本紙ft尺度遑用中BIH家摆毕(CHS)T4規格(210父297公《) S1. 2. 20,000 Μ 五、發明説明158) 順序
GTAAAACGAG GCCAGT 順序號碼：8 3 順序長度：17 順序型：核酸 股數：箪股 局部解剖：直鐽狀. 順序種類：合成DNA 順序
AACAGCTATG ACCATGA 經濟部屮央橾準局貝工消费合作社印製 ih 先 閲 in 背 而 注 意 事 項 填 寫 Η 順序號碼.：8 4 順序長度：4 3 3 順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 起源 生物名：鼠和人類 直接起源 選殖条：pUC-RVh-1220b 特徽：對人類I L 一 6R的重組人類化AUK12 — 20 抗體Η鐽V領域b轉變部分以及其编碼基因，而去 S1. 2. 20,000 L紙張尺度遑用中Β明家《毕(CHS) Τ4規格(210X297公*> _ 160 _ Λ 6 It 6 五、發明説明Ϊ59) 除插入序列者。 胺基酸 1 9 — 1 • « 1 e a d e r 胺基酸 1 — 3 0 « • F R 1 胺基酸 3 1 一 3 5 * « C D R 1 胺基酸 3 6 — 4 9 F R 2 胺基酸 5 0 一 6 6 C D R 2 胺基酸 6 7 一 9 8 F R 3 胺基酸 9 9 一 1 0 5 • • C D R 3 胺基酸 1 0 6 一 1 1 6 ♦ 會 F R 4 核替酸 1 — 6 • Η • n d I 部位 核替酸 4 2 7 一 4 3 3 • B a m Η I部位 順序 (請先閲讀背而之注意事項再项寫i") 經濟部中央標準局A工消费合作杜印製 本紙張尺度逍用+ B B家«毕(CNS) Ή規格(210x297公*) S1. 2. 20,000 -161 - Λ 6 Η 6 C〇5i>t>3 五、發明説明160) AAGCTTGCCG CCACC ATG GAC TGG ACC TGG CGC GTG TTT TGC CTG CTC GCC 51
Tk 先 閲 ih 背 之 注 意 事 項 再 m %
Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala -15 -10 GTP GCT CCT GGG GCC CAC AGC CAG GTG CAA CTA GTG CAG TCC GGC GCC 99
Val Ala Pro Gly Ala His Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala -5 -1 1 5 GAA GTG AAG AAA CCC GGT GCT TCC GTG AAA GTC AGC TGT ΑΑΛ GCT AGC 147 *
Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 10 15 20 25 GGT TAT TCA TTC ACT AGT TAT TAC ATA CAC TGG GTT AGA CAG GCC CCA 195
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Tyr lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro 30 35 40 GGC CAA GGG CTC GAG TGG GTG GGC ΤΛΤ ATT GAT CCT TTC ΛΑΤ GGT GGT 243
Gly Gin Gly Leu Glu Trp Val Gly Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly 45 50 55 ! ACT AGC TAT AAT CAG AAG TTC AAG GGC AAG GTT ACC ATG ACC GTG GAU 291
Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Lys Val Thr Met Thr Val Asp 60 65 70 ACC TCT ACA AAC ACC GCC TAC ATG GAA CTG TCC AGC CTG CGC TCC GAG 339
Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 經濟部屮央標準局员工消费合作社印製 75 80 85 、 GAC ACT GCA GTC TAC TAC TGC GCC AGA GGG GGT AAC CGC TTT GCT TAC 387 t
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Asn Arg Phe Ala Tyr 90 95 100 105 433 81. 2. 20,000 TGG GGA CAG GGT ACC CTT GIC ACC GTC ACT TCA GGTGAGTGGA TCC Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 本紙張尺度遑用中Β 家«毕(CHS) 規格(210 X297公ft) -162 - 五、發明説明ί61) 順序號碼：8 5 順序長度：4 3 3 *
順序型：核酸 股數：雙股 局部解剖'直鏈狀 順序種類：合成D N A .起源 生物名：鼠和人類 直接起源 選殖条：pUC — RVh — 12 20d 特歡：對人類I L 一 6 R的重组人類化A U K 1 2 — 2 0 抗體Η鏈V領域j轉變部分以及其编碼基因，而去 除插入序列者。 (請先閲讀背而之注意事項再填寫"頁) 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 胺基酸 1 9 一 1 • • 1 e a d e r 胺基酸 1 — 3 0 • • F R 1 胺基酸 3 1 一 3 5 • • C D R 1 胺基酸 3 6 一 4 9 F R 2 胺基酸 5 0 — 6 6 C D R 2 胺基酸 6 7 — 9 8 F R 3 胺基酸 9 9 一 1 0 5 C D R 3 胺基酸 1 0 6 — 1 1 6 • F R 4 核苷酸 1 ·— 6 • Η • n d I 部位 核苷酸 4 2 7 一 4 3 3 • • B a m Η I部位 順序 S1. 2. 20,000 本紙張尺度遑用中B B家《毕(CNS) T4規格(210X297公*) -163 - £ 05553 Λ 6 Π 6 五、發明説明162) AAGCTTGCCG CCACC ATG GAC TGG ACC TGG CGC GTG TTT TGC CTG CTC GCC 51
Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala •15 -10 GTG GCT CCT GGG GCC CAC AGC CAG GTG CAA CTA GTG CAG TCC GGC GCC 99
Val Ala Pro Gly Ala His Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala -5 -115 GAA GTG AAG AAA CCC GGT GCT TCC GTG AAA GTC AGC TGT AAA GCT AGC 147
Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 10 15 20 25 GGT TAT TCA TTC ACT AGT TAT TAC ATA CAC TGG GTT AGA CAG GCC CCA 195
Gly Tyr.Ser Phe Thr Ser Tyr Tyr.Ile'His Trp Val Arg Gin. Ala Pro 30 35 40 GGC CAA GGG CTC GAA TGG ATT GGC TAT ATT GAT CCT TTC AAT· GGT GGT 243
Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly ' 45 50 55 ACT AGC TAT AAT CAG AAG TTC AAG GGC AAG GTT ACC ATG ACC GTG GAC 291
Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Lys Val Thr Met Thr Val Asp 60 . 65 70 ACC TCT ACA AAC ACC GCC TAC ATG GAA CTG TCC AGC CTG CGC TCC GAG 339
Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 75 80 85
I GAC ACT GCA GTC TAC TAC TGC GCC AGA GGG GGT AAC CGC TTT GCT TAC 387
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Asn Arg Phe Ala Tyr 90 95 100 105 TGG GGA CAG GGT ACC CTT GTC ACC GTC AGT TCA GGTGAGTGGA TCC 433
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 t紙ft尺度遑用中B Η家棋毕(CHS) T4規格(210X297公麓） ih 先 «I 讀 背 而 之 注 意 事 項 再 填 η % 經濟部中央標準局ex工消费合作社印姐 S1. 2. 20,000 164 Λ 6 IV6
五、發明说明_ 163) 順序號碼：8 6 順序長度：9 0 順序型••核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 顒序種類：合成D N A 順序 GATAAGCTTG CCGCCACCAT GGACTGGACC TGGAGGGTCT TCTTCTTGCT GGCTGTAGCT CCAGGTGCTC ACTCCCAGGT GCAGCTTGTG 先 閲 背 1¾ 之 注 意 事 項 # 寫 經濟部中央標準局貝工消f合作社印91
順序號碼：87 ' 順序長度：9 0 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序 CACTCCCAGG TGCAGCTTGT GCAGTCTGGA GCTGAGGTGA AGAAGCCTGG GGCCTCAGTG AAGGTTTCCT GCAAGGCTTC TGGATACTCA 順序號碼：8 8 順序長度：9 0 本紙張尺度遑用中曲《家《準(CNS) T 4規格(210x297公*) 81. 2. 20,000 -165 - A 6 Η 6 ,〇55δ3 五、發明説明ί64)
Tk 先 «) 背 1¾ 之 注 意 事 項 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成D N A . 順序
TGCAAGGCTT CTGGATACTC ATTCACTAGT TATTACATAC ACTGGGTGCG CCAGGCCCCC GGACAAAGGC TTGAGTGGAT .... t . · " ... . . .. . GGGATATATT · 順序號碼·· 8 9 順序長度：9〇 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏟狀
順序種類：合成D N A 順序 、
經濟部中央楳準局貝工消合作社印M
CTTGAGTGGA TGGGATATAT TGAGCCTTTC AATGGTGGTA CTAGCTATAA TCAGAAGTTC AAGGGCAGAG TCACCATTAC CGTAGACACA 順序號碼：9 0 順序長度：9 0 順序型：核酸 股數：單股 S1. 2. 20,000 k紙Λ尺度遑用中B B家《準(CHS) T4規格(2丨0乂297公龙） 166 ^05553 Λ 6 Π6
五、發明説明ί65) 局部解剖：直鏟狀 順序種類：合成DN A 順序 GTCACCATTA CCGTAGACAC ATCCGCGAGC ACAGCCTACA TGGAGCTGAG CAGCCTGAGA TCTGAAGACA CGGCTGTGTA TTACTGTGCG ..‘ ... 順序號碼：Θ1 順序長度：9 4 順序型·•核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序 ACGGCTGTGT ATTAGTGTGC GAGAGGGGGT AACCGCTTTG t CTTACTGGGG CCAGGGAACC CTGGTCACCG TCTCCTCAGG TGAGTGGATC CGAC 先 閲 讀 背 而 之 注 意 事 項 填 寫 經濟部中央櫺準局C3：工消#合作杜印31
暇序號碼：9 2 順序長度：15 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖< 直鍵狀 順序種類：合成DNA 本紙張尺度逍用中《«家《率(CNS>T4規格(210x297公 81. 2. 20,000 -167 - 0551 八6 Η 6 五、發明説明166) 順序
GATAAGCTTG CCGCC 順序號碼：9 3 順序長度：15 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成D N A 順序
GTCGGATCCA CTCAC 經濟部中央橾準局β工消费合作社印製 ih 先 間 讀 背 而 之 注 意 事 項 # m % 頁 順序號碼：9 4 順序長度：4 3 3 順序型：核酸 股數:雙股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA 起源 生物名：鼠和人類 直接起源 選殖条：PUC — RV»-s 1 el220Ha 特徽：對人類IL一6R的重組人類s1eAUK12— 2 0抗體Η鏈V領域a轉變部分以及其编碼基因。 本紙張尺度遑用中Β國家樣準(CNS) Τ 4規格(210X297公:tt) S1. 2. 20,000 Λ 6 Π 6 五、發明説明 167) 胺基酸 1 9 — 1 • • 1 e a d e r 胺基酸 1 — 3 0 • • F R 1 ih 胺基酸 3 1 一 3 5 C D R 1 先 閲 讀 胺基酸 3 6 一 4 9 F R 2 背 而 胺基酸 5 0 一 6 6 C D R 2 之 注 意 胺基酸 6 7 - 9 8 F R 3 事 項 补 .胺基酸 9 9 一 1 0 5 ♦ C D R 3 m 寫 胺基酸 1 0 9 一 1 1 6 • F R 4 ' 核苷酸 1 — 6 • • Η * 1 n d I 部位 核砮酸 4 2 7 一 4 3 3 • B a m Η I部位 順序 SI. 2. 20,000 本紙Λ尺度逍用中Β國家楳準(CNS) Τ4規格(210X297公龙） 經濟部屮央標準局只工消费合作社印製 -169 -
經濟部中央楳準局s：工消t合作社印製 五、發明説明168) AAGCTTGCCG CCACC ATG GAC TGG ACC Met Asp Trp Thr GTA GCT CCA GGT Val Ala Pro Gly -5 GAG GTG AAG AA6 Glu Val Lys Lys 10 GGA TAC TCA TTC Gly Tyr Ser Phe GGA CAA AGG CTT Gly Gin Arg Leu 45 ACT AGC TAT AAT Thr Ser Tyr Asn 60 ACA TCC GCG AGC Thr Ser Ala Ser 75 GAC ACG GCT GTG Asp Thr Ala Val 90 TGG GGC CAG GGA Trp Gly Gin Gly
TGG AGG GTC TTC TTC TTG CTG GCT Trp Arg Val Phe Phe Leu«Leu Ala 、 i -15 -10 GTG CAG CTT GTG CAG TCT GGA GCT 51 GCT CAC TCC CAG Ala His Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala 99 CCT GGG GCC TCA Pro Gly Ala Ser 15. ACT AGT TAT TAC Thr Ser Tyr Tyr 30 GAG TGG ATG. GGA Glu Trp Met Gly CAG AAG Gin Lys ACA GCC Thr Ala TAT TAC Tyr Tyr 95 ACC CTG Thr Leu 110 TTC AAG Phe Lys 65 TAC ATG Tyr Met 80 TGT GCG Cys Ala GTC ACC Val Thr GTG AAG GTT TCC TGC AAG GCT TCT Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 ATA CAC TGG GTG CGC CAG GCC CCC lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro 35 40 TAT ATT GAC CCT TTC AAT GGT GGT Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly 50 55 GGC AGA GTC ACC ATT ACC GTA GAC Gly Arg Val Thr lie Thr Val Asp 70 GAG CTG AGC AGT CTG AGA TCT GAA Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu 85 AGA GGG GGT AAC CGC TTT GCT TAC Arg Gly Gly Asn Arg Phe Ala Tyr 100 105 GTC TCC TCA GGTGAGTGGA TCC Val Ser Ser 115 - 147 195 243 291 339 387 433
Tk 先 Ml 1ft 背 而 之 注 意 事 項 # 堝 寫 、木 各紙張尺度遑用中a B家«毕(CNS) T4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 -170 -
rQ 05553 經濟部中央樣準局员工消费合作社印31
五、發明説明ί69) 順序號碼：9 5 順序長度：2 7 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鍵狀 順序種類：合成DNA 順序 AGGCTTGAGT GGATTGGATA TATTGAC 順序號碼：9 6 順序長度：2 7 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鐽狀 順序種類：合成DNA 順序 AAGTTCAAGG GCAAGGTCAC CATTACC 順序號碼：9 7 順序長度：3 0 順序型：核酸 股數：單股_ 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成DNA η 先κι 背 而 之 注 意 事 項 再 填 寫 '1- ^紙張尺度遑用中B 家«準(CNS)肀4規格(210X297公*) 81. 2. 20,000 -171 - -055li3 五、發明説明ί70) 順序 GGTGCTTCCG TGAAAGTCAG CTGTAAAGCT 順序號碼：9 8 順序長度：3 Ο 順序型：核酸 股數：單股 局部解剖：直鏈狀 順序種類：合成D N A 順序
AGCTTTACAG CTGACTTTCA CGGAAGCACC Λ 6 η 6 先 WJ ίή 背 而 之 注 意 事 項 再 填 % _^_I_ 經濟部屮央標準局貝工消费合作社印31 本紙張疋度遑用中ΒΒ家«準(CNS)T4規格(210X297公*) S1. 2. 20,000 -172 -

Claims (1)

  1. 六、申請專利範園 •第8 1 1 03237號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國81年12月修正 1.一種抗人類間白素一6受體之抗體的L鐽，其特 徵為由含有任一組下列所示胺基酸序列或其一部份所構成 之3値互補性決定領域（CDR).及架構領域（FR)之 L鐽V領域、及人類L鐽固定領域（C領域）所成者、 CDR1 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His CDR2 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser CDR3 Gin His Ser Arg Glu Asn Pro Tyr Thr ; CDR1 . Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr Leu Asn CDR2 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser CDR3 Gin Gin Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr j CDR1 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His CDR2 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser CDR3 Gin Gin Ser Asn Glu Asp Pro Pro Thr *, CDR1 Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn CDR2 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser CDR3 Gin Gin Gly Tyr Thr Pro Pro Trp Thr % 2 .如申請專利範圍第1項 之L鐽，其中，L鍵 V領域之F R乃源自鼠廣抗體者。 3.如申請專利範圍第1項之L鐽，其中，L鍵V領 域為下列所示胺基酸序列之任一者， 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意， 事 項 再 填 窝 裝 訂 經濟部t央標竿局S工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公兌） -1 - 81.9.10,000 05553 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 序列號碼2 4 : flet Glu Ser Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 Gly Ser Thr Gly Asp lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Gly 1 5 10 Val Ser Leu Gly Gin Arg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser 15 20 25 ,Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Net His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 30 35 40 Gly Gin Thr Pro Lys Leu Leu 11e Tyr Leu Ala Ser Asn Lsu Glu Ser 45 50 55 60 Gl^ Val Pro Ala Arg PI10 Ser Cly Ser Gly Sar Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 Leu rtsn [le His Pro Val Glu Clu CIu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys SO 85 30 Cln His Ser i\rg Clu Asn Pro Tyr Thr Ρπ·2 Cly Cly Cly Tiir Lys Leu 95 100 105 Clu lie l.ys 11G 、 81.9.10,000 (請先《讀背面之注意事項再填ί V頁) -丨装· 訂· 經 濟 部 中 夹 揉 竿 局 Ά 工 消 費 合 作 社 393 鳗濟部中喪標準局员工消费合作社印製 L05553 at B7 C7 _._D7_六、申請專利範困 序列號碼2 6 : ilet Val Ser Ser Ala Gin Phe Leu Giy Leu Leu Leu Leu Cys Pne Gin '20 -15 -10 -5 Gly Thr Arg Cys .Asp Ile GJn Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser 1 5 10 Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp 15 20 25 lie Ser Ser Tyr Leu Asn 丁rp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr ile 30 35 40 Lys Leu Leu ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly VaI Pro Ser 45 50 55 50 Arg ?he Ser Gly Ser Gly Scr Gly T’nr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Asn 55 70 75 Asn Lsu GIu Cln Ciu Asp [[5 .Aia Thr Tyr Phe Cys Gin CIn Gly Asa 80 85 90 Thr Leu Pro Tyr Tiir Phe Cly Cly Gly Thr Lys Leu Clu lie Asn 95 100 105 (請先w讀背面之注意事項再填h 頁). 裝. 訂. 本紙張夂度通用中國國家揉準（CMS)甲4规格（210 X 297公) 81.9.10,000 £05(353 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 序列號碼2 8 : 請 a 讀 背 之 注 意 事 項 再 I Met Glu Ser Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Lsu Trp Val Pro -2〇 -15 -10 -5 Gly Ser Thr Gly Asp lie Val Leu lie Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ala -1 5 10 Val Ser Leu Gly Gin Arg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser 15 20 25 Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 30 35 40 Gly Gin Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 45 50 55 60 Cly lie Pro Ala rtrg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr 65 70 75 «濟部中夹#竿扃W工消費合作社印製 Lsu Thr lie Asn Pro Val Clu (\\a Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 80 85 90 Gin Gin Ser Asn Clu Asp Pro Pro Thr Phe Cly flla Cly Thr Lys Leu 95 100 105 Glu Leu Lys 110 本紙張尺度適用中S S家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公蹵〉--___ 81.9.10,000 六、申請專利範面序列號碼έ 〇 : Α7 Β7 C7 D7 缓濟部中央#竿局Λ工消费合作社印製 Net Val Ser Thr Pro Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu lie Cys Pne Gin "20 -15 -10 -5 Gly Thr Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser -1 5 10 Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ils Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp 15 20 25 lie Ser Asn Tyr Leu rtsn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val _ 30 35 40 Lys Leu Leu Ils Tyr Tyr Thr Ser Arg Lsu His Ser Gly Val 卩ro Ser 45 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser 65 70 75 Asn Leu Clu Gin GIu Asp lie Ala Ser Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Tyr 80 85 90 Thr Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Clu lie Lys95 100 105 表纸張尺度適用中SS家標準（C^js)甲4规格（210 X 297公背）一（一 81.9·10,000 (請先《讀背面 之注意事項再場窝it 丨裝· 訂· A7 B7 C7 D7 經濟部中央«準局m工消費合作社印製 六、申請+利範团 4. 如申請專利範圍第1項之L鐽，其中，L鐽V領 域之F R為源自人類抗腥者。 5. 如申請專利範圍第1項之L鐽，其中，L鐽V領 域之FR傜源自RE I者。 6. 如申請專利範圔第1項之L鐽，其中，L鐽V領 域係包含如下所示之胺基酸或^ 一部份所成4値F R的任 一組： FRl Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys FR2 Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr FR3 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys FR4 Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys FRl Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys FR2 Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie FR3 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys FR4 Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys ； .或 FRl Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys FR2 Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr FR3 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys FR4 Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys (請先《讀背*之注 意事項再蜞h 寫本頁). .丨裝· 訂· 表紙張尺度適用中a·团家標準（CNS) y 4规格（210 X 297公；》) 81.9.10,000 Α7 ΒΤ C7 D7 六、申請專利範囲 7. 如申請專利範圍第1項之L鐽，其中，人類L鐽 C領域為>cC領域者。 8. —種抗人類間白素一6受體之抗體的Η鐽，其持 徴為含有任一组下列胺基酸序列或其一部份所構成3值C DR或FR之Η鐽V領域，及人類Η鍵C領域所構成者、 CDRl Ser Tyr Tyr lie His CDR2 Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly CDR3 Gly Gly Asn Arg Phe Ala Tyr ,* CDRl Ser Asp His Ala Trp Ser CDR2 Tyr lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser CDR3 S.er Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr ; CDRl Ser Tyr Trp 工le Val CDR2 Glu lie Leu Pro Gly Thr Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly CDR3 Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr l SX CDRl Asn Tyr Trp Val Gin CDR2 Ser lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Asn Thr Gin Lys Phe Lys Gly CDR3 Ser Thr Gly Asn His Phe Asp Tyr 請 先 « 讀-背 « 之, 注 意 事 項 再 % 本 頁 裝 訂 線 鳗濟部中喪標準局員工消費合作社印製 9.如申請專利範圍第8項之H鐽，其中H鍵V領域 之FR乃源自鼠類抗體者。 1 0.如申請專利範圍第8項之Η鐽，其中Η鐽V領 域為下列所示胺基酸序列之任一者。 tt 濟 部 央 櫺 準M, Ά 消 费 合 作 社 印 製 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範圍序列號碼2 5 : Met Gly Trp Ser Gly lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -15 -10 -5 Val His Ser Glu lie Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro GJu Leu Net Lys -1 5 l〇 Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys_ Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 15 20 25 Thr Ser Tyr Tyr lie His Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu 30 35 40 45 Glu Trp lie Gly Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 50 55 60 Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 65 70 75 Thr Ala Tyr het His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu .Asp Ser flla Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys Ala Ar〇 Hly Gly Asn Arc Phe Ala Tyr Trp Gly Cln Gly 95 100 105 Thr Leu Val Thr Val Ser-Ala lio 115 (請先閲讀背面之注意事項再填 本紙張尺度適用中回a家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公踅） 81-9-10,000 9 *濟部中*#準局Λ工消»合作社印製 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範囲 序列號碼2 7 : flet Arg Val Leu lie Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly lie -15 -10 -5 Leu Ser Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro 1 -1 5 10 Ser Gin Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser lie Thr. 15 20 25 30, Ser Asp His /Via Trp Ser Trp lie Arg Gin Phe Pro Gly Asn Lys Leu. 35 40 45 Glu Trp Het Gly Tyr I le Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro 50 55 SO Ser Leu Lys Ser rtrg lie Ser lie Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin 65 70 75 Phe Phe Leu Gin Leu rtsn Ser Val Thr Thr Gly Asp Thr Ser Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Ala Arg Ser Leu Λ1 a Arc Thr Thr ΛI a Met Asp Tyr Trp G l y 95 100 105 110 C1 n Ciy Thr Ser Val Tfir Val Scr Scr 115 夂紙張尺茂適用中SS家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公楚） 81.9.10,000 A7 B7 C7 D7 煖濟部+表揉苹扃Λ工消费合作社印製 六、申請專利範团序列號碼2 9 : Met Gly Trp Ser Gly Val Fhe He Phe leu Leu Ser Val Thr rtla Gly -15 -10 -5 Val His Ser Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys -1 5 10 ·· Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 Ser Ser Tyr Trp lie Val Trp lie Lys Gin Arg Pro Gly His Gly Leu 30 35 40 45 Glu Trp lie Gly Glu He Leu Pro Gly Thr Gly Ser Thr Asn Tyr Asn 50 55 60 Glu Lys Phe Lys Gly Lys /Ua Thr Phe Thr Ala Asp 丁hr Ser Ser Asn • 65 TO 75 Thr Ala Tyr Net Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu .Aso Ser rtla Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys Ala Ser l.eu Asp Scr Snr Cly Tyr Tyr ΛΙλ Met rtsp Tyr 95 100 105 Trp Cly Cln Gly Thr Ser V,i! Thr Val So r Ser 110 115 120 81.9.10.000 適 度 尺 張 纸 本 s, N (c 準 榇 公 97 2 - I- 鳗濟部-+央«準局貝工消費合作社印* 0 挪 3 Λ7 Β7 C7 __ D7 _ 六、申請專利範面 序列號碼3 1 : Met Glu Leu Asp Leu Tyr Leu lie Leu Ser Val Thr Ser Gly Val Tyr -15 -10 -5 Ser Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly -1 5 10 IS Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr-Asn 20 25 30 Tyr Trp Val Gin Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp , 35 40 45 He Gly Ser lie Tyr Pro Gly Asp Cly Asp Thr Arg Asn Thr Gin Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Sqr lie Thr Ala 65 70 75 Tyr Het Gin Leu Thr Ser Leu Ala Ser Clu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr 80 85 90 95 Cys Ala Arc Ser Thr Gly Asn His Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Dir 100 105 110 Tin· Leu Thr Val Ser Sc:r (請先閲讀背面之注意事項再iJ,本1). 丨裝· 訂· 115 Α7 Β7 C7 D7 六、申請專利範固 11. 如申諳專利範圍第8項之Η鍵，其中Η鏈V領 域之FR像源自人類抗饈者。 12. 如申諳專利範圍第8項之Η鐽，其中Η鐽V領 域之FR傜源自NEW, ΗΑΧ,或是HSGI者。 13. 如申諳專利範圍第8項之Η鐽，其中Η鐽V領 域之F R包含下列之任一组胺基酸序列或其一部份所構成 之4痼F R者。 (請先閲讀背面之注意事項再填wC¾ -丨裝· 訂- 鳗濟部t央橒竿工消费合作杜印*. 衣紙張尺度適用中SS家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） 17 81.9.10.000 A7 B7 熳濟部中央揉準局Λ工消費合作社印製 C7 D7 六、申請丰利範面 FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 9 FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 .Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 9 FR1 Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser J FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly 本頁) 裝· 竦. 太纸張尺斥谪用申固围家橒進（CNS) Ψ 4祁姝（？Ί0 X 297公弩） 81.9.10,000 經 濟 部 * 揉 準 Ά X 消 费 合 作 杜 印 製 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser \ FR1 Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser ; FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala' Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser j FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Val Gly FR3 Arg Val Thr Met Thr Leu ASp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys AXa Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser j • .·· ---- 〆 FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Val Gly 本纸張夂度適用中国H家橒準（CNS>甲4规格（210 X 297公；5? ) - 1.#-_ 81.9.!〇.〇〇〇 請 先 讀 背 面 注 意 事 項 再 填 · A7 B7 C7 D7 經 濟 部 中 去 竿M, 貝 工 消 费 合 作 社 印 製 FR3 FR4 FR1 FR2 FR3 FR4 FR1· FR2 FR3 FR4 FR1 FR2 FR3 FR4 FR1 FR2 、申請專利範团 Lys Val Thr Met Thr Val Asp Thr. Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala. Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ； Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Arg Val Thr Met Thr Leu Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser \ Gin Val Gin Ueu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys X^ys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Lys Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 'Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ,* Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Giy Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr AXa Val Tyr Tyr Cys Ala Ar^r Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ; Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp lie Gly (請先《讀背面之注《事項再填SL. -丨裝· 訂. 本紙張尺度通用中國S家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公) 81.9.10,000 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 FR3 Arg Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser i FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp Met Gly FR3 Lys Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ; 或 FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp lie Gly FR3 Lys Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg «濟部t*樣赛扃Λ工消费合作社印* FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 本紙Λ尺度適用令國國家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公穿） _ _ _81.9.10,000 05553 Α7 Β7 C7 D7 六、申請專利範囲 14. 如申請專利範圍第8項之Η鐽，其中，人類C 領域為7 C領域者。 15. —種抗人類間白素一6受屋之抗體，其持戡為 由如申請專利範圍第1項之L鍵及如申請專利範圍第8項 之Η鐽所成者。 ' 16. 如申請專利範圍第1 5_項之抗體，其中，V領 域之FR傜源自鼠類抗饅者。 17. 如申請專利範圍第15項之抗體，其中，V領 域之FR傜源自人類抗髏者。 18. —種编碼抗人類間白素一6受箧之抗體中L鐽 的DNA,其待徵為由如申請專利範圍第1項之含任一组 胺基酸序列或其一部份所成之3値C D R及F R的L鐽V 領域7以及人類L鐽C領域所组成。 19·如申請專利範圍第18項之DNA,其中L鍵 V領域為下列順序號碼55、 57或71所示之任一核苷 者 請 先 « 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 填 窝一 頁 裝 訂 熳 濟 部 中 » 準 Λ Ά 工 消 费 合 作 社 印 * 本纸張尺度適用中a因家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） SL 81-9.10.000, 5; A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 序列號碼5 5 AAGCTTC A丁G GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA GCT 49 ACA G GTAAGGGGCT CACAGTAGCA GGCTTGAGGT CTGGACATAT ATATGGGTGA 103 CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCflC AG GT GTC CAC TCC GAC ΛΤΟ CAG 1SS ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC CTG AGC GCC AGC CTG GGT GAC ftGA GTG '2θ3 ACC ATC ACC TGT rtCA GCC ACC CAC CAC ATC AGC ACT TAC CTG ΛΛΤ TGG 2-51 TAC CAG CAG AAG CCA GGT AAG GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC TAC ACC 299 TCC AGA CTG CAC TCT GGT GTG CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC 347 GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC 395 熳濟部中夫揉竿扃Λ工消费合作社印« GCT ACC TAC TAC TGC ΟΑΛ CAG GGT AAC ACG CTT CCA TAC ACG TTC GGC 443 CAA-GGG ACC AAG GTG Gflrt ΛΤΟ ΑΛΛ C GTGAGTAGAA TTTAArtCTTT 488 IGCTTCCTCAG TTGGATCC 506 -lg - 本纸張尺度速用中a國家標準（CMS)甲4規格（210 X 297公») 經濟部中夹捃竿局β工消费合作社印« A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 序列號碼5 7 rtAGCTTCCAC C ATG GGA TGC ACC TCT ATC ATC CTC TTC TTC GTA GCA ACrt 5〇 CCT ACfl CGT CTC CAC TCC CAC ATC CAC ΛΙΧ ACC CAG AGC CCA ACC ACC 98 I CTG AGC GCC AGC GTG GGT GAC AGA GTG ACC ATC ACC TGT flGA GCC AGC 146 CAG GAC ATC AGC AGT TAC CTG AAT TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGA AAG 194 GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC TAC ACC. TCC AGA CTG CAC TCT GGT GTG 242 ' . CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC 290 ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCT ACC TAC TAC TGC CArt CAG 338 GGT AAC ACG CTT CCA TAC ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG CTG GAA ATC 386 AAA C GTGAGTGGrtT CC 402 (請先Μ讀背面之注意事項再•填«-.;頁) •丨装 订· 农紙張尺茂適用令团a家櫺準（CNS>甲4规格（210 X 297公if ) j_9_ 81.9.10,000 鳗濟部t*#竿局we工消费合作社印製 A7 B7 ^ C7 ；______ D7 _六、申請專利範团序列號碼7 1 flACCTTCCAC C ATG GGA TGG AGC TCT ATC ftTC CTC TIC TTG GTA GCA ΛΟΛ 50 • GCT ACA GGT GTC CAC TCC GAC ATC CAG ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC 38 CTG AGC GCC AGC GTG GGT GrtC AGA GTG ACC ATC ACC TGT AGA GCC AGC 145 ! AAG ACT GTT AGT ACA TCT GGC TAT AGT TAT ATG CAC TGG TAC CAG CAG 194 30 35 40 AAG CCA GGA AAG GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC CTT GCA TCC AAC CTG 242 GAA TCT GGT GTG CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC GGT ACC GAC 290 TTC ACC TTC ACC ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCT ACC TAC 338 TAC TGC C.AG CAC ACT AGC CAG AAC CCA TAC ACG TTC GGC CAA GGG ACC 38S AAG CTC GAA ATC ΑΑή CGTCAGTGCA TGC 414 請 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 I. 本 頁 裝 訂 線 一一 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 20·—種编碼抗人類間白素一6受髏之抗體中H鐽 之DNA,其特徽為由如申請專利範圍第8項之含任一组 @基酸序列或其中一部份所構成之3個C D R及F R的 鐽V領域，以及人頚Η鐽C領域所组成。 21.如申請專利範圍第20項之DNA,其中Η鐽 V領域為下列順序號碼54、56.、84、85 或9 5所不之任一核奋。 請先《讀背®之注意事項*填 i装· 訂· *濟却中夬棣竿扃典工消费合作社印« 本紙張尺度適用中國因家標準（CNS)甲4规格（210 X 297么' 踅） -21 - 81.9.10.000 *濟部t*樣準扃Λ工消費合作杜印製 A7 B7 C7 D7 六、申請+利範面 序列號碼5 4 AAGCTTC ATG GG.A TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA GCT 49 ACA G GTAAGGGOCT CACAGTAGCA GGCTTGAGGT CTGGACATAT ATATGGGTGA 103 CAATGACftTC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AG GT GTC CAC TCC CAG GTC CAA 155 CTG CAG GAG AGC CGT CCA CGT CTT GTG AGA CCT AGC CAG ACC CTC AGC 203 • . - CTC ACC TCC ACC CTC TCT GGC TAC ΤΟΛ ATT ftCC AGC CAT CAT CCC TCC 251 AGC TGG GTC AGA CAG CCA CCT GGA CG.A GGT CTT GAG TGG ΛΤΤ CGA TrtC 299 ATT AGT TAT AGT GGA ATC ACA ACC T.AT Λ.ΑΤ CCA TCT CTC AAA TCC AGA 347 GTG ACA ATG CTG AGA GAC ACC AGC AAG AAC CAG TTC AGC CTG AGA CTC 395 AGC AGC GTG ACA GCC GCC GAC ACC GCG GTT ΤΛΤ TAT TCT GCA AGA TCC 443 CTA GCT CGG ACT ACG GCT ATG GAC TAC TGG GGT CrtA GGC AGC CTC GTC 491 ACA GTC TCC TCA G GTGAGTCCTT ACAACCTCTC TCTTCTATTC AGCTTAAATA 544 'GATTTTACTG CATTTGTTGG GGGGGAAATG TGTGTATCTG AATTTCAGCT CATGAAGGAC 604 TAGGGACACC TTGGGAGTCA GAAAGGGTCA TTGGGAGCCC GGGCTGATGC AGACAGACAT 664 CCTCflGCTCC CAGACTTCAT CGCCAGAGAT TTATAGGGAT CC 706. 纸張尺茂適用中國围家橒举（CMS)甲4规格(210X297公分） 81.9.10.000 I ----- I ^1 - - n n n n i i ·1 n n.— ' ·· i iiiif -丨装· 訂· j iD ΰ ο ία A7窗C7识 «濟部中央揉準局典工消f合作社印製 六、申請專利範囲 序列號碼5 6 AAGCTTCCnC C ATG GGrt TGC ACC TCT ATC ATC CTC TTC TTG GTA CCA ACA 5〇 CCT ACA CCT CTC CrtC TCC CAC CTC CAA CTC CAC CrtC rtCC GCT CCA CCT 98 CTT GTG AGA CCT AGC CAG flGC CTG flGC CTG ACC TGC ACC GTG TCT GGC 146 TAC TCA ATT ACC AGC GAT CAT GCC TGG AGC TGG GTT CGC CAG CCA CCT 194 GGA CGA GGT CTT GAG TGG ATT GGA TAC ATT AGT TAT ACT GGA ATC ACfl 242 ACC TAT AAT CCA TCT CTC AAA TCC AGA GTG ACA ATG CTG AGA GAC ACC 290 AGC AAG AAC CAG TTC AGC CTG AGA CTC AGC AGC GTG ACA GCC GCC GAC 338 ACC GCG GTT TAT TAT TGT GCA AGA TCC CTA GCT CGG ACT ACG GCT ATG 386. I GAC TAC TGG GCT CAA GGC rtGC CTC CTC ACA GTC TCC TCA G GTGAGTGGAT 436 一 CC_______ 438_ 本纸張尺度適用中囷國家橒準（CNS)甲4规格（210 X_ 297公踅)81.9.10,000 ---------*|------IJ------装-------ΤΓ (請先閲讀背面之注意事項再«頁) Α7 Β7 C7 D7 六、申請專利範面 序列號碼8 4 AACCTTCCCG CCACC ATG GAC TGG ACC TGG CCC GTG ITT TGC CTG CTC GCC 51 GTG GCT CCT GGG GCC CAC AGC CAG GTG CAA CT.4 GTG CAG TCC GGC GCC 99 GAA GTG AAG ΑΛΑ CCC GGT GCT TCC GTG AAA GTC AGC TGT AAA GCT AGC 147 GGT TAT ΤΟΛ TTC ACT AGT TAT TAC ATA CAC TGG GTT AGA CAG GCC CCA 195 GGC CAA GGG CTC GAG TGG GTG GGC TAT ATT GAT CCT TTC AAT GGT GGT 243 ACT AGC TAT ΑΛΤ CAG AAG TTC AAG GGC AAG GTT ACC ATG ACC GTC GflC 2S1 ACC TCT ACA AAC ACC GCC TAC ATG GArt CTG TCC AGC CTG CGC TCC G.AC· 339 «濟部中**準扃貝工消费合作杜印製 CAC rtCT CCA CTC TAC TAC TGC GCC rtGrt GGG GCT AAC CCC TTT GCT TAC 387 TGG GCA CAG GGT ACC CTT GTC ACC CTC rtCT TCA GCTC.ACTGGA .TCC 433 本紙張尺度適用中®囯家櫺準（CNS)甲4规格（210X2£»7公釐）-2if. - 81.9.10.000 熳濟部t *揉準扃貝工消'♦合作：in印《 咖沾3 B7 C7 __ D7 ___ 六、申請專利範团 序列號碼8 5 AAGCHGCCG CCACC ATG GAC IGG ACC TGG CGC GTG TTT TGC CIG CTC GCC 51 GTG GCT CCT GGG GCC CAC AGC CAG GTG CAA CTA GTG CAG TCC GGC GCC 99 GAA GTG AAG AAA CCC GGT GCT TCC G.TG ΆΑΛ OTC AGC TGT AAA GCT AGC 147 ·· . . . . GGT TAT TCA TTC ACT AGT TAT TAC ΑΤΛ CAC TGG GTT AGA CAG GCC CCA 195 GGC CAA GGG CTC GAA TGG ATT GGC TAT ATT GAT CCT TTC ΛΑΤ GGT GGT 243 ACT AGC TAT ΛΑΤ CAG AAG TTC AAG GGC AAG GTT ACC ATG ACC GTG GAC 291 ACC TCT ACft AAC ACC CCC TAC ATC GAA CTG TCC AGC CTG COC TCC GAG 339 GAC ACT CC.A CTC TAC TAC TCC GCC AGA GGC GGT ΛΛΟ CGC TTT GCT 1AC 387 TGG GGft CAG GCT ACC CTT CTC ACC CTC ΛϋΤ TCA GCTCrtCTGCA TCC 433 一 —_ <請先《讀背面之注*事項再^.ί本頁) i裝. 訂. '4-丨—': A7 B7 C7 D7 六、申請專利範a 序列號碼9 4 AAGCTTGCCG CCACC ATG GAC TGC ACC TGG AGG GTC TTC TTC TTG CTG GCT 51 GTA GCT CCA GGT GCT CAC TCC CAG GTC CAG CTT GTG CAG TCT GGA GCT 99 GAG GTG AAG AAG CCT GGG GCC TCA GTG AAG GTT TCC TGC AAG GCT TCT 147 GGA TAC TCA TTC ACT AGT TAT TAC ATA CAC TGG GTG CGC CAG GCC CCC 195 GGA CAA AGG CTT GAG 丁GG ATG GGA TAT ATT GAC CCT TTC AAT GGT GGT 243 ACT AGC ΤΛΤ AAT CAG AAG TTC AAG GGC AGA GTC ACC ATT ACC GTA GAC 291 «濟却中兴襟準為典工消费合作社印« ACA TCC GCG AGC ΛΟΛ CCC TAC ATC GAG CTG AGC AGT CTG AGA TCT GArt 339 GAC ACG CCT CTG TAT TAC TCT GCC flGA GGG GCT ΛΛΟ CGC TTT CCT TAC 387 TCC CGC CAC CCA ACC CTG GTC ACC CTC TCC TCA GCTCACTCGrt TCC 433 81.9.10,000 本纸張尺度適用中國固家橒準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐）一jit' Α7 Β7 C7 D7 六、申請專利範β 22.—種抗人類間白素一6受髏之抗體的製造方法 ，其持撳為培養藉由包含有如申請專利範圍第18項之 ♦ DNA或其一部份之重组載體以及如申請專利範圍第2 0 項之DNA或其一部份之重组載箧同時轉形之轉形箧，繼 而分離所産生之所欲抗鳢。 {#先W讀背由 之注意事項再填h 4頁> i装. 訂· «濟部t夹樣率局R工消费合作社印* 一 •k ht Λ ^ ι» ffl OB DO 言持灌,PMC、田 4 拍拉，οιλ v 〇<Τ7 綠、 六、申請專利範園
    口 -η~~η 1 4 第8 1 1 03237號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國83年 3月修正 經濟部中央搮準局S工消費合作社印製 1 · 一種抗人類間白素一 6受髏之抗髏的L鏈，其持 徵為由含有任一組下列所示胺基酸序列或其一部份所構成 之3痼互補性決定領域（c D R )及架構領域（F R )之 L鐽V領域、及人類L鐽固定領域（C領域）所成者、 CDR1 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His CDR2 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser CDR3 Gin His Ser Arg Glu Asn Pro Tyr Thr *, CDR1 Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr Leu Asn CDR2 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser CDR3 Gin Gin Gly Asn Thr Leu Pro iyr Thr r CDR1 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His CDR2 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser CDR3 Gin Gin Ser Asn Glu Asp Pro Pro Thr 或 CDRl Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn CDR2 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser CDR3 Gin Gin Gly Tyr Thr Pro Pro Trp Thr 2 ·如申請專利範圍第i項所載之l鏈，其中，l鐽 V領域之F R乃源自鼠類抗體者。 3.如申§青專利範圍第1項之l鍵，其中，匕鍵^^領 域為下列所示胺基酸序列之任一者， (請先閲讀背面之注意事^各見寫太 if •丨裝. 訂. 本纸張尺度通用中囡园家櫺準（CNS)甲4规格（210 X 297公；f ) 81.9.10.000 Α7 Β7 C7 D7 綬濟部中央櫺竿局R工消費合作杜-印« 六、申請專利範团序列號碼2 4 : Met Glu.Ser Asp Thr Leu Leu Leu Trp Va[ Leu Leu Lsu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 ·» * · Gly Ser Thr Gly Asp lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Gly 1 5 10 •一 . Val Ser Leu Gly Gin Arg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser 15 20 25 .Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Tro Tyr Gin Gin Lys Pro 30 35 40 Gly Gin Thr Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Lsu Glu Ser 45 50 55 60 Gly Val Pro Ala Arg Plie Ser Gly Ser Gly Ssr Gly Thr As? Phe Thr 65 70 75 Leu Asn lie His Pro Val Clu Glu CIu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 80 85 90 一· Cln His Ser Arg Clu Asn Pro Tyr. Thr Phe Cly Gly Cly Thr Lys Leu 95 100 105 393 no 一 2 — (請先Μ讀背面之达*事项再塡f頁) ·—裝· 訂· ..4. Clu lie l,yr.
    坦濟部中央«竿局Kf工消費合作社印製 • A7 B7 C7 __D7_ 六、申請專利範团 序列號碼2 6 : Het Val Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Pne Gin -20 -15 -10 -5 Gly Thr Arg Cys Asp lie GJn Mst Thr Gin Thr Tnr Ser Ser Leu Ser 1 5 10 Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp 15 20 25 lie Ser Ser Tyr Leu rtsn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly 丁hr Ile 30 35 40 Lys Leu Leu I[s Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser 45 50 55 50 Arg Phe Ser Gly Ser GI y Scr Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr I le Asn 65 70 75 Asn Leu GIu Gin GIu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Asn SO 85 . 90 Thr Leu 卩ro Ty「Tfir Plie Gly Gly Cly Thr Lys Leu GIu [le Asn 95 100 105 太紙張尺度通用中S S家棵準（CNS)甲4规格（210 X 297公公）一 3 _ 81,9.10,000 (請先W讀背面之注-*事項•再填_ 頁) i裝. 訂· 娩濟部中**竿工消费合作杜印製 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 序列號碼2 8 : Met Glu Ser Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 20 -15 -10 -5 * * . Gly Ser Thr Gly Asp He Val Leu lie Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ala -1 5 10 Val Ser Leu Gly Gin flrg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser 15 20 25 / Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gin .Gin Lys Pro 30 35 40 Gly Gin Pro Pro Lys Leu Leu He Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 45 50 55 60 Gly He Pro Ala rtrg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr 65 70 75 Leu Thr lie Asn Pro Val Glu rtla Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 80 85 90 Gin Gin Ser flsn Clu Asp Pro Pro Thr Phe Gly rtla Cly Trir (#ys (,eu 95 100 105 Glu Leu Lys . 110 本纸張尺茂通用中S园家橒準（CNS>甲4规格（210 X 297公分） 81.9.10,000 (請先閲讀背面之注-意事項·再填♦ 頁Y 丨裝. 訂· 經濟部中央揉年局W工消費合作社印¾ A7 B7 C7 D7 六、申請專利範因 序列號碼3 0 : Met Val Ser Thr Pro Gin Phe Leu Gly Uu Leu Leu ile Cys Phe Gin -20 -15 -l〇 -5 Gly Thr Arg Cys Asp lie Gin Het Thr Gin Thr Thr Ser Ssr Leu Ser . -l 5 l〇 Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg rtla Ser Gin /\sp 15 20 25 lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val 30 35 40 Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val 卩ro Ser 45 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser 65 70 75 Asn Leu Clu Gin GIu Asp lie Ala Ser Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Tyr 80 85 90 Thr Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gly"Gly Thr Lys Leu Clu lie Lys 95 100 105 表紙Λ尺度適用中S国家«準（CNS)甲4规格（210 X 297公译） r_ 81.9.10,000 (請先閲讀背面之注意事項·再填«·頁). -丨裝. 訂· 綬濟部t央»準局Λ工消費合作社印製 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 4. 如申請專利範圍第1項之L鐽，其中，L鐽V領 域之F R為源自人類抗髏者。 5. 如申請專利範圍第1項之L鐽，其中，L鐽V領 域之F R係源自R E I者。 6. 如申請專利範圍第1項之L鐽，其中.L鐽V領 域偽包含如下所示之胺基酸或€一部份所成4値F R的任 -组： FR1 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys FR2 Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr FR3 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys FR4 Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys ,* FR1 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys FR2 Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie FR3 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys FR4 Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys ; * 5X FR1 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys FR2 Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr FR3 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys FR4 Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 1 . 一 L·一 --------------Λ1-------裝------ΤΓ----(..; (請先Μ讀背面之注意事#再填Ψ-頁) qi 〇 in non A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 7. 如申諳專利範圍第1項之L鐽，其中，人類L鐽 C領域為kC領域者。 8. —i抗人頚間白素一6受體之抗體的Η鐽，其待 徴為含有任一组下列肢基酸序列或其一部份所構成3個C DR及；FR之Η鐽V領域.及人類Η鍵C領域所構成者、 CDR1 Ser Tyr Tyr lie His CDR2 Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly CDR3 Gly Gly Asn Arg Phe Ala Tyr J CDR1 Ser Asp His Ala Trp Ser GDR2 Tyr lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser CDR3 Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr ; CDR1 Ser Tyr Trp lie Val CDR2 Glu lie Leu Pro Gly Thr Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly CDR3 Leu Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr ,* 或 1 CDR1 Asn Tyr Trp Val Gin CDR2 Ser lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr: Arg Asn Thr Gin Lys Phe Lys Gly 經濟部中央»準房R工消费合作杜印製 (請先《讀背面之-注意事再ί Γ本頁) CDR3 Ser Thr Gly Asn His Phe Asp Tyr 9. 如申請專利範圍第8項之H鐽，其中H鐽V領域 之F R乃源自鼠類抗體者。- 10. 如申諳專利範圍第8項之Η鐽，其中Η鐽V領 域為下列所示胺基酸序列之任一者。 7 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範困 {請先W讀背面之注老事項再···頁Y 序列號碼2 5 : Met Gly Trp Ser Gly lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -15 -10 -5 Val His Ser GIu lie Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro GIu Leu Met Lys -1 5 10 Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe 15 20 25 Thr Ser Tyr Tyr lie His Trp Val Lys Cln Ser His Gly Lys Ser Leu 30 35 40 45 GIu Trp He Gly Tyr lie Asp Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn 50 55 60 Gin Lys Phe Lys Gly tys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 65 70 75 设 濟 部 中 * 標 準 S) Ά 工 消 费 合 作 杜 印 KL Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser CIu .Asp Ser flla Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys rtla rtre Cly Hly Asn Arc f'he flla Tyr Trp Gly Cin Gly 95 100 105 Thr Leu Val Thr Val Ser-rtla 夂紙張尺度通用中囯因家橒準（CNS‘）甲4规格（210 X 297公穿）_ 81.9.10.000 110 115 A7 B7 C7 _______D7 六、申請專利範囲 序列號碼2 7 : Met Arg Val Leu lie Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly lie -15 -10 -5 Leu Ser Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro -1 5 10 Ser Gin Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser lie Thr, 15 20 25 30, Ser Asp His Ala Trp Ser Trp lie Arg Gin Phe Pro Gly Asn Lys Leu. 35 40 45 Glu Trp ilet Gly Tyr lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro 50 55 50 Ser Leu Lys Ser Arg lie Ser lie Thr Arg rtsp Thr Ser Lys Asn Gin 65 70 75 Phe Phe Leu Gin Leu rtsn Ser Val Thr Thr Gly Asp Thr Ser Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Λ In Are Ser Leu Ala Arc Thr Thr A1 a Me l Asp Tyr Trp Gly 95 100 105 110 C1 n Cly Thr Ser Val Thr Val Scr Scr 115 (請先閲讀背面之注*事呔再蜞 4頁). 經濟部中*#平為炎工消費合作社印爱 Οι η 1 Λ ΛΛ/\ A7 B7 C7 D7 .«濟部中央揉準工消费合作社印製 六、申請專利範团序列號碼2 9 : Met Gly Trp Ser Gly Val Phe He Phe Leu Leu Ser Val Tfir rtla Gly -15 -l〇 -5 Val His Ser Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala GIu Leu Met Lys -1 5 10 ·· Pro-Gly Ala Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 • · Ser Ser Tyr Trp He Val Trp lie Lys Gin /Irg Pro Gly His Gly Leu 30 35 40 45 Glu Trp lie Gly GIu lie Leu Pro Gly Thr Gly Ser Thr Asn Tyr Asn 50 55 60 Glu Lys Phe Lys Gly Lys rtla Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ssr Ser Asn • . 65 TO 75 Thr Ala Tyr Het Gin Leu Scr Ser Leu Thr Ser GIu .Asp Ser Ala Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Asp Scr Sor Gly Tyr Tyr ΛΙλ Net rtsp Tyr 95 100 105 Trp Cly Cln Cly Tlir Ser Vn I Thr Va! Sor Ser 110 115 120 請 先 閲 讀 背 面 之 注 事 項 再- 填 頁 裝 订 匕紙張尺度通用中因Η家橒準（CNS) T4规格（210 X 297公？f ) 81.9.10.000 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 序列號碼3 1 : Met Glu Leu Asp Leu Tyr Leu lie Leu Ser Val Thr Scr Gly Val Tyr -15 -10 *5 Ser Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly -1 5 10 IS Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn 20 25 30 . · · Tyr Trp Val Gin Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp , 35 40 45 lie Gly Ser lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Asn Thr Gin Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser lie Thr Ala 65 70 75 Tyr Met Gin Leu Thr Ser Leu rtla Ser Glu flsp Ser Ala Val Tyr Tyr 80 85 90 95 Cys Ala rtrc Ser Thr Cly rtsn His Phe rtsp Tyr Trp Cly CIn Cly TTir 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Scr 115 木紙張尺度適用中國S家樣準（CMS)甲4规格（210 X 297公Jf) . , 81.9.10.000 (請先Μ讀背面之注惫事項再填--，頁一 丨裝· 訂. «濟部-t央«準局ΛΧ消费合作杜印« A7 B7 C7 ____： J_ 六、申請專利範团 1 1.如申請專利範圍第8項之H鏈，其中Η鐽v領 1或之FR傜源自人類抗體者。 1 2·如申請專利範圍第8項之Η缝，其中Η鍵V領 域之FR傜源自NEW, ΗΑΧ，或是HSG][者。 13.如申請專利範圍第8項之Η鐽，其中Η鐽V領 域之F R包含下列之任一组胺基酸序列或其一部份所構成 之4齒F R者。 (請先Μ讀背面之注意事項再填4 •頁 丨裝· 訂 «濟部中央樣竿局R工消費合作杜印製 衣紙張尺度適用令國3家樣準（CNS)甲4规格（210 X 297公背） 1〇 - 81.9.10,000 六、申請專利範团 A7 B7 C7 D7 垣濟部中央檁準局R工消費合作杜印« FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Tht Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 9 FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser J FR1 Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp He Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 1 FR1 Gin Val Gin Leu Gin.Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Ser Pro Gly Ser Tyr Gin Thr Thr Leu Phe Thr Ser Leu Thr Cys Thr Val FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly (請先W讀背面之注*事叽再城本頁). i裝· 訂· 線. A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser ； FR1 Asp Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser i FR1 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly .Tyr Ser lie Thr FR2 Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp lie Gly FR3 Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala. Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser ,* (請先w讀背面之注意事項再填A ，頁 i装· 訂· .綬 濟 郜 中 央 * 準M, 貝 工 消 费 合 作 杜 印 製 FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Pro Gly Ala Ser Val Lys Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Gly Arg Val Thr Met Ala Tyr Met Glu Ala Val Tyr Tyr Trp Gly Gin Gly • .··- Gin Val Gin Leu Pro Gly Ala Ser Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Gly « - 本紙張尺茂通用中固a家揉準（CNS)甲4规格（210 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly FR2 FR3 FR4 FR1 FR2 Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Val Thr Leu Leu Ser Cys Ala Thr Leu Val Gin Val Lys ASp Thr Ser Thr Asn Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Arg Val Thr Val Ser Ser ,* Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Val -1 /t- 81.9.10,000 六 A7 B7 C7 D7 «濟却中央榣竿扃R工消費合作杜印製 FR3 FR4 FR1 FR2 FR3 FR4 FR1 FR2 FR3 FR4 FR1 FR2 FR3 FR4 FR1 FR2 申請專利範面 Lys Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala. Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser i Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Arg Val Thr Met Thr Leu Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ί Gin Val Gin Eeu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly . Lys Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala "Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ϊ Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp lie Gly (請先Η讀背面之注意事項再填< '，頁 :紙張尺度通用中aa家揉準（CNS)甲4规格<210 X 297公jn 81.9.10,000 六，申請專利範团 A7 B7 C7 D7 «濟部中央»準扃霣X消费合作社印製 FR3 Arg Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser i FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp Met Gly FR3 Lys Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ； 或 FR1 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr FR2 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp lie Gly FR3 Lys Val Thr lie Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg FR4 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (請先Μ讀背面之注意事項扣填.t頁) i裝· 訂. 東纸張夂茂通用中S S京橒箪（CNS)甲4规《· x ?C)7 v iJM - 1 6 - 81.9.10.000 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 14. 如申請專利範圍第8項之Η鐽，其中，人類C 領域為7C領域者。 15. —種抗人類間白素一 6受體之抗體，·其持戡為 由如申諳專利範圍第1項之L鐽及如申請專利範圍第8項 之Η缝所成者。 ' 16. 如申諳專利範圍第15_項之抗體，其中，V領 域之FR傜源自鼠類抗體者。 17. 如申請專利範圍第15項之抗體，其中，V領 域之FR像源自人類抗體者。 18. —種编碼抗人類間白素一6受體之抗體中L鐽 的DNA,其待徵為由如申請專利範圍第1項之含任一组 胺基酸序列或其一部份所成之3値CDR及F R的L鐽V 領域7以及人類L鍵C領域所组成。 19. 如申請專利範圍第18項之DNA,其中L鐽 V領域為下列順序號碼55、 57或71所示之任一核苔 序列者 請 先 聞 讀 背 面 之 注 * 事 項 再· m 頁 装 訂 «濟部中喪樣準ΛΛ工消费合作社印製 通 尺 張 紙 準 S) 格 规 公 97 2 經濟部中央櫺準肩KC工消«合作社印製 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 序列號碼5 5 AAGCTTC ATG GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA GCT 49 ACA G GTAAGGGGCT CACAGTAGCA GGCTTGAGGT CTGGACATAT ATATGGGTGA 103 CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AG GT GTC CAC TCC G.AC ATC CAG 155 ATG ACC CAC ACC CCA rtGC AGC CTG AGC GCC AGC GTC GGT GAC ACA GTG '203 ACC ATC ACC TGT ACA GCC AGC CAC GAC ATC AGC ACT TACCTG ΛΛΤ TGG 251 TAC CAG CAG AAG CCA GGT AAG GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC TAC ACC 299 TCC AGA CTG CAC TCT GGT GTC CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC 347 GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC 395 • - · · · . * GCT ACC TAC TAC TGC CAA CAG GGT AAC ACG CTT CCA TAC ACG TTC GGC 443 CAAGGG ACC ΑΛ0 GTGGAA ATC ΑΛΛ C GTGAGTAGAfl ΤΤΤΑΑΛΟΤΤΤ 488 iGCTTCCTCAG TTGGrtTCC · 506 本纸張尺度適用中S S家橒準（CNS)甲4规格（210 X 297公兌）_ , ^ _ 81.9.10,000 ----------------^ ·,--;----裝------#------( (請先《讀背面之注意事項再填Λ頁· A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 序列號碼5 7 AAGCTTCCAC C ATG CGA TGC ACC TCT ATC ATC CTC TTC TTC GTA GCA ACrt 50 CCT ΛΟΛ GGT CTC CAC TCC CrtC ΛΤΟ CAC rtTC rtCC CAC AGC CCA ACC rtCC 98 CTG AGC GCC AGC CTG GGT GAC AGA GTG ACC ATC ACC TGT AGA GCC iGC 146 CAG GAC ATC AGC AGT TAC CTG AAT TGG TAC CflG CAG AAG CCA GGA AAG 194 GCT CCA AAG CTG CTG ATC TAC TAC ACC. TCC AGA CTG CAC TCT GOT GTG 242 C請.先《讀背面之注意事項*填· f頁) .装· 订. fe濟却中央標準局e:工消費合作杜印製 CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC 290 ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCT ACC TAC TAC TGC CArt CAG 338 GGT AAC ACG CTT CCA TAC ACG TTC CGC CAA GGG ACC AAG CTG CAA ATC 386 AAA C CTGAGTGGAT CC 402 太紙張尺茂逋用中S困家櫺箪（CNS>甲4 4P i毛iWO 乂如7 、 81.9.10.000 A7 B7 垤濟部中夬橒年局ec工消費合作社印製 C7 _______D7__ 六、申請專利範園 序列號碼7 1 AACCTTCCAC C ATG GCA TGG rtGC TCT ATC ΛΤΟ CTC TTC TTC CTA- GCA ACA 50 GCT ACA GGT GTC CAC TCC GAC ATC CAG ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC 98 CTG AGC GCC AGC GTG GGT GAC AGA GTG ACC ATC ACC TGT AGA GCC AGC 145 ! AAG ACT GTT AGT ACA TCT GGC TAT ACT TAT ATG CAC TGG TAC CAG CAG 194 30 35 40 AAG CCA GGA AAG GCT CCA AAG CTC CTG ATC TAC CTT GCA TCC AAC CTC 242 GAA TCT GGT GTG CCA AGC AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC GGT ACC GAC 2S0 TTC ACC TTC ACC ATC AGC AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCT ACC TAC 338 iO TAC TGC CAC CAC ACT AGG CAG AAC CCA TAC ACC TTC GGC CAA GGG ACC 38S AAG GTG GAA ATC AAA CGTGAGTGGA TGC 414 "·Ζο — (請先《讀背面之.注意事唷再ί 【本頁). · —裝. 訂. 線· A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 2 0. —種编碼抗人類間白素一 6受體之抗體中只鍵 之DNA,其待歡為由如申請專利範圍第8項之含任一组 胺基酸序列或其中一部份所構成之3個CDR及FR的Η 鐽V領域，以及人類Η鐽C領域所组成。 2 1.如申請專利範圍第20項之DNA，其中Η鍵 V領域為下列順序號碼54、56.、84、85 或？ 4所示之任一核苔序列者 Μ 濟 部 t 央 標 準 Ά X 消 費 合 作 杜 印 81.9-10,000 (請先Μ讀背面之注*事項-fr-填* KW. 製 本紙張尺度適用t a a家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公;¢) ·«濟部中*揉準扃员工消费合作杜印¾ A7 B7 C7 D7 六、申請專利範团 序列號碼5 4 AAGCTTC ATG GG.A TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA GCT 49 ACA G GTAAGGGGCT CACAGTAGCA GGCTTGAGGT CTGGACATAT ATATGGGTGA 103 CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AG GT GTC CAC TCC CAG GTC CAA 155 CTC CAG GflG AGC GGT CCA GCT CTT GTG AGA CCT AGC CAG ACC CTC AGC 203 CTC ACC TCC ACC CTC TCT GCC ΤΛ0 TCrt ATT ACC rtCC GAT CAT CCC TGG 251 AGC TGG GTG AGA CAG CCrt CCT GCA CCA GGT CTT GAG TGC ATT GGA TrtC 299 ATT AGT TAT AGT GGA ATC ACA ACC TAT ΛΑΤ CCA TCT CTC AAA TCC AGA 347 GTG ACA ATG CTG AGA GAC ACC ACC AAG AAC CAG TTC AGC CTG AGA CTC 395 AGC AGC GTG ACA GCC GCC GAC ACC GCG GTT TAT TAT TGT GCA AGA TCC 443 ♦ CTA GCT CGG ACT ACC GCT ATG GAC TAC TGG GGT CAA GGC AGC CTC GTC 491 ACA GTC TCC TCA G GTGAGTCCTT rtCAACCTCTC TCTTCTATTC AGCTTAAATA 544 I ! GATTTTACTG CATTTGTTGG GGGGGAAATG TGTGTATCTG AATTTCAGGT CATC.AAGGAC 604 TAGGGACACC TTGGGAGTCA GAAAGGGTCA TTGGGAGCCC GGGCTGATGC AGACAGACAT 664 CCTCACCTCC CAGACTTCAT GGCCAGAGAT TTflTAGGGrtT CC 706 81.9.10.000 (請先ΗΪ»背面之注意事項•再塡令頁) 裝· A7 & a D7 六、申請專利範团 序列號碼5 6 rtAGCTTCCAC C ATG GGA TGC ACC TGT rtTC ATC CTC TTC TIG CTA GCA .ACrt 50 GCT ΛΟΛ CCT CTC CAC ICC CAC CTC ΟΛΛ CTC Cl\C CflC ACC CCT CCA CCT 98 CTT GTG AGA CCT AGC CAG ACC CTG AGC CTG ACC TGC ACC GTG TCT GGC 146 • TAC TCA ATT ACC AGC GAT CAT GCC TGG AGC TGG GTT CGC CAG CCA CCT 194 (請先Μ讀背®之注-意事項•再填 令萸). -丨装· GGA CGA GCT CTT GAG TGG ATT GGA TAC ATT AGT TAT AGT GGA ATC ACA 242 ACC TAT AAT CCA TCT CTC ΑΑΛ TCC ACfl CTG ACA ATG CTG AGA GAC ACC 290 AGC AAC AAC CAG TTC AGC CTG AGA CTC AGC AGC GTG ACA GCC GCC GAC 338 訂· ·*濟部中央#準扃R工消费合作社印« ACC CCG GTT ΤΛΤ ΤΛΤ TGT GCA /\GA TCC CTA GCT CGG ACT ACG GCT ATG 386. GAC TAC TGG GCT CAA GCC ACC CTC GTC ACA GTC TCC TCA G CTGAGTGGAT 436 CC 438 lAit 尺茂適用中 sa 京樘車 iCNS) 4 » «· Y i>〇7 81.9.10 nno A7 B7 C7 _D7 _ 六、中請專利範困序列號碼8 4 AAGCTTGCCG CCrtCC ΛΤΟ CrtC TGC rtCC TCC CGC GTG TTT TCC CTG CTC GCC 51 GTG GCT CCT GGC GCC CAC AGC CAG GTG CAA CTA GTG CflG TCC GGC GCC 99 GAA GTG AAG ΛΛΑ CCC GGT GCT TCC GTG AAA GTC AGC TGT AAA GCT AGC 147 GGT TAT TCA TTC ACT AGT TAT TAC ATA CAC TGG GTT AGA CAG GCC CCA 195 GGC CAA GGG CTC GAG TGG GTG GGC TAT ATT GAT CCT TTC AAT GGT GGT 243 ACT AGC TAT ΑΛΤ CAG AAG TTC AAG GGC ΑΛϋ GTT ACC ATG ACC GTG GAC 2S1 'ACC TCT flCA AAC ACC GCC TAC ATG GAA CTG TCC AGC CTG CGC TCC G.AG 339 煖 濟 部 中 * m 苹 JS, Ά 工 消 费 合 作 杜 印 製 GAC ACT GCA CTC TAC TAC TGC GCC AGA GGG GCT AAC CGC TTT GCT TAC TGG GG.A CAC GGT ACC CTT CTC ACC CTC rtCT TCA GGTGACTGGA TCC 本紙張尺度適用中as家橒準（CNS>肀4规格（210父297公兑）_ - 387 433 81.9.10.000 . «濟部中夬標竿居Λ工消'«-合作社印tt A7 B7 C7 _D7_ 六，申請專利範困 · 序列號碼8 5 AAGCTTGCCG CCACC ATG GAC TGG ACC TGG CGC GTG TTT TGC CTG CTC GCC 51 GTG GCT CCT GGG GCC CAC AGC CAG GTG CAA CTA GTG CAG TCC GGC GCC 99 GAA GTG AflG ΑΛΛ CCC GGT GCT TCC aTG ΆΑΛ GTC AGC TGT AAA GCT AGC 147 " --. ..... - ... . GGT TAT TCA TTC ACT ACT ΤΛΤ ΤΛΟ ΑΤΛ CAC TGC GTT AGA CAG CCC CCA 195 .GGC CAA GGG CTC GAA TGG ATT GGC TAT ATT GAT CCT TTC ΛΑΤ GGT GGT 243 ACT AGC ΤΛΤ AAT CAG AAG TTC AAG GGC AAG GTT ACC ATG ACC GTC GAC 291 ACC TCT ACA AAC ACC CCC TAC ATC GAA CTG TCC AGC CTG CGC TCC GAG 339 GAC ACT GCA GTC TAC TAC TCC GCC AGA GGC GCT AAC CGC TTT CCT TAC 387 TCG GCA CAC GGT ACC CTT CTC ACC CTC ACT ΤΟΛ CCTC/\CTGC/i TCC 433 _ 一 $—_ (請先閲讀背*之注*事货再ί ΐ本頁). -丨裝_ 訂· .4.. A7 B7 a ___D7____ 六、申請專利範面 序列號碼9 4 AAGCTTCCCG .CCACC ATG GAC TGG ACC TGG AGG GTC TTC TTC TTG CTG GCT 51 GTA GCT CCA GGT GCT CAC TCC CAG GTG CAG CTT GTG C,4G TCT GGA GCT 99 GAG GTG AAG AAG CCT GGG GCC TCA GTG AAG GTT TCC TGC AAG GCT TCT 147 GGA TAC TCA TTC ACT AGT TAT TAC ΑΤΛ CrtC TGG GTG CGC CAG GCC CCC 195 GGA CAA AGG CTT GAG TGG ATG GGA TAT ATT GAC CCT TTC AAT GGT GGT 243 ACT AGC ΤΛΤ AAT CAG AAG TTC AAG GGC AGA GTC ACC ATT ACC GTA GAC 291 «濟部t央#準局RX消費合作社印« ACA TCC GCG ACC ΛΟΛ GCC TAC ATG GAG CTG AGC AGT CTG AGrt TCT GAA 339 C.AC ACC CCT CTG ΤΛΤ TAC TCT GCC AC,1 GGC CCT .AAC CCC TTT CCT TAC 387 TCC GCC CAC CCA ACC CTG GTC ACC CTC TCC TCA GCTGrtCTGCA TCC <133 -. 81.9.10,000 (請先《讀背*之注意事項再填V Γ頁) 本紙a尺度適用中a围家橒準（CNS)甲4规格（210 X 297公牙） A7 B7 C7 __D7___ 六、申請專利範团 22.—種抗人類間白素一S受體之抗髏的製造方法 ，其待m為培養藉由包含有如申諳專利範圍第18項之 ♦ DNA或其一部份之重组載體以及如申請專利範圍第2 0 項之DNA或其一部份之重组載諼同時轉形之轉形體，盌 而分離所産生之所欲抗體。 1 —i ϋ ί ϋ n n n ff— n (f «I f— ·1 J* ·}ί 1 (請先《讀背面之注意事項再填tv頁〉 ktTti^v·*1’：·*.，* 1 « Ί1-J-1 · - , . . 一 一.....-· 一 , 鳗濟部中央揉準局貝工消费合作杜印製 訂· 81.9.10,000 本紙張尺茂適用中SS家櫺準（CNS)甲4規格（210 X 297公
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Families Citing this family (330)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995006119A1 (en) * 1993-08-24 1995-03-02 Scotgen Limited Recombinant humanized anti-human immunodeficiency virus antibody
US5472693A (en) * 1993-02-16 1995-12-05 The Dow Chemical Company Family of anti-carcinoembryonic antigen chimeric antibodies
AU6808194A (en) * 1993-05-31 1994-12-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstructed human antibody against human interleukin-6
US5914110A (en) * 1993-09-07 1999-06-22 Smithkline Beecham Corporation Recombinant IL4 antibodies useful in treatment of IL4 mediated disorders
AU7949394A (en) 1993-11-19 1995-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human medulloblastomatous cell
WO1995029690A1 (en) * 1994-04-29 1995-11-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Biologically active peptides and methods of identifying the same
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
ES2384222T3 (es) 1994-10-07 2012-07-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Inhibición del crecimiento anómalo de células sinoviales utilizando un antagonista de IL-6 como principio activo
CN100350973C (zh) * 1994-10-21 2007-11-28 岸本忠三 用于治疗il－6产生所致疾病的药物组合物
CA2211578C (en) * 1995-02-13 2010-09-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Muscle protein proteolysis inhibiting agent containing il-6 receptor antibody
PT923941E (pt) 1996-06-27 2006-09-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Medicamentos para mieloma a serem utilizados com agentes antitumorais de mostarda nitrogenada
HUP9904177A3 (en) 1996-09-26 2001-10-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody against human parathormone related peptides
UA76934C2 (en) * 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
DE69830492T2 (de) 1997-02-12 2006-03-16 Chugai Seiyaku K.K. Antikörper als ARZNEIMITTEL GEGEN LYMPHOCYTISCHE TUMORE (AUSSCHLIESSLICH MYELOME)
ATE547119T1 (de) 1997-03-21 2012-03-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Präventives oder therapeutisches mittel mit einem il-6-antagonisten als wirkstoff für durch sensibilisierte t-zellen vermittelte erkrankungen
IL132896A0 (en) 1997-05-15 2001-03-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Cachexia remedy
US20020187150A1 (en) * 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
KR20010022846A (ko) * 1997-08-15 2001-03-26 나가야마 오사무 항 인터루킨-6 수용체 항체를 유효성분으로서 함유하는 전신성 홍반성 낭창의 예방 및/또는 치료제
US6723319B1 (en) 1998-03-17 2004-04-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of treating inflammatory intestinal diseases containing as the ingredient IL-6 receptors antibodies
ATE512225T1 (de) 1998-04-03 2011-06-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humanisierter antikörper gegen den menschlichen gewebefaktor (tf) und verfahren für die konstruktion eines solchen humanisierten antikörpers.
DE69934698T2 (de) 1998-08-24 2007-10-04 Chugai Seiyaku K.K. Mittel zur vorbeugung oder behandlung von pankreatitis die anti-il-6 receptor antikörper als aktive komponente enthalten
BRPI9915679B8 (pt) 1998-11-27 2021-05-25 Darwin Discovery Ltd composições e métodos para aumentar a mineralização óssea
US7696325B2 (en) 1999-03-10 2010-04-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide inducing apoptosis
AU7078200A (en) 1999-08-27 2001-03-26 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The Polypeptides, comprising il-6 ligand-binding receptor domains and related nucleic acids, antibodies, compositions, and methods of use
IL148980A0 (en) 1999-10-01 2002-11-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd An antibody to human tissue factor and experimental animals having inserted cells with the gene encoding human tissue factor
GB0002666D0 (en) 2000-02-04 2000-03-29 Univ London Blockade of voltage dependent sodium channels
ATE420661T1 (de) 2000-04-28 2009-01-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Zellproliferation-inhibitoren
EP1314437B1 (en) 2000-08-11 2014-06-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized antibody-containing preparations
WO2002032374A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Immunex Corporation Methods for treating il-18 mediated disorders
ATE391174T1 (de) 2000-10-20 2008-04-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modifizierter tpo-agonisten antikörper
AU2002210918B2 (en) 2000-10-20 2006-03-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Degraded agonist antibody
CN1308447C (zh) 2000-10-20 2007-04-04 中外制药株式会社 低分子化的激动剂抗体
DK1334731T3 (da) 2000-10-25 2008-05-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Forebyggende eller terapeutisk middel mod psoriasis omfattende anti-IL-6-receptorantistof som aktiv bestanddel
WO2002036164A1 (fr) * 2000-10-27 2002-05-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agent abaissant le taux sanguin de vegf contenant un antagoniste de il-6 en tant que principe actif
AU2000279625A1 (en) * 2000-10-27 2002-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Blood mmp-3 level-lowering agent containing il-6 antgonist as the active ingredient
EP1364657B1 (en) 2001-02-07 2016-12-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Remedies for myelocytic leukemia
AU2002322478A1 (en) * 2001-03-02 2002-12-16 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing cd2 antagonists for the prevention and treatment of autoimmune disorders or inflammatory disorders
EP3088412B1 (en) 2001-03-09 2021-05-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein purification method
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
WO2002086492A1 (fr) 2001-04-17 2002-10-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Procede de quantification de tensioactif
US20100056762A1 (en) * 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US7589180B2 (en) * 2001-05-11 2009-09-15 Abbott Laboratories Inc. Specific binding proteins and uses thereof
SI1475101T1 (sl) 2002-02-14 2011-03-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Farmacevtski proizvodi iz raztopine, ki vsebuje protitelo
GB0208041D0 (en) * 2002-04-08 2002-05-22 Lonza Biologics Plc Method of culturing animal cells
EP1498137A1 (en) * 2002-04-25 2005-01-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Remedy for lung cancer
EP1513879B1 (en) * 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1541165A4 (en) 2002-08-27 2009-06-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd METHOD FOR STABILIZING PROTEIN PREPARATION
AU2002338020A1 (en) 2002-09-04 2004-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody against blood-solubilized n-terminal peptide in gpc3
CN100522989C (zh) 2002-09-11 2009-08-05 中外制药株式会社 纯化蛋白质的方法
MXPA05008713A (es) * 2003-02-24 2005-09-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico para dano de medula espinal que comprende antagonista de interluceina-6.
JP2004279086A (ja) 2003-03-13 2004-10-07 Konica Minolta Holdings Inc 放射線画像変換パネル及び放射線画像変換パネルの製造方法
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
RS20050934A (en) * 2003-06-16 2008-04-04 Celltech R. & D. Inc., Antibodies specific for sclerostin and methods fo r increasing bone mineralization
TW200510532A (en) 2003-07-15 2005-03-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd IgM production by transformed cell and method of quantifying the same
SI1690550T1 (sl) 2003-10-17 2012-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Terapevtska sredstva za mezoteliom
US8298816B2 (en) 2003-12-03 2012-10-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Expression systems using mammalian beta-actin promoter
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
AR048210A1 (es) 2003-12-19 2006-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Un agente preventivo para la vasculitis.
BRPI0506679A (pt) * 2004-02-11 2007-05-15 Warner Lambert Co métodos de tratar osteoartrite com antagonistas de il-6
WO2005079479A2 (en) * 2004-02-17 2005-09-01 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
US7767792B2 (en) * 2004-02-20 2010-08-03 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Antibodies to EGF receptor epitope peptides
AR048335A1 (es) * 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
EP3269738A1 (en) * 2004-03-24 2018-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
GB0410627D0 (en) * 2004-05-12 2004-06-16 Scancell Ltd Specific binding members
WO2006046661A1 (ja) * 2004-10-28 2006-05-04 Osaka University インターロイキン－６阻害剤
EP1835022B1 (en) 2005-01-05 2015-02-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell culture method and utilization of the same
KR20070108270A (ko) * 2005-02-28 2007-11-08 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 술폰아미드 화합물의 신규 병용
EP1870459B1 (en) 2005-03-31 2016-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
EP1870458B1 (en) 2005-03-31 2018-05-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha sc(Fv)2 STRUCTURAL ISOMERS
JO3058B1 (ar) * 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
US8003108B2 (en) 2005-05-03 2011-08-23 Amgen Inc. Sclerostin epitopes
US9074189B2 (en) 2005-06-08 2015-07-07 Janssen Biotech, Inc. Cellular therapy for ocular degeneration
CA2610987C (en) 2005-06-10 2013-09-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilizer for protein preparation comprising meglumine and use thereof
CN101262885B (zh) 2005-06-10 2015-04-01 中外制药株式会社 含有sc(Fv)2的药物组合物
NZ595386A (en) * 2005-08-11 2013-08-30 Arpi Matossian Rogers Peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
KR101239051B1 (ko) 2005-10-21 2013-03-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 심장질환 치료제
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
EP1964574B1 (en) 2005-11-14 2016-09-07 Cellmid Limited Method for treatment or prevention of disease associated with functional disorder of regulatory t cell
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
EP1967209B1 (en) 2005-11-25 2012-06-06 Keio University Therapeutic agent for prostate cancer
EP1977763A4 (en) 2005-12-28 2010-06-02 Chugai Pharmaceutical Co Ltd STABILIZER PREPARATION CONTAINING ANTIBODIES
AU2007208678B2 (en) 2006-01-27 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
WO2007108505A1 (ja) 2006-03-22 2007-09-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha エリスロポエチン溶液製剤
DK2009101T3 (en) 2006-03-31 2018-01-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody modification method for purification of a bispecific antibody
DK2006381T3 (en) 2006-03-31 2016-02-22 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROCEDURE FOR REGULATING ANTIBODIES BLOOD PHARMACOKINETICS
US9260516B2 (en) * 2006-04-07 2016-02-16 Osaka University Method for promoting muscle regeneration by administering an antibody to the IL-6 receptor
US8741643B2 (en) 2006-04-28 2014-06-03 Lifescan, Inc. Differentiation of pluripotent stem cells to definitive endoderm lineage
TWI422387B (zh) * 2006-05-25 2014-01-11 Glaxo Group Ltd 免疫球蛋白
MY159787A (en) 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
EP2032166B1 (en) 2006-06-13 2013-04-10 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating cancer
KR101351208B1 (ko) 2006-06-21 2014-01-14 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 Ｆｚｄ10에 대한 종양-표적화 모노클로날 항체 및 이의 용도
AU2007285695B2 (en) 2006-08-18 2012-05-24 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with IL-6-mediated signalling
WO2008042611A2 (en) * 2006-09-29 2008-04-10 Centocor, Inc. Method of using il6 antagonists with mitoxantrone for prostate cancer
EP2123302B1 (en) 2007-01-23 2015-12-09 Shinshu University Il-6 inhibitors to treat chronic rejection
AU2008209482B2 (en) 2007-01-24 2014-05-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating cancer
CN104013956B (zh) 2007-01-25 2018-12-18 达娜-法勃肿瘤研究所公司 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CL2008000719A1 (es) 2007-03-12 2008-09-05 Univ Tokushima Chugai Seiyaku Agente terapeutico para cancer resistente a agentes quimioterapeuticos que comprende un anticuerpo que reconoce hla de clase i como ingrediente activo; composicion farmaceutica que comprende dicho anticuerpo; y metodo para tratar cancer resistente a
US8404235B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US7906117B2 (en) 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
LT2164514T (lt) 2007-05-21 2017-03-10 Alderbio Holdings Llc Il-6 antikūnai ir jų naudojimas
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
WO2008144757A1 (en) * 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
JP5142265B2 (ja) * 2007-05-28 2013-02-13 独立行政法人産業技術総合研究所 抗モータリン抗体のパラトープ及びエピトープ
US9080145B2 (en) 2007-07-01 2015-07-14 Lifescan Corporation Single pluripotent stem cell culture
JP5424330B2 (ja) * 2007-07-26 2014-02-26 国立大学法人大阪大学 インターロイキン６受容体阻害剤を有効成分とする眼炎症疾患治療剤
KR101617243B1 (ko) 2007-07-31 2016-05-02 라이프스캔, 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 분화
CA2696360C (en) 2007-08-14 2018-11-20 Ludwig Institute For Cancer Research Monoclonal antibody targeting the egfr receptor and uses thereof
CL2008002775A1 (es) 2007-09-17 2008-11-07 Amgen Inc Uso de un agente de unión a esclerostina para inhibir la resorción ósea.
HUE029635T2 (en) * 2007-09-26 2017-03-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A method for modifying an isoelectric point of an antibody by amino acid substitution in CDR
CN101939425B (zh) 2007-09-26 2014-05-14 中外制药株式会社 抗il-6受体抗体
SG193868A1 (en) 2007-09-26 2013-10-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified antibody constant region
BRPI0817482B8 (pt) 2007-10-02 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd uso de um anticorpo do receptor da interleucina-6 (il-6) no tratamento da doença do enxerto versus hospedeiro (gvhd)
BRPI0818674B1 (pt) * 2007-10-15 2023-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Métodos para produção de um anticorpo inteiro ou de um fragmento do mesmo e para preparação de fármacos, bem como vetor recombinante
EP2229434B1 (en) 2007-11-27 2011-09-07 Lifescan, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
KR101643005B1 (ko) 2007-12-05 2016-07-28 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ｎｒ１０ 항체 및 그의 이용
JPWO2009075344A1 (ja) 2007-12-12 2011-04-28 独立行政法人国立がん研究センター Ｍ−ｃｓｆ受容体を分子標的とするｍｌｌ白血病及びｍｏｚ白血病治療剤、およびその利用
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
WO2009095489A2 (en) * 2008-02-01 2009-08-06 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
CN102046779A (zh) 2008-02-21 2011-05-04 森托科尔奥索生物科技公司 用于细胞粘附、培养和分离的方法、表面改性培养板和组合物
DK2708559T3 (en) 2008-04-11 2018-06-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of repeatedly binding two or more antigen molecules
US8623648B2 (en) 2008-04-24 2014-01-07 Janssen Biotech, Inc. Treatment of pluripotent cells
EP2282769A4 (en) * 2008-04-29 2012-04-25 Abbott Lab DUAL VARIABLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND ITS USES
MX2010012031A (es) 2008-05-13 2011-01-20 Novimmune Sa Anticuerpos anti-il-6/il-6r y metodos de uso de los mismos.
EP2297209A4 (en) 2008-06-03 2012-08-01 Abbott Lab IMMUNOGLOBULINS WITH TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF
JP5723769B2 (ja) 2008-06-03 2015-05-27 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
TW201503898A (zh) 2008-06-05 2015-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 神經浸潤抑制劑
US8188235B2 (en) * 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
PL2310492T3 (pl) 2008-06-30 2015-12-31 Janssen Biotech Inc Różnocowanie pluripotencjalnych komórek macierzystych
EP2321422A4 (en) 2008-07-08 2013-06-19 Abbvie Inc PROSTAGLANDINE E2 VARIABLE DOUBLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND USES THEREOF
JP5560270B2 (ja) 2008-07-08 2014-07-23 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｎｏｔｃｈ結合剤およびアンタゴニストならびにその使用方法
US9132189B2 (en) 2008-07-08 2015-09-15 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Notch1 binding agents and methods of use thereof
TWI440469B (zh) * 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
AU2009308967C1 (en) 2008-10-31 2017-04-20 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells to the pancreatic endocrine lineage
KR102025158B1 (ko) 2008-10-31 2019-09-25 얀센 바이오테크 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 췌장 내분비 계통으로의 분화
AU2009316583B2 (en) 2008-11-20 2016-04-21 Janssen Biotech, Inc. Methods and compositions for cell attachment and cultivation on planar substrates
MX356756B (es) 2008-11-20 2018-06-11 Centocor Ortho Biotech Inc Células madre pluripotentes en microportadores.
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US9452227B2 (en) * 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
TWI682995B (zh) 2009-03-19 2020-01-21 日商中外製藥股份有限公司 抗體恆定區域改變體
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2417162A2 (en) 2009-04-10 2012-02-15 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
BRPI1013877A2 (pt) 2009-04-10 2017-08-15 Ablynx Nv Sequências de aminoácidos melhoradas contra il-6r e polipeptídeos que compreendem os mesmos para o tratamento de doenças e distúrbios relacionados com il-6r
US20110008766A1 (en) * 2009-05-01 2011-01-13 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
MA33405B1 (fr) 2009-05-15 2012-07-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorps anti-axl
EP2456862A4 (en) 2009-07-20 2013-02-27 Janssen Biotech Inc DIFFERENTIATION OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS
TWI523661B (zh) * 2009-07-31 2016-03-01 Shin Maeda Anti-IL-6 receptor antibody in the manufacture of inhibitors of metastatic inhibition of lung cancer metastasis to the liver
TW201118166A (en) 2009-09-24 2011-06-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd HLA class I-recognizing antibodies
WO2011037158A1 (ja) 2009-09-24 2011-03-31 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
WO2011047262A2 (en) * 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SI3202785T1 (sl) 2009-10-26 2024-08-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za proizvodnjo glikoziliranega imunoglobulina
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011066369A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
CN102712902B (zh) 2009-12-23 2019-01-08 詹森生物科技公司 人胚胎干细胞的分化
CN102741395B (zh) 2009-12-23 2016-03-16 詹森生物科技公司 人胚胎干细胞的分化
WO2011080796A1 (en) 2009-12-28 2011-07-07 Oncotherapy Science, Inc. Anti-cdh3 antibodies and uses thereof
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
ES2561102T3 (es) 2010-01-13 2016-02-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Agentes de unión a Notch1 y procedimientos de uso de los mismos
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
RU2702198C2 (ru) 2010-03-01 2019-10-04 Янссен Байотек, Инк. Способы очистки клеток, производных от плюрипотентных стволовых клеток
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
WO2011108638A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 大日本住友製薬株式会社 炎症性腸疾患用薬剤
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
WO2011128096A1 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Roche Diagnostics Gmbh Polymorphism markers for predicting response to interleukin-6 receptor-inhibiting monoclonal antibody drug treatment
RU2587634C2 (ru) 2010-05-12 2016-06-20 Янссен Байотек, Инк. Дифференцирование эмбриональных стволовых клеток человека
DK3195880T3 (da) 2010-05-14 2020-03-02 Amgen Inc Højkoncentrerede anti-sclerostin-antistofformuleringer
US20130149302A1 (en) 2010-05-28 2013-06-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for pancreatic cancer
DK2578231T3 (da) 2010-05-28 2022-12-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antitumor-t-celle-reaktionsforstærker
WO2011152503A1 (ja) 2010-06-02 2011-12-08 大日本住友製薬株式会社 自己免疫疾患またはアレルギー疾患の治療剤
CA2801107A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 F. Hoffman-La Roche Ag Gene expression markers for predicting response to interleukin-6 receptor-inhibiting monoclonal antibody drug treatment
JO3330B1 (ar) * 2010-06-10 2019-03-13 Lilly Co Eli الأجسام المضادة cgrp
JP2013537415A (ja) 2010-08-03 2013-10-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2809433A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
KR101851956B1 (ko) 2010-08-31 2018-04-25 얀센 바이오테크 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 분화
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2815277A1 (en) * 2010-10-29 2012-05-03 Immunogen, Inc. Novel egfr-binding molecules and immunoconjugates thereof
EA201390575A1 (ru) 2010-10-29 2014-01-30 Иммьюноджен, Инк. Неантагонистические egfr-связывающие молекулы и их иммуноконъюгаты
WO2012064627A2 (en) 2010-11-08 2012-05-18 Genentech, Inc. Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody
RU2620071C2 (ru) 2010-11-17 2017-05-22 Чугаи Сеияку Кабушики Каиша Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii
DK2643018T3 (da) 2010-11-23 2021-01-18 Vitaeris Inc Anti-il-6-antistoffer til behandling af oral mucositis
TWI812066B (zh) 2010-11-30 2023-08-11 日商中外製藥股份有限公司 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
WO2012101251A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Sanofi Human antibodies to pcsk9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens
KR20230005405A (ko) 2011-02-25 2023-01-09 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 ＦｃγＲＩＩｂ 특이적 Ｆｃ 항체
MX2013010011A (es) 2011-03-01 2014-10-24 Amgen Inc Agentes de unión biespecífica.
MA35009B1 (fr) 2011-03-25 2014-04-03 Amgen Inc Cristaux d'anticorps anti-sclérotine et formulations de ceux-ci
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
DK3006464T3 (en) 2011-06-10 2018-09-17 Canada Minister Nat Defence ANTIRICIN ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
US10400029B2 (en) 2011-06-28 2019-09-03 Inhibrx, Lp Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
AU2012275287B2 (en) 2011-06-28 2017-10-05 Inhibrx, Inc. Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
US9574005B2 (en) 2011-07-19 2017-02-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stable Protein-containing preparation containing argininamide or analogous compound thereof
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
WO2013017656A1 (en) 2011-08-02 2013-02-07 Medizinische Universität Wien Antagonists of ribonucleases for treating obesity
WO2013017691A1 (en) 2011-08-04 2013-02-07 Medizinische Universität Innsbruck Cahgt1p inhibitors for use in the treatment of candidiasis
SI2739311T1 (en) 2011-08-04 2018-07-31 Amgen Inc. Method for the treatment of bone defect defects
CN103889555B (zh) 2011-09-01 2018-10-26 中外制药株式会社 通过超滤制备包含高度浓缩的抗体的组合物的方法
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2747782B1 (en) 2011-09-23 2018-01-17 Ablynx NV Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling
TW201817744A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
DE102011083811A1 (de) * 2011-09-30 2013-04-04 Airbus Operations Gmbh Sitzvorrichtung für ein Luft- oder Raumfahrzeug
EP3939996A1 (en) 2011-09-30 2022-01-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
EP3492109B1 (en) 2011-10-03 2020-03-04 ModernaTX, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
WO2013059548A1 (en) 2011-10-19 2013-04-25 Sanofi Compositions and methods for treating cancer using jak2 inhibitor
CN109022465B (zh) 2011-10-28 2022-04-29 特瓦制药澳大利亚私人有限公司 多肽构建体及其用途
JO3370B1 (ar) 2011-11-10 2019-03-13 Regeneron Pharma طريقة لتثبيط نمو الورم عن طريق تثبيط مستقبل انترلوكين 6
RU2014121820A (ru) 2011-11-21 2015-12-27 Иммьюноджен, Инк. Способ лечения опухолей, устойчивых к анти-egfr терапиям, с помощью конъюгата антитела egfr с цитотоксическим средством
AU2011382454B2 (en) * 2011-11-30 2017-02-23 Abbvie Biotechnology Ltd Vectors and host cells comprising a modified SV40 promoter for protein expression
SG11201403134PA (en) * 2011-12-13 2014-07-30 Nordic Nanovector As Chimeric therapeutic anti - cd37 antibodie hh1
JP2015501844A (ja) 2011-12-16 2015-01-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 修飾ヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸組成物
KR102203056B1 (ko) 2011-12-22 2021-01-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 단일 인슐린 호르몬 양성 세포로의 분화
JP6363954B2 (ja) 2011-12-28 2018-07-25 アムジエン・インコーポレーテツド 抗スクレロスチン抗体の使用による歯槽骨消失の治療方法
US9120870B2 (en) 2011-12-30 2015-09-01 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-13 and IL-17
EA030828B1 (ru) 2012-03-15 2018-10-31 Янссен Байотек, Инк. Человеческие антитела к cd27, методы и применение
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
EP2833923A4 (en) 2012-04-02 2016-02-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS
WO2013156443A1 (en) 2012-04-17 2013-10-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for the expression of polypeptides using modified nucleic acids
KR101510302B1 (ko) * 2012-05-11 2015-04-10 가톨릭대학교 산학협력단 Ｉｌ-６ 수용체를 표적으로 하는 항체가 생성되도록 미니서클 벡터를 통해 형질전환된 줄기세포 치료제
KR101510831B1 (ko) * 2012-05-11 2015-04-10 가톨릭대학교 산학협력단 항 ｉｌ-６ｒ 및 ｔｎｆｒ２을 포함하는 이중특이적 단백질을 발현하는 미니서클 벡터를 포함하는 줄기세포 치료제
KR101510830B1 (ko) 2012-05-11 2015-04-10 가톨릭대학교 산학협력단 생리활성 단백질을 발현하는 미니서클을 이용하여 형질전환된 줄기세포를 통한 치료법
CN108034633B (zh) 2012-06-08 2022-08-02 詹森生物科技公司 人胚胎干细胞向胰腺内分泌细胞的分化
EP3626267A1 (en) 2012-07-05 2020-03-25 UCB Pharma, S.A. Treatment for bone diseases
EP2896291B1 (en) 2012-09-13 2019-03-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gene knock-in non-human animal
US9487590B2 (en) 2012-09-25 2016-11-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind interleukin-6 receptor and methods of use thereof
BR112015009961B1 (pt) 2012-11-01 2020-10-20 Abbvie Inc. proteína de ligação capaz de se ligar a dll4 e vegf, bem como composição que a compreende como composição que a compreende
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
BR112015015714A2 (pt) 2012-12-31 2017-07-11 Janssen Biotech Inc suspensão e aglomeração de células pluripotentes humanas para diferenciação em célu-las endócrinas pancreáticas
EP2938724B1 (en) 2012-12-31 2020-10-28 Janssen Biotech, Inc. Culturing of human embryonic stem cells at the air-liquid interface for differentiation into pancreatic endocrine cells
AU2013368224B2 (en) 2012-12-31 2018-09-27 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using HB9 regulators
US10370644B2 (en) 2012-12-31 2019-08-06 Janssen Biotech, Inc. Method for making human pluripotent suspension cultures and cells derived therefrom
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
DK3677591T5 (da) 2013-04-29 2024-08-26 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antistoffer og fusioner til svækket interferon alpha-2b
JP6442404B2 (ja) 2013-06-11 2018-12-19 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
RU2674996C2 (ru) 2013-07-04 2018-12-14 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Иммуноферментный анализ с подавлением интерференции для определения антител к лекарствам в образцах сыворотки
CA2925256C (en) 2013-09-27 2023-08-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
DE202014010499U1 (de) 2013-12-17 2015-10-20 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
FI3088517T3 (fi) 2013-12-26 2023-11-30 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Ihmisen Anti-IL-33 neutraloiva monoklonaalinen vasta-aine
CA3233584A1 (en) 2013-12-27 2015-07-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for purifying antibody having low isoelectric point
EP2898896A1 (en) 2014-01-22 2015-07-29 Université Pierre et Marie Curie (Paris 6) Agents for use in the treatment of retinal inflammation
WO2015116852A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating rheumatoid arthritis by administering an il-6r antibody
TWI684600B (zh) 2014-03-21 2020-02-11 美商艾伯維有限公司 抗－ｅｇｆｒ抗體及抗體藥物結合物
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
EP3143127B1 (en) 2014-05-16 2021-07-14 Janssen Biotech, Inc. Use of small molecules to enhance mafa expression in pancreatic endocrine cells
US20170362304A1 (en) 2014-08-20 2017-12-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for measuring viscosity of protein solution
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
EP3209327A1 (en) 2014-10-21 2017-08-30 Ablynx N.V. Treatment of il-6r related diseases
PE20170908A1 (es) 2014-10-29 2017-07-12 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd VARIANTES DE INTERFERON a2b
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
MA41142A (fr) 2014-12-12 2017-10-17 Amgen Inc Anticorps anti-sclérostine et utilisation de ceux-ci pour traiter des affections osseuses en tant qu'élements du protocole de traitement
CA3008162A1 (en) 2014-12-15 2016-06-23 The Regents Of The University Of California Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
US11384350B2 (en) 2014-12-15 2022-07-12 The Regents Of The University Of California Cytotoxic molecules responsive to intracellular ligands for selective T cell mediated killing
PL3233921T3 (pl) 2014-12-19 2022-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Przeciwciała anty-c5 i sposoby ich stosowania
TWI779010B (zh) 2014-12-19 2022-10-01 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素之抗體、含變異Ｆｃ區域之多胜肽及使用方法
EP3253778A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses therof
CN107249637A (zh) 2015-02-27 2017-10-13 中外制药株式会社 用于治疗il‑6相关疾病的组合物
AR104050A1 (es) 2015-03-26 2017-06-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Proceso de producción con iones de cobre controlados
EP3279216A4 (en) 2015-04-01 2019-06-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER
PL3299810T3 (pl) 2015-05-19 2021-12-13 National Center Of Neurology And Psychiatry Sposób określania zastosowania nowej terapii u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym (sm)
US11174317B2 (en) 2015-06-04 2021-11-16 National Center Of Neurology And Psychiatry Therapeutic agent for mental illness comprising IL-6 inhibitor as active ingredient
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
CN107922507B (zh) 2015-08-18 2022-04-05 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者
CN108473583A (zh) 2015-11-03 2018-08-31 赛诺菲生物技术公司 用于治疗葡萄膜炎和黄斑水肿的包含il6r抗体的组合物及其使用方法
EP3394098A4 (en) 2015-12-25 2019-11-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP3398965A4 (en) 2015-12-28 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
GB201604124D0 (en) 2016-03-10 2016-04-27 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical formulation
US11072666B2 (en) 2016-03-14 2021-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell injury inducing therapeutic drug for use in cancer therapy
MA45479A (fr) 2016-04-14 2019-02-20 Janssen Biotech Inc Différenciation de cellules souches pluripotentes en cellules de l'endoderme de l'intestin moyen
KR102538749B1 (ko) 2016-08-05 2023-06-01 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
AU2017319702A1 (en) 2016-09-02 2019-04-11 The Regents Of The University Of California Methods and compositions involving interleukin-6 receptor alpha-binding single chain variable fragments
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
CN109862880A (zh) 2016-09-27 2019-06-07 德国费森尤斯卡比有限公司 液体药物组合物
KR102051177B1 (ko) * 2016-10-19 2019-12-17 주식회사 엘지화학 전압 분배를 이용한 스위치 진단 장치 및 방법
ES2882181T3 (es) 2016-10-31 2021-12-01 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Composición farmacéutica líquida
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
EP3596175A4 (en) 2017-03-17 2021-01-13 The Ohio State Innovation Foundation NANOPARTICLE FOR THE DELIVERY OF CHEMOPREVENTIVE AGENTS
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
CN107098969B (zh) * 2017-06-28 2018-10-12 武汉波睿达生物科技有限公司 一种治疗hiv感染的嵌合抗原受体的重组基因构建及其应用
IL272864B2 (en) 2017-08-31 2024-03-01 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp A therapeutic agent containing an IL-33 antagonist for the treatment of endometriosis
WO2019052457A1 (zh) 2017-09-13 2019-03-21 江苏恒瑞医药股份有限公司 Il-6r抗体、其抗原结合片段及医药用途
JP7235249B2 (ja) 2017-10-20 2023-03-08 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
US20210363238A1 (en) 2018-01-31 2021-11-25 Motokazu Kato Therapeutic agent for asthma containing il-6 inhibitor
CA3093729A1 (en) 2018-03-15 2019-09-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to zika virus and methods of use
SG11202008206TA (en) 2018-03-30 2020-09-29 Amgen Inc C-terminal antibody variants
TWI840360B (zh) 2018-05-21 2024-05-01 日商中外製藥股份有限公司 密封於玻璃容器之凍結乾燥的製劑、套組、製造凍結乾燥製劑的方法、防止或減低凍結乾燥製劑的玻璃容器成霧的方法、及容器內面經過硫酸銨處理或ｖｉｓｔ處理之玻璃容器
CN115636141A (zh) 2018-05-28 2023-01-24 中外制药株式会社 填充喷嘴
CN112955222A (zh) 2018-08-29 2021-06-11 里珍纳龙药品有限公司 用于治疗患有类风湿性关节炎的个体的方法和组合物
CN114206442A (zh) 2019-01-31 2022-03-18 赛诺菲生物技术公司 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体
BR112021017702A2 (pt) 2019-03-29 2021-11-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Inibidor contendo anticorpo anti-receptor de il-6 para inibição de deterioração da função bhe
WO2020201362A2 (en) 2019-04-02 2020-10-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
TW202104244A (zh) 2019-04-10 2021-02-01 日商中外製藥股份有限公司 Fc區域改變抗體的純化方法
KR20220019670A (ko) 2019-04-17 2022-02-17 고쿠리츠다이가쿠호진 히로시마다이가쿠 Il-6 저해제 및 ccr2 저해제를 조합하여 투여하는 것을 특징으로 하는 비뇨기암의 치료제
WO2020257586A2 (en) 2019-06-20 2020-12-24 Baxalta Incorporated Method of treatment with viral-based gene therapy
CN110483640B (zh) * 2019-07-16 2020-05-01 北京汇智和源生物技术有限公司 白介素-6r的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用
MX2022010957A (es) 2020-03-03 2023-01-24 Twentyeight Seven Inc Compuestos que se dirigen a las proteínas de unión al arn o a las proteínas modificadoras del arn.
WO2021194860A1 (en) 2020-03-23 2021-09-30 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
JP2023518814A (ja) 2020-03-23 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｏｖｉｄ－１９肺炎における、ｉｌ－６アンタゴニストに対する応答を予測するためのバイオマーカー
JP2023518815A (ja) 2020-03-23 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｉｌ６アンタゴニストによるｃｏｖｉｄ－１９肺炎を含む肺炎の治療方法
WO2021211006A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Federal State Budgetary Institution Center Of Biomedical Technologies Of Federal Medical And Biological Agency Inhaled hexapeptide for treating interleukin-6 related respiratory diseases
JP2023520249A (ja) 2020-05-15 2023-05-16 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 非経口タンパク質溶液中の可視粒子形成の防止方法
WO2021233246A1 (en) * 2020-05-18 2021-11-25 Biosion Inc. Antibodies binding il6r and uses thereof
WO2022005321A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Federal State Budgetary Institution Scientific center of biomedical technologies of Federal Medical and Biological Agency Inhaled tocilizumab for treating interleukin-6 related respiratory diseases
KR20220028972A (ko) 2020-08-31 2022-03-08 (주)셀트리온 안정한 약제학적 제제
CN116685351A (zh) 2020-09-17 2023-09-01 基因泰克公司 Empacta的结果：一项用于评估托珠单抗在患有covid-19肺炎的住院患者中的功效和安全性的随机、双盲、安慰剂对照、多中心研究
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022165419A1 (en) 2021-02-01 2022-08-04 Kyverna Therapeutics, Inc. Methods for increasing t-cell function
WO2022191306A1 (ja) 2021-03-12 2022-09-15 中外製薬株式会社 重症筋無力症の治療または予防用の医薬組成物
CN117980333A (zh) 2021-06-11 2024-05-03 基因泰克公司 用st2拮抗剂治疗慢性阻塞性肺疾病的方法
JPWO2023058723A1 (zh) 2021-10-08 2023-04-13
WO2024107752A2 (en) 2022-11-15 2024-05-23 Onestone Therapeutics Llc Compositions and methods for immunomodulatory bifunctional fusion molecules

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4304583A (en) * 1980-06-02 1981-12-08 Corning Glass Works Process for drying optical waveguide preforms
JPS6147500A (ja) * 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
GB8422238D0 (en) * 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
GB8607679D0 (en) * 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5082782A (en) 1988-12-27 1992-01-21 Worcester Polytechnic Institute Production of horseshoe crab amebocytes in vitro
IL162181A (en) * 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5216128A (en) * 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
ATE144713T1 (de) * 1989-07-20 1996-11-15 Tadamitsu Kishimoto Antikörper gegen menschlichen interleukin-6- rezeptor
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
US20050142635A1 (en) 2005-06-30
AU5621396A (en) 1996-10-24
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EP0628639A1 (en) 1994-12-14
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JP2007082560A (ja) 2007-04-05
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ES2134212T3 (es) 1999-10-01
AU668349B2 (en) 1996-05-02
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US5795965A (en) 1998-08-18
RU2139351C1 (ru) 1999-10-10
AU692100B2 (en) 1998-05-28
DK0628639T3 (da) 2000-01-24
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US5817790A (en) 1998-10-06
DE69229482T2 (de) 1999-11-18
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WO1992019759A1 (en) 1992-11-12
DE69229482D1 (de) 1999-07-29
US7479543B2 (en) 2009-01-20
LU91556I2 (fr) 2009-06-24
EP0628639B1 (en) 1999-06-23
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JP2004045433A (ja) 2004-02-12

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