JP2020527345A6 - 細胞培養容器 - Google Patents

Abstract

細胞培養容器は、壁と、「スフェロイド」と称される、三次元構造で細胞を培養するための複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面とを有する。その壁の内面およびその細胞培養表面は、その容器の細胞培養チャンバを画成する。その壁は、
容器が、三次元細胞集合、すなわちスフェロイドの均質集団の産生に適した環境を提供するように、その細胞培養表面上またはその周りに平らな表面を提供しないやり方で細胞培養表面に取り付けられている。

Description

関連出願の説明

本出願は、その内容が依拠され、ここに全てが引用される、「Cell Culture Container and Methods of Culturing Cells」と題する、２０１８年３月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／６４２４２７号；「Cell Culture Container and Methods of Culturing Cells」と題する、２０１７年７月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５３２６８１号；「Cell Culture Container and Methods of Culturing Cells」と題する、２０１７年７月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５３２６３９号；「Cell Culture Container and Methods of Culturing Cells」と題する、２０１７年７月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５３２６４８号；および「Cell Culture Container and Methods of Culturing Cells」と題する、２０１７年７月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５３２６７１号の優先権の恩恵を主張するものである。

本開示は、広く、細胞培養容器および細胞を培養する方法に関し、より詳しくは、三次元細胞を収容するための細胞培養容器およびその細胞培養容器内で三次元細胞を培養する方法に関する。

細胞培養容器内に三次元細胞を収容することが公知である。細胞培養容器内で三次元細胞を培養することも公知である。

以下は、詳細な説明に記載されたいくつかの例示の実施の形態の基本的な理解を与えるために、本開示の簡単な概要を提示するものである。

いくつかの実施の形態において、細胞培養容器は側壁および底面を有する。実施の形態において、その底面は、複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面である。実施の形態において、その細胞培養表面は、その側壁に取り付けられた基体である。実施の形態において、その側壁は、細胞培養表面の周囲に平らな表面がないようにその基体に取り付けられている。

実施の形態において、前記容器は、上部、底部、側壁、首付き開口または開口部およびその首付き開口と反対にある端部壁を備え得る。もしくは、実施の形態において、細胞培養容器は、蓋を有することがある。もしくは、実施の形態において、細胞培養容器は、容器の上部であることがある、蓋、および首付き開口または開口部を有することがある。容器の底部の内部表面は、実施の形態において、細胞培養表面である。その細胞培養表面は、細胞培養チャンバの長さに亘り得る。容器は、その開口部から細胞培養表面まである角度で延在する壁の内面の首部分を含み得る。その細胞培養容器内で細胞を培養する方法は、容器の外部から細胞培養チャンバ中へと液体を開口部に通し、それによって、所定量の液体を細胞培養チャンバに供給する工程を含み得る。

実施の形態において、複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティは、凹形底面および上部にある開口を有する。液体は、各マイクロキャビティの上部にある開口を通じて、各マイクロキャビティに入る。

実施の形態において、前記容器は、キャップで閉じることのできる首付き開口または開口部を有し得る。実施の形態において、容器の上部壁は蓋であることがある。実施の形態において、その蓋は、スライド式開口、またはヒンジ式開口、または任意の他の公知の開口機構によって、開けることができる。実施の形態において、その容器は、首付き開口を持たず、その代わりに、蓋を有する。

前記細胞培養容器内で細胞を培養する方法は、細胞を含有する、液体培地などの所定量の液体を細胞培養チャンバに導入する工程、および複数のマイクロキャビティの少なくとも１つのマイクロキャビティ内にその所定量の液体の少なくとも一部を堆積させる工程を含み得る。その方法は、その少なくとも１つのマイクロキャビティ内にその所定量の液体の少なくとも一部を堆積させた後、その複数のマイクロキャビティの少なくとも1つのマイクロキャビティ内で細胞を培養する工程をさらに含み得る。

先の実施の形態は、例示であり、本開示の範囲から逸脱せずに、ここに与えられたどの１つ以上の実施の形態と、どの組合せで提供しても、または単独で提供しても差し支えない。さらに、先の一般的な説明および以下の詳細な説明の両方とも、本開示の実施の形態を提示しており、記載され、請求項に定義されたような実施の形態の性質および特徴を理解するための概要または骨子を提供する意図があることを理解すべきである。添付図面は、その実施の形態のさらなる理解を与えるために含まれ、本明細書に包含され、その一部を構成する。図面は、本開示の様々な実施の形態を示しており、説明と共に、その原理および作動を説明する働きをする。

本開示のこれらと他の特徴、実施の形態、および利点は、添付図面を参照して読んだときに、さらに理解することができる。

本開示の実施の形態による細胞培養容器の側面図 本開示の実施の形態による図１の線２－２に沿った細胞培養容器の平面図 本開示の実施の形態による図２の線３－３に沿った細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による図１の線４－４に沿った細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による、複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を含む、図４の区域５でとられた細胞培養容器の拡大概略図 本開示の実施の形態による図５の線６－６に沿った、複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を有する細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による図６の複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を含む細胞培養容器の代わりの実施の形態の断面図 本開示の実施の形態による、蓋部分および溝を備えた、図２の線８－８に沿った細胞培養容器の部分断面図 本開示の実施の形態による、蓋およびヒンジを備えた、図２の線９－９に沿った細胞培養容器の部分断面図 本開示の実施の形態による、共に積み重ねられた３つの細胞培養容器の側面図 本開示の実施の形態による、第５の例示の細胞培養容器内で細胞を培養する方法を含む、図３の細胞培養容器の代わりの実施の形態の断面図 本開示の実施の形態による図１１の細胞培養容器内で細胞を培養する方法の工程を示す断面図 本開示の実施の形態による、複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を含む図１２の区域１３でとられた細胞培養容器の拡大概略図 本開示の実施の形態による図１１の細胞培養容器内で細胞を培養する方法の工程を示す断面図 本開示の実施の形態による、複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を備えた図１４の区域１５でとられた細胞培養容器、およびその複数のマイクロキャビティの内の少なくとも１つのマイクロキャビティ内で細胞を培養する方法の拡大概略図 本開示の実施の形態による図４の細胞培養容器内で細胞を培養する方法の工程を示す断面図 本開示の実施の形態による細胞培養容器の側面図 本開示の実施の形態による図１７の線１８－１８に沿った細胞培養容器の平面図 本開示の実施の形態による、凹部を備えた図１８の線１９－１９に沿った細胞培養容器の実施の形態の断面図 本開示の実施の形態による、凹部を備えた図１９の細胞培養容器の代わりの実施の形態の断面図 本開示の実施の形態による、凹部内に配置された複数のマイクロキャビティを含む細胞培養表面を備えた図１９の区域２１でとられた第３の例示の細胞培養容器の一部の拡大概略図 本開示の実施の形態による、階段状部分を備えた図２１の凹部内に配置された複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を有する細胞培養容器の一部の代わりの実施の形態の拡大概略図 本開示の実施の形態による、細胞培養表面の周囲面を含む図２１に凹部内に配置された複数のマイクロキャビティを含む細胞培養表面を有する細胞培養容器の代わりの実施の形態の拡大概略図 本開示の実施の形態による、凹部を備えた図１７の線２４－２４に沿った第３の例示の細胞培養容器の例示の実施の形態の断面図 本開示の実施の形態による、突起部を備えた図１９の例示の細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による、図２５の突起部を備えた細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による、突起部上に配置された複数のマイクロキャビティを含む細胞培養表面を備えた図２５の区域２８でとられた細胞培養容器の一部の実施の形態の拡大概略図 本開示の実施の形態による、階段状部分を備えた図２７の突起部上に配置された複数のマイクロキャビティを有する細胞培養表面を含む細胞培養容器の一部の実施の形態の拡大概略図 本開示の実施の形態による、突起部を備えた図２４の細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による、所定量の液体を含む図１９の細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による、図３０の所定量の液体を含む細胞培養容器の断面図 本開示の実施の形態による、容器の水没面を含む図３０の区域３２でとられた細胞培養容器の一部の実施の形態の拡大概略図 本開示の実施の形態による、凹部を備えた図３２の容器の水没面を含む細胞培養容器の一部の代わりの実施の形態の拡大概略図 本開示の実施の形態による、突起部を備えた図３２の容器の水没面を含む細胞培養容器の一部の代わりの例示の実施の形態の拡大概略図 マイクロキャビティ内でスフェロイドとして増殖する細胞および細胞培養容器内の平らな表面上において不規則な形状で増殖する細胞を示す概略図 マイクロキャビティ内でスフェロイドとして増殖する細胞および細胞培養容器内の平らな表面上において不規則な形状で増殖する細胞を示す概略図 マイクロキャビティのアレイ内のスフェロイドの写真 不規則な細胞集合体で増殖する細胞の写真

ここで、本開示の例示の実施の形態が示されている添付図面を参照して、特徴構造を下記により十分に記載する。できるときはいつでも、同じまたは同様の部分を称するために、図面に亘り同じ参照番号が使用される。しかしながら、本開示は、多くの異なる形態で具体化することができ、ここに述べられた実施の形態に限定されると解釈すべきではない。

細胞培養容器（例えば、フラスコ）は、細胞を培養するための無菌細胞培養チャンバを提供することができる。いくつかの実施の形態において、細胞培養は、疾患と毒物学の研究、薬物と治療の効果、腫瘍の特徴、有機体、遺伝学、並びに細胞のおよび細胞に関連する他の科学、生物学、および化学原理に関連する情報を提供することができる。

いくつかの実施の形態において、三次元細胞培養は、二次元細胞培養と比べて、より生理学的に正確であり、研究室内での模擬条件と比べて、実生活用途で細胞が存在し、成長できる環境をより実現的に表す多細胞性構造を生じることができる。例えば、三次元細胞培養は、「インビボ」（すなわち、実生活の環境内の生き物内）細胞増殖をシミュレーションする現実的環境をより厳密に提供することが分かっており、一方で、二次元細胞培養は、研究室の外部で生じる現実的環境をそれほど表していない「インビトロ」（すなわち、研究室環境におけるガラス内）細胞増殖をシミュレーションする環境を提供することが分かっている。三次元細胞培養物と相互作用し、その性質と挙動を観察することによって、例えば、疾患と毒物学の研究、薬物と治療の効果、腫瘍、有機体の特徴、遺伝学、並びに細胞のおよび細胞に関連する他の科学、生物学、および化学原理に関連する細胞の理解の向上を成し遂げることができる。特定の条件下では、細胞は互いに群がって、スフェロイドまたはオルガノイドと呼ばれる三次元の「ボール」を形成する。

これらのタイプの研究と使途について、スフェロイドの制御された均質集団を提供することが望ましい。細胞培養容器は、細胞が培養中にスフェロイドを形成するのに適した環境を提供するように構造を作り、配置することができる。細胞培養容器は、複数のマイクロキャビティ（例えば、マイクロキャビティ、微小サイズのウェル、ミリリットル未満のサイズのウェル）を含む細胞培養表面を備えることができる。これらのマイクロキャビティがアレイ状に配列され、１つの細胞培養容器内に多数のマイクロキャビティを提供する場合、多数のスフェロイドを培養することが可能になり、したがって、多数の細胞についての検定および実験を行うことが可能になる。

しかしながら、スフェロイドを増殖させる目的の細胞培養容器内に平らな表面が存在すると、細胞は、これらの平らな表面上に積もり、不規則な細胞集合体を形成し得る。これらは望ましくない。実施の形態において、本開示は、細胞がその上に積もり、不規則な多細胞形態で増殖し得る平らな表面を持たない細胞培養容器を提供する。すなわち、その容器の細胞培養表面は、マイクロキャビティから実質的になる。

実施の形態において、その細胞培養表面は、フラスコ内に配置された挿入物であり得る、または細胞培養表面は、細胞培養容器の壁に結合され得る。マイクロキャビティのアレイを有する細胞培養表面は、例えば、接着、レーザ溶接、超音波溶接、またはいくつかの他の方法によって、細胞培養容器の壁に結合することができる。その細胞培養表面は、複数のマイクロキャビティを形成する波状の（例えば、正弦波）表面を含む上部側および／または底部側を備えることができる。

細胞を培養するときに、その容器に、三次元細胞培養物（例えば、細胞集合体、スフェロイド）の増殖を促進させる材料（例えば、培地、固体、液体、気体）を充填することができる。例えば、液体中に懸濁された細胞を含む培地を容器の細胞培養チャンバに加えることができる。懸濁された細胞は、その複数のマイクロキャビティ内に集まることができ、細胞の集団または塊を形成する（例えば、増殖する）ことができる。これらの集団または塊がスフェロイドまたはオルガノイドである。

例えば、いくつかの実施の形態において、１つのスフェロイドが、少なくとも重力に基づいて複数のマイクロキャビティの各々のマイクロキャビティ中に形成し、液体中に懸濁された１つ以上の細胞が、その液体を通って落下し、各マイクロキャビティ内に堆積し始め得る。マイクロキャビティの形状（例えば、ウェルを画成する凹状表面または底部）、および細胞が表面に付着するのを防ぐマイクロキャビティの表面コーティングも、各マイクロ内での三次元細胞培養物の増殖を促進することができる。すなわち、その細胞はスフェロイドを形成し、マイクロキャビティの寸法によって、特定のサイズに増殖するように制約される。培養中、スフェロイドは、培地（例えば、食物、栄養素）を消費し、副生成物として代謝産物（例えば、老廃物）を産生し得る。それゆえ、いくつかの実施の形態において、食物培地を培養中に細胞培養チャンバに加えることができ、培養中に、細胞培養チャンバから廃棄培地を除去することができる。培地を追加および除去する際に、スフェロイドをマイクロキャビティから移動させることを避け、スフェロイドの所望の細胞培養を促進させる試みを行うことができる。

ここで、図１～３７を参照して、細胞培養容器１００および細胞培養容器１００内で細胞を培養する方法の実施の形態を記載する。図１は、細胞培養容器１００の実施の形態の側面図を示しており、図２は、図１の線２－２に沿った容器１００の平面図を示している。いくつかの実施の形態において、細胞培養容器１００は、上部１０１、底部１０８、首付き開口１１２およびキャップ１０４で覆われているのが図１に示されているポートを含むことができる。平面図の図２は、細胞培養表面１１５を取り囲む壁１０７を示している。上部１０１、底部１０８、および壁１０７（図２に示されている）並びに首付き開口１１２のこれらの特徴構造の各々は、内部表面を有する。すなわち、上部１０１は内部表面２０１を有し、壁１０７は内部表面２０７を有し、底部１０８は内部表面２０８を有し、首付き開口１１２は内部表面２１２を有する。これらの内部表面が細胞培養チャンバ１０３を画成する。容器１００の底部１０８の内部表面２０８は細胞培養表面１１５である。この細胞培養表面１１５は、スフェロイドを収容し、培養するためのマイクロキャビティのアレイ（図５～７参照）を有する。図２に示されるように、前記壁の内部表面は細胞培養表面１１５に当接している。実施の形態において、細胞培養表面１１５と壁１０７の内部表面２０７との間に、平らな表面はない。すなわち、細胞培養表面１１５は、平らな表面を実質的に含まない。言い方を変えれば、細胞培養表面１１５は、完全にマイクロキャビティから作られている。その細胞培養表面はマイクロキャビティから実質的になる。

その容器は、以下に限られないが、高分子、ポリカーボネート、ガラス、およびプラスチックを含む材料から製造することができる。図面において、容器１００は、透き通った（例えば、透明）材料から製造されていると示されている；しかしながら、いくつかの実施の形態において、容器１００は、もう一つの方法として、本開示の範囲から逸脱せずに、半透明の、ほとんど不透明の、または不透明の材料から製造されることがある。図３は、図２の線３－３に沿った容器１００の断面図を示している。いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５および壁１０７の内部表面２０７は、容器１００の細胞培養チャンバ１０３を画成し、開口部１０５が、壁１０７を通って、細胞培養チャンバ１０３と流体連通している。例えば、いくつかの実施の形態において、細胞培養チャンバ１０３は、容器１００の内部空間体積を含み得る。

図１および図２に戻ると、いくつかの実施の形態において、容器１００は、開口部１０５を覆って開口部１０５を密封するか塞ぐかの少なくとも一方を行い、それによって、開口部１０５を通る容器１００の外側からの細胞培養チャンバ１０３への通路を遮るように正しく置かれたキャップ１０４を備えることができる。明確にするために、キャップ１０４は取り除かれ、したがって、他の図面には示されていないが、いくつかの実施の形態において、本開示の範囲から逸脱せずに、キャップ１０４を設け、容器１００の開口部１０５に選択的に加えたり、取り外したりできることを理解すべきである。いくつかの実施の形態において、キャップ１０４は、容器１００の細胞培養チャンバ１０３中へのおよび／またはそこからの気体の移動を可能にするフィルタを備えることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、キャップ１０４は、細胞培養チャンバ１０３内の気体の圧力を調整し、それによって、容器１００の外部の環境の圧力（例えば、大気圧）に対して細胞培養チャンバ１０３の加圧（例えば、過圧）を防ぐように正しく置かれたガス透過性フィルタを備えることができる。

図２の線３－３に沿った断面図を示す図３、および図１の線４－４に沿った断面図を示す図４に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５は、軸５１０に沿って延在する細胞培養チャンバの長さ「Ｌ１」に亘ることができる。図５は、図４の区域５でとられた細胞培養表面１１５の一部の拡大概略図を示している。さらに、図６は、図５の線６－６に沿った細胞培養表面１１５の一部の断面図を示しており、図７は、図６の断面図の代わりの実施の形態を示している。図５に示されるように、いくつかの実施の形態において、マイクロキャビティ１２０は、対角配列で配列させることができるが、他の実施の形態において、他の配置を設けても差し支えない。さらに、いくつかの実施の形態において、各マイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃは、ウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃを画成する凹形底部１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃ（図６および７参照）を備えることができる。さらに、各マイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃは、各マイクロキャビティ１２０の上部に開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃを備えることができる。図６に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５の第一面１２５は、非線形（例えば、波状、正弦波）プロファイルを備えることができ、細胞培養表面１１５の第二面１２６は平らであり得る。同様に、図７に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５の第一面１２５および第二面１２６の両方とも、非線形（例えば、波状、正弦波）プロファイルを備えることができる。

いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５、並びに容器１００（図１～１６に述べられるような）および３００（図１７～３４に述べられるような）は、以下に限られないが、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリスチレン共重合体、フルオロポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリスチレンブタジエン共重合体、完全に水素化されたスチレン重合体、ポリカーボネートＰＤＭＳ共重合体、およびポリエチレン、ポリプロピレン、ポリメチルペンテン、ポリプロピレン共重合体および環状オレフィン共重合体などのポリオレフィンを含む高分子材料を含み得る。それに加え、いくつかの実施の形態において、凹形底部１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃにより画成されたウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃの少なくとも一部を超低結合性コーティングで被覆し、それによって、ウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃのその少なくとも一部を、細胞に対して非接着性にすることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、ペルフルオロ高分子、オレフィン、アガロース、ポリアクリルアミドなどの非イオン性ヒドロゲル、ポリエチレンオキシドなどのポリエーテル、ポリビニルアルコールなどのポリオールまたはその混合物の１種類以上を、凹形底部１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃにより画成されたウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃの少なくとも一部に施すことができる。

さらに、いくつかの実施の形態において、複数のマイクロキャビティ１２０（図１～１６に述べられるような）および３２０（図１７～３４に述べられるような）の各マイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃは、本開示の範囲から逸脱せずに、様々な特徴構造およびそれらの特徴構造の変種を含むことができる。例えば、いくつかの実施の形態において、複数のマイクロキャビティ１２０は、直線配列（図示の）、対角配列、長方形配列、円形配列、放射状配列、六方最密配置などを含むアレイで配列することができる。それに加え、いくつかの実施の形態において、開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃは、様々な形状を含むことができる。いくつかの実施の形態において、開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃは、円形、卵形、長方形、四辺形、六角形、および他の多角形の１つ以上を含むことができる。それに加え、いくつかの実施の形態において、開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃは、約１００マイクロメートル（μｍ）から約５０００μｍの寸法（例えば、直径、幅、正方形または長方形の対角線など）を含むことができる。例えば、いくつかの実施の形態において、開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃは、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、５５０μｍ、６００μｍ、６５０μｍ、７００μｍ、７５０μｍ、８００μｍ、８５０μｍ、９００μｍ、９５０μｍ、１０００μｍ、１５００μｍ、２０００μｍ、２５００μｍ、３０００μｍ、３５００μｍ、４０００μｍ、４５００μｍ、５０００μｍの寸法、および約１００μｍから約５０００μｍの範囲内に含まれる任意の寸法または寸法の範囲を含むことができる。

いくつかの実施の形態において、凹形底部１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃにより画成されたウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃ（図１～１６に述べられるような）および３２２（図１７～３４に述べられるような）は、様々な形状を含むことができる。いくつかの実施の形態において、凹形底部１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃにより画成されたウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃは、円形、楕円形、放物形、双曲形、山形、傾斜、または他の断面プロファイル形状の１つ以上を含むことができる。それに加え、いくつかの実施の形態において、ウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃの深さ（例えば、開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃにより画成される平面から、凹形底部１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃまでの深さ）は、約１００マイクロメートル（μｍ）から約５０００μｍまでの寸法を含むことができる。例えば、いくつかの実施の形態において、ウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃの深さは、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、５５０μｍ、６００μｍ、６５０μｍ、７００μｍ、７５０μｍ、８００μｍ、８５０μｍ、９００μｍ、９５０μｍ、１０００μｍ、１５００μｍ、２０００μｍ、２５００μｍ、３０００μｍ、３５００μｍ、４０００μｍ、４５００μｍ、５０００μｍの寸法、および約１００μｍから約５０００μｍの範囲内に含まれる任意の寸法または寸法の範囲を含むことができる。

いくつかの実施の形態において、複数のマイクロキャビティ１２０の少なくとも１つのマイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃ内で培養できる三次元細胞１５０（例えば、スフェロイド、オルガノイド１５０ａ、１５０ｂ、１５０ｃ）（図１６参照）（図１～１６に述べられるような）および３５０（図１７～３４に述べられるような）は、約５０μｍから約５０００μｍの寸法（例えば、直径）、および約５０μｍから約５０００μｍの範囲内に含まれる任意の寸法または寸法の範囲を含むことができる。いくつかの実施の形態において、開示された明確な寸法より大きいまたは小さい寸法を提供することができ、したがって、特に明記のない限り、開示された明確な寸法より大きいまたは小さい寸法は、本開示の範囲内にあると考えられる。例えば、いくつかの実施の形態において、開口１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃの１つ以上の寸法、ウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃの深さ、および三次元細胞１５０（例えば、スフェロイド１５０ａ、１５０ｂ、１５０ｃ）の寸法は、本開示の範囲から逸脱せずに、開示された明確な寸法より大きくても、小さくても差し支えない。

図１～４に戻ると、いくつかの実施の形態において、容器１００は、開口部１０５から細胞培養表面１１５まで延在する首部５５５を備え得る。いくつかの実施の形態において、首部５５５は、傾斜（例えば、斜め）プロファイル、開口部１０５に向かうおよび／またはそこから離れる方向に狭くなるプロファイル、および細胞培養表面１１５に向かうおよび／またはそこから離れる方向に広がるプロファイルの１つ以上を含むことができる。図３に示されるように、いくつかの実施の形態において、首部５５５は、細胞培養チャンバ１０３に対して角度が付けられている。さらに、いくつかの実施の形態において、容器の首部５５５は、曲げ部１５８を有し得る。いくつかの実施の形態において、曲げ部１５８は、細胞培養表面１１５より高い。しかしながら、いくつかの実施の形態において、その曲げ部はどの形状のものであっても差し支えないことを理解すべきである。例えば、曲げ部１５８は、湾曲、または傾斜、または角度付き、または階段状であり得る。

それに加え、またはそれに代えて、図３および図４に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養容器１００は、首部１１２の内部表面２１２から延在するダム１３０を備えることができる。いくつかの実施形態において、ダム１３０は、開口部１０５と細胞培養表面１１５との間で画成される通路を遮るポートに面する表面１３１を備え得る。いくつかの実施の形態において、ダム１３０のポートに面する表面１３１は、容器１００の軸５１０に対して実質的に垂直であり得る。さらに、図３に示されるように、いくつかの実施の形態において、ダム１３０の自由端１３５の少なくとも一部は、上部１０１の内面２０１から距離「ｄ１０」だけ距離をあけて配置することができる。いくつかの実施の形態において、ダム１３０の自由端１３５の少なくとも一部を内面２０１から距離をあけて配置することによって、いくつかの実施の形態において、容器１００の後方部分（例えば、開口部１０５と反対側）へのアクセスを設けることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、１つ以上の器具（図示せず）を、ダム１３０を越えて（例えば、距離「ｄ１０」を通って）容器１００の開口部１０５中に挿入して、ダム１３０の背後に配置された細胞培養チャンバ１０３のある領域に到達することができる。したがって、例えば、第１の例示の細胞培養容器１００のダム１３０に関して開示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養容器１００のダム１３０は、同様に、容器１００に流入する材料（例えば、食物、栄養素）および／または容器１００から流出する材料（例えば、老廃物）の速度を遅くすること、およびそれを遮ることの少なくとも一方を行いつつ、容器１００の細胞培養チャンバ１０３中へのバルクアクセスも可能にすることができる。

図１に示されるように、いくつかの実施の形態において、容器１００は蓋１３７を備えることができる。いくつかの実施の形態において、蓋１３７は、閉じているときに、容器１００の上部１０１であり得る（図３も参照のこと）。いくつかの実施の形態において、第１の主面５３８が細胞培養チャンバ１０３の少なくとも一部を画成することができる。それに加え、いくつかの実施の形態において、蓋１３７は、開けたり閉じたり、またはある程度開けたり（またはある程度閉じたり）することができる。蓋１３７は、容器１００にスライド式に取り付けることができ、または、いくつかの実施の形態において、蓋１３７は、容器１００にヒンジで取り付けることができる。いくつかの実施の形態において、開口部５３６は、細胞培養チャンバ１０３と流体連通することができる。

さらに、図３に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５から上部１０１または蓋１３７までの第１の距離「ｄ１１」は、細胞培養表面１１５から開口部１０５の開口５０７までの第２の距離「ｄ１２」より小さいことがあり得る。いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５から開口部１０５の開口５０７までの第２の距離「ｄ１２」は、開口５０７のどの位置で定義されても差し支えない。しかしながら、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５から開口部１０５の開口５０７までの第２の距離「ｄ１２」は、細胞培養表面１１５に対する開口部１０５の開口５０７の最も近い位置として定義することができる。例えば、いくつかの実施の形態において、軸５１０が重力「ｇ」の方向（図１６参照）に対して垂直な方向に延在するように容器１００が向けられている場合、細胞培養表面１１５から開口部１０５の開口５０７までの第２の距離「ｄ１２」は、重力「ｇ」の方向に対して開口部１０５の開口５０７の最も低い位置として定義することができる。

したがって、いくつかの実施の形態において、例えば、細胞培養表面１１５から蓋１３７の部分まで延在する距離が、細胞培養表面１１５から開口部１０５の開口５０７までの第２の距離より大きい比較容器と比べて、容器１００の１つ以上の特徴構造が、単独または組合せで、材料を収容できるより大きい容積を含む細胞培養チャンバ１０３を提供することができる。すなわち、軸５１０が重力「ｇ」の方向に対して垂直な方向に延在するように容器１００が向けられている場合、細胞培養表面１１５から開口部１０５の開口５０７までの第２の距離「ｄ１２」（重力「ｇ」の方向に対して開口部１０５の開口５０７の最も低い位置として定義される）は、容器１００の細胞培養チャンバ１０３内に収容できる材料の体積に関する最大充填ラインを定義することができる。例えば、第２の距離「ｄ１２」が第１の距離「ｄ１１」より小さく、軸５１０が重力「ｇ」の方向に対して垂直な方向に延在するように容器１００が向けられている場合、細胞培養チャンバ１０３内に収容される材料の体積の最大充填ラインは、蓋１３７からの距離に相応するであろう。何故ならば、細胞培養チャンバ１０３に加えられるどの追加の材料も、細胞培養チャンバ１０３内に収容されずに、開口部１０５の開口から流出するであろうからである。それゆえ、第２の距離「ｄ１２」が第１の距離「ｄ１１」より小さく、軸５１０が重力「ｇ」の方向に対して垂直な方向に延在するように容器１００が向けられている場合、容器１００は、収容している材料に関して利用されない細胞培養チャンバ１０３の部分を含む体積を含み得る。したがって、いくつかの実施の形態において、第１の距離「ｄ１１」より大きい第２の距離「ｄ１２」を含む、本開示の実施の形態による容器１００を提供することによって、細胞培養チャンバ１０３の全体積を利用して、材料を収容することができ、より大きい体積の材料を細胞培養チャンバ１０３内に収容することができ、材料の効率的な配分、および容器１００の空間の全体利用を達成することができる。同様に、いくつかの実施の形態において、第２の距離「ｄ１２」は、本開示の範囲から逸脱せずに、第１の距離「ｄ１１」と等しくても差し支えない。

さらに、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面１１５の単位面積（例えば、１種類以上の細胞を培養できるそれぞれの表面を提供する単位面積）に関して、三次元細胞培養は、例えば、比較の二次元細胞培養よりも、多くの培地（例えば、食物、栄養素）を消費し、副生成物として多くの培地（例えば、老廃物）を生じ得る。それゆえ、いくつかの実施の形態において、例えば、比較の二次元細胞培養と比べて、本開示の実施の形態による三次元細胞培養は、同等の期間で、より頻繁な培地交換（例えば、食物、栄養素の追加、および／または老廃物の除去）を含み得る。それに加え、またはそれに代えて、いくつかの実施の形態において、例えば、比較の二次元細胞培養と比べて、本開示の実施の形態による三次元細胞培養は、同等の期間で、より大きい培地体積（例えば、より多くの食物、栄養素を消費する、および／またはより多くの老廃物を生じる）を含み得る。したがって、いくつかの実施の形態において、細胞培養容器１００の１つ以上の特徴構造、および細胞培養容器１００内で細胞１５０を培養する方法は、培地交換の頻度、並びに容器１００の細胞培養チャンバ１０３内に収容できるもの、細胞培養チャンバ１０３に加えられるもの、および細胞培養チャンバ１０３から除去できるものの１つ以上であり得る培地の体積に関する利点を提供し、それによって、三次元細胞を培養するのに望ましい効果的な環境を提供することができる。

図２の線８－８に沿った容器１００の部分断面図を示す図８に示されるように、いくつかの実施の形態において、上部壁１０１は溝１８０を備えることができ、蓋１３７は、例えば、開口部１３６の開口を通じて、細胞培養チャンバ１０３へのアクセスを選択的に提供するために、溝１８０内で摺動可能であり得る（図２に矢印１８１で示されるように）。それに加え、またはそれに代えて、図２の線９－９に沿った容器１００の部分断面図を示す図９に示されるように、いくつかの実施の形態において、容器１００は、蓋１３７を壁１０１に接続するヒンジ１８２を備えることができる。いくつかの実施の形態において、蓋１３７は、例えば、開口部１３６の開口を通じて、細胞培養チャンバ１０３へのアクセスを選択的に提供するために、ヒンジ１８２の周りで回転可能であり得る（矢印１８３で示されるように）。さらに、いくつかの実施の形態において、蓋１３７は、例えば、開口部１３６の開口を通じて、細胞培養チャンバ１０３へのアクセスを選択的に提供するために、再利用可能な接着剤および再利用できない接着剤を含む接着剤（図示せず）および／または１つ以上の特徴構造（図示せず）で壁１０１に接続されても差し支えない。

それに加え、いくつかの実施の形態において、ポート１０５から端部壁１０７まで容器の軸５１０に沿って測定される、容器１００の長さ「Ｌ２」は、細胞培養表面１１５の長さ「Ｌ１」以上であり得る。したがって、いくつかの実施の形態において、例えば、複数の容器１００が占める表面積（例えば、研究室の表面積、テーブルの表面積）を減少させるために、複数の容器１００を積み重ねることができる（例えば、重力の方向に対して垂直に）。例えば、図１０は、本開示の実施の形態にしたがって互いに積み重ねられた複数の容器１００、１００ａ、１００ｂの側面図を概略示している。

図１０に概略示されているように、いくつかの実施の形態において、壁１０１ａ、キャップ１０４ａ、首部５５５ａ、蓋１３７ａ、および底部１０８ａを備えた容器１００ａを、他のものの上部に１つ、積み重ねることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、容器１００ｂの底部１０８ｂは、壁１０１、１０１ａ、１０１ｂに関して、重力の方向に垂直な主面を画成する水平面（図示せず）上に配置することができる。いくつかの実施の形態において、容器１００の底部１０８は、容器１００ｂの蓋１３７ｂ上に（例えば、面するように）配置することができる。同様に、いくつかの実施の形態において、容器１００ａの底部１０８ａを容器１００の蓋１３７上に（例えば、面するように）配置することができる。本開示の実施の形態にしたがって複数の容器１００、１００ａ、１００ｂを配置する（例えば、積み重ねる）ことによって、複数の容器１００、１００ａ、１００ｂは、例えば、容器１００、１００ａ、１００ｂに関する貯蔵、洗浄、および培養の１つ以上の最中に、容器１００、１００ａ、１００ｂが提供される空間（例えば、面積、体積）を効率的に利用することができる。３つの積み重ねられた容器１００、１００ａ、１００ｂが複数として示されているが、本開示の範囲から逸脱せずに、本開示の実施の形態にしたがって、２つの容器または４つ以上の容器を積み重ねられることを理解すべきである。さらに、いくつかの実施の形態において、複数の容器１００、１００ａ、１００ｂは、本開示の範囲から逸脱せずに、本開示に明白に開示されていない配置を含む様々な配置で、別々に、および／または一緒に（例えば、積み重ねられて）配置することができる。

実施の形態において、前記容器は積み重ねられる。さらに、首部１１２における曲げ部１５８の１つ以上の特徴構造に少なくとも部分的に基づいて、本開示の実施の形態にしたがって積み重ねられた場合、ポート１０５、１０５ａ、１０５ｂへのアクセスは、複数の容器１００、１００ａ、１００ｂが積み重ねられている間に（例えば、固定された）、例えば、それぞれの細胞培養チャンバ１０３、１０３ａ、１０３ｂに材料（例えば、食物、栄養素）を追加する、および／またはそこから材料（例えば、老廃物）を除去するために、維持することができる。例えば、いくつかの実施の形態において、本開示の１つ以上の特徴構造を備えていない容器を積み重ねると、開口部の開口へのアクセスを制限する、遮る、および妨げるの１つ以上が行われ得る。いくつかの実施の形態において、アクセスが制限される、遮られる、および妨げられるの１つ以上が行われる開口部の開口を含む積み重ねられた容器は、例えば、開口部の開口へのアクセスを提供するために、培養過程中に互いに対して動かされることがある（例えば、平行移動および回転の少なくとも一方）。しかしながら、いくつかの実施の形態において、培養過程中に互いに対して容器が動かされると、その容器内で培養されている細胞が押しのけられる、および乱されるの１つ以上が行われ、それによって、細胞培養過程に悪影響が及ぶであろう。したがって、容器１００、１００ａ、１００ｂの首部５５５、５５５ａ、５５５ｂの曲げ部１５８、１５８ａ、１５８ｂの１つ以上の特徴構造に少なくともある程度基づいて、本開示の実施の形態にしたがって積み重ねられた場合、ポートの開口へのアクセスが達成され、細胞培養過程に関する利点を得ることができる。

ここで、図１１～１６を参照して、細胞培養容器１００内で細胞を培養する方法を記載する。図１１に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養容器１００内で細胞１５０（図１５参照）を培養する方法は、開口部１０５を通じて容器１００の外部から細胞培養チャンバ１０３中に液体を通し（例えば、矢印１０６で示される）、それによって、細胞培養チャンバ１０３内に所定量の液体１４０を提供する工程を含み得る。実施の形態において、その方法は、随意的なダム１３０の有無にかかわらずに、容器内で行うことができる。

また、容器１００の首部１１２の曲げ部１５８も示されている。いくつかの実施の形態において、前記方法は、曲げ部１５８が首部１１２において最下点を形成するように容器１００を傾ける工程を含み得る。その容器に導入された液体１４０は、曲げ部１５８で首部１１２内に蓄積し得る。すなわち、その容器は、液体１４０がマイクロキャビティのアレイ１１５と接触せずに、首部１１２の曲げ部１５８内に所定量の液体１４０を収容することができる。下記により詳しく述べられるように、前記方法のこの段階で、液体１４０がマイクロキャビティ１２０のアレイを含有する細胞培養表面１１５の１つ以上のマイクロキャビティ１２０と接触するのを防ぐことにより、例えば、細胞１５０（図１５参照）の改善された培養を促進するいくつかの利点を提供することができる。次に、軸５１０が重力「ｇ」に対して垂直となり、液体１４０が、マイクロキャビティ１２０のアレイを有する細胞培養表面１１５を横断してゆっくりと流れ、その液体がマイクロキャビティ１２０をゆっくりと満たすように、容器をゆっくりと傾けることができる。この工程が、図１２に概略示されている。

例えば、図１３は、図１２の区域１３でとられた細胞培養容器１００の拡大概略図を示しており、液体１４０の少なくとも一部が、首部１１２から細胞培養チャンバ１０３の長さ「Ｌ１」に沿って細胞培養表面１１５上に流れ、マイクロキャビティ１２０のアレイのマイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃに入るのを示している。いくつかの実施の形態において、液体を流す容器１００の動作は、制御することができ、遅いことがあり得る（例えば、およそ数分の期間で行われる）。例えば、複数のマイクロキャビティ１２０のマイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃに液体を直接充填する（例えば、本開示の方法に基づかない）と、マイクロキャビティ内で気泡が形成され得ることが観察された。マイクロキャビティ１２０に液体をこのようにゆっくりと導入すると、気泡の形成が減少して、液体がマイクロキャビティに流入することができる。気泡は、細胞増殖を妨害する。液体培地は、高い表面張力を有し得（液体培地は粘度が高くあり得）、マイクロキャビティ１２０は非常に小さい。理論で束縛する意図はないが、マイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃに液体を直接かつ急速に（例えば、およそ数秒の期間で行われる）充填しようとした場合、表面張力のために、気泡がマイクロキャビティ内に捕捉されると考えられる。しかしながら、本開示の方法の１つ以上の特徴構造を利用することによって、例えば、首部１１２の曲げ部１５８に液体を導入し、次いで、容器１００をその細胞培養位置（細胞培養表面が重力「ｇ」に対して垂直である）にゆっくりと傾けることによって、気泡の形成を減少させることができることが観察される。

それに加え、長期の細胞培養について、細胞が栄養素の新鮮な供給を維持することを確実にするために、培地を交換しなければならない。これには、各マイクロキャビティ１２０内にスフェロイドが適所にある間に、培地を除去し、培地を補給する必要がある。培地の交換中にマイクロキャビティ１２０からスフェロイドを押しのけないことが重要である。スフェロイド１５０がそのマイクロキャビティ１２０から「飛び出た」場合、それは、別の既に占有されたマイクロキャビティ中に沈み得る。スフェロイドが互いに触れたときに、それらは不規則な細胞集合体８０１（図３５および３６参照）を形成し、不均質細胞培養がもたらされる。

いくつかの実施の形態において、首部１１２の曲げ部１５８は細胞培養表面１１５に当接し得、液体１４０が首部１１２の曲げ部１５８から流れ、制御された流動で（例えば、液体の飛沫が減少しているかまたはなく、乱流が減少しているかまたはない）、マイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃ中に堆積し、それによって、気体をウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃから移動させつつ、マイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃのそれぞれの開口部１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃの一部を通ってマイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃのウェル１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃ中に堆積する液体の定常流を与えることができる。実施の形態において、細胞培養表面１１５は、壁１０７から壁１０７まで延在する。実施の形態において、細胞培養表面１１５は、どのような平らな区域も持たない。すなわち、その細胞培養表面は、細胞培養表面と壁１０７との間に縁も、平らな区域もない、壁から壁までマイクロキャビティのアレイである。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。実施の形態において、細胞が定着する平らな区域が細胞培養チャンバ内にない。このことは、細胞が、マイクロウェルの外部の細胞培養チャンバ内に定着しないことを確実するために重要である。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体８０１（図３５Ａと３５Ｂ、３６Ａと３６Ｂ参照）として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。

実施の形態において、細胞培養表面１１５は壁１０７から壁１０７まで延在する。実施の形態において、細胞培養表面１１５は、どのような平らな区域も持たない。すなわち、その細胞培養表面は、細胞培養表面と壁１０７との間に縁も、平らな区域もない、壁から壁まで延在するマイクロキャビティ１２０のアレイである。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。実施の形態において、細胞が定着する平らな区域が細胞培養チャンバ内にない。このことは、細胞が、マイクロウェルの外部の細胞培養チャンバ内に定着しないことを確実するために重要である。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体８０１（図３５Ａと３５Ｂ、３６Ａと３６Ｂ参照）として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。

図１４に示されるように、いくつかの実施の形態において、少なくとも容器１００の動きに基づいて、液体１４０を、細胞培養表面１１５の全面に亘り首部１１２から流すことができる。それに加え、図１５は、細胞培養容器１００内で細胞１５０を培養する方法を含む、図１４の区域１５でとられた細胞培養容器１００の拡大概略図を示している。例えば、いくつかの実施の形態において、その方法は、少なくとも１つのマイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃ内に所定量の液体１４０の少なくとも一部を堆積させた後、複数のマイクロキャビティ１１５の少なくとも１つのマイクロキャビティ１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃ内で細胞１５０（例えば、スフェロイド１５０ａ、スフェロイド１５０ｂ、スフェロイド１５０ｃ）を培養する工程を含むことができる。図１４および図１５に示されるように、いくつかの実施の形態において、容器１００の軸５１０は、マイクロキャビティ１２０内で細胞１５０を培養している間、重力「ｇ」の方向に対して実質的に垂直であり得る。

図１６に概略示されるように、いくつかの実施の形態において、前記方法は、細胞培養チャンバ１０３に追加の液体培地１４０を加える工程をさらに含むことができる（矢印５０８で示されるように）。例えば、いくつかの実施の形態において、細胞培養容器１００内で細胞１５０（図１５参照）を培養している間に、液体培地１４０（細胞の食物、栄養素を含有する液体）を細胞培養チャンバ１０３に加えることができる。ポート１５０は、隆起しており、上に向いているので、液体１４０を、ポート１５０の開口部５０７の最下点からの距離「ｄ１３」まで、容器に加えることができる。すなわち、実施の形態において、その容器は、容器１００の蓋１３７または上部１０１に至るまで充填することができる。このようにして、細胞培養チャンバ１０３は、ポートが容器１００の上部１０１より低く配置されている場合に収容できるであろうよりも大きい体積の液体１４０を収容することができる。

ここで、図１７～３４を参照して、細胞培養容器３００および細胞培養容器３００内で細胞を培養する方法の追加の実施の形態を記載する。図１７～３４に示された実施の形態は、首付き開口またはポートを持たない実施の形態を示しているが、図１７～３４に示された実施の形態を、ポートを持つ容器である、図１～１６に示された実施の形態に組み込めることが理解されよう。例えば、図１７は、細胞培養容器３００の側面図を概略示しており、図１８は、図１７の線１８－１８に沿った容器３００の平面図を概略示している。いくつかの実施の形態において、細胞培養容器３００は、壁３０１および蓋３０４を備えることができる。図面において、容器３００は、透き通った（例えば、透明）材料から製造されていると示されている；しかしながら、いくつかの実施の形態において、容器３００は、もう一つの方法として、本開示の範囲から逸脱せずに、半透明の、ほとんど不透明の、または不透明の材料から製造することができる。いくつかの実施の形態において、蓋３０４は、容器３００の開口を覆って開口を密封するか塞ぐかの少なくとも一方を行い、それによって、開口を通る容器３００の外側からの細胞培養チャンバ３０３への通路を遮るように正しく置くことができる。明確にするために、蓋３０４は取り除かれ、したがって、他の図面には示されていないが、いくつかの実施の形態において、本開示の範囲から逸脱せずに、蓋３０４を設け、容器３００の開口に選択的に加えたり、取り外したりできることを理解すべきである。いくつかの実施の形態において、蓋３０４は、容器３００の細胞培養チャンバ３０３中へのおよび／またはそこからの気体の移動を可能にするフィルタ（図１９参照）を備えることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、蓋３０４は、細胞培養チャンバ３０３内の気体の圧力を調整し、それによって、容器３００の外部の環境の圧力（例えば、大気圧）に対して細胞培養チャンバ３０３の加圧（例えば、過圧）を防ぐように正しく置かれたガス透過性フィルタを備えることができる。

図１９は、図１８の線１９－１９に沿った細胞培養容器３００の例示の実施の形態の断面図を示しており、図２０は、図１９の細胞培養容器３００の代わりの例示の実施の形態の断面図を示している。それに加え、図２５は、図１８の細胞培養容器３００の代わりの例示の実施の形態の断面図を示しており、図２６は、図２５の細胞培養容器３００の代わりの例示の実施の形態の断面図を示している。いくつかの実施の形態において、壁３０１は内面３０２を備えることができ、容器３００は、複数のマイクロキャビティ３２０を含む細胞培養表面３１５を備えることができる。図１９および図２５に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５および壁３０１の内面３０２が容器３００の細胞培養チャンバ３０３を画成する。あるいは、図２０および図２６に示されるように、いくつかの実施の形態において、壁３０１の内面３０２が、例えば、第１の領域３０３ａおよび第２の領域３０３ｂを含む容器３００の細胞培養チャンバ３０３を画成することができ、細胞培養表面３１５は、細胞培養チャンバ３０３内で、第１の領域３０３ａと第２の領域３０３ｂとの間に位置付けることができる。

図１９および図２０に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５の外周３３０は、複数のマイクロキャビティ３２０を取り囲むことができ、その外周３３０の少なくとも一部３３１は、容器３００の壁３０１の内面３０２の凹部３３５内に位置付けることができる。例えば、図２４は、図１７の線２４－２４に沿ってとられた容器３００の例示の断面図を示しており、ここで、全外周３３０は複数のマイクロキャビティ３２０を側面に沿って囲んでおり、その全外周３３０は凹部３３５内に位置付けられている。あるいは、図２５および図２６に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５の外周３３０は複数のマイクロキャビティ３２０を取り囲むことができ、その外周３３０の少なくとも一部３３１は、容器３００の壁３０１の内面３０２の突起部３３７上に位置付けることができる。例えば、図２９は、図２４の第３の例示の細胞培養容器３００の代わりの例示の実施の形態の断面図を示しており、ここで、全外周３３０は複数のマイクロキャビティ３２０を側面に沿って囲んでおり、その全外周３３０は突起部３３７上に位置付けられている。本開示の全体に亘り、「取り囲む」とは、細胞培養表面３１５の主要な特徴構造に対して垂直な方向の上面図または底面図において、例えば、第１の特徴構造により画成される外周が、第２の特徴構造により画成される外周を取り囲むことを意味する。それゆえ、例えば、図２４および図２９の図に示されるように、細胞培養表面３１５の外周（外周３３０により画成される）は、細胞培養表面３１５の外周（複数のマイクロキャビティ３２０により画成される）を取り囲んでいる。

実施の形態において、細胞培養表面３１５は、壁３０１から壁３０１まで延在する。実施の形態において、細胞培養表面３１５は、どのような平らな区域も有していない。すなわち、その細胞培養表面は、細胞培養表面と壁３０１との間に縁も、平らな区域もない、壁から壁まで延在するマイクロキャビティ３２０のアレイである。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。実施の形態において、細胞が定着する平らな区域が細胞培養チャンバ内にない。このことは、細胞が、マイクロウェルの外部の細胞培養チャンバ内に定着しないことを確実するために重要である。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体８０１（図３５Ａと３５Ｂ、３６Ａと３６Ｂ参照）として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。

図２１～２３は、凹部３３５内に位置付けられた細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１を含む、図１９の区域２１でとられた容器３００の一部の例示の実施の形態の拡大図を示している。同様に、図２７および図２８は、突起部３３７上に位置付けられた外周３３０の少なくとも一部３３１を含む、図２５の区域２８でとられた容器３００の一部の例示の実施の形態の拡大図を示している。いくつかの実施の形態において、複数のマイクロキャビティ３２０の各マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃは、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃを画成する凹面３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃおよび開口３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃを備えることができる。液体は、開口３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃを通じてそれらのマイクロキャビティに出入りする。いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５は、容器３００の壁３０１に取り付けることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５は、接着剤（図示せず）、溶剤（図示せず）、留め具（図示せず）により、または溶接（レーザ溶接または超音波溶接）で、容器３００の壁３０１に取り付けることができる、もしくはその壁および細胞培養表面３１５は、一緒に成形することができる。それに加え、またはそれに代えて、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５は、少なくとも一部には、例えば、プラスチック溶接過程、レーザ溶接過程、超音波溶接過程の操作に基づいて、容器３００の壁３０１の内面３０２に取り付けることができる。いくつかの実施の形態において、壁３０１および外周３３０の少なくとも一方は、少なくとも一部にはプラスチック溶接過程の操作に基づいて、容器３００の壁３０１への細胞培養表面３１５の結合を促進するためにエネルギーディレクタ（図示せず）を含み得る。

それに加え、図２２に示されるように、いくつかの実施の形態において、容器３００は、細胞培養表面３１５から外側に広がり、凹部３３５を形成する階段状部分３０６を備えることができる。いくつかの実施の形態において、階段状部分３０６は、細胞培養チャンバ３０３の体積およびその細胞培養チャンバ３０３内の複数のマイクロキャビティ３２０のマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの数量の少なくとも一方を増加させることができる。それに加え、またはそれに代えて、階段状部分３０６は、例えば、図２１に示された対応する凹部３３５と壁３０１の厚さと比べて、容器３００の壁３０１の厚さを増加させずに、比較的大きい凹部３３５を提供することができる。いくつかの実施の形態において、階段状部分３０６により形成された凹部３３５は、凹部３３５内に位置付けられた細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１を収容するように向けることができる。同様に、図２８に示されるように、いくつかの実施の形態において、容器３００は、細胞培養表面３１５に向けて内側に延在し、突起部３３７を形成する階段状部分３０８を備えることができる。いくつかの実施の形態において、階段状部分３０８は、例えば、図２７に示された対応する突起部３３７と壁３０１の厚さと比べて、容器３００の壁３０１の厚さを増加させずに、比較的大きい突起部３３７を提供することができる。いくつかの実施の形態において、階段状部分３０８により形成された突起部３３７は、突起部３３７上に位置付けられた細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１を収容するように向けることができる。

実施の形態において、細胞培養表面３１５は、壁３０１から壁３０１まで延在する。実施の形態において、細胞培養表面３１５は、どのような平らな区域も持たない。すなわち、その細胞培養表面は、細胞培養表面と壁３０１との間に縁も、平らな区域もない、壁から壁まで延在するマイクロキャビティ３２０のアレイである。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。実施の形態において、細胞が定着する平らな区域が細胞培養チャンバ内にない。このことは、細胞が、マイクロウェルの外部の細胞培養チャンバ内に定着しないことを確実するために重要である。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体８０１（図３５Ａと３５Ｂ、３６Ａと３６Ｂ参照）として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。

それに加え、図２３、図２５、および図２８に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１は、複数のマイクロキャビティ３２０の各マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの凹面３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃから離れる方向に、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの開口３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃを含む細胞培養表面３１５の部分から間隔を置いて配置することができる。例えば、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５は、外周３３０の少なくとも一部３３１から、開口３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃを含む細胞培養表面３１５の部分まで延在する外周面３３２を備えることができる。いくつかの実施の形態において、外周面３３２は、垂直の向き（例えば、重力の方向に延在する）を備えることができる；しかしながら、いくつかの実施の形態において、外周面３３２は、重力の方向に対して傾斜して、例えば、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの開口３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃに細胞を向けることができる。

さらに、細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１を凹部３３５内に位置付けることによって、いくつかの実施の形態において、例えば、マイクロキャビティ３２０ａの開口３２３ａを、凹部３３５の位置で壁３０１の内面３０２に当接するように位置付けることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、例えば、いくつかの実施の形態において、マイクロキャビティ３２０ａの開口３２３ａは、液体中に懸濁された細胞が、容器３００の表面上に定着せずにまたは接着せずに、マイクロキャビティ３２０ａのウェル３２２ａ中に落下する（例えば、少なくとも重力に基づいて）および／または内面３０２により向けられるように壁３０１の内面３０２と同一平面にあり得る。同様に、細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１を突起部３３７上に位置付けることによって、いくつかの実施の形態において、例えば、突起部３３７で外周３３０を支持して、マイクロキャビティ３２０ａの開口３２３ａを細胞培養表面３１５の外周面３３２と当接するように位置付けることができる。例えば、いくつかの実施の形態において、マイクロキャビティ３２０ａの開口３２３ａは、液体中に懸濁された細胞が、容器３００のどの他の表面上にも定着せずにまたは接着せずに、マイクロキャビティ３２０ａのウェル３２２ａ中に落下する（例えば、少なくとも重力に基づいて）および／または外周面３３２により向けられるように細胞培養表面３１５の外周面３３２と同一平面にあり得る。実施の形態において、細胞培養表面３１５は壁３０１から壁３０１まで延在する。実施の形態において、細胞培養表面３１５は、どのような平らな区域も持たない。すなわち、その細胞培養表面は、細胞培養表面と壁３０１との間に縁も、平らな区域もない、壁から壁まで延在するマイクロキャビティ３２０のアレイである。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。実施の形態において、細胞が定着する平らな区域が細胞培養チャンバ内にない。このことは、細胞が、マイクロウェルの外部の細胞培養チャンバ内に定着しないことを確実するために重要である。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体８０１（図３５Ａと３５Ｂ、３６Ａと３６Ｂ参照）として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。

いくつかの実施の形態において、容器３００の表面上に定着するまたは接着する細胞は、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの外部で蓄積し、成長し（例えば、増殖し）、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内の三次元細胞の所望の増殖に関して問題を生じ得る。図３５Ａおよび図３５Ｂは、マイクロキャビティの外周の平らな区域に蓄積している細胞の概略図である。例えば、いくつかの実施の形態において、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に落下（少なくとも重力に基づいて）せず、容器３００の他の表面に蓄積するまたは接着する細胞は、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部で増殖し得る。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は、望ましくない不規則な細胞集合体８０１として増殖し得る。それに加え、これらの不規則な細胞集合体８０１は、隣接するマイクロキャビティ中に入り込み、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞の所望の増殖を乱し（例えば、阻止し、変更し、遅くし、または妨げ）得る。同様に、いくつかの実施の形態において、容器３００の他の表面に蓄積するまたは接着する細胞は、増殖し、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞を押しのけ、それによって、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞の所望の増殖を乱しまたは損ない、細胞の所望の大きさの均一性を変え得る。したがって、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１を凹部３３５内または突起部３３７上に位置付けることにより、液体内に懸濁された全ての細胞を、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に向け、それゆえ、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部の容器３００の表面に細胞が接着した場合にそうしなければ起こり得る問題を低下させる、またはなくすことができる。

細胞培養容器３００の別の例示の実施の形態が、図３０の断面図に示されている。いくつかの実施の形態において、細胞培養容器３００および細胞培養表面３１５は、同じ材料から製造することができる。例えば、いくつかの実施の形態において、複数のマイクロキャビティ３２０を備えた細胞培養表面３１５は、容器３００の壁３０１の一体部分として製造（例えば、造形、機械加工、プレス、押出し、成形、３Ｄプリントの操作によってプリントなど）することができ、よって、細胞培養表面３１５と容器３００の壁３０１との間に直接的な境界がない。図３０に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５および壁３０１の内面３０２（共に一体に形成された）は、容器３００の細胞培養チャンバ３０３を画成することができる。あるいは、図３１に示されるように、いくつかの実施の形態において、壁３０１の内面３０２は、第１の領域３０３ａおよび第２の領域３０３ｂを含む、容器３００の細胞培養チャンバ３０３を画成することができ、細胞培養表面３１５（壁３０１と一体に形成された）は、第１の領域３０３ａと第２の領域３０３ｂとの間の細胞培養チャンバ３０３内に位置付けることができる。いくつかの実施の形態において、共に一体に製造された壁３０１および細胞培養表面３１５を含む容器３００は、非透過性である材料を含み得る。あるいは、いくつかの実施の形態（例えば、細胞培養表面３１５が容器３００の壁３０１に取り付けられている場合）において、容器３００の壁３０１は、非透過性材料から製造することができ、細胞培養表面３１５は、壁３０１と一体に形成された、非透過性材料、非多孔質材料、ガス透過性材料、または多孔質材料の１つ以上から製造することができる。

細胞培養表面３１５および壁３０１が単一部品として製造されている、この実施の形態において、細胞培養表面３１５は壁３０１から壁３０１まで延在する。実施の形態において、細胞培養表面３１５は、どのような平らな区域も有していない。すなわち、その細胞培養表面は、細胞培養表面と壁３０１との間に縁も、平らな区域もない、壁から壁まで延在するマイクロキャビティ３２０のアレイである。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。実施の形態において、細胞が定着する平らな区域が細胞培養チャンバ内にない。このことは、細胞が、マイクロウェルの外部の細胞培養チャンバ内に定着しないことを確実するために重要である。細胞がマイクロウェルの外部で細胞培養表面の外の平らな区域に定着すると、細胞は不規則な細胞集合体８０１（図３５Ａと３５Ｂ、３６Ａと３６Ｂ参照）として増殖し、その容器内で多細胞３Ｄ構造の不均質集団を形成し得る。実施の形態において、細胞培養表面は複数のマイクロキャビティから実質的になる。

したがって、いくつかの実施の形態において、容器３００は、所定量の液体３７０を含むことができ、細胞培養容器３００内で細胞を培養する方法は、複数のマイクロキャビティ３２０の少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内に液体３７０を堆積させる工程、および少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内に液体３７０を堆積させた後、少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内で細胞を培養する工程を含むことができる。

図３０の区域３２での容器３００の一体に形成された細胞培養表面３１５および壁３０１の拡大図を示す図３２に示されるように、所定量の液体３７０が、容器３００の水没する表面３２５と接触し、容器３００の細胞培養チャンバ３０３のある領域を占めることができる。図３３は、容器３００の壁３０１の凹部３３５内に位置付けられた細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１の特徴を含む、図３２の代わりの例示の実施の形態を示しており、その所定量の液体は、細胞培養表面３１５の外周面３３２を含む、容器３００の水没する表面３２５と接触し、容器３００の細胞培養チャンバ３０３のある領域を占めている。同様に、図３４は、容器３００の壁３０１の突起部３３７上に位置付けられた細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１の特徴を含む、図３２の代わりの例示の実施の形態を示しており、その所定量の液体３７０は、細胞培養表面３１５の外周面３３２を含む、容器３００の水没する表面３２５と接触し、容器３００の細胞培養チャンバ３０３のある領域を占めている。

説明目的のためだけに、いくつかの実施の形態において、水没する表面３２５は、所定量の液体３７０と接触している容器３００の表面を含むことができるという了解の下で、図３２～３４における極太線の太さで、水没する表面３２５が示されている。いくつかの実施の形態において、水没する表面３２５は、容器３００内で細胞を培養する方法の特定の工程での、またはその最中に重力「ｇ」の方向に対して定義することができる。例えば、いくつかの実施の形態において、所定量の液体３７０は、液面３７１を画成することができ、ここで、水没する表面３２５は、重力「ｇ」の方向に対して、液面３７１より下に位置し、したがって、所定量の液体３７０中に沈んだ、所定量の液体３７０と接触している容器３００の表面を含む。いくつかの実施の形態において、所定量の液体３７０の液面３７１は、細胞培養表面３１５の一部分３７５からある距離だけ間隔が置かれた所定量の液体３７０の平らな自由表面を画成することができる。例えば、細胞培養表面３１５の一部分３７５は、開口３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃを含むことができ、所定量の液体３７０の液面３７１により画成された平らな自由表面は、複数のマイクロキャビティ３２０の各マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの凹面３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃから離れる方向に一部分３７５からある距離だけ間隔を空けることができる。

それに加え、いくつかの実施の形態において、容器３００の水没する表面３２５は、所定量の液体３７０の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含まない。所定量の液体３７０の液面３７１の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含まない水没する表面３２５を設けることによって、液体３７０中に懸濁された細胞は、細胞が定着できる、または細胞が接着できる水没する表面３２５がないので、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃのウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に落下する（例えば、少なくとも重力に基づいて）および／または水没する表面３２５により向けられる。上述したように、いくつかの実施の形態において、容器３００の表面に定着するまたは接着する細胞は、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの外部で蓄積し、成長し（例えば、増殖し）、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内の三次元細胞の所望の増殖に関して問題を生じ得る。例えば、いくつかの実施の形態において、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に落下（少なくとも重力に基づいて）せず、容器３００の他の表面に蓄積するまたは接着する細胞は（例えば、水没する表面３２５が、所定量の液体３７０の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含む場合）、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部で増殖し得、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞の所望の増殖を乱し（例えば、阻止し、変更し、遅くし、または妨げ）得る。同様に、いくつかの実施の形態において、水没する表面３２５が、所定量の液体３７０の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含む場合、細胞は、その平らな表面部分上に蓄積または接着し得、増殖し、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞を押しのけ、それによって、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞の所望の増殖を乱しまたは損ない得る。したがって、いくつかの実施の形態において、所定量の液体３７０の液面３７１の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含まない水没する表面３２５を設けることにより、液体３７０内に懸濁された全ての細胞を、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に向け、それゆえ、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部の容器３００の表面に細胞が接着した場合にそうしなければ起こり得る問題を低下させる、またはなくすことができる。

図３３に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１は、複数のマイクロキャビティ３２０の各マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの凹面３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃから離れる方向に細胞培養表面３１５の一部分３７５から距離「ｄ４」だけ間隔を空けることができる。それに加え、細胞培養表面３１５は、外周３３０の少なくとも一部３３１から細胞培養表面３１５の一部分３７５まで延在する外周面３３２を含むことができる。いくつかの実施の形態において、前記方向に沿った、平らな自由表面を画成する液面３７１から、細胞培養表面３１５の一部分３７５までの所定量の液体３７０の深さ「ｄ５」は、距離「ｄ４」より小さくすることができる。同様に、図３４に示されるように、いくつかの実施の形態において、細胞培養表面３１５の外周３３０の少なくとも一部３３１は、複数のマイクロキャビティ３２０の各マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの凹面３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃから離れる方向に細胞培養表面３１５の一部分３７５から距離「ｄ６」だけ間隔を空けることができる。細胞培養表面３１５は、外周３３０の少なくとも一部３３１から細胞培養表面３１５の一部分３７５まで延在する外周面３３２を含むことができる。いくつかの実施の形態において、前記方向に沿った、平らな自由表面を画成する液面３７１から、細胞培養表面３１５の一部分３７５までの所定量の液体３７０の深さ「ｄ７」は、距離「ｄ６」より小さくすることができる。

したがって、いくつかの実施の形態において、単独で、または組合せで、所定量の液体３７０の液面３７１の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含まない水没する表面３２５を設けることによって、前記方向に沿った、平らな自由表面を画成する液面３７１から、細胞培養表面３１５の一部分３７５までの所定量の液体３７０の深さ「ｄ５」は、距離「ｄ４」より小さくすることができ（例えば、凹部３３５を含む、図３３）、前記方向に沿った、平らな自由表面を画成する液面３７１から、細胞培養表面３１５の一部分３７５までの所定量の液体３７０の深さ「ｄ７」は、距離「ｄ６」より小さくすることができ（例えば、突起部３３７を含む、図３４）、液体３７０内に懸濁された全ての細胞を、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に向け、それゆえ、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部の容器３００の表面に細胞が接着した場合にそうしなければ起こり得る問題を低下させる、またはなくすことができる。さらに、明白に示されていないが、いくつかの実施の形態において、容器３００内で細胞（図１６参照）を培養する方法は、複数のマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内に所定量の液体３７０の一部を堆積させる工程、および少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内に所定量の液体３７０の一部を堆積させた後、少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内で細胞を培養する工程を含むことができる。

図３２～３４を参照すると、いくつかの実施の形態において、細胞培養容器３００内で細胞を培養する方法は、容器３００の細胞培養チャンバ３０３のある領域に所定量の液体３７０を充填する工程を含むことができる。いくつかの実施の形態において、細胞培養チャンバ３０３は、容器３００の壁３０１の内面３０２により少なくとも部分的に画成することができ、前記方法は、細胞培養表面３１５の複数のマイクロキャビティ３２０の少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内に所定量の液体３７０の一部を堆積させる工程を含むことができる。細胞培養表面３１５はその領域の少なくとも一部３３１を画成することができ、複数のマイクロキャビティ３２０の各マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃは、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃを画成する凹面３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃおよびウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃへの通路を画成する細胞培養表面３１５の一部分３７５内の開口３２３ａを含むことができる。いくつかの実施の形態において、その方法は、少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内に所定量の液体３７０の一部を堆積させた後、所定量の液体３７０が容器３００の水没する表面３２５に接触しつつ、少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内で細胞を培養する工程をさらに含むことができる。いくつかの実施の形態において、少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内で細胞を培養する間に、水没する表面３２５は、重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む平らな表面部分を含まない。必要に応じて、いくつかの実施の形態において、複数のマイクロキャビティ３２０の少なくとも１つのマイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内で細胞を培養する間に、所定量の液体３７０の液面３７１は、重力「ｇ」の方向に対して垂直な、所定量の液体３７０の平らな自由表面を画成することができる。

重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む平らな表面部分を含まない水没する表面３２５を設けることによって、液体３７０中に懸濁された細胞は、細胞が定着できる、または細胞が接着できる水没する表面３２５がないので、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃのウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に落下する（例えば、少なくとも重力に基づいて）および／または水没する表面３２５により向けられる。上述したように、いくつかの実施の形態において、容器３００の表面に定着するまたは接着する細胞は、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃの外部で蓄積し、成長し（例えば、増殖し）、マイクロキャビティ３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ内の三次元細胞の所望の増殖に関して問題を生じ得る。例えば、いくつかの実施の形態において、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に落下（少なくとも重力に基づいて）せず、容器３００の他の表面に蓄積するまたは接着する細胞は（例えば、水没する表面３２５が、重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む平らな表面部分を含む場合）、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部で増殖し得、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞の所望の増殖を乱し（例えば、阻止し、変更し、遅くし、または妨げ）得る。同様に、いくつかの実施の形態において、水没する表面３２５が、重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む平らな表面部分を含む場合、細胞は、その平らな表面部分上に蓄積または接着し得、増殖し、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞を押しのけ、それによって、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ内の三次元細胞の所望の増殖を乱しまたは損ない得る。したがって、いくつかの実施の形態において、重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む平らな表面部分を含まない水没する表面３２５を設けることにより、液体３７０内に懸濁された全ての細胞を、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に向け、それゆえ、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部の容器３００の表面に細胞が定着または接着した場合にそうしなければ起こり得る問題を低下させる、またはなくすことができる。

さらに、本開示の目的のために、特に明記のない限り、「平らな表面部分」は、約５マイクロメートル超の平面寸法を含む任意の平らな表面部分を意味することを目的としている。例えば、いくつかの実施の形態において、所定量の液体３７０の液面３７１の平らな自由表面に対して平行な平らな表面部分を含まない水没する表面３２５は、所定量の液体３７０の液面３７１の平らな自由表面に対して平行な、約５マイクロメートル超の平面寸法を含む平らな表面部分を含まない水没する表面３２５と定義することができる。同様に、いくつかの実施の形態において、重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む平らな表面部分を含まない水没する表面３２５は、重力「ｇ」の方向と反対の表面法線を含む、約５マイクロメートル超の平面寸法を含む平らな表面部分を含まない水没する表面３２５と定義することができる。

例えば、いくつかの実施の形態において、水没する表面３２５は、平面の部分を含み得る；しかしながら、平らな表面部分の平面寸法が、例えば、５マイクロメートル以下である場合、いくつかの実施の形態において、その平らな表面部分は、細胞が無理なく蓄積または接着するのに小さすぎると考えられる。したがって、いくつかの実施の形態において、約５マイクロメートル超の平面寸法を含む平らな表面部分を含まない水没する表面３２５を設けることによって、液体３７０内に懸濁された全ての細胞を、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ中に向け、それゆえ、ウェル３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃの外部の容器３００の表面に細胞が定着または接着した場合にそうしなければ起こり得る問題を低下させる、またはなくすことができる。しかしながら、いくつかの実施の形態において、水没する表面３２５は、その平らな表面部分を画成する閾値寸法にかかわらず、平らな表面部分を完全になくすことができる。

図３５Ａおよび図３５Ｂは、マイクロキャビティ内でスフェロイドとして増殖する細胞および不規則な細胞集合体８０１として増殖する細胞を示す概略図である。これらの不規則な細胞集合体は、容器内で平らな表面が生じる所で、図１～１６に示された実施の形態（細胞培養表面１１５）または図１７～３４に示された実施の形態（細胞培養表面３１５）において生じ得る。これらの不規則な細胞集合体を避けるために、細胞培養チャンバ１０３または３０３内で平らな表面を避けることが重要である。

図３６Ａは、容器内にスフェロイドの均質集団を提供する適切な条件下にあるマイクロキャビティのアレイ内のスフェロイドの写真である。図３６Ｂは、細胞培養チャンバ１０３、３０３内に平らな表面を有する容器から単離された不規則な細胞集合体８０１の写真である。これらの不規則な細胞集合体８０１の産生を回避するために、細胞培養表面に平らな表面を持たない、または細胞培養表面の水没する領域に平らな表面を持たない細胞培養容器の実施の形態が提供される。すなわち、細胞培養容器の実施の形態において、細胞培養表面は、マイクロキャビティのアレイから実質的になり、望ましくない不規則な細胞集合体８０１を産生し得る平らな表面を提供しない。

本開示の全体に亘り、「材料」、「液体」、および「気体」という用語は、例えば、細胞培養容器内で細胞を培養するときに用いられる材料の性質を記載するために使用することができる。特に明記のない限り、本開示の目的のために、「材料」は、流体材料（例えば、液体または気体）を含むことができる。それに加え、材料は、液体中に懸濁された固体粒子（例えば、細胞）を含む液体を含む培養液または培地を含むことができる。特に明記のない限り、本開示の目的のために、「液体」は、例えば、細胞培養チャンバを洗浄するため、細胞培養表面と容器の１つ以上の特徴構造を殺菌するため、細胞増殖および液体の他の使途のために細胞培養表面を準備するために容器に添加できる、または容器から除去できる、洗浄液または濯ぎ液、水溶液、または他の液体を含むことができる。それに加え、液体は、液体中に懸濁された固体粒子（例えば、細胞）を含む液体を含む培養液または培地を含むことができる。特に明記のない限り、本開示の目的のために、「気体」は、空気、濾過または処理空気、もしくは他の気体を含むことができる。

本開示の全体に亘り、「非透過性」、「ガス透過性」、および「多孔質」という用語は、細胞培養表面の１つ以上の特徴構造の性質（例えば、材料特性、特徴、パラメータ）を記載するために使用することができる。

特に明記のない限り、本開示の目的のために、「非透過性」細胞培養表面（例えば、非透過性細胞培養表面の材料）は、標準状態（例えば、以下に限られないが、圧力および力を含む外部からの影響のない）で固体、液体、および気体に対して不透過性であると考えられ、したがって、標準状態でその非透過性細胞培養表面中に、その中を通じて、またはそこから外に、固体、液体、または気体の移動を可能にしない。いくつかの実施の形態において、非透過性細胞培養表面は、その容器の壁の一部を形成することができる。それに加え、その容器の細胞培養チャンバは、非透過性細胞培養表面がその容器の壁の一部を形成する場合、例えば、細菌がその非透過性細胞培養表面を通過できないので、無菌であると考えられる。しかしながら、その細胞培養表面の複数のマイクロキャビティに材料を充填した場合、気体が、その液体の表面張力に基づいて、非透過性細胞培養表面のマイクロキャビティ内に捕捉され、それによって、いくつかの実施の形態において、材料がマイクロキャビティを充填するのを妨げ、スフェロイドの増殖を妨げることがあり得る。

特に明記のない限り、本開示の目的のために、「ガス透過性」細胞培養表面（例えば、ガス透過性細胞培養表面の材料）は、標準状態で固体と液体に対して不透過性であり、気体に対して透過性であると考えられる。したがって、ガス透過性細胞培養表面は、そのガス透過性細胞培養表面中に、その中を通じて、またはそこから外に、固体と液体の移動を可能にせず、そのガス透過性細胞培養表面中に、その中を通じて、またはそこから外に、気体の移動を可能にする。いくつかの実施の形態において、ガス透過性細胞培養表面は、その容器の壁の一部を形成することができる。それに加え、その容器の細胞培養チャンバは、ガス透過性細胞培養表面がその容器の壁の一部を形成する場合、例えば、細菌がそのガス透過性細胞培養表面を完全ではないが満足な程度に通過できないので、無菌であると考えられる。しかしながら、その細胞培養表面はガス透過性であるが、そのガス透過性細胞培養表面を通るガス透過速度は、通常の作動条件下でマイクロキャビティから気体を移動させるのに必要とされる速度より遅くあり得、したがって、その細胞培養表面を通って透過するのに許容できないほど長い時間がかかり得るので、材料の充填中にマイクロキャビティ中に気体がまだ捕捉され得る。それゆえ、いくつかの実施の形態において、マイクロキャビティにゆっくりと充填すると、液体の前面がある角度で各マイクロキャビティに入り、それによって、液体がマイクロキャビティを充填するにつれて、気体を移動させることができる。いくつかの実施の形態において、そのマイクロキャビティに液体を充填した後、気体は、ガス透過性細胞培養表面を通って（ゆっくりと）透過することができる。

特に明記のない限り、本開示の目的のために、「多孔質」細胞培養表面（例えば、多孔質細胞培養表面の材料）は、標準状態で固体に対して不透過性であり、液体と気体に対して透過性であると考えられる。したがって、多孔質細胞培養表面は、その多孔質細胞培養表面中に、その中を通じて、またはそこから外に、固体の移動を可能にせず、その多孔質細胞培養表面中に、その中を通じて、またはそこから外に、液体と気体の移動を可能にする。多孔質細胞培養表面は、細菌が多孔質細胞培養表面を通過でき、それゆえ、細胞培養チャンバにおける無菌問題を生じ得るので、容器の一部を形成することができない。それゆえ、多孔質細胞培養表面を使用する場合、その細胞培養表面は、容器の無菌細胞培養チャンバ内に密閉（完全に密閉）されなければならない。しかしながら、マイクロキャビティに材料を充填する最中に、気体は多孔質細胞培養表面を通って漏れ（例えば、通過）し得る。それゆえ、マイクロキャビティの充填は、そのマイクロキャビティ内に気体を捕捉する懸念なく迅速に行うことができる。いくつかの実施の形態において、液体は、圧力の増加または物理的接触および細胞培養表面の撹乱だけで、多孔質細胞培養表面を通過することができる。それゆえ、いくつかの実施の形態において、液体を含む材料は、細胞培養表面が圧力の増加または物理的接触および細胞培養表面の撹乱に曝されない限り、細胞培養表面のマイクロキャビティ内に収容することができる。例えば、いくつかの実施の形態において、多孔質細胞培養表面を細胞培養チャンバ内に支持して、充填中、並びに培養中に、気体に細胞培養表面を通過させ、その細胞培養表面を、圧力の増加または物理的接触および外力（例えば、細胞培養チャンバの外の）からの撹乱から隔絶することができる。

細胞培養容器および細胞を培養する方法の数多くの態様をここに開示してきた。いくつかの選択された態様の概要が、下記に提示されている。

第１の態様において、本開示は、細胞培養容器であって、複数のマイクロキャビティから実質的になる細胞培養表面と；その細胞培養表面に取り付けられた壁とを備え、その細胞培養表面およびその壁の内面がこの容器の細胞培養チャンバを画成する、細胞培養容器を提供する。

第２の態様において、本開示は、その複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティが、凹形底部および開口を含む、態様１の細胞培養容器を提供する。

第３の態様において、本開示は、首付き開口をさらに備える、態様１または２の細胞培養容器を提供する。

第４の態様において、本開示は、その首付き開口にダムをさらに備える、態様３の細胞培養容器を提供する。

第５の態様において、本開示は、蓋をさらに備える、態様１または２の細胞培養容器を提供する。

第６の態様において、本開示は、蓋をさらに備える、態様３または４の細胞培養容器を提供する。

第７の態様において、本開示は、その蓋がヒンジ式開口を含む、態様６の細胞培養容器を提供する。

第８の態様において、本開示は、その蓋がスライド式開口を含む、態様４の細胞培養容器を提供する。

第９の態様において、本開示は、その首付き開口が曲げ部を含む、態様３、４、または６～８の細胞培養容器を提供する。

第１０の態様において、本開示は、その壁が凹部を含み、その細胞培養表面がその凹部に取り付けられている、態様１～９のいずれか１つの細胞培養容器を提供する。

第１１の態様において、本開示は、その壁が突起部を含み、その細胞培養表面がその突起部に取り付けられている、態様１～９のいずれか１つの細胞培養容器を提供する。

第１２の態様において、本開示は、細胞培養容器であって、平らではない正弦波形状を有する複数のマイクロキャビティを含む細胞培養表面と；その細胞培養表面に取り付けられた壁とを備え、その細胞培養表面およびその壁の内面がこの容器の細胞培養チャンバを画成し、その細胞培養表面が平らな区域を実質的に含まない、細胞培養容器を提供する。

第１３の態様において、本開示は、その複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティが、凹形底部および開口を含む、態様１２の細胞培養容器を提供する。

第１４の態様において、本開示は、首付き開口をさらに備える、態様１２または１３の細胞培養容器を提供する。

第１５の態様において、本開示は、その首付き開口にダムをさらに備える、態様１４の細胞培養容器を提供する。

第１６の態様において、本開示は、蓋をさらに備える、態様１２または１３の細胞培養容器を提供する。

第１７の態様において、本開示は、蓋をさらに備える、態様１４または１５の細胞培養容器を提供する。

第１８の態様において、本開示は、その蓋がヒンジ式開口を含む、態様１７の細胞培養容器を提供する。

第１９の態様において、本開示は、その蓋がスライド式開口を含む、態様１７の細胞培養容器を提供する。

第２０の態様において、本開示は、その首付き開口が曲げ部を含む、態様１４、１５、または１７～１９の細胞培養容器を提供する。

第２１の態様において、本開示は、その壁が凹部を含み、その細胞培養表面がその凹部に取り付けられている、態様１２～１７のいずれか１つの細胞培養容器を提供する。

第２２の態様において、本開示は、その壁が突起部を含み、その細胞培養表面がその突起部に取り付けられている、態様１２～１７のいずれか１つの細胞培養容器を提供する。

様々な開示の実施の形態は、その特定の実施の形態に関して記載された特定の特徴構造、要素または工程を含んでも差し支えないことが認識されよう。特定の特徴構造、要素または工程は、１つの特定の実施の形態に関連して記載されているが、様々な図示されていない組合せまたは順序で、代わりの実施の形態と交換されても、または組み合わされても差し支えないことも認識されよう。

ここに用いられているように、名詞は、「少なくとも１つ」の対象を指し、特に明記のない限り、「ただ１つ」に限定されるべきではないことを理解すべきである。それゆえ、例えば、「成分」に対する言及は、特に明記のない限りそのような成分を２つ以上有する実施の形態を含む。

範囲は、「約」１つの特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとここに表現することができる。そのような範囲が表現された場合、実施の形態は、その１つの特定の値から、および／または他方の特定の値までを含む。同様に、値が、先行詞「約」を使用して、近似として表現されている場合、その特定の値は別の態様を形成することが理解されよう。範囲の各々の端点は、他方の端点と関係して、および他方の端点と関係なくの両方で有意であることがさらに理解されよう。

特に明記のない限り、ここに述べられたどの方法も、その工程が特定の順序で行われることを必要としていると解釈されることは決して意図されていない。したがって、方法の請求項が、その工程がしたがうべき順序を実際に列挙していない場合、またはその工程が、特定の順序に限定されることが、請求項または説明に他に具体的に述べられていない場合、どの特定の順序も暗示されることは決して意図されていない。

特定の実施の形態の様々な特徴構造、要素または工程は、移行句「含む」を使用して開示することができるが、移行句「からなる」または「から実質的になる」を使用して記載できるものを含む代わりの実施の形態が暗示されることを理解すべきである。それゆえ、例えば、Ａ＋Ｂ＋Ｃを含む装置に対して暗示される代替の実施の形態は、装置がＡ＋Ｂ＋Ｃからなる実施の形態、および装置がＡ＋Ｂ＋Ｃから実質的になる実施の形態を含む。

本開示の精神および範囲から逸脱せずに、本開示に様々な改変および変更を行えることが、当業者に明白であろう。それゆえ、本開示は、本開示の改変および変更を、それらが付随の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内に入るという前提で包含することが意図されている。

以下、本発明の好ましい実施形態を項分け記載する。

実施形態１
細胞培養容器であって、
複数のマイクロキャビティから実質的になる細胞培養表面と、
前記細胞培養表面に取り付けられた壁と、
を備え、
前記細胞培養表面および前記壁の内面が前記容器の細胞培養チャンバを画成する、細胞培養容器。

実施形態２
前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティが、凹形底部および開口を含む、実施形態１に記載の細胞培養容器。

実施形態３
首付き開口をさらに備える、実施形態１または２に記載の細胞培養容器。

実施形態４
前記首付き開口にダムをさらに備える、実施形態３に記載の細胞培養容器。

実施形態５
蓋をさらに備える、実施形態１または２に記載の細胞培養容器。

実施形態６
蓋をさらに備える、実施形態３または４に記載の細胞培養容器。

実施形態７
前記蓋がヒンジ式開口を含む、実施形態６に記載の細胞培養容器。

実施形態８
前記蓋がスライド式開口を含む、実施形態４に記載の細胞培養容器。

実施形態９
前記首付き開口が曲げ部を含む、実施形態３、４、および６～８のいずれか１つに記載の細胞培養容器。

実施形態１０
前記壁が凹部を含み、前記細胞培養表面が該凹部に取り付けられている、実施形態１～９のいずれか１つに記載の細胞培養容器。

実施形態１１
前記壁が突起部を含み、前記細胞培養表面が該突起部に取り付けられている、実施形態１～９のいずれか１つに記載の細胞培養容器。

実施形態１２
細胞培養容器であって、
平らではない正弦波形状を有する複数のマイクロキャビティを含む細胞培養表面と、
前記細胞培養表面に取り付けられた壁と、
を備え、
前記細胞培養表面および前記壁の内面がこの容器の細胞培養チャンバを画成し、
前記細胞培養表面が平らな区域を実質的に含まない、細胞培養容器。

実施形態１３
前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティが、凹形底部および開口を含む、実施形態１２に記載の細胞培養容器。

実施形態１４
首付き開口をさらに備える、実施形態１２または１３に記載の細胞培養容器。

実施形態１５
前記首付き開口にダムをさらに備える、実施形態１４に記載の細胞培養容器。

実施形態１６
蓋をさらに備える、実施形態１２または１３に記載の細胞培養容器。

実施形態１７
蓋をさらに備える、実施形態１４または１５に記載の細胞培養容器。

実施形態１８
前記蓋がヒンジ式開口を含む、実施形態１７に記載の細胞培養容器。

実施形態１９
前記蓋がスライド式開口を含む、実施形態１７に記載の細胞培養容器。

実施形態２０
前記首付き開口が曲げ部を含む、実施形態１４、１５、および１７～１９のいずれか１つに記載の細胞培養容器。

実施形態２１
前記壁が凹部を含み、前記細胞培養表面が該凹部に取り付けられている、実施形態１２～１７のいずれか１つに記載の細胞培養容器。

実施形態２２
前記壁が突起部を含み、前記細胞培養表面が該突起部に取り付けられている、実施形態１２～１７のいずれか１つに記載の細胞培養容器。

１００、３００ 細胞培養容器
１０１ 上部
１０３、３０３ 細胞培養チャンバ
１０４ キャップ
１０５ 開口部
１０７、３０１ 壁
１０８ 底部
１１２、５０７ 開口
１１５、３１５ 細胞培養表面
１２０、１２０ａ、１２０ｂ、１２０ｃ、３２０、３２０ａ、３２０ｂ、３２０ｃ マイクロキャビティ
１２１ａ、１２１ｂ、１２１ｃ、３２１ａ、３２１ｂ、３２１ｃ 凹面
１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃ、３２２ａ、３２２ｂ、３２２ｃ ウェル
１２３ａ、１２３ｂ、１２３ｃ、３２３ａ、３２３ｂ、３２３ｃ 開口
１３０ ダム
１３６ 開口部
１３７、３０４ 蓋
１４０、３７０ 所定量の液体
１５０、１５０ａ、１５０ｂ、１５０ｃ、３５０ 細胞、スフェロイド
１５８ 曲げ部
１８０ 溝
１８２ ヒンジ
２００ 細胞培養表面
３３０ 全外周
３３５ 凹部
３３７ 突起部
５５５、５５５ａ 首部
８０１ 多細胞３Ｄ集合体

Claims (22)

1. 細胞培養容器であって、
   複数のマイクロキャビティから実質的になる細胞培養表面と、
   前記細胞培養表面に取り付けられた壁と、
   を備え、
   前記細胞培養表面および前記壁の内面が前記容器の細胞培養チャンバを画成する、細胞培養容器。
2. 前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティが、凹形底部および開口を含む、請求項１記載の細胞培養容器。
3. 首付き開口をさらに備える、請求項１または２記載の細胞培養容器。
4. 前記首付き開口にダムをさらに備える、請求項３記載の細胞培養容器。
5. 蓋をさらに備える、請求項１または２記載の細胞培養容器。
6. 蓋をさらに備える、請求項３または４記載の細胞培養容器。
7. 前記蓋がヒンジ式開口を含む、請求項６記載の細胞培養容器。
8. 前記蓋がスライド式開口を含む、請求項４記載の細胞培養容器。
9. 前記首付き開口が曲げ部を含む、請求項３、４、および６～８のいずれか１項記載の細胞培養容器。
10. 前記壁が凹部を含み、前記細胞培養表面が該凹部に取り付けられている、請求項１～９のいずれか１項記載の細胞培養容器。
11. 前記壁が突起部を含み、前記細胞培養表面が該突起部に取り付けられている、請求項１～９のいずれか１項記載の細胞培養容器。
12. 細胞培養容器であって、
    平らではない正弦波形状を有する複数のマイクロキャビティを含む細胞培養表面と、
    前記細胞培養表面に取り付けられた壁と、
    を備え、
    前記細胞培養表面および前記壁の内面がこの容器の細胞培養チャンバを画成し、
    前記細胞培養表面が平らな区域を実質的に含まない、細胞培養容器。
13. 前記複数のマイクロキャビティの各マイクロキャビティが、凹形底部および開口を含む、請求項１２記載の細胞培養容器。
14. 首付き開口をさらに備える、請求項１２または１３記載の細胞培養容器。
15. 前記首付き開口にダムをさらに備える、請求項１４記載の細胞培養容器。
16. 蓋をさらに備える、請求項１２または１３記載の細胞培養容器。
17. 蓋をさらに備える、請求項１４または１５記載の細胞培養容器。
18. 前記蓋がヒンジ式開口を含む、請求項１７記載の細胞培養容器。
19. 前記蓋がスライド式開口を含む、請求項１７記載の細胞培養容器。
20. 前記首付き開口が曲げ部を含む、請求項１４、１５、および１７～１９のいずれか１項記載の細胞培養容器。
21. 前記壁が凹部を含み、前記細胞培養表面が該凹部に取り付けられている、請求項１２～１７のいずれか１項記載の細胞培養容器。
22. 前記壁が突起部を含み、前記細胞培養表面が該突起部に取り付けられている、請求項１２～１７のいずれか１項記載の細胞培養容器。

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