WO2011108638A1 - 炎症性腸疾患用薬剤 - Google Patents

炎症性腸疾患用薬剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2011108638A1
WO2011108638A1 PCT/JP2011/054900 JP2011054900W WO2011108638A1 WO 2011108638 A1 WO2011108638 A1 WO 2011108638A1 JP 2011054900 W JP2011054900 W JP 2011054900W WO 2011108638 A1 WO2011108638 A1 WO 2011108638A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
antibody
inflammatory bowel
bowel disease
drug
remission
Prior art date
Application number
PCT/JP2011/054900
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
孝正 渡邉
Original Assignee
大日本住友製薬株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大日本住友製薬株式会社 filed Critical 大日本住友製薬株式会社
Priority to CN2011800123947A priority Critical patent/CN102869381A/zh
Priority to US13/582,179 priority patent/US20130004516A1/en
Priority to JP2012503241A priority patent/JP5845171B2/ja
Priority to EP11750747.5A priority patent/EP2543388A4/en
Publication of WO2011108638A1 publication Critical patent/WO2011108638A1/ja

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule

Definitions

  • the present invention provides an anti-CD81 antibody as an active ingredient for the prevention or improvement of inflammatory bowel disease (inflammatory bowel disease; hereinafter sometimes abbreviated as “IBD”) or for the prevention or improvement of refractory inflammatory bowel disease or It relates to therapeutic drugs. Furthermore, the present invention relates to a method for maintaining remission of inflammatory bowel disease or a method for preventing, improving or treating refractory inflammatory bowel disease using an anti-CD81 antibody.
  • IBD inflammatory bowel disease
  • the intestine is an organ that digests and absorbs nutrients and water that are essential for vital life. On the other hand, it also has an immune defense function for eliminating foreign substances such as pathogens, and is also an organ responsible for maintaining life by controlling the conflicting properties in a balanced manner.
  • IBD inflammatory bowel disease
  • UC ulcerative colitis
  • CD Crohn's disease
  • CD is a lesion that extends from the small intestine to the large intestine, and is a disease with strong inflammation in all layers, mainly in the discontinuous submucosa. Repeated inflammation causes intestinal complications (stenosis, fistula, abscess) and surgery. It is said that it is necessary (Non-Patent Document 1).
  • the period of remission is not the cure of the disease, but the period in which the symptoms have subsided.
  • intractable diseases such as IBD that are difficult to cure, the importance of how long the period in which the symptoms subside can be maintained is emphasized.
  • IBD intractable diseases
  • the current drug therapy not only the medication is stopped, but even if the medication is taken, it relapses at a certain number of patients and symptomatically inhibits the production and action of inflammatory factors. Often there are only.
  • a TNF- ⁇ antibody (Remicade or Infliximab) may be used.
  • it has been reported that the TNF- ⁇ antibody relapses after a single administration, and that some patients relapse even if administration is continued Non-patent Documents 2 and 3).
  • CD81 is a 26 kDa surface molecule expressed in a wide range of cells, and has the effect of lowering the threshold for B cell activation by forming a complex with CD21, CD19, and Leu13 on B cells.
  • T cells it associates with CD4 and CD8 and transmits stimulation information into the cells. It is also physiologically and functionally involved with various integrins and activates VLA-4 ( ⁇ 4 ⁇ 1 integrin) on B cells and LFA-1 ( ⁇ L ⁇ 2 integrin) on thymocytes.
  • anti-CD81 antibody it has been reported that the 45-hour vascular permeability reaction that occurs in a passive skin anaphylaxis model, which is an allergic disease, is suppressed by a single administration of anti-CD81 antibody (Patent Document 1). In addition, it has been reported that a single-day intestinal inflammatory condition that develops in a mouse colitis model, which is an animal model of inflammatory bowel disease, can be suppressed by administering an anti-CD81 antibody (Patent Document 2).
  • Non-patent Document 4 a disease state model that is improved by administering an anti-CD81 antibody every two days has been reported, and it is shown that continuous administration of the anti-CD81 antibody is important for the expression of the drug effect.
  • an object of the present invention is to provide a drug for maintaining remission of inflammatory bowel disease that has not only the introduction of remission but also a long-term remission maintaining effect, and a method for maintaining remission of inflammatory bowel disease. Furthermore, an object of the present invention is to provide a drug for the prevention, amelioration or treatment of refractory inflammatory bowel disease, and a method for the prevention, amelioration or treatment of refractory inflammatory bowel disease.
  • the inventors of the present invention have conducted extensive studies to solve the above problems.
  • the anti-CD81 antibody has not only a remission introduction effect but also a long-term remission maintenance effect.
  • the present inventors have found that it is useful as a drug for maintaining remission, and as a drug for preventing, improving or treating refractory inflammatory bowel disease among inflammatory bowel diseases.
  • the present invention has been completed based on this knowledge.
  • the present invention relates to the following [1] to [32]: [1].
  • a drug for maintaining remission of inflammatory bowel disease comprising an anti-CD81 antibody as an active ingredient; [2].
  • An agent for the prevention, amelioration or treatment of refractory inflammatory bowel disease comprising an anti-CD81 antibody as an active ingredient: [3].
  • the preventive, ameliorating, or therapeutic agent according to the above [2], wherein the intractable inflammatory bowel disease means inflammatory bowel disease in which relapse or recurrence repeats or inflammatory bowel disease in which chronic disease persists. [4].
  • the preventive, ameliorating or therapeutic agent according to [5] above, wherein the normal treatment means administration of an existing therapeutic agent; [7].
  • the existing therapeutic agent is a 5-aminosalicylic acid preparation, a steroid, an immunosuppressant, a TNF inhibitor or an integrin inhibitor; [8].
  • Existing treatments include sulfasalazine, anti-TNF antibody, salazosulfapyridine, mesalazine, betamethasone, betamethasone sodium phosphate, betamethasone phosphate, prednisolone, azathioprine, tacrolimus, 6-mercaptopurine, cyclosporine, infliximab, adalimumab, certolizumab Or a drug for prevention, amelioration or treatment according to the above [7], which is Pegor or Natalizumab; [9].
  • the agent according to [11] above, wherein the existing therapeutic agent is the existing therapeutic agent according to [7] or [8] above; [13].
  • the drug according to [13] above, wherein a single dose is 0.01 to 15 mg / kg; [15].
  • the agent according to any one of [1] to [14] above, wherein the inflammatory bowel disease is ulcerative colitis; [16].
  • the agent according to any one of [1] to [14] above, wherein the inflammatory bowel disease is Crohn's disease; [17].
  • a method of maintaining remission of inflammatory bowel disease comprising administering to a subject in need of an anti-CD81 antibody; [18].
  • a method for preventing, ameliorating or treating refractory inflammatory bowel disease comprising administering to a subject in need of an anti-CD81 antibody; [19].
  • the method according to [18] or [19] above, wherein the refractory inflammatory bowel disease is a steroid-dependent or steroid-resistant inflammatory bowel disease; [21].
  • the method according to any one of [18] to [20] above, wherein the refractory inflammatory bowel disease means an inflammatory bowel disease resistant or resistant to usual treatment; [22].
  • normal treatment means administration of an existing therapeutic agent; [23].
  • the existing therapeutic agent is a 5-aminosalicylic acid preparation, a steroid, an immunosuppressant, a TNF inhibitor, or an integrin inhibitor; [24].
  • the remission maintaining effect is an effect of suppressing relapse or recurrence of enteritis and maintaining a remission state; [27].
  • the method according to [27] above, wherein the existing therapeutic agent is the existing therapeutic agent described in [23] or [24] above; [29].
  • anti-CD81 antibody can prevent, ameliorate, and treat refractory inflammatory bowel disease, and has a long-term remission maintenance effect even by a single administration.
  • IBD inflammatory bowel disease
  • a drug comprising an anti-CD81 antibody as an active ingredient not only exhibits a remission induction effect of inflammatory bowel disease by a single administration, but also exhibits a long-term remission maintenance effect, and is also an intractable relief drug.
  • a single administration of the anti-CD81 antibody not only exerts the effect of introducing remission of inflammatory bowel disease, but also exhibits a long-term remission maintaining effect, as a method for maintaining remission, and for intractable inflammatory bowel disease. It can be used as a prevention, improvement, or treatment method.
  • FIG. 1 (a) shows changes over time in the state of colon inflammation when a single hamster IgG antibody and anti-CD81 antibody were administered once to a mouse relapsed / resolved ulcerative colitis model in the pharmacological test of Example 1.
  • FIG. 1 (b) shows colitis when a rat IgG antibody and a rat anti-TNF- ⁇ antibody were each administered once to a mouse relapsed / resolved ulcerative colitis model, and when sulfasalazine was administered daily. It is the graph which showed the daily change of the symptom.
  • FIG. 1 (b) shows changes over time in the state of colon inflammation when a single hamster IgG antibody and anti-CD81 antibody were administered once to a mouse relapsed / resolved ulcerative colitis model in the pharmacological test of Example 1.
  • FIG. 1 (b) shows colitis when a rat IgG antibody and a rat anti-TNF- ⁇ antibody were each administered once to a mouse relapsed
  • FIG. 2 shows a case where, in the pharmacological test of Example 2, a hamster IgG antibody and an anti-CD81 antibody were each administered once to a mouse relapsed and relapsed inflammatory bowel disease model (Crohn's disease and ulcerative colitis), and It is the graph which showed the daily change of the inflammatory state of the large intestine when sulfasalazine is administered every day.
  • FIG. 3 shows the daily changes in the state of colon inflammation when each of the hamster IgG antibody and the anti-CD81 antibody was administered once to a mouse relapsed / resolved ulcerative colitis model in the pharmacological test of Example 3. It is a graph.
  • FIG. 3 shows the daily changes in the state of colon inflammation when each of the hamster IgG antibody and the anti-CD81 antibody was administered once to a mouse relapsed / resolved ulcerative colitis model in the pharmacological test of Example 3. It is a graph.
  • Example 4 shows colitis when hamster IgG antibody, anti-CD81 antibody clone 2F7, and anti-CD81 antibody clone Eat2 are each administered once to a mouse relapsed / resolved ulcerative colitis model in the pharmacological test of Example 4. It is the graph which showed the daily change of the symptom.
  • the anti-CD81 antibody in the present invention may be an antibody that specifically recognizes CD81. Specifically, it is an expression product (protein) of CD81 gene (this is referred to as “CD81” in this specification). As long as it is an antibody that can specifically recognize ".”
  • CD81 is not only a “protein” or “(poly) peptide” represented by a specific amino acid sequence (SEQ ID NO: 2 (NP_004347)) representing human CD81, but also has biological functions equivalent to these. To the limit, homologues thereof (homologs and splice variants), mutants, derivatives, matured products, amino acid modified products, and the like are included.
  • homologs include proteins of other species such as mice and rats that correspond to human proteins, and these are the base sequences (sequences) of the genes listed on http://www.ncbi.nlm.nih.gov It can be identified a priori from the number 1 (NM_004356)).
  • Variants also include naturally occurring allelic variants, non-naturally occurring variants, and variants having amino acid sequences that have been altered by artificial deletion, substitution, addition or insertion. .
  • Examples of the mutant include those that are at least 70%, preferably 80%, more preferably 95%, and still more preferably 97% homologous to a protein or (poly) peptide without mutation.
  • the amino acid modifications include naturally occurring amino acid modifications and non-naturally occurring amino acid modifications, and specific examples include phosphorylated amino acids.
  • antibodies used in the present invention include polyclonal and monoclonal antibodies. Depending on the type of constant domain of the heavy chain, antibodies are of five major classes: IgA, IgD, IgE, IgG, or IgM. Some of these are further divided into subclasses or isotypes such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and the like.
  • the antibody of the present invention is a monoclonal antibody. These include human antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, single chain antibodies, or fragments generated by Fab fragments or Fab expression libraries, low molecular weight antibodies (including antibody fragments), multispecific antibodies, etc. Antibody modifications are included. Also included are some of the above antibodies having antigen binding properties.
  • Anti-CD81 antibodies used in the present invention include, for example, commercially available anti-CD81 antibodies (manufactured by Farmingen, Santa Cruz, Biolegend, Southern Biotechnology, Ansell, Morphosys, Chemicon) Manufactured by Abcam, manufactured by Immunotech, manufactured by R & D, etc.), or a polyclonal or monoclonal antibody manufactured using known means.
  • anti-CD81 antibody used in the present invention a mammal-derived monoclonal antibody and a polyclonal antibody are particularly preferable.
  • Monoclonal and polyclonal antibodies can be prepared by methods known to those skilled in the art.
  • Monoclonal antibodies and polyclonal antibodies derived from mammals are produced in animal blood, produced by hybridomas, and produced by hosts transformed with expression vectors containing antibody genes by genetic engineering techniques. The best antibody is screened from a huge clone library of 1 trillion molecules by phage display and the gene is mass-produced at a CHO cell factory, or a transgenic mouse that produces a human antibody is used. And those from which human antibodies can be directly obtained.
  • the protein used as a sensitizing antigen for obtaining the anti-CD81 antibody of the present invention for the production of a polyclonal antibody is not limited to the animal species from which it is derived, such as human, mouse, rat and the like. However, it is preferable to select in consideration of compatibility with the parent cell used for cell fusion. In general, a protein derived from a mammal is preferable, and a protein derived from a human is particularly preferable. For example, when CD81 is human CD81, a human CD81 protein, a cell expressing human CD81, a partial peptide of human CD81, and the like can be used. Further, it may be a complete protein or a partial peptide of the protein.
  • the anti-CD81 antibody in the present invention means an antibody that binds to the full length or fragment of a protein.
  • a polyclonal antibody can be obtained as follows. That is, a recombinant CD81 protein expressed in a microorganism such as E. coli or a partial peptide thereof as a fusion protein with natural CD81 protein or GST is immunized to a small animal such as a rabbit to obtain serum.
  • This is prepared by, for example, purification using ammonium sulfate precipitation, protein A, protein G column, DEAE ion exchange chromatography, affinity column coupled with CD81 protein or synthetic peptide, or the like.
  • the antigen can be prepared, for example, according to a method using baculovirus (for example, International Publication No. WO98 / 46777).
  • immunization may be performed by binding to an immunogenic macromolecule such as albumin.
  • an animal is immunized with a sensitizing antigen according to a known method.
  • a sensitizing antigen is injected into a mammal intraperitoneally or subcutaneously.
  • the sensitizing antigen is diluted to an appropriate amount with PBS (Phosphate-Buffered Saline), physiological saline or the like, and mixed with an appropriate amount of an ordinary adjuvant, for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • PBS Phosphate-Buffered Saline
  • physiological saline or the like and mixed with an appropriate amount of an ordinary adjuvant, for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • an ordinary adjuvant for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • an appropriate carrier can be used during immunization with the sensitizing antigen.
  • Immunoma cells are collected from the mammal and subjected to cell fusion.
  • Mammalian myeloma cells are used as the other parent cell to be fused with the immune cells.
  • This myeloma cell is known in various known cell lines such as P3U1 (P3-X63Ag8U1), P3 (P3x63Ag8.653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U. 1 (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C., Eur.
  • the cell fusion between the immunocytes and myeloma cells is basically performed by a known method, for example, the method of Kohler and Milstein et al. (Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73, 3- 46) etc.
  • the cell fusion is performed in a normal nutrient culture medium in the presence of a cell fusion promoter, for example.
  • a cell fusion promoter for example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus (HVJ), or the like is used as the fusion promoter, and an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide can be added and used to increase the fusion efficiency as desired.
  • PEG polyethylene glycol
  • HVJ Sendai virus
  • the use ratio of immune cells and myeloma cells can be arbitrarily set.
  • the number of immune cells is preferably 1-10 times that of myeloma cells.
  • RPMI1640 culture solution suitable for growth of the myeloma cell line for example, RPMI1640 culture solution suitable for growth of the myeloma cell line, MEM culture solution, and other normal culture solutions used for this kind of cell culture can be used. Serum replacement fluid such as fetal calf serum (FCS) can be used in combination.
  • FCS fetal calf serum
  • a predetermined amount of the immune cells and myeloma cells are mixed well in the culture medium, and a PEG solution (for example, an average molecular weight of about 1000-6000) preliminarily heated to about 37 ° C. is usually 30-60% ( The desired hybridoma is formed by adding at a concentration of w / v) and mixing. Subsequently, cell fusion agents and the like that are undesirable for the growth of the hybridoma are removed by sequentially adding an appropriate culture medium and centrifuging to remove the supernatant.
  • PEG solution for example, an average molecular weight
  • the hybridoma thus obtained is selected by culturing in a normal selective culture solution, for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, a normal limiting dilution method is performed, and screening and single cloning of a hybridoma that produces the target antibody are performed.
  • a normal selective culture solution for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die.
  • a normal limiting dilution method is performed, and screening and single cloning of a hybrido
  • human lymphocytes such as human lymphocytes infected with EB virus are sensitized with proteins, protein-expressing cells or lysates thereof in vitro, and sensitized. Lymphocytes can be fused with human-derived myeloma cells having permanent mitotic activity, such as U266, to obtain a hybridoma that produces a human antibody having a desired activity (for example, cell migration inhibitory activity).
  • a desired activity for example, cell migration inhibitory activity
  • the hybridoma producing the monoclonal antibody thus produced can be subcultured in a normal culture solution and can be stored for a long time in liquid nitrogen. That is, a desired antigen or a cell expressing the desired antigen is used as a sensitizing antigen and immunized according to a normal immunization method, and the resulting immune cell is fused with a known parent cell by a normal cell fusion method. And can be prepared by screening monoclonal antibody-producing cells (hybridomas) by a normal screening method.
  • the hybridoma is cultured according to a usual method and obtained as a culture supernatant thereof, or the hybridoma is administered to a mammal compatible therewith to proliferate, and as ascites is obtained.
  • the method of obtaining is adopted.
  • the former method is suitable for obtaining highly pure antibodies, while the latter method is suitable for mass production of antibodies.
  • a human antibody means an antibody that is an expression product of a human-derived antibody gene.
  • Human antibodies can be obtained, for example, by introducing a human antibody locus and administering an antigen to a transgenic animal having the ability to produce human-derived antibodies. Examples of the transgenic animal include mice, and a method for producing a mouse capable of producing a human antibody is described in, for example, International Publication No. WO02 / 43478.
  • the monoclonal antibody in the present invention includes a heavy chain and / or a light chain having an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted or added in the amino acid sequences of the heavy chain and / or light chain constituting the antibody. Monoclonal antibodies consisting of chains are also included.
  • Such partial modification (deletion, substitution, insertion, addition) of such amino acids into the amino acid sequence of the antibody according to the present invention is introduced by partially modifying the base sequence encoding the amino acid sequence. Can do.
  • This partial modification of the base sequence can be introduced by a conventional method using a known site-specific mutagenesis method (Proc. Natl. Acsd. Sci. USA., 1984 Vol81, 5562; Sambrook et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual (1989) Second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press).
  • a genetically engineered antibody that has been artificially modified for the purpose of reducing the heterologous antigenicity to humans such as a chimeric antibody or a humanized antibody, can also be used.
  • These modified antibodies can be produced using known methods.
  • a chimeric antibody is an immunoglobulin molecule characterized by the binding of two or more parts derived from different animal species.
  • the variable region (V region) of a chimeric antibody is derived from a non-human mammalian antibody (eg, mouse monoclonal antibody), and its immunoglobulin constant region (C region) is derived from a human immunoglobulin molecule.
  • a variable region with low immunogenicity is selected and combined with a human constant region that also has low immunogenicity. And it is preferable that the combination also has low immunogenicity.
  • Chimeric antibodies include monovalent, divalent or multivalent immunoglobulins.
  • a monovalent chimeric antibody is a dimer (HL) formed by a chimeric heavy chain linked to a chimeric light chain via a disulfide bridge.
  • a bivalent chimeric antibody is a tetramer (H2L2) formed by two HL dimers linked via at least one disulfide bridge.
  • a humanized antibody is also called a reshaped human antibody, and is obtained by transplanting the complementarity determining region (CDR) of a non-human mammal, for example, a mouse antibody, to the complementarity determining region of a human antibody.
  • CDR complementarity determining region
  • a known genetic recombination technique is also known (see European Patent Application Publication No. EP125503, International Publication No. WO92-19759).
  • a method for producing a humanized antibody a known method can be used. For example, a DNA sequence designed so as to link a CDR of a mouse antibody and a framework region (FR) of a human antibody is PCR from several oligonucleotides prepared so as to have a portion overlapping at the end. Synthesize by the method.
  • the framework regions of a human antibody that are linked via CDRs are selected such that the complementarity determining regions form a good antigen binding site. If necessary, amino acid in the framework region of the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen binding site (Sato, K. et al., Cancer). Res. (1993) 53, 851-856).
  • the human antibody C region is used for the chimeric antibody and the humanized antibody.
  • human antibody C region examples include C ⁇ , and for example, C ⁇ 1, C ⁇ 2, C ⁇ 3, or C ⁇ 4 can be used.
  • the human antibody C region may be modified in order to improve the stability of the antibody or its production.
  • the chimeric antibody is composed of a variable region of a non-human mammal-derived antibody and a C region derived from a human antibody, and the humanized antibody is a complementarity determining region of a non-human mammal-derived antibody, a framework region and a C region derived from a human antibody Since the antigenicity in the human body is reduced, it is useful as an antibody used in the present invention.
  • the antibody used in the present invention may be an antibody fragment or a modified product thereof as long as it can be suitably used in the present invention.
  • antibody fragments include Fab, F (ab ′) 2, Fv, or single chain Fv (scFv) diabody in which H chain and L chain Fv are linked by an appropriate linker, a low molecular weight antibody, one Examples include chain antibodies.
  • the low molecular weight antibody is not particularly limited as long as it includes an antibody fragment in which a part of a full-length antibody (such as whole IgG) is deleted and has an ability to bind to an antigen (CD81 protein).
  • the antibody fragment is not particularly limited as long as it is a part of a full-length antibody, but preferably contains a heavy chain variable region (VH) and / or a light chain variable region (VL).
  • Single chain antibodies also called “single chain Fv” or “sFv” antibody fragments, contain the VH and VL domains of an antibody, and these domains are present in a single polypeptide chain.
  • An “Fv” fragment is the smallest antibody fragment and contains a complete antigen recognition and binding site.
  • an “Fv” fragment is a dimer (VH-VL dimer) in which one VH and VL are strongly linked by a non-covalent bond.
  • the three complementarity determining regions (CDRs) of each variable region interact to form an antigen binding site on the surface of the VH-VL dimer. Six CDRs confer antigen binding sites on the antibody.
  • variable region or half of an Fv containing only three CDRs specific for the antigen
  • the Fv polypeptide further includes a polypeptide linker between the VH and VL domains so that the sFv can form the desired structure for antibody binding (Pluckthun, The Pharmacologic of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenberg. and Moore eds.Springer-Verlag, New York, pp.269-315 (1994)).
  • a method for producing a low molecular weight antibody or a single chain antibody includes, for example, treating an antibody with an enzyme such as papain or pepsin to generate antibody fragments, or constructing and expressing genes encoding these antibody fragments. After being introduced into the vector, it is expressed in an appropriate host cell (for example, Co, MS et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976, Better, M. & Horwitz, AH. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496, Plueckthun, A. & Skerra, A.
  • an enzyme such as papain or pepsin
  • scFv is obtained by linking the H chain V region and L chain V region of an antibody. These regions are present in a single polypeptide chain.
  • Fv polypeptides further include a polypeptide linker between VH and VL, which allows the scFv to form the necessary structure for antigen binding (for a review of scFv, see Pluckthun “The Pharmacology of Monoclonal Antibodies ”Vol. 113 (see Rosenberg and Moore eds. (Springer Verlag, New York) pp. 269-315, 1994)).
  • the linker is not particularly limited as long as it does not inhibit the expression of the antibody variable region linked to both ends thereof.
  • the H chain V region and the L chain V region are linked via a linker, preferably a peptide linker (Huston, JS et al., Proc. Natl.
  • the H chain V region and the L chain V region in scFv may be derived from any of those described as the above antibody.
  • the peptide linker that links the V regions for example, any single chain peptide consisting of amino acid residues 12-19 is used.
  • the DNA encoding the scFv is a DNA encoding the H chain or H chain V region of the antibody, and a DNA encoding the L chain or L chain V region, and a desired amino acid sequence of those sequences.
  • a DNA portion encoding the DNA is amplified by PCR using a primer pair that defines both ends thereof, and then further defined so that the DNA encoding the peptide linker portion and both ends thereof are connected to the H chain and L chain, respectively. Obtained by combining and amplifying primer pairs. Moreover, once DNA encoding scFv is prepared, an expression vector containing them and a host transformed with the expression vector can be obtained according to a conventional method, and the host can be used according to a conventional method. , ScFv can be obtained.
  • Diabody refers to a bivalent antibody fragment constructed by gene fusion (Holliger, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993), published European patent application) No. 404097, International Publication No. WO93 / 11161, etc.).
  • a diabody is a dimer composed of two polypeptide chains, and each polypeptide chain is usually a linker having a short length such that VL and VH cannot bind to each other in the same chain, for example, about 5 residues. Are combined. Since VL and VH encoded on the same polypeptide chain cannot form a single-chain variable region fragment due to a short linker between them, a diabody forms two antigen-binding sites.
  • sc (Fv) 2 is a low molecular weight antibody in which two VHs and two VLs are combined with a linker or the like to form a single chain (Hudson et al., J Immunol. Methods 1999; 231: 177-189). . sc (Fv) 2 can be produced, for example, by linking scFv with a linker.
  • the linker that binds the variable region of an antibody is disclosed in any peptide linker that can be introduced by genetic engineering, or a synthetic compound linker (see, for example, Protein TM Engineering, 9 (3), 299-305, 1996).
  • the linker etc. which are used can be used.
  • a peptide linker When a peptide linker is used, its length is not particularly limited and can be appropriately selected by those skilled in the art according to the purpose, but is usually 1 to 100 amino acids, preferably 3 to 50 amino acids, more preferably 5 -30 amino acids, particularly preferably 12-18 amino acids (eg 15 amino acids).
  • Synthetic chemical linkers are commonly used for cross-linking peptides such as N-hydroxysuccinimide (NHS), disuccinimidyl suberate (DSS), bis (sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3), dithiobis (succinimidylpropionate) (DSP), dithiobis (sulfosuccinimidylpropionate) (DTSP), ethylene glycol bis (succinimidyl succinate) (EGS) ethylene glycol Bis (sulfosuccinimidyl succinate) (sulfo-EGS), disuccinimidyl tartrate (DST), disulfosuccinimidyl tartrate (sulfo-DST), bis [2- (succinimideoxycarbonyloxy) Ethyl] sulfone (BSOCOES), bis [2 And the like (sulfosuccinimide oxy carbonyloxy
  • antibody fragments can be produced by the host by obtaining and expressing the gene in the same manner as described above.
  • the term “antibody” as used in the claims of the present application encompasses these antibody fragments.
  • an antibody conjugated with various molecules such as polyethylene glycol (PEG) can also be used.
  • PEG polyethylene glycol
  • the “antibody” referred to in the claims of the present application includes these modified antibodies. In order to obtain such a modified antibody, it can be obtained by chemically modifying the obtained antibody. These methods are already established in this field.
  • the antibody produced and expressed as described above can be isolated from the inside and outside of the cell and from the host and purified to homogeneity. Separation and purification of the antibody used in the present invention can be performed by affinity chromatography.
  • the column used for affinity chromatography include a protein A column and a protein G column.
  • the carrier used for the protein A column include HyperD, POROS, Sepharose F., and the like. F. Etc.
  • the antibody used in the present invention can be separated and purified by appropriately selecting and combining chromatography other than the affinity chromatography, filter, ultrafiltration, salting out, dialysis and the like.
  • chromatography include ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, gel filtration, and the like. These chromatographies can be applied to high performance liquid chromatography (HPLC). Alternatively, reverse phase HPLC may be used.
  • Inflammatory bowel disease is a disease in which the intestine is inflamed, causing severe abdominal pain and diarrhea. It is abbreviated as ulcerative colitis (UC). And Crohn's disease (abbreviated as CD), both of which are repetitive and relapsed over a long period of time.
  • UC ulcerative colitis
  • CD Crohn's disease
  • azathioprine which is an immunosuppressant, is used in the treatment of inflammatory bowel disease in Japan as "introduction and maintenance of remission of steroid-dependent Crohn's disease and steroid dependence.
  • infliximab which is an anti-TNF antibody, is effective in Japan for Crohn's disease even if appropriate treatments such as “nutrition therapy, other drug therapy (5-aminosalicylic acid preparations, etc.) are performed. This drug should be administered if the apparent clinical symptoms remain. " In the United States, the drug is, for Crohn's disease, "suppressing and introducing and maintaining signs and symptoms in moderate to severe adults or young active Crohn's disease patients who are resistant to conventional treatment. As for ulcerative colitis, “moderate to severe activity resistant to usual treatment” for ulcerative colitis Approved as "suppression of signs and symptoms, induction and maintenance of clinical remission and mucosal healing" in patients with ulcerative colitis.
  • remission introduction means introduction of remission into active lesions such as bloody stool, intestinal ulcer and erosion, and QOL decrease.
  • the remission maintenance means that repetitive relapse / relapse of active lesions is suppressed and the remission state is maintained for as long as possible.
  • “remission” refers to symptoms such as diarrhea, diarrhea, abdominal pain, fever, weight loss and anal pain, which are symptoms of inflammatory bowel disease, CDAI (Crohn's disease activity index), IOIBD assessment score, Dutch AI, Shown as an activity index such as the ulcerative colitis activity index, which means that the activity index is improved.
  • Refractory means a state in which clinical symptoms due to diseases such as repeated flare-ups or chronic disease persist, even if normal treatment such as nutritional therapy or other drug therapy is properly performed .
  • “Chronic condition persists” means a condition in which symptoms have been maintained for 6 months or more after the start of treatment, and is resistant or resistant to a normal treatment such as steroid dependence or steroid resistance (disease) Is included.
  • Existing therapeutic agents used for normal treatment include 5-aminosalicylic acid preparations (eg, salazosulfapyridine, sulfasalazine, mesalazine), steroids (eg, betamethasone, betamethasone sodium phosphate ester, betamethasone phosphate, prednisolone),
  • immunosuppressants for example, azathioprine, tacrolimus, 6-mercaptopurine, cyclosporine
  • TNF inhibitors for example, infliximab, adalimumab, sertolizumab, pegol
  • integrin inhibitors for example, natalizumab.
  • an anti-CD81 antibody having an effect of maintaining remission over a long period of time and effective for improvement or treatment for relapsed remission type inflammatory bowel disease (IBD) among IBD A drug containing as an active ingredient is provided.
  • IBD inflammatory bowel disease
  • relapse means that the symptom appears again after a certain period after the symptom of inflammatory bowel disease is cured, and recurrence has the same meaning.
  • Patent Document 2 International Publication No. WO / 2005/021792
  • CD81 is highly expressed in IBD-inducing cells, and the anti-CD81 antibody shows a therapeutic effect on a mouse model of colitis of the first stroke type. New findings are shown.
  • anti-CD81 antibody is also effective for the prevention, improvement or treatment of relapsed and relapsed and chronic persistent refractory inflammatory bowel disease that repeats relapse (recurrence) and remission It has not been made clear that this is the case.
  • the present inventor has created a new animal model showing inflammatory bowel disease with relapsed remission-type symptoms, and by simply administering an anti-CD81 antibody to this animal model, enteritis can be sustained over a long period of time. It was newly found that relapse (recurrence) can be suppressed.
  • the present invention is based on the new finding that the anti-CD81 antibody is also effective in the prevention, improvement or treatment of relapsing / remitting type (symptom of repeated relapse (recurrence) and remission) and chronic persistent refractory inflammatory bowel disease.
  • the drug for maintaining remission of IBD or the drug for preventing, improving and treating refractory IBD provided by the present invention comprises an anti-CD81 antibody having an effect of maintaining remission, which an existing therapeutic agent does not have, as an active ingredient. It is.
  • the above symptoms can be prevented, ameliorated, or treated even after single administration. It can be done.
  • the drug containing the anti-CD81 antibody as an active ingredient can be administered either orally or parenterally, but is preferably administered parenterally, specifically, injection, nasal administration, pulmonary administration Examples thereof include a dosage form and a transdermal dosage form.
  • parenterally specifically, injection, nasal administration, pulmonary administration
  • examples thereof include a dosage form and a transdermal dosage form.
  • the injection form it can be administered systemically or locally by, for example, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, or the like.
  • the dose varies depending on the type of active ingredient, administration route, administration subject or patient's age, body weight, symptoms, etc., and cannot be defined unconditionally, but is usually 0.01 to 15 mg / kg as a single dose, preferably 1 -15 mg / kg, more preferably 3-5 mg / kg, or preferably 0.01-5 mg / kg, more preferably 0.05-5 mg / kg, as long as the effect continues
  • the next administration may not be performed. For example, once every 2 to 30 weeks, 2 to 15 weeks, 2 to 13 weeks, 2 to 10 weeks, or 2 to 8 weeks during the treatment period, or once every several weeks or months for one year Or it may be once every few years.
  • the anti-CD81 antibody usually has a single dose of 0.01 to 15 mg / kg, preferably 1 to 15 mg / kg, more preferably 3 to 5 mg / kg, or preferably 0.01 to
  • 5 mg / kg, more preferably 0.05 to 5 mg / kg the effect of maintaining remission can be exerted over a long period of 2 to 13 weeks, 2 to 10 weeks, or 2 to 8 weeks.
  • the drug effect is not sufficiently obtained or the drug effect is attenuated, it is possible to achieve and maintain the drug effect by administering multiple times (for example, about 2 to 5 times) with the above as one cycle.
  • the drug itself containing the anti-CD81 antibody as an active ingredient is administered as a drug formulated by a known pharmaceutical method.
  • a drug formulated by a known pharmaceutical method can be used in the form of a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or an injection of suspension.
  • a pharmacologically acceptable carrier or medium specifically sterilized water, physiological saline, emulsifier, suspending agent, surfactant, stabilizer, vehicle, preservative, etc. It is envisaged to formulate by blending in the unit dosage form required for recognized pharmaceutical practice.
  • the amount of active ingredient in these preparations is such that an appropriate volume within the indicated range can be obtained.
  • Sterile compositions for injection can be formulated according to normal pharmaceutical practice using a vehicle such as distilled water for injection.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, isotonic solutions containing physiological saline, glucose and other adjuvants such as D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol and sodium chloride.
  • Suitable solubilizers such as Alcohol, specifically ethanol, polyalcohol such as propylene glycol, polyethylene glycol, nonionic surfactants such as polysorbate 80TM, HCO-50 may be used in combination.
  • the oily liquid include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer, a soothing agent, for example, procaine hydrochloride, stabilizer, for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • a soothing agent for example, procaine hydrochloride
  • stabilizer for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • Example 1 Inhibition of relapse in DSS (dextran sulfate aqueous solution) induced mouse colitis model by single administration of anti-CD81 antibody DDS (dextran sulfate aqueous solution) was administered to mice to induce relapse remission type ulcerative colitis, and this relapse remission type Single administration of anti-CD81 antibody compared to single administration of anti-TNF- ⁇ antibody, which is an existing therapeutic agent, and multiple administration of sulfasalazine, to ulcerative mouse colitis model The effect of suppressing relapse (recurrence) of ulcerative colitis was investigated.
  • hamster anti-CD81 antibody The hamster anti-CD81 antibody, the rat anti-TNF- ⁇ antibody and sulfasalazine were used as the sample drugs for preparation of the administration liquid , and rat IgG and hamster IgG were used as the pathological condition sample drugs.
  • Hamster anti-CD81 antibody (Clone: 2F7, manufactured by Southernbiotech, monoclonal antibody against mouse CD81) and rat IgG were added to a concentrated solution, and rat anti-TNF- ⁇ antibody and hamster IgG were added with phosphate buffer to the stock solution. A 0.25 mg / ml administration solution was obtained.
  • Sulfasalazine (manufactured by Sigma) was prepared by suspending sulfasalazine at 20 mg / ml in an aqueous solution in which methylcellulose (manufactured by Nacalai Tesque) was dissolved in 0.5% distilled water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical). .
  • mice Grouping, DSS intake, and administration of 4-week-old mice (BALB / cAnNCrj, Sakai, manufactured by Charles River Japan) were measured, and the weights of mice that were not observed abnormal after 6 days of quarantine breeding were measured. 1 group was divided into 6 groups with 10 animals. Five days from the grouping date, 5% of mice were ingested 1% DSS (first DSS ingestion), and 1 group was a normal mouse group, and normal drinking water was ingested. After ingesting DSS for 5 days, all mice in group 6 were ingested normal drinking water for 5 days.
  • mice After ingesting normal drinking water, 5 groups of mice were allowed to freely ingest 1% DSS for 5 days (second DSS ingestion), and 1 group was allowed to ingest normal drinking water as a normal mouse group, and the test was terminated.
  • hamster IgG, rat IgG, anti-CD81 antibody, and anti-TNF antibody were administered once intraperitoneally at 0.5 mg / mouse.
  • the sulfasalazine solution was orally administered at a dose of 200 mg / kg once a day from the grouping date to the day before the test end date.
  • Colon inflammation symptoms score determination The colon inflammation symptoms were observed from the grouping date to the test end date. The state of inflammation of the large intestine was scored according to the state of stool (normal stool (score: 0), loose stool (score: 1), diarrhea (score: 2)).
  • Day 0 is the grouping date
  • Day 0 to 4 is the first DSS intake period
  • Day 5 to 9 is the normal drinking water intake period
  • Day 10 to 14 is the second DSS intake It corresponds to a period.
  • the symptoms of colonic inflammation at the first intake of DSS were Day 5 in FIG. 1 (a) and FIG. 1 (b).
  • To Day 9 was observed as the first symptom peak (first colitis), and intestinal inflammation at the second relapse (relapsed colitis) was observed from Day 10 to Day 14 in FIGS. 1 (a) and 1 (b). .
  • the single dose of anti-CD81 antibody significantly increased the initial colitis compared to the single dose of the existing anti-TNF- ⁇ antibody and the daily dose of sulfasalazine.
  • the symptoms of recurrent colitis could be strongly suppressed, and colon ulcers could be strongly suppressed after initial colitis and recurrent colitis. Therefore, it has been clarified that a single administration of the anti-CD81 antibody exerts an effect of maintaining remission over a long period of time against relapsed remission type inflammatory bowel disease such as ulcerative colitis.
  • Example 2 Long-term remission effect of anti-CD81 antibody on TNBS (2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid) -induced mouse colitis model Relapsed remission inflammatory bowel disease (Crohn's disease and ulcerative colon) obtained by administering TNBS to mice Inflammation) Relapse (recurrence) of inflammatory bowel disease when a single dose of anti-CD81 antibody is administered to a model and compared to multiple doses of sulfasalazine, an existing treatment, compared to multiple doses The effect was investigated.
  • TNBS 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid
  • TNP-OVA 0.5 g of ovalbumin (OVA: Sigma) and 0.5 g of K 2 CO 3 (Nacalai Tesque) were dissolved in 25 ml of distilled water for injection (OVA solution).
  • OVA solution 0.5 g of 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid
  • TNBS solution 0.5 g of 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid
  • the OVA solution and the TNBS solution were mixed and stirred overnight at room temperature.
  • the stirred solution was dialyzed against 0.01M NaHCO 3 (Nacalai Tesque) with a dialysis membrane (Spectra / Por Membrane MWCO: 10,000, Spectrum Medical Industries Inc.).
  • the dialyzed solution was subjected to protein quantification with BCA protein assay reagent (Peirce).
  • mice Grouping, sensitization, challenge, relapse, and dosing 5 weeks old mice (SJL / JorlIcoCrj, Aoi, Charles River, Japan) : The emulsion was injected subcutaneously (sensitized) at 0.1 ml / head. Seven days after sensitization, a 10 mg / ml TNBS 50% ethanol solution was enemaed under ether anesthesia (0.2 ml / head was injected with a sonde up to 3 cm from the anus: challenge). The group was divided into 7 groups per group and 4 groups based on body weight and symptom score 6 days after the challenge.
  • Table 3 shows the mean value and standard error (SEM) of each group of colon inflammation symptoms score from day 15 to day 28. Further, FIG. 2 shows the daily changes in the inflammatory state of colon in the hamster IgG single administration group, the 1 mg (0.2 ml) / head anti-CD81 antibody single administration group, and the sulfasalazine daily administration group.
  • Example 3 Inhibition of relapse in DSS (dextran sulfate aqueous solution) -induced mouse colitis model by single administration of anti-CD81 antibody
  • Anti-CD81 antibody was applied to a relapsed relapsing-remitting ulcerative colitis model obtained by administering DSS (dextran sulfate aqueous solution) to mice.
  • the effect of anti-CD81 antibody on suppressing relapse when a single dose was administered and relapsed / relapsed ulcerative colitis was induced over a longer period was examined.
  • a hamster anti-CD81 antibody was used as the sample drug for preparation of the administration liquid, and hamster IgG was used as the disease state control sample drug.
  • a hamster anti-CD81 antibody (Clone: 2F7, manufactured by Southernbiotech) was prepared by adding a solution obtained by concentrating the stock solution, and hamster IgG was prepared by adding a phosphate buffer to the stock solution to obtain a 0.25 mg / ml administration solution.
  • mice grouped, DSS intake and dosed 4 weeks old mice (BALB / cAnNCrlCrlj, Samurai, Charles River Japan) were purchased, and after 7 days of quarantine breeding, mice were weighed after 7 days of normal breeding And 6 groups per group were divided into 2 groups.
  • hamster IgG or anti-CD81 antibody was administered once intraperitoneally at 0.5 mg / mouse.
  • 2% DSS was ingested freely by all mice (first DSS ingestion), and normal drinking water was ingested for 10 days.
  • second DSS intake was freely given to all mice for 5 days (second DSS intake), followed by normal drinking water for 9 days.
  • Colon inflammation symptoms score determination The colon inflammation symptoms were observed from the grouping date to the test end date. The state of inflammation of the large intestine was scored according to the state of stool (normal stool (score: 0), loose stool (score: 1), diarrhea (score: 2)).
  • FIG. 3 shows the daily changes in the inflammatory condition of the large intestine according to the determination of the inflammatory condition of the large intestine when each of the hamster IgG and the hamster anti-CD81 antibody was administered once.
  • Day 0 is the grouping date
  • Day 0 to Day 5 is the first DSS intake period
  • Day 15 to Day 20 is the second DSS intake period
  • Day 29 to Day 34 is the third DSS intake period
  • Day 50 to Day 56 is the fourth time This corresponds to the DSS intake period.
  • the anti-CD81 antibody was administered once on Day 0, and in addition to suppressing the initial DSS-induced colitis, long-term remission was maintained by suppressing and improving the recurrence of the subsequent three DSS-induced colitis. The effect was recognized.
  • Example 4 Inhibition of relapse in DSS (dextran sulfate aqueous solution) -induced mouse colitis model by single administration of anti-CD81 antibody
  • the anti-CD81 antibody relapse suppression effect of each clone was investigated when 2F7 or clone Eat2 was administered once and relapsed remission-type ulcerative colitis was induced multiple times.
  • hamster anti-CD81 antibodies Two kinds were used as the sample drugs for preparation of the administration liquid , and hamster IgG was used as the pathological condition control sample drug.
  • Hamster anti-CD81 antibody both anti-mouse CD81 monoclonal antibody Clone: 2F7, Southernbiotech or Clone: Eat2, Biolegend
  • hamster IgG added phosphate buffer to the stock solution
  • a 0.1 mg / ml administration solution was obtained.
  • mice were purchased, and after 7 days of quarantine breeding, mice were weighed. Divided into 4 groups. On the day of grouping, hamster IgG, anti-CD81 antibody clone 2F7 or anti-CD81 antibody clone Eat2 was administered once intraperitoneally at 0.2 mg / mouse. The mice were allowed to ingest 2% DSS ad libitum for 5 days from the grouping date (first DSS ingestion), and then normal drinking water was ingested for 10 days.
  • mice were allowed to ingest 2% DSS freely for 5 days (second DSS ingestion), and then normal drinking water was ingested for 10 days.
  • second DSS ingestion mice were allowed to ingest 2% DSS freely for 5 days (second DSS ingestion), and then normal drinking water was ingested for 10 days.
  • third DSS ingestion mice were allowed to ingest 2% DSS freely for mice for 5 days (third DSS ingestion), normal drinking water was ingested for 6 days.
  • the normal group received regular drinking water during all experimental periods.
  • Colon inflammation symptoms score determination The colon inflammation symptoms were observed for 40 days from the grouping date. The state of inflammation of the large intestine was scored according to the state of stool (normal stool (score: 0), loose stool (score: 1), diarrhea (score: 2)).
  • FIG. 4 shows the daily changes in the inflammatory state of the colon due to the determination of the inflammatory state score of the large intestine when hamster IgG, hamster anti-CD81 antibody clone 2F7 or anti-CD81 antibody clone Eat2 was each administered once.
  • FIG. 4 shows that anti-CD81 antibody clone 2F7 or anti-CD81 antibody clone Eat2 is administered only once to Day 0, and suppresses the initial DSS-induced colitis, and subsequently suppresses the recurrence of two subsequent DSS-induced colitis. A remission maintaining effect was observed throughout. Based on the results of daily changes in the symptoms of colitis in FIG.
  • the average colitis score of each mouse from Day 0 to Day 11 is defined as the initial colitis score, and the average colitis score of each mouse from Day 15 to Day 23 is used as the relapsed colitis.
  • the average colitis score of each mouse from Day 30 to Day 38 was taken as the second relapse colitis score.
  • the colitis scores of each group were compared with those of the pathological condition control group (hamster IgG administration group) by Wilcoxon test. The results are shown in Table 4.
  • an anti-CD81 antibody can prevent, ameliorate, and treat refractory inflammatory bowel disease, and it has a remission maintaining effect over a long period of time even by a single administration.
  • IBD inflammatory bowel disease
  • a drug containing an anti-CD81 antibody as an active ingredient not only exhibits the effect of introducing remission of inflammatory bowel disease, but also exhibits an effect of maintaining remission over a long period of time even by a single administration. It can be used as a drug for maintaining disease remission, or as a drug for preventing, improving, or treating inflammatory bowel disease.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

　抗ＣＤ８１抗体は、単回投与により、炎症性腸疾患の緩解導入効果を示すのみならず、長期間に亘って緩解維持効果を示すことで、炎症性腸疾患の緩解維持用医薬として、また、難治性の炎症性腸疾患に対しても予防、治療、改善効果を示すことで、炎症性腸疾患の予防、改善、治療用医薬として有効である。

Description

炎症性腸疾患用薬剤
　本発明は、抗ＣＤ８１抗体を有効成分とする、炎症性腸疾患（inflammatory bowel disease；以下「ＩＢＤ」と略する場合もある）の緩解維持用乃至難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療用薬剤に関する。更に、抗ＣＤ８１抗体を用いた、炎症性腸疾患の緩解維持方法乃至難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療方法に関する。
　腸は、生体の生命活動に必須である栄養分・水分を消化吸収する器官である。一方で病原体などの異物を排除するための免疫防御機能も備えており相反する性質をバランスよく制御することで生命の維持を担っている器官でもある。しかしこれら機能バランスに異常が生じると、この動的平衡状態が破綻し様々な腸疾患が引き起こされることが知られている。特に近年患者数が増加してきている炎症性腸疾患（inflammatory bowel disease;ＩＢＤと略される）は、腹痛・下痢・粘血便などの消化器異常が起こり、再燃と緩解を繰り返す病気である。ＩＢＤは、その病態から潰瘍性大腸炎（Ulcerative colitis；ＵＣと略される）とクローン病（Crohn's disease；ＣＤと略される）とに分類される。
　ＵＣは大腸に限局された、びまん性の腸粘膜の炎症が主体の疾患であり、炎症の繰り返しにより大腸癌の発症をもたらし、手術が必要となる場合も多い。また手術後も便回数の増加、漏便、嚢炎（pouchitis）の発症の問題がある。ＵＣには、初回発作型、再燃緩解型、慢性持続型、急性激症型の症状が知られている。ＵＣの重症例に対してはステロイド投与が行われているが、ステロイド投与による副作用発現（骨粗しょう症や易感染性）などへの、より強い配慮が必要で、いたずらに長期のステロイド投与にならないように留意すべきとされている。
　ＣＤは小腸から大腸にまたがる病変で、非連続性の粘膜下を中心に全層性の炎症が強い疾患であり、炎症を繰り返すことで腸管合併症（狭窄、ろう孔、膿瘍）を生じ手術を要するとされている（非特許文献１）。
　緩解期とは病気が治ることではなく、症状がおさまっている期間をいい、ＩＢＤのような完治しにくい難病では症状がおさまっている時期がどれだけ長く維持出来るかが重要視される。現行の薬物療法では、薬の投薬を中止するだけでなく、薬を投薬していても、一定の患者数の割合で再燃しており、炎症因子の産生や作用を対症療法的に阻害しているのみである場合が多い。最近では、栄養療法や他の薬物療法（５－アミノサリチル酸製剤等）等の適切な治療を行っても、疾患に起因する明らかな臨床症状が残る場合のような難治性のＩＢＤに対して、ＴＮＦ－α抗体（レミケードまたはインフリキシマブ：Infliximab）が使用されることがある。しかしながら、ＴＮＦ－α抗体は、単回投与後に再燃することや、投与を継続していても再燃する患者が認められることが報告されている（非特許文献２及び非特許文献３）。
　他方、ＣＤ８１は、広範な細胞に発現している２６ｋＤａの表面分子であり、Ｂ細胞上ではＣＤ２１、ＣＤ１９、Ｌｅｕ１３と複合体を形成してＢ細胞活性化の閾値を下げる作用がある。Ｔ細胞上ではＣＤ４、ＣＤ８と会合し細胞内に刺激情報を伝達する。また、各種インテグリン類と生理的かつ機能的に関与しており、Ｂ細胞上のＶＬＡ－４（α４β１インテグリン）や、胸腺細胞上のＬＦＡ－１（αＬβ２インテグリン）を活性化させる。
　抗ＣＤ８１抗体に関して、アレルギー疾患である受身皮膚アナフィラキシーモデルに生じる４５時間の血管透過性反応を、抗ＣＤ８１抗体の単回投与で抑えることが報告されている（特許文献１）。また、炎症性腸疾患の動物モデルであるマウス大腸炎モデルにおいて発症する５日間の単発性の腸炎症状が抗ＣＤ８１抗体を投与することで抑えられることも報告されている（特許文献２）。
　また、多発性硬化症のモデル動物である実験的自己免疫性脳脊髄炎マウスにおいて発症する単発性の神経麻痺症状が、抗ＣＤ８１抗体の一つのクローンＥａｔ２を２日毎に、合計１０回投与することで抑えられ、他の抗ＣＤ８１抗体クローン２Ｆ７では抑えられなかったことも報告されている（非特許文献４）。
　以上のように、２日毎に抗ＣＤ８１抗体を投与することで改善する病態モデルは報告されており、抗ＣＤ８１抗体の継続投与が薬効の発現に重要であることを示している。
国際公開第ＷＯ１９９８／０２５６４７号 国際公開第ＷＯ２００５／０２１７９２号
Inflamm．Bowel．Dis．8，244-250，2002 New England Journal of Medicine．337，1029-1035，1997 Journal of Clinical Gastroenterology．41; 799-809，2007 Neurobiology of Disease 31，413-421，2008
　緩解と再燃（再発）を繰り返すような難治性の炎症性腸疾患の症状を予防、治療、改善できる薬剤や緩解を維持できる薬剤の創製が待たれる。いいかえれば、長期予後を改善するための炎症性腸疾患の緩解維持用薬剤の開発は未だ進んでいないのが現状であり、長期予後改善、特に再発や手術を減少させる薬剤の創製が望まれる。
　従って、本発明の課題は、緩解導入だけでなく長期間緩解維持効果を有する炎症性腸疾患の緩解維持用薬剤、並びに炎症性腸疾患の緩解維持方法を提供することにある。更に、本発明の課題は、難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療用薬剤、並びに難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療方法を提供することにある。
　本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行っていたところ、抗ＣＤ８１抗体が、緩解導入効果のみならず、長期間緩解維持効果も有することから、抗ＣＤ８１抗体が炎症性腸疾患の緩解維持用薬剤として、また炎症性腸疾患の中でも難治性の炎症性腸疾患に対して予防、改善または治療用薬剤として有用であるとの知見を得た。
　本発明はかかる知見を基礎にして完成するに至ったものである。
　すなわち本発明は、下記の［１］から［３２］に関するものである：
　［１］．抗ＣＤ８１抗体を有効成分として含む、炎症性腸疾患の緩解維持用薬剤；
　［２］．抗ＣＤ８１抗体を有効成分として含む、難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療用薬剤：
　［３］．難治性の炎症性腸疾患が、再燃若しくは再発を繰り返す炎症性腸疾患または慢性に病勢が持続する炎症性腸疾患を意味する、上記［２］に記載の予防、改善または治療用薬剤。
　［４］．難治性の炎症性腸疾患が、ステロイド依存性またはステロイド抵抗性の炎症性疾患である、上記［２］または［３］に記載の予防、改善または治療用薬剤；
　［５］．難治性の炎症性腸疾患が、通常の治療に抵抗性または耐性の炎症性腸疾患を意味する、上記［２］～［４］のいずれかに記載の予防、改善または治療用薬剤；
　［６］．通常の治療が、既存治療薬を投与することを意味する、上記［５］に記載の予防、改善または治療用薬剤；
　［７］．既存治療薬が、５－アミノサリチル酸製剤、ステロイド、免疫抑制剤、ＴＮＦ阻害剤またはインテグリン阻害剤である、上記［６］に記載の予防、改善または治療用薬剤；
　［８］．既存治療薬が、スルファサラジン、抗ＴＮＦ抗体、サラゾスルファピリジン、メサラジン、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、リン酸ベタメタゾン、プレドニゾロン、アザチオプリン、タクロリムス、６－メルカプトプリン、サイクロスポリン、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ペゴールまたはナタリズマブである、上記［７］に記載の予防、改善または治療用薬剤；
　［９］．単回投与で長期間緩解維持効果を有する、上記［１］～［８］のいずれかに記載の薬剤；
　［１０］．緩解維持効果が、腸炎の再燃もしくは再発の繰り返しを抑制し、緩解状態を維持する効果である、上記［９］に記載の薬剤；
　［１１］．既存治療薬を単回もしくは複数回投与しても緩解維持しない炎症性腸疾患患者に対して処置される、上記［１］～［４］のいずれかに記載の薬剤；
　［１２］．既存治療薬が上記［７］または［８］に記載の既存治療薬である、上記［１１］に記載の薬剤；
　［１３］．治療期間中は２～３０週間に１回投与される、上記［１］～［１２］のいずれかに記載の薬剤；
　［１４］．１回の投与量が０．０１～１５ｍｇ／ｋｇである、上記［１３］に記載の薬剤；
　［１５］．炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎である、上記［１］～［１４］のいずれかに記載の薬剤；
　［１６］．炎症性腸疾患が、クローン病である、上記［１］～［１４］のいずれかに記載の薬剤；
　［１７］．抗ＣＤ８１抗体を必要とする対象に投与することを含む、炎症性腸疾患の緩解を維持する方法；
　［１８］．抗ＣＤ８１抗体を必要とする対象に投与することを含む、難治性の炎症性腸疾患を予防、改善または治療する方法；
　［１９］．難治性の炎症性腸疾患が、再燃若しくは再発を繰り返す炎症性腸疾患または慢性に病勢が持続する炎症性腸疾患を意味する、上記［１８］に記載の方法；
　［２０］．難治性の炎症性腸疾患が、ステロイド依存性またはステロイド抵抗性の炎症性腸疾患である、上記［１８］または［１９］に記載の方法；
　［２１］．難治性の炎症性腸疾患が、通常の治療に抵抗性または耐性の炎症性腸疾患を意味する、上記［１８］～［２０］のいずれかに記載の方法；
　［２２］．通常の治療が、既存治療薬を投与することを意味する、上記［２１］に記載の方法；
　［２３］．既存治療薬が、５－アミノサリチル酸製剤、ステロイド、免疫抑制剤、ＴＮＦ阻害剤またはインテグリン阻害剤である、上記［２２］に記載の方法；
　［２４］．既存治療薬が、スルファサラジン、抗ＴＮＦ抗体、サラゾスルファピリジン、メサラジン、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、リン酸ベタメタゾン、プレドニゾロン、アザチオプリン、タクロリムス、６－メルカプトプリン、サイクロスポリン、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ぺゴールまたはナタリズマブである、上記［２３］に記載の方法；
　［２５］．単回投与で長期間緩解維持効果を発揮する上記［１７］～［２４］のいずれかに記載の方法；
　［２６］．緩解維持効果が、腸炎の再燃もしくは再発の繰り返しを抑制し、緩解状態を維持する効果である上記［２５］に記載の方法；
　［２７］．既存治療薬を単回もしくは複数回投与しても緩解維持しない炎症性腸疾患患者に対して抗ＣＤ８１抗体を投与する、上記［１７］～［２０］のいずれかに記載の方法；
　［２８］．既存治療薬が上記［２３］または［２４］に記載の既存治療薬である、上記［２７］に記載の方法；
　［２９］．治療期間中は２～３０週間に１回投与される、上記［１７］～［２８］のいずれかに記載の方法；
　［３０］．１回の投与量が０．０１～１５ｍｇ／ｋｇである、上記［２９］に記載の方法；
　［３１］．炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎である、上記［１７］～［３０］のいずれかに記載の方法；および
　［３２］．炎症性腸疾患が、クローン病である、上記［１７］～［３０］のいずれかに記載の方法。
　本発明によって、抗ＣＤ８１抗体が難治性の炎症性腸疾患を予防、改善、治療できること、単回の投与によっても長期間緩解維持効果を有することが明らかとなった。言い換えれば、既存の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）治療剤を単回、複数回投与しても緩解導入効果までしか発揮しない難治性の患者に対しても大きな効果を発揮することが明らかとなった。
　従って、抗ＣＤ８１抗体を有効成分とする薬剤は、単回投与により、炎症性腸疾患の緩解導入効果を示すのみならず、長期間緩解維持効果を示すことで緩解維持用薬剤として、また、難治性の炎症性腸疾患の予防、改善、治療用薬剤として利用することができる。更に、抗ＣＤ８１抗体の単回投与により、炎症性腸疾患の緩解導入効果を発揮するのみならず、長期間緩解維持効果を示すことで緩解維持方法として、また、難治性の炎症性腸疾患の予防、改善、治療方法として利用することができる。
図１（ａ）は、実施例１の薬理試験において、マウス再燃緩解型潰瘍性大腸炎モデルに対してハムスターＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ８１抗体のそれぞれを単回投与した場合の大腸炎症状の経日変化を、図１（ｂ）は、マウス再燃緩解型潰瘍性大腸炎モデルに対してラットＩｇＧ抗体及びラット抗ＴＮＦ－α抗体のそれぞれを単回投与した場合、並びにスルファサラジンを毎日投与した場合の大腸炎症状の経日変化を示したグラフである。 図２は、実施例２の薬理試験において、マウス再燃緩解型炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）モデルに対してハムスターＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ８１抗体のそれぞれを単回投与した場合、並びにスルファサラジンを毎日投与した場合の大腸炎症状の経日変化を示したグラフである。 図３は、実施例３の薬理試験において、マウス再燃緩解型潰瘍性大腸炎モデルに対してハムスターＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ８１抗体のそれぞれを単回投与した場合の大腸炎症状の経日変化を示したグラフである。 図４は、実施例４の薬理試験において、マウス再燃緩解型潰瘍性大腸炎モデルに対してハムスターＩｇＧ抗体、抗ＣＤ８１抗体クローン２Ｆ７及び抗ＣＤ８１抗体クローンＥａｔ２のそれぞれを単回投与した場合の大腸炎症状の経日変化を示したグラフである。
　以下の本発明を詳細に説明する。
（１）抗ＣＤ８１抗体
　本発明における抗ＣＤ８１抗体は、ＣＤ８１を特異的に認識する抗体であればよく、具体的には、ＣＤ８１遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＣＤ８１」ともいう）を特異的に認識することのできる抗体であればよい。
　ここにおいて、ＣＤ８１とは、ヒトＣＤ８１を示す特定のアミノ酸配列（配列番号２(NP_004347)）で示される「タンパク質」または「（ポリ）ペプチド」だけでなく、これらと生物学的機能が同等であることを限度として、その同族体（ホモログやスプライスバリアント）、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などが包含される。ここでホモログとしては、ヒトのタンパク質に対応するマウスやラットなど他生物種のタンパク質が例示でき、これらはhttp://www.ncbi.nlm.nih.govに掲載された遺伝子の塩基配列（配列番号１(NM_004356)）から演繹的に同定することができる。また変異体には、天然に存在するアレル変異体、天然に存在しない変異体、及び人為的に欠失、置換、付加または挿入されることによって改変されたアミノ酸配列を有する変異体が包含される。なお、上記変異体としては、変異のないタンパク質または（ポリ）ペプチドと、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９５％、さらにより好ましくは９７％相同なものを挙げることができる。またアミノ酸修飾体には、天然に存在するアミノ酸修飾体、天然に存在しないアミノ酸修飾体が包含され、具体的にはアミノ酸のリン酸化体が挙げられる。
　本発明で用いられる上記抗体には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体が含まれる。重鎖の定常ドメインのタイプに依存して、抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭである。これらのうちのいくらかは、さらに、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのようなサブクラスまたはイソタイプに分けられる。
　好ましくは、本発明の抗体はモノクローナル抗体である。これらにはヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、またはＦａｂフラグメントやＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメント、低分子化抗体（抗体断片も含む）、多特異性抗体等、さらに抗体修飾物が含まれる。また抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。
　「特異的に認識する」とは、ＣＤ８１に結合することを意味する。
　本発明で使用される抗ＣＤ８１抗体は、例えば市販の抗ＣＤ８１抗体（ファーミンジェン社製、サンタクルーズ社製、バイオレジェンド社製、サザンバイオテクノロジー社製、アンセル社製、モルフォシス社製、ケミコン社製、アブカム社製、イムノテック社製、Ｒ＆Ｄ社製など）を使用することもできるし、公知の手段を用いて製造されるポリクローナル又はモノクローナル抗体であってもよい。
　本発明で使用される抗ＣＤ８１抗体として、特に哺乳動物由来のモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が好ましい。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体は当業者に公知の方法によって作製することができる。
　哺乳動物由来のモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体としては、動物の血中に産生されるもの、ハイブリドーマによって産生されるもの、および遺伝子工学的手法により抗体遺伝子を含む発現ベクターで形質転換した宿主によって産生されるもの、ファージディスプレイにより１兆個の分子からなる莫大なクローンライブラリーから最適抗体がスクリーニングされ、その遺伝子をＣＨＯ細胞工場で大量生産されるもの、もしくは、ヒトの抗体を生産するトランスジェニックマウスを使い、直接ヒト抗体が得られるものなどが挙げられる。
　ポリクローナル抗体の作製のために本発明の抗ＣＤ８１抗体取得の感作抗原として使用されるタンパク質は、ヒト、マウス、ラットなど、その由来となる動物種に制限されない。しかし細胞融合に使用する親細胞との適合性を考慮して選択することが好ましく、一般的には、哺乳動物由来のタンパク質が好ましく、特にヒト由来のタンパク質が好ましい。例えば、ＣＤ８１がヒトＣＤ８１の場合、ヒトＣＤ８１タンパク質やヒトＣＤ８１を発現する細胞、ヒトＣＤ８１の部分ペプチドなどを用いることができる。また、完全なタンパク質あるいはタンパク質の部分ペプチドであってもよい。タンパク質の部分ペプチドとしては、例えば、タンパク質のアミノ基（Ｎ）末端断片やカルボキシ（Ｃ）末端断片が挙げられる。本発明における抗ＣＤ８１抗体とは、タンパク質の全長又は断片に結合する抗体を意味する。
　例えば、ポリクローナル抗体は、次のようにして得ることができる。すなわち、天然のＣＤ８１タンパク質、あるいはＧＳＴとの融合タンパク質として大腸菌等の微生物において発現させたリコンビナントＣＤ８１タンパク質、またはその部分ペプチドをウサギ等の小動物に免疫し血清を得る。これを、例えば、硫安沈殿、プロテインＡ、プロテインＧカラム、ＤＥＡＥイオン交換クロマトグラフィー、ＣＤ８１タンパク質や合成ペプチドをカップリングしたアフィニティーカラム等により精製することにより調製する。
　抗原の調製は、例えば、バキュロウイルスを用いた方法（例えば、国際公開第ＷＯ９８／４６７７７号など）などに準じて行うことができる。抗原の免疫原性が低い場合には、アルブミン等の免疫原性を有する巨大分子と結合させ、免疫を行えばよい。
　モノクローナル抗体の製造方法としては、公知の方法にしたがって、感作抗原を動物に免疫する。一般的方法として、感作抗原を哺乳動物の腹腔内または皮下に注射することにより行われる。具体的には、感作抗原をＰＢＳ（Phosphate-Buffered Saline）や生理食塩水等で適当量に希釈、懸濁したものに所望により通常のアジュバント、例えばフロイント完全アジュバントを適量混合し、乳化後、哺乳動物に４－２１日毎に数回投与する。また、感作抗原免疫時に適当な担体を使用することもできる。
　このように哺乳動物を免疫し、血清中に所望の抗体レベルが上昇するのを確認した後に、哺乳動物から免疫細胞を採取し、細胞融合に付すが、好ましい免疫細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。前記免疫細胞と融合される他方の親細胞として、哺乳動物のミエローマ細胞を用いる。このミエローマ細胞は、公知の種々の細胞株、例えば、Ｐ３Ｕ１（Ｐ３－Ｘ６３Ａｇ８Ｕ１）、Ｐ３（Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３）（J.Immunol.（1979）123，1548-1550）、Ｐ３ｘ６３Ａｇ８Ｕ．１（Current Topics in Microbiology and Immunology（1978）81，1-7）、ＮＳ－１（Kohler.G．and Milstein，C.，Eur．J．Immunol.（1976）6，511-519）、ＭＰＣ－１１（Margulies．D．H．et al.，Cell（1976）8，405-415）、ＳＰ２／０（Shulman，M．et al.，Nature（1978）276，269-270）、ＦＯ（de St．Groth，S.F．et al.，J.Immunol．Methods（1980）35，1-21）、Ｓ１９４（Trowbridge，I.S.，J．Exp．Med.（1978）148，313-323）、Ｒ２１０（Galfre，G．et al.，Nature（1979）277，131-133）等が好適に使用される。
　前記免疫細胞とミエローマ細胞との細胞融合は、基本的には公知の方法、たとえば、ケーラーとミルステインらの方法（Kohler．G．and Milstein，C.、Methods Enzymol.（1981）73，3-46）等に準じて行うことができる。
　より具体的には、前記細胞融合は、例えば細胞融合促進剤の存在下に通常の栄養培養液中で実施される。融合促進剤としては、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等が使用され、更に所望により融合効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもできる。
　免疫細胞とミエローマ細胞との使用割合は任意に設定することができる。例えば、ミエローマ細胞に対して免疫細胞を１－１０倍とするのが好ましい。前記細胞融合に用いる培養液としては、例えば、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適なＲＰＭＩ１６４０培養液、ＭＥＭ培養液、その他、この種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能であり、さらに、牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を併用することもできる。
　細胞融合は、前記免疫細胞とミエローマ細胞との所定量を前記培養液中でよく混合し、予め３７℃程度に加温したＰＥＧ溶液（例えば平均分子量１０００－６０００程度）を通常３０－６０％（ｗ／ｖ）の濃度で添加し、混合することによって目的とするハイブリドーマを形成する。続いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心して上清を除去する操作を繰り返すことによりハイブリドーマの生育に好ましくない細胞融合剤等を除去する。
　このようにして得られたハイブリドーマは、通常の選択培養液、例えばＨＡＴ培養液（ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む培養液）で培養することにより選択される。上記ＨＡＴ培養液での培養は、目的とするハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅するのに十分な時間（通常、数日～数週間）継続する。ついで、通常の限界希釈法を実施し、目的とする抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニングおよび単一クローニングを行う。
　また、ヒト以外の動物に抗原を免疫して上記ハイブリドーマを得る他に、ヒトリンパ球、例えばＥＢウィルスに感染したヒトリンパ球をｉｎ　ｖｉｔｒｏでタンパク質、タンパク質発現細胞又はその溶解物で感作し、感作リンパ球をヒト由来の永久分裂能を有するミエローマ細胞、例えばＵ２６６と融合させ、所望の活性（例えば、細胞遊走抑制活性）を有するヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることもできる。
　このようにして作製されるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、通常の培養液中で継代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期保存することが可能である。すなわち、所望の抗原や所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞（ハイブリドーマ）をスクリーニングすることによって作製できる。当該ハイブリドーマからモノクローナル抗体を取得するには、当該ハイブリドーマを通常の方法に従い培養し、その培養上清として得る方法、あるいはハイブリドーマをこれと適合性がある哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水として得る方法などが採用される。前者の方法は、高純度の抗体を得るのに適しており、一方、後者の方法は、抗体の大量生産に適している。
　ヒト抗体は、ヒト由来の抗体遺伝子の発現産物である抗体を意味する。ヒト抗体は、例えば、ヒト抗体遺伝子座を導入し、ヒト由来抗体を産生する能力を有するトランスジェニック動物に抗原を投与することにより得ることができる。該トランスジェニック動物としてマウスが挙げられ、ヒト抗体を産生し得るマウスの作出方法は、例えば、国際公開ＷＯ０２／４３４７８号に記載されている。
　本発明におけるモノクローナル抗体には、抗体を構成する重鎖および／または軽鎖の各々のアミノ酸配列において一若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有する重鎖および／または軽鎖からなるモノクローナル抗体も包含される。本発明による抗体のアミノ酸配列中への、このようなアミノ酸の部分的改変（欠失、置換、挿入、付加）は、そのアミノ酸配列をコードする塩基配列を部分的に改変することにより導入することができる。この塩基配列の部分的改変は、既知の部位特異的変異導入法（Site specific mutagenesis）を用いて常法により導入することができる（Proc．Natl．Acsd．Sci．USA.，1984 Vol81，5662; Sambrook et al.，Molecular Cloning A Laboratory Manual (1989) Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press)。
　本発明では、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体も使用できる。これらの改変抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。
　キメラ型抗体は、異なる動物種に由来する２以上の部分の結合によって特徴づけられる免疫グロブリン分子である。一般に、キメラ型抗体の可変領域（Ｖ領域）は、ヒト以外の哺乳類抗体（例えばマウスモノクローナル抗体）に由来し、その免疫グロブリン定常領域（Ｃ領域）は、ヒト免疫グロブリン分子に由来する。好ましくは、低免疫原性を持つ可変領域を選択し、それを、やはり低免疫原性を持つヒト定常領域と組み合わせる。そして、その組み合わせもまた、低い免疫原性を持つことが好ましい。キメラ型抗体には、一価、二価又は多価免疫グロブリンが含まれる。一価のキメラ型抗体は、ジスルフィド橋を介してキメラＬ鎖と結合したキメラＨ鎖によって形成される二量体（ＨＬ）である。二価のキメラ型抗体は、少なくとも１つのジスルフィド橋を介して結合した２つのＨＬ二量体によって形成される四量体（Ｈ２Ｌ２）である。
　キメラ型抗体及びそれらの製造方法は、当該技術分野で既に記述されている（Morrison et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81:6851～6855(1984)；Boulianne et al.，Nature 312：643～646(1984)；Liu et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84 :3439～3443(1987)；Sun et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，84:214～218(1987)；Better et al.，Science 240:1041～1043(1988)；及びHarlowとLane，ANTIBODIES: ALABORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory(1988)）。
　ヒト化抗体は、再構成（reshaped）ヒト抗体とも称され、ヒト以外の哺乳動物、例えばマウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒト抗体の相補性決定領域へ移植したものであり、その一般的な遺伝子組換え手法も知られている（欧州特許出願公開番号ＥＰ１２５０２３号明細書、国際公開第ＷＯ９２－１９７５９号参照）。ヒト化抗体の製造方法としては、公知の方法を用いて行うことができる。例えば、マウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ；framework region）を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡとヒト抗体Ｃ領域をコードするＤＮＡとを連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開番号ＥＰ２３９４００号明細書、国際公開第ＷＯ９２－１９７５９号参照）。ＣＤＲを介して連結されるヒト抗体のフレームワーク領域は、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するように選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Sato，K．et al.，Cancer Res．(1993) 53，851-856）。
　キメラ抗体、ヒト化抗体には、ヒト抗体Ｃ領域が使用される。ヒト抗体Ｃ領域としては、Ｃγが挙げられ、例えば、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３又はＣγ４を使用することができる。また、抗体又はその産生の安定性を改善するために、ヒト抗体Ｃ領域を修飾してもよい。キメラ抗体はヒト以外の哺乳動物由来抗体の可変領域とヒト抗体由来のＣ領域からなり、ヒト化抗体はヒト以外の哺乳動物由来抗体の相補性決定領域とヒト抗体由来のフレームワーク領域およびＣ領域からなり、ヒト体内における抗原性が低下しているため、本発明に使用される抗体として有用である。
　本発明で使用される抗体は、本発明に好適に使用され得るかぎり、抗体の断片やその修飾物であってよい。例えば、抗体の断片としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はＨ鎖とＬ鎖のＦｖを適当なリンカーで連結させたシングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）ダイアボディ、低分子化抗体、一本鎖抗体等が挙げられる。
　低分子化抗体は、全長抗体（whole antibody、例えばｗｈｏｌｅ　ＩｇＧ等）の一部分が欠損している抗体断片を含み、抗原（ＣＤ８１タンパク質）への結合能を有していれば特に限定されない。抗体断片は、全長抗体の一部分であれば特に限定されないが、重鎖可変領域（ＶＨ）又は／及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでいることが好ましい。
　一本鎖抗体とは、「単鎖Ｆｖ」すなわち「ｓＦｖ」抗体フラグメントとも呼ばれ、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含有し、これらのドメインはポリペプチド単鎖に存在する。「Ｆｖ」断片は最小の抗体断片であり、完全な抗原認識部位と結合部位を含む。一般的に「Ｆｖ」断片は１つのＶＨおよびＶＬが非共有結合により強く連結されたダイマー（ＶＨ－ＶＬダイマー）である。各可変領域の３つの相補性決定領域（complementarity determining region；ＣＤＲ）が相互作用し、ＶＨ－ＶＬダイマーの表面に抗原結合部位を形成する。６つのＣＤＲが抗体に抗原結合部位を付与している。しかしながら、１つの可変領域（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、全結合部位よりも親和性は低いが、抗原を認識し、結合する能力を有する。Ｆｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗体結合のための所望の構造を形成できるように、ＶＨとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含んでいる（Pluckthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，vol．113，Rosenberg and Moore eds．Springer-Verlag，New York，pp．269-315（1994））。
　低分子抗体や一本鎖抗体の製造方法は、例えば、抗体を酵素、例えば、パパイン、ペプシンで処理し抗体断片を生成させるか、又は、これら抗体断片をコードする遺伝子を構築し、これを発現ベクターに導入した後、適当な宿主細胞で発現させる（例えば、Co，M．S．et al.，J．Immunol．(1994) 152，2968-2976、Better，M．& Horwitz，A．H．Methods in Enzymology (1989) 178，476-496、Plueckthun，A．& Skerra，A．Methods in Enzymology (1989) 178，497-515、Lamoyi，E.，Methods in Enzymology (1986) 121，652-663、Rousseaux，J．et al.，Methods in Enzymology (1986) 121，663-669、Bird，R．E．et al.，TIBTECH (1991) 9，132-137参照）。
　ｓｃＦｖは、抗体のＨ鎖Ｖ領域とＬ鎖Ｖ領域を連結することにより得られる。これらの領域は単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、ＦｖポリペプチドはさらにＶＨおよびＶＬの間にポリペプチドリンカーを含んでおり、これによりｓｃＦｖは、抗原結合のために必要な構造を形成することができる（ｓｃＦｖの総説については、Pluckthun“The Pharmacology of Monoclonal Antibodies”Vol.113（Rosenberg and Moore eds. (Springer Verlag，New York) pp.269-315，1994）を参照）。リンカーは、その両端に連結された抗体可変領域の発現を阻害するものでなければ特に限定されない。
　このｓｃＦｖにおいて、Ｈ鎖Ｖ領域とＬ鎖Ｖ領域はリンカー、好ましくは、ペプチドリンカーを介して連結される（Huston，J．S．et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．(1988) 85，5879-5883）。ｓｃＦｖにおけるＨ鎖Ｖ領域およびＬ鎖Ｖ領域は、上記抗体として記載されたもののいずれの由来であってもよい。Ｖ領域を連結するペプチドリンカーとしては、例えばアミノ酸１２－１９残基からなる任意の一本鎖ペプチドが用いられる。
　ｓｃＦｖをコードするＤＮＡは、前記抗体のＨ鎖又は、Ｈ鎖Ｖ領域をコードするＤＮＡ、およびＬ鎖又は、Ｌ鎖Ｖ領域をコードするＤＮＡを鋳型とし、それらの配列のうちの所望のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ部分を、その両端を規定するプライマー対を用いてＰＣＲ法により増幅し、次いで、さらにペプチドリンカー部分をコードするＤＮＡおよびその両端を各々Ｈ鎖、Ｌ鎖と連結されるように規定するプライマー対を組み合せて増幅することにより得られる。また、一旦ｓｃＦｖをコードするＤＮＡが作製されれば、それらを含有する発現ベクター、および該発現ベクターにより形質転換された宿主を常法に従って得ることができ、また、その宿主を用いて常法に従って、ｓｃＦｖを得ることができる。
　ダイアボディは、遺伝子融合により構築された二価（bivalent）の抗体断片を指す（Holliger，P．et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA90：6444-6448(1993)、欧州特許出願公開第４０４０９７号明細書、国際公開第ＷＯ９３／１１１６１号等）。ダイアボディは、２本のポリペプチド鎖から構成されるダイマーであり、通常、ポリペプチド鎖は各々、同じ鎖中でＶＬ及びＶＨが、互いに結合できない位に短い、例えば、５残基程度のリンカーにより結合されている。同一ポリペプチド鎖上にコードされるＶＬとＶＨとは、その間のリンカーが短いため単鎖可変領域フラグメントを形成することが出来ず二量体を形成するため、ダイアボディは２つの抗原結合部位を有することとなる。
　ｓｃ（Ｆｖ）２は、２つのＶＨ及び２つのＶＬをリンカー等で結合して一本鎖にした低分子化抗体である（Hudson et al.，J Immunol．Methods 1999；231：177-189）。ｓｃ（Ｆｖ）２は、例えば、ｓｃＦｖをリンカーで結ぶことによって作製できる。
　本発明において、抗体の可変領域を結合するリンカーとしては、遺伝子工学により導入し得る任意のペプチドリンカー、又は合成化合物リンカー（例えば、Protein Engineering，9(3)，299-305，1996参照）に開示されるリンカー等を用いることができる。ペプチドリンカーを用いる場合、その長さは特に限定されず、目的に応じて当業者が適宜選択することが可能であるが、通常、１～１００アミノ酸、好ましくは３～５０アミノ酸、更に好ましくは５～３０アミノ酸、特に好ましくは１２～１８アミノ酸（例えば、１５アミノ酸）である。合成化学物リンカー（化学架橋剤）は、ペプチドの架橋に通常用いられている架橋剤、例えばＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ３）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ＤＳＰ）、ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシネート）（スルホ－ＥＧＳ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジル酒石酸塩（スルホ－ＤＳＴ）、ビス［２－（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、ビス［２－（スルホスクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（スルホ－ＢＳＯＣＯＥＳ）などであり、これらの架橋剤は市販されている。
　これら抗体の断片は、前記と同様にしてその遺伝子を取得し発現させ、宿主により産生させることができる。本願特許請求の範囲でいう「抗体」にはこれらの抗体の断片も包含される。
　抗体の修飾物として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の各種分子と結合した抗体を使用することもできる。本願特許請求の範囲でいう「抗体」にはこれらの抗体修飾物も包含される。このような抗体修飾物を得るには、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。これらの方法はこの分野においてすでに確立されている。
　前記のように産生、発現された抗体は、細胞内外、宿主から分離し均一にまで精製することができる。本発明で使用される抗体の分離、精製はアフィニティークロマトグラフィーにより行うことができる。アフィニティークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、例えば、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムが挙げられる。プロテインＡカラムに用いる担体として、例えば、ＨｙｐｅｒＤ、ＰＯＲＯＳ、ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ．Ｆ．等が挙げられる。その他、通常のタンパク質で使用されている分離、精製方法を使用すればよく、何ら限定されるものではない。
　例えば、上記アフィニティークロマトグラフィー以外のクロマトグラフィー、フィルター、限外濾過、塩析、透析等を適宜選択、組み合わせれば、本発明で使用される抗体を分離、精製することができる。クロマトグラフィーとしては、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルろ過等が挙げられる。これらのクロマトグラフィーはＨＰＬＣ（High performance liquid chromatography）に適用し得る。また、逆相ＨＰＬＣを用いてもよい。
（２）炎症性腸疾患
　炎症性腸疾患とは、腸が炎症を起こし、腹部の激しい痛みと下痢を繰り返し起こす状態の疾患であり、その病態から潰瘍性大腸炎（Ulcerative colitis；ＵＣと略される）とクローン病（Crohn's disease；ＣＤと略される）とに分類されるが、共に長期にわたり、多くが緩解、再燃を繰り返す疾患である。
　現在、炎症性腸疾患の治療用医薬品の効能効果としては、例えば、免疫抑制剤であるアザチオプリン（azathioprine）は、日本においては、「ステロイド依存性のクローン病の緩解導入及び緩解維持並びにステロイド依存性の潰瘍性大腸炎の緩解維持」として承認され、免疫抑制剤であるタクロリムス（tacrolimus）は、日本においては、「難治性（ステロイド抵抗性、ステロイド依存性）の活動期潰瘍性大腸炎（中等症～重症に限る）」として承認されている。また、抗ＴＮＦ抗体であるインフリキシマブ（infliximab）は、日本においては、クローン病に対して「栄養療法、他の薬物療法（５－アミノサリチル酸製剤等）等の適切な治療を行っても、疾患に起因する明らかな臨床症状が残る場合に本剤の投与を行うこと。」とされている。また、該医薬品は、米国においては、クローン病については、「通常の治療に抵抗性の中等度～重症の成人あるいは若年性活動性クローン病患者における徴候と症状の抑制と緩解導入および維持。ろう孔を伴う成人クローン病患者の外腸瘻数および直腸膣瘻の減少とろう孔の閉塞の維持」として、潰瘍性大腸炎については、「通常の治療に抵抗性の中等度～重症の活動性潰瘍性大腸炎患者における徴候と症状の抑制、臨床的緩解と粘膜治癒の導入および維持」として承認を受けている。
　このように、炎症性腸疾患の治療には、緩解導入と緩解維持という用途が認められ、さらに、軽症～重症の概念、既存の薬剤に抵抗性のある、難治性等の疾患の状態の区別が認められている。ここにおいて、緩解導入とは、血便、腸管の潰瘍やびらん、ＱＯＬの低下などの活動期病変に緩解を導入することを意味する。また、緩解維持とは、活動期病変の再燃／再発の繰り返しを抑制し、出来るだけ長期に緩解状態を維持することを意味する。ここで、「緩解」とは、炎症性腸疾患の症状である下痢、下血、腹痛、発熱、体重減少、肛門痛等の病勢をＣＤＡＩ（Crohn's disease activity index）、ＩＯＩＢＤアセスメントスコア、Ｄｕｔｃｈ　ＡＩ、潰瘍性大腸炎活動性指数などの活動指数として示し、活動指数が改善されることを意味する。
　難治性とは、栄養療法や他の薬物療法等の通常の治療を適切に行っていても、再燃を繰り返したり、慢性に病勢が持続する等の疾患に起因する臨床症状が残る状態を意味する。「慢性に病勢が持続する」とは、治療開始後６ヶ月以上症状が持続している状態を意味し、ステロイド依存性またはステロイド抵抗性等の通常の治療に抵抗性又は耐性の状態（疾患）が含まれる。
　通常の治療に使用される既存治療薬としては、５－アミノサリチル酸製剤（例えば、サラゾスルファピリジン、スルファサラジン、メサラジン）、ステロイド（例えば、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、リン酸ベタメタゾン、プレドニゾロン）、免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、タクロリムス、６－メルカプトプリン、サイクロスポリン）、ＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ぺゴール）、インテグリン阻害剤（例えば、ナタリズマブ）が例示できる。
　本発明においては、ＩＢＤの中でも再燃緩解型の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に対して、単回投与で、長期間に亘って緩解維持効果を有し、改善または治療に有効である抗ＣＤ８１抗体を有効成分とする薬剤を提供する。本発明において、再燃とは、炎症性腸疾患の症状が治まった後の一定期間後に再度症状が現れることを意味し、再発も同様の意味を有する。
　特許文献２（国際公開番号ＷＯ／２００５／０２１７９２号）には、ＣＤ８１がＩＢＤ惹起性細胞に高発現しており、抗ＣＤ８１抗体が、初回発作型のマウス大腸炎モデルに対して治療効果を示すという新たな知見が示されている。しかしながら、国際公開番号ＷＯ／２００５／０２１７９２号には、抗ＣＤ８１抗体が、再燃（再発）と緩解を繰り返す再燃緩解型および慢性持続型の難治性炎症性腸疾患の予防、改善または治療にも有効であるということについてまでは、明らかにされていない。本発明者は、再燃緩解型症状の炎症性腸疾患を示す新たな動物モデルを作製し、この動物モデルに対して、抗ＣＤ８１抗体を単回投与するだけで、長期間に亘って腸炎の持続と再燃（再発）を抑制できることを新たに見出した。本発明は、抗ＣＤ８１抗体が再燃緩解型（再燃（再発）と緩解を繰り返す症状）および慢性持続型の難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療にも有効であるという新たな知見に基づくものである。
　したがって、本発明が提供するＩＢＤの緩解維持用薬剤乃至難治性のＩＢＤの予防、改善および治療用薬剤は、既存の治療剤が有さない緩解維持効果を有する抗ＣＤ８１抗体を有効成分とするものである。言い換えれば既存の治療剤では単回もしくは複数回投与しても再燃（再発）と緩解を繰り返す症状が予防、改善または治療されない患者に対して、単回の投与でも上記症状が予防、改善または治療できるものである。
　抗ＣＤ８１抗体を有効成分として含有する薬剤は、経口、非経口投与のいずれでも可能であるが、好ましくは非経口投与であり、具体的には、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身または局部的に投与することができる。投与量は、有効成分の種類、投与経路、投与対象または患者の年齢、体重、症状などによって異なり一概に規定できないが、通常、１回投与用量として、０．０１～１５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１～１５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、３～５ｍｇ／ｋｇを、または、好ましくは０．０１～５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．０５～５ｍｇ／ｋｇを、投与間隔としては、その効果が続く限り次の投与は行わずともよい。例えば、治療期間中は２～３０週間、２～１５週間、２～１３週間、２～１０週間または２～８週間に１回投与される、或いは、数週間もしくは数ヶ月に１回、１年若しくは数年に一回の頻度でよい場合もある。言い換えれば、抗ＣＤ８１抗体は、通常、１回投与用量として、０．０１～１５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１～１５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、３～５ｍｇ／ｋｇ、または、好ましくは０．０１～５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．０５～５ｍｇ／ｋｇを投与することにより、２～１３週間、２～１０週間または２～８週間の長期間に亘って緩解維持効果を発揮することができる。また薬効が十分に得られない、あるいは薬効が減弱した場合は、上記を１サイクルとして、複数回（例えば、２～５回程度）投与を行い、薬効を達成・維持させることも可能である。
　抗ＣＤ８１抗体を有効成分として含有する薬剤自体は、公知の製剤学的方法により製剤化した薬剤として投与を行う。例えば、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で使用できる。また、例えば、薬理学上許容される担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、ベヒクル、防腐剤などと適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
　注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ－５０と併用してもよい。
　油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
　次に、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。しかし、本発明はこれらの実施例になんら限定されるものではない。
実施例１
抗ＣＤ８１抗体単回投与によるＤＳＳ（デキストラン硫酸水溶液）誘発マウス大腸炎モデルに対する再燃抑制効果
　マウスにＤＤＳ（デキストラン硫酸水溶液）を投与して再燃緩解型の潰瘍性大腸炎を誘発し、この再燃緩解型潰瘍性マウス大腸炎モデルに、抗ＣＤ８１抗体を単回投与し、既存治療剤である抗ＴＮＦ－α抗体の単回投与及びサルファサラジンの複数回投与と比較し、抗ＣＤ８１抗体を単回投与した場合の潰瘍性大腸炎の再燃（再発）抑制効果について調べた。
１．方法
（１）ＤＳＳの調製
　デキストラン硫酸（TdB consultancy AB社製、平均分子量４７，０００）を飲料水に溶解し、１％水溶液に調製した。
（２）投与液の調製
　対象検体薬として、ハムスター抗ＣＤ８１抗体、ラット抗ＴＮＦ－α抗体およびスルファサラジンを用い、病態コントロール検体薬として、ラットＩｇＧ及びハムスターＩｇＧを用いた。
　ハムスター抗ＣＤ８１抗体（Clone:2F7、Southernbiotech社製、マウスＣＤ８１に対するモノクローナル抗体）とラットＩｇＧは原液を濃縮した液に、ラット抗ＴＮＦ－α抗体とハムスターＩｇＧは原液にリン酸バッファーを添加して、０．２５ｍｇ／ｍｌ投与液とした。スルファサラジン（シグマ社製）は、メチルセルロース（ナカライテスク社製）を注射用蒸留水（大塚製薬社製）で、０．５％に溶解した水溶液に、２０ｍｇ／ｍｌでスルファサラジンを懸濁し投与液とした。
（３）群分け、ＤＳＳ摂取および投薬
　４週齢のマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒｊ、♂、日本チャールズリバー社製）を購入し、６日間の検疫飼育後に異常の観察されなかったマウスの体重を測定し、１群１０匹で６群に群分けした。群分け日から５日間、１％ＤＳＳを５群のマウスに自由摂取させ（１回目ＤＳＳ摂取）、１群は正常マウス群として、通常飲料水を摂取させた。５日間、ＤＳＳを摂取させた後に、６群全てのマウスに通常飲料水を５日間、摂取させた。通常飲料水摂取後に、５日間、１％ＤＳＳを５群のマウスに自由摂取させ（２回目ＤＳＳ摂取）、１群は正常マウス群として通常飲料水を摂取させた後に試験を終了とした。群分け日に、０．５ｍｇ／マウスで、ハムスターＩｇＧ、ラットＩｇＧ、抗ＣＤ８１抗体、抗ＴＮＦ抗体を腹腔内に１回投与した。群分け日から試験終了日の前日までに、１日１回、スルファサラジン投与液を２００ｍｇ／ｋｇで経口投与した。
（４）大腸炎症状スコア判定
　群分け日から試験終了日までの大腸炎症状観察を行った。大腸炎症状は便の状態（正常便（スコア：０）、軟便（スコア：１）、下痢（スコア：２））でスコア判定した。
（５）潰瘍スコア判定
　実験終了日に、全群のマウス尾静脈に０．１ｍｌの２．５％ブリリアントブルー６Ｂ液を静注した。静注１０分後に炭酸ガスで安楽死処分し、心臓採血にて脱血した。肛門の２ｃｍ上から４ｃｍまでの大腸を摘出し、生理食塩水でよく洗い、ろ紙に挟み７５％エタノールで３０分間固定化し、５％過酸化水素含有生理食塩水で１０分間浸した。その後、エタノール液でよく洗い、潰瘍の大きさを測定した。１平方ミリ以上の潰瘍があるマウスを潰瘍スコア「１」、１平方ミリ以上の潰瘍がないマウスを潰瘍スコア「０」とした。
２．結果
（１）大腸炎症状スコア判定による大腸炎症状の経日変化
　図１（ａ）に、ハムスターＩｇＧ及びハムスター抗ＣＤ８１抗体のそれぞれを単回投与した場合、並びに通常飲料水を摂取させた場合（正常群）の大腸炎症状スコア判定による大腸炎症状の経日変化を、図１（ｂ）に、ラットＩｇＧ及びラット抗ＴＮＦ－α抗体をそれぞれ単回投与した場合、並びにスルファサラジンを毎日投与した場合の大腸炎症状スコア判定による大腸炎症状の経日変化を示した。図１（ａ）及び図１（ｂ）において、Ｄａｙ０が群分け日、Ｄａｙ０から４までが１回目ＤＳＳ摂取期間、Ｄａｙ５から９までが通常飲料水摂取期間、Ｄａｙ１０から１４までが２回目ＤＳＳ摂取期間に相当する。
　図１（ａ）のハムスターＩｇＧ投与群及び図１（ｂ）のラットＩｇＧ投与群から明らかなように、ＤＳＳ１回目摂取時の大腸炎症状は、図１（ａ）及び図１（ｂ）のＤａｙ５からＤａｙ９に１回目の症状ピーク（初回大腸炎）として認められ、２回目再燃時の腸炎症状（再燃大腸炎）は、図１（ａ）及び図１（ｂ）のＤａｙ１０からＤａｙ１４に認められた。そして、スルファサラジンを毎日投与した場合及びラット抗ＴＮＦ－α抗体を単回投与した場合の初回大腸炎及び再燃大腸炎の抑制効果に比べて、ハムスター抗ＣＤ８１抗体を単回投与した場合には、初回大腸炎及び再燃大腸炎の強い抑制効果が認められた。
（２）大腸炎症状スコア判定および潰瘍スコア判定
　図１（ａ）及び図１（ｂ）の大腸炎症状の経日変化の結果に基づき、Ｄａｙ５からＤａｙ９の各マウスの平均した大腸炎スコアを初回大腸炎スコアとし、Ｄａｙ１０からＤａｙ１４の各マウスの平均した大腸炎スコアを再燃大腸炎スコアとした。そして、各群の大腸炎スコア（初回大腸炎スコア及び再燃大腸炎スコア）と潰瘍スコアを、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの検定で病態コントロール群（ハムスターＩｇＧ投与群）との２群比較を行った。それらの結果を表１と表２に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表１および２の結果から明らかなように、抗ＣＤ８１抗体の単回投与により、既存治療薬である抗ＴＮＦ－α抗体の単回投与及びスルファサラジンの毎日投与に比べて、有意に、初回大腸炎及び再燃大腸炎の症状を強力に抑制することができ、また、初回大腸炎及び再燃大腸炎の後において、大腸潰瘍を強力に抑制することができた。従って、抗ＣＤ８１抗体の単回投与により、潰瘍性大腸炎などの再燃緩解型の炎症性腸疾患に対して、長期間に亘って緩解維持効果が発揮されることが明らかとなった。
実施例２
抗ＣＤ８１抗体のＴＮＢＳ（２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸）誘発マウス大腸炎モデルに対する長期間緩解効果
　マウスにＴＮＢＳを投与して得られる再燃緩解型炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）モデルに、抗ＣＤ８１抗体を単回投与し、既存治療剤であるサルファサラジンの複数回投与と比較し、抗ＣＤ８１抗体を単回投与した場合の炎症性腸疾患の再燃（再発）抑制効果について調べた。
１．方法
（１）ＴＮＰ－ＯＶＡの調製
　卵白アルブミン（ＯＶＡ：Ｓｉｇｍａ）０．５ｇとＫ２ＣＯ３（ナカライテスク）０．５ｇを２５ｍｌ注射用蒸留水に溶解した（ＯＶＡ溶液）。２５ｍｌの０．１ＭＫ２ＣＯ３に２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ：ナカライテスク）０．５ｇを溶解した（ＴＮＢＳ溶液）。ＯＶＡ溶液とＴＮＢＳ溶液を混合し、室温で一晩攪拌した。攪拌した溶液を透析膜（Spectra/Por Membrane MWCO:10,000、Spectrum Medical Industries Inc.）で０．０１ＭＮａＨＣＯ３（ナカライテスク）に透析した。透析した溶液をＢＣＡタンパクアッセイ試薬（Peirce）でタンパク定量した。
（２）群分け、感作、チャレンジ、再燃および投薬
　５週齢のマウス（ＳＪＬ／ＪｏｒｌＩｃｏＣｒｊ、♂、日本チャールス．リバー）背部に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ：Difco Laboratories）と２ｍｇ／ｍｌＴＮＰ－ＯＶＡの１：１乳化液を０．１ｍｌ／ｈｅａｄで皮下注射（感作）した。感作７日後に１０ｍｇ／ｍｌＴＮＢＳ５０％エタノール溶液をエーテル麻酔下で注腸（０．２ｍｌ／ｈｅａｄを肛門より３ｃｍまでゾンデを挿入して注入：チャレンジ）した。チャレンジ６日後の体重と症状スコアで１群７匹、４群で群分けした。群分け２１日後に１日絶食させ、２３日後に１０ｍｇ／ｍｌＴＮＢＳ５０％エタノール溶液をエーテル麻酔下で再度、注腸（０．２ｍｌ／ｈｅａｄを肛門より３ｃｍまでゾンデを挿入して注入：チャレンジ）した。群分け２８日後に試験を終了した。
　４群は、それぞれ、１ｍｇ（０．２ｍｌ）／ｈｅａｄ抗ＣＤ８１抗体溶液（Clone:2F7、Southernbiotech社製）投与群、０．１ｍｇ（０．２ｍｌ）／ｈｅａｄ抗ＣＤ８１抗体溶液（Clone:2F7、Southernbiotech社製）投与群、０．２ｍｌ／ｈｅａｄコントロール抗体投与病態コントロール群、２００ｍｇ／ｋｇスルファサラジン（ＳＳＺ：Ｓｉｇｍａ）投与群を設定した。コントロール抗体として、ハムスターＩｇＧを用いた。
　投薬は抗体投与群と病態コントロール群には群分け日に単回、腹腔内投与し、ＳＳＺは群分け日から１日１回連日経口投与した。群分け２８日後に実験を終了した。ＳＳＺ溶液は０．５％メチルセルロース（ナカライテスク）溶液に懸濁した。
（３）症状スコア判定
　群分け（抗ＣＤ８１抗体の単回投与後）１５日目から２８日目までの大腸炎症状観察を行い効果の持続を調べた。腸炎症状は便の状態（正常便（スコア：０）、軟便（スコア：１）、下痢（スコア：２））でスコア判定した。死亡個体は結果より除いた。統計処理はＷｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定で病態コントロール群と抗ＣＤ８１抗体投与群あるいはＳＳＺ投与群での２群比較を行った。
２．結果
　群分け（抗ＣＤ８１抗体の単回投与後）１５日目から２８日目までの大腸炎症状スコアの各群の平均値と標準誤差（ＳＥＭ）を表３に示した。また、図２に、ハムスターＩｇＧ単回投与群、１ｍｇ（０．２ｍｌ）／ｈｅａｄ抗ＣＤ８１抗体単回投与群、並びにスルファサラジン毎日投与群の大腸炎症状の経日変化を示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　表３の結果から、抗ＣＤ８１抗体（１ｍｇ／ｈｅａｄ）単回投与後の１５日目から２８日目までで、ＴＮＢＳ誘発大腸炎マウスの腸炎症状の改善効果が持続されていたことが判った。また、図２の結果から、抗ＣＤ８１抗体を１回、炎症性腸疾患モデルに投与することで、長期間に亘って緩解維持効果を発揮することがわかった。
実施例３
抗ＣＤ８１抗体単回投与によるＤＳＳ（デキストラン硫酸水溶液）誘発マウス大腸炎モデルに対する再燃抑制効果
　マウスにＤＳＳ（デキストラン硫酸水溶液）を投与して得られる再燃緩解型潰瘍性大腸炎モデルに、抗ＣＤ８１抗体を単回投与し、より長期間に亘って再燃緩解型潰瘍性大腸炎を誘発した場合の抗ＣＤ８１抗体の再燃抑制効果について調べた。
１．方法
（１）ＤＳＳの調製
　デキストラン硫酸（和光純薬社製、平均分子量５，０００）を飲料水に溶解し、２％水溶液に調製した。
（２）投与液の調製
　対象検体薬としてハムスター抗ＣＤ８１抗体を、病態コントロール検体薬としてハムスターＩｇＧを用いた。ハムスター抗ＣＤ８１抗体（Clone:2F7、Southernbiotech社製）は原液を濃縮した液を投与液とし、ハムスターＩｇＧは原液にリン酸バッファーを添加して０．２５ｍｇ／ｍｌ投与液とした。
（３）群分け、ＤＳＳ摂取および投薬
　４週齢のマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒlＣｒｌｊ、♂、日本チャールズリバー社製）を購入し、７日間の検疫飼育後、7日間の通常飼育後にマウスの体重を測定し、１群６匹で２群に群分けした。群分け日に、０．５ｍｇ／マウスで、ハムスターＩｇＧまたは抗ＣＤ８１抗体を腹腔内に１回投与した。群分け日から５日間、２％ＤＳＳを全てのマウスに自由摂取させた後に（１回目ＤＳＳ摂取）、通常飲料水を１０日間摂取させた。次に５日間、２％ＤＳＳを全てのマウスに自由摂取させた後に（２回目ＤＳＳ摂取）、通常飲料水を９日間摂取させた。次に５日間、２％ＤＳＳを全てのマウスに自由摂取させた後に（３回目ＤＳＳ摂取）、通常飲料水を１６日間摂取させた。次に７日間、２％ＤＳＳを全てのマウスに自由摂取させて（４回目ＤＳＳ摂取）、試験を終了した。
（４）大腸炎症状スコア判定
　群分け日から試験終了日までの大腸炎症状観察を行った。大腸炎症状は便の状態（正常便（スコア：０）、軟便（スコア：１）、下痢（スコア：２））でスコア判定した。
２．結果
　図３に、ハムスターＩｇＧ及びハムスター抗ＣＤ８１抗体のそれぞれを単回投与した場合の大腸炎症状スコア判定による大腸炎症状の経日変化を示した。図３において、Ｄａｙ０が群分け日、Ｄａｙ０からＤａｙ５までが１回目ＤＳＳ摂取期間、Ｄａｙ１５からＤａｙ２０までが２回目ＤＳＳ摂取期間、Ｄａｙ２９からＤａｙ３４までが３回目ＤＳＳ摂取期間、Ｄａｙ５０からＤａｙ５６までが４回目ＤＳＳ摂取期間に相当する。図３から明らかなように、抗ＣＤ８１抗体はＤａｙ０に１回投与したのみで、初回ＤＳＳ誘発大腸炎の抑制に加え、その後の３回のＤＳＳ誘発大腸炎の再発を抑制し改善する長期緩解維持効果が認められた。
実施例４
抗ＣＤ８１抗体単回投与によるＤＳＳ（デキストラン硫酸水溶液）誘発マウス大腸炎モデルに対する再燃抑制効果
　マウスにＤＳＳ（デキストラン硫酸水溶液）を投与して得られる再燃緩解型潰瘍性大腸炎モデルに、抗ＣＤ８１抗体クローン２Ｆ７またはクローンＥａｔ２を単回投与し、再燃緩解型潰瘍性大腸炎を複数回誘発した場合の抗ＣＤ８１抗体の各クローンの再燃抑制効果について調べた。
１．方法
（１）ＤＳＳの調製
　デキストラン硫酸（和光純薬社製、平均分子量５，０００）を飲料水に溶解し、２％水溶液に調製した。
（２）投与液の調製
　対象検体薬として、２種類のハムスター抗ＣＤ８１抗体を、病態コントロール検体薬として、ハムスターＩｇＧを用いた。
　ハムスター抗ＣＤ８１抗体（共に抗マウスＣＤ８１モノクローナル抗体であるClone:2F7、Southernbiotech社製またはClone:Eat2、Biolegend社製）は原液を濃縮した液を投与液とし、ハムスターＩｇＧは原液にリン酸バッファーを添加して、０．１ｍｇ／ｍｌ投与液とした。
（３）群分け、ＤＳＳ摂取および投薬
　４週齢のマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒlＣｒｌｊ、♂、日本チャールズリバー社製）を購入し、７日間の検疫飼育後にマウスの体重を測定し、１群１５匹で４群に群分けした。群分け日に、０．２ｍｇ／マウスで、ハムスターＩｇＧ、抗ＣＤ８１抗体クローン２Ｆ７または抗ＣＤ８１抗体クローンＥａｔ２を腹腔内に１回投与した。群分け日から５日間、２％ＤＳＳをマウスに自由摂取させた後に（１回目ＤＳＳ摂取）、通常飲料水を１０日間摂取させた。次に５日間、２％ＤＳＳをマウスに自由摂取させた後に（２回目ＤＳＳ摂取）、通常飲料水を１０日間摂取させた。次に５日間、２％ＤＳＳをマウスに自由摂取させた後に（３回目ＤＳＳ摂取）、通常飲料水を６日間摂取させた。正常群は、すべての実験期間中、通常飲料水を摂取させた。
（４）大腸炎症状スコア判定
　群分け日から４０日間の大腸炎症状観察を行った。大腸炎症状は便の状態（正常便（スコア：０）、軟便（スコア：１）、下痢（スコア：２））でスコア判定した。
２．結果
　図４に、ハムスターＩｇＧ、ハムスター抗ＣＤ８１抗体クローン２Ｆ７または抗ＣＤ８１抗体クローンＥａｔ２のそれぞれを単回投与した場合の大腸炎症状スコア判定による大腸炎症状の経日変化を示した。図４から、抗ＣＤ８１抗体クローン２Ｆ７または抗ＣＤ８１抗体クローンＥａｔ２はＤａｙ０に１回投与したのみで、初回ＤＳＳ誘発大腸炎を抑制し、その後の２回のＤＳＳ誘発大腸炎の再発を抑制し長期に亘って緩解維持効果が認められた。
　図４の大腸炎症状の経日変化の結果に基づき、Ｄａｙ０からＤａｙ１１の各マウスの平均した大腸炎スコアを初回大腸炎スコアとし、Ｄａｙ１５からＤａｙ２３の各マウスの平均した大腸炎スコアを再燃大腸炎スコアとし、Ｄａｙ３０からＤａｙ３８の各マウスの平均した大腸炎スコアを２回目再燃大腸炎スコアとした。そして、各群の大腸炎スコア（初回大腸炎スコア及び再燃大腸炎スコア及び２回目再燃大腸炎スコア）をＷｉｌｃｏｘｏｎの検定で病態コントロール群（ハムスターＩｇＧ投与群）との２群比較を行った。それらの結果を表４に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　表４の結果から、抗ＣＤ８１抗体（０．２ｍｇ／ｈｅａｄ）単回投与後の初回大腸炎スコア、再燃大腸炎スコア、２回目再燃大腸炎スコアで腸炎症状の改善効果が持続されていたことが判った。
　本発明によって、抗ＣＤ８１抗体を投与することで、難治性の炎症性腸疾患を予防、改善、治療できること、単回の投与によっても長期間に亘って緩解維持効果を有することが明らかとなった。言い換えれば、既存の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）治療剤を単回、複数回投与しても緩解導入効果までしか発揮しない難治性の患者に対しても大きな効果を発揮することが明らかとなった。
　従って、抗ＣＤ８１抗体を有効成分とする薬剤は、単回の投与によっても、炎症性腸疾患の緩解導入効果を示すのみならず、長期間に亘って緩解維持効果を示すことで、炎症性腸疾患の緩解維持用薬剤として、また、炎症性腸疾患の予防、改善、治療用薬剤として利用することができる。

Claims (16)

  1. 　抗ＣＤ８１抗体を有効成分として含む、炎症性腸疾患の緩解維持用薬剤。
  2. 　抗ＣＤ８１抗体を有効成分として含む、難治性の炎症性腸疾患の予防、改善または治療用薬剤。
  3. 　難治性の炎症性腸疾患が、再燃若しくは再発を繰り返す炎症性腸疾患または慢性に病勢が持続する炎症性腸疾患を意味する、請求項２に記載の予防、改善または治療用薬剤。
  4. 　難治性の炎症性腸疾患が、ステロイド依存性またはステロイド抵抗性の炎症性腸疾患である、請求項２または３に記載の予防、改善または治療用薬剤。
  5. 　難治性の炎症性腸疾患が、通常の治療に抵抗性または耐性の炎症性腸疾患を意味する、請求項２～４のいずれかに記載の予防、改善または治療用薬剤。
  6. 　通常の治療が、既存治療薬を投与することを意味する、請求項５に記載の予防、改善または治療用薬剤。
  7. 　既存治療薬が、５－アミノサリチル酸製剤、ステロイド、免疫抑制剤、ＴＮＦ阻害剤またはインテグリン阻害剤である、請求項６に記載の予防、改善または治療用薬剤。
  8. 　既存治療薬が、スルファサラジン、抗ＴＮＦ抗体、サラゾスルファピリジン、メサラジン、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、リン酸ベタメタゾン、プレドニゾロン、アザチオプリン、タクロリムス、６－メルカプトプリン、サイクロスポリン、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ぺゴールまたはナタリズマブである、請求項７に記載の予防、改善または治療用薬剤。
  9. 　単回投与で長期間緩解維持効果を有する請求項１～８のいずれかに記載の薬剤。
  10. 　緩解維持効果が、腸炎の再燃もしくは再発の繰り返しを抑制し、緩解状態を維持する効果である請求項９に記載の薬剤。
  11. 　既存治療薬を単回もしくは複数回投与しても緩解維持しない炎症性腸疾患患者に対して処置される、請求項１～４のいずれかに記載の薬剤。
  12. 　既存治療薬が請求項７または８に記載の既存治療薬である、請求項１１に記載の薬剤。
  13. 　治療期間中は２～３０週間に１回投与される、請求項１～１２のいずれかに記載の薬剤。
  14. 　１回の投与量が０．０１～１５ｍｇ／ｋｇである、請求項１３に記載の薬剤。
  15. 　炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項１～１４のいずれかに記載の薬剤。
  16. 　炎症性腸疾患が、クローン病である、請求項１～１４のいずれかに記載の薬剤。
PCT/JP2011/054900 2010-03-04 2011-03-03 炎症性腸疾患用薬剤 WO2011108638A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011800123947A CN102869381A (zh) 2010-03-04 2011-03-03 用于炎性肠病的药物
US13/582,179 US20130004516A1 (en) 2010-03-04 2011-03-03 Drug for inflammatory bowel disease
JP2012503241A JP5845171B2 (ja) 2010-03-04 2011-03-03 炎症性腸疾患用薬剤
EP11750747.5A EP2543388A4 (en) 2010-03-04 2011-03-03 MEDICINAL PRODUCT FOR INFLAMMATORY ENDURANCE

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2010-048052 2010-03-04
JP2010048052 2010-03-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2011108638A1 true WO2011108638A1 (ja) 2011-09-09

Family

ID=44542285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2011/054900 WO2011108638A1 (ja) 2010-03-04 2011-03-03 炎症性腸疾患用薬剤

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20130004516A1 (ja)
EP (1) EP2543388A4 (ja)
JP (2) JP5845171B2 (ja)
CN (1) CN102869381A (ja)
WO (1) WO2011108638A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8440797B2 (en) 2010-12-06 2013-05-14 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Human monoclonal antibody

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106100816B (zh) 2011-11-25 2019-10-22 华为技术有限公司 实现载波聚合的方法、基站和用户设备
CN104698187B (zh) * 2015-03-03 2017-01-18 南京鼓楼医院 膜蛋白cd81在子痫前期预测、分型及诊疗中的应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0125023A1 (en) 1983-04-08 1984-11-14 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobulin preparations, methods for their preparation, DNA sequences, expression vectors and recombinant host cells therefor
EP0239400A2 (en) 1986-03-27 1987-09-30 Medical Research Council Recombinant antibodies and methods for their production
EP0404097A2 (de) 1989-06-22 1990-12-27 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente Rezeptoren, ihre Herstellung und Verwendung
WO1992019759A1 (en) 1991-04-25 1992-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor
WO1993011161A1 (en) 1991-11-25 1993-06-10 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
WO1998025647A1 (en) 1996-12-13 1998-06-18 Beth Israel Deaconess Medical Center Calcium-independent modulation by cd81 of receptor signalling
WO1998046777A1 (fr) 1997-04-11 1998-10-22 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Preparation de recepteurs membranaires a partir de baculovirus extracellulaires
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2005021792A1 (ja) 2003-08-28 2005-03-10 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 抗ｃｄ８１抗体を有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防または治療剤

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY162179A (en) * 2004-04-01 2017-05-31 Elan Pharm Inc Steroid sparing agents and methods of using same
ES2376493T3 (es) * 2006-09-08 2012-03-14 Ore Pharmaceuticals Inc. Procedimiento para reducir o aliviar la inflamación en el tubo digestivo.

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0125023A1 (en) 1983-04-08 1984-11-14 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobulin preparations, methods for their preparation, DNA sequences, expression vectors and recombinant host cells therefor
EP0239400A2 (en) 1986-03-27 1987-09-30 Medical Research Council Recombinant antibodies and methods for their production
EP0404097A2 (de) 1989-06-22 1990-12-27 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente Rezeptoren, ihre Herstellung und Verwendung
WO1992019759A1 (en) 1991-04-25 1992-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor
WO1993011161A1 (en) 1991-11-25 1993-06-10 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
WO1998025647A1 (en) 1996-12-13 1998-06-18 Beth Israel Deaconess Medical Center Calcium-independent modulation by cd81 of receptor signalling
WO1998046777A1 (fr) 1997-04-11 1998-10-22 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Preparation de recepteurs membranaires a partir de baculovirus extracellulaires
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2005021792A1 (ja) 2003-08-28 2005-03-10 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 抗ｃｄ８１抗体を有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防または治療剤

Non-Patent Citations (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BETTER ET AL., SCIENCE, vol. 240, 1988, pages 1041 - 1043
BETTER, M.; HORWITZ, A. H., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 178, 1989, pages 476 - 496
BIRD, R. E. ET AL., TIBTECH, vol. 9, 1991, pages 132 - 137
BOULIANNE ET AL., NATURE, vol. 312, 1984, pages 643 - 646
CO, M. S. ET AL., J. IMMUNOL., vol. 152, 1994, pages 2968 - 2976
CURRENT TOPICS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, vol. 81, 1978, pages 1 - 7
DE ST. GROTH, S. F. ET AL., J. IMMUNOL. METHODS, vol. 35, 1980, pages 1 - 21
FEIGELSON SW ET AL.: "The CD81 tetraspanin facilitates instantaneous leukocyte VLA-4 adhesion strengthening to vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) under shear flow.", J BIOL CHEM., vol. 278, no. 51, 19 December 2003 (2003-12-19), pages 51203 - 51212, XP002290255 *
GALFRE, G ET AL., NATURE, vol. 277, 1979, pages 131 - 133
HARLOW; LANE: "ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL", 1988, COLD SPRING HARBOR LABORATORY
HOLLIGER, P. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 90, 1993, pages 6444 - 6448
HUDSON ET AL., J IMMUNOL. METHODS, vol. 231, 1999, pages 177 - 189
HUSTON, J. S. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. U.S.A., vol. 85, 1988, pages 5879 - 5883
INFLAMM. BOWEL. DIS., vol. 8, 2002, pages 244 - 250
J. IMMUNOL., vol. 123, 1979, pages 1548 - 1550
JOURNAL OF CLINICAL GASTROENTEROLOGY, vol. 41, 2007, pages 799 - 809
KATZ S.: "''Mind the Gap'': an unmet need for new therapy in IBD.", J CLIN GASTROENTEROL., vol. 41, no. 9, October 2007 (2007-10-01), pages 799 - 809, XP008164415 *
KOHLER. G; MILSTEIN, C., EUR. J. IMMUNOL., vol. 6, 1976, pages 511 - 519
KOHLER. G; MILSTEIN, C., METHODS ENZYMOL., vol. 73, 1981, pages 3 - 46
LAMOYI, E., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 121, 1986, pages 652 - 663
LIU ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 84, 1987, pages 3439 - 3443
MARGULIES. D. H. ET AL., CELL, vol. 8, 1976, pages 405 - 415
MORRISON ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 81, 1984, pages 6851 - 6855
NEUROBIOLOGY OF DISEASE, vol. 31, 2008, pages 413 - 421
NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE, vol. 337, 1997, pages 1029 - 1035
PLUCKTHUN: "The Pharmacology of Monoclonal Antibodies", vol. 113, 1994, SPRINGER VERLAG, pages: 269 - 315
PLUCKTHUN: "The Pharmacology of Monoclonal Antibodies", vol. 113, 1994, SPRINGER-VERLAG, pages: 269 - 315
PLUECKTHUN, A.; SKERRA, A., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 178, 1989, pages 497 - 515
PROC. NATL. ACSD. SCI. USA., vol. 81, 1984, pages 5662
PROTEIN ENGINEERING, vol. 9, no. 3, 1996, pages 299 - 305
ROUSSEAUX, J. ET AL., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 121, 1986, pages 663 - 669
RUBINSTEIN E ET AL.: "CD9, CD63, CD81, and CD82 are components of a surface tetraspan network connected to HLA-DR and VLA integrins.", EUR J IMMUNOL., vol. 26, no. 11, November 1996 (1996-11-01), pages 2657 - 2665, XP008164416 *
SAMBROOK ET AL.: "Molecular Cloning A Laboratory Manual", 1989, COLD SPRING HARBOR LABORATORY PRESS
SATO, K. ET AL., CANCER RES., vol. 53, 1993, pages 851 - 856
See also references of EP2543388A4
SHULMAN, M. ET AL., NATURE, vol. 276, 1978, pages 269 - 270
SUN ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 84, 1987, pages 214 - 218
TROWBRIDGE, I. S., J. EXP. MED., vol. 148, 1978, pages 313 - 323

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8440797B2 (en) 2010-12-06 2013-05-14 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Human monoclonal antibody
US8940710B2 (en) 2010-12-06 2015-01-27 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Human monoclonal antibody
US9562105B2 (en) 2010-12-06 2017-02-07 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Human monoclonal antibody

Also Published As

Publication number Publication date
EP2543388A1 (en) 2013-01-09
EP2543388A4 (en) 2013-11-27
JPWO2011108638A1 (ja) 2013-06-27
CN102869381A (zh) 2013-01-09
US20130004516A1 (en) 2013-01-03
JP5845171B2 (ja) 2016-01-20
JP2015232034A (ja) 2015-12-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2123302B1 (en) Il-6 inhibitors to treat chronic rejection
EP1967207B1 (en) Agents for suppressing the induction of cytotoxic t cells
US8771686B2 (en) Methods for treating a disease involving choroidal neovascularization by administering an IL-6 receptor antibody
EP2196220B1 (en) Inhibting anti-IL-6 receptor antibody for treating graft-versus-host disease
KR20170095802A (ko) Il-6 관련 질환 치료용 조성물
JP2023080215A (ja) 肝細胞癌のための免疫療法
EP2481755A1 (en) Antibody capable of recognizing hla class i
JP2015232034A (ja) 炎症性腸疾患用薬剤
CN113018431A (zh) 治疗血管疾病及其并发症
US11999788B2 (en) Treatment or prevention method of radiation damage by administration of IL-5 receptor alpha chain binding antibody
CN108026176A (zh) 用于增强nk细胞杀伤活性的方法和药物组合物
US20150037886A1 (en) Treatment drug for autoimmune diseases and allergic diseases
JP2019508448A (ja) 移植片対宿主病予防の方法
EP3735426A1 (en) Hgf-met agonist for use in the treatment of cancer and colorectal fibrosis
US20230357392A1 (en) Treatment Paradigm for an Anti-CD19 Antibody Therapy
KR20240057508A (ko) 항-ｉｇｓｆ1 항체를 포함하는 암 치료용 약학 조성물
US20080254043A1 (en) Drug For Treating Ischemic Disease
JP2022177481A (ja) 炎症性腸疾患の予防又は治療薬
WO2020018364A1 (en) Anti-galectin-9 antibody and methods of use thereof
KR20200074160A (ko) 항il-6 수용체 항체를 함유하는 수술 후의 유착을 억제하기 위한 의약 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201180012394.7

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11750747

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012503241

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13582179

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2011750747

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011750747

Country of ref document: EP