PT1707061E - Processo para a produção heterotrófica de produtos microbianos com concentrações elevadas de ácidos gordos altamente insaturados ómega-3 - Google Patents

Processo para a produção heterotrófica de produtos microbianos com concentrações elevadas de ácidos gordos altamente insaturados ómega-3 Download PDF

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Description

DESCRIÇÃO "PROCESSO PARA A PRODUÇÃO HETEROTRÓFICA DE PRODUTOS MICROBIANOS COM CONCENTRAÇÕES ELEVADAS DE ÁCIDOS GORDOS ALTAMENTE INSATURADOS ÓMEGA-3"
Campo da Invenção O campo da presente invenção refere-se a organismos heterotróf icos e a um processo para a sua cultura, para a produção de lipidos com concentrações elevadas de ácidos gordos altamente insaturados (HUFA) ómega-3 adequados para o consumo humano e animal como aditivos alimentares ou para utilização em produtos farmacêuticos ou industriais.
Antecedentes da Invenção Ácidos gordos altamente insaturados (HUFA) ómega-3 apresentam um interesse comercial significativo, uma vez que foram recentemente reconhecidos como compostos alimentares importantes para a prevenção da arteriosclerose e da doença cardíaca coronária, para aliviar as situações inflamatórias e para retardar o crescimento de células tumorais. Estes efeitos benéficos são um resultado quer dos HUFA ómega-3 causarem inibição competitiva dos compostos produzidos a partir de ácidos gordos ómega-6, quer dos compostos benéficos produzidos directamente dos próprios HUFA ómega-3 (Simopoulos et al., 1986). Os ácidos gordos ómega-6 são os HUFA predominantes 1 encontrados em plantas e animais. Actualmente, uma fonte alimentar de HUFA ómega-3 comercialmente disponível são certos óleos de peixe que podem conter até 20-30% destes ácidos gordos. Os efeitos benéficos destes ácidos gordos podem ser obtidos comendo peixe várias vezes por semana ou ingerindo diariamente óleo de peixe concentrado. Em consequência, são processadas e encapsuladas grandes quantidades de óleo de peixe por ano, para venda como suplemento alimentar. No entanto, existem vários problemas significativos com estes suplementos de óleo de peixe, incluindo bioacumulação de vitaminas lipossolúveis e níveis elevados de ácidos gordos saturados e ómega-6, podendo ambos causar efeitos prejudiciais na saúde.
Outra fonte de HUFA ómega-3 é a microflora Thraustochytrium e Schizochytrium a qual é discutida em detalhe na Patente US. N0 5130242. Estas microfloras têm a vantagem de serem heterotróficas e capazes de produzirem níveis elevados de HUFA ómega-3. O documento WO91/07498 divulga um processo para a produção de Thraustochytrium spp. num meio de cultura compreendendo cloreto de sódio. Contudo, existe ainda a necessidade de métodos de fermentação melhorados destas microfloras e a identificação de utilizações melhoradas para o produto da microflora.
Breve Sumário da Invenção
De acordo com a presente invenção, é proporcionado um processo para a cultura de um microrganismo da ordem Thraustochytriales para a produção de lípidos, o processo compreendendo: 2 cultura do microrganismo da ordem Thraustochytriales num meio de cultura que compreende uma concentração de cloreto de entre 60 mg e menos de 3 grama de cloreto por litro do referido meio de cultura, e que compreende sulfato de sódio, em que o sulfato de sódio proporciona uma concentração de sódio de, pelo menos, 1 g/L e em que o microrganismo tem um teor em esterol de, pelo menos 0,1% de peso seco livre de cinzas (afdw) e um teor em colesterol de, pelo menos, 15% do teor total em esterol. A presente invenção é dirigida para um novo processo para o crescimento da microflora Thraustochytrium, Schizochytrium e as suas misturas, o qual inclui o crescimento da microflora num meio de cultura contendo sulfato de sódio. Verificou-se que uma parte significativa dos requisitos em sódio da fermentação podem ser fornecidos como um sal de sódio não contendo cloreto. O presente processo é particularmente útil na produção comercial porque o teor em cloreto no meio pode ser substancialmente reduzido, evitando, deste modo, os efeitos corrosivos do cloreto no equipamento de fermentação. Adicionalmente, a presente invenção é particularmente útil para a produção de produtos alimentares para utilização em aquacultura, uma vez que Thraustochytrium e Schizochytrium cultivados nesses meios formam conjuntos muito mais pequenos do que os cultivados em meios com cloreto elevado e estão, assim, mais disponíveis como fonte alimentar para o camarão na fase larvar. Em particular, Thraustochytrium e Schizochytrium cultivados em meios contendo sulfato de sódio, podem formar agregados celulares com um tamanho médio de menos de cerca de 150 mícron (1 mícron = 1 pm) de diâmetro. 3
Uma outra forma de realização da presente invenção é a produção de uma biomassa de microflora compreendendo Thraustochytrium , Schizochytrium e as suas misturas que tem um tamanho médio de agregado celular de menos de cerca de 150 mícron. A biomassa de microflora é útil para a aquacultura e, em particular, para a alimentação do camarão em fase larvar, porque a microflora tem as vantagens alimentares primárias necessárias para camarões, com um elevado teor em esteróis e um elevado teor em ácidos gordos altamente insaturados (HUFA) ómega-3. Adicionalmente, devido ao pequeno tamanho do agregado celular, a microflora pode ser comida pelo camarão na fase larvar, camarão das salinas, rotiferos e moluscos. A presente invenção inclui, ainda, um processo para a produção destes organismos que inclui alimentá-los com Thraustochytrium, Schizochytrium e suas misturas, possuindo um tamanho celular médio de menos de cerca de 150 micron.
Descreve-se um produto alimentar o qual é constituído por microflora seleccionada do grupo consistindo de Thraustochytrium, Schizochytrium e suas misturas, e um componente adicional seleccionado do grupo consistindo em semente do linho, sementes de colza, óleo de soja, farinha de abacate e as suas misturas. O produto alimentar pode ser produzido por extrusão. O processo de extrusão envolve a mistura da microflora com o componente adicional, reduzindo, deste modo, a percentagem de humidade do produto alimentar. O produto alimentar é, depois, submetido a extrusão sob calor, eliminando, deste modo, uma porção significativa da humidade reduzida. A quantidade restante da percentagem do teor de humidade original é rapidamente removida por secagem ao ar ou por pequenos tempos de cozedura, reduzindo, desse modo, as necessidades energéticas 4 totais de secagem e a degradação potencial dos HUFA ómega-3 por secagem extensa a temperaturas elevadas.
Breve Descrição das Figuras A Fig. 1 é uma representação gráfica da produção de HUFA em estirpes recentemente isoladas da úteis na invenção, representadas por . e por estirpes isoladas anteriormente, representadas por +. Cada ponto representa uma estirpe, sendo a posição de cada ponto determinado pela percentagem em peso dos ácidos gordos totais que eram HUFA ómega-3 (abcissa) e pela percentagem em peso dos ácidos gordos totais que eram ácidos gordos ómega-β (ordenada). Foram apenas representadas graficamente as estirpes úteis na invenção em que menos de 10,6% (p/p) dos ácidos gordos totais eram ómega-6 e mais de 67% dos ácidos gordos totais eram ómega-3. A Fig. 2 é uma representação gráfica da produção de HUFA em estirpes recentemente isoladas úteis da invenção, representadas por e por estirpes isoladas anteriormente, representadas por +. Cada ponto representa uma estirpe, sendo a posição de cada ponto determinado pela percentagem em peso dos ácidos gordos totais que eram HUFA ómega-3 (abcissa) e pela percentagem em peso dos ácidos gordos totais que eram ácido eicosapentaenóico (aep C20:5n-3) (ordenada). Foram apenas representadas graficamente as estirpes úteis na invenção em que mais de 67% (p/p) dos ácidos gordos totais eram ómega-3 e mais de 7,8% (p/p) dos ácidos gordos totais eram C20:5n-3. A Fig. 3 é uma representação gráfica da composição de HUFA ómega-3 em estirpes recentemente isoladas úteis na invenção, 5 representado por □ e em estirpes isoladas anteriormente, representado por +. Cada ponto representa uma estirpe separada. Os valores na abcissa são a fracção em peso dos HUFA ómega-3 totais que eram C20:5n-3 e na ordenada são a fracção em peso dos ácidos gordos altamente insaturados ómega-3 totais que eram C22:6n-3. Foram apenas representadas graficamente as estirpes da presente invenção possuindo ou uma fracção em peso de C20:5n-3 de 28% ou maior, ou uma fracção em peso de C22:6n-3 maior que 93,6%. A Fig. 4 é um gráfico representando o crescimento de várias estirpes recentemente isoladas úteis na invenção e de estirpes isoladas anteriormente, a 25 °C e a 30 °C. As velocidades de crescimento estão normalizadas à velocidade de crescimento da estirpe U-30 a 25 °C. As estirpes isoladas anteriormente são designadas pelos seus números de admissão na ATCC. A Fig. 5 é um gráfico de rendimentos totais de produção celular após indução por limitação de azoto. Foram representados graficamente cada um dos valores de peso seco livre de cinzas, ácidos gordos totais e HUFA ómega-3, como indicado, normalizados aos valores correspondentes para a estirpe 28211. Todas as estirpes foram identificadas pelos números de admissão na ATCC. A Fig. 6 é um gráfico dos rendimentos em ácidos gordos após crescimento em meios de cultura com a salinidade indicada na abcissa. As estirpes apresentadas são as estirpes recentemente isoladas S31 (ATCC 20888) (□) e U42-2 (ATCC 20891) ( + ) e as estirpes isoladas anteriormente ATCC 28211 (O) e ATCC 28209 (Δ) . Os rendimentos em ácidos gordos são representados como rendimentos relativos normalizados a um valor arbitrário de 1,00 6 com base na velocidade de crescimento média apresentada pela S31 (ATCC 20888) (□) ao longo da gama de salinidade testada. A Fig. 7 é um gráfico de aumentos no teor em HUFA ómega-3 dos lipidos totais do camarão das salinas, Artemia salina, alimentado com uma estirpe Thraustochytrid (ATCC 20890) isolada pelo método no Exemplo 1. AEP = C20:5n-3; ADH = C22:5n-3. A Fig. 8 é um gráfico de aumentos no teor em HUFA ómega-3 dos lipidos totais do camarão das salinas, Artemia salina, alimentado com uma estirpe Thraustochytrid (ATCC 20888) isolada pelo método no Exemplo 1. AEP = C20:5n-3; ADH = C22:5n-3.
Descrição Detalhada das Formas de Realização Preferidas
Com o propósito de definição ao longo da aplicação, é aqui entendido que um ácido gordo é um ácido monocarboxílico alifático. Lipidos são entendidos serem gorduras ou óleos incluindo os ésteres glicéridos de ácidos gordos juntamente com fosfatidos, esteróis, álcoois, hidrocarbonetos, cetonas e compostos relacionados, associados.
Um sistema de estenografia correntemente empregue é utilizado nesta descrição para referir a estrutura dos ácidos gordos {e.g., Weete, 1980). Este sistema usa a letra "C" acompanhada por um número indicando o número de carbonos na cadeia hidrocarbonada, seguido por um sinal de dois pontos e um número indicando o número de duplas ligações, í.e., C20:5, ácido eicosapentaenóico. Os ácidos gordos são numerados a começar pelo carbono do carboxilo. A posição das duplas ligações é indicada adicionando a letra Grega delta (Δ) seguida pelo número do 7 carbono da dupla ligação; i.e., C20:5ómega-3A5'8,11'14'17. A notação "ómega" é um sistema de estenografia para ácidos gordos insaturados em que é utilizada a numeração a partir do carbono do terminal carboxilo. Por conveniência, n-3 será utilizado para simbolizar "ómega-3", principalmente quando se utiliza a nomenclatura numérica de estenografia aqui descrita. Ácidos gordos altamente insaturados ómega-3 são entendidos serem ácidos gordos polietilénicos, em que a última ligação etilénica está a 3 carbonos e incluindo o grupo metilo terminal do ácido gordo. Deste modo, a nomenclatura completa para o ácido eicosapentaenóico, um ácido gordo altamente insaturado ómega-3, seria C20: 5η-3Δ5,8,11'14'17. Por razões de brevidade, a localização das duplas ligações (Δ5,8,11,14,-^ será omitida. 0 ácido eicosapentaenóico é, então, designado por C20:5n-3, o ácido docosapentaenóico (C22: 5η-3Δ7,10,13'16'19) é C22:5n-3 e o ácido docosa-hexaenóico (C22: 6η-3Δ4,7'10,13'16'19) é C22:6n-3. A nomenclatura "ácido gordo altamente insaturado" significa um ácido gordo com 4 ou mais duplas ligações. "Ácido gordo saturado" significa um ácido gordo com 1 a 3 duplas ligações.
Foi desenvolvido um processo de recolha e rastreio para isolar rapidamente muitas estirpes de microrganismos com a seguinte combinação de caracteristicas economicamente desejáveis para a produção de HUFA ómega-3: 1) capazes de crescimento heterotrófico; 2) teor elevado em HUFA ómega-3; 3) unicelulares; 4) de um modo preferido, de baixo teor de saturados e de HUFA ómega-6; 5) de um modo preferido, células não-pigmentadas, brancas ou essencialmente incolores; 6) de um modo preferido termotolerantes (capacidade para crescer a temperaturas acima de 30 °C) ; e 7) de um modo preferido, eurialinas (capazes de crescer numa grande gama de salinidades, mas especialmente a 8 baixas salinidades) . Este processo é descrito em detalhe na Patente US. N° 5130242, relacionada.
Utilizando o processo de recolha e rastreio, podem ser isoladas estirpes de microflora unicelular que têm teores em ácidos gordos até cerca de 45% em percentagem de peso seco celular total (%dwt), que apresentam crescimento numa gama de temperaturas de 15-48 °C e que crescem num meio de cultura de muito baixa salinidade. Muitas das estirpes com ómega-3 elevados são de crescimento muito lento. As estirpes que foram isoladas pelo método descrito acima e que apresentam rápido crescimento, boa produção e teor elevado de HUFA ómega-3, têm teores de ácidos gordos insaturados ómega-3 até 12% dwt, aproximadamente.
Um dos aspectos da presente invenção é o crescimento de Thraustochytrium, Schizochytrium e as suas misturas, com teor elevado de HUFA ómega-3, em meio de fermentação contendo um sal de sódio sem cloreto, i. e., sulfato de sódio. Mais em particular, uma parte significativa dos requisitos em sódio da fermentação é fornecida como sais de sódio em cloreto. Por exemplo, menos de 75% do sódio no meio de fermentação é fornecido como cloreto de sódio, de um modo mais preferido, menos de 50% e, de um modo muito preferido, menos de 25%. Uma vantagem particular da presente invenção é que o meio fornece a fonte de sódio necessária à microflora para o seu crescimento, na ausência de uma quantidade significativa de cloreto que pode corroer o recipiente no qual a microflora está em desenvolvimento e outro equipamento de fermentação ou purificação. Surpreendentemente, tem sido verificado que a microflora da presente invenção pode ser desenvolvida a concentrações de cloreto de entre 60 mg/L e menos de cerca de 3 g/L, de um modo mais preferido, menos de 500 mg/L, de um modo 9 preferido, menos de 250 mg/L e, de um modo mais preferido, entre cerca de 60 mg/L e cerca de 120 mg/L enquanto mantêm ainda os elevados rendimentos em biomassa por açúcar de cerca de 50% ou mais. Como discutido abaixo, uma vantagem adicional da presente invenção é a produção de microflora que tem teor elevado em HUFA ómega-3 mas tem um tamanho de agregado celular suficientemente pequeno para ser consumido pelo camarão em fase larvar, camarão das salinas, rotíferos e moluscos. A concentração de sulfato de sódio é eficaz para se conseguir os requisitos de salinidade da microflora e a concentração de sódio é (expressa em g/L de Na) maior que cerca de 1,0 g/L, de um modo preferido, entre cerca de 1,0 g/L e cerca de 50,0 g/L e, de um modo mais preferido, entre cerca de 2,0 g/L e cerca de 25 g/L.
Surpreendentemente, verificou-se que a fermentação de estirpes na presença de sulfato de sódio limita o tamanho dos agregados celulares das estirpes a ser inferior a cerca de 150 micron, de um modo preferido, menos de cerca de 100 micron e, de um modo mais preferido, menos de cerca de 50 micron. Tal como aqui utilizado, a expressão tamanho do agregado celular refere-se ao diâmetro médio aproximado dos conjuntos ou agregados celulares num meio de fermentação ou em cultura de microflora. Geralmente, mais de cerca de 25 porcento dos agregados celulares numa cultura de microflora têm o tamanho de agregado celular abaixo do tamanho médio, de um modo preferido, mais de cerca de 50 porcento e, de um modo mais preferido, mais de cerca de 75 porcento. Células da microflora produzidas de acordo com a presente invenção respeitam os parâmetros para o tamanho do agregado celular descritos anteriormente, enquanto se mantêm no meio de fermentação, bem como após congelação e/ou 10 desidratação da biomassa, se ressuspensa em líquido ou agitada fisicamente, tal como por um misturador ou agitador em vórtice. 0 presente processo é particularmente importante para a microflora que replica por bipartição sucessiva (em que uma única célula replica por divisão em duas células que, cada uma, se divide em duas mais, etc.) porque, à medida que as células repetidamente e rapidamente executam por este processo, as células tendem a amontoar formando agregados multicelulares que, muitas vezes, estão fora dos parâmetros para o tamanho dos agregados celulares identificados acima. Schizochytrium replica por bipartição sucessiva a por formação de esporângio que liberta zoosporos. No entanto, Thraustochytrium replica apenas por formação de esporângio e libertação de zoosporos. Para Thraustochytrium que replica por formação de esporângio/zoosporo, o amontoar pode ser também um problema, particularmente porque, apesar de o número de células num agregado poder não ser tão grande como os agregados formados por bipartição sucessiva, o tamanho da célula individual de Thraustochytrium tende a ser maior e, assim, conjuntos de um número mais pequeno de células são maiores. No entanto, uma estirpe depositada de Thraustochytrium, ATCC 26185, tem sido identificada como não apresentando agregação significativa.
Num outro exemplo útil da presente invenção, foi verificado que restringindo o teor em oxigénio do meio de fermentação durante o crescimento de Thraustochytrium, Schizochytrium e as suas misturas, o teor lipídico destas estirpes pode ser aumentado. A concentração de oxigénio óptima para a produção de lípido pode ser determinada para qualquer microflora, em particular, através da variação do teor em oxigénio do meio. Em particular, o teor em oxigénio do meio de fermentação é mantido a um teor em oxigénio de menos de cerca de 40% da saturação e, 11 de um modo preferido, entre cerca de 5% da saturação e cerca de 40% da saturação. O crescimento das estirpes pelo processo da presente invenção pode ser realizado a qualquer temperatura conducente a um crescimento satisfatório das estirpes; por exemplo, entre cerca de 5 °C e cerca de 48 °C, de um modo preferido, entre cerca de 15 °C e 40 °C e, de um modo mais preferido, entre cerca de 25 °C e cerca de 35 °C. O meio de cultura torna-se, de um modo geral, mais alcalino durante a fermentação se o pH não for controlado por adição ácida ou tampões. As estirpes irão crescer numa gama de pH desde 5,0-11,0, com uma gama preferida de cerca de 6,0-8,5. Vários parâmetros de fermentação para inoculação, crescimento e recuperação da microflora são discutidos em detalhe na Patente US. N° 5130242. A biomassa recolhida de um ciclo de fermentação pode ser seca (e.g., secagem por pulverização, secagem em túnel, secagem por vácuo ou um processo idêntico) e utilizada como ração ou suplemento alimentar para qualquer animal cuja carne ou produtos são consumidos pelos humanos. De um modo idêntico, HUFA ómega-3 extraídos podem ser utilizados como ração ou suplemento alimentar. Em alternativa, a biomassa recolhida e lavada pode ser utilizada directamente (sem secagem) como um suplemento de ração. Para aumentar o seu prazo de validade, a biomassa húmida pode ser acidificada (pH aproximado = 3,5 - 4,5) e/ou pasteurizada ou submetida a aquecimento rápido para inactivar os enzimas e, depois, enlatada, engarrafada ou embalada sob vácuo ou atmosfera não oxidante (e.g. N2 ou C02) . O termo "animal" significa qualquer organismo pertencente ao reino Animalia e inclui, sem limitações, qualquer animal do qual são derivados a carne de 12 aves, marisco, carne de vaca, carne de porco ou carne de carneiro. 0 marisco é derivado, sem limitações, de camarão e moluscos de concha. 0 termo "produtos" inclui qualquer outro produto que não carne derivada desses animais, incluindo, sem limitações, ovos ou outros produtos. Quando dado a comer a esses animais, hufa ómega-3 na biomassa recolhida ou HUFA ómega-3 extraídos são incorporados na carne, ovos ou outros produtos desses animais para aumentar o seu teor em HUFA ómega-3.
Descreve-se a utilização da biomassa recolhida como produto alimentar do camarão em fase larvar, do camarão das salinas, rotíferos e moluscos e, em particular, do camarão em fase larvar. Durante a etapa de desenvolvimento larvar, as larvas do camarão são incapazes de utilizar algumas fontes alimentares porque essas fontes de comida são muito vastas. Em particular, em algumas etapas de desenvolvimento, a larva do camarão é incapaz de utilizar uma fonte alimentar que possua um diâmetro maior que cerca de 150 mícron. Assim, a microflora desenvolvida em meio de fermentação contendo um sal de sódio sem cloreto, em particular, sulfato de sódio, como amplamente discutido anteriormente, é adequada para utilização como produto alimentar do camarão. Tal como discutido anteriormente, a microflora desenvolvida sob tais condições possui, em geral, um tamanho de agregado celular menor que cerca de 150 mícron, de um modo preferido, menor que cerca de 100 mícron e, de um modo muito preferido, menor que cerca de 50 mícron.
Uma outra vantagem da utilização da microflora obtida pela presente invenção como fonte alimentar para o camarão é que tal microflora tem um teor em esterol significativo, incluindo colesterol, o qual é um requisito alimentar primário para o camarão. A microflora produzida pela presente invenção tem, de 13 um modo geral, um teor em esterol, numa forma preferida, de pelo menos cerca de 0,1% do peso seco livre de cinzas (afdw), de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 0,5% afdw e, de um modo muito preferido, pelo menos, cerca de 1,0% afdw. Adicionalmente, a microflora produzida pela presente invenção tem, de um modo preferido, um teor em colesterol de, pelo menos, cerca de 15% do teor total em esteróis, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 25% do teor total em esteróis e, de um modo muito preferido, pelo menos, cerca de 40% do teor total em esteróis. Além disso, a biomassa da microflora da presente invenção fornece o camarão também com requisitos nutricionais adicionais, tais como ácidos gordos ómega-6, proteínas, hidratos de carbono, pigmentos e vitaminas. O produto microbiano produzido pela presente invenção tem importância como uma fonte de HUFA ómega-3 para peixe, camarão e outros produtos produzidos por aquacultura. O produto pode ser utilizado como produto alimentar tal como descrito para o camarão; ou adicionado directamente como um suplemento, para a alimentação de camarão e de peixe em geral; ou pode ser dado como alimento ao camarão das salinas ou outros organismos alimentadores vivos para consumo por um organismo em aquacultura. A utilização dessa microflora, desta forma, permite, ao criador de camarão, obter velocidades de crescimento e/ou taxas de sobrevivência significativamente mais elevadas para o camarão na fase larvar e produzir camarão pós-larvar que é mais vivaz e robusto.
Para a maioria das aplicações alimentares, o teor em ácidos gordos das células recolhidas será, aproximadamente, 15-50% dwt, com o restante material sendo principalmente proteína e hidratos de carbono. A proteína pode contribuir significativamente para o 14 valor nutricional das células, uma vez que várias das estirpes que foram estudadas têm todos os aminoácidos essenciais e poderiam ser consideradas como fonte nutricionalmente equilibrada de proteínas.
Descreve-se a produção de um produto alimentar utilizando Thraustochytrium, Schizochytrium e as suas misturas, da presente invenção, combinado com um componente adicional seleccionado de entre o qrupo constituído por semente do linho, sementes de colza, óleo de soja e farinha de abacate. Uma vantagem particular desta é que o produto alimentar contém, quer os HUFA ómega-3 de cadeia curta do componente adicional, quer os HUFA ómega-3 de cadeia longa da microflora. Os produtos alimentares contendo semente do linho, sementes de colza, óleo de soja e farinha de abacate são conhecidas como úteis para fornecerem uma fonte de HUFA ómega-3 de cadeia curta e para, adicionalmente, fornecerem uma fonte de HUFA ómega-3 de cadeia curta que podem ser alongados pelos humanos e animais que os ingerem. Estes produtos alimentares têm, no entanto, a desvantagem de possuírem teores elevados em colina do componente adicional que pode formar aminas primárias originando um cheiro desagradável a peixe; e compostos tóxicos do componente adicional, os quais a níveis elevados podem, por exemplo, inibir a postura de ovos pelas galinhas ou fazer com que os animais deixem de se alimentar. Assim sendo, o produto alimentar obtido pela presente invenção tem a vantagem de ter um teor baixo em sementes de linho, sementes de colza, óleo de soja e farinha de abacate porque o organismo que ingere o produto alimentar não necessita de níveis elevados de HUFA ómega-3 de cadeia curta com o fim de os converter em HUFA de cadeia longa. Assim, o teor mais baixo em sementes de linho e sementes de colza do produto alimentar 15 origina baixas quantidades de colina e/ou compostos tóxicos inibidores presentes no produto alimentar. A quantidade de Thraustochytrium, Schizochytrium e as suas misturas, utilizada no produto alimentar pode variar de entre cerca de 5% a cerca de 95% por peso. 0 componente adicional pode estar presente no produto alimentar numa gama de entre cerca de 5% a cerca de 95% por peso. Adicionalmente, o produto alimentar pode também incluir outros compostos, incluindo cereais, suplementos, vitaminas, aglutinantes e conservantes.
De um modo preferido, o produto alimentar anterior é produzido utilizando um processo de extrusão. 0 processo de extrusão envolve misturar a microflora com o componente adicional, reduzindo deste modo a humidade da biomassa microfloral da quantidade de componente adicional misturado. 0 produto alimentar é submetido a extrusão sob calor, removendo, assim, mais humidade do produto alimentar. 0 produto resultante, que tem um teor baixo em humidade, pode ser seco por secagem ao ar ou por pequenos tempos de cozedura, reduzindo, desse modo, as necessidades energéticas totais de secagem e a degradação potencial dos HUFA ómega-3 devido a longos períodos a temperaturas elevadas. Adicionalmente, o calor do processo de extrusão pode degradar alguns dos compostos tóxicos não-desejados, geralmente presentes no composto adicional, que podem, por exemplo, inibir a postura de ovos pelas galinhas ou fazer com que os animais deixem de se alimentar. A presente invenção irá ser descrita em maior detalhe através de exemplos de trabalho. As espécies que se encontrem dentro dos critérios de selecção descritos acima não foram descritas nos antecedentes da invenção. Pela aplicação destes 16 critérios de selecção, foram isoladas mais de 25 estirpes potencialmente promissoras a partir de, aproximadamente, 1000 amostras analisadas. Das cerca de 20500 estirpes na American Type Culture Collection (ATCC), 10 estirpes foram posteriormente identificadas como pertencendo ao mesmo grupo taxonómico das estirpes isoladas. Essas estirpes ainda viáveis na Collection foram adquiridas e utilizadas para comparação com as estirpes isoladas e cultivadas pelos processos revelados. Os resultados desta comparação são apresentados nos Exemplos 4 e 5 abaixo.
Os mais recentes teóricos taxonómicos colocam Thraustochydrid com as algas ou protistas do tipo alga. Todas as estirpes de microrganismos unicelulares revelados e reivindicados são membros da ordem Thraustchytriales (Ordem: Thraustochytriales; Família: Thraustochytriaceae; Género Thraustochytrium ou Schizochytrium) . Com o objectivo geral de citação, estes microrganismos serão aqui chamados microflora para melhor referir a incerta da sua posição taxonómica exacta.
As novas estirpes identificadas abaixo foram depositadas, de acordo com o Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Microrganismos com o Objectivo de Peddido de Patente.
Os microrganismos preferidos, úteis na presente invenção, têm todas as caracteristicas identificadoras das estirpes depositadas e, em particular, as caracteristicas identificadoras de serem capazes de produzir HUFA ómega-3, como aqui descrito, e possuindo caracteristicas de tamanho de agregado de células, quando cultivadas de acordo com as condições aqui descritas. Em particular, os microrganismos preferidos úteis na presente 17 invenção referem-se aos seguintes microrganismos depositados e seus mutantes.
Estirpe
N°. ATCC
Data de depósito
Schizochytrium S31 Schizochytrium S8 20888 20889 8/8/88 8/8/88 A presente invenção enquanto revelada em termos de estirpes de organismos específicos, tem a intenção de incluir todos esses métodos e estirpes obteníveis e úteis de acordo com os ensinamentos aqui revelados, incluindo todas as substituições, modificações e optimizações semelhantes como seriam expedientes disponíveis para os especialistas na área.
Os seguintes exemplos e resultados de testes são fornecidos com o propósito de ilustração e não têm a intenção de limitar o âmbito da invenção (Exemplos 1-12 são Exemplos Preparativos).
EXEMPLOS
Exemplo Preparativo 1. Recolha e Rastreio
Foi recolhida uma amostra de 150 mL de água de um lago artificial de água salgada pouco profundo e guardada numa garrafa de polietileno estéril. Foram realizados cuidados especiais para incluir algum material de plantas vivas e de detritos naturais (plantas em apodrecimento e matéria animal) juntamente com a amostra de água. A amostra foi colocada em gelo até chegar ao laboratório. No laboratório, a amostra de água foi agitada durante 15-30 segundos e 1-10 mL da amostra foram 18 pipetados ou vertidos numa unidade de filtração contendo 2 tipos de filtros: 1) em cima, um filtro estéril Whatman N° 4 de 47 mm de diâmetro com um tamanho de poro de cerca de 25 pm; e 2) por baixo do filtro Whatman, um filtro de policarbonato de 47 mm de diâmetro com tamanho de poro de cerca de 1,0 pm. Tendo em conta ligeiras variações nos tamanhos nominais dos poros para os filtros, as células recolhidas no filtro de policarbonato variam em tamanho de cerca de 1,0 pm a cerca de 25 pm. O filtro Whatman foi retirado e deitado fora. O filtro de policarbonato foi colocado em meio sólido F-l numa placa de
Petri, consistindo o referido meio de (por litro) : 600 mL água do mar (pode usar-se água do mar artificial), 400 mL de água destilada, 10 g de ágar, 1 g de glucose, 1 g de hidrolisado proteico, 0,2 g de extracto de levedura, 2 mL de 0,1 M KH2P04, 1 mL de uma solução vitaminica (Vitaminas A) (contendo 100 mg/L tiamina, 0,5 mg/L biotina e 0,5 mg/L cianocobalamina), 5 mL de uma mistura de metais vestigiais (metais Pll, contendo por litro: 6,0 g Na2EDTA, 0,29 g FeCl36H20, 6,84 g H3B03, 0,86 MnCl24H20, 0, 06 g ZnCl2, 0, 026 g CoCl26H20, (0,052 g NiS04H20, 0, 002 g CuS045h20 e 0, 005 g Na2Mo042H20 e 500 mg de sulfato de estreptomicina e de penicilina-G. A placa de ágar foi incubada no escuro a 30 °C. Após 2-4 dias aparecerem várias colónias no filtro. As colónias de microflora unicelular foram retiradas da placa e plaqueadas numa nova placa com meio de composição semelhante. Foi dada especial atenção para se apanharem todas as colónias compostas por células brancas incolores. A nova placa foi incubada a 30 °C e foram recolhidas as colónias individualizadas após 2 a 4 dias de período de incubação. As colónias individualizadas foram então recolhidas e colocadas em 50 mL de meio líquido contendo o mesmo enriquecimento orgânico das placas de ágar. Estas culturas foram incubadas durante 19 2-4 dias a 30 °C numa placa agitadora rotatória (100-200 rpm) . Quando as culturas pareceram ter atingido a densidade máxima, foram recolhidos 20-40 mL da cultura, centrifugados e liofilizados. A amostra foi então analisada por técnicas padrão de cromatografia gasosa bem conhecidas (e. g., Lepage e Roy, 1984) para identificar o teor em ácidos gordos da estirpe. As estirpes com HUFA ómega-3 foram assim identificadas e as culturas destas estirpes foram mantidas para rastreio futuro.
Utilizando o processo de recolha e rastreio delineado acima, foram isoladas cerca de 150 estirpes de microflora unicelular que possuem teor elevado de HUFA ómega-3, em percentagem dos ácidos gordos totais, e que apresentam crescimento no intervalo de temperaturas de 15-48 °C. Podem também ser isoladas as estirpes que têm menos de 1% (em % de ácidos gordos totais) dos HUFA C20:4n-6 e C22:5n-6 indesejáveis para algumas aplicações. Estirpes com teor elevado em ómega-6 podem também ser isoladas. Estirpes desta microflora podem ser isoladas repetidamente a partir da mesma localização utilizando o procedimento descrito acima em linhas gerais. Algumas das estirpes recentemente isoladas apresentam perfis de ácidos gordos muito idênticos. A possibilidade de algumas serem isolados duplicados da mesma estirpe não pode ser, neste momento, excluída. O rastreio adicional de outras características desejáveis, tais como tolerância à salinidade ou capacidade de utilizar uma variedade de fontes de carbono e azoto, podem então ser realizadas utilizando um processo idêntico. 20
Exemplo Preparativo 2, Manutenção de Crescimento Livre: PO4 e Extracto de Levedura Células de Schizochytrium aggregatum (ATCC 28209) foram retiradas do meio sólido F-l e inoculadas em 50 mL de meio FFM (Fuller et al., 1964). Este meio contém: água do mar, 1000 mL; glucose, 1,0 g; hidrolisado de gelatina, 1,0 g; extracto de figado, 0,01 g; extracto de levedura, 0,1 g; metais PII, 5 mL; 1 mL de solução B-vitaminas (Goldstein et al., 1969); e 1 mL de uma solução de antibiótico (25 g/L de sulfato de estreptomicina e penicilina-G). 1,0 mL da mistura vitaminica (pH 7,2) contém: tiamina-HCl, 200 pg; biotina, 0,5 pg; cianocobalamina, 0,05 pg; ácido nicotinico, 100 pg; pantotenato de cálcio, 100 pg; riboflavina, 5,0 pg; piridoxina-HCl, 40,0 pg; piridoxamina-2HCl, 20,0 pg; ácido p-aminobenzóico, 10 pg; cloreto HC1, 500 pg; inositol, 1,0 mg; timina, 0,8 mg; ácido orótico, 0,26 mg; ácido folinico, 0,2 pg; e ácido fólico, 2,5 pg. A cultura foi colocada num agitador rotativo (200 rpm) a 27 °C. Após 3-4 dias, foi transferido 1 mL desta cultura para 50 mL de cada um dos seguintes tratamentos: 1) meio FFM (como controlo); e 2) meio FFM com a adição de 250 mg/L KH2P04 e 250 mg/L de extracto de levedura. Estas culturas foram colocadas num agitador rotativo (200 rpm) a 27 °C durante 48 horas. As células foram recolhidas e quantificado o rendimento das células. No tratamento 1, a concentração final das células, numa base de peso seco livre de cinzas, foi de 616 mg/L. No tratamento 2, a concentração final das células foi de 1675 mg/L, demonstrando o efeito melhorado de aumentar as concentrações de P04 e de extracto de levedura no meio de cultura. 21
Exemplo Preparativo 3, Manutenção de Crescimento Livre: Substituição do Licor de maceração de Milho por Extracto de Levedura Células de Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888) foram retiradas do meio sólido F-l e colocadas em 50 mL de meio M-5. Este meio consiste de (com base em por litro) : extracto de levedura, 1 g; NaCl, 25 g; MgS04.7H20, 5 g; KC1, 1 g; CaCl2, 200 mg; glucose, 5 g; glutamato, 5 g; KH2P04, 1 g; metais PII, 5 mL; solução vitaminas-A, 1 mL; e solução de antibiótico, 1 mL. O pH da solução foi acertado a 7,0 e a solução foi esterilizada por filtração. Foram preparadas soluções estéreis de licor de maceração de milho (4 g/40 mL; pH 7,0) e extracto de levedura (1 g/40 mL; pH 7,0). A um conjunto de frascos de meio M-5 foi adicionada a seguinte quantidade de solução de extracto de levedura: 1) 2 mL; 2) 1,5 mL; 3) 1 mL; 4) 0,5 mL; e 5) 0,25 mL. A outro conjunto de frascos de meio M-5 foram adicionadas soluções de extracto de levedura e licor de maceração do milho, nos seguintes níveis: 1) 2 mL de extracto de levedura; 2) 1,5 mL de extracto de levedura e 0,5 mL de licor de maceração do milho; 3) 1,0 mL do extracto de levedura e 1,0 mL de licor de maceração do milho; 4) 0,5 mL de extracto de levedura e 1,5 mL de licor de maceração do milho; e 5) 2 mL de licor de maceração do milho.
Para inocular cada frasco foi utilizado um mL da cultura em meio F-l. Foram colocados num agitador rotativo a 27 °C durante 48 horas. As células foram recolhidas por centrifugação e foi determinado o rendimento das células (como peso seco livre de cinzas). Os resultados são apresentados na Tabela 1. Os resultados indicam que a adição de extracto de levedura até 0,8 g/L de meio pode aumentar o rendimento das células. No entanto, a adição de licor de maceração do milho é ainda mais eficaz e resulta no dobro do rendimento dos tratamentos com 22 extracto de levedura. Isto é muito vantajoso para a produção económica das células uma vez que o licor de maceração do milho é muito menos dispendioso que o extracto de levedura.
Tabela 1.
Tratamento
Peso Seco Livre de Cinzas (mg/L) (Quantidade Adicionada de Suplemento de Nutriente) 2, 0 mL Extr. levedura 4000 1,5 mL Extr. levedura 4420 1,0 mL Extr. levedura 4300 0,5 mL Extr. levedura 2780 0,25 mL Extr . levedura 2700 2,0 mL Extr. levedura 4420 1,5 mL Extr. levedura + 0,5 mL CSL* 6560 0 1 1 mL Extr. levedura + 1,0 mL CSL 6 640 0,5 mL Extr. levedura + 1,5 mL CSL 7200 2, 0 mL CSL 7590 *CSL = licor de maceração de milho
Exemplo Preparativo 4. Teor em HUFA Melhorado das Estirpes Isoladas pelo Método do Exemplo 1 Comparadas com Estirpes da ATCC (Estirpes Conhecidas Anteriormente) A uma bateria de 151 estirpes recentemente isoladas, seleccionadas de acordo com o método descrito no Exemplo 1, foram retiradas amostras na última fase de crescimento exponencial e analisadas quantitativamente por cromatografia 23 gás-líquido para o teor em HUFA. Todas as estirpes cresceram em meio Ml ou em meio líquido FFM, dependendo de qual deu maior rendimento das células. 0 meio Ml tem a mesma composição do meio M5, excepto que as concentrações de glucose e glutamato são de 1 g/L. Adicionalmente, foram obtidas da American Type Culture Collection cinco espécies previamente isoladas de Thraustochytrium e Schizochytrium, representando todas as estirpes que podiam ser obtidas em forma viável a partir dessa colecção. Estas estirpes foram: T. aureum (ATCC N° 28211), Γ. aureum (ATCC N° 34304), Γ. roseum (ATCC N° 28210), Γ. straitum (ATCC N° 34473) e S. aggregatum (ATCC N° 28209) . Todas as estirpes apresentaram um crescimento abreviado em meio convencional e apresentaram, de um modo geral, um crescimento melhorado no meio da presente invenção, incluindo o meio M5 e o meio FFM. Foi determinada, como descrito, a produção de ácidos gordos de cada uma das estirpes conhecidas, com base no crescimento melhorado das estirpes no meio da presente invenção.
Os picos dos ácidos gordos foram identificados recorrendo à utilização de compostos puros de estrutura conhecida. A quantificação, em termos da percentagem em peso de ácidos gordos totais, foi realizada integrando os picos cromatográficos. Os compostos identificados foram: ácido palmítico (Cl6:0), C20:4n-6 e C22:l (que não foram resolvidos em separado pelo sistema utilizado), C20:5n-3, C22:5n-6, C22:5n-3 e C22:6n-3. Os restantes, normalmente ácidos gordos de baixo peso molecular, foram incluídos na categoria combinada de "outros ácidos gordos". Os ácidos gordos ómega-3 totais foram calculados como a soma de 20:5n-3, 22:5n-3 e 22:6n-3. Os ácidos gordos ómega-6 totais foram calculados como a soma do pico 20:4/22:1 e do pico 22:5n-6. 24
Os resultados são apresentados nas Tabelas 2-3 e ilustrados nas Fig. 1-3. Pode ser verificado da Tabela 2 que podem ser isoladas um grande número de estirpes pelo método da presente invenção e que um grande número de estirpes supera as estirpes conhecidas anteriormente em vários critérios importantes. Por exemplo, 102 estirpes produziram pelo menos 7,8% por peso dos ácidos gordos totais C20:5w3, uma percentagem superior desse ácido gordo à de qualquer outra estirpe conhecida anteriormente. As estirpes 23B (ATCC N° 20982) e 12B (ATCC N° 20890) são exemplos destas estirpes. Trinta (30) estirpes da presente invenção produziram pelo menos 68% por peso de ácidos gordos totais como ácidos gordos ómega-3, mais do que qualquer estirpe anterioremente conhecida. A estirpe 23B (ATCC N° 20892) é um exemplo dessas estirpes. Setenta e seis (76) estirpes da presente invenção renderam não mais de 10% por peso de ácidos gordos totais sob a forma de ácidos gordos ómega-6, considerados como componentes indesejáveis na dieta humana, mais baixo do que qualquer estirpe conhecida anteriormente. As estirpes 23B (ATCC N° 20892) e 12B (ATCC N° 20890) são exemplos destas estirpes. Adicionalmente, há trinta e cinco estirpes da presente invenção que produzem mais de 25% por peso de ácidos gordos totais como ácidos gordos ómega-6, mais do que qualquer outra estirpe conhecida anteriormente. Embora estas estirpes possam ter uma gama mais estreita de utilizações para objectivos alimentares, são úteis como matéria-prima para a síntese química de eicosanóides a partir de ácidos gordos ómega-6.
Adicionalmente, os resultados revelaram muitas estirpes da presente invenção que produzem uma proporção elevada de ácidos gordos ómega-3 totais como C22:6n-3. Na Tabela 3, 48 das estirpes apresentadas na Tabela 2 foram comparadas com as estirpes conhecidas anteriormente, apresentando-se cada um de 25 C20:5n-3, C22:5n-3 e C22:6n-3 em percentagem por peso do teor total em ómega-3. Quinze estirpes tinham pelo menos 94% por peso dos ácidos gordos ómega-3 totais como C22:6n-3, mais do que qualquer estirpe conhecida anteriormente. A estirpe S8 (ATCC N° 20889) foi um exemplo dessas estirpes. Dezoito estirpes tinham, pelo menos, 28% por peso dos ácidos gordos ómega-3 totais como C20:5n-3, mais do que qualquer estirpe conhecida anteriormente. A estirpe 12B (ATCC N° 20890) foi um exemplo dessas estirpes. 26
TABELA 2: LISTA DE ESTIRPES E COMPOSIÇÕES OBTIDAS SOB CONDIÇÕES DE RASTREIO PADRÃO PERCENTAGEM DE ÁCIDOS GORDOS TOTAIS Ómega-3 Ómega-6 Estirpe 016:0 C20:4w6 C20:5w3 C22:5w6 C22:5w3 C22:6w3 Outros AG Total Total
3,3¾ 48,5¾ 15,1¾ 6,0¾ 21 47,0¾ 11,5¾ 49,7¾ 15,9¾ ATCC20889 49,7¾ 4,7¾ 62,1¾ 18,3¾ U40-2 8,2¾ 37,4¾ 12,0¾ 10,2¾ 21B 1,1¾ 70,1¾ 8,9¾ 0,4¾ BGI 9,7¾ 46,7¾ 11,9¾ 15,4¾ 56A 46,4¾ 21,8¾ 58,6¾ 3,3¾ 11A-1 29,9¾ 28,9¾ 42,2¾ 5,2¾ 4A-1 25,2¾ 24,9¾ 37,5¾ 13,3¾ 17B 51,2¾ 11,6¾ 59,3¾ 13,7¾ ATCC20891 22,1¾ 20,2¾ 30,2¾ 27,4¾ S44 43,3¾ 5,5¾ 59,4¾ 20,7¾ U30 14,9¾ 38,3¾ 19,0¾ 20,5¾ 59A 52,2¾ 10,6¾ 59,9¾ 11,4¾ U37-2 53,3¾ 5,5¾ 63,3¾ 15,5¾ S50W 43,0¾ 15,6¾ 50,0¾ 10,7¾ ATCC20891 0,0¾ 90,0¾ 0,0¾ 0,0¾ UX 43,0¾ 7,3¾ 56,6¾ 19,5¾ LW9 53,6¾ 6,5¾ 62,6¾ 13,6¾ C32-2 34,4¾ 29,8¾ 42,6¾ 3,7¾ 5A-1 27,2¾ 29,6¾ 40,4¾ 12,9¾ BGI 46,0¾ 8,8¾ 56,7¾ 9,1¾ U3 25,1¾ 22,8¾ 32,1¾ 28,2¾ 558 32,4¾ 25,5¾ 43,5¾ 4,6¾ 18A 33,4¾ 31,7¾ 48,6¾ 0,3¾ 32B 30,4% 2,81 6,6% 3,2% 0,2% 22,9¾ 0,4¾ 2,3¾ 15,5¾ 0,5¾ 14,9¾ 6,5¾ 12,0¾ 11,8¾ 0,4¾ 40,3¾ 1,7¾ 3,3¾ 3,6¾ 0,0¾ 20,7¾ 0,4¾ 7,8¾ 0,0¾ 0,0¾ 26,0¾ 5,7¾ 1,5¾ 9,7¾ 0,7¾ 16,4¾ 1,4¾ 10,0¾ 1,9¾ 2,2¾ 23,7¾ 3,3¾ 10,5¾ 1,9¾ 1,8¾ 13,7¾ 6,9¾ 9,2¾ 11,9¾ 3,2¾ 15,4¾ 4,2¾ 7,3¾ 9,5¾ 0,9¾ 22,3¾ 3,9¾ 7,6¾ 23,5¾ 0,5¾ 14,4¾ 2,3¾ 15,0¾ 18,4¾ 0,7¾ 22,1¾ 7,3¾ 3,1¾ 12,7¾ 1,0¾ 18,1¾ 2,3¾ 6,9¾ 9,1¾ 0,8¾ 15,3¾ 3,9¾ 3,3¾ 11,6¾ 1,2¾ 23,7¾ 3,8¾ 6,3¾ 6,9¾ 0,6¾ 10,0¾ 0,0¾ 0,0¾ 0,0¾ 0,0¾ 16,6¾ 6,3¾ 11,9¾ 13,3¾ 1,7¾ 17,3¾ 2,3¾ 8,4¾ 11,4¾ 0,7¾ 23,3¾ 1,2¾ 6,4¾ 2,5¾ 1,9¾ 17,1¾ 5,2¾ 11,1¾ 7,6¾ 2,2¾ 25,4¾ 2,2¾ 9,6¾ 7,0¾ 1,1¾ 16,9¾ 12,0¾ 6,6¾ 16,2¾ 0,4¾ 26,3¾ 2,6¾ 8,6¾ 2,0¾ 2,5¾ 19,4¾ 0,3¾ 9,8¾ 0,0¾ 0,3¾
TABELA 2: LISTA DE ESTIRPES E COMPOSIÇÕES OBTIDAS SOB CONDIÇÕES DE RASTREIO PADRÃO PERCENTAGEM DE ÁCIDOS GORDOS TOTAIS Ómega-3 Ómega-6 Estirpe C16:0 C20:4w6 C20:5w3 C22:5w6 C22:5w3 C22:6w3 Outros AG Total Total 16,01 16,71 8,6% 18,41 0,01 2 8
22,5¾ 17,7¾ 31,1¾ 35,1¾ 56B 31,7¾ 22,7¾ 47,4¾ 11,2¾ SX2 33,6¾ 17,8¾ 53,5¾ 10,9¾ 53B 39,3¾ 5,5¾ 54,4¾ 23,3¾ S49 33,9¾ 20,3¾ 44,5¾ 14,4¾ S3 69,9¾ 7,4¾ 73,6¾ 4,2¾ 3A-1 20,9¾ 29,0¾ 34,5¾ 8,4¾ 15A 35,8¾ 33,0¾ 44,3¾ 1,7¾ 9A-1 23,9¾ 26,3¾ 34,3¾ 23,7¾ 51B 20,4¾ 26,5¾ 29,7¾ 27,6¾ 8A-1 28,7¾ 29,2¾ 40,0¾ 10,3¾ 13A-1 28,4¾ 14,8¾ 39,4¾ 29,6¾ 24B-2 40,8¾ 12,4¾ 57,2¾ 13,4¾ 24B-1 56,5¾ 15,5¾ 67,4¾ 1,0¾ 3B 73,4¾ 2,3¾ 78,3¾ 2,3¾ SBG5 22,7¾ 41,3¾ 29,5¾ 8,4¾ 16B 23,9¾ 15,2¾ 32,9¾ 32,9¾ 6A-1 48,9¾ 22,7¾ 59,0¾ 0,3¾ 33B 18,6¾ 7,7¾ 11,4¾ 3,6¾ 4,3¾ 17,8¾ 4,4¾ 16,2¾ 6,4¾ 3,7¾ 16,8¾ 2,7¾ 13,8¾ 20,5¾ 1,4¾ 20,8¾ 8,0¾ 8,9¾ 6,4¾ 1,7¾ 14,8¾ 0,3¾ 3,7¾ 3,9¾ 0,0¾ 28,1¾ 5,2¾ 12,7¾ 3,2¾ 0,9¾ 20,9¾ 0,7¾ 8,5¾ 1,0¾ 0,0¾ 15,7¾ 10,2¾ 8,8¾ 13,4¾ 1,5¾ 16,2¾ 11,2¾ 7,8¾ 16,4¾ 1,5¾ 20,5¾ 5,5¾ 8,6¾ 4,8¾ 2,7¾ 16,1¾ 13,6¾ 11,1¾ 16,0¾ 0,0¾ 16,9¾ 7,3¾ 16,4¾ 6,1¾ 0,0¾ 16,2¾ 0,0¾ 10,9¾ 1,0¾ 0,0¾ 17,0¾ 0,0¾ 5,0¾ 2,3¾ 0,0¾ 20,8¾ 4,5¾ 5,8¾ 3,8¾ 1,0¾ 19,0¾ 14,0¾ 8,3¾ 18,9¾ 0,7¾ 18,0¾ 0,3¾ 10,1¾ 0,0¾ 0,0¾
TABELA 2: LISTA DE ESTIRPES E COMPOSIÇÕES OBTIDAS SOB CONDIÇÕES DE RASTREIO PADRÃO PERCENTAGEM DE ÁCIDOS GORDOS TOTAIS Ómega-3 Ómega-6 Estirpe 016:0 020:4w6 020:5w3 C22:5w6 C22:5w3 022:6w3Outros AG Total Total 16,7¾ 5,5¾ 14,8¾ 8,5¾ 1,7¾ 2 9
31,8¾ 21,0¾ 48,3¾ 13,9¾ B40 62,3¾ 6,9¾ 74,9¾ 3,1¾ 28A 22,1¾ 12,9¾ 30,2¾ 39,0¾ 43B 61,2¾ 15,8¾ 64,6¾ 2,7¾ 1A-1 53,7¾ 4,9¾ 65,9¾ 13,6¾ D41-2 68,4¾ 6,7¾ 72,2¾ 4,6¾ 56B 66,4¾ 3,8¾ 78,3¾ 3,4¾ 46A 66,3¾ 10,4¾ 68,7¾ 3,3¾ 15A-1 53,2¾ 17,1¾ 57,9¾ 0,0¾ 13A 32,3¾ 15,3¾ 41,6¾ 27,0¾ 37B 38,9¾ 15,6¾ 52,1¾ 15,9¾ 43B 30,5¾ 12,5¾ 43,3¾ 28,1¾ 17B 67,0¾ 4,1¾ 78,6¾ 3,6¾ 27A 21,7¾ 13,7¾ 30,1¾ 38,1¾ 46B 43,5¾ 9,9¾ 67,3¾ 1,4¾ ATCC20890 68,2¾ 9,1¾ 68,8¾ 4,4¾ 5A 25,6¾ 12,4¾ 35,2¾ 34,8¾ 28B-2 64,7¾ 5,5¾ 77,9¾ 2,6¾ 27B 30,2¾ 28,1¾ 48,5¾ 4,0¾ 49B 63,0¾ 9,6¾ 69,8¾ 3,4¾ 18B 37,2¾ 4,4¾ 51,6¾ 29,5¾ S49-2 36,7¾ 7,8¾ 52,4¾ 23,7¾ 20B 30,2¾ 23,5¾ 47,3¾ 11,9¾ 8B 59,9¾ 6,5¾ 12,2¾ 9,8¾ 13B 59,7¾ 10,8¾ 70,4¾ 2,2¾ 26A 38,7¾ 4,7¾ 52,2¾ 27,1¾ S42 60,2¾ 11,5¾ 72,3¾ 0,6¾ 35B 15,0¾ 1,0¾ 11,7¾ 2,1¾ 0,9¾ 17,8¾ 18,5¾ 8,n 20,5¾ 0,0¾ 16,9¾ 0,0¾ 3,4¾ 2,7¾ 0,0¾ 15,6¾ 2,7¾ 11,4¾ 10,9¾ 0,8¾ 16,5¾ 0,7¾ 3,9¾ 3,9¾ 0,0¾ 14,4¾ 0,9¾ 10,9¾ 2,5¾ 1,0¾ 17,6¾ 0,0¾ 2,4¾ 3,3¾ 0,0¾ 25,0¾ 0,0¾ 3,3¾ 0,0¾ 1,4¾ 16,1¾ 13,4¾ 9,3¾ 13,6¾ 0,0¾ 16,5¾ 9,1¾ 13,2¾ 6,7¾ 0,0¾ 16,1¾ 12,4¾ 12,0¾ 15,7¾ 0,8¾ 13,8¾ 0,8¾ 11,5¾ 2,8¾ 0,0¾ 17,5¾ 18,6¾ 9,0¾ 19,5¾ 0,0¾ 21,4¾ 1,4¾ 18,9¾ 0,0¾ 5,0¾ 17,7¾ 0,0¾ 0,6¾ 4,4¾ 0,0¾ 17,6¾ 16,0¾ 9,6¾ 18,8¾ 0,0¾ 14,0¾ 0,9¾ 13,2¾ 1,6¾ 0,0¾ 19,5¾ 2,9¾ 16,6¾ 1,1¾ 1,6¾ 17,2¾ 0,7¾ 6,8¾ 2,7¾ 0,0¾ 14,4¾ 3,5¾ 13,5¾ 26,0¾ 1,0¾ 16,1¾ 2,2¾ 15,7¾ 21,6¾ 0,0¾ 17,3¾ 4,7¾ 14,3¾ 7,2¾ 2,9¾ 11,5¾ 3,3¾ 11,3¾ 6,5¾ i,n 16,6¾ 0,7¾ 10,7¾ 1,6¾ 0,0¾ 16,1¾ 3,3¾ 13,5¾ 23,8¾ 0,0¾ 15,6¾ 0,6¾ 12,1¾ 0,0¾ 0,0¾
TABELA 2: LISTA DE ESTIRPES E COMPOSIÇÕES OBTIDAS SOB CONDIÇÕES DE RASTREIO PADRÃO PERCENTAGEM DE ÁCIDOS GORDOS TOTAIS Ómega-3 Ómega-6 Estirpe C16:0 C20:4w6 C20:5w3 C22:5w6 C22:5w3 C22:6w3 Outros AG Totais Totais 3 Ο 19,5¾ 0,0¾ 1,4¾ 3,4¾ 0,0¾ 18,9¾ 3,5¾ 12,7¾ 25,0¾ 0,0¾ 25,2¾ 3,3¾ 9,3¾ 21,8¾ 0,0¾ 17,6¾ 11,1¾ 13,2¾ 14,1¾ 1,3¾ 19,9¾ 0,0¾ 5,5¾ 1,9¾ 0,0¾ 15,4¾ 3,1¾ 13,2¾ 26,1¾ 0,0¾ 18,9¾ 0,7¾ 11,6¾ 0,0¾ 0,0¾ 14,1¾ 1,1¾ 12,4¾ 2,0¾ 0,0¾ 22,2¾ 16,2¾ 6,3¾ 17,7¾ 0,0¾ 16,0¾ 1,0¾ 4,5¾ 0,0¾ 0,0¾ 17,0¾ 4,3¾ 12,4¾ 29,8¾ 0,0¾ 15,4¾ 4,3¾ 8,7¾ 13,2¾ 0,0¾ 14,2¾ 3,1¾ 12,0¾ 20,0¾ 1,1¾ 16,8¾ 14,6¾ 10,1¾ 16,0¾ 0,6¾ 23,2¾ 1,9¾ 8,3¾ 1,1¾ 2,3¾ 24,6¾ 15,8¾ 8,7¾ 16,0¾ 0,0¾ 15,5¾ 0,0¾ 1,3¾ 2,9¾ 0,0¾ 18,4¾ 1,0¾ 5,0¾ 3,0¾ 0,0¾ 18,6¾ 15,3¾ 9,4¾ 18,0¾ 0,0¾ 23,5¾ 13,1¾ 7,3¾ 17,9¾ 0,0¾ 13,3¾ 1,1¾ 14,5¾ 0,9¾ 0,0¾ 22,9¾ 2,4¾ 10,3¾ 21,5¾ 0,0¾ 16,8¾ 1,0¾ 9,7¾ 2,7¾ 0,0¾ 0,4¾ 8,5¾ 14,1¾ 10,2¾ 2,1¾
66,6¾ 9 ,n 68,0¾ 3,4¾ 42A 35,0¾ 5,0¾ 47,6¾ 28,5¾ 40A 30,3¾ 10,1¾ 39,6¾ 25,1¾ S50C 28,7¾ 14,0¾ 43,2¾ 25,2¾ 59A 66,8¾ 6,0¾ 72,3¾ 1,9¾ SBG9 35,8¾ 6,5¾ 49,1¾ 29,1¾ 21B 59,1¾ 9,7¾ 70,7¾ 0,7¾ 2B 65,2¾ 5,2¾ 77,6¾ 3,1¾ 1B 18,1¾ 19,5¾ 24,4¾ 33,8¾ 55B 69,5¾ 9,0¾ 74,0¾ 1,0¾ 3A 34,0¾ 2,5¾ 46,4¾ 34,1¾ 9B 53,2¾ 5,1¾ 62,0¾ 17,5¾ U24 35,2¾ 14,3¾ 48,3¾ 23,2¾ U28 27,7¾ 14,0¾ 38,5¾ 30,7¾ 28B-1 22,7¾ 40,4¾ 33,3¾ 3,0¾ 44B 15,3¾ 19,6¾ 24,0¾ 31,8¾ 54B 72,7¾ 7,6¾ 74,0¾ 2,9¾ 55A 66,2¾ 6,4¾ 71,3¾ 3,9¾ 49A 27,3¾ 11,4¾ 36,7¾ 33,3¾ 51A 26,7¾ 11,4¾ 34,0¾ 31,0¾ 14A-1 64,6¾ 5,6¾ 79,1¾ 2,0¾ 25B 26,5¾ 16,4¾ 36,9¾ 23,9¾ 41A 58,3¾ 11,5¾ 68,0¾ 3,7¾ 24A 27,6¾ 37,0¾ 43,8¾ 18,8¾ 61A τ ε
TABELA 2: LISTA DE ESTIRPES E COMPOSIÇÕES OBTIDAS SOB CONDIÇÕES DE RASTREIO PADRÃO PERCENTAGEM DE ÁCIDOS GORDOS TOTAIS Ómega-3 Ómega-6 Estirpe C16:0 C20:4w6 C20:5w3 C22:5w6 C22:5w3 C22:6w30utros AG Total Total 30,5¾ 0,0¾ 7,1¾ 0,0¾ 0,0¾ 0,6¾ 61,8¾ 7,7¾ 0,0¾ BRBG 18,2¾ 14,9¾ 8,3¾ 18,7¾ 0,0¾ 24,4¾ 15,5¾ 32,7¾ 33,6¾ 17A 17,4¾ 2,0¾ 9,3¾ 2,8¾ 0,0¾ 55,7¾ 12,7¾ 65,0¾ 4,9¾ 60A 14,1¾ 0,8¾ 13,0¾ 1,2¾ 0,0¾ 67,8¾ 3,1¾ 80,8¾ 2,0¾ 26B 17,8¾ 5,0¾ 6,9¾ 15,0¾ 1,5¾ 47,4¾ 6,4¾ 55,8¾ 20,0¾ ATCC20888 16,0¾ 0,0¾ 1,8¾ 2,0¾ 0,0¾ 70,8¾ 9,4¾ 72,6¾ 2,0¾ 2A 24,6¾ 0,0¾ 4,0¾ 0,0¾ 0,0¾ 49,4¾ 22,0¾ 53,4¾ 0,0¾ 44A 17,4¾ 1,8¾ 0,0¾ 2,9¾ 0,0¾ 55,3¾ 23,3¾ 55,3¾ 4,6¾ 14A 23,3¾ 1,3¾ 4,6¾ 0,0¾ 0,0¾ 12,6¾ 58,U 17,3¾ 1,3¾ 41B 19,3¾ 0,0¾ i,n 3,8¾ 0,0¾ 66,6¾ 9,1¾ 67,8¾ 3,8¾ 66A 18,6¾ 15,6¾ 8,3¾ 17,1¾ 1,1¾ 24,6¾ 14,8¾ 33,9¾ 32,7¾ 11A 19,6¾ 5,1¾ 10,1¾ 27,2¾ 0,0¾ 27,5¾ 10,6¾ 37,5¾ 32,3¾ 2X 15,7¾ 2,4¾ 14,0¾ 25,7¾ 0,0¾ 36,7¾ 5,4¾ 50,8¾ 28,1¾ 33A 14,6¾ 1,5¾ 13,5¾ 0,0¾ 0,0¾ 66,0¾ 4,3¾ 79,5¾ 1,5¾ ATCC20892
ESTIRPES ANTERIORES PERCENTAGEM DE ÁCIDOS GORDOS TOTAIS Ómega-3 Ómega-6 Estirpe C16:0 C20:4w6 C20:5w3C22:5w6 C22:5w3 C22:6w30utros AG Total Total 15,7¾ 3,9¾ 3,7¾ 8,1¾ 0,0¾ o\o 1-0 LO 13,5¾ ©\® oo co LO 12,0 ATCC34304 28,2¾ 1,6¾ 6,9¾ 11,4¾ 0,0¾ 17,8¾ 34,n 24,7¾ 12,9¾ ATCC24473 15,2¾ 2,9¾ 7,7¾ 9,8¾ 0,6¾ 54,6¾ 9,2¾ 62,9¾ 12,7¾ ATCC28211 23,2¾ 10,7¾ 4,3¾ 12,6¾ 1,5¾ 20,6¾ 27,0¾ 26,4¾ 23,4¾ ATCC28209 13,2¾ 6,3¾ 6,9¾ 4,3¾ 0,0¾ 60,1¾ 9,1¾ 67,0¾ 10,6¾ ATCC28110 TABELA 3: COMPOSIÇÃO DA FRACÇÃO DE ÁCIDOS GORDOS ÓMEGA 3 3 2
EPA C20:5w3 DPA C22:5w3 DHA C22:6w3 Estirpe EPA C20:5w3 DPA C22:5w3 DHA C22:6w3 Estirpe 44,0¾ 1,1¾ 54,9¾ 21 19,8¾ 5,8¾ 74,4¾ 18A 4,6¾ 0,9¾ 94,5¾ ATCC20889 20,1¾ 0,7¾ 79,2¾ 32B 19,3¾ 0,7¾ 80,0¾ U40-2 27,8¾ 0,0¾ 72,2¾ 56B 31,9¾ 0,0¾ 68,1¾ 21B 24,1¾ 9,1¾ 66,9¾ SX2 37,9¾ 0,0¾ 12,1¾ BRBG1 39,3¾ 6,9¾ 62,8¾ 53B 12,5¾ 6,1¾ 81,5¾ 56A 25,3¾ 2,5¾ 72,2¾ S49 17,0¾ 3,7¾ 79,3¾ 11A-1 19,9¾ 3,8¾ 76,3¾ S3 24,9¾ 4,3¾ 70,8¾ 4A-1 5,0¾ 0,0¾ 95,0¾ 3A-1 24,4¾ 8,4¾ 67,2¾ 17B 36,9¾ 2,6¾ 60,5¾ 15A 12,2¾ 1,5¾ 86,3¾ ATCC20891 19,3¾ 0,0¾ 80,7¾ 9A-1 25,1¾ 1,7¾ 73,2¾ S44 25,8¾ 4,4¾ 69,8¾ 51B 25,2¾ 1,1¾ 73,7¾ U30 26,3¾ 5,0¾ 68,7¾ 8A-1 16,2¾ 5,4¾ 78,4¾ 59A 21,6¾ 6,7¾ 71,7¾ 13A-1 11,5¾ 1,4¾ 87,1¾ U37-2 28,0¾ 0,0¾ 72,0¾ 24B-2 14,0¾ 1,9¾ 84,2¾ S50W 28,7¾ 0,0¾ 71,3¾ 24B-1 12,7¾ 1,3¾ 86,0¾ ATCC20891 16,2¾ 0,0¾ 83,8¾ 3B — — — UX 6,3¾ 0,0¾ 93,7¾ SBG5 21,0¾ 2,9¾ 76,1¾ LWN9 19,7¾ 3,3¾ 77,0¾ 16B 13,4¾ 1,0¾ 85,6¾ C32-2 25,2¾ 2,n 72,6¾ 6A-1 15,0¾ 4,3¾ 80,7¾ 5A-1 17,1¾ 0,0¾ 82,9¾ 33B 27,4¾ 5,4¾ 67,2¾ BRBG1 30,5¾ 3,6¾ 65,9¾ B40 17,0¾ 1,9¾ 81,1¾ U3 15,6¾ 1,2¾ 83,1¾ 28A 20,5¾ 1,3¾ 78,2¾ 55B TABELA 3: COMPOSIÇÃO DA FRACÇÃO DE ÁCIDOS GORDOS ÓMEGA-3 3 3
EPA C20:5w3 DPA C22:5w3 DIIA C22:6w3 Estirpe EPA C20:5w3 DPA C22:5w3 DHA C22:6w3 Estirpe 26,8¾ 0,0¾ 73,2¾ 43B 26,6¾ 0,0¾ 73,4¾ 40A 5,2¾ 0,0¾ 94,8¾ 1A-1 23,4¾ 0,0¾ 76,6¾ S50C 17,4¾ 1,2¾ 81,5¾ U41-2 30,6¾ 2,9¾ 66,4¾ 59A 5,4¾ 0,0¾ 94,6¾ 56B 7,6¾ 0,0¾ 92,4¾ SBG9 13,9¾ 1,3¾ 84,8¾ 46A 27,0¾ 0,0¾ 73,0¾ 2IB 3,5¾ 0,0¾ 96,5¾ 15A-1 16,4¾ 0,0¾ 83,6¾ 2B 5,8¾ 2,4¾ 91,8¾ 13A 15,9¾ 0,0¾ 84,1¾ 1B 22,3¾ 0,0¾ 77,7¾ 37B 25,9¾ 0,0¾ 74,1¾ 55B 25,4¾ 0,0¾ 74,6¾ 43B 6,0¾ 0,0¾ 94,0¾ 3A 27,7¾ 1,9¾ 70,3¾ 17B 26,7¾ 0,0¾ 73,3¾ 9B 14,7¾ 0,0¾ 85,3¾ 27A 14,1¾ 0,0¾ 85,9¾ U24 29,2¾ 0,0¾ 70,8¾ 46B 24,9¾ 2,2¾ 72,9¾ U28 28,0¾ 7,5¾ 64,5¾ ATCC20890 26,4¾ 1,5¾ 72,1¾ 28B-1 0,9¾ 0,0¾ 99,1¾ 5A 24,6¾ 6,9¾ 68,3¾ 44B 27,3¾ 0,0¾ 72,7¾ 28B-2 36,4¾ 0,0¾ 63,6¾ 54B 16,9¾ 0,0¾ 83,1¾ 27B 1,8¾ 0,0¾ 98,2¾ 55A 34,3¾ 3,4¾ 62,3¾ 49B 7,1¾ 0,0¾ 92,9¾ 49A 9,7¾ 0,0¾ 90,3¾ 18B 25,6¾ 0,0¾ 74,4¾ 51A 26,1¾ 1,9¾ 71,9¾ S49-2 21,5¾ 0,0¾ 78,5¾ 14A-1 29,9¾ 0,0¾ 70,1¾ 20B 18,4¾ 0,0¾ 81,6¾ 25B 30,1¾ 6,2¾ 63,7¾ 8B 28,1¾ 0,0¾ 71,9¾ 41A 15,6¾ 1,5¾ 82,9¾ 13B 14,3¾ 0,0¾ 85,7¾ 24A 15,2¾ 0,0¾ 84,8¾ 26A 32,3¾ 4,8¾ 63,0¾ 61A 25,9¾ 0,0¾ 74,1¾ S42 91,6¾ 0,0¾ 8,4¾ BRBG 16,7¾ 0,0¾ 83,3¾ 35B 2,1¾ 0,0¾ 97,9¾ 42A TABELA 3: COMPOSIÇÃO DA FRACÇÃO DE ÁCIDOS GORDOS ÓMEGA-3 EPA C20:5w3 DPA C22:5w3 DHA C22:6w3 Estirpe 25, 5% 0,0% 74,5% 17A 14, 4% 0,0% 85,6% 60A 16, 1% 0,0% 83,9% 26B 12, 4% 2, 7% 84, 9% ATCC20888 2,5% 0,0% 97,5% 2A 7, 5% 0,0% 92,5% 44A 0, 0% 0,0% 100,0% 14A 26, 7% 0,0% 73,3% 41B 1, 7% 0,0% 98,3% 66A 24, 5% 3,1% 72,4% 11A 26, 8% 0,0% 73,2% 2X 27, 6% 0,0% 72,4% 33A 17, 0% 0,0% 83,0% ATCC20892 ESTIRPES ANTERIORES EPA DPA DHA Estirpe C20:5w3 C22:5w3 C22:6w3 6, 4% 0,0% 93,6% ATCC34304 27, 9% 0,0% 72,1% ATCC24473 12,2% 1,0% 86,8% ATCC28211 16, 4% 5,6% 78,1% ATCC28209 10,3% 0,0% 89, 7% ATCC28210 34 A Fig. 1 ilustra o conjunto de estirpes, isoladas pelo método do Exemplo 1, que possuem mais de 6 7% de ácidos gordos ómega-3 (em % dos ácidos gordos totais) e menos de 10,6% de ácidos gordos ómega-6 (em % dos ácidos gordos totais). Todas as estirpes conhecidas anteriormente tinham menos de 67% de ácidos gordos ómega-3 (em % dos ácidos gordos totais) e mais de 10,6% de ómega-6 (em % dos ácidos gordos totais). A Fig. 2 ilustra o conjunto de estirpes isoladas pelo método do Exemplo 1 que possuem mais de 6 7% de ácidos gordos ómega-3 (em % dos ácidos gordos totais) e mais de 7,5% em C20:5n-3 (em % dos ácidos gordos totais) . Todas as estirpes conhecidas anteriormente tinham menos de 67% de ácidos gordos ómega-3 (em % dos ácidos gordos totais) e menos de 7,8% de C20:5n-3 (em % dos ácidos gordos totais).
Exemplo Preparativo 5. Velocidades de Crescimento Melhoradas das Estirpes Isoladas pelo Método do Exemplo 1 Comparadas com Estirpes da ATCC (Estirpes Conhecidas Anteriormente) Células de Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888), Schizochytrium sp. S8 (ATCC N° 20889), Thraustochytrium sp. S42, Thraustochytrium sp. U42-2, Thraustochytrium sp. S42 e U30 (todas isoladas pelo método do Exemplo 1) e Thraustochytrium aureum (ATCC N° 28211) e Schizochytrium aggregatum (ATCC N° 28209) (estirpes conhecidas anteriormente) foram retiradas do meio sólido F-l e colocadas em 50 mL de meio M-5. O pH da solução foi acertado a 7,0 e a solução foi esterilizada por filtração. Após 3 dias de crescimento num agitador rotativo (200 rpm, 27 °C), 1-2 mL de cada cultura foram transferidos para 35 outro frasco de meio M-5 e colocadas no agitador durante 2 dias. As culturas (1-2 mL) foram então transferidas para outro frasco de meio M-5 e colocadas no agitador durante 1 dia. Este processo garantiu que todas as culturas estavam na fase exponencial de crescimento. Estas últimas culturas foram então usadas para inocular dois frascos de 250 mL de meio M-5 para cada estirpe. Estes frascos foram então colocados em agitadores a 25 °C e 30 °C e foram monitorizadas as mudanças na sua densidade óptica num espectrof otómetro Beckman DB-G (660 nm, 1 cm de percurso óptico). As leituras de densidade óptica foram realizadas aos seguintes intervalos de tempo: 0, 6, 10, 14, 17,25, 20,25 e 22,75 horas. As velocidades de crescimento exponencial (duplicações/dia) foram então calculadas a partir das leituras de densidade óptica pelo método de Sorokin (1973) . Os resultados são apresentados na Tabela 4 e ilustrados (normalizados ao crescimento da estirpe U30 a 25 °C) na Fig. 4. Os resultados indicam que as estirpes isoladas pelo método no Exemplo 1 têm velocidades de crescimento muito mais elevadas que as estirpe da ATCC conhecidas anteriormente, a 25 °C e a 30 °C, mesmo aos niveis optimizados de fosfato essenciais para crescimento continuo. As estirpes de Thraustochytriales isoladas das águas frias do Antárctico não apresentaram crescimento a 30 °C. 36
Tabela 4. Velocidade de Crescimento Exponencial (duplicaçoes/dia)
Estirpe 25 °C OJ O o O S31* (ATCC N°. 20888) 8,5 9,4 U40-2* 5,8 6,0 S8* (ATCC N°. 20889) 7,1 00 00 S42* 6,6 00 00 U30* 5,5 7,3 28209** 4,6 5,0 28210** 3,5 4,5 28211** 4,2 5,7 34304** 2,7 3,7 24473** 4,6 5,3 * estirpe isolada pelo método do Exemplo 1 ** estirpe ATCC conhecida anteriormente Exemplo Preparativo 6. Caracteristicas de Produção Melhoradas (Crescimento e Indução de Lipidos) de Estirpes Isoladas pelo Método do Exemplo 1 Comparadas com Estirpes ATCC (Estirpes Anteriores da Literatura) Células de Schizochytrium Schizochytrium sp. S8 (ATCC N° sp. S31 (ATCC 20889) (ambas N° 20888), isoladas pelo método do Exemplo 1) e Thraustochytrium aureum (ATCC N° 28211) e Schizochytrium aggregatum (ATCC N° 28209) (estirpes conhecidas anteriormente) foram retiradas do meio sólido F-l e colocadas em 37 50 mL de meio M-5 (ver exemplo 3) . O pH da solução foi acertado a 7,0 e a solução foi esterilizada por filtração. Após 3 dias de crescimento num agitador rotativo (200 rpm, 27 °C), 1-2 mL de cada cultura foram transferidos para outro frasco de meio M-5 e colocadas no agitador durante 2 dias. Os pesos secos livres de cinzas para cada uma destas culturas foram então rapidamente determinados e, de seguida, foram pipetados 3,29 mg de cada cultura para dois frascos erlenmeyers de 250 mL contendo 50 mL de meio M-5. estes frascos foram colocados num agitador rotativo (200 rpm, 27 °C) Após 24 horas, alíquotas de 20 mL de cada cultura foram então centrifugadas, os sobrenadantes foram rejeitados e as células foram transferidas para frascos erlenmeyer de 250 mL, contendo 50 mL de meio M-5 sem qualquer glutamato (fonte de N) . Os frascos foram novamente colocados no agitador e, após outras 12 horas, foram retiradas amostras para determinar os pesos secos livres de cinzas e quantificar o teor em ácidos gordos pelo método de Lepage e Roy (1984) . Os resultados estão ilustrados (normalizados aos rendimentos da ATCC N° 28211, estirpe conhecida anteriormente) na Fig. 5. Os resultados indicam que as estirpes isoladas pelo método do
Exemplo 1 produziram 2-3 vezes mais peso seco livre de cinzas no mesmo periodo de tempo, sob uma combinação de crescimento exponencial e limitação de azoto (para indução de lipidos) como as estirpes ATCC conhecidas da literatura. Além disso, foram obtidos maiores rendimentos de ácidos gordos totais e de ácido gordos ómega-3 nas estirpes da presente invenção com as estirpes S31 (ATCC N° 20888) a produzirem 3-4 vezes mais ácidos gordos ómega-3 do que as estirpes ATCC conhecidas da literatura. 38
Exemplo Preparativo 7. Baixa Tolerância à Salinidade e Produção de Ácidos Gordos Melhoradas por Estirpes Isoladas pelo Método do Exemplo 1
Estirpes de 4 espécies de Thraustochytrids, Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888) e Thraustochytrium sp. U42-2 (ATCC N° 20891) (ambas isoladas e despistadas pelo método do Exemplo 1) e S. aggregatum (ATCC N° 28209) e T. aureum (ATCC N° 28210) (obtidas da American Type Culture Collection) foram retiradas do meio sólido F-l e incubadas durante 3-4 dias a 27 °C num agitador rotativo (200 rpm). Uma gama de meios de diferentes salinidades foi preparada realizando as seguintes diluições dos sais do meio M (NaCl, 25 g/L; MgS04.7H20, 5 g/L; KC1, 1 g/L;
CaCl2, 200 mg/L): 1) 100% (p/v sais do meio M); 2) 80% (v/v) meio M, 20% (v/v) água destilada; 3) 60% (v/v) meio M, 40% (v/v) água destilada; 4) 40% (v/v) meio M, 60% (v/v) água destilada; 5) 20% (v/v) meio M, 80% (v/v) água destilada; 6) 15% (v/v) meio M, 85% (v/v) água destilada; 7) 10% (v/v) meio M, 90% (v/v) água destilada; 8) 7% (v/v) meio M, 93% (v/v) água destilada; 9) 3% (v/v) meio M, 97% (v/v) água destilada; 10) 1,5% (v/v) meio M, 98,5% (v/v) água destilada. Foram adicionados os seguintes nutrientes aos tratamentos (por litro): glucose, 5 g; glutamato, 5 g; extracto de levedura, 1 g; (NH4)2S04, 200 mg; NaHC03, 200 mg; metais PII, 5 mL; solução Vitaminas-A, 1 mL; e solução de antibióticos, 2 mL. Cinquenta mL de cada um destes tratamentos foram inoculados com 1 mL das células em crescimento no meio F-l. Estas culturas foram colocadas num agitador orbital (200 rpm) e mantida a 27 °C durante 48 h. As células foram recolhidas por centrifugação e os ácidos gordos totais foram determinados por cromatografia gasosa. Os resultados estão ilustrados na Fig. 6. Thraustochytrium sp. U42-2 (ATCC N° 20891) isolada pelo método do Exemplo 1 pode render quase o dobro da quantidade de 39 ácidos gordos produzidos pela T. aureum (ATCC 28211) e cerca de 8 vezes a quantidade de ácidos gordos produzidos pela S. aggregatum (ATCC 28209). Além disso, U42-2 parece possuir uma tolerância a salinidade mais larga no topo superior da gama de salinidade estudada. Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888), também isolada pelo método do Exemplo 1, apresentou um rendimento em ácidos gordos maior (2,5 a 10 vezes o das estirpes ATCC anteriormente conhecidas) e uma gama muito mais ampla de tolerância a salinidade do que as estirpes ATCC. Além disso, Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888) cresce melhor a salinidades muito baixas. Esta propriedade fornece uma forte vantagem económica quando se considera a produção comercial, quer por causa dos efeitos corrosivos das águas salinas nos reactores metálicos, quer por causa dos problemas associados com a eliminação das águas salinas.
Exemplo Preparativo 8. Cultura/Baixa Salinidade
Cinquenta mililitros de meio de cultura M/10-5, num frasco erlenmeyer de 250 mL, foram inoculados com uma colónia de
Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888) retiradas de uma cultura em plano inclinado de ágar. O meio M/10-5 contém: 1000 mL de água desionizada, 2,5 g de NaCl, 0,5 g de MgS04.7H20, 0,1 g de KC1, 0,02 g de CaCl2, 1,0 g de KH2P04, 1,0 g de extracto de levedura, 5,0 g de glucose, 5,0 g de ácidos glutâmicos, 0,2 g de NaHCCb, 5 mL de metais vestigiários PII, 2 mL de mistura vitaminica e 2 mL de mistura de antibióticos. A cultura foi incubada a 30 °C num agitador rotativo (200 rpm) . Após 2 dias a cultura estava a uma densidade moderada e em crescimento activo. Foram utilizados 20 mL desta cultura em crescimento activo para inocular um fermentador de 2 litros contendo 1700 mL do mesmo 40 meio de cultura excepto que a concentração de glucose e de glutamato tinha sido aumentada para 40 g/L (meio M/10-40). O fermentador foi mantido a 30 °C, com arejamento a 1 vol/min e agitação a 300 rpm. Após 48 h, a concentração de células no fermentador era de 21,7 g/L. As células foram recolhidas por centrifugação, liofilizadas e guardadas em sob N2. O teor em ácidos gordos totais e o teor em ácidos gordos ómega-3 foram determinados por cromatografia gasosa. O teor em ácidos gordos totais do produto final foi 39% peso seco livre de cinzas. O teor em HUFA ómega 3 (C20:5n-3, C22:5n-3 e C22:6n-3) do produto microbiano foi 25,6% do teor de ácidos gordos totais. A teor em cinzas da amostra foi 7%.
Exemplo Preparativo 9. Diversidade do Teor em Ácidos Gordos O crescimento e a análise da produção de ácidos gordos por várias estirpes, como descrito no Exemplo 4, revelou diferenças na diversidade de ácidos gordos. As estirpes da presente invenção sintetizaram menos ácidos gordos diferentes do que as estirpes disponíveis anteriormente. Uma diversidade mais baixa em ácidos gordos é vantajosa na purificação dos ácidos gordos, uma vez que há menos impurezas a serem separadas. Para os objectivos de suplemento alimentar, menos ácidos gordos diferentes é vantajoso porque a probabilidade de ingestão de ácidos gordos indesejados é reduzida. A Tabela 5 apresenta o número de HUFA diferentes presentes, a concentrações maiores que 1% por peso dos ácidos gordos totais para as estirpes conhecidas anteriormente, referidas pelo número ATCC e de várias estirpes da presente invenção. 41
Tabela 5.
Estirpe N° de ácidos gordos diferentes, a 1% ou % maior de ácidos gordos totais 34304** 8 28211** 8 24473** 10 28209** 13 28210** 8 S31* 5 S8* 6 79B* 6 * estirpe isolada pelo método do Exemplo 1 ** estirpe ATCC conhecida anteriormente
Exemplo Preparativo 10. Recuperação
Cinquenta mililitros de meio de cultura M5 num frasco erlenmeyer de 250 mL foram inoculados com uma colónia de Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888) retiradas de uma cultura em plano inclinado de ágar. A cultura foi incubada a 30 °C num agitador rotativo (200 rpm). Após 2 dias, a cultura estava a uma densidade moderada e em crescimento activo. Foram utilizados 20 mL desta cultura em crescimento activo para inocular um fermentador de 1 litros contendo 1000 mL do mesmo meio de cultura excepto que a concentração de glucose e de glutamato tinha sido aumentada para 40 g/L (meio M20) . O fermentador foi mantido a 30 °C e pH 7,4, com arejamento a 1 vol/min e agitação a 400 rpm. Após 48 h, a concentração de células no fermentador era de 18,5 g/L. O arejamento e a agitação foram desligados. Em 2-4 minutos, as células flocularam e acumularam-se nos 250 mL do 42 fundo do fermentador. Esta zona concentrada de células tinha uma concentração celular de 72 g/L, Esta zona de células pode extraída do fermentador por sifão, e: (1) transferida para outro reactor para um período de limitação de azoto (e.g., combinando a produção altamente concentrada de vários fermentadores) ; ou (2) recolhida directamente por centrifugação ou filtração. Ao pré-concentrar as células desta forma, 60-80% menos de água tem de ser processada para recuperar as células.
Exemplo Preparativo 11. Utilização de uma Variedade de Fontes de Carbono e Azoto
Cinquenta mililitros de meio de cultura M5, num frasco erlenmeyer de 250 mL, foram inoculados com uma colónia de Schizochytrium sp. S31 (ATCC N° 20888) ou Thraustochytrium sp. U42-2 (ATCC N° 20891) retirada de uma cultura em plano inclinado de ágar. O meio M5 foi descrito no Exemplo 3 excepto para a adição de 2 mL de mistura de vitaminas e 2 mL de mistura de antibióticos. A cultura foi incubada a 30 °C num agitador rotativo (200 rpm). Após 2 dias, a cultura estava a uma densidade moderada e em crescimento activo. Esta cultura foi usada para inocular frascos de meio M5 com um dos seguintes substitutos para a glucose (a 5 g/L): dextrina, sorbitol, frutose, lactose, maltose, sacarose, amido de milho, amido de trigo, amido de batata, milho moído; ou um dos seguintes substitutos para o glutamato (a 5 g/L): gelisato, peptona, triptona, caseína, licor de maceração de milho, ureia, nitrato, amónio, soro de leite coalhado ou farinha de glúten de milho. As culturas foram incubadas durante 48 horas num agitador rotativo (200 rpm, 27 °C) . As densidades relativas de cultura, 43 representando o crescimento nos diferentes substratos orgânicos, estão ilustradas nas Tabelas 6-7.
Tabela 6. Utilização de Fontes de Azoto
Fonte de N Estirpes
Thraustochytrium Schizochytrium sp . U42-2 sp. S31 ATCC N° 20891 ATCC N° 20888 glutamato + + + + + + gelisato + + + + + + peptona + + + + triptona + + + + caseina + + + + licor de maceração de milho + + + + + + ureia + + + nitrato + + + + + amónio + + + + soro de leite coalhado + + + + + + farinha de glúten de milho + + + + + + +++ = crescimento elevado ++ = crescimento médio + = crescimento baixo 0 = sem crescimento 44
Tabela 7. Utilização de Fontes de Carbono Orgânico
Fonte de C Estirpes
Thraustochytri um sp. U42-2 ATCC N° 20891 Schizochytrium sp. S31 ATCC N° 20888 glucose +++ +++ dextrina +++ +++ sorbitol + + frutose + +++ lactose + + maltose +++ + sacarose + + amido de milho +++ + amido de trigo +++ + amido de batata +++ + milho moído + + + 0 +++ = crescimento elevado ++ = crescimento médio + = crescimento baixo 0 = sem crescimento
Exemplo Preparativo 12. Alimentação do Camarão das Salinas com Suplemento Alimentar Baseado em Thraustochytrid para Aumentar o seu Teor em HUFA ómeqa-3
Biomassa celular de Thraustochytrium sp. 12B (ATCC 20890) foi produzida em frascos de agitação em meio M-5 (ver Exemplo 3) a 25 °C. A biomassa celular de Thraustochytrium sp. S31 (ATCC 20888) foi produzida em frascos de agitação em meio M/10-5 (ver Exemplo 8) a 27 °C. As células de cada estirpe foram recolhidas 45 por centrifugação. 0 sedimento foi lavado uma vez com água destilada e recentrifugado para produzir uma pasta sólida a 50%. A pasta resultante foi ressuspensa em água do mar e, de seguida, adicionada a uma cultura adulta de camarão das salinas como uma suplemento alimentar. O camarão das salinas tinha sido previamente criado em produtos excedentes da agricultura e, como resultado, o seu teor em HUFA ómega-3 foi muito baixo, apenas 1,3 a 2,3% dos ácidos gordos totais (o camarão das salinas de crescimento selvagem tem um teor médio de HUFA ómega-3 de 6-8% dos ácidos gordos totais) . O camarão das salinas (2-3/ml) foi mantido numa proveta de 1 litro cheia com água do mar e utilizou-se uma pedra de arejamento para arejar e misturar a cultura. Após a adição do suplemento alimentar, foram periodicamente recolhidas amostras do camarão das salinas, lavadas e o seu teor em ácidos gordos foi determinado por cromatografia gasosa. Os resultados estão ilustrados nas Fig. 7 e 8. Quando o suplemento alimentar baseado em Thraustochytrid é dado como alimentação final, o teor em ómega-3 do camarão das salinas pode ser aumentado para valor igual ao do camarão das salinas de crescimento selvagem em 5 horas, se dado como alimento à estirpe 12B, ou em 11 horas, se dado como alimento à estirpe S31. O teor em HUFA ómega-3 do camarão das salinas pode ser muito superior ao do tipo selvagem se alimentado com estes suplementos alimentares durante 24 horas. Em adição, estes suplementos alimentares aumentam muito o teor em ADH do camarão das salinas o qual é apenas relatado em valores vestigiais para o camarão das salinas de crescimento selvagem. 46
Exemplo 13, Utilização do Sulfato de Sódio no Meio de Cultura
Este exemplo demonstra que a produção de ómega-3 e o teor de ácidos gordos não são prejudicados e podem ser os mesmos ou melhores quando se utiliza sulfato de sódio em vez de cloreto de sódio, como o sal de sódio no meio de fermentação.
Schizochytrium ATCC N°. 20888 foi cultivado em meio, pH 7,0, contendo 2,36 grama de sódio por litro de meio, 1,5-3,0 grama de uma fonte de azoto por litro de meio e 3,0 grama de glucose por litro de meio. As células foram incubadas a 28 °C, a 200 rotações por minuto, durante 48 horas. Os resultados são apresentados na Tabela 8. 47
Tabela 8. Efeito do Sulfato de Sódio Comparado com o Cloreto de Sódio no Teor de Ácidos Gordos A) Sal de Na = cloreto de sódio; fonte de N = glutamato de sódio
Fonte de (g/L) N Ómega-3 (% dwt) Ácidos gordos totais (% dwt) Rendimento em biomassa (g/L) 3, 0 6,0 11,2 1, 74 2,5 5, 8 10,8 1, 71 2,0 5, 8 11,0 1,65 1,5 7,5 20,3 1,39 B) Sal de Na = cloreto de sódio; fonte de N = peptona Ácidos gordos Rendimento em Fonte de N Ómega-3 totais biomassa (g/L) (% dwt) (% dwt) (g/L) 3,0 7,9 21,9 1,34 2,5 9, 4 27, 4 1,21 2, 0 6,7 28,9 1,18 1,5 11,1 42,1 1,16 C) Sal de Na = sulfato de sódio; fonte de N = glutamato de sódio Ácidos gordos Rendimento em Fonte de N Ómega-3 totais biomassa (g/L) (% dwt) (% dwt) (g/L) 3,0 9,3 31,9 1,34 2,5 10,1 38,6 1,35 2,0 10,1 41,4 1,30 1,5 9,5 43,6 1,26 48
Como observado na Tabela 8, a produção de ómega-3 e a produção de ácidos gordos totais quando se utiliza o sulfato de sódio é comparável a, ou melhor do que quando se utiliza cloreto de sódio como um sal de sódio.
Exemplo 14. Produção de Schizochytrium em Meio de Cultura de Baixa Salinidade
Este Exemplo ilustra a fermentação de Schizochytrium num meio de cultura de baixa salinidade mantendo-se os rendimentos elevados em biomassa e elevada produção de ómega-3 e ácidos gordos.
Schizochytrium ATCC N° 20888 foi cultivado em meio contendo 3,33 g/L de peptona como fonte de azoto, 5,0 g/L de glucose como fonte de carbono, com concentrações variáveis de sódio. As células foram fermentadas a 30 °C com um inoculo de cerca de 40 mg/L dwt durante um período de 48 horas. O sódio foi fornecido como cloreto de sódio. Os resultados deste estudo estão apresentados na Tabela 9.
Tabela 9. Produção de Schizochytrium em Meio de Cultura de Baixa Salinidade
Rendimento Ácidos Glucose
Cone. Na g/L Cone. Cl g/L em biomassa g/L gordos % dwt Ómega-3 % dwt final g/L 00 00 7,12 1,76+0,60 35,4+1,0 10,2+0,6 0, 00 3, 90 5, 70 1,72±0,67 37,0+0,7 11,1+0,3 0, 15 2, 93 4, 27 1,7010,42 43,0+0,2 12,1+0, 1 0, 22 1, 95 2, 85 1,6610,57 29,810,7 9,310, 1 1, 55 0,98 1, 42 0,4010,61 10,612,4 4,011,0 4, 31 49
Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 9, conseguem-se obter rendimentos em biomassa, produção de ácidos gordos ómega-3 e ácidos gordos totais elevados para concentrações de sódio superiores a cerca de 1,0 g/L.
Exemplo 15. Cultura de Schizochytrium em Meio de Cultura com Baixo Teor em Cloreto
Este Exemplo ilustra a fermentação da microflora da presente invenção a concentrações mínimas de cloreto alcançando simultaneamente rendimentos elevados em biomassa com base na concentração inicial em açúcar.
Schizochytrium ATCC N° 20888 foi cultivado em frascos de agitação a 200 rpm e 28 °C em 50 mL do seguinte meio. 1000 mL de água desionizada; 1,2 g de MgS04.7H20; 0, 067 g de CaCC>3; 3,0 g glucose; 3,0 g de glutamato monossódico; 0,2 g de KH2PO4; 0,4 g extracto de levedura; 5,0 mL metais PII, 1,0 mL de mistura de vitaminas; e 0,1 g de penicilina-G e de sulfato de estreptomicina. A concentração em cloreto foi alterada pela adição de diferentes quantidades de KC1 a cada tratamento. A concentração em potássio em todos os tratamentos foi mantida constante através da adição de citrato de potássio. A concentração em sódio foi de 2,37 g/L ou de 4,0 g/L, através da adição de sulfato de sódio. Os resultados destas fermentações são apresentados abaixo na Tabela 10. 50
Tabela 10. Fermentação de Schízochytrium a Concentrações Mínimas de Cloreto
Na 2,37 g/L Na 4,0 g/L
Cone. Cloreto Rendimento em Biomassa Rendimento em Biomassa (mg/L) (mg/L) (mg/L) 0,1 198 ± 21 158 + 48 7,1 545 + 120 394 + 151 15,1 975 + 21 758 ± 163 30,1 1140 ± 99 930 ± 64 59,1 1713 + 18 1650 + 14 119,1 1863 + 53 1663 ± 46 238,1 1913 ± 11 1643 ± 39
Como pode ser visto a partir dos resultados apresentados na Tabela 10, conseguem-se obter rendimentos elevados em biomassa a baixas concentrações de cloreto. Por exemplo, a uma concentração de mais de 59,1 mg/L, são conseguidos rendimentos superiores a 50%.
Exemplo 16. Variação da Concentração de Sulfato de Sódio a Baixas Concentrações de Cloreto
Este Exemplo ilustra o efeito da variação da concentração de sulfato de sódio a baixa concentração de cloreto.
Schízochytrium ATCC N° 20888 foi cultivado em frascos de agitação a 200 rpm e 28 °C em 50 mL do seguinte meio. 1000 mL de água desionizada; 1,2 g de MgS04.7H20; 0,125 g KC1; 0, 067 g de 51
CaC03; 3,0 g glucose; 3,0 g de glutamato monossódico; 0,2 g de KH2P04; 0,4 g extracto de levedura; 5,0 mL metais PII, 1,0 mL de mistura de vitaminas; e 0,1 g de penicilina-G e de sulfato de estreptomicina. A concentração em sulfato de sódio foi alterada nos vários tratamentos de 3,0 g/L a 30,2 g/L. Os resultados das várias fermentações são apresentados abaixo na Tabela 11.
Tabela 11. Variação da Concentração de Sulfato de Sódio em Baixo Teor em Cloreto
Sulfato de Sódio Rendimento em Biomassa (g/L) (g/L) 3,0 0, 78 6,0 1,13 9,1 1, 72 12,1 1,88 15,1 1,89 22,7 1,91 30,2 1,63
Os resultados apresentados na Tabela 11, documentam que a baixa concentração de cloreto de cerca de 59 mg/L, podem ser obtidos rendimentos elevados em biomassa a partir de glucose superiores a 50%, por selecção de uma concentração de sulfato de sódio apropriada.
Lisboa, 8 de Março de 2010 52

Claims (20)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a cultura de um microrganismo da ordem Thraustochytriales, para a produção de lípidos, o processo compreendendo: a cultura de microrganismos da ordem Thraustochytriales num meio de cultura que compreende uma concentração de cloreto de entre 60 mg/L e menos de 3 grama de cloreto por litro do referido meio de cultura, e que compreende sulfato de sódio, em que o sulfato de sódio proporciona uma concentração de sódio de, pelo menos, 1 g/L e em que o microrganismo tem um teor de esterol de, pelo menos, 0,1% de peso seco livre de cinzas (afdw) e um teor em colesterol de, pelo menos, 15% do teor total de esterol.
  2. 2. Processo da Reivindicação 1, em que o sulfato de sódio proporciona uma concentração na gama de desde 1 g/L a 50 g/L.
  3. 3. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 2, em que o meio de cultura compreende entre 60 mg a 120 mg de cloreto por litro de meio de cultura.
  4. 4. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 3, em que o sulfato de sódio proporciona uma concentração de sódio no intervalo de desde 2 g/L a 25 g/L.
  5. 5. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 4, em que os lípidos compreendem pelo menos um ácido gordo altamente insaturado (HUFA). 1
  6. 6. Processo da reivindicação 5, em que o pelo menos um HUFA é seleccionado do grupo consistindo de D HA, EPA, DPA(n-3) e suas misturas.
  7. 7. Processo da reivindicação 6, em que o pelo menos um HUFA compreende DHA.
  8. 8. Processo de qualquer das reivindicações 1-3 ou 5-7, em que o sulfato de sódio proporciona uma concentração de sódio numa quantidade inferior a 25 g/L.
  9. 9. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 8, em que os microrganismos produzem até 12% do peso seco total de células.
  10. 10. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 9, em que os microrganismos replicam por bipartição sucessiva.
  11. 11. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 9, em que os microrganismos replicam por formação de esporângio e libertação de zoosporos.
  12. 12. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 11, em que o microrganismo é Thraustochytrium, Schizochytrium ou as suas misturas.
  13. 13. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 12, compreendendo a cultura de microrganismo a uma temperatura desde 5 °C a 48 °C e um pH desde ph %,0 a pH 11,0. 2
  14. 14. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 13, em que menos de 25% do sódio no meio de fermentação é fornecido como cloreto de sódio.
  15. 15. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 14, em que o microrganismo tem um tamanho médio de agregado celular inferior a 150 micron de diâmetro.
  16. 16. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 15, em que o microrganismo tem um tamanho médio de agregado celular inferior a 100 micron de diâmetro.
  17. 17. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 16, em que o microrganismo tem um tamanho médio de agregado celular inferior a 50 micron de diâmetro.
  18. 18. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 17, em que a cultura produz um rendimento de biomassa por açúcar de 50% ou superior.
  19. 19. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 18, compreendendo ainda o passo de recuperação dos ácidos gordos do microrganismo.
  20. 20. Processo de qualquer das reivindicações 1 a 13 ou 15 a 19, em que menos de 50% do sódio no meio de fermentação é fornecido como cloreto de sódio. Lisboa, 8 de Março de 2010 3
PT06008735T 1992-10-16 1993-10-12 Processo para a produção heterotrófica de produtos microbianos com concentrações elevadas de ácidos gordos altamente insaturados ómega-3 PT1707061E (pt)

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Families Citing this family (220)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US20060094089A1 (en) * 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5985348A (en) * 1995-06-07 1999-11-16 Omegatech, Inc. Milk products having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) * 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US7033584B2 (en) * 1988-09-07 2006-04-25 Omegatech, Inc. Feeding Thraustochytriales to poultry for increasing omega-3 highly unsaturated fatty acids in eggs
US6977167B2 (en) * 1988-09-07 2005-12-20 Martek Biosciences Corporation Mixtures of omega-3 and omega-6 highly unsaturated fatty acids from euryhaline microorganisms
US6410281B1 (en) 1992-07-10 2002-06-25 Omegatech, Inc. Reducing corrosion in a fermentor by providing sodium with a non-chloride sodium salt
US5583019A (en) * 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
EP0823475B1 (en) * 1995-04-17 2009-06-17 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms
US20080175953A1 (en) * 1995-06-07 2008-07-24 Martek Biosciences Corporation Process for the Heterotrophic Production of Microbial Products with High Concentrations of Omega-3 Highly Unsaturated Fatty Acids
CN1217029A (zh) * 1996-03-28 1999-05-19 吉斯特-布罗卡迪斯股份有限公司 从用巴氏法灭菌的生物量中制备含有微生物多不饱和脂肪酸的油的方法
CA2201652C (en) * 1996-04-04 2007-09-11 The University Of Saskatchewan Use of purified sdg as an antioxidant
DE69737063T2 (de) 1996-07-23 2007-07-19 Nagase Chemtex Corp. Verfahren zur herstellung von decosahexaensäure und decosapentsäure
US6566583B1 (en) * 1997-06-04 2003-05-20 Daniel Facciotti Schizochytrium PKS genes
ES2249839T3 (es) 1997-08-01 2006-04-01 Martek Biosciences Corporation Composiciones nutritivas que contienen acido docasahexanoico y sus procedimientos de produccion.
JP2001514863A (ja) 1997-08-14 2001-09-18 オメガテック インコーポレイテッド 禽肉へのオメガ３高度不飽和脂肪酸の取り込み効率を向上させるための方法
US7217856B2 (en) * 1999-01-14 2007-05-15 Martek Biosciences Corporation PUFA polyketide synthase systems and uses thereof
US7247461B2 (en) * 1999-01-14 2007-07-24 Martek Biosciences Corporation Nucleic acid molecule encoding ORFA of a PUFA polyketide synthase system and uses thereof
US7211418B2 (en) * 1999-01-14 2007-05-01 Martek Biosciences Corporation PUFA polyketide synthase systems and uses thereof
US20070244192A1 (en) * 1999-01-14 2007-10-18 Martek Biosciences Corporation Plant seed oils containing polyunsaturated fatty acids
US8003772B2 (en) * 1999-01-14 2011-08-23 Martek Biosciences Corporation Chimeric PUFA polyketide synthase systems and uses thereof
GB9910461D0 (en) * 1999-05-07 1999-07-07 Ewos Ltd Pigment
KR100338193B1 (ko) * 1999-12-13 2002-05-24 김광양 신규 원시균류 씨져카이트리움 에스피. 에스파이-2 및 그 배양방법
AU2001232786A1 (en) 2000-01-11 2001-07-24 Monsanto Company Process for making an enriched mixture of polyunsaturated fatty acid esters
DE60143287D1 (de) 2000-01-19 2010-12-02 Martek Biosciences Corp Lösungsmittelfreies extraktionsverfahren
CA2396691C (en) * 2000-01-28 2012-09-18 Omegatech, Inc. Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors
JP2003523765A (ja) * 2000-02-24 2003-08-12 ロング，トーマス・ビーチ，ザセカンド 真核微生物を利用したカロテノイド、キサントフィルおよびアポ−カロテノイドの生産法
JP3425622B2 (ja) * 2000-03-30 2003-07-14 独立行政法人産業技術総合研究所 ラビリンチュラ属菌を用いた高度不飽和脂肪酸含有培養物および高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
US20060025781A1 (en) * 2001-01-17 2006-02-02 Young Wayne P Laparoscopic instruments and methods utilizing suction
TWI324181B (en) 2001-04-16 2010-05-01 Martek Biosciences Corp Product and process for transformation of thraustochytriales microorganisms
US7045683B2 (en) * 2001-05-04 2006-05-16 Abbott Laboratories Δ4-desaturase genes and uses thereof
FR2830416B1 (fr) * 2001-10-10 2004-04-16 Valorex Sa Aliment pour la nutrition humaine
US6851387B2 (en) * 2002-02-15 2005-02-08 Automated Shrimp Holding Corporation Aquaculture method and system for producing aquatic species
US6615767B1 (en) * 2002-02-15 2003-09-09 Automated Shrimp Corporation Aquaculture method and system for producing aquatic species
DE10310021A1 (de) 2002-02-28 2003-10-23 Lukowski Gerold Pharmazeutisch oder kosmetisch wirksame Mittel aus liqidhaltigen marinen Oragnismen
KR100379075B1 (en) * 2002-03-07 2003-04-08 Jinis Biopharmaceuticals Co Method for producing low cholesterol animal food product and food product therefrom
US20040203120A1 (en) * 2002-03-22 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Method for enhancing levels of polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid protists
AU2003237182B2 (en) * 2002-05-03 2008-09-11 Dsm Ip Assets B.V. High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass
US6953574B2 (en) * 2002-06-21 2005-10-11 Technology Commercialization, Inc. Method for producing a fermented hydrolyzed medium containing microorganisms
KR100755016B1 (ko) * 2002-07-27 2007-09-06 후지필름 이미징 컬러런츠 리미티드 잉크
JP2004083428A (ja) * 2002-08-23 2004-03-18 Yoshihara Oil Mill Ltd 抗血栓作用および／または抗動脈硬化作用を持つ食品および薬剤
JP4280158B2 (ja) 2002-12-27 2009-06-17 富士フイルム株式会社 ドコサヘキサエン酸生産能を有する微生物及びその利用
US20060265766A1 (en) * 2003-03-19 2006-11-23 Advanced Bionutrition Corporation Fish and the production thereof
KR101234198B1 (ko) * 2003-03-26 2013-02-19 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 Ｐｕｆａ 폴리케타이드 신타제 시스템 및 이의 용도
US20050019880A1 (en) * 2003-03-31 2005-01-27 Council Of Scientific And Industrial Research Method of enhancing levels of polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid protists
EP1617730A1 (en) * 2003-04-25 2006-01-25 The University of Newcastle Biomass containing animal feed
US6846942B2 (en) * 2003-05-20 2005-01-25 David Rubin Method for preparing pure EPA and pure DHA
AU2003902794A0 (en) * 2003-06-03 2003-06-19 Agresearch Limited Improvements in grass endophytes
RU2346033C2 (ru) * 2003-09-01 2009-02-10 Новозимс А/С Способ непрерывного культивирования водорослей
CN1890376B (zh) * 2003-10-02 2012-06-13 马泰克生物科学公司 使用改进量的氯和钾在微藻类中产生高水平的dha
DE10352838A1 (de) * 2003-11-10 2005-07-07 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh Verfahren zur Kultivierung von Mikroorganismen der Gattung Thraustochytriales unter Verwendung eines optimierten Niedrigsalzmediums
CN1898376A (zh) * 2003-12-03 2007-01-17 圣诺菲·帕斯图尔有限公司 用于微生物的冷冻保护剂
US7138391B2 (en) * 2004-08-09 2006-11-21 Silverbrook Research Pty Ltd Hydrophilizable and hydrophilic cyanine dyes
US7114461B2 (en) * 2004-09-28 2006-10-03 Winterlab Limited Method for raising aquatic animals
WO2006085144A2 (en) * 2004-10-15 2006-08-17 Photonz Corporation Limited Compositions containing high omega-3 and low saturated fatty acid levels
US7678931B2 (en) 2004-10-22 2010-03-16 Martek Biosciences Corporation Process for preparing materials for extraction
US7588931B2 (en) 2004-11-04 2009-09-15 E. I. Du Pont De Nemours And Company High arachidonic acid producing strains of Yarrowia lipolytica
ES2909600T3 (es) 2005-06-07 2022-05-09 Dsm Nutritional Products Ag Microorganismos eucarióticos para producir lípidos y antioxidantes
WO2007005725A2 (en) 2005-07-01 2007-01-11 Martek Biosciences Corporation Polyunsaturated fatty acid-containing oil product and uses and production thereof
US8968721B2 (en) 2005-12-28 2015-03-03 Advanced Bionutrition Corporation Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
WO2007079147A2 (en) 2005-12-28 2007-07-12 Advanced Bionutrition Corporation A delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
DE602006015701D1 (de) * 2005-12-29 2010-09-02 Abl Biotechnologies Ltd Neuer schizochytrium-limacinum-stamm, der sich für die produktion von lipiden und extrazellulären polysacchariden eignet, sowie verfahren hierfür
CA2647150A1 (en) * 2006-03-15 2007-09-20 Martek Biosciences Corporation Plant seed oils containing polyunsaturated fatty acids
MX2008012874A (es) * 2006-04-03 2008-12-17 Advanced Bionutrition Corp Formulaciones alimenticias que contienen acido docosahexaenoico.
TW200806184A (en) * 2006-04-11 2008-02-01 Martek Biosciences Corp Food products comprising long chain polyunsaturated fatty acids and methods for preparing the same
KR100700486B1 (ko) * 2006-05-03 2007-03-28 대상 주식회사 오메가-3 불포화 지방산을 생산하는 균주 및 이를 이용한오메가-3 불포화 지방산의 제조방법
GB2437909A (en) * 2006-05-12 2007-11-14 Advanced Bionutrition Inc Animal feed comprising docosahexaenois acid from a microbial source
AU2007260873B2 (en) 2006-06-22 2013-05-02 Dsm Ip Assets B.V. Encapsulated labile compound compositions and methods of making the same
US9162953B2 (en) * 2006-07-05 2015-10-20 Centre Nationale De Recherche Scientifique Iron-copper co-catalyzed process for carbon-carbon or carbon-heteroatom bonding
MX2009001346A (es) * 2006-08-01 2009-04-17 Ocean Nutrition Canada Ltd Microbios productores de aceite y metodos de modificacion de los mismos.
JP2010502189A (ja) 2006-08-29 2010-01-28 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 乳幼児用調合乳におけるＤＰＡ（ｎ−６）油の使用
KR100860111B1 (ko) * 2006-10-02 2008-09-25 인제대학교 산학협력단 신규 미생물 트라우스토카이트리움 에스피.케이제이에스-1, 바실러스 폴리퍼멘티쿠스 케이제이에스-2 및 이들과 바실러스 리케니포르미스를 포함하고 있는 사료첨가제 및 사료
US20100086979A1 (en) * 2006-10-27 2010-04-08 Thomas Kiy Production of omega-3 fatty acids in microflora of thraustochytriales using modified media
WO2008076975A1 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Advanced Bionutrition Corporation A dry food product containing live probiotic
MY154965A (en) * 2007-06-01 2015-08-28 Solazyme Inc Production of oil in microorganisms
JP5371750B2 (ja) * 2007-06-04 2013-12-18 国立大学法人北海道大学 微生物発酵によるｄｈａ含有リン脂質の製造方法
JP2010532418A (ja) * 2007-06-29 2010-10-07 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 多価不飽和脂肪酸のエステルの製造方法および精製方法
CN113846129A (zh) * 2007-09-12 2021-12-28 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 生物油及其制备与应用
US20100010088A1 (en) * 2007-11-01 2010-01-14 Wake Forest University School Of Medicine Compositions and Methods for Prevention and Treatment of Mammalian Diseases
US8343753B2 (en) * 2007-11-01 2013-01-01 Wake Forest University School Of Medicine Compositions, methods, and kits for polyunsaturated fatty acids from microalgae
EP2071019A1 (en) * 2007-12-15 2009-06-17 Lonza AG Method for the cultivation of microoranisms of the order thraustochytriales
ES2333571B1 (es) * 2008-03-07 2010-10-21 Universidad De Las Palmas De Gran Canaria Procedimiento para la produccion de biomasa rica en acidos grasos poliinsaturados a partir del cultivo de un thraustochytrido.
EP2105506A1 (de) * 2008-03-26 2009-09-30 Lonza Ag Verfahren zur Herstellung PUFAs enthaltender Öle unter Verwendung von Mikroorganismen der Ordnung Labyrinthulomycota
CN104561150A (zh) 2008-04-09 2015-04-29 索拉兹米公司 微生物生物质和微生物油的直接化学修饰
US20100297295A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Microalgae-Based Beverages
US20100297296A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Healthier Baked Goods Containing Microalgae
US20100297292A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Reduced Pigmentation Microalgae Strains and Products Therefrom
US20100303989A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. Microalgal Flour
US20100297331A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Reduced Fat Foods Containing High-Lipid Microalgae with Improved Sensory Properties
US20100303957A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. Edible Oil and Processes for Its Production from Microalgae
US20100303961A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. Methods of Inducing Satiety
US20100297323A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Gluten-free Foods Containing Microalgae
US20100303990A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. High Protein and High Fiber Algal Food Materials
US20100297325A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Egg Products Containing Microalgae
MX352984B (es) * 2008-10-14 2017-12-15 Terravia Holdings Inc Composiciones alimenticias a partir de biomasa de microalgas.
US8809037B2 (en) 2008-10-24 2014-08-19 Bioprocessh20 Llc Systems, apparatuses and methods for treating wastewater
SG171430A1 (en) 2008-11-28 2011-07-28 Solazyme Inc Production of tailored oils in heterotrophic microorganisms
EP2401386A4 (en) * 2009-02-25 2013-03-13 Vb Medicare Pvt Ltd IMPROVED METHODS FOR THE FERMENTATIVE MANUFACTURE OF DOCOSAHEXAENIC ACID
KR101939014B1 (ko) 2009-03-16 2019-01-15 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 라비린툴로바이코타문 미생물에서의 단백질 생산
BRPI1006435B1 (pt) * 2009-03-19 2021-01-19 Dsm Ip Assets B.V. molécula de ácido nucleico recombinante e célula hospedeira microbiana
US8207363B2 (en) 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
ES2908047T3 (es) 2009-03-27 2022-04-27 Intervet Int Bv Vacunas en micropartículas para la vacunación oral o nasal y el refuerzo de animales incluidos los peces
MY157343A (en) 2009-05-26 2016-05-31 Advanced Bionutrition Corp Stable dry powder composition comprising biologically active microorganisms and/or bioactive materials and methods of making
EP2478089B1 (en) 2009-09-18 2019-05-08 Phycoil Biotechnology International, Inc. Microalgae fermentation using controlled illumination
AU2010313249B2 (en) 2009-10-30 2016-05-19 Biojiva Llc Alleviating oxidative stress disorders with PUFA derivatives
EP2519636B8 (en) * 2009-12-28 2017-08-09 DSM IP Assets B.V. Production of hemagglutinin-neuraminidase protein in microalgae
WO2011082190A1 (en) 2009-12-28 2011-07-07 Martek Biosciences Corporation Recombinant thraustochytrids that grow on sucrose, and compositions, methods of making, and uses thereof
EP2519642B1 (en) * 2009-12-28 2017-10-25 DSM IP Assets B.V. Recombinant thraustochytrids that grow on xylose, and compositions, methods of making, and uses thereof
EP4130273A1 (en) 2009-12-28 2023-02-08 Sanofi Vaccine Technologies, S.A.S. Production of heterologous polypeptides in microalgae, microalgal extracellular bodies, compositions, and methods of making and uses thereof
CN105360351A (zh) * 2010-01-19 2016-03-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 生产二十碳五烯酸的微生物、脂肪酸组成物及其制作方法与用途
RU2535869C2 (ru) 2010-01-28 2014-12-20 Эдванст Бионутришн Корпорейшн Сухая стекловидная композиция для стабилизации и защиты биологически активного материала и способ ее получения
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
US20120323029A1 (en) * 2010-03-11 2012-12-20 BP Biofuels IK Limited Methods, Biological Oils, Biofuels, Units, and Organisms Related to Use in Compression Engines
CA2795460A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for obtaining polyunsaturated fatty acid-containing compositions from microbial biomass
KR101916421B1 (ko) 2010-05-28 2018-11-08 테라비아 홀딩스 인코포레이티드 종속영양 미생물유기체로부터 생성된 맞춤 오일
EP2576801B1 (en) 2010-06-01 2019-10-02 DSM IP Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
ES2733134T3 (es) 2010-06-09 2019-11-27 Fermentalg Composiciones que comprenden ácido eicosapentaenoico adecuado para una alta purificación
MY163938A (en) 2010-06-14 2017-11-15 Io-Mega Holding Corp Method for the production of algae derived oils
EP2397074B1 (en) 2010-06-19 2012-10-24 M Stenqvist AB A system and computer readable medium for determination of transpulmonary pressure in a patient connected to a breathing apparatus
CA2805882A1 (en) 2010-08-11 2012-02-16 E. I. Dupont De Nemours And Company Improved aquaculture meat products
US20120204802A1 (en) 2010-08-11 2012-08-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Sustainable aquaculture feeding strategy
US20120040076A1 (en) 2010-08-11 2012-02-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Aquaculture feed compositions
KR101863920B1 (ko) 2010-08-13 2018-06-01 어드밴스드 바이오뉴트리션 코프. 생물학적 물질용 저장 안정화 건조 조성물
US10479969B2 (en) 2010-10-11 2019-11-19 Phycoil Biotechnology International. Inc. Utilization of wastewater for microalgal cultivation
EP3521408B1 (en) 2010-11-03 2021-12-22 Corbion Biotech, Inc. Genetically-engineered chlorella or prototheca microbe and oil produced therefrom
MX351063B (es) 2011-02-02 2017-09-29 Terravia Holdings Inc Aceites adaptados producidos a partir de microorganismos oleaginosos recombinantes.
CA2829296C (en) 2011-03-07 2019-10-29 ShuoCheng ZHANG Engineering thraustochytrid microorganisms
KR102014526B1 (ko) 2011-04-26 2019-08-26 레트로토프 인코포레이티드 Ｐｕｆａ 산화와 관련된 장애
EP2701695B1 (en) 2011-04-26 2019-04-03 Retrotope, Inc. Neurodegenerative disorders and muscle diseases implicating pufas
KR102112087B1 (ko) 2011-04-26 2020-05-18 레트로토프 인코포레이티드 에너지 프로세싱 손상 장애 및 미토콘드리아 결함
WO2012148930A2 (en) 2011-04-26 2012-11-01 Retrotope, Inc. Oxidative retinal diseases
CN103608450A (zh) 2011-05-06 2014-02-26 索拉兹米公司 基因工程改造的代谢木糖的微生物
CN102787074B (zh) * 2011-05-20 2016-06-08 罗盖特兄弟公司 生产角鲨烯的微藻新菌株
AU2012280937B2 (en) 2011-07-13 2016-01-21 Alltech, Inc. Algal lipid compositions and methods of preparing and utilizing the same
CN103930104A (zh) 2011-07-21 2014-07-16 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 脂肪酸组合物
KR20240035899A (ko) 2011-11-01 2024-03-18 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 산화적으로 안정한 다중불포화된 지방산 함유 오일
JP6499577B2 (ja) 2012-04-18 2019-04-10 テラヴィア ホールディングス， インコーポレイテッド 調整油
US9719114B2 (en) 2012-04-18 2017-08-01 Terravia Holdings, Inc. Tailored oils
DK2947141T3 (da) 2013-01-18 2019-12-09 Kyowa Hakko Bio Co Ltd Mikroorganismer der fremstiller docosahexaensyre og anvendelse deraf
US10098371B2 (en) 2013-01-28 2018-10-16 Solazyme Roquette Nutritionals, LLC Microalgal flour
WO2014122092A1 (de) 2013-02-05 2014-08-14 Evonik Industries Ag Verbesserung der bioverfügbarkeit von wertstoffen aus mikroorganismen
EP2762008A1 (de) 2013-02-05 2014-08-06 Evonik Industries AG Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen durch Verwendung eines Rotor-Stator Systems für den Zellaufschluss
US9873880B2 (en) 2013-03-13 2018-01-23 Dsm Nutritional Products Ag Engineering microorganisms
US9249252B2 (en) 2013-04-26 2016-02-02 Solazyme, Inc. Low polyunsaturated fatty acid oils and uses thereof
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
FR3009619B1 (fr) 2013-08-07 2017-12-29 Roquette Freres Compositions de biomasse de microalgues riches en proteines de qualite sensorielle optimisee
CA2925527A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Solazyme, Inc. Tailored oils
EP3082792A4 (en) 2013-12-20 2017-08-16 DSM IP Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
AR098893A1 (es) 2013-12-20 2016-06-22 Dsm Ip Assets Bv Proceso para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
US10342772B2 (en) 2013-12-20 2019-07-09 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CA2934212C (en) 2013-12-20 2021-06-29 MARA Renewables Corporation Methods of recovering oil from microorganisms
EP3083974A1 (en) 2013-12-20 2016-10-26 DSM Nutritional Products AG Methods of recovering oil from microorganisms
MX2016008223A (es) 2013-12-20 2016-11-28 Dsm Ip Assets Bv Procedimiento para la obtención de aceite microbiano a partir de células microbianas.
WO2015116671A2 (en) 2014-01-28 2015-08-06 Dsm Ip Assets B.V. Factors for the production and accumulation of polyunsaturated fatty acids (pufas) derived from pufa synthases
EP3943081A1 (en) 2014-03-13 2022-01-26 Retrotope, Inc. Optic neuropathy treatment and reduction of steroid- induced oxidative stress with stabilized polyunsaturated substances
US9394550B2 (en) 2014-03-28 2016-07-19 Terravia Holdings, Inc. Lauric ester compositions
FR3019559B1 (fr) * 2014-04-03 2018-01-05 Fermentalg Procede de culture des microalgues du genre aurantiochytrium dans un milieu de culture a teneur reduite en sodium et en chlorure pour la production de dha
CN106795539B (zh) 2014-05-22 2021-06-22 玛拉可再生能源公司 在微生物中产生油的方法
EP3167053B1 (en) 2014-07-10 2019-10-09 Corbion Biotech, Inc. Novel ketoacyl acp synthase genes and uses thereof
JP6402524B2 (ja) * 2014-07-30 2018-10-10 富士電機株式会社 排ガス処理方法及び排ガス処理装置
EP3200603A1 (de) * 2014-10-02 2017-08-09 Evonik Degussa GmbH Pufas enthaltendes futtermittel mit hoher abriebfestigkeit und hoher wasserstabilität
BR112017006834B1 (pt) * 2014-10-02 2022-04-26 Evonik Operations Gmbh Processo para a preparação de um alimento para animais compreendendo pufas, produto extrudado de alimento para animais e método de criação de animais
BR112017005388B1 (pt) 2014-10-02 2022-09-13 Evonik Operations Gmbh Alimento para animais contendo biomassa de aurantiochytrium
CA2958457C (en) 2014-10-02 2022-10-25 Evonik Industries Ag Process for producing a pufa-containing biomass which has high cell stability
KR101521274B1 (ko) 2014-10-08 2015-05-22 에스케이이노베이션 주식회사 신규 미세조류 오란티오키트리움（Aurantiochytrium sp.) LA3（KCTC12685BP) 및 이를 이용한 바이오오일의 제조방법
PT3207164T (pt) 2014-10-16 2021-02-05 Mara Renewables Corp Métodos de cultura semi-contínuos
DK3207165T3 (da) 2014-10-16 2020-04-06 Mara Renewables Corp Gentagne fed-batch dyrkningsfremgangsmåder
US20180303129A1 (en) * 2014-10-24 2018-10-25 Trustees Of Dartmouth College Aquaculture feed formulation and aquaculture product produced with same
EP3098318A1 (en) 2015-01-24 2016-11-30 Indian Oil Corporation Limited Thraustochytrid based process for treating waste effluents
FR3031984B1 (fr) * 2015-01-27 2019-05-24 Roquette Freres Procede d'enrichissement de la biomasse de microalgues du genre traustochytrium en dha et en acides amines arg et glu
AR104042A1 (es) 2015-03-26 2017-06-21 Mara Renewables Corp Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto
US20180320208A1 (en) 2015-07-03 2018-11-08 Kyushu University, National University Corporation Labyrinthulid microorganism capable of producing microbial oil, microbial oil, methods for producing said microorganism and for producing said microbial oil, and uses of said microorganism and said microbial oil
KR20180027584A (ko) 2015-07-13 2018-03-14 마라 리뉴어블즈 코퍼레이션 크실로오스의 미세조류 대사를 강화시키는 방법
FR3038913B1 (fr) * 2015-07-17 2020-05-01 Fermentalg Biomasse de thraustochytrides, procede de culture et utilisations
WO2017019273A1 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Advanced Bionutrition Corporation Stable dry probiotic compositions for special dietary uses
JP2018196327A (ja) * 2015-10-14 2018-12-13 味の素株式会社 ステロールの製造法
CN105334793B (zh) * 2015-10-27 2018-05-01 武汉工程大学 一种制备人工海水的自动控制系统及方法
CN108698987B (zh) 2015-11-23 2021-07-13 乐巢拓普有限公司 1,4-二烯体系的位点特异性同位素标记
JP2019068741A (ja) * 2016-03-03 2019-05-09 味の素株式会社 ステロールの製造法
US10851395B2 (en) 2016-06-10 2020-12-01 MARA Renewables Corporation Method of making lipids with improved cold flow properties
CN107523504A (zh) * 2016-06-21 2017-12-29 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 裂殖壶菌突变株
US11419350B2 (en) 2016-07-01 2022-08-23 Corbion Biotech, Inc. Feed ingredients comprising lysed microbial cells
WO2018011286A1 (en) 2016-07-13 2018-01-18 Evonik Degussa Gmbh Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
CA3030467C (en) 2016-07-13 2023-07-11 Evonik Degussa Gmbh Method for isolating lipids from lipid-containing cells
BR112019000435A2 (pt) 2016-07-13 2019-04-30 Evonik Degussa Gmbh método para separar lipídios de uma biomassa contendo lipídios lisados
WO2018015926A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 MARA Renewables Corporation A two-step fractionation method for winterizing oil.
BR112018076943B1 (pt) 2016-07-20 2023-02-07 MARA Renewables Corporation Método para obter óleo escoável
US11352651B2 (en) 2016-12-27 2022-06-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2018122057A1 (en) 2016-12-27 2018-07-05 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2019034354A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Evonik Degussa Gmbh ENHANCED PRODUCTION OF LIPIDS BY LIMITING AT LEAST TWO SOURCES OF NUTRIENT LIMITING
BR112020003326A2 (pt) 2017-08-17 2020-11-17 Evonik Operations Gmbh produção acentuada de lipídios pela limitação de pelo menos duas fontes de nutrientes limitantes
EP3470502A1 (en) 2017-10-13 2019-04-17 Evonik Degussa GmbH Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
WO2019048327A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 Evonik Degussa Gmbh METHOD FOR SEPARATING LIPIDS IN A BIOMASS CONTAINING LYDE LIPIDS
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2019121752A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2019122030A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Dsm Ip Assets B.V. Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
WO2019185891A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted chroman-6-ols
WO2019185939A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Use of twin-chromanols as antioxidants in oil
WO2019185888A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of tocopherols
PE20211495A1 (es) 2018-03-29 2021-08-11 Dsm Ip Assets Bv Uso novedoso de cromanoles gemelos
WO2019185898A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted 2h-chromens and their derivatives
BR112020019776A2 (pt) 2018-03-29 2021-01-05 Dsm Ip Assets B.V. Uso inovador de croman-6-óis substituídos
WO2019185910A2 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted 2h-chromens and their derivatives
WO2019185889A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of carnosic acid
WO2019185938A2 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted chroman-6-ols with extended lipophilic side chains
WO2019185941A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted chroman-6-ols with extended lipophilic side chains
WO2019185942A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Use of tocotrienols as antioxidants
WO2019185904A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Chroman-6-ols with an extended lipophilic side chain in position 2, their manufacture and use
WO2019219396A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lysed lipids containing biomass by emulsion inversion
US11414621B2 (en) 2018-05-15 2022-08-16 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass with aid of hydrophobic silica
FR3085825B1 (fr) 2018-09-14 2021-07-16 Fermentalg Huile de microorganismes riche en acide docosahexaenoique
FR3085962B1 (fr) 2018-09-14 2021-06-18 Fermentalg Procede d'extracton d'une huile riche en pufa
BR112021008842A2 (pt) * 2018-11-09 2021-08-17 Evonik Operations Gmbh método para produzir uma biomassa com um teor aumentado de ácidos graxos poli-insaturados
BR112021008853A2 (pt) * 2018-11-09 2021-08-17 Evonik Operations Gmbh método para produzir uma biomassa que pode ser facilmente rompida e que tem um teor aumentado de ácidos graxos poliinsaturados
CN110330104B (zh) * 2019-06-21 2022-04-29 临沂大学 一种用微生物去除水体中对氨基苯甲酸的方法
WO2021122770A1 (en) * 2019-12-20 2021-06-24 Dsm Ip Assets B.V. Method of reducing the self-heating propensity of microbial lc-pufa comprising biomass
IL295783A (en) 2020-02-21 2022-10-01 Retrotope Inc Processes for isotopic modification of polyunsaturated fatty acids and their derivatives
EP3933016A1 (en) 2020-06-30 2022-01-05 Evonik Operations GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2023144707A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 Dsm Ip Assets B.V. Media refinement and nutrient feeding approaches to increase polyunsaturated fatty acid production
WO2023175141A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Purac Biochem B.V. Method for reducing fermentation broth viscosity

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2879162A (en) * 1956-10-04 1959-03-24 Du Pont Augmenting poultry feed
US2890989A (en) * 1957-07-01 1959-06-16 Ralph F Anderson Method for the production of carotenes
GB857161A (en) 1958-01-07 1960-12-29 Boots Pure Drug Co Ltd Improvements in the propagation of fungi
US3108402A (en) * 1961-03-16 1963-10-29 Grain Processing Corp Production of carotenoid pigments
US3444647A (en) * 1961-08-08 1969-05-20 Masahito Takahashi Process of cultivating algae
US3142135A (en) * 1962-02-13 1964-07-28 Grain Processing Corp Production of carotenoids by the cultivation of algae
US3282794A (en) * 1963-09-19 1966-11-01 Ajinomoto Kk Method of producing citrulline by bacterial fermentation
US3296079A (en) * 1963-12-09 1967-01-03 Pfizer & Co C Products sweetened without sugar and characterized by freedom from aftertaste
US3316674A (en) * 1964-09-11 1967-05-02 Yakult Honsha Kk Method of new industrial cultivation of unicellular green algae such as chlorella
GB1143405A (en) 1965-02-25 1969-02-19 Unilever Ltd Processing of foodstuffs and the like
GB1123884A (en) 1966-05-23 1968-08-14 Pfizer & Co C Animal feed compositions
FR1557635A (pt) * 1967-04-20 1969-02-21
US3661663A (en) * 1968-08-21 1972-05-09 Owens Corning Fiberglass Corp Method of producing siliceous fiber corrosion inhibiting composites
DE1901980A1 (de) * 1969-01-16 1970-09-03 Wunder Kg Heinrich Sicherheits-Skibindung mit ausschwenkbarem Andrueckbacken
IL33732A (en) * 1969-02-06 1973-05-31 Meiji Seika Kaisha The new antibiotics sf-837,sf-837-a2,sf-837-a3 and sf-837-a4 and their production
US3617299A (en) 1969-09-15 1971-11-02 Abbott Lab Animal feed premix resistant to static charge and method of making same
US3647482A (en) * 1970-03-04 1972-03-07 Gen Mills Inc Reduction and modification of the unpleasant aftertaste of saccharin
GB1401956A (en) 1971-09-11 1975-08-06 Marmite Ltd Growing of yeast and other microorganisms
DE2219741B1 (de) * 1972-04-21 1973-01-25 Kurt 2000 Hamburg Lohwasser Verpackung für Nahrungs- und Genußmittel
US3924017A (en) * 1972-07-28 1975-12-02 Gen Foods Corp Sweetness inducer
JPS564233B2 (pt) * 1973-03-30 1981-01-29
US3908028A (en) * 1973-04-19 1975-09-23 Procter & Gamble Soft drink composition containing paramethoxycinnamaldehyde as a flavoring agent and sweetner
US3908026A (en) * 1973-04-19 1975-09-23 Procter & Gamble Culinary composition containing paramethoxycinnamaldehyde as a flavoring agent and sweetener
GB1466853A (en) 1973-05-22 1977-03-09 Simon Rosedowns Ltd Extraction
US3879890A (en) * 1974-02-06 1975-04-29 Canadian Patents Dev Algal polysaccharide production
US4162324A (en) * 1975-11-21 1979-07-24 Merck & Co., Inc. Antibiotics 890A1 and 890A3
IT1109471B (it) * 1976-08-17 1985-12-16 Deral Sa Procedimento e prodotto per la conservazione e la valorizzazione di vegetali a verde e dei sotto prodotti umidi delle industrie agro alimentari
US4229544A (en) * 1978-08-08 1980-10-21 Payfer Laboratories Inc. Living organism packaging
US4304794A (en) * 1978-12-14 1981-12-08 Chimicasa Gmbh Artificial-sweetener composition and process of preparing and using same
US4232122A (en) 1979-01-17 1980-11-04 Z-L Limited Partnership Antioxidants, antioxidant compositions and methods of preparing and using same
JPS55111794A (en) * 1979-02-19 1980-08-28 Agency Of Ind Science & Technol Production of lipid having high linolic acid content
US4405649A (en) * 1979-05-07 1983-09-20 Marvin Dudley Process for producing premium quality fish meal from whole fish
IL57712A (en) * 1979-07-03 1984-02-29 Yissum Res Dev Co Cultivation of halophilic algae of the dunaliella species for the production of fuel-like product
DE3011185A1 (de) * 1980-03-22 1981-10-01 Kali-Chemie Pharma Gmbh, 3000 Hannover Verfahren zur gewinnung von fuer physiologische zwecke direkt verwendbarem rin(paragraph)lecithin
GB2098065A (en) 1981-04-14 1982-11-17 Nippon Suisan Kaisha Ltd Antithrombotic compositions containing docosahexaenoic acid
US4426396A (en) * 1981-06-11 1984-01-17 Union Oil Company Of California Preservation of harvested crops and animal feedstuffs
IL63734A (en) 1981-09-04 1985-07-31 Yeda Res & Dev Lipid fraction,its preparation and pharmaceutical compositions containing same
US4554390A (en) 1981-10-07 1985-11-19 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization Method for harvesting algae
US4383038A (en) * 1981-12-10 1983-05-10 Ethyl Corporation Process for the preparation of L-proline by cultivating algae
ATE24266T1 (de) * 1982-04-16 1987-01-15 Nestle Sa Lipidhaltige zusammensetzung fuer die orale, enterale oder parenterale ernaehrung.
JPS58196068A (ja) * 1982-05-12 1983-11-15 Nec Corp 電歪効果素子
JPS58213613A (ja) * 1982-06-03 1983-12-12 Sumitomo Bakelite Co Ltd 球型活性炭の製造方法
US4670285A (en) * 1982-08-06 1987-06-02 The University Of Toronto Innovations Foundation Infant formula
US4588600A (en) * 1983-04-18 1986-05-13 Scm Corporation Dry premix composition for imparting a fried appearance to baked foods
JPS6087798A (ja) * 1983-10-21 1985-05-17 Meiji Milk Prod Co Ltd 藻類によるエイコサペンタエン酸の生産方法
JPS60105471A (ja) * 1983-11-14 1985-06-10 Nisshin Flour Milling Co Ltd 健康食品卵の生産方法
JPS60133094A (ja) 1983-12-21 1985-07-16 日清製油株式会社 高純度エイコサペンタエン酸の製造法
EP0155420B1 (en) 1984-02-09 1988-03-23 The Agency of Industrial Science and Technology A method for the preparation of a fungal body and a lipid rich in gamma-linolenic acid therefrom
US4634533A (en) * 1985-04-26 1987-01-06 Somerville Robert L Method of converting brines to useful products
US4792418A (en) * 1985-08-14 1988-12-20 Century Laboratories, Inc. Method of extraction and purification of polyunsaturated fatty acids from natural sources
CN1017679B (zh) * 1985-10-11 1992-08-05 日清制油株式会社 卤虫饲料
US4749522A (en) * 1985-10-31 1988-06-07 Angio-Medical Corporation Supercritical fluid extraction of animal derived materials
DE3603000A1 (de) 1986-01-31 1987-08-06 Milupa Ag Neue polyensaeure-reiche fettmischung und deren verwendung bei der herstellung von saeuglingsnahrungen
US4758438A (en) * 1986-10-14 1988-07-19 Stroz John J Sweetener composition
US5023091A (en) * 1987-03-23 1991-06-11 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Ruminant feed method of making and method of using
US4957748A (en) * 1987-03-23 1990-09-18 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Ruminant feed, method of making and method of using
US5064665A (en) 1987-03-23 1991-11-12 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Method of making and using a ruminant feed
US4764392A (en) * 1987-04-01 1988-08-16 Q.P. Corporation Margarine containing fish oil
US4918104A (en) * 1987-06-16 1990-04-17 Weiss Howard S Method and composition for increasing the concentration of omega-3 polyunsaturated fatty acids in poultry and poultry eggs and poultry and eggs resulting therefrom
WO1989000606A1 (en) * 1987-07-20 1989-01-26 Maricultura, Incorporated Microorganism production of omega-3 (n-3) lipids
CA1263270A (en) * 1987-08-19 1989-11-28 Bruce J. Holub Animal feed supplement
US4871551A (en) * 1988-02-08 1989-10-03 Microbio Resources, Inc. Pigmentation supplements for animal feed compositions
JPH01218573A (ja) * 1988-02-25 1989-08-31 Yoshio Tanaka ドナリエラ藻体含有固形状食品の製造法
US4822500A (en) * 1988-02-29 1989-04-18 Texas United Chemical Corporation Saturated brine well treating fluids and additives therefore
US4874629A (en) 1988-05-02 1989-10-17 Chang Stephen S Purification of fish oil
US6451567B1 (en) * 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US7033584B2 (en) * 1988-09-07 2006-04-25 Omegatech, Inc. Feeding Thraustochytriales to poultry for increasing omega-3 highly unsaturated fatty acids in eggs
US5985348A (en) 1995-06-07 1999-11-16 Omegatech, Inc. Milk products having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US20060094089A1 (en) * 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6977167B2 (en) 1988-09-07 2005-12-20 Martek Biosciences Corporation Mixtures of omega-3 and omega-6 highly unsaturated fatty acids from euryhaline microorganisms
US5340742A (en) * 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US5130242A (en) * 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5698244A (en) 1988-09-07 1997-12-16 Omegatech Inc. Method for raising animals having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5340594A (en) * 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5012761A (en) * 1988-11-17 1991-05-07 Oh Suk Y Chicken egg having relatively high percentage of long chain fatty acids and method of reducing heart related disease in humans using such eggs
JP2664452B2 (ja) 1988-12-23 1997-10-15 サントリー株式会社 魚貝類用餌料
DE3920679A1 (de) 1989-06-23 1991-01-10 Milupa Ag Fettmischung zur herstellung von nahrungen, insbesondere saeuglingsnahrungen
US5272085A (en) 1989-10-31 1993-12-21 Queen's University Sodium tolerance genes derived from schizosaccharomyces pombe
US5407957A (en) * 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
US5244921A (en) * 1990-03-21 1993-09-14 Martek Corporation Eicosapentaenoic acids and methods for their production
US5297625A (en) * 1990-08-24 1994-03-29 Associated Universities, Inc. Biochemically enhanced oil recovery and oil treatment
US5133963A (en) * 1990-12-21 1992-07-28 Shuntaro Ise Method of producing commercially useful poultry products with increased concentrations of Omega-3 polyunsaturated fatty acids
PH11992043811B1 (en) 1991-01-24 2002-08-22 Martek Corp Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US5658767A (en) * 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
EP1787532A3 (en) * 1991-01-24 2010-03-31 Martek Biosciences Corporation Microbial oil mixtures and uses thereof
KR940005180B1 (ko) * 1991-08-20 1994-06-13 주식회사 우방랜드 n-3 지방산이 축적된 돈육 생산용 사료 조성물
FR2686619B1 (fr) * 1992-01-28 1995-07-13 Commissariat Energie Atomique Procede de production selective de lipides poly-insatures a partir d'une culture de micro-algues du type porphyridium et cuve utilisee dans ce procede.
US6410281B1 (en) * 1992-07-10 2002-06-25 Omegatech, Inc. Reducing corrosion in a fermentor by providing sodium with a non-chloride sodium salt
JPH078215A (ja) * 1993-04-30 1995-01-13 Kawasaki Steel Corp ドコサヘキサエン酸含有海洋性微細藻類食品素材およびその製造方法
EP0823475B1 (en) 1995-04-17 2009-06-17 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms
CN1089561C (zh) * 1995-05-30 2002-08-28 三得利公司 高度不饱和脂肪酸含量高的家禽蛋,其制造方法及其用途
US20080175953A1 (en) * 1995-06-07 2008-07-24 Martek Biosciences Corporation Process for the Heterotrophic Production of Microbial Products with High Concentrations of Omega-3 Highly Unsaturated Fatty Acids
US6255505B1 (en) * 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP0821068A3 (en) 1996-03-29 1999-06-02 Rohm And Haas Company Novel sphingolipids and a process thereto
DE69737063T2 (de) 1996-07-23 2007-07-19 Nagase Chemtex Corp. Verfahren zur herstellung von decosahexaensäure und decosapentsäure
CZ299290B6 (cs) * 1997-02-20 2008-06-11 Dsm Ip Assets B.V. Zpusob výroby beta-laktamové slouceniny, zpusob prípravy a/nebo zlepšení vláknitého mikrobiálního kmene a použití chemicky definovaného fermentacníhomédia
US6140486A (en) 1997-06-04 2000-10-31 Calgene Llc Production of polyunsaturated fatty acids by expression of polyketide-like synthesis genes in plants
JP2001514863A (ja) * 1997-08-14 2001-09-18 オメガテック インコーポレイテッド 禽肉へのオメガ３高度不飽和脂肪酸の取り込み効率を向上させるための方法
US5894799A (en) 1997-10-01 1999-04-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Element for cushioning a flexographic printing plate
DE19749413A1 (de) * 1997-11-07 1999-05-12 Hoechst Ag Neuartige Sophoroselipide, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung
DE19838011C2 (de) 1998-08-21 2000-01-13 Christoph Syldatk Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Fettsäuremethylestern ("Biodiesel") auf Molkebasis
DE19903095C2 (de) * 1999-01-27 2003-05-22 Nutrinova Gmbh Gewinnung von gamma-Linolensäure aus Protozoen der Gattung Colpidium
JP4252145B2 (ja) 1999-02-18 2009-04-08 新日鐵住金ステンレス株式会社 耐遅れ破壊性に優れた高強度・高靭性ステンレス鋼
ATE361676T2 (de) * 1999-03-04 2007-06-15 Suntory Ltd Verwendung von docosapentsaeure enthaltendem material
CA2396691C (en) 2000-01-28 2012-09-18 Omegatech, Inc. Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors
US6338866B1 (en) 2000-02-15 2002-01-15 Applied Food Biotechnology, Inc. Pet foods using algal or fungal waste containing fatty acids
US6582914B1 (en) * 2000-10-26 2003-06-24 Genencor International, Inc. Method for generating a library of oligonucleotides comprising a controlled distribution of mutations
TWI426127B (zh) 2001-04-16 2014-02-11 Dsm Ip Assets Bv 多不飽和脂肪酸（ｐｕｆａ）聚乙醯合成酶系統及其用途（三）
KR101234198B1 (ko) 2003-03-26 2013-02-19 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 Ｐｕｆａ 폴리케타이드 신타제 시스템 및 이의 용도
US7208160B2 (en) * 2003-08-26 2007-04-24 Sol Katzen Process of treating sea algae and halophytic plants
JP4152861B2 (ja) 2003-10-27 2008-09-17 シャープ株式会社 コーナーキューブリフレクタ、その製造方法及びそれを用いた反射型表示装置
DE102004017370A1 (de) 2004-04-08 2005-10-27 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh PUFA-PKS Gene aus Ulkenia
BRPI0817320B1 (pt) * 2007-09-25 2019-07-09 Monsanto Technology Llc Composições de tinta e substrato impresso

Also Published As

Publication number Publication date
ATE241914T1 (de) 2003-06-15
AU687016B2 (en) 1998-02-19
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WO1994008467A1 (en) 1994-04-28
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CA2146235A1 (en) 1994-04-28
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CA2146235C (en) 2011-12-20
DE69333026T2 (de) 2004-04-01
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US6566123B1 (en) 2003-05-20
AU4537497A (en) 1998-02-19
JP2004073215A (ja) 2004-03-11
US8288135B2 (en) 2012-10-16
US7381558B2 (en) 2008-06-03
DK0669809T3 (da) 2003-09-22
JP2005323603A (ja) 2005-11-24
EP2179660A3 (en) 2010-05-19
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ATE452541T1 (de) 2010-01-15
DE69334309D1 (de) 2010-02-04
US5340742A (en) 1994-08-23
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US20070082384A1 (en) 2007-04-12
DE69333026D1 (de) 2003-07-10
PT1714561E (pt) 2010-03-05
US6103225A (en) 2000-08-15
EP1298199A2 (en) 2003-04-02
US20060160203A1 (en) 2006-07-20
EP1714561B1 (en) 2009-12-02
US20080166780A1 (en) 2008-07-10
ES2338348T3 (es) 2010-05-06
JPH08502405A (ja) 1996-03-19

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