JPH11285376A - 高濃度オメガ三系高度不飽和脂肪酸を含有する微生物相バイオマス - Google Patents

高濃度オメガ三系高度不飽和脂肪酸を含有する微生物相バイオマス

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JPH11285376A
JPH11285376A JP11047924A JP4792499A JPH11285376A JP H11285376 A JPH11285376 A JP H11285376A JP 11047924 A JP11047924 A JP 11047924A JP 4792499 A JP4792499 A JP 4792499A JP H11285376 A JPH11285376 A JP H11285376A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】高濃度オメガ三系高度不飽和脂肪酸を生成する
微生物相及び同微生物相を生育する方法を提供するこ
と。 【解決手段】非塩化物ナトリウム塩、特に、硫酸ナトリ
ウムを含有する発酵培地において生育することにより、
高濃度オメガ三系高度不飽和脂肪酸を含有する、トラウ
ストキトリウム、シゾキトリウム及びそれらの混合物か
らなる微生物相バイオマスが生成される。更に、得られ
た微生物相バイオマスは、水産養殖用の食品を生成する
のに有用な寸法の細胞集合体を含むものである。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は従属栄養生体並びに
人間及び動物の食品添加物としての使用或いは医薬品及
び工業製品における使用に適正な高濃度オメガ三系高度
不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ）を含有する脂質を生成するた
めの従属栄養生体及びその培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】オメガ三系高度不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ
ｓ）は動脈硬化症及び心疾患を予防し、炎症を緩和し、
腫瘍細胞の成長を抑制するのに重要な栄養化合物である
と最近になって認識されるようになり、営利的な関心が
大きくもたれている。これらの利点はオメガ六系脂肪酸
から生成される化合物の拮抗的阻害を生じさせるオメガ
三系ＨＵＦＡｓに由来すると同時に、オメガ三系ＨＵＦ
Ａｓ自体から直接生成される有利な化合物にも由来する
（シモポウロス（Simopoulos）ら）。オメガ六系脂肪酸
は植物及び動物に見出される優位なＨＵＦＡｓである。
現在、オメガ三系ＨＵＦＡｓの市販栄養源はこれら脂肪
酸を２０〜３０％含有可能なある種の魚油である。これ
ら脂肪酸の効果は一週間に数回魚を食べ、或いは濃縮魚
油を毎日摂取することによって得られる。従って、栄養
補給として毎年多量の魚油が加工、封入され、販売され
ている。しかし、これら魚油補給物には幾つかの重要な
問題があり、この中には脂溶性ビタミンが生物学的に蓄
積し、飽和したオメガ六系脂肪酸が高濃度になるという
問題があり、双方とも健康に害を及ぼし得る。
【０００３】別のオメガ三系ＨＵＦＡｓ源は関連米国特
許第５，１３０，２４２号に詳述されている微生物相の
トラウストキトリウム属（Thraustochytrium）及びシゾ
キトリウム属（Schizochytrium）である。これら微生物
相は従属栄養性であって高濃度のオメガ三系ＨＵＦＡｓ
を生成できるという利点を有している。しかし、これら
微生物相の発酵方法を改良し、微生物相生産物の改良形
の使用方法を特定する必要性が依然として存在してい
る。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記の事情
を考慮してなされたものであって、高濃度のオメガ三系
高度不飽和脂肪酸を生成する微生物相及び同微生物相を
生育する方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上述の目的を達成するた
め、請求項１に記載の発明は、約１５０ミクロン以下の
寸法の細胞集合体を有するトラウストキトリウム属、シ
ゾキトリウム属及びこれらの混合物とからなる群から選
択される微生物相バイオマスを提供する。
【０００６】請求項２に記載の発明では、請求項１に記
載の微生物相バイオマスにおいて、シゾキトリウム属が
ＡＴＣＣ第２０８８８番、第２０８８９番及びこれらの
変異体からなる群から選択されるとともにオメガ三系高
度不飽和脂肪酸を産生できるという特徴を備え、同シゾ
キトリウムは少なくとも約０．５％の乾燥重量のオメガ
三系高度不飽和脂肪酸含量を有することをその要旨とす
る。
【０００７】請求項３に記載の発明では、請求項１に記
載の微生物相バイオマスにおいて、トラウストキトリウ
ム属がＡＴＣＣ第２０８９０番、第２０８９１番、第２
０８９２番及びこれらの変異体からなる群から選択され
るとともにオメガ三系高度不飽和脂肪酸を産生できると
いう特徴を備え、同トラウストキトリウム属が少なくと
も約０．５％の乾燥重量のオメガ三系高度不飽和脂肪酸
含量を有することをその要旨とする。
【０００８】請求項４に記載の発明では、培地１リット
ル当り約３グラム以下の塩化物と、炭素源及び窒素源
と、微量養分と、１リットル当たり１グラム以上の非塩
化物ナトリウム塩を含有する培地において約５〜４８℃
の温度及びｐＨ約５．０〜１１．０でトラウストキトリ
ウム、シゾキトリウム及びこれらの混合物からなる群か
ら選択された微生物を生育することを含む請求項１に記
載の微生物相を生成する方法を提供する。
【０００９】請求項５に記載の発明は、請求項４に記載
の方法において、ナトリウム塩は硫酸ナトリウム、ソー
ダ灰、酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリ
ウム及びこれらの混合物からなる群から選択されたもの
であることをその要旨とする。
【００１０】請求項６に記載の発明は、請求項４に記載
の方法において、シゾキトリウム属がＡＴＣＣ第２０８
８８番、第２０８８９番及びこれらの変異体からなる群
から選択されるとともにオメガ三系高度不飽和脂肪酸を
産生できるという特徴を備え、同シゾキトリウムは少な
くとも約０．５％の乾燥重量のオメガ三系高度不飽和脂
肪酸含量を有していることをその要旨とする。
【００１１】請求項７に記載の発明は、請求項４に記載
の方法において、トラウストキトリウム属がＡＴＣＣ第
２０８９０番、第２０８９１番、第２０８９２番及びこ
れらの変異体からなる群から選択されるとともにオメガ
三系高度不飽和脂肪酸を産生できるという特徴を備え、
同トラウストキトリウム属が少なくとも約０．５％の乾
燥重量のオメガ三系高度不飽和脂肪酸含量を有している
ことをその要旨とする。
【００１２】請求項８に記載の発明は、請求項４に記載
の方法において、培地が培地１リットル当り約２５０ミ
リグラム以下の塩化物含量を有していることをその要旨
とする。
【００１３】請求項９に記載の発明は、ａ）非塩化物ナ
トリウム塩を含んだ培地中で生育される請求項１に記載
の微生物相バイオマスと、ｂ）亜麻仁、菜種、大豆、ア
ボカドミール及びこれらの混合物からなる群から選択さ
れる物質とからなる食品を提供する。
【００１４】請求項１０に記載の発明は、請求項９に記
載の食品において、同食品の組成に約５〜９５重量％の
物質ｂ）が含まれることをその要旨とする。請求項１１
に記載の発明は、請求項９に記載の食品において、同食
品は押出し成形物であることをその要旨とする。
【００１５】請求項１２に記載の発明は、請求項１に記
載のトラウストキトリウム属、シゾキトリウム属及びこ
れら混合物からなる群から選択される微生物相を、仔エ
ビ、塩水エビ、クルマムシ及び軟体動物からなる群から
選択された生体に給餌することからなる水産養殖の方法
を提供する。
【００１６】請求項１３に記載の発明は、培地１リット
ル当り約５００ミリグラム以下の塩化物と、炭素源及び
窒素源と、微量養分と、非塩化物ナトリウム塩を含有す
る培地において、約５〜４８℃の温度及びｐＨ約５．０
〜１１．０でトラウストキトリウム属、シゾキトリウム
属及びこれらの混合物からなる群から選択された微生物
を生育することを含む請求項１に記載の微生物相バイオ
マスを生育する方法をその要旨とする。
【００１７】請求項１４に記載の発明は、炭素源、窒素
源、微量養分、及び硫酸ナトリウムを含有する培地にお
いて、約５〜４８℃の温度及びｐＨ約５．０〜１１．０
で請求項１に記載の微生物相バイオマスを生育する方法
をその要旨とする。
【００１８】請求項１５に記載の発明は、請求項１４に
記載の方法において、硫酸ナトリウムの濃度は約１ｇ／
ｌから約５０ｇ／ｌの間であることをその要旨とする。
請求項１６に記載の発明は、請求項１４に記載の方法に
おいて、硫酸ナトリウムの濃度は約２ｇ／ｌから約２５
ｇ／ｌの間であることをその要旨とする。
【００１９】本発明の一実施例では、細胞集合体の平均
寸法が約１５０ミクロン以下のトラウストキトリウム
属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物からなる微生
物相バイオマスが生成される。微生物相バイオマスは水
産養殖に有用であり、特にステロール含有量及びオメガ
三系高度不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ）含有量が多い、エビ
に必要な主たる給餌的利点を微生物相が有するため、仔
エビ（larval shrimp）に給餌するのに有用である。加
えて、微生物相は細胞集合体の寸法が小さいため、仔エ
ビ、塩水エビ（brine shrimp）、クルマムシ及び軟体動
物によって摂取可能である。本発明にはこれらの生物を
生産する方法も含まれ、この方法には細胞の平均寸法が
約１５０ミクロン以下のトラウストキトリウム属、シゾ
キトリウム属及びこれらの混合物を給餌することが含ま
れる。
【００２０】本発明の更なる実施例では、トラウストキ
トリウム属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物から
なる群から選択された微生物を生育する新規の方法を含
む。この方法には、特に硫酸ナトリウム等の非塩化物ナ
トリウム塩を有する培地において微生物相を生育するこ
とが含まれる。より詳細には、発酵に必要なナトリウム
の大部分は非塩化物ナトリウム塩として供給される。本
発明の方法は、培地における塩化物含有量が大幅に低減
され、よって塩化物が発酵装置を腐食することを回避で
きるために、特に市販向けの製造に有用である。加え
て、本発明は水産養殖に利用される食品の製造に特に有
用である。それは、この種の培地において培養されるト
ラウストキトリウム属及びシゾキトリウム属は高塩化物
の培地において培養される場合よりも遥かに小さなクラ
ンプを形成し、よって仔エビの餌料源としてより得やす
くなっているためである。特に、硫酸ナトリウム含有の
培地において培養されるトラウストキトリウム属及びシ
ゾキトリウム属は平均寸法が直径約１５０ミクロン以下
の細胞集合体を有し得る。
【００２１】本発明の更なる実施例は、トラウストキト
リウム属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物からな
る群から選択される微生物相と、亜麻仁、菜種、大豆、
アボカドミール（avocado meal）及びこれらの混合物か
らなる群から選択される添加成分とからなる食品に関す
る。この食品が特に効果的であるのは、長鎖オメガ三系
脂肪酸と、添加成分由来の短鎖オメガ三系脂肪酸の含有
量が多いことである。更なる実施例において、食品は押
出しによって生成される。押出し工程には微生物相と添
加成分とを混合する工程が含まれ、食品の水分含量が低
減されるということがある。次に、食品は加熱されて押
し出され、よって低減した水分含量の大部分を除去す
る。元来の水分含量の残量は自然乾燥又は短時間の焼成
によって容易に除去されて乾燥に必要な総エネルギーが
低減され、高温乾燥を延長することによってオメガ三系
ＨＵＦＡｓの減成度が低減される。
【００２２】
【発明の実施の形態】本明細書全体にわたる定義付けと
して、脂肪酸は脂肪族モノカルボン酸であると理解され
たい。脂質は脂肪酸のグリセリドエステルを関連ホスフ
ァチド、ステロール、アルコール、炭化水素、ケトン及
び関連化合物とともに含有する脂肪又は油であると理解
されたい。
【００２３】この明細書中では脂肪酸の構造を示すのに
一般的に用いられる簡略表記システムを用いている（例
えばウィート（Weete）、１９８０）。このシステムで
は文字「Ｃ」で始まり、炭化水素鎖中の炭素原子数を示
す数が続き、コロン及び二重結合数を示す数と続いて、
即ちＣ２０：５のエイコサペンタエン酸となる。脂肪酸
はカルボキシカーボンから始まるように番号付けされて
いる。二重結合位置はギリシャ文字デルタ（Δ）を付加
し、この後に二重結合の炭素原子数が続くように示さ
れ、即ちＣ２０：５オメガ三系Δ5,8,11,14,17となる。
「オメガ」表記は不飽和脂肪酸のための簡略表記システ
ムであり、カルボキシル基端末炭素からの番号付けが用
いられている。便宜的に「オメガ三系」を記号化するた
め、特に本明細書中に記載の数値式簡略表記法を使用す
る際にｎ−３が用いられている。オメガ三系高度不飽和
脂肪酸はポリエチレン脂肪酸であり、末端のエチレン結
合は脂肪酸の端末メチル基から由来すると同時にこれを
含有する３つの炭素原子であると理解されたい。よっ
て、オメガ三系高度不飽和脂肪酸であるエイコサペンタ
エン酸を完全に表記するとＣ２０：５ｎ−３Δ
5,8,11,14,17となる。簡略化するため二重結合位置（Δ
5,8,11,14,17）は省略される。エイコサペンタエン酸は
Ｃ２０：５ｎ−３と示され、ドコサペンタエン酸（Ｃ２
２：５ｎ−３Δ7,10,13,16 ,19）はＣ２２：５ｎ−３で
あり、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６ｎ−３Δ4,7
,10,13,16,19）はＣ２２：６ｎ−３である。「高度不飽
和脂肪酸」という術語は４つ以上の二重結合を有する脂
肪酸のことである。「飽和脂肪酸」は１〜３つの二重結
合を有する脂肪酸のことである。
【００２４】オメガ三系ＨＵＦＡｓを生成するのに経済
的に望ましい特性を有する以下の組合せによって多くの
微生物株を容易に分離するための収集及び選別方法が生
み出された。それは、１）従属栄養生育が可能、２）含
有量の多いオメガ三系ＨＵＦＡｓ、３）単細胞性、４）
好ましくは含有量の少ない飽和したオメガ六系ＨＵＦＡ
ｓ、５）好ましくは無着色、白色又は本質的に無色の細
胞、６）好ましくは耐熱性（３０℃以上の温度にて生育
する能力）及び７）好ましくは広塩度（広範囲の塩度に
わたり、特に低塩度にて生育可能）である。この方法は
関連米国特許第５，１３０，２４２号に詳述されてい
る。
【００２５】この収集及び選別方法を用いて、細胞の総
乾燥重量パーセント（％ｄｗｔ）の約４５％までの脂肪
酸分を有し、１５〜４８℃の範囲の温度にわたって生育
し、かつ塩度が非常に低い培地において生育する単細胞
微生物相菌株を分離することができる。非常に高度のオ
メガ三系菌株の多くは非常に緩慢に生育する。上記のよ
うに概説した方法によって分離され、かつ急速な生育
度、優れた生成能及び多量のオメガ三系ＨＵＦＡ含有量
を示す菌株は約１２％ｄｗｔまでのオメガ三系不飽和脂
肪酸含量を有している。
【００２６】本発明の一態様では非塩化物ナトリウム
塩、好ましくは硫酸ナトリウムを含有する発酵培地にお
いてオメガ三系ＨＵＦＡ含有量が多いトラウストキトリ
ウム属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物を生育し
ている。より詳細には、発酵に必要なナトリウムの大部
分は非塩化物ナトリウム塩として供給される。例えば、
発酵培地中のナトリウムの約７５％以下、好ましくは約
５０％以下、更に好ましくは約２５％以下が塩化ナトリ
ウムとして供給される。本発明の特に有利な点は、微生
物相が生育される容器並びに他の発酵装置又は下流処理
装置を腐食し得る塩化物が多量には存在しない状態で、
微生物相が生育するのに必要なナトリウムの供給源が培
地によって提供されていることにある。驚くべきこと
に、本発明の微生物相は約３ｇ／ｌ以下、好ましくは約
５００ｍｇ／ｌ以下、更に好ましくは約２５０ｍｇ／ｌ
以下、より一層好ましくは約６０〜１２０ｍｇ／ｌの塩
化物濃度で生育可能であるとともに、１糖当り約５０％
以上のバイオマスを多量に生成することが見出された。
以下のように、本発明の更なる利点は、オメガ三系ＨＵ
ＦＡ含有量が多いにも拘らず、仔エビ、塩水エビ、クル
マムシ及び軟体動物が摂取できるほどに小さな寸法の細
胞集合体を有する微生物相を生成することにある。
【００２７】非塩化物ナトリウム塩の中にはソーダ灰
（炭酸ナトリウム及び酸化ナトリウムの混合物）、炭酸
ナトリウム、重炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム及びこ
れらの混合物があり、この中でも硫酸ナトリウムが好ま
しい。ソーダ灰、炭酸ナトリウム及び重炭酸ナトリウム
は発酵培地のｐＨを増加させる性質を有し、よって培地
のｐＨを適正に維持するために制御工程を必要とする。
硫酸ナトリウム濃度は微生物相の塩度要件を満たすのに
効果的であり、好ましくはナトリウム濃度（Ｎａのｇ／
ｌで表す）は約１．０ｇ／ｌ以上、更に好ましくは約
１．０〜５０．０ｇ／ｌ、より一層好ましくは約２．０
〜２５ｇ／ｌである。
【００２８】驚くべきことに、非塩化物ナトリウム塩、
詳細には硫酸ナトリウムが存在する際の菌株の発酵によ
って、菌株の細胞集合体の寸法が約１５０ミクロン以
下、好ましくは約１００ミクロン以下、更に好ましくは
約５０ミクロン以下に制限されるということが見出され
た。本明細書中で用いられる細胞集合体の寸法という用
語は、微生物相培養株の発酵培地における細胞のクラン
プ、即ち集合体の概算平均寸法のことをいう。通常、微
生物相培養株における細胞集合体の約２５％以上、好ま
しくは約５０％以上、更に好ましくは約７５％以上が平
均寸法以下の細胞集合体を有している。本発明に基づい
て生成される微生物相細胞は、ブレンダー又は渦発生装
置等によって液体状に再度懸濁され、即ち物理的に撹拌
されても、バイオマスの凝固及び／又は乾燥後のみなら
ず発酵培地に存在する間も、上記の細胞集合体の寸法パ
ラメータを満たしている。本発明の方法は連続二分裂
（１つの細胞が２つの細胞に分裂することによって複製
し、この２つの細胞の各々が更に２つに分裂し…と繰り
返す。）によって複製する微生物相には特に意味があ
る。これは、細胞が反復的かつ急速にこの工程に晒され
ると、形成中の多細胞集合体を凝集させる性質を帯び、
この凝集体は上記の細胞集合体の寸法範囲を超える場合
が多いためである。シゾキトリウム属は連続二分裂及び
精胞子を放出する胞子のうの形成によって複製する。し
かし、トラウストキトリウム属は胞子のうを形成し、精
胞子を放出することによってのみ複製する。胞子のう／
精胞子の形成によって複製するトラウストキトリウム属
では、凝集も問題となり得る。これは特に、集合体中に
おける細胞の数は連続二分裂によって形成される集合体
ほど多くはなくとも、トラウストキトリウム属の個々の
細胞の寸法が大きくなる傾向になり、よって少数の細胞
からなる凝集塊が大きくなる。しかし、凝集が顕著では
ない、１つのトラウストキトリウム属寄託株であるＡＴ
ＣＣ ２６１８５が確認された。
【００２９】本発明の別態様において、トラウストキト
リウム属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物の生育
中に発酵培地の酸素分を制限することによって菌株の脂
質分を増加できることが見出された。脂質生成に最適な
酸素濃度は培地の酸素分を変動させることによっていず
れの微生物相の場合でも確定できる。特に、発酵培地の
酸素分は約４０％以下の飽和度、好ましくは約５〜４０
％の飽和度の酸素分に維持される。
【００３０】本発明の方法による菌株の生育は菌株が充
分に生育するように誘導する温度であれば何度であって
も行うことができる。これは、例えば約５〜４８℃、好
ましくは１５〜４０℃、更に好ましくは約２５〜３５℃
である。通常、酸の添加又は緩衝液によってｐＨを調節
しないと、発酵中に培地のアルカリ性が増す。菌株はｐ
Ｈが５．０〜１１．０、好ましくは約６．０〜８．５の
範囲で生育する。
【００３１】接種、生育及び回収のための種々の発酵パ
ラメータが米国特許第５，１３０，２４２号に詳述され
ている。発酵管から採収されたバイオマスは乾燥させて
（例えば、噴霧乾燥、トンネル乾燥（tunnel dryin
g）、真空乾燥又は類似の方法によって）、給餌、即ち
栄養補給としていかなる動物にも用いることができ、こ
の動物の肉又は生産物が人間に消費される。同様に、抽
出されたオメガ三系ＨＵＦＡｓも給餌、即ち栄養補給と
して使用できる。また、採収かつ洗浄されたバイオマス
は給餌補給として（乾燥させずに）直接使用できる。保
存寿命を延ばすために、湿性バイオマスは酸性にされ
（ｐＨ約３．５〜４．５）、かつ／或いは低温殺菌又は
急速加熱されて酵素を不活性化し、次に真空又は非酸化
雰囲気（例えば、Ｎ2又はＣＯ2）下において缶詰め、瓶
詰めにして包装することができる。「動物」という用語
は動物界に属するいかなる生物体をも指し、家禽肉、海
産食物、牛肉、豚肉又は小羊肉が得られるいかなる動物
をも制限なく含んでいる。海産食物は魚、エビ及び貝等
から制限なく得られる。「生産物」という用語にはこう
した動物から得られる肉以外のいかなる生成物をも含ま
れ、この中には卵又は他の生成物等、制限なく含まれ
る。採収バイオマス中のオメガ三系ＨＵＦＡｓ又は抽出
オメガ三系ＨＵＦＡｓはこうした動物に給餌されると、
動物の肉、卵又は他の生産物の中に取り込まれ、これら
の中のオメガ三系ＨＵＦＡ含有量を増加させる。
【００３２】本発明の更なる実施例では採収バイオマス
を仔エビ、塩水エビ、クルマムシ及び軟体動物、特に仔
エビ用の食品として使用している。未だ幼態にある時、
エビの幼態動物には大きすぎて利用できない餌料源があ
る。詳細には、ある生育段階においてエビの幼態動物は
約１５０ミクロン以上の直径を有する餌料源を利用する
ことができない。よって、先におおまかに記載したよう
に、非塩化物ナトリウム塩、詳細には硫酸ナトリウム含
有の発酵培地において生育された微生物相はエビ用食品
としての使用に適している。上記のように、通常、この
ような条件のもとで生育された微生物相の細胞集合体は
約１５０ミクロン以下、好ましくは約１００ミクロン以
下、更に好ましくは約５０ミクロン以下の寸法を有して
いる。
【００３３】本発明の微生物相をエビ用餌料源として使
用する更なる利点は、この微生物相はコレステロールを
含むステロールを多量に含有し、これが仔エビの主たる
給餌要件となっていることである。通常、本発明の微生
物相は好ましくは少なくとも約０．１％の無灰乾燥重量
（ａｆｄｗ）、更に好ましくは少なくとも約０．５％ａ
ｆｄｗ、より一層好ましくは少なくとも約１．０％ａｆ
ｄｗのステロール含量を有している。加えて、通常、本
発明の微生物相は総ステロール含量の好ましくは少なく
とも約１５％、更に好ましくは少なくとも約２５％、よ
り一層好ましくは少なくとも約４０％のコレステロール
含量を有している。更に、本発明の微生物相バイオマス
はオメガ六系脂肪酸、タンパク質、炭水化物、色素及び
ビタミンのような更なる栄養素をもエビに付与してい
る。
【００３４】本発明の微生物生産物は水産養殖によって
生産される魚、エビ及び他の生産物のオメガ三系ＨＵＦ
Ａｓ源として価値がある。この生産物は上記のエビの場
合のように食品として使用でき、或いはエビ及び魚への
一般的な給餌補給物として直接添加でき、或いは水産養
殖生物体の摂取用の塩水エビ又は他の生きたままの給餌
用生物体に給餌できる。この微生物相をこのように用い
ることによって、エビ養殖家は成長率及び／又は生存率
が顕著に高い仔エビを得ることができるとともに、更に
丈夫な幼態経過後の仔エビを生産することができる。
【００３５】大部分の給餌用では採収細胞の脂肪酸分は
約１５〜５０％ｄｗｔであり、残りの物質の大部分はタ
ンパク質及び炭水化物である。評価された菌株の幾つか
が全ての必須アミノ酸を有するため、タンパク質は細胞
の栄養価に多大な役割を果たし、栄養学的にバランスの
とれたタンパク質であると考えられる。
【００３６】本発明の更なる実施例では本発明のトラウ
ストキトリウム属、シゾキトリウム属及びこれらの混合
物と菜種、亜麻仁、大豆及びアボカドミールからなる群
から選択された添加成分とを組み合わせて使用した食品
を生成している。この実施例の利点は食品が添加成分か
らの短鎖オメガ三系ＨＵＦＡｓ及び微生物相からの長鎖
オメガ三系ＨＵＦＡｓの双方を含有していることにあ
る。亜麻仁、菜種、大豆及びアボカドミールを有する食
品は短鎖オメガ三系ＨＵＦＡｓ源を供給し、かつ摂取す
る人間及び動物によって伸長し得る短鎖オメガ三系ＨＵ
ＦＡｓ源を更に供給するのに有用であることは周知であ
る。しかし、こうした食品には添加成分からのコリン含
有量が多く、第一アミンを形成し、魚の不快な臭味を生
じさせ得るという問題がある。更に、添加成分からの毒
性化合物が高濃度の時、例えば鶏の産卵が抑制され、或
いは動物が食餌を受け付けなくなることがあり得る。こ
うして、本発明の食品には亜麻仁、菜種、大豆又はアボ
カドミール含有量を低減できるという利点がある。これ
は、食品を摂取する生物体が長鎖ＨＵＦＡｓに変換する
目的で高濃度の短鎖オメガ三系ＨＵＦＡｓを必要としな
いためである。よって、食品中の亜麻仁及び菜種含有量
が低減されることによって食品中のコリン及び／又は抑
制毒性化合物の量が低減される。
【００３７】食品に使用されるトラウストキトリウム
属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物の量は約５〜
９５重量％の範囲にわたっている。添加成分は約５〜９
５重量％の範囲で食品中に存在できる。加えて、食品は
他の成分も含有することができ、これには穀粒、栄養補
給物、ビタミン、結合剤及び防腐剤がある。
【００３８】好ましい実施例において、上記の食品は押
出しを用いて生成される。押出しによって微生物相と添
加成分とを混合し、この混合した添加成分量だけ微生物
相バイオマスにおける湿度を低減する。食品は加熱され
て押し出され、食品から湿度を更に除去する。結果とし
て生じた水分含量が少ない生産物には自然乾燥又は比較
的短い時間の焼成による乾燥が可能であり、乾燥に必要
な総エネルギー及び長時間の高温に起因するオメガ三系
ＨＵＦＡｓの減成度を低下させる。加えて、押出しから
発生する熱によって添加成分中に一般的に見出される不
要な毒性化合物の幾分かが減成可能である。この毒性化
合物により、例えば鶏の産卵が抑制され、或いは動物が
食餌を受け付けなくなることがある。
【００３９】本発明を実施例に従ってより詳細に記載す
る。上記の選択基準にかなう種は先行技術には記載され
ていない。これら選択基準を用いることによって、選別
した約１，０００個のサンプルから２５を上回る、潜在
的に有望な菌株を分離した。アメリカン・タイプ・カル
チャ・コレクション（ＡＴＣＣ）における約２０，５０
０株の内、分離する時に１０株が同一の分類群に属する
と後に確認された。この保存機関にてまだ生存可能な菌
株を入手し、開示した処理によって分離かつ培養された
菌株と比較するのに使用した。この比較結果を以下の例
４，５に提示している。
【００４０】最近の分類理論家はトラウストキドリッド
（Thraustochydrid）を藻又は藻状原生生物に分類して
いる。本明細書中にて開示し、かつクレームしている単
細胞微生物の全ての菌株はトラウストキトリアレス（Th
raustochytriales）目に属している（目：トラウストキ
トリアレス、科：トラウストキトリアシー（Thraustoch
ytriaceae）、属：トラウストキトリウム属又はシゾキ
トリウム属）。ここでは概略的に記載する目的で、これ
ら微生物は正確な分類位置が不確定であることをより明
らかに示すため、微生物相と呼ぶことにする。
【００４１】以下の新規株は「特許手続きを目的とする
微生物寄託の国際承認に関するブダペスト条約」のもと
で寄託された。こうして寄託される素材の公共利用性に
関する全ての制約は特許付与と同時に取り払われ、取消
はできない。各寄託物は寄託微生物のサンプルを供与す
る最近の申請がアメリカン・タイプ・カルチャ・コレク
ション（ＡＴＣＣ）によって受理された後、少なくとも
５年間、またどのような場合でも寄託日後、少なくとも
３０年間保存される。
【００４２】本発明の好ましい微生物は寄託株であると
同定する特性、詳細には本明細書中に記載のオメガ三系
ＨＵＦＡｓを生成することができ、かつ本明細書中に記
載の条件下にて培養された時に細胞集合体の寸法特性を
有するという同定特性を全て有している。詳細には、本
発明の好ましい微生物とは次の寄託微生物及びこの変異
体のことをいう。
【００４３】 菌株 ATCC No. 寄託年月日 シゾキトリウム属 S31 20888 8/8/88 シゾキトリウム属 S8 20889 8/8/88 本発明は特定の微生物株に関して開示されているが、開
示した示唆に基づいて得られる有用な方法及び菌株の全
てを包含するものであり、当業者に可能な手段である代
替、改変及び最適化の全てを包含している。
【００４４】以下の例及び試験結果は例示することを目
的としており、本発明の範囲を限定するものではない。 （例） （例１．収集及び選別）内陸の浅い塩水池から１５０ｍ
ｌの試料水を収集し、無菌ポリエチレン瓶に保存した。
試料水とともに生きている植物の素材及び自然に生じた
有機堆積物（腐敗動植物物質）も幾分含有するように特
に注意を払った。このサンプルを実験室に戻すまで氷の
上に置いた。実験室で試水を１５〜３０秒間振り動か
し、２種類のフィルタを有するフィルタ装置の中にこの
サンプルを１〜１０ｍｌ、ピペットで移し入れ、即ち注
入した。これらのフィルタは、１）上部における、孔寸
法が約２５μｍの無菌４７ｍｍ径ワットマン第４番フィ
ルタ及び２）同ワットマンフィルタの下部における、孔
寸法が約１．０μｍである４７ｍｍ径ポリカーボネート
フィルタである。フィルタの称呼孔寸法に僅かな変動が
あると、ポリカーボネートフィルタ上に収集される細胞
の寸法は約１．０〜２５μｍの範囲になる。
【００４５】ワットマンフィルタを取り外して廃棄し
た。ポリカーボネートフィルタをペトリ板の中の固体Ｆ
−１培地上に置いた。この培地は（１リットル当り）６
００ｍｌの海水（人工海水を利用可能）、４００ｍｌの
蒸留水、１０ｇの寒天、１ｇのブドウ糖、１ｇのタンパ
ク質加水分解物、０．２ｇの酵母エキス、２ｍｌの０．
１Ｍ ＫＨ2ＰＯ4、１ｍｌのビタミン溶液（Ａ−ｖｉｔ
ｓ）（１００ｍｇ／ｌのチアミン、０．５ｍｇ／ｌのビ
オチン及び０．５ｍｇ／ｌのシアノコバラミンを含
有）、５ｍｌの微量金属混合物（ＰＩＩ金属、１リット
ル当りの含有物は６．０ｇのＮａ2ＥＤＴＡ、０．２９
ｇのＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ、６．８４ｇのＨ3ＢＯ 3、０．
８６ｇのＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、０．０６ｇのＺｎＣ
ｌ2、０．０２６ｇのＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ、０．０５２
ｇのＮｉＳＯ4・Ｈ2Ｏ、０．００２ｇのＣｕＳＯ4・５
Ｈ2Ｏ及び０．００５ｇのＮａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ。）並
びに各々５００ｍｇの硫酸ストレプトマイシン及びペニ
シリン−Ｇからなっている。寒天板を暗所にて３０℃で
保温培養した。２〜４日後、フィルタ上に多くのコロニ
ーが出現した。単細胞微生物相（酵母は除く）をプレー
トから摘採し、同様の培地組成の新たなプレート上にて
再度画線培養した。ほぼ無色の細胞からなるコロニーは
全て摘採するように特に注意を払った。新しいプレート
を３０℃で保温培養し、２〜４日の保温培養期間後に単
一コロニーを摘採した。次に、摘採した単一コロニーを
寒天板と同様の富化有機物を含有する５０ｍｌの液体培
地に置いた。これら培地株を回転振とう培養機のテーブ
ル（１００〜２００ｒｐｍ）上で３０℃にて２〜４日
間、保温培養した。培地株が最大密度に達した様相を呈
すると、この内の２０〜４０ｍｌを採収し、遠心分離さ
せ、凍結乾燥させた。次に、菌株の脂肪酸分を明らかに
するため、周知の技術であるガスクロマトグラフィー
（ルパージュ（Lepage）及びロイ（Roy）、１９８４
年）によってサンプルを分析した。よって、オメガ三系
ＨＵＦＡｓを有する菌株が確認され、更に選別するため
にこれら培地株を維持した。
【００４６】上記で概説した収集及び選別方法を利用
し、１５０を上回る数の単細胞微生物相の菌株が分離さ
れた。これらの菌株は全脂肪酸に占めるパーセントとし
てオメガ三系ＨＵＦＡ含有量が多く、１５〜４８℃にわ
たる温度で生育する。用途によっては、有害なＣ２０：
４ｎ−６及びＣ２２：５ｎ−６ＨＵＦＡｓを（全脂肪酸
に占めるパーセントとして）１％未満有する菌株も分離
可能である。オメガ六系含有量が多い菌株も分離可能で
ある。これら微生物相の菌株は上記で概説した処置を利
用して同一位置から繰り返し分離可能である。新たに分
離される菌株が非常に酷似した様相の脂肪酸を有するこ
とが少なからずある。現時点で、同一菌株の複製分離物
が存在する可能性も否定できない。次に、同様の方法に
より、耐塩性又は多様な炭素及び窒素源を用いる能力の
ような他の望ましい特性を得るための更なる選別を実施
できる。
【００４７】（例２．無制限生育の維持：ＰＯ4及び酵
母エキス）シゾキトリウムアグリゲータム（Schizochyt
rium Aggregatum）（ＡＴＣＣ２８２０９）の細胞を固
体Ｆ−１培地から摘採し、５０ｍｌのＦＦＭ培地に接種
した（フラー（Fuller）ら、１９６４年）。この培地は
海水を１，０００ｍｌ、ブドウ糖を１．０ｇ、ゼラチン
加水分解物を１．０ｇ、肝臓エキスを０．０１ｇ、酵母
エキスを０．１ｇ、ＰＩＩ金属を５ｍｌ、１ｍｌのＢ−
ビタミン溶液（ゴールドスタイン（Goldstein）ら、１
９６９年）及び１ｍｌの抗生物質溶液（２５ｇ／ｌの硫
酸ストレプトマイシン及びペニシリン−Ｇ）を含有して
いる。１．０ｍｌのビタミン配合物（ｐＨ７．２）はチ
アミンＨＣｌを２００μｇ、ビオチンを０．５μｇ、シ
アノコバラミンを０．０５μｇ、ニコチン酸を１００μ
ｇ、パントテン酸カルシウムを１００μｇ、リボフラビ
ンを５．０μｇ、ピリドキシンＨＣｌを４０．０μｇ、
ピリドキサミン２ＨＣｌを２０．０μｇ、ｐ−アミノ安
息香酸を１０μｇ、塩素ＨＣｌを５００μｇ、イノシト
ールを１．０ｍｇ、チミンを０．８ｇ、オロチン酸を
０．２６ｍｇ、ホリニン酸を０．２μｇ及び葉酸を２．
５μｇ含有している。２７℃にして回転振とう培養機
（２００ｒｐｍ）上に培養株を置いた。３〜４日後、こ
の培養株の１ｍｌを各々５０ｍｌの以下の処理剤に移し
変えた。１）ＦＦＭ培地（対照標準として）及び２）２
５０ｍｇ／ｌのＫＨ2ＰＯ4及び２５０ｍｇ／ｌの酵母エ
キスを添加したＦＦＭ培地である。これら培養株を４８
時間、２７℃にして回転振とう培養機（２００ｒｐｍ）
上に置いた。細胞を採収し、細胞の収率を定量化した。
第１処理において、無灰乾燥重量ベースでの細胞の最終
濃度は６１６ｍｇ／ｌであった。第２処理において、細
胞の最終濃度は１，６７５ｍｇ／ｌであり、培地におい
てＰＯ4及び酵母エキスの濃度を高くするという効果が
強調されたことを示している。
【００４８】（例３．無制限生育の維持：酵母エキスの
代替物としてのコーンスティープリカー）シゾキトリウ
ム属ｓｐ．Ｓ３１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．２０８８８）の細
胞を固体Ｆ−１培地から摘採し、５０ｍｌのＭ−５培地
の中に置いた。この培地は（１リットルベースで）１ｇ
の酵母エキス、２５ｇのＮａＣｌ、５ｇのＭｇＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ、１ｇのＫＣｌ、２００ｍｇのＣａＣｌ2、５ｇ
のブドウ糖、５ｇのグルタミン酸塩、１ｇのＫＨ2Ｐ
Ｏ4、５ｍｌのＰＩＩ金属、１ｍｌのＡ−ビタミン溶液
及び１ｍｌの抗生物質溶液からなっている。この溶液の
ｐＨを７．０に調節し、溶液をろ過殺菌した。コーンス
ティープリカー（４ｇ／４０ｍｌ；ｐＨ７．０）及び酵
母エキス（１ｇ／４０ｍｌ；ｐＨ７．０）の無菌溶液を
調製した。一組のＭ−５培地フラスコに以下の量の酵母
エキス溶液を添加した。１）２ｍｌ；２）１．５ｍｌ；
３）１ｍｌ；４）０．５ｍｌ及び５）０．２５ｍｌであ
る。別の一組のＭ−５培地フラスコに酵母エキス及びコ
ーンスティープリカー溶液を以下の濃度で添加した。
１）２ｍｌの酵母エキス；２）１．５ｍｌの酵母エキス
及び０．５ｍｌのコーンスティープリカー；３）１．０
ｍｌの酵母エキス及び１．０ｍｌのコーンスティープリ
カー；４）０．５ｍｌの酵母エキス及び１．５ｍｌのコ
ーンスティープリカー及び５）２ｍｌのコーンスティー
プリカーである。各フラスコに接種するのにＦ−１培地
における培養株を１ｍｌだけ使用した。これら培養株を
４８時間、２７℃にして回転振とう培養機上に置いた。
遠心分離法によって細胞を採収し、（無灰乾燥重量とし
て）細胞の収率を測定した。表１に結果を示している。
この結果は０．８ｇ／ｌの培地まで酵母エキスを添加す
ることによって細胞の収率を高めることができるという
ことを示している。しかし、酵母エキスとともにコーン
スティープリカーを添加すると更に効果的であり、処理
剤の収率が２倍になる。コーンスティープリカーは酵母
エキスよりも遥かに安価であるため、細胞を経済的に生
成するにはこれは非常に有利である。
【００４９】
【表１】
【００５０】（例４．ＡＴＣＣ株（周知の菌株）と比較
した場合の例１の方法によって分離した菌株のＨＵＦＡ
含有量の増加）例１に記載の方法に基づいて選択され、
新たに分離された一群の１５１個の菌株を後期指数増殖
期中にサンプルとし、ガスクロマトグラフィーによって
ＨＵＦＡ含有量を分析した。全ての菌株はＭ１培地又は
液体ＦＦＭ培地のいずれかにおいて生育され、いずれに
しても細胞の収率が最大であることを示した。Ｍ１培地
はＭ５培地と同一の組成であり、ブドウ糖及びグルタミ
ン酸塩の濃度が１ｇ／ｌである点が例外である。加え
て、以前に分離されたトラウストキトリウム属又はシゾ
キトリウム属を５種、アメリカン・タイプ・カルチャ・
コレクションから得た。この保存機関では保存物から生
存できる形態で得られる全ての菌株を表示している。こ
れらの菌株とはＴ．アウレウム（aureum）（ＡＴＣＣ第
２８２１１番）、Ｔ．アウレウム（ＡＴＣＣ第３４３０
４番）、Ｔ．ロゼウム（roseum）（ＡＴＣＣ第２８２１
０番）、Ｔ．ストレータム（straitum）（ＡＴＣＣ第３
４４７３番）及びＳ．アグリゲータム（ＡＴＣＣ第２８
２０９番）であった。従来の培地において菌株は全て生
育が短縮されることを示し、本発明のＭ５培地及びＦＦ
Ｍ培地等の培地においては概して生育が向上することを
示した。本発明の培地において菌株の生育が向上したこ
とに基づき、各周知株の脂肪酸生成量を上記のように測
定した。
【００５１】周知の構造からなる純粋化合物を使用する
ことによって、脂肪酸のピークを確認した。クロマトグ
ラフィーのピークを統合することによって全脂肪酸の重
量パーセントで計量した。確認された化合物はパルチミ
ン酸（Ｃ１６：０）、Ｃ２０：４ｎ−６及びＣ２２：１
（これらは用いたシステムによって別々に分解しなかっ
た。）、Ｃ２０：５ｎ−３、Ｃ２２：５ｎ−６、Ｃ２
２：５ｎ−３並びにＣ２２：６ｎ−３であった。通常は
低分子量の残りの脂肪酸は「他の脂肪酸」という分類に
まとめた。全オメガ三系脂肪酸を２０：５ｎ−３、２
２：５ｎ−３及び２２：６ｎ−３の総計として計算し
た。全オメガ六系脂肪酸を２０：４／２２：１のピーク
及び２２：５ｎ−６のピークの総計として計算した。
【００５２】表２〜７及び図１〜３にこの結果を示して
いる。表２〜４より、本発明の方法によって多数の菌株
を分離でき、かつ幾つかの重要な基準によって周知の菌
株よりも優れた菌株が多数存在するということがわか
る。例えば、１０２個の菌株は全脂肪酸の少なくとも
７．８重量％のＣ２０：５ｗ３を生成し、これは周知の
いずれの菌株よりも同脂肪酸の割合が高い。菌株２３Ｂ
（ＡＴＣＣ第２０８９２番）及び１２Ｂ（ＡＴＣＣ第２
０８９０番）がこの菌株の例である。本発明の３０個の
菌株はオメガ三系脂肪酸として全脂肪酸の少なくとも６
８重量％を生成し、これは周知のいずれの菌株よりも多
い。菌株２３Ｂ（ＡＴＣＣ第２０８９２番）がこの菌株
の例である。本発明の７６個の菌株は人間の栄養分には
望ましくないと考えられるオメガ六系脂肪酸として全脂
肪酸の僅か１０重量％を生成したのみであり、これは周
知のいずれの菌株よりも少ない。菌株２３Ｂ（ＡＴＣＣ
第２０８９２番）及び１２Ｂ（ＡＴＣＣ第２０８９０
番）がこの菌株の例である。加えて、オメガ六系脂肪酸
として全脂肪酸の２５重量％を上回る量を生成する本発
明の菌株が３５個あり、これは周知のいずれの菌株より
も多い。これらの菌株は栄養目的とするには利用範囲が
相対的に狭いといえるが、オメガ六系脂肪酸から開始す
るエイコサノイドの化学合成用の供給原料として有用で
ある。
【００５３】加えて、Ｃ２２：６ｎ−３として全オメガ
三系脂肪酸を高率に生成する菌株が多く存在することを
データが明らかにしている。表５〜７において、表２〜
４に示した菌株の４８個を周知の菌株と比較し、Ｃ２
０：５ｎ−３、Ｃ２２：５ｎ−３及びＣ２２：６ｎ−３
の各々を総オメガ三系重量パーセントとして示してい
る。１５個の菌株がＣ２２：６ｎ−３として全オメガ三
系脂肪酸の少なくとも９４重量％を有し、これは周知の
いずれの菌株よりも多い。菌株Ｓ８（ＡＴＣＣ第２０８
８９番）がこの菌株の例であった。１８個の菌株がＣ２
０：５ｎ−３として全オメガ三系脂肪酸の少なくとも２
８重量％を有し、これは周知のいずれの菌株よりも多
い。菌株１２Ｂ（ＡＴＣＣ第２０８９０番）がこの菌株
の例であった。
【００５４】
【表２】
【００５５】
【表３】
【００５６】
【表４】
【００５７】
【表５】
【００５８】
【表６】
【００５９】
【表７】
【００６０】図１は例１における方法によって分離さ
れ、（全脂肪酸パーセントにして）６７％を上回るオメ
ガ三系脂肪酸及び（全脂肪酸パーセントにして）１０．
６％を下回るオメガ六系脂肪酸を有する一連の菌株を示
している。周知の菌株は全て（全脂肪酸パーセントにし
て）６７％を下回るオメガ三系脂肪酸及び（全脂肪酸パ
ーセントにして）１０．６％を上回るオメガ六系脂肪酸
を有していた。
【００６１】図２は例１における方法によって分離さ
れ、（全脂肪酸パーセントにして）６７％を上回るオメ
ガ三系脂肪酸及び（全脂肪酸パーセントにして）７．５
％を上回るＣ２０：５ｎ−３を有する一連の菌株を示し
ている。周知の菌株は全て（全脂肪酸パーセントにし
て）６７％を下回るオメガ三系脂肪酸及び（全脂肪酸パ
ーセントにして）７．８％を下回るＣ２０：５ｎ−３を
有していた。
【００６２】（例５．ＡＴＣＣ菌株（周知の株）と比較
した場合の例１の方法によって分離した菌株の生育率の
上昇）シゾキトリウム属ｓｐ．Ｓ３１（ＡＴＣＣ第２０
８８８番）、シゾキトリウム属ｓｐ．Ｓ８（ＡＴＣＣ第
２０８８９番）、トラウストキトリウム属ｓｐ．Ｓ４
２、トラウストキトリウム属ｓｐ．Ｕ４２−２、トラウ
ストキトリウム属ｓｐ．Ｕ４２及びＵ３０並びにトラウ
ストキトリウムアウレウム（ＡＴＣＣ第２８２１１番）
及びシゾキトリウムアグリゲータム（ＡＴＣＣ第２８２
０９番）（周知の菌株）の細胞を固体Ｆ−１培地から摘
採し、５０ｍｌのＭ−５培地に置いた。この溶液のｐＨ
を７．０に調節し、溶液をろ過殺菌した。回転振とう培
養機（２００ｒｐｍ、２７℃）上で３日間生育した後、
各培養菌株の１〜２ｍｌをＭ−５培地の他のフラスコに
移し換え、２日間、同振とう培養機上に置いた。次に、
これら培養株（１〜２ｍｌ）をＭ−５培地の他のフラス
コに移し換え、１日間、振とう培養機上に置いた。この
工程により全ての培養株は指数増殖期中にあった。次
に、これらの後期培養株を用いてＭ−５培地の２本の２
５０ｍｌフラスコに接種し、各々に株を育成することと
した。次に、これらフラスコを２５℃及び３０℃にて振
とう培養機上に置き、ベックマンＤＢ−Ｇ分光測光器
（６６０ｎｍ、１ｃｍの路程）上でその光学濃度の変化
を監視した。光学濃度の読取りは０，６，１０，１４，
１７．２５，２０．２５，２２．７５時間で行った。次
に、ソロキン（（Sorokin）１９７３年）の手法によっ
て光学密度データから指数増殖率（１日当りの倍加）を
計算した。この結果を表８及び図４（２５℃における菌
株Ｕ３０の生育が標準）に示している。例１における方
法によって分離された菌株が２５℃及び３０℃の双方で
周知のＡＴＣＣ菌株よりも遥かに高い生育率を有し、連
続して生育するのに欠かせないリン酸塩濃度に最適化し
ても結果は同じであることをデータは示している。南極
の冷水から分離されたトラウストキトリアレス株は３０
℃で生育する様子を示さなかった。
【００６３】
【表８】
【００６４】（例６．ＡＴＣＣ株（従来の菌株）と比較
した場合の例１の方法によって分離した菌株の生成特性
（生育及び脂質誘導）の向上）シゾキトリウム属ｓｐ．
Ｓ３１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）、シゾキトリウム属
ｓｐ．Ｓ８（ＡＴＣＣ第２０８８９番）（双方とも例１
の方法で分離）並びにトラウストキトリウムアウレウム
（ＡＴＣＣ第２８２１１番）及びシゾキトリウムアグリ
ゲータム（ＡＴＣＣ第２８２０９番）（従来の菌株）の
細胞を固体Ｆ−１培地から摘採し、５０ｍｌのＭ−５培
地の中に置いた（例３を参照）。この溶液のｐＨを７．
０に調節し、溶液をろ過殺菌した。回転振とう培養機
（２００ｒｐｍ、２７℃）上で３日間生育した後、各培
養株の１〜２ｍｌをＭ−５培地の他のフラスコに移し換
え、２日間、同振とう培養機上に置いた。次に、これら
培養株の各々の無灰乾燥重量を素早く測定し、５０ｍｌ
のＭ−５培地を含有する２本の２５０ｍｌ三角フラスコ
の中に各培養株を３．２９ｍｇだけピペットで移し換え
た。これらフラスコを回転振とう培養機上に置いた（２
００ｒｐｍ、２７℃）。２４時間後、各培養株の２０ｍ
ｌ分を遠心分離し、上澄みを廃棄し、グルタミン酸塩
（Ｎ源）を全く含有しない５０ｍｌのＭ−５培地を有す
る２５０ｍｌ三角フラスコに細胞を移し換えた。フラス
コを振とう培養機に置き直し、ルパージュ及びロイ（１
９８４年）の手法によって１２時間後に試料採取して無
灰乾燥重量を測定し、脂肪酸分を定量化した。この結果
を図５（周知の菌株であるＡＴＣＣ第２８２１１番の収
率が標準）に示している。この結果は例１の方法によっ
て分離された菌株が指数増殖及び窒素制限下において、
同時間内で従来のＡＴＣＣ株より２〜３培も多い無灰乾
燥重量を生成したことを示している。加えて、本発明の
菌株から得られる全脂肪酸及びオメガ三系脂肪酸の収率
が多くなり、菌株Ｓ３１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）は
従来のＡＴＣＣ株より３〜４培も多いオメガ三系脂肪酸
を生成している。
【００６５】（例７．例１の方法で分離した菌株によっ
て向上した耐塩性及び脂肪酸生成）トラウストキトリッ
ドの４種の菌株、即ちシゾキトリウム属ｓｐ．Ｓ３１
（ＡＴＣＣ第２０８８８番）、トラウストキトリウム属
ｓｐ．Ｕ４２−２（ＡＴＣＣ第２０８９１番）（双方と
も例１の方法で分離かつ選別）並びにＳ．アグリゲータ
ム（ＡＴＣＣ第２８２０９番）及びＴ．アウレウム（Ａ
ＴＣＣ第２８２１０番）（アメリカン・タイプ・カルチ
ャ・コレクションから入手）を固体Ｆ−１培地から摘採
し、回転振とう培養機（２００ｒｐｍ）上で２７℃にて
３〜４日間、保温培養した。以下のようにＭ培地塩（２
５ｇ／ｌのＮａＣｌ、５ｇ／ｌのＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、
１ｇ／ｌのＫＣｌ、２００ｍｇ／ｌのＣａＣｌ2）を希
釈することによって、異なる塩度域の培地を調製した。
それは、１）１００％（ｗ／ｖ）のＭ培地塩、２）８０
％（ｖ／ｖ）のＭ培地、２０％（ｖ／ｖ）の蒸留水、
３）６０％（ｖ／ｖ）のＭ培地、４０％（ｖ／ｖ）の蒸
留水、４）４０％（ｖ／ｖ）のＭ培地、６０％（ｖ／
ｖ）の蒸留水、５）２０％（ｖ／ｖ）のＭ培地、８０％
（ｖ／ｖ）の蒸留水、６）１５％（ｖ／ｖ）のＭ培地、
８５％（ｖ／ｖ）の蒸留水、７）１０％（ｖ／ｖ）のＭ
培地、９０％（ｖ／ｖ）の蒸留水、８）７％（ｖ／ｖ）
のＭ培地、９３％（ｖ／ｖ）の蒸留水、９）３％（ｖ／
ｖ）のＭ培地、９７％（ｖ／ｖ）の蒸留水、１０）１．
５％（ｖ／ｖ）のＭ培地、９８．５％（ｖ／ｖ）の蒸留
水である。以下の栄養素、即ち５ｇのブドウ糖、５ｇの
グルタミン酸塩、１ｇの酵母エキス、２００ｍｇの（Ｎ
Ｈ4）2ＳＯ4、２００ｍｇのＮａＨＣＯ3、５ｍｌのＰＩ
Ｉ金属、１ｍｌのＡビタミン溶液及び２ｍｌの抗生物質
溶液を処理剤に添加した（１リットル当り）。これら処
理剤の各々の５０ｍｌにＦ−１培地にて生育する細胞の
１ｍｌを接種した。これら培養株を回転振とう培養機
（２００ｒｐｍ）上に置き、４８時間、２７℃で維持し
た。遠心分離により細胞を採収し、ガスクロマトグラフ
ィーにより全脂肪酸を測定した。この結果を図６に示し
ている。例１の方法で分離されたトラウストキトリウム
属ｓｐ．Ｕ４２−２（ＡＴＣＣ第２０８９１番）はＴ．
アウレウム（ＡＴＣＣ第２８２１１番）が生成する脂肪
酸の量のほぼ２倍、Ｓ．アグリゲータム（ＡＴＣＣ第２
８２０９番）が生成する脂肪酸の量の８倍以上を生成で
きる。加えて、Ｕ４２−２は評価塩度域の上端におい
て、より広範囲の耐塩性を有しているように思われる。
やはり例１の方法で分離されたシゾキトリウム属ｓｐ．
Ｓ３１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）は脂肪酸収率が多く
（周知のＡＴＣＣ株の２．５〜１０倍）、ＡＴＣＣ株よ
りも遥かに広範囲の耐塩性を示した。加えて、シゾキト
リウム属ｓｐ．Ｓ３１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）は非
常に低い塩度で最大に生育している。市販性を考慮した
場合、この特性は経済的に大きな効果となる。それは、
塩水が金属反応装置に腐食効果を及ぼし、塩水処理に関
連して問題が発生するためである。
【００６６】（例８．培養／低塩度）２５０ｍｌ三角フ
ラスコ中のＭ／１０−５培地の５０ｍｌに、寒天斜面か
ら摘採したシゾキトリウム属ｓｐ．Ｓ３１（ＡＴＣＣ第
２０８８８番）のコロニーを接種した。Ｍ／１０−５培
地は１０００ｍｌの脱イオン水、２．５ｇのＮａＣｌ、
０．５ｇのＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．１ｇのＫＣｌ、
０．０２ｇのＣａＣｌ2、１．０ｇのＫＨ2ＰＯ4、１．
０ｇの酵母エキス、５．０ｇのブドウ糖、５．０ｇのグ
ルタミン酸、０．２ｇのＮａＨＣＯ3、５ｍｌのＰＩＩ
微量金属、２ｍｌのビタミン配合物及び２ｍｌの抗生配
合物を含有している。回転振とう培養機（２００ｒｐ
ｍ）上で３０℃にて培養株を保温培養した。２日後、培
養株は適度の密度になり、活発に生育していた。この活
発に生育する培養株を２０ｍｌ用いて、同一の培地を１
７００ｍｌ含有する２リットル発酵そうに接種した。但
し、この培地ではブドウ糖及びグルタミン酸塩の濃度は
４０ｇ／ｌに増大していた（Ｍ／１０−４０培地）。発
酵そうを３０℃、１ｖｏｌ／ｍｉｎのエアレーション、
３００ｒｐｍの混合で維持した。４８時間後、発酵そう
中の細胞密度は２１．７ｇ／ｌであった。細胞を遠心分
離によって採収し、凍結乾燥させ、Ｎ2下にて保存し
た。
【００６７】全脂肪酸分及びオメガ三系脂肪酸含有量を
ガスクロマトグラフィーによって測定した。最終生成物
の総脂肪酸分は３９．０％の無灰乾燥重量であった。微
生物生産物のオメガ三系ＦＵＦＡ含有量（Ｃ２０：５ｎ
−３、Ｃ２２：５ｎ−３及びＣ２２：６ｎ−３）は、総
脂肪酸分の２５．６％であった。試料の灰分は７．０％
であった。
【００６８】（例９．脂肪酸分の多様性）例４に記載の
種々の菌株によって生成される脂肪酸の生育及びガスク
ロマトグラフ分析によって、脂肪酸の多様性に相違があ
ることが明らかになった。本発明の菌株は従来から得ら
れる菌株よりも互いに異なる脂肪酸を合成することが少
なかった。分離すべき不純物がより少なくなるため、脂
肪酸の精製では脂肪酸の多様性が低いほうが効果的であ
る。餌料補給を目的として、不要な脂肪酸を摂取する可
能性が減じるため、互いに異なる脂肪酸の数は少ないほ
うが効果的である。表９はＡＴＣＣ番号で示す周知の菌
株及び本発明の種々の菌株において、総脂肪酸重量にし
て１％以上の濃度を占めて存在し、互いに異なっている
ＨＵＦＡｓの数を示している。
【００６９】
【表９】
【００７０】（例１０．回収）２５０ｍｌ三角フラスコ
中のＭ５培地の５０ｍｌに、寒天斜面から摘採したシゾ
キトリウム属ｓｐ．Ｓ３１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）
のコロニーを接種した。回転振とう培養機（２００ｒｐ
ｍ）上で３０℃にて培養株を保温培養した。２日後、培
養株は適度の密度になり、活発に生育していた。この活
発に生育する培養株の２０ｍｌを用いて、同一の培地を
１０００ｍｌ含有する１リットル発酵そうに接種した。
但し、この培地ではブドウ糖及びグルタミン酸塩の濃度
を４０ｇ／ｌに増大していた（Ｍ２０培地）。発酵そう
を３０℃、ｐＨ７．４で維持し、エアレーションを１ｖ
ｏｌ／ｍｉｎ、混合を４００ｒｐｍとした。４８時間
後、発酵そう中の細胞密度は１８．５ｇ／ｌであった。
発酵そうにおけるエアレーション及び混合を止めて２〜
４分以内に細胞は発酵そうの下部２５０ｍｌにおいて凝
集し、沈澱した。細胞のこの凝集領域は７２ｇ／ｌの細
胞密度を有していた。この細胞域は発酵そうからサイホ
ンで吸収でき、更に（１）窒素制限時間中、別の反応装
置に移され（例えば、幾つかの発酵そうの高密度生成を
組み合わせる。）或いは（２）遠心分離又はろ過によっ
て直接採収できる。このように予め細胞を凝集させるこ
とによって、細胞を回収するために加工処理する必要が
ある水の量が６０〜８０％少なくなった。
【００７１】（例１１．種々の炭素源及び窒素源の利
用）２５０ｍｌ三角フラスコ中のＭ５培地の５０ｍｌ
に、寒天斜面から摘採したシゾキトリウム属ｓｐ．Ｓ３
１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）又はトラウストキトリウ
ム属ｓｐ．Ｕ４２−２（ＡＴＣＣ第２０８９１番）のコ
ロニーを接種した。Ｍ５培地については例３で記載し、
その相違は２ｍｌのビタミン配合物質及び２ｍｌの抗生
物質混合物を添加したことにある。回転振とう培養機
（２００ｒｐｍ）上で３０℃にて培養株を保温培養し
た。２日後、培養株は適度の密度になり、活発に生育し
ていた。この培養株を用いてＭ５培地のフラスコにブド
ウ糖の代替としてデキストリン、ソルビトール、フルク
トース、ラクトース、マルトース、スクロース、コーン
スターチ、小麦でんぷん、ジャガイモでんぷん、グラン
ドコーン（ground corn）の中の１つを接種し（５ｇ／
ｌ）、或いはグルタミン酸塩の代替としてゲリセート
（gelysate）、ペプトン、トリプトン、カゼイン、コー
ンスティープリカー、尿素、硝酸塩、アンモニウム、ホ
エー又はコーングルテンミールの中の１つを接種した
（５ｇ／ｌ）。回転振とう培養機（２００ｒｐｍ、２７
℃）上で４８時間、培養株を保温培養した。互いに異な
る有機物上での生育を比較した培養密度を表１０，１１
に示している。
【００７２】
【表１０】
【００７３】
【表１１】
【００７４】（例１２．塩水エビのオメガ三系ＨＵＦＡ
含有量の増加を目的とするトラウストキトリッドベース
の飼養補給物の給餌）Ｍ−５培地のシェーク（shake）
フラスコにおいてトラウストキトリウム属ｓｐ．１２Ｂ
（ＡＴＣＣ第２０８９０番）の細胞バイオマスを２５℃
で生成した（例３を参照）。Ｍ／１０−５培地のシェー
クフラスコにおいてトラウストキトリウム属ｓｐ．Ｓ３
１（ＡＴＣＣ第２０８８８番）の細胞バイオマスを２７
℃で生成した（例８を参照）。遠心分離によって各菌株
の細胞を採収した。このペレットを一度蒸留水で洗浄
し、再度遠心分離させ、５０％の固形ペーストを生成し
た。生じたペーストを海水中に再度懸濁させ、次に給餌
補給物として成体塩水エビ用の培養物に添加した。塩水
エビは老廃農産物上にて予め飼養され、この結果、塩水
エビのオメガ三系ＨＵＦＡ含有量は非常に少なく、全脂
肪酸の僅か１．３〜２．３％であった（野生塩水エビの
オメガ三系ＨＵＦＡの平均含有量は全脂肪酸の６〜８％
である。）。海水で満たした１リットルビーカー中に塩
水エビ（２〜３／ｍｌ）を保持し、エアーストーン（ai
rstone）を用いてこの培養物を曝気かつ混合した。給餌
補給物の添加後、塩水エビのサンプルを時々採収して洗
浄し、ガスクロマトグラフィーによって脂肪酸含有量を
測定した。この結果を図７及び８に示している。最後の
給餌としてトラウストキトリッドベースの給餌補給物を
給餌すると、塩水エビのオメガ三系含有量は菌株１２Ｂ
を給餌する場合には５時間以内に、或いはＳ３１を給餌
する場合には１１時間以内に野生塩水エビのオメガ三系
含有量にまで増加可能である。塩水エビのオメガ三系Ｈ
ＵＦＡ含有量は、これら給餌補給物を２４時間まで給餌
すると、野生塩水エビのオメガ三系含有量よりも大幅に
増加可能である。加えて、これら給餌補給物によって塩
水エビのＤＨＡ含有量が大幅に増加する。通常、ＤＨＡ
は野生塩水エビでは微量にしか報告されていない。
【００７５】（例１３．培地における硫酸ナトリウムの
使用）この例では、発酵培地におけるナトリウム塩とし
て塩化ナトリウムの代わりに硫酸ナトリウムを用いた
時、オメガ三系生成及び総脂肪酸分が損なわれず、同等
か或いは優れていることを示している。培地１リットル
当り２．３６ｇのナトリウム、１．５〜３．０ｇの窒素
源及び３．０ｇのブドウ糖を含有し、ｐＨが７．０の培
地において、シゾキトリウム属 ＡＴＣＣ第２０８８８
番を生育した。２００ｒｐｍにて２８℃で４８時間、細
胞を保温培養した。この結果を表１２に示している。
【００７６】
【表１２】
【００７７】表１２からわかるように、ナトリウム塩と
して硫酸ナトリウムを用いた時のオメガ三系及び全脂肪
酸の生成は塩化ナトリウムを用いた時に匹敵するか、或
いはより優れている。
【００７８】（例１４．低塩度培地におけるシゾキトリ
ウム属の生成）この例では、低塩度の培地でありながら
バイオマス収率並びにオメガ三系及び脂肪酸の生成を高
度に維持したシゾキトリウム属の発酵を示している。
【００７９】窒素源として３．３３ｇ／ｌのペプトン、
炭素源として５．０ｇ／ｌのブドウ糖を含有し、ナトリ
ウム濃度を色々に変えた培地において、シゾキトリウム
属ＡＴＣＣ第２０８８８番を生育した。約４０ｍｇ／ｌ
ｄｗｔの接種物によって４８時間、３０℃にて細胞を
発酵させた。ナトリウムは塩化ナトリウムとして供給し
た。この進行結果を表１３に示している。
【００８０】
【表１３】
【００８１】表１３の結果からわかるように、約１．０
ｇ／ｌ以上のナトリウム濃度でバイオマス収率並びにオ
メガ三系脂肪酸及び全脂肪酸の生成を高めることができ
る。 （例１５．塩化物含有量が少ない培地におけるシゾキト
リウム属の培養）この例では、最低限の塩化物濃度であ
りながら初期糖濃度に基づいてバイオマス収率を増大さ
せた、本発明の微生物相の発酵を示している。
【００８２】下記に示す培地の５０ｍｌアリコートで２
００ｒｐｍ及び２８℃にてシェークフラスコ中において
シゾキトリウム属 ＡＴＣＣ第２０８８８番を培養し
た。この培地は１０００ｍｌの脱イオン水、１．２ｇの
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．０６７ｇのＣａＣＯ3、３．
０ｇのブドウ糖、３．０ｇのグルタミン酸モノナトリウ
ム、０．２ｇのＫＨ2ＰＯ4、０．４ｇの酵母エキス、
５．０ｍｌのＰＩＩ金属、１．０ｍｌのビタミン配合物
並びに各０．１ｇのペニシリンＧ及び硫酸ストレプトマ
イシンからなっていた。塩化物の濃度は各処理剤に添加
するＫＣｌの量を変えることによって様々であった。全
ての処理剤におけるカリウム濃度はクエン酸カリウムを
添加することによって一定に保持された。硫酸ナトリウ
ムの添加によってナトリウム濃度は２．３７ｇ／ｌ又は
４．０ｇ／ｌのいずれかであった。これら発酵の結果を
下記の表１４に示している。
【００８３】
【表１４】
【００８４】表１４に示す結果からわかるように、低塩
化物濃度にて１糖当りのバイオマス収率を多くすること
ができる。例えば、５９．１ｍｇ／ｌ以上の塩化物濃度
において理論値の５０％以上の収率を達成している。
【００８５】（例１６．低塩化物濃度での硫酸ナトリウ
ム濃度の変動）この例では、低塩化物濃度での発酵にお
ける様々な硫酸ナトリウム濃度の効果を示している。
【００８６】下記に示す培地の５０ｍｌアリコートで２
００ｒｐｍ及び２８℃にてシェークフラスコ中において
シゾキトリウム属 ＡＴＣＣ第２０８８８番を培養し
た。この培地は１０００ｍｌの脱イオン水、１．２ｇの
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．１２５ｇのＫＣｌ、０．０６
７ｇのＣａＣＯ3、３．０ｇのブドウ糖、３．０ｇのグ
ルタミン酸モノナトリウム、０．２ｇのＫＨ2ＰＯ4、
０．４ｇの酵母エキス、５．０ｍｌのＰＩＩ金属、１．
０ｍｌのビタミン配合物並びに各０．１ｇのペニシリン
Ｇ及び硫酸ストレプトマイシンからなっていた。硫酸ナ
トリウムの濃度を処理剤において３．０〜３０．２ｇ／
ｌに変化させた。発酵の進行結果を下記の表１５に示し
ている。
【００８７】
【表１５】
【００８８】表１５に示す結果は約５９ｇ／ｌという低
塩化物濃度において、適正な硫酸ナトリウム濃度を選択
することによって、ブドウ糖から理論値の５０％以上の
バイオマス収率が多く得られることを示している。
【００８９】
【発明の効果】以上詳述したように、本発明によれば、
微生物相及び同微生物相を生育する方法を改良して、高
濃度のオメガ三系高度不飽和脂肪酸を生成することがで
きる。
【図面の簡単な説明】
【図１】新たに分離された本発明の菌株（●）及び以前
に分離された菌株（＋）におけるＨＵＦＡ生成のグラフ
図である。各点は菌株を表し、各点の位置はオメガ三系
ＨＵＦＡｓ（横座標）の全脂肪酸に占める重量パーセン
ト及びオメガ六系脂肪酸（縦座標）の全脂肪酸に占める
重量パーセントによって確定されている。本発明の菌株
は全脂肪酸の１０．６％（ｗ／ｗ）以下がオメガ六系
で、全脂肪酸の６７％以上がオメガ三系の範囲内にのみ
示された。
【図２】新たに分離された本発明の菌株（●）及び以前
に分離された菌株（＋）におけるＨＵＦＡ生成のグラフ
図である。各点は菌株を表し、各点の位置はオメガ三系
ＨＵＦＡｓ（横座標）の全脂肪酸に占める重量パーセン
ト及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ Ｃ２０：５ｎ−
３）（縦座標）の全脂肪酸に占める重量パーセントによ
って確定されている。本発明の菌株は全脂肪酸の６７％
（ｗ／ｗ）以上がオメガ三系で、全脂肪酸の７．８％
（ｗ／ｗ）以上がＣ２０：５ｎ−３の範囲内にのみ示さ
れた。
【図３】新たに分離された本発明の菌株（□）及び以前
に分離された菌株（＋）におけるオメガ三系ＨＵＦＡ組
成のグラフである。各点は個々の菌株を表している。横
座標値はＣ２０：５ｎ−３の全オメガ三系ＨＵＦＡｓの
重量画分であり、縦座標値はＣ２２：６ｎ−３の全オメ
ガ三系高度不飽和脂肪酸の重量画分である。本発明の菌
株のみがＣ２０：５ｎ−３の重量画分が２８％以上であ
るか、或いはＣ２２：６ｎ−３の重量画分が９３．６％
を上回る範囲に示された。
【図４】新たに分離された本発明の種々の菌株及び以前
に分離された菌株の２５℃及び３０℃における生育を示
すグラフである。生育率は２５℃での菌株Ｕ−３０の生
育率に対して標準化されている。以前に分離された菌株
はＡＴＣＣ受入番号で示されている。
【図５】窒素の制限による誘導後の細胞生成の総収率の
グラフである。図示したような無灰乾燥重量、全脂肪酸
及びオメガ三系ＨＵＦＡｓの各々は菌株２８２１１の対
応値を標準とするように示された。全ての菌株はＡＴＣ
Ｃ受入番号で識別されている。
【図６】横座標に示す塩度を有する培地において生育さ
れた後の脂肪酸収率のグラフである。図示した菌株は新
たに分離された菌株Ｓ３１（ＡＴＣＣ ２０８８８）
（□）及びＵ４２−２（ＡＴＣＣ ２０８９１）（＋）
並びに以前に分離された菌株ＡＴＣＣ ２８２１１
（◇）及びＡＴＣＣ ２８２０９（△）である。脂肪酸
収率はＳ３１（ＡＴＣＣ ２０８８８）（□）が試験塩
度域にわたって示す平均生育率に基づき、任意値１．０
０を標準とした相対収率としてプロットされている。
【図７】例１の方法で分離されたトラウストキトリッド
（Thraustochytrid）菌株（ＡＴＣＣ ２０８９０）を
給餌されたアルテミアサリナ（Artemia salina）という
塩水エビにおける総脂質中のオメガ三系ＨＵＦＡ含量の
増加を示すグラフである。ＥＰＡはＣ２０：５ｎ−３、
ＤＨＡはＣ２２：５ｎ−３である。
【図８】例１の方法で分離されたトラウストキトリッド
菌株（ＡＴＣＣ ２０８８８）を給餌されたアルテミア
サリナという塩水エビにおける総脂質中のオメガ三系Ｈ
ＵＦＡ含量の増加を示すグラフである。ＥＰＡはＣ２
０：５ｎ−３、ＤＨＡはＣ２２：５ｎ−３である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:645） (71)出願人 595169780 5766 Ｃｅｎｔｒａｌ Ａｖｅｎｕｅ，Ｂ ｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ 80301 Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａ ｍｅｒｉｃａ

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】約１５０ミクロン以下の寸法の細胞集合体
    を有するトラウストキトリウム属、シゾキトリウム属及
    びこれらの混合物とからなる群から選択される微生物相
    バイオマス。
  2. 【請求項２】前記シゾキトリウム属はＡＴＣＣ第２０８
    ８８番、第２０８８９番及びこれらの変異体からなる群
    から選択されるとともにオメガ三系高度不飽和脂肪酸を
    産生できるという特徴を備え、前記シゾキトリウムは少
    なくとも約０．５％の乾燥重量のオメガ三系高度不飽和
    脂肪酸含量を有している請求項１に記載の微生物相バイ
    オマス。
  3. 【請求項３】前記トラウストキトリウム属はＡＴＣＣ第
    ２０８９０番、第２０８９１番、第２０８９２番及びこ
    れらの変異体からなる群から選択されるとともにオメガ
    三系高度不飽和脂肪酸を産生できるという特徴を備え、
    前記トラウストキトリウム属が少なくとも約０．５％の
    乾燥重量のオメガ三系高度不飽和脂肪酸含量を有してい
    る請求項１に記載の微生物相バイオマス。
  4. 【請求項４】培地１リットル当り約３グラム以下の塩化
    物と、炭素源及び窒素源と、微量養分と、１リットル当
    たり１グラム以上の非塩化物ナトリウム塩を含有する培
    地において約５〜４８℃の温度及びｐＨ約５．０〜１
    １．０でトラウストキトリウム、シゾキトリウム及びこ
    れらの混合物からなる群から選択された微生物を生育す
    ることを含む請求項１に記載の微生物相を生成する方
    法。
  5. 【請求項５】前記ナトリウム塩は硫酸ナトリウム、ソー
    ダ灰、酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリ
    ウム及びこれらの混合物からなる群から選択されたもの
    である請求項４に記載の方法。
  6. 【請求項６】前記シゾキトリウム属はＡＴＣＣ第２０８
    ８８番、第２０８８９番及びこれらの変異体からなる群
    から選択されるとともにオメガ三系高度不飽和脂肪酸を
    産生できるという特徴を備え、前記シゾキトリウムは少
    なくとも約０．５％の乾燥重量のオメガ三系高度不飽和
    脂肪酸含量を有している請求項４に記載の方法。
  7. 【請求項７】前記トラウストキトリウム属はＡＴＣＣ第
    ２０８９０番、第２０８９１番、第２０８９２番及びこ
    れらの変異体からなる群から選択されるとともにオメガ
    三系高度不飽和脂肪酸を産生できるという特徴を備え、
    前記トラウストキトリウム属が少なくとも約０．５％の
    乾燥重量のオメガ三系高度不飽和脂肪酸含量を有してい
    る請求項４に記載の方法。
  8. 【請求項８】前記培地が培地１リットル当り約２５０ミ
    リグラム以下の塩化物含量を有している請求項４に記載
    の方法。
  9. 【請求項９】ａ）非塩化物ナトリウム塩を含んだ培地中
    で生育される請求項１に記載の微生物相バイオマスと、 ｂ）亜麻仁、菜種、大豆、アボカドミール及びこれらの
    混合物からなる群から選択される物質とからなる食品。
  10. 【請求項１０】前記食品の組成には約５〜９５重量％の
    前記物質が含まれる請求項９に記載の食品。
  11. 【請求項１１】前記食品は押出し成形物である請求項９
    に記載の食品。
  12. 【請求項１２】請求項１に記載のトラウストキトリウム
    属、シゾキトリウム属及びこれら混合物からなる群から
    選択される微生物相を、仔エビ、塩水エビ、クルマムシ
    及び軟体動物からなる群から選択された生体に給餌する
    ことからなる水産養殖の方法。
  13. 【請求項１３】培地１リットル当り約５００ミリグラム
    以下の塩化物と、炭素源及び窒素源と、微量養分と、非
    塩化物ナトリウム塩を含有する培地において、約５〜４
    ８℃の温度及びｐＨ約５．０〜１１．０でトラウストキ
    トリウム属、シゾキトリウム属及びこれらの混合物から
    なる群から選択された微生物を生育することを含む請求
    項１に記載の微生物相バイオマスを生育する方法。
  14. 【請求項１４】炭素源、窒素源、微量養分、及び硫酸ナ
    トリウムを含有する培地において、約５〜４８℃の温度
    及びｐＨ約５．０〜１１．０で請求項１に記載の微生物
    相バイオマスを生育する方法。
  15. 【請求項１５】前記硫酸ナトリウムの濃度は約１ｇ／ｌ
    から約５０ｇ／ｌの間である請求項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】前記硫酸ナトリウムの濃度は約２ｇ／ｌ
    から約２５ｇ／ｌの間である請求項１４に記載の方法。
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