JP2020526219A - 3d培養のための細胞培養容器及び3d細胞の培養方法 - Google Patents
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Abstract
Description
例えば、幾つかの実施形態では、開口105に分配ポート181を挿入することによって、細胞培養チャンバ103に物質(例えば、食物、栄養素)を加え、分配ポートからチャネル175の開口部176に物質185を分配する(図16参照)方法は、例えば、フランジ170及びチャネル175の1つ以上の特徴を含まない方法又は細胞培養容器と比較して、細胞培養チャンバ103に物質185のゆっくりとした連続的な制御された(例えば、乱流のない)流れを提供することができる。同様に、幾つかの実施形態では、開口105に回収ポート183を挿入することにより、細胞培養チャンバ103から物質(例えば、老廃物)を取り出し、チャネル175から物質184を回収する(図17参照)方法は、例えば、フランジ170及びチャネル175の1つ以上の特徴を含まない方法又は細胞培養容器と比較して、細胞培養チャンバ103からの物質184のゆっくりとした連続的な制御された(例えば、乱流のない)流れを提供することができる。第1の流路185a、185b及び第2の流路184a、184bに沿ってそれぞれ流れる物質185、184の速度を低下させることにより、幾つかの実施形態では、フランジ170及びチャネル175は、したがって、複数のマイクロキャビティ115の少なくとも1つのマイクロキャビティ120a、120b、120c内で培養されている細胞150が移動するのを防ぐことができる。例えば、幾つかの実施形態では、物質の流れによって1つ以上の細胞150が移動する場合、1つ以上のマイクロキャビティ120a、120b、120cは、複数のスフェロイドを含んでも、スフェロイドを含まなくてもよい。したがって、幾つかの実施形態では、本開示の方法及び実施形態に従って、少なくとも一部にはフランジ170及びチャネル175の1つ以上の特徴に基づいて、物質のゆっくりとした連続的な制御された(例えば、乱流のない)流れを提供することによって、容器100内で培養されている細胞150が移動する可能性を低減することができ、より質の高い細胞培養及び細胞培養に関するより正確な科学的結果を得ることができる。
結腸癌細胞株であるHCT116を、完全なマッコイ5a培地(10単位/mLのペニシリン/10μg/mLのストレプトマイシンを含む10%ウシ胎児血清)のフラスコで約80%コンフルエンシーまで増殖させ、トリプシン処理して表面から細胞を分離させた。次に、細胞をカウントし、マイクロキャビティあたり1000細胞の最終細胞濃度で完全なマッコイ培地に再懸濁した(T−75マイクロキャビティフラスコでは、約6.5×105細胞/mLの最終濃度で15mLの細胞を加える)。細胞がマイクロキャビティフラスコの表面に定着するように、マイクロキャビティフラスコを室温に置く。室温でのインキュベーション後、実験期間中に、フラスコを5%CO2及び95%相対湿度の37℃インキュベータに入れる。スフェロイドの形成は最初の24時間以内に起こる。
細胞培養容器において、
上部、底部、側壁、及び首のある開口部;
複数のマイクロキャビティを含む、前記容器の前記底部上の基板であって、前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティがウェル開口部と凹状のウェル底部とを備えている、基板;並びに
前記基板の外周を取り囲む傾斜したフランジ
を含み、
前記フランジが、前記基板に隣接した内面と前記基板とは反対側の外面とを有している、
細胞培養容器。
前記基板が前記容器の前記底部に固定されている、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記基板が前記容器の底面と一体化している、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記フランジの前記外面が傾斜している、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記フランジの前記外面が傾斜している、実施形態2に記載の細胞培養容器。
前記フランジの前記外面が傾斜している、実施形態3に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態2に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態3に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態4に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態5に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態6に記載の細胞培養容器。
実施形態1に記載の細胞培養容器内で細胞を培養する方法であって、
前記細胞培養容器の前記フランジのネック側に液体を堆積させること;
液体が前記フランジを越えて複数のマイクロキャビティを含む前記基板上にこぼれるまで、前記容器を液体で満たすこと;及び
前記複数のマイクロキャビティ内で細胞を培養すること
を含む、方法。
培養後、前記細胞培養容器を傾けてチャネル内に細胞液を蓄積すること;
前記容器の開口に回収ポートを挿入し、該回収ポートを使用してチャネルから液体を除去すること
をさらに含む、実施形態13に記載の方法。
101 上部/壁
102 内面
103 細胞培養チャンバ
104 キャップ
105 開口
107 端部壁
108 底部
110 軸
112 ネック
115 マイクロキャビティのアレイ/基板
120 複数のマイクロキャビティ
120a,120b,120c 各マイクロキャビティ
121a,121b,121c 凹面
122a,122b,122c ウェル
123a,123b,123c 開口部
125 第1の側
126 第2の側
142 領域
150 細胞
170 フランジ
171 内面
172 外面
173 周囲
174 ベース
175 チャネル
176 開口部
180 液体
182 物質
183 回収ポート
184 老廃物
201,207,208,212 内部表面
202 平坦な表面
250 細胞/スフェロイド
801 細胞集塊
結腸癌細胞株であるHCT116を、完全なマッコイ5a培地(10単位/mLのペニシリン/10μg/mLのストレプトマイシンを含む10%ウシ胎児血清)のフラスコで約80%コンフルエンシーまで増殖させ、トリプシン処理して表面から細胞を分離させた。次に、細胞をカウントし、マイクロキャビティあたり1000細胞の最終細胞濃度で完全なマッコイ培地に再懸濁した(T−75マイクロキャビティフラスコでは、約6.5×105細胞/mLの最終濃度で15mLの細胞を加える)。細胞がマイクロキャビティフラスコの表面に定着するように、マイクロキャビティフラスコを室温に置く。室温でのインキュベーション後、実験期間中に、フラスコを5%CO2及び95%相対湿度の37℃インキュベータに入れる。スフェロイドの形成は最初の24時間以内に起こる。
細胞培養容器において、
上部、底部、側壁、及び首のある開口部;
複数のマイクロキャビティを含む、前記容器の前記底部上の基板であって、前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティがウェル開口部と凹状のウェル底部とを備えている、基板;並びに
前記基板の外周を取り囲む傾斜したフランジ
を含み、
前記フランジが、前記基板に隣接した内面と前記基板とは反対側の外面とを有している、
細胞培養容器。
前記基板が前記容器の前記底部に固定されている、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記基板が前記容器の底面と一体化している、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記フランジの前記外面が傾斜している、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記フランジの前記外面が傾斜している、実施形態2に記載の細胞培養容器。
前記フランジの前記外面が傾斜している、実施形態3に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態1に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態2に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態3に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態4に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態5に記載の細胞培養容器。
前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、実施形態6に記載の細胞培養容器。
実施形態1に記載の細胞培養容器内で細胞を培養する方法であって、
前記細胞培養容器の前記フランジのネック側に液体を堆積させること;
液体が前記フランジを越えて複数のマイクロキャビティを含む前記基板上にこぼれるまで、前記容器を液体で満たすこと;及び
前記複数のマイクロキャビティ内で細胞を培養すること
を含む、方法。
培養後、前記細胞培養容器を傾けてチャネル内に細胞液を蓄積すること;
前記容器の開口に回収ポートを挿入し、該回収ポートを使用してチャネルから液体を除去すること
をさらに含む、実施形態13に記載の方法。
101 上部/壁
102 内面
103 細胞培養チャンバ
104 キャップ
105 開口
107 端部壁
108 底部
110 軸
112 ネック
115 マイクロキャビティのアレイ/基板
120 複数のマイクロキャビティ
120a,120b,120c 各マイクロキャビティ
121a,121b,121c 凹面
122a,122b,122c ウェル
123a,123b,123c 開口部
125 第1の側
126 第2の側
142 領域
150 細胞
170 フランジ
171 内面
172 外面
173 周囲
174 ベース
175 チャネル
176 開口部
180 液体
182 物質
183 回収ポート
184 老廃物
201,207,208,212 内部表面
202 平坦な表面
250 細胞/スフェロイド
801 細胞集塊
Claims (14)
- 細胞培養容器において、
上部、底部、側壁、及び首のある開口部;
複数のマイクロキャビティを含む、前記容器の前記底部上の基板であって、前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティがウェル開口部と凹状のウェル底部とを備えている、基板;並びに
前記基板の外周を取り囲む傾斜したフランジ
を含み、
前記フランジが、前記基板に隣接した内面と前記基板とは反対側の外面とを有している、
細胞培養容器。 - 前記基板が前記容器の前記底部に固定されている、請求項1に記載の細胞培養容器。
- 前記基板が前記容器の底面と一体化している、請求項1に記載の細胞培養容器。
- 前記フランジの前記外面が傾斜している、請求項1に記載の細胞培養容器。
- 前記フランジの前記外面が傾斜している、請求項2に記載の細胞培養容器。
- 前記フランジの前記外面が傾斜している、請求項3に記載の細胞培養容器。
- 前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、請求項1に記載の細胞培養容器。
- 前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、請求項2に記載の細胞培養容器。
- 前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、請求項3に記載の細胞培養容器。
- 前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、請求項4に記載の細胞培養容器。
- 前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、請求項5に記載の細胞培養容器。
- 前記傾斜したフランジの外周を取り囲み、前記フランジの外側で前記基板の周りに堀を形成するチャネルをさらに含む、請求項6に記載の細胞培養容器。
- 請求項1に記載の細胞培養容器内で細胞を培養する方法であって、
前記細胞培養容器の前記フランジのネック側に液体を堆積させること;
液体が前記フランジを越えて複数のマイクロキャビティを含む前記基板上にこぼれるまで、前記容器を液体で満たすこと;及び
前記複数のマイクロキャビティ内で細胞を培養すること
を含む、方法。 - 培養後、前記細胞培養容器を傾けてチャネル内に細胞液を蓄積すること;
前記容器の開口に回収ポートを挿入し、該回収ポートを使用して前記チャネルから液体を除去すること
をさらに含む、請求項13に記載の方法。
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US201862642400P | 2018-03-13 | 2018-03-13 | |
US62/642,400 | 2018-03-13 | ||
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