RS62568B1 - Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe - Google Patents

Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe

Info

Publication number
RS62568B1
RS62568B1 RS20211320A RSP20211320A RS62568B1 RS 62568 B1 RS62568 B1 RS 62568B1 RS 20211320 A RS20211320 A RS 20211320A RS P20211320 A RSP20211320 A RS P20211320A RS 62568 B1 RS62568 B1 RS 62568B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mab
domain
seq
binding
cancer
Prior art date
Application number
RS20211320A
Other languages
English (en)
Inventor
Kalpana Shah
Douglas H Smith
Motte-Mohs Ross La
Leslie S Johnson
Paul A Moore
Ezio Bonvini
Scott Koenig
Original Assignee
Macrogenics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Macrogenics Inc filed Critical Macrogenics Inc
Publication of RS62568B1 publication Critical patent/RS62568B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70521—CD28, CD152

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Description

Opis
Upuć ivanje na srodne prijave
[0001] Ova prijava zasniva pravo na patentne prijave US 62/198,867 (podneta 30. jula 2015; na čekanju), US 62/239,559 (podneta 9. oktobra 2015; na čekanju), US 62/255,140 (podneta 13. novembra , 2015; na čekanju), i US 62/322.974 (podneta 15. aprila 2016; na čekanju).
Upućivanje na listu sekvenci
[0002] Ova prijava uključuje jednu ili više lista sekvenci u skladu sa 37 C.F.R.1.821 i dalje, koji su obelodanjeni na računarima čitljivim medijima (naziv datoteke:1301_0122PCT_Sekuence_Listing_ST25.tkt, kreiran 1. jula 2016. i veličine 282.789 bajtova).
Polje pronalaska
[0003] Ovaj pronalazak je usmeren na molekule za vezivanje PD-1 koji sadrže domen za vezivanje PD-1 odabranih PD-1 antitela sposobnih da se vezuju i za PD-1 majmuna cinomolgus i za ljudski PD-1: PD- 1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji vezuju PD-1 koji su humanizovane ili himerne verzije takvih antitela, ili koje sadrže PD-1 vezujuć e fragmente takvih PD-1 antitela (naročito imunokongugate, dijatela, BiTE, bispecifična antitela itd.). Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji vezuju PD-1 i koji su dodatno sposobni da vezuju epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunološke ć elije. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke upotrebe takvih molekula koji vezuju PD-1 za detekciju PD-1 ili za stimulisanje imunološkog odgovora. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezuju ć ih domena odabranih PD-1 antitela primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunološkog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
Stanje tehnike
I.Ć elijski posredovani imunološki odgovori
[0004] Imuni sistem ljudi i drugih sisara odgovoran je za pružanje zaštite od infekcija i bolesti. Takva zaštita obezbeđena je humoralnim imunološkim odgovorom i imunološkim odgovorom posredovanim ć elijama. Humoralni odgovor rezultira proizvodnjom antitela i drugih biomolekula koji su sposobni da prepoznaju i neutrališu strane mete (antigene). Nasuprot tome, ć elijski posredovani imunološki odgovor uključuje aktivaciju makrofaga, ć elija prirodnih ubica (NK) i antigen specifičnih citotoksičnih T-limfocita pomoć u T- ć elija i oslobađanje različitih citokina kao odgovor na prepoznavanje antigena (Dong , C. i sar. (2003) "Regulacija imuniteta pomoć u novih kostimulatornih molekula", Imunolog. Res.28 (1): 39-48).
[0005] Sposobnost T-ć elija da optimalno posreduju u imunološkom odgovoru na antigen zahteva dve različite signalne interakcije (Viglietta, V. et al. (2007) "Modulating CoStimulation", Neurotherapeutics 4: 666-675; Korman, AJ et al. (2007) "Blokada kontrolnih tačaka u imunoterapiji protiv raka", Adv. Immunol. 90: 297-339). Prvo, antigen koji je raspoređen na površinić elija za predstavljanje antigena (APC) mora biti predstavljen nezreloj CD4<+>T-ć eliji specifičnoj za antigen. Takva prezentacija daje signal preko receptora T-ć elija (TCR) koji usmerava T ć eliju da inicira imunološki odgovor kojić e biti specifičan za predstavljeni antigen. Drugo, niz kostimulacionih i inhibitornih signala, posredovanih kroz interakcije između APC-a i različitih površinskih molekula T-ć elija, prvo pokre ć e aktivaciju i proliferaciju T- ć elija i na kraju njihovu inhibiciju. Dakle, prvi signal daje specifičnost imunološkom odgovoru, dok drugi signal služi za određivanje prirode, veličine i trajanja odgovora.
[0006] Imuni sistem je strogo kontrolisan kostimulatornim i koinhibitornim ligandima i receptorima. Ovi molekuli pružaju drugi signal za aktivaciju T-ć elija i pružaju uravnoteženu mrežu pozitivnih i negativnih signala za maksimiziranje imunoloških odgovora na infekciju uz ograničavanje imuniteta na sebe (Wang, L. i sar. (7. marta 2011) "VISTA , Novi mišji superligand miša koji negativno reguliše reakcije T-ć elija, "J. Ekp. Med. 10.1084/jem.20100619: 1-16; Lepenies, B. et al. (2008)" Uloga negativnih kostimulatora tokom parazita Infekcije, „Endokrini, metabolički i imunološki poremeć aji - lekovi 8: 279-288). Od posebnog značaja je vezivanje između liganda B7.1 (CD80) i B7.2 (CD86) ć elije koja predstavlja antigen i receptora CD28 i CTLA-4 CD4+ T limfocita (Sharpe, AH et al. (2002) "Superporodica B7-CD28", Nature Rev. Immunol.2: 116-126; Dong, C. et al. (2003) "Regulacija imuniteta pomoć u novih kostimulatornih molekula", Imunolog. Res. 28 (1): 39-48; Lindlei, P.S. et al. (2009) "Klinička korisnost inhibicije CD28-posredovane kostimulacije", Immunol. Rev.229: 307-321). Vezivanje B7.1 ili B7.2 za CD28 stimuliše aktivaciju T-ć elija; vezivanje B7.1 ili B7.2 za CTLA-4 inhibira takvu aktivaciju (Dong, C. et al. (2003) "Regulacija imuniteta pomoć u novih kostimulatornih molekula", Imunolog. Res. 28 (1): 39-48; Lindlei , PS i sar. (2009) "Klinička korisnost inhibiranja CD28 posredovane kostimulacije", Immunol. Rev. 229: 307-321; Greenvald, RJ i sar. (2005) "Ponovljena poseta porodice B7", Ann. Rev. Immunol. 23: 515-548). CD28 je konstitutivno izražen na površini T-ć elija (Gross, J., et al. (1992) "Identification and Distribution of Costimulatori Receptor CD28 In The Mouse", J. Immunol. 149: 380-388), dok je CTLA -4 ekspresija se brzo reguliše nakon aktivacije T-ć elija (Linslei, P. et al. (1996) "Intracelularni promet CTLA4 i fokalne lokalizacije ka mestima angažovanja TCR-a", Immuniti 4: 535-543). Pošto je CTLA-4 receptor višeg afiniteta (Sharpe, AH et al. (2002) "Superporodica B7-CD28," Nature Rev. Immunol. 2: 116-126), vezivanje prvo pokreć e proliferaciju T-ć elija (preko CD28) a zatim ga inhibira (putem novonastale ekspresije CTLA-4), čime se umanjuje efekat kada proliferacija više nije potrebna.
[0007] Dalja istraživanja liganda receptora CD28 dovela su do identifikacije i karakterizacije skupa srodnih molekula B7 ("superporodica B7") (Coile, AJ et al. (2001) "Proširena B7 superporodica: poveć anje složenosti u kostimulatornim signalima koji regulišu funkciju T-ć elija, "Nature Immunol. 2 (3): 203-209; Sharpe, AH et al. (2002)" Superfamilija B7-CD28, "Nature Rev. Immunol. 2: 116-126 ; Greenvald, RJ et al. (2005) "The B7 Famili Revisited", Ann. Rev. Immunol.
23: 515-548; Collins, M. et al. (2005) "The B7 Family of Immune-Regulatory Ligands," Genom Biol. 6: 223.1-223.7; Loke, P. et al. (2004) "Mehanizmi imunološke regulacije: proširena porodica B7 i regulatorne T-ć elije." Arthritis Res. Ther. 6: 208-214; Korman , AJ et al. (2007) "Blokada kontrolnih tačaka u imunoterapiji protiv raka", Adv. Immunol. 90: 297-339; Flies, DB et al. (2007) "Novi B7: Igraju ključnu ulogu u imunosti na tumore", J Immunother. 30 (3): 251-260; Agarval, A. et al. (2008) "Uloga pozitivnih kosimulatornih molekula u transplantaciji i toleranciji", Curr. Opin. Transplantacija organa. 13: 366-372; Lenschov, D.J. et al. (1996) "CD28/B7 sistem kostimulacije T-ć elija", Ann. Rev. Immunol. 14: 233-258; Wang, S. i sar. (2004) "Kosignalni molekuli porodice B7-CD28 u pozitivnoj i negativnoj regulaciji odgovora limfocita T", Mikrobi zaraženi. 6: 759-766). Trenutno postoji nekoliko poznatih članova porodice: B7.1 (CD80), B7.2 (CD86), inducibilni kostimulatorni ligand (ICOS-L), programirani ligand smrt-1 (PD-L1; B7-H1 ), programirani ligand smrti-2 (PD-L2; B7-DC), B7-H3, B7-H4 i B7-H6 (Collins, M. et al. (2005) "Porodica B7 imunoregulatornih liganda, "Genom Biol. 6: 223.1-223.7; Flajnik, MF et al. (2012)" Evolucija porodice B7: ko-evolucija B7H6 i Nkp30, identifikacija novog člana porodice B7, B7H7 i istorijske veze B7 sa MHC, „Immunogenetics epub doi.org/10.1007/s00251-012-0616-2).
II. Programirana smrt-1 ("PD-1")
[0008] Programirana smrt-1 ("PD-1", takođe poznata i kao "CD279") je otprilike 31 kD membranski proteinski član tipa I iz proširene porodice regulatora T-ć elija CD28/CTLA-4 koji negativno reguliše imunološki sistem odgovora (Ishida, I. i dr. (1992) "Indukovana ekspresija PD-1, novi član superporodice gena imunoglobulina, nakon programirane ć elijske smrti", EMBO J. 11: 3887-3895; publikacija br. 2007/0202100; 2008/0311117; 2009/00110667; US patenti br.
6,808,710; 7,101,550; 7,488,802; 7,635,757; 7,722,868; PCT publikacija br. WO 01/14557).
[0009] PD-1 se eksprimira na aktiviranim T-ć elijama, B- ć elijama i monocitima (Agata, I. i sar. (1996) "Ekspresija PD-1 antigena na površini stimuliranih limfocita T i B miša, "Int. Immunol. 8 (5): 765-772; Iamazaki, T. et al. (2002)" Ekpression of Programmed Death 1 Ligands Bi Murine T-Cells And APC "J. Immunol.169: 5538-5545) i na niskim nivoima u T-ć elijama prirodnih ubica (NK) (Nishimura, H. i sar. (2000) "Olakšavanje selekcije beta i modifikacija pozitivne selekcije u timusu miševa sa nedostatkom PD-1", J. Ekp. Med 191: 891-898; Martin-Orozco, N. i dr. (2007) "Inhibitori Costimulation And Antitumor Immuniti", Semin. Cancer Biol. 17 (4): 288-298).
[0010] Vanć elijski region PD-1 sastoji se od jednog imunoglobulinskog (Ig) V domena sa 23 % identičnosti sa ekvivalentnim domenom u CTLA-4 (Martin-Orozco, N. i sar. (2007) "Inhibitori Costimulation And Anti -Tumorski imunitet, "Semin. Biocr. Cancer Biol. 17 (4): 288-298). Vanć elijski IgV domen prati transmembranski region i unutarć elijski rep. Unutar ć elijski rep sadrži dva mesta fosforilacije koja se nalaze u inhibitornom motivu imunoreceptora na bazi tirozina i motiv prekidača na bazi imunoreceptora na bazi tirozina, što sugeriše da PD-1 negativno reguliše TCR signale (Ishida, I. et al. (1992) "Induced Ekpression Of PD-1, novi član superporodice gena imunoglobulina, nakon programirane ć elijske smrti, "EMBO J. 11: 3887-3895; Blank, C. et al. (2006)" Doprinos PD-L1/PD- 1 Put do iscrpljivanja T-ć elija: ažuriranje o implikacijama za hronične infekcije i rak izbegavanja tumora, "Immunol. Immunother.56 (5): 739-745).
[0011] PD-1 posreduje u inhibiciji imunološkog sistema vezivanjem za B7-H1 i B7-DC (Flies, DB et al. (2007) "Novi B7: Igraju ključnu ulogu u imunosti na tumore", J. Immunother 30 (3): 251-260; US patenti br.6,803,192; 7,794,710; US br.
2005/0059051; 2009/0055944; 2009/0274666; 2009/0313687; PCT publikacije br. WO 01/39722; WO 02/086083).
[0012] B7-H1 i B7-DC su široko izraženi na površinama ljudskih i mišijh tkiva, poput srca, placente, mišić a, fetalne jetre, slezine, limfnih čvorova i timusa, kao i mišje jetre, pluć a, bubrega, ostrvske ć elije pankreasa i tankog creva (Martin-Orozco, N. i sar. (2007) "Inhibitori Costimulation And Antitumor Immuniti," Semin. Cancer Biol. 17 (4): 288-298). Kod ljudi, ekspresija proteina B7-H1 je nađena u endotelnim ć elijama čoveka (Chen, I. et al. (2005) "Ekspresija B7-H1 u inflamatornim bubrežnim tubularnim epitelnim ć elijama", Nephron. Ekp. Nephrol. 102: e81- e92; de Haij, S. et al. (2005) "Bubrežne tubularne epitelne ć elije moduliraju odgovore T- ć elija putem ICOS-L i B7-H1" Bubrezi Int. 68: 2091-2102; Mazanet, MM et al. (2002) "B7-H1 se eksprimira ljudskim endotelnim ć elijama i potiskuje sintezu citokina T-ć elija", J. Immunol. 169: 3581-3588), miokard (Brovn, JA et al. (2003) "Blokada programiranih ligamenata smrti-1 na Dendritičke ć elije poboljšavaju aktivaciju T- ć elija i proizvodnju citokina, "J. Immunol. 170: 1257-1266), sincciotrofoblasti (Petroff, MG i sar. (2002)" Molekuli porodice B7: novi imunomodulatori na interfejsu majke i ploda, "Placenta 23: S95-S101). Molekule takođe eksprimiraju rezidentni makrofagi nekih tkiva, makrofagi koji su aktivirani interferonom (IFN) -g ili faktorom tumorske nekroze (TNF)-a (Latchman, I. et al. (2001) "PD-L2 Is Drugi ligand za PD-1 i inhibira aktivaciju T-ć elija, "Nat. Immunol 2: 261-268), i kod tumora (Dong, H. (2003)" B7-H1 put i njegova uloga u izbegavanju tumorskog imuniteta , "J. Mol. Med.81: 281-287).
[0013] Utvrđeno je da interakcija između B7-H1 i PD-1 pruža ključni negativni kostimulatorni signal T i B-ć elijama (Martin-Orozco, N. i sar. (2007) "Inhibitorna kostimulacija i antitumorski imunitet , "Semin. Biol. Cancer. 17 (4): 288-298) i funkcioniše kao induktor ć elijske smrti (Ishida, I. et al. (1992)" Indukovana ekspresija PD-1, novog člana superporodice gena imunoglobulina , After Programmed Cell Death, "EMBO J. 11: 3887-3895; Subudhi, SK et al. (2005)" Balance of Immune Responses: Costimulation Verse Coinhibition, "J. Molec. Med. 83: 193-202). Preciznije, utvrđeno je da interakcija između niskih koncentracija receptora PD-1 i liganda B7-H1 dovodi do prenosa inhibitornog signala koji snažno inhibira proliferaciju CD8+ T-ć elija specifičnih za antigen; pri ve ć im koncentracijama interakcije sa PD-1 ne inhibiraju proliferaciju T-ć elija, ali značajno smanjuju proizvodnju više citokina (Sharpe, AH et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamili," Nature Rev. Immunol. 2: 116 -126). Utvrđeno je da su proliferacija T-ć elija i proizvodnja citokina i u mirovanju i u prethodno aktiviranim CD4 i CD8 T-ć elijama, pa čak i u naivnim T- ć elijama iz krvi iz pupčane vrpce, inhibirane rastvorljivim fuzionisanim proteinima B7-H1-Fc (Freeman, GJ et al. (2000) "Angažovanje imuno-inhibitornog receptora PD-1 od strane člana porodice B7 dovodi do negativne regulacije aktivacije limfocita", J. Ekp. Med. 192: 1-9; Latchman, I. et al. (2001) "PD-L2 je drugi ligand za PD-1 i inhibira aktivaciju T-ć elija," Nature Immunol. 2: 261-268; Carter, L. et al. (2002) "PD-1: PD-L Inhibitorni put utiče i na CD4 (+) i na CD8 (+) T-ć elije i savladava ih IL-2, "Eur. J. Immunol. 32 (3): 634-643; Sharpe, AH et al. (2002)" Superporodica B7-CD28, „Nature Rev. Immunol. 2: 116-126).
[0014] Uloga B7-H1 i PD-1 u inhibiranju aktivacije i proliferacije T-ć elija sugeriše da bi ovi biomolekuli mogli poslužiti kao terapijske mete za lečenje upale i raka. Tako je predložena upotreba antitela na PD-1 za lečenje infekcija i tumora i poveć anje modulacije adaptivnog imunološkog odgovora (videti, US br. 2010/0040614; 2010/0028330; 2004/0241745; 2008 /0311117; 2009/0217401; US patenti br. 7,521,051; 7,563,869; 7,595,048; publikacije PCT-a WO 2004/056875; WO 2008/083174). Agata, T. i sar. Su prijavili antitela sposobna za specifično vezivanje za PD-1. (1996) "Ekspresija PD-1 antigena na površini stimuliranih limfocita T i B miša", Int. Immunol. 8 (5): 765-772; i Berger, R. i sar. (2008) "I faza bezbednosti i farmakokinetička studija CT-011, humanizovanog antitela u interakciji sa PD-1, kod pacijenata sa uznapredovalim hematološkim malignitetima", Clin. Cancer Res. 14 (10): 3044-3051 (vidi, takođe, US patente br. 8,008,449 i 8,552,154; US patente br. 2007/0166281; 2012/0114648; 2012/0114649; 2013/0017199; 2013/0230514 i 2014/0044738 i PCT patentne publikacije br. WO 2003/099196; WO 2004/004771; WO 2004/056875; WO 2004/072286; WO 2006/121168; WO 2007/005874; WO 2008/083174; WO 2009/014708; WO 2009/ 073533; WO 2012/135408, WO 2012/145549; i WO 2013/014668).
[0015] Međutim, uprkos svim takvim napredovanjima, ostaje potreba za poboljšanim sastavima sposobnim da snažnije usmere imunološki sistem tela na napad kancerogene ć elije ili ć elije zaražene patogenima, posebno pri nižim terapijskim koncentracijama. Jer iako adaptivni imunološki sistem može biti moć an odbrambeni mehanizam protiv raka i bolesti, često ga ometaju imunološki supresivni mehanizmi u mikrookruženju tumora, poput ekspresije PD-1. Štaviše, koinhibitorni molekuli koje eksprimiraju tumorske ć elije, imunske ć elije i stromalne ć elije u tumorskom miljeu mogu dominantno oslabiti odgovore T-ć elija na ć elije raka. Dakle, ostaje potreba za mo ć nim molekulima koji se vezuju za PD-1. Konkretno, postoji potreba za snažnim molekulima koji se vezuju za PD-1 sa poželjnim kinetičkim profilom vezivanja i koji antagoniziraju osovinu PD-1/PD-L1 blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1, što bi moglo pružiti poboljšanu terapijsku vrednost pacijentima koji boluju od raka ili drugih bolesti i stanja. Ovaj pronalazak je usmeren na ove i druge ciljeve.
WO 2014194302 odnosi se na kompozicije i postupke koji se odnose na ili potiču od antitela na PD-1.
WO 2014179664 odnosi se na izolovani polipeptid teškog lanca imunoglobulina i izolirani polipeptid lakog lanca imunoglobulina koji se vezuju za programirani protein smrti-1 (PD-1)
Suština pronalaska
[0016] Ovaj pronalazak je usmeren na monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za humani PD-1 i koje obuhvata promenljivi domen teškog lanca i domen promenljivog lakog lanca, pri čemu navedeni domen promenljivog teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 147, a navedeni domen promenljivog lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 153. Pronalazak je takođe usmeren na kompoziciju koja sadrži anti-humano antitelo za vezivanje za PD-1 prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač. Pronalazak je takođe usmeren na monospecifično monoklonsko antitelo ili kompoziciju prema pronalasku koje se vezuje protiv humanog PD-1, za upotrebu u postupku stimulacije imunološkog odgovora posredovanog T-ć elijama subjekta koji ima rak ili infekciju. Pronalazak je takođe usmeren na monospecifično monoklonsko antitelo ili kompoziciju prema pronalasku koje se vezuje za humani PD-1 za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa potisnutim imunološkim sistemom, pri čemu je bolest ili stanje rak ili infekcija . Pronalazak je takođe usmeren prema monospecifičnom monoklonalnom antitelu ili kompoziciji pronalaska koje vezuje za humani PD-1, za upotrebu u lečenju raka ili infekcije. Pronalazak je takođe usmeren na upotrebu monospecifičnog monoklonalnog antitela ili kompozicije prema pronalasku koji se vezuje za humani PD-1, u in vitro detekciji PD-1, gde je antitelo detektovano obeleženo. Ostvarenja pronalaska su opisana u nekim donjim slučajevima. Ovaj pronalazak je usmeren na molekule za vezivanje PD-1 koji sadrže domen za vezivanje PD-1 odabranih PD-1 antitela sposobnih za vezivanje i za PD-1 majmuna cinomolgusa i za humani PD-1: PD-1 mAb 1 , PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD -1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Pronalazak se posebno odnosi na molekule za vezivanje PD-1 koji su humanizovani ili himerične verzije takvih antitela, ili koje sadrže fragmente vezivanja PD-1 takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugate, dijatela, BiTE, bispecifična antitela itd.). Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji vezuju PD-1 i koji su dodatno sposobni da vezuju epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunološke ć elije. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke upotrebe takvih molekula koji vezuju PD-1 za detekciju PD-1 ili za stimulisanje imunološkog odgovora. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezujuć ih domena (ova) odabranih PD-1 antitela primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunološkog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
[0017] Detaljno, pronalazak obezbeđuje molekul koji se vezuje za humani PD-1 koji sadrži tri CDR domena teškog lanca, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i tri domena lakog lanca CDR, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, pri čemu:
(A)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 1, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 71, SEK ID BR: 72 i SEK ID BR: 73; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 1 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 76, SEK ID BR: 77 i SEK ID BR: 78;
ili (B)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 2, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 85, SEK ID BR: 86 i SEK ID BR: 87; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 2, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 90, SEK ID BR: 91 i SEK ID BR: 92;
ili (C)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 3 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 99, SEK ID BR: 100 i SEK ID BR: 101; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 3 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 104, SEK ID BR: 105 i SEK ID BR:106;
ili (D)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 4, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 109, SEK ID BR: 110 i SEK ID BR: 111; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 4 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 114, SEK ID BR: 115 i SEK ID BR: 116;
ili (E)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 5, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 119, SEK ID BR: 120 i SEK ID BR: 121; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 5 i imaju sekvence aminokiselina: SEK ID BR: 124, SEK ID BR: 125 i SEK ID BR: 126;
ili (F)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 6, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 129, SEK ID BR: 130 i SEK ID BR: 131; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 6, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 134, SEK ID BR: 135 i SEK ID BR: 136;
ili (G)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 7 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 139, SEK ID BR: 140 i SEK ID BR: 141; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 7 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 144, SEK ID BR: 145 i SEK ID BR: 146;
ili (H)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 8, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 161, SEK ID BR: 162 i SEK ID BR: 163; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 8, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 166, SEK ID BR: 167 i SEK ID BR: 168;
ili (I)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 9, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 171, SEK ID BR: 172 i SEK ID BR: 173; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 9 i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 176, SEK ID BR: 177 i SEK ID BR: 178;
ili (J)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 10 i imaju sekvence aminokiselina:
SEK ID BR: 192, SEK ID BR: 193 i SEK ID BR: 194; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 10, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 197, SEK ID BR: 198 i SEK ID BR: 199;
ili (K)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 11 i imaju sekvence aminokiselina:
SEK ID BR: 202, SEK ID BR: 203 i SEK ID BR: 204; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 11, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 207, SEK ID BR: 208 i SEK ID BR : 209;
ili (L)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 12, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 212, SEK ID BR: 213 i SEK ID BR: 214; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 12, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 217, SEK ID BR: 218 i SEK ID NE: 219;
ili (M)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 13, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 222, SEK ID BR: 223 i SEK ID BR: 224; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 13, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 227, SEK ID BR: 228 i SEK ID BR: 229;
ili (N)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 14, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 232, SEK ID BR: 233 i SEK ID BR: 234; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR lakog lanca PD-1 mAb 14, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 237, SEK ID BR: 238 i SEK ID BR: 239;
ili (O)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca PD-1 mAb 15, i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 242, SEK ID BR: 243 i SEK ID BR: 244; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca PD-1 mAb 15, i imaju aminokiselinske sekvence:
SEK ID BR: 247, SEK ID BR: 248 i SEK ID BR: 249;
ili (P)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su teški lanci CDR-ova hPD-1 mAb 7 (1.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 139, SEK ID BR: 140 i SEK ID BR: 141; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca hPD-1 mAb 7 (1.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 157, SEK ID BR: 145, i SEK ID BR: 146; ili
ili (Q)
1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su teški lanci CDR-ova hPD-1 mAb 7 (1.3) i imaju sekvence aminokiselina: SEK ID BR: 139, SEK ID BR: 140 i SEK ID BR: 141; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca hPD-1 mAb 7 (1.3) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 157, SEK ID BR: 158, i SEK ID BR: 145; ili
ili (R)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 su CDR-ovi teškog lanca hPD-1 mAb 9 (2.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 183, SEK ID BR: 172 i SEK ID BR: 173; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 su CDR-ovi lakog lanca hPD-1 mAb 9 (2.2) i imaju aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 188, SEK ID BR: 189, i SEK ID BR: 178.
[0018] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve svih takvih molekula koji vezuju humani PD-1, pri čemu je molekul antitelo, a posebno pri čemu je molekul himerno antitelo ili humanizovano antitelo.
[0019] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve takvih molekula koji se vezuju za humani PD-1, pri čemu promenljivi domen teškog lanca ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 79, SEK ID BR: 93, SEK ID BR: 147, SEK ID BR: 149, SEK ID BR: 179, SEK ID BR: 181, ili SEK ID BR: 250.
[0020] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve takvih molekula koji se vezuju za humani PD-1, gde promenljivi domeni lakog lanca ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 81, SEK ID BR: 95, SEK ID BR: 151, SEK ID BR: 153, SEK ID BR: 155, SEK ID BR: 184, SEK ID BR: 186, ili SEK ID BR: 251.
[0021] Pronalazak se dalje odnosi na slučaj gde je molekul koji vezuje anti-humani PD-1 bispecifični vezujuć i molekul, sposoban da se istovremeno veže za humani PD-1 i za drugi epitop, a posebno se odnosi na slučaj gde je drugi epitop je epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke prisutne na površini imunološke ć elije (posebno gde je drugi epitop epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD40L, CD47, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, SVETLO, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OKS40, OKS40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ili VISTA, a naročito gde je druga epitop je epitop CD137, CTLA-4, LAG-3, OX40, TIGIT ili TIM-3).
[0022] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve u kojima je molekul koji se vezuje za humani PD-1 bispecifičan molekul koji sadrži mesto vezivanja za epitop LAG-3, naročito gde mesto za vezivanje epitopa LAG-3 sadrži:
(A)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 promenljivog teškog lanca LAG-3 mAb 1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 42, SEK ID BR: 43, i SEK ID BR: 44, redom; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 promenljivog lakog lanca LAG-3 mAb 1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 46, SEK ID BR: 47, i SEK ID BR: 48, respektivno;
ili (B)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 promenljivog teškog lanca hLAG-3 mAb 1 VH1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 42, SEK ID BR: 43 i SEK ID BR: 44 , redom; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 promenljivog lakog lanca hLAG-3 mAb 1 VL4, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 55, SEK ID BR: 47 i SEK ID BR: 48, respektivno;
ili (C)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 promenljivog teškog lanca LAG-3 mAb 6, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 57, SEK ID BR: 58 i SEK ID BR: 59, redom; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 promenljivog lakog lanca LAG-3 mAb 6, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 61, SEK ID BR: 62, i SEK ID BR: 63, respektivno;
ili (D)
(1) domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3 promenljivog teškog lanca hLAG-3 mAb 6 VH1, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 57, SEK ID BR: 58 i SEK ID BR: 59 , redom; i
(2) domen CDRL1, domen CDRL2 i domen CDRL3 promenljivog lakog lanca LAG-3 mAb 6, koji ima aminokiselinske sekvence: SEK ID BR: 298, SEK ID BR: 62 i SEK ID BR: 63, respektivno.
[0023] Pronalazak se dalje odnosi na slučaj takvih molekula koji vežu humane PD-1, pri čemu je molekul dijatelo, a posebno, pri čemu je dijatelo kovalentno vezan kompleks koji sadrži dva, tri, ili četiri ili pet polipeptidnih lanaca. Pronalazak se dalje odnosi na slučaj takvih molekula koji se vezuju za humane PD-1, pri čemu je molekul trovalentni vezujuć i molekul, a posebno pri čemu je molekul trovalentnog vezivanja kovalentno vezan kompleks koji sadrži tri, četiri, pet ili više od pet lanaca polipeptida. Pronalazak se dodatno odnosi na slučaj takvih molekula koji se vezuju za humane PD-1 u kojima molekul sadrži Fc region. Pronalazak se dodatno odnosi na slučaj takvih molekula koji se vezuju za humane PD-1 u kojima molekul sadrži domen koji veže albumin, a posebno deimunizovan domen koji veže albumin.
[0024] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve svih takvih molekula koji vezuju humani PD-1, pri čemu molekul sadrži Fc region, i gde je Fc region varijanta Fc regiona koji sadrži jednu ili više aminokiselinskih modifikacija koje smanjuju afinitet varijantnog Fc regiona za FcgR i/ili produžava poluživot u serumu, a naročito, pri čemu modifikacije sadrže najmanje jednu aminokiselinsku supstituciju izabranu iz grupe koju čine:
(1) L234A; L235A;
(2) L234A i L235A;
(3) M252Y; M252Y i S254T;
(4) M252Y i T256E;
(5) M252Y, S254T i T256E; ili
(6) K288D i H435K;
pri čemu je numerisanje indeksa EU kao u Kabatu.
[0025] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve u kojima se bilo koji od napred opisanih molekula koji vežu PD-1 koristi za stimulaciju imunološkog odgovora posredovanog T-ć elijama. Pronalazak se dodatno odnosi na slučajeve u kojima se bilo koji od napred opisanih molekula koji vežu PD-1 koristi u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa potisnutim imunološkim sistemom, posebno rakom ili infekcijom.
[0026] Pronalazak se posebno odnosi na takvu upotrebu u lečenju ili dijagnostici ili prognozi raka, pri čemu se rak karakteriše prisustvom ć elije raka izabrane iz grupe koju čine ć elije: tumor nadbubrežne žlezde, rak povezan sa AIDS-om, alveolarni sarkom mekog dela, astrocitni tumor, rak bešike, rak kostiju, rak mozga i kičmene moždine, metastatski tumor mozga, rak dojke, tumori karotidnog tela, rak grlić a materice, hondrosarkom, hordoma, hromofobni karcinom bubrežnih ć elija, karcinom čistih ć elija, rak debelog creva, kolorektalni karcinom, kožni benigni vlaknasti histiocitom, desmoplastični tumor malih okruglih ć elija, ependimom, Evingov tumor, ekstraskeletni miksoidni hondrosarkom, fibrogeneza nesavršeni kalijum displazija kostiju, rak žučne kese ili žučnih puteva, rak želuca, gestacijska trofoblastna bolest, tumor zametnih ć elija, rak glave i vrata, hepatocelularni karcinom, Kaposijev sarkom, rak bubrega, leukemija, lipom/benigni lipomatozni tumor, liposarkom/maligni lipomatozni tumor, rak jetre, limfom, rak pluć a, meduloblastom, melanom, meningiom, multipla endokrina neoplazija, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom, neuroblastom, neuroendokrini tumori, rak jajnika, rak pankreasa, papilarni karcinom štitne žlezde, paratiroidni tumor, pedijatrijski karcinom, tumor perifernih nervnih ovojnica, feohromocitom, tumor hipofize, prostata rak, strašni uvealni melanom, retki hematološki poremeć aj, bubrežni metastatski rak, rabdoidni tumor, rabdomisarkom, sarkom, rak kože, sarkom mekih tkiva, karcinom pločastih ć elija, rak želuca, sinovijalni sarkom, rak testisa, karcinom timusa, timom, metastatski rak štitne žlezde i rak materice.
[0027] Pronalazak se posebno odnosi na takvu upotrebu u lečenju ili dijagnostici ili prognozi karcinoma, pri čemu je rak kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, gliom, rak bubrega, rak dojke, multipla mijelom, rak bešike, neuroblastom; sarkom, ne-Hodgkinov limfom, nedrobnoć elijski karcinom plu ć a, rak jajnika, pankreatični karcinom, rektalni karcinom, akutna mijeloična leukemija (AML), hronična mijeloična leukemija (CML), akutna B limfofinijska leukemija (B-ALL ), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija dlakavih ć elija (HCL), blastična neoplazma dendritičkih ć elija plazmacitoidnih ć elija (BPDCN), ne-Hodgkinovi limfomi (NHL), uključuju ć i leukemiju mantel ć elija (MCL) i mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkinova bolest limfom, sistemska mastocitoza ili Burkittov limfom.
[0028] Pronalazak se dalje odnosi na slučajeve u kojima je bilo koji od napred opisanih molekula koji se vezuje za PD-1 detektabilno obeležen i koristi se za detekciju PD-1.
Kratak opis slika
[0029]
Slika 1 daje šemu reprezentativno kovalentno vezanog dijatela koje ima dva epitop-vezujuć a mesta sastavljena od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki ima E-zavojnicu ili K-zavojnicu heterodimera koja promoviše domen. Ostatak cisteina može biti prisutan u linkeru i/ili u domenu koji promoviše heterodimer, kao što je prikazano na slici 3B. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazani su koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slika 2 prikazuje šemu reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela sa dva epitop-vezujuć a mesta sastavljena od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki ima domen CH2 i CH3, tako da povezani lanci formiraju celu ili deo Fc regiona. VL i VH domeni koje prepoznaju isti epitop prikazuju se koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slike 3A-3C pružaju šeme koje prikazuju reprezentativna četvorovalentna dijatela sa četiri epitop-vezujuć a mesta sastavljena od dva para polipeptidnih lanaca (tj. ukupno četiri polipeptidna lanca). Jedan polipeptid svakog para poseduje domen CH2 i CH3, tako da povezani lanci formiraju celu ili deo Fc regije. VL i VH domeni koji prepoznaju isti epitop prikazuju se koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja. Dva para polipeptidnih lanaca mogu biti ista. U takvim slučajevima gde VL i VH domeni prepoznaju različite epitope (kao što je prikazano na slikama 3A-3C), dobijeni molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i bispecifičan je i dvovalentan u odnosu na svaki vezani epitop. U takvim slučajevima u kojima VL i VH domeni prepoznaju isti epitop (npr. Isti CDR-ovi VL domen i isti CDR-i VH domen se koriste na oba lanca), dobijeni molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i monospecifičan je i četvorovalentan u odnosu na do jednog epitopa. Alternativno, dva para polipeptida mogu biti različita. U takvim slučajevima gde VL i VH domeni svakog para polipeptida prepoznaju različite epitope (kao što je prikazano na slikama 3A-3C), rezultujuć i molekul poseduje četiri mesta za vezivanje epitopa i tetraspecifičan je i monovalentan u odnosu na svaki vezani epitop. Slika 3A prikazuje Fc dijatelo koje sadrži peptidni domen koji promoviše heterodimer koji sadrži ostatak cisteina. Slika 3B prikazuje dijatelo koje sadrži Fc regiju, koje sadrži E-zavojnice i K-zavojnice domena za promociju heterodimera, koje se sastoji od ostatka cisteina i linkera (sa opcionim ostatkom cisteina). Slika 3C, prikazuje Fc-region koje sadrži dijatelo, koje sadrži CH1 i CL domene antitela.
Slike 4A i 4B daju šeme reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela koji ima dva mesta za vezivanje epitopa sastavljena od tri polipeptidna lanca. Dva polipeptidna lanca poseduju domen CH2 i CH3, tako da povezani lanci čine celu ili deo Fc regiona. Polipeptidni lanci koji obuhvataju VL i VH domen dalje sadrže domen koji promoviše heterodimer. VL i VH domeni koje prepoznaju isti epitop prikazuju se koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slika 5 prikazuje šeme reprezentativnog kovalentno vezanog molekula dijatela koji ima četiri mesta za vezivanje epitopa sastavljena od pet polipeptidnih lanaca. Dva polipeptidna lanca poseduju domen CH2 i CH3, tako da povezani lanci formiraju Fc regiju koja obuhvata celu ili deo Fc regije. Polipeptidni lanci koji sadrže povezane VL i VH domene dalje sadrže domen koji promoviše heterodimer. VL i VH domeni koje prepoznaju isti epitop prikazuju se koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slike 6A-6F pružaju šeme reprezentativnih molekula trovalentnog vezivanja koji sadrže region Fc koji imaju tri mesta za vezivanje epitopa. Slike 6A i 6B, redom, šematski prikazuju domene trovalentnih vezujuć ih molekula koji se sastoje od dva vezujuć a domena tipa dijatela i vezujućeg domena tipa Fab koji imaju različitu orijentaciju domena u kojima su vezni domeni tipa dijatela N-terminalni ili C-terminalni deo i Fc region. Molekuli na slikama 6A i 6B sadrže četiri lanca. Slike 6C i 6D, redom, ilustruju šematski domene trovalentnih vezujuć ih molekula koji se sastoje od dva domena veznog tipa dijatela N-terminala za Fc region, i veznog domena tipa Fab u kome su laki lanac i teški lanac obojeni polipeptidom vezom ili vezujućim domenom tipa scFv. Molekuli trovalentnog vezivanja na slikama 6E i 6F, redom, ilustruju šematski domene trovalentnih vezujuć ih molekula koji sadrže dva domena vezivanja tipa dijatela, C-terminal za Fc region, i povezani vezni domen tipa Fab, ili vezni domen tipa scFv u kojima su domeni vezivanja tipa dijatela. Molekuli trovalentnog vezivanja na slikama 6C-6F sadrže tri lanca. VL i VH domeni koje prepoznaju isti epitop prikazuju se koristeć i isti obrazac senčenja ili popunjavanja.
Slike 7A-7D pokazuju da se PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za humani PD-1. Krive vezivanja za vezivanje za shPD-1-His prikazane su na slici 7A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 4 i PD-1 mAb 9), slici 7B (PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6 i PD-1 mAb 7) i slici 7C (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD- 1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15). Krive vezivanja za vezivanje za shPD-1 humani Fc prikazane su na slici 7D (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15).
Slike 8A-8C pokazuju da se PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za cinomolgus majmuna PD-1. Krive vezivanja za vezivanje za scinoPD-1-hFc prikazane su na slici 8A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7), slici 8B (PD-1 mAb 9) i slici 8C (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15).
Slike 9A -9D pokazuju sposobnost PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1. Krive inhibicije su prikazane na slici 9A (PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 15 i PD-1 mAb A), slici 9B (PD-1 mAb 4), slici 9C (PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7 i PD-1 mAb A) i slici 9D (PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 10 , PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, PD-1 mAb 15 i PD-1 mAb A).
Slike 10A-10B pokazuju specifičnost tkiva anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7. Slika 10A prikazuje histološke mrlje normalnog debelog creva (paneli i i vii), jetre (paneli ii i viii), pluć a (paneli iii i ix), tkiva pankreasa (paneli iv i x), bubrega (paneli v i xi) i srca (paneli vi i xii). Slika 10A, paneli i-vi prikazuju rezultate tkiva inkubiranog sa obeleženim PD-1 mAb 7 (0,313 mg/mL). Slika 10A, paneli vii-xii prikazuju rezultate tkiva inkubiranog sa obeleženim izotipom kontrolnog mAb (0,314 mg/mL). Slika 10B prikazuje histološke mrlje kože (paneli i iv), krajnika (paneli ii i v) i NSO ć elije koje eksprimiraju PD-1 (paneli iii i vi).
Slika 10B, paneli i-iii prikazuju rezultate tkiva inkubiranog sa obeleženim PD-1 mAb 7 (0,313 mg/mL).
Slika 11 prikazuje profile vezivanja humanizovanih anti-humanih antitela na PD-1 hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.1), hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) za vezivanje zać elijsku površinu PD-1.
Slike 12A-12B pokazuju sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.1), hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentnih anti -PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) da blokiraju vezivanje rastvorljivog humanog PD-L1 (slika 12A) i rastvorljivog ljudskog PD-L2 (slika 12B ) nać elijsku površinu ljudskog PD-1.
Slika 13 prikazuje sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.1), hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentnog anti-PD -1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koja imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) da antagoniziraju osovinu PD-1/PD-L1 blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1 i sprečavanjem -regulacija odgovora T-ć elija u Jurkat-luc-NFAT / CHO-PD-L1 reporter testu.
Slika 14 pokazuje da su PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 sposobni da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa uporedivih ili viših od navedenih anti-PD-1 antitela (PD- 1 mAb A i PD-1 mAb B) i taj tretman sa PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 u kombinaciji sa LAG-3 mAb 1 obezbedio je najveć e pove ć anje oslobađanje citokina. Profili sekrecije IFNg iz stafilokoknih enterotoksina B (SEB) -stimuliranih PBMC-ova tretiranih sa anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitelima sami i u kombinaciji.
Slike 15A-15B pokazuju sposobnost humanizovanih anti-PD antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7 (1.2), hPD-1 mAb 9 (1.1) i referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B, koji imaju IgG1 (AA) ili IgG4 (P) za stimulisanje proizvodnje citokina. IFNg (Slika 15A) i TNFa (Slika 15B), profili sekrecije iz SEB-stimulisanih PBMC-a tretiranih sa anti-PD-1 antitelima.
Slike 16A-16B pokazuju da su PD-1 x LAG-3 bispecifični dijatelesni konstrukti DART A, DART D, DART E, DART F, DART G i DART H sposobni da stimulišu proizvodnju citokina do nivoa uporedivog ili višeg od onog koji je primeć en nakon davanje kombinacije anti-PD-1 mAb i anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A), i da PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo konstruiše DART A , DART D, DART E, DART F i DART G čime su obezbedili su najveć e pove ć anje oslobađanja citokina. Profili sekrecije IFNg PBMC-a stimulisani niskom koncentracijom SEB (0,2 ng/mL tretirani sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima, ili samo na antitela na PD-1 i anti-LAG-3 i u kombinaciji. Rezultati dobijeni pomoć u PBMC-ova dva reprezentativna donatora prikazani su na slici 16A i slici 16B.
Slike 17A-17B pokazuju da su PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela DART A, DART B i DART C sposobni da stimulišu proizvodnju citokina na nivoa već eg od onih koji su prime ć eni primenom kombinacije anti-PD-1 mAb anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). Profili sekrecije IFNg PBMC-a od dva reprezentativna davaoca, stimulisani visokom koncentracijom SEB (85 ng/mL) tretiranih sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima, ili samo anti-PD-1 antitelima i anti-LAG-3 i u kombinaciji su iscrtani. Rezultati dobijeni pomoć u PBMC-a dva reprezentativna donatora prikazani su na slici 17A i slici 17B.
Slike 18A-18B pokazuju da su PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela DART A, DART B i DART C sposobni da stimulišu proizvodnju citokina na nivou već em od onih koji su prime ć eni primenom kombinacije anti-PD-1 mAb i anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). Profili sekrecije IFNg PBMC od dva reprezentativna davaoca, stimulisani srednjom koncentracijom SEB (0,5 ng/mL) tretirani sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima, ili samo anti-PD-1 antitelima i anti-LAG-3 i u kombinaciji su iscrtani. Rezultati dobijeni pomoć u PBMC -a dva reprezentativna donatora prikazani su na slici 18A i slici 18B.
Slika 19 pokazuje da PD-1 x LAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela DART D i DART H može da stimuliše proizvodnju citokina do nivoa uporedivog ili višeg od onog koji je primeć en primenom kombinacije anti-PD-1 mAb an anti-LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A), i da je DART D obezbedio najveć e pove ć anje oslobađanja citokina. Profili sekrecije IL-2 PBMC od reprezentativnog donora stimulisani visokom koncentracijom SEB (85 ng/mL) tretiranom sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima ili samo anti PD-1 antitelima i anti-LAG-3 a u kombinaciji su iscrtani.
Slika 20 pokazuje da su PD-1 x LAG-3 bispecifični dijatelesni konstrukti DART B i DART I sposobni da stimulišu proizvodnju citokina na nivoe već e od onog koji je prime ć en primenom kombinacije anti-PD-1 mAb i LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A, hPD-1 mAb 7 (1.2) hLAG-3 mAb 1 (1.4), hPD-1 mAb 7 (1.2) hLAG-3 mAb 6 ( 1.1)). Profili sekrecije IFNg PBMC od reprezentativnog davaoca, stimulisani srednjom koncentracijom SEB (0,5 ng/mL) tretiranom sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim antitelima, ili samo anti-PD-1 antitelima i anti-LAG-3 i u kombinaciji su iscrtani.
Slike 21A-21D pokazuju da je PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo DART I sposobno da stimuliše proizvodnju citokina na nivoe već e od onog koji je prime ć en primenom kombinacije anti-PD-1 mAb i LAG-3 mAb (PD-1 mAb A LAG-3 mAb A). IFNg (slike 21A i 21C) i IL-2 (slike 21B i 21D) profili sekrecije CD4 memorijskih ć elija od dva reprezentativna davaoca, stimulisani tetanusnim toksoidom (5 mg/mL) tretirani sa PD-1 x LAG-3 bispecifičnim dijatelom kada se ucrtavaju DART-I, anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela u kombinaciji ili kontrola izotipa. Rezultati 7. dana dobijeni korišć enjem CD4 memorijskih T ć elija od dva reprezentativna davaoca prikazani su na slikama 21A-B i slikama 21C-D.
Slika 22 pokazuje da je farmakokinetika PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula, DART I uporediva sa onima anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb A IgG4 (P) u majmuna cinomolgus. Linije pokazuju srednju serumsku koncentraciju DART I (čvrsta) i PD-1 mAb A (isprekidana). Pojedinačne vrednosti za mužjake (ispunjene) i ženke (otvorene) majmune iscrtane su za DART I (trouglovi) i PD-1 mAb A (krugovi).
Slike 23A-23C pokazuju koncentracije antitela u serumu i procenat vezanog PD-1 na površini CD4+ ili CD8+ T ć elija tokom vremena kod životinja nakon tretmana sa različitim anti-PD-1 antitelima. Procenat vezanog PD-1 na površini CD4+ ili CD8+ T ć elija nakon tretmana sa mAb anti-PD 1 naveden je na desnoj y-osi; simboli predstavljaju % vezanog PD 1 na Tć elijama za svaku pojedinačnu životinju, a isprekidane linije predstavljaju srednje vrednosti. Koncentracije serumskog mAb iscrtane su na levoj y-osi; simboli predstavljaju nivoe seruma za svaku pojedinu životinju, a pune linije predstavljaju nelinearno uklapanje podataka. Svaki panel prikazuje podatke za životinje (n = 1/pol/grupu) kojima se daje 10 mg/kg hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) (slika 23A), PD-1 mAb A IgG4 (P) (slika 23B), ili PD-1 mAb B IgG4 (P) (slika 23B) IV infuzijom prvog dana.
Detaljan opis pronalaska
[0030] Ovaj pronalazak je usmeren na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji sadrže domen za vezivanje PD-1 selektovanih antitela na PD-1 sposobnih za vezivanje i za PD-1 majmuna cinomolgus i za humani PD-1: PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD- 1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Pronalazak se posebno odnosi na vezivanje PD-1 molekula koji su humanizovane ili himerne verzije takvih antitela, ili koji sadrže fragmente koji vezuju PD-1 takvih anti-PD-1 antitela (naročito imunokongugate, dijatela (uključujuć i, ali bez ograničenja na DART-A, DART-B, DART-C , DART-D, DART-E, DART-F, DART-G, DART-H, DART-I i DART-J), BiTE, bispecifična antitela itd.). Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji su dodatno sposobni da vezuju epitop molekula uključenog u regulaciju imunološke kontrolne tačke koja je prisutna na površini imunske ć elije. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke upotrebe takvih molekula koji vezuju PD-1 za detekciju PD-1 ili za stimulisanje imunološkog odgovora. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke kombinovane terapije u kojima se PD-1-vezujuć i molekul koji sadrži jedan ili više PD-1-vezujuć ih domena (ova) odabranih anti-PD-1 antitela primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji su efikasni u stimulisanju imunološkog odgovora i/ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih molekula koji specifično vezuju antigen raka.
I. Antitela i njihov vezujući domen
[0031] Antitela prema ovom pronalasku su molekuli imunoglobulina sposobni za specifično vezivanje za metu, kao što su ugljeni hidrati, polinukleotidi, lipidi, polipeptidi, itd., Preko najmanje jednog seta za prepoznavanje antigena, koji se nalaze u promenljivom domenu molekula imunoglobulina. Kako se ovde koristi, termini "antitelo" i "antitela" se odnose na monoklonska antitela, multispecifična antitela, ljudska antitela, humanizovana antitela, sintetička antitela, himerna antitela, poliklonska antitela, kamelizovana antitela, jednolančani Fvs (scFv), jednolančana antitela, Fab fragmente, F (ab') fragmente, disulfidno vezane bispecifične Fvs (sdFv), intratela i fragmente koji vezuju epitope bilo
1
čega od napred navedenog. Konkretno, antitela uključuju molekule imunoglobulina i imunološki aktivne fragmente molekula imunoglobulina, tj. molekule koji sadrže mesto za vezivanje antigena. Molekuli imunoglobulina mogu biti bilo koje vrste (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgI), klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase. Pored njihove poznate upotrebe u dijagnostici, antitela su se pokazala korisnim i kao terapijska sredstva. Antitela su sposobna za imunospecifično vezivanje za polipeptid ili protein ili neproteinski molekul zbog prisustva na tom molekulu određenog domena ili dela ili konformacije ("epitopa"). Molekul koji sadrži epitop može imati imunogeno delovanje, tako da izaziva odgovor na stvaranje antitela kod životinje; takvi molekuli se nazivaju "antigeni"). U poslednjih nekoliko decenija došlo je do oživljavanja interesovanja za terapeutski potencijal antitela, a antitela su postala jedna od vodeć ih klasa lekova dobijenih biotehnologijom (Chan, CE et al. (2009) "Upotreba antitela u lečenju Infectural Diseases, "Singapore Med. J. 50 (7): 663-666). Preko 200 lekova zasnovanih na antitelima odobreno je za upotrebu ili su u postupku.
[0032] Izraz "monoklonsko antitelo" odnosi se na populaciju homogenih antitela gde se monoklonsko antitelo sastoji od aminokiselina (prisutnih u prirodi i koje se ne pojavljuju u prirodi) koje su uključene u selektivno vezivanje antigena. Monoklonska antitela su visoko specifična, usmerena su protiv jednog epitopa (ili antigenog mesta). Izraz "monoklonsko antitelo" ne obuhvata samo netaknuta monoklonska antitela i monoklonska antitela pune dužine, već i njihove fragmente (poput Fab, Fab', F (ab') 2 Fv), jednolančane (scFv), njihove mutante, fuzione proteine koji sadrže deo antitela, humanizovana monoklonska antitela, himerna monoklonska antitela i bilo koju drugu modifikovanu konfiguraciju molekula imunoglobulina koja sadrži mesto za prepoznavanje antigena potrebne specifičnosti i sposobnosti vezivanja za antigen. Ne namerava se ograničiti u pogledu izvora antitela ili načina na koji je ono napravljeno (na primer, hibridomom, selekcijom faga, rekombinantnom ekspresijom, transgenim životinjama itd.). Izraz uključuje cele imunoglobuline, kao i fragmente itd. napred opisane pod definicijom "antitela". Postupci stvaranja monoklonskih antitela poznati su u tehnici. Jedan metod koji se može koristiti je metod Kohler, G. et al. (1975) "Kontinuirane kulture fuzionisanih ć elija koje luče antitelo unapred definisane specifičnosti", Nature 256: 495-497 ili njegove modifikacije. Obično se monoklonska antitela razvijaju kod miševa, pacova ili zečeva. Antitela se proizvode imunizacijom životinje imunogenom količinom ć elija, ć elijskim ekstraktima ili proteinskim preparatima koji sadrže željeni epitop. Imunogen može biti, ali nije ograničen na, primarne ć elije, kultivisane ć elijske linije, ć elije raka, proteine, peptide, nukleinske kiseline ili tkivo. Ć elije koje se koriste za imunizaciju mogu se uzgajati u određenom vremenskom periodu (na primer, najmanje 24 sata) pre nego što se upotrebe kao imunogen. Ć elije se mogu same koristiti kao imunogeni ili u kombinaciji sa nedenaturirajuć im adjuvansom, kao što je Ribi (vidi, npr., Jennings, VM (1995) "Pregled odabranih adjuvansa koji se koriste u proizvodnji antitela", ILAR J. 37 (3) : 119-125). Generalno, ć elije treba da budu očuvane i poželjno održive kada se koriste kao imunogeni. Netaknute ć elije mogu dozvoliti da imunizovana životinja bolje detektuje antigene nego pukle ć elije. Upotreba denaturišu ć ih ili oštrih adjuvansa, na primer, Frojdovog adjuvansa, može da dovede do pucanjać elije i stoga se ne preporučuje. Imunogen se može primenjivati više puta u periodičnim intervalima, kao što je, dvonedeljno ili nedeljno, ili se može primenjivati na takav način da održava životnu sposobnost kod životinja (npr. U tkivnom rekombinantnom). Alternativno, postojeć a monoklonska antitela i bilo koja druga ekvivalentna antitela koja su imunospecifična za željeni patogeni epitop mogu se sekvencirati i proizvesti rekombinantno na bilo koji način poznat u tehnici. U jednom slučaju, takvo antitelo je sekvencirano i polinukleotidna sekvenca je zatim klonirana u vektor za ekspresiju ili razmnožavanje. Sekvenca koja kodira antitelo od značaja može se održavati u vektoru u ć eliji doma ć inu, a ć elija doma ć in se zatim može proširiti i zamrznuti za buduć u upotrebu. Polinukleotidna sekvenca takvih antitela može se koristiti za genetsku manipulaciju za generisanje monospecifičnih ili multispecifičnih (na primer, bispecifičnih, trispecifičnih i tetraspecifičnih) molekula iz ovog pronalaska, kao i afini optimizovano, himerno antitelo, humanizovano antitelo i/ili kaninizirano antitelo, radi poboljšanja afiniteta ili drugih karakteristika antitela. Opšti princip humanizacije antitela uključuje zadržavanje osnovne sekvence dela antitela koji se vezuje za antigen, uz zamenu nehumanog ostatka antitela sa sekvencama humanih antitela.
[0033] Prirodna antitela (kao što su IgG antitela) sastavljena su od dva laka lanca kompleksirana sa dva teška lanca. Svaki laki lanac sadrži promenljivi domen (VL) i konstantan domen (CL). Svaki teški lanac sadrži promenljivi domen (VH), tri konstantna domena (CH1, CH2 i CH3) i domen šarki koji se nalazi između domena CH1 i CH2. Osnovna strukturna jedinica prirodnih imunoglobulina (npr., IgG) je prema tome tetramer koji ima dva laka lanca i dva teška lanca, obično izražena kao glikoprotein od oko 150.000 Da. Amino-terminalni ("N-terminalni") deo svakog lanca uključuje promenljivi domen od oko 100 do 110 ili više aminokiselina prvenstveno odgovornih za prepoznavanje antigena. Karboksi-terminalni ("C-terminalni") deo svakog lanca definiše konstantan region, pri čemu laki lanci imaju jedan konstantan domen, a teški lanci obično tri konstantna domena i domen šarki. Dakle, struktura lakih lanaca molekula IgG je n-VL-CL-c, a struktura teških lanaca IgG n-VH-CH1-H-CH2-CH3-c (gde je H domeni šarki, i n i c predstavljaju, respektivno, N-kraj i C-kraj polipeptida). Promenljivi domeni molekula IgG sastoje se od određivanja komplementarnosti regiona (CDR), koji sadrže ostatke u kontaktu sa epitopom, i anti-CDR segmente, koji se nazivaju okvirni segmenti (FR), koji generalno održavaju strukturu i određuju pozicioniranje CDR petlji kako bi se omoguć ilo takvo kontaktiranje (iako određeni okvirni ostaci mogu takođe kontaktirati antigen). Dakle, VL i VH domeni imaju strukturu n-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-c. Polipeptidi koji su (ili mogu služiti kao) prvi, drugi i treć i CDR lakog lanca antitela ovde su označeni respektivno kao domen CDRL1, domen CDRL2 i domena CDRL3. Slično, polipeptidi koji su (ili mogu služiti kao) prvi, drugi i treć i CDR teškog lanca antitela ovde su označeni kao domen CDRH1, domen CDRH2 i domen CDRH3. Prema tome, termini domena CDRL1, domena CDRL2, domena CDRL3, domena CDRH1, domena CDRH2 i domena CDRH3 usmereni su na polipeptide koji, kada se ugrade u protein, uzrokuju da se taj protein veže za određeni epitop, bez obzira na to da li je takav protein je antitelo koje ima lake i teške lance ili dijatelo ili molekul vezivanja sa jednim lancem (npr. scFv, BiTe, itd.), ili je druga vrsta proteina. Shodno tome, kako se ovde koristi, izraz "fragment koji se veže za epitop" označava fragment antitela sposobnog za imunospecifično vezivanje za epitop, a izraz "mesto za vezivanje epitopa" odnosi se na onaj deo molekula koji sadrži fragment koji se veže za epitop koji je odgovoran za vezivanje epitopa. Mesto za vezivanje epitopa može sadržati 1, 2, 3, 4, 5 ili svih 6 domena CDR takvog antitela i, iako je sposobno za imunospecifično vezivanje za takav epitop, može pokazati imunospecifičnost, afinitet ili selektivnost prema takvom epitopu koji se razlikuje od onog takvog antitela. Poželjno je, međutim, da fragment koji veže epitop sadrži svih 6 domena CDR takvog antitela. Fragment antitela koji se vezuje za epitop može biti jedan polipeptidni lanac (npr. ScFv), ili može sadržati dva ili više polipeptidnih lanaca, od kojih svaki ima amino kraj i karboksi kraj (na primer, jedno telo, Fab fragment, F (ab ') 2 fragment itd.).
[0034] Pronalazak posebno obuhvata fragmente promenljivih domena sa jednim lancem ("scFv") anti-PD-1 antitela iz ovog pronalaska i molekule sa više specifičnih vezivanja koji ih sadrže. Fragmenti promenljivog domena sa jednim lancem nastaju povezivanjem lakog i/ili teškog lanca promenljivog domena korišć enjem kratkog peptida za povezivanje. Bird i dr. (1988) ("Jednolančani proteini koji vezuju antigen", Science 242: 423-426) opisuje primer povezivanja peptida koji premošć uju približno 3,5 nm između karboksi završetka jednog promenljivog domena i amino završetka drugog promenljivog domena. Dizajnirani su i korišć eni linkeri drugih sekvenci (Bird et al. (1988) "Single-Chain Antigen-Binding Proteins", Science 242: 423-426). Linkeri se zauzvrat mogu modifikovati za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili vezivanje za čvrste nosače. Varijante sa jednim lancem mogu se proizvesti rekombinantno ili sintetički. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatizovani sintisajzer. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, odgovarajuć i plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv može se uvesti u odgovarajuć u ć eliju doma ć ina, bilo eukariotsku, poput ć elija kvasca, biljaka, insekata ili sisara, ili prokariotsku, poput E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od značaja mogu se napraviti rutinskim manipulacijama kao što je vezivanje polinukleotida. Dobijeni scFv se može izolovati primenom standardnih tehnika prečišć avanja proteina poznatih u tehnici.
[0035] Pronalazak takođe posebno obuhvata humanizovane varijante anti-PD-1 antitela iz pronalaska i multispecifične vezuju ć e molekule koji ih sadrže. Izraz "humanizovano" antitelo se odnosi na himerni molekul, generalno pripremljen primenom rekombinantnih tehnika, koji ima antigen-vezujuć e mesto imunoglobulina iz nehumane vrste i preostalu imunoglobulinsku strukturu molekula zasnovanu na strukturi i/ili sekvencu humanog imunoglobulina. Anti-humana antitela na PD-1 prema ovom pronalasku uključuju humanizovane, himerne ili kaninizirane varijante antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5 , PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD -1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15. Polinukleotidna sekvenca varijabilnih domena takvih antitela može se koristiti za genetsku manipulaciju za generisanje takvih derivata i poboljšanje afiniteta ili drugih karakteristika takvih antitela. Opšti princip humanizacije antitela uključuje zadržavanje osnovne sekvence dela antitela koji se vezuje za antigen, uz zamenu nehumanog ostatka antitela sa sekvencama humanih antitela. Postoje četiri opšta koraka za humanizaciju monoklonalnog antitela. To su: (1) određivanje nukleotida i predviđena aminokiselinska sekvenca početne lakih i teških promenljivih domena antitela (2) za projektovanje humanizovanog antitela ili kanizovanog antitela, odnosno, odlučivanje koji okvirni okvir antitela ć e se koristiti tokom procesa humanizacije ili kanonizacije (3) stvarne metodologije/tehnike humanizacije ili kaniziranja i (4) transfekcija i ekspresija humanizovanog antitela. Videti, na primer, US br. 4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; i 6,331,415.
[0036] Mesto koje se vezuje za antigen može sadržati ili kompletan promenljivi domen spojen sa konstantnim domenom ili samo regione za određivanje komplementarnosti (CDR) takvog promenljivog domena kalemljenog na odgovarajuć a okvirna područja. Mesta za vezivanje antigena mogu biti divljeg tipa ili modifikovana jednom ili više supstitucija aminokiselina. Ovo eliminiše konstantnu regiju kao imunogen kod ljudskih pojedinaca, ali ostaje moguć nost imunološkog odgovora na strani promenljivi domen (LoBuglio, AF et al. (1989) "Miš/humano himerno monoklonsko antitelo kod čoveka: kinetika i imunološki odgovor, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86: 4220-4224). Drugi pristup se ne fokusira samo na obezbeđivanje konstantnih regiona izvedenih od čoveka, već i na promenu promenljivih domena tako da ih preoblikuju što je moguć e bliže ljudskom obliku. Poznato je da promenljivi domeni i teških i lakih lanaca sadrže tri regiona za određivanje komplementarnosti (CDR) koji variraju u odgovoru na dotične antigene i određuju sposobnost vezivanja, okruženi sa četiri okvirna regiona (FR) koji su relativno očuvani u date vrste i koje navodno pružaju skele za CDR -ove. Kada se ne-humana antitela pripremaju u odnosu na određeni antigen, promenljivi domeni mogu biti "preoblikovani" ili "humanizovani" kalemljenjem CDR-a izvedenih iz ne-humanog antitela na FR-ove prisutne u ljudskom antitelu koje treba modifikovati. Primenu ovog pristupa na različita antitela prijavili su Sato, K. i sar. (1993) Cancer Res 53: 851-856. Riechmann, L. i sar. (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela za terapiju", Nature 332: 323-327; Verhoeien, M. et al. (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela: kalemljenje antilizomske aktivnosti", Nauka 239: 1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) "Humanizacija mišjeg monoklonalnog antitela CDR-kalemljenjem: važnost okvirnih ostataka na konformaciji petlje", Protein Engineering 4: 773-3783; Maeda, H. i sar. (1991) "Konstrukcija preoblikovanih humanih antitela sa aktivnošć u neutralisanja HIV-a", Hibridoma ljudskih antitela 2: 124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) "Preoblikovanje terapeutskog antitela na CD4", Proc. Natl. Akad. Sci. (U.S.A.) 88: 4181-4185; Tempest, P. R. i sar. (1991) "Preoblikovanje humanog monoklonalnog antitela za inhibiranje infekcije sincicijalnog virusa humanih respiratornih organa in vivo", Bio/Technologi 9: 266-271; Co, M. S. i sar. (1991) "Humanizovana antitela za antivirusnu terapiju", Proc. Natl. Akad. Sci.
(U.S.A.) 88: 2869-2873; Carter, P.etal. (1992) "HumanizationOfAnAnti-p185her2AntibodiForHumanCancerTherapi," Proc. Natl. Akad. Sci. (U.S.A.) 89: 4285-4289; i Co, M.S. et al. (1992) "Himerna i humanizovana antitela sa specifičnošć u za CD33 antigen", J. Immunol. 148: 1149-1154. U nekim slučajevima, humanizovana antitela čuvaju sve CDR sekvence (na primer, humanizovano mišje antitelo koje sadrži svih šest CDR iz mišjih antitela). U drugim slučajevima, humanizovana antitela imaju jedan ili više CDR -ova (jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest) koji se razlikuju u sekvenci u odnosu na originalno antitelo.
[0037] Opisani su brojni "humanizovani" molekuli antitela koji sadrže mesto za vezivanje antigena izvedeno iz imunoglobulina koji nije humani, uključujuć i himerna antitela koja imaju varijabilni domen glodara ili modifikovane glodare i njihove povezane regione za određivanje komplementarnosti (CDR) spojene sa ljudima Constant Domains (vidi, na primer, Winter et al. (1991) "Man-made Antibodies", Nature 349: 293-299; Lobuglio et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Moncleonal Antibodi In Man: Kinetics And Immune Response, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86: 4220-4224 (1989), Shav et al. (1987)" Characterization of a Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antitelo (17-1A) to A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen, "J. Immunol.138: 4534-4538, and Brovn et al. (1987)" Tumor-Specific Genetic Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody, "Cancer Res. 47: 3577-3583). Druge reference opisuju CDR-ove glodara kalemljene u okvir ljudskog potpornog okvira (FR) pre fuzije sa odgovarajuć im konstantnim domenom humanog antitela (videti, na primer, Riechmann, L. et al. (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela za terapiju", Priroda 332: 323-327; Verhoeien, M. i saradnici (1988) "Preoblikovanje ljudskih antitela: kalemljenje antilizomske aktivnosti", Science 239: 1534-1536; i Jones et al. (1986) "Zamena regiona koji određuju komplementarnost u Ljudsko antitelo sa onima od miša, „Priroda 321: 522-525). Druga referenca opisuje CDR glodara podržane rekombinantno furniranim okvirnim regionima glodara. Videti, na primer, EP br. 519,596. Ovi "humanizovani" molekuli su dizajnirani da minimiziraju neželjeni imunološki odgovor na molekule antitela glodara, što ograničava trajanje i efikasnost terapeutske primene ovih delova na ljudima. Druge metode humanizacije antitela koje se takođe mogu koristiti otkrivaju Daugherty et al. (1991) "Lančana reakcija polimeraze olakšava kloniranje, presađivanje CDR-a i brzu ekspresiju mišjeg monoklonalnog antitela usmerenog protiv komponente CD18 leukocitnih integrina", Nucl. Acids Res.
19: 2471-2476 i u US br.6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; i 5,866,692.
II. Fcγ receptori (FcyRs)
[0038] CH2 i CH3 domeni dva teška lanca međusobno deluju i formiraju Fc region, koji je domen koji prepoznaju ć elijski Fc receptori, uključuju ć i, ali bez ograničenja, Fc gama receptore (FcγRs). Kako se ovde koristi, izraz "Fc region" se koristi za definisanje C-terminalnog regiona teškog lanca IgG. Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG1 je (SEK ID BR: 1):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
[0039] Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG2 je (SEK ID BR: 2):
1
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
[0040] Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG3 je (SEK ID BR: 3):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
[0041] Aminokiselinska sekvenca domena CH2-CH3 primernog humanog IgG4 je (SEK ID BR: 4):
kako je označeno indeksom EU kako je navedeno u Kabatu, pri čemu je X lizin (K) ili ga nema.
[0042] U ovoj specifikaciji, numerisanje ostataka u konstantnoj oblasti teškog IgG lanca je ono za indeks EU kao u Kabat et al., Sekvence proteina od imunološkog interesa, 5. izd. Služba za javno zdravlje, NH1, MD (1991) (dalje u tekstu: Kabat), izričito. Izraz "EU indeks kao u Kabatu" odnosi se na numerisanje humanog IgG1 EU antitela. Aminokiseline iz promenljivih domena zrelih teških i lakih lanaca imunoglobulina označene su položajem aminokiseline u lancu. Kabat je opisao brojne aminokiselinske sekvence za antitela, identifikovao aminokiselinsku konsenzusnu sekvencu za svaku podgrupu i dodelio broj ostataka svakoj aminokiselini, a CDR su identifikovani kako ih definiše Kabat (razumeć e se da je CDRH1 definisan od Chothia, C. & Lesk, AM ((1987) "Kanonske strukture za hipervarijabilne regione imunoglobulina,". J. Mol. Biol. 196: 901-917) počinje pet ostataka ranije). Kabatova šema numerisanja se može proširiti na antitela koja nisu uključena u njegov rezime usklađivanjem predmetnog antitela sa jednom od konsenzusnih sekvenci u Kabatu pozivanjem na očuvane aminokiseline. Ova metoda za dodeljivanje brojeva ostataka postala je standardna na terenu i lako identifikuje aminokiseline na ekvivalentnim položajima u različitim antitelima, uključujuć i himerne ili humanizovane varijante. Na primer, aminokiselina na položaju 50 lakog lanca humanog antitela zauzima ekvivalentan položaj aminokiselini na položaju 50 lakog lanca mišjeg antitela.
[0043] Polimorfizmi su primeć eni na brojnim različitim položajima unutar konstantnih regiona antitela (npr. položaji CH1, uključujuć i, ali bez ograničenja na položaje 192, 193 i 214; položaje Fc, uključuju ć i, ali bez ograničenja na položaje 270, 272, 312 , 315, 356 i 358 numerisani indeksom EU kako je navedeno u Kabat-u), pa stoga mogu postojati male razlike između predstavljenih sekvenci i sekvenci u prethodnom stanju tehnike. Polimorfni oblici humanih imunoglobulina su dobro okarakterisani. Trenutno je poznato 18 Gm alotipova: G1m (1, 2, 3, 17) ili G1m (a, x, f, z), G2m (23) ili G2m (n), G3m (5, 6, 10, 11 , 13, 14, 15, 16, 21, 24, 26, 27, 28) ili G3m (b1, c3, b3, b0, b3, b4, s, t, g1, c5, u, v, g5) (Lefranc , et al., "Podklase humanog IgG: Molekularna analiza strukture, funkcije i regulacije." Pergamon, Okford, str. 43-78 (1990); Lefranc, G. et al., 1979, Hum. Genet .: 50 , 199-211). Posebno se razmatra da antitela prema ovom pronalasku mogu uključivati bilo koji alotip, izoalotip ili haplotip bilo kog gena imunoglobulina, i nisu ograničena na alotip, izoalotip ili haplotip ovde navedenih sekvenci. Štaviše, u nekim ekspresionim sistemima, C-terminalni aminokiselinski ostatak (podebljano iznad) CH3 domena može biti posttranslaciono uklonjen. Shodno tome, C-terminalni ostatak CH3 domena je izborni aminokiselinski ostatak u molekulima koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska. Ovim pronalaskom su posebno obuhvać eni molekuli koji se vezuju za PD-1 i kojima nedostaje C-terminalni ostatak domena CH3. Takođe su predmetnim pronalaskom posebno obuhvać eni takvi konstrukti koji sadrže C-terminalni lizinski ostatak CH3 domene.
[0044] Aktivacioni i inhibitorni signali se transdukuju kroz ligaciju Fc regiona u ć elijski Fc gama receptor ( FcγR). Sposobnost takvog vezivanja da rezultira dijametralno suprotnim funkcijama rezultat je strukturnih razlika između različitih FcγR. Dva različita domena unutar citoplazmatskih signalnih domena receptora koji se nazivaju imunoreceptorski motivi aktivacije zasnovani na tirozinu (ITAM) i inhibitorni motivi na bazi imunoreceptora tirozina (ITIMS) uzimaju u obzir različite odgovore. Regrutovanje različitih citoplazmatskih enzima u ove strukture diktira ishod ć elijskih odgovora posredovanih FcγR. Kompleksi FcγR koji sadrže ITAM uključuju FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIIA, dok kompleksi koji sadrže ITIM uključuju samo FcγRIIB. Humani neutrofili eksprimiraju gen FcγRIIA. Grupisanje FcγRIIA putem imunoloških kompleksa ili umrežavanjem specifičnih antitela služi za agregiranje ITAM-a zajedno sa receptorpovezanim kinazama koje olakšavaju fosforilaciju ITAM-a. Fosforilacija ITAM -a služi kao osnova za aktivaciju Syk kinaze zbog čega dolazi do aktivacije nizvodnih podloga (npr. PI3K). Ć elijska aktivacija dovodi do oslobađanja proinflamatornih medijatora. Gen FcγRIIB je eksprimiran na B limfocitima; njegov vanć elijski domen je 96 % identičan FcγRIIA i na nerazlučiv način veže komplekse IgG. Prisustvo ITIM -a u citoplazmatskom domenu FcγRIIB definiše ovu
1
inhibitornu podklasu FcγR. Nedavno je uspostavljena molekularna osnova ove inhibicije. Kada se koliguje zajedno sa aktiviraju ć im FcγR, ITIM u FcγRIIB postaje fosforilisan i privlači SH2 domen inozitol polifosfatne 5'-fosfataze (SHIP), koji hidrolizuje delove fosfoinozitola koji se oslobađaju kao posledica FcγR posredovane tirozin kinaze koja sadrži ITAM aktivaciju, čime se sprečava priliv unutarć elijskog Ca<++>. Tako umrežavanje FcγRIIB prigušuje aktivirajuć i odgovor na ligaciju FcγR i inhibira ć elijski odgovor. Aktivacija B- ć elija, proliferacija B- ć elija i sekrecija antitela se time prekida.
III. Bispecifična antitela, multispecifična dijatela i DART® dijatela
[0045] Sposobnost antitela da veže epitop antigena zavisi od prisustva i aminokiselinske sekvence VL i VH domena antitela. Interakcija lakog lanca antitela i teškog lanca antitela i, posebno, interakcija njegovih VL i VH domena čine jedno od dva epitop-vezujuć a mesta prirodnog antitela. Prirodna antitela su sposobna da se vezuju samo za jednu vrstu epitopa (tj. monospecifična su), mada mogu da se vezuju za više kopija te vrste (tj., ispoljavajuć i bivalenciju ili viševalentnost).
[0046] Vezivni domeni ovog pronalaska vezuju se za epitope na "imunospecifičan" način. Kako se ovde koristi, za antitelo, dijatelo ili drugi molekul koji se vezuje za epitop se kaže da "imunospecifično" vezuje region drugog molekula (tj. epitopa) ako reaguje ili deluje češć e, brže, sa dužim trajanjem i/ili sa ve ć im afinitetetom sa tim epitopom u odnosu na alternativne epitope. Na primer, antitelo koje se imunospecifično vezuje za virusni epitop je antitelo koje se veže za ovaj virusni epitop sa već im afinitetom, pritiskom, lakše i/ili sa dužim trajanjem nego što se imunospecifično vezuje za druge virusne epitope ili nevirusne epitope. Takođe se može razumeti čitanjem ove definicije da se, na primer, antitelo (ili deo ili epitop) koje se imunospecifično vezuje za prvu metu može ili ne mora specifično ili preferencijalno da se veže za drugu metu. Kao takvo, "imunospecifično vezivanje" ne zahteva nužno (iako može uključivati) isključivo vezivanje. Uopšteno, ali ne nužno, pozivanje na vezivanje znači "specifično" vezivanje. Za dva molekula se kaže da su sposobni da se međusobno vezuju na "fiziospecifičan" način, ako takvo vezivanje pokazuje specifičnost sa kojom se receptori vezuju za njihove odgovarajuć e ligande.
[0047] Funkcionalnost antitela može se poboljšati generisanjem molekula zasnovanih na više antitela koji mogu istovremeno vezati dva odvojena i različita antigena (ili različite epitope istog antigena) i/ili generisanjem molekula zasnovanog na antitelima ve ć e valencije (tj. više od dva mesta vezivanja) za isti epitop i/ili antigen.
[0048] Da bi se obezbedili molekuli koji imaju već e sposobnosti od prirodnih antitela, razvijen je širok spektar formata rekombinantnih bispecifičnih antitela (videti, na primer, PCT publikaciju br. WO 2008/003116, WO 2009/132876, WO 2008/003103, WO 2007/146968, WO 2009/018386, WO 2012/009544, WO 2013/070565), od kojih već ina koristi linkerske peptide ili za fuziju daljeg fragmenta koji se veže za epitop (npr. ScFv, VL, VH itd.) sa, ili unutar jezgra antitela (IgA, IgD, IgE, IgG ili IgM), ili za fuziju više fragmenata koji vezuju epitop (npr. dva Fab fragmenta ili scFvs). Alternativni formati koriste linkerske peptide za fuziju epitop-vezujuć eg fragmenta (npr. ScFv, VL, VH, itd.) Sa domenom dimerizacije kao što je domen CH2-CH3 ili alternativni polipeptidi (WO 2005/070966, WO 2006/107786A WO 2006/107617A, WO 2007/046893). Obično takvi pristupi uključuju kompromise. Na primer, publikacije PCT -a pod brojevima WO 2013/174873, WO 2011/133886 i WO 2010/136172 otkrivaju da upotreba povezivača može izazvati probleme u terapeutskim okruženjima i uči trispecifično antitelo u kome se CL i CH1 domeni prebacuju sa njihovih odgovarajuć ih prirodnih položaja i VL i VH domeni su raznoliki (WO 2008/027236; WO 2010/108127) kako bi im se omoguć ilo da se vežu za više od jednog antigena. Prema tome, molekuli otkriveni u ovim dokumentima snabdeveni su specifičnošć u vezivanja za dodatne vrste antigena. PCT publikacije br. WO 2013/163427 i WO 2013/119903 otkrivaju modifikovanje CH2 domena tako da sadrže delove fuzionog proteina koji sadrži vezujuć i domen. U dokumentu se primeć uje da domen CH2 verovatno igra samo minimalnu ulogu u posredovanju efektorske funkcije. PCT publikacije br. WO 2010/028797, WO 2010028796 i WO 2010/028795 otkrivaju rekombinantna antitela čije su Fc regije zamenjene dodatnim VL i VH domenima, tako da se formiraju molekuli trovalentnog vezivanja. PCT publikacije br. WO 2003/025018 i WO 2003012069 otkrivaju rekombinantna dijatela čiji pojedinačni lanci sadrže scFv domene. PCT publikacije br. WO 2013/006544 otkrivaju multivalentne molekule Fab koji se sintetišu kao jedan polipeptidni lanac, a zatim podvrgavaju proteolizi da bi se dobile heterodimerne strukture. Prema tome, molekuli otkriveni u ovim dokumentima imaju sve ili neke od sposobnosti posredovanja efektorske funkcije za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena. PCT publikacije br. WO 2014/022540, WO 2013/003652, WO 2012/162583, WO 2012/156430, WO 2011/086091, WO 2008/024188, WO 2007/024715, WO 2007/075270, WO 1998/002463, WO 1992/022583 i WO 1991/003493 otkrivaju dodavanje dodatnih vezivnih domena ili funkcionalnih grupa na antitelo ili deo antitela (npr. dodavanje dijatela u laki lanac antitela ili dodavanje dodatnih VL i VH domena lakim i teškim antitelima), ili dodavanjem heterolognog fuzionisanog proteina ili međusobnim povezivanjem više Fab domena). Prema tome, molekuli otkriveni u ovim dokumentima imaju prirodnu strukturu antitela za sposobnost vezivanja dodatnih vrsta antigena.
[0049] Stručnjaci su dodatno primetili sposobnost stvaranja dijatela koja se razlikuju od takvih prirodnih antitela po tome što su sposobna da vezuju dve ili više različitih vrsta epitopa (tj. ispoljavaju bispecifičnost ili multispecifičnost pored bivalencije ili viševalentnosti) (vidi, npr. Holliger et al. (1993) "" Dijatela ": Mali fragmenti dvovalentnih i bispecifičnih antitela," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 90: 6444-6448; US 2004/0058400 (Hollinger et al.); US 2004/0220388/ WO 02/02781 (Mertens et al.); Alt et al. (1999) FEBS Lett. 454 (1-2): 90-94; Lu, D. et al. (2005) "Potpuno čovek Rekombinantno bispecifično antitelo nalik IgG na receptor epidermalnog faktora rasta i receptor faktora rasta sličan insulinu za pojačanu antitumorsku aktivnost, "J. Biol. Chem. 280 (20): 19665-19672; VO 02/02781 (Mertens et al.); Olafsen, T. et al. (2004) "Kovalentno disulfidno povezano anti-CEA dijatelo omoguć ava konjugaciju i radio-obeležavanje specifične za lokaciju za aplikacije ciljanja tumora", Protein Eng. Des. Sel. 7 (1): 21-27; Vu, A. i sar. (2001) "Multimerizacija himernog anti-CD20 jednolančanog fuzionisanog proteina Fv-Fv posreduje putem razmene promenljivih domena", Proteinsko inženjerstvo 14 (2): 1025-1033; Asano i dr. (2004) "Dijatelo za imunoterapiju raka i
1
njegovo funkcionalno poboljšanje fuzijom humanog Fc domena", Sažetak 3P-683, J. Biochem. 76 (8): 992; Takemura, S. i sar. (2000) "Konstrukcija dijatela (malo rekombinantno bispecifično antitelo) pomoć u sistema ponovnog sklapanja", Protein Eng. 13 (8): 583-588; Baeuerle, P.A. et al. (2009) "Bispecific T-Cell Engaging Antitodies For Cancer Therapi", Cancer Res.69 (12): 4941-4944).
[0050] Dizajn dijatela se zasniva na derivatu antitela poznatom kao jednolančani fragment promenljivog domena (scFv). Takvi molekuli nastaju povezivanjem lakih i/ili teških lanaca promenljivih domena korišć enjem kratkog peptida za povezivanje. Bird i dr. (1988) ("Jednolančani proteini koji vezuju antigen", Science 242: 423-426) opisuje primer povezivanja peptida koji premošć uju približno 3,5 nm između karboksi završetka jednog promenljivog domena i amino završetka drugog promenljivog domena. Dizajnirani su i korišć eni linkeri drugih sekvenci (Bird et al. (1988) "Single-Chain Antigen-Binding Proteins", Science 242: 423-426). Linkeri se zauzvrat mogu modifikovati za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili vezivanje za čvrste nosače. Varijante sa jednim lancem mogu se proizvesti rekombinantno ili sintetički. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatizovani sintisajzer. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, odgovarajuć i plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv može se uvesti u odgovarajuć u ć eliju doma ć ina, bilo eukariotsku, poput ć elija kvasca, biljaka, insekata ili sisara, ili prokariotsku, poput E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od interesa mogu se napraviti rutinskim manipulacijama kao što je vezivanje polinukleotida. Dobijeni scFv se može izolovati primenom standardnih tehnika prečišć avanja proteina poznatih u tehnici.
[0051] Obezbeđivanje nemonospecifičnih dijatela pruža značajnu prednost u odnosu na antitela, uključujuć i, ali bez ograničenja, sposobnost koligacije i kolokalizacije ć elija koje eksprimiraju različite epitope. Bispecifična dijatela stoga imaju široku primenu, uključujuć i terapiju i imunodijagnozu. Bispecifičnost omogu ć ava veliku fleksibilnost u dizajnu i inženjeringu dijatela u različitim aplikacijama, pružajuć i pove ć anu avidnost prema multimernim antigenima, ukrštajuć i različite antigene i usmeravaju ć i ciljanje na određene tipove ć elija oslanjaju ć i se na prisustvo oba ciljana antigena. Zbog poveć ane valencije, niske stope disocijacije i brzog uklanjanja iz cirkulacije (za dijatela male veličine, na ili ispod -50 kDa), molekuli dijateleski poznati u tehnici takođe su pokazali posebnu upotrebu u oblasti snimanja tumora (Fitzgerald et al. (1997) "Poboljšano ciljanje tumora pomoć u disulfidno stabilizovanih dijatela izraženih u Pichia pastoris", Protein Eng.10: 1221).
[0052] Bispecifičnost dijatela dovela je do njihove upotrebe za koaligovanje različitih ć elija, na primer, umrežavanje citotoksičnih T-ć elija sa tumorskim ć elijama (Staerz et al. (1985) "Hibridna antitela mogu ciljati na mesta za napad T ćelija, "Nature 314: 628-631, i Holliger et al. (1996)" Specifično ubijanje limfomskih ć elija citotoksičnim T- ć elijama posredovanim bispecifičnim dijatejlom, "Protein Eng. 9: 299-305; Marvin et al. . (2005) "Rekombinantni pristupi IgG-sličnim bispecifičnim antitelima," Acta Pharmacol. Sin. 26: 649-658). Alternativno, ili dodatno, bispecifična dijatela se mogu koristiti za koaligovanje receptora na površini različitih ć elija ili na jednoj ć eliji. Koligacija različitih ć elija i/ili receptora je korisna za modulaciju efektorskih funkcija i/ili signalizaciju imunih ć elija. Multispecifični molekuli (npr. bispecifična dijatela) koja sadrže epitop vezujuć a mesta mogu biti usmereni na površinsku determinantu bilo koje imunološke ć elije kao što su B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), BTLA (CD272), CD3, CD8, CD16, CD27, CD32, CD40, CD40L, CD47, CD64, CD70 (CD27L), CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), CD94 (KLRD1), CD137 (4-1BB), CD137L (4-1BBL), CD226, CTLA- 4 (CD152), Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS (CD278), ICOSL (CD275), Receptor za aktivaciju ubice (KIR), LAG-3 (CD223), SVETLO (TNFSF14, CD258), MHC klasa I ili II, NKG2a, NKG2d, OKS40 (CD134), OKS40L (CD134L), PD1H, PD-1 (CD279), PD-L1 (B7-H1, CD274), PD-L2 (B7-CD, CD273), PVR (NECL5 , CD155), SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 (HAVCR2) i/ili VISTA (PD-1H), koji su eksprimirani na T limfocitima, ć elijama prirodnih ubica (NK), ć elijama koje predstavljaju antigen ili drugim mononuklearnim ć elijama. Konkretno, mesta za vezivanje epitopa usmerena na receptor na ć elijskoj površini koji je uključen u regulaciju imunološke kontrolne tačke (ili njenog liganda) korisna su u stvaranju bispecifičnih ili multispecifičnih vezujuć ih molekula koji antagoniziraju ili blokiraju inhibitornu signalizaciju molekula imune kontrolne tačke i na taj način stimulišu ili pojačavaju imunološke odgovore subjekta. Molekuli uključeni u regulisanje imunoloških kontrolnih punktova uključuju, ali nisu ograničeni na, B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD40L, CD47, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L, CD226, CTLA-4, Galectin-9 , GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OKS40, OKS40L, PD1H, PD-1, PD-L1, PD-L2, PVR, SIRPa , TCR, TIGIT, TIM-3 i/ili VISTA.
[0053] Međutim, gore navedene prednosti dolaze po značajnoj ceni. Formiranje takvih nemonospecifičnih dijatela zahteva uspešno sklapanje dva ili više različitih i različitih polipeptida (tj. takva formacija zahteva da se antitela formiraju heterodimerizacijom različitih vrsta polipeptidnog lanca). Ova činjenica je za razliku od monospecifičnih dijatela, koja nastaju homodimerizacijom identičnih polipeptidnih lanaca. Zato što se moraju obezbediti najmanje dva različita polipeptida (tj. dve vrste polipeptida) da bi se formiralo nemonospecifično dijatelo, i zato što homodimerizacija takvih polipeptida dovodi do neaktivnih molekula (Takemura, S. et al. (2000) "Construction of Dijatelo (malo rekombinantno bispecifično antitelo) Pomoć u sistema za ponovno savijanje, „Protein Eng. 13 (8): 583-588), proizvodnja takvih polipeptida mora se postić i na takav način da se spreči kovalentna veza između polipeptida iste vrste. (tj. kako bi se sprečila homodimerizacija) (Takemura, S. i sar. (2000) "Konstrukcija dijatejskog tela (malo rekombinantno bispecifično antitelo) korišć enjem sistema za presavijanje", Protein Eng.13 (8): 583-588 ). Ova tehnika je stoga naučila nekovalentnu asocijaciju takvih polipeptida (vidi, npr., Olafsen et al. (2004) "Anti-CEA dijavalentno povezano kovalentnim disulfidom omoguć ava konjugaciju i radio-obeležavanje specifične za mesto primene za ciljanje tumora", Prot. Engr. Des. Sel. 17: 21-27; Asano et al. (2004) "Dijatelo za imunoterapiju raka i njegovo funkcionalno poboljšanje fuzijom ljudskog FC domena", Sažetak 3P-683, J. Biochem. 76 (8) ): 992; Takemura, S. i sar. (2000) "Konstrukcija dijatela (malo rekombinantno bispecifično antitelo) korišć enjem sistema za presavijanje", Protein Eng.
13 (8): 583-588; Lu, D. i sar. (2005) "Potpuno humano rekombinantno bispecifično antitelo nalik IgG na receptor epidermalnog faktora rasta i receptor faktora rasta sličan insulinu za pojačanu antitumorsku aktivnost", J. Biol. Chem.
280 (20): 19665-19672).
[0054] Međutim, struka je prepoznala da su bispecifična dijatela sastavljena od nekovalentno povezanih polipeptida
1
nestabilna i da se lako disociraju na nefunkcionalne monomere (videti, na primer, Lu, D. i sar. (2005) "Potpuno ljudski kombinovano bispecifično antitelo nalik IgG na receptor epidermalnog faktora rasta i receptor nalik insulinu na faktor rasta za pojačanu antitumorsku aktivnost, "J. Biol. Chem.280 (20): 19665-19672).
[0055] Suočeno sa ovim izazovom, tehnika je uspela da razvije stabilna, kovalentno vezana heterodimerna nemonospecifična antitela, nazvana DART® (reagensi za ponovno ciljanje sa dvostrukim afinitetom) dijatela; videti, na primer, US br. 2013-0295121; 2010-0174053 i 2009-0060910; Evropska patentna publikacija br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT publikacije br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538; i Sloan, D.D. et al. (2015) "Ciljanje rezervoara HIV-a u zaraženim CD4 T ć elijama pomo ć u molekula ponovnog ciljanja dvostrukog afiniteta (DART) koji vežu omotač HIV-a i regrutuju citotoksične T ć elije", PLoS Pathog. 11 (11): e1005233. doy: 10.1371/journal.ppat.1005233; Al Hussaini, M. et al. (2015) "Ciljanje CD123 u AML-u pomoć u T- ć elijski usmerene platforme za ponovno ciljanje sa dvostrukim afinitetom (DART®)", Blood pyy: blood-2014-05-575704; Chichili, G.R. et al. (2015) "CD3xCD123 Bispecific DART za preusmeravanje T ć elija doma ć ina na mielogenu leukemiju: pretklinička aktivnost i bezbednost kod neljudskih primata," Sci. Transl. Med. 7 (289): 289ra82; Moore, P.A. et al. (2011) "Primena molekula preusmeravanja dvostrukog afiniteta za postizanje optimalnog preusmerenog ubijanja T-ć elija limfoma B-ć elija", Krv 117 (17): 4542-4551; Very, M.C. et al. (2010) "Terapijska kontrola aktivacije B ć elija putem regrutovanja inhibitorne funkcije receptora fcgamam IIb (CD32B) sa novom skelom za bispecifična antitela", Arthritis Rheum. 62 (7): 1933-1943; Johnson, S. i sar. (2010) "Efektorsko ć elijsko oplemenjivanje sa novim proteinima na dvostrukom afinitetu na bazi Fv koji ponovo ciljaju protein dovodi do snažne citolize tumora i iscrpljivanja B-ć elija in vivo", J. Mol. Biol. 399 (3): 436-449). Takva dijatela sadrže dva ili više kovalentno kompleksnih polipeptida i uključuju inženjering jednog ili više cisteinskih ostataka u svaku od upotrebljenih vrsta polipeptida koji dozvoljavaju formiranje disulfidnih veza i na taj način kovalentno vezuju dva polipeptidna lanca. Na primer, pokazano je da dodavanje cisteinskog ostatka na C-kraj takvih konstrukata omoguć ava disulfidnu vezu između polipeptidnih lanaca, stabilizuju ć i rezultujuć i heterodimer bez ometanja karakteristika vezivanja dvovalentnog molekula.
[0056] Svaki od dva polipeptida najjednostavnijeg bispecifičnog DART® dijatela sadrži tri domena. Prvi polipeptid sadrži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1), (ii) drugi domen koji sadrži region vezivanja promenljivog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2) i (iii) treć i domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i domen koji promoviše heterodimer koji služi za promociju heterodimerizacije sa drugim polipom eptida dijatela i da kovalentno vezuju prvi i drugi polipeptid dijatela jedan za drugi. Drugi polipeptid sadrži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2), (ii) drugi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1) i (iii) treci domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i komplementarni domen koji promoviše heterodimer. Promovisanje domena prvog polipeptidnog lanca je u cilju promovisanja heterodimerizacije sa prvim polipeptidnim lancem. Ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) treć eg domena drugog polipeptidnog lanca služi za promovisanje kovalentne veze drugog polipeptidnog lanca za prvi polipeptidni lanac dijatela. Takvi molekuli su stabilni, snažni i imaju sposobnost da istovremeno vezuju dva ili više antigena. U jednom slučaju, treć i domeni prvog i drugog polipeptida sadrže svaki ostatak cisteina, koji služi za vezivanje polipeptida zajedno disulfidnom vezom. Slika 1 daje šemu takvog dijatela, koje koristi domene koji promovišu E-zavojnicu/K-zavojnicu heterodimera i linker koji sadrži cistein za kovalentno vezivanje. Kao što je prikazano na slikama 2 i slikama 3A-3C, jedan ili oba polipeptida mogu dodatno posedovati sekvencu domena CH2-CH3, tako da kompleksiranje između dva polipeptida dijatebona formira Fc region koji je sposoban da se veže za Fc receptor ć elija (kao što su B limfociti, dendritične ć elije, ć elije prirodne ubice, makrofagi, neutrofili, eozinofili, bazofili i mastociti). Kao što je detaljnije prikazano u nastavku, domeni CH2 i/ili CH3 takvih polipeptidnih lanaca ne moraju biti identični u nizu, i poželjno su modifikovani tako da podstiču kompleksiranje između dva polipeptidna lanca.
[0057] Opisane su mnoge varijacije takvih molekula (videti, na primer, US br. 2015/0175697; 2014/0255407; 2014/0099318; 2013/0295121; 2010/0174053 i 2009/0060910; evropske patente br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT publikacije br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538). Ova DART® dijatela koja sadrže Fc region mogu da sadrže dva para polipeptidnih lanaca. Prvi polipeptidni lanac sadrži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1), (ii) drugi domen koji sadrži vezujuć u regiju promenljivog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2), (iii) treci domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i služi za promovisanje heterodimerizacije sa drugim polipeptidom dijatela i da kovalentno vežu prvi i drugi polipeptid dijatela jedan za drugi, i (iv) domen CH2-CH3. Drugi polipeptid sadrži (u smeru od N-kraja do C-terminala): (i) prvi domen koji sadrži vezujuć i region promenljivog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2), (ii) drugi domen koji sadrži oblast vezivanja promenljivog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1) i (iii)) treći domen koji sadrži ostatak cisteina (ili domen koji sadrži cistein) i domen koji promoviše heterodimer koji promoviše heterodimerizaciju sa prvim polipeptidnim lancem. Ovde se dva prva polipeptida međusobno kompleksuju i formiraju Fc region. Slike 3A-3C pružaju šeme tri varijacije takvih dijatela koje koriste različite domene koji promovišu heterodimer.
[0058] Druga DART® dijatela koja sadrže Fc-region mogu sadržati tri polipeptidna lanca. Prvi polipeptid takvih DART® dijatela sadrži tri domena: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Drugi polipeptid takvih DART® dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa prvim polipeptidnim lancem dijatela. Treć i polipeptid takvih DART® dijatela sadrži sekvencu CH2-CH3. Dakle, prvi i drugi polipeptidni lanac takvih DART® dijatela udružuju se zajedno da formiraju mesto vezivanja VL1/VH1 koje je sposobno da se veže za epitop, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje je sposobno da se veže za drugi epitop . Takvi složeniji DART® molekuli takođe poseduju domene koji sadrže cistein i koji funkcionišu da formiraju kovalentno vezan kompleks. Tako su prvi i drugi polipeptidi međusobno vezani disulfidnom vezom koja uključuje cisteinske ostatke u njihovim odgovarajuć im tre ć im domenima. Značajno je
1
da se prvi i treć i polipeptidni lanac međusobno kompleksuju kako bi formirali Fc regiju koja je stabilizovana disulfidnom vezom. Slike 4A-4B daju šeme takvih dijatela koja sadrže tri polipeptidna lanca.
[0059] Još druga DART® dijatela koja sadrže Fc-region mogu sadržati pet polipeptidnih lanaca koji mogu sadržati vezujuć e regione iz promenljivih domena lakog i teškog lanca do tri različita imunoglobulina (koji se nazivaju VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3). Na primer, prvi polipeptidni lanac takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CHI i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Drugi i peti polipeptidni lanac takvih dijatela može sadržati: (i) domen koji sadrži VL1 i (ii) domen koji sadrži CL. Treć i polipeptidni lanac takvih dijatela može da sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CHI, (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, (iv) domen koji sadrži VL2, (v) domen koji sadrži VH3 i (vi) domen koji promoviše heterodimer, pri čemu domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju treć eg lanca sa četvrtim lancem. Četvrti polipeptid takvih dijatela može sadržati: (i) domen koji sadrži VL3, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa treć im polipeptidnim lancem dijatela. Ovde se prvi i tre ć i polipeptidi međusobno kompleksuju i formiraju Fc region. Takvi složeniji DART® molekuli takođe poseduju domene koji sadrže cistein i koji funkcionišu tako da formiraju kovalentno vezan kompleks, tako da je svaki polipeptidni lanac vezan za najmanje jedan adicijski polipeptidni lanac preko disulfidne veze koja uključuje cistein ostaci. Poželjno je da su takvi domeni poređani u smeru od N-terminala do C-terminala. Slika 5 prikazuje šeme takvih dijatela koja sadrže pet polipeptidnih lanaca.
[0060] Alternativni konstrukti su poznati u tehnici za aplikacije u kojima je poželjan četvorovalentni molekul, ali nije potreban Fc, uključujuć i, ali bez ograničenja, četvorovalentna tandem antitela, koja se takođe nazivaju "TandAbs" (vidi, npr. US br. 2005-0079170, 2007-0031436, 2010-0099853, 2011-020667 2013-0189263; evropske publikacije patenata br. EP 1078004, EP 2371866, EP 2361936 i EP 1293514; publikacije PCT-a WO 1999/057150, WO 2003/ 025018 i WO 2013/013700) koji su nastali homo-dimerizacijom dva identična lanca od kojih svaki poseduje VH1, VL2, VH2 i VL2 domen.
[0061] Nedavno su opisane trovalentne strukture koje uključuju dva domena vezanja tipa dijatela i jedan domen tipa dijatela i Fc region (videti, na primer, PCT prijavu br: PCT/US15/33076, pod nazivom "Tri-specifično vezivanje" Molekuli i načini njihove upotrebe ", podnet 29. maja 2015; i PCT/US15/33081, pod naslovom" Tri-specifične vezujuć e molekule koje se specifično vezuju za više antigena raka i metode njihove upotrebe", podnete 29. maja 2015). Takvi trovalentni molekuli mogu se koristiti za stvaranje monospecifičnih, bispecifičnih ili trispecifičnih molekula. Slike 6A-6F prikazuju šemu takvih trovalentnih molekula koji sadrže 3 ili 4 polipeptidna lanca.
IV. Molekuli vezivanja za humane PD-1 predmetnog pronalaska
[0062] Poželjni molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku uključuju antitela, dijatela, BiTE, itd. i sposobni su da se vezuju za kontinuirani ili diskontinuirani (npr. konformacioni) deo (epitop) humanog PD-1 (CD279) ). Molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaskać e poželjno takođe pokazivati sposobnost vezivanja za molekule PD-1 jedne ili više vrsta koje nisu humane, posebno vrste primata (a naročito vrste primata, poput majmuna cinomolgus). Reprezentativni humani PD-1 polipeptid (NCBI sekvenca NP_005009.2; uključujuć i signalnu sekvencu ostatka od 20 aminokiselina (prikazano podvučeno) i zreli protein 268 aminokiselina) ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 68):
[0063] U određenim slučajevima, ili više) sledeć ih kriterijuma: molekuli koji vežu humani PD-1 iz ovog pronalaska karakterišu bilo koji:
(1) specifični humani PD-1 izražen kao endogeno izražen na površini stimulisane humane T-ć elije;
(2) specifični humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom vezivanja (KD) od 40 nM ili manje;
(3) specifični humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom vezivanja (KD) od 5 nM ili manje;
(4) specifični humani PD-1 sa stopom vezivanja (ka) od 1,5 x 10<4>M<-1>min<-1>ili više;
(5) specifični humani PD-1 sa stopom vezivanja (ka) od 90.0 x 10<4>M<-1>min<-1>ili više;
(6) specifični humani PD-1 sa stopom vezivanja (ka) od 7 x 10<4>M<-1>min<-1>ili manje;
(7) specifični humani PD-1 sa stopom vezivanja (ka) od 2 x 10<4>M<-1>min<-1>ili manje;
(8) specifični nehumani PD-1 primata (npr. PD-1 majmuna cinomolgus);
(9) inhibira (tj. blokira ili ometa) vezivanje/inhibitornu aktivnost) PD-1 liganda (PD-L1/PD-L2) za PD-1; (10) stimuliše imunološki odgovor; i/ili
(11) sinergiše sa anti-humanim LAG-3 antitelom da stimuliše antigen specifičan T-ć elijski odgovor.
[0064] Kako se ovde koristi, izraz "specifičan antigenski T-ć elijski odgovor" odnosi se na odgovore T- ć elija koji su rezultat stimulacije T-ć elije antigenom za koji je T- ć elija specifična. Neograničavaju ć i primeri odgovora T- ć elija na stimulaciju specifičnom za antigen uključuju proliferaciju i proizvodnju citokina (npr. Proizvodnja TNF-a, IFN-g). Sposobnost molekula da stimuliše antigen specifičan T-ć elijski odgovor može se odrediti, na primer, koriš ć enjem ovde
1
opisanog PBMC testa stimulisanog Staphilococcus aureus enterotoksinom tipa B ("SEB")-stimulisanog.
[0065] Poželjni molekuli koji vezuju anti-humani PD-1 prema ovom pronalasku poseduju VH i/ili VL domene mišjih anti-humanih monoklonskih antitela na PD-1 "PD-1 mAb 1", "PD-1 mAb 2" , "" PD-1 mAb 3, '' '' PD-1 mAb 4, "" PD-1 mAb 5, "" PD-1 mAb 6, "" PD-1 mAb 7, "" PD-1 mAb 8 , "" PD-1 mAb 9, "" PD-1 mAb 10, "" PD-1 mAb 11, "" PD-1 mAb 12, "" PD-1 mAb 13, "" PD-1 mAb 14, " ili "PD-1 mAb 15", i poželjnije poseduju 1, 2 ili sva 3 CDRH-a VH domena i/ili 1, 2 ili sva 3 CDRL-a VL domena takvog anti-humanog PD-1 monoklonska antitela. Takvi poželjni molekuli koji vežu humane PD-1 uključuju bispecifična (ili multispecifična) antitela, himerna ili humanizovana antitela, BiTes, dijatela itd, i takve vezujuć e molekule koji imaju varijantne Fc regione.
[0066] Pronalazak se posebno odnosi na molekule koji se vezuju za PD-1 i koji sadrže domen za vezivanje PD-1 koji poseduju:
(A)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1mAb 1;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 1;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 1 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 1;
(4) VH domen hPD-1 mAb 1 VH1;
(5) VL domen hPD-1 mAb 1 VL1;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 1;
(B)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 2;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 2;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 2 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 2;
(4) VH domen hPD-1 mAb 2 VH1;
(5) VL domen hPD-1 mAb 2 VL1;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 2;
(C)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 3;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 3;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 3 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 3;
(D)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 4;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 4;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 4 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 4;
(E)
(1) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 5;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 5;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 5 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 5;
(F)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 6;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 6;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 6 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 6;
(G)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 7;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 7, ili hPD-1 mAb 7 VL2, ili hPD-1 mAb 7 VL3;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 7 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 7, ili hPD-1 mAb 7 VL2, hPD-1 mAb 7 VL3;
(4) VH domen hPD-1 mAb 7 VH1, ili hPD-1 mAb 7 VH2;
(5) VL domen hPD-1 mAb 7 VL1, ili hPD-1 mAb 7 VL2, ili hPD-1 mAb 7 VL 3;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 7 (1.1), ili hPD-1 mAb 7 (1.2), ili hPD-1 mAb 7 (1.3), ili hPD-1 mAb 7 (2.1), ili hPD-1 mAb 7 (2.2), ili hPD-1 mAb 7 (2.3);
(H)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 8;
2
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 8;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 8 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 8;
(I)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VH2;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VL2;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VH2 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 9, ili hPD-1 mAb 9 VL2;
(4) VH domen hPD-1 mAb 9 VH1, ili hPD-1 mAb 9 VH2;
(5) VL domen hPD-1 mAb 9 VL1, ili hPD-1 mAb 9 VL2;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 9 (1.1), ili hPD-1 mAb 9 (1.2), ili hPD-1 mAb 9 (2.1), ili hPD-1 mAb 9 (2.2); (J)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 10;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 10;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 10 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 10;
(K)
(1) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 11;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 11;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 11 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 11;
(J)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 12;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 12;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 12 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 12;
(M)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 13;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 13;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 13 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 13;
(N)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 14;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 14;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 14 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 14;
(O)
(1) tri CDRHiz VH domena PD-1 mAb 15;
(2) tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 15;
(3) tri CDRH-a VH domena PD-1 mAb 15 i tri CDRL-a VL domena PD-1 mAb 15; (4) VH domen hPD-1 mAb 15 VH1; (5) VL domen hPD-1 mAb 15 VL1;
(6) VH i VL domene hPD-1 mAb 15;
ili koji se vezuje ili se nadmeće za vezivanje sa istim epitopom kao PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD -1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD- 1 mAb 15.
A. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 1
1. Mišje antihumano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 1
[0067] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 1 (SEK ID BR: 69) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 1 (SEK ID BR:71): NDYAWN
CDRH2 of PD-1 mAb 1 (SEK ID BR:72): HITYSGSTSYNPSLKS
CDRH3 of PD-1 mAb 1 (SEK ID BR:73): DYGSGYPYTLDY
[0068] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 1 je SEK ID BR: 70 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0069] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 1 (SEK ID BR: 74) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 1 (SEK ID BR:76): SATSIVSYVY
CDRL2 of PD-1 mAb 1 (SEK ID BR:77): LTSNLAS
CDRL3 of PD-1 mAb 1 (SEK ID BR:78): QQWSDNPYT
[0070] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 1 je SEK ID BR: 75 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 1 u formu "hPD-1 mAb 1"
[0071] Napred opisano mišje anti-humano antitelo na PD-1 PD-1 mAb 1 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije anti-humanog antitela na PD-1 kako bi se smanjilo njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom je dobijen jedan humanizovani VH domen, ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VH1", i jedan humanizovani VL domen ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1". Shodno tome, antitelo koje sadrži humanizovane VL domene uparene sa humanizovanim VH domenom naziva se "hPD-1 mAb 1."
[0072] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 1 VH1 (SEK ID BR: 79) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0073] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 1 VH1 je SEK ID BR: 80 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0074] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 1 VL1 (SEK ID BR: 81) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0075] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 1 VL1 je SEK ID BR: 82 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
B. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 2
1. Mišje anti humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 2
[0076] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 83) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 2 (SEK ID BR:85): SFGMH
CDRH2 of PD-1 mAb 2 (SEK ID BR:86): YISSGSMSISYADTVKG
2
CDRH3 of PD-1 mAb 2 (SEK ID BR:87): LSDYFDY
[0077] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 2 je SEK ID BR: 84 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0078] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 2 (SEK ID BR: 88) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 2 (SEK ID BR:90): RSSQSLVHSTGNTYLH
CDRL2 of PD-1 mAb 2 (SEK ID BR:91): RVSNRFS
CDRL3 of PD-1 mAb 2 (SEK ID BR:92): SQTTHVPWT
[0079] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 2 je SEK ID BR: 89 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija antitela na PD-1 antitela PD-1 mAb 2 u formu "hPD-1 mAb 2"
[0080] Gore opisano mišje anti-humano antitelo na PD-1 PD-1 mAb 2 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije anti-humanog antitela na PD-1 tako da se smanji njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom je dobijen jedan humanizovani VH domen, ovde označen kao "hPD-1 mAb 2 VH1", i jedan humanizovani VL domen ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1". Shodno tome, svako antitelo koje sadrži humanizovane VL domene uparene sa humanizovanim VH domenom naziva se "hPD-1 mAb 2."
[0081] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 2 VH1 (SEK ID BR: 93) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni)):
[0082] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 2 VH1 je SEK ID BR: 94 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0083] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 2 VL1 (SEK ID BR: 95) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni)):
[0084] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 2 VL1 je SEK ID BR: 96 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
C. Mišije anti humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 3
[0085] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 97) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:99): DYVMH
CDRH2 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:100): TIDPETGGTAYNQKFKG
CDRH3 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:101): EKITTIVEGTYWYFDV
[0086] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 3 je SEK ID BR: 98 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0087] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 3 (SEK ID BR: 102) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:104): RSSQNIVHSNGDTYLE
CDRL2 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:105): KVSNRFS
CDRL3 of PD-1 mAb 3 (SEK ID BR:106): FQGSHLPYT
[0088] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 3 je SEK ID BR: 103 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
D. Mišje anti humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 4
[0089] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 107) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 4 (SEK ID BR:109): SFGMH
CDRH2 of PD-1 mAb 4 (SEK ID BR:110): YISSGSMSISYADTVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 4 (SEK ID BR:111): LTDYFDY
[0090] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 4 je SEK ID BR: 108 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0091] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 112) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 4 (SEK ID BR:114): RSSQSLVHSTGNTYFH
CDRL2 of PD-1 mAb 4 (SEK ID BR:115): RVSNRFS
CDRL3 of PD-1 mAb 4 (SEK ID BR:116): SQTTHVPWT
[0092] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 4 je SEK ID BR: 113 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
E. Mišje anti humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 5
[0093] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 117) je prikazana ispod (ostaci CDRH
prikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 5 (SEK ID BR:119): AYWMN
CDRH2 of PD-1 mAb 5 (SEK ID BR:120): VIHPSDSETWLNQKFKD
CDRH3 of PD-1 mAb 5 (SEK ID BR:121): EHYGSSPFAY
[0094] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 5 je SEK ID BR: 118 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0095] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 5 (SEK ID BR: 122) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0096] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 5 je SEK ID BR: 123 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke su prikazani podvučeno):
F. Mišje anti humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 6
[0097] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 127) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 6 (SEK ID BR:129): SYGMS
CDRH2 of PD-1 mAb 6 (SEK ID BR:130): TISGGGSDTYYPDSVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 6 (SEK ID BR:131): QKATTWFAY
[0098] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 6 je SEK ID BR: 128 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
[0099] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 6 (SEK ID BR: 132) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 6 (SEK ID BR:134): RASESVDNYGISFMN
CDRL2 of PD-1 mAb 6 (SEK ID BR:135): PASNQGS
CDRL3 of PD-1 mAb 6 (SEK ID BR:136): QQSKEVPWT
[0100] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 6 je SEK ID BR: 133 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
G. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 7
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 7
[0101] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 137) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 7 (SEK ID BR:139): SYWMN
CDRH2 of PD-1 mAb 7 (SEK ID BR:140): VIHPSDSETWLDQKFKD
CDRH3 of PD-1 mAb 7 (SEK ID BR:141): EHYGTSPFAY
[0102] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 7 je SEK ID BR: 138 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
2
Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 7 (SEK ID BR: 142) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 7 (SEK ID BR:144): RANESVDNYGMSFMN
CDRL2 of PD-1 mAb 7 (SEK ID BR:145): AASNQGS
CDRL3 of PD-1 mAb 7 (SEK ID BR:146): QQSKEVPYT
[0104] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 7 je SEK ID BR: 143 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 7 u formu "hPD-1 mAb 7"
[0105] Gore opisano mišje anti-humano antitelo na PD-1 PD-1 mAb 7 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije anti-humanog antitela na PD-1 kako bi se smanjilo njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom su dobijena dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 7 VH1" i "hPD-1 mAb 7 VH2", i tri humanizovana VL domena ovde označena kao "hPD-1 mAb 7 VL1," "hPD- 1 mAb 7 VL2, "i" hPD-1 mAb 7 VL3. " Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se u opštem naziva "hPD-1 mAb 7", a posebne kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifični VH/VL domeni, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 7 VH1 i hPD-1 mAb 1 VL2, posebno se nazivaju "hPD-1 mAb 7 (1.2)."
[0106] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 7 VH1 (SEK ID BR: 147) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0107] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VH1 je SEK ID BR: 148 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0108] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 7 VH2 (SEK ID BR: 149) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0109] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VH2 je SEK ID BR: 150 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0110] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL1 (SEK ID BR: 151) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0111] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL1 je SEK ID BR: 152 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0112] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL2 (SEK ID BR: 153) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
1
[0113] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL2 je SEK ID BR: 154 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0114] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 7 VL3 (SEK ID BR: 155) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0115] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 7 VL3 je SEK ID BR: 156 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0116] CDRL1 VL domena i hPD-1 mAb 7 VL2 i hPD-1 mAb 7 VL3 sadrži supstituciju aminokiselina asparagin-serin i ima aminokiselinsku sekvencu: RASESVDNYGMSFMN (SEK ID BR: 157), zamenjeni serin prikazan je podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od gore opisanih domena PD-1 mAb 7 CDRL1.
[0117] Pored toga, CDRL2 VL domena hPD-1 mAb 7 VL3 sadrži supstituciju aminokiseline glutamin u arginin i ima aminokiselinsku sekvencu: AASNRGS (SEK ID BR: 158), supstituisani arginin je prikazan ispod podvučene). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od gore opisanih domena PD-1 mAb 7 CDRL2.
H. Mišje anti humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 8
[0118] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 159) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
2
CDRH1 of PD-1 mAb 8 (SEK ID BR:161): DYYMN
CDRH2 of PD-1 mAb 8 (SEK ID BR:162): DINPKNGDTHYNQKFKG
CDRH3 of PD-1 mAb 8 (SEK ID BR:163): DFDY
[0119] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 8 je SEK ID BR: 160 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0120] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 8 (SEK ID BR: 164) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 8 (SEK ID BR:166): RSSQTLVYSNGNTYLN
CDRL2 of PD-1 mAb 8 (SEK ID BR:167): KVSNRFS
CDRL3 of PD-1 mAb 8 (SEK ID BR:168): SQSTHVPFT
[0121] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 8 je SEK ID BR: 165 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
I. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 9
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 9
[0122] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 169) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 9 (SEK ID BR:171): SYLVS
CDRH2 of PD-1 mAb 9 (SEK ID BR:172): TISGGGGNTYYSDSVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 9 (SEK ID BR:173): YGFDGAWFAY
[0123] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 9 je SEK ID BR: 170 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 9 (SEK ID BR: 174) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 9 (SEK ID BR:176): RASENIYSYLA
CDRL2 of PD-1 mAb 9 (SEK ID BR:177): NAKTLAA
CDRL3 of PD-1 mAb 9 (SEK ID BR:178): QHHYAVPWT
[0125] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 9 je SEK ID BR: 175 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 9 u formu "hPD-1 mAb 9"
[0126] Gore opisano mišje anti-humano antitelo na PD-1 PD-1 mAb 9 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije anti-humanog antitela na PD-1 kako bi se smanjila njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom su dobijena dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VH1" i "hPD-1 mAb 9 VH2", i dva humanizovana VL domena ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VL1" i "hPD -1 mAb 9 VL2." Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa humanizovanim VH domenima. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom u opštem se naziva "hPD-1 mAb 9", a određene kombinacije humaniziranih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 9 VH1 i hPD-1 mAb 9 VL2, posebno se nazivaju "hPD-1 mAb 9 (1.2)."
[0127] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 9 VH1 (SEK ID BR: 179) prikazana je ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0128] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VH1 je SEK ID BR: 180 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0129] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 9 VH2 (SEK ID BR: 181) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
4
[0130] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VH2 je SEK ID BR: 182 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0131] CDRH1 VH domena hPD-1 mAb 9 VH2 sadrži supstituciju aminokiselina serin-glicin i ima aminokiselinsku sekvencu: SYLVG (SEK ID BR: 183), supstituisani glicin je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od gore opisanih domena PD-1 mAb 9 CDRH1.
[0132] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 9 VL1 (SEK ID BR: 184) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0133] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VL1 je SEK ID BR: 185 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0134] Aminokiselinska sekvenca VL domena hPD-1 mAb 9 VL2 (SEK ID BR: 186) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0135] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 9 VL2 je SEK ID BR: 187 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0136] CDRL1 VL domen hPD-1 mAb 9 VL2 sadrži supstituciju aminokiselina serin-asparagin i ima aminokiselinsku sekvencu: RASENIYNYLA (SEK ID BR: 188), supstituisani asparagin je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od gore opisanih domena PD-1 mAb 9 CDRL1.
[0137] CDRL2 VL domen hPD-1 mAb 9 VL2 sadrži supstituciju aminokiseline asparagin-aspartat i ima aminokiselinsku sekvencu: DAKTLAA (SEK ID BR: 189), supstituisani aspartat je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od gore opisanih domena PD-1 mAb 7 CDRL2.
J. Mišje anti-humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 10
[0138] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 190) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 10 (SEK ID BR:192): NYLMS
CDRH2 of PD-1 mAb 10 (SEK ID BR:193): SISGGGSNIYYPDSVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 10 (SEK ID BR:194): QELAFDY
[0139] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 10 je SEK ID BR: 191 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0140]
Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 10 (SEK ID BR: 195) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 10 (SEK ID BR:197): RTSQDISNFLN
CDRL2 of PD-1 mAb 10 (SEK ID BR:198): YTSRLHS
CDRL3 of PD-1 mAb 10 (SEK ID BR:199): QQGSTLPWT
[0141] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 10 je SEK ID BR: 196 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
K. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 11
[0142] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 200) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 11 (SEK ID BR:202): GYWMH
CDRH2 of PD-1 mAb 11 (SEK ID BR:203): AIYPGNSDTHYNQKFKG
CDRH3 of PD-1 mAb 11 (SEK ID BR:204): GTYSYFDV
[0143] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 11 je SEK ID BR: 201 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0144] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 11 (SEK ID BR: 205) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 11 (SEK ID BR:207): RASQSIGTSIH
CDRL2 of PD-1 mAb 11 (SEK ID BR:208): YASESIS
CDRL3 of PD-1 mAb 11 (SEK ID BR:209): QQSNSWLT
[0145] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 11 je SEK ID BR: 206 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
L. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 12
[0146] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 12 (SEK ID BR: 210) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 12 (SEK ID BR:212): DYEMH
CDRH2 of PD-1 mAb 12 (SEK ID BR:213): TIDPETGGTAYNQKFKG
CDRH3 of PD-1 mAb 12 (SEK ID BR:214): ERITTVVEGAYWYFDV
[0147] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 12 je SEK ID BR: 211 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0148] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 4 (SEK ID BR: 215) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 12 (SEK ID BR:217): RSSQNIVHSNGNTYLE
CDRL2 of PD-1 mAb 12 (SEK ID BR:218): KVSTRFS
CDRL3 of PD-1 mAb 12 (SEK ID BR:219): FQGSHVPYT
[0149] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 12 je SEK ID BR: 216 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
M. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 13
[0150] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 220) je prikazana ispod (ostaci CDRHprikazani su podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 13 (SEK ID BR:222): SHTMS
CDRH2 of PD-1 mAb 13 (SEK ID BR:223): TISGGGSNIYYPDSVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 13 (SEK ID BR:224): QAYYGNYWYFDV
[0151] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 13 je SEK ID BR: 221 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0152] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 13 (SEK ID BR: 225) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 13 (SEK ID BR:227): LASQTIGTWLA
CDRL2 of PD-1 mAb 13 (SEK ID BR:228): AATSLAD
CDRL3 of PD-1 mAb 13 (SEK ID BR:229): QQLDSIPWT
[0153] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 13 je SEK ID BR: 226 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
N. Mišje anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 14
[0154] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 230) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 14 (SEK ID BR:232): SYWIT
CDRH2 of PD-1 mAb 14 (SEK ID BR:233): NIYPGTDGTTYNEKFKS
CDRH3 of PD-1 mAb 14 (SEK ID BR:234): GLHWYFDV
[0155] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 14 je SEK ID BR: 231 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0156] Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 14 (SEK ID BR: 235) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 14 (SEK ID BR:237): KASQSVGTNVA
CDRL2 of PD-1 mAb 14 (SEK ID BR:238): SASSRFS
CDRL3 of PD-1 mAb 14 (SEK ID BR:239): QQYNSYPYT
[0157] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 14 je SEK ID BR: 236 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
4
O. Anti-humano PD-1 antitelo PD-1 mAb 15
1. Mišje anti-humano PD-1 antitelo na PD-1 mAb 15
[0158] Aminokiselinska sekvenca VH domena PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 240) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni).
CDRH1 of PD-1 mAb 15 (SEK ID BR:242): SYLIS
CDRH2 of PD-1 mAb 15 (SEK ID BR:243): AISGGGADTYYADSVKG
CDRH3 of PD-1 mAb 15 (SEK ID BR:244): RGTYAMDY
[0159] Primer polinukleotida koji kodira VH domen PD-1 mAb 15 je SEK ID BR: 241 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0160]
Aminokiselinska sekvenca VL domena PD-1 mAb 15 (SEK ID BR: 245) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 of PD-1 mAb 15 (SEK ID BR:247): LASQTIGTWLA
CDRL2 of PD-1 mAb 15 (SEK ID BR:248): AATSLAD
CDRL3 of PD-1 mAb 15 (SEK ID BR:249): QQLYSIPWT
[0161] Primer polinukleotida koji kodira VL domen PD-1 mAb 15 je SEK ID BR: 246 (nukleotidi koji kodiraju CDRLostatke prikazani su podvučeni):
2. Humanizacija anti-humanog PD-1 antitela PD-1 mAb 15 u formu "hPD-1 mAb 15"
[0162] Napred opisano mišje anti-humano antitelo na PD-1 PD-1 mAb 15 je humanizovano i dalje deimunizovano kada su identifikovani antigeni epitopi kako bi se pokazala sposobnost humanizacije anti-humanog antitela na PD-1 kako bi se smanjilo njegova antigenost nakon primene na humanog primaoca. Humanizacijom je dobijen jedan humanizovani VH domen, ovde označen kao "hPD-1 mAb 2 VH1", i jedan humanizovani VL domen ovde označen kao "hPD-1 mAb 1 VL1". Antitelo koje sadrži humanizovani VL domen uparen sa humanizovanim VH domenom naziva se "hPD-1 mAb 15."
[0163] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 15 VH1 (SEK ID BR: 250) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0164] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 15 VH1 je SEK ID BR: 251 (nukleotidi koji kodiraju ostatke CDRHprikazani su podvučeni):
[0165] Aminokiselinska sekvenca VH domena hPD-1 mAb 15 VL1 (SEK ID BR: 252) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0166] Primer polinukleotida koji kodira hPD-1 mAb 15 VL1 je SEK ID BR: 253 (nukleotidi koji kodiraju CDRHsu prikazani podvučeni):
V. Anti-humana PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, i njihovi derivati koji imaju projektovanu Fc regiju
[0167] U tradicionalnoj imunološkoj funkciji, interakcija kompleksa antitelo-antigen sa ć elijama imunološkog sistema rezultira širokim spektrom odgovora, u rasponu od efektorskih funkcija kao što su citotoksičnost zavisna od antitela, degranulacija mastocita i fagocitoza do imunomodulatornih signala, kao što je reguliše proliferaciju limfocita i lučenje antitela. Sve ove interakcije započinju vezivanjem Fc regiona antitela ili imunih kompleksa za specijalizovane ć elijske površinske receptore na hematopoetskim ć elijama. Raznolikost ć elijskih odgovora izazvanih antitelima i imunskim kompleksima rezultat je strukturne heterogenosti tri Fc receptora: FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) i FcγRIII (CD16). FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A) i FcγRIII (CD16) aktiviraju receptore (tj. jačanje imunog sistema); FcγRIIB (CD32B) je receptorski inhibitor (tj. prigušivač imunog sistema). Osim toga, interakcija sa neonatalnim Fc receptorom (FcRn) posreduje u recikliranju molekula IgG sa endosoma na ć elijsku površinu i oslobađanje u krv. Aminokiselinska sekvenca primera IgG1 divljeg tipa (SEK ID BR: 1), IgG2 (SEK ID BR: 2), IgG3 (SEK ID BR: 3) i IgG4 (SEK ID BR: 4) su predstavljene gore.
[0168] Modifikacija Fc regiona obično dovodi do izmenjenog fenotipa, na primer promenjenog poluvremena seruma, izmenjene stabilnosti, promenjene osetljivosti na ć elijske enzime ili izmenjene efektorske funkcije. Može biti poželjno modifikovati antitelo ili drugi vezujuć i molekul ovog pronalaska u odnosu na efektorsku funkciju, na primer, tako da se poveć a efikasnost takvog molekula u lečenju raka. Smanjenje ili uklanjanje efektorske funkcije je poželjno u određenim slučajevima, na primer u slučaju antitela čiji mehanizam delovanja uključuje blokiranje ili antagonizam, ali ne i ubijanje ć elija koje nose ciljni antigen. Pove ć ana efektorska funkcija je generalno poželjna kada se usmeri na neželjene ć elije, poput tumora i stranih ć elija, gde su FcγR izražene na niskim nivoima, na primer, tumorske specifične B ć elije sa niskim nivoom FcγRIIB (npr. ne-Hodgkinov limfom, CLL i Burkitov limfom). U navedenim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska sa dodeljenom ili izmenjenom aktivnošć u efektorske funkcije su korisni za lečenje i/ili prevenciju bolesti, poremeć aja ili infekcije gde je poželjna pove ć ana efikasnost aktivnosti efektorske funkcije.
[0169] U određenim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže Fc region koji poseduje jednu ili više modifikacija (npr. supstitucije, delecije ili insercije) u sekvencu aminokiselina divljeg tip Fc regiona (npr. SEK ID BR: 1), koji smanjuju afinitet i avidnost Fc regiona i, prema tome, molekul iz pronalaska, za jedan ili više receptora FcγR. U drugim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska obuhvataju Fc region koji poseduje jednu ili više modifikacija aminokiselina Fc regiona divljeg tipa, koje poveć avaju afinitet i avidnost Fc regiona i, prema tome, molekul pronalaska, za jedan ili više FcγR receptora. U drugim slučajevima, molekuli sadrže varijantu Fc regiona u kojoj pomenuta varijanta daje ili posreduje poveć anu aktivnost citotoksičnosti zavisnu od antitela (ADCC) i/ili pove ć ano vezivanje za FcγRIIA, u odnosu na molekul koji ne sadrži Fc region ili sadrži region divljeg tipa Fc. U alternativnim slučajevima, molekuli sadrže varijantu Fc regiona u kojoj navedena varijanta daje ili posreduje smanjenu aktivnost ADCC (ili drugu efektorsku funkciju) i/ili pove ć ano vezivanje za FcγRIIB, u odnosu na molekul koji ne sadrži Fc region ili koji sadrži region Fc divljeg tipa. U nekim slučajevima, pronalazak obuhvata molekule koji se vezuju za PD-1 i koji sadrže varijantu Fc regiona, čija varijanta Fc regija ne pokazuje detektibilno vezivanje za bilo koji FcγR, u odnosu na uporedni molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata molekule za vezivanje PD-1 koji sadrže varijantu Fc regiona, čija varijanta Fc regija vezuje samo jedan FcγR, poželjno jedan od FcγRIIA, FcγRIIB ili FcγRIIIA. Svaki takav poveć an afinitet i/ili avidnost poželjno se procenjuje merenjem in vitro stepena detektibilnog vezivanja za aktivnost povezanu sa FcγR ili FcγR u ć elijama koje izražavaju niske nivoe FcγR pri vezivanju aktivnosti matičnog molekula (bez modifikovane Fc regije) ne mogu se otkriti u ć elijama ili u ć elijama koje izražavaju antigene ciljane na receptor ne- FcγR pri gustini od 30.000 do 20.000 molekula/ć eliji, pri gustini od 20.000 do 10.000 molekula/ć eliji, pri gustini od 10.000 do 5.000 molekula/ ć elija, pri gustini od 5.000 do 1.000 molekula/ć eliji, pri gustini od 1.000 do 200 molekula/ ć eliji ili pri gustini od 200 molekula/ ć eliji ili manje (ali najmanje 10, 50, 100 ili 150 molekula/ć eliji).
[0170] Molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska može sadržati varijantu Fc regiona sa izmenjenim afinitetima za aktiviranje i/ili inhibiciju receptora Fcγ. U jednom slučaju, molekul koji se veže za PD-1 sadrži varijantu Fc regiona koja ima pove ć an afinitet za FcγRIIB i smanjen afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u poređenju sa uporedivim molekulom sa Fc regionom divljeg tipa. U drugom slučaju, molekul koji se vezuje za PD-1 prema ovom pronalasku sadrži varijantu Fc regiona, koja je smanjila afinitet za FcγRIIB i pove ć ala afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u poređenju sa uporedivim molekulom sa Fc regionom divljeg tipa. U još jednom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona koja je smanjila afinitet za FcγRIIB i smanjila afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u poređenju sa uporedivim molekulom sa Fc regionom divljeg tipa. U još jednom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, koja ima nepromenjen afinitet za FcγRIIB i smanjen (ili poveć an) afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA, u odnosu na uporedni molekul sa Fc regija divljeg tipa.
[0171] U određenim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona koja ima izmenjeni afinitet za FcγRIIIA i/ili FcγRIIA tako da imunoglobulin ima pojačanu efektorsku funkciju. Neograničavajuć i primeri efektivnih ć elijskih funkcija uključuju citotoksičnost zavisnu od ć elija zavisnu od antitela, fagocitozu zavisnu od antitela, fagocitozu, opsonizaciju, opsonofagocitozu, vezivanje ć elija, rozetiranje, vezivanje C1q ić eliju posredovanu citotoksičnost zavisnu od komplementa.
[0172] U poželjnom slučaju, promena afiniteta ili efektorske funkcije je najmanje 2 puta, poželjno najmanje 4 puta, najmanje 5 puta, najmanje 6 puta, najmanje 7 puta, najmanje 8 puta, najmanje 9 puta, najmanje 10 puta, najmanje 50 puta ili najmanje 100 puta, u odnosu na uporedni molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim slučajevima otkrivanja, varijanta Fc regiona imunospecifično vezuje jedan ili više FcR sa najmanje 65 %, poželjno najmanje 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 125 %, 150 %, 175 %, 200 %, 225 % ili 250 %već i afinitet u odnosu na molekul koji
4
sadrži Fc region divljeg tipa. Takva merenja mogu biti in vivo ili in vitro testovi, a u poželjnom slučaju su in vitro testovi kao što su ELISA ili površinski plazmonski rezonantni testovi.
[0173] U različitim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona u kojoj navedena varijanta agonizuje najmanje jednu aktivnost receptora FcγR, ili antagonizira najmanje jednu aktivnost receptora FcγR. U poželjnom slučaju, molekuli sadrže varijantu koja antagonizira jednu ili više aktivnosti FcγRIIB, na primer, signalizacija posredovana receptorima B ć elija, aktivacija B ć elija, proliferacija B ć elija, proizvodnja antitela, unutar ć elijski priliv kalcijuma B ć elija, napredovanje ć elijskog ciklusa, FcγRIIB posredovana inhibicija signalizacije FceRI, fosforilacija FcγRIIB, regrutovanje SHIP-a, fosforilacija SHIP-a i povezanost sa Shc, ili aktivnost jednog ili više nizvodnih molekula (npr. MAP kinaza, JNK, p38 ili Akt) FcγRIIB put transdukcije signala. U drugom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu koja agonizuje jednu ili više aktivnosti FceRI, na primer, aktivaciju mastocita, mobilizaciju kalcijuma, degranulaciju, proizvodnju citokina ili otpuštanje serotonina.
[0174] U nekim slučajevima, molekuli obuhvataju Fc region koji obuhvata regione iz dva ili više IgG izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4). Kako se ovde koristi, za Fc region se kaže da je određenog IgG izotipa ako je njegova aminokiselinska sekvenca najhomolognija tom izotipu u odnosu na druge izotipe IgG. Različiti izotipi IgG pokazuju različita fizička i funkcionalna svojstva, uključujuć i poluživot u serumu, fiksaciju komplementa, afinitete vezivanja za FcγR i aktivnosti efektorske funkcije (npr. ADCC, CDC, itd.) Zbog razlika u aminokiselinskim sekvencama njihovih šarki i/ili Fc regije, na primer kako je opisano u Flesch and Neppert (1999) J. Clin. Lab. Anal. 14: 141-156; Chappel et al. (1993) J. Biol. Chem. 33: 25124-25131; Chappel et al. (1991) Proc. Natl. Akad. Sci. (U.S.A.) 88: 9036-9040; ili Bruggemann et al. (1987) J. Ekp. Med 166: 1351-1361. Ova vrsta opcionog Fc regiona može se koristiti sama, ili u kombinaciji sa modifikacijom aminokiseline, da utiče na Fc posredovanu efektorsku funkciju i/ili aktivnost vezivanja. U kombinaciji, modifikacija aminokiselina i IgG šarka/Fc region mogu pokazati sličnu funkcionalnost (npr. poveć an afinitet za FcγRIIA) i mogu delovati aditivno ili, još poželjnije, sinergistički da izmene efektorsku funkcionalnost u molekulu iz ovog pronalaska, u odnosu na molekul iz pronalaska koji sadrži Fc region divljeg tipa. U drugim slučajevima, modifikacija aminokiselina i IgG Fc region mogu pokazivati suprotnu funkcionalnost (npr. poveć an i smanjen afinitet za FcγRIIA, respektivno) i mogu delovati tako da selektivno temperiraju prema ili smanjenju specifične funkcionalnosti u molekulu iz pronalaska, u odnosu na molekul iz pronalaska koji ne sadrži Fc region ili sadrži Fc region divljeg tipa istog izotipa.
[0175] U poželjnom specifičnom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, gde navedena varijanta Fc regija sadrži najmanje jednu modifikaciju aminokiselina u odnosu na Fc region divljeg tipa, tako da je molekul ima izmenjeni afinitet prema FcR, pod uslovom da navedena varijanta Fc regiona nema supstituciju na pozicijama koje ostvaruju direktan kontakt sa FcγR na osnovu kristalografske i strukturne analize interakcija Fc-FcR, poput onih koje su otkrili Sondermann et al. (2000) Nature 406: 267-73. Primeri položaja unutar Fc regiona koji imaju direktan kontakt sa FcγR su aminokiselinski ostaci 234-239, aminokiselinski ostaci 265-269 (B/C petlja), aminokiselinski ostaci 297-299 (C '/E petlja) i aminokiselinski ostaci 327-332 (F/G petlja). U nekim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska sadrže varijantu Fc regiona obuhvataju modifikaciju najmanje jednog ostatka koji ne ostvaruje direktan kontakt sa FcγR na osnovu strukturne i kristalografske analize, na primer, nije na mestu vezivanja Fc-FcγR.
[0176] Varijante Fc regiona su dobro poznate u tehnici, a bilo koja poznata varijanta Fc regiona može se koristiti u ovom pronalasku za davanje ili modifikovanje efektorske funkcije koju ispoljava molekul iz pronalaska koji sadrži Fc region (ili njegov deo) kao funkcionalno ispitani, npr. u testu zavisnom od NK ili makrofaga. Na primer, varijante Fc regiona identifikovane kao promenljiva efektorska funkcija otkrivene su u PCT publikacijama br. WO 04/063351; WO 06/088494; WO 07/024249; WO 06/113665; WO 07/021841; WO 07/106707; i WO 2008/140603, i bilo koja pogodna varijanta koja je ovde otkrivena može se koristiti u predmetnim molekulima.
[0177] U određenim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, koja ima jednu ili više aminokiselinskih modifikacija u jednom ili više regiona, koje se modifikacije menjaju (u odnosu na divlji tip Fc regiona). Odnos afiniteta varijantnog Fc regiona prema aktiviraju ć em FcγR (kao što je FcγRIIA ili FcγRIIIA) u odnosu na inhibitorni FcγR (kao što je FcγRIIB) je:
[0178] Posebno su poželjni molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku i koji imaju varijantu Fc regiona (u odnosu na Fc region divljeg tipa) u kojoj varijanta Fc regiona ima odnos afiniteta već i od 1. Takvi molekuli imaju naročitu upotrebu u obezbeđivanju terapeutskog ili profilaktičkog lečenja bolesti, poremeć aja ili infekcije, ili ublažavanja njenog simptoma, gde je poželjna poveć ana efikasnost efektorske ć elijske funkcije (npr. ADCC) posredovana FcγR, npr. ili zarazne bolesti. Nasuprot tome, varijanta Fc regiona sa odnosom afiniteta manjim od 1 posreduje u smanjenju efikasnosti funkcije efektorske ć elije. Tabela 1 prikazuje primere pojedinačnih, dvostrukih, trostrukih, četvorostrukih i petostrukih mutacija prema tome da li je njihov odnos afiniteta već i ili manji od 1.
4
(nastavak)
[0179] U određenom slučaju, u varijantama Fc regiona, sve modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 235, 240, 241, 243, 244, 247, 262, 263, 269, 298, 328 ili 330 i poželjno jedan ili više sledeć ih ostataka: A240, 1240, L241, L243, H244, N298, 1328 ili V330. U drugačijem specifičnom slučaju, u varijantama Fc regiona, sve modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 268, 269, 270, 272, 276, 278, 283, 285, 286, 289, 292, 293, 301, 303, 305, 307, 309, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ili 439 i poželjno jedan ili više od sledeć i ostaci: H280, K280, I280, G290, S290, T290, I290, N294, K295, P296, D298, N298, P298, V298, I300 ili L300.
[0180] U poželjnom slučaju, u varijanti Fc regiona koje vezuju FcγR sa izmenjenim afinitetom, bilo koje modifikacije aminokiselina (npr., supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 255, 256, 258, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ili 439. Poželjno je varijanta Fc regiona ima bilo koji od sledeć ih ostataka: A256, N268, K272, D286, K286, S286, A290, S290, A298, M301, A312, E320, M320, K320, R320, E322, A326, D326, E326, N326, S326 , K330, T339, A333, A334, E334, H334, L334, M334, K334, V334, K335, K335, A359, A360 ili A430.
[0181] U drugom slučaju, u varijanti Fc regiona koje vezuju FcγR (preko njegove Fc regije) sa smanjenim afinitetom, sve modifikacije aminokiselina (npr. supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 252, 254, 265, 268, 269, 270, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 ili 439.
[0182] U drugom slučaju, u varijanti Fc regiona koje vezuju FcγR (preko njegove Fc regije) sa pojačanim afinitetom, sve modifikacije aminokiselina (npr., Supstitucije) na bilo kojoj od pozicija 280, 283, 285, 286, 290, 294, 295, 298, 300, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 ili 430. U drugom slučaju, u varijanti Fc regiona koji vezuje FcγRIIA sa pojačanim afinitetom, bilo koji od sledeć ih ostataka: A255, A256, A258, A267, A268, N268, A272, K272, A276, A280, A283, A285, A286, D286, K286, S286, A290, S290, M301, E320 , M320, K320, R320, E322, A326, D326, E326, S326, K330, A331, K335, A337 ili A430.
[0183] Poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija na bilo kojoj poziciji: 228, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 262, 263, 264, 265 , 266, 271, 273, 275, 281, 284, 291, 296, 297, 298, 299, 302, 304, 305, 313, 323, 325, 326, 328, 330 ili 332.
[0184] Posebno poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija izabranih iz grupa A-AI:
4
(nastavak)
[0185] Još posebno poželjne varijante uključuju jednu ili više modifikacija izabranih iz Grupa 1-105:
4
� (nastavak)
[0186] U jednom slučaju, PD-1-vezujuć i molekul iz ovog pronalaska ć e sadržati varijantu Fc regiona koja ima najmanje jednu modifikaciju u Fc regionu. U određenim slučajevima, varijanta Fc region sadrži najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine L235V, F243L, R292P, I300L, V305I i P396L.
[0187] U određenom slučaju, varijanta Fc regiona obuhvata:
(A) najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine F243L, R292P, I300L, V305I i P396L;
(B) najmanje dve supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L i P396L;
(2) F243L i R292P; i
(3) R292P i V305I;
(C) najmanje tri supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P i I300L;
(2) F243L, R292P i V305I;
(3) F243L, R292P i P396L; i
(4) R292P, V305I i P396L;
(D) najmanje četiri supstitucije izabrane iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P, I300L i P396L; i
(2) F243L, R292P, V305I i P396L; ili
(E) najmanje pet supstitucija izabranih iz grupe koju čine:
(1) F243L, R292P, I300L, V305I i P396L; i
(2) L235V, F243L, R292P, I300L i P396L.
[0188] U drugom specifičnom slučaju, varijanta Fc region sadrži supstitucije za:
(A) F243L, R292P i I300L;
4
(B) L235V, F243L, R292P, I300L i P396L; ili
(C) F243L, R292P, I300L, V305I i P396L.
[0189] U jednom slučaju, molekul koji se vezuje za PD-1 iz ovog otkrić a sadrži varijantu Fc regiona koja pokazuje smanjeno (ili u suštini nema) vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a ) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje ispoljava Fc regija divljeg tipa IgG1 (SEK ID BR: 1)). U jednom slučaju, PD-1- vezujuć i molekul iz ovog pronalaska ć e sadržati varijantu Fc regiona koja pokazuje smanjeno (ili u suštini nikakvo) vezivanje za FcγR (npr. FcγRIIIA) i smanjenu (ili u suštini nema) efektorsku funkciju ADCC. U određenim slučajevima, varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koju čine L234A, L235A, D265A, N297K i N297G. U određenom slučaju, varijanta Fc regiona obuhvata supstituciju L234A; L235A; L234A i L235A; D265A; N297K ili N297G.
[0190] Poželjna sekvenca IgG1 za domene CH2 i CH3 molekula koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska ć e imati supstitucije L234A/L235A (SEK ID BR: 5):
pri čemu je X lizin (K) ili je odsutan.
[0191] U drugom slučaju, molekul koji veže PD-1 iz ovog pronalaska sadrži Fc region koji inherentno pokazuje smanjeno (ili u suštini nema) vezivanje za FcγRIIIA (CD 16a) i/ili smanjenu efektorsku funkciju (u odnosu na izloženo vezivanje) pomoć u IgG1 Fc regiona divljeg tipa (SEK ID BR: 1)). U određenom slučaju, molekul koji se vezuje za PD-1 prema ovom pronalasku sadrži IgG2 Fc region (SEK ID BR: 2) ili IgG4 Fc region (SEK ID: NO: 4). Kada se koristi IgG4 Fc region, predmetni pronalazak takođe obuhvata uvođenje stabilizirajuć e mutacije, kao što je supstitucija zglobnog regiona IgG4 S228P (vidi, npr. SEK ID BR: 13: ESKYGPPCPPCP, (Lu et al., (2008) "The Effect of a Point mutation on the Stability of Igg4 as Monitored by Analitical Ultracentrifugation", J. Pharmaceutical Sciences 97: 960-969) da bi se smanjila incidencija razmene niti. Druge stabilizujuć e mutacije poznate u tehnici mogu se uvesti u IgG4 Fc region (Peters, P et al., (2012) "Inženjering poboljšane molekule IgG4 sa smanjenom heterogenošć u disulfidnih veza i poveć anom termičkom stabilnoš ć u domena Fab", J. Biol. Chem ., 287: 24525-24533; PCT patentna publikacija br: WO 2008/145142).
[0192] U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata upotrebu bilo koje varijante Fc regiona poznate u tehnici, poput onih otkrivenih u Jefferis, B.J. et al. (2002) "Mesto interakcije na humanom IgG-Fc za FcγR: trenutni modeli", Immunol. Lett. 82: 57-65; Presta, L.G. et al. (2002) "Inženjerska terapijska antitela za poboljšanu funkciju", Biohemija. Soc. Trans. 30: 487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) "Inženjerska antitela sa poveć anom aktivnoš ć u za regrutovanje komplementa", J. Immunol. 166: 2571-75; Shields, R.L. et al. (2001) "Mapiranje veznog mesta visoke rezolucije mesta vezivanja na humanom IgG1 za Fc gama RI, Fc gama RII, Fc gama RIII i FcRn i dizajn varijanti IgG1 sa poboljšanim vezivanjem za Fc gama R", J. Biol. Chem. 276: 6591-6604; Idusogie, E.E. et al. (2000) "Mapiranje mesta vezivanja Clq na Rituksanu, himenom antitelu sa humanim IgG Fc", J. Immunol. 164: 4178-84; Reddi, M.P. et al. (2000) "Uklanjanje efektorskih funkcija zavisnih od receptora zavisnih modifikovanih IgG4 monoklonskih antitela na humani CD4", J. Immunol. 164: 1925-1933; Ksu, D. i sar. (2000) "In vitro karakterizacija pet humanizovanih antitela sa funkcijom efektora OKT3", ć elija. Immunol. 200: 16-26; Armor, K.L. et al. (1999) "Rekombinantni humani IgG molekuli kojima nedostaju aktivnosti vezivanja receptora Fcgamma I i aktiviranje monocita", Eur. J. Immunol. 29: 2613-24; Jefferis, R. i sar. (1996) "Modulacija aktivacije Fc (gama) R i humanog komplementa interakcijama oligosaharida IgG3-jezgra", Immunol. Lett. 54: 101-04; Lund, J. i sar. (1996) "Više interakcija IgG sa jezgrom oligosaharida može modulirati prepoznavanje komplementom i ljudskim Fc gama receptorom I i uticati na sintezu njegovih oligosaharidnih lanaca", J. Immunol. 157: 4963-4969; Hutchins i sar. (1995) "Poboljšana biodistribucija, ciljanje tumora i smanjena imunogenost kod miševa sa varijantom gama 4 Campath-1H", Proc. Natl. Akad. Sci. (SAD) 92: 11980-84; Jefferis, R. i sar. (1995) "Prepoznavanje lokacija na ljudskom IgG za Fc gama receptore: Uloga glikozilacije", Immunol. Lett. 44: 111-17; Lund, J. i sar. (1995) "Oligosaharidno-proteinske interakcije u IgG mogu modulirati prepoznavanje pomoć u Fc gama receptora", FASEB J. 9: 115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) "Aktivirajuć e" humanizovano "anti-CD3 monoklonsko antitelo zadržava imunosupresivna svojstva in vivo," Transplantation 57: 1537-1543; Lund i dr. (1992) „Višestruko vezivanje Lokacije na domenu CH2 IgG za mišju Fc gama R11, "Mol. Imuno. 29: 53-59; Lund et al. (1991)" Ljudska Fc gama RI i Fc gama RII interaguju sa različitim, ali preklapajuć im mestima na ljudskom IgG, "J. Immunol. 147: 2657-2662; Duncan, AR et al. (1988)" Lokalizacija vezivnog mesta za humani Fc receptor visokog afiniteta na IgG, "Nature 332: 563-564; US Patenti br. 5,624,821 ; 5,885,573; 6,194,551; 7,276,586; i 7,317,091; i PCT publikacije WO 00/42072 i PCT WO 99/58572.
[0193] U nekim slučajevima, molekuli iz ovog pronalaska dalje sadrže jedno ili više mesta glikozilacije, tako da je jedan ili više ugljeno hidratnih delova kovalentno vezan za molekul. Poželjno, molekuli iz ovog pronalaska sa jednim ili više mesta glikozilacije i/ili jednom ili više modifikacija u Fc regionu daju ili imaju pojačanu efektorsku funkciju posredovanu antitelom, na primer, pojačanu aktivnost ADCC, u poređenju sa nemodifikovanim antitelom. U nekim slučajevima, pronalazak dalje obuhvata molekule koji sadrže jednu ili više modifikacija aminokiselina za koje je poznato da direktno ili indirektno stupaju u interakciju sa ugljenikohidratnim delom Fc regiona, uključujuć i, ali bez ograničenja, aminokiseline na položajima 241, 243, 244, 245 , 245, 249, 256, 258, 260, 262, 264, 265, 296, 299 i 301. Aminokiseline koje direktno ili indirektno stupaju u interakciju sa ugljeno hidratnim delom Fc regiona poznate su u tehnici, videti, na primer, Jefferis et al., 1995 Immunology Letters, 44: 111-7.
[0194] U drugom slučaju, pronalazak obuhvata molekule koji su modifikovani uvođenjem jednog ili više mesta glikozilacije u jedno ili više mesta molekula, poželjno bez promene funkcionalnosti molekula, na primer, aktivnosti vezivanja za ciljni antigen ili FcγR. Mesta glikozilacije mogu se uvesti u varijabilnu i/ili konstantnu oblast molekula iz ovog pronalazak. Kako se ovde koristi, "mesta glikozilacije" uključuju bilo koju specifičnu sekvencu aminokiselina u antitelu za koju ć e se oligosaharidi (tj. ugljeni hidrati koji sadrže dva ili više jednostavnih še ć era povezanih zajedno) specifično i kovalentno vezati. Bočni lanci oligosaharida su tipično povezani sa okosnicom antitela preko N- ili O-veza. N-vezana glikozilacija se odnosi na vezivanje oligosaharidnog dela na bočni lanac ostatka asparagina. O-vezana glikozilacija se odnosi na vezivanje oligosaharidnog dela na hidroksiamino kiselinu, na primer, serin, treonin. Molekuli iz ovog pronalaska mogu sadržati jedno ili više mesta glikozilacije, uključujuć i N-vezana i O-vezana mesta glikozilacije. Bilo koje mesto glikozilacije za N-vezano ili O-vezano glikozilovanje poznato u tehnici može se koristiti u skladu sa trenutnim pronalaskom. Primerno mesto glikozilacije vezano za N koje je korisno u skladu sa postupcima ovog pronalaska je aminokiselinska sekvenca: Asn-X-Thr/Ser, pri čemu X može biti bilo koja aminokiselina, a Thr/Ser označava treonin ili serin. Takva lokacija ili mesta mogu se uvesti u molekul iz pronalaska pomoć u metoda dobro poznatih u tehnici na koje se ovaj pronalazak odnosi (vidi, na primer, IN VITRO MUTAGENEZA, REKOMBINANTNA DNK: KRATAK KURS, JD Watson, et al. WH Freeman and Company, New York, 1983, poglavlje 8, str. 106-116.) Primerna metoda za uvođenje mesta glikozilacije u molekul iz ovog pronalaska može da sadrži: modifikovanje ili mutiranje aminokiselinske sekvence molekula tako da od željenog Asn se dobije X-Thr/Ser sekvenca.
[0195] U nekim slučajevima, pronalazak obuhvata metode modifikovanja sadržaja ugljenih hidrata u molekulu iz ovog pronalaska dodavanjem ili brisanjem mesta glikozilacije. Postupci za modifikovanje sadržaja ugljenih hidrata u antitelima (i molekulima koji sadrže domene antitela, npr. Fc region) dobro su poznati u tehnici i obuhvać eni su pronalaskom, videti, na primer, US br. 6,218,149; EP 0 359 096 B1; US Publication No. US 2002/0028486; WO 03/035835; US br. 2003/0115614; US Patent 6,218,149; US Patent No. 6,472,511. U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata postupke modifikovanja sadržaja ugljenih hidrata u molekulu iz pronalaska brisanjem jednog ili više endogenih ugljenih hidratnih delova molekula. U konkretnom slučaju, pronalazak obuhvata pomeranje mesta glikozilacije Fc regiona antitela, menjanjem položaja pored 297. U određenom slučaju, pronalazak obuhvata modifikovanje položaja 296 tako da je položaj 296, a ne položaj 297 glikoziliran.
[0196] Efektorska funkcija se takođe može modifikovati tehnikama kao što je uvođenje jednog ili više ostataka cisteina u Fc region, čime se omoguć ava stvaranje međulančanih disulfidnih veza u ovom regionu, što rezultira stvaranjem homodimernog antitela koje je moglo poboljšati internalizaciju sposobnosti i/ili poveć ano ubijanje ć elija posredovano komplementom i ADCC (Caron, PC et al. (1992) "Projektovani humanizovani dimerni oblici IgG su efikasnija antitela", J. Ekp. Med. 176: 1191-1195; Shopes, B (1992) "Genetski modifikovani humani IgG mutant sa pojačanom citolitičkom aktivnošć u," J. Immunol. 148 (9): 2918-2922. Homodimerna antitela sa pojačanom antitumorskom aktivnošć u mogu se takođe pripremiti koriš ć enjem heterobifunkcionalnih umreživača kao što je opisano u Wolff, EA i dr. (1993) "Homodimeri monoklonskih antitela: poboljšana antitumorska aktivnost kod golih miševa", Istraživanje raka 53: 2560-2565. Alternativno, može se proizvesti antitelo koje ima dvostruke Fc regione i na taj način može poboljšati liza elemenata i sposobnosti ADCC -a (Stevenson, G.T. et al. (1989) "Himerno antitelo sa dvostrukim Fc regionima (bisFabFc) pripremljeno od strane manipulacija na IgG šarki", "Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230).
[0197] Poluživot u serumu molekula prema ovom pronalasku koji sadrži Fc regione može se poveć ati pove ć anjem afiniteta vezivanja Fc regiona za FcRn. Izraz "poluživot" kako se ovde koristi označava farmakokinetičko svojstvo molekula koje je mera srednjeg vremena preživljavanja molekula nakon njihove primene. Poluživot se može izraziti kao vreme potrebno za uklanjanje pedeset posto (50 %) poznate količine molekula iz tela subjekta (na primer, pacijenta ili drugog sisara) ili njegovog posebnog dela, na primer, mereno u serumu, tj. poluvreme cirkulacije ili u drugim tkivima. Generalno, poveć anje poluživota rezultira pove ć anjem srednje vrednosti vreme boravka (MRT) u cirkulaciji za primenjeni molekul.
[0198] U nekim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, gde navedena varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu modifikaciju aminokiselina u odnosu na Fc region divljeg tipa, tako da navedeni molekul ima produženo vreme poluraspada (u odnosu na Fc region divljeg tipa).
[0199] U nekim slučajevima, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku sadrže varijantu Fc regiona, gde navedena varijanta Fc regiona sadrži poluživu produženu aminokiselinsku supstituciju na jednom ili više položaja izabranih iz grupe koju čini 238 , 250, 252, 254, 256, 257, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380 , 382, 413, 424, 428, 433, 434, 435 i 436. U tehnici su poznate brojne specifične mutacije sposobne za produženje poluživota molekula koji sadrži Fc region i uključuju, na primer M252I, S254T, T256E i njihove kombinacije. Na primer, pogledajte mutacije opisane u US br. 6,277,375, 7,083,784; 7,217,797, 8,088,376; US br. 2002/0147311; 2007/0148164; i međunarodne publikacije br. WO 98/23289; WO 2009/058492; i WO 2010/033279. Molekuli koji sadrže Fc region sa produženim poluživotom takođe uključuju one sa supstitucijama na dva ili više ostataka Fc regiona 250, 252, 254, 256, 257, 288, 307, 308, 309, 311, 378, 428, 433, 434 , 435 i 436. Konkretno, dve ili više supstitucije izabrane između: T250K, M252I, S254T, T256E, K288D, T307K, V308P, A378V, M428L, N434A, H435K i I436I.
[0200] U određenom slučaju, varijanta Fc regiona sadrži supstitucije za:
1
(A) M252I, S254T i T256E;
(B) M252I i S254T;
(C) M252I i T256E;
(D) T250K i M428L;
(E) T307K i N434A;
(F) A378V i N434A;
(G) N434A i I436I;
(H) V308P i N434A; ili
(I) K288D i H435K.
[0201] Predmetni pronalazak dalje obuhvata varijante Fc regiona koje sadrže:
(A) jednu ili više mutacija koje menjaju efektorsku funkciju i/ili FcγR; i
(B) jedna ili više mutacija koje produžavaju poluživot u serumu.
VI. Bispecifični anti PD-1 vezujući molekuli
[0202] Jedan primer ovog pronalaska se odnosi na bispecifične molekule vezivanja koji su sposobni da se vezuju za "prvi epitop" i "drugi epitop", pri čemu je prvi epitop epitop humanog PD-1, a drugi epitop je isti ili drugačiji epitop PD-1, ili je epitop drugog molekula koji je prisutan na površini imunološke ć elije (kao što je T limfocit) i uključen je u regulaciju imunološke kontrolne tačke. U jednom slučaju, drugi epitop je epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD3, CD8, CD16, CD27, CD32, CD40, CD40L, CD47, CD64, CD70, CD80, CD86, CD94, CD137, CD137L , CD226, CTLA-4, Galectin-9, GITR, GITRL, HHLA2, ICOS, ICOSL, KIR, LAG-3, LIGHT, MHC klase I ili II, NKG2a, NKG2d, OX40, OX40L, PD1H, PD-1, PD -L1, PD-L2, PVR, SIRPa, TCR, TIGIT, TIM-3 ili VISTA. U jednom slučaju, drugi epitop nije epitop PD-1. U određenom slučaju, drugi epitop je CD137, CTLA-4, LAG-3, OX40, TIGIT ili TIM-3. U određenim slučajevima, bispecifični molekul sadrži više od dva mesta vezivanja epitopa. Takvi bispecifični molekuli mogu vezati dva ili više različitih epitopa LAG-3 i najmanje jedan epitop molekula koji nije LAG-3.
[0203] Predmetni pronalazak obuhvata bispecifična antitela sposobna da se istovremeno vezuju za PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG -3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). U nekim slučajevima, bispecifično antitelo sposobno da se istovremeno veže za PD-1 i drugi epitop proizvodi se bilo kojim od metoda opisanih u PCT publikacijama br. WO 1998/002463, WO 2005/070966, WO 2006/107786 WO 2007/024715 , WO 2007/075270, WO 2006/107617, WO 2007/046893, WO 2007/146968, WO 2008/003103, WO 2008/003116, WO 2008/027236, WO 2008/024188, WO 2009/132876, WO 2009/018386 , WO 2010/028797, WO 2010028796, WO 2010/028795, WO 2010/108127, WO 2010/136172, WO 2011/086091, VO 2011/133886, WO 2012/009544, WO 2013/003652, WO 2013/070565, WO 2012 /162583, WO 2012/156430, WO 2013/174873 i WO 2014/022540.
A. Bispecifična dijatela kojima nedostaju Fc regioni
[0204] Jedan primer ovog pronalaska odnosi se na bispecifična dijatela koja sadrže, a najpoželjnije su sastavljena od, prvog polipeptidnog lanca i drugog polipeptidnog lanca, čije sekvence dozvoljavaju polipeptidnim lancima da se kovalentno vezuju jedni za druge da formiraju kovalentno povezano dijatelo koje je sposobno da se istovremeno veže za prvi epitop i drugi epitop, pri čemu takvi epitopi nisu identični jedan drugom. Takva bispecifična dijatela stoga obuhvataju "VL1"/"VH1" domene koji su sposobni da se vezuju za prvi epitop i "VL2"/"VH2" domene koji su sposobni da se vezuju za drugi epitop. Oznake "VL1" i "VH1" označavaju domen promenljivog lakog lanca i promenljivo područje teškog lanca koji vezuju "prvi" epitop takvog bispecifičnog dijatela. Slično, oznake "VL2" i "VH2" označavaju, domen promenljivog lakog lanca i promenljivo područje teškog lanca koji vezuju "drugi" epitop takvog bispecifičnog dijatela. Nije važno da li je određeni epitop označen kao prvi naspram drugog epitopa; takva notacija je relevantna samo u pogledu prisustva i orijentacije domena polipeptidnih lanaca vezujuć ih molekula prema ovom otkri ć u. U jednom slučaju, jedan od takvih epitopa je epitop PD-1, a drugi od takvih epitopa nije epitop PD-1 (na primer, epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0205] VL domen prvog polipeptidnog lanca stupa u interakciju sa VH domenom drugog polipeptidnog lanca da formira prvo funkcionalno mesto za vezivanje antigena koje je specifično za prvi antigen (tj. ili PD-1 ili antigen koji sadrži drugi epitop). Slično, VL domen drugog polipeptidnog lanca stupa u interakciju sa VH domenom prvog polipeptidnog lanca kako bi formirao drugo funkcionalno mesto za vezivanje antigena koje je specifično za drugi antigen (tj. ili antigen koji sadrži drugi epitop ili PD-1). Tako je odabir VL i VH domena prvog i drugog polipeptidnog lanca koordiniran, tako da dva polipeptidna lanca dijatela zajedno čine VL i VH domene sposobne da se vežu i za epitop PD-1 i za drugi epitop (tj. oni sadrže VLPD-1/VHPD-1 i VL2/VH2, pri čemu je PD-1 "prvi" epitop, ili VL1/VH1 i VLPD-1/VHPD-1, gde je PD-1 "drugi" "epitop).
[0206] Prvi polipeptidni lanac instance takvih bispecifičnih dijatela sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja, N-kraj, VL1 domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za prvi ili drugi epitop (ili VLPD-1 ili VL epitop 2), prvi interventni odstojni peptid (linker 1), VH2 domena monoklonalnog antitela sposobna da se veže za drugi epitop (ako takav prvi polipeptidni lanac sadrži VLPD-1) ili prvi epitop (ako takav prvi polipeptidni lanac sadrži VL epitop 2), drugi interventni odstojni peptid (linker 2) koji opciono sadrži cisteinski ostatak, domen koji promoviše heterodimer i C-kraj (slika 1).
[0207] Drugi polipeptidni lanac u ovoj instanci bispecifičnih antitela sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja, N-kraj, VL2 domen monoklonskog antitela sposobnog da se veže za PD-1 ili drugi epitop (tj. ili VLPD-1 ili VL epitop 2, i buduć i da VL domen nije odabran za uključivanje u prvi polipeptidni lanac dijatela), interveni linker peptid (linker 1), VH1
2
domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za ili drugi epitop (ako takav drugi polipeptidni lanac sadrži VLPD-1) ili PD-1 (ako takav drugi polipeptidni lanac sadrži VL epitop 2), drugi interventni odstojni peptid (Linker 2) koji opciono sadrži ostatak cisteina, heterodimer promovišući domen i C-kraj (slika 1). Najpoželjnije je da se dužina interventnog linkerskog peptida (npr., linkera 1) koji razdvaja takve VL i VH domene odabere tako da u suštini ili potpuno spreči međusobno vezivanje VL i VH domena polipeptidnog lanca. Tako su VL i VH domeni prvog polipeptidnog lanca u osnovi ili potpuno nesposobni da se međusobno vezuju. Slično, VL i VH domeni drugog polipeptidnog lanca suštinski ili potpuno nesposobni da se međusobno vezuju. Poželjni interventni odstojni peptid (linker 1) ima sekvencu (SEK ID BR: 14): GGGSGGGG.
[0208] Dužina i sastav drugog interventnog linker peptida (linker 2) se bira na osnovu izbora domena koji promovišu heterodimer. Tipično, drugi interventni linker peptid (linker 2) ć e sadržati 3-20 aminokiselinskih ostataka. Konkretno, tamo gde domeni koji promovišu heterodimer ne sadrže ostatak cisteina, koristi se drugi interventni linker peptid koji sadrži cistein (linker 2). Drugi interventni odstojni peptid koji sadrži cistein (linker 2) sadržać e 1, 2, 3 ili više cisteina. Poželjni odstojni peptid koji sadrži cistein (linker 2) ima sekvencu SEK ID BR: 15: GGCGGG. Alternativno, linker 2 ne sadrži cistein (npr. GGG, GGGS (SEK ID BR: 29), LGGGSG (SEK ID BR: 261), GGGSGGGSGGG (SEK ID BR: 262), ASTKG (SEK ID BR: 30), Koriste se LEPKSS (SEK ID BR: 33), APSSS (SEK ID BR: 34), itd.) i domen koji promoviše heterodimere koji sadrže cistein, kao što je dole opisano. Opciono, koriste se i linker 2 koji sadrži cistein i domen koji promoviše heterodimer koji sadrži cistein.
[0210] Domeni koji promovišu heterodimer mogu biti GVEPKSC (SEK ID BR: 16) ili VEPKSC (SEK ID BR: 17) ili AEPKSC (SEK ID BR: 18) na jednom polipeptidnom lancu i GFNRGEC (SEK ID BR: 19) ili FNRGEC (SEK ID BR: 20) na drugom polipeptidnom lancu (US2007/0004909).
[0211] Međutim, još poželjnije je da domeni za promovisanje heterodimera takvih dijatela formiraju od jednog, dva, tri ili četiri tandemno ponovljena domena zavojnice suprotnog naelektrisanja koji sadrže niz od najmanje šest, najmanje sedam ili najmanje osam amino kiselinski ostaci, tako da domen za promociju heterodimera poseduje neto naelektrisanje (Apostolović , B. i sar. (2008) "pH-osetljivost E3/K3 Heterodimerne namotane zavojnice", Biomakromolekule 9: 3173-3180; Arndt, KM i sar. . (2001) "Fragmenti antitela stabilizovani helikopterima Fv (hsFv): Zamena konstantnih domena Fab fragmenta za a Heterodimeric Coiled-coil Domain, "J. Molec. Biol. 312: 221-228; Arndt, KM et al. (2002)" Comparison of In Vivo Selection and Rational Design of Heterodimeric Coiled Coil, "Structure 10: 1235-1248 ; Boucher, C. et al. (2010) "Detection Protein Bi Vestern Blot Via Coiled-Coil Interactions", Analitical Biochemistri 399: 138-140; Cachia, PJ et al. (2004) "Sinthetic Peptide Vaccine Development: Measurement of Policlonal Afinitet antitela i unakrsna reaktivnost pomoć u novog sistema za hvatanje i oslobađanje peptida za spektroskopiju površinske plazmonske rezonancije, "Mol. Recognit. 17: 540-557; De Crescenzo, GD et al. (2003)" Prać enje Interakcije dvolančanih de novo dizajniranih namotanih namotaja: Efekat dužine lanca na kinetičke i termodinamičke konstante vezivanja, "Biochemistri 42: 1754-1763; Fernandez-Rodrikuez, J. et al. (2012)" Indukovana heterodimerizacija i prečišć avanje Od dva ciljna proteina pomo ć u sintetičke namotane zavojnice, "Protein Science 21: 511-519; Ghosh, TS et al. (2009) "Međuspolne interakcije s kraja na kraj i s kraja na kraj: nove klase interaktivnih parova spirala u proteinskim strukturama", Acta Cristallographica D65: 1032-1041; Grigorian, G. et al. (2008) "Strukturne specifičnosti u interakcijama namotane zavojnice", Curr. Opin. Struc. Biol. 18: 477-483; Litovski, J. R. i sar. (2002) "Projektovanje heterodimernih dvolančanih a-spiralnih zavojnica: efekti hidrofobnosti i a-spiralne sklonosti na savijanje proteina, stabilnost i specifičnost", J. Biol. Chem. 277: 37272-37279; Steinkruger, J.D. et al. (2012) "Vertikalna trijada d '-d -d' manje je diskriminirajuć a od a '-a-a' vertikalne trijade u antiparalelnom namotanom kolutu Dimer Motiv", J. Amer. Chem. Soc. 134 (5): 2626-2633; Straussman, R. et al. (2007) "Kinking the Coiled Coil - Negativno naplać eni ostaci na interfejsu namotane zavojnice", J. Molec. Biol. 366: 1232-1242; Tripet, B. i sar. (2002) "Kinetička analiza interakcija između troponina C i regulatornog regiona C-terminala troponina I i potvrđivanje novog sistema isporuke/hvatanja peptida koji se koristi za površinsku plazmonsku rezonancu", J. Molec. Biol. 323: 345-362; Voolfson, D.N. (2005) "Dizajn namotanih konstrukcija i sklopova", Adv. Prot. Chem. 70: 79-112; Zeng, I. i dr. (2008) "Sistem ligandpseudooreceptora zasnovan na de novo dizajniranim peptidima za generisanje adenovirusnih vektora sa izmenjenim tropizmom", J. Gene Med.10: 355-367).
[0212] Takvi ponovljeni domeni zavojnica mogu se tačno ponoviti ili mogu imati zamene. Na primer, domen kalema domena koji promoviše heterodimer prvog polipeptidnog lanca može sadržati sekvencu od osam aminokiselinskih ostataka odabranih da daju negativan naboj takvom domenu koji promoviše heterodimer, i domen kalema domena koji promoviše heterodimer drugi polipeptidni lanac može sadržati sekvencu od osam aminokiselinskih ostataka odabranih da daju pozitivan naboj takvom domenu koji promoviše heterodimer. Nije važno koja je zavojnica obezbeđena za prvi ili drugi polipeptidni lanac, pod uslovom da se za drugi polipeptidni lanac koristi zavojnica suprotnog naelektrisanja. Pozitivno naelektrisana aminokiselina može biti lizin, arginin, histidin itd. I/ili negativno naelektrisana aminokiselina može biti glutaminska kiselina, asparaginska kiselina itd. Pozitivno naelektrisana aminokiselina je poželjno lizin i/ili negativno naelektrisana aminokiselina je poželjno glutaminska kiselina. Moguć e je da se koristi samo jedan domen koji promoviše heterodimer (buduć i da ć e takav domen inhibirati homodimerizaciju i time promovisati heterodimerizaciju), međutim, poželjno je da i prvi i drugi polipeptidni lanac dijatela ovog pronalaska sadrže heterodimer koji promoviše domen.
[0213] U poželjnom slučaju, jedan od domena za promociju heterodimera ć e sadržati četiri tandem spiralna domena "E-zavojnica" (SEK ID BR: 21: EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK), čiji ć e ostaci glutamata formirati negativan naboj na pH 7, dok ć e drugi domeni koji promovišu heterodimer sadržati četiri tandem domena „K-zavojnica“ (SEK ID BR: 22: KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE), čiji ć e ostaci lizina formirati pozitivan naboj pri pH 7 Prisustvo takvih naelektrisanih domena promoviše vezu između prvog i drugog polipeptida, i na taj način podstiče stvaranje heterodimera. Posebno je poželjan domen koji promoviše heterodimer u kome je jedan od četiri tandemska spiralna domena "E-zavojnica" SEK ID BR: 21 modifikovan tako da sadrži ostatak cisteina: EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23). Slično, naročito je poželjan Heterodimer-promovišuć i domen u kome je jedan od četiri tandemska spiralna domena "K-zavojnica" SEK ID BR: 22 modifikovan tako da sadrži ostatak cisteina: KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR : 24).
[0214] Kao što je otkriveno u WO 2012/018687, u cilju poboljšanja in vivo farmakokinetičkih svojstava dijatela, dijatelo se može modifikovati tako da sadrži polipeptidni deo proteina koji se vezuje za serum na jednom ili više delova dijatela. Najpoželjnije je da takav deo polipeptida proteina koji se vezuje za serum bude instaliran na C-kraju dijatela. Albumin je najzastupljeniji protein u plazmi i ima poluživot od 19 dana kod ljudi. Albumin poseduje nekoliko mesta za vezivanje malih molekula koje mu omoguć avaju da se nekovalentno veže za druge proteine i na taj način produžava njihov poluživot u serumu. Domen 3 za vezivanje albumina (ABD3) proteina G soja Streptococcus G148 sastoji se od 46 aminokiselinskih ostataka koji formiraju stabilan snop sa tri spirale i imaju široku specifičnost vezivanja za albumine (Johansson, MU et al. (2002) "Struktura, specifičnost , I način interakcije za module za vezivanje bakterijskih albumina, "J. Biol. Chem. 277 (10): 8114-8120. Dakle, posebno poželjan polipeptidni deo proteina koji se vezuje za serum za poboljšanje in vivo farmakokinetičkih svojstava dijatela je domen koji veže albumin (ABD) iz streptokoknog proteina G, a još poželjnije je domen 3 koji veže albumin (ABD3) proteina G soja G148 Streptococcus disgalactiae (SEK ID BR: 25): LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIDNAKS AEGVKALIDE ILAALP.
[0215] Kao što je otkriveno u WO 2012/162068, "deimunizovane" varijante SEK ID BR: 25 imaju sposobnost da oslabe ili eliminišu vezivanje za MHC klase II. Na osnovu rezultata kombinovane mutacije, sledeć e kombinacije supstitucija se smatraju poželjnim supstitucijama za formiranje takvog deimunizovanog ABD -a: 66D / 70S 71A; 66S / 70S 71A; 66S / 70S 79A; 64A / 65A / 71A; 64A / 65A / 71A 66S; 64A / 65A / 71A 66D; 64A / 65A / 71A 66E; 64A / 65A / 79A 66S; 64A / 65A / 79A 66D; 64A / 65A / 79A 66E. Varijante ABD -a sa modifikacijama L64A, I65A i D79A ili modifikacijama N66S, T70S i D79A. Varijanta deimunizovana ABD sa aminokiselinskom sekvencom:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLID66NAKS70A71EGVKALIDE ILAALP (SEK ID BR: 26),
ili aminokiselinska sekvenca:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNA64A65NNAKT VEGVKALIA79E ILAALP (SEK ID BR: 27),
ili aminokiselinska sekvenca:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIS66NAKS70VEGVKALIA79E ILAALP (SEK ID BR: 28),
su posebno poželjni jer takvi deimunizovani ABD pokazuju u osnovi vezivanje divljeg tipa, dok obezbeđuju oslabljeno vezivanje MHC klase II. Prema tome, prvi polipeptidni lanac takvog dijatela koje ima ABD sadrži peptidni linker poželjno pozicioniran C-terminalno na domenu E-zavojnice (ili K-zavojnice) takvog polipeptidnog lanca tako da interveniše između zavojnice E-zavojnice) domen i ABD (koji je poželjno deimunizovan ABD). Poželjna sekvenca za takav peptidni linker je SEK ID BR: 29: GGGS.
B. Bispecifična dijatela koja sadrže Fc regione
[0216] Jedan primer ovog pronalaska odnosi se na bispecifična dijatela koja sadrže Fc regiju sposobnu da se istovremeno veže za PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA -4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-1, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.). Dodavanje IgG CH2-CH3 domena jednom ili oba polipeptidna lanca dijatela, tako da kompleksiranje lanaca dijatela dovodi do stvaranja Fc regiona, poveć ava biološki poluživot i/ili menja valenciju diabodi. Uključivanje IgG CH2-CH3 domena na oba polipeptida dijatela omoguć i ć e formiranje dvolančanog bispecifičnog dijatela koje sadrži Fc-region (slika 2).
[0217] Alternativno, uključivanje domena IgG CH2-CH3 u samo jedan od polipeptida dijatela omoguć i ć e da se formira složenije četvorolančano bispecifično dijacito koje sadrži Fc region (slike 3A-3C). Slika 3C prikazuje reprezentativno dijabelo od četiri lanca koje poseduje domen konstantne svetlosti (CL) i domen konstantne teške CH1, međutim fragmenti takvih domena, kao i drugi polipeptidi mogu se alternativno koristiti (videti, na primer, slike 3A i 3B, US br.
2013-0295121; 2010-0174053 i 2009-0060910; Evropska patentna publikacija br. EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 i PCT publikacije br. WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538). Tako, na primer, umesto domena CH1, može se upotrebiti peptid koji ima aminokiselinsku sekvencu GVEPKSC (SEK ID BR: 16) VEPKSC (SEK ID BR: 17) ili AEPKSC (SEK ID BR: 18), izvedene iz zglobnog domena humanog IgG, a umesto CL domena, može se upotrebiti C-terminalnih 6 aminokiselina humanog lakog lanca kapa, GFNRGEC (SEK ID BR: 19) ili FNRGEC (SEK ID BR: 20). Reprezentativni peptid koji sadrži dijatelo sa četiri lanca prikazan je na slici 3A. Alternativno, ili kao dodatak, može se upotrebiti peptid koji sadrži domene tandem zavojnica suprotnog naelektrisanja, poput spiralnih domena "E-zavojnica" (SEK ID BR: 21: EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK ili SEK ID BR: 23: EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK); i domene "K-coil" (SEK ID BR: 22: KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE ili SEK ID BR: 24: KVAACKE-KVAAL-KE-KVAALKE-KVAALKE). Reprezentativni domen zavojnice koji sadrži dijabelo sa četiri lanca prikazan je na slici 3B.
[0218] Molekuli dijatela koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku generalno uključuju dodatne interventne linker peptide (linkeri). Tipično, dodatni Linkeri ć e sadržati 3-20 aminokiselinskih ostataka. Dodatni ili alternativni linkeri koji se mogu primeniti u molekulima dijatela koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku uključuju: GGGS (SEK ID BR: 29), LGGGSG (SEK ID BR: 261), GGGSGGGSGGG (SEK ID BR: 262), ASTKG (SEK ID BR: 30), DKTHTCPPCP (SEK ID BR: 31), EPKSCDKTHTCPPCP (SEK ID BR: 32), LEPKSS (SEK ID BR: 33), APSSS (SEK ID BR: 34) i APSSSPME (SEK ID BR: 35), LEPKSADKTHTCPPC (SEK ID BR: 36), GGC i GGG. SEK ID BR: 33 se može koristiti umesto GGG ili GGC radi lakšeg kloniranja. Dodatno, amino kiseline GGG ili SEK ID BR: 33 mogu odmah biti pra ć ene SEK ID BR: 31 da bi se formirali alternativni linkeri: GGGDKTHTCPPCP (SEK ID BR: 263); i LEPKSSDKTH-TCPPCP (SEK ID BR: 37). Molekul dijatela koji sadrži region Fc prema ovom otkrić u može da uključi zglobnu regiju IgG pored ili umesto linkera. Primeri regija šarki uključuju: EPKSCDKTHTCPPCP (SEK ID BR: 32) iz IgG1, ERKCCVECPPCP (SEK ID BR: 11) iz IgG2, ESKIGPPCPSCP (SEK ID BR: 12) iz IgG4 i ESKIGPPCPCPCP (SEK ID BR: 13) i IgG varijanta koja sadrži stabilizujuć u zamenu za smanjenje razmene niti.
[0219] Kao što je prikazano na slici 3A-3C, dijatela iz ovog pronalaska mogu sadržati četiri različita lanca. Prvi i treć i
4
polipeptidni lanac takvog dijatela sadrže tri domena: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2, (iii) domen koji promoviše heterodimer i (iv) domen koji sadrži CH2-CH3 niz. Drugi i četvrti polipeptidni lanac sadrže: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimer, gde domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju prvog/ treć i polipeptidni lanci sa drugim/četvrtim polipeptidnim lancem. VL i/ili VH domeni treć eg i četvrtog polipeptidnog lanca, i VL i/ili VH domeni prvog i drugog polipeptidnog lanca mogu biti isti ili različiti tako da dozvoljavaju četvorovalentno vezivanje koje je ili monospecifično, bispecifično ili tetraspecifično. Oznake "VL3" i "VH3" označavaju domen promenljivog lakog lanca i promenljivo područje teškog lanca koji vezuju "tre ć i" epitop takvog dijatela. Slično, notacija "VL4" i "VH4" označavaju domen promenljivog lakog lanca i promenljivi domen teškog lanca koji vezuju "četvrti" epitop takvog dijatela. Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih otkrivenih antitela koja sadrže Fc region sa četiri lanca data je u Tabeli 2:
[0220] U konkretnom slučaju, antitela prema ovom pronalasku su bispecifična, četverovalentna (tj. poseduju četiri mesta za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc (slike 3A-3C) koja su sastavljena od četiri ukupna polipeptidna lanca. Bispecifična, četvorovalentna, antitela koja sadrže Fc iz ovog pronalaska sadrže dva epitop-vezujuć a mesta imunospecifična za PD-1 (koja mogu biti sposobna da se vezuju za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1), i dva mesta za vezivanje epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD -L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0221] U sledeć em slučaju, dijatela koja sadrže bispecifična Fc regija mogu sadržati tri polipeptidna lanca. Prvi polipeptid takvog dijatela sadrži tri domena: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2 i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Drugi polipeptid takvih dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa prvim polipeptidnim lancem dijatela. Treć i polipeptid takvih dijatela sadrži sekvencu CH2-CH3. Prema tome, prvi i drugi polipeptidni lanac takvih dijatela zajedno se povezuju da formiraju mesto vezivanja VL1 / VH1 koje je sposobno da se veže za prvi epitop, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje se može vezati za drugi epitop. Prvi i drugi polipeptidi su međusobno vezani disulfidnom vezom koja uključuje ostatke cisteina u njihovim odgovarajuć im tre ć im domenima. Značajno je da se prvi i tre ć i polipeptidni lanac međusobno kompleksuju kako bi formirali Fc regiju koja je stabilizovana disulfidnom vezom. Takva dijatela imaju pove ć anu mo ć . Slike 4A i 4B ilustruju strukture takvih dijatela. Takva bispecifična dijatela koja sadrže Fc-region mogu imati bilo koju od dve orijentacije (Tabela 3):
[0222] U određenom slučaju, dijatela prema ovom pronalasku su bispecifična, dvovalentna (tj. poseduju dva mesta za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc (slike 4A-4B) koja su sastavljena od tri ukupna polipeptidna lanca. Bispecifična, dvovalentna dijatela koja sadrže Fc iz ovog pronalaska sadrže jedno epitop-vezujuć e mesto imunospecifično za PD-1 i jedno mesto vezivanja epitopa specifično za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40 , CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0223] U sledeć em slučaju, dijatela koja sadrže bispecifična Fc regija mogu sadržati ukupno pet lanaca polipeptida. U određenom slučaju, dva od navedenih pet polipeptidnih lanaca imaju istu sekvencu aminokiselina. Prvi polipeptidni lanac takvih dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CHI i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Prvi polipeptidni lanac može biti teški lanac antitela koje sadrži VH1 i konstantan region teškog lanca. Drugi i peti polipeptidni lanac takvih dijatela sadrže: (i) domen koji sadrži VL1 i (ii) domen koji sadrži CL. Drugi i/ili peti polipeptidni lanac takvih dijatela može biti laki lanac antitela koje sadrži VL1 komplementaran sa VH1 prvog/treć eg polipeptidnog lanca. Prvi, drugi i/ili peti polipeptidni lanac mogu se izolovati iz antitela koja se prirodno pojavljuju. Alternativno, oni se mogu konstruisati rekombinantno. Treć i polipeptidni lanac takvih dijatela sadrži: (i) domen koji sadrži VH1, (ii) domen koji sadrži CHI, (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3, (iv) domen koji sadrži VL2, (v )) domen koji sadrži VH3 i (vi) domen koji promoviše heterodimer, pri čemu domeni koji promovišu heterodimer promovišu dimerizaciju treć eg lanca sa četvrtim lancem. Četvrti polipeptid takvih dijatela sadrži: (i) Domen koji sadrži VL3, (ii) Domen koji sadrži VH2 i (iii) Domen koji promoviše heterodimerizaciju i kovalentno vezivanje sa treć im polipeptidnim lancem dijatela.
[0224] Prema tome, prvi i drugi, i treć i i peti, polipeptidni lanac takvih dijatela se povezuju zajedno da formiraju dva mesta vezivanja VL1/VH1 sposobna da vezuju prvi epitop. Treć i i četvrti polipeptidni lanac takvih dijatela zajedno se povezuju da formiraju mesto vezivanja VL2/VH2 koje je sposobno da se veže za drugi epitop, kao i mesto vezivanja VL3/VH3 koje je sposobno da se veže za treć i epitop. Prvi i tre ć i polipeptidi su međusobno vezani disulfidnom vezom koja uključuje ostatke cisteina u njihovim odgovarajuć im konstantnim regionima. Značajno je da se prvi i tre ć i polipeptidni lanac međusobno kompleksuju i formiraju Fc regiju. Takva dijatela imaju pove ć anu mo ć . Slika 5 prikazuje strukturu takvih dijatela. Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti kako bi se omoguć ilo monospecifično, bispecifično ili trispecifično vezivanje. Međutim, kako je ovde navedeno, poželjno je da su ovi domeni odabrani tako da vezuju PD-1 i drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR , LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3, itd.).
[0225] VL i VH domeni polipeptidnih lanaca su odabrani tako da formiraju mesta vezivanja VL/VH specifična za željeni epitop. Vezna mesta VL/VH formirana udruživanjem polipeptidnih lanaca mogu biti ista ili različita da omoguć e četvorovalentno vezivanje koje je monospecifično, bispecifično, trispecifično ili tetraspecifično. Konkretno, VL i VH domeni mogu biti odabrani tako da bispecifično dijatelo može sadržati dva mesta vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop, ili tri mesta vezivanja za prvi epitop i jedno mesto vezivanja za drugi epitop, ili dva mesta vezivanja za prvi epitop, jedno mesto vezivanja za drugi epitop i jedno mesto vezivanja za treć i epitop (kao što je prikazano na slici 5). Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih petolančanih Fc regiona koja sadrže otkrivena otkrivena antitela data je u Tabeli 4:
[0226] U određenom slučaju, dijatela prema ovom pronalasku su bispecifična, četverovalentna (tj. poseduju četiri mesta za vezivanje epitopa), dijatela koja sadrže Fc sastavljena od pet ukupnih polipeptidnih lanaca koji imaju dva mesta vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop. U jednom slučaju, bispecifična, četvorovalentna, antitela koja sadrže Fc iz ovog pronalaska sadrže dva epitop-vezujuć a mesta imunospecifična za PD-1 (koja mogu biti sposobna da se vezuju za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1 ) i dva mesta za vezivanje epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II , OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). U drugom slučaju, bispecifična, četvorovalentna, antitela koja sadrže Fc iz ovog pronalaska sadrže tri epitop-vezujuć a mesta imunospecifična za PD-1 koja mogu biti sposobna da se vezuju za isti epitop PD-1 ili za različite epitope PD-1) i jedno mesto za vezivanje epitopa specifično za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). U drugom slučaju, bispecifična, četvorovalentna, antitela koja sadrže Fc iz ovog pronalaska sadrže jedno mesto za vezivanje epitopa imunospecifično za PD-1 i tri mesta za vezivanje epitopa specifična za drugi epitop (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
C. Bispecifični trovalentni vezivni molekuli koji sadrže Fc regione
[0227] Sledeć i primer ovog pronalaska odnosi se na bispecifične, trovalentne vezuju ć e molekule, koji sadrže Fc region, i koji su sposobni da se istovremeno vezuju za prvi epitop, drugi epitop i treć i epitop, pri čemu je najmanje jedan od takvih epitopa nije identičan drugom. Takva bispecifična dijatela stoga obuhvataju "VL1"/"VH1" domene koji su sposobni da se vezuju za prvi epitop, "VL2"/"VH2" domene koji su sposobni da se vezuju za drugi epitop i "VL3"/"VH3" domeni koji mogu se vezati za treć i epitop. U jednom slučaju, jedan ili dva takva epitopa su epitopi PD-1, a drugi (ili drugi) takvih epitopa nije epitop PD-1 (na primer, epitop B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OKS40, PD-1, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Takvi bispecifični trovalentni molekuli za vezivanje sadrže tri epitop-vezujuć a mesta, od kojih su dva vezuju ć a domena tipa dijatela, koja obezbeđuju vezujuć e mesto A i vezujuće mesto B, i jedno od njih je domen veznog tipa koji nije dijatibolički, koji obezbeđuje vezivno mesto C (vidi, na primer, slike 6A-6F i PCT prijavu br: PCT/US15/33081; i PCT/US15/33076).
[0228] Tipično, molekuli trovalentnog vezivanja prema ovom pronalasku sadržać e četiri različita polipeptidna lanca (videti slike 6A-6B), međutim, molekuli mogu sadržati manji ili već i broj polipeptidnih lanaca, na primer spajanjem takvih polipeptidnih lanaca sa jednih sa drugim (npr. preko peptidne veze) ili deljenjem takvih polipeptidnih lanaca u dodatne polipeptidne lance ili povezivanjem manjeg ili više polipeptidnih lanaca preko disulfidnih veza. Slike 6B-6F ilustruju ovaj aspekt ovog pronalaska šematski prikazujuć i takve molekule koji imaju tri polipeptidna lanca. Kao što je prikazano na slikama 6A-6F, molekuli trovalentnog vezivanja prema ovom pronalasku mogu imati alternativne orijentacije u kojima su domeni vezivanja tipa dijatela N-terminalni (slike 6A, 6C i 6D) ili C-terminalni (slike 6B, 6E i 6F) u Fc region.
[0229] U određenim slučajevima, prvi polipeptidni lanac takvih trivalentnih vezujuć ih molekula prema ovom pronalasku sadrži: (i) domen koji sadrži VL1, (ii) domen koji sadrži VH2, (iii) domen koji promoviše heterodimer, i (iv) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Domeni VL1 i VL2 se nalaze N-terminalni ili C-terminalni domen koji sadrži CH2-CH3 kako je prikazano u Tabeli 5 (Slike 6A i 6B). Drugi polipeptidni lanac u takvim slučajevima sadrži: (i) domen koji sadrži VL2, (ii) domen koji sadrži VH1 i (iii) domen koji promoviše heterodimer. Treć i polipeptidni lanac u takvim slučajevima sadrži: (i) domen koji sadrži VH3, (ii) domen koji sadrži CHI i (iii) domen koji sadrži sekvencu CH2-CH3. Treć i polipeptidni lanac može biti teški lanac antitela koje sadrži VH3 i konstantan region teškog lanca. Četvrti polipeptid u takvim slučajevima sadrži: (i) domen koji sadrži VL3 i (ii) domen koji sadrži CL. Četvrti polipeptidni lanac može biti laki lanac antitela koji sadrži VL3 komplementaran sa VH3 treć eg polipeptidnog lanca. Tre ć i ili četvrti polipeptidni lanac može biti izolovan iz antitela koja se prirodno pojavljuju. Alternativno, mogu se konstruisati rekombinantno, sintetički ili na drugi način.
[0230] Domen promenljivog lakog lanca prvog i drugog polipeptidnog lanca odvojen je od promenljivog domena teškog lanca takvih polipeptidnih lanaca posredskim odstojnim linkerom čija je dužina prekratka da dozvoli njihovim VL1/VH2 (ili njihov VL2/ VH1) domenima koji se povezuju da formiraju epitop-vezujuć e mesto sposobno za vezivanje za prvi ili drugi epitop. Poželjni interventni odstojni peptid (linker 1) za ovu svrhu ima sekvencu (SEK ID BR: 14): GGGSGGGG. Drugi domeni trovalentnih vezujuć ih molekula mogu biti odvojeni jednim ili više interventnih odstojnih peptida, po izboru koji sadrže cisteinski ostatak. Primeri linkera korisnih za stvaranje molekula trovalentnog vezivanja dati su ovde i takođe su dati u PCT prijavama br: PCT/US15/33081; i PCT/US15/33076. Tako se prvi i drugi polipeptidni lanac takvih molekula trovalentnog vezivanja povezuju zajedno i formiraju mesto vezivanja VL1/VH1 sposobno za vezivanje prvog epitopa, kao i mesto vezivanja VL2/VH2 koje se može vezati za drugi epitop. Treć i i četvrti polipeptidni lanac takvih molekula trovalentnog vezivanja zajedno se povezuju i formiraju mesto vezivanja VL3/VH3 koje se može vezati za treć i epitop. Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti kako bi se omoguć ilo monospecifično, bispecifično vezivanje ili trispecifično vezivanje.
[0231] Kao što je napred opisano, molekuli trovalentnog vezivanja prema ovom pronalasku mogu sadržati tri polipeptida. Molekuli trovalentnog vezivanja koji sadrže tri polipeptidna lanca mogu se dobiti povezivanjem domena četvrtog polipeptidnog N-terminala sa domenom treć eg polipeptida koji sadrži VH3. Alternativno, koristi se tre ć i polipeptidni lanac trovalentnog vezujuć eg molekula iz ovog otkri ć a koji sadrži slede ć a tri domena: (i) domen koji sadrži VL3, (ii) domen koji sadrži VH3 i (iii) domen koji sadrži CH2- CH3 sekvenca, pri čemu su VL3 i VH3 razmaknuti jedan od drugog interventnim spejser peptidom koji je dovoljno dugačak (najmanje 9 ili više aminokiselinskih ostataka) tako da se omoguć i udruživanje ovih domena u mesto za vezivanje epitopa.
[0231] Podrazumeva se da domeni VL1/VH1, VL2/VH2 i VL3/VH3 mogu biti isti ili različiti kako bi se omoguć ilo monospecifično, bispecifično ili trispecifično vezivanje. Međutim, kako je ovde navedeno, ovi domeni su poželjno odabrani tako da vezuju PD-1 i drugi epitop (ili drugi i treć i epitop) (poželjno, takvi epitopi su epitopi B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3 MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.).
[0233] Posebno, VL i VH domeni mogu biti odabrani tako da trovalentni vezujuć i molekul sadrži dva mesta vezivanja za prvi epitop i jedno mesto vezivanja za drugi epitop, ili jedno mesto vezivanja za prvi epitop i dva mesta vezivanja za drugi epitop ili jedno mesto vezivanja za prvi epitop, jedno mesto vezivanja za drugi epitop i jedno mesto vezivanja za treć i epitop. Opšta struktura polipeptidnih lanaca reprezentativnih trovalentnih vezuju ć ih molekula iz opisa je data na slikama 6A-6F i u Tabeli 5:
[0234] Jedan primer ovog pronalaska odnosi se na bispecifične molekule trovalentnog vezivanja koji sadrže dva mesta za vezivanje epitopa za PD-1 i jedno mesto za vezivanje epitopa za drugi epitop prisutan na molekulu koji nije PD-1 (npr. B7-H3 , B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Dva epitop-vezujuć a mesta za PD-1 mogu vezati isti epitop ili različite epitope. Drugi primer ovog pronalaska odnosi se na bispecifične molekule trovalentnog vezivanja koji sadrže, jedno mesto za vezivanje epitopa za PD-1 i dva mesta za vezivanje epitopa koja vezuju drugi antigen prisutan na molekulu koji nije PD-1 (npr. B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CD80, CD86, CD137, CTLA-4, ICOS, KIR, LAG-3, MHC klase I ili II, OX40, PD-L1, TCR, TIM-3 itd.). Dva mesta za vezivanje epitopa za drugi antigen mogu vezati isti epitop ili različite epitope antigena (npr. isti ili različiti epitopi LAG-3). Kao što je napred navedeno, takvi bispecifični trovalentni vezujuć i molekuli mogu sadržati tri ili četiri polipeptidna lanca.
VII. Konstantni domeni i regije Fc
[0235] Ovde su dati konstantni domeni antitela korisni u stvaranju molekula koji se vezuju za PD-1 (npr. antitela, dijatela, molekuli trovalentnog vezivanja, itd.) iz ovog pronalaska.
[0236] Poželjni CL domen je humani IgG CL Kappa domen. Aminokiselinska sekvenca poželjnog humanog CL Kappa domena je (SEK ID BR: 8):
[0237] Alternativno, primer CL domena je humani IgG CL lambda domen. Aminokiselinska sekvenca poželjnog humanog CL Kappa domena je (SEK ID BR: 9):
[0238] Kako je ovde predviđeno, molekuli koji vezuju PD-1 prema pronalasku mogu sadržati Fc region. Fc regija takvih molekula iz ovog pronalaska može biti bilo kog izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4). Molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska mogu dalje sadržavati CH1 domenu i/ili zglobnu regiju. Kada je prisutan, domen CH1 i/ili region šarki može biti bilo kog izotipa (npr. IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4), i poželjno je istog izotipa kao i željeni Fc region.
[0239] Primer CH1 domena je humani IgG1 CH1 domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog IgG1 CH1 domena je (SEK ID BR: 10):
[0240] Primer CH1 domena je humani IgG2 CH1 domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog IgG2 CH1 domena je (SEK ID BR: 257):
[0241] Primer CH1 domena je humani IgG4 CH1 domen. Aminokiselinska sekvenca primera humanog IgG4 CH1 domena je (SEK ID BR: 254):
[0242] Jedan primeran region sa šarkama je zglobni region humanog IgG1. Aminokiselinska sekvenca primera zglobnog regiona humanog IgG1 je (SEK ID BR: 32): EPKSCDKTHTCPPCP.
[0243] Još jedan primeran region sa šarkama je zglobni region humanog IgG2. Aminokiselinska sekvenca primera zglobnog regiona humanog IgG2 je (SEK ID BR: 11): ERKCCVECPPCP.
[0244] Još jedan primeran region sa šarkama je zglobni region humanog IgG4. Aminokiselinska sekvenca uzornog zglobnog regiona humanog IgG4 je (SEK ID BR: 12): ESKYGPPCPSCP. Kao što je ovde opisano, zglobni region IgG4 može sadržati stabilizirajuć u mutaciju kao što je supstitucija S228P. Aminokiselinska sekvenca uzorno stabilizovanog zglobnog regiona IgG4 je (SEK ID BR: 13): ESKYGPPCPPCP.
[0245] Fc region molekula koji sadrže Fc region (npr. antitela, dijatela i trovalentni molekuli) prema ovom pronalasku može biti ili potpun Fc region (npr. potpun IgG Fc region) ili samo fragment Fc regiona. Opciono, Fc regionu molekula koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku nedostaje C-terminalni lizin aminokiselinski ostatak. Konkretno, Fc region molekula koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku može biti konstruisana varijanta Fc regiona. Iako Fc region molekula koje sadrže bispecifičnu Fc regiju prema ovom pronalasku može imati sposobnost vezivanja za jedan ili više Fc receptora (npr., FcγR (s)), poželjnije je da je takva varijanta Fc regiona promenila vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje ispoljava Fc region divljeg tipa) ili ć e imati značajno smanjenu sposobnost ili se ne ć e vezati za inhibitorne receptore. Prema tome, Fc region molekula koji sadrži Fc region prema ovom pronalasku može uključivati neke ili sve CH2 domene i/ili neke ili sve CH3 domene kompletne Fc regiona, ili može sadržati varijantu CH2 i/ili varijanta CH3 sekvence (koja može uključivati, na primer, jedno ili više umetanja i/ili jedno ili više brisanja u odnosu na CH2 ili CH3 domene kompletnog Fc regiona). Takvi Fc regioni mogu sadržati delove polipeptida koji nisu Fc, ili mogu sadržati delove neprirodno potpunih Fc regiona, ili mogu sadržati neprirodne orijentacije domena CH2 i/ili CH3 (kao što su, na primer, dva domena CH2 ili dva CH3 domeni, ili u smeru od N-terminala do C-terminala, CH3 domen povezan sa domenom CH2, itd.).
[0246] Modifikacije Fc regiona identifikovane kao promena efektorske funkcije poznate su u tehnici, uključujuć i modifikacije koje poveć avaju vezivanje za aktiviraju ć e receptore (npr. FcγRIIA (CD16A) i smanjuju vezivanje za inhibitorne receptore (npr. FcγRIIB (CD32B) (videti, npr. Stavenhagen, JB i dr. (2007) "Fc optimizacija terapeutskih antitela poveć ava njihovu sposobnost da ubijaju tumorske ć elije in vitro i kontroliše ekspanziju tumora in vivo putem receptora za aktiviranje fcgama niske afiniteta," Cancer Res. 57 (18): 8882-8890 Primeri varijanti humanih IgG1 Fc regiona sa smanjenim vezivanjem za CD32B i/ili poveć anim vezivanjem za CD16A sadrže supstitucije F243L, R292P, I300L, V305I ili P296L. Ove supstitucije aminokiselina mogu biti prisutne u humanom IgG1 Fc regionu u bilo kojoj kombinaciji ili u jednom slučaju, varijanta humanog IgG1 Fc regiona sadrži supstituciju F243L, R292P i I300L. U drugom slučaju, varijanta humanog IgG1 Fc regiona sadrži zamene F243L, R292P, I300L, V305I i P296L.
[0247] Konkretno, poželjno je da Fc regioni polipeptidnih lanaca molekula koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku pokažu smanjeno (ili u suštini nema) vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje FG region divljeg tipa IgG1 (SEK ID BR: 1). Napred su opisane varijantne Fc regiona i mutantni oblici sposobni da posreduju u takvom izmenjenom vezivanju). U određenom slučaju, molekuli koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku sadrže IgG Fc region koji ispoljava smanjenu efektorsku funkciju ADCC molekula koji sadrže bilo koju 1, 2 ili 3 supstituciju: L234A, L235A, N297K i N297G. U drugom slučaju, varijanta humanog IgG Fc regiona sadrži supstituciju N297K, supstituciju N297G, L234A i L235A ili supstituciju D265A, gde mutacije ukidaju vezivanje FcR. Alternativno, domen CH2-CH3 Fc regiona koji inherentno pokazuje smanjeno (ili u suštini nema) vezivanje za FcγRIIIA (CD16a) i/ili smanjenu efektorsku funkciju (u odnosu na vezivanje koje pokazuje FG region divljeg tipa (SEK ID NO : 1) se koristi. U određenom slučaju, molekuli koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku sadrže IgG2 Fc region (SEK ID BR: 2) ili IgG4 Fc region (SEK ID: NO: 4). Kada se koristi IgG4 Fc region, predmetni pronalazak takođe uključuje uvođenje stabilizirajuć e mutacije, kao što je napred opisana supstitucija zglobnog područja S228P (vidi, na primer, SEK ID BR: 13). Pošto supstitucije N297G, N297K, L234A, L235A i D265A ukidaju efektorsku funkciju, u okolnostima u kojima je efektorska funkcija poželjna, ove supstitucije se poželjno se ne bi koristile.
[0248] Konkretno, poželjno je da Fc regioni polipeptidnih lanaca molekula koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku pokažu poveć ani poluživot u serumu (u odnosu na poluživot koji pokazuje odgovaraju ć i Fc divljeg tipa). Napred su opisane varijantne Fc regiona i mutantni oblici koji pokazuju produženo poluvreme eliminacije. U poželjnom slučaju, domen CH2-CH3 prvog i/ili treć eg polipeptidnog lanca takvih molekula koji sadrže Fc region uključuju bilo koju 1, 2 ili 3 supstituciju: M252I, S254T i T256E. Pronalazak dalje obuhvata molekule sadržine Fc regiona prema ovom pronalasku koji sadrže varijante Fc regiona koje sadrže:
(A) jednu ili više mutacija koje menjaju efektorsku funkciju i/ili FcγR; i
(B) jednu ili više mutacija koje produžavaju poluživot eliminacije.
[0249] Poželjna IgG1 sekvenca za CH2 i CH3 domene molekula koji sadrže Fc region prema ovom pronalasku ć e sadržati supstitucije L234A/L235A/M252I/S254T/T256E (SEK ID BR: 258):
pri čemu je X lizin (K) ili je odsutan.
[0250] Poželjna sekvenca IgG4 za domene CH2 i CH3 molekula koji sadrže region Fc prema ovom pronalasku ć e sadržati supstitucije M252I/S254T/T256E (SEK ID BR: 259):
1
pri čemu je X lizin (K) ili je odsutan.
[0251] Za dijatela i molekule trovalentnog vezivanja čiji prvi i treć i polipeptidni lanac nisu identični), poželjno je smanjiti ili sprečiti nastanak homodimerizacije između domena CH2-CH3 dva prva polipeptidna lanca ili između domena CH2-CH3 drugog i treć eg polipeptidnog lanca. CH2 i/ili CH3 domeni takvih polipeptidnih lanaca ne moraju biti identični u sekvenci, i poželjno su modifikovani da podstiču kompleksiranje između dva polipeptidna lanca. Na primer, supstitucija aminokiseline (poželjno supstitucija sa aminokiselinom koja se sastoji od glomazne bočne grupe koja formira "dugme", na primer, triptofan) može se uvesti u domen CH2 ili CH3 tako da ć e sterilne smetnje sprečiti interakciju sa sličnim mutiranim domenom i obavezać e mutirani domen da se upari sa domenom u koji je inženjerirana komplementarna ili prilagodljiva mutacija, tj. "rupa" (npr. supstitucija glicinom). Takvi setovi mutacija mogu se uneti u bilo koji par polipeptida koji sadrži CH2-CH3 domene koje formiraju Fc region. Metode proteinskog inženjeringa koje favorizuju heterodimerizaciju u odnosu na homodimerizaciju su dobro poznate u tehnici, posebno u pogledu inženjeringa molekula sličnih imunoglobulinu, i ovde su obuhvać ene (videti, na primer, Ridgvai et al. (1996) "'Knobs-Inženjering inicijalnih CH3 domena antitela za heterodimerizaciju teških lanaca, "Protein Engr. 9: 617-621, Atvell et al. (1997)" Stabilni heterodimeri iz remodeliranja interfejsa domena Homodimera pomoć u biblioteke faznog prikaza, "J Mol.Biol. 270: 26-35, i Ksie et al. (2005) "Novi format bispecifičnih antitela: visoko efikasna heterodimerizacija, ekspresija i liza tumorskih ć elija", J. Immunol. Metode 296: 95-101). Poželjno je da je "dugme" projektovano u domene CH2-CH3 prvog polipeptidnog lanca, a "rupa" u domene CH2-CH3 treć eg polipeptidnog lanca dijatela koja se sastoje od tri polipeptidna lanca. Prema tome, "dugme" ć e pomo ć i u sprečavanju da se prvi polipeptidni lanac homodimerizuje preko svojih CH2 i/ili CH3 domena. Pošto treć i polipeptidni lanac poželjno sadrži supstituciju "rupa", on ć e se heterodimerizovati sa prvim polipeptidnim lancem, kao i homodimerizovati sam sa sobom. Ova strategija se može koristiti za dijatela i molekule za trovalentno vezivanje koji se sastoje od tri, četiri ili pet lanaca kao što je gore opisano, gde se "dugme" projektuje u domene CH2-CH3 prvog polipeptidnog lanca, a "rupa" u CH2 -CH3 Domen tre ć eg polipeptidnog lanca.
[0252] Poželjno dugme je stvoreno modifikovanjem IgG Fc regiona tako da sadrži modifikaciju T366W. Poželjna rupa se stvara modifikovanjem IgG Fc regiona tako da sadrži modifikaciju T366S, L368A i Y407V. Da bi se pomoglo u prečišć avanju homodimera tre ć eg polipeptidnog lanca koji nosi rupe iz konačnog molekula koji sadrži bispecifični heterodimerni Fc region, mesto vezivanja proteina A u domenama CH2 i CH3 koje nose rupe treć eg polipeptidnog lanca poželjno je mutirano supstitucijama aminokiselina na poziciji 435 (H435R). Tako se homodimer treć eg polipeptidnog lanca koji nosi rupe neć e vezati za protein A, dok ć e bispecifični heterodimer zadržati svoju sposobnost da veže protein A preko mesta za vezivanje proteina A na prvom polipeptidnom lancu. U alternativnom slučaju, treć i polipeptidni lanac koji nosi rupe može uključivati aminokiselinske supstitucije na pozicijama 434 i 435 (N434A/N435K).
[0253] Poželjna sekvenca aminokiselina IgG1 za domene CH2 i CH3 prvog polipeptidnog lanca molekula koji sadrži Fc region prema ovom pronalasku ima ć e sekvencu "koja nosi dugmad" (SEK ID BR: 6):
pri čemu je X lizin (K) ili je odsutan.
[0254] Poželjna sekvenca aminokiselina IgG1 za domene CH2 i CH3 drugog polipeptidnog lanca molekula koji sadrži Fc region prema ovom pronalasku ima dva polipeptidna lanca (ili treć i polipeptidni lanac molekula koji sadrži region Fc koji ima tri , četiri ili pet polipeptidnih lanaca) ć e imati sekvencu koja nosi rupu (SEK ID BR: 7):
2
pri čemu je X lizin (K) ili je odsutan.
[0255] Kao što ć e biti prime ć eno, CH2-CH3 domeni SEK ID BR: 6 i SEK ID BR: 7 uključuju supstituciju na poziciji 234 sa alaninom i 235 sa alaninom, i na taj način formiraju Fc region koji pokazuje smanjenje (ili ne značajno) vezivanje za FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) ili FcγRIIIB (CD16b) (u odnosu na vezivanje koje pokazuje Fc region divljeg tipa (SEK ID BR: 1). Pronalazak takođe obuhvata takve CH2-CH3 domene, koji sadrže alternativne i/ili dodatne supstitucije koje menjaju efektorsku funkciju i/ili aktivnost vezivanja FgR Fc regiona. Pronalazak takođe obuhvata takve CH2-CH3 domene, koje dalje sadrže jednu ili više polovina žive produžene aminokiselinske supstitucije. Posebno pronalazak obuhvata takve CH2-CH3 domene koji nose rupice i one koji drže dugmad koji dalje sadrže M252I/S254T/T256E.
[0256] Poželjno je da prvi polipeptidni lanac ima sekvencu CH2-CH3 "koja nosi dugmad", kao što je ona iz SEK ID BR: 6. Međutim, kao što ć e biti prepoznato, domen CH2-CH3 sa "rupama" ( npr. SEK ID BR: 7) mogao bi se koristiti u prvom polipeptidnom lancu, u kom slučaju bi domen CH2-CH3 "koji nosi dugmad" npr., SEK ID BR: 6) bi se koristio u drugom polipeptidnom lancu molekula koji sadrži Fc region prema ovom pronalasku i koji ima dva polipeptidna lanca (ili u tre ć em polipeptidnom lancu molekula koji sadrži Fc region sa tri, četiri, ili pet polipeptidnih lanaca).
[0257] Kao što je napred detaljno objašnjeno isto obuhvata molekule koji sadrže Fc region (npr. antitela i antitela koja sadrže Fc region) koji imaju domene CH2 i CH3 divljeg tipa ili koji imaju domene CH2 i CH3 koje sadrže kombinacije napred opisanih supstitucija. Primer aminokiselinske sekvence IgG1 CH2-CH3 domena koji obuhvata takve varijacije je (SEK ID BR: 260):
pri čemu:
(a) X1i X2su oba L (divlji tip), ili su oba A (smanjeno vezivanje FcγR);
(b) X3, X4i X5respektivno su M, S i T (divlji tip), ili su Y, T i E (produženi poluživot),
(c) X6, X7i X8su: T, L i Y (divlji tip), ili su W, L i I (dugme), ili S, A i V (rupa);
(d) X9i X10respektivno su N i H (divlji tip), ili su N i R (bez vezivanja za protein A), ili A i K (bez vezivanja za protein A); i
(e) X11je K ili ga nema.
[0258] U drugim slučajevima, pronalazak obuhvata molekule koji se vezuju za PD-1 i sadrže CH2 i/ili CH3 domene koji su konstruisani da favorizuju heterodimerizaciju nad homodimerizacijom koristeć i mutacije poznate u tehnici, kao što su one otkrivene u PCT publikaciji br. WO 2007 /110205; WO 2011/143545; WO 2012/058768; WO 2013/06867.
VIII. PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujući molekuli
[0259] Ovaj pronalazak se posebno odnosi na PD-1 x LAG-3 bispecifične vezujuć e molekule (npr. bispecifična antitela, bispecifična antitela, itd.) koji sadrže epitop-vezujuć i fragment anti-PD-1 antitela, i poželjno jedno od novih antihumanih antitela na PD-1 dato ovde, i fragment koji vezuje epitop anti-humanog antitela na LAG-3, poželjno jedno od novih anti-humanih antitela na LAG-3 koji su ovde navedeni. Poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujuć i molekuli prema ovom pronalasku poseduju fragmente antitela koji vezuju epitop i koji im omoguć avaju da se mogu koordinatno vezati za dva različita epitopa: epitop PD-1 i epitop LAG-3 , kako bi se umanjile inhibitorne aktivnosti takvih molekula. Kako se ovde koristi, takvo slabljenje se odnosi na smanjenje od najmanje 20 %, smanjenje od najmanje 50 %, smanjenje od najmanje 80 % ili smanjenje od najmanje 90 % u detektibilnim PD-1 i/ili LAG- 3 inhibitornim aktivnostima, ili potpuno eliminisanje inhibitorne aktivnosti PD-1 i/ili LAG-3 koja se može otkriti. Izbor epitopvezujuć ih fragmenata (npr. VL i VH domena) anti-humanog antitela na PD-1 i antitela na LAG-3 koordiniran je tako da polipeptidni lanci koji čine takav PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli vezivanja se okupljaju da formiraju najmanje jedno funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za prvi antigen (tj. ili PD-1 ili LAG-3) i najmanje jedno funkcionalno mesto vezivanja antigena koje je specifično za drugi antigen (tj. PD-1 ili LAG-3, u zavisnosti od identiteta prvog antigena).
[0260] U određenom slučaju, PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujuć i molekul iz ovog pronalaska je bispecifično dijatelo, koje poželjno sadrži dva, tri, četiri ili pet polipeptidnih lanaca kako je ovde opisano. U drugom posebnom slučaju, PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujuć i molekul iz ovog pronalaska je bispecifično antitelo, koje poželjno sadrži dva, tri ili četiri polipeptidna lanca kako je ovde opisano (takođe videti, na primer, WO 2007/024715; WO 2007/110205; WO 2009/080251; WO 2009/080254; WO 2009/089004; WO 2011/069104; WO 2011/117329; WO 2011/131746; WO 2011/133886; WO 2011/143545; WO 2012/023053; WO 2013/060867).
A. Anti-humana LAG-3 antitela
[0261] U nastavku su navedena primeri antitela koja su imunospecifična za humani LAG-3. Dodatna željena antitela mogu se napraviti izolovanjem hibridoma koji luče antitela izazvanih upotrebom LAG-3 ili njegovog peptidnog fragmenta, ili skriningom biblioteka rekombinantnih antitela za vezivanje za LAG-3 ili njegov peptidni fragment. Humani LAG-3 (uključujuć i signalnu sekvencu ostataka od 28 aminokiselina (prikazano podvučeno) i zreli protein ostatka aminokiseline 497) ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 38):
1. LAG-3 mAb A.
[0262] Anti-humano LAG-3 antitelo BMS-986016 (25F7; Medarex/BMS), ovde označeno kao "LAG-3 mAb A", i njegove varijante su opisane (videti, na primer, WO 2014/008218). Aminokiselinska sekvenca promenljivog domena teškog lanca LAG-3 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 39) (CDR su prikazani podvučeni):
[0263] Aminokiselinska sekvenca promenljivog domena lakog lanca LAG-3 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 40) (CDR su prikazani podvučeni):
[0264] Nedavno su identifikovana dodatna mišja anti-humana LAG-3 antitela koja imaju jedinstvene karakteristike vezivanja (videti, US br. 62/172,277). Poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujuć i molekuli prema ovom pronalasku
4
sadrže fragmente koji vezuju epitop anti-humanog LAG-3 antitela LAG-3 mAb 1 ili LAG-3 mAb 6, antitela, koja vezuju novi epitop i ne konkurišu sa BMS-986016 za vezivanje LAG-3. Posebno su poželjni PD-1 x LAG-3 bispecifični vezujuć i molekuli ovog pronalaska koji poseduju humanizovane VH i/ili VL domene LAG-3 mAb 1 ili LAG-3 mAb 6.
2. LAG-1 mAb 1
[0265] Aminokiselinska sekvenca VH domena LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR: 41) prikazana je ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
CDRH1 LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:42): RNYGMN
CDRH2 LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:43): WINTYTGESTYADDFEG
CDRH3 LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR:44): ESLYDYYSMDY
[0266] Aminokiselinska sekvenca VL domena LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR: 45) prikazana je ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
CDRL1 LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR: 46): KSSQSLLHSDGKTYLN
CDRL2 LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR: 47): LVSELDS
CDRL3 LAG-3 mAb 1 (SEK ID BR: 48): WQGTHFPYT
[0267] Dva primerna humanizovana VH domena LAG-3 mAb 1 označena ovde kao "hLAG-3 mAb 1 VH1" i "hLAG-3 mAb 1 VH2", i četiri izuzetna humanizovana VL domena LAG-3 mAb 1 "hLAG -3 mAb 1 VL1" " hLAG- 3 mAb 1 VL2", "hLAG-3 mAb 1 VL3" i "hLAG-3 mAb 1 VL4" su navedena ispod. Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena da bi se generisao LAG-3 vezujuć i domen. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom se u opštem naziva "hLAG-3 mAb 1", a određene kombinacije humanizovanih VH/VL domena se pozivaju na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hLAG-3 mAb 1 VH1 i hLAG-3 mAb 1 VL2, posebno se nazivaju "hLAG-3 mAb 1 (1.2)".
[0268] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 1 VH1 (SEK ID BR: 49) prikazana je ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0269] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 1 VH2 (SEK ID BR: 50) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0270] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL1 (SEK ID BR: 51) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0271] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL2 (SEK ID BR: 52) prikazana je ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0272] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL3 (SEK ID BR: 53) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0273] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 1 VL4 (SEK ID BR: 54) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0274] CDRL1 VL domena hLAG-3 mAb 1 VL4 sadrži supstituciju aminokiseline glicin u alanin i ima aminokiselinsku sekvencu: KSSQSLLHSDAKTYLN (SEK ID BR: 55), supstituisani alanin je prikazan podvučen). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od gore opisanih domena LAG-3 mAb 1 CDRL1.
3. LAG-3 mAb 6
[0275] Aminokiselinska sekvenca VH domena LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR: 56) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
CDRH1 LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:57): DYNMD
CDRH2 LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:58): DINPDNGVTIYNQKFEG
CDRH3 LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:59): EADYFYFDY
[0276] Aminokiselinska sekvenca VL domena LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR: 60) prikazana je ispod (ostaci CDR-a su prikazani podvučeni):
CDRL1 LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:61): KASQDVSSWA
CDRL2 LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:62): SASYRYT
CDRL3 LAG-3 mAb 6 (SEK ID BR:63): HYSTPWT
[0277] Dva primerna humanizovana VH domena LAG-3 mAb 6 ovde označena kao "hLAG-3 mAb 6 VH1" i "hLAG-3 mAb 6 VH2", i dva primerna humanizovana VL domena LAG-3 mAb 6 "hLAG -3 mAb 1 VL1, "i" hLAG- 3 mAb 1 VL2" su navedena ispod. Bilo koji od humanizovanih VL domena može biti uparen sa bilo kojim od humanizovanih VH domena da bi se generisao LAG-3 vezujuć i domen. Shodno tome, svako antitelo koje sadrži jedan od humanizovanih VL domena uparenih sa humanizovanim VH domenom u opštem se naziva "hLAG-3 mAb 6", a određene kombinacije humaniziranih VH/VL domena se pozivaju na pozivanje na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hLAG-3 mAb 6 VH1 i hLAG-3 mAb 6 VL2, posebno se nazivaju "hLAG-3 mAb 6 (1.2)".
[0278] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 6 VH1 (SEK ID BR: 294) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0279] Aminokiselinska sekvenca VH domena hLAG-3 mAb 6 VH2 (SEK ID BR: 295) je prikazana ispod (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0280] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 6 VL1 (SEK ID BR: 296) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0281] Aminokiselinska sekvenca VL domena hLAG-3 mAb 6 VL2 (SEK ID BR: 297) je prikazana ispod (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
[0282] CDRL1 VL domena hLAG-3 mAb 6 VL1 i VL2 sadrži supstituciju aminokiseline lizin-arginin i ima aminokiselinsku sekvencu: RASQDVSSVVA (SEK ID BR: 298), supstituisani arginin je prikazan podvučeno). Predviđeno je da se slična supstitucija može ugraditi u bilo koji od napred opisanih domena LAG-3 mAb 6 CDRL1.
B. Primeri dijatela sa četiri lanca Fc regiona koji sadrže E/K-zavojnice
[0283] Četiri primerna PD-1 x LAG-3 bispecifična, četiri lanca dijatela koja sadrže Fc region i koja sadrže domene koji promovišu heterodemer E/K-zavojnicu (označeni kao "DART A", "DART B", "DART C," i "DART I"). Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku. Ova primera PD-1 x LAG-3 dijatela imaju za cilj da ilustruju, ali ni na koji način ne ograničavaju, obim pronalaska.
1. DART A
[0284] DART A je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezana mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za LAG-3, varijantnu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot i cistein koji sadrže E/K-zavojnicu heterodimer koji promoviše domene. Prvi i treć i polipeptidni lanac DART A sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj, VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); heterodimer promovišući (E-zavojnica) domen koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); varijanta domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252I/S254T/T256E i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0285] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART A je varijanta SEK ID BR: 267:
pri čemu su X1, X2, X3i X4nezavisno izabrani, i pri čemu je X1A ili G; X2je I ili M; X3je T ili S; i X4je E ili T.
[0286] Aminokiselinske sekvence prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART A je SEK ID BR: 267, pri čemu X1je A; X2je I; X3je T; i X4je E.
[0287] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART A sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj, VL domen monoklonskog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1 hPD- 1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnicu) koji sadrži cistein (KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 24)) i C-kraj.
[0288] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART A je (SEK ID BR: 268):
2. DART B
[0289] DART B je identičan DART A, samo što prvi i treć i polipeptidni lanac DART B sadrže VL domen hLAG-3 mAb 1 VL3 (SEK ID BR: 53), koji sadrži supstituciju aminokiseline u CDRL1. Prema tome, prvi i treć i polipeptidni lanac DART B sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL3) (SEK ID BR: 53); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linker peptid (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (E-zavojnicu) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); varijanta domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252I/S254T/T256E i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0290] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART B je SEK ID BR: 267, gde X1je G; X2je Y; X3je T; i X4je E.
[0291] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART B je SEK ID BR: 268.
3. DART C.
[0292] DART C je identičan DART B, samo što prvi i treć i polipeptidni lanac DART B sadrže domen divljeg tipa IgG4 CH2-CH3 koji nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 4). Prema tome, prvi i treć i polipeptidni lanac DART C sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj, VL domen monoklonskog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL3) (SEK ID BR: 53); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposoban za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linker peptid (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (E-zavojnicu) koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); domen IgG4 CH2-CH3 bez C-terminalnog ostatka (SEK ID BR: 4); i C-kraj.
[0293] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART C je SEK ID BR: 267, gde X1je G; X2je M; X3je S; i X4je T.
[0294] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART C je SEK ID BR: 268.
4. DART I
[0295] DART I je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva veujuća mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za LAG-3, varijantnu IgG4 Fc regiju projektovanu za produženi poluživot i cistein koji sadrže domene za promociju herodrodimera E/K-zavojnice. Prvi i treć i polipeptidni lanac DART I sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj, VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 6 VL1) (SEK ID BR: 296); interventni linker peptid (Linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); heterodimer koji promoviše (E-zavojnica) domen koji sadrži cistein (EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 23); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); varijantu domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252I/S254T/T256E i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0296] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART I je (SEK ID BR: 290):
[0297] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART I sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj, VL domen monoklonskog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD- 1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 6 VH1) (SEK ID BR: 294); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnicu) koji sadrži cistein (KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 24) i C-kraj.
[0298] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART I je (SEK ID BR: 291):
C. Primeri dijatela sa četiri lanca Fc regiona koji sadrže CL/CH1 domene
[0299] Četiri primerna PD-1 x LAG-3 bispecifična, četiri lanca dijatela koja sadrže Fc region sadrže CL/CH1 domene označene kao "DART D", "DART E", "DART J" i "DART 1" . Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku. Ova primera PD-1 x LAG-3 dijatela imaju za cilj da ilustruju, ali ni na koji način ne ograničavaju, obim pronalaska.
1. DART D.
[0300] DART D je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezana mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za LAG-3, CL/CH1 domene i varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot. Prvi i treć i polipeptidni lanac DART D sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); domen IgG4 CH1 (SEK ID BR: 254); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); varijantu domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252I/S254T/T256E i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0301] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART D je (SEK ID BR: 269):
[0302] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART D sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); interventni linker peptid lLinker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); Kappa CL domen (SEK ID BR: 8); i C-kraj.
[0303] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART D je (SEK ID BR: 270):
2. DART E.
[0304] DART E je još jedno bispecifično, sa četiri lanca, dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezana mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za domene LAG-3, CL/CH1 i varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot. Položaj veznih mesta PD-1 i LAG-3 DART E je obrnut u poređenju sa DART D.
[0305] Prvi i treć i polipeptidni lanac DART E sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj, VL domen monoklonskog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG- 3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); domen IgG4 CH1 (SEK ID BR: 254); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); varijantu domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252I/S254T/T256E i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0306] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART E je (SEK ID BR: 271):
[0307] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART E sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); Kappa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0308] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART E je (SEK ID BR: 272):
1
3. DART J
[0309] DART J je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezana mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za domene LAG-3, CL/CH1 i varijantu IgG4 Fc regiona projektovanu za produženi poluživot. Prvi i treć i polipeptidni lanac DART J sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 6 VL1) (SEK ID BR: 296); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); domen IgG4 CH1 (SEK ID BR: 254); stabilizovano zglobno područje IgG4 (SEK ID BR: 13); varijanta domena IgG4 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije M252I/S254T/T256E i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 259); i C-kraj.
[0310] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART J je (SEK ID BR: 292):
[0311] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART J sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 6 VH1) (SEK ID BR: 294); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); Kappa CL domen (SEK ID BR: 8); i C-kraj.
[0312] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART J je (SEK ID BR: 293):
2
4. DART 1
[0313] DART 1 je bispecifično, četvorolančano dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezana mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za LAG-3, CL/CH1 domene i varijantu IgG1 Fc regiona projektovanu za smanjenje FcγR vezivanja. Prvi i treć i polipeptidni lanac DART 1 sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1PD-1 mAb A VL) (SEK ID BR: 65); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3LAG-3 mAb A VH1) (SEK ID BR: 39); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); region šarki IgG1 (SEK ID BR: 32); varijantu domena IgG1 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije L234A/L235A i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 5); i C-kraj.
[0314] Aminokiselinska sekvenca prvog i tre ć eg polipeptidnog lanca DART 1 je (SEK ID BR: 284):
[0315] Drugi i četvrti polipeptidni lanac DART 1 sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3LAG-3 mAb A VL) (SEK ID BR: 40); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1PD-1 mAb A VH) (SEK ID BR: 64); interventni linker peptid (linker 2: LGGGSG (SEK ID BR: 261); Kappa CL domen (SEK ID BR: 8); i C-kraj.
[0316] Aminokiselinska sekvenca drugog i četvrtog polipeptidnog lanca DART 1 je (SEK ID BR: 285):
D. Primeri pet lanaca Fc regiona koji sadrže dijatela
[0317] Dva primerna PD-1 x LAG-3 bispecifična, pet lanaca dijatela koja sadrže Fc region sadrže domene CL/CH1 i domene koji promovišu heterodimere E/K-zavojnice označeni kao "DART F" i "DART G" koji su generisani. Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku. Ova primerna PD-1 x LAG-3 dijatela imaju za cilj da ilustruju, ali ni na koji način ne ograničavaju, obim pronalaska.
1. DART F.
[0318] DART F je bispecifično, petolančano, dijatelo koje sadrži Fc region i ima tri vezana mesta specifična za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za domene LAG-3, CL/CH1, varijantu domena/IgG1 Fc regiona projektovan za smanjenje vezivanja FcγR-a i produženo vreme poluraspada, i domene koji promovišu heterodimere E/K-zavojnica. Prvi polipeptidni lanac DART F sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); region šarki IgG1 (SEK ID BR: 32); domen IgG1 CH2-CH3 sa rupom koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252I/S254T/T256E/N434A/H435K i koji nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260), pri čemu X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je S, X7je A, X8je V, X9je A, X10je K, i X11je odsutan); i C-kraj.
[0319] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 273):
[0320] Drugi i peti polipeptidni lanac DART F sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153), Kappa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj .
[0321] Aminokiselinska sekvenca drugog i petog polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 274):
4
[0322] Treć i polipeptidni lanac DART F sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); region šarki IgG1 (SEK ID BR: 32); IgG1 CH2-CH3 domen sa dugmetama koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252I/S254T/T256E i koji nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260), pri čemu je X1A, X2A; X3Y, X4T, X5E , X6V, X7L, X8Y, X9N, X10H, i X11je odsutan); interventni vezni peptid (GGGSGGGSGGG (SEK ID BR: 262); VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 21); i C-kraj.
[0323] Aminokiselinska sekvenca tre ć eg polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 275):
[0324] Četvrti polipeptidni lanac DART F sadrži, u smeru od N-krajado C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 22); i C-kraj.
[0325] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca DART F je (SEK ID BR: 276):
2. DART G
[0326] DART G je bispecifično, petolančano, dijatelo koje sadrži Fc region i ima dva vezana mesta specifična za PD-1, dva vezujuć a mesta specifična za domene LAG-3, CL/CH1, varijantu dugmeta/IgG1 Fc region sa rupom projektovan za smanjenje vezivanja FcγR-a i produženo vreme poluraspada, i domene koji promovišu heterodemer E/K-zavojnice. Prvi polipeptidni lanac DART G sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); region šarki IgG1 (SEK ID BR: 32); domen IgG1 CH2-CH3 sa rupom koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252I/S254T/T256E/N434A/H435K i koji nema C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260), gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je S, X7je A, X8je V, X9je A, X10je K, a X11je odsutan); i C-kraj.
[0327] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 277):
[0328] Drugi i peti polipeptidni lanac DART G sadrže, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54), Kappa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj .
[0329] Aminokiselinska sekvenca drugog i petog polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 278):
[0330] Treć i polipeptidni lanac DART G sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); region šarki IgG1 (SEK ID BR: 32); domen IgG1 CH2-CH3 koji nosi dugmad koji sadrži supstitucije L234A/L235A/M252I/S254T/T256E i kojima nedostaje C-terminalni ostatak (SEK ID BR: 260), gde X1je A, X2je A; X3je Y, X4je T, X5je E, X6je V, X7je L, X8je Y, X9je N, X10je H i X11je odsutan); interventni linker peptid (GGGSGGGSGGG (SEK ID BR: 262); VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen promovišućeg heterodimera (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 21); i C-kraj.
[0331] Aminokiselinska sekvenca treć eg polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 279):
[0332] Četvrti polipeptidni lanac DART G sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 22); i C-kraj.
[0333] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca DART G je (SEK ID BR: 280):
E. Primerni trolančani Fc region koji dijatela koja sadrže E/K-zavojnice
[0334] Ovaj pronalazak dodatno obezbeđuje PD-1 x LAG-3 bispecifično, trolančano telo koje sadrži Fc region koji sadrži domene koji promovišu heterodimere E/K-zavojnice. Generisano je primerno PD-1 x LAG-3 bispecifično, trolančano dijatelo koje sadrži Fc koje sadrži E/K-zavojnicu domena koji promoviše heterodimer označen kao "DART H". Struktura ovih dijatela koja sadrže Fc region je detaljno opisana u nastavku. Ovo primerno PD-1 x LAG-3 dijatelo namenjeno je da ilustruje, ali ni na koji način ne ograničava, obim pronalaska.
[0335] DART H je bispecifično, trolančano, dijatelo koje sadrži Fc regiju i koje ima jedno mesto vezivanja specifično za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, varijantu domena/otvor IgG1 Fc regiona projektovanu za smanjenje FcγR vezivanja, i domen koji promoviše heterodimer sa E/K-zavojnicama.
[0336] Prvi polipeptidni lanac DART H sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; a VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog da se veže za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (E-zavojnica) (EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK (SEK ID BR: 21); interventni linker (linker 3: GGGDKTHTCPPCP (SEK ID BR: 263); IgG1 CH2-CH3 domen koji sadrži dugmad koji sadrži supstitucije L234A/L235A i ima C-terminalni lizinski ostatak (SEK ID BR: 6); i C-kraj.
[0337] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca DART H je (SEK ID BR: 281):
[0338] Drugi polipeptidni lanac DART H sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); interventni linker peptid (linker 1: GGGSGGGG (SEK ID BR: 14); VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); interventni linkerski peptid koji sadrži cistein (linker 2: GGCGGG (SEK ID BR: 15); domen koji promoviše heterodimer (K-zavojnica) (KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE (SEK ID BR: 22); i C-kraj.
[0339] Aminokiselinska sekvenca drugog polipeptidnog lanca DART H je (SEK ID BR: 282):
[0340] Tre ć i polipeptidni lanac DART H sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; region (DKTHTCPPCP (SEK ID BR: 31); IgG1 CH2-CH3 domen sa rupama koji sadrži supstitucije L234A/L235A i ima C-terminalni lizinski ostatak (SEK ID BR: 7); i C-kraj.
[0341] Aminokiselinska sekvenca tre ć eg polipeptidnog lanca DART H je (SEK ID BR: 283):
F. Primer bispecifičnih antitela
[0342] Generisano je primerno PD-1 x LAG-3 bispecifično antitelo sa četiri lanca označeno kao "BSAB A". Struktura ovog bispecifičnog antitela je dole detaljno opisana. Ovo primerno PD-1 x LAG-3 bispecifično antitelo ima za cilj da ilustruje, ali ni na koji način ne ograničava, obim pronalaska.
[0343] BSAB A je bispecifično antitelo koje ima jedno mesto vezivanja specifično za PD-1, jedno mesto vezivanja specifično za LAG-3, varijantni IgG1 Fc region projektovan da smanji vezivanje FcγR i da podstakne kompleksiranje između dva različita polipeptida teškog lanca (vidi, na primer, WO 2011/143545).
[0344] Prvi polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VHPD-1hPD-1 mAb 7 VH1) (SEK ID BR: 147); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); varijantni region šarki IgG1 koji sadrži supstitucije D221E/P228E (numerisan indeksom EU kao u Kabatu i podvučen u SEK ID BR: 286, ispod); varijanta domena IgG1 CH2-CH3 koja sadrži supstitucije L234A/L235A/L368E (podvučeno u SEK ID BR: 286, ispod) i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak; i C-kraj.
[0345] Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptidnog lanca BSAB A je (SEK ID BR: 286):
[0346] Drugi polipeptidni lanac BSAB sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za PD-1 (VLPD-1hPD-1 mAb 7 VL2) (SEK ID BR: 153); Kappa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0347] Aminokiselinska sekvenca drugog polipeptidnog lanca BSAB je (SEK ID BR: 287):
[0348] Treć i polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VH domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VHLAG-3hLAG-3 mAb 1 VH1) (SEK ID BR: 49); domen IgG1 CH1 (SEK ID BR: 10); varijanta zglobnog regiona IgG1 koja sadrži supstitucije D221R/P228R (podvučeno u SEK ID BR: 288, ispod); varijanta IgG1 CH2-CH3 domena koja sadrži supstitucije L234A/L235A/L409R (podvučeno u SEK ID BR: 288, dole) i kojoj nedostaje C-terminalni ostatak; i C-kraj.
[0349] Aminokiselinska sekvenca treć eg polipeptidnog lanca BSAB A je (SEK ID BR: 288):
[0350] Četvrti polipeptidni lanac BSAB A sadrži, u smeru od N-kraja do C-kraja: N-kraj; VL domen monoklonalnog antitela sposobnog za vezivanje za LAG-3 (VLLAG-3hLAG-3 mAb 1 VL4) (SEK ID BR: 54); Kappa CL domen (SEK ID BR: 8) i C-kraj.
[0351] Aminokiselinska sekvenca četvrtog polipeptidnog lanca BSAB A je (SEK ID BR: 289):
IX. Referentna antitela
A. Referentna anti-humana antitela na PD-1
[0352] Da bi se procenili i okarakterisali novi molekuli koji vežu humane PD-1 prema ovom pronalasku, korišć ena su sledeć a referentna antitela: nivolumab (takođe poznat kao 5C4, BMS-936558, ONO-4538, MDKS-1106 , i plasiran na tržište kao OPDIVO® od strane Bristol-Miers Skuibb), humano IgG4 antitelo označeno ovde kao "PD-1 mAb A" i pembrolizumab (ranije poznat kao lambrolizumab, takođe poznat i kao MK-3475, SCH-900475, a Mercx ga je prodavao kao KEITRUDA®) humanizovano antitelo IgG4 ovde označeno kao "PD-1 mAb B."
1. Nivolumab ("PD-1 mAb A")
[0353] Aminokiselinska sekvenca promenljivog domena teškog lanca PD-1 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 64) (ostaci CDRHsu prikazani podvučeni):
[0354] Aminokiselinska sekvenca promenljivog domena lakog lanca PD-1 mAb A ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 65) (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
2. Pembrolizumab ("PD-1 mAb B")
[0355] Aminokiselinska sekvenca promenljivog domena teškog lanca PD-1 mAb B ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 66) (ostaci CDRHprikazani su podvučeni):
[0356] Aminokiselinska sekvenca promenljivog domena lakog lanca PD-1 mAb B ima aminokiselinsku sekvencu (SEK ID BR: 67) (ostaci CDRLsu prikazani podvučeni):
X. Metode proizvodnje
[0357] Anti-humani PD-1 polipeptid i drugi PD-1 agonisti, antagonisti i modulatori mogu se stvoriti od polinukleotida i/ili sekvenci anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 prema poznatim postupcima u tehnici, na primer, sintetički ili rekombinantno. Jedan postupak za proizvodnju takvih peptidnih agonista, antagonista i modulatora uključuje hemijsku sintezu polipeptida, nakon čega sledi tretman pod oksidacionim uslovima koji odgovaraju za dobijanje nativne konformacije, to jest ispravnih veza disulfidnih veza. Ovo se može postić i koriš ć enjem metodologija koje su dobro poznate stručnjacima (vidi, na primer, Kellei, RF et al. (1990) U: NAČELA I METODE GENETIČKOG INŽENJERSTVA, Setlov, JK Ed., Plenum Press, NI, tom 12 , str. 1-19; Stevart, JM i dr. (1984) SINTEZA ČVRSTE FAZNE PEPTIDE, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; videti takođe patente US br.4,105,603; 3,972,859; 3,842,067; i 3,862,925).
[0358] Polipeptidi iz ovog pronalaska mogu se pogodno pripremiti primenom sinteze peptida u čvrstoj fazi (Merrifield, B. (1986) "SolidPhase Sinthesis," Science 232 (4748): 341-347; Houghten, RA (1985) "Opšta metoda za Brza čvrstofazna sinteza velikog broja peptida: specifičnost interakcije antigen-antitelo na nivou pojedinačnih aminokiselina, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82 (15): 5131-5135; Ganesan, A. (2006) "Sinteza čvrste faze u dvadeset prvom veku", Mini Rew. Med. Chem.6 (1): 3-10).
[0359] U još jednoj alternativi, potpuno humana antitela koja imaju jedan ili više CDR-a PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD -1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, ili koji se takmiče sa PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD -1 mAb 15, za vezivanje za humani PD-1 ili njegov rastvorljivi oblik, može se dobiti upotrebom komercijalno dostupnih miševa koji su konstruisani za ekspresiju specifičnih proteina humanog imunoglobulina. Transgene životinje koje su dizajnirane da proizvode poželjnije (npr. Potpuno ljudska antitela) ili snažniji imunološki odgovor mogu se takođe koristiti za stvaranje humanizovanih ili humanih antitela. Primeri takve tehnologije su KSENOMOUSETM (Abgenik, Inc., Fremont, CA) i HUMAB-MOUSE® i TC MOUSETM (oba iz Medarek, Inc., Princeton, NJ).
[0360] Alternativno, antitela se mogu napraviti rekombinantno i eksprimirati bilo kojim postupkom poznatim u tehnici. Antitela se mogu proizvesti rekombinantno tako što se prvo izoluju antitela napravljena od životinja domać ina, dobijanjem sekvence gena i upotrebom sekvence gena za ekspresiju antitela rekombinantno u ć elijama domać inima (npr., CHO ć elije). Drugi metod koji se može koristiti je ekspresija sekvence antitela u biljkama (npr. duvan) ili transgenom mleku. Otkriveni su odgovarajuć i postupci za ekspresiju antitela rekombinantno u biljkama ili mleku (videti, na primer, Peeters et al. (2001) "Proizvodnja antitela i fragmenata antitela u biljkama", Vakcina 19: 2756; Lonberg, N. et al. (1995) "Humana antitela od transgenih miševa", Int. Rev. Immunol 13: 65-93; i Pollock et al. (1999) "Transgeno mleko kao metoda za proizvodnju rekombinantnih antitela", J. Immunol Methods 231: 147 -157). Pogodni postupci za dobijanje derivata antitela, na primer, humanizovanih, jednolančanih itd. Poznati su u tehnici. U drugoj alternativi, antitela se mogu proizvesti rekombinantno tehnologijom prikaza faga (videti, na primer, US br.
5,565,332; 5,580,717; 5,733,743; 6,265,150; i Winter, G. et al. (1994) "Making Antitodies bi Phage Display Technology, "Annu. Rev. Immunol.12.433-455).
[0361] Antitela ili proteini od značaja mogu biti podvrgnuti sekvenciranju Edmanovom razgradnjom, što je dobro poznato stručnjacima u ovoj oblasti. Podaci o peptidima dobijeni masenom spektrometrijom ili Edmanovom razgradnjom mogu se koristiti za projektovanje sondi ili prajmera koji se koriste za kloniranje proteina od značaja.
[0362] Alternativni metod kloniranja proteina od značaja je "panovanje" pomoć u prečiš ć enog PD-1 ili njegovih delova za ć elije koje eksprimiraju antitelo ili protein od interesa koji poseduju jedan ili više CDR-ova PD-1 mAb1, PD -1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, ili antitela koje se takmiči sa PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10 , PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15, za vezivanje za humani PD-1. Postupak "pomicanja" može se sprovesti tako što se dobije biblioteku cDNK iz tkiva ili ć elija koje eksprimiraju PD-1, prekomernu ekspresiju cDNK u drugom tipu ć elije i skrining transficiranih ć elija drugog tipa ć elije za određenu specifikaciju IC vezivanje za PD-1 u prisustvu ili odsustvu PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD- 1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15. Detaljni opisi metoda koje se koriste u kloniranju gena sisara koji kodiraju proteine na ć elijskoj površini pomo ć u "pomicanja" mogu se pronać i u struci (videti, na primer, Aruffo, A. i sar. (1987) "Molekularno kloniranje CD28 cDNK pomoć u visoko efikasnog COS ć elijskog ekspresionog sistema, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 84: 8573-8577 i Stephan, J. et al. (1999)" Selektivno kloniranje proteina ć elijske površine uključenih u razvoj organa : Epitelni glikoprotein je uključen u normalnu epitelnu diferencijaciju, "Endokrinol.140: 5841-5854).
[0363] Vektori koji sadrže polinukleotide od značaja mogu se uneti u ć eliju doma ć ina na bilo koji od brojnih odgovarajuć ih načina, uključuju ć i elektroporaciju, transfekciju upotrebom kalcijum hlorida, rubidijum hlorida, kalcijum fosfata, DEAE-dekstrana ili drugih supstanci; bombardovanje mikroprojektima; lipofekcija; i infekcija (npr. gde je vektor infektivni agens kao što je virus vakcinije). Izbor uvođenja vektora ili polinukleotida često ć e zavisiti od karakteristikać elije doma ć ina.
[0364] Svaka ć elija doma ć in sposobna za prekomerno ekspresiju heterolognih DNK može se koristiti u svrhu izolacije gena koji kodiraju antitelo, polipeptid ili protein od interesa. Neograničavajuć i primeri pogodnih ć elija doma ć ina sisara uključuju, ali nisu ograničeni na, ć elije COS, HeLa i CHO. Poželjno, ć elije doma ć ini eksprimiraju cDNK na nivou od oko 5 puta više, poželjnije 10 puta više, čak poželjnije 20 puta više od onog odgovarajuć eg endogenog antitela ili proteina od interesa, ako je prisutan, u domać inu ć elije. Skrining ć elija doma ć ina na specifično vezivanje za PD-1 vrši se imunološkim testom ili FACS-om. Može se identifikovati ć elija koja prekomerno eksprimira antitelo ili protein od značaja.
[0365] Pronalazak uključuje polipeptide koji sadrže aminokiselinsku sekvencu antitela iz ovog pronalaska. Polipeptidi ovog pronalaska mogu se dobiti postupcima poznatim u tehnici. Polipeptidi se mogu proizvesti proteolitičkom ili drugom razgradnjom antitela, rekombinantnim metodama (tj. pojedinačnim ili fuzionim polipeptidima) kako je gore opisano ili hemijskom sintezom. Polipeptidi antitela, naročito krać i polipeptidi do oko 50 aminokiselina, pogodno se stvaraju hemijskom sintezom. Postupci hemijske sinteze su poznati u struci i komercijalno su dostupni. Na primer, anti-humani PD-1 polipeptid se može proizvesti automatizovanim polipeptidnim sintetizatorom koji koristi metod čvrste faze.
1
[0366] Pronalazak uključuje varijante PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, Antitela na PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15 njihovi polipeptidni fragmenti koji se vezuju za PD-1, uključujuć i funkcionalno ekvivalentna antitela i fuzijske polipeptide koji ne utiču značajno na svojstva takvih molekula, kao i varijante koje imaju pojačanu ili smanjenu aktivnost. Modifikacija polipeptida je rutinska praksa u tehnici i ne mora se ovde detaljno opisivati. Primeri modifikovanih polipeptida uključuju polipeptide sa konzervativnim supstitucijama aminokiselinskih ostataka, jednom ili više delecija ili dodavanja aminokiselina koje ne menjaju značajno funkcionalnu aktivnost ili upotrebu hemijskih analoga. Ostaci aminokiselina koji se mogu konzervativno međusobno supstituisati uključuju, ali nisu ograničeni na: glicin/alanin; serin/treonin; valin/izoleucin/leucin; asparagin/glutamin; asparaginska kiselina/glutaminska kiselina; lizin/arginin; i fenilalanin/tirozin. Ovi polipeptidi takođe uključuju glikozilirane i neglikozilirane polipeptide, kao i polipeptide sa drugim post-translacijskim modifikacijama, kao što je, na primer, glikozilacija sa različitim šeć erima, acetilacija i fosforilacija. Poželjno, aminokiselinske supstitucije bi bile konzervativne, tj. supstituisana aminokiselina bi imala slična hemijska svojstva kao i originalna aminokiselina. Takve konzervativne zamene su poznate u tehnici, a primeri su dati gore. Modifikacije aminokiselina mogu se kretati od promene ili modifikacije jedne ili više aminokiselina do potpunog redizajna regiona, kao što je promenljivi domen. Promene u promenljivom domenu mogu promeniti afinitet vezivanja i/ili specifičnost. Drugi metodi modifikacije uključuju korišć enje tehnika spajanja poznatih u tehnici, uključuju ć i, ali bez ograničenja, enzimska sredstva, oksidativnu supstituciju i helaciju. Modifikacije se mogu koristiti, na primer, za pričvršć ivanje etiketa za imunološki test, kao što je vezivanje radioaktivnih delova za radioimunski test. Modifikovani polipeptidi su napravljeni primenom ustaljenih postupaka u tehnici i mogu se pregledati korišć enjem standardnih testova poznatih u tehnici.
[0367] Pronalazak obuhvata fuzione proteine koji sadrže jedan ili više polipeptida ili PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili antitela na PD-1 mAb 15 iz ovog otkrić a. U jednom slučaju, obezbeđen je fuzioni polipeptid koji sadrži laki lanac, teški lanac ili oboje lagan i težak lanac. U drugom slučaju, fuzioni polipeptid sadrži heterolognu konstantnu regiju imunoglobulina. U drugom slučaju, fuzioni polipeptid sadrži promenljivi domen lakog lanca i promenljiv domen teškog lanca antitela proizvedenog od javno deponovanog hibridoma. Za svrhe ovog pronalaska, fuzioni protein antitela sadrži jedan ili više polipeptidnih domena koji se specifično vezuju za PD-1 i drugu aminokiselinsku sekvencu za koju nije vezan u nativnom molekulu, na primer, heterologna sekvenca ili homologni niz iz drugog regiona.
XI. Upotreba PD-1-vezujuć ih molekula predmetnog pronalaska
[0368] Ovaj pronalazak obuhvata kompozicije, uključujuć i farmaceutske kompozicije, koje sadrže PD-1-vezuju ć e molekule iz ovog pronalaska (npr. anti-PD-1 antitela, anti-PD-1 bispecifična antitela, itd.), polipeptide izvedene iz takve molekule, polinukleotidi koji sadrže sekvence koje kodiraju takve molekule ili polipeptide, i druga sredstva kao što je ovde opisano.
A. Terapeutska upotreba
[0369] Kao što je napred navedeno, PD-1 igra važnu ulogu u negativnoj regulaciji proliferacije, funkcije i homeostaze T-ć elija. Određeni molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku imaju sposobnost da inhibiraju funkciju PD-1, i na taj način ponište inhibiciju imunog sistema posredovanu PD-1. Kao takvi, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10 , PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15, njihovi humanizovani derivati i molekuli koji sadrže njihove fragmente koji vezuju PD-1 (npr. -pecifična antitela, bispecifična antitela (uključujuć i, ali bez ograničenja na, DART-A, DART-B, DART-C, DART-D, DART-E, DART-F, DART-G, DART-H, DART-I, i DART-J), itd.), ili koji se takmiče za vezivanje sa takvim antitelima, mogu se koristiti za blokiranje inhibicije imunološkog sistema posredovanog PD-1, i na taj način promovisati aktivaciju imunog sistema.
[0370] Takvi bispecifični molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku koji se vezuju za PD-1 i drugi molekul koji učestvuje u regulisanju imunološke kontrolne tačke prisutne na ć elijskoj površini (npr. LAG-3) pove ć avaju imunološki sistem blokiranjem imunog inhibicija sistema posredovana PD-1 i takvim molekulima imunološke kontrolne tačke. Prema tome, takvi molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska su korisni za poveć anje imunološkog odgovora (npr. imunološki odgovor posredovanog T-ć elijama) subjekta. Konkretno, takvi molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska i mogu se koristiti za lečenje bilo koje bolesti ili stanja povezanog sa nepoželjno potisnutim imunološkim sistemom, uključujuć i rak i bolesti koje su povezane sa prisustvom patogena (npr. gljivične, virusne ili protozojske infekcije).
[0371] Karcinomi koji se mogu lečiti takvim molekulima koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku uključuju rakove koje karakteriše prisustvo ć elije raka izabrane iz grupe koju čine ć elije: tumor nadbubrežne žlezde, povezan sa AIDS-om rak, sarkom alveolarnog mekog dela, astrocitni tumor, rak bešike, rak kostiju, rak mozga i kičmene moždine, metastatski tumor mozga, rak dojke, tumori karotidnog tela, rak grlić a materice, hondro-sarkom, hordoma , hromofobni karcinom bubrežnih ć elija, karcinom čistih ć elija, rak debelog creva, kolorektalni karcinom, kožni benigni fibrozni histiocitom, desmoplastični tumor malih okruglih ć elija, ependimom, Evingov tumor, ekstraskeletni miksoidni hondrosarkom, fibrogeneza imperfekta oksid, fibrozna displazija kostiju, rak žučne kese ili žučnih puteva, rak želuca, gestacijska trofoblastna bolest, tumor zametnih ć elija, rak glave i vrata, hepatocelularni karcinom, tumor ostrvčanih ć elija, Kaposijev Sarcom a, rak bubrega, leukemija, lipoma/benigni lipomatozni tumor, liposarkom/maligni lipomatozni tumor, rak jetre, limfom, rak pluć a, meduloblastom, melanom, meningiom, višestruka endokrina neoplazija, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom, neuroblastom, neuroendokrini tumori, rak jajnika, rak pankreasa, papilarni karcinom štitne žlezde, paratiroidni tumor, pedijatrijski karcinom, tumor perifernih nervnih ovojnica, feohromocitom, tumor hipofize , rak prostate, posteriorni uveal melanom, retki hematološki poremeć aj,
2
bubrežni metastatski rak, rabdoidni tumor, rabdomisarkom, sarkom, rak kože, sarkom mekih tkiva, karcinom pločastih ć elija, rak želuca , sinovijalni sarkom, rak testisa, karcinom timusa, timom, metastatski rak štitne žlezde i rak materice.
[0372] Konkretno, takvi molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku mogu se koristiti u lečenju kolorektalnog karcinoma, hepatocelularnog karcinoma, glioma, karcinoma bubrega, raka dojke, multiplog mijeloma, karcinoma bešike, neuroblastoma; sarkoma, ne-Hodgkinovog limfoma, karcinoma pluć a, raka jajnika, raka pankreasa i rektalnog karcinoma.
[0373] Bolesti povezane sa patogenima koje se mogu lečiti takvim molekulima koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku uključuju hronične virusne, bakterijske, gljivične i parazitske infekcije. Hronične infekcije koje se mogu lečiti molekulima koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku uključuju virus Epstein Barr, virus hepatitisa A (HAV); Virus hepatitisa B (HBV); Virus hepatitisa C (HCV); virusi herpesa (npr. HSV-1, HSV-2, HHV-6, CMV), virus humane imunodeficijencije (HIV), virus vezikularnog stomatitisa (VSV), bacili, citrobakter, kolera, difterija, enterobakter, gonokoki, helikobakter pilori, klebsiella, Legionella, Meningococci, mikobakterije, Pseudomonas, Pneumonococci, bakterije rikecije, Salmonella, Serratia, Sta-philococci, Streptococci, Tetanus, Aspergillus (fumigatus, niger itd.), Blastomices dermatitidis, Candida, itd. ), Criptococcus neoformans, Gen Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporothrik schenkii, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Leptospirosis, Borrelia burgdor-feri, kormilo inth parazit (ankilograf, trakavice, metilji, ravni crvi (npr. Schistosomia), Giardia lambia, trihinela, Dien-tamoeba Fragilis, Tripanosoma brucei, Tripanosoma cruzi i Leishmania donovani.
[0374] Takvi molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska mogu se kombinovati sa drugim sredstvima protiv raka, posebno sa molekulima koji specifično vezuju antigen raka (npr. antitela, dijatela). Terapije protiv karcinoma koje se mogu kombinovati sa molekulima koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska uključuju molekule koji specifično vezuju još jedan antigen raka uključujuć i: 19.9 kao što je pronađeno u raku debelog creva, mucine karcinoma želuca; 4.2; A33 (antigen kolorektalnog karcinoma; Almkvist, I. 2006, Nucl Med Biol. Novembar; 33 (8): 991-998); ADAM-9 (US br.
2006/0172350; PCT publikacija br. WO 06/084075); AH6 koji se nalazi u karcinomu želuca; ALCAM (PCT publikacija br. WO 03/093443); APO-1 (maligni humani limfocitni antigen) (Trauth et al. (1989) "Regresija tumora posredovana monoklonskim antitelima indukcijom apoptoze", Nauka 245: 301-304); B1 (Egloff, AM et al. 2006, Cancer Res. 66 (1): 6-9); B7-H3 (Collins, M. et al. (2005) "Porodica imunoregulativnih liganada B7," Genom Biol.6: 223.1-223.7). Chapoval, A. i sar. (2001) "B7-H3: Kostimulatorna molekula za aktivaciju T ć elija i proizvodnju IFN-g", Nature Immunol. 2: 269-274; Sun, M. i sar. (2002), "Karakterizacija gena miša i čoveka B7-H3", J. Immunol. 168: 6294-6297); BAGE (Bodei, B.
2002 Stručno mišljenje Biol Ther. 2 (6): 577-84); beta-katenin (Prange V. et al. 2003 J Pathol. 201 (2): 250-9); krvna grupa ALeb/Lei pronađena u adenokarcinomu debelog creva; Antigen Burkittovog limfoma-38.13, C14 koji se nalazi u adenokarcinomu debelog creva; CA125 (antigen karcinoma jajnika) (Bast, RC Jr. et al. 2005 Int J Ginecol Cancer 15 Suppl 3: 274-81; Iu et al. (1991) "Koekspresija različitih antigenih markera na delovima koji nose determinante CA 125," Cancer Res. 51 (2): 468-475); Karboksipeptidaza M (US br. 2006/0166291); CD5 (Calin, GA et al. 2006 Semin Oncol. 33 (2): 167-73; CD19 (Ghetie et al. (1994) "Anti-CD19 inhibira rast tumorskih linija ljudskih B-ć elija in vitro i Daudi ć elija U SCID miševa izazivanjem hapšenja ć elijskog ciklusa, "Krv 83: 1329-1336; Troussard, Ks. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40 (4): 139-48); CD20 (Reff et al. (1994)" Osiromašenje Od ć elija B in vivo pomo ć u ljudskog monoklonalnog antitela himernog miša na CD20, "Krv 83: 435-445; Thomas, DA et al. 2006 Hematol Oncol Clin North Am. 20 (5): 1125-36); CD22 (Kreitman, RJ 2006 AAPS J. 18; 8 (3): E532-51); CD23 (Rosati, S. et al. 2005 Curr Top Microbiol Immunol. 5; 294: 91-107); CD25 (Troussard, Ks. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40 (4): 139-48); CD27 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91 (9): 1234-40); CD28 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91 (9): 1234-40) ; CD33 (Sgouros et al. (1993) "Modeliranje i dozimetrija monoklonalnog antitela M195 (Anti-CD33) kod akutne mijelogene leukemije", J. Nucl. Med. 34: 422-430); CD36 (Ge, I. 2005 Lab. Hematol.11 (1): 31-7); CD40/CD154 (Messmer, D. et al.
2005 Ann N I Acad Sci. 1062: 51-60); CD45 (Jurčić , J.G. 2005 Curr Oncol Rep. 7 (5): 339-46); CD56 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91 (9): 1234-40); CD46 (Patent Sjedinjenih Država br. 7,148,038; PCT publikacija br. VO 03/032814); CD52 (Eketorp, SS et al. (2014) "Alemtuzumab (mono-klonalno antitelo protiv CD52) kao terapija sa jednim agensom kod pacijenata sa relapsom/refraktornom hroničnom limfocitnom leukemijom (CLL) -A iskustvo iz jedne regije na uzastopnim pacijentima, "Ann Hematol. 93 (10): 1725-1733; Suresh, T. et al. (2014)" Novi pristupi antitelima terapiji limfoma ", J. Hematol. Oncol. 7:58; Hoelzer, D. (2013)" Ciljana terapija monoklonskim antitelima kod akutne limfoblastne leukemije, "Curr. Opin. Oncol. 25 (6): 701-706); CD56 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91 (9): 1234-40); CD79a/CD79b (Troussard, Ks. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40 (4): 139-48; Chu, P.G. et al. 2001 Appl Immunohistochem Mol Morphol. 9 (2): 97-106); CD103 (Troussard, Ks. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40 (4): 139-48); CD317 (Kavai, S. et al. (2008) "Interferon-A pojačava ekspresiju CD317 i antitumorsku aktivnost mono-klonalnog antitela protiv CD317 u modelima ksenografta karcinoma bubrežnih ć elija," Cancer Science 99 (12): 2461-2466; Wang, V. et al. (2009) HM1.24 (CD317) je nova meta protiv raka pluć a za imunoterapiju upotrebom anti-HM1.24 antitela, "Imunologija raka, imunoterapija 58 (6): 967-976; Wang, V. et al. (2009) "Himerna i humanizovana anti-HM1.24 antitela posreduju ć elijsku citotoksičnost zavisnu od antitela protiv ć elija raka plu ć a. Rak plu ć a," 63 (1): 23-31; Saieed, A. et al. (2013) " Aberantna regulacija promotera BST2 (teterina) pojačava proliferaciju ć elija i izbegavanje apoptoze u ć elijama raka dojke visokog stepena, "PLoS ONE 8 (6) e67191, str. 1-10); CDK4 (Lee, IM et al. 2006, ć elijski ciklus 5, 2006) (18): 2110-4); CEA (karcinoembrionski antigen; Foon et al. (1995) "Imunski odgovor na karcinoembrionski antigen kod pacijenata lečenih vakcinom protiv idiotipskih antitela", J. Clin. Invest. 96 (1) : 334-42); Mateja lin, C. 2006 Ginecol Obstet Fertil.34 (7-8): 638-46; Tellez-Avila, F.I. et al. 2005 Rev Invest Clin. 57 (6): 814-9); CEACAM9/CEACAM6 (Zheng, C. et al. (2011) "Novo anti-CEACAM5 monoklonsko antitelo, CC4, suzbija rast kolorektalnog tumora i pojačava imunološki tumor posredovan NK ć elijama", PLoS One 6 (6): e21146, str. 1-11); CO17-1A (Ragnhammar et al. (1993) "Efekat monoklonskih antitela 17-1A i GM-CSF kod pacijenata sa uznapredovalim kolorektalnim karcinomom-mogu se izazvati dugotrajne potpune remisije", Int. J. Cancer 53: 751-758); CO-43 (krvna grupa Leb); CO-514 (krvna grupa Lea) pronađena u adenokarcinomu; CTA-1; CTLA-4 (Peggs, K.S. et al. 2006 Curr Opin Immunol. 18 (2): 206-13); Citokeratin 8 (PCT publikacija br. WO 03/024191); D1.1; D156-22; DR5 (Abdulghani, J. et al. (2010) "TRAIL Receptor Signaling And Therapeutics," Stručno mišljenje. Ther. Ciljevi 14 (10): 1091-1108; Andera, L. (2009) "Signalizacija aktivirana smrć u Receptori porodice TNFR, "Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacki Olomouc Češka. Republika 153 (3): 173-180; Carlo-Stella, C. et al. (2007)" Ciljanje TRAIL-ovih agonističkih receptora za Cancer Therapi, "Clin, Cancer 13 (8): 2313-2317; Chaudhari, BR et al. (2006)" Follov the TRAIL to Apoptosis, "Immunologic Res. 35 (3): 249-262); Serija E1 (krvna grupa B) pronađena kod raka pankreasa; EGFR (receptor za epidermalni faktor rasta; Adenis, A. i sar . 2003 Bik Rak. 90 Specifikacija br: S228-32); Receptori za ephrin (i posebno EphA2 (US br. 7,569,672; PCT publikacija br. WO 06/084226); Erb (ErbB1; ErbB3; ErbB4; Zhou, H. i dr. 2002 Onkogen 21 (57): 8732-8740 ; Rimon, E. et al. 2004 Int J Oncol. 24 (5): 1325-1338); GAGE (GAGE-1; GAGE-2; Akcakanat, A. et al. 2006 Int J Cancer. 118 (1): 123-128); GD2/GD3/GM2 (Livingston, PO et al. 2005 Cancer Immunol Immunother. 54 (10): 1018-1025); gangliozid GD2 (GD2; Saleh et al. (1993) "Generation of A Human Anti -Idiotipsko antitelo koje imitira GD2 antigen, "J.Immunol., 151, 3390-3398); gangliozid GD3 (GD3; Shitara et al. (1993)" Mouse/Human Himeric Anti- (Ganglioside GD3) Antitelo sa pojačanim antitumorima Activities, "Cancer Immunol. Immunother. 36: 373-380); gangliozid GM2 (GM2; Livingston et al. (1994)" Poboljšano preživljavanje kod pacijenata sa melanomima III faze sa GM2 antitelima: nasumično ispitivanje adjuvantne vakcinacije GM2 Ganglioside, "J. Clin. Oncol. 12: 1036-1044); gangliozid GM3 (GM3; Hoon et al. (1993)" Mo lekularno kloniranje humanog monoklonalnog antitela reaktivnog na gangliozid GM3 antigen na raku čoveka, "Cancer Res. 53: 5244-5250); GICA 19-9 (Herlin et al. (1982) "Detekcija monoklonskih antitela cirkulišuć eg tumora povezanog antigena. I. Prisustvo antigena u serumu pacijenata sa kolorektalnim, želučanim i karcinomom pankreasa", J. Clin. Immunol. 2 : 135-140); gp100 (Lotem, M. i sar. 2006 J Immunother. 29 (6): 616-27); Gp37 (antigen T ć elija humane leukemije; Bhattacharia-Chatterjee et al. (1988) "Idiotip Vakcine protiv humane T ć elijske leukemije. II. Generisanje i karakterizacija monoklonalne kaskade idiotipa (Abl, Ab2 i Ab3), "J. Immunol. 141: 1398-1403); gp75 (antigen za melanom; Vijaiasardahl et al. (1990)" Melannomski antigen Gp75 je ljudski homolog Proizvoda gena lokusa miša B (smeđi), "J. Ekp. Med. 171 (4): 1375-1380); gpA33 (Heath, JK et al. (1997)" Humani A33 antigen je transmembranski glikoprotein i A Novi član superfamilije imunoglobulina, "Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 94 (2): 469-474; Ritter, G. et al. (1997)" Karakterizacija posttranslacionih modifikacija humanog antigena A33, roman Palmitoilirani površinski glikoprotein humanog gastrointestinalnog epitela, "Biochem. Biophis. Res. Commun. 236 (3): 682-686; Vong, NA et al. (2006)" EpCAM i gpA33 su markeri Barrettove metaplazije, "J. Clin. Pathol 59 (3): 260-263); HER2 antigen (HER2/neu, p185HER2; Kumar, Pal S et al. 2006 Semin Oncol. 33 (4): 386-91); HMFG (antigen u obliku globule u humanom mleku; VO1995015171); humani papiloma virus-E6/humani pa pillomavirus-E7 (DiMaio, D. i sar.2006 Adv Virus Res.66: 125-59; HMV-MAA (antigen melanoma velike molekularne težine; Natali et al. (1987) "Imunohistohemijsko otkrivanje antigena u primarnim i metastatskim melanomima čoveka pomoć u monoklonalnog antitela 140.240 i njegov mogu ć i prognostički značaj", Rak 59: 55-63; Mittelman i dr. (1990) "Aktivna specifična imunoterapija kod pacijenata sa melanomom. Kliničko ispitivanje sa mišjim antiidiotipskim monoklonskim antitelima izazvanim singeničnim monoklonskim antitelima vezanim za melanom," J. Clin. Invest. 86: 2136-2144); I antigen (antigen za diferencijaciju; Feizi (1985) "Demonstracija monoklonalnim antitelima da su ugljikohidratne strukture glikoproteina i glikolipida onko-razvojni antigeni", Nature 314: 53-57); IL13Ra2 (PCT publikacija br. VO 2008/146911; Brovn, CE et al. (2013) "Glioma IL13Ra2 je povezan sa ekspresijom gena mezenhimskog potpisa i lošom prognozom za pacijente", PLoS One. 18; 8 (10): e77769; Barderas, R. i dr. (2012) "Visoka ekspresija receptora A2 IL-13 u kolorektalnom karcinomu povezana je sa invazijom, metastazama u jetri i lošom prognozom", Cancer Res. 72 (11): 2780-2790; Kasaian, MT et al. . (2011) "IL-13 antitela utiču na čišć enje IL-13 kod ljudi moduliranjem aktivnosti čiš ć enja IL-13Ra2", J. Immunol.187 (1): 561-569; Bozinov, O. i dr. (2010) " Smanjena ekspresija receptora interleukina-13 IL-13Ralpha2 u lečenim ponavljajuć im malignim gliomima, "Neurol. Med. Chir. (Tokio) 50 (8): 617-621; Fujisava, T. i sar. (2009)" Nova uloga receptora interleukin-13 alfa2 u invaziji i metastazama raka pankreasa, "Cancer Res. 69 (22): 8678-8685); Integrin b6 (PCT publikacija br. WO 03/087340); JAM-3 (PCT publikacija br. WO 06/084078); KID3 (PCT publikacija br. WO 05/028498); KID31 (PCT publikacija br. WO 06/076584); X 1/4 antigen karcinoma pankarcinoma (Perez et al. (1989) "Izolacija i karakterizacija cDNA koja kodira marker epitelnog karcinoma Ks1/4," J. Immunol. 142: 3662-3667; Moller et al. (1991) "Bi-specifičnamonoklonalna-antitela usmerena liza ć elija karcinoma jajnika aktiviranim humanim T limfocitima", Immunol protiv raka. Immunother. 33 (4): 210-216; Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123: 157-80 ); L6 i L20 (antigeni humanog karcinoma pluć a; Hellstrom et al. (1986) "Monoklonska mišja antitela podignuta protiv karcinoma plu ć a kod ljudi", Rak Res. 46: 3917-3923); LEA; LUCA-2 (US br. 2006/0172349; PCT publikacija br. WO 06/083852); M1: 22: 25: 8; M18; M39; MAGE (MAGE-1; MAGE-3; (Bodei, B. 2002 Stručno mišljenje Biol Ther. 2 (6): 577-84); MART (Kounalakis, N. et al. 2005 Curr Oncol Rep. 7 (5): 377-82; mezotelin (Chang K i Pastan I. 1996 "Molekularno kloniranje mezotelina, antigena za diferencijaciju prisutnog na mezotelijumu, mezoteliomima i raku jajnika", Proc Natl Acad Sci USA 93: 136-40), MUC-1 ( Mathelin, C. 2006 Ginecol Obstet Fertil. 34 (7-8): 638-46); MUM-1 (Castelli, C. et al. 2000 J Cell Phisiol. 182 (3): 323-31); Mil; N -acetilglu-kosaminiltransferaza (Dennis, JV 1999 Biochim Biophis Acta. 6; 1473 (1): 21-34); neoglikoprotein; NS-10 koji se nalazi u adenokarcinomima; OFA-1; OFA-2; Onkostatin M (receptor za onkostatin beta; US br. 7,572,896; PCT publikacija br. WO 06/084092); p15 (Gil, J. i sar. 2006 Nat Rev Mol Cell Biol. 7 (9): 667-77); p97 (antigen povezan sa melanomom); Estin et al. (1989) "Transfektirane linije miša melanoma miša koje izražavaju različite nivoe humanog antigena povezanog sa melanomom p97", J. Natl. Cancer Instit. 81 (6): 445-454); PEM (polimorfni epitelni mucin; Hilkens i dr. (1992) "Mucini povezani sa ć elijskom membranom i njihova svojstva moduliranja adhezije", Trendovi u biohemiji. Sci. 17: 359-363); PEMA (polimorfni epitelni mucinski antigen); PIPA (US br. 7,405,061; PCT publikacija br. WO 04/043239); PSA (antigen specifičan za prostatu; Henttu et al. (1989) "cDNA kodirajuć i za čitav humani prostatski specifični antigen pokazuje visoke homologije T geni kalikreina u ljudskom tkivu, "Biochem. Biophis. Res. Comm. 10 (2): 903-910; Israeli et al. (1993)" Molekularno kloniranje komplementarne DNK koja kodira membranski antigen specifičan za prostatu, "Cancer Res. 53: 227-230; Cracco, CM et al. 2005 Minerva Urol Nefrol. 57 (4): 301-11); PSMA (prostatski specifični membranski antigen; Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123: 157-180) fosfat prostatične kiseline (Tailor et al. (1990) "Nukleotidni niz fosfataze humane prostate prostate, određen iz klona cDNA pune dužine,"
4
Nucl. Acids Res. 18 (16): 4928); R24 kao što je pronađeno u melanomu; ROR1 (Patent Sjedinjenih Država br.
5,843,749); sfingolipidi; SSEA-1; SSEA-3; SSEA-4; sTn (Holmberg, LA 2001 Ekpert Opin Biol Ther. 1 (5): 881-91); T-ć elijski receptor peptid iz kožnog T ć elijskog limfoma (videti Edelson (1998) "Limfom kožnih T- ć elija: model za selektivnu imunoterapiju", Rak J Sci Am. 4: 62-71); T5A7 pronađen u mijeloidnim ć elijama; TAG-72 (Jokota et al. (1992) "Brza penetracija tumora jednog lanca Fv i poređenje sa drugim oblicima imunoglobulina, "Cancer Res. 52: 3402-3408); TL5 (krvna grupa A); TNF-receptor (TNF-a receptor, TNF-b receptor; TNF-i receptor (van Horssen, R. et al.
2006 Onkolog. 11 (4): 397-408; Gardnerova, M. et al. 2000 Curr Drug Targets . 1 (4): 327-64); TRA-1-85 (krvna grupa H); Receptor transferina (US 7,572,895; PCT publikacija br. WO 05/121179); 5T4 (TPBG, glikoprotein trofoblasta; Boghaert , ER i sar. (2008) "Onkofetalni protein, 5T4, pogodna je meta za antitela-Vođena hemoterapija protiv raka sa kaliheamicinom, "Int. J. Oncol. 32 (1): 221-234; Eisen, T. et al. (2014)" Naptumomab Estafenatok: Ciljana imunoterapija sa novim imunotoksinom, "Curr. Oncol. Rep. 16: 370, str. 1-6); TSTA (tumorski specifični transplantacijski antigen), kao što su virusno indukovani tumorski antigeni, uključujuć i T-antigen DNK tumorske viruse i omotače antigena RNA tumorskih virusa, onkofetalni antigen-alfa-fetoprotein, npr. kao CEA onkofetalnog antigena za tumor debelog creva, tumora bešike (Hellstrom et al. (1985) "Monoklonska antitela na ć elijske površinske antigene koje dele hemijski indukovani karcinomi bešike miša", Rak. Res. 45: 2210-2188); VEGF (Pietrantonio, F. et al. (2015) "Neoadjuvantna hemoterapija na bazi bevacizumaba za metastaze u jetri raka debelog creva: zamke i korisni trikovi u pregledu za kliničare", Crit. Rev. Oncol. Hematol. 95 (3): 272-281; Grabovski, JP (2015) ) "Current Management Of Cancer Cancer", Minerva Med. 106 (3): 151-156; Field, KM (2015) "Bevacizumab i glioblastom: naučni ific Review, Novo prijavljena ažuriranja i tekuć e kontroverze, „Rak 121 (7): 997-1007; Suh, D.H. et al. (2015) "Napredak velikih kliničkih istraživanja u ginekološkom karcinomu 2014.", J. Ginecol. Oncol. 26 (2): 156-167; Liu, K.J. et al. (2015) "Bevacizumab u kombinaciji sa lekovima protiv raka za prethodno lečeni napredni rak nemalih ć elija plu ć a", Tumor Biol. 36 (3): 1323-1327; Di Bartolomeo, M. i sar. (2015) "Lečenje bevacizumabom kod starijih pacijenata sa metastatskim kolorektalnim karcinomom", Clin. Interv. Starenje 10: 127-133); VEGF receptor (O’Dvier. P.J. 2006 Onkolog. 11 (9): 992-998); VEP8; VEP9; VIM-D5; i I hapten, Lei kako se nalazi uć elijama karcinoma embriona.
[0375] U određenim slučajevima, takvi molekuli koji vezuju anti-PD-1 iz ovog pronalaska se koriste u kombinaciji sa jednim ili više molekula koji specifično vezuju 5T4, B7H3, CD19, CD20, CD51, CD123, DR5, EGFR, EpCam, GD2 , gpA33, HER2, ROR-1, TAG-72, VEGF-A antitelo i/ili VEGFR2.
[0376] Takvi molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska mogu se kombinovati sa imunogenim sredstvom kao što je tumorska vakcina. Takve vakcine mogu sadržati pročišć ene tumorske antigene (uključuju ć i rekombinantne proteine, peptide i molekule ugljenih hidrata), autologne ili alogene ć elije tumora. Opisane su brojne strategije vakcinacije protiv tumora (vidi, na primer, Palena, C., et al., (2006) "Vakcine protiv raka: predkliničke studije i nove strategije", Adv. Cancer Res. 95, 115-145; Mellman, I., et al. (2011) "Imunoterapija raka postaje punoletna", Nature 480, 480-489; Zhang, KSM et al. (2008) "Antitumorski imunološki odgovor izazvan kombinacijom MAGE-3/MAGE -n-izvedeni peptidi, "Oncol. Rep. 20, 245-252; Disis, ML et al. (2002)" Generisanje imuniteta T-ć elija na protein HER-2/neu nakon aktivne imunizacije sa HER-2/neu vakcine na bazi peptida, "J. Clin. Oncol. 20, 2624-2632; Vermeij, R. i sar. (2012)" Potenciranje p53-SLP vakcine ciklofosfamidom kod raka jajnika: studija II faze sa jednom rukom. "Int. J. Cancer 131, E670-E680). Takvi molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog otkrić a mogu se kombinovati sa hemoterapeutskim režimima. U ovim slučajevima, moguć e je smanjiti dozu primenjenog hemoterapeutskog reagensa (Mokir et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304).
[0377] Takvi molekuli koji vezuju PD-1 iz ovog pronalaska mogu se kombinovati sa drugim imunostimulativnim molekulima, kao što su antitela koja aktiviraju imunološki odgovor domać ina kako bi se obezbedio pove ć ani nivo aktivacije T-ć elija. Konkretno, pokazano je da antitela na PD-1, antitela na PD-L1 i/ili antitela na CTLA-4 aktiviraju imunološki sistem (vidi, npr. Del Rio, ML. Et al. (2005) "Signalizacija posredovana antitelima kroz PD-1 kostimuliše T ć elije i pojačava proliferaciju zavisnu od CD28", Eur. J. Immunol 35: 3545-3560; Barber, DL et al. (2006) "Vra ć anje funkcije u iscrpljenim CD8 T ć elijama tokom hroničnog virusna infekcija, "Nature 439, 682-687; Ivai, I. et al. (2002)" Uključenost PD-L1 u tumorskeć elije u bekstvu iz imunološkog sistema doma ć ina i imunoterapija tumora blokadom PD-L1, "Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 12293-12297; Leach, DR, et al., (1996) "Enhancement Of Antitumor Immuniti bi CTLA-4 Blokada", Science 271, 1734-1736). Dodatni imunostimulacijski molekuli koji se mogu kombinovati sa molekulima koji vezuju PD-1- iz ovog pronalaska uključuju antitela na molekule na površini dendritičnih ć elija koje aktiviraju funkciju dendritičkih ć elija (DC) i prezentaciju antigena, antitela na CD40 sposobna da zamene T- ć elijsku pomoć nu aktivnost i aktiviranje antitela na kostimulatorne molekule T- ć elija, kao što su PD-L1, CTLA-4, OX-404-1BB i ICOS (vidi, na primer, Ito et al. (2000) "Efikasno primitiranje citotoksičnih Prekursori limfocita T supkutanom primenom peptidnih antigena u liposomima u pratnji antitela na CD40 i anti-CTLA-4, "Imunobiologija 201: 527-40; US patent br.
5,811,097; Veinberg et al. (2000)" Angažovanje OX-40 receptor in vivo pojačava antitumorski imunitet, "Immunol 164: 2160-2169; Meler o i dr. (1997) "Monoklonalna antitela protiv molekule aktivacije T-ć elije 4-1BB za uklanjanje ustanovljenih tumora", Nature Medicine 3: 682-685; Hutloff i sar. (1999) "ICOS je inducibilni kostimulator T-ć elija, strukturno i funkcionalno povezan sa CD28", Nature 397: 263-266; i Moran, A.E. et al. (2013) "TNFR-ovi OX40, 4-1BB i CD40 kao mete za imunoterapiju protiv raka", Curr Opin Immunol. 2013 apr; 25 (2): 10.1016/j.coi.2013.01.004), i/ili stimulativne receptore himernog antigena (CAR) koji sadrže dogen koji se vezuje za antigen usmeren protiv antigena bolesti spojenog na jedan ili više unutarć elijskih signalnih domena iz različitih kostimulatornih proteina receptori (npr. CD28, 4-1BB, ICOS, OX40 itd.) koji služe za stimulaciju T-ć elija nakon vezivanja antigena (videti, na primer, Tettamanti, S. et al. (2013) "Ciljanje akutne mijeloidne leukemije””Ć elije ubice izazvane citokinima preusmerene su na novi CD123-specifični receptor himernog antigena, "Br. J. Haematol. 161: 389-401; Gill, S. i sar. (2014)" Efikasnost protiv humane akutne mijeloidne leukemije i mijeloabacije normalnih Hematopoeza u modelu miša koristeć i T ć elije modifikovane receptorima himernog antigena, "Blood 123 (15): 2343-2354; Mardiros, A. et al. (2013)" T ć elije koje eksprimiraju CD123-specifične receptore himernog antigena pokazuju specifične funkcije citolitičkog efekta I antitumorski efekti protiv humane mijeloidne leukemije kod ljudi, "Krv 122: 3138-3148; Pizzitol a, I. i sar. (2014) „Receptori himernih antigena protiv CD33/CD123 antigena efikasno ciljaju ć elije primarne akutne mijeloidne leukemije in vivo, „Leukemia doi: 10.1038/leu.2014.62).
[0378] Takvi PD-1-vezujući molekuli prema pronalasku mogu se kombinovati sa inhibitornim himernim antigenskim receptorima (iCAR) da bi se preusmerili sa ciljanih imunoterapijskih odgovora. iCAR je domen koji vezuje antigen usmeren protiv antigena bolesti spojenog sa jednim ili više unutarć elijskih signalnih domena iz različitih inhibitornih receptora proteina (npr. CTLA-4, PD-1, itd.) koji služe za ograničavanje odgovora T-ć elija na vezivanje antigena (vidi , na primer, Fedorov VD (2013) „Inhibitorni himerični antigenski receptori (iCAR) zasnovani na PD-1- i CTLA-4 (iCARs) preusmeravaju Off-Target Immunotherapy Responses,” Sci. Transl. Med.5:215ra172 doi:10.1126/ sci.3006597.
[0379] Konkretno, takvi anti-PD-1-vezujući molekuli iz ovog pronalaska se koriste u kombinaciji sa anti-CD 137 antitelom, anti-CTLA-4 antitelom, anti-OX40 antitelom, anti-LAG-3 antitelom, anti-PD-Ll antitelom, anti-TIGIT antitelom, anti TIM-3 antitelom i/ili vakcinom protiv raka.
B. Dijagnostička i terapijska pomo ć
[0380] Određeni molekuli koji se vezuju za PD-1 prema ovom pronalasku ne pokazuju nikakvu sposobnost blokiranja vezivanja između PD-1 i PD-1L liganda. Kao takva, antitela PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4, njihovi humanizovani derivati i molekuli koji sadrže njihove fragmente koji se vezuju za PD-1 (npr. bispecifična dijatela, itd.) ili koja se nadmeću za vezivanje sa takvim antitelima mogu se otkriti obeležavanjem (npr. radioaktivnim, enzimskim, fluorescentnim, hemiluminiscentnim, paramagnetnim, dijamagnetnim ili drugim obeleživačima) i korišćeni u detekciji PD-1 u uzorcima ili u prikazu PD-1 na ćelijama. Pošto takvi molekuli ne utiču na biološku aktivnost PD-1, oni su posebno korisni u metodama određivanja obima, lokacije i promene ekspresije PD-1 kod subjekata (npr. subjekti koji se leče od raka povezanog sa ekspresijom ili ciljanjem PD-1).
XII. Farmaceutske kompozicije
[0381] Kompozicije iz pronalaska uključuju masovne kompozicije lekova korisne u proizvodnji farmaceutskih kompozicija (npr. nečiste ili nesterilne smeše) i farmaceutske smeše (tj. kompozicije pogodne za administraciju subjektu ili pacijentu) koje se mogu koristi se u pripremi jediničnih doznih oblika. Takve kompozicije sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu molekula koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku, ili kombinaciju takvih agenasa i farmaceutski prihvatljivog nosača. Poželjno, kompozicije iz ovog pronalaska sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu molekula koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač. Pronalazak naročito obuhvata takve farmaceutske kompozicije u kojima je molekul koji veže PD-1: PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD -1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15; humanizovani PD-1 mAb1; PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD- 1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15; fragment koji vezuje PD-1 bilo kog takvog antitela; ili u kome je molekul koji se vezuje za PD-1 bispecifično PD-1 dijatelo (na primer, PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo). Posebno su obuhvać eni molekuli koji sadrže 3 CDRL i 3 CDRH PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6 , PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili antitelo na PD-1 mAb 15; humanizovano PD-1 mAb 1; PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD- 1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD- 1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15.
[0382] Pronalazak takođe obuhvata takve farmaceutske kompozicije koje dodatno uključuju drugo terpeutičko antitelo (npr., monoklonsko antitelo specifično za tumor) koje je specifično za određeni antigen raka, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0383] U određenom slučaju, izraz "farmaceutski prihvatljiv" znači odobren od strane regulatorne agencije savezne ili državne vlade ili naveden u američkoj farmakopeji ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, a naročito kod ljudi. Izraz "nosač" odnosi se na razblaživač, adjuvans (npr. Freundovo pomoć no sredstvo (kompletno i nepotpuno), pomoć nu supstancu ili nosač sa kojim se primenjuje terapeut. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što su voda i ulja nafte, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što je ulje kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slično. Voda je poželjan nosač kada se farmaceutska kompozicija primenjuje intravenozno. Rastvori soli i vodeni rastvori dekstroze i glicerola se takođe se mogu koristiti i kao nosači tečnosti, posebno za rastvore za injekcije. Pogodni farmaceutski pomoć ni sastojci uključuju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, suvo obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i sl. Kompozicija, po želji, može takođe sadržavati manje količine ovlaživača ili emulgatora, ili pH pufera. Ove kompozicije mogu biti u obliku rastvora, suspenzija, emulzija, tableta, pilula, kapsula, prahova, formulacija sa produženim oslobađanjem i slično.
[0384] Generalno, sastojci kompozicija iz ovog pronalaska se isporučuju odvojeno ili mešaju zajedno u obliku jedinične doze, na primer, kao suvi liofilizovani prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenoj posudi, kao što je ampula ili vreć ica koja označava količinu aktivnog agensa. Tamo gde se kompozicija primenjuje infuzijom, može se dozirati bocom za infuziju koja sadrži sterilnu vodu farmaceutskog kvaliteta ili fiziološki rastvor. Tamo gde se kompozicija primenjuje injekcijom, može se obezbediti ampula sterilne vode za injekcije ili fiziološki rastvor tako da se sastojci mogu pomešati pre primene.
[0385] Kompozicije iz ovog pronalaska mogu se formulisati kao neutralne ili u obliku soli. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na one koje nastaju sa anionima, poput onih dobijenih iz hlorovodonične, fosforne, sirć etne, oksalne, vinske kiseline itd., i one nastale sa kationima, kao što su oni izvedeni iz natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, ferohidroksidima, izopropilamin, trietilamin, 2-etilamino etanola, histidina, prokaina itd.
[0386] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više posuda napunjenih molekulom koji vezuje PD-1 prema ovom pronalasku (i još poželjnije, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD- 1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15; humanizovani PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12 , PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 ili PD-1 mAb 15 antitelo; PD-1-vezujuć i fragment bilo kog takvog antitela; ili u kome je molekul koji veže PD-1 bispecifično PD-1 dijatelo (npr. PD-1 x LAG-3 bispecifično dijatelo). Posebno su obuhvać eni molekuli koji sadrže 3 CDRL i 3 CDRH PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6 , PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, ili PD-1 mAb 15, sam ili sa takvim farmaceutski prihvatljivim nosačem. Dodatno, jedno ili više drugih profilaktičkih ili terapijskih sredstava korisnih za lečenje bolesti takođe mogu biti uključeni u farmaceutsko pakovanje ili komplet. Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više posuda napunjenih sa jednim ili više sastojaka farmaceutskih kompozicija iz ovog pronalaska. Opciono povezano sa takvom posudom (ama) može biti obaveštenje u formi koju je propisala vladina agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih ili bioloških proizvoda, koje označava odobrenje agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za administraciju na ljudima.
[0387] Ovaj pronalazak pruža komplete koji se mogu koristiti u napred navedenim postupcima. Komplet može sadržati bilo koji od molekula koji vežu PD-1 prema ovom pronalasku. Komplet može dalje sadržati jedno ili više drugih profilaktičkih i/ili terapeutskih sredstava korisnih za lečenje raka, u jednoj ili više posuda; i/ili komplet može dalje sadržati jedno ili više citotoksičnih antitela koja vezuju jedan ili više antigena raka povezanih sa rakom. U određenim slučajevima, drugi profilaktički ili terapijski agens je hemoterapeutski. U drugim slučajevima, profilaktičko ili terapeutsko sredstvo je biološka ili hormonska terapija.
XIII. Metodi administracije
[0388] Kompozicije iz ovog pronalaska mogu se obezbediti za lečenje, profilaksu i ublažavanje jednog ili više simptoma povezanih sa bolešć u, poreme ć ajem ili infekcijom davanjem subjektu efikasne količine fuzionog proteina ili konjugovanog molekula iz pronalaska, ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži fuzioni protein ili konjugovani molekul iz pronalaska. U poželjnom aspektu, takve kompozicije su u velikoj meri prečišć ene (tj. suštinski bez supstanci koje ograničavaju njegovo dejstvo ili proizvode neželjene sporedne efekte). U određenom slučaju, subjekat je životinja, poželjno sisar kao što je neprimat (npr. goveče, konj, mačka, pas, glodar itd.) Ili primat (npr. majmun, poput majmuna cinomolgus, čovek itd.). U poželjnom slučaju, subjekat je čovek.
[0389] Poznati su različiti sistemi isporuke i mogu se koristiti za davanje kompozicija iz pronalaska, npr. inkapsulacija u lipozome, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije sposobne da eksprimiraju antitelo ili fuzioni protein, endocitoza posredovana receptorom (vidi, npr. Wu i dr. (1987) "In vitro transformacija gena posredovana receptorima pomoć u topljivog sistema nosača DNK", J. Biol. Chem. 262: 4429-4432), konstrukcija nukleinske kiseline kao dela retroviralnog ili drugog vektora itd.
[0390] Postupci davanja molekula iz pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, parenteralnu primenu (npr. intradermalna, intramuskularna, intraperitonealna, intravenozna i subkutana), epiduralna i mukozna (npr. intranazalni i oralni putevi). U određenom slučaju, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku se administriraju intramuskularno, intravenozno ili potkožno. Kompozicije se mogu primenjivati bilo kojim pogodnim putem, na primer, infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom kroz epitelne ili mukokutane obloge (npr. oralnu sluznicu, rektalnu i crevnu sluznicu itd.) i mogu se primenjivati zajedno sa drugim biološki aktivnim agensima. Administracija može biti sistemska ili lokalna. Pored toga, plućna administracija se takođe može primeniti, na primer, upotrebom inhalatora ili nebulizatora, i formulacijom sa agensom za aerosolizaciju. Videti, npr., U.S. patent br. 6,019,968; 5,985, 320; 5,985,309; 5,934,272; 5,874,064; 5,855,913; 5,290,540; i 4,880,078; i PCT publikacije br. WO 92/19244; WO 97/32572; WO 97/44013; WO 98/31346; i WO 99/66903.
[0391] Pronalazak takođe predviđa da su molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku pakovani u hermetički zatvorenu posudu kao što je ampula ili vreć ica koja pokazuje količinu molekula. U jednom slučaju, takvi molekuli se isporučuju kao suvi sterilisani liofilizovani prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenoj posudi i mogu se rekonstituisati, na primer, sa vodom ili fiziološkim rastvorom do odgovarajuć e koncentracije za davanje subjektu. Poželjno, molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku isporučuju se kao suvi sterilni liofilizovani prah u hermetički zatvorenoj posudi.
[0392] Liofilizovani molekuli koji vezuju PD-1 prema ovom pronalasku treba da se čuvaju na između 2 °C i 8 °C u njihovoj originalnoj posudi, a molekule treba administrirati u roku od 12 sati, poželjno u roku od 6 sati, u roku od 5 sati, u roku od 3 sata ili u roku od 1 sata nakon rekonstitucije. U alternativnom slučaju, takvi molekuli se isporučuju u tečnom obliku u hermetički zatvorenoj posudi koja pokazuje količinu i koncentraciju molekula, fuzionisanog proteina ili konjugovanog molekula. Poželjno je da se takvi molekuli koji se vezuju za PD-1, kada su u tečnom obliku, isporučuju u hermetički zatvorenoj posudi.
[0393] Količina kompozicije iz pronalaska koja ć e biti efikasna u lečenju, prevenciji ili ublažavanju jednog ili više simptoma povezanih sa poremeć ajem može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama. Precizna doza koja će se koristiti u formulaciji takođe će zavisiti od načina primene i ozbiljnosti stanja, i treba je sprovesti prema proceni lekara i stanjem svakog pacijenta. Efektivne doze se mogu ekstrapolirati iz krivih doza izvedenih iz in vitro ili sistema za testiranje na životinjskim modelima.
[0394] Kako se ovde koristi, "efikasna količina" farmaceutske kompozicije, u jednom slučaju, je količina dovoljna za postizanje korisnih ili željenih rezultata uključujuć i, bez ograničenja, kliničke rezultate kao što su smanjenje simptoma koji su rezultat bolesti, ublažavanje simptoma infekcije (npr. virusno opterećenje, groznica, bol, sepsa, itd.) ili simptom raka (npr. proliferacija ćelija raka, prisustvo tumora, tumorske metastaze, itd.), čime se povećava kvalitet života onih koji pate od bolesti, smanjujući dozu drugih lekova potrebnih za lečenje bolesti, pojačavajući efekat drugog leka kao što je ciljanje i/ili internalizacija, odlaganje napredovanja bolesti i/ili produženje života pojedinaca.
[0395] Efikasna količina može se primeniti u jednoj ili više primena. Za potrebe ovog pronalaska, efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije je količina dovoljna da smanji proliferaciju (ili efekat) prisustva virusa i da smanji i /ili odloži razvoj virusne bolesti, bilo direktno ili posredno. U nekim slučajevima, efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije može ili ne mora biti postignuta zajedno sa drugim lekom, jedinjenjem ili farmaceutskom kompozicijom. Prema tome, "efikasna količina" može se uzeti u obzir u kontekstu davanja jednog ili više hemoterapeutskih agenasa, a može se smatrati da se pojedinačno sredstvo daje u efikasnoj količini ako se, zajedno sa jednim ili više drugih sredstava, postigne željeni rezultat biti ili je postignut. Dok se individualne potrebe razlikuju, određivanje optimalnih opsega efektivnih količina svake komponente je u okviru veštine struke.
[0396] Za molekule koji se vezuju za PD-1 i koji su obuhvać eni pronalaskom, doza koja se daje pacijentu se poželjno određuje na osnovu telesne težine (kg) subjekta primaoca. Za molekule koji se vezuju za PD-1 obuhvać eni otkri ć em, doza koja se daje pacijentu je tipično najmanje oko 0,01 µg/kg, najmanje oko 0,05 µg/kg, najmanje oko 0,1 µg/kg, najmanje oko 0,2 µg/kg, najmanje oko 0,5 µg/kg, najmanje oko 1 µg/kg, najmanje oko 2 µg/kg, najmanje oko 5 µg/kg, najmanje oko 10 µg/kg, najmanje oko 20 µg/kg, najmanje oko 50 µg/kg, najmanje oko 0,1 mg/kg, najmanje oko 1 mg/kg, najmanje oko 3 mg/kg, najmanje oko 5 mg/kg, najmanje oko 10 mg/kg, pri najmanje oko 30 mg/kg, najmanje oko 50 mg/kg, najmanje oko 75 mg/kg, najmanje oko 100 mg/kg, najmanje oko 125 mg/kg, najmanje oko 150 mg/kg ili veće telesne težine subjekta.
[0397] Doziranje i učestalost davanja molekula koji se vezuje za PD-1 prema ovom pronalasku može se smanjiti ili promeniti pove ć anjem usvajanja i prodiranja molekula u tkivo modifikacijama kao što je, na primer, lipidizacija.
[0398] Doziranje molekula koji se vezuje za PD-1 prema pronalasku datog pacijentu može se izračunati za upotrebu kao terapija sa jednim agensom. Alternativno, molekul se može koristiti u kombinaciji sa drugim terapeutskim kompozicijama i doze koje se primenjuju pacijentu su niže situacije kada se navedeni molekuli koriste kao monoterapija.
[0399] Farmaceutski preparati iz ovog pronalaska mogu se primenjivati lokalno na oblast kojoj je potrebno lečenje; ovo se može postić i, na primer, a ne ograničenjem, lokalnom infuzijom, injekcijom ili pomo ć u implantata, pri čemu je navedeni implantat porozan, neporozan ili želatinastog materijala, uključujuć i membrane, poput sijastičnih membrana ili vlakna. Poželjno, kada se daje molekul prema pronalasku, mora se voditi računa da se koriste materijali koje molekul ne apsorbuje.
[0400] Kompozicije iz ovog pronalaska mogu se isporučiti u vezikuli, posebno lipozomu (vidi Langer (1990) "New Methods Of Delivery Drug", Science 249: 1527-1533); Treat et al., LIPOZOMI U TERAPIJI INFEKTIVNE BOLESTI I RAKA, Lopez-Berestein i Fidler (ur.), Liss, New York, str.353- 365 (1989); Lopez-Berestein, ibid, str.317-327).
[0401] Kompozicije iz ovog mogu se isporučiti u sistemu sa kontrolisanim ili produženim oslobađanjem. Bilo koja tehnika poznata stručnjaku u ovoj oblasti može se koristiti za proizvodnju formulacija sa produženim oslobađanjem koje sadrže jednu ili više molekula (molekula) koji se vezuju za PD-1 iz ovog pronalaska. Videti, na primer, US No.
4,526,938; PCT publikacija WO 91/05548; PCT publikacija WO 96/20698; Ning i dr. (1996) "Intratumoralna radioimunoterapija ksenotransplantata raka debelog creva kod ljudi koji koristi gel sa produženim oslobađanjem", Radioterapija i onkologija 39:179-189, Song et al. (1995) "Antitelom posredovano pluć no ciljanje emulzija sa dugom cirkulacijom", PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50: 372-397; Cleek i dr. (1997) "Biorazgradivi polimerni nosači za antitela bFGF za kardiovaskularnu primenu", Pro. Int’l. Simp. Kontrola. Rel. Bioact. Mater.24: 853-854; i Lam et al. (1997) "Mikrokapsulacija rekombinantnog humanizovanog monoklonalnog antitela za lokalnu isporuku", Proc. Int’l. Simp. Control Rel. Bioact. Mater. 24: 759-760. U jednom slučaju, pumpa se može koristiti u sistemu sa kontrolisanim otpuštanjem (vidi Langer, supra; Sefton, (1987) "Implantable Pumps, " CRC Crit. Rev. Biomed. Eng. 14:201-240; Buchwald et al. (1980) "Dugotrajna, kontinuirana intravenska primena heparina pomoć u implantabilne infuzione pumpe kod ambulantnih pacijenata sa ponavljanom venskom trombozom", Hirurgija 88: 507-516; i Saudek et al. (1989) "Preliminarno ispitivanje programabilnih lekova za implantaciju sistema za isporuku insulina", N. Engl. J. Med. 321:574-579). U drugom slučaju, polimerni materijali se mogu koristiti za postizanje kontrolisanog otpuštanja molekula (vidi npr. MEDICINSKE PRIMENE KONTROLISANOG OTPUŠTANJA, Langer and Wise (ur.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); KONTROLISANA BIOUPLOŠNOST LEKOVA , DIZAJN I PERFORMANSE LEKOVA, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Levy et al. (1985) "Inhibicija kalcifikacije bioprostetičkih srčanih zalistaka pomoću lokalnog kontrolisanog oslobađanja difosfonata", Nauka 228 : 190-192; Tokom i sar. (1989) "Kontrolisano oslobađanje dopamina iz polimernog implantata mozga: in vivo karakterizacija", Ann. Neurol. 25: 351-356; Hovard et al. (1989) "Intracerebralna isporuka lekova u pacovima sa ošteć enjima memorije izazvanim lezijama, "J. Neurosurg.7 (1): 105-112); US 5,679,377; US 5,916,597; US 5,912,015; US 5,989,463; US 5,128,326; PCT publikacija br. WO 99/15154; i PCT publikacija br. WO 99/20253). Primeri polimera koji se koriste u formulacijama sa produženim oslobađanjem uključuju, ali nisu ograničeni na, poli (2-hidroksi etil metakrilat), poli (metil metakrilat), poli (akrilna kiselina), poli (etilen-ko-vinil acetat), poli (metakrilna kiselina), poliglikolidi (PLG), polianhidridi, poli (N-vinil pirolidon), poli (vinil alkohol), poliakrilamid, poli (etilen glikol), polilaktidi (PLA), polis (laktid-ko-glikolidi) (PLGA) i poliortoestri. Sistem sa kontrolisanim oslobađanjem se može postaviti u blizinu terapeutskog cilja (npr. pluća), tako da zahteva samo delić sistemske doze (videti, npr., Goodson, u MEDICINSKIM PRIMENAMA KONTROLISANOG OTPUŠTANJA, supra, tom 2, str. 115-138 (1984)). Polimerne kompozicije korisne kao implantati sa kontrolisanim otpuštanjem mogu se koristiti prema Dunn et al. (vidi U.S. 5,945,155). Ova posebna metoda se zasniva na terapijskom efektu in situ kontrolisanog oslobađanja bioaktivnog materijala iz polimernog sistema. Implantacija se generalno može desiti bilo gde u telu pacijenta kome je potreban terapijski tretman. Može se koristiti nepolimerni sistem za dugotrajno isporučivanje, pri čemu se nepolimerni implantat u telu subjekta koristi kao sistem za isporuku leka. Nakon implantacije u telo, organski rastvarač implantata će se raspršiti, dispergovati ili ispirati iz kompozicije u okolnu tkivnu tečnost, a nepolimerni materijal će postepeno koagulirati ili precipitirati da bi formirao čvrstu, mikroporoznu matricu (vidi US 5,888,533) .
[0402] Sistemi sa kontrolisanim oslobađanjem su razmatrani u Langerovom pregledu (1990, "New Methods Of Drug Delivery, " Science 249:1527-1533). Bilo koja tehnika poznata stručnjaku može se koristiti za proizvodnju formulacija sa produženim oslobađanjem koje sadrže jedan ili više terapeutskih agenasa prema pronalasku. Videti, na primer, US 4,526,938; međunarodne publikacije br. WO 91/05548 i WO 96/20698; Ning i dr. (1996) "Intratumoralna radioimunoterapija ksenografta karcinoma ljudskog debelog creva korišć enjem gela sa produženim oslobađanjem", radioterapija i onkologija 39: 179-189, Song et al. (1995) "Antitelom posredovano dugo ciljanje emulzija sa dugom cirkulacijom", PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50: 372-397; Cleek i dr. (1997) "Biorazgradivi polimerni nosači za antitela na bFGF za kardiovaskularnu primenu", Pro. Int’l. Symp. Kontrola. Rel. Bioact. Mater. 24: 853-854; i Lam et al. (1997) "Mikrokapsulacija rekombinantnog humanizovanog monoklonskog antitela za lokalnu isporuku", Proc. Int’l. Simp. Control Rel. Bioact. Mater.24:759-760.
[0403] Kada je kompozicija iz ovog pronalaska nukleinska kiselina koja kodira molekul koji vezuje PD-1 prema ovom pronalasku, nukleinska kiselina se može primeniti in vivo za promovisanje ekspresije njenog kodiranog PD-1-bi i pronalaženje molekula konstruisanjem kao dela odgovarajuć eg vektora ekspresije nukleinske kiseline i davanjem tako da postane unutarć elijski, na primer, upotrebom retrovirusnog vektora (vidi US 4,980,286), ili direktnom injekcijom, ili upotrebom mikročestica injektiranjem (npr. genski pištolj; Biolistic, Dupont) ili oblaganje lipidima ili receptorima na ć elijskoj površini ili agensima za transfekciju, ili davanjem u vezu sa peptidom sličnim homeoboksu za koji je poznato da ulazi u jezgro (vidi npr. Joliot et al. (1991) "Antennapedia Homeobox Peptide Regulates Neural Morphogenesis," Proc. Natl. Acad. Sci. (SAD) 88:1864-1868), itd. Alternativno, nukleinska kiselina se može uvesti intracelularno i ugraditi u ćeliju domaćina DNK za ekspresiju homolognom rekombinacijom.
[0404] Tretman subjekta sa terapeutski ili profilaktički efikasnom količinom molekula koji se vezuje za PD-1 prema ovom pronalasku može uključivati jedan tretman ili, poželjno, može uključivati niz tretmana. U jednom poželjnom primeru, subjekt se leči takvim dijabetelom jednom nedeljno u trajanju od oko 1 do 10 nedelja, poželjno između 2 do 8 nedelja, poželjnije između oko 3 do 7 nedelja, a još poželjnije oko 4, 5, ili 6 nedelja. Farmaceutski preparati iz ovog pronalaska mogu se primenjivati jednom dnevno, dva puta dnevno ili tri puta dnevno. Alternativno, farmaceutske kompozicije se mogu davati jednom nedeljno, dva puta nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom mesečno, jednom u šest nedelja, jednom u dva meseca, dva puta godišnje ili jednom godišnje. Takođe ć e biti cenjeno da se efikasna doza molekula koji se koriste za lečenje može pove ć ati ili smanjiti tokom određenog tretmana.
Primeri
[0405] Sledeć i primeri ilustruju različite metode za kompozicije u dijagnostičkim metodama ili metodama lečenja. Primeri imaju za cilj da ilustruju, ali ni na koji način ne ograničavaju, obim pronalaska.
Primer 1
Karakterizacija anti-humanih monoklonskih antitela na PD-1
[0406] Izolovano je petnaest mišjih monoklonskih antitela kao sposobnih da se specifično vezuju za PD-1 čoveka i cinomolgus majmuna, i dodeljene su im oznake "PD-1 mAb 1", "PD-1 mAb 2", "PD-1 mAb 3 ,“ „PD-1 mAb 4“, „PD-1 mAb 5“, „PD-1 mAb 6“, „PD-1 mAb 7“, „PD-1 mAb 8“, „PD-1 mAb 9,“ "PD-1 mAb 10", "PD-1 mAb 11", "PD-1 mAb 12", "PD-1 mAb 13", "PD-1 mAb 14" i "PD-1 mAb 15." Utvrđeno je da se CDR ovih antitela razlikuju i navedeni su napred. Vezivanje za ekstracelularni domen humanog i cinomologus majmuna PD-1 je procenjen na sledeć i način, ploče sa 96 šupljina sa makisorbom ravnog dna bile su obložene rastvorljivim humanim ili cinomolgus majmunom PD-1 (vanć elijski domen humanog PD-1 spojen sa His oznakom (shPD-1 His) ili na ljudski Fc region (shPD-1 hFc), ili vanćelijski domen PD-1 majmuna cinomolgus fuzionisan sa ljudskim Fc regionom (scyno-PD1 Fc)) svaki po 0,5 ili 1 mg/mL , ploče su isprane i inkubirane sa jednim od izolovanih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15. Za ove studije, anti-PD-1 antitela su korišć ena u količinama 3, 1.0, 0.3333, 0.1111, 0.0370, 0.0123 ili 0.0041 mg/mL (trostruka serijska razblaženja). Količina vezivanja antitela za imobilizovani PD-1 (ljudski ili cinomolgus majmun) je procenjena korišćenjem kozjeg anti-mišjeg IgG-HRP sekundarnog antitela. Svi uzorci su analizirani na čitaču ploča (Victor 2 Vallac, Perkin Elmers). Reprezentativne krive vezivanja za rastvorljivi humani i rastvorljivi cinomolgus PD-1 prikazane su na slikama 7A-7D i slikama 8A-8C, respektivno.
[0407] Rezultati ovih testova vezivanja (slike 7A-7D i slike 8A-8C) pokazuju da se sva anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 vezuju za rastvorljivi humani i rastvorljivi cinomolgus majmun PD-1.
[0408] Da bi se dalje karakterisala mišja anti-PD-1 antitela, njihova sposobnost da blokiraju vezivanje rastvorljivog humanog PD-L1 za rastvorljivi humani PD-1 procenjena je u dva različita testa. U jednom testu ispitana je sposobnost antitela da blokiraju vezivanje humanog PD-1 za PD-L1 imobilisan na površini. Za ovaj test svako od anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentno anti-PD-1 antitelo (PD-1 mAb A) je pomešano sa shPD-1 His fuzionim proteinom, (na 2,5 mg /mL) i odvojeno je inkubirano sa rastvorljivim ljudskim PD-L1 obeleženim biotinom (ekstrać elijski domen PD-L1 spojen sa ljudskim Fc (sPD-L1)) pri 1 mg/mL imobilizovanom na ploči obloženoj streptavidinom. Za ove studije, anti-PD-1 antitela su korišć ena u količinama 10, 5.0, 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125 ili 0.1563 mg/mL (dvostruko serijsko razblaživanje). Količina vezivanja shPD-1 His za imobilizovani sPD-L1 procenjena je putem His-Taga pomoć u anti-His-Tag-HRP sekundarnog antitela. Svi uzorci su analizirani na čitaču ploča (Victor 2 Vallac, Perkin Elmers). Rezultati ovog eksperimenta prikazani su na slikama 9A-9D.
[0409] Rezultati ovih testova inhibicije (slike 9A-9D) pokazuju da su anti-PD-antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 8, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15, bila u stanju da blokiraju vezivanje rastvorljivog humanog PD-L1 za rastvorljiv humani PD-1 u različitim stepenima, dok su PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4 pokazali malo ili nimalo blokirajuć e aktivnosti u ovom formatu testa.
[0410] U drugom testu, sposobnost mišjih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15 da blokiraju vezivanje PD-1 liganda (tj. Humanog PD-L1 ili humanog PD-L2) za PD-1 ispitivana je ekspresija na površini ć elija NSO. Za ovaj test, svako od anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentno anti-PD-1 antitelo (PD-1 mAb A ili PD-1 mAb B) je odvojeno pomešano sa biotiniliranim rastvorljivim humani PD-L1 (shPD-L1 fuzioni protein) ili biotinilovani rastvorljivi humani PD-L2-muIgFc fuzioni protein (shPD-L2; Ancell Cat# 573-030), svaki u 0,1 mg/test, i inkubirani sa NSO ćelijama pritiskanje humanog PD-1 (~250.000 ćelija/bunariću) u puferu za blokiranje (FACS 10 % humanog serumskog albumina). Za ove studije, anti-PD-1 antitela su korišć ena na 4.0, 1.0,2.5 x 10-1, 6.25 x 10-2, 1.56 x 10-2, 3.90 x 10-3, 9.76 x 10-4, 2.4 x 10- 4, 0,6 x 10-4 mg/test (četvorostruka serijska razblaženja). Količina shPD-L1 (ili shPD-L2) koja se vezuje za površinu NSO ć elija određena je pomo ć u PE-konjugovanog sekundarnog antitela na streptavidinu pomo ć u FACS analize. Određene su vrednosti IC50za inhibiciju vezivanja PD-1/PD-L1 i data je srednja vrednost uzorka (h) u najmanje dva eksperimenta (osim gde je naznačeno) u Tabeli 6.
[0411] Rezultati testova inhibicije shPD-L1 (Tabela 6) pokazuju da su anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD -1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 11, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14 i PD-1 mAb 15, mogla da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1 izražen na površini ć elija NSO. Konkretno, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 10 i PD-1 mAb 15 blokirale su vezivanje shPD-L1 kao i bolje od referentnih PD-1 antitela (PD-1 mAb A, PD-1 mAb B), dok se PD-1 mAb 8 u suštini nije blokiralo u ovom formatu testa. I PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 4 su mogli da blokiraju vezivanje PD-1/PD-L1 u ovom formatu testa.
[0412] Slično, anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 3, PD-1 mAb 4, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD -1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 10, PD-1 mAb 12, PD-1 mAb 13, PD-1 mAb 14, bili su u stanju da blokiraju vezivanje humanog PD-L2 za humani PD- 1 izražen na površinić elija NSO, dok PD-1 mAb 8 u suštini nije blokirao u ovom formatu testa. Konkretno, PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 5, PD-1 mAb 6, PD-1 mAb 7 i PD-1 mAb 10 blokirali su vezivanje shPD-L2, kao i, ili bolje od referentnog PD-1 antitela (PD-1 mAb A, PD-1 mAb B). Antitela PD-1 PD-1 mAb 11 i PD-1 mAb 15 nisu testirana u ovom testu. Rezultati za nekoliko humanizovanih antitela na PD-1, uključujuć i hPD-1 mAb 15, dati su u nastavku.
Primer 2
Humanizacija i dalja karakterizacija
[0413] Promenljivi domeni anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 su humanizovani, gde su antigeni epitopi su identifikovanim antitelima dalje deimunizovani da bi se generisali konačni humanizovani varijabilni domeni. Humanizacijom PD-1 mAb 1, PD-1 mAb 2 i PD-1 mAb 15 dat je jedan humanizovani VH domen i jedan humanizovani VL domen za svako antitelo označeno kao "hPD-1 mAb 1 VH1" i "hPD-1" mAb 1 VL1" "hPD-1 mAb 2 VH1" i "hPD-1 mAb 2 VL1" i "hPD-1 mAb 15 VH1" i "hPD-1 mAb 15 VL1". Humanizacija PD-1 mAb 7 dala je dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 7 VH1" i "hPD-1 mAb 7 VH2", i tri humanizovana VL domena ovde označena kao "hPD-1 mAb 1 VL1", "hPD-1 mAb 7 VL2" i "hPD-1 mAb 7 VL3". Humanizacija PD-1 mAb 9 je dala dva humanizovana VH domena, ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VH1" i "hPD-1 mAb 9 VH2", i dva humanizovana VL domena koja su ovde označena kao "hPD-1 mAb 9 VL1" i "hPD-1 mAb 1 VL2".
Tamo gde je generisano više humanizovanih promenljivih domena, humanizovani promenljivi domeni teškog i lakog lanca određenog anti-PD-1 antitelima (npr. PD-1 mAb 7) mogu se koristiti u bilo kojoj kombinaciji, a određene kombinacije humanizovanih lanaca se pozivaju na referencu na specifične VH/VL domene, na primer humanizovano antitelo koje sadrži hPD-1 mAb 7 VH1 i hPD-1 mAb 7 VL2 se posebno naziva "hPD-1 mAb 7 (1.2)". Humanizovana antitela pune dužine su generisana ili sa humanim IgG1 konstantnim regionom koji sadrži L234A/L235A supstitucije (IgG1 (AA)) ili humanim IgG4 konstantnim regionom koji sadrži S228P supstituciju (IgG4 (P)).
[0414] Teški lanci humanizovanih antitela pune dužine IgG1 konstruisani su na sledeć i način: C-kraj humanizovanog VH domena je spojen sa N-krajem humanog IgG1 konstantnog regiona koji ima varijantu CH2-CH3 domena (koja sadrži L234A/L235A (AA) supstitucije) i kojima nedostaje C-terminalni lizinski ostatak (SEK ID BR: 255):
[0415] U SEK ID BR: 255, aminokiselinski ostaci 1-98 odgovaraju IgG1 CH1 domenu (SEK ID BR: 10), aminokiselinski ostaci 99-113 odgovaraju IgG1 zglobovima (SEK ID BR: 32) i aminokiselinski ostaci 114-329 odgovaraju IgG1 CH2-CH3 domenu koji sadrži supstitucije L234A/L235A (podvučeno) (SEK ID BR: 5), ali im nedostaje C-terminalni lizinski ostatak.
[0416] Aminokiselinska sekvenca teškog lanca uzornog humanizovanog antitela ((hPD-1 mAb 7 (1.2)) koja ima konstantnu regiona teškog lanca IgG1 koja sadrži mutaciju L234A/L235A i kojoj nedostaje C-terminalni lizinski ostatak je (SEK ID BR: 265):
[0417] U SEK ID BR: 265, aminokiselinski ostaci 1-119 odgovaraju VH domenu hPD-1 mAb 7 VH1 (SEK ID BR: 147), aminokiselinski ostaci 120-217 odgovaraju IgG1 CH1 domenu (SEK ID BR: 10), ostaci 218-232 odgovaraju regiji zgloba IgG1 (SEK ID BR: 32), a ostaci 233-448 odgovaraju domenu IgG1 CH2-CH3 koji sadrži supstitucije L234A/L235A (podvučeno) (SEK ID BR: 5) ali mu nedostaje C-terminalni ostatak lizina.
[0418] Teški lanci humanizovanih antitela pune dužine IgG4 konstruisani su na sledeć i način: C-kraj humanizovanog VH domena je spojen sa N-krajem humanog IgG4 konstantnog regiona koji ima stabilizovano područje zgloba (sadrži
1
supstituciju S228P) i nedostaje mu C-terminalni lizinski ostatak (SEK ID BR: 256):
[0419] U SEK ID BR: 256, aminokiselinski ostaci 1-98 odgovaraju IgG4 CH1 domenu (SEK ID BR: 254), aminokiselinski ostaci 99-110 odgovaraju stabilizovanom zglobnom regionu IgG4 koji sadrži supstitucije S228P (podvučeno) (SEK ID BR: 13) i aminokiselinski ostaci 111-326 odgovaraju IgG4 CH2-CH3 domenu (SEK ID BR: 4) ali nemaju C-terminalni lizinski ostatak.
[0420] Aminokiselinska sekvenca teškog lanca uzornog humanizovanog antitela ((hPD-1 mAb 7 (1.2)) koja ima konstantnu regiju teškog lanca IgG4 koja sadrži stabilizovanu zglobnu regiju koja ima mutaciju S228P i kojoj nedostaje C-terminalni lizin ostatak je (SEK ID BR: 266):
[0421] U SEK ID BR: 266, aminokiselinski ostaci 1-119 odgovaraju VH domenu hPD-1 mAb 7 VH1 (SEK ID BR: 147), aminokiselinski ostaci 120-217 odgovaraju IgG4 CH1 domenu (SEK ID BR: 254), aminokiselinski ostaci 218-229 odgovaraju stabilizovanom zglobnom regionu IgG4 koji sadrži supstitucije S228P (podvučeno) (SEK ID BR: 13) i aminokiselinski ostaci 230-445 odgovaraju domenu IgG4 CH2-CH3 (SEK ID BR: 4), ali bez C-terminalnog ostatka lizina. Laki lanci humanizovanih antitela pune dužine konstruisani su na sledeć i način: C-kraj humanizovanog VL domena je fuzionisan sa N-završetkom kapa regiona humanog lakog lanca (SEK ID BR: 8). Isti laki lanac je uparen sa teškim lancima IgG1 (AA) i IgG4 (P).
[0423] Aminokiselinska sekvenca lakog lanca primernog humanizovanog antitela na PD-1 (hPD-1 mAb 7 (1.2)) koja ima konstantni region kappa je (SEK ID BR: 264):
[0424] U SEK ID BR: 264, aminokiselinski ostaci 1-111 odgovaraju VL domenu hPD-1 mAb 7 VL2 (SEK ID BR: 153), a aminokiselinski ostaci 112-218 odgovaraju konstanti kappa lakog lanca region (SEK ID BR: 8). [0425] Anti-PD-1 antitela koja imaju alternativne konstantne regione, na primer projektovane Fc regione, koji se lako stvaraju uključivanjem različitih konstantnih regiona i/ili uvođenjem jedne ili više aminokiselinskih supstitucija, dodavanjem ili delecijom. Na primer, gde je poželjno bispecifično antitelo, CH2-CH3 domeni koji nose dugmad i rupe se koriste da bi se olakšala heterodimerizacija. Himerna anti-PD-1 antitela koja sadrže mišje varijabilne domene i humane konstantne regione se generišu kao što je napred opisano.
[0426] Humanizovana antitela (IgG1 (AA) i/ili IgG4 (P)) su testirana na vezujuće i blokirajuće aktivnosti kao što je napred opisano. Vezivanje humanizovanih antitela za humani PD-1 (shPD-I His i shPD-1 hFc) i PD-1 majmuna
2
cinomolgus (shPD-L1 hFc) bilo je uporedivo sa onim kod odgovarajućih mišjih antitela. Osim toga, humanizovana antitela su zadržala sposobnost da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 za humani PD-1 u ELISA testu.
[0427] Kinetika vezivanja mišjih antitela PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9, PD-1 mAb 15, humanizovanih antitela hPD-1 mAb 2, hPD-1 mAb 7(1.), hPD-1 mAb 9 (1.1), hPD-1 mAb 15 i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B ispitivani su pomoć u Biacore analize. Antitela na PD-1 su uhva ć ena na imobilizovanom proteinu A i inkubirana su sa rastvorljivim humanim PD-1 (shPD-1-His) označenim His oznakom ili rastvorljivom fuzijom humanog cinomolgusa majmuna PD-1 Fc (scino PD-1 hFc) da se ukloni deo Fc, a kinetika vezivanja je određena Biacore analizom. U dodatnim studijama, antitela na PD-1 hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA), hPD -1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P), PD-1 mAb A IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG4 (P), PD-1 mAb B IgG1 (AA) i PD-1 mAb B IgG4 ( P), su uhvaćeni na imobilisanom F(ab)2 kozjem anti-humanom Fc i kinetika vezivanja je određena Biacore analizom kao što je napred opisano. Izračunati ka, kd i KD iz ovih studija prikazani su u tabeli:
[0428] Rezultati pokazuju da PD-1 mAb 7 i humanizovani hPD-1 mAb 7 (1.2) pokazuju bolju kinetiku vezivanja u odnosu na referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B. PD -1 mAb 2 i hPD-1 mAb 2 pokazuju kinetiku vezivanja u oko dva puta od referentnih antitela na PD-1, dok PD-1 mAb 9, hPD-1 mAb 9 (1.1), PD-1 mAb 15 i hPD-1 mAb 15 pokazuju kinetiku vezivanja unutar 2-6 puta od referentnih anti-PD-1 antitela.
[0429] Ispitivana je tkivna specifičnost anti-humanog antitela na PD-1 PD-1 mAb 7. Normalno tkivo je kontaktirano sa PD-1 mAb 7 ili sa kontrolom izotipa (0,313 mg/mL) i vizualizovan je stepen bojenja. Blok se koristi za endogeni blok enzima za smanjenje nespecifičnog bojenja u tkivu debelog creva. Kao što je prikazano na slici 10A, paneli i-xii, PD-1 mAb 7 i kontrola izotipa nisu uspeli da obeleže ćelije normalnog debelog creva, jetre, pluća, pankreasa, bubrega i srčanog tkiva. Osim toga, PD-1 mAb 7 i kontrola izotipa nisu uspeli da oboje normalnu kožu (slika 10B, paneli i-ii). Nasuprot tome, otkriveno je da PD-1 mAb 7 snažno obeležava limfocite prisutne u normalnom tkivu krajnika i PDCD1 transficirane NSO ć elije koje eksprimiraju PD-1 (slika 10B, paneli iii i v), dok ni kontrola izotipa nije uspela da obeleži (slika 10B, paneli iv i vi). Rezultati prikazani na slikama 10A-10B stoga ukazuju na to da je PD-1 mAb 7 sposobno za specifično vezivanje za limfocite ić elije koje eksprimiraju PD-1.
[0430] Profili zasić enja vezivanja hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9(1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9(1.1) IgG4 (P), hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA) i referentni anti-PD. Ispitano je -1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B. Ukratko, svako od antitela na PD-1, PD-1 mAb 1-15 ili referentna antitela na PD-1 (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) je pomešano sa ć elijama NSO koje eksprimiraju humani PD -1 (∼ 250.000 ćelija/bunariću) u puferu za blokiranje (FACS 10% humanog serumskog albumina). Za ove studije, anti-PD-1 antitela su korišć ena na 50, 12,5, 3,13, 2,0 x 10 -1, 4,9 x 10-2, 1,2 x 10-2, 3,0 x 10-3, 1,9 x 10-4, 7,6 x 10-4, 4,75 x 10-5 ili 1,19 x 10-5 mg/test (četvorostruka serijska razblaženja). Količina antitela koja se vezuje za površinu NSOć elija određena je pomo ć u kozjeg anti-humanog-APC sekundarnog antitela pomo ć u FACS analize. Reprezentativne krive zasićenja su prikazane na slici 11. Određene su vrednosti EC50 i EC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ ) iz četiri odvojena eksperimenta su date u tabeli 8.
[0431] Studije zasić enja vezivanja pokazuju da humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 imaju povoljan profil za vezivanje zać elijsku površinu PD-1. Konkretno, humanizovani PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7 (1.1) i hPD-1 mAb 7 (1.2) koji imaju ili IgG1 (AA) ili IgG4 (P) Fc region) imaju najniže vrednosti EC90 od svih ispitanih antitela.
[0432] Da bi se dodatno okarakterisala humanizovana antitela na PD-1 hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG1, ( AA), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P) i hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA), ispitana je njihova sposobnost blokiranja vezivanja humanog PD-L1 (shPD-L1) i humanog PD-L2 (shPD-L2) za PD-1 izraženu na površini ć elija NSO. Ovi testovi su u suštini izvedeni kao što je napred opisano. Reprezentativne krive za inhibiciju vezivanja sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 izražene na NSO ć elijama prikazane su na slikama 12A i 12B, respektivno. Određene su vrednosti IC50 i IC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) iz tri odvojena eksperimenta date su u Tabeli 9.
4
(nastavak)
[0433] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da su humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 sposobne da inhibiraju vezivanje sPD-L1 i sPD -L2 do PD-1 na površini ć elije. Konkretno, humanizovani PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7 (1.1) i hPD-1 mAb 7 (1.2)) imaju najniže vrednosti IC90 od svih ispitivanih antitela.
Primer 3
Blokada kontrolnog punkta PD-1/PD-L1 humanizovanim anti-humanim PD-1 antitelima
[0434] Sposobnost hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1,1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG1, (AA), hPD-1 mAb 7 (1,2 ) IgG4 (P), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA), hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P), hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA) i referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B da antagoniziraju osovinu PD-1/PD-L1 (tj. blokiraju interakciju PD-1/PD-L1 i spreče regulaciju odgovora T-ć elija) Jurkat-luc-NFAT/CHO-PD-L1 reporterski test luciferaze. Ukratko, CHO ćelije koje eksprimiraju PD-L1 (CHO/PD-L1) su postavljene na 40.000/bunariću u 100 mL medijuma za kulturu (RPMI 10 % FBS 100 mg/mL higromycine B 100 mg/mL G418) i inkubirane preko noći. Sledeć eg dana medijum je uklonjen i MNFAT-luc2/PD-1 Jurkat ć elije (Promega) na 50.000 ć elija/bunariću u 40 mL u puferu za ispitivanje (RPMI 2 % FBS), i anti-PD-1 antitela PD-1 mAb 1-15, ili referentna anti-PD-1 antitela (PD-1 mAb A i PD-1 mAb B) (0-25 mg/mL; osam 2,5 puta serijskih razblaženja u puferu za ispitivanje) su dodata u svaki bunar i inkubirana 6 sati na 37 °C, a zatim 5-10 minuta inkubirana na sobnoj temperaturi. 80 mL BioGlo supstrata (Promega) je zatim dodato u svaki bunar i ploča je inkubirana dodatnih 5-10 minuta na sobnoj temperaturi. Luminiscencija je izmerena u Victor Plate Reader-u. Reprezentativne krive zasićenja su prikazane na slici 13. Određene su vrednosti EC50 i EC90, a srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) iz četiri odvojena eksperimenta su date u tabeli 10.
(nastavak)
[0435] Studije signalizacije reportera pokazuju da humanizovane verzije PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 mogu blokirati osu PD-1/PD-L1 i sprečiti smanjenje odgovora T-ćelija. Konkretno, humanizovana PD-1 mAb 7 (hPD-1 mAb 7(1.1) i hPD-1 mAb 7(1.2) koja imaju ili IgG1 (AA) ili IgG4 (P) Fc region) imaju najniži EC50/EC90 vrednosti.
Primer 4
Funkcionalna aktivnost anti-humanih PD-1 antitela
[0436] Staphilococcus aureus enterotoksin tipa B (SEB) je mikrobni superantigen sposoban da aktivira veliki deo T-ć elija (5-30 %) kod davalaca koji reaguju na SEB. SEB se veže za MHC II izvan mesta za vezivanje peptida i stoga je zavisan od MHC II, ali neograničeno i posreduje TCR. SEB-stimulacija T-ć elija dovodi do proliferacije oligoklonalnih T-ć elija i proizvodnje citokina (mada se može uočiti donorska varijabilnost i neki donatori ne ć e reagovati). U roku od 48 sati od SEB-stimulacije, PMBC povećavaju regulaciju PD-1 i LAG-3 sa daljim povećanjem, vidi 5. dan, postsekundarna kultura u ploči sa 96 bunarčića sa SEB-stimulacijom. Poboljšanje imunoloških proteina kontrolne tačke PD-1 i LAG-3 nakon SEB-stimulacije PBMC-a ograničava oslobađanje citokina nakon restimulacije. Ispitana je sposobnost samih antitela na PD-1 i u kombinaciji sa antitelima na LAG-3 da poveć aju oslobađanje citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka.
[0437] Ukratko, PBMC su prečišć eni pomo ć u Ficoll-Pakue Plus (GE Healthcare) metoda centrifugiranja sa gradijentom gustine prema uputstvima proizvođača iz pune krvi dobijene uz pristanak informisanih zdravih davalaca (Biological Specialty Corporation), a T ć elije su zatim prečiš ć ene koriš ć enjem Dinabeads® Untouched Human T Cells Kit (Life Technologies) prema uputstvima proizvođača. Prečišć eni PBMC su kultivisani u RPMI-medijumu 10 % toplotno inaktiviranom FBS-u 1% penicilina/streptomicina u T-25 posudama u rasutom stanju 2-3 dana sami ili sa SEB (Sigma-Aldrich) pri 0,1 ng/mL (primarna stimulacija). Na kraju prvog kruga SEB-stimulacije, PBMCs su dva puta isprani PBS-om i odmah postavljeni u ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarića u koncentraciji od 1-5 x 10<5>ćelija/bunariću samo u medijumu, medijumu sa kontrolom ili anti-PD-1 antitelom, medijum sa SEB na 0,1 ng/mL (sekundarna stimulacija) i bez antitela, ili medijum sa SEB i kontrolnim IgG ili anti-PD-1 antitelom /- anti-LAG-3 mAb, i kultivisana dodatna 2-3 dana. Na kraju druge stimulacije, supernatanti su sakupljeni za merenje sekrecije citokina korišć enjem humanih DuoSet ELISA setova za IPNg, TNFa, IL-10 i IL-4 (R&D sistemi) prema uputstvima proizvođača.
[0438] Sposobnost PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 samih ili u kombinaciji sa jedinstvenim anti-LAG-3 antitelom LAG-3 mAb 1 da ispitivano je pojačavanje oslobađanja citokina inhibicijom kontrolnih tačaka. Ove studije su takođe uključivale jedno ili više od sledeć ih referentnih antitela na PD-1: PD-1 mAb A; PD-1 mAb B; i LAG-3 mAb A, samih ili u kombinaciji. Slika 14 prikazuje profile sekrecije IPNg iz SEB-stimulisanih (0,1 ng/mL) PBMC-a od reprezentativnog davaoca odgovora (D: 38941), tretiranih sa: nema antitela; antitelo za kontrolu izotipa; PD-1 mAb 7 i/ili LAG-3 mAb 7; PD-1 mAb 9 i/ili LAG-3 mAb 1; PD-1 mAb 15 i/ili LAG-3 mAb 1; PD-1 mAb 2 i/ili LAG-3 mAb 1; ili referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb B i/ili LAG-3 mAb A (antitela su korišć ena pri 10 mg/mL).
[0439] U dodatnim studijama, sposobnost humanizovanih verzija PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 (koja sadrži humani IgG1 (AA) ili humani IgG4 ( P) Fc region) kao i referentna anti-PD-1 antitela, ispitano je PD-1 mAb A i PD-1 mAb B za poveć anje oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. Za ove studije, antitela su koriš ć ena u količinama 0,625, 2,5 i 10 mg/mL. Slike 15A-15B prikazuju IPNγ (slika 15A) i TNFa (slika 15B), profile sekrecije iz SEB-stimulisanih (0,2 ng/mL) PBMC od reprezentativnog davaoca odgovora (D: 57709), tretiranih bez antitela ili nekog od sledeć a antitela: kontrola izotipa; hPD-1 mAb 2 IgG1 (AA); hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA); hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG1 (AA); hPD-1 mAb 9 (1.1) IgG4 (P); hPD-1 mAb 15 IgG1 (AA); ili referentna anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG4 (P), PD-1 mAb B IgG1 (AA), PD-1 mAb B IgG4 (P). Ukupni pg/mg IPNγ u uzorcima tretiranim sa SEB+Ab određeni su za uzorke tretirane anti-PD-1 antitelima na 0,625, 2,5 i 10 mg/mL i srednju vrednost uzorka (SM) i standardnu devijaciju (SD σ ) od 3 različita davaoca odgovora (osim gde je navedeno) prikazani su u Tabeli 11. Odnos IFNy izlučenog u uzorku tretiranom humanizovanim verzijama PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD -1 mAb 15 (koje sadrži humani IgG1 (AA) ili humani IgG4 (P) Fc region) preko referentnih anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A i PD-1 mAb B (tj. Humanizovani anti-PD- 1/PD-1 mAb A i humanizovano anti-PD-1/PD-1 mAb B) prikazani su u Tabeli 12, odnosno Tabeli 13.
Ĩnastavak)
[0440] Rezultati ovih studija pokazuju da su PD-1 antitela PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 i PD-1 mAb 15 dramatično poveć ala IPN γ (slike 14 i 15A i tabele 11-13), i proizvodnja TNFa (Slika 15B) iz SEB-stimulisanih PBMC posle restimulacije. Pored toga, kombinacija anti-PD-1 antitela sa anti-LAG-3 antitelima rezultirala je daljim poveć anjem oslobađanja citokina ( slika 14) iz PBMC-a stimulisanih SEB-om nakon restimulacije. Konkretno, kombinacija PD-1 mAb 2, PD-1 mAb 7, PD-1 mAb 9 ili PD-1 mAb 15 sa jedinstvenim anti-LAG-3 antitelom LAG-3 mAb 1 obezbedila je najveće poboljšanje.
Primer 5
PD-1 x LAG-3 studije vezivanja bispecifičnih molekula
[0441] Generisan je određeni broj PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula, uključujuć i dijatela koja sadrže Fc regiju koja sadrže tri, četiri i pet lanaca i bispecifično antitelo. Četiri dijatela koja imaju četiri lanca i koja se sastoje od E/K-zavojnica domena koji promovišu heterodimere su generisana i dobila su oznake "DART A", "DART B", "DART C i" DART I. "Četiri dijatela koja imaju četiri lanca i sadrže CH1 /CL domene su generisana i dobili su oznake "DART D", "DART E", "DART J" i "DART 1." Dva dijatela koja imaju pet lanaca i sastoje se od E/K-zavojnica domena koji promovišu heterodemer i CH1/CL domeni su generisani i dobili su oznake "DART F" i "DART G." Jedno dijatelo koje ima tri lanca i sastoji se od E/K-zavojnice domena koji promovišu heterodemer je generisano i dobilo je oznaku "DART H." Jedno bispecifično antitelo koje ima četiri lanca jr generisano i dobilo je oznaku "BSAB A." Struktura i aminokiselinske sekvence ovih PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula date su gore i sumirane su u Tabeli 14 ispod.
1
11 (nastavak)
[0442] Dodatni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli koji sadrže alternativna PD-1 i/ili LAG-3 epitop-vezujuć a mesta mogu se lako generisati uključivanjem različitih VH i VL domena. Slično, molekuli koji vezuju drugi antigen osim LAG-3 mogu se generisati uključivanjem VH i VL koji imaju željenu specifičnost.
[0443] Profili zasić enja vezivanja PD-1 x LAG-3 bispecifičnih konstrukcija dijatela: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I i DART 1; antitela na PD-1: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P); i antitela na LAG-3: hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P), LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG1 (AA) i LAG-3 mAb A IgG1 (AA) su ispitani u suštini kao što je gore opisano. PD-1 x LAG-3 konstrukti bispecifičnog dijatela su testirani na vezivanje i za PD-1 i za LAG-3, dok su anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela testirana samo na vezivanje za njihove odgovarajuće antigene. Za ove studije korišć ene su NSO ć elije koje eksprimiraju PD-1 ili LAG-3. Korišć ena su antitela i antitela (170,0-0,013 mM ili 85,0-0,0021 mM (četvorostruka serijska razblaženja). Vrednosti EC50 i EC90 su određene i predstavljene su u Tabelama 15-16. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) obezbeđuju se tamo gde su izvedena 2 ili više zasebnih eksperimenata.
1 2
(nastavak)
[0444] Studije zasić enja vezivanja pokazuju da PD-1 kxLAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela zadržavaju vezivanje za PD-1 i imaju profile vezivanja koji su slični profilima vezivanja roditeljskih anti-PD-1 antitela. Slično, konstrukti bispecifičnog dijatela PD-1 x LAG-3 zadržavaju vezivanje za LAG-3 i, sa izuzetkom DART 1, imaju profile vezivanja koji su slični profilima vezivanja roditeljskih anti-LAG-3 antitela.
Primer 6
Studije inhibicije bispecifičnih molekula PD-1 x LAG-3
[0445] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART 1 i BSAB A; i antitela na PD-1: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P), da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 (shPD-L1) i humanog PD-L2 (shPD-L2) za PD-1 eksprimiran na površini NSO ćelija, ispitan je u suštini kao što je gore opisano. Dijatela i antitela su korišćena na 33,75-0,002 mM ili 107,5-0,0001 mM (četvorostruka serijska razblaženja).
[0446] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i predstavljene su u Tabeli 17. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date gde su izvedena 2 ili više zasebnih eksperimenata.
1
[0447] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da konstrukti bispecifičnog dijatela PD-1 x LAG-3 zadržavaju sposobnost da inhibiraju vezivanje sPD-L1 i sPD-L2 za PD-1 na površini ćelije.
[0448] Pored toga, sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART 1 i BSAB A; i anti-LAG-3 antitela: hLAG-3 mAb 1(1.4) IgG4 (P), LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1(1.4) IgG1 (AA) i LAG-3 mAb je ispitivana IgG1 (AA) za blokiranje vezivanja humanog LAG-3 za nativnu MHC klasu II na površini Daudijevih ć elija. Ukratko, svaki PD-1 x LAG-3 bispecifičan molekul i kontrolno anti-LAG-3 antitelo pomešani su sa biotiniliranim rastvorljivim humanim LAG-3-Fc fuzionim proteinom (shLAG-3), (pri 0,5 mg/ml) i bili su odvojeno inkubirani sa MHC II-pozitivnim Daudi ć elijama (2,5 x 106 ć elija). Količina LAG-3 koja se vezuje za površinu Daudi ć elija određena je pomo ć u PE-konjugovanog sekundarnog antitela na Streptavidin pomo ć u FACS analize. Dijatela i antitela su korišć ena na 27,5-0,026 mM (dva puta serijska razblaženja) ili 107,5-0,0001 mM (četvorostruka serijska razblaženja), ili 35-0,002 mM (četvorostruka serijska razblaženja).
[0449] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i predstavljene su u Tabeli 18. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date gde su izvedena 2 ili više odvojenih eksperimenata.
1 4
(nastavak)
[0450] Studije inhibicije vezivanja liganda pokazuju da PD-1 k LAG-3 bispecifična konstrukcija dijatela zadržavaju sposobnost da inhibiraju vezivanje fuzionisanog proteina shLAG-3-Fc za MHC klasu II na površini ć elije. Sa izuzetkom DART 1, bis-specifični molekuli PD-1 k LAG-3 imaju slične profile inhibicije kao i roditeljska anti-LAG-3 antitela.
Primer 7
Blokada kontrolne tačke PD-1/PD-L1 pomoć u PD-1 k bispecifičnih molekula LAG-3
[0451] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H, DART I, DART 1 i BSAB A; i antitela na PD-1: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG1 (AA), PD-1 mAb A IgG1 (AA) i PD-1 mAb A IgG4 (P), za antagonizaciju osi PD-1/PD-L1 (tj. blokiranje interakcije PD-1/PD-L1 i sprečavanje smanjenja odgovora T-ć elija) ispitivan je u Jurkat-luc2-NFAT/ CHO-PD-L1 reporter test luciferaze (koriš ć enjem CHO/PD-L1 ć elija i MNFAT-luc2/PD-1 Jurkat ć elija) u suštini kao što je gore opisano. Dijatela i antitela su koriš ć ena na 100-0.0065 mM (četvorostruka serijska razblaženja) ili 100-0.0013 mM (petostruka serijska razblaženja).
[0452] Vrednosti IC50 i IC90 su određene i prikazane su u Tabeli 19. Srednja vrednost uzorka (SM) i standardna devijacija (SD σ) su date gde su izvedena 2 ili više zasebnih eksperimenata.
1
(nastavak)
[0453] Reporterske signalne studije pokazuju da već ina konstrukata bispecifičnog dijatela PD-1 x LAG-3 zadržava sposobnost inhibiranja vezivanja sPD-L1 za PD-1 na površini ć elije. Četvorovalentni PD-1 x LAG-3 bispecifični konstrukti dijatela, DART A, DART B, DART D, DART-E, DART F, DART G i DART I bili su najjači inhibitori u ovom testu. Slični rezultati su dobijeni za nekoliko ovih bispecifičnih konstrukata ispitanih u reporterskom testu PD-L2.
Primer 8
Funkcionalna aktivnost PD-1 x LEG-3 bispecifičnih molekula
[0454] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula da poveć aju oslobađanje citokina inhibicijom kontrolnih tačaka ispitana je u PBMC-ima stimulisanim SEB-om nakon restimulacije, u suštini kao što je gore opisano, osim gde je navedeno.
[0455] U početnim studijama sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART D, DART E, DART F, DART G, DART H; i ispitana su anti-PD-1 i anti-LAG antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), sami ili u kombinaciji za poboljšanje oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli i antitela su korišćeni u ukupnoj koncentraciji od 3,125, 12,5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani sa 0,2 ng/mL SEB (prethodne studije su koristile 0,1 ng/mL ). Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je obezbeđeno u polovini ukupne koncentracije (tj. 1,563, 6,25 ili 25 nM). Slike 16A i 16B prikazuju profile sekrecije IPNg iz PBMC-a stimulisanih sa SEB od dva reprezentativna donora odgovora, D: 35644 i D: 59697, respektivno.
[0456] Kao što je primećeno, ne reaguju svi donatori na SEB na 0,1 ili 0,2 ng/mL. Da bi se pojačala SEB stimulacija PBMC -ova od već eg broja donatora, SEB je koriš ć en u visokoj koncentraciji od 85 ng/mL, ili srednjoj koncentraciji od 0,5 ng/mL u dodatnim studijama. Pri ovim koncentracijama, stimulacija SEB -a je snažnija kod više donora, iako se još uvek može videti varijabilnost donora prema donoru.
[0457] U jednoj takvoj studiji sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula: DART A, DART B; anti-PD-1 antitelo: hPD-1 mAb 7(1.2) IgG4(P); anti-LAG-3 antitelo: LAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P); i ispitivana je kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), radi poveć anja oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima su korišć eni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli i antitela u koncentraciji od 0,019, 0,078, 0,3125, 1,25, 5 ili 20 nM i PBMC su stimulisani sa 85 ng/mL SEB. Za ovaj test gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je dato u navedenoj koncentraciji, pa je ukupna koncentracija antitela dvostruko već a od koncentracije koja se koristi za svako antitelo (tj. 0,038, 0,156, 0,625, 2,5, 10 ili 40 nM). Slike 17A i 17B prikazuju profile sekrecije IPNg iz PBMC-a stimulisanih sa SEB od dva reprezentativna donora, D: 55515 i D: 54024, respektivno.
[0458] U drugoj studiji, PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli: DART A, DART B, DART C; antitelo na PD-1: hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); anti-LAG-3 antitelo: LAG-3 mAb 1(1.4) IgG4(P); i ispitivana je kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), radi poveć anja oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima su koriš ć eni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli i antitela u ukupnoj koncentraciji od 0.048, 0.195, 0.78, 3.125, 12.5 ili 50 nM i PBMC su stimulisani sa 0.5 ng/mL SEB. Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo se daje na polovini ukupne koncentracije (tj. 0,024, 0,098, 0,39, 1,563, 6,25 ili 25 nM). Slike 18A i 18B prikazuju profile sekrecije IPNg iz PBMC stimulisanih SEB od dva reprezentativna donora, D: 20990 i D: 54947, respektivno).
[0459] U daljoj studiji, ispitivano je oslobađanje citokina IL-2. Konkretno, PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli: DART D, DART H; antitela na PD-1: PD-1 mAb A IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P); anti- LAG-3 antitela: LAG-3 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb 1(1.4) IgG4(P); i kombinacija: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), i hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) i LAG-3 mAb 1 (1,4) IgG4 (P ), da poboljša oslobađanje IL-2 ispitana je inhibicija preko kontrolne tačke. U ovim testovima PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli i antitela su korišćeni u ukupnoj koncentraciji od 3,125, 12,5 ili 50 nM, a PBMC su stimulisani visokom koncentracijom SEB od 85 ng/mL. Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo se daje na polovini ukupne koncentracije (tj. 1,563, 6,25 ili 25 nM). Slika 19 prikazuje profil sekrecije IL-2 iz PBMC-a stimuliranih sa SEB od reprezentativnog donora (D: 54024).
[0460] U dodatnim studijama PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli: DART B i DART I; anti-PD-1 antitela: PD-1 mAb A IgG4 (P) i hPD-1 mAb 7(1.2) IgG4(P); anti-LAG-3 antitela: LAG-3 mAb A IgG4 (P), hLAG-3 mAb 1 (1.4) IgG4 (P) i hLAG-3 mAb
1
6 (1.1) IgG4 (P); i kombinacije: PD-1 mAb A IgG4 (P) i LAG-3 mAb A IgG4 (P), hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) i hLAG-3 mAb 1 (1,4) IgG4 (P) , i ispitivani su hPD-1 mAb 7(1.2) IgG4(P) i hLAG-3 mAb 6(1.1) IgG4 (P) radi poboljšanja oslobađanja citokina putem inhibicije kontrolnih tačaka. U ovim testovima su korišć eni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli i antitela u koncentraciji od 0.0061, 0.024, 0.09, 0.39, 1.56, 6.25 ili 25 nM i PBMC su stimulisani sa 0.5 ng/mL SEB. Za ove studije, gde se koristi kombinacija antitela, svako antitelo je dato u navedenoj koncentraciji, pa je ukupna koncentracija antitela dvostruko već a od koncentracije koja se koristi za svako antitelo (tj. 0,0122, 0,048, 0,18, 0,78, 3,12, 12,5 ili 50 nM). Slika 20 prikazuje profile sekrecije IPNg iz PBMC-a stimuliranih sa SEB od reprezentativnog donora D: 56041).
[0461] Sposobnost PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula DART I; kombinacija anti-PD-1 antitela PD-1 mAb A IgG4 i antitela na LAG-3 antitela LAG-3 mAb A IgG4 (P); i antitelo sa negativnom kontrolom za pojačavanje antigenspecifičnih odgovora T ć elija ispitano je koriš ć enjem testa opoziva tetanusa-toksoida. Konkretno, odgovor antigenspecifične pojačane sekrecije citokina je meren korišć enjem tetanus toksoida kao antigena za opoziv u sistemu za ispitivanje kokulture. Ukratko, CD4 memorijske T ć elije (0,5 - 1,0 x 10<5>ć elija/udubljenje) izolovane su pomo ć u izolacionih setova za negativnu selekciju (Miltenii Biotec, San Diego, CA i Invitrogen, Carlsbad, CA) iz periferne krvi čoveka i kultivisane 5-7 dana sa ozračenom monocitu (0,01 – 0,05 x 10<5>ć elija/udubljenje, 3500 rads) od istog davaoca u prisustvu ili odsustvu 5 mg/mL opoziva antigen tetanus toksoida (TTd) i razblaženja (počevši od 25 nM) DART I, PD -1 mAb IgG4 LAG-3 mAb A IgG4 (P) ili kontrola izotipa. U paralelnim pločama, proliferacija je merena kroz inkorporaciju tricijanog timidina i IL-2, a IFNg je meren korišćenjem ELISA (R&D sistemi, Mineapolis, MN) 5-7 dana.
Slike 21A-D prikazuju profile sekrecije IFNg (Slike 21A, 21C) i IL-2 (Slika 21B, 21D) 7. dana, od dva reprezentativna donora (D50702 i D54267).
[0462] Rezultati ovih studija pokazuju da su bispecifični molekuli PD-1 x LAG-3 dramatično poveć ali IFNg ( slike 16A-16B, 17A-17B, 18A-18B, 20) i IL-2 (slika 19) iz PBMC-i stimulirani SEB-om nakon restimulacije. Osim toga, PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli dramatično su pove ć ali proizvodnju IFNg (slike 21A i 21C) iz CD4 memorijskih T ć elija stimulisanih tetanusnim toksoidom. Konkretno, tetravalentni PD-1 x LAG-3 bispecifični molekuli su obezbedili veće poboljšanje od kombinacije anti-PD-1 antitela sa anti-LAG-3 antitelima.
Primer 9
Farmakokinetika PD-1 x LAG-3 bispecifičnih molekula
[0463] Farmakokinetika reprezentativnog PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula, DART I i reprezentativnog anti-PD-1 antitela, PD-1 mAb A, ispitana je kod Cinomolgus majmuna. Ukratko, dva majmuna cinomolgus (jedan mužjak i jedna ženka) infuzirani su sa jednom dozom DART I (5 mg/kg) ili PD-1 mAb A (10 mg/kg), a serumska koncentracija molekula je prać ena tokom vremena koristeći sendvič ELISA test. Ukratko, maxisorb ploče za ispitivanje sa 96 bunarčića su obložene rastvorljivim humanim PD-1 (shPD-1), blokirane albuminom goveđeg seruma, isprane i inkubirane sa kalibracionim standardima, standardima za kontrolu kvaliteta i razblaženim uzorcima seruma. Količina uhvaćenog DART I i PD-1 mAb A je procenjena sekvencijalnim dodavanjem kozjeg anti-humanog IgG Fc-biotin sekundarnog i streptavidin-hren peroksidaze (SA-HRP). HRP aktivnost je detektovana korišć enjem TMB supstrata. Svi uzorci su analizirani čitačem mikroploča (SpectraMax M2e, Molecular Device, Sunnivale, CA), a OD signali proizvedeni standardnim kalibratorima korišć eni su u četvoroparametarskom logističkom modelu pomo ć u softvera SoftMax Pro (verzija 5.4, Molecular Devices). Koncentracije PD-1 mAb A ili DART I određene su interpolacijom podataka o OD signalu uzoraka sa jednačinom koja opisuje standardnu krivu. Donja granica kvantifikacije (LLOQ) za ovaj test procenjena je na 9,775 ng/mL. Slika 22 prikazuje koncentraciju seruma tokom vremena, linije repredstavlja srednju vrednost i mužjaka (ispunjeni simboli) i ženki (otvoreni simboli) majmuna koji su infuzirani sa DART I (puna linija, trouglovi) ili PD-1 mAb A (isprekidana linija, krugovi). Ovi podaci pokazuju da je farmakokinetika PD-1 x LAG-3 bispecifičnog molekula uporediva sa farmakokinetikom anti-PD-1 antitela kod cinomolgus majmuna.
Primer 10
Toksikološka studija antitela na PD-1 i PD-1 x LEG-3 bispecifičnih molekula
[0465] Bezbednosni profil reprezentativnog reprezentativnog anti-PDl antitela, hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) i reprezentativnog PD1 x LAG3 bispecifičnog molekula, DART I, procenjen je u ne-GLP (dobro Laboratory Practice) studija doziranja kod majmuna cinomolgus.
[0466] U ovoj studiji je procenjena potencijalna toksičnost i toksikokinetika anti-PD-1 antitela (hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)), kada se primenjuje kroz više intravenskih infuzija. Pored toga, procenjena je i potencijalna toksičnost i farmakokinetika PD-1 x LAG-3 DART molekula (DART I), kada se daje jednom intravenskom infuzijom. Dizajn studije prikazan je u Tabeli 20.
1
[0467] U ovoj studiji su ocenjeni sledeć i parametri i krajnje tačke: klinički znaci, telesna težina, potrošnja hrane, telesna temperatura, parametri kliničke patologije (hematologija, koagulacija i klinička hemija), bioanaliza i toksikokinetički parametri, antitela nasuprot analiziranim lekovima, protočna citometrija, citokini, nalazi velike obdukcije, težina organa i histopatološki pregledi.
[0468] Sve životinje su preživele do zakazane eutanazije 18. ili 22. dana ili otpuštanja iz ispitivanja 29. dana. Za hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) nije bilo promena u kliničkim znacima vezanim za proizvod, potrošnju hrane, telesnu težinu, telesnu temperaturu, hematologiju, koagulaciju ili kliničko-hemijske parametre, ili grube nalaze nekropsije. Na dan 18 i 22, poveć anje težine slezine i dozno zavisni blagi do umereni limfohistiocitni infiltrat crvene pulpe bili su evidentni kod životinja koje su primale hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) u dozi od 1 ili 100 mg/kg. U poređenju sa okolnim limfocitima, limfohistiocitne ć elije su imale bledu citoplazmu i nepravilna jezgra. Retke mitotičke figure su bile evidentne. Infiltrat je bio mikroskopski korelat za povećanu težinu slezine.
[0469] Profili serumske koncentracije-vreme za životinje kojima je dat hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) pokazuju profil očekivan za antitelo u ovoj vrsti, uz nekoliko izuzetaka. Nagibi krivih nakon treć e doze opali su oštrije nego nakon prve doze za dve životinje u grupi sa dozom od 1 mg/kg i dve životinje u grupi sa dozom od 100 mg/kg, što ukazuje na moguć u pojavu antitela na lekove (ADA) u kasnijim ciklusima. Analiza je pokazala da je 2/4 životinja razvilo ADA u grupi od 1 mg/kg, a 1/4 životinja razvilo je ADA u grupi od 100 mg/kg.
[0470] U zaključku, primena hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) intravenoznom infuzijom jednom nedeljno tokom 3 nedelje (1., 8. i 15. dan) dobro se podnosila kod majmuna cinomolgus na nivoima 1 i 100 mg/kg. Blago do umereno limfohistiocitni ć elijski infiltrat crvene pulpe slezene zavisan od doze bio je prisutan pri 1 i 100 mg/kg hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P).
[0471] Za DART I nije bilo promena kliničkih znakova, unosa hrane, telesne težine, telesne temperature, hematologije ili parametara koagulacije povezanih sa testnim člankom. Promene u parametrima kliničke hemije povezane sa DART I uključivale su nepoželjna, prolazna povišenja aspartat aminotransferaze (AST) i laktat dehidrogenaze (LDH) 2. dana. Prosečna promena AST bila je 3,2 x kontrolne životinje tretirane nosačem i 7,8 x nivo prethodnog ispitivanja, sa nivoima iznad kontrolnog referentnog opsega 2. Prosečna promena LDH bila je 2,5 x kontrolnih životinja tretiranih nosačem i 6,9 x nivoa pre studije. Oba parametra su se vratila na početne nivoe 8. dana. U zaključku, jednokratna primena DART-I intravenoznom infuzijom dobro se tolerisala kod majmuna cinomolgus u količini od 5 mg/kg.
Primer 11
PK studija za jednu dozu sa antitelima na PD-1
[0472] PK studija sa jednom dozom sa odabranim toksikološkim krajnjim tačkama je sprovedena na majmunima
1
cinomolgus. U ovoj studiji, hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) je upoređen sa dva druga anti-PDl IgG4 (P), x mAb: PD-1 mAb A IgG4 (P) i PD-1 mAb B IgG4 (P ). Svako antitelo je dato u dozi od 10 mg/kg 1-satnom intravenskom infuzijom na 2 majmuna (1M, IF) i životinje su praćene 65 dana.
[0473] Nije bilo kliničkih znakova povezanih sa testnim elementima, promena telesne težine, konzumiranja hrane, citokina ili imunofenotipizacije povezanih sa davanjem hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ili PD-1 mAb A IgG4 (P). Podaci su bili slični za PD-1 mAb B IgG4 (P), s tim što je primeć eno pove ć anje IL-5 nakon primene PD-1 mAb B IgG4 (P).
[0474] Vezivanje anti-PD-1 antitela za PD-1 na površini T ćelija je određeno protočnom citometrijom korišćenjem kompetitivne metode u kojoj je srednji intenzitet fluorescencije (MFI) fluorescentno obeleženog hPD-1 mAb 7 (1,2). Vezivanje IgG4 (P) za T ć elije u odsustvu (kontrola PBS-a) ili u prisustvu viška konkurenta (neoznačeni hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)) za celokupni tok uzoraka krvi prikupljenih od majmuna cinomolgus sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), PD-1 mAb A IgG4 (P) ili PD-1 mAb B IgG4 (P). Kao što je prikazano na slikama 23A-23C, hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) i PD-1 mAb B IgG4 (P) pokazalo je produženo vezivanje za PD-1 na površini CD4+ i CD8+ Tć elija (PD-1 vezivanje održavano na ≥ 80 % 28 dana ili više) (slike 23A i 23C, respektivno) u poređenju sa PD-1 mAb A IgG4 (P) (vezivanje PD-1 održavano na ≥ 80 % 21 dan ili manje) (slika 23B). Za svako od anti-PD-1 antitela, podaci vezivanja T-ć elija PD-1 korelirali su sa njihovim serumskim koncentracijama.
Primer 12
Ponovljene studije toksikološke doze
[0475] Da bi se procenio bezbednosni, toksikokinetički i farmakodinamički profil terapijskih molekula prema ovom pronalasku, primerak molekula (hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P)) primenjen je na majmune cinomolgus i GLP (Good Laboratory Practice) izvršena je studija doziranja. U ovoj studiji, četiri grupe životinja (10 po gr up, 5 mužijaka i 5 ženki) tretirani su sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ili kontrolnim artiklom, jednom nedeljno infuzijom u 3 nivoa doze. Životinje su procenjene na bilo kakvu potencijalnu toksičnost tokom 4-nedeljnog perioda doziranja leka, praćenog praćenjem tokom dodatnih 10 nedelja bez lekova. Eksperimentalni dizajn ove studije predstavljen je u Tabeli 21. Životinje su dozirane jednom nedeljno putem jednočasovne intravenske infuzije pomoć u kalibrisane infuzione pumpe na 1., 8., 15. i 22. dan ispitivanja pa su umrtvljene 25. dana, dok su preostale životinje umrtvljene 95. dana studije. Efekti primene hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) na subpopulacije leukocita u cirkulaciji, uključujući okupaciju PD-1 receptora na T-limfocitima bili su procenjeni. Pored toga, određeni su profili antitela nasuprot lekova (ADA).
1
(nastavak)
[0476] Jednom nedeljno intravenske (IV) infuzije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u 0, 10, 40 i 150 mg/kg kod cinomolgus majmuna su dobro tolerisane i sve životinje su preživele zakazanu eutanaziju. 25. ili 95. dan pritisak i broj otkucaja srca, koagulacija, klinička hemija i parametri analize urina, težina organa ili ukupni nalazi obdukcije.
[0477] hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) povezane promene hematoloških parametara uključivale su prolazna smanjenja titra limfocita. Titri limfocita bili su umereno smanjeni u poređenju sa prethodnom studijom (predoziranje 1. dana) 2. dana (23 sata nakon infuzije) kod muškaraca i žena pri ≥ 10 mg/kg, statistički značajni za muškarce od 10 i 40 mg/kg i žene za 40 godina i 150 mg/kg u poređenju sa kontrolama. Titri limfocita su se vratili na blizu nivoe pre studije 8. dana pre doze, ali su blago smanjeni za neke pojedinačne muškarce i žene na svim nivoima doze (0,47 x do 0,68 x pre studije) 9. dana (23 sata nakon infuzije). Titri limfocita su se povećali pre doziranja 15. i 22. dana, ali su se smanjili za neke pojedinačne muškarce i žene (0,36 x do 0,54 x pre studije) 16. i 23. dana (23 sata nakon infuzije).
[0478] Dozno nezavisno, prolazno opadanje populacije imunoloških ć elija u cirkulaciji, uključuju ć i ukupne leukocite, T ć elije, B ć elije i NK ć elije, prime ć eno je 23 sata nakon završetka infuzije u hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 ( P) tretirane životinje u poređenju sa kontrolnom grupom. Najveć a veličina promene je prime ć ena nakon prve doze prvog dana; manje promene veličine su prolazno primeć ene nakon naknadnih doza 8., 15. ili 22. dana. Imunske ć elijske populacije su se generalno oporavile na ili blizu početnih vrednosti 72 sata nakon EOI i tokom cele faze oporavka. Nisu primeć ene promene u cirkulišuć im monocitima kod životinja tretiranih hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u poređenju sa kontrolnom grupom.
[0479] Maksimalno vezivanje hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) zać elije PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ prime ć eno je tokom faze tretmana hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ispitivanja u svim testiranim dozama (10, 40 ili 150 mg/kg). U oporavku, životinje koje nisu razvile reakcije na antitela nasuprot lekova (ADA), serumske koncentracije hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) ostale su iznad 29 mg/ml i maksimalne hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P ) vezivanje za PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ Tć elije održavano je tokom čitavog 10-nedeljnog perioda oporavka. Kod ovih životinja nije bilo dokaza o PD-1 modulaciji na T ć elijama. Kod životinja za oporavak koje su razvile ADA odgovore, učestalost PD-1+ T ć elija vezanih za MGD012 opala je na početne nivoe. Pad od maksimalnog vezivanja hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) nać elijama PD-1+/CD4+ i PD-1+/CD8+ ADA-pozitivnih životinja generalno se desio kada je prividni serumski hPD-1 mAb 7 (1,2 ). Koncentracije IgG4 (P) pale su ispod približno 25 mg/mL. Međutim, nije poznato da li se ova očigledna granična vrednost odnosi na ADA-negativne životinje, jer prisustvo ADA u ADA-pozitivnih životinja može doprineti blokiranju vezivanja PD-1 antitela na PD-1.
[0480] Postojale su minimalne razlike povezane sa polom u farmakokinetičkim odgovorima hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P), koje su bile linearne u rasponu doza (10 do 150 mg/kg). Za hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) pri 10, 40 i 150 mg/kg, kombinovana srednja vrednost Cmax za pol bila je 240 mg/mL (0,240 mg/mL), 1078 mg/mL (1,08 mg/mL) ), i 3938 mg/mL (3,94 mg/mL), a AUC je bila 47310 h • mg/mL (47,3 h • mg/mL), 205723 h • mg/mL (206 h • mg/mL) i 745681 h • mg/mL (746 h • mg/mL), respektivno. Srednji klirens pomoć u nekompartment analize (NCA) prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1,2) IgG4 (P) pre pojave ADA, bio je 0,21 ml/h/kg, znatno niži od stope glomerularne filtracije cinomolgusa majmuna, kao što bi se očekivalo za protein velike molekulske mase. Srednji volumen distribucije u ravnotežnom stanju prema NCA prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) bio je 68 ml/kg, otprilike 1,5 puta već i od serumskog volumena, ali manji od vanć elijskog vodenog prostora. Ovo sugeriše da hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) ekstrahuje iz vaskularnog odeljka u ekstracelularni prostor tkiva, ali da nije sav vanć elijski prostor bio dostupan ovom molekulu. Prosečna vrednost srednjeg vremena boravka (MRT) prema NCA prvog ciklusa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) bila je 335 sati ili približno 14 dana. Pojava ADA smanjila je koncentracije hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u ciklusima 2 do 4. Dokazi o smanjenoj koncentraciji hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u serumu nakon ponovljenih doza hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) zabeleženi su u 7 /10, 4/10 i 3/10 životinja u grupama sa 10, 40 i 150 mg/kg, respektivno. Prisustvo ADA protiv hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) potvrđeno je u 4, 2 i 1 od ovih životinja u grupama sa 10, 40 i 150 mg/kg, respektivno; sve životinje kod kojih ADA nije potvrđen bile su u terminalnoj grupi za obdukciju tokom koje je koncentracija hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) u serumu verovatno ometala sposobnost otkrivanja ADA. Shodno tome, u kasnijoj analizi TK, kada je najniža koncentracija bila niža od prethodne najniže koncentracije, podaci od ovog trenutka na dalje su cenzurisani. Iz dvokomornog modeliranja podataka tokom svih ciklusa za 3 dozne grupe, isključujuć i tačke na koje je uticao ADA, srednje vrednosti za primarne parametre TK za model sa 2 odeljka bile su 0,22 ml/h/kg za klirens, 38,5 ml/ kg za početni volumen distribucije (V1), i 33,8 mL/kg za V2, što je dalo srednji volumen distribucije u stabilnom stanju (Vss)
11
od 72,3 mL/kg i MRT od 329 sati. Ove vrednosti su bile u skladu sa parametrima dobijenim od NCA prve doze. U odsustvu ADA, simulacije predviđaju da ć e se nedeljnim doziranjem posti ć i stabilno stanje kod majmuna cinomolgus nakon pete doze, a indeks akumulacije bi bio 2,4.
[0481] Dana 25., hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) vezani minimalni multifokalni perivaskularni mononuklearni ć elijski infiltrati bili su prisutni u površnom dermisu mesta IV injekcije kod muškaraca pri ≥ 40 mg/kg i kod žena pri ≥ 10 mg/kg i bili su očekivana reakcija na ponovljeno ubrizgavanje stranog proteina (monoklonsko antitelo). Dana 95. nije bilo zabeleženih mikroskopskih promena povezanih sa hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) povezanih sa hPD-1, što ukazuje na oporavak promene povezane sa testnim elementom prisutnim 25. dana.
[0482] Ukratko, rezultati ove studije pokazuju da je primena hPD-1 mAb 7 (1.2) IgG4 (P) putem intravenozne infuzije jednom nedeljno (1., 8., 15. i 22. dan) klinički dobro podnošena kod majmuna cinomolgus na nivoima od 10, 40 ili 150 mg/kg. Uočeni efekti bili su ograničeni na prolazno smanjenje cirkulišuć ih limfocita i minimalne promene na mestu injekcije povezane sa ubrizgavanjem stranog proteina. Na osnovu ovih rezultata, smatralo se da je nivo neopaženih neželjenih efekata (NOAEL) 150 mg/kg (kombinovana srednja Cmax po polu od 3,94 mg/mL i AUC od 746 h • mg/mL po polu).
[0483] Iako je pronalazak opisan u vezi sa njegovim konkretnim primerima, razumeć e se da je podoban za dalje izmene i da je namera ove prijave da obuhvati sve varijacije, upotrebe ili adaptacije pronalaska koje slede, generalno, načela pronalaska, uključujuć i i odstupanja od ovog pronalaska koja spadaju u poznatu ili uobičajenu praksu u oblasti tehnike na koju se pronalazak odnosi i koja se mogu primeniti na bitne karakteristike koje su prethodno navedene.
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
�
11
12
1
14
1
�
1
1
1
14
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
21
21
21
21
21
21
21
22
22
22
22
22
22
22
2
21
22
2
��
2
2
�
2
2
��
24
��
24
24
��
24
2
21
22
2
24
�
2
2
�
�
2
21
22
�
24
2
2
�
�
2
2
21
22
2
��
2
2
�
�
2
2
21
22
�
24
2
2
2

Claims (12)

Patentni zahtevi
1. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 i koje sadrži promenljivi domen teškog lanca i promenljivi domen lakog lanca, pri čemu:
navedeni promenljivi domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID NO: 147, a navedeni promenljivi domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID NO: 153.
2. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema patentnom zahtevu 1, pri čemu navedeno antitelo sadrži Fc region, i pri čemu:
(a) navedeni Fc region je izotipa IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4;
(b) navedeni molekul dodatno sadrži domen zgloba; ili
(c) navedeni Fc regiion je IgG4 Fc domen i navedeno antitelo dodatno sadr ži IgG4 domen zgloba koji sadrži stabilizirajuć u mutaciju.
3. Anti-humano PD-1-antitelo prema patentnom zahtevu 2, pri čemu navedeno antitelo sadrži: SEK ID NO: 264 i 266.
4. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema patentnom zahtevu 2, pri čemu je navedeni Fc region varijanta Fc regiona koji sadrži:
(a) jednu ili više modifikacija aminokiselina koje smanjuju afinitet promenljivog Fc regiona za FcγR; i/ili (b) jednu ili više modifikacija aminokiselina koje poveć avaju poluživot u serumu promeljivog Fc regiona.
5. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema patentnom zahtevu 4, pri čemu:
(A) navedene modifikacije koje smanjuju afinitet promenljivog Fc regiona za FcγR obuhvataju supstituciju L234A; L235A; ili L234A i L235A, pri čemu je navedena numeracija indeksa EU kao u Kabatu; i
(B) navedene modifikacije koje poveć avaju poluživot u serumu promenljivog Fc regiona obuhvataju supstituciju M252Y; M252Y i S254T; M252Y i T256E; M252Y, S254T i T256E; ili K288D i H435K, pri čemu je navedena numeracija indeksa EU kao u Kabatu.
6. Kompozicija koja sadrži antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
7. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u postupku stimulacije imunološkog odgovora posredovanog T-ć elijama subjekta koji boluje od raka ili infekcija.
8. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u le čenju bolesti ili stanja povezanih sa potisnutim imunološkim sistemom, pri čemu je bolest ili stanje rak ili infekcija.
9. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1, za upotrebu u lečenju raka
2
ili infekcije.
10. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 ili kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 7 do 9, pri čemu je navedeni rak izabran iz grupe koju čine: tumor nadbubrežne žlezde, rak povezan sa AIDS-om, alveolarni sarkom mekog dela, astrocitni tumor, rak bešike, rak kostiju, rak mozga i kičmene moždine, metastatski tumor mozga, rak dojke, tumor karotidnog tela, rak grlić a materice, hondrosarkom, hordoma, karcinom hromofobnih bubre žnih ć elija, karcinom čistih ć elija, karcinom debelog creva, kolorektalni karcinom, kožni benigni fibrozni histiocitom, desmoplastični tumor malih okruglih ć elija, ependimom, Evingov tumor, ekstraskeletni miksoidni hondrosarkom, fibrogeneza imperfekta olijuma, fibrozna displazija, rak kostiju, žučne kese ili žučnih puteva, rak želuca, gestacijska trofoblastna bolest, tumor zametnih ć elija, rak glave i vrata, hepatocelularni karcinom, tumor ostrvcanih ć elija, Kaposijev sarkom, rak bubrega, leukemija, lipoma/benigni lipomatozni tumor, liposarkom/maligni lipomatozni tumor, rak jetre, limfom, rak pluć a, meduloblastom, melanom, meningiom, multipla endokrina neoplazija, multipla mijelom, mijelodisplastični sindrom, neuroblastom, neuroendokrini tumor, rak jajnika, rak pankreasa, papilarni karcinom štitne žlezde, paratiroidni tumor, pedijatrijski rak, tumor perifernog nervnog omota ča, feohromocitom, tumor hipofize, rak prostate, posteriorni uvealni melanom, retki hematolo ški poremeć aj, metastatski rak bubrega, rabdoidni tumor, rabdomisarkom, sarkom, rak kože, sarkom mekog tkiva, karcinom pločastih ć elija, rak želuca, sinovijalni sarkom, rak testisa, timus karcinom, timom, metastatski rak štitne žlezde i rak materice.
11. Monospecifično monoklonsko antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 ili kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 7 do 9, pri čemu je navedeni rak kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, gliom, rak bubrega, rak dojke, multipla mijelom, rak be šike, neuroblastom; sarkom, ne-Hodgkinov limfom, nedrobnoć elijski karcinom plu ć a, rak jajnika, rak pankreasa, rektalni karcinom, akutna mijeloična leukemija (AML), hronična mijeloična leukemija (CML), akutna B limfoblastna leukemija (B-ALL), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija dlakavih ć elija (HCL), blastična neoplazma dendritičkih ć elija plazmacitoida (BPDCN), ne-Hodgkinov limfom (NHL), uključuju ć i leukemiju mantelnih ć elija (MCL) i mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkinov limfom, sistemska mastocitoza, ili Burkitov limfom.
12. Upotreba monospecifičnog monoklonskog antitelo koje se vezuje za anti-humano PD-1 prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5 ili kompozicije prema patentnom zahtevu 6, u in vitro detekciji PD-1, pri čemu je navedeno antitelo vidljivo označeno.
RS20211320A 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe RS62568B1 (sr)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562198867P 2015-07-30 2015-07-30
US201562239559P 2015-10-09 2015-10-09
US201562255140P 2015-11-13 2015-11-13
US201662322974P 2016-04-15 2016-04-15
EP16831339.3A EP3328419B1 (en) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
PCT/US2016/044430 WO2017019846A1 (en) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-binding molecules and methods use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62568B1 true RS62568B1 (sr) 2021-12-31

Family

ID=57884977

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20241291A RS66208B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe
RS20211320A RS62568B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metodi njihove upotrebe
RS20211102A RS62374B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20241291A RS66208B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Pd-1-vezujući molekuli i metode njihove upotrebe

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211102A RS62374B1 (sr) 2015-07-30 2016-07-28 Molekuli za vezivanje pd-1 i lag-3 i metode njihove upotrebe

Country Status (39)

Country Link
US (3) US10577422B2 (sr)
EP (4) EP4450088A3 (sr)
JP (5) JP6959907B2 (sr)
KR (3) KR102762075B1 (sr)
CN (4) CN107847574B (sr)
AU (5) AU2016298227B9 (sr)
CA (1) CA2993948A1 (sr)
CL (1) CL2018000254A1 (sr)
CO (1) CO2018000867A2 (sr)
CR (3) CR20220194A (sr)
CY (3) CY1124634T1 (sr)
DK (3) DK3456346T3 (sr)
EA (1) EA201890296A1 (sr)
EC (1) ECSP18006831A (sr)
ES (3) ES2994122T3 (sr)
FI (2) FI3981792T3 (sr)
FR (1) FR24C1033I2 (sr)
GE (6) GEAP202215554A (sr)
HR (3) HRP20211645T1 (sr)
HU (4) HUE055207T2 (sr)
IL (4) IL290571B2 (sr)
JO (2) JO3736B1 (sr)
LT (4) LT3456346T (sr)
MA (2) MA58293B1 (sr)
MD (3) MD3328419T2 (sr)
MX (3) MX2018001227A (sr)
NL (1) NL301287I2 (sr)
PE (3) PE20240111A1 (sr)
PH (1) PH12018500232A1 (sr)
PL (3) PL3456346T3 (sr)
PT (3) PT3328419T (sr)
RS (3) RS66208B1 (sr)
SG (2) SG10201906059VA (sr)
SI (3) SI3456346T1 (sr)
SM (3) SMT202100527T1 (sr)
TW (5) TWI886756B (sr)
UA (1) UA127372C2 (sr)
WO (1) WO2017019846A1 (sr)
ZA (2) ZA201800500B (sr)

Families Citing this family (347)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
RS52711B (sr) 2005-05-10 2013-08-30 Incyte Corporation Modulatori indolamin 2,3-dioksigenaze i postupci upotrebe istih
PL2315756T3 (pl) 2008-07-08 2015-02-27 Incyte Holdings Corp 1,2,5-oksadiazole jako inhibitory 2,3-dioksygenazy indoloaminy
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US9611267B2 (en) 2012-06-13 2017-04-04 Incyte Holdings Corporation Substituted tricyclic compounds as FGFR inhibitors
CN105051069B (zh) 2013-01-14 2019-12-10 Xencor股份有限公司 新型异二聚体蛋白
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
TWI649318B (zh) 2013-04-19 2019-02-01 英塞特控股公司 作為ｆｇｆｒ抑制劑之雙環雜環
KR102497443B1 (ko) 2014-03-28 2023-02-08 젠코어 인코포레이티드 Cd38 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항체
TWI742423B (zh) * 2014-05-29 2021-10-11 美商宏觀基因股份有限公司 特異性結合多種癌症抗原的三特異性結合分子和其使用方法
TWI693232B (zh) * 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
CA2967426A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
BR112017011166A2 (pt) 2014-11-26 2018-02-27 Xencor, Inc. anticorpos heterodiméricos que se ligam a cd3 e cd38
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
AU2016219822B2 (en) 2015-02-20 2020-07-09 Incyte Holdings Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
EP3283508B1 (en) 2015-04-17 2021-03-17 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
TWI773646B (zh) * 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI870335B (zh) * 2015-06-12 2025-01-21 美商宏觀基因股份有限公司 變異的嵌合4d5抗體及其與抗pd-1抗體聯合用於治療癌症的應用
CN114591433A (zh) 2015-07-13 2022-06-07 西托姆克斯治疗公司 抗pd-1抗体、可活化抗pd-1抗体及其使用方法
HUE055207T2 (hu) * 2015-07-30 2021-11-29 Macrogenics Inc PD-1 és LAG-3 kötõ molekulák és eljárások azok alkalmazására
CN114605548A (zh) 2015-09-01 2022-06-10 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
HK1251158A1 (zh) 2015-09-29 2019-01-25 细胞基因公司 Pd-1结合蛋白及其使用方法
CA3001131A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Cd80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
SMT202200118T1 (it) 2015-11-03 2022-05-12 Janssen Biotech Inc Anticorpi che legano specificamente pd-1 e loro usi
CN108699136B (zh) 2015-12-07 2022-03-18 Xencor股份有限公司 结合cd3和psma的异二聚抗体
EA201891178A1 (ru) 2015-12-14 2019-01-31 Макродженикс, Инк. Биспецифичные молекулы, обладающие иммунореактивностью в отношении pd-1 и ctla-4, и способы их применения
AU2017241524B2 (en) 2016-03-28 2021-07-08 Incyte Corporation Pyrrolotriazine compounds as TAM inhibitors
SG11201808457PA (en) 2016-04-15 2018-10-30 Alpine Immune Sciences Inc Icos ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11078282B2 (en) 2016-04-15 2021-08-03 Alpine Immune Sciences, Inc. CD80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CA3026151A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
TWI640536B (zh) 2016-06-20 2018-11-11 克馬伯有限公司 抗體
TW201831513A (zh) 2016-06-20 2018-09-01 Ｆ星貝塔有限公司 結合物件(一)
MX2018016265A (es) 2016-06-28 2019-07-04 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen al receptor 2 de somatostatina.
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
AU2017329024A1 (en) 2016-09-19 2019-03-21 Celgene Corporation Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
WO2018053401A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Celgene Corporation Methods of treating vitiligo using pd-1 binding proteins
PE20240950A1 (es) 2016-10-14 2024-05-06 Xencor Inc PROTEINAS DE FUSION FC HETERODIMERICAS IL 15/IL 15R(alfa)
CN118634323A (zh) 2016-12-07 2024-09-13 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
PT3565828T (pt) 2017-01-05 2022-02-08 Kahr Medical Ltd Proteína de fusão sirp1 alfa-41bbl e seus métodos de utilização
WO2018127918A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A sirp alpha-cd70 fusion protein and methods of use thereof
WO2018127916A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A pd1-cd70 fusion protein and methods of use thereof
HRP20230937T1 (hr) 2017-01-05 2023-11-24 Kahr Medical Ltd. Pd1-41bbl fuzijski protein i metode korištenja istog
EP3565842A1 (en) 2017-01-06 2019-11-13 Crescendo Biologics Limited Single domain antibodies to programmed cell death (pd-1)
EP3569616B1 (en) * 2017-01-13 2021-09-29 Taizhou Hanzhong Biopharmaceutics, Inc. Monoclonal antibody against pd-1 and applications thereof
WO2018133842A1 (zh) 2017-01-20 2018-07-26 大有华夏生物医药集团有限公司 人程序性死亡受体pd-1的单克隆抗体及其片段
CN108341871A (zh) * 2017-01-24 2018-07-31 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用
US10577421B2 (en) 2017-02-22 2020-03-03 I-Mab Anti-LAG-3 antibodies and uses thereof
SG11201907753TA (en) 2017-02-24 2019-09-27 Macrogenics Inc Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
WO2018160540A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Sanofi Therapeutic rna
CN110662758A (zh) 2017-03-16 2020-01-07 高山免疫科学股份有限公司 Cd80变体免疫调节蛋白及其用途
WO2018170023A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-l2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
IL269026B2 (en) 2017-03-31 2024-12-01 Bristol Myers Squibb Co Anti-pd-1 antibodies for treating tumors in high tumor mutational burden (tmb) patients
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
CA3058966A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Tollnine, Inc. Immunomodulating polynucleotides, antibody conjugates thereof, and methods of their use
JOP20190248A1 (ar) 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
CA3057866A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treatment with cd80 extracellular domain polypeptides
WO2018217940A2 (en) * 2017-05-24 2018-11-29 Sutro Biopharma, Inc. Pd-1/lag3 bi-specific antibodies, compositions thereof, and methods of making and using the same
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
KR102713203B1 (ko) 2017-05-30 2024-10-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Lag-3 양성 종양의 치료
KR20240155979A (ko) 2017-05-30 2024-10-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-lag-3 항체 또는 항-lag-3 항체 및 항-pd-1 또는 항-pd-l1 항체를 포함하는 조성물
US20210340250A1 (en) 2017-05-30 2021-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
WO2018223040A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor using an anti-pd-1 antibody
AU2018282094B2 (en) 2017-06-05 2024-06-27 Janssen Biotech, Inc. Antibodies that specifically bind PD-1 and methods of use
EP3645740A4 (en) * 2017-06-25 2021-08-18 Systimmune, Inc. ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHOD OF MANUFACTURING AND USE
TW202542197A (zh) * 2017-07-06 2025-11-01 荷蘭商米樂斯股份有限公司 藉由細胞表現之調控生物活性的抗體
ES2910969T3 (es) 2017-08-03 2022-05-17 Amgen Inc Muteínas de interleucina-21 y métodos de tratamiento
WO2019025545A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Genmab A/S BINDING AGENTS BINDING TO PD-L1 AND CD137 AND THEIR USE
BR112020003533A2 (pt) 2017-08-25 2020-11-17 Five Prime Therapeutics, Inc. anticorpos b7-h4 e métodos de uso dos mesmos
TWI821200B (zh) 2017-09-27 2023-11-11 美商英塞特公司 Tam抑制劑之鹽
JP7749319B2 (ja) 2017-10-10 2025-10-06 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｔｌａ－４変異型免疫調節タンパク質およびそれらの使用
KR20200064132A (ko) 2017-10-15 2020-06-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
PT3697810T (pt) 2017-10-18 2026-02-19 Alpine Immune Sciences Inc Proteínas imunomoduladoras de ligandos icos variantes e composições e métodos relacionados
SG11202003626RA (en) 2017-11-06 2020-05-28 Bristol Myers Squibb Co Methods of treating a tumor
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
KR20200085828A (ko) 2017-11-08 2020-07-15 젠코어 인코포레이티드 신규의 항-pd-1 서열을 사용한 이중특이적 및 단일특이적 항체
JP7312168B2 (ja) 2017-11-13 2023-07-20 クレッシェンド、バイオロジックス、リミテッド Ｃｄ１３７に結合するシングルドメイン抗体
CN109897111B (zh) * 2017-12-08 2021-02-23 杭州翰思生物医药有限公司 抗pd-1/cd47的双特异性抗体及其应用
EP3728302A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Xencor, Inc. Engineered il-2 fc fusion proteins
CN109971714B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 自表达pd-1抗体并靶向间皮素的嵌合抗原受体修饰t细胞及其用途
CN109971712B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 特异性靶向cd19抗原且高水平稳定表达pd-1抗体的car-t细胞及用途
BR112020013236A2 (pt) * 2018-01-03 2020-12-01 Alpine Immune Sciences, Inc. proteínas imunomoduladoras de múltiplos domínios e métodos de seu uso
TW201930344A (zh) 2018-01-12 2019-08-01 美商安進公司 抗ｐｄ-１抗體及治療方法
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
WO2019144126A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Pascal Biosciences Inc. Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
WO2019148412A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
WO2019148410A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1 antibodies
GB201802573D0 (en) * 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
CN111741978A (zh) 2018-02-21 2020-10-02 戊瑞治疗有限公司 B7-h4抗体制剂
JP7110369B2 (ja) 2018-02-23 2022-08-01 ユーキュア・（ベイジン）・バイオファーマ・カンパニー・リミテッド 抗ｐｄ－１抗体及びその用途
US20190292188A1 (en) 2018-02-27 2019-09-26 Incyte Corporation Imidazopyrimidines and triazolopyrimidines as a2a / a2b inhibitors
EP3759142A1 (en) 2018-03-02 2021-01-06 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
US20210115138A1 (en) * 2018-03-20 2021-04-22 WuXi Biologics Ireland Limited Novel bispecific pd-1/lag-3 antibody molecules
TWI841554B (zh) 2018-03-21 2024-05-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 以鉑為主之劑與抗組織因子抗體－藥物共軛物的組合治療癌症之方法
BR112020018539A2 (pt) 2018-03-23 2020-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Anticorpos contra mica e/ou micb e usos dos mesmos
CN108546297B (zh) * 2018-03-29 2019-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对pd-1的单克隆抗体及其应用
KR20200139724A (ko) 2018-03-30 2020-12-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
EP3773911A2 (en) 2018-04-04 2021-02-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
CN112584901A (zh) * 2018-04-04 2021-03-30 真和制药有限公司 用于阻断非糖基化的pd-1多肽之间的相互作用的方法和组合物
KR20200143689A (ko) * 2018-04-15 2020-12-24 살루브리스 (청두) 바이오테크 코., 리미티드 Pd-1 결합 항체 및 그의 용도
KR20210003814A (ko) 2018-04-18 2021-01-12 젠코어 인코포레이티드 IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 TIM-3 항원 결합 도메인을 함유하는 TIM-3 표적화 이종이량체 융합 단백질
MX2020010910A (es) 2018-04-18 2021-02-09 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas dirigidas a pd-1 que contienen proteinas de fusion il-15 / il-15ra fc y dominios de union al antigeno pd-1 y usos de los mismos.
MX2020011588A (es) * 2018-05-03 2020-12-07 Shanghai Epimab Biotherapeutics Co Ltd Anticuerpos de alta afinidad a pd-1 y lag-3 y proteinas de union bispecificas preparadas a partir de las mismas.
ES2991427T3 (es) 2018-05-04 2024-12-03 Incyte Corp Formas sólidas de un inhibidor de FGFR y procedimientos para preparar las mismas
TW201946630A (zh) 2018-05-04 2019-12-16 美商英塞特公司 Fgfr抑制劑之鹽
CA3099547A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Reshma Abdulla RANGWALA Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
SG11202009986QA (en) 2018-05-07 2020-11-27 Genmab As Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
MA52940A (fr) 2018-05-18 2021-04-28 Incyte Corp Dérivés de pyrimidine fusionnés utilisés en tant qu'inhibiteurs de a2a/a2b
EP3818085A4 (en) 2018-06-01 2022-03-09 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. COMPOSITIONS AND THEIR USES FOR THE TREATMENT OF DISEASES OR DISORDERS
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
CN120714023A (zh) * 2018-06-20 2025-09-30 因赛特公司 抗pd-1抗体及其用途
US11241438B2 (en) 2018-06-29 2022-02-08 Incyte Corporation Formulations of an AXL/MER inhibitor
CN113166153B (zh) 2018-07-05 2024-11-01 因赛特公司 作为a2a/a2b抑制剂的稠合吡嗪衍生物
CN110684113A (zh) * 2018-07-06 2020-01-14 复旦大学 一种抗PD-1抗原和抗c-Met抗原的双特异性抗体及其构建方法
SG11202013170RA (en) 2018-07-11 2021-01-28 Kahr Medical Ltd Pd1-4-1bbl variant fusion protein and methods of use thereof
KR20210044220A (ko) 2018-07-11 2021-04-22 카 메디컬 리미티드 SIRPalpha-4-1BBL 변이체 융합 단백질 및 이의 사용 방법
US12344672B2 (en) * 2018-07-12 2025-07-01 Invox Pharma Limited Antibody molecules that bind PD-L1 and CD137
GB201811408D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd CD137 Binding Molecules
GB201811403D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Antibody molecules
GB201811404D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-CD137 Antibodies
GB201811450D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Delta Ltd Mesothelin and CD137 binding molecules
GB201811410D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd OX40 Binding molecules
GB201811415D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-Mesothelin Anti bodies
MX2021000399A (es) 2018-07-12 2021-05-27 F Star Therapeutics Ltd Moleculas de anticuerpo que se unen a cd137 y ox40.
EP3823991A4 (en) 2018-07-19 2022-08-03 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. ANTI-PD-1 ANTIBODIES, DOSAGE FORMS AND USES THEREOF
SG11202100693UA (en) 2018-07-26 2021-02-25 Bristol Myers Squibb Co Lag-3 combination therapy for the treatment of cancer
EP3852779A4 (en) 2018-09-17 2022-06-08 Abcuro, Inc. ANTI-KLRG1 ANTIBODIES
US11591390B2 (en) 2018-09-27 2023-02-28 Celgene Corporation SIRP-α binding proteins and methods of use thereof
PE20211491A1 (es) 2018-09-27 2021-08-11 Celgene Corp PROTEINAS DE FIJACION A SIRPa Y METODOS DE USO DE ESTAS
MX2021003765A (es) 2018-10-03 2021-07-15 Xencor Inc Proteínas il-12 de fusión a fc heterodimérico.
US11066404B2 (en) 2018-10-11 2021-07-20 Incyte Corporation Dihydropyrido[2,3-d]pyrimidinone compounds as CDK2 inhibitors
CA3117016A1 (en) 2018-10-19 2020-04-23 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for melanoma
US12479917B2 (en) 2018-10-23 2025-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating NSCLC comprising administering platinum doublet chemotherapy followed by an anti-PD-1 antibody and an anti-CTLA-4 antibody
TWI844571B (zh) 2018-10-30 2024-06-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
WO2020102233A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Jn Biosciences Llc Bispecific antibodies for activation of immune cells
MY205758A (en) 2018-11-16 2024-11-12 Bristol Myers Squibb Co Anti-nkg2a antibodies and uses thereof
EP3887394A2 (en) 2018-11-30 2021-10-06 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd86 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
JP7584418B2 (ja) 2018-12-04 2024-11-15 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 多重反応同位体分子種反応モニタリングによる、サンプル内検量線を用いた分析方法
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
EP3898677A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 OSE Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule
KR20210107062A (ko) 2018-12-21 2021-08-31 오제 이뮈노테라프틱스 이작용성 항-PD-1/SIRPα 분자
CN111349162A (zh) 2018-12-21 2020-06-30 神州细胞工程有限公司 人源化抗pd-1抗体及其用途
CN111423510B (zh) * 2019-01-10 2024-02-06 迈威(上海)生物科技股份有限公司 重组抗人pd-1抗体及其应用
TWI850316B (zh) 2019-01-21 2024-08-01 法商賽諾菲公司 用於晚期實性瘤癌症之治療性rna及抗pd1抗體
CN113795511B (zh) 2019-01-23 2024-07-23 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-l1双抗体及其用途
TWI829857B (zh) 2019-01-29 2024-01-21 美商英塞特公司 作為a2a / a2b抑制劑之吡唑并吡啶及三唑并吡啶
JP7604379B2 (ja) * 2019-02-03 2024-12-23 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド 抗ｐｄ－１抗体、その抗原結合フラグメントおよびそれらの医薬用途
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
US11384083B2 (en) 2019-02-15 2022-07-12 Incyte Corporation Substituted spiro[cyclopropane-1,5′-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin]-6′(7′h)-ones as CDK2 inhibitors
MA54947A (fr) 2019-02-15 2021-12-22 Incyte Corp Biomarqueurs de kinase 2 dépendant de la cycline et leurs utilisations
AU2020232605A1 (en) 2019-03-01 2021-10-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind ENPP3 and CD3
US11472791B2 (en) 2019-03-05 2022-10-18 Incyte Corporation Pyrazolyl pyrimidinylamine compounds as CDK2 inhibitors
US11628162B2 (en) 2019-03-08 2023-04-18 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an FGFR inhibitor
CN113891748A (zh) 2019-03-28 2022-01-04 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
CN113677402A (zh) 2019-03-28 2021-11-19 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
WO2020205560A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Incyte Corporation Sulfonylamide compounds as cdk2 inhibitors
US11447494B2 (en) 2019-05-01 2022-09-20 Incyte Corporation Tricyclic amine compounds as CDK2 inhibitors
US11440914B2 (en) 2019-05-01 2022-09-13 Incyte Corporation Tricyclic amine compounds as CDK2 inhibitors
CN113874036A (zh) 2019-05-24 2021-12-31 辉瑞公司 使用cdk抑制剂的联合治疗
CN114174537A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 细胞定位特征和组合疗法
WO2020243568A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
WO2020243563A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
CN117447596A (zh) * 2019-06-30 2024-01-26 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
CN112225809B (zh) * 2019-06-30 2023-09-05 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
EP3998081A4 (en) 2019-07-05 2023-07-12 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. TREATMENT OF BLOOD CANCER WITH PD-1/CD3 DUAL SPECIFICITY PROTEIN
WO2021007269A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2021005546A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Cadila Healthcare Limited Antibodies to human programmed death receptor pd-1
CN112239506B (zh) * 2019-07-16 2023-09-26 复旦大学 一种抗PD-1及c-Met抗原的小分子双特异性抗体Diabody
WO2021022172A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Incyte Corporation A dosing regimen for an ido inhibitor
EP4008351A4 (en) * 2019-08-02 2023-08-09 CTTQ-Akeso (ShangHai) Biomed. Tech. Co., Ltd. Anti-pd-1 antibody and medical use thereof
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
JP7771749B2 (ja) 2019-08-08 2025-11-18 小野薬品工業株式会社 二重特異性タンパク質
MX2022001940A (es) 2019-08-14 2022-05-10 Incyte Corp Compuestos de imidazolil pirimidinilamina como inhibidores de cdk2.
WO2021055994A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
EP4034248A1 (en) 2019-09-25 2022-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Composite biomarker for cancer therapy
EP4039704A4 (en) * 2019-09-30 2023-09-20 Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND USE THEREOF
WO2021067374A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN119930610A (zh) 2019-10-11 2025-05-06 因赛特公司 作为cdk2抑制剂的双环胺
GEAP202415945A (en) 2019-10-14 2024-04-25 Incyte Corp Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2021076728A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
JP2022553821A (ja) 2019-11-05 2022-12-26 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｍ－タンパク質アッセイおよびその使用
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
CN115942973A (zh) 2019-11-08 2023-04-07 百时美施贵宝公司 用于黑色素瘤的lag-3拮抗剂疗法
US20220395553A1 (en) 2019-11-14 2022-12-15 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
WO2021097800A1 (en) * 2019-11-22 2021-05-27 Abl Bio Inc. Anti-pd-l1/anti-b7-h3 multispecific antibodies and uses thereof
AU2020395185A1 (en) 2019-12-04 2022-06-02 Incyte Corporation Derivatives of an FGFR inhibitor
CA3163875A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2021122866A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an il-7 variant
JP2023510108A (ja) 2019-12-19 2023-03-13 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｄｇｋ阻害剤およびチェックポイントアンタゴニストの組み合わせ
WO2021121373A1 (zh) * 2019-12-20 2021-06-24 广东菲鹏制药股份有限公司 抗人程序死亡因子-1单克隆抗体
US20230056230A1 (en) * 2019-12-23 2023-02-23 Macrogenics, Inc. Therapy for the Treatment of Cancer
IL294438A (en) * 2020-01-03 2022-09-01 Incyte Corp Combined treatment including a2a/a2b and pd-1/pd-l1 inhibitors
US11396647B2 (en) 2020-01-07 2022-07-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Human methylthioadenosine/adenosine depleting enzyme variants for cancer therapy
WO2021146424A1 (en) 2020-01-15 2021-07-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
EP4097234A1 (en) 2020-01-28 2022-12-07 Université de Strasbourg Antisense oligonucleotide targeting linc00518 for treating melanoma
EP4096789A4 (en) 2020-01-29 2023-10-11 Board of Regents, The University of Texas System USE OF POZIOTINIB TO TREAT CANCER WITH NRG1 FUSIONS
CN115362270A (zh) 2020-01-29 2022-11-18 得克萨斯州大学系统董事会 Egfr/her2酪氨酸激酶抑制剂和/或her2/her3抗体在具有nrg1融合的癌症的治疗中的用途
KR20220133996A (ko) 2020-01-30 2022-10-05 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 암 및 암 전이를 치료하기 위한 병용 요법
EP4100426A1 (en) 2020-02-06 2022-12-14 Bristol-Myers Squibb Company Il-10 and uses thereof
CA3170330A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Macrogenics, Inc. Cd137 binding molecules and uses thereof
IL295759A (en) 2020-02-28 2022-10-01 Tallac Therapeutics Inc Transglutaminase mediated coupling
EP4112647A4 (en) * 2020-02-28 2024-03-27 Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-cd47/anti-pd-l1 antibody and applications thereof
JP2023516724A (ja) 2020-03-06 2023-04-20 オーエヌエー セラピューティクス エセ．エレ． 抗ｃｄ３６抗体及び癌を治療するためのそれらの使用
EP4114401A1 (en) * 2020-03-06 2023-01-11 Incyte Corporation Combination therapy comprising axl/mer and pd-1/pd-l1 inhibitors
BR112022017637A2 (pt) 2020-03-06 2022-11-08 Celgene Quanticel Res Inc Métodos de tratamento do câncer de pulmão de células pequenas e/ou câncer de pulmão de células não pequenas
IL297165A (en) 2020-04-16 2022-12-01 Incyte Corp Soysag tricyclic CRS inhibitors
CN113583127A (zh) * 2020-04-30 2021-11-02 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种靶向nkg2a和pd-l1的双特异性抗体及应用
EP4147053B1 (en) 2020-05-07 2026-01-28 Institut Curie Antxr1 as a biomarker of immunosuppressive fibroblast populations and its use for predicting response to immunotherapy
BR112022022524A2 (pt) 2020-05-08 2022-12-13 Alpine Immune Sciences Inc Proteínas imunomoduladoras inibidoras de april e baff com e sem uma proteína inibidora de células t e métodos de uso das mesmas
US11739102B2 (en) 2020-05-13 2023-08-29 Incyte Corporation Fused pyrimidine compounds as KRAS inhibitors
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
US20250262293A1 (en) 2020-07-07 2025-08-21 BioNTech SE Therapeutic rna for hpv-positive cancer
CN116368155A (zh) * 2020-08-19 2023-06-30 潘迪恩运营公司 多互补位抗pd-1抗体及其用途
JP7773528B2 (ja) 2020-08-19 2025-11-19 ゼンコア インコーポレイテッド 抗ｃｄ２８組成物
EP4204095A1 (en) 2020-08-28 2023-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
WO2022047093A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Incyte Corporation Vinyl imidazole compounds as inhibitors of kras
IL300916A (en) 2020-08-31 2023-04-01 Bristol Myers Squibb Co Cell localization signature and immunotherapy
US11767320B2 (en) 2020-10-02 2023-09-26 Incyte Corporation Bicyclic dione compounds as inhibitors of KRAS
US20230374064A1 (en) 2020-10-05 2023-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Methods for concentrating proteins
US20230364127A1 (en) 2020-10-06 2023-11-16 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
US12555649B2 (en) 2020-10-09 2026-02-17 Worldwide Innovative Network Prediction method and gene signatures for the treatment of cancer
AU2021364837A1 (en) 2020-10-23 2023-05-25 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
KR20230098279A (ko) 2020-10-28 2023-07-03 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Pdx 억제제 또는 독소루비신과 ahr 억제제의 조합
CN117580859A (zh) 2020-11-17 2024-02-20 思进股份有限公司 用图卡替尼和抗pd-1/抗pd-l1抗体的组合治疗癌症的方法
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
US20220168293A1 (en) 2020-12-02 2022-06-02 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
EP4261225A4 (en) * 2020-12-10 2024-11-13 Eutilex Co., Ltd. ANTI-PD-1 ANTIBODY AND ITS USES
US20240067727A1 (en) 2020-12-17 2024-02-29 Ose Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd1/il-7 molecules
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022146947A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
MX2023007650A (es) 2020-12-28 2023-09-11 Bristol Myers Squibb Co Metodos de tratamiento de tumores.
KR20230157940A (ko) 2020-12-29 2023-11-17 인사이트 코포레이션 A2a/a2b 저해제, pd-1/pd-l1 저해제 및 항-cd73 항체를포함하는 병용 요법
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
CN117321079A (zh) * 2021-01-11 2023-12-29 优特力克斯有限公司 包含抗4-1bb抗体及pd-1蛋白或其片段的双特异性表位结合蛋白及其用途
CA3210196A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of treating cancer with kinase inhibitors
CN113336848B (zh) * 2021-02-03 2022-08-19 上海莱馥医疗科技有限公司 一种抗pd-1抗体及其用途
CA3212665A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
US20240181052A1 (en) 2021-03-29 2024-06-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
WO2022216979A1 (en) 2021-04-08 2022-10-13 Board Of Regents, The University Of Texas System Compounds and methods for theranostic targeting of parp activity
CA3213917A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Nicolas Poirier New scaffold for bifunctional molecules with improved properties
WO2022214652A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
EP4323405A1 (en) 2021-04-12 2024-02-21 Incyte Corporation Combination therapy comprising an fgfr inhibitor and a nectin-4 targeting agent
WO2022240741A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
AR126101A1 (es) 2021-06-09 2023-09-13 Incyte Corp Heterociclos tricíclicos como inhibidores de fgfr
CA3220274A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US11981671B2 (en) 2021-06-21 2024-05-14 Incyte Corporation Bicyclic pyrazolyl amines as CDK2 inhibitors
CA3224674A1 (en) 2021-07-07 2023-01-12 Pei Gan Tricyclic compounds as inhibitors of kras
CR20240065A (es) * 2021-07-09 2024-04-08 Macrogenics Inc Composiciones farmacéuticas de un anticuerpo contra pd-1 y uso de las mismas
MX2024000674A (es) 2021-07-13 2024-02-07 BioNTech SE Agentes de union multiespecificos contra cd40 y cd137 en terapia de combinacion.
EP4370515A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Incyte Corporation Tricyclic compounds as inhibitors of kras
JP2024529502A (ja) 2021-07-30 2024-08-06 オーエヌエー セラピューティクス エセ．エレ． 抗ｃｄ３６抗体及び癌を治療するためのそれらの使用
CA3229855A1 (en) 2021-08-31 2023-03-09 Incyte Corporation Naphthyridine compounds as inhibitors of kras
US12030883B2 (en) 2021-09-21 2024-07-09 Incyte Corporation Hetero-tricyclic compounds as inhibitors of KRAS
WO2023056361A1 (en) 2021-09-29 2023-04-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-hsp70 antibodies and therapeutic uses thereof
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
WO2023056421A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Incyte Corporation Pyrazoloquinoline kras inhibitors
TW202327595A (zh) 2021-10-05 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合
US20250002600A1 (en) 2021-10-06 2025-01-02 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination therapy
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
IL312114A (en) 2021-10-14 2024-06-01 Incyte Corp Quinoline compounds as Kras inhibitors
EP4419566A4 (en) * 2021-10-21 2025-09-17 Seismic Therapeutic Inc DUAL-TARGETED IMMUNE REGULATORY COMPOSITIONS
CN118176214A (zh) 2021-10-29 2024-06-11 百时美施贵宝公司 血液癌症的lag-3拮抗剂疗法
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
JP2024542248A (ja) 2021-11-22 2024-11-13 インサイト・コーポレイション Ｆｇｆｒ阻害剤とｋｒａｓ阻害剤を含む併用療法
US11976073B2 (en) 2021-12-10 2024-05-07 Incyte Corporation Bicyclic amines as CDK2 inhibitors
TW202340215A (zh) 2021-12-22 2023-10-16 美商英塞特公司 Ｆｇｆｒ抑制劑之鹽及固體形式以及其製備方法
MX2024008831A (es) 2022-01-26 2024-07-25 Bristol Myers Squibb Co Terapia combinada para carcinoma hepatocelular.
MX2024010310A (es) 2022-02-25 2024-08-28 Bristol Myers Squibb Co Terapia de combinacion para carcinoma colorrectal.
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
CA3254481A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag USE OF ANTI-CLAUDIN-1 ANTIBODIES TO INCREASE T LYMPHOCYTE AVAILABILITY
JP2025509749A (ja) 2022-03-18 2025-04-11 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー ポリペプチドの単離方法
US20260042840A1 (en) 2022-04-07 2026-02-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
IL315992A (en) 2022-04-08 2024-11-01 Bristol Myers Squibb Co Identification, classification and quantification of tertiary lymphoid structures using machine learning
AU2023269545A1 (en) 2022-05-12 2024-11-14 BioNTech SE Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
EP4531916A1 (en) 2022-06-02 2025-04-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
CA3258446A1 (en) * 2022-06-07 2023-12-14 Incyte Corporation POLYTHERAPY COMBINING AN ANTI-PD-1 ACTIVE AGENT, AN ANTI-TIM-3 ACTIVE AGENT AND AN ANTI-LAG-3 ACTIVE AGENT FOR THE TREATMENT OF CANCER
CA3258613A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Incyte Corporation Triazolo tricyclic compounds used as DGK inhibitors
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024015731A1 (en) 2022-07-11 2024-01-18 Incyte Corporation Fused tricyclic compounds as inhibitors of kras g12v mutants
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
JP2025526369A (ja) 2022-07-27 2025-08-13 アストラゼネカ・アクチエボラーグ Ｐｄ－１／ｐｄ－ｌ１阻害剤を有するインターロイキン１２を発現する組換えウイルスの組み合わせ
JP2025525886A (ja) 2022-08-02 2025-08-07 オーエスイー・イミュノセラピューティクス Ｃｄ２８に対する多機能性分子
WO2024072893A1 (en) * 2022-09-28 2024-04-04 Incyte Corporation Anti-pd-1/lag-3 bispecific antibodies and uses thereof
JP2025533015A (ja) 2022-09-30 2025-10-03 アレンティス セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 薬物抵抗性肝細胞癌の処置
WO2024092031A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Seismic Therapeutic, Inc. VARIANT IgG FC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
CN120569402A (zh) * 2022-10-25 2025-08-29 布里格姆妇女医院 Klrb1结合剂及其使用方法
WO2024097328A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Incyte Corporation Combination therapies comprising an anti-gitr antibody for treating cancers
WO2024107731A2 (en) * 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
CN120202222A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 勃林格殷格翰国际有限公司 抗SIRPa抗体的疗效预测性生物标志物
US20240217989A1 (en) 2022-11-18 2024-07-04 Incyte Corporation Heteroaryl Fluoroalkenes As DGK Inhibitors
AU2023403103A1 (en) 2022-12-01 2025-07-10 Medimmune Limited Combination therapy for treatment of cancer comprising anti-pd-l1 and anti-cd73 antibodies
EP4626446A1 (en) 2022-12-01 2025-10-08 BioNTech SE Multispecific antibody against cd40 and cd137 in combination therapy with anti-pd1 ab and chemotherapy
IL321098A (en) 2022-12-14 2025-07-01 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy including bispecific binding agents that bind to CLDN18.2- and CD3- and immune checkpoint inhibitors
IL321575A (en) 2022-12-21 2025-08-01 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy for lung cancer
CN117482246B (zh) * 2022-12-30 2024-10-15 英百瑞(杭州)生物医药有限公司 抗cd33/cll1双特异性抗体-自然杀伤细胞偶联物及其用途
KR20240112755A (ko) * 2023-01-11 2024-07-19 주식회사 녹십자 혈전성 질환의 예방 또는 치료를 위한 신규한 액상 제형물
WO2024150177A1 (en) 2023-01-11 2024-07-18 Advesya Treatment methods for solid tumors
WO2024151346A1 (en) 2023-01-12 2024-07-18 Incyte Corporation Heteroaryl fluoroalkenes as dgk inhibitors
JP2026504180A (ja) 2023-01-30 2026-02-03 カイマブ・リミテッド 抗体
WO2024175699A1 (en) 2023-02-23 2024-08-29 Imcheck Therapeutics Combination of btn3a activating antibody and immune checkpoint inhibitors
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy
WO2024200823A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
EP4687990A1 (en) 2023-03-30 2026-02-11 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
WO2024209072A1 (en) 2023-04-06 2024-10-10 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 for treating cancer
WO2024220532A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Incyte Corporation Pyrrolidine kras inhibitors
TW202509071A (zh) 2023-05-12 2025-03-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 能夠與ｏｘ４０結合之抗體、其變異體及其用途
WO2024236048A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Nh Theraguix Combination therapy for treating tumors with radiotherapy
CN121605130A (zh) 2023-06-23 2026-03-03 感应检查疗法公司 靶向btn3a和pd-1/pd-l1抑制轴的双特异性抗体
CN121712571A (zh) 2023-08-15 2026-03-20 百时美施贵宝公司 陶瓷羟基磷灰石色谱流通法
TW202517247A (zh) 2023-08-24 2025-05-01 美商英塞特公司 雙環ｄｇｋ抑制劑
WO2025056180A1 (en) 2023-09-15 2025-03-20 BioNTech SE Methods of treatment using agents binding to epcam and cd137 in combination with pd-1 axis binding antagonists
WO2025068452A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
WO2025068461A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
US20250114346A1 (en) 2023-10-09 2025-04-10 Incyte Corporation Combination therapy using a kras g12d inhibitor and pd-1 inhibitor or pd-l1 inhibitor
WO2025096738A1 (en) 2023-11-01 2025-05-08 Incyte Corporation Kras inhibitors
TW202540189A (zh) 2023-11-30 2025-10-16 德商生物新技術公司 在組合療法中能夠結合ｏｘ４０之抗體
WO2025122545A1 (en) 2023-12-05 2025-06-12 Incyte Corporation Tricyclic triazolo compounds as dgk inhibitors
WO2025122695A1 (en) 2023-12-06 2025-06-12 Incyte Corporation Combination therapy comprising dgk inhibitors and pd-1/pd-l1 inhibitors
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
TW202541837A (zh) 2023-12-08 2025-11-01 日商安斯泰來製藥公司 含有結合至cldn18.2和cd3之雙特異性結合劑和穩定或增加cldn18.2表現之藥劑之組合療法
WO2026033885A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
US20250195536A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Incyte Corporation Bicyclooctane kras inhibitors
WO2025132831A1 (en) 2023-12-19 2025-06-26 Universite D'aix-Marseille N-heteroaryl derivatives and uses thereof for treating cancer
WO2025133115A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising il-35
US20250215087A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg depleting agent
US12521446B2 (en) 2024-02-27 2026-01-13 Bristol-Myers Squibb Company Anti-CEACAM5 antibody drug conjugates
WO2025184208A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
WO2025242835A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Ose Immunotherapeutics Molecules comprising masking linkers and uses thereof for the treatment of cancer
WO2025245489A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of tumors in subjects having fgl-1 positive samples
WO2025262250A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their uses

Family Cites Families (249)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US320A (en) 1837-07-31 John dainty
US5985A (en) 1848-12-26 Pianoforte-action
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (sr) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
DE68928427T2 (de) 1988-09-15 1998-06-04 Univ Columbia Antikörper mit modifiziertem Kohlenhydratgehalt und Verfahren zur Herstellung und Verwendung
AU6290090A (en) 1989-08-29 1991-04-08 University Of Southampton Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates
WO1991005548A1 (en) 1989-10-10 1991-05-02 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
CA2071867A1 (en) 1989-11-06 1991-05-07 Edith Mathiowitz Method for producing protein microspheres
FR2656800B1 (fr) 1990-01-08 1992-05-15 Roussy Inst Gustave Nouvelles proteines produits par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques.
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
FR2664500B1 (fr) 1990-07-13 1994-10-28 Lille Ii Universite Droit Sant Procede de preparation d'une lipoproteine modifiee par incorporation d'une substance active lipophile, lipoproteine modifiee ainsi obtenue et composition pharmaceutique ou cosmetique la contenant.
US5972337A (en) 1990-11-01 1999-10-26 Cancer Research Fund Of Contra Costa 46 kilodalton human milk fat globule (HMFG) antigen, fragments and fusion protein
CA2109528A1 (en) 1991-05-01 1992-11-02 Gregory A. Prince A method for treating infectious respiratory diseases
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5843749A (en) 1991-07-26 1998-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ehk and Ror tyrosine kinases
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9225453D0 (en) 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
IL108501A (en) 1994-01-31 1998-10-30 Mor Research Applic Ltd Antibodies and pharmaceutical compositions containing them
WO1995030750A2 (fr) 1994-05-06 1995-11-16 Institut Gustave Roussy Fractions polypeptidiques solubles de la proteine lag-3; procede de production; composition therapeutique; anticorps anti-idiotype
CA2207961A1 (en) 1995-01-05 1996-07-11 Robert J. Levy Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
AU710347B2 (en) 1995-08-31 1999-09-16 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US5942328A (en) 1996-02-29 1999-08-24 International Business Machines Corporation Low dielectric constant amorphous fluorinated carbon and method of preparation
DK0885002T3 (da) 1996-03-04 2011-08-22 Penn State Res Found Materialer og fremgangsmåder til forøgelse af cellulær internalisering
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
CA2273080C (fr) 1996-11-28 2004-11-09 Institut Gustave Roussy Mutants de la proteine lag-3, leur expression et utilisation
CA2277801C (en) 1997-01-16 2002-10-15 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US6090381A (en) 1997-02-11 2000-07-18 Immunomedics, Inc. Stimulation of an immune response with antibodies labeled with the . .alpha-galactosyl epitope
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP0900841A1 (en) 1997-06-18 1999-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) LAG-3 splice variants
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE19819846B4 (de) 1998-05-05 2016-11-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Multivalente Antikörper-Konstrukte
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
CA2336139C (en) 1998-06-24 2008-10-14 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
WO2001014557A1 (en) 1999-08-23 2001-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
CA2383424C (en) 1999-08-23 2011-02-15 Gordon Freeman Novel b7-4 molecules and uses therefor
EP3225632B1 (en) 1999-11-30 2020-05-06 Mayo Foundation for Medical Education and Research Antibodies binding to b7-h1, a novel immunoregulatory molecule
US6803192B1 (en) 1999-11-30 2004-10-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
DK1252192T3 (da) 2000-02-11 2006-11-20 Merck Patent Gmbh Forbedring af antistofbaserede fusionsproteiners serumhalveringstid
AU2001270609A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
AU2002258941A1 (en) 2001-04-20 2002-11-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing cell responsiveness
JP4249013B2 (ja) 2001-07-31 2009-04-02 佑 本庶 Ｐｄ−１に対し特異性を有する物質
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
DE60124912T2 (de) 2001-09-14 2007-06-14 Affimed Therapeutics Ag Multimerische, einzelkettige, Tandem-Fv-Antikörper
US20030138425A1 (en) 2001-09-21 2003-07-24 Mather Jennie Powell Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof
WO2003032814A2 (en) 2001-10-16 2003-04-24 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen cd46 and methods of use thereof
US20030157108A1 (en) 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
WO2003087340A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to integrin alpha-v-beta-6 and methods of use thereof
KR20040101502A (ko) 2002-04-16 2004-12-02 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물
US20040048319A1 (en) 2002-05-03 2004-03-11 Mather Jennie P. ALCAM and ALCAM modulators
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
EP2206517B1 (en) 2002-07-03 2023-08-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Immunopotentiating compositions comprising anti-PD-L1 antibodies
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
JP4757493B2 (ja) 2002-11-13 2011-08-24 レイベン バイオテクノロジーズ，インコーポレイティド 抗原ｐｉｐａおよびそれに結合する抗体
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7563869B2 (en) 2003-01-23 2009-07-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human PD-1
WO2004078928A2 (en) 2003-02-28 2004-09-16 The Johns Hopkins University T cell regulation
ES2301099T3 (es) 2003-07-07 2008-06-16 The Scripps Research Institute Composiciones de parejas ortogonales lisil-arnt y aminoacil-arnt sintetasa y usos de las mismas.
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2005028498A2 (en) 2003-09-18 2005-03-31 Raven Biotechnologies, Inc. Kid3 and kid3 antibodies that bind thereto
CA2545603A1 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto
CA2550551C (en) 2004-01-16 2013-10-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion polypeptides capable of activating receptors
KR20050082389A (ko) 2004-02-18 2005-08-23 메덱스젠 주식회사 직렬 연쇄체를 갖는 면역접합체를 포함하는 장기이식합병증 치료용 약제학적 조성물
EP1765868B1 (en) 2004-06-07 2016-04-20 MacroGenics, Inc. Transferrin receptor antibodies
US20070166281A1 (en) 2004-08-21 2007-07-19 Kosak Kenneth M Chloroquine coupled antibodies and other proteins with methods for their synthesis
US20090123413A1 (en) 2004-08-23 2009-05-14 Britta Hardy Use of bat monoclonal antibody for immunotherapy
KR20070050504A (ko) 2004-10-15 2007-05-15 베리사인 인코포레이티드 일회용 비밀번호
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
CA2593786A1 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Raven Biotechnologies, Inc. Kid31 and antibodies that bind thereto
CA2596115A1 (en) 2005-01-31 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Luca2 and antibodies that bind thereto
NZ556561A (en) 2005-02-02 2011-08-26 Macrogenics West Inc Adam-9 modulators
US20060171952A1 (en) 2005-02-02 2006-08-03 Mather Jennie P JAM-3 and antibodies that bind thereto
JP5328156B2 (ja) 2005-02-03 2013-10-30 マクロジェニックス ウエスト， インコーポレイテッド オンコスタチンｍレセプターに対する抗体
AU2006210460B2 (en) 2005-02-04 2012-04-05 Macrogenics West, Inc. Antibodies that bind to EphA2 and methods of use thereof
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
EP1874824A4 (en) 2005-04-06 2009-12-30 Ibc Pharmaceuticals Inc METHODS OF GENERATING STABLE COMPOUND RELATED COMPLEXES OF HOMODIMERS, HOMOTRATEERS OR DIMER SIZES AND USES THEREOF
EP3479844B1 (en) 2005-04-15 2023-11-22 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2720160T3 (es) 2005-05-09 2019-07-18 Ono Pharmaceutical Co Anticuerpos monoclonales humanos contra muerte programada 1(PD-1) y métodos para tratar el cáncer usando anticuerpos dirigidos contra PD-1 solos o junto con otras sustancias inmunoterapéuticas
CN104436190A (zh) 2005-06-08 2015-03-25 达纳-法伯癌症研究院公司 通过抑制程序性细胞死亡1(pd-1)途经治疗持续性感染和癌症的方法及组合物
JP2006345852A (ja) 2005-06-16 2006-12-28 Virxsys Corp 抗体複合体
EA019344B1 (ru) 2005-07-01 2014-03-31 МЕДАРЕКС, Эл.Эл.Си. Человеческие моноклональные антитела против лиганда-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1) и их применения
CA2618681C (en) 2005-08-10 2015-10-27 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP2500352A1 (en) 2005-08-19 2012-09-19 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CA2607056C (en) 2005-10-19 2015-11-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
JP5090366B2 (ja) 2005-12-16 2012-12-05 アイビーシー ファーマスーティカルズ，インク． 多価イムノグロブリン系生物活性アセンブリー
JP2009529331A (ja) 2006-03-10 2009-08-20 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型重鎖を有する抗体の同定および工学的改変ならびにその使用方法
ES2395969T3 (es) 2006-03-24 2013-02-18 Merck Patent Gmbh Dominios de proteínas heterodiméricas genéticamente modificados
EP2418223A3 (en) 2006-06-12 2013-01-16 Emergent Product Development Seattle, LLC Single-chain multivalent binding proteins with effector function
AT503902B1 (de) 2006-07-05 2008-06-15 F Star Biotech Forsch & Entw Verfahren zur manipulation von immunglobulinen
AT503889B1 (de) 2006-07-05 2011-12-15 Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F Multivalente immunglobuline
EP2059533B1 (en) 2006-08-30 2012-11-14 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
WO2008140603A2 (en) 2006-12-08 2008-11-20 Macrogenics, Inc. METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING
CA2673870A1 (en) 2006-12-27 2008-07-10 Emory University Compositions and methods for the treatment of infections and tumors
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
EP2666787B1 (en) 2007-05-31 2022-02-09 Genmab A/S STABLE IgG4 ANTIBODIES
JP2010190572A (ja) 2007-06-01 2010-09-02 Sapporo Medical Univ ＩＬ１３Ｒａ２に対する抗体およびこれを含む診断・治療薬
JP5191537B2 (ja) 2007-06-18 2013-05-08 エム・エス・ディー・オス・ベー・フェー ヒトのプログラムされたデスレセプターｐｄ−１に対する抗体
ES2702087T3 (es) 2007-06-21 2019-02-27 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos
WO2009014708A2 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
WO2009018386A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Medimmune, Llc Multispecific epitope binding proteins and uses thereof
US8062852B2 (en) 2007-10-01 2011-11-22 The Children's Hospital And Regional Medical Center Detection and treatment of autoimmune disorders
TW200938224A (en) 2007-11-30 2009-09-16 Medarex Inc Anti-B7H4 monoclonal antibody-drug conjugate and methods of use
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
SI2235064T1 (sl) 2008-01-07 2016-04-29 Amgen Inc. Metoda za izdelavo heterodimernih molekul - protitelesa fc z uporabo elektrostatičnih usmerjevalnih učinkov
EP2242773B1 (en) 2008-02-11 2017-06-14 Cure Tech Ltd. Monoclonal antibodies for tumor treatment
EP2113255A1 (en) 2008-05-02 2009-11-04 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Cytotoxic immunoglobulin
US7565048B1 (en) 2008-05-30 2009-07-21 Ofs Fitel Llc Undersea optical fiber transmission systems
WO2010033279A2 (en) 2008-06-04 2010-03-25 Macrogenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
EP2307050A4 (en) 2008-07-04 2012-07-25 Ono Pharmaceutical Co USE OF A EFFECTIVENESS MARKER TO OPTIMIZE THE THERAPEUTIC EFFECTIVENESS OF AN ANTI-HUMAN PD-1 ANTIBODY ON CANCERS
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
RS54233B1 (sr) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc. Kompozicije pd-1 antagonista i postupci za njihovu primenu
WO2010028797A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
WO2010028796A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Trispecific hexavalent antibodies
WO2010028795A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
BRPI0919377A2 (pt) 2008-09-26 2016-09-27 Dana Farber Cancer Inst Inc anticorpo isolado ou um fragmento ligante de antígeno do memso, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, composição farmacêutica, método de produzir o referido anticorpo ou fragmento, uso dos mesmos, e composição compreendendo o referido anticorpo ou fragmento
SG172254A1 (en) 2008-12-19 2011-07-28 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
KR20110099762A (ko) * 2008-12-26 2011-09-08 고쿠리츠다이가쿠호우진 도쿄다이가쿠 항ｌｇｒ７항체를 사용하는 암의 진단 및 치료
ES2629337T3 (es) 2009-02-09 2017-08-08 Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale Anticuerpos contra PD-1 y anticuerpos contra PD-L1 y usos de los mismos
NZ594665A (en) 2009-03-20 2013-08-30 Genentech Inc Bispecific anti-her antibodies
EP2435473B1 (en) 2009-05-27 2013-10-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies
US8277919B2 (en) 2009-07-23 2012-10-02 VMO Systems, Inc. Reflective coating for an optical disc
CN102666874B (zh) 2009-10-07 2016-06-01 宏观基因有限公司 由于岩藻糖基化程度的改变而表现出改善的效应子功能的含Fc区的多肽及其使用方法
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
MX2012006406A (es) 2009-12-04 2012-07-25 Genentech Inc Anticuerpos multiespecificos, analogos de anticuerpo, composiciones y metodos.
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
US20110206672A1 (en) 2010-02-25 2011-08-25 Melvyn Little Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof
EP2361936B1 (en) 2010-02-25 2016-04-20 Affimed GmbH Antigen-binding molecule and uses thereof
DK2542256T3 (da) * 2010-03-04 2019-08-26 Macrogenics Inc Antistoffer reagerende med b7-h3, immunologisk aktive fragmenter deraf og anvendelser deraf
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
CA2791930A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Kerry Louise Tyson Pd-1 antibody
TWI426920B (zh) 2010-03-26 2014-02-21 Hoffmann La Roche 雙專一性、雙價抗－ｖｅｇｆ／抗－ａｎｇ－２抗體
PL2560993T3 (pl) 2010-04-20 2024-11-04 Genmab A/S Heterodimeryczne białka zawierające region FC przeciwciała i sposoby ich wytwarzania
US8876892B2 (en) 2010-04-21 2014-11-04 Medtronic, Inc. Prosthetic heart valve delivery system with spacing
US9637557B2 (en) 2010-04-23 2017-05-02 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
CA2797981C (en) 2010-05-14 2019-04-23 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
WO2011159877A2 (en) 2010-06-18 2011-12-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
US20130115215A1 (en) 2010-07-14 2013-05-09 Hongxing Zhou Domain insertion immunoglobulin
CA2807127C (en) 2010-08-02 2019-02-12 Leslie S. Johnson Covalent diabodies and uses thereof
RU2608640C2 (ru) 2010-08-16 2017-01-23 Новиммун С.А. Способы получения мультиспецифичных и мультивалентных антител
AU2011325833C1 (en) 2010-11-05 2017-07-13 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
CA2830806C (en) 2011-03-31 2020-05-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of antibodies to human programmed death receptor pd-1 and related treatments
JP6072771B2 (ja) 2011-04-20 2017-02-01 メディミューン，エルエルシー Ｂ７−ｈ１およびｐｄ−１に結合する抗体およびその他の分子
US9750806B2 (en) 2011-05-17 2017-09-05 Trion Research Gmbh Vaccine preparation containing trifunctional antibodies with antigen immunogenicity enhancer properties
WO2012162068A2 (en) 2011-05-21 2012-11-29 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
CN107827985A (zh) 2011-05-21 2018-03-23 宏观基因有限公司 能够与人和非人cd3结合的cd3结合分子
WO2012162583A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
WO2013003652A1 (en) 2011-06-28 2013-01-03 Sea Lane Biotechnologies, Llc Multispecific stacked variable domain binding proteins
CN107988156B (zh) 2011-06-30 2022-01-04 建新公司 T细胞活化的抑制剂
EP2729488A4 (en) 2011-07-06 2015-01-14 Medimmune Llc PROCESS FOR PREPARING MULTIMANT POLYPEPTIDES
US9920438B2 (en) 2011-07-07 2018-03-20 Massachusetts Institute Of Technology Methods and apparatus for ultrathin catalyst layer for photoelectrode
WO2013013700A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 Affimed Therapeutics Ag Multivalent antigen-binding fv molecule
JP6240600B2 (ja) 2011-07-24 2017-11-29 キュアテク リミテッド ヒト化免疫モノクローナル抗体の変異体
HUE044633T2 (hu) 2011-10-27 2019-11-28 Genmab As Heterodimer fehérjék elõállítása
EP2776061B1 (en) 2011-11-07 2019-08-14 MedImmune, LLC Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
EP2812432B1 (en) 2012-02-10 2020-10-14 Research Corporation Technologies, Inc. Fusion proteins comprising immunoglobulin constant domain-derived scaffolds
WO2013163427A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
US9212224B2 (en) 2012-05-15 2015-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies that bind PD-L1 and uses thereof
KR20150013188A (ko) 2012-05-24 2015-02-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중특이적 항체
UY34887A (es) * 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
CN104936982B (zh) 2012-08-03 2020-04-24 丹娜法伯癌症研究院 抗-pd-l1和pd-l2双结合抗体单一试剂及其使用方法
CN104812244B (zh) 2012-09-17 2018-10-30 卡莱克汀医疗有限公司 增强癌症治疗中特异性免疫疗法的方法
KR102130865B1 (ko) 2012-10-02 2020-08-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 암을 치료하기 위한 항-kir 항체와 항-pd-1 항체의 조합물
US20150273056A1 (en) 2012-10-12 2015-10-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Enhancement of the immune response
US9789182B2 (en) 2012-10-23 2017-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-KIR and anti-CTLA-4 antibodies to treat cancer
EP2911669B1 (en) 2012-10-26 2024-04-10 The University of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
HRP20201113T1 (hr) 2013-03-15 2020-10-30 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Vežući proteini protiv lag-3
KR102243062B1 (ko) * 2013-05-02 2021-04-21 아납티스바이오, 아이엔씨. 예정된 사멸-1에 대한 항체
US9676853B2 (en) * 2013-05-31 2017-06-13 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-1
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
DK177790B1 (en) 2013-08-08 2014-07-07 Liqtech Internat A S A METHOD OF PRODUCING A CERAMIC FILTER MEMBRANE, A METHOD OF IMPROVING A CERAMIC FILTER MEMBRANE AND THE CERAMIC FILTER MEMBRANE OBTAINED BY THE METHOD
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
EP2839842A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
EP2840091A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
JP6623353B2 (ja) 2013-09-13 2019-12-25 ベイジーン スウィッツァーランド ゲーエムベーハー 抗ｐｄ−１抗体並びにその治療及び診断のための使用
SI3508502T1 (sl) 2013-09-20 2023-07-31 Bristol-Myers Squibb Company Kombinacija anti-lag-3 protiteles in anti-pd-1 protiteles za zdravljenje tumorjev
US10570204B2 (en) * 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
ES2746805T3 (es) 2013-12-12 2020-03-06 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Anticuerpo de PD-1, fragmento de unión a antígeno del mismo y aplicación médica del mismo
NZ720353A (en) 2013-12-30 2019-12-20 Epimab Biotherapeutics Inc Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
EP3096782A4 (en) 2014-01-21 2017-07-26 Medlmmune, LLC Compositions and methods for modulating and redirecting immune responses
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
ES2716685T3 (es) 2014-01-24 2019-06-14 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo para PD-1 y usos de las mismas
KR20160106762A (ko) 2014-01-28 2016-09-12 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 혈액 악성종양을 치료하기 위한 항-lag-3 항체
TWI777174B (zh) 2014-03-14 2022-09-11 瑞士商諾華公司 針對lag-3之抗體分子及其用途
US20150307620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-29 University Of Connecticut Linked immunotherapeutic agonists that costimulate multiple pathways
JP2017515859A (ja) 2014-05-15 2017-06-15 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体と他の抗癌剤の組み合わせを使用する肺癌の処置
TWI742423B (zh) 2014-05-29 2021-10-11 美商宏觀基因股份有限公司 特異性結合多種癌症抗原的三特異性結合分子和其使用方法
WO2015195163A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 R-Pharm Overseas, Inc. Pd-l1 antagonist fully human antibody
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
EP3160497A4 (en) 2014-06-27 2018-01-17 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Conjugates for immunotherapy
JP6986965B2 (ja) 2014-07-22 2021-12-22 アポロミクス インコーポレイテッド 抗ｐｄ−１抗体
CN105330740B (zh) 2014-07-30 2018-08-17 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
US9982053B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
WO2016022630A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Jiping Zha Anti-pd-l1 antibodies
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
US10822414B2 (en) 2014-11-11 2020-11-03 Sutro Biopharma, Inc. Anti-PD-1 antibodies, compositions comprising anti-PD-1 antibodies and methods of using anti-PD-1 antibodies
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
CA3175979A1 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Pd-1 Acquisition Group, Llc Anti-pd-1 antibodies
EA201791768A1 (ru) 2015-02-06 2018-07-31 КАДМОН КОРПОРЕЙШН, ЭлЭлСи Иммуномодулирующие агенты
SG11201708223QA (en) 2015-04-17 2017-11-29 Bristol Myers Squibb Co Compositions comprising a combination of an anti-pd-1 antibody and another antibody
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI870335B (zh) * 2015-06-12 2025-01-21 美商宏觀基因股份有限公司 變異的嵌合4d5抗體及其與抗pd-1抗體聯合用於治療癌症的應用
HUE055207T2 (hu) 2015-07-30 2021-11-29 Macrogenics Inc PD-1 és LAG-3 kötõ molekulák és eljárások azok alkalmazására
CN108136010A (zh) 2015-10-08 2018-06-08 宏观基因有限公司 用于治疗癌症的联合疗法
SMT202200118T1 (it) 2015-11-03 2022-05-12 Janssen Biotech Inc Anticorpi che legano specificamente pd-1 e loro usi

Also Published As

Publication number Publication date
HUE055207T2 (hu) 2021-11-29
CY1124723T1 (el) 2022-07-22
FI3981792T3 (fi) 2024-09-23
CR20180062A (es) 2018-05-25
EP3456346A1 (en) 2019-03-20
SMT202100527T1 (it) 2021-11-12
TW202229357A (zh) 2022-08-01
JP2019055948A (ja) 2019-04-11
IL287916B1 (en) 2023-05-01
LT3456346T (lt) 2021-09-27
PL3981792T3 (pl) 2024-12-16
LT3981792T (lt) 2024-11-11
RS66208B1 (sr) 2024-12-31
JP2023075241A (ja) 2023-05-30
KR20180093127A (ko) 2018-08-20
CN108976300A (zh) 2018-12-11
PE20181151A1 (es) 2018-07-17
JP2022002540A (ja) 2022-01-11
SI3981792T1 (sl) 2024-10-30
CR20200423A (es) 2021-01-20
DK3328419T3 (da) 2021-10-11
US10577422B2 (en) 2020-03-03
US20200231675A1 (en) 2020-07-23
PE20231958A1 (es) 2023-12-06
PH12018500232A1 (en) 2018-08-29
JP2024178244A (ja) 2024-12-24
PE20240111A1 (es) 2024-01-22
EP3328419A4 (en) 2018-12-26
TW202535469A (zh) 2025-09-16
EP3981792A1 (en) 2022-04-13
HRP20211645T1 (hr) 2022-02-04
KR102762075B1 (ko) 2025-02-05
GEAP202315864A (en) 2023-05-25
EA201890296A1 (ru) 2018-08-31
US20230357404A1 (en) 2023-11-09
KR20250020718A (ko) 2025-02-11
PL3328419T3 (pl) 2021-12-27
ES2898958T3 (es) 2022-03-09
MA58293B1 (fr) 2024-11-29
ES2898511T9 (en) 2025-03-12
MD3328419T2 (ro) 2022-01-31
AU2022200168A1 (en) 2022-02-10
JO3736B1 (ar) 2021-01-31
CA2993948A1 (en) 2017-02-02
CO2018000867A2 (es) 2018-04-19
JOP20200213B1 (ar) 2025-10-01
RS62374B1 (sr) 2021-10-29
IL287916A (en) 2022-01-01
UA127372C2 (uk) 2023-08-02
IL290571B (en) 2022-11-01
SMT202100610T1 (it) 2021-11-12
SI3328419T1 (sl) 2021-11-30
HUE068868T2 (hu) 2025-02-28
WO2017019846A8 (en) 2018-01-25
JP6959907B2 (ja) 2021-11-05
LTPA2024525I1 (sr) 2024-08-26
EP4450088A2 (en) 2024-10-23
IL297090B1 (en) 2024-09-01
AU2018214151B2 (en) 2019-10-31
EP3328419B1 (en) 2021-08-25
MD3981792T2 (ro) 2025-02-28
TWI691509B (zh) 2020-04-21
PT3328419T (pt) 2021-11-26
SI3456346T1 (sl) 2021-11-30
MA42542A (fr) 2021-05-26
TWI762879B (zh) 2022-05-01
FR24C1033I1 (fr) 2024-08-30
WO2017019846A1 (en) 2017-02-02
JP7557567B2 (ja) 2024-09-27
CL2018000254A1 (es) 2018-07-20
EP3981792B1 (en) 2024-08-21
CN108976300B (zh) 2023-04-14
IL297090B2 (en) 2025-01-01
KR20180034588A (ko) 2018-04-04
MX2019001161A (es) 2019-07-04
FIC20240028I1 (fi) 2024-08-05
GEAP202214712A (en) 2022-07-25
AU2020200054B2 (en) 2022-03-03
DK3456346T3 (da) 2021-08-30
MX2022014645A (es) 2022-12-15
MA42542B1 (fr) 2021-09-30
ES2898511T3 (es) 2022-03-07
HRP20241289T1 (hr) 2024-12-20
IL290571B2 (en) 2023-03-01
PT3456346T (pt) 2021-09-28
US20190127467A1 (en) 2019-05-02
TW202417048A (zh) 2024-05-01
CN107847574A (zh) 2018-03-27
SG10201906059VA (en) 2019-08-27
IL297090A (en) 2022-12-01
EP3328419A1 (en) 2018-06-06
GEP20237538B (en) 2023-09-11
CY2024026I1 (el) 2025-03-28
JP6959897B2 (ja) 2021-11-05
LT3328419T (lt) 2021-11-10
IL257216A (en) 2018-03-29
HRP20211333T1 (hr) 2021-11-26
PL3456346T3 (pl) 2021-12-20
GEP20227419B (en) 2022-10-10
NZ739493A (en) 2024-12-20
HUS2400028I1 (hu) 2024-08-28
ZA201800500B (en) 2020-10-28
FR24C1033I2 (fr) 2025-05-23
AU2016298227B9 (en) 2019-10-31
SG10202010506TA (en) 2020-11-27
AU2016298227B2 (en) 2019-10-03
ZA201807856B (en) 2020-09-30
IL287916B2 (en) 2023-09-01
CN116333138A (zh) 2023-06-27
AU2016298227A1 (en) 2018-02-22
TW201710292A (zh) 2017-03-16
KR102761886B1 (ko) 2025-02-06
PT3981792T (pt) 2024-11-08
JP2018524394A (ja) 2018-08-30
TWI833183B (zh) 2024-02-21
AU2016298227A8 (en) 2018-03-08
HUE056201T2 (hu) 2022-02-28
AU2020200054A1 (en) 2020-01-30
JP7245304B2 (ja) 2023-03-23
US11623959B2 (en) 2023-04-11
AU2022200168B2 (en) 2025-01-02
ECSP18006831A (es) 2018-04-30
CN114773475B (zh) 2024-01-12
ES2994122T3 (en) 2025-01-17
CR20220194A (es) 2022-06-16
GEP20227438B (en) 2022-11-10
IL290571A (en) 2022-04-01
EP3456346B1 (en) 2021-07-07
HK1248106A1 (en) 2018-10-12
IL257216B (en) 2022-03-01
TW202028234A (zh) 2020-08-01
AU2018214151A1 (en) 2018-08-30
DK3981792T3 (da) 2024-09-02
CN107847574B (zh) 2023-05-23
GEAP202215554A (en) 2022-06-10
CY1124634T1 (el) 2022-07-22
AU2016298227A2 (en) 2018-09-13
NL301287I2 (nl) 2024-08-21
SMT202400381T1 (it) 2024-11-15
JOP20200213A1 (ar) 2022-10-30
EP4450088A3 (en) 2025-03-26
MX2018001227A (es) 2018-03-26
TWI886756B (zh) 2025-06-11
MD3456346T2 (ro) 2021-11-30
US12534531B2 (en) 2026-01-27
CN114773475A (zh) 2022-07-22
AU2025202334A1 (en) 2025-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7557567B2 (ja) Ｐｄ‐１結合分子及びその使用方法
TWI773646B (zh) 結合lag-3的分子和其使用方法
TWI814758B (zh) 雙特異性ｃｄ１６-結合分子及其在疾病治療中的用途
JP7192042B2 (ja) Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
HK40070346A (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40117494A (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40070346B (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
HK40006310B (en) Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof
HK40006310A (en) Pd-1 and lag-3 binding molecules and methods of use thereof
HK1248106B (en) Pd-1-binding molecules and methods of use thereof