JP2015050964A - 多段式培養フラスコおよび細胞培養フラスコの製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】簡素な構成でありながら、最上段のトレイに収容された液体が毛管現象で不所望に漏れ出すことを防止可能であり、かつ外部寸法の製品個体差の発生を排除した細胞培養フラスコおよびその製造方法を提供する。【解決手段】本発明の細胞培養フラスコ100は、外部底面部と、外部底面部の全周に設けられた外部立ち上がり周壁部と、立ち上がり周壁部の一部に設けられたポート280とを含む外部筐体200と；内部底面部と、内部底面部の全周に設けられた内部立ち上がり周壁部とを含む内部トレイが複数段積層され、外部筐体内に収容された内部多段トレイ400と；外部立ち上がり周壁部の上端と、内部多段トレイにおける最上段内部トレイの内部立ち上がり周壁部の上端との両方を被覆し、且つ、両方の上端と溶着する蓋体500と；内部多段トレイの各段における内部立ち上がり周壁部に、内部トレイ内の空間と外部筐体内の空間とを連通させる連通孔が形成されている。【選択図】図１

Description

本発明は、多段式培養フラスコに関する。より具体的には、本発明は、培養効率をより向上させるための多段式培養フラスコに関する。

従来から、複数段のトレイが積層された構造を有する多段式培養フラスコが提供されている。
たとえば、国際公開第９３／１０２１１号パンフレット（特許文献１）に記載の培養容器においては、培養室を規定する積層されたトレイ部材が、平坦な底壁および端壁を有する外部筐体に収容されており、積層されたトレイ部材は、その周囲が互いに封止されており、上階のトレイ部材の端は、筐体の天面の内面から離隔されることで解放されており、液体は、端壁に沿って設けられたトンネルを通じて各培養室に分配される。

特開２０１１−５２８２２６号公報（特許文献２）に記載の多段細胞培養システムは、上板、側壁及びポートを含むカバー；底板、下側部分及びギャップ領域を備えた細胞等収容用中間トレイ、但しギャップ領域は、中間トレイ底板の内部部分で外側に曲げられたリップと、外側に曲げられた中間トレイ底板の隣接した側壁部分との間に形成され、リップは外側への曲線状エッジ態様を有する；並びに底板及び側壁を備える細胞等収容用ベーストレイ；を備える。上記中間トレイはカバー／ベーストレイ間に配置され、中間トレイ底板のギャップ領域はカバー上のポートと一直線上にあり、ポート、中間トレイ及びベーストレイを互いに流体連通させて、各中間トレイ及びベーストレイ上に配置された細胞等を除去及び／又は添加するため直接アクセス可能としている。上記中間トレイは、互いの上部に積み重ねられた複数であり、各中間トレイのギャップ領域は互いに一直線上にある。

特開２０１１−２４５７７号公報（特許文献３）に記載の多層の組織培養容器は、基部を含み且つ基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、基部を含み且つ基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、開口を画成する管状首部と、一以上の棚部とを含み、各棚部が基部と、基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える。第１の棚部の上方に延びる壁が頂部の下方に延びる壁に隣接し、第１の棚部が底部と頂部の間に位置される。各棚部の基部がこれに形成された少なくとも一つの穴を有する。底部、頂部および一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成する。管状首部が容器から延び、囲まれた容積が、管状首部の開口によってアクセス可能である。

国際公開第９３／１０２１１号パンフレット 特開２０１１−５２８２２６号公報 特開２０１１−２４５７７号公報

しかしながら、特許文献１に記載の容器においては、最上段のトレイ部材の上端が天面から隔離されており、固定されていない。したがって、最上段のトレイ部材に収容された培養液が、毛管現象により、当該上端と天面とのわずかな隙間を伝ってトレイ部材外へ漏れ出すことがある。

また、特許文献２および３に記載の容器においては、複数の棚部それぞれと底部と頂部とが全て積層されている。したがって、製造時における積層ずれが実質的に免れず、外部寸法の製品個体差が常に発生する。

本発明の目的は、中間トレイの最上段内の培養液が外に漏れ出すおそれがなく、かつ、外部寸法の製品個体差を排除可能な多段式培養フラスコを提供することにある。

（１）
一局面に従う細胞培養フラスコは、外部筐体と、内部多段トレイと、蓋体とを含む。外部筐体は、外部底面部と、外部底面部の全周に設けられた外部立ち上がり周壁部と、外部立ち上がり周壁部の一部に設けられたポートを含む。内部多段トレイは、内部底面部と、内部底面部の全周に設けられた内部立ち上がり周壁部とを含む内部トレイが複数段積層され、内部立ち上がり周壁部の上端と、当該上端に積重なる内部底面部の下面とが互いに溶着され、且つ、外部筐体内に収容される。蓋体は、外部立ち上がり周壁部の上端と、内部多段トレイにおける最上段内部トレイの内部立ち上がり周壁部の上端との両方を被覆し、且つ、当該両方の上端と溶着する。さらに、内部多段トレイの各段における内部立ち上がり周壁部には、内部トレイ内の空間と外部筐体内の空間とを連通させる連通孔が形成される。

これによって、簡素な構成でありながら、最上段のトレイに収容された液体が毛管現象で不所望に漏れ出すことを防止することができる。このため、たとえば内部トレイの深さを小さくし、外部筐体の深さの割に内部トレイの積層段数を多くして、培養効率を向上させることができる。さらに、内部多段トレイが外部筐体に収容されているため、たとえ内部多段トレイの積層ずれがあったとしても外部寸法（外部筐体の寸法に相当）の製品個体差の発生を排除することができ、製造工程でのマシンによるハンドリングが容易となる。

（２）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、内部立ち上がり周壁部の外周側において、連通孔と連通する肉盗み部が、内部トレイの積層方向全体にわたって形成されていてよい。

これによって、連通孔内の液流がよりスムーズとなる。したがって、仮に内部トレイの積層にずれが生じることで、内部立ち上がり周壁部が外部立ち上がり周壁部に接触する部分が生じたとしても、当該接触部分近傍における連通孔内の液流障害を回避することができる。また、内部底面部に連通のための孔を設けない構造が可能となるため、培養容積のロスが無く、効率よく培養容積を確保することができる。

（３）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、外部立ち上がり周壁部の内周側において、内部立ち上がり周壁部の連通孔近傍に接触するようにスペーサが突設されてよい。

これによって、連通孔内の液流がよりスムーズとなる。したがって、仮に内部トレイの積層にずれが生じることで、内部立ち上がり周壁部が外部立ち上がり周壁部に接触する部分が生じたとしても、当該接触部分近傍における連通孔内の液流障害を回避することができる。

（４）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、外部立ち上がり周壁部の内周側において、内部多段トレイを外部底面部から所定の高さで離間させて保持する保持部が突設されてよい。この場合、保持部は、スペーサに連設するように設けられる。

これによって、外部底面部も培養スペースとして利用することができる。さらにこの場合、仮に内部トレイの積層にずれが生じることで、最下段の内部トレイの内部立ち上がり周壁部が外部立ち上がり周壁部に接触する部分が生じたとしても、当該培養スペースへスムーズに培養液を分配することができる。

（５）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、外部筐体の長手方向に対向する外部立ち上がり周壁部間の長さが、外部筐体の短手方向に対向する外部立ち上がり周壁部間の長さの１．９倍以上２．２倍以下であってよい。

このため、多段フラスコでありながら、片手での持ち運びがしやすい。本発明の細胞培養フラスコは、内部トレイからの不所望の液体漏れを防止できるため、傾きの影響を受けやすいこのような長タイプの形状も許容される。また、長タイプであることによって、たとえば、内部トレイ１段当たりの容量の割に当該１段当たりの深さを小さくしても培養容積を充分確保することができるため、外部筐体の深さの割に積層段数をより多くすることができ、したがって、培養効率をより向上させることができる。

（６）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、内部底面部の厚みは、１．２ｍｍ以上２．０ｍｍ以下であってよい。

これによって、内部トレイ１段当たりの容量の割に、内部立ち上がり周壁部の高さを小さくすることができるため、外部筐体の深さの割に積層段数をより多くすることができ、培養効率をより向上させることができる。
本発明の細胞培養フラスコは、内部多段トレイが外部筐体に収容されているため、内部多段トレイの内部底面部の厚みが相対的に小さくても、細胞培養フラスコ全体としての強度が保証される。

（７）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、内部立ち上がり周壁部の高さが、８．５ｍｍ以上１１．０ｍｍ以下であってよい。

これによって、外部筐体の深さの割に積層段数をより多くすることができ、培養効率をより向上させることができる。

（８）
本発明の細胞培養フラスコにおいては、外部立ち上がり周壁部が、対向する一対の側壁と、対向する一対の端壁と、傾斜側壁とを含んでよい。この場合、対向する一対の端壁のうち一方にはポートが形成されており、傾斜側壁は一対の側壁の少なくとも一方から延び且つ上方からの平面視において、ポートの根元に向かって傾斜している。さらにこの場合、傾斜側壁は第１傾斜側壁と第２傾斜側壁とを含む。第１傾斜側壁は側壁から延び、ポートの軸心に対してより小さい角度で傾斜する。第２傾斜側壁は第１傾斜側壁から延び、ポートの軸心に対してより大きい角度で傾斜する。なおかつこの場合、内部多段トレイにおける内部立ち上がり周壁部は、外部立ち上がり周壁部のうち、側壁、端壁の他方（すなわちポートが形成されていないほう）、および第１傾斜側壁に沿うように形成される。

したがって、第２傾斜側壁によってポートからのデカンテーションを容易にしつつも、より小さい角度で傾斜する第１傾斜側壁によって、１段あたりの培養容積をより大きくとることができる。

（９）
他の局面に従う細胞培養フラスコの製造方法は、積層工程と、覆蓋工程と、収容工程とを含む。
積層工程においては、内部底面部と、内部底面部の全周に設けられた内部立ち上がり周壁部と、内部立ち上がり周壁部の上端の一部が切欠かれた切欠き部とを含む内部トレイを、複数積層し、内部立ち上がり周壁部の上端と、当該上端に積重なる内部底面部の下面とを互いに溶着させ、内部多段トレイを得る。
覆蓋工程においては、内部多段トレイにおける最上段内部トレイの内部立ち上がり周壁部の上端を蓋体で被覆し、上端と蓋体とを溶着し、覆蓋された内部多段トレイを得る。
収容工程においては、外部底面部の全周に設けられた外部立ち上がり周壁部と、外部立ち上がり周壁部の一部に設けられたポートとを含む外部筐体の内部に、覆蓋された内部多段トレイを収容し、外部立ち上がり周壁部の上端と蓋体とを溶着し、内部多段トレイ収容筐体を得る。

これによって、簡素な構成でありながら、最上段のトレイに収容された液体が毛管現象で不所望に漏れ出すことを防止可能であり、かつ外部寸法の製品個体差の発生を排除した細胞培養フラスコを製造することができる。

第１実施形態にかかる培養フラスコ１００の一例を示す模式的外観斜視図である。 図１の培養フラスコ１００の模式的分解図である。 図１のＡ−Ａ線断面図である。 図１のＢ−Ｂ線断面図である。 図１の培養フラスコ１００の一部を示す模式的外観斜視図である。 図５の丸囲み部分の拡大図である。 図１のＣ−Ｃ線断面図である。 図１の一部の切欠き拡大図である。 培養フラスコ１００の製造方法の工程を示す模式図である。 培養フラスコ１００の製造方法の工程を示す模式図である。 培養フラスコ１００の操作方法の工程を示す説明図である。 培養フラスコ１００の操作方法の工程を示す説明図である。 培養フラスコ１００の操作方法の工程を示す説明図である。 培養フラスコ１００の他の例を示す一部切欠き拡大図である。 図１４の断面図である。 図１４の断面図である。 培養フラスコ１００の他の例を示す一部切欠き拡大図である。 図１７の断面図である。 図１７の断面図である。 培養フラスコ１００の他の例を示す一部拡大図である。 培養フラスコ１００の他の例を示す一部拡大図である。 培養フラスコ１００の他の例を示す一部拡大図である。 培養フラスコ１００の他の例を示す一部拡大図である。

以下、図面を参照しつつ、本発明の実施の形態について説明する。以下の説明では、同一の要素には同一の符号を付しており、それらの名称および機能も同じである。したがって、それらについての詳細な説明は繰り返さない。

［第１実施形態］
図１は、第１実施形態にかかる培養フラスコ１００の一例を示す模式的外観斜視図である。説明の便宜上、図１の上側を上、下側を下と呼称する。図２は、図１の培養フラスコ１００の模式的分解図である。図３は、図１のＡ−Ａ線断面図である。図４は、図１のＢ−Ｂ線断面図である。図５は、図１の培養フラスコ１００の一部を示す模式的外観斜視図である。図６は、図５の丸囲み部分の拡大図である。図７は、図１のＣ−Ｃ線断面図である。図８は、図１の一部の切欠き拡大図である。

［基本構成］
図１および図２に示すように、培養フラスコ１００は、外部筐体２００と、内部多段トレイ４００と、蓋体５００とを含む。外部筐体２００は、内部多段トレイ４００を収容する。蓋体５００は、外部筐体２００と内部多段トレイ４００とを覆蓋する。また、培養フラスコ１００は、内部多段トレイ４００に設けられた第１連通部４５０と第２連通部４８０とを含む。さらに、培養フラスコ１００は、外部筐体２００に装着されたキャップ２９０を含む。

［外部筐体］
図２に示すように、外部筐体２００は、外部底面部２１０と、その全周に設けられた外部立ち上がり周壁部２２０とを含む。外部立ち上がり周壁部２２０は、外部筐体２００の長手方向に対向する一対の端壁２２１，２２２と、短手方向に対向する一対の側壁２２３，２２４とを含む。一方の端壁２２１には、ポート２８０が設けられている。図３に示すように、ポート２８０は、端壁２２１から外部筐体２００の外部へ向かって突出し、且つ、外部筐体２００の内部と外部とを連通させる管状に形成されている。ポート２８０の軸心は、外部筐体２００の長手方向に平行であり、側壁２２３，２２４間の中央に位置する。ポート２８０には、図１および図２に示すようにキャップ２９０が着脱自在に装着される。

図２に示すように、外部立ち上がり周壁部２２０は、さらに、ポート２８０の根元に向かって傾斜する傾斜壁を有する。傾斜壁は、上部から下部への平面視において、ポート２８０の軸心に対して線対称となるように構成される。傾斜壁は、一対の第１傾斜壁２２５，２２６および一対の第２傾斜壁２２７，２２８を含む。第１傾斜壁２２５，２２６は、それぞれ、側壁２２３，２２４に連設される。第２傾斜壁２２７，２２８は、それぞれ、第１傾斜壁２２５，２２６に連設され、共に、端壁２２１に連設される。第２傾斜壁２２７，２２８は、上部から下部への平面視において、ポート２８０の軸心に向かって、第１傾斜壁２２５，２２６より大きい角度で傾斜する。

図２に示すように、外部立ち上がり周壁部２２０の内周面には、後述する保持部２３０が複数突設されている。保持部２３０は、外部筐体２００内で、内部多段トレイ４００を所定の高さ位置に保持するように設けられる。具体的には図４に示すように、保持部２３０の上端をなす保持面２３１が、内部多段トレイ４００の最下面（後述の内部底面部４１０の下面）と接触し、且つ、保持面２３１の位置が、外部底面部２１０の上面から高さＨだけ離間した位置となる。

このように、保持部２３０によって、外部筐体２００内には、外部底面部２１０、内部多段トレイ４００の最下面（後述の内部底面部４１０の下面）、および外部立ち上がり周壁部２２０で囲まれる空間ｍ１が確保される。保持部２３０によって確保されたこの空間ｍ１は、培養フラスコ１００において、内部多段トレイ４００内部の空間（培養空間ｍ２，〜，ｍ６）と同様に培養空間として使用されることができる。以下において、空間ｍ１は培養空間ｍ１と記載する。

図２に示すように、外部立ち上がり周壁部２２０の内周面のうち、第１連通部４５０の近傍に、スペーサ２５０が突設される。スペーサ２５０は、外部筐体２００内の第１連通部４５０で、内部多段トレイ４００の外周面と外部筐体２００の内周面との間に空隙を確保するように設けられる。具体的には図４に示すように、スペーサ２５０は、側壁２２４の内周面から高さＩで突設され、内部多段トレイ４００の外周面（後述の側壁３２４）と接触する。これによって、当該外周面（側壁３２４）と、外部筐体２００の側壁２２４の内周面との間にスペーサ２５０の高さＩに相当する幅の空隙を確保する。

長手方向に対向する一対の端壁２２１，２２２間の長さは、２１０ｍｍ以上２４０ｍｍ以下、例えば２２３ｍｍである。長手方向に対向する一対の端壁２２１，２２２間の長さは、短手方向に対向する一対の側壁２２３，２２４の長さの１．９倍以上２．２倍以下、例えば２．０倍である。第１傾斜壁２２５，２２６とポート２８０の軸心とが成す角は、４５度以上７０度以下、例えば６０度である。第２傾斜壁２２７，２２８と端壁２２１とが成す角は、３度以上１０度以下、例えば５度である。

［内部多段トレイ］
内部多段トレイ４００は、図５に示す内部トレイ３００と同形同大のものが、複数積層されて構成される。本実施形態においては、５枚積層される。
図５に示すように、内部トレイ３００は、内部底面部３１０と、その全周に設けられた内部立ち上がり周壁部３２０とを含む。内部トレイ３００の積層の態様としては、図２および図４に示すように、内部立ち上がり周壁部３２０の上端３２９と、上端３２９に積層される別の内部トレイ３００の内部底面部３１０の下面とが互いに溶着されるように積層される。これによって、内部多段トレイ４００は、内部トレイ３００同士で囲まれた培養空間ｍ２，〜，ｍ５を有する。

なお、図２、図３および図４に記載のように、内部多段トレイ４００のうち最上段の内部トレイ３００の上端３２９を、特に、内部多段トレイ４００の上端４２９と表記する。また、内部多段トレイ４００のうち最下段の内部トレイ３００の内部底面部３１０を、特に、内部多段トレイ４００の内部底面部４１０と表記する。

図５に示すように、内部立ち上がり周壁部３２０は、長手方向に対向する一対の端壁３２１，３２２と、短手方向に対向する一対の側壁３２３，３２４と、一対の傾斜壁３２５，３２６とを含む。一対の傾斜壁３２５，３２６は、側壁３２３，３２４のそれぞれおよび端壁３２１の両方に連設される。

図５に示すように、側壁３２４には、端壁３２１より端壁３２２に近い側、具体的には端壁３２２から距離ｌだけ隔てた位置に切欠き部３５１が設けられる。より具体的には、図６に示すように、側壁３２４に、上端３２９から下に凹となる切欠き部３５１が幅ｗで設けられる。側壁３２４には、さらに、外周面から内に凹となる肉盗み部３５５が、切欠き部３５１と同じ幅ｗで、側壁３２４の高さｈ方向全体に亘って設けられる。
一方、図５に示すように、端壁３２１には、上端３２９から下に凹となる切欠き部３８１が設けられる。切欠き部３８１の深さは、所望の培養容積を確保できる深さであれば特に限定されるものではない。したがって、切欠き部３５１と同じ深さであってもよいし、異なる深さであってもよい。

内部多段トレイ４００を構成する内部トレイ３００各段の端壁３２１，３２２は、内部多段トレイ４００が外部筐体２００内に収容された状態（図１参照）において、外部筐体２００の端壁２２１，２２２の面に沿うように配置される。同様に、内部多段トレイ４００における側壁３２３，３２４は、外部筐体２００の側壁２２３，２２４の面に沿い、内部多段トレイ４００における傾斜壁３２５，３２６は、外部筐体２００の第１傾斜壁２２５，２２６の面に沿うように配置される。

内部トレイ３００において、一対の端壁３２１，３２２間の長さは、２００ｍｍ以上２３０ｍｍ以下、たとえば２１４ｍｍである。また、一対の側壁３２３，３２４間の長さは、１００ｍｍ以上１１５ｍｍ以下、たとえば１０７ｍｍである。側壁３２４の高さｈは８．５ｍｍ以上１１．０ｍｍ以下、例えば９．０ｍｍである。内部トレイ３００の内部底面部３１０の厚さは、１．２ｍｍ以上２．０ｍｍ以下、例えば１．６ｍｍである。内部トレイ３００の深さは、７．０ｍｍ以上９．５ｍｍ以下、たとえば７．４ｍｍであってよい。内部トレイ３００の内部立ち上がり周壁部３２０の厚さは、内部底面部３１０の厚さと同様であってよい。切欠き部３５１の端壁３２２からの距離ｌは、外部筐体２００の長手方向に対向する一対の端壁２２１，２２２間の長さの１５％以上２５％以下、たとえば１９％である。切欠き部３５１の幅ｗは、外部筐体２００の端壁２２１，２２２間の長さの４％以上１０％以下、たとえば６％である。切欠き部３５１の深さｄは、高さｈの１０％以上３０％以下、たとえば１７％である。切欠き部３８１の幅は、外部筐体２００の短手方向に対向する一対の側壁２２３，２２４間の長さの４０％以上８０％以下、たとえば６０％である。

［蓋体］
蓋体５００は、図１に示すように、外部筐体２００の上部開口全体を覆蓋する形状で構成される。
図３および図４に示すように、蓋体５００は、外部筐体２００を覆蓋すると共に、外部筐体２００に収容された内部多段トレイ４００も覆蓋する。この場合、蓋体５００の下面は、外部筐体２００の外部立ち上がり周壁部２２０の上端２２９と、内部多段トレイ４００の上端４２９の両方と溶着する。これによって、培養フラスコ１００は、内部トレイ４００の最上段の内部トレイ３００と蓋体５００とに囲まれた培養空間ｍ６を有する。したがって、培養フラスコ１００は、前述の培養空間ｍ１および培養空間ｍ２，〜，ｍ５と合わせ、全部で６段の培養空間を含む。

［第１連通部］
前述のように、内部トレイ３００において、切欠き部３５１が端壁３２２から所定の距離ｌだけ隔てた位置に設けられ、切欠き部３８１が端壁３２１に設けられる（図５参照）ことにより、図１に示すように、第１連通部４５０は、第２連通部４８０と十分に隔離して配置される。第１連通部４５０は、通気のため、および培養液を各段に分配するために利用することができる。したがって、第１連通部４５０は、内部多段トレイ４００を構成する全ての内部トレイ３００の内部空間と、外部筐体２００の内部空間とを連通させるように構成される。

図４で述べたように、内部多段トレイ４００と外部筐体２００との間には、スペーサ２５０によって所定の空隙（図中、スペーサ２５０の高さＩに相当）が確保される。これに加えて、図６で述べたように、内部多段トレイの外周面（側壁３２４）には肉盗み部３５５が設けられている。肉盗み部３５５は、図７に示すように、内部トレイ３００の積層方向全体にわたって設けられるため、第１連通部４５０においては、内部多段トレイ４００と外部筐体２００との間の空隙Ｓが、肉盗み部３５５の分だけさらに幅広に確保される。これによって、培養液は、十分に確保された空隙Ｓ内を容易に流通することができる。

図８は、図１の第１連通部４５０付近の切欠き拡大図である。図８に示すように、第１連通部４５０においては、上述の肉盗み３５５が幅ｗで内部トレイ３００の積層方向全体にわたって設けられる。これに加えて、図６で述べたように、内部トレイ３００それぞれの側壁３２４に、切欠き部３５１が深さｄで設けられている。内部トレイ３００が積層されることにより、図８に示すように、切欠き部３５１と、直上に積層された内部トレイ３００の内部底面部３１０とに囲まれた第１連通孔ＣＨ１が構成される。同様に、最上段の内部トレイ３００の切欠き部３５１と、上端４２９を覆蓋した蓋体５００とに囲まれた第１連通孔ＣＨ１も構成される。これによって、培養液は、内部トレイ３００内部空間と外部筐体２００の内部空間とを連通する第１連通孔ＣＨ１内を流通することができる。

［第２連通部］
図１に示すように、第２連通部は、培養フラスコ１００において、ポート２８０近傍に設けられる。本実施形態では、図２に示すように、内部多段トレイ４００を構成する端壁３２１に配設される。第２連通部は、通気のため、および培養液をポート２８０へ送るために利用することができる。したがって、第２連通部は、内部多段トレイ４００を構成する全ての内部トレイ３００の内部空間と、外部筐体２００の内部空間とを連通させるように構成される。

すでに述べたように、内部トレイ３００それぞれの端壁３２１に、切欠き部３８１（図５参照）が深さｄで設けられている。内部トレイ３００が積層されることにより、切欠き部３８１と、直上に積層された内部トレイ３００の内部底面部３１０とに囲まれた第２連通孔ＣＨ２が構成される。同様に、最上段の内部トレイ３００の切欠き部３８１と、上端４２９を覆蓋した蓋体５００とに囲まれた第２連通孔ＣＨ２も構成される。これによって、内容液は、内部トレイ３００の内部空間と外部筐体２００の内部空間とを連通する第２連通孔ＣＨ２内を流通することができる。

［材質および表面処理］
培養フラスコ１００を構成する外部筐体２００，内部多段トレイ４００および蓋体５００は、熱可塑性樹脂で構成されてよい。好ましくは、ポリスチレンで構成される。
培養フラスコ１００の構成部材の表面は、当業者によって適宜処理されてよい。たとえば、生物学的薬品（たとえば、細胞外基質、より具体的には、ラミニン、フィブロネクチン、およびコラーゲンの少なくともいずれかの成分）または合成剤による表面処理、若しくは、プラズマ処理等の親水化処理がなされていてよい。

［培養フラスコの製造方法］
図９および図１０は、培養フラスコ１００の製造方法の工程を示す模式図である。
培養フラスコ１００の製造方法においては、まず、図９（i）に示すように、複数（図中では５枚）の内部トレイ３００を用意する。次に図９（ii）に示すように、内部トレイ３００を積層させる。この場合、内部トレイ３００の上端３２９と、別の内部トレイ３００の内部底面部３１０下面とが接触するように内部トレイ３００を重ね、互いに接触する上端３２９と内部底面部３１０とを溶着する。溶着された部分は、液密に封止される。溶着の方法としては、超音波溶接法などが挙げられる。

溶着された部分は、液密に封止される。これによって、培養空間ｍ２，〜，ｍ５が形成される。一方、内部トレイ３００の切欠き部３８１については溶着されることなく、最上段を除いて、切欠き部３８１と直上の内部底面部３１０とに囲まれた第２連通孔ＣＨ２が形成される。図示しない他の切欠き部３５１（図７参照）についても同様に、第１連通孔ＣＨ１が形成される。これにより、内部多段トレイ４００を得る。

次に、図１０（iii）に示すように、内部多段トレイ４００の上端４２９に、蓋体５００を覆蓋し、上端４２９と蓋体５００の下面とを溶着する。溶着の方法としては、先の工程と同様である。溶着された部分は、液密に封止される。これによって、培養空間ｍ６がさらに形成される。一方、内部多段トレイ４００の最上段に設けられた切欠き部３８１については溶着されることなく、切欠き部３８１と蓋体５００とに囲まれた第２連通孔ＣＨ２が形成される。これによって、第２連通部４８０が形成される。図示しない他の切欠き部３５１（図７参照）についても同様に、最上段における第１連通孔ＣＨ１が形成され、第１連通部４５０が形成される。

次に、図１０（iv）に示すように、蓋体５００が溶着された内部多段トレイ４００を外部筐体２００に収容し、外部筐体２００の上端２２９と蓋体５００の下面とを溶着する。溶着の方法は、先の工程と同様である。これによって、培養空間ｍ１がさらに形成される。適宜、キャップ２９０（図１参照）がポート２８０に装着されることで、培養フラスコ１００を得る。

［操作方法］
図１１から図１３は、培養フラスコ１００の操作方法の工程を示す説明図である。
培養フラスコ１００の操作方法においては、まず、培養フラスコ１００内に培養液Ｍを入れ、図１１（I）に示すように、端壁２２２が下となるように立て、静置する。この場合、端壁２２２近傍の側壁３２４に形成された第１連通部４５０を培養液Ｍが流通し、各段に培養液Ｍが分配される。静置時間は、培養液Ｍが第１連通部４５０内を流通することで、各段で液位が同じ高さとなる程度でよく、具体的には１０秒程度である。

次に、図１１（II）に示すように、培養フラスコ１００を、第１連通部４５０が形成されていない側（外部筐体の側壁２２３側）に傾け、第１連通部４５０から培養液Ｍを隔離する。培養フラスコ１００を傾ける角度θは、たとえば４５度以上７０度以下である。
第１連通部から培養液Ｍを隔離した状態を維持するため、角度θをおおよそ保った状態で、図１２（III）に示すように、外部底面部２１０が下となるように培養フラスコ１００を倒す。その結果、図１２（IV）に示すように、培養フラスコの各段に、均等に培養液Ｍが分配される。

培養液Ｍを培養フラスコ外に排出する場合は、図１３（V）に記載のように、ポート２８０からデカンテーションによって排出操作を行う。この場合、内部多段トレイ４００の各内部トレイ３００内の培養液Ｍが、第２連通部４８０の第２連通孔ＣＨ２を通って外部筐体２００内に排出される（図３参照）。さらに、培養液Ｍは、外部筐体２００の第１傾斜壁２２５（または第１傾斜壁２２６）および第２傾斜壁２２７（または第２傾斜壁２２８）内周面を伝ってポート２８０から外部へ排出される。

［他の例］
図１４から図２３は、培養フラスコ１００の他の例を示す。他の例においては、主に第１実施形態と異なる点について説明し、同一点については説明を省略する。

［第１連通部の他の例］
図１４は、培養フラスコ１００ａの第１連通部４５０ａ付近の切欠き拡大図であり、第１実施形態の図８に対応する。図１５は、図１４の線Ｂａにおける断面図であり、図１６は、図１４の線Ｃａにおける断面図である。図１５および図１６は、それぞれ、第１実施形態の図４および図７に対応する。

図１４および図１５に示すように、培養フラスコ１００ａは、外部筐体２００ａにおいて保持部２３０ａを有する一方、スペーサを有しない。さらに、内部多段トレイ４００ａの側壁３２４ａにおいて、切欠き部３５１ａと肉盗み部３５５ａを有する。切欠き部３５１ａおよび肉盗み部３５５ａは、第１実施形態よりも幅広の幅ｗａで設けられている。

内部多段トレイ４００ａは、第１実施形態の内部多段トレイ４００と同様に製造される。ここで、内部トレイ３００ａが積層される工程では（特に超音波溶着法が用いられた場合）、内部トレイ３００ａの積層ずれが生じ得る。積層ずれが生じると、図１５に示すように、内部多段トレイ４００ａにおける側壁３２４ａと外部筐体２００ａの側壁２２４ａとの間の空隙の幅は一定にならない。

このような積層ずれの場合、図１５に示すように、最下段の内部トレイ３００ａの側壁３２４ａが、外部筐体２００ａの側壁２２４ａとほとんど接触する位にまで近接している。このため、最下段の内部トレイ３００ａでは、側壁３２４ａと側壁２２４ａとの間には十分な空隙は確保されない。このような場合において、もし、連通を十分に確保する構造が他になかった場合、側壁３２４ａと側壁２２４ａとの間で流通障害が起こり、内部底面部４１０ａより下の培養空間ｍ１まで培養液が容易に分配されない恐れがある。

しかしながら、図１４および図１６に示すように、側壁２２４ａには肉盗み部３５５ａが設けられている。このため、第１連通部４５０ａにおいては、最下段の内部トレイ３００ａの部分であっても、肉盗み部３５５ａと側壁２２４ａとの間に空隙Ｓａ（図１６参照）が確保される。したがって、図１５のような積層ずれがある場合であっても、培養フラスコ１００ａの最下段の培養空間ｍ１まで培養液を容易に分配することができる。

［第１連通部のさらに他の例］
図１７は、培養フラスコ１００ｂの第１連通部４５０ｂ付近の切欠き拡大図であり、第１実施形態の図８に対応する。図１８は、図１７の線Ｂｂにおける断面図であり、図１９は、図１７の線Ｃｂにおける断面図である。図１８および図１９は、それぞれ、第１実施形態の図４および図７に対応する。

図１７および図１８に示すように、培養フラスコ１００ｂは、外部筐体２００ｂにおいて保持部２３０ｂとスペーサ２５０ｂとを有する。内部多段トレイ４００ｂにおいては、切欠き部３５１ｂを有する一方、肉盗み部を有さない。

ここで、内部多段トレイ４００ｂには、上記と同様に、積層ずれが生じ得る。このような積層ずれの場合、図１８に示すように、最下段の内部トレイ３００ｂの側壁３２４ｂが外部筐体２００ｂの側壁２２４ｂに最も接近する。しかしながら、図１８に示すように、側壁２２４ｂから突設されたスペーサ２５０ｂが、側壁２２４ｂと最下段の内部トレイ３００ｂの側壁３２４ｂとの間に介在することにより、図１９に示すように、最も接近する側壁３２４ｂと側壁２２４ｂとの間であっても、十分な空隙Ｓｂが確保される。したがって、図１８のような積層ずれがある場合であっても、培養フラスコ１００ｂの最下段の培養空間ｍ１まで培養液を容易に分配することができる。

なお、本発明の培養フラスコが、内部多段トレイの積層ずれがあっても培養液の流通障害を回避できることは、図１４から図１９で説明した他の態様における場合に限られるものではない。流通障害の回避効果の観点からは、スペーサ２５０および肉盗み部３５５の両方を具備する第１実施形態において当該効果をより有利に得られることは、言うまでもない。

［第１連通部のさらに他の例］
図２０および図２１は、内部トレイ３００の側壁３２４に設けられた切欠き部３５１および肉盗み部３５５の他の例を示す。図２０および図２１は、第１実施形態の図６に対応する。

図２０に示すように、側壁３２４ｃにおいては、切欠き部３５１ｃが、肉盗み部３５５ｃの幅ｗよりも広い幅ｗｃで設けられてもよい。また、図２１に示すように、側壁３２４ｄにおいては、肉盗み部３５５ｄが、切欠き部３５１ｄの幅ｗよりも広い幅ｗｄで設けられてもよい。

［第１連通部のさらに他の例］
第１実施形態においては、スペーサ２５０が第１連通部４５０よりポート２８０側の近傍に配設されている（図１参照）が、ポート２８０とは反対側の近傍に配設されてもよい。スペーサ２５０は、本実施形態では保持部２３０の上に連設されている（図２参照）が、保持部２３０とスペーサ２５０とは、分離されて設けられてもよい。スペーサ２５０の上下方向の長さは、本実施形態では内部トレイ３００一段分の高さである（図４参照）が、任意の高さであってよい。たとえば、スペーサ２５０は、外部筐体２００の深さ（外部立ち上がり周壁部２００内周面の上下方向の長さ）全部に延在するように配設されてもよい。

［外部筐体の他の例］
図２２および図２３は、外部筐体２００の他の例を示す。
図２２に示すように、外部筐体２００ｅにおいては、傾斜壁２２５ｅ，２２６ｅが、それぞれ側壁２２３ｅ，２２４ｅから直接端壁２２１ｅに連設されていてもよい。
また、図２３に示すように、外部筐体２００ｆにおいては、傾斜壁２２５ｆ，２２６ｆが、それぞれ側壁２２３ｆ，２２４ｆから直接端壁２２１ｆに連設され、かつ、下部傾斜壁２１１ｆが、外部底面部２１０ｆから端壁２２１ｆに連設されていてもよい。この場合、下部傾斜壁２１１ｆには、脚部２１５ｆが突設されていてもよい。

［外部筐体のさらに他の例］
第１実施形態においては、保持部２３０が側壁２２３，２２４に設けられているが、この態様に限定されるものではない。保持部２３０は、内部底面部４１０が外部底面部２１０と平行かつ所定の高さとなるように内部多段トレイ４００を保持する態様であれば、その数および配設箇所は限定されない。したがって、同様の保持部２３０が、外部立ち上がり周壁部２２０の内周面のいずれの場所に設けられてもよい。

［外部筐体のさらに他の例］
第１実施形態では、ポート２８０が、その軸心が側壁２２３，２２４間の中央に位置するように設けられているが、この態様に限定されることなく、ポート２８０は、その軸心が側壁２２３，２２４間の中央からずれた位置となるように設けられてもよい。さらに、第１実施形態では、ポート２８０の軸心が、外部筐体２００の長手方向に平行であるように設けられているが、この態様に限定されることなく、当該長手方向に非平行であってもよい。ポート２８０の位置および形状は、たとえばデカンテーション（図１１（V）参照）の観点から、当業者によって適宜設計されてよい。

［第１実施形態および他の例によって得られる効果］
以上のように、細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂは、簡素な構成でありながら、最上段の内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂに収容された液体が毛管現象で不所望に漏れ出すことを防止することができる。このため、たとえば内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂの内部立ち上がり周壁部３２０（側壁３２４，３２４ａ，３２４ｂ，３２４ｃ，３２４ｄ）の高さｈを小さくし、外部筐体２００，２００ａ，２００ｂ，２００ｅ，２００ｆの深さの割に内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂの積層段数を多くして、培養効率を向上させることができる。さらに、内部多段トレイ４００，４００ａ，４００ｂが外部筐体２００，２００ａ，２００ｂ，２００ｅ，２００ｆに収容されているため、たとえ内部多段トレイ４００，４００ａ，４００ｂの積層ずれがあったとしても外部寸法（外部筐体２００，２００ａ，２００ｂ，２００ｅ，２００ｆの寸法に相当）の製品個体差の発生を排除することができ、製造工程でのマシンによるハンドリングが容易となる。

細胞培養フラスコ１００，１００ａは、内部立ち上がり周壁部３２０（側壁３２４，３２４ａ，３２４ｃ，３２４ｄ）の外周側において、第１連通孔ＣＨ１，ＣＨ１ａ，ＣＨ１ｂと連通する肉盗み部３５５，３５５ａ，３５５ｃ，３５５ｄが、内部トレイ３００，３００ａの積層方向全体にわたって形成されているため、第１連通孔ＣＨ１，ＣＨ１ａ内の液流がよりスムーズとなる。さらに、肉盗み部３５５，３５５ａ，３５５ｃ，３５５ｄが内部立ち上がり周壁部３２０（側壁３２４，３２４ａ，３２４ｂ，３２４ｃ，３２４ｄ）に設けられており、内部底面部３１０に連通のための孔を有しないため培養容積のロスが無い。したがって、培養容積を効率よく確保することができる。

細胞培養フラスコ１００，１００ｂは、外部立ち上がり周壁部２２０（側壁２２４，２２４ｂ）の内周側において、内部立ち上がり周壁部３２０（側壁３２４，３２４ｂ）の第１連通孔ＣＨ１，ＣＨ１ｂ近傍に接触するようにスペーサ２５０，２５０ｂが突設されているため、第１連通孔ＣＨ１，ＣＨ１ｂ内の液流がよりスムーズとなる。

細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂは、外部立ち上がり周壁部２２０（側壁２２４，２２４ａ，２２４ｂ）の内周側において、内部多段トレイ４００，４００ａ，４００ｂを外部底面部２１０，２１０ａ，２１０ｂから所定の高さで離間させて保持する保持部２３０，２３０ａ，２３０ｂが突設されているため、外部底面部２１０，２１０ａ，２１０ｂも培養空間ｍ１として利用することができる。

細胞培養フラスコ１００は、外部筐体２００の長手方向に対向する外部立ち上がり周壁部２２０（端壁２２１，２２２）間の長さが、外部筐体２１０の短手方向に対向する外部立ち上がり周壁部２２０（側壁２２３，２２４）間の長さの１．９倍以上２．２倍以下であるため、多段フラスコでありながらも、片手での持ち運びがしやすい。本発明の細胞培養フラスコ１００は、内部トレイ３００からの不所望の液体漏れを防止できるため、傾きの影響を受けやすいこのような長タイプの形状も許容される。また、長タイプであることによって、たとえば、内部トレイ３００の１段当たりの容量の割に当該１段当たりの深さを小さくしても培養容積を充分確保することができるため、外部筐体２００の深さの割に積層段数をより多くすることができ、したがって、培養効率をより向上させることができる。

細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂは、内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂの内部底面部の厚みが１．２ｍｍ以上２．０ｍｍ以下であるため、内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂの１段当たりの容量の割に、内部立ち上がり周壁部３２０（側壁３２４，３２４ａ，３２４ｂ，３２４ｃ，３２４ｄ）の高さｈを小さくすることができる。このため、外部筐体２００の深さの割に積層段数をより多くすることができ、したがって、培養効率をより向上させることができる。
細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂは、内部多段トレイ４００，４００ａ，４００ｂが外部筐体２００，２００ａ，２００ｂに収容されているため、内部多段トレイ４００，４００ａ，４００ｂの内部底面部の厚みが相対的に小さくても、細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂ全体としての強度が保証される。

細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂにおいては、内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂの内部立ち上がり周壁部３２０（側壁３２４，３２４ａ，３２４ｂ，３２４ｃ，３２４ｄ）の高さｈが８．５ｍｍ以上１１．０ｍｍ以下であるため、外部筐体２００，２００ａ，２００ｂの深さの割に積層段数をより多くすることができ、培養効率をより向上させることができる。

細胞培養フラスコ１００においては、外部立ち上がり周壁部２２０において、第１傾斜側壁２２５，２２６および第２傾斜側壁２２７，２２８を含み、内部多段トレイ４００における内部立ち上がり周壁部３２０は、外部立ち上がり周壁部２２０のうち、側壁２２３，２２４、端壁２２２、および第１傾斜側壁２２５，２２６に沿うように形成されるため、第２傾斜側壁２２７，２２８によってポート２８０からのデカンテーションを容易にしつつも、第１傾斜側壁２２５，２２６によって、１段あたりの培養容積をより大きくとることができる。

［第１実施形態および他の例における各部と請求項の各構成要素との対応関係］
本発明においては、細胞培養フラスコ１００，１００ａ，１００ｂが「細胞培養フラスコ」に相当し、外部底面部２１０，２１０ａ，２１０ｂ，２１０ｆが「外部底面部」に相当し、外部立ち上がり周壁部２２０が「外部立ち上がり周壁部」に相当し、ポート２８０が「ポート」に相当し、外部筐体２００，２００ａ，２００ｂ，２００ｅ，２００ｆが「外部筐体」に相当し、内部底面部３１０が「内部底面部」に相当し、内部立ち上がり周壁部３２０が「内部立ち上がり周壁部」に相当し、内部トレイ３００，３００ａ，３００ｂが「内部トレイ」に相当し、上端３２９が「内部立ち上がり周壁部の上端」に相当し、内部多段トレイ４００，４００ａ，４００ｂが「内部多段トレイ」に相当し、上端２２９が「外部立ち上がり周壁部の上端」に相当し、上端４２９が「最上段内部トレイの内部立ち上がり周壁部の上端」に相当し、蓋体５００が「蓋体」に相当し、第１連通孔ＣＨ１，ＣＨ１ａ，ＣＨ１ｂが「連通孔」に相当し、肉盗み部３５５，３５５ａ，３５５ｃ，３５５ｄが「肉盗み部」に相当し、スペーサ２５０，２５０ｂが「スペーサ」に相当し、高さＨが「所定の高さ」に相当し、保持部２３０，２３０ａ，２３０ｂが「保持部」に相当し、高さｈが「内部立ち上がり周壁部の高さ」に相当し、側壁２２３，２２４，２２４ａ，２２４ｂが「側壁」に相当し、端壁２２１，２２２，２２１ｅ，２２１ｆが「端壁」に相当し、第１傾斜壁２２５，２２６が「第１傾斜側壁」に相当し、第２傾斜壁２２７，２２８が「第２傾斜側壁」に相当し、切欠き部３５１，３５１ａ，３５１ｂ，３５１ｃ，３５１ｄが「切欠き部」に相当する。

本発明の好ましい実施形態は上記の通りであるが、本発明はそれらのみに限定されるものではなく、本発明の趣旨と範囲とから逸脱することのない様々な実施形態が他になされる。さらに、本実施形態において述べられる作用および効果は一例であり、本発明を限定するものではない。

１００，１００ａ，１００ｂ 細胞培養フラスコ
２００，２００ａ，２００ｂ，２００ｅ，２００ｆ 外部筐体
２１０，２１０ａ，２１０ｂ，２１０ｆ 外部底面部
２２０ 外部立ち上がり周壁部
２２１，２２２，２２１ｅ，２２１ｆ 端壁
２２３，２２４，２２４ａ，２２４ｂ 側壁
２２５，２２６ 第１傾斜壁
２２７，２２８ 第２傾斜壁
２２９ （外部立ち上がり周壁部の）上端
２３０，２３０ａ，２３０ｂ 保持部
２５０，２５０ｂ スペーサ
２８０ ポート
３００，３００ａ，３００ｂ 内部トレイ
３１０ 内部底面部
３２０ 内部立ち上がり周壁部
３２９ （内部立ち上がり周壁部の）上端
３５１，３５１ａ，３５１ｂ，３５１ｃ，３５１ｄ 切欠き部
３５５，３５５ａ，３５５ｃ，３５５ｄ 肉盗み部
４００，４００ａ，４００ｂ 内部多段トレイ
４２９ （最上段内部トレイの内部立ち上がり周壁部の）上端
５００ 蓋体
ＣＨ１，ＣＨ１ａ，ＣＨ１ｂ 第１連通孔
ｈ （内部立ち上がり周壁部の）高さ
Ｈ （外部底面部上面から内部多段トレイの内部底面部下面までの）高さ

Claims (9)

1. 外部底面部と、前記外部底面部の全周に設けられた外部立ち上がり周壁部と、前記外部立ち上がり周壁部の一部に設けられたポートとを含む外部筐体と、
   内部底面部と、前記内部底面部の全周に設けられた内部立ち上がり周壁部とを含む内部トレイが複数段積層され、前記内部立ち上がり周壁部の上端と、上記上端に積重なる前記内部底面部の下面とが互いに溶着され、且つ、前記外部筐体内に収容された内部多段トレイと、
   前記外部立ち上がり周壁部の上端と、前記内部多段トレイにおける最上段内部トレイの前記内部立ち上がり周壁部の上端との両方を被覆し、且つ、前記両方の上端と溶着する蓋体と、
   前記内部多段トレイの各段における前記内部立ち上がり周壁部に、前記内部トレイ内の空間と前記外部筐体内の空間とを連通させる連通孔が形成されている、細胞培養フラスコ。
2. 前記内部立ち上がり周壁部の外周側において、前記連通孔と連通する肉盗み部が、前記内部トレイの積層方向全体にわたって形成されている、請求項１に記載の細胞培養フラスコ。
3. 前記外部立ち上がり周壁部の内周側において、前記内部立ち上がり周壁部の前記連通孔近傍に接触するようにスペーサが突設される、請求項１または２に記載の細胞培養フラスコ。
4. 前記外部立ち上がり周壁部の内周側において、前記内部多段トレイを前記外部底面部から所定の高さで離間させて保持する保持部が突設され、且つ、前記保持部が前記スペーサに連設される、請求項３に記載の細胞培養フラスコ。
5. 前記外部筐体の長手方向に対向する前記外部立ち上がり周壁部間の長さが、前記外部筐体の短手方向に対向する前記外部立ち上がり周壁部間の長さの１．９倍以上２．２倍以下である、請求項１から４のいずれか１項に記載の細胞培養フラスコ。
6. 前記内部底面部の厚みが、１．２ｍｍ以上２．０ｍｍ以下である、請求項１から５のいずれか１項に記載の細胞培養フラスコ。
7. 前記内部立ち上がり周壁部の高さが、８．５ｍｍ以上１１．０ｍｍ以下である、請求項１から６のいずれか１項に記載の細胞培養フラスコ。
8. 前記外部立ち上がり周壁部が、対向する一対の側壁と、一方に前記ポートが形成された対向する一対の端壁と、前記一対の側壁の少なくとも一方から延び且つ上方からの平面視において前記ポートの根元に向かって傾斜する傾斜側壁を含み、
   前記傾斜側壁が、前記側壁から延び且つ前記ポートの軸心に対してより小さい角度で傾斜する第１傾斜側壁と、前記第１傾斜側壁から延びかつ前記軸心に対してより大きい角度で傾斜する第２傾斜側壁とから構成され、
   前記内部立ち上がり周壁部が、前記側壁、前記端壁の他方、および前記第１傾斜側壁に沿うように形成される、請求項１から７のいずれか１項に記載の細胞培養フラスコ。
9. 内部底面部と、前記内部底面部の全周に設けられた内部立ち上がり周壁部と、前記内部立ち上がり周壁部の上端の一部が切欠かれた切欠き部とを含む内部トレイを、複数積層し、前記内部立ち上がり周壁部の上端と、上記上端に積重なる前記内部底面部の下面とを互いに溶着し、内部多段トレイを得る積層工程と、
   前記内部多段トレイにおける最上段内部トレイの前記内部立ち上がり周壁部の上端を蓋体で被覆し、前記上端と蓋体とを溶着し、覆蓋された内部多段トレイを得る覆蓋工程と、
   外部底面部と、前記外部底面部の全周に設けられた外部立ち上がり周壁部と、前記外部立ち上がり周壁部の一部に設けられたポートとを含む外部筐体の内部に、前記覆蓋された内部多段トレイを収容し、前記外部立ち上がり周壁部の上端と前記蓋体とを溶着し、内部多段トレイ収容筐体を得る収容工程と、を含む、細胞培養フラスコの製造方法。

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