CN113874036A - 使用cdk抑制剂的联合治疗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通过与PD‑1轴结合拮抗剂和任选存在的OX40激动剂和/或4‑1BB激动剂联合，向有需要的个体施用CDK4/6或CDK2/4/6抑制剂以治疗癌症的方法。

Description

使用CDK抑制剂的联合治疗

引用的序列表

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发明领域

本发明涉及用于治疗癌症的联合治疗。特别地，本发明涉及这样的联合治疗，其包括施用CDK抑制剂或其药学上可接受的盐，或包含此类化合物或盐的药物组合物，联合PD-1轴结合拮抗剂和任选存在的OX40激动剂和/或4-1BB激动剂。本发明还涉及相关的治疗方法、药物组合物和制药学应用。所述方法和组合物可用于所述治疗剂自身可用于检测、治疗和/或预防个体的疾病、病症或其它病况的任何适应症。

发明背景

细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)是重要的细胞酶，在调节真核细胞分裂和增殖中发挥重要作用。细胞周期蛋白依赖性激酶催化单位被称为细胞周期蛋白的调节亚单位激活。已经鉴定了至少16种哺乳动物细胞周期蛋白(Johnson DG,Walker CL.,Cyclins andCell Cycle Checkpoints.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.1999,39:295312)。细胞周期蛋白B/CDK1、细胞周期蛋白A/CDK2、细胞周期蛋白E/CDK2、细胞周期蛋白D/CDK4、细胞周期蛋白D/CDK6和其它可能的外差回路(heterodynes)是细胞周期进程的重要调节因子。细胞周期蛋白/CDK外差回路的其它功能包括转录调节、DNA修复、分化和细胞凋亡(Morgan DO.,Cyclin dependent kinases:engines,clocks,and microprocessors.Annu.Rev.Cell.Dev.Biol.1997,13:261291)。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂已被证明可用于治疗癌症。已表明细胞周期蛋白依赖性激酶的活性增加或暂时异常激活导致人肿瘤的发生，而人肿瘤的发生通常与CDK蛋白本身或其调节因子的改变有关(Cordon Cardo C.,Mutations of cell cycleregulators:biological and clinical implications for humanneoplasia.Am.J.Pathol.1995,147:545560；Karp JE,Broder S.,Molecular foundationsof cancer:new targets for intervention.Nat.Med.1995,1:309320；Hall M,PetersG.Genetic alterations of cyclins,cyclin dependent kinases,and CDK inhibitorsin human cancer.Adv.Cancer Res.1996,68:67108)。CDK和细胞周期蛋白的调节亚基的扩增，以及内源性CDK抑制剂的突变、基因缺失或转录沉默也有报道(Smalley et al.,Identification of a novel subgroup of melanomas with KIT/cyclin dependentkinase4 overexpression.Cancer Res 2008,68:574352)。

CDK4/6抑制剂帕博西尼(palbociclib)、瑞博西尼(ribociclib)和阿贝西利(abemaciclib)已被批准与芳香酶抑制剂联合用于治疗绝经后妇女的激素受体(HR)阳性、人表皮生长因子受体2(HER2)阴性晚期或转移性乳腺癌，以及联合氟维司群(fulvestrant)用于在内分泌治疗后的疾病进展(O’Leary et al.,Treating cancer with selectiveCDK4/6inhibitors.Nature Reviews 2016,13:417-430)。虽然CDK4/6抑制剂已在HR阳性转移性乳腺癌中表现出显著的临床疗效，但与其它激酶一样，其作用可能会随着时间的推移受到原发性或获得性抗性形成的限制。

CDK2的过表达与细胞周期的异常调节有关。细胞周期蛋白E/CDK2复合物在G1/S转换、组蛋白生物合成和中心体复制的调节中起重要作用。细胞周期蛋白D/Cdk4/6和细胞周期蛋白E/Cdk2对Rb的逐步磷酸化释放G1转录因子E2F，并促进S期进入。在早期S期期间细胞周期蛋白A/CDK2的激活促进内源性底物的磷酸化，使得DNA复制和E2F失活，以完成S期(Asghar et al.,The history and future of targeting cyclin-dependent kinasesin cancer therapy,Nat.Rev.Drug.Discov.2015,14(2):130-146)。

细胞周期蛋白E，CDK2的调节性细胞周期蛋白，通常在癌症中过表达。长期以来，细胞周期蛋白E扩增或过表达与乳腺癌的不良预后有关(Keyomarsi et al.,Cyclin E andsurvival in patients with breast cancer.N Engl J Med.2002,347:1566-75)。细胞周期蛋白E2(CCNE2)过表达与乳腺癌细胞中的内分泌抵抗有关，据报道CDK2抑制在他莫昔芬抗性和CCNE2过表达细胞中恢复对于他莫昔芬或CDK4抑制剂的敏感性(Caldon et al.,Cyclin E2 overexpression is associated with endocrine resistance but notinsensitivity to CDK2inhibition in human breast cancer cells.Mol CancerTher.2012,11:1488-99；Herrera-Abreu et al.,Early Adaptation and AcquiredResistance to CDK4/6Inhibition in Estrogen Receptor–Positive Breast Cancer,Cancer Res.2016,76:2301–2313)。据报道，细胞周期蛋白E扩增也导致HER2+乳腺癌中的曲妥珠单抗(trastuzumab)抗性(Scaltriti et al.,Cyclin Eamplification/overexpression is a mechanism of trastuzumab resistance in HER2+breast cancerpatients,Proc Natl Acad Sci.2011,108:3761-6)。据报道，细胞周期蛋白E过表达在基底细胞样和三阴性乳腺癌(TNBC)以及炎性乳腺癌中发挥作用(Elsawaf&Sinn,TripleNegative Breast Cancer:Clinical and Histological Correlations,Breast Care2011,6:273-278；Alexander et al.,Cyclin E overexpression as a biomarker forcombination treatment strategies in inflammatory breast cancer,Noske,et.al.,Detection of CCNE1/URI(19q12)amplification by in situ hybridisation is commonin high grade and type II endometrial cancer,Oncotarget2017,8:14897-14911)。

细胞周期蛋白E1(CCNE1)的扩增或过表达与卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌和其它癌症的不良预后相关(Nakayama et al.,Gene amplification CCNE1 is related to poorsurvival and potential therapeutic target in ovarian cancer,Cancer 2010,116:2621-34；Etemadmoghadam et al.,Resistance to CDK2 Inhibitors Is Associatedwith Selection of Polyploid Cells in CCNE1-Amplified Ovarian Cancer,ClinCancer Res 2013,19:5960–71；Au-Yeung et al.,Selective Targeting of Cyclin E1-Amplified High-Grade Serous Ovarian Cancer by Cyclin-Dependent Kinase 2andAKT Inhibition,Clin.Cancer Res.2017,23:1862-1874；Ayhan et al.,CCNE1 copy-number gain and overexpression identify ovarian clear cell carcinoma with apoor prognosis,Modern Pathology 2017,30:297–303；Ooi et al.,Gene amplificationof CCNE1,CCND1,and CDK6 in gastric cancers detected by multiplex ligation-dependent probe amplification and fluorescence in situ hybridization,HumPathol.2017,61:58-67；Noske et al.,Detection of CCNE1/URI(19q12)amplificationby in situ hybridization is common in high grade and type II endometrialcancer,Oncotarget 2017,8:14794-14805)。

帕博西尼或6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮(也称作“palbo”、“Palbo”或“PD-0332991”)是一种有效的选择性CDK4和CDK6抑制剂，具有以下结构：

帕博西尼描述于WHO Drug Information,2013,Vol.27，No.2,第17页。帕博西尼及其药学上可接受的盐公开于国际公开号WO 2003/062236和美国专利号6,936,612、7,208,489和7,456,168；国际公开号WO 2005/005426和美国专利号7,345,171和7,863,278；国际公开号WO 2008/032157和美国专利号7,781,583；以及国际公开号WO 2014/128588中。前述参考文献中的每一个文献的内容以其整体通过援引加入本文。

化合物PF-06873600或6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮是一种有效的选择性CDK2、CDK4和CDK6抑制剂，具有以下结构：

PF-06873600及其药学上可接受的盐公开于2018年2月22日公布的国际公开号WO2018/033815中。这个参考文献的内容通过援引以其整体加入本文。程序性死亡1(PD-1)受体和PD-1配体1和2(分别为PD-L1和PD-L2)在免疫调节中发挥着不可或缺的作用。PD-1由活化的T细胞、B细胞和骨髓细胞表达。此外，相对于正常组织中的T淋巴细胞和外周血T淋巴细胞，大多数肿瘤浸润性T淋巴细胞过表达PD-1(Ahmadzadeh et al.,Tumor antigen–specific CD8 T cells infiltrating the tumor express high levels of PD-1andare functionally impaired,Blood,2009 114(8):1537)。PD-1有两种已知的配体，即程序性死亡配体1(PD-L1)和程序性死亡配体2(PD-L2)。PD-1是由基质细胞、肿瘤细胞或两者表达的PD-L1(也称为B7-H1、B7-4、CD274和B7-H)和PD-L2激活，启动T细胞死亡和局部免疫抑制(Dong et al.,B7-H1,a third member of the B7 family,co-stimulates T-cellproliferation and interleukin-10secretion,Nat Med 1999；5:1365-69；Freeman etal.,Engagement of the PD-1immunoinhibitory receptor by a novel B7 familymember leads to negative regulation of lymphocyte activation,J Exp Med 2000；192:1027-34)，潜在地为肿瘤的发生和生长提供免疫耐受环境。相反，在非临床动物模型中，抑制这种相互作用可以增强局部T细胞应答及介导抗肿瘤活性(Iwai Y,et al.,Involvement of PD-L1 on tumor cells in the escape from host immune system andtumor immunotherapy by PD-L1 blockade,Proc Natl Acad Sci USA 2002；99:12293-97)。

PD-L1是一种细胞表面蛋白，是B7家族的成员。PD-L1存在于几乎所有类型的淋巴造血细胞中，在静息T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞中低水平表达，并被B细胞的抗CD40抗体、T细胞的抗CD3抗体、巨噬细胞的抗CD40抗体、IFNγ和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和/或树突状细胞(DC)的抗CD40抗体、IFNγ、IL-4、IL-12和GM-CSF进一步上调。PD-L1也由一些非造血细胞表达，并在许多癌症中过表达，其中其过表达往往与不良预后相关(Okazaki T et al.,PD-1and PD-1ligands:from discovery to clinicalapplication,Intern.Immun.2007 19(7):813)(Thompson R H et al.,Tumor B7-H1 isassociated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up,Cancer Res 2006,66(7):3381)。令人感兴趣的是，与正常组织和外周血中的T淋巴细胞相反，大多数肿瘤浸润性T淋巴细胞主要表达PD-1。肿瘤反应性T细胞上的PD-1可导致受损的抗肿瘤免疫应答(Ahmadzadeh et al.,Tumor antigen–specific CD8 Tcells infiltrating the tumor express high levels of PD-1and are functionallyimpaired,Blood 2009 114(8):1537)。这可能是由于利用表达PD-L1的肿瘤细胞与表达PD-1的T细胞相互作用介导的PD-L1信号传导所致，导致T细胞活化减弱和免疫监视的逃避(Sharpe et al.,The B7-CD28 superfamily,Nat Rev 2002)(Keir ME et al.,PD-1andits ligands in tolerance and immunityAnnu.Rev.Immunol.2008,26:677)。因此，抑制PD-L1/PD-1相互作用可增强CD8+T细胞介导的肿瘤杀伤。

另一种已知的PD-1配体PD-L2，也称为B7-DC、Btdc和CD273，是一种细胞表面蛋白。PD-L2由抗原呈递细胞(包括树突状细胞)表达，在其它非造血组织中也有表达。

通过其直接配体(例如PD-L1、PD-L2)抑制PD-1轴信号传导已被提议作为增强T细胞免疫以治疗癌症(例如肿瘤免疫)的一种手段。此外，通过抑制PD-L1与结合伴侣B7-1的结合，也观察到了类似的T细胞免疫增强(Ribas A.and Wolchok J.,Cancer immunotherapyusing checkpoint blockade,Science,2018,359:1350-1355)。

OX40受体(也称为CD134、TNFRSF4、ACT-4、ACT35和TXGP1L)是TNF受体超家族的成员。发现OX40在活化的CD4+和CD8+T细胞上表达。已经证明在肿瘤(肿瘤浸润淋巴细胞)和癌症患者的引流淋巴结中存在大量OX40+T细胞(Weinberg,A.et al.,Assessment ofactivity of an adhesion molecule CD134 and CD137 in colorectal cancerpatients,J.Immunol.2000,164:2160-69；Petty,J.et al.,Survival in humancolorectal cancer correlates with expression of the T-cell costimulatorymolecule OX-40(CD134),Am.J.Surg.2002,183:512-518)。在小鼠的肿瘤模型中表明，与对照治疗的小鼠相比，在肿瘤引发期间体内OX40的募集(engagement)显著延迟和防止肿瘤的出现(Weinberg et al.,2000)。因此，已经考虑经由使用OX40结合剂通过募集OX40以增强哺乳动物对抗原的免疫应答(WO1999/042585；Weinberg et al.,2000)。

4-1BB(也称为CD137和TNFRSF9)首先被鉴定为在活化的T细胞上表达的诱导型共刺激受体，是肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的跨膜糖蛋白。目前对4-1BB的理解表明表达通常是活化依赖的，并且包括广泛的免疫细胞亚群，包括活化的NK和NKT细胞；调节性T细胞；树突状细胞(DC)，包括滤泡DC；受刺激的肥大细胞、分化的骨髓细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和活化的B细胞。4-1BB的表达也已在肿瘤血管系统(19-20)和动脉粥样硬化内皮上得到证实。刺激4-1BB(4-1BBL)的配体在激活的抗原呈递细胞(APC)、骨髓祖细胞和造血干细胞上表达。4-1BB激动剂mAb增加共刺激分子表达并显着增强溶细胞的T淋巴细胞应答，从而在各种模型中产生抗肿瘤作用。4-1BB激动剂mAb已在预防和治疗环境以及单一疗法和联合疗法肿瘤模型中显示出功效，并已建立持久的抗肿瘤保护性T细胞记忆应答。

用于治疗、稳定、预防和/或延迟各种癌症(包括对CDK抑制剂具有抗性的癌症)形成的改进疗法包括大量未满足的医疗需求，需要确定新的联合方案以改善治疗结果。本发明优选的联合治疗显示出比仅用单一治疗剂的治疗更大的功效。

本文引用的所有参考文献，包括专利申请、专利公布和UniProtKB/Swiss-Prot登录号均通过援引以其整体加入本文，犹如每个参考文献均被特别地及单独地指出通过援引加入。

发明概述

本发明涉及用于治疗癌症的治疗方法、组合和药物组合物。还提供了联合治疗，其包括本发明的化合物与其它治疗剂联合。本发明还提供包含一种或多种本发明的组合物的药盒。

一方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，其包括与一定量的PD-1轴结合拮抗剂联合，向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，其中所述量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述个体组合施用一定量的：a.OX40激动剂；b.4-1BB激动剂；或c.OX40激动剂和4-1BB激动剂；其中所述量一起有效治疗癌症。

在一些此类实施方案中，任何上述方法中的PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂或PD-L2结合拮抗剂。

在一特定实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂。在一些此类实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与其配体结合伴侣的结合。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1的结合。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L2的结合。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和PD-L2二者的结合。

在一特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。

在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一些此类实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗(nivolumab)(MDX 1106)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)(MK-3475)、匹地利珠单抗(pidilizumab)(CT-011)、西米普利单抗(cemiplimab)(REGN2810)、替雷利珠单抗(BGB-A317)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)(PDR001)、RN888、mAb15、MEDI-0680(AMP-514)、BGB-108或AGEN-2034，或它们的组合。

在本文所述的治疗方法的一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，其中PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1的结合。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与B7-1的结合。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和B7-1二者的结合。

在一个特定的实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在更具体的实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(MDX-1105)、AMP-714、阿特朱单抗(atezolizumab)(MPDL3280A)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(MEDI4736)、阿维鲁单抗(avelumab)，或包含由ATCC登录号PTA-121183的表达载体产生的VH区并具有由ATCC登录号PTA-121182的表达载体产生的VL区的抗体，或它们的组合。

一方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，其包括与一定量的PD-1轴结合拮抗剂和一定量的OX40激动剂联合，向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，其中所述量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在如本文所述的治疗方法的一些实施方案中，OX40激动剂是抗OX40抗体、OX40L激动剂片段、OX40寡聚受体、三聚OX40L-Fc蛋白或OX40免疫粘附素，或它们的组合。在一特定实施方案中，OX40激动剂是抗OX40抗体。在一些此类实施方案中，抗OX40抗体是MEDI6469、MEDI0562、MEDI6383、MOXR0916或GSK3174998，或它们的组合。在一个特定的实施方案中，抗OX40抗体是全长人IgG-1抗体。在一些实施方案中，OX40激动剂是包含一个或多个OX40L胞外域的OX40L激动剂片段。

一方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，其包括与一定量的PD-1轴结合拮抗剂和一定量的4-1BB激动剂联合，向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，其中所述量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

另一方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，包括与一定量的PD-1轴结合拮抗剂、一定量的OX40激动剂和一定量的4-1BB激动剂联合，向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，其中所述量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一些实施方案中，所述4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。在一特定实施方案中，所述4-1BB激动剂是乌托鲁单抗(utomilumab)(PF-05082566)、1D8、3Elor、4B4、H4-1BB-M127、BBK2、145501、由作为ATCC No.HB-11248保藏的细胞系产生的抗体、5F4、C65-485、乌瑞芦单抗(urelumab)(BMS-663513)、20H4.9-IgG-1(BMS-663031)、4E9、BMS-554271、BMS-469492、3H3、BMS-469497、3E1、53A2或3B8。

在本文所述的治疗方法的一些实施方案中，CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂。在一些此类实施方案中，CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在本文所述的治疗方法的一些实施方案中，CDK抑制剂是CDK2/4/6抑制剂。在一些此类实施方案中，CDK2/4/6抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)-哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐。

在本文所述的方法的一些实施方案中，所述个体是人。

在本文所述的方法的一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。

在本文所述的方法的一些实施方案中，所述癌症是血液系统癌症。

在本文所述的治疗方法的一些实施方案中，所述癌症选自脑癌、头颈癌(包括头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌(包括尿路上皮癌，也称为移行细胞癌(TCC))、肺癌(包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))、乳腺癌、骨癌、结直肠癌、肾癌、肝癌(包括肝细胞癌(HCC))、胃癌、胰腺癌、食道癌、宫颈癌、肉瘤、皮肤癌(包括黑色素瘤和Merkel细胞癌(MCC))、多发性骨髓瘤、间皮瘤、恶性横纹肌样瘤(malignant rhabdoid tumor)、成神经细胞瘤、弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)、癌、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和SWI/SNF突变体癌症。

在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括向所述个体施用化学疗法、放射疗法、免疫疗法或光疗法或其任何组合。

一方面，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-1结合拮抗剂；b.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；c.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；或d.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂。

一方面，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-L1结合拮抗剂；b.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；c.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；d.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；或e.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)PD-L1结合拮抗剂；(iv)OX40激动剂；和(v)4-1BB激动剂。

一方面，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)-哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-1结合拮抗剂；b.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；c.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；或d.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂。

一方面，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)-哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-L1结合拮抗剂；b.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；c.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；d.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；或e.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂，(iii)PD-L1结合拮抗剂，(iv)OX40激动剂，和(v)抗4-1BB抗体。

在本文中组合的一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体；PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体；OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

在本文中组合的特定实施方案中，所述组合具有协同作用。在本文中组合的一些实施方案中，个体是人。在本文中组合的一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在本文中组合的一些实施方案中，所述癌症是血液系统癌症。在本文所述的组合的一些实施方案中，所述癌症选自脑癌、头颈癌(包括头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌(包括尿路上皮癌，也称为移行细胞癌(TCC))、肺癌(包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))、乳腺癌、骨癌、结直肠癌、肾癌、肝癌(包括肝细胞癌(HCC))、胃癌、胰腺癌、食道癌、宫颈癌、肉瘤、皮肤癌(包括黑色素瘤和Merkel细胞癌(MCC))、多发性骨髓瘤、间皮瘤、恶性横纹肌样瘤、成神经细胞瘤、弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)、癌、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性型淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和SWI/SNF突变体癌症。

在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌。乳腺癌可包括管腔A型、管腔B型、三阴性/基底细胞样型或HER2富集型。乳腺癌可以是雌激素受体(ER)阳性和/或孕酮受体(PR)阳性的，或者称为激素受体(HR)阳性的。HR阳性乳腺癌可以是人表皮生长因子受体2(HER2)阴性(即HR+/HER2-)或HER2阳性(即HR+/HER2+)的。HR阴性乳腺癌可以是HER2阳性(即HR-/HER2+)的，或HER阴性(HR-/HER2-)的，即“三阴性”乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，乳腺癌表现出对内分泌疗法、抗HER2剂和/或CDK4/CDK6抑制剂的原发性或获得性抗性。在一些实施方案中，乳腺癌是晚期或转移的乳腺癌。在上述的一些实施方案中，乳腺癌的特征在于CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达。

一方面，本发明提供药盒，其包含：a.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；b.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；c.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；或d.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iv)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；以及用于给药所述药物组合物以治疗癌症的说明。

在上述药盒的一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体；OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

一方面，本发明提供药盒，其包含：a.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；b.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；c.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；d.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iv)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；或e.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iv)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(v)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；以及用于给药所述药物组合物以治疗癌症的说明。

在本文所述药盒的一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体；OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

在本文所述药盒的一些实施方案中，CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂。在本文所述药盒的特定实施方案中，CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在本文所述药盒的一些实施方案中，CDK抑制剂是CDK2/4/6抑制剂。在本文所述药盒的特定实施方案中，CDK抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐。

附图简述

图1描绘了同基因MC38肿瘤生长抑制作用，以队列平均肿瘤体积(误差条表示均值的标准差)对比同种型/载体对照与免疫检查点阻断(PD-L1(PF-06834635)、OX40(PF-07201252)或4-1BB(PF-072188CDK4/6抑制(帕博西尼))以及检查点阻断联合CDK4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+帕博西尼)。

图2A以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图1的应答同种型和载体对照的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图2B以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图1的应答免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图2C以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图1的应答CDK4/6抑制(帕博西尼)的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图2D以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图1的应答检查点阻断与CDK4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+帕博西尼)联合的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图3描绘了同基因MC38肿瘤生长抑制作用，以队列平均肿瘤体积(误差条表示均值的标准差)对比同种型/载体对照与免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)、PD-L1(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)、PD-L1(PF-06834635)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)、抗PD-L1抗体(PF-06834635))、CDK2/4/6抑制(PF-06873600)以及免疫检查点阻断联合CDK2/4/6抑制((抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600)、抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600)、抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600)、抗PD-L1抗体(PF-06834635)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600))。

图4A以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答同种型和载体对照的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4B以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答CDK2/4/6抑制(PF-06873600)的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4C以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4D以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答检查点阻断联合CDK2/4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600)的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4E以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗4-1BB抗体(PF-07218859))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4F以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答检查点阻断联合CDK2/4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600)的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4G以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3应答的免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4H以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答检查点阻断联合CDK2/4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4I以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图4J以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图3的应答检查点阻断联合CDK2/4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600))的同基因MC38肿瘤生长抑制作用。

图5描绘了同基因4T1肿瘤生长抑制作用，以队列平均肿瘤体积(误差条表示均值的标准差)对比同种型/载体对照与免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859))、CDK2/4/6抑制(PF-06873600)以及检查点阻断联合CDK2/4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)、(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600))。

图6A以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图5的应答同种型和载体对照的同基因4T1肿瘤生长抑制作用。

图6B以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图5的应答免疫检查点阻断(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859))的同基因4T1肿瘤生长抑制作用。

图6C以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图5的应答CDK2/4/6抑制(PF-06873600)的同基因4T1肿瘤生长抑制作用。

图6D以单独的肿瘤生长曲线形式描绘了图5的应答检查点阻断联合CDK2/4/6抑制(抗PD-L1抗体(PF-06834635)/抗OX40抗体(PF-07201252)/抗4-1BB抗体(PF-07218859)+CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600))的同基因4T1肿瘤生长抑制作用。

发明详述

下文描述的每个实施方案均可以与本文描述的任何其它实施方案组合，而不与其所组合的实施方案相矛盾。此外，本文描述的每个实施方案设想本文描述的小分子化合物的药学上可接受的盐在其范围内。因此，短语“或其药学上可接受的盐”隐含在本文所述的所有小分子化合物的描述中。

I.缩写

在本发明的详细描述和实施例中，将使用如下缩写：

BID：每天两次

CDR：互补决定区

CHO：中国仓鼠卵巢

CR：完全应答

DFS：无病存活率

DMSO：二甲亚砜

DTR：剂量限制性毒性

FBS：胎牛血清

FFPE：福尔马林固定的石蜡包埋的

FR：构架区

IgG：免疫球蛋白G

IHC：免疫组织化学或免疫组织化学的

MPK：毫克/千克(mg/kg，或mg药物/kg动物体重)

MTD：最大耐受剂量

NCBI：国家生物技术信息中心

NCI：国家癌症研究所

OR：总体应答

OS：总体存活率

PD：进展性疾病

PFS：无进展存活率

PR：部分应答

Q2W：每两周一剂

Q3W：每三周一剂

Q4W：每四周一剂

QD：每天一剂

RECIST：实体瘤的应答评估标准

RPMI：Roswell Park Memorial Institute

SD：稳定的疾病

TGI：肿瘤生长抑制

VH：免疫球蛋白重链可变区

VK：免疫球蛋白κ轻链可变区

w/w：重量/重量

II.定义

通过参考以下对本发明的优选实施方案和本文包括的实施例的详细描述，可以更容易地理解本发明。应当理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在进行限制。还应理解的是，除非在本文具体定义，否则在本文使用的术语将被赋予其在相关领域中已知的传统含义。

如本文所用，除非另有说明，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式。例如，“一个”取代基包括一个或多个取代基。当复数形式用于化合物、盐等时，这也被认为是指单一化合物、盐等。

本文描述的本发明适当地可在不存在本文未具体公开的任何元素的情况下实施。因此，例如，在本文的每种情况中，术语“包含”、“基本上由…组成”和“由…组成”中的任何一个术语均可以被另两个术语中的任一个替换。

当用于修饰数字定义的参数(例如CDK抑制剂的剂量、PD-1轴结合拮抗剂的剂量、OX40激动剂(例如抗OX40抗体(αOX40))的剂量、4-1BB激动剂(例如抗4-1BB抗体(α4-1BB))的剂量等)时，术语“约”意味着所述参数可以在对于该参数所述的数值之上或之下变化多达10％。例如，约5mg/kg的剂量应理解为表示可在4.5mg/kg和5.5mg/kg之间变化的剂量。

如本文所用，术语，包括但不限于“药物”、“药剂”、“组分”、“组合物”、“化合物”、“物质”、“靶向剂”、“靶向治疗剂”、“治疗剂”和“药品”可以互换使用，用于指代本发明的小分子化合物，例如CDK抑制剂。如本文所用，术语，包括但不限于“药物”、“药剂”、“组分”、“组合物”、“化合物”、“物质”、“靶向剂”、“靶向治疗剂”、“治疗剂”、“治疗性抗体”和“药品”，可以互换使用，用于指代本发明的抗体，例如抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体、抗OX40抗体和抗4-1BB抗体，或它们的组合。

术语“治疗性抗体”是指用于治疗疾病或病症的抗体。治疗性抗体可具有多种作用机制。治疗性抗体可以结合并中和与抗原相关的靶的正常功能。例如，阻断癌细胞存活所需的蛋白质的活性的单克隆抗体导致细胞死亡。另一种治疗性抗体可以结合并激活与抗原相关的靶的正常功能。例如，单克隆抗体可以与细胞上的蛋白质结合并触发细胞凋亡信号。另一种单克隆抗体可以与仅在患病组织上表达的靶抗原结合；将毒性有效载荷(有效药剂)例如化疗剂或放疗剂与单克隆抗体缀合可以产生用于将所述毒性有效载荷特异性输送至病变组织的药剂，减少对健康组织的伤害。治疗性抗体的“生物学功能片段”会表现出至少一种归因于完整抗体的生物学功能(如果不是部分或全部功能)，所述功能至少包括与靶抗原的特异性结合。

治疗性抗体可以结合任何蛋白质，包括但不限于PD-L1、PD-1、OX40和/或4-1BB抗原。因此，治疗性抗体包括但不限于抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体、抗OX40抗体和抗4-1BB抗体或它们的组合。

“生物治疗剂”是指生物分子，例如抗体或融合蛋白，其在支持肿瘤维持和/或生长或抑制抗肿瘤免疫应答的任何生物学途径中阻断配体/受体信号传导。

“化疗剂”是用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实施例包括烷化剂，比如塞替派和环磷酰胺

烷基磺酸盐，比如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，比如苯并二唑(benzodopa)、卡波醌、米特多帕(meturedopa)和uredopa；乙烯亚胺和甲基精胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺、三乙撑密胺、三乙烯基磷酰胺、三乙烯基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰酸(特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatasinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，

)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物托泊替康

CPT-11(伊立替康、

)、乙酰喜树碱、东莨菪素和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；培美曲塞；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；足叶草毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(cryptophycin，特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；多卡米星(包括合成类似物KW-2189和CB 1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；TLK-286；CDP323，口服α-4整联蛋白抑制剂；sarcodictyin；软海绵素(spongistatin)；氮芥，比如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(cholophsophamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氧化氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、氯乙环磷酰胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，比如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷尼莫司汀；抗生素，比如烯二炔抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ和加利车霉素ΩI(参见，例如，Nicolaou et al.,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994))；包括达内霉素(dynemicin)A的达内霉素；埃斯波霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸、争光霉素、放线菌素c、carabicin、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、更生霉素、道诺霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括

吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯基-多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射液

和脱氧大青霉素)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素例如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、potfiromycin、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢产物，比如甲氨蝶呤、吉西他滨

替加氟

卡培他滨

epothilone和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，比如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，比如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，比如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎胞苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷和伊马替尼(2-苯基氨基嘧啶衍生物)，以及其他c-it抑制剂；抗肾上腺素，比如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，比如如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；defofamine；地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；乙环氧啶；硝酸镓；羟脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素生物碱类，比如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-ethlhydrazide；丙卡巴肼；PSK多糖复合物(JHS天然产物，Eugene，OR)；丙亚胺；根霉素；

锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯乙胺；单端孢霉烯(特别是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦；长春地辛

达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌血生；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；硫替派；紫杉烷，例如紫杉醇、紫杉醇(ABRAXANE^TM)的白蛋白工程化的纳米颗粒制剂和多西紫杉醇

苯丁酸氮芥；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲喋呤；铂类似物，比如顺铂和卡铂；长春碱

铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱

奥沙利铂；甲酰四氢叶酸；长春瑞滨

诺消灵；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维生素A，比如视黄酸；任何上述药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种的组合，比如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙组合治疗的缩写)，和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATIN^TM)组合5-FU和甲酰四氢叶酸的治疗方案的缩写)。

化疗剂的其它实例包括抗激素剂，其作用是调节、减少、阻断或抑制可促进癌症生长的激素的作用，而且通常是系统性或全身治疗的形式。其本身可以是激素。实例包括抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括

他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)

屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬

抗孕酮；雌激素受体下调因子(ERDs)；雌激素受体拮抗剂，例如氟维司群(fulvestrant)

用于抑制或关闭卵巢的药剂，例如促黄体激素释放激素(LHRFI)激动剂如醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(

和

)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(tripterelin)；抗雄激素药，例如氟他胺(fiutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡鲁胺(bicalutamide)；以及抑制芳香化酶的芳香化酶抑制剂(芳香化酶调节肾上腺中雌激素的产生)，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)

依西美坦(exemestane)

福美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)

来曲唑(letrozole)

和阿那曲唑(anastrozole)

此外，这种定义的化疗剂包括双膦酸盐，例如氯膦酸盐(例如

或

)、依替膦酸钠(etidronate)

NE-58095、唑来膦酸(zoledronic acid)/唑来膦酸盐

阿仑膦酸钠(alendronate)

帕米膦酸二钠盐(pamidronate)

替鲁膦酸钠(tiludronate)

或利塞膦酸钠(risedronate)

以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，尤其是抑制参与异常细胞增殖的信号传导途径中基因表达的那些寡核苷酸，例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗例如

疫苗和基因治疗疫苗如

疫苗，

疫苗和

疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(如

)；抗雌激素，如氟维司群(fulvestrant)；Kit抑制剂，如伊马替尼(imatinib)或EXEL-0862(酪氨酸激酶抑制剂)；EGFR抑制剂，如厄洛替尼(erlotinib)或西妥昔单抗(cetuximab)；抗VEGF抑制剂，如贝伐单抗(bevacizumab)；伊立替康(arinotecan)；rmRH(例如

)；拉帕替尼(lapatinib)和二甲苯磺酸拉帕替尼(ErbB-2和EGFR双酪氨酸激酶小分子抑制剂，也称为GW572016)；17AAG(格尔德霉素(geldanamycin)衍生物，其为一种热休克蛋白(Hsp)90毒物)，以及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

如本文所用，术语“细胞因子”泛指由一个细胞群释放的蛋白质，其作为细胞间介质作用于另一细胞或对产生蛋白质的细胞具有自分泌作用。这种细胞因子的实例包括淋巴因子、单核因子；白介素(“IL”)，例如IL-1、IL-1a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A-F、IL-18至IL-29(如IL-23)、IL-31，包括

rIL-2；肿瘤坏死因子如TNF-α或TNF-β、TGF-β；以及其它多肽因子，包括白血病抑制因子(“LIF”)、睫状神经营养因子(“CNTF”)、CNTF样细胞因子(“CLC”)、心肌营养素(“CT”)和kit配体(“L”)。

如本文所用，术语“趋化因子”是指具有选择性诱导白细胞趋化性和活化能力的可溶因子(例如细胞因子)。其还触发血管生成、炎症、创伤愈合和肿瘤发生的过程。示例的趋化因子包括IL-8，一种鼠角质形成细胞趋化剂(KC)的人同源物。

术语“异常细胞生长”和“过度增殖性疾病”在本申请中可互换使用。除非另有说明，否则本文所用的“异常细胞生长”是指不依赖于正常调节机制(例如失去接触抑制)的细胞生长。异常细胞生长可能是良性的(非癌性的)，也可能是恶性的(癌性的)。

“病症”是会受益于用本发明的化合物进行的治疗的任何病症。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使个体易患所讨论的病症的那些病理状况。

如本文中所使用，术语“抗体”是能够经由至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区中的抗原识别位点特异性结合至靶标诸如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽的免疫球蛋白分子。如本文中所使用，该术语涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、双重特异性抗体、双功能抗体、三特异性抗体、多特异性抗体、双特异性异二聚体双抗体、双特异性异二聚体IgG、标记抗体、人源化抗体、人抗体以及它们的片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(ScFv)和结构域抗体(包括例如鲨鱼和骆驼抗体)、包含抗体的融合蛋白、包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型以及抗体样结合肽模拟物(ABiP)。抗体包括任何类别的抗体，诸如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，且该抗体不必为任何特定类别。根据其重链的恒定区的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可被归为不同类别。存在五种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且这些中的几种可进一步分成亚类(同种型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3、IgG-4、IgA1和IgA2。对应于不同种类的免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是众所周知的。

如本文所用，“双特异性抗体”、“双重特异性抗体”、“双功能抗体”、“异多聚体”、“异多聚体复合物”、“双特异性异二聚体双抗体”或“异多聚体多肽”是至少包含第一多肽和第二多肽的分子，其中第二多肽在氨基酸序列上与第一多肽至少有一个氨基酸残基不同。在一些情况中，双特异性是具有两个不同重链区和轻链区的人工杂合抗体。优选地，双特异性抗体对至少两种不同的配体、抗原或结合位点具有结合特异性。因此，双特异性抗体可以同时结合两种不同的抗原。双特异性抗体的两个抗原结合位点结合两个不同的表位，这些表位可以位于相同或不同的蛋白质靶位例如肿瘤靶位上。

双特异性抗体、双重特异性抗体、双功能抗体、异源多聚体、异源多聚体复合物、双特异性异二聚体双抗体或异多聚体多肽可以通过在VH和VL区之间用短接头(例如约3至10个残基)构建sFv片段来制备，由此实现V区的链间而非链内配对，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性抗体可以源自全长抗体或抗体片段(例如，F(ab')₂双特异性抗体)。双抗体在如下文献中更充分描述：EP404,097；WO 1993/011161；和Hollingeret al.,A small bispecific antibody construct expressed as a functionalsingle-chain molecule with high tumor cell cytotoxicity,Proc.Natl.Acad.Sci.1993,90:6444-6448。双特异性抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH和VL区存在于不同的多肽链上。

作为非限制性实例，双特异性抗体可以包含识别一种蛋白质(例如OX40、4-1BB、PD-1或PD-L1)上表位的一个抗原结合位点，以及进一步包含识别第二种蛋白质(例如OX40、4-1BB、PD-1或PD-L1)上不同表位的第二个不同的抗原结合位点。通常，但不一定，提及结合是指特异性结合。

术语“免疫球蛋白”(Ig)与本文中的“抗体”可互换使用。基本的4-链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本异四聚体单元和另外一个称为J链的多肽组成，并含有10个抗原结合位点，而IgA抗体包含2-5个可以聚合形成与J链相结合的多价组合的基本4-链单元。在IgG的情况下，4-链单元通常为约150,000道尔顿。每个L链通过一个共价二硫键与H链连接，而两个H链通过一个或多个二硫键相互连接，这取决于H链同种型。每个H和L链还具有规则间隔的链内二硫桥。每个H链在N-末端具有可变结构域(V_H)，随后是α和γ链中的每一个的三个恒定结构域(C_H)和μ和ε同种型的四个C_H结构域。每个L链在N末端具有可变结构域(V_L)，在其另一端具有恒定结构域。V_L与V_H对齐，而C_L与重链的第一恒定区(CHI)对齐。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。V_H和V_L的配对一起形成单个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Daniel P.Sties,Abba I.Terr and Tristram G.Parsolw(eds),Basicand Clinical Immunology,8th Edition,1994,page 71and Chapter 6。来自任何脊椎动物物种的L链可基于其恒定结构域的氨基酸序列分配为两种明显不同的类型之一，称为κ和λ。取决于其重链(CH)的恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分配到不同的类别或同种型。

术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”可互换使用，指基本上完整形式的抗体，而不是抗体片段。具体而言，全抗体包括具有重链和轻链(包括Fc区)的那些抗体。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可以具有一种或多种效应子功能。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合区和/或可变区。适用于本发明的抗体片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成；(ii)由VH和CH1结构域组成的“Fd”片段；(iii)由单个抗体的VL和VH结构域组成的“Fv”片段；(iv)由VH结构域组成的“dAb”片段；(v)分离的CDR区；(vi)F(ab')2个片段，即包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头连接，使两个结构域结合形成结合结构域；(viii)双特异性单链Fv二聚体(例如美国专利号5,091,513)；和(ix)通过基因融合构建的双抗体、多价或多特异性片段(美国专利申请公开2005/0214860)。Fv、scFv或双抗体分子可以通过掺入连接VH和VL结构域的二硫键桥而稳定。还可以制备包含连接于CH3结构域的scFv的微型抗体(Hu et al.,Minibodies areminimized antibody-like proteins comprising a scFv joined to a CH3 domain,Cancer Res.1996,56:3055-3061))。

Murali et al.,Antibody like peptidomimetics as large scaleimmunodetection probes,Cell Mol Biol 2003,49:209-216描述了一种将抗体还原成更小的肽模拟物的方法，将其称为“抗体样结合肽模拟物”(ABiP)，可用作抗体的替代。

“分离的抗体”或“分离的抗体片段”是指纯化状态，并且在这种情况下意味着命名的分子基本上不含其他生物学分子，诸如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料，诸如细胞碎片和生长培养基。通常，如本文所述，术语“分离的”并不意指完全不存在这类材料或不存在水、缓冲剂或盐，除非它们以基本上干扰结合化合物的如上所述的实验或治疗性用途的量存在。

如本文所用，“单克隆抗体”或“mAb”或“Mab”是指基本上同质的抗体群，即包含除可能少量存在的自然发生的突变之外氨基酸序列相同的群体的抗体分子。相反，常规(多克隆)抗体制剂通常包括在其可变结构域中具有不同氨基酸序列的多种不同抗体，特别是通常对不同表位具有特异性的抗体的CDR。修饰词“单克隆”指从基本上均一的抗体群中获得的抗体的特征，且不应被理解为需要任何特殊的方法来产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler等人,Continuous cultures of fused cells secretingantibody of predefined specificity,Nature 1975,256:495首次描述的杂交瘤方法制备；或可以通过重组DNA方法制备(例如，美国专利号4,816,567)。还可以使用例如Clackson等人,Making antibody fragments using phage display libraries,Nature 1991,352:624-628和Marks等人,By-passing immunization:human antibodies from V-genelibraries displayed on phage,J.Mol.Biol.1991,222:581-597描述的技术从噬菌体抗体库中分离“单克隆抗体”(另见Presta,Selection,design,and engineering oftherapeutic antibodies,J.Allergy Clin.Immunol.2005,116:731)。

“嵌合抗体”是指其中一部分重链和/或轻链与衍生自特定物种(例如人)或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与衍生自另一物种(例如小鼠)或属于另一种抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的抗体，以及此类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物学活性。

“人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。如果人抗体在小鼠、小鼠细胞或源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，其可含有鼠碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”分别是指仅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。

“人源化抗体”是指含有来自非人(例如鼠)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。此类抗体含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将包含基本上所有、至少一个且通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的那些高变环并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的那些FR区。人源化抗体任选地还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。当需要区分人源化抗体与亲本啮齿动物抗体时，将前缀“hum”、“hu”或“h”添加到抗体克隆名称中。虽然出于增加亲和性、增加人源化抗体的稳定性或其他原因可包括某些氨基酸取代，但是人源化形式的啮齿动物抗体通常包含亲本啮齿动物抗体的相同CDR序列。

抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。如本领域中已知，重链和轻链的可变区各自由三个互补决定区(CDR)(也称为高变区)连接的四个构架区(FR)组成。

术语“高变区”、“HVR”或“HV”在本文中使用时指抗体可变结构域的序列高变和/或形成结构限定环的区域。通常，抗体包含六个HVR，三个在VH(H1、H2、H3)，三个在VL(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3在六个HVR中表现出最多的多样性，尤其是H3被认为在赋予抗体良好的特异性方面发挥着独特的作用。参见例如Xu et al,Disruption of Early TumorNecrosis Factor Alpha Signaling Prevents Classical Activation of DendriticCells in Lung-Associated Lymph Nodes and Development of Protective Immunityagainst Cryptococcal Infection,Immunity 2000,J-3:37-45；Johnson and Wu,Antibody Engineering Methods and Protocols Methods in Molecular Biology 2003,248:1-25。事实上，天然存在的仅由重链组成的骆驼抗体在没有轻链的情况下是有功能和稳定的。参见例如Hamers-Casterman et al.,Naturally occurring antibodies devoidof light chains,Nature 1993,363:446-448；Sheriff et al.,Similarity between C2domain jaws and immunoglobulin CDRs,Nature Struct.Biol 1996,3:733-736。

许多HVR描述正在使用中并且包含在本文中。Kabat互补决定区(CDR)基于序列可变性并且是最常用的(Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,1991)。Chothia指的是结构环的位置(Chothia and Lesk,Canonical structures for thehypervariable regions of immunoglobulins,J.Mol.Biol.1987,196:901-917)。AbM HVR代表Kabat HVR和Chothia结构环之间的折衷，由Oxford Molecular's AbM抗体建模软件使用。“接触”HVR基于对可用复杂晶体结构的分析。

可变结构域的“CDR”是可变区内的氨基酸残基，其根据Kabat定义、Chothia定义、Kabat和Chothia二者的累积、AbM、接触和/或构型定义或本领域中众所周知的任何CDR测定方法鉴定。抗体CDR可被鉴定为最初由Kabat等人定义的高变区。参见例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,NIH,1992。CDR的位置也可被鉴定为最初由Chothia和其他人描述的结构环结构。参见例如Chothia等人,Conformations of immunoglobulin hypervariable regions,Nature,1989,342:877-883。其他CDR鉴定的方法包括“AbM定义”，其为Kabat和Chothia之间的折衷且使用Oxford Molecular's AbM抗体模型化软件(现为

)或基于观察的抗原接触的CDR的“接触定义”获得，其记载于MacCallum等人,Antibody-antigen interactions:contact analysis and binding site topography,J.Mol.Biol.,1996,262:732-745中。在另一方法(在本文中称为CDR的“构型定义”)中，CDR的位置可被鉴定为向抗原结合贡献热焓的残基。参见例如Makabe等人,Thermodynamic consequences of mutations invernier zone residues of a humanized anti-human epidermal growth factorreceptor murine antibody,528,Journal of Biological Chemistry,2008,283:1156-1166。其他CDR边界定义可不严格遵循以上方法之一，但仍然将与Kabat CDR的至少一部分重叠，虽然其可根据以下预测或实验结果而缩短或延长：特定残基或残基组或甚至全部CDR不显著影响抗原结合。如本文所用，CDR可指由本领域中已知的任何方法(包括方法的组合)所定义的CDR。本文所用的方法可利用根据任何这些方法定义的CDR。对于任何含有超过一个CDR的给定实施方案，CDR可根据Kabat定义、Chothia定义、扩展定义、AbM定义、接触定义和/或构型定义中的任一种定义。

表述“如Kabat中的可变结构域残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”及其变化用语是指Kabat等人(如前)汇编的用于抗体重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用这种编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含更少或额外的氨基酸，对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变结构域可以包括在H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和在重链FR残基82之后的插入残基(例如根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。对于给定的抗体，可以通过比对抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源区域确定残基的Kabat编号。

“构架”或“FR”残基是除本文定义的HVR残基之外的那些可变结构域残基。

“人共有构架”或“受体人构架”是代表人免疫球蛋白VL或VH构架序列选择中最常出现的氨基酸残基的构架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。

通常，序列亚组是如Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5^lh Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,1991中所述的亚组。例如对于VL，所述亚组可以是亚组κI、κII、κIII或κIV，如Kabat等(如前述)。另外，对于VH，所述亚组可以是亚组I、亚组II或亚组III，如Kabat等(如前述)。或者，人共有构架可以源自如上文所述，其中特定残基例如人构架残基是基于通过将供体构架序列与各种人构架序列的集合比对时其与供体构架的同源性进行选择。“源自”人免疫球蛋白构架或人共有构架的受体人构架可以包含其相同的氨基酸序列，或者其可以包含预先存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数目是10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、或者2个或更少。

在例如Fc区的特定位置处的“氨基酸修饰”是指特定残基的取代或缺失，或在特定残基邻近插入至少一个氨基酸残基。与特定残基“邻近”的插入是指在其一至两个残基内插入。所述插入可以在特定残基的N末端或C末端。本文优选的氨基酸修饰是取代。

“保守性修饰的变体”或“保守性取代”是指用其他具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构型和刚性等)的氨基酸取代蛋白中的氨基酸，使得所述变化可通常在不改变蛋白的生物学活性或其他所需性质(诸如抗原亲和力和/或特异性)的情况下进行。本领域技术人员认识到，通常，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代不会实质上改变生物学活性(例如Watson等人,Molecular Biology of the Gene(第4版),1987,第224页)。此外，结构上或功能上类似的氨基酸的取代不大可能破坏生物学活性。示例性保守性取代记载于下文表1中。

表1

“亲和力成熟的”抗体是在其一个或多个HVR中具有一种或多种改变的抗体，与不具有这些改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力提高。在一个实施方案中，亲和力成熟的抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体通过本领域已知的方法产生。例如Marks et al.,By-passing immunization:Building highaffinity human antibodies by chain shuffling,Bio/Technology 1992,10:779-783描述了通过VH和VL结构域混编(domain shuffling)产生的亲和力成熟。HVR和/或构架残基的随机诱变描述于例如Barbas et al.,In vitro evolution of a neutralizing humanantibody to human immunodeficiency virus type 1to enhance affinity andbroaden strain cross-reactivity,Proc Nat.Acad.Sci.1994,91:3809-3813；Schier etal.,Identification of functional and structural amino-acid residues byparsimonious mutagenesis,Gene 1995,169:147-155；Yelton et al.,Affinitymaturation of the BR96 anti-carcinoma antibody by codon-based mutagenesis,J.Immunol.1995,155:1994-2004；Jackson et al.,In vitro antibodymaturation.Improvement of a high affinity,neutralizing antibody against IL-1beta,J.Immunol.1995,154(7):33 10-9；以及Hawkins et al.,Selection of phageantibodies by binding affinity:mimicking affinity maturation,J.Mol.Biol.1992,226:889-896。

本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，包括天然序列Fc区和变异Fc区。尽管免疫球蛋白重链Fc区的边界可能会有所不同，但人IgG重链Fc区通常定义为从Cys226位置的氨基酸残基或Pro230至其羧基末端的一段序列。本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变异Fc区。尽管免疫球蛋白重链Fc区的边界可能会有所不同，但人IgG重链Fc区通常定义为从Cys226位置的氨基酸残基或Pro230至其羧基末端的一段序列。Fc区的C-末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可以被去除，例如在抗体的生产或纯化期间或通过重组工程化编码抗体重链的核酸而去除。因此，完整抗体的成分可以包含去除了所有K447残基的抗体群、没有去除K447残基的抗体群、以及具有含有和不含K447残基的抗体混合物的抗体群。用于本发明抗体的合适的天然序列Fc区包括人IgG-1、IgG-2(IgG2A、IgG2B)、IgG-3和IgG-4。

“Fc受体”或“FcR”描述与抗体Fc区结合的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体(γ受体)并包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和可变剪接形式的受体，FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活受体”“)和FcγRIIB(“抑制受体”)，其具有相似的氨基酸序列，主要区别在于其细胞质结构域。激活受体FcγRIIA在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ΙΤΓM)(例如M.Daeron,Fc RECEPTOR BIOLOGY,Annu.Rev.Immunol.J 1997,5:203-234)。FcRs综述于Ravetch and Kinet,Fc receptors,Annu.Rev.Immunol.1991,9:457-92；Capel et al.,Heterogeneity of human IgG Fc receptors,Immunomethods 1994,4:25-34；及de Haaset al.,Fcγreceptors of phagocytes,J.Lab.Clin.Med.1995,126:330-41。本文中的术语“FcR”涵盖其它FcR，包括将来要鉴定的那些。

术语Fc受体或FcR还包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移到胎儿。Guyeret al.,Immunoglobulin binding by mouse intestinal epithelial cell receptors,J.Immunol.1976,1 17:587和Tokoyama et al.,How do natural killer cells findself to achieve tolerance？Immunity,1994,24,249-257。测量与FcRn结合的方法是已知的(例如Ghetie and Ward,FcRn:the MHC class I-related receptor that is morethan an IgG transporter,Immunol.Today1997,1 8:(12):592-8；Ghetie et al.,Increasing the serum persistence of an IgG fragment by random mutagenesis,NatBiotechnol.Jul.1997；15(7):637-40；Hinton et al.,Engineered human IgGantibodies with longer serum half-lives in primates,J.Biol.Chem.2004,279(8):6213-6；WO 2004/092219(Hinton et al.)。可以例如在表达人FcRn的转基因小鼠或转染的人细胞系中或在施用了具有变异Fc区的多肽的灵长类动物中，测定与FcRn的体内结合和人FcRn高亲和力结合多肽的血清半衰期。WO 2004/042072(Presta)描述了改善或减少与FcR结合的抗体变体。也见例如Shields et al.,High Resolution Mapping of the BindingSite on Human IgG1 for FcγRI,FcγRII,FcγRIII,and FcRn and Design of IgG1Variants with Improved Binding to the FcγR,J.Biol.Chem.2001,9(2):6591-6604。

如本文所用，短语“实质性地减少”、“实质性地不同”或“实质性地抑制”表示两个数值之间的差异程度足够高(通常一个数值与一个分子相关，另一个数值与参考/比较分子相关)，由此本领域技术人员会认为这两个数值之间的差异在由所述值(例如Kd值)测量的生物特征的语境中具有统计显著性。所述两个数值之间的差异是例如相对于参考/比较分子的数值大于约10％、大于约20％、大于约30％、大于约40％和/或大于约50％。

如本文所用，术语“实质上相似”或“实质上相同”表示两个数值之间的足够高的相似度(例如一个数值与本发明的抗体相关，另一个数值与参考/比较抗体相关)，由此本领域技术人员会认为这两个值之间的差异在由所述值(例如Kd值)测量的生物特征的语境中具有很小或没有生物学和/或统计学显著性。所述两个值之间的差异是例如相对于参考/比较数值小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％和/或小于约10％。

如本文所用，术语“特异性结合于”或“对……具有特异性”是指可测量和可重复的相互作用，例如靶和抗体之间的结合，其决定在存在异质分子群包括生物分子的情况下所述靶的存在情况。例如，与靶(其可以是表位)特异性结合的抗体是与该靶的结合比与其它靶的结合具有更高的亲和力、亲合力、更容易和/或更长的持续时间的抗体。在一个实施方案中，抗体与无关靶的结合程度小于抗体与靶结合的约10％，如通过例如放射免疫测定(RIA)测量的。在某些实施方案中，特异性结合靶的抗体的解离常数(Kd)≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM的。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白质上的表位，该蛋白质在来自不同物种的蛋白质中是保守的。在另一个实施例中，特异性结合可以包括但不要求排他性结合。

如本文所用，术语“免疫粘附素”表示组合异源蛋白质(“粘附素”)的结合特异性与免疫球蛋白恒定结构域的效应子功能的抗体样分子。在结构上，免疫粘附素包含具有所需结合特异性的氨基酸序列和免疫球蛋白恒定域序列的融合体，所述氨基酸序列不同于抗体的抗原识别和结合位点(即“异源的”)。免疫粘附素分子的粘附素部分通常是连续的氨基酸序列，至少包含受体或配体的结合位点。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可得自任何免疫球蛋白，例如IgG-1、IgG-2(包括IgG2A和IgG2B)、IgG-3或IgG-4亚型、IgA(包括IgA-1和IgA-2)、IgE、IgD或IgM。Ig融合优选包括取代本文所述的多肽或抗体的结构域以代替Ig分子内的至少一个可变区。在一个特别优选的实施方案中，免疫球蛋白融合体包括IgG-1分子的铰链、CH2和CH3，或铰链、CH1、CH2和CH3区。对于免疫球蛋白融合体的产生，也参见1995年6月27日授权的美国专利号5,428,130。Ig Fc和细胞表面受体的ECD的免疫粘附素组合有时被称为可溶性受体。

“融合蛋白”和“融合多肽”是指具有共价连接在一起的两个部分的多肽，其中每个部分是具有不同性质的多肽。所述性质可以是生物学性质，例如体外或体内活性。所述性质也可以是简单的化学或物理性质，例如与靶分子的结合、反应的催化等。这两个部分可以通过单个肽键或通过肽接头直接连接，但彼此都在读框内。

“PD-1寡肽”、“PD-L1寡肽”或“PD-L2寡肽”是分别结合、优选特异性结合PD-1、PD-L1或PD-L2阴性共刺激多肽的寡肽，分别包括受体、配体或信号传导组分，如本文所述。这种寡肽可使用已知的寡肽合成方法化学合成或可使用重组技术制备和纯化。这种寡肽的长度通常是至少约5个氨基酸，或者至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸或更长。这种寡肽可以使用熟知的技术来鉴定。在这点上，应注意筛选寡肽文库中能特异性结合多肽靶的寡肽的技术是本领域熟知的(例如，美国专利号5,556,762、5,750,373、4,708,871、4,833,092、5,223,409、5,403,484、5,571,689、5,663,143；PCT公开号WO 1984/0003506和WO1984/0003564；Geysen et al.,Use of peptidesynthesis to probe viral antigens for epitopes to a resolution of a singleamino acid,Proc.Natl.Acad.Sci.1984,81:3998-4002；Geysen et al.,Small peptidesinduce antibodies with a sequence and structural requirement for bindingantigen comparable to antibodies raised against the native protein,Proc.Natl.Acad.Sci.1985,82:178-182；Geysen et al.,A priori delineation of apeptide which mimics a discontinuous antigenic determinant,Synthetic Peptidesas Antigens,1986,130-149；Geysen,et al.,Strategies for epitope analysis usingpeptide synthesis,J.Immunol.Meth.1987,102,259-274；Schoofs et al.,Epitopes ofan influenza viral peptide recognized by antibody at single amino acidresolution,J.Immunol,1988,140:611-616；Cwirla,S.E.et al.,Peptides on phage:avast library of peptides for identifying ligands.,Proc.Natl.Acad.Sci.1990,87:6378；Lowman,H.B.et al.,Selecting high-affinity binding proteins by monovalentphage display,Biochemistry,1991,30:10832；Clackson,T.et al.,Making antibodyfragments using phage display libraries,Nature,1991,352:624；Marks,J.D.et al.,By-passing immunization:human antibodies from V-gene libraries displayed onphage,J.Mol.Biol,1991,222:581；Kang,et al.,Linkage of Recognition andReplication Functions by Assembling Combinatorial Antibody Fab LibrariesAlong Phage Surfaces,PNAS,1991,vol.88,pp.4363-4366以及Smith,G.P.Surfacepresentation of protein epitopes using bacteriophage expression systems,Curr.Opin.Biotechnol.1991,2:668。

“拮抗剂”抗体或“阻断”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物活性的抗体。在一些实施方案中，阻断抗体或拮抗剂抗体实质性地或完全抑制抗原的生物活性。本发明的抗PD-L1抗体阻断通过PD-1的信号传导，以从对抗原刺激的功能失调状态恢复T细胞的功能应答(例如增殖、细胞因子产生、靶细胞杀伤)。

“激动剂”或“激活抗体”是通过其结合的抗原增强或启动信号传导的抗体。在一些实施方案中，激动剂抗体在不存在天然配体的情况下引起或激活信号传导。

在免疫功能障碍的语境中，术语“功能障碍”是指对抗原刺激的免疫应答性降低的状态。该术语包括其中可能发生抗原识别的衰竭和/或无反应性的共同要素，但继而发生的免疫应答对控制感染或肿瘤生长无效。

如本文所用，术语“功能障碍”还包括对抗原识别不应答或免疫失能，具体而言，将抗原识别转化为下游T细胞效应子功能的能力受损，例如增殖、细胞因子产生和/或靶细胞杀伤。

术语“免疫失能”是指由于通过T细胞受体传递的信号不完整或不足(例如在没有ras激活的情况下细胞内Ca²⁺增加)导致的对抗原刺激无应答的状态。在没有共刺激的情况下，基于抗原刺激也可能导致T细胞免疫失能，从而导致细胞对抗原的后续激活变得无反应，即使在共刺激的情况下也是如此。无应答状态通常由白细胞介素2的存在所覆盖。免疫失能的T细胞不经历克隆扩展和/或不获得效应子功能。

术语“耗竭”是指T细胞耗竭是一种T细胞功能障碍的状态，其由在许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导引起。其与免疫失能的区别在于其不是由不完整或有缺陷的信号传导产生的，而是由持续的信号传导产生的。其被定义为效应子功能不良、抑制性受体的持续表达以及不同于功能效应子或记忆T细胞的转录状态。耗竭会妨碍对感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可得自外来负调节途径(例如免疫调节细胞因子)和内在负调节(共刺激)途径。

“增强T细胞功能”是指诱导、引起或刺激T细胞具有持续或放大的生物学功能，或更新或重新激活耗竭或功能失调的T细胞。增强T细胞功能的实例包括：相对于干预之前的水平增加CD4+或CD8+T细胞分泌γ-干扰素、增加增殖、提高存活率、增加分化、增加抗原应答性(例如病毒、病原体或肿瘤清除)。在一些实施方案中，增强水平为至少50％，或者60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％。测量这种增强的方式是本领域普通技术人员已知的。

如本文所用，“转移”或“转移性”是指癌症从其原发部位扩散到身体的其它部位。癌细胞可以脱离原发肿瘤，渗入淋巴管和血管，在血液中循环，并在身体其它部位的正常组织的远处病灶中生长(转移)。转移可以是局部转移或远处转移。转移是一个连续过程，取决于肿瘤细胞从原发肿瘤脱离，在血流中循环，并在远处停止。在新位置，肿瘤细胞建立血液供应，并可以生长形成危及生命的肿块。肿瘤细胞内的刺激性和抑制性分子途径调节这种行为，并且肿瘤细胞与远处宿主细胞之间的相互作用也很重要。

术语“癌症”、“癌性的”或“恶性的”是指或描述个体的生理状况，其通常以不受调节的细胞生长为特征。术语“癌症”包括但不限于起源于身体特定部位的原发性癌症、已从其起始部位扩散到身体其它部位的转移性癌症、从最初的原发性癌症缓解后复发的癌症，以及第二个原发癌症(其为具有既往癌症病史的人的新原发癌症，该既往癌症的类型不同于后者)。癌症的实例包括但不限于脑癌、头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌(SCCHN))、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌(包括尿路上皮癌，也称为移行细胞癌(TCC))、肺癌(包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))、乳腺癌、骨癌、结直肠癌、肾癌、肝癌(包括肝细胞癌(HCC))、胃癌、胰腺癌、食道癌、宫颈癌、肉瘤、皮肤癌(包括黑色素瘤和Merkel细胞癌(MCC))、多发性骨髓瘤、间皮瘤、恶性横纹肌样瘤、弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)、癌、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和SWI/SNF突变体癌症。

如本文所用，“与……联合”或“与……组合”是指除了至少一种其它治疗方式之外，还施用一种治疗方式。因此，“与…联合”或“与…组合”是指在向个体施用至少一种其它治疗方式之前、期间或之后施用一种治疗方式。

“客观应答”是指可测量的应答，包括完全应答(CR)或部分应答(PR)。在一些实施方案中，术语“客观应答率”(ORR)是指完全应答(CR)率和部分应答(PR)率之和。

如本文所用，“完全应答”或“CR”是指响应于治疗的所有癌症迹象的消失(例如所有靶病变的消失)。这并不总是意味着癌症已经治愈。

如本文所用，“部分应答”或“PR”是指响应于治疗的机体中一种或多种肿瘤或病变的大小或体内癌症程度的降低。例如，在一些实施方案中，PR是指靶病变的最长直径(SLD)的总和以基线SLD为参考减少至少30％。

如本文所用，“进展性疾病”或“PD”是指以自治疗开始或存在一个或多个新病灶以来记录的最小SLD作为参考，靶病灶的SLD增加至少20％。

如本文所用，“无进展存活”或“PFS”是指在治疗期间和之后被治疗的疾病(例如癌症)不恶化的时间长度。无进展存活可包括患者经历完全应答或部分应答的时间量，以及患者经历稳定疾病的时间量。

如本文所用，“总体应答率”(ORR)是指完全应答(CR)率和部分应答(PR)率之和。

如本文所用，“总存活率”是指在特定持续时间后可能存活的组中个体的百分比。

“持续应答”是指在停止治疗后对减少肿瘤生长的持续作用。例如，与药物施用阶段开始时的大小相比，肿瘤大小可以相同或更小。在一些实施方案中，持续应答的持续时间至少与治疗持续时间相同，至少是治疗持续时间的1.5×、2×、2.5×或3×长度，或更长。

就本发明而言，“应答持续时间”是指从记录由于药物治疗所致肿瘤模型生长抑制至获得与治疗前生长速率相似的恢复生长速率的时间。

在一些实施方案中，如本文所用，治疗癌症的方法的抗癌效力包括“客观应答”、“完全应答”、“部分应答”、“疾病进展”、“疾病稳定”、“无进展存活”、“应答持续时间”，这些由研究人员使用RECIST v1.1(Eisenhauer et al.,New response evaluation criteriain solid tumors:revised RECIST guideline,Eur J of Cancer 2009；45(2):228-47)在局部进展或转移的实体瘤患者而不是转移的CRPC中定义和评估，以及使用RECIST v1.1和PCWG3(Scher et al.,Trial Design and Objectives for Castration-ResistantProstate Cancer:Updated Recommendations From the Prostate Cancer ClinicalTrials Working Group 3,J Clin Oncol2016；34(12):1402-18)在具有转移的CRPC患者中定义和评估。The disclosures of Eisenhauer et al.,2009和Scher et al.,2016的公开内容通过援引以其整体加入本文。

术语“患者”或“个体”是指需要治疗或参与临床试验、流行病学研究或用作对照的任何个体，包括人和非人动物，包括兽医个体，例如牛、马、狗和猫。在一个优选的实施方案中，个体是人并且可以称为患者。医学领域的技术人员能够容易地识别患有癌症的个体患者。

在一些实施方案中，两种或更多种制剂的联合或共同施用可用于治疗患有对正在进行的疗法具有原发性或获得性抗性的癌症的个体。本文提供的联合治疗对于对这种治疗有应答的个体可用于提高癌症治疗功效和/或减少癌症治疗的副作用。

如本文所用，术语“联合治疗”是指单独或在药物中同时、单独或依次施用本发明的联合治疗的每种药剂，以混合或单独的剂量施用。

如本文所用，术语“同时”、“同时施用”、“同时地给药”、“同时地”或“同时给药”是指在同一时间点或彼此紧随地施用药剂，但是所述药剂可以以任何顺序施用。例如，在后一种情况下，两种或多种药剂的施用时间足够接近，以至于观察到的结果与在同一时间点施用所述药剂时所获得的结果没有区别。术语同时包括在同一药物中施用本发明的联合治疗中的每种药剂。

本发明的药剂可以完全单独施用或以一种或多种单独的组合物的形式施用。例如，可以在治疗过程中的不同时间单独给予所述药剂(以时间顺序交错的方式，尤其是顺序特异性方式)，施用的时间间隔使所述联合治疗有效治疗癌症。

如本文所用，术语“相继地”、“依次地”、“相继施用”或“依次施用”是指本发明的联合治疗中的每种药剂单独施用或在药物中一个接一个地施用，其中每种药剂可以以任何顺序施用。当联合治疗中的治疗剂是不同剂型时，依次施用可能特别有用，例如一种制剂是片剂而另一种制剂是无菌液体的情况，和/或所述药剂根据不同的给药方案施用，例如一种制剂每天施用而第二种药剂的施用频率较低例如每周给药的情况。

如本文所用，“与……联合”、“与……组合”或“联合施用”是指除了至少一种其它药剂之外还施用一种药剂。因此，“与……联合”、“与……组合”或“联合施用”是指在向个体施用至少一种其它药剂之前、期间或之后施用一药制剂。两种或更多种药剂的施用旨在包括其中所述药剂不一定通过相同的施用途径或同时施用的治疗方案。

“组合”或“药物组合”是指本文所述的任何两种或更多种药剂的组合，例如本文所述的任何CDK抑制剂与本文所述的任何PD-1轴结合拮抗剂、任选与本文所述的任何OX40激动剂的组合；与本文所述的任何4-1BB激动剂的组合；或与本文所述的任何OX40激动剂和任何4-1BB激动剂的组合。这两种或多种药剂可能(但不一定)属于不同类别的药剂。

在一些实施方案中，如本文所述的组合，例如CDK抑制剂组合PD-1轴结合拮抗剂，以单剂量施用。在一些实施方案中，如本文所述的组合，例如CDK抑制剂组合PD-1轴结合拮抗剂，以多剂量施用。在一些实施方案中，如本文所述的组合，例如CDK抑制剂组合PD-1轴结合拮抗剂，其施用量可以以规则的间隔定期施用(例如每1、2、3、4、5或6天、或每1、2、3、4、5、6、7、8或9周、或每1、2、3、4、5、6、7、8、9个月或更长时间施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多次)。

在一些实施方案中，如本文所述的组合，例如CDK抑制剂组合PD-1轴结合拮抗剂，以预定间隔施用(例如每1、2、3、4、5或6天、或每1、2、3、4、5、6、7、8或9周、或每1、2、3、4、5、6、7、8、9个月或更长时间施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多次)。

本发明涉及用于同时、单独或依次施用的两种或更多种药剂的组合，特别是用于治疗或预防癌症。例如，本发明组合的各个药剂可以在治疗过程中的不同时间以任何顺序单独施用，或者以分开的或单一组合形式同时施用。

如本文所用，术语“同时施用”、“联合施用”、“同时给药”或“同时地给药”是指在同一时间点或彼此紧随地施用所述药剂。例如，在后一种情况下，两种药剂的施用时间足够接近，以至于观察到的结果与在同一时间点施用所述药剂时所获得的结果没有区别。

本发明的药剂可以完全单独施用或以一种或多种单独的组合物形式施用。例如，可以在治疗过程中的不同时间给予所述药剂(以时间顺序交错的方式，尤其是顺序特异性方式)，这种施用时间间隔使所述组合治疗有效治疗癌症。

如本文所用，术语“依次”是指这样一种治疗，其中使用第一种治疗例如施用第一种药剂，随后施用第二种治疗例如施用第二种药剂。

所述组合的各个药剂的剂量可能需要与所述组合中的其它药剂相比更频繁地施用一种或多种药剂。因此，为了可以适当地给药，包装的药物产品可能含有一种或多种含有药剂组合的剂型，以及一种或多种含有所述药剂组合之一但不含有所述组合的其它药剂的剂型。

如本文所用，术语“单一制剂”是指经配制的向个体递送有效量的两种治疗剂的单一载体或运载体。单一运载体被设计为递送有效量的每种药剂以及任何药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，所述运载体是片剂、胶囊、丸剂或贴剂。在其它实施方案中，所述运载体是溶液或悬浮液。

术语“单位剂量”在本文中用于表示在一种剂型中将两种药剂一起同时施用于被治疗的个体。在一些实施方案中，单位剂量是单一制剂。在某些实施方案中，单位剂量包括一种或多种运载体，使得每种赋形剂包括有效量的至少一种药剂以及药学上可接受的载体和赋形剂。在一些实施方案中，单位剂量是同时施用于个体的一种或多种片剂、胶囊剂、丸剂或贴剂。

“口服剂型”包括规定或指定用于口服施用的单位剂型。

如本文所用，与乳腺癌有关的术语“晚期”，包括局部晚期(非转移性)疾病和转移性疾病。

如本文所用，术语“治疗”或“处理”癌症是指为患有癌症或被诊断患有癌症的个体施用根据本发明的联合治疗以实现至少一种积极的治疗效果，所述效果例如癌细胞数量减少，肿瘤大小减小，癌细胞浸润到外周组织的速度降低或肿瘤转移或肿瘤生长的速度降低，逆转、停止、控制、减缓、中断、阻止、缓解和/或抑制体征、症状、病症、病况或疾病的进展或严重程度，但不一定涉及完全消除所有与疾病相关的体征、症状、病况或病症。在本发明的含义内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发作(即疾病临床表现或疾病症状之前的时期)和/或降低疾病症状的发生或恶化的风险。

除非另有说明，否则本文所用术语“治疗”是指如上文所定义的“治疗”行为。术语“治疗”还包括对个体的辅助和新辅助治疗。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于以下一种或多种结果：减少(或破坏)肿瘤细胞或癌细胞的增殖；抑制转移或肿瘤细胞；缩小或减小肿瘤的大小；缓解癌症；减少癌症引起的至少一种症状；提高癌症患者的生活质量；减少治疗癌症所需的其它药物的剂量；延缓癌症的进展；治愈癌症；克服癌症的一种或多种耐药机制；和/或延长癌症患者的存活期。可以通过多种方式测量癌症的积极治疗效果(例如W.A.Weber,J.Nucl.Med.50:1S-10S(200))。在一些实施方案中，通过本发明的组合实现的治疗是部分应答(PR)、完全应答(CR)、总体应答(OR)、无进展存活(PFS)、无疾病存活(DFS)和总存活率(OS)。PFS，也称为“肿瘤进展时间”，表示治疗期间和治疗后癌症不生长的时间长度，包括患者经历CR或PR的时间量，以及患者经历疾病稳定(SD)的时间量。DFS是指在治疗期间和之后患者保持无病状态的时间长度。OS是指与天然的或未经治疗的个体或患者相比预期寿命的延长。在一些实施方案中，对本发明组合的应答是使用实体瘤中的应答评估标准(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST)1.1应答标准评估PR、CR、OR、OS、PFS或DFS中的任一个。有效治疗癌症患者的本发明组合的治疗方案可根据诸如疾病状态、患者年龄、体重和所述治疗在个体体内引起抗癌应答的能力等因素而变化。虽然本发明的任何方面的实施方案可能无法有效地在每个个体中实现积极的治疗效果，但其应该在通过本领域已知的任何统计检验确定的统计学显著数量的个体中实现，所述检验例如是Student’s t检验、chi2检验、Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstrat检验和Wilcon检验。

术语“施用”、“给药”或“施予”、“治疗(treat)”、“处理(treating)”或“治疗(treatment)”适用于动物、人、实验个体、细胞、组织、器官或生物体液，是指将外源性药物、治疗剂或诊断剂、化合物、颗粒和/或组合物接触、植入、吸收、摄取、注射、吸入或引入所述动物、人、实验个体、细胞、组织、器官或生物体液。细胞的治疗包括将药剂与细胞接触，以及将药剂与流体接触，在其中所述流体与所述细胞接触。术语“治疗”还包括体外和离体治疗，例如通过试剂、诊断化合物、结合化合物或通过另一种细胞对细胞进行治疗。

术语“诊断”在本文中用于指对疾病或病症(例如癌症)的分子学或病理学状态的鉴定或分类。例如，“诊断”可以指鉴定特定类型的癌症。“诊断”还可以指对特定癌症亚型的分类，例如通过组织病理学标准或通过分子特征(例如特征在于一种或一组生物标志物(例如由所述基因编码的特定基因或蛋白质)的表达的亚型))。

术语“辅助诊断”在本文中用于指帮助对于特定类型的疾病或病症(例如癌症)的症状或病症的存在或性质做出临床确定的方法。例如，帮助诊断疾病或病症(例如癌症)的方法可以包括测量来自个体的生物样品中的某些生物标志物。

如本文所用，术语“样品”是指得自或衍生自个体和/或感兴趣的个体的组合物，其包含例如基于物理、生物化学、化学和/或生理特性待鉴定和/或鉴别的细胞和/或其它分子实体。例如，短语“疾病样品”及其变化用语是指从预期或已知含有待鉴定的细胞和/或分子实体的感兴趣个体中获得的任何样品。样品包括但不限于原代或培养的细胞或细胞系、细胞上清、细胞裂解物、血小板、血清、血浆、玻璃体液、淋巴液、滑液、卵泡液、精液、羊水、乳汁、全血、血液来源的细胞、尿液、脑脊液、唾液、痰、泪液、汗液、粘液、肿瘤裂解物，以及组织培养基、组织提取物如匀浆组织、肿瘤组织、细胞提取物，及其组合。

“组织样品”或“细胞样品”是指从受试者或个体的组织中获得的相似细胞的集合。组织或细胞样品的来源可以是来自新鲜、冷冻和/或保存的器官的固体组织、组织样品、活检和/或抽吸物；血液或任何血液成分如血浆；体液如脑脊髓液、羊水、腹膜液或间质液；来自受试者妊娠或发育任何时间的细胞。组织样品也可以是原代或培养的细胞或细胞系。任选地，组织或细胞样品得自疾病组织/器官。组织样品可包含在自然界中与所述组织非天然混杂的化合物，例如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养物、抗生素等。

如本文所用，“参考样品”、“参考细胞”、“参考组织”、“对照样品”、“对照细胞”或“对照组织”是指用于比较目的的样品、细胞、组织、标准或水平。在一个实施方案中，参考样品、参考细胞、参考组织、对照样品、对照细胞或对照组织得自相同受试者或个体的健康和/或非患病部分(例如组织或细胞)。例如，健康和/或非患病细胞或组织与患病细胞或组织相邻(例如与肿瘤相邻的细胞或组织)。在另一个实施方案中，参考样品得自相同受试者或个体的机体的未处理组织和/或细胞。在又一个实施方案中，参考样品、参考细胞、参考组织、对照样品、对照细胞或对照组织得自不是所述受试者或个体的个体的健康和/或非患病部分(例如组织或细胞)。在又一个实施方案中，参考样品、参考细胞、参考组织、对照样品、对照细胞或对照组织得自不是所述受试者或个体的个体的机体的未处理的组织和/或细胞。

术语“药物组合物”是指这样一种配制物，其形式使得活性成分的生物活性有效，并且不包含对施用该配制物的个体具有不可接受的毒性的其它组分。这种配制物是无菌的。“药学上可接受的”载体或赋形剂(运载体、添加剂)是可以合理地施用于个体以提供所用活性成分的有效剂量的那些载体或赋形剂。

本文提供的组合可以通过药物制剂领域的技术人员显而易见的多种方法来配制。可以以各种不同的方式实现上述各种释放性质。合适的制剂包括例如片剂、胶囊剂、压制包衣制剂和其它易于施用的制剂。

“包装说明书”是指通常包含在药物商业包装中的说明书，其中包含关于适应症、用法、剂量、施用、禁忌症、与所述包装产品组合的其它药物和/或关于使用这种药物的警告等信息。

药物、药剂、组分、组合物、化合物、物质、靶向剂、靶向治疗剂、治疗性抗体、治疗剂、药品或药物组合物的“有效剂量”、“有效量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是实现任何一种或多种有益或期望的结果的量，包括疾病的生化、组织学和/或行为、症状、其并发症和在疾病发展过程中出现的中间病理表型。

对于治疗应用，治疗有效量是指施用的药物、药剂、组分、组合物、化合物、物质、靶向剂、靶向治疗剂、治疗性抗体、治疗剂、药品或药物组合物的量，所述量将正在治疗的疾病的一种或多种症状减轻至一定程度，例如减少由疾病引起的一种或多种症状，提高患有该疾病的人的生活质量，减少治疗该疾病所需的其它药物的剂量，增强另一种药物的效力，例如通过靶向、延缓疾病进展和/或延长存活期实现。

关于癌症的治疗，治疗有效量是指药物、药剂、组分、组合物、化合物、物质、靶向剂、靶向治疗剂、治疗性抗体、治疗剂、药品或药物组合物的量，所述量在施用一种或多种治疗后有效实现以下一种或多种结果：(1)降低肿瘤的大小，(2)减少癌细胞的数量，(3)抑制(即在一定程度上减缓、优选停止)癌细胞浸润到周围器官，(4)抑制(即在一定程度上减缓、优选停止)肿瘤转移，(5)抑制(即在一定程度上减缓、优选停止)肿瘤生长或肿瘤侵袭，(6)缓解(即在一定程度上缓解、优选消除)与癌症相关的一种或多种体征或症状，(7)降低治疗疾病所需的其它药物的剂量，(8)增强另一种药物的作用，(9)延缓疾病的进展，(10)改善或增加无病、无复发、无进展和/或总存活、存活时间或存活率，(11)增加应答率、应答持久性或者应答或缓解的患者数量，(12)降低住院率，(13)缩短住院时间，(14)肿瘤大小保持不变且不增加或增加小于10％，优选小于5％，优选小于4％，优选小于2％；(12)缓解患者数量增加，(15)延长缓解期长度或持续时间，(16)降低癌症复发率；(15)降低癌症复发时间，和(17)改善癌症相关症状和/或生活质量。

根据本发明，将一定量的CDK抑制剂与一定量的PD-1轴结合拮抗剂和任选存在的一定量的OX40激动剂和/或一定量的4-1BB激动剂联合，其中这些量一起有效治疗癌症。

有效量可以一次或多次施用。对于本发明的目的，有效量是足以直接或间接完成预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景中所理解的，药物、化合物或药物组合物的有效量的实现可以或可以不联合另一种药物、药剂、成分、组合物、化合物、物质、靶向剂、靶向治疗剂、治疗性抗体、治疗剂、药品或药物组合物。

有效量可以一次或多次施用。对于本发明的目的，药物、化合物和/或药物组合物的有效量是足以直接或间接完成预防性或治疗性治疗的量。

如在临床背景中所理解的，药物、化合物或药物组合物的有效量的实现可以或可以不联合另一种药物、化合物或药物组合物。因此，在施用一种或多种治疗剂的情况下可以考虑“有效量”，而一种药剂，如果与一种或多种其它药剂联合可以达到或达到了期望的结果，则被认为以有效量提供。

治疗量还可以指已被监管机构批准使用的药物剂量。如本文所用，“亚治疗剂量(subtherapeutic amount)”是指明显低于批准剂量的药物剂量。

术语“治疗方案”、“给药方案”和“投药方案”可互换使用，指本发明组合中每种治疗剂的给药剂量和时间。

关于疾病、病症或病况的术语“改善”是指任何可观察到的治疗有益效果。治疗不必是绝对有益于个体的。例如，改善意味着与不施用本发明方法或方案的治疗剂相比减轻或改善疾病、病症或病况的一个或多个症状。改善还包括缩短或减少症状的持续时间。

术语“生物类似剂”是指与FDA批准的生物制品(参比品)高度相似的生物制品，在药代动力学、安全性和有效性方面与参比品没有临床意义的差异。

术语“生物等效剂”是指与FDA批准的生物制品(参比品)是药学等效且具有相似生物利用度的生物制品。例如，根据FDA，术语生物等效性被定义为“在适当设计的研究中在相似条件下以相同摩尔剂量施用时，药学等效物或药学替代物中的活性成分或活性部分在药物作用部位的可用率和程度不存在显著差异(United States Food and DrugAdministration,"Guidance for Industry:Bioavailability and BioequicalenceStudies for Orally Administered Drug Products-General Considerations,"2003,Center for Drug Evaluation and Research)。.

术语“生物改良剂(biobetter)”是指与FDA批准的生物制品(参比品)属于同一类别但不完全相同的生物制品，其在安全性、有效性、稳定性等方面比参比品有所改进。

应用于被诊断患有或怀疑患有癌症的对象的“肿瘤”是指任何大小的恶性或潜在恶性新生物或组织块，并且包括原发性肿瘤和继发性新生物。实体瘤是通常不包含囊肿或液体区的异常生长或组织块。实体瘤的实例是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病(血液癌症)通常不形成实体瘤(National Cancer Institute,Dictionary of Cancer Terms)。

“肿瘤负荷”也称为“肿瘤荷载”，是指分布在全身的肿瘤物的总量。肿瘤负荷是指全身、包括淋巴结和骨髓的癌细胞总数或肿瘤的总大小。肿瘤负荷可以通过本领域已知的多种方法确定，例如使用卡尺，或在体内使用成像技术，例如超声、骨扫描、计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)扫描。

术语“肿瘤大小”是指可以用肿瘤的长度和宽度来测量的肿瘤总大小。肿瘤大小可以通过本领域已知的多种方法来确定，例如通过在从个体身上移除后测量肿瘤的尺寸，例如使用卡尺，或者在体内使用成像技术，例如骨扫描、超声波、CR或MRI扫描。

术语“累加”用于表示两种或多种药剂组合的结果不大于每种药剂单独的总和。

在一个实施方案中，本文所述的药剂组合表现出协同作用。术语“协同作用”或“协同的”用于表示两种或多种药剂组合的结果大于每种药剂单独的总和。在治疗的疾病、病况或病症中的这种改善是“协同”作用。“协同作用量”是导致两种或更多种药剂组合协同作用的量，如本文中定义的“协同的”。“协同作用组合”是指根据本文所述的方法测量的在体内或体外产生协同作用的药剂组合。

确定两种或两种以上药剂之间的协同相互作用，每种药剂效果的最佳范围和绝对剂量范围可通过在不同剂量范围和/或剂量比向需要治疗的个体施用所述药剂而最后确定。然而，在体外模型或体内模型中观察到的协同作用可以预测在人和其它物种以及体外模型或体内模型中存在的作用，以测量协同作用。这种研究的结果还可用于预测人和其它物种所需的有效剂量和血浆浓度比范围以及绝对剂量和血浆浓度，例如通过应用药代动力学和/或药效学方法进行。

如本文所用，“非标准临床给药方案”是指用于施用物质、药剂、化合物或组合物的方案，其不同于在临床环境中通常用于该物质、药剂、化合物或组合物的量、剂量或方案。“非标准临床给药方案”包括“非标准临床剂量”或“非标准给药方案”。

如本文所用，“低剂量方案”是指一种给药方案，其中该方案中的一种或多种物质、药剂、化合物或组合物以低于临床环境中通常使用所述药剂的量或剂量给药，例如当所述药剂作为单一治疗给药时。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。一些实施方案还涉及本文所述化合物的药学上可接受的酸加成盐。合适的酸加成盐由形成非毒性盐的酸形成。合适的酸加成盐，即含有药理学上可接受的阴离子的盐的非限制性实例包括但不限于乙酸盐、酸式柠檬酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、右旋樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己氨磺酸盐(cyclamate)、乙二磺酸盐、乙磺酸胺(esylate)、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔萘酸盐(xinofoate)。

其它实施方案涉及本文所述化合物的碱加成盐。合适的碱加成盐由形成非毒性盐的碱形成。合适的碱盐的非限制性实例包括铝、精氨酸、苄星青霉素(benzathine)、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌的盐。

本文所述的碱性化合物能够与各种无机酸和有机酸形成多种盐。可用于制备本文所述碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成非毒性酸加成盐的那些酸，例如含有药学上可接受的阴离子的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、醋酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。除了上述酸之外，本文描述的包括碱性部分例如氨基的化合物可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。

可用作制备本文所述的那些化合物的药学上可接受的碱性盐的试剂的化学碱是与这些化合物形成非毒性碱盐的那些碱。这种非毒性碱盐包括但不限于衍生自这种药理学上可接受的阳离子如碱金属阳离子(例如钾和钠)和碱土金属阳离子(例如钙和镁)、铵或水溶性胺加成盐如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)，以及药学上可接受的有机胺的低级链烷醇铵和其它碱盐。还可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。

关于合适的盐的综述，参见Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use by Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,2002)。制备本文所述化合物的药学上可接受的盐的方法是本领域技术人员已知的。

如本文所用，“载体”包括在所采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或个体无毒性的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。通常生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲液，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸缓冲液；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子例如钠；和/或非离子表面活性剂，例如TWEEN^TM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICS^TM。

术语“溶剂化物”在本文中用于描述包含本文所述的化合物和一种或多种药学上可接受的溶剂分子例如水和乙醇的分子复合物。

本文所述的化合物也可以非溶剂化和溶剂化形式存在。因此，一些实施方案涉及本文所述化合物的水合物和溶剂化物。

本文所述的含有一个或多个不对称碳原子的化合物可以两种或多种立体异构体的形式存在。当本文所述的化合物包含烯基或亚烯基时，几何顺式/反式(或Z/E)异构体是可能的。在结构异构体可通过低能位垒相互转化的情况下，可能会发生互变的异构现象(“互变异构现象”)。这可以在本文所述的包含例如亚氨基、酮基或肟基团的化合物中采用质子互变异构的形式，或在包含芳族部分的化合物中采用所谓的价互变异构的形式。单一化合物可能表现出不止一种类型的异构现象。

本文所述实施方案的化合物包括本文所述化合物的所有立体异构体(例如顺式和反式异构体)和所有光学异构体(例如R和S对映异构体)，以及这种异构体的外消旋、非对映异构体和其它混合物。尽管所有立体异构体均涵盖在我们的权利要求范围内，但本领域技术人员会认识到特定的立体异构体可能是优选的。

在一些实施方案中，本文所述的化合物可以以一些互变异构形式存在，包括烯醇和亚胺形式，以及酮和烯胺形式以及几何异构体及其混合物。所有这种互变异构形式均包括在本发明实施方案的范围内。互变异构体以溶液中互变异构体的混合物形式存在。在固体形式中，通常以一种互变异构体为主。尽管可以描述一种互变异构体，但本实施方案包括本发明化合物的所有互变异构体。

本发明实施方案的范围包括本文所述化合物的所有立体异构体、几何异构体和互变异构形式，包括表现出一种以上类型的异构现象的化合物，及其一种或多种的混合物。还包括酸加成盐或碱盐，其中抗衡离子是光学活性的，例如d-乳酸盐或l-赖氨酸，或外消旋的，例如dl-酒石酸盐或dl-精氨酸。

本实施方案还包括本文所述化合物的阻转异构体。阻转异构体是指可以分离成旋转受限异构体的化合物。

顺式/反式异构体可以通过本领域技术人员熟知的常规技术分离，例如色谱法和分级结晶法。

用于制备/分离单个对映体的常规技术包括从合适的光学纯前体中进行手性合成或使用例如手性高压液相色谱(HPLC)解离外消旋物(或者，盐或衍生物的外消旋物)。

或者，外消旋物(或外消旋前体)可以与合适的光学活性化合物例如醇反应，或者在本文所述的化合物包含酸性或碱性部分的情况下与碱或酸例如1-苯乙胺或酒石酸反应。所得非对映体混合物可以通过色谱法和/或分级结晶法分离，并且通过本领域技术人员熟知的方式将一种或这两种非对映体转化为相应的纯对映体。

示例的方法和材料在本文中描述，然而与本文中描述的那些相似或等效的方法和材料也可用于本发明的实践或测试中。所述材料、方法和实施例仅是说明性的而不是限制性的。

III.CDK抑制剂

本发明的实施方案包括CDK抑制剂。CDK和相关的丝氨酸/苏氨酸激酶是重要的细胞酶，在调节细胞分裂和增殖方面发挥重要作用。

在一实施方案中，CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂(CDK4/6抑制剂或CDK4/6i)或CDK2/4/6抑制剂(CDK2/4/6抑制剂或CDK2/4/6i)。

在一个此类实施方案中，CDK2/4/6抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(PF-06873600)，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。帕博西尼是指6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮，或其药学上可接受的盐。

IV.PD-1轴结合拮抗剂

本发明的实施方案包括PD-1轴结合拮抗剂。

如本文所用，术语“PD-1轴结合拮抗剂”或“PD-1轴拮抗剂”是指抑制PD-1轴结合伴侣(例如PD-1、PD-L1、PD-L2)与其一个或多个结合伴侣的相互作用，例如以克服或部分克服由PD-1信号传导轴上的信号传导导致的T细胞功能障碍——结果是恢复、部分恢复或增强T-细胞功能(例如增殖、细胞因子产生、靶细胞杀伤、存活)。如本文所用，PD-1轴结合拮抗剂包括如下一种或多种拮抗剂：(i)PD-1结合拮抗剂，(ii)PD-L1结合拮抗剂和/或(iii)PD-L2拮抗剂。

如本文所用，术语“PD-1结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其一种或多种结合伴侣例如PD-L1、PD-L2相互作用所致的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1与其结合伴侣结合的分子。在一个具体方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1结合拮抗剂包括抗PD-1抗体、其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子，它们降低、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用所致信号转导。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂降低通过或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白通过PD-1介导的信号传导介导的阴性共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞较少地非功能障碍。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体(αPD-1)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是帕博利珠单抗。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是匹地利珠单抗。

在一些实施方案中，可用于本发明的PD-1结合拮抗剂选自MDX-1106(纳武单抗)、MK-3475(帕博利珠单抗)、CT-011(匹地利珠单抗)、MEDI-0680(AMP-514)、REGN-2810(西米普利单抗)、mAb7(RN888)、mAb15、AMP-224(B7-DCIg)和AGEN-2034w(斯巴达珠单抗)。

示例的PD-1结合拮抗剂包括在如下专利申请中描述的那些PD-1结合拮抗剂：美国专利申请公开20130280265，美国专利申请公开20130237580，美国专利申请公开20130230514，美国专利申请公开20130109843，美国专利申请公开20130108651，美国专利申请公开20130017199，美国专利申请公开20120251537，美国专利申请公开20110271358，欧洲专利EP2170959B1，PCT公开号WO 2011/066342，PCT公开号WO2015/035606，PCT公开号WO 2015/085847，PCT公开号WO 2015/112800，PCT公开号WO 2015/112900，PCT公开号WO2016/092419，PCT公开号WO 2017/017623，PCT公开号WO 2017/024465，PCT公开号WO 2017/054646，PCT公开号WO 2017/071625，PCT公开号WO 2017/019846，PCT公开号WO 2017/132827，PCT公开号WO 2017/214092，PCT公开号WO 2018/013017，PCT公开号WO 2018/053106，PCT公开号WO 2018/055503，PCT公开号WO 2018/053709，PCT公开号WO 2018/068336和PCT公开号WO2018/072743，其全部公开内容通过援引加入本文。其它示例的PD-1结合拮抗剂在如下文献中描述：Curran et al.，PD-1and CTLA-4combination blockadeexpands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cellswithin B16 melanoma tumors，PNAS，2010，107，4275；Topalian et al.，Safety，activity，and immune correlates of anti–PD-1antibody in cancer，NewEngl.J.Med.2012，366，2443；Brahmer et al.，Safety and activity of anti–PD-L1antibody in patients with advanced cancer，New Engl.J.Med.2012，366，2455；Dolanet al.，PD-1pathway inhibitors:changing the landscape of cancer immunotherapy，Cancer Control 2014，21，3；及Sunshine et al.，Pd-1/Pd-L1 Inhibitors，Curr.Opin.inPharmacol.2015，23。

如本文所用，术语“PD-L1结合拮抗剂”是指降低、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一种或多种结合伴侣如PD-1、B7-1相互作用引起的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与其结合伴侣的结合。在一个具体方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1的结合。在另一个具体方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和/或B7-1的结合。在另一个具体方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和B7-1二者的结合。

在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括抗PD-L1抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其它分子，它们降低、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一种或多种结合伴侣例如PD-1和/或B7-1相互作用引起的信号转导。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂减少通过或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白通过PD-L1介导的信号传导介导的阴性共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞较少地非功能障碍。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体(αPD-L1)。在一些实施方案中，PD-L1抗体是其生物类似剂、生物改良剂或生物等效剂。

在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(MDX-1105)、AMP-714、阿特珠单抗(MPDL3280A)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、阿维鲁单抗，或包含由ATCC登录号PTA-121183的表达载体产生的VH区并具有由ATCC登录号PTA-121182的表达载体产生的VL区的抗体，或它们的组合。

在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂选自YW243.55.S70、BMS-936559(MDX-1105)、AMP-714、阿特珠单抗(MPDL3280A)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、阿维鲁单抗和包含由ATCC登录号PTA-121183的表达载体产生的VH区并具有由ATCC登录号PTA-121182的表达载体产生的VL区的抗体。

一些示例的PD-L1结合拮抗剂包括在如下专利申请中描述的那些：美国专利申请公开20090055944，美国专利申请公开20100203056，美国专利申请公开20120039906，美国专利申请公开20130045202，美国专利申请公开20130309250，美国专利申请公开US20130034559，美国专利申请公开US20150282460，美国专利申请公开20160108123，PCT公开号WO 2011/066389，PCT公开号WO 2016/000619，PCT公开号WO 2016/094273，PCT公开号WO 2016/061142，PCT公开号WO 2016/149201，PCT公开号WO 2016/149350，PCT公开号WO2016/179576，PCT公开号WO 2017/020801，PCT公开号WO 2017/103147，PCT公开号WO 2017/112741，PCT公开号WO 2017/205213，PCT公开号WO 2017/054646，PCT公开号WO 2017/084495，PCT公开号WO 2017/161976，PCT公开号WO 2018/005682，PCT公开号WO 2018/053106，PCT公开号WO 2018/085469，PCT公开号WO 2018/111890和PCT公开号WO 2018/106529，其全部公开内容通过援引加入本文。其它示例的PD-L1结合拮抗剂在Sunshine etal.，2015中描述。

如本文所用，术语“PD-L2结合拮抗剂”是指降低、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合伴侣例如PD-1相互作用引起的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2与其结合伴侣结合的分子。在一个具体方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括抗PD-L2抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其它分子，它们降低、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合伴侣例如PD-1相互作用引起的信号转导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂减少通过或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白通过PD-L2介导的信号传导介导的阴性共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞较少地非功能障碍。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是PD-L2免疫粘附素。

在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂或PD-L2结合拮抗剂)是小分子拮抗剂。在一些进一步的实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-L1结合拮抗剂)是PCT公开号WO 2015/033299或PCT公开号WO2015/033301中公开的化合物或其药学上可接受的盐，例如选自表2中化合物1至25的化合物或其药学上可接受的盐。

表2

在一些进一步的实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-L1结合拮抗剂)是表2中的化合物编号12，即下式的(((S)-3-氨基-1-(3-((S)-1-氨基-2-羟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-3-氧代丙基)氨基甲酰基)-L-别苏氨酸：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-L1结合拮抗剂)是下式的2-(3-(3-氨基-1-(3-(1-氨基-2-羟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-3-氧代丙基)脲基)-3-羟基丁酸：

或其非对映异构体，或其非对映异构体的混合物，或任何前述物质的药学上可接受的盐。

下表3提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途的示例性PD-1轴结合拮抗剂的氨基酸序列列表。mAb7和mAb15的CDR带有下划线。mAB7也称为RN888或PF-6801591。mAb7(又名RN888)和mAb15在PCT公开号WO 2016/092419中公开，其全部公开内容通过援引加入本文。

表3

如本文所用，抗人PD-L1 mAb是指与成熟的人PD-L1特异性结合的单克隆抗体。成熟的人PD-L1分子由如下序列的19-290氨基酸组成：mrifavfifmtywhllnaftvtvpkdlyvveygsnmtieckfpvekqldlaalivywemedkniiqfvhgeedlkvqhssyrqrarllkdqlslgnaalqitdvklqdagvyrcmisyggadykritvkvnapynkinqrilvvdpvtseheltcqaegypkaeviwtssdhqvlsgkttttnskreeklfnvtstlrintttneifyctfrrldpeenhtaelvipelplahppnerthlvilgaillclgvaltfifrlrkgrmmdvkkcgiqdtnskkqsdthleet(SEQ ID NO:33)。

下表4提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途的示例性抗PD-L1抗体序列。

表4

在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂是阿维鲁单抗，并且在整个治疗过程中以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/kg的剂量以约14天(±2天)或约21天(±2天)或约30天(±2天)的间隔静脉内施用。在一些实施方案中，阿维鲁单抗在整个治疗过程中以约80、150、160、200、240、250、300、320、350、400、450、480、500、550、560、600、640、650、700、720、750、800、850、880、900、950、960、1000、1040、1050、1100、1120、1150、1200、1250、1280、1300、1350、1360、1400、1440、1500、1520、1550或1600mg、优选800mg、1200mg或1600mg的固定剂量以约14天(±2天)或约21天(±2天)或约30天(±2天)的间隔施用。在某些实施方案中，向所述个体静脉内(IV)输注施用包含本文所述的任何PD-1轴结合拮抗剂的药物。在某些实施方案中，向所述个体皮下(SC)输注施用包含本文所述的任何PD-1轴结合拮抗剂的药物。

在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂是RN888，并且在整个治疗过程中以约1、2、3、4、5、6、7或8mg/kg的剂量以约14天(±2天)或约21天(±2天)或约30天(±2天)的间隔施用。在一些实施方案中，RN888以约80、150、160、200、240、250、300、320、350、400、优选300mg的固定剂量以约14天(±2天)或约21天(±2天)或大约30天(±2天)的间隔施用。在一些实施方案中，RN888以300mg的量以Q4W皮下施用。

在一个实施方案中，“PD-1拮抗剂”是指阻断癌细胞上表达的PD-L1与免疫细胞(T细胞、B细胞或NKT细胞)上表达的PD-1结合的任何化学化合物或生物分子，并且优选地还阻断癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1的结合。PD-1及其配体的替代名称或同义词包括：对于PD-1而言，PDCD1、PD1、CD279和SLEB2；对于PD-L1而言，PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H；以及对于PD-L2而言，PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。在治疗人类个体的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，PD-1拮抗剂可以阻断人PD-L1与人PD-1的结合，并阻断人PD-L1和PD-L2二者与人PD-1的结合。示例性人PD-1氨基酸序列可以在NCBI基因座号：NP_005009中找到。示例性人PD-L1和PD-L2氨基酸序列可以分别在NCBI基因座号：NP_054862和NP_079515中找到。

可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途的PD-1拮抗剂包括单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段，其特异性结合PD-1或PD-L1，优选特异性结合PD-1或PD-L1。mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，在一些实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')₂、scFv和Fv片段。

结合人PD-1并可用于本发明的治疗方法、药物和用途的mAb的实例在美国专利号7,488,802、7,521,051、8,008,449、8,354,509、8,168,757、PCT公开号WO 2004/004771、WO2004/072286、WO 2004/056875和美国专利公开号2011/0271358中描述。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的特异性抗人PD-1mAb包括：纳武单抗(MDX 1106)、帕博利珠单抗(MK-3475)、匹地利珠单抗(CT-011)、西米普利单抗(REGN2810)、替雷利珠单抗(BGB-A317)、斯巴达珠单抗(PDR001)、RN888、mAb15、MEDI-0680(AMP-514)、BGB-108或AGEN-2034，或它们的组合。

下表5提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途的示例性抗PD-1抗体序列。

表5

V.OX40激动剂

本发明的某些实施方案包含OX40激动剂。如本文所用，术语“OX40激动剂”或“OX40结合激动剂”是指如本文所定义的任何化学化合物或生物分子，其在与OX40结合后：(1)刺激或激活OX40，(2)增强、增加、促进、诱导或延长OX40的活性、功能或存在，或(3)增强、增加、促进或诱导OX40的表达。可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途的OX40激动剂包括与OX40特异性结合的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。在治疗人类个体的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，OX40激动剂增加OX40介导的应答。在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，OX40激动剂显著增强细胞毒性T细胞应答，从而在若干模型中产生抗肿瘤活性。

OX40激动剂包括例如OX40激动剂抗体(例如抗人OX40激动剂抗体)、OX40L激动剂片段、OX40寡聚受体和OX40免疫粘附素。

如本文所用，术语“OX40抗体”、“OX40激动剂抗体”、“抗OX40单克隆抗体”、“αOX40”或“抗OX40抗体”是指如本文所定义的能结合OX40受体的抗体(例如人OX40受体)。

术语“OX40”和“OX40受体”在本申请中可互换使用，是指任何形式的OX40受体，以及其保留OX40受体至少部分活性的变体、异构型(isoforms)和物种同源物。因此，如本文定义和公开的结合分子也可以结合来自除人之外的物种的OX40。在其它情况下，结合分子可以完全特异于人OX40，并且可以不表现出物种或其它类型的交叉反应性。除非另有说明，例如特别提到人OX40，否则OX40包括所有哺乳动物物种的天然序列OX40，例如人、犬、猫、马和牛。一个示例性人OX40是277个氨基酸的蛋白质(UniProt登录号P43489)。

如本文所用，OX40激动剂抗体是指如本文所定义的任何抗体，其在与OX40结合后，(1)刺激或激活OX40，(2)增强、增加、促进、诱导或延长OX40的活性、功能、或存在，或(3)增强、增加、促进或诱导OX40的表达。

可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途中的OX40激动剂包括与OX40特异性结合的单克隆抗体(mAb)(例如抗OX40激动剂抗体)。

在一些实施方案中，与用OX40激动剂抗体治疗之前的增殖和/或细胞因子产生相比，OX40激动剂抗体增加CD4+效应T细胞增殖和/或增加通过CD4+效应T细胞的细胞因子产生。在一些实施方案中，细胞因子是IFN-γ。

在一些实施方案中，OX40激动剂抗体增加记忆T细胞增殖和/或增加通过记忆细胞的细胞因子产生。在一些实施方案中，细胞因子是IFN-γ。在一些实施方案中，OX40激动剂抗体抑制Treg对效应T细胞功能的抑制作用。在一些实施方案中，效应T细胞功能是效应T细胞增殖和/或细胞因子产生。在一些实施方案中，效应T细胞是CD4+效应T细胞。

在一些实施方案中，OX40激动剂抗体增加表达OX40的靶细胞中的OX40信号转导。在一些实施方案中，OX40信号转导通过监测NFκB下游信号传导来检测。

在一些实施方案中，抗人OX40激动剂抗体是耗竭性抗人OX40抗体(例如耗竭表达人OX40的细胞)。在一些实施方案中，表达人OX40的细胞是CD4+效应T细胞。在一些实施方案中，表达人OX40的细胞是Treg细胞。在一些实施方案中，耗竭是通过ADCC和/或吞噬作用进行的。在一些实施方案中，抗体通过结合人效应细胞表达的FcγR并激活人效应细胞功能来介导ADCC。在一些实施方案中，抗体通过结合人效应细胞表达的FcγR并激活人效应细胞功能来介导吞噬作用。示例性的人效应细胞包括例如巨噬细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞。在一些实施方案中，人效应细胞是巨噬细胞。

在一些实施方案中，抗人OX40激动剂抗体具有功能性Fc区。在一些实施方案中，功能性Fc区的效应子功能是ADCC。在一些实施方案中，功能性Fc区的效应子功能是吞噬作用。在一些实施方案中，功能性Fc区的效应子功能是ADCC和吞噬作用。在一些实施方案中，Fc区是人IgG-1。在一些实施方案中，Fc区是人IgG-4。

在一些实施方案中，抗人OX40激动剂抗体是人抗体或人源化抗体。

OX40激动剂抗体的实例以及可用于本发明的治疗方法、药物和用途的实例描述于例如美国专利号7,960,515、PCT专利申请公开号WO 2013/028231和WO 2013/119202以及美国专利申请公开号2015/0190506中。

在一些实施方案中，可用于本文公开的治疗方法、药物和用途的抗OX40抗体是包含重链可变区和轻链可变区的完全人激动剂单克隆抗体，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗OX40抗体是完全人IgG-2或IgG-1抗体。

下表6提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途的示例性抗OX40单克隆抗体序列。

表6

VI.4-1BB激动剂

本发明的某些实施方案包含4-1BB结合激动剂。如本文所用，术语“4-1BB结合激动剂”或“4-1BB激动剂”是指如本文所定义的任何化学化合物或生物分子，其在与4-1BB结合后：(1)刺激或激活4-1BB，(2)增强、增加、促进、诱导或延长4-1BB的活性、功能或存在，或者(3)增强、增加、促进或诱导4-1BB的表达。可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途中的4-1BB激动剂包括与4-1BB特异性结合的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。4-1BB的替代名称或同义词包括CD137和TNFRSF9。在治疗人类个体的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，4-1BB激动剂增加4-1BB介导的应答。在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，4-1BB激动剂显著增强细胞毒性T细胞反应，从而在若干模型中产生抗肿瘤活性。

如本文所用，术语“4-1BB抗体”、“4-1BB激动剂抗体”、“抗4-1BB单克隆抗体”、“α4-1BB”或“抗4-1BB抗体”是指如本文所定义的能结合4-1BB受体(例如人4-1BB受体)的抗体。

术语“4-1BB”和“4-1BB受体”在本申请中可互换地使用，且是指4-1BB受体的任何形式，以及其保留4-1BB受体的至少一部分活性的变体、同种型和物种同系物。因此，如本文中所定义和公开的结合分子也可结合来自除人类以外的物种的4-1BB。在其他情况下，结合分子可对人类4-1BB具有完全特异性且可不呈现物种或其他类型的交叉反应性。除非另有说明，诸如通过特定提及人类4-1BB，否则4-1BB包括具有4-1BB的天然序列的所有哺乳动物物种，例如人类、犬、猫、马和牛。一种示例性人类4-1BB为255个氨基酸的蛋白(登录号NM_001561；NP_001552)。

4-1BB包含信号序列(氨基酸残基1-17)，随后为细胞外结构域(169个氨基酸)、跨膜区(27个氨基酸)和胞内结构域(42个氨基酸)(Cheuk ATC等人2004Cancer GeneTherapy11:215-226)。受体以单体和二聚体形式表达于细胞表面上且可能与4-1BB配体三聚化以进行信号传导。

人类4-1BB包含信号序列(氨基酸残基1-17)，随后为细胞外结构域(169个氨基酸)、跨膜区(27个氨基酸)和胞内结构域(42个氨基酸)(Cheuk ATC等人,Cancer GeneTherapy2004,11:215-226)。受体以单体和二聚体形式表达于细胞表面上且可能与4-1BB配体三聚化以进行信号传导。

结合至人类4-1BB且可用于本发明的治疗方法、药剂和用途中的mAb的实例描述于US 8,337,850和US20130078240中。在一些实施方案中，可用于本文中所公开的治疗、方法、药剂和用途中的抗4-1BB抗体是完全人源化IgG-2激动剂单克隆抗体，其包含分别包含SEQID NO:64和SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区。

以下表7提供用于本发明的治疗方法、药剂和用途的示例性抗4-1BB单克隆抗体序列。

表7

VII.方法、用途和药物

一般方法

分子生物学中的标准方法描述于Sambrook,Fritsch and Maniatis(1982&19892nd Edition，2001 3rd Edition)Molecular Cloning，A Laboratory Manual；Sambrookand Russell Molecular Cloning，3rd ed.，2001；Wu,Recombinant DNA，Vol.217。标准方法也见于Ausbel，et al.，Current Protocols in Molecular Biology，Vols.1-4，2001中，其中描述了细菌细胞中的克隆和DNA诱变(Vol.1)、哺乳动物细胞和酵母中的克隆(Vol.2)、糖缀合物和蛋白质表达(Vol.3)和生物信息学(Vol.4)。

用于蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀、色谱分析、电泳、离心和结晶法已有描述(Coligan，et al.，Current Protocols in Protein Science，Vol.1，2000,John Wileyand Sons，Inc.，New York)。化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生和蛋白质的糖基化已有描述(例如Coligan,et al.,Current Protocols in Protein Science,Vol.2,2000；Ausubel,et al.,Current Protocols in Molecular Biology,Vol.3,2001,pp.16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich,Co.Products for Life Science Research,2001,pp.45-89；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory,pp.384-391)。多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和片段化已有描述(Coligan,et al.,Current Protocols inImmunology,Vol.1,2001；Harlow and Lane,Using Antibodies,1999)。可获得的是用于鉴定配体/受体相互作用的标准技术(例如Coligan,et al.,Current Protocols inImmunology,Vol.4,2001)。

可以制备单克隆、多克隆和人源化抗体(例如Sheperd and Dean(eds.)Monoclonal Antibodies,2000；Kontermann and Dubel(eds.)Antibody Engineering,2001；Harlow and Lane,Antibodies A Laboratory Manual,1988,pp.139-243；Carpenter,et al.,Non-Fc receptor-binding humanized anti-CD3 antibodies induceapoptosis of activated human T cells,J.Immunol.2000,165:6205；He,et al.,Humanization and pharmacokinetics of a monoclonal antibody with specificityfor both E-and P-selectin，J.Immunol.1998,160:1029；Tang et al.,Use of apeptide mimotope to guide the humanization of MRK-16,an anti-P-glycoproteinmonoclonal antibody,J.Biol.Chem.1999,274:27371-27378；Baca et al.,Antibodyhumanization using monovalent phage display,J.Biol.Chem.1997,272:10678-10684；Chothia et al.,Conformations of immunoglobulin hypervariable regions,Nature1989,342:877-883；Foote and Winter Antibody framework residues affecting theconformation of the hypervariable loops,J.Mol.Biol.1992,224:487-499；美国专利号6，329，511)。

人源化的另一种方法是使用在噬菌体上展示的人抗体文库或转基因小鼠中的人抗体文库(Vaughan et al.,Human antibodies with sub-nanomolar affinitiesisolated from a large non-immunized phage display library,NatureBiotechnol.1996,14:309-314；Barbas,Synthetic human antibodies,Nature Medicine1995,1:837-839；Mendez et al.,Functional transplant of megabase humanimmunoglobulin loci recapitulates human antibody response in mice,NatureGenetics 1997,15:146-156；Hoogenboom and Chames,Natural and designer bindingsites made by phage display technology,Immunol.Today 2000,21:371-377；Barbaset al.,Phage Display:A Laboratory Manual,2001；Kay et al.,Phage Display ofPeptides and Proteins:ALaboratory Manual,1996；de Bruin et al.,Selection ofhigh-affinity phage antibodies from phage display libraries,NatureBiotechnol.1999,17:397-399)。

抗原的纯化不是产生抗体所必需的。动物可以用带有感兴趣抗原的细胞进行免疫。然后可以从免疫动物中分离脾细胞，可以将脾细胞与骨髓瘤细胞系融合以产生杂交瘤(例如Meyaard,L.,et.al.,LAIR-1,a novel inhibitory receptor expressed on humanmononuclear leukocytes,Immunity 1997,7:283–290；Wright et al.,Inhibition ofchicken adipocyte differentiation by in vitro exposure to monoclonalantibodies against embryonic chicken adipocyte plasma membranes,Immunity2000,13:233-242；Preston,et al.,The leukocyte/neuron cell surface antigen OX2binds to a ligand on macrophages,Eur.J.Immunol.1997,27:1911-1918,Kaithamanaet al.,Induction of experimental autoimmune Graves'disease in BALB/c mice,J.Immunol.1999,163:5157-5164)。

抗体可以与例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇(PEG)缀合。抗体可用于治疗、诊断、药盒或其它目的，包括与例如染料、放射性同位素、酶或金属例如胶体金偶联的抗体(例如Le Doussal et al.,Enhanced in vivo targeting of an asymmetric bivalenthapten to double-antigen-positive mouse B cells with monoclonal antibodyconjugate cocktails,J.Immunol.1991,146:169-175；Gibellini et al.,ExtracellularHIV-1Tat protein induces the rapid Ser133 phosphorylation and activation ofCREB transcription factor in both Jurkat lymphoblastoid T cells andprimary…,J.Immunol.1998160:3891-3898；Hsing and Bishop,Requirement fornuclear factor-κB activation by a distinct subset of CD40-mediated effectorfunctions in B lymphocytes,J.Immunol.1999,162:2804-2811；Everts et al.,Selective intracellular delivery of dexamethasone into activated endothelialcells using an E-selectin-directed immunoconjugate,J.Immunol.2002，168:883-889)。

流式细胞术方法，包括荧光激活细胞分选术(FACS)是可获得的(例如Owens,etal.,Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice,1994；GivanFlow Cytometry,2nd ed.；2001；Shapiro,Practical Flow Cytometry,2003)。可获得的有适用于修饰核酸包括核酸引物和探针、多肽和抗体的荧光试剂，例如用作诊断试剂(Molecular Probes,Catalogue,2003；Sigma-Aldrich,Catalogue,2003。

免疫系统的组织学标准方法已有描述(例如Muller-Harmelink(ed.),HumanThymus:Histopathology and Pathology,1986；Hiatt,et al.,Color Atlas ofHistology,2000；Louis,et al.,Basic Histology:Text and Atlas,2002)。

可获得的有确定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库(例如GenBank,Vector

Suite(Informax,Inc,Bethesda,MD)；GCG Wisconsin Package(Accelrys,Inc.,San Diego,CA)；

(TimeLogicCorp.,Crystal Bay,Nevada)；Menne,et al.,A comparison of signal sequenceprediction methods using a test set of signal peptides,Bioinformatics 2000,16:741-742；Menne，K.M.L.,et.al.A comparisonof signal sequence predictionmethods using a test set of signal peptides,Bioinformatics 2000,16,741–742；Wren,et al.,SIGNAL-sequence information and GeNomic AnaLysisComput.MethodsPrograms Biomed.2002,68:177-181；von Heijne,Patterns of amino acids nearsignal-sequence cleavage sites,Eur.J.Biochem.1983,133:17-21；von Heijne,A newmethod for predicting signal sequence cleavage sites,Nucleic Acids Res.1986，14:4683-4690)。

治疗方法和用途

本发明进一步提供治疗方法和用途，包括向所述个体施用如本文所述的组合，任选地与其它治疗剂或姑息剂进一步组合。

在本发明的一个方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，其包括与一定量的PD-1轴结合拮抗剂联合，向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，其中这些量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一个此类实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，其进一步包括向所述个体施用一定量的：a.OX40激动剂；b.4-1BB激动剂；或c.OX40激动剂和4-1BB激动剂；其中这些量一起有效治疗癌症。在上述每一项的一些实施方案中，OX40激动剂是抗OX40抗体。在上述每一项的进一步实施方案中，4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

在一些实施方案中，所述治疗导致所述个体在所述治疗停止后持续应答。本发明的方法可用于治疗需要增强免疫原性的病症，例如增加肿瘤免疫原性以治疗癌症。因此，可以治疗多种癌症，或者可以延迟其进展。

在一些实施方案中，所述个体患有对一种或多种PD-1轴结合拮抗剂具有抗性(已证明具有抗性)的癌症。在一些实施方案中，对PD-1轴结合拮抗剂的抗性包括癌症复发或难治性癌症。复发可以是指癌症在治疗后在原部位或新部位再次出现。在一些实施方案中，对PD-1轴结合拮抗剂的抗性包括在用PD-1轴结合拮抗剂治疗期间癌症的进展。在一些实施方案中，对PD-1轴结合拮抗剂的抗性包括对治疗没有应答的癌症。所述癌症可能在治疗开始时具有抗性，或可能在治疗期间变得具有抗性。在一些实施方案中，所述癌症处于早期或晚期。

在一个实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂或PD-L2结合拮抗剂。在一些此类实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂。在上述每一项的进一步实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与其配体结合伴侣的结合。在特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1的结合。在另一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L2的结合。在另一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和PD-L2二者的结合。在一特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。在另外的实施方案中，本发明提供的PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是其生物类似剂、生物改良剂(biobetter)或生物等效剂。在一个特定实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗(MDX 1106)、帕博利珠单抗(MK-3475)、匹地利珠单抗(CT-011)、西米普利单抗(REGN2810)、替雷利珠单抗(BGB-A317)、斯巴达珠单抗(PDR001)、RN888、mAb15、MEDI-0680(AMP-514)、BGB-108或AGEN-2034，或它们的组合。

在上述每一项的进一步实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-L1结合拮抗剂。在一个特定实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1的结合。在另外的实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与B7-1的结合。在又一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和B7-1二者的结合。

在特定实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是其生物类似剂、生物改良剂或生物等效剂。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(MDX-1105)、AMP-714、阿特珠单抗(MPDL3280A)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、阿维鲁单抗，或包含由ATCC登录号PTA-121183的表达载体产生的VH区并具有由ATCC登录号PTA-121182的表达载体产生的VL区的抗体，或它们的组合。

在本发明的一个方面，OX40激动剂是抗OX40抗体、OX40L激动剂片段、OX40寡聚受体、三聚OX40L-Fc蛋白或OX40免疫粘附素，或其组合。在一些实施方案中，OX40激动剂抗体结合人OX40。在一些实施方案中，抗OX40抗体是本文公开的任何一种抗人OX40抗体。在上述每一项的特定实施方案中，OX40激动剂是抗OX40抗体。在一些实施方案中，抗OX40抗体是其生物类似剂、生物改良剂或生物等效剂。在一个这种实施方案中，抗OX40抗体是MEDI6469、MEDI0562、MEDI6383、MOXR0916或GSK3174998，或它们的组合。

在上述每一项的一些实施方案中，抗OX40抗体是全长人IgG-1抗体。在一个特定实施方案中，OX40激动剂是包含OX40L的一个或多个胞外域的OX40L激动剂片段。

另一方面，4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。在一些实施方案中，抗4-1BB抗体是其生物类似剂、生物改良剂或生物等效剂。在一个特定实施方案中，4-1BB激动剂是乌托鲁单抗(PF-05082566)、1D8、3Elor、4B4、H4-1BB-M127、BBK2、145501、由作为ATCC No.HB-11248保藏的细胞系产生的抗体、5F4、C65-485、乌瑞芦单抗(BMS-663513)、20H4.9-IgG-1(BMS-663031)、4E9、BMS-554271、BMS-469492、3H3、BMS-469497、3El、53A2或3B8。

一方面，针对PD-L1、PD-1、OX40和/或4-1BB的抗体可以并入多特异性抗体(例如双特异性抗体)中。在一些此类实施方案中，双特异性抗体包含第一抗体可变结构域和第二抗体可变结构域，其中所述第一抗体可变结构域能够通过特异性结合位于人免疫效应细胞上的效应抗原而募集所述人免疫效应细胞的活性，并且其中所述第二抗体可变结构域能够特异性结合本文提供的靶抗原。在一些实施方案中，所述抗体具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，所述抗体包含免疫学惰性的Fc区。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体或人源化抗体。

在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体结合同一靶细胞上的两种不同靶抗原(例如同一肿瘤细胞上的两种不同抗原)。此类抗体可以有利于例如增加对感兴趣的靶细胞(例如对表达两种特定的感兴趣的肿瘤相关抗原的肿瘤细胞)的特异性。例如，在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体包含第一抗体可变结构域和第二抗体可变结构域，其中所述第一抗体可变结构域能够特异性结合本文提供的第一靶抗原，并且所述第二抗体可变结构域能够特异性结合本文提供的第二靶抗原。在一些实施方案中，第一靶抗原是PD-L1，而第二靶抗原是CD47。结合人PD-L1并且可用于双特异性抗PD-L1/抗CD47抗体的mAb的实例包括在WO 2013/079174、WO 2015/061668、WO 2010/089411、WO2007/005874、WO 2010/036959、WO 2014/100079、WO 2013/019906、WO 2010/077634和美国专利号8,552,154、8779,108和8,383,796中描述的抗体。结合CD47并且可用于双特异性抗PD-L1/抗CD47抗体的mAb的实例包括抗CD47抗体Hu5F9-G4(Forty Seven Inc.)、CC-90002(Celgene)、SRF231和B6H12。

制备双特异性抗体的方法是本领域已知的(例如，c)。传统上，双特异性抗体的重组制备是基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两个重链具有不同的特异性(Millstein and Cuello,Hybrid hybridomas and their use inimmunohistochemistry,Nature 1983,305,537-539)。

在本发明的一个方面，CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂。在一个此类实施方案中，CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。

另一方面，CDK抑制剂是CDK2/4/6抑制剂。在一些此类实施方案中，CDK2/4/6抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐。

一方面，本发明提供一种治疗个体癌症的方法，其包括向所述个体施用本发明的联合治疗。一方面，本发明提供治疗癌症的方法，其包括向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂和一定量的PD-1轴结合拮抗剂，其中这些量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。在一些此类实施方案中，所述个体是人。

在一些实施方案中，所述方法包括与抗PD-L1抗体联合，使用CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一些实施方案中，所述方法包括与抗PD-L1抗体和抗OX40抗体联合，使用CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一些实施方案中，所述方法包括与抗PD-L1抗体和抗4-1BB抗体联合，使用CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一些实施方案中，所述方法包括与抗PD-L1抗体、抗OX40抗体和抗4-1BB抗体联合，使用CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)、或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗联合，使用帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗联合，使用6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗和抗OX40抗体联合，使用帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗和抗OX40抗体联合，使用6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗和乌托鲁单抗联合，使用帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗和乌托鲁单抗联合，使用6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗、抗OX40抗体和乌托鲁单抗联合，使用帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括与阿维鲁单抗、抗OX40抗体和乌托鲁单抗联合，使用6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，联合治疗中的OX40激动剂包括抗OX40抗体，其包含：重链可变区(VH)，所述重链可变区包含重链互补决定区1(CDRH1)、重链互补决定区2(CDRH2)、重链互补决定区3(CDRH3)，其包含SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；及轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含轻链互补决定区1(CDRL1)、轻链互补决定区2(CDRL2)和轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。

在本文描述的每个方面的特定实施方案中，抗OX40抗体包含：包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的CDRH1、包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的CDRH2和包含SEQ IDNO:50所示的氨基酸序列的CDRH3；和/或包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的CDRL1、包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的CDRL2和包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的CDRL3。

在本文描述的每个方面的特定实施方案中，抗OX40抗体包含VH和VL，其中VH和VL分别包含SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55。

在一些实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂包括抗4-1BB单克隆抗体，其包含：VH，所述VH包含CDRH1、CDRH2、CDRH3，其包含SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列；以及VL，所述VL包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，其包含SEQ ID NO:61、SEQID NO:62和SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列。

在本文所述的每个方面的特定实施方案中，抗4-1BB抗体包含：包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的CDRH1，包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的CDRH2，和包含SEQ IDNO:60所示的氨基酸序列的CDRH3；和/或包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列的CDRL1，包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的CDRL2，以及包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列的CDRL3。

在一些具体的实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂包括抗4-1BB单克隆抗体，其包含分别含有SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的VH和VL。

在上述每一项的一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在又一个实施方案中，所述癌症是血液系统癌症。

在进一步的实施方案中，本发明涉及用于治疗癌症的方法，其中所述癌症选自脑癌，头颈癌(包括头颈鳞状细胞癌(SCCHN))，前列腺癌，卵巢癌，膀胱癌(包括尿路上皮癌，也称为移行细胞癌(TCC))，肺癌(包括鳞状细胞癌，小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))，乳腺癌，骨癌，结直肠癌，肾癌，肝癌(包括肝细胞癌(HCC))，胃癌，胰腺癌，食道癌，宫颈癌，肉瘤，皮肤癌(包括黑色素瘤和Merkel细胞癌(MCC))，多发性骨髓瘤，间皮瘤，恶性横纹肌瘤，成神经细胞瘤、弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)、癌、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和SWI/SNF突变体癌症。

在一些实施方案中，所述方法还可包括其它疗法。所述其它疗法可以是放射疗法、手术(例如乳房肿瘤切除术(lumpectomy)和乳房切除术)、化学疗法、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法、光疗法或前述疗法的组合。所述其它疗法可以是辅助疗法或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，所述其它疗法是施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，所述其它疗法是施用副作用限制剂(例如旨在减少治疗副作用的发生和/或严重程度的制剂，例如抗恶心药剂等)。在一些实施方案中，所述其它疗法是放射疗法。在一些实施方案中，所述其它疗法是手术。在一些实施方案中，所述其它疗法是放射疗法和手术的组合。

CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂可以通过相同施用途径或不同施用途径施用。

可以施用有效量的CDK抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂以预防或治疗疾病。CDK抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂的合适剂量可以根据待治疗的疾病类型、CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂的类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、个体的临床病史和对治疗的应答以及主治医师的判断来确定。

在上文和在此描述的方法、用途、组合物和药盒的一些实施方案中，所述治疗还包括施用化疗剂以治疗个体的癌症或延缓癌症进展。在一些实施方案中，个体在用CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40结合激动剂和/或4-1BB激动剂联合治疗之前已经用化疗剂治疗。在一些实施方案中，用CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40结合激动剂和/或4-1BB激动剂的联合治疗的个体对化疗剂治疗而言是难治性的。在整个本申请中描述的方法、用途、组合物和药盒的一些实施方案进一步包括施用化疗剂以治疗癌症或延缓癌症进展。

在一些实施方案中，本发明的联合治疗包括与PD-1轴结合拮抗剂联合，施用CDK抑制剂，并任选地另外联合OX40激动剂(例如抗人OX40抗体)和/或4-1BB激动剂(抗人4-1BB抗体)。在本文提供的方法中，CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂中的每一种可以以本领域已知的任何合适的方式施用。在一个实施方案中，CDK抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂同时或以任何顺序依次施用。在进一步的实施方案中，CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和OX40激动剂同时或以任何顺序依次施用。在进一步的实施方案中，CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂同时或以任何顺序依次施用。

在另外的实施方案中，CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂和4-1BB激动剂同时或以任何顺序依次施用。在又一个实施方案中，CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂同时或以任何顺序依次施用。

在上述每一项的一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂是：PD-1结合拮抗剂；PD-L1结合拮抗剂；或PD-1结合拮抗剂和PD-L1结合拮抗剂。

在上述每一项的一些实施方案中，a.PD-1结合拮抗剂和PD-L1结合拮抗剂在同一组合物中；b.PD-1结合拮抗剂和OX40激动剂在同一组合物中；c.PD-1结合拮抗剂和4-1BB激动剂在同一组合物中；d.PD-L1结合拮抗剂和OX40激动剂在同一组合物中；e.PD-L1结合拮抗剂和4-1BB激动剂在同一组合物中；f.OX40激动剂和4-1BB激动剂在同一组合物中；g.PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和OX40激动剂在同一组合物中；h.PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和4-1BB激动剂在同一组合物中；i.PD-1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂在同一组合物中；j.PD-L1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂在同一组合物中；或k.PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂在同一组合物中。

VIII.剂型与方案

本发明化合物的施用可以通过能够将化合物递送至作用部位的任何方法实现。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、皮下、肌肉、血管内或输注)、局部和直肠施用。

考虑到多种因素，本领域技术人员能确定本发明联合使用的每种化合物的适当量、剂量或用量以施用于患者，所述因素包括但不限于疾病的进展程度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用的化合物、施用的时间和途径、癌症的性质和进展、需要的治疗以及个体正在服用的其它药物。

在一些实施方案中，本文的药剂和组合的施用方法可以包括口服、静脉内、肌肉、皮下、局部、透皮、腹膜内、眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内施用。

可以调整剂量方案以提供最佳的所需应答。例如，可以施用单次推注，可以随着时间的推移施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急情况按比例减少或增加剂量。特别有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以易于施用和均匀剂量。如本文所用，剂量单位形式是指适合作为待治疗个体的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有经计算以产生所需治疗效果的预定量的活性化合物以及所需的药物载体。本发明的剂量单位形式的规格由以下决定并直接取决于以下：(a)化疗剂的独特特性和要达到的特定治疗或预防效果，和(b)调配此类活性化合物以治疗个体敏感性的技术领域中的内在限制。

因此，基于本文提供的公开内容，本领域技术人员会意识到根据治疗技术领域中熟知的方法调整剂量和给药方案。即，可以容易地确立最大耐受剂量，并且还可以确定为患者提供可检测的治疗益处的有效量，也可以确定施用每种药剂以向患者提供可检测的治疗益处的时间要求。因此，虽然本文举例说明了某些剂量和施用方案，但这些实例决不限制在实践本发明时可以提供给患者的剂量和施用方案。

对于如本文所述的联合治疗，可以以其批准的剂量施用所述药剂。只要观察到临床益处或不出现不可接受的毒性或疾病进展，治疗就会继续。然而，在某些实施方案中，本发明的联合治疗可以有利地利用较低剂量的所施用的治疗剂，从而避免与各种单一治疗相关的可能的毒性或并发症。例如，施用的药剂的剂量显著低于批准的剂量，例如未达到治疗剂量的CDK2/4/6抑制剂与未达到治疗剂量的PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂联合施用。本领域技术人员会理解，当本发明的药剂用作联合治疗的一部分时，与单独将该药剂施用于个体相比，较低剂量的该药剂可能是合乎需要的，协同治疗效果可以通过使用联合治疗来实现，而联合治疗反过来又允许使用较低剂量的药剂来实现所需的治疗效果。

在一个实施方案中，剂量可以更低并且也可以更低的频率施用，这样可以降低副作用的发生率或严重性。这符合待治疗个体的愿望和要求。

本发明的一个目的是提供一种药物组合物，其包含可以这样的量，所述量联合起来治疗癌症是治疗上有效的。在该组合物中，两种或更多种化合物可以在一个组合单位剂型或两个单独的单位剂型中一起施用、一个接一个地施用或者单独施用。

单位剂型也可以是固定组合。需要注意的是，剂量值可以随着待减轻的病症的类型和严重程度而变化，并且可能包括单次或多次剂量。应进一步理解，对于任何特定个体，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人员的专业判断随时间调整具体的剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，无意限制要求保护的组合物的范围或实施。例如，可以根据药代动力学或药效学参数调整剂量，这些参数可以包括临床作用例如毒性作用和/或实验室数值。因此，本发明包括由本领域技术人员确定的患者内剂量递增。确定施用化疗剂的适当剂量和方案在相关领域中是熟知的，并且一旦提供了本文公开的教导，本领域技术人员会理解涵盖这些剂量和方案。

本发明药剂的施用量将取决于被治疗的个体、病症或病况的严重程度、施用速率、化合物的处置和处方医师的判断。

可以施用有效量的CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂以预防或治疗疾病。CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂(例如抗人OX40激动剂抗体)的合适剂量可基于待治疗的疾病类型、CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂的类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、个体的临床病史和对治疗的应答，以及主治医师的判断而确定。在一些实施方案中，CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)、OX40激动剂(例如抗人OX40激动剂抗体)和/或4-1BB激动剂(例如抗人4-1BB激动剂抗体)的联合治疗具有协同作用，由此联合的CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂的有效剂量低于CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂中的每种作为单一药剂的有效剂量。

PD-1轴结合拮抗剂(例如帕博利珠单抗，纳武单抗，阿维鲁单抗)的剂量单位可以表示为固定剂量，即100mg、200mg、300mg，或表示为患者特异性剂量，即mg/kg(mg治疗剂/kg体重)或mg/m²(每平方米体表面积的毫克数)。

作为一般建议，施用于人的抗体的治疗有效量会是约0.01至约50mg/kg患者体重的范围，无论是一次还是多次施用。在一些实施方案中，所用抗体每天施用例如约0.01至约45mg/kg、约0.01至约40mg/kg、约0.01至约35mg/kg、约0.01至约30mg/kg、约0.01至约25mg/kg、约0.01至约20mg/kg、约0.01至约15mg/kg、约0.01至约10mg/kg、约0.01至约5mg/kg或约0.01至约1mg/kg。在一些实施方案中，抗体以15mg/kg施用。然而，其它剂量方案也可能是有用的。例如，在一些实施方案中，本文所述的抗PD-L1抗体在21天周期的第1天以约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg或约1400mg的剂量施用。所述剂量可以作为单剂量或多剂量(例如2或3剂)施用，例如输注。与单一治疗相比，在联合治疗中施用的抗体剂量可以减少。这种疗法的进展很容易通过常规技术进行监测。

在联合治疗中采用抗体、抗体片段或融合的可溶性受体作为PD-1轴结合拮抗剂的一些实施方案中，可以包括在整个治疗过程中以约7天(±2天)或14天(±2天)或约21天(±2天)或约30天(±2天)的间隔以约0.5、1、2、3、5或10mg/的剂量施用所述抗体。或者，在联合治疗中使用抗体、抗体片段或融合的可溶性受体作为PD-1轴结合拮抗剂的一些实施方案中，给药方案会包括以患者内剂量递增方式，以约0.005mg/kg至约10mg/kg的剂量施用所述抗体。在其它剂量递增的实施方案中，给药之间的间隔会逐渐缩短，例如第一剂和第二剂之间约30天(±2天)，第二剂和第三剂之间约14天(±2天)。在某些实施方案中，对于第二次剂量之后的剂量，给药间隔会是约14天(±2天)。在某些实施方案中，对于第二次剂量之后的剂量，给药间隔会是约7天(±2天)。

在某些实施方案中，向个体经静脉内(IV)输注施用包含本文所述的任何PD-1轴结合拮抗剂的药物。

在本发明的一个实施方案中，联合治疗中的PD-1轴结合拮抗剂是纳武单抗、帕博利珠单抗或阿维鲁单抗(MSB0010718C)，其以选自以下的剂量经静脉内或以液体剂型施用：1mg/kg Q2W，2mg/kg Q2W，3mg/kg Q2W，5mg/kg Q2W，10mg Q2W，1mg/kg Q3W，2mg/kg Q3W，3mg/kg Q3W，5mg/kg Q3W和10mg Q3W。

在一些实施方案中，帕博利珠单抗每3周以2mg/kg(最多200mg)的剂量施用一次。在一些实施方案中，阿维鲁单抗每两周以10mg/kg的剂量以静脉内输注施形式经60分钟施用一次。在一些实施方案中，与CDK抑制剂联合的PD-1轴结合拮抗剂的最佳剂量可以通过这些药剂中的一者或两者的剂量递增来确定。CDK抑制剂可以口服(PO)，每天一次(QD)或每天两次(BID)，与或不与食物同服，从第1周期第1天开始以连续或间歇的方案施用，CDK抑制剂的引入期(lead-in)的情况除外。PD-1轴结合拮抗剂如阿维鲁单抗可以每2周(Q2W)、每3周(Q3W)、或在剂量减少的情况下每4周(Q4W)以30分钟至1小时的静脉(IV)输注方式施用，从第1周期第1天开始，CDK抑制剂的引入期的情况除外。在施用CDK抑制剂当天，CDK抑制剂可以在PD-1轴结合拮抗剂施用之前或之后给予。在另一个实施方案中，CDK抑制剂可以BID或QD方案，以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、200mg或250mg施用，可以连续或以间歇给药方案施用，例如3周施用:1周休息(3:1)或2周施用:1周休息(2:1)的方案，而且PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg或5mg/kg或10mg/kg的起始剂量施用，给药间隔为Q2W、Q3W或Q4W。

在一个实施方案中，CDK抑制剂以25mg、50mg、75mg、100mg或125mg以BID或QD施用持续3周的引入期，然后在所述引入期之后，将PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q3W或200mgQ3W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以25mg、50mg、75mg、100mg或125mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q4W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以25mg、50mg、75mg、100mg或125mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q3W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以25mg、50mg、75mg、100mg或125mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q4W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以25mg、50mg、75mg、100mg或125mg以BID或QD施用，而RN888以2mg/kgQ3W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以25mg、50mg、75mg、100mg或125mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q4W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg以BID或QD施用持续3周的引入期(lead-in period)，然后在所述引入期后，以2mg/kg Q3W或200mgQ3W的起始剂量施用PD-1轴结合拮抗剂。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q4W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q3W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kgQ4W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg以BID或QD施用，而RN888以2mg/kg Q3W的起始剂量施用。在另一个实施方案中，CDK抑制剂以1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg以BID或QD施用，而PD-1轴结合拮抗剂以2mg/kg Q4W的起始剂量施用。在一些此类实施方案中，CDK抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。在其它的此类实施方案中，CDK抑制剂是PF-06873600或其药学上可接受的盐。在一特定实施方案中，在与本文所述的药剂联合的情况下，阿维鲁单抗每2周以10mg/kg的剂量以静脉输注方式经60分钟施用一次，直至出现疾病进展或不可接受的毒性。

在一特定实施方案中，帕博利珠单抗每3周以200mg的剂量以静脉输注施用方式经30分钟施用一次，直至出现疾病进展或不可接受的毒性，或在没有疾病进展的患者中施用长达24个月。在一些实施方案中，用3周的引入期的单药剂CDK抑制剂治疗个体，紧接着联合施用CDK抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂。

在一些实施方案中，用3周的引入期的单药剂CDK抑制剂治疗患者，紧接着联合施用CDK抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂。

在一些实施方案中，治疗周期在联合治疗的第一天开始且持续3周。在此类实施方案中，联合疗法施用优选持续至少18周(6个治疗周期)，更优选持续至少24周(8个治疗周期)且甚至更优选持续至患者实现CR之后至少2周。

在本文描述的联合治疗的一些实施方案中，OX40激动剂大约每一周、每两周、每三周、每四周、每五周或每六周以下述剂量施用一次：a)每个个体的固定剂量，其选自约0.1、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000mg，或者b)选自以下的剂量：约0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg和25mg/kg，而4-1BB激动剂大约每一周、每两周、每三周、每四周、每五周或每六周以下述剂量施用一次：a)每个个体的固定剂量，其选自约0.1、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000mg，或b)选自以下的剂量：约0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg和25mg/kg。

在特定实施方案中，抗4-1BB单克隆抗体以选自以下的剂量施用：1mg/kg Q2W、2mg/kg Q2W、3mg/kg Q2W、5mg/kg Q2W、10mg Q2W、1mg/kg Q3W、2mg/kg Q3W、3mg/kg Q3W、5mg/kg Q3W和10mg Q3W。在一些其他实施方案中，抗4-1BB单克隆抗体以液体药剂形式施用，且通过静脉内输注在约60分钟时段内施用所选择剂量的药剂。

在一些实施方案中，抗4-1BB单克隆抗体以约0.6mg/kg Q4W的起始剂量施用且阿维鲁单抗以10mg/kg Q2W的起始剂量施用，且如果个体不耐受起始剂量组合，则阿维鲁单抗的剂量降低至5mg/kg Q2W和/或抗4-1BB单克隆抗体的剂量降低至0.3mg/kg Q4W。

CDK抑制剂或其药学上可接受的盐的有效剂量为约0.001至约100mg/kg体重/天，优选约1至约35mg/kg/天，以单剂量或分开剂量的形式。例如，对于70kg体重的人，这等同于约0.01至约7g/天，优选约0.02至约2.5g/天。在某些情况下，低于上述范围下限的剂量水平可能是足够的，而在其它情况下，可以使用更大的剂量而不会引起任何有害的副作用，前提是这些较大的剂量首先分成几个小剂量用于全天施用。

在一些实施方案中，如果个体耐受较低总剂量的CDK抑制剂的联合治疗，则将CDK抑制剂的剂量增加至最大剂量250mg BID。

在一些实施方案中，CDK抑制剂或其药学上可接受的盐以每天约5mg至约250mg、优选每天约10mg至约125mg的日剂量施用。在一些实施方案中，CDK抑制剂或其药学上可接受的盐以每天约5mg、每天约10mg、每天约15mg、每天约20mg、每天约25mg、每天约30mg，每天约35mg、每天约40mg、每天约45mg、每天约50mg、每天约75mg、每天约100mg、每天约125mg、每天约150mg、每天约200mg或每天约250mg的日剂量施用。该剂量可以任选分为小剂量，例如每天150mg的剂量可以75mg的剂量每天两次给药。

CDK抑制剂(例如PF-06873600或帕博西尼)的剂量单位可以表示为固定剂量，即1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、75mg、100mg、125mg等，或表示为个体特异性剂量，即mg/kg(mg治疗剂/kg体重)或mg/m²(每平米体表面积的毫克数量)。

一些实施方案可以包括以大约下述值的剂量施用CDK抑制剂：5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg或大于250mg，其中所述量可以每天一次(q.d.)、每天两次(b.i.d.)、每天三次(t.i.d.)、每天四次(q.i.d.)或以一些其它给药方案施用。

可以根据需要进行施用或给药方案的重复、或者施用或给药方案的调整，以实现所需的治疗。如本文所用，“连续给药方案”是没有剂量中断的施用或给药方案，例如没有治疗休息日。连续给药方案的一个实例是重复21天或28天的治疗周期且在治疗周期之间没有剂量中断。在一个实施方案中，本发明组合的化合物可以在连续给药方案中施用。在其它实施方案中，CDK抑制剂以间歇给药方案施用，例如3:1或2:1方案。

在一些此类实施方案中，CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂或其药学上可接受的盐。在一个此类实施方案中，CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，CDK抑制剂是CDK2/4/6抑制剂或其药学上可接受的盐。在一特定实施方案中，CDK2/4/6抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)-哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，帕博西尼或其药学上可接受的盐以每天一次约5mg至约125mg、每天一次约5mg至约100mg、每天一次5mg至约75mg或每天一次约5mg至约50mg的日剂量施用。在作为推荐起始剂量或标准临床剂量的实施方案中，帕博西尼或其药学上可接受的盐以每天一次约125mg的日剂量施用。在一实施方案中，帕博西尼或其药学上可接受的盐以非标准临床剂量施用。在一实施方案中，非标准临床剂量是低剂量的帕博西尼或其药学上可接受的盐。例如，帕博西尼或其药学上可接受的盐以每天一次约100mg、每天一次约75mg或每天一次约50mg的剂量施用。在一个实施方案中，帕博西尼或其药学上可接受的盐以每天一次约100mg的剂量施用。在一个实施方案中，帕博西尼或其药学上可接受的盐以每天一次约75mg的剂量施用。在一个实施方案中，帕博西尼或其药学上可接受的盐以每天一次约50mg的剂量施用。本文提供的剂量是指帕博西尼的游离碱形式的剂量，或以施用的帕博西尼盐形式的游离碱当量计算。例如，帕博西尼的剂量或量(例如100mg、75mg或50mg)是指游离碱当量。可以调整这个剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，剂量可以根据治疗情况的紧急情况按比例减少或增加。

在一实施方案中，PF-06873600或其药学上可接受的盐以每天约5mg至约125mg、每天约5mg至约100mg、每天约5mg至约75mg或每天约5mg至约50mg的日剂量施用。在一实施方案中，PF-06873600或其药学上可接受的盐以每天约10mg、约15mg、约25mg、约30mg、约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的日剂量施用。在一实施方案中，PF-06873600或其药学上可接受的盐以非标准临床剂量施用。在一实施方案中，非标准临床剂量是低剂量的PF-06873600或其药学上可接受的盐。例如，PF-06873600或其药学上可接受的盐以每天约100mg、每天约75mg、每天约50mg、每天约30mg、每天约25mg、每天约15mg的剂量、或每天约10mg的剂量施用。在一实施方案中，PF-06873600或其药学上可接受的盐以每天约50mg的剂量施用。在一实施方案中，PF-06873600或其药学上可接受的盐以每天约30mg的剂量施用。在一实施方案中，PF-06873600或其药学上可接受的盐以每天约25mg的剂量施用。本文提供的剂量是指PF-06873600或其药学上可接受的盐的游离碱形式的剂量，以施用的PF-06873600盐形式的游离碱当量计算。例如，PF-06873600的剂量或量(例如100mg、75mg、50mg、30mg、25mg、15mg或10mg)是指游离碱当量。可以调整这个剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，剂量可以根据治疗情况的紧急情况按比例减少或增加。

本发明方法的实施可以通过各种施用或给药方案来完成。本发明组合的施用包括以单一制剂或单位剂型施用所述组合的各个药剂。本发明的组合的施用还包括同时或分别以任何顺序施用所述组合的各个药剂。在一些实施方案中，所述组合的各个药剂可以分开施用或作为固定组合施用。在一个实施方案中，所述组合的各个药剂可以通过任何合适的途径依次施用。例如，根据本发明治疗癌症的方法可以包括同时或以任何顺序依次(i)施用第一游离或药学上可接受的盐的形式的药剂(a)，和(ii)施用游离或药学上可接受的盐的形式的药剂(b)，其中其量一起有效治疗癌症，优选以协同有效量，例如对应于本文所述量的每天或间歇剂量。本发明组合的各个药剂可以在治疗过程中的不同时间单独施用，或以分开或单一组合形式同时施用。此外，术语施用还包括使用在体内转化为所述组合药剂的组合药剂前药。因此，本发明应理解为包括所有这些同时或交替治疗的方案，并且术语“施用”应如前所述地解释。

本发明组合的化合物可以间歇、同时或依次施用。在一实施方案中，本发明组合的化合物可以同时给药方案施用。

可以根据需要进行施用或给药方案的重复以实现期望的癌细胞降低或减少。如本文所用，“连续给药方案”是没有剂量中断的施用或给药方案，例如没有治疗休息日。连续给药方案的一个实例是重复21天或28天的治疗周期且在治疗周期之间无剂量中断。在一实施方案中，本发明组合的化合物可以在连续给药方案中施用。在一实施方案中，本发明组合的化合物可以在连续给药方案中同时施用。

一方面，本发明提供了一种协同组合。在一些此类实施方案中，本发明提供一种协同组合，其包括：a.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-1结合拮抗剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)是协同的；b.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(ii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；c.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(ii)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；或d.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(i)和组分(iv)；组分(ii)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iv)；组分(iii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)；组分(i)、组分(ii)和组分(iv)；组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；或组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)是协同的。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种协同组合，其包括：a.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-L1结合拮抗剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)是协同的；b.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)或；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；c.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症；其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；d.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(i)和组分(iv)；组分(ii)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iv)；组分(iii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)；组分(i)、组分(ii)和组分(iv)；组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；或组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)是协同的；或e.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)PD-L1结合拮抗剂；(iv)OX40激动剂；和(v)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(i)和组分(iv)；组分(i)和组分(v)；组分(ii)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iv)；组分(ii)和组分(v)；组分(iii)和组分(iv)；组分(iii)和组分(v)；组分(iii)和组分(v)；组分(iv)和组分(v)；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)；组分(i)、组分(ii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)和组分(v)；组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；组分(ii)、组分(iii)和组分(v)；组分(ii)、组分(iv)和组分(v)；组分(iii)、组分(vi)和组分(v)；组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(v)；组分(i)、组分(iii)、组分(iv)和组分(v)；或组分(ii)、组分(iii)、组分(iv)和组分(v)是协同的。

在又一个实施方案中，本发明提供了一种协同组合，其包括：a.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-1结合拮抗剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)是协同的；b.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；c.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；d.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(i)和组分(iv)；组分(ii)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iv)；组分(iii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)；组分(i)、组分(ii)和组分(iv)；组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；或组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)是协同的。

在另一个实施方案中，本发明涉及协同组合，其包括：a.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-L1结合拮抗剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)是协同的；b.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；c.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iii)；或组分(i)、组分(ii)和组分(iii)是协同的；d.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；其用于治疗个体的癌症，其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(i)和组分(iv)；组分(ii)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iv)；组分(iii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)；组分(i)、组分(ii)和组分(iv)；组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；或组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)是协同的；或e.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂，(iii)PD-L1结合拮抗剂，(iv)OX40激动剂，和(v)抗4-1BB抗体；其用于治疗个体的癌症；其中组分(i)和组分(ii)；组分(i)和组分(iii)；组分(i)和组分(iv)；组分(i)和组分(v)；组分(ii)和组分(iii)；组分(ii)和组分(iv)；组分(ii)和组分(v)；组分(iii)和组分(iv)；组分(iii)和组分(v)；组分(iii)和组分(v)；组分(iv)和组分(v)；组分(i)、组分(ii)和组分(iii)；组分(i)、组分(ii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)和组分(v)；组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；组分(ii)、组分(iii)和组分(v)；组分(ii)、组分(iv)和组分(v)；组分(iii)、组分(iv)和组分(v)；组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(iv)；组分(i)、组分(ii)、组分(iii)和组分(v)；组分(i)、组分(iii)、组分(iv)和组分(v)；或组分(ii)、组分(iii)、组分(iv)和组分(v)是协同的。

在一个实施方案中，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.帕博西尼或其药学上可接受的盐和PD-1结合拮抗剂；b.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂和OX40激动剂；c.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂和4-1BB激动剂；或d.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂。

在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.帕博西尼或其药学上可接受的盐和PD-L1结合拮抗剂；b.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-L1结合拮抗剂和4-1BB激动剂；c.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-L1结合拮抗剂和OX40激动剂；d.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-L1结合拮抗剂、4-1BB激动剂；或e.帕博西尼或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂。

在又一个实施方案中，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐和PD-1结合拮抗剂；b.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂和OX40激动剂；c.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂和4-1BB激动剂；或d.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂。

在一个实施方案中，本发明提供用于治疗个体的癌症的组合，其包括：a.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)-哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐和PD-L1结合拮抗剂；b.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐、PD-L1结合拮抗剂和OX40激动剂；c.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐、PD-L1结合拮抗剂和4-1BB激动剂；d.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基-磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂；或e.6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐、PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂、OX40激动剂和4-1BB激动剂。

在上述各项的特定实施方案中，本发明提供一种组合，其中PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体；PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体；OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

在上述各项的一些实施方案中，所述个体旨在包括动物。所述个体的实例包括哺乳动物，例如人、牛、羊、猫、狗、马、灵长类动物、兔和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)，以及转基因非人类动物。在一个特定的实施方案中，所述个体是人，例如癌症患者、有患癌症风险或可能患有癌症的人。

在上述各项的进一步实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述癌症是血液系统癌症。在上述各项的一些实施方案中，所述癌症选自脑癌、头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌(SCCHN))、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌(包括尿路上皮癌，也称为移行细胞癌(TCC))、肺癌(包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))、乳腺癌、骨癌、结直肠癌、肾癌、肝癌(包括肝细胞癌(HCC))、胃癌、胰腺癌、食道癌、宫颈癌、肉瘤、皮肤癌(包括黑色素瘤和Merkel细胞癌(MCC))、多发性骨髓瘤、间皮瘤、恶性横纹肌样瘤、成神经细胞瘤、弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)、癌、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和SWI/SNF突变体癌症。

IX.药盒

一方面，本发明提供一种药盒，其包括：a.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；b.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；c.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；或d.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组用于给药所述药物组合物以治疗癌症的说明。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体；OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

在本发明的一个方面，提供一种药盒，其包括：a.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；b.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；c.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；d.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iv)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；或e.(i)包含CDK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(ii)包含PD-1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iii)包含PD-L1结合拮抗剂和药学上可接受的载体的药物组合物；(iv)包含OX40激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物；和(v)包含4-1BB激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物。

在一些实施方案中，所述药盒还包括包装说明书，其中包含用于联合使用CDK抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-1或抗PD-L1抗体)、OX40激动剂(例如抗人OX40激动剂抗体)和/或4-1BB激动剂(例如抗人4-1BB激动剂抗体)以治疗个体癌症或延缓其进展、或增强患有癌症的个体的免疫功能的说明。在进一步的实施方案中，本文所述的任何CDK抑制剂、PD-1轴结合拮抗剂、OX40激动剂和/或4-1BB激动剂可包括在药盒中。

例如，在一些实施方案中，CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂。在一些此类实施方案中，CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，CDK抑制剂是CDK2/4/6抑制剂。在一个特别的实施方案中，CD2/4/6抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。在特定实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在又一特定实施方案中，OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂、OX40结合激动剂(例如抗人OX40激动剂抗体)和/或4-1BB激动剂在相同容器或分开的容器中。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、袋子和注射器。容器可由多种材料形成，例如玻璃、塑料(例如聚氯乙烯或聚烯烃)或金属合金(例如不锈钢或哈斯特洛合金(hastelloy))。在一些实施方案中，容器容纳制剂，容器上或与容器相关联的标签可指示使用说明。所述药盒还可以包括从商业和用户角度看需要的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头、注射器和带有使用说明的包装说明书。在一些实施方案中，所述药盒进一步包括另一制剂(例如化疗剂和抗肿瘤剂)中的一种或多种。一种或多种药剂的合适容器包括例如瓶子、小瓶、袋子和注射器。

本说明书足以使本领域技术人员能够实施本发明。除了在此示出和描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员而言根据前文描述变得显而易见并且在所附权利要求的范围内。在本文引用的所有出版物、专利和专利申请出于所有目的通过援引以其整体加入本文。

实施例

参考以下实施例会更全面地理解本发明。然而，这些实施例不应被解释为限制本发明的范围。应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于举例说明目的，提示本领域技术人员可据此进行各种修改或改变并包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的范围内。

实施例1：在MC38同基因小鼠肿瘤模型中CDK4/6抑制剂帕博西尼与基于PD-L1的免疫检查点阻断协同作用

概述

在MC38同基因小鼠肿瘤模型中对帕博西尼组合靶向PD-L1、4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。帕博西尼组合免疫检查点阻断剂导致显著的肿瘤生长抑制作用(p＝0.0000001)。

材料和方法

MC38细胞得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞均保持在37℃具有5％二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将50万个MC38肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。在肿瘤细胞植入后第9天，基于每组约70mm³的平均肿瘤大小将荷瘤小鼠随机分为4个处理组。研究组包括载体，15mg/kg帕博西尼每天两次通过管饲法口服，通过腹腔注射(IP)施用的10mg/kg阿维鲁单抗(抗PD-L1抗体，PF-06834635)、通过腹腔注射施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)和10mg/kg和以3mg/kg通过腹腔注射施用的抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，以及每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼与通过腹腔注射施用的10mg/kg阿维鲁单抗(抗PD-L1抗体，PF-06834635)、通过腹腔注射施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)和10mg/kg和以3mg/kg通过腹腔注射施用的抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合。所有抗体在研究开始后每三天施用一次，共三剂。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而帕博西尼在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中施用。处理组和剂量方案信息总结在表8中。

表8

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽²)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时处死小鼠，这是本研究的存活终点。使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线。使用Holm-Sidak方法确定统计学显著性，alpha＝0.05。

结果

在治疗开始后第27天，肿瘤生长结果显示在MC38异种移植肿瘤模型中，用CDK4/6抑制剂帕博西尼单一疗法治疗没有显著抑制肿瘤生长。然而，与阿维鲁单抗+抗OX40抗体+抗4-1BB抗体(p＝0.0000008)组合的帕博西尼治疗显示出组合效应的趋势，肿瘤生长抑制增加。这些数据总结为图1中的平均肿瘤体积、图2中的单独的肿瘤体积和表9中的绝对值。

表9

结论

在MC38同基因肿瘤模型中，帕博西尼与检查点阻断抗体的组合相对于帕博西尼单一治疗、或仅抗4-1BB抗体、抗OX40抗体和阿维鲁单抗的组合导致更大的肿瘤生长抑制和显著改善的存活率。

实施例2：在MC38同基因小鼠肿瘤模型中CDK2/4/6抑制剂(PF-068736000)与基于PD-L1的免疫检查点阻断协同作用

概述

在MC38同基因小鼠肿瘤模型中对PF-06873600组合靶向PD-L1、4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。PF-06873600与免疫检查点阻断剂组合导致显著的肿瘤生长抑制，PF-06873600组合PD-L1和OX40靶向抗体的效果最显著(p＝0.0000001)。

材料和方法

MC38细胞得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞都保持在37℃含有5％二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将50万个MC38肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。在肿瘤细胞植入后第9天，基于每组约70mm³的平均肿瘤大小将荷瘤小鼠随机分为9个处理组。研究组包括运载体，每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600(CDK2/4/6抑制剂)，通过腹腔注射(IP)施用的10mg/kg阿维鲁单抗(抗PD-L1抗体，PF-06834635)，通过腹腔注射施用的10mg/kg阿维鲁单抗与5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)的组合，通过腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-L1抗体与3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，如上所述的抗PD-L1抗体与每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600的组合，如上述的抗PD-L1抗体和抗OX40抗体与每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600的组合，如上述抗的PD-L1抗体和抗4-1BB抗体与每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600的组合，以及如上所述的抗PD-L1抗体、抗OX40抗体和抗4-1BB抗体与每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-068736的组合。所有抗体均按三剂给药；研究开始后每三天施用一次。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而PF-06873600在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中给药。处理组和剂量方案信息总结在表10中。

表10

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽²)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时处死小鼠，这是本研究的存活终点。使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线。使用Holm-Sidak方法确定统计学显著性，alpha＝0.05。

结果

在治疗开始后第27天，肿瘤生长结果显示，在MC38异种移植肿瘤模型中，使用阿维鲁单抗或CDK2/4/6抑制剂PF06873600的单一疗法的治疗未显著抑制肿瘤生长。然而，与阿维鲁单抗(p＝0.08)、阿维鲁单抗+抗OX40抗体(p＝0.0000001)、阿维鲁单抗+抗4-1BB抗体(p＝0.00002)或阿维鲁单抗+抗OX40抗体+抗4-1BB抗体(p＝0.000000009)组合的PF06873600治疗显示出组合效应的趋势，肿瘤生长抑制增加。这些数据总结为图3中的平均肿瘤体积、图4中的单独的肿瘤体积和表11中的绝对值。

表11

结论

相对于阿维鲁单抗单一治疗、PF-06873600单一治疗、或者抗4-1BB抗体或抗OX40抗体与仅有的阿维鲁单抗的组合，CDK2/4/6抑制剂(PF-06873600)与检查点阻断抗体的组合在MC38同基因肿瘤模型中导致更大的肿瘤生长抑制和显著改善的存活率。

实施例3：在MC38同基因小鼠肿瘤模型中CDK4/6抑制剂帕博西尼与OX40/4-1BB免疫检查点调节剂协同作用

概述

在MC38同基因小鼠肿瘤模型中对帕博西尼组合靶向4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。

材料和方法

MC38细胞得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞保持在37℃具有5％二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将50万个MC38肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。在肿瘤细胞植入后第9天，基于每组约70mm³的平均肿瘤大小，将荷瘤小鼠随机分为6个处理组。研究组包括运载体，每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼，经腹腔注射(IP)施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)，经腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)，每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼与经腹腔注射(IP)施用的5mg/kg抗OX40(PF-07201252)的组合，每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼和经腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，经腹腔注射(IP)施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)和通过腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，以及每天两次通过管饲法口服的PF-06873600与通过腹腔腹膜注射(IP)施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)和通过腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，每三天施用一次，共三剂。所有抗体均按三剂给药；研究开始后每三天施用一次。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而PF-06873600在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中施用。处理组和剂量方案信息总结在表12中。

表12

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽2)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时处死小鼠，作为本研究的存活终点。使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线，使用Holm-Sidak方法确定统计学显著性，alpha＝0.05。

实施例4：在MC38同基因小鼠肿瘤模型中CDK4/6抑制剂帕博西尼与基于PD-L1的免疫检查点阻断协同作用

概述

在MC38同源小鼠肿瘤模型中对帕博西尼与靶向PD-L1、4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。

材料和方法

MC38细胞得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞保持在37℃和具有5％二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将50万个MC38肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。在肿瘤细胞植入后第9天，基于每组约70mm³的平均肿瘤大小将荷瘤小鼠随机分为8个处理组。研究组包括运载体，每天两次管饲法口服的3015mg/kg帕博西尼，腹腔(IP)注射施用的10mg/kg阿维鲁单抗(抗PD-L1抗体，PF-06834635)，通过腹腔注射施用的10mg/kg阿维鲁单抗与5mg/kg的抗OX40抗体(PF-07201252)的组合，通过腹腔注射施用的10mg/kg的抗PD-L1与3mg/kg的抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，如上所述的抗PD-L1抗体与每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼的组合，如上所述的抗PD-L1抗体和抗OX40抗体与每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼的组合，以及如上所述的抗PD-L1抗体和抗4-1BB抗体与每天两次通过管饲法口服的15mg/kg帕博西尼的组合。所有抗体在研究开始后每三天施用一次，共三剂。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而帕博西尼在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中施用。处理组和剂量方案信息总结在表13中。

表13

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽2)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时处死小鼠，作为本研究的存活终点。使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线，使用Holm-Sidak方法确定统计学显著性，alpha＝0.05。

实施例5：在MC38同基因小鼠肿瘤模型中CDK4/6抑制剂(PF-080665)与基于PD-1的免疫检查点阻断协同作用

概述

在MC38同基因小鼠肿瘤模型中对帕博西尼组合靶向PD-1、4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。

材料和方法

MC38细胞得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞均保持在37℃及具有5％二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将50万个MC38肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。在肿瘤细胞植入后第9天，基于每组约70mm3的平均肿瘤大小，将荷瘤小鼠随机分为7个处理组。研究组包括运载体，每天两次通过管饲法口服的10mg/kg帕博西尼(CDK4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)(每三天施用一次，共三剂)的组合，每天两次通过管饲法口服的10mg/kg帕博西尼(CDK4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)和经腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)(每三天施用一次，共三剂)的组合，每天两次通过管饲法口服的10mg/kg帕博西尼(CDK4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)和经腹腔注射施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)(每三天施用一次，共三剂)的组合，以及每天两次通过管饲法口服的10mg/kg帕博西尼(CDK4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)、经腹腔注射施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)和经腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)(每三天施用一次，共三剂)的组合。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而帕博西尼在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中施用。处理组和剂量方案信息总结在表14中。

表14

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽2)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时处死小鼠，作为本研究的存活终点。使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线，使用Holm-Sidak方法确定统计学显著性，alpha＝0.05。

实施例6：在MC38同基因小鼠肿瘤模型中CDK2/4/6抑制剂(PF-068736000)与基于PD-1的免疫检查点阻断协同作用

概述

在MC38同基因小鼠肿瘤模型中对PF-06873600组合靶向PD-1、4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。

材料和方法

MC38细胞得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞都保持在37℃具有5％二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将50万个MC38肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。在肿瘤细胞植入后第9天，基于每组约70mm³的平均肿瘤大小，将荷瘤小鼠随机分为7个处理组。研究组包括运载体，每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600(CDK2/4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)(每三天施用一次共三剂)的组合，每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600(CDK2/4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)和经腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)(每三天施用一次，共三剂)的组合，每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600(CDK2/4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)、经腹腔注射施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)(每三天施用一次，共三剂)的组合，以及每天两次通过管饲口服的30mg/kg的PF-06873600(CDK2/4/6抑制剂)与经腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)、经腹腔注射施用的5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)和经腹腔注射施用的3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)(每三天施用一次，共三剂)的组合。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而PF-06873600在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中给药。处理组和剂量方案信息总结在表15中。

表15

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽²)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时将处死小鼠，作为本研究的存活终点。将使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线，并使用Holm-Sidak方法确定统计显著性，alpha＝0.05。

实施例7：在4T1同基因小鼠肿瘤模型中CDK2/4/6抑制剂(PF-068736000)与基于PD-1的免疫检查点阻断协同作用

概述

在4T1同基因小鼠肿瘤模型中对PF-06873600组合靶向PD-L1、4-1BB和OX40的抗体进行评估，以评价对原发肿瘤生长和存活的效力。PF-06873600与免疫检查点阻断剂组合可显著抑制肿瘤生长(p＝0.0000001)。

材料和方法

4T1细胞得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，在补加10％胎牛血清(FBS)的Roswell Park Memorial Institute(RPMI1640)中培养。所有细胞都保持在37℃含有5％的二氧化碳(CO₂)的加湿培养箱中。雌性C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson Laboratories获得。为了生成同基因模型，将30000个4T1肿瘤细胞皮下植入雌性C57/BL6小鼠的右侧腹部。基于每组约70mm³的平均肿瘤大小，将荷瘤小鼠随机分为4个处理组。研究组包括运载体，每天两次通过管饲法口服的30mg/kg的PF-06873600(CDK2/4/6抑制剂)，通过腹腔注射施用的10mg/kg抗PD-1抗体(PF-06937004)和5mg/kg抗OX40抗体(PF-07201252)及3mg/kg抗4-1BB抗体(PF-07218859)的组合，如以上队列中所述给药的PF-06873600、抗PD-1抗体、抗OX40抗体和抗41-BB抗体的组合。所有抗体均按三剂给药；研究开始后每三天施用一次。所有抗体制剂均基于磷酸盐缓冲盐水，而PF-06873600在0.5％甲基纤维素/Tween悬浮液中施用。处理组和剂量方案信息总结在表16中。

表16

BID＝每天两次；PO＝口服给药；QD3＝每3天1剂

每周测量3次肿瘤体积。肿瘤体积基于二维卡尺测量计算，使用公式(长×宽²)×0.5计算立方毫米单位的体积。当肿瘤体积达到2000mm³时处死小鼠，这是本研究的存活终点。使用GraphPad Prism 7软件绘制存活曲线。使用Holm-Sidak方法确定统计显著性，alpha＝0.05。

结果:

在治疗开始后的第18天，肿瘤生长结果显示，在4T1异种移植肿瘤模型中，用CDK2/4/6抑制剂(PF06873600)单一治疗显著抑制了肿瘤生长(p＝0.00000000002)。

抗PD-1抗体+抗OX40抗体+抗4-1BB抗体检查点阻断队列获得显著但轻微的肿瘤生长抑制(p＝0.008)。然而，PF 06873600与抗PD-1抗体+抗OX40抗体+抗4-1BB抗体的组合治疗显示出强力的组合效应，具有最显著的肿瘤生长抑制作用(p＝0.000000000003)。

这些数据总结为图5中的平均肿瘤体积、图6中的单度的肿瘤体积和表17中的绝对值。

表17

本文引用的所有参考文献，包括专利申请、专利出版物和说明书中引用的UniProtKB/Swiss-Prot登录号均通过引用整体并入本文。虽然已经通过举例说明和示例的方式对上述发明进行了一些详细的描述，但根据本发明的教导，本领域的普通技术人员将很容易明白，在不脱离本发明所附权利要求的精神或范围的前提下，可以对其进行某些改变和修改。

前述描述和实施例详述本发明的某些特定实施方案，且描述本发明人预期的最佳模式。然而应理解，无论以文字呈现的前述内容如何详细，本发明可以许多方式实施，且本发明应根据随附权利要求和其任何等效物来解释。

序列表

<110> 辉瑞公司

默克专利股份有限公司

S·G·丹恩

C·M·奥德鲁普

S·萨利克-阿尔达卡尼

<120> 使用CDK抑制剂的联合治疗

<130> PC72481A

<150> 62/852,523

<151> 2019-05-24

<150> 63/009,433

<151> 2020-04-13

<160> 67

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 444

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

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305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

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340 345 350

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370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

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405 410 415

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

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Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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115

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<220>

<223> Synthetic Construct

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

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35 40 45

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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

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Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

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Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

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Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

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Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

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Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

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275 280 285

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Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

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Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

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Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

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Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu

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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

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Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

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Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

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Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

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Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

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Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val

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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

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260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

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Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

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Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

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Gly Lys

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Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

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Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

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Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

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Asn

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Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr

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<211> 17

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<220>

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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Trp Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu

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Thr

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Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

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Gly

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<220>

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Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr

1 5

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<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

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<223> Synthetic Construct

<400> 51

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

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<220>

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Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

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Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr

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<400> 54

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val

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Leu Val Thr Val Ser Ser

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<400> 55

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

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<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 56

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 57

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 57

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 58

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 58

Ser Thr Tyr Trp Ile Ser

1 5

<210> 59

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 59

Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 60

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 60

Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr

1 5

<210> 61

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 61

Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala His

1 5 10

<210> 62

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 62

Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 63

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 63

Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu Ala Val

1 5 10

<210> 64

<211> 116

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 64

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 65

<211> 108

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 65

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu

85 90 95

Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 66

<211> 442

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 66

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

225 230 235 240

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

245 250 255

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

260 265 270

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

275 280 285

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val

290 295 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

305 310 315 320

Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly

325 330 335

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

340 345 350

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

355 360 365

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

370 375 380

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

385 390 395 400

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

405 410 415

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

420 425 430

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 67

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic Construct

<400> 67

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala

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50 55 60

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

Claims (26)

1.治疗癌症的方法，其包括与一定量的PD-1轴结合拮抗剂联合，向有此需要的个体施用一定量的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，其中所述量一起有效治疗癌症，并且其中所述CDK抑制剂是CDK4和CDK6的抑制剂(CDK4/6抑制剂)，或CDK2、CDK4和CDK6的抑制剂(CDK2/4/6抑制剂)。

2.权利要求1的方法，其还包括向所述个体联合施用一定量的：

a.OX40激动剂；

b.4-1BB激动剂；或者

c.OX40激动剂和4-1BB激动剂；

其中所述量一起有效治疗癌症。

3.权利要求1或2的方法，其中所述PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂或PD-L2结合拮抗剂。

4.权利要求3的方法，其中所述PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂。

5.权利要求4的方法，其中所述PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。

6.权利要求5的方法，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗(MDX 1106)、帕博利珠单抗(MK-3475)、匹地利珠单抗(CT-011)、西米普利单抗(REGN2810)、替雷利珠单抗(BGB-A317)、斯巴达珠单抗(PDR001)、RN888、mAb15、MEDI-0680(AMP-514)、BGB-108或AGEN-2034，或它们的组合。

7.权利要求3的方法，其中所述PD-1轴结合拮抗剂包括PD-L1结合拮抗剂。

8.权利要求7的方法，其中所述PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。

9.权利要求8的方法，其中所述抗PD-L1抗体是BMS-936559(MDX-1105)、AMP-714、阿特珠单抗(MPDL3280A)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、阿维鲁单抗、或包含由ATCC登录号PTA-121183的表达载体产生的VH区并具有由ATCC登录号PTA-121182的表达载体产生的VL区的抗体，或它们的组合。

10.权利要求2的方法，其中所述OX40激动剂是抗OX40抗体、OX40L激动剂片段、OX40寡聚受体、三聚OX40L-Fc蛋白或OX40免疫粘附素，或它们的组合。

11.权利要求10的方法，其中所述OX40激动剂是抗OX40抗体。

12.权利要求11的方法，其中所述抗OX40抗体是MEDI6469、MEDI0562、MEDI6383、MOXR0916或GSK3174998，或它们的组合。

13.权利要求2的方法，其中所述4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

14.权利要求2的方法，其中所述4-1BB激动剂是乌托鲁单抗(PF-05082566)、1D8、3Elor、4B4、H4-1BB-M127、BBK2、145501、由作为ATCC No.HB-11248保藏的细胞系产生的抗体、5F4、C65-485、乌瑞芦单抗(BMS-663513)、20H4.9-IgG-1(BMS-663031)、4E9、BMS-554271、BMS-469492、3H3、BMS-469497、3El、53A2或3B8。

15.权利要求1至14中任一项的方法，其中所述CDK抑制剂是CDK4/6抑制剂。

16.权利要求15的方法，其中所述CDK4/6抑制剂是帕博西尼或其药学上可接受的盐。

17.权利要求1至14中任一项的方法，其中所述CDK抑制剂是CDK2/4/6抑制剂。

18.权利要求17的方法，其中所述CDK2/4/6抑制剂是6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐。

19.权利要求1至18中任一项的方法，其中所述个体是人。

20.权利要求1至19中任一项的方法，其中所述癌症选自脑癌、头颈癌(包括头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌(包括尿路上皮癌，也称为移行细胞癌(TCC))、肺癌(包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))、乳腺癌、骨癌、结直肠癌、肾癌、肝癌(包括肝细胞癌(HCC))、胃癌、胰腺癌、食道癌、宫颈癌、肉瘤、皮肤癌(包括黑色素瘤和Merkel细胞癌(MCC))、多发性骨髓瘤、间皮瘤、恶性横纹肌样瘤、成神经细胞瘤、弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)、癌、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和SWI/SNF突变体癌症。

21.用于治疗个体的癌症的组合，其包括：

a.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-1结合拮抗剂；

b.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；

c.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；或者

d.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂。

22.用于治疗个体的癌症的组合，其包括：

a.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-L1结合拮抗剂；

b.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；

c.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；

d.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；或者

e.(i)帕博西尼或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)PD-L1结合拮抗剂；(iv)OX40激动剂；和(v)4-1BB激动剂。

23.用于治疗个体的癌症的组合，其包括：

a.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-1结合拮抗剂；

b.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；

c.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；或者

d.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂。

24.用于治疗个体的癌症的组合，其包括：

a.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；和(ii)PD-L1结合拮抗剂；

b.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)OX40激动剂；

c.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；和(iii)4-1BB激动剂；

d.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-L1结合拮抗剂；(iii)OX40激动剂；和(iv)4-1BB激动剂；或者

e.(i)6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羟基-2-甲基环戊基)-2-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮，或其药学上可接受的盐；(ii)PD-1结合拮抗剂；(iii)PD-L1结合拮抗剂；(iv)OX40激动剂；和(v)抗4-1BB抗体。

25.权利要求21或23的组合，其中所述PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体；所述OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或所述4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

26.权利要求22或24的组合，其中所述PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体；所述PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体；所述OX40激动剂是抗OX40抗体；和/或所述4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体。

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